Генотипический и биохимический анализ плацент у женщин с самопроизвольным досрочным прерыванием беременности

© Т.Э. Иващенко, Г.К. Парцалис, ГЕНОТИПИЧЕСКИЙ И БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ В.М. Прокопенко, И .1".Павлова, ПЛАЦЕНТ У ЖЕНЩИН С САМОПРОИЗВОЛЬНЫМ А.В. Апyтюнян, В.С. Баранов ДОСРОЧНЫМ ПРЕРЫВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ

НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН, Санкт- Петербург

Изучено распределение частот полиморфных вариантов трех генов глютатион^-трансфераз — М1, Т1, P1

в плаценте при самопроизвольном досрочном прерывании беременности (СДПБ) и определена зависимость активности ферментов глютатионзависимой системы антиоксидантной защиты плаценты на протяжении беременности от генотипов исследованных генов. Выявлено достоверное повышение частоты GSTM10/0 (64,5 %) в исследуемой группе по сравнению с контрольной группой (39,47 %). Показано увеличение частоты А/С генотипа GSTP1 гена в плацентах по сравнению с контролем в 2,5 раза. Сочетания двух функционально неполноценных вариантов генов GST в плацентах при самопроизвольном прерывании беременности достоверно выше таковых в контрольной группе. Генотип GST Т10/0 + GST М10/0 при СДПБ встречался в 5 раз чаще (25,8 %) по сравнению с контролем (6,6 %), а сочетание генотипов GST Р1 D + GST T1 0/0 — в 8 раз чаще (22,5 % и 3,9 %, соответственно). При анализе лютатионтрансферазной (Г-S-T) активности при различных генотипах GST Р1 гена наибольшая активность Г-S-T отмечена при генотипах А/А, тогда как при генотипах А/В, А/С, В/В, и В/С ее активность достоверно снижена. Таким образом, мутации генов GSTT1, GSTМ1, GSTP1, приводящие к снижению активности соответствующих ферментов, уже сейчас можно рассматривать как фактор генетического риска СДПБ.

Ключевые слова: невынашивание беременности;

глютатион^-трансфераза; гены системы детоксикации ксенобиотиков

Введение

Невынашивание беременности (НБ) является одной из наиболее серьезных проблем современного акушерства. Частота НБ варьирует от 10 до 25 % всех беременностей. Несмотря на некоторые успехи в профилактике и лечении НБ, частота этой патологии не снижается [11]. Этиология НБ разнообразна и многофакторна. Самопроизвольное прерывание беременности нередко является следствием не одной, а нескольких причин. В настоящее время разработана концепция, согласно которой количественно измеряемые параметры репродуктивной системы (в том числе и самопроизвольные выкидыши) могут служить оценочными критериями экологического неблагополучия региона и биологической опасности окружающей среды [1].

Исследования последних лет показали, что изменения функций ферментов системы детоксикации ксенобиотиков, составляющей частью которой является глутатионзависимая антиоксидантная система, повышают восприимчивость организма к вредным воздействиям и, как следствие, ведут к увеличению риска развития некоторых заболеваний [5, 13, 14]. Процесс детоксикации ксенобиотиков осуществляется сложной системой ферментов и включает несколько последовательных стадий (фаз) [5]. Ферменты фазы I связывают ксенобиотики с образованием промежуточных геноток-сических метаболитов, которые под действием ферментов фазы II превращаются в водорастворимые нетоксические производные и выводятся из организма. Гены суперсемейства глютатион^-транс-фераз (М1, Т1 и Р1) относятся к так называемой глютатионзависи-мой антиоксидантной системе и контролируют синтез ферментов фазы II детоксикации. Гены этого суперсемейства характеризуются значительным популяционным полиморфизмом.

Сведения об активности глютатионзависимой антиоксидантной системы и ее генетическом полиморфизме в плаценте при НБ малочисленны и неоднозначны [9, 10].

Между тем, есть все основания предполагать, что углубленные исследования в этой области позволят выявить функциональные нарушения, возникающие в плаценте при НБ, и откроют реальные возможности для осуществления рациональной профилактики и научнообоснованной терапии данной патологии.

Целью настоящей работы явилось изучение особенностей ал-лельного полиморфизма генов GSTT1, GSTМ1 и GSTР1 в плаценте и хорионе при досрочном самопроизвольном прерывании беременности и определение зависимости активности ферментов глютати-онзависимой системы антиоксидантной защиты плаценты, таких как глютатион^-трансфераза (Г^-^), глютатионредуктаза (ГР) и глютатионпероксидаза (ГП) от генотипов исследованных генов.

