ЛЕЧЕНИЕ ИНФЕКЦИЙ H. PYLORI С ПРИМЕНЕНИЕМ ИНГИБИТОРОВ MTAN
TREATMENT OF HELICOBACTER PYLORI INFECTIONS WITH USE OF MTAN INHIBITORS

ПРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
[0001]
Для настоящей заявки испрашивается приоритет по предварительной патентной заявке США № 61/938755, зарегистрированной 12 февраля 2014 года, содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
ЗАЯВЛЕНИЕ О ГОСУДАРСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКЕ
[0002]
Настоящее изобретение получено при государственной поддержке по гранту № GM41916, выданному National Institutes of Health, и по гранту Center for Synchrotron Biosciences № P30-EB-009998, выданному National Institute of Biomedical Imaging and Bioengineering (NIBIB). Правительство имеет определенные права на изобретение.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0003]
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Изобретение относится к лечению инфекций  () с применением ингибиторов MTAN (5'-метилтиоаденозиннуклеозидазы) , в частности, у индивидуумов, имеющих пептическую язву.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004]
На всем протяжении настоящей заявки различные публикации обозначают с помощью сносок. Полное цитирование для этих ссылок можно найти в конце описания перед формулой изобретения. Таким образом, описания этих публикаций включены в настоящую заявку посредством ссылок в полном объеме для более полного описания уровня техники, к которому относится настоящая заявка.
[0005]
H. pylori
H. pylori
H. pylori
H. pylori
1
2
является грамотрицательной бактерией и существует микроаэрофильно в слизистой оболочке желудка человека-хозяина. Она связана с 85 процентами случаев язвы желудка и 95 процентами случаев язвы двенадцатиперстной кишки. В клинических изолятах  преобладает устойчивость к лекарственным средствам. После менее чем тридцати лет специфического лечения антибиотиками становится все труднее осуществлять эрадикацию  с использованием комбинации двух антибиотиков при двухнедельной терапии. Для лечения инфекций  необходимы антибиотики с новыми мишенями и механизмами действия.
[0006]
3
4,5
6
6,7
Campylobacter
Helicobacter
N
Hp
Hp
S
S
Грамотрицательные бактерии зависят от менахинонов в качестве транспортеров электронов при дыхании и имеют поддерживаемые пути биосинтеза для этих необходимых метаболитов. В отличие от этого, у людей отсутствует путь синтеза менахинона, и воздействие на путь менахинона представляет собой подход для дизайна антибактериальных лекарственных средств. Недавно представлен путь синтеза менахинона в и, отличающийся от большинства бактерий. В этом пути 6-амино-6-дезоксифуталозин синтезируется с помощью MqnA и расщепляется по -рибозильной связи с помощью MTAN со специфичностью, также распространяющейся на 5′-метилтиоаденозин и аденозилгомоцистеин, а также 6-амино-6-дезоксифуталозин. MTAN превращает 6-амино-6-дезоксифуталозин в аденин и дегипоксантин футалозин, последний из которых служит процессором при синтезе менахинона. Ранние реакции этого пути не существуют в нормальной бактериальной флоре людей, что делает ферменты, катализирующие эти реакции, привлекательными мишенями для лекарственных средств. MTAN тесно связана с 5′-метилтиоаденозин/-аденозилгомоцистеингидролазами (MTAN), обнаруживаемыми у других бактерий. Хорошо изученные MTAN ассоциированы с чувством кворума и круговоротом -аденозилметионина у большинства видов и не являются необходимыми для бактериального роста. Разработаны ингибиторы аналогов переходных комплексов с аффинностью от пикомолярной до фемтомолярной для противодействия бактериальным функциям, ассоциированным с чувством кворума.
[0007]
H. pylori
Настоящее изобретение направлено на удовлетворение потребности в новых соединениях, избирательно блокирующих рост .
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008]
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Изобретение относится к способам лечения инфекции  () у индивидуума, включающим введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста , где формула (I) представляет собой
(I)
2
2
где R представляет собой Q или CHSQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галогена, OH- и/или NH-групп,
или его фармацевтически приемлемую соль или сложный эфир.
[0009]
Изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру:
,,,,,,,,,,,,,,или,
или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
[0010]
Фиг. 1 - концентрация гексил-SerMe-иммуциллина A в желудочной слизи мыши относительно времени после введения однократной дозы 10 мг/кг PO.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0011]
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Изобретение относится к способу лечения инфекции  () у индивидуума, включающему введение индивидууму соединения формулы (I) в количестве, эффективном для ингибирования роста , где формула (I) представляет собой
(I)
2
2
где R представляет собой Q или CHSQ, где Q представляет собой C1-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галогена, OH- и/или NH-групп,
или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
[0012]
Предпочтительные соединения включают соединения, имеющие формулу
.
[0013]
Q может представлять собой, например, C1-C9-алкил, например, C1-C5-алкил; например, метильную (Me), этильную (Et), пропильную (Pr), бутильную или пентильную группу. Q может представлять собой, например, C4-C7-циклоалкил, т.е. C4-циклоалкил, C5-циклоалкил, C6-циклоалкил или C7-циклоалкил. Q может представлять собой, например, арил. Термин "арил" означает ароматический радикал, содержащий от 4 до 12 атомов углерода. Примеры включают фенил, 1-нафтил и 2-нафтил. "Гетероарил" означает 4-12-членное кольцо, включающее один или несколько атомов N, S, или O в кольце. Примеры включают имидазол-4-ил, имидазол-2-ил, тиазол-2-ил, тиазол-4-ил, тиазол-5-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил и пиразин-2-ил. Предпочтительные арилы и гетероарилы включают те, которые содержат 5 или 6 членов в кольце. Предпочтительно, аралкил включает C1-C3-алкильную группу и 4-6-членное кольцо, которое может включать гетероатомы.
[0014]
2
Q можно замещать одним или несколькими из галогена, гидроксильной или NH-групп. Предпочтительными галогенами являются Cl, F, Br или I. Хлор и фтор являются более предпочтительными галогенами.Замену можно осуществлять в орто-, мета или пара-положении.
[0015]
2
2
Предпочтительные соединения включают те, в которых R представляет собой Q или CHSQ, где Q представляет собой линейный C2-C9-алкил, арил, гетероарил, аралкил или C4-C7-циклоалкил, и где Q является необязательно замещенным одним или несколькими из галоген, OH- и/или NH-групп. Предпочтительные соединения также включают те, в которых Q представляет собой линейный C3-C9-алкил или гетероарил.
[0016]
Предпочтительные соединения включают те, которые выбраны из группы, состоящей из
,,,,,,,,,,,,,и,
или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
[0017]
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Настоящее изобретение относится к способу лечения инфекции  () у индивидуума, включающему введение индивидууму соединения в количестве, эффективном для ингибирования роста , где соединение выбрано из группы, состоящей из:
,,,,,,,,,,,,,,и,
или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
[0018]
Изобретение дополнительно относится к соединению, имеющему структуру:
,,,,,,,,,,,,,или,
или его фармацевтически приемлемой соли или сложному эфиру.
[0019]
p
Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает нетоксичные соли, полученные из неорганических или органических кислот, включая, например, следующие кислые соли: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфаты, бутират, цитрат, камфорат, камфоросульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, йодогидрат, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат,-толуолсульфонат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат и ундеканоат.
[0020]
H. pylori
Предпочтительно, соединение вводят в количестве, эффективном для ингибирования 5'-метилтиоаденозиннуклеозидазы (MTAN) .
[0021]
H. pylori,
E. coli
V. cholerae
S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica
P. aeruginosa
E. coli
V. cholerae
S. aureus, K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica
P. aeruginosa
H. pylori,
Предпочтительно, соединение ингибирует рост  но не ингибирует рост одной или нескольких бактерий, выбранных из группы, состоящей из , ,  и . Более предпочтительно, соединение не ингибирует рост всех из , ,  и . Предпочтительно, соединение является более эффективным в ингибировании роста  чем амоксициллин, метронидазол или тетрациклин.
[0022]
Предпочтительно, индивидуум имеет пептическую язву, такую как язва желудка или язва двенадцатиперстной кишки.
[0023]
Предпочтительно, соединение вводят перорально. В случае перорального введения, соединение можно составлять в твердых или жидких препаратах, например, таблетках, капсулах, порошках, растворах, суспензиях и дисперсиях. Соединение можно составлять со средствами, такими как, например, лактоза, сахароза, кукурузный крахмал, желатин, картофельный крахмал, альгиновая кислота и/или стеарат магния.
[0024]
Соединение также можно вводить индивидууму другими путями, известными в этой области, такими как, например, парентеральный, посредством ингаляции, местный, ректальный, назальный, буккальный или посредством имплантированного резервуара. Соединение можно вводить с помощью средств с замедленным высвобождением.
[0025]
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Helicobacter pylori
H. pylori
H. pylori
Изобретение дополнительно относится к применению соединения, ингибирующего MTAN  (), для получения лекарственного средства для лечения инфекции. Изобретение также относится к соединению, ингибирующему MTAN  (), для применения в лечении инфекции.
[0026]
Helicobacter pylori
H. pylori
Helicobacter pylori
H. pylori
Изобретение дополнительно относится к применению соединения, ингибирующего MTAN  (), для получения лекарственного средства для лечения пептической язвы. Изобретение также относится к соединению, ингибирующему MTAN  (), для применения в лечении пептической язвы.
[0027]
Helicobacter
Campylobacter
C. jejuni
Способы по настоящему изобретению также можно применять для лечения инфекций другими видами и видами , такими как.
[0028]
Изобретение дополнительно относится к фармацевтической композиции, содержащей любое из соединений, представленных в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель. Как применяют в настоящем описании, "фармацевтически приемлемый носитель" (i) совместим с другими ингредиентами композиции, не делая композицию неподходящей для предполагаемой цели, и (ii) пригоден для использования в отношении индивидуумов, как представлено в настоящем описании, без чрезмерных побочных эффектов (таких как токсичность, раздражение и аллергический ответ). Побочные эффекты являются "чрезмерными", когда их риск перевешивает пользу, приносимую композицией. Не ограничивающие примеры фармацевтически приемлемых носителей включают любые из стандартных фармацевтических носителей, такие как фосфатно-солевые буферные растворы, вода и эмульсии, такие как эмульсии масла/воды и микроэмульсии.
