Пептидный состав Церебролизина как основа молекулярных механизмов действия и клинической эффективности препарата

ПЕПТИДНЫЙ СОСТАВ ЦЕРЕБРОЛИЗИНА

КАК ОСНОВА МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ

И КЛИНИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА

О.А. Громова, И.Ю. Торшин, И.В. Гоголева ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия»

Препарат Церебролизин широко используется в неврологической практике при травматических повреждениях головного и спинного мозга, хронической цереброваскулярной недостаточности, задержке умственного развития у детей, гиперактивности и дефиците внимания у детей, для восстановления пациентов после инсульта и в терапии деменции. Несмотря на существование доказательной базы и ряд экспериментальный исследований, точные механизмы фармакологического действия препарата сформулированы недостаточно четко и остаются «за кадром» для большинства неврологов. В настоящей работе представлены результаты молекулярнобиологического анализа пептидного состава Церебро-лизина, указавшего на наличие в составе препарата активных пептидных фрагментов нейропептидов фактора роста нервов, энкефалинов, орексина, галанина. Проведено систематическое сопоставление известных к настоящему времени результатов клинических и экспериментальных исследований Церебролизина. Показано, что экспериментальные и клинические детали всех известных эффектов препарата (прежде всего, нейротрофического, ней-ропротекторного, иммуномодулирующего) при ишемических и нейродегенеративнъх повреждениях ЦНС полностью объясняются активностью перечисленные выше нейропептидов. Анализ позволил сделать ряд ценным выводов по механизму действия Церебролизина, важных для повышения эффективности использования препарата в клинической практике.

Ключевые слова: нейропептиды, Церебролизин, молекулярная фармакология, механизмы действия, клиническая эффективность и безопасность.

ВВЕДЕНИЕ

Высокая распространенность неврологических заболеваний (и прежде всего, ишемического инсульта и дементных расстройств) обуславливает необходимость рационального выбора наиболее эффективных препаратов для неврологической реабилитации и профилактики.

В России инсульт является одной из основных причин смертности, важнейшей причиной се-

рьезных физических, психических расстройств и инвалидности. Нейропротективные и нейротрофи-ческие препараты открыли новые пути в лечении инсульта и в увеличении потенциала выживаемости и реабилитации даже для тех больных, кто поступал позже трехчасового критического окна от начала цереброваскулярного инцидента. Цель нейропротекции состоит в том, чтобы уменьшить ишемическое повреждение нейронов головного мозга и, таким образом, улучшить неврологическое выздоровление и уменьшить недееспособность. Предполагается, что фармакологические нейропротективные и нейротрофические эффекты Церебролизина могут тормозить развитие патофизиологических процессов ишемического каскада, следствием чего и является клиническая эффективность препарата в течение острой и восстановительной фазы инсульта.

В последние десятилетия происходит интенсивная переоценка важности отдельных компонентов комплексной фармакотерапии инсульта. Так, ранее считалось, что вазоактивные препараты представляют собой «наибольшее значение» для восстановления функционирования головного мозга. В настоящее время происходит смещение акцента в сторону нейропротективныих (препятствующих преждевременному апоптозу/некрозу нейронов) и нейротрофических (способствующих росту нейронов) препаратов.

Сосудистые заболевания головного мозга - одна из ведущих причин не только заболеваемости, но, и в первую очередь смертности и инвалидизации как в Российской Федерации, так и во всем мире. Хроническая недостаточность мозгового кровообращения - один из наиболее частых клинических синдромов в неврологии. По данным профилактических осмотров населения, эти заболевания выявляются в 20-30 % случаев даже у лиц трудоспособного возраста. В настоящее время деменции не излечиваются. Все фармакологические попытки лечения деменции направлены на то, чтобы сохранить и улучшить когнитивную функцию и задержать прогрессирование заболевания. Другим подходом является клиническое использование нейротрофического фактора роста (фактор роста нервов, ген N0?). Однако при периферическом

№ 2 • 2014

№ 2 • 2014

введении NGF не сможет проникать через гемато-энцефалический барьер. В то же время Церебро-лизин обладает нейроспецифической активностью (сходной с активностью природных нейротрофиче-ских факторов). Он восстанавливает трофическую активность нейронов в различных частях мозга, не только индуцируя процессы регенерации, но и обнаруживая нейропротективные свойства, защищая нейроны от определенных патологических факторов при различных заболеваниях.

Церебролизин (EVER Neuro Pharma, Австрия) — один из таких препаратов. Церебролизин, являющийся результатом высокотехнологичного экстрагирования пептидной фракции головного мозга молодых свиней, отвечает достаточно жестким требованиям международных стандартов нейропротекции не только в терапевтической, но и в педиатрической практике [1]. Препарат производится в соответствии со стандартом GMP Good Manufacturing Practice — надлежащая производственная практика) и тестируется в лаборатории по стандарту GLP (Good Laboratory Practice — надлежащая лабораторная практика). Клинические испытания препарата были проведены по стандарту GCP (Good Clinical Practice — надлежащая клиническая практика, ГОСТ Р 523792005) [2].

В течение ряда лет нами были исследованы различные аспекты состава Церебролизина, включая исследование олигопептидной и мембранной фракции препарата [3], витаминной активности [4], аминокислотного состава [5], микроэлемент-ного состава [6, 7] и воздействия Церебролизина на гомеостаз микроэлементов мозга [8, 9] и, что особенно важно, пептидного состава препарата [3, 10]. Экспериментальный анализ пептидного состава препарата в диапазоне молекулярных масс 500-1500 Да с последующим биоинформационным анализом позволил установить наличие в Церебро-лизине биоактивных пептидных фрагментов фактора роста нервов и ряда нейротрофных пептидов, стимулирующих регенерацию нейронов, рост аксонов, равно как и другие аспекты функционирования нейронов.

В настоящей работе мы проводим систематическое сопоставление результатов молекулярнобиологического исследования пептидного состава Церебролизина и известных к настоящему времени результатов клинических и экспериментальных исследований Церебролизина.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПЕПТИДНОГО СОСТАВА ЦЕРЕБРОЛИЗИНА

Комплексный анализ пептидного состава препарата позволил установить вхождение в его состав активных пептидных фрагментов — нейропептидов фактора роста нервов, энкефалинов, орексина, галанина [10].

Результаты суммированы в таблице. За исключением фрагмента Бег-Бег-рЬе^у-йе (соответствующего АВС-транспортным белкам), все идентифицированные пептиды в исследованных образцах Церебролизина являются фрагментами нейропептидов протеома человека. Ниже приведена информация по каждому из этих нейропептидов, которая весьма важна для последующего анализа молекулярно-фармакологических механизмов действия Церебролизина.

1. Фактор роста нервов (ген N0?) необходим для развития и восстановления сетей нейронов. Обладая нейропротекторными свойствами, ФРН способен ограничивать размеры повреждения нервной ткани при ишемии, травме, интоксикациях, замедлять прогрессирование нейродегенеративных процессов, усиливать активность сохранившихся нейронов, способствует процессам регенерации. Однако ФРН не проникает через гематоэнцефали-ческий барьер и эффективен лишь при условии его локального введения непосредственно в нервную ткань.

