Выявление клеточной сенсибилизации к местным анестетикам у пациентов с аллергопатологией

ВЫЯВЛЕНИЕ КЛЕТОЧНОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К МЕСТНЫМ

АНЕСТЕТИКАМ У ПАЦИЕНТОВ С АЛЛЕРГОПАТОЛОГИЕЙ НОВИКОВ Д.К., КАРПУК И. Ю.

УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский

университет»;

кафедра клинической иммунологии и аллергологии с курсом ФПК

Резюме. В статье описано изучение клеточной сенсибилизации к местным анестетикам среди пациентов, страдающих аллергопатологией.

Обследованы 22 пациента, выбранных произвольно, в возрасте от 26 до 58 лет больных аллергической и неаллергической бронхиальной астмой (БА), рецидивирующей крапивницей, аллергическим ринитом, которым ранее неоднократно вводились МА.

Сенсибилизация к новокаину в тесте стимуляции экспрессии рецептора CD25 обнаруживалась у 8 (38,1%) пациентов, к лидокаину у 11 (50%), к ультракаину у 9 (40,9%).

В реакции выброса миелопероксидазы у 2 (9%) обследованных пациентов на новокаин, у 3 (14,3%) на лидокаин, у 2 (9%) на ультракаин.

По результатам обследования пациентов данной группы реакцией антигениндуцированного повреждения лейкоцитов была выявлена сенсибилизация к новокаину у 1 (4,7%) пациента, к лидокаину у 3 (14,3%), к ультракаину у 2 (9%).

Ключевые слова: местные анестетики, лабораторная диагностика, лекарственная аллергия, лейкоциты, миелопероксидаза, аллергопатология.

Abstract. The study of cell sensibilisation to local anesthetics in patients with allergopathology is described in this article.

Absorved 22 patient, free selected, the age of 26 to 58 with allergy and nonallergy bronchial asthma (BA), recidive urticaria, allergy rhinitis, who has a therapeutic to local anesthetics before.

The sensibilisation to novocain made 8 (38,1%) patients, for lidocaine - 11 (50%), for ultracaine - 9 (40,9%) patients in test stimulation CD 25 receptor.

In two observed patients to novocain made 2 (9 %) patients, for lidocaine - 3 (14, 3 %), for ultracaine - 2 (9%) in the reaction to activation of myeloperoxidase.

The sensibilisation to novocain made 1 (4,7%) patients, for lidocaine -3(14,3%), for ultracaine - 2 (9%) in the reaction of antigeninduction injury of leucocytes for diagnostics of an allergy to local anesthetics.

Адрес для корреспонденции: Республика

Беларусь, 210027, г. Витебск, ул. Правды, д. 66, кв.

112, р.тел. 8-0212-22-53-80, моб. (МТС) 711-97-36.

- Карпук И.Ю.

Введение

Сегодня мы достаточно часто сталкиваемся с аллергическими реакциями слабой силы - так называемой скрытой сенсибилизацией. Как показывют исследования [1,2] доля пациентов, имевших по лабораторным критериям несильную чувствительность организма к местным анестетикам (МА), в течение последних лет повышалась, особенно у лиц, страдающих аллергическими заболеваниями. Лишь у части этих пациентов при использовании МА наблюдаются клинические проявления аллергонепереносимости, которые обычно не доходят до анафилактического шока. Диагноз атопии правомочен при подтверждении аллергоанамнеза результатом провокационных проб [1,3]. Специфическое аллергологическое обследование, проводимое in vitro, является необходимым этапом при постановке диагноза «аллергия» [4-7]. Специальные лабораторные пробы, проводимые с клетками больного и аллергеном, по сути и являются провокационными пробами, которые можно применять без опасения развития побочных эффектов [1].

Среди компрометированных по аллергореакциям на местные анестетики (МА), повышается процент лиц с поливалентной аллергической реакцией на местные анестетики. Поливалентной считают такую аллергическую реакцию на МА если у пациента выявлялась повышенная чувствительность организма к 3 и более МА [5-7].

