Антивирусная активность рекомбинантного интерферона альфа-2b в комбинации с некоторыми антиоксидантами

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Антивирусная активность рекомбинантного интерферона альфа-2Ъ в комбинации с некоторыми антиоксидантами

А. Н. ВАСИЛЬЕВ1, П. Г ДЕРЯБИН2, Г А. ГАЛЕГОВ2

' Институт доклинической и клинической экспертизы лекарственных средств Минздравсоцразвития России, Москва 2 Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН, Москва

Antiviral Activity of Recombinant Interferon-a-2b in Combination with Certain Antioxidant

A. N. VASILEV, P. G. DERYABIN, G. A. GALEGOV

Institute for Preclinical and Clinical Examination of Drugs, Moscow D. I. Ivanovsky Research Institute of Virology, Moscow

Изучена in vitro активность интерферона альфа-2Ъ в комбинации с различными антиоксидантами в отношении вируса гриппа и вируса простого герпеса. Использовались эталонные штаммы и клинический изолят вируса простого герпеса , выделенный от больного и обладающий резистентностью к ацикловиру. Установлено, что антиоксиданты альфа-токоферола ацетат (витамин Е), унитиол и аскорбиновая кислота оказывают выраженное противогриппозное и противогерпетиче-ское действие в отношении вируса гриппа A/H5N1 и вариантов вируса простого герпеса in vitro. Они защищали до 100% клеточного монослоя от цитопатического действия вируса. Растворы таурина не проявляли противовирусной активности, вне зависимости от заражающей дозы. Комбинации интерферона альфа-2Ъ с альфа-токоферола ацетатом (витамин Е), унитиолом и аскорбиновой кислотой обладали явно выраженным синергидным эффектом: противовирусная активность интерферона увеличивалась в несколько раз. Противогриппозная активность интерферона альфа-2Ъ в присутствии различных концентраций таурина не изменялась.

Ключевые слова: рекомбинантный интерферон альфа-2Ь, альфа-токоферола ацетат, унитиол, аскорбиновая кислота, таурин, противовирусная активность in vitro, комбинации интерферона альфа-2Ь с антиоксидантами.

Ф- -Ф-

In vitro activity of interferon-a-2b in combination with various antioxidants against the influenza virus and Herpes simplex was studied. The standard strains and a clinical strain of Herpes simplex isolated from a patient with resistance to acyclovir were used.

The in vitro studie showed that antioxidants, such as alpho-tocoferol acetate (vitamin E), Unithiol and ascorbic acid had a significant antiinfluenzae and antiherpetic action on the influenza virus A/H5N1 and Herpes simplex variants. They protected up to 100% of the cell monolayer from the virus cytopathic effect. The taurin solutions had no antiviral activity irrespective of the infection dose. Combinations of interferon-a-2b with alpha-tocopherol acetate (vitamin E), Unithiol or ascorbic acid showed a significant synergistic effect: the antiviral activity of interferon increased several times. The antiinfluenza activity of interferon-a-2b in the presence of various concentrations of taurin did not change.

Key words: recombinant interferon-a-2b, alfa-tocopherol acetate, unithiol, ascorbinic acid, taurine, in vitro antiviral activity, inter-feron-a-2b combinations with antioxidants.

Введение

Проблема терапии наиболее распространённых и социально значимых вирусныгх инфекций — ОРВИ и инфекций вируса семейства герпеса крайне актуальна в настоящий момент, поскольку именно эти инфекции относятся к самым распространённым вирусным инфекциям среди населения: так, местные проявления герпетической или гриппозной инфекции встречаются практически у каждого человека ежегодно [1—3]. Наличие большого количества специфических противовирус-

© Коллектив авторов, 2011

Адрес для корреспонденции: 123436, Москва, ул. Щукинская, д. 6. ИДКЭЛС

ных препаратов проблему полностью не решает, так как довольно часто имеет место инфицирование вирусами с устойчивостью к специфическим лекарственным препаратам. Следует также отметить тот факт, что специфические противогерпе-тические препараты, проявляя высокую активность при купировании проявлений инфекции, недостаточно эффективны в предупреждении возникновения рецидивов [4, 5].

