ПРОИЗВОДНОЕ ПИРИМИДИНСУЛЬФАМИДА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, И МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
PYRIMIDINE SULFAMIDE DERIVATIVE AND ITS PRODUCTION METHOD, AND MEDICAL USE

Ссылка на родственные заявки
[1] Настоящая заявка испрашивает приоритет следующей заявки:
[2] CN201711168111.3, дата подачи: 21 ноября 2017 г.
Область техники, к которой относится изобретение
A
[3] Настоящее изобретение относится к классу соединений, производных от пиримидинсульфамида, и их применению в изготовлении лекарственного препарата от заболевания, связанного с антагонистом рецептора ET. В частности, раскрыто производное соединение формулы (I), его таутомер или фармацевтически приемлемая композиция на его основе.
Уровень техники
[4] Эндотелин (ET) представляет собой семейство изомерных пептидов, содержащих 21 аминокислоту, все из которых имеют гидрофобный C-конец, состоящий из 6 идентичных аминокислотных остатков, и 2 внутрицепочечные дисульфидные связи. Существует три изоформы эндотелина, кодируемые различными генами в организме человека, а именно ET-1, ET-2 и ET-3. Среди них ET-1, который является основной изоформой, обуславливающей заболевание, характеризуется наиболее сильно выраженной сосудосуживающей активностью, при этом в случае вен степень сужения в 3-10 раз выше, чем в случае артерий. ET-1 является наиболее многочисленным типом в семействе эндотелина, и он также обладает наиболее важной функцией. В основном он экспрессируется в эндотелии сосудов, а также распространен в тканях, отличных от тканей сосудов, таких как ткани сердца, почки, легкого, надпочечной железы и других органов.
[5] ET функционирует не только в качестве сосудистого фактора, который модулирует давление крови, но также в качестве гормона, который вызывает множество изменений клеток (таких как пролиферация, апоптоз и миграция), что приводит к гипертрофии, ремоделированию, фиброзу и воспалению ткани. Уровни ET-1 в плазме крови и ткани повышаются при различных заболеваниях, таких как легочная артериальная гипертензия, сепсис, атеросклероз, острый инфаркт миокарда, застойная сердечная недостаточность, мигрень, астма и т.п. Поэтому антагонисты рецептора эндотелина широко исследуются в качестве потенциальных терапевтических средств.
A
B
C
A
B
B1
B2
A
B
C
A
B
A
B
A
B
A
A
B
[6] Рецепторы эндотелина относятся к рецепторам, сопряженным с G-белком, которые в основном относятся к трем типам: ET, ET и ET. Они характеризуются различными уровнями распространения в различных тканях и органах, характеризуются различными показателями аффинности в отношении трех подтипов эндотелина и характеризуются значительными отличиями в физиологических эффектах. Рецепторы эндотелина ET в основном распространены в клетках гладких мышц, и избирательно связываются с ET-1, и опосредуют сокращение гладких мышц сосудов. Рецепторы эндотелина ET подразделяют на два подтипа, а именно ET и ET, при этом первый распространен в эндотелиальных клетках и опосредует высвобождение эндотелиального фактора релаксации (EDRF), простациклина (PGI2) и оксида азота (NO), тем самым обуславливая расширение просвета кровеносных сосудов, в то время как второй расположен на гладких мышцах сосудов, при этом эффект является таким же, как эффект рецептора ET, состоящий в непосредственном опосредовании сокращения сосудов венозной крови, и аффинность рецептора эндотелина ET в отношении ET-1, ET-2 и ET-3 является подобной. Рецептор ET представляет собой рецептор, избирательный в отношении ET-3, в основном распространенный в нервных клетках, и функционирует в качестве нейротрансмиттера. ET-1 действует в основном через рецепторы ET и ET. Антагонисты рецептора эндотелина можно подразделить на антагонисты рецептора ET, антагонисты рецептора ET и двойные антагонисты ET/ET, для которых в доклинических и/или клинических исследованиях были доказаны эффекты в отношении различных заболеваний, таких как субарахноидальное кровоизлияние, сердечная недостаточность, легочная артериальная гипертензия, первичная гипертензия, рефрактерная гипертензия, нейрогенное воспаление, диабетическая нефропатия, фокально-сегментарный гломерулосклероз, почечная недостаточность, нейрогенное воспаление, спазм сосудов головного мозга при почечной недостаточности и инфаркт миокарда и т.п. Высокоизбирательные антагонисты рецептора ET подавляют сильный сосудосуживающий эффект ET-1, при этом позволяя избежать некоторых ответных неблагоприятных реакций неизбирательных двойных антагонистов рецепторов ET/ET, тем самым уменьшая проявление клинических побочных эффектов.
[7] В патенте WO200205355 раскрыто соединение мацитентан, которое можно применять для лечения заболеваний, ассоциированных с действием эндотелина.
Содержание изобретения
[8] В настоящем изобретении предусмотрено соединение формулы (I), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль:
,
[9] где
1
2
[10] R выбран из H, F, Cl, Br, I, OH и NH;
2
1-3
1-3
[11] R выбран из H и Cалкила, где Cалкил необязательно замещен одним, двумя или тремя R;
3
1-6
1-6
1-3
3-6
3-6
1-3
1-6
1-6
1-3
3-6
3-6
1-3
[12] R выбран из H, Cалкила, Cгетероалкила, -Cалкил-Cциклоалкила, Cциклоалкила и -Cалкил-3-7-членного гетероциклоалкила, где Cалкил, Cгетероалкил, -Cалкил-Cциклоалкил, Cциклоалкил или -Cалкил-3-7-членный гетероциклоалкил необязательно замещены одним, двумя или тремя R;
2
3
[13] или R и R соединены с образованием 3-8-членного кольца, необязательно замещенного одним, двумя или тремя R;
[14] кольцо B выбрано из 3-7-членного гетероциклоалкила и 5-6-членного гетероарила, при этом 3-7-членный гетероциклоалкил или 5-6-членный гетероарил необязательно замещены одним, двумя или тремя R;
2
1-6
1-6
1-6
1-6
[15] R независимо выбран из H, F, Cl, Br, I, OH, NH, CN, Cалкила и Cгетероалкила, где Cалкил или Cгетероалкил необязательно замещены одним, двумя или тремя R';
2
2
2
3
[16] R' независимо выбран из F, Cl, Br, I, OH, NH, CN, Me, CHF, CHF, CF и Et;
1-6
2
[17] каждый из Cгетероалкила, 3-7-членного гетероциклоалкила и 5-6-членного гетероарила содержит один, два, три или четыре гетероатома или гетероатомные группы, независимо выбранные из N, -O-, -S-, -NH -, -S(=O)- и -S(=O)-.
2
1-3
1-3
2
1-3
1-3
1-3
2
1-3
[18] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, F, Cl, Br, I, OH, NH, CN, Cалкила, Cалкил-S(=O)- и Cалкил-O-, где Cалкил, Cалкил-S(=O)- или Cалкил-O- необязательно замещены одним, двумя или тремя R', и другие переменные определены в настоящем изобретении.
2
[19] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, F, Cl, Br, I, OH, NH, CN, Me, Et, ,  и , где Me, Et, ,  или  необязательно замещены одним, двумя или тремя R', и другие переменные определены в настоящем изобретении.
2
2
2
3
[20] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, F, Cl, Br, I, OH, NH, CN, Me, CHF, CHF, CF, Et, , ,  и , и другие переменные определены в настоящем изобретении.
2
[21] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H и Me, и другие переменные определены в настоящем изобретении.
3
1-4
1-4
1-4
1-3
1-3
1-3
1-3
1-4
1-4
1-4
1-3
1-3
1-3
1-3
[22] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, Cалкила, Cалкил-O-Cалкила, циклобутила, -Cалкилциклобутила, -Cалкилциклопропила, -Cалкилтетрагидрофуранила и -Cалкилтетрагидропиранила, где Cалкил, Cалкил-O-Cалкил, циклобутил, -Cалкилциклобутил, -Cалкилциклопропил, -Cалкилтетрагидрофуранил или -Cалкилтетрагидропиранил необязательно замещены одним, двумя или тремя R, и другие переменные определены в настоящем изобретении.
3
[23] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, Me, Et, , , , , , , , ,  и , где Me, Et, , , , , , , , ,  или  необязательно замещены одним, двумя или тремя R, и другие переменные определены в настоящем изобретении.
3
[24] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R выбран из H, Me, Et, , , , , , , , , , , , , ,  и , и другие переменные определены в настоящем изобретении.
2
3
[25] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения R и R соединены с образованием 6-8-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного одним, двумя или тремя R.
[26] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения структурное звено  выбрано из ,  и , где ,  или  необязательно замещены одним, двумя или тремя R, и другие переменные определены в настоящем изобретении.
[27] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения структурное звено  выбрано из ,  и , и другие переменные определены в настоящем изобретении.
[28] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кольцо B выбрано из тетрагидрофуранила, тетрагидротиенила, 1,3-диоксоланила, пирролидинила, тиазолила, пиразолила и имидазолила, где тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, 1,3-диоксоланил, пирролидинил, тиазолил, пиразолил или имидазолил необязательно замещены одним, двумя или тремя R, и другие переменные определены в настоящем изобретении.
[29] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения структурное звено  выбрано из , , ,  и , и другие переменные определены в настоящем изобретении.
[30] Другие варианты осуществления настоящего изобретения можно получить посредством произвольной комбинации переменных.
[31] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль выбраны из
, ,
,  и,
[32] где
1
2
[33] R, R или R определены в настоящем изобретении.
[34] В настоящем изобретении также предусмотрено соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль, которые выбраны из
, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,  и .
[35] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль выбраны из
, ,  и .
[36] В настоящем изобретении также предусмотрена фармацевтическая композиция, которая содержит терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.
A
[37] В настоящем изобретении также предусмотрено применение соединения или его фармацевтически приемлемых солей или композиций в изготовлении лекарственного препарата, относящегося к антагонистам рецептора ET.
A
[38] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения лекарственный препарат, относящийся к антагонистам рецептора ET, представляет собой лекарственный препарат для показаний, таких как легочная артериальная гипертензия, первичная гипертензия, рефрактерная гипертензия, диабетическая нефропатия и внутричерепной вазоспазм.
[39] Определение и описание
[40] Если не указано иное, следующие термины при использовании в описании и формуле настоящего изобретения имеют следующие значения. Конкретный термин или выражение при отсутствии точного определения не следует считать неопределенными или неясными, а следует понимать в соответствии с общепринятым значением. Если в данном документе встречается торговое название, то предполагается, что оно относится к соответствующему продукту или его активному ингредиенту. Термин «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе применительно к тем соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые в рамках тщательной медицинской оценки являются подходящими для применения в контакте с тканями человека и животного без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений в соответствии с обоснованным соотношением польза/риск.
