ПОЛИПЕПТИДНЫЙ КОМПЛЕКС, СОДЕРЖАЩИЙ НЕПЕПТИДИЛЬНЫЙ ПОЛИМЕР, ОБЛАДАЮЩИЙ ТРЕМЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ КОНЦАМИ

1. Белковый комплекс, содержащий физиологически активный полипептид, димерный белок и непептидильный полимер, обладающий тремя функциональными концами, с присоединением как физиологически активного полипептида, так и димерного белка к непептидильному полимеру посредством соответствующих ковалентных связей.
2. Белковый комплекс по п.1, где димерный белок представляет собой Fc-домен иммуноглобулина.
3. Белковый комплекс, как определено по п.2, где Fc-домен иммуноглобулина является агликолированным.
H
H
H
H
4. Белковый комплекс по п.2, где Fc-домен иммуноглобулина состоит из 1-4 различных доменов, выбранных из C1, C2, C3 и C4.
5. Белковый комплекс по п.4, где Fc-домен иммуноглобулина дополнительно содержит шарнирную область.
6. Белковый комплекс по п.2, где Fc-домен иммуноглобулина выбран из группы, состоящей из Fc-доменов IgG, IgA, IgD, IgE, IgM и их комбинаций и гибридов.
7. Белковый комплекс по п.6, где Fc-домен иммуноглобулина выбран из группы, состоящей из Fc-доменов IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и их комбинаций и гибридов.
8. Белковый комплекс по п.6, где Fc-домен иммуноглобулина присутствует в форме димеров или мультимеров (комбинаций Fc иммуноглобулина), каждый из которых содержит гликозилированные иммуноглобулины, состоящие из доменов одинакового происхождения.
9. Белковый комплекс по п.6, где Fc-домен иммуноглобулина представляет собой Fc-домен IgG4.
10. Белковый комплекс по п.9, где Fc-домен иммуноглобулина представляет собой человеческий агликозилированный Fc-домен IgG4.
11. Белковый комплекс по п.1, где непептидильный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированного полиола, поливинилового спирта, полисахарида, декстрана, поливинилэтилового эфира, таких биоразлагаемых полимеров, как PLA (полимолочная кислота) и PLGA (сополимер молочной и гликолевой кислот), биоразлагаемых полимеров, липополимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций.
12. Белковый комплекс по п.11, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
13. Белковый комплекс по п.1, где непептидильный полимер обладает концевой функциональной группой, выбранной из альдегидных групп, пропиональдегидных групп, бутилальдегидных групп, малеинимидных групп и сукцинимидных производных.
14. Белковый комплекс по п.13, где непептидильный полимер обладает тремя функциональными альдегидными группами на своих соответствующих концах.
15. Белковый комплекс по п.1, где три функциональных конца непептидильного полимера связаны с N-концевыми функциональными группами Fc-домена иммуноглобулина и физиологически активного полипептида, где указанные N-концевые функциональные группы выбраны из группы, состоящей из остатков лизина, гистидина, цистеина и их комбинаций.
16. Белковый комплекс по п.1, где физиологически активный полипептид выбран из группы, состоящей из гормонов, цитокинов, интерлейкинов, связывающих интерлейкин белков, ферментов, антител, факторов роста, факторов транскрипции, факторов крови, вакцин, структурных белков, белков-лигандов, рецепторов, антигенов поверхности клеток, антагонистов рецепторов и их производных или аналогов.