Церебролизин в настоящее время является единственным препаратом полипептидной природы, который при периферическом введении свободно проникает через гематоэнцефалический барьер и моделирует в тканях мозга эффект зрелого нейро-трофического фактора роста, т. е. предотвращает дальнейшую дегенерацию холинергических ней-

Таблица. Пептидные фрагменты в составе Церебролизина

Пептид Идентификация пептида по БД NCBI/SWISSPROT

ser-ser-phe-gly-ile (SSFGI) ХР_001924499; АВС-транспортный белок

gly-glu-phe-ser-val

asn-ser-tyr-cys-thr-thr-thr

tyr-gly-gly-phe-leu (YGGFL) Р01214; Р-неоэндорфин-динорфин

gly-gly-phe-leu-arg (GGFLR) Р01214; Р-неоэндорфин-динорфин

tyr-gly-gly-phe-met (YGGFM) рг1761141А а-эндорфин, ргЮ506562А р-эндорфин, рг!764744Ау-эндорфин, Р01192 опиомеланокортин

pro-gln-arg-phe (PQRF) ACQ82801; нейропептид V?

cys-cys-arg-gln-lys

trp-trp-leu-asn-ser-ala-gly-tyr (WWLNSAGY) Р07480;галанин

Рис. 1. Взаимодействие сигнального каскада ретиноидных рецепторов (RARp) с сигнальными каскадами ФРН, каскадом Shh и ростом нейритов

ронов и способствует восстановлению их функциональной активности. Вместе с тем суммарный фармакологический эффект Церебролизина существенно выше, чем у ФР^ так как Церебролизин оказывает стимулирующее нейрометаболическое воздействие на различные нейромедиаторные системы мозга, а ФPH — только на холинергическую систему.

Будучи секретирован нейронами, NGF связывается специфическими рецепторами типов TrkA (тирозинкиназа А) и LNGFR (англ. «Low affinity nerve growth factor receptor», т.е. «низкоаффинный рецептор NGF»), которые и стимулируют процессы деления и дифференциации. В составе Цереброли-зина были найдены два пептида, образовавшихся при протеолизе секретируемой молекулы ФР^ GEFSV, соответствующий остаткам 119-123 полипептида, и NSYCTTT, соответствующий остаткам 18б-192.

Анализ модели взаимодействия ФPH с рецептором, основанной на данных [13], позволяет предположить, что пептид GEFSV (119-123) непосредственно может взаимодействовать с молекулой рецептора, тем самым имеет нейротрофическую активность. Действительно, известны модельные пептиды, включающие пептид GEFSV и обладающие ФР^подобной активностью [14, 15]. Обнаружение биологически активных пептидов фактора роста нервов практически во всех фракциях исследованных образцов имеет непреходящее значение для фундаментального осознания нейротрофической активности Церебролизина.

2. Энкефалины. В составе исследованных фракций Церебролизина были обнаружены несколько эндорфин/энкефалин-подобных пептидов: tyr-gly-gly-phe-leu (YGGFL), gly-gly-phe-leu-arg (GGFLR) и tyr-gly-gly-phe-met (YGGFM). Leu-энкефалины и динорфины синтезируются в организме как результат многостадийного протеолиза полипептида, кодируемого геном PDYN (динорфин). Энкефали-ны — эндогенные опиоидные пептидные нейротрансмиттеры, которые поддерживают множество физиологических и психологических функций, включая реакцию на стресс, восприятие боли, эмоции, контроль приема пищи и др.

3. Нейропептид VF. В составе исследованных фракций Церебролизина был найден пептид PQRF,

соответствующий фрагменту недавно открытого нейроактивного нейропептида V?. К сожалению, к настоящему времени имеется мало данных о биологических ролях этого нейропептида, хотя и известно, что нейропептид V? может активировать ^,-опиоидные и к-опиоидные рецепторы и регулировать работу гипоталамуса [16].

4. Орексин. Пептид суБ-суБ-а^^1п-1уБ (CCRQK), найденный в исследованных образцах Цереброли-зина, идентифицируется как фрагмент полипептида орексина (ген 0RX). Пептид CCRQK локализуется в районе 39-43 полипептида орексина и, по данным интегрального биоинформационного анализа, может иметь важное значение для взаимодействия орексина-А с рецепторами. Орексины (гипокретины) играют роль в регуляции приема пищи, цикла сна и бодрствования [17] и воздействуют на разнообразные аспекты физиологии человека, включая энергетический метаболизм, баланс гормонов, регуляцию уровня жидкости в организме. Орексин-А также увеличивает уровни экспрессии нейротрофина-3 [18], который в свою очередь поддерживает выживание и дифференциацию нейронов, также стимулируя образование новых нейронов и синаптогенез.

5. Галанин. В составе Церебролизина был найден галанин-подобный пептид WWLNSAGY (в галанинах соответствующий пептид имеет последовательность WTLNSAGY). Анализ интегрированной функциональной карты галанина указывает на фрагмент 33-42 как имеющий важное значение для взаимодействия галанина с рецепторами. Галанин (ген GALN) участвует в таких разнообразных процессах, как регуляция приема пищи, энергетический метаболизм, регулирование секреции других нейротрансмиттеров, модуляция ноцицепции, перистальтика кишечника и восстановление нервной системы после повреждений. Галанин выступает преимущественно как нейропептид, модулирующий секрецию важнейших нейротрофических нейротрансмиттеров ацетилхолина, серотонина и норадреналина [19, 20]. Активация рецепторов галанина имеет анти-конвульсантное, антидепрессантное и успокаивающее действие [21]. Нейротрофические эффекты галанина активно изучаются в настоящее время. Галанин принципиально необходим для развития и функционирования нейронов [22], стимулируя спраутинг (т.е. прорастание) аксонов [23].

Таким образом, экспериментальное и био-информационное изучение пептидного состава Церебролизина позволило установить присутствие в изученных образцах препарата ряда нейроактив-ных пептидов фактора роста нервов, энкефалинов, орексина и галанина. Биоинформационный анализ указывает на то, что идентифицированные пептиды функционально значимы и могут проявлять специфическую биологическую активность, взаимодействуя с соответствующими рецепторами [10]. Результаты анализа пептидного состава препарата последовательно сопоставляются с данными фун-

№ 2 • 2014

№ 2 • 2014

даментальных и клинических исследований применения Церебролизина при ишемии головного мозга, при деменции и для иммуномодуляции с целью установления точных молекулярно-фармакологических механизмов нейропротектор-ного и нейротрофического действия Цереброли-зина.

МОЛЕКУЛЯРНО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОГО И НЕЙРОТРОФИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ПРИ ИШЕМИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА

В многочисленных клинических исследованиях была продемонстрирована эффективность использования пептидного экстракта Церебролизина в терапии ишемических повреждений мозга, особенно в составе комплексной терапии. Применение Церебролизина при инсульте и ЧМТ достоверно снижает неврологический дефицит [24], улучшает когнитивные способности [25, 26], восстанавливает биоэлектрическую активность мозга [27], снижает объем зоны инфаркта [28].

Экспериментальные исследования подтвердили результаты клинических наблюдений и позволили уточнить физиологические механизмы действия препарата. Церебролизин оказывает нейрореге-неративное воздействие [29], ослабляя нарушения структуры нейронов и нейрональный дефицит [30, 31], снижает когнитивную функцию на моделях диабета, снижая уровни провоспалительного фактора ФНО-а, повышая уровни инсулиноподобного гормона роста IGF-1, серотонина и оказывая антиоксидантное действие на нейроны головного мозга [32].

В целом экспериментальные исследования показали, что нейропротекторные свойства Цере-бролизина связаны со следующими механизмами действия:

(1) активация сигнального каскада Shh;

(2) активация сигнального пути PI3K/Akt;

(3) стимулирование ангиогенеза;

(4) модуляция системы синтеза/секреции оксида азота.

Далее сопоставляются результаты этих исследований с данными о биологической активности нейропептидов, входящих в состав Церебролизина (ФРН, энкефалины, орексин, галанин).

(1) Активация сигнального каскада Shh

Улучшение неврологических функций после инсульта Церебролизином связывают с активацией сигнального каскада Shh (Sonic hedgehog, дословно «сверхзвуковой ежик», герой одноименного мультфильма). Терапия Церебролизином значительно увеличивала деление нейронных клеток-предше-ственников и их дифференциацию в нейроны и в миелинизирующие олигодендроциты. Эти положительные изменения сопровождались параллельным увеличением активности каскада Shh [33].

