СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПОНЕНТОВ, КОТОРЫЕ ОБЛАДАЮТ СПОСОБНОСТЬЮ К САМОСБОРКЕ В КЛЕТКАХ И ОБУСЛОВЛИВАЮТ РНКI-АКТИВНОСТЬ

1. Препарат, который ингибирует экспрессию по меньшей мере одной представляющей интерес последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в клетке индивидуума, содержащий;
а) первую композицию, включающую первую цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом для введения in vivo наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, эффективно повышающие стабильность и активность указанной первой цепи в ткани-мишени in vivo;
б) вторую композицию, включающую вторую цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, эффективно повышающие стабильность и активность указанной второй цепи в ткани-мишени in vivo;
где указанные композиции не содержат пролекарство или носитель и по меньшей мере одна цепь комплементарна нуклеиновой кислоте-мишени на протяжении по меньшей мере 6 смежных нуклеозидов; и
I) первая и вторая цепи, указанные в подпунктах а) и б), комплементарны друг другу и состоят из 13-27 нуклеотидов, и обладают способностью образовывать дуплекс;
II) указанные модификации повышают устойчивость к нуклеазам указанных цепей in vivo;
III) указанные модификации изменяют Tm дуплекса;
и
после последовательного введения указанных первой и второй цепей in vivo, указанные цепи проявляют повышенную способность ингибировать экспрессию указанной последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в указанной клетке в организме индивидуума по сравнению с ингибирующей способностью, достигаемой при использовании препаратов, содержащих традиционные олигонуклеотидные дуплексы цепей, указанных в подпунктах а) и б), или препаратов, содержащих одну из цепей, указанных в подпунктах а) или б).
2. Препарат по п.1, в котором представляющая интерес клетка не представляет собой клетку проксимальных канальцев почки.
3. Препарат по п.1, в котором указанная первая цепь представляет собой смысловую цепь и состоит из 13-27 нуклеозидов, вторая цепь представляет собой антисмысловую цепь и состоит из 16-27 нуклеозидов и антисмысловая цепь имеет область комплементарности с рибонуклеиновой кислотой-мишенью, состоящую по меньшей мере из 6 смежных нуклеозидов.
4. Препарат по п.1, в котором указанная первая цепь представляет собой антисмысловую цепь, состоящую из 16-27 нуклеозидов, и имеет область комплементарности с рибонуклеиновой кислотой-мишенью, состоящую по меньшей мере из 6 смежных нуклеозидов, а вторая цепь представляет собой смысловую цепь и состоит из 13-27 нуклеозидов.
5. Препарат по п.1, в котором указанная первая или вторая цепь представляет собой антисмысловую цепь и указанная последовательность рибонуклеиновой кислоты-мишени представляет собой мРНК, которая содержит область комплементарности с указанной антисмысловой цепью в ее 3′-UTR, которая состоит из 6-7 смежных нуклеозидов, где указанная область является комплементарной последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и где нуклеозидные положения 10 и/или 11, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, необязательно содержат модификацию, выбранную из группы, состоящей из лишенного азотистого основания нуклеозида, UNA и FANA.
6. Препарат по п.5, в котором указанная комплементарная область в указанной мРНК комплементарна последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и она является такой же, что и затравочная последовательность из эндогенной miРНК.
7. Препарат по п.5, в котором указанная комплементарная область в указанной мРНК комплементарна последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и она содержит новую затравочную последовательность, комплементарную последовательности в 3′-UTR по меньшей мере одной последовательности мРНК-мишени.
8. Препарат по п.5, в котором указанную последовательность, находящуюся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, модифицируют так, чтобы изменять ее аффинность к указанной мишени.
9. Препарат по п.1, в котором указанная первая или вторая цепь представляет собой антисмысловую цепь и указанная рибонуклеиновая кислота-мишень представляет собой мРНК или miРНК, которая содержит область комплементарности, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеозидов, с последовательностью, которая присутствует в указанной антисмысловой цепи в положениях 7-14, считая с 5′-конца.
