СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ АЛЛОГЕННЫХ И УСТОЙЧИВЫХ К ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПРЕПАРАТАМ Т-КЛЕТОК ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ

1. Способ получения иммунных клеток ex-vivo, которые устойчивы к медикаменту, который представляет собой аналог пурина, включающий стадии:
(a) обеспечения иммунной клетки;
(b) осуществления трансфекции указанной иммунной клетки нуклеотидной последовательностью, кодирующей редкощепящую эндонуклеазу, специфически направленную на ген, экспрессирующий фермент, обладающий активностью дезоксицитидинкиназы (dcK - ЕС 2.7.1.74;
(с) осуществления экспрессии указанной эндонуклеазы в указанных иммунных клетках для достижения направленной инактивации указанного гена dcK;
(d) осуществление размножения сконструированных иммунных клеток, полученных на этапе с, необязательно в присутствии указанного аналога пурина.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки представляют собой первичные клетки.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки представляют собой Т-клетки.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки представляют собой CD8+-клетки.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки представляют собой TIL (клетки, инфильтрующиеся в опухоль.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки происходят из организма пациента, которому диагностировали рак.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки происходят из организма донора.
8. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанные иммунные клетки дополнительно инактивированы по их генам, кодирующим РТЛ-альфа (рецептор Т-клеток альфа и РТЛ-бета, что делает их аллогенными.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанная редкощепящая эндонуклеаза представляют собой TALE-нуклеазу.
10. Способ по п. 9 отличающийся тем, что инактивацию гена dCK TALE-нуклеазами проводят с применением TALE-нуклеаз с последовательностью SEQ ID №63 или SEQ ID №64, а целевая последовательность dCK - SEQ ID №62.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество указанных сконструированных клеток на этапе е увеличивается in-vivo.
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что количество указанных сконструированных клеток увеличивается in-vitro.
13. Способ по п. 3, дополнительно включающий осуществление экспрессии в Т-клетках химерного рецептора антигенов.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанный химерный рецептор антигенов является CD19+ или CD123+.
15. Способ по п. 1, дополнительно включающий осуществление инактивации гена иммунной контрольной точки.
16. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный аналог пурина представляют собой клофарабин или флударабин.
17. Изолированная иммунная клетка, полученная посредством способа по любому из пп. 1-16, которая устойчива к аналогу пурина и в которой ген лекарственной чувствительности dCK инактивирован при помощи редкощепящей эндонуклеазы.
18. Изолированная иммунная клетка по п. 17 для применения в качестве медикамента.
19. Изолированная иммунная клетка по п. 18 для применения в комбинации с аналогом пурина.
20. Изолированная иммунная клетка по п. 17 для применения при лечении рака.
21. Изолированная иммунная клетка по п. 20 для применения при лечении рака, который представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) или амиотрофический миелоидный лейкоз (АМЛ).
22. Изолированная Т-клетка, устойчивая к аналогу пурина, которая содержит по меньшей мере один нарушенный ген, кодирующий компонент рецептора Т-клеток.
23 Изолированная Т-клетка по п. 22, отличающаяся тем, что инактивацию рецептора Т-клеток осуществляют с помощью редкощепящей эндонуклеазы.
24. Изолированная Т-клетка по п. 23, отличающаяся тем, что указанная редкощепящая эндонуклеаза представляет собой TALE-нуклеазу.
25. Изолированная Т-клетка по любому из пп. 22-24 для применения в качестве медикамента.
26. Изолированная Т-клетка по п. 25 для применения в комбинации с аналогом пурина.
27. Изолированная Т-клетка по любому из пп. 22-24 для применения при лечении рака.
28. Изолированная Т-клетка по п. 27 для применения при лечении рака, который представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) или амиотрофический миелоидный лейкоз (АМЛ).
29. Изолированная Т-клетка, устойчивая к аналогу пурина, в которой ген лекарственной чувствительности dCK инактивирован при помощи редкощепящей эндонуклеазы, и в которой присутствует химерный рецептор антигенов (CAR, специфичный в отношении определенного антигена.
30. Изолированная Т-клетка по п. 29, отличающаяся тем, что указанный CAR нацелен на CD19+-клетки или CD123+-клетки.
31. Изолированная Т-клетка по п. 29 или 30 для применения в качестве лекарственного препарата.
32. Изолированная Т-клетка по п. 20 для применения в комбинации с аналогом пурина.
33. Изолированная Т-клетка по любому из пп. 20-22 для применения при лечении рака.
34. Изолированная Т-клетка по п. 23 для применения при лечении рака, который представляет собой острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ) или амиотрофический миелоидный лейкоз (АМЛ).
35. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одну иммунную клетку по п. 17 или изолированную Т-клетку по любому из пп. 12-24, 29 и 30.
36. Способ лечения пациента, нуждающегося в таком лечении, включающий:
(a) приготовление популяции иммунных клеток по п. 17 или Т-клеток согласно любому из пп. 22-24, 29, 30;
(b) введение указанных иммунных клеток или Т-клеток указанному пациенту.
37. Способ лечения пациента по п. 36, дополнительно сочетаемый с введением аналога пурина.
38. Популяция Т-клеток, которая обладает частотой вставок-делеций, генерируемых при помощи редкощепящей эндонуклеазы в локусе dCK более 80% и указанная популяция устойчива к дозе клофарабина по меньшей мере 1 мкМ.
39. Популяция Т-клеток, которая имеет частоту вставок-делеций, генерированных при помощи редкощепящей эндонуклеазы в локусе dCK, более 80% и указанная популяция устойчива к дозе флударабина по меньшей мере 100 мкМ.
40. Популяция Т-клеток, которая имеет частоту вставок-делеций, генерированных при помощи редкощепящей эндонуклеазы в локусе dCK, более 80%, и имеет IC50 в отношении клофарабина по меньшей мере 10 мкМ.
41. Популяция Т-клеток, которая имеет частоту вставок-делеций, генерированных при помощи редкощепящей эндонуклеазы в локусе dCK более 80% и имеет IC50 в отношении флударабина по меньшей мере 400 мкМ.
42. Популяция Т-клеток по любому из пп. 38-41 для применения в качестве лекарственного препарата.