Пептиды тимуса корректируют нарушения физиологических показателей при болезни Паркинсона у крыс различного возраста

2016, том 18 [10]

-—

УДК 612

ПЕПТИДЫ ТИМУСА КОРРЕКТИРУЮТ НАРУШЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА У КРЫС РАЗЛИЧНОГО ВОЗРАСТА

1 12 А.Г. Королев , А.В. Новоселецкая , Н.М. Киселева ,

А.Н. Иноземцев1

1 Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова Москва, Россия

2ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России Москва, Россия

Аннотация. Известно, что старение организма сопровождается разнообразными изменениями в органах и тканях. К такого рода патологическим возрастным изменениям относятся, в том числе, инволютивные процессы в органах и тканях нервной (коры головного мозга, нейроэндокринных желез) и иммунной систем (тимуса). Целью данного исследования явилось изучение возможности коррекции пептидами тимуса (тактивином и тимозином фракцией 5) физиологических признаков болезни Паркинсона у крыс различного возраста в тесте «Открытое поле».

Работа проведена на 160 крысах (80 животных в возрасте 1,5 месяца и 80 — 1,5 года). В каждой

возрастной группе животные были разделены на 4 группы. Каждой группе внутрибрюшинно в течение пяти дней один раз в сутки вводили препараты в объеме 0,5 мл: 1 группа (контроль 1) — 0,9% р-р №С1;

2 группа — тактивин в дозе 0,5 мг/кг; 3 группа — тимозин фракция 5 (0,5 мг/кг); 4 группа — интактные животные (контроль 2). В данном исследовании проведено изучение влияния пептидных препаратов тактивина и тимозина фракции 5 на поведение животных в норме и в МРТР-индуцированной модели Паркинсона (после введения метилфенилтетрагидропиридина). Физиологические показатели крыс исследовали в тесте «Открытое поле».

На фоне исследуемых препаратов уменьшение периферической двигательной активности было более выражено, чем в контроле, и привело к большему уровню посещения центра арены и медиальных секторов. Большая выраженность этого процесса на фоне тактивина и тимозина фракции 5 указывает на положительное влияние препаратов на исследовательскую активность у животных различного возраста.

Полученные результаты на фоне различных пептидных лекарственных препаратов тимуса в МРТР-индуцированной модели болезни Паркинсона позволяют предположить, что введение тактивина и тимозина фракции 5 крысам корректирует физиологические нарушения, вызванные однократным введением

—--—

..... 14 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

раствора МРТР. Введение исследуемых пептидов предотвращает появление таких реакций, как: тремор конечностей и головы, наличие замедленной стартовой реакции до начала движений, отсутствие возможности остановить начатое движение без столкновения с препятствием (стенка арены), нарушение координации — падение из стоек, неспособность пройти по прямой, походка на пальцах задних лап, а не на полной стопе. Таким образом, положительное действие исследуемых пептидных препаратов проявилось в предотвращении нарушений физиологических показателей в тесте «открытое поле» после введения крысам различного возраста МРТР.

Ключевые слова: двигательная активность, болезнь Паркинсона, тактивин, тимозин фракция 5.

Введение. Нейродегенеративные заболевания представляют собой огромную медико-социальную проблему, особенно у лиц пожилого возраста. Известно, что старение организма сопровождается разнообразными изменениями в органах и тканях, являющихся следствием метаболических и эндокринных изменений. Таким образом, проблема изучения механизмов поддержания гомеостаза занимает особое место в современной медицине. Многочисленные исследования показывают, что основные системы, ответственные за поддержание гомеостаза в организме имеют единый механизм химической регуляции. Ключевым звеном данного механизма являются продукция и секреция ряда клеточных медиаторов, объединенных общим названием регуляторные пептиды, к которым относятся пептидные гормоны и цитокины [1; 2].

