Вовлечение антиоксидантов в васкулогенную мимикрию при диссеминированной меланоме

_БИОТЕРАПИЯ_

УДК 616-006.81-08:615.225.3

A. A. Vartanian, O. S. Burova, E. V Stepanova

THE INVOLVEMENT OF ANTIOXIDANMTS IN MELANOMA

VASCULOGENIC MIMICRY

N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow

ABSTRACT

The development of the tumor microcirculation compartment includes both the production of new blood vessels (angiogenesis) and their remodeling. Recently, the generation of a functional perfusable network by highly invasive tumor cells that mimic embryonic vasculogenic network has been demonstrated in three-dimentional culture. Using in vitro Matrigel angiogenesis model we have studied the effects of resveratrol, the major catechin of green tea, EGCG, and N-acetyl-cysteine on the ability of melanoma cells to form/destroy the capillary-like structure (CLS). Our findings suggest that reactive oxygen species (ROS) may act as an important mediator in CLS formation.

Key words: melanoma, vasculogenic mimicry, ROS, antioxidants, H2O2.

А. А. Вартанян, О. С. Бурова, Е. В. Степанова

ВОВЛЕЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТОВ В ВАСКУЛОГЕННУЮ МИМИКРИЮ ПРИ ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМЕ

ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

РЕЗЮМЕ

Развитие микроциркуляции в опухоли включает два последовательных процесса: рост новых сосудов (ан-гиогенез) и их ремоделирование. Недавно в 3Э-культуре было продемонстрировано формирование сети сосудов опухолевыми клетками, которые имитировали эмбриональноподобную сеть сосудов. Используя in vitro модель ангиогенеза на Матригеле, мы показали, что антиоксиданты ресвератрол (РТ), EGCG, основной алкалоид зеленого чая, и N-ацетил-цистеин блокируют формирование сосудистоподобных структур (СПС) на Матригеле. Мы предполагаем, что уровень активных форм кислорода (АФК) является той лимитирующей характеристикой опухолевых клеток, которая способна запустить процесс формирования СПС.

Ключевые слова: меланома, васкулогенная мимикрия, АФК, перекись водорода, антиоксиданты.

ВВЕДЕНИЕ

Формирование новых микрососудов на основе уже существующей в ткани сети сосудов, или неоангиоге-нез, - необходимое условие роста опухоли и развития метастазов [8]. Большое количество микрососудов в опухоли способствует ее быстрой пролиферации в результате постоянного поступления питательных веществ и кислорода и снижению апоптической активности опухолевых клеток. Однако неоангиогенез - не единственная возможность доставки в опухоль кислорода и питательных веществ. Недавно было показано, что клетки высокоагрессивных метастатических мела-ном способны в отсутствии эндотелиальных клеток (ЭК) и фибробластов формировать высокоструктурированные васкулярные каналы, ограниченные базаль-ной мембраной [16]. Образование микроваскулярной сети агрессивными опухолевыми клетками получило название «васкулогенной мимикрии» (ВМ), подчерки-

вая образование таких каналов de novo, без участия эндотелиальных клеток (ЭК), т.е. независимо от неоанги-огенеза. Образование этих структур - уникальная способность клеток с высокозлокачественным клеточным фенотипом: менее агрессивные опухолевые клетки таких структур не образуют [17]. Функциональное значение этих сосудистоподобных структур, несмотря на возрастающий интерес к этому вопросу, остается не выясненным. Кажется разумным, что образование сети каналов внутри опухоли может частично нейтрализовать отсутствие питания и предотвратить ранний некроз внутри агрессивной опухоли. Высокая статистическая корреляция между способностью опухоли к ВМ и частотой метастазирования опухоли подтверждает эту гипотезу. То, что наличие ВМ компонента описывается и при некоторых других типах агрессивных опухолей - раке молочной железы, простаты и яичников [22; 23; 25], - говорит о том, что мы имеем

