КАПЛИ ПЛЕТНЕВА N 251 ДЛЯ АНТИАНГИОГЕННОЙ ТЕРАПИИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
PLETNEV'S DROPS N 251 FOR ANTI-ANGIOGENESIS THERAPY OF BENIGN AND MALIGNANT NEW GROWTHS

Изобретение относится к области фармацевтики, биохимической медицины, молекулярной биологии, фармакологии и может быть использовано в клинической медицине для антиангиогенной терапии доброкачественных и злокачественных новообразований.
Известно, что при отсутствии кровоснабжения опухоли получают кислород и питательные вещества путем диффузии и обычно не вырастают более 1-2 мм в диаметре. В бессосудистых опухолях скорость клеточного роста равна скорости их гибели, поэтому опухоль остается в спящем состоянии до тех пор, пока в ней не начнется рост кровеносных сосудов, то есть процесс ангиогенеза, начало которого ведет к формированию нового кровоснабжения опухоли и облегчает ее быстрый рост и метастазирование.
В настоящее время для антиангиогенной терапии злокачественных новообразований принимают рекомбинантные моноклональные антитела к рецепторам фактора роста эндотелия сосудов, нейтрализуя его действие и подавляя ангиогенез. Однако эта терапия не оказывает влияния на доброкачественные новообразования.
Известно, что современные препараты, обладающие антиангиогенным действием, часто вызывают побочные действия, например при приеме бевацизумаба возможны повышение артериального давления, сердечная недостаточность, артериальная тромбоэмболия, тромбоз, диарея, алергическая реакция, перфорация желудочно-кишечного тракта, замедление заживления ран и др. (Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система), Выпуск XII, М., "ЭХО", 2011, с 753-754); при приеме авастина возможны кровоизлияния, включая легочные кровотечения/кровохарканье (чаще встречаются у пациентов с немелкоклеточным раком легкого), артериальная тромбоэмболия, повышение артериального давления, артериальная тромбоэмболия (включая инфаркт миокарда, инсульт, транзиторную ишемическую атаку и другие артериальные эмболии), тромбоз глубоких вен, застойная сердечная недостаточность, суправентрикулярная тахикардия, кровотечение, лейкопения, нейтропения, фебрильная нейтропения, тромбоцитопения, анемия, диарея, тошнота, рвота, запор, ректальное кровотечение, стоматит, анорексия, перфорация желудочно-кишечного тракта, непроходимость кишечника, гастроинтестинальные расстройства, ринит, одышка, носовое кровотечение, легочная тромбоэмболия, гипоксия, сухость кожи, изменение цвета кожи, ладонно-подошвенный синдром, периферическая сенсорная нейропатия, извращение вкуса, инсульт, синкопе, сонливость, нарушение зрительной функции, повышенное слезотечение, артралгия, мышечная слабость, миалгия, протеинурия, инфекция мочевыводящих путей, боль в месте введения препарата, астения, повышенная усталость, повышение температуры тела; заторможенность, боли различной локализации, присоединение вторичных инфекций, абсцесс, сепсис, дегидратация, гипергликемия, снижение уровня гемоглобина, гипокалиемия, гипонатриемия, лейкопения, нейтропения, тромбоцитопения, протеинурия, увеличение протромбинового времени, увеличение международного нормализованного отношения (MHO), гипертензивная энцефалопатия, в некоторых случаях с летальным исходом, синдром обратимой поздней лейкоэнцефалопатии, включающий эпилептический припадок, психические нарушения, нарушение зрения, поражение зрительных центров коры головного мозга, дисфония, перфорация носовой перегородки и др. (см. Инструкцию по применению препарата АВАСТИН на сайтах Интернет http://www.aptekamed.ru/catalog/; http://medi.ru/doc/22212.htm; http://health.mail.ru/drug/avastin/).
Задачей изобретения является создание нового высокоэффективного комплексного растительного лекарственного препарата, обладающего антиангиогенной активностью, не вызывающего побочного действия, привыкания к нему и применяемого как самостоятельно, так и в комплексе со стандартной терапией.
Техническим результатом изобретения является селективная аваскуляризация доброкачественных и злокачественных новообразований путем восстановления структуры и функции эндотелия сосудов без побочного действия и привыкания к препарату.
Указанный технический результат достигается каплями для антиангиогенной терапии доброкачественных и злокачественных новообразований, характеризующимися тем, что они представляют собой настойку листьев подорожника, листьев земляники и корня лопуха на 95%-ном этиловом спирте при содержании 15-25 мг субстанции в 1 мл настойки.
