СОЕДИНЕНИЯ ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ СО СПЕЦИФИЧЕСКИМ ДЛЯ ТРОМБОЦИТОВ ГЛИКОПРОТЕИНОМ IIB/IIIA И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ТРОМБОВ
COMPOUNDS FOR BINDING TO PLATELET SPECIFIC GLYCOPROTEIN IIB/IIIA AND THEIR USE FOR IMAGING THROMBI

Область техники, к которой относится изобретение
19
18
Настоящее изобретение относится к фтор-содержащим соединениям, F и соответствующим F меченным соединениям, способам их получения, промежуточным соединениям синтеза, их применению в качестве диагностических средств, в особенности для визуализации тромбов. Настоящее изобретение относится к средствам для позитронно-эмиссионной томографии (PET) и ассоциированным реагентам-предшественникам, и способам получения таких радиоактивно меченных средств для визуализации тромбов в организме млекопитающего. В особенности, изобретение относится к небольшим, непептидным, с высоким сродством, специфически связывающимся антагонистам гликопротеина IIb/IIIa для визуализации тромбов.
Предпосылки создания изобретения
1. Введение
Инфаркт миокарда (MI), удар, преходящие ишемические атаки (TIA) и эмболия легких (PE) являются основными причинами заболеваний и смертности во всем мире. Эти опасные для жизни клинические события в большинстве случаев вызываются тромбами, которые могут быть расположены в различных сосудах, распространяясь по всему организму, и могут иметь различных размер и состав. Источником удара или TIA может быть, например, тромб в левой артерии (LA) сердца или в одном из крупных сосудов между сердцем и головным мозгом, таком как сонная артерия. В случае PE, причиной может быть венозный тромбоз, часто расположенный в нижних конечностях.
В растущих тромбах заключительная обычная стадия агрегации тромбоцитов характеризуется связыванием активированного гликопротеина IIb/IIIa с фибриногеном крови, что приводит к перекрестному сшиванию внутри тромбоцитов. Создание и развитие ингибиторов гликопротеина IIb/IIIa (Scarborough R.M., Gretler D.D., J. Med. Chem. 2000, 43, 3453-3473) представляет значительный интерес в фармакологическом исследовании по отношению к анти-агрегатной и анти-тромботической активности.
3
Тем не менее, для специалистов в области здравоохранения необходимы не только соединения, которые предотвращают тромбоз при неотложной, интенсивной терапии, а также для удовлетворительного способа визуализации тромбов вплоть до размера 1 мм. В особенности, визуализация тромбов является важной, поскольку для применения в клинике, такие как тромболитическое вмешательство, необходимо, чтобы участок образования тромба был идентифицирован и предоставлена возможность наблюдения эффектов терапии. Следовательно, визуализация тромбов может помочь избежать ненужного профилактического применения и вместе с этим антикоагулянтного лечения, которое связано с рисками (например, тяжелые кровотечения вследствие сниженной коагуляционной способности).
Популяция пациентов, которая может получить преимущества от такой диагностической процедуры, является очень большой. В соответствии с "Heart disease and Stroke Statistics - 2010 Update" Американской ассоциации кардиологов, только в США от ишемической болезни сердца страдает 17,6 миллиона человек. Каждый год предположительно 785 тысяч американцев получат новую коронарную атаку, и около 470 тысяч получат повторную атаку. Каждый год приблизительно 795 тысяч пациентов испытают новый или повторный удар. Для около 610 тысяч это будут первые атаки. Из всех ударов, 87% являются ишемическими, большинство из них вследствие тромбоэмболической причины (Lloyd-Jones, D. и др., Circulation, 2010, 121(7): cc. e46-215). Встречаемость преходящей ишемической атаки (TIA) в Соединенных Штатах Америки по оценкам составляет приблизительно 200 тысяч - 500 тысяч в год, с распространением в популяции 2,3%, что переводится в около 5 миллионов людей (Easton, J.D. и др., Stroke, 2009, 40(6): cc. 2276-2293). Особи, которые имеют TIA, имеют 90-дневный риск удара от 3,0% до 17,3% и 10-летний риск удара 18,8%. Комбинированный 10-летний удар, инфаркт миокарда, или риск смерти от сосудистого заболевания составляет даже 42,8% (Clark, T.G., M.F.G. Murphy, и P.M. Rothwell, Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry, 2003, 74(5): cc. 577-580).
Визуализация занимает важнейшее место в идентификации тромбов. В настоящее время, визуализация тромбов основывается на различных средствах в зависимости от области расположения сосудов. Ультразвук сонной артерии используют для поиска тромбов сонной артерии, с помощью чреспищеводной эхокардиографии (TEE) ищут сгустки в камерах сердца, с помощью ультразвука ищут тромбоз глубоких вен, и СТ становится «золотым стандартом» для PE обнаружения.
2. Описание уровня техники, проблем, подлежащих решению, и их решения
Несмотря на успех этих техник, существует большая необходимость в решении проблемы молекулярной визуализации для обнаружения и контролирования тромба: во-первых, существуют определенные сосудистые области, которые плохо разработаны. Например, несмотря на наилучшие усилия визуализации, некоторые 30%-40% ишемических ударов являются "криптогенными", то есть неопределенной причины, или другими словами, источник тромбоэмболии никогда не будет идентифицирован (Guercini, F. и др., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2008, 6(4): cc. 549-554). Основные источники криптогенного удара включают атеросклероз в дуге аорты или внутричерепных артериях. В частности, полагают, что разрыв атеросклеротической бляшки в дуге или других основных сосудах может быть основным источником криптогенных ударов и его может быть сложно обнаружить с помощью общепринятых методов. Данные недавнего клинического испытания для чреспищеводной эхокардиографии (TEE) показали, что наличие утолщенной сосудистой стенки в дуге аорты не является прогнозирующим ишемического удара, хотя изъязвленные атеросклеротические бляшки дуги аорты связаны с криптогенным ударом. Подход молекулярной визуализации, нацеленный на тромбоциты, потенциально может идентифицировать сгусток в присутствии атеросклеротической бляшки. В завершение, существует потребность в подходе, в котором один механизм может использоваться для идентификации тромбов в организме. Например, при последующем наблюдении за TIA или ударом необходимы проводимые в настоящее время множественные исследования для поиска источника эмболии (Ciesienski, K.L. и P. Caravan, Curr Cardiovasc Imaging Rep., 2010, 4(1): cc. 77-84).
Как уже было указано, терапевтическое применение ингибиторов гликопротеина IIb/IIIa (Scarborough R.M., Gretler D.D., J. Med. Chem. 2000, 43, 3453-3473) представляло существенных интерес ранее. В то же время коммерчески доступно три антагониста гликопротеина IIb/IIIa: рекомбинантное антитело (Abciximab), циклические гептапептид (Eptifibatid) и синтетический, непептидный ингибитор (Tirofiban). Tirofiban (торговая марка AGGRASTAT) относится к классу сульфонамидов и представляет собой исключительно синтетическую, небольшую молекулу среди других указанных фармацевтических препаратов. Duggan и др., 1994, патент США №5,292,756, раскрыли сульфонамидный антагонист рецептора фибриногена в качестве терапевтических средств для предотвращения и лечения заболеваний, вызываемых образованием тромбов.

Одной из попыток решить проблему визуализации тромбов является разработка SPECT радиоактивного индикатора apticide (AcuTect). Apticide представляет собой меченный Tc-99m пептид, которые специфически связывается с рецептором GPIIb/IIIa и используется для визуализации тромбов в организме млекопитающего. Dean и др., 1996, патент США №5,508,020, описали радиоактивно меченные пептиды, способы и наборы для получения таких пептидов для визуализации участков в организме млекопитающего, меченных технецием-99m посредством Tc-99m связывающих частей. Dean и Lister-James описали пептиды, которые специфически связываются с рецепторами GPIIb/IIIa на поверхности активированных тромбоцитов (патент США №5,645,815; патент США №5,830,856 и патент США №6,028,056). Apticide был разрешен к применению для обнаружения тромбоза глубоких вен. Разрешение, достигаемое с помощью пептида, меченного технецием, было признано неудовлетворительным вследствие неспецифического связывания и высокого фона.
В уровне техники были описаны новые высокоспецифические непептидные антагонисты гликопротеина IIb/IIIa (Damiano и др., Thrombosis Research 2001 104, 113-126; Hoekstra, W.J., и др., J. Med. Chem., 1999, 42, 5254-5265). Известно, что эти соединения являются антагонистом GPIIb/IIIa, и эффективны в качестве терапевтических средств с антиагрегатной и антитромботической активностью (см. WO 95/08536, WO 96/29309, WO 97/33869, WO 9701/60813, патент США №6,515,130). Также предложено потенциальное применение антагонистов гликопротеина IIb/IIIa в качестве контрастных средств (см. US 2007/0189970 A1). Тем не менее, не была показана визуализация тромбов с применением этих соединений.
18
F-18 радиоактивно меченные соединения и их предшественники, описанные в этом изобретении, неожиданно проявляют высокую метаболическую стабильность, низкое связывание белка и быструю элиминацию. Успешно было продемонстрировано неинвазивную PET визуализацию очень небольших тромбов in vivo с помощью F-меченного радиоактивного индикатора.
Изображения проявляют сильные сигналы в артериальных и венозных тромбах. В отличие от Apticide (патент США №5,645,815; патент США №5,830,856 и патент США №6,028,056, не существует фона, видимого в целом организме, за исключением экскретирующих органов печени и почек. Более неожиданно, можно обнаружить даже очень небольшие тромбы (толщина <1 мм) и показать яркий сигнал на изображении. До настоящего времени обнаружение таких небольших тромбов не было описано. Тромбы, показанные с Apticide, имели размер 89 плюс/минус 26 мг [среднее значение плюс/минус СКО] (Lister-James, J., и др., J Nucl Med, 1996, 37(5): p. 775-81).
Визуализация небольших тромбов является чрезвычайно важной по отношению к тромбоэмболическим заболеваниям, таким как инфаркт миокарда, эмболия легких, удар и преходящие ишемические атаки. Кроме того, чувствительный к тромбу PET маркер можно использовать для регулярного наблюдения за состоянием здоровья пациентов с сердечно-сосудистым риском, или диагностики опасных для жизни заболеваний, таких как аневризма аорты, хроническая тромбоэмболическая легочная гипертония (СЕТРН), фибрилляция предсердий и тромбоз венечных сосудов.
Соотношение in vivo сгусток к крови описанных соединений находится в высоком, чрезвычайно желательном диапазоне, который является особенностью, никогда ранее не описанной. В действительности, это является решающей отличительной особенностью новых соединений, которое отвечает за очевидное преимущество по сравнению с соединениями, известными в настоящее время из уровня техники и предоставляет возможность вводить существенно более низкую радиоактивную дозу потенциальному пациенту (только 15 МБк необходимо для обезьян, что составляет по меньшей мере в 20 раз меньшую дозу по сравнению с дозой, используемую в наиболее близком источнике из уровня техники US 2007/0189970 А1).
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, которые связываются с гликопротеином IIb/IIIa и могут использоваться в качестве радиоактивных индикаторов для диагностической визуализации, в особенности позитронно-эмиссионной томографии (PET), тромбов. Описанные соединения предоставляют возможность визуализации артериальных и венозных тромбов с чувствительностью, которая ранее никогда не была описана и которой достаточно для визуализации самых маленьких тромбов в одноцифровом миллиграммовом диапазоне. По сравнению с известным уровнем техники, описанные соединения предоставляют возможность получать изображения с по существу отсутствующим фоном в релевантных тканях и органах и вводить радиоактивные дозы в значительно более низком диапазоне.
Описание
- Настоящее изобретение обеспечивает новые соединения формулы I, формулы II и формулы III.
- Изобретение также обеспечивает радиоактивную фармацевтическую композицию соединений формулы III или их фармацевтически приемлемых солей неорганических или органических кислот или оснований, их гидратов, комплексов и сольватов и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, адъювант или наполнитель.
- Соединения формулы III могут существовать в виде цвиттер-ионов. Все формы соединений, включая свободные кислоты, свободные основания и цвиттер-ионы, охватываются объемом настоящего изобретения. В данной области техники хорошо известно, что соединения, содержащие как амино, так и карбоксильные группы, часто существуют в равновесии с их формами цвиттер-ионов. Таким образом, полагают, что любые из соединений, описанных в настоящей заявке, которые содержат, например, как амино, так и карбоксильные группы, также включают ссылку на их соответствующие цвиттер-ионы.
18
- Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединений формулы III, которые содержат F:
Прямой метод:
18
- F введение радиоактивной метки в соединения формулы I, получая соединения формулы II, и
- отщепление защитных групп от соединений формулы II, получая соединения формулы III.
непрямой метод:
18
- Взаимодействие соединений формулы I с F радиоактивно меченным строительным блоком, и
- Отщепление защитных групп, получая соединения формулы III.
19
- Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения соединений формулы III, которые содержат F:
Метод 1:
19
- F Фторирование соединений формулы I, получая соединения формулы II,
- Отщепление защитных групп от соединений формулы II, получая соединения формулы III.
Метод 2:
19
19
- Взаимодействие соединения формулы I с F фторсодержащим реагентом или F фторированным строительным блоком,
- Отщепление защитных групп, получая соединения формулы III.
Подробное описание
В преддверии подробного описания, охватываются основные соединения формулы III.
Основной и третий аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы III:
где
3
3
2
R представляет собой Н, F, CF, CN или NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R представляет собой Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z
или -С≡С-Z;
X представляет собой CH или N;
18
Y представляет собой F или F;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
3
2
R представляет собой H, CF, CN или NO;
8
2
n
2
2
m
R представляет собой Y, -O(СН)-Y или -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3,
включая E- и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и любую фармацевтически приемлемую соль или их комплекс.
Первый аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы I:
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой H;
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, F, CF, CN и NO;
4
+
-
+
11
-
4
+
-
2
3
2
n
2
2
m
2
2
2
3
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -NO, -N(Me)(W), -IR(W)-O(СН)-LG, -(ОСНСН)-LG, Q, -ОСН-Q; -СН-СН-Q, -СН=СН-Q и -С≡С-Q; предпочтительно R выбирают из группы, включающей ОН, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG, -(ОСНСН)-LG, Q, -ОСН-Q; -СН-CH-Q, -CH=CH-Q и -C≡C-Q;
X выбирают из CH или N;
LG представляет собой уходящую группу;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (C-C)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил;
11
11
R выбирают из группы, включающей фенил, (4-метил)фенил, (4-метокси)фенил, 2-фуранил и 2-тиенил; предпочтительно R выбирают из группы, включающей (4-метокси)фенил и 2-тиенил;
-
-
-
-
-
-
3
2
3
3
2
3
W выбирают из группы, включающей CF(S(O)O, анион йодида, анион бромида и CFC(O)O; предпочтительно W выбирают из группы CF(S(O))O, анион бромида и CFC(O)O;
Q представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Q;
5
9
10
10
10
5
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, CF, CN и NO
6
+
-
+
11
-
6
+
-
2
3
2
n
2
2
m
3
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -NO, -N(Ме)(W), -IR(W), -O(СН)-LG и -(ОСНСН)-LG; предпочтительно R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG и -(ОСНСН)-LG;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
4
+
-
+
11
-
3
9
10
10
10
6
+
-
+
11
-
5
9
10
10
10
2
3
3
2
2
2
3
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Галоген, -NO, -N(Me)(W) или -IR(W), R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO, и при условии, что если R имеет значения Галоген, -NO, -N(Ме)(W) или -IR(W), R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
включая Е и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и любую фармацевтически приемлемую соль или их комплекс.
1
Предпочтительно, R представляет собой аминозащитную группу, содержащую трет-бутилоксикарбонил (BOC), карбобензилокси (Cbz) и 9-флуоренилметилоксикарбонил (FMOC).
1
Более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC) или карбобензилокси (Cbz).
1
Еще более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC).
2
Предпочтительно, R представляет собой карбоксил-защитную группу, выбранную из группы, включающей метил, этил, пропил, трет-бутил, бензил и п-метоксибензил.
2
Более предпочтительно, R выбирают из группы, включающей метил и трет-бутил.
1
2
Предпочтительно, R представляет собой азот-защитную группу и R представляет собой карбоксил-защитную группу.
1
2
Более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC) и R представляет собой метил или трет-бутил.
Предпочтительно, X представляет собой N.
1
2
Предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC), R представляет собой метил или трет-бутил, и X представляет собой N.
Предпочтительно LG представляет собой уходящую группу, выбранную из группы, включающей метилсульфонилокси и (4-метилфенил)сульфонилокси.
Более предпочтительно, LG представляет собой (4-метилфенил)сульфонилокси.
3
4
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(CH)-LG.
3
4
1
2
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(CH)-LG и R представляет собой Boc и R представляет собой метил или трет-бутил и LG представляет собой метилсульфонилокси или (4-метилфенил)сульфонилокси.
Соединения формулы I определяются общей формулой и/или комбинацией предпочтительных характерных признаков, как определено выше.
В первом варианте осуществления, соединения формулы I определяются в виде отдельных диастереомеров формулы I-А, см. структуру в таблице А.
Во втором варианте осуществления, соединения формулы I определяются в виде смеси двух диастереомеров формулы I-A и формулы I-B, см. структуру в таблице А.
Предпочтительные характерные признаки, как определено выше, включены в настоящей заявке во все варианты осуществления.
Таблице А: Формула I диастереомеры
Соединения формулы I-А и формулы I-В также охватывают их фармацевтически приемлемые соли неорганических или органических кислот или оснований, гидраты, комплексы, и их сольваты и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, адъювант или наполнители.
Предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 21 трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)-фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 22
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 23
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 24
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 25
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 26
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 27
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 28
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-цианофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 29
трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-бром-4-цианобензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 30
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 31
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[2-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 32
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 33
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 34
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 35
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 36
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 37
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 2b
трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[1-(4-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 4е
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-гидроксифенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 5е
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(гидрокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 6а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 7а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 8d
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 17d
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-фтор-4′-гидроксибифенил-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 23b
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(4-гидроксифенил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 25е
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 27d
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 34a
трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 35a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 36a
трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(3-трет-бутокси-1-{5-[2-(4-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы I представляет собой Пример 37a
трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(3-трет-бутокси-1-{5-[2-(3-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
Второй аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы II:
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой водород;
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, F, CF, CN, NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z и -С≡С-Z;
X выбирают из CH или N;
18
Y выбирают из F или F;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (С-С)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
9
10
10
10
5
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей Н, CF, CN, NO;
8
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y и -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
7
3
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO и
8
5
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
включая E и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и любую фармацевтически приемлемую соль или их комплекс.
1
Предпочтительно, R представляет собой аминозащитную группу, выбранную из группы, включающей трет-бутилоксикарбонил (BOC), карбобензилокси (Cbz) и 9-флуоренилметилоксикарбонил (FMOC).
1
Более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC) или карбобензилокси (Cbz).
1
Еще более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC)
2
Предпочтительно, R представляет собой карбоксил-защитную группу, выбранную из группы, включающей метил, этил, пропил, трет-бутил, бензил и п-метоксибензил.
2
Более предпочтительно, R выбирают из группы, включающей метил и трет-бутил.
1
2
Предпочтительно, R представляет собой азот-защитную группу и R представляет собой карбоксил-защитную группу.
1
2
Более предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC) и R представляет собой метил или трет-бутил.
Предпочтительно, X представляет собой N.
1
2
Предпочтительно, R представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC), R представляет собой метил или трет-бутил, и X представляет собой N.
18
Предпочтительно, Y представляет собой F.
Предпочтительно, Y представляет собой F.
3
7
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(CH)-F.
3
7
18
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(CH)-F.
3
7
1
2
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(CH)-F и R представляет собой BOC и R представляет собой метил или трет-бутил.
3
7
18
1
2
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой H и R представляет собой -O(СН)-F и R представляет собой BOC и R представляет собой метил или трет-бутил.
Соединения формулы II определяются общей формулой и/или комбинацией предпочтительных характерных признаков, как определено выше.
В первом варианте осуществления, соединения формулы II определяются в виде отдельных диастереомеров, формулы II-А, см. структуру в таблице В.
Во втором варианте осуществления, соединения формулы II определяются в виде смеси двух диастереомеров формулы II-А и формулы II-В, см. структуру в таблице В.
Предпочтительные характерные признаки, как определено выше, включены в настоящей заявке во все варианты осуществления.
Таблица В: Формула II диастереомеры
Соединения формулы II-А и формулы II-В также охватывают их фармацевтически приемлемые соли неорганических или органических кислот или оснований, гидраты, комплексы, и их сольваты и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, адъювант или наполнители.
Предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 1d трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 1е
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 2c
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 2d
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[4-(2-фторэтокси)фенил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 3a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 4f
трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 5f
трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 6b
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 6c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 7b
трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 7c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 8e
трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 8f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 9a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 9b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 10a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 10b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 11а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 11b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 12а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 13а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 15a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 16a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 17e
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 17f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 18a
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 19а
трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой Пример 20
(E/Z) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[3-(2-фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{3-[2-[F]фторэтокси]фенил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой (3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{3-[2-[F]фторэтокси]фенил}пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{4-[2-[F]фторэтокси]фенил}пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой (3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-[F]фторэтокси]пиридин-3-ил}пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-[F]фторэтокси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-[F]фторэтокси]пиридин-3-ил}пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{4-[2-[F]фторэтокси]фенил}пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой (3S)-3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-(5-{4-[2-[F]фторэтокси]фенил}пиридин-3-ил)пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{4-[2-[F]фторэтокси]фенил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[3-циано-4-[F]фторфенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(3-циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-циано-3-[F]фторфенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[4-циано-3-[F]фторфенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(15)-3-трет-бутокси-1-({[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[3-(2-{2-[2-[F]фторэтокси]этокси}этокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
Другое предпочтительное соединение формулы II представляет собой 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[3-(2-{2-[2-[F]фторэтокси]этокси}этокси)фенил]пропановая кислота
Третий аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы III:
где
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей Н, F, CF, CN, NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z и -С≡С-Z;
X выбирают из СН или N;
18
Y выбирают из F или F;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (С-C)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, CF, CN, NO;
8
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y и -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
7
3
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO и
8
5
9
10
10
3
10
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
включая E и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и любую фармацевтически приемлемую соль или их комплекс.
Предпочтительно, X представляет собой N.
18
Предпочтительно, Y представляет собой F.
Предпочтительно, Y представляет собой F.
3
7
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой Н и R представляет собой -O(СН)-F.
3
7
18
2
n
В предпочтительном варианте осуществления, X представляет собой N и R представляет собой Н и R представляет собой -O(СН)-F.
Соединения формулы III определяются общей формулой и/или комбинацией предпочтительных характерных признаков, как определено выше.
В первом варианте осуществления, соединения формулы III определяются в виде отдельных диастереомеров формулы III-А, см. структуру в таблице С.
Во втором варианте осуществления, соединения формулы III определяются в виде смеси двух диастереомеров формулы III-А и формулы III-В, см. структуру в таблице С.
Предпочтительные характерные признаки, как определено выше, включены в настоящей заявке во все варианты осуществления.
Соединения формулы III-А и формулы III-В также охватывают их фармацевтически приемлемые соли неорганических или органических кислот или оснований, гидраты, комплексы, и их сольваты и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, адъювант или наполнители.
Соединения формулы III могут существовать в виде цвиттер-ионов. Все формы соединений, включая свободную кислоту, свободное основание и цвиттер-ионы, охватываются объемом настоящего изобретения. В данной области техники хорошо известно, что соединения, содержащие как амино, так и карбоксильные группы, часто существуют в равновесии с их цвиттер-ионными формами. Таким образом, полагают, что любые из соединений, описанных в настоящей заявке, которые содержат, например, как амино, так и карбоксильные группы, также включают ссылку на их соответствующие цвиттер-ионы.
Предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 1 (3S)-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 2
(3S)-3-[4-(2-фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 3
(3S)-3-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 4
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 5
(3S)-3-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 6
(3S)-3-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 7
(3S)-3-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 8
(3S)-3-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 9
(3S)-3-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 10
(3S)-3-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 11
(3S)-3-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]-пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 12
(3R)-3-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 13
(3S)-3-{5-[(4-циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 14
(3S)-3-(4-циано-3-фторфенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 15
(3S)-3-(5-{[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 16
(3S)-3-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 17
(3S)-3-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 19
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 20
(E/Z)(3S)-3-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 38
18
(3S)-3-[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 39
18
(3S)-3-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 40
18
(3S)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 41
18
(3S)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 42
18
(3S)-3-[5-(3-циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 43
18
(3S)-3-[5-(4-циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 44
18
(3S)-3-(5-{[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 45
18
(3S)-3-(5-{[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 46
18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 47
18
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Другое предпочтительное соединение формулы III представляет собой Пример 48
18
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Четвертый аспект настоящего изобретения относится к способам получения соединений формулы III
где
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, F, CF, CN, NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z и -С≡С-Z;
X выбирают из СН или N;
18
Y выбирают из F или F;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (С-С)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей Н, CF, CN, NO;
8
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y и -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
7
3
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO, и
8
5
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
используя в качестве исходных соединения формулы I,
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой H;
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, F, CF, CN, и NO;
4
+
-
+
11
-
4
+
-
2
3
2
n
2
2
m
2
2
2
3
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -NO, -N(Me)(W), -IR(W)-O(СН)-LG, -(ОСНСН)-LG, Q, -ОСН-Q; -СН-СН-Q, -СН=СН-Q и -С≡С-Q; предпочтительно R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG, -(ОСНСН)-LG, Q, -ОСН-Q; -СН-СН-Q, -СН=СН-Q и -С≡С-Q;
X выбирают из CH или N;
LG представляет собой уходящую группу;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (С-С)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил;
11
11
R выбирают из группы, включающей фенил, (4-метил)фенил, (4-метокси)фенил, 2-фуранил и 2-тиенил; предпочтительно R выбирают из группы, включающей (4-метокси)фенил и 2-тиенил;
-
-
-
-
-
-
3
2
3
3
2
3
W выбирают из группы, включающей CF(S(O)O, анион йодида, анион бромида и CFC(O)O; предпочтительно W выбирают из группы CF(S(O)O, анион бромида и CFC(O)O;
Q представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Q;
5
9
10
10
10
5
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, CF, CN, и NO
6
+
-
+
11
-
6
+
-
2
3
2
n
2
2
m
3
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -NO, -N(Me)(W), -IR(W), -O(СН)-LG и -(ОСНСН)-LG; предпочтительно R выбирают из группы, включающей OH, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG и -(ОСНСН)-LG;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
4
+
-
+
11
-
3
9
10
10
10
6
+
-
+
11
-
5
9
10
10
10
2
3
3
2
2
2
3
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Галоген, -NO, -N(Me)(W) или -IR(W), R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO, и при условии, что если R имеет значения Галоген, -NO, -N(Me)(W) или -IR(W), R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
и реакция фторирования, получая соединения формулы II,
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой водород;
3
9
10
10
10
3
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, F, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, F, CF, CN, NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z и -С≡С-Z;
X выбирают из СН или N;
18
Y выбирают из F или F;
9
1
6
1
4
R представляет собой водород или (С-С)алкил; предпочтительно водород или (С-С)алкил, более предпочтительно водород, метил, этил или трет-бутил;
10
1
6
1
4
R представляет собой (С-С)алкил; предпочтительно (С-С)алкил, более предпочтительно метил, этил или трет-бутил; 2 представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
9
10
10
10
5
3
2
2
3
2
R выбирают из группы, включающей H, CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN и NO; предпочтительно R выбирают из группы, включающей H, CF, CN, NO;
8
2
n
2
2
m
R выбирают из группы, включающей Y, -O(СН)-Y и -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
7
3
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO, и
8
5
9
10
10
10
3
2
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, COR, COOR, SOR, SOR, CN или NO;
и отщепление защитной (ых) группы (групп)
или
18
18
реакция соединений формулы I с F или F реагентом или F или F строительным блоком и отщепление защитных групп, получая соединения формулы III.
Кроме того, четвертый аспект настоящего изобретения относится к способам получения соединений формулы III
где
3
3
2
R представляет собой Н, F, CF, CN или NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R представляет собой Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z
или -С≡С-Z;
X выбирают из СН или N;
18
Y представляет собой F или F;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
3
2
R представляет собой Н, CF, CN или NO;
8
2
n
2
2
m
R представляет собой Y, -O(СН)-Y или -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3,
используя в качестве исходных соединения формулы I,
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой H;
3
3
2
R представляет собой Н, F, CF, CN и NO;
4
+
-
3
2
n
2
2
m
2
2
2
R представляет собой OH, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG, (ОСНСН)-LG, Q, -ОСН-Q; -СН-СН-Q, -СН=СН-Q и -С≡С-Q;
X выбирают из СН или N;
LG представляет собой уходящую группу;
-
-
-
3
2
3
W представляет собой CF(S(O)O, анион бромида и CFC(O)O;
Q представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Q;
5
3
2
R представляет собой Н, CF, CN и NO;
6
+
-
3
2
n
2
2
m
R представляет собой OH, Галоген, -N(Me)(W), -O(СН)-LG и (ОСНСН)-LG;
n представляет собой 1-3;
и m, представляет собой 2-3;
4
+
-
3
3
3
2
при условии, что если R имеет значения Галоген или -N(Me)(W), R имеет значения CF, CN или NO, и
6
+
-
5
3
3
2
при условии, что если R имеет значения Галоген или -N(Ме)(W), R имеет значения CF, CN или NO;
и реакция фторирования, получая соединения формулы II,
где
1
R представляет собой водород или аминозащитную группу;
2
R представляет собой водород или карбоксил-защитную группу;
1
2
где по меньшей мере один из R и R не представляет собой водород;
3
3
2
R представляет собой Н, F, CF, CN и NO;
7
2
n
2
2
m
2
2
2
R представляет собой Y, -O(СН)-Y, -(ОСНСН)-Y, Z, -ОСН-Z; -СН-СН-Z, -СН=СН-Z
или -С≡С-Z;
X выбирают из СН или N;
18
Y выбирают из F или F;
Z представляет собой группу
где * указывает атом присоединения Z;
5
3
2
R представляет собой Н, CF, CN и NO;
8
2
n
2
2
m
R представляет собой Y, -O(СН)-Y или -(ОСНСН)-Y;
n представляет собой 1-3;
и m представляет собой 2-3;
7
3
8
5
3
2
3
2
при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, CN или NO, и при условии, что если R имеет значения Y, то R имеет значения CF, CN или NO;
и отщепление защитной (ых) группы (групп)
или
18
18
реакция соединений формулы I с F или F реагентом или F или F строительным блоком и отщепление защитных групп, получая соединения формулы III.
В первом варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединений формулы III, который включает стадии:
18
4
18
6
- F-радиоактивное фторирование соединения формулы I, где R отличается от ОН, или F-радиоактивное фторирование соединения формулы I, где R отличается от ОН, с получением соединения формулы II, и последующее
- Отщепление защитных групп от соединения формулы II с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III путем твердофазной экстракции или путем полупрепаративной ВЭЖХ. Предпочтительные ВЭЖХ колонки представляют собой колонки с обращенной фазой, такие как АСЕ 5 µ C18-HL (10×250 мм), Phenomenex Gemini 5 µ C18 110A (10×250 мм) или Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм). Смеси буферного раствора, кислот, оснований, воды и др. с органическими растворителями, такими как ацетонитрил, метанол, этанол и др. можно использовать в качестве подвижной фазы. Собранный пик при ВЭЖХ очистке необязательно можно захватывать на картридж для твердофазной экстракции, предпочтительно с помощью С18 разделительного картриджа. Чистые органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол, этанол и др., или водные буферные растворы, кислоты, основания, воду и др. или смеси органических растворителей и процитированных водных растворов можно использовать для элюирования очищенного F-18 меченного продукта из картриджа. Предпочтительно F-18 меченный продукт элюировали из чистого этанола или смесей с водой.
Предпочтительные характерные особенности и варианты осуществления, раскрытые для соединений общей формулы I, II и III, включены в настоящую заявку.
18
18
18
18
18
18
18
18
2
Способы F-фторирования хорошо известны специалисту в данной области техники. Например, F реагент может представлять собой KF, KHF, HF, RbF, CsF, NaF.
18