17. Белковый комплекс по п.16, где физиологически активный полипептид выбран из группы, состоящей из человеческих гормонов роста, высвобождающих гормон роста гормонов, высвобождающих гормон роста пептидов, интерферонов и рецепторов интерферона, колониестимулирующих факторов, глюкагоноподобных пептидов, пептидов эксендина-4, ANP, BNP, CNP, DNP, связанных с G белком рецепторов, интерлейкинов и рецепторов интерлейкина, ферментов, связывающих интерлейкины белков, связывающих цитокины белков, факторов активации макрофагов, пептидов макрофагов, факторов B-клеток, факторов T-клеток, белка A, ингибиторов аллергии, гликопротеинов некроза клеток, иммунотоксинов, лимофтоксинов, фактора некроза опухоли, супрессоров опухолей, трансформирующего фактора роста, антитрипсина альфа-1, альбумина, α-лактальбумина, аполипопротеина-E, эритропоэтина, высокогликозилированного эритропоэтина, ангиопоэтинов, гемоглобина, тромбина, активирующих рецепторы тромбина пептидов, тромбомодулина, фактора крови VII, VIIa, VIII, IX и XIII, активаторов плазминогена, связывающих фибрин пептидов, урокиназы, стрептокиназы, гирудина, белка C, C-реактивного белка, ингибитора ренина, ингибитора коллагеназы, супероксиддисмутазы, лептина, тромбоцитарного фактора роста, эпителиального фактора роста, эпидермального фактора роста, ангиостатина, ангиотензина, фактора роста кости, стимулирующего рост костей белка, кальцитонина, инсулина, соматостатина, октреотида (агониста соматостатина), атриопептина, индуцирующего образование хряща фактора, элкатонина, фактора активации соединительной ткани, ингибитора пути тканевого фактора, фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон, факторов роста нервной ткани, паратиреоидного гормона, релаксина, секретина, соматомедина, инсулинподобного фактора роста, адренокортикального гормона, глюкагона, холицистокинина, панкреатического полипептида, высвобождающего гастрин пептида, высвобождающего кортикотропин фактора, тиреоидстимулирующего гормона, аутотаксина, лактоферрина, миостатина, рецепторов, антагонистов рецепторов, антигенов поверхности клеток, антигенов полученных из вирусов вакцин, моноклональных антител, поликлональных антител, фрагментов антител.
18. Белковый комплекс по п.17, где физиологически активный полипептид выбран из группы, состоящей из человеческих гормонов роста, интерферона-альфа, интерферона-бета, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, эритропоэтина, эксендина-4, имидазолацетила пептида эксендина-4 (агониста эксендина-4), кальцитонина, октреотида (агониста соматостатина), BNP и Fab'-фрагмента.
19. Способ получения белкового комплекса, состоящего из физиологически активного полипептида, димерного белка и непептидильного полимера, обладающего тремя функциональными концами, с присоединением как физиологически активного полипептида, так и димерного белка к непептидильному полимеру посредством соответствующих ковалентных связей, включающий в себя:
(1) ковалентное присоединение двух функциональных концов непептидильного полимера к противоположным N-концевым аминогруппам димерного белка с образованием конъюгата
(2) выделения из реакционной смеси со стадии (1) конъюгата, в котором димерный белок ковалентно присоединен по своим N-концам к непептидильному полимеру, и
(3) ковалентного присоединения физиологически активного полипептида к одному свободному функциональному концу непептидильного полимера выделенного конъюгата.
20. Способ по п.19, где димерный белок представляет собой Fc-домен иммуноглобулина.
21. Способ по п.19, где непептидильный полимер обладает тремя функциональными альдегидными группами на своих соответствующих концах.
22. Способ по п.19, где на стадии (1) проводят реакцию димерного белка с непептидильным полимером в молярном соотношении от 1:2 до 1:5.
23. Способ по п.19, где на стадии (3) проводят реакцию конъюгата с физиологически активным полипептидом в молярном соотношении от 1:0,5 до 1:0,05.
24. Способ по п.19, где реакции на обеих стадиях (1) и (3) проводят в присутствии восстанавливающего средства.
3
25. Способ по п.24, где восстанавливающее средство выбрано из группы, состоящей из цианоборогидрида натрия (NaCNBH), борогидрида натрия, бората диметиламина и бората пиридина.
26. Фармацевтическая композиция, содержащая белковый комплекс по любому из пп.1-18 и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель.
27. Белковый комплекс, полученный с использованием способа по любому из пп.19-25.