СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ, СОДЕРЖАЩЕЙ ЦЕВТРИАКСОН НАТРИЯ И ТАЗОБАКТАМ НАТРИЯ
METHOD FOR PREPARING COMPOSITION FOR INJECTIONS CONTAINING SODIUM CEVTRIAXONE AND SODIUM TAZOBACTAM

Настоящая заявка претендует на приоритет заявки на патент КНР №200910138402.7, под названием "Способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия", поданной 30 апреля 2009 г. в Патентное ведомство КНР, содержание которой полностью включено в настоящее описание посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к способу получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Цевтриаксон натрия, представляющий собой цефалоспорин третьего поколения, имеет широкий спектр антибактериального действия. Широкое клиническое применение цефалоспориновых антибиотиков привело к тому, что под воздействием антибиотика бактерии подвергаются генетическим изменениям. На протяжении последних двух десятилетий постоянно выявляются все новые штаммы микроорганизмов, резистентные к лекарственным средствам, и, кроме того, были выявлены случаи возникновения тяжелых инфекционных поражений и инфекций, устойчивых к действию лекарственных средств, в особенности, инфекций дыхательных путей, и, таким образом, устойчивость бактерий к лекарственным средствам становится серьезной проблемой в лечебной практике. Для клинического применения была разработана сложная (включающая более одного активного компонента) композиция. Из-за разности в удельном объеме двух стерильных порошков смесь не обладает достаточной гомогенностью, которая является важным показателем качества продукта. Для получения гомогенной смеси наилучшим способом считают приготовление смеси в жидком виде. В нормативном документе Pharmacopoeia of the People's Republic of China, Part II (Фармакопея Китайской Народной Республики, часть II) (2005) отмечена необходимость определения "прозрачности и цвета раствора" цевтриаксона натрия; то есть контроль прозрачности и цвета стерильных цефалоспориновых продуктов представляет собой важный аспект их получения. В традиционной сложной композиции, получаемой смешиванием и распределением по отдельным упаковкам стерильного порошка цевтриаксона натрия и тазобактама натрия, прозрачность и цвет стерильного продукта влияет не только на прозрачность раствора стерильного продукта, но и на концентрацию стерильного продукта и степень окрашивания раствора.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задача настоящего изобретения состоит в предложении способа получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, включающего смешивание цевтриаксона натрия и тазобактама натрия в жидком виде с образованием гомогенной смеси.
Для решения указанной задачи настоящим изобретением предложено следующее техническое решение, т.е. способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, который включает следующие стадии:
(1) установление соотношения исходных материалов: взвешивание исходных материалов, т.е. цевтриаксона натрия, тазобактама натрия, стерилизованной воды для инъекций, смешанного раствора этилацетата и изопропилового спирта и безводного этанола, в массовом соотношении, составляющем 3~5:1:2:5:9;
и при этом смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта получают смешиванием до гомогенного состояния этилацетата и изопропилового спирта в объемном соотношении, составляющем 1:2~4;
(2) растворение и фильтрование: добавление стерилизованной воды для инъекций в резервуар для растворения при температуре, составляющей 8°C~12°C, с последующим добавлением цевтриаксона натрия и тазобактама натрия и перемешиванием до полного их растворения; добавление активированного угля в количестве, составляющем 0,2% от общей массы жидкости, находящейся в резервуаре; перемешивание в течение 30 минут и последующее фильтрование, в результате чего получают фильтрат;
(3) кристаллизация и промывка: добавление фильтрата в резервуар для кристаллизации; добавление смешанного раствора этилацетата и изопропилового спирта и тщательное перемешивание смеси; последующее добавление 1~5 г затравочных кристаллов цевтриаксона натрия к смешанному раствору для инициирования кристаллизации, роста и трансформации кристаллов, которые выдерживают в течение по меньшей мере 5 часов; последующая троекратная промывка кристаллов каждый раз трехкратным количеством безводного этанола; и сушка;
(4) лиофилизация:
(4.1) предварительное замораживание: понижение температуры продукта в термостате до -28°C и выдерживание при этой температуре в течение 2,5 часов;
(4.2) сублимация и сушка: включение системы нагрева после достижения степени разрежения в термостате, составляющей менее 30 Па, и поддержание температуры в диапазоне от -15°C до -20°C для выполнения сублимации и сушки продукта;
(4.3) повторная сушка: повышение температуры до 20°C~30°C и выдерживание при этой температуре в течение 3 часов;
(4.4) продувка высокочистым азотом, стерилизованным фильтрованием через фильтровальный картридж с размерами отверстий, составляющими 0,22 мкм;
приведение давления к нормальному значению; и получение сложной композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия.