Предложенные капли для антиангиогенной терапии доброкачественных и злокачественных новообразований получили название «капли Плетнева №251».
Капли Плетнева №251 представляют собой настойку трех видов лекарственного растительного сырья - листьев подорожника, листьев земляники и корня лопуха, содержащих в совокупности селен, β-каротин, байкалеин, витамины P, E, C, гиспидулин, инулин, кверцетин и хлорофилл.
Листья подорожника содержат β-каротин, байкалеин, витамин C, гиспидулин и хлорофилл.
Листья земляники содержат селен, β-каротин, витамин P, кверцетин и хлорофилл.
Корень лопуха содержит витамин E и инулин.
Настойка изготовлена на 95%-ном этиловом спирте при содержании 15-25 мг субстанции в 1 мл настойки.
Капли Плетнева №251 изготавливаются следующим образом.
В качестве исходных продуктов выбирают растительное сырье трех видов, содержащее селен, β-каротин, байкалеин, витамины P, E, C, гиспидулин, инулин, кверцетин и хлорофилл: листья подорожника, земляники и корни лопуха. Растительную массу предварительно высушивают и измельчают. Для выбора технологического режима исследуют кинетику экстрагирования растительного материала и определяют время установления динамического равновесия в системе твердое вещество-жидкость по действующим веществам. 100 г высушенной и измельченной зеленой массы помещают в стеклянную емкость и заливают 95% этиловым спиртом (ФС 42-3072-00) в соотношении 1:10. Извлечения, полученные при экстрагировании сырья, отстаивают в отстойнике в течение регламентированного в НД времени. Полученное извлечение фильтруют посредством мембранной ультрафильтрации (размер пор составляет 0,2 мкм). Изготовленную настойку расфасовывают дозатором во флаконы или ампулы различной емкости, герметизируют и упаковывают.
При доклиническом токсикологическом изучении установлено, что при однократном введении мышам линии BALB/c и крысам Wistar капли Плетнева №251 являются малотоксичным препаратом. Показатели ЛД50 капель Плетнева №251 составляют 41,2-51,8 мл/кг.
При этом не выявлено существенных видовых и половых различий в чувствительности указанных видов животных к токсическому действию препарата.
При изучении токсичности капель Плетнева №251 при 3-месячном введении крысам и при 1-месячном введении собакам в испытанных дозах не установлено повреждающего действия препарата на основные органы и системы организма подопытных животных. При патогистологическом исследовании внутренних органов животных и мест введения капель Плетнева №251, проведенном после окончания хронических экспериментов, не выявлено патологических изменений и местнораздражающего действия, связанных с токсичностью препарата.
При исследовании мутагенности капель Плетнева №251 была изучена способность препарата вызывать генные мутации индикаторных штаммов бактерий в тесте Эймса, вызывать хромосомные аберрации в клетках костного мозга млекопитающих, влиять на количество доминантных леталей в зародышевых клетках мышей и оказывать ДНК-повреждающие действия SOS в хромотесте. При этом установлено, что ни сам препарат, ни его метаболиты в диапазоне испытанных концентраций (от 0,1 до 1000 мкг/чашку Петри) не обладают мутагенными свойствами в тесте Эймса на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium TA 98, TA 100 и TA 1537 в условиях метаболической активации фракцией S9 печени крысы.
1
57
6
Капли Плетнева №251 в испытанных дозах не вызывают хромосомных аберраций в клетках костного мозга и доминантных летальных мутаций у мышей-гибридов F(CBA×CBl). Капли Плетнева №251 в диапазоне испытанных концентраций 0,01, 0,02, 0,04, 0,07, 0,15, 0,3, 0,6, 1,25, 2,5, 5,0 мг/мл не оказывают ДНК-повреждающего действия в SOS-хромотесте. Следовательно, результаты проведенных исследований свидетельствуют, что Капли Плетнева №251 не обладают мутагенными свойствами и не являются потенциальным канцерогеном.
При введении беременным крысам капли Плетнева №251 в испытанных дозах с 1 по 19 день гистации не влияли на прибавку массы беременных крыс, уменьшение продолжительности беременности, количество живых плодов, мест имплантации, желтых тел и массы тела эмбрионов. Индексы пред- и постимплантационной гибели в группе крыс, подвергавшихся во время беременности воздействию капель Плетнева №251 в испытанных дозах не отличались от показателей в контроле.
Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что введение капель Плетнева №251 в испытанных дозах с 1 по 20 день беременности не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.
При ежедневном введении капель Плетнева №251 в испытанных дозах крысам-самцам в течение 10 недель и крысам-самкам в течение 2 недель не установлено влияния препарата на репродуктивную функцию животных.
