Основные итоги координации исследований по проблеме диагностики и профилактики паразитарных зоонозов

ОСНОВНЫЕ ИТОГИ КООРДИНАЦИИ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО ПРОБЛЕМЕ ДИАГНОСТИКИ И ПРОФИЛАКТИКИ ПАРАЗИТАРНЫХ ЗООНОЗОВ

Успенский А.В.

ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина

В системе профилактических мероприятий при паразитарных зоонозах ведущее значение занимает диагностика, внедрение средств специфической профилактики, оптимизация мониторинга эпизоотической и эпидемической ситуации.

С этой целью усовершенствована постановка твердофазного ИФА с использованием полистироловых микропанелей-стрипов,

сенсибилизированных антигеном трихинелл молекулярной массой 63-29 кДа.

Оптимизированы параметры и режимы постановки ИФА и dot-ИФА с различными концентрациями экскреторно-секреторного антигена.

Отработаны режимы приготовления компонентов тест-системы сэндвич-ИФА для диагностики трихинеллеза на ранних стадиях развития инвазии.

Создана тест-система на основе ИФА при трихинеллезе свиней с использованием мясного сока и разработан метод определения жизнеспособности и инвазионности личинок трихинелл.

В практику Украины внедрена прижизненная диагностика трихинеллеза методом ИФА. Для этого разработана новая иммуноферментная тест-система «TrichinelHso test AB», которая позволяет выявлять антитела против трихинелл в сыворотках крови свиней, лошадей, собак. С помощью ИФА обследовано 170 тыс. голов свиней.

Разработан способ прижизненной диагностики трихинеллеза свиней методом кристаллоскопии, который обеспечивает эффективную диагностику при экспериментальном и естественном заражении.

Получен фрагмент гена, использованный при создании экспрессирующей векторной системы, позволившей получить in vitro гибридные белки, пригодные для использования в качестве основы биологического препарата для профилактики трихинеллеза лабораторных животных.

Проводена работа по созданию и испытанию на лабораторных животных биологического препарата для профилактики трихинеллеза на основе амплифицированных фрагментов генов, кодирующих протективные антигены паразита.

Составлен лабораторный регламент на применение иммуноферментной тестсистемы «ИФА-Биотех-T.spiralis» для прижизненной диагностики трихинеллеза свиней и на проведение ПЦР для амплификации генов, кодирующих белки-антигена. Предложен способ получения гибридного белка Tsp1 трихинелл для иммунопрофилактики трихинеллеза животных.

Проведено производственное испытание диагностической эффективности иммуноферментной тест-системы (ИФТС) «ИФА-Биотех-Т^рпаНв-стрип» на

3

основе иммунодиагностических антигенов Trichinella spiralis для

прижизненной диагностики у свиней. Чувствительность теста составила 88,9%, специфичность - 72%.

Разработан способ прижизненной диагностики трихинеллеза

плотоядных и всеядных животных, способ прижизненной диагностики ларвального гидатидоза (эхинококкоза) овец и предложена адъювантная композиция для инъекционных вакцин против тканевых гельминтозов.

В целях создания представительного банка геномных ДНК паразитов рода Trichinella, циркулирующих на территории РФ, выделены природные изоляты трихинелл из географически удаленных друг от друга очагов трихинеллеза, проведено их пассирование на лабораторных грызунах и получены препаративные количества биомассы гельминтов.

Проведены серии ПЦР геномных ДНК изолятов трихинелл от свиньи из Северной Осетии, шакала с Северного Кавказа, медведя с Дальнего Востока и лисицы из Рязанской области с олигонуклеотидными праймерами Tsp-1.

Разработаны: методика фиксации и окрашивания культивируемых клеток протосколексов Echinococcus multilocularis в культуре in vitro, способ профилактики вторичного альвеолярного эхинококкоза (гидатидоза), способ получения иммуногенного антигена Trichinella spiralis.

Разработаны способы очистки антигенов эхинококков, проведен иммунологический и масс-спектрометрический анализ структуры гомологичных антигенных белков разных видов эхинококка. Обнаружены различия в пептидных картах пары сравниваемых белков E.granulosus и E.multilocularis.

Проведены исследования по выявлению сыворотычных антител к Dirofilaria immitis у собак иммунологической реакцией и разработан метод диагностики дирофиляриоза собак фракционированным антигеном из сетарий. Специфичность и чувствительность ИФР была в пределах 84-86%.

Отработаны параметры приготовления экскреторно секреторного антигена Strongyloides papillosus и изучена диагностическая эффективность РНГ А, ИФА при стронгилоидозе крупного рогатого скота.

Предложена методика приготовления экскреторно-секреторных антигенов из личинок токсокар и изучена динамика антител к личинкам Toxocara canis при спонтанном и экспериментальном токсокарозе, а также после дегельминтизации.

Подготовлены методические рекомендации по дезинвазии объектов ветеринарных лабораторий и ветеринарных лечебниц для уничтожения яиц и личинок Toxocara canis и методические рекомендации по диагностике и профилактике паразитарных зоонозов у бурых, полярных и уссурийских медведей в условиях зоопарков и цирков.

Проведены исследования по иммунологической диагностике гиподерматоза и фасциолеза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа “ИФА-гиподерма». На способ иммуноферментной диагностики ранних стадий фасциолеза крупного рогатого скота получен патент.

4

В целях совершенствования трихинеллоскопического контроля осуществлен анализ производственных и диагностических параметров аппаратов типа АВТ-Л и ТП. Проведены испытания активатора, изготовленного в виде сетчатого металлического контейнера, а также новой системы удаления осадка и отработанного искусственного желудочного сока из реакторов. Введение двойного фильтра позволяет получить чистый осадок, увеличивающий диагностическую эффективность и сократить время пептолиза. С учетом этих данных создан улучшенный вариант под названием АВТ-Л7. Предложена новая пропись и метод приготовления искусственного желудочного сока, которая получила название бетасол.

Оптимизирована послеубойная диагностика цистицеркоза крупного рогатого скота и овец. Определены связанные и свободные аминокислоты в продуктах убоя животных при тканевых гельминтозах.

Составлены методические рекомендации по проведению ветеринарносанитарного контроля за качеством и безопасностью продовольственного сырья и методические указания по методам санитарно-паразитологической экспертизы мяса и мясной продукции.

Совместно с рядом институтов медицинского и ветеринарного профиля разработаны методы санитарно-паразитологической экспертизы мяса и мясной продукции МУК 4.2. 2010 (Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека).

Заключение. Комплекс исследований, выполненных по данной проблеме, позволил оптимизировать иммунологическую диагностику зоонозов на основе ИФА, создать ряд перспективных приборов и устройств для повышения эффективности ветеринарно-санитарного контроля при паразитарных зоонозах и разработать технологию создания средств специфической профилактики при данных заболеваниях.

Литература: Материалы отчетов научно-исследовательских учреждений за 2006-2010 гг. по проблеме «Изыскать новые подходы к усовершенствованию методов иммунологической диагностики и профилактики, создать высокоэффективную систему ветеринарно-санитарного контроля продуктов животноводства при паразитарных болезнях».

Main results of scientific research coordination on diagnosis and prophylaxis of parasitic zoonoses. Uspensky A.V. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Helminthology.

Summary. One represented analysis of researches over the last 5 years on diagnosis and prophylaxis of parasitic zoonoses carried out by scientific organizations of Russia and the Commonwealth of Independent States.

5