Способ приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексный гелеобразный препарат на его основе
PREPARATION METHOD OF THE COMPLEX GEL FOR MASTITIS TREATMENT AND PREVENTION IN COWS AND COMPLEX GEL ON ITS BASIS

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способу приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексному гелеобразному препарату на его основе, и может быть использовано в акушерстве и гинекологии при создании лекарственных препаратов на основе экстрактов растений и антибактериальных компонентов, а так же для профилактики в комплексном лечении эндометритов овец и свиней.
Уровень техники
Известно средство для лечения животных при послеродовом эндометрите, включающее противомикробные и противовоспалительные препараты и полимерную основу, при этом в качестве противомикробных препаратов оно содержит этакридина лактат и цефатоксим, в качестве противовоспалительного препарата сок алое при следующем соотношении компонентов, масс. %: этакридина лактат 0,6; сок алое 50,4; цефатоксим 2, мочевина 15,0; формалин нейтральный 10; вода дистиллированная 5; глицерин 17,0 (см. пат. RU №2367416, МПК А61К 31/047, А61К 1/115, А61К 31/17, А61К 31/473, А61К 36/886, А61Р 15/00, опубл. 20.09.2009 г).
Недостатком данного средства является то, что оно не обладает антигистаминным действием, а именно не снимает спазм гладкой мускулатуры, не уменьшает проницаемости капилляров, так как воспалительный процесс обуславливает повышенную чувствительность к продуктам тканевого распада и антигенам микробной клетки.
Известен препарат для лечения маститов у коров, содержащий растительную основу и нашатырный спирт, при этом он дополнительно содержит димексид, а в качестве растительной основы фуз, полученный в производстве масла из семян тыквы, и носитель типа Аэросил-380 при следующем соотношении исходных компонентов в масс. %:
- 30% -ный раствор димексида - 4-5;
- 0,5%-ный раствор аммиака (нашатырный спирт) - 2-4;
- носитель Аэросил-380 - 2-5;
- фуз - остальное (см. пат. RU №2170085, МПК А61К 31/00, А61К 35/78, А61Р 15/00 опубл. 10.07.2001 г.).
Недостатком данного препарата является невысокая антибиотическая активность, а, следовательно, невысокая эффективность лечения мастита.
Известен препарат для лечения и профилактики мастита у коров, содержащий противомикробные, противовоспалительные препараты и дистиллированную воду, при этом он дополнительно содержит корень солодки, причем в качестве противомикробного препарата содержит метронидазол, а в качестве противовоспалительного препарата - ципрофлосацин, при следующем соотношении компонентов, г/л:
- корень солодки 80-85 г;
- метронидазол 3,5-4,0 г;
- ципрофлоксацин 2,0-2,5 г:
- дистиллированная вода - остальное (см. пат. RU №2537143, МПК А61К 36/484, А61К 31/415, А61К 31/395, А61Р 15/00, А61Р 29/00, А61Р 31/04 опубл. 27.12.2014 г.).
Недостатком данного препарата является невысокая антибиотическая активность и эффективность лечения мастита у коров.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ приготовления препарата для лечения и профилактики мастита у коров и препарат на его основе, включающий смешивание противомикробных и противовоспалительных препаратов, гомогенизацию, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы и хрена (см. Гандрабурова Н.И., Тимченко Л.Д., Ржепаковский И.В., «Принципы моделирования нового ветеринарного препарата «УТЕРОМАСТИН», СКФУ, г. Ставрополь, с. 69-73).
Недостатком данного препарата является то, что он обладает недостаточно высоким противовоспалительным действием по отношению к микроорганизмам и на морфофункциональное состояние слизистой оболочки матки.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексного гелеобразного препарата на его основе, обладающего выраженным противомикробным и противовоспалительным широкого спектра действием с одновременным, обезболивающим, регенерирующим, биостимулирующим, антипротозойным и антибактериальным действием, а именно к подавлению большинства основных и сопутствующих патогенных микроорганизмов, возбуждению механизмов иммунной защиты, а также более простого и дешевого способа приготовления на основе чайного гриба, экстрактов растений и антибактериальных компонентов.
Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к противомикробному и противовоспалительному широкого спектра действию с одновременным, обезболивающим, регенерирующим, биостимулирующим, антипротозойным и антибактериальным действием, возбуждению механизмов иммунной защиты, упрощению и удешевлению способа приготовления на основе чайного гриба, экстрактов растений и антибактериальных компонентов.