Сложности при идентификации возбудителя, изменчивость вирусов и формирование устойчивости их к химиопрепаратам требуют применения при терапии заболеваний универсальных противовирусных средств, обладающих активностью в отношении широкого спектра вирусов.

-е-

Taкими свойствами обладает интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный — аналог эндогенного альфа-интерферон (ИФН) человека. Интерферон альфа^ обладает противовирусными, иммуномодулирующими и антипролифера-тивными свойствами, а также антимикробной активностью за счёт способности стимулировать систему фагоцитов. Интерферон альфа^ является универсальным противовирусным средством, проявляя активность в отношении широкого спектра вирусов.

Не вызывает сомнения факт участия антиоксидантов в регуляции клеточного иммунитета. Внутриклеточный окислительно-восстанови-тельный баланс является регуляторным фактором в процессах T-клеточной активации, секреции лимфокинов макрофагами, а также клеточной гибели при апоптозе. Выявлено стимулирующее действие антиоксидантов на фагоцитирующую активность макрофагов. Антиоксиданты защищают T-клетки от гибели по апоптотическому типу под воздействием фактора некроза опухоли (ФНО). Показано, что антиоксиданты обладают противовирусной активностью in vitro и in vivo: при их использовании наблюдается торможение развития вирусной инфекции [6—8]. Показано [3] показано, что антиоксиданты способны влиять на функционирование и активность системы ИФН в организме. В работах [У, 9, l0] показано наличие выраженного синергидного эффекта комбинации интерферона альфа-2b и антиоксидантов in vitro и in vivo: в присутствии антиоксидантов специфическая противовирусная активность интерферона увеличивается в несколько раз, что позволяет существенно повысить эффективность терапии и снизить возможность проявления побочных эффектов.

Цель настоящей работы — изучение in vitro противовирусной активности интерферона альфа^ в сочетании с различными антиоксидантами в отношении вируса гриппа и вируса простого герпеса (использовались эталонные штаммы и клинический изолят вируса простого герпеса, выделенный от больного и обладающий резистентностью к ацикловиру).

Материал и методы

Вирусы. Вирус гриппа А H5Nl. Штамм депонирован в коллекции вирусов НИИ Вирусологии им. Д.И. Ивановского PАMH. Инфекционный титр вируса в культуре клеток MRC5, по нашим данным, составил 5,5—6,0 lgTH3,5o. Вирус простого герпеса ВПГ-1/Л2 тип l, штамм Л2 и вирус простого герпеса ВПГ-1/^+) тип l, штамм (F+). Штаммы депонированы в коллекции вирусов НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского PАMH. Инфекционный титр вирусов в культуре клеток Vero, по нашим данным, составил 6,0—б,5 lg TЦИД5o/мл.

ВПГ-l изолят Avd. Вирус выделен в 2006 году от больного рецидивирующим ВПГ по стандартной методике [ll]. По антигенной структуре, по данным MФА, также по наличию специфического цитопатического эффекта в культуре клеток

Vero (образование синцитиев) вирус подобен ВПГ-1. ИД50 ацикловира 12,5 мкг/мл, ЭДШ — 25 мкг/мл. Изолят относится к ацикловирорезистентным штаммам.