Известно, что старение сопровождается нарушением во всех звеньях пептидной регуляции, проявляющееся в снижении синтеза регуляторных пептидов в клетках, а также изменением чувствительности клеток-мишеней с течением времени. Подобные изменения обуславливают рост нейродегенартивных заболеваний, в частности болезни Альцгеймера и Паркинсона. Принимая во внимание вероятную роль некоторых цитокинов в патогенезе указанных заболеваний [3] и возможность изменения продукции цитокинов в центральной нервной системе с помощью регулятор-ных пептидов, актуальным является изучение влияния пептидных препаратов на когнитивные и поведенческие особенности животных с искусственно индуцированными нейродеге-неративными заболеваниями.

Целью данного исследования явилось изучение возможности коррекции пептидами тимуса (тактивином и тимозином фракцией 5) физиологических признаков болезни Паркинсона у крыс различного возраста в тесте «Открытое поле».

Материалы и методы. Работа проведена на 160 крысах Wistar. Животных содержали в виварии при температуре +22—24 °С в условиях свободного доступа к воде и пище. Животные были разделены на две возрастные группы: 1,5 месяца (n = 80) и 1,5 года (n = 80).

30 животным из каждой возрастной группы однократно вводили по 50 мкл раствора MPTP (1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидро-пиридин) в концентрации 20 мг/мл в каждую ноздрю [4] для получения MPTP-индуциро-ванной модели болезни Паркинсона. Контрольным крысам — по 50 мкл физиологического раствора в каждую ноздрю. Через 10 дней после введения раствора MPTP этим крысам внутрибрюшинно вводили лекарственные средства. В течение пяти дней один раз в сутки животным внутрибрюшинно вводили препараты в дозе 0,5 мг/кг объемом 0,5 мл: тактивин (Биомед им. И.И. Мечникова, Россия), тимозин фракция 5 (Hoffmann-La Inc., Швеция) и физиологический раствор. Для дополнительного контроля была выбрана группа интактных животных (20 особей из каждой возрастной группы), которым не вводили внутрибрюшинно лекарственные средства.

Для оценки адекватности MPTP-индуци-рованной модели болезни Паркинсона проводили тестирование животных в «Открытом

~ 15 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

поле» (НПК Открытая Наука, Россия). Данный тест широко используется в психофармакологии для изучения влияния веществ на ориентировочно-исследовательское поведение и двигательную активность [5].

Экспериментальная установка представляет собой круглую арену диаметром 97 см, пол которой разделен на сектора с отверстиями. Наблюдение за животным проводили в течение пяти минут [6]. Всех животных тестировали в «Открытом поле» за сутки до введения препаратов. Повторное тестирование проводили после 5 дней введения фармакологических веществ. У животных в течение 5 минут регистрировали количество пересеченных секторов, вертикальных стоек и норковых реакций, среднюю продолжительность замираний и среднюю длительность одного акта. Тесты для всех групп проводили в одинаковое время суток.

Тестирования в «Открытом поле» проводили дважды. Первому тестированию подвергались животные за день до введения раствора MPTP. Результаты этого тестирования использовались для распределения высокоактивных и низкоактивных животных равномерно по группам. Повторные тестирования проводили через 5 дней после начала введения пептидных препаратов. Все регистрируемые показатели в данном тесте выражали в процентах по отношению к результатам первого тестирования, показатели которого принимали за 100%.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием непараметрического критерия Вилкоксона в компьютерной программе «Statistica 8.0».

Результаты и их обсуждение. При первом тестировании животных в тесте «Открытое поле» статистических различий между средними показателями сформированных групп крыс (в пределах одного возрастного показателя) не было выявлено.