Необязательно, F реагент включает хелатирующий агент, такой как криптанд (например: 4,7,13,16,21,24-Гексаокса-1,10-диазабицикло[8,8,8]-гексакозан - Kryptofix) или краун-эфир (например: 18-краун-6).
18
18
-
18
-
18
18
F реагент также может представлять собой тетраалкиламмониевую соль F или тетраалкилфосфониевую соль F, известную специалисту в данной области техники, например: тетрабутиламмоний [F]фторид, тетрабутилфосфоний [F]фторид.
18
18
18
18
18

2
Предпочтительно, F реагент представляет собой CsF, KF, KHF, тетрабутиламмоний [F]фторид и содержит Kryptofix.
Реагенты, растворители и условия, которые можно использовать для этого фторирования, являются общепринятыми и хорошо известны специалисту в данной области техники. См., например, J. Fluorine Chem., 27 (1985): 177-191; Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions (2006), в: Schubiger P.A., Friebe M., Lehmann L (ред.), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, cc. 15-50). Предпочтительно, растворители, которые используются в данном способе, представляют собой ДМФА, ДМСО, ацетонитрил, DMA, или их смеси, предпочтительно растворитель представляет собой ацетонитрил, ДМСО.
18
4
6
+
-
+
11
-
4
6
th
2
3
Предшественники для алкил-F соединений I (где R или R не представляет собой ОН, -Галоген, -NO, -N(Me)(W), -IR(W)), имеют значения, например, галогениды или сульфонаты, такие как метилсульфонилокси, (4-метилфенил)сульфонилокси, трифторметилсульфонилокси, нонафторбутилсульфонилокси, (4-бромфенил)сульфонилокси, (4-нитрофенил)сульфонилокси и др. (формула I с R или R, содержащим уходящую группу (LG)), которые могут быть синтезированы из соответствующих гидрокси соединений в соответствии с методами, известными в данной области (J. March, Advanced Organic Chemistry, 4 ed. 1992, John Wiley & Sons, c. 352 и далее).
18
4
6
Предшественники для алкил-F соединений I (где R или R имеет значения -ОН) могут быть связаны в щелочных условиях с простетическими группами, содержащими как F-18 меченную, так и хорошую уходящую группу, такую как галогенид или сульфонат, такой как метилсульфонилокси, (4-метилфенил)сульфонилокси, трифторметилсульфонилокси, нонафторбутилсульфонилокси, (4-бромфенил)сульфонилокси, (4-нитрофенил)сульфонилокси и др. Эти непрямые введения меток, описанные в настоящем изобретении, можно осуществить в соответствии с методами, известными в данной области (в: Schubiger Р.А., Friebe M., Lehmann L, (ред), PET-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, cc. 15-50).
18
4
6
+
-
+
11
-
18
2
3
Предшественники для арил-F соединений I (где R или R имеет значения -Галоген, -NO, -N(Me)(W), -IR(W)) представляют собой, например, арил галогениды, нитро соединения, триметил аммоний соединения, арилйодоний соединения и др., которые можно превратить в соответствующие F соединения согласно настоящему изобретению с помощью методов, известных в данной области (L. Cai, S. Lu, V. Pike, Eur. J. Org. Chem. 2008, 2853-2873). Исходные вещества для этих предшественников могут быть синтезированы с помощью методов, известных в данной области (R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, 1989).
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III путем твердофазной экстракции или путем полупрепаративной ВЭЖХ. Предпочтительные ВЭЖХ колонки представляют собой колонки с обращенной фазой, такие как АСЕ 5 µ C18-HL (10×250 мм), Phenomenex Gemini 5 µ C18 110A (10×250 мм) или Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм). Смеси буферного раствора, кислот, оснований, воды и др. с органическими растворителями, такими как ацетонитрил, метанол, этанол и др., можно использовать в качестве подвижной фазы. Собранный пик при ВЭЖХ очистке необязательно можно захватывать на картридж для твердофазной экстракции, предпочтительно с помощью С18 разделительного картриджа. Чистые органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол, этанол и др., или водные буферные растворы, кислоты, основания, воду и др. или смеси органических растворителей и процитированных водных растворов можно использовать для элюирования очищенного F-18 меченного продукта из 10 картриджа. Предпочтительно F-18 меченный продукт элюировали из чистого этанола или смесей с водой.
Во втором варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединений формулы III, который включает стадии:
4
6
18
- Взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, или взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, с F меченным строительным блоком, и последующее
- Отщепление защитных групп от соединения формулы II с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III путем твердофазной экстракции или путем полупрепаративной ВЭЖХ. Предпочтительные ВЭЖХ колонки представляют собой колонки с обращенной фазой, такие как АСЕ 5 µ C18-HL (10×250 мм), Phenomenex Gemini 5 µ C18 110A (10×250 мм) или Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм). Смеси буферного раствора, кислот, оснований, воды и др. с органическими растворителями, такими как ацетонитрил, метанол, этанол и др., можно использовать в качестве подвижной фазы. Собранный пик при ВЭЖХ очистке необязательно можно захватывать на картридж для твердофазной экстракции, предпочтительно с помощью С18 разделительного картриджа. Чистые органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол, этанол и др., или водные буферные растворы, кислоты, основания, воду и др. или смеси органических растворителей и процитированных водных растворов можно использовать для элюирования очищенного F-18 меченного продукта из картриджа. Предпочтительно F-18 меченный продукт элюировали из чистого этанола или смесей с водой.
В третьем варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединений формулы III, который включает стадии:
4
6
- Взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, или взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, со строительным блоком, содержащим уходящую группу LG и последующее
18
- F-радиоактивное фторирование полученного соединения формулы I, с получением соединения формулы II, и последующее
- Отщепление защитных групп с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III путем твердофазной экстракции или путем полупрепаративной ВЭЖХ. Предпочтительные ВЭЖХ колонки представляют собой колонки с обращенной фазой, такие как АСЕ 5 µ C18-HL (10×250 мм), Phenomenex Gemini 5 µ C18 110A (10×250 мм) или Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм). Смеси буферного раствора, кислот, оснований, воды и др. с органическими растворителями, такими как ацетонитрил, метанол, этанол и др., можно использовать в качестве подвижной фазы. Собранный пик при ВЭЖХ очистке необязательно можно захватывать на картридж для твердофазной экстракции, предпочтительно с помощью С18 разделительного картриджа. Чистые органические растворители, такие как ацетонитрил, метанол, этанол и др., или водные буферные растворы, кислоты, основания, воду и др. или смеси органических растворителей и процитированных водных растворов можно использовать для элюирования очищенного F-18 меченного продукта из картриджа. Предпочтительно F-18 меченный продукт элюировали из чистого этанола или смесей с водой.
Пятый аспект настоящего изобретения относится к способам получения соединений формулы III (холодный стандарт).
В первом варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединений формулы III, который включает стадии:
- Фторирование соединения формулы I с получением соединения формулы II, и последующее
- Отщепление защитных групп от соединения формулы II с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III. Подходящими методами очистки являются хроматографические методы (например, ВЭЖХ, флэш-хроматография).
Предпочтительные характерные особенности и варианты осуществления, раскрытые для соединений общей формулы I, II и III, включены в настоящую заявку.
Во втором варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединения формулы III, который включает стадии:
4
6
- Взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, или взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, с фтор-содержащим строительным блоком, и последующее
- Отщепление защитных групп с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III. Подходящими методами очистки являются хроматографические методы (например, ВЭЖХ, флэш-хроматография).
Предпочтительные характерные особенности и варианты осуществления, раскрытые для соединений общей формулы I и III, включены в настоящую заявку.
В третьем варианте осуществления, изобретение относится к способу получения соединений формулы III, который включает стадии:
4
6
- Взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, или взаимодействие соединения формулы I, где R представляет собой ОН, со строительным блоком, содержащим уходящую группу LG и последующее
- Фторирование полученного соединения формулы I, с получением соединения формулы II, и последующее
- Отщепление защитных групп с получением соединения формулы III.
Необязательно способ сопровождается очисткой соединения формулы III. Подходящими методами очистки являются хроматографические методы (например, ВЭЖХ, флэш-хроматография).
Изобретение также относится к применению соединения формулы III для приготовления лекарственного средства или фармацевтического препарата для лечения.
18
В шестом аспекте изобретения, изобретение относится к F меченным соединениям в соответствии с формулой III для приготовления визуализирующего меченного вещества или радиофармпрепарата для визуализации тромбов. Визуализирующее вещество или радиофармпрепарат предпочтительно пригоден в качестве визуализирующего вещества для PET применений.
18
Другими словами, изобретение относится к F меченным соединениям III в качестве визуализирующего меченного вещества или радиофармпрепарата.
18
Изобретение относится к F меченным соединениям III для применения для визуализации тромбов.
Изобретение также относится к способу визуализации или диагностики тромбов, который включает стадии:
18
- Введение млекопитающему эффективного количества F меченного соединения формулы III,
- Получение изображений млекопитающего и
- Оценка изображений.
18
Настоящее изобретение также относится к способу визуализации, который включает стадию введения пациенту обнаруживаемого количества F меченного соединения формулы III и визуализацию указанного соединения.
Другой аспект изобретения представляет собой применение соединения формулы III, как описано выше и в настоящей заявке, для диагностики тромбов у пациента, в частности у млекопитающего, такого как человек.
Предпочтительно, применение соединения в соответствии с изобретением для диагностики осуществляют с использованием позитронно-эмиссионной томографии (PET).
Другой аспект изобретения относится к способу визуализации тромбов. Такой способ включает а) введение соединения млекопитающему, как описано выше и в настоящей заявке, содержащего обнаруживаемую метку, и б) обнаружение сигнала, исходящего от соединения, которое специфически поглощается тромбом.
В дальнейшем аспекте, изобретение относится к способу диагностики пациента с тромбоэмболическим заболеванием, таким как инфаркт миокарда, эмболия легких, удар и преходящие ишемические атаки. Этот способ включает а) введение человеку, нуждающемуся в такой диагностике, соединения в соответствии с изобретением с обнаруживаемой меткой для обнаружения соединения у человека, как описано выше и в настоящей заявке, и б) определение сигнала от обнаруживаемой метки, возникающего вследствие введения человеку соединения, предпочтительно путем позитронно-эмиссионной томографии (PET).
В дальнейшем аспекте, изобретение относится к способу диагностики пациента с заболеванием, опасным для жизни, таким как аневризма аорты, хроническая тромбоэмболическая легочная гипертония (СЕТРН), артериальная фибрилляция и тромбоз коронарных артерий. Этот способ включает а) введение человеку, нуждающемуся в такой диагностике, соединения в соответствии с изобретением с обнаруживаемой меткой для обнаружения соединения у человека, как описано выше и в настоящей заявке, и б) определение сигнала от обнаруживаемой метки, возникающего вследствие введения человеку соединения, предпочтительно путем позитронно-эмиссионной томографии (РЕТ).
В дальнейшем аспекте, изобретение относится к способу диагностики и контроля за состоянием здоровья пациентов с риском сердечнососудистых заболеваний. Этот способ включает а) введение человеку, нуждающемуся в такой диагностике, соединения в соответствии с изобретением с обнаруживаемой меткой для обнаружения соединения у человека, как описано выше и в настоящей заявке, и б) определение сигнала от обнаруживаемой метки, возникающего вследствие введения человеку соединения, предпочтительно путем позитронно-эмиссионной томографии (РЕТ).
Способы диагностики и применения для РЕТ визуализации тромбов включают введение одного из предпочтительных соединений, перечисленных ниже:
18
(3S)-3-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(2-[F]Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-{5-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
включая диастереомеры, их смеси, и их подходящие соли, и фармацевтически приемлемые носители или разбавители, как описано выше.
В седьмом аспекте, изобретение относится к набору, включающему один флакон или больше одного флакона, содержащего заранее определенное количество:
a) соединений формулы I, или
19
b) F меченных соединений формулы III.
Кроме того, в соответствии с этим аспектом настоящего изобретения, набор включает соединение, имеющее общую химическую формулу, как описано выше, в сочетании с приемлемым носителем, разбавителем, наполнителем или адъювантом или их смесью.
18
Предпочтительно, набор содержит физиологически приемлемый наполнитель или носитель и необязательные адъюванты и консерванты, реагенты, пригодные для осуществления описанных в настоящей заявке реакций и/или для получения F меченных реагентов. Кроме того, набор может содержать инструкции по его применению.
19
В восьмом аспекте, изобретение относится к применению соединений III для проведения биологических исследований и хроматографической идентификации. Более предпочтительно, применение относится к F меченным соединениям III.
19
F меченные соединения III пригодны в качестве сравнительных и/или измерительных средств.
Соединений III раскрыты в настоящей заявке, как определено выше, и охватывают все варианты осуществления и предпочтительные характерные особенности.
В девятом аспекте, изобретение относится к композиции, которая включает соединения формулы I, II или III, как определено в вышеописанных аспектах и включает варианты осуществления.
18
В первом варианте осуществления, изобретение относится к композиции, которая включает F меченное соединение формулы III и фармакологически приемлемые адъюванты. Эти адъюванты включают, в частности, носители, растворители, или стабилизаторы.
Специалисту в данной области техники известны адъюванты, которые являются подходящими для желательных фармацевтических составов, препаратов или композиции на основании своих экспертных знаний.
Введение соединений, фармацевтических композиций или комбинаций в соответствии с изобретением осуществляют с помощью любого из общепринятых способов введения, доступных в данной области. Парентеральное введение можно использовать для обхода стадии биоабсорбции. Внутривенные доставки являются предпочтительными.
Предпочтительно, композиции в соответствии с изобретением вводятся таким образом, что доза активного соединения для визуализации находится в диапазоне от 3,7 МБк (0,1 мКи) до 740 МБк (20 мКи) на пациента.
Более предпочтительно, будет использоваться доза в диапазоне от 3,7 МБк до 400 МБк на пациента.
Предпочтительно, композиция включает одно из соединений, представленных ниже:
18
(3S)-3-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(2-[F]Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-{5-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
включая диастереомеры, их смеси, и их подходящие соли, и фармацевтически приемлемые носители или разбавители, как описано выше.
19
Во втором варианте осуществления, изобретение относится к композиции, которая включает F меченные соединения формулы III. Такую композицию можно использовать для аналитических целей.
Предпочтительно, композиция включает одно из соединений, представленных ниже:
(3S)-3-[3-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[4-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[5-(2-Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(5-{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-{5-[3-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-{5-[4-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-{5-[2-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[5-(4-Фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]-пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3R)-3-{5-[(3-Циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-{5-[(4-Циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(4-Циано-3-фторфенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(5-{[4-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(5-{[3-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-[5-Фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
(E/Z)(3S)-3-(5-{[3-(2-Фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
включая E и Z-изомеры и диастереомеры, их смеси, и их подходящие соли.
18
19
В третьем варианте осуществления, изобретение относится к композиции, которая включает соединение формулы I. Такую композицию можно использовать для приготовления F меченных соединений формулы III (радиофармацевтический препарат) и F меченных соединений формулы III (холодный стандарт).
Предпочтительно, композиция включает одно из соединений, представленных ниже:
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)-фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-цианофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-бром-4-цианобензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[2-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
включая диастереомеры, их смеси, и их подходящие соли.
Определения
Следующие термины описывают общие и специфические структурные элементы химического каркаса соединений в соответствии с настоящим изобретением, а также функциональных групп и заместителей, присоединенных к ним. Они могут комбинироваться в известном смысле с образованием структур согласно правилам химической валентности и подходящей химической стабильности, то есть соединения, которые достаточно устойчивые для того, чтобы выдержать выделение до полезной степени чистоты из реакционной смеси, и для их предназначенного применения, такого как приготовления в виде фармацевтической композиции.
Для целей настоящего изобретения термины имеют следующие значения, если специально не указано иначе.
Термин "амин-защитная группа", как используется в настоящей заявке самостоятельно или в виде части другой группы, известный или очевидный специалисту в данной области техники, которую выбирают, не ограничиваясь только ими, из класса защитных групп, а именно карбаматы, амиды, имиды, N-алкил амины, N-арил амины, имины, енамины, бораны, N-P защитные группы, N-сульфенил, N-сульфонил и N-силил, и которые выбирают, но не ограничиваясь только ими, из тех, которые описаны в пособии Greene и Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, третье издание, страницы 494-653, которая включена в настоящую заявку в качестве ссылки. "Амин-защитная группа" предпочтительно представляет собой карбобензилокси (Cbz), п-метоксибензил карбонил (Moz или MeOZ), трет-бутилоксикарбонил (ВОС), 9-20 флуоренилметилоксикарбонил (FMOC), бензил (Bn), п-метоксибензил (РМВ), 3,4-диметоксибензил (DMPM), п-метоксифенил (РМР), трифенилметил (Тритил), метоксифенил дифенилметил (ММТ) или защищенная амино группа представляет собой 1,3-диоксо-1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2-ил (фталимидо) или азидо группа.
Термин "карбоксил-защитная группа", как используется в настоящей заявке самостоятельно или в виде части другой группы, известный или очевидный специалисту в данной области техники, которую выбирают, не ограничиваясь только ими, из класса защитных групп, а именно сложные эфиры, амиды и гидразиды, и которые выбирают, но не ограничиваясь только ими, из тех, которые описаны в пособии Greene и Wuts, Protecting groups in Organic Synthesis, третье издание, страницы 369-453, которая включена в настоящую заявку в качестве ссылки. "Карбоксил-защитная группа" предпочтительно представляет собой метил, этил, пропил, бутил, трет-бутил, аллил, бензил, 4-метоксибензил или 4-метоксифенил.
Термин "алкил", отдельно или в качестве части другой группы, относится к неразветвленной или разветвленной алкильной группе с 1-6 атомами углерода, такой как, например, метил, этил, пропил изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил.
Термин "галоген" представляет собой фтор, хлор и бром.
4
9
2
4
9
2
Термин "уходящая группа", как используется в настоящей заявке самостоятельно или в виде части другой группы, известный или очевидный специалисту в данной области техники, и обозначает, что атом или группа атомов отсоединяется от химического вещества с помощью нуклеофильного агента. Примеры представлены, например, в P. Stang и др. Synthesis (1982), cc. 85-125, табл. 2 (с. 86 (последнюю запись в этой таблице 2 необходимо откорректировать: "н-CFS(O)-O-нонафлат" вместо "н-CHS(O)-O-нонафлат"), Carey и Sunthese, Organische Synthese, (1995), cc. 279-281, табл. 5.8; или Netscher, Recent Res. Dev. Org. Chem., 2003, 7, 71-83, схемы 1, 2, 10 и 15 и другие). (Coenen, Fluorine-18 Labeling Methods: Features and Possibilities of Basic Reactions, (2006), в: Schubiger P.А., Friebe M., Lehmann L. (ред.), РЕТ-Chemistry - The Driving Force in Molecular Imaging. Springer, Berlin Heidelberg, cc. 15-50, подробно: схема 4 cc. 25, схема 5 cc. 28, таблица 4 cc. 30, фигура 7 cc. 33).
Предпочтительно, "уходящая группа" представляет собой фторид-, хлорид-, бромид-, йодид- или сульфонат-уходящую группу, включая но не ограничиваясь только ими, метилсульфонилокси, (4-метилфенил)сульфонилокси, трифторметилсульфонилокси, нонафторбутилсульфонилокси, (4-бромфенил)сульфонилокси, (4-нитрофенил)сульфонилокси, (2-нитрофенил)сульфонилокси, (4-изопропилфенил)сульфонилокси, (2,4,6-три-изопропил-фенил)сульфонилокси, (2,4,6-триметилфенил)сульфонилокси, (4-третбутилфенил)сульфонилокси, (4-метоксифенил)сульфонилокси.
18
18
18
18
18
18
Термин "F строительный блок", как используется в настоящей заявке самостоятельно или в виде части другой группы, известный или очевидный специалисту в данной области техники, который выбирают из класса соединений, используемых для непрямого метода F фторирования с помощью простетической группы. Это обозначает, что первичное F-меченное соединение содержит дополнительную функциональную группу, подходящую для связывания этой простетической группы со второй молекулой. Эта функциональная группа может представлять собой уходящую группу, включая, но не ограничиваясь только ими, галоген или сульфонат уходящую группу. Примеры представлены, например, для F-фторалкилирования в Block и др. J. Label. Compd. Radiopharm. (1988), cc. 201-216 и для F-фторацилирования в Block и др. J. Label. Compd. Radiopharm. (1988), cc. 185-200. Функциональной также может быть другая электрофильная часть, такая как альдегид, используемая, например, для связывания посредством восстановительного аминирования со второй молекулой (Wilson и др. J. Label. Compd. Radiopharm. (1990), cc. 1189-1199). Альтернативно функциональная группа также может представлять собой нуклеофильную часть, например, амин, используемый для F-фторамидирования, такой как в Shia и др. Biochem. (1989), cc. 4801-4806.
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
Предпочтительно "F строительный блок" выбирают из группы простетических групп, используемых для F-фторалкилирования, такие как н-[F]фторалкил-1-арил сульфонаты, такие как н-[F]фторалкоксиалкил-1-арил сульфонаты и н-[F]фторалкил-1-галогениды. Более предпочтительно "F строительный блок" представляет собой бром-[F]фторметан, 1-бром-2-[F]фторэтан, 1-бром-2-[F]фторпропан, 2-[F]фторэтил метансульфонат, 2-[F]фторэтил 4-метилбензолсульфонат, 2-[F]фторэтил 4-нитробензолсульфонат, 2-[F]фторпропил метансульфонат, 2-[F]фторпропил 4-метилбензолсульфонат, 2-[F]фторпропил 4-нитробензолсульфонат, 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этил метансульфонат, 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]-этил 4-метилбензолсульфонат и 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этил 4-нитробензолсульфонат.
Если хиральные центры или другие формы изомерных центров не определены в другом месте в соединении в соответствии с настоящим изобретением, то все формы таких стереоизомеров, включая Е- и Z-изомеры и диастереомеры, охватываются объемом настоящего изобретения. Соединения, содержащие хиральные центры, можно использовать в качестве диастереомерной смеси или в качестве диастереомерно обогащенной смеси, или эти изомерные смеси можно разделять с помощью хорошо известных техник, и отдельный стереоизомер можно использовать отдельно. В случаях, когда где соединения могут существовать в таутомерных формах, каждая таутомерная форма рассматривается как включена в настоящее изобретение, независимо от того, существует ли в равновесии или преимущественно в одной форме.
Подходящие соли соединений в соответствии с изобретением включают соли минеральных кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например, соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталин дисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.
Подходящие соли соединений в соответствии с изобретением также включают соли обычных оснований, такие как в качестве примера и в качестве предпочтительных, соли щелочных металлов (например, соли натрия и соли калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и соли магния) и соли аммония, производные аммиака или органических аминов, имеющих 1-16 атомов углерода, такие как, в качестве примера и в качестве предпочтительных, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, этилдиизопропиламин, моноэтаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, прокаин, дибензиламин, N-метилморфолин, аргинин, лизин, этилендиамин и N-метилпиперидин.
Термин "тромб (тромбы)" описывает все виды кровяных сгустков (венозные и артериальные тромбы). Термин "тромб (тромбы)" включает также любые термины таких фраз, так "тромбозные отложения" и "участки образования тромбов". Тромбы обычно возникают в результате стадии свертывания крови при гемостазе или патологически в результате различных причин, таких как тромбозные нарушения. В этом исследовании охватываются все тромбы, содержащие тромбоциты, а также циркулирующие тромбы (эмбол), которые вызовут закупорку где-нибудь в сосудистой сети.
18
Термин "очистка", как используется в настоящей заявке, относится к удалению избытка побочного продукта, такого как F-Фторид, и к концентрированию и улавливанию продукта реакции. Очистку можно осуществлять с помощью любого метода, известного для этой цели из уровня техники, пригодного для радиоактивного индикатора, например, хроматография, ВЭЖХ, картриджи или колонки для твердофазной экстракции.
Общий синтез
В целом, синтез этих соединений описан в литературе:
1) J. Med. Chem. 1999, 42, 5254-5265
2) Organic Progress Research & Development 2003, 7, 866-872
Модификации и усовершенствования этих методов описаны подробно в экспериментальной части. Главный путь для получения соединений формулы I представлен на схеме 1:
СТЕРЕОХИМИЯ
Соединения формулы I, полученные при синтезе, изложенном на схеме 1, представляют собой смеси двух диастереомеров. Их разделяют в конце синтеза с помощью препаративной ВЭЖХ. Представляется возможным (примеры 4, 5, 8, 25 и 27) реализовать стереоселективный подход для защищенных 3-амино-3-арилпропановых кислот (схемы 2-4). В целом, применимы стереоселективные методы для синтеза β-амино кислот (М. Liu, M.P. Sibi, Tetrahedron 2002 58, 7991-8035 или Ε. Juaristi, V. Soloshonok Eds. of Enantioselective Synthesis of Beta-Amino Acids, второе издание, Wiley-Interscience, ISBN 0-471-46738-3).
D
D
трет-Бутиловый эфир (Е)-3-(5-бром-пиридин-3-ил)акриловой кислоты синтезируют, как описано в WO 2010/038081, страница 143. Получение трет-бутилового эфира (S)-3-амино-3-(5-бром-пиридин-3-ил)-пропионовой кислоты осуществляют, как описано в J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2002, 1858-1868 для трет-бутилового эфира (S)-3-амино-3-(пиридин-3-ил)пропионовой кислоты 14. Для этого соединения указано оптическое вращение [α] -17,6°, в то время как полученное бром-производное дает [α] -18,8°. Конечный продукт синтеза, используя это чистое энантиомерное производное, дает активный диастереомер с энантиомерным избытком 53% (схема 2).
Во втором подходе (схема 3) 3-пиридил нитрил может быть трансформирован в арил енамин, которые стереоселективно восстанавливают (Yi Hsiao и др., J. Am. Chem. Soc. 2004 126, 9918-9919) в энантиомерно обогащенный трет.-бутиловый эфир 3-амино-3-арилпропановой кислоты. Сложный эфир связывают с пиперидиновым фрагментом посредством активированного сложного эфира. Другие стандартные превращения защитных групп или превращения, катализируемые палладием, такие как реакции Сузуки или Соногашира, обеспечивают проиллюстрованные соединения.
В третьем подходе (схема 4) смешанный малоновый диэфир связывают в стереоселективной реакции Манниха с полученным in situ BOC имином (J. Song и др., Org. Lett. 2007, 9, 603-606), производным от соответствующего N-ВОС амидо сульфона в присутствии хирального катализатора тиомочевины (Y. Yamaoka и др., Synthesis 2007, 16, 2571-2575). Другие стандартные превращения защитных групп, включая декарбоксилирование замещенного моно малонового эфира, обеспечивают проиллюстрованные соединения.
Радиохимия
Соединения формулы II и III, содержащие F-18 мечение, получают в соответствии с одной из трех общих процедур синтеза, описанных ниже.
Общий синтез алкил-F-18 соединений посредством прямого введения метки
18
18
18
18
18
18