Культура клеток. Исследования проводили с использованием культуры клеток лёгкого эмбриона человека MRC5, культуры клеток почки зелёной мартышки Vero и культуры клеток почки эмбриона свиньи СПЭВ. Культуры получены из лаборатории культур тканей НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского. Клетки выращивали в виде монослоя в 48-луночных планшетах при 37°С в атмосфере 5% СО2 с использованием среды Игла МЕМ с добавлением антибиотиков (100 ед/мл пенициллина и стрептомицина 50 мкг/мл), глутамина 300 мкг/мл и 10% сыворотки крови эмбрионов коров (ростовая среда). В качестве поддерживающей использовали среду Игла с добавлением антибиотиков (100 ед/мл пенициллина и стрептомицина 50 мкг/мл), глутамина — 300 мкг/мл и 2% инактивированной при 56°С сыворотки крови эмбрионов коров.

Препараты. В работе использовались следующие препараты: интерферон альфа-2Ъ человеческий рекомбинантный, Р N003726/01 (ООО «Фармапарк», Россия) с активностью 4х108 МЕ/мл; унитиол (димеркаптопропансульфонат натрия) Р N003207/01 (ФГУП «Технолог СКТБ», Россия); таурин (аминоэтансульфоновая кислота), Р N000151/01 (ОАО «Фармстандарт-Лексредства», Россия); аскорбиновая кислота, Р N002030/01 (ООО «Полисинтез», Россия); витамин E (dl — альфа-токоферола ацетат, тип CWS/F500 (водорастворимая форма), в концентрации 500 МЕ/г.

В качестве референс-препарата для интерферона альфа-2Ъ человеческого рекомбинантного использовали международный стандарт активности интерферона (WHO International Standard Interferon alpha 2b, NIBSC code: 95/566).

Для тестов из вышеперечисленных препаратов готовили растворы, используя в качестве растворителя поддерживающую среду. Интерферон альфа-2Ъ изучали в концентрациях 1000, 2000, 5000 и 10000 МЕ/мл; унитиол — в концентрациях 25, 12,5, 6,25, 5 и 3,125 мг/мл, таурин в концентрациях 250, 125, 62,5 и 31,1 мкг/мл. Растворы аскорбиновой кислоты в концентрациях 100, 50, 25 и 12,5 мкг/мл, корректировали по рН до значения 5,5 при помощи 2% раствора гидрокарбоната натрия. Альфа-токоферола ацетат (витамин Е) использовали в виде растворов в концентрациях 1,0 мкг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,05 и 0,01 мкг/мл.

Перед определением противовирусной активности была проведена оценка цитотоксичности исследуемых растворов в перечисленных концентрациях по стандартной методике: исследуя морфологию и жизнеспособность клеток в монослое после 72 часов инкубации с растворами препаратов. При отсутствии изменений качества клеток в монослое растворы препаратов считали не цитотоксичными.

Изучение противовирусной активности препаратов и их комбинаций. Оценку противовирусной активности препаратов и их комбинаций проводили в соответствии с рекомендациями [12—14].

Для оценки противовирусного действия препаратов или их комбинаций в отношении вируса гриппа A/H5N1 в работе использовали 2-суточный монослой культуры клеток MRC5, выращенный в стандартных 48-луночных планшетах. Полностью сформированный монослой клеток заражали вирусом гриппа A/H5N1 с инфекционной активностью 1 ТЦО^/лунку в объёме 25 мкл на лунку. После сорбции в течение 1 часа вируссодержащий материал удаляли, монослой клеток отмывали от неадсорбировавшегося вируса средой Игла МЕМ и вносили растворы препаратов или их комбинаций, приготовленные на поддерживающей среде, как описано ранее, в количестве 200 мкл. Планшеты инкубировали в течение 96 часов в атмосфере 5% СО2 при температуре 37°С. Для подсчёта количества жизнеспособных клеток использовали метод окрашивания 0,1% спиртовым раствором метиленового синего. Противовирусную активность препаратов и их комбина-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ций оценивали по их влиянию на жизнеспособность инфицированных клеток в сравнении с культурой инфицированных клеток без растворов препаратов. Учёт воздействия веществ на процессы репликации вируса проводили только в случае, если в интактных клетках отсутствовала клеточная дегенерация и при развитии практически 100% цитопатического действия вируса в контрольных инфицированных клетках.

