Успокоительное средство для мелких домашних животных на основе гвайфензина
GUAIFENESIN-BASED SEDATIVE FOR SMALL PETS

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для коррекции психо-эмоционального состояния мелких домашних животных (МДЖ) в различных стрессовых ситуациях. Предложено успокоительное средство для МДЖ, обладающее противотревожным (анксиолитическим) и слабым седативным действием. Новый препарат отличается тем, что в качестве действующего вещества (ДВ) включает гвайфенезин. Преимуществами предлагаемого средства являются его высокая эффективность и безопасность, быстродействие и возможность однократного применения, определяемая пролонгированным действием препарата, а также отсутствие необходимости в создании многокомпонентного состава ДВ.
Уровень техники
Информация о ветеринарных препаратах с анксиолитическим и психотропным эффектом, специально предназначенных для коррекции аномального поведения мелких МДЖ в стрессовых ситуациях, крайне ограничена, как и само число такого рода средств.
Одной из групп успокоительных препаратов для МДЖ являются средства, основанные на использовании феромонов. Так, например, известен препарат «Адаптил» - модулятор поведения для собак, выпускаемый французской фирмой CEVA SANTE ANIMALE, который представляет собой синтетический успокаивающий феромон D.A.P. (Dog Appeasing Pheromone), являющийся аналогом природного феромона кормящих сук. «Адаптил» нормализует поведение собак в стрессовых ситуациях, преимущественно связанных с необходимостью находиться и осваиваться в незнакомых или некомфортных местах. Препарат представлен в форме спрея, который предварительно распыляют в помещениях или местах предстоящего пребывания животных (салон автомобиля, клетка, переноска, лежак или домик) либо вручную, либо с применением диффузора. Срок действия препарата составляет около 2 часов, после чего, если не достигнут ожидаемый эффект, предлагается его повторное применение
(http://www.vetlek.ru/shop/?gid=32151 &id=8789). Существует аналогичный прапарат на основе феромона для кошек - «Феливей» (CEVA).
Общим недостатком препаратов этого типа являются короткий срок их действия, узкий спектр влияния, где стрессовые ситуации фактически ограничиваются помещением или перемещением животного в непривычное или некомфортное для него место, а также выраженная аллергенность и высокая стоимость.
Наиболее распространенной на ветеринарном рынке РФ является вторая группа успокоительных препаратов для кошек и собак, представляющих собой многокомпонентные составы, которые содержат различные комбинации известных лекарственных растений. К этой группе средств относятся, например, успокаивающие капли «Фитекс» (ООО «Группа ЭКСПА»), препарат «Кот Баюн» (ООО «Веда»), Relaxivet - линейка препаратов (ЭкоПром).
В состав препарата «Фитекс» входят экстракт валерианы лекарственной, сухой экстракт пустырника, сухой экстракт хмеля обыкновенного, сухой экстракт шлемника байкальского. Успокоительное действие препарата достигается в результате курсового применения, предусматривающего пероральное введение капель животному 3 раза в день в течение 15-30 дней (http://www.fauna-vesh.ru/catalog.php?id=242).
Препарат «Кот Баюн» представляет собой стерильный водный настой лекарственных трав: душицы, травы донника, корневища с корнями валерианы, цветов и плодов боярышника, шишек хмеля, травы пустырника, листьев мяты перечной, травы будры плющевидной, травы котовника, травы мелисы, цветов таволги вязолистной, травы зверобоя, травы чабреца, травы сушеницы топяной, травы солянки холмовой, листа крапивы, корней пиона уклоняющегося. Применение препарата, предусматривающее систематическое пероральное применение (3-4 раза в день в течение 5-7 дней ежемесячно), поддерживает у животного состояние, при котором подавлено проявление фобий (страха перед шумом; страха и возбуждения перед выставками и при транспортировке и т.п.) (https://veterinarka.ru/vetmedicaments/kot-bayun)
Relaxivet (линейка лекарственных форм) - препарат, который в качестве действующих веществ содержит мяту, хмель, шлемник байкальский. Для жидкой пероральной формы рекомендовано применение 3 раза в день по 1 капле/кг в течение 7-14 дней (https//www.ecoprm.ors./catalog/476: https://samizoo.ru/catalog/relaxivet-kapli).
Входящие в эту группу составы растительного происхождения не являются специализированными препаратами с направленным психотропным и анксиолитическим действием. В значительной степени их успокоительное влияние на животных в стрессовых ситуациях определяется адаптогенными и общеукрепляющими свойствами растительных микронутриентов и является результатом общей нормализации деятельности ЦНС, стабилизации сердечно-сосудистой системы и кровяного давления, наличием у них спазмалитического действия и седативного эффекта. Общим недостатком средств этого типа является недостаточно высокая эффективность, необходимость курсового использования и отсутствие быстродействия, необходимого для нормализации поведения животного в короткие сроки.
