Композиция для лечения остеоартрита, содержащая гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту, и способ получения такой композиции
OSTEOARTHRITIS TREATMENT COMPOSITION COMPRISING HYDROPHILISED SULPHASALASINE AND HYALURONIC ACID, AND A METHOD OF PRODUCING SAID COMPOSITION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к композиции для лечения остеоартрита и к способу получения этой композиции и, более конкретно, относится к композиции, содержащей гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту в качестве активных ингредиентов, для обеспечения возможности эффективного лечения остеоартрита, такого как дегенеративный остеоартрит, путем предупреждения дегенерации хрящей в дополнение к ослаблению симптомов посредством внутрисуставной инъекции и местного введения, и к способу получения этой композиции.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Остеоартрит относится к состоянию, при котором внутрисуставной хрящ непрерывно разрушается и повреждается цитокинами и ферментами разрушения хрящей, экспрессирующимися из хондроцитов и синовиальной оболочки, в результате физического раздражения области сустава, что приводит к боли, нестабильности сустава и потери подвижности.
В настоящее время, кроме хирургических операций, для лечения остеоартрита используют некоторые лекарственные средства, внутрисуставное (в синовиальную полость) введение гиалуроновой кислоты и т.д., но они предназначены главным образом для ослабления симптомов и обладают незначительным действием для восстановления повреждения хрящей. Таким образом, лекарственные средства, которые могут эффективно лечить остеоартрит, в значительной степени востребованы.
В то же время, сульфасалазин применяется в настоящее время в качестве перорального терапевтического средства при лечении ревматоидного артрита и воспалительного заболевания кишечника, но результаты некоторых современных исследований говорят о том, что существует возможность использования сульфасалазина для лечения остеоартрита путем защиты хондроцитов от изменения, которое является причиной остеоартрита, и ингибирования экспресии факторов разрушения хрящей из синовиальной мембраны (Nose М. et al. J Rheumatol 1997; 24:550-4, Lakey et al. Rheumatology 2009; 48:1208-1212, Endo W. et al Mod Rheumatol 2014; 24(5):844-50).
Известно, что при пероральном приеме сульфасалазина, скорость его всасывания является очень низкой, в результате концентрация в крови равняется 12 мкг/мл даже после максимальной дозы 4 г/сутки, и он также вызывает расстройство пищеварения из-за плохой растворимости, и сообщалось о различных побочных эффектах, вызываемых высокой концентрацией в крови сульфапиридина, который является продуктом разложения сульфасалазина (Hoult JRS. Drugs 1986; 32:18-26). Таким образом, ожидается, что прямая внутрисуставная инъекция сульфасалазина предотвратит эти побочные эффекты, возникающие при пероральном введении. Однако плохая растворимость сульфасалазина не дает возможности проявиться его эффекту против остеоартрита в жидкой композиции с достаточной концентрацией. Кроме того, так как известно, что периодичность обновления синовиальной жидкости 2 часа (Levick JR et al. Ann Rheuma 1995; 54:417-423), ожидается, что внутрисуставное введение сульфасалазина не будет достаточно эффективным.
С другой стороны, гиалуроновая кислота представляет собой один из основных компонентов синовиальной жидкости в организме и присутствует между суставными хрящями, играя роль смазки. Так как концентрация гиалуроновой кислоты в суставе снижается, если у пациентов остеоартрит, гиалуроновая кислота в виде добавки широко используется в качестве терапевтического средства при остеоартрите. В отличие от других компонентов синовиальной жидкости, период полувыведения гиалуроновой кислоты составляет более 13 часов (Brown TJ et al. ExpPhysiol 1991:76; 125-134). Таким образом, при смешивании сульфасалазина и гиалуроновой кислоты, ожидается, что длительность нахождения сульфасалазина в синовиальной полости может сохраняться в течение 24 часов или более.
