Применение новых хроматографических методов в исследовании пива

Применение новых хроматографических методов в исследовании пива

С.А. Савчук, К.В. Кобелев, Т.П. Рыжова, В.Н. Арбузов

ГУ ВНИИпивобезалкогольной и винодельческой промышленности Е.А. Симонов, В.И. Сорокин

ГУ экспертно-криминалистический центр МВД РФ С.А. Апполонова

Антидопинговый центр Спорткомитета РФ

Пищевые продукты и напитки — одни из самых сложных объектов по качественному и количественному химическому составу. Во многих случаях для установления факта их фальсификации или использования при производстве запрещенных веществ требуется проведение целого комплекса исследований различными химическими, физико-химическими, органолептическими и другими методами. Такой подход обусловлен наличием большого количества компонентов близкого химического строения, присутствующих в исследуемом образце во много раз более высоких концентрациях, чем исследуемое вещество. Пиво, как напиток, получаемый путем ферментации биологического сырья и не подвергающийся в процессе производства дистилляции и ректификации, в отличие от других напитков, в том числе спиртсо-держащих, и прочих продуктов как раз и относится к таким объектам [1].

В связи с этим для исследования пива недопустимо применение методов, разработанных для других объектов, так как полученные результаты могут быть недостоверны, что может привести к серьезным последствиям.

Контроль качества пивоваренной продукции и аналитический контроль в процессе ее производства всегда являлись важным фактором успеха предприятия в условиях насыщения рынка и высокой конкуренции. Ниже приведены краткий обзор основных химических компонентов пива, их влияние на показатели качества продукции, а также основные инструментальные методы, которые используются для контроля производства пива в мире.

Химический состав пива и показатели, определяемые инструментальными методами. Среди веществ, содержащихся в пиве, можно выделить определенные группы.

Легколетучие дикетоновые и серосодержащие соединения. Дикетоновые соединения (диацетил, 2,3-бутандион, 2,3-пентандион, ацетоин) и серосодержащие соединения, представленные в основном сульфидами (диметилсуль-

фид, диметилдисульфид), влияют на формирование органолептических свойств пива (запаха, вкуса и послевкусия напитка). Для определения летучих дикетоновых и серосодержащих соединений обычно применяют метод газовой хроматографии с парофазным пробоот-бором. Для определения дикетоновых соединений применяют электронозах-ватный детектор, а пламенно-фотометрический и хемилюминесцентный детекторы, селективно регистрирующие серо-органические компоненты, используют для высокочувствительного определения сульфидов в пиве. Диацетил и пен-тандион количественно определяют в диапазоне 40-1500 мкг/л. Диметил-сульфид присутствует в пиве в диапазоне 100-400 мкг/л.

Метод газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием (ГХ-ДИП) и метод хромато-масс-спектро-метрии успешно применяют для определения высших спиртов, альдегидов, эфи-ров и фурановых соединений, также влияющих на органолептические свойства пива. В пиве определяют более 70 компонентов хмелевого масла, придающих пиву аромат. К ним относят монотерпены (мирцен), сесквитерпены и терпено-вые спирты (линолоол, гераниол), определяемые методами ГХ-ДИП и ГМ-МС [2-12].

Горькие вещества. Они поступают в пиво из хмеля и придают напитку специфический горький привкус. В зависимости от технологии приготовления и хранения пива они могут подвергаться окислению и полимеризации, что отрицательно сказывается на качестве напитка. Основными горькими веществами хмеля являются альфа-кислоты (гу-мулоны) и бета-кислоты (лупулоны), а пива — изогумулоны, которые образуются в результате кипячения сусла с хмелем.

Гумулоны и их изомеры при их суммарном содержании менее 7 % обеспечивают специфические вкусовые свойства пива. Повышение их концентрации приводит к появлению в пиве избыточной горечи. При больших содержаниях

горчащие хмелевые вещества обладают седативным, снотворным или галлюциногенным действием. Для контроля содержания горьких хмелевых веществ в мировой практике применяется метод капиллярного электрофореза, или метод высокоэффективной жидкостной хроматографии [13].