Наиболее близким аналогом данного изобретения является состав (препарат «Стоп-стресс») для снижения возбуждения и коррекции психогенных нарушений поведения кошек и собак, который, помимо традиционно применяемых экстрактов трав (валерианы, пустырника, шишек хмеля, шлемника и мяты) включает в качестве действующего вещества производное гамма-аминомасляной кислоты - фенибут (патент РФ № 2367428 С1, 20.09.2009). Испытания препарата на кошках и собаках, отличающихся возбудимой нервной системой, в частности проявлявших испуг при переездах, который сопровождался агрессивным поведением, самопроизвольным мочеиспусканием, последующей потерей аппетита и выпадением шерсти, показали наличие у данного состава успокоительного действия. При этом желаемый результат достигался при пероральном введении препарата за 4 дня до наступления стрессовой ситуации и в течение 4 дней после её окончания.
Очевидно, что существенным недостатком данного средства является то, что предлагаемый в качестве ДВ фенибут (бета-фенил-гамма-аминомасляная кислота) известен в фармацевтике как транквилизатор мягкого действия, относящийся к классу ноотропов, основной функцией которых является активирующее влияние на интегративные функции мозга (М.Д.Машковский. Лекарственные средства. М., Медицина, 1988, т.1, с. 106), тогда как анксиолитический и седативный эффекты являются второстепенными и выражены значительно слабее. Вследствие этого необходимым условием достижения описываемого успокоительного эффекта следует считать обязательное дополнение данного ДВ большим числом успокаивающих травяных настоев, в результате чего прототип, как и многие предыдущие разработки, представляет собой сложный комбинированный препарат, включающий 6 основных активных ингредиентов. Кроме того, использование препарата «Стоп-стресс» предусматривает его неоднократное применение, начинающееся за несколько дней до предполагаемого стресса и в течение нескольких дней после его завершения.
С учетом перечисленных выше недостатков средства-прототипа, задачей настоящего изобретения была разработка эффективного, простого по составу, быстродействующего успокоительного (антистрессового) средства однократного применения для МДЖ.
Раскрытие изобретения.
Поставленная задача была решения путем использования в качестве ДВ нового препарата гвайфенезина.
Гвайфенезин (ГФ) - полученный химическим синтезом аналог природного вещества гваякола, которое было выделено из коры гваякового дерева -химическое наименование вещества - 3-(2-) метоксифенокси пропан- 1,2-диол.
Известно, что ГФ легко всасывается из желудочно-кишечного тракта и подвергается метаболизму в печени (60%) с последующим выделением метаболитов с мочой. Время полужизни в организме составляет примерно 5 часов. Все литературные данные, связанные с изучением острой токсичности гвайфенезина на мышах и крысах, свидетельствуют о низкой токсичности вещества, величина LD50 для которого согласно различным источникам составляет от 1,0 до 2,0 г/кг веса животного.
ГФ более 80 лет используется в качестве терапевтического агента. В медицине он применяется, главным образом, как отхаркивающее средство. Однако с середины прошлого века ГФ начал использоваться в качестве вспомогательного средства при анестезии, которое, как было установлено, усиливает и удлиняет действие типичных анестетиков (Maier RD., Arch Toxicol. 1980 Jul;45(2): 123-31; Haga HA et al., Am J Vet Res. 2000 Dec;61(12):1599-601; Brosnan RJ., Am J Vet Res. 2011 Dec;72(12):1569-75; Oku K. et al., J Vet Med Sci. 2011 Dec;73(12): 1639-43 др.) К началу 50-х гг. относятся первые попытки применения ГФ в психиатрии. При этом медики пришли к выводу, что здесь основным показанием к назначению гвайфенезина являются симптомы подавленности и тревоги, сопровождающие различные психические заболевания, а также аналогичные состояния, возникающие и у психически здоровых людей. Широкого применения в этой области медицины ГФ не получил, однако в некоторых препаратах с успокоительным эффектом он используется и сегодня (см., например, препарат «Ново-пассит», а также патент РФ 2199309 от 27.02.2003). Что касается применения ГФ в качестве успокоительного (противострессового, противотревожного, психотропного) лекарственного средства для какого-либо вида животных, где определяющими были бы его анксиолитические свойства, то ни в научно-технической литературе, ни в патентных документах такой информации не обнаружено.
