Атриальный натрийуретический пептид корригирует нарушения процессов синтеза ДНК и свободнорадикального окисления, индуцированные L-NAME, в органах дыхания новорожденных белых крыс

свидетельствуют о снижении энергетических ресурсов клеток за счет частоты обострений.

Выводы

У детей с БЛД при обострении по типу БОС происходит активация всех звеньев системного иммунитета на фоне невысокого уровня про- и противовоспалительных цитокинов, что, видимо, указывает на участие компенсаторных реакций за счет незначительной секреции цитокинов при данном типе обострения. У детей с БЛД при обострении по пневмоническому типу выявлено снижение уровня показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета с дисфункцией фагоцитарной активности клеток, что, возможно, обусловлено особенностями клинического течения хронического процесса и косвенно свидетельствует об истощении энергетического потенциала иммуноцитов, в результате чего, вероятно, происходит компенсаторное повышение продукции про- и противовоспалительных цитокинов. Следовательно, имеют место диаметрально противоположные механизмы иммунной защиты при различных вариантах обострения БЛД.

Выявленные различия в иммунном реагировании у детей с БЛД при различных вариантах обострения подтверждают обоснованность использования и дифференциального подхода при выборе иммуномодулирующей терапии в комплексном лечении больных с данной патологии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Цитокины клеток крови здоровых и больных с атопией: особенности методической интерпретации [Текст]/Е.В.Бердышев, Е.Г.Исаченко//Тихоокеанский медицинский журнал.-1999.-№3.-С.61-63.

2. Клинические особенности и течение бронхо-

легочной дисплазии [Текст]/Богданова А.В. [и

др.]//РМЖ.-2002.-№1.-С.28-32.

3. Цитокины - общая система гомеостатической регуляции клеточных функций [Текст] /Г.И.Васильева, С.Ю.Тюкавкина, И.А.Иванова//Цитология.-2001.-.№12.-С1101-1111.

4. Цитокины и аллергия [Гекст]/Н.В.Медуницын //Иммунология. -1999. -№5 .-С.5-9.

5. Метод фенотипирования лимфоцитов в тестах розеткообразования с частицами, покрытыми моноклональными антителами [Текст]/Д.К.Новиков: методические рекомендации.-Витебск: Изд-во Витебского мед. ун-та, 2000.

6. Определение общей окислительновосстановительной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [Текст]/В.В.Климов, Т.В.Кошовкина: методические указания.-М.: Изд-во ЦОЛИУВ, 1995.-6 с.

7. Цитокины и оксид азота при бронхиальной астме [Текст]/Огородова Л.М. [и др.]//Бюллетень сибирской медицины.-2002.-№1.-С.70-73.

8. Клетки иммунной системы

[Текст]/И.С.Фрейдлин, А.А.Тотолян.-СПб.: Наука,

2001.-390 с.

9. Bronchopulmonary dysplasia [Text]/Farell P.A. [et al.]//Curr. Probl. Pediatr.-1998.-Vol.27.-P.127-163.

10. Bronchopulmonary dysplasia: ante - and postnatal [Text]/A.A.Hislop//Pediatr.Pulmonol.-1997.-Vol.23.-P.71-75.

11. Bronchopulmonary dysplasia: then and now [Text]/W.H.Northway//Am. J. Dis. Child.-1990.-Vol.65.-P.1076-1081.

П

УДК 612.398.145.1:615.711.17-092.9

О.А.Лебедько, С.С.Тимошин

АТРИАЛЬНЫЙ НАТРИЙУРЕТИЧЕСКИЙ ПЕПТИД КОРРИГИРУЕТ НАРУШЕНИЯ ПРОЦЕССОВ СИНТЕЗА ДНК И СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ, ИНДУЦИРОВАННЫЕ Ь-КАМЕ, В ОРГАНАХ ДЫХАНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ БЕЛЫХ КРЫС

Хабаровский филиал ГУДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства, Дальневосточный государственный медицинский университет

РЕЗЮМЕ

Пятикратное введение Ь-КАМЕ (внутри-брюшинно, в дозе 9,3*10-5 М/кг, ежедневно, с 2 по 6 сутки постнатального развития) стимулировало ДНК-синтетическую активность гладких миоцитов в бронхах белых крыс на фоне активации процессов свободнорадикального окисления в легких. Атриальный натрийуретический пептид (вводимый в аналогичном режиме, через 30 минут после инъекции Ь-КАМЕ) в дозе 3,2*10'8 М/кг нивелировал эффекты Ь-КАМЕ.