Биогенные амины. Суммарное содержание биогенных аминов (путресци-на, кадаверина, гистамина, тирамина и др.) в пиве составляет 1-3 мг/л. Более высокие содержания могут вызывать повышение артериального давления и головную боль. Уровень биогенных аминов в пиве обычно контролируют методом жидкостной хроматографии с диод-но-матричным детектированием по методике, аналогичной для анализа вин на содержание биогенных аминов [14, 15].

Полифенольные соединения. Общее содержание полифенольных соединений в пиве составляет 150-300 мг/л, что примерно в 10 раз ниже, чем в натуральном виноградном вине. Полифе-нольные соединения можно отнести к наиболее ценным в биохимическом отношении компонентам, предупреждающим образование тромбов, регулирующим липидный обмен и являющимся природными антиоксидантами. Большая часть полифенольных соединений переходит в пиво из солода, остальные — из хмеля. В пиве данный класс веществ представлен антоцианами (14-77 мг/л), кверцетином (5-125 мг/л), а также ка-техинами, эпикатехинами, кумарино-вой, феруловой, синаповой, эллаговой, кофейной, ванилиновой, сиреневой и другими кислотами. Присутствие этих веществ положительно влияет на качество пива. Однако повышенное содержание полифенолов может привести к развитию ишемической болезни сердца. Избыточное содержание фенольных соединений в присутствии азотсодержащих компонентов пива — витамина В1 (тиамина) и др. может привести к помутнению напитка и выпадению осадка фе-нольных веществ. Для определения по-лифенольных соединений в пиве используют метод ВЭЖХ, условия анализа сходны с применяемыми для исследования полифенолов в винах [16-19].

Органические кислоты и аминокислоты. Аминокислотный и белковый состав в пивном сусле анализируется после фильтрации образца. Органические кислоты (лимонная, пировиноград-ная, уксусная, глюконовая, щавелевая и др.) присутствуют в пиве в виде солей и могут быть определены методом капиллярного электрофореза. Лимонная кислота, представленная в пиве в наибольшем количестве (около 130 мг/л), выполняет роль природного антиоксидан-та и предупреждает образование камней в почках [20-22].

Другие нелетучие кислород- и азотсодержащие соединения. Системы для жидкостной хроматографии с рефрактометрическим детектированием используют для исследования и контроля состава сахаров, как мономеров, так и полимеров в пиве. Для определения витаминов (в пиве содержится до 1,5 % витаминов группы В, никотиновая, фолиевая кислоты и др.) применяют систему ВЭЖХ с диодно-матричным детектированием при 220/230 нм, 400/100 нм и колонкой НурегэП BDS 3 цш [23-27].

Нитрозамины. Канцерогенные ал-килзамещенные нитрозамины образуются в ходе производства пива на стадии высушивания солода горячим воздухом. При использовании такого солода содержание этих веществ в пиве может достигать 7-9 мкг/л. Для снижения их содержания в воздух при сушке солода добавляют сернистые газы, что позволяет довести содержание, например, диме-тилнитрозамина, до 0,15-0,7 мкг/л. Нитрозамины извлекают из пробы дистилляцией с паром с последующей экстракцией дихлорометаном и определяют методом хромато-масс-спектрометрии с химической ионизацией и регистрацией положительных ионов. В качестве внутреннего стандарта можно применять дейтерированный диметилнитрозамин. Чувствительность метода составляет 0,04 мкг/л [28-30].

Микотоксины. Токсичные компоненты, которые накапливаются в зерне при его неправильном хранении и переходят в пиво в процессе производства, обнаруживают методом высокоэффективной жидкостной хроматографии [31, 32].

Пищевые добавки. Для консервации безалкогольных напитков и увеличения срока их хранения используют различные вещества, например бензойную, сорбиновую, аскорбиновую кислоты, эфиры гидроксибензойной кислоты и др. Эти вещества угнетают рост дрожжей и посторонних микроорганизмов, а также подавляют активность ферментов. Для

пива применяют аскорбиновую кислоту как антиоксидант и стабилизаторы бел-ково-коллоидной стойкости типа сили-кагелей или ПВПП.

Поверхностно-активные вещества, консерванты и другие пищевые добавки определяют в пиве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии или капиллярным электрофорезом [33].

