Особенности экспрессии мРНК и белка AKR1B10 в опухолях кишечного и диффузного типов у больных раком желудка

ций лимфоцитов в % (CD3+, CD4+, CD4+DR+, CD8+, CD8+DR+ , CD19+, CD16+), HLA-DR+ моноцитов, параметры фагоцитоза, тестирование спонтанной и митоген (Соп-А и PWM) индуцированной пролиферативной активности мононуклеарных клеток (МНК) в имп/мин. Контрольная группа практически здоровых добровольцев (п=51) была сопоставима по полу и возрасту с группой больных раком желудка. При оценке ФМА по 4 парным функциям больные были разделены на группу 1Б (люди с доминантным левым полушарием головного мозга) и группу 2Б (с преимущественно доминантным правым полушарием головного мозга), практически здоровые люди на группы 1А и 2А соответственно. Статистическая обработка проведена методом Вилкоксонна-Манна-Уитни.

Результаты. Группа 1Б больных раком желудка составила - 33 человека

и моноцитарного (47(36-60) и 60(54-69), р=0,001) фагоцитоза, выше количество HLA-DR+ моноцитов (93(91-95) и 91(87-94), р=0,01), а также CD8+DR+ лимфоцитов (2,7(2,09-4,12) и 2,07(1,52-2,72), р=0,02) и, кроме того, ниже количество CD20+ лимфоцитов (139,5(90,9-222,42) и 218,61(149,24-299,04), р=0,009). Между больными из группы 2Б (люди с преимущественно доминантным правым полушарием головного мозга) и контрольной группой 2А определены подобные различия только уровня гранулоци-тарного (51(30-64)и 68,5(55,5-73), р=0,0004) и моноцитарного (47,5(32,5-55) и 55,5(48,5-64,5), р=0,017) фагоцитоза, а также количества HLA-DR+ моноцитов (91 (90-94) и 89 (83,5-91), р=0,01).

Выводы. В процессе проведенного исследования выявлено наличие сопряженности между ФМА и иммунологическими показателями у больных раком желудка. Полученные данные свидетельствуют, что возможность развития иммунного ответа по ТЪ-1 типу (более высокий уровень CD8+DR+ лимфоцитов и меньшее число CD20+ лимфоцитов) у больных раком желудка, вероятно, обусловлена доминированием у них левого полушария головного мозга. При этом наличие у больных раком желудка более низкого уровня фагоцитарной активности в сравнении с контрольной группой не зависит от латерализации функций головного мозга.

ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ МРНК И БЕЛКА А^1В10 В ОПУХОЛЯХ КИШЕЧНОГО И ДИФФУЗНОГО ТИПОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА

И.В. СТЕПАНОВ12, В.В. ВОЛКОМОРОВ13, Е.С. ГРИГОРЬЕВА1, Ю.А. БУКУРОВА4, Г.С. КРАСНОВ4, С.В. ВТОРУШИН12, О.В. САВЕНКОВА1, А.В. АВГУСТИНОВИЧ1,

А.О. КАРПОВА2, М.В. ЗАВЬЯЛОВА12

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск1 ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Томск2 ГОУ ВПО «Томский государственный университет»3 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, г. Москва4

Актуальность. AKR1B10 (альдо-кето ре-дуктаза I B10 семейства) является НАД (Ф)-

зависимой оксидоредуктазой, восстанавливающей карбонильные соединения (альдегиды

и кетоны) до спиртов, что обусловливает ее важную роль в метаболизме ксенобиотиков и при воспалительных процессах различного генеза. Есть сведения об участии AKR1B10 в метаболическом пути ретиноевой кислоты, которая регулирует дифференцировку и осуществляет рост-супрессивные эффекты в трансформированных клетках. Данные о вовлечении этого гена в канцерогенез немногочисленны и противоречивы. Недавно обнаружено значительное понижение экспрессии гена AKR1B10 в злокачественных новообразованиях кишечника по сравнению с нормальным кишечным эпителием. В литературе практически нет сведений об уровне экспрессии этого гена в злокачественных опухолях желудка, за исключением данных Gomez et al., (2005), которые на ограниченном числе образцов с использованием микрочипов показали снижение экспрессии гена AKR1B10 в образцах с аденокарциномами пищевода и кар-диоэзофагиальных раках, а также при кишечном типе рака желудка в сравнении с образцами с кишечной метаплазией эпителия.

Цель исследования. Изучить экспрессию гена AKR1B10 в опухолях желудка и оценить особенности экспрессии белка AKR1B10 в опухолевых клетках при кишечном и диффузном типах рака желудка.

Материал и методы. Проанализировано 45 парных образцов опухолей и нормальной слизистой, полученных при оперативном вмешательстве у больных раком желудка стадии T1-4N0-3M0, не получавших предоперационной терапии (НИИ онкологии СО РАМН, Томск). Образцы хранились при -80°С, из них получали тотальную РНК с помощью набора RNasy mini Kit (Qiagen, Inc). Экспрессию исследуемых генов оценивали с помощью метода обратной транскрипции и ПЦР в режиме реального времени. Для получения кДНК на матрице РНК проводили реакцию обратной транскрипции с помощью набора RevertAidtm (K1622) (Ферментас, Литва). Иммуногистохимическому исследованию подвергался заключенный в парафиновые блоки операционный материал от 46 больных РЖ, использовались первичные/специфичные антитела (анти-AKRlB^) в рабочем разведении 1:300. Изучение экспрессии белка AKR1B10 проводили в ткани первичной опухоли, в неизмененной слизистой оболочке желудка и в

слизистой оболочке, подвергшейся кишечной метаплазии. Оценивался процент экспрессии AKR1B10 в клетках железистоподобных, кри-брозных, трабекулярных, солидных структур опухоли и в мелких группах опухолевых клеток на разной глубине инвазии. Выраженность экспрессии в опухоли в целом определяли по трехбалльной системе, где 1 баллом обозначали слабо выраженную экспрессию (<20 % позитивных клеток), 2 баллами умеренно выраженную экспрессию (>20 %—<б0 %) и 3 баллами резко выраженную экспрессию (>60%). Срок наблюдения за больными составил от 1 года до 6 лет. Анализировались первичные документы - амбулаторные карты и истории болезни пациентов. Обработка полученных данных выполнялась с использованием пакета программ «Statistica 6.0 for Windows».

