СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ДЕФИБРОТИДА, ОСНОВАННЫЙ НА ПРИМЕНЕНИИ ЭУГЛОБУЛИНА

1. Способ определения биологической активности дефибротида, включающий этапы:
а) приведения в контакт дефибротида, эуглобулина млекопитающего и субстрата, специфичного для плазмина, который в результате реакции с плазмином дает измеряемый продукт; и
б) измерения количества образовавшегося продукта в последовательных временных точках для определения биологической активности дефибротида.
2. Способ по п. 1, в котором эуглобулин представляет собой эуглобулин млекопитающего.
3. Способ по п. 2, в котором эуглобулин представляет собой эуглобулин человека, кролика или животного подсемейства бычьих.
4. Способ по п. 1, в котором плазмин, реагирующий с субстратом, специфичным для плазмина, высвобождается плазминогеном, содержащимся в эуглобулине.
5. Способ по п. 1, в котором субстрат, специфичный для плазмина, представляет собой хромогенный субстрат.
1
2
3
1
2
3
6. Способ по п. 1, в котором субстрат, специфичный для плазмина, представляет собой соединение формулы А-А-А-Х, где A и А являются неполярными аминокислотами, А является лизином или аргинином и X является измеряемым продуктом.
7. Способ по п. 6, в котором измеряемый продукт X выбирают из группы, состоящей из пара-нитроанилина и 2-нафтиламина.
8. Способ по п. 4, в котором субстратом, специфичным для плазмина, является H-D-валил-L-лейцил-L-лизин-п-нитроанилин.
9. Способ по п. 6, в котором измеряемый продукт X измеряют при помощи спектрофотометрии или спектрофлюорометрии.
10. Способ по п. 2, в котором эуглобулин млекопитающего ресуспендируют до объема первоначальной плазмы или разбавляют до соотношения 1:10 с приемлемым буфером, а хромогенный / флуорогенный субстрат имеет концентрацию от 2.5 до 3.5 мМ, предпочтительно 3 мМ.
11. Способ по п. 1, в котором реакционной средой является водный раствор, забуференный до рН в пределах от 7 до 8, предпочтительно до рН 7.4.
12. Способ по п. 1, в котором температуру этой системы поддерживают при 35-39°С, предпочтительно при 37°С.
13. Способ по п. 1, в котором концентрация субстрата, специфичного для плазмина, составляет от 0.3 до 4 мМ, предпочтительно от 2.5 до 3.5 мМ, более предпочтительно 3 мМ.
14. Способ по п. 1, включающий также этапы: в) определения скорости высвобождения измеряемого продукта в ходе ферментативной реакции на стандартном и анализируемом образцах дефибротида; г) математической и/или графической корреляции скорости высвобождения и соответствующей концентрации дефибротида для определения биологической активности анализируемого образца дефибротида.
15. Жидкая композиция дефибротида с биологической активностью от 25 до 35 МЕ/мг дефибротида, предпочтительно от 27.5 до 32.5 МЕ/мг и, более предпочтительно, от 28 до 32 МЕ/мг.
16. Жидкая композиция дефибротида по п. 15, отличающаяся тем, что является водным раствором.
17. Жидкая композиция дефибротида по п. 16, отличающаяся тем, что является забуференной при рН в пределах от 6.5 до 8.5, предпочтительно от 7 до 8.
18. Жидкая композиция дефибротида по пп. 15-17 для применения в лечении и профилактике веноокклюзионной болезни.
19. Набор, который содержит жидкую композицию дефибротида и имеет биологическую активность от 5000 до 7000 ME, предпочтительно от 5500 до 6500 ME, более предпочтительно от 5600 до 6400.
20. Набор по п. 19, в котором упомянутая жидкая композиция дефибротида является водным раствором.