ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ В ОТНОШЕНИИ Т-КЛЕТОЧНОГО РЕЦЕПТОРА МЫШИ

1. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:
нереаранжированный вариабельный генный локус Т-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRα.
2. Животное по п. 1, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα.
3. Животное по п. 1, у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα.
4. Животное по п. 1, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα.
5. Животное по п. 4, у которого отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делецию всех эндогенных генных сегментов Jα, и (с) их комбинации.
6. Животное по п. 1, у которого сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека.
7. Животное по п. 6, которое экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область TCRα человека на поверхности Т-клетки.
8. Животное по п. 1, у которого Т-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 Т-клеток.
9. Животное по п. 1, которое содержит нормальное соотношение CD3+ Т-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.
10. Животное по п. 1, которое производит популяцию центральных и эффекторных Т-клеток памяти к представляющему интерес антигену.
11. Животное по п. 1, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека.
12. Животное по п. 1, которое сохраняет эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα,и причем локус представляет собой нефункциональный локус.
13. Животное по п. 1, которое представляет собой грызуна.
14. Животное по п. 13, причем грызун представляет собой мышь.
15. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:
нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRβ.
16. Животное по п. 15, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ.
17. Животное по п. 15, у которого эндогенные сегменты Vβ, Dβ и Jβ грызуна являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.
18. Животное по п. 15, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.
19. Животное по п. 18, y которого отсутствие функционального эндогенного вариабельного локуса TCRβ грызуна предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (с) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.
20. Животное по п. 15, у которого сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.
21. Животное по п. 20, которое экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область TCRβ человека на поверхности Т-клетки.
22. Животное по п. 15, у которого Т-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 Т-клеток.
23. Животное по п. 15, которое содержит нормальное соотношение CD3+ Т-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.
24.Животное по п. 15, которое производит популяцию центральных и эффекторных Т-клеток памяти к представляющему интерес антигену.
25. Животное по п. 15, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.
26. Животное по п. 15, которое сохраняет эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ, и причем локус представляет собой нефункциональный локус.
27. Животное по п. 15, которое представляет собой грызуна.
28. Животное по п. 27, причем грызун представляет собой мышь.
29. Генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, содержащее в своем геноме:
нереаранжированный вариабельный генный локус Т-клеточного рецептора (TCR) α, содержащий по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один сегмент Jα человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRα; и
нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ,содержащий по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, функционально связанный с не относящейся к человеку константной генной последовательностью TCRβ.
30. Животное по п. 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRα, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный не относящийся к человеку вариабельный генный локус TCRβ.
31. Животное по п. 29, у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и у которого эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.
32. Животное по п. 29, которое не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα и не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.
33. Животное по п. 32, у которого отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Jα, и (с) их комбинации;
и отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (с) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.
34. Животное по п. 29, у которого сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβчеловека.
35. Животное по п. 34, которое экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область на поверхности Т-клетки.
36. Животное по п. 29, у которого Т-клетки животного проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 Т-клеток.
37. Животное по п. 29, причем животное содержит нормальное соотношение CD3+ Т-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.
38. Животное по п. 29, причем животное производит популяцию центральных и эффекторных Т-клеток памяти к представляющему интерес антигену.
39. Животное по п. 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит 14 сегментов Jβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Vβ человека.
40. Животное по п. 29, у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, и у которого нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека.
41. Животное по п. 29, которое сохраняет эндогенные не относящиеся к человеку вариабельные генные локусы TCRα и TCRβ, и причем локусы представляют собой нефункциональные локусы.
42. Животное по п. 29, которое дополнительно содержит нуклеотидные последовательности сегментов Vδ человека на гуманизированном локусе TCRα.
43. Животное по п. 42, которое дополнительно содержит полный репертуар сегментов Vδ человека, полный репертуар сегментов Dδ человека и полный репертуар сегментов Jδ человека на гуманизированном локусе TCRα.
44. Животное по п. 29, которое представляет собой грызуна.
45. Животное по п. 44, причем грызун представляет собой мышь.
46. Способ получения генетически модифицированного не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область на поверхности Т-клетки, предусматривающий:
замещение у первого не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRα нереаранжириванным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRα, содержащим по меньшей мере один сегмент Vα человека и по меньшей мере один Jα сегмент человека, для создания гуманизированного вариабельного генного локуса TCRα, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRα функционально связан с эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCRα;
замещение у второго не относящегося к человеку животного эндогенного не относящегося к человеку вариабельного генного локуса TCRβ нереаранжированным гуманизированным вариабельным генным локусом TCRβ, содержащим по меньшей мере один сегмент Vβ человека, по меньшей мере один сегмент Dβ человека и по меньшей мере один сегмент Jβ человека, для создания гуманизированного вариабельного генного локуса TCRβ, причем гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ функционально связан с эндогенной не относящейся к человеку константной областью TCRβ; и
скрещивание первого и второго животного для получения не относящегося к человеку животного, которое экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и не относящуюся к человеку константную область.