Технический результат достигается с помощью комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров, содержащего противомикробные и противовоспалительные препараты, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы, хрена и хлорофитума, где в качестве экстрагента используют пропиленгликоль в соотношении 1:5, дополнительно содержит акриловую кислоту и триэтаноламин, при следующем соотношении компонентов в г/л:
- хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный
9-13
- метронидазол
3,5-5,0
- акриловую кислоту
2,5-3,5
- триэтаноламин
1,0-1,5
- экстракт мать-и-мачехи
1,0-1,5
- экстракт хлорофитума
1,0-1,5
- экстракт ромашки аптечной
1,0-1,5
- экстракт березовых почек
1,0-1,5
- экстракт чистотела большого
1,0-1,5
- экстракт крапивы
1,0-1,5
- экстракт хрена
1,0-1,5
- биомасса культуры чайного гриба
остальное
Технический результат достигается с помощью способа приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров, заключающегося в смешивании противомикробных и противовоспалительных препаратов, гомогенизации, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - Экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы, хрена и хлорофитума, и дополнительно акриловую кислоту и триэтаноламин, причем растительные компоненты предварительно сушат, затем в количестве 1-1,5 г каждый гомогенизируют, заливают экстрагентом, в качестве которого используют пропиленгликоль, в соотношении 1:5 дополнительно настаивают в течение 14-15 дней и фильтруют, готовят биомассу культуры чайного гриба, настаивают в течение 10-12 дней, затем гомогенизируют зооглею чайного гриба, разбавляют ее настоем чайного гриба в соотношении 1,6:1 соответственно, до получения однородной гелеобразной массы, автоклавируют в течение 10-12 мин с последующими поэтапным добавлением всех компонентов в миксер, гомогенизацией до получения однородной гелеобразной массы и фасовкой в стерильные шприцы.
Таким образом, технический результат достигается за счет действия противомикробных и противовоспалительных свойств соотношения используемых компонентов в предлагаемом изобретении:
- хлоргексидин биглюконат 0,05%-ный используют в качестве лечебно-профилактического средства при различных инфекциях, для антисептической обработки и дезинфекции, который проявляет в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий бактериостатическое или бактерицидное действие. Бактериостатическое действие проявляется в концентрации 0,01% и менее; бактерицидное - в концентрации более 0,01% при температуре 22°С и воздействии в течение 1 мин. Фунгицидное действие - при концентрации 0,05%, температуре 22°С и воздействии в течение 10 мин. Вирулицидное действие (в отношении лигюфильных вирусов) - проявляется при концентрации 0,01-1%. На споры бактерий действует только при повышенной температуре. Эффективен в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий - Treponema spp., Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas spp., Chlamydia spp., Ureaplasma spp.;
- метронидазол (метрогил) - антипротозойное и антибактериальное средство широкого спектра действия. Механизм действия препарата заключается в восстановлении 5-нитрогруппы метронидазола внутриклеточными транспортными протеинами анаэробных микроорганизмов и простейших. Восстановленная 5-нитрогруппа метронидазола взаимодействует с ДНК клетки микроорганизмов, ингибируя синтез их нуклеиновых кислот, что ведет к гибели бактерий. Действующее вещество препарата - метронидазол. Показания: протозойные инфекции (амебиаз, трихомониаз, лямблиоз, балантидиаз, трихомонадный вагинит и уретрит, амебная дизентерия); анаэробные инфекции (вызванные Bac. fragilis и другими бактероидами, фузобактериями, эубактериями, клостридиями, анаэробными кокками);
- акриловая кислота - сополимер акрилонитрогена Acrylic acid/acrylonitrogens copolymer, учитывая ее свойства связывания и контроля вязкости, используют ее в качестве первичного эмульгатора;
- триэтаноламин химический рН регулятор, ароматический ингредиент, ПАВ-эмульгатор, нейтрализует жирные кислоты, способствует лучшему растворению масел и других ингредиентов, которые не являются полностью растворимыми в воде, способствует смешению водорастворимых и жирорастворимых компонентов;
- экстракт мать-и-мачехи обыкновенной (Tussilago farfam L.) - оказывает противовоспалительное действие, усиливает секрецию бронхиальных желез, смягчающее, антисептическое, отхаркивающее, спазмолитическое и потогонное действие, в листьях обнаружены гликозид туссилагин, ситостерин, яблочная, галловая и винная кислоты, каротиноиды, дубильные вещества, слизи, декстрин, инулин, флавоноиды, витамин С, следы эфирного масла, в соцветиях находится фитостерин, тритерпеновые спирты, арнидол и фирадиол, углеводы, каротиноид тараксантин, стигмастерин, ситостерин, рутин, гептакозан, дубильные вещества;