При втором тестировании во всех группах животных в возрасте 1,5 месяца происходило снижение горизонтальной двигательной

активности, как показано на рис. 1А. Следует отметить, что введение тимозина фракции 5 и тактивина привело к достоверному (р < 0,05) снижению количества посещений периферических секторов, а также к увеличению количества посещений медиальных и центрального секторов арены в сравнении с контрольной группой. В интактной группе данные эффекты отсутствовали, а полученные результаты соответствовали группе, которой вводили физиологический раствор (контроль). Снижение активности в периферических секторах указывает на привыкание к установке во всех группах животных, но под действием препаратов данный показатель был достоверно ниже контроля за счет увеличения посещений центра арены и медиальных секторов.

На фоне пептидов тимуса наблюдали достоверное уменьшение числа норковых реакций (рис. 1А), а число стоек не отличалось от показателей контрольных групп. Полученный эффект тактивина и тимозина фракции 5 соответствует эффекту кортексина [7].

При тестировании животных в возрасте 1,5 лет (рис. 1Б) также наблюдали снижение горизонтальной двигательной активности, как и у крыс в возрасте 1,5 месяца. Введение ти-мозина фракции 5 и тактивина у животных в возрасте 1,5 года привело к достоверному (р < 0,05) снижению количества посещений периферических секторов и к увеличению количества посещений медиальных и центрального секторов арены в сравнении с контрольными группами. Уровень активности животных в возрасте 1,5 года был ниже, чем у крыс в возрасте 1,5 месяца.

У животных в возрасте 1,5 года на фоне пептидов тимуса наблюдали достоверное уменьшение числа норковых реакций (рис. 1Б), а число стоек не отличалось от показателей контрольных групп. Результаты у животных в возрасте 1,5 года были схожи с результатами, полученными у животных в возрасте 1,5 месяцев.

—--—

.....16 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

Количество, % 140

120

100

80

60

40

20

0

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

центр медиальная периферическая стойки норки

часть часть

Количество, % 140

120

100

80

60

40

20

0

А

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

центр медиальная периферическая стойки

часть часть

норки

Б

Рис. 1. Поведение животных во втором тесте «открытое поле». Количество посещений секторов «Открытого поля» и количество стоек и норковых реакций.

Показатели выражены в процентах по отношению к результатам первого тестирования, *р < 0,05 относительно контроля; Л р < 0,05 относительно интактных животных. А. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 месяца; Б. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 года

. 17 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

Время. %

200

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

180 160 140 120 100 80 60 40 20 0

i

средняя длительность одной остановки

средняя продолжительность одного акта груминга

А

Время. %

200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

средняя длительность одной остановки

средняя продолжительность одного акта груминга

Б

Рис. 2. Средняя длительность одной остановки и средняя продолжительность акта груминга в тесте «Открытое поле».

Показатели выражены в процентах по отношению к результатам первого тестирования, *р < 0,05 относительно контроля; А р < 0,05 относительно интактных животных. А. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 месяца; Б. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 года

—--—

.....18 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

Под действием исследуемых лекарственных средств у животных в возрасте 1,5 месяца достоверно (р < 0,05) уменьшалась средняя длительность одной остановки животного (рис. 2А). Это, а также более частое посещение центрального отсека указывает на анксиоли-тический эффект тактивина и тимозина фракции 5. Различий в средней продолжительности одного акта груминга не наблюдалось.

У животных в возрасте 1,5 года также достоверно (р < 0,05) уменьшалась средняя длительность одной остановки животного (рис. 2Б), как и у крыс в возрасте 1,5 месяцев (рис. 2А). Различий в средней продолжительности одного акта груминга выявлено не было.

Таким образом, поведение в открытом поле при втором тестировании характеризовалось уменьшением двигательной активности в периферических и медиальных секторах, а также в центре арены у животных всех возрастных групп. На фоне пептидов тимуса уменьшение периферической двигательной активности было более выражено, чем в контрольных группах, и привело к большему уровню посещения центра арены и медиальных секторов (рис. 1А, Б). В соответствии с двухфакторной теорией [8; 9] поведение в «Открытом поле» определяется двумя конкурирующими мотивациями (страх новой обстановки и ее исследование). По мере снижения страха растет исследовательская активность. Уменьшение периферической двигательной активности и увеличение посещения центра арены относительно контрольного уровня свидетельствует о снижении уровня страха и увеличении исследовательской активности.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что один показатель поведения крыс в «Открытом поле» (периферическая двигательная активность) при втором тестировании уменьшается, а другой (посещение центра арены), наоборот, возрастает, причем оба эти показателя более выражены на фоне тактивина и тимозина фракции 5.

