СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
METHODS FOR TREATMENT OF NEURODEGENERATIVE DISEASES

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 62/477535, поданной 28 марта 2017 г.; предварительной заявке на патент США № 62/532696, поданной 14 июля 2017 г.; предварительной заявке на патент США № 62/577559, поданной 26 октября 2017 г.; и предварительной заявке на патент США № 62/580359, поданной 1 ноября 2017 г., каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки для любых целей.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Настоящее изобретение относится к способам лечения нейродегенеративных заболеваний антителами к тау.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Нейрофибриллярные клубки и нейропильные нити (NT) являются основными нейропатологическими признаками болезни Альцгеймера (БА). NT состоят из связанного с микротрубочками тау-белка, который подвергся посттрансляционным модификациям, включая фосфорилирование, и возникают в результате агрегации конформеров гиперфосфорилированного тау. Эта патология является общей для БА и многих нейродегенеративных таупатий, в частности некоторых типов лобно-височной деменции (FTD). Тау-белок, по-видимому, является ключевым фактором когнитивного спада при БА и родственных нейродегенеративных таупатиях.
[0004] Терапевтические подходы, которые нацелены на тау-белок, являются немногочисленными и включают в основном ингибиторы киназ, которые, как полагают, увеличивают фосфорилирование тау до патологических уровней, и соединения, которые блокируют цитоплазматическую агрегацию гиперфосфорилированного тау-белка. Эти подходы имеют различные недостатки в отношении специфичности и эффективности. Существует потребность в дополнительных терапевтических агентах, нацеленных на патологические конформеры белка, которые, как известно или как предполагают, вызывают нейродегенеративные нарушения.
[0005] Дополнительной проблемой при поиске подходящих терапевтических агентов является потребность в терапевтическом агенте, который может получить доступ к нейрофибриллярным клубкам и другим нейропатологическим формам тау, которые расположены в головном мозге. Если терапевтический агент представляет собой белок, только очень небольшая доля терапевтического агента, вводимого периферически, способна преодолеть гематоэнцефалический барьер и достичь предполагаемого места расположения патологических конформеров белка, для нацеливания на которые предназначен агент. Таким образом, существует потребность в схемах лечения, способных доставлять терапевтически эффективные количества агента без какого-либо вредного воздействия.
[0006] Одной из особых проблем, которая возникает в отношении способов лечения БА, является появление нарушений обработки визуальной информации, которые, как полагают, указывают на церебральный вазогенный отек и микрокровотечение. Об этих нарушениях сообщалось в связи с применением в исследовательских целях иммунотерапии, нацеленной на бета-амилоидный пептид, возможно, в результате взаимодействия с бета-амилоидным пептидом, депонированным в кровеносных сосудах или вокруг них, и стимуляции иммунного ответа. Обнаружено, что эти нарушения зависят от дозы и чаще возникают при введении более высокой дозы антитела. См., например, Sevigny et al., 2016, Nature. 537:50-6. Сообщалось, что симптомы, если они присутствуют в связи с такими нарушениями обработки визуальной информации, включают головную боль, ухудшение когнитивной функции, изменение сознания, судороги, неустойчивость и рвоту (Salloway et al. 2009, Neurology 73:2061-70; Sperling et al. 2011, Alzheimers Dement 7:367-85). Тау-патология появляется главным образом внутриклеточно в цитоплазме пораженных нейронов (Braak et al. 2006), и растворимый внеклеточный тау обнаруживается в спинномозговой жидкости (Blennow and Zetterberg 2009). В отличие от Aβ, отсутствуют сведения о том, что тау откладывается в сосудистых структурах, однако неизвестно, может ли нацеливание на тау в мозге человека вызывать типы дозозависимых побочных эффектов, наблюдаемые при той или иной иммунотерапии, направленной против бета-амилоида, в частности, при введении высоких доз иммунотерапевтического средства против тау.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
[0007] Согласно настоящему изобретению предложены способы лечения нейродегенеративных заболеваний антителами к тау. Как описано в настоящем документе, авторы настоящего изобретения обнаружили, что иммунотерапия антителами, связывающими тау, является безопасной и переносимой даже при введении в высоких дозах как здоровым добровольцам, так и пациентам, страдающим БА.
[0008] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения способ лечения нейродегенеративного заболевания включает введение выделенного антитела, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело связывается с мономерным тау, олигомерным тау, нефосфорилированным тау и фосфорилированным тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывает эпитоп в пределах аминокислот со 2 по 24 зрелого человеческого тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой моноклональное антитело. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное антитело. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой фрагмент антитела, который связывает человеческий тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения человеческий тау содержит последовательность SEQ ID NO: 2.
[0009] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит гипервариабельный участок тяжелой цепи HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; гипервариабельный участок легкой цепи -HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25.
[00010] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; и HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25.
[00011] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
[00012] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело hMTAU, описанное в настоящем документе, содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
[00013] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28. Выделенные антитела, описанные в настоящем документе, можно применять в способах лечения заболеваний, связанных с тау-белком. Выделенные антитела, описанные в настоящем документе, можно применять в способах замедления потери памяти или сохранения или увеличения объема памяти, функции памяти или когнитивной функции у индивидуума. Выделенные антитела, описанные в настоящем документе, можно применять в способах снижения уровня тау-белка.
[00014] Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может представлять собой антитело IgG1 или IgG4. Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может представлять собой антитело IgG4. Согласно некоторым таким вариантам реализации антитело содержит мутации M252Y, S254T и T256E. Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может содержать мутацию S228P. Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может содержать мутации S228P, M252Y, S254T и T256E. Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может представлять собой антитело IgG4, содержащее мутации S228P, M252Y, S254T и T256E. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой фрагмент антитела. Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, антитело может представлять собой антитело IgG4, содержащее мутации S228P, M252Y, S254T и T256E и не содержащее С-концевой лизин константной области тяжелой цепи. С-концевой лизин константной области тяжелой цепи может быть удален, например, во время очистки антитела или с помощью рекомбинантного конструирования нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело, так, что С-концевой лизин не кодируется.
D
[00015] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено выделенное антитело, которое связывается с человеческим тау, причем указанное антитело связывает каждый из мономерного тау, фосфорилированного тау, нефосфорилированного тау и олигомерного тау с K менее 100 нМ, менее 75 нМ или менее 50 нМ. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывается с тау яванской макаки (SEQ ID NO: 4).
[00016] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, связанного с тау-белком, включающий введение индивидууму, имеющему связанное с тау-белком заболевание, антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения заболевание, связанное с тау-белком, представляет собой таупатию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия выбрана из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейцфельдта-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с тельцами включений, церебральной амилоидной ангиопатии, вызванной прионными белками, травматического повреждения мозга, бокового амиотрофического склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (болезнь Гуам), негуамской болезни двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменции с аргирофильными гранулами, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезни Халлевордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитного паркинсонизма и миотонической дистрофии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера (БА) или прогрессирующий надъядерный паралич. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения БА является ранней, продромальной, от продромальной до легкой, от легкой до умеренной или умеренной.
[00017] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лечение заболевания, связанного с тау-белком, включает замедление потери памяти или сохранение или увеличение объема памяти, функции памяти или когнитивной функции у индивидуума.
[00018] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ замедления потери памяти либо сохранения или увеличения объема памяти, функции памяти или когнитивной функции у индивидуума, включающий введение антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе.
[00019] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения объем памяти, функцию памяти, когнитивную функцию или потерю памяти оценивают с использованием одного или более из шкалы оценки клинических проявлений деменции по сумме ячеек (CDR-SB), батареи многократных тестов для определения нейропсихологического статуса (RBANS) и шкалы оценки болезни Альцгеймера с дополнительной когнитивной шкалой (ADAS-Cog). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения ADAS-Cog представляет собой ADAS-Cog 13.
[00020] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения уменьшение оценки CDR-SB или увеличение оценки RBANS, или уменьшение оценки ADAS-Cog после введения одной или более доз антитела указывает на увеличение объема когнитивной памяти у индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка CDR-SB, оценка RBANS или оценка ADAS-Cog после введения одной или более доз антитела указывает на сохраненные объем памяти, функцию памяти, когнитивную функцию или замедленную потерю памяти у индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения замедление скорости повышения оценки CDR-SB или оценки ADAS-Cog или замедление скорости уменьшения оценки RBANS указывает на сохраненные объем памяти, функцию памяти, когнитивную функцию или замедленную потерю памяти у индивидуума.
[00021] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения оценку CDR-SB, оценку RBANS или оценку ADS-Cog сравнивают с соответствующей оценкой в начальных условиях. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения начальные условия предшествуют введению антитела. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения объем памяти, функцию памяти, когнитивную функцию или потерю памяти оценивают через по меньшей мере 13 недель, по меньшей мере 24 недели, по меньшей мере 25 недель, по меньшей мере 37 недель, по меньшей мере 49 недель, по меньшей мере 61 неделю, по меньшей мере 69 недель, по меньшей мере 73 недели, по меньшей мере 85 недель, по меньшей мере 97 недель, по меньшей мере 109 недель, по меньшей мере 121 неделю, по меньшей мере 133 недели, по меньшей мере 145 недель, по меньшей мере 157 недель или по меньшей мере 169 недель после начала лечения антителом.
[00022] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ снижения уровня тау-белка, нефосфорилированного тау-белка, фосфорилированного тау-белка или гиперфосфорилированного тау-белка у индивидуума, включающий введение антитела, описанного в настоящем документе, или фармацевтической композиции, содержащей антитело, описанное в настоящем документе.
[00023] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения выделенное антитело, описанное в настоящем документе, предназначено для применения в качестве лекарственного средства. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения выделенное антитело, описанное в настоящем документе, предназначено для применения при лечении таупатии у индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия выбрана из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейцфельдта-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с тельцами включений, церебральной амилоидной ангиопатии, вызванной прионными белками, травматического повреждения мозга, бокового амиотрофического склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (болезни Гуам), негуамской болезни двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменции с аргирофильными гранулами, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезни Халлевордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитного паркинсонизма и миотонической дистрофии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера (БА) или прогрессирующий надъядерный паралич. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения БА является ранней, продромальной, от продромальной до легкой, от легкой до умеренной или умеренной.
[00024] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения выделенное антитело, описанное в настоящем документе, обеспечено для применения при замедлении потери памяти либо сохранении или увеличении объема памяти, функции памяти или когнитивной функции у индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения выделенное антитело, описанное в настоящем документе, обеспечено для применения при снижении уровня тау-белка, фосфорилированного тау-белка, нефосфорилированного тау-белка или гиперфосфорилированного тау-белка у индивидуума.
[00025] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено применение антитела, описанного в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного с тау-белком, у индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения заболевание, связанное с тау-белком, представляет собой таупатию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой нейродегенеративную таупатию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия выбрана из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Крейцфельдта-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с тельцами включений, церебральной амилоидной ангиопатии, вызванной прионными белками, травматического повреждения мозга, бокового амиотрофического склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (болезни Гуам), негуамской болезни двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменции с аргирофильными гранулами, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезни Халлевордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа C, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитного паркинсонизма и миотонической дистрофии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера или прогрессирующий надъядерный паралич. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения БА является ранней, продромальной, от продромальной до легкой, от легкой до умеренной или умеренной.
[00026] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено применение антитела, описанного в настоящем документе, для изготовления лекарственного средства для замедления потери памяти или сохранения, или увеличения объема памяти, функции памяти или когнитивной функции у индивидуума.
[00027] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ детектирования нейрофибриллярных клубков, нейропильных нитей или дистрофического неврита, включающий приведение образца в контакт с антителом, описанным в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения образец представляет собой образец мозга, образец спинномозговой жидкости или образец крови.
[00028] Согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, способ или применение могут включать введение антитела, описанного в настоящем документе, в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим средством. Неограничивающие примеры видов дополнительных терапевтических средств включают нейрологические препараты, кортикостероиды, антибиотики, противовирусные агенты и другие терапевтические агенты. Такие другие терапевтические агенты включают, но не ограничиваются ими, другие антитела к тау, антитела против бета-амилоида, антитела против бета-секретазы («BACE»), такие как антитела против бета-секретазы 1 («BACE1») или антитела против бета-секретазы 2 («BACE 2»), и ингибиторы бета-секретазы, такие как ингибиторы бета-секретазы 1 или ингибиторы бета-секретазы 2.
[00029] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе 225 мг, 675 мг, 1200 мг, 1500 мг, 2100 мг, 4200 мг, 4500 мг, 8100 мг, 8400 мг или 16800 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 225 мг до 1000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 225 мг до 600 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 600 мг до 1000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 1000 мг до 2000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 2000 мг до 3000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 3000 мг до 4000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 4000 мг до 16800 мг. В некоторых случаях антитело можно вводить в дозе от 4000 мг до 8500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 4000 мг до 4500 мг, от 4000 мг до 5000 мг, от 4500 мг до 5000 мг, от 5000 мг до 5500 мг, от 5500 мг до 6000 мг, от 6000 мг до 6500 мг, от 6500 мг до 7000 мг, от 7000 мг до 7500 мг, от 7500 мг до 8000 мг или от 8000 мг до 8500 мг.
[00030] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 2,5 мг/кг до 5 мг/кг, от 5 мг/кг до 10 мг/кг, от 10 мг/кг до 15 мг/кг, от 15 мг/кг до 20 мг/кг, от 20 мг/кг до 30 мг/кг, от 30 мг/кг до 40 мг/кг, от 40 мг/кг до 50 мг/кг, от 50 мг/кг до 60 мг/кг, от 50 мг/кг до 240 мг/кг. В некоторых случаях антитело вводят в дозе от 60 мг/кг до 120 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело вводят в дозе от 60 мг/кг до 70 мг/кг, от 70 мг/кг до 80 мг/кг, от 80 мг/кг до 90 мг/кг, от 90 мг/кг до 100 мг/кг, от 100 мг/кг до 110 мг/кг или от 110 мг/кг до 120 мг/кг.
[00031] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения способы и варианты применения, описанные в настоящем документе, включают введение антитела один раз каждые 2, 4, 5, 6, 7 или 8 недель. В некоторых случаях антитело вводят дважды каждые 2, 4, 5, 6, 7 или 8 недель.
[00032] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения способы и варианты применения, описанные в настоящем документе, включают подкожное введение антитела. В некоторых случаях способы и варианты применения включают внутривенное введение антитела.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[00033] На ФИГ. 1 показан общий дизайн исследования, включая этап повышения однократной дозы и этап введения многократных доз клинического исследования в примере 1. Сокращения, используемые в фигуре, приведены далее: ОДНЯ, ограничивающее дозу нежелательное явление; ЗД, здоровые добровольцы; БА, болезнь Альцгеймера; в/в, внутривенно; п/к, подкожно; СМЖ, спинномозговая жидкость.
[00034] На ФИГ. 2 показаны профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации hMTAU от времени в сыворотке крови после в/в или п/к введения.
[00035] На ФИГ. 3 показаны профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации hMTAU от времени в СМЖ после в/в введения однократной дозы 2100 мг и 8400 мг.
[00036] На ФИГ. 4 показаны профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации hMTAU от времени в сыворотке крови после в/в или п/к введения однократной дозы или многократных доз.
[00037] На ФИГ. 5 показаны профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации hMTAU от времени в СМЖ после в/в введения однократной дозы 2100 мг и 8400 мг или в/в введения многократных доз 8400 мг.
[00038] На ФИГ. 6 показаны профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации hMTAU от времени в сыворотке крови (левая ось) и профили зависимости среднего значения (±стандартное отклонение) концентрации тау от времени в плазме крови (правая ось) после в/в введения четырех еженедельных доз hMTAU 8400 мг. Показаны профили зависимости концентрации от времени для ФК (фармакокинетики) и ФД (фармакодинамики). БА=пациенты с болезнью Альцгеймера; ЗД=здоровые добровольцы.
[00039] На ФИГ. 7 показана схема клинического исследования hMTAU у пациентов с продромальной стадией или легкой степенью тяжести болезни Альцгеймера.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[00040] «Человеческий акцепторный каркас» для целей настоящего документа представляет собой каркас, содержащий аминокислотную последовательность каркаса вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркаса вариабельного домена тяжелой цепи (VH), который происходит из каркаса человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркаса, как определено ниже. Человеческий акцепторный каркас, «происходящий из» каркаса человеческого иммуноглобулина или человеческого консенсусного каркаса, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать изменения в аминокислотной последовательности. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения число замен аминокислот составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее или 2 или менее. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения последовательность акцепторного каркаса человеческой VL идентична последовательности каркаса VL человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной последовательности.
