АНТИ-CD79b АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Сконструированное анти-CD79b антитело с цистеиновыми заменами, содержащее одно или несколько свободных цистеинов и
(a) по меньшей мере одну последовательность HVR, выбранную из группы, состоящей из:
(i) HVR-L1, содержащей последовательность A1-A15, где A1-A15 представляет собой KASQSVDYDGDSFLN (SEQ ID NO:131);
(ii) HVR-L2, содержащей последовательность B1-B7, где B1-B7 представляет собой AASNLES (SEQ ID NO:132);
(iii) HVR-L3, содержащей последовательность C1-C9, где C1-C9 представляет собой QQSNEDPLT (SEQ ID NO:133);
(iv) HVR-H1, содержащей последовательность D1-D10, где D1-D10 представляет собой GYTFSSYWIE (SEQ ID NO:134);
(v) HVR-H2, содержащей последовательность E1-E18, где E1-E18 представляет собой GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO:135); и
(vi) HVR-H3, содержащей последовательность F1-F10, где F1-F10 представляет собой TRRVPVYFDY (SEQ ID NO:136); и
(b) по меньшей мере один вариант HVR, где указанный вариант HVR имеет модификацию по меньшей мере в одном остатке последовательности, представленной в SEQ ID NO:131, 132, 133, 134, 135 или 136.
2. Сконструированное анти-CD79b антитело с цистеиновыми заменами, содержащее один или несколько свободных цистеинов и
(а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:164-166), последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:160-163), и последовательность CH1 и/или Fc, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:167 и/или 168);
(b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:156-158), последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:152-155), и последовательность CL1, представленную на фигуре 15 (SEQ ID NO:159);
(c) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:183-185), последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:179-182), и последовательность CH1 и/или Fc, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:186 и/или 187);
(d) вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:175-177), вариабельный домен включает последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:171-174), и последовательность CL1, представленную на фигуре 16 (SEQ ID NO:178);
(e) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:202-204), последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:198-201), и последовательность CH1 и/или Fc, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:205 и/или 206);
(f) вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:194-196), последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:190-193), и последовательность CL1, представленную на фигуре 17 (SEQ ID NO:197);
(g) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность HVR1-HC, HVR2-HC и/или HVR3-HC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:221-223), последовательность FR1-HC, FR2-HC, FR3-HC и/или FR4-HC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:217-220), и последовательность CH1 и/или Fc, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:224 и/или 225); или
(h) вариабельный домен легкой цепи, включающий последовательность HVR1-LC, HVR2-LC и/или HVR3-LC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:213-215), последовательность FR1-LC, FR2-LC, FR3-LC и/или FR4-LC, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:209-212), и последовательность CL1, представленную на фигуре 18 (SEQ ID NO:216).
3. Сконструированное анти-CD79b антитело с цистеиновыми заменами, содержащее один или несколько свободных цистеинов и
(a) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:170, и вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:169;
(b) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:189, вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:188;
(c) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:208, вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:207;
(d) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:227, вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:226;
(е) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:301, вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:302; или
(f) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:14, вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO:10.
