Способ биотехнологического восстановления кожного покрова аллогенными стволовыми клетками человека
METHOD FOR BIOTECHNOLOGICAL SKIN RECOVERY WITH HUMAN ALLOGENIC HUMAN STEM CELLS

Изобретение относится к медицине, а именно, к военно-полевой хирургии и комбустиологии, и может быть использовано для восстановления кожного покрова при обширных глубоких ожогах кожи, т.е. у тяжелообожженных.
Для осуществления данного способа проводится некрэктомия раны субфасциально, внутримышечно и по периметру ожога в зону глубокого ожога кожи вводится суспензия мезенхимальных стволовых клеток и проводится аутодермопластика раны. Инъекции осуществляют по периметру раны и субфасциально под пересаженный трансплантант.
Одно из интенсивно развивающихся направлений современной медицины связано с использованием мезенхимальных стволовых клеток для частичного или полного восстановления морфологической и функциональной целостности тканей организма, поврежденных вследствие травмы или развития патологического процесса (например, ожога).
В настоящее время все большее развитие для целей клеточной терапии приобретает введение в поврежденную область мезенхимальных клеток жировой ткани.
Клеточный материал, используемый в регенеративной медицине для введения в пораженную область, должен удовлетворять ряду требований:
1. Легкая приживаемость, отсутствие реакции отторжения.
2. Способность к миграции в поврежденную область и пролиферация.
3. Способность к дифференцировке в клетки, аналогичные клеточной популяции поврежденной ткани.
4. Способность к секреции факторов, способствующих ранозаживлению, в т.ч. ангиогенных факторов.
Наличие или отсутствие отторжения организмом хозяина во многом определяется иммуномодулирующими свойствами мезенхимальных клеток. В настоящее время известно, что мезенхимальные клетки имеют ряд механизмов, позволяющих им, по крайней мере, локально подавлять функцию иммунных и иммунокомпетентных клеток (Shi et al., Mesenchymal stem cells: a new strategy for immunosuppression and tissue repair. Cell Res. 2010; 20(5): 510-518).
Описание
Целью хирургического лечения при обширных глубоких ожогах кожи является хирургическое восстановление кожного покрова в максимально короткие сроки, предпочтительно в первые 1,5-2 месяца после травмы, т.е. до того, как успеют развиться тяжелые осложнения и необратимые изменения в организме обожженного. Известны многочисленные способы хирургического восстановления кожного покрова, включающие свободную пересадку сплошных или перфорированных аутотрансплантантов, представляющих собой полнослойные или расщепленные лоскуты кожи пациента (Братусь В.Д. Хирургическое лечение термических ожогов. - Киев: МедГиз УССР, 1963. - 382 с; Атясов Н.И. Система активного хирургического лечения тяжелообожженных. - Горький, 1972. - 385 с; Вихрев Б.С., Бурмистров В.М. Ожоги: руководство для врачей. - Л.: Медицина, 1986. - 272 с.; Крылов К.М. Хирургическое лечение глубоких ожогов: Автореф. Дис. … д-ра мед. Наук. - СПб, 2000. - 42 с; Парамонов Б.А. Порембский Я.О., Яблонский В.Г. Ожоги: рук. Для врачей. - СПб.: Спецлит, 2000. - 488 с.)
Перспективными являются биотехнологические методики восстановления кожного покрова, предусматривающие использование клеточных культур (кератоцитов, фибропластов, стволовых клеток), а также биотехнологических продуктов на их основе (Рахматуллин P.P. Биопластический материал на основе гидроколлоида гиалуроновой кислоты и пептидного комплекса для восстановительной и реконструктивной хирургии. Автореф. Дисс. д.б.н. - М., 2014. - 39 с.), одним из наиболее эффективных направлений признается использование биопластических материалов, разработка 2D и 3D матриксов искусственных органов в качестве структурной основы для тканеинженерных конструкций, в т.ч. на основе клеточных продуктов, в т.ч. на основе стволовых клеток (Рахматуллин P.P. Биопластический материал на основе гидроколоида гиалуроновой кислоты и пептидного комплекса для восстановительной и реконструктивной хирургии. Дисс. на соискание ученой степени д.б.н. - М., 2014. - 324 с.)).
