Неолимфогенез: морфометрическая характеристика постнатальных индуцированных лимфатических узлов

УДК 616-006

© Коллектив авторов, 2016

Ш.Х. Ганцев1, А.М. Ханов1, К.Ш. Ганцев1, А.И. Лебедева2, Р.А. Рустамханов2, Ш.Р. Кзыргалин2 НЕОЛИМФОГЕНЕЗ: МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСТНАТАЛЬНЫХ ИНДУЦИРОВАННЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ

'ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Уфа 2ФГБУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии» Минздрава России, г. Уфа

Неолимфогенез - широко обсуждаемая проблема в литературе. Изучение процессов образования новой лимфоидной ткани, способной вызывать специфический иммунный ответ, может оказаться прорывом в лечении злокачественных новообразований. Цель исследования - морфометрическая характеристика постнатальных лимфатических узлов, образованных в процессе неолимфогенеза, индуцированного опухолевым ростом. В исследовании представлены данные сравнительного морфометрического анализа постнатальных индуцированных, нативных и сторожевых лимфатических узлов в эксперименте. Первой группе животных (15 крыс) проводили перевивку опухолевого штамма саркомы М1 в правую боковую область живота. Вторая группа состояла из интактных животных (10 крыс). Изучались основные структурно-функциональные зоны подмышечных лимфатических узлов: толщина капсулы, краевого и промежуточного синусов, количество лимфатических фолликулов и средняя суммарная площадь кровеносных сосудов. Также были изучены ретикулиновые волокна лимфатических узлов. Исследование показало, что при схожести гистологической структуры имеются определенные значимые различия в строении постнатальных индуцированных лимфатических узлов.

Ключевые слова: опухоль, неолимфогенез, постнатальный индуцированный лимфатический узел.

Sh.Kh. Gantsev, A.M. Khanov, K.Sh. Gantsev, A.I. Lebedeva, R.A. Rustamkhanov, Sh.R. Kzyrgalin NEOLYMPHOGENESIS: MORPHOMETRIC CHARACTERISTICS OF POSTNATAL INDUCED LYMPH NODES

Neolymphogenesis is a widely discussed topic in the literature. The study of processes of development of a new lymphoid tissue, that can cause a specific immune response, can be a breakthrough in the treatment of malignancies. The purpose of research is a comparative morphometric characteristic of postnatal lymphatic nodes, formed in the process of neolymphogenesis, induced by tumor growth. The study presents the comparative morphometric analysis of induced post-natal, native and sentinel lymph nodes in the experiment. The first group of experimental animals (15 rats) received transplantable tumor Sarcoma M1 into right lateral abdominal area. The second group consisted of intact animals (10 rats). We studied the basic structural and functional areas of axillary lymph nodes: the thickness of the capsule, the thickness of the marginal sinus, intermediate sinus, the number of lymph follicles and the average total area of blood vessels. In addition, argyrophilic fibers of lymph nodes were examined. The study showed that in case of similarity of histological structure there are certain significant differences in the structure of postnatal induced lymph nodes.

Key words: tumor, neolymphogenesis, postnatal induced lymph node.

Лимфатическая система - это одна из важнейших и малоизученных систем организма человека и животных, что прежде всего объясняется ее тончайшим строением и труднодо-ступностью для изучения в эксперименте [1-8].

Лимфатическая система является составной частью сосудистой системы и представляет собой добавочное русло венозной системы, в тесной связи с которой она развивается и с которой имеет сходные черты строения [9]. Лимфатические узлы, расположенные по ходу лимфатических сосудов, вместе с ними составляют лимфатическую систему.

У млекопитающих, в том числе и у человека, число лимфатических узлов постоянное - 600-800 ед. Они закладываются внутриутробно и функционируют в течение всей жизни. Вследствие контакта с инфекционными или иными агентами с возрастом число функционирующих лимфатических узлов уменьшается до 300-600 ед. Снижение числа лимфатических узлов и их активности создает предпосылки к развитию различных заболеваний, в том числе и рака [10].