Из огромного корпуса фундаментальных исследований следует, что БКК осуществляет, скорее, масштабную координацию клеточного роста и не обладает нейротрофическим эффектом как таковым. Так, активность каскада Shh имеет огромное значение для процессов развития эмбриона, осуществляя формирование общей структуры конечностей, структур головного мозга [34], спинного мозга [35], таламуса [36] и др. В частности, одной из наиболее изученных ролей каскада Shh является формирование нервной трубки плода из базальной пластины и последующее формирование разнообразных вентральных типов клеток в нервной трубке [37].

По данным фундаментальных исследований, Shh не может вызвать сам по себе рост аксонов, но может усиливать сигнал от ретиноидных рецепторов [38], повышая выживание клеток [39]. Известно, что дотации витамина А индуцируют синтез ФРН и нейротрофического фактора мозга [40], поэтому перспективно изучить сочетанное действие Цере-бролизина и витамина А на темпы нейрореабилитации пациентов с инсультом, ЧМТ и деменцией, особенно у пациентов с нарушениями функционирования зрительного нерва, дистрофией сетчатки.

Принимая во внимание приводимые выше данные о функционировании ФРН и наличие активных пептидных фрагментов ФРН в составе Цереброли-зина, причина повышения активности каскада Shh под воздействием препарата становится очевидной [33]. Во-первых, ФРН инициирует рост нейритов, а также потенцирует активность рецепторов рети-ноидов (RARp2 и др.). Во-вторых, активированный ретиноидами рецептор RARp2 дополнительно стимулирует рост нейритов и активирует каскад Shh. В-третьих, активация каскада Shh способствует росту нейритов посредством усиления сигнала от ретиноидных рецепторов, что и является нейротро-фическим эффектом.

(2) Активация сигнального пути PI3K/Akt

В недавнем экспериментальном исследовании применение Церебролизина (2,5 мл/кг) активировало рост клеток — предшественников нейронов за счет активации сигнального пути PI3K/Akt и параллельно существенно повышало балльную оценку неврологического тестирования [41]. Известно, что сигнальный путь Р1зК/АШ активируется фактором роста нервов и орексином, которые были найдены в составе Церебролизина. При этом ФРН стимулирует цикл клеточного деления с участием циклинов и ци-клин-зависимых киназ [42], а орексин стимулирует активное поглощение нервной тканью глюкозы за счет транслокации транспортера глюкозы 0ШТ4 из цитоплазмы нейронов на внешнюю поверхность клеточной мембраны [43]. Таким образом, Цере-бролизин может стимулировать усвоение глюкозы нейронами и другими типами клеток.

Важно отметить, что и ФРН, и орексин стимулируют синтез/секрецию еще одного весьма важного нейропептида — нейротрофического фактора

Рис. 2. Повышение экспрессии фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) при инъекциях ФРН после введения нейротоксина (ци-клофосфамида). Показано иммуногистохимическое окрашивание VEGF-секретирующих клеток (коричневый): С — кора; М — средний мозг. Слайды а-с—увеличение х100, слайды д-і—увеличение х200

Нейротоксин

Норма Плацебо ФРН

мозга (англ. БОШ). Заметим, что нейротрофический фактор мозга также активирует упоминаемый выше сигнальный путь Р!зК/Акх [44], связанный с использованием Церебролизина. При этом ФРН активирует циклин-зависи-мую киназу 5 (сёк5) с участием сигнальной молекулы цАМФ, что активирует процессы клеточного роста [45], нейропротекцию [46] и регулирует экспрессию ВЭОТ [47] через сигнальный каскад внеклеточной регулируемой киназы 1/2 (ERK1/2) [48]. Ней-ропротекторный пептид орексин подавляет постишемическую толерантность к глюкозе и повреждения нейронов именно посредством повышения активности нейротрофического фактора мозга (ВЭОТ) [49, 50].

(3) Стимулирование ангиогенеза

Церебролизин улучшает восстановление когнитивных способностей после легкой черепномозговой травмы, что происходит, в частности, за счет стимулирования ангиогенеза [25]. Улучшение неврологического состояния при использовании Церебролизина после экспериментального сотрясения мозга сопровождается восстановлением целостности аксонов в полосатом теле. Улучшение неврологических показателей было ассоциировано с повышением уровней фактора роста васкулярного эндотелия ^ЕСБ), стимулирующего восстановление сосудистого русла и повышающего кровоток в зоне ишемии [51]. Данный эффект также объясняется вхождением в состав Церебролизина фактора роста нервов. Известно, что ФРН стимулирует повышение экспрессии VEGF и ангиогенез при репаративной регенерации нейрональной ткани [52] (рис. 2).

(4) Модуляция системы синтеза/секреции оксида азота

Было установлено, что Церебролизин модулирует активность системы синтеза/секреции оксида азота. В эксперименте хроническая алкогольная интоксикация в течение 30 дней приводила к увеличению уровня свободнорадикальных метаболитов оксида азота N0 с одновременным снижением уровней L-аргинина, каталазы и супе-роксиддисмутазы. Применение Церебролизина в течение последующих 14 дней привело к нормализации параметров системы оксида азота [53].

Данный эффект основан на том, что в состав Церебролизина входят энкефалины и ФРН, которые оказывают непосредственное влияние на метаболизм окиси азота. Цитопротекция энкефалином

опосредована через активацию синтазы окиси азота (СОА) и аденозинтрифосфат-регулируемые калиевые каналы [54]. В частности, Мет-энкефалин модулирует синтез/секрецию окиси азота [55]. Фактор роста нервов стимулирует экспрессию индуцируемой формы СОА и нейропептида «вещество Р» [56]. При этом сигнальный путь Ак — оксид азота — цГМФ способствует осуществлению воздействия ФРН на рост нейритов у моделей деменции (делеция гена аполипопротеина Е) [57].

МЕХАНИЗМЫ НЕЙРОТРОФИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРИ ДЕМЕНЦИИ

Успешное применение Церебролизина для поддержания состояния пациентов при нейроде-генеративных заболеваниях было многократно продемонстрировано. Например, кохрейновский мета-анализ 6 рандомизированных исследований по использованию Церебролизина для терапии сосудистой деменции суммарно включил 597 участников. Мета-анализ подтвердил хорошо известный положительный эффект Церебролизина на улучшение когнитивных функций пациентов по шкалам ММБЕ (на 1,10 балла в среднем, 95 % ДИ 0,37-1,82) и ADAS-cog+ (в среднем на 4,01 балла, 95 % ДИ 2,66-5,36) и по шкале общего клинического состояния (ОШ 2,71, 95 % ДИ 1,83-4,00) [58, 59].

В исследованиях Церебролизина использовались дозировки препарата от 10 мл до 60 мл в день. Периоды лечения колебались в пределах от 10 до 84 дней.

№ 2 • 2014

№ 2 • 2014

Лечение Церебролизином снижает уровень атрофии таламуса у молодых пациентов (20 ± 0,5 лет) с активным рецидивирующим рассеянным склерозом [60] и способствует профилактике частичной атрофии зрительного нерва у детей (п = 646) [61].

Исследования показывают явное благоприятное действие Церебролизина на когнитивные параметры у больных с сосудистой деменцией и соответствует предыдущим исследованиям препарата при этом показании.

В эксперименте вызываемое Церебролизином улучшение дефицита памяти и сокращение симптоматических проявлений нейродегенеративной патологии сохраняются по крайней мере в течение 3 месяцев после окончания лечения. Посредством иммуногистохимического анализа было показано, что снижение амилоидных бляшек в неокортексе и гиппокампе также сохраняется в течение 3 месяцев [62].

Воздействие Церебролизина при деменции связывают со следующими механизмами:

(1) преодоление холинергического дефицита;

(2) воздействие на амилоидный белок и ассоциированный с микротрубочками тау-белок;

(3) модуляция активности киназы 3 гликоген-синтазы (GSK3);

(4) ингибирование каскада калпаина.

