СПОСОБЫ ПОВЫШЕНИЯ УСИЛИВАЮЩЕЙ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЛИПЕПТИДА

1. Способ повышения активности полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, включающий добавление растворимого активирующего катиона двухвалентного металла к композиции, содержащей полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, отличающийся тем, что растворимый активирующий катион двухвалентного металла находится в эффективной концентрации, равной от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ в ходе разложения или преобразования содержащего целлюлозу сырья, и наличие растворимого активирующего катиона двухвалентного металла и полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, повышает уровень разложения или преобразования указанного содержащего целлюлозу сырья композицией целлюлолитического фермента, по сравнению с полипептидом, усиливающим целлюлолитическую активность, но без добавления растворимого активирующего катиона двухвалентного металла.
++
++
++
++
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что растворимый активирующий катион двухвалентного металла выбирают из группы, состоящей из: Mn, Co, Mg, Ca и их комбинации.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, выбирают из группы, состоящей из:
(а) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, содержащего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где Х обозначает любую аминокислоту, X(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и X(4) обозначает любую аминокислоту в 4 соседних положениях и
(b) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, содержащего [ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(3)-A-[HNQ], где х обозначает любую аминокислоту, х(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и х(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях;
где полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, содержащий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], необязательно также содержит
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],
[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV],
где Х обозначает любую аминокислоту, X(1,2) обозначает любую аминокислоту в 1 положении или в 2 соседних положениях, и X(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях, и X(2) обозначает любую аминокислоту в 2 соседних положениях.
4. Способ разложения или преобразования содержащего целлюлозу сырья, включающий: обработку содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством композиции целлюлолитического фермента, содержащей эффективное количество полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, и растворимый активирующий катион двухвалентного металла, причем растворимый активирующий катион двухвалентного металла находится в эффективной концентрации, равной от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ.
++
++
++
+
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что растворимый активирующий катион двухвалентного металла выбирают из группы, состоящей из Mn, Co, Mg, Ca и их комбинации.
6. Способ по п.4, отличающийся тем, что полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, выбирают из группы, состоящей из:
(а) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, содержащего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где Х обозначает любую аминокислоту, X(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и X(4) обозначает любую аминокислоту в 4 соседних положениях; и
(b) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, содержащего [ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(3)-A-[HNQ], где х обозначает любую аминокислоту, х(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и х(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях;
где указанный полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, включающий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], необязательно также включает:
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],
[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV], где Х обозначает любую аминокислоту, X(1,2) обозначает любую аминокислоту в 1 положении или в 2 соседних положениях, и X(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях, и X(2) обозначает любую аминокислоту в 2 соседних положениях.
7. Способ по п.4, включающий также обработку содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством бета-глюкозидазы.
8. Способ по п.4, включающий также обработку содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством одного или нескольких ферментов, выбранных из группы, состоящей из: гемицеллюлазы, эстеразы, протеазы, лакказы, пероксидазы или их смесей.
9. Способ по п.4, включающий внесение добавки растворимого активирующего катиона двухвалентного металла в концентрации, позволяющей поддерживать эффективную концентрацию указанного растворимого активирующего катиона двухвалентного металла на уровне от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ.
10. Способ по п.4, включающий также восстановление деградированного содержащего целлюлозу сырья.
11. Способ получения продукта ферментации, включающий (а) осахаривание содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством композиции целлюлолитического фермента, содержащей: эффективное количество полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, и растворимый активирующий катион двухвалентного металла, причем указанный растворимый активирующий катион двухвалентного металла находится в эффективной концентрации, равной предпочтительно от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ; (b) ферментацию осахаренного содержащего целлюлозу сырья со стадии (a) одним или несколькими ферментирующими организмами с получением продукта ферментации; и (c) восстановление продукта ферментации из ферментационной среды.
++
++
++
++
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что растворимый активирующий катион двухвалентного металла выбирают из группы, состоящей из: Mn, Co, Mg, Ca и их комбинации.
13. Способ по п.11, отличающийся тем, что полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, выбирают из группы, состоящей из:
(a) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, включающего [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], где Х обозначает любую аминокислоту, X(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и X(4) обозначает любую аминокислоту в 4 соседних положениях; и
(b) полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, который включает [ILMV]-P-x(4,5)-G-x-Y-[ILMV]-x-R-x-[EQ]-x(3)-A-[HNQ], где x обозначает любую аминокислоту, x(4,5) обозначает любую аминокислоту в 4 или 5 соседних положениях, и x(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях;
где указанный полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, включающий [ILMV]-P-X(4,5)-G-X-Y-[ILMV]-X-R-X-[EQ]-X(4)-[HNQ] и [FW]-[TF]-K-[AIV], необязательно также включает:
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV],
[EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV] или
H-X(1,2)-G-P-X(3)-[YW]-[AILMV] и [EQ]-X-Y-X(2)-C-X-[EHQN]-[FILV]-X-[ILV], где Х обозначает любую аминокислоту, X(1,2) обозначает любую аминокислоту в 1 положении или в 2 соседних положениях, и X(3) обозначает любую аминокислоту в 3 соседних положениях, и X(2) обозначает любую аминокислоту в 2 соседних положениях.
14. Способ по п.11, включающий также обработку содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством бета-глюкозидазы.
15. Способ по п.11, включающий также обработку содержащего целлюлозу сырья эффективным количеством одного или нескольких ферментов, выбранных из группы, состоящей из: гемицеллюлазы, эстеразы, протеазы, лакказы, пероксидазы или их смеси.
16. Способ по п.11, включающий также внесение добавки растворимого активирующего катиона двухвалентного металла, позволяющий поддерживать эффективную концентрацию растворимого активирующего катиона двухвалентного металла на уровне от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ.
17. Композиция целлюлолитического фермента, содержащая полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, и растворимый активирующий катион двухвалентного металла, причем растворимый активирующий катион двухвалентного металла находится в эффективной концентрации, равной от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ в ходе разложения или преобразования содержащего целлюлозу сырья, и наличие указанного растворимого активирующего катиона двухвалентного металла и полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, повышает уровень разложения или преобразования содержащего целлюлозу сырья композицией целлюлолитического фермента, по сравнению с полипептидом, усиливающим целлюлолитическую активность, но без растворимого активирующего катиона двухвалентного металла.
++
++
++
++
18. Композиция целлюлолитического фермента по п.17, где растворимый активирующий катион двухвалентного металла выбирают из группы, состоящей из Mn, Co, Mg, Ca и их комбинации.
19. Композиция, содержащая полипептид, усиливающий целлюлолитическую активность, и растворимый активирующий катион двухвалентного металла, причем растворимый активирующий катион двухвалентного металла находится в эффективной концентрации, равной от примерно 0,001 мМ до примерно 50 мМ в ходе разложения или преобразования содержащего целлюлозу сырья, и наличие растворимого активирующего катиона двухвалентного металла и полипептида, усиливающего целлюлолитическую активность, повышает уровень разложения или преобразования указанного содержащего целлюлозу сырья благодаря композициям целлюлолитического фермента, по сравнению с полипептидом, усиливающим целлюлолитическую активность, но без растворимого активирующего катиона двухвалентного металла.
++
++
++
++
20. Композиция по п.19, отличающаяся тем, что растворимый активирующий катион двухвалентного металла выбирают из группы, состоящей из Mn, Co, Mg, Ca и их комбинации.