В этих обстоятельствах, с целью создания эффективного способа лечения остеоартрита с использованием сульфасалазина, который является плохорастворимым, авторы настоящего изобретения разработали фармацевтическую композицию, содержащую высокую концентрацию сульфасалазина в качестве активного ингредиента, который растворяют с помощью конкретной концентрации основной добавки, смешанного с гиалуроновой кислотой. Кроме того, в результате использования композиции, содержащей высокую концентрацию сульфасалазина и гиалуроновой кислоты, в животной модели, подтверждено, что композиция с конкретным уровнем концентрации сульфасалазина не только подавляет развитие остеоартрита, но также одновременно демонстрирует снижение боли, посредством этого завершая настоящее изобретение.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ТЕХНИЧЕСКАЯ ЗАДАЧА
Для решения указанной выше задачи, настоящее изобретение предлагает композицию для лечения остеоартрита, пригодную для внутрисуставного или местного введения, содержащую гидрофилизированный сульфасалазин в качестве активного ингредиента и дополнительно гиалуроновую кислоту, ее соль или производное.
Кроме того, настоящее изобретение предлагает способ получения композиции для лечения остеоартрита, пригодную для внутрисуставного или местного введения.
ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ
Когда композицию для лечения остеоартрита, содержащую гидрофилизированный сульфасалазин и дополнительно гиалуроновую кислоту, получают посредством способа получения согласно настоящему изобретению, растворенное состояние сохраняется даже после прохождения стадии нейтрализации после растворения, и посредством этого предотвращается осаждение сульфасалазина путем высаливания, имеющего место после нейтрализации. Таким образом, может быть получена композиция, содержащая высокую концентрацию сульфасалазина, и композиция, приготовленная соответствующим образом, является в высокой степени полезной для лечения остеоартрита, особенно дегенеративного остеоартрита, посредством внутрисуставной инъекции или местного введения, так как она содержит высокую концентрацию сульфасалазина по сравнению с обычной композицией с низкой концентрацией из-за плохой растворимости сульфасалазина.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
ФИГ. 1 представляет собой фотографию композиции для лечения остеоартрита, содержащей 1, 2, 4, и 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты согласно настоящему изобретению.
ФИГ. 2 представляет собой диаграмму, показывающую результат in vitro испытания, ингибирование композицией согласно настоящему изобретению воспаления и экспрессии фактора разрушения хрящей в стволовых клетках человека, полученных из адипоцитов, в которых воспаление индуцируется IL-1b.
ФИГ. 3 представляет собой график измерения совокупного высвобождения количества сульфасалазина, высвобожденного в физиологический раствор, когда смесь гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты содержится в физиологическом растворе.
ФИГ. 4 представляет собой рентгенограммы животной модели остеоартрита (крыса), индуцированного в синовиальной мембране путем обработки 1 мг MIA в 8 неделю после введения композиции против остеоартрита, содержащей гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту согласно настоящему изобретению от 0 до 8 мМ.
ФИГ. 5 представляет собой результат введения композиции против остеоартрита, содержащей гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту согласно настоящему изобретению от 0 до 8 мМ, на животной модели остеоартрита (крыса), индуцированного в синовиальной мембране путем обработки 1 мг MIA, и наблюдение симптомов восстановления в течение 6 недель, используя оборудование, допускающее измерение уровней симптомов животной модели.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙ
В одном аспекте, настоящее изобретение относится к композиции для лечения остеоартрита, пригодной для внутрисуставного или местного введения, содержащей от 2 до 10 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и от 1 до 2% (масс./об.) гиалуроновой кислоты в качестве активных ингредиентов, и к способу снижения развития или лечения остеоартрита посредством введения таковой.
Сульфасалазин (в дальнейшем обозначается "SSZ") представляет собой соединение, образованное посредством азо-связи сульфапиридина и 5-аминосалициловой кислоты (5-ASA), и имеет структуру со следующей химической формулой 1.
Химическая формула 1
В настоящем изобретении композиция характеризуется тем, что содержит от 2 до 10 мМ гидрофилизированного сульфасалазина в качестве активного ингредиента для лечения остеоартрита.