В ветеринарии известно применение ГФ в больших дозах (в основном для лошадей и коров, а также для свиней и овец), когда требуется кратковременно обездвижить животное за счет его миорелаксантного и седативного действия. При проведении хирургических операций на сельскохозяйственных животных он обычно используется в комбинации с типичными анестетиками, такими как кетамин, ксилазин и др. (одновременно или непосредственно перед их введением), в качестве индуктора их действия. Хотя молекулярный и клеточный механизмы действия ГФ у животных мало изучены, ответ различных систем животного организма на его введение исследован достаточно хорошо. Так, известно, что сразу после введения (в частности, лошадям) наблюдается некоторое снижение артериального давления с последующей сравнительно быстрой его нормализацией, тогда как скорость и сила сердечных сокращений не меняются. Специалисты считают, что ГФ с высокой степенью вероятности оказывает поддерживающее действие на СС-систему (Veterenary Pharmacology and Therapeutics (9 ред., ed. Riviere J.E. and Papich M.G., pp. 287-288). Co стороны дыхательной системы введение ГФ сопровождается кратковременным повышением скорости дыхания, но без изменения объема вентиляции за минуту (Lumb, 1996; Mair, 2000). Из этого следует, что, хотя ГФ является миорелаксантом, он не парализует дыхательные мышцы и мышцы диафрагмы. Со стороны скелетной мускулатуры после введения ГФ регистрируется быстрая релаксация. Об использовании ГФ для кратковременной седации и/или релаксации МДЖ в литературных источниках не сообщается.
Исходя из опыта применения ГФ в психиатрии и учитывая низкую токсичность соединения, а также отсутствие негативных эффектов со стороны основных систем животного организма на его введение, нами была предпринята попытка применить данное соединение в качестве ДВ успокоительного (антистрессового) препарата для мелких домашних животных, в частности для кошек и собак. С этой целью были проведены испытания на животных, включавшие три основных этапа: а) исследование анксиолитической и седативной активности различных доз ГФ на мышах с использованием известных модельных систем; б) исследование успокоительного действия составов, включавших ГФ, на собаках; в) исследование успокоительного эффекта аналогичных составов с ГФ на кошках.
Первый этап. Для определения анксиолитической и седативной активности ГФ использовали широко применяемые в испытаниях такого рода тесты: «темно-светлая камера» и «открытое поле».
Установка для проведения первого теста (фиг. 1а) представляет собой ящик из непрозрачного белого пластика, разделенный перегородкой на две неравные части, связанные между собой небольшим отверстием в перегородке. Большая из частей (3/4 объема камеры) ярко освещается, тогда как меньшая (1/4 объема камеры) - темная и представляет собой комфортное «укрытие» для животных. В этом тесте исследуют широкий спектр поведенческих показателей, свидетельствующих о наличии и преодолении животными стресса, который возникает вследствие помещения их в незнакомую обстановку. Основными характеристиками, указывающими на отсутствие чувства тревоги и страха, а после введения препарата - на эффективность его анксиолитического действия, принято считать уменьшение (по сравнению с контролем) общего времени пребывания в темной части камеры (фиг. 16), а также увеличение числа выходов из темного в светлое пространство (фиг. 1в).
Установка для проведения теста «отрытое поле» представляет собой круглую арену (диаметр - 1м) с высоким (35 см) бортом и четко видимой решеткой на полу (фиг. 2а), которая равномерно освещается светом лампы. Подсчет числа пересеченных мышью за определенный промежуток времени квадратов решетки служит прямым определением спонтанной двигательной активности животного (фиг. 2б). Дополнительным критерием при оценке «подвижности» мышей в данной модели является время нахождения животных в состоянии покоя (фиг. 2в).
В результате серии экспериментов, проведенных на мышах, было установлено что ГФ в дозе 20-30 мг/кг демонстрирует противотревожное действие (анксиолитическую активность). При этом визуальное наблюдение за поведением животных показало, что мыши, получившие максимальную в данном эксперименте дозу ГФ (40 мг/кг), отличались некоторой вялостью и снижением общей подвижности. На этом основании было сделано предположение, что при увеличении дозировки ДВ до 40 мг/кг начинало проявляться влияние седативной активности препарата. Это заключение было подтверждено в тесте «открытое поле», где основной исследуемой функцией является двигательная активность животных, которая, как было установлено, постепенно снижалась при дозах ГФ более 30 мг/кг (пример 2, фиг. 2б, в).
