Способ детекции свободных опухолевых клеток по материалам перитонеальных смывов при раке желудка

Способ детекции свободных опухолевых клеток по материалам перитонеальных смывов при раке желудка, при котором перитонеальные смывы получают при диагностической лапароскопии по следующей методике: доступом в околопупочной области устанавливается 10 мм троакар с лапароскопом, далее устанавливается два дополнительных 5 мм троакара для аспиратора или ирригатора и мягкого зажима, затем проводится визуальная оценка париетальной и висцеральной брюшины, стенки желудка, сальника, поверхности печени, гепатодуоденальной связки, далее выполняется смыв, путем ирригации предварительно подогретого изотонического раствора хлорида натрия в свободную брюшную полость на диафрагмальную и висцеральную поверхность печени, париетальную брюшину с последующей полной аспирацией; материал доставляется в лабораторию; производится окраска готовых препаратов, цитологический готовый препарат оценивается на светооптическом уровне, для выявления опухолевых клеток используется панель моноклональных антител, отличающийся тем, что после доставки материала в лабораторию получают и оценивают осадок, приготовленный центрифугированием из части образца; в зависимости от величины осадка, материал разделяют на гипоклеточный менее 0,5 мл, нормоклеточный 0,5–1 мл и гиперклеточный более 1 мл, проводят пробоподготовку образцов по методике клеточного блока cell-block или методом жидкостной технологии; если материал гипо- или нормоклеточный, то оставшуюся 1/2 часть материала подвергают аналогичной пробоподготовке и используют для проведения иммуноцитохимических исследований, в случае гиперклеточного материала пробоподготовку проводят по технологии клеточного блока, предварительно объединяя осадок и неотработанную 1/2 часть пробы; конечный продукт готовят на основе формалиновой фиксации и парафинового блока, далее делают срезы, на основании светооптической оценки выделяют морфологические признаки, такие как:
ядерно-цитоплазматическое соотношение: если смещено в пользу цитоплазмы, реже в пользу ядра – мезотелиальные клетки; если смещено в пользу ядра – опухолевые клетки;
гиперхромия клеток или ядра: если слабо выражена - мезотелиальные клетки; если сильно выражена - опухолевые клетки;
дискариоз ядер: если не отмечался - мезотелиальные клетки; если отмечался часто - опухолевые клетки;
наличие перстневидных клеток: если в качестве редких находок - мезотелиальные клетки; если отмечается в 90% диссеминации перстневидноклеточного рака - опухолевые клетки;
наличие невизуализируемых ядрышек: если умеренно выражен - мезотелиальные клетки; если сильно выражен – опухолевые клетки;
кластерные и/или шаровидные структуры, гиперхромные структуры: если выражен клетки слабо-мезотелиальные; если сильно выражен - опухолевые клетки;
наслоение ядер в структурах: если выражен слабо-мезотелиальные клетки; если сильно выражен - опухолевые клетки;
позволяющие определить характер процесса и сделать одно из заключений: материал отрицательный по наличию свободных опухолевых клеток (СОК), материал положительный по наличию СОК, материал подозрительный по наличию СОК, затем для первой и второй групп заключений проводят иммуноцитохимические исследования с применением моноклональных антител к Ber-ЕР4, а для третьей - с применением панели моноклональных антител к Ber-EP4, СEA, CK20.