В этом документе термин "гидрофилизированный сульфасалазин" означает, что одно из растворимости или равномерности распределения плохо растворимого в воде сульфасалазина повышается в водной среде, и такой гидрофилизированный сульфасалазин содержит (1) форму растворимой в воде соли сульфасалазина, или (2) смесь, распределенную равномерно путем смешивания растворителя для гидрофилизации и сульфасалазина в водной среде, и растворитель гидрофилизации может представлять собой полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Форма (1) растворимой в воде соли сульфасалазина может представлять собой форму соли присоединения кислоты или соли присоединения щелочи посредством добавления соляной кислоты, хлорида натрия, хлорида кальция или хлорида калия к сульфасалазину, и может быть получена путем смешивания сульфасалазина с полиэтиленгликолем.
Предпочтительно, сульфасалазин по настоящему изобретению может содержать фазу, смешанную с (2) полиэтиленгликолем. Сульфасалазин, смешанный с полиэтиленгликолем, может быть получен путем добавления полиэтиленгликоля к водорастворимой среде с регулируемым рН с использованием соли и добавления сульфасалазина к водорастворимой среде, содержащей полиэтиленгликоль.
Такой сбалансированный солевой раствор может содержать полиэтиленгликоль различной молекулярной массы и концентрации, например, он может содержать полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой от 380 до 420 в концентрации от 1% до 40% (масс./об.).
В связи с этим, авторы настоящего изобретения подтвердили, что терапевтический эффект сульфасалазина при остеоартрите проявлялся только при достаточно высоких концентрациях, но не в концентрации ниже вышеуказанного диапазона, например, при 1 мМ. При содержании сульфасалазина менее 2 мМ (0,08% масс./об.), эффект против остеоартрита не мог проявляться, и когда его содержание превышает 10 мМ (0,4% масс./об.), это является неподходящим для жидкой композиции или композиции для инъекции из-за плохой растворимости самого сульфасалазина.
При этом, в композиции с гидрофилизированным сульфасалазином, описанным в настоящем изобретении, может дополнительно содержаться гиалуроновая кислота, ее соль или ее производное.
6
6
Гиалуроновая кислота представляет собой главный компонент внеклеточного матрикса, известный защитой тканей, таких как радужная оболочка, сетчатка и т.д., и клеток, таких как васкулярная эндотелиальная клетка, эпителиальная клетка и т.д., из-за ее роли механического и физиологического буфера, образуя адгезивный и эластичный раствор, широко распространенный в клеточном матриксе соединительной ткани при физиологических условиях. В настоящем изобретении гиалуроновая кислота не имеет ограничения по физическим свойствам, форме, размеру и т.д., и предпочтительно она подлежит асептической обработке, более предпочтительно, может использоваться гиалуроновая кислота, имеющая среднюю молекулярную массу от 1,0×10 до 6,0×10 г/моль массы. Кроме того, можно использовать гиалуроновую кислоту в форме фармацевтически приемлемой соли, где фармацевтически приемлемая соль содержит соль натрия, соль калия, соль кальция и т.д., и предпочтительно содержит соль натрия. Кроме того, также можно использовать производное гиалуроновой кислоты, и соль этого производного может представлять собой гиалуроновую кислоту, химически модифицированную посредством поперечного сшивания, сульфирования, эстерификации или аминокислотной связи. Как описано выше, в настоящем изобретении концентрация гиалуроновой кислоты равна предпочтительно от 1 до 2% (масс./об.) от всей композиции. При использовании в количестве меньше, чем в вышеуказанном диапазоне, она не может находиться в течение надлежащего времени в синовиальной полости с остеоартритом из-за слишком низкой вязкоэластичности, и при использовании в количестве больше, чем в вышеуказанном диапазоне, трудно гарантировать подходящую текучесть в виде жидкой композиции из-за чрезмерно высокой вязкоэластичности.