Фильтрование на стадии (2) выполняют следующим образом:
последовательно проводят ультрафильтрацию смешанного раствора через фильтр из титановой проволоки с размерами отверстий 0,45 мкм, затем через фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,22 мкм и фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,01 мкм.
Резервуар для кристаллизации на стадии (3) расположен в асептической (стерильной) зоне класса А.
Сушку на стадии (3) выполняют следующим образом: применяют чистый горячий сжатый воздух, стерилизованный пропусканием через фильтры; скорость потока составляет 2 м/с; температура составляет 45°C~50°C; и продолжительность сушки составляет 4~5 часов.
Объемное соотношение этилацетата к изопропиловому спирту при выполнении стадии (1) составляет 1:3.
Массовое соотношение [цевтриаксон натрия:тазобактам натрия:стерильная вода для инъекций:смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта:безводный этанол] составляет 3:1:2:5:9.
Настоящее изобретение имеет ряд преимуществ: настоящее изобретение может быть применено для получения сложной композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия в соотношении, составляющем 3:1~5:1 (цевтриаксон:тазобактам); смешивание в среде жидкость-жидкость может обеспечивать гомогенность смеси; настоящее изобретение всегда позволяет проводить кристаллизацию цевтриаксона натрия и тазобактама натрия в соотношении 3~5:1, то есть позволяет решить проблему, связанную со сложностью поддержания в готовом продукте соотношения кристаллизации цевтриаксона натрия к тазобактаму натрия, составляющего 3~5:1, которая обусловлена различными скоростями кристаллизации цевтриаксона натрия и тазобактама натрия из-за разности в их растворимостях; в то же время, применение настоящего изобретения может эффективно повысить чистоту композиции и, таким образом, обеспечить высокую безопасность ее клинического использования.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Ниже настоящее изобретение описано более подробно с помощью графических материалов и примеров осуществления, но при этом объем настоящего изобретения не ограничен приведенными примерами.
Пример 1
Способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, включающий следующие этапы:
А. Выбор рецептуры
Рецептура 1 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:2)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 2 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 3 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:4)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 4 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта(1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
8
итого
1000 флаконов
Рецептура 5 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 6 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
10
итого
1000 флаконов
Рецептура 7 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта(1:3)
1250 г
4
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 8 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекции
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
Рецептура 9 и соотношение: спецификация 1,0 г
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта (1:3)
1250 г
6
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
В настоящем примере:
1. С помощью рецептур 1, 2 и 3 оценивают прозрачность и цвет смешанных растворов, содержащих различные соотношения этилацетата и изопропилового спирта, и влияние этих различных соотношений на выход кристаллизованных цевтриаксона натрия и тазобактама натрия.
2. С помощью рецептур 4, 5 и 6 оценивают прозрачность и цвет смешанных растворов, содержащих различные соотношения безводного этанола и цевтриаксона натрия и тазобактама натрия, и влияние этих различных соотношений на выход.
3. С помощью рецептур 7, 8 и 9 оценивают прозрачность и цвет смешанных растворов, содержащих различные соотношения смешанного раствора этилацетата и изопропилового спирта (1:3) и цевтриаксона натрия и тазобактама натрия, и влияние этих различных соотношений на выход.
4. Гомогенность и прозрачность приведенных выше рецептур сравнивали с гомогенностью и прозрачностью продукта предшествующего уровня техники (в котором цевтриаксон натрия и тазобактам натрия смешивают в соотношении 3:1, см. рецептуры 10-1,10-2,10-3,10-4, 10-5 и 10-6).