Неолимфогенез - широко обсуждаемая проблема в литературе [11,12]. Лимфоидные узелки являются прообразом формирующегося лимфоузла [11,12]. В свою очередь образование новых лимфоидных узелков следует рассматривать, как компенсаторную реакцию в восстановлении иммунной защиты, ослабленной на этапе постнатального онтогенеза.

Изучение процессов образования новой лимфоидной ткани, способной вызвать специфический иммунный ответ, может оказаться прорывом в лечении злокачественных новообразований [13].

Цель исследования - проведение сравнительной морфометрической характеристики постнатальных лимфатических узлов, образованных в процессе неолимфогенеза, индуцированного опухолевым ростом. Материал и методы Для моделирования неолимфогенеза (образования новых лимфатических узлов, индуцированных опухолевым ростом) и последующего изучения морфометрических показателей вновь образованных лимфатических узлов был

проведен эксперимент на 25 белых крысах-самцах линии «Wistar», весом 120-180 г.

Первой группе животных (15 крыс) проводили перевивку опухолевого штамма саркомы М1 в правую боковую область живота. Вторая группа (10 крыс) состояла из ин-тактных животных.

Все манипуляции, описываемые в эксперименте, проводили согласно международным этическим и научным стандартам планирования и выполнения исследований на животных.

Выведение животных из эксперимента и микрохирургическое препарирование подмышечных лимфатических узлов производили на 16-е сутки после перевивки опухоли, так как средняя продолжительность жизни крыс с перевитой опухолью саркомы М1 составляла от 16 до 28 дней [14]. Для эвтаназии крыс использовали ветеринарный препарат с анестезирующим и анальгезирующим эффектом - 2% раствор ксилазина гидрохлорида в летальной дозе 1 мл.

Выделяли правые подмышечные лимфатические узлы, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Изготавливали гистологические срезы толщиной 5-7 мкм на микротоме LEICA RM 2145 (Германия), окрашивали гематоксилином и эозином, им-прегнировали солями серебра по Футу. Для морфометрических исследований использовался микроскоп Leica DMD 108 со специализированным программным обеспечением управления настройками и захватом изображения и микроскоп AxioImager Z1, оснащенный фотонасадкой ProgRes C3 и программой анализа изображений Axiovision (C. Zeiss, Германия). Морфометрические исследования проводили по основным параметрам лимфатического узла: толщина капсулы, краевого и промежуточного синусов, количество лимфо-идных фолликулов, средняя суммарная площадь кровеносных сосудов. Полученные данные морфометрических исследований подвергались статистическому анализу.

Предварительный анализ выборок и групп состоял в оценках резко отличающихся значений по тесту Граббса, теста на нормальность распределения по методам Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка, тест Фишера на равенство дисперсий. Для выборок, которые не отличались по распределению от нормального и имели положительные тесты на равенство дисперсий, применяли параметрические методы. В отдельных случаях после параметрических расчетов анализ проверялся ранговыми методами для исключения возможных ошибок. Для сравнения двух выборок

(групп) использовали ^тест для независимых выборок с расчетом величины ^критерия и уровня его статистической значимости (р). При числе групп больше 2-х применяли од-нофакторный дисперсионный анализ с расчетом критерия Фишера и уровня его статистической значимости. Множественное сравнение средних проводили при помощи теста Тьюки для равных и неравных выборок.

В случае отсутствия условий для использования параметрических тестов применяли тест Манна-Уитни с расчетом критерия и и его статистической значимости. При наличии большего числа групп оценки проводили с помощью рангового дисперсионного анализа Краскела-Уоллеса. При множественном сравнении средних рангов учитывали поправку Бонферрони (0,05/п, где п - число групп). Критический уровень статистической значимости при сравнении 2-х групп принимался за 0,05.

