Влияние очищенных пептидных фракций из тромбоцитов курицы домашней на гемолитическую и протеолитическую активность бактерий

2,8 раза. Длина железистого отдела желудка в постинкубационный период онтогенеза увеличивается в 2,6, ширина — в 3,2, а высота — в 1,9 раза. Длина и ширина мышечного отдела желудка от 5- до 38-суточного возраста увеличивается в 1,8, высота — в 2,5, а толщина дорсальной и вентральной боковой мышцы органа — в 3 раза.

2. Увеличение морфометрических показателей кишечника цыплят-бройлеров в постинкубационный период онтогенеза происходит неритмично. Так, масса кишечника цыплят-бройлеров в возрасте 5—38 сут. увеличивается в 22 раза, длина тонкого отдела кишечника — в 1,8, а ширина — в 2,2 раза, а линейные показатели толстого отдела кишечника имеют следующие значения: длина слепых отростков возрастает в 2,5, ширина — в 1,8 раза; длина прямой кишки — в 1,8, а ширина — в 8,7 раза.

Литература

1. Бобылев А. Возможности пищеварительной системы птицы / А. Бобылев, А. Глотов, Ц. Батоев, М. Аюрзанаева, П. Бердников, Г. Шпилева // Птицеводство. 2002. № 5. С. 14-17.

2. Жарова Е., Ткачёв А. Морфология толстого кишечника кур кросса «ИСА браун» // Птицеводство. 2007. № 10. С. 38.

3. Крыгин А.В. Морфология постэмбрионального развития мышечной части желудка курицы // Эколого-экспери-

ментальные аспекты функциональной и возрастной морфологии домашних птиц. Воронеж. 1988. С. 45—49.

4. Налетова Л.А. Макроморфологические особенности мышечного отдела желудка кур и гусей // Исследования по морфологии и физиологии животных: сб. науч. трудов ДальГАУ. Благовещенск, 2002. Вып. 14. С. 126-132.

5. Пономарева Т.А., Сытько В.В. Сравнительная динамика постнатального роста толстой кишки курицы и утки домашних // Материалы всеросс. науч.-методич. конф. патологоанатомов ветеринарной медицины. М., 2003. С. 123-125.

6. Пономарева Т.А. Сравнительная динамика постнатального роста массы тонкой кишки курицы и утки домашних // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, товароведения, экономики и организации сельскохозяйственного производства и подготовки кадров на Южном Урале: матер. межвузов. науч.-практич. и науч.-методич. конф. Троицк, 2002. С. 104-106.

7. Прибытов И.В. Морфологические особенности железистого и мышечного отделов желудка у домашних и диких птиц из отряда курообразные // Аграрная наука и образование в реализации национального проекта «Развитие АПК»: матер. Всеросс. науч.-практич. конф. Ульяновск, 2006. С. 201-204.

8. Ткачев А., Степанова Е., Осипов К. Возрастная морфоме-трия передней кишки птицы // Птицеводство. 2007. № 2. С. 25-26.

9. Жилин A.B., Зайцева Е.В., Крикливый H.H. К морфологии желудка бройлеров // Экологическая безопасность региона: сб. статей II Междунар. науч.-практич. конф. Брянск: Изд-во «Курсив», 2009. С. 130-133.

10. Джамбулатова К.Д., Тайгузин Р.Ш. Особенности морфологии железистого желудка цыплят-бройлеров при гипотрофии и коррекции пробиотиками Ветом-1.1. и Лактобифадол // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2015. № 6 (56). С. 113-116.

