ИНСЕКТИЦИДНЫЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ УСТОЙЧИВЫХ К НАСЕКОМЫМ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ

1. Способ усиления аккумуляции первого инсектицидного белка в клетке-хозяине, причем указанный способ предусматривает одновременную экспрессию указанного первого белка, выбранного из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, со вторым инсектицидным белком, выбранным из группы, состоящей из TIC810 и TIC812, где указанная одновременная экспрессия усиливает аккумуляцию первого белка по сравнению с аккумуляцией указанного первого белка, экспрессируемого в отсутствие указанного второго белка.
2. Композиция, проявляющая инсектицидную активность, содержащая первый белок, выбранный из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и второй белок, выбранный из группы, состоящей из TIC810 и TIC812.
3. Композиция по п.2, где указанным первым белком является TIC809, а указанным вторым белком является TIC810.
4. Композиция по п.2, где отношение указанного первого белка к указанному второму белку равно от приблизительно 1:1 до приблизительно 2:1.
5. Композиция по п.2, обеспеченная в рационе вредителя из отрядов Coleoptera (Жесткокрылых) или Hemiptera (Полужесткокрылых) растений в приемлемой для сельского хозяйства готовой форме.
6. Композиция по п.5, где указанная готовая форма состоит из обоих белков, экспрессируемых в клетке растения.
7. Композиция по п.5, где указанным вредителем из отряда Coleoptera является жук-блошка кукурузы, а указанным вредителем из отряда Hemiptera является клоп полевой Lygus.
8. Продукт, содержащий обнаруживаемое количество первого белка, выбранного из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и обнаруживаемое количество второго белка, выбранного из группы, состоящей из TIC810 и TIC812.
9. Продукт, содержащий обнаруживаемое количество (1) первой нуклеотидной последовательности, кодирующей первый белок, выбранный из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и второй нуклеотидной последовательности, кодирующей второй белок, выбранный из группы, состоящей из TIC810 и TIC812; (2) первого белка, выбранного из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и второго белка, выбранного из группы, состоящей из TIC810 и TIC812; (3) как (1), так и (2); или (4) любой комбинации (1) и (2).
10. Продукт по п.8 или 9, выбранный из группы, состоящей из семян хлопчатника, масла из семян хлопчатника, кормовой муки из жмыха семян хлопчатника, семян сои, соевого масла, соевой мучки, соевой муки, твердых веществ сухих продуктов дистиллятора, семян кукурузы, кукурузной муки, кукурузной мучки, кукурузного сиропа, кукурузного масла, кукурузного крахмала, корма для животных и злаков, приготовленных в целом или частично из побочных продуктов сои и/или кукурузы.
11. Способ получения клетки растения, устойчивой к насекомому-вредителю, включающий трансформацию указанной клетки растения для экспрессии инсектицидно эффективного количества композиции токсина, причем указанная композиция токсина содержит первый белок, выбранный из группы, состоящей из ЕТ29, ЕТ37 и TIC809, и второй белок, выбранный из группы, состоящей из TIC810 и TIC812.
12. Способ по п.11, где указанную клетку растения регенерируют в фертильное трансгенное растение.
13. Способ по п.11, где указанная клетка растения выбрана из группы, состоящей из клетки однодольного растения и клетки двудольного растения.
14. Способ по п.13, где (1) указанная клетка однодольного растения выбрана из группы, состоящей из клетки растения кукурузы, пшеницы, овса, риса, сорго, мило, гречихи, ржи, травы (овсяницы, тимофеевки луговой, костра, ежи сборной, августиновой травы, бермудской травы, полевицы) и ячменя, и (2) указанная клетка двудольного растения выбрана из группы, состоящей из клеток растений люцерны, яблони, абрикоса, спаржи, фасоли, ягод, ежевики, черники, канолы (рапса), моркови, цветной капусты, сельдерея, вишни, куриного гороха, цитрусового дерева, хлопчатника, коровьего гороха, клюквы, огурца, тыквы, баклажана, плодового дерева, винограда, лимона, салата латука, льна обыкновенного, дыни, горчицы, орехоплодного дерева, гибискуса съедобного, апельсина, гороха, персика, арахиса, груши, сливы, картофеля, сои, сквоша, земляники, сахарной свеклы, подсолнечника, сладкого картофеля, табака, томата, репы и овощных растений.
15. Способ по п.12, где растения и семена потомства получают из указанного трансгенного растения и где указанные растения и семена потомства содержат указанные первый и второй белки.
16. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения, устойчивые к заражению насекомыми, включающие нуклеотидную последовательность, кодирующую первый токсин cyt, выбранный из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и второй токсин cyt, выбранный из группы, состоящей из TIC810 и TIC812.
17. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по п.16, где указанное трансгенное растение выбрано из группы, состоящей из двудольного растения или клетки двудольного растения и однодольного растения или клетки однодольного растения, причем указанное двудольное растение или клетка двудольного растения дополнительно выбраны из группы, состоящей из люцерны, яблони, абрикоса, спаржи, фасоли, ягод, ежевики, черники, канолы (рапса), моркови, цветной капусты, сельдерея, вишни, куриного гороха, цитрусового дерева, хлопчатника, коровьего гороха, клюквы, огурца, тыквы, баклажана, плодового дерева, винограда, лимона, салата латука, льна обыкновенного, дыни, горчицы, орехоплодного дерева, гибискуса съедобного, апельсина, гороха, персика, арахиса, груши, сливы, картофеля, сои, сквоша, земляники, сахарной свеклы, подсолнечника, сладкого картофеля, табака, томата, репы и овощных растений, и указанное однодольное растение дополнительно выбрано из группы, состоящей из кукурузы, пшеницы, овса, риса, сорго, мило, гречихи, ржи, травы (овсяницы, тимофеевки луговой, костра, ежи сборной, августиновой травы, бермудской травы, полевицы) и ячменя.
18. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по п.17, устойчивые (1) к заражению жесткокрылыми насекомыми, где указанные жесткокрылые насекомые выбраны из группы, состоящей из Chrysomelidae, Cucujidae, Scarabaeidae, Trogositidae, Tenebrionidae, Curculionidae, Elateridae и Bruchidae, и (2) к заражению полужесткокрылыми насекомыми, где указанные полужесткокрылые насекомые выбраны из подотрядов Heteroptera (Полужесткокрылых) и Homoptera (Равнокрылых).
19. Трансгенное растение или клетка трансгенного растения по п.18, где указанные Chrysomelidae являются видами рода Diabrotica, выбранными из группы, состоящей из D. virgifera (западного жука-блошки кукурузы), D. undecempunctata (блошки 11-точечной кукурузы), D. barberi (северного жука-блошки кукурузы), D. virgifera zeae (мексиканского жука-блошки кукурузы), D. balteata (бразильского жука-блошки кукурузы) и комплекса бразильских жуков-блошек кукурузы (BCR), содержащего дополнительно D. viridula и D. speciosa.
20. Потомство или семена трансгенного растения или клетки трансгенного растения по п.18, где указанные потомство или семена включают указанную нуклеотидную последовательность.
21. Способ борьбы с заражением жесткокрылыми или полужесткокрылыми насекомыми растения обеспечением в рационе насекомого одной или более клеток растений, трансформированных последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащей в функциональной связи функциональный в растениях промотор и нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок, где указанный слитый белок включают первую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:8 и SEQ ID NO:14, и вторую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:4 и SEQ ID NO:6.
22. Способ защиты сельскохозяйственной культуры в поле от заражения насекомыми, включающий выращивание трансгенного сельскохозяйственного растения, содержащего инсектицидно эффективное количество первого белка и второго белка, причем указанный первый белок выбран из группы, состоящей из ЕТ37, ЕТ29 и TIC809, и указанный второй белок выбран из группы, состоящей из TIC810 и TIC812, и обеспечение этих белков вместе в рационе этого насекомого для ингибирования выживания этого насекомого на указанном трансгенном сельскохозяйственном растении.
23. Способ по п.22, где указанное насекомое выбрано из группы, состоящей из жесткокрылого насекомого (Coleoptera) и полужесткокрылого насекомого (Hemiptera).
24. Способ по п.22, где указанное трансгенное сельскохозяйственное растение дополнительно включает инсектицидный агент, токсичный в отношении того же насекомого, что и первый и второй белки, где указанный дополнительный инсектицидный агент выбран из группы, состоящей из токсина Bacillus, токсина Xenorhabdus, токсина Photorhabdus и двухцепочечной РНК (dsRNA), специфической в отношении супрессии одного или нескольких важных генов в указанных насекомых.
25. Способ по любому из пп.22-24, где урожай указанной сельскохозяйственной культуры улучшается по сравнению с урожаем изогенной сельскохозяйственной культуры, лишенной указанных инсектицидных белков.
26. Выделенная и очищенная нуклеотидная последовательность, кодирующая инсектицидный белок, причем указанный белок выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:47.
27. Выделенная и очищенная нуклеотидная последовательность по п.26, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11 и SEQ ID NO:46.