Действующая на территории Российской Федерации нормативная документация по контролю качества пива представлена в основном одним ГОСТом [34], по которому контролируются следующие параметры: содержание этилового спирта, экстрактивность сусла, плотность, кислотность, цвет, содержание углекислоты, стойкость, а также содержание тяжелых металлов аб, РЬ, С^ и радионуклидов, содержание нитрозаминов. Другие органические компоненты пива не контролируются.

Неточности в нормативной документации по контролю состава органических компонентов пива приводят к тому, что контролирующие организации, оснащенные современным оборудованием, вынуждены использовать аналитические методики, не предназначенные для анализа этого продукта, что часто приводит к получению ошибочных результатов. Например, по имеющимся у авторов данным, в результате исследования целого ряда образцов пива методом высокоэффективной жидкостной хроматографии по ГОСТу, регламентирующему определение консервантов в безалкогольных напитках [35], на наличие в нем бензоата натрия, было сделано заключение о присутствии этого вещества в исследуемых образцах.

Настоящая работа была проведена с целью проверки полученных результатов, а также для выработки научно обоснованных рекомендаций по разработке нормативной документации. Исследования проводили методами высокоэффективной жидкостной хроматографии с детектированием в видимом и УФ-свете, а также хромато-масс-спектральным ме-

тодом с использованием ионизации электронным ударом при 70 эВ.

Метод жидкостной хроматографии. Исследования проводили на хроматографе Agilent 1100 производства фирмы AGILENT (США). Условия изо-кратического анализа: элюент — 20 % ацетонитрила в 0,0125 М водном растворе KH2PO4 с доведением рН до 3,2 фосфорной кислотой. Колонка Chrompack С-18 длиной 150 мм и внутренним диаметром 4,6 мм. Детектор — диодная матрица (ВЭЖХ-DAD). Хроматограммы регистрировали при 210 нм, а также в диапазоне от 190 до 400 нм. Для исследования отбирали 10 мкл образца.

Метод хромато-масс-спектромет-рии. Идентификацию веществ проводили на приборе Agilent 6890-5973N с капиллярной колонкой HP FFAP длиной 60 м, внешним диаметром 0,32 мм, толщиной фазы 0,52 мкм. Условия анализа: температуры инжектора хроматографа и интерфейса (хроматограф/масс-спектрометр) устанавливали на 180 и 190 °С, соответственно. Температуры источника ионов и квадрупольного фильтра масс составляли 230 и 150 °С соответственно. Режим анализа — SCAN, диапазон сканирования — а.е.м. 29-500 . Температура колонки программировалась от 60 °С (6 мин), 10 °С/мин, 190 °С (20 мин). Газ-носитель — гелий с линейной скоростью 1 мл/мин. Ввод пробы размером 1 мкл осуществляли при использовании деления потока газа-носителя (1:10). Напряжение на электронном умножителе выставляли согласно проводимой настройке масс-спектрометра в режиме LowMassTune.

Методика пробоподготовки. Пиво фильтровали через полимерный фильтр 5 мкм и исследовали вышеописанными методами.

В методах высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектро-метрии бензоат натрия определяли в виде бензойной кислоты (Н-форма бен-зоата натрия).

Результаты исследования пива методом высокоэффективной хро-

матографии. По стандартной методике готовили растворы бензоата натрия в водно-спиртовой смеси в следующих концентрациях: 0,1; 1,0; 10,0; 25,0; 50,0; 75,0; 100,0 мг/л, исследовали по описанной выше методике и строили график зависимости площади пика бензоата натрия от его концентрации. Указанный график оказался линейным в использованном нами диапазоне концентраций. Время удерживания бензоата натрия составило 7,70 мин. Предел определения метода — не менее 0,1 мг/л. На рис. 1 представлена хроматограмма стандартного раствора бензоата натрия и УФ-спектр, соответствующий максимуму данного пика.

Как видно из представленного рисунка, УФ-спектр бензоата натрия в использованных нами хроматографических условиях имеет четко выраженный максимум поглощения в области 230 нм, что характерно для веществ, имеющих в своем составе сопряженные двойные связи или ароматическое кольцо.