Результаты. При сравнительном изучении уровня экспрессии гена AKR1B10 (относительно уровня гена рефери ACTB) в 45 парных образцах опухолевой и нормальной ткани было показано двукратное снижение среднего группового уровня мРНК в опухоли по сравнению с нормальной слизистой; изменение экспрессии мРНК у разных пациентов колебалось от 2 до 342 раз. При этом более чем двукратное снижение экспрессии данного гена наблюдалось в клетках опухоли у 49 % обследуемых. В клетках опухолей как диффузного, так и интестинального гистологических типов экспрессия данного гена была значимо понижена по сравнению с нормальной тканью (p=0,006 и р=0,001) (средняя относительная экспрессия составила 0,090 ± 0,016 и 0,14 5± 0,040 против 0,275 ± 0,07 и 0,254 ± 0,05 соответственно). При этом кратность изменения экспрессии варьировала от 2 до 75 при диффузном типе и от 2 до 342 при интестинальном. Схожая картина наблюдалась и при разделении группы больных по основным клинико-патологическим показателям. По сравнению с нормальной тканью наблюдалось значимое понижение экспрессии гена AKR1B10 в группе с большим размером первичной опухоли T3-T4 (p=0,0005) (снижение у 47 %, варьирование от 2 до 342) и в группе больных c наличием метастазов в регионарные лимфоузлы (группа N1-N3) (p=0,002) (понижение экспрессии у 81 % больных, изменение варьировало от 2 до 342). При сравнении нормальной ткани с

тканью опухоли от больных без метастазов в регионарные лимфоузлы значимых различий получено не было.

Иммуногистохимический анализ показал, что выраженность экспрессии белка AKR1B10 в нормальном и метаплазированном эпителии слизистой оболочки не различалась. При кишечном типе рака интенсивность экспрессии AKR1B10 не отличалась от таковой в нормальном или метаплазированном эпителии. При диффузном типе рака желудка экспрессия была менее выраженной в сравнении с экспрессией AKR1B10 в цитоплазме клеточных элементов карциномы кишечного типа (соответственно, 2,0 ± 0,6 и 2,7 ± 0,5; F=13,9; р=0,0005). При кишечном типе рака желудка экспрессия AKR1B10 в железистоподобных структурах, располагающихся в серозной оболочке, была ниже (36,7 ± 30,1 %) в сравнении с экспрессией этого маркера в подобных структурах в слизистой оболочке (87,2 ± 16,9 %; р=0,0000), подслизистой (79,9 ± 22,7 %; р=0,002) и мышечной (73,4 ± 31,2%; р=0,038) оболочках. В паренхиматозном компоненте диффузного рака желудка процент экспрессии А^1В10 не зависел от глубины расположения разных структур в стенке желудка. Кроме того, при кишечном типе рака желудка в случаях с наступлением летальных исходов отмечалось снижение процента экспрессии AKR1B10 в клетках, формирующих желези-

стоподобные структуры, располагающиеся в слизистой оболочке желудка, в сравнении со случаями с благоприятным исходом заболевания (соответственно, 76,7 ± 24,9 % и 92,5 ± 7,7 %; F=6,1; р=0,02).

Выводы. По сравнению с нормальной тканью опухолевая ткань желудка отличается пониженным уровнем экспрессии гена АКШВ10 как при диффузном, так и интестинальном гистотипах. Значимое понижение экспрессии отмечено, начиная с ранних стадий процесса (Т1-Т2), и связано с вовлечением лимфатических узлов. Кишечный и диффузный типы рака желудка отличаются как по выраженности экспрессии белка AKR1B10 в клетках новообразования, так и по прогностической значимости этого маркера. Существенные различия в характере и интенсивности белковой экспрессии AKR1В10 в клетках диффузных и интестинальных опухолей указывают на разные механизмы его вовлечения в патогенез этих типов злокачественных новообразований желудка. Полученные данные свидетельствуют о возможной роли AKR1B10 в патогенезе РЖ и об актуальности дальнейших исследований для оценки его диагностической и прогностической значимости.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (09-04-99072) и Международного научнотехнического центра (# 3909).

ВОЗМОЖНОСТИ СПИРАЛЬНОЙ КОМПЬЮТЕРНОЙ ТОМОГРАФИИ В ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ГОРТАНИ И ГОРТАНОГЛОТКИ

П.В. СУРКОВА

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск

Актуальность. Злокачественные опухоли головы и шеи занимают 6-е место по распространенности во всем мире и составляют 1,8-2,2 % в структуре общей заболеваемости злокачественными опухолями. Современная своевременная диагностика этой патологии является актуальной проблемой в онкологии. Ввиду скрытого клинического течения, слож-

ности анатомо-топографического строения, инфильтративного характера роста, онкологи чаще встречаются с местно-распространенным процессом. Доля пациентов с Ш-ІУ стадиями составляет 60-70 %. Методы лучевой диагностики злокачественных опухолей гортани позволяют правильно оценить распространенность первичного патологического процесса