4. Сконструированное антитело с цистеиновыми заменами, содержащее одну или несколько свободных цистеиновых аминокислот в одном или нескольких положениях, выбранных из положений 15, 110, 114, 121, 127, 168 и 205 легкой цепи в соответствии с нумерацией по Кэбату; положений 5, 23, 84, 112 тяжелой цепи в соответствии с нумерацией по Кэбату и положений 118, 120, 282, 375 и 400 тяжелой цепи в соответствии с Европейской нумерацией в родительском антителе, где указанным родительским антителом является антитело против CD79b, содержащее:
(a) по меньшей мере одну последовательность HVR, выбранную из группы, состоящей из:
(i) HVR-L1, содержащей последовательность A1-A15, где A1-A15 представляет собой KASQSVDYDGDSFLN (SEQ ID NO:131);
(ii) HVR-L2, содержащей последовательность B1-B7, где B1-B7 представляет собой AASNLES (SEQ ID NO:132);
(iii) HVR-L3, содержащей последовательность C1-C9, где C1-C9 представляет собой QQSNEDPLT (SEQ ID NO:133);
(iv) HVR-H1, содержащей последовательность D1-D10, где D1-D10 представляет собой GYTFSSYWIE (SEQ ID NO:134);
(v) HVR-H2, содержащей последовательность E1-E18, где E1-E18 представляет собой GEILPGGGDTNYNEIFKG (SEQ ID NO:135); и
(vi) HVR-H3, содержащей последовательность F1-F10, где F1-F10 представляет собой TRRVPVYFDY (SEQ ID NO:136); и
(b) по меньшей мере один вариант HVR, где указанный вариант HVR имеет модификацию по меньшей мере в одном остатке последовательности, представленной в SEQ ID NO:131, 132, 133, 134, 135 или 136.
5. Антитело по п.1, где указанное антитело ковалентно связывается с ауристатиновым или майтанзиноидным лекарственным средством, в результате чего образуется конъюгат «антитело-лекарственное средство».
I
6. Конъюгат «антитело-лекарственное средство» по п.5, содержащий антитело (Ab) и молекулу ауристатинового или майтанзиноидного лекарственного средства (D), где указанное сконструированное антитело с цистеиновыми заменами связано с D линкерной молекулой (L) посредством одной или нескольких свободных цистеиновых аминокислот, где указанное соединение имеет формулу :
где p равно 1, 2, 3 или 4.
7. Соединение-конъюгат «антитело-лекарственное средство», выбранное из структур:
где Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; p равен 1, 2, 3 или 4; а Ab представляет собой антитело по п.191.
8. Способ получения соединения-конъюгата «антитело-лекарственное средство», содержащего анти-CD79b антитело (Ab) по п.1 и молекулу ауристатинового или майтанзиноидного лекарственного средства (D), где указанное антитело связано с D с помощью линкерной молекулы (L) через одну или несколько цистеновых замен, где указанное соединение имеет формулу I:
где p равно 1, 2, 3 или 4, и где указанный способ включает стадии:
(a) реакции взаимодействия цистеиновой группы, введенной в сконструированное антитело с цистеиновыми заменами, с линкерным реагентом, с образованием промежуточного соединения антитело-линкер Ab-L; и
(b) реакции взаимодействия Ab-L с активированной молекулой лекарственного средства D с образованием конъюгата «антитело-лекарственное средство»; или стадии:
(c) реакции взаимодействия нуклеофильной группы молекулы лекарственного средства с линкерным реагентом с образованием промежуточного соединения «лекарственное средство-линкер» D-L; и
(d) реакции взаимодействия D-L с цистеиновой группой, введенной в сконструированное антитело с цистеиновыми заменами, с образованием конъюгата «антитело-лекарственное средство».
9. Композиция, содержащая антитело по п.1.
10. Фармацевтический состав, содержащий конъюгат «антитело-лекарственное средство» по п.7 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или эксципиент.
11. Сконструированное анти-CD79b антитело с цистеиновыми заменами по п.10, содержащее одну или несколько последовательностей, выбранных из:
Последовательность возле Cys-мутации
Номер в последовательности
Нумерация по Кабат
EU-нумерация
SEQ ID NO
SLSASCGDRVT
V15C
V15C
278
EIKRTCAAPSV
V114C
V110C
279
FIFPPCDEQLK
S125C
S121C
281
DEQLKCGTASV
S131C
S127C
282
VTEQDCKDSTY
S172C
S168C
283
GLSSPCTKSFN
V209C
V205C
284
12. Сконструированное анти-CD79b антитело с цистеиновыми заменами по п.11, содержащее последовательность тяжелой цепи, выбранную из: SEQ ID NO: 308, 304, 306 и 310,
и/или
последовательность легкой цепи, выбранную из: SEQ ID NO:307, 303, 305 и 309.