Доклиническое изучение влияния лекарственный: средств на активность цитохрома Р450 и прогнозирование субстратной принадлежности как способ прогнозирования безопасности применения комбинированной терапии

Доклиническое изучение влияния лекарственных средств на активность цитохрома Р450 и прогнозирование субстратной принадлежности как способ прогнозирования безопасности применения комбинированной терапии

Е. В. ФОМИН', И. Х. БАЙЧОРОВ2, Е. В. ШИХ3, Ж. М. СИЗОВА3

1 ФГБУ Научный Центр Экспертизы средств медицинского применения Минздрава России, Москва

2 ГБУЗ Городская поликлиника №2 Департамента здравоохранения г. Москвы

3 ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России, Москва

Preclinical Investigation of Pharmaceuticals Impact Against Cytochrome P450 Activity and Prognosis of Substrate Affinity as Means for Providing Substrate Therapy Safety

E. V. FOMIN, I. H. BAYCHOROV, E. V. SHIH, ZH. M. SIZOVA

Scientific Centre for Examination of Medicinal Product, Moscow Municipal Polyclinic No. 2, Moscow

I. M. Sechenov 1st Moscow State Medical University, Moscow

Антидепрессанты трициклической группы, не влияющие на активность Р450 3А4, являются максимально безопасными при сочетании с лекарственными средствами других групп, применяемых для лечения коморбидных состояний. Одним из наиболее широко применяемых в клинической практике является препарат Азафен. В проведённом электрохимическом исследовании in vitro показано, что пипофезин (азафен) не является субстратом, индуктором и/или ингибитором изоферментов цитохрома Р450 CYP3A4. Компьютерное моделирование, проведённое с использованием программы Gusar, а так же данные литературы говорят о субстратной принадлежности пипофезина к CYP1A2.

Ключевые слова: взаимодействие лекарственных средств, пипофезин, метаболизм, субстраты, индукторы и ингибиторы изоферментов гщтохрома Р450 3А4; Р4501А2, электрохимический метод.

Tricyclic antidepressants, not influencing the P450 3A4 activity, are safe in combination with drugs of other groups used in the treatment of comorbid patients. Azaphen is is one of the agents most widely used in the clinical practice. The in vitro electrochemical analysis showed that pipofezin (azaphen) was not a substrate, inductor, and/or inhibitor of cytochrome P450 CYP3A4 isoenzymes. The Guzar programme computer modelling and the literature data demonstrated the substrate affinity of pipifezin to CYP1A2.

Keywords: drug interactions, pipofezin, metabolism, substrates, inducers and inhibitors of cytochrome isoenzymes P4503A4; P4501A2, electrochemical method.

Введение

Назначение комплексной терапии с учетом данных по метаболизму лекарственных препаратов как перспективный путь повышения безопасности фармакотерапии. При назначении комбинированной терапии у коморбидных пациентов необходимо учитывать пути метаболизма лекарственных препаратов, что позволит заранее спрогнозировать нежелательные взаимодействия и повысить безопасность проводимой комплексной терапии.

Одной из основных современных тенденций в медицине при назначении комплексной фар© Коллектив авторов, 2013

Адрес для корреспонденции: 127051, Москва, Петровский бульвар, д. 8. НЦЭСМП

макотерапии является минимизация побочных эффектов. Это достигается путём персонификации пациента и «его» болезни. Персонализированная медицина — это методология медикаментозного лечения заболеваний на основе знания биологических особенностей человека. Инструментами персонализированной медицины являются генетическое тестирование (фармакогене-тика и фармакотранскриптомика) и определение биомаркёров (фармакопротеомика и фармако-метаболика). Фармакометаболомика — изучение активности ферментов биотрансформации и транспортёров [1].

