СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ МАРКЕРА ДЛЯ АКТИВНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА

1. Способ обнаружения маркера для активного туберкулеза, включающий стадии:
i) предоставления образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза;
ii) экспонирования указанного образца для стеринового липида, где указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, где указанный стериновый липид представляет собой холестерин или его производное и где указанный стериновый липид устраняет антихолестериновые антитела из образца;
iii) получения, по меньшей мере, двух фракций указанного образца до или после его экспонирования для указанного стеринового липида;
iv) экспонирования первой из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
v) экспонирования второй из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, не несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
vi) экспонирования фракции образца, экспонированной на стадии iv), для тестовой подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и экспонирования фракции образца, экспонированной на стадии v), для контрольной подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
vii) обнаружения связывания антител с антигеном со стадии vi) в реальном времени; и
viii) сравнения степени или меры связывания между тестовой и контрольной подложками, причем какое-либо наблюдаемое меньшее связывание с тестовой подложкой представляет собой индикатор присутствия антител к антигену в образце, который указывает на активный туберкулез у человека или животного, от которого происходят образцы.
2. Способ по п. 1, в котором обнаружение осуществляют с использованием поверхностного плазмонного резонанса или электрохимической импедансной спектроскопии, калориметрии изотермического титрования, интерферометрии биослоя, оптических решеток, фотонного кристалла, акустического резонансного профилирования, микровесов с кристаллом кварца или с использованием чипа биологического датчика с использованием Si кольцевого резонатора.
3. Способ обнаружения маркера для активного туберкулеза, включающий стадии:
i) предоставления образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза;
ii) экспонирования указанного образца для стеринового липида, где указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, где указанный стериновый липид представляет собой холестерин или его производное и где указанный стериновый липид устраняет антихолестериновые антитела из образца;
iii) получения, по меньшей мере, двух фракций указанного образца до или после его экспонирования для указанного стеринового липида;
iv) экспонирования первой из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
v) экспонирования второй из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, не несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген; или хранения, по меньшей мере, части второй из указанных фракций до стадии vi), пропуская стадию экспонирования второй из указанных фракций для подложки, не несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
vi) экспонирования, по меньшей мере, части фракции образца, экспонированного на стадии iv), для тестовой подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и экспонирования, по меньшей мере, части фракции образца, экспонированного или сохраненного на стадии v), для контрольной подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
vii) обнаружения связывания антител с антигеном со стадии vi) в конечном анализе; и
viii) сравнения степени или меры связывания между тестовой и контрольной подложками, причем какое-либо наблюдаемое меньшее связывание с тестовой подложкой представляет собой индикатор присутствия антител к антигену в образце, который указывает на активный туберкулез у человека или животного, от которого происходят образцы.
4. Способ по п. 3, в котором конечный анализ выбирают из группы, состоящей из твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), вестерн-блоттинга, анализа радиоактивного мечения, фотоспектрометрического анализа, иммунофлуоресценции, иммунопреципитации, иммуноцитохимии, иммуногистохимии, электрохимической импедансной спектроскопии, анализа фильтрования с иммунным окрашиванием золотом или точечного анализа с иммунным окрашиванием золотом (DIGFA).
5. Способ по любому из пп. 3 или 4, в котором обнаружение ведет к визуальному сигналу, который анализируют посредством мобильного приложения, которое разработано для того, чтобы сравнивать сигнал связывания тестовых и контрольных подложек, и который указывает, имеет ли человек или животное, от которого происходит образец, активный туберкулез.
6. Способ предварительной обработки образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза, для обнаружения, включающий стадии:
i) предоставления образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза;
ii) экспонирования указанного образца для стеринового липида, где указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, где указанный стериновый липид представляет собой холестерин или его производное и где указанный стериновый липид устраняет антихолестериновые антитела из образца;
iii) получения, по меньшей мере, двух фракций указанного образца до или после его экспонирования для указанного стеринового липида;
iv) экспонирования первой из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
v) экспонирования второй из указанных экспонированных для стеринового липида фракций для подложки, не несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген; или хранение, по меньшей мере, части второй из указанных фракций для дальнейшего использования, пропуская стадию экспонирования второй из указанных фракций для подложки, не несущей иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
при этом, после экспонирования на стадиях iv) и v), по меньшей мере, часть экспонированных фракций образца хранят для дальнейшего использования.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором указанный полученный из миколовой кислоты антиген представляет собой, по меньшей мере, одно, выбранное из групп: миколовой кислоты, фактора жгутообразования, химически модифицированной миколовой кислоты, химически модифицированного фактора жгутообразования, синтетического производного миколовой кислоты, синтетического производного фактора жгутообразования.