Результаты и обсуждение

В подмышечной области у 9 из 15 крыс первой группы кроме обычных лимфатических узлов, описанных в нормальной анатомии крыс, со стороны опухоли были выявлены постнатальные лимфатические узлы (ПНИЛУ). Первичным критерием детекции послужило наличие только одного афферентного и одного эфферентного лимфатических сосудов. В контрольной группе у всех найденных лимфатических узлов в аналогичных областях количество проникающих в лимфатический узел афферентных лимфатических сосудов превышало количество эфферентных лимфатических сосудов в соотношении 3:1, 4:1 и 5:1. ПНИЛУ также имели визуально меньший диаметр в сравнении с лимфатическими узлами, которые принимались за лимфатические узлы «в норме». В группе крыс, у которых были обнаружены ПНИЛУ, в месте опухоли также наблюдались характерные «сторожевые» лимфатические узлы (СЛУ) большего диаметра, чем остальные.

ПНИЛУ (рис.1) имели округлую форму, снаружи были покрыты соединительнотканной капсулой, состоящей из зрелых коллагеновых волокон I типа, окрашивающихся при импрегнации солями серебра по Футу в коричневый цвет. От капсулы радиально отходят аргенто-фильные ретикулиновые волокна (рис. 2).

Толщина соединительнотканной капсулы ПНИЛУ составила 16,2±4,7 мкм. Между коллагеновыми волокнами определялись клетки фибробластического ряда - активные фибробласты и неактивные фиброциты. Фиб-робласты крупных размеров имеют вытяну-

тую веретеновидную или овальную формы, фиброциты более мелких размеров, уплощенные, располагаются между плотными колла-геновыми пучками.

Толщина краевого синуса ПНИЛУ составляла 13,5±5,3 мкм. В его просвете определялись лимфоциты. Ширина промежуточных синусов достигала 26,3±15,4 мкм. Корковое вещество было меньше по объему, чем в

СЛУ и НЛУ. Мозговые тяжи инфильтрированы лимфоцитами, макрофагами, сидерофага-ми, скоплениями эритроцитов.

В некоторых зонах отмечалась высокая доля форменных элементов крови - эритроцитов, которые выявлялись в различных морфо-функциональных состояниях - как в нормальном состоянии, так и в стадии деградации и лизиса. Вокруг них определялись сидерофаги.

а б в

Рис. 1. Постнатальный индуцированный лимфатический узел: а - обзорный снимок, х100; б - толщина капсулы, х400; в - измерение краевого синуса; х400. Окраска гематоксилином и эозином

а б в

Рис. 2. Визуализация ретикулярного каркаса лимфатического узла: а - постнатальный индуцированный лимфатический узел; б -нативный лимфатический узел; в - «сторожевой» лимфатический узел. Импрегнация солями серебра по Футу, х400

Корковое вещество содержало лимфатические узелки, распределенные крайне неравномерно. Они наблюдались в малом количестве, их число составляло 0,4±0,4 штуки в поле зрения. У некоторых имелся реактивный пролиферативный центр. Митотически делящихся клеток (фигур митоза) не обнаруживалось. Однако определялись клетки, находящиеся в 8-фазе клеточного цикла. Мантийная зона была расширена, что является свидетельством антигенной стимуляции.

Мякотные тяжи мозгового вещества были с высокой клеточной плотностью, представленной лимфоцитами, эритроцитами, макрофагами, ретикулоцитами. Среди всех перечисленных клеток доминировала лимфо-идно-клеточная реакция.

Средняя суммарная площадь кровеносных сосудов была большая и составила 7097,7±3661,8 мкм2. Просветы сосудов были несвободные. В них отмечался гемолимфос-таз. Основная масса кровеносных сосудов и синусов, содержащих эритроциты, располагалась в корковом веществе.

НЛУ, в отличие от ПНИЛУ, имели вытянутую бобовидную форму. Толщина соединительнотканной капсулы НЛУ составила 8,8±1,9 мкм. При импрегнации солями серебра по Футу обнаружено, что ретикулиновые волокна в НЛУ выявлялись в соединительнотканной капсуле, в мякотных тяжах вокруг сосудов, в строме коркового и мозгового вещества. Капсула была инфильтрирована клетками фибробластического ряда.

От капсулы внутрь узла радиально отходили аргентофильные трабекулы, инфильтрированные лимфоцитами, макрофагами, фибробластами. Признаков склеротических изменений не обнаруживалось.