В табл. 1 приведены основные ферменты ма-таболизма лекарственных препаратов, применяемых для лечения депрессивных состояний, и ле-

Таблица 1. Основной фермент метаболизма лекарственных препаратов, применяемых для лечения депрессивных состояний и лекарственные препараты других групп, изменяющие их активность

Фермент Субстрат Ингибитор Индуктор

СУР1А2 Антидепрессанты: амитриптилин*, кломипрамин*, Ципрофлоксацин Карбамазепин

дулоксетин, флувоксамин, имипрамин*, миртазапин. Флувоксамин Фентоин

Нейролептики: клозапин, галоперидол, оланзапин. Рифампицин

Разные препараты: кофеин, К-варфарин. Курение

СУР2С19 Антидепрессанты: амитриптилин*, циталопрам, Флувоксамин Барбитураты

кломипрамин*, эсциталопрам, имипрамин*. Омепразол Карбамазепин

Разные препараты: диазепам, омепразол, фентоин, Фентоин

пропанолол. Рифампицин

СУР2Б6 Нейролептики: арипипразол, клозапин, галоперидол, Дулоксетин Не известны

оланзапин, перфеназин, рисперидон Флуоксетин

Бета-блокаторы: метопролол, пропанолол. Пароксетин

Разные препараты: атомоксетин, кодеин.

СУР3А4 Антидепрессанты: амитриптилин*, циталопрам, Эритромицин Барбитураты

кломипрамин*, эсцитаопрам, имирпамин*, миртазапин, Кетоконазол Карбамазепин

сертралин, венлафаксин. Фентоин

Нейролептики: арипипразол, клозапин, галоперидол, Рифампицин

кветиапин, рисперидон, зипрасидон

Бензодиазепины: алпразолам, клоназепам, диазепам, миртазолам.

Блокаторы кальциевых каналов: дилтиазем, нифедипин, верапамил

Иммуносупрессоры: циклоспорин.

Разные препараты: амиодарон, карбамазепин,

кларитромицин, эритромицин.

Примечание. * — деметилирование; ** - гидроксилирование.

карственные препараты других групп, изменяющие их активность.

Совершенствование схем психофармакотерапии депрессий с максимально оптимизирующим подбором лекарственных средств приобретает всё большую актуальность. Нежелательные реакции при комбинации психотропных средств с лекарственными препаратами других групп у комор-бидных больных, особенно старших возрастных групп, — а именно такие чаще обращаются к врачам первичного звена, — как правило, возникают чаще и проявляются интенсивнее, чем у более молодых пациентов [2, 3].

Большинство лекарственных препаратов, применяемых для лечения соматических заболеваний, метаболизируются изоферментом СУР3А4. Для исключения возможного взаимодействия на уровне этого изофермента цито-хрома целесообразно выбрать в качестве антидепрессанта у пациентов, принимающих другую лекарственную терапию, лекарственные средства, которые метаболизируются другим изоферментом цитохрома Р-450.

Азафен как один из наиболее безопасных препаратов для лечения депрессивных состояний у коморбидных пациентов. Одним из наиболее широко применяемых антидепрессантов в амбулаторной практике и в стационарах является отечественный препарат Азафен. Азафен (пипофезин) — антидепрессант трициклической группы, обладает отчётливым антисеротонинер-гическим действием; холинолитическая активность практически отсутствует. Азафен относит-

ся к «малым» антидепрессантам и сочетает в себе умеренный тимоаналептический и седатив-ный (транквилизирующий) эффекты. Использование азафена может быть предпочтительно при состояниях, протекающих со снижением настроения в сочетании с астенической и другой неврозоподобной симптоматикой, что делает его интересным для использования в общетерапевтической амбулаторной практике, где депрессии часто носят невротический характер [4].

Нами проанализировано 152 случая применения препарата азафен у больных, страдающих депрессией и принимающих лекарственные препараты по поводу различных заболеваний внутренних органов. Выявлено 540 комбинаций лекарственных средств. Комбинация азафена с лекарственными средствами — субстратами СУР3А4 встречалась наиболее часто — в 326 случаев (60,1%); ингибиторами СУР3А4 — в 34 случаях (6,4%); с индукторами СУР3А4 — в 15 случаях (2,7%); с лекарственными средствами — субстратами СУР2Б6 — в 89 случаях (16,5%); субстратами СУР2С9 — в 56 случаях (10,4%); с субстратами СУР1А2 — в 3 случаях (0,5%); с ингибиторами СУР2Д19 — в 12 случаях (2,2%), ингибиторами СУР2Д6 — в 5 случаях (0,9%) (рис. 1).

В связи с широким применением азафена в составе комплексной терапии коморбидных пациентов, совместно с ФГБУ НИИ Биомедицинской химии им. В. Н. Ореховича было проведено экспериментальное электрохимическое изучение влияния пипофезина на активность системы цитохрома СУР3А4.