- экстракт хлорофитума хохлатого (Chlorophitum comosum), - содержит широкий перечень аминокислот в высоких концентрациях: цистин, лейцин, валин, фенилаланин, гистидин, которые обладают мощным антиоксидантным, детоксикационным, репаративным, иммуномодулирующим действием, участвует в обменных клеточных и тканевых процессах, активизирует биохимические реакции, способствует уменьшению болевых ощущений при воспалениях;
- экстракт ромашки аптечной, лекарственной (Matricaria chamomilla), оказывает спазмолитическое, противовоспалительное, антисептическое, седативное и некоторое обезболивающее, желчегонное действие, уменьшает процессы брожения. Механизм спазмолитического действия объясняется холинолитическими свойствами гликозидов растения. Препараты ромашки ускоряют процессы регенерации эпителия при экспериментальных язвах и задерживают развитие экспериментального воспаления. Ромашка аптечная содержит никотиновую, салициловую, аскорбиновую кислоты, фитостерин, горечи, камедь, холин, эфирное масло (содержащее более 40 компонентов, такие как бисаболол и его окиси, хамазулен и прочие), дубильные вещества, диоксикумарин, жиры, воска, сахара, гликозид умбеллиферон, глицериды жирных кислот, пектины, слизи. Именно им она обязана своими полезными и целебными свойствами. Цветы ромашки аптечной содержат до 1,8% (обычно - 0,3-1,0%) эфирного масла, основным компонентом масла считается хамазулен (до 10% в селекционных сортах), а также флавоноиды, производные апигенина, лютеолина и кверцетина, которые также обладают  противовоспалительными и противовирусными действиями, бета-каротин, кумарины, ситостерин, каротин, гликозид спазмолитического действия, гликозид потогонного действия, полисахариды и органические кислоты. Остальные компоненты также оказывают лечебное воздействие: фернезен (способствует эпителизации и грануляции тканей), бизаболоксид А (имеет противовоспалительное и спазмолитическое действие), герниарин и N-индициклоэфир (оба - спазмолитическое действие). Соцветия ромашки аптечной накапливают макроэлементы (мг/г): 41,80; Са - 8,30; Mg - 3,10; Fe - 0,30; Mn - 0,29; Cu - 0,78; Zn - 0,80; Со - 0,16; Cr - 0,09; Al - 0,27; Ва - 0,20; V - 0;08; Se - 7,20; Ni - 0,24; Pb - 0,07; I - 0,07;
- экстракт березовых почек (Betula alba), оказывает противовоспалительное, мочегонное, ранозаживляющее, потогонное, антибактериальное действие. Они содержат эфирное масло, флавоноиды, витамин РР, сапонины, причем в состав эфирного масла (3,5-5,3%), входят бетулен, бетулол, бетуленовая кислота и нафталин, а в листьях содержатся: дубильные вещества, аскорбиновая кислота, флавоноиды, сапонины, эфирное масло, бетулоретиновая кислота, кроме того, в них много фитонцидов. В листьях также содержатся: зола - 5,22%; макроэлементы (мг/г): калий - 11,40, кальций - 12,50, магний - 3,80, железо - 0,30; микроэлементы (мкг/г): - марганец - 374,00, медь - 7,52, цинк - 159,00, кобальт - 0,16, молибден - 1,44, хром - 0,56, алюминий - 98,32, барий - 85,76, ванадий - 0,24, селен - 0,29, никель - 5,28, стронций - 11,70, свинец - 2,64, бор. Концентрирует марганец, цинк, барий, особенно цинк. Кора березы содержит до 15% дубильных веществ, тритерпеновый спирт бетулин, эфирное масло, гликозиды - бетулозид и гаультерин, суберин. В почках березы содержатся: зола - 5,55%; макроэлементы (мг/г): калий - 12,60, кальций - 7,40, магний - 2,00, железо - 0,30; микроэлементы (мкг/г): марганец - 127,00, медь - 10,80, цинк - 100,00, кобальт - 0,72, хром - 0,56, алюминий - 153,80, барий - 35,20, ванадий - 0,48, селен - 0,70, никель - 5,84, стронций - 7,52, свинец - 1,36, бор - 19,60. Концентрирует цинк, селен;
- экстракт чистотела большого (Chelidonium majus) обладает противовоспалительным, противозудным, противомикробным, ранозаживляющим и прижигающим действиями, при этом основными свойствами чистотела являются спазмолитическое, желчегонное и противовоспалительные (бактерицидные). Наибольшей фармакологической активностью обладают алкалоиды чистотела. Например, хелидонин дает выраженный болеутоляющий и успокаивающий эффект. Кроме того, этот алкалоид оказывает спазмолитическое действие на гладкомышечные органы, обладает гипотензивным и брадикардическим свойствами. Гомохелидонин, другой алкалоид чистотела, напротив, дает возбуждающе-судорожный эффект и проявляет местно-анестезирующую активность. Алкалоид протопин уменьшает реактивность вегетативной нервной системы и усиливает тонус гладкой мускулатуры. Для хелеритрина характерно выраженное местно-раздражающее действие. Во всех частях растения найдены алкалоиды, количество которых в траве может достигать 0,27-2,25%, а в корнях - до 4%. Кроме алкалоидов, в чистотеле содержатся флавоноиды, сапонины, дубильные вещества, витамины А, С, органические кислоты (1,40-4,32%). Из органических кислот наиболее распространены хелидоновая, лимонная, яблочная, аскорбиновая, янтарная. Кроме этого, в чистотеле содержится высший алифатический спирт - хелидониол, а в плодах имеется до 40% жирного масла. Содержатся в чистотеле алкалоиды подгрупп: протоберберина - берберин, коптизин, стилопин (производное тетрагидротропоберберина); протопина - протопин, аллокриптопин; бензофенонтридина - хелидонин, хелеритрин, хелирубин, сангвиритрин, азотсодержащие соединения - холин, гистамин, тирамин. Алкалоиды в чистотеле могут находиться как в свободном состоянии, так и в связанной форме. Связаны они чаще всего с хелидоновой кислотой, по своей структуре весьма близкой к меконовой кислоте;
