Молекулярные механизмы резистентности к отечественным препаратам n-алкил-n-нитрозомочевинам и производным цисплатина

MOLECULAR MECHANISMS OF RESISTANCE TO RUSSIAN N-ALKYL-N-NITROSOUREAS AND CISPLATIN DERIVATIVES

L.B. Gorbacheva, L. Yu. Dederer N.M. Emanuel Institute of Biochemical Physics RAS, Moscow

ABSTRACT

N-alkyl-N-nitrosoureas (ANU) and cisplatin derivatives are important as therapeutic drugs in the treatment of various types of tumors. The very high antitumor activity of ANU was revealed in experiments with tumor-bearing animals, but it doesn’t realize in clinics. Drug resistance to ANU, both intrinsic and acquired, is an important problem in cancer chemotherapy. Under physiological conditions ANU decompose to yield the highly reactive 2-chloroethylcarbonium ions that alkylate bases of DNA and RNA. ANU also generate isocyanates that carbamoylate proteins and lipids. The formation and persistence of 06-alkylguanine (06-AG) is important for cytotoxicity of 1-methyl-1- nitrosourea (MNU) and aranoza. 06-AG adducts in DNA are repaired 06-alkylguanine DNA transferase (06-AGT). Cells deficient in AGT exhibit increased sensitivity to ANU (Mer), while cells with high level of AGT are resistant (Mer+). Determination of 06-AGT activity in tumor cells may be used for predication of their sensitivity to ANU. The loss of postreplicative mismatch repair of DNA (MMR) also plays the marked role in resistance to methylating nitrosoureas. Glutathione(GSH) and GSH-dependent enzymes also may take part in drug resistance to ANU. Inhibitors of 06-AGT Os-benzylguanine (BG) and some others close analogues were offered for overcoming drug resistance to ANU. Besides may be used some new inhibitors of antiapoptotic protein Bcl-2. Resistance to cisplatin derivatives is a multifactor phenomenon. The mechanism resistance include decrease platinum accumulations, elevated G-SH levels, enhanced platinum-DNA adduct repair capacity. In was shown that resistance to cycloplatam is due to essential increase of G-SH level and activity of G-SH-dependent enzymes in P388/c leukemia cells (cycloplatam- resistant strain) in comparison parent strain. There is not complete cross- resistant between both different analogs of ANU and cisplatin derivatives.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ОТЕЧЕСТВЕННЫМ ПРЕПАРАТАМ ^АЛКИЛ-^НИТРОЗОМОЧЕВИНАМ И ПРОИЗВОДНЫМ ЦИСПЛАТИНА

Л. Б. Горбачева, Л.Ю. Дедерер Институт Биохимической Физики РАН, Москва

РЕЗЮМЕ

^алкил^-нитрозомочевины (АНМ) и производные платины широко используются при лечении опухолей различных локализаций. В экспериментах с опухолями животных была выявлена очень высокая противоопухолевая активность АНМ, которая полностью не реализуется в клинической практике. Существование врожденной или появление приобретенной резистентности к АНМ в процессе лечения опухолевых заболеваний существенно ограничивает эффективность химиотерапии. АНМ в условиях, близких к физиологическим, подвергаются гидролитическому распаду с образованием хлорэтилкарбониевых ионов, алкшшрующих основания и фосфатные группы ДНК и РНК, а также изоцианатов, карбамоилирующих белки и липиды.

Цитотоксичность N-Memn-N-HHTp030M04eBHHbi (МНМ) и аранозы зависит в основном от алкилирования гуанина в положении О6 (Об-АГ) и уровня Об-алкилгуанин ДНК трансферазы (06-АГТ). В резистентных опухолевых клетках (тип Мег+) уровень Об-АГТ высокий, а в чувствительных - очень низкий (тип Мег). Определение активности 06-АГТ в опухолевых клетках может быть использовано для предсказания их чувствительности к АНМ. Утрата способности к пострепликативной репарации неправильно спаренных оснований ДНК (MMR) играет значительную роль в возникновении резистентности к метальным нитрозомочевинам. Глутатион (G-SH) и G-SH-зависимые ферменты также вовлекаются в развитие резистентности к АНМ. Для преодоления лекарственной устойчивости предлагается использовать ингибиторы 06-АГТ, 06-бензилгуанин и некоторые другие аналоги, а также ингибиторы антиапоптического белка Вс1-2.