В качестве конкретного одного аспекта, композицию для лечения остеоартрита согласно настоящему изобретению можно вводить внутрисуставно или местно. Согласно эксперименту авторов настоящего изобретения, необходимо, чтобы сульфасалазин использовался в концентрации 2 мМ или более, так как он не может проявлять эффективной уровень результата лечения остеоартрита в низкой концентрации, например 1 мМ, но имеет место высокий риск серьезных побочных эффектов, когда его вводят перорально для поддержания такой высокой концентрации сульфасалазина в крови. Таким образом, композиция для лечения остеоартрита согласно настоящему изобретению может быть изготовлена предпочтительно в виде жидкой композиции, более предпочтительно, инъецируемой композиции, путем гидрофилизации сульфасалазина, подлежащего введению внутрисуставно и местно в область с остеоартритом. В отношении состава, композиция для лечения остеоартрита согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемую добавку в дополнение к конкретной концентрации сульфасалазина и гиалуроновой кислоты. Фармацевтически приемлемые добавки обозначают носитель или разбавитель, которые не подавляют биологическую активность и характеристики активного ингредиента без значительного стимулирования организма. Они представляют собой изотонизирующее средство, буфер, стабилизатор, регулятор рН и т.д. для фармацевтически приемлемой добавки. Кроме того, так как композиция согласно настоящему изобретению предпочтительно представляет собой жидкую композицию, она может дополнительно содержать носитель, содержащий водный раствор для нее. Носитель, содержащий водный раствор, может содержать один или больше классов фармацевтически приемлемых носителей, выбранных из группы, состоящей из дистиллированной воды, фосфатно-солевого буферного раствора, сбалансированного солевого раствора и физиологического раствора. Далее, содержание используемого носителя можно регулировать в соответствии с количеством, требующимся для полного объема жидкой композиции или композиции для инъекции, подлежащих получению. Сбалансированный солевой раствор означает солевой раствор, обеспечивающий физиологические рН и концентрации солей (осмотическое давление), и он может называться уравновешенным солевым раствором, и обычный сбалансированный солевой раствор содержит один или более классов, выбранных из группы, состоящей из натрия, калия, кальция, магния и их хлоридов. В этом документе термин "введение" означает ввод компонента по настоящему изобретению пациенту посредством любого подходящего способа, и путь введения по настоящему изобретению представляет собой внутрисуставную или местную инъекцию. В этом документе "лечение" означает прекращение, замедление или снижение развития заболевания, когда используется в отношении субъекта, проявляющего патологический симптом. Способ лечения по настоящему изобретению включает введение гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты в терапевтически эффективной дозе. Конкретная терапевтически эффективная доза для конкретного пациента может варьироваться в соответствии с различными факторами, включая характер и уровень реакции, которые должны быть достигнуты, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и питание пациента, интервал введения, период лечения, комбинированное лекарственное средство, и подобные хорошо известные в медицинской области факторы.
В другом аспекте, настоящее изобретение относится к способу получения композиции для лечения остеоартрита, пригодной для внутрисуставного или местного введения, содержащей гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту. В качестве предпочтительного аспекта, способ получения композиции для лечения остеоартрита согласно настоящему изобретению включает а) стадию получения водного раствора ПЭГ, имеющего значение рН от рН 11 до рН 14, путем растворения основной добавки и ПЭГ в воде и растворения в нем сульфасалазина; б) стадию растворения гиалуроновой кислоты, ее соли или производного в продукте стадии а); и в) стадию нейтрализации продукта, полученного на стадии б), с помощью кислотной добавки.
Стадия а) представляет собой стадию гидрофилизации плохо растворимого сульфасалазина, и представляет собой стадию взаимодействия сульфасалазина с основной добавкой и полиэтиленгликолем (ПЭГ). Конкретно, в качестве основной добавки можно использовать от 0,01 до 1% (масс./об.) NaOH, KOH или аммиака, посредством чего рН водного раствора ПЭГ доводят до значения в диапазоне от 11 или более до 14 или менее. Таким образом, сульфасалазин может быть успешно растворен. Когда концентрация основной добавки находится вне пределов указанного выше диапазона, сульфасалазин высаливается и выпадает в осадок во время следующей стадии нейтрализации. Таким образом, его невозможно использовать в виде жидкой композиции. В отношении содержания сульфасалазина и подобных, подробности о композиции согласно настоящему изобретению можно применять как есть. В то же время, полиэтиленгликоль стабилизирует солюбилизацию сульфасалазина благодаря свойству растворения как гидрофильных, так и гидрофобных компонентов, и предпочтительно можно использовать полиэтиленгликоль, имеющий среднюю молекулярную массу от 400 до 20000 по массе, более предпочтительно ПЭГ400, 1500, 4000, 6000, 20000, и можно использовать ПЭГ в количестве от 1 до 40% (масс./об.) от всей композиции.
