СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ АКТИВНОСТИ АНТИТРОМБИНА III В КРОВИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ
METHOD FOR NORMALISING BLOOD ANTITHROMBIN III ACTIVITY IN NEWBORN CALVES WITH IRON-DEFICIENCY ANAEMIA

Изобретение относится к ветеринарии и биологии, а именно к гематологии.
Аналогов предлагаемого способа коррекции активности антитромбина III (AT III) в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией не существует.
В литературе имеются сведения о применении при анемии у телят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под. ред. В.М.Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991. - 576 с.).
В литературе также имеются рекомендации по применению у животных с целью иммунностимуляции гликопина (N-ацетилглюкозаминил-N-ацетил-мурамил-аланил-Д-изоглутамин) (Андронова Т.М., Пинегин Б.В., Козлов И.Г., Устинова Г.И. Применение иммуномодулятора гликопина для профилактики и лечения заболеваний животных. Методические рекомендации. М., 2009. - 12 с.) Однако никогда ранее гликопин и тем более его сочетание с ферроглюкином не применялось у новорожденных телят с железодефицитной анемией с целью коррекции имеющегося у них ослабления активности АТ III в крови, способного вызвать тромбогенную опасность у животных, резко ухудшая течение анемии, ослабляя реактивность живого организма, нередко приводя его к гибели.
Целью изобретения является коррекция активности АТ III в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что для коррекции AT III в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией однократно внутримышечно применяется раствор ферроглюкина-75 (1 мл), содержащий 75 мг железа в 1 мл раствора из расчета 15 мг железа на 1 кг живой массы тела теленка и выпаивание гликопина по 6,0 мг/сутки утром (разводят в небольшом количестве (100,0-150,0 мл) воды или молока или молозива, предназначенных для выпаивания телятам) в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина-75.
Способ позволяет стабильно нормализовать активность АТ III в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией на следующий день после окончания лечения, что позволит существенно оздоровить стадо, сократить падеж, увеличить привесы и получать от этих животных здоровое потомство.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Определение активности АТ III в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией проводится следующим образом (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. M., 1999. - 214 с.).
Принцип метода основан на выявлении снижения активности (в отсутствие гепарина) в плазме АТ III, которую определяют по способности исследуемой плазмы инактивировать тромбин, для чего ее предварительно обрабатывают сорбентом гепарина, затем подвергают тепловой дефибринации и смешивают со стандартным количеством тромбина. После инкубации смеси в ней определяют остаточную коагуляционную активность тромбина и по уровню снижения активности тромбина в процентах от нормы оценивают активность АТ III в исследуемой плазме.
Используются следующие реактивы. 1. Трис-HCl буфер 0,05 М, рН 7,4. 2. Раствор тромбина в буфере: 0,2 мл раствора должны свертывать 0,3 мл 0,4% раствора фибриногена за 15-16 сек. Рабочий раствор тромбина готовят в пластиковой или силиконированной пробирке, хранят при комнатной температуре и используют в тесте в день исследования. 3. Сорбент гепарина Генасорб-1 (фирма "Технология-Стандарт"). 4. Свежеприготовленный раствор фибриногена в концентрации 3,5-4,0 г/л, который применяют для тестирования остаточной активности тромбина. Допускается замена раствора фибриногена нормальной бедной тромбоцитами нитратной плазмой, разведенной буфером в 2 раза. 5. Свежая нитратная бедная тромбоцитами плазма, полученная от 6-8 здоровых телят, или лиофилизированная фирменная, с известной активностью АТ III, которую используют для построения калибровочного графика.
Материалом для исследования служит нитратная бедная тромбоцитами плазма.
Для приготовления сорбированной и дефибринированной плазмы в пробирке смешивают 10 мг сорбента гепарина с 1,0 мл исследуемой плазмы. Постоянно встряхивая пробирку, перемешивают ее содержимое при комнатной температуре в течение 8 мин, исключая образование пены и осадка на ее дне. После этого смесь центрифугируют в течение 2 мин при 1000-1500 об/мин. Плазму в надосадке переносят в чистую пробирку и дефибринируют на водяной бане при +56°С в течение 6 мин, после чего вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, снимают надосадочную часть и исследуют в течение первых 2 ч.