Сопоставление эффектов Церебролизина с информацией о пептидном составе препарата позволяет лучше понять механизм действия препарата.

(1) Преодоление холинергического дефицита

В эксперименте было показано, что Цереброли-зин стимулирует увеличение числа холинергических нейронов [63] и увеличивает общую длину дендритных пирамидальных нейронов [64].

Известно, что ФРН рецептор ТгкА повышает экспрессию генов, вовлеченных в холинерги-ческую передачу сигнала [65].

(2) Воздействие на амилоидный белок и ассоциированный с микротрубочками тау-белок

На амилоидной модели деменции Церебролизин уменьшал уровни в-амилоидного белка и фосфорилирование ассоциированного с микротрубочками т-белка путем регулирования киназы 3 гли-когенсинтазы и циклин-зави-симой киназы 5, увеличивая плотность синапсов и восстанавливая цитоархитектонику нейрональной ткани [66, 67].

Этот эффект Церебролизина может быть связан с воздействием активного фрагмента пептидов галанина и ФРН.

В эксперименте было показано, что галанин тормозит ухудшение пространственной памяти и уменьшает уровни р-амилоида в модели болезни Альцгеймера [68]. Галанин также способствует дифференцировке нейронов в культуре клеток суб-вентрикулярной зоны [69] (рис. 3).

Антиамилоидное действие Церебролизина также может быть связано с наличием в его составе активных пептидов ФРН. В эксперименте было показано, что интраназальное введение фактора роста нервов снижает отложения амилоидного белка [70] и токсическое воздействие амилоида на нейроны [71].

При этом ФРН воздействует на активность киназы 3 гликогенсинтазы (GSK3) посредством активации сигнального пути Ак [72], что приводит к подавлению активности GSK3 [73]. ФРН активирует циклин-зависимую киназу 5 ^к5) с участием сигнальной молекулы цАМФ, что активирует процессы клеточного роста и дифференциации [45] и нейропротекцию, причем взаимодействие между cdk5 и GSK3 опосредовано сигнальным белком ней-регулином [46]. Как было отмечено ранее, именно эти пути и были изучаемы в связи с применением Церебролизина.

(4) Ингибирование каскада калпаина

Церебролизин стабилизирует структурную целостность нейронов и уменьшает количество апоптотических клеток после ишемического по-

Рис. 3. Церебролизин снижает повреждения дендритов в коре животных с делецией гена Меср2

ражения путем ингибирования каскада калпаина — по всей видимости, опять же за счет активности ФРН и галанина. Активация рецептора ФРН (ТгкД) тормозит активность в- и у-секретаз, что предотвращает стимулируемое СБКЭ патогенное фосфорилирова-ние т-белка и активацию каспаз и калпаина, которые приводят к распаду цитоскелета и ухудшению аксонального транспорта [74]. Делеция гена галанина в эксперименте приводит к увеличению экспрессии гена калпаина, увеличивая гибель нейронов, в том числе холинергических [75].

МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ЦЕРЕБРОЛИЗИНА ПРИ ЧАСТИЧНОЙ АТРОФИИ ЗРИТЕЛЬНОГО НЕРВА У ДЕТЕЙ

Терапевтический эффект Церебролизина на частичную атрофию зрительного нерва у детей (п = 646) отмечался при внутримышечном (0,1 мл/кг массы тела) и ретробульбарном (0,3-

0,5 мл) введении.

У пациентов, получавших через ирригационную систему Церебролизин (6 раз в сутки), положительный результат получен в 70 % случаев, градиент повышения остроты зрения составил 1,46. Значительно меньший эффект был получен при ретробульбарных инъекциях препарата: улучшение достигнуто в 41,5 % случаев, градиент повышения остроты зрения составил 1,24. Очень важным является факт повышения остроты зрения у больных, получающих Церебролизин через ирригационную систему, с 5-го дня интенсивной терапии, достигавшего максимума на 10-й день лечения.

Функцию ганглиозных клеток сетчатки изучили методом регистрации ПЭРГ до и после 5-дневного введения препарата к заднему полюсу глаза через катетер. Амплитуда ПЭРГ в процессе лечения достоверно возросла в 1,7-1,8 раза при одновременном укорочении ретинокоркового времени, объективизирующего лечебное воздействие Цере-бролизина при ЧАЗН, свидетельствуя об ускорении проведения зрительного импульса по зрительному пути, основную часть которого представляет зрительный нерв. В результате электростимуляции зрительного нерва после терапии с применением Церебролизина через ирригационную систему отмечается выраженная положительная динамика клинико-электрофизиологических показателей у больных с ЧАЗН. Положительная динамика показателей ЗВП получена в 79,3 % случаев, острота зрения повысилась у 72,7 % больных, поле зрения увеличилось в 66,6 % случаев [61]. Этот эффект Церебролизина связан, по всей видимости, с вхождением активных пептидов ФРН в состав препарата. Отмечено снижение экспрессии генов ФРН и рецептора ТгкД в зрительном нерве крыс с экспериментально индуцированной глаукомой [76]. В эксперименте на моделях дегенерации ганглиозных клеток сетчатки было установлено вли-

яние ФРН на регенерацию сетчатки [77]. В норме ФРН и его рецепторы ТгкА и р75 экспрессируются в переднем и заднем сегментах глаза человека. Фармакодинамические данные показали, что при топическом применении на поверхность глаза введенный ФРН достигает сетчатки и зрительного нерва [78].

Положительное воздействие Церебролизина на структуру нервной ткани на столь наглядной модели, как синдром Ретта, вполне объясняется входящими в состав препарата активными пептидами ФРН. Действительно, при синдроме Ретта у пациентов отмечаются сниженные уровни ФРН, который регулирует развитие и функционирование центральных холинергических нейронов. При этом уровни ФРН у пациентов падают с возрастом, в то время как в контрольной группе здоровых участников уровни ФРН возрастают [80]. Активные пептиды ФРН компенсируют дефицит ФРН и оказывают нейротрофический и нейропротекторный эффекты.

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА

1. Уменьшение апоптоза лимфоцитов человека

Церебролизин уменьшает вызываемый окислительным стрессом апоптоз лимфоцитов человека [81, 82] (рис. 4). Этот эффект Церебролизина может осуществляться за счет ФРН и энкефалиновых пептидов в составе препарата. ФРН имеет выраженный антиапоптотический эффект на лимфоциты и защищает их от апоптоза путем активации сигнального белка PKCzeta [83]. В В-лимфоцитах памяти ФРН ингибирует апоптоз с помощью инактивации белка р38МАРК и предотвращения фосфорилиро-вания регулирующего апоптоз белка Вс1-2 [84]. Энкефалиновые пептиды также активно защищают лимфоциты от апоптоза [85]. Антиапоптотическое действие метионинэнкефалина связано с участием каспазы-3 [86].

2. Применение Церебролизина для снижения

тяжести перинатальных расстройств ЦНС

Церебролизин снижает тяжесть перинатальных расстройств ЦНС посредством иммуномодуляции,

Рис. 4. Лимфоциты периферической крови, обработанные про-апоптотической 2-дезокси^-рибозой без Церебролизина и с Церебролизи-ном [81]. Апоптотирующие клетки обозначены красным цветом, жизнеспособные — зеленым. Увеличение х200

№ 2 • 2014

№ 2 • 2014

антиоксидантной защиты и нейротрофического эффекта. В одной из наших работ мы исследовали влияние препарата на аутоиммунные параметры (FasL, Fas и металлотионеин-1) в группе 20 новорожденных с перинатальными ишемическими повреждениями ЦНС и группе 20 здоровых новорожденных. Лечение Церебролизином (0,1 мл/кг, 10 инъекций через день) привело к достоверной (р < 0,001) нормализации апоптоза Т-лимфоцитов (увеличение Fas и снижение FasL) и активации антиоксидантной защиты путем увеличения экспрессии белка-антиоксиданта металлотионеина-1. Нормализация аутоиммунных реакций была связана с уменьшением отека мозга и улучшением циркуляции крови в участках мозга пострадавших от ишемии [87].

