Изучение антигенной активности вакцины против ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 и хламидиоза КРС на лабораторных животных

References

1. Infekcionnaya patologiya zhivotnyh [Infectious pathology of animals] / A.Ya.Samujlenko, B.V.Soloveva, E.A.Nepoklonova, E.S.Voronina. - M.: IKC «Akademkniga», 2006. - 1911 p.

2. Dyakonova L.P. Zhivotnaya kletka v kulture (Metody i primenenie v biotekhnologii) [Animal cells in culture (Methods and application in biotechnology)] / L.P.Dyakonova. - M.: Izd-vo «Sputnik+», 2009. - 656 p.

3. Kultivirovanie kletok i tkanej zhivotnyh. 2 Chast [Cultivation of cells and tissues of animals. Part 2] / L.P.Dyakonov [et al.]. - Stavropol: Stavrop. Pravda, 1988. - 91 p.

4. Freshni, R. Metody. Kultura zhivotnyh kletok [Methods. Culture of animal cells] / R.Freshni. - M.: Mir, 1989. - 333 p.

5. Sergeev, V.A. Reprodukciya i vyrashchivanie virusov zhivotnyh [Reproduction and cultivation of animals viruses] / V.A.Sergeev. - M.: Kolos, 1976. - 303 p.

6. Dyakonov, L.P. Specializirovannaya Kollekciya kletochnyh kultur selskohozyajstvennyh i promyslovyh zhivotnyh [Specialized Collection of Cell Cultures of Agricultural and Commercial Animals] (SKHZH RASKHN) RKKK RAN i kriobank ViEhV, «Konservaciya geneticheskih resursov»: materialy XIV rabochego soveshchaniya, Pushchino, 28-30 maya 1996 g. [Conservation of genetic resources: proceedings of the Fourteenth Workshop, Pushchino, May 28-301996] / L.P.Dyakonov. - Pushchino, 1996. - P. 76-79

7. Ulasov, V.I. Problemy borby s boleznyu Aueski u svinej [Problems of control of Aujeszky's disease in pigs] / V.I.Ulasov, A.A.Olshanskaya // Veterinariya. - 2009. - № 1. - P. 20-23.

8. Chuvstvitelnost zhivotnyh raznyh vidov k virusu bolezni Aueski [Sensitivity of animals of different species to the Aujeszky's disease virus] / V.A.Mishchenko, E.P.Baborenko, L.N.Kornienko [et al.] // Veterinariya. - 1994. -№ 5. - P. 20-22.

9. Yaschur [Foot-and-mouth disease] / A.N.Burdov, A.I.Dudnikov, P.V.Malyarec [et al.]. - M.: Agropromizdat, 1990.

- 320 p.

10. Infekcionnaya patologiya zhivotnyh. Tom I. Yaschur [Infectious pathology of animals. Volume I. Foot-and-mouth disease] / A.Ya.Samujlenko [et al.]. - M., 2014. - 909 p.

11. Gruzdev, K.N. Beshenstvo zhivotnyh [Rabies of animals] / K.N.Gruzdev, V.V.Nedosekov. - M.: Akvarium, 2001.

- 304 p.

12. Akinshina, T.V. Razrabotka nabora reagentov dlya ocenki effektivnosti postvakcinalnogo immuniteta k virusu beshenstva v serologicheskih reakciyah [Development of a reagent kit for assessing the effectiveness of postvaccinal immunity to rabies virus in serological reactions] abstract from dissertation for Doctor of Biological Sciences / T.V.Akinshina. - Schelkovo, 2005. - 28 p.

УДК: 619:616.98:578.822.2

ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 И ХЛАМИДИОЗА КРС НА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

И.Р.Акбашев - аспирант; В.В.Евстифеев - доктор биологических наук, доцент, зав. лабораторией;

В.Г.Гумеров - доктор ветеринарных наук, вед. н.с.; И.Г.Каримуллина - кандидат ветеринарных наук, ст. н. с.; Г.И.Хусаинова - кандидат биологических наук, ст. н. с.

ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г. Казань (420075, Казань, Научныйгородок-2; тел. +7(843) 239-53-49, e-mail: vnivi@mail.ru).