Материалы и методы

Основная группа исследования состояла из 31 женщины, беременность которых прервалась самопроизвольно преждевременно

в различные сроки. Беременные с истмико-цери-кальной недостаточностью в наше исследование не входили. В зависимости от сроков беременности у этих пациенток были получены образцы 10 хорионов в I триместре, 10 и 11 плацент во II и III триместрах соответственно, в которых проводились генотипирование и определение активности фермента глютатион-Б-трансферазы. Группу сравнения составили 76 женщин с физиологическим течением беременности, от них были получены плаценты при срочных родах. В образцах полученного материала методом полимеразной цепной реакции исследована частота нулевого аллеля генов GSTT1, GSTM1 и частоты полиморфных аллелей гена GSTP1.

Смесь для амплификации, объемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера, 67 мМ трис-HCl, рН 8.8, 16,6 мМ сульфата аммония, 6,7 мМ MgCl2, 6,7 мкМ ЭДТА, 10 мМ меркаптоэтанола, 170 мкг BSA, 1,0 мМ каждого dNTP и 1U Taq-ДНК-полимеразы (производства «Бион», Москва).

Для амплификации фрагментов генов GSTM1 (GSTM1 F GAA CTC CCT GAA AAG CTA AAG C; GSTM1 R GTT GGG CTC AAA TAT ACG GTG G) и GSTT1 (GST T1 F TTC CTT ACT GGT CCT CAC ATC TC; GST T1 R TCA CCG GAT CAT GGC CAG CA) использовали следующие условия ПЦР: после денатурации (94 °С, 7 минут) проводили 32 цикла амплификации в режиме 94 °С-1 минута; 53 °С-1 минута; 72 °С-1 минута 20 секунд. После амплификации анализировали продукты реакции в 7,0 % полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ свете.

Гомозиготы по нормальному аллелю «+» определяли по наличию на электрофореграммах продукта амплификации размером 315 п. о. для GSTT1 и фрагмента 271 п. о. для GSTM1. Отсутствие соответствующих фрагментов указывало на гомозиготность индивидуума по делеции соответствующего гена. В качестве внутреннего контроля использовали амплификацию фрагмента гена CYPA1 (192 п. о.). Гетерозиготные особи 0/+ не дискриминировались.

Для амплификации двух фрагментов гена GSTP1 (GST P1 1F CTC TAT GGG AAG GAC CAG CAG GAG; GST P1 2R CAA GCC ACC TGA GGG GTA AGG; GST P1 3 F GTT GTG GGG AGC AAG CAG AGG; GST P14 R GCC TTC ACA TAG TCA TCC TTG CGC) использовали следующие условия ПЦР: после денатурации (94 °С, 7 минут) проводили 32 цикла амплификации в режиме: 94 °С-40 секунд, 60 °С-40 секунд, 72 °С-1 минута. После амплификации продукты ПЦР подвергались расщеплению с помощью специфических эндонуклеаз Bso MA1 (праймеры GST P1 1F и

GST P1 2R) и BstFNl (праймеры GST P1 3F и GST P1 4R) по прописям, рекомендованным фирмой-изготовителем рестриктаз в буфере, прилагаемом к ферменту. Продукты реакции анализировали в 7,0 % полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ свете.

Для проведения анализа ферментативной активности в плаценте, образцы тканей предварительно тщательно отмывали в ледяном физиологическом растворе, разрушали в фосфатном буфере, центрифугировали при температуре 4 °С. Полученный супернатант использовали для определения активности ферментов. Активность глютати-онредуктазы (ГР) измеряли по степени окисления НАДФН [7], селеновой глютатионпероксидазы (ГП) — с использованием гидроперекиси третичного бутила [3], глютатион^-трансферазы — по скорости образования GS-2,4-динитробензола [2]. Концентрацию белка определяли по методу Лоури.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы «STATISTICA v5.5a». При сравнении частот генотипов использовали стандартный критерий X2. При анализе зависимости активности ферментов глютатионзависимой системы антиоксидант-ной защиты плаценты, от генотипов исследованных генов использовали метод множественного регрессионного анализа.

