СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У ДЕТЕЙ

1. Способ диагностики атопического дерматита у детей, включающий перемешивание и охлаждение пробы крови пациента до температуры тающего льда, осаждение и выделение эритроцитов, промывку средой промывки при температуре тающего льда, прединкубацию упакованных (осажденных) эритроцитов в среде прединкубирования при температуре 37°С в течение 3 ч, осаждение полученной суспензии, удаление наружного лития, перенесение упакованных эритроцитов в среду, свободную от натрия, и в среду В, богатую натрием, в каждой из указанных сред проводят инкубацию в течение периода экспрессии при температуре 37°С с периодическим встряхиванием, затем проводят отбор равного количества суспензии эритроцитов из обеих сред, их раздельное осаждение, затем набирают надосадочную жидкость из каждой пробы, разбавляют водой, производят измерение содержания лития в обеих средах, по полученной концентрации лития определяют скорость натрий-литиевого противотранспорта V в как разность между концентрацией лития в среде, богатой натрием, и в среде, свободной от натрия, по формуле
V=(ANa-AMg)·K мкМ лития/1 л клеток/ч, где
ANa - концентрация лития в среде, богатой натрием;
AMg - концентрация лития в среде, богатой магнием (свободной от натрия);
К - коэффициент, связанный с разбавлением сред на предыдущих этапах,
при значении скорости натрий-литиевого противотранспорта в мембране эритоцита,
превышающем 258 мкМ лития/литр клеток/час, диагностируют атопический дерматит у детей.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что осаждение эритроцитов проводят путем центрифугирования в режиме 3000 g в течение 5 мин.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что выделение эритроцитов и плазмы проводят путем отсасывания.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что выделенные эритроциты дважды промывают трехкратным объемом холодной средой А промывки.
2
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что среду промывки берут следующего состава (мМ): 75 - MgCl; 85-сахароза; 10-глюкоза; 10-HEPES-трис при рН, равном 7,4.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что прединкубацию проводят в среде прединкубирования следующего состава (мМ): 150 - LiCl; 10-глюкоза; 10-HEPES-трис при рН, равном 7,4.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что прединкубирование проводят при температуре 37°С в течение 3 ч с периодическим встряхиванием каждые 15 мин по 15 с.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что удаление наружного лития проводят промывкой эритроцитов.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что промывку эритроцитов проводят 4 раза четырехкратным объемом среды промывки.
2
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве среды, свободной от натрия, берут среду промывки, содержащую изоосмотическую смесь хлористого магния MgCl и сахарозы с добавлением 0,1 мМ уабаина.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве среды, богатой натрием, берут состав следующего содержания (мМ): 150 NaCl, 10 глюкоза, 10 HEPES-трис (рН 7,4), 0,1 уабаин.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что измерение содержания лития проводят методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в режиме эмиссии.
13. Способ по пп.1 и 12, отличающийся тем, что калибровочные растворы для измерения содержания лития готовят на средах инкубации с учетом разведения пробы.
14. Способ по пп.1 и 12, отличающийся тем, что измерение содержания лития проводят при следующих параметрах: длина волны 670,6 нм, состав пламени ацетилен-воздух, стехиометрия пламени окисляющая, чувствительность 10-7 моль/литр.
15. Способ по п.1, отличающийся тем, что коэффициент, связанный с разбавлением сред на предыдущих этапах, выбирают равным К=33 при следующих условиях:
проведение прединкубации эритроцитов в среде прединкубации в соотношении 1:5;
помещение эритроцитов в среду, богатую натрием, и свободную от натрия, в соотношении 1:10;
разбавление надосадочной жидкости в 3 раза.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что период экспрессии определяют в течение 60 мин.