Резистентность к производным цисплатина имеет мультифакторную природу. Механизм устойчивости включает уменьшение внутриклеточного накопления платины, уменьшение скорости и интенсивности образования адцуктов ДНК, усиление скорости репарации повреждений ДНК. Было показано, что резистентность к циклоп-

латаму обусловлена существенным повышением концентрации внутриклеточного глутатиона и активности G-SH-зависимых ферментов в клетках лейкоза Р388/ц (штамм с приобретенной устойчивостью к циклоплатаму) по сравнению с исходным штаммом. Производные как ]Ч-алкил-М-нитрозомочевин (АНМ), так и цисплатина характеризуются отсутствием полной перекрестной устойчивости между близкими аналогами.

В настоящее время отечественные препараты из класса М-алкил-М-нитрозомочевин (АНМ) метальные и

хлорэтильные, также как и соединения, синтезированные в США и Японии (табл. 1), успешно применяются в составе схем комбинированной химиотерапии при лечении лимфогранулематоза, лимфосаркомы, диссеминированной меланомы, мелкоклеточного рака легкого, некоторых форм опухолей мозга [3; 5; 25].

Очень высокая противоопухолевая активность АНМ, установленная в экспериментальных исследованиях, полностью не реализуется при лечении опухолевых заболеваний. Одной из причин этого является существование врожденной или появление приобретенной резистентности к АНМ в процессе лечения.

В отличие от большинства противоопухолевых препаратов, для АНМ не характерна множественная лекарственная устойчивость. Более того, оказалось, что не существует полной перекрестной устойчивости между близкими аналогами АНМ [6].

Биохимические механизмы действия АНМ. В водных растворах при pH 7,0-7,5 АНМ неустойчивы и быстро подвергаются гидролитическому распаду с образованием алкилкарбониевых ионов, алкилирующих основания и фосфатные группы ДНК и РНК, а также изоцианатов, карбамоилирующих белки и липиды с образованием N-,О- и S- карбамоильных производных [15; 22]. Цитотоксичность АНМ определяется способностью алкилкарбониевых ионов к алкилированию ДНК с образованием широкого спектра алкилированных оснований и фосфатных групп. Установлено, что определяющую роль в цитотоксичности АНМ играет образование адцукта Об-алкилгуанина (Об-АГ). Монофункциональные АНМ в условиях in vivo вызывают фрагментацию ДНК с образованием множества одноцепочных разрывов, что приводит к нарушению процессов транскрипции и трансляции [16]. Хлорэтильные АНМ, в частности, нитруллин, быстро реагируют с различными сайтами ДНК с образованием хлорэтильных ад-дуктов, которые затем реализуются в сшивки ДНК-ДНК и ДНК-белок [8; 29]. Противоопухолевая актив-

ность АНМ определяется не только интенсивностью алкилирования гуанина ДНК в положении О6, но и длительностью существования этой модификации, которая, в свою очередь, зависит от уровня и активности ферментов репарации и прежде всего от О6 - алкил-гуанин-ДНКтрансфераза (О6 - АГТ).

Общие свойства О6 - АГТ и ее роль в резистентности к АНМ. 06-АГТ - акцепторный белок, вьшолняющий функции фермента. Высокие уровни Об-АГТ в опухолевых клетках способствуют появлению резистентности к АНМ. В табл. 2 представлены общие свойства О6-АГТ [18].

Уникальность механизма действия этого фермента заключается в том, что в клетках эукариот он переносит алкильные группировки с 06-алкилгуанина, а составе ДНК на свой собственный цистеиновый остаток. В результате этой реакции образуется N-алкилцистеин и восстанавливается немодифицированный гуанин в составе ДНК. Одна молекула Об-АГТ может стехиометри-чески связываться с одной алкильной группой. Эта реакция протекает очень быстро (1 с. 37°). Об-АГТ вступает в реакцию однократно, и поэтому количество репа-рируемого адцукта 06-АГ в клетке зависит от пула О6-

Таблица 2

Свойства 06-алкилгуанин-ДНК трансферазы (Oö-ATT) [211

Молекулярный вес 23 кДа_______________________________

207 аминокислот, мРНК 0.95 кб_________________________

pH оптимум 8.5____________________________________

Не зависит от кофакторов _____________________________

Один активный центр: Pro-Cys-His-Arg-Val______________

Цистеин в положении 145-акцепторный сайт _____________

Конкурентно ингибируется свободным 0<>-метилгуанином

и близкими аналогами_________________________

Существует клеточная и тканевая специфичность_________

20-25% линий опухолей человека не экспрессируют

Об-АГТ________________________________________________

В опухолях in situ отмечается большая вариабельность активности Об-АГТ.