Изучение противогерпесвирусной активности препаратов как отдельно взятых, так и в комбинациях, проводили в культуре клеток Vero E6 в отношении трёх различных вариантов вируса простого герпеса по общепринятому методу [12, 13]. Культуру клеток выращивали в стандартных 96-луночных планшетах в течение 2—3 суток. После формирования плотного монослоя среду роста удаляли, клетки заражали разведением вируса, соответствующим 100 ТЦИД50/клетку. Планшеты инкубировали в течение 60 мин в атмосфере 5% СО2 при температуре 37°С, затем инокулюм удаляли и добавляли последовательные двукратные разведения растворов изучаемых препаратов на поддерживающей среде, каждый препарат исследовали в четырёх повторах. Планшеты инкубировали в атмосфере 5% СО2 при температуре 37°С, через 48 часов проводили оценку цитопатического действия вируса и оценку ингибирующего действия веществ на развитие вирусиндуци-рованного ЦПД. За 100% поражение принимали полное развитие вирусиндуцированного ЦПД на поверхности клеточного монослоя. Концентрацию вещества, обеспечивающую защиту клеточного монослоя от развития вирусиндуцированного ЦПД в 50% лунок, обозначали как ИД50. Учёт воздействия веществ на репликацию вируса в культуре клеток проводили только в случае отсутствия клеточной дегенерации в лунках контроля качества клеточного монослоя и при развитии 100% поражения клеточного монослоя в контрольных лунках, соответствующих инфекционной дозе вируса 100 ТЦИД50/клетку.

Статистическую обработку результатов проводили по методу Спирмена-Кербера, используя формулу:

Log2HMso = Dmax + (d/n) X [p - (n/2)]

где Dmax — двоичный логарифм шага разведения, выше которого произошла 100 % защита;

d — двоичный логарифм шага разведения (1,0); n — число лунок на каждую дозу (4); р — число лунок, давших защиту в Dmax и последующих разведениях.

Для оценки эффективности комбинации различных препаратов в отношении вируса простого герпеса использовали понятие фракционного ингибирующего коэффициента (ФИК), значение которого вычисляли по формуле:

ФИК = -

сумма ИД50

сумма ИД50

Значение ФИК 0,5 оценивали как умеренный синергизм соединений, при ФИК, равном 1,0—1,5 — как аддитивный эффект комбинации, при ФИК более 2 — как антагонизм соединений [15].

Результаты исследований

Результаты оценки противовирусного действия препаратов и их комбинаций в отношении вируса гриппа А/Н5Ш представлены в табл. 1 и 2. Максимальный противовирусный эффект препаратов наблюдали при заражении культур клеток вирусом гриппа А/Н5М1 с инфекционной множественностью 0,1 ТЦД50/лунку. При этом в контрольных лунках показатель жизнеспособности клеток на четвертые сутки после заражения не превышал 9%, в то время как в присутствии раз-

m

U

си

*

£

Ф

*

Ф

а

т

I

<

s

н

с

03

с

с

5

а

го

6 а

S

ш

S

S

X

ф

3

о

X

н

о

ш

ш

о

н

го

а

го

с

ф

а

с

J3

н

U

о

X

ш

S

н

*

го

го

X

U

>

а

S

ш

о

ш

S

н

о

а

ГО

I

%

ро

тр

рф ф

в— о

те W

3 S

^ н

а

CD

ср

ср

о

-О-

Таблица 2. Противовирусная активность комбинаций препаратов в отношении вируса гриппа птиц А H5N1 с множественностью заражения 1,0 ТЦД50/лунку в культуре клеток MRC5

Препарат Концентрация Количество жизнеспособных клеток в монослое на 4-е сутки после заражения, %

концентрация интерферона альфа-2Ь, МЕ/мл контроль 0 1000 2000 5000 10000 дозы вируса контроль клеток