На препаратах отчетливо выделялись корковый слой, паракортикальная зона и мозговой слой. В корковом плато обнаруживались вторичные лимфоидные фолликулы со светлым центром. Мантийный слой в сравнении с ПНИЛУ был шире. Количество фолликулов составляло 2,8±0,7 штуки в поле зрения. В светлом (реактивном) центре выявлялись в большом количестве митотически де-

лящиеся клетки. Толщина краевого синуса составляла 7,7±3,0 мкм. В просвете определялись малые лимфоциты. Толщина промежуточных синусов составляла 30,6±12,3 мкм. Промежуточные синусы были инфильтрированы лимфоцитами и макрофагами практически в равной степени, отмечался синус-лимфогистиоцитоз.

Мякотные тяжи паракортикальной зоны являлись продолжением лимфатических узелков корковой зоны, в которой обнаруживались лимфоциты, макрофаги и плазмоциты с доминированием плазмоцитов. Встречались сиде-рофаги. Средняя суммарная площадь кровеносных сосудов составляла 1949±1622,0 мкм2. Просветы сосудов были несвободные. В них отмечался гемолимфостаз. Наиболее крупные сосуды были расположены ближе к воротам узла. В кортикальной и паракортикальной зонах васкулярный рисунок был беднее.

СЛУ имели округлую форму. Толщина соединительнотканной капсулы - 9,5±2,3 мкм2. Капсула лимфоузла состояла из коллагеновых волокон I типа, окрашивающихся при импрегнации солями серебра по Футу в коричневый цвет, характерный для зрелой соединительной ткани. Среди коллагеновых волокон наблюдались клетки фибробластического ряда. Ретикулиновые аргентофильные волокна (коллаген III типа), как правило, характерны для незрелой соединительной ткани. Однако в зрелых лимфоузлах данный коллаген представлен в большом количестве, что является нормой. В СЛУ ретикулиновые волокна выявляются в строме коркового и мозгового вещества, вокруг кровеносных и лимфатических сосудов.

От капсулы внутрь узла радиально отходят трабекулы, инфильтрированные лимфоцитами, макрофагами, фибробластами. Также определяются раковые клетки - крупные округлые клетки с широким ободком цитоплазмы и полиморфными ядрами, содержащие эозинофильный, функционально активный эухроматин. В ядрах наблюдался развитый ядрышковый аппарат. Краевой синус имел толщину просвета 18,9±6,3 мкм. Просвет несвободный, в нем определялись лимфоциты, макрофаги, полиморфноядерные лимфоциты. В резко расширенных промежуточных синусах коркового слоя и мозговых синусах отмечалась лимфогистиоцитарная гиперплазия с доминированием макрофагов. Ширина промежуточных синусов достигала 47,3±12,6 мкм. Причем фигур митозов в ядрах макрофагов выявлено не было, следовательно, пополнение макрофагальных клеток происхо-

дило за счет костно-мозговых предшественников, т.е. реакция синусов классифицируется как синус-гистиоцитоз. Васкулярный рисунок был обеднен. Просвет имеющихся редких сосудов свободный. В нем определялись форменные элементы крови. Признаков стаза и тромбоза не было. Средняя суммарная площадь кровеносных сосудов достигала 658,3±617,9 мкм2. Распределение кровеносных сосудов было крайне неравномерным. В корковом веществе наблюдались лимфоидные фолликулы крупных размеров. Их численность достигала 1,7±0,6 в поле зрения. Они располагались в несколько слоев, а порой сливались друг с другом, образуя обширные поля. Выявлялись признаки фолликулярной гиперплазии. В лимфоидных фолликулах наблюдались пролиферативные центры и широкий мантийный слой, что свидетельствует о вторичной антигенной стимуляции. В проли-феративных центрах выявлялись признаки распада лимфоцитов и фагоцитоза их обломков макрофагами. Четкая идентификация коркового и паракортикального слоев была затруднена из-за высокой клеточной плотности лимфоцитами.

В мозговом веществе мякотные тяжи были инфильтрированы плазмоцитами, лимфоцитами, макрофагами, доминировала лим-фоплазмоцитарная реакция, а также отмечался синусный гистиоцитоз.

