Анализ лекарственных средств группы адамантана методом тонкослойной хроматографии

© ТЫЖИГИРОВА В.В., БАТОЦЫРЕНОВА Д.Э. - 2014 УДК 615.012.8:543.544.943.3

АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ГРУППЫ АДАМАНТАНА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Валентина Викторовна Тыжигирова, Дарима Эрденеевна Батоцыренова

Резюме. Изучено хроматографическое поведение производных адамантана в тонком слое сорбента на пластинках Силуфол и Сорбфил. Разработаны методики установления подлинности лекарственных препаратов риманта-дина гидрохлорида методом тонкослойной хроматографии.

Ключевые слова: тонкослойная хроматография, производные адамантана, подлинность, римантадина гидрохлорид, лекарственные препараты.

ANALYSIS OF ADAMANTANE DERIVATIVES DRUGS BY THIN-LAYER CHROMATOGRAPHY

V.V Tyzhigirova, D.E. Batotsirenova

Summary. The chromatographic behavior of adamantane derivatives is stydied by thin-layer chromatography (TLC) with use of Silufol and Sorbfil plates. TLS-methods for the identification of Rimantadine hydrochloride drugs have been developed.

Key words: thin-layer chromatography, adamantane derivatives, identification, Rimantadine hydrochloride, drugs.

Производные адамантана были синтезированы во второй половине ХХ в. В основе их лежит насыщенный углеводород - адамантан, состоящий из трех циклогексановых колец в конформации «кресло» (рис.

1). Атомы углерода в молекуле ада-мантана расположены так же, как и в кристаллической решетке алмаза, поэтому свое название адамантан получил от греческого слова «ада-мантос», что означает алмаз [1]. рис ; Адамантан.

Циклическая система адамантана обладает такими уникальными свойствами, как объемность, симметричность, высокая липофильность. Благодаря этим свойствам производные адамантана легко проникают через биологические мембраны, адсорбируются на клетках и оказывают биологическое действие, особенно содержащие аминогруппы.

Противовирусным действием обладают риманта-дин и тромантадин, нейропротекторным - амантадин, гимантан и мемантин, антиастеническим - ладастен. Лекарственные препараты (ЛП) мемантина включены в список жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств и рекомендованы для лечения болезни Альцгеймера. Важно отметить, что гимантан и ладастен - оригинальные отечественные препараты, разработанные в НИИ фармакологии им. В.А. Закусова РАМН.

Изыскание новых лекарственных средств (ЛС) в ряду адамантана не прекращается. В настоящее время накоплен обширный материал, касающийся изучения фармакологических свойств, механизма действия, клинического применения, маркетингового исследования ЛС группы адамантана [2,3,5,8]. В то же время физические, физико-химические свойства и методы анализа производных адамантана описаны в доступной литературе недостаточно. В частности, мало изучены хроматографические характеристики производных ада-мантана, в том числе их анализ методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Благодаря специфичности, высокой чувствительности и экспрессности данный метод широко применяется в фармацевтическом анализе для установления подлинности субстанций и ЛП, контроля специфических примесей, разделения и идентификации комбинированных препаратов.

Цель настоящего исследования заключалась в сравнительном изучении хроматографических характеристик производных адамантана в тонком слое сорбента и использовании полученных данных для разработки ме-

тодик идентификации ЛП римантадина гидрохлорида.

Материалы и методы

Объектами исследования служили ЛП, содержащие производные адамантана: Мидантан - таблетки, покрытые оболочкой 100 мг; Мемантин Канон - таблетки, покрытые оболочкой 10 мг; Ладастен - таблетки 50 мг; Ремантадин - таблетки 50 мг; Орвирем - сироп для детей; комбинированные препараты АнвиМакс и АнГрикапс -в форме порошков и капсул соответственно.

В работе использовали метод ТСХ на пластинках Силуфол и Сорбфил ПЭТФ. Органические растворители соответствовали квалификации «ч», «чда», «хч». Образцы для хроматографирования с концентрацией вещества 10 мг/мл готовили из лекарственных форм. Для этого таблеточную массу или содержимое капсулы обрабатывали спиртом этиловым 96%, из сиропа Орвирем получали эфирное извлечение.