10. Препарат по п.1, в котором одна или обе цепи содержат по меньшей мере один модифицированный сахар, выбранный из группы, состоящей из 2′-фтора, 2′-фторзамещенной рибозы, 2′-фтор-D-арабинонуклеиновой кислоты (FANA), 2′-O-метилэтилрибозы, 2′-O-метилэтилдезоксирибозы, 2′-O-метилзамещенной рибозы, 2′-дезоксирибозы, морфолиногруппы, пиперазина и «замкнутой» нуклеиновой кислоты (LNA), и
по меньшей мере одну модифицированную каркасную связь, выбранную из группы, состоящей из фосфоротиоатной связи, метилфосфонатной связи, этилфосфонатной связи, боранофосфатной связи, сульфонамида, карбониламида, фосфородиамидата, фосфородиамидатной связи, содержащей положительно заряженную боковую группу, фосфородитиоатов, аминоэтилглицина, фосфотриэфиров, аминоалкилфосфотриэфиров; 3′-алкиленфосфонатов; 5′-алкиленфосфонатов, хиральных фосфонатов, фосфинатов, 3′-аминофосфорамидата, аминоалкилфосфорамидатов, тионофосфорамидатов; тионоалкилфосфонатов, тионоалкилфосфотриэфиров, селенофосфатов, 2′-5′-связанных боранофосфонатных аналогов, связи с инвертированной полярностью, лишенной азотистого основания связи, короткоцепочечной алкильной связи, циклоалкильной межнуклеозидной связи, смешанной гетероатомно или алькильной или циклоалкильной межнуклеозильно связи, короткоцепочечной гетероатомной или гетероциклической межнуклеозидной связи с силоксановыми каркасами, сульфида, сульфоксида, сульфона, формацетильной связи, тиоформацетильной связи, метиленформацетильной связи, тиоформацетильной связи, рибоацетильной связи, алкеновой связи, сульфаматных каркасов, метилениминовой связи, метиленгидразиновой связи, сульфонатной связи и амидной связи, где указанная связь необязательно может присутствовать в предшественнике выступа.
11. Препарат по п.1, содержащий по меньшей одну изменяющую Tm модификацию, указанную в таблице 2.
12. Препарат по п.9, в котором указанные смысловая и/или антисмысловая цепи имеют по меньшей мере одну модификацию, выбранную из группы, включающей:
(I) 2′-O-метильную модификацию второго нуклеозида, считая с 5′-конца, при этом наличие в этом положении рибозы и 2-фтора исключается;
(II) по меньшей мере один из нуклеозидов в положениях 3-7, считая с 5′-конца, представляет собой UNA или лишенный азотистого основания нуклеозид;
(III) «неоднозначную» пару оснований aG:U для минимизации нетребуемого сайленсинга рибонуклеотида-мишени;
(IV) по меньшей мере один из нуклеозидов в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной цепи, представляет(ют) собой 2′-рибонуклеозид(ы), при этом не более четырех 2′-рибонуклеозидов являются смежными.
13. Препарат по одному из п.п.1, 3-11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, где смысловая и антисмысловая цепи имеют одинаковую длину, и состоят из 16-23 нуклеозидов, и каждая цепь не содержит предшественников выступа.
14. Препарат по одному из п.п.1, 3-9, 11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, в котором и смысловая, и антисмысловая цепи содержат предшественник 3′-концевого выступа размером от 1 до 4 структурных единиц, где указанные структурные единицы выбраны из группы, состоящей из встречающегося в естественных условиях дезоксирибонуклеозида, нуклеозида с заменой рибозы морфолиновым кольцом, 2′-O-метилуридина, модифицированного 2′-O-метилом нуклеозида, немодифицированного рибонуклеозида, 2′-O-метила, 2′-фтора, FANA; 2′-O-метоксиэтила, LNA, морфолиногруппы, трицикло-ДНК, рибодифтортолила, 4′-тиорибонуклеотидов, 2′-O-метил-4′-тиорибонуклеотида, алтритолнуклеозида (ANA), циклогексенилнуклеозида (CeNA), пиперазина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметил-2′-дезоксиуридина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметилтимидина, 1,3-бис(гидроксиметил)бензола, 1,3-бис(гидроксиметил)пиридина, 1,2-бис(гидроксиметил)бензола и биарильных структурных единиц, и указанные структурные единицы соединены вместе устойчивой к нуклеазам связью, выбранной из группы, состоящей из фосфоротиоата, боранофосфата, фосфоноацетата, тиофосфоноацетата, метилборанофосфина, амида, карбамата и мочевины.