47. Способ по п. 46, в котором эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vα и Jα являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и в котором эндогенные не относящиеся к человеку сегменты Vβ, Dβ и Jβ являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.
48. Способ по п. 46, в котором генетически модифицированное животное не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRα и не содержит функциональный эндогенный не относящийся к человеку вариабельный локус TCRβ.
49. Способ по п. 48, в котором отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRα предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vα, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Jα, и (с) их комбинации;
а отсутствие функционального эндогенного не относящегося к человеку вариабельного локуса TCRβ предусматривает делецию, выбранную из группы, состоящей из (а) делеции всех эндогенных генных сегментов Vβ, (b) делеции всех эндогенных генных сегментов Dβ, (с) делеции всех эндогенных генных сегментов Jβ, и (d) их комбинации.
50. Способ по п. 46, в котором сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.
51. Способ по п. 46, в котором Т-клетки грызуна проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 Т-клеток.
52. Способ по п. 46, в котором животное содержит нормальное соотношение CD3+ Т-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.
53. Способ по п. 46, в котором животное производит популяцию центральных и эффекторных Т-клеток памяти к представляющему интерес антигену.
54. Способ по п. 46, в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит 61 сегмент Jα человека и 8 сегментов Vα человека, и в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит 14 сегментов Jβ человека, 2 сегмента Dβ человека и 14 сегментов Vβ человека.
55. Способ по п. 46, в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRα содержит полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, и в котором нереаранжированный гуманизированный вариабельный генный локус TCRβ содержит полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуарсегментов Vβ человека.
56. Способ по п. 46, в котором не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна.
57. Способ по п. 56, в котором грызун представляет собой мышь.
58.Генетически модифицированная мышь, содержащая в своем геноме:
нереаранжированный вариабельный генный локус Т-клеточного рецептора (TCR)α, содержащий полный репертуар сегментов Jα человека и полный репертуар сегментов Vα человека, функционально связанный с константной генной последовательностью TCRα мыши, и
нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ, содержащий полный репертуар сегментов Jβ человека, полный репертуар сегментов Dβ человека и полный репертуар сегментов Vβ человека, функционально связанный с константной генной последовательностью TCRβ мыши.
59. Мышь по п. 58, у которой нереаранжированный вариабельный генный локус TCRα замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRα мыши, и у которой нереаранжированный вариабельный генный локус TCRβ замещает эндогенный вариабельный генный локус TCRβ мыши.
60. Мышь по п. 58, у которой эндогенные сегменты Vα и Jα мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα, и у которой эндогенные сегменты Vβ, Dβ и Jβ мыши являются неспособными к реаранжировке для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ.
61. Мышь по п. 58, у которой сегменты Vα и Jα человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vα/Jα человека, и сегменты Vβ, Dβ и Jβ человека реаранжируются для образования реаранжированной последовательности Vβ/Dβ/Jβ человека.
62. Мышь по п. 61, которая экспрессирует Т-клеточный рецептор, содержащий вариабельную область человека и константную область мыши на поверхности Т-клетки.
63. Мышь по п. 58, у которой Т-клетки мыши проходят развитие Т-клеток в тимусе для образования одинарных позитивных в отношении CD4 и CD8 Т-клеток.
64. Мышь по п. 58, которая содержит нормальное соотношение CD3+ Т-клеток селезенки к общему количеству спленоцитов.
65. Мышь по п. 58, которая производит популяцию центральных и эффекторных Т-клеток памяти к представляющему интерес антигену.
66. Мышь по п. 58, которая дополнительно содержит полный репертуар сегментов Vδ, полный репертуар сегментов Dδ и полный репертуар сегментов Jδ на гуманизированном локусе TCRα.
67. Мышь по п. 58, которая сохраняет эндогенные вариабельные генные локусы TCRα и TCRβ мыши, и причем локусы представляют собой нефункциональные локусы.
68. Способ получения Т-клеточного рецептора человека к представляющему интерес антигену, предусматривающий:
иммунизацию не относящегося к человеку животного по п. 1 представляющим интерес антигеном;
предоставление животному возможности развивать иммунный ответ;
выделение из животного Т-клетки, реактивной по отношению к представляющему интерес антигену;
определение последовательности нуклеиновой кислоты вариабельной области TCR человека, экспрессированной Т-клеткой;
клонирование вариабельной области TCR человека в нуклеотидную конструкцию, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты константной области TCR человека, причем вариабельная область TCR человека функционально связана с константной областью TCR человека; и
экспрессию Т-клеточного рецептора человека в клетке.