Известен способ лечения ожогов кожи, предусматривающий на первом этапе при поступлении пациента проведение первичной хирургической обработки раны и декомпрессионные разрезы с целью предотвращения ишемии в связи с нарастающим отеком. Второй этап включает раннюю некрэктомию, как правило, с одномоментной аутодермопластикой. В случае глубокого поражения тканей и невозможности полного хирургического удаления выполняются частые, вплоть до ежедневных, перевязки с антисептическими растворами, ферментами. На третьем этапе лечения раневую поверхность закрывают аутодермотрансплантантом (Алексеев А.А. Современные методы лечения ожогов и ожоговой болезни // Комбустиология (эл. версия). - 1999. - №1 //http://combustiolog.ru/joumal/sovremenny-e-metody-lecheniya-ozhogov-i-ozhogovoj-bolezni/).
Недостатками этого способа являются:
1. Высокая летальность в случае обширного глубокого термического ожога.
2. Дефицит донорского ресурса для закрытия ожоговой раны.
3. Высокая частота лизиса аутодермотрансплантантов, в связи с антибиотикоустойчивыми штаммами микроорганизмов.
4. Необходимость длительного поэтапного лечения.
5. Необходимость частых перевязок под наркозом.
6. Большое количество инфекционных осложнений.
7. Тяжесть состояния пациента, обусловленная пулом поступающих из раны эндогенных воспалительных агентов.
8. Длительность реабилитационного периода.
9. Обширные косметические дефекты в исходе заживления, вследствие рубцовых деформаций и контрактур.
Известен способ кожной пластики, предусматривающий закрытие ран свободным расщепленным дермальным лоскутом с последующим закрытием операционной и донорской ран антисептическими повязками, в качестве антисептических повязок используют салфетки из диальдегидцеллюлозы, содержащие медь и антиоксидант растительного происхождения «Тыквеол» (патент РФ №2158112 от 2000.10.27)
Известен способ оперативного лечения ожоговых ран, при осуществлении которого для закрытия пораженного участка используют аутодермотрансплантант. На донорское место предварительно наносят эмульсию 30% раствора димексида и 10% масляного раствора токоферола ацетата в соотношении 5:1 (патент РФ 2176911 от 2001.12.20).
Для оперативного восстановления кожного покрова при ожогах предложен аллотрансплантант, представляющий собой клетки диплоидного штамма фибробластов легкого эмбриона человека Л-68, нанесенного на целлофановую пленку. Пленку обрабатывают детергентом, обмывают, обезжиривают и наносят клетки фибробластов легкого эмбриона человека. Данный способ восстановления кожного покрова оказывается эффективным при лечении кожных ран различной этиологии: ожоговых, донорских, образующихся после забора кожного лоскута при выполнении операции аутодермопластики, полученных в результате отморожения, флегмонозного воспаления. Трансплантируемые на подложке фибропласты стимулируют краевую и островковую эпителизацию собственных тканей, ускоряют процесс заживления кожного покрова и при инфицировании ран способствуют очищению раневой поверхности от гноя (патент РФ №2142820 от 1999.12.20).
Известен способ восстановления кожного покрова, предусматривающий выделение и последующее культивирование кератиноцитов на полимерной пористой подложке из оптического прозрачного полимера со сквозными порами диаметром D - 0.01-3,0 мкм и плотностью пор N = (103-109) 1/см2 до формирования монослоя кератиноцитов. Кератиноциты могут культивировать в присутствии фибропластов линии 3ТЗ на противоположной стороне подложки. Подложка может быть выполнена из полиэтилентетрафталата, полиимида или карбоксиметилцеллюлозы. В качестве кератиноцитов могут культивироваться аллогенные кератиноциты. Способ повышает эффективность лечения и позволяет осуществить визуальный контроль за регенерацией кожного покрова на раневой поверхности (патент РФ №2148970 от 1999.02.26).
Недостатки всех указанных выше способов состоят в их низкой эффективности при обширных глубоких ожоговых поражениях, большей трудоемкости и высокой стоимости проводимого лечения, относительно низкой эффективности и высокой стоимости проводимого лечения, относительно низкой эффективности и высокой частоте осложнений при лечении тежелообожженных. Из-за развития анемии, эндотоксикоза, ДВС-синдрома, инфекционных осложнений, выполнение обширных травматичных хирургических вмешательств может значительно утяжелить состояние тяжелообожженного и спровоцировать осложнения (полиорганная недостаточность, сепсис).
