ГЛИКОПОЛИСИАЛИРОВАНИЕ БЕЛКОВ, НЕ ЯВЛЯЮЩИХСЯ БЕЛКАМИ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

1. Способ конъюгации полисиаловой кислоты (PSA) или модифицированной PSA (mPSA) с окисленной углеводной частью гликопротеина, отличного от белка свертывания крови, содержащего углеводную группу, включающий контактирование окисленной углеводной части с PSA или mPSA в условиях, которые обеспечивают конъюгацию,
где указанная PSA или mPSA содержат гидразидную группу и между окисленной углеводной частью и гидразидной группой на PSA или mPSA образуется гидразоновая связь.
2. Способ по п. 1, где PSA или mPSA представляет собой коломиновую кислоту или модифицированную коломиновую кислоту.
3. Способ по п. 1 или 2, где PSA или mPSA содержит 2-500 звеньев сиаловой кислоты.
4. Способ по п. 1 или 2, где гликопротеин выбран из цитокинов, таких как интерлейкины, альфа-, бета- и гамма-интерфероны, колониестимулирующих факторов, включая гранулоцитарные колониестимулирующие факторы, фибробластных факторов роста, тромбоцитарных факторов роста, активирующего фосфолипазу белка (PUP), инсулина, растительных белков, таких как лектины и рицины, факторов некроза опухоли и родственных аллельных форм, растворимых форм рецепторов фактора некроза опухоли, рецепторов интерлейкинов и растворимых форм рецепторов интерлейкинов, факторов роста, тканевых факторов роста, трансформирующих факторов роста, таких как TGFα или TGFβ, и эпидермальных факторов роста, гормонов, соматомединов, пигментарных гормонов, гипоталамических рилизинг-факторов, антидиуретических гормонов, пролактина, хорионического гонадотропина, фоликулостимулирующего гормона, тиреотропного гормона, тканевого активатора плазминогена и иммуноглобулинов, таких как IgG, IgE, IgM, IgA и IgD, моноклональных антител, эритропоэтина (EPO), факторов крови, отличных от белков свертывания крови, галактозидаз, α-галактозидаз, β-галактозидаз, ДНКаз, фетуина, их фрагментов и любых слитых белков, содержащих любой из упомянутых выше белков или их фрагментов.
4
5. Способ по п. 1 или 2, включающий окисление углеводной части путем инкубации гликопротеина с перйодатом натрия (NaIO).
6. Способ по п. 1 или 2, включающий окисление PSA или mPSA с образованием альдегидной группы на концевом звене PSA или mPSA и реакцию окисленного PSA или mPSA с гидразидным линкером.
4
7. Способ согласно п. 6, включающий окисления PSA или mPSA с использованием NaIO.
8. Способ по п. 1 или 2, включающий контактирование окисленной углеводной части с PSA или mPSA в буфере, содержащем нуклеофильный катализатор, выбранный из анилина или производных анилина.
9. Способ по п. 1 или 2, где указанная PSA или mPSA содержит гидразидную группу и между окисленной углеводной частью и гидразидной группой на PSA или mPSA образуется гидразоновая связь.
10. Способ по п. 9, где гидразидная группа образуется путем реакции окисленного PSA или mPSA с гидразидным линкером.
11. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий восстановление гидразоновой связи в конъюгированном гликопротеине путем инкубации в присутствии восстановителя.
3
12. Способ по п. 11, где восстанавливающее соединение представляет собой цианоборгидрид натрия (NaCNBH) или аскорбиновую кислоту (витамин C).
13. Конъюгированный гликопротеин, получаемый способом по любому из предшествующих пунктов.
14. Конъюгированный гликопротеин, отличный от белка свертывания крови, включающий:
(a) гликопротеин и
(b) по меньшей мере одну гидразид-PSA или гидразид-mPSA, связанную с гликопротеином согласно (а), где указанная гидразид-PSA или гидразид-mPSA присоединена к гликопротеину через одну или несколько углеводных частей.