5. Результаты:
№ рецепт
выход (%)
Содержание цевтриаксона
Содержание тазобактама
Соотношение
Результаты
тех. условия Фармакопеи КНР и стандарты внутреннего контроля
прозрачность
цвет
тех.условия Фармакопеи КНР (2005)
Стандарты внутреннего контроля
1
86,5
645
202
3,2:1
прозрачный
<6# (желтовато-зеленый)
Цвет раствора не должен быть темнее цвета стандартного раствора степени прозрачности (мутности) №1. Цвет раствора не должен быть темнее цвета №8 желтого, желтовато-зеленого или оранжевого стандартного раствора
Цвет раствора не должен быть темнее цвета стандартного раствора степени прозрачности (мутности) №0.5. Цвет раствора не должен быть темнее цвета №6 желтого, желтовато-зеленого или оранжевого стандартного раствора
2
85,3
643
207
3,1:1
прозрачный
<6# (желтовато-зеленый)
3
85,2
650
210
3,1:1
прозрачный
<6# (желтовато-зеленый)
4
92,1
660
220
3:1
прозрачный
<5# (желтовато-зеленый)
5
93,2
645
215
3:1
прозрачный
<5# (желтовато-зеленый)
6
94,2
657
219
3:1
прозрачный
<5# (желтовато-зеленый)
7
83,2
629
217
2,9:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
8
82,3
670
216
3,1:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
9
83,9
672
210
3,2:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-1
672
210
3,2:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-2
629
217
2,9:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-3
672
210
3,2:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-4
643
207
3,1:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-5
683
210
3,3:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
10-6
672
210
3,2:1
прозрачный
<7# (желтовато-зеленый)
Эксперименты показали:
1. Если соотношение смешанного раствора этилацетата и изопропилового спирта (1:3), к тазобактаму натрия составляет 1:5, и соотношение безводного этанола к тазобактаму натрия составляет 1:9, то выход превышает 93%, и как прозрачность, так и цвет раствора (прозрачный, <6# (желтовато-зеленый)) превосходят параметры прозрачности и цвета, установленные стандартами Фармакопеи КНР (2005);
2. На основании результатов экспериментов была выбрана следующая рецептура для получения композиции:
исходные материалы
рецептура
соотношение
цевтриаксон натрия
894,0 г (соответствует 750 г цевтриаксона)
3
тазобактам натрия
294,0 г (соответствует 250 г тазобактама)
1
стерильная вода для инъекций
500 г
2
смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта(1:3)
1250 г
5
безводный этанол
2250 г
9
итого
1000 флаконов
В. Растворение и фильтрование
1. Стерилизованную воду для инъекций добавляли в резервуар для растворения, который затем охлаждали до 10°C±2, при перемешивании растворяли цевтриаксон натрия и тазобактам натрия в количестве, указанном в рецептуре, добавляли при перемешивании 0,2% активированного угля, затем не позднее чем спустя 30 минут выполняли фильтрование.
2. Фильтрование выполняли следующим образом: смешанный раствор, полученный в резервуаре, в который был добавлен активированный уголь, пропускали через стерилизованный трубопровод с помощью перекачивающего насоса, последовательно пропуская через фильтр из титановой проволоки с размерами отверстий 0,45 мкм, фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,22 мкм и фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,01 мкм, выполняя ультрафильтрационную стерилизацию; затем раствор направляли в резервуар для кристаллизации, находящийся в сушильной камере, расположенной в стерильной чистой зоне класса А; от фильтрата отбирали образцы, которые направляли в отдел контроля качества для определения таких параметров, как содержание компонентов, содержание эндотоксина, pH и т.д.
С. Кристаллизация и промывка кристаллов
1. Смесь этилацетата и изопропилового спирта (1:3) в количестве, в пять раз превышающем количество смеси в резервуаре для кристаллизации, добавляли к смешанному раствору цевтриаксона натрия и тазобактама натрия в резервуаре для кристаллизации и тщательно перемешивали; затем к смешанному раствору добавляли 5 г затравочных кристаллов цевтриаксона натрия для инициирования кристаллизации и выдерживали в течение по меньшей мере 5 часов для осуществления роста кристаллов; затем продукт перекачивали перекачивающим насосом в стерильное устройство для сушки типа «три в одном», затем продукт три раза промывали трехкратным количеством безводного этанола и затем сушили.
