Итоги и перспективы биотехнологических исследований в Никитском ботаническом саду - национальном научном центре

ИТОГИ И ПЕРСПЕКТИВЫ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В НИКИТСКОМ БОТАНИЧЕСКОМ САДУ - НАЦИОНАЛЬНОМ НАУЧНОМ ЦЕНТРЕ

О.В. МИТРОФАНОВА, доктор биологических наук Никитский ботанический сад - Национальный научный центр

Начало биотехнологических исследований в Никитском ботаническом саду можно отнести к середине 50-х годов прошлого столетия, и связаны они с именем всемирно известного ученого доктора биологических наук Антонины Иосифовны Здруйковской-Рихтер. Итогом ее многолетних работ по эмбриокультуре плодовых растений стала монография, изданная в 2003 году [3].

В 70-х годах в связи с бурным развитием цветоводства открытого и закрытого грунта в Никитском ботаническом саду широко велись селекционные исследования и интродукция, осуществлялся массовый завоз посадочного материала из различных регионов СССР и из-за рубежа. Последнее способствовало возникновению серьезной проблемы распространения вирусных болезней цветочных культур, что вызвало необходимость их диагностики и разработки комплексных мероприятий по борьбе с вирусной инфекцией. Поэтому в 1976 году в Никитском ботаническом саду была создана группа вирусологии и культуры органов и тканей, работу которой возглавила Ольга Владимировна Митрофанова. В этот период научными сотрудниками группы впервые были разработаны методы диагностики вирусных болезней, идентификации вирусов и оздоровления растений гвоздики ремонтантной, хризантемы, антуриума Андрэ, бегонии Элатиор, тюльпанов, лилии, гиацинта, нарциссов, гиппеаструма, гладиолусов [21, 27, 37, 38]. На основе полученных результатов исследований были опубликованы методические рекомендации по производству безвирусного посадочного материала цветочно-декоративных культур [22, 23, 34, 35]. Эти разработки были отмечены серебряными и бронзовыми медалями ВДНХ СССР. В 80-е годы в рамках международной программы сотрудничества были начаты совместные исследования с немецкими и болгарскими учеными по проблемам диагностики вирусных болезней промышленных цветочных культур и мерам борьбы [47, 56]. В эти же годы в Степном отделении Сада сотрудниками группы проводилось изучение видового состава вирусов косточковых плодовых культур и разрабатывались методы получения безвирусного посадочного материала. Значительный вклад в разработку методов оздоровления косточковых плодовых культур от вирусов внес научный сотрудник Тесленко А.В. [39, 46].

Как самостоятельное научное направление биотехнология растений в Никитском ботаническом саду сформировалось в 80-е годы. Лишь благодаря комплексному использованию различных знаний в области вирусологии, микробиологии, генетики, биохимии, физиологии и эмбриологии растений стало возможным активное развитие и расширение сферы применения биотехнологических исследований.

В 1986 году был организован отдел биотехнологии растений, сотрудники которого принимали участие в Международной комплексной программе научно-технического сотрудничества по заданию «Разработать технологии для оздоровления и клонального микроразмножения цветочных культур», а также государственных программах по двум темам: «Изучить способы получения, условия культивирования растений-регенерантов плодовых, субтропических, орехоплодных и декоративных культур» и «Осуществить клональное микроразмножение и оздоровление цветочно-декоративных растений с использованием культуры клеток и тканей для улучшения качества посадочного материала и повышения урожайности растений». Проводимые в отделе исследования имели теоретическое и практическое значение.