Влияние очищенных пептидных фракций из тромбоцитов курицы домашней на гемолитическую и протеолитическую активность бактерий

М.В. Сычёва, д.б.н, Ю.И. Пешкова, аспирантка, В.В. Дымова, к.б.н., ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ; О.Л. Карташова, д.б.н., профессор, ИКВС УрО РАН

Поиск новых противомикробных веществ — одна из глобальных проблем, возникших в результате распространения антибиотикорезистентных патогенных микроорганизмов в клинике. Известно, что клетки крови, в частности кровяные пластинки, являются источником различных катионных пептидов, обладающих выраженной биологической активностью [9, 10]. В частности, установлено, что кислотные экстракты, полученные из тромбоцитов и кровяных пластинок животных, обладают широким спектром антимикробной активности [ 1], повышают чувствительность к антибиотикам и антагонистическому действию нормальной микрофлоры кишечника животных, а также ингибируют факторы персистенции и гемолитическую активность микроорганизмов. Выраженность их действия определяется видом животного, являющегося источником тромболизатов, при этом наиболее эффективным ингибитором персистентных и вирулентных свойств бактерий выступают кислотные экстракты из тромбоцитов курицы домашней [2—4].

Из тромбоцитов курицы домашней выделены индивидуальные фракции пептидов, обладающие

антимикробной активностью [5], с использованием электроаналитических и сепарационных методов детализирован механизм их антимикробного действия [6, 7]. Между тем вопрос о влиянии очищенных АМП из тромбоцитов кур на факторы вирулентности микроорганизмов остаётся открытым. Вышеизложенное определило дальнейшее направление нашей работы — изучение влияния очищенных антимикробных пептидов из тромбоцитов курицы домашней на гемолитическую и протеолитическую активности микроорганизмов.

Материал и методы исследования. При проведении работы были использованы три гомогенные пептидные фракции (№ 29, 30 и 31) с выраженным антимикробным действием, которые были получены из уксуснокислого экстракта тромбоцитов курицы домашней методом обращённо-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ) в ступенчатом и линейном градиентах увеличения концентрации органического растворителя [8].

Воздействие очищенных пептидных фракций на гемолитическую активность изучали на трёх клонах Staphylococcus aureus. Протеолитическую активность изучали на трёх клонах Staphylococcus aureus и Escherichia coli. Клоны микроорганизмов получали путём рассева суточной культуры на плотную пи-

тательную среду в соответствии с указаниями Дж. Миллера (1976). Взвесь суточных агаровых культур в стерильном изотоническом растворе NaCl, содержащем 0,1% раствора бычьего сывороточного альбумина (SIGMA, Германия), соинкубировали с пептидными фракциями из тромбоцитов курицы домашней в предварительно установленных минимальной подавляющей концентрации (МПК) и 1/4 минимальной подавляющей концентрации в течение 1 часа при 37°С.

Количественную оценку гемолитической активности клонов S. aureus до и после соинкубирования с пептидными фракциями проводили фотометрическим методом.

Активность протеаз культур микроорганизмов определяли биуретовым методом по убыли альбумина после их инкубации с пептидными фракциями.

Полученные данные подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования и выводы. На первом этапе было определено влияние очищенных пептидных фракций на гемолитическую активность S. aureus. Все клоны S. aureus до соинкубирования с исследуемыми пептидными фракциями обладали гемолитической активностью, среднее значение которой составляло 17+1,5% (рис. 1).

После соинкубирования стафилококков с 29-й и 30-й пептидными фракциями в МПК способность к гемолизу эритроцитов у изученных клонов отсутствовала; в 1/4 МПК — значимо снижалась — на 94 и 98% соответственно и составляла 0,94+0,174% и 0,28+0,075% (Р<0,001).

Аналогичные результаты были получены при со-инкубировании клонов золотистого стафилококка с пептидами 31-й фракции: гемолитическая активность под влиянием АМП в МПК уменьшалась до 0,5+0,02 %, в 1/4 МПК - до 3,23+0,16%. Разница значений по сравнению с контролем в обеих концентрациях достоверна (Р<0,001).

Таким образом, отмечено, что АМП из тромбоцитов курицы домашней ингибировали гемолитическую активность золотистого стафилококка в 100%

случаев, при этом её снижение в большей степени происходило при соинкубировании с пептидными фракциями в МПК.