- экстракт крапивы двудомной (Urtica dioica), обладает большим набором целебных и лечебных свойств: ускоряет процесс свертывания крови, повышает содержание гемоглобина и эритроцитов, улучшает обмен веществ, понижает содержание сахара в крови, укрепляет иммунитет, обладает общеукрепляющим действием, помогает сопротивляться воздействию радиационного излучения, повышает тонус кишечника и сердечно-сосудистой системы, усиливает тонус и сокращение мускулатуры матки, нормализует менструальный цикл, обладает стимулирующим и тонизирующим действием, стимулирует эпителизацию пораженных тканей, обладает свойством восстанавливать функцию обоняния, регулирует кислотно-щелочное равновесие в организме, обладает противовоспалительным, поливитаминным, противозудным, желчегонным, мочегонным, гепатопротекторным (защищающим клетки печени), отхаркивающим, обезболивающим, антисептическим, противосудорожным и другими свойствами. В ней обнаружены почти все витамины, многие микроэлементы, органические кислоты, а также фитонциды и танины, в семенах - жирное масло. Крапива богата биологически активными веществами, такими, как гликозид, уртицин, флавоноиды, фенольные кислоты. В корнях содержится до 2% дубильных кислот. В листьях крапивы присутствуют муравьиная, кремниевая, пантотеновая, щавелевая, янтарная, молочная, лимонная и хинная кислоты. В 100 граммах крапивы двудомной содержится 3,7 грамм белков, 0,5 грамм жиров, 5,4 грамма углеводов, 3,1 грамма клетчатки, 41 мг железа, 1,3 мг меди, 8,2 мг марганца, 4,3 мг бора, 2,7 мг титана, 0,03 мг никеля. Листья содержат хлорофилл (2-5%), крахмал (до 10%), алкалоиды (до 0,29%), аскорбиновую кислоту (200 мг/%), каротиноиды (до 50 мг/%);
- экстракт хрена обыкновенного (Armoracia rusticana), содержит витамин С, витамины группы В, РР, аскорбиновую кислоту, большой набор эфирных горчичных масел, фитонциды, крахмал, смолистые вещества, клетчатку, большое количество микро- и макроэлементов, обладает противовоспалительным и бактерицидным качествам, а также считается сильным природным антибиотиком, в нем содержатся углеводы, жиры, азотистые вещества, много минеральных солей (особенно калия - до 371 мг %), витамин С (128 мг %), эфирное масло, главной составной частью которого является аллиловое горчичное масло. Острый вкус хрену придает гликозид синигрин;
- биомасса культуры (экстракт) чайного гриба - Medusomyces gysevii представляет собой симбиоз уксуснокислых бактерий с несколькими видами дрожжей, которые образуют целлюлозную пленку на поверхности питательной среды. Нативная жидкость чайного гриба имеет достаточно сложный химический состав. В продуктах брожения гриба содержится большое количество органических кислот: уксусная, глюкуроновая, щавелевая, лимонная, яблочная, молочная, пировиноградная, койевая, фосфорная и совсем небольшое количество спирта. Нативная жидкость Medusomyces gisevii также обладает широким спектром антибактериального действия. Выделенный из настоя антибиотик получил название бактериоцидина или медузина. В частности, чайный гриб проявляет бактериостатическое и бактерицидное действие в отношении Helicobacter pylori, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Agrobacterium tumefaciens, Bacillus cereus, Shigella sonnei, Salmonella enteritidis, Escherichia coli. Ферментный состав: каталаза, липаза, протеаза, зимаза, сахараза, карбогидраза, амилаза, триптические ферменты настоя чайного гриба. Липаза способствует распаду или образованию жиров. Протеаза, способствует расщеплению протеина на аминокислоты и играет существенную роль в усвоении животного белка. Амилаза препятствует повышению сахара в крови, расщепляя крахмал. Наличие микроэлементов, витаминов (витамины группы В, витамин С, РР, D), танина и кахетинов способствует повышению иммунитета, нормализации обмена веществ. Спектр применения чайного гриба очень широк. Его применяют при целом ряде желудочно-кишечных заболеваний (колитах, дизентерии, гастритах, диспепсии), хронических болезней желчного пузыря и печени, ангинах и хронических тонзиллитах, как профилактическое средство при атеросклерозе, полиартрите, ревмокардите в период затухания или неострого течения болезни, для повышения иммунитета, настой чайного гриба и его тело применяется при ожогах и инфицированных ранах. Таким образом, чайный гриб обладает бактериостатическим, фибринолитическим, детоксикационным свойствами, биостимулирующим, местным, умеренно раздражающим действием, стимулирует регенерационные процессы (см. Авакян А.Д. Пробиотические и пребиотические свойства культуральной жидкости чайного гриба// Мат-лы четвертого всероссийского конгресса по медицинской микологии. - М.: Нац. акад. микологии, 2006, с. 214-216).