При изучении аллергизирующих свойств капель Плетнева №251 на морских свинках установлено, что при 5-кратном введении препарата в сенсибилизирующих испытанных дозах и введении разрешающей испытанной дозы препарата на 14 и 21 дни после сенсибилизации капли Плетнева №251 не вызывают анафилактического шока.
Капли Плетнева №251 в испытанных дозах и схемах сенсибилизации не проявляют аллергизирующего действия в реакции гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок и в реакции подколенного лимфоузла у мышей.
В испытанных дозах капли Плетнева №251 не влияют на число антителобразующих и ядросодержащих клеток в селезенке, а также на реакцию гиперчувствительности замедленного типа у мышей. Полученные данные свидетельствую об отсутствии негативного влияния капель Плетнева №251 на гуморальный и клеточный иммунитет и, следовательно, об отсутствии у препарата иммунотоксичности.
Способ антиангиогенной терапии осуществляют следующим образом.
Полученные капли Плетнева №251 представляют собой раствор активного вещества в 95%-ном этиловом спирте, 1 мл которого содержит 15-25 мг лекарственной субстанции. Капли Плетнева №251 вводят перорально.
При пероральном введении необходимую дозу рассчитывают следующим образом:
в 20 каплях раствора содержится 15-25 мг лекарственной субстанции;
в 10 каплях (1/2) раствора содержится 7,5-12,5 мг лекарственной субстанции;
в 5 каплях (1/4) раствора содержится 3,75-6,25 мг лекарственной субстанции;
в 3 каплях (1/7) раствора содержится 2,25-3,75 мг лекарственной субстанции.
Продолжительность курса лечения составляет 2-3 месяца в зависимости от состояния больного. Проведение повторных курсов лечения по рекомендации врача. В период проведения лечения контролируют состояние больного по результатам анализа крови, биохимического исследования крови, иммунограммы, цитогенетического исследования, УЗИ-исследования.
При применении капель Плетнева №251 наблюдается относительная нормализация показателей анализа крови, биохимического исследования крови, иммунограммы, а также результатов цитогенетического и УЗИ-исследования, проявляющаяся улучшением клинического самочувствия больных.
Примеры осуществления способа антиангиогенной терапии.
Пример 1. Больная Е. 22 года.
Клинический диагноз: Фиброаденома обеих молочных желез.
Больная Е. обратилась к нам 06.02.2012 года года. Жалобы на боль в правой молочной железе при пальпации. Температура тела 36,6°С. Дыхание жесткое. ЧДД: 18/мин. Тоны сердца ритмичные, приглушены. АД: 110/70 мм рт.ст. Пульс: 60/мин. Соски и ареолы без изменений. Выделений из сосков нет. При пальпации в верхневнутреннем квадранте справа определяется плотное подвижное болезненное уплотнение размером приблизительно 2 см, легко смещающееся в ткани железы. При пальпации в центральном квадранте слева определяется уплотнение размером приблизительно 1 см, легко смещающееся в ткани железы. Подмышечные, над- и подключичные лимфоузлы не увеличены. Живот мягкий, безболезненный. Стул, диурез адекватный. Отеков нет.
Больной рекомендован курс (90 суток) лечения каплями Плетнева №251.
С устного согласия больной проведена терапия каплями Плетнева по следующей схеме (Таблица 1): 5 капель препарата за 10 минут до еды утром 1 раз в день, растворяя в 50 мл кипяченой воды комнатной температуры.
- Лабораторные исследования:
Цитологическое исследование №22082-83 от 06.10.2011 года: элементы крови, голоядерные элементы, элементы стромы, скопления клеток кубического эпителия. Заключение: цитограмма более соответствует фиброаденоме.
Таблица 1
Анализ крови.
Параметр
Результат 06.02.12
Результат 04.05.12
Результат 02.08.12
Норма
Ед. изм.
Лейкоциты
4,61
3,33
4,57
4,0-9,0
10<sup>9</sup>/л
Эритроциты
4,41
4,77
4,83
Ж: 3,7-4,7
10<sup>12</sup>/л
Гемоглобин
134
137
147
Ж: 115-145
г/л
Гематокрит
40
41,9
43.5
35-45
%
Тромбоциты
324
197
210
150-350
10<sup>9</sup>/л
Палочкоядерные
1
1
2
1-5
%
Сегментоядерные
37
40
38
47-72
%
Эозинофилы
10
8
5
1-5
%
Базофилы
1
1
0
0-1
%
Лимфоциты
41
41
44
19-37
%
Моноциты
10
9
11
3-11
%
СОЭ
10
3
3
Ж: 2-20
мм/час
Таблица 2
Биохимическое исследование крови.