[41] Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли соединения по настоящему изобретению, которую получают путем осуществления реакции соединения, содержащего конкретный заместитель по настоящему изобретению, с относительно нетоксичными кислотой или основанием. Если соединение по настоящему изобретению содержит относительно кислотную функциональную группу, то соль присоединения основания может быть получена посредством приведения нейтральной формы соединения в контакт с достаточным количеством основания в чистом растворе или подходящем инертном растворителе. Фармацевтически приемлемая соль присоединения основания включает соль натрия, калия, кальция, аммония, органического амина или магния или подобные соли. Если соединение по настоящему изобретению содержит относительно основную функциональную группу, то соль присоединения кислоты может быть получена посредством приведения нейтральной формы соединения в контакт с достаточным количеством кислоты в чистом растворе или подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты включают соль неорганической кислоты, где неорганическая кислота включает, например, хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, азотную кислоту, угольную кислоту, бикарбонат, фосфорную кислоту, моногидрофосфат, дигидрофосфат, серную кислоту, гидросульфат, йодистоводородную кислоту, фосфористую кислоту и т. п.; и соль органической кислоты, где органическая кислота включает, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, изомасляную кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, бензойную кислоту, янтарную кислоту, субериновую кислоту, фумаровую кислоту, молочную кислоту, миндальную кислоту, фталевую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, лимонную кислоту, винную кислоту, метансульфоновую кислоту и т.п.; и соль аминокислоты (такой как аргинин и т.п.), и соль органической кислоты, такой как глюкуроновая кислота и т.п. Некоторые конкретные соединения по настоящему изобретению, которые содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, могут быть превращены в любую соль присоединения основания или кислоты.
[42] Фармацевтически приемлемая соль по настоящему изобретению может быть получена из исходного соединения, которое содержит кислотный или основный фрагмент, с помощью общепринятого химического способа. Как правило, такая соль может быть получена путем осуществления реакции свободной кислотной или основной формы соединения со стехиометрическим количеством соответствующих основания или кислоты в воде, или в органическом растворителе, или в их смеси.
[43] Соединение по настоящему изобретению может находиться в форме конкретного геометрического изомера или стереоизомера. В настоящем изобретении подразумеваются все такие соединения, в том числе цис- и транс-изомер, (-)- и (+)-энантиомер, (R)- и (S)-энантиомер, диастереоизомер, (D)-изомер, (L)-изомер и рацемическая смесь, и другие смеси, например энантиомерно или диастереоизомерно обогащенная смесь, все из которых включены в объем настоящего изобретения. Заместитель, такой как алкил, может содержать дополнительный асимметричный атом углерода. Все такие изомеры и их смеси включены в объем настоящего изобретения.
[44] Если не указано иное, термин «энантиомер» или «оптический изомер» относится к стереоизомерам, которые являются зеркальными отражениями друг друга.
[45] Если не указано иное, термины «цис-транс-изомер» или «геометрический изомер» определяются неспособностью к свободному вращению вокруг двойной связи или одинарной связи между атомами углерода в кольце.
[46] Если не указано иное, термин «диастереомер» относится к стереоизомерам, молекулы которых имеют два или более хиральных центров и не являются зеркальными отражениями друг друга.
[47] Если не указано иное, «(D)» или «(+)» обозначает правостороннее вращение, «(L)» или «(-)» обозначает левостороннее вращение, «(DL)» или «(±)» обозначает рацемизацию.
[48] Если не указано иное, абсолютная конфигурация стереогенного центра представлена связью, обозначенной клиновидной сплошной линией (), и связью, обозначенной клиновидной пунктирной линией (), а относительная конфигурация стереогенного центра представлена связью, обозначенной прямой сплошной линией (), и связью, обозначенной прямой пунктирной линией (). Волнистая линия () представляет собой связь, обозначенную клиновидной сплошной линией (), или связь, обозначенную клиновидной пунктирной линией (), или представляет собой связь, обозначенную прямой сплошной линией (), или связь, обозначенную прямой пунктирной линией ().
[49] Соединения по настоящему изобретению могут находиться в конкретной форме. Если не указано иное, термины «таутомер» или «таутомерная форма» относятся к тому факту, что различные функциональные изомеры находятся в состоянии динамического равновесия при комнатной температуре и могут быстро превращаться друг в друга. Если возможно наличие таутомеров (как, например, в растворе), то может быть достигнуто химическое равновесие изомеров. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) предусматривают взаимопревращения посредством протонного переноса, например кето-енольная изомеризация и имин-енаминовая изомеризация. Валентный таутомер предусматривает взаимное превращение с участием некоторых связывающих электронов. Конкретным примером кето-енольной таутомеризации является взаимопревращение двух таутомеров – пентан-2,4-диона и 4-гидроксипент-3-ен-2-она.
[50] Если не указано иное, термины «обогащенный одним изомером», «обогащенный изомером», «обогащенный одним энантиомером» или «обогащенный энантиомером» относятся к содержанию одного из изомеров или энантиомеров, которое составляет менее 100%, и при этом содержание изомера или энантиомера составляет 60% или больше, или 70% или больше, или 80% или больше, или 90% или больше, или 95% или больше, или 96% или больше, или 97% или больше, или 98% или больше, или 99% или больше, или 99,5% или больше, или 99,6% или больше, или 99,7% или больше, или 99,8% или больше, или 99,9% или больше.
[51] Если не указано иное, термины «избыток изомера» или «избыток энантиомера» относятся к разнице между значениями относительного процентного содержания двух изомеров или энантиомеров. Например, если содержание одного из изомеров или энантиомеров составляет 90%, а другого – 10%, то избыток изомера или энантиомера (значение ee) составляет 80%.
3
125
14
[52] Оптически активный (R)- и (S)-изомер или D- и L-изомер можно получить с применением хирального синтеза, или хиральных реагентов, или других традиционных методик. Если требуется получение одного типа энантиомера определенного соединения по настоящему изобретению, то чистый необходимый энантиомер может быть получен посредством асимметрического синтеза или дериватизирующего действия хирального вспомогательного вещества с последующим разделением полученной в результате смеси диастереомеров и отщеплением вспомогательной группы. В качестве альтернативы, если молекула содержит основную функциональную группу (такую как аминогруппа) или кислотную функциональную группу (такую как карбоксильная группа), то соединение вступает в реакцию с подходящими оптически активными кислотой или основанием с образованием соли диастереомерного изомера, которую затем подвергают разделению диастереомеров посредством традиционного способа, известного из уровня техники, с получением чистого энантиомера. Кроме того, энантиомеры и диастереоизомеры обычно выделяют посредством хроматографии, в которой используется хиральная неподвижная фаза, и необязательно в комбинации со способом химической дериватизации (например, карбамат, полученный из амина). Соединение по настоящему изобретению может характеризоваться неприродным соотношением атомных изотопов при одном или более атомах, которые составляют соединение. Например, соединение может быть мечено радиоактивным изотопом, таким как тритий (H), йод-125 (I) или C-14 (C). В качестве другого примера водород может быть заменен тяжелым водородом с образованием дейтерированного лекарственного средства, и при этом связь, образуемая между барием и углеродом, является более прочной, чем связь, образуемая между обычным водородом и углеродом. По сравнению с недейтерированными лекарственными средствами дейтерированные лекарственные средства характеризуются менее выраженными побочными эффектами и более высокой стабильностью лекарственного средства с усилением эффективности и продлением биологического периода полувыведения лекарственного средства. Все изотопные варианты соединения по настоящему изобретению, вне зависимости от радиоактивности, включены в объем настоящего изобретения.
[53] «Необязательный» или «необязательно» означает, что последующее событие или условие могут реализовываться, но не являются необходимыми, и что термин включает случаи, в которых событие или условие реализуются, и случаи, в которых событие или условие не реализуются.
[54] Термин «замещенный» означает, что один или более атомов водорода при конкретном атоме замещены заместителем, в том числе дейтерием и вариантами водорода, при условии, что валентность конкретного атома является нормальной, и замещенное соединение является стабильным. Если заместитель представляет собой атом кислорода (т.е. =O), то это означает, что два атома водорода являются замещенными. Положения в ароматическом кольце не могут быть замещены кетоном. Термин «необязательно замещенный» означает, что атом может быть замещенным или не быть замещенным заместителем, если не указано иное. Тип и число заместителей могут быть произвольными при условии, что это химически достижимо.
[55] Если любая переменная (такая как R) встречается более одного раза в составе или структуре соединения, то определение переменной в каждом случае является независимым. Таким образом, например, если группа замещена 0-2 R, то данная группа может быть необязательно замещена не более чем двумя R, при этом определение R в каждом случае является независимым. Более того, комбинация заместителя и/или его варианта является допустимой, только если такая комбинация приводит к образованию стабильного соединения.
0
[56] Если число линкерных групп равно 0, например -(CRR)-, это означает, что линкерная группа представляет собой одинарную связь.
[57] Если одна из переменных выбрана из одинарной связи, это означает, что две группы, соединенные одинарной связью, соединены непосредственно. Например, если L в A-L-Z представляет собой одинарную связь, то структура A-L-Z фактически представляет собой A-Z.
[58] Если заместитель не указан, это означает, что заместитель отсутствует. Например, если X не указан в A-X, то структура A-X фактически представляет собой A. Если в перечисленных заместителях не указано, посредством какого атома они присоединены к замещенной группе, то такой заместитель может быть связан посредством любого из атомов в его составе, например, пиридильная группа в качестве заместителя может быть связана с замещенной группой посредством любого из атомов углерода в пиридиновом кольце. Если в перечисленной линкерной группе не указано направление связывания, то направление связывания является произвольным; например, если линкерная группа L, содержащаяся в  представляет собой -MW-, то -MW- может связывать кольцо A и кольцо B с образованием  в направлении, соответствующем порядку чтения слева направо, и с образованием  в направлении, противоположном порядку чтения слева направо. Комбинации линкерных групп, заместителей и/или их вариантов являются допустимыми, только если такие комбинации дают в результате стабильные соединения.
2
2
[59] Если не указано иное, термин «гетеро» представляет собой гетероатом или гетероатомную группу (например, группу атомов, содержащую гетероатом), в том числе атом, отличный от атома углерода (C) и водорода (H), и группу атомов, содержащую гетероатом, например, в том числе атом кислорода (O), азота (N), серы (S), кремния (Si), германия (Ge), алюминия (Al), бора (B), -O-, -S-, =O, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O), -S(=O)- и группу, состоящую из -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=O)N(H)- и -S(=O)N(H)-, каждое из которых необязательно замещено.
[60] Если не указано иное, термин «кольцо» относится к замещенному или незамещенному циклоалкилу, гетероциклоалкилу, циклоалкенилу, гетероциклоалкенилу, циклоалкинилу, гетероциклоалкинилу, арилу или гетероарилу. Так называемое кольцо включает одинарное кольцо, двойное кольцо, спирокольцо, конденсированное кольцо или кольцо с мостиковой связью. Число атомов в кольце обычно определяется как число членов в кольце, например, «5-7-членное кольцо» означает, что от 5 до 7 атомов расположены в виде кольца. Если не указано иное, кольцо необязательно содержит от 1 до 3 гетероатомов. Следовательно, «5-7-членное кольцо» включает, например, фенил, пиридинил и пиперидинил; в то же время термин «5-7-членное гетероциклоалкильное кольцо» включает пиридил и пиперидинил, но не включает фенил. Термин «кольцо» также включает кольцевую систему, содержащую по меньшей мере одно кольцо, где каждое кольцо независимо соответствует определению.
[61] Если не указано иное, термин «гетероцикл» или «гетероцикло» относится к стабильному моноциклическому, бициклическому или трициклическому кольцу, содержащему гетероатом или гетероатомную группу, которое может быть насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным (ароматическим) и может содержать атомы углерода и один, два, три или четыре гетероатома в кольце, независимо выбранных из N, O и S, при этом любой из гетероциклов может быть конденсирован с бензольным кольцом с образованием бициклического кольца. Гетероатомы, представляющие собой азот и серу, необязательно могут быть окислены (т.е. NO и S(O)p, p равняется 1 или 2). Атом азота может быть замещенным или незамещенным (т.е. N или NR, где R представляет собой H или другие заместители, уже определенные в данном документе). Гетероцикл может быть присоединен к боковой группе любого гетероатома или атома углерода с образованием стабильной структуры. Если полученное в результате соединение является стабильным, гетероцикл, описанный в данном документе, может иметь замещение в положении, соответствующем атому углерода или азота. Атом азота в гетероцикле необязательно является кватернизированным. В предпочтительном варианте осуществления, если общее число атомов S и O в гетероцикле превышает 1, то гетероатомы не являются смежными друг с другом. В другом предпочтительном варианте осуществления общее число атомов S и O в гетероцикле не превышает 1. Используемый в данном документе термин «ароматическая гетероциклическая группа» или «гетероарил» относится к стабильному 5-, 6- или 7-членному моноциклическому или бициклическому или 7-, 8-, 9- или 10-членному бициклическому гетероциклическому ароматическому кольцу, которое содержит атомы углерода и один, два, три или четыре гетероатома в кольце, независимо выбранных из N, O и S. Атом азота может быть замещенным или незамещенным (т.е. N или NR, где R представляет собой H или другие заместители, уже определенные в данном документе). Гетероатомы, представляющие собой азот и серу, необязательно могут быть окислены (т.е. NO и S(O)p, p равняется 1 или 2). Следует отметить, что общее число атомов S и O в ароматическом гетероцикле не превышает один. Кольцо с мостиковой связью также включено в определение гетероцикла. Кольцо с мостиковой связью образуется, если один или более атомов (т.е. C, O, N или S) соединяют два несмежных атома углерода или азота. Предпочтительное кольцо с мостиковой связью содержит без ограничения один атом углерода, два атома углерода, один атом азота, два атома азота и одну группу углерод-азот. Следует отметить, что мостиковая связь всегда превращает моноциклическое кольцо в трициклическое кольцо. В кольце с мостиковой связью заместитель в кольце также может присутствовать при мостиковой связи.
[62] Примеры гетероциклического соединения включают без ограничения акридинил, азоцинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензомеркаптофуранил, бензомеркаптофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензотиазолил, бензотриазолил, бензотетразолил, бензоизоксазолил, бензоизотиазолил, бензоимидазолинил, карбазолил, 4aH-карбазолил, карболинил, хроманил, хромен, циннолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3-b]тетрагидрофуранил, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изобензофуранил, изоиндолил, изоиндолинил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, гидроксиндолил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназин, фенотиазин, бензоксантинил, фенолоксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазолил, пиридоимидазолил, пиридотиазолил, пиридинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тетразолил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, изотиазолилтиенил, тиенооксазолил, тиенотиазолил, тиеноимидазолил, тиенил, триазинил, 1H-1,2,3-триазолил, 2H-1,2,4-триазолил, 1H-1,2,4-триазолил, 4H-1,2,4-триазолил и ксантенил. Также включены соединения с конденсированными кольцами и спиросоединения.
1
12
1-12
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
3-12
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
[63] Если не указано иное, термин «гидрокарбил» или его гипонимы (например, алкил, алкенил, алкинил и арил и т.д.), сами по себе или в качестве части другого заместителя, относятся к линейному, имеющему разветвленную цепь или циклическому углеводородному радикалу или любой их комбинации, при этом они могут быть полностью насыщенными (например, алкил), моно- или полиненасыщенными (например, алкенил, алкинил и арил), могут быть моно-, ди- или полизамещенными, могут быть одновалентными (например, метил), двухвалентными (например, метилен) или многовалентными (например, метенил), могут также включать двухвалентную или многовалентную группу, содержать определенное число атомов углерода (например, C-C означает 1-12 атомов углерода, при этом C выбран из C, C, C, C, C, C, C, C, C, C, C и C; C выбран из C, C, C, C, C, C, C, C, C и C). Термин «гидрокарбил» включает без ограничения алифатический гидрокарбил и ароматический гидрокарбил, при этом алифатический гидрокарбил включает линейный и циклический гидрокарбил, в частности включает без ограничения алкил, алкенил и алкинил. Ароматический гидрокарбил включает без ограничения 6-12-членный ароматический гидрокарбил, такой как фенил, нафтил и т.п. В некоторых вариантах осуществления термин «гидрокарбил» относится к линейной или разветвленной группе или их комбинации, которая может быть полностью насыщенной, моно- или полиненасыщенной и может включать двухвалентную или многовалентную группу. Примеры насыщенной гидрокарбильной группы включают без ограничения метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, изобутил, втор-бутил, циклогексил, (циклогексил)метил, циклопропилметил и гомолог или изомер н-амила, н-гексила, н-гептила, н-октила и других групп атомов. Ненасыщенный гидрокарбил содержит одну или более двойных или тройных связей. Примеры ненасыщенного алкила включают без ограничения винил, 2-пропенил, бутенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3-(1,4-пентадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и гомологи и изомеры более высокого порядка.
2
2
3
2
2
3
2
2
3
3
2
2
3
2
2
3
2
2
2
3
3
2
3
3
3
2
3
[64] Если не указано иное, термин «гетерогидрокарбил» или его гипонимы (такие как гетероалкил, гетероалкенил, гетероалкинил и гетероарил и т. д.), сами по себе или в качестве части другого заместителя, относятся к стабильной линейной, разветвленной или циклической углеводородной группе или любой их комбинации, которая содержит конкретное число атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом. В некоторых вариантах осуществления термин «гетероалкил», сам по себе или в комбинации с другим термином, относится к стабильной линейной цепи, разветвленному углеводородному радикалу или их комбинации, которые содержат конкретное число атомов углерода и по меньшей мере один гетероатом. В конкретном варианте осуществления гетероатом выбран из B, O, N и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом азота необязательно является кватернизированным. Гетероатом или гетероатомная группа могут находиться в любом внутреннем положении гетерогидрокарбила, в том числе в положении, где гидрокарбил присоединяется к остальной части молекулы. Но термины «алкокси», «алкиламино» и «алкилтио» (или тиоалкил) используются в их общепринятом значении и относятся к алкильной группе, соединенной с остальной частью молекулы посредством атома кислорода, аминогруппы или атома серы соответственно. Примеры включают без ограничения -CH-CH-O-CH, -CH-CH-NH-CH, -CH-CH-N(CH)-CH, -CH-S-CH-CH, -CH-CH, -S(O)-CH, -CH-CH-S(O)-CH, -CH=CH-O-CH, -CH-CH=N-OCH и -CH=CH-N(CH)-CH. Могут присутствовать не более двух последовательно расположенных гетероатомов, например -CH-NH-OCH.
[65] Если не указано иное, термины «циклогидрокарбил», «гетероциклогидрокарбил» или их гипонимы (такие как арил, гетероарил, циклоалкил, гетероциклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкенил, циклоалкинил, гетероциклоалкинил и т.д.), сами по себе или в комбинации с другим термином, относятся к циклизированному «гидрокарбилу» или «гетерогидрокарбилу». Кроме того, в случае гетерогидрокарбила или гетероциклогидрокарбила (например, гетероалкил и гетероциклоалкил) один гетероатом может занимать положение, в котором гетероцикл присоединяется к остальной части молекулы. Примеры циклоалкила включают без ограничения циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, 3-циклогексенил, циклогептил и т.п. Неограничивающие примеры гетероциклоалкила включают 1-(1,2,5,6-тетрагидропиридил), 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-морфолинил, 3-морфолинил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидротиофен-2-ил, тетрагидротиофен-3-ил, 1-пиперазинил и 2-пиперазинил.
[66] Если не указано иное, термин «гетероциклоалкил», сам по себе или в комбинации с другими терминами, обозначает циклизированный «гетероалкил», и кроме того, применительно к «гетероциклоалкилу» гетероатом может занимать положение присоединения гетероциклоалкильной группы к остальной части молекулы. В некоторых вариантах осуществления гетероциклоалкил представляет собой 4-6-членный гетероциклоалкил; в других вариантах осуществления гетероциклоалкил представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкан. Примеры гетероциклоалкильных групп включают без ограничения азетидинил, оксетанил, тиетанил, пирролидинил, пиразолидинил, имидазолидинил, тетрагидротиенил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, диоксанил, дитианил, изоксазолидинил, изотиазолидинил, 1,2-оксазинил, 1,2-тиазинил, гексагидропиридазинил, гомопиперазинил, гомопиперидинил или оксепанил.
2
3
[67] Если не указано иное, термин «алкил» относится к линейной цепи или разветвленной насыщенной углеводородной группе, которая может быть монозамещенной (например, -CHF) или полизамещенной (например, -CF), может быть одновалентной (например, метил), двухвалентной (например, метилен) или многовалентной (например, метенил). Примеры алкила включают метил (Me), этил (Et), пропил (такой как н-пропил и изопропил), бутил (такой как н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил), пентил (такой как н-пентил, изопентил, неопентил) и т.п.
[68] Если не указано иное, циклоалкил включает любой стабильный циклический или полициклический гидрокарбил, и любой атом углерода, который является насыщенным, может быть монозамещенным или полизамещенным и может быть одновалентным, двухвалентным или многовалентным. Примеры циклоалкила включают без ограничения циклопропил, норборнанил, [2.2.2]бициклооктан, [4.4.0]бициклодеканил и т.п.
1
4
[69] Если не указано иное, термин «галогено» или «галоген», сам по себе или в качестве части другого заместителя, относится к атому фтора, хлора, брома или йода. Кроме того, подразумевается, что термин «галогеналкил» включает моногалогеналкил и полигалогеналкил. Например, подразумевается, что термин «галоген(C-C)алкил» включает без ограничения трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3-бромпропил и т. п. Примеры галогеналкила включают без ограничения трифторметил, трихлорметил, пентафторэтил и пентахлорэтил.
1-6
1
2
3
4
5
6
[70] Термин «алкокси» представляет любой алкил, определенный выше, содержащий конкретное число атомов углерода, присоединенных посредством кислородного мостика. Если не указано иное Cалкокси включает C-, C-, C-, C-, C- и Cалкокси. Примеры алкокси включают без ограничения метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентилокси и S-пентокси.
[71] Если не указано иное, термин «арил» относится к полиненасыщенному ароматическому заместителю, который может быть моно-, ди- или полизамещенным, может быть одновалентным, двухвалентным или многовалентным, может представлять собой одно кольцо или несколько колец (например, от одного до трех колец; где по меньшей мере одно кольцо является ароматическим), которые являются конденсированными друг с другом или соединенными ковалентно. Термин «гетероарил» относится к арилу (или кольцу), содержащему от одного до четырех гетероатомов. В иллюстративном примере гетероатом выбран из B, O, N и S, где атомы азота и серы необязательно окислены, и атом азота необязательно является кватернизированным. Гетероарил может быть присоединен к остальной части молекулы посредством гетероатома. Неограничивающие примеры арила или гетероарила включают фенил, нафтил, бифенил, пирролил, пиразолил, имидазолил, пиразинил, оксазолил, фенилоксазолил, изоксазолил, тиазолил, фуранил, тиенил, пиридил, пиримидинил, бензотиазолил, пуринил, бензимидазолил, индолил, изохинолил, хиноксалинил, хинолил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4-бифенил, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 2-фенил-4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил, 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил, 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, 5-индолил, 1-изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил и 6-хинолил. Заместитель любой из арильной и гетероарильной кольцевых систем выбран из приемлемых заместителей, описанных ниже.
[72] Если не указано иное, при использовании термина «арил» в комбинации с другими терминами (например, арилокси, арилтио, арилалкил) «арил» включает арильное и гетероарильное кольцо, определенные выше. Таким образом, подразумевается, что термин «арилалкил» включает группу (например, бензил, фенэтил, пиридилметил и т.д.), в которой арил присоединен к алкилу, в том числе к алкилу, где атом углерода (например, в метилене) был заменен таким атомом, как атом кислорода, например, феноксиметил, 2-пиридилокси, 3-(1-нафтилокси)пропил и т.п.
[73] Термин «уходящая группа» относится к функциональной группе или атому, которые могут быть заменены другими функциональной группой или атомом посредством реакции замещения (такой как реакция замещения по аффинности). Например, иллюстративные уходящие группы включают трифлат; хлор, бром и йод; сульфонатную группу, например, мезилат, тозилат, п-бромбензолсульфонат, п-толуолсульфонаты и т.п.; ацилокси, например, ацетокси, трифторацетокси и т.п.
[74] Термин «защитная группа» включает без ограничения «защитную группу для аминогруппы», «защитную группу для гидроксигруппы» или «защитную группу для тиогруппы». Термин «защитная группа для аминогруппы» относится к защитной группе, подходящей для блокирования побочной реакции с участием атома азота аминогруппы. Иллюстративные защитные группы для аминогруппы включают без ограничения формил, ацил, такой как алканоил (например, ацетил, трихлорацетил или трифторацетил); алкоксикарбонил, такой как трет-бутоксикарбонил (Boc); арилметоксикарбонил, такой как бензилоксикарбонил (Cbz) и 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc); арилметил, такой как бензил (Bn), тритил (Tr), 1,1-бис-(4'-метоксифенил)метил; силил, такой как триметилсилил (TMS) и трет-бутилдиметилсилил (TBS), и т.п. Термин «защитная группа для гидроксигруппы» относится к защитной группе, подходящей для блокирования побочной реакции с участием гидроксигруппы. Иллюстративные защитные группы для гидроксигруппы включают без ограничения алкил, такой как метил, этил и трет-бутил; ацил, такой как алканоил (например, ацетил); арилметил, такой как бензил (Bn), п-метоксибензил (PMB), 9-флуоренилметил (Fm) и дифенилметил (бензгидрил, DPM); силил, такой как триметилсилил (TMS) и трет-бутилдиметилсилил (TBS) и т.п.
[75] Соединение по настоящему изобретению может быть получено посредством различных способов синтеза, хорошо известных специалистам в данной области техники, в том числе посредством следующего перечисленного варианта осуществления, варианта осуществления, образованного комбинацией следующего перечисленного варианта осуществления и других способов химического синтеза, и эквивалентной замены, хорошо известных специалистам в данной области техники. Предпочтительный вариант осуществления включает без ограничения вариант осуществления настоящего изобретения.
[76] Соединения по настоящему изобретению могут иметь различные применения или предназначения, в том числе без ограничения конкретные применения или предназначения, перечисленные в настоящей заявке.
3
2
2
2
4
[77] Используемый в настоящем изобретении растворитель является коммерчески доступным. В настоящем изобретении используются следующие сокращения: вод. обозначает воду; HATU обозначает O-(7-азабензoтриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат; EDC обозначает N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида гидрохлорид; m-CPBA обозначает 3-хлорпероксибензойную кислоту; экв. обозначает эквивалент; CDI обозначает карбонилдиимидазол; DCM обозначает дихлорметан; PE обозначает петролейный эфир; DIAD обозначает диизопропилазодикарбоксилат; DMF обозначает N,N-диметилформамид; DMSO обозначает диметилсульфоксид; EtOAc обозначает сложные эфиры уксусной кислоты; EtOH обозначает этанол; MeOH означает метанол; CBz обозначает бензилоксикарбонил, который представляет собой защитную группу для амина; BOC обозначает трет-бутоксикарбонил, который представляет собой защитную группу для амина; HOAc обозначает уксусную кислоту; NaCNBH обозначает цианоборгидрид натрия; к.т. обозначает комнатную температуру; O/N обозначает в течение ночи; THF обозначает тетрагидрофуран; BocO обозначает ди-трет-бутилдикарбонат; TFA обозначает трифторуксусную кислоту; DIPEA обозначает диизопропилэтиламин; SOCl обозначает тионилхлорид; CS обозначает сероуглерод; TsOH обозначает п-толуолсульфоновую кислоту; NFSI обозначает N-фтор-N-(фенилсульфонил)бензолсульфонамид; NCS обозначает 1-хлорпирролидин-2,5-дион; n-BuNF обозначает тетрабутиламмоний; iPrOH обозначает 2-пропанол; т.пл. обозначает точку плавления; LDA обозначает диизопропиламид лития; DEA обозначает диэтиламин; ACN обозначает ацетонитрил.
[78] Названия соединениям давали самостоятельно или с помощью программного обеспечения ChemDraw, а для коммерчески доступных соединений используются их названия в соответствии с каталогом поставщика.
A
A
B
[79] Технические эффекты. Все соединения по настоящему изобретению проявляют очень высокую антагонистическую активность в отношении рецепторов ET человека in vitro, и селективность в отношении ET/ET является более чем 10000-кратной; при этом соединения по настоящему изобретению оказались лучше контрольного соединения, представляющего собой мацитентан, в характеристических экспериментах по определению опосредованной PXR индукции экспрессии CYP3A. В характеристических экспериментах по определению ингибирующего эффекта в отношении 5 основных изозимов печеночного микросомального цитохрома P450 человека соединения по настоящему изобретению оказались лучше мацитентана; ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению в отношении насосов для выведения желчных кислот является значительно более слабым, чем в случае мацитентана, что тем самым в значительной степени снижает риск развития гепатотоксичности. Соединения по настоящему изобретению характеризуются хорошими фармакокинетическими свойствами как у крыс линии SD, так и у собак породы бигль.
Подробное описание предпочтительного варианта осуществления
[80] Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение, однако настоящее изобретение ими не ограничивается. Настоящее изобретение было подробно описано в описании и его конкретные варианты осуществления также были раскрыты, для специалиста в данной области техники будет очевидно, что модификации и улучшения вариантов осуществления настоящего изобретения находятся в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
[81] Иллюстративный вариант осуществления 1: фрагмент BB-1
[82] Путь синтеза
[83] Стадия 1. Синтез соединения BB-1-2
[84] При комнатной температуре соединение BB-1-1 (30,00 г, 211,97 ммоль, 18,40 мл) растворяли в дихлорметане (200 мл), затем смесь охлаждали до 0°C, раствор трет-бутанола (15,71 г, 211,97 ммоль, 20,40 мл) в дихлорметане (100 мл) медленно добавляли по каплям (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа. Целевое соединение BB-1-2 (неочищенный продукт) удерживали в реакционном растворителе дихлорметане и применяли непосредственно в следующей реакции.
[85] Стадия 2. Синтез соединения BB-1-3
1
6
[86] При комнатной температуре соединение 2,2,2-трифторэтиламин (8,00 г, 80,77 ммоль, 6,35 мл) и триэтиламин (24,52 г, 242,30 ммоль, 33,59 мл) растворяли в дихлорметане (100,00 мл), затем смесь охлаждали до 0°C и раствор соединения BB-1-2 (80,77 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 14 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении, в остаток добавляли воду (150 мл), экстрагировали дихлорметаном (100 мл) и органическую фазу отбрасывали. Водную фазу доводили до pH 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-1-3 (белое твердое вещество, 15,00 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 3,55 (q, J=9,8 Гц, 2H), 1,37 (s, 9H).
[87] Стадия 3. Синтез соединения BB-1-4
1
19
6
6
[88] При комнатной температуре соединение BB-1-3 (15,00 г, 53,91 ммоль) добавляли в воду (150,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-1-4 (желтое твердое вещество, 7,50 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 7,51 (t, J=7,0 Гц, 1H), 6,83 (s, 2H), 3,69-3,54 (m, 2H).F ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: -70,81 (s, 3F).
[89] Стадия 4. Синтез соединения BB-1-5
1
6
[90] При комнатной температуре соединение BB-1-4 (1,56 г, 8,78 ммоль) и трет-бутоксид калия (1,97 г, 17,55 ммоль) растворяли в диметилсульфоксиде (80,00 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (2,00 г, 8,78 ммоль) добавляли к реакционной смеси и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов. После завершения реакции добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали водой (50 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-4/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-1-5 (желтое твердое вещество, 1,90 г, выход: 58,56%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 8,60 (s, 1H), 7,51 (t, J=7,0 Гц, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,84 (q, J=9,6 Гц, 2H).
[91] Стадия 5. Синтез соединения BB-1
+
+
1
19
3
3
[92] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,73 г, 15,42 ммоль) добавляли к этиленгликолю (52,68 г, 848,46 ммоль, 47,46 мл) и диметиловому эфиру этиленгликоля (10 мл) и реакционную смесь нагревали до 40°C в атмосфере азота и перемешивали в течение 0,5 часа, раствор соединения BB-1-5 (1,90 г, 5,14 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20 мл) добавляли к раствору и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 5-6 с помощью 2 M разбавленной хлористоводородной кислоты, затем смесь экстрагировали этилацетатом (60 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 8/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-1 (желтое твердое вещество, 1,55 г, выход: 76,31%). MS-ESI масса/заряд: 394,7 [M+H], 396,7 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,33 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,53 (t, J=4,4 Гц, 2H), 3,93 (t, J=4,4 Гц, 2H), 3,67 (q, J=8,6 Гц, 2H). F ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: -71,87 (s, 3F).
[93] Иллюстративный вариант осуществления 2: фрагмент BB-2
[94] Путь синтеза
[95] Стадия 1. Синтез соединения BB-2-1
1
3
[96] При комнатной температуре гидрохлорид этиламина (5,00 г, 61,32 ммоль) и триэтиламин (18,61 г, 183,96 ммоль, 25,49 мл) добавляли к дихлорметану (100,00 мл), затем реакционную смесь охлаждали до 0°C и раствор соединения BB-1-2 (61,32 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли воду (150 мл), экстрагировали дихлорметаном (100 мл) и органическую фазу отбрасывали. Водную фазу доводили до pH 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, затем растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-2-1 (белое твердое вещество, 6,00 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,07 (t, J=5,6 Гц, 1H), 3,13-3,01 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,16 (t, J=7,3 Гц, 3H).
[97] Стадия 2. Синтез соединения BB-2-2
1
3
[98] При комнатной температуре соединение BB-2-1 (7,02 г, 31,30 ммоль) добавляли в воду (200,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-2-2 (желтое масло, 2,87 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 4,80 (s, 2H), 4,57 (s, 1H), 3,23-3,14 (m, 2H), 1,24 (t, J=7,3 Гц, 3H).
[99] Стадия 3. Синтез соединения BB-2-3
1
6
[100] При комнатной температуре соединение BB-2-2 (2,87 г, 23,12 ммоль) и трет-бутоксид калия (5,19 г, 46,24 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (80,00 мл), затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (5,27 г, 23,12 ммоль) добавляли к реакционной смеси и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (150 мл), pH регулировали до 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали водой (50 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-4/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-2-3 (желтое твердое вещество, 2,40 г, выход: 32,89%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) ×: 8,59 (s, 1H), 2,96 (q, J=7,1 Гц, 2H), 1,02 (t, J=7,0 Гц, 3H).
[101] Стадия 4. Синтез соединения BB-2
+
+
1
3
[102] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,50 г, 13,41 ммоль) добавляли в смесь раствора этиленгликоля (33,30 г, 536,49 ммоль, 30,00 мл) и диметилового эфира этиленгликоля (10 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-2-3 (1,41 г, 4,47 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20 мл) добавляли в раствор одной порцией и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 16 часов. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 5-6 с помощью 2 M разбавленной хлористоводородной кислоты, затем смесь экстрагировали этилацетатом (60 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 8/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-2 (желтое твердое вещество, 1,36 г, выход: 87,21%). MS-ESI масса/заряд: 340,7 [M+H], 342,7 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,38 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 5,54 (t, J=5,9 Гц, 1H), 4,60 (t, J=4,8 Гц, 2H), 4,00 (t, J=4,0 Гц, 2H), 3,19-3,03 (m, 2H), 2,45 (br s, 1H), 1,21 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[103] Иллюстративный вариант осуществления 3: фрагмент BB-3
[104] Путь синтеза
[105] Стадия 1. Синтез соединения BB-3-1
1
3
[106] При комнатной температуре н-пропиламин (7,61 г, 128,70 ммоль, 10,57 мл) и триэтиламин (14,21 г, 140,40 ммоль, 19,47 мл) растворяли в дихлорметане (100,00 мл), затем смесь охлаждали до 0°C, затем раствор соединения BB-1-2 (117,00 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли в реакционный раствор (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (200 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (200 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-3-1 (белое твердое вещество, 21,00 г, выход: 75,32%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 2,93 (t, J=7,0 Гц, 2H), 1,58-1,48 (m, 2H), 1,46-1,37 (s, 9H), 0,88 (t, J=7,4 Гц, 3H).
[107] Стадия 2. Синтез соединения BB-3-2
1
6
[108] При комнатной температуре соединение BB-3-1 (20,00 г, 83,93 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа в атмосфере азота. После завершения реакции реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-3-2 (бесцветное масло, 10,00 г, выход: 86,22%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 6,44 (s, 2H), 2,88-2,78 (m, 2H), 1,52-1,43 (m, 2H), 0,87 (t, J=7,5 Гц, 3H).
[109] Стадия 3. Синтез соединения BB-3-3
1
3
[110] При комнатной температуре соединение BB-3-2 (18,19 г, 131,66 ммоль) растворяли в диметилсульфоксиде (300,00 мл), затем добавляли трет-бутоксид калия (19,70 г, 175,54 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа. Затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (20,00 г, 87,77 ммоль) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 48 часов. После завершения реакции добавляли насыщенный солевой раствор (1000 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 10% разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (500 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-3-3 (белое твердое вещество, 15,00 г, выход: 51,85%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,58 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 5,52-5,54 (m, 1H), 3,07 (q, J=6,8 Гц, 2H), 1,59-1,64 (m, 2H), 0,96 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[111] Стадия 4. Синтез соединения BB-3
+
+
1
3
[112] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (10,21 г, 91,02 ммоль) добавляли к этиленгликолю (56,50 г, 910,19 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота. Затем раствор соединения BB-3-3 (15,00 г, 45,51 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (50,00 мл) добавляли к раствору и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 48 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (200 мл), pH регулировали до 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали, растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении и остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-3 (желтое твердое вещество, 7,10 г, выход: 40,13%). MS-ESI масса/заряд: 354,8 [M+H], 356,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,39 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 5,59-5,62 (m, 1H), 4,83-4,75 (m, 2H), 4,02-4,00 (m, 2H), 3,04 (q, J=6,8 Гц, 2H), 2,05 (br s, 1H) 1,63-1,57 (m, 2H), 0,95 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[113]  Иллюстративный вариант осуществления 4: фрагмент BB-4
[114] Путь синтеза
[115] Стадия 1. Синтез соединения BB-4-1
1
3
[116] При комнатной температуре соединение 2-метоксиэтиламин (2,00 г, 26,63 ммоль, 2,33 мл) и триэтиламин (5,39 г, 53,26 ммоль, 7,38 мл) растворяли в дихлорметане (100,00 мл) и затем реакционную смесь охлаждали до 0°C, раствор соединения BB-1-2 (26,63 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли к реакционному раствору (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 5 с помощью 1 M хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-4-1 (белое твердое вещество, 6,00 г, выход: 88,59%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,37 (s, 1H), 5,50 (br s, 1H), 3,53 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,40 (s, 3H), 3,26 (d, J=4,8 Гц, 2H), 1,51 (s, 9H).
[117] Стадия 2. Синтез соединения BB-4-2
1
3
[118] При комнатной температуре соединение BB-4-1 (6,00 г, 23,59 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-4-2 (желтое твердое вещество, 2,00 г, выход: 54,99%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,52 (br s, 2H), 3,58-3,48 (m, 2H), 3,41-3,19 (m, 5H).
[119] Стадия 3. Синтез соединения BB-4-3
1
3
[120] При комнатной температуре соединение BB-4-2 (1,12 г, 7,24 ммоль) и трет-бутоксид калия (2,22 г, 19,75 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (20,00 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,50 г, 6,58 ммоль) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. После завершения реакции добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: дихлорметан/метанол = 30/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-4-3 (желтое твердое вещество, 1,40 г, выход: 61,56%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,57 (s, 1H), 7,89 (br s, 1H), 5,99 (br s, 1H), 3,36 (br d, J=2,3 Гц, 2H), 3,32-3,20 (m, 5H).
[121] Стадия 4. Синтез соединения BB-4
+
+
1
3
[122] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,36 г, 12,15 ммоль) добавляли к этиленгликолю (22,20 г, 357,66 ммоль, 20,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа и затем раствор соединения BB-4-3 (1,40 г, 4,05 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (10,00 мл) добавляли в раствор и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 12 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (50 мл), pH регулировали до 3 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: метиленхлорид/метанол = 20/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-4 (желтое твердое вещество, 1,20 г, выход: 76,63%). MS-ESI масса/заряд: 370,8 [M+H], 372,8 [M+H]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,39 (s, 1H), 7,64 (br s, 1H), 6,03-5,94 (m, 1H), 4,65-4,54 (m, 2H), 3,99 (d, J=3,0 Гц, 2H), 3,49 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,33-3,19 (m, 5H), 2,39 (t, J=5,3 Гц, 1H).
[123] Иллюстративный вариант осуществления 5: фрагмент BB-5
[124] Путь синтеза
[125] Стадия 1. Синтез соединения BB-5-1
1
3
[126] При комнатной температуре соединение 2-этоксиэтиламин (5,00 г, 56,09 ммоль) и триэтиламин (11,35 г, 112,18 ммоль, 15,55 мл) растворяли в дихлорметане (50,00 мл) в атмосфере азота, смесь охлаждали до 0°C и затем раствор соединения BB-1-2 (56,09 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане добавляли по каплям в реакционный раствор и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (80 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (80 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-5-1 (белое твердое вещество, 11,00 г, выход: 73,09%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,41 (s, 1H), 5,43 (t, J=5,7 Гц, 1H), 3,50 (t, J=5,0 Гц, 2H), 3,46-3,40 (m, 2H), 3,19 (q, J=5,5 Гц, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,14 (t, J=7,0 Гц, 3H).
[127] Стадия 2. Синтез соединения BB-5-2
1
3
[128] При комнатной температуре соединение BB-5-1 (10,00 г, 37,27 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 12 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (80 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-5-2 (белое твердое вещество, 5,20 г, выход: 82,95%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,02 (t, J=5,8 Гц, 1H), 5,00-4,88 (m, 2H), 3,63-3,57 (m, 2H), 3,55 (d, J=7,0 Гц, 2H), 3,33 (d, J=5,0 Гц, 2H), 1,22 (t, J=6,2 Гц, 3H).
[129] Стадия 3. Синтез соединения BB-5-3
+
+
1
3
[130] При комнатной температуре соединение BB-5-2 (5,00 г, 29,72 ммоль) и трет-бутоксид калия (10,01 г, 89,17 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (50,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 35°C и перемешивали в течение 0,5 часа, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (6,77 г, 29,72 ммоль) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь дополнительно перемешивали при 35°C в течение 12 часов. После завершения реакции добавляли хлористоводородную кислоту (0,5 M, 50 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-5-3 (светло-желтое твердое вещество, 2,10 г, выход: 16,76%). MS-ESI масса/заряд: 358,9 [M+H], 360,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,49 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,99 (t, J=5,5 Гц, 1H), 3,47-3,43 (m, 2H), 3,34 (d, J=7,0 Гц, 2H), 3,18 (d, J=4,7 Гц, 2H), 1,05 (t, J=6,9 Гц, 3H).
[131] Стадия 4. Синтез соединения BB-5
1
3
[132] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,87 г, 16,68 ммоль) добавляли к этиленгликолю (33,30 г, 536,49 ммоль, 30,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-5-3 (2,00 г, 5,56 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20,00 мл) добавляли в раствор и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли хлористоводородную кислоту (0,5 M, 50 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-5 (светло-желтое твердое вещество, 1,30 г, выход: 60,69%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,38 (s, 1H), 7,67 (br s, 1H), 6,09 (d, J=5,0 Гц, 1H), 4,72-4,52 (m, 2H), 4,00 (br s, 2H), 3,62-3,50 (m, 2H), 3,47-3,36 (m, 2H), 3,31-3,20 (m, 2H), 2,46 (br s, 1H), 1,21-1,05 (m, 3H).
[133] Иллюстративный вариант осуществления 6: фрагмент BB-6
[134] Путь синтеза
[135] Стадия 1. Синтез соединения BB-6-1
[136] При комнатной температуре соединение 2-н-пропоксиэтиламин (5,00 г, 48,47 ммоль) и триэтиламин (9,81 г, 96,94 ммоль, 13,44 мл) растворяли в дихлорметане (50,00 мл), реакционную смесь охлаждали до 0°C в атмосфере азота и затем раствор соединения BB-1-2 (48,47 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям в реакционный раствор и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 часов. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (80 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (80 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-6-1 (белое твердое вещество, 11,00 г, выход: 80,37%).
[137] Стадия 2. Синтез соединения BB-6-2
1
3
[138] При комнатной температуре соединение BB-6-1 (11,00 г, 38,96 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 2 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (80 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-6-2 (белое твердое вещество, 5,60 г, выход: 78,87%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,01-4,96 (m, 1H), 4,90 (br s, 2H), 3,58-3,66 (m, 2H), 3,41-3,47 (m, 2H), 3,34 (d, J=4,5 Гц, 2H), 1,55-1,68 (m, 2H), 0,90-0,96 (m, 3H).
[139] Стадия 3. Синтез соединения BB-6-3
+
+
1
3
[140] При комнатной температуре соединение BB-6-2 (5,00 г, 27,44 ммоль) и трет-бутоксид калия (9,24 г, 82,32 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (50,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 35°C и перемешивали в течение 0,5 часа, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (6,25 г, 27,44 ммоль) добавляли в реакционный раствор и реакционную смесь дополнительно перемешивали при 35°C в течение 12 часов. После завершения реакции добавляли хлористоводородную кислоту (0,5 M, 50 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-6-3 (светло-желтое твердое вещество, 2,00 г, выход: 18,15%). MS-ESI масса/заряд: 372,8 [M+H], 374,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,48 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 5,96 (t, J=5,6 Гц, 1H), 3,43-3,47 (m, 2H), 3,24 (t, J=6,6 Гц, 2H), 3,18 (d, J=4,7 Гц, 2H), 1,43 (d, J=7,2 Гц, 2H), 0,81 (t, J=7,4 Гц, 3H).
[141] Стадия 4. Синтез соединения BB-6
1
3
[142] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,80 г, 16,06 ммоль) добавляли к этиленгликолю (33,30 г, 536,49 ммоль, 30,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-6-3 (2,00 г, 5,35 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20,00 мл) добавляли к раствору и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли хлористоводородную кислоту (0,5 M, 30 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-6 (светло-желтое твердое вещество, 1,20 г, выход: 56,18%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,39 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,08 (t, J=5,7 Гц, 1H), 4,56-4,65 (m, 2H), 3,97-4,03 (m, 2H), 3,52-3,57 (m, 2H), 3,33 (t, J=6,6 Гц, 2H), 3,24 (q, J=5,5 Гц, 2H), 2,44 (br s, 1H), 1,44-1,59 (m, 2H), 0,90 (t, J=7,4 Гц, 3H).
[143] Иллюстративный вариант осуществления 7: фрагмент BB-7
[144] Путь синтеза
[145] Стадия 1. Синтез соединения BB-7-1
1
3
[146] При комнатной температуре н-бутиламин (2,83 г, 38,64 ммоль, 3,82 мл) и триэтиламин (3,91 г, 38,64 ммоль, 5,36 мл) растворяли в дихлорметане (100 мл) и реакционную смесь охлаждали до 0°C, затем раствор соединения BB-1-2 (46,37 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям к реакционному раствору (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток добавляли в дихлорметан (200 мл) и промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (80 мл) и воды (100 мл×2) соответственно. Органическую фазу высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-7-1 (белое твердое вещество, 3,00 г, выход: 30,77%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 2,98 (q, J=8,0 Гц, 2H), 1,47 (t, J=4,0 Гц 2H), 1,24-1,38 (m, 11H), 0,86 (t, J=4,0 Гц, 3H).
[147] Стадия 2. Синтез соединения BB-7-2
1
3
[148] При комнатной температуре соединение BB-7-1 (3,00 г, 11,89 ммоль) добавляли в воду (150,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 0,5 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали дихлорметаном (50 мл). Органическую фазу отбрасывали и водную фазу экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Затем органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-7-2 (бесцветное масло, 1,10 г, выход: 60,78%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 3,06 (q, J=8,0 Гц, 2H), 1,46-1,54 (m, 2H), 1,32 (s, 2H), 0,87 (t, J=8,0 Гц, 3H).
[149] Стадия 3. Синтез соединения BB-7-3
+
+
1
3
[150] При комнатной температуре соединение BB-7-2 (1,10 г, 7,23 ммоль) растворяли в диметилсульфоксиде (50,00 мл), затем добавляли трет-бутоксид калия (1,22 г, 10,85 ммоль), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота. Затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,98 г, 8,68 ммоль) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь дополнительно перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре в защитной атмосфере азота. После завершения реакции добавляли насыщенный солевой раствор (50 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 10% разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (80 мл). Органические фазы объединяли, промывали водой (50 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-7-3 (белое твердое вещество, 350,00 мг, выход: 9,58%). MS-ESI масса/заряд: 342,7 [M+H], 344,7 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,49 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 5,41 (t, J=6,0 Гц, 1H), 3,00 (q, J=7,2 Гц, 2H), 1,47 (q, J=7,6 Гц, 2H), 1,28-1,32 (m, 2H), 0,84 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[151] Стадия 4. Синтез соединения BB-7
1
3
[152] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (343,36 мг, 3,06 ммоль) добавляли к этиленгликолю (3,17 г, 51,00 ммоль, 2,85 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-7-3 (350,00 мг, 1,02 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20,00 мл) добавляли к раствору одной порцией и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли ледяную воду (50 мл), доводили до pH 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: дихлорметан/метанол = 20/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-7 (желтое твердое вещество, 300,00 мг, выход: 79,66%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,30 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 5,44 (t, J=6,0 Гц, 1H), 4,52 (t, J=4,8 Гц, 2H), 3,92 (q, J=3,2 Гц, 2H), 2,98 (q, J=6,8 Гц, 2H), 2,31 (t, J=6,0 Гц, 1H), 1,45 (q, J=8,0 Гц, 2H), 1,26-1,32 (m, 2H), 0,83 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[153] Иллюстративный вариант осуществления 8: фрагмент BB-8
[154] Путь синтеза
[155] Стадия 1. Синтез соединения BB-8-1
1
3
[156] При комнатной температуре растворяли циклобутиламин (5,00 г, 70,30 ммоль, 6,02 мл) и триэтиламин (8,54 г, 84,36 ммоль, 11,70 мл) растворяли в дихлорметане (100,00 мл) и реакционную смесь охлаждали до 0°C, затем раствор соединения BB-1-2 (84,36 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане добавляли по каплям в реакционный раствор (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 часов. После завершения реакции смесь экстрагировали водой (100 мл×3). Водные фазы объединяли, доводили до pH 5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-8-1 (белое твердое вещество, 12,00 г, выход: 68,19%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,35 (d, J=9,8 Гц, 1H), 3,94-3,84 (m, 1H), 3,15 (d, J=7,3 Гц, 1H), 2,38-2,30 (m, 2H), 2,03-1,90 (m, 2H), 1,77-1,61 (m, 2H), 1,50 (s, 9H).
[157] Стадия 2. Синтез соединения BB-8-2
1
3
[158] При комнатной температуре соединение BB-8-1 (5,00 г, 19,98 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-8-2 (белое твердое вещество, 2,90 г, выход: 96,63%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 4,72-4,48 (m, 2H), 4,07-3,81 (m, 1H), 2,47-2,25 (m, 2H), 2,04-1,90 (m, 2H), 1,83-1,65 (m, 2H).
[159] Стадия 3. Синтез соединения BB-8-3
1
3
[160] При комнатной температуре соединение BB-8-2 (2,90 г, 19,31 ммоль) и трет-бутоксид калия (4,33 г, 38,62 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (80,00 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (3,52 г, 15,45 ммоль) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов. После завершения реакции добавляли воду (150 мл), pH регулировали до 6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-8-3 (желтое твердое вещество, 2,50 г, выход: 37,90%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,59 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,71 (d, J=8,5 Гц, 1H), 4,10-3,74 (m, 1H), 2,30-2,17 (m, 2H), 1,94-1,79 (m, 2H), 1,74-1,58 (m, 2H).
[161] Стадия 4. Синтез соединения BB-8
1
3
[162] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (2,46 г, 21,96 ммоль) добавляли к этиленгликолю (22,20 г, 357,66 ммоль, 20,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-8-3 (2,50 г, 7,32 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (80,00 мл) добавляли к раствору и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (200 мл), доводили до pH 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 5/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-8 (желтое твердое вещество, 1,1 г, выход: 40,92%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,41 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 5,72 (br d, J=8,8 Гц, 1H), 4,81-4,42 (m, 2H), 4,03-3,96 (m, 2H), 3,96-3,87 (m, 1H), 2,31-2,16 (m, 2H), 1,93-1,79 (m, 2H), 1,73-1,61 (m, 2H).
[163] Иллюстративный вариант осуществления 9: фрагмент BB-9
[164] Путь синтеза
[165] Стадия 1. Синтез соединения BB-9-1
1
3
[166] При комнатной температуре циклопропилметиламин (5,00 г, 70,30 ммоль) и триэтиламин (14,23 г, 140,60 ммоль, 19,49 мл) растворяли в дихлорметане (100,00 мл), реакционную смесь охлаждали до 0°C и затем добавляли раствор соединения BB-1-2 (70,30 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане (время добавления по каплям составляло 0,5 часа), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (100 мл), доводили до pH 5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-9-1 (белое твердое вещество, 11,00 г, выход: 62,51%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 2,94 (dd, J=4,0, 6,8 Гц, 2H), 1,53-1,44 (m, 9H), 1,11-0,94 (m, 1H), 0,64-0,52 (m, 2H), 0,30-0,12 (m, 2H).
[167] Стадия 2. Синтез соединения BB-9-2
1
3
[168] При комнатной температуре соединение BB-9-1 (10,00 г, 39,95 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-9-2 (белое твердое вещество, 5,00 г, выход: 83,33%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 4,64-4,54 (m, 2H), 3,64 (br s, 1H), 3,03-2,86 (m, 2H), 1,16-0,98 (m, 1H), 0,63-0,42 (m, 2H), 0,29-0,10 (m, 2H).
[169] Стадия 3. Синтез соединения BB-9-3
1
3
[170] При комнатной температуре соединение BB-9-2 (4,94 г, 32,91 ммоль) и трет-бутоксид калия (4,92 г, 43,88 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (80,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (5,00 г, 21,94 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-3/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-9-3 (белое твердое вещество, 5,00 г, выход: 66,71%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,57 (s, 1H), 7,80 (br s, 1H), 5,63 (t, J=5,4 Гц, 1H), 2,96 (t, J=6,7 Гц, 2H), 1,09-0,86 (m, 1H), 0,62-0,39 (m, 2H), 0,26-0,03 (m, 2H).
[171] Стадия 4. Синтез соединения BB-9
1
3
[172] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (4,93 г, 43,91 ммоль) добавляли к этиленгликолю (22,20 г, 357,66 ммоль, 20,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа и затем раствор соединения BB-9-3 (5,00 г, 14,64 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (80,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 15 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (200 мл), доводили до pH 3 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (200 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 5/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-9 (желтое масло, 3,50 г, выход: 65,10%). H ЯМР (400 MГц, CDCl): 8,45-8,29 (m, 1H), 7,68 (br s, 1H), 5,74 (t, J=5,5 Гц, 1H), 4,73-4,52 (m, 2H), 4,04-3,93 (m, 2H), 2,93 (t, J=6,5 Гц, 2H), 2,04 (s, 1H), 1,11-0,78 (m, 1H), 0,62-0,41 (m, 2H), 0,14 (q, J=5,0 Гц, 2H).
[173] Иллюстративный вариант осуществления 10: фрагмент BB-10
[174] Путь синтеза
[175] Стадия 1. Синтез соединения BB-10-1
[176] При 0°C гидрохлорид циклобутилметиламина (5,00 г, 41,12 ммоль), триэтиламин (10,40 г, 102,80 ммоль, 14,25 мл) и дихлорметан (50,00 мл) добавляли к раствору соединения BB-1-2 (41,12 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (60 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (60 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-10-1 (желтое твердое вещество, 7,20 г, выход: 66,24%).
[177] Стадия 2. Синтез соединения BB-10-2
1
3
[178] При комнатной температуре соединение BB-10-1 (7,00 г, 26,48 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 2 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-10-2 (бесцветное масло, 3,80 г, выход: 87,38%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,10-4,92 (m, 2H), 3,15-3,10 (m, 2H), 2,54-2,50 (m, 1H), 2,07-2,04 (m, 2H), 1,90-1,88 (m, 2H), 1,88-1,69 (m, 2H).
[179] Стадия 3. Синтез соединения BB-10-3
1
3
[180] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (3,14 г, 28,00 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-10-2 (2,30 г, 14,00 ммоль) в диметилсульфоксиде (40,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (3,19 г, 14,00 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (80 мл), pH регулировали до 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (40 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-10-3 (желтое твердое вещество, 3,10 г, выход: 62,29%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,49 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 5,45 (t, J=6,0 Гц, 1H), 3,03-2,98 (m, 2H), 2,53-2,33 (m, 1H), 2,04-1,98 (m, 2H), 1,84-1,78 (m, 2H), 1,63-1,57 (m, 2H).
[181] Стадия 4. Синтез соединения BB-10
1
3
[182] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,89 г, 16,88 ммоль) добавляли к этиленгликолю (15,79 г, 254,55 ммоль, 14,23 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-10-3 (3,00 г, 8,44 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (30,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 120°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (60 мл), pH регулировали до 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-10 (желтое масло, 2,50 г, выход: 77,73%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,39 (s, 1H), 7,65 (br s, 1H), 5,52 (t, J=6,0 Гц, 1H), 4,71-4,49 (m, 2H), 4,02 (br d, J=3,8 Гц, 2H), 3,12-3,01 (m, 2H), 2,60-2,47 (m, 1H), 2,43 (br s, 1H), 2,09-2,01 (m, 2H), 1,98-1,77 (m, 2H), 1,74-1,64 (m, 2H).
[183] Иллюстративный вариант осуществления 11: фрагмент BB-11
[184] Путь синтеза
[185] Стадия 1. Синтез соединения BB-11-1
1
3
[186] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (78,00 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям к раствору 3-метоксипропиламина (6,95 г, 78,00 ммоль, 7,99 мл) и триэтиламина (15,79 г, 156,00 ммоль, 21,63 мл) в дихлорметане (50,00 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (200 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (150 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл) соответственно, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-11-1 (белое твердое вещество, 16,00 г, выход: 76,45%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 3,42 (t, J=5,8 Гц, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,15-3,04 (m, 2H), 1,91-1,64 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).
[187] Стадия 2. Синтез соединения BB-11-2
1
6
[188] При комнатной температуре соединение BB-11-1 (16,00 г, 59,63 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-11-2 (бесцветное масло, 8,50 г, выход: 84,74%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 6,49-6,38 (m, 3H), 3,37-3,32 (m, 2H), 3,23-3,19 (m, 3H), 2,96-2,82 (m, 2H), 1,73-1,63 (m, 2H).
[189] Стадия 3. Синтез соединения BB-11-3
1
6
[190] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (2,67 г, 23,78 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-11-2 (2,00 г, 11,89 ммоль) в диметилсульфоксиде (10,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (2,71 г, 11,89 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (60 мл), pH регулировали до 4 с помощью 0,5 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-11-3 (белое твердое вещество, 3,30 г, выход: 77,21%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 8,59 (s, 1H), 3,29-3,25 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 2,96 (t, J=6,9 Гц, 2H), 1,70-1,62 (m, 2H).
[191] Стадия 4. Синтез соединения BB-11
1
3
[192] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (2,06 г, 18,35 ммоль) добавляли к этиленгликолю (30,24 г, 487,25 ммоль, 27,25 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-11-3 (3,30 г, 9,18 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (10,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 24 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (60 мл), доводили до pH 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-11 (желтое масло, 2,20 г, выход: 61,34%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,51-8,08 (m, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,10 (t, J=5,9 Гц, 1H), 4,67-4,45 (m, 2H), 4,01 (d, J=3,8 Гц, 2H), 3,53-3,39 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 3,26-3,13 (m, 2H), 2,46 (br s, 1H), 1,85 (q, J=6,0 Гц, 2H).
[193] Иллюстративный вариант осуществления 12: фрагмент BB-12
[194] Путь синтеза
[195] Стадия 1. Синтез соединения BB-12-1
1
6
[196] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (74,19 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли к раствору 3-этоксипропил-1-амина (7,65 г, 74,19 ммоль, 8,90 мл) и триэтиламина (22,52 г, 222,58 ммоль, 30,85 мл) в дихлорметане (40,00 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 14 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток добавляли в воду (200 мл) и экстрагировали дихлорметаном (100 мл). Органическую фазу отбрасывали и водную фазу доводили до pH 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты, затем водную фазу экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-12-1 (желтое твердое вещество, 17,00 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 10,80 (s, 1H), 7,51 (t, J=5,8 Гц, 1H), 3,40-3,37 (m, 2H), 2,93 (q, J=6,4 Гц, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,74-1,61 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,10 (t, J=6,8 Гц, 3H).
[197] Стадия 2. Синтез соединения BB-12-2
1
6
[198] При комнатной температуре соединение BB-12-1 (17,00 г, 60,21 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-12-2 (желтое масло, 9,00 г, неочищенный продукт). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 6,46 (s, 2H), 6,41 (t, J=6,2 Гц, 1H), 3,43-3,37 (m, 4H), 2,90 (q, J=6,4 Гц, 2H), 1,75-1,60 (m, 2H), 1,10 (t, J=7,0 Гц, 3H). Стадия 3. Синтез соединения BB-12-3
1
6
[199] При комнатной температуре соединение BB-12-2 (1,60 г, 8,78 ммоль) и трет-бутоксид калия (1,97 г, 17,55 ммоль) добавляли в диметилсульфоксид (20,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа в атмосфере азота, добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (2,00 г, 8,78 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 11 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (100 мл), pH регулировали до 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали водой (50 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1 -4/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-12-3 (желтое твердое вещество, 1,30 г, выход: 39,64%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 8,59 (s, 1H), 3,34-3,29 (m, 4H), 2,98 (t, J=6,8 Гц, 2H), 1,69-1,61 (m, 2H), 1,06 (t, J=6,8 Гц, 3H).
[200] Стадия 4. Синтез соединения BB-12
+
+
1
3
[201] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,17 г, 10,44 ммоль) добавляли в смесь раствора этиленгликоля (35,63 г, 574,20 ммоль, 32,10 мл) и диметилового эфира этиленгликоля (10,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-12-3 (1,30 г, 3,48 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20,00 мл) добавляли в смесь одной порцией и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), доводили до pH 5-6 с помощью 2 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (60 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 3/1-1/3, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-12 (белое твердое вещество, 1,10 г, выход: 79,17%). MS-ESI масса/заряд: 398,9 [M+H], 400,9 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,29 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,02 (t, J=6,0 Гц, 1H), 4,52 (t, J=4,6 Гц, 2H), 3,99-3,87 (m, 2H), 3,46-3,31 (m, 4H), 3,11 (q, J=6,4 Гц, 2H), 2,38 (t, J=6,0 Гц, 1H), 1,80-1,71 (m, 2H), 1,14 (t, J=7,0 Гц, 3H).
[202] Иллюстративный вариант осуществления 13: фрагмент BB-13
[203] Путь синтеза
[204] Стадия 1. Синтез соединения BB-13-1
1
3
[205] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (49,43 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли к раствору 2-тетрагидрофурфуриламина (5,00 г, 49,43 ммоль, 5,10 мл) и триэтиламина (10,00 г, 98,86 ммоль, 13,70 мл) в дихлорметане (50,00 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (100 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (90 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл) соответственно, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-13-1 (белое твердое вещество, 8,30 г, выход: 59,90%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,75 (d, J=4,8 Гц, 1H), 4,02 (dd, J=3,9, 6,7 Гц, 1H), 3,88-3,64 (m, 2H), 3,30-2,83 (m, 2H), 2,06-1,76 (m, 3H), 1,71-1,18 (m, 10H).
[206] Стадия 2. Синтез соединения BB-13-2
1
3
[207] При комнатной температуре соединение BB-13-1 (8,00 г, 28,54 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-13-2 (бесцветное масло, 4,90 г, выход: 95,27%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 5,18-5,01 (m, 1H), 4,07-3,91 (m, 1H), 3,86-3,61 (m, 2H), 3,27-2,90 (m, 2H), 1,96-1,74 (m, 3H), 1,62-1,41 (m, 1H).