Для установления влияния фона сопутствующих веществ на определение бензоата натрия исследовали различные сорта пива, закупленные в розничной продаже. На рис. 2 представлена ВЭЖХ-

DAD хроматограмма и УФ-спектр хро-матографического пика вещества, определенного в пиве «Очаково оригинальное». Это вещество имеет время удерживания 7,23 мин и отличается по времени удерживания и УФ-спектру от бензоата натрия. В этих условиях хромато-графирования время удерживания бен-зоата натрия составило 7,70 мин, а его УФ-спектр представлен на рис. 1.

Аналогичные результаты получены для других сортов пива «Очаково»: оригинальное, специальное и классическое, а также для пива других производителей: «Невское классическое», «Балтика № 7», «Клинское светлое» и импортного пива «Spiritus of hemp».

Для подтверждения полученных результатов во все образцы исследованного пива добавляли раствор бензоата натрия до получения концентрации 70 мг/л. В образцах пива с введенной добавкой бензоата натрия время удерживания пика определяемого вещества и бензо-ата натрия также различалось и составило 7,23 и 7,70 мин соответственно. Так же отличались и УФ-спектры этих пиков. На рис. 3 приведена хроматограм-ма пива «Очаково специальное» с добав-

лением бензоата натрия и УФ-спектры рассматриваемых веществ.

Таким образом, установлено, что хро-матографический пик со временем удерживания 7,23 мин присутствует не только в пиве марок «Очаково», но также в продукции других производителей. Вероятно, это вещество является продуктом брожения и неотъемлемой частью пива.

Для оценки количественного содержания обнаруженного вещества применяли метод внутреннего стандарта, в качестве которого использовали раствор бензоата натрия. Результаты определения (в мг/л) приведены ниже:

«Очаково оригинальное» 22,58

«Очаково специальное» 14,00

«Очаково классическое» 12,28

«Невское классическое» 19,94

«Балтика №7» 21,79

«Клинское светлое» 23,77

«Spiritus of hemp» (фирма Tirolhanf) 10,96

В результате проведенных исследований методом высокоэффективной жидкостной хроматографии установлено следующее:

в проанализированных нами образцах пива «Очаково» разных сортов, закуп-

1•2003

НАПИТКИ

Рис. 5. Хроматограмма пива без добавления бензоата натрия, время удерживания последнего 35,01 мин

ленных в розничной продаже, бензоат натрия на уровне предела определения метода не обнаружен;

во всех исследованных образцах пива, в том числе и других производителей, присутствует хроматографический пик со временем удерживания 7,23 мин, который может быть ошибочно идентифицирован как бензоат натрия по близкому с ним времени удерживания и при использовании только одной длины волны при 210 нм для детектирования (по ГОСТ 30059-93).

Результаты исследования пива методом хромато-масс-спектрометрии.

Для качественного подтверждения полученных результатов проводили исследования методом хромато-масс-спектрометрии. Для этого различные сорта пива анализировали без добавления и с добавлением бензоата натрия из расчета получения концентрации последнего, равной 70 мг/л. На рис. 4 приведена хроматограмма пива «Очаково специальное» с добавлением бензо-ата натрия, а также его масс-спектр.

Хроматограмма этого пива без добавления бензоата натрия представлена на рис. 5.

Данные, полученные методом хрома-то-масс-спектрометрии, полностью под-

тверждают результаты ВЭЖХ-анализа и позволяют утверждать, что исследованные образцы пива не содержат бензота натрия.

Идентификация неизвестного вещества в пиве методом хромато-масс-спектрометрии. Для идентификации целевого компонента пива (время удерживания 7,23 мин в методе ВЭЖХ) проводили его предварительное выделение и концентрирование. Для этого при проведении ВЭЖХ-анализа отбирали подвижную жидкую фазу на выходе из аналитической колонки в момент времени, соответствующий выходу из колонки исследуемого вещества. Эту операцию повторяли несколько раз, после чего отобранную жидкую фазу концентрировали упариванием в токе азота и проводили ВЭЖХ-анализ полученного концентрата. Результаты исследования показывают, что исследуемое вещество со временем удерживания 7,23 мин присутствует в концентрате, и степень концентрирования по сравнению с исходной пробой составляет не менее 1,5 раза. После этого концентрат анализировали методом ГХ-МС. На хроматограмме наблюдали пик со временем удерживания 29,631 мин, элюирующийся перед бензойной кислотой. Масс-спектр этого вещества представлен на рис. 6.