Представлены данные по изучению антигенной активности «Ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и хламидиоза КРС инактивированная эмульсионная» на лабораторных животных. В качестве лабораторных моделей использовали здоровых, серонегативных к ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и хламидийному антигенам кроликов, массой 2,5-3 кг. Для определения оптимальной прививочной дозы использовали 16 кроликов, из которых были сформированы, по принципу аналогов, 3 опытные группы и 1 контрольная группа, по 4 животных в каждой. Антигенную активность ассоциированной вакцины определяли путем двукратной, с интервалом 14 дней, подкожной вакцинации кроликов в определенной прививочной дозе и исследовании их сывороток крови с целью установления уровня специфических антител к вирусным (ИРТ, ВД-БС, ПГ-3) и хламидийному антигенам, через 30, 60, 90, 180 и 360 дней после вакцинации. Взятие крови у животных для определения уровня гуморального иммунитета осуществляли через 30 дней после первого введения вакцины. Таким образом, в ходе опыта было установлено, что двукратная с интервалом 14 дней, вакцинация кроликов в дозе 1,0 мл «Ассоциированной вакциной против ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и хламидиоза инактивированной эмульсионной» вызывает формирование высокого уровня антител ко всем 4-м антигенам. Изучен срок продолжительности действия иммунитета ко всем 4-м антигенам в течение 1 года.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: антигенная активность, ИРТ, ВД-БС, ПГ-3, хламидиоз, КРС, ассоциированная вакцина.

|ассовые заболевания новорожденных телят с симптомами конъюнктивита, поражения верхних и нижних дыхательных путей, гастроэнтеритов, артритов и других синдромов представляют серьезную проблему для животноводческих хозяйств во многих регионах Российской Федерации. Несмотря на то, что в той или иной мере, в инфекционном процессе могут принимать участие большое число микроорганизмов различной природы, как правило, главная роль принадлежит только нескольким возбудителям, таким, как хламидии, а также вирусам ПГ-3, ИРТ и ВД-БС [3, 4, 5, 6].

Ассоциированные инфекции протекают тяжелее, длительнее, со значительной вариабельностью клинических признаков. При них чаще возникают осложнения. Такие сочетания затрудняют постановку диагноза, выбор средств лечения и профилактики. Учитывая вышеизложенное, становится очевидным, что профилактика инфекционных болезней, должна проводиться с использованием ассоциированных вакцин [1, 2, 7].

Ранее в ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» на основе «Вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота инактивированной эмульсионной» была разработана и успешно испытана «Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и хламидиоза КРС инактивированная эмульсионная». Позднее она была внедрена в ветеринарную практику и успешно зарекомендовала себя для профилактики заболеваний репродуктивных органов у коров и респираторно-кишечных болезней телят. Но, в связи с возросшей этиологической ролью вируса диареи - болезни слизистых оболочек (ВД-БС) в структуре заболеваний молодняка КРС, возникла необходимость расширения антигенного спектра ассоциированной вакцины путем добавления в её состав соответствующего вирусного антигена. Так, нами была сконструирована «Ассоциированная вакцина против ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 и хла-мидиоза КРС инактивированная эмульсионная».

На первоначальном этапе внедрения вакцины нам предстояло определить ее оптимальную прививочную дозу и изучить антигенную активность на лабораторных животных, что и стало целью данной работы.

Материалы и методы. В качестве лабораторных моделей использовали здоровых, серонегативных к ПГ-3, ИРТ, ВД и хламидийному антигенам кроликов, массой 2,5-3 кг.

Для определения оптимальной прививочной дозы использовали 16 кроликов, из которых были сформированы, по принципу аналогов, 3 опытные группы и 1 контрольная группа, по 4 животных в каждой:

1-ая группа - кролики, вакцинированные в дозе 0,5 см3,подкожно;

2-ая группа - кролики, вакцинированные в дозе 1.0 см3,подкожно;

3-я группа - кролики, вакцинированные в дозе 2.0 см3,подкожно;

4-ая группа - (контрольная) не вакцинированные животные.

Через 14 дней, по 2 кролика, из каждой опытной группы, ревакцинировали в тех же дозах, с целью установления целесообразности ревакцинации для стимулирования выработки специфических антител.

Взятие крови у животных для определения уровня гуморального иммунитета осуществляли через 30 дней после первого введения вакцины.