D
[00041] «Аффинность» относится к силе всех нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антитела) и ее партнером по связыванию (например, антигеном). Если не указано иное, в настоящем документе «аффинность связывания» относится к внутренней аффинности связывания, которая отражает взаимодействие в соотношении 1:1 между членами пары связывания (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X в отношении ее партнера Y обычно может быть представлена константой диссоциации (K). Аффинность может быть измерена с помощью общепринятых способов, известных в данной области техники, включая те, которые описаны в настоящем документе. Конкретные иллюстративные и примерные варианты реализации для измерения аффинности связывания описаны ниже.
[00042] «Антитело с созревшей аффинностью» относится к антителу с одним или более изменениями в одном или более гипервариабельных участках (HVR) по сравнению с исходным антителом, которое не содержит такие изменения, при этом такие изменения приводят к улучшению аффинности антитела в отношении антигена.
D
-8
-8
-13
-9
-13
[00043] Термины «антитело к тау» (анти-тау антитело) и «антитело, которое связывается с тау» относятся к антителу, которое способно связывать тау с достаточной аффинностью, так, что антитело можно применять в качестве диагностического и/или терапевтического агента при нацеливании на тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения степень связывания антитела к тау с неродственным белком, отличным от тау, составляет менее приблизительно 10% от связывания антитела с тау, измеренного, например, с помощью радиоиммуноанализа (RIA). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело, которое связывается с тау, имеет константу диссоциации (K) ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10 М или менее, например, от 10М до 10 М, например, от 10М до 10 М). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау связывается с эпитопом тау, который является консервативным в тау из разных видов. В настоящем документе термины «антитело к тау» и «антитело, которое связывается с тау» относятся к антителу, которое связывает мономерный тау, олигомерный тау и/или фосфорилированный тау, если специально не указано иное. Согласно некоторым таким вариантам реализации антитело к тау связывается с мономерным тау, олигомерным тау, нефосфорилированным тау и фосфорилированным тау с сопоставимыми значениями аффинности, такими как значения аффинности, которые отличаются не более чем в 50 раз друг от друга. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело, которое связывает мономерный тау, олигомерный тау, нефосфорилированный тау и фосфорилированный тау, называется «пан-антителом к тау».
[00044] В настоящем документе термин «антитело» используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, что они демонстрируют желательную специфичность связывания антигена.
2
[00045] «Фрагмент антитела» относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваются ими, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab'); диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител (например, scFv); и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
[00046] «Антитело, которое связывается с тем же эпитопом», как и эталонное антитело (антитело сравнения), относится к антителу, которое блокирует связывание эталонного антитела с его антигеном на 50% или более в конкурентном количественном исследовании, и наоборот, эталонное антитело блокирует связывание антитела с его антигеном на 50% и более в конкурентном количественном исследовании. Примерное конкурентное количественное исследование представлено в настоящем документе.
[00047] Термин «химерное» антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи происходит из определенного источника или вида, тогда как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи происходит из другого источника или вида.
1
2
3
4
1
2
[00048] «Класс» антитела относится к типу константного домена или константной области, которую содержит его тяжелая цепь. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть далее разделены на подклассы (изотипы), например, IgG, IgG, IgG, IgG, IgA и IgA. Константные домены тяжелых цепей, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно.
211
131
125
90
186
188
153
212
32
212
[00049] В настоящем документе термин «цитотоксический агент» относится к веществу, которое ингибирует или предотвращает клеточную функцию и/или вызывает гибель или разрушение клетки. Цитотоксические агенты включают, но не ограничиваются ими, радиоактивные изотопы (например, At, I, I, Y, Re, Re, Sm, Bi, P, Pb и радиоактивные изотопы Lu); химиотерапевтические агенты или лекарственные препараты (например, метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие агенты); ингибирующие рост агенты; ферменты и их фрагменты, такие как нуклеолитические ферменты; антибиотики; токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, включая их фрагменты и/или варианты; и различные противоопухолевые или противораковые агенты, описанные ниже.
[00050] «Эффекторные функции» относятся к тем видам биологической активности, характерным для области Fc антитела, которые изменяются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают: связывание C1q и комплементзависимую цитотоксичность (КЗЦ); связывание с рецептором Fc; антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ); фагоцитоз; подавление рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора); и активацию В-клеток.
[00051] «Эффективное количество» агента, например, фармацевтического состава, относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желательного терапевтического или профилактического результата.
, Sequences of Proteins of Immunological Interest
th
[00052] В настоящем документе термин «область Fc» используется для определения С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Термин включает области Fc с нативной последовательностью и варианты областей Fc. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения область Fc тяжелой цепи человеческого IgG распространяется от Cys226 или от Pro230 до карбоксильного конца тяжелой цепи. Однако C-концевой лизин (Lys447) области Fc может присутствовать или может не присутствовать. Если не указано иное, нумерация аминокислотных остатков в области Fc или константной области соответствует системе нумерации ЕС, также называемой индексом ЕС, как описано в Kabat et al., 5 Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
[00053] «Каркас» или «FR» относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельного участка (HVR). FR вариабельного домена обычно состоит из четырех доменов FR: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности HVR и FR обычно встречаются в VH (или VL) в следующем порядке: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
[00054] В настоящем документе термины «полноразмерное антитело», «интактное антитело» и «целое антитело» используются взаимозаменяемо для обозначения антитела, имеющего структуру, по существу сходную со структурой нативного антитела, или имеющего тяжелые цепи, которые содержат область Fc, определенную в настоящем документе.
[00055] Термины «клетка-хозяин», «линия клеток-хозяев» и «культура клеток-хозяев» используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают «трансформанты» и «трансформированные клетки», которые включают первичную трансформированную клетку и ее потомство, независимо от количества пассажей. Потомство может быть не полностью идентичным по содержанию нуклеиновой кислоты с родительской клеткой и может содержать мутации. Термин включает мутантное потомство, которое имеет ту же функцию или биологическую активность, которую выявили с помощью скрининга или отобрали в исходной трансформированной клетке.
[00056] «Человеческое антитело» представляет собой антитело, которое содержит аминокислотную последовательность, которая соответствует последовательности антитела, вырабатываемого человеком или клеткой человека или происходящего из источника, отличного от человека, который использует репертуар человеческих антител или другие последовательности, кодирующие человеческие антитела. Это определение человеческого антитела конкретно исключает гуманизированное антитело, содержащее антигенсвязывающие остатки из вида, отличного от человека.
Kuby Immunology
J. Immunol.
Nature
th
[00057] Термин «вариабельная область» или «вариабельный домен» относится к домену тяжелой или легкой цепей антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL, соответственно) нативного антитела обычно имеют сходные структуры, причем каждый домен содержит четыре консервативных каркасных участка (FR) и три гипервариабельных участка (HVR). (См., например, Kindt et al. , 6 Ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)). Одного домена VH или VL может быть достаточно для придания антигенсвязывающей специфичности. Кроме того, антитела, которые связывают конкретный антиген, могут быть выделены с использованием домена VH или VL из антитела, которое связывает антиген, для скрининга библиотеки комплементарных доменов VL или VH, соответственно. См., например, Portolano et al.,  150:880-887 (1993); Clarkson et al.,  352:624-628 (1991).
Sequences of Proteins of Immunological Interest
[00058] «Человеческий консенсусный каркас» это каркас, который представляет наиболее часто встречающиеся остатки аминокислот в группе каркасных последовательностей VL или VH человеческого иммуноглобулина. Как правило, группа последовательностей VL или VH человеческого иммуноглобулина получена из подгруппы последовательностей вариабельных доменов. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу как в Kabat et al., , Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения для VL подгруппа представляет собой подгруппу каппа I, как в Kabat et al., выше. В некоторых вариантах для VH подгруппа представляет собой подгруппу III, как в Kabat et al., выше.
[00059] «Гуманизированное» антитело относится к химерному антителу, содержащему остатки аминокислот из HVR из вида, отличного от человека, и остатки аминокислот человеческого FR. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все HVR (например, CDR) соответствуют таковым антитела из вида, отличного от человека, и все или по существу все FR соответствуют таковым человеческого антитела. Гуманизированное антитело необязательно может содержать по меньшей мере часть константной области антитела, происходящей из человеческого антитела. «Гуманизированная форма» антитела, например, антитела из вида, отличного от человека, относится к антителу, которое подверглось гуманизации.
[00060] В настоящем документе термин «гипервариабельный участок» или «HVR» относится к каждой из областей вариабельного домена антитела, последовательности которых являются гипервариабельными («области, определяющие комплементарность» или «CDR») и/или образуют структурно определенные петли («гипервариабельные петли») и/или содержат антигенсвязывающие остатки («антигенные контакты»). Обычно антитела содержат шесть HVR: три в VH (H1, H2, H3) и три в VL (L1, L2, L3). Типичные HVR в настоящем документе включают:
J. Mol. Biol.
(a) гипервариабельные петли, присутствующие в остатках аминокислот 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) и 96-101 (H3) (Chothia and Lesk,  196:901-917 (1987));
, Sequences of Proteins of Immunological Interest
th
(b) CDR, присутствующие в остатках аминокислот 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2) и 95-102 (H3) (Kabat et al., 5 Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
J. Mol. Biol.
(c) антигенные контакты, присутствующие в остатках аминокислот 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2) и 93-101 (H3) (MacCallum et al. 262: 732-745 (1996)); и
(d) комбинации (a), (b) и/или (c), включая остатки аминокислот HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) и 94-102 (H3).
[00061] Если не указано иное, остатки HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки FR) пронумерованы в настоящем документе в соответствии с Kabat et al., выше.
[00062] «Иммуноконъюгат» представляет собой антитело, конъюгированное с одной или более гетерологичными молекулами, включая, но не ограничиваясь им, цитотоксический агент.
[00063] «Индивидуум», «субъект» или «пациент» представляет собой млекопитающее. Млекопитающие включают, но не ограничиваются ими, одомашненных животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, человека и приматов, отличных от человека, таких как обезьяны), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс). Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения индивидуум или субъект представляет собой человека.
J. Chromatogr. B
[00064] «Выделенное» антитело представляет собой антитело, которое было отделено от компонента его естественного окружения. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело очищено до степени чистоты более 95% или 99%, согласно результатам определения, например, с помощью электрофоретических (например, электрофореза в ДСН-ПААГ, изоэлектрического фокусирования (IEF), капиллярного электрофореза) или хроматографических (например, ионообменной хроматографии или ВЭЖХ с обращенной фазой) способов. Для обзора способов оценки чистоты антител см., например, Flatman et al.,  848:79-87 (2007).
[00065] «Выделенная» нуклеиновая кислота относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая была отделена от компонента ее естественного окружения. Выделенная нуклеиновая кислота включает молекулу нуклеиновой кислоты, содержащуюся в клетках, которые обычно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, но молекула нуклеиновой кислоты присутствует внехромосомно или в хромосомном местоположении, которое отличается от ее природного хромосомного местоположения.
[00066] «Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к тау» относится к одной или более молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим тяжелую и легкую цепи антитела (или их фрагменты), включая такую молекулу(ы) нуклеиновой(ых) кислоты (кислот) в одном векторе или отдельных векторах, и такую молекулу(ы) нуклеиновой(ых) кислоты (кислот), присутствующую(ие) в одном или более местоположениях в клетке-хозяине.
[00067] В настоящем документе термин «моноклональное антитело» относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантов антител, например, содержащих природные мутации или мутации, возникающие во время получения препарата моноклонального антитела, такие варианты обычно присутствуют в небольших количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело препарата моноклональных антител направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, обстоятельство «моноклональный» указывает на характер антитела, как полученного из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с помощью различных методик, включая, но не ограничиваясь ими, способ гибридомы, способы рекомбинантной ДНК, способы фагового дисплея и способы с использованием трансгенных животных, содержащих все или часть локусов человеческого иммуноглобулина, такие способы и другие типичные способы получения моноклональных антител описаны в настоящем документе.
[00068] «Оголенное антитело» относится к антителу, которое не конъюгировано с гетерологичным фрагментом (например, цитотоксическим фрагментом) или радиоактивной меткой. Оголенное антитело может присутствовать в фармацевтическом составе.
[00069] «Нативные антитела» относятся к природным молекулам иммуноглобулинов с различной структурой. Например, нативные антитела IgG представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины массой примерно 150000 дальтон, состоящие из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, которые связаны дисульфидной связью. В направлении от N-конца к C-концу каждая тяжелая цепь имеет вариабельную область (VH), также называемую вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, за которой следуют три константных домена (CH1, CH2 и CH3). Аналогичным образом, в направлении от N-конца к C-концу каждая легкая цепь имеет вариабельную область (VL), также называемую вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, за которой следует константный легкий домен (CL). Легкая цепь антитела может быть отнесена к одному из двух типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ), на основании аминокислотной последовательности своего константного домена.
[00070] Термин «вкладыш в упаковку» используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях относительно использования таких терапевтических продуктов.
[00071] «Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» относительно эталонной полипептидной последовательности определяется как процент остатков аминокислот в последовательности-кандидате, которые идентичны остаткам аминокислот в эталонной полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения пропусков, если необходимо, для достижения максимального процента идентичности последовательностей и не рассматривая какие-либо консервативные замены как часть идентичности последовательностей. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые известны в данной области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить подходящие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Однако для целей настоящего описания значения процента (%) идентичности аминокислотных последовательностей получают с использованием компьютерной программы сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 была создана Genentech, Inc., и исходный код был подан вместе с пользовательской документацией в Бюро регистрации авторских прав США, Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где он зарегистрирован под регистрационным номером авторского права США TXU510087. Программа ALIGN-2 общедоступна от Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния или может быть скомпилирована из исходного кода. Программа ALIGN-2 должна быть скомпилирована для использования в операционной системе UNIX, включая Digital UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей устанавливаются программой ALIGN-2 и не изменяются.
[00072] В тех ситуациях, когда для сравнений аминокислотных последовательностей применяют ALIGN-2, процент (%) идентичности конкретной аминокислотной последовательности A конкретной аминокислотной последовательности B, с ней или в сравнении с ней (что в другом варианте может быть сформулировано как конкретная аминокислотная последовательность A, которая имеет или обладает определенным % идентичности аминокислотной последовательности конкретной аминокислотной последовательности B, с ней или в сравнении с ней), рассчитывается следующим образом:
Доля X/Y×100,
в которой X представляет собой количество остатков аминокислот, оцененных как идентичные совпадения программой выравнивания последовательностей ALIGN-2, при выравнивании этой программой A и B, и в которой Y представляет собой общее количество остатков аминокислот в B. Следует понимать, что в случае если длина аминокислотной последовательности A не равна длине аминокислотной последовательности B, % идентичности аминокислотной последовательности A с B не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности B с A. Если специально не указано иное, все процентные значения (%) идентичности аминокислотных последовательностей, применяемые в настоящем документе, получают, как описано в непосредственно предшествующем абзаце, с использованием компьютерной программы ALIGN-2.
[00073] Термин «фармацевтический состав» относится к препарату, который находится в форме, обеспечивающей реализацию биологической активности содержащегося в нем активного ингредиента, и который не содержит дополнительные компоненты, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет введен состав.
[00074] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к ингредиенту в фармацевтическом составе, отличному от активного ингредиента, который нетоксичен для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает, но не ограничивается ими, буфер, вспомогательное вещество, стабилизатор или консервант.
[00075] В настоящем документе термин «тау» относится к любому нативному тау-белку из любого позвоночного животного, включая млекопитающих, таких как приматы (например, человек) и грызуны (например, мыши и крысы), если не указано иное. Термин охватывает «полноразмерный» непроцессированный тау, а также любую форму тау, возникающую в результате процессинга в клетке. Термин также охватывает природные варианты тау, например, сплайс-варианты или аллельные варианты.
[00076] В настоящем документе термин «pTau» относится к тау, в котором остаток серина, треонина или тирозина фосфорилируется протеинкиназой путем добавления ковалентно связанной фосфатной группы. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения pTau фосфорилирован по остатку серина или треонина. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения pTau фосфорилирован по серину в положении 409 и/или серину в положении 404. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения pTau фосфорилирован по серину в положении 409.