Альфа-токоферола ацетат 1,0 мкг/мл 25 45 55 65 70 0 100

Tay^H 250 мкг/мл 0 10 10 30 40 0 100

Унитиол 3,125 мг/мл 45 55 65 70 85 0 100

Аскорбиновая кислота 100 мкг/мл 20 35 45 55 65 0 100

Контроль — 0 20 30 40 45 0 100

Таблица 3. Цитотоксическое действие и антигерпесвирусная активность изучаемых препаратов

Препарат ИД50

Вариант ВПГ

Л2 F(+) Avd

Унитиол, мкг/мл 297,30 594,60 353,55

Таурин, мкг/мл 0* 0* 0*

Интерферон альфа-2Ъ, МЕ/мл 2973,01 5946,03 2500,00

Аскорбиновая кислота, мкг/мл 74,32 88,38 62,5

Альфа-токоферола ацетат, мкг/мл 1,3 2,2 1,5

Примечание. 0* - отсутствие противовирусной активности соединения в выбранном диапазоне концентраций без прямого цитотоксического действия на клетки.

личных концентраций препаратов наблюдалось увеличение жизнеспособности клеток от 10 до 100% (табл. 1).

Так, например интерферон альфа-2Ъ защищал монослой культуры клеток в концентрации 2000 или 10000 Ме/мл на 85 и 90% соответственно. Унитиол в концентрации от 3,125 до 25 мг/мл защищал культуру клеток от 45 до 100% соответственно. Высокой противовирусной активностью обладали растворы аскорбиновой кислоты: разные концентрации от 12,5 мкг/мл до 100 мкг/мл приводили к защите от 70 до 95% клеток соответственно. Раствор альфа-токоферола ацетата в концентрации 1,0 мкг/мл приводил к 100% защите клеточного монослоя от цитопатического действия вируса, меньшие концентрации защищали культуру клеток от 75 до 90%. Таурин в концентрации от 31,1 до 250 мкг/мл не обладал сколько-нибудь существенной противовирусной активностью, оцениваемой по увеличению количества жизнеспособных клеток.

Изучение противовирусной активности комбинаций интерферона альфа-2Ъ с другими препаратами — альфа-токоферола ацетатом (витамин Е), таурином, унитиолом и аскорбиновой кислотой в отношении вируса гриппа A/H5N1 проводили при инфекционной множественности заражения вируса 1,0 ТЦД50/лунку. Было

установлено, что использование интерферона альфа-2Ъ в концентрациях 1000 и 10000 МЕ/мл в комбинации с раствором альфа-токоферола ацетата, унитиола или аскорбиновой кислоты позволило повысить противовирусную активность интерферона в несколько раз (см. табл. 2), то есть наблюдался синергидный эффект при комбини-

рованном использовании препаратов. В комбинации интерферона альфа-2Ъ и таурина не наблюдали не только синергидного эффекта комбинации, но и аддитивного действия: противовирусная активность интерферона аль-фа-2Ъ как в комбинации с таурином так и без него, была одной и той же (см. табл. 2).

Данные анализа противогерпетической активности препаратов представлены в табл. 3. Проанализировав результаты изучения противовирусной активности препаратов в отношении вариантов вируса простого герпеса, в том числе вариантов вируса с лекарственной устойчивостью к ацикловиру (клинический изолят Дуё), можно сделать вывод о том, что унитиол, аскорбиновая кислота и альфа-токоферола ацетат обладают прямой противогерпесвирусной активностью, в отличие от таурина, который такими свойстваами не обладает в исследуемом диапазоне концентраций.