Таблица 1

Противоопухолевые препараты ГЧ-алкил-ГЧ-нитрозомочевины

№п/п Соединения Общепринятые обозначения Страна

1 Монофункциональные метальные производные 1 -метил-1 -нитрозомочевина МНМ Россия

2 3-а-Ь-арабинопиранозил-1 - метил-1-нитрозомочевина Араноза Россия

3 5-(диметилтриазено) имидазол-4-карбоксамид DTIC США

4 Бифункциональные хлорэтильные производные Смесь изомеров 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-Ь-гомоцитрулин(А) + 9-(2-хлорэтил)- Нитруллин Россия

5 9-нитрозо-Ь-гомоцитрулин(Б) 1,3-бис (2-хлорэтил)-1- нитрозомочевина (Лизомустин) BCNU США

6 1-(2-хлорэтил)-3-циклогексил-1- нитрозомочевина CCNU США

7 1-(4-амино-2-метил-5-пиримидинил) метил-3-(2-хлорэтил)-3-нитрозомочевина ACNU Япония

АГТ, для восстановления которого необходим синтез этого акцепторного белка de novo. Существенная особенность функционирования О6-АГТ в клетках заключается в том, что в процессе репарации не нарушается целостность структуры ДНК и вероятность пострепара-ционных ошибок уменьшается. Определение активности О6-АГТ в опухолевых клетках может быть использовано для предсказания их чувствительности к АНМ.

В 1977 г. были выявлены различия в способности некоторых культур клеток человека реактивировать аденовирус 5, предварительно обработанный N-метил-№‘-нитро-]\[-нитрозогуанидином (MNNG). Клетки, способные реактивировать аденовирус, были отнесены к Мег+ типу, а неспособные - к Мегфенотипу. В многочисленных исследованиях в основном с культурами опухолевых клеток человека было установлено, что клетки Мег- типа характеризуются низким уровнем О6-АГТ и высокой чувствительностью к АНМ. Клетки Мег+ типа отличаются высоким уровнем О6-АГТ и устойчивостью к повреждающему действию АНМ [24]. Определение активности О6-АГТ в 100 штаммах опухолей человека показало, что только 20-25% из них относятся к Мег типу, т.е. характеризуются высокой чувствительностью к АНМ [10; 30]. В то же время в большинстве экспериментальных опухолей животных определяется низкая активность О6АГТ, что способствует проявлению их чрезвычайно высокой противоопухолевой активности на этих моделях [6]. Может быть, это является одной из причин различной чувствительности опухолей животных и человека к АНМ. В клетках костного мозга человека, крыс и мышей обнаруживается очень низкая активность Об-АГТ, что вполне согласуется с ярко выраженным повреждающим действием АНМ на системы кроветворения [19]. Прямые доказательства участия Об-АГТ в определении чувствительности к ACNU были получены после трансфекции pSV2 АГТ-neo вектора в клетки HeLa Мег типа. В результате трансфекции гена 06-АГТ активность фермента Об-АГТ увеличивалась в 18-20 раз, и резко возрастала резистентность этих клеток к ACNU [31].

Роль системы репарации неправильно спаренных оснований (MMR) и р53 в апоптозе, индуцированном АНМ. В большинстве опухолей человека система MMR утрачена, что способствует проявлению резистентности к противоопухолевым препаратам. В последние годы интенсивно разрабатываются представления об участии MMR в апоптозе, индуцированном различными противоопухолевыми препаратами, в частности АНМ [11].

Утрата способности к MMR может быть связана с уменьшением уровня гетеродимерных белков hMLHl, hMSH2 или hMSH6 [17]. Предполагается, что не само появление сигнала - Об-МГ в составе ДНК, а реализация его дальнейших превращений вносит основной вклад в клеточную гибель, вызываемую АМН. Как уже бьшо упомянуто выше, алкилкарбониевыеионы образуются при распаде бифункциональных хлорэтильных нитро-зомочевин (BCNU,CCNU) и алкилируют ДНК с образованием не Об-МГ, а 06-хлорэтилгуанина. Утрата способности к MMR не влияет на чувствительность опухолей к BCNU [21]. Можно предположить, что отсутствие

полной перекрестной устойчивости между метальными и хлорэтильными АНМ частично связано с различиями в механизмах репарации повреждения ДНК. Резистентность к метилирующим агентам обеспечивается репарацией 06-МГ О6-АГТ и в более отдаленные сроки - утратой MMR. В случае хлорэтильных. АНМ определяющим является репарация Об-хлорэтилгуанина 06-АГТ. В этом случае роль MMR не известна.