15. Препарат по одному из п.п.1, 3-11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, в котором указанная антисмысловая цепь содержит как предшественника 5′-концевого выступа, так и предшественник 3′-концевого выступа, где каждый предшественник состоит из 1-4 структурных единиц, где указанные структурные единицы предшественника 5′-концевого выступа выбраны из группы, состоящей из нормальных рибонуклеозидов и нуклеозидов, перечисленных в таблице 2, и они соединены связями, выбранными из группы, состоящей из фосфодиэфира, фосфоротиоата и боранофосфата, и указанные структурные единицы предшественника 3′-концевого выступа выбраны из группы, состоящей из встречающегося в естественных условиях дезоксирибонуклеозида, нуклеозида с заменой рибозы морфолиновым кольцом, 2′-O-метилуридина, модифицированного 2′-O-метилом нуклеозида, немодифицированного рибонуклеозида, 2′-O-метила, 2′-фтора, FANA; 2′-O-метоксиэтила, LNA, морфолиногруппы, трицикло-ДНК, рибодифтортолила, 4′-тиорибонуклеотидов, 2′-O-метил-4′-тиорибонуклеотида, алтритолнуклеозида (ANA), циклогексенилнуклеозида (CeNA), пиперазина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметил-2′-дезоксиуридина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметилтимидина, 1,3-бис(гидроксиметил)бензол, 1,3-бис(гидроксиметил)пиридина, 1,2-бис(гидроксиметил)бензола и биарильных структурных единиц, и указанные структурные единицы соединены вместе устойчивой к нуклеазам связью, выбранной из группы, состоящей из фосфоротиоата, боранофосфата, фосфоноацетата, тиофосфоноацетата, метилборанофосфина, амида, карбамата и мочевины.
16. Препарат по одному из п.п.1, 3-11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, в котором указанная антисмысловая цепь содержит предшественник 3′-концевого выступа размером 1-4 структурные единицы, где указанные структурные единицы выбраны из группы, состоящей из встречающегося в естественных условиях дезоксирибонуклеозида, нуклеозида с заменой рибозы морфолиновым кольцом, 2′-O-метилуридина, модифицированного 2′-O-метилом нуклеозида, немодифицированного рибонуклеозида, 2′-O-метила, 2′-фтора, FANA; 2′-O-метоксиэтила, LNA, морфолиногруппы, трицикло-ДНК, рибодифтортолила, 4′-тиорибонуклеотидов, 2′-O-метил-4′-тиорибонуклеотида, алтритолнуклеозида (ANA), циклогексенилнуклеозида (CeNA), пиперазина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметил-2′-дезоксиуридина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметилтимидина, 1,3-бис(гидроксиметил)бензола, 1,3-бис(гидроксиметил)пиридина, 1,2-бис(гидроксиметил)бензола и биарильных структурных единиц, и указанные структурные единицы соединены вместе устойчивой к нуклеазам связью, выбранной из группы, состоящей из фосфоротиоата, боранофосфата, фосфоноацетата, тиофосфоноацетата, метилборанофосфина, амида, карбамата и мочевины, и где в указанной смысловой цепи отсутствует предшественник выступа.
17. Препарат по одному из п.п.1, 3-9, 11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, в котором указанная антисмысловая цепь содержит предшественник 5′-концевого выступа размером 1-4 структурные единицы, где указанные нуклеозиды выбраны из группы, состоящей из нормальных рибонуклеозидов и нуклеозидов, перечисленных в таблице 2, и они соединены связями, выбранными из группы, состоящей из фосфодиэфира, фосфоротиоата и боранофосфата, и где в указанной смысловой цепи отсутствует предшественник выступа.
