Заживление кожи при использовании раневых покрытий на основе коллаген-хитозанового комплекса

При исследовании зоны рубца его размеры во всех экспериментальных группах достоверно не отличаются друг от друга, ширина составляет 1051,0 ± 97,0 мкм у животных контрольной группы 2, 1303,0 ± 178,0 мкм - в контрольной группе 3 и 1102,0 ± 74,6 мкм - в опытной группе 4. Толщина рубца меньше во всех группах эксперимента: в 1,5 раза в контрольных группах и в 1,7 раза в опытной по сравнению с группой интактных крыс (р<0,001) (табл. 5). При рассмотрении объемных отношений элементов кожи выявлено, что эпидермис во всех экспериментальных группах занимает объем, в 1,4-1,7 раза превышающий показатели нормальной кожи (р<0,001). При этом в контрольной группе 2 и опытной группе 4 объемные показатели дермы соответственно на 9,3% и 9,4% меньше, чем в группе контроля 1 (табл. 6).

Собственно кожа - дерма в зоне рубца представлена соединительной тканью, содержание которой во всех исследуемых группах в 1,4-1,5 раза больше, чем в контрольной группе 1 (р<0,001). В коже, восполнившей раневой дефект, отсутствуют потовые, сальные железы и

волосяные луковицы. Однако в зоне рубца у групп животных 3 и 4 регистрируется большое количество сосудов, которое превышает показатели контрольной группы 1 более чем в 2 раза (р<0,001). Полученные результаты указывают на то, что раневое покрытие на основе коллаген-хитозанового комплекса способно стимулировать новообразование кровеносных сосудов и, как следствие этого, ускорять процесс заживления ран (рис. 1 цв. вкладки).

Соединительная ткань в зоне рубца имеет различное строение, но ярких признаков, позволяющих дифференцировать сосочковый и сетчатый слои дермы, нет. И тем не менее в 4-й опытной группе регистрируются отдельные сосочки толщиной от 50 мкм до 150 мкм. Поэтому данная зона условно разделена на поверхностный (сосочковый) и глубокий (сетчатый) слои. Толщина поверхностного сосочкового слоя у опытных животных снижена в 4,2-5 раз по сравнению с интактной группой (табл. 7). Слой представлен волокнистыми элементами, содержание которых в контрольных группах не различается между собой и составляет 51,7 + 0,8%, 49,1 ± 1,0% и 56,6 ± 1,9% соответственно, а в опытной группе объем волокон на 17,3% больше, чем в контрольной группе 1 (р<0,01). Клеточные элементы - фибробласты в исследуемом слое по размерам ядер и объему не имеют отличий от интактной группы к 26-м суткам, а содержание основного вещества в 1,3 раза меньше (р<0,001).

В ходе исследования установлено, что при восстановлении сосочкового слоя коллагеновые волокна в 1,4 раза тоньше (р<0,01) в группах 3 и 4 по сравнению с группой интактных животных. Волокна располагаются в косопоперечном и поперечном направлениях с большими интервалами. Однако сравнительный анализ показывает, что более плотное расположение и больший объем коллагеновых волокон характерен для группы 4, что соответствует аналогичному строению кожи интактных животных.

Эластические волокна к 26-м суткам во всех группах эксперимента в поверхностном слое зоны рубца отсутствуют.

Ретикулярные волокна ориентируются косо к базальной мембране эпидермиса, переплетаются с прилежащими коллагеновыми волокнами, занимают объем, в 2,2-3,5 раза превышающий показатели интактной кожи во всех исследуемых группах (р<0,001). При этом в опытной группе 4 диаметр этих волокон, объем и плотность расположения очень высоки.

В поверхностном слое рубца в отличие от интактной кожи помимо ядер фибробластов содержатся лимфоциты и плазмоциты, максимальное число которых регистрируется в контрольной группе, где раны лечили при помощи марлевой повязки. Их содержание в сосочковом слое в 2,2-2,5 раза больше, чем в группах крыс, леченных раневыми покрытиями «Коллахит».

Таким образом, наиболее зрелая соединительная ткань сосочкового слоя рубцовой зоны кожи определяется в опытной группе 4.

При исследовании глубокого (сетчатого) слоя собственно кожи в области рубца выявлено, что его толщина в контрольной группе 3 в 3,3 раза меньше, чем в остальным группах сравнения (р<0,001) (табл. 8).

Слой представлен волокнистыми элементами. Наименьшее количество волокон отмечается в контрольной группе 2 (47,9 ± 1,3%), а наибольшее - в опытной группе 4 (73,6 ± 1,8%). На долю основного вещества во всех исследуемых группах приходится меньший (в 1,3-9 раз) объем.

При детальном рассмотрении волокнистых элементов установлено, что коллагеновые волокна в глубокое зоне рубца тоньше (р<0,001), не сгруппированы в пучки, направляются параллельно друг другу, поперечно оси тела только в группах крыс, раны которых закрывались раневыми покрытиями «Коллахит», с незначительно большими интервалами (рис. 2 цв. вкладки).

У животных, для лечения ран которых применяли.) марлевую повязку, коллагеновые волокна образуют хаотичную сеть, и количество волокон в этой группе в 1,4 раза меньше интактной кожи (р<0,01), а в остальных группах исследования их число не имеет отличий от группы контроля.

К 26-м суткам послеоперационного периода в области рубца в глубоком слое, так же, как и в поверхностном эластические волокна не регистрируются.

Тонкие ретикулярные волокна занимают основной объем соединительной ткани и превышают показатели

интактной кожи в 1,6; 1,9 и в 2,4 раза соответственно) (р<0,001), располагаясь вдоль коллагеновых волокон и вокруг кровеносных сосудов (рис. 3 цв. вкладки).

Ядра клеток фибробластов, диаметр которых только) в опытной группе 4 в 1,5 раза больше группы контроля 1 (р<0,01), располагаются вдоль волокон. Наличие лимфоцитов и плазмоцитов в зоне рубца максимально в контрольной группе 2, где их количество в 2-2,3 раза больше, чем в других экспериментальных группах.

Т аким образом, проведенное предварительное экспериментально-морфологическое исследование выявило, что использование коллаген-хитозановой конструкции с гликозаминогликанами для закрытия чистых полнослойных кожных ран способствует полному новообразованию сосудов и тканевой жидкости, более активной пролиферации фибробластов и ориентированному фибриллогенезу. Анализ подобной динамики репарации кожи и реорганизации рубца позволит установить возможности предложенного раневого покрытия и рекомендовать его в качестве основной матрицы при трансплантации клеточных колоний с целью восстановления обширных кожных дефектов.

Таблица5. Количественная характеристика кожи крыс в зоне рубца при репарации раны конструкцией

«Коллахит»

Количественные показатели Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Опыт 4

Толщина кожи и рубца, в мкм 595,5± 15,84 539,4+15,8 537,1+40,5 481,9+18,3'

- эпидермис, в мкм 37,1 +1,7" 61,3 ± 2,8' •' 47,5 ± 3,92 49,2 +2,6й

-дерма, в мкм 558,4 ± 1б,624 478,1 + 13,0' 489,6 + 36,6 425,3 ±18,4'

Примечание. М+т'1и - различия между группами достоверны Р < 0,05; 0,01; 0,001.

Таблица 6. Объемные отношения кожи у крыс в зоне рубца при репарации раны конструкцией «Коллахит»

Объемные показатели Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Опыт 4

1 эпидермис, % 12,0 ± 0,5"4 17,5 + 0,5" 1б,3±1,1" 21,3±и'"

2 дерма,?/. 88,0 + 2,3" 78,7 ±1,0" 83,8 ±1,1" 78,6+. 1,1"

-соединительная ткань, % 57,5 + 1,8-'4 88,1+3,4' 81,4 + 2,5' 82,5 + 2,3'

- потовые железы, % 15,9+1,4 0 0 0

- волосяные луковицы и сальные железы, % 18,1 + 1,8 0 0 0

- сосуды дермы, % 8,5 +1,0м 11,9+1,1- 18,6+1,5'-' 17,5 ±1,8'

Примечание. М±тии -различиямежду группами достовершР < 0,05; 0,01; 0,001.

Таблица7. Количественная характеристика поверхностного

Количественные показатели Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Опыт 4

Толщина, в мкм 127,1 ±4,6А14 25,3 + 4,2' 30,0 ±6,0' 26,8 ±3,1'

Коллагеновые волокна: - размеры, в мкм - интервалы, в мкм 2,9 ± 0,2м 0,9-3 2 2,3 ±0,4 1,2-7,5 27,4 . - ~м 2,0 ±0,2' 0,7-6,7 2,1 ±0,1' 0,7-5 34,0

Эластические волокна: - размеры, в мкм - интервалы, в мкм 1,6 + 0,1 2,3-13,2 0 0 0

Ретикулярные волокна: - размеры, в мкм - интервалы, в мкм 1,4 + 0,34 1,5-5 1,8 + 0,41,2-9 0,5 ± 0,3м 0,7-5 26,0 ± 2,4 ± 0,1м 0,7-5 35,0 ±

Фибробласты: - размеры, в мкм - интервалы, в мкм 3,3 ±0,1 1.5-12 . 4,4 ±0,6 1,2-7,5 14,8 3, 1 ±0,9 0,7-10 2,6 ±0,3 0,7-10

Лимфоплазматические клетки: - объем, в % 0 10,3 ± 0,9'' 4,1±0,92 4,7 ± 0,82

Основное вещество: - объем, в % 34,3±1,2ЛМ 25,8 ±1,7' 26,7 ±2,3' 25,8 ±1,7'

Примечание. М±тим — различия между группами достоверны Р < 0,05; 0,01; 0,001.

Таблица8.Количественная характеристика глубокого

Количественные показатели Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Опыт 4

Толщина, в мкм 431,3±12,05 452,8+13,0' 130,0 ± 25,7й4 398,5 ±18,43

Коллагеновые волокна 6,9±0,42Д4 2,6 + 0,1' 2,5 ±0,06' 2,5 ±0,1' 0,75 36,5 ±2,32'5

- размеры, в мкм 0,9-6,3 1,2-12,5 0,7-7,5 26,0 ±1,Г

Эластические волок на - размеры, в мкм - интервалы, в мкм 2,9 ±0,5 1,8-24 9,3±1,0 0 0 0

Ретикулярные волокна -размеры, в мкм -интервалы, в мкм -объем, в % 1,6 + 0,3 1,2-5 1,1 ±0,3 1,2-10 1,9 ±0,3 0,7-5 1.4 ±0,6 1,2-7,5

Фибробласты -размеры, в мкм -интервалы, в мкм -объем, в % 3,0 ± 0,24 3-12 12,4 + 0,6"' 3,3 ±0,4 0,7-12,5 17,2 ±1,2' 3,3 ±0,8 2,5-12 4.5 ±+,4' 1,7-12,5 17.5 ±1,8

Лимфоплазматические клегки -объем, в % Основное вещество -объем, в % 0 36,4 ± 1,7-“' 11,7 ± 1,6м 23,2 ± 1,3м 5,6±1,12 24,3 ±1,5' 5,0±1,02 3,9±0,2'-д

Примечание. М±т'и -различиямежду группами достоверны Р< 0,05; 0,01; 0,001.