2. Сушка. Для сушки применяли чистый сжатый горячий воздух, нагреваемый испарением и стерилизованный фильтрованием. Температуру на вводе горячего потока устанавливали приблизительно равной 45°C. Очищенную смесь порошков цевтриаксона натрия и тазобактама натрия сушили в течение приблизительно 4 часов для удаления этанола.
D. Лиофилизация
1. Предварительное замораживание: полку охлаждали до -45°C. Температуру продукта понижали до -28°C и выдерживали при этой температуре в течение 2,5 часов.
2. Сублимация и сушка: когда степень разрежения в термостате достигала значения, составляющего менее 30 Па, включали систему нагрева, и для проведения сублимации и сушки поддерживали температуру ниже -20°C.
3. Повторная сушка: на этом этапе температуру продукта поддерживали ниже значения 30°C, и продолжительность повторной сушки составляла 3 часа.
4. После проведения лиофилизации для достижения нормального давления систему вентилировали высокочистым азотом, стерилизованным фильтрованием через фильтр с отверстиями размером 0,22 мкм; продукт извлекали из термостата, получая, таким образом, композицию для инъекций, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия.
Пример 2
Способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, включающий следующие этапы:
(1) Исходные материалы: соответственно взвешивали исходные материалы, включающие цевтриаксон натрия, тазобактам натрия, стерилизованную воду для инъекций, смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта и безводный этанол в массовом соотношении 5:1:2:5:9.
При этом объемное соотношение этилацетата к изопропиловому спирту в смешанном растворе этилацетата и изопропилового спирта составляло 1:2;
(2) Растворение и фильтрование: стерилизованную воду для инъекций добавляли в резервуар для растворения при температуре 8°C~12°C; затем добавляли при перемешивании цевтриаксон натрия и тазобактам натрия и перемешивали до растворения; затем добавляли активированный уголь (0,2% масс. от массы жидкости, находящейся в резервуаре) и перемешивали в течение 30 минут; затем, для проведения ультрафильтрации, смешанный раствор пропускали через фильтр из титановой проволоки с размерами отверстий 0,45 мкм, фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,22 мкм и фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,01 мкм, получая фильтрат;
(3) Кристаллизация и промывка: фильтрат добавляли в резервуар для кристаллизации, туда же добавляли смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта и тщательно перемешивали; затем к смешанному раствору добавляли 1 г затравочных кристаллов цевтриаксона натрия для инициирования кристаллизации и выдерживали в течение по меньшей мере 5 часов для осуществления роста кристаллов; затем продукт трижды промывали каждый раз трехкратным количеством безводного этанола, и затем сушили следующим образом: для сушки применяли чистый сжатый горячий воздух, стерилизованный фильтрованием, при этом скорость потока составляла 2 м/с, температура составляла 45°С и продолжительность сушки составляла 5 часов;
(4) Лиофилизация:
(4.1) Предварительное замораживание: температуру продукта в термостате понижали до -28°C и выдерживали при этой температуре в течение 2,5 часов;
(4.2) Сублимация и сушка: когда степень разрежения в термостате достигала значения, составляющего менее 30 Па, включали систему нагрева, и, для проведения сублимации и сушки, поддерживали температуру ниже -15°C;
(4.3) Повторная сушка: температуру повышали до 20°С и выдерживали при этой температуре в течение 3 часов;
(4.4) Для достижения нормального давления систему вентилировали высокочистым азотом, стерилизованным фильтрованием через фильтр с отверстиями размером 0,22 мкм, получая, таким образом, композицию для инъекций, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия.
Пример 3
Способ получения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, включающий следующие этапы:
(1) Исходные материалы: соответственно взвешивали исходные материалы, включающие цевтриаксон натрия, тазобактам натрия, стерилизованную воду для инъекций, смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта и безводный этанол в массовом соотношении 5:1:2:5:9.