Таким образом, увеличение размеров СЛУ (по сравнению с НЛУ- и ПНИЛУ-образцами) происходило по типу смешанных вариантов реактивной гиперплазии за счет расширения синусов, увеличения количества и размеров фолликул.

Гистологическое строение ПНИЛУ имеет сходство с нативными лимфатическими узлами, но были обнаружены различия в фолликулярном аппарате, кровоснабжении, разграничении коркового и медуллярного слоев и капсуле. Полученные морфологические и морфометрические различия (см. таблицу) также позволяют предположить о различной функциональной активности исследованных лимфатических узлов.

Статистически значимые различия (р>0,05) в группах при сравнении морфометри-ческих показателей лимфатических узлов были найдены во всех исследуемых структурах.

Таким образом толщина капсулы у ПНИЛУ статистически значимо отличается от толщины капсулы у СЛУ и НЛУ (р=0,000117йМ). Значения толщины капсулы у НЛУ и СЛУ статистически значимо не отличаются.

Таблица

Сравнительная характеристика морфометрических па раметров исследуемых лимфатических узлов

Параметр ПНИЛУ M±a* Me (LQ-UQ)** р НЛУ M±a* Me (LQ-UQ)** р СЛУ M±a* Me (LQ-UQ)** р

Толщина капсулы, мкм 16,2±4,8 0,000117™ 8,5±1,5 0,771998s 0,000117p 9,5±2,4 0,771998" 0,000117P

Толщина краевого синуса, мкм 12,2 (8,8-16,7) 0,093687s 0,000834" 7,3 (5,1-8,5) 0,000000s 0,000834p 18,5 (15,2-20,4) 0,000000" 0,093687P

Толщина промежуточного синуса, мкм 26,3±15,8 0,000150s 0,591351" 30,6±12,7 0,001099s 0,591351p 47,3±13,0 0,001099" 0,000150P

Количество лимфатических фолликулов 0,0 (0,0-1,0) 0,033255s 0,000023" 3,0 (2,0-3,0) 0,160671s 0,000023P 2,0 (1,0-2,0) 0,160671" 0,033255P

Средняя суммарная площадь кровеносных сосудов, мкм2 7115(3656-10525) 0,000000s 0,000711" 1562 (931-2786) 0,042440s 0,000711P 572 (153-860) 0,042440" 0,000000P

Примечание. М - значение средней арифметической; а - стандартное отклонение; Ме - медиана; верхний квартиль; ! - различия по сравнению с группой СЛУ; " - различия по сравнению с группой нию с группой ПНИЛУ, выделены статистически значимые уровни «р»: * - при параметрическом при непараметрическом распределении выборок.

LQ - нижний квартиль; UQ -НЛУ; р - различия по сравне-распределении выборок, ** -

Толщина краевого синуса у ПНИЛУ также статистически значимо отличается от значений у НЛУ и СЛУ (р=0,000834к, р=0,0936878). Значение данной переменной для НЛУ статистически значимо отличается от значений для ПНИЛУ и СЛУ (р=0,000834р, р=0,0000008). Толщина краевого синуса у СЛУ статистически значимо отличается от толщины краевого синуса у НЛУ и ПНИЛУ (р=0,000000ы, р=0,093687р).

Толщина промежуточного синуса у ПНИЛУ статистически значимо отличается от значений этого параметра у СЛУ (р=0,0001508), но не отличается от значений у НЛУ (р=0,591351м).

Количество лимфоидных фолликулов у ПНИЛУ статистически значимо отличается от значений для НЛУ (р=0,000023ы) и значимо не отличается от значений для СЛУ (р=0,0332558).

Средняя суммарная площадь кровеносных сосудов (ССПКС) у ПНИЛУ статистически значимо отличается от НЛУ (р=0,000711м) и СЛУ (р=0,0000008). Значения переменной ССПКС для СЛУ и НЛУ статистически значимо не отличаются (р=0,042440ы).

