Формирование CD4+ и СD8+ Т-клеток иммунологической памяти у волонтеров после вакцинации живыми аттенуированными гриппозными вакцинами а (H5N2) и а (H1N1)pdm2009

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

Инфекция и иммунитет

ство, которое способствует возникновению новых случаев заболевания. Поэтому исследование сывороток крови декретированного контингента на наличие антител к Уьантигену в Российской Федерации является обязательным (СП 3.1.1.2137-06 № 31).

Цель работы заключалась в апробации нового эритроцитарного диагностикума для выявления хронического бактерионосительства возбудителя брюшного тифа путем выявления антител к VI-антигену в реакции пассивной гемагглютинации.

Работа проводилась в Республике Кыргызстан в период 2003—2013 гг. Исследовано 470 образцов сывороток, собранных от лиц, переболевших брюшным тифом в последние десять лет. Диагноз был подтвержден выделением возбудителя из крови и фекалий. Выявление М-антител проводили с использованием «Диагностикума эритроцитарного сальмонеллезно-го ^-антигенного жидкого» от двух производителей: экспериментальные серии производства НИИЭМ им. Пастера (Санкт-Петербург) и производства ООО «Биодиагностика» (Москва). Кроме того, в сыворотке крови, переболевших брюшным тифом, определяли антитела к О-антигенному комплексу сальмонелл группы Д с помощью «Диагностикума эритроцитар-ного сальмонеллезного О-антигенного жидкого», производства ООО «Биодиагностика» (Москва).

По суммарным данным, ^-антитела обнаружены в 114 сыворотках (24,3%), О-антитела — в 171 сыворотке (36,4%), причем в 54 сыворотках обнаружены VI- и О-антитела (11,5%); в 60 образцах — только VI-антитела (12,8%), в 117 образцах — только О-антитела (24,9%).

Результаты серологического исследования сывороток лиц, переболевших брюшным тифом, показали, что у 12,8% обследованных после перенесенного острого заболевания брюшным тифом, возможно, сформировалось хроническое носительство возбудителя брюшного тифа, о чем свидетельствовало наличие М-антител. Реконвалесценты брюшного тифа выявлены в 11,5% случаев по наличию VI- и О-антител. В целом, М-антитела в диагностических титрах выявлены у 24,3% обследованных.

Расхождений в результатах при использовании VI-диагностикумов разных производителей не обнаружено. Следует отметить, что разработанный нами диагно-стикум имеет ряд практических преимуществ: 1) более четкая регистрация положительных и отрицательных результатов (за счет сенсибилизации эритроцитов хро-матографически очищенным М-антигеном); 2) быстрое получение результатов (30 мин против 60 мин) за счет использования куриных эритроцитов; 3) визуальный контроль стадии внесения сыворотки за счет изменения цвета раствора-разбавителя.

РОЛЬ НЕКОТОРЫХ ПРО-И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ ЛЕПТОСПИРОЗОВ

О.А. Петрова

ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт -Петербург

Лептоспироз является одной из наиболее широко распространенных и социально значимых зооантро-понозных инфекций. Полиморфизм клинических проявлений лептоспирозов и отсутствие патогно-моничных симптомов болезни приводят к поздней диагностике, нерациональному лечению, что явля-

ется одной из причин высокой летальности при этой инфекции, достигающей на некоторых территориях 25%. Новые данные помогут уточнить иммунопато-генез данного заболевания и помогут обосновать инновационные подходы в современной тактике комплексной терапии заболевания (иммунокоррекция).

Цель работы. Изучение роли про- и противовоспалительных цитокинов для углубления знаний об иммунопатогенезе лептоспирозов.

Материалы и методы. Объектом исследования служили сыворотки крови от больных лептоспиро-зом (n = 86) и 14 сывороток от практически здоровых лиц. Количественное измерение цитокинов проводили на анализаторе «MagPix» («Millipore», США), основанном на технологии хМАР (мультиплексный анализ) с использованием магнитных частиц «Milliplex Mag». Математическую обработку данных осуществляли с применением программы GraphPad Prizm 6 (GraphPad Software, США). Для описания полученных результатов использовались стандартные методы непараметрической статистики.