Известен способ лечения глубоких ожогов кожи, в том числе и III-Б степени. Способ включает в себя нанесение на раневую поверхность биодеградируемого материала, содержащего аллогенные культивированные фибропласты фетусов животного и губчатую композицию, приготовленную из 2% раствора ацетата коллагена и 2% раствора ацетата хитозана молекулярной массы 100-700 кДа и степенью дезацетилирования свыше 95%. При этом в 2% раствор ацетата хитозана добавлены: аскорбиновая кислота 1,8 г, хондроитинсерная кислота 5-100 мг, D-глюкуроновая кислота - 10-100 мг, гепарин - 2,5-5 мг и сывороточный фактор роста крупного рогатого скота "адгелон" - 11-220 мкг.(патент РФ №2372922 от 2008.06.18).
Недостатками указанного выше способа являются:
1. Полученные в результате экспериментального исследования данные не могут быть использованы для дальнейшего развития исследования и применения методики лечения у человека, так как в нашей стране законодательно запрещено в качестве субстрата для выделения фибропластов использовать эмбриональные ткани.
2. В экспериментальном исследовании животным производили отсроченное лечение, на 2й день после снятия ожогового струпа. Отсроченное лечение может стать причиной дополнительной контаминации ожоговой раны, также в условиях лечения пациентов с обширными ожогами дополнительная операция под наркозом может сыграть злую роль.
3. В эксперименте в качестве носителя фибропластов используют раневое покрытие, аппликацию проводят на второй день после моделирования ожога. Возникает вопрос о том насколько жизнеспособными будут клетки в условиях экссудации из раны, наличия контаминации бактериальными агентами. Возможно ли полностью реализовать весь потенциал фибропластов их поверхностной аппликацией.
Известна группа изобретений для лечения ожогов и ран. Средство для лечения ран получают следующим способом, включающим культивирование мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани (МСК ЖТ) человека 2-5 пассажа в среде роста до момента достижения концентрации общего белка в среде 3-4 мг/мл. Проводят отбор и очистку среды культивирования и ее концентрирование до уменьшения исходного объема очищенной среды культивирования в 9-11 раз с получением стерильного концентрата, с последующей его лиофилизацией. Средство содержит продукты секреции МСК человека, включающие ключевые факторы роста: FGF basic в концентрации от 2 до 4 пкг/мл, HGF в концентрации от 40 до 80 пкг/мл, VEGF в концентрации от 200 до 800 пкг/мл, ангиопоэтин-1 в концентрации от 0,5 до 10,0 пкг/мл, определяемого методом иммуноферментного анализа при восстановлении лиофилизата в 100 мл стерильного физиологического раствора. При этом среда роста содержит раствор AdvanceSTEM Cell Culture Media, раствор антибиотиков Penicillin-Streptomycin и добавки AdvanceSTEM Stem Cell Growth Supplement при следующем соотношении компонентов, об %: AdvanceSTEM Cell Culture Vedia - 85-95, раствор антибиотиков Penicillin-Streptomycin - 0,95-1,05, добавки к среде роста AdvanceSTEM Stem Cell Growth Supplement - 9,5-10,5 (патент РФ №2574017 от 2014.09.30).
Для оценки потенциала данного средства необходимо оценить его в условиях обширного глубокого ожога кожи, в эксперименте, проведенном авторами средство было испытано на крысах линии Wistar на ожогах кожи паром I-III А степени (экспозицию паром выполняли в течение 2 сек.).
Известен способ лечения открытых кожных ран, включающих ожоговые раны, невропатические язвы, пролежни, язвы при венозном застое и диабетические язвы. Авторы описывают применение средства, выбранного из адипоцитов, преадипоцитов для приготовления фармацевтической композиции, адаптированной для имплантации в кожную рану для индукции или ускорения процесса заживления кожной раны, где указанные адипоциты или предадипоциты предварительно подвергали действию модулятора адипоцитов, причем указанный модулятор адипоцитов является антагонистом PPAR-γ, предпочтительно GW9662 (патент РФ №2419441 от 2004.05.08).
Недостаток данного метода состоит в том, что в процессе эксперимента авторы проводили наблюдение за лабораторными животными в течение 6 дней, также их методика требует ежедневного лечения, они говорят о лечении различными средствами, но не указывают какими именно. В результатах говорится об активной миграции кератиноцитов и как следствие уменьшение раны связанных с влиянием адипсина. Но встает вопрос, так как в эксперименте использовали мелких лабораторных животных, не связано ли раннее закрытие раны, со слабо развитой подкожно-жировой клетчаткой у мелких лабораторных животных и как следствие закрытие раны первичным натяжением. Не раскрытым остается также вопрос о том стимулирует ли адипсин миграцию эпителиоцитов в область поражения.