[00077] В настоящем документе термины «растворимый тау» или «растворимый тау-белок» относятся к белкам, состоящим как из полностью солюбилизированных мономеров белка/пептида тау, так и из тау-подобных пептидов/белков, или из модифицированных или усеченных пептидов/белков тау или из других производных мономеров пептидов/белков тау и олигомеров тау-белка. «Растворимый тау» исключает, в частности, нейрофибриллярные клубки (NFT).
in vitro
in vivo
[00078] В настоящем документе термин «нерастворимый тау» относится к множеству агрегированных мономеров пептидов или белков тау или тау-подобных пептидов/белков, или модифицированных или усеченных пептидов/белков тау, или других производных пептидов/белков тау, образующих олигомерные или полимерные структуры, которые нерастворимы как в условиях  в водной среде, так и в условиях  в организме млекопитающего или человека, более конкретно в мозге, и, в частности, к множеству агрегированных мономеров тау или модифицированных или усеченных пептидов/белков тау или их производных, которые нерастворимы в организме млекопитающего или человека, более конкретно в мозге, соответственно. «Нерастворимый тау», в частности, включает нейрофибриллярные клубки (NFT).
[00079] В настоящем документе термины «мономерный тау» или «мономер тау» относятся к полностью солюбилизированным тау-белкам без агрегированных комплексов в водной среде.
in vitro
in vivo
[00080] В настоящем документе термины «агрегированный тау», «олигомерный тау» и «олигомер тау» относятся к множеству агрегированных мономеров пептидов или белков тау, или тау-подобных пептидов/белков, или модифицированных или усеченных пептидов/белков тау, или других производных пептидов/белков тау, образующих олигомерные или полимерные структуры, которые нерастворимы или растворимы как в условиях  в водной среде, так и в условиях  в организме млекопитающего или человека, более конкретно в мозге, и, в частности, к множеству агрегированных мономеров тау или модифицированных или усеченных пептидов/белков тау или их производных, которые нерастворимы или растворимы в организме млекопитающего или человека, более конкретно в мозге, соответственно.
[00081] В настоящем документе термины «pTau PHF», «PHF» и «спаренные спиральные филаменты» используются как синонимы и относятся к парам филаментов, смотанных в спирали с периодичностью 160 нм, которые видимы при электронной микроскопии. Ширина варьируется от 10 до 22 нм. PHF являются преобладающими структурами в нейрофибриллярных клубках при болезни Альцгеймера (БА) и нейропильных нитях. PHF также могут наблюдаться при некоторых, но не при всех дистрофических невритах, связанных с нейритными бляшками. Основным компонентом PHF является гиперфосфорилированная форма тау-белка, связанного с микротрубочками. PHF может частично состоять из дисульфид-соединенных антипараллельных гиперфосфорилированных тау-белков. PHF тау может быть усечен по 20 его C-концевым остаткам аминокислот. Механизмы, лежащие в основе формирования PHF, не определены, но гиперфосфорилирование тау может отделить его от микротрубочек, увеличивая растворимый пул тау, из которого внутри нейронов могут образовываться PHF.
[00082] В настоящем документе термин «лечение» (и его грамматические варианты, такие как «лечить» или «лечащий») относится к клиническому вмешательству с целью изменения естественного течения заболевания индивидуума, которого лечат, и может проводиться как для профилактики, так и при течении клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают, но не ограничиваются ими, предотвращение возникновения или рецидива заболевания, ослабление симптомов, уменьшение любых непосредственных или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение образования метастазов, уменьшение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или облегчение патологического состояния и ремиссию или улучшение прогноза. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитела согласно настоящему изобретению применяют для задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевания.
2
[00083] «Фиксированная» или «постоянная» доза терапевтического агента относится к дозе, которую вводят пациенту-человеку без учета массы (WT) или площади поверхности тела (BSA) пациента. Соответственно, фиксированная или постоянная доза обеспечена не в виде дозы мг/кг или дозы мг/м, а как абсолютное количество терапевтического агента.
[00084] В настоящем документе термин «ранняя стадия болезни Альцгеймера» или «ранняя стадия БА» (например, «пациент, у которого диагностирована ранняя стадия БА» или «пациент, страдающий ранней БА»), включает пациентов с легкой степенью когнитивного нарушения, например, дефицит памяти, обусловленный БА, и пациентов, имеющих биомаркеры БА, например, пациентов с положительным результатом определения амилоида, пациентов с положительным результатом ПЭТ-сканирования флорбетапира или пациентов с положительным результатом ПЭТ-сканирования тау.
[00085] Термин «MMSE» относится к краткой шкале оценки психического статуса, которая дает оценку от 1 до 30. См. Folstein, et al., 1975, J. Psychiatr. Res. 12:189-98. Оценки от 26 и ниже обычно считаются показателем дефицита. Чем ниже числовая оценка по MMSE, тем больше дефицит или нарушение у исследуемого пациента по сравнению с другим индивидуумом с более низкой оценкой. Увеличение оценки MMSE может быть показателем улучшения состояния пациента, тогда как уменьшение оценки MMSE может указывать на ухудшение состояния пациента.
Arch Neurol
[00086] Термин «CDR-SB» относится к шкале оценки клинической деменции по сумме ячеек, которая дает оценку от 0 до 18. См., например. O'Bryant et al., 2008,  65: 1091-1095. Оценка CDR-SB основана на полуструктурированных интервью пациентов и осуществляющих уход лиц, заполняющих анкету, и дает пять степеней ухудшения результативности для каждой из шести категорий когнитивных функций: память, ориентация, суждение и решение проблем, общественная активность, дом и хобби и личная гигиена. Каждая категория оценивается от 0 до 3 (пять степеней включают 0, 0,5, 1, 2 и 3). Сумма оценок по шести категориям представляет собой оценку CDR-SB. Снижение оценки CDR-SB может быть показателем улучшения состояния пациента, тогда как увеличение оценки CDR-SB может быть показателем ухудшения состояния пациента. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка CDR-SB может быть показателем замедления, задержки или прекращения прогрессирования БА либо отсутствия появления новых клинических, функциональных или когнитивных симптомов или нарушений, либо общей стабилизации активности заболевания.
J Clin Exp Neuropsychol
[00087] Термин «RBANS» относится к батарее многократных тестов по оценке нейропсихологического состояния, которая состоит из двенадцати подтестов, которые объединены для получения пяти индексов, по одному для каждого из пяти протестированных доменов (краткосрочная память, зрительно-пространственное конструирование, язык, внимание и долгосрочная память). См., например, Randolph et al., 1998,  20: 310-319. Исчерпывающие нормативные значения приведены в руководствах по тестированию. Увеличение оценки RBANS может быть показателем улучшения состояния пациента, тогда как снижение оценки RBANS может быть показателем ухудшения состояния пациента. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка RBANS может быть показателем замедления, задержки или прекращения прогрессирования БА либо уменьшения клинического или когнитивного ухудшения.
Amer. J. Psych
Alzheimer's Disease Assoc. Disorders
[00088] Термин «ADAS-Cog 13» относится к версии шкалы оценки болезни Альцгеймера с дополнительной когнитивной шкалой, которая включает 13 пунктов. См., например, Rosen et al., 1984, . 141: 1356-1364; Mohs et al., 1997, , 11(2): S13-S21. ADAS-Cog 13 представляет собой когнитивную оценку, состоящую из нескольких частей, которая позволяет оценить несколько когнитивных доменов, включая память, тест на название, поиск слов, осознанное восприятие, праксис, внимание, ориентацию и спонтанную речь. ADAS-Cog 13 основывается на ADAS-Cog и дополнительно включает задержку воспроизведения слова и тест на вычеркивание номера. ADAS-Cog 13 дает оценки до 85 баллов. Снижение оценки ADAS-Cog 13 может быть показателем улучшения состояния пациента, тогда как увеличение оценки ADAS-Cog 13 может быть показателем ухудшения состояния пациента. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка ADAS-Cog 13 может быть показателем замедления, задержки или прекращения прогрессирования БА или уменьшения клинического или когнитивного ухудшения.
[00089] В настоящем документе термин «вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной размножать другую нуклеиновую кислоту, с которой она соединена. Термин включает вектор как самореплицирующуюся структуру нуклеиновой кислоты, а также вектор, встроенный в геном клетки-хозяина, в которую он был введен. Определенные векторы способны управлять экспрессией нуклеиновых кислот, с которыми они функционально соединены. Такие векторы называются в настоящем документе «векторы экспрессии».
II. КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ
[00090] Согласно настоящему изобретению предложены способы лечения таупатий антителами, связывающими тау. В частности, было обнаружено, что способы лечения таупатий антителами, связывающими тау, безопасны и переносимы даже при введении в высоких дозах. Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены способы лечения таупатий с применением антител, которые связывают тау, в дозах от 225 мг до 16800 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывает мономерный тау, олигомерный тау, нефосфорилированный тау и фосфорилированный тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывается с эпитопом в пределах аминокислот со 2 по 24 зрелого человеческого тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывается с эпитопом в пределах аминокислот тау со 2 по 24 и связывает мономерный тау, олигомерный тау, нефосфорилированный тау и фосфорилированный тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывается с эпитопом человеческого тау, имеющим последовательность AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO: 2) или состоящим из нее. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывается с эпитопом тау яванской макаки, имеющим последовательность AEPRQEFDVMEDHAGTYGLGDRK (SEQ ID NO: 4) или состоящим из нее.
A. Примерные антитела к тау
[00091] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит (a) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (b) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (c) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит по меньшей мере один, два или три HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (b) HVR-H2, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и (c) HVR-H3, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит (a) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20; (b) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; (c) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; (d) HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; (e) HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24; и (f) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25.
[00092] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит (a) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; (b) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и (c) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит по меньшей мере один, два или три HVR, выбранных из (a) HVR-H1, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; (b) HVR-H2, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и (c) HVR-H3, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит (a) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; (b) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; (c) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; (d) HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; (e) HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16; и (f) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17.
[00093] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау является гуманизированным. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау содержит HVR как в вышеупомянутом варианте реализации и дополнительно содержит человеческий акцепторный каркас, например, каркас человеческого иммуноглобулина или человеческий консенсусный каркас.
[00094] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 19, соответственно, включая посттрансляционные модификации этих последовательностей, если таковые имеются.
[00095] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит последовательности VH и VL, представленные в SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 11, соответственно, включая посттрансляционные модификации этих последовательностей, если таковые имеются.
2
[00096] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 или SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау, причем указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау, причем указанное антитело состоит из тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау, причем указанное антитело состоит из тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и легкой цепи, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27. Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения антитело к тау в соответствии с любым из указанных выше вариантов реализации представляет собой моноклональное антитело, включая химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В одном варианте реализации антитело к тау представляет собой фрагмент антитела, например, фрагмент Fv, Fab, Fab', scFv, диатело или F(ab'). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное антитело IgG1 или IgG4 или другой класс или изотип антитела, определенный в настоящем документе.
[00097] Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения антитело к тау в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов реализации может включать любые из признаков, по отдельности или в комбинации, описанных в разделах 1-5 ниже:
1. Аффинность антител
D
-8
-8
-13
-9
-13
[00098] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению имеет константу диссоциации (K) ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ, ≤0,1 нМ, ≤0,01 нМ или ≤0,001 нМ (например, 10 М или менее, например, от 10 М до 10 М, например, от 10 М до 10 М).
D
125

125

J. Mol. Biol.
Cancer Res.
[00099] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения K измеряют с помощью количественного исследования связывания антигена, содержащего радиоактивную метку (RIA). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения РИА проводят с вариантом Fab антитела, представляющего интерес, и его антигеном. Например, аффинность связывания Fab с антигеном в растворе измеряют путем уравновешивания Fab с минимальной концентрацией (I)-меченого антигена в присутствии ряда титрующих концентраций немеченого антигена с последующим захватом связанного антигена на планшете, покрытом антителом к Fab (см., например, Chen et al.,  293:865-881(1999)). Чтобы установить условия для количественного исследования, многолуночные планшеты MICROTITER (Thermo Scientific) покрывают в течение ночи 5 мкг/мл захватывающего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ карбонате натрия (рН=9,6) и затем блокируют 2% (масс./об.) бычьим сывороточным альбумином в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) в течение двух-пяти часов при комнатной температуре (приблизительно 23°C). В неабсорбирующем планшете (Nunc #269620) смешивают 100 пМ или 26 пМ [I]-антигена с последовательными разведениями представляющего интерес Fab (например, в соответствии с оценкой антитела к VEGF, Fab-12, в Presta et al.,  57:4593-4599 (1997)). Представляющий интерес Fab затем инкубируют в течение ночи; однако инкубацию можно продолжать в течение более длительного периода (например, около 65 часов), чтобы достичь равновесия. После этого смеси переносят в планшет для захвата для инкубации при комнатной температуре (например, в течение часа). Затем раствор удаляют и планшет промывают восемь раз 0,1% полисорбатом 20 (TWEEN-20) в ФСБ. После высыхания планшетов добавляют по 150 мкл/лунку сцинтиллятора (MICROSCINT-20™; Packard), и сигнал в планшетах подсчитывают на счетчике гамма-излучения TOPCOUNT™(Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, которые дают 20% или менее от максимального связывания, отбирают для использования в количественных исследованиях конкурентного связывания.
D
on
off
D
off
on

6
-1
-1
J. Mol. Biol.
[000100] Согласно другому варианту реализации K количественно измеряли с помощью поверхностного плазмонного резонанса BIACORE. Например, количественное исследование с использованием BIACORE-2000 или BIACORE-3000 (BIAcore, Inc., Пискатауэй, Нью-Джерси, США) проводили при 25°C с использованием чипов с иммобилизованным антигеном CM5 при ~10 резонансных единицах (RU). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения биосенсорные чипы из карбоксиметилированного декстрана (CM5, BIACORE, Inc.) активировали гидрохлоридом N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляли 10 мМ ацетатом натрия, рН=4,8, до 5 мкг/мл (~0,2 мкМ) перед впрыскиванием при скорости потока 5 мкл/минуту для достижения приблизительно 10 резонансных единиц (RU) связанного белка. После впрыскивания антигена вводили 1 М этаноламина, чтобы блокировать не вступившие в реакцию группы. Для измерений кинетики впрыскивали двукратные последовательные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) в ФСБ с 0,05% сурфактанта полисорбата 20 (TWEEN-20™) (PBST) при 25°C при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Значения скорости ассоциации (k) и скорости диссоциации (k) рассчитывали с использованием простой модели связывания Ленгмюра в соотношении 1:1 (оценочное программное обеспечение BIACORE, версия 3.2) путем одновременной аппроксимации сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (K) рассчитывали как отношение k/k. См., например, Chen et al.,  293:865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 10 Мс, согласно данным количественного исследования методом поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, то скорость ассоциации можно определить с помощью методики гашения флуоресценции, которая позволяет измерить увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение=295 нм; испускание=340 нм, полоса пропускания 16 нм) 20 нМ антитела к антигену (форма Fab) в ФСБ, pH=7,2 при 25°C, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеренных в спектрометре, таком как спектрофотометр, оборудованный для остановки потока (Aviv Instruments), или спектрофотометр SLM-AMINCO™, серии 8000 (ThermoSpectronic), оборудованный кюветой с мешалкой.
2. Фрагменты антител
2
2
Nat. Med.
The Pharmacology of Monoclonal Antibodies
in vivo
[000101] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антител включают, но не ограничиваются ими, фрагменты Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab'), Fv и scFv и другие фрагменты, описанные ниже. Для обзора некоторых фрагментов антител см. Hudson et al.  9:129-134 (2003). Для обзора фрагментов scFv, см., например, Pluckthün, в , vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); см. также WO 93/16185; патенты США №№ 5571894 и 5587458. Для обсуждения фрагментов Fab и F(ab'), содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и имеющих увеличенное время полужизни в условиях , см. патент США № 5869046.
Nat. Med.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Nat. Med.
[000102] Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими. См., например, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al.,  9:129-134 (2003); и Hollinger et al.,  90: 6444-6448 (1993). Тритела и тетратела также описаны в Hudson et al.,  9:129-134 (2003).
[000103] Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь вариабельный домен тяжелой цепи или его часть или весь вариабельный домен легкой цепи антитела или его часть. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (Domantis, Inc., Волтэм, Массачусетс, США; см., например, патент США № 6248516 B1).
E.coli
[000104] Фрагменты антител могут быть получены с помощью различных методик, включая, но не ограничиваясь ими, протеолитическое расщепление интактного антитела, а также выработку рекомбинантными клетками-хозяевами (например,  или фагом), как описано в настоящем документе.