В целях размножения, оздоровления, оптимизации и ускорения селекционного процесса для создания экологически устойчивых и иммунных сортов и форм интенсивного типа изучалось действие гамма облучения на ткани и органы розы и персика в культуре in vitro и выявлялись оптимальные условия культивирования эксплантов и получения растений

in vitro [25, 40, 55]. Наряду с этим научными сотрудниками Кравцовой Т.А. и Евмененко А.Ф. разрабатывались методы ранней диагностики фенотипической изменчивости растений-регенерантов различных сортов розы садовой, способы получения фузариозоустойчивых сортов гвоздики и устойчивых к мучнистой росе сортов персика в условиях in vitro и in vivo [2].Для ускоренного размножения генетически однородного посадочного материала эфиромасличных и лекарственных растений (полыни лимонной, монарды дудчатой, солодки голой, мирта обыкновенного, ладанника крымского) научными сотрудниками Пивень И.П., Ивановой Н.Н. и Лагутовой Е.И., заведующей отделом Митрофановой О.В. выявлены особенности регенерации растений и представлены методы высокоэффективного получения растительного сырья в условиях in vitro [9, 28, 31, 42]. Исследования каллусной биомассы полыни метельчатой и лимонной (Artemisia balchanorum Krasch. и Artemisia scoparia W.K.) показали зависимость содержания эфирного масла от продолжительности культивирования каллуса [28]. Изучены условия накопления каллусной биомассы растений розмарина (Rosmarinus officinalis L.), ладанника (Cistus tauricus Prese.), мирта (Myrtus communis L.). Кроме того, сотрудниками отдела выполнены исследования по изучению потенций различных органов и тканей тиса ягодного (Taxus baccata L.) к каллусообразованию в условиях in vitro. Участие в этой работе научного сотрудника отдела биохимии растений Фадеева Ю.М. позволило выделить три типа эксплантов, содержащих оптимальное количество таксола. Разработаны биотехнологические приемы получения и накопления каллусной и ризогенной массы марены красильной (Rubia tinctoria) из молодых корней растения-донора. Ивановой Н.Н. и научным сотрудником отдела биохимии растений Рихтером А.А. проведено изучение содержания антоцианов у растений периллы нанкинской (Perilla nankinensis Deche), полученных в условиях in vitro и адаптированных in situ, и выделено 19 новых форм с высоким содержанием антоцианов.

Итогом многолетних исследований Митрофановой О.В. стала разработанная ею модель системы освобождения от вирусов цветочно-декоративных культур и монография, опубликованная в 1992 году. Эти результаты легли в основу докторской диссертации по теме «Вирусные болезни промышленных цветочных культур и биотехнологические приемы их оздоровления» [24].

В 90-х годах в рамках проекта Государственного комитета по науке и технологии СССР «Новые растения» были выполнены исследования по созданию ценных форм субтропических плодовых культур (киви, зизифуса, ананаса) с помощью биотехнологических методов. Митрофановой И.В. изучены основные пути регенерации растений различных видов, сортов киви и зизифуса. При этом показано влияние фитогормонов на процессы индукции развития эксплантов. Впервые разработан способ соматического эмбриогенеза зизифуса из семядолей зиготических зародышей трех сортов и получены полноценные растения [18, 20]. По результатам проведенных исследований Митрофановой И.В. в 1994 году защищена кандидатская диссертация на тему «Биологические особенности индуцированного морфогенеза и регенерации растений зизифуса (Zizyphus jujuba Mill.) в условиях in vitro» по специальности биотехнология [12]. В 1996 году успешно закончили аспирантуру и защитили кандидатские диссертации 2 аспиранта из Индии. Виджешваром Паулем выполнены исследования по теме «Биотехнологические и физиологические основы клонального микроразмножения Actinidia deliciosa (Chev.) Liang, Ferguson» [1]. Пандеем Д.К. на основе сравнительного изучения в условиях in vitro регенерационной способности двух видов зизифуса защищена диссертация на тему «Индуцированный морфогенез и микроразмножение in vitro зизифуса индийского (Zizyphus mauritiana Lam.) и китайского (Zizyphus jujube Mill.)» [41]. Наряду с этим, в рамках выполненного проекта Ивановой Н.Н. и сотрудниками отдела разработаны способы получения растений ананаса различных экотипов [6, 7].