Как отмечено выше, одновременно с уменьшением периферической двигательной

активности наблюдалось увеличение посещения центра арены. Большая выраженность этого процесса на фоне тактивина и тимозина фракции 5 указывает на положительное влияние пептидов тимуса на исследовательскую активность. О привыкании к установке и снижении тревожности под действием исследуемых пептидов свидетельствует уменьшение длительности остановки, которое значимо ниже уровня контрольной группы и группы ин-тактных животных.

В МРТР-индуцированной модели болезни Паркинсона у всех животных контрольной группы (крысы в возрасте 1,5 месяца и 1,5 года) были отмечены такие признаки как: тремор конечностей и головы, наличие замедленной стартовой реакции до начала движений, отсутствие возможности остановить начатое движение без столкновения с препятствием (стенка арены), нарушение координации — падение из стоек, неспособность пройти по прямой, походка на пальцах задних лап, а не на полной стопе. Все перечисленные признаки отсутствовали у животных на фоне так-тивина и тимозина фракции 5 крысы в возрасте 1,5 месяца и 1,5 года.

Как показано на рис. ЗА и 3Б, после однократного интраназального введения МРТР у животных контрольной группы в возрасте 1,5 месяца и 1,5 года происходило увеличение горизонтальной двигательной активности. Животные перемещались вдоль стенки арены по периферическим секторам и не могли остановиться, пока не найдут препятствие — остановка головой в стенку арены. Следует отметить, что введение тимозина фракции 5 и тактивина привело к достоверному (р < 0,05) снижению данных нарушений. Количество посещений медиальных секторов, а также центрального сектора арены превышало показатели контрольных животных, но были ниже, чем показатели интакт-ных животных, которым вводили интраназаль-но вместо МРТР физиологический раствор, и животных без введения МРТР (рис. 1А и 1Б).

. 19 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

—--—

Количество, % 180

160 140 120 100 80 60 40 20 0

центр

Количество, % 180

160 140 120 100 80 60 40 20 0

центр

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

т 1 Г

4XW О I"1! 1

медиальная часть

периферическая часть

А

контроль тактивин

стоики

норки

тимозин фракция 5 интактные животные

медиальная периферическая стоики

часть часть

Б

норки

Рис. 3. Поведение животных во втором тесте «Открытое поле» после введения МРТР в сравнении с группой интактных животных. Количество посещений секторов «Открытого поля»

и количество стоек и норковых реакций.

Показатели выражены в процентах по отношению к результатам первого тестирования, *р < 0,05; **р < 0,001 относительно контроля; Л р < 0,05 относительно интактных животных. А. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 месяца; Б. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 года

*

*л *л

—--—

.....20 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

Время, % 180

160 140 120 100 80 60 40 20 0

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

**лл **лл

А

i

средняя длительность одной остановки

средняя продолжительность одного акта груминга

Время, % 160

140 120 100 80 60 40 20

А

контроль тактивин

тимозин фракция 5 интактные животные

**лл **лл

йшА

i

средняя длительность одной остановки

средняя продолжительность одного акта груминга

Б

Рис. 4. Средняя длительность одной остановки и средняя продолжительность акта груминга в тесте «открытое поле» после введения МРТР в сравнении с группой интактных животных.