В связи с этим необходимо иметь методы, задачей которых является выявление непереносимости анестетиков с целью отбора инертных препаратов для конкретного компрометированного или относящегося к группе риска пациента на основе наиболее эффективных методов исследования in vitro и in vivo. Методов лабораторной аллергодиагностики, выявляющих и учитывающих все типы реакций, практически нет в арсенале аллергологов и врачей-лаборантов. В связи с этим стоит важная задача использования новых и совершенствования имеющихся методов аллергодиагностики для выявления скрытой сенсибилизации к МА, что и определяет актуальность настоящей работы.

Целью данной статьи явилось изучение клеточной сенсибилизации к местным анестетикам среди пациентов, страдающих аллергопатологией.

Методы

Нами было обследовано 22 пациента, выбранных произвольно, в возрасте от 26 до 58 лет больных аллергической и неаллергической бронхиальной астмой (БА), рецидивирующей крапивницей, аллергическим ринитом. Пациентам данной группы ранее неоднократно вводились МА.

Для выявления сенсибилизации к местным анестетикам мы использовали реакцию антигениндуцированного повреждения лейкоцитов (РАПЛ) использовали как метод, обладающий высокой диагностической эффективностью для МА[10].

Также нами использовалась реакция выброса миелопероксидазы гранулоцитами (выявляет те же механизмы аллергии, что и РАПЛ).

Миелопероксидаза является специфическим и доступным для клинического исследования маркером гранулоцитов [8-13].

Для оценки сенсибилизации лимфоцитов мы использовали тест стимуляции экспрессии рецепторов к ИЛ-2 под влиянием аллергена[8,10]. Сущность его заключается в том, что с помощью стабильного анти-CD25-диагностикума на основе моноклональных антител определяется прирост экспрессии CD25-рецептора на лимфоцитах (ЛС-CD25) после инкубации лейкосуспензии с аллергеном. По проценту прироста CD25+-лимфоцитов диагностируется наличие или отсутствие сенсибилизации и аллергии in vitro.

Для установления степени связи между выделенными признаками в исследовании использовался непараметрический коэффициент корреляции Спирмена (r). Для количественной оценки тесноты связи между признаками применялась шкала Чеддока (таблица 1) [14,15].

Результаты и обсуждение

Сенсибилизацию лимфоцитов выявляли в тесте стимуляции ИЛ-2 рецептора под влиянием аллергенов - местных анестетиков: новокаина, лидокаина, ультракаина. Кроме того, для выявления взаимосвязи различных механизмов аллергии было проведена оценка сенсибилизации с помощью реакции выброса миелопероксидазы и реакции антигениндуцированного повреждения лейкоцитов.

Результаты тестов по выявлению сенсибилизации вышеуказанными методами в представлены в таблице 1. Сенсибилизация к новокаину в тесте стимуляции экспрессии рецептора CD25 обнаруживалась у 8 (38,1%) пациентов, к лидокаину у 11 (50%), к ультракаину у 9 (40,9%).

Таблица 1

Шкала Чеддока.

Величина r 0,1-0,3 0,3-0,5 0,5-0,7 0,7-0,9 0,9-1,0

Характеристика силы связи слабая умеренная заметная высокая весьма высокая

средняя сильная

В результате обследования пациентов аллергологического отделения на наличие сенсибилизации лейкоцитов в реакции РВМ к МА, было установлено следующее: у 2 (9%) обследованных пациентов РВМ была положительной на новокаин, у 3 (14,3%) на лидокаин, у 2 (9%) на ультракаин. В одном случаяе имелась сенсибилизация к двум аллергенам (лидокаину и ультракаину), а у остальных - к одному.

По результатам обследования пациентов данной группы РАПЛ была выявлена сенсибилизация к новокаину у 1(4,7%) пациента, к лидокаину у 3 (14,3%), к ультракаину у 2 (9%). Моновалентной сенсибилизация была в трех случаях, бивалентной в двух: к лидокаину и ультракаину и к новокаину и лидокаину.