18
[F]Фторид получали путем бомбардировки протонами в циклотроне, используя серебряную мишень (1 мл), заполненном [O] водой для O (p,n)F реакции. Водный [F]фторид пропускали через картридж (например, QMA-полимер картридж Waters, Sep Рак Light QMA Part. No.: WAT023525). Захваченный [F]фторид впоследствии элюировали с картриджа, используя смесь Kryptofix (Kryptofix представляет собой 4,7,13,16,21,24-Гексаокса-1,10-диазабицикло[8,8,8]гексакозан) (5,27 мг в 1,5 мл ацетонитрила) и карбонат калия (1,0 мг в 0,5 мл воды). Альтернативно карбонат цезия (2,3 мг в 0,5 мл воды) использовали в качестве основания. Этот F-фторид (вплоть до 10 ГБк) раствор азеотропно высушивали путем нагревания в потоке азота при 110-120°C в течение 20-30 минут. В течение этого времени 3×1 мл добавляли ацетонитрил и упаривали. После высушивания добавляли раствор предшественника (2-4 мг в 200-300 мкл ацетонитрила). Реакционный сосуд нагревали при 100-110°C в течение 10-20 минут для введения метки. Неочищенную реакционную смесь анализировали с помощью ВЭЖХ. Пик продукта подтверждали путем совместной инъекции реакционной смеси с F-19 холодными стандартами общей формулы II.
В зависимости от защитных групп F-18 промежуточного соединения общей формулы II осуществляли одностадийный или двустадийный гидролиз. В случае метилового эфира соединений II к реакционной смеси добавляли 0,5 M NaOH (100 мкл) и после перемешивания в течение 5-10 минут при 25°C, добавляли 1 M HCL (200 мкл) и продолжали перемешивать в течение 5-15 минут при 100-110°C. В случае трет-бутилового эфира соединений II к реакционной смеси добавляли 1 M HCl (150-400 мкл) и продолжали перемешивать в течение 5-15 минут при 100-110°C.
После завершения гидролиза реакционную смесь необязательно нейтрализовали с помощью 1 M NaOH или непосредственно разводили водой (4 мл) и переносили на полупрепаративную ВЭЖХ для очистки. Собранный пик продукта разводили водой (15-40 мл) и иммобилизовали на С18 разделительный картридж. Чистый F-18 меченный продукт элюировали с картриджа с помощью чистого этанола (1-2 мл). После завершения упаривания этанола при 80-90°C конечный F-18 продукт ресуспендировали в воде (100-300 мкл).
Общий синтез Арил-F-18 Соединений путем прямого введения метки
18
18
18
18
18

18
[F]Фторид получали путем бомбардировки протонами в циклотроне, используя серебряную мишень (1 мл), заполненном [O] водой для 180 (p, n)F реакции. Водный [F]фторид пропускали через картридж (например, QMA-полимер картридж Waters, Sep Pak Light QMA Part. No.: WAT023525). Захваченный [F]фторид впоследствии элюировали с картриджа, используя смесь Kryptofix (10,4 мг в 1,5 мл ацетонитрила) и бикарбонат калия (2,8 мг в 0,5 мл воды). Этот F-фторид (вплоть до 5 ГБк) раствор азеотропно высушивали путем нагревания в потоке азота при 110-120°C в течение 20-30 минут. В течение этого времени 3×1 мл Добавляли ацетонитрил и упаривали. После высушивания добавляли раствор предшественника (1-2 мг в 200-300 мкл ДМСО). Реакционный сосуд нагревали при 150-160°C в течение 10-15 минут для введения метки. Неочищенную реакционную смесь анализировали с помощью ВЭЖХ. Пик продукта подтверждали путем совместной инъекции реакционной смеси с F-19 холодными стандартами общей формулы II. Этот F-18 промежуточный продукт общей формулы II гидролизовали с помощью двустадийной процедуры. К реакционной смеси добавляли 0,5 M NaOH (100 мкл) и после перемешивания в течение 5-10 минут при 25°C, добавляли 1 M HCl (200 мкл) и продолжали перемешивать в течение 5-10 минут при 70-80°C. После завершения гидролиза реакционную смесь необязательно нейтрализовали с помощью 1 M NaOH или непосредственно разводили водой (4 мл) и переносили на полупрепаративную ВЭЖХ для очистки. Собранный пик продукта разводили водой (15-40 мл) и иммобилизовали на С18 разделительный картридж. Чистый F-18 меченный продукт элюировали с картриджа с помощью чистого этанола (1-2 мл). После завершения упаривания этанола при 80-90°C конечный F-18 продукт ресуспендировали в воде (100-300 мкл).
18
18
2
n
2
2
m
Общий синтез Алкил-F18 Соединений путем непрямого введения метки с помощью простетической группы общей формулы F-O(CH)-LG, F-(OCHCH)-LG, где LG представляет собой подходящую уходящую группу для связывания
18
18
18
18
18
18

18
18
18
18
18
2
n
2
2
m
[F]Фторид получали путем бомбардировки протонами в циклотроне, используя серебряную мишень (1 мл), заполненном [O] водой для O (p, n)F реакции. Водный [F]фторид пропускали через картридж (например, QMA-полимер картридж Waters, Sep Pak Light QMA Part. No.: WAT023525). Захваченный [F]фторид впоследствии элюировали с картриджа, используя смесь Kryptofix (5,27 мг в 1,5 мл ацетонитрила) и карбонат калия (1,0 мг в 0,5 мл воды). Этот F-фторид (вплоть до 5 ГБк) раствор азеотропно высушивали путем нагревания в потоке азота при 110-120°C в течение 20-30 минут. В течение этого времени 3×1 мл. Добавляли ацетонитрил и упаривали. После высушивания добавляли раствор предшественника простетической группы (10 мг) в ДМФА или орто-дихлорбензол (500 мкл). Реакционный сосуд нагревали при 100-130°C в течение 10-15 минут для введения метки. Полученную простетическую группу общей формулы F-O(CH)-LG или F-(OCHCH)-LG либо очищали путем дистилляции (15-25 минут при 100-110°C) в медленном потоке азота (например, для 2-[F]фторэтил бромида) или путем полупрепаративной ВЭЖХ после разведения водой (4 мл) (например, 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этиловый эфир толуол-4-сульфоновой кислоты). В случае очистки путем полупрепаративной ВЭЖХ собранный пик разводили водой (15-20 мл) и иммобилизовали на С18 разделительный картридж. Чистый F-18 меченный продукт элюировали с картриджа с помощью ацетонитрила (1-2 мл). Ацетонитрил упаривали при 90-100°C.
18
18
2
n
2
2
m
Предшественник (2,5 мг) для связывания с простетической группой растворяли в ДМФА (100-300 мкл) и добавляли 2 M NaOH (20 мкл) для депротонирования. Эту смесь добавляли к сосуду, содержащему простетическую группу F-O(CH)-LG или F-(OCHCH)-LG. После нагревания при 100-110°C в течение 20-25 минут повторно охлажденную реакционную смесь обрабатывали с помощью 1-2 M NaOH (100 мкл). Раствор перемешивали дополнительно в течение 10-15 минут перед добавлением 2-4 M HCl (200 мкл). Смесь нагревали в течение 10 минут при 100-110°C.
После завершения гидролиза реакционную смесь необязательно нейтрализовали с помощью 1 M NaOH или непосредственно разводили водой (4 мл) и переносили на полупрепаративную ВЭЖХ для очистки. Собранный пик продукта разводили водой (15-40 мл) и иммобилизовали на С18 разделительный картридж. Чистый F-18 меченный продукт элюировали с картриджа с помощью чистого этанола (1-2 мл). После завершения упаривания этанола при 80-90°C конечный F-18 продукт ресуспендировали в воде (100-300 мкл).
Описание фигур
Фигура 1:
Анализ аффинности: На первой стадии GPIIb/IIIa человека, очищенный от тромбоцитов человека, иммобилизовали на твердом планшете на 96 лунок.

