Сравнительная физико-химическая и иммунохимическая характеристика белковых экстрактов из половозрелых Setaria labiato-papillosa и Dirofilaria immitis

достаточном количестве наземных, водных беспозвоночных, амфибий, а также мелких млекопитающих, птиц, иногда и рыб.

Основным источником пищи бродячих собак в городах служат мусорные баки с пищевыми отходами.Кроме этого важным источником питания является подкормка их населением. Бездомные собаки, живущие на окраинах города, часто выходят в поля, луга, где охотятся на мышевидных грызунов, зайцев, птиц.

Фауна гельминтов у бродячих собак была представлена 14 видами гельминтов, относящихся к трем классам: Trematoda-Alaria alata (ЭИ=28,4%, ИИ=5-31 экз.); Cestoda-Mesocestoides lineatus (3,2%, 1-6 экз.), Dipylidium caninum (74,7%, 4-28 экз.), Taenia hydatigena (9,5%, 1-4 экз.), Taenia pisiformis (5,3%, 1-3 экз.); Nematoda-Toxocara canis (67,4%, 4-19 экз.), Toxascaris leonina (29,5%, 3-12 экз.), Uncinaria stenocephala (51,6%, 2-9 экз.), Ancylostoma caninum (18,9%, 1-10 экз.), Crenosoma vulpis (17,9%, 1-11 экз.), Thominx aerophilus (23,2%, 1-6 экз.), Dirofilaria repens (5,3%, 1-3 экз.), (9,5%, 2-7 экз.), Trichinella spiralis (2,1%).

Заключение. Таким образом, фауна гельминтов у квартирных собак городских популяций в Ивановской области представлена 11 видами, в том числе 1 видом трематод, 2 видами цестод и 8 видами нематод. У бродячих, бездомных собак паразитирует 14 видов гельминтов, в том числе 1 вид трематод, 4 вида цестод и 9 видов нематод.

Литература: 1. Березина Е.С. Автореф. дис. ...канд. биол. наук. -Новосибирск - 2000 - 15 с. 2. Березина Е.С.//Ж-л «Ветеринарная патология». -М. - 2002. - № 1. - С. 132 - 135. 3. Воличев А.Н. // Автореф. дис. .канд. вет. наук. - М. - 2000. - 18 с. 4. Заиченко И.В. //Автореф. дис. .канд. вет. наук. -Ставрополь. - 2012. - 20 с. 5. Рахманов А.И.//Ж-л «Ветеринарная патология». -М. - 2002. - №1. - С. 136-140. 6. Шамсувалеева Э.Ш. // Автореф. дис. .канд. биол. наук. - М. - 2009. - 20 с. 7. Savolainen P., Zhang Y., Luo J., Lundeberg J., Leitner T. // Science. - 2002. - V. 298. - P. 1610-1613.

Heminth fauna in dogs of urban populations in the Ivanovo Region.

Balandina V.N., Kruchkova E.N., Abalichin B.G., Sokolov E.A. D.K. Belyaev Ivanovo State Agricultural Academy.

Summary. Helminth fauna in flat dogs of urban populations in the Ivanovo Region is represented by 11 species including 1 trematode species, 2 cestode species and 8 nematode species. 14 helmith species parasitize in stray dogs including 1 trematode species, 4 cestode species and 9 nematode species.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ И ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БЕЛКОВЫХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ ПОЛОВОЗРЕЛЫХ SETARIA LABIATO-PAPILLOSA И DIROFILARIA IMMITIS

44

Бережко В.К., Написанова Л.А., Хайдаров К.А., Тхакахова А.А.

ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина

Введение. При разработке иммунодиагностических и иммунопрофилактических методов при гельминтозах, требующих достаточного количества антигенов, исследователи в некоторых случаях сталкиваются с объективными трудностями в получении исходного гомологичного биоматериала.

В таких случаях вполне можно воспользоваться серологически родственными гетерологичными видами паразитов в качестве источника необходимого антигенного материала.

Приразработке иммуноферментной диагностики дирофиляриоза собак мы, не имея возможности приобрести необходимое количество дирофилярий, использовали в качестве источника антигенного материала половозрелые сетарии (Setaria labiato-papillosa) от зараженного крупного рогатого скота. Поскольку сетарии, как и дирофилярии, относятся к подотряду Filariata, то они вполне могут содержать в белковом спектре антигенные компоненты диагностического значения при дирофиляриозе.

В научной литературе имеются сообщения об успешном использовании гетерологичных видов гельминтов в диагностических целях [1-3; 5-7; 10-14].