Начиная с 1994 года, Митрофановой О.В. и Лесниковой Н.П. совместно со специалистами отдела плодовых культур выполнены исследования в рамках программы ГКНТП Украины по заданию «Разработка технологий создания разнообразного генетического материала персика, абрикоса, алычи на основе сомаклональных вариаций,

эмбриокультуры, индуцированной изменчивости in vitro на безвирусной основе». Были определены биотические и абиотические факторы культивирования зиготических зародышей (зрелых и незрелых) персика, абрикоса, алычи и с помощью сочетания методов традиционной селекции и биотехнологии получены новые формы растений [10, 33]. В этот же период усовершенствована модель системы освобождения растений персика, абрикоса и алычи от вирусов и на ее основе разработаны биотехнологии получения и клонального микроразмножения безвирусного посадочного материала [29, 30, 32, 36, 54].

Созданная в Степном отделении группа биотехнологии как подразделение отдела выполняла исследования по изучению состава вирусов косточковых плодовых культур, оздоровлению и клональному микроразмножению вишни и сливы [46]. Итогом многолетней работы стала защищенная Лукичевой Л.А. в 2004 году кандидатская диссертация на тему «Биотехнологические приемы оздоровления и клонального микроразмножения вишни (Cerasus vulgaris Mill.) и сливы (Prunus domestica L.) в Крыму» [11].

Наряду с этим, в 1997-2000 гг. Митрофановой О.В., Митрофановой И.В., Ивановой Н.Н. и аспирантом Зильберварг И.Р. совместно с заведующим отделом новых технических и лекарственных растений д.б.н. Работяговым В.Д., а также заведующим отделом физико-химической биологии клетки Института клеточной биологии и генетической инженерии д.б.н. Блюмом Я.Б. и научным сотрудником Емец А.И. были выполнены оригинальные исследования в рамках проекта Министерства образования и науки Украины «Синтезировать полиплоиды лекарственных растений Hyssopus officinalis L. и Nepeta cataría var. citriodora Beck. с использованием антимикротрубочковых соединений в условиях in vitro». В результате этих исследований были разработаны способы полиплоидизации in vitro котовника и иссопа, получены новые полиплоидные формы и проведена их апробация в условиях in situ [5, 53]. По материалам исследований аспирантом Зильберварг И.Р. была подготовлена и успешно защищена кандидатская диссертация на тему «Биотехнологические основы получения полиплоидных растений котовника (Nepeta sp.) с использованием антимикротрубочковых соединений для целей селекции» [4]. Митрофановой И.В., Ивановой Н.Н., Митрофановой О.В. получен патент Украины «Способ регенерации микропобегов Hyssopus officinalis L. в условиях in vitro» [45].

За время обучения в аспирантуре отдела, Попковой Л.Л. разработан метод асимбиотического микроразмножения в условиях in vitro редких и исчезающих видов орхидей флоры Крыма для восстановления их численности и репатриации в естественные места обитания. Результаты, полученные ею, легли в основу защищенной в 1999 году кандидатской диссертации на тему «Редкие виды орхидных флоры Крыма, их микроразмножение и поддержание биологического разнообразия» [43].

Следует подчеркнуть, что сотрудники отдела принимали активное участие в организации и проведении международных симпозиумов. Благодаря широкой известности работ Никитского ботанического сада по вирусам растений в 1994 году отделом совместно с кафедрами вирусологии Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова и Киевского государственного университета им. Т.Г. Шевченко, была проведена в НБС первая Международная конференция «Фундаментальные и прикладные проблемы фитовирусологии». В 1997 и 2002 году отделом совместно с Институтом клеточной биологии и генетической инженерии НАНУ были организованы и успешно проведены международные конференции «Пути решения проблем и перспективы развития биотехнологии в декоративном садоводстве и плодоводстве» и «Биотехнологические приемы использования и сохранения растительных ресурсов» с участием ученых из 15 стран мира.

Результаты многолетних исследований отдела биотехнологии были представлены в 2002 году на международной выставке Biotech-2002 в Ганновере (Германия) и отраслевых выставках, проводимых в Украине.

