ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО С ИНТЕРФЕРОНОМ ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ ЛЕЙКОЦИТАРНЫМ НА ОСНОВЕ ХИТОЗАНА СУКЦИНАТА
ANTIVIRUS AGENT WITH HUMAN LEUKOCYTIC HUMAN INTERFERON BASED ON CHITOSAN SUCCINATE

Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности, а именно к технологии лекарственных средств, и касается создания новых лекарственных форм, содержащих интерферон. Предлагаемое средство предназначено для лечения вирусных заболеваний и может использоваться в офтальмологии, дерматологии, хирургии для местного применения.
Интерфероны - одна из ключевых групп цитокинов, участвующих в развитии иммунных реакций, направленных на поддержание и регуляцию гомеостаза.
Использование препаратов интерферона получило широкое распространение, однако в ряде случаев при их применении наблюдается быстрое снижение концентрации действующего вещества, что требует многократного применения. В связи с этим существует необходимость в повышении эффективности действия и расширении арсенала таких препаратов посредством создания пролонгированных лекарственных форм для местного применения.
Известен лекарственный препарат для лечения урогенитальных инфекций, содержащий в качестве активных ингредиентов альфа-, бета- и гамма-интерфероны и различные целевые добавки. Препарат представляет собой суппозитории, мазь или крем [патент RU №2073520, А61К 35/74, 1997].
Известна мазь на основе интерферона альфа-2, содержащая дополнительно витамин С, витамин Е и мазевую основу в определенном количестве [патент RU №2114611, А61К 9/06, 38/21, 1998].
Известен препарат "Локферон" для лечения и профилактики вирусных заболеваний на основе человеческого лейкоцитарного интерферона. Препарат содержит не менее 8000 ME в одной ампуле противовирусной активности альфа-интерферона и клеточные медиаторы с м.м. 1-100 кД, овальбумин менее 1 нг/мг, а также хлорид натрия до конечной концентрации 0,9 мас.% и стабилизатор [патент RU №2108804, А61К 38/21, 1998]. Следует отметить, что глазные капли быстро смываются, что требует многократного применения.
Известна мазь с интерфероном «Интерон», содержащая человеческий лейкоцитарный интерферон очищенный и липофильно-гидрофильную основу, включающую вазелин и поверхностно-активные вещества [патент RU №2141819, А61К 9/06, 1999]. Вазелин, обладая гидрофобными свойствами, снижает контакт со слизистыми, поэтому биодоступность действующих компонентов в таких основах может быть ограничена.
Известно противовирусное средство на основе рекомбинантного интерферона в виде мази, геля, суппозитория, крема, линимента, содержащее консистентно-образующую основу с добавлением нипагина и поливинилпирролидона, а также трилона Б, бутилокситолуола, диметилсульфоксида и твин-80 [патент RU №2150291, А61К 38/21, 2000].
Известно противовирусное средство, состоящее из коллагена и интерферона, лиофильно высушенных. Средство эффективно при лечении гнойных ран, однако может вызывать затруднения при применении в случае сухих ран и на слизистую глаза [патент RU №2204410, А61К 9/06, 38/21, 2003].
2
Известно противовирусное средство в мазевой форме на основе интерферона -альфа 2, содержащее рекомбинантный интерферон α на основе гидроксида алюминия и поливинилового спирта [патент RU №2159609, А61К 9/06, 38/21, 2000].
Известно противовирусное средство, содержащее альфа-, или бета-, или гамма-рекомбинантный интерфероны, стабилизатор и фармацевтически приемлемые целевые добавки, согласно изобретению дополнительно содержит иммуномодулятор, антимикробное средство и/или противовоспалительный препарат [патент RU №2187330, А61К 38/21, 2002].
Известен лекарственный гель с рекомбинантным интерфероном и витамином Е, содержащий дополнительно метионин, лимонную кислоту, бензойную кислоту, альбумин сывороточный человеческий, спирт этиловый, глицерин [патент RU 2184564, А61К 38/21, 2002]. Недостатками использования препаратов на основе рекомбинантного интерферона является вероятность накопления антител, значительно подавляющих их активность и развитие сенсибилизации при продолжительном и многократном применении.
Известное противовирусное средство в виде геля, содержащее интерферон лейкоцитарный человеческий, в качестве основы 2%-ный раствор сополимера стирола и малеинового ангидрида, нипагин [патент RU №2302881, А61К 38/21, 9/06, 31/12, 2007], является наиболее близким по сущности.