3. Химерные и гуманизированные антитела
,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
[000105] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению представляет собой химерное антитело. Некоторые химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567; и Morrison et al., 81:6851-6855 (1984)). В одном примере химерное антитело содержит вариабельную область из вида, отличного от человека (например, вариабельную область, происходящую из мыши, крысы, хомяка, кролика или примата, отличного от человека, такого как обезьяна), и константную область человека. В дополнительном примере химерное антитело представляет собой антитело с «переключенным классом», в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с исходным антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
[000106] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, антитело из вида, отличного от человека, гуманизируют для снижения иммуногенности для человека, сохраняя при этом специфичность и аффинность исходного антитела из вида, отличного от человека. Обычно гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых HVR, например, CDR (или их части), происходят из антитела из вида, отличного от человека, и FR (или их части) происходят из последовательностей человеческих антител. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения некоторые остатки FR в гуманизированном антителе заменены соответствующими остатками из антитела из вида, отличного от человека (например, антитело, из которого происходят остатки HVR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.
Front. Biosci.
Nature
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA
et al
Methods
Mol. Immunol.
Methods
Methods
Br. J. Cancer
[000107] Гуманизированные антитела и способы их получения рассматриваются, например, в Almagro and Fransson,  13:1619-1633 (2008), и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., 332:323-329 (1988); Queen et al.,  86:10029-10033 (1989); патентах США №№ 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Kashmiri .,  36:25-34 (2005) (где описана прививка области, определяющей специфичность (SDR)); Padlan,  28:489-498 (1991) (где описано «изменение поверхности»); Dall'Acqua et al.,  36:43-60 (2005) (где описана «перестановка FR»); и Osbourn et al.,  36:61-68 (2005) и Klimka et al., , 83:252-260 (2000) (описание подхода «направляемого отбора» при перестановке FR).
J. Immunol.
[000108] Человеческие каркасные участки, которые можно применять для гуманизации, включают, но не ограничиваются ими: каркасные участки, выбранные с использованием метода «наилучшего соответствия» (см., например, Sims et al.  151:2296 (1993)); каркасные участки, происходящие из консенсусной последовательности человеческих антител из определенной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепей (см., например, Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); и Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)); зрелые человеческие каркасные участки (соматически мутированные) или каркасные участки человеческой зародышевой линии (см., например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасные участки, полученные в результате скрининга библиотек FR (см., например, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).
4. Полиспецифические антитела
[000109] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению представляет собой полиспецифическое антитело, например, биспецифическое антитело. Полиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые обладают видами специфичности связывания по меньшей мере для двух разных сайтов. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения один из видов специфичности связывания относится к тау, и другой вид относится к любому другому антигену. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один из видов специфичности связывания относится к тау, и другой вид относится к бета-амилоиду. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения биспецифические антитела могут связываться с двумя различными эпитопами тау. Биспецифические антитела также можно использовать для локализации цитотоксических агентов в клетках, которые экспрессируют тау. Биспецифические антитела могут быть получены в виде полноразмерных антител или фрагментов антител.
Nature
EMBO J.
, Science
J. Immunol.
,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
,
J. Immunol.
J. Immunol.
[000110] Методики получения полиспецифических антител включают, но не ограничиваются ими, рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелой цепи и легкой цепи иммуноглобулина, имеющих различную специфичность (см. Milstein and Cuello,  305: 537 (1983)), WO 93/08829, и Traunecker et al.,  10: 3655 (1991)), и конструирование «выступ-во-впадину» (см., например, патент США № 5731168). Полиспецифические антитела также могут быть получены путем конструирования с использованием эффекта электростатического взаимодействия для получения Fc-гетеродимерных молекул антител (WO 2009/089004A1); перекрестного сшивания двух или более антител или фрагментов (см., например, патент США № 4676980, и Brennan et al., 229: 81 (1985)); с использованием лейциновых застежек для получения биспецифических антител (см., например, Kostelnyet al., , 148(5):1547-1553 (1992)); с использованием технологии «диатела» для получения фрагментов биспецифических антител (см., например, Hollinger et al., 90:6444-6448 (1993)); и с использованием димеров одноцепочечных Fv (sFv) (см., например, Gruber et al.,152:5368 (1994)); и получение триспецифических антител, как описано, например, в Tutt et al.  147: 60 (1991).
[000111] Сконструированные антитела с тремя или более функциональными антигенсвязывающими сайтами, включая «антитела-осьминоги», также включены в объем настоящего изобретения (см., например, US 2006/0025576A1).
[000112] Антитело или фрагмент согласно настоящему изобретению также включает «FAb с двойной активностью» или «DAF», содержащие антигенсвязывающий сайт, который связывается с тау, а также с другим антигеном (см., например, US 2008/0069820).
5. Варианты антител
[000113] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения предусмотрены варианты аминокислотной последовательности антител согласно настоящему изобретению. Например, желательным может быть улучшение аффинности связывания и/или других биологических свойств антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела могут быть получены путем введения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или с помощью пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции из аминокислотных последовательностей антител и/или вставки в них, и/или замены остатков в них. Любая комбинация делеции, вставки и замены может быть сделана для получения готовой конструкции, при условии, что готовая конструкция обладает желательными характеристиками, например, связывание антигена.
a) Варианты c заменой, вставкой и делецией
[000114] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения предложены варианты антител, имеющие одну или более замен аминокислот. Сайты, представляющие интерес для заместительного мутагенеза, включают HVR и FR. Консервативные замены представлены в таблице 1 под заголовком «предпочтительные замены». Более существенные изменения представлены в таблице 1 под заголовком «примерные замены» и как дополнительно описано ниже со ссылкой на классы боковых цепей аминокислот. Замены аминокислот могут быть введены в представляющее интерес антитело, и продукты могут быть подвергнуты скринингу для выявления желательной активности, например, сохраненного/улучшенного связывания антигена, сниженной иммуногенности или улучшенной АЗКЦ или КЗЦ.
ТАБЛИЦА 1
<b>Исходный остаток</b>
<b>Примерные замены</b>
<b>Предпочтительные замены</b>
Ala (A)
Val; Leu; Ile
Val
Arg (R)
Lys; Gln; Asn
Lys
Asn (N)
Gln; His; Asp, Lys; Arg
Gln
Asp (D)
Glu; Asn
Glu
Cys (C)
Ser; Ala
Ser
Gln (Q)
Asn; Glu
Asn
Glu (E)
Asp; Gln
Asp
Gly (G)
Ala
Ala
His (H)
Asn; Gln; Lys; Arg
Arg
Ile (I)
Leu; Val; Met; Ala; Phe; норлейцин
Leu
Leu (L)
Норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe
Ile
Lys (K)
Arg; Gln; Asn
Arg
Met (M)
Leu; Phe; Ile
Leu
Phe (F)
Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
Tyr
Pro (P)
Ala
Ala
Ser (S)
Thr
Thr
Thr (T)
Val; Ser
Ser
Trp (W)
Tyr; Phe
Tyr
Tyr (Y)
Trp; Phe; Thr; Ser
Phe
Val (V)
Ile; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин
Leu
Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислые: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[000115] Неконсервативные замены повлекут за собой замену члена одного из этих классов другим классом.
[000116] Один тип варианта с заменой включает замену одного или более остатков гипервариабельного участка исходного антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Обычно полученный (ые) вариант (ы), отобранный (ые) для дальнейшего исследования, будет (будут) иметь модификации (например, улучшения) определенных биологических свойств (например, повышенную аффинность, сниженную иммуногенность) по сравнению с исходным антителом и/или будет (будут) по существу сохранять определенные биологические свойства исходного антитела. Примерным вариантом с заменой является антитело с созревшей аффинностью, которое может быть легко получено, например, с применением методик созревания аффинности на основе фагового дисплея, таких как те, которые описаны в настоящем документе. В общих чертах, один или более остатков HVR мутируют, и варианты антител экспонируют на фаге и подвергают скринингу для выявления определенной биологической активности (например, аффинности связывания).
Methods Mol. Biol.
Methods in Molecular Biology
[000117] В HVR могут быть сделаны изменения (например, замены), например, для улучшения аффинности антитела. Такие изменения могут быть сделаны в «горячих точках» HVR, т.е. в остатках, кодируемых кодонами, которые с высокой частотой подвергаются мутации во время процесса соматического созревания (см., например, Chowdhury,  207:179-196 (2008)), и/или в остатках, которые контактируют с антигеном, при этом испытывают аффинность связывания полученного варианта VH или VL. Созревание аффинности с помощью конструирования и повторного отбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom et al. в  178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001). Согласно некоторым вариантам реализации аффинного созревания, разнообразие вводят в вариабельные гены, выбранные для созревания, с помощью любого из множества способов (например, подверженной ошибкам ПЦР, перестановки цепей или олигонуклеотид-направленного мутагенеза). Затем создается вторичная библиотека. После этого библиотеку подвергают скринингу для выявления любых вариантов антител с желательной аффинностью. Другой способ введения разнообразия включает HVR-направленные подходы, в которых рандомизируют несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков за один раз). Остатки HVR, участвующие в связывании антигена, могут быть конкретно идентифицированы, например, с использованием аланинового сканирующего мутагенеза или моделирования. В частности, мишенями часто являются CDR-H3 и CDR-L3.
[000118] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения замены, вставки или делеции могут происходить в пределах одного или более HVR, при условии, что такие изменения по существу не снижают способность антитела связываться с антигеном. Например, в HVR могут быть сделаны консервативные изменения (например, консервативные замены, как предусмотрено в настоящем документе), которые по существу не снижают аффинность связывания. Такие изменения могут, например, быть вне контактирующих с антигеном остатков в HVR. В определенных вариантах реализации последовательностей VH и VL, представленных выше, каждый HVR либо остается неизменным, либо содержит не более одной, двух или трех замен аминокислот.
Science
[000119] Подходящий способ выявления остатков или областей антитела, которые могут быть мишенью мутагенеза, называется «аланиновый сканирующий мутагенез», описанный Cunningham and Wells (1989) , 244:1081-1085. В этом способе остаток или группу целевых остатков (например, заряженные остатки, такие как Arg, Asp, His, Lys и Glu) выявляют и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином), чтобы определить, оказало ли это влияние на взаимодействие антитела с антигеном. Дополнительные замены могут быть введены в положениях аминокислот, демонстрирующих функциональную чувствительность к начальным заменам. Альтернативно или дополнительно, для идентификации точек контакта между антителом и антигеном можно применять кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело. Такие контактирующие остатки и соседние остатки могут являться мишенями или могут быть удалены в качестве кандидатов на замену. Варианты могут быть подвергнуты скринингу, чтобы определить, имеют ли они желательные свойства.
[000120] Вставки в аминокислотной последовательности включают амино- и/или карбокси-концевые гибриды, длина которых варьируется от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки одного или более аминокислотных остатков внутри последовательности. Примеры концевых вставок включают антитело с N-концевым метионильным остатком. Другие инсерционные варианты молекулы антитела включают слияние N- или C-конца антитела с ферментом (например, для ADEPT) или полипептидом, который увеличивает период полужизни антитела в сыворотке крови.
b) Варианты гликозилирования
[000121] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению изменено для увеличения или уменьшения степени гликозилирования антитела. Добавление или удаление сайтов гликозилирования к антителу можно удобно осуществлять путем изменения аминокислотной последовательности так, чтобы создать или удалить один или более сайтов гликозилирования.
TIBTECH
[000122] Если антитело содержит область Fc, то прикрепленный к ней углевод может быть изменен. Нативные антитела, вырабатываемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный биантенарный олигосахарид, который обычно прикреплен посредством N-связи к Asn297 домена CH2 области Fc. См., например, Wright et al.  15:26-32 (1997). Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, прикрепленную к GlcNAc в «стволе» биантенарной олигосахаридной структуры. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения могут быть сделаны модификации олигосахарида в антителе согласно настоящему изобретению для создания вариантов антител с определенными улучшенными свойствами.
J. Mol. Biol.
Biotech. Bioeng.
Arch. Biochem. Biophys.
et al
Biotech. Bioeng.
, Biotechnol. Bioeng
[000123] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложены варианты антител, имеющие углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, прикрепленная (непосредственно или опосредовано) к области Fc. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяют путем расчета среднего количества фукозы в сахарной цепи в Asn297 по отношению к сумме всех гликоструктур, прикрепленных к Asn 297 (например, сложных, гибридных и высокоманнозных структур), согласно результатам измерения методом масс-спектрометрии MALDI-TOF, например, как описано в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному приблизительно в положении 297 в области Fc (остатки области Fc пронумерованы согласно системе ЕС); однако Asn297 также может быть расположен приблизительно на ±3 аминокислоты левее или правее положения 297, т.е. между положениями 294 и 300, из-за незначительных изменений последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут иметь улучшенную функцию АЗКЦ. См., например, публикации патентов США № US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Примеры публикаций, относящихся к «дефукозилированным» или «дефицитным по фукозе» вариантам антител, включают: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. 87: 614 (2004). Примеры клеточных линий, способных вырабатывать дефукозилированные антитела, включают клетки Lec13 CHO, дефицитные по фукозилированию белка (Ripka et al.249:533-545 (1986); заявка на патент США US 2003/0157108 A1, Presta, L; и WO 2004/056312 A1, Adams ., в частности, в примере 11), и линии клеток с выключенными генами, такими как ген альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8, клетки линии CHO с выключенными генами (см., например, Yamane-Ohnuki et al. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al.., 94(4):680-688 (2006); и WO2003/085107).
et al
[000124] Согласно настоящему изобретению дополнительно предложены варианты антител с раздвоенными олигосахаридами, например, в которых биантенарный олигосахарид, прикрепленный к области Fc антитела раздвоен GlcNAc. Такие варианты антител могут иметь уменьшенное фукозилирование и/или улучшенную функцию АЗКЦ. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); патенте США № 6602684 (Umana et al.); и US 2005/0123546 (Umana .). Согласно настоящему изобретению также предложены варианты антител с по меньшей мере одним остатком галактозы в олигосахариде, прикрепленном к области Fc. Такие варианты антител могут иметь улучшенную функцию КЗЦ. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); и WO 1999/22764 (Raju, S.).
c)
Варианты области Fc
[000125] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения одна или более модификаций аминокислот могут быть введены в область Fc антитела согласно настоящему изобретению с получением варианта области Fc. Вариант области Fc может содержать последовательность человеческой области Fc (например, область Fc человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одном или более положениях аминокислот.
in vivo
in vitro
in vivo
Annu. Rev. Immunol.
in vitro
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA
J. Exp. Med.
in vivo
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA
et al
J. Immunol. Methods
Blood
Blood
in vivo
Int'l. Immunol.

[000126] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предусмотрен вариант антитела, который обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, что делает его желательным кандидатом для вариантов применения, в которых важен период полужизни антитела в условиях , но при этом определенные эффекторные функции (такие как КЗЦ и АЗКЦ) не нужны или вредны. Для подтверждения снижения/истощения активности КЗЦ и/или АЗКЦ можно проводить количественные исследования цитотоксичности в условиях  и/или . Например, количественные исследования связывания рецептора Fc (FcR) могут быть проведены, чтобы убедиться в том, что антитело не способно к связыванию FcγR (следовательно, вероятно, не обладает АЗКЦ-активностью), но сохраняет способность связывать FcRn. Первичные клетки, опосредующие АЗКЦ, NK-клетки, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках обобщенно описана в таблице 3 на странице 464 Ravetch and Kinet,  9:457-492 (1991). Неограничивающие примеры количественных исследований в условиях  для оценки активности АЗКЦ молекулы, представляющей интерес, описаны в патенте США № 5500362 (см., например, Hellstrom, I. et al.  83:7059-7063 (1986)) и Hellstrom, I et al.,  82:1499-1502 (1985); 5821337 (см. Bruggemann, M. et al.,  166:1351-1361 (1987)). Согласно другому варианту можно применять способы нерадиоактивных количественных исследований (см., например, нерадиоактивное количественное исследование цитотоксичности ACTI™ для проточной цитометрии (CellTechnology, Inc., Маунтин-Вью, Калифорния, США; и нерадиоактивное количественное исследование цитотоксичности CytoTox 96 (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Эффекторные клетки, подходящие для таких количественных исследований, включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и природные клетки-киллеры (NK). Альтернативно или дополнительно, АЗКЦ-активность молекулы, представляющей интерес, можно оценить в условиях , например, в модели на животных, такой как та, которая раскрыта в Clynes et al.  95:652-656 (1998). Можно также осуществлять количественные исследования связывания C1q, чтобы подтвердить, что антитело не способно связывать C1q и, следовательно, не обладает КЗЦ-активностью. См., например, ИФА для связывания C1q и C3c в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента можно проводить количественное исследование КЗЦ (см., например, Gazzano-Santoro .,  202:163 (1996); Cragg, M.S. et al.,  101:1045-1052 (2003); и Cragg, M.S. and M.J. Glennie,  103:2738-2743 (2004)). Определения связывания FcRn и клиренса/полужизни в условиях  также можно проводить с помощью способов, известных в данной области техники (см., например, Petkova, S.B. et al.,  18(12):1759-1769 (2006)).