Сущность способа приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексный гелеобразный препарат на его основе, заключается в следующем.
Смешивают противомикробные и противовоспалительные препараты, проводят их гомогенизацию, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - Экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы и хрена, при этом он дополнительно содержит экстракт хлорофитума, акриловую кислоту и триэтаноламин, причем растительные компоненты предварительно сушат, затем в количестве 1-1,5 г каждый гомогенизируют, заливают экстрагентом, где в качестве экстрагента используют пропиленгликоль, в соотношении 1:5 настаивают в течение 14-15 дней и фильтруют, одновременно готовят биомассу культуры чайного гриба, настаивают в течение 10-12 дней, затем гомогенизируют зооглею чайного гриба, разбавляют ее настоем чайного гриба в соотношении 1,6:1 соответственно, до получения однородной гелеобразной массы, автоклавируют в течение 10-12 мин, с последующими поэтапным добавлением всех компонентов в миксер, гомогенизацией до получения однородной гелеобразной массы и фасовкой в стерильные шприцы, при этом комплексный гелеобразный препарат для лечения и профилактики мастита у коров, включает противомикробные и противовоспалительные препараты, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы и хрена, при этом он дополнительно содержит экстракт хлорофитума, акриловую кислоту и триэтаноламин, при следующем соотношении компонентов в г/л: хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный - 9-13; метронидазол - 3,5-5,0; акриловую кислоту - 2,5-3,5; триэтаноламин - 1,0-1,5; экстракт мать-и-мачехи - 1,0-1,5; экстракт хлорофитума - 1,0-1,5; экстракт ромашки аптечной - 1,0-1,5; экстракт березовых почек - 1,0-1,5; экстракт чистотела большого - 1,0-1,5; экстракт крапивы - 1,0-1,5; экстракт хрена - 1,0-1,5; однородная гелеобразная масса чайного гриба - остальное.
Краткое описание иных материалов. В таблице 1 дан способ приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексный гелеобразный препарат на его основе, результаты изучения органолептических и токсикологических свойств препарата в процессе хранения.
В таблице 2, то же, изучение хронической токсичности препарата, коэффициент кумуляции.
В таблице 3, то же, изучение аллергизирующего действия препарата.
В таблице 4, то же, органолептические свойства препарата.
В таблице 5, то же, изучение токсикологических параметров препарата.
Осуществление изобретения
Примеры конкретного выполнения способа приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексный гелеобразный препарат на его основе.