28. Выделенный и очищенный инсектицидный белок, выбранный из группы, состоящей из ЕТ37, TIC809, TIC810, TIC812 и TIC127.
29. Растение или клетка растения, трансформированные нуклеотидной последовательностью, кодирующей инсектицидный белок, причем указанный инсектицидный белок выбран из группы, состоящей из ЕТ37, TIC809, TIC810, TIC812 и TIC127.
30. Потомство или семена из растения по п.29, где указанные потомство или семена содержат указанную нуклеотидную последовательность.
31. Вектор, включающий нуклеотидную последовательность, кодирующую белок, выбранный из группы, состоящей из ЕТ37, TIC809, TIC810, TIC812 и TIC127.
32. Клетка-хозяин, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую белок cyt, причем указанный белок выбран из группы, состоящей из ЕТ37, TIC809, TIC810, TIC812 и TIC127.
33. Клетка-хозяин по п.32, выбранная из группы, состоящей из клетки растения, грибковой клетки и бактериальной клетки.
34. Клетка-хозяин по п.33, где указанная клетка растения выбрана из группы, состоящей из клетки однодольного растения и клетки двудольного растения.
35. Клетка-хозяин по п.34, где (1) указанная клетка однодольного растения выбрана из группы, состоящей из клетки растения кукурузы, пшеницы, овса, риса, сорго, мило, гречихи, ржи, травы (овсяницы, тимофеевки луговой, костра, ежи сборной, августиновой травы, бермудской травы, полевицы) и ячменя, и (2) указанная клетка двудольного растения выбрана из группы, состоящей из клеток растений люцерны, яблони, абрикоса, спаржи, фасоли, ягод, ежевики, черники, канолы (рапса), моркови, цветной капусты, сельдерея, вишни, куриного гороха, цитрусового дерева, хлопчатника, коровьего гороха, клюквы, огурца, тыквы, баклажана, плодового дерева, винограда, лимона, салата латука, льна обыкновенного, дыни, горчицы, орехоплодного дерева, гибискуса съедобного, апельсина, гороха, персика, арахиса, груши, сливы, картофеля, сои, сквоша, земляники, сахарной свеклы, подсолнечника, сладкого картофеля, табака, томата, репы и овощных растений.
36. Экспрессионная кассета для применения в экспрессии инсектицидного белка в клетке-хозяине, где указанная экспрессионная кассета содержит в функциональной связи промоторную последовательность, функциональную в указанной клетке-хозяине, и нуклеотидную последовательность, кодирующую указанный белок, причем указанный белок выбран из группы, состоящей из ЕТ37, TIC809, TIC810, TIC812 и TIC127.
37. Экспрессионная кассета по п.36, где указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из бактериальной клетки, грибковой клетки, клетки млекопитающего и клетки растения.
38. Экспрессионная кассета по п.37, где
(а) указанная бактериальная клетка выбрана из группы, состоящей из клетки вида Bacillus, клетки вида Enterobacteriaceae, клетки вида Pseudomonas, клетки вида Clostridium и клетки вида Rhizobium, и клетки вида Agrobacterium; и
(b) указанная клетка растения выбрана из группы растений, состоящих из двудольного растения и однодольного растения, причем указанное двудольное растение дополнительно выбрано из группы, состоящей из люцерны, яблони, абрикоса, спаржи, фасоли, ягод, ежевики, черники, канолы (рапса), моркови, цветной капусты, сельдерея, вишни, куриного гороха, цитрусового дерева, хлопчатника, коровьего гороха, клюквы, огурца, тыквы, баклажана, плодового дерева, винограда, лимона, салата латука, льна обыкновенного, дыни, горчицы, орехоплодного дерева, гибискуса съедобного, апельсина, гороха, персика, арахиса, груши, сливы, картофеля, сои, сквоша, земляники, сахарной свеклы, подсолнечника, сладкого картофеля, табака, томата, репы и овощных растений, и указанное однодольное растение дополнительно выбрано из группы, состоящей из кукурузы, пшеницы, овса, риса, сорго, мило, гречихи, ржи, травы (овсяницы, тимофеевки луговой, костра, ежи сборной, августиновой травы, бермудской травы, полевицы) и ячменя.
39. Экспрессионная кассета по п.36, где указанная клетка-хозяин является клеткой растения и указанная экспрессионная кассета дополнительно содержит в функциональной связи последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательности энхансера экспрессии, нетранслируемой лидерной последовательности, последовательности интрона, последовательности, кодирующей нацеливающий на хлоропласт пептид, и последовательности терминации транскрипции и полиаденилирования.
40. Вектор, содержащий экспрессионную кассету по любому из пп.36-39.