Интерпретацию масс-спектра выполняли на основании следующего подхода. На первом этапе осуществляли сравнение полученного спектра с имеющимися библиотечными спектрами. Сравнение масс-спектров проводили методом компьютерного поиска по нескольким стандартным алгоритмам, предусматривающим «прямой» и «обратный» поиск с расчетом коэффициентов совпадения. Для этой цели использовали библиотеки масс-спектров Национального института стандартов и технологий США (NIST 98) и библиотеки Wiley & Sons 7-го издания (Wiley7N). Вещество считалось идентифицированным при получении коэффициентов совпадения выше 80 %.

В результате библиотечного поиска масс-спектра исследуемого соединения по указанным выше библиотекам спектров с коэффициентом совпадения выше 70 % выявлено не было. Это привело к необходимости использования метода структурно-спектральных корреляций, который достаточно подробно описан в зарубежных и отечественных монографиях по масс-спектрометрии [36-41]. Основной принцип этого метода состоит в том, что масс-спектр вещества рассматривается как совокупность аналитических сигналов, формирующихся в процессе распада молекулы вещества в вакууме под действием электронного удара. При распаде вещества образуют-

ПИВО и НЛПИТКИ

' 1 •2003

18

с2н3о

m/z 43

51 50

н,с

н,с

сн

сЛ°

m/z 96 95

сн

vjC6H7°

m/z 95

с4н

m/z5 53

сн

XJ

/C5H5° 8

/ m/z 81

с4н5°

m/z 67

25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

Рис. 7. Масс-спектр 2,5-диметилфурана и схема его фрагментации по Г. Бузикевич и др.

96

43

н

53

с

27

39

67

ся заряженные фрагменты — ионы, которые формируют характерный для исследуемого вещества масс-спектр. К настоящему моменту выявлен ряд эмпирических правил, позволяющих из фрагментов масс-спектра по характеру их распада под действием электронного удара «составить» исходную молекулу. Отобранные на первом этапе спектры, подвергали детальному разбору на основе эмпирических принципов структурно-спектральных корреляций (распада органических молекул под воздействием облучения электронного удара энергией 70 эВ).

Анализ результатов как библиотечного поиска, проведенного с использованием различных алгоритмов, так и метода структурно-спектральных корреляций позволил сделать предположение о высокой вероятности отнесения искомого вещества к классу кислородсодержащих гетероциклических веществ фуранового ряда. В пользу полученных результатов говорит рассмотрение фрагментирова-ния фурана и 2,5-диметилфурана, приведенное в монографии [38].

Исследуемый масс-спектр более соответствует веществу фуранового ряда, чем циклическим кетонам, так как у них следовало бы ожидать в спектре присутствия стабильных ионов m/z 56 и 43, определяющих наличие в структуре исследуемого вещества кумулированных двойных связей или потерю этого фрагмента при распаде молекулы с образованием положительного иона m/z 43, например [M-56]+ соответственно.

Таким образом, по результатам трактовки исследуемого масс-спектра с использованием классических приемов спектрально-структурных корреляций можно предположить, что исследуемое вещество относится к классу фурановых соединений, поскольку содержит характерные для фурановых веществ фрагменты масс-спектра m/z 53, 39 и 29 [39]. С меньшей вероятностью исследуемое вещество можно отнести к классу моноциклических кетонов.

Масс-спектр 2,5-диметилфурана и схема его фрагментации, которые соответствуют наиболее близкому классу органических соединений к исследуемому нами веществу, представлены на рис. 7 [38] (Бузикевич Г. и др. Интерпретация масс-спектров органических соединений — М.: Мир. 1968. С. 274-275).