18. Препарат по одному из п.п.1, 3-9, 11 или 12, содержащий смысловую и антисмысловую цепи, в которых шесть 3′-концевых нуклеозидов смысловой цепи содержат от 1 до 6 мисмэтчей с комплементарной антисмысловой цепью, исключая любого из предшественников выступа.
19. Препарат по п.п.5-8 или 9, в котором смысловая цепь содержит три области и в котором один или несколько нуклеозидов по меньше мере в одной области имеет структуру, выбранную из группы, состоящей из мисмэтча с антисмысловой цепью, лишенного азотистого основания нуклеозида, UNA или ANA, и в котором три области смысловой цепи соответствуют указанным в таблице 3.
20. Препарат, который ингибирует экспрессию по меньшей мере одной представляющей интерес последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в клетке индивидуума, содержащий;
а) первую композицию, включающую первую цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом для введения in vivo наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, обладающие способностью повышать стабильность и активность указанной первой цепи в ткани-мишени in vivo;
б) вторую композицию, включающую вторую цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, обладающие способностью повышать стабильность и активность указанной второй цепи в ткани-мишени in vivo;
в) третью композицию, включающую третью цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, обладающие способностью повышать стабильность и активность указанной третьей цепи в ткани-мишени in vivo;
где
указанные композиции не содержат пролекарство или носитель и по меньшей мере одна цепь комплементарна рибонуклеиновой кислоте-мишени на протяжении по меньшей мере 6 смежных нуклеозидов и
I) две цепи, указанные в подпунктах а), б) и в), не комплементарны друг другу и указанная третья состоит из 16-27 нуклеотидов, где указанные три цепи обладают способностью образовывать дуплекс, в котором указанные некомплементарные цепи разделены не более чем двумя нуклеозидами в любом из указанных дуплексов, и где Tm между каждой из указанных некомплементарных цепей в сочетании с комплементарной цепью равна или превышает 40°С;
II) указанные модификации повышают устойчивость к нуклеазам указанных цепей in vivo;
III) указанные модификации изменяют Tm дуплекса;
и
после последовательного введения указанных первой, второй и третьей цепей in vivo, указанные цепи проявляют повышенную способность ингибировать экспрессию указанной последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в указанной клетке индивидуума по сравнению с ингибирующей способностью, достигаемой при использовании препаратов, содержащих традиционные олигонуклеотидные дуплексы цепей, указанных в подпунктах а), б) и в), или препаратов, содержащих цепи, в которых отсутствуют модификации, указанные в подпунктах II) и III).
21. Препарат, который ингибирует экспрессию по меньшей мере одной представляющей интерес последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в клетке индивидуума, содержащий;
композицию, включающую цепь нуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом для введения in vivo наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, обладающие способностью повышать стабильность и активность указанной первой цепи в ткани-мишени in vivo;
где
указанная композиция не содержит пролекарство или носитель;
I) указанная цепь состоит из 16-27 нуклеотидов и содержит первую область, комплементарную указанной мишени, которая включает нуклеозиды 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца цепи;
III) указанная цепь содержит вторую область, состоящую из 6 или 7 смежных нуклеозидов, которые комплементарны первой области цепи, в результате указанные первая и вторая области обладают способностью образовывать «шпильку», где указанная цепь обладает также способностью образовывать димер с другой цепью этой же структуры;
IV) указанные модификации повышают устойчивость к нуклеазам указанной цепи in vivo;
V) указанные модификации изменяют Tm дуплекса;
и
где указанная цепь обладает способностью ингибировать экспрессию указанной рибонуклеиновой кислоты-мишени в указанной клетке в организме индивидуума.
22. Препарат по п.21, в котором первая область имеет такую же последовательность, что и последовательность эндогенной miРНК.
23. Препарат по п.21, в котором первая область не имеет такую же последовательность, что и эндогеннная miРНК, но она комплементарна последовательности в 3′UTR по меньшей мере одной мРНК.