Далее, стадия б) представляет собой стадию добавления и перемешивания гиалуроновой кислоты с растворенным сульфасалазином. Физические свойства, форма, размер и содержание гиалуроновой кислоты такие, как определено в композиции согласно настоящему изобретению, и она предпочтительно подлежит асептической обработке. Добавленная гиалуроновая кислота может находиться в форме порошка или жидкого раствора, и например может находиться в форме порошка. Кроме того, предпочтительно перемешивать гидрофилизированный сульфасалазин и гиалуроновую кислоту при 10-40°С в течение от 3 часов до 6 часов. Когда их перемешивают при температуре ниже, чем указано в диапазоне, компоненты композиции могут быть перемешаны неоднородно, и перемешивание в этом диапазоне температур является нежелательным, так как трудно получать стабильную композицию. Кроме того, когда их перемешивают быстрее, чем указано в диапазоне времени, компоненты композиции могут быть неоднородными, и когда их перемешивают в течение более длительного время, может иметь место изменение вязкости гиалуроновой кислоты.
Кроме того, стадия в) представляет собой стадию нейтрализации продукта, полученного на стадии б), с помощью кислотной добавки для приведения рН к уровню, который является подходящим для введения в организм человека. До тех пор пока кислотная добавка может регулировать соответствующий рН и является безопасной для организма человека, ее можно использовать без ограничения в качестве кислотной добавки, например уксусную кислоту, соляную кислоту, фосфорную кислоту, серную кислоту, лимонную кислоту, азотную кислоту и винную кислоту, но без ограничения этими.
В то же время, способ получения композиции для лечения остеоартрита может дополнительно включать стадию добавления фармацевтически приемлемых добавки, носителя или соли, или стадию стерилизации для получения асептической композиции.
Способ, описанный выше, позволяет авторам настоящего изобретения получать стабильную композицию, содержащую сульфасалазин в достаточно высокой концентрации для лечения остеоартрита, в результате чего решается проблема, что композиция высококонцентрированного сульфасалазина не может быть получена из-за исключительно плохой растворимости сульфасалазина, хотя в прошлом для лечения остеоартрита требовалась композиция, содержащая высокую концентрацию сульфасалазина. Более точно, так как в способе получения согласно настоящему изобретению использование конкретной концентрации основной добавки предупреждает осаждение сульфасалазина путем высаливания на стадии нейтрализации и делает возможным стабильное растворенное состояние, может быть получена композиция, содержащая высокую концентрацию сульфасалазина.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В дальнейшем настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров. Однако эти примеры предназначаются только для иллюстрации настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами.
В дальнейшем настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров. Однако следующие примеры предназначаются только для иллюстрации настоящего изобретения, и настоящее изобретение не ограничивается следующими примерами.
Пример 1: Получение смешанной композиции от 1 до 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и от 1 до 2% (масс./об.) гиалуроновой кислоты
Композицию, содержащую 1, 2, 4 и 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и от 1 до 2% (масс./об.) гиалуроновой кислоты, получали посредством следующего способа.
Сначала получали раствор с рН 10 или более, используя 1% KOH. После этого 4% (масс./об.) ПЭГ6000 добавляли к полученному раствору, затем добавляли сульфасалазин с конечной концентрацией 1, 2, 4, 8 мМ и перемешивали в течение 3 часов. Затем раствор, полученный путем перемешивания, фильтровали с помощью 0,22 мкм стерильного фильтра (Millipore Company Millex-GP), затем добавляли гиалуроновую кислоту (гиалуроновую кислоту Ildong, сырье Ildong) с конечной концентрацией 1% масс./об. (10 мг/мл), и размешивали и перемешивали. После перемешивания в течение 4 часов добавляли 1% раствор соляной кислоты для регулирования рН до 7,5, получая таким образом смешанную композицию гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты (смотри Фиг. 1).
