ВАРИАНТЫ ХИМОЗИНА С УЛУЧШЕННЫМИ МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ

1. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина, включающий стадии:
(a): осуществления изменений в одном или нескольких положениях исходного полипептида, имеющего активность химозина, где изменение включает замещение, делецию или инсерцию в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, соответствующем любому из положений 117, 134, 141, 143, 156, 241, 279, 280, 281, 298, 300, 307, 309, 311, 325, 350, 352 и 353; и
(b): продуцирования и выделения измененного полипептида со стадии (а) с получением при этом выделенного варианта полипептида химозина, где вариант имеет активность химозина;
и где
(i): положение аминокислоты исходного полипептида определяют посредством выравнивания последовательностей исходного полипептида с полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином), то есть полипептид SEQ ID NO:1 используют для определения соответствующей последовательности аминокислот в исходном полипептиде, и
(ii): исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 65% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином), который содержит аминокислоты от положения аминокислоты 59 до положения аминокислоты 381 SEQ ID NO:1.
2. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 1, где выделенный вариант полипептида химозина имеет:
- активность химозина, дающую более высокое отношение С/Р по сравнению с отношением С/Р бычьего химозина, содержащего зрелый полипептид SEQ ID NO:1; и
- активность химозина, дающую более высокое отношение С/Р по сравнению с отношением С/Р верблюжьего химозина, содержащего зрелый полипептид SEQ ID NO:2.
3. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из предыдущих пунктов, где изменение включает замещение в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, и где замещение представляет собой 134Q, 141Е, 143F, 2801, 281V, 298Е, 300R, 307D, 309D, 309W, 3111, 352L, 352Q, 353L или 353Q.
4. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 3, где замещение представляет собой H134Q, Q141E, I143F, L280I, F281V, Q298E, Q300R, N307D, G309D, G309W, L311I, Q352L, E352L, E352Q, K353L или K353Q.
5. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 1, где изменение включает замещение в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, и где замещение представляет собой:
6. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по п. 1 или 2, где исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 95% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином).
7. Способ получения выделенного варианта полипептида химозина по любому из пп. 1 или 2, где исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 95% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:2 (верблюжьим химозином), который содержит аминокислоты от положения аминокислоты 59 до положения аминокислоты 381 SEQ ID NO:2.
8. Выделенный вариант полипептида химозина, полученный способом по любому из пп. 1 или 2.
9. Выделенный вариант полипептида химозина, включающий:
(a): изменение в одном или нескольких положениях исходного полипептида, имеющего активность химозина, где изменение включает замещение, делецию или инсерцию в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, соответствующем любому из положений 117, 134, 141, 143, 156, 241, 279, 280, 281, 298, 300, 307, 309, 311, 325, 350, 352 и 353; и
(b): где вариант имеет активность химозина; и где
(i): положение аминокислоты исходного полипептида определяют посредством выравнивания последовательностей исходного полипептида с полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином), то есть полипептид SEQ ID NO:1 используют для определения соответствующей последовательности аминокислот в исходном полипептиде; и
(ii): исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 90% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином), который содержит аминокислоты от положения аминокислоты 59 до положения аминокислоты 381 SEQ ID NO:1; и
(iii): выделенный вариант полипептида имеет менее чем 100% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином); и
где выделенный вариант имеет активность химозина, дающую более высокое отношение С/Р по сравнению с отношением С/Р бычьего химозина, содержащего зрелый полипептид SEQ ID NO:1.
10. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 9, где исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 97% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином); и
где выделенный вариант бычьего химозина содержит менее 10 изменений аминокислот (например, замещения) по сравнению со зрелым полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином).
11. Выделенный вариант полипептида химозина по любому из пп. 9 или 10, где изменение включает замещение в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, и где замещение представляет собой D117N, H134Q, Q141Е, I143F, D156V, V241I, V279M, L280I, F281V, Q298E, Q300R, N307D, G309D, G309W, L311I, D325M, H350N, Q352L, E352L, E352Q, K353L или K353Q.
12. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 9, где изменение включает замещение в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, и где замещение представляет собой:
13. Выделенный вариант полипептида химозина, содержащий:
(a): изменение в одном или нескольких положениях исходного полипептида, имеющего активность химозина, где изменение включает замещение, делецию или инсерцию в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, соответствующем любому из положений 117, 134, 141, 143, 156, 241, 279, 280, 281, 298, 300, 307, 309, 311, 325, 350, 352 и 353; и
(b): где вариант имеет активность химозина; и где
(i): положение аминокислоты исходного полипептида определяют посредством выравнивания последовательностей исходного полипептида с полипептидом SEQ ID NO:1 (бычьим химозином), то есть полипептид SEQ ID NO:1 используют для определения соответствующей последовательности аминокислот в исходном полипептиде; и
(ii): исходный полипептид имеет, по меньшей мере, 90% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:2 (верблюжьим химозином), который содержит аминокислоты от положения аминокислоты 59 до положения аминокислоты 381 SEQ ID NO:2; и
(iii): выделенный вариант полипептида имеет менее чем 100% идентичность последовательностей со зрелым полипептидом SEQ ID NO:2 (верблюжьим химозином); и
где выделенный вариант имеет активность химозина, дающую более высокое отношение С/Р по сравнению с отношением С/Р верблюжьего химозина, содержащего зрелый полипептид SEQ ID NO:2.
14. Выделенный вариант полипептида химозина по п. 13, где изменение включает замещение в положении, по меньшей мере, одной аминокислоты, и где замещение представляет собой:
15. Способ приготовления пищевого или кормового продукта, включающий добавление эффективного количества выделенного варианта полипептида химозина по п. 8 или 13 в пищевой или кормовой ингредиент (ингредиенты) и осуществление дополнительных стадий приготовления с получением пищевого или кормового продукта; и
где продукт представляет собой продукт на основе молока, и где способ включает добавление эффективного количества выделенного варианта полипептида химозина по п. 8 или 14 в молоко и осуществление дополнительных стадий приготовления с получением продукта на основе молока; и
где молоко представляет собой соевое молоко, овечье молоко, козье молоко, буйволиное молоко, молоко яка, молоко ламы, верблюжье молоко или коровье молоко, и
где продукт на основе молока представляет собой ферментированный молочный продукт, столовый творог или сыр.