3
19
3
3
Через 48 часов планшеты промывали и неспецифические сайты связывания блокировали с помощью Roti-Block. 2. На следующей стадии, планшеты одновременно инкубировали с меченным тритием известным GPIIb/IIIa связующим (H), смешанным с возрастающими концентрациями новых низкомолекулярных соединений (ингибитор, F). Чем более высокая аффинность ингибитора, тем более низкая связанная фракция меченного тритием известного GPIIb/IIIa связующего (Н). Фракцию меченного тритием соединения (Н), которая не вытеснена ингибитором, измеряли в сцинтилляционном счетчике для микропланшет.
Фигура 2:
На диаграмме показано соотношение кровь-сгусток в зависимости от IC50 значений исследуемых соединений. Каждая точка обозначена с помощью сопроводительного номера примера. Соотношения кровь-сгусток снижаются при повышении аффинности.
Фигура 3:
Биораспределение соединения, описанного в примере 41, у мышей. Соединение быстро элиминируется из крови и быстро экскретируется через почки и печень. Почти отсутствует фон во всех других частях организма через 15 минут после инъекции.
Фигура 4:
2
Кинетика в крови соединения, описанного в примере 40, у обезьян циномольгус. РЕТ-визуализацию осуществляли непрерывно до инъекции вплоть до 60 минут после инъекции. Образцы венозной крови отбирали через 3, 10, 30 и 60 минут после инъекции и анализировали на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer) и выражали в виде импульсов в минуту/мг крови. Дополнительно, концентрацию в крови соединения измеряли с РЕТ-изображения в течение всего периода визуализации и выражали в виде %ID/г. Как уже было показано у мышей, соединение быстро элиминируется из крови.
Фигура 5:
РЕТ-визуализация артериального тромба у обезьяны циномольгус: На фигуре показан артериальный тромб (стрелка 2), который образовался на поверхности шероховатой полиэтиленовой катетерной трубки (РЕ50). Тромб уже виден внутри нисходящей аорты возле сердца (стрелка 1) в течение первых 15 минут (левое изображение). Отсутствует потеря сигнала вплоть до 60 минут (правое изображение). Соединение быстро элиминируется из крови и нет фона в смежных тканях и органах через 15 минут (правое изображение).
Фигура 6:
РЕТ-визуализация артериального тромба у обезьяны циномольгус: На фигуре показано два артериальных тромба (стрелка 2), которые образовались на поверхности полиэтиленовой катетерной трубки (РЕ50), которой была придана шероховатость на двух частях с отверстием между ними. Отсутствует видимый сигнал между тромбами, что является доказательством того, что соединение связывается только с тромбом, а не и с полимерной трубкой отдельно. Тромб уже виден внутри нисходящей аорты возле сердца (стрелка 1) в течение первых 15 минут (левое изображение). Отсутствует потеря сигнала вплоть до 60 минут (правое изображение). Соединение быстро элиминируется из крови и нет фона в смежных тканях или органах через 15 минут (правое изображение).
Фигура 7:
Артериальный тромб удалили у обезьяны 2: На изображении показано полиэтиленовую катетерную трубку (РЕ50, внешний диаметр: 1 мм), которой была придана шероховатость на двух частях (1/3) с отверстием (2) между ними. Тромб образовался только на круглых частях поверхности трубки и был чрезвычайно тонким (приблизительно 1/10ая мм [стрелка 1] или еще меньше [стрелка 3]). Это указывает на то, что даже самые тонкие тромбы могут быть обнаружены в каком-либо участке организма.
Фигура 8:
РЕТ-визуализация артериальных и венозных тромбов у обезьяны циномольгус с уменьшенной дозой радиоактивного индикатора 15 МБк на животное: На фигуре показано несколько артериальных (стрелка 3) и венозных (стрелка 4) тромбов, которые образовались на поверхности полиэтиленовых катетерных трубок (РЕ50), которым была придана шероховатость с отверстиями между ними. Все тромбы уже можно видеть в течение первых 15 минут. Тем не менее, контраст уже значительно лучше через 15 минут в связи с низким фоном. Кроме тромбогенных катетеров, другие артериальные тромбы впоследствии появлялись на изображении, что было обнаружено в правой сонной артерии и наиболее вероятной причиной их появления было повреждение сосуда при получении. Сердце (левое изображение, стрелка 1) видно только в течение первых 15 минут, в то время как печень (правое изображение, стрелка 5) можно видеть вплоть до 60 минут.
Экспериментальная часть
Примеры анализировали и характеризовали с помощью следующих аналитических методов для определения характерных времени удержания и масс-спектра:
Метод 1: СВЭЖХ (ACN-HCOOH):
Прибор: Waters Acquity СВЭЖХ-МС SQD 3001; колонка: Acquity СВЭЖХ ВЕН С18 1,7 50×2,1 мм; элюент А: вода + 0,1% муравьиная кислота, элюент В: ацетонитрил; градиент: 0-1,6 мин. 1-99% В, 1,6-2,0 мин. 99% В; поток 0,8 мл/мин; температура: 60°C; впрыскивание: 2 мкл; DAD сканирование: 210-400 нм; ELSD
Метод 2: СВЭЖХ (ACN-NH3):
Прибор: Waters Acquity СВЭЖХ-МС SQD 3001; колонка: Acquity СВЭЖХ ВЕН С18 1,7 50×2,1 мм; элюент А: вода + 0,2% аммиак элюент В: ацетонитрил; градиент: 0-1,6 мин. 1-99% В, 1,6-2,0 мин. 99% В; поток 0,8 мл/мин; температура: 60°C; впрыскивание: 2 мкл; DAD сканирование: 210-400 нм; ELSD
Примеры
Пример 1
(3S)-3-[3-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 1а
Метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-(3-гидроксифенил)пропаноат
Метил 3-амино-3-(3-гидроксифенил)пропаноат (2,78 г, 14,2 ммоль) в ТГФ (70 мл) и триэтиламин (3 мл, 21,3 ммоль) добавляли к раствору ди трет.-бутилдикарбоната (4,66 г, 21,3 ммоль) в ТГФ (70 мл) и смесь перемешивали в течение 72 часов. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония и смесь экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 0 до 30%), получая 3,24 г метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-(3-гидроксифенил)пропаноата.
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 1,35 (s, 9 Н), 2,56-2,75 (m, 2 Н), 3,55 (s, 3 Н), 4,81 (m, 1 Н), 6,60 (ddd, 1 Н), 6,69 (m, 2 Н), 7,08 (dd, 1 Н), 7,42 (d, 1 Н), 9,37 (s, 1 Н) част. на млн.
Пример 1b
Метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-[3-(2-фторэтокси)фенил)пропаноат
К метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-(3-гидроксифенил)пропаноату (4,46 г, 20 ммоль) в ТГФ добавляли карбонат цезия (9,84 г, 30 ммоль) и 1-фтор-2-йодэтан (5 г, 30 ммоль) и смесь перемешивали в течение 9 часов. После фильтрации фильтрат концентрировали в вакууме, получая 5,0 г метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-[3-(2-фторэтокси)фенил)пропаноата.
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ = 1,43 (br. s, 9 Н), 2,83 (m, 2 Н), 3,63 (s, 3 Н), 4,23 (ddd, 2 Н), 4,76 (ddd, 2 Н), 5,08 (br., 1 Н), 5,48 (br., 1Н), 6,82 (dd, 1 Н), 6,88 (s, 1 Н), 6,91 (d, 1 Н), 7,26 (t, 1 Н) част. на млн.
Пример 1с
Метил 3-амино-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропаноат
К метил 3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-3-[3-(2-фторэтокси)фенил)пропаноату (5,0 г, 20 ммоль) в дихлорметане добавляли трифтор уксусную кислоту (5,64 мл, 73 ммоль). После перемешивания в течение 24 часов при комнатной температуре дополнительно добавляли трифтор уксусную кислоту (1,13 мл) и продолжали перемешивать в течение 20 часов. Смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (метанол в дихлорметане от 0% до 40%)), получая 4,9 г метил 3-амино-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропаноата.
1
d6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ = 2,86-3,12 (m, 2 Н), 4,13-4,24 (m, 1 Н), 4,24-4,34 (m, 1 Н), 4,52-4,75 (m, 2 Н), 4,75-4,95 (m, 1 Н), 7,00 (dd, 1 Н), 7,06 (d, 1 Н), 7,12 (d, 1 Н), 7,28-7,42 (m, 1 Н), 8,44 (br. s., 2Н) част. на млн.
Пример 1d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-карбоновую кислоту (105 мг, 286 мкмоль, Bioorg. Med. Chem. 13 (2005) 4343-4352, Соединение 10) суспендировали в 2 мл N,N-диметилформамида и охлаждали до 0°C. Добавляли HATU (117 мг, 308 мкмоль), раствор метил 3-амино-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропаноата (53 мг, 220 мкмоль) в 3,4 мл N,N-диметилформамида и N-этил-диизопропиламин (0,11 мл, 660 мкмоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут и при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли воду и смесь экстрагировали дихлорметаном, промывали насыщенным раствором хлорида натрия и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на аминофазной колонке (Separtis Flash-NH2, этил ацетат в дихлорметане от 0% до 100%), получая 88 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,22/1,23 мин.
+
+
MC (ES): m/е=592,44 (М+Н)
Пример 1е
3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1-[3-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (67 мг, 102 мкмоль) растворяли в метаноле (12,4 мл) и добавляли октагидрат гидроксид бария (2,2 г, 7,1 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение одного часа и после этого разводили солевым раствором и простым диэтиловым эфиром. Смесь подкисляли с помощью 1 М соляной кислоты и фазы разделяли. При концентрировании органической фазы получали 70 мг 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропановой кислоты
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,12/1,14 мин.
+
+
MC (ES): m/е=578,3 (М+Н)
1
d6
Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО, при 80°C): δ = 0,82-1,05 (m, 2 Н), 1,05-1,51 (m, 6 Н), 1,40 (s, 9 Н), 1,56-1,70 (m, 4 Н), 2,29-2,41 (m, 3 Н), 2,58-2,80 (m, 5 Н), 3,20 (br., 3 Н), 3,91 (d, 2 Н), 4,25 (ddd, 2 Н), 4,73 (ddd, 2 Н), 5,19 (m, 1 Н), 6,85 (m, 1 Н), 6,94 (m, 2 Н), 7,23 (td, 1 Н), 8,15 (d, 1 Н) част. на млн.
Пример 1f
(3S)-3-[3-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
К 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[3-(2-фторэтокси)фенил]пропановой кислоте (65 мг, 90 мкмоль) в диоксане добавляли 4 М раствор соляной кислоты в диоксане (0,23 мл, 900 мкмоль) и перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 8,7 мг (3S)-3-[5-(2-фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,76 мин.
+
+
MC (ES): m/e=478,29 (М+Н)
1
d6
Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО, 80°C): δ = 1,20-1,70 (m, 8 Н), 1,80 (m, 2 Н), 2,17 (br. 1Н), 2,25-2,50 (m, 4 Н), 2,60-2,71 (m, 3 Н), 3,05-3,25 (m, 3 Н), 3,72 (br., 3 Н), 4,23 (ddd, 2 Н), 4,73 (ddd, 2 Н), 5,10 (m, 1 Н), 6,80 (m, 1 Н), 6,91 (m, 2 Н), 7,21 (t, 1 Н), 8,28 (br., 1 Н) част. на млн.
Пример 2
(3S)-3-[4-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 2а
Метиловый эфир 3-амино-3-(4-гидроксифенил)пропионовой кислоты
5,298 г (29,24 ммоль) коммерчески доступной 3-амино-3-(4-гидроксифенил)пропионовой кислоты суспендировали в 136 мл метанола, смесь охлаждали до 0°C и медленно добавляли 3,20 мл (43,86 ммоль) тионил хлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток обрабатывали с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном и дихлорметан/2-пропанол 8:2. Органическую часть концентрировали, получая 5,09 г (80%) метиловый эфир 3-амино-3-(4-гидроксифенил)пропионовой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,45 мин.
+
+
3
MC (ES): m/е=179,07 (М+Н-NH)
-
-
MC (ES): m/е=240,30 (М+НСОО)
Пример 2b
Трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[1-(4-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]Карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилат
490,75 мг (1,33 ммоль) (3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-карбоновой кислоты (Bioorg. Med. Chem. 13 (2005) 4343-4352, Соединение 10) суспендировали в 8 мл N,N-диметилформамида и охлаждали до 0°C. Добавляли 0,545 г (1,43 ммоль) HATU, раствор 200,0 мг (1,0 ммоль) метилового эфира 3-амино-3-(4-гидрокси-фенил)-пропионовой кислоты в 12 мл N,N-диметилформамида и 0,53 мл (3,07 ммоль) N-этил-диизопропиламина. Смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут и при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 20 мл воды и смесь экстрагировали дихлорметаном, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 28 г основного силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10-80/20) получали 465 мг (83%) трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[1-(4-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,11 мин.
+
+
MC (ES): m/е=546,31 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/е=590,23 (М+НСОО)
Пример 2с
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
150 мг (0,28 ммоль) трет-бутилового эфира 4-(3-{(R)-3-[1-(4-гидрокси-фенил)-2-метоксикарбонил-этилкарбамоил]-пиперидин-1-ил}-3-оксо-пропил)-пиперидин-1-карбоновую кислоту растворяли в 3 мл тетрагидрофурана. Добавляли 179 мг (0,55 ммоль) карбоната цезия и 91 мг (0,52 ммоль) 1-йод-2-фторэтана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 часов и фильтровали. Фильтрат концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 90 мг (50%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата и 40 мг исходного вещества.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt. = 1,24-1,25 мин.
+
+
MC (ES): m/e=592,31 (М+Н)
-
-
MC (ES): m/e=590,29 (М-Н), 636,26 (М+НСОО)
Пример 2d
({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[4-(2-фторэтокси)фенил]пропановая кислота
96 мг (0,16 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[4-(2-фторэтокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 20 мл метанола. Добавляли 512 мг (1,62 ммоль) октагидрат гидроксид бария. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов и после этого разводили с помощью 20 мл воды. Смесь подкисляли с помощью 1 н. соляной кислоты до pH 4 и экстрагировали с помощью 2×40 мл дихлорметана. При концентрировали органической фазы получали 93 мг (99%) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[4-(2-фторэтокси)фенил]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,14-1,16 мин.
+
+
MC (ES): m/e=578,30 (М+Н)
-
-
MC (ES): m/е=576,30 (М-Н), 622,16 (М+НСОО)
Пример 2е
(3S)-3-[4-(2-Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
93 мг (0,16 ммоль) сложного эфира 3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[4-(2-фторэтокси)фенил]пропановой кислоты растворяли в 3,3 мл диоксана. Добавляли 0,4 мл (1,6 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов и после этого концентрировали, получая 131 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,65 мин.
+
+
MC (ES): m/е=478,37 (М+Н)
-
MC (ES): m/е=476,43 (М-Н)
Пример 3
(3S)-3-[5-(2-Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 3a
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 25е, 800 мг, 1,36 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (52 мл). Добавляли карбонат цезия (1,1 г, 3,4 ммоль) и 2-фторэтилтозилат (445 мг, 2,04 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 часов, дополнительно добавляли карбонат цезия (70 мг, 0,21 ммоль) и 2-фторэтилтозилат (28 мг, 0,13 ммоль) и продолжали перемешивать в течение 2,5 часов при комнатной температуре и 17 часов при 5°C. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью простого диэтилового эфира и этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20 до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 50%), получая 670 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,24 мин.
+
+
MC (ES): m/е=633,5 (М+Н)
Пример 3b
(3S)-3-[5-(2-Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (660 мг, 1,06 ммоль) в муравьиной кислоте (12 мл) нагревали в течение 30 минут до 60°C и 10 минут до 100°C. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 311 мг (3S)-3-[5-(2-фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,50 мин.
+
+
MC (ES): m/е=479,4 (М+Н)
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ = 1,13-1,29 (m, 2 Н), 1,35-1,77 (m, 7 Н), 1,88 (d, 1 Н), 2,00 (m, 1 Н), 2,21-2,43 (m, 4 Н), 2,50-2,78 (m, 3 Н), 2,96-3,11 (m, 1 Н), 3,15 (d, 1 Н), 3,28 (d, 1 Н), 3,64 (br., 4 Н), 4,30 (ddd, 2 Н), 4,75 (ddd, 2 Н), 5,09 (m, 1 Н), 7,27 (s, 1 Н), 8,10 (s, 1 Н), 8,16 (s, 1 Н), 8,53 (d, 1 Н) част. на млн.
Пример 4
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 4а
Трет-бутил {[3-(бензилокси)фенил](фенилсульфонил)метил}карбамат
К 3-(бензилокси)бензальдегиду (5 г, 23,6 ммоль) и натриевой соли бензолсульфиновой кислоты (3,9 г, 23,6 ммоль) в ТГФ (23 мл) добавляли воду (51,5 мл), трет-бутил карбамат (2,76 г, 23,6 ммоль) и муравьиную кислоту (2,66 мл, 70 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 дней и фильтровали. Осадок промывали водой и растирали в порошок в гексане, содержащем 9% дихлорметан. После фильтрации твердые вещества высушивали в вакууме, получая 7,24 г трет-бутил {[3-(бензилокси)фенил](фенилсульфонил)метил}карбамата.
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ = 1,27 (s, 9 Н), 5,07 (s, 2 Н), 5,73 (d, 1 Н), 5,90 (d, 1 Н), 6,94-7,14 (m, 3 Н), 7,30-7,49 (m, 6 Н), 7,55 (t, 2 Н), 7,65 (t, 1 Н), 7,92 (d, 2 Н) част. на млн.
Пример 4b
Трет-бутил метил 2-{(S)-[3-(бензилокси)фенил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоат
Трет-бутил {[3-(бензилокси)фенил](фенилсульфонил)метил}карбамат (3,0 г, 5,93 ммоль) суспендировали в смеси толуола (21,6 мл) воды (16 мл). При 0°C добавляли трет-бутил метил малонат (1,2 мл, 7,1 ммоль), карбонат цезия (1,94 г, 5,9 ммоль) и 1-[3,5-бис(трифтормети)фенил]-3-[(1R,2R)-(-)-2-(диметиламино)циклогексил]тиомочевину (246 мг, 0,59 ммоль) и смесь перемешивали в течение 72 часов при 0°C. После хранения при -20°C в течение 72 часов смесь разводили водой и этил ацетатом, после фильтрации фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 0 до 35%), получая 2,17 г энантиомерно обогащенного трет-бутил метил 2-{(S)-[3-(бензилокси)фенил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоата.
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ = 1,20 (s, 4,5 Н), 1,36 (s, 9 Н), 1,41 (s, 4,5 Н), 3,04 (br., 3 Н), 3,47 (s, 1,5 Н), 3,66 (s, 1,5 Н), 3,88 (m, 1 Н), 5,09 (s, 2 Н), 5,06-5,11 (m, 1Н), 6,85-6,93 (m, 2 Н), 7,02 (m, 1 Н), 7,21 (m, 1 Н), 7,28-7,46 (m, 5 Н) част. на млн.
Пример 4c
Трет-бутил метил 2-[(S)-[3-(бензилокси)фенил]({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)метил]пропандиоат
К трет-бутил метил 2-{(S)-[3-(бензилокси)фенил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоату (600 мг, 1,24 ммоль) добавляли 0°C холодную муравьиную кислоту (13,8 мл) и раствор хранили при 5°C в течение 20 часов. Добавляли лед и pH доводили до 8 путем добавления водного раствора гидрокарбоната натрия. Водную фазу экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали водным раствором гидрокарбоната натрия и солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. При концентрировании при пониженном давлении получали 390 мг необработанного трет-бутил метил 2-{(S)-амино[3-(бензилокси)фенил]метил}пропандиоата. (3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-карбоновую кислоту (447 мг, 1,21 ммоль) суспендировали в N,N-диметилформамиде (14 мл) и охлаждали до 0°C. Добавляли HATU (646 мг, 1,7 ммоль), раствор необработанного трет-бутил метил 2-{(S)-амино[3-(бензилокси)фенил]метил}пропандиоата (780 мг, 1,21 ммоль) в N,N-диметилформамиде (14 мл) и N-этил-диизопропиламин (350 мкл, 3,64 ммоль). Смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов. Добавляли ледяную воду и насыщенный раствор хлорида аммония, смесь экстрагировали с помощью этил ацетата и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на аминофазной колонке (Separtis Flash-NH2, этил ацетат в гексане от 0 до 100%), получая 700 мг трет-бутил метил-[(S)-[3-(бензилокси)фенил]({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)метил]пропандиоата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,53 мин.
+
+
MC (ES): m/е=736,68 (М+Н)
-
-
MC (ES): m/е=780,82 (М+НСОО)
Пример 4d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(бензилокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил метил 2-[(S)-[3-(бензилокси)фенил]({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)метил]пропандиоат (700 мг, 0,95 ммоль) растворяли в муравьиной кислоте (5,4 мл) и хранили в течение 5 дней при комнатной температуре. Смесь концентрировали при пониженном давлении, получая 640 г необработанной (3S)-3-[3-(бензилокси)фенил]-2-(метоксикарбонил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты. Метиловый эфир в ТГФ (65 мл) и триэтиламин (2,5 мл, 18 ммоль) нагревали до 60°C в течение 4 часов. После концентрирования при пониженном давлении остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 147 мг метил (3S)-3-[3-(бензилокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропаноата.
К свободному пиперидину в дихлорметане (1,5 мл) и триэтиламине (0,11 мл) добавляли ди-трет-бутил дикарбонат (90 мкл, 0,38 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 часов, получая 159 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(бензилокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата после концентрирования в вакууме.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,41 мин.
+
+
МС (ES): m/e=636,59 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/е=680,44 (М+НСОО)
Пример 4е
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-гидроксифенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[3-(бензилокси)фенил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (650 мг, 1,02 ммоль) растворяли в этил ацетате (45 мл) и метаноле (7,4 мл) и добавляли палладий на угле (65 мг, 10%). Смесь встряхивали в атмосфере водорода в течение 16 часов, фильтровали через целит, который промывали метанолом. Фильтрат концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле (метанол в этил ацетате от 0% до 25%), получая 422 мг трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, при 80°C): δ = 1,01 (m, 2 Н), 1,26-1,53 (m, 4 Н), 1,41 (s, 9 Н), 1,65 (m, 4 Н), 1,83 (m, 1 Н), 2,23-2,38 (m, 3 Н), 2,65-2,76 (m, 5 Н), 3,57 (s, 3 Н), 3,92 (m, 3 Н), 5,19 (q, 1 Н), 6,64 (d, 1 Н), 6,72 (m, 2 Н), 7,09 (t, 1 Н), 8,05 (d, 1 Н), 9,04 (br., 1 Н) част. на млн
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,14 мин.
+
+
MC (ES): m/е=546,53 (М+Н)
-
-
MC (ES): m/е=590,43 (М+НСОО)
Пример 4f
Трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (26 мг, 50 мкмоль) в ДМФА (6,6 мл) добавляли карбонат цезия (38,8 мг, 120 мкмоль) и 2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этил 4-метилбензолсульфонат (22 мг, 70 мкмоль), при этом перемешивали при комнатной температуре. Через 5 часов добавляли толуол и смесь концентрировали в вакууме. Остаток без ДМФА очищали путем препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (дихлорметан в этил ацетате 30%), получая 21 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, при 80°C): δ = 1,02 (m, 2 Н), 1,25-1,51 (m, 5 Н), 1,41 (s, 9 Н), 1,55-1,70 (m, 4 Н), 1,82 (m, 1 Н), 2,26-2,38 (m, 3 Н), 2,73-2,81 (m, 4 Н), 3,40 (m, 1 Н), 3,56-3,65 (m, 5 Н), 3,58 (s, 3 Н), 3,69-3,74 (m, 1 Н), 3,74-3,81 (m, 2 Н), 3,91 (br., 2 Н), 4,06-4,14 (m, 2 Н) 4,50 (ddd, 2 Н), 5,21 (q, 1 Н), 6,82 (dd, 1 Н), 6,85-6,96 (m, 2 Н), 7,21 (t, 1 Н), 8,08 (d, 1 Н) част. на млн.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,26 мин.
+
+
МС (ES): m/е=680,54 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=724,50 (М+НСОО)
Пример 4g
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (20,3 мг, 27 мкмоль) растворяли в трет.-бутаноле (0,77 мл) и метаноле (0,76 мл) и добавляли октагидрат гидроксид бария (42 мг, 0,13 ммоль). После перемешивания в течение 60 минут при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума. Остаток растворяли в воде (1 мл) и подкисляли с помощью муравьиной кислоты (2 мл). Через 18 часов при 5°C дополнительно добавляли муравьиную кислоту (2 мл). Через 3 часа при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 8,4 мг (3S)-3-(3-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,69 мин.
+
+
МС (ES): m/e=566,41 (М+Н)
-
МС (ES): m/е=564,37 (М-Н)
Пример 5
(3S)-3-(5-{2-[2-(2-Фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 5а
Трет-бутил {[5-(бензилокси)пиридин-3-ил](фенилсульфонил)метил}карбамат
К 5-(Бензилокси)пиридин-3-карбальдегиду (3,61 г, 16,9 ммоль, Harrowven, D.C. и др., Tetrahedron, 2001, 57, cc. 4447-4454) и натриевой соли бензолсульфиновой кислоты (2,7 г, 16,6 ммоль) в ТГФ (16,3 мл) добавляли воду (36,3 мл), трет-бутил карбамат (1,94 г, 16,6 ммоль) и муравьиную кислоту (1,9 мл, 49 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 дней и фильтровали. Фильтрат перемешивали дополнительно в течение 2 дней и снова фильтровали. Образованные осадки промывали водой и растирали в порошок в гексане, содержащем 9% дихлорметан. После фильтрации твердые вещества высушивали в вакууме, получая 3,17 г трет-бутил {[5-(бензилокси)пиридин-3-ил](фенилсульфонил)метил}карбамата.
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ = 1,27 (s, 9 Н), 5,13 (s, 2 Н), 5,83 (d, 1 Н), 5,97 (d, 1 Н), 7,32-7,50 (m, 6 Н), 7,53-7,63 (m, 2 Н), 7,68 (t, 1 Н), 7,93 (d, 2 Н), 8,27 (s, 1 Н), 8,44 (d, 1 Н) част. на млн.
Пример 5b
Трет-бутил метил 2-{(S)-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоат
Трет-бутил {[5-(бензилокси)пиридин-3-ил](фенилсульфонил)метил}карбамат (2,2 г, 4,84 ммоль) суспендировали в смеси толуол (16,5 МЛ) вода (13 мл). При 0°C добавляли трет-бутил метил малонат (1,0 мл, 5,8 ммоль), карбонат цезия (1,58 г, 4,84 ммоль) и 1-[3,5-бис(трифтормети)фенил]-3-[(1R,2R)-(-)-2-(диметиламино)циклогексил]тиомочевину (200 мг, 0,48 ммоль) и смесь перемешивали в течение 48 часов при 0°C. После хранения при 5°C в течение 72 часов смесь разводили водой и этил ацетатом, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 0% до 60%), получая 1,54 г энантиомерно обогащенного трет-бутил метил 2-{(S)-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоата.
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ = 1,36 (s, 4,5 Н), 1,43 (s, 9 Н), 1,48 (s, 4,5 Н), 3,65 (s, 1,5 Н), 3,76-3,87 (m, 1Н), 3,77 (s, 1,5 Н), 5,10 (s, 2 Н), 5,48 (br., 1 Н), 6,27 (br., 1 Н), 7,26 (s, 1 Н), 7,35-7,44 (m, 5 Н), 8,21 (d, 1 Н), 8,28 (s, 1 Н) част. на млн.
Пример 5с
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К (3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-карбоновой кислоте (1,91 г, 5,18 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (13,5 мл) добавляли N-гидроксисукцинимид (0,60 г, 5,18 ммоль) и 1,3-дициклогексил карбодиимид (1,18 г, 5,7 ммоль). Раствор перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре, при этом образовывался осадок. После этого смесь охлаждали до 0°C, фильтровали и твердое вещество промывали диэтиловым эфиром. Фильтрат и диэтилэфирные промывки объединяли и концентрировали, получая 2,61 г необработанного трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,13 мин.
+
+
МС (ES): m/e=466,31 (М+Н)
Пример 5d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил метил 2-{(S)-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил][(трет-бутоксикарбонил)амино]метил}пропандиоату в диоксане (15 мл) добавляли 4 М раствор соляной кислоты в диоксане (11,2 мл, 45 ммоль) и перемешивали в течение 20 часов. Смесь разбавляли диоксаном и толуолом и концентрировали при пониженном давлении. Процедуры разбавления и концентрации повторяли с толуолом и дихлорметаном, получая 1,64 г необработанного монометилового эфира 2-[(S)-амино-(5-бензилокси)пиридин-3-ил)метил]малоновой кислоты. Монометиловый эфир охлаждали до 0°C в ДМФА (18 мл) и раствор трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (3,0 г, 5,15 ммоль) и триэтиламина (1,94 мл, 13,9 ммоль) в дихлорметане (18 мл). Смесь перемешивали при 0°C в течение 21 часа и после этого нагревали до 60°C в течение одного часа. После охлаждения до комнатной температуры добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью простого диэтилового эфира и этил ацетата. Объединенные экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (метанол в этил ацетате от 0% до 15%), получая 1,4 г трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(15)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,25 мин.
+
+
MC (ES): m/e=637,6 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=681,5 (М+НСОО)
Пример 5е
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(гидрокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (650 мг, 1,02 ммоль) растворяли в этил ацетате (45 мл) и метаноле (7,4 мл) и добавляли палладий на угле (65 мг, 10%). Смесь встряхивали в атмосфере водорода в течение 16 часов, фильтровали через целит, который промывали метанолом. Фильтрат концентрировали и очищали путем хроматографии на силикагеле (метанол в этил ацетате от 0% до 25%), получая 422 мг трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, при 80°C): δ = 1,00 (m, 2 Н), 1,26-1,55 (m, 4 Н), 1,40 (s, 9Н), 1,65 (m, 4Н), 1,83 (m, 1 Н), 2,17-2,40 (m, 3 Н), 2,63-2,74 (m, 2 Н), 2,75-2,90 (m, 3 Н), 3,58 (s, 3 Н), 3,90 (m, 3 Н), 5,19 (m, 1 Н), 7,08 (d, 1 Н), 7,94-8,07 (m, 2 Н), 8,16 (d, 1 Н), 9,57 (br., 1 Н) част. на млн.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,95 мин.
+
+
MC (ES): m/e=547,4 (М+Н)
Пример 5f
Трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (30 мг, 60 мкмоль) в ДМФА (7,6 мл) добавляли карбонат цезия (44,7 мг, 140 мкмоль) и 2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этил 4-метилбензолсульфонат (25 мг, 80 мкмоль), при этом перемешивали при комнатной температуре. Через 5 часов добавляли толуол и смесь концентрировали в вакууме. Остаток без ДМФА очищали путем препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (этил ацетат), получая 16,7 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
Н-ЯМР (400 МГц, MeOD): δ = 1,00-1,19 (m, 2 Н), 1,40-1,60 (m, 5 Н), 1,45 (s, 9 Н), 1,73 (m, 4 Н), 1,94 (m, 1 Н), 2,27-2,54 (m, 3 Н), 2,73 (br., 2 Н), 2,91 (m, 3 Н), 3,66 (s, 3 Н), 3,64-3,72 (m, 7 Н), 3,87 (m, 2 Н), 4,06 (br., 3 Н), 4,23 (m, 2 Н), 4,50 (ddd, 2 Н), 5,36 (t, 1 Н), 7,41 (dd, 1 Н), 8,17 (d, 1 Н), 8,13 (d, 1 Н) част. на млн.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,10 мин.
+
+
MC (ES): m/e=681,3 (М+Н)
-
-
MC (ES): m/е=725,5 (М+НСОО)
Пример 5g
(3S)-3-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (16,5 мг, 22 мкмоль) как растворенный в трет.-бутаноле (0,62 мл) и метаноле (0,6 мл) и октагидрат гидроксид бария (34 мг, 315 мкмоль) добавляли. После перемешивания в течение 45 минут при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума. Остаток растворяли в воде (0,3 мл) и подкисляли с помощью муравьиной кислоты (0,9 мл). Через 18 часов при 5°C растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 1,6 мг (3R)-3-(5-{2-[2-(2-фторэтокси)этокси]этокси}пиридин-3-ил)-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,55 мин.
+
+
MC (ES): m/e=567,4 (М+Н)
-
MC (ES): m/e=565,4 (М-Н),
Пример 6
(3S)-3-{5-[3-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 6а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 400,0 мг (0,66 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (пример 8c) в 16 мл толуола добавляли 15,17 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 108,6 мг (0,79 ммоль) (3-гидроксифенил)бороновой кислоты в 4,0 мл этанола и 118,3 мг (2,04 ммоль) фторида калия в 4,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 26 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 236 мг (58%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt=1,10 мин.
+
+
МС (ES): m/е=624,70 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/е=621,46 (М-Н), 667,57 (М+НСОО)
Пример 6b
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
128 мг (0,21 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 2,25 мл тетрагидрофурана. Добавляли 134 мг (0,41 ммоль) карбоната цезия и 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана, 2 мл тетрагидрофурана и 134 мг (0,41 ммоль) карбоната цезия и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 68 мг (0,39 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 100 мг (65%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,20 мин.
+
+
МС (ES): m/е=669,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/е=713,5 (М+НСОО)
Пример 6c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
95 мг (0,14 ммоль) Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 17 мл метанола. Добавляли 448 мг (1,42 ммоль) октагидрат гидроксид бария. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали, получая 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[3-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановую кислоту.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,12 мин.
+
+
МС (ES): m/e=655,5 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=653,6 (М-Н)
Пример 6d
(3S)-3-{5-[3-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-{[(3R)-1-(3-пиперидин-4-ил-пропионил)пиперидин-3-карбонил]амино}пропионовая кислота
Смесь, полученную в примере 9c, содержащую 93 мг (0,14 ммоль) трет-бутилового эфира 4-{3-[(R)-3-(2-карбокси-1-{5-[3-(2-фтор-этокси)-фенил]-пиридин-3-ил}-этилкарбамоил)-пиперидин-1-ил]-3-оксо-пропил}-пиперидин-1-карбоновой кислоты, растворяли в 8,7 мл диоксана. Добавляли 1,07 мл (4,26 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Добавляли 0,178 мл (0,71 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 8,0 мл диоксана и 0,178 мл (0,71 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали с помощью этил ацетата/этанол 9:1 и с помощью дихлорметан/метанол 9:1. Органические растворы фильтровали, объединяли и концентрировали, получая 55 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 13 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,95 мин.
+
+
МС (ES): m/e=555,12 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=553,17 (М-Н)
Пример 7
(3S)-3-{5-[4-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 7а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 300,0 мг (0,49 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (пример 8c) в 12 мл толуола добавляли 11,4 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 81,5 мг (0,59 ммоль) (4-гидроксифенил)бороновой кислоты в 3,0 мл этанола и 88,7 мг (1,53 ммоль) фторида калия в 3,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 4 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 218 мг (71%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,02 мин.
+
+
МС (ES): m/e=624,8 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=621,5 (М-Н), 667,6 (М+НСОО)
Пример 7b
Трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
120 мг (0,19 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 2,11 мл тетрагидрофурана. Добавляли 126 мг (0,39 ммоль) карбоната цезия и 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Добавляли 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. Добавляли 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов. Добавляли 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана, 2 мл тетрагидрофурана и 126 мг (0,39 ммоль) карбоната цезия и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 64 мг (0,37 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 84 мг (62%) трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,16 мин.
+
+
МС (ES): m/e=669,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=713,5 (М+НСОО)
Пример 7c
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
76 мг (0,11 ммоль) трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 14 мл метанола. Добавляли 358,5 мг (1,14 ммоль) октагидрат гидроксид бария. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали, получая 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановую кислоту.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,08 мин.
+
+
МС (ES): m/e=655,5 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=653,5 (М-Н)
Пример 7d
(3S)-3-{5-[4-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Смесь, полученную в примере 7c, содержащую 74 мг (0,11 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[4-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановой кислоты, растворяли в 6,9 мл диоксана. Добавляли 0,85 мл (3,39 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. Добавляли 0,141 мл (0,56 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали с помощью этил ацетата/этанол 9:1. Органические растворы фильтровали и концентрировали, получая 49 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,89 мин.
+
+
МС (ES): m/e=555,11 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=553,16 (М-Н)
Пример 8
(3S)-3-{5-[2-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 8а
3-Амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)пропионовая кислота
9,50 г (51,07 ммоль) 5-бромпиридин-3-карбальдегида суспендировали в 22 мл этанола. Добавляли 5,31 г (51,07 ммоль) пропандиоевой кислоты и 8,27 г (107,25 ммоль) ацетата аммония. Смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 4 часов и после охлаждения до комнатной температуры фильтровали. Остаток промывали холодным этанолом и высушивали в вакууме при 45°C, получая 8,69 г (69%) 3-амино-3-(5-бром-пиридин-3-ил)пропионовой кислоты.
1
6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d): δ = 3,03 (dd, 2Н), 4,71 (br., 1Н), 8,24 (t, 1Н), 8,68 (d, 1Н), 8,75 (d, 1Н) част. на млн.
Пример 8b
Метиловый эфир 3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)пропионовой кислоты
9,54 г (38,93 ммоль) 3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)пропионовой кислоты суспендировали в 158 мл метанола и смесь охлаждали до 0°C. Медленно добавляли 4,26 мл (58,39 ммоль) тионил хлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток обрабатывали с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Органическую часть высушивали с сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через силикагель (дихлорметан/этанол 100/0-50/50) получали 5,84 г (52%) метилового эфира 3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)-пропионовой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=0,74 мин.
+
+
МС (ES): m/e=261,2 (М+Н)