Для расширения сортимента цветочно-декоративных культур закрытого грунта научными сотрудниками отдела исследованы особенности органогенеза и соматического эмбриогенеза в условиях in vitro, показаны пути регенерации и получены безвирусные

растения орхидей, гуцмании, бильбергии, ахмеи, маранты, корделины, юкки, различных видов папоротника, алоказии, герберы, каладиума и цветной каллы [8, 14, 19, 26, 48, 49].

Особое теоретическое значение имеют работы Митрофановой И.В. по исследованию вопросов соматического эмбриогенеза in vitro декоративных растений, разработке реципиентных систем in vitro субтропических плодовых культур и эфиромасличных растений, которые легли в основу докторской диссертации [13, 16, 44, 50-52]. Ею предложены возможные пути сохранения растительной плазмы в виде медленнорастущих коллекций с помощью разработки способа минимизации роста растений [15, 17]. Тема по созданию генобанка in vitro имела дополнительное финансирование в рамках государственной научно-технической программы «Биотехнология растений и биобезопасность» в 2003-2006 гг., в которой участвовали научные сотрудники: Митрофанова И.В., Иванова Н.Н., Мовчан О.П.

Неоценимую помощь в разные годы работы отдела оказывали лаборанты: Костенко Т.Н., Бурдейный А.А., Кормилицина Н.А., Семенова А.В., Бойко Е.Е., Винокурова Е.Н., Семина Т.В., Шенфиш Н.Р., Никифорова Т.М., Челомбит С.В.

Научные сотрудники отдела являются членами Международной ассоциации по культуре тканей и биотехнологии IAPTC&Biotechnology, Европейской ассоциации по исследованиям в области селекции растений EUCARPIA, Европейской федерации обществ по физиологии растений FESPP, Украинского общества клеточных биологов, ежегодно цитируются во всемирной энциклопедии «Кто есть кто» в 2-х томах «Кто есть кто в мире» и «Кто есть кто в науке и инженерии».

Полученные результаты биотехнологических исследований широко внедрены и внедряются в виде способов, методов и систем in vitro в научных, производственных и учебных процессах России и Украины.

С 2003 года биотехнологические исследования проводятся в объединенном отделе биотехнологии и биохимии растений НБС-ННЦ, возглавляемом академиком УААН Ежовым В.Н., и направлены на создание генобанка in vitro ценных декоративных, субтропических, косточковых плодовых культур и лекарственных растений на безвирусной основе.

Перспективными и конкурентоспособными в области биотехнологии на сегодняшний день являются такие направления:

1. Изучение биологии культивируемых клеток, тканей, особенностей роста и дифференцировки in vitro субтропических и косточковых плодовых культур, декоративных и лекарственных растений.

2. Соматический эмбриогенез субтропических плодовых и декоративных растений в культуре in vitro.

3. Восстановление численности редких и исчезающих видов растений дикой флоры с помощью разработки систем регенерации растений в условиях in vitro.

4. Ускорение интродукционного процесса путем размножения в условиях in vitro новых видов, сортов, представленных в единичных экземплярах и трудноразмножаемых традиционными методами.

5. Селекция in vitro - разработка реципиентных систем растений in vitro, создание селекционных форм и получение генетического разнообразия с использованием биотехнологических методов (эмбриокультуры, гаплоидии, индуцированного мутагенеза и генетической инженерии).

6. Создание системы безвирусного растениеводства на основе:

а) разработки новых высокоэффективных технологий оздоровления и современных экспресс-методов массовой диагностики вирусов;

б) получение устойчивых к вирусным инфекциям форм субтропических и косточковых плодовых культур, цветочно-декоративных и лекарственных растений методами биотехнологии и генной инженерии.

Список литературы

1. Виджешвар П. Биотехнологические и физиологические основы клонального микроразмножения Actinidia deliciosa (Chev.) Liang, Ferguson: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.23. - Ялта. - 1996. - 25 с.

2. Евмененко А.Ф., Исиков В.П., Митрофанова О.В. Профилактика увядания гвоздики ремонтантной // Бюл. Никит. ботан. сада. - 1988. - Вып. 66. - С. 67-71.