Результаты

При анализе полиморфизма гена GSTP1 в плацентах и хорионах выявлено 3 аллельных варианта. Аллель А содержит изолейцин в 105-м положении аминокислотной последовательности белка и аланин в 114-м положении; аллель В — валин в 105-м положении и аланин в 114-м положении и аллель С — валин в 105-м положении и валин в 114-м положении аминокислотной послед ова-тельности белка.

Как видно из таблицы 1 частоты генотипов GST P1 гена в основной группе достоверно не отличались от таковых в группе сравнения, однако отмечалась определенная тенденция к увеличению частоты гетерозигот А/С. Так частота А/С генотипа в плацентах при самопроизвольном досрочном прерывании беременности составила 25,6 %, что в 2,5 раза превышает таковую в контрольной группе (10,5 %).

В таблице 2 представлены результаты анализа делеций в генах GST T1 и GST М1. Согласно полученным данным, частота гомозигот GST T1 0/0 (35,5 %) в плацентах женщин с НБ несколько выше, чем в группе сравнения (21,05 %), однако

Таблица 2

Частота встречаемости генотипов GST M1 и GST T1 в плацентах женщин основной группы и группы сравнения

Таблица 1

Частота генотипов по GST P1 в плаценте женщин основной группы и группы сравнения

Генотип GST P1 Основная группа n = 31 Группа сравнения n = 76

абсолютное число M ± m % абсолютное число M ± m %

А/А 14 45,2 ± 8,9 40 52,6 ± 5,7

А/В 5 16,1 ± 6,6 19 25,0 ± 5,0

А/С 8 25,8 ± 7,9 8 10,5 ± 3,5

В/В 3 9,7 ± 5,3 6 7,9 ± 3,1

В/С 1 3,2 ± 3,2 3 3,9 ± 2,2

Примечание. Вариант А/А GST P1 гена кодирует синтез фермента с нормальной активностью, остальные варианты — со сниженной.

Основная группа Группа сравнения

Генотип n = 31 n = 76

абсолютное число M ± m % абсолютное число M ± m %

GST Т1 0/0 11 35,5 ± 8,6 16 21,05 ± 4,70

GST Т+ 20 64,5 ± 8,6 60 78,95 ± 4,70

GST М1 0/0 20 64,5 ± 8,6* 30 39,47 ± 5,60

GST М+ 11 35,5 ± 8,6* 46 60,5 ± 5,6

Примечание: * — р < 0,05 по сравнению с группой сравнения

эти различия были статистически недостоверны, что, возможно, связано с малочисленностью выборки.

При анализе делеции гена GST M1 выявлено достоверное повышение частоты гомозигот по нулевому аллелю (64,5 %) в основной группе по сравнению с группой сравнения (39,47 %).

Учитывая результаты по генотипированию функционально неполноценных аллелей генов глютатион^-трансфераз, представлял интерес анализ распределения сочетаний нулевых вариантов генов GST Т1 0/0 и GST M1 0/0 между собой, а также в сочетании с так называемыми «дефектными» генотипами GST Р1 (GST Р1 D — варианты генотипов А/В, А/С, В/В и В/С).

Как видно из таблицы 3 частота сочетаний двух функционально неполноценных вариантов генов GST в плацентах и хорионах при самопроизвольном досрочном прерывании беременности достоверно выше таковой в группе сравнения.

Так генотип GST Т10/0 + GST М10/0 при спонтанном прерывании беременности встречался в 5 раз чаще (25,8 0%) по сравнению с группой сравнения (6,6 %), а сочетание генотипов GST Р1 D + GST T1 0/0 — в 8 раз чаще (22,5 % и 3,9 о% соответственно). Интересно отметить, что сочетание всех трех функционально ослабленных генотипов (GST Т10/0 + GST М10/0 + GST Р1 D) выявлено в 20 % образцов основной группы, тогда как в группе сравнения оно не превышало 4 %.