Спиртовые и эфирные извлечения хроматографировали в тонком слое сорбента в системах растворителей нейтрального, кислого и основного характера. Зоны веществ на пластинках Силуфол обнаруживали модифицированным реактивом Драгендорфа, на пластинках Сорбфил - 0,1 М раствором йода в смеси с хлороводородной кислотой разведенной (9:1). Реактивы готовили и стандартизовали в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи РФ.

Результаты и обсуждение

В ходе исследования было установлено, что лекарственные вещества (ЛВ) сильно адсорбируются в нейтральных (1-4) и кислых (9-10) системах растворителей и подвижны в основных системах (5-8). Графическая зависимость величины от состава подвижной фазы представлена на рисунке 2.

Как видно из рис. 2, амантадин (мидантан) и меман-тин обладают высокой адсорбционной способностью по сравнению с другими веществами группы. Это объясняется тем, что ЛВ имеют в структуре однотипную первичную аминогруппу, связанную с узловым атомом углерода в кольце адамантана (рис. 3, 4).

Такие аминогруппы образуют прочные водородные связи с активными центрами сорбента. Сходное химическое строение амантадина и мемантина обусловливает не только высокую адсорбционную способность, но и однотипное нейропротекторное действие их на организм.

1

0,9

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

О

- - - римантадин

—  мидантан

ладастен

-ч

— мемантин

./ . \

П.' \>

1 23456789 10

Подвижная фаза

Обозначения: 1 - ацетон; 2 - этилацетат; 3 - эфир-этанол (9:1); 4 - хлороформ-этанол (9:1); 5 - эфир-этанол-аммиака раствор 25% (9:1:0,1); 6 - хлороформ-этанол-аммиака раствор 25% (9:1:0,1); 7 - хлороформ-ацетон-аммиака раствор 25% (8:4:0,15); 8 - хлороформ-ацетон-аммиака раствор 25% (8:4:0,1); 9 - хлороформ-ацетон-уксусная кислота ледяная (8:4:0,1); 10 - хлороформ-этанол-уксусная кислота ледяная (9:1:0,1).

Рис. 2. Зависимость величины производных адамантана от состава подвижной фазы.

Римантадин отличается тем, что его первичная аминогруппа находится в боковой алифатической цепочке

Рис. 3. Амантадин (МНН), Мидантан.

Рис. 4. Мемантин (МНН).

-СН3 • НС1-

Рис. 5. Римантадин (МНН), Ремантадин.

и экранирована адамантильным радикалом (рис. 5). Стерический фактор сильно влияет на хроматографическое поведение ри-мантадина. Поэтому римантадин слабее адсорбируется, чем амантадин и меман-тин, и, в отличие от них, обладает противовирусным действием.

Ладастен по химическому строению является вторичным ароматическим амином (рис. 6). Его основные свойства снижены вследствие р-п-сопряжения. Кроме того, ЛВ отличается большей ли-

пофильностью за счет бромфе-нильного радикала. В связи с этим ладастен не задерживается на поверхности адсорбента и перемещается во

всех системах (1-10) с фронтом растворителя. По фармакологическому действию ладастен относится к группе антиастенических ЛС принципиально нового типа, сочетающих стимулирующий и анксиолитический эффекты [5].

Таким образом, прослеживается четкая закономерность между химическим строением, хроматографическим поведением и фармакологическим действием производных адамантана. Полученные данные могут быть использованы при поиске и создании новых ЛВ ряда адамантана, а также для аналитических целей, в частности для разработки методик идентификации ЛП риман-тадина гидрохлорида. В соответствии с нормативной

Рис. 6. Ладастен.

документацией [4,6,7] установление подлинности таких ЛП проводится химическим методом по реакции с раствором нитропруссида натрия. Однако эта реакция является групповой, характерной для всех соединений с первичной алифатической аминогруппой.

В настоящее время химические реакции ввиду невысокой специфичности рассматриваются как дополнительные к основным методам идентификации. Такими методами для ЛП являются современные физико-химические методы: высокоэффективная жидкостная

хроматография (ВЭЖХ), тонкослойная хроматография, УФ-спектрофотометрия. Однако применение ВЭЖХ и УФ-спектрофотометрии в анализе ЛП римантадина гидрохлорида не представляется возможным, так как риман-тадин не поглощает УФ-излучение из-за отсутствия в структуре хромофорных групп с сопряженными двойными связями. Наиболее приемлемым для данной группы ЛП является метод ТСХ, отличающийся универсальностью, специфичностью и доступностью.