5
Известен способ лечения с применением композиции для регенерации клеток кожи и слизистых оболочек. Кондиционированную продуктами жизнедеятельности и ростовыми факторами мезенхимальных стволовых клеток, на стадиях логарифмической фазы и стационарной фазы роста стабильной клеточной культуры мезенхимальных стволовых клеток, содержащую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов с молекулярной массой 6-8 кДа и низкомолекулярных веществ с молекулярной массой 2-3 кДа, соответствующих активным цитокинам, в количестве по меньшей мере n×10, где n - количество названных биологически активных соединений в исходной культуральной питательной среде. В состав композиции также входят костномозговые мезенхимальные стволовые клетки (МСК) человека в количестве по меньшей мере 10 клеток/мл. Композиция включает культуральную питательную среду (патент РФ №2455354 от 2010.12.29).
Недостаток данного способа состоит в применение в качестве источника стволовых клеток красного костного мозга человека, так как процедура получения является болезненной и дорогостоящей.
Наиболее близким по совокупности существенных признаков следует признать способ лечения радиационных ожогов с использованием клеточных препаратов на основе мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в рамках клинического исследования (К.В. Котенко, И.И. Еремин, Б.Б. Еремин, Б.Б. Мороз, А.Ю. Бушманов, Н.М. Надежина, И.А. Галстян, О.С. Гринаковская, А.В. Аксененко, Ю.Б. Дешевой, В.Г. Лебедев, Т.С. Слободина, Ю.А. Жгутов, С.Е. Лаук-Дубицкий, П.С. Еремин, Клеточные технологии в лечении радиационных ожогов: опыт ФМБЦ им. А.И. Бурназяна. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. Том VII, №2, 2012. Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва). Исследование направлено на стимуляцию регенерации незаживляющих и устойчивых к стандартной терапии трофических язв. В работе авторами использовано местное введение мезенхимальных стволовых клеток красного костного мозга. Клеточных материал был получен путем пункции подвздошной кости под местным обезболиванием. Объем аспирированного костного мозга составлял от 50 до 100 мл. Протокол лечения радиационных ожогов с использованием аутогенных ММСК, наносимых на поверхность раны аппликационного в фибрированном клее Тиссукол Кит (рег. №П №014732/01) и путем обкалывания зоны поражения.
Недостатки способа, выбранного в качестве прототипа состоят в:
1. Материал выдвигаемый в качестве источника стволовых клеток не оптимальный, так как в красном костном мозге лишь 0,01-0,001% ядерных клеток могут быть отнесены к МСК, что ограничивает исходное количество клеток и повышает техническую сложность метода.
2. В клиническом исследовании авторы использовали аутологичный клеточный материал, что значительно сокращает область его применения в случае ургентного лечения термических поражений, так как процесс выделения и культивирования стволовых клеток является длительным, не менее 2-3 недель.
3. В клиническом исследовании материал был получен путем пункции подвздошной кости под местным обезболиванием, объем аспирированного костного мозга составлял от 5 до 100 мл. В случае обширного ожога данный факт является недостатком в условиях постоянных кровопотерь, связанных с перевязками, а также активно проходящими неопластическими процессами в поврежденной области, дополнительная потеря части кроветворной ткани может неблагоприятно сказаться на организме.
4. В клиническом исследовании аутогенные мезенхимальные стволовые клетки наносили на поверхность раны аппликационно в фибриновом клее ТиссуколКит (рег. №П №014732/01) и путем обкалывания зоны поражения. По нашему мнению, активная экссудация и контаминация раневой поверхности делают малоэффективной аппликацию стволовых клеток в фибриновом клее.
5. В исследовании мезенхимальные стволовые клетки применяли у пациентов с длительным анамнезом болезни, мы считаем, что при отсроченном введении стволовых клеток снижается потенциал паракринного противовоспалительного воздействия, что снижает эффективность метода.
Цель предлагаемого изобретения состоит в повышении эффективности классических методик лечения, сокращении сроков восстановления кожного покрова в зоне глубоких термических ожогов кожи, ускорение процессов закрытия ожоговой раны, улучшение и совершенствование традиционных методов лечения глубоких ожогов кожи.
Паракринный эффект, оказываемый мезенхимальными стволовыми клетками, способствует миграции собственных клеток организма, а также оказывает противовоспалительное действие.
Введение аллогенных стволовых клеток позволяет решить проблему дефицита донорских ресурсов пациента, ограниченных тяжестью состояния и площадью поражения.