Показатель
Результат 06.02.12
Результат 04.05.12
Результат 02.08.12
Норма
Ед. изм.
Общий белок
63,2
65,6
71
64-83
г/л
Билирубин общий
8,32
8,65
9
5-21
мкМ/л
Холестерин общий
6,53
5,08
5,0
0-5,2
мМ/л
ACT
14,7
19,4
23
до 42
ед/л
АЛТ
13
20,5
20
до 37
ед/л
Щелочная фосфатаза
73
66
66
42-98
ед/л
Амилаза панкриатическая
18,88
20,5
27
8-53
ед/л
Креатинин
63,1
60,8
65
53-115
мкМ/л
Мочевина
3,1
3,9
5,2
2,1-7,1
мМ/л
- Инструментальные исследования:
УЗИ от 06.10.2011 года: структура ткани однородна. В правой молочной железе в верхневнутреннем квадранте локализуется узловое образование размером 2,3×1,4 см, с четкими ровными контурами.
В левой молочной железе в центральном квадранте локализуется узловое образование размером 1,1 см, с четкими ровными контурами.
УЗИ от 10.02.2012 года: структура молочных желез соответствует возврасту. Протоки не расширены. В правой молочной железе на 14 час продолжает локализоваться тканевое образование размером 2,3×1,2 см с четкими ровными контурами, однородной структуры. Обращает на себя внимание активная васкуляризация образования. Сосудистый рисунок окружающих тканей обычный.
В левой молочной железе на 11 час локализуется аналогичное образование размером 1,5×0,6 см, аваскулярное. Сосудистый рисунок окружающих тканей обычный.
В правой подмышечной области локализуются лимфатические узлы 1,6×0,6 см, обычной УЗ-структуры.
УЗИ от 12.03.2012 года: сохраняется фиброаденома в правой молочной железе размером 2.3×1,2 см с единичными сосудистыми структурами (их количество уменьшилось).
В левой молочной железе на 11 час образование уменьшилось до 0,8 см, аваскулярное. Сосудистый рисунок окружающих тканей обычный.
В правой подмышечной области продолжают локализоваться лимфатические узлы 1,6×0,6 см, обычной УЗ-структуры.
УЗИ от 04.06.2012 года: сохраняется фиброаденома в правой молочной железе размером 2.4×1,2 см, слабо васкуляризированная.
В левой молочной железе образование практически не визуализируется.
В правой подмышечной области продолжают локализоваться лимфатические узлы 1,6×0,6 см, обычной УЗ-структуры.
После проведения первого курса реабилитации на 04.06.2012 года: самочувствие хорошее. Сохраняется болезненность в правой молочной железе при пальпации. Температура тела 36,7°C. Дыхание жесткое. ЧДД: 18/мин. Тоны сердца ритмичные, приглушены. АД: 115/75 мм рт.ст. Пульс: 65/мин. Соски и ареолы без изменений. Выделений из сосков нет. При пальпации в верхневнутреннем квадранте справа сохраняется плотное болезненное уплотнение размером приблизительно 2 см, легко смещающееся в ткани железы. Подмышечные, над- и подключичные лимфоузлы не увеличены. Живот мягкий, безболезненный. Печень, селезенка не пальпируются. Дизурических явлений нет. Отеков нет.
Заключение: проведены 2 курса лечения (по 90 дней каждый) каплями Плетнева с положительным эффектом. Терапия продолжается в прежнем объеме.
2
x
0
Пример 2. Больная Н. 41 год. Клинический диагноз: Рак молочной железы TNM.
Больная Н. обратилась к нам 29.04.2013 года. Жалобы на наличие образования в правой молочной железе при пальпации. Температура тела 36,6°C. Дыхание жесткое. ЧДД: 19/мин. Тоны сердца ритмичные, приглушены. АД: 120/70 мм рт.ст. Пульс: 65/мин. Сосок и ареол правой молочной железы втянут, слева без изменений. Выделений из сосков нет. Правая молочная железа отечна. При пальпации в нижневнутреннем квадранте справа определяется образование размером 20×20 мм, спаянное с кожей. В правой подмышечной области пальпируются увеличенные лимфоузлы размером до 10 мм, плотные. Над- и подключичные лимфоузлы не увеличены. Живот мягкий, безболезненный. Печень, селезенка не пальпируются. Дизурических явлений нет.Отеков нет.
Больной рекомендован курс (90 суток) лечения каплями Плетнева №251.