[000127] Антитела со сниженной эффекторной функцией включают антитела с заменой одного или более остатков области Fc 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (патент США № 6737056). Такие мутанты Fc включают мутанты Fc с заменами в двух или более положениях аминокислот 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый мутант Fc «DANA» с заменой остатков 265 и 297 аланином (патент США № 7332581).
, J. Biol. Chem.
[000128] Описаны некоторые варианты антител с улучшенным или уменьшенным связыванием с FcR (см., например, патент США № 6737056; WO 2004/056312, и Shields et al. 9(2): 6591-6604 (2001)).
[000129] Согласно определенным вариантам реализации вариант антитела содержит область Fc с одной или более заменами аминокислот, которые улучшают АЗКЦ, например, замены в положениях 298, 333 и/или 334 области Fc (нумерация остатков в соответствии с системой ЕС).
J. Immunol.
[000130] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения в область Fc вносят изменения, которые приводят к измененному (т.е. либо улучшенному, либо уменьшенному) связыванию C1q и/или комплементзависимой цитотоксичности (КЗЦ), например, как описано в патенте США № 6194551, WO 99/51642, и Idusogie et al. 164: 4178-4184 (2000).
J. Immunol.
J. Immunol.
[000131] Антитела с увеличенным периодом полужизни и улучшенным связыванием с неонатальным рецептором Fc (FcRn), который отвечает за перенос материнских IgG плоду (Guyer et al.,  117:587 (1976) и Kim et al.,  24:249 (1994)), описаны в US2005/0014934A1 (Hinton et al.). Эти антитела содержат область Fc с одной или более заменами, которые улучшают связывание области Fc с FcRn. Такие варианты Fc включают варианты с заменами у одного или более остатков области Fc: 238, 252, 254, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, замену остатка 434 области Fc (например, патент США №7371826).
Nature
[000132] См. также Duncan & Winter,  322:738-40 (1988); патент США № 5648260; патент США № 5624821; и WO 94/29351 касательно других примеров вариантов области Fc.
d) Варианты антител, модифицированные цистеином
[000133] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения желательным может быть создание антител, модифицированных цистеином, например, «тиоМАТ», в которых один или более остатков антитела заменены остатками цистеина. В конкретных вариантах реализации замененные остатки встречаются в доступных сайтах антитела. При замене этих остатков цистеином реакционноспособные тиоловые группы, располагаются тем самым в доступных сайтах антитела и могут применяться для конъюгирования антитела с другими фрагментами, такими как фрагменты лекарственного препарата или фрагменты линкер-лекарственный препарат, для создания иммуноконъюгата, описанного далее в настоящем документе. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения любой один или более из следующих остатков могут быть заменены цистеином: V205 (нумерация Kabat) легкой цепи; A118 (нумерация по системе ЕС) тяжелой цепи; и S400 (нумерация по системе ЕС) области Fc тяжелой цепи. Модифицированные цистеином антитела можно получать, как описано, например, в патенте США № 7521541.
e) Производные антител
[000134] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению может быть дополнительно модифицировано для включения дополнительных непротеиновых фрагментов, которые известны в данной области техники и легко доступны. Фрагменты, подходящие для дериватизации антитела, включают, но не ограничиваются ими, водорастворимые полимеры. Неограничивающие примеры водорастворимых полимеров включают, но не ограничиваются ими, полиэтиленгликоль (ПЭГ), сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (как гомополимеры, так и статистические сополимеры) и декстран или поли(н-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропропиленгликоля, сополимеры пролипропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт и их смеси. Пропионовый альдегид полиэтиленгликоля может иметь преимущества при изготовлении из-за его стабильности в воде. Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. Количество полимеров, прикрепленных к антителу, может варьироваться, и если прикреплено более одного полимера, они могут представлять собой одинаковые или различные молекулы. В целом, количество и/или тип полимеров, применяемых для дериватизации, можно определить на основании соображений, которые включают, но не ограничиваются ими, конкретные свойства или функции антитела, которое улучшают, независимо от того, будет ли производное антитела применяться в терапии при определенных условиях и т.д.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
[000135] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения предложены конъюгаты антитела и небелкового фрагмента, которые могут быть селективно нагреты путем облучения. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения небелковый фрагмент представляет собой углеродную нанотрубку (Kam et al.,  102: 11600-11605 (2005)). Излучение может иметь любую длину волны и включает, но не ограничивается ими, длины волн, которые не вредят обычным клеткам, но которые нагревают непротеиновый фрагмент до температуры, при которой погибают клетки, расположенные проксимально по отношению к конъюгату антитело-небелковый фрагмент.
B. Рекомбинантные способы и композиции
[000136] Антитела могут быть получены с применением рекомбинантных способов и композиций, например, как описано в патенте США № 4816567. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к тау, описанное в настоящем документе. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH, антитела (например, легкие и/или тяжелые цепи антитела). Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения предложен один или более векторов (например, векторов экспрессии), содержащих такую нуклеиновую кислоту. Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения предложена клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. В одном таком варианте реализации клетка-хозяин содержит (например, была трансформирована): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения клетка-хозяин является эукариотической, например, клетка яичника китайского хомяка (СНО) или лимфоидная клетка (например, клетка Y0, NS0, Sp20). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ получения антитела к тау, причем указанный способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, как указано выше, в условиях, подходящих для экспрессии антитела, и необязательно выделение антитела из клетки-хозяина (или культуральной среды клетки-хозяина).
[000137] Для рекомбинантного получения антитела к тау нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, например, описанную выше, выделяют и вставляют в один или более векторов для дальнейшего клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такая нуклеиновая кислота может быть легко выделена и секвенирована с использованием обычных процедур (например, с использованием олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела).
Methods in Molecular Biology, Vol. 248
E. coli
[000138] Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитела, включают прокариотические или эукариотические клетки, описанные в настоящем документе. Например, антитела могут вырабатываться в бактериях, в частности, если не требуется гликозилирование и эффекторная функция Fc. Касательно экспрессии фрагментов антител и полипептидов в бактериях см., например, патенты США №№ 5648237, 5789199 и 5840523. (См. также  (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254, где описана экспрессия фрагментов антител в ). После экспрессии антитело может быть выделено из пасты из бактериальных клеток в растворимой фракции и затем может быть очищено.
Nat. Biotech.
Nat. Biotech.
[000139] В дополнение к прокариотам эукариотические микробы, такие как нитчатые грибки или дрожжи, являются подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитела, включая грибки и штаммы дрожжей, пути гликозилирования которых были «гуманизированы», что приводит к образованию антитела с частичным или полностью человеческим профилем гликозилирования. См. Gerngross,  22:1409-1414 (2004) и Li et al.,  24:210-215 (2006).
Spodoptera frugiperda
[000140] Клетки-хозяева, подходящие для экспрессии гликозилированного антитела, также происходят из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные штаммы бакуловирусов, которые можно применять вместе с клетками насекомых, в частности, для трансфекции клеток .
[000141] Культуры растительных клеток также можно применять в качестве хозяев. См., например, патенты США № 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описывающие технологию PLANTIBODIES™ для получения антител в трансгенных растениях).
, J. Gen Virol.
Biol. Reprod.
, Annals N.Y. Acad. Sci
, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Methods in Molecular Biology, Vol. 248
-
[000142] Клетки позвоночных также можно применять в качестве хозяев. Например, подходящими могут быть клеточные линии млекопитающих, которые адаптированы для размножения в суспензии. Другими примерами подходящих линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия клеток почки обезьяны CV1, трансформированная SV40 (COS-7); линия клеток эмбриональной почки человека (293 или клетки 293, как описано, например, в Graham et al. 36:59 (1977)); клетки почки новорожденного хомяка (BHK); клетки Сертоли мыши (клетки TM4, как описано, например, в Mather,  23:243-251 (1980)); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK; клетки печени буйвола (BRL 3A); клетки легкого человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); клетки опухоли молочной железы мыши (MMT 060562); клетки TRI, как описано, например, в Mather et al.. 383:44-68 (1982); клетки MRC 5, а также клетки FS4. Другие подходящие линии клеток-хозяев млекопитающих включают клетки яичника китайского хомяка (СНО), включая DHFR клетки СНО (Urlaub et al. 77:4216 (1980)), и линии клеток миеломы, такие как Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев млекопитающих, подходящих для получения антител, см., например, Yazaki and Wu,  (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003).
C. Количественные исследования
[000143] Антитела к тау согласно настоящему изобретению могут быть идентифицированы, подвергнуты скринингу или охарактеризованы по их физическим/химическим свойствам и/или видам биологической активности с помощью различных количественных исследований, известных в данной области техники.
1. Количественные исследования связывания и другие количественные исследования
[000144] Согласно одному аспекту испытывают антигенсвязывающую активность антитела согласно настоящему изобретению, например, с помощью известных способов, таких как ИФА, Вестерн-блоттинг и т. д.
Methods in Molecular Biology
[000145] Согласно другому аспекту конкурентные количественные исследования можно применять для идентификации антитела, которое конкурирует с антителом, описанным в настоящем документе, за связывание с тау. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), который связан MTAU или hMTAU. Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) «Epitope Mapping Protocols» в  vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
Antibodies: A Laboratory Manual
[000146] В примерном конкурентном количественном исследовании иммобилизованный тау (такой как мономерный тау) инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с тау (например, любое антитело, описанное в настоящем документе, такое как MTAU или hMTAU), и второе немеченое антитело, способность которого конкурировать с первым антителом за связывание с тау испытывают. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный тау инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, обеспечивающих связывание первого антитела с тау, избыток несвязанного антитела удаляют и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным тау. Если количество метки, связанной с иммобилизованным тау, существенно снижается в испытываемом образце по сравнению с контрольным образцом, это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с тау. См. Harlow and Lane (1988)  ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
2. Количественные исследования активности
in vivo
in vitro
[000147] Согласно одному аспекту предложены количественные способы исследования для идентификации антител к тау (например, пан-тау), обладающих биологической активностью. Биологическая активность может включать, например, связывание таких антител с несколькими формами тау (например, мономерным тау, олигомерным тау, нефосфорилированным тау и фосфорилированным тау) и снижение уровня тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого нефосфорилированного тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, нерастворимого нефосфорилированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау, в головном мозге, например, в коре головного мозга и/или гиппокампе). Согласно настоящему изобретению также предложены антитела, обладающие такой биологической активностью в условиях  и/или .
[000148] Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению испытывают для определения такой биологической активности. Например, модель таупатии на животных, такую как трансгенные по тау мыши (например, P301L), можно применять для детектирования связывания антител к тау со срезами мозга и, например, с нейрофибриллярными клубками в мозге трансгенных мышей. Кроме того, модель таупатии на животных, такую как трансгенные по тау мыши (например, P301L), можно лечить антителами к тау и можно применять экспериментальные методики, известные в данной области техники, чтобы оценить, снижает ли такое лечение уровень тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, растворимого нефосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, нерастворимого фосфорилированного тау, нерастворимого нефосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау) в мозге мыши (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе).
D. Иммуноконъюгаты
[000149] Согласно настоящему изобретению также предложены иммуноконъюгаты, содержащие антитело к тау, конъюгированное с одним или более другими терапевтическими агентами или радиоактивными изотопами.
211
131
125
90
186
188
153
212
32
212
[000150] Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения иммуноконъюгат содержит антитело, описанное в настоящем документе, конъюгированное с радиоактивным атомом с образованием радиоконъюгата. Различные радиоактивные изотопы доступны для получения радиоконъюгатов. Примеры включают At, I, I, Y, Re, Re, Sm, Bi, P, Pbи радиоактивные изотопы Lu. Если радиоконъюгат применяют для детектирования, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например, tc99m или I123, или спиновую метку для ядерно-магнитного резонанса (ЯМР) (также известного как магнитно-резонансная томография, МРТ), такую как йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.
Science
Cancer Res.
[000151] Конъюгаты антитела могут быть получены с применением различных бифункциональных связывающих белки агентов, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис-(п-азидобензоил)гександиамин, производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин может быть получен, как описано в Vitetta et al.,  238:1098 (1987). Меченная углеродом-14 1-изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминопентауксусная кислота (MX-DTPA) представляет собой типичный хелатирующий агент для конъюгации радионуклида с антителом. См. WO94/11026. Линкер может представлять собой «расщепляемый линкер», облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного препарата в клетке. Например, можно применять кислотолабильный линкер, пептидазочувствительный линкер, фотолабильный линкер, диметиловый линкер или дисульфидсодержащий линкер (Chari et al.,  52:127-131 (1992); патент США № 5208020).
[000152] Иммуноконъюгаты или ADC явным образом предусмотрены в настоящем изобретении, но не ограничиваются такими конъюгатами, полученными с перекрестно сшивающими реагентами, включая, но не ограничиваясь ими, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC и сульфо-SMPB, а также SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые коммерчески доступны (например, от Pierce Biotechnology, Inc., Рокфорд, Иллинойс, США).
E. Фармацевтические составы
Remington
s Pharmaceutical Sciences

[000153] Фармацевтические составы антитела к тау, описанные в настоящем документе, получают путем смешивания такого антитела, имеющего желательную степень чистоты, с одним или более необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями и/или вспомогательными веществами (' 16 изд., Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители, разбавители и вспомогательные вещества обычно нетоксичны для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и включают, но не ограничиваются ими: стерильную воду, буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония; хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Примерные фармацевтически приемлемые носители согласно настоящему изобретению дополнительно включают интерстициальные агенты для диспергирования лекарственных препаратов, такие как растворимые нейтрально-активные гликопротеины гиалуронидазы (sHASEGP), например, растворимые гликопротеины человеческой гиалуронидазы PH-20, такие как rHuPH20 (HYLENEX, Baxter International, Inc.). Некоторые примерные sHASEGP и способы их применения, включая rHuPH20, описаны в публикациях патентов США №№ 2005/0260186 и 2006/0104968. Согласно одному аспекту sHASEGP комбинируют с одной или более дополнительными гликозаминогликаназами, такими как хондроитиназы.
[000154] Примерные составы лиофилизированных антител описаны в патенте США № 6267958. Водные составы антител включают те, которые описанные в патенте США № 6171586 и WO2006/044908, причем последние составы включают гистидин-ацетатный буфер.
[000155] Состав согласно настоящему изобретению также может содержать более одного активного ингредиента, если необходимо для конкретного показания, которое лечат, предпочтительно те, которые обладают дополняющими видами активности и не оказывают отрицательного влияния друг на друга. Такие активные ингредиенты приемлемо присутствуют в комбинации в количествах, которые эффективны для предполагаемой цели.
Remington
s Pharmaceutical Sciences
th
[000156] Активные ингредиенты также могут быть заключены в микрокапсулы, полученные, например, с помощью методик коацервации или за счет межфазной полимеризации, например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и полиметилметакрилатные микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы для доставки лекарственных препаратов (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики описаны в ', 16 Ed., Osol, A. Ed. (1980).
[000157] Могут быть получены препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матриксы из твердых гидрофобных полимеров, содержащих антитело, причем матриксы имеют форму формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.
in vivo
[000158] Составы, которые будут применять для введения в условиях , обычно являются стерильными. Стерильность может быть легко достигнута, например, путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны.
F. Терапевтические способы и композиции
[000159] Любое антитело к тау согласно настоящему изобретению можно применять в терапевтических способах.