16 БИОТЕРАПИЯ

>- дело с новой характеристикой агрессивной опухоли. затем помещали в С02-инкубатор на 30 мин для полНа сегодняшний день процесс ВМ можно отнести ного затвердения. Опухолевые клетки (2х105) в полк опухолеспецифичным, поскольку не известно ни од- ной среде RPMI 1640 наносили на Матригель и инку-ного физиологического процесса - аналога ВМ бировали при 37 оС в течение 24 ч. у взрослых или детей. Практически формирование ци- тотрофобластами васкулярных каналов в плаценте - 'Миграция клеток (метод раневой поверхности) единственный пример ВМ, встречающийся у человека Клетки меланомы (150 тыс/лунка) сажали на 24-лу-в процессе эмбриогенеза. Изучение молекулярных ос- ночный планшет в полной среде RPMI 1640 и инкубиро-нов этого феномена открывает возможность воздей- вали до образования монослоя, который затем нарушал-ствовать на рост агрессивной опухоли с минимальным ся соскабливанием части клеток, к клеткам добавляли эффектом на нормальные физиологические процессы. антиоксидант и продолжали инкубировать в течение Хотя меланома составляет всего около 4% общего еще 24 ч. В качестве положительного контроля исполь-количества злокачественных заболеваний кожи, с ней зовались клетки, инкубированные в RPMI 1640 без до-связано большинство смертей от опухолей кожи [9; бавления сыворотки. Результаты оценивали как про-12]. Увеличение количества больных с этим диагнозом цент мигрирующих клеток в опыте по отношению делает меланому важнейшей социальной проблемой. к контролю (клетки в полной RPMI 1640 среде). Меланома не поддается лечению традиционными методами химиотерапии [2; 15]. На моделях опухоли Иммуноцитохимическое определение экспрессии в животных было показано, что применение некото- Ki-67 рых природных соединений способно подавить разви- Цитопрепараты фиксировали в холодном ацетоне тие многих типов опухоли, включая меланому [6; 11; 10 мин и высушивали при комнатной температуре 19]. В настоящей работе впервые обсуждается роль в течение 15-20 мин. Для блокирования эндогенной АФК как движущей силы организации меланомных пероксидазы цитопрепараты инкубировали в темноте клеток в васкулярную сеть. Из полученного экспери- с 3 %-ным Н202, затем промывали фосфатным буфе-ментального материала мы заключаем, что противо- ром 5 мин. Эндогенный авидин и биотин в клетках опухолевые свойства РТ и зеленого чая могут быть блокировали с помощью набора Dako Blocking System связаны с их способностью снижать васкуляризацию (DAKO). Неспецифическое связывание антител блоки-опухоли. ровали 1 %-ным БСА в течение 10 мин. Затем клетки инкубировали с первичными анти-КГ67 моноклональ-МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ными антителами (DAKO) в течение 45 мин, промыва-Кулътура клеток ли дважды по 5 мин фосфатным буфером и инкубиро-Из операционного материала больных диссемини- вали со вторичными антителами (LSAB+kit, DAKO) рованной меланомой кожи, получавших лечение в течение 20 мин. Для визуализации использовали в РОНЦ им. Н. Н. Блохина, были выведены культуры DAB систему (DAKO). Результаты окрашивания оце-опухолевых клеток [1]. Клетки меланомы культивиро- нивали с применением светового микроскопа "Leica" вали в среде RPMI-1640, содержащей 10 % сыворотки, (Германия). антибиотики, 10 мМ HEPES, рН 7,3 при 37 оС в атмосфере 5% С02. Определение внутриклеточного пероксида Внутриклеточный пероксид определяли методом Определение апоптических клеток по окрашива- проточной цитофлюометрии с использованием флюо-нию пропидий иодидом ресцентного субстрата DCF-DA. Клетки инкубирова-Апоптотические клетки определяли по методу ли в темноте при 37 оС в течение 30 мин с 50 мкМ Nicoletti I. [21]. Клетки снимали с Матригеля инкуби- DCA-DA в присутствии и отсутствии антиоксиданта, рованием с 1и/мл диспазы (Roche Diagnostics Corp., затем дважды промывали фосфатным буфером, и ин-Германия) в течение 2 ч при 37 оС, промывали дважды тенсивность флюоресценции считали при длине вол-PBS,ресуспендировали в охлажденном 70 %-ном эта- ны 488 нм (возбуждение) и 530 нм (поглощение). ноле и хранили при 4 оС. Перед реакцией окрашивания клетки осаждали центрифугированием (7 мин РЕЗУЛЬТАТЫ 500 об/мин). Осевшие клетки осторожно ресуспенди- Временной и дозозависимый эффект ресвератро-ровали в 1 мл гипотонического раствора, содержащего ла на рост меланомных клеток 5 мкг/мл PI, 0,1% цитрата натрия и 0,1% тритона В последние годы появляются все больше работ, Х-100 и инкубировали в темноте в течение 15 мин при указывающих на то, что РТ и ЕвСв являются для мно-4 оС. Суспензию клеток, окрашенных PI, без дальней- гих типов опухолей высокоэффективными препарата-шего отмывания анализировали методом проточной ми, предотвращающими увеличение их размеров [6; цитофлуориметрии. 11; 19]. Мы предположили, что эти природные соединения могут быть вовлечены в формирование сосудов 3 'й-кулътура опухолевыми клетками. В этой работе мы использова-200 мкл Матригеля (8,7 мг.мл) быстро наносили на ли 4 культуры клеток меланомы, выведенные в клеточ-лунку, оставляли при комнатной температуре на 1 ч, ные линии из операционного материала больных дис- Ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1