24. Препарат по п.21, в котором последовательность первой области модифицирована для изменения ее аффинности связывания с комплементарной последовательностью в указанной мишени.
25. Препарат, который ингибирует экспрессию по меньшей мере одной представляющей интерес последовательности рибонуклеиновой кислоты-мишени в клетке в организме индивидуума, содержащий:
композицию, включающую цепь рибонуклеиновой кислоты в фармацевтически приемлемом для введения in vivo наполнителе, где указанная цепь содержит модификации, обладающие способностью повышать стабильность и активность указанной первой цепи в ткани-мишени in vivo;
где
указанная композиция не содержит пролекарство или носитель;
I) указанная цепь состоит из 18-23 нуклеотидов и содержит область, комплементарную указанной рибонуклеиновой кислоте-мишени, которая включает по меньшей мере 6 смежных нуклеозидов;
2
II) указанная цепь фосфорилирована в 5′-СНЩН-положении 5′-рибозы;
III) указанная цепь содержит предшественник 3′-концевого выступа размером от 2 до 3 структурных единиц, где указанные структурные единицы выбраны из группы, состоящей из встречающегося в естественных условиях дезоксирибонуклеозида, нуклеозида с заменой рибозы морфолиновым кольцом, 2′-O-метилуридина, модифицированного 2′-O-метилом нуклеозида, немодифицированного рибонуклеозида, 2′-O-метила, 2′-фтора, FANA; 2′-O-метоксиэтила, LNA, морфолиногруппы, трицикло-ДНК, рибодифтортолила, 4′-тиорибонуклеотидов, 2′-O-метил-4′-тиорибонуклеотида, алтритолнуклеозида (ANA), циклогексенилнуклеозида (CeNA), пиперазина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметил-2′-дезоксиуридина, 5-бис(аминоэтил)аминоэтилкарбамоилметилтимидина, 1,3-бис(гидроксиметил)бензола, 1,3-бис(гидроксиметил)пиридина, 1,2-бис(гидроксиметил)бензола и биарильных структурных единиц, и указанные структурные единицы соединены вместе устойчивой к нуклеазам связью, выбранной из группы, состоящей из фосфоротиоата, боранофосфата, фосфоноацетата, тиофосфоноацетата, метилборанофосфина, амида, карбамата и мочевины, и
IV) указанные модификации повышают устойчивость цепи к нуклеазам in vivo;
V) указанные рибонуклеозидные модификации изменяют Tm дуплекса и содержат по меньшей мере один 2′-фтор;
и
где указанная цепь обладает способностью ингибировать экспрессию указанной рибонуклеиновой кислоты-мишени в указанной клетке в организме индивидуума.
26. Способ, обеспечивающий понижающую модуляцию экспрессии указанной нуклеотидной последовательности-мишени в представляющей интерес клетке или ткани в организме млекопитающего, где этот способ включает
а) введение препарата по п.1 индивидууму, который нуждается в этом, где указанный препарат содержит две различные композиции первой и второй комплементарных цепей, при этом указанную первую цепь вводят отдельно указанному млекопитающему;
б) выдерживание в течение соответствующего периода времени для того, чтобы произошло поглощение клеткой указанной первой цепи,
в) введение второй цепи в клетку, указанную в подпункте б), указанная первая цепь и указанная вторая цепь обладают способностью образовывать дуплекс в указанной клетке, который обладает способностью обеспечивать понижающую модуляцию экспрессии последовательности указанной нуклеиновой кислоты-мишени, где указанный препарат обладает способностью:
I) индуцировать расщепление нуклеотидной последовательности мРНК-мишени; или
II) ингибировать трансляцию мРНК, кодирующей белок, который является продуктом указанной нуклеотидной последовательности; или
III) индуцировать расщепление нуклеотидной последовательности miРНК-мишени; или
IV) ингибировать функцию нуклеотидной последовательности miРНК-мишени; или
V) имитировать действие нуклеотидной последовательности эндогенной miРНК-мишени.