8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, которая содержит указанный стериновый липид и соединение, связывающееся с холестерином в образце, такое как пектин, амфотерицин B или β-циклодекстрин.
9. Способ по любому из пп. 1-7, в котором указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, которая содержит указанный стериновый липид и фосфатидилхолин.
10. Система или устройство для осуществления способа обнаружения маркера для активного туберкулеза, которое содержит, по меньшей мере, один контейнер, содержащий стериновый липид, где указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, причем указанный стериновый липид представляет собой холестерин или его производное, устроенный и выполненный с возможностью принимать поток образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза; средство для деления указанного потока образца, по меньшей мере, на первый и второй потоки образца; указанное средство соединено или выше по потоку или ниже по потоку от указанного, по меньшей мере, одного контейнера, содержащего стериновый липид; дополнительный контейнер для приема указанного первого потока образца в соединении ниже по потоку с указанным контейнером, который содержит стериновый липид и содержит первую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген; еще один дополнительный контейнер для приема второго потока образца, расположенный параллельно указанному дополнительному контейнеру и в соединении ниже по потоку с указанным контейнером, который содержит стериновый липид; и содержит вторую подложку, не несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и первую подложку для обнаружения, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, чтобы принимать, по меньшей мере, часть первого потока образца от указанного дополнительного контейнера, и вторую подложку для обнаружения, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, чтобы принимать, по меньшей мере, часть второго потока образца от указанного еще одного дополнительного контейнера.
11. Система или устройство по п. 10, которое представляет собой портативное устройство для осуществления способа обнаружения маркера для активного туберкулеза, которое содержит
биологический датчик (8), содержащий первую камеру (9) для приема первого потока образца в соединении с указанным дополнительным контейнером (6), содержащую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и вторую камеру (10) для приема второго потока образца в соединении с указанным еще одним дополнительным контейнером (7), и содержащую ту же подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, что и первая камера (9).
12. Система или устройство по п. 10 или 11, которое дополнительно содержит блок (3) фильтра в соединении с указанной первой трубкой (2) и указанным первым контейнером (4) и выполненный с возможностью отделять плазму от образца цельной крови, предпочтительно
причем блок (3) фильтра содержит фильтровальную матрицу.
13. Система или устройство по любому из пп. 10-12, которое содержит
- проникающий в кожу конец (1), соединенный с первой трубкой (2), которая устроена и выполнена с возможностью принимать образец крови от проникающего в кожу конца (1) и нести указанный образец крови от участка кожи;
- блок (3) фильтра в соединении с указанной первой трубкой (2) для приема указанного образца крови и выполненный с возможностью отделять плазму от указанного образца цельной крови;
- первый контейнер (4) для приема указанного образца, указанный первый контейнер (4) содержит стериновый липид;
- средство (5) для деления указанного образца, по меньшей мере, на первый и второй потоки образца;
- второй контейнер (6) для приема указанного первого потока образца, указанный второй контейнер содержит первую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген;
- третий контейнер (7) для приема второго потока образца, указанный третий контейнер содержит вторую подложку, не несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген; и
- биологический датчик (8), содержащий первую камеру (9) для приема первого потока образца в соединении со вторым контейнером (6), которая содержит подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и вторую камеру (10) для приема второго потока образца в соединении с третьим контейнером (7) и содержащую ту же подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, что и первая камера (9).
14. Система или устройство по любому пп. 11-13, в котором подложка из первой и второй камер (9, 10) основана на диоксиде кремния, предпочтительно, причем указанный биологический датчик содержит Si кольцевой резонатор.
15. Система или устройство для предварительной обработки потока образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза, которая содержит, по меньшей мере, один контейнер, содержащий стериновый липид, устроенный и выполненный с возможностью принимать поток образца от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза; средство для деления указанного потока образца, по меньшей мере, на первый и второй потоки образца; указанное средство соединено или выше по потоку или ниже по потоку от указанного, по меньшей мере, одного контейнера, содержащего стериновый липид; дополнительный контейнер для приема указанного первого потока образца в соединении ниже по потоку с указанным контейнером, который содержит стериновый липид и содержит первую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген; еще один дополнительный контейнер для приема второго потока образца, расположенный параллельно указанному дополнительному контейнеру и в соединении ниже по потоку с указанным контейнером, который содержит стериновый липид; и содержит вторую подложку, не несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, и средство для хранения или транспортировки обработанных образцов.