БИОТЕРАПИЯ

н

Рис. 1. Влияние РТ на рост клеток меланомы:

А - ингибиторный эффект РТ на кинетику роста клеток меланомы. Количество живых клеток определяли окрашиванием Трипановым синим;

В - иммуноцитохимическое определение экспрессии белка К1-67 в клетках меланомы (а) контроль, (б) клетки были инкубированы с 50 мкМ РТ;

С - гистограммы клеток меланомы, инкубированных с 10; 20 и 50 мкМ РТ (1-3); О - влияние антиоксидантов на уровень АФК в клетках меланомы. (1-3 - клетки были инкубированы с 1; 5; 10 мкМ РТ; 4 - клетки были инкубированы с 50 мкМ БОСО; 5 - клетки были инкубированы с 20мМ К-ацетил-цистеина).

семинированной меланомой. Все 4 клеточные линии экспрессировали традиционные маркеры ЭК, они обладали высоким инвазивным потенциалом и вовлекались в ВМ [27]. Чтобы исключить цитотоксический и антипролиферативный эффекты РТ, мы исследовали влияние РТ на рост меланомных клеток. Окрашивание клеток Трипановым синим не выявило никакой цито-токсичности РТ до 100 мкМ после 24 ч инкубации. На рис. 1, А показано влияние РТ на выживаемость клеток при инкубировании с 1; 2; 5; 10 и 50 мкМ РТ в течение 48 ч. Наблюдаемое снижение выживаемости клеток может оказаться следствием антипролифера-тивного эффекта РТ. Используя иммуноцитохимичес-кий метод анализа, мы показали действие РТ на уровень белка К1-67, маркера пролиферации клеток: он быстро подвергается протеолизу при переходе клеток в статус непролиферирующих клеток [7]. Мы обнаружили заметное снижение экспрессии К1-67, когда клетки инкубировались с 50 мкМ РТ в течение 48 ч (рис. 1, В). Полученные данные указывали на то, что снижение выживаемости клеток в ответ на РТ - результат снижения их пролиферации. Поскольку анти-пролиферативный эффект РТ мог быть связан со способностью РТ индуцировать апоптоз в меланомных

клетках, далее мы использовали метод проточной ци-тометрии для выяснения влияния различных концентраций РТ на способность индуцировать апоптоз в ме-ланомных клетках. Наибольший апоптический индекс наблюдался при инкубировании клеток с 50 мкМ в течение 24 ч, 32 % (рис. 1, С). В наших экспериментах не было также выявлено влияния РТ (1-20 мкМ) на миграцию клеток.

Антиоксиданты ингибируют формирование СПС

Работы последних лет указывают на то, что использование антиоксидантов в качестве биологических добавок к пище эффективно ингибирует УБОБ-индуцированный ангиогенез [4; 13]. Мы предположили, что подобный феномен может вовлекаться также в формирование сосудов опухолевыми клетками. Для выявления корреляции между эффектом РТ и способностью меланомных клеток формировать СПС мы исключали те концентрации РТ, которые блокировали клеточную пролиферацию. Клетки растили на пластике с 1-20 мкМ РТ, затем снимали с пластика и сажали на Матригель в полной ЯРМ1 1640-среде. РТ не оказывал влияния на формирование СПС от 1 до 5 мкМ, но полностью блокировал этот процесс при 10 мкМ

н

БИОТЕРАПИЯ

н

(рис. 2, А, С). 1; 5 и 10 мкМ РТ вызывали снижение АФТ, выявленной ОСР-ОА на 10; 24 и 70 % соответственно (рис. 1, О, 1-3). Когда клетки инкубировали с 10 мкМ РТ в течение 2-4 ч, каких-либо изменений в геометрии СПС не наблюдалось (рис. 2, В), что указывало на то, что ингибирование формирования СПС - результат снижения уровня АФК в клетках. В отличие от множества работ, которые использовали концентрации РТ выше 100 мкМ для выявления эффекта РТ на тот или иной метаболический процесс в опухолевых клетках, мы показали, что даже столь низкие концентрации РТ вызывают значительное ин-гибирование формирования СПС.