Антигенную активность ассоциированной вакцины определяли путем двукратной, с интервалом 14 дней, подкожной вакцинации кроликов в определенной прививочной дозе и исследовании их сывороток крови с целью установления уровня специфических антител к вирусным (ИРТ, ВД-БС, ПГ-3) и хламидийному антигенам, через 30, 60, 90, 180 и 360 дней после вакцинации.

Уровень хламидийных антител в сыворотке крови кроликов определяли в РСК с использованием «Набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных живот-ных»(РОСС Ш.ФВ01.Н00022) производства ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань), по инструкции, утвержденной Заместителем руководителя Россельхознад-зора от 3 марта 2008 года.

Для выявления уровня специфических антител к вирусам ИРТ и ВД использовали иммуноферментный анализ (ИФА), который ставили в непрямом варианте с использованием коммерческих тест систем: «Набор для выявления антител к вирусу инфекционного ри-нотрахеита крупного рогатого скота иммунофермент-ным методом «ИРТ-СЕРОТЕСТ» (ООО «Ветбиохим», г. Москва); «Набор для иммуноферментной диагностики вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС) крупного рогатого скота», (ВИЭВ, г. Москва).

Определение активности образования антител к вирусу ПГ-3 проводили путем постановки реакции торможения гемагглютинации с использованием набора диагностикума ПГ-3 КРС, изготовленного в ФГУ «Курская биофабрика - фирма «БИОК».

Результаты исследований. Анализ результатов титров специфических антител, представленных в таблице №1, позволяет заключить, что двукратное введение ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ, ВД и хламидиоза КРС инактивированной эмульсионной, подкожно, в дозах 1,0 и 2,0 мл вызывает у кроликов формирование гуморального иммунитета выражающегося в образовании высокого уровня специфических антител ко всем четырем антигенам, соответственно дозам: к ПГ-3 - 1:60 и 1:100; к ИРТ - 1:2400 и 1:3200; к ВД - 1:1600 и 1:4800; к хламидийному антигену - 1:15 и 1:25.

Таблица 1

Уровень специфических антител в крови кроликов на 30 день после вакцинации и ревакцинации

Группа Доза, мл Номер жи- Кратность Обратные величины титров антител к антигену

вотного вакцинации ПГ-3 ИРТ ВД-БС хламидиоз

1 1-кратно 5 100 200 10

1 опытная 0,5 мл 2 5 100 200 20

3 2-кратно 20 400 800 10

4 10 400 1600 20

Средний титр(М) 5/15 100/400 200/1200 15/15

5 1-кратно 10 200 1600 10

2 опытная 1,0 мл 6 5 200 200 40

7 2-кратно 40 1600 1600 10

8 80 3200 1600 20

Средний титр(М) 7/60 200/2400 900/1600 25/15

9 1-кратно 10 1600 3200 20

3 опытная 2,0 мл 10 20 800 1600 10

11 2-кратно 160 3200 3200 40

12 40 3200 6400 10

Средний титр(М) 15/100 1200/3200 2400/4800 15/25

4 контроль 13-16 0 0 0 0

Примечание: через дробь указаны средние титры антител при однократной/двукратной вакцинации.

При этом, доза вакцины в 0,5 мл не была достаточной, для выработки у кроликов гуморального иммунитета, как при однократной, так и при двукратной вакцинации.

Исходя из этого, для дальнейшего изучения антигенной активности вакцины, оптимальной, для иммунизации кроликов, была определена доза 1,0 мл при двукратной вакцинации, с интервалом 14 дней.

Дальнейшие результаты опыта по изучению антигенной активности ассоциированной вакцины показали, что в течение всего периода наблюдений (1 год) в сыворотках крови опытных кроликов регистрировали высокий уровень антител ко всем четырем антигенам, включенным в состав препарата. Так, на 30-ый день после вакцинации, специфические антитела к ПГ-3 регистрировались в крови у опытных животных в тирах 1:80 - 1:320 или в среднем титре - 1:120. На 60-й и 90-й дни происходило постепенное увеличение титров антител данному антигену, которое достигало максимального значения к 180-му дню - 1:1440, а затем постепенно снижалось до уровня 1:180 через год после вакцинации.

Аналогичная картина наблюдалась и при исследовании сывороток вакцинированных животных с антигеном вируса ИРТ. Так, к 30-му дню средний титр антител по группе составлял 1:650, к 60-му и 90-му дням

- 1:2350 и 1:12800, достигал максимального уровня на 180-ый день - 1:14400 и, затем, постепенно снижался к 360-му дню, достигая среднего значения 1:750.