Церебролизин стимулирует секрецию у-интер-ферона лимфоцитами человека [89]. Фундаментальные исследования показали, что метиони-нэнкефалин оказывает стимулирующий эффект на субпопуляции лимфоцитов в периферической крови [90], а энкефалин-подобные агонисты 5-опиоидных рецепторов существенно улучшают выживаемость в моделях сепсиса [91]. В частности, мет-энкефалин и его пептидный фрагмент YGG оказывают непосредственное влияние на синтез у-интерферона, стимулируя синтез при низких дозах и тормозя синтез в высоких дозах. Пептидный фрагмент YG, по всей видимости, является минимальным молекулярным фрагментом энке-фалина, оказывающим иммуномодулирующее воздействие [92]. Из фундаментальных исследований также известно, что процессы дифференцировки нейронов сопровождаются вызываемыми рецептором ФРН (TrkA) повышением уровней у-интер-ферона [93].

3. Применение Церебролизина у детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью

Основополагающая роль энкефалинов и ФРН в осуществляемой Церебролизином иммуномодуляции подтверждается и профилем иммунологических изменений при применении Церебролизина в группе детей 3-8 лет с СДВГ. Применение Церебро-лизина у детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью (СДВГ) посредством внутримышечного введения (0,1 мл/кг, 1 месяц) приводило к одновременной нормализации неврологических и иммунных показателей. Церебролизин повышал экспрессию маркеров активации (HLA-DR, CD25) и нормализации количеств клеток лимфоцитов типа CD45 + , CD14-, CD4 + , CD19 + , CD16 + , CD11b + и CD56+, а также уровней IgG и IgA в сыворотке [94], активность Т-клеток-киллеров (NK-клеток) и активацию Т-хелперов [95].

Данный эффект Церебролизина также объясняется через эффекты энкефалинов и ФРН. Метиони-нэнкефалин достоверно воздействует на лимфоциты человека, нормализуя количество и активность Т-клеток CD4+, CD8+, регуляторных Т-клеток, ден-

дритных клеток, Т-клеток-киллеров (NK-клеток) и маркер активации CD25 [90]. Бета-эндорфин и мет-энкефалин оказывают иммуномодулирующее воздействие, влияя на экспрессию маркеров CD11b+, CD18+ и CD16+ [96]. ФРН влияет на экспрессию маркера активации Т-клеток HLA-DR [97], а рецептор ФРН (NGFR) присутствует на поверхности лимфоцитов человека и модулирует деление В-клеток и секрецию иммуноглобулинов [98].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на существование доказательной базы по использованию Церебролизина и ряд экспериментальных исследований, точные механизмы фармакологического действия препарата сформулированы недостаточно четко. В настоящей работе был впервые проведен систематический анализ взаимосвязей пептидного состава Церебролизина и результатов исследований препарата in vitro, in vivo и в клинической практике. Показано, что установленные ранее специфические особенности воздействия Церебролизина в рамках нейротрофического, нейропротекторного, иммуномодулирующего эффектов препарата могут быть объяснены через специфическую активность пептидных компонентов препарата (активные фрагменты фактора роста нервов, энкефалинов, орексина, галанина).

Анализ позволил сделать ряд выводов, важных для повышения эффективности использования Церебролизина в клинической практике. Наиболее интересным, на наш взгляд, является возможный синергизм Церебролизина с витамином А (рети-ноидами). Анализ фундаментальных исследований показал, что установленное в эксперименте повышение активности сигнального каскада Shh под воздействием Церебролизина связано, скорее всего, с наличием активных пептидных фрагментов ФРН в составе препарата. ФРН потенцирует активность рецепторов ретиноидов, которые стимулируют долговременный рост нейритов и параллельно активируют каскад Shh. Активация каскада Shh дополнительно способствует росту нейритов посредством усиления сигнала от ретиноидных рецепторов.

Таким образом, напрашивается весьма важный вывод: долговременное воздействие Церебролизина может существенно зависеть от обеспеченности организма витамином А. Поэтому у пациентов с дефицитом витамина А (и/или с неблагоприятными вариантами полиморфизмов генов метаболизма витамина А) можно ожидать более низкую нейротрофическую активность Церебролизина. И наоборот, у пациентов, обеспеченных витамином А, Церебролизин будет проявлять большую нейтро-трофическую активность.

Кроме того, представляется весьма перспективным исследовать возможный синергийный эффект Церебролизина и ряда других микронутриентов. Первым этапом такого исследования является системно-биологический и биоинформационный

анализ возможных молекулярно-фармакологических механизмов такого рода синергизма. Данный анализ позволит отобрать микронутриен-ты, восполнение дефицита которых максимизирует эффективность препарата Церебролизин в экспериментальных и клинических исследованиях.

Литература

1. Торшин И.Ю., Громова О.А. Мультимодальный эффект Церебролизина против воинствующего редукционизма // Журнал им. В.М. Бехтерева. — 2008. — Т. XL, № 3. — С. 83-91.

2. www.everpharma. com/en/test/20110519. pdf

3. Громова О.А., Третьяков В.Е., Мошковский С.А., Гусев Е.И., Никонов А.А., Валькова ЛА, Глибин А.С, Катаев А.С. Олигопептидная мембранная фракция Церебролизина // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. — 2006. — Т. 106, № 7. — С. 68-70.

4. Громова О.А., КрасныхЛ.М., Гусев Е.И., НиконовА.А. Витаминная активность Церебролизина // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. — 2005. — Т. 105, № 5. — С. 59-61.

5. Громова О.А., Торшин И.Ю., Гусев Е.И., Никонов А.А., Лиманова О.А. Молекулярные механизмы воздействия аминокислот в составе Церебролизина на нейротрансмиссию. Нейротрофические и нейропротективные эффекты аминокислот // Трудный пациент. — 2010. -Т. 8, № 4. — С. 25-31.

6. Торшин И.Ю., Громова О.А., Тогузов Р.Т., Волков А.Ю. Элементный состав нейропротекторов природного происхождения // Новости медицины и фармации. — 2010. — № 316.

7. Громова О.А., Авдеенко Т.В., Бурцев Е.М. Влияние Церебролизина на оксидантный гомеостаз, содержание микроэлементов и электролитов у детей с минимальной мозговой дисфункцией // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. — 1998. — Т. 98, № 1. — С. 27.

8. Громова О.А., Кудрин А.В., Катаев С.И., Мазина С.С., Волков А.Ю. Влияние Церебролизина на микроэлементный гомеостаз головного мозга // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. — 2003. — № 11.

9. Сотникова Н.Ю., Громова О.А., Новикова Е.А. Нейроиммуномодулиру-ющие свойства Церебролизина // Цитокины и воспаление. — 2004. -Т. 3, № 2. — С. 34-39.

10. Торшин И.Ю., Громова О.А. Экспертный анализ данных в молекулярной фармакологии. — М.: МЦНМО, 2012. — 684.

11. Torshin I.Yu. Bioinformatics in the Post-Genomic Era: The Role of Biophysics, 2006 Nova Biomedical Books, NY, ISBN 1-60021-048-1.

12. Torshin I.Yu. Sensing the change from molecular genetics to personalized medicine. Nova Biomedical Books, NY, USA, 2009, In “Bioinformatics in the Post-Genomic Era” series, ISBN 1-60692-217-0.

13. Wiesmann C., Ultsch M.H., Bass S.H., de Vos A.M. Crystal structure of nerve growth factor in complex with the ligand-binding domain of the TrkA receptor // Nature. 1999; 401 (6749): 184-188.

