ОЧИСТКА ПОЛИПЕПТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДВУХСТАДИЙНОЙ УЛЬТРАФИЛЬТРАЦИИ В ТАНГЕНЦИАЛЬНОМ ПОТОКЕ

1. Способ отделения представляющего интерес белка от раствора клеточной культуры, содержащего указанный белок, с помощью двухстадийной ультрафильтрации в тангенциальном потоке (TFF), в котором указанная двухстадийная TFF заключается в том, что осуществляют первую операцию с использованием устройства для TFF и вторую операцию с использованием устройства для TFF, в котором
при осуществлении указанной первой операции с использованием устройства для TFF фильтруют первой поток продукта, содержащего указанный белок, с использованием первой ультрафильтрационной мембраны с такой границей отсечки, чтобы указанный белок собирался в ретентате, полученном в результате первой операции с использованием устройства для TFF; и
при осуществлении указанной второй операции с использованием устройства для TFF фильтруют второй поток продукта, содержащего указанный белок, с использованием второй ультрафильтрационной мембраны с такой границей отсечки, чтобы указанный белок собирался в пермеате, полученном в результате второй операции с использованием устройства для TFF;
и в котором указанный первый или указанный второй поток продукта представляет собой супернатант клеточной культуры.
2. Способ по п. 1, в котором указанный первый поток продукта представляет собой супернатант клеточной культуры и указанную первую операцию с использованием устройства для TFF осуществляют перед указанной второй операцией с использованием устройства для TFF.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором указанная двухстадийная TFF дополнительно включает третью операцию с использованием устройства для TFF, при осуществлении которой фильтруют третий поток продукта, содержащий указанный белок, с использованием третьей ультрафильтрационной мембраны, имеющей такую границу отсечки, чтобы указанный белок собирался в ретентате, полученном в результате третьей операции с использованием устройства для TFF, и в котором указанную третью операцию с использованием устройства для TFF осуществляют после указанных первой и второй операций с использованием устройства для TFF.
4. Способ по п. 3, в котором граница отсечки третьей ультрафильтрационной мембраны является такой же, что и граница отсечки первой ультрафильтрационной мембраны.
5. Способ по п. 1 или 2, в котором указанный белок имеет молекулярную массу по меньшей мере 10 кДа, но не более чем 500 кДа.
6. Способ по п. 3, в котором указанный белок имеет молекулярную массу по меньшей мере 10 кДа, но не более чем 500 кДа.
7. Способ по п. 4, в котором указанный белок имеет молекулярную массу по меньшей мере 10 кДа, но не более чем 500 кДа.
8. Способ по п. 5, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, равную одной второй от молекулярной массы (т.е. 0,5 от молекулярной массы) указанного белка или менее; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, по меньшей мере вдвое (т.е. в 2 раза) превышающую молекулярную массу указанного белка, но составляет не более чем 1000 кДа.
9. Способ по п. 6, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, равную одной второй от молекулярной массы (т.е. 0,5 от молекулярной массы) указанного белка или менее; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, по меньшей мере вдвое (т.е. в 2 раза) превышающую молекулярную массу указанного белка, но составляет не более чем 1000 кДа.
10. Способ по п. 7, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, равную одной второй от молекулярной массы (т.е. 0,5 от молекулярной массы) указанного белка или менее; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки, по меньшей мере вдвое (т.е. в 2 раза) превышающую молекулярную массу указанного белка, но составляет не более чем 1000 кДа.
11. Способ по п. 5, в котором указанный белок имеет молекулярную массу 150±75 кДа.
12. Способ по п. 6, в котором указанный белок имеет молекулярную массу 150±75 кДа.
13. Способ по п. 8, в котором указанный белок имеет молекулярную массу 150±75 кДа.
14. Способ по п. 9, в котором указанный белок имеет молекулярную массу 150±75 кДа.
15. Способ по п. 1 или п. 2, в котором указанный белок представляет собой антитело.
16. Способ по п. 3, в котором указанный белок представляет собой антитело.
17. Способ по п. 5, в котором указанный белок представляет собой антитело.
18. Способ по п. 1 или 2, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки 50 кДа или менее; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки от 300 до 1000 кДа.
19. Способ по п. 3, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки 50 кДа или менее; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки от 300 до 1000 кДа.
20. Способ по п. 18, в котором указанная первая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки 50 кДа; и в котором указанная вторая ультрафильтрационная мембрана имеет границу отсечки 300 кДа.
21. Способ по п. 1 или 2, в котором указанная двухстадийная TFF снижает концентрацию белка клеток-хозяев (НСР) в растворе, содержащем представляющий интерес белок, по меньшей мере на 10% относительно концентрации в указанном супернатанте клеточной культуры и/или снижает концентрацию ДНК клеток-хозяев (HCDNA) в растворе, содержащем представляющий интерес белок, по меньшей мере на 30% относительно концентрации в указанном супернатанте клеточной культуры.
22. Способ по п. 1 или 2, в котором указанная двухстадийная TFF снижает концентрацию НСР в растворе, содержащем представляющий интерес белок, до 400000 нг/мл указанного белка или менее и/или снижает концентрацию HCDNA в растворе, содержащем представляющий интерес белок, до 1500000 пг/мл указанного белка или менее.
23. Способ по п. 1 или 2, дополнительно заключающийся в том, что осуществляют процесс хроматографии на колонке после осуществления указанной двухстадийной TFF.
24. Способ по п. 23, в котором указанный процесс хроматографии на колонке представляет собой не основанный на аффинности процесс хроматографии на колонке.
25. Способ по п. 24, в котором указанный процесс хроматографии на колонке представляет собой операцию с использованием устройства для анионообменной хроматографии (АЕХ) или операцию с использованием устройства для катионообменной хроматографии (СЕХ).