Пример 2: Подтверждающий тест замедленного высвобождения от 1 до 6 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и от 1 до 2% (масс./об.) гиалуроновой кислоты
Смесь, полученную в Примере 1, помещали в физиологический раствор, и количественно определяли совокупное высвобождение сульфасалазина в физиологический раствор из смеси сульфасалазин-гиалуроновая кислота. В результате подтвердили, что высвобождение сульфасалазина, смешанного с гиалуроновой кислотой, сохранялось в течение по меньшей мере 60 суток или более, что свидетельствовало о замедленном высвобождении сульфасалазина (смотри Фиг. 2).
Пример 3: in vitro тест на эффективность против остеоартрита для смеси от 1 до 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты
Влияние на выраженность воспаления и экспрессию факторов деструкции хрящей (ММР-3, ММР-13, ADMT-5, СОХ-2) подтверждали с помощью RealTime-PCR из стволовых клеток человека, полученных из жировой ткани (АТСС PCS-500-011), у которых вызывали воспаление с помощью IL-b, с последующим лечением смесями, полученными в Примере 1. В результате подтвердили, что выраженность воспаления и экспрессия факторов деструкции хрящей подавлялась, уровень подавления непосредственно зависел от концентрации гидрофилизированного сульфасалазина.
Пример 4: in vivo тест на эффективность против остеоартрита для смеси от 1 до 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты
После индуцирования остеоартрита у животной модели путем обработки 1 мг MIA (монойодоацетат натрия) синовиальной оболочки 8-недельной крысы (Sprague Dawley), через 1 неделю, полученные в Примере 1 смеси вводили посредством внутрисуставной инъекции. На 8 неделе после введения область сустава экспериментальных животных изучали с помощью рентгенографии. В результате изучения было подтверждено, что в то время, как отдельная композиция гиалуроновой кислоты не имела никакого защитного воздействия на хрящ, комплекс от 1 до 4 мМ сульфасалазин-гиалуроновая кислота задерживал развитие остеоартрита по сравнению с контрольной группой, и комплекс от 6 до 8 мМ гидрофилизированный сульфасалазин-гиалуроновая кислота полностью подавлял развитие остеоартрита.
Пример 5: тест на эффективность смеси от 2 до 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина и гиалуроновой кислоты в отношении подавления симптомов остеоартрита у животной модели
После индуцирования остеоартрита у животной модели посредством того же самого способа, как в Примере 3, через 1 неделю вводили посредством внутрисуставной инъекции физиологический раствор, отдельную композицию гиалуроновой кислоты (только ГК), 8 мМ раствор гидрофилизированного сульфасалазина (только 8 мМ SSZ) или комплекс 8 мМ гидрофилизированного сульфасалазина-гиалуроновая кислота (8 мМ SSZ-ГК), полученный в Примере 1. Массы правых и левых лап, соответственно, измеряли, используя измеритель Incapacitance (Linton instrument Co., UK, Ser No. 01/45/25) или эквивалентное измерительное оборудование, каждую неделю с 4-ой недели после введения. Когда под влиянием MIA в лапе крысы развился остеоартрит, крысу помещали в держатель измерителя опирающейся на лапу, которую не обрабатывали MIA. Каждую массу (г) левой и правой лапы измеряли и приводили в такое положение, чтобы живот крысы не касался датчика устройства. Результат эксперимента представляли в виде среднего значения (%) ± стандартное отклонение путем вычисления отношения массы правых лап к массе обеих лап.
Результат показал, что сам сульфасалазин показывал отсутствие первичного эффекта снятия боли, и отдельная композиция гиалуроновой кислоты показывала эффект только в начале, тогда как смесь 8 мМ сульфасалазина-гиалуроновая кислота показывала равномерный эффект снятия боли с начала и до завершения испытания.