3. Здруйковская-Рихтер А.И. Эмбриокультура изолированных зародышей, генеративных структур и получение новых форм растений. - Симферополь: Издательство «Крым-Фарм-Трейдинг», 2003. - 368 с.

4. Зшьберварг 1.Р. Бiотехнологiчнi основи одержання полшлощних рослин м'яти котячо1 (Nepeta sp.) iз застосуванням антимжротрубочкових сполук для цiлей селекци: Автореф. дис. канд. бiол. наук: 03.00.20 - Ялта. - 2002. - 20 с.

5. Зильберварг И.Р., Митрофанова И.В., Емец А.И., Митрофанова О.В., Работягов

B.Д., Блюм Я.Б. Использование оризалина и амипрофосметила для эффективной полиплоидизации котовника (Nepeta sp.) // Доповвд Нац. академп наук. - 2001. - № 3. -

C.169-174.

6. Иванова Н.Н. Клональное микроразмножение некоторых лиственных декоративных растений // Биотехнологические исследования садовых и других ценных многолетних культур. Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1997. - Т. 119. - С. 153-168.

7. Иванова Н.Н., Митрофанова И.В., Митрофанова О.В. Особенности клонального размножения Ananas comosus Merr. // Проблемы дендрологии, садоводства и цветоводства: Междунар. конф. молодых ученых, 24-26 октября 1994, Ялта. Материалы. - Ялта. - 1994. -С. 67-71.

8. Карпов П.А. Биологические особенности Yucca torreyi Shafer.: размножение растений и получение стероидных гликозидов in situ и in vitro: Автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.20 - Ялта. - 2000. - 19 с.

9. Лагутова Е.И., Пивень И.П. О возможности получения генетического разнообразия полыни лимонной в культуре in vitro // Основные направления научных исследований по интенсификации эфиромасличного производства: V Всесоюз. симпозиум, 17-19 сентября, 1990. Тез. докл. - Симферополь. - 1990. - С. 29-30.

10. Лесникова Н.П., Смыков А.В., Горина В.М. Культура зародышей и получение гибридных форм персика, абрикоса, алычи // Биотехнологические исследования садовых и других ценных многолетних культур. Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1997. - Т. 119. -С. 46-63.

11. Луючова Л.О. Бютехнолопчш прийоми оздоровлення i клонального мшророзмноження вишш (Cerasus vulgaris Mill.) i сливи (Prunus domestica L.) у Криму: Автореф. дис. канд. бюл. наук: 03.00.20 - Ялта. - 2004. - 20 с.

12. Митрофанова И.В. Биологические особенности индуцированного морфогенеза и регенерации растений зизифуса (Zizyphus jujuba Mill.) в условиях in vitro: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.20 - Ялта. - 1994. - 23 с.

13. Митрофанова И.В. Прямая регенерация микропобегов из листовых дисков киви (Actinidia deliciosa (Chev.) Liang, Ferguson) в условиях in vitro // 1нтродукщя рослин. - 2000. - № 1. - С. 157-158.

14. Митрофанова И.В. Особенности микроразмножения гемарии разноцветной и доссинии в условиях in vitro // Бюлопчний вюник. - 2003. - Т. 7, № 1-2. - С. 43-45

15. Митрофанова И.В. Использование биотехнологических методов в создании медленно растущих коллекций ценного растительного генофонда // Фактори експериментально'1 еволюци органiзмiв: Зб. наук. пр. Укр. т-ва генетиюв i селекцiонерiв iм. М.1. Вавилова / За ред. М.В. Ро'1'ка. - Кив: Логос, 2006. - Т. 3. - С. 613-618.

16. Митрофанова И.В., Галаев А.В., Сиволап Ю.М. Исследование молекулярно-генетической гетерогенности растений клематиса (Clematis L.), полученных путем

органогенеза и соматического эмбриогенеза in vitro // Цитология и генетика. - 2003. - № 6. -С. 12-16.

17. Митрофанова И.В., Кондратенко О.В. Збереження в культурi in vitro мЫатюрних троянд // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2004. - Вып. 90. - C. 77-80.