Задачей изобретения является разработка нового лекарственного средства пролонгированного действия, расширение арсенала средств противовирусного действия.
Техническим результатом изобретения является создание лекарственного средства пролонгированного действия, обеспечивающего хорошую проникающую способность и обладающего противовирусным, иммуномодулирующим, противовоспалительным, противоопухолевым и антибактериальным действием.
Предлагаемое противовирусное средство содержит интерферон человеческий лейкоцитарный, в качестве основы хитозана сукцинат, консервант нипагин, физиологический раствор при следующем соотношении компонентов в 1 мл смеси:
интерферон человеческий лейкоцитарный - 1000-10000 ME;
хитозана сукцинат, г - 0,018-0,022;
нипагин, г - 0,0002-0,0004;
физиологический раствор - остальное.
Предлагаемое средство получают следующим образом. Хитозана сукцинат в количестве 2,0 г растворяют при перемешивании в 50 мл физраствора в течение суток при комнатной температуре. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр. рН готового геля 7,2-7,6. Стерилизуют автоклавированием при 0,5 атм и 110°С в течение 30 минут. В условиях ламинарбокса добавляют интерферон концентрированный с активностью 30000-40000 ME (жидкий) до концентрации 1000-10000 ME в 1 мл получаемого геля. Вносят нипагин, 0,02 г. Объем доводят стерильным физраствором до 100 мл.
Широта фармакологических эффектов интерферона направлена на нейтрализацию внутриклеточных вирусных и бактериальных антигенов. Активный компонент заявляемого геля интерферон оказывает противовирусное, иммуномодулирующее, противовоспалительное, антибактериальное действие, кроме этого он может препятствовать развитию злокачественных новообразований.
Хитозаны (хитозана сукцинат), используемые как гидрофильная основа для создания лекарственных препаратов, имеют низкую токсичность, не оказывают кумулирующего эффекта, и, являясь альтернативой синтетическим полимерам, способны обеспечивать продолжительное нахождение действующего вещества в организме, обладая при этом собственным спектром фармакологической активности, в частности противоопухолевой. Хитозановые гели увеличивают время контакта лечебных компонентов со слизистой. При этом важно отметить, что взаимодействие хитозанов с клеточной мембраной сопровождается увеличением проницаемости для лекарственного средства.
Использование предлагаемого геля с интерфероном не выявило у 4 интактных кроликов (8 глаз) раздражающего или токсического действия при биомикроскопии и офтальмоскопии в течение месяца, что было подтверждено в дальнейшем при морфологическом исследовании энуклеированных глаз.
3.5
Последующие эксперименты проводили в 4 группах животных массой тела 2,0-2,5 кг по 4 кролика (8 глаз) в каждой. В первую группу были включены не леченные животные (контроль), вторую группу составили кролики, у которых использовался раствор интерферона (ФГУП «НПО «Микроген», филиал «Иммунопрепарат», Россия), третью группу - заявляемый гель на основе хитозана сукцината, в четвертой группе применялся препарат сравнения 3% мазь «Зовиракс» (Glaxo Smith Kline, Великобритания). На эпителии роговицы после анестезии (0,5% раствор дикаина) инъекционной иглой наносили поверхностные насечки до 3-4 мм в виде 4 взаимно перпендикулярных полос. Для моделирования герпетического кератита использовали культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса (штамм L2 с активностью 10 ТЦД50/0,1 мл на культуре клеток Vero). Клинико-биомикроскопические исследования проводились с использованием щелевой лампы Carl Zeiss (Германия).
Для определения степени тяжести течения экспериментального герпетического кератита у животных была использована ранее предложенная балльная система [патент RU, №2302881, С2, А61К 38/21, 9/06, 31/12, 03.20.2007].
Через 24 часа после развития экспериментального герпетического кератита у животных 3 раза в день проводили инстилляции раствора интерферона (1-2 капли), или закладывали в конъюнктивальную полость разработанный гель, или мазь «Зовиракс». Выявлено, что при применении предложенного геля клиническая картина характеризовалась меньшей тяжестью герпетического поражения, которая была оценена в 1,35±0,15 балла, тогда как в контроле в 1,95±0,25. В группах сравнения: пролеченных раствором интерферона 1,75±0,20 балла, мазью «Зовиракс» - 1,80±0,25 балла.
Таким образом, при сравнительной оценке исследуемых веществ установлена противогерпетическая активность предлагаемого геля, применение которого характеризовалось меньшей выраженностью клинических проявлений герпетического кератоконъюнктивита.