Влияние имунофана на показатели системы иммунитета и перекисного окисления липидов при остром токсическом действии хлорированных углеводородов

Статья

реципиентам с последующим введением ЭБ и оценкой реакции ГЗТ установлено снижение прироста массы лапы под влиянием острого отравления ДХЭ. В этом случае формирование реакции ГЗТ зависит от иммунных свойств спленоцитов доноров.

Таблица 1

Влияние дипироксима на различные модели реакции ГЗТ у мышей при отравлении ДХЭ в дозе 0,75 ЛД50

Модель Условия эксперимента Прирост массы лапы, мг

ДХЭ ДХЭ+ дипироксим

Реакция ГЗТ Контроль Опыт 40,3±4,5 17,1±3,3* 38,9±4,4 33,2±4,9

Локальная адаптивная реакция ГЗТ Отрицат. контроль Положит. контроль Опыт 18,9±2,4 31,2±3,1* 22,4±2,5** 23,3±2,2 36,1±3,0* 37,1±3,5**

Эффект переноса спленоцитов после иммунизации Контроль Опыт 72,4±6,1 50,1±5,3* 76,1±5,2 73,0±4,9

Эффект переноса супрессорных клеток Контроль Опыт 30,2±2,5 19,3±3,3* 32,3±2,9 23,1±2,6*

Примечание: * - различия достоверны при сравнении с контролем

Снижение реакции ГЗТ у реципиентов под влиянием ДХЭ, по нашему мнению, можно объяснить уменьшением способности спленоцитов доноров к реализации вторичного иммунного ответа вследствие снижения активности а-нафтил-А8-ацетатэстеразы клеток селезенки. Также показано, что кроме снижения исследованного энзима в селезенке, отмечается его редукция в подколенных лимфоузлах. Это вполне закономерно, т.к. формирование реакции ГЗТ в этой модели прямо связано, в отличие от локальной адаптивной реакции ГЗТ, с функцией клеток периферических лимфоузлов, из которых для реализации реакции ГЗТ мигрируют ТЬ1-лимфоциты, моноциты и макрофаги, определяющие проявление реакции. Опытные данные по оценке возможности применения реактиваторов холинэстеразы при острой интоксикации ДХЭ говорят о том, что дипироксим полностью восстанавливает реакцию ГЗТ и активность а-нафтил-А8-ацетатэстеразы сплено-цитов и клеток лимфоузлов.

Таблица 2

Оценка влияния дипироксима на активность а-нафтил-А8-ацетатэстеразы спленоцитов мышей по относительному содержанию эстеразопозитивных клеток селезенки доноров и лимфоузлов реципиентов в различных моделях реакции ГЗТ при остром отравлении ДХЭ

в дозе 0,75 ЛД50

Модель реакции ГЗТ Селезенка Подколенный лимфоузел

1 2 3 1 2 3

Реакция ГЗТ без переноса клеток 47±3 23±3* 46±4 52±4 20±4* 47±5

Локальная адаптивная реакция ГЗТ 53±4 23±3* 50±3 55±4 47±4 49±4

Эффект переноса спленоцитов после иммунизации 45 ±3 22±2* 48±5 57±5 30±3* 53±4

Эффект переноса супрессорных клеток 47±5 31±3* 29±4* 54±4 40±3* 43±3*

Примечание: 1 - контроль, 2 - ДХЭ, 3 - ДХЭ+дипироксим, * - различия достоверны

При изучении влияния ДХЭ на формирование супрессоров в селезенке установлено снижение супрессорной активности спленоцитов доноров через 5 сут. после действия яда. Активность эстеразы в клетках селезенки падала по сравнению с контролем. Это обусловлено тем, что а-нафтил-А8-ацетатэстераза локализована чаще в Т-хелперах [7], и при относительном увеличении

доли Т-супрессоров в селезенке относительное число эстеразопо-зитивных клеток уменьшается. Данным механизмом можно объяснить и снижение активности а-нафтил-А8-ацетатэстеразы в подколенных лимфоузлах у животных-реципиентов. В этом случае применение дипироксима не восстанавливает реакцию ГЗТ и активность эстераз спленоцитов доноров и клеток подколенных лимфоузлов. Это объясняется относительным ростом числа супрессорных клеток со слабой эстеразной активностью.

Выводы. Острое отравление ДХЭ в дозе 0,75 ЛД50 снижает клеточный иммунитет, оцениваемый по формированию реакции гиперчувствительности замедленного типа, вследствие снижения активности а-нафтил-А8-ацетатэстеразы в спленоцитах и клетках подколенных лимфоузлов. ДХЭ уменьшает эффект переноса супрессорных клеток в реакции гиперчувствительности замедленного типа, которая сопровождается снижением а-нафтил-А8-ацетатэстеразы в спленоцитах доноров и подколенных лимфоузлах реципиентов. Применение реактиватора холинэстеразы дипироксима восстанавливает формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа при острой интоксикации ДХЭ.

Литература

1. Курашов О.В., Троцевич В.А // Врач. дело, Киев.- 1992.-№10.- С. 109-111.