При этом объемное соотношение этилацетата к изопропиловому спирту в смешанном растворе этилацетата и изопропилового спирта составляло 1:4;
(2) Растворение и фильтрование: стерилизованную воду для инъекций добавляли в резервуар для растворения при температуре 8°С~12°С; затем добавляли при перемешивании цевтриаксон натрия и тазобактам натрия и перемешивали до растворения; затем добавляли активированный уголь (0,2% масс. от массы жидкости, находящейся в резервуаре) и перемешивали в течение 30 минут; затем, для проведения ультрафильтрации, смешанный раствор пропускали через фильтр из титановой проволоки с размерами отверстий 0,45 мкм, фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,22 мкм и фильтровальный картридж с размерами отверстий 0,01 мкм, получая фильтрат;
(3) Кристаллизация и промывка: фильтрат добавляли в резервуар для кристаллизации, туда же добавляли смешанный раствор этилацетата и изопропилового спирта и тщательно перемешивали; затем к смешанному раствору добавляли 3 г затравочных кристаллов цевтриаксона натрия для инициирования кристаллизации и выдерживали в течение по меньшей мере 5 часов для осуществления роста кристаллов; затем продукт трижды промывали каждый раз трехкратным количеством безводного этанола и затем сушили следующим образом: для сушки применяли чистый сжатый горячий воздух, стерилизованный фильтрованием, при этом скорость потока составляла 2 м/с, температура составляла 50°C и продолжительность сушки составляла 5 часов;
(4) Лиофилизация:
(4.1) Предварительное замораживание: температуру продукта в термостате понижали до -28°C и выдерживали при этой температуре в течение 2,5 часов;
(4.2) Сублимация и сушка: когда степень разрежения в термостате достигала значения, составляющего менее 30 Па, включали систему нагрева и, для проведения сублимации и сушки, поддерживали температуру ниже -15°C;
(4.3) Повторная сушка: температуру повышали до 20°C и выдерживали при этой температуре в течение 3 часов;
(4.4) Для достижения нормального давления систему вентилировали высокочистым азотом, стерилизованным фильтрованием через фильтр с отверстиями размером 0,22 мкм, получая, таким образом, композицию для инъекций, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия.
Исследования стабильности
Выполняли исследования стабильности композиций, полученных способом, описанным выше.
1. Способ
Номера партий образцов: Пример 1 (080501), Пример 2 (080502) и Пример 3 (080503).
Исследуемые параметры: внешний вид, содержание, прозрачность, соответствующие материалы, содержание воды и т.д.
Способ исследования. Способ исследования содержания и соответствующих материалов в образцах в течение 0-18 месяцев был следующим.
Условия проведения хроматографии и испытания применимости системы.
Детектор: детектор SPD-10AVP.
Хроматографическая колонка: в качестве заполнителя применяли октадецилсилан, химически связанный с оксидом кремния.
Подвижная фаза: в качестве подвижной фазы применяли смесь реагент А:
вода (85:15), где реагент А содержал 0,015 моль/л фосфата тетрабутиламмония (добавляли 600 мл воды к 50 мл раствора фосфата тетрабутиламмония концентрацией 0,2 моль/л), метанол и ацетонитрил в соотношении 650:250:100, pH доводили до 7.3±0.1 добавлением 0,5%-ной фосфорной кислоты.
Длина волны для выполнения определений: 230 нм.
Число теоретических тарелок: исходя из расположения пика цевтриаксона, число теоретических тарелок не должно быть меньше 3000.
18
18
8
7
3
10
12
4
5
Определение, Приблизительно 100 мг полученной, как указано выше, композиции точно взвешивали и помещали в мерную колбу емкостью 50 мл, растворяли и разбавляли подвижной фазой, получая нужную степень разведения. Раствор встряхивали до гомогенного состояния и отбирали 10 мкл, которые вводили в жидкостной хроматограф; записывали хроматограмму; отбирали подходящие количества эталонов цевтриаксона и тазобактама, используемых в качестве контроля, точно взвешивали и растворяли в подвижной фазе, получая раствор, содержащий, соответственно, 1,5 мг цевтриаксона и 0,5 мг тазобактама (3:1) в миллилитре; тот же способ применяли для определения содержания CHNOS и CHNOS в испытуемых образцах, используя для этого величины площадей под пиками и внешний эталон.