Таким образом, интервал доз ГФ для проявления в основном противотревожного действия у мышей был определен как 20-30 мг/кг, тогда как при дозах от 30 до 40 мг/кг наблюдавшееся успокоительное действие сочетало в себе анксиолитический эффект с некоторым снижением двигательной активности (слабый седативный эффект без выраженного снотворно-гипнотического влияния), что может быть предпочтительным при особо сильных стрессовых воздействиях. Для последующего применения на целевых животных экспериментально определенные для мышей эффективные дозы были пересчитаны с использованием коэффициентов, учитывающих различие в интенсивности метаболизма у разных видов млекопитающих (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармацевтических веществ п/ред. Р.У. Хабриева, М., 2005). Рассчитанные таким образом дозы ГФ для кошек и собак теоретически должны были соответствовать области примерно 4-20 мг/кг веса животного (кошки, собаки), что было принято за отправную точку в дальнейших исследованиях.
Второй этап включал испытание композиций по изобретению на целевых животных -собаках, которые имели 2 основных вида поведенческих отклонений после действия раздражителя: повышенное возбуждение (беспокойство, навязчивые движения, суетливость, повышенная двигательная активность, наматывание цепи, вокализация) и повышенное чувство страха (тревожность, умеренная вокализация, дрожь и т.п.).
Для оценки изменений в психо-эмоциональном состоянии собак и кошек врачами компании совместно с зоопсихологом была разработана специальная шкала (Приложение 1), где каждому значению в баллах соответствовала определенная совокупность визуальных признаков, отражающих степень эмоционального напряжения животного. Оценка проводилась индивидуально по каждому животному с применением указанной шкалы через 15 мин., 30 мин., 45 мин., 1 час и далее через каждый час до 6 часов с момента воздействия раздражителя. Такая постановка эксперимента позволяла определить скорость, эффективность и продолжительность действия препаратов. Параллельно велось наблюдение за возможными проявлениями побочных эффектов (со стороны ЦНС: сонливость, нарушение координации движений, заторможенность; со стороны ЖКТ: рвота, метеоризм, диарея, запор; со стороны иммунной системы - наличие аллергических реакций; индивидуальная непереносимость).
Полученные на этом этапе данные (пример 3, табл. 1) подтвердили эффективность и безопасность ГФ при использовании его в качестве ДВ быстродействующего (с началом действия через 30 минут) успокоительного препарата с продолжительностью эффекта не менее 5-6 часов.
На третьем этапе проводилось испытание действия нового препарата на кошках, отличающихся повышенной возбудимостью и/или находящихся в состоянии стресса. Результатами исследований успокоительного препарата на кошках в целом были подтверждены эффективные дозы ДВ, определенные на предыдущем этапе для собак (пример 4, табл. 2), однако при этом была отмечена худшая «поедаемость» препарата животными. С целью улучшения восприятия кошками вкуса композиций по изобретению были дополнительно исследованы таблетированные формы успокоительного средства, содержащие те же концентрации ГФ, что и суспензии. Для предложенных кошкам таблеток в целом отмечалось заметное улучшение восприятия препарата; в случае использования таблеток с покрытием, включающим вкусовые добавки, препарат принимался животными без принуждения. При применении всех таблетированных форм у животных отмечалось выраженное снижение уровня эмоционального напряжения, с незначительной задержкой начала действия препарата (примерно на 10-15 мин).
За весь период наблюдений за собаками и кошками, получавшими успокоительное средство по изобретению, не было выявлено ни одного случая проявления серьезных побочных эффектов, таких, как рвота, диарея, аллергические реакции и др.
Таким образом, проведенные на целевых животных испытания композиций по изобретению, представленных в различных лекарственных формах, показали, что использование гвайфенезина в качестве ДВ позволило получить эффективное успокоительное средство для МДЖ, преимущественно для кошек и собак, которое отличается простотой состава, быстродействием и достаточно большой продолжительностью достигнутого эффекта, позволяющей использовать препарат однократно (технические результаты).
Краткое описание чертежей.
Фигура 1. Определение анксиолитической активности гвайфенезина на мышах в тесте «темно-светлая камера».
а) общий вид конструкции для проведения экспериментов;
б) определение общего времени нахождения животных в темном отсеке (сек.):
1-контроль (физраствор); 2 - ГФ, 4 мг/кг; 3 -ГФ, 40 мг/кг;
в) определение числа выходов мышей в светлый отсек:
1- контроль, 2 - ГФ, 4 мг/кг; 3 - ГФ, 20 мг/кг; 4 - ГФ, 30 мг/кг; 5 - ГФ, 40 мг/кг.
Фигура 2. Определение двигательной активности (седативного эффекта ГФ) мышей в тесте «открытое поле».
а) общий вид конструкции для проведения экспериментов;
б) определение числа пересекаемых квадратов за определенный промежуток времени:
1- контроль; 2 - ГФ, 20 мг/кг; 3 - ГФ, 30 мг/кг; 4 - ГФ, 40 мг/кг;
в) измерение общего времени нахождения мышей в неподвижном состоянии(сек):
1 - контроль; 2 - ГФ, 40 мг/кг.