Материал и методы

Электрохимические исследования проводили совместно с ФГБУ НИИ Биомедицинской химии им. В. Н. Ореховича (лаборатория биоэлектрохимии, проф. Шумянцева В. В.). Использовали потенциостат/гальваностат PGSTAT12 AUTOLAB («Eco Chemie», Нидерланды), снабжённый программным обеспечением GPES. Все измерения проводили при комнатной температуре. Электрохимические исследования цитохро-ма Р450 3A4 проводили в 0,1 M калий-фосфатном буфере, содержащем 0,05 M NaCl, рН 7,4. В работе использовали трёхконтактные электроды, полученные методом трафаретной печати (ООО НПП «ЭЛКОМ», Россия); с графитовыми рабочим и вспомогательным электродами (графит фирмы Achison), и хлорсеребряным электродом сравнения. Диаметр рабочего электрода 2 мм. Все потенциалы приведены относительно хлорсеребряного Ag/AgCl электрода сравнения.

Цикловольтамперограммы (CV) регистрировали при скорости развёртки от 10 до 100 мВ/с. Параметры, используемые при исследовании квадратно-волновой вольтамперометрии (КВВА, восстановление, аэробные условия): начальный потенциал + 100 мВ, конечный потенциал — 600 мВ, шаг потенциала 5 мВ, амплитуда 20 мВ, частота 10 Гц.

Реагенты. В работе использовали следующие реактивы: дидодецилдиметиламмоний бромид (DDAB), HAuCM х ЗН2О, боргидрид натрия — фирмы Sigma-Aldrich, диклофенак и ит-раконазол («Новартис АГ»), азафен (Макиз-Фарма, Москва).

В электрохимических экспериментах использовали свежеприготовленные растворы 10 мМ диклофенака в дистиллированной воде, и 10 мМ итраконазол в диметилсульфоксиде, 10 мМ азафен в дистиллированной воде.

Коллоидный раствор золота, стабилизированный DDAB в хлороформе, был охарактеризован спектрально: 2max = 520 нм.

Рекомбинантный Р450 3А4 (165 М) был любезно предоставлен С. А. Усановым (Институт биоорганической химии, Минск, Республика Беларусь). Концентрацию цитохрома Р450 3А4 определяли по образованию комплекса восстановленной формы с оксидом углерода, используя коэффициент экстинкции £450 =91 мМ-1 см-1.

Приготовление электродов. На поверхность рабочего графитового электрода наносили 2 мкл 5 мМ коллоидного раствора золота в 0,1 М DDAB в хлороформе, после испарения хлороформа (10 мин) наносили 1 мкл цитохрома Р450 3А4. Электроды оставляли на 12 часов при +4°С во влажной камере, предотвращающей полное высыхание электродов.

Азафен (C16H19N5O) — навеска 3 мг/мл воды — исходный (10 M раствор) ; добавление 1 мкл (в пробе 10 мкМ); добавление 10 мкл (в пробе 100 мкМ).

Для исследования влияния лекарственных препаратов на активность цитохрома Р450 3А4 были проведены эксперименты в системах электрод/цитохром Р450 3А4 [5—7]. Электрохимические подходы перспективны для исследования фермент-субстратных взаимодействий вследствие высокой чувствительности. Особенностью электрохимических сенсоров на основе цитохромов Р450 является использование нано-структурированных электродов для повышения чувствительности анализа.

Для исследования электроаналитических характеристик используют вольтамперные отклики электродов, регистрируемые с помощью цикловольтамперометрии и вольтампе-рометрического анализа (квадратно-волновой и дифференциальной импульсной вольтамперометрии). Субстраты соответствующих форм цитохромов Р450 вызывают существенное повышение каталитического тока при контролируемом напряжении, а ингибиторы не изменяют или снижают максимальные амплитуды токов [8].