14. Colangelo A.M., Bianco M.R., Vitagliano L., Cavaliere C., Cirillo G., De Gioia L., Diana D., Colombo D., Redaelli C., Zaccaro L., Morelli G., Papa M., Sarmientos P., Alberghina L., Martegani E. A new nerve growth factor-mimetic peptide active on neuropathic pain in rats // J Neurosci. 2008; 28(11): 2698-709 doi.

15. Bradshaw R.A., Murray-Rust J., Ibanez C.F., McDonald N.Q., Lapatto R., Blundell T.L. Nerve growth factor: structure/function relationships // Protein Sci. 1994;3 (11): 1901-1913.

16. Cline M.A., Bowden C.N., CalcharyW.A., LayneJ.E. Short-term anorexigenic effects of central neuropeptide VF are associated with hypothalamic changes in chicks // J Neuroendocrinol. 2008; 20 (8): 971-7 doi.

17. Prospero-Garcia O., Mendez-Diaz M. The role of neuropeptides in sleep modulation // Drug News Perspect. 2004; 17(8): 518-522.

18. Yamada N., Katsuura G., Tatsuno I., Kawahara S., Ebihara K., Saito Y., Nakao K. Orexins increase mRNA expressions of neurotrophin-3 in rat primary cortical neuron cultures // Neurosci Lett. 2009; 450(2): 132-5 doi.

19. Wynick D., Thompson S.W., McMahon S.B. The role of galanin as a multifunctional neuropeptide in the nervous system // Curr Opin Pharmacol. 2001; 1 (1): 73-77.

20. Vrontakis M.E. Galanin: a biologically active peptide // Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 2002; 1(6): 531-541.

21. Lerner J.T., Sankar R., Mazarati A.M. Galanin and epilepsy // Cell Mol Life Sci. 2008; 65(12): 1864-71 doi.

22. Porzionato A., Macchi V., Parenti A., De Caro R. Trophic factors in the carotid body // Int Rev Cell Mol Biol. 2008; 269: 1-58 doi.

23. Suarez V., Guntinas-Lichius O., Streppel M., Ingorokva S., Grosheva M., Neiss W.F., Angelov D.N., Klimaschewski L. The axotomy-induced neuropeptides galanin and pituitary adenylate cyclase-activating peptide promote axonal sprouting of primary afferent and cranial motor neurons // Eur J Neurosci. 2006; 24(6): 1555-1564.

24. Izhbul>dina G.I. Changes in the hemostasis system and free-radical lipid oxidation in the acute stage of ischemic stroke in patients on neuroprotection treatment // Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova. 2012; 112(3) Pt 2:31-37.

25. Chen C.C., Wei S.T., Tsaia S.C., Chen X.X., Cho D.Y. Cerebrolysin enhances cognitive recovery of mild traumatic brain injury patients: double-blind, placebo-controlled, randomized study // Br J Neurosurg. 2013.

26. Jianu D.C., Muresanu D.F., Bajenaru O., Popescu B.O., Deme S.M., Moessler H., Meinzingen S.Z., Petrica L. Cerebrolysin adjuvant treatment in Broca>s

aphasics following first acute ischemic stroke of the left middle cerebral artery // J Med Life. 2010; 3(3): 297-307.

27. Khabirov F.A., Khaibullin T.I., Grigor>eva O.V. The complex approach to the rehabilitation of post-stroke patients with movement disorders in the early rehabilitation period // Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova. 2011; 111 (4) Pt2: 32-36.

28. Shamalov N.A., Stakhovskaia L.V., Burenchev D.V., Kichuk I.V., Tvorogova T.V., Botsina A.Iu., Smychkov A.S., Kerbikov O.B., Moessler H., Novak P., Skvortsova V.I. The effect of cerebrolysin in dosage 50 ml on the volume of lesion in ischemic stroke // Zh Nevrol Psikhiatr Im S. S. Korsakova. 2010; 110 (12) Pt: 34-37.

29. Sadin A.V., Zhydomorov N.Y., Gogoleva I.V., Demidov V.I., Grishina T.R., Gromova O.A. A study of neuroregenerative action of cerebrolysin in brain trauma // Zh Nevrol Psikhiatr Im S. S. Korsakova. 2013; 113 (4): 57-60.

30. Vazquez-Roque R.A., Ubhi K., Masliah E., Flores G. Chronic cerebrolysin administration attenuates neuronal abnormalities in the basolateral amygdala induced by neonatal ventral hippocampus lesion in the rat // Synapse. 2013; Synapse. 2: 101002/syn21718.

31. Sharma H.S., Sharma A., Mossler H., Muresanu D.F. Neuroprotective effects of cerebrolysin, a combination of different active fragments of neurotrophic factors and peptides on the whole body hyperthermia-induced neurotoxicity: modulatory roles of co-morbidity factors and nanoparticle intoxication // Int Rev Neurobiol. 2012; 102: 249-76 doi.

32. Georgy G.S., Nassar N.N., Mansour H.A., Abdallah D.M. Cerebrolysin Ameloriates Cognitive Deficits in Type III Diabetic Rats // PLoS One. 2013; 8(6): e64847 Print 2013.

33. Zhang L., Chopp M., Meier D.H., Winter S., Wang L., Szalad A., Lu M., Wei M., Cui Y., Zhang Z.G. Sonic hedgehog signaling pathway mediates cerebrolysin-improved neurological function after stroke // Stroke. 2013; 44(7): 1965-72 doi.

34. Herzog W., Zeng X., Lele Z., Sonntag C., Ting J.W., Chang C.Y., Hammerschmidt M. Adenohypophysis formation in the zebrafish and its dependence on sonic hedgehog // Dev Biol. 2003; 254(1): 36-49.

35. Lewis K.E., Eisen J.S. Hedgehog signaling is required for primary motoneuron induction in zebrafish // Development. 2001; 128(18): 3485-3495.

36. Scholpp S., Wolf O., Brand M., Lumsden A. Hedgehog signalling from the zona limitans intrathalamica orchestrates patterning of the zebrafish diencephalon // Development. 2006; 133(5): 855-6.

37. Litingtung Y., Chiang C. Control of Shh activity and signaling in the neural tube // Dev Dyn. 2000; 219(2): 143-154.

38. So P.L., Yip P.K., Bunting S., Wong L.F., Mazarakis N.D., Hall S., McMahon S., Maden M., Corcoran J.P. Interactions between retinoic acid, nerve growth factor and sonic hedgehog signalling pathways in neurite outgrowth // Dev Biol. 2006; 298(1): 167-75 Epub 2006 Ju.

39. Akazawa C., Tsuzuki H., Nakamura Y., Sasaki Y., Ohsaki K., Nakamura S., Arakawa Y., Kohsaka S. The upregulated expression of sonic hedgehog in motor neurons after rat facial nerve axotomy // J Neurosci. 2004; 24(36): 7923-7930.

40. Kheirvari S., Uezu K., Yamamoto S., Nakaya Y. High-dose dietary supplementation of vitamin A induces brain-derived neurotrophic factor and nerve growth factor production in mice with simultaneous deficiency of vitamin A and zinc // Nutr Neurosci. 2008; 11(5): 228-34.

41. Zhang C., Chopp M., Cui Y., Wang L., Zhang R., Zhang L., Lu M., Szalad A., Doppler E., Hitzl M., Zhang Z.G. Cerebrolysin enhances neurogenesis in the ischemic brain and improves functional outcome after stroke // J Neurosci Res. 2010; 88(15): 3275-81.

42. Hong J., Qian T., Le Q., Sun X., Wu J., Chen J., Yu X., Xu J. NGF promotes cell cycle progression by regulating D-type cyclins via PI3K/Akt and MAPK/Erk activation in human corneal epithelial cells // Mol Vis. 2012; 18: 758-64.

43. Skrzypski M., Le T., Kaczmarek P., Pruszynska-Oszmalek E., Pietrzak P., Szczepankiewicz D., Kolodziejski P.A., Sassek M., Arafat A., Wiedenmann B., Nowak K.W., Strowski M.Z. Orexin A stimulates glucose uptake, lipid accumulation and adiponectin secretion from 3T3-L1 adipocytes and isolated primary rat adipocytes // Diabetologia. 2011; 54(7): 1841-52.

