Молекулярные методы диагностики в системе эпидемиологического надзора за коклюшной инфекцией

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

с заболеваниями урогенитального тракта. У 60,2% пациентов диагностирована латентная ГВИ без нарушений иммунного статуса. Хронический рецидивирующий характер с нарушениями иммунорегу-ляторной функции Т-лимфоцитов и фагоцитарной активности мононуклеарных клеток носило заболевание у 7,7% больных. Именно в этой группе больных (72 человека) была дана оценка эффективности лечения противовирусными препаратами в комплексе с иммунотерапией ферровиром. По результатам иммунологического исследования, у 56,9% этих пациентов наблюдался выраженный иммуномодулирую-щий эффект: восстановление зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов, числа фагоцитирующих клеток. В 85% случаев длительность межрецидивного периода увеличивалась в 2,5—3 раза, с ослаблением клинических симптомов рецидива ГВИ. Побочных эффектов от проводимого лечения не наблюдалось. Отмечалось также улучшение общего состояния организма и повышение жизненного тонуса.

Таким образом, использование в клинической практике испытанных алгоритмов диагностики и лечения ГВИ позволили получить оптимальный результат и улучшить качество жизни пациентов.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ В СИСТЕМЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

М.Н. Прадед1, Т.С. Селезнева1, С.В. Малинина2, Н.В. Бирюлева2, Т.Е. Любимова2, Р.А. Панферова3, С.Б. Яцышина1

ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора», Москва; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в ВАО г. Москвы; ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в СЗАО г. Москвы

Вакцинация против коклюша входит в национальные календари прививок большинства стран мира, однако, цель, поставленная ВОЗ — сократить заболеваемость коклюшной инфекцией к 2010 г. до уровня менее 1 случая на 100 тыс. населения, не достигнута ни в одной стране. В РФ за 2008—2011 гг. заболеваемость регистрируется на уровне 2,5—3,8 на 100 тыс. населения, однако, можно предположить, что эти данные существенно занижены. Возможными причинами сохранения неблагоприятной ситуации являются недостатки в лабораторной диагностике коклюша, что выражается в неизвестности истинной распространенности возбудителя среди населения, низком проценте установления источников инфекции, составившем в 2011 г. лишь 11,6% случаев, и связано с отсутствием разрешенных для применения в РФ эффективных и доступных средств быстрой лабораторной диагностики. Не менее важной проблемой являются недостаточный охват прививками, несоблюдение календаря прививок, а также вероятное несоответствие по антигенному спектру вакцинных и современных штаммов. В пользу последнего предположения говорят снижение напряженности иммунитета в отношении коклюша и вовлечение в эпидемический процесс привитых детей, подростков и взрослых. С целью оптимизации лабораторной диагностики в ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора разработан и поставлен на производство набор реагентов «АмплиСенс Bordetella multi-FL», предназначенный для выявления и дифференциации ДНК возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза в биоло-

гическом материале методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Проведены приемочно-технические и клинические испытания набора реагентов. Как было показано на этапе апробации в ФБУЗ ЦГиЭ ВАО г. Москвы при обследовании 364 детей с анамнезом, не исключающем коклюшную инфекцию, диагностическая чувствительность разработанного набора реагентов оказалась в 16 раз выше по сравнению с чувствительностью стандартного бактериологического исследования (17,6 и 1,1% соответственно) при 100% специфичности. ДНК возбудителей коклюшной инфекции (B. pertussis в 52 (14,3%) образцах, ДНК B. parapertussis — в 4 образцах; в 8 образцах видовая принадлежность возбудителя не могла быть уточнена по причине недостаточного содержания микроорганизма в клиническом материале) обнаруживалась с первых дней и до 18 дня болезни. Высокая аналитическая чувствительность набора реагентов (500—1000 ГЭ в 1 мл исследуемого материала) позволит повысить процент установления источников инфекции при работе в очагах и скрининге носителей. С целью изучения антигенных различий современных изо-лятов B. pertussis в сравнении с вакцинными штаммами проведен анализ с помощью MAST (multiple antigen sequence typing) с изучением 3х генов (ptxP, prn и tcfA) генома B. pertussis. Исследованы 3 штамма B. pertussis, использующиеся в вакцине АКДС (305, серовар 1,2.0, выделен в 1957г; 267, серовар 1,0.3 выделен в 1967 г.; и 475, серовар 1,2.3 выделен в 1966г), 29 штаммов (из коллекции ФБУН ЦНИИЭ), выделенные с 1975 по 1998 гг и 33 изолята (серовар 1,0.3.), выделенные в ФБУЗ ЦГиЭ СЗАО за 2010-2011 гг. Результаты молекулярно-генетического анализа трех локусов, косвенно характеризующих антигенные свойства B. pertussis, показали наличие различий по двум локусам — ptxP и prn изолятов, выделенных с 2010 по 2011 гг. (аллели ptxP3, prn2), по сравнению с изолятами прошлых лет (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), включая вакцинные штаммы (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), что свидетельствует о произошедших изменениях антигенных свойств B. pertussis за время применения вакцинации. При этом результаты изучения напряженности иммунитета к каждому из вакцинных штаммов B. pertussis, полученные при исследовании 100 сывороток от привитых в срок и не болевших коклюшем детей 5-7 лет свидетельствуют об эффективности вакцины: защитные титры (1:160-1:5120) к штамму 267 имели 77% детей, к штамму 305 — 42% детей, к штамму 475 — 40% детей.

АССОЦИАТИВНЫЙ МИКРОБНЫЙ СИМБИОЗ ПОЛОВЫХ ПУТЕЙ ЖЕНЩИН

Т.Д. Примак

ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия, г. Чита

Заболеваемость инфекциями репродуктивного тракта за последние годы не имеет тенденции к снижению, при этом не всегда учитываются микробные ассоциации. Проведены количественные исследования резидентной микрофлоры и условно-патогенных микроорганизмов отделяемого цервикального канала. Обследовано 30 сексуально активных здоровых женщин в возрасте 18-25 лет, не имеющих урологических и гинекологических заболеваний, не болевших в течение 6 месяцев острыми инфекционными заболеваниями и не имеющих патологических измене-