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ = 2,68 (d, 2Н), 3,71 (s, 3Н), 4,48 (t, 1Н), 7,91-7,95 (m, 1Н), 8,53 (d, 1Н), 8,59 (d, 1Н) част. на млн.
Пример 8c
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
3,324 г (9,02 ммоль) (3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-карбоновой кислоты [Bioorg. Med. Chem. 13 (2005) 4343-4352, Соединение 10) суспендировали в 52 мл N,N-диметилформамида и охлаждали до 0°C. Добавляли 3,694 г (9,71 ммоль) HATU, раствор 1,798 г (6,94 ммоль) метилового эфира 3-амино-3-(5-бром-пиридин-3-ил)-пропионовой кислоты в 78 мл N,N-диметилформамида и 3,56 мл (20,82 ммоль) N-этил-диизопропиламина. Смесь перемешивали при 0°C в течение 5 минут и при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 160 мл воды и смесь экстрагировали с помощью 280 мл дихлорметан. Органическую фазу промывали водой, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 55 г основного силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-97/3-94/6) получали 4395 мг (104%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,18 мин.
+
+
МС (ES): m/e=511,3 (М+Н-BOC)
-
МС (ES): m/e=609,5 (М-Н)
Пример 8d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 400,0 мг (0,66 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата в 16 мл толуола добавляли 15,17 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 108,6 мг (0,79 ммоль) (2-гидроксифенил)бороновой кислоты в 4,0 мл этанола и 118,3 мг (2,04 ммоль) фторида калия в 4,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 20 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 240 мг (59%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,02 мин.
+
+
МС (ES): m/e=624,58 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=621,55 (М-Н), 667,57 (М+НСОО)
Пример 8e
Трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилат
124 мг (0,20 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 2,2 мл тетрагидрофурана. Добавляли 130 мг (0,40 ммоль) карбоната цезия и 66 мг (0,38 ммоль) 1-йод-2-фторэтана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 часов. Добавляли 66 мг (0,38 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Добавляли 66 мг (0,38 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 80 мг (54%) трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt=1,18 мин.
+
+
МС (ES): m/e=669,57 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=667,57 (М-Н), 713,62 (М+НСОО)
Пример 8f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановая кислота
73 мг (0,11 ммоль) трет-бутил 4-(3-{(3R)-3-[(1-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил)карбамоил]пиперидин-1-ил}-3-оксопропил)пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 13 мл метанола. Добавляли 344 мг (1,09 ммоль) октагидрат гидроксид бария. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали, получая 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановую кислоту.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,09 мин.
+
+
МС (ES): m/e=655,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=653,5 (М-Н), 622,16 (М+НСОО)
Пример 8g
(3S)-3-{5-[2-(2-Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Смесь, полученную в примере 8f, содержащую 71 мг (0,11 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-{5-[2-(2-фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}пропановой кислоты, растворяли в 6,6 мл диоксана. Добавляли 0,81 мл (3,25 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Добавляли 0,136 мл (0,54 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. Добавляли 6,0 мл диоксана и 0,136 мл (0,54 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали с помощью этил ацетата/этанол 9:1 и с помощью дихлорметан/метанол 9:1, Органические растворы фильтровали, объединяли и концентрировали, получая 76 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 13 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,88 мин.
+
+
МС (ES): m/e=555,08 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=553,18 (М-Н)
Пример 9
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 9a
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 300,0 мг (0,49 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 8c) в 12 мл толуола добавляли 11,4 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 97,4 мг (0,59 ммоль) (3-циано-4-фтор-фенил)бороновой кислоты в 3,0 мл этанола и 88,7 мг (1,53 ммоль) фторида калия в 3,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 3 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 206 мг (58%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,23 мин.
+
+
МС (ES): m/e=652,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=648,5 (М-Н), 694,5 (М+НСОО)
Пример 9b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
100 мг (0,15 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 5 мл тетрагидрофурана и обрабатывали с помощью 2,5 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 15 минут и концентрировали, получая 97 мг (99%).
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,13 мин.
+
+
МС (ES): m/e=636,5 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=634,5 (М-Н)
Пример 9c
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Смесь, полученную в примере 9b, содержащую 97 мг (0,15 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(3-циано-4-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановой кислоты, растворяли в 9,6 мл диоксана. Добавляли 0,39 мл (1,57 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали дихлорметаном/2-пропанол 8:2. Органические растворы фильтровали и концентрировали, получая 44 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,95 мин.
+
+
МС (ES): m/e=536,11 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=534,11 (М-Н)
Пример 10
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 10а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 300,0 мг (0,49 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 8c) в 12 мл толуола добавляли 11,4 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 97,4 мг (0,59 ммоль) (4-циано-3-фтор-фенил)бороновой кислоты в 3,0 мл этанола и 57,2 мг (0,98 ммоль) фторида калия в 3,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 10 часов и при 60°C в течение 20 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата и раствора гидрокарбоната натрия. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 157 мг (44%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,23 мин.
+
+
МС (ES): m/e=652,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=648,5 (М-Н), 694,6 (М+НСОО)
Пример 10b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
220 мг (0,34 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат растворяли в 11 мл тетрагидрофурана и обрабатывали с помощью 4,1 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 15 минут и концентрировали, получая 215 мг (100%).
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,14 мин.
+
+
МС (ES): m/e=638,2 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=634,5 (М-Н)
Пример 10c
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Смесь, полученную в примере 10b, содержащую 215 мг (0,34 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-циано-3-фторфенил)пиридин-3-ил]пропановой кислоты, растворяли в 20,6 мл диоксана. Добавляли 0,85 мл (3,4 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали дихлорметаном/2-пропанол 8:2. Органические растворы фильтровали и концентрировали, получая 205 мг, 203 мг которого очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,79 мин.
+
+
МС (ES): m/e=536,4 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=534,4 (М-Н), 680,4 (М+НСОО)
Пример 11
(3S)-3-[5-(4-Фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 11а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 300,0 мг (0,49 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 8c) в 12 мл толуола добавляли 11,4 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 109,2 мг (0,59 ммоль) (4-фтор-3-нитро-фенил)бороновой кислоты в 3,0 мл этанола и 88,7 мг (1,53 ммоль) фторида калия в 3,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 9 часов и при 60°C в течение 20 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 147 мг (40%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,23 мин.
+
+
МС (ES): m/e=670,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=668,5 (М-Н), 714,6 (М+НСОО)
Пример 11b
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]пропановая кислота
225 мг (0,34 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 11 мл тетрагидрофурана и обрабатывали с помощью 4,0 мл 0,1 н. раствора гидроксида натрия. Смесь перемешивали в течение 15 минут и концентрировали, получая 220 мг (100%).
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,15 мин.
+
+
МС (ES): m/e=656,4 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=654,5 (М-Н)
Пример 11c
(3S)-3-[5-(4-Фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Смесь, полученную в примере 11b, содержащую 220 мг (0,34 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-(4-фтор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]пропановой кислоты, растворяли в 20,5 мл диоксана. Добавляли 0,84 мл (3,4 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали. К остатку добавляли небольшое количество воды и насыщенного раствора гидрокарбоната натрия для получения pH=6. Смесь концентрировали и экстрагировали дихлорметаном/2-пропанол 8:2. Органические растворы фильтровали и концентрировали, получая 213 мг, 211 мг которого очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,78 мин.
+
+
МС (ES): m/e=556,4 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=554,4 (М-Н)
Пример 12
(3R)-3-{5-[(3-Циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 12а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Связанный с полимером трифенилфосфин (30 мг) и трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 5e, 30 мг, 60 мкмоль) перемешивали в дихлорметане в течение 30 минут. Добавляли 2-Фтор-5-(гидроксиметил)бензонитрил (26 мг, 0,17 ммоль) в ТГФ и смесь охлаждали до 0°C. Добавляли дипропан-2-ил диазен-1,2-дикарбоксилат (20 мкл, 0,11 ммоль), смесь перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре и после этого хранили в течение 16 часов при 5°C. После фильтрации фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (этил ацетат 100%), получая 3,2 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,24 мин.
+
+
МС (ES): m/e=680,4 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=724,5 (М+НСОО).
Пример 12b
(3R)-3-{5-[(3-Циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (3,2 мг, 10 мкмоль) как растворенный в трет.-бутаноле (0,15 мл) и метаноле (0,13 мл) и добавляли октагидрат гидроксид бария (7,4 мг, 20 мкмоль). После перемешивания в течение 45 минут при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума. Остаток растворяли в воде (0,3 мл) и подкисляли с помощью муравьиной кислоты (0,9 мл). Через 3 часа при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 0,8 мг (3R)-3-{5-[(3-циано-4-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,70 мин.
+
+
МС (ES): m/e=567,3 (М+Н)
МС (ЕЗ): m/e=565,3 (М-Н).
Пример 13
(3S)-3-{5-[(4-Циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 13а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (пример 5e, 200 мг, 0,37 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляли гидрид натрия (60%, 9,6 мг, 0,24 ммоль) и смесь охлаждали до 0°C. Добавляли 4-(бромметил)-2-фторбензонитрил (70,5 мг, 0,33 ммоль) в ДМФА (3 мл), при этом перемешивали, и смесь нагревали до комнатной температуры. Через один час добавляли воду, солевой раствор и этил ацетат. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 10 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(4-циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,22 мин.
+
+
МС (ES): m/e=680,4 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=678,6 (М-Н), 724,5 (М+НСОО).
Пример 13b
(3S)-3-{5-[(4-Циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-(4-циано-3-фторбензилокси)пиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (10 мг, 15 мкмоль) как растворенный в трет.-бутаноле (0,6 мл) и метаноле (0,6 мл) и добавляли октагидрат гидроксид бария (23 мг, 74 мкмоль). После перемешивания в течение 45 минут при комнатной температуре растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума. Остаток подкисляли с помощью муравьиной кислоты (1 мл). Через 18 часов при 5°C растворитель отгоняли при 0°C с помощью высокого вакуума и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 4 мг (3R)-3-{5-[(4-циано-3-фторбензил)окси]пиридин-3-ил}-3-[({(3S)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,71 мин.
+
+
МС (ES): m/e=566,4 (М+Н)
Пример 14
(3S)-3-(4-Циано-3-фторфенил)-3-[({(23R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 14а
3-Амино-3-(4-циано-3-фторфенил)пропионовая кислота
500 мг (3,35 ммоль) 2-фтор-4-формилбензонитрил суспендировали в 2 мл этанола. Добавляли 349 мг (3,35 ммоль) пропандиоевой кислоты и 0,54 г (7,04 ммоль) ацетата аммония. Смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 6 часов и после охлаждения фильтровали. Остаток промывали этанолом и высушивали в вакууме, получая 360 мг (52%) 3-амино-3-(4-циано-3-фторфенил) пропионовой кислоты.
Пример 14b
Метиловый эфир 3-амино-3-(4-циано-3-фторфенил)пропионовой кислоты
436 мг (2,09 ммоль) 3-амино-3-(4-циано-3-фторфенил)пропионовой кислоты суспендировали в 8,5 мл метанола и смесь охлаждали до 0°С.Медленно добавляли 0,23 мл (3,14 ммоль) тионил хлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток обрабатывали с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Органическую часть высушивали с сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через силикагель (дихлорметан/этанол 100/0-97/3-94/6) получали 245 мг (47%) метилового эфира 3-амино-3-(4-циано-3-фтор-фенил)-пропионовой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=0,77 мин.
+
+
МС (ES): m/e=222,74 (М+Н)
Пример 14c
(3S)-3-(4-Циано-3-фторфенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Ее получали аналогично примерам 2b-2e, используя в качестве исходного пример 17b, получая 254 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 23 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,63 мин.
+
+
МС (ES): m/e=459,1 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=457,3 (М-Н)
Пример 15
(3S)-3-(5-{[4-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 15а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К дегазированному раствору трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата (пример 27c, 100 мг, 150 мкмоль), йодида меди (3,5 мг, 20 мкмоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (17,7 мг, 20 мкмоль) и {[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}(триметил)силана (73 мг, 310 мкмоль) в 1,2-диметоксиэтане (0,9 мл) и н-бутил амине (0,23 мл) добавляли 1 М раствор тетра-н-бутил аммоний фторид в ТГФ (200 мкл) в течение 15 минут при 80°C. Дополнительно через 20 минут при 80°C добавляли (36 мг, ммоль), смесь разводили водой через 20 минут и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 43 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,43 мин.
+
+
МС (ES): m/e=735,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=779,7 (М+НСОО)
Пример 15b
(3S)-3-(5-{[4-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (15,7 мг, 20 мкмоль) нагревали до 60°C в муравьиной кислоте в течение 40 минут. После этого раствор концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 8,9 мг (3S)-3-(5-{[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,83 мин.
+
+
МС (ES): m/e=579,3 (М+Н)
Пример 16
(3S)-3-(5-{[3-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 16а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К дегазированному раствору трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата (пример 27c, 100 мг, 15 ммоль), йодида меди (4,4 мг, 23 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (18 мг, 15 мкмоль) в ДМФА (0,4 мл) и н-бутил амина (0,23 мл) добавляли раствор 1-этинил-3-(2-фторэтокси)бензола (50 мг, 0,31 ммоль) в ДМФА (0,6 мл) в течение 60 минут при 100°C. Дополнительно через 20 минут при 100°C смесь разводили с помощью ДМСО и очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 90 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,45 мин.
+
+
МС (ES): m/e=735,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=779,5 (М+НСОО)
Пример 16b
(3S)-3-(5-{[3-(2-Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (15,7 мг, 20 мкмоль) нагревали до 60°C в муравьиной кислоте (1,5 мл) в течение 40 минут. После этого раствор концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 9,6 мг (3S)-3-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,91 мин.
+
+
МС (ES): m/e=579,4 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=577,4 (М-Н)
Пример 17
(3S)-3-[5-Фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 17а
3-Амино-3-(3-бром-5-фторфенил)пропионовая кислота
4,72 г (23,25 ммоль) 3-бром-5-фторбензальдегида суспендировали в 10 мл этанола. Добавляли 2,42 г (23,25 ммоль) пропандиоевой кислоты и 3,76 г (48,82 ммоль) ацетата аммония. Смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 5 часов и после охлаждения до комнатной температуры фильтровали. Остаток промывали холодным этанолом и высушивали в вакууме при 30°C, получая 880 мг (13%) 3-амино-3-(3-бром-5-фторфенил)пропионовой кислоты. Фильтрат концентрировали и кристаллизовали из этанола, получая в дальнейшем 706 мг (12%) 3-амино-3-(3-бром-5-фторфенил) пропионовой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,58 мин.
+
+
МС (ES): m/e=264,1 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=262,1 (М-Н)
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ = 2,43 (d, 2Н), 4,25 (t, 1Н), 7,31 (d, 1Н), 7,43 (dt, 1Н), 7,50 (s, 1Н) част. на млн.
Пример 17b
Метиловый эфир 3-амино-3-(3-бром-5-фторфенил)пропионовой кислоты
1,59 г (6,05 ммоль) 3-амино-3-(3-бром-5-фторфенил)пропионовой кислоты суспендировали в 24,5 мл метанола и смесь охлаждали до 0°C. Медленно добавляли 0,66 мл (9,08 ммоль) тионил хлорида. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток обрабатывали с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Органическую часть высушивали с сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 1,55 г (93%) метилового эфира 3-амино-3-(3-бром-5-фторфенил)пропионовой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=1,02 мин.
+
+
МС (ES): m/e=278,1 (М+Н)
1
Н-ЯМР (300 МГц, ХЛОРОФОРМ-d): δ = 2,55-2,71 (m, 2Н), 3,70 (s, 3Н), 4,40 (dd, 1Н), 7,06 (d, 1Н), 7,15 (d, 1Н), 7,33 (s, 1Н) част. на млн.
Пример 17c
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(3-бром-5-фторфенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
587,2 мг (2,13 ммоль) метилового эфира 3-амино-3-(3-бром-5-фтор-фенил)-пропионовой кислоты растворяли в 8,2 мл N,N-диметилформамида и охлаждали до 0°C. К этому раствору добавляли раствор 1100 мг (2,36 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопиррол идин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 5c) и 0,89 мл (6,38 ммоль) триэтиламина в 8,2 мл дихлорметане. Смесь выдерживали при 6°C в течение 20 часов. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония и смесь экстрагировали дихлорметаном. Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме, получая 1,66 г (125%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(3-бром-5-фторфенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата с чистотой 80%.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,35 мин.
+
+
МС (ES): m/e=628,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=626,4 (М-Н), 672,4 (М+НСОО)
Пример 17d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-фтор-4′-гидроксибифенил-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 558,0 мг (0,71 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(3-бром-5-фторфенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату в 17,4 мл толуола добавляли 16,5 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 117,9 мг (0,85 ммоль) (4-гидроксифенил)бороновой кислоты в 4,3 мл этанола и 82,8 мг (1,43 ммоль) фторида калия в 4,4 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 4 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 417 мг (92%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-фтор-4′-гидроксибифенил-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,24 мин.
+
+
МС (ES): m/e=640,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=638,5 (М-Н), 684,5 (М+НСОО)
Пример 17e
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
234 мг (0,37 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1-(5-фтор-4′-гидроксибифенил-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 4,0 мл тетрагидрофуране. Добавляли 238 мг (0,73 ммоль) карбоната цезия и 120,9 мг (0,70 ммоль) 1-йод-фторэтана. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. Добавляли 120,9 мг (0,70 ммоль) 1-йод-2-фторэтана и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 225 мг (90%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,38 мин.
+
+
МС (ES): m/e=686,2 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=730,5 (М+НСОО)
Пример 17f
3-({[(3R)-1-{3-[1-(Трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]пропановая кислота
220 мг (0,32 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата растворяли в 10,4 мл тетрагидрофурана. Добавляли 3,85 мл (0,39 ммоль) 0,1 н. раствора гидроксида натрия. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов, разводили водой и небольшим количеством 1 н. раствора гидроксида натрия и экстрагировали с помощью этил ацетата. Водный слой доводили до pH=4,5 с помощью 10% водного раствора лимонной кислоты и экстрагировали дихлорметаном и дихлорметан/2-пропанол 8/2. Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме, получая 150 мг (70%) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,32 мин.
+
+
МС (ES): m/e=672,3 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=670,4 (М-Н)
Пример 17g
(3S)-3-[5-Фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
148 мг (0,22 ммоль) 3-({[(3R)-1-{3-[1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-4-ил]пропаноил}пиперидин-3-ил]карбонил}амино)-3-[5-фтор-4′-(2-фторэтокси)бифенил-3-ил]пропановой кислоты суспендировали в 13,4 мл диоксана. Добавляли 0,55 мл (2,20 ммоль) 4 н. соляной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и после этого концентрировали, получая 150 мг, которые очищали путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,12 мин.
+
+
МС (ES): m/e=572,19 (М+Н)
-
МС (ES): m/e=570,16 (М-Н)
Пример 18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 18а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (20 мг, 30 мкмоль) в этил ацетате (0,8 мл) и метаноле (013 мл) перемешивали в течение 4,45 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода в присутствии палладия на угле (10%, 19 мг). Суспензию фильтровали через целит, который тщательно промывали метанолом. Раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 13,9 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,31 мин.
+
+
МС (ES): m/e=739,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=783,4 (М+НСОО)
Пример 18b
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (12,5 мг, 20 мкмоль) нагревали до 60°C в муравьиной кислоте в течение 30 минут. После этого раствор концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 9,2 мг (3S)-3-(5-{2-[4-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,69 мин.
+
+
МС (ES): m/e=583,5 (М+Н)
Пример 19
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Пример 19а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (30 мг, 40 мкмоль) в этил ацетате (1,2 мл) и метаноле (0,2 мл) перемешивали в течение 2,5 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода в присутствии палладия на угле (10%, 3 мг). Суспензию фильтровали через целит, который тщательно промывали метанолом. Раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 21,9 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,31 мин.
+
+
МС (ES): m/e=739,5 (М+Н)
и 2,4 мг E/Z смеси трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,38 мин.
+
+
МС (ES): m/e=737,5 (М+Н)
Пример 19b
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (20 мг, 30 мкмоль) нагревали до 60°C в муравьиной кислоте в течение 50 минут. После этого раствор концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 12 мг (3S)-3-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,69 мин.
+
+
МС (ES): m/e=583,3 (М+Н)
Пример 20
(E/Z)(3S)-3-(5-{2-[3-(2-Фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-({[3-(2-фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (2,4 мг, 3,2 мкмоль) нагревали до 60°C в муравьиной кислоте в течение 40 минут. После этого раствор концентрировали в вакууме, получая 1,6 мг (E/Z)(3S)-3-(5-{2-[3-(2-фторэтокси)фенил]этенил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=0,75/0,77 мин.
+
+
МС (ES): m/e=581,5 (М+Н)
Пример 21
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 4е, 80 мг, 0,15 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (20 мл). Добавляли карбонат цезия (120 мг, 0,37 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфонат (81 мг, 0,22 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов, закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (этил ацетат в дихлорметане 60%), получая 67 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,39 мин.
+
+
МС (ES): m/e=744,60 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=788,52 (М+НСОО)
Пример 22
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
100 мг (0,18 ммоль) Трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[1-(4-гидроксифенил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата (пример 2б) растворяли в 7 мл N,N-диметилформамида. Добавляли 179 мг (0,55 ммоль) карбоната цезия и 102 мг (0,28 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали, получая 195 мг. При осуществлении хроматографии через 5 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5) получали 95 мг (63%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,37-1,38 мин.
+
+
МС (ES): m/e=744,37 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=788,34 (М+НСОО)
Пример 23
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 23а
трет-Бутиловый эфир (S)-3-амино-3-(4-гидроксифенил)пропионовой кислоты
1,00 г (5,52 ммоль) коммерчески доступной 3-амино-3-(4-гидрокси-фенил)-пропионовой кислоты суспендировали в 20 мл трет-бутил ацетате и смесь охлаждали до 15°C. Медленно добавляли 0,90 мл (11,10 ммоль) перхлорной кислоты и смесь перемешивали при 20°C в течение 1,5 часа. Раствор экстрагировали с помощью насыщенного раствора гидрокарбоната натрия. Водный слой доводили до pH=8 с помощью карбоната натрия и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органические части объединяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали, получая 1,0 г (60%) рацемического трет-бутилового эфира 3-амино-3-(4-гидрокси-фенил)-пропионовой кислоты. Его разделяли на энантиомеры путем ВЭЖХ:
Фракция 12 содержала желательный изомер.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=0,81 мин.
+
+
МС (ES): m/e=239,18 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=236,18 (М-Н), 282,18 (М+НСОО)
3
D
Оптическое вращение (Р2000 Поляриметр, CHCl): [α]=-13,6°+/-0,11°
D
Литература: [α]=-8,5° (Tetrahedron: Asymmetry 18 (2007) 1554-1566, 3.6.72 Соединение (S)-46)
Пример 23b
трет-Бутиловый эфир 4-(3-{(R)-3-[(5)-2-трет-бутоксикарбонил-1-(4-гидрокси-фенил)-этилкарбамоил]-пиперидин-1-ил}-3-оксо-пропил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
214,0 мг (0,90 ммоль) трет-бутилового эфира (S)-3-амино-3-(4-гидрокси-фенил)-пропионовой кислоты растворяли в 3,5 мл N,N-диметилформамида и охлаждали до 0°C. К этому раствору добавляли раствор 466,4 мг (1,00 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 5c) и 0,38 мл (2,71 ммоль) триэтиламина в 3,5 мл дихлорметана. Смесь выдерживали при 6°C в течение 20 часов. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония и смесь экстрагировали дихлорметаном. Органический слой высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме, получая 820 мг. При осуществлении хроматографии через 5 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 539 мг (102%) трет-бутилового эфира 4-(3-{(R)-3-[(S)-2-трет-бутоксикарбонил-1-(4-гидрокси-фенил)-этилкарбамоил]-пиперидин-1-ил}-3-оксо-пропил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,24 мин.
+
+
МС (ES): m/e=588,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=586,6 (М-Н), 632,6 (М+НСОО)
Пример 23c
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
270,0 мг (0,46 ммоль) трет-бутилового эфира 4-(3-{(R)-3-[(S)-2-трет-бутоксикарбонил-1-(4-гидрокси-фенил)-этилкарбамоил]-пиперидин-1-ил}-3-оксо-пропил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты растворяли в 17,7 мл N,N-диметилформамида. Добавляли 449 мг (1,38 ммоль) карбоната цезия и 255,3 мг (0,69 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 227 мг (63%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата, который очищали с помощью ВЭЖХ:
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=1,48 мин.
+
+
МС (ES): m/e=787,8 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=784,6 (М-Н), 830,6 (М+НСОО)
Пример 24
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 5e, 200 мг, 0,37 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (25,3 мл). Добавляли карбонат цезия (298 мг, 0,92 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфонат (203 мг, 0,55 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и хранили при 5°C в течение 17 часов. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле (этил ацетат 100%), получая 109 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=1,26 мин.
+
+
МС (ES): m/e=745,6 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=789,5 (М+НСОО)
Пример 25
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 25a
5-(Бензилокси)пиридин-3-карбонитрил
3-(Бензилокси)-5-бромпиридин (5,38 г, 20,4 ммоль, Harrowven и др. Tetrahedron, 2001, 57, 4447-4454) в ДМФА (33 мл) перемешивали с цианидом меди (2,9 г, 32,6 ммоль) при 160°C в течение 7 часов. Добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и этил ацетат и образованную суспензию перемешивали при 50°C в течение 15 минут. После фильтрации жидкие фазы разделяли. Осадок растирали в порошок с 10% ДМФА в этил ацетате (500 мл) и насыщенном водном растворе гидрокарбоната натрия (100 мл) при 50°C и осуществляли фильтрацию и разделение фаз. Обработку осадка насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и 10% ДМФА в этил ацетате повторяли два раза и объединенные органические фазы промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 0 до 65%), получая 3,13 г 5-(бензилокси)пиридин-3-карбонитрила.
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ = 5,16 (s, 2 Н), 7,35-7,55 (m, 6 Н), 8,50 (d, 1 Н), 8,58 (d, 1 Н) част. на млн.
Пример 25b
Трет-бутил 3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]проп-2-еноат
Диизопропиламин (12,8 мл, 91 ммоль) добавляли при 0°C к 3М раствору бромида этил магния в диэтиловом эфире (15 мл, 45 ммоль) и дополнительно диэтиловому эфиру (40 мл). Через один час при добавляли 0°C t-бутил ацетат и продолжали перемешивать в течение 30 минут. Добавляли 5-(бензилокси)пиридин-3-карбонитрил (2,9 г, 13,8 ммоль) в диэтиловом эфире (40 мл) при 0°C. Через 2,5 часа при 0°C добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 0 до 45%), получая 1,95 г трет-бутил 3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]проп-2-еноата.
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ = 1,53 (s, 9 Н), 4,89 (s, 1 Н), 5,14 (s, 2 Н), 7,33-7,48 (m, 6 Н), 8,42 (m, 2 Н) част. на млн.
Пример 25c
Трет-бутил (3S)-3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]пропаноат
К димеру хлор(1,5-циклооктадиен)родия (I) (29 мг, 60 мкмоль) и (R)-(-)-1-[(S)-2-Ди-трет.-бутил-фосфино)ферроценил]этилди-(4-трифторметилфенил)фосфина (81 мг, 120 мкмоль) в атмосфере аргона добавляли 2,2,2-трифторэтанол (4 мл) и раствор перемешивали в течение 40 минут. К трет-бутил 3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]проп-2-еноату (1,95 г 5,97 ммоль) в дегазированном 2,2,2-трифторэтаноле (10 мл) в сосуде под давлением добавляли раствор родиевого катализатора и раствор перемешивали в течение 22 часов при 50°C под давлением водорода 10 бар. Добавление идентично приготовленного раствора родиевого катализатора в 2,2,2-трифторэтаноле (4 мл) повторяли и перемешивание под давлением водорода 10 бар при 50°C продолжали дополнительно в течение 16 часов. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 12 до 100%, после этого метанол в этил ацетате от 0 до 15%), получая 1,16 г энантиомерно обогащенного трет-бутил (3S)-3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]пропаноата.
1
3
Н-ЯМР (400 МГц, CDCl): δ = 1,43 (s, 9 Н), 2,59 (d, 2 Н), 4,42 (t, 1 Н), 5,12 (s, 2 Н), 7,32-7,50 (m, 6 Н), 8,23 (s, 1 Н), 8,29 (m, 1 Н) част. на млн.
3
D
3
Оптическое вращение (Р2000 Поляриметр, CHCl): [α]=-15,5° (с=1,0 г/100 мл CHCl)
Пример 25d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-трет-бутокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил (3S)-3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]пропаноату (1,15 г, 3,5 ммоль) в ДМФА (13,4 мл) добавляли трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат и триэтиламин (1,46 мл, 10,5 ммоль) в дихлорметане (13,5 мл) при 0°C. Через 3 часа смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 20 до 100%, после этого метанол в этил ацетате от 0 до 20%), получая 1,76 г трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-трет-бутокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
d6
Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО): δ = 0,79-1,08 (m, 3 Н), 1,38 (s, 9 Н), 1,35 (s, 9 Н), 1,49-1,75 (m, 9 Н), 2,29 (m, 3 Н), 2,59-2,77 (m, 5 Н), 2,89-3,13 (m, 1 Н), 3,68-3,83 (m, 1 Н), 3,83-3,97 (m, 2 Н), 5,07-5,27 (m, 1 Н), 5,17 (s, 2Н), 7,28-7,51 (m, 6 Н), 8,12 (br. s, 1 Н), 8,24 (br. s, 1 Н), 8,39-8,55 (m, 1 Н)
Пример 25e
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]-3-трет-бутокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (1,69 г, 2,49 ммоль) в этил ацетате (73 мл) и метаноле (12 мл) перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода в присутствии палладия на угле (10%, 170 мг). Суспензию фильтровали через целит, который тщательно промывали метанолом. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (метанол в этил ацетате от 0 до 15%), получая 1,37 г Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
1
d6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО, 80°C): δ = 0,85-1,09 (m, 2 Н), 1,36 (s, 9 Н), 1,41 (s, 9 Н), 1,30-1,47 (m, 5 Н), 1,55-1,72 (m, 4 Н), 1,77-1,89 (m, 1 Н), 2,29 (m, 3 Н), 2,59-2,77 (m, 5 Н), 2,89-3,13 (m, 1 Н), 3,83-3,97 (m, 3 Н), 5,03-5,25 (m, 1 Н), 7,09 (t, 1 Н), 7,88-8,09 (m, 2 Н), 8,14 (d, 1 Н), 9,55 (br., 1 Н) част. на млн.
Пример 25f
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (200 мг, 0,34 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (39 мл). Добавляли карбонат цезия (277 мг, 0,85 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфонат (188 мг, 0,51 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, повторяли добавление карбоната цезия (277 мг, 0,85 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната (188 мг, 0,51 ммоль) и перемешивание при 5°C продолжали в течение 17 часов. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью простого диэтилового эфира и этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20% до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 60%), получая 207 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-NH2): Rt.=1,37 мин.
+
+
МС (ES): m/e=787,5 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=785,5 (М-Н), 831,5 (М+НСОО)
Пример 26
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
82,0 мг (0,13 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 7a) растворяли в 5,1 мл N,N-диметилформамида. Добавляли 129 мг (0,40 ммоль) карбоната цезия и 73,2 мг (0,20 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 64 мг (59%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,30 мин.
+
+
МС (ES): m/e=821,4 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=819,6 (М-Н), 865,5 (М+НСОО)
Пример 27
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 27a
Трет-бутил 3-амино-3-[5-бромпиридин-3-ил]проп-2-еноат
Диизопропиламин (9,2 мл, 65 ммоль) добавляли при 0°C к 3М раствору бромида этил магния в диэтиловом эфире (10,9 мл, 32,7 ммоль) и дополнительно диэтиловому эфиру (20 мл). Через один час при 0°C добавляли трет-бутил ацетат (4,3 мл, 32,7 ммоль) и продолжали перемешивать в течение 30 минут. Добавляли 5-бромпиридин-3-карбонитрил (2,0 г, 10,9 ммоль) в диэтиловом эфире (42 мл) при 0°C. Через два часа при 0°C добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 0 до 60%), получая 1,12 г трет-бутил 3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)проп-2-еноата.
1
6
Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d): δ = 1,44 (s, 9 Н), 4,77 (s, 1 Н), 7,15 (br., 2 Н), 8,22 (t, 1 Н), 8,75 (d, 1 Н), 8,76 (d, 1 Н) част. на млн.
Пример 27b
Трет-бутил (3S)-3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)пропаноат