Механизм активации и ингибирования алоптоза, индуцированного метальными АНМ, полностью не выяснен.

Важно отметить, что появление апоптоза в культуре клеток СНО было обнаружено не ранее, чем через 48 ч. после начала инкубации с MNNG, затем апоптоз постепенно нарастал вплоть до 120 ч. Появлению апоптоза предшествовало уменьшение уровня цитоплазматического белка Bel-2 и активация каспазы-9 и каспазы-3. Введение в клетки Мег гена Вс1-2 снимало индукцию апоптоза MNNG, что свидетельствует о ключевой роли Вс1-2 в реализации цитотоксичности этого соединения [23].

В этой же работе были использованы толерантные клетки, которые не экспрессировали 06-МГТ, но были резистентны к Об-МГ-генерирующему агенту MNNG за счет уменьшения образования пар GT и снижения уровня белка hMSH2. В толерантных клетках экспрессия Вс1-2 при воздействии MNNG практически не изменялась. Значение Вс1-2 в цитотоксичности АНМ было подтверждено также и другими наблюдениями. Клетки глиобластомы человека, привитые бестимусным мышам после трансфекции гена Вс1-2, оказались более резистентными к воздействию BCNU по сравнению с клетками исходного чувствительного штамма. Следовательно, образование Об-МГ в ДНК при воздействии MNNG запускает гибель клеток по пути апоптоза благодаря неправильному спариванию оснований и, в конечном счете, образованию двойных разрывов в ДНК в клетках Мег-, но не Мег+ и толерантных. Несмотря на то, что р53 вовлекается в регуляцию активности гена О6-АГТ и может опосредовано влиять на резистентность к АНМ, предполагается, что MMR статус скорее, чем р53, является индикатором чувствительности опухолевых клеток к АНМ [17; 23]. Не следует забывать, что образование сигнала апоптоза Ое-МГ и возможность его дальнейшего функционирования, прежде всего, зависит от активности О6-АГТ в опухолях, и поэтому поиск эффективных нетоксичных селективно действующих ингибиторов О6-АГТ для преодоления лекарственной устойчивости вполне оправдан. Кроме того, в свете новых данных представляется интересной разработка подходов к ингибированию Вс1-2 в клетках опухолей.

Возможные пути преодоления резистентности к АНМ. Поскольку было достаточно убедительно показано, что устойчивость к АНМ определяется высоким уровнем Об-АГТ в опухолевых клетках, то логично было предположить, что применение активных ингибиторов О6-АГТ может приводить к истощению пула Об-АГТ, затруднению репарации и созданию условий для реализации цитотоксичности АНМ.

Для преодоления лекарственной устойчивости было предложено в культуры клеток или эксперимен-

тальным животным с ксенографтами опухолей человека вводить готовый экзогенный субстрат - 06-метилгу-анин (Об-МГ) [9]. Он вызывал заметную, но не полную инактивацию Об-АГТ только в высоких дозах. В этих условиях он был очень плохо растворим. Нами был предложен менее токсичный 06-метил-2“-дезоксигуано-зин (06-МдГ) [2]. Опыты проводились на мышах с лейкозом L1210, чувствительным (L1210/0) и резистентным к ACNU (L1210/ACNU) штаммами, а также на мышах с меланомой В16, умеренно чувствительной к ACNU. Ингибитор Об-МдГ усиливал терапевтическую эффективность ACNU только в чувствительных и умеренно чувствительных к этому препарату штаммах клеток опухолей. Преодолеть ярко выраженную устойчивость к ACNU у мышей с лейкозом L 1210/ACNU не удалось. В настоящее время самое широкое распространение в качестве ингибитора получил псевдосубстрат 06-АГТ Об-бензилгуанин (BG) [26; 28]. На II фазе клинических испытаний комбинации BG с BCNU, как и следовало ожидать, лимитирующим фактором оказалась гематопоэтическая токсичность [27].