При исследовании проб сывороток крови вакцинированных животных с антигеном вируса диареи -болезни слизистых в ИФА на 30-ый день средний титр антител по группе составлял 1:1200, достигая максимального значения, также, к 180-му дню - 1:14400 и снижаясь к концу срока наблюдений до 1:550.

Несколько иная картина наблюдалась при изучении динамики специфических антител к хламидийному антигену, средний максимальный титр антител к которому выявлялся уже на 90 день после вакцинации -1:80, сохранялся на этом уровне до 180 дня и снижался до 1:8, через год после вакцинации.

Заключение. Таким образом, в ходе опыта было установлено, что двукратная с интервалом 14 дней, вакцинация кроликов в дозе 1,0 мл «Ассоциированной вакциной против ПГ-3, ИРТ, ВД-БС и хламидиоза инактивированной эмульсионной» вызывает формирование высокого уровня антител ко всем 4-м антигенам, которые достигают максимального уровня через 90 - 180 дней и сохраняются в крови опытных животных до 1 года после иммунизации, что свидетельствует о высокой антигенной активности испытанной вакцины.

еои^и^вих РСК цо о о со

Ф щ эа-Яа ИФА о о со 0 о 8 0 о 4 0 о 8 0 5

О СО со 1ИИ ИФА 1600 0 о 4 0 о 2 0 о 8 0 ю 1-—

8"Л1 РТГА 0 со со о со 0 со 0 со 0 со

сс еои^и^вих РСК о со о о со о о со

Щ го со О Ф ^ Ф 1С эа-Яа ИФА 6400 12800 25600 12800 14400

о у о а. о со ИФА 12800 6400 25600 12800 14400

Ф _а щ 6~_Ш РТГА 1280 1280 0 6 2560 1440

со го а. со ^ еои^и^вих РСК О со о О со о О СО

го Щ ф Щ го ^ ф Щ эа-Яа ИФА 6400 12800 25600 12800 12800

^ у о ф 1Т ^ ф с О о СП 1ИИ ИФА 12800 6400 25600 12800 12800

6~_Ш РТГА 1280 1280 0 6 2560 1280

Ф :Е го еои^и^вих РСК О СО О СО О СО О О СО

о а. го Щ ^ Ф Щ 1=3 эа-Яа ИФА 6400 6400 1200 1000 3750

:т Ф со ее со 1ИИ ИФА 3200 3200 1000 2000 2350

:Е ел а. о О 6~_Ш РТГА 1280 0 6 0 6 0 6 0 О 8

еоиАиивих РСК О СО О со О со о со О со

^ ф Щ 1=3 эа-Яа ИФА 2000 1000 1000 0 о 8 1200

со 1ИИ ИФА 1000 0 о 4 0 о 6 0 о 6 0 6

6~_Ш РТГА О со о со 0 со 0 со 3 0 СО

сионюаиж оИ - со со Ср. титр

Литература

1. Ахметсафин, Р.Г. Смешанные респираторные инфекции молодняка крупного рогатого скота / Р.Г.Ахмет-сафин, Р.Р.Шарафиева // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов. - Казань, 2007 - С. 102-104.

2. Иванов, А.В. Этиопатогенез респираторно-генитальных инфекций крупного рогатого скота, проблемы и перспективы их диагностики, профилактики и борьбы с ними / А.В.Иванов, Х.З.Гаффаров // Ветеринарный врач. - 2008. - № 4. - С. 2-7.

3. Митрофанов, П.М. Клиника и патогенез хламидиоза / П.М.Митрофанов // Ветеринария. - 1980. - № 6. - С. 37-39.

4. Митрофанов, П.М. Хламидиоз крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / П.М.Митрофанов, В.А.Семенов, Р.Х.Хамадеев. - Чебоксары: РИЦ «Гранит», 2001. - 54 с.

5. Вирусные болезни животных / В.Н.Сюрин, А.Я.Самуйленко , Б.Н.Соловьев, Н.В.Фомина. - М.: ВНИТИБП, 1998. - 927 с.

6. Сюрин, В.Н. Частная вирусология: справочная книга / В.Н.Сюрин, Н.В.Фомина. - М.: Колос, 1979. - 472 с.