Компьютерная интерпретация исследуемого масс-спектра. Интерпретацию исследуемого масс-спектра проводили с применением алгоритмов программы MS Spectral Interpreter 0.99 из стандартного набора математического обеспечения для прибора 5973N фирмы AGILENT (США). Эта программа базируется на классических приемах интерпретации масс-спектров по методу

структурно-спектральных корреляций, но ее алгоритм позволяет оценивать вероятность присутствия и отсутствия определенных фрагментов и функциональных групп в составе молекулы.

В первую очередь масс-спектр исследуемого вещества был исследован с применением программы интерпретации масс-спектров на предмет установления молекулярной массы. В результате с вероятностью более 80 % этот показатель для идентифицируемого вещества был определен в m/z 98. Анализ исследуемого масс-спектра на возможное присутствие атомов хлора и (или) брома позво-

лил сделать заключение с вероятностью 99 % об их отсутствии в молекуле исследуемого вещества. Также идентифицируемая молекула не содержит атомов азота.

В результате проведенных исследований с применением указанной программы можно считать, что в структуре исследуемой молекулы содержатся пяти-членный гетероцикл с одним атомом кислорода, двойные связи, два атома кислорода, фурановый цикл, а сама молекула состоит только из углерода, водорода и кислорода. В то же время с большим основанием можно утверждать, что эта

Рис. 8. Структуры наиболее близких кандидатов для идентификации исследуемого вещества и их масс-спектры

молекула не содержит ароматических колец, не является стероидом, и в ней нет связей углерод — азот.

Рассмотрев все вышеизложенное, мы пришли к выводу, что наиболее вероятно искомое вещество является одним из изомеров фурфурилового спирта.

Такие выводы в целом не противоречат результатам высокоэффективной хроматографии и Уф-спектрометрии. На рис. 8 показаны структуры наиболее близких кандидатов для идентификации и их масс-спектры.

Дополнительным подтверждением правильности идентификации служит наличие в пиве веществ, сходных по строению исследуемому соединению. Ближайшим аналогом этого соединения является мальтол, который также был определен в образцах пива методом ГХ-МС.

Результаты исследования пива методами высокоэффективной жидкостной хроматографии, УФ-спектрометрии и хромато-масс-спектрометрии показали присутствие во всех образцах пива вещества со временем удерживания, близким бензоату натрия, которое может послужить причиной получения оши-

бочных результатов по определению его в пиве. Это вещество имеет УФ-спектр, масс-спектр и время удерживания в методах ВЭЖХ и ГХ-МС, отличные от бен-зоата натрия. Это вещество присутствует во всех проанализированных образцах пива различных производителей и является естественным характерным компонентом этого напитка.

Проведен первый этап идентификации рассматриваемого вещества, которое по результатам отнесено к классу замещенных фуранов.

С учетом полученных результатов можно утверждать, что для исследования пива на наличие бензоата натрия необходимо внести изменения в действующий ГОСТ 30059-93 «Напитки безалкогольные. Методы определения аспар-тама, сахарина, кофеина и бензоата натрия».

ЛИТЕРАТУРА

1. Нужный В.П. Пиво: химический состав, пищевая ценность, биологическое действие и по-требление//Вопросы наркологии. 1997.№ 4. С. 69-76.

2. Cataldi T.R.I., Centonze D., Desimoni E. Sensitive Determination of Ethanol in Low-

Alcohol Samples by Ion-Exclusion Chromatography with EC Detection Using a Ruthenium-Based Inorganic Film Electrode//FOOD CHEMISTRY, 1996. Vol 55. Iss 1. PP. 17-21.

3. Dibenedetto L.T., Alexander P.W., Hibbert D.B. Portable Battery-Powered Flow-Injection Analyzer for Volatile Alcohols Using Semiconductor Gas Sensors//ANALYTICA CHIMICA ACTA. 1996. Vol 321. Iss 1. PP. 61-67.

4. Mcgarrity M., Garcia C., Hurst L., Lee J., LynessA., Munar M., Penarski J., Sakuma S., Shamaila M., Murphey J. Beer Volatiles by Headspace Gas-Chromatography//JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF BREWING CHEMISTS. 1997. Vol 55. Iss 4. PP. 193-196.

5. Scarlata C.J, Ebeler S.E. Headspace Solid-Phase Microextraction for the Analysis of Dimethyl Sulfide in Beer//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. 47 (7). 2505-2508.

