СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ УВЕИТА ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ И БОЛЕЗНИ БЕХТЕРЕВА
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR UVEITIS IN RHEUMATOID ARTHRITIS AND MARIE-STRUMPELL DISEASE

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано в медицинской практике для диагностики увеита ревматической этиологии.
Известны различные формы увеитов при ревматических заболеваниях (синдроме Рейтера, анкилозирующем спондилоартрите - болезни Бехтерева, ревматоидном артрите и других). Проведение диагностических мероприятий этих увеитов носит достаточно сложный характер. Постановка диагноза занимает длительный период и включает такие мероприятия, как сбор жалоб, анамнеза, проведение различных лабораторных исследований и консультацию ревматолога, в то время как больному необходима своевременная помощь. К тому же нередко ревматические заболевания впервые (иногда за несколько лет) проявляются поражениями глаз, однако объективные признаки для постановки диагноза ревматологом отсутствуют.
Существует способ диагностики увеита ревматоидной этиологии путем определения аутоантител к нативной ДНК (нДНК) и к IgG (РФ) (Катаргина Л.А. и соавторы «Клинические вариации и иммунологические особенности ревматоидных увеитов у детей разного возраста», Вестник офтальмологии, 2001, №1, с.30-33). Способ заключается в том, что исследуют состояние межорганного иммунитета у детей с ревматоидным увеитом, включающий определение РФ, антинуклеарных антител, в том числе антител к нативной и денатурированной ДНК, в сыворотке крови и слезной жидкости. Недостатком данного метода следует считать низкую частоту диагностики ревматических увеитов: частота обнаружения аутоантител к нДНК составила 21,2%, а к IgG - 9%. А выявленные в 60% случаев общие антинуклеарные аутоантитела наблюдаются при многих ревматических заболеваниях, что не позволяет диагностировать нозологические формы ревматических увеитов.
При постановке диагноза ревматического увеита (Азнабаев М.Т., Мамбеткулова Г.К., 2001; Дроздова Е.А., 2006) диагностическое значение имеет повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). В то же время авторами не связывается величина их уровня с тем или иным видом ревматического увеита.
Трудности в диагностике увеитов при ревматических заболеваниях связаны с возможностью выявления не только различных видов аутоантител, но и с обнаружением одних и тех же аутоантител при различных заболеваниях (Потехин О.Е., Малышев B.C., 2005).
Прототипом изобретения является способ диагностики ревматических увеитов, заключающийся в том, что в острый период болезни в сыворотке крови больного увеитом определяют аутоантитела к IgG и к нативной ДНК, а также уровень циркулирующих иммунных комплексов. При обнаружении аутоантител к IgG на фоне отсутствия аутоантител к нативной ДНК или при обнаружении аутоантител к IgG на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 190 до 335 усл.ед. диагностируют ревматоидный увеит. При выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне отсутствия аутоантител к IgG или выявлении аутоантител к нативной ДНК на фоне уровня циркулирующих иммунных комплексов от 65 до 189 усл.ед. - увеит при болезни Бехтерева (патент RU 2314534, 2008 г.).
Задачей изобретения является расширение арсенала средств диагностики ревматических увеитов.
Техническим результатом изобретения является повышение частоты диагностики ревматических увеитов.
2
2
2
Технический результат достигается тем, что в способе диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева, включающем определение иммунологического показателя в сыворотке крови в острый период заболевания, согласно изобретению в качестве иммунологического показателя определяют уровень простагландина Е и дополнительно его определяют в слезной жидкости, после чего определяют показатель соотношения уровней как отношение уровня простагландина E в сыворотке крови к уровню простагландина Е в слезной жидкости и при его значении в пределах 0,54-2,95 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а в пределах 8,3-26,0 - увеит при болезни Бехтерева.
В группе контроля (практически здоровых лиц) значение изучаемого показателя для сыворотки крови, по нашим данным, составляет 340,0±47,4 пг/мл, для слезной жидкости - 175,8±21,7 пг/мл.
2
2
Преимуществом предлагаемого способа диагностики ревматических увеитов является высокая эффективность предлагаемого метода: у 3 из 4 больных (75%) по показателю соотношения уровня ПГЕ в интервале 0,54-2,95 диагностируют увеит ревматоидной этиологии, а у 4 из 4 больных (100%) при показателе соотношения уровня ПГЕ 8,3-26,0 пг/мл - увеит при болезни Бехтерева, то есть в целом диагноз был правилен в 87,5% случаев.
2
2
2
2
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. В острый период болезни взятие крови у всех пациентов осуществляют натощак из локтевой вены в строго стерильных условиях, слезную жидкость пациентов собирают с помощью микрокапилляра из конъюнктивальной полости, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания простагландина Е в сыворотке крови и слезной жидкости больных увеитом проводят с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «PGE» (фирма R & D Systems, США). В лунки микропланшета вносят по 100 мкл стандартов ПГЕ в разведении (концентрация 39-2500 пг/мл). В остальные лунки микропланшета вносят по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки крови и слезной жидкости, затем в эти лунки добавляют по 50 мкл первых антител к ПГЕ и по 50 мкл конъюгата. Планшет инкубируют 2 часа при комнатной температуре на шейкере (500±50 об/мин), затем жидкость из лунок удаляют, и планшет 5 раз промывают буфером. Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.