2. Забродский П.Ф. и др.. // Токсикол. вестн.- 1996.- №1.-С. 13-15.

3. Аксалонов А.А. и др.// Иммунология.- 1985.- №2.- С.56-

59.

4. Гюллинг Э.В., Самбур М.Б. // Физиол. журн.- 1981.-Т. 27, № 2.- С. 237-240.

5. Писарев В.М., Певницкий Л.А. // Бюл. экспер. биол.-1985.- №5.- С. 571-573.

6. ФроловБ.А. и др. // Иммунология.- 1985.- №2.- С. 39-41.

7. Хейхоу Д.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия.- М.: Медицина, 1983.- 154-173 с.

8. Черноусов А.Д., Юрин Б.Л. // Иммунология.- 1982.- №1.-С. 13-16.

УДК 612.017

ВЛИЯНИЕ ИМУНОФАНА НА ПОКАЗАТЕЛИ СИСТЕМЫ ИММУНИТЕТА И ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ ПРИ

ОСТРОМ ТОКСИЧЕСКОМ ДЕЙСТВИИ ХЛОРИРОВАННЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ

П. Ф. ЗАБРОДСКИЙ, В. Г. ЛИМ, Н. М. ТРОШКИН*

Введение. Исследование токсического действия хлорированных углеводородов дихлорэтана (ДХЭ), тетрахлорметана (ТХМ) и трихлорэтилена (ТХЭ) на иммунную систему для снижения частоты постинтоксикационных инфекционных осложнений и заболеваний путем прим применения иммуностимуляторов [1, 6] является актуальной задачей токсикологии и фармакологии в связи с ростом частоты отравлений этими веществами [4]. Влияние имунофана (ИФ), имеющего иммуностимулирующий, антиоксидантный и гепатотропный эффекты, на показатели восстановления системы иммунитета и снижения интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) при острых отравлениях хлорированными углеводородами мало изучено [2].

Цель работы - оценка возможности восстановления сниженных острым действием хлорированных углеводородов показателей системы иммунитета и ПОЛ применением иммуностимулятора и антиоксиданта ИФ.

Материал и методы исследования. Эксперименты велись на беспородных белых крысах массой 180-240 г. Хлорированные углеводороды вводили перорально в растворе оливкового масла в

*

Военный институт радиационной, химической и биологической защиты МО РФ, 410037, Саратов, ул. 50 лет Октября, дом 5

П. Ф. Забродский, В. Г. Лим, Н. М. Трошкин

дозе 0,75 ЛД50. Среднелетальные дозы для крыс ДХЭ, ТХМ и ТХЭ составляли соответственно 0,97±0,08, 6,5 ±0,6 и 4,7±0,4 г/кг. ИФ применяли подкожно в дозе 10 мкг/кг через 30 мин после введения хлорированных углеводородов и в последующие 3 суток ежедневно однократно.

Иммунные реакции исследовали с использованием общепринятых методов [1]. Гуморальный иммунный ответ к Т-зависимому антигену (эритроцитам барана - ЭБ) оценивали через 5 сут по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке после введения хлорированных углеводородов с одновременной внутрибрюшинной иммунизацией крыс ЭБ в дозе 2-108 клеток. Гуморальная иммунная реакция на введение ЭБ характеризует способность ТЬ1-лимфоцитов участвовать в продукции В-лимфоцитами (плазматическими клетками) 1§М. Антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) исследовали через 5 суток после иммунизации крыс в дозе 108 ЭБ, используя их спле-ноциты, спектрофотометрическим методом.

Активность естественных клеток-киллеров (ЕКК) определяли по показателю естественной цитотоксичности (ЕЦ) спектрофотометрически по числу оставшихся не разрушенными в ходе цитотоксического теста клеток-мишеней через 3 сут после введения хлорированных углеводородов. Формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), отражающей функцию клеточного иммунного ответа (в частности, активность ТЬ1-клеток), оценивали у крыс по приросту (в %) массы стопы задней лапы. При этом животных иммунизировали внутрибрю-шинным введением 108 ЭБ.

Разрешающую дозу ЭБ (5-108) вводили под апоневроз стопы задней лапы через 4 суток. Реакцию ГЗТ определяли через 24

ч. Процессы свободно-радикального ПОЛ оценивали по суммарной продукции радикалов в крови методом люминолзависимой хемилюминесценции, активированной форболовым эфиром (0,156 МКм) [5], и содержанию малонового диальдегида (МДА) в крови спектрофотометрически [3] через 3 суток после отравления хлорированными углеводородами. Данные обрабатывали статистически с использованием 1-критерия достоверности Стьюдента и непараметрического и-критерия Вилкоксона - Манна - Уитни.

Результаты. После острой интоксикации хлорированными углеводородами в дозе 0,75 ЛД50 достоверно снижались показатели системы иммунитета (табл.1). Применение ИФ после отравления хлорированными углеводородами восстанавливало Т-зависимое антителообразование, АЗКЦ, активность ЕКК, реакции ГЗТ - по приросту массы стопы. Острые отравления сопровождались статистически значимым ростом в крови уровня суммарной продукции радикалов и МДА (табл.2).