18. Митрофанова И.В., Митрофанова О.В., Пандей Д.К. Соматический эмбриогенез и регенерация растений Zizyphus jujuba Mill. in vitro // Физиология растений. - 1997. - Т. 44, № 1. - С. 108-114.

19. Митрофанова И.В., Соколов О.И., Митрофанова О.В., Иванова Н.Н. Пути реализации морфогенетического потенциала каладиума (Caladium hortulanum Birdsey.) и цветной каллы (Zantedeschia hybrida) в условиях in vitro // Бюлопчний вюник. - 2006. - Т. 10, № 1. - С. 64-67.

20. Митрофанова И.В., Чеботарь А.А., Митрофанова О.В. Влияние генотипа материнского растения и условий культивирования на способность вегетативных почек и зародышей зизифуса (Zizyphus jujuba Mill.) к морфогенезу in vitro // Физиология растений. -1994. - Т. 41, № 6. - С. 826-831.

21. Митрофанова О.В. Диагностика вирусных болезней хризантемы // Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1981. - Т. 85. - С. 122-133.

22. Митрофанова О.В. Методические рекомендации по диагностике болезней гвоздики и меры борьбы с ними. - Ялта: Издательство ГНБС, 1981. - 28 с.

23. Митрофанова О.В. Производство на безвирусную основу // Цветоводство. - 1986.

- № 1. - С. 15-16.

24. Митрофанова О.В. Вирусные болезни промышленных цветочных культур и биотехнологические приемы их оздоровления: Дис. в форме науч. докл. на соиск. уч. степени докт. биол. наук: 06.01.11; Защищена 26.11.1992; Утверждена 05.03.1993. - Санкт-Петербург. - 1992. -73 с.

25. Митрофанова О.В. Особенности оздоровления и клонального микроразмножения розы // Биология культивируемых клеток растений и биотехнология: Междунар. конф., 28 сентября-2 октября, 1993, Алматы. Тез. докл. - Алматы. - 1993. - С. 238.

26. Митрофанова О.В., Зленко И.Л., Митрофанова И.В., Иванова Н.Н. Об условиях пролиферации протокормов цимбидиума // Бюл. Никит. ботан. сада. - 1990. - Вып. 72. - С. 105-111.

27. Митрофанова О.В., Иванова Н.Н. Получение безвирусных клонов луковичных цветочных культур // Бюл. Никит. ботан. сада. - 1987. - Вып. 62. - С. 37-41.

28. Митрофанова О.В., Логвиненко И.Е., Иванова Н.Н. Регенерация растений из изолированных органов и тканей Artemisia balchanorum Krasch. и Artemisia scoparia W.K. // Биотехнологические исследования садовых и других ценных многолетних культур. Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1997. - Т. 119. - С. 143-153.

29. Митрофанова О.В., Митрофанова И.В. Изучение вирусов цветочных культур и эффективные методы оздоровления in vitro // Вюник Кшвського Нац. ун-ту iм. Тараса Шевченка. Сер. Бюлопя. - 2001. - Вип. 35. - С. 47-53.

30. Митрофанова О.В., Митрофанова И.В., Ежов В.Н., Лесникова-Седошенко Н.П., Лукичева Л.А., Смыков А.В., Сенин В.В., Литвинова Т.В. Изучение вирусов и вирусных болезней косточковых плодовых культур на юге Украины и особенности оздоровления растений in vitro // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2005. - Вып. 91. - С. 111-120.

31. Митрофанова О.В., Митрофанова И.В., Работягов В.Д., Иванова Н.Н. Использование клеточной инженерии в селекции новых технических растений // Новые методы биотехнологии растений: III Всеросс. симпоз., 23-25 мая, 1995, Пущино. Тез. докл. -Пущино. - 1995. - С. 161.

32. Митрофанова О.В., Митрофанова И.В., Смыков А.В., Лесникова Н.П. Методы биотехнологии в селекции и размножении субтропических и косточковых плодовых культур // Интенсификация селекции плодовых культур. Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1999.