Показатели выражены в процентах по отношению к результатам первого тестирования, *р < 0,05; **р < 0,001 относительно контроля; Л р < 0,05; лл р < 0,001 относительно интактных животных. А. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 месяца; Б. Результаты, полученные в группе животных в возрасте 1,5 года

. 21 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

*

*

0

—--—

В контрольной группе животных после однократного интраназального введения МРТР наблюдалось увеличение норковых реакций за счет зацикливания данной реакции. На фоне тимозина фракции 5 и тактивина у животных различных возрастных групп такого эффекта не наблюдалось, а отмечали достоверное уменьшение числа норковых реакций в сравнении с показателями контрольной и интактной группы (рис. ЗА и ЗБ). Следует отметить, что на фоне тимозина фракции 5 и тактивина, а также в интактной группе животных увеличивалось количество стоек, в сравнении с контрольной группой животных.

Под действием исследуемых пептидов тимуса у животных в возрасте 1,5 месяца после однократного интраназального введения МРТР достоверно (р < 0,05) уменьшалась средняя длительность одной остановки животного (рис. 4А). Этот результат соответствует показателям, полученным без введения МРТР (рис. 2 А). Различий в средней продолжительности одного акта груминга в опытных группах животных не наблюдалось. Однако данный показатель у интактных животных достоверно превышал уровень контрольной группы.

У животных в возрасте 1,5 года также достоверно (р < 0,05) уменьшалась средняя длительность одной остановки животного (рис. 4Б), как и у крыс в возрасте 1,5 месяцев (рис. 4А). Различий в средней продолжительности одного акта груминга у опытных животных в сравнении с контролем выявлено не было.

Показатели, полученные на фоне такти-вина и тимозина фракции 5 в МРТР-инду-цированной модели болезни Паркинсона, схожи с данными, полученными в различных возрастных группах, но без введения МРТР. Полученные результаты позволяют предположить, что введение тактивина и тимозина фракции 5 животным корректирует физиологические нарушения, вызванные однократным введением МРТР у животных различного возраста.

ВЫВОДЫ

1. На фоне тактивина и тимозина фракции 5 у животных в возрасте 1,5 месяца и 1,5 года выявлен высокий уровень исследовательской и двигательной активности в «Открытом поле».

2. Введение тактивина и тимозина фракции 5 животным в возрасте 1,5 месяца и 1,5 года корректирует физиологические нарушения в MPTP-индуцированной модели болезни Пар-кинсона у животных различного возраста.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кветной И.М., Ингель И.Э., Хавинсон В.Х. Регуляторные пептиды и митохондриальные болезни // Вестник образования и развития науки РАЕН. 2001. Т. 5. № 2. С. 151—159.

2. Хавинсон В.Х., Кветная Т.В. Регуляторные пептиды и гомеостаз // Журнал российского химического общества им. Д.И. Менделеева. 2005. Т. XLIX. № 1. С. 112—117.

3. Heppner F.L., Ransohoff R.M., Becher B. Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease // Nature Rev. Neuroscience. 2015. V. 16. Р. 358—372.

4. Prediger R.D., Batista L.C., Medeiros R., Pandolfo P., Florio J.C., Takahashi R.N. The risk is in the air: Intranasal administration of MPTP to rats reproducing clinical features of Parkinson's disease // Exp. Neurology. 2006. V. 202. Р. 391—403.

5. Воронина Т. А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ред-медиум, 2000. С. 153—158.

6. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991. С. 175—189.

7. Шабанов П. Д. Пептидные нейропротек-торы // Психофармакол. и биол. наркол. 2007. Т. 7, Спецвыпуск. Ч. 2. С. 2009.

8. Дьюсбери Д. Поведение животных. Сравнительные аспекты. М.: Мир, 1981.

9. Маркель А.Л. К оценке основных характеристик поведения крыс в тесте «открытого поля» // Журн. высш. нерв. деят. 1981. Т. 31. № 2. С. 301— 307.