[000160] Согласно одному аспекту предложено антитело к тау для применения в качестве лекарственного средства. Согласно дополнительным аспектам предложено антитело к тау для применения при лечении заболевания или нарушения, связанного с тау-белком. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при лечении заболеваний или нарушений, вызванных или связанных с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при лечении таупатии, такой как нейродегенеративная таупатия. Примерные заболевания или нарушения, связанные с тау-белком, которые можно лечить антителами к тау, включают, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз, болезнь Паркинсона, болезнь Крейцфельдта-Якоба, деменцию боксеров, синдром Дауна, болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозит с тельцами включений, церебральную амилоидную ангиопатию, вызванную прионными белками, травматическое повреждение мозга, боковой амиотрофический склероз/комплекс паркинсонизм-деменция (болезнь Гуам), негуамскую болезнь двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменцию с аргирофильными гранулами, кортикобазальную дегенерацию, диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, лобно-височную деменцию, лобно-височную деменцию с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезнь Халлевордена-Шпатца, множественную системную атрофию, болезнь Ниманна-Пика типа С, паллидо-понто-нигральную дегенерацию, болезнь Пика, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий надъядерный паралич, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитный паркинсонизм и миотоническую дистрофию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера (БА). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело к тау предназначено для применения при лечении БА умеренной степени тяжести, БА легкой степени тяжести или умеренной степени тяжести, БА легкой степени тяжести, БА на ранней стадии, БА на продромальной стадии или легкой степени тяжести или БА на продромальной стадии. Кроме того, заболевания или нарушения, связанные с тау-белком, которые можно лечить антителом к тау, включают заболевания или нарушения, которые проявляются как нарушение или потеря когнитивной функции, такой как рассуждение, ситуационное суждение, объем памяти, обучение и/или специализированная навигация. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения в способе лечения. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения в способе лечения индивидуума, имеющего любое одно из заболеваний или нарушений, связанных с тау, описанных выше, включающем введение индивидууму эффективного количества антитела к тау. В одном таком варианте реализации способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, описанного ниже.
[000161] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению применяют для лечения индивидуума, имеющего оценку MMSE от 16 до 28, от 16 до 18, от 16 до 20, от 20 до 30, от 20 до 26, от 24 до 30, от 21 до 26, от 22 до 26, от 22 до 28, от 23 до 26, от 24 до 26 или от 25 до 26. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент имеет оценку по MMSE от 22 до 26. В настоящем документе оценка MMSE между двумя числами включает числа на каждом конце диапазона. Например, оценка MMSE от 22 до 26 включает оценки MMSE 22 и 26.
[000162] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению применяют для лечения индивидуума, который является «тау-положительным», например, пациент, имеющий отложения тау в мозге, которые являются типичными для нарушений, связанных с тау-белком, например, пациент, имеющий положительные результаты сканирования тау методом позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ).
[000163] Согласно дополнительным вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении у индивидуума уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении у индивидуума уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау), согласно результатам измерения тау с помощью ПЭТ. Например, такое снижение может происходить в мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении уровней фосфорилированного тау, включая растворимый фосфорилированный тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении уровней агрегированного тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении уровней нерастворимого тау (например, нерастворимого фосфорилированного тау). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении уровней гиперфосфорилированного тау. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения при снижении уровней спаренных спиральных филаментов (например, спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау) в ткани головного мозга (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения в способе снижения у индивидуума уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау) в мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе), включающем введение индивидууму эффективного количества антитела к тау для снижения уровней тау-белка. «Индивидуум» в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов реализации представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения снижение уровня тау-белка определяют путем измерения плотности и/или степени таупатии и/или агрегированного тау. Соответственно, снижение плотности или степени таупатии и/или агрегированного тау (измеренного, например, с помощью позитронно-эмиссионной томографии) считается показателем снижения уровня тау. Уровень тау-белка, нефосфорилированного тау-белка, фосфорилированного тау-белка или гиперфосфорилированного тау-белка может быть измеряют с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) или путем анализа спинномозговой жидкости, такой как спинномозговая жидкость, полученная посредством спинномозговой пункции. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения снижение уровня тау-белка определяют путем измерения уровня фрагмента тау.
[000164] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложено антитело к тау для применения в модуляции уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау), например, в головном мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе) индивидуума.
[000165] Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение антитела к тау в изготовлении или получении лекарственного средства. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или нарушения, связанного с тау-белком. Заболевание или нарушение, связанное с тау-белком, может представлять собой заболевание или нарушение, вызванное или связанное с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для лечения таупатии, такой как нейродегенеративная таупатия. Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для лечения заболеваний или нарушений, выбранных из группы, состоящей из: болезни Альцгеймера (БА), болезни Крейцфельдта-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с тельцами включений, церебральной амилоидной ангиопатии, вызванной прионными белками, травматического повреждения мозга, бокового амиотрофического склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (болезнь Гуам), негуамской болезни двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменции с аргирофильными гранулами, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезни Халлевордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа С, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитного паркинсонизма и миотонической дистрофии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для лечения БА. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или нарушения, связанного с тау, которое проявляется как нарушение или потеря когнитивной функции, такой как рассуждение, ситуационное суждение, объем памяти, обучение или специализированная навигация. Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе лечения одного из перечисленных выше заболеваний (например, таупатии, такой как БА), включающем введение индивидууму, имеющему такое заболевание, эффективного количества лекарственного средства. В одном таком варианте реализации способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, описанного ниже.
[000166] Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для снижения уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого нефосфорилированного тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, нерастворимого нефосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау). Например, такое снижение тау-белка может наблюдаться в мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе) или в спинномозговой жидкости индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для снижения уровней спаренных спиральных филаментов. Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения лекарственное средство предназначено для применения в способе снижения у индивидуума уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау), включающем введение индивидууму эффективного количества лекарственного средства для снижения уровня тау-белка. «Индивидуум» в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов реализации представляет собой млекопитающее, предпочтительно человека.
[000167] Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания или нарушения, связанного с тау-белком. Заболевание или нарушение, связанное с тау-белком, которое можно лечить в соответствии со способами согласно настоящему изобретению, включает заболевания или нарушения, вызванные или связанные с образованием нейрофибриллярных клубков или нейропильных нитей. Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ лечения таупатии, такой как нейродегенеративная таупатия. Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания или нарушения, выбранного из группы, состоящей из: болезни Альцгеймера, болезни Крейцфельдта-Якоба, деменции боксеров, синдрома Дауна, болезни Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозита с тельцами включений, церебральной амилоидной ангиопатии, вызванной прионными белками, травматического повреждения мозга, бокового амиотрофического склероза/комплекса паркинсонизм-деменция (болезнь Гуам), негуамской болезни двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, деменции с аргирофильными гранулами, кортикобазальной дегенерации, диффузных нейрофибриллярных клубков с кальцификацией, лобно-височной деменции, лобно-височной деменции с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, болезни Халлевордена-Шпатца, множественной системной атрофии, болезни Ниманна-Пика типа С, паллидо-понто-нигральной дегенерации, болезни Пика, прогрессирующего субкортикального глиоза, прогрессирующего надъядерного паралича, подострого склерозирующего панэнцефалита, деменции с преобладанием нейрофибриллярных клубков, постэнцефалитного паркинсонизма и миотонической дистрофии. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ лечения болезни Альцгеймера (БА). Согласно конкретным вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, которое проявляется как нарушение или потеря когнитивной функции, такой как рассуждение, ситуационное суждение, объем памяти, обучение или специализированная навигация. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения способ включает введение индивидууму, имеющему любое из заболеваний или нарушений, описанных выше, эффективного количества антитела к тау. В одном таком варианте реализации способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, например, описанного ниже. Согласно некоторым вариантам способ включает введение индивидууму, имеющему одно из описанных в настоящем документе заболеваний, эффективного количества антитела к тау. В одном таком варианте реализации способ дополнительно включает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, описанного ниже. «Индивидуум» в соответствии с любым из вышеупомянутых вариантов реализации может представлять собой человека.
[000168] Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен способ снижения у индивидуума уровней тау-белка (например, общего тау, общего растворимого тау, растворимого фосфорилированного тау, общего нерастворимого тау, агрегированного тау, нерастворимого фосфорилированного тау, гиперфосфорилированного тау или спаренных спиральных филаментов, содержащих гиперфосфорилированный тау). Например, такое снижение уровней тау-белка может наблюдаться в мозге (например, в коре головного мозга и/или гиппокампе) или спинномозговой жидкости индивидуума. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложен способ снижения уровней спаренных спиральных филаментов. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения способ включает введение индивидууму эффективного количества антитела к тау для снижения уровней тау-белка. «Индивидуум» в соответствии с любым из вышеупомянутых вариантов реализации может представлять собой человека.
[000169] Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предложен способ облегчения одного или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для облегчения одного или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком (таких как любое из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предложен способ снижения числа симптомов или степени тяжести одного или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для снижения числа симптомов или степени тяжести одного или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком (например, любого из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой нарушение когнитивных функций. Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой нарушение обучения и/или памяти. Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой потерю долгосрочной памяти. Согласно конкретному варианту реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой деменцию. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой спутанность сознания, раздражительность, агрессию, перепады настроения или нарушение речи. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения симптом заболевания или нарушения, связанного с тау-белком, представляет собой нарушение или потерю одной или более когнитивных функций, таких как рассуждение, ситуационное суждение, объем памяти и/или обучение. Способы согласно настоящему изобретению включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела к тау индивидууму (например, у которого проявляется один или более симптомов потери памяти или уменьшения объема памяти).
[000170] Согласно конкретным аспектам настоящего изобретения предложен способ сохранения или повышения объема памяти, функции памяти или когнитивной функции или замедления потери памяти, связанной с заболеванием или нарушением, связанным с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для сохранения или повышения объема памяти, функции памяти или когнитивной функции, или для замедления потери памяти, связанной с заболеванием или нарушением, связанным с тау-белком (таким как любое из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы согласно настоящему изобретению включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела к тау индивидууму (например, у которого проявляется один или более симптомов потери памяти или уменьшения объема памяти).
[000171] Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предложен способ уменьшения скорости прогрессирования заболевания или нарушения, связанного с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для уменьшения скорости прогрессирования заболевания или нарушения, связанного с тау-белком (такого как любое из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы согласно настоящему изобретению включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела к тау индивидууму (например, у которого проявляется один или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком).
[000172] Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предложен способ предотвращения развития заболевания или нарушения, связанного с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для предотвращения развития заболевания или нарушения, связанного с тау-белком (такого как любое из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы согласно настоящему изобретению включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела к тау индивидууму (например, который подвергается риску возникновения заболевания или нарушения, связанного с тау-белком).
[000173] Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения предложен способ задержки развития заболевания или нарушения, связанного с тау-белком; или антитело к тау или лекарственное средство, содержащее антитело к тау, для задержки развития заболевания или нарушения, связанного с тау-белком (такого как любое из заболеваний или нарушений, описанных в настоящем документе, например, БА). Способы согласно настоящему изобретению включают введение некоторого количества (например, терапевтически эффективного количества) антитела к тау индивидууму (например, у которого проявляется один или более симптомов заболевания или нарушения, связанного с тау-белком).
[000174] Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложены фармацевтические составы, содержащие любое антитело к тау согласно настоящему изобретению, например, для применения в любом из вышеуказанных терапевтических способов. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения фармацевтический состав содержит любое из антител к тау согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения фармацевтический состав содержит любое из антител к тау согласно настоящему изобретению и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент, например, описанный ниже.
[000175] Антитела согласно настоящему изобретению можно применять либо по отдельности, либо в комбинации с другими агентами в терапии. Например, антитело согласно настоящему изобретению можно совместно вводить с по меньшей мере одним дополнительным терапевтическим агентом.
[000176] Например, композицию в соответствии с настоящим изобретением можно вводить в комбинации с другими композициями, содержащими дополнительный терапевтический агент, такой как биологически активное вещество или соединение, такое как, например, известное соединение, применяемое при лечении таупатий и/или амилоидозов, группы заболеваний и нарушений, связанных с амилоидом или амилоидоподобным белком, таким как бета-амилоидный белок, вовлеченный в болезнь Альцгеймера.
[000177] Обычно другое биологически активное соединение может включать усилители нейротрансмиссии, психотерапевтические лекарственные препараты, ингибиторы ацетилхолинэстеразы, блокаторы кальциевых каналов, биогенные амины, бензодиазепиновые транквилизаторы, усилители синтеза, хранения или высвобождения ацетилхолина, агонисты постсинаптических ацетилхолиновых рецепторов, ингибиторы моноаминоксидазы A или B, антагонисты глутаматных рецепторов NMDA-типа (N-метил-D-аспартат), нестероидные противовоспалительные препараты, антиоксиданты, антагонисты серотонинергических рецепторов или другие терапевтические агенты. В частности, биологически активный агент или соединение может содержать по меньшей мере одно соединение, выбранное из соединений против окислительного стресса, антиапоптотических соединений, хелаторов металлов, ингибиторов репарации ДНК, таких как пирензепин и метаболиты, 3-амино-1-пропансульфоновой кислоты (3APS), 1,3-пропандисульфоната (1,3PDS), активаторов секретазы, ингибиторов бета- и гамма-секретазы, тау-белков, антител к тау (включая, но не ограничиваясь ими, антитела, описанные в WO2012049570, WO2014028777, WO2014165271, WO2014100600, WO2015200806, US8980270 и US8980271), нейротрансмиттера, нарушителей бета-структуры, противовоспалительных молекул, «атипичных антипсихотиков», таких как, например, клозапин, зипразидон, рисперидон, арипипразол или оланзапин, или ингибиторов холинэстеразы (ChEI), таких как такрин, ривастигмин, донепезил и/или галантамин, и других лекарственных препаратов и пищевых добавок, таких как, например, витамин B 12, цистеин, предшественник ацетилхолина, лецитин, холин, гинкго билоба, ацетил-L-карнитин, идебенон, пропентофиллин или производное ксантина вместе со связывающим пептидом в соответствии с настоящим изобретением, включая антитела, в частности, моноклональные антитела и их активные фрагменты, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель и/или вспомогательное вещество и инструкции по лечению заболеваний.
[000178] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с нейрологическим лекарственным препаратом. Такие нейрологические лекарственные препараты включают, но не ограничиваются ими, антитело или другую связывающую молекулу (включая, но не ограничиваясь ими, небольшую молекулу, пептид, аптамер или другую связывающую белок молекулу), которая специфически связывается с мишенью, выбранной из: бета-секретазы, презенилина, белка-предшественника амилоида или его части, бета-амилоидного пептида или его олигомеров или фибрилл, рецептора смерти 6 (DR6), рецептора конечных продуктов гликозилирования (RAGE), паркина и хантингтина; антагониста NMDA-рецепторов (т.е. мемантина), истощителя моноаминов (т.е. тетрабеназина); эрголоида мезилата; антихолинергического агента, направленного против паркинсонизма (т.е. проциклидина, дифенгидрамина, тригексилфенидила, бензотропина, биперидена и тригексифенидила); допаминергического агента, направленного против паркинсонизма (т.е. энтакапона, селегилина, прамипексола, бромокриптина, ротиготина, селегилина, ропинирола, разагилина, апоморфина, карбидопа, леводопа, перголида, толкапона и амантадина); тетрабеназина; противовоспалительного агента (включая, но не ограничиваясь ими, нестероидный противовоспалительный лекарственный препарат (например, индометицин и другие соединения, перечисленные выше), гормона (т.е. эстрогена, прогестерона и лейпролида), витамина (т.е. фолата и никотинамида) димеболина, гомотаурина (т.е. 3-аминопропансульфоновой кислоты; 3APS), модулятора активности серотониновых рецепторов (т.е. халипродена); интерферона и глюкокортикоида или кортикостероида. Термин «кортикостероид» включает, но не ограничивается ими, флутиказон (включая пропионат флутиказона (FP)), беклометазон, будесонид, циклесонид, мометазон, флунизолид, бетаметазон и триамцинолон. «Ингаляционный кортикостероид» означает кортикостероид, который подходит для доставки путем ингаляции. Примеры ингаляционных кортикостероидов включают флутиказон, дипропионат беклометазона, буденозид, фуроат мометазона, циклесонид, флунизолид и ацетонид триамцинолона.

[000179] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения одно или более антител к бета-амилоиду (анти-Aβ) можно вводить с антителом к тау согласно настоящему изобретению. Неограничивающие примеры таких антител к Aβ включают кренезумаб, соланезумаб, бапинейзумаб, адуканумаб, гантенерумаб и BAN-2401 (Biogen, Eisai Co., Ltd.). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один или более ингибиторов агрегации бета-амилоида можно вводить с антителом к тау согласно настоящему изобретению. Неограничивающие примерные ингибиторы агрегации бета-амилоида включают ELND-005 (также называемый AZD-103 или сциллоинозит), трамипросат и PTI-80 (экзебрил-1; ProteoTech). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один или более ингибиторов BACE можно вводить с антителом к тау согласно настоящему изобретению. Неограничивающие примеры таких ингибиторов BACE включают E-2609 (Biogen, Eisai Co., Ltd.), AZD3293 (также известный как LY3314814; AstraZeneca, Eli Lilly & Co.), MK-8931 (верубецестат) и JNJ-54861911 (Janssen, Shionogi Pharma). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один или более ингибиторов тау можно вводить с антителом к тау согласно настоящему изобретению. Неограничивающие примеры таких ингибиторов тау включают метилтиониний, LMTX (также известный как лейко-метилтиониний или Trx-0237; TauRx Therapeutics Ltd.), Rember™ (метиленовый синий или хлористый метилтиониний [MTC]; Trx-0014; TauRx Therapeutics Ltd), PBT2 (Prana Biotechnology) и PTI-51-CH3 (TauPro™; ProteoTech). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения одно или более других антител к тау можно вводить с антителом к тау согласно настоящему изобретению. Неограничивающие примеры таких других антител к тау включают BIIB092 или BMS-986168 (Biogen, Bristol-Myers Squibb) и ABBV-8E12 или C2N-8E12 (AbbVie, C2N Diagnostics, LLC). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения общий ингибитор неправильного сворачивания, такой как NPT088 (NeuroPhage Pharmaceuticals), может быть введен с антителом к тау согласно настоящему изобретению.