- Т. 118. - С. 189-199.

33. Митрофанова О.В., Михайлов А.П., Чехов А.В. Биотехнологические аспекты освобождения от вирусов и клонального микроразмножения некоторых экономически важных многолетних культур // Биотехнологические исследования садовых и других ценных многолетних культур. Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1997. - Т. 119. - С. 7-34.

34. Митрофанова О.В., Мустафин А.М. Технология выращивания безвирусного антуриума Андрэ // Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1985. - Т. 97. - С. 115-124.

35. Митрофанова О.В., Проценко А.Е. Методические рекомендации по ограничению распространения вирусных болезней луковичных и клубнелуковичных цветочных культур. -Ялта: Издательство ГНБС, 1975. - 24 с.

36. Митрофанова О.В., Славгородская-Курпиева Л.Е., Митрофанова И.В., Лукичева Л.А. Диагностика вирусных болезней и биотехнологические приемы получения безвирусного посадочного материала косточковых плодовых культур. - Ялта: Крымпресс. - 2000. - 45 с.

37. Митрофанова О.В., Смирнова Т.А. Вирусные болезни гвоздики сортотипа Сим и получение безвирусного посадочного материала // Эффективность защиты интродуцированных растений от вредных организмов. - Киев: Наукова думка, 1981. -С. 63-66.

38. Митрофанова О.В., Смирнова Т.А., Ильницкий О.А. Термотерапия плюс меристемная культура // Цветоводство. - 1978. - № 3. - С. 11-12.

39. Митрофанова О.В., Тесленко А.В. Диагностика вирусных болезней персика в Крыму // Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1982. - Т. 87. - С. 89-99.

40. Мовчан О.П., Митрофанова И.В., Клименко З.К., Работягов В.Д. Введение в культуру in vitro перспективных сортов роз различных садовых групп для создания растущих коллекций // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2006. - Вып. 92. - С. 9-12.

41. Пандей Д.К. Индуцированный морфогенез и микроразмножение in vitro зизифуса индийского (Zizyphus mauritiana Lam.) и китайського (Zizyphus jujube Mill.): Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.23. - Ялта. - 1996. - 25 с.

42. Пивень И.П. Размножение полыни лимонной методом культуры меристем // Роль ботанических садов в охране и обогащении растительного мира: Республ. науч. конф., посвященная 150-летию ботан. сада им. А.В. Фомина. Тез. докл. - Киев. - 1989. - Т. 2.

- С. 148.

43. Попкова Л.Л. Редкие виды орхидей флоры Крыма, их микроразмножение и поддержание биологического разнообразия: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.05. - Ялта.

- 1999. - 17 с.

44. Споаб прямо!' регенерацп мшропагошв з листкових експлашив Actinidia deliciosa (Chev.) Liang, Ferguson в культурi in vitro: 61018 A Украша, МПК 7 А01Н4/00 / Митрофанова 1.В., 1ванова Н.М. (Украша). - № 20021210668; Заявлено 27.12.2002 р.; Надрук. 15.10.2003 р. Бюл. 10.

45. Споаб регенерацп рослин Hyssopus officinalis L. в умовах in vitro: 68595 A Украша, МПК 7 А01Н4/00 / Митрофанова 1.В., 1ванова Н.М., Митрофанова О.В. (Украша). -№ 2003087613; Заявлено 12.08.2003 р.; Надрук. 16.08.2004 р. Бюл. 8.

46. Тесленко А.В., Митрофанова О.В., Лукичева Л.А. Разработка технологии получения безвирусного посадочного материала персика // Сб. науч. трудов / Никит. ботан. сад. - 1986. - Т. 99. - С. 85-92.

47. Хофманн К., Олбрихт К., Митрофанова О.В., Митрофанова 1.В. Пеларгонп з Дрездена // Квгти Украши. - 2000. - № 8. - С. 15-17.

48. Karpov P. Clonal propagation of Yucca aloifolia L. // Acta Universitatis Latvinensis. Biology. - 2004. - Vol. 676. - P. 177-182.