Предыдущие наши исследования показали, что активность глутатион^-трансферазы в хорионе и плаценте на протяжении физиологической беременности изменялась, возрастая к концу беременности более чем в 2,5 раза по сравнению с I триместром [13]. Это послужило основанием рассматривать зависимость активности данного фермента от так называемого «нормального» или «дефектного» генотипа GST Р1 отдельно по срокам беременности. В ходе работы проанали-

Таблица3

Частота встречаемости сочетания функционально ослабленных вариантов GST T1, GST M1 и GST Р1 генов в плацентах женщин основной группы и группы сравнения

Генотип Основная группа n = 31 Группа сравнения n = 76

абсолютное число M ± m % абсолютное число M ± m %

GST Т1 0/0 + GST М1 0/0 8 25,8 ± 7,9* 5 6,6 ± 2,8

GST Р1 D + GST T1 0/0 7 22,6 ± 7,5* 3 3,9 ± 2,2

GST Р1 D + GST M1 0/0 13 41,9 ± 8,9* 14 18,4 ± 4,4

Примечание: * — р < 0,05 по сравнению с группой сравнения; D — так называемый «дефектный ген», кодирующий синтез белка со сниженной активностью

Таблица 4

Активность глутатион^-трансферазы в плацентах пациенток с преждевременным прерыванием беременности при различных генотипах GST Р1 гена при различных сроках беременности

Генотип I триместр n = 10 II триместр n = 10 III триместр n = 11

АА 18,40 ± 5,32 28,54 ± 3,78 29,62 ± 5,39

АБ 29,44 ± 2,94 17,24 ± 2,41*0 17,55 ± 1,63*0

Примечание: * — р < 0,001 по сравнению с генотипом АА; ◊ — р < 0,001 по сравнению с I триместром группы АD; D — так называемый «дефектный ген», кодирующий синтез белка со сниженной активностью

зирована зависимость активности фермента глу-татион^-трансферазы в плацентах женщин при преждевременном прерывании беременности в различные сроки от наличия функционально неполноценного варианта генотипа Г-S-T Р1. Функционально неполноценные варианты генотипа Г-S-T Р1 обозначены как AD. Эти данные представлены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, активность глутатион-S-трансферазы в плацентах и хорионах женщин, беременность которых прервалась преждевременно, при наличии аллелей АА достоверно не изменялась с увеличением срока беременности. В группе беременных, плаценты которых несли функционально неполноценные аллели (АD), отмечено достоверное снижение активности глу-татион-Б-трансферазы с увеличением срока беременности (U = 1, p < 0,05). При сопоставлении активности глутатион-Б-трансферазы в плацентах и хорионах при преждевременном прерывании беременности нами выявлено достоверное снижение активности фермента во II и III триместрах беременности при наличии функционально неполноценного аллеля (АБ).

Таким образом, снижение активности глу-татион-Б-трансферазы в плацентах женщин с преждевременным прерыванием беременности, по-видимому, может быть объяснено наличием генотипа GST Р1, несущего неполноценные аллели, то есть кодирующие синтез белка (фермента) со сниженной активностью.

Показатели активности ферментов ГП и ГР в плацентах и хорионах при различных генотипах GST Т1 и GST М1 генов практически не отличались друг от друга. Эти данные свидетельствуют о том, что активность глутатионзависимых ферментов плаценты не зависит от генотипов GST Т1 и GST М1 генов, так как в плаценте присутствуют лишь глутатион-S-трансфераза класса р1, синтез которой кодируется геном GST Р1.

Для выявления статистически значимых корреляций между активностью ферментов глютати-онзависимой антиоксидантной системы плаценты и различными вариантами генотипа GST Р1, проведен множественный регрессионный анализ,

который позволил обнаружить наличие прямой корреляции между показателями активности глю-татион^-трансферазы и наличием аллеля А гена GST Р1 и обратной корреляции с наличием алле-ля С. Вместе с тем, активность глютатионперок-сидазы напрямую зависела от наличия аллеля В. Наряду с этим показано, что активность глутати-онредуктазы связана лишь со сроком беременности и никак не коррелирует с вариантами генотипа GST Р1.

Обсуждение

При самопроизвольном досрочном прерывании беременности в плацентах и хорионах выявлена достоверно более высокая частота встречаемости гомозигот GST М1 0/0 по сравнению с таковой в общей популяции. Аналогичная ассоциация выявлена ранее у пациенток с привычным невынашиванием ранних сроков [14]. Было показано, что у женщин, в плацентах и хорионах которых обнаружена гомозиготная делеция гена GST М1, риск неблагоприятного исхода беременности повышен в 3 раза. В исследовании, проведенном на образцах ДНК крови супружеских пар с привычным невынашиванием беременности ранних сроков, также было показано некоторое повышение частоты гомозигот по делеции GST М1 гена [4].