44. Li M., Dai F.R., Du X.P., Yang Q.D., Zhang X., Chen Y. Infusion of BDNF into the nucleus accumbens of aged rats improves cognition and structural synaptic plasticity through PI3K-ILK-Akt signaling // Behav Brain Res. 2012; 231(1): 146-53 doi.

45. Chen M.C, Lin H., Hsu F.N., Huang P.H., Lee G.S., Wang P.S. Involvement of cAMP in nerve growth factor-triggered p35/Cdk5 activation and differentiation in PC12 cells // Am J Physiol Cell Physiol. 2010; 299(2): C516-27 doi.

46. Wang Y., Xie W.Y., He Y., Wang M., Yang Y.R., Zhang Y., Yin D.M., Jordan-Sciutto K.L., Han J.S., Wang Y. Role of CDK5 in neuroprotection from serum deprivation by mu-opioid receptor agonist // Exp Neurol. 2006; 202(2): 313-23 Epub 2006 Au.

47 Kino T., Jaffe H., Amin N.D., Chakrabarti M., Zheng Y.L., Chrousos G.P., Pant H.C. Cyclin-dependent kinase 5 modulates the transcriptional activity of the mineralocorticoid receptor and regulates expression of brain-derived neurotrophic factor // Mol Endocrinol. 2010; 24(5): 941-52 doi.

48. Matsuoka Y., Yang J. Selective inhibition of extracellular signal-regulated kinases 1/2 blocks nerve growth factor to brain-derived neurotrophic factor signaling and suppresses the development of and reverses already established pain behavior in rats // Neuroscience. 2012; 206: 224-36.

49. Harada S., Yamazaki Y., Tokuyama S. Orexin-A suppresses postischemic glucose intolerance and neuronal damage through hypothalamic brain-derived neurotrophic factor // J Pharmacol Exp Ther. -2013; 344(1): 276-85.

№ 2 • 2014

№ 2 • 2014

50. Yu S.J., Grider J.R., Gulick M.A., Xia C.M., Shen S., Qiao L.Y. Up-regulation of brain-derived neurotrophic factor is regulated by extracellular signal-regulated protein kinase 5 and by nerve growth factor retrograde signaling in colonic afferent neurons in colitis // Exp Neurol. 2012; 238(2): 209-17.

51. Zhang Y., Chopp M., Meng Y., Zhang Z.G., Doppler E., Mahmood A., Xiong Y. Improvement in functional recovery with administration of Cerebrolysin after experimental closed head injury // J Neurosurg. 2013; 118(6): 1343-55.

52. Park H.J., Kim M.N., Kim J.G., Bae Y.H., Bae M.K., Wee H.J., Kim T.W., Kim

B.S., Kim J.B., Bae S.K., Yoon S. Up-regulation of VEGF expression by NGF that enhances reparative angiogenesis during thymic regeneration in adult rat // Biochim Biophys Acta. 2007; 1773(9): 1462-72.

53. Belenichev I.F., Sokolik E.P. Pharmacological modulation of nitrogen oxide system in experimental chronic alcoholic intoxication in rats // Eksp Klin Farmakol. 2011; 74(10): 43-45.

54. Gross G.J., Hsu A., Nithipatikom K., Pfeiffer A.W., Bobrova I., Bissessar E. Acute and chronic cardioprotection by the enkephalin analogue, Eribis peptide 94, is mediated via activation of nitric oxide synthase and adenosine triphosphate-regulated potassium channels // Pharmacology. 2012; 90 (1-2):110.

55. Marotti T., Balog T., Mazuran R., Rocic B. The role of cytokines in MET-enkephalin-modulated nitric oxide release // Neuropeptides. 1998; 32(1): 57-62.

56. Pan P., Huang S., Hu C. Nerve growth factor induced expression of iNOS and substance P in dorsal root ganglion sensory neuron and interferon regulatory factor-1 // Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2011; 36(5): 386-91 doi.

57. Hashikawa-Hobara N., Hashikawa N., Yutani C., Zamami Y., Jin X., Takatori S., Mio M., Kawasaki H. The Akt-nitric oxide-cGMP pathway contributes to nerve growth factor-mediated neurite outgrowth in apolipoprotein E knockout mice // J Pharmacol Exp Ther. 2011; 338(2): 694-700.

58. Chen N., Yang M., Guo J., Zhou M., Zhu C., He L. Cerebrolysin for vascular dementia // Cochrane Database Syst Rev. 2013;1: CD008900.

59. GuekhtA.B., Moessler H., Novak P.H., Gusev E.I. Cerebrolysin in vascular dementia: improvement of clinical outcome in a randomized, double-blind, placebo-controlled multicenter trial // J Stroke Cerebrovasc Dis. 2011; 20(4): 310-8 doi.

60. Boiko A.N., Batysheva T.T., Mel>nikova M.V., Boiko O.V., Mugutdinova B.T., Gorina T.P., Ovcharov V.V., Bykova O.V., Popova N.F., Gusev E.I. Assessment of the size of the thalamus as a method for the evaluation of the activity of neurodegenerative process after the treatment with cerebrolisin in young patients with multiple sclerosis // Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova. 2013; 113(2) Pt 2: 104-110.

61. Guseva M.R. Neuropeptides in the treatment of optic nerve atrophy in children // Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova. 2010; 110(4): 37-40.

62. Rockenstein E., Ubhi K., Pham E., Michael S., Doppler E., Novak P., Inglis C., Mante M., Adame A., Alvarez X.A., Moessler H., Masliah E. Beneficial effects of a neurotrophic peptidergic mixture persist for a prolonged period following treatment interruption in a transgenic model of Alzheimer>s disease // J Neurosci Res. 2011; 89(11): 1812-21 doi.

63. Ubhi K., Rockenstein E., Vazquez-Roque R., Mante M., Inglis C., Patrick C., Adame A., Fahnestock M., Doppler E., Novak P., Moessler H., Masliah E. Cerebrolysin modulates pronerve growth factor/nerve growth factor ratio and ameliorates the cholinergic deficit in a transgenic model of Alzheimer>s disease // J Neurosci Res. 2013; 91(2): 167-77 doi.

64. Alcantara-Gonzalez F., Mendoza-Perez C.R., Zaragoza N., Juarez I., Arroyo-Garcia L.E., Gamboa C., De La Cruz F., Zamudio S., Garcia-Dolores F., Flores G. Combined administration of cerebrolysin and donepezil induces plastic changes in prefrontal cortex in aged mice // Synapse. 2012; 66(11): 938-49.

65. Berse B., Lopez-Coviella I., Blusztajn J.K. Activation of TrkA by nerve growth factor upregulates expression of the cholinergic gene locus but attenuates the response to ciliary neurotrophic growth factor // Biochem J. 1999; 342 (Pt 2): 301-308.

66. Masliah E., Diez-Tejedor E. The pharmacology of neurotrophic treatment with Cerebrolysin: brain protection and repair to counteract pathologies of acute and chronic neurological disorders // Drugs Today (Barc). 2012; 48 Suppl A: 3-24.

67. Anton Alvarez X., Fuentes P. Cerebrolysin in Alzheimer>s disease // Drugs Today (Barc). 2011; 47(7): 487-513.

68. Li L., Yu L., Kong Q. Exogenous galanin attenuates spatial memory impairment and decreases hippocampal beta-amyloid levels in rat model of Alzheimer>s disease // Int J Neurosci. 2013; 123(11): 759-65.

69. Agasse F., Xapelli S., Coronas V., Christiansen S.H., Rosa A.I., Sarda-Arroyo L., Santos T., Ferreira R., Schitine C., Harnois T., Bourmeyster N., Braganca J., Bernardino L., Malva J.O., Woldbye D.P. Galanin promotes neuronal differentiation in murine subventricular zone cell cultures // Stem Cells Dev. 2013; 22(11): 1693-708 doi.