49. Mitrofanova I.V. Influence of carbohydrates and physical factors of cultivation on formation of Cymbidium hybridum and Cymbidium minima protocorms in vitro // Бюл. Никит. ботан. сада. -2005. - Вып. 91. - C. 126-130.

50. Mitrofanova I.V., Mitrofanova O.V. Using broad genetic diversity and in vitro culture to enhance of breeding of some subtropical fruit plants // Acta Hort. - 2000. - N 538. - P. 169-172.

51. Mitrofanova I., Mitrofanova O. Development of recipient system of woody subtropical plants in vitro // Acta Universitatis Latviensis. Biology. - 2004. - Vol. 676. - P. 189-196.

52. Mitrofanova I.V., Yezhov V.N. Plants regeneration of Clematis L. through somatic embryogenesis in vitro // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2002. - Вып. 86. - P. 16 - 19.

53. Mitrofanova I.V., Zilbervarg I.R., Yemets A.I., Mitrofanova O.V., Blume Ya.B. The effect of dinitroaniline and phosphorothiamidate herbicides on polyploidisation in vitro of Nepeta plants // Cell Biology International. - 2003. - Vol. 27. - P. 229 - 231.

54. Mitrophanova O.V. A model of a system for conversion of floriculture to the virus-free basis // Breeding, Propagation, Disease control of Glasshouse flowers and other Ornamental Plants: Intl. Symp., Salaspils, Latvia. Abstracts, - Salaspils. - 1991. - P. 50-51.

55. Mitrofanova O.V., Lesnikova N.P., Zykov K.I., Smikov A.V., Klimenko Z.K. About perspectives of using the gamma-irradiation for stimulating micropropagation and obtaining new selectional forms of rose and peach // Problems and perspectives of biotechnology development in ornamental gardening and horticulture: Intl. Conf., Sep. 25-26, 1997, Yalta. Abstracts. - Yalta. -1997. - P. 77.

56. Mitrophanova O.V., Oertel C. Erste schritte auf dem Wage einer Zusammenarbeit der Virusfreimachung von Zierpflanzen Nikitzki Botanischen Garten Jalta/ - Forschungslabor fur Viruskrankheiten bei Zierpflanzen in VEB PAC-Jungpflanzen Dresden // Gartenbau. - 1981. - Bd. 28, H. 1. - S. 29-30.

Results and prospects of biotechnological researches in Nikitsky Botanical Gardens -

National Scientific Center

Mitrofanova O.V.

The results of long standing plant biotechnology researches have been submitted and the prospects of their development in Nikitsky Botanical Garden have been shown.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ПРЯМОГО СОМАТИЧЕСКОГО ЭМБРИОГЕНЕЗА 8 СОРТОВ КЛЕМАТИСА

И.В. МИТРОФАНОВА1, кандидат биологических наук;

Н.В ЗУБКОВА1;

М.К. СОКОЛОВА2 1Никитский ботанический сад - Национальный научный центр 2Институт биохимии и физиологии растений микроорганизмов РАН

Прямой соматический эмбриогенез представляет собой процесс образования соматических эмбриоидов непосредственно из клеток соматических тканей экспланта в условиях in vitro и в большей степени подобен формированию зиготических зародышей. Впервые этот путь регенерации растений был описан в 1980 году [51]. Клетки, из которых образуется соматический зародыш, были названы как «проэмбриогенные детерминированные клетки» (ПЭДК), которые уже сами по себе работают на развитие эмбриоида. Соматическое развитие зародышей очень пластично и подвержено влиянию, как самой культуры, так и условий культивирования. В настоящее время уже установлено, что основными параметрами, определяющими соматический эмбриогенез, являются тип экспланта, стадия развития экспланта и взаимодействие между средой и эксплантом [1, 6, 7, 14, 27, 37, 47, 54].

В настоящее время о разработке соматического эмбриогенеза как способа регенерации растений in vitro известно у ряда покрытосеменных и голосеменных древесных растений,