Интересно отметить, что сочетание функционально ослабленных генотипов по крайней мере двух GST генов выявлено нами в 90 % проанализированных образцов плацент и хоринов пациенток основной группы. Как было показано в работе Беспаловой О.Н. и соавт. [4], частота таких сочетаний в образцах ДНК у мужчин и у женщин из супружеских пар с привычным невынашиванием беременности повышена и составляет 68 % и 75 % соответственно [11]. Исходя из этих данных, можно предположить, что вероятность беременности плодом с функционально ослабленным генотипом в этих семьях достаточно велика.

Согласно нашему предположению, основанному на исследовании полиморфных вариантов генов GST, у плодов с ослабленным генотипом по генам II фазы детоксикации защитная функция

плаценты менее эффективна, чем в норме, и риск невынашивания беременности возрастает. Риск самопроизвольного досрочного прерывания беременности становится особенно значимым при сочетаниях нескольких функционально неполноценных генов GST. В свете полученных результатов генотипического исследования, особый интерес представлял анализ активности ферментов глюта-тионзависимой системы антиоксидантной защиты (Г-S-T, ГР и ГП) в тех же самых плацентах.

Так было установлено, что при различных генотипах GST Р1 гена существуют достоверные различия в показателях активности фермента Г-S-T в каждый изученный срок. Наибольшая активность Г-S-T наблюдается при генотипе А/А (при котором кодируется синтез фермента с нормальной активностью), тогда как при остальных вариантах генотипа А/В, А/С, В/В и В/С ее активность достоверно снижена во II и III триместрах беременности. Таким образом, результаты генотипи-ческого анализа согласуются с данными биохимического исследования, свидетельствующими о том, что аллели В и С гена GST Р1 кодируют синтез фермента глютатион^-трансферазы со сниженной активностью.

Согласно нашим данным, при различных генотипах GST Т1 и GST М1 показатели активности глютатион^-трансферазы в плацентах и хорионах женщин основной группы практически не отличаются друг от друга, а, следовательно, ее активность в исследуемой ткани не зависит от наличия или отсутствия делеций этих генов. Эти результаты подтверждают, что именно плацента является основным органом, где происходит экспрессия гена глютатион^-трансфераза класса р1

Как уже упоминалось, исследованные нами гены GSTM1, GSTT1, GSTP1 кодируют ферменты, участвующие во второй фазе системы детокси-кации ксенобиотиков [12]. Учитывая, что белковые продукты этих генов в значительной мере отвечают за эффективность II фазы детоксикации (нейтрализация поступающих в организм ксенобиотиков путем связывания глютатиона), наши результаты свидетельствуют о нарушении антиоксидантных механизмов защиты в плаценте и хорионе при невынашивании беременности, что имеет существенное значение в генезе этой патологии.

Обнаруженная нами в плацентах и хорионах зависимость активности ферментов II фазы де-токсикации от генотипа GSTP1 дает основания предполагать, что подобная закономерность может быть выявлена при изучении этих параметров и в крови беременных. Дальнейшие исследования в этом направлении позволят выявить ранние количественные маркеры досрочного прерывания беременности.

Интересно также отметить, что в работах других авторов у женщин с привычным невынашиванием обнаружено достоверное повышение частот медленных форм NAT-2 — еще одного фермента II фазы детоксикации [14]. Поэтому нельзя исключить, что экзогенные факторы и, прежде всего, промышленные и сельскохозяйственные яды, действительно играют важную роль в этиологии привычного невынашивания. В какой мере их неблагоприятный эффект зависит от нарушений детоксикации ксенобиотиков в организме матери или плода, прежде всего в плаценте, остается предметом наших дальнейших исследований. Заслуживает внимание и вопрос о том, в какой мере другие гены детоксикации, помимо генов GST, вовлечены в мультифакториальный патологический процесс, следствием которого является привычное невынашивание беременности. Вместе с тем, полученные результаты, а также данные наших более ранних исследований [4], не оставляют сомнения в целесообразности тестирования полиморфизмов в генах глютатион^-трансфераз с целью раннего выявления женщин групп высокого риска по невынашиванию беременности.

Литература

1. Акушерство: учебник для мед. вузов / Айламазян Э.К., Новиков Б.Н., Павлова Л.П. [и др.]. — 5-е изд. — СПб.: Спец-Лит, 2005. — 527 с.

2. Арутюнян А.В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.Н.; под ред. В.Х. Ха-винсона. — СПб, 2000. — 76 с.