3
3
Пример 1. Способ приготовления комплексного гелеобразного препарата для лечения и профилактики мастита у коров и комплексный гелеобразный препарат на его основе готовят следующим образом. Смешивают противомикробные и противовоспалительные препараты, гомогенизируют их, причем в качестве противомикробных препаратов он содержит метронидазол, хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный, биомассу культуры чайного гриба, а в качестве противовоспалительных препаратов - экстракты растительных компонентов: мать-и-мачехи, ромашки аптечной, березовых почек, чистотела большого, крапивы и хрена, при этом он дополнительно содержит экстракт хлорофитума, акриловую кислоту и триэтаноламин, причем растительные компоненты предварительно сушат, затем гомогенизируют, заливают экстрагентом, в качестве которого используют пропиленгликоль, в соотношении 1:5 настаивают в течение 14-15 дней и фильтруют, одновременно готовят биомассу культуры чайного гриба, настаивают в течение 10-12 дней, затем гомогенизируют зооглею чайного гриба, разбавляют ее настоем чайного гриба в соотношении 1,6:1 соответственно, до получения однородной гелеобразной массы, автоклавируют в течение 10-12 мин, с последующими поэтапным добавлением всех компонентов в миксер, гомогенизацией до получения однородной гелеобразной массы и фасовкой в стерильные шприцы, при следующем соотношении компонентов в г/л: хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный - 8,0; метронидазол - 3,0; акриловую кислоту - 2,0; триэтаноламин - 0,5; экстракт мать-и-мачехи - 0,5; экстракт хлорофитума 0,5; экстракт ромашки аптечной - 0,5; экстракт березовых почек - 0,5; экстракт чистотела большого - 0,5; экстракт крапивы - 0,5; экстракт хрена - 0,5; однородная гелеобразная масса чайного гриба - остальное, при этом биомассу культуры чайного гриба (зооглею), готовят следующим образом, для приготовления используют культуру, полученную из коллекции чистых культур ВНИИ ПБ и ВП, причем допускается использование зооглеи на 20-25-й дни выращивания культуры чайного гриба, кусочек зооглеи в количестве 0,8 кг/100дм готового напитка помещают в питательную среду при соотношении зооглеи и питательной среды 1:10, соответственно, при этом используют питательную среду, приготовленную из настоя черного чая и сахара песка, на 1 дм питательной среды, расход чая и сахара песка составляет 1,6 и 90 г, соответственно, чай заливают питьевой водой при температуре 98°С, в соотношении 1:50 и выдерживают 20-21 мин, после чего полученный настой отфильтровывают через сито с порами диаметром 0,5 мм и направляют в резервуар для приготовления питательной среды, добавляют сахар и обеспложенную питьевую воду при температуре 25°С, смесь тщательно перемешивают, при этом культуру чайного гриба выращивают при температуре 25°С в условиях доступа кислорода, в открытой емкости в течение 10 суток, затем зооглею чайного гриба в количестве 400 г гомогенизируют с 250 мл настоя чайного гриба до получения однородной гелеобразной массы, полученный полуфабрикат чайного гриба помещают в стерильные стеклянные флаконы объемом 250 мл, заполняя до половины, закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, автоклавируют при температуре 132°С, давлении 2 атм в течение 20 минут в стерилизаторе паровом СПВА75-1 НН (ТРАНС-СИГНАЛ) с последующим хранением до использования (см. пат. RU №2153816, МПК A23L 2/00, A23L 2/38, A23F 3/14). Полученный комплексный гелеобразный препарат для лечения и профилактики острого мастита у коров используют следующим образом.
При мастите у коров препарат вводят интрацистернально: при субклиническом, серозном и катаральном мастите по 7 мл один раз в сутки в течение 5-7 дней; при гнойно-катаральном мастите - по 10 мл один раз в сутки в течение 10 дней, причем перед введением препарата из больной четверти вымени секрет выдаивают, а сосок дезинфицируют, препарат перед применением нагревают до комнатной температуры и вводят в сосок пораженной четверти вымени при помощи катетера. После введения проводят легкий массаж вымени снизу вверх. Для профилактики и лечения воспалительных процессов матки у коров, овец и свиней препарат вводят внутриматочно после оказания родовспоможения, оперативного отделения последа, при послеродовых эндометритах и метрит-мастит-агалактии.
Перед введением препарата проводят санитарную обработку наружных половых органов и корня хвоста. При необходимости освобождают полость матки от воспалительного экссудата.
Препарат вводят в полость матки с помощью шприца Жане или прибора для искусственного осеменения свиней ПОС-5 и катетера: с лечебной целью каждые 24 часа в течение 7-10 дней коровам в дозе 100 мл на одно животное, а свиноматкам и овцематкам в дозе 35-40 мл на 50 кг массы тела, с профилактической целью после оказания родовспоможения или оперативного отделения последа однократно - коровам в дозе 100 мл на одно животное, свиноматкам и овцематкам в дозе 25 мл на 50 кг массы тела.
Молоко с больной доли вымени утилизируют, затем проводят воздействие на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в области вымени в течение 2 мин с интервалом 12 ч до выздоровления. Выздоровление коров проходило в течение трех недель. Профилактика мастита: за 5-6 дней перед отелом проводят точечный массаж в области поясницы и таза прибором, например, «Вокал - В» воздействуя на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в течение 1 мин с интервалом 12 ч в течение 5 дней, затем с первого дня после отела проводят антисептическую обработку сосков вымени предлагаемым препаратом на протяжении 7-ми дней после каждого доения, а за 5-6 дней перед переводом коровы в общее стадо проводят точечный массаж в области поясницы, таза и вымени прибором, например, «Вокал - В» воздействуя на биологически активные точки (БАТ) импульсным низкочастотным током в течение 1 мин с интервалом 12 ч в течение 5 дней.
Результат: Полученный комплексный гелеобразный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров проходило в течение двадцати одного дня.