SUMMARY

O.A.Lebedko, S.S.Timoshin

ATRIAL SODIUM UREIC PEPTID CORRECTS L-NAME - INDUCED DNA SYNTHESIS AND FREE-RADICAL OXIDATION IN RESPIRATORY ORGANS OF NEWBORN WHITE RATS

L-NAME injected 5 times (intraperitoneally, at a dose 9,3*10'5 М/kg, daily, on the 2-6 days of the postnatal period) stimulated DNA synthetic activity of smooth myocytes in bronchi of white rats with free-radical oxidation processes in lungs

being enhanced. Atrial sodium-ureic peptide (injected in the same manner, 30 minutes after L-NAME injection at a dose 3,2-10-8 М/kg ) grade L-NAME effects.

Атриальный натрийуретический пептид (1-28) или (АНП) является представителем семейства вазоактивных пептидов. На ранних этапах онтогенеза АНП активно синтезируется эпителием респираторного тракта и, наряду с оксидом азота (NO), участвует в регуляции базального и стимулированного тонуса воздухоносных путей [8, 9]. Доказано, что, в сравнении с прочими органами, легкие содержат максимальное количество АНП-рецепторов [4]. Цель настоящей работы: исследовать влияние системного введения АНП на ДНК-синтетическую активность гладких миоцитов бронхов, а также свободнорадикальное окисление (СРО) легких новорожденных белых крыс в условиях блокады синтеза оксида азота с помощью ингибитора нитро-ксидсинтаз метилового эфира NG-нитро-Ь-

аргинина (L-NAME).

Материалы и методы исследований

Эксперименты проводили на 92 новорожденных белых крысах. Вещества вводили внутрибрюшин-но, ежедневно со 2 по 6 сутки жизни. Крысы 1-й группы получали АНП (1-28) или H-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-OH в дозе 3,2-10-8 М/кг. Животные 2-й группы - L-NAME или NG-nitro-L-arginine methyl ester ("ICN Biomedicals Inc.") в дозе 9,3-10-5 М/кг. Крысам 3-й группы в вышеуказанных дозах вводили: L-NAME и через 30 минут - АНП. Животным 4-й группы инъецировали изотонический раствор NaCl.

Крыс декапитировали через 24 часа после заключительного воздействия. Процессы синтеза ДНК исследовали методом радиоавтографии. За 1 час до эвтаназии крысам внутрибрюшинно вводили 3Н-тимидин (молярная активность - 1570 ТБк/М) в дозе 1 мкКи/г. Радиоавтографы готовили по стандартной методике. Подсчитывали количество клеток, находящихся в S-периоде (индекс меченых ядер - ИМЯ, %) в гладких миоцитах бронхов с хрящевой основой. Для интегральной оценки процессов СРО легочных гомогенатов использовали метод хемилюминесценции (ХЛ). Регистрацию ХЛ осуществляли на люминесцентном спектромет-

ре LS 50B «PERKIN ELMER». Спонтанную и индуцированную Fe2+ ХЛ исследовали по методу [2]. Определяли: светосумму за 1 мин. спонтанной ХЛ (Son), величина которой коррелирует с интенсивностью СРО; максимум быстрой вспышки (h) индуцированной ХЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов. Кинетику ХЛ, инициированную H2O2 в присутствии люминола [1, 7] анализировали по трем параметрам: максимуму первой вспышки (Hj), указывающему на интенсивность радикалообразования в реакциях, подобной реакции Фентона; максимуму второй вспышки (H2), свидетельствующему об активности антирадикаль-ной защиты; временному интервалу между H1 и H2 вспышек, продолжительность которого зависит от состояния антиоксидантной системы. Показатели ХЛ рассчитывали на 1 мг липидов, выражали в относительных единицах. Концентрацию общих липидов определяли фосфованилиновым методом с помощью тест-наборов «LACHEMA». Полученные данные обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследований и их обсуждение

При воздействии L-NAME наблюдалось увеличение ДНК-синтетической активности гладких миоци-тов бронхов (табл. 1): ИМЯ гладких миоцитов - повышался в 1,6 раза. Анализ ХЛ-показателей (табл. 2) продемонстрировал, что введение L-NAME интенсифицировало СРО в легких: S^ возросла в 2,4 раза. При этом возросло содержание гидроперекисей липидов и накопление гидроксил-радикалов: h и Hi увеличились в 1,7 раза, и 5,3 раза, соответственно. Выявленные нарушения свободнорадикального статуса обусловлены ослаблением антиоксидантной и антирадикальной защиты: t снизилось в 1, 6 раза, H2 возросла в 1,7 раза, соответственно.