Технический результат поставленной задачи достигнут посредством того, что в способе лечения термических ожогов кожи III степени (по МКБ 10 пересмотра) применяемом в клиническом исследовании в качестве субстрата для выделения мезенхимальных стволовых клеток используют жировую клетчатку. Пациентам после письменного соглашения, вводится местно суспензия аллогенных мезенхимальных стволовых клеток. Введение осуществляли в острый период ожоговой болезни методом инфильтрации подлежащих тканей в области ожога.
Подкожная жировая ткань содержит большое количество целевых клеток (стромально-васкулярная фракция жировой ткани содержит от 5 до 10% мезенхимальных стволовых клеток в числе ядерных клеток) (Zuk et al., 2001). Так многими исследователями показано, что аллогенные мезенхимальные стволовые клетки могут пролиферировать на протяжении более чем 25-50 пассажей, не теряя своей генетической стабильности. В предлагаемом способе объем изымаемого материала может составить от 100 мл до 3000 мл. Локальное введение клеточной суспензии с инфильтрацией раневой поверхности позволяет создать высокую концентрацию клеток в области повреждения. Противовоспалительный эффект стволовых клеток выражается в их паракринном действии на окружающие ткани.
При использовании данного способа исключена возможность имунного отторжения трансплантированных клеток вследствие их низкой иммунной активности. Предлагаемый способ воспроизводится в клиническом исследовании с применением сертифицированного в России продукта - суспензии мезенхимальных стволовых клеток, полученной из жировой ткани, что позволяет избежать проблем этического характера связанных с использованием эмбрионального материала в качестве источника стволовых клеток. Внедрение указанного метода в клиническую практику позволит значительно снизить продолжительность лечения и реабилитации пациентов, снизить экономические затраты.
Способ позволяет воспроизводить данную методику в рамках клинических исследований, при этом его воспроизведение не требует дополнительной травматизации и забора донорского материала у пациента с ожогом, широкое применением метода не требует дорогостоящего оборудования, и, возможно, в стандартных условиях ожоговых отделений и стационаров.
2
Способ реализуют следующим образом: пациенту проводят первичную обработку раны (ожога), назначается плановая терапия, включавшая, но не ограничивающаяся, проведением инфузионно-трансфузионной, антибактериальной, десенсибилизирующей терапии. В ближайшее возможное время, насколько позволяет состояние пациента, проводится некрэктомия раны с одновременным забором отрезка здоровой кожи пациента нужного размера. Субфасциально, внутримышечно и по периметру ожога в зону глубокого ожога кожи вводится суспензия мезенхимальных стволовых клеток и проводится аутодермопластика раны. Суспензия (1 млн клеток в 1 мл) используется для внутрикожных и внутримышечных инъекций, ее вводят после выполнения ранней некрэктомии и одномоментной аутодермопластики (на 2-3 сутки после травмы), дозировка - до 0,5 мл на 1 см, инъекции осуществляют по периметру раны и субфасциально под пересаженный трансплантант.
Возможность достижения цели и решение задач изобретения подтверждена следующими примерами.
Пример 1. Пострадавший Г., 49 лет, поступив в ожоговое отделение №1 НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе 28.05.17 в 15 часов 20 минут спустя 24 ч после травмы, полученной в быту. Диагноз при поступлении: ожог пламенем 6% III-Б правой нижней конечности. Общее состояние пострадавшего средней степени тяжести. Пострадавшему выполнен первичный туалет ожоговых ран, наложены повязки с растворами антисептиков. Назначена плановая терапия, включавшая проведение инфузионно-трансфузионной, антибактериальной, десенсибилизирующей терапии. Пострадавший получал витамины, антикоагулянты, метаболические корректоры дезагреганты, симптоматическую терапию. На 2-е сутки выполнена ранняя радикальная фасциальная некректомия на площади 6% поверхности тела (п.т.) с одномоментной аутодерморпластикой на той же площади с коэффициентом перфорации 1:2-1:3, субфасциальным введением суспензии аллогенных мезенхимальных стволовых клеток (20 млн в 20 мл), повторное введением той же дозы аллогенных мезенхимальных стволовых клеток в зону первичной трансплантации при первой перевязке, на 6-е сутки после травмы. Приживление трансплантантов 95-100%. В ранах - активная эпителизация. Окончательное заживление ран на 4-5 неделе, после второй аутодермопластики гранулирующих ран до 5-10 кв.см. Выписан из клиники в удовлетворительном состоянии на 38 сутки после поступления.