Наночастицы золота, стабилизированные синтетическим мембраноподобным веществом бромидом дидодецилдимети-ламмония (DDAB), обеспечивают эффективный электронный транспорт между графитовым электродом и гемом цито-

Рис. 1. Анализ частоты встречаемости комбинаций азафена с другими лекарственными средствами с точки зрения их метаболизма

хромов Р450. Мембрана синтетического липида с коллоидным золотом ООАВ/Аи содержит достаточное количество воды для поддержания структуры гемопротеинов и обеспечивает фиксацию ферментов на графитовом печатном электроде. Ранее было показано [9], что ББАВ/Аи/Р450 2В4, ББАВ/Аи/Р450 1А2, ББАВ/Аи/Р450 51Ь1 электроды имеют стабильные электрохимические параметры, что позволяет использовать такие химически модифицированные электроды в качестве сенсоров при исследовании субстратов и (или) ингибиторов этих форм цитохромов Р450. Цитохром Р450 3А4 является наиболее функционально значимым среди цитохромов Р450, т.к. метаболизирует 225 субстратов, из которых 191 вещество является лекарствами, а из 97 ингибиторов этой формы — 87 соединений являются лекарствами. Цитохром Р450 3А4 участвует в метаболизме 34% применяемых лекарственных препаратов [10—13].

При модификации поверхности печатных графитовых электродов 0,1 М ООАВ/Аи в хлороформе с последующим включением в мембраноподобную матрицу цитохрома Р450 3А4 наблюдается прямой безмедиаторный перенос электронов между электродом и гемом. ВВАВ/Аи/Р450 3А4 электроды электроактивны при нанесении пикомолярных количеств фермента на электрод. По данным цикловольтамперометрии электроактивны 10—15% молекул цитохрома Р450 3А4, что составляет 16—20 пмол/электрод.

Результаты и обсуждение

Для исследования электроаналитических характеристик использовали вольтамперные отклики электродов, регистрируемые с помощью цикловольтамперометрии и вольтаметрического анализа (квадратно-волновой вольтамперомет-рии КВВА). На рисунках 2 и 3 представлены цикловольтамперограммы и квадратно-волновые вольтамперограмы ББАВ/Аи/Р450 3А4 электрода до, и после прибавления азафена (100 мкМ). Как следует из полученных экспериментальных данных, азафен не провоцирует увеличение каталитического тока цитохрома Р450 3А4, что доказывает отсутствие субстратных свойств этого препарата по отношению к цитохрому Р450 3А4

Рис. 2. Циклические вольтамперограммы электродов 00АВ/Аи/Р450 3А4 (-) и ДБи/Р450 3А4 + 100 мкМ азафен.

ЗР1 УСОА1¥А№я вф 1' 1Я1

е, Ууз.Ае/Ада

Рис. 3. Квадратно-волновые вольтамперограммы электродов:

1 — ЭйДВ/Ди; 2 — ЭйДВ/Ди + 10 мкл азафена (в пробе 100 |М; 3 — Э0ДВ/Ди/3Д4 (пик на -347 тУ, высота пика -4,53Х10-7 (-0.45 |Д); 4 — Э0ДВ/Ди/3Д4 + 10 мкл азафена (в пробе 100 |М) пик на -332 тУ, высота пика -3,71Х10-7 (-0.37 рД).

100-

*

о

н

50.

БРе/ОСДВ1 Аш-Р450 2М

100%

I

5РеИИЩ№и»Р450 ЗйД-чга^га ШЭДО

89%

Вариант опыта

Рис. 4. Интенсивность пиков квадратно-волновых вольтамперограмм в аэробных условиях электродов: 0йАВ/Аи/Р450 3А4 (1), 0йАВ/Аи/Р450 3А4+азафен (100 мкМ) (см. табл. 2). Значения амплитуд токов КВВА были скорректированы по базовой линии.

1 — 2 |1 0ЭДВ/Ди/1 |1 3Д4 пик на -347 тУ, высота пика — 4,53Х10-7 (-0.45 |Д); 2 — 2 |1 0ЭДВ/Ди/1 |1 3Д4 + 10 мкл азафена (в пробе 100 |М) пик на — 332 тУ, высота пика -3,71 Х10-7 (-0.37 |Д).

(табл. 2). Азафен не дает восстановительных пиков в исследуемой области потенциалов (рис. 2) при использовании ББАБ/Аи электродов без цитохрома Р450.

Максимальные амплитуды токов КВВА, скорректированные по базовой линии, для ферментативных электродов без азафена и в присутствии азафена приведены на рис. 4.