[000180] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композиция в соответствии с настоящим изобретением может содержать ниацин или мемантин вместе с химерным антителом или гуманизированным антителом в соответствии с настоящим изобретением, включая антитела, в частности, моноклональные антитела и их активные фрагменты, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель, и/или вспомогательное вещество.
[000181] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предложены композиции, которые содержат «атипичные антипсихотики», такие как, например, клозапин, зипразидон, рисперидон, арипипразол или оланзапин, для лечения положительных и отрицательных психотических симптомов, включая галлюцинации, бред, нарушения процессов мышления (проявляющиеся в существенной непоследовательности, соскальзывании, тангенциальности) и странное или дезорганизованное поведение, а также ангедонии, аффективной тупости, апатии и социального отторжения, вместе с химерным антителом или гуманизированным антителом в соответствии с настоящим изобретением или их активными фрагментами, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель, и/или вспомогательное вещество.
[000182] Другие соединения, которые можно применять подходящим образом в композициях в дополнение к химерному антителу или гуманизированному антителу согласно настоящему изобретению, включают те соединения, которые раскрыты, например, в WO 2004/058258 (см., в частности, стр. 16 и 17), включая терапевтические лекарственные мишени (стр. 36-39), алкансульфокислоты и алканолсульфокислоту (стр. 39-51), ингибиторы холинэстеразы (стр. 51-56), антагонисты рецепторов NMDA (стр. 56-58), эстрогены (стр. 58-59), нестероидные противовоспалительные препараты (стр. 60-61), антиоксиданты (стр. 61-62), агонисты рецепторов, активируемых пролифераторами пероксисом (PPAR) (стр. 63-67), агенты, снижающие уровень холестерина (стр. 68-75); ингибиторы амилоида (стр. 75-77), ингибиторы образования амилоида (стр. 77-78), хелаторы металлов (стр. 78-79), антипсихотики и антидепрессанты (стр. 80-82), пищевые добавки (стр. 83-89) и соединения, увеличивающие доступность биологически активных веществ в мозге (см. стр. 89-93), а также пролекарства (стр. 93 и 94), причем указанный документ включен в настоящую заявку посредством ссылки, и, в частности, соединения, упомянутые на страницах, указанных выше.
[000183] Такие виды комбинированной терапии, отмеченные выше, охватывают комбинированное введение (при котором два или более терапевтических агентов включены в один и тот же или отдельные составы) и раздельное введение, и в этом случае введение антитела согласно настоящему изобретению может происходить до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического агента или агентов. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения введение антитела к тау и введение дополнительного терапевтического агента происходит с интервалом приблизительно один месяц или приблизительно одну, две или три недели, или приблизительно один, два, три, четыре, пять или шесть дней друг от друга.
[000184] Антитело согласно настоящему изобретению (и любой дополнительный терапевтический агент) можно вводить любым подходящим способом, включая парентеральное, внутрилегочное и интраназальное, и, если необходимо для местного лечения, внутриочаговое введение. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Дозирование можно осуществлять любым подходящим путем, например, с помощью инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, в зависимости от того, является ли введение краткосрочным или долгосрочным. Согласно настоящему изобретению предусмотрены различные схемы дозирования, включая, но не ограничиваясь ими, однократное или многократное введение в различные моменты времени, болюсное введение и импульсную инфузию.
[000185] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводят дозу MTAU или hMTAU. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 225 мг до 16800 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет 225 мг, 675 мг, 1200 мг, 1500 мг, 2100 мг, 4200 мг, 4500 мг, 8100 мг, 8400 мг или 16800 мг.
[000186] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет 4000 мг, 4100 мг, 4200 мг, 4300 мг, 4400 мг, 4500 мг, 4600 мг, 4700 мг, 4800 мг, 4900 мг, 5000 мг, 5100 мг, 5200 мг, 5300 мг, 5400 мг, 5500 мг, 5600 мг, 5700 мг, 5800 мг, 5900 мг, 6000 мг, 6100 мг, 6200 мг, 6300 мг, 6400 мг, 6500 мг, 6600 мг, 6700 мг, 6800 мг, 6900 мг, 7000 мг, 7100 мг, 7200 мг, 7300 мг, 7400 мг, 7500 мг, 7600 мг, 7700 мг, 7800 мг, 7900 мг, 8000 мг, 8100 мг, 8200 мг, 8300 мг, 8400 мг или 8500 мг.
[000187] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет 200 мг, 700 мг, 1200 мг, 1500 мг, 1700 мг, 2200 мг, 2700 мг, 3200 мг, 3700 мг, 9000 мг, 9500 мг, 10000 мг, 10500 мг, 11000 мг, 11500 мг, 12000 мг, 12500 мг, 13000 мг, 13500 мг, 14000 мг, 14500 мг, 15000 мг, 15500 мг, 16000 мг или 16500 мг.
[000188] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет 225 мг, 725 мг, 1225 мг, 1725 мг, 2225 мг, 2725 мг, 3225 мг, 3725 мг, 4225 мг, 4725 мг, 5225 мг, 5725 мг, 6225 мг, 6725 мг, 7225 мг, 7725 мг, 8225 мг, 8725 мг, 9225 мг, 9725 мг, 10225 мг, 10725 мг, 11225 мг, 11725 мг, 12225 мг, 12725 мг, 13225 мг, 13725 мг, 14225 мг, 14725 мг, 15225 мг, 15725 мг, 16225 мг или 16725 мг.
[000189] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 1000 мг до 2000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 4000 мг до 16800 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 4000 мг до 5000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 4000 мг до 4500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 4500 мг до 5000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 5000 мг до 5500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 5500 мг до 6000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 6000 мг до 6500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 6500 мг до 7000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 7000 мг до 7500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 7500 мг до 8000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 8000 мг до 8500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 8500 мг до 9000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 9000 мг до 9500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 9500 мг до 10000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 10000 мг до 10500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 10500 мг до 11000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 11000 мг до 11500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 11500 мг до 12000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 12000 мг до 12500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 12500 мг до 13000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 13000 мг до 13500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 13500 мг до 14000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 14000 мг до 14500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 14500 мг до 15000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 15000 мг до 15500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 15500 мг до 16000 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 16000 мг до 16500 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза MTAU или hMTAU составляет от 16500 мг до 17000 мг.
[000190] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 50 мг/кг до 240 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 60 мг/кг до 120 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 60 мг/кг до 70 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 70 мг/кг до 80 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 80 мг/кг до 90 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 90 мг/кг до 100 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 100 мг/кг до 110 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 110 мг/кг до 120 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет от 2,5 мг/кг до 5 мг/кг, от 5 мг/кг до 10 мг/кг, от 10 мг/кг до 15 мг/кг, от 15 мг/кг до 20 мг/кг, от 20 мг/кг до 30 мг/кг, от 30 мг/кг до 40 мг/кг, от 40 мг/кг до 50 мг/кг или от 50 мг/кг до 60 мг/кг.
[000191] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет 60 мг/кг, 70 мг/кг, 80 мг/кг, 90 мг/кг, 100 мг/кг, 110 мг/кг, 120 мг/кг, 130 мг/кг, 140 мг/кг, 150 мг/кг, 160 мг/кг, 170 мг/кг или 180 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет 150 мг/кг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вводимая доза hMTAU составляет 180 мг/кг.
[000192] Антитела согласно настоящему изобретению будут изготовлены, дозированы и введены способом, соответствующим требованиям Надлежащей медицинской практики. Факторы, которые необходимо учитывать в данном случае, включают конкретное нарушение, которое лечат, конкретное млекопитающее, которое лечат, клиническое состояние отдельного пациента, причину нарушения, место доставки агента, способ введения, график введения и другие факторы, известные врачам. В настоящем документе термин «разделенная доза» представляет собой разделение однократной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или более доз, например, два или более введений однократной стандартной дозы. Антитело можно вводить в виде «разделенной дозы».
[000193] Антитело необязательно изготавливают с одним или более агентами, применяемыми в настоящее время для предотвращения или лечения рассматриваемого нарушения, однако это не является обязательным. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества антитела, присутствующего в составе, типа нарушения или лечения и других факторов, обсуждаемых выше. Другие агенты обычно применяют в тех же дозировках и вводят с помощью путей, описанных в настоящем документе, или приблизительно от 1 до 99% дозировок, описанных в настоящем документе, или в любой дозировке и любым путем, который эмпирически/клинически определен как подходящий. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело предложено в составе для немедленного высвобождения и другой агент предложен в форме для пролонгированного высвобождения или наоборот.
[000194] Антитело вводят пациенту подходящим образом за один раз или в течение серии процедур. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят один раз каждые 4 недели. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят один раз каждые 1, 2, 4, 5, 6, 7 или 8 недель. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 раз каждые 1, 2, 4, 5, 6, 7 или 8 недель.
[000195] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят внутривенно. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят подкожно. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят подкожно в дозе 1200 мг. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения hMTAU вводят внутривенно в дозе 225 мг, 675 мг, 1500 мг, 2100 мг, 4200 мг, 4500 мг, 8100 мг, 8400 мг или 16800 мг.
G. Мониторинг/оценка ответа на терапевтическое лечение
[000196] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечат антителом, описанного в настоящем документе, находится под наблюдением или проходит оценку, чтобы определить, получает ли пациент пользу от лечения. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения терапевтическая польза представляет собой замедление, задержку или прекращение прогрессирования БА или уменьшение клинического, функционального или когнитивного ухудшения. Например, виды пользы могут включать, но не ограничиваются ими, (1) ингибирование, до некоторой степени, прогрессирования заболевания, включая замедление прогрессирования и полную его остановку; (2) снижение количества бляшек или уменьшение накопления амилоида в мозге и/или уменьшение нейрофибриллярных клубков и/или снижение накопления тау в мозге; (3) улучшение по одной или более оценочным матрицам, включая, но не ограничиваясь ими, оценки CDR-SB, RBANS и/или ADAS-Cog 13; (4) улучшение ежедневного функционирования пациента; (5) уменьшение биомаркера, указывающего на БА, такого как Aβ или тау в спинномозговой жидкости; и (6) увеличение биомаркера, указывающее на улучшение БА. Пациентов можно оценивать с применением любого показателя, который может выявить пользу для пациента.
[000197] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения когнитивные способности и/или ежедневное функционирование пациента оценивают до, во время и/или после курса терапии антителом, описанного в настоящем документе. В данной области техники известны различные инструменты для когнитивной и функциональной оценки, которые можно применять для оценки, диагностики и/или определения показателя психической функции, когнитивного и/или неврологического дефицита. Примеры инструментов включают, но не ограничиваются ими, ADAS-Cog (включая ADAS-Cog 12, ADAS-Cog 13 и ADAS-Cog 14), CDR-SB, MMSE, шкалу оценки полезных навыков в каждодневной жизни (iADL), шкалу оценки повседневной деятельности при болезни Альцгеймера группы кооперативного исследования болезни Альцгеймера (ADCS-ADL) и RBANS.
[000198] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, имеет улучшение (т.е. уменьшение) оценки CDR-SB этого пациента по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения оценка CDR-SB пациента уменьшается по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45%, или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, демонстрирует замедление скорости увеличения своей оценки CDR-SB по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45%, или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка CDR-SB по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения) может указывать на замедление, задержку или прекращение прогрессирования БА или отсутствие появления новых клинических, функциональных или когнитивных симптомов или нарушений, или на общую стабилизацию активности заболевания.
[000199] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, демонстрирует улучшение (т.е. увеличение) оценки RBANS этого пациента по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения оценка RBANS пациента увеличивается по меньшей мере на 15% или на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45% или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, демонстрирует замедление скорости уменьшения своей оценки RBANS по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45%, или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка RBANS по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения) может быть показателем замедления, задержки или прекращения прогрессирования БА, или снижения клинического или когнитивного ухудшения.
[000200] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, демонстрирует улучшение (т. е. уменьшение) оценки ADAS-Cog этого пациента (такой как ADAS-Cog 13) по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения оценка ADAS-Cog пациента уменьшается по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45%, или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения пациент, которого лечили антителом, описанного в настоящем документе, демонстрирует замедление скорости увеличения оценки ADAS-Cog 13 по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20%, или по меньшей мере на 25%, или по меньшей мере на 30%, или по меньшей мере на 35%, или по меньшей мере на 40%, или по меньшей мере на 45%, или по меньшей мере на 50%. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения стабильная оценка ADAS-Cog 13 по сравнению с исходным уровнем (например, до лечения или в более ранний момент во время лечения) может быть показателем замедления, задержки или прекращения прогрессирования БА или снижения клинического или когнитивного ухудшения.
[000201] Согласно различным вариантам реализации настоящего изобретения пациент проходит оценку через по меньшей мере 13 недель, по меньшей мере 24 недели, по меньшей мере 25 недель, по меньшей мере 37 недель, по меньшей мере 49 недель, по меньшей мере 61 неделю, по меньшей мере 69 недель, по меньшей мере 73 недели, по меньшей мере 85 недель, по меньшей мере 97 недель, по меньшей мере 109 недель, по меньшей мере 121 неделю, по меньшей мере 133 недели, по меньшей мере 145 недель, по меньшей мере 157 недель или по меньшей мере 169 недель после начала лечения антителом, описанного в настоящем документе. Согласно различным вариантам реализации настоящего изобретения исходная оценка получена до начала лечения согласно настоящему изобретению. В настоящем документе «до начала лечения» означает в любой момент времени от диагностики заболевания (такого как БА) до введения лекарственного средства согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения до начала лечения означает в течение 12 месяцев, 6 месяцев, 3 месяцев, 2 месяцев, 1 месяца, 3 недель, 2 недель или 1 недели до начала лечения. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения исходный уровень соответствует более раннему моменту во время лечения согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения интервал между оценкой исходного уровня и моментом времени, во время которого оценивают терапевтическую пользу для пациента, составляет по меньшей мере 13 недель, по меньшей мере 24 недели, по меньшей мере 25 недель, по меньшей мере 37 недель, по меньшей мере 49 недель, по меньшей мере 61 неделю, по меньшей мере 69 недель, по меньшей мере 73 недели, по меньшей мере 85 недель, по меньшей мере 97 недель, по меньшей мере 109 недель, по меньшей мере 121 неделю, по меньшей мере 133 недели, по меньшей мере 145 недель, по меньшей мере 157 недель или по меньшей мере 169 недель.
H. Готовое изделие
[000202] Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено готовое изделие, содержащее материалы, которые можно применять для лечения, предотвращения и/или диагностики нарушений, описанных выше. Готовое изделие содержит контейнер и этикетку или вкладыш в упаковку на контейнере или связанные с ним. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, пакеты с внутривенным раствором и т. д. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая сама по себе или в комбинации с другой композицией эффективна для лечения, предотвращения и/или диагностики состояния, и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой мешок с внутривенным раствором или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой антитело согласно настоящему изобретению. Этикетка или вкладыш в упаковку указывает, что композиция применяется для лечения выбранного состояния. Кроме того, готовое изделие может содержать (a) первый контейнер с содержащейся в нем композицией, причем указанная композиция содержит антитело согласно настоящему изобретению; и (b) второй контейнер с содержащейся в нем композицией, причем указанная композиция содержит дополнительный цитотоксический или иной терапевтический агент. Готовое изделие в этом варианте реализации настоящего изобретения может дополнительно содержать вкладыш в упаковку, указывающий, что композиции можно применять для лечения конкретного состояния. Альтернативно или дополнительно, готовое изделие может дополнительно содержать второй (или третий) контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как бактериостатическая вода для инъекций (BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Кроме того, он может содержать другие материалы, желательные с коммерческой и пользовательской точек зрения, включая другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
[000203] Следует понимать, что любое из указанных выше готовых изделий может содержать иммуноконъюгат согласно настоящему изобретению вместо антитела к тау или в дополнение к нему.