Пример 2. Пострадавший А. 34 лет, поступил в отделение анестизиологии и реанимации №8 НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе 20.05.17 в 14 часов 09 минут спустя 2 ч после травмы, полученной на производстве (взрыв склада с горючими материалами). Диагноз при поступлении: Многофакторное поражение. Ожог пламенем 78% (67%) IIIa-б головы, туловища, конечностей, промежности. Ингаляционная травма 2 ст., отравление СО, шок 3 ст. Общее состояние пострадавшего с момента поступления крайне тяжелое. Раны представлены обнаженной болезненной дермой, беловато-серым, местами коричневым струпом, без чувствительности. Выполнена декомпрессионная некротомия на груди, конечностях. В условиях отделения пациенту выполнена катетеризация центральных сосудов, проводилась интенсивная инфузионно-трансфузионная терапия, коррекция водно-электролитного баланса, антибактериальная, антисекреторная, антикоагулянтная, метаболическая, симптоматическая терапия, нутриционная подержка, перевязки с растворами антисептиков, больной помещен в флюидизирующую установку. На 3-й сутки выполнена ранняя обширная фасциальная некрэкотомия в области нижней конечности на площади 15% поверхности тела с одномоментной аутодермопластикой на площади 5% п.т. с коэффициентом перфорации 1:3-1:4, субфасциальным введением суспензии аллогенных мезенхимальных стволовых клеток (20 млн в 20 мл), повторное введение той же дозы аллогенных мезинхимальных стволовых клеток в зону первичной трансплантации при первой перевязке, на 6-е сутки после травмы. В послеоперационном периоде констатировано развитие тяжелого сепсиса, тяжелые расстройства гомеостаза, рефрактерная гипотермия - 32-33 градуса Цельсия. Несмотря на столь неблагоприятные условия, констатировано отсутствие лизиса и 100% приживление аутотрансплантанта. Летальный исход пострадавшего обусловлен прогрессированием органной дисфункции, развитием септического шока, вне связи с успешным восстановлением кожного покрова.
Пример 3. Пострадавший М. 46 лет, поступил в отделение анестизиологии и реанимации №8 НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе 13.06.17 в 00 часов 25 минут спустя 12 ч после травмы, полученной в быту. Диагноз при поступлении: Ожог пламенем 36% (16%) IIIa-б головы, шеи, туловища, верхних конечностей, шок 3 ст. Клиническая смерть 13.06.2017. Общее состояние пострадавшего с момента поступления крайне тяжелое, обусловлено особенностями медицинской помощи на догоспитальном этапе, постреанимационной болезнью, отсрочной проведения противошоковой терапии, ранним развитием органной дисфункции. Раны представлены обнаженной болезненной дермой, беловато-серым местами коричневым струпом, без чувствительности. Выполнена декомпрессионная некротомия в области верхних конечностей. В условиях отделения пациенту выполнена катетеризация центральных сосудов, проводилась интенсивная инфузионно-трансфузионная терапия, коррекция водно-электролитного баланса, антибактериальная, антисекреторная, антикоагулянтная, метаболическая, симптоматическая терапия, нутриционная подержка, перевязки с растворами антисептиков, больной помещен в флюидизирующую установку. На 2-й сутки выполнена ранняя фасциальная некрэкотомия в области правой верхней конечности на площади 8% поверхности тела с одномоментной аутодермопластикой на площади 5% п.т. с коэффициентом перфорации 1:3, субфасциальным введением суспензии аллогенных мезенхиальных стволовых клеток (20 млн. в 20 мл), повторное введение той же дозы аллогенных мезенхиальных стволовых клеток в зону первичной трансплантации при первой перевязке, на 5-е сутки после травмы. В послеоперационном периоде констатировано отсутствие лизиса и 100% приживление аутотрансплантанта. Летальный исход пострадавшего обусловлен прогрессированием органной дисфункции, развитием септического шока, в не связи с успешным восстановлением участка кожного покрова.
Новизна предложенного способа состоит в применении мезенхимальных стволовых клеток, полученных из жировой клетчатки. Для лечения ожогов допустимо применение как аутологичных, так и аллогенных клеток, что позволяет расширить возможности применения метода.
Возможность практической реализации и пригодность к применению доказана возможностью клинического применения мезенхимальных адипогенных стволовых клеток, доступностью сертифицированного продукта «Суспензия мезенхимальных стволовых клеток».
Изобретательский уровень определяется тем, что из применения аутологичных стволовых клеток однозначно не следует возможность применения аллогенных клеток, полученных не из крови согласно способу-пробнику, а из подкожной жировой клетчатки. Задачи изобретения решены в полном объеме.