[0029]
Настоящее изобретение будет более понятным с учетом следующих подробностей экспериментов. Однако специалисту в этой области будет понятно, что конкретные способы и обсуждаемые результаты представлены исключительно в целях иллюстрирования изобретения, более подробно описанного в формуле изобретения ниже.
ПОДРОБНОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТОВ
ПРИМЕР 1
Материалы и способы
[0030]
Материалы. H. pylori
K. pneumoniae, S. flexneri, S. enterica, S. aureus
P. aeruginosa
(J99 и 43504),  и  приобретали в American Type Culture Collection. Дефибринированную кровь лошади (DHB) получали из Hemostat Laboratories (Dixon, CA). Триптический соевый агар (TSA) приобретали в Becton Dickinson and Company (Sparks, MD). Агар МакКонки получали из Oxoid LTD. (Basingstoke, Hampshire, England). Ксантиноксидазу и 5ʹ-метилтиоаденозин приобретали в Sigma-Aldrich (St Louis, MO). Остальные материалы приобретали с наиболее высокой доступной чистотой.
[0031]
Очистка HpMTAN.
Hp
Hp
Hp
10
Способочистки MTAN описывали ранее. В кратком изложении, клетки BL21 (DE3), несущие плазмиду, кодирующую MTAN с N-концевой меткой His6, выращивали до оптической плотности 0,7, измеряемой при 595 нм, и вносили IPTG до конечной концентрации 0,5 мМ. Через 15 часов при 22°C клетки собирали посредством центрифугирования. Осадок суспендировали, а затем разрушали с помощью ячейки давления и обработки ультразвуком. Растворимую часть наносили на колонку Ni-NTA и элюировали MTAN с использованием градиента концентрации имидазола от 200 до 500 мМ. Белок обессоливали с использованием колонки для гель-фильтрации Superdex G15, затем уравновешивали и концентрировали в 10 мМ Hepes, 30 мМ KCl, pH 7,6. Чистоту подтверждали посредством электрофореза в ПААГ в присутствие SDS.
[0032]
Определение
K
.
Hp
K
K
i
i
i
8
Кинетику MTAN определяли с использованием прямого анализа, включающего непрерывное снижение поглощения при 274 нм вследствие образования свободного аденина из 5ʹ-метилтиоаденозина. Значения  и * определяли с использованием сопряженных анализов, в которых ксантиноксидазу использовали в качестве присоединяющего фермента, и наблюдали повышение поглощения при 292 нм с превращением продукта аденина в 2,8-дигидроксиаденин. Оба анализа описаны ранее.
[0033]
Выращивание бактерий. H. pylori
H. pylori
H. pylori
2
2
2
выращивали в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях (5% O, 10% CO и 85% N) при 37°C на триптическом соевом агаре с 5% кровью лошади. Для определения значений MIC тестируемое вещество добавляли в раствор геля непосредственно перед разливкой. Для сравнения зон ингибирования в центр диска после распространения  добавляли конкретные антибиотики, а, затем  позволяли расти в течение 72 часов в микроаэрофильных условиях при 37°C.
[0034]
Общий эксперимент для соединений.
Трет
4
254
2
2
4
3
3
4
3
3
-1
2
-1
1
13
1
13
1
1
1
13
Все реакции осуществляли в атмосфере аргона. Органические растворы сушили с помощью безводного MgSOи выпаривали растворители при пониженном давлении. Безводные и хроматографические растворители получали в коммерческих источниках и использовали без какой-либо дополнительной очистки. -бутоксид калия возгоняли при 220°C/0,1 мм рт.ст. Тонкослойную хроматографию (TLC) осуществляли на стекле или листах алюминия, покрытых силикагелем 60 F. Органические соединения визуализировали под УФ-излучением и/или погружали в 0,1% нингидрин в EtOH, раствор Эрлиха или молибдат аммония (5% масс.) и сульфат церия (IV)⋅4 HO (0,2% масс.) в воде. HSO (2 M). Хроматографию (флэш-хроматографию или хроматографию с помощью автоматизированной системы с оборудованием для непрерывного градиента) осуществляли на силикагеле (40-63 мкм). Вращение плоскости поляризации света регистрировали при длине пути 1 дм и выражали в единицах 10град см г; концентрации выражали в г/100 мл. H-спектры ЯМР измеряли в CDCl или CDOD (внутренний MeSi, δ 0) и C-спектры ЯМР в CDCl (центральная линия, как указано) или CDOD (центральная линия, как указано). Определение резонансов H и C основано на экспериментах 2D (H-H DQF-COSY, H-C HSQC) и DEPT. Используемые сокращения: с, синглет, д, дублет, т, триплет, к, квартет, ш.с., широкий синглет, ш.т., широкий триплет, дд, дублет дублетов, ддд, дублет дублетов дублетов, дт, дублет триплетов. Массовые спектры с электрораспылением с высоким разрешением (ESI-HRMS) регистрировали с помощью тандемного масс-спектрометра Q-TOF.
[0035]
Пример A. Синтез 2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]этан-1-ола (A.1).
[0036]
A.1
2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]этан-1-ол (A.1).
трет-
J
J
3
4
4
3
3
2
2
2
9
14
5
1
13
+
+
2-Аминоэтанол (0,099 мл, 1,64 ммоль), 9-деазааденин (0,220 г, 1,64 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,15 мл, 1,99 ммоль) смешивали в бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-MeOH-28% водн. NHOH, 70:25:5). Выпаривали фракции, содержащие продукт, и остаток снова хроматографировали на силикагеле (2-PrOH-28% водн. NHOH, 92:8) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,101 г, 30%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,95 (с, 2H), 3,68 (т, =5,6 Гц, 2H), 2,78 (т, =5,6 Гц, 2H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,4 (C), 61,6 (CH), 51,6 (CH), 43,4 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 208,1193, найдено 208,1192.
[0037]
Пример B. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пропан-1-ола (B.1).
[0038]
B.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пропан-1-ол (B.1).
S
трет
J
J
J
J
J
3
4
3
3
2
2
3
10
16
5
1
13
+
+
(2)-2-аминопропан-1-ол (0,120 г, 1,60 ммоль), 9-деазааденин (0,179 г, 1,33 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,12 мл, 1,60 ммоль) смешивали в -бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-MeOH-28% водн. NHOH, 80:18,5:1,5) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,180 г, 61%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 4,01 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,92 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,54 (дд, =11,0, 4,8 Гц, 1H), 3,43 (дд, =11,0, 7,0 Гц, 1H), 2,84 (м, 1H), 1,09 (д, =6,5 Гц, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,5 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,5 (C), 66,6 (CH), 54,8 (CH), 41,0 (CH), 16,5 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 222,1350, найдено 222,1349.
[0039]
Пример C. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]бутан-1-ола (C.1).
[0040]
C.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]бутан-1-ол (C.1).
S
трет
J
J
J
J
J
3
3
3
3
2
2
2
3
11
17
5
1
13
+
+
(2)-2-аминобутан-1-ол (0,100 г, 1,12 ммоль), 9-деазааденин (0,150 г, 1,12 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,101 мл, 1,35 ммоль) смешивали в -бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-7M NH/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,133 г, 50%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,95 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,67 (дд, =11,2, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, =11,2, 6,5 Гц, 1H), 2,61 (м, 1H), 1,62-1,53 (м, 1H), 1,51-1,42 (м, 1H), 0,91 (т, =7,5 Гц, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 63,9 (CH), 60,9 (CH), 41,1 (CH), 24,6 (CH), 10,7 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNNaO, (M+Na), 258,1326, найдено 258,1321.
[0041]
Пример D. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пентан-1-ола (D.1).
[0042]
D.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]пентан-1-ол (D.1). (2S)-2-аминопентан-1-ол (
, 0,48 ммоль), 9-деазааденин (
, 0,48 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,044 мл, 0,59 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (2 мл) при 70°C в течение ночи. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-7M NH
/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 60%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD):δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,96 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,66 (дд, J=11,3, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,3, 6,6 Гц, 1H), 2,69 (м, 1H), 1,54-1,30 (м, 4H), 0,89 (т, J=7,2 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 62,3 (CH
), 59,2 (CH), 41,1 (CH
), 34,3 (CH
), 20,3 (CH
), 14,6 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 250,1663, найдено 250,1663.
3
3
3
3
2
2
2
2
3
12
20
5
1
13
+
+
0,050 г0,065 г0,073 гC
[0043]
Пример E. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ола (E.1).
[0044]
E.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ол (E.1). (2S)-2-аминогексан-1-ол (
, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (
, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали при 70°C в трет-бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-7M NH
/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 50%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,65 (дд, J=11,2, 4,4 Гц, 1H), 3,48 (дд, J=11,2, 6,6 Гц, 1H), 2,66 (м, 1H), 1,55-1,38 (м, 2H), 1,32-1,22 (м, 4H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 128,9 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 64,4 (CH
), 59,3 (CH), 41,2 (CH
), 31,7 (CH
), 29,3 (CH
), 23,9 (CH
), 14,3 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
NaO
, (M+Na)
, 286,1644, найдено 286,1644.
3
3
3
3
2
2
2
2
2
3
13
21
5
1
13
+
+
0,100 г0,114 г0,112 гC
[0045]
Пример F. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ола (F.1).
[0046]
F.1
E.1
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гексан-1-ол (F.1). (2R)-2-аминогексан-1-ол (
, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (
, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали при 70°C в трет-бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-7M NH
/MeOH, 9:1, затем 85:15) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 48%).
H- и
C-спектры ЯМР являлись идентичными энантиомеру
. ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
(M+H)
, 264,1819, найдено 264,1717.
3
3
13
22
5
1
13
+
+
0,100 г0,114 г0,108 г
[0047]
Пример G. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилбутан-1-ола (G.1).
[0048]
G.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилбутан-1-ол (G.1).