Осуществление изобретения
Пример 1. Определение анксиолитической активности ГФ в тесте «темно-светлая камера».
Животные. Опыты по определению анксиолитической активности ГФ проводили на самцах мышей двух инбредных линий C57BL/6J и DBA2J, рандомизированных по возрасту и массе, которые в течение недели до начала эксперимента содержались в условиях лабораторного вивария на обычном пищевом рационе, при естественном световом режиме. Каждая группа (контрольная и 4 опытных) включала по 12 животных.
Испытуемые препараты. В модельных экспериментах на мышах использовали приготовленные на физрастворе составы с различными концентрациями ГФ, обеспечивающими получение доз 4, 20, 30 и 40 мг/кг веса животного. Растворы для инъекций готовили из заранее подготовленных навесок непосредственно перед инъекцией.
Постановка эксперимента. Опытным группам животных вводили внутрибрюшинно испытуемый состав в объеме 0,16 мл, содержащий различные концентрации ДВ (см. выше), а контрольной группе животных - тот же объем физраствора. Через 30 мин. после введения препарата (или физраствора контрольным мышам) животных помещали в темно-светлую камеру (фиг. 1а) и осуществляли общее наблюдение за их поведением и измерение основных количественных показателей анксиолитической активности в течение последующих 3 минут. Подавление чувства тревожности и страха (анксиолитический эффект) в данном тесте предполагает изменение целого ряда поведенческих характеристик, из которых наиболее показательными являются увеличение числа выходов и времени нахождения в светлом отсеке камеры (или снижения времени пребывания в темном отсеке). Обработку показателей поведения проводили с помощью дисперсионного анализа однофакторного ANOVA (стандартный пакет программ Statistica 6).
Результаты. При проведения теста «темно-светлая камера» было установлено, что время пребывания в темном отсеке мышей из опытной группы, получавшей минимальную дозу ГФ (4 мг/кг), было сопоставимо (изменение не было статистически достоверным) с соответствующим показателем, определенным для контрольной группы животных (фиг. 16, столбцы 1 и 2). При десятикратном увеличении дозы ГФ (40 мг/кг) общее время пребывания мышей в темном отсеке уменьшалось по сравнению с контролем почти вдвое (пример 1, фиг. 16, столбец 3), что однозначно свидетельствует о наличии у испытуемого препарата выраженного анксиолитического эффекта. Применение ГФ в «промежуточных» дозах 20 и 30 мг/кг показало, что в группе мышей, получавших ДВ в количестве 20 мг/кг число выходов в светлую часть камеры увеличивалось (по сравнению с контролем) примерно втрое (фиг. 1в; столбцы 1 и 2); во второй опытной группе (30 мг/кг ГФ) также имело место повышение этого показателя, но оно составляло не более 50 % от контроля (фиг. 1в, столбец 3), а в третьей группе животных (доза 40 мг/кг) исследуемый показатель практически не отличался от контрольного уровня (пример 1, фиг. 1в, столбе 4). Наиболее вероятной причиной такого результата было признано наращивание седативного действия при увеличении концентрации ГФ.
Это заключение подтвердили как результаты визуального наблюдения за поведением животных, в ходе которого для мышей обеих опытных групп отмечалось явное снижение двигательной активности в целом, так и экспериментальные данные, полученные в тесте «открытое поле».
Пример 2. Определение седативного эффекта ГФ в тесте «открытое поле».
При проведении данного теста использовали тех же животных, что и в примере 1 (через 1 час после завершения первого теста). После помещения мышей в открытое поле осуществляли визуальное наблюдение за их поведением и проводили измерение числа квадратов на полу камеры, которое пересекает каждое животное за определенный, промежуток времени, что служит основной характеристикой его спонтанной двигательной активности. При испытании препаратов с седативным эффектом снижение этого числа по сравнению с контролем является показателем проявления действующим веществом седативной активности. Результаты. В тесте «открытое поле» получены данные, которые суммированы на фиг. 2б-в. Из диаграммы, приведенной на фиг. 2б следует, что в группе животных, получавших ГФ в дозе 20 мг/кг, активность перемещения мышей повышалась (в сравнении с контрольными животными) в среднем на 25-30% (столбцы 1 и 2), что с высокой степенью вероятности отражает анксиолитический эффект ГФ, приводящий к снижению чувства естественного страха при попадании животного в незнакомую обстановку. Двигательная активность животных после введения им препарата в дозе 30 мг/кг была сравнима с контролем (столбец 3), а подвижность мышей после получения максимальной дозы ГФ (40 мг/кг) - на 25-30% ниже, чем в контрольной группе. На фиг 2в дополнительно представлены данные по измерению времени неподвижности у мышей после введения максимальной дозы ГФ (40 мг/кг), из которых следует, что этот показатель для обработанных мышей достоверно выше, чем в контрольной группе.