27. Способ по п.26, в котором стадию в) осуществляют в период времени примерно между 4 и примерно 24 ч после осуществления стадии а).
28. Способ по п.26, предназначенный для лечения медицинских состояний и для коммерческих применений, указанных в таблице 6, 7 или 8.
29. Способ по п.28 лечения медицинского состояния, в котором указанное лечение модулирует состояние, выбранное из группы, состоящей из сенсибилизации к цитотоксическим терапиям типов рака, характеризующихся присутствием р53 дикого типа; лечения типов рака, характеризующихся присутствием мутантного р53; сенсибилизации типов рака, характеризующихся присутствием мутантного р53, индукции апоптоза любым индуктором апоптоза; индукции покоя стволовых клеток у злокачественных стволовых клеток; размножения здоровых стволовых клеток и/или потомства; воздействия на клеточный цикл злокачественных стволовых клеток таким образом, чтобы они могли быть «атакованы» зависящими от клеточного цикла противораковыми агентами; сердечной недостаточности; стимулирования апоптоза; ингибирования апоптоза незлокачественных стволовых клеток; болезни Гентингтона; синдрома Даймонда-Блекфена; синдрома Швекмана-Даймонда; рибосомопатии; жирового метаморфоза печени; индуцированной стрессом иммуносупрессии; осложнений, ассоциированных с субарахноидным кровоизлиянием; патологической гиперпигментации; гиперкератоза; токсических воздействий противораковой химиотерапии и лучевой терапии; потери волосяного покрова; воспаления слизистой оболочки, миелосупрессии, потери слуха, повреждения периферических нервов, нарушения функции головного мозга и повреждения почек; воспалительного заболевания кишечника; болезни Крона; РДСВ; множественной недостаточности органов; сенсибилизации различных типов рака к цитотоксическим обработкам; амилоидного отложения; нейродегенеративных заболеваний; повреждений, вызванных ишемией-пеперфузией; избегания воздействий цитотоксической терапии благодаря нахождению злокачественных клеток в состоянии покоя; снижения экспансии (разрастания) незлокачественной ткани благодаря нахождению стволовых клеток в состоянии покоя; предупреждения демиелинизации; рассеянного склероза; болезни Альцгеймера; болезни Паркинсона; предупреждения клеточной гибели, ассоциированной с диабетической ишемией; спонтанного апоптоза, остановки клеточного цикла, старения и дифференцировки стволовых клеток, включая эмбриональные стволовые клетки и iPS; размножения для создания животных или для применения в научном исследовании; предупреждения гибели клеток, ассоциированной с ишемией головного мозга; предупреждения гибели клеток, ассоциированной с инфарктом миокарда, включая последующий разрыв сердечной стенки; шизофрении; псориаза; СПИДа; предупреждения разрыва атеросклеротической бляшки; предупреждения разрыва аневризмы; болезни «трансплантат-против-хозяина»; системно красной волчанки; стимулирования заживления трудно заживающих ран; синдрома капиллярной утечки; эмфиземы; снижения эндосомальной, лизосомальной или фагосомальной секвестрации терапевтических средств на основе олигонуклеотидов с оказанием воздействия на повышение их биологической активности; стимулирования пролиферации стволовых клеток, таких как гематопоэтические или нервные клетки; сахарного диабета, включая резистентный к инсулину диабет; синдрома 5q-; порокератоза; индуцированной ферритином гибели клеток; анемии; врожденного дискератоза, включая форму с теломеразной недостаточностью; предупреждения эмфиземы; предупреждения ХОЗЛ; резистентности к инсулину при сердечной недостаточности.
30. Способ по п.26, в котором указанное заболевание представляет собой рак.
31. Препарат по п.1, содержащий по меньшей мере одно соединение, представленное на чертежах.
32. Способ по п.26, заключающийся в том, что вводят по меньшей мере одно соединение, представленное на чертежах.