S
трет
J
J
J
J
J
J
3
3
3
3
2
2
3
3
12
20
5
1
13
+
+
(2)-2-амино-3-метилбутан-1-ол (0,100 г, 0,97 ммоль) 9-деазааденин (0,130 г, 0,97 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,087 мл, 1,16 ммоль) смешивали в -бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-7M NH/MeOH, 93:7, затем 85:15) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,082 г, 34%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,99 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,95 (д, =13,6 Гц, 1H), 3,68 (дд, =11,3, 4,8 Гц, 1H), 3,54 (дд, =11,3, 6,5 Гц, 1H), 2,49 (м, 1H), 1,90 (м, 1H), 0,93 (д, =6,9 Гц, 3H), 0,88 (д, =6,9 Гц, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,7 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 115,0 (C), 64,6 (CH), 62,3 (CH), 41,9 (CH), 29,8 (CH), 19,2 (CH), 18,9 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO (M+H), 250,1663, найдено 250,1661.
[0049]
Пример H. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-метилпентан-1-ола (H.1).
[0050]
H.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-метилпентан-1-ол (H.1). (2S)-2-амино-4-метил-пентан-1-ол (
, 0,85 ммоль), 9-деазааденин (
, 0,85 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,077 мл, 1,02 ммоль) смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-7M NH
/MeOH, 93:7, затем 85:15) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 45%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,65 (дд, J=11,3, 4,4 Гц, 1H), 3,47 (дд, J=11,3, 6,5 Гц, 1H), 2,75 (м, 1H), 1,62 (м, 1H), 1,35 (ддд, J=13,7, 7,4, 6,2 Гц, 1H), 1,28 (ддд, J=13,9, 7,2, 7,2 Гц, 1H), 0,88 (д, J=6,6 Гц, 3H), 0,80 (д, J=6,6 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 64,6 (CH
), 57,2 (CH), 41,6 (CH
), 41,0 (CH
), 26,0 (CH), 23,3 (CH
), 23,1 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 264,1819, найдено 264,1820.
3
3
3
3
2
2
2
3
3
13
22
5
1
13
+
+
0,100 г0,114 г0,102 гC
[0051]
Пример I. Синтез (2S,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилпентан-1-ола (I.1).
[0052]
I.1
(2S,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-метилпентан-1-ол (I.1). (2S,3S)-2-Амино-3-метилпентан-1-ол (
, 1,02 ммоль), 9-деазааденин (
, 1,02 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,092 мл, 1,22 ммоль) нагревали и смешивали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-7M NH
/MeOH, 92:8, затем 89:11, затем 85:15) для получения
в виде бесцветного воскообразного твердого вещества (
, 45%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,98 (с, 2H), 3,69 (дд, J=11,3, 4,3 Гц, 1H), 3,51 (дд, J=11,3, 7,1 Гц, 1H), 2,62 (ддд, J=7,0. 4,4, 4,4 Гц, 1H), 1,67 (м, 1H), 1,46 (м, 1H), 1,17 (м, 1H), 0,89-0,85 (м, 6H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,7 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,9 (C), 63,1 (CH), 62,1 (CH
), 41,8 (CH
), 36,7 (CH), 27,2 (CH
), 15,0 (CH
), 12,3 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 264,1819, найдено 264,1820.
3
3
3
3
2
2
2
3
3
13
22
5
1
13
+
+
0,120 г0,137 г0,120 гC
[0053]
Пример J. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-2-фенилэтан-1-ола (J.1).
[0054]
J.1
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-2-фенилэтан-1-ол (J.1).
S
трет
J
J
J
3
3
3
3
2
2
15
18
5
1
13
+
+
(2)-2-амино-2-фенил-этанол (0,150 г, 1,09 ммоль), 9-деазааденин (0,147 г, 1,10 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,098 мл, 1,31 ммоль) смешивали и нагревали в -бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-7M NH/MeOH, 92:8, затем 89:11, затем 85:15) для получения  в виде бесцветной пены (0,117 г, 38%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,14 (с, 1H), 7,38-7,31 (м, 5H), 7,28-7,24 (м, 1H), 3,88-3,82 (м, 2H), 3,75 (д, =13,8 Гц, 1H), 3,65 (дд, =11,0, 4,9 Гц, 1H), 3,60 (дд, =11,0, 8,4 Гц, 1H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 141,5 (C), 129,6 (CH), 129,0 (CH), 128,8 (CH), 128,6 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 67,7 (CH), 65,4 (CH), 41,7 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 284,1506, найдено 284,1501.
[0055]
Пример K. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ола (K.3).
[0056]
Трет-бутил(4R)-4-{[(4-хлорфенил)сульфанил]метил}-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (K.1)
.
Этап 1
трет-
S
13
2
2
3
. Метансульфонилхлорид (0,40 мл, 5,19 ммоль) по каплям добавляли к перемешанному раствору бутил(4)-4-(гидроксиметил)-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата [полученного, как описано для его энантиомера, Dondoni, et al.] (1,00 г, 4,32 ммоль) и триэтиламина (1,22 мл, 8,65 ммоль) в CHCl (15 мл) при 0°C. Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 мин, затем промывали насыщенным NaHCO (3×5 мл), сушили и выпаривали растворитель для получения сырого мезилата в виде маслянистого вещества (1,22 г, 3,94 ммоль).
[0057]
K.1
Этап 2
этапа 1
J
J
J
2
2
3
3
3
2
2
3
3
3
17
24
3
1
13
35
+
+
. 4-Хлорбензол-1-тиол (0,351 г, 2,42 ммоль) добавляли к раствору гидрида натрия (60%, 0,089 г, 2,23 ммоль) в DMF (3 мл) при 0°C. Через 20 мин добавляли раствор мезилата из описываемого выше  (0,30 г, 0,97 ммоль) в DMF (0,75 мл) и смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Добавляли воду (2 мл) и смесь экстрагировали с помощью EtO (60 мл). Экстракт промывали HO (3×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель до получения бесцветного маслянистого вещества, которое хроматографировали на силикагеле (градиент 0-6% EtOAc в гексанах) для получения  в виде бесцветной смолы (0,234 г, 67%). [α]-17,9 (c 1,05, CHCl). H ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 7,40-7,30 (м, 2H), 7,28-7,22 (м, 2H), 4,11-3,98 (м, 1,5H), 3,94-3,89 (м, 1,5H), 3,50 (д, =13,7 Гц, 0,5H), 3,27 (д, =13,4 Гц, 0,5H), 2,79 (дд, =13,5, 10,7 Гц, 1H), 1,63-1,56 (м, 3H), 1,51-1,42 (м, 12H). C ЯМР (125,7 МГц, CDCl, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,4 (C), 134,2, 133,8 (C), 132,5, 131,6 (C), 130,9, 129,3 (CH), 129,1 (CH), 94,5, 93,9 (C), 80,5, 80,3 (C), 66,0 (CH), 56,6, 56,3 (CH), 35,7, 33,8 (CH), 28,5, 28,4 (CH), 27,7, 27,0 (CH), 24,3, 23,1 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHClNNaOS, (M+Na), 380,1058, найдено 380,1056.
[0058]
K.1
K.2
(2R)-2-амино-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ол гидрохлорид (K.2).
J
J
J
J
J
1
13
35
+
+
3
3
2
2
9
13
Соединение  (0,228 г, 0,64 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл), охлаждали до 0°C и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 2 мл). Перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 16 часов, затем выпаривали растворитель для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,161 г, 99%). [α]-27,7 (c 1,09, MeOH). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 7,47 (д, =8,6 Гц, 2H), 7,36 (д, =8,7 Гц, 2H), 3,82 (дд, =11,7, 3,4 Гц, 1H), 3,74 (дд, =11,7, 5,0 Гц, 1H), 3,30-3,25 (м, 2H), 3,19 (dd. =16,3, 9,2 Гц, 1H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 134,31 (C), 134,26 (C), 132,9 (CH), 130,5 (CH), 61,2 (CH), 53,5 (CH), 34,1 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHClNOS, (M-HCl+H), 218,0401, найдено 218,0408.
[0059]
K.2 (
K.2
K.3
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[(4-хлорфенил)сульфанил]пропан-1-ол (K.3).
трет
J
J
J
J
J
J
3
3
3
4
3
3
2
2
2
16
18
5
1
13
35
+
+
Соединение 0,151 г, 0,59 ммоль) растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21. Затем смесь пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH для получения свободной амино-формы  в виде желтого маслянистого вещества (129 мг). Его растворяли в -бутаноле (3 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,060 мл, 0,80 ммоль) и 9-деазааденин (0,080 г, 0,60 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl-7M NH/MeOH, 92:8, затем 85:15) и выпаривали фракции, содержащие продукт. Затем очищали остаток на силикагеле (CHCl-MeOH-28% водн. NHOH, 92:8:0,5) для получения  в виде бесцветной пены (0,022 г, 10%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,35 (с, 1H), 7,13-7,08 (м, 4H), 4,02 (д, =14,0 Гц, 1H), 3,92 (д, =14,0 Гц, 1H), 3,70 (дд, =11,3, 5,2 Гц, 1H), 3,66 (дд, =11,3, 5,2 Гц, 1H), 3,13 (дд, =13,8, 6,2 Гц, 1H), 2,92 (дд, =13,8, 6,9 Гц, 1H), 2,75 (м, 1H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,5 (C), 135,8 (C), 133,0 (C), 131,8 (CH), 129,8 (CH), 129,1 (CH), 115,5 (C), 114,4 (C), 63,5 (CH), 57,0 (CH), 41,0 (CH), 36,1 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHClNNaOS (M+Na), 386,0813, найдено 386,0816.
[0060]
Пример L. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ола (L.3).
[0061]
K.1
L.1
Трет-бутил(4R)-4-[(бензилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (L.1). Фенилметантиол (0,285 мл, 2,42 ммоль) добавляли к перемешанному раствору гидрида натрия (60%,
, 2,23 ммоль) в DMF (3 мл) при 0°C. Через 20 мин добавляли раствор сырого мезилата (
, 0,97 ммоль, из этапа 1 получения
) в DMF (0,75 мл), затем смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. Добавляли воду (2 мл) и смесь экстрагировали с помощью Et
O (60 мл). Экстракт промывали H
O (3×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель до получения бесцветного маслянистого вещества, которое хроматографировали на силикагеле (градиент 0-6% EtOAc в гексанах) для получения
в виде бесцветной смолы (
, 51%). [α]
+61,7 (c 1,12, CHCl
).