В таблице 2 представлены результаты изучения распространенности положительных и отрицательных реакций на местные анестетики среди пациентов аллергологического отделения определяемых разными методами.

Таблица 2

Распространенность положительных и отрицательных реакций на местные анестетики среди пациентов аллергологического отделения _________________определяемых разными методами (п=22)_________________

Местные анестетики Виды реакций

РВМ+ РВМ- РАПЛ+ РАПЛ- CD 25+ CD 25-

новокаин 2

лидокаин 3

ультракаин 2

Интересно отметить, имеющиеся различия в распространенности моно- и полисенсибилизации к местным анестетикам, выявляемых различными методами. Моновалентной сенсибилизация была в 2 случаях к новокаину, в двух к лидокаину и к ультракаину. Также выявлялась бивалентная сенсибилизация к аллергенам разных МА: в одном случае к новокаину и лидокаину, новокаину и ультракаину. К лидокаину и ультракаину в двух случаях. Поливалентная сенсибилизация (ко всем трем МА одновременно) отмечена в четырех случаях (таблица 3).

Таблица 3

Частота моно- и полисенсибилизации к местным анестетикам,

выявляемая в тесте стимуляции экспрессии рецептора CD25

ЛС^25 Общее кол-во пациентов, имеющих положительную реакцию хотя бы к одному аллергену Сенсибилизация к одному аллергену Сенсибилизация к двум и более аллергенам абс. кол-во

новокаин 8 2

лидокаин 11 3

ультракаин 9 3

Необходимо отметить, что при сравнении результатов, полученных разными методами, выборки положительных ответов были неодинаковы, т.е. у больных, которые имели положительный ответ в одном тесте, в другом он был отрицательный и, наоборот. Такой результат имеет в своей основе причиной то, что разные методы направлены на выявление разных механизмов аллергии. Так РВМ и РАПЛ диагностирует в основном ]^Е- и ^в-опосредованные, а тест стимуляции экспрессии рецептора СБ25 - реакции замедленного типа. Это подтверждают результаты, представленные в таблице 1: процент

положительных реакций по РВМ и РАПЛ к лидокаину и ультракаину был одинаков, а в тесте стимуляции экспрессии рецептора СБ25 значительно отличался. В то же время положительные реакции на местные анестетики имели смешанный вариант ответа - у них определялись различные варианты сочетания сенсибилизации гранулоцитов и лимфоцитов: между РВМ и тестом стимуляции экспрессии рецептора СБ25 положительный ответ к лидокаину наблюдался у трех пациентов (для РВМ - 100% проб имели смешанный вариант ответа с ЛС-СБ25), к новокаину в одном случае (50% от всех положительных РВМ), к ультракаину - в одном (100% от всех положительных РВМ); между РАПЛ и ЛС-СБ25 положительный ответ к новокаину наблюдался у одного пациента (100% от всех положительных РАПЛ), к лидокаину у четырех пациентов (100% от всех положительных РАПЛ), к ультракаину у одного пациента (50% от всех положительных РАПЛ). На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что 83% положительных ответов РАПЛ и РВМ имели смешанный вариант ответа с ЛС-СБ25.

Мы провели статистическую обработку данных для выявления связи между результатами РАПЛ, РВМ и ЛС-СБ25.

Выявлена положительная корреляция между РАПЛ и РВМ, которая составляла для новокаина г = +0,776; р<0,05 (рисунок 1), для лидокаина г = +0,661; р<0,05 (рисунок 2), для ультракаина (г = +0,262; р<0,05) (рисунок 3). Такой результат имеет в своей основе причиной то, что РВМ и РАПЛ направлены на выявление одного механизма аллергии, в основном клеточные, корреляция между ними заметно сильнее, чем с другими методами.

С

с

0_

Scatterplot: РВМ новокаин vs. новокаин РАПЛ % (Casewise MD deletion) новокаин РАПЛ % = -.3851 + ,02074 * РВМ новокаин

Correlation: r = ,77657

РВМ новокаин

95% confidence

Рис.1. Корреляционная взаимосвязь результатов реакции антигениндуцированного повреждения лейкоцитов и реакции выброса миелопероксидазы для новокаина (г=+0,77657; р<0,05).

