ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ ПЧЕЛИНОГО МАТОЧНОГО МОЛОЧКА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ГЕМОБАРТОНЕЛЛЕЗЕ
PREPARATION BASED ON ROYAL JELLY FOR TREATING SMALL DOMESTIC ANIMALS WITH HAEMOBARTONELLOSIS

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к препаратам для комплексной терапии животных, больных гемобартонеллезом.
Уровень техники
Известно вещество по способу стабилизации пчелиного маточного молочка путем адсорбирования лактозой в смеси с пектином, при этом адсорбирование проводят при массовом отношении маточного молочка и адсорбента 1:2 (патент РФ №2186573, кл. A61K 35/64 A61K 35/64, A61K 31:732, A61K 31:7016, опубл. 10.08.2002).
Недостатком данного вещества является малая сорбционная емкость используемого сорбента, что приводит к относительно малому содержанию собственно маточного молочка в получаемом препарате (33% - сохраняемое маточное молочко, остальное - сорбент и пектин).
Известно вещество по способу стабилизации маточного молочка путем растворения нативного маточного молочка в 40%-ном водном растворе этилового спирта (патент РФ №2199328, кл. A61K 35/64, опубл. 27.02.2003).
Недостатком данного вещества является частичная потеря биологических свойств маточного молочка и недостаточно высокая эффективность получаемого препарата.
Известно вещество по способу стабилизации маточного молочка путем смешивания пчелиного маточного молочка с медом, цветочной пыльцой и прополисом (патент РФ №2185836, кл. A61K 35/64, A61K 35/78, А61Р 3/00.
Недостатком данного вещества является короткий срок хранения, быстрая потеря биологических свойств компонентов.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является препарат для лечения гемобартонеллеза кошек и способ его применения, содержащий этиотропное вещество, которое содержит верибен, вводимы однократно (патент РФ №22541237, кл. A61K 31/155, А61Р 33/00 опубл. 20.06.2005).
Недостатком данного вещества является внутримышечное введение, большой расход препарата на 1 кг веса.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является разработка вещества на основе пчелиного маточного молочка, полученного путем его лиофилизации с целью активизации защитных сил организма животных, нормализации гематологических показателей при лечении животных больных гемобартонеллезом, увеличения срока хранения, а также получения более дешевого в производстве и доступного препарата.
Технический результат, который может быть достигнут сводится к увеличению сроков хранения препарата, повышению общей резистентности организма животных, нормализации гематологических показателей.
Технический результат изобретения отличается от выше указанных тем, что состоит из маточного молочка и воды, дополнительно содержит следующие ингредиенты: физиологический раствор, сахарозу, желатин и воду, при следующем соотношении компонентов в мас. %:
маточное молочко - 25-30,
физиологический раствор - 25-30,
сахароза - 8-16,
желатин - 2-4,
вода - остальное
Маточное молочко - это секрет верхнечелюстной и глоточной желез рабочей пчелы, используемый для кормления маточных личинок. Оно имеет богатый химический состав: белок 18,0-45,0%, жиры 7,0-19,0%, углеводы
15,8-52,0%, витамины: B1, В2, Bc, В5, В6, В12, Н, С, РР, а также калий, натрий, кальций, медь, цинк, магний, марганец и аминокислоты. Эти вещества обладают разнообразным действием, нормализуют обменные процессы в тканях, улучшая их трофику, стимулируют иммунную и эндокринную системы, регулируют уровень гормонов, обладают анаболическим, антиоксидантным, восстанавливающим,
гепатопротекторным, адаптогенным, антимикробным и др. действиями. В том числе маточное молочко повышает устойчивость организма к гипоксии, улучшая тканевое дыхание, потребление ими кислорода, оказывает выраженное влияние на клеточные и гуморальные звенья иммунной системы. Это позволяет рассматривать маточное молочко также в качестве перспективного иммуномодулятора у ослабленных организмов. Однако натуральное пчелиное маточное молочко быстро теряет биологическую активность при взаимодействии с внешней средой (см. Скрипник В.В., Головецкий И.И., Бочков В.М., Корбут О.В. // Пуд меда. - 2015).