H ЯМР (500 МГц, CDCl
): δ 7,40-7,28 (м, 4H), 7,26-7,20 (м, 1H), 4,09 (д, J=7,1 Гц, 0,5H), 3,99-3,85 (м, 2,5H), 3,76 (с, 2H), 2,86 (м, 1H), 2,51 (к, J=13,0 Гц, 1H), 1,58, 1,53, 1,49, 1,47, 1,46, 1,42 (6×с, 15H).
ЯМР (125,7 МГц, CDCl
, центральная линия δ 77,0): δ 152,0, 151,4 (C), 138,5, 138,1 (C), 129,0, 128,7 (CH), 128,6, 128,4 (CH), 127,2, 126,9 (CH), 94,2, 93,7 (C), 80,3, 79,9 (C), 66,5 (CH
), 57,2, 56,9 (CH), 36,9, 36,4 (CH
), 34,8, 33,6 (CH
), 28,4 (CH
), 27,6, 26,8 (CH
), 24,4, 23,2 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
ClNNaO
S
(M+Na)
, 360,1604, найдено 360,1592.
2
2
3
3
3
2
2
2
3
3
3
18
27
3
1
13
35
+
+
0,089 г0,3 г0,166 гC
[0062]
L.1
(2R)-2-амино-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ол гидрохлорид (L.2). Соединение
(
, 0,49 ммоль) растворяли в MeOH (3 мл), охлаждали до 0°C и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 2 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1,5 часов, выпаривали растворитель до получения бесцветной смолы, затертой до получения бесцветного твердого вещества (
, 100%). [α]
-52,6 (c 0,91, MeOH).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 7,38-7,35 (м, 2H), 7,34-7,30 (м, 2H), 7,25 (м, 1H), 3,81 (с, 2H), 3,77 (дд, J=11,7, 3,8 Гц, 1H), 3,65 (дд, J=11,7, 5,7, Гц, 1H), 3,27 (м, 1H), 2,74 (дд, J=14,2, 6,7 Гц, 1H), 2,67 (дд, J=14,2, 7,4 Гц, 1H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 139,2 (C), 130,1 (CH), 129,7 (CH), 128,3 (CH), 61,5 (CH
), 53,7 (CH), 37,1 (CH
), 31,2 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
ClNOS
, (M-HCl+H)
, 198,0948, найдено 198,0948.
1
13
35
+
+
3
3
2
2
2
10
16
0,166 г0,115 гC
[0063]
L.2
L.2
L.3
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бензилсульфанил)пропан-1-ол (L.3). Соединение
(
, 0,73 ммоль) растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21. Затем смесь пропускали через небольшую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH для получения свободной амино-формы
в виде желтого маслянистого вещества. Его растворяли в трет-бутаноле (3 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,071 мл, 0,95 ммоль) и 9-деазааденин (
, 0,73 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и очищали остаток посредством хроматографии на силикагеле (CHCl
-MeOH-28% водн. NH4OH, 92:8:0,5). Выпаривали фракции, содержащие продукт, а затем очищали остаток на силикагеле (градиент 2-10% 7M NH
/MeOH-CHCl
) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 8%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,17 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 7,25-7,21 (м, 2H), 7,19-7,15 (м, 3H), 3,99 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,91 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,66 (дд, J=11,2, 4,9 Гц, 1H), 3,57 (дд, J=11,2, 5,5 Гц, 1H), 3,53 (д, J=1,6 Гц, 2H), 2,77 (м, 1H), 2,60 (дд, J=13,6, 6,4 Гц, 1H), 2,49 (дд, J=13,6, 6,9 Гц, 1H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 139,8 (C), 129,9 (CH), 129,4 (CH), 129,1 (CH), 127,9 (CH), 115,5 (C), 114,7 (C), 63,8 (CH
), 57,8 (CH), 41,2 (CH
), 36,9 (CH
), 33,9 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
NaOS
(M+Na)
, 366,1360, найдено 366,1362.
3
3
3
3
3
2
2
2
2
17
21
5
1
13
+
+
0,170 г0,098 г0,021 гC
[0064]
Пример P. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(1H-имидазол-4-ил)пропан-1-ола (P.4).
[0065]
P.1
(4S)-4-{[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]метил}-1,3-оксазолидин-2-он или (4S)-4-{[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]метил}-1,3-оксазолидин-2-он (P.1). Следовали модифицированному способу из [Madrigal, et al.
]. (S)-Гистидинол дигидрохлорид (
, 2,34 ммоль) и диэтилкабонат (2,86 мл, 23,61 ммоль) смешивали в этаноле (24 мл), затем добавляли метоксид натрия в растворе метанола (25%, 1,6 мл, 7,0 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 72 часов, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (CHCl
-MeOH-28% водн. NH
OH, 9:1:0,1) для получения (4S)-4-(1H-имидазол-4-илметил)-1,3-оксазолидин-2-она в виде бесцветного твердого вещества (
, 1,56 ммоль, чистота 90-95%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 7,61 (д, J=1,0 Гц, 1H), 6,93 (с, 1H), 4,45-4,40 (м, 1H), 4,18-4,12 (м, 2H), 2,86 (дд, J=14,7, 4,8 Гц, 1H), 2,80 (дд, J=14,8, 6,1 Гц, 1H). Его растворяли в DMF (4 мл), затем добавляли триэтиламин (0,42 мл, 3,00 ммоль) и трифенилхлорметан (
, 1,70 ммоль). Перемешивали смесь в течение 60 часов при комнатной температуре, затем разбавляли Et
O (60 мл) и смесь промывали H
O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% MeOH в EtOAc) для получения
в виде бесцветной пены (
, 54%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 7,41 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,39-7,34 (м, 9H), 7,16-7,11 (м, 6H), 6,82 (м, 1H), 4,39 (т, J=8,4 Гц, 1H), 4,19-4,11 (м, 2H), 2,78 (дд, J=14,6, 4,9 Гц, 1H), 2,73 (дд, J=14,6, 6,1 Гц, 1H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 162,1 (C), 143,6 (C×3), 139,8 (CH), 136,6 (C), 130,9 (CH), 129,32 (CH), 129,27 (CH), 121,6 (CH), 76,9 (C), 70,4 (CH
), 53,4 (CH), 33,9 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
NaO
, (M+Na)
, 432,1683, найдено 432,1677.
14
1
1
13
+
+
3
4
3
2
2
3
3
2
2
26
23
3
2
0,500 г0,26 г0,489 г0,520 гC
[0066]
P.1
P.2
(2S)-2-амино-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]пропан-1-ол или (2S)-2-амино-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]пропан-1-ол (P.2). Соединение
(
, 1,25 ммоль) растворяли в 2-пропаноле (7 мл) и добавляли гидроксид калия (
, 3 мл, 6 ммоль). Смесь нагревали при 80°C в течение 6 часов, затем для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (CHCl
-MeOH-28% водн. NH
OH, 9:1:0,1) для получения
в виде бесцветной смолы (
, 100%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 7,40 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,38-7,34 (м, 9H), 7,18-7,13 (м, 6H), 6,75 (м, 1H), 3,52 (дд, J=10,9, 4,5 Гц, 1H), 3,35 (дд, J=10,9. 6,8 Гц, 1H), 3,09-3,03 (м, 1H), 2,65 (дд, J=14,4, 6,0 Гц, 1H), 2,50 (дд, J=14,4, 7,4 Гц, 1H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 143,7 (C), 139,7 (CH), 139,2 (C), 130,8 (CH), 129,3 (CH), 129,2 (CH), 121,0 (CH), 76,8 (C), 66,7 (CH
), 53,8 (CH), 33,0 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 384,2071, найдено 384,2068.
3
4
3
3
2
2
25
26
3
1
13
+
+
0,510 г2 M0,478 гC
[0067]
P.2
P.3
трет
3
3
3
2
2
2
32
32
7
1
13
+
+
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-4-ил]пропан-1-ол или (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-[1-(трифенилметил)-1H-имидазол-5-ил]пропан-1-ол (P.3). Соединение  (0,200 г, 0,52 ммоль), 9-деазааденин (0,070 г, 0,52 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,051 мл, 0,68 ммоль) нагревали при 70°C в -бутаноле (3 мл) в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (10% 7M NH3/MeOH-CHCl) для получения  в виде бесцветной пены (0,101 г, 37%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,03 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,35 (д, J=1,3 Гц, 1H), 7,33-7,29 (м, 9H), 7,12-7,08 (м, 6H), 6,75 (д, J=1,2 Гц, 1H), 3,96 (д, J=13,7 Гц, 1H), 3,93 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,61 (дд, J=11,3, 4,8 Гц, 1H), 3,49 (дд, J=11,3, 6,1 Гц, 1H), 3,02-2,97 (м, 1H), 2,72 (дд, J=14,5, 6,5 Гц, 1H), 2,69 (дд, J=14,5, 6,7 Гц, 1H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 143,7 (C×3), 139,5 (CH), 139,2 (C), 130,8 (CH), 129,24 (CH), 129,20 (CH), 128,9 (CH), 121,2 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 76,8 (C), 64,3 (CH), 59,4 (CH), 41,3 (CH), 30,7 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 530,2663, найдено 530,2666.
[0068]
P.3
P.4
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(1H-имидазол-4-ил)пропан-1-ол (P.4). Трифторуксусную кислоту (0,6 мл, 8 ммоль) добавляли к перемешанному раствору
(
, 0,19 ммоль) и триэтилсилана (0,090 мл, 0,57 ммоль) в CH
Cl
(3 мл). Через 2 часа выпаривали растворитель и остаток растворяли в MeOH и выпаривали растворитель (3 раза). Остаток снова растворяли в MeOH, добавляли силикагель и выпаривали растворитель. С помощью флэш-хроматографии на силикагеле (CHCl
-MeOH-28% водн. NH
OH, 7:2,5:0,5) получали
в виде бесцветной смолы, кристаллизовавшейся при выстаивании (
, 92%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,14 (с, 1H), 7,52 (д, J=0,9 Гц, 1H), 7,42 (с, 1H), 6,80 (с, 1H), 4,01 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,98 (д, J=13,6 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,3, 4,7 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,3, 5,9 Гц, 1H), 3,01-2,96 (м, 1H), 2,76 (д, J=6,7 Гц, 2H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 136,1 (CH), 134,8 (b, C), 129,0 (CH), 119,4 (b, CH), 115,4 (C), 114,3 (C), 64,0 (CH
), 59,3 (CH), 41,3 (CH
), 29,2 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 288,1568, найдено 288,1567.