6. Hill P.G, Smith R.M. Determination of sulphur compounds in beer using headspace solid-phase microextraction and gas chromatographic analysis with pulsed flame photometric detection// J. Chromatogr. A 2000. 872: 203-13.

7. Perpete P., Collin S. Contribution of 3-Me-thylthiopropionaldehyde to the Worty Flavor of Alcohol-Free Beers//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. 47 (6). 2374-2378.

8. Kaneda H, TakashioM, Osawa T., Kawakishi S, Tamaki T. Behavior of Sulfites During Fermentation and Storage of Beer//JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF BREWING CHEMISTS. 1996. Vol 54. Iss 2. PP. 115-120.

ПИВО U НАПИТКИ

' 1 •2003

20

9. Jelen H.H., Wlazly K, Wasowicz E, Kaminski E. Solid-Phase Microextraction for the Analysis of Some Alcohols and Esters in Beer: Comparison with Static Headspace Method//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1998. 46 (4). 1469-1473.

10. Mills E.N.C., Kauffman J.A, Morgan M.R.A., Field J.M., Hejgaard J., Nakajima S., Hagiwara, Y., Hagiwara, H, Shibamoto, T. Effect of the Antioxidant 2''-O-Glycosylisovitexin from Young Green Barley Leaves on Acetaldehyde Formaton in Beer Stored at 50 C for 90 Days// Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1998. 46 (4). 1529-1531.

11. Gordin A, Amirav A. SnifProbe: new method and device for vapor and gas sampling// J. Chromatogr. A. 2000. 903. 155-72.

12. Van Lierop B.H., Nootenboom H. Gas-liquid chromatographic-mass fragmentographic determination of low levels of diethylcarbonate in beverages//J.Assoc.Off Anal.Chem. 1979. 62: 253-6.

13. Stevens J.F., Taylor A.W., Clawson J.E., Deinzer M.L. Fate of Xanthohumol and Related Prenylflavonoids from Hops to Beer//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. 47 (6). 2421-2428.

14. Izquierdo-Pulido M., Hernandez-Jover T., Marine-Font A., Vidal-Carou M.C. Biogenic Amines in European Beers//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1996. 44 (10). 3159-3163.

15. Busto O., Guasch J., Borrull F. Improvement of a Solid-Phase Extraction Method for Determining Biogenic-Amines in Wines// JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A. 1995. Vol 718. Iss 2. PP 309-317.

16. Sanchez F.G., Diaz A.N., Lovillo J., Feria L.S. Alpha-Cyclodextrin as a Restricted Access Mobile-Phase for Reversed-Phase Liquid-Chromatography with Fluorometric Detection of Phenolic-Compounds//ANALYTICA CHIMICA ACTA. 1996. Vol 328. Iss 1. PP. 73-79.

17. Maillard M.N., Soum M.H., Boivin P., Berset C. Antioxidant Activity of Barley and Malt— Relationship with Phenolic Content// FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY-LEBENSMITTEL-WISSENSCHAFT & TECHNOLOGIE. 1996. Vol 29. Iss 3. PP. 238-244.

18. Mcmurrough I., Madigan D, Donnelly D, Hurley J., Doyle A.M., Hennigan G., Mcnulty N., Smyth M.R. Control of Ferulic Acid and 4-Vinyl Guaiacol in Brewing//JOURNAL OF THE INSTITUTE OF BREWING. 1996. Vol 102. Iss 5. PP. 327-332.

19. Mcmurrough I., Madigan D., Smyth M.R. Semipreparative Chromatographic Procedure for the Isolation of Dimeric and Trimeric Pro-anthocyanidins from Barley// JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY. 1996.Vol 44. Iss 7. PP. 1731-1735.

20. Klampfl C.W. Analysis of Organic Acids and Inorganic Anions in Different Types of Beer Using Capillary Zone Electrophoresis, Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1999. 47 (3). 987-990.

21. Fernandes S.M.V., RangelA.O.S.S., Lima J.L.F.C. Flow Injection Determination of Sodium, Potassium, Calcium, and Magnesium in Beer by Flame Emission and Atomic Absorption Spectrometry//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1997. 45 (4). 1269-1272.