—--—

.....22 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций

THYMIC PEPTIDES ARE CORRECT DISORDERS OF PHYSIOLOGICAL PARAMETERS IN RATS OF DIFFERENT AGES AFFECTED BY THE PARKINSON'S DISEASE

A.G. Korolev1, A.V. Novoseletskaya1, N.M. Kiseleva2, A.N. Inozemtsev1

1Lomonosov Moscow State University Moscow, Russia

2Pirogov Russian National Research Medical University Moscow, Russia

Annotation. It is well known that aging of an organism is accompanied by pathological changes in tissues and organs. An example isset by involution of cortex, endocrine glands and immune system components (thymus). In this study we aim to investigate corrective action of thymus peptides (tactivin and thymosin fraction 5) towards physioligical signs of Parkinson's desease inflicted in rats of various age groups by implementing an "Open field" testing procedure.

The study was performed on 160 Wistar rats (80 6-week and 80 18-months old animals). Each age group was divided into 4 subgroups. Animals from each subgroup recived 0.5 ml IP injections of the active agent once a day for the duration of 5 days. Group 1 (control 1) received 0.9% solution of NaCl; group 2 — 0.5 mg/kg tactivin; group 3 — 0.5 mg/kg thymosin fraction 5; group 4 — intact animals (control 2). The goal of this experiment was to estimate the therapeutic effects of peptide therapies on behaviour of normal animals and those with MRTP induced Parkinson's syndrom. Physiological response of the animals was evaluated by the "Open field" test.

Both tactivin and thymosin caused significant decrease in peripheral motor activity and lead to a higher frequency of center circle visits and median areas. Our results demonstrate a positive therapeutic effect of thymus peptides on exploratory activity of animals of various ages.

We propose that the injection of tactivin and thymosin fraction 5 corrects MPTP inflicted physiological aberrations in rats. It delays an early acquisition of symptoms such as limbs and head tremor, motor retardation, unability to stop movement before hitting the wall of the test field; other problems with motor coordination such as: incorrect postures, unability to walk straght lines etc. In conclusion, the preventive action of thymus peptides was observed after MPTP-induced signes of Parkinson's desease in rats by means of the "Open Field" test.

Key words: motor activity, parkinson's disease, Taktivin, thymosin fraction 5._

REFERENCES

1. Kvetnoy I.M., Ingel I.E., Havinson V.H. Regulatory peptides and mitochondrial diseases. Herald of education and science development of Russian Academy of Natural Sciences, 2001, vol. 5, no. 2, pp. 151—159.

2. Havinson V.H., Kvetnaya T.V. Regulatory peptides and homeostasis. Russian Chemical Journal, 2005, vol. XLIX, no. 1, p. 112—117.

3. Heppner F.L., Ransohoff R.M., Becher B. Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease. Nature Rev. Neuroscience, 2015, vol. 16, pp. 358—372.

4. Prediger R.D., Batista L.C., Medeiros R., Pandolfo P., Florio J.C., Takahashi R.N. The risk is in the air: Intranasal administration of MPTP to rats reproducing clinical features of Parkinson's disease. Exp. Neurology, 2006, vol. 202, pp. 391—403.

5. Voronina T.A., Ostrovskaya R.U. Guidelines for the study of nootropic activity of pharmacological substances. Manual on experimental

6. Buresh Ya., Bureshova O., Houston J.P. Methods and basic experiments on the study of the brain and behavior. Moscow, Higher School, 1991. P. 175—189.

7. Shabanov P.D. Neuroprotective peptide. Psy-chopharmacol. and Biol. Narkol, 2007, vol. 7, Special Issue. Part 2. P. 2009.

8. Dewsbury D. Animal Behavior. Comparative aspects. Moscow, Publishing House of the World, 1981.

9. Markel' A.L. Evaluation of the basic characteristics of rat behavior in the "open field" test. Zh. Vyssh. Nerv. Deiat. Im. I.P. Pavlova, 1981, vol. 31, no. 2, pp. 301—307.

~ 23 ~

Издание зарегистрировано в Федеральной службе по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций