КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБЫ КРИОКОНСЕРВАЦИИ КЛЕТОК HUTC

1. Композиция для криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины, причем указанная композиция содержит:
аминокислоты: L-аргинин, L-глутамин, глицин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизина HCl, L-метионин, L-фенилаланин, L-серин, L-треонин, L-триптофан и L-валин;
витамины: D-пантотенат кальция, хлорид холина, фолиевую кислоту, ниацинамид, пиридоксина HCl, рибофлавин и тиамина HCl;
неорганические соли: хлорид калия по Фарм. США, бикарбонат натрия по Фарм. США, хлорид натрия по Фарм. США и одноосновный фосфат натрия, гидрат;
2
2
2
2
3
2
4
неорганические соли: хлорида кальция дигидрат (CaCl*2HO), хлорид магния (MgCl*6HO), бикарбонат калия (KHCO) и монофосфат калия (KHPO); и
ДМСО, лактобионовую кислоту, глутатион, декстрозу, сахарозу и маннит.
2. Композиция по п. 1, содержащая:
по меньшей мере около 37,8 мг/л L-аргинина, по меньшей мере около 262,8 мг/л L-глутамина, по меньшей мере около 13,5 мг/л L-глицина, по меньшей мере около 47,16 мг/л L-изолейцина, по меньшей мере около 47,16 мг/л L-лейцина, по меньшей мере около 65,79 мг/л L-лизина HCl, по меньшей мере около 13,5 мг/л L-метионина, по меньшей мере около 29,7 мг/л L-фенилаланина, по меньшей мере около 18,9 мг/л L-серина, по меньшей мере около 42,75 5 мг/л L-треонина, по меньшей мере около 7,2 мг/л L-триптофана и 41,85 мг/л L-валина;
по меньшей мере около 0,18 мг/л рибофлавина и по меньшей мере около 1,8 мг/л каждого из витаминов: D-пантотената кальция, хлорида холина, фолиевой кислоты, ниацинамида, пиридоксина HCl и тиамина;
2
2
2
2
3
2
4
по меньшей мере около 432 мг/л хлорида калия по Фарм. США, около 2565 мг/л бикарбоната натрия по Фарм. США, около 2880 хлорида натрия по Фарм. США, около 56,25 мг/л одноосновного фосфата натрия, гидрата, около 3,2 мкг/л хлорида кальция дигидрата (CaCl*2HO), около 458 мг/л хлорида магния (MgCl*6HO), около 225 мг/л бикарбоната калия (KHCO) и около 612 мг/л монофосфата калия (KHPO); и
от около 5 до около 10% об. ДМСО, по меньшей мере около 855 мг/л декстрозы, по меньшей мере около 415 мг/л глутатиона; по меньшей мере около 3081 мг/л сахарозы и по меньшей мере около 1639 мг/л маннита.
3. Композиция для криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины, причем указанная композиция содержит:
аминокислоты: L-аргинин, L-глутамин, глицин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизина HCl, L-метионин, L-фенилаланин, L-серин, L-треонин, L-триптофан и L-валин;
витамины: D-пантотенат кальция, хлорид холина, фолиевую кислоту, ниацинамид, пиридоксина HCl, рибофлавин и тиамина HCl;
неорганические соли: хлорид калия по Фарм. США, бикарбонат натрия по Фарм. США, хлорид натрия по Фарм. США и одноосновный фосфат натрия, гидрат; и
ДМСО, декстрозу, сахарозу и маннит.
4. Композиция по п. 3, содержащая:
по меньшей мере около 75,6 мг/л L-аргинина, по меньшей мере около 525,6 мг/л L-глутамина, по меньшей мере около 27 мг/л L-глицина, по меньшей мере около 94,32 мг/л L-изолейцина, по меньшей мере около 94,32 мг/л L-лейцина, по меньшей мере около 131,58 мг/л L-лизина HCl, по меньшей мере около 27 мг/л L-метионина, по меньшей мере около 59,4 мг/л L-фенилаланина, по меньшей мере около 37,8 мг/л L-серина, по меньшей мере около 85,5 мг/л L-треонина, 14,4 мг/л L-триптофана и по меньшей мере около 83,7 мг/л L-валина;
по меньшей мере около 0,36 мг/л рибофлавина и по меньшей мере около 3,6 мг/л каждого из витаминов: D-пантотената кальция, хлорида холина, фолиевой кислоты, ниацинамида, пиридоксина HCl и тиамина;
по меньшей мере около 360 мг/л хлорида калия по Фарм. США, по меньшей мере около 3330 мг/л бикарбоната натрия по Фарм. США, по меньшей мере около 5760 мг/л хлорида натрия по Фарм. США и по меньшей мере около 112,5 мг/л одноосновного фосфата натрия, гидрата; и
от около 5 до около 10% об. ДМСО, по меньшей мере около 900 мг/л декстрозы, по меньшей мере около 6160 мг/л сахарозы и по меньшей мере около 3240 мг/л маннита.
2
2
2
2
3
2
4
5. Композиция по п. 3, причем композиция не включает лактобионовую кислоту, глутатион и неорганические соли: хлорида кальция дигидрат (CaCl*2HO), хлорид магния (MgCl*6HO), бикарбонат калия (KHCO) и монофосфат калия (KHPO).
6. Композиция для криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины, причем указанная композиция содержит:
аминокислоты: L-аргинин, L-глутамин, глицин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизина HCl, L-метионин, L-фенилаланин, L-серин, L-треонин, L-триптофан и L-валин;
витамины: D-пантотенат кальция, хлорид холина, фолиевую кислоту, ниацинамид, пиридоксина HCl, рибофлавин и тиамина HCl;
неорганические соли: хлорид калия по Фарм. США, бикарбонат натрия по Фарм. США, хлорид натрия по Фарм. США и одноосновный фосфат натрия, гидрат;
2
2
2
2
3
2
4
неорганические соли: хлорида кальция дигидрат (CaCl*2HO), хлорид магния (MgCl*6HO), бикарбонат калия (KHCO) и монофосфат калия (KHPO); и
от около 5 до около 10% об. ДМСО, от около 12 000 до около 20 000 мг/л лактобионовой кислоты, от около 329 до около 495 мг/л глутатиона, декстрозу, от около 2460 до около 3695 мг/л сахарозы и от около 1310 до около 1967 мг/л маннита.
7. Композиция по п. 1, в которой клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
8. Композиция по п. 7, в которой клетки, полученные из ткани пуповины, дополнительно содержат одну или более из следующих характеристик:
экспрессируют рецептор-1 окисленных липопротеинов низкой плотности, ретикулон, лиганд-3 рецептора хемокина и/или хемотаксический белок гранулоцитов;
не экспрессируют CD31 или CD34;
экспрессируют повышенные по отношению к фибробластам человека, мезенхимальным стволовым клеткам или клеткам костного мозга гребня подвздошной кости человека уровни интерлейкина-8 или ретикулона-1; и
экспрессируют CD10, CD13, CD44, CD73 и CD90.
9. Набор, содержащий композицию по п. 1 и клетки, полученные из ткани пуповины, причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
10. Набор, содержащий композицию по п. 3 и клетки, полученные из ткани пуповины, причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
11. Набор, содержащий композицию по п. 6 и клетки, полученные из ткани пуповины, причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
12. Набор по п. 11, в котором клетки, полученные из ткани пуповины, дополнительно содержат одну или более из следующих характеристик:
экспрессируют рецептор-1 окисленных липопротеинов низкой плотности, ретикулон, лиганд-3 рецептора хемокина и/или хемотаксический белок гранулоцитов;
не экспрессируют CD31 или CD34;
экспрессируют повышенные по отношению к фибробластам человека, мезенхимальным стволовым клеткам или клеткам костного мозга гребня подвздошной кости человека уровни интерлейкина-8 или ретикулона-1; и
экспрессируют CD10, CD13, CD44, CD73 и CD90.
13. Способ криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины человека, включающий:
обеспечение состава, содержащего композицию для криоконсервации по п. 1 и клетки, полученные из ткани пуповины;
охлаждение композиции для криоконсервации от исходной температуры около 4°C со скоростью -1,0°C/мин до достижения композицией температуры около -45,0°C; и
дополнительное охлаждение композиции для криоконсервации до тех пор, пока композиция не достигнет температуры хранения около -120,0°C;
причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
14. Способ по п. 13, который дополнительно включает охлаждение композиции для криоконсервации до исходной температуры около 4°C и/или поддержание исходной температуры около 4°C в течение около 15 минут.
15. Способ криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины человека, включающий:
обеспечение состава, содержащего композицию для криоконсервации по п. 2 и клетки, полученные из ткани пуповины;
охлаждение композиции для криоконсервации от исходной температуры около 4°C со скоростью -1,0°C/мин до достижения композицией температуры около -45,0°C; и
дополнительное охлаждение композиции для криоконсервации до тех пор, пока композиция не достигнет температуры хранения около -120,0°C;
причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
16. Способ по п. 15, в котором клетки, полученные из ткани пуповины, дополнительно содержат одну или более из следующих характеристик:
экспрессируют рецептор-1 окисленных липопротеинов низкой плотности, ретикулон, лиганд-3 рецептора хемокина и/или хемотаксический белок гранулоцитов;
не экспрессируют CD31 или CD34;
экспрессируют повышенные по отношению к фибробластам человека, мезенхимальным стволовым клеткам или клеткам костного мозга гребня подвздошной кости человека уровни интерлейкина-8 или ретикулона-1; и
экспрессируют CD10, CD13, CD44, CD73 и CD90.
17. Способ криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины человека, включающий:
обеспечение состава, содержащего композицию для криоконсервации по п. 3 и клетки, полученные из ткани пуповины;
охлаждение композиции для криоконсервации от исходной температуры около 4°C со скоростью -1,0°C/мин до достижения композицией температуры около -45,0°C; и
дополнительное охлаждение композиции для криоконсервации до тех пор, пока композиция не достигнет температуры хранения около -120,0 °C;
причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
18. Способ по п. 17, который дополнительно включает охлаждение композиции для криоконсервации до исходной температуры около 4°C и/или поддержание исходной температуры около 4°C в течение около 15 минут.
19. Способ криоконсервации клеток, полученных из ткани пуповины человека, включающий
обеспечение состава, содержащего композицию для криоконсервации по п. 6 и клетки, полученные из ткани пуповины;
охлаждение композиции для криоконсервации от исходной температуры около 4°C со скоростью -1,0°C/мин до достижения композицией температуры около -45,0°C; и
дополнительное охлаждение композиции для криоконсервации до тех пор, пока композиция не достигнет температуры хранения около -120,0°C;
причем клетки, полученные из ткани пуповины, выделены из ткани пуповины человека по существу свободными от крови, способны к самообновлению и размножению в культуре, обладают потенциалом к дифференцировке, не продуцируют CD117 или CD45 и не экспрессируют hTERT или теломеразу.
20. Способ по п. 19, который дополнительно включает охлаждение композиции для криоконсервации до исходной температуры около 4°C и/или поддержание исходной температуры около 4°C в течение около 15 минут.
21. Способ по п. 19, в котором композиция обеспечивает экзотермическую реакцию вокруг точки замерзания состава около -45,0°C, и причем способ дополнительно включает охлаждение композиции для криоконсервации при температуре около -45,0°C со скоростью -25,0°C/мин до тех пор, пока состав не достигнет температуры около -50,0°C.