2
2
3
4
3
13
3
2
2
2
13
18
7
1
+
+
0,100 г0,050 гC
[0069]
Пример Q. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бутилсульфанил)пропан-1-ола (Q.2).
[0070]
K.1
Q.1
Трет-бутил(4R)-4-[(бутилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (Q.1). Гидрид натрия (60%,
, 2,4 ммоль) частями добавляли к раствору бутан-1-тиола (0,53 мл, 4,85 ммоль) в DMF (5 мл). Через 15 мин добавляли раствор сырого мезилата (
, 1,62 ммоль, из этапа 1 получения
) в DMF (1 мл). Перемешивали смесь в течение 16 часов, затем добавляли H
O (6 мл). После экстракции с помощью Et
O (100 мл) экстракт промывали H
O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали растворитель. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-10% EtOAc в гексанах) для получения
в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 88%).
H ЯМР (500 МГц, CDCl
): δ 4,06-3,92 (м, 2,5H), 3,91-3,85 (м, 0,5H), 2,94 (д, J=13,0 Гц, 0,5H), 2,80 (д, J=13,0 Гц, 0,5H), 2,62-2,47 (м, 3H), 1,65-1,53 (м, 5H), 1,50-1,35 (м, 14H), 0,91 (т, J=7,1 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CDCl
, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,4 (C), 94,3, 93,7 (C), 80,2, 79,9 (C), 66,5, 66,3 (CH
), 57,4, 57,2 (CH), 34,6, 33,9 (CH
), 32,0, 31,9, (2×CH
), 28,5, 28,4 (CH
), 27,7, 26,9 (CH
), 24,5, 23,2 (CH
), 21,9 (CH
), 13,6 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
NNaO
S
, (M+Na)
, 326,1761, найдено 326,1760.
2
2
2
3
3
2
2
2
3
3
3
2
3
15
29
3
1
13
+
+
0,097 г0,500 г0,429 гC
[0071]
Q.1
Q.2
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(бутилсульфанил)пропан-1-ол (Q.2). Соединение
(
, 1,32 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель, полученную смолу растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (
, 1,32 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,12 мл, 1,60 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH
/MeOH в CHCl
) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 32%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 4,06 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,97 (д, J=13,9 Гц, 1H), 3,69 (дд, J=11,2, 5,1 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,2, 5,4 Гц, 1H), 2,81-2,76 (м, 1H), 2,69 (дд, J=13,5, 6,3 Гц, 1H), 2,53 (дд, J=13,5, 6,9 Гц, 1H), 2,31 (ддд, J=12,5, 8,0, 6,5 Гц, 1H), 2,25 (ддд, J=12,5, 8,1, 6,7 Гц, 1H), 1,45-1,35 (м, 2H), 1,33-1,25 (м, 2H), 0,85 (т, J=7,3 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,1 (CH), 115,5 (C), 114,6 (C), 63,9 (CH
), 57,8 (CH), 41,2 (CH
), 34,5 (CH
), 32,7 (CH
), 32,6 (CH
), 22,9 (CH
), 13,9 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
OS
, (M+H)
, 310,1697, найдено 310,1702.
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
3
14
24
5
1
13
+
+
0,400 г0,177 г0,131 гC
[0072]
Пример R. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(гептилсульфанил)пропан-1-ола (R.2).
[0073]
K.1
R.1
Трет-бутил(4R)-4-[(гептилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (R.1). Гидрид натрия (60%,
, 4,05 ммоль) частями добавляли в раствор гептан-1-тиола (
, 4,85 ммоль) в DMF (5 мл) при комнатной температуре. Через 15 мин добавляли раствор сырого мезилата (
, 1,62 ммоль, из этапа 1 получения
) в DMF (1 мл). Перемешивали смесь в течение 16 часов, затем добавляли H
O (6 мл). После экстракции с помощью Et
O (100 мл) экстракт промывали H
O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали до получения маслянистого остатка, который хроматографировали на силикагеле (градиент 0-12% EtOAc в гексанах) для получения
в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 79%).
H ЯМР (500 МГц, CDCl
): δ 4,05-3,98 (м, 1,5H), 3,97-3,93 (м, 1H), 3,91-3,85 (м, 0,5H), 2,93 (д, J=13,5 Гц, 0,5H), 2,80 (д, J=12,9 Гц, 0,5H), 2,62-2,45 (м, 3H), 1,63-1,53 (м, 5H), 1,51-1,43 (м, 12H), 1,41-1,22 (м, 8H), 0,88 (т, J=6,8 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CDCl
, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,5 (C), 94,3, 93,7 (C), 80,2, 79,9 (C), 66,5, 66,3 (CH
), 57,4, 57,2 (CH), 34,7, 33,8 (CH
), 32,4, 31,7 (2×CH
), 30,0, 29,8 (CH
), 28,9, 28,8, (2×CH
), 28,5, 28,4 (CH
), 27,7, 26,9 (CH
), 24,5, 23,2 (CH
), 22,6 (CH
), 14,0 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
NNaO
S
, (M+Na)
, 368,2230, найдено 368,2227.
2
2
2
3
3
2
2
2
2
2
3
3
3
2
3
18
35
3
1
13
+
+
0,162 г0,641 г0,500 г0,443 гC
[0074]
R.1
R.2
R.2
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(гептилсульфанил)пропан-1-ол (R.2). Соединение
(
, 1,22 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения смолы, которую растворяли в смеси 7:3 MeOH-CHCl
(10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью смеси 7:3 MeOH-CHCl
. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (
, 0,97 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,087 мл, 1,16 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH
/MeOH в CHCl
) для получения сырого
(210 мг). Посредством дополнительной хроматографии на силикагеле (градиент 0-5% водн. NH
OH (28%) в 2-PrOH) получали
в виде бесцветного твердого вещества (
, 34%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 4,06 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,97 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,69 (дд, J=11,2, 5,1 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=11,2, 5,4 Гц, 1H), 2,81-2,76 (м, 1H), 2,69 (дд, J=13,5, 6,3 Гц, 1H), 2,54 (дд, J=13,5, 6,9 Гц, 1H), 2,32 (ддд, J=12,5, 7,9, 6,8 Гц, 1H), 2,26 (ддд, J=12,6, 7,9, 6,9 Гц, 1H), 1,47-1,37 (м, 2H), 1,33-1,20 (м, 8H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,9 (CH), 146,6 (C), 129,1 (CH), 115,4 (C), 114,6 (C), 63,8 (CH
), 57,9 (CH), 41,2 (CH
), 34,5 (CH
), 32,9 (CH
×2), 30,6 (CH
), 30,0 (CH
), 29,8 (CH
), 26,6 (CH
), 14,4 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
OS
, (M+H)
, 352,2166, найдено 352,2157.
3
3
3
3
4
3
3
2
2
2
2
2
2
2
2
3
17
30
5
1
13
+
+
0,420 г0,130 г0,134 гC
[0075]
Пример S. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]гепатн-1-ола (S.2).
[0076]
S.1
Трет-бутил(4S)-2,2-диметил-4-pentyl-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (S.1). Трет-бутил
S
трет-
15
16
17
1
13
+
+
2
5
2
2
3
3
2
2
2
3
3
2
3
2
3
15
29
3
(4)-2,2-диметил-4-(3-oxoпропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.] (0,400 г, 1,55 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) и бромид этилтрифенилфосфония [Paleček, J. et al.] (0,866 г, 2,33 ммоль, высушенный с помощью PO, затем выпаренный 2 раза из сухого толуола) растворяли в безводном CHCl (7 мл) и охлаждали при 0°C. Раствор бутоксид калия в THF (1,6 M, 1,5 мл, 2,4 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (0,304 г, 73%). Последний продукт (0,430 г, 1,60 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite, затем выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения  в виде бесцветного маслянистого вещества (0,359 г, 61%). H ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 3,93-3,71 (м, 3H), 1,83-1,42 (м, 17H), 1,36-1,20 (м, 6H), 0,93-0,80 (м, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDCl, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,9 (C), 93,6, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,8 (CH), 57,8, 57,4 (CH), 33,6, 32,8 (CH), 31,7 (CH), 28,5 (CH), 27,5, 26,7 (CH), 25,9 (CH), 24,6, 23,3 (CH), 22,6 (CH), 13,9 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNNaO, (M+Na), 294,2040, найдено 294,2038.
[0077]
S.1
S.2
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]heptan-1-ол (S.2).
трет
J
J
J
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
3
14
24
5
1
13
+
+
Соединение  (0,358 г, 1,32 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в MeOH (10 мл), нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения маслянистого остатка, который растворяли в -бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,177 г, 1,32 ммоль) и водный раствор формальдегида (0,12 мл, 1,59 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH/MeOH в CHCl) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,122 г, 33%). H ЯМР (500 МГц, CDOD): δ 8,16 (с, 1H), 7,47 (с, 1H), 3,64 (дд, =11,2, 4,5 Гц, 1H), 3,48 (дд, =11,2, 6,5 Гц, 1H), 2,68-2,64 (м, 1H), 1,52-1,38 (м, 2H), 1,32-1,17 (м, 6H), 0,86 (т, =7,1 Гц, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDOD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,8 (C), 64,4 (CH), 59,2 (CH), 41,2 (CH), 33,1 (CH), 32,0 (CH), 26,8 (CH), 23,6 (CH), 14,4 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 278,1976, найдено 278,1974.
[0078]
Пример T. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]октан-1-ола (T.2).