Пример 2. Проводят аналогично примера 1, но берут компоненты при следующем соотношении компонентов в г/л: хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный - 9; метронидазол - 3,5; акриловую кислоту - 2,5; триэтаноламин - 1,0; экстракт мать-и-мачехи - 1,0; экстракт хлорофитума - 1,0; экстракт ромашки аптечной - 1,0; экстракт березовых почек - 1,0; экстракт чистотела большого - 1,0; экстракт крапивы - 1,0; экстракт хрена - 1,0; однородная гелеобразная масса чайного гриба - остальное.
Результат: Полученный комплексный гелеобразный препарат использован для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло в течение четырнадцати дней. Препарат соответствует всем показателям таблиц 1-5.
Пример 3. Проводят аналогично примера 1, но берут компоненты при следующем соотношении компонентов в г/л: хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный - 13; метронидазол - 5,0; акриловую кислоту - 3,5; триэтаноламин - 1,5; экстракт мать-и-мачехи - 1,5; экстракт хлорофитума - 1,5; экстракт ромашки аптечной - 1,5; экстракт березовых почек - 1,5; экстракт чистотела большого - 1,5; экстракт крапивы - 1,5; экстракт хрена - 1,5; однородная гелеобразная масса чайного гриба - остальное.
Результат: Полученный препарат использован для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло в течение четырнадцати дней. Препарат соответствует всем показателям таблиц 1-5.
Пример 4. Проводят аналогично примера 1, но берут компоненты при следующем соотношении компонентов в г/л: хлоргексидина биглюконат 0,05%-ный - 14; метронидазол - 5,5; акриловую кислоту - 4,0; триэтаноламин - 1,8; экстракт мать-и-мачехи - 1,8; экстракт хлорофитума - 1,8; экстракт ромашки аптечной - 1,8; экстракт березовых почек - 1,8; экстракт чистотела большого - 1,8; экстракт крапивы - 1,8; экстракт хрена - 1,8; однородная гелеобразная масса чайного гриба - остальное.
Результат: Полученный препарат испытан для лечения и профилактики острого мастита у коров, выздоровление коров прошло также в течение четырнадцати дней, но увеличился расход компонентов. Препарат соответствует всем показателям таблиц 1-5.
Таким образом, наиболее оптимальными примерами являются примеры 2 и 3, так как препарат с данным соотношением компонентов дал положительный результат в наиболее короткие сроки.
Пример 5. Изучение токсикологических параметров препарата, определение острой токсичности (см. табл. 1, 5).
Для определения острой токсичности препарата применяют методику, изложенную в «Методических указаниях по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных», утвержденных В.Т. Самохиным (1987). Опыт проводят на белых беспородных мышах. По принципу аналогов отобрано 48 животных с массой тела 22,0±0,6 г и сформировано 6 групп мышей (n=8), поение и кормление которых было прекращено за 4 часа до начала опыта. Наименьшую токсичную дозу препарата определяют по наиболее токсичному препарату, входящему в его состав - метронидозолу. Мышам первой группы в желудок с помощью металлического зонда вводят 0,1 мл препарата - 0,25 мг, животным второй группы - 0,2 мл, третьей - 0,3, четвертой - 0,4 мл, пятой - 0,5 мл, шестой - 0,6 мл. После введения препарата корм дают через три часа. Наблюдение за мышами осуществляют в течение 72 часов, учитывают активность, аппетит, состояние шерстного покрова, регистрируют случаи гибели животных.
Мыши первой, второй третьей и четвертой групп в течение 20 минут после введения препарата были незначительно угнетены, сбивались в кучу в углу клетки, далее вели себя активно. После дачи корма ели с аппетитом. На протяжении оставшегося времени наблюдения изменений в поведении и общем состоянии не наблюдалось.
Мыши пятой и шестой групп в течение 5 минут после введения препарата наблюдалась инспираторная одышка, на протяжении 1-1,5 часов мыши были угнетены, шерсть взъерошена, сбивались в углу в кучу, аппетит отсутствовал. Состояние животных нормализовалось в течение 3 часов.
Летальных случаев не наблюдалось ни в одной из групп. Полученные данные позволили отнести предлагаемый препарат к группе малотоксичных препаратов.
Пример 6. Изучение хронической токсичности препарата (см. табл. 2).