К димеру хлор(1,5-циклооктадиен)родия (I) (39 мг, 80 мкмоль) и (R)-(-)-1-[(S)-2-ди-трет.-бутил-фосфино)ферроценил]этилди-(4-трифторметилфенил)фосфина (108 мг, 160 мкмоль) в атмосфере аргона добавляли 2,2,2-трифторэтанол (5,8 мл) и раствор перемешивали в течение 40 минут. К трет-бутил 3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)проп-2-еноату (1,59 г 5,32 ммоль) в дегазированном 2,2,2-трифторэтаноле (11,6 мл) в сосуде под давлением добавляли раствор родиевого катализатора и раствор перемешивали в течение 22 часов при 50°C под давлением водорода 11 бар. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 12 до 100%, после этого метанол в этил ацетате от 0 до 15%), получая 1,16 г энантиомерно обогащенного трет-бутил (3S)-3-амино-3-[5-(бензилокси)пиридин-3-ил]пропаноата.
1
3
Н-ЯМР (300 МГц, CDCl): δ = 1,43 (s, 9 Н), 2,59 (d, 2 Н), 4,42 (t, 1 Н), 7,92 (t, 1 Н), 8,58 (d, 1 Н), 8,53 (d, 1 Н) част. на млн.
3
α=-17,6° (c=1,0 г/100 мл, CHCl)
Пример 27с
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-1-[5-бромпиридин-3-ил]-3-трет-бутокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил (3S)-3-амино-3-(5-бромпиридин-3-ил)пропаноату (1,33 г, 4,42 ммоль) в ДМФА (17 мл) добавляли трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(2,5-диоксопирролидин-1-ил)окси]карбонил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 25c, 2,54 г, 4,91 ммоль) и триэтиламин (1,85 мл, 13,2 ммоль) в дихлорметане (17 мл) при 0°C. Через 3 часа смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония, фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью диэтилового эфира. Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия, концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 12 до 100%, после этого метанол в этил ацетате от 0 до 15%), получая 2,1 г трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,35 мин.
+
+
МС (ES): m/e=651,4/653,4 (М+Н)
Пример 27d
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[4-гидроксифенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилату (200 мг, 307 мкмоль) в толуоле (7,5 мл) добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (14 мг, 0,01 ммоль), (4-гидроксифенил) бороновую кислоту (55 мг, 399 мкмоль) в этаноле (1,87 мл) и фторид калия (55 мг, 0,61 ммоль) в воде (1,87 мл). Смесь перемешивали при 100°C в течение 4 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме, остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане, от 12 до 100%, после этого метанол в этил ацетате от 0 до 15%), получая 156 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[4-гидроксифенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,17 мин.
+
+
МС (ES): m/e=665,5 (М+Н)
-
МС (Е8): m/e=663,5 (М-Н), 709,5 (М+НСОО)
Пример 27e
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[4-гидроксифенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (100 мг, 0,15 ммоль) растворяли в Ν,Ν-диметилформамиде (17,4 мл). Добавляли карбонат цезия (122 мг, 0,38 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфонат (84 мг, 0,23 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, добавление карбоната цезия (122 мг, 0,38 ммоль) и этилен гликоль бис-п-толуолсульфонат (84 мг, 0,23 ммоль) повторяли и перемешивание при 5°C продолжали в течение 17 часов. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью простого диэтилового эфира и этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20 до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 60%), получая 85 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=1,44 мин.
+
+
МС (ES): m/e=863,6 (M+Н)
-
МС (ES): m/e=861,5 (M-H).
Пример 28
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-цианофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 100,0 мг (0,16 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (пример 8c) в 4 мл толуола добавляли 3,8 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 35,7 мг (0,20 ммоль) (4-хлор-3-циано-фенил)бороновой кислоты в 1,0 мл этаноле и 29,6 мг (0,51 ммоль) фторида калия в 1,0 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 6 часов, разводили водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 44 мг (36%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-цианофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,27 мин.
+
+
МС (ES): m/e=668,6 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=664,5 (М-Н), 710,5 (М+НСОО)
Пример 29
Трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-бром-4-цианобензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилату (100 мг, 0,18 ммоль) в ДМФА (3 мл) добавляли гидрид натрия (8 мг, 60% 0,2 ммоль). Раствор охлаждали до 0°C и 2-бром-4-(бромметил)бензонитрил (55 мг, 0,2 ммоль), при этом перемешивали. Смесь нагревали до комнатной температуры и закаливали путем добавления воды и этил ацетата через 45 минут. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные органические экстракты концентрировали в вакууме и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 46 мг трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-1-{5-[(3-бром-4-цианобензил)окси]пиридин-3-ил}-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,27 мин.
+
+
МС (ES): m/e=740,3/742,3 (М+Н)
Пример 30
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
98,0 мг (0,16 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(3-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 6а) растворяли в 6,1 мл N,N-диметилформамида. Добавляли 154 мг (0,47 ммоль) карбоната цезия и 87,4 мг (0,24 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 68 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 70 мг (49%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,33 мин.
+
+
МС (ES): m/e=821,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=865,5 (М+НСОО)
Пример 31
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[2-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
108,0 мг (0,17 ммоль) Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(2-гидроксифенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 8d) растворяли в 6,7 мл N,N-диметилформамиде. Добавляли 170 мг (0,52 ммоль) карбоната цезия и 96,4 мг (0,26 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 68 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-90/10) получали 55 мг (37%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[2-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,30 мин.
+
+
МС (ES): m/e=821,3 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=865,5 (М+НСОО)
Пример 32
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К 171,5 мг (0,28 ммоль) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 8c) в 7 мл толуола добавляли 6,5 мг (0,01 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия (0), 68,0 мг (0,34 ммоль) (4-хлор-3-нитро-фенил)бороновой кислоты в 1,7 мл этанола и 50,7 мг (0,87 ммоль) фторида калия в 1,7 мл воды. Смесь перемешивали при 100°C в течение 60 часов, разводили водой и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5-90/10) получали 100 мг (47%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-нитрофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,30 мин.
+
+
МС (ES): m/e=686,2 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=730,4 (М+НСОО)
Пример 33
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
178,0 мг (0,28 ммоль) трет-бутилового эфира 4-(3-{(R)-3-[1-(5-фтор-4′-гидрокси-бифенил-3-ил)-2-метоксикарбонил-этилкарбамоил]-пиперидин-1-ил}-3-оксо-пропил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (пример 17d) растворяли в 10,7 мл N,N-диметилформамида. Добавляли 272 мг (0,84 ммоль) карбоната цезия и 154,6 мг (0,42 ммоль) этилен гликоль бис-п-толуолсульфоната. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 70 часов и концентрировали. Остаток ресуспендировали с помощью насыщенного раствора хлорида аммония и этил ацетата. Водную фазу экстрагировали с помощью 3×20 мл этил ацетата. Экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали. При осуществлении хроматографии через 10 г силикагеля (дихлорметан/этанол 100/0-95/5) получали 167 мг, которые дополнительно очищали путем ВЭЖХ, получая 27 мг (11%) трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-фтор-4′-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)бифенил-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,47 мин.
+
+
МС (ES): m/e=838,4 (М+Н)
-
-
МС (ES): m/e=882,4 (М+НСОО)
Пример 34
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 34а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К дегазированному раствору трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата (400 мг, 0,61 моль), йодида меди (14 мг, 70 мкмоль), тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (71 мг, 60 мкмоль) и 4-[(триметилсилил)этинил]фенола (234 мг, 1,23 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (3,5 мл) и н-бутил амина (0,91 мл) добавляли 1 М раствор тетра-н-бутил аммоний фторида в ТГФ (800 мкл, 0,8 ммоль) в течение 60 минут при 80°C. Дополнительно через 10 минут при 80°C смесь разводили водой после охлаждения до комнатной температуры и экстрагировали с помощью этил ацетата. Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 338 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата
СВЭЖХ (ACN-НСООН): Rt.=1,31 мин.
+
+
МС (ES): m/e=689,5 (M+H)
Пример 34b
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (60 мг, 0,09 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (10 мл). Добавляли карбонат цезия (71 мг, 0,22 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфонат) (48 мг, 0,13 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 25 часов, в то время как добавление карбоната цезия (71 мг, 0,22 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфоната) (48 мг, 0,13 ммоль) повторяли через 4 и 6 часов. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью простого диэтилового эфира и этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20% до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 50%), получая 48 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,51 мин.
+
+
МС (ES): m/e=887,7 (M+Н)
Пример 35
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 35а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
К дегазированному раствору трет-бутил 4-[3-((3R)-3-{[(1S)-1-(5-бромпиридин-3-ил)-3-трет-бутокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил)-3-оксопропил]пиперидин-1-карбоксилата (пример 27c, 300 мг, 0,46 ммоль), йодида меди (13 мг, 70 мкмоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) (53 мг, 50 мкмоль) в ДМФА (1,5 мл) и н-бутил амина (0,68 мл) добавляли раствор 3-этинилфенола (103 мг, 0,88 ммоль) в ДМФА (1,0 мл) через 35 минут при 100°C. Дополнительно через 5 минут при 100°C смесь разводили с помощью ДМСО и очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 289 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,33 мин.
+
+
МС (ES): m/e=689,6 (М+Н)
Пример 35b
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (40 мг, 0,06 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (6,7 мл). Добавляли карбонат цезия (47 мг, 0,15 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфонат) (32 мг, 0,09 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и хранили в течение 72 часов при 5°C. Добавление карбоната цезия (47 мг, 0,15 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфоната) (32 мг, 0,09 ммоль) повторяли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20% до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 50%), получая 24 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,50 мин.
+
+
МС (ES): m/e=887,5 (М+Н)
Пример 36
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 36а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[2-(4-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (190 мг, 0,28 ммоль) в этил ацетате (8,1 мл) и метаноле (1,34 мл) перемешивали в течение 4,45 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода в присутствии палладия на угле (10%, 19 мг). Суспензию фильтровали через целит, который тщательно промывали метанолом. Раствор концентрировали при пониженном давлении и очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 89 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[2-(4-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,18 мин.
+
+
МС (ES): m/e=693,6 (М+Н)
Пример 36b
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(4-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (67 мг, 0,10 ммоль) растворяли в Ν,Ν-диметилформамиде (9,7 мл). Добавляли карбонат цезия (79 мг, 0,24 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфонат) (54 мг, 0,15 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20% до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 60%), получая 64 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-NH3): Rt.=1,48 мин.
+
+
МС (ES): m/e=891,6 (M+Н)
Пример 37
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Пример 37а
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этинил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (200 мг, 0,29 ммоль) в этил ацетате (8,5 мл) и метаноле (1,4 мл) перемешивали в течение 7 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода в присутствии палладия на угле (10%, 20 мг), при этом добавление палладия на угле (10%, 20 мг) повторяли через 4 часов. Суспензию фильтровали через целит, который тщательно промывали метанолом. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем препаративной ВЭЖХ, получая 125 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[2-(3-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,19 мин.
+
+
МС (ES): m/e=693,5 (М+Н)
Пример 37b
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
Трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[(3-гидроксифенил)этил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (67 мг, 0,10 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (9,7 мл). Добавляли карбонат цезия (79 мг, 0,24 ммоль) и этан-1,2-диил бис(4-метилбензолсульфонат) (54 мг, 0,15 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов, закаливали путем добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали с помощью этил ацетата. Объединенные экстракты промывали солевым раствором и высушивали над сульфатом натрия. Раствор концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали путем хроматографии на силикагеле (этил ацетат в гексане от 20% до 100%, после этого диоксан в этил ацетате от 0 до 50%), получая 49 мг трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата.
СВЭЖХ (ACN-HCOOH): Rt.=1,43 мин.
+
+
МС (ES): m/e=891,5 (М+Н)
Пример 38
18
(3S)-3-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Радиоактивный синтез путем прямого введения метки:
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 21, 2,0 мг, 2,69 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 М NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 М HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм), 17/83/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 18,3-19,5 мин; время удерживания (3R)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 12,8-14,0 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 20 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл воды). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения от 73 до 297 МБк (3S)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 14±5,4% d.c.; время синтеза: 116±9,6 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 1) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, градиент: 5% В до 40% В в течение 7 мин). Радиоактивный синтез путем непрямого введения метки:
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетионитрила. 500 мкл о-дихлорбензола (o-DCB) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 2 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и после этого добавляли 2-бром-этиловый эфир 4-нитро-бензолсульфоновой кислоты (10 мг, 32,24 мкмоль). Повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 130°C. Впоследствии реакционную смесь снова охлаждали и двумя иглами с системами труб протыкали через тефлоновую мембрану запечатанного реакционного сосуда. Одну систему труб соединяли с регулятором потока азота, а другую систему труб со вторым сосудом, оборудованным 400 мкл ДМФА. Используя постоянный небольшой поток газообразного азота через реакционную смесь, эту смесь нагревали дополнительно в течение 20 минут при 100°C, при этом подводя этот поток азота во второй сосуд, где поток азота постоянно барботировали через 400 мкл ДМФА. При нагревании и потоке азота образованный 2-[F]фтор-1-бром-этан в сосуде 1 постоянно перегоняли в сосуд 2. Через 20 мин перегонку останавливали, поскольку нельзя было обнаружить больше дальнейшего повышения радиоактивности в сосуде 2.
18
18
18
18
В отдельном сосуде трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 4е, 2,50 мг, 4,58 мкмоль) растворяли в 100 мкл ДМФА. После этого добавляли 2 M раствор NaOH (20 мкл, 40,0 мкмоль) и после отстаивания в течение 1 минуты при 25°C эту смесь добавляли в сосуд 2, содержащий 2-[F]фтор-1-бром-этан в 400 мкл ДМСО. Запечатанный сосуд 2 нагревали в течение 25 минут при 100°C. После охлаждения к реакционной смеси дополнительно добавляли 100 мкл 2 M NaOH и продолжали перемешивать в течение 15 минут при 25°C. Раствор подкисляли с помощью 200 мкл 4 M HCl и нагревали в течение 10 минут при 100°C в запечатанном сосуде. Реакционную смесь нейтрализовали с помощью 4 M NaOH, разводили с помощью 3 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм), 17/83/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 13,4-14,7 мин; время удерживания (3R)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 8,6-9,7 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 20 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) для получения от 10 до 15 МБк (3S)-3-[3-(2-[F]фтор-этокси)-фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 3±1,7% d.c.; время синтеза: 195±14,3 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 1) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, градиент: 5% В до 40% В в течение 7 мин).
Пример 39
18
(3S)-3-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетионитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 22, 2,0 мг, 2,69 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 M NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 M HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Zorbax Bonus RP 5 мкм C18-HL (9,4×250 мм), 19/81/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 10,3-12,4 мин; время удерживания (3R)-3-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 8,3-10,3 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 20 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) и стерильно фильтровали, получая от 115 до 151 МБк (3S)-3-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 11±4,0% d.c.; время синтеза: 108±10,5 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 2) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, градиент: 5% В до 50% В в течение 7 мин).
Пример 40
18
(3S)-3-[5-(2-[F]Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Введение метки в трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат:
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO раствор и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 24, 2,0 мг, 2,68 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 М NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 М HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкм С18 110А (S/N: 337148-3; 10,0×250 мм), 10/90/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 15,1-17,0 мин; время удерживания (3R)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 8,0-8,4 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 40 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения от 113 до 168 МБк (3S)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 8,7±1,5% d.c.; время синтеза: 132±15,4 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 3) на аналитической ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Gemini, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 1,5 мл/мин (Agilent), растворитель A: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 12% B в течение 7 мин).
Введение метки в mpem-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-метокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 24, 2,0 мг, 2,68 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 M NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 M HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкм С18 110А (S/N: 337148-3; 10,0×250 мм), 10/90/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 15,4-18,4 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 40 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения от 127 до 435 МБк (3S)-3-[5-(2-[F]Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 19,5±4,6% d.c.; время синтеза: 117±10 мин). Радиохимическая чистота составляла >99% и удельная активность была в диапазоне от 38 до 107 ГБк/мкмоль. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 3) на аналитической ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Gemini, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 1,5 мл/мин (Agilent), растворитель A: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 12% B в течение 7 мин).
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
Введение метки в трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат [F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,28 мг CsCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({(1S)-3-трет-бутокси-1-[5-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)пиридин-3-ил]-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 25, 4,0 мг, 5,08 мкмоль) в безводном MeCN (400 мкл) добавляли к высушенному [F]CsF-K. После нагревания при 100°C в течение 20 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и 1 M HCl (400 мкл) добавляли. После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 12 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Phenomenex Gemini 5 мкм С18 110А (S/N: 337148-3; 10,0×250 мм), 9/91/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[5-(2-[F]фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 11,0-17,2 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 40 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения от 154 до 1351 МБк (3S)-3-[5-(2-[F]Фторэтокси)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 21,3±5,9% d.c.; время синтеза: 126±20 мин). Радиохимическая чистота составляла >99% и удельная активность находилась в диапазоне от 28,5 до 61,2 ГБк/мкмоль. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 3) на аналитической ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Gemini, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 1,5 мл/мин (Agilent), растворитель A: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 12% B в течение 7 мин).
Пример 41
18
(3S)-3-{5-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
Введение метки в трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[3-метокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 26, 2,0 мг, 2,44 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 М NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 М HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), градиент (20 мин): 20/80/0,1 - 35/65/0,1 ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 15,5-16,8 мин; время удерживания (3R)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 13,2-15,4 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 40 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения от 65 до 163 МБк (3S)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 9,0±1,0% d.c.; время синтеза: 128±10,0 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 7) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 15% В в течение 7 мин).
Введение метки в трет-Бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,28 мг CsCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-{5-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 27, 2,0 мг, 2,31 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [А]CsF-K. После нагревания при 100°С в течение 15 минут в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 1 M HCl (150 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь нейтрализовали с помощью 1 M NaOH (150 мкл) и разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), 21/79/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 13,0 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 30 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (300 мкл) для получения 226 МБк (3S)-3-{5-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]пиридин-3-ил}-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 11% d.c.; время синтеза: 113 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 7) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 15% В в течение 7 мин).
Пример 42
18
(3S)-3-[5-(3-Циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
3
222
2
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,8 мг KHCO в 100 мкл воды и 10,4 мг K в 1,9 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутилового эфира 4-[3-((R)-3-{1-[5-(4-хлор-3-циано-фенил)-пиридин-3-ил]-2-метоксикарбонил-этилкарбамоил}-пиперидин-1-ил)-3-оксо-пропил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты (2,0 мг, 3,00 мкмоль) в безводном ДМСО (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KHF-K. После нагревания при 160°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 М NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 5 минут при 25°C, после этого добавляли 1 М HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 5 минут при 70°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), градиент (20 мин): 20/80/0,1 - 30/70/0,1 ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[5-(3-циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 12,0-11,8 мин; время удерживания (3R)-3-[5-(3-циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 10,0-10,5 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 30 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light C18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 0,7 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (200 мкл) для получения от 12 до 111 МБк (3S)-3-[5-(3-циано-4-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 4,0±1,0% d.c.; время синтеза: 125±19,8 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 9) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 15% В в течение 7 мин).
Пример 43
18
(3S)-3-[5-(4-Циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
3
222
2
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,8 мг KHCO в 100 мкл воды и 10,4 мг K в 1,9 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого диастереомерную смесь трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-({1-[5-(4-хлор-3-цианофенил)пиридин-3-ил]-3-метокси-3-оксопропил}карбамоил)пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилата (пример 28, 1,0 мг, 1,87 мкмоль) в безводном ДМСО (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KHF-K. После нагревания при 160°C в течение 15 минут в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 0,5 M NaOH (100 мкл). Продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C, после этого добавляли 1 M HCl (200 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 70°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), градиент (20 мин): 20/80/0,1 - 30/70/0,1 ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-[5-(4-циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 11,5-12,2 мин; время удерживания (3R)-3-[5-(4-циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 9,9-10,8 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 15 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) для получения от 7 до 38 МБк (3S)-3-[5-(4-циано-3-[F]фторфенил)пиридин-3-ил]-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 2,4±1,0% d.c.; время синтеза: 111±10,6 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 10) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 15% В в течение 7 мин).
Пример 44
18
(3S)-3-(5-{[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,28 мг CsCO в 0,5 мл воды и 5,25 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 34, 2,0 мг, 2,25 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]CsF-K. После нагревания при 100°C в течение 15 минут в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 1 М HCl (150 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 12 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 (10,0×250 мм), 28/72/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-(5-{[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 17,8 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 15 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) для получения 44 МБк (3S)-3-(5-{[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 5,0% d.c.; время синтеза: 139 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 15) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 20% В в течение 7 мин).
Пример 45
18
(3S)-3-(5-{[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,28 мг CsCO в 500 мкл воды и 5,25 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 35, 2,0 мг, 2,25 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]CsF-K. После нагревания при 100°C в течение 15 минут в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 1 M HCl (150 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), 31/69/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-(5-{[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 14,9 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 15 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 0,5 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) для получения 63 МБк (3S)-3-(5-{[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этинил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 5,0% d.c.; время синтеза: 115 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 16) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50× 4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 23% В в течение 7 мин).
Пример 46
18
(3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO раствор и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[4-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 36, 3,0 мг, 3,37 мкмоль) в безводном MeCN (300 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 15 минут в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 1 М HCl (150 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 10 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (Phenomenex Synergi Hydro-RP 4 мкм (250×10 мм), 18/82/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 17,8 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 15 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) и стерильно фильтровали для получения 52 МБк (3S)-3-(5-{2-[4-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 5,5% d.c.; время синтеза: 145 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом на аналитической ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Hydro, С18 RP, 50×4,6 мм, 4 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 18% В в течение 7 мин).
Пример 47
18
(3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]Фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
18
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 M раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (2,28 мг CsCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого трет-бутил 4-{3-[(3R)-3-{[(1S)-3-трет-бутокси-1-(5-{2-[3-(2-{[(4-метилфенил)сульфонил]окси}этокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 37, 2,5 мг, 2,81 мкмоль) в безводном MeCN (200 мкл) добавляли к высушенному [F]CsF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали и добавляли 1 M HCl (150 мкл). После этого повторно запечатанный сосуд снова нагревали в течение 8 минут при 100°C. После охлаждения реакционную смесь разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ (АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), 25/75/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 13,2 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 15 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (200 мкл) для получения 290 МБк (3S)-3-(5-{2-[3-(2-[F]фторэтокси)фенил]этил}пиридин-3-ил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 19,1% d.c.; время синтеза: 88 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 19) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent, растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, градиент: 5%В до 50% В в течение 7 мин).
Пример 48
18
(3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]Фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановая кислота
18
18
18
18
18
18
18
18
2
3
2
3
222
222
[F] Фторид получали путем O (p, n) F ядерной реакции путем бомбардировки 98% O-обогащенной водой мишени с помощью 11MeVproton луча на RDS111 циклотроне. Водный раствор [F]фторида захватывали на небольшой анионо-обменный Sep-Pak™ Plus QMA картридж (Waters) (предварительно обработанный 5 мл 0,5 М раствора KCO и 10 мл воды). Радиоактивность элюировали с помощью смеси растворов (1,0 мг KCO в 0,5 мл воды и 5,27 мг K в 1,5 мл MeCN) с QMA картриджа в конический сосуд Wheaton объемом 5 мл. Растворитель упаривали в потоке азота при 110°C. Обезвоживание азеотропной перегонкой повторяли три раза порциями 1,0 мл ацетонитрила. После этого три(этилен гликоль) ди-п-толуолсульфонат (10 мг, 21,81 мкмоль) в безводном MeCN (500 мкл) добавляли к высушенному [F]KF-K. После нагревания при 100°C в течение 10 мин в запечатанном сосуде сосуд охлаждали, разводили с помощью 4 мл воды и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0× 250 мм), 50/50/0,1 - ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания 2-[2-(2-[F]-фторэтокси)этокси]этилового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты: 12,5 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 20 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Light С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 1,0 мл MeCN. Впоследствии MeCN полностью упаривали при 90°C в медленном потоке газообразного азота для получения чистой простетической группы 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этилового эфира толуол-4-сульфоновой кислоты (570 МБк).
18
18
18
18
В отдельном сосуде трет-бутил-4-{3-[(3R)-3-{[1-(5-гидроксипиридин-3-ил)-3-метокси-3-оксопропил]карбамоил}пиперидин-1-ил]-3-оксопропил}пиперидин-1-карбоксилат (пример 4е, 2,50 мг, 4,58 мкмоль) растворяли в 300 мкл ДМФА. После этого добавляли 2 M раствор NaOH (20 мкл, 40,0 мкмоль) и после отстаивания в течение 1 минуты при 25°C эту смесь добавляли в сосуд 1, содержащий безводный 2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этиловый эфир толуол-4-сульфоновой кислоты. Запечатанный сосуд 2 нагревали в течение 20 минут при 100°C. После охлаждения к реакционной смеси дополнительно добавляли 100 мкл 1 M NaOH и продолжали перемешивать в течение 10 минут при 25°C. Раствор подкисляли с помощью 200 мкл 2 M HCl и нагревали в течение 10 минут при 100°C в запечатанном сосуде. Реакционную смесь разводили с помощью 4 мл смеси вода/MeCN (1:1) и наносили на полупрепаративную ВЭЖХ АСЕ 5 мкм С18 HL (10,0×250 мм), градиент (20 мин): 15/85/0,1 - 50/50/0,1 ацетонитрил/вода/трифтор уксусная кислота (соотношение объем-объем-объем), 4 мл/мин, время удерживания (3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 28,3 мин; время удерживания (3R)-3-(3-{2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты: 29,0 мин). Собранную фракцию разводили с помощью 20 мл воды и наносили на предварительно обработанный Sep-Pak™ Plus С18 картридж (предварительно обработанный 5 мл EtOH и 10 мл). Картридж промывали с помощью 5 мл воды и после этого активность элюировали с помощью 2,0 мл EtOH. После полного упаривания EtOH в потоке азота при 90°C конечный меченный индикатор ресуспендировали в воде (100 мкл) для получения 34 МБк (3S)-3-(3-{2-[2-(2-[F]фторэтокси)этокси]этокси}фенил)-3-[({(3R)-1-[3-(пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]пропановой кислоты (радиохимический выход: 4,5% d.c.; время синтеза: 172 мин). Радиохимическая чистота составляла >99%. F-18 меченный продукт подтверждали путем совместной инъекции с F-19 холодным стандартом (пример 4) на аналитической ВЭЖХ (колонка: АСЕ, С18 RP, 50×4,6 мм, 3 µ, 2 мл/мин (Agilent), растворитель А: H2O + 0,1% TFA, растворитель В: MeCN + 0,1% TFA, изократический 20% В в течение 7 мин).
Сравнительное соединение
3
(3S)-3-[({(3R)-1-[3-(Пиперидин-4-ил)пропаноил]пиперидин-3-ил}карбонил)амино]-3-{6-[Н]Пиридин-3-ил}пропановая кислота
3
(3S)-3-(6-Бромпиридин-3-ил)-3-{[(3R)-1-(3-пиперидин-4-ил-пропаноил)пиперидин-3-карбонил]амино}пропановую кислоту (1,85 мг, 3,73 мкмоль) растворяли в смеси ДМФА (500 мкл) и EtN (25 мкл). К этому раствору добавляли палладий на угле (20%) (6,45 мг) и смесь присоединяли к тритиевому коллектору для тритиирования в течение ночи с газообразным тритием. Впоследствии реакционную смесь 3 раза криостатически упаривали в коллекторе. Полученный неочищенный продукт очищали на полупрепаративной ВЭЖХ (Kromasil 100 С8 5 мкм (250×4,6 мм), элюент: 35 мМ аммиак/метанол, поток: 1 мл/мин). Собранная фракция содержала 2061 МБк (S)-3-{5-3Н-пиридин-3-ил}-3-{[(R)-1-(3-пиперидин-4-ил-пропаноил)-пиперидин-3-карбонил]-амино}-пропановой кислоты (радиохимический выход: 12,6%; радиохимическая чистота: 98%; удельная активность: 7,81 Ки/ммоль).
Пример 49
Аффинность антагонистов GPIIb/IIIa к рецепторам GPIIb/IIIa человека
Общая процедура используемого GPIIb/IIIa анализа схематически представлена на фигуре 1.
2
3