[0079]
T.1
Трет-бутил(4S)-4-гексил-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (T.1). Трет-
S
n
трет-
15
17
1
13
+
+
2
5
2
2
3
3
2
2
2
2
3
3
2
3
2
3
16
32
3
бутил(4)-2,2-диметил-4-(3-oxoпропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.] (0,500 г, 1,94 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) и бромид -пропилтрифенилфосфония (1,12 г, 2,91 ммоль, высушенный с помощью PO, затем выпаренный 2 раза из сухого толуола) растворяли в безводном CHCl (7 мл) и охлаждали до 0°C. Раствор бутоксида калия в THF (1,6 M, 1,8 мл, 2,90 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-4% EtOAc в гексанах для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (0,361 г, 66%). Последний продукт (0,360 г, 1,27 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite, затем выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения  в виде бесцветного маслянистого вещества (0,342 г, 94%). H ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 3,93-3,71 (м, 3H), 1,82-1,42 (м, 17H), 1,36-1,19 (м, 8H), 0,92-0,85 (м, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, CDCl, центральная линия δ 77,0): δ 152,1, 151,9 (C), 93,5, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,7(CH), 57,8, 57,4 (CH), 33,6, 32,9 (CH), 31,8 (CH), 29,1 (CH), 28,5 (CH), 27,5, 26,7 (CH), 26,2 (CH), 24,6, 23,3 (CH), 22,5 (CH), 14,0 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNO, (M+H), 286,2377, найдено 286,2375.
[0080]
T.1
T.2
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]октан-1-ол (T.2).
трет
J
J
J
J
J
3
3
3
3
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
2
3
15
25
5
1
13
+
+
Соединение  (0,320 г, 1,12 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в смеси 4:1 MeOH-CHCl (10 мл), нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью 4:1 MeOH-CHCl. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтого твердого вещества, которое растворяли в -бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (0,150 г, 1,12 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,101 мл, 1,35 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH/MeOH в CHCl) для получения  в виде бесцветного твердого вещества (0,148 г, 45%). H ЯМР (500 МГц, 1:1 CDOD-CDCl): δ 8,20 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 3,98 (д, =13,7 Гц, 1H), 3,95 (д, =13,7 Гц, 1H), 3,73 (дд, =11,4, 4,0 Гц, 1H), 3,50 (дд, =11,4, 6,6 Гц, 1H), 2,74-2,69 (м, 1H),1,54-1,39 (м, 2H), 1,34-1,22 (м, 8H), 0,88 (т, =6,9 Гц, 3H). C ЯМР (125,7 МГц, 1:1 CDOD-CDCl, центральные линии δ 49,0 и δ 78,3): δ 151,2 (C), 150,2 (CH), 146,0 (C), 128,1 (CH), 115,0 (C), 114,2 (C), 63,6 (CH), 59,0 (CH), 40,7 (CH), 32,4 (CH), 31,6 (CH), 30,0 (CH), 26,7 (CH), 23,1 (CH), 14,3 (CH). ESI-HRMS вычислены для CHNNaO, (M+Na), 314,1952, найдено 314,1953.
[0081]
Пример U. Синтез (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]ундекан-1-ола (U.2).
[0082]
Трет-бутил (4S)-2,2-диметил-4-нонил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (U.1). Этап 1. Tрифенилфосфин (
, 14,11 ммоль) и 1-бромгексан (2,97 мл, 21,16 ммоль) смешивали и нагревали с обратным холодильником в толуоле (10 мл) в течение 16 часов. Полученный бромид n-гексилтрифенилфосфония (
, 55%) отфильтровывали и сушили с помощью P
O
затем выпаривали 2 раза из сухого толуола.
2
5,
3,70 г3,30 г
[0083]
U.1
Этап 2. Соль фосфония из этапа 1 (
, 3,04 ммоль) и трет-бутил(4S)-2,2-диметил-4-(3-оксопропил)-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат [Goswami, et al.
] (
, 1,94 ммоль, очищенный на силикагеле с градиентом 0-50% EtOAc в гексанах) растворяли в CH
Cl
(7 мл) и охлаждали до 0°C. Раствор трет-бутоксида калия в THF (
, 1,9 мл, 3,00 ммоль) добавляли по каплям и перемешивали смесь в течение 20 мин. [способ аналогичен описываемому в Ksander, et al.
]. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения продукта реакции Виттига в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 59%). Последний продукт (
, 1,04 ммоль) и 10% Pd на углероде (60 мг) смешивали в EtOAc (15 мл) в атмосфере водорода в течение 16 часов. Смесь фильтровали через Celite и выпаривали фильтрат и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-5% EtOAc в гексанах) для получения
в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 99%).
H ЯМР (500 МГц, CDCl
): δ 3,93-3,70 (м, 3H), 1,82-1,42 (м, 17H), 1,35-1,82 (м, 14H), 0,88 (т, J=6,9 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CDCl
, центральная линия δ 77,0): δ 152,2, 151,9 (C), 93,6, 93,0 (C), 79,8, 79,3 (C), 67,1, 66,8 (CH
), 57,8, 57,5 (CH), 33,6, 32,9 (CH
), 31,9 (CH
), 29,6, 29,5, 29,3 (4×CH
), 28,5 (CH
), 27,5, 26,8 (CH
), 26,3 (CH
), 24,6, 23,3 (CH
), 22,6 (CH
), 14,1 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
NNaO
, (M+Na)
, 350,2666, найдено 350,2663.
15
17
1
13
+
+
2
2
3
3
2
2
2
2
3
3
2
3
2
3
19
37
3
1,30 г0,500 г1,6 M0,370 г0,340 г0,340 гC
[0084]
U.1
U.2
(2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]ундекан-1-ол (U.2). Соединение
(
, 0,947 ммоль) растворяли в MeOH (4 мл) и добавляли водный раствор соляной кислоты (36%, 1 мл). Через 15 мин выпаривали растворитель до получения бесцветного твердого вещества, которое растворяли в смеси 4:1 MeOH-CHCl
, нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью 4:1 MeOH-CHCl
. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтого маслянистого вещества, которое растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли 9-деазааденин (
, 0,95 ммоль) и водный раствор формальдегида (37%, 0,085 мл, 1,10 ммоль) и перемешивали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15% 7M NH
/MeOH в CHCl
) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 43%).
H ЯМР (500 МГц, 1:1 CD
OD-CDCl
): δ 8,20 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 3,96 (с, 1H), 3,73 (дд, J=11,4, 3,9 Гц, 1H), 3,50 (дд, J=11,4, 6,6 Гц, 1H), 2,74-2,69 (м, 1H),1,55-1,39 (м, 2H), 1,35-1,21 (м, 14H), 0,89 (т, J=7,0 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, 1:1 CD
OD-CDCl
, центральные линии δ 49,0 и δ 78,3): δ 151,2 (C), 150,2 (CH), 146,0 (C), 128,1 (CH), 115,0 (C), 114,2 (C), 63,6 (CH
), 59,0 (CH), 40,7 (CH
), 32,5 (CH
), 31,6 (CH
), 30,4 (CH
), 30,1 (2×CH
), 29,9 (CH
), 26,8 (CH
), 23,2 (CH
), 14,3 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
O
, (M+H)
, 334,2602, найдено 334,2605.
3
3
3
3
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
18
32
5
1
13
+
+
0,310 г0,127 г0,135 гC
[0085]
Пример V. Синтез (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(пиразин-2-илсульфанил)пропан-1-ола (V.2).
[0086]
K.1
Трет-бутил(4R)-2,2-диметил-4-[(пиразин-2-илсульфанил)метил]-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат (V.1). Этап 1. Тиоацетат калия (
, 5,05 ммоль)) и мезилат из этапа 1 получения
(
, 1,68 ммоль,) смешивали в DMF (5 мл) при комнатной температуре в течение 16 часов, затем при 70°C в течение 1 часа. Добавляли воду (5 мл) и экстрагировали смесь с помощью Et
O (100 мл). Экстракт промывали H
O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили, выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-30% EtOAc в гексанах) для получения трет-бутил(4R)-4-[(ацетилсульфанил)метил]-2,2-диметил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 71%)
2
2
0,588 г0,520 г0,347 г
[0087]
V.1
Этап 2. Метоксид натрия в растворе метанола (25%, 0,27 мл, 1,2 ммоль) добавляли в раствор тиоацетата из этапа 1 (
, 1,17 ммоль) в MeOH (5 мл)). Через 10 мин выпаривали растворитель и остаток растворяли в DMF (5 мл), затем добавляли 2-хлорпиразин (0,32 мл, 3,6 ммоль) и перемешивали смесь в течение 16 часов. Добавляли воду (5 мл), затем смесь экстрагировали с помощью Et
O (100 мл). Экстракт промывали H
O (4×5 мл), водным раствором солей (5 мл), сушили и выпаривали. Остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 0-30% EtOAc в гексанах) для получения
в виде бесцветного маслянистого вещества (
, 59%).
H ЯМР (500 МГц, CDCl
): δ 8,55, 8,48 (2×ш.с., 1H), 8,36, 8,33 (2×ш.с., 1H), 8,22 (ш.с., 1H), 4,23, 4,14 (2×ш.с., 1H), 4,06-3,93 (м, 2H), 3,76-3,63 (м, 1H), 3,37-3,27 (м, 0,5H), 3,17-3,07 (м, 0,5H), 1,67-1,59 (м, 3H), 1,53-1,45 (м, 12H).
ЯМР (125,7 МГц, CDCl
, центральная линия δ 77,0): δ 156,5, 156,1 (C), 152,2, 151,6 (C), 143,7, 143,6 (2×CH), 139,8, 139,7 (CH), 94,5, 93,9 (C), 80,5, 80,2 (C), 66,4, 66,3 (CH
), 56,9, 56,5 (CH), 31,4, 31,0 (CH
), 28,5 (CH
), 27,5, 26,9 (CH
), 24,4, 23,2 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
NaO
S
(M+Na)
, 348,1353, найдено 348,1350.