Зеленый чай - один из древних и широко используемых в мире напитков. Химические компоненты зеленого чая - это в основном полифенолы, известные как катехины [13]. Инкубация клеток, растущих на пластике с 50 мкМ БОСО в течение 24 ч, т.е в концентрации, которая не оказывает влияния на рост и метаболическую активность клеток (данные не приводятся) и снижает внутриклеточный уровень АФК на 65 % (рис 1, О, 4), приводила к полной блокаде формирования СПС. Аналогичный эффект наблюдался при использовании классического антиоксиданта К-ацетил-цистеина, тиол-содержащей аминокислоты - предшественника глутатиона (рис. 1, О, 5, рис. 2, Е). Полученный экспериментальный материал дает основание предположить, что способность меланомных клеток формировать СПС зависит от уровня АФК

в клетках. Закономерно ставится вопрос об их участии в разрушении уже сформированных СПС. Эксперимент показал неожиданный результат. Ни БОСО, ни К-ацетил-цистеин не вызывали каких-либо изменений в рисунке СПС. Однако РТ вызывал округление клеток, который приводил к распаду СПС (рис. 2, Р).

Н202 стабилизирует СПС

На сегодняшний день уже не вызывает сомнений, что АФК, такие, как Н2О2 и О2-, вовлекаются в сигнальные пути, запускающие ангиогенез [3; 5]. Мы предположили, что подобно тому, как Н2О2 увеличивает скорость роста кровеносных сосудов, он может также участвовать в ВМ. Клетки ме-ланомы инкубировали с Н2О2 (0,1-100 мкМ) в течение 30 мин, затем снимали и сажали на Матригель. Мы не заметили каких-либо изменений в формировании СПС в ответ на Н2О2 по сравнению с контролем. Однако низкие концентрации Н2О2 защищали СПС от спонтанного распада (рис. 2, Н).

ОБСУЖДЕНИЕ

Два независимых наблюдения подвели нас к необходимости исследовать влияние антиоксидантов на способность клеток меланомы формировать СПС. Во-первых, специфические ингибиторы ангиогенеза вопреки ожиданию не привели к ингибированию формирования СПС [26]. Одним из объяснений может служить широко обсуждаемый в литературе феномен: для опухолевых клеток характерна репрессия одного (или обоих) апоптогенных сигнальных путей. В клет-

Рис. 2. Влияние антиоксидантов/ Н2О2 на формирование СПС: А - контроль (клетки, инкубированные на Матригеле в течение 24 ч);

В - клетки были инкубированы с 10 мкМ РТ на пластике в течение 5 ч, затем их снимали, сажали на Мат-ригель и продолжали инкубировать еще 24 ч;

С - клетки инкубировали с 10 мкМ в течение 24 ч, далее, как описано в А; О - клетки были инкубированы в течение 24 ч с БОСО, далее, как в подписи к А; Е - клетки были инкубированы с 20 мМ К-ацетил-цистеина, далее, как в подписи А; Р - клетки, организованные в СПС, инкубировали в течение 8 ч с БОСО;

О - клетки были инкубированы с 10 мкМ Н2О2 в течение 30 мин, затем их снимали и инкубировали на Ма-тригеле еще 72 ч;

Н - контрольные клетки после роста на Матригеле в течение 32 ч. Наблюдается спонтанная деградация СПС.