Очищенный гликопротеин IIB/IIIa человека (20 мМ Трис-HCl, 0,1 М NaCl, 0,1% Тритон Х-100, 1 мМ CaCl, 0,05% NaN, 50% Глицерин, pH 7,4) получали от Enzyme Research Laboratories Inc. (South Bend, IN). GPIIb/IIIa рецептор разводили в фосфатно-буферном солевом растворе (забуференный фосфатом солевой раствор Дульбекко (D-PBS (+)) с кальцием и магнием, GIBCO, Invitrogen) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (альбумин из бычьей сыворотки - лиофилизированный порошок, ≥96%, Sigma).
GPIIb/IIIa рецептор иммобилизовали 48 часов минимально (100 мкл на лунку, 48 до максимально 96 часов) на твердом планшете на 96 лунок (Immuno Plate MaxiSorp™, Nunc, Roskilde, Denmark) при температуре от 277 K до 280 K и при концентрации от 0,1 мкг на лунку до 1 мкг на лунку. В качестве отрицательного контроля один ряд планшета (n=8) инкубировали только с 2% бычьим сывороточным альбумином (200 мкл на лунку, альбумин из бычьей сыворотки - лиофилизированный порошок, ≥96%, Sigma, разведенный в D-PBS (+)).

3
19
После трехкратного промывания промывочным буфером (230 мкл на лунку, забуференный фосфатом солевой раствор Дульбекко (D-PBS (-)), который не содержит ни кальция, ни магния, GIBCO, Invitrogen) оставшиеся подверженные воздействию пластические и неспецифические сайты связывания блокировали путем инкубирования планшета со специальным блокирующим раствором (200 мкл на лунку, Roti-Block, Carl Roth GmbH Co KG, Karlsruhe), содержащим 2% бычий сывороточный альбумин (Альбумин из бычьей сыворотки - лиофилизированный порошок, ≥96%, Sigma) 1 час при комнатной температуре. После трехкратного промывания промывочным буфером 50 мкл тритиированного сравнительного соединения (60 нМ, Н-меченное соединение) и 50 мкл нового соединения (ингибитор, F) одновременно добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Исследовали несколько концентраций каждого нового ингибитора (0,1, 1, 2, 5, 10, 20 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 10000 и 20000 нМ). Для каждой концентрации ингибитора осуществляли четырехкратное определение. Результаты для исследованных ингибиторов обобщены в таблице 1.
3
Определяли максимальное значение тритиированного сравнительного соединения без добавления ингибитора (n=8). Для исключения неспецифического связывания Н-сравнительного соединения лунки без гликопротеиновых рецепторов использовали в качестве отрицательных контролей (n=12, обработанные идентично, только без GPIIb/IIIa рецепторов).