Процедура. Отбирали подходящее количество образца и растворяли его в подвижной фазе, получая раствор образца для испытаний, содержащий приблизительно 2 мг образца в миллилитре раствора; из этого раствора отбирали точно отмеренный 1 мл, который помещали в мерную колбу емкостью 100 мл. Раствор, который затем использовали в качестве контрольного раствора, разбавляли подвижной фазой, получая нужную степень разведения, и встряхивали до гомогенного состояния. В соответствии с условиями исследования параметров, для уточнения диапазона измерений таким образом, что высота пика цевтриаксона составляла приблизительно 20% от всего диапазона записывающего устройства, отбирали 10 мкл контрольного раствора и впрыскивали в жидкостной хроматограф; затем точно отбирали по 10 мкл каждого из приготовленных, как указано выше, растворов и, соответственно, впрыскивали в жидкостной хроматограф; хроматограмму записывали в течение времени, в 3,5 превышающего продолжительность удержания цевтриаксона. Если в хроматограмме раствора образца имелись пики примесей, то площадь пика одной примеси не должна была превышать сумму площадей под пиками цевтриаксона и тазобактама в контрольном растворе (1,0%), и сумма площадей под пиками индивидуальных примесей не должна была более чем в 4 раза превышать сумму площадей под двумя основными пиками контрольного раствора (4,0%).
2. Результаты
2.1 Ускоренные испытания
Отбирали три партии образцов (300 в каждой партии), которые хранили при 40±2°C и относительной влажности 75±5% в течение 6 месяцев. По истечении 1, 2, 3, 6 месяцев отбирали образцы для определения указанных выше параметров с помощью описанных выше способов; результаты представлены в Таблице 1.
Таблица 1
Результаты ускоренных испытаний образцов трех партий 080501, 080502 и 080503
Время
№ партии
Результаты
Внешний вид
Щелочность
Прозрачность
Содерж. воды
Соответств. материалы (%)
Указанное содержание (%)
Максима льное
Сумма
Цевтриаксон
Тазобактам
0 мес
080501
Беловатый порошок
6,5
соответствует*
8,0
0,1
0,3
103,2
101,5
080502
Беловатый порошок
6,5
соответствует
7,8
0,1
0,3
105,6
103,6
080503
Беловатый порошок
6,4
соответствует
7,8
0,1
0,3
101,0
100,1
1 мес
080501
Беловатый порошок
6,5
соответствует
8,1
0,1
0,3
103,0
101,0
080502
Беловатый порошок
6,5
соответствует
7,9
0,1
0,3
105,0
103,0
080503
Беловатый порошок
6,5
соответствует
7,9
0,1
0,3
100,6
99,6
2 мес
080501
Беловатый порошок
6,6
соответствует
8,2
0,2
0,4
102,5
100,5
080502
Беловатый порошок
6,6
соответствует
8,0
0,2
0,4
104,3
102,5
080503
Беловатый порошок
6,7
соответствует
8,0
0,2
0,4
100,0
99,2
3 мес
080501
Беловатый порошок
6,7
соответствует
8,2
0,3
0,5
102,0
100,0
080502
Беловатый порошок
6,6
соответствует
8,1
0,3
0,6
103,8
102,0
080503
Беловатый порошок
6,8
соответствует
8,1
0,4
0,6
99,5
98,5
6 мес
080501
Беловатый порошок
6,9
соответствует
8,3
0,4
0,6
100,9
99,5
080502
Беловатый порошок
6,8
соответствует
8,2
0,4
0,7
102,0
100,5
080503
Беловатый порошок
6,9
соответствует
8,2
0,4
0,8
99,0
98,0
* соответствует, т.е. соответствует техническим требованиям
2.2 Долговременные испытания
Отбирали три партии образцов (1400 в каждой партии), которые хранили при 25±2°C и относительной влажности 60±14%. По истечении 3, 6, 9, 12, 18 и 24 месяцев отбирали образцы для определения указанных выше параметров с помощью описанных выше способов и сравнивали с результатами, полученными в момент времени 0 (0 месяц), делая выводы о возможности последующего проведения клинических исследований. Результаты представлены в Таблице 2.
Таблица 2
Результаты долговременных испытаний образцов трех партий 080501, 080502 и 080503
Время
№ партии
Результаты
Внешний вид
Щелочность
Стерильность
Прозрачность
Содержание воды
Соответствующ. материалы (%)
Указанное содержание (%)
Максимальное
Итого
Цевтриаксон
Тазобактам
0 месяц
080501
беловатый порошок
6,5
соотв.