В опытах с культурами клеток ОНО было показано, что BG увеличивает чувствительность к АНМ только в случае экспрессии гена Об-АГТ дикого типа. Экспрессия мутантных форм гена 06-АГТ, резистентных к BG, выражается в полной защите клеток от цитотокси-ческого действия АНМ, не зависимо от BG. Скорее всего, вопрос о целесообразности применения BG в клинической практике для преодоления лекарственной устойчивости остается открытым, и решение этой проблемы заключается не только в разработке оптимальных доз BG и режимов лечения.

Преодоление лекарственной устойчивости с использованием BG следует ожидать в отношении опухолей с умеренной активностью Об-АГТ, так как, вероятнее всего, необходимо полное истощение пула Об~АГТ. Для I фазы клинических испытаний комбинации BCNU + BG были отобраны опухоли с очень высоким уровнем Об-АГТ [14]. Наряду с BG можно ожидать, что использование ингибиторов антиапоптического белка Вс1-2, ДНК-полимеразы ß и снижения уровня GSH-зависимых ферментов будет более успешно способствовать преодолению лекарственной устойчивости к АНМ.

Механизм резистентности опухолей к производным цисплатина. В настоящее время препарат цисплатин -цис-дихлордиаминоплатина (ДДП) широко применяется в составе комбинированной химиотерапии опухолей яичка, яичников, плоскоклеточного рака легкого и некоторых других форм опухолевых заболеваний. Существенным препятствием для применения этого соединения является заметно выраженная нефро-токсичность и нейротоксичность. Поиск новых препаратов среди производных ДДП оправдан тем обстоятельством, что не существует полной перекрестной резистентности между близкими аналогами этого класса соединений. Так, например, опухоли, резистентные к цисплатину и карбоплатину, сохраняют чувствительность к тетраплатину, оксалиплатину и новому отечественному препарату циклоплатаму, синтезированному П.А. Чельцовым в Институте общей

и неорганической химии РАН [12; 20].

Среди возможных причин проявления резистентности к производным ДДП отмечаются: 1) уменьшение внутриклеточного накопления Д ДП; 2) уменьшение скорости и интенсивности образования адцуктов ДНК; 3) усиление скорости репарации повреждений ДНК; 4) повышение концентрации внутриклеточного глутатиона и глутатион-зависимых ферментов, участвующих в детоксикации производных ДДП; 5) нарушение в экспрессии генов fos, nm23, bcl-2 и р53; 6) утрата системы MMR.

Поскольку общие механизмы резистентности к цисплатину подробно рассмотрены в доступной отечественной литературе [4; 7], представляется целесообразным рассмотреть возможные причины устойчивости опухолей к отечественному препарату циклоплатаму.

Было показано, что циклоплатам в клетках лейкоза Р388 и Р388/ц (штамм с приобретенной устойчивостью к циклоплатаму) вызывает глубокое и длительное ингибирование синтеза ДНК. Ингибирующий эффект выражен в большей степени в лейкозных клетках Р388, однако различия между двумя штаммами несущественны (см. рис. 1).

Уровень восстановленного глутатиона (G-SH) был в 9,3 раза выше в клетках Р388/ц по сравнению с Р388, а активность G-SH - зависимых ферментов глутатион-пероксидазы, глутатионредуктазы и глутатионтранс-феразы была в 2,2; 1,8 и 1,5 раза выше в клетках Р388/ ц соответственно (табл. 3). Полученные результаты свидетельствуют о том, что увеличение уровня детоксицирующего агента G-SH и G-SH - зависимых ферментов вносят существенный вклад в развитие резистентности клеток Р388 к циклоплатаму [1].

Недавно было установлено, что аддукты, образуемые в ДНК после воздействия цисплатина и карбопла-тина и последующей репликации, узнаются системой MMR, и в результате каскада последующих превращений наблюдается апоптоз опухолевых клеток. Утрата MMR способствует возникновению резистентности к этим препаратам. Интересно отметить, что устойчивость опухолей к оксалиплатину, тетраплатину и, возможно, к циклоплатаму не зависит от MMR [13].

Время, ч

Рис. 1. Влияние циклоплатама на синтез ДНК в опухолевых клетках лейкоза Р388

Таблица 3

Содержание G-SH и активность G-SH-зависимых ферментов в клетках лейкоза Р388 и Р388/Ц

Измеряемые параметры Р388 Р388/Ц

G-SH, ммоль/мг белка 0,014х10'4 ОДЗОх 10°

Глутатионпероксидаза, ед. активности/мг белка 0,043 0,090

Глутатионредуктаза, ед. активности/мг белка 0,023 0,041

Глугатион-8-трансфераза, ед. активности/мг белка 0,017 0,026

Можно предположить, что эти различия в механизмах

репарации повреждений ДНК объясняют отсутствие

полной перекрестной резистентности между близкими

аналогами цисплатина.