2
2
3
3
2
2
3
3
3
15
23
3
3
1
13
+
+
0,340 г0,224 гC
[0088]
V.1
V.2
(2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(пиразин-2-илсульфанил)пропан-1-ол (V.2). Соединение
(
, 0,68 ммоль) растворяли в CH
Cl
(8 мл) и добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл). Через 2 часа выпаривали растворитель, остаток растворяли в MeOH (10 мл) и нейтрализовали с помощью смолы Amberlyst A21, затем пропускали через короткую колонку с той же смолой и элюировали с помощью MeOH. Фракции, содержащие продукт, выпаривали до получения желтой смолы, которую растворяли в трет-бутаноле (4 мл), затем добавляли водный раствор формальдегида (37%, 0,061 мл, 0,81 ммоль) и 9-деазааденин (
, 0,68 ммоль) и нагревали смесь при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 10-15% 7M NH
/MeOH в CHCl
) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 25%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,35 (д, J=1,5 Гц, 1H), 8,28 (дд, J=2,6, 1,7 Гц, 1H), 8,14 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,12 (с, 1H), 7,43 (с, 1H), 4,05 (д, J=13,9 Гц, 1H), 4,02 (д, J=13,8 Гц, 1H), 3,74 (дд, J=11,3, 4,9 Гц, 1H), 3,64 (дд, J=11,3, 5,5 Гц, 1H), 3,39-3,31 (м, 2H+остаточный дейтерированный растворитель), 3,01-2,97 (м, 1H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 158,2 (C), 152,0 (C), 150,8 (CH), 146,5 (C), 145,2 (CH), 144,6 (CH), 140,3 (CH), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,7 (C), 63,7 (CH
), 58,4 (CH), 41,4 (CH
), 31,6 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
OS
(M+H)
, 332,1289, найдено 332,1287.
2
2
3
3
3
3
2
2
2
14
18
7
1
13
+
+
0,220 г0,091 г0,055 гC
[0089]
Пример W. (2R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(метилсульфанил)пропан-1-ол (W.1).
[0090]
18
Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.].
[0091]
Пример X. (2S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-3-(метилсульфанил)пропан-1-ол (X.1).
[0092]
18
Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.].
[0093]
Пример Y. (2R,3S)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-(метилсульфанил)бутан-1,3-диол (Y.1).
[0094]
18
Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.].
[0095]
Пример Z. (2S,3R)-2-[({4-амино-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил}метил)амино]-4-(метилсульфанил)бутан-1,3-диол (Z.1).
[0096]
Получали, как описано в литературе [Clinch, et al.
].
18
[0097]
Пример AA. Синтез 7-[(октиламино)метил]-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (AA.1).
[0098]
AA.1
7-[(Октиламино)метил]-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (AA.1) Октан-1-амин (
, 0,77 ммоль), водный раствор формальдегида (37%, 0,076 мл, 1,01 ммоль) и 9-деазааденин (
, 0,78 ммоль) нагревали в трет-бутаноле (3 мл) при 70°C в течение 16 часов. Для поглощения всех растворителей добавляли силикагель, затем выпаривали растворитель и остаток хроматографировали на силикагеле (градиент 5-15%
NH
/MeOH в CHCl
) для получения
в виде бесцветного твердого вещества (
, 62%).
H ЯМР (500 МГц, CD
OD): δ 8,16 (с, 1H), 7,46 (с, 1H), 3,91 (с, 2H), 2,61 (т, J=7,5 Гц, 2H), 1,52 (пент, J=7,4 Гц, 2H), 1,34-1,21 (м, 10H), 0,88 (т, J=7,1 Гц, 3H).
ЯМР (125,7 МГц, CD
OD, центральная линия δ 49,0): δ 152,1 (C), 150,8 (CH), 146,6 (C), 129,0 (CH), 115,4 (C), 114,5 (C), 49,9 (CH
), 43,7 (CH
), 33,0 (CH
), 30,5 (CH
), 30,4 (CH
), 30,3 (CH
), 28,4 (CH
), 23,7 (CH
), 14,4 (CH
). ESI-HRMS вычислены для C
H
N
, (M+H)
, 276,2183, найдено 276,2181.
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
2
2
3
15
26
5
1
13
+
+
0,100 г0,105 г7 M0,132 гC
Результаты и обсуждение
[0099]
H. pylori
H. pylori
Общеупотребительные антибиотики при инфекциях  включают амоксициллин, метронидазол и тетрациклин. Эффекты выбранных соединений против  сравнивали с общеупотребительными антибиотиками.
[00100]
N
S
13
У большинства бактерий MTAN экспрессируется и катализирует гидролиз -рибозильных связей 5'-метилтиоаденозина и S-аденозилгомоцистеина. Две реакции участвуют в бактериальном чувстве кворума, круговороте серы через синтез-аденозилметионина и полиамина; однако, большинство бактериальных MTAN не являются необходимыми для пролиферации бактерий, судя по условиям планктонного роста.
[00101]
Hp
Campylobacter
Campylobacter jejuni
4
11
Посредством анализа бактериального генома прогнозируют, что MTAN-опосредованный путь биосинтеза менахинона является редким, но также присутствует в видах . является основной причиной бактериального гастроэнтерита в мире.
[00102]
H. pylori
H. pylori
H. pylori,
H. pylori
H. pylori,
H. pylori
H. pylori
H. pylori
H. pylori
12
2
У  быстро развивается устойчивость к лекарственным средствам, и в настоящее время приблизительно 30% инфекций  являются устойчивыми к лекарственным средствам монотерапии первой линии. В результате в современном подходе общепринято используют терапию тремя средствами в случае инфекций  и он включает два антибиотика с различными механизмами действия. Даже при терапии тремя средствами более 20% инфекций  не легко подвергнуть эрадикации. Устойчивость в популяции  несомненно, частично является результатом воздействия антибиотиков широкого спектра на  при лечении других бактериальных инфекций. Кроме того, в случае существующего подхода эрадикации  необходимо введение антибиотиков в течение двух недель или более и повышается развитие устойчивости, если лечение прерывается. В таблице 1 представлены константы диссоциации в отношении MTAN  и значения MIC90 в отношении в случае конкретных соединений по изобретению. Комбинации лекарственных средств с использованием этих соединений также могут быть направлены на решение существующих проблем устойчивости к антибиотикам.
Таблица 1. Ациклические амины-ингибиторы MTAN Helicobacter pylori и их значения MIC90 в отношении H. pylori.
<img file="00000079.jpg" he="36" wi="55" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>Ингибирование MTAN</b><b><i> H. pylori</i></b>
<b>Ингибирование роста </b><b><i>H. pylori</i></b>
<b>Номер соединения, R</b><sup><b>1</b></sup><b>=, R</b><sup><b>2</b></sup><b>=</b>
<b>Ki (нМ)</b>
<b>Ki* (нМ)</b>
<b>MIC90 (нг/мл)</b>
(<b>V.2</b>) R<sup>1=</sup>пиразин-2-илтиометил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000080.jpg" he="39" wi="62" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,10 ± 0,01
8
(<b>S.2</b>) R<sup>1=</sup>n-пентил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000081.jpg" he="39" wi="57" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,10 ± 0,01
8
(<b>T.2</b>) R<sup>1=</sup>n-гексил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000082.jpg" he="33" wi="61" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,030 ± 0,003
8
(<b>Q.2</b>) R<sup>1=</sup>n-бутилтиометил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000083.jpg" he="32" wi="65" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,11 ± 0,01
16
(<b>E.1</b>), R<sup>1</sup>=n-бутил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000084.jpg" he="30" wi="57" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,9 ± 0,2
16
(<b>D.1</b>) R<sup>1</sup>=n-пропил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000085.jpg" he="30" wi="52" img-content="undefined" img-format="jpg" />
1,2 ± 0,4
40
(<b>U.2</b>) R<sup>1 </sup>=H, R<sup>2=</sup>n-нонил
<img file="00000086.jpg" he="25" wi="60" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,12 ± 0,01
80
(<b>L.3</b>) R<sup>1=</sup>бензилтиометил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000087.jpg" he="34" wi="67" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,7 ± 0,1
0,21 ± 0,02
>80
(<b>F.1</b>) R<sup>1 </sup>=H, R<sup>2=</sup>n-бутил <img file="00000088.jpg" he="35" wi="67" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,8 ± 0,1
>80
(<b>K.3</b>) R<sup>1</sup>=4-хлорфенилтиометил, R<sup>2=</sup>H
<img file="00000089.jpg" he="33" wi="61" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,9 ± 0,1
>80
(<b>Y.1</b>) R<sup>1</sup>=(<i>S</i>)-1-гидрокси-2-метилтиоэт-1-ил, R<sup>2</sup>=H(синтез в WO 08 030118)
<img file="00000012.jpg" he="40" wi="65" img-content="undefined" img-format="jpg" />
5 ± 2
>80
(<b>B.1</b>) R<sup>1</sup>=метил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000090.jpg" he="29" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" />
13 ± 2
>80
(<b>J.1</b>) R<sup>1</sup>=фенил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000014.jpg" he="31" wi="49" img-content="undefined" img-format="jpg" />
13 ± 2
>80
(<b>C.1</b>) R<sup>1</sup>=этил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000091.jpg" he="31" wi="49" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
(<b>Z.1</b>) R<sup>1</sup> =H, R<sup>2</sup>=(<i>R</i>)-1-гидрокси-2-метилтиоэт-1-ил (синтез в WO 08 030118)
<img file="00000092.jpg" he="41" wi="65" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>10
>80
(<b>P.4</b>) R<sup>1</sup>=имидазол-4-илметил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000017.jpg" he="37" wi="67" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>50
>80
(<b>R.2</b>) R<sup>1</sup>=n-гептилтиометил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000093.jpg" he="46" wi="67" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,05 ± 0,01
80
(<b>G.1</b>) R<sup>1</sup>=2-пропил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000094.jpg" he="27" wi="49" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
(<b>H.1</b>) R<sup>1</sup>=2-метилпропил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000095.jpg" he="30" wi="43" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
(<b>W.1</b>) R<sup>1</sup>=метилтиометил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000096.jpg" he="27" wi="45" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
(<b>X.1</b>) R<sup>1</sup>=H, R<sup>2</sup>=метилтиометил
<img file="00000097.jpg" he="27" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
(<b>I.1</b>) R<sup>1</sup>=(S)-2-бутил, R<sup>2</sup>=H
<img file="00000098.jpg" he="27" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
Таблица 2. Другие ациклические амины-ингибиторы MTAN Helicobacter pylori и их значения MIC90 в отношении H. pylori.