70. Tian L., Guo R., Yue X., Lv Q., Ye X., Wang Z., Chen Z., Wu B., Xu G., Liu X. Intranasal administration of nerve growth factor ameliorate beta-amyloid deposition after traumatic brain injury in rats // Brain Res. 2012; 1440: 47-55.

71. Onyango I.G., Ahn J.Y., Tuttle J.B., Bennett J.P. Jr., Swerdlow R.H. Nerve growth factor attenuates oxidant-induced beta-amyloid neurotoxicity in sporadic Alzheimer>s disease cybrids // J Neurochem. 2010; 114(6): 1605-18.

72. Yuan J., Huang G., Xiao Z., Lin L., Han T. Overexpression of beta-NGF promotes differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into neurons through regulation of AKT and MAPK pathway // Mol Cell Biochem. 2013; 383(1-2): 201-11.

73. Hu Y.S., Long N., Pigino G., Brady S.T., Lazarov O. Molecular mechanisms of environmental enrichment: impairments in Akt/GSK3beta, neurotrophin-3 and CREB signaling // PLoS One. 2013; 8(5): e64460.

74. Calissano P., Matrone C., Amadoro G. Nerve growth factor as a paradigm of neurotrophins related to Alzheimer>s disease // Dev Neurobiol. 2010; 70(5): 372-83 doi.

75. Counts S.E., He B., Che S., Ginsberg S.D., Mufson E.J. Galanin fiber hyperinnervation preserves neuroprotective gene expression in cholinergic basal forebrain neurons in Alzheimer>s disease // J Alzheimers Dis. 2009; 18(4): 885-9б.

76. Sposato V., Bucci M.G., Coassin M., Russo M.A., Lambiase A., Aloe L. Reduced NGF level and TrkA protein and TrkA gene expression in the optic nerve of rats with experimentally induced glaucoma // Neurosci Lett. 2008; 44б(1): 20-4.

77. Colafrancesco V., Coassin M., Rossi S., Aloe L. Effect of eye NGF administration on two animal models of retinal ganglion cells degeneration // Ann Ist Super Sanita. 2011; 47(3): 284-9.

78. Lambiase A., Mantelli F., Sacchetti M., Rossi S., Aloe L., Bonini S. Clinical applications of NGF in ocular diseases // Arch Ital Biol. 2011; 149(2): 283-92.

79. Doppler E., Rockenstein E., Ubhi K., Inglis C., Mante M., Adame A., Crews L., Hitzl M., Moessler H., Masliah E. Neurotrophic effects of Cerebrolysin in the Mecp2(308/Y) transgenic model of Rett syndrome // Acta Neuropathol. 2008; 11б(4): 425-37.

80. Calamandrei G., Aloe L., Hajek J., Zappella M. Developmental profile of serum nerve growth factor levels in Rett complex // Ann Ist Super Sanita. 2001; 37(4): б01-б05.

81. Formichi P., Radi E., Battisti C., Di Maio G., Muresanu D., Federico A. Cerebrolysin administration reduces oxidative stress-induced apoptosis in limphocytes from healthy individuals // J Cell Mol Med. 2012; 1б(11): 2840-3.

82. Formichi P., Radi E., Battisti C., Di Maio G., Dotti M.T., Muresanu D., Federico A. Effects of cerebrolysin administration on oxidative stress-induced apoptosis in lymphocytes from CADASIL patients // Neurol Sci. 2013; 34(4): 553-б.

83. Kronfeld I., Kazimirsky G., Gelfand E.W., Brodie C. NGF rescues human B lymphocytes from anti-IgM induced apoptosis by activation of PKCzeta // Eur J Immunol. 2002; 32(1): 13б-143.

84. Torcia M., De Chiara G. Nerve growth factor inhibits apoptosis in memory B lymphocytes via inactivation of p38 MAPK, prevention of Bcl-2 phosphorylation, and cytochrome c release // J Biol Chem. 2001; 27б(42): 39027-3б.

85. Li P.F., Hao Y.S., Zhang F.X., Liu X.H., Liu S.L., Li G. Signaling pathway involved in methionine enkephalin-promoted survival of lymphocytes infected by simian immunodeficiency virus in the early stage in vitro // Int Immunopharmacol. 2004; 4(1): 79-90.

86. Xu J., Xin S., Li H., Liu L., Xia W., Li P., Liu X., Li G. Involvement of caspase-3 pathway in anti-apoptotic action of methionine enkephalin on CEM x 174 cells in prolonged infection with simian immunodeficiency virus in vitro // Cell Biol Int. 200б; 30(2): 114-21 Epub 200б Fe.

87. Серкина Е.В., Громова OA, ^ршин И.Ю., Сотникова КЮ. Церебро-лизин облегчает состояние больных с перинатальными поражениями ЦЖ через модуляцию аутоиммунитета и антиоксидантную защиту // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. — 2008.—T. 108, № 11. — С. б2-бб.

88. Bowden R., Soto S., Specter S. Modulation of fas/fasL in a murine retroviral infection by AZT and methionine encephalin // Adv Exp Med Biol. 2001; 493: 143-152.

89. Kul>chikov A.E., Makarenko A.N. Effects of neuropeptides on interferon production in vitro // Patol Fiziol Eksp Ter. 2008; (2): 11-12.

90. Hua H., Lu C., Li W., Meng J., Wang D., Plotnikoff N.P., Wang E., Shan F. Comparison of stimulating effect on subpopulations of lymphocytes in human peripheral blood by methionine enkephalin with IL-2 and IFN-gamma // Hum Vaccin Immunother. 2012; 8(8): 1082-9 doi.

91. Tang C.W., Feng W.M., Du H.M., Bao Y., Zhu M. Delayed administration of D-Ala2-D-Leu5-enkephalin, a delta-opioid receptor agonist, improves survival in a rat model of sepsis // Tohoku J Exp Med. 2011; 224(1): б9-7б.

92. Piva M., Moreno J.I., Jenkins F.S., Smith J.K., Thomas J.L., Montgomery

C., Wilson C.B., Sizemore R.C. In vitro modulation of cytokine expression by enkephalin-derived peptides // Neuroimmunomodulatio 2005; 12(б): 339-347.

93. Shikata A., Shikata T., Sotozono Y., Hosoi H., Matsumura T., Sugimoto T., Sawada T. Neuronal differentiation in human neuroblastoma cells by nerve growth factor following TrkA up-regulation by interferon-gamma // Med Pediatr Oncol. 2000; 34(б): 394-401.

94. Sotnikova N.Y., Gromova O.A., Novicova E.A. Dual effect of cerebrolysin in children with attention deficit syndrome with hyperactivity: neuroprotection and immunomodulation // Russ J Immunol. 2002; 7(4): 357-3б4.

95. Sotnikova N.Y., Gromova O.A., Novikova E.A., Burtsev E.M. Immunoactive Properties of Cerebrolysin // Russ J Immunol. 2000; 5(1): б3-70.

96. Pasnik J., Tchorzewski H., Baj Z., Luciak M., Tchorzewski M. Priming effect of met-enkephalin and beta-endorphin on chemiluminescence, chemotaxis and CD11b molecule expression on human neutrophils in vitro // Immunol Lett. 1999; б7(2): 77-83.

97. Bracci-Laudiero L., Aloe L., Caroleo M.C., Buanne P., Costa N., Starace G., Lundeberg T. Endogenous NGF regulates CGRP expression in human monocytes, and affects HLA-DR and CD86 expression and IL-10 production // Blood. 2005; 10б(10): 3507-14 Epub 2005 A.98. Brodie C., Gelfand E.W. Regulation of immunoglobulin production by nerve growth factor: comparison with anti-CD40 // J Neuroimmunol. 1994; 52(1): 87-96.