СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ОШИБКИ ВКЛЮЧЕНИЯ НОРЛЕЙЦИНА В БЕЛКИ

1. Способ предотвращения или снижения ошибки включения норлейцина в белок или полипептид, включающий экспрессию белка или полипептида микроорганизмом, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой мутантный микроорганизм, который вырабатывает метионин в степени или объеме, достаточном для предотвращения или снижения ошибки включения норлейцина в белок или полипептид.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой бактерии.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой Е. coli.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизм представляет собой микроорганизм, резистентный по механизму обратной связи или нечувствительный по механизму обратной связи к гомосерин сукцинилтрансферазе.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизм является дерепрессированным для выработки метионина.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metA, мутантный аллель metK, или мутантный аллель metA и мутантный аллель metK.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что экспрессия белка или полипептида в микроорганизме осуществляется при отсутствии экзогенного добавления метионина к культуральной среде или без подачи метионина.
8. Микроорганизм, содержащий мутантный аллель metA, мутантный аллель metK, или мутантный аллель metA и мутантный аллель metK.
9. Микроорганизм по п. 8, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metA, где мутантный аллель metA включает нуклеиновую последовательность, кодирующую аминокислотную замену в MetA, выбранную из группы, состоящей из замены аргинина на цистеин в положении аминокислоты 27, замены глутамина на глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 64, замены тирозина на цистеин в положении аминокислоты 294, замены изолейцина на серии в положении аминокислоты 296, замены пролина на лейцин в положении аминокислоты 298, и замены изолейцина на серии в положении аминокислоты 296 и замена пролина на лейцин в положении аминокислоты 298.
10. Микроорганизм по п. 9, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metA, где мутантный аллель metA включает нуклеиновую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, и SEQ ID NO: 26.
11. Микроорганизм по п. 8, отличающийся тем, что мутантный аллель metK содержит нуклеиновую последовательность, кодирующую аминокислотную замену в MetK, включающую замену валина на глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 185 или нуклеиновую последовательность, содержащую делецию основания цитозина в положении остатка нуклеиновой кислоты 1132 аллеля metK.
12. Микроорганизм по п. 11, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metK, где мутантный аллель metK включает нуклеиновую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 28.
13. Микроорганизм по п. 8, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metA, где мутантный аллель metA включает нуклеиновую последовательность, кодирующую аминокислотную замену в MetA, выбранную из группы, состоящей из замены аргинина на цистеин в положении аминокислоты 27, замены глутамина на глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 64, замены тирозина на цистеин в положении аминокислоты 294, замены изолейцина на серии в положении аминокислоты 296, замены пролина на лейцин в положении аминокислоты 298, и замены изолейцина на серии в положении аминокислоты 296 и замены пролина на лейцин в положении аминокислоты 298, и, кроме того, где мутантный аллель metK включает нуклеиновую последовательность, кодирующую аминокислотную замену в MetK, включающую замену валина на глутаминовую кислоту в положении аминокислоты 185 или нуклеиновую последовательность, включающую делецию основания цитозина в положении остатка нуклеиновой кислоты 1132 аллеля metK.
14. Микроорганизм по п. 13, отличающийся тем, что микроорганизм содержит мутантный аллель metA, где мутантный аллель metA включает нуклеиновую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, и SEQ ID NO: 26, и, кроме того, где микроорганизм содержит мутантный аллель metK, где мутантный аллель metK включает нуклеиновую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 28.
15. Микроорганизм по п. 8, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела.
16. Микроорганизм по п. 15, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную
последовательность SEQ ID NO: 46 и нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47.
17. Микроорганизм по п. 15, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела, выбрана из группы, состоящей из нуклеиновой последовательности, включающей SEQ ID NO: 33, и нуклеиновой последовательности, включающей SEQ ID NO: 34.
18. Микроорганизм по п. 8, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело против Фактора D или фрагмент антитела против Фактора D.
19. Микроорганизм по п. 18, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая антитело против Фактора D или фрагмент антитела против Фактора D, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, и нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49.
20. Микроорганизм по п. 8, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую анти-МЕТ антитело или фрагмент анти-МЕТ антитела.
21. Микроорганизм по п. 20, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая анти-МЕТ антитело или фрагмент анти-МЕТ антитела, выбрана из группы, состоящей из нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50, нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52.
22. Способ получения белка или полипептида в бактериальной клетке-хозяине, отличающийся тем, что белок или полипептид является свободным от ошибки
включения норлейцина, при этом способ включает экспрессию в бактериальной клетке-хозяине нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или полипептид в культуральных условиях, подходящих для обеспечения экспрессии белка или полипептида, в котором бактериальная клетка-хозяин содержит мутантный аллель metA, мутантный аллель metK, или мутантный аллель metA и мутантный аллель metK, в результате чего получают белок или полипептид, свободный от ошибки включения норлейцина.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что бактериальная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из микроорганизма по п. 9, микроорганизма по п. 10, микроорганизма по п. 11, микроорганизма по п. 12, микроорганизма по п. 13, и микроорганизма по п. 14.
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что белок или полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела.
25. Способ по п. 23, отличающийся тем, что белок или полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела.
26. Способ по п. 24, отличающийся тем, что антитело или фрагмент антитела представляет собой анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела.
27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что нуклеиновая кислоты, кодирующая анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46, и нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47.
28. Способ по п. 26, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела, выбрана из группы, состоящей
из нуклеиновой последовательности, включающей SEQ ID NO: 33, и нуклеиновой последовательности, включающей SEQ ID NO: 34.
29. Способ по п. 24, отличающийся тем, что антитело или фрагмент антитела представляет собой антитело против Фактора D или фрагмент антитела против Фактора D.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая антитело против Фактора D или фрагмент антитела против Фактора D, представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, и нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49.
31. Способ по п. 24, отличающийся тем, что антитело или фрагмент антитела представляет собой анти-МЕТ антитело или фрагмент анти-МЕТ антитела.
32. Способ по п. 31, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, кодирующая анти-МЕТ антитело или фрагмент анти-МЕТ антитела, выбрана из группы, состоящей из нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50, нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51, и нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52.
33. Способ по п. 22, отличающийся тем, что экспрессия белка или полипептида в бактериальной клетке-хозяине осуществляется при отсутствии экзогенного добавления метионина в культуральную среду или без подачи метионина.
34. Анти-VEGF антитело или фрагмент анти-VEGF антитела, полученные согласно способу по п. 26, 27 или 28.
35. Анти-Фактор D антитела или фрагмент анти-Фактор D антитела, полученные согласно способу по п. 29 или 30.
36. Анти-МЕТ антитело или фрагмент анти-МЕТ антитела, полученные согласно способу по п. 31 или 32.