Пчелиное маточное молочко обладает всеми необходимыми питательными веществами, которые способны ассимилироваться через слизистую полости рта, что обуславливает его применение при лечении кошек, больных гемобартонеллезом.
Гемобартонеллез - кровепаразитарное заболевание, характеризующееся общей слабостью, кахексией, анемией и желтизной видимых слизистых оболочек, гиперплазией селезенки и лимфатических узлов, дистрофией печени и паренхиматозных органов. Возбудитель Haemobartonella felis (Mycoplasma haemofelis) поражает форменные элементы крови (эритроциты), из-за чего в крови происходит уменьшение количества эритроцитов, тромбоцитов, гемоглобина. Данные процессы приводят к нарушению кислородного питания клеток и тканей (гипоксии), что способствует изменению кислотно-щелочного равновесия и развитию ацидоза. Тканевая гипоксия ведет к развитию диатезных явлений, анемии и дистрофии органов, к процессам распада белков. В связи с этим в комплексе
со специфическим лечением целесообразно применение повышенного количества питательных веществ. Однако всасывание через пищеварительный тракт при этом заболевании практически невозможно из-за поражения слизистых оболочек.
Сахароза, желатин и вода являются защитной средой высушивания -криопротектором, содержащей вещества, предохраняющие биопрепараты от необратимых изменений в процессе замораживания, высушивания и при последующем хранении. Различают криопротекторы двух типов: проникающие и непроникающие. Наиболее распространенные проникающие криопротекторы: глицерин, пропиленгликоль, этиленгликоль, диметилсульфоксид. К непроникающим криопротекторам относят две группы веществ: олигосахариды (сахароза, трегалоза и др.) и высокомолекулярные соединения (фиколл, альбумин, поливинилпирролидон, декстран, желатин, пептон) (см. https://ru.wikipedia.org/wiki).
Сущность получения препарата на основе пчелиного маточного молочка для лечения мелких домашних животных при гемобартонеллезе заключается в следующем: исходные вещества в мас. %, а именно:
маточное молочко - 25-30,
физиологический раствор - 25-30,
сахароза - 8-16,
желатин - 2-4,
вода - остальное
замораживают, размораживают, гомогенизируют и фильтруют, расфасовывают и проводят лиофильную сушку. Замораживание маточного молочка проводят при температуре - 18°С на 30 дней, с дальнейшим размораживанием при температуре +20°С за 2 часов и разводят физиологическим раствором 1:1. При этом полученную смесь фильтруют через 2 слоя стерильной марли в другую стерильную емкость и соединяют с сахарозой 8-16%, желатином 2-4% и водой 1:1 после чего перемешивают. Эту суспензию разливают по 3 мл в стерильные флаконы объемом 10 мл и подвергают лиофильной сушке в аппарате ТГ-50 при следующем режиме:
заморозка: плиты вакуумной камеры охлаждают до температуры не выше -25°С-(-30°С), кассеты с расфасованным маточным молочком устанавливают на плиты и замораживают при общем времени заморозки не менее 12-14 часов.
После окончания заморозки (температура в продукте должна быть не менее - 35°С-(-40°С) начинают сублимационную сушку. Для этого включают охлаждение конденсора и при достижении им температуры - 45°С-(-50°С) открывают вакуумную задвижку для создания вакуума в сушильной камере. За 30 минут до этого необходимо включить вакуум-насосы для прогрева. Через 2 часа после создания вакуума необходимой глубины (≥ 8 mV или 40-50 mA) устанавливают температуру подогрева плит на +15°С и включают подогрев. Безопасный уровень вакуума не менее 5-6 mV (70 mA). Затем через каждые 5 часов увеличивают температуру подогрева плит на 5°С до +30°С. При достижении температуры продукта +20°С снижают температуру подогрева плит до +25°С. Досушивание производят в течение 20-22 часов после достижения в продукте температуры +22°С-(+24°С). Максимальная температура в продукте не должна превышать +26°С (+28°С кратковременно). После извлечения флаконы закрывают пробками с алюминиевой крышкой и укупоривают.
Описание чертежей
Фиг. 1: Таблица 1 - Химический состав сырья и готового препарата.
Фиг. 2 Таблица 2 - Масса тела и длительность активного плавания мышей при скармливании им лиофилизированного препарата на основе маточного молочка (ЛММ) (М±m).
Фиг. 3 Таблица 3 - Гематологические показатели у мышей при скармливании им лиофилизированного маточного молочка (ЛММ) (М±m).
Осуществление изобретения
Примеры конкретного выполнения получения и испытания препарата на основе пчелиного маточного молочка для лечения кошек при гемобартонеллезе.
Пример 1
Препарат на основе пчелиного маточного молочка для лечения мелких домашних животных при гемобартонеллезе готовят путем сбора пчелиного маточного молочка на пасеке (извлекают из маточников с привитыми личинками шпательком в стерильные колбочки или флаконы с широким горлышком) и помещением его в морозильную камеру при температуре -18°С на 30 дней, предлагаемой биологически активной добавки на основе пчелиного маточного молочка. Также были сформированы 2 группы мышей в возрасте 50-52 дней по методу аналогов, первая - опытная группа, мыши второй группы служили контролем. Далее маточное молочко размораживают при температуре +20°С в течении 2 часов, добавляя физиологический раствор (0,9%) из расчета 1:1. Полученную суспензию фильтруют через 2 слоя стерильной марли в стерильную емкость, после чего суспензию соединяют со средой высушивания (сахароза 8, желатин 2, вода 90) 1:1 и перемешивают при следующем соотношении компонентов в мас. %:
маточное молочко - 20,
физиологический раствор - 20,
сахароза - 7,
желатин - 1,
вода - остальное.
После этого суспензию разливают по 3 мл в стерильные флаконы объемом 10 мл и подвергают лиофильной сушке в аппарате ТГ-50: плиты вакуумной камеры охлаждают до температуры не выше -25°С-(-30°С), кассеты с расфасованным маточным молочком устанавливают на плиты и замораживают при общем времени заморозки не менее 12-14 часов. После окончания заморозки (температура в продукте должна быть не менее - 35°С-
(-40°С) начинают сублимационную сушку. Для этого включают охлаждение конденсора и при достижении им температуры - 45°С-(-50°С) открывают вакуумную задвижку для создания вакуума в сушильной камере. За 30 минут до этого необходимо включить вакуум-насосы для прогрева. Через 2 часа после создания вакуума необходимой глубины (≥ 8 mV или 40-50 mA) устанавливают температуру подогрева плит на +15°С и включают подогрев. Безопасный уровень вакуума не менее 5-6 mV (70 mA). Затем через каждые 5 часов увеличивают температуру подогрева плит на 5°С до +30°С. При достижении температуры продукта +20°С снижают температуру подогрева плит до +25°С. Досушивание производят в течение 20-22 часов после достижения в продукте температуры +22°С-(+24°С). Максимальная температура в продукте не должна превышать +26°С (+28°С кратковременно). После извлечения флаконы закрывают пробками с алюминиевой крышкой и укупоривают.
Полученный препарат частично растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, но имеет нехарактерный жженный запах, темно-серо-желтый цвет, во флаконе образовывается не вполне сформированная таблетка, которая быстро рассыпается. При посеве на питательные среды в течение 10 суток рост микроорганизмов отсутствует. При скармливании препарата подопытным животным показатели общей и специфической резистентности организма не отличаются от таковых показателей у животных контрольной группы, то есть отсутствует ожидаемый эффект.
Пример 2
Проводят аналогично примеру 1, но берут следующее соотношение компонентов в мас. %:
маточное молочко - 25,
физиологический раствор - 25,
сахароза - 8,
желатин - 2,
вода - остальное.