Заключение

Таким образом, сравнительный морфо-метрический анализ постнатальных лимфатических узлов, образованных в процессе неолимфогенеза, индуцированного опухолевым ростом, показал, что группа ПНИЛУ статистически значимо отличается от групп НЛУ и СЛУ некоторыми количественными характеристиками структурно-функциональных зон: толщина капсулы (р=0,000117™), толщина краевого синуса (р=0,000834к, р=0,0936878), промежуточного синуса (р=0,000150э), количество лимфоидных фолликулов (р=0,000023ы) и средняя суммарная площадь кровеносных сосудов (р=0,0000008, р=0,000711м).

Данное исследование указывает на то, что морфологически ПНИЛУ соответствуют вторичным лимфоидным органам с идентичной ретикулярной стромой и с определенными различиями.

Полученные морфологические и мор-фометрические различия позволяют предположить о различной функциональной активности исследованных лимфатических узлов.

Сведения об авторах статьи:

Ганцев Шамиль Ханафиевич - д.м.н., профессор, член-корр. АН РБ, зав. кафедрой онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИДПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел./факс: 8 (347) 237-43-58. E-mail: prfg@mail.ru.

Ханов Айрат Мидхатович - генеральный директор АО «Технология здоровья». Адрес: 117246 г. Москва, проезд Научный, 12. Ганцев Камиль Шамильевич - профессор кафедры онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИДПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел. 8 (347) 237-43-58.

Лебедева Анна Ивановна - к.б.н., с.н.с. отдела морфологии ФГБУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии» Минздрава России. Адрес: 450075, г. Уфа, ул. Зорге 67/1.

Рустамханов Расул Айдарович - аспирант, ассистент кафедры онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИДПО ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. E-mail: weather86@mail.ru. Кзыргалин Шамиль Римович - ассистент кафедры онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИДПО БГМУ Минздрава России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел. 8 (347) 237-43-58.

ЛИТЕРАТУРА

1. Видякина, М.А. Характеристика клеточного состава брыжеечных лимфоузлов у телят // Науке нового века -тезисы докладов II научной конференции аспирантов и соискателей. - Киров: ВГСХА, 2001. - С. 51-52.

знания молодых:

2. Горчаков, В.Н. Морфологические методы исследования сосудистого русла. - Новосибирск: СО РАМН, 1997. - 440 с.

3. Иммуногенез и лимфоток (структурно-функциональные основы) / под ред. В.М. Петренко, А.В. Борисова, Г.И. Лобова. - СПб.: СПбГМА им. И.И. Мечникова, 2003. - Вып. 3. - С. 34-36.

4. Чумаков, В.Ю. Гистоструктура капсул регионарных лимфатических узлов тощей кишки овец / В.Ю. Чумаков, Е.Л. Безрук // Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных: материалы международной научной конференции. -Улан-Удэ: Изд-во БГСХА, 2003. - С. 112-113.

5. Морфофункциональная характеристика капсулы регионарных лимфатических узлов некоторых млекопитающих / В.Ю. Чумаков [и др.] // Успехи современного естествознания. - 2004. - № 8. - С. 82-83.

6. Чумаков, В.Ю. Структурные особенности лимфатического русла мочевого пузыря домашних плотоядных при спонтанном уролитиазе и в условиях лимфотропной антибиотикотерапии: монография / В.Ю. Чумаков, Е.Ю. Складнева. - Абакан: Хакасское книжное издательство, 2010. - 124 с.

7. Чумаков, В.Ю. Регионарные лимфатические узлы некоторых органов кролика: учебное пособие для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 11801.65 - Ветеринария. - Черногорск: Изд-во ООО «Риц», 2011. - 29 с.

8. Чумаков, В.Ю. Миоциты стенки лимфатических сосудов сердца и органов головной кишки кролика / В.Ю. Чумаков, П.П. Ша-лаумов, А.В. Захаров // Вестник КрасГАУ. - 2012. - №5 (68).

9. Привес, М.Г. Анатомия человека. - М.: Медицина, 1985. - 454 с.

10. Ганцев, Ш.Х. Новое к теории метастазирования рака и подходам к его лечению // Креативная хирургия и онкология. - 2010. -№ 4. - С. 5-11.