Подсчитано среднее значение катодного пика в присутствии азафена: 89 ± 7%, (К8Б =7%, п=6). Азафен в концентрации 10—100 мкМ не дает увеличение катодного восстановительного пика ци-тохрома Р450 3А4, что свидетельствует об отсутствии субстратных свойств этого лекарственного препарата.

Было исследовано влияние лекарственного противовоспалительного препарата диклофена-

Таблица 2. Высота катодного пика квадратно-волновых вольтамперограмм для электродов 0йАВ/Аи/Р450 3А4 и для электродов в присутствии 100 мкМ азафена

Система Значение тока

3А4 -0,453 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0, 371 82

3А4 -0,457 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0,437 96

3А4 -0,633 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0,554 87

3А4 -0,491 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0,441 90

3А4 -0,491 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0,449 91

3А4 -0,412 100

3А4+Азафен (исх.10 тМ) в пробе 100 мкМ -0,385 93

Таблица 3. Высота катодного пика квадратно-волновых вольтамперограмм для электродов ййАВ/Аи/Р450 3А4 и для электродов в присутствии 100 мкМ азафена, и азафена и диклофенака

Система Значение тока

3А4 -0,457 100

3А4+Азафен (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,437 96

3А4+ Азафен +Диклофенак (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,531 116

3А4 -0,633 100

3А4+Азафен (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,554 87

3А4+ Азафен +Диклофенак (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,646 102

3А4 -0,491 100

3А4+Азафен (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,441 90

3А4+ Азафен +Диклофенак (исх.10 мМ) в пробе 100 мкМ -0,650 132

120 -

100-

10».

,80-

: ео-

40.

20 -О-

S

ш

а

«

о-

I

(Л

^ I

г з 4

Вариант опыта

100- 100%

с? £ 1 50-О г п о щ % Z 0 S ? 1 I 1 1 i §

В Si

1 1 2 3

Вариант опыта

Рис. 5. Интенсивность пиков квадратно-волновых вольтамперограмм в аэробных условиях электродов: DDAB/Au/P450 3А4 (1), DDAB/Au/P450 3А4 + азафен (100 мкМ) (2, 4), DDAB/Au/P450 3А4 + аза-фен (100 мкМ), затем 100 мкМ диклофенак (3, 5) (см. табл. 3).

Значения амплитуд токов КВВА были скорректированы по базовой линии. 2 |_il DDAB/Au/1 |_il 3A4 + 10 |_il азафена исх. 10 мкМ (в пробе 100 |М) +10 |l DF исх. 10 мкМ (в пробе 100 мкМ).

ка на цитохром Р40 3А4 в присутствии азафена (табл. 3 и рис. 5). Азафен не ингибирует цитохром Р450 3А4, так как диклофенак в системе цитохром Р450 3А4/азафен четко увеличивает каталитический ток цитохрома Р450 3А4, т. е. проявляет субстратные свойства.

Противогрибковый препарат итраконазол проявляет ингибирующие свойства по отношению к цитохрому Р450 3А4 и в присутствии азафена, т. е. азафен не влияет на ингибирующую активность итраконазола (рис. 6).

Таким образом, в проведенном нами электрохимическом исследовании in vitro показано, что пипофезин (азафен) не является субстратом, индуктором и/или ингибитором изоферментов ци-тохрома Р450 CYP3A4.

Прогнозирование субстратной принадлежности пипофезина по результатам компьютерного моделирования. Компьютерное моделирование прове-

Рис. 6. Интенсивность пиков квадратно-волновых вольтамперограмм в аэробных условиях электродов: ййАВ/Аи/Р450 3А4 (1), ййАВ/Аи/Р450 3А4 + итраконазол (10 мкМ) (2), ййАВ/Аи/Р450 3А4 + итраконазол, затем азафен (100 мкМ), (3).

дено совместно с ФГБУ НИИ Биомедицинской химии им. В. Н. Ореховича (лаборатория структурно-функционального конструирования лекарств, проф. Поройков В. В.).

Структурная формула Азафена обнаружена в системе СИешИИш [14].

Структурная формула преобразована — удалено две молекулы соляной кислоты (рис. 7).