Изучая противовирусную активность комбинаций интерферона альфа-2Ъ с альфа-токоферола ацетатом, таурином, унитиолом и аскорбиновой кислотой в отношении вируса простого герпеса, было установлено, что использование интерферона альфа-2Ъ в концентрациях 1000 и 10000 МЕ/мл в комбинации с раствором альфа-токоферола ацетата, унитиолом или аскорбиновой кислотой позволяет повысить противовирусную активность интерферона. При использовании комбинации интерферона альфа-2Ъ и таурина не наблюдали не только синергидного эффекта, но и аддитивного действия: интерферон альфа-2Ъ, как в комбинации с таурином так и без него обладал одной и той же противовирусной активностью.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Проанализировав полученною результатні, мы пришли к заключению, что антиоксиданты унити-ол и аскорбиновая кислота не только обладают прямой противогерпесвирусной активностью в культуре клеток, но и составляют эффективные комбинации с интерфероном альфа-2Ъ, причем при комбинировании унитиола или аскорбиновой кислоты с интерфероном альфа-2Ъ наблюдается выраженный синергидный эффект: в присутствии указанных соединений концентрация интерферона альфа-2Ъ, которая предотвращает развитие ви-русиндуцированного цитопатического действия в 50% лунок, снижается в несколько раз в зависимости от концентрации антиокидантов. Например, при комбинировании интерферона альфа-2Ъ с унитиолом удалось добиться снижения концентрации в 5 с лишним раз, при этом значение ФИК составило в среднем 0,3, что свидетельствует о выраженном синергизме соединений. Для сравнения при комбинировании интерферона альфа-2Ъ и аскорбиновой кислоты ИД50 интерферона альфа-2Ъ снижается практически в 6 раз, а значение ФИК в среднем составляет 0,23, что показывает выраженный синергизм соединения. Относительно активности комбинации интерферона альфа-2Ъ и таурина не выявлено влияния присутствия таурина на специфическую противогерпесвирусную активность интерферона альфа-2Ъ: присутствие различных концентраций таурина не оказывало влияния на специфическую противогерпетическую активность интерферона альфа-2Ъ.

Полученные данные согласуются с данными литературы об антиокислительной активности соединений: альфа-токоферола ацетат является одним из самых сильных природных антиоксидантов, аскорбиновая кислота, являясь одним из самых сильных водорастворимых антиоксидантов, способна блокировать свободные радикалы и предотвращать дальнейшее развитие ПОЛ. Антиокислительная активность унитиола несколько слабее, механизм действия унитиола связан с его способностью блокировать перекиси, образующиеся в процессе ПОЛ, а также связывать ионы металлов переменной валентности подобно комплексону. Относительно антиокислительной активности таурина и механизме его действия как антиоксиданта в литературе не найдено достаточно объективных данных.

Выводы

1. Установлено, что используемые в работе антиоксиданты альфа-токоферола ацетат (витамин E), унитиол и аскорбиновая кислота оказывают выраженное противогриппозное и противо-герпетическое действие в отношении вируса гриппа А/Н5Ш и вариантов вируса простого герпеса in vitro. Растворы препаратов в различных концентрациях позволяют защитить до 100% клеточного монослоя от цитопатического действия вируса. Растворы таурина не проявляли противовирусной активности ни при множественности заражения 1,0 TЦД50/лyнкy, так и при снижении инфекционности вируса до 0,1 TЦД50/лyнкy.

2. Комбинация интерферона альфа^ с альфа-токоферола ацетатом, унитиолом или аскорбиновой кислотой обладала явно выраженным синергидным эффектом: при совместном использовании противовирусная активность интерферона увеличивалась в несколько раз. В отличие от вышеперечисленных сильных антиоксидантов таурин в сочетании с интерфероном альфа^ не оказывал синергидного влияния на противовирусную активность последнего: противогриппозная активность интерферона не изменялась в присутствии различных концентраций таурина.