Полученный препарат имеет приятный специфический приятный запах, хорошо растворяется в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствуют. Введение препарата мышам способствует увеличению среднесуточных привесов, выносливости при экстремальной физической нагрузке и наблюдается повышение показателей, характеризующих общую резистентность у животных опытной группы, по сравнению с контрольной.
Пример 3
Проводят аналогично примеру 1, но берут следующее соотношение компонентов в мас. %:
маточное молочко - 28,
физиологический раствор - 28,
сахароза - 11,
желатин - 3,
вода - остальное.
Полученный препарат имеет приятный специфический запах, хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствуют. Введение препарата мышам способствует увеличению среднесуточных привесов, выносливости при экстремальной физической нагрузке и наблюдается повышение показателей, характеризующих общую резистентность у животных опытной группы, по сравнению с контрольной.
Пример 4
Проводят аналогично примеру 1, но берут следующее соотношение компонентов в мас. %:
маточное молочко - 30,
физиологический раствор - 3,
сахароза - 16,
желатин - 4,
вода - остальное.
Полученный препарат имеет жженый запах, плохо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида - образует сгустки, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствуют. Введение препарата мышам способствует снижению среднесуточных привесов и понижению показателей, характеризующих общую резистентность у животных опытной группы, по сравнению с контрольной.
Пример 5
Проводят аналогично примеру 1, но берут следующее соотношение компонентов в мас. %:
маточное молочко - 35,
физиологический раствор - 35,
сахароза - 20,
желатин - 5,
вода - остальное.
Полученный препарат имеет приятный специфический запах, хорошо растворим в дистиллированной воде и изотоническом растворе натрия хлорида, равномерного светло-серо-желтого цвета. При посеве на питательные среды колонии микроорганизмов отсутствуют. Введение препарата мышам способствует увеличению среднесуточных привесов, выносливости при экстремальной физической нагрузке и повышение показателей, характеризующих общую резистентность у животных опытной группы, по сравнению с контрольной.
Таким образом, наиболее оптимальными вариантами препарата на основе пчелиного маточного молочка для лечения кошек при гемобартонеллезе являются примеры 2, 3, 4. Как показали исследования, данная добавка не обладает токсичностью. Она содержит богатый состав незаменимых аминокислот. Среди них самый большой процент занимают: аспарагиновая кислота - 0,44%, глютаминовая кислота - 0,34%, глицин - 0,20%, пролин - 0,19%. В таблице 1 приведены сведения о химическом составе готового препарата, а также его токсичности.
Проведены испытания эффективности предлагаемой препарата на основе пчелиного маточного молочка. Сформированы 2 группы мышей в возрасте 50-52 дней по методу аналогов, первая - опытная группа, мыши второй группы служили контролем. Содержание и рацион у мышей обеих групп был одинаковым, но мышам первой группы давали с водой испытуемую биологически активную добавку в дозе 0,007 мл/г 1 раз в день, в течение 10 дней. До начала опыта и через 10 дней по его окончании производили взвешивание мышей, оценивали длительность их активного плавания, а также определяли ряд показателей крови: количества эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, лейкоцитов (в том числе гранулоциты, лимфоциты, моноциты), гематокрит.
Как видно из данных таблиц 2 и 3 введение в рацион мышей препарата на основе пчелиного маточного молочка способствовало более быстрому приросту массы у животных опытной группы по сравнению с мышами в контроле; у них также увеличилась длительность активного плавания, что свидетельствует о повышении стрессоустойчивости животных опытной группы. При исследовании гематологических показателей у мышей опытной и контрольной групп установлено, что после курса предлагаемого препарата у животных опытной группы возросло количество эритроцитов и тромбоцитов и уровень гемоглобина. Поскольку при гемобартонеллезе у животных значительно снижается уровень этих показателей, мы можем рассматривать полученные данные как свидетельство возможного положительного эффекта биологически активной добавки на основе пчелиного маточного молочка при терапии гемобартонеллеза у кошек.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными решениями имеет следующие преимущества:
- имеет длительный срок хранения до 3-х лет;
- способствует повышению резистентности организма;
- способствует более быстрому набору массы тела;
- улучшает гематологические показатели.