Результаты. В группе больных лептоспирозом по сравнению с контрольной группой выявлены достоверно повышенные уровни IL-8, IL-10, MCP-1, TNFa (p < 0,05). Проведен корреляционный анализ полученных результатов содержания цитокинов в сыворотке крови с помощью мультиплексного анализа, выявлены корреляционные связи между TNFa и MCP-1, TNFa и IL-1Ra (r = 0,51; r = 0,49 соответственно), такие же связи были обнаружены и в группе контроля (но более сильные: r = 0,69 для обоих случаев). Так же была выявлена корреляционная связь между IL-12 (р70) и IFNy (r = 0,55) в опытной группе, нехарактерная для группы контроля.

Выводы. Получены новые данные о содержании цитокинов у больных лептоспирозом и у практически здоровых лиц. Мы получаем новые знания о взаимодействии цитокинов и механизмах иммунопато-генеза лептоспирозов.

ФОРМИРОВАНИЕ CD4+ И СD8+ Т-КЛЕТОК ИМУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ У ВОЛОНТЕРОВ ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВЫМИ АТТЕНУИРОВАННЫМИ ГРИППОЗНЫМИ ВАКЦИНАМИ А (H5N2) И А (H1N1)pdm2009 Г.Д. Петухова, И.В. Лосев, С.А. Донина, А.Н. Найхин ФГБУ НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН, Санкт-Петербург

Высокая патогенность некоторых птичьих вирусов гриппа А позволяет считать их потенциально пандемическими для человеческой популяции. За 2003— 2014 гг. было зарегистрировано 650 случаев инфицирования людей вирусами А (H5N1), из них 386 летальных. Кроме того, в 2009 г. мир столкнулся с пандемией нового гриппа А (H1N1). Вакцинация признана одним наиболее эффективных видов профилактики заболевания в периоды эпидемий и пандемий. Основной целью любой вакцинации является формирование клеток иммунологической памяти, обеспечивающих ускоренный и усиленный иммунный ответ при повторной встрече с возбудителем инфекции. Целью настоящего исследования являлась оценка способности живых гриппозных вакцин (ЖГВ) A/17/Утка/ Потсдам/86/92 (H5N2) и А/17/Калифорния/2009/38 (H1N1) индуцировать формирование CD4+ и CD8+ Т-клеток иммунологической памяти у людей.

2014, Т. 4, № 1

Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»

Материалы и методы. Молодые люди 18—20 лет были двукратно привиты ЖГВ А (H5N2), А (H1N1) pdm2009 или препаратом плацебо. Образцы венозной крови и носовых секретов собирали до вакцинации (день 0), через 21 день после первой вакцинации (день 21), через 21 день после ревакцинации (день 42) и через 42 дня после ревакцинации (день 63). Для определения титров сывороточных и локальных антител использовали РТГА и иммуно-ферментный анализ. Процент вирус-специфичных CD3+CD4+IFNy+ и CD3+CD8+IFNy+ определяли методом проточной цитометрии.

Результаты. Обе ЖГВ стимулировали продукцию как сывороточных, так и локальных антител. У части непривитых людей обнаруживались пере-крестнореагирующие Т-клетки к птичьему вирусу A (H5N2). Такие же клетки к вирусу A (H1N1)pdm2009 выявлялись еще до его эпидемического распространения в 2009—2010 гг. Процент таких предсуществу-ющих клеток существенно варьировал. После первой вакцинации достоверное увеличение уровней клеток происходило к вирусу А (H5N2) у 10—20% волонтеров, к вирусу А (H1N1) — у 38—69% лиц. После ревакцинации эти цифры увеличились до 30—40% и 69—75% соответственно. Выявлена обратная зависимость между уровнями вирусспецифичных Т-клеток до и после вакцинации. Кроме того, введение ЖГВ А (H5N2) индуцировало гетеросубти-пический иммунный ответ к другому сероподтипу вируса гриппа А.