33. Способ скрининга in vitro для выбора сайта связывания антисмысловой цепи в представляющей интерес рибонуклеиновой кислоте-мишени, где способ включает:
(I) идентификацию сайта в указанной мишени, который пригоден для связывания антисмысловой цепи с использованием антисмыслового олигонуклеотида;
(II) получение набора из первого и второго олигонуклеотидов с последовательностями, которые обладают способностью образовывать дуплекс, или набора из первого и второго олигонуклеотидов, которые не комплементарны друг другу, но которые обладают способностью образовывать дуплекс с третьей цепью, где по меньшей мере одна цепь комплементарна сайту, идентифицированному в качестве пригодного для связывания, в подпункте (I);
(III) модификацию указанных олигонуклеотидных цепей для повышения их стабильности и активности;
(IV) контактирование клетки, экспрессирующей указанную мишень, с указанной первой олигонуклеотидной цепью или указанными двумя некомплементарными цепями и выдерживают в течение соответствующего периода времени для того, чтобы произошло поглощение клеткой указанной(ых) цепи(ей);
(V) контактирование указанной клетки с указанной второй или указанными второй и третьей олигонуклеотидными цепями, которые не комплементарны друг другу, но комплементарны цепи, указанной в подпункте (IV), и;
(VI) определение экспрессии последовательности-мишени относительно экспрессии последовательности-мишени, не модифицированной согласно стадии (III).
34. Способ in vitro по п.33, в котором указанный первый олигонуклеотид укорочен относительно второго олигонуклеотида.
35. Способ in vitro по п.33, в котором одна или обе указанные цепи включают предшественник выступа на 3′-конце и/или, в котором одна цепь включает предшественник 5′-концевого выступа.
36. Способ in vitro по п.33, в котором два или большее количество первых олигонуклеотидов представляют собой смежную последовательность.
37. Способ in vitro по п.33, в котором указанный первый олигонуклеотид представляет собой смысловую цепь, а указанный второй олигонуклеотид представляет собой антисмысловую цепь.
38. Способ in vitro по п.33, в котором указанные олигонуклеотиды выбирают из группы олигонуклеотидов, представленных на чертежах.
39. Способ in vitro по п.33, в котором указанная первая или вторая цепь представляет собой антисмысловую цепь и указанная последовательность рибонуклеиновой кислоты-мишени представляет собой мРНК, которая содержит область комплементарности с указанной антисмысловой цепью в ее 3′-UTR, которая состоит из 6-7 смежных нуклеозидов, где указанная область является комплементарной последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и где нуклеозидные положения 10 и/или 11 из 5′-конца указанной антисмысловой цепи необязательно содержат модификацию, выбранную из группы, состоящей из лишенного азотистого основания нуклеозида, UNA и FANA.
40. Способ in vitro по п.33, в котором указанная комплементарная область в указанной мРНК комплементарна последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и она является такой же, что и затравочная последовательность из эндогенной miРНК.
41. Способ in vitro по п.33, в котором указанная комплементарная область в указанной мРНК комплементарна последовательности, находящейся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, и она содержит новую затравочную последовательность, комплементарную последовательности в 3′-UTR по меньшей мере одной последовательности мРНК-мишени.
42. Способ in vitro по п.33, в котором указанную последовательность, находящуюся в положениях 2-7 или 2-8, считая с 5′-конца указанной антисмысловой цепи, модифицируют так, чтобы изменять ее аффинность к указанной мишени.
43. Способ in vitro по п.33, в котором указанная первая или вторая цепь представляет собой антисмысловую цепь и указанная рибонуклеиновая кислота-мишень представляет собой мРНК или miРНК, которая содержит область комплементарности, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеозидов, с последовательностью, которая присутствует в указанной антисмысловой цепи в положениях 7-14, считая с 5′-конца.
44. Препарат по п.21, в котором нуклеозидные положения 10 и/или 11, считая с 5′-конца указанной цепи, необязательно содержат модификацию, выбранную из группы, состоящей из лишенного азотистого основания нуклеозида, UNA и FANA.
45. Способ по п.26, в котором стадию в) осуществляют примерно через неделю после осуществления стадии а).