СПОСОБЫ И ВЕЩЕСТВА ДЛЯ ОСНОВАННОГО НА РЕКОМБИНАЦИИ ПОЛУЧЕНИЯ СОЕДИНЕНИЙ ШАФРАНА

1. Рекомбинантная, продуцирующая каротиноиды клетка-хозяин, содержащая экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую расщепляющую зеаксантин диоксигеназу (ZCD), при этом указанная ZCD необязательно представляет собой ZCD Crocus sativus.
2. Клетка-хозяин по п. 1, в котором указанная клетка-хозяин продуцирует регистрируемые количества кроцетина, диальдегида кроцетина или гидроксил-β-циклоцитраля (НВС).
3. Клетка-хозяин по п. 1, содержащая экзогенную нуклеиновую кислоту, содержащую (a) рекомбинантный ген, кодирующий геранилгеранилдифосфатсинтазу (GGPPS); (b) рекомбинантный ген, кодирующий фитоинсинтазу; (c) рекомбинантный ген, кодирующий фитоиндегидрогеназу; и (d) рекомбинантный ген, кодирующий β-каротинсинтазу.
4. Клетка-хозяин по п. 1, в котором указанная клетка-хозяин дополнительно содержит рекомбинантный ген, кодирующий β-каротингидроксилазу или альдегиддегидрогеназу, или рекомбинантный ген, кодирующий β-каротингидроксилазу или альдегиддегидрогеназу.
5. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая экзогенные нуклеиновые кислоты, содержащие
(a) рекомбинантный ген, кодирующий GGPPS,
(b) рекомбинантный ген, кодирующий фитоинсинтазу,
(c) рекомбинантный ген, кодирующий фитоиндегидрогеназу, и рекомбинантный ген, кодирующий β-каротинсинтазу, β-каротингидроксилазу или расщепляющую зеаксантин диоксигеназу
(ZCD),
при этом клетка продуцирует кроцетин и/или диальдегид кроцетина.
6. Клетка-хозяин по любому из пп. 1 или 5, в котором указанная клетка-хозяин дополнительно содержит рекомбинантный ген, кодирующий агликон-O-гликозил-уридин-5′-дифосфо(UDP)гликозилтрансферазу (O-гликозил-UGT).
7. Клетка-хозяин по п. 6, в котором указанная клетка-хозяин продуцирует пикрокроцин или кроцин.
8. Клетка-хозяин по п. 6, в котором указанная агликон-O-гликозил UGT представляет собой UGT85C2, UGT73-EV12 или гибридный фермент UGT71.
9. Клетка-хозяин по любому из пп. 1 или 5, в котором указанныая клетка-хозяин дополнительно содержит экзогенную нуклеиновую кислоту, кодирующую уридин-5′-дифосфоглюкоза (UDP-глюкоза)кроцетин-8,8′-глюкозилтрансферазу.
10. Клетка-хозяин по п. 9, в котором указанная клетка-хозяин продуцирует регистрируемое количество моноглюкозида кроцетина или диглюкозида кроцетина.
11. Клетка-хозяин по любому из пп. 1 или 5, в котором указанная клетка-хозяин дополнительно содержит рекомбинантный ген, кодирующий UGT, где UGT катализирует образование β-глюкозидной связи между двумя остатками глюкозы.
12. Способ получения пикрокроцина, при этом указанный способ включает в себя осуществление контакта гидроксил-β-циклоцитраля (НВС) с агликон-O-гликозил-UGT и UDP-глюкозой, где указанная агликон-O-гликозил-UGT представляет собой UGT85C2, UGT73-EV12
или гибридный фермент UGT71.
13. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид UGT73, имеющий по меньшей мере 80% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью UGT73, указанной на фиг. 3.
14. Выделенный полипептид, имеющий по меньшей мере 80% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью UGT73, указанной на фиг. 3, или имеющий аминокислотную последовательность, указанную на фиг. 9.
15. Синтетическая последовательность ДНК, которая указана в SEQ ID NO: 58, кодирующая аминокислотную последовательность, которая указана в SEQ ID NO: 57.
16. Синтетическая последовательность ДНК, которая указана в SEQ ID NO: 65, кодирующая аминокислотную последовательность, которая указана в SEQ ID NO: 66.
17. Кассета экспрессии ДНК, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по п. 13, в которой выделенная нуклеиновая кислота функционально связана с промотором.
18. Рекомбинантный вектор, содержащий кассету экспрессии ДНК по п. 17.
19. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая кассету экспрессии ДНК по п. 17.
20. Рекомбинантная клетка по п. 19, в котором клетка представляет собой клетку дрожжей, клетку Е. coli, растительную клетку, клетку млекопитающего и клетку насекомого.
21. Рекомбинантная клетка по п. 20, в которой клетка дрожжей является Saccharomyces cerevisiae.
22. Рекомбинантная клетка, содержащая рекомбинантный вектор по п. 18.
23. Способ получения кроцетина, при этом указанный способ включает в себя осуществление контакта диальдегида кроцетина с альдегиддегидрогеназой с получением кроцетина в клетке по пункту 19 или 22.
24. Клетка-хозяин по пункту 1, где ZCD содержит ZCD Crocus sativus.
25. Клетка-хозяин по п. 1, содержащая экзогенные нуклеиновые кислоты, содержащие
(a) рекомбинантный ген, кодирующий геранилгеранилдифосфатсинтазу (GGPPS),
(b) рекомбинантный ген, кодирующий фитоинсинтазу,
(c) рекомбинантный ген, кодирующий фитоиндегидрогеназу, или
(d) рекомбинантный ген, кодирующий β-каротинсинтазу.
26. Клетка-хозяин по п. 5, где β-каротингидроксилаза содержит β-каротингидроксилазу Xanthophyllomyces dendrorhous, и где ZCD содержит ΖCD Crocus sativus.
27. Клетка-хозяин по п. 9, где указанная UDP-глюкоза-кроцетин-8,8′-глюкозилтрансфераза содержит UDP-глюкоза-кроцетин-8,8′-глкжозилтрансферазу Crocus, и где указанная UDP-глюкоза-кроцетин-8,8′-глюкозилтрансфераза Crocus содержит CsVrUGT2.
28. Клетка-хозяин по п. 11, где UGT представляет собой UGT76G1.
29. Конструкция нуклеиновой кислоты, содержащая регуляторную область, функционально связанную с нуклеиновой кислотой по п. 13.
30. Кассета экспрессии ДНК, содержащая синтетическую последовательность ДНК по п. 15 или 16, где синтетическая последовательность ДНК функционально связанную с промотором.