[208] Стадия 3. Синтез соединения BB-13-3
1
3
[209] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (3,86 г, 34,40 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-13-2 (3,10 г, 17,20 ммоль) в диметилсульфоксиде (20,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (3,92 г, 17,20 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (60 мл), pH регулировали до 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-13-3 (желтое твердое вещество, 2,10 г, выход: 32,85%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,65-8,36 (m, 1H), 8,08-7,70 (m, 1H), 5,99-5,80 (m, 1H), 4,08-3,90 (m, 1H), 3,82-3,55 (m, 2H), 3,25-3,13 (m, 1H), 3,04-2,89 (m, 1H), 1,98-1,72 (m, 3H), 1,60-1,44 (m, 1H).
[210] Стадия 4. Синтез соединения BB-13
+
+
[211] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,27 г, 11,30 ммоль) добавляли к этиленгликолю (10,58 г, 170,40 ммоль, 9,53 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-13-3 (2,10 г, 5,65 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (30,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 120°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (60 мл), доводили до pH 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-13 (желтое масло, 1,80 г, выход: 78,35%). MS-ESI масса/заряд: 396,8 [M+H], 398,8 [M+H+2]. Иллюстративный вариант осуществления 14: фрагмент BB-14
[212] Путь синтеза
[213] Стадия 1. Синтез соединения BB-14-1
[214] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (43,41 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане добавляли к раствору 4-(аминометил)тетрагидро-2H-пирана (5,00 г, 43,41 ммоль) и триэтиламина (8,79 г, 86,82 ммоль, 12,04 мл) в дихлорметане (50,00 мл), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (80 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (80 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (200 мл) соответственно, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-14-1 (грязно-белое масло, 5,20 г, выход: 40,69%).
[215] Стадия 2. Синтез соединения BB-14-2
[216] При комнатной температуре соединение BB-14-1 (5,00 г, 16,99 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 12 часов. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (80 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-14-2 (светло-желтое масло, 1,70 г, выход: 51,51%).
[217] Стадия 3. Синтез соединения BB-14-3
+
+
[218] При 35°C смесь соединения BB-14-2 (1,70 г 8,75 ммоль) и трет-бутоксида калия (2,95 г, 26,25 ммоль) в диметилсульфоксиде (50,00 мл) перемешивали в течение 0,5 часа, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,99 г, 8,75 ммоль), реакционную смесь перемешивали при 35°C в течение 12 часов. После завершения реакции в смесь добавляли 0,5 M разбавленную хлористоводородную кислоту (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-14-3 (желтое твердое вещество, 1,20 г, выход: 12,80%). MS-ESI масса/заряд: 384,8 [M+H], 386,8 [M+H+2].
[219] Стадия 4. Синтез соединения BB-14
+
+
1
3
[220] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,05 г, 9,33 ммоль) добавляли к этиленгликолю (33,30 г, 536,49 ммоль, 30,00 мл), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-14-3 (1,20 г, 3,11 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (20,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли 0,5 M разбавленную хлористоводородную кислоту (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл×2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-0/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-14 (светло-желтое твердое вещество, 200,00 г, выход: 14,59%). MS–ESI масса/заряд: 410,9 [M+H], 412,9 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,38 (s, 1H), 7,62 (br s, 1H), 5,65 (t, J=6,5 Гц, 1H), 4,60 (t, J=4,8 Гц, 2H), 4,05–3,89 (m, 4H), 3,38 (t, J=10,8 Гц, 2H), 2,93 (t, J=6,5 Гц, 2H), 1,86–1,75 (m, 1H), 1,71–1,61 (m, 2H), 1,31–1,22 (m, 2H).
[221] Иллюстративный вариант осуществления 15: фрагмент BB-15
[222] Путь синтеза
[223] Стадия 1. Синтез соединения BB-15-1
1
6
[224] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (31,32 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям к смешанному раствору гидрохлорида 2-аминоэтилметилсульфона (5,00 г, 31,32 ммоль) и триэтиламина (6,34 г, 62,64 ммоль, 8,68 мл) в дихлорметане (50,00 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 часов в атмосфере азота. После завершения реакции к реакционному раствору добавляли воду (100 мл) и смесь экстрагировали дихлорметаном (100 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты (50 мл) и насыщенного солевого раствора (80 мл) соответственно, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-15-1 (белое твердое вещество, 5,00 г, выход: 52,81%). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 11,04 (s, 1H), 7,83 (br s, 1H), 3,44 (br s, 2H), 3,35-3,30 (m, 2H), 3,02 (s, 3H), 1,44 (s, 9H).
[225] Стадия 2. Синтез соединения BB-15-2
1
[226] При комнатной температуре соединение BB-15-1 (4,80 г, 15,87 ммоль) добавляли в воду (100,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, экстрагировали этилацетатом (100 мл), органическую фазу отбрасывали и водную фазу концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-15-2 (бесцветное масло, 2,10 г, выход: 65,43%). H ЯМР (400 MГц, MeOD) δ: 3,55-3,47 (m, 2H), 3,41-3,35 (m, 2H), 3,06-3,02 (s, 3H).
[227] Стадия 3. Синтез соединения BB-15-3
+
+
1
3
[228] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (2,22 г, 19,78 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-15-2 (2,00 г, 9,89 ммоль) в диметилсульфоксиде (20,00 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем добавляли 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (2,25 г, 9,89 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли воду (60 мл), pH регулировали до 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-15-3 (желтое твердое вещество, 1,80 г, выход: 43,98%). MS-ESI масса/заряд: 392,8 [M+H], 394,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,60 (s, 1H), 6,36 (br s, 1H), 3,66 (q, J=6,0 Гц, 2H), 3,46-3,25 (m, 2H), 3,09-2,82 (m, 3H).
[229] Стадия 4. Синтез соединения BB-15
+
+
[230] В атмосфере азота и при 40°C смесь этиленгликоля (4,28 г, 68,95 ммоль, 3,86 мл) и трет-бутоксида калия (513,07 мг, 4,57 ммоль) перемешивали в течение 0,5 часа и затем раствор соединения BB-15-3 (0,9 г, 2,29 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (30,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение 3 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (60 мл), доводили до pH 4 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-15 (светло-желтое масло, 327,27 мг, выход: 33,40%). MS-ESI масса/заряд: 440,9 [M+Na], 442,9 [M+Na+2].
[231] Иллюстративный вариант осуществления 16: фрагмент BB-16
[232] Путь синтеза
[233] Стадия 1. Синтез соединения BB-16-1
1
3
[234] При 0-5°C раствор соединения BB-1-2 (9,19 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане медленно добавляли по каплям к раствору 3-азабицикло[3.1.0]гексана в гидрохлориде (900,00 мг, 7,53 ммоль) и триэтиламина (2,28 г, 22,58 ммоль) в дихлорметане (10 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (20 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (25 мл×4). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-16-1 (белое твердое вещество, 1,90 г, выход: 96,19%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 3,56-3,68 (m, 4H), 1,55-1,59 (m, 2H), 1,51 (s, 9H), 0,69-0,74 (m, 1H), 0,41-0,45 (m, 1H).
[235] Стадия 2. Синтез соединения BB-16-2
1
3
[236] При комнатной температуре трифторуксусную кислоту (3,30 г, 28,96 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-16-1 (1,90 г, 7,24 ммоль) в дихлорметане (10,00 мл) одной порцией, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель реакционной смеси удаляли при пониженном давлении с получением соединения BB-16-2 (грязно-белое твердое вещество, 1,44 г, выход: 72,00%, трифторацетатная соль). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 3,28-3,36 (m, 4H), 1,54-1,59 (m, 2H), 0,61-0,69 (m, 1H), 0,44-0,58 (m, 1H).
[237] Стадия 3. Синтез соединения BB-16-3
1
3
[238] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,75 г, 15,63 ммоль) добавляли к смеси трифторацетатной соли соединения BB-16-2 (1,44 г, 5,21 ммоль) в диметилсульфоксиде (30,00 мл) одной порцией, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,42 г, 6,25 ммоль) добавляли к смеси, реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли ледяную воду (60 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 4 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении и остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-16-3 (коричневое твердое вещество, 1,40 г, выход: 74,14%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,59 (s, 1H), 7,80 (br s, 1H), 3,73-3,79 (m, 2H), 3,66-3,72 (m, 2H), 1,58-1,62 (m, 2H), 0,69-0,76 (m, 1H), 0,33 (q, J=4,3 Гц, 1H).
[239] Стадия 4. Синтез соединения BB-16
1
3
[240] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (760,78 г, 6,78 ммоль) добавляли к этиленгликолю (22,20 г, 357,67 ммоль), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота и затем раствор соединения BB-16-3 (799,18 г, 2,26 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (10,00 мл) добавляли к смеси и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 39 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли ледяную воду (60 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (60 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (120 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-16 (желтое твердое вещество, 520,00 г, выход: 59,45%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,38 (s, 1H), 7,63 (br s, 1H), 4,55-4,61 (m, 2H), 3,94-4.02 (m, 2H), 3,69-3,74 (m, 2H), 3,64-3,69 (m, 2H), 2,48 (br s, 1H), 1,49-1,58 (m, 2H), 0,62-0,71 (m, 1H), 0,30-0,37 (m, 1H).
[241] Иллюстративный вариант осуществления 17: фрагмент BB-17
[242] Путь синтеза
[243] Стадия 1. Синтез соединения BB-17-1
1
3
[244] При 0°C раствор соединения BB-1-2 (12,39 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане добавляли по каплям к раствору 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептана (1,17 г, 11,80 ммоль) и триэтиламина (3,58 г, 35,40 ммоль) в дихлорметане (10 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении, к остатку добавляли воду (20 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 5 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (25 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-17-1 (белое твердое вещество, 1,70 г, выход: 51,76%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,07 (br s, 1H), 4,79 (s, 4H); 4,34 (s, 4H), 1,52 (s, 9H).
[245] Стадия 2. Синтез соединения BB-17-2
1
3
[246] При комнатной температуре соединение BB-17-1 (1,70 г, 6,11 ммоль) добавляли в воду (10,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 1 часа. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали этилацетатом (10 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения BB-17-2 (белое твердое вещество, 920,00 мг, выход: 84,49%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 4,78 (s, 4H), 4,39 (br s, 2H), 4,04 (s, 4H).
[247] Стадия 3. Синтез соединения BB-17-3
+
+
[248] При комнатной температуре соединение BB-17-2 (920,00 мг, 5,16 ммоль) и трет-бутоксид калия (1,50 г, 13,37 ммоль) добавляли к диметилсульфоксиду (15,00 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа. Затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,41 г, 6,19 ммоль) добавляