СЕЛЕКТИВНОЕ ОБОГАЩЕНИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ПО N-КОНЦУ ПЕПТИДОВ ИЗ СЛОЖНЫХ ОБРАЗЦОВ

1. Способ селективного обогащения и/или разделения N-концевых фрагментов полипептидов и/или пептидов в образце, включающий:
(a) двойное химическое мечение белков, полипептидов и/или пептидов, включенных, по меньшей мере, в первый образец;
(b) двойное химическое мечение белков, полипептидов и/или пептидов, включенных, по меньшей мере, во второй образец;
(c) объединение меченых белков, полипептидов и/или пептидов стадий (a) и (b);
(d) гидролиз меченых белков, полипептидов и/или пептидов с образованием их фрагментов;
(e) фракционирование указанных фрагментов;
(f) осуществление реакции метилирования с указанными фрагментами;
(g) повторное фракционирование указанных фрагментов;
(h) сравнение фракционированных образцов, полученных на стадиях (e) и (g); и
(i) разделение N-концевых фрагментов указанных полипептидов и/или пептидов, несущих метку, на основании результатов, полученных на стадии (g),
где двойное химическое мечение на стадиях (a) и (b) включает изотопную и изобарную метку.
2. Способ по п.1, где, по меньшей мере, одна химическая метка, используемая на стадиях (a) и (b), имеет конфигурацию, дающую возможность мечения первичных аминогрупп указанных полипептидов и/или пептидов.
3. Способ по п.2, где первичные аминогруппы представляют собой N-концы указанных полипептидов и/или пептидов.
4. Способ по любому из пп.1-3, где на стадиях (a) и (b) используют, по меньшей мере, две различные изотопные метки.
5. Способ по п.1, где изотопные и/или изобарные метки, используемые на стадии (a) и/или (b), дополнительно включают аффинную группу.
6. Способ по п.1, где после мечения любые свободные аминогруппы, присутствующие в указанных белках, полипептидах и/или пептидах, блокируют перед стадией (d), так чтобы эти аминогруппы не могли метилироваться на стадии (f).
7. Способ по п.1, где фракционирование/повторное фракционирование стадий (e) и (g) осуществляют посредством изоэлектрического фокусирования.
8. Способ по п.1, где реакция метилирования стадии (f) дает возможность метилирования первичных аминогрупп.
9. Способ по п.8, где реакция метилирования дает возможность метилирования первичных аминогрупп на N-концах фрагментов, образованных на стадии (d).
10. Способ по п.1, дополнительно включающий анализ N-концевых фрагментов, полученных посредством масс-спектрометрии.
11. Способ по п.10, включающий MS/MS-сканирование.
12. Способ по п.1, дополнительно включающий:
(j) фракционирование N-концевых фрагментов;
(k) удаление или изменение, по меньшей мере, одной фосфатной группы, по меньшей мере, из первой субфракции N-концевых фрагментов;
(l) повторное фракционирование N-концевых фрагментов;
(m) сравнение фракционированных образцов, полученных на стадиях (j) и (l); и
(n) разделение, по меньшей мере, первой субфракции N-концевых фосфо-фрагментов, модифицированных на стадии (k), на основании результатов, полученных на стадии (m).
13. Способ по п.12, где фосфатную группу удаляют химически посредством β-элиминирования.
14. Способ по п.1, осуществляемый в высокопроизводительном формате.