7. Шабунин, С.В. Бактериальные и вирусные инфекции в патологии воспроизводительной функции у коров / С.В.Шабунин, А.Г.Шахов, А.Г.Нежданов // Ветеринария. - 2012. - № 10. - С. 3-8.

DEFINITION OF THE ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINE AGAINST IRT, VD-BS, PG-3 AND CHLAMIDIOSIS OF CATTLE IN LABORATORY ANIMALS

Akbashev I.R. - postgraduate; Evstifeev V.V. - Doctor of Biological Sciences;

Gumerov V.G. - Doctor of Veterinary Sciences; Karimullina I.G. - Candidate of Veterinary Sciences;

Khusainova G.I. - Candidate of Veterinary Sciences.

Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: vnivi@mail.ru).

The article presents data on the study of the antigenic activity of the "Associated vaccine against PG-3, IRT, VD-BS and chlamidiosis of the cattle inactivated emulsion" in laboratory animals. As laboratory models healthy, with seronegativity antigens to PG-3, IRT, VD-BS and chlamidiosis rabbits weighing 2.5-3 kg were used. To determine the absolute vaccination dose, 16 rabbits were used, of which 3 experienced and 1 control groups were formed by analogy, of 4 heads in each. The antigenic activity of the associated vaccine was determined by double 14 days interval subcutaneous vaccination of rabbits with a certain dose, and their blood serums were studied to determine the level of specific antibodies to viral PG-3, IRT, VD-BS and chlamidiosis antigens in 30,60,90,180 and360 days after vaccination. Taking blood from animals to determine the level of humoral immunity was performed in 30 days after the first administration of the vaccine. Thus, in the results of the experiment, the double 14 days interval rabbit vaccination in a dose of 1 ml. by "Associated vaccine against PG-3, IRT, VD-BS and chlamidiosis of the cattle inactivated emulsion" was found to cause the formation of high level antibodies to all 4 antigens. The duration of the effect of immunity to all 4 antigens within 1 year was studied.

KEYWORDS: Antigenic activity, IRT, VD-BS, PG-3, chlamidiosis, cattle, associated vaccine.

References

1. Ahmetsafin, R.G. Smeshannye respiratornye infektsii molodnyaka krupnogo rogatogo skota [Mixed respiratory infections of young cattle] / R.G.Ahmetsafin, R.R.SHarafieva // Aktualnye problemy veterinarii: materialy nauch.-prakt. konf. molodyh uchenyh i spetsialistov. - Kazan, 2007 - P. 102-104.

2. Ivanov, A.V. Etiopatogenez respiratorno-genitalnyh infektsij krupnogo rogatogo skota, problemy i perspektivy ih diagnostiki, profilaktiki i borby s nimi [Etiopathogenesis of respiratory genital infections of cattle, problems and prospects of their diagnostics, prevention and control] / A.V.Ivanov, H.Z.Gaffarov // Veterinarnyj vrach. - 2008. - № 4. - P. 2-7.

3. Mitrofanov, P.M. Klinika i patogenez hlamidioza [Clinical picture and pathogenesis of chlamydiosis ] / P.M.Mitrofanov // Veterinariya. - 1980. - № 6. - P. 37-39.

4. Mitrofanov, P.M. Hlamidioz krupnogo rogatogo skota i mery borby s nim [Chlamydiosis of cattle and measures to control it] / P.M.Mitrofanov, V.A.Semenov, R.H.Hamadeev. - Cheboksary: RITS «Granit», 2001. - 54 p.

5. Virusnye bolezni zhivotnyh [Viral animals diseases] / V.N.Syurin, A.Ya.Samujlenko, B.N.Soloviev, N.V.Fomina. - M.: VNITIBP, 1998. - 927 p.

6. Syurin, V.N. Chastnaya virusologiya: spravochnaya kniga [Private virology: a reference book] / V.N.Syurin, N.V.Fomina. - M.: Kolos, 1979. - 472 p.

7. Shabunin, S.V. Bakterialnye i virusnye infektsii v patologii vosproizvoditelnoj funktsii u korov [Bacterial and viral infections in the pathology of the reproductive function in cows] / S.V.Shabunin, A.G.SHahov, A.G.Nezhdanov // Veterinariya. - 2012. - № 10. - P. 3-8.