соотв.
8,0
0,1
0,3
103.2
101,5
080502
беловатый порошок
6,5
соотв.
соотв.
7,8
0,1
0,3
105,6
103,6
080503
беловатый порошок
6,4
соотв.
соотв.
7,8
0,1
0,3
101,0
100,1
3 месяц
080501
беловатый порошок
6,5
соотв.
соотв.
8,0
0,1
0,3
103,1
101,2
080502
беловатый порошок
6,5
соотв.
соотв.
7,8
0.1
0,3
105,1
103,2
080503
беловатый порошок
6,4
соотв.
соотв.
7,8
0,1
0,3
100,8
99,8
6 месяц
080501
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
8,1
0,2
0,4
102,8
101,0
080502
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
7,9
0,2
0,4
104,5
103,0
080503
беловатый порошок
6,5
соотв.
соотв.
7,9
0,2
0,4
100,6
99,5
9 месяц
080501
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
8,1
0,2
0,5
102,5
100,5
080502
беловатый порошок
6,7
соотв.
соотв.
8,0
0,2
0,4
104,0
102,5
080503
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
7,9
0,2
0,5
100,3
99,2
12 месяц
080501
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
8,1
0,2
0,5
102,2
100,1
080502
беловатый порошок
6,7
соотв.
соотв.
8,0
0,2
0,5
103,7
102,2
080503
беловатый порошок
6,6
соотв.
соотв.
7,9
0,2
0,5
100,0
99,1
18 месяц
080501
беловатый порошок
6,7
соотв.
соотв.
8,2
0,2
0,6
102,0
99,5
080502
беловатый порошок
6,9
соотв.
соотв.
8,3
0,2
0,7
103,2
101,6
080503
беловатый порошок
6,8
соотв.
соотв.
8,1
0,2
0,6
99,6
98,7
24 месяц
080501
беловатый порошок
6,9
соотв.
соотв.
8,4
0,2
0,7
101,5
99,2
080502
беловатый порошок
7,0
соотв.
соотв.
8,5
0,2
0.8
102,7
101,1
080503
беловатый порошок
6,9
соотв.
соотв.
8,4
0,2
0,7
99,2
98,2
* соотв. означает "соответствует техническим требованиям"
3. Заключение
Приведенные выше результаты показывают, что параметры всех трех партий образцов (спецификация 1,0 г) после хранения в течение 24 месяцев соответствуют требованиям; при этом не наблюдали значительных изменений всех параметров, за исключением параметра «Соответствующие материалы», который до некоторой степени возрастал по сравнению со значением, полученным в момент времени 0 (0 месяц).
Испытания на гиперчувствительность, гемолиз и стимуляцию сосудистой реакции при системном введении
1. Композиция для инъекций концентрацией 150 мг/мл, содержащая цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1), не вызывала заметного гемолиза; все результаты согласуются с требованиями безопасности для введения посредством внутривенных инъекций.
Композицию для инъекций концентрацией 150 мг/мл, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1), три раза вводили с помощью внутривенной инъекции в ушную вену кролика, но при этом не наблюдали явной ответной реакции; композицию для инъекций концентрацией 150 мг/мл, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1), вводили с помощью инъекции в четырехглавую бедренную мышцу и также не наблюдали явной ответной реакции. Таким образом, результаты испытания тестируемого лекарственного средства на местную (топическую) стимуляцию согласуются с установленными требованиями.
Композицию для инъекций концентрацией 150 мг/мл, содержащую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1), вводили каждые вторые сутки с помощью внутримышечных инъекций морским свинкам, получившим в общей сложности по 3 инъекции каждая. Экспериментальную группу подвергали освидетельствованию на 14-е и 21-е сутки после первой инъекции, но не обнаружили симптомов гиперчувствительности; таким образом, результаты испытания тестируемого лекарственного средства согласуются с требованиями, установленными для испытаний на гиперчувствительность.
2. Задача: определение наличия гемолитического и агглютинирующего действия у композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия в соотношении 3:1 или 5:1, то есть определение безопасности лекарственного средства при внутривенном введении.