Первыйэтап наших исследований включал физико-химическую и иммунохимическую характеристику антигенов-экстрактов из половозрелых Dirofilaria immitis и S. labiato-papillosa.

Материалы и методы. Материалом исследования служили половозрелые сетарии (S.labiato-papillosa) и дирофилярии (D.immitis), выделенные соответственно от зараженного крупного рогатого скота и собак.

Из свежезамороженных паразитов готовили белковые экстракты (каждый в отдельности) методом гомогенизации, попеременного замораживания и оттаивания биоматериала до получения однородной массы. Экстрагированиебелков осуществляли в забуференном физиологическом растворе в соотношении 1:10 на магнитной мешалке при 40С в течение 24-48 часов. Полученныйматериал центрифугировали при 14000 об./мин в течение 15-20 минут и надосадочную жидкость - экстракт использовали в дальнейшей работе, предварительно определив содержание белка спектрофотометрически при 280 нм по методу E. Layne [9].

Физико-химическую характеристику полученных белковых экстрактов из сетарий и дирофилярий проводили электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ) по методике U.K. Laemmli[8] с некоторыми модификациями применительно к нашим условиям.Разделение белков осуществляли в 12,5%-ном геле, в аппарате (VE-G 2C) фирмы «Хеликон» при напряжении 100-120 вольт.

Вкачестве маркеров для определения молекулярной массы белковых компонентов в составе исследуемых экстрактов использовали белки известный молекулярной массы в диапазоне 6,5-200 кДа. Фиксацию и

45

окрашивание электрофореграмм проводили в 1%-ном растворе амидочерного 10Б на 7%-ной уксусной кислоте в течение 15-20 мин, отмывку 7%-ной уксусной кислотой. По степени окрашивания и четкости проявления полос косвенно судили оконцентрации белковых компонентов в исследуемом экстракте. Иммунохимический анализ проводили реакцией иммунодиффузии (РИД) в 1,2%-ном агаровом геле Difco по методу А.И. Гусева и В.С. Цветкова

[4].

Результаты и обсуждение. В белковом спектре соматического экстракта из дирофилярий регистрировали не менее 18 белковых компонентов в диапазоне белков мол.массы 14,4-200 кДа, отличающихся по степени окрашивания и электрофоретической подвижности (табл.). Наиболее четко выраженные и интенсивно окрашенные 4 компонента проявились в зоне белков мол.массы 14,4 кДа (лизоцима); 45,0 кДа (овальбумина); 66,0 кДа (бычьего сывороточного альбумина) и 200 кДа (миозина). Несколько слабее окрашенные с четкими границами 3 компонента проявились в диапазоне белков мол.массы 21,0 кДа (ингибитора трипсина); 31,0 кДа (углекислой ангидразы) и между белками мол. масса - 31,0-45 кДа. Остальные, менее выраженные, слабо окрашенныебелковые компоненты, располагались в виде тонких полос по всей длине электрофореграммы.

Аналогичный анализ экстракта из сетарий позволил определить в нем не менее 16 белковых компонентов, также различающихся как по подвижности, так и по степени проявления (табл.). В этом биоматериале не менее 6 наиболее интенсивно окрашенных полос представляли белковые компоненты мол.массы 14,4 кДа - 1; 45,0кДа - 1; 45,0-66,0 кДа - 2; и 200 кДа - 2. Мажорными из 6 были 3 белковых компонента, два из которых проявились в зоне белков между 45,0-66,0 кДа (овальбуминаи бычьего сывороточного альбумина) и 1 - в области подвижности миозина - 200 кДа. Остальные, слабо выраженные компоненты, проявились на электрофореграмме в диапазоне белков мол.массы между 14,4-45,0 кДа и 66,0-116,0 кДа. Судяпо степени окраски количественное содержание этих белков в общей массе соматического экстракта незначительное. Однако, если учесть, что даже в биоматериале из гомологичных видов гельминтов количественное содержание специфических диагностически значимых белков-антигенов невелико (8-10%), товполне вероятно, что именно эти слабо выраженные компоненты в белковом спектре экстракта из сетарий будут иметь диагностическое значение при дирофиляриозе. Темне менее, для доказательства наличия в белковом экстракте из сетарий диагностического антигена, при дирофиляриозе исследовали гомологичный и гетерологичный антигены-экстракты в РИД с референс сывороткой зараженных D. immitis собак.