ЛШЕРАТУРА

1.ДедерерЛ.Ю., Ланкин В.З., Коновалова АЛ., ГорбачеваЛ.Б. Исследования биохимических механизмов резистентности к новому противоопухолевому препарату амин(цик-лопентиламин)- 8-(-)-малатоплатине (циклоплатаму). // Биохимия. - 1995. - 60. - С. 602 - 609.

2.ДедерерЛ.Ю., СоколоваИ.С., БахмедоваА.А ucoaem. Модуляция противоопухолевой активности 1-(4-амино-2-ме-тил-5-пиримидинил)-метил-3-(2-хлорэтил)-3-нитрозо-мочевины 06-метил-2'-дезоксигуанозином - новым ингибитором 06-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы. // Биохимия. - 1995. - 60. - С. 1521 - 1529.

3. Дементьева Н.П., КорманД.Б. Нитрозометилмочевина-30

лет изучения и применения для лечения онкологических больных. // Вопр. онкол. - 2001. - 47, № 6. - С. 3 -11.

4. Иванов С.Д., Акимов А. А., Акимов М.А., Гершанович М.Л.

Молекулярно-клеточные механизмы устойчивости опухоли к цитостатикам и возможные пути преодоления этой химиорезистентности. // Усп.совр.биологии. - 2001. -121, №2. -С. 198-210.

5. Кутан Д.З., МанзюкЛ.В. Характеристика отдельных противоопухолевых препаратов. В кн. «Химиотерапия опухолевых заболеваний» под ред. Переводчиковой Н.И. -Москва, 2000. - С. 45 - 84.

6. Островская Л.А., Фомина М. М. Биологические основы применения нитрозомочевин в химиотерапии опухолей. // Химическая физика. - 1995. -14. - С. 71 - 83.

7. ШишоваЮ.В., ЧехунВ.Ф. Механизмы резистентности опухолей к цисплатину. // Эксп. Онкология. - 1998. -

20.-С. 3-14.

8. Brent Т.P. Suppression of cross-link formation in chloroethylnitrosourea - treated DNA by an activity in extracts of human leukemic lymphoblasts. // Cancer Res. -1984.-44.-P. 1887-1892.

9. Citti L„ Mariani L., Capecchi B., et ai. The sensitization of cells treated with 06-methylguanine to alkylation damage is affected by the number of 06-methylguanine-DNA methyltransferase molecules escaped from inactivation. // Mut. Res.-1998.-409.-P. 173-179.

10. Day R.SIII, Ziolkowski C.H., Scudiero D.A., et al. Defective repair of alkylated DNA by human tumor and SV-40-transformed human cells strains. // Nature (London). -1980. -288.-P. 724-727.

11. Dosch J„ Christman M„ Kaina B. Mismatch G-T binding activity and MSH2 expression is quantitatively related to sensitivity of cells to methylating agents. II Carcinogenesis. -1998.-19.-P. 567-573.

12. Dress М., Dengler W.M., HendriksH.R., et al. Cycloplatam: a novel platinum compound exhibiting a different spectrum of anti-tumour activity to cisplatin. // Eur. J. Cancer. -1995. -31A. - P. 356-361.

13. FinkD., Aevi S., Howell S.B. The role of DNA mismatch repair in

drug resistance // Clin. Cancer Res. -1998. - 4. - P. 1 - 6.

14. Friedman H.S. Can alkylguanine-DNA alkyl transferase depletion enhance alkylator activity in the clinic? // Clin. Cancer Res. - 2000. - 6. - P. 2967 - 2968.

15. Gorbacheva L.B., Kukushkina G.V., Sokolova I.S., Serebryanyi A.M. Studies of N-methyl-N- nitrosourea 11 Cancer Chemotherapy II, Plenum Press, London, 1976. -P. 209-213.

16. GorbachevaL.B., Verovsky V.N., Sokoloval.S., Kukushkina G. V. Inhibition and recovery of DNA and RNA synthesis in normal and tumour cells by some nitrosoureas. // Nitrosoureas in Cancer Treatment. INSERM Symp. №19 / Eds. Serrou B., Schein P.S., Imbach J.L. 1981. Elsevier/North Holland Biomedical Press. - P. 85 - 96.