н

БИОТЕРАПИЯ 19

>- ках же нормальных тканей, в том числе ЭК, оба апоп- опухолевыми клетками, предполагает потенциально тогенные пути остаются интактными, что делает их новый путь распространения метастазов. В этой связи чувствительными к стимулам, запускающим апоптоз. полученные нами данные о роли АФК в ВМ представ-Во-вторых, доказано, что в патогенезе меланомы су- ляют особую важность: с одной стороны, позволяют щественная роль принадлежит оксидативному клеточ- объяснить механизмы становления ВМ, с другой — ному стрессу: уровень АФК в меланомных клетках являются основой для создания новых подходов к ле-значительно выше, чем в меланоцитах, что по-видимо- чению злокачественных заболеваний. му и является решающим фактором в становлении болезни [9; 12; 18]. Мы впервые показали, что умень- ЗАКЛЮЧЕНИЕ шение уровня АФК в клетках РТ, EGCG и N-ацетил- Результаты проведенных исследований позволяют цистеином полностью блокирует способность высоко- заключить, что уровень АФК в опухолевой клетке явля-агрессивных меланомных клеток формировать ется тем чувствительным индикатором, который опре-СПС. Полученный экспериментальный материал ука- деляет статус высокоагрессивной опухолевой клетки: зывает на то, что уровень АФК может являться тем снижение уровня АФК антиоксидантами на 60-70 % чувствительным индикатором, который позволяет переводит клетку в статус слабоагрессивной, что пред-клеткам вступать в ВМ. Множество исследований под- полагает, что она будет чувствительна к апоптозу. Поводят нас к заключению, что АФК функционируют как лученные данные представляют определенную практи-важнейший медиатор в VEGF-индуцированном ангио- ческую значимость, так как меланома не поддается ле-генезе, включая формирование сосудов. Полученные чению традиционными методами химиотерапии. данные указывают на то, что уровень АФК - критический фактор также в становлении ВМ. Появляются все ЛИТЕРАТУРА больше работ, указывающих на то, что мишенью 1. Михайлова И. Н., Барышников А. Ю., Морозов клетках для РТ являются AP-1, NF-kB, MAPK, PKC ва Л. Ф. и др. РОСПАТЕНТ № 2005111954/13(013846). [10; 14]. Эти клеточные мишени функционально связа- 2. Bedikian A. Y. Metastatic uveal melanoma thera-ны с клеточной пролиферацией, дифференцировкой py: current options // Int. Ophthalmol. Clin. - 2006. - Vol. и апоптозом. Однако эффект в цитированной литерату- 46(1). - P. 151-166. ре наблюдался лишь при высоких дозах РТ (200мкМ), 3. Berk B C. Redox signals that regulate the vascu-который на порядок выше использованных в настоя- lar response to injury // Thromb. Haemost. - 1999. - Vol. щем исследовании. Одним из выводов нашей работы 82(2). - P. 810-817. является то, что впервые обнаружено природное со- 4. Brakenhielm E., Cao R., Cao Y. Suppression of единение, которое вызывает разрушение СПС. Полу- angiogenesis, tumor growth and wound healing by resver-ченные данные позволили поднять вопрос о роли atrol, a natural compound in red wine and grapes // Н2О2 в ВМ. Мы показали в прямом эксперименте, что FAZEB J. - 2002. - Vol. 15. - P. 1798-1800. ни низкие концентрации Н2О2 (0,1-10 мкМ), 5. Colavitti R., Pani G., Bedogni B. et al. Reactive ни 100 мкМ не влияют на формирование сосудов, од- oxygen species as downstream mediators of angiogenic нако низкие концентрации способствуют стабилиза- signaling by VEGF receptor-2/KDR // J Biol. Chem. -ции СПС. Корреляция между повышением уровня 2002. - Vol. 277. - P. 3101-3108. АФК в клетке и активацией ангиогенеза в литературе 6. Demierre M. F., Natanson L. Chemoprevention хорошо аргументирована [3; 5; 24; 28]. Было показано, of melanoma: an unexpected strategy // J Clin. Oncol. -что 0,1-5 мкМ Н2О2 индуцируют фосфорилирование 2003. - Vol. 21. - P. 158-165. тирозина рецептора VEGF-R2, что приводит к актива- 7. Endl E., Gerdes J. Ki-67 protein: fascinating ции МАP киназы и Akt киназы, ответственных за вы- forms and unknown functions // Exp. Cell Res. - 2000. -живаемость клеток [20; 24]. Эти наблюдения могут ча- Vol. 257(2). - P. 231-237. стично объяснить феномен стабилизации СПС Н2О2. 8. Folkman J. Fundamental concepts of the angio-Мы предполагаем, что существуют также не идентифи- genic process // Curr. Mol. Med. - 2003. - Vol. 3. - P. цированные пути, которые активируются Н2О2 в про- 643-651. цессе формирования СПС. 9. Forguson K. Melanoma // J Cont. Educ. Nurs. - На сегодняшний день применяются в клинике 2005. - Vol. 36(6). - P. 242-243. и проходят клинические испытания более сотни анти- 10. Garcia-Garcia J., Micol V., de GodesA. et al. The ангиогенных препаратов. И, несмотря на это, антиан- cancer chemopreventive agent resveratrol is incorporated гиогенная терапия не находит столь широкого приме- into model membranes and inhibits protein kinase C alpha нения, как цитотоксическая химиотерапия. Гетероген- activity // Arch. Biochem. Biophys. - 1999. - Vol. 372. -ность васкулярных сосудов может быть одной из P. 382-388. причин выживаемости опухолевых клеток: в васкуля- 11. Jang M., Cai L., Udeani G.O. et al. Cancer ризации опухоли традиционный ангиогенез идет па- chemopreventive activity of resveratrol, a natural product раллельно с формированием сосудов из опухолевых derived from grapes // Science. - 1997. - Vol. 275. - P. клеток (без эндотелиальных клеток), а иногда и появ- 218-220. лением мозаичных структур (эндотелиальные иопухо- 12. Keilhdz U. Biochemistry of melanoma. Forum левые клетки). Присутствие сосудов, сформированных (Zenova). - 2003. - Vol. 21. - P.158-165. ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1