Через один час планшет промывали три раза фосфатно-буферным солевым раствором (200 мкл на лунку, забуференный фосфатом солевой раствор Дульбекко (D-PBS (+)), GIBCO, Invitrogen). После этого в каждую лунку добавляли 140 мкл жидкого сцинтилляционного коктейля (MicroScint™ 40 водный, Perkin Elmer). Через 15 минут при комнатной температуре планшеты анализировали на сцинтилляционном счетчике для микропланшет (TopCount NXT v2.13, Perkin Elmer, Packard Instrument Company).

На фигуре 1 представлена схематическая диаграмма GPIIb/IIIa анализа. На первой стадии гликопротеин IIB/IIIa человека, который очищен от тромбоцитов человека, иммобилизовали на твердом планшете на 96 лунок. Через 48 часов планшеты минимально промывали и неспецифические сайты связывания блокировали с помощью Roti-Block. На следующей стадии планшеты одновременно инкубировали с меченным тритием сравнительным соединением и новым низкомолекулярным соединением (ингибитор). Чем более высокая активность ингибитора, тем меньшей является связанная фракция сравнительного соединения. Фракцию тритиированного сравнительного соединения, которая не вытесняется ингибитором, измеряли на сцинтилляционном счетчике для микропланшет.
Результаты обобщены в таблице 1.
Чем более высокая аффинность ингибитора, тем меньшей является связанная фракция меченного тритием сравнительного соединения. С помощью этого анализа можно идентифицировать активные диастереомеры и определить аффинности (IC50 значения). Исследования, описанные выше, свидетельствуют о том, что соединения формулы I пригодны в качестве контрастных агентов для визуализации тромбов. Хорошая корреляция между IC50-значениями и действительной аккумуляцией тромбов описана в примере 50.
Пример 50
Характеристика ex vivo
Связывание с тромбами человека:

Связывание соединений с тромбами дополнительно исследовали на модели кровотока ex vivo, сходной с описанной в Wakhloo, A.K. и др. "Thrombus and stroke 2008, in vitro models 57-66", но модифицированной с учетом развития тромба. Вкратце, открытый вручную изготовленный набор трубок, состоящий из трубок tygon (Tygon R-1000, part № AAU00007: I.D. 3,2 мм, O.D. 6,4 мм, Saint Gobain Performance Plastics North America), промежуточных трубок (Intrafix Infusion set, B. Braun, Melsungen, Germany) открытого резервуара (10 мл Combitip, Eppendorf) и камеры, сделанной из куска полиэтиленовой трубки, (INTRAMEDIC Polyethylene Tubing, Clay Adams, PE160, длина: 6,5 см), содержащую петлю из шероховатой нитки (рыболовная леска: Okuma UltraMax whitefish, диаметр: 0,14 мм, длина: 5 см; наждачная бумага: CAMI номер абразивного материала: 600, СР918а, VSM) использовали для образования тромба. Связь между промежуточной трубкой и камерой для тромбов осуществляли с помощью подогнанных наконечников (epTIPS, 200 мкл, Eppendorff, Hamburg/Germany). Резервуар и камеру для тромбов фиксировали с помощью клемм и стоек. Перистальтический насос (Minipuls 3, Gilson, Middelton/USA) использовали для накачивания крови вокруг, таким образом регулируя ток в середине камеры для тромбов до 70-90 см в секунду, за которым наблюдали с помощью ультразвукового допплеровского измерения (Vevo 770 High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System, VisualSonics, Toronto/Ontario, Canada; Scanhead: RMV 704, 40 МГц). Объем целого набора трубок составлял 7,5 или 15 мл.

2
2
Для каждого эксперимента свежую кровь отбирали у добровольцев, используя пробирки с цитратом объемом 10 мл (Sarstedt S-Monovette 02.1067.001, 10 мл, цитрат 3,13%) и сразу же переносили в поворотное устройство инкубатора при температуре 37°C (Heraeus miniTherm СТТ с интегрированным вращающимся и поворотным устройством, частота вращения: 19 оборотов в минуту, Heraeus Instruments GmbH, Hanau/Germany). При необходимости, две трубки вынимали из поворотного устройства и 15 мл переносили в шприц объемом 20 мл (Omnifix, B. Braun, Melsungen/Germany) и осторожно смешивали с 0,75 мл раствором CaCl перед началом работы перистальтического насоса и все содержимое шприца переносили в резервуар набора трубок с помощью клеточного фильтра (BD Falcon™ клеточный штамм, 40 мкм, BD, Franklin Lakes, NJ USA). Через 7 минут 1 МБк или 0,5 МБк (15 мл или 7,5 мл) соединения добавляли в резервуар с помощью пипетки, таким образом осторожно смешивая содержимое с помощью тонкого конца пипетки. Кровь оставляли циркулировать в течение других 3 минут. После этого насос останавливали, отбирали ал и квоты из крови и тромбы совместно с шероховатой ниткой удаляли из камеры для тромбов, после этого оба взвешивали и анализировали на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer). После этого тромбы совместно с ниткой инкубировали в растворе плазмина (плазмин из плазмы человека, Sigma Aldrich, маточный раствор: 500 мкг в 500 мкл 150 мкМ Трис-буфера (pH 7,8), 20 мкл маточный раствор до 230 мкл солевого раствора 0,9%) в течение 48 часов для отделения тромбоцитов от нитки и для определения нетто-веса тромба. В завершение, определяли активность соединения в крови и тромбе, а также соотношения между обоими (имп. в минуту/вес [мг]). Результаты для исследуемых соединений обобщены в таблице 2.
Для подтверждения специфичности соединения осуществляли конкурирующий эксперимент, в котором холодное соединение добавляли в резервуар совместно с горячим соединением. Конечная концентрация в плазме холодного соединения составляла 2,8 мкМ. Результаты обобщены в таблице 3.
18
* Значения ± среднеквадратическое отклонение (СКО) через 3 минуты после инъекции F-меченного соединения на описанной модели тромбов in vitro.
Конкурирующие эксперименты свидетельствуют о том, что накопление индикатора может быть вытеснено путем добавления холодного соединения и подтверждения того, что связывание является специфическим.
50
Сильное специфическое связывание соединений с тромбами, показанное в таблице 2 и 3 (in vitro соотношение сгусток-кровь), хорошо коррелирует со значениями IC, определенными ранее (Фигура 2 и пример 49). Накопление соединений в тромбах или соотношения сгусток-кровь возрастали при повышении аффинности.
Пример 51
Связывание белка плазмы
Определение связывания белка плазмы с помощью соединения осуществляли посредством равновесного диализа в HT планшете на 96 лунок. Растворы тестируемого соединения (0,3 мкмМ и 3 мкмМ) приготавливали в буфере (50 мМ фосфатный буфер) и 10% плазме. HT диализный планшет на 96 лунок (Teflon) собирали таким образом, чтобы каждая лунка была разделена на два компартмента с помощью полупроницаемой целлюлозной мембраны (регенерированная целлюлоза, MWCO 12-14K). Фосфатно-буферный раствор (150 мкл) добавляли на одну сторону мембраны, а плазмовый раствор - на другую сторону (150 мкл). Соединения добавляли на сторону плазмового раствора и инкубировали при 37 градусах. Несвязанная фракция соединения может проходить через мембрану и можно достигать уравновешивания между двумя сторонами (6-8 ч, 37°C). Для каждого соединения анализировали оба раствора (без плазмы и содержащего плазму) с помощью ЖХ-МС. Оба раствора для каждого соединения разводили с помощью буфера или плазмы для достижения аналогичного матрикса (10% плазма) для анализа и осаждали путем добавления метанола. Несвязанную фракцию (Fu) рассчитывали в виде частного равновесных концентраций соединения в растворе без плазмы и в растворе, содержащем плазму.
Результаты обобщены в таблице 4. Величину связывания белка плазмы исследовали у людей и обезьян. Примеры не проявили существенного связывания с белками плазмы, с несвязанной фракцией (Fu) больше чем 10%, во всех исследуемых видах.
Пример 52
Метаболическая стабильность in vitro в микросомах печени
2
Микросомы печени человека в суспензии (содержание белка 0,5 мг/мл) использовали для исследований метаболической стабильности. Инкубационная концентрация составляли 0,3 мкМ. Объем луночной инкубации составил 3,03 мл, в котором 2,4 мл микросомной суспензии в фосфатном буфере (7,4 pH) активировали путем добавления 0,6 мл NADPH регенерационной системы (кофакторная смесь: 1,2 мг NADP, 3 МЕ глюкоза-6-фосфат дигидрогеназа, 14,6 мг глюкоза-6-фосфат и 4,9 мг MgCl в фосфатном буфере, pH 7,4). После добавления 30 мкл тестируемого соединения начинали исследование. Соединение растворяли в органическом растворителе и разводили с помощью аналогичной среды для микросомы печени для поддержания органического содержимого ниже рекомендованной концентрации (диметилсульфоксид ДМСО <0,2% и метанол <1%). Суспензию инкубировали при 37 градусах в течение 60 минут при непрерывном перемешивании (Tec Control Shaker RS 485 при 300 об. в минуту). В различные временные точки (2, 8, 16, 30, 45 и 60 мин) 250 мкл отбирали аликвоты и смешивали с холодным метанолом. Образцы замораживали в течение ночи при -20°C. Растворы центрифугировали в течение 15 минут при 3000 g. Прозрачный супернатант (100 мкл) использовали для определения концентрации. Анализ осуществляли с помощью ВЭЖХ системы Agilent 1200 с детектором ЖХМС/МС.
кровь
Исследовали чувствительность исследуемых соединений к разложению путем фазы-I окислительного метаболизма с использованием микросом печени из различных видов. Соединение 1 и 3 проявляли очень высокую метаболическую стабильность у людей, обезьян и крыс (рассчитанное CL=0,0001 л/ч/кг). Восстановлением составило почти 100% для всех исследуемых видов. Экстраполяция клиренса in vitro к in vivo (Clint) подтверждает очень низкий метаболический клиренс у людей, мышей, крыс и обезьян.
Пример 53
Фармакокинетика у мышей
Биораспределение соединения, описанного в примере 41, определяли у бесшерстых мышей.
2
Вкратце, мыши получали 185 кБк соединения каждая. В различные временные точки (1, 3, 10, 30, 120 минут после инъекции, 3 мышей на группу) животных умертвляли и представляющие интерес органы или их аликвоты удаляли и в завершение измеряли на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer).
Соединение быстро элиминируется из крови и отсутствует усиление в сосудистой стенке. Соединение быстро экскретируется через почки и печень и почти отсутствует фон во всех других частях организма через 15 минут после инъекции (Фигура 3).
Пример 54
Клиренс в крови у обезьяны циномольгус

2
Клиренс в крови соединения, описанного в примере 40, определяли у обезьяны циномольгус. Самку обезьяны циномольгус анестезировали смесью Ксилазин (Rompun, Bayer Healthcare, Leverkusen, Germany), 0,12 мл/кг веса тепла и Кетамин (Ketavet, Pfizer) 0,12 мл/кг веса тела в/м. Обезьяну помещали внутрь РЕТ-сканера (Inveon РЕТ/СТ, Siemens Medical, Erlangen) и 25 МБк соединения инъецировали в/в, при этом ЕТ-визуализацию осуществляли непрерывно сразу перед инъекцией вплоть до 60 минут после инъекции. Образцы венозной крови отбирали через 3, 10, 30 и 60 минут после инъекции и анализировали на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer). Дополнительно, концентрацию в крови соединения измеряли с РЕТ-изображения в течение всего периода визуализации (Фигура 4).
Было обнаружено, что соединение, описанное в примере 40, быстро выводится из крови. Присутствует только незначительный сигнал, видимый в любой другой ткани. Головной мозг полностью не содержит контраста.
Этот результат хорошо коррелирует с результатами фармакологического исследования у мышей и дополнительно подчеркивает благоприятный фармакокинетический профиль соединения. Кроме того, было показано, что также отсутствует перекрестная реакция с любыми другими структурами (например, интегринами) в здоровом эндотелии.
Пример 55
Визуализация тромбов у обезьян циномольгус
Способность соединения, описанного в примере 40, визуализировать тромбы анализировали в РЕТ-исследовании с обезьянами циномольгус (самки, 2,8-3,2 кг).
Обезьяна 1:

Первую обезьяну анестезировали смесью Ксилазин (Rompun, Bayer HealthCare, Leverkusen, Germany), 0,12 мл/кг и Кетамин (Ketavet, Pfizer) 0,12 мл/кг веса тела в/м и дополнительно анальгезировали путем в/м инъекции 6 мкг бупренорфина на кг. При проведении исследования, инъецировали небольшие количества кетамина при необходимости. Левую общую сонную артерию открывали хирургически и полиэтиленовую трубку (INTRAMEDIC polyethylene Tubing, Clay Adams, PE50), которой придавал шероховатость ранее с помощью наждачной бумаги (обозначением зернистости 600 - CAMI), вставляли с сосуд, распространяясь на нисходящую часть дуги аорты и оставляли там в течение 30 минут для предоставления возможности образования тромба на шероховатой поверхности трубки. В это же время обезьяну помещали внутрь РЕТ-сканера (Inveon РЕТ/СТ, Siemens Medical, Erlangen). После этого обезьяна получала 25 МБк соединения в/в и РЕТ-сканирование запускали сразу до инъекции вплоть до 60 минут после инъекции. Изображение показало яркий сигнал внутри нисходящей аорты поблизости шероховатой части трубки (Фигура 5), в то время как был только слабый сигнал в любой ткани вокруг трубки. Неожиданно, был только очень тонкий слой тромба, покрывающий неровную часть трубки, видимый после удаления шероховатой трубки с животного. Толщина этого слоя была значительно меньше 1 мм (см. также удаление тромба у обезьяны 2, Фигура 7) и к тому же также значительно ниже разрешения изображения, которое составляет приблизительно 1 мм. Это также обозначает, что даже самые тонкие тромбы, даже если их размер значительно ниже разрешения визуализирующего устройства, могут быть визуализированы благодаря массивному накоплению соединения в тромбоцитах тромба.
2
После окончания эксперимента трубку осторожно удаляли из сосуда, после этого ее взвешивали и анализировали на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer). После этого тромб совместно с трубкой инкубировали в растворе плазмина (плазмин из плазмы человека, Sigma Aldrich, маточный раствор плазмина: 500 мкг плазмина в 500 мкл трис-буфера (150 мкМ, pH 7,8), 20 мкл маточного раствора плазмина к 230 мкл солевого раствора 0,9%) в течение 48 часов для отделения тромбоцитов от трубки и для определения нетто-веса тромба. В завершение, определяли активность соединения в крови и тромбе, а также соотношение между этими двумя показателями (имп. в минуту/вес [мг]).
Обезьяна 2:
Эксперимент повторяли с тем же самым соединением для другой обезьяны с немного отличающимся приготовлением тромбогенной трубки: Это трубке придавали шероховатость только в двух коротких отделах с промежутком между ними. В остальном схема эксперимента, включая определение соотношение сгусток-кровь in vivo, была аналогичной описанной выше для обезьяны 1.
В отличие от тромба у первой обезьяны, сейчас было обнаружено два отдельных сильных сигнала, показанных на PET, изображении, с промежутком между ними (Фигура 6). После удаления тромбогенной трубки из сосуда, два отдельных тромба можно было обнаружить в шероховатых частях трубки (Фигура 7), свидетельствуя о том, что сигналы имеют происхождение исключительно из тромба, а не из самой трубки. Как уже известно для обезьяны 1, два тромба также были чрезвычайно тонкими (Фигура 7).
Обезьяна 3, уменьшение дозы и венозный тромб
Эксперимент повторяли с тем же самым соединением у другой обезьяны, но с уменьшенной дозой 15 МБк для целого животного. Дополнительно к артериальному катетеру, этому животному также вводили венозный катетер, также приготовленный из РЕ50-катетерной трубки, и ему придана шероховатость в некоторых частых с промежутками между ними, как описано выше. Этот катетер вставляли с левую бедренную вену и распространяли на верхнюю полую вену. Оба катетера оставляли в сосудах в течение 30 минут перед внутривенным введением соединения. PET визуализацию осуществляли непосредственно перед этим и до 60 минут после инъекции.
Как и других обезьян, все артериальные и венозные тромбы показали сильный сигнал на изображении (Фигура 8). Как и раньше, большая часть сигнала исчезала из крови и других тканей вокруг тромбов в течение нескольких минут.
Соотношение сгусток-кровь in vivo:
2
Определяли соотношение сгусток-кровь in vivo для 5 тромбов из вышеописанных опытов на обезьянах. Как уже было указано выше, тромбы удаляли из сосудов после визуализации и взвешивали и анализировали на гамма-счетчике (Автоматический гамма-счетчик Wizard 3, Perkin Elmer) совместно с образцами крови, отобранными у животного. После инкубирования тромбов в плазмине (плазмин из плазмы человека, Sigma Aldrich, маточный раствор плазмина: 500 мкг плазмина в 500 мкл трис-буфера (150 мкмМ, pH 7,8), 20 мкл маточного раствора плазмина к 230 мкл солевого раствора 0,9%) и удаления тромбов из катетерных трубок, рассчитывали нетто-вес тромбов и концентрацию соединения в тромбе (сгусток) и крови, а также рассчитывали соотношение между этими двумя показателями. Соотношение сгусток-кровь in vivo неожиданно было высоким (126+/-52, таблица 6) и существенно выше соотношения, описанного в ближайшем уровне техники (US 2007/0189970 A1).
В таблице 6 показана концентрация соединения в тромбе (сгусток) и крови и определенное в результате этого соотношение сгусток-кровь in vivo для 5 тромбов у обезьяны путем визуализирующих экспериментов, описанных выше. Было обнаружено, что оно является неожиданно высоким и существенно выше показанного в известном уровне техники (US 2007/0189970 A1).
Вывод:
Соединение, описанное в примере 40, проявляет неожиданно высокое накопление даже в самых тонких венозных и артериальных тромбах у обезьян. Почти отсутствует фон в какой-либо близлежащей ткани или органе у любой из исследуемых обезьян. Соединение почти полностью остается в пределах тромба в течение продолжительного периода времени (было показано 60 минут). В отличие от наиболее близкого уровня техники (US 2007/0189970 A1), доза, введенная в описанных в настоящей заявке экспериментах, была почти в 50 раз ниже и при этом соотношение сгусток-кровь in vivo было существенно выше.