17. HickmanM.J., SamsonL.D. Role ofmismatch repair and p53 in signaling induction of apoptosis by alkylating agents. // Proc.Natl.Acad.Sd,-USA, 1999.-96.-P. 10764—10769.

18. KainaB., FritzG., EschbachE., et al. Transfer of genes affecting resistance of mammalian cells to alkylating drugs - implications for cancer chemotherapy. // Reduction of Anticancer Drug Toxicity, Pharmacologic, Biologic, Immunologic and Gene Therapeutic Approaches. / Eds. Zeller W.J., Eisenbrand G., Helliman K. Basel, Karger, 1995. -48.-P. 125-141.

19. KleiblK., Margison G.P. Increasing DNA repair capacity in bone marrow by gene transfer as a prospective tool in cancer therapy // Neoplasma. -1998. - 45. - P. 181 - 186.

20. Konovalova A.L., Cheltsov P.A., Stetsenko A.I., et al. Antitumour activity of new platinum complexes. 7-th NCI - EORTC Symposium on new drugs in cancer chemotherapy. -Amsterdam., 1992. - March 17-20. - abstr. 136. - P. 92.

21. LiuL., Martowitz S., GersonS.L. Mismatch repair mutations override alkyltransferase in conferring resistance to temolozolamide but not to l,3~bis(2-chloroethyl)nitrosourea. // Cancer Res. - 1996. - 56. - P. 5375 - 5379.

22. Montgomery J. A. The development of the nitrosoureas: a study in congener synthesis. In «Nitrosoureas carrent status and new development». 1981, Academic press. - Eds. A.W.Prestayko, L.H.Baker, S.T.Crooke, S.K.Carter, P.S.Schein, P. 3-8.

23. Ochs K., Kaina B. Apoptosis induced by DNA damage O6-methylguanine is Bcl-2 and caspase 9/3 regulated and Fus/caspase-8 independent. // Cancer Res. - 2000. - 60. - P. 5815 - 5820.

24. Pegg A.E. Mammalian 06-alkylguanine - DNA alkyltransferase: regulation and importance in response to alkylating carcinogenic and therapeutic agents. // Cancer Res. -1990.-50.-P. 6119-6120.

25. Perevodchikova N.I., Gorbunova V.A., Orel N.F. et al. Aranoza - a new nitrosourea derivative with antitumor action. Phase I-II trials. // Int. J. Clin. Chemother. -1992. -5, №4.-P. 231 -236.

26. Philips W.P., Gerson S. L. Acquired resistance to Of’-benzylguanine, plus chloroethyl-nitrosoureas in human brest cancer. // Cancer Chemother. Pharmacol. -1999. - 44. - P. 319 - 326.

27. Schilsky R. C., Dolan M.E., Bertucci D., et al. Phase I clinical and pharmacological study of Os-benzylguanine followed by carmustine in patients with advanced cancer. // Clin.Cancer Res. - 2000. - 6. - P. 3025 - 3031.

28. Spiro T.P., Gerson S.L., Liu L., et al. 06-benzyIguanine: a clinical trial establishing the biochemical modulatory dose in tumor tissue for alkyltransferase-directed repair. // Cancer Res. - 1999. - 59. - P. 5402 - 5410.

29. Tong W.P., KirkM.X., LudlumD.B. Formation of the crosslink l-[N3-deoxycytidyl]-2-(Nl-deoxyguanosyI)ethane in DNA treated with N,N-bis(2-chloroethyl)-N-nitrosourea. / / Cancer Res. - 1982. - 42. - P. 3102 - 3105.

30. Tsujmura T., Zhang Yang-Pei, Fujio C., et al. O6-methylguanine- DNA methyltransferase activity and sensitivity of Japanese tumor cells strains. // Jpn. J. Cancer Res.-1987.-78.-P. 1207-1215.

31. Yang Jtm, Chen Jian-Min., Zhang Yang-Pei. Transfer and expression of human 06-methylguanine- DNA methyltransferase cDNA confers resistance of mer HeLa MR cells to l-(4-amino-2-methyl-5-pyrimidinyl)methyl-3-(2-chloroethyl)-3-nitrosourea. // Carcinogenesis. - 1995. —16. -P. 2271-2274.