Полученные в тесте «открытое поле» результаты свидетельствуют о повышении седативного эффекта ГФ (на фоне имеющейся анксиолитической активности) при дозировках более 30 мг/кг веса мыши.
Принимая во внимание известный факт, состоящий в различии уровня метаболизма у различных видов млекопитающих, где наиболее высокий уровень обмена приписывается грызунам, определенные в экспериментах на мышах эффективные дозы ГФ были пересчитаны для кошек и собак с учетом коэффициентов, учитывающих различие в интенсивности метаболизма у разных видов млекопитающих (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармацевтических веществ п/ред. Р.У. Хабриева, М., 2005) и согласно теоретическим выкладкам должны были располагаться в интервале примерно от 4 до 20 мг/кг.
Пример 3. Исследование успокоительного действия препаратов с ГФ у собак.
Животные. Испытания новых успокоительных средств проводились в питомнике «Спорт-хаски» (Тверская обл., Андреапольский р-н, дер. Гущино) на животных пород хаски и маламут. Для проведения экспериментов отбирали животных обоих полов и различного возраста, которые согласно характеристике, данной сотрудниками питомника, при различных исходных психотипах (сангвиник, флегматик, холерик, меланхолик) имели, находясь в состоянии стресса, 2 основных вида поведенческих отклонений: повышенное возбуждение (беспокойство, навязчивые движения, суетливость, повышенная двигательная активность, вокализация) и повышенное чувство страха (тревожность, напряженность, заторможенность реакций, умеренная вокализация, и т.п.). Имевшиеся различия в весе животных, учитывались при расчете объема препарата, необходимого для получения нужной эффективной дозы.
Препараты. В данной серии экспериментов использовали 2 основных состава, представляющих собой суспензию для перорального введения, приготовленную на смеси воды и глицерина (1:1) и включавшую ГФ в концентрации 40 мг/мл (состав №1 для получения дозы 4 мг/кг) или 80 мг/мл (состав №2 для получения дозы 8 мг/кг), а также целевые добавки (лимонную кислоту, Аспасвит, Униконс). Состав №3 соответствующий по концентрации ДВ составу №1, дополнительно включал экстракты трав пассифлоры и шлемника байкальского (обе добавки в концентрации по 20 мг/мл), и контрольный состав №4 - растворитель с целевыми добавками, содержащий экстракты пассифлоры и шлемника в тех же количествах, что и в составе №3.
Постановка эксперимента. При определении эффективности состава №1 участвовало 5 собак, состава №2 - 5 собак; состава №3 - 5 собак; состава №4 - 3 собаки.
Препараты задавали собакам путем смешивания с кормом, из расчета 1 мл/10 кг веса животного (4 мг ГФ/кг веса). В качестве источника стресса использовали появление в непосредственной близости от животных незнакомого человека. Наблюдение за животными вели в течение 6 часов после введения препаратов и следующего сразу после кормления воздействия раздражителя. Оценку психо-эмоционального состояния собак осуществляли индивидуально по каждому животному с применением разработанной нами совместно с зоопсихологом 4х-балльной шкалы (Приложение 1) через 15 мин., 30 мин., 45 мин., 1 час и далее через каждый час до 6 часов с момента начала воздействия раздражителя. Это позволяло установить время до начала действия лекарства, степень (эффективность) и продолжительность успокоительного эффекта. Одновременно вели наблюдение за возможными проявлениями побочных эффектов (сонливость, нарушение координации движений, рвота, метеоризм, диарея, запор, наличие аллергических реакций, индивидуальная непереносимость).
Результаты. При проведении серии экспериментов на собаках были получены результаты, приведенные в таблице 1.
Состав №1 с дозой ДВ 4 мг/кг (в 1 мл) во всех случаях демонстрировал успокоительное действие, начало которого у большинства животных отмечалось примерно через 30 минут после стрессового воздействия, максимальный эффект достигался, как правило, через 45 минут и продолжался в течение 5-6 часов. Единственным психотипом, в целом реагировавшим на дачу препарата, однако не дававшим ярко выраженного (с успокоительным действием порядка 2-х баллов) и устойчивого (с длительностью не менее 5 часов) ответа на введение ГФ в дозе 4 мг/кг, был ярко выраженный холерик (холерик+). Включение в состав №1 травяных экстрактов пассифлоры и шлемника с получением состава №3 не приводило к каким-либо достоверным изменениям определяемых показателей (скорости, эффективности, длительности действия), что полностью согласовалось с тем, что контрольный состав (№4), включающий только настои указанных лекарственных трав, не обладал определимым успокаивающим действием (данные не приводятся) при однократном применении. Этот результат, однако, не исключает возможности применения добавок лекарственных трав с успокоительным действием в случаях необходимости повторных введений составов с ГФ животным.