11. Коненков, В.И. Лимфология / В.И. Коненков, Ю.И. Бородин, М.С. Любарский. - Новосибирск: Манускрипт, 2012. - 1100 с.

12. Aloisi F. Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases / F. Aloisi, R. Pujol-Borrell // Nat. Rev. Immunol. - 2006. -Vol. 6. -P. 205-217.

13. Synthesis of artificial lymphoid tissues with immunological function / Y. Kobayashi, T. Watanabe // Trends in Immunology. - 2010. -Vol. 31. - P. 422-428.

14. Шабад Л.М., Блох М.М. Новый перевиваемый штамм саркомы крыс М1/ Л.М. Шабад, М.М. Блох // Бюллетень экспериментальной биологии. - 1947. - Т. 24. - №10. - С. 4.

УДК 615.451.16 + 615.454 + 615.071 © Ю.А. Морозов, 2016

Ю.А. Морозов

ИЗУЧЕНИЕ СПОСОБНОСТИ ЛИГНАНОВ ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО К ЧРЕСКОЖНОЙ ПРОНИЦАЕМОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

ФГБОУ ВО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хетагурова», г. Владикавказ

В работе приводятся результаты исследований по установлению возможности лигнанов - основной группы биологически активных веществ, содержащихся в лекарственном растительном сырье лимонника китайского, - к чрескожной проницаемости в экспериментах in vitro (диализ через «переживающую» кожу белых крыс) и in vivo (аппликации модельного трансдермального пластыря на выстриженные участки тела белых крыс). В качестве объектов исследований были выбраны суммарные фитопрепараты, представляющие собой СО2-экстракты, полученные сверхкритической экстракцией из семян, корневищ с корнями, ветвей и листьев лимонника китайского. С помощью метода газовой хроматографии с масс-селективным детектором во всех исследуемых биообъектах (диализат; плазма крови, печень, почки и головной мозг крыс) зарегистрировано присутствие схизандрина, доминирующего по содержанию и биологической роли среди всех лигнанов лимонника китайского. В диализате найдены и другие представители лигнанов: у-схизандрин и гомизин А, а также лимонен - вещество, способствующее активации переноса лекарственных средств через целостные кожные покровы.

Ключевые слова: лимонник китайский, схизандрин, трансдермальные терапевтические системы.

Yu. A. Morozov

THE STUDY OF THE ABILITY OF LIGNANS OF SCHIZANDRA CHINENSIS TO PERCUTANEOUS PERMEABILITY IN THE EXPERIMENT

The work presents the results of research on establishment of possibility of lignans - a major group of biologically active substances contained in various herbal medicinal raw materials of Schizandra chinensis - to cutaneous permeability in experiments of in vitro (the dialysis through «experiencing» the skin of white rats) and in vivo (application of a model transdermal plaster to white rats on the shaven body sites). As objects of research the total herbal remedies were chosen, which represents a CO2-extracts received by supercritical extraction from seeds, rhizomes with roots, branches and leaves of the Schizandra chinensis. Using the method of gas chromatography with mass-selective detector all the studied biological objects (dialysate; blood plasma, liver, kidney and cerebrum of rats) revealed the presence of schizandrin, the dominant among all lignans of Schizandra chinensis by content and biological roles. In the dialysate other representatives of lignans have been found: y-schizandrin and gomisin A, as well as lemonem - the substance promoting activation of transfer of medicines through complete integuments.

Key words: Schizandra chinensis, schizandrin, transdermal therapeutic system.

Лигнаны - это димерные соединения фенольной природы, состоящие из двух фе-нилпропановых фрагментов (С6-С3), связанных между собой Р-углеродными атомами боковых цепей. Термин «лигнаны» впервые введен У.Н. Хоуорсом в 1936 году.

В настоящее время известно более 200

представителей этой группы. Разнообразие лигнанов обусловлено наличием различных заместителей в бензольных кольцах и характером связи между ними, а также степенью насыщенности боковых цепей и степенью окисления Р-углеродных атомов. В состав ароматических колец входит не менее двух