Выводы. Обе изученные вакцины — A/17/Duck/ Potsdam/86/92 (H5N2) и A/17/California/ 2009/38 (H1N1) — индуцировали гуморальный и Т-клеточ-ный иммунный ответ у волонтеров. ЖГВ A (H1N1) стимулировала продукцию вирусспецифичных CD4+ и CD8+ Т-клеток в большей степени, чем A (H5N2). Клетки иммунологической памяти, индуцированные вирусом A/17/Duck/Potsdam/86/92 (H5N2) обладали кроссреактивностью в отношении сезонного штамма A (H1N1).

ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧНОСТИ И ЦИТОПАТОГЕННОСТИ ГЛИКОПРОТЕИНА КАПСУЛЫ BURKHOLDERIA PSEUDOMALLEI 100 НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ

Е.В. Пименова, Н.П. Храпова

ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора

На сегодняшний день существует несколько альтернативных способов получения результатов по оценки токсичности различных соединений (химических и биологических). Одним из важных преимуществ моделей in vitro заключается в возможности работы со стандартными перевиваемыми линиями клеточных культур с известными свойствами. Модель in vitro обеспечивает хорошую воспроизводимость на всех этапах работы в связи с их однородной морфологией и характеристиками роста.

В качестве экспериментальной модели использовали культивируемые in vitro клетки линии L929, полученной из банка клеточных культур позвоночных института цитологии РАН, Санкт-Петербург). Пластины с высевами клеточных культур инкубировали в СО2-инкубаторе при 37°С, и насыщении атмосферы 5—7% СО2. Культивирование проводи-

ли в полусинтетической питательной среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной сыворотки плодов коровы, 2 mM глютамина, 4 mM пирувата натрия, пенициллин 100 ЕД/мл, стрептомицин 100 мкг/мл. Для пересева клеток использовали раствор трипси-на-версена 1:3.

Проверке цитотоксичности и цитопатогенно-сти подлежали 7 образцов формамидных экстрактов (ФЭ) В. pseudomallei 100, серии 5, 7, 16, 19, 22, 23, 24. Свежеприготовленную взвесь клеток вносили в 24-луночные пластины с концентрацией клеток в каждой лунке 1,6 х 105 в объеме 0,5 мл. Через сутки после образования плотного монослоя в опытные лунки вносили по 40 мкл одного из вариантов антигена. Время прямого контакта клеток-мишеней с антигеном составлял 3 суток; условия инкубации, как описано выше.

Ежедневно в течение срока эксперимента производили подсчет жизнеспособности, оценку роста клеток и оценку повреждения клеток в каждой лунке. После окончания опыта рассчитывали относительные показатели прироста или убывания числа клеток в популяции L929.

К концу 3 суток было зарегистрировано торможение роста популяции в лунках с антигеном серий 5, 16, 19, 24 по сравнению с контрольными лунками, что свидетельствовало об отсроченном цитопатоген-ном эффекте гликопротеина капсулы В. pseudomallei 100 этих образцов 5, 16, 19, 24 на клетки-мишени.

ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ

Е.М. Полещук1, А.А. Девяткин2, М.В. Бекова2, В.Г. Дедков2

1ФБУН Омский НИИприродно-очаговых инфекций Роспотребнадзора

2 ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва

Бешенство включено в кодекс здоровья наземных животных и признано заболеванием, имеющим значение для международной торговли (OIE). Оно входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший экономический ущерб, является серьезной проблемой общественного здравоохранения (WHO). В этих условиях решающую роль играет быстрая и надежная лабораторная диагностика. Бешенство — зооноз, для которого методы диагностики стандартизированы на международном уровне.

На территории России диагностику инфекции определяют ГОСТ 26075-84 и МУ от 14 мая 1997 г., включающие методы: МФА, ИФА, гистологический (обнаружение телец Негри), реакция преципитации, биопроба. Наибольшее распространение в лабораторной практике получили МФА, ИФА, биопроба.

Случайное использование молекулярно-генети-ческих методов, при подтверждении диагноза у людей больных энцефалитом неясной этиологии, позволило констатировать бешенство в трех случаях, дополнительно к данным официальной статистики (Леонова и др., 2009; Дедков и др., 2014), что позже было подтверждено стандартными методами. Эти факты указывают на несомненную роль в диагностике бешенства молекулярно-генетических методов, рекомендованных ВОЗ, в качестве дополнительных.