Ход определения. В пробирку вносят 0,4 мл рабочего раствора тромбина и прогревают его на водяной бане при +37°С в течение 2 мин. Затем добавляют 0,1 мл исследуемой адсорбированной и дефибринированной плазмы, включают секундомер. Через 2 мин (точно!) 0,2 мл смеси переносят в пробирку с 0,3 мл раствора фибриногена (или разведенной нормальной плазмы), предварительно подогретой до +37°С. Немедленно включают секундомер и регистрируют время свертывания.
По калибровочной кривой находят активность АТ III в процентах.
Построение калибровочной кривой проводят следующим образом. Плазму здоровых телят подвергают дефибринированию, как указано выше. Затем из нее готовят разведения для построения калибровочной кривой в соответствии с табл.1.
Таблица 1
Схема приготовления разведений плазмы для построения калибровочной кривой при определении активности AT III
Номер разведения
Плазма + буфер
Активность AT III, %
1
Плазма без буфера
100
2
0,2 мл +0,2 мл
50
3
0,1 мл +0,3 мл
25
С каждым из разведений определяют время свертывания по указанной выше методике. Все измерения проводят трижды, рассчитывают средний результат. При построении калибровочной кривой по оси ординат откладывают время свертывания в секундах, по оси абсцисс - активность АТ III в % в соответствии с указанными выше разведениями. Примерная калибровочная кривая приведена на фиг.1.
Калибровочную кривую для одного типа и одной серии тромбина и буфера строят однократно. Периодически контролируют лишь активность рабочего раствора тромбина.
В норме активность АТ III в плазме составляет 85-115%.
Для коррекции сниженного АТ III в крови новорожденных телят с железодефицитной анемией однократно назначается ферроглюкин-75, содержащий в 1 мл раствора 75 мг железа из расчета 15 мг железа на 1 кг живой массы тела теленка, и выпаивание гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина-75.
Способ позволяет нормализовать активность АТ III крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией на следующие сутки после окончания лечения, переводя ее на уровень, характерный для здоровых животных, что способствует повышению реактивности организма животного, лечению основного заболевания, существенно снижая риск тромботических осложнений и способствуя нормальному росту и развитию животных.
Пример 1. Теленок №74, третьи сутки жизни, масса тела 27,0 кг, с железодефицитной анемией, обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой активности в ней АТ III, которая оказалась сниженной до 75%. Теленку назначено 5,4 мл раствора ферроглюкина-75 внутримышечно однократно и выпаивание разведенного в 100,0 мл молока гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина-75. Применение данной коррекции позволило на следующие сутки после ее окончания поднять активность АТ III до нормативных значений - 110,0%, исключив риск се ослабления в последующем.
В дальнейшем содержать данного теленка было рекомендовано на рациональном рационе для профилактики у него рецидива дефицита железа и ослабления АТ III в крови.
Пример 2. Теленок №82, четвертые сутки жизни, масса тела 31,5 кг, с железодефицитной анемией, обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой активности в ней АТ III, которая оказалась сниженной - 78%. Теленку назначено 6,3 мл раствора ферроглюкина-75 внутримышечно однократно и выпаивание разведенного в 150,0 мл молока гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина-75. Это позволило на следующие сутки после окончательной коррекции поднять активность АТ III до нормативных значений - 99%, исключив риск ее ослабления в последующем.
В дальнейшем содержать данного теленка было рекомендовано на рациональном рационе для профилактики у него рецидива дефицита железа и ослабления активности АТ III в крови.
Пример 3. Теленок №94, вторые сутки жизни, масса тела 30,5 кг, с железодефицитной анемией, обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь с оценкой активности в ней АТ III, которая оказалась сниженной до 73%. Теленку назначено 6,1 мл раствора ферроглюкина-75 внутримышечно однократно и выпаивание разведенного в 150,0 мл молока гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина-75. Это позволило на следующие сутки после окончания коррекции поднять активность АТ III до нормативных значений - 107%, исключив риск ее ослабления в последующем.
В дальнейшем содержать данного теленка было рекомендовано на рациональном рационе для профилактики у него рецидива дефицита железа и понижения активности АТ III в крови.
Заявленный способ апробирован на 149 новорожденных телятах с железодефицитной анемией и показал в 100% случаев эффективность коррекции железодефицитной анемии и уровня активности АТ III в крови.