Таблица 1

Влияние ИФ на показатели системы иммунитета при острой интоксикации крыс хлорированными углеводородами в дозе 0,75 ЛД50,

АОК к ЭБ, 103 АЗКЦ, % ЕЦ,% ГЗТ, , %

Контроль 35,3+3,7 19,1+2,2 28,2+2,7 31,5+3,3

ДХЭ 15,1+2,1* 7,5+1,2* 11,2+2,0* 12,0+1,8*

ДХЭ + ИФ 30,1+3,3 17,5+1,6 24,0+3,2 28,1+2,7

ТХМ 17,2+2,2* 9,3+1,4* 13,0+1,9* 15,6+1,7*

ТХМ + ИФ 31,3+3,2 20,2+2,1 20,0+3,2 27,3+1,8

ТХЭ 20,3+2,8* 12,5+1,6* 16,7+2,3* 17,1+1,9*

ТХЭ + ИФ 35,2+3,3 18,3+1,8 25,0+3,0 29,6+2,3

Примечание: * - различия достоверны, p<0,05

Изменения показателей ПОЛ в крови отражают интенсивность процессов свободно-радикального ПОЛ как всех клеток различных органов в целом, так и органов системы иммунитета, в частности лимфоцитов [2].

При анализе зависимости между числом АОК к ЭБ, реакцией ГЗТ при остром отравлении хлорированными углеводородами и суммарной продукцией радикалов установлено, что коэффици-

енты корреляции оказались равными соответственно от -0,727 до -0,783 (р<0,05). Коэффициенты корреляции между содержанием МДА в крови и показателями иммунного статуса при токсическом действии хлорированных углеводородов составляли от -0,639 до -0,769 (р<0,05).

Таблица 2

Токсическое действие хлорированных углеводородов в дозе

0,75 ЛД50 на показатели ПОЛ у крыс,

Вещества Суммарная продукция радикалов, усл. ед. МДА, нмоль/мл

Контроль 33,4+4,0 8,51+0,38

ДХЭ- 67,8+6,9* 12,13+0,59*

ДХЭ + ИФ 51,9+5,3* 10,49+0,60*

ТХМ 75,5+7,1* 14,27+0,61*

ТХМ + ИФ 56,9+5,8* 11,82+0,63*

ТХЭ 60,0+6,8* 11,56+0,62*

ТХЭ+ИФ 49,8+5,4* 9,39+0,44**

Примечание: *; ** - различия достоверны (р<0,05) по сравнению с контролем

Применения имунофана после острого отравления хлорированными углеводородами частично восстанавливало показатели ПОЛ до контрольного значения. ИФ снижал редукцию суммарной продукции радикалов, увеличенной действием ядов, по сравнению с соответствующими параметрами после отравления ДХЭ, ТХМ и ТХЭ соответственно в 1,30; 1,33 и 1,20 раза, снижал содержание МДА в крови, которое росло под влиянием хлорированных углеводородов, соответственно в 1,16; 1,21 и 1,23 раза.

Опыты показали, что инициация ПОЛ под влиянием хлорированных углеводородов может являться одним из общих механизмов их иммунотоксичности. ИФ, вызывая инактивацию свободно-радикальных и перекисных соединений, способствует восстановлению иммунного статуса. Фармакологическое действие этого пептидного иммунооксиредуктанта основано на коррекции иммунной системы и интенсивности процессов ПОЛ.

Выводы. Изучено влияние ИФ на показатели системы иммунитета и ПОЛ после острого токсического действия хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50. Установлено, что ИФ при подкожном введении в дозе 10 мкг/кг в течение 3 суток (ежедневно, однократно) восстанавливает основные показатели иммунного статуса: Т-зависимое антителообразование, АКЦТ,

активность ЕКК, реакцию ГЗТ после острых отравлений хлорированными углеводородами. Применение ИФ приводило к частичному восстановлению показателей ПОЛ после острой интоксикации хлорированными углеводородами... Иммунотоксические эффекты хлорированных углеводородов в дозе 0,75 ЛД50 прямо связаны с постинтоксикационной активацией ПОЛ.

Литература

1. Забродский П.Ф. Иммунотропные свойства ядов и лекарственных средств. - Изд. Саратов. ун-та, 1998.-214 с.

2. Забродский П. Ф. Влияние ксенобиотиков на иммунный гомеостаз. - В кн.: Общая токсикология / Под ред. Б. А. Курляндского, В.А. Филова.- М.: Медицина, 2002. - С. 352-384.

3. Коробейникова Э.Н. // Лаб. дело.- 1989.- №7.- С.8-10.

4. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей. 2-е изд..- М.:Медицина, 2000.- 434 с.

5. Михалъчик Е.В., Иванова А.В., Ануров М.В., Титкова СМ. и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед.- 2004.- Т.138, №9.- С. 299.

6. Утешев Б.С., Сергеев А.С., Коростелев С.А. // Эксперим. и клин. фармакол .-1995.-Т.58, №3.- С.3-7.