Наблюдали ответную реакцию кровеносных сосудов и мышц после введения композиции, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1), в ушную вену и четырехглавую бедренную мышцу кролика.
3. Определение вероятности возникновения системной аллергической реакции после введения композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (3:1 и 5:1).
1. Гемолитические испытания
1.1 Материалы
(1) Животное: один самец большеухого японского кролика массой 2,3 кг был предоставлен Центром подопытных животных Медицинского университета Xi′an (Xi′an Medical University), номер сертификата: ShanxiYi Dong Zi №08-018.
(2) Испытуемые лекарственные средства: композиция для инъекций, содержащая цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, белый порошок, соотношения активных компонентов 3:1 и 5:1. Композиция (1,0 г/флакон), включающая соотношение 3:1, содержала 0,75 г цевтриаксона и 0,25 г тазобактама, номер партии 010105; композиция (1,2 г/флакон), включающая соотношение 5:1, содержала 1,0 г цевтриаксона и 0,2 г тазобактама, номер партии 010106. Лекарственные средства были предоставлены HaiKou QILI Pharmaceutical Co., LTD. Лекарственные средства хранили в холодильнике и перед использованием растворяли в стерилизованной воде для инъекций, а затем разбавляли до получения содержания цевтриаксона натрия и тазобактама натрия, равного 150 мг в миллилитре.
1.2 Способы
(1) Получение 2%-ной суспензии клеток крови кролика: кровь отбирали из сердечных тканей кролика, и отделяли фибрин с помощью стеклянных шариков, получая дефибринированную кровь; кровь помещали в градуированную центрифужную пробирку, в которую добавляли физиологический солевой раствор, смешивали и центрифугировали; жидкость над осадком отделяли, и жидкость над осадком промывали физиологическим солевым раствором до получения бесцветного и прозрачного вещества; затем красные кровяные клетки разбавляли физиологическим солевым раствором до получения 2%-ной суспензии.
(2) Гемолитические испытания. В 14 пробирок, содержащих композицию для инъекций, включающую цевтриаксон натрия и тазобактам натрия, где в 7 пробирках находилась композиция с соотношением цевтриаксон натрия:тазобактам натрия = 3:1, и в 7 пробирках находилась композиция с соотношением цевтриаксон натрия: тазобактам натрия = 5:1, добавляли различные жидкости (представленные в Таблицах 1 и 2). В шестую пробирку раствор образца не добавляли (холостой контроль). В седьмую пробирку раствор образца не добавляли, и вместо физиологического солевого раствора добавляли дистиллированную воду (положительный гемолитический контроль). Содержимое всех пробирок осторожно и равномерно перемешивали и инкубировали в инкубаторе, представляющем собой водяную баню, при температуре 37°C, проводя наблюдения каждый час в течение 4 часов. Если раствор становился красным и прозрачным, это свидетельствовало о протекании гемолиза; если в растворе появлялся коричневато-красный или красно-коричневый хлопьевидный осадок, это свидетельствовало о протекании агглютинации красных кровяных клеток; если все красные кровяные клетки оседали на дно, и жидкость над осадком становилась бесцветной и прозрачной, это свидетельствовало об отсутствии гемолиза.
1.3 Результаты
Данные, представленные в Таблицах 1 и 2, показывают отсутствие гемолиза и агглютинации в пробирках, содержащих 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл композиции для инъекций, содержащей цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (150 мг/мл, 37°С в течение 4 часов) как в соотношении 3:1, так и в соотношении 5:1. Жидкости над осадком были прозрачными и бесцветными, и все красные кровяные клетки оседали на дно - это показывает, что композиция для инъекций, содержащая цевтриаксон натрия и тазобактам натрия (150 мг/мл как в соотношении 3:1, так и в соотношении 5: 1), не оказывает гемолитического воздействия, что согласуется с требованиями безопасности для внутривенного введения.
Представленное описание представляет собой предпочтительные примеры осуществления настоящего изобретения. Очевидно, что специалистом в данной области техники могут быть произведены различные усовершенствования и модификации, не выходящие за рамки принципов настоящего изобретения, и такие усовершенствования и модификации включены в область настоящего изобретения.