<img file="00000099.jpg" he="33" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" /><b>Номер соединения, R=</b>
<b>Ингибирование MTAN</b><b><i> H. pylori</i></b>
<b>Ингибирование роста </b><b><i>H. pylori</i></b>
<b>Ki (нМ)</b>
<b>Ki* (нМ)</b>
<b>MIC90 (нг/мл)</b>
(<b>AA.1</b>), R=n-октил
<img file="00000100.jpg" he="22" wi="62" img-content="undefined" img-format="jpg" />
0,2 ± 0,04
>80
(<b>A.1</b>), R=2-гидроксиэтил
<img file="00000101.jpg" he="28" wi="52" img-content="undefined" img-format="jpg" />
>5
>80
ПРИМЕР 2
Активность соединения T.2 (гексил-SerMe-иммуциллина A) in vitro
[00103]
Следующие эксперименты осуществляли в UNT Health Science Center (руководитель исследования: William J Weiss, Director of Pre-Clinical Services), Fort Worth, TX, USA.
[00104]
(a) Получение планшета с образцами
: Аликвоты 2-кратного серийного разведения гексил-SerMe-иммуциллина A (62,5-6,25 мкг/мл в DMSO, 0,02 мл) смешивали с отдельными объемами расплавленного агара MHIIb по 2 мл и наливали в отдельные лунки в каждую лунку 12-луночного планшета, позволяли отстаиваться в течение 20-30 минут и сушили в боксе биологической безопасности в течение 10 минут перед инокуляцией.
[00105]
(b) Инокуляция
H. pylori
H. pylori
: Замороженный сток инокулята штаммов UNT020-1 (Sydney Strain SS1) и UNT189-1 (ATCC43504)  раздельно наносили полосами на агар Columbia+5% крови овцы и микроаэрофильно инкубировали в течение 72 часов при 37°C. Затем культуры штаммов  на агаре собирали в 0,9% стерильный физиологический раствор и определяли оптическую плотность суспензии при 530 нм. Оптическую плотность каждой суспензии доводили до 1,5-2,0 посредством разведения в 0,9% стерильном физиологическом растворе. Суспензию UNT020-1 дополнительно разводили 2:5, а суспензию UNT189-1 - нет, и их использовали для инокуляции планшетов с агаром. Образцы суспензий (3 мкл) пятнами наносили в лунки с агаром MHIIb в 12-луночном планшете. Подтверждали количество КОЕ/мл каждого посевного материала, получая 10-кратное серийное разведение каждого посевного материала в 0,9% стерильном физиологическом растворе и нанося пятнами 8 мкл каждого разведения на планшеты с агаром Columbia+5% крови овцы. После того, как пятнам давали высохнуть в течение 10 мин, планшеты помещали в микроаэрофильную камеру и инкубировали при 37°C в течение 72 часов.
[00106]
Результаты
H. pylori
H. pylori
: Определяли минимальные ингибиторные концентрации (MIC) гексил-SerMe-иммуциллина A в отношении изолятов  UNT020-1 (штамм Sydney SS1) и UNT189-1 (ATCC43504). Гексил-SerMe-иммуциллин A проявлял исключительную активность в отношении двух штаммов  с MIC 1,9нг/мл в каждом случае.
Концентрация соединения T.2 (гексил-SerMe-иммуциллин A) в желудочной слизи мыши после однократной пероральной дозы 10 мг/кг
[00107]
Следующие эксперименты осуществляли в UNT Health Science Center (руководитель исследования: William J Weiss, Director of Pre-Clinical Services), Fort Worth, TX, USA.
[00108]
(a) Пероральное введение мышам дозы 10 мг/кг
гексил-SerMe-иммуциллина A
: Самкам мышей C57/BL6 с диапазоном возраста 5-6 недель и массой 18-22 граммов (Harlan Laboratories) вводили гексил-SerMe-иммуциллин A (0,4 мл раствора 0,5 мг/мл в воде для инъекций) посредством гаважа.
[00109]
(b) Забор слизи
2
: Мышей (3 мыши/временную точку) умерщвляли посредством ингаляции CO через 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 12 и 24 часа, затем слой слизи соскребали с продольно рассеченного желудка с использованием предметного стекла, собирали и взвешивали.
[00110]
c) Получение гомогенатов желудочной слизи:
(Приблизительно 30 мг слизи мыши взвешивали в пробирке гомогенизатора емкостью 2 мл (предварительно наполненной 3,0 мм i.d. циркониевых бус) и смешивали с 0,2 мл буфера PBS. Это гомогенизировали в течение 3 мин при 4000 об./мин. в гомогенизаторе Beadbug D1030 (Benchmark Scientific).
[00111]
(d) Экстракция
гомогенатов желудочной слизи
:Образцы гомогенатов слизи (50 мкл) и внутренний стандарт (см. ниже) в воде (10 мкл) обрабатывали трихлоруксусной кислотой (30% масс./об., 30 мкл), разводили водой (160 мкл), центрифугировали на центрифуге типа вортекс в течение 10 сек и обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин, затем центрифугировали при 14500 об./мин. в течение 5 мин.Образец супернатанта (160 мкл) переносили в сосуды автосемплера. Внутренним стандартом являлся бутилтио-DADMe-иммуциллин-H в концентрации 5,0 и 20,0 мкг/мл.
[00112]
(f) Анализ ВЭЖХ-MS-MS
m/z
: Аликвоты супернатанта (10 мкл) инъецировали для анализа с помощью системы ВЭЖХ Surveyor (Thermo), оборудованной колонкой ACE 3 C18 (50×3 мм, частицы 3 мкм), с элюцией с градиентом при 30°C с подвижной фазой 400 мкл/мин, состоящей из смесей 0,1% трифторуксусной кислоты в воде (A) и метаноле (B), следующим образом: 0-5 мин, A:B 9:1; 5-6,1 мин, A:B 1:9; 6,1-10 мин A:B 9:1. Гексил-SerMe-иммуциллин A элюировали в 4,41±0,003 мин. Детекция представляла собой ESI MS/MS с использованием LCQ Deca (Thermo) в режиме положительного контроля селективных реакций (SRM) с использованием MS/MS с  292,2 → 147,2 и вольтажа ионораспыления 4,5 кВ.
[00113]
(г) Результаты
max
(0-inf)
: Результаты для гексил-SerMe-иммуциллина A в желудочной слизи после введения 10 мг/кг посредством гаважа у мышей представлены в таблице и на фигуре ниже. В желудочной слизи определяли высокий и пролонгированный уровень гексил-SerMe-иммуциллина A, при этом значение C составляло 65,5 мкг/г, суммарное воздействие [AUC] составляло 78,6 мкг-ч./г, и конечное время полужизни составляло 2,72 ч.
Таблица 3. Концентрация гексил-SerMe-Иммуциллина A в желудочной слизи мыши относительно времени после введения однократной дозы 10 мг/кг PO.
Время (ч.)
Гексил-SerMe-иммуциллин A (мкг/г)
Животное-1
Животное-2
Животное-3
Среднее
SD
SEM
0,25
60,42
64,36
45,91
56,89
9,71
4,34
0,50
46,24
90,18
60,18
65,53
22,46
10,04
1,00
20,39
12,20
12,04
14,88
4,77
2,13
2,00
2,02
1,08
16,24
6,44
8,49
3,80
4,00
0,67*
3,74
0,91
1,77
1,71
0,76
8,00
0,65*
1,62
0,53*
0,93
0,60
0,27
12,0
0,96
0,95
0,33*
0,74
0,36
0,16
24,0
0,54*
0,39*
0,30*
0,41
0,12
0,06
* ниже LLOQ
ССЫЛКИ
Aliment. Pharm. Therap.
1. Kuipers, E. J., Thijs, J.C. & Festen, H. P.  9 Suppl 2, 59-69 (1995).
et al.
Lancet
2. Malfertheiner, P. 377, 905-913 (2011).
Anal. Biochem.
3. Popp, J.L., Berliner, C. & Bentley, R.  178, 306-310 (1989).
J. Biol. Chem.
4. Li, X., Apel, D., Gaynor, E. C. & Tanner, M. E.  286, 19392-19398 (2011).
J. Antibiot.
5. Dairi, T.  62, 347-352 (2009).
et al.
Nature Chem. Biol.
6. Gutierrez, J.A. 5, 251-257 (2009).
J. Med. Chem.
53
7. Longshaw, A.I., Adanitsch, F., Gutierrez, J.A., Evans, G.B., Tyler, P.C., Schramm, V.L. Design and Synthesis of Potent "Sulfur-Free" Transition State Analogue Inhibitors of 5'-Methylthioadenosine Nucleosidase and 5'-Methylthioadenosine Phosphorylase. , 6730-6746 (2010).
et al.
Escherichia coli
J. Biol. Chem.
8. Singh, V. Femtomolar transition state analogue inhibitors of 5'-methylthioadenosine/S-adenosylhomocysteine nucleosidase from .  280, 18265-18273 (2005).
J. Am. Chem. Soc.
9. Singh, V. & Schramm, V.L. 129, 2783-2795 (2007).
et al.
ACS Chem. Biol.
10. Gutierrez, J. A. Picomolar inhibitors as transition-state probes of 5'-methylthioadenosine nucleosidases.  2, 725-734 (2007).
Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol.
11. Man, S.M.  8, 669-685 (2011).
Am. J. Gastro.
12. Vakil, N.  104, 26-30 (2009).
Org. Synth
Coll. Vol. 10
Org. Synth
77
13. Dondoni, A.; Perrone, D.; ., . 320 (2004); . , 64, (2000).
Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem
334
14. Madrigal, B.; Puebla, P.; Caballero, E.; Peláez, R.; Grávalos, D. G.; Medarde, M. . , 177-179 (2001).
Tetrahedron
68
15. Goswami, K.; Paul, S.; Budge, S. T.; Sinha, S. , 280-286 (2012).
J. Fluorine Chem
113
16. Paleček, J.; Kvíčala, J.; Paleta, O. . , 177-18 (2002).
J. Med. Chem
40
17. Ksander, G. M.; de Jesus, R.; Yuan, A.; Ghai, R. D.; Trapani, A; McMartin, C.; Bohacek, R. . . 495-505 (1997).
Bioorg. Med. Chem. Lett
20
18. Clinch, K.; Evans, G. B.; Fröhlich, R. F. G.; Gulab, S. A.; Gutierrez, J. A.; Mason, J. M.; Schramm, V. L.; Tyler, P. C.; Woolhouse, A. D. . , 5181-5187 (2012).
19. Публикация международной патентной заявки PCT № WO 2008/030118, опубликованная 13 марта 2008 г.