СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ САЙЛЕНСИНГА СЕМЕЙСТВ ГЕНОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ ИСКУССТВЕННЫХ МИКРОРНК

1. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид, способный транскрибироваться в последовательность РНК, где указанный полинуклеотид содержит конструкт для экспрессии miRNA, при этом указанный конструкт для экспрессии miRNA содержит:
a) остов предшественника miRNA, содержащий первый полинуклеотидный сегмент, кодирующий miRNA, и второй полинуклеотидный сегмент, кодирующий последовательность-штрих;
b) указанный первый и указанный второй полинуклеотидные сегменты являются гетерологичными по отношению к остову предшественника miRNA;
c) указанный первый полинуклеотидный сегмент cодержит 22 нуклеотида (22 нт), которые характеризуются достаточной комплементарностью последовательности c целевой последовательностью, уровень РНК от которой подлежит снижению;
d) указанный второй полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, комплементарную первому полинуклеотидному сегменту, и дополнительно содержит по меньшей мере на 1 нуклеотид меньше, чем указанный первый полинуклеотидный сегмент, где 22-нт miRNA является наиболее распространенной формой miRNA, полученной из указанного конструкта для экспрессии miRNA; и
e) указанная 22-нт miRNA, полученная из указанного конструкта для экспрессии miRNA, способна обеспечивать снижение уровня мРНК от целевой последовательности и по меньшей мере от одной дополнительной последовательности из одного и того же семейства белков и/или генов, экспрессия представителей которого не будет снижена при помощи 21-нт miRNA, направленной на тот же
участок, что и 22-нт miRNA.
2. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанный первый полинуклеотидный сегмент расположен 5' по отношению к указанному второму полинуклеотидному сегменту.
3. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанный второй полинуклеотидный сегмент расположен 5' по отношению к указанному первому полинуклеотидному сегменту.
4. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанный остов предшественника miRNA происходит из растения.
5. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 4, где указанное растение представляет собой однодольное растение.
6. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 4, где указанное растение представляет собой двудольное растение.
7. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 5, где указанное однодольное растение представляет собой маис.
8. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 6, где указанное двудольное растение представляет собой сою.
9. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанный остов предшественника miRNA содержит полинуклеотидную последовательность, изложенную в любой из SEQ ID NO:9 или 16, или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO:9 или 16, при этом указанная последовательность сохраняет активность остова предшественника miRNA.
10. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанная целевая последовательность кодирует представителя семейства белков и/или генов галактинолсинтазы (GAS).
11. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 10, где указанный первый полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:2, и второй полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:6.
12. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 10, где указанная miRNA, полученная из указанного конструкта для экспрессии miRNA, содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:1.
13. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1, где указанная целевая последовательность кодирует представителя семейства белков и/или генов дельта-12-десатуразы жирных кислот 2.
14. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 13, где указанный первый полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:4, и второй полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:8.
15. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 13, где указанная miRNA, полученная из указанного конструкта для экспрессии miRNA, содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:3.
16. Рекомбинантный ДНК-конструкт, содержащий выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1.
17. Рекомбинантный ДНК-конструкт по п. 16, где указанный рекомбинантный ДНК-конструкт содержит промотор, функционально связанный с выделенным или рекомбинантным полинуклеотидом.
18. Трансформированная растительная клетка, содержащая выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1.
19. Трансформированное растение, содержащее выделенный или рекомбинантный полинуклеотид по п. 1.
20. Трансформированная растительная клетка по п. 18, где указанная растительная клетка происходит из двудольного растения.
21. Трансформированная растительная клетка по п. 20, где указанное двудольное растение представляет собой сою, Brassica, подсолнечник, хлопчатник или люцерну.
22. Трансформированная растительная клетка по п. 18, где указанная растительная клетка происходит из однодольного растения.
23. Трансформированная растительная клетка по п. 22, где указанное однодольное растение представляет собой маис, сахарный тростник, пшеницу, рис, ячмень, сорго или рожь.
24. Трансформированное растение по п. 19, где указанное растение представляет собой двудольное растение.
25. Трансформированное растение по п. 24, где указанное двудольное растение представляет собой сою, Brassica, подсолнечник, хлопчатник или люцерну.
26. Трансформированное растение по п. 19, где указанное растение представляет собой однодольное растение.
27. Трансформированное растение по п. 26, где указанное однодольное растение представляет собой маис, сахарный тростник, пшеницу, рис, ячмень, сорго или рожь.
28. Трансформированное семя растения по п. 19.
29. Способ снижения уровня мРНК по меньшей мере от двух последовательностей из одного и того же семейства белков и/или генов в клетке, включающий введение в клетку рекомбинантного или выделенного полинуклеотида по п. 1, причем экспрессия указанного полинуклеотида обеспечивает снижение уровня мРНК от каждой из указанных по меньшей мере двух последовательностей по сравнению с уровнем мРНК от каждой из указанных по меньшей мере двух последовательностей при отсутствии экспрессии указанного полинуклеотида.
30. Способ по п. 29, где уровень мРНК только от одной из указанных двух или более последовательностей будет снижен, если длина указанной miRNA будет составлять 21 нуклеотид.
31. Способ по п. 29, где указанная клетка представляет собой растительную клетку.
32. Способ по п. 29, где указанный остов предшественника miRNA содержит полинуклеотидную последовательность, изложенную в любой из SEQ ID NO:9 или 16, или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO:9 или 16, при этом указанная последовательность сохраняет активность остова предшественника miRNA.
33. Способ по п. 29, где указанная целевая последовательность кодирует представителя семейства белков и/или генов галактинолсинтазы (GAS).
34. Способ по п. 33, где указанный первый полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:2, и второй полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:6.
35. Способ по п. 34, где указанная miRNA, полученная из указанного конструкта для экспрессии miRNA, содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:1.
36. Способ по п. 29, где указанная целевая последовательность кодирует представителя семейства белков и/или генов дельта-12-десатуразы жирных кислот 2.
37. Способ по п. 36, где указанный первый полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:4, и второй полинуклеотидный сегмент содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:8.
38. Способ по п. 37, где указанная miRNA, полученная из указанного конструкта для экспрессии miRNA, содержит последовательность, изложенную в SEQ ID NO:3.
39. Способ по п. 31, где указанное растение представляет собой двудольное растение.
40. Способ по п. 39, где указанное двудольное растение представляет собой сою, Brassica, подсолнечник, хлопчатник или люцерну.
41. Способ по п. 31, где указанное растение представляет собой однодольное растение.
42. Способ по п. 41, где указанное однодольное растение представляет собой маис, сахарный тростник, пшеницу, рис, ячмень, сорго или рожь.