СЛИТЫЙ БЕЛОК ТЕЛОМЕРАЗНОЙ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПТАЗЫ, КОДИРУЮЩИЕ ЕГО НУКЛЕОТИДЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок теломеразной обратной транскриптазы человека (hTERT), причем слитый белок hTERT содержит белок hTERT или его вариант, слитый со значительной частью белка субъединицы B термолабильного энтеротоксина (LTB) E. coli, и где слитый белок способен к индукции иммунного ответа у млекопитающего.
2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где нуклеотидная последовательность кодирует вариант белка hTERT, причем указанный вариант содержит одну или несколько мутаций относительно аминокислотной последовательности hTERT дикого типа, приведенной в SEQ ID NO: 12, и функция указанных мутаций приводит к устранению или снижению теломеразной каталитической активности кодируемого белка hTERT.
3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.2, где мутации включают D712A и V713I.
4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.3, где кодоны нуклеотидной последовательности, кодирующей hTERT, оптимизированы для высокоэффективной экспрессии в клетке человека.
5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.3, где кодируемый белок LTB укорочен по его сигнальной последовательности.
6. Молекула нуклеиновой кислоты по п.5, где кодоны нуклеотидной последовательности, кодирующей LTB, оптимизированы для высокоэффективной экспрессии в клетке человека.
7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, где кодоны нуклеотидной последовательности, кодирующей LTB, и нуклеотидной последовательности, кодирующей hTERT, оптимизированы для высокоэффективной экспрессии в клетке человека.
8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.7, где нуклеотидная последовательность содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5.
9. Молекула нуклеиновой кислоты по п.3, где нуклеотидная последовательность кодирует слитый белок hTERT-LTB, приведенный в SEQ ID NO: 6.
10. Очищенный слитый белок, содержащий белок теломеразной обратной транскриптазы человека (hTERT) или его вариант, слитый с белком B субъединицы термолабильного энтеротоксина (LTB) E. coli.
11. Очищенный слитый белок по п.10, где C-конец белка hTERT слит с N-концом белка LTB.
12. Очищенный слитый белок по п.11, где белок hTERT содержит мутации, функция которых приводит к устранению теломеразной каталитической активности.
13. Очищенный слитый белок по п.12, где белок содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 6.
14. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
15. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.9.
16. Вектор по п.15, где вектор представляет собой плазмидный вектор или аденовирусный вектор.
17. Вектор по п.16, где вектор представляет собой плазмиду pV1J.
18. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.15.
19. Молекула нуклеиновой кислоты по п.7, где нуклеотидная последовательность дополнительно содержит лидерную последовательность, кодирующую сигнальную последовательность активатора тканевого плазминогена (TPA) человека.
20. Молекула нуклеиновой кислоты по п.19, где нуклеотидная последовательность содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1
21. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.20.
22. Аденовирусный вакцинный вектор, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую теломеразную обратную транскриптазу человека (hTERT), где нуклеотидная последовательность содержит мутации, функция которых приводит к устранению теломеразной каталитической активности.
23. Аденовирусный вакцинный вектор по п.22, где нуклеотидная последовательность кодирует белок hTERT, приведенный в SEQ ID NO: 10.
24. Вектор по п.23, где вектор представляет собой вектор Ad5 или вектор Ad6.
25. Способ экспрессии слитого белка hTERT-LTB в рекомбинантной клетке-хозяине, включающий
(a) введение вектора, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, в подходящую клетку-хозяина; и,
(b) культивирование клетки-хозяина в условиях, позволяющих экспрессию указанного слитого белка hTERT-LTB.
26. Способ профилактики или лечения злокачественной опухоли, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту вакцинного вектора, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты по п.2.
27. Способ по п.26, где вектор представляет собой аденовирусный вектор или плазмидный вектор.
28. Способ по п.27, где вектор представляет собой аденовирусный вектор, содержащий аденовирусный геном с делецией в области аденовируса E1, и вставку в область аденовируса E1, где вставка содержит экспрессирующую кассету, содержащую
(a) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок hTERT-LTB, где слитый белок hTERT-LTB содержит вариант белка hTERT; где указанный вариант белка hTERT, содержащий мутации для устранения теломеразной каталитической активности, слит со значительной частью субъединицы B термолабильного энтеротоксина (LTB) E. coli и где слитый белок способен к индукции иммунного ответа у млекопитающего; и
(b) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом.
29. Способ по п.27, где вектор представляет собой плазмидный вакцинный вектор, который содержит плазмидную часть и экспрессируемую кассету, содержащую
(a) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок hTERT-LTB, где слитый белок hTERT-LTB содержит вариант белка hTERT; где указанный вариант белка hTERT, содержащий мутации для устранения теломеразной каталитической активности, слит со значительной частью субъединицы B термолабильного энтеротоксина (LTB) E. coli и где слитый белок способен к индукции иммунного ответа у млекопитающего; и
(b) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом.
30. Аденовирусный вакцинный вектор, содержащий аденовирусный геном с делецией в области E1 и вставкой в области E1, где вставка содержит экспрессирующую кассету, содержащую
(a) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую вариант теломеразной обратной транскриптазы человека, приведенный в SEQ ID NO: 10; и
(b) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом.
31. Аденовирусный вектор по п.30, который представляет собой вектор Ad5 или Ad6.
32. Способ лечения пациента, страдающего от ассоциированной с TERT злокачественной опухоли или предрасположенного к ней, включающий
(a) одно или несколько введений пациенту первого вектора, содержащего
(i) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок hTERT-LTB, где слитый белок hTERT-LTB содержит вариант белка hTERT; где указанный вариант белка hTERT, содержащий мутации для устранения теломеразной каталитической активности, слит со значительной частью субъединицы B термолабильного энтеротоксина (LTB) E. coli, и где слитый белок способен к индукции иммунного ответа у млекопитающего; и
(ii) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом;
(b) ожидание прохождения предопределенного периода времени; и
(c) введение пациенту второго вектора, содержащего
(i) полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую вариант теломеразной обратной транскриптазы человека, приведенный в SEQ ID NO: 10; и
(ii) промотор, функционально связанный с полинуклеотидом;
где первый вектор и второй вектор являются различными.
33. Способ по п.32, где первый вектор представляет собой плазмиду, а второй вектор представляет собой аденовирусный вектор.
34. Способ по п.33, где плазмидный вектор перед введением аденовирусного вектора вводят пациенту более одного раза.