В дальнейшем для поиска информации в базах данных и для осуществления прогноза использовалась именно эта структурная формула. Нами был осуществлён поиск в имеющихся ис-

Рис. 7. Преобразованная структурная формула аза-фена

точниках информации. Были рассмотрены базы биотрансформаций и базы, описывающие взаимодействие веществ с цитохромами P450.

В базе данных, описывающей взаимодействие веществ с цитохромами P450, не было обнаружено записей, относящихся к молекуле Азафена.

С использованием программы GUSAR 2010.1 и созданных ранее компьютерных моделей для предсказания взаимодействия молекул с изофор-мами CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 и CYP3A4 был осуществлён компьютерный прогноз принадлежности Азафена к субстратам или ингибиторам указанных выше изоформ. В результате прогноза предсказана принадлежность Азафена к субстратам CYP1A2.

ЛИТЕРАТУРА

1.

2.

3.

4.

5.

6.

Заключение

Электрохимическое исследование in vitro продемонстрировало, что пипофезин не является субстратом, индуктором и/или ингибитором изо-фермента 3A4 цитохрома Р450. Компьютерное моделирование, проведённое с использованием программы Gusar, прогнозирует субстратную принадлежность пипофезина к CYP1A2. Назначение Азафена (пипофезина) в качестве антидепрессанта у пациентов с коморбидными заболеваниями при лечении которых используются лекарственные средства, метаболизирующиеся другими изоферментами цитохрома, не является прогностически опасным с точки зрения взаимодействия на уровне метаболизма.

Кукес В. Г., Фисенко В. П., Стародубцев А. К., Раменская Г. В., Сычев Д. А., Андреев Д. А., Рейхарт Д. В. Метаболизм лекарственных препаратов / Под ред. В. Г. Кукеса, В. П. Фисенко М.: 2004. Смулевич А. Б. Депрессии в общей медицине. Руководство для врачей. М.: Медицинское информационное агентство, 2001. Сыркин А. Л., Медведев В. Э., Троснова А. П. и др. Терапия депрессивных расстройств в кардиологической практике. Психич расстр в общ мед 2007; 2: 28-31.

Зотов П. Б., Уманский М. С. Депрессия в общемедицинской практике (клиника, диагностика, лекарственная терапия). Методическое пособие для врачей. М.: 2006; 35.

Шумянцева В. В., Супрун Е. В., Булко Т. В., Добрынина О. В., Арча-ков А. ЖСенсорные системы медицинского назначения на основе гемопротеинов и нанокомпозитных материалов. Биомед хим 2010; 56: 55-71.

Makhova A. A., Shumyantseva V. V., Shich E. V., Bulko T. V., Kukes V. G., Sizova O. S., Ramenskaya G. V., Usanov S. A., Archakov A. I. Electroanalysis of су1оеЬгоше P450 3A4 са1а1уЦе properties with nanos-tructured electrodes: the influence of vitamin B group on diclofenac metabolism, DOI 10.1007/s12668-011-0007-4. BioNanoScience 2011; 1: 46-52.

7. Шумянцева В. В., Ших Е. В., Махова А. А., Булко Т. В., Кукес В. Г., Сизова О. С, Раменская Г. В., Усанов С.А., Арчаков А. И. Влияние витаминов группы В на монооксигеназную активность цитохрома Р450 3А4: фармакокинетические исследования и электроанализ каталитических свойств. Биомед хим 2011; 57: 3: 343—354.

8. Шумянцева В. В., Булко Т. В., Кузнецова Г. П., Саменкова Н. Ф., Арчаков А. И. Анализ вольтамперных характеристик электродов с иммобилизованными цитохромами р450 для поиска субстратов и ингибиторов. Биохимия 2009; 74: 542—549.

9. Shumyantseva V. V., Bulko T. V., Archakov A. I. J Inorg Biochem 2005; 99: 1051—1063.

10. Archakov A. I., Bachmanova G. I. Cytochrome P450 and Active Oxygen, Taylor and Francis, London. 1990.

11. R. Ortiz de Montellano. (1995) Cytochrome P450. Plenum press, New York, Second Edition.

12. Lewis D. F. V. (2001) Guide to Cytochrome P450. Structure and function. London and New York.

13. http://cpd.ibmh.msk.su (База данных по цитохрому Р450).

14. http://chem.sis.nlm.nih.gov/chemidplus/): NAME: Azaphen, RN: 24853-80-3.