Состав №2 с дозой ДВ 8 мг/кг (в 1 мл) не приводил к значимому дополнительному усилению эффекта, скорости и/или продолжительности действия препарата в сравнении с составом №1 (4 мг ГФ/кг).
При проведении испытаний на собаках предлагаемых препаратов, в том числе и включавших лекарственные травы, не было отмечено ни одного случая отказа от поедания препарата или возникновения каких-либо побочных эффектов (в виде слюнотечения, рвоты, диареи, аллергических реакций и т.п.).
Результаты серии экспериментов, проведенной на собаках, позволили заключить, что композиция, включавшая гвайфенезин и как единственное активное начало препарата, и в комбинации с экстрактами лекарственных трав, при применении в дозе 4-8 мг ГФ/кг веса животного во всех случаях демонстрировала очевидный успокоительный эффект в отношении стрессового состояния, вызванного действием раздражителя. Он выражался в снижении возбуждения животных на 1,5-3 балла согласно разработанной нами шкале оценки (см. Приложение 1) и длился в большинстве случаев не менее 5 часов. При этом была установлена следующая зависимость степени и длительности эффекта от психотипа животного: только у ярко выраженных холериков (см. холерик*) действие ГФ было более слабым (1-1,5 балла) и/или менее длительным (3-4,5 часов), чем у всех остальных.
Пример 4. Исследование успокоительного действия препаратов на кошках.
Животные. Испытания проводили на домашних кошках. Использовали животных обоих полов, различного возраста и веса, где разницу в последнем учитывали, как и в исследованиях на собаках, путем незначительного изменения объема вводимого препарата. Первую серию экспериментов (с суспензией для перорального применения) проводили с 5 кошками, принадлежащими сотрудникам компании, которые отмечали у своих животных неадекватную реакцию на различные раздражители, такие, как громкие звуки, приход в дом незнакомых людей, транспортировка в машине или общественном транспорте. Вторую и третью серию опытов (с различными таблетированными формами) проводили, соответственно, с 9 и 15 кошками, поступившими для лечения в стационар ветеринарной клиники «Айболит» (г. Москва) и при этом отличавшимися беспокойным поведением или иными проявлениями чувства тревоги и страха при нахождении в новом помещении и/или в присутствии других животных и незнакомых людей, а также в ответ на громкие звуки.
4.1 В первой серии опытов использовали суспензию, включавшую ГФ (20 мг/мл); вкусовые добавки (Аспасвит и лимонная кислота), консервант (Униконс) и смесь глицерина с водой (1:1) в качестве растворителя. Препарат в условиях действия раздражителя вводили кошкам из расчета 1 мл/5 кг веса (доза 4 мг/кг веса) на корень языка насильственным путем. При этом во всех случаях, кроме одного, отмечалась неудовлетворительная реакция на дачу препарата, которая выражалась в кратковременном (1-1,5 мин.) слюнотечении. Все испытуемые животные через 30-45 мин. после дачи препарата приходили в спокойное состояние, оценку которого осуществляли на основе критериев, разработанных ранее для собак. Состояние успокоения длилось в течение 3-4, 5 часов, (таблица 2).
По результатам проведенных наблюдений можно было предположить, что в силу вкусовых особенностей и развивающегося в ответ на это кратковременного слюнотечения животные могли не получать рассчитанной дозы ГФ. Это могло, в свою очередь, послужить причиной некоторого увеличения (в сравнении с собаками) времени достижения максимального эффекта (до 1 часа) и сокращении длительности эффекта успокоения до 4-4,5 часов. В связи с этим, последующие эксперименты проводились с использованием различных лекарственных форм, позволяющих улучшить вкусовые качества препарата и восприятие его кошками.
4.2. Для проведения второй серии экспериментов новый успокоительный препарат предлагался кошкам в виде таблеток, где 1 таблетка (без оболочки) весом 100 мг, включала 40 мг ГФ и вспомогательные компоненты, используемые для проведения процесса таблетирования, в частности микроцеллюлозу, диоксид кремния, стеарат Са. Препарат задавали принудительно на корень языка, с помощью таблеткодавателя.