Производные адамантана, как видно из рис. 2, I удовлетворительно разделяются в системах растворителей 6-7. Наиболее

о|11ПЧ.1 М.И'й я в I я е I с я

система 7, обладающая

минимальной вязкостью.

Эта система выбрана нами для разработки методик идентификации ЛП ри-мантадина гидрохлорида: таблеток Ремантадин по 50 мг, сиропа Орвирем для детей и комбинированных препаратов АнвиМакс и АнГрикапс. Спиртовые извлечения из таблеточной массы и эфирное извлечение из сиропа хроматографировали по 5 мкл на пластинках Сорбфил ПЭТФ в системе растворителей хлороформ-ацетон-аммиака раствор 25% (8:4:0,2) по обще-

принятой методике восходящей хроматографии.

Параллельно хроматографировали раствор стандартно-

• • • 9 •

Обозначения: 1 - Орвирем, сироп; 2 - Ремантадин, таблетки 50 мг (АО Олайнфарм); 3 - Ремантадин, таблетки 50 мг (ООО Розфарм); 4 - Ремантадин, таблетки 50 мг (ОАО Биохимик); 5 - СОВС римантадина.

Рис. 7. Хроматограмма ЛП римантадина гидрохлорида.

АнвиМакс, порошок

АнГрикапс, капсулы

Обозначения: 1 - Анвимакс и АнГрикапс; 2 - СОВС парацетамола; 3 - СОВС римантадина гидрохлорида; 4 - СОВС лората-дина.

Рис. 8. Хроматограммы комбинированных ЛП римантадина гидрохлорида.

го образца вещества-свидетеля (СОВС), в качестве которого использовали субстанцию риманта-дина гидрохлорида.

Хроматограмму проявляли подкисленным раствором йода.

Зоны римантадина обнаруживаются в виде коричневых пятен на желтом фоне (рис. 7). Размер зоны, интенсивность окрашивания и величина зоны римантадина в таблетках и сиропе соответствуют зоне СОВС римантадина, что свидетельствует об их идентичности.

Эти же условия хроматографирования (адсорбент и система растворителей) оказались оптимальными для обнаружения римантадина гидрохлорида в комбинированных ЛП АнвиМакс и АнГрикапс (рис. 8).

Сопутствующие компоненты не мешают обнаружению римантадина гидрохлорида. Аскорбиновая кислота и рутозид остаются на линии старта, лоратадин перемещается с фронтом растворителя, зона парацетамола располагается ближе к линии старта, а зона римантади-на занимает оптимальную среднюю часть хроматограммы. Как видно из рис. 8, основное пятно римантадина на хроматограммах комбинированных препаратов соответствует по форме, интенсивности окрашивания и величине пятну на хроматограмме СОВС римантади-

Таблица 1

Оптимальные условия идентификации ЛП римантадина гидрохлорида методом ТСХ

Лекарственные Значение Адсорбент, система Обнаружение

препараты римантадина г/х Rf растворителей УФ-свет 0,1М раствор 12 - НС1

Ремантадин, таблетки 50 мг (АО Олайнфарм) 0,45 коричневый

Ремантадин, таблетки 50 мг (ООО Розфарм) 0,45 Сорбфил ПЭТФ коричневый

Ремантадин, таблетки 50 мг (ОАО Биохимик) 0,43 Хлороформ-ацетон-аммиака раствор 25% (8:4:0,2) коричневый

Орвирем, сироп для детей 0,44 коричневый

АнвиМакс, порошок Парацетамол 360 мг Аскорбиновая к-та 300мг Римантадина г/х 50 мг Рутозид 20 мг Лоратадин 3 мг 0,17 0 0,43 0 0,60 Сорбфил ПЭТФ темный темный желтый коричневый светло-коричневый

АнГрикапс, капсулы Парацетамол 180 мг Аскорбиновая к-та 150мг Римантадина г/х 25 мг Рутозид 10 мг Лоратадин 1,5 мг 0,26 0 0,45 0 0,63 Хлороформ-ацетон-аммиака раствор 25% (8:4:0,2) темный темный желтый коричневый светло-коричневый

на, что подтверждает их идентичность. Оптимальные условия идентификации ЛП римантадина гидрохлорида методом ТСХ представлены в таблице 1.