3. Власова С.Н. Активность глутатионзависимых ферментов эритроцитов при хронических заболеваниях печени у детей / Власова С.Н., Шабунина Е.И., Переслегина И.А. // Лаб. дело. — 1990. — № 8. — С. 19-22.

4. Генетические факторы предрасположенности к привычному невынашиванию беременности ранних сроков / Беспалова О.Н., Аржанова О.Н., Иващенко Т.Э. [и др.] // Ж. акуш. и жен. болезн. — 2001. — Т. L, Вып. 2. — С. 8-13.

5. Геном человека и гены «предрасположенности» / Баранов В.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э. [и др.]. — СПб.: Интермедика, 2000.

6. Колесниченко Л.С. Глютатионтрансферазы / Колесничен-ко Л.С., Кулинский В.И. // Успехи современной биологии. — 1989. — Т. 107, Вып. 2. — С. 179-194.

7. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах / Моин В.М. // Лаб. дело. — 1986. — № 12. — С. 724-727.

8. Парцалис Г.К. Глутатионзависимая система антиокси-дантной защиты при физиологической беременности и преждев ременных родах / Парцалис Г.К., Павлова Н.Г., Прокопенко В.М. // Невынашивание беременности и недоношенный ребенок: материалы Российской науч.-прак-тич. конф. — Петрозаводск, 2002. — С. 88.

9. Свободнорадикальное окисление в тканях последа при недоношенной беременности / Прокопенко В.М., Арутюнян А.В., Кузьминых Т.У. [и др.] // Вопр. мед. хим. -1995. — Т. 41, № 3. — С. 53-56.

10. Свободнорадикальное окисление и антиокислительная активность в тканях плаценты при преждевременных ро-

дах / Прокопенко В.М., Арутюнян А.В., Кузьминых Т.У. [и др.] // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1997. -Т. 124., № 12. — С. 632-634.

11. Сидельникоеа В.М. Невынашивание беременности. — М.: Медицина, 1986. — 176 с.

12. Daly A.K. Molecular basis of polymorphic drug metabolism / Daly A.K. // J. Mol. Med. — 1995. — Vol. 73. — Р. 539-553.

13. Polymorphisms in biotransformation enzymes and the risk for recurrent early pregnancy loss / Zusterzeel P.L., Nelen W.L., Roelofs H.M. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 2000. — Vol. 6, N 5. — P. 474-478.

14. Xenobiotic metabolism genes and the risk of recurrent spontaneous abortions / Hirvonen A., Taylor J.A., Wilcox A. [et al.] // Epideimiology. — 1996. — Vol. 7. — P. 206-208.

Статья представлена О.Н. Аржановой

НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН,

Санкт-Петербург

GENOTYPICAL AND BIOCHEMICAL ANALYSES OF

PLACENTAS IN WOMEN WITH PREGNANCY MISCARRIAGE

Ivaschenko T.E., Parcalis G.K., Prokopenko V.M.,

Pavlova N.G., Arutjunyan A.V., Baranov V.S.

Summary: Frequency distribution of polymorphic variants

of glutathione-transferase genes (GSTM1, GSTT1, GSTP1) in

placenta during preterm delivery or miscarriage was studied. Also, the relationship between enzymatic activity of glutathione-dependent system of antioxidant placenta protection during pregnancy and genotypes of studied genes were investigated. Reliable increase of frequency GSTM10/0 (64,5 %) in studied group compared to control group (39,47 %) was reviewed. 2,5-fold expansion of frequency ofA/C genotype of GSTP1 gene in placenta to control group was shown. Combination of two functionally impaired genetic variants of GST genes in placentas during preterm termination of pregnancy is reliably higher than in control group. Genotype GST T10/0 + GST M10/0 in spontaneous preterm interruption of pregnancy cases was found 5 times more often (25,8 %) compared to control group. Combination of GST P1 D + GST T1 0/0 genotypes was found 8 times more often (22,5 % and 3,9 % respectively). Analysis of glutathione-transferase activity in different GSTP1 genotypes was performed, it was shown that the highest activity was presented by A/A genotypes, in genotypes such as A/B, A/C, B/B and B/C this activity was reliably lower.

Thus, mutations of GSTM1, GSTT1, GSTP1 genes, which lead to decreasing of activity of appropriate enzymes, even now may be evaluated as a genetic risk factor of spontaneous preterm pregnancy miscarriage.

Key words: pregnancy miscarriage; glutathione-S-transferase; metabolic genes