3. Полученные данные свидетельствуют о высокой антиокислительной активности альфа-токоферола ацетата, унитиола и аскорбиновой кислоты, что согласуется с данными литературы, где подробно описан механизм антиокислитель-ного действия этих веществ. Объективных данных об антиокислительной активности таурина и механизмах его антиокислительного действия, как в отечественной, так и в зарубежной литературе не найдено, что подтверждается данными об отсутствии его противовирусной активности в используемой модели вирусной инфекции.

4. Результаты проведённого исследования дают основание рекомендовать включение препаратов интерферона альфа^ человеческого рекомбинантного в комбинации с высокоактивными антиоксидантами альфа-токоферола ацетатом, аскорбиновой кислотой или унитиолом в схему лекарственной терапии гриппозной и герпетической инфекции.

ЛИТЕРАТУРА

1. Львов Н. Д., Самойлович Е. О., Баринский И. Ф. Комбинированная терапия герпесвирусной инфекции, экспериментальные и клинические данные. Вопросы вирусол 1992; 1: 8—16.

2. Никонова А. П., Асцатурова О. Р. Генитальный герпес и беременность. Инфекции и антимикроб тер 1999; 3: 77—80.

3. Онищенко Г. Г. Ситуация по заболеваемости гриппом в мире и в Российской Федерации. Совершенствование надзора и контроля за гриппом при подготовке к возможной пандемии. Документы Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

4. Галегов Г. А., Андронова В. Л., Леонтьева Н. А. и др. Этиотропная лекарственная терапия вирусных инфекций. Вопросы вирусол 2004; 3: 35—40.

5. Галегов Г. А. Лекарственная терапия герпес-вирусной инфекции: фундаментальные аспекты и современные клинические достижения. Consilium Medicum 2002; 4: 5: 240—243.

6. Амвросьева Т. В., Вотяков В. И., Андреева О. Т. Дислепидемия, повышенное содержание в клетках липидов при экспериментальной герпесвирусной инфекции и их коррекция антивирусными химиопрепаратами. Вопросы вирусол 1992; 1: 61—64.

7. Васильев А. Н. Оценка влияния антиоксидантов на специфическую противовирусную активность интерферона альфа-2Ъ челове-

10,

11,

ческого рекомбинантного в отношении вируса простого герпеса в 12. культуре клеток. Антибиотики и химиотер 2001; 55: 7—8.

Красавина Б. С, Майчук Ю. Ф., Долгат Л. Д., Ромащенко А. Д. Влияние водорастворимого антиоксиданта оксипиридина-6 на интенсивность процессов перекисного окисления липидов мембран 13. тканей глаза при экспериментальном офтальмогерпесе. Бюлл эксп биол и мед 1982; 7: 731—740.

Темичева Е. В. Интерфероновый статус при рецидивирующем 14. герпесе гениталий и коррекция его нарушений: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. М.: 1989.

Темичева Е. В., Малиновская В. В., Манахова Л. С. и др. Вопросы вирусол 1986; 1: 12—18. 15.

Львов Н. Д., Андронова В. Л., Леонтьева Н. А., Галегов Г. А. Изоляция из клинического материала штаммов вируса герпеса простого, обладающих резистентностью к ацикловиру. Там же 1999; 6: 247—249.

Львов Д. К., Федякина И. Т., Щелканов М. Ю. и др. Действие ин ви-тро противовирусных препаратов на репродукцию высокопатогенных штаммов вируса гриппа A/H5N1, вызвавших эпизоотию среди домашних птиц летом 2005 г. Там же 2006: 2.

Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред Р. У. Хабриева, М.: 2005.

Федякина И. Т., Ленёва И. А., Ямникова С. С. и др. Чувствительность вирусов гриппа A /H5N1, изолированных от диких птиц на территории России, к арбидолу в культуре клеток MDCK. Вопросы вирусол 2005; 6: 22—25.

De Clercq E., Sakuma T., Baba M. et al. Antiviral activity of phospho-nylm ethoxy alkyl derivatives of purine and pyrimidines. Antiviral

Research 1987; 8: 5—6: 261—272.

-Q-