Scatterplot: РВМ лидокаин vs. лидокаин РАПЛ % (Casewise MD deletion) лидокаин РАПЛ % = 2,2507 + ,01468 * РВМ лидокаин Correlation: r = ,66149

iz

с

0_

РВМ лидокаин

95% confidence

Рис.2. Корреляционная взаимосвязь результатов реакции антигениндуцированного повреждения лейкоцитов и реакции выброса миелопероксидазы для лидокаина (г=+0,66149; р<0,05).

Scatterplot: РВМ ультракаин vs. ультракаин РАПЛ % (Casewise MD deletion) ультракаин РАПЛ % = 3,3068 + ,01072 * РВМ ультракаин Correlation: r = ,26220

iz

с

0_

РВМ ультракаин

95% confidence

Рис.3. Корреляционная взаимосвязь результатов реакции антигениндуцированного повреждения лейкоцитов и реакции выброса миелопероксидазы для ультракаина (г=+0,26220; р<0,05).

Необходимо отметить наличие средней умеренной корреляции между результатами РАПЛ и РВМ для лидокаина и ультракаина г=+0,427; р<0,05 (рисунок 4), что подтверждает предположение о возможности возникновения перекрестных аллергических реакций между анестетиками одной группы (в данном случае группы амидов).

Scatterplot: лидокаин РАПЛ % vs. ультракаин РАПЛ % (Casewise MD deletion) ультракаин РАПЛ % = 4,0826 + ,36615 * лидокаин РАПЛ % Correlation: r = ,42759

IZ

<

CL

лидокаин РАПЛ %

о 95% confidence

Рис.4. Корреляционная взаимосвязь результатов в реакции

антигениндуцированного повреждения лейкоцитов для ультракаина и

лидокаина (г=+0,42759; р<0,05).

Между РВМ и РАПЛ и сенсибилизацией лимфоцитов (в тесте ЛС-СБ25) достаточно значимой корреляционной взаимосвязи не наблюдалось: для новокаина (г = +0,048; р<0,05), для лидокаина (г = +0,212; р<0,05), для ультракаина (г = +0,252; р<0,05).

Данные корреляционного анализа подтверждают предположение о сходности механизмов сенсибилизации гранулоцитов, выявляемой методом РВМ и РАПЛ, в то же время о различии между ними и механизме лимфоцитарной сенсибилизации.

Нами был проведен анализ тестов на местные анестетики каждого пациента с аллергопатологией с учетом механизмов аллергических реакций, что позволило выявить следующее:

- сенсибилизация к новокаину в тесте стимуляции экспрессии рецептора СБ25 обнаруживалась у 8 (38,1%) пациентов, к лидокаину у 11 (50%), к ультракаину у 9 (40,9%) пациентов.

В реакции выброса миелопероксидазы к новокаину обнаруживалась у 2 (9%) пациентов, к лидокаину у 3 (14,3%), к ультракаину у 2 (9%) пациентов, реакции антигениндуцированного повреждения лейкоцитов к новокаину обнаруживалась у 1 (4,7%) пациента, к лидокаину у 3 (14,3%), к ультракаину у 2 (9%) пациентов;

- в 83% положительных ответов реакций антигениндуцированного повреждения лейкоцитов и выброса миелопероксидазы имели смешанный вариант ответа с тестом стимуляции ИЛ-2 рецептора;

- сенсибилизация к двум и более аллергенам в тесте стимуляции ИЛ-2 рецептора отмечена с новокаином обнаруживалась у 2 (25%) пациентов. с лидокаином у 3 (27.3%). с ультракаином у 3 (33.3%) пациентов.

Таким образом. у пациентов с аллергопатологией к местным анестетикам развиваются различные комбинации механизмов аллергических реакций как сенсибилизированных гранулоцитов так и лимфоцитов. На наш взгляд для правильного и более полного выявления сенсибилизации к местным анестетикам при аллергических заболеваниях целесообразно использование комплекса методов по определению антител связанных с лейкоцитами и сенсибилизированных лимфоцитов.