Таблица

Белковый спектр соматических экстрактов из половозрелыхдирофилярий и сетарий

46

№ п/п Исследованный биоматериал Кол-во выявленных белковых компонентов Результаты электрофореза в ПААГ

Молекулярная масса белковых компонентов, кДа

6,5-14,4-21,5 21,5-31,0-45,0 45,0-66,0 66,0-97,0 97,0-116,0 116,0-200,0

1 Соматический экстракт из половозрелых Dirofilaria immitis 18 4 6 4 2 1 1

2 Соматический экстракт из половозрелых Setaria labiato-papillosa 16 3 5 2 2 2 2

Результаты этого анализа показали, что в обоих случаях, как в гомологичной, так и в гетерологичной системе реакции регистрировали одну полосу преципитации диффузного характера (рис.). Причиной проявления диффузных полос в РИД может быть, с одной стороны, наличие в сыворотке антител различной специфичности, а с другой, гетерогеностью антигенов.

Верхняя лунка - антиген-экстракт S. labiato-papillosa Правая лунка - антиген-экстракт D. immitis.

Левая лунка - сыворотка клинически здоровой собаки

Центральная лунка - сыворотка зараженной

D. immitis собаки

Рис. Реакция иммунодиффузии в агаровом геле (вариант “четверка”) с сывороткой собаки, инвазированной D. immitis, и антигенами-экстрактами D. immitis и S. labiato-papillosa

Полученные результаты являются доказательством того, что соматический экстракт из половозрелых сетарий имеет в составе антигенного спектра компонент, идентичный функциональному диагностически ценному

47

при дирофиляриозе. Дальнейшие исследования предполагают выделение и оценку диагностической эффективности этого антигена при дирофиляриозе собак.

Литература: 1. Аксенова И.Н.// Бюл. Всес. Ин-та гельминтол. - 1974. -вып. 12. - С. 5-10. 2.Андреева Г.Н., Бережко В.К.// Тр. Всес. ин-та гельминтол.

- 1980. -Т.25. -С. 15-21. З.Гламаздин И.Г. Дис.... канд. вет. наук. Москва.-1990.-С.144. 4.Гусев А.И. Цветков В.С.//Лаб. дело.-1961.-№2.- С.43-45. 5.Комаров Ю.Б. // Ветеринария.-1977.-№ 2.-С. 62-63.6.BenexJ. // Bull. Soc. pathol.exot. - 1972. - V. 65., №4. - P. 563-569.7.CalamelM., SouleC.// Rev. Med. Vet.-1972- V. 123, № 8-9 - P. 1105-1114.8.LaemmliU.K. // Nature. - 1970. - V. 227. - P. 680-685.9.LayneE. //MethodsEnzymol. - 1957. - V.3. - P.447-454.10.Minozzo J. C., de Moura J., Monteiro A. S.// Braz. Arch. Biol. and Technol.

- 2008. - V.51, №6.-Р. 1127-1137. 11.Niel Y., Gentilini M., Couture J. et al. // Bull. soc. pathol. exot. - 1972. - V. 65, №4. - P. 569-579. 12. Rifaat M.A., Khalil H.M., Salem S.A., Mohamed H.H. // 3-rd Int. Congr. Parasitol. Munich. - 1974. -V.3. - P.1209. 13. Rifaat M.A., Khalil H.M. // 2-nd EuroP.multicol. parasitol. Yugoslavia. - 1975. - P. 63. 14. Twaiko G.L., Mkufya A. // E. Afr. Mod. J. - 1977.

- V.54, №12. - P. 680-683.

Comparative physical, chemical and immunochemical characteristics of protein extracts of Setaria labiato-papillosa and Dirofilaria immitis. Berezhko V.K., Napisanova L.A., Haidarov K.A., Thakachova A.A. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.

Summary. One represented the results of physical, chemical and immunochemical characteristics of protein extracts of mature S. labiato-papillosa and D. immitis using electrophoresis in polyacrylamide gel. 18 and 16 protein components of different abundance level, electrophoretic mobility and molecular weight were found respectively. Using immunodiffusion in agar gel with reference sera from dogs infected by D. immitis in homologous and heterologous versions one determined 1 component in each case. Thus antigenic component is contained in S. labiato-papillosа extract having the diagnostic value at D. immitis infection.

РЕТРОСПЕКТИВНЫЙ АНАЛИЗ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ДОМАШНИХ ПЛОТОЯДНЫХ ДИРОФИЛЯРИОЗОМ В ВОРОНЕЖЕ

Беспалова Н.С., Золотых Т.А.

ФГБОУ ВПО: «Воронежский госагроуниверситет им. Императора Петра I»

Введение. Среди гельминтозов, которые регистрируются в России, дирофиляриоз плотоядных не занимает лидирующего места, однако в последние годы вследствие изменившихся природно-климатических и социально-экономических факторов отмечается стойкая тенденция к

48