16. Система или устройство для предварительной обработки потока образца, полученного от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза, которая содержит средство для деления указанного потока образца, по меньшей мере, на первый и второй потоки образца; по меньшей мере, первую и вторую колонки, выполненные с возможностью принимать указанный первый и указанный второй потоки образца, соответственно; указанная первая колонка содержит компартмент, содержащий стериновый липид, и дополнительный компартмент, содержащий первую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, ниже по потоку от указанного компартмента, содержащего стериновый липид; и указанная вторая колонка содержит компартмент, содержащий стериновый липид, и еще один дополнительный компартмент, содержащий вторую подложку, не несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, ниже по потоку от указанного компартмента, содержащего стериновый липид; и средство для хранения или транспортировки обработанных образцов, прошедших через указанные колонки.
17. Система или устройство для осуществления способа обнаружения маркера для активного туберкулеза в образце, полученном от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза, которая содержит средство для деления указанного потока образца, по меньшей мере, на первый и второй потоки образца; по меньшей мере, первую и вторую колонки, выполненные с возможностью принимать указанный первый и указанный второй потоки образца, соответственно; указанная первая колонка содержит компартмент, содержащий стериновый липид, и дополнительный компартмент, содержащий первую подложку, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, ниже по потоку от указанного компартмента, содержащего стериновый липид; и указанная вторая колонка содержит компартмент, содержащий стериновый липид, и еще один дополнительный компартмент, содержащий вторую подложку, не несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, ниже по потоку от указанного компартмента, содержащего стериновый липид, и первую подложку для обнаружения, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, чтобы принимать, по меньшей мере, часть первого потока образца, и вторую подложку для обнаружения, несущую иммобилизованный, полученный из миколовой кислоты, антиген, чтобы принимать, по меньшей мере, часть второго потока образца.
18. Система или устройство по п. 16 или 17, в котором указанный стериновый липид иммобилизуют на гранулах, и указанные первая и вторая подложки представляют собой гранулы.
19. Система или устройство по любому из пп. 10, 17-18, в котором первая и вторая подложки для обнаружения представляют собой микропористую мембрану, предпочтительно нитроцеллюлозную мембрану.
20. Система или устройство по пп. 10 и 17-19, в котором первую и вторую подложки для обнаружения формируют посредством отдельных пятен на одной и той же мембране.
21. Система или устройство по любому пп. 10-20, в котором указанный стериновый липид иммобилизуют на подложке, которая содержит указанный стериновый липид и соединение, связывающееся с холестерином в образце, такое как пектин, амфотерицин B или β-циклодекстрин.
22. Набор для использования в диагностировании туберкулеза или предварительной обработки образцов для диагностирования туберкулеза, который содержит:
- одно или несколько проникающих в кожу средств;
- одну или несколько трубок;
- один или несколько контейнеров, покрытых стериновым липидом и необязательно фосфатидилхолином, пектином, амфотерицином B или β-циклодекстрином;
- один или несколько контейнеров, содержащих подложку с и без иммобилизованного, полученного из миколовой кислоты, антигена;
- один или несколько контейнеров для транспортировки и хранения образцов и/или, по меньшей мере, одну микропористую мембрану с полученным из миколовой кислоты антигеном, иммобилизованным на ней, и необязательно вторичные антитела, связывающиеся с тяжелой цепью антител против полученных из миколовой кислоты антигенов, содержащихся в образце, полученном от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза; или один или несколько биологических датчиков, содержащих, по меньшей мере, две камеры, содержащих подложку с иммобилизованным, полученным из миколовой кислоты, антигеном; и
- необязательно средство для разведения крови или плазмы и/или блок фильтра.
23. Набор для использования в диагностировании туберкулеза или предварительной обработки образцов для диагностирования туберкулеза, который содержит:
- одно или несколько проникающих в кожу средств;
- одну или несколько трубок;
- одну или несколько колонок, которые содержат компартмент, содержащий подложку, покрытую стериновым липидом и необязательно фосфатидилхолином, пектином, амфотерицином B или β-циклодекстрином; и компартмент, содержащий подложку, покрытую иммобилизованным, полученным из миколовой кислоты, антигеном, ниже указанного компартмента, содержащего подложку, покрытую стериновым липидом;
- одну или несколько колонок, которые содержат компартмент, содержащий подложку, покрытую стериновым липидом и необязательно фосфатидилхолином, пектином, амфотерицином B или β-циклодекстрином; и компартмент, содержащий подложку, покрытую без иммобилизованного, полученного из миколовой кислоты, антигена, ниже указанного компартмента, содержащего подложку, покрытую стериновым липидом;
- необязательно один или несколько контейнеров для транспортировки и хранения образцов;
- необязательно средство для разведения крови или плазмы и/или блок фильтра;
- необязательно, по меньшей мере, одну микропористую мембрану с полученным из миколовой кислоты антигеном, иммобилизованным на ней;
- и необязательно вторичные антитела, связывающиеся с тяжелой цепью антител против полученных из миколовой кислоты антигенов, содержащихся в образце, полученном от человека или животного, подозреваемого в наличии активного туберкулеза.