20 БИОТЕРАПИЯ

>- 13. Lamy S., Gingras D., Beliveau R. Green tea cate- 21. Nicoletti I., Miglioratti G., Pagliacci M.C. et al. chins inhibit vascular endothelial growth factor receptor A rapid and simple method for measuring thymocyte phosphorylation // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62. - P. apoptosis by propidium iodide staining and flow cytome-381-385. try // J Immun. Meth. - 1991. - Vol. 139. - P. 271-280. 14. Manna S. K., Mukhopadhyay A., Aggarwal B. B. 22. Sharma N., Seftor R.E., Seftor E. et al. Prostatic Resveratrol suppress TNF-induced activation ofNF-kappa tumor cell plasticity involves cooperative interaction of B, activator protein-1 and apoptosis: potential role of reac- distinct phenotypic subpopulation: role in vasculogenic tive oxygen intermediates and lipid peroxidation // J mimicry // Prostate. - 2002. - Vol. 50. - P. 189-201. Immunol. - 2000. - Vol. 164. - P. 6509-6519. 23. Shirakawa P, Kobayashi H, Sobajima J et al. 15. Mandara M., Nortilli R., Sava T. et al. Inflamatory breast cancer: vasculogenic mimicry and its Chemotherapy for metastatic melanoma // Expert. Rev. hemodynamics of an inflammatory breast cancer xenigraft Anticancer Ther. - 2006. - Vol. 6(1). - P. 121-130. model // Breast Cancer Res. - 2003. - Vol. 5. - P. 136-139. 16. Maniotis A., Folberg R., Hess A. et al. Vascular 24. Stone J.R., Collins T. The role of hydrogen perox-channel formation by human melanoma cells in vivo and ide in endothelial proliferative response // Endothelium. -in vitro: vasculogenic mimicry // Am. J Pathol. - 1999. - 2002. - Vol. 9(4). - P. 231-238. Vol. 55. - P. 739-752. 25. Sood A.K., Seftor E.A., Fletcher M.S. et al. 17. Maniotis A.J., Chen X., Garcia C. et al. Control Molecular determinants of ovarian cancer plasticity // Am. of melanoma morphogenesis, endothelial survival and per- J Pathol. - 2001. - Vol. 158. - P. 1279-1288. fusion by extracellular matrix // Lab. Invest. - 2002. - Vol. 26. Van der Schaft D.W.I., Seftor R.E.B., Seftor E.A. 82. - P. 1031-1043. et al. Effects of angiogenesis inhibitors on vascular net- 18. Meykens F.L., Farmer P., Fruehanf J.P. Redox work formation by human endothelial and melanoma cells regulation in human melanocytes and melanoma // Pigm. // J Natl. Cancer Inst. - 2004. - Vol. 96. - P. 1473-1476. Cell. Res. - 2001. -Vol.14. - P. 148-152. 27. Vartanian A.A., Stepanova E. V., Burova O.S. et 19. Mukhtar H., Ahmad N.Green tea in chemopre- al. The involvement of apoptosis in mlanoma vasculo-vention of cancer // Toxicol. Sci. - 1999. - Vol. 52. - P. genic mimicry // Melanoma Res. - 2006. - in press. 111-117. 28. Yasuda M., Ohzeki Y., Shimizu S. et al. 20. Natarajan V, Scribner WM, al-Hassani M et al. Stimulation of in vitro angiogenesis by hydrogen peroxide Reactive oxygen species signaling through regulation of and the relation with ETS-1 in endothelial cells // Life Sci. protein tyrosine phosphorylation in endothelial cells // - 1999. - Vol. 64(4). - P. 249-258. Envirom. Health Perspec. - 1998. - Vol. 106. - P. 1205-1212. Поступила 20.07.2006. Ч

№3/том5/2006 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

1