На втором этапе было оценено влияние очищенных пептидных фракций из тромбоцитов кур на протеолитическую активность S. aureus и E. coli. В ходе эксперимента было установлено, что изучаемые фракции преимущественно ингибировали протеолитическую активность S. aureus (рис. 2).

Максимальный ингибирующий эффект оказывала 31-я фракция в 1/4 МПК: протеолитиче-ская активность S. aureus уменьшалась на 36% с 0,11+0,002 мг-мл/мин до 0,07+0,003 мг-мл/мин (Р<0,05). Отмечено снижение активности протеаз при соинкубировании S. aureus со всеми тремя фракциями в МПК до одинакового значения — 0,08+0,004 мг - мл/мин (Р<0,05). Исключение составила 29-я пептидная фракция в 1/4 МПК, которая стимулировала изучаемый признак золотистого стафилококка до 0,17+0,003 мг-мл/мин (Р<0,05).

Соинкубирование E. coli с тремя пептидными фракциями позволило установить их преимущественно стимулирующее влияние на изучаемый признак (рис. 3).

Пептиды 29-й фракции в 1/4 МПК не оказывали влияния на протеолитическую активность кишечной палочки (0,16+0,008 мг-мл/мин), в то время как пептиды этой фракции в МПК повышали активность протеаз до 0,2+0,0013 мг • мл/мин. Максимальный стимулирующий эффект в отношении изучаемого признака демонстрировали пептиды 30-й фракции в 1/4 МПК (0,25+0,002 мг • мл/мин). Соинкубирование с пептидами данной фракции в МПК приводило к снижению протео-литической активности до 0,15+0,002 мг • мл/мин. Пептиды 31-й фракции в МПК и 1/4 МПК оказывали стимулирующий эффект на рассматриваемый фактор вирулентности, увеличивая протеолити-ческую активность до 0,17+0,001 мг-мл/мин и 0,18+0,003 мг-мл/мин соответственно.

Вывод. В ходе эксперимента было установлено, что очищенные антимикробные пептиды, выделен-

Рис. 1

I S

Изменение гемолитической активности S. aureus под воздействием АМП из тромбоцитов кур: *** - достоверность различий показателя гемолитической активности в контроле и опыте

0.2 0.1S 0.1В 0.54 0.12 0.1 D.0S 0.06 0.04 Й.02 0

1 п

-

.... г"~1

- 1 -

Контроль меж | тшк Фракция 29 мпк | 1/4 мпк Фракция 30 мпк 1 1/4 мпк Фрикция 31

Рис. 2

Изменение протеолитической активности S. aureus под воздействием АМП из тромбоцитов кур:* - достоверность различий показателя протеолитической активности в контроле и опыте

IM МШч фпщвмзд

Рис. 3 - Изменение протеолитической активности E. coli под воздействием очищенных пептидных фракций

ные из тромбоцитов курицы домашней, оказывают ингибирующее влияние на гемолитическую активность S. aureus. Подобный эффект был выявлен Trine S. Ryge et al. (2008), которые не только установили антимикробное действие синтетических АМП, но и показали их ингибирующее воздействие на гемолитическую активность бактерий и грибов [11].

Максимальный эффект (утрата способности разрушать эритроциты) отмечен после соинкуби-рования стафилококков с 29-й и 30-й пептидными фракциями.

Оценка влияния очищенных пептидных фракций на протеолитическую активность S. aureus позволила установить, что АМП из тромбоцитов кур оказывают разнонаправленное влияние на активность протеаз. Эффективно ингибируют про-теолитическую активность пептиды 31-й фракции.

Полученные результаты открывают перспективу для дальнейшего изучения АМП из тромбоцитов кур, перспективных в качестве основы для создания

антимикробных препаратов, способных регулировать вирулентный потенциал патогенов.

Литература

1. Антибактериальный спектр тромбодефенсинов некоторых видов животных / М.В. Сычёва [и др.] // Аграрный вестник Урала. 2010. № 7 (73). С. 50-51.