С устного согласия больной проведена терапия каплями Плетнева №251 по следующей схеме: внутрь 7 капель препарата за 10 минут до еды, растворяя в 50 мл кипяченой воды комнатной температуры, 2 раза в день утром и вечером.
- Лабораторные исследования:
Цитологическое исследование №1626 от 28.02.2013 года. Заключение: больше данных за дольковый рак.
Цитологическое исследование №2013/4355 от 15.03.2013 года. Заключение: в полученном материале обнаруженные клетки соответствуют код: 8010/3 рак, БДУ.
Таблица 3
Анализ крови
Параметр
Результат 25.04.2013
Результат 17.06.2013
Норма
Ед. изм.
Лейкоциты
6,4
5,59
4,0-9,0
10<sup>9</sup>/л
Эритроциты
4,3
4,7
Ж: 3,7-4,7
10<sup>12</sup>/л
Гемоглобин
120
130
Ж: 115-145
г/л
Тромбоциты
240
216
150-350
10<sup>9</sup>/л
Палочкоядерные
8
1
1-5
%
Сегментоядерные
69
57
47-72
%
Эозинофилы
1
2
1-5
%
Лимфоциты
21
35
19-37
%
Моноциты
1
5
3-11
%
СОЭ
25
14
Ж: 2-20
мм/час
Таблица 4
Биохимическое исследование крови.
Показатель
Результат 25.04.2013
Результат 17.06.2013
Норма
Ед. изм.
Общий белок
67,4
67
64-83
г/л
Билирубин общий
28,3
23,6
5-21
мкМ/л
Холестерин общий
7,53
5,08
0-5,2
мМ/л
ACT
46
14,5
до 42
ед/л
АЛТ
64,8
33,4
до 37
ед/л
Щелочная фосфатаза
73
64
42-98
ед/л
Амилаза панкриатическая
18,8
20,7
8-53
ед/л
Креатинин
83,3
63,1
53-115
мкМ/л
Мочевина
3,2
4,1
2,1-7,1
мМ/л
- Инструментальные исследования:
УЗИ от 19.02.2013 года: в правой молочной железе в нижневнутреннем квадранте локализуется гипоэхогенное образование неправильной формы с неровным контуром размером 11×15×15 мм с наличием в структуре мелких гиперэхогенных включений с умеренно выраженным кровотоком при ЦДК.
Справа в области латеральной поверхности локализуются гипоэхогенные лимфатические узлы округлой формы без дифференцировки паренхимы 11 мм, 10 мм, 6 мм, 4 мм.
Заключение: образование правой молочной железы. Лимфоаденопатия.
УЗИ от 29.04.2013 года: в правой молочной железе в нижневнутреннем квадранте локализуется гипоэхогенное образование неправильной формы с неровным контуром размером 32×20×20 мм. При ЦДК в образовании определяются множественные сосуды с низкорезистентным кровотоком.
В подмышечной области справа локализуется лимфоузел размером 19×9 мм, в области передней подмышечной линии справа определяются гипоэхогенные лимфоузлы размерами 12 мм, 6 мм, 8 мм.
Заключение: образование правой молочной железы. Лимфоаденопатия.
УЗИ от 17.06.2013 года: в правой молочной железе в нижневнутреннем квадранте сохраняется образование с неровным нечетким контуром размером 31×24×23 мм с единичными сосудами.
В подмышечной области справа локализуется лимфоузел размером 19×9 мм, в области передней подмышечной линии справа определяются гипоэхогенные лимфоузлы размерами 16×10 мм, 4,6×7 мм, 5,5 мм, 17×9 мм.
Заключение: образование правой молочной железы. Лимфоаденопатия.
После проведения половины первого курса лечения на 17.06.2013 года: самочувствие хорошее. Сохраняется образование в правой молочной железе при пальпации. Температура тела 36,6°C. Дыхание везикулярное. ЧДД: 16/мин. Тоны сердца ритмичные, приглушены. АД: 110/70 мм рт.ст. Пульс: 60/мин. Соски и ареолы без изменений. Выделений из сосков нет. Правая молочная железа не отечна. При пальпации в нижневнутреннем квадранте справа определяется образование размером 20×20 мм, спаянное с кожей. В правой подмышечной области пальпируются увеличенные лимфоузлы размером до 10 мм, плотные.
Над- и подключичные лимфоузлы не увеличены. Живот мягкий, безболезненный. Печень, селезенка не пальпируются. Дизурических явлений нет. Отеков нет.
Заключение: проведена половина 1 курса лечения (90 дней) каплями Плетнева №251 с положительным эффектом. Терапия продолжается в прежнем объеме.