В каждую лунку вносят по 200 мкл раствора субстрата. Планшет инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносят по 50 мкл стоп-раствора.
2
Учет концентрации осуществляют с помощью анализатора «Multisсаn» при длине волны 450 нм через 30 минут после внесения стоп-раствора. Количественное содержание ПГЕ выражают в пг/мл. Общее время постановки исследования 3 часа.
2
Нами проведено исследование сыворотки крови и слезной жидкости в разгар заболевания: определены уровни ПГЕ у 8 больных увеитом ревматической этиологии, у 3 из которых в анамнезе имелся ревматоидный артрит, у 3 - болезнь Бехтерева. У 2 пациентов был увеит, предположительно ревматической этиологии.
2
2
В острый период болезни взятие крови у всех пациентов осуществляли натощак из локтевой вены в строго стерильных условиях, слезную жидкость пациентов собирали с помощью микрокапилляра из конъюнктивальной полости, не касаясь роговой и слизистой оболочек глазного яблока. Определение содержания простагландина Е в слезной жидкости больных увеитом проводили с помощью твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «PGE» (фирма R&D Systems, США).
2
2
В лунки микропланшета вносили по 100 мкл стандартов ПГЕ в разведении (концентрация 39-2500 пг/мл). В остальные лунки микропланшета вносили по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки крови и слезной жидкости, затем в эти лунки добавляли по 50 мкл первых антител к ПГЕ и по 50 мкл конъюгата. Планшет инкубировали 2 часа при комнатной температуре на шейкере (500±50 об/мин), затем жидкость из лунок удаляли, и планшет 5 раз промывали буфером. Проводили полную аспирацию оставшейся жидкости.
В каждую лунку вносили по 200 мкл раствора субстрата. Планшет инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносили по 50 мкл стоп-раствора.
2
Учет концентрации осуществляли с помощью анализатора «Multisсаn» при длине волны 450 нм через 30 минут после того, как внесли стоп-раствор. Количественное содержание ПГЕ выражали в пг/мл. Общее время постановки исследования 3-3,5 часа.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.
2
2
Пример 1. Больная Д., 47 лет (и/б 875, 2008 г.), поступила в клинику с диагнозом рецидив вялотекущего увеита, предположительно ревматоидной этиологии. Из анамнеза: периодические боли в суставах. В сыворотке крови, взятой на 10-й день рецидива заболевания, обнаружен уровень ПГЕ, равный 2676,200 пг/мл, а в слезной жидкости 911,810 пг/мл. Показатель соотношения составил 2,935. Было высказано предположение о ревматоидной этиологии этого заболевания. Позже ревматологом был выставлен диагноз - ревматоидный артрит. Следовательно, полученные данные о содержании ПГЕ подтвердили ревматоидную этиологию увеита.
2
Пример 2. Больная И., 69 лет (и/б 501, 2008 г.), находилась на стационарном лечении в Уфимском НИИ глазных болезней по поводу увеита ревматоидной этиологии правого глаза. Из анамнеза: ревматоидный артрит. При проведении исследования сыворотки крови на 8-й день заболевания выявлен уровень ПГЕ 3028,500 пг/мл, а в слезной жидкости 1084,800 пг/мл. Показатель соотношения составил 2,792. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.
2
Пример 3. Больной Г., 44 года (и/б 995, 2008 г.), поступил на стационарное лечение в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней с диагнозом увеит левого глаза при болезни Бехтерева. Из анамнеза: болезнь Бехтерева в течение 3-х лет. Согласно предложенному способу на 5-й день болезни проведено исследование сыворотки крови и слезной жидкости. Уровень ПГЕ в сыворотке крови составил 1327,700 пг/мл, а в слезной жидкости - 158,520 пг/мл. Показатель соотношения в этом случае составил 8,375. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.
2
2
Пример 4. Больной Ф., 47 года (и/б 5994, 2007 г.), поступил в отделение по изучению инфекционных заболеваний глаз Уфимского НИИ глазных болезней с диагнозом: острый увеит правого глаза при болезни Бехтерева. Из анамнеза: болезнь Бехтерева в течение 10 лет. Проведено определение содержания ПГЕ в сыворотке крови и слезной жидкости по предлагаемому способу. В разгар заболевания на 14-й день болезни концентрация ПГЕ в сыворотке крови составила 1339,360 пг/мл, а в слезной жидкости 161,320 пг/мл. Показатель соотношения в этом случае составил 8,302. Таким образом, предложенный нами способ диагностики ревматического увеита подтвердил правильность поставленного диагноза.
Таким образом, предлагаемый нами способ делает достоверной диагностику ревматических увеитов, а именно при ревматоидном увеите у 3 больных из 4, а в случае увеита при болезни Бехтерева - у 4 из 4, то есть в целом диагноз правилен у 7 из 8 пациентов (87,5%). Использование данного способа диагностики ревматических увеитов повышает ее частоту и устанавливает нозологическую форму увеита при ревматоидном артрите и при болезни Бехтерева.