В испытании участвовало 9 животных весом 4-5 кг, которые были разделены на 3 группы (по 3 кошки в каждой), где первая группа получала по 1/2 таблетки (4-5 мг/кг), вторая - по таблетке (8-10 мг/кг) и третья - по 1,5 таблетки (12-15 мг/кг). Помимо общего эмоционального напряжения, у кошки № 3 из третьей группы отмечались явные признаки половой охоты. Наблюдение за поведением животных и оценку их состояния проводили на протяжении 6 часов после дачи препарата в присутствии раздражителя и дополнительно ещё в течение нескольких часов после прекращения его действия. Полученные результаты представлены в таблице 3.
Проведенные исследования показали, что под действием препарата у всех животных снижалась или полностью прекращалась вокализация, а также другие ранее отмеченные реакции на действующий раздражитель. Двигательная активность животных уменьшалась от высокой до «пониженной», что было более характерно для дозы ГФ 4-5 мг/кг, или даже до состояния «слабой дремоты», наблюдаемой в основном при более высоких дозах ГФ (8-16 мг/кг). При этом кошки, находившееся в состоянии «дремоты», не проявляли вялости и адекватно реагировали на голос и прикосновения. Увеличение дозы ГФ от 8 до 16 мг/кг, нашедшее отражение некотором снижении двигательной активности животных, практически не влияло на срок, необходимый для начала действия (30-40 мин.), на время достижения максимального эффекта (примерно 45 мин.-1 час) и на его продолжительность (6 ч.). Кошка (№3) из третьей группы, проявлявшая явные признаки половой охоты, которую можно считать проявлением сильного стресса, также реагировала на дачу препарата, но при этом действие препарата в указанных дозах проявлялось значительно медленнее: срок до начала успокоения составлял 60 минут; до максимального проявления - примерно 2,5 часа. Следует отметить, что после прекращения действия стресс-фактора (через 6 часов от начала эксперимента), все животные находились в спокойном состоянии ещё от 3 до 6 часов. Таким образом, предлагаемое успокоительное средство в таблетированной форме было эффективно во всем указанном интервале доз, который в целом совпадает с дозами, установленными в примерах 3 и 4.1 для жидкой формы препарата.
4.3. Учитывая то, что в предыдущем опыте, несмотря на значительное улучшение поедаемости предлагаемого средства при переходе к таблетированной форме, у двух из 9 животных (22%) как следствие недостаточно качественного введения таблетки все же имело место незначительное слюнотечение, была проведена дополнительная серия испытаний на 15 кошках, поступивших в стационар ветклиники «Айболит». Отобранные животные относились примерно к одной возрастной категории, имели разницу в весе не более 1 кг (4-5 кг), были клинически здоровы и содержались в одинаковых условиях, имея свободный доступ к воде и корму. В эксперимент включали кошек, исходно находившихся в состоянии нервного возбуждения из-за пребывания в новом месте и незнакомых людей, которое дополнительно сопровождалось действием звуковых раздражителей. Препарат представлял собой таблетки массой 100 мг, содержащие 40 мг ГФ, МКЦ, диоксид кремния и стеарат кальция, и покрытых пленочной оболочкой Sepifilm PW (SEPPIC) с включенной в неё нами вкусовой добавкой (вкус говядины, креветок или рыбы). Препарат задавали кошкам на корень языка по 1 таблетке (доза 8-10 мг/кг). Оценку поведения животных проводили через 15, 30, 45 мин. 1 час и 2 часа, делая в данном эксперименте акцент, прежде всего, на восприятии кошками лекарственного средства, и учитывая при этом сохранение сроков начала действия препарата и достижения максимального эффекта (т.е. его быстродействии).
Проведенные испытания показали, что пероральное введение препарата в виде таблеток, покрытых оболочкой, не вызвало никаких затруднений ни у одного животного. Таблетки с различными вкусами поедались кошками одинаково хорошо, слюнотечения не наблюдалось ни в одном из случаев. В таблице 4 в качестве примера приведены данные для группы кошек (5 животных), получавших таблетки со вкусом говядины (Beef SC 0304021, SC Beef Council).
Очевидно, что у всех животных усовершенствованная таблетированная форма разработанного успокоительного средства с улучшенными вкусовыми качествами полностью сохраняла эффективность и свойство быстродействия: препарат начинал действовать в пределах получаса, а максимальное успокоение животных достигалось через 45-60 минут после его дачи.
Таким образом, разработанный успокоительный препарат на основе ГФ в любой из испытанных лекарственных форм, позволявших при необходимости улучшать его вкус и восприятие животными и, соответственно, обеспечивающих удобство его применения, является быстродействующим, эффективным и безопасным средством для коррекции психо-эмоционального состояния кошек и собак в различных стрессовых ситуациях.