2. Сычева М.В., Галиуллина Л.Ф., Карташова О.Л. Влияние антимикробных пептидов из тромбоцитов сельскохозяйственных животных на чувствительность микроорганизмов к антагонистически активным представителям нормальной микрофлоры // Вестник Оренбургского государственного университета. 2011. № 10 (146). С. 78-82.

3. Влияние антимикробных пептидов из тромбоцитов сельскохозяйственных животных на способность микроорганизмов к образованию биоплёнок / М.В. Сычёва [и др.] // Вестник Красноярского государственного аграрного университета. 2011. № 1. С. 130-132.

4. Карташова О.Л., Дымова В.В., Сычева М.В. Влияние пептидов из тромбоцитов животных на факторы вирулентности микроорганизмов // Вестник ветеринарии. 2012. № 4. С. 50-52.

5. Биологическая активность антимикробных пептидов из тромбоцитов кур / М.В. Сычёва [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2016. № 2. С. 24-30.

6. Применение электроаналитических и сепарационных методов исследования для оценки механизма биологической активности антимикробных пептидов из тромбоцитов курицы домашней / М.В. Сычёва [и др.] // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. № 1. 2016. С. 1-8.

7. Сычёва М.В. Изучение биологических эффектов антимикробных пептидов из тромбоцитов кур методом атомно-силовой микроскопии / М.В. Сычёва, Ю.И. Пешкова, А.С. Ва-сильченко, О.Л. Карташова, Е.А. Рогожин // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2015. № 5 (55). С. 198-200.

8. Сычева М.В., Пешкова Ю.И., Карташова О.Л. Влияние антимикробных пептидов из тромбоцитов кур на E. coli // Вестник ветеринарии. 2015. № 4 (75). С. 40-43.

9. Tang Y.-Q., Yeaman M.R., Selsted M.E. Antimicrobal peptides from human platelets // Infection and Immunity. 2002. Р. 6529-6533.

10. Ivanov I.B., Gritsenko V.A. Comparative activites of cattle and swine platelent microbicidal proteins // Proteins: Structure, Function and Bioinformatics. 2009. № 1. Р. 148.

11. Trine S. Ryge, Niels Frimodt-Mшller, Paul R. Hansen. Antimicrobial Activities of Twenty Lysine-Peptoid Hybrids against Clinically Relevant Bacteria and Fungi // Chemotherapy. 2008. Р. 152-156.

Влияние препарата СБА на динамику гистологического строения корня перьев и кожи у уток в постнатальном периоде онтогенеза

Э.О. Оганов, к.в.н, ФГОУ ВО Московская ГАВМиБ; Т.С. Ку-батбеков, д.б.н., профессор, Л.Б. Инатуллаева, аспирантка, ФГАОУ ВО РУДН; В.И. Косилов, д.с.-х.н, профессор, ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ

Птицеводство является перспективной и динамично развивающейся отраслью АПК [1—3]. Для её дальнейшей интенсификации необходимо разработать и внедрить эффективные технологии ведения отрасли, основанные на глубоком знании морфологического строения всех органов и тканей птицы. Изучая доступную нам литературу об анатомическом и гистологическом строении кожи и её производных, мы выяснили, что исследований в этой области морфологии очень мало, они фрагментарны, больше касаются кур, меньше внимания

уделено гусям и незначительно — уткам. В ряде работ содержатся некоторые сведения о морфологии рамфотеки, строении и смене перьев [4—7], данные по вопросам жировой ткани у домашних уток в постэмбриональный период онтогенеза [8]. При изучении литературных источников о коже и её производных установлено, что многие аспекты этого вопроса нуждаются в обстоятельном и глубоком изучении. Дальнейшего и более детального изучения требуют и вопросы гистологического и ультрамикроскопического строения кожи и её производных, в частности у уток.

Материал и методы исследования. В нашем исследовании было изучено гистологическое строение кожи и её производных у уток пекинской породы (п=28), в том числе перьевой покров, в