22. Ekborgott K.H., Armstrong D.W. Evaluation of the Concentration and Enantiomeric Purity of Selected Free Amino-Acids in Fermented Malt Beverages (Beers)// CHIRALITY. 1996. Vol 8. Iss 1. PP. 49-57.

23. Gautschi M., Schmid J.P., Peppard T.L., Ryan T.P., Tuorto R.M., Yang X. Chemical Characterization of Diketopiperazines in Beer// Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1997. 45 (8). 3183-3189.

24. Mcmurrough I., Madigan D., Smyth M.R. Semipreparative Chromatographic Procedure for the Isolation of Dimeric and Trimeric Pro-anthocyanidins from Barley//JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY. 1996. Vol 44. Iss 7. РР. 1731-1735.

25. Cheng T.M.H., Malawer E.G. Confirmation by Pyrolysis-Gas Chromatography of the Absence of Polyvinylpyrrolidone in Beer Treated with Cross-Linked Polyvinylpyrrolidone//JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF BREWING CHEMISTS. 1996. Vol 54. Iss 2. РР. 85-90.

26. Izawa M., Takashio M., Tamaki T. Determination of High-Molecular-Weight Beta-Glucan in Wort and Beer Using a Postcolumn Calcofluor Flow-Injection-Analysis (FIA)//JOURNAL OF THE INSTITUTE OF BREWING. 1996. Vol 102. Iss 3. РР. 183-189.

27. Ishibashi Y., Terano Y., Fukui N., Honbou N., Kakui T., Kawasaki S., Nakatani K. Development of a New Method for Determining Beer Foam and Haze Proteins by Using the Immunochemical Method ELISA //JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF BREWING CHEMISTS. 1996. Vol 54. Iss 3. РР. 177-182.

28. Gloria M.B.A., Barbour J.F., Scanlan R.A. N-Nitrosodimethylamine in Brazilian, U.S. Domestic, and U.S. Imported Beers//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1997. 45 (3). 814-816.

29. Sen N.P., Seaman S.W., Bergeron C, Brou-sseau R. Trends in the Levels of N-Nitro-sodimethylamine in Canadian and Imported Beers//Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1996. 44 (6). 1498-1501.

30. Volmer DA, Lay J.O., Billedeau S.M., VollmerD.L. Detection and Confirmation of N-Nitro-sodialkylamines Using Liquid-Chromatography Electrospray-Ionization Coupled Online with a Photolysis Reactor//ANALYTICAL CHEMISTRY. 1996. Vol 68. Iss 3. РР. 546-552.

31. Scott P.M. Mycotoxins Transmitted into Beer from Contaminated Grains During Brewing// JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL. 1996. Vol 79. Iss 4. РР. 875-882.

32. Scott P.M., Lawrence G.A. Analysis of Beer for Fumonisins// JOURNAL OF FOOD PROTECTION. 1995. Vol 58. Iss 12. РР 1379-1382.

33. Гратцфилд-Хьюзген А, Шустер Р. Анализ пищевых продуктов с помощью высокоэффективной газовой хроматографии/Пер. Б.П. Лапина Hewlett-Packard, 1996.

34. ГОСТ Р 51 174-98 «Пиво. Общие технические условия».

35. ГОСТ 30059-93 «Напитки безалкогольные. Методы определения аспартама, сахарина, кофеина и бензоата натрия».

36. Бейнон Дж. Масс-спектрометрия и ее применение в органической химии. — М.: Мир. 1964.

37. Biemann K. Mass Spectrometry McGray-Hill. — New-York, 1962.

38. Будзикевич Г., Джерасси К., Уильяме Д. Интерпретация масс-спектров органических соединений. — М.: Мир, 1968.

39. Полякова А.А., Хмельницкий Р.А. Масс-спек-трометрия в органической химии. — Л.: Химия, 1972.

40. Вульфсон Н.С., Заикин В.Г., Микая А.И. Масс-спектрометрия органических соединений. — М.: Химия, 1986.

41. Карасек Ф, Клемент Р. Введение в масс-спектрометрию. — М.: Мир, 1993.

1•2003

21