III. ПРИМЕРЫ
[000204] Ниже приведены примеры способов и композиций согласно настоящему изобретению. Следует понимать, что различные другие варианты реализации могут быть осуществлены на практике с учетом общего описания, приведенного выше.
Пример 1. Клиническое исследование для оценки безопасности и переносимости гуманизированного моноклонального антитела к тау у здоровых добровольцев и пациентов с болезнью Альцгеймера легкой и умеренной степени тяжести
18
[000205] Рандомизированное плацебо-контролируемое двойное слепое исследование фазы I разрабатывали для оценки безопасности, переносимости, фармакокинетики и фармакодинамики гуманизированного моноклонального антитела к тау (hMTAU) у здоровых добровольцев и пациентов, у которых диагностирована болезнь Альцгеймера легкой и умеренной степени тяжести (БА). Здоровые добровольцы были в возрасте 18-80 лет и без симптоматического ухудшения когнитивных функций. Пациенты с БА были в возрасте 50-80 лет, и имели диагноз вероятной БА (по критериям NIA-AA) с оценкой 16-28 по краткой шкале оценки психического статуса (MMSE; Folstein et al., 1975, J Psychiatr. Res. 12:189-98), общую оценку 0,5, 1 или 2 по шкале для оценки клинической деменции (CDR; Morris, 1993, Neurology 43:2412-4) и ПЭТ-сканирование F-флорбетапира, которое было положительным для церебрального амилоида в соответствии с визуальным определением.
[000206] Исследование включало стадию повышения однократной дозы (SD) у здоровых добровольцев, за которой следовала стадия введения многократных доз (MD) у здоровых добровольцев и пациентов с БА. Исследование включало приблизительно семь когорт SD у здоровых добровольцев, которым вводили hMTAU, либо внутривенно (в/в), либо подкожно (п/к), одну или более когорт MD у здоровых добровольцев, которым hMTAU вводили внутривенно каждую неделю (Q1W)×4, и одну или более когорт MD у участников с БА, которым hMTAU вводили внутривенно Q1W×4. В исследовании с повышением однократной дозы здоровые добровольцы получили однократные дозы hMTAU либо внутривенно (в/в; дозы, находились в пределах диапазона от 225 мг до 16800 мг) либо подкожно (п/к; 1200 мг). Каждая когорта SD в/в включала 6 здоровых добровольцев, получавших активный hMTAU, и 2 участников, получавших соответствующее плацебо, на уровне однократной дозы. Когорта SD п/к предназначалась для оценки биодоступности и переносимости при п/к введении. Когорта SD п/к включала 12 здоровых участников-добровольцев, получавших активный hMTAU; без группы плацебо. Дизайн стадии SD изображен на ФИГ. 1.
[000207] Приблизительно 10 здоровых добровольцев включали в когорты MD (внутривенное введение), и приблизительно 10 участников с БА включали в когорты MD (внутривенное введение). MD когорты состояли из здоровых добровольцев или участников с БА. Каждая когорта MD в/в включала 8 участников, получавших активный hMTAU, и 2 участников, получавших соответствующее плацебо. Когорты MD у здоровых добровольцев и участников с БА включали в исследование скользящим, параллельным образом. В таблице 2 представлена подробная информация о когортах лечения.
[000208] Таблица 2
<b>Когорта A</b><b>225 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта B 675 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта C 2100 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта D 4200 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта E 8400 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта H 16800 мг в/в ×1</b>
<b>Когорта G 1200 мг п/к ×1</b>
<b>Когорта F 8400 мг в/в QW ×4</b>
<b>Когорта БА 8400 мг</b><b>в/в QW ×4</b>
N(активный агент: плацебо)
3 (2:1)
8 (6:2)
8 (6:2)
8 (6:2)
8 (6:2)
8 (6:2)
12 (12:0)
10 (8:2)
10 (8:2)
[000209] Оценки проводили следующим образом. Клинические оценки и оценки безопасности при скрининге и в заранее определенные моменты времени во время исследования включали: показатели жизненно важных функций, физические и неврологические обследования, лабораторные исследования, ЭКГ, фармакокинетику в сыворотке и (в некоторых когортах) в спинномозговой жидкости (СМЖ), уровни тау в плазме и (в некоторых когортах) в СМЖ. Комитет по мониторингу безопасности анализировал данные по безопасности на постоянной основе и принимал решения о повышении дозы в соответствии с правилами остановки исследования и ограничивающими дозу нежелательными явлениями, определенными в протоколе. Для того чтобы явление считалось ограничивающим дозу нежелательным явлением (ОДНЯ), оно должно было возникнуть в течение окна ОДНЯ, не иметь другой четко определенной причины, кроме исследуемого лекарственного препарата, и представлять собой по меньшей мере одно из следующих: серьезное; 3 степени или выше; 2 степени в неврологической категории; или 2 степени и связано с инфузией/инъекцией.
[000210] Пятьдесят пять (55) здоровых добровольцев включали в когорты однократной дозы. На стадии повышения однократной дозы предварительные данные из ранних оценок показали, что наиболее часто сообщаемыми нежелательными явлениями (НЯ), независимо от причинно-следственной связи, были головная боль (n=6), тошнота (n=3), кровоподтеки в месте инфузии (n=2) и гематома (n=1), а также инфекция мочевыводящих путей (n=3). НЯ, относящиеся к исследуемому лечению, представляли собой реакции в месте инъекции (кровоподтеки в месте инъекции (n=2) и боль в месте инъекции (n=1). Сообщалось о дополнительных связанных НЯ у одного пациента (увеличение АЛТ/АСТ; тошнота; плохое самочувствие; усталость; головная боль; диарея; артралгия). При оценке когорт однократной дозы с дополнительными временными точками данные показали, что нежелательные явления отмечались у >1 участника, включая головную боль (n=6), реакцию в месте инъекции/инфузии (n=6), инфекцию верхних дыхательных путей (n=3), тошноту (n=3), рвоту (n=2) и вирусную инфекцию желудочно-кишечного тракта (n=2). В когортах многократных доз нежелательные явления, отмеченные у >1 участника, включали осложнения в месте пункции сосудов (n=2) и постуральное головокружение (n=2). Девять (12%) участников (все в когортах однократной дозы) испытали нежелательное явление, зарегистрированное как связанное с исследуемым препаратом: реакция в месте инъекции 1 степени была единственным связанным нежелательным явлением у>1 участника (n=3, включая 2 субъектов, сообщивших о кровоподтеках, и 1 субъекта, сообщившего о боли в месте инъекции; все три разрешились без лечения). На момент оценки данных 32 (43%) участника испытали нежелательное явление, независимо от причинно-следственной связи: 23/55 (42%) в когортах однократной дозы; 9/20 (45%) в когортах многократных доз (40% ЗД и 50% пациентов с БА).
[000211] В целом, исследование показало, что hMTAU хорошо переносилось. При предварительной оценке во время исследования НЯ были несерьезными 1-2 степени; не было отмечено НЯ ≥3 степени тяжести. Отсутствовали ограничивающие дозу нежелательные явления (ОДНЯ) или НЯ, ведущие к прекращению лечения, модификациям дозы или перерывам во введении доз. Один пациент в когорте D (4200 мг в/в) вышел из исследования на 57 день исследования по личному решению. Отсутствовали сообщения о серьезных НЯ или смертельных случаях в исследовании, даже при самой высокой испытанной дозе. В заключение следует отметить, что предварительные данные показали, что однократные внутривенные и подкожные дозы hMTAU до 16800 мг были безопасными и хорошо переносились у здоровых добровольцев.
[000212] hMTAU проявляло пропорциональную дозе и двухкомпартментную фармакокинетику в сыворотке крови во всем исследованном диапазоне доз (225 мг - 16800 мг). Конечный период полужизни hMTAU составил ~30 дней: медиана конечного t1/2 hMTAU составила 32,3 дня (диапазон 23-46 дней; после однократного внутривенного введения). ФИГ. 4. Оценка биодоступности для подкожного состава (1200 мг) составила ~70%. hMTAU поддавалось детектированию в СМЖ и имело % СМЖ/сыворотка 0,15-0,2%. На ФИГ. 2-5 представлена средняя концентрация hMTAU в сыворотке крови (ФИГ. 2 и ФИГ. 4) и СМЖ (ФИГ. 3 и ФИГ. 5) после введения однократной дозы при указанных дозах и с помощью указанных путей. В целом, фармакокинетические свойства hMTAU проявили пропорциональную зависимость от дозы, без каких-либо признаков опосредуемого мишенью распределения лекарственного препарата. Помимо этого hMTAU поддавалось детектированию в СМЖ, что свидетельствует о воздействии антитела на ЦНС.
1/2
[000213] Соответственно, hMTAU было безопасным и хорошо переносилось в однократных дозах до 16800 мг в/в у людей-добровольцев и в многократных дозах 8400 мг Q1W×4 у людей-добровольцев и пациентов с БА. hMTAU проявило пропорциональную дозе ФК и медиану t 32,3 дня, а также биодоступность при п/к введении приблизительно 70%. hMTAU поддавалось детектированию в СМЖ, что указывает на воздействие на ЦНС.
[000214] Профили фармакокинетики (ФК) и фармакодинамики (ФД) оценивали у восьми (8) пациентов с болезнью Альцгеймера (БА) и у семи (7) здоровых добровольцев (ЗД) после в/в введения четырех еженедельных доз hMTAU 8400 мг. Одному здоровому добровольцу ввели неправильную дозу 4200 мг hMTAU и его данные исключили из анализа воздействия. Как показано на ФИГ. 6, предварительные результаты показали, что, несмотря на аналогичное воздействие hMTAU, более выраженный ФД ответ наблюдали у пациентов с болезнью Альцгеймера (БА) по сравнению со здоровыми добровольцами (ЗД). У пациентов с БА уровни тау в плазме крови после введения hMTAU были в два раза выше, чем у ЗД. ФК ответ был одинаковым у пациентов с БА и ЗД. Предварительные исследования показали, что исходные уровни тау в плазме крови были выше у пациентов с БА (среднее=26,3536 пг/мл; медиана=24,806 пг/мл) по сравнению с ЗД (среднее=16,4181 пг/мл; медиана=15,0045 пг/мл).
Пример 2: Клиническое исследование для оценки трех разных доз гуманизированного моноклонального антитела к тау у пациентов с продромальной стадией или легкой степенью тяжести болезни Альцгеймера
18
[000215] На Фигуре 7 показана схема клинического исследования для оценки трех разных доз гуманизированного моноклонального антитела к тау (hMTAU) у пациентов с продромальной стадией и легкой степенью тяжести болезни Альцгеймера. В исследование включали 360 пациентов по следующим критериям отбора: одно или более из (1) оценка 20-30 по краткой шкале оценки психического статуса (MMSE); (2) общая оценка 0,5 или 1 по шкале для оценки клинической деменции (CDR-GS); (3) оценка отсроченного воспроизведения ≤85 согласно батарее многократных тестов для определения нейропсихологического статуса (RBANS); и/или (4) положительный результат ПЭТ для амилоида или положительный результат определения Aβ в СМЖ. hMTAU вводили через 1, 3 и 5 недель, а затем приблизительно каждые 4 недели. В ходе исследования пациентов подвергали одному или более из МРТ, ПЭТ-сканирования [F]GTP1 для определения тау, MMSE, CDR-GS, RBANS, а также скрининга Aβ в СМЖ.
[000216] Несмотря на то, что настоящее изобретение было подробно описано выше с помощью иллюстрации и примера в целях ясности понимания, описания и примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения. Если явно не указано иное, все диапазоны, описанные в настоящем документе (например, «от 4000 мг до 16800 мг»), охватывают конечные точки диапазона. Раскрытие всех патентов и научной литературы, цитированных в настоящем документе, полностью включено посредством ссылки.
Таблица последовательностей
SEQ ID NO
Описание
Последовательность
2
Эпитоп человеческого тау (2-24)
AEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRK
4
Эпитоп тау яванской макаки (2-24)
AEPRQEFDVMEDHAGTYGLGDRK
10
Вариабельная область тяжелой цепи MTAU (VH)
EVQLVESGGD LAKPGGSLKL SCTASGLIFR SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNAKNTLY LQMSSLKSED TAMYYCANSY SGAMDYWGQG TSVTVSS
11
Вариабельная область легкой цепи MTAU (VL)
DDLLTQTPLS LPVSLGDPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYFEW YLQKPGQSPK LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSLVP WTFGGGTKLE IK
12
MTAU HVR-H1
SYGMS
13
MTAU HVR-H2
TINSGGTYTYYPDSVKG
14
MTAU HVR-H3
SYSGAMDY
15
MTAU HVR-L1
RSSQSIVHSNGNTYFE
16
MTAU HVR-L2
KVSNRFS
17
MTAU HVR-L3
FQGSLVPWT
18
Вариабельная область тяжелой цепи hMTAU (VH)
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSS
19
Вариабельная область легкой цепи hMTAU (VL)
DDVLTQTPLS LPVTPGQPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IK
20
hMTAU HVR-H1
SYGMS
21
hMTAU HVR-H2
TINSGGTYTYYPDSVKG
22
hMTAU HVR-H3
SYSGAMDY
23
hMTAU HVR-L1
RSSQSIVHSNGNTYLE
24
hMTAU HVR-L2
KVSNRFS
25
hMTAU HVR-L3
FQGSLVPWT
26
Вариант тяжелой цепи hMTAU 1
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
27
Вариант тяжелой цепи hMTAU 2
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGLIFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT INSGGTYTYY PDSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANSY SGAMDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLYI TREPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLG
28
Легкая цепь hMTAU
DDVLTQTPLS LPVTPGQPAS ISCRSSQSIV HSNGNTYLEW YLQKPGQSPQ LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCFQGSLVP WTFGQGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC
--->
Перечень последовательностей
<110>  GENENTECH, INC.
<120>  Способы лечения нейродегенеративных заболеваний
<130>  01146-0069-00PCT
<150>  US 62/477,535
<151>  2017-03-28
<150>  US 62/532,696
<151>  2017-07-14
<150>  US 62/577,559
<151>  2017-10-26
<150>  US 62/580,359
<151>  2017-11-01
<160>  28
<170>  PatentIn, версия 3.5
<210>  1
<400>  1
000
<210>  2
<211>  23
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
<400>  2
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  3
<400>  3
000
<210>  4
<211>  23
<212>  PRT
<213>  Macaca fascicularis
<400>  4
Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Asp Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr
1               5                   10                  15
Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys
20
<210>  5
<400>  5
000
<210>  6
<400>  6
000
<210>  7
<400>  7
000
<210>  8
<400>  8
000
<210>  9
<400>  9
000
<210>  10
<211>  117
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Ala Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  11
<211>  112
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  11
Asp Asp Leu Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  12
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  12
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  13
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  13
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  14
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  14
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  15
<211>  16
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  15
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Phe Glu
1               5                   10                  15
<210>  16
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  16
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  17
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Неизвестно
<220>
<223>  Виды мышиных
<400>  17
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  18
<211>  117
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область тяжелой цепи (VH) hMTAU
<400>  18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210>  19
<211>  112
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариабельная область легкой цепи (VL) hMTAU
<400>  19
Asp Asp Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
<210>  20
<211>  5
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-H1
<400>  20
Ser Tyr Gly Met Ser
1               5
<210>  21
<211>  17
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-H2
<400>  21
Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  22
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-H3
<400>  22
Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr
1               5
<210>  23
<211>  16
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-L1
<400>  23
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1               5                   10                  15
<210>  24
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-L2
<400>  24
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>  25
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  hMTAU HVR-L3
<400>  25
Phe Gln Gly Ser Leu Val Pro Trp Thr
1               5
<210>  26
<211>  444
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариант тяжелой цепи hMTAU 1
<400>  26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435                 440
<210>  27
<211>  443
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Вариант тяжелой цепи hMTAU 2
<400>  27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Ile Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Asn Ser Tyr Ser Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115                 120                 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130                 135                 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145                 150                 155                 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165                 170                 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180                 185                 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195                 200                 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210                 215                 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225                 230                 235                 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245                 250                 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260                 265                 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275                 280                 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290                 295                 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305                 310                 315                 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325                 330                 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340                 345                 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355                 360                 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370                 375                 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385                 390                 395                 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405                 410                 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420                 425                 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435                 440
<210>  28
<211>  219
<212>  PRT
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Легкая цепь hMTAU
<400>  28
Asp Asp Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20                  25                  30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85                  90                  95
Ser Leu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115                 120                 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130                 135                 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145                 150                 155                 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165                 170                 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180                 185                 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195                 200                 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210                 215
<---