С целью определения хронической токсичности препарата, был проведен опыт по ускоренному определению кумулятивного эффекта. Было отобрано 20 белых нелинейных мышей с массой тела 18-25 гр. По принципу аналогов сформированы Две группы (n=10). Препарат вводят внутрижелудочно с помощью металлического зонда ежедневно. Мышам контрольной группы таким же способом вводят дистиллированную воду. В течение 4 суток препарат дают в дозе 1000 мг/кг. Следующие четверо суток животные получают препарат из расчета 2000 мг/кг. В течение 9-15 дня опыта доза препарата составляет 4000 мг/кг. С 15 по 20 день мыши получают препарат из расчета 8000 мг/кг. Наблюдение осуществляют ежедневно на протяжении всего периода опыта. При оценке состояния мышей учитывают габитус животных, их активность, аппетит. Клиническое состояние животных в течение первого и второго периодов опыта оставалось в пределах нормы, мыши были активны, с аппетитом принимали корм, шерсть гладкая. С 9-го дня опыта было отмечено, что шерсть животных стала взъерошенной, тусклой, реакция на внешние раздражители заторможена, крысы подолгу сидели у кормушки, после чего медленно начинали есть. С 15 дня стала заметна задержка в росте мышей опытной группы по сравнению с мышами контрольной группы, шерсть стала редкой, взъерошенной, мыши подолгу сидели у кормушки, после чего медленно начинают есть, упитанность животных опытной группы была ниже средней. Состояние крыс контрольной группы на протяжении всего периода наблюдения оставалось удовлетворительным.
Суммарная средняя летальная доза при многократном введении составила 88000 мг/кг.
Для определения коэффициента кумуляции используют формулу:
50
50
x
o
K=LD/LD, где
К - коэффициент кумуляции;
50
x
LD - летальная средняя доза при многократном введении;
50
o
LD - средняя летальная доза при однократном введении.
препарат
К=88000/10000=8,8
Коэффициент кумуляции равен 8,8, что относит данный препарат к четвертой группе - слабо выраженная степень кумуляции (см. таблицу 1).
Пример 7. Изучение аллергизирующего действия препарата (см. табл. 3). Изучение аллергизирующего действия препарата проводят методом накожных аппликаций. Для этого были сформированы 2 группы беспородных кроликов, по 5 особей в каждой. Кроликов первой группы ежедневно сенсибилизируют многократными аппликациями (n=24), препарат в один и тот же участок кожи на боку диаметром 5 см каждые 4 часа в течение четырех дней. Вторую группу (контрольную) сенсибилизируют многократными аппликациями (n=24) лошадиной сыворотки по 0,1 мл каждые 4 часа 4 дня подряд. Через 72 часа (на 7-ой день) проводят капельные пробы. В опытной группе, используют препарат по предлагаемому изобретению, в контрольной - лошадиную сыворотку. Учет реакции ведут каждые 24 часа, обращая внимание на признаки развития дерматита в местах капельной пробы. В результате опыта установлено отсутствие аллергизирующего действия препарата.
Пример 8. Местно-раздражающее действие препарата
Для определения раздражающего действия препарата используют метод конъюнктивальных проб. Для проведения конъюнктивальной пробы используют три морские свинки. Животным однократно на конъюнктиву под верхнее веко левого глаза с помощью стерильной пипетки вводят одну каплю препарата по предлагаемому изобретению. Правый глаз служит контролем, в него инстилируют одну каплю дистиллированной воды. Учет результатов проводят через 30 минут, 1, 3, 6, 12 и 24, 72 часа, регистрируя наличие истечений, гиперемию, плотность, цвет конъюнктивы.
В результате обследования морских свинок спустя 30 минут после введения препарата отмечают незначительную гиперемию конъюнктивы и умеренное слезотечение, что закономерно при введении в конъюнктивальный мешок плохо растворимых веществ. Указанные изменения постепенно исчезают через 2-5 часов. При последующих осмотрах признаков воспалительной реакции, зуда, слезотечения не было. На основании вышеизложенных результатов делают вывод о том, что препарат по предлагаемому изобретению не обладает местным раздражающим действием.
Пример 9. Определение антимикробных свойств препарата.
Для определения антибактериальной активности препарата используют диско-диффузионный метод. Для изготовления дисков препарат разводят равным количеством дистиллированной воды. Один миллилитр полученной суспензии используют для пропитки 100 дисков фильтровальной бумаги. Далее диски перемещают в стерильную чашку Петри, которую помещают в термостат для просушивания при температуре 37°С. Посев тест-культуры полевого штамма стафилококка проводят на плотную питательную среду мясо-пептонный агар. После посева в стерильных условиях на поверхность агара помещают диски, пропитанные препаратом по предлагаемому изобретению. Диффузия препарата в агар привела к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 37°С в течение 48 часов, учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах, которая составила 24±1,6 мм, на основании чего делают вывод, что комплексный препарат по предлагаемому изобретению достаточно активен в отношении полевого штамма стафилококка.
Препарат для лечения и профилактики мастита у коров по предлагаемому изобретению прошел испытания в фермерском хозяйстве Ставропольского края.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- противомикробное и противовоспалительное широкого спектра действие;
- обезболивающее, регенерирующее, биостимулирующее, антипротозойное и антибактериальное действие;
- возбуждение механизмов иммунной защиты;
- упрощение и удешевление способа приготовления на основе чайного гриба, экстрактов растений и антибактериальных компонентов;
- уменьшение реакции организма на гистамин;
- снятию спазм гладкой мускулатуры.