Заключение

1. У пациентов с аллергопатологией выявляется сенсибилизация лимфоцитов и гранулоцитов к местным анестетикам. Между анестетиками одной химической группы (амидов): лидокаина и ультракаина существует наличие средней умеренной корреляции по результатам РАПЛ (г=+0.427; р<0.05). что свидетельствует о возможности возникновения перекрестных аллергических реакций между анестетиками одной группы (в данном случае группы амидов).

2. Выявлена положительная корреляция между РАПЛ и РВМ. которая

составляла для новокаина г = +0.776; p<0.05 - сильная высокая корреляция. для

лидокаина г = +0.661; p<0.05- заметная средняя корреляция. для ультракаина (г = +0.262; p<0.05) - слабая положительная корреляция.

Литература

1. Новиков. Д. К. Лекарственная аллергия / Д. К. Новиков.

Ю. В. Сергеев. П. Д. Новиков; под ред. Д. К. Новикова. - Москва: Нац. акад. микологии. 2001. - 313 с.

2. Аллергические реакции на местные анестетики и методы их

диагностики / К. А. Лебедев [и др.] // Стоматология для всех. - 2005. - № 3. - C. 3-7.

3. Новиков. Д. К. Клиническая аллергология / Д. К. Новиков. - Минск: Высшая школа. 1991. - 511 с.

4. Пыцкий. В. И. Аллергические заболевания / В. И. Пыцкий. Н. В. Андрианова. А. В. Артомасова. - Москва: Триада-Х. 1999. - 797 с.

5. Malandain. H. Quelle valeur clinique accorder aux resultats chiffres des ddosages d.lgE specifiques? / H. Malandain // Ref. Fr. Allergol. et immunol. - 2002.

- Vol. 31. - P. 139.

6. Patient suitability for cataract surgery under local anesthesia /

G. Vlajkovic [et al.] // Clin. Exp.Immunol. - 2009. - Vol. 47. - P. 62.

7. Кононенко. Ю. Г. Местное обезболивание в амбулаторной стоматологии / Ю. Г. Кононенко. Н. М. Рожко. Г. П. Рузин. - Москва: Книга плюс. 2004. - 352 с.

8. Новиков. П. Д. Иммунодиагностика / П. Д. Новиков. - Витебск. 2006. - 250 с.

9. Медицинские стандарты (протоколы) диагностики и лечения больных с аллергическими заболеваниями и нарушениями иммунной системы /

Н. И. Ильина [и др.]; под общ. ред. Р. М. Хаитова. - 2-е изд.. доп. - Москва. 2001. - 32 с.

10. Новиков. Д. К. Оценка иммунного статуса / Д. К. Новиков. В. И. Новикова. - Москва-Витебск. 1996. - 282 с.

11. Schneider. T. Quantitation of eosinophil and neutrophil infiltration into rat lung by specific assays for eosinophil peroxiase and myeloperoxidase: Application in a Brown Norway rat model of allergic pulmonary inflammation / T. Schneider. A. C. Issekutz // J. Immunol. Meth. - 1996. - № 1. - Р.1-14.

12. In vivo treatment with granulocyte colony-stimulating factor results in divergent effects on neutrophil functions measured in vitro / P. J. Leavey [et al.] // Blood. - 1998. - № 11. - Р. 4366-4374.

13. F. IgE-dependeht release of myeloperoxidase by neutrophils from allergic patients / J. Monteseirin [et al.] // Clin. Exp. Allergy - 2001. - Vol. 31. - P. 889-892.

14. Бююль. А. SPSS: искусство обработки информации. Анализ

статистических данных и восстановления скрытых закономерностей: пер. с нем. / А. Бююль. П. Цефель. - СПб: ООО «ДиаСофтЮП». 2002. - 608 с.

15. Малхотра. Н. К. Маркетинговые исследования: практ. рук.: пер. с англ.

- М.: Изд. дом «Вильямс». 2002. - 960 с.