Таким образом, изучено хроматографическое поведение амантадина, мемантина, римантадина и ладастена в тонком слое сорбента в системах растворителей нейтрального, кислого и основного характера. Подобраны оптимальные системы растворителей (6-7), пригодные для разделения и идентификации ЛВ группы адаман-тана. Разработана унифицированная методика идентификации ЛП римантадина гидрохлорида методом ТСХ. Предлагаемая методика специфичная, экспрессная, обеспечивает объективность и надежность испытания ЛП римантадина гидрохлорида на подлинность.

ЛИТЕРАТУРА

1. Багрий Е.И. Адамантаны: получение, свойства, применение. - М.: Наука, 1989. - 264 с.

2. Геллер Л.Н., Лапшина М.П., Тыжигирова В.В. Позиционирование комбинированных противогриппозных лекарственных препаратов на региональном фармацевтическом рынке // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). -2012. - Т. 118. №3. - С.92-94.

3. Моисеев И.К., Коньков С.А., Овчинников К.А. и др. Синтез и противовирусная активность новых производных адамантанового ряда // Химико-фармацевтический журнал.

- 2011. - Т. 45. №10. - С.9-13.

4. НД-7274-05. Ремантадин, таблетки 50 мг.

5. Сюняков С.А., Гришин С.А., Телешова Е.С. и др. Результаты пилотного клинического исследования ладастена // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2006.

- Т. 69. №4. - С.10-15.

6. ФСП 42-0064002405. Альгирем, сироп для детей 2 мг/мл.

7. ФСП 42-8903-07. Антигриппин-Максимум, порошок.

8. Шибнев В.А., Гараев Т.М., Финогенова М.П. и др. Некоторые пути преодоления резистентности вирусов гриппа А к препаратам адамантанового ряда // Химикофармацевтический журнал. - 2012. - Т. 46. №1. - С.3-7.

REFERENCES

1. Bagriy E.I. Adamantanes: preparation, properties and application. - Moscow: Nauka, 1989. - 264 p.

2. Geller L.N., Lapshina M.P., Tyzhigirova V.V. Positioning of the combined antiinfluenzal drugs in the regional pharmaceutical market // Sibirskij Medicinskij Zurnal

3. MoiseevI.K., Konkov S.A., Ovchinnikov K.A., et al. Synthesis and antiviral activity of nev adamantane derivatives // Khimiko-Farmacevticheskij Zurnal. - 2011. - Vol. 45. №10. - P.9-13.

4. ND-7274-05. Rimantadine, tablets 50 mg.

5. Syunyakov S.A., Grishin S.A., Teleshova Е.S., et al. The results of a pilot clinical study ladastena // Experimentalnaya i Klinicheskaja Farmacologya. - 2006. - Vol. 69. №4. - P.10-15.

6. FSP 42-0064002405. Algirem, syrup for children 2 mg / ml.

7. FSP 42-8903-07. Antigrippin-Maximum, powder.

8. Shibnev V.I., Garaev T.M., Finogenova M.P., et al. Some Pathways to overcoming drug resistance of influenza a virus to adamantane derivatives // Khimiko-Farmacevticheskij Zurnal. -2012. - Vol. 46. №1. - P.3-7.

Информация об авторах:

664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, ИГМУ, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, тел.: (3952) 24-34-47; e-mail: tyzhigirova51@mail.ru; Тыжигирова Валентина Викторовна - к.ф.н., доцент;

Батоцыренова Дарима Эрденеевна - интерн.

Information About the Authors:

664003, Irkutsk, Krasnogo Vosstaniya str., 1, ISMU, department of Pharmaceutical and Toxicological Chemistry, tel. (3952) 24-34-47, e-mail: tyzhigirova51@mail.ru; Tyzhigirova Valentina Viktorovna - candidate of Pharmaceutical Sciences,

assistant professor; Batotsirenova Darima Erdeneevna - intern.