Таблица 1

Влияние АНП на синтез ДНК в гладких миоцитах бронхов новорожденных белых крыс, М±т

Показатели ИМЯ, %

Контроль 0,526+0,034

АНП 0,255+0,024*

L-NAME 0,854+0,071*

L-NAME+АНП 0,504+0,045

Примечание: здесь и далее * - р<0,05 по отношению к группе "контроль".

Таблица 2

Влияние АНП на показатели хемилюминесценции гомогенатов

легких новорожденных белых крыс, M±m

Показатели Sen, отн.ед. h, отн.ед. Иь отн.ед. t, мин. H2, отн.ед.

Контроль 6,27+0,20 0,086+0,002 0,138+0,007 0,84+0,04 0,473+0,023

АНП 6,50+0,22 0,080+0,005 0,144+0,005 0,96+0,06 0,350+0,018*

L-NAME 15,14+0,63* 0,145+0,005* 0,742+0,005* 0,52+0,02* 0,794+0,048*

L-NAME+АНП 6,94+0,25 0,092+0,005 0,155+0,008 0,75+0,03 0,522+0,034

В условиях физиологического уровня активности NO-синтетических процессов введение АНП снижало количество ДНК-синтезирующих ядер гладких миоцитов, о чем свидетельствует падение величины ИМЯ в 2,1 раза (табл. 1).

При этом ХЛ-анализ выявил (табл. 2) активизацию антирадикальной защиты легких: H2 снизилась в 1,4 раза. Представленные нами данные об ингибирующем влиянии АНП на синтез ДНК в гладких миоцитах бронхов новорожденных белых крыс соответствуют результатам, полученным in vitro - на культуре гладких миоцитов воздухоносных путей человека [5].

АНП, вводимый на фоне воздействия L-NAME, предотвратил увеличение количества гладких мио-цитов, находящихся в S-периоде клеточного цикла: ИМЯ не отличался от аналогичного показателя в контроле (табл. 1). В этих условиях АНП нивелировал эффекты L-NAME и в отношении процессов СРО: при анализе хемилюминограмм не выявлено изменений, статистически значимых в сравнении с контрольными уровнями (табл. 2). Вероятно, корригирующие эффекты АНП, зарегистрированные нами в условиях применения L-NAME, в определенной степени опосредованы участием этого пептида в поддержании физиологического уровня продукции NO [3, 6]. Выявленные нами свойства АНП ограничивать пролиферативный ответ гладких миоцитов и купировать развитие окислительного стресса, могут быть использованы при разработке новых методов профилактики и коррекции гиперреактивности дыхательных путей, в том числе на ранних этапах онтогенеза.

ЛИТЕРАТУРА

1. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма [Текст]/А.В.Арутюнян, Е.Е. Дубинина,

Н.Н.Зыбина:. методические рекомендации.-СПб., 2000.

2. Свободные радикалы в живых системах [Текст]/Владимиров Ю.А. [и др.]//ВИНИТИ АН СССР: Итоги науки и техники. Серия «Биофизика».-М., 1991.-Т.29.-147 с.

3. Cytokine-stimulated nitric oxide production in the human renal proximal tubule and its modulation by natriuretic pep-tides: A novel immunomodulatory mechanism? [Text]/P.K.Chatterjee, G.M.Hawksworth, J.S.McLay//Exp. Nephrol.-1999.-Vol.7, №5-6.-P. 438448.

4. Cardiac natriuretic peptides: a physiological lineage of cardioprotective hormones? [Text]/A.P.Farrell, K.R.Olson//Physiol. Biochem. Zool.-2000.-Vol.73, №1.-P.1-11.

5. Antiproliferative effect of NO and ANP in cultured human airway smooth muscle [Text]/A.M.Hamad, S.R.Jonson, A.J.Knox//Am. J. Physiol.-1999.-Vol.277, №5.-P.L910-L918.

6. Elevation of intracellular calcium levels contributes to the inhibition of nitric oxide production by atrial natriuretic peptide [Text]/A.K.Kiemer, A.M.Vollmar//Immunol. Cell Biol.-2001.-Vol.79, №1.-P.11-17.

7. Characterization of H2O2 - initiated oxidation of blood serum lipids by kinetic parameters [Text]/A.I.Kuzmenko//West. Med. J.-1999.-Vol.71, №4.-P.63-66.

8. Effects of atrial natriuretic peptide and 8-brom cyclic guanosine monophosphate on human tracheal smooth muscle [Text]/K.Mikawa, H.Kume, K.Takagi//Arzneimittel-forschung.-1998.-Vol.48,№9.-P.914-918.

9. Control of airway smooth muscle tone; pharmacology of relaxation [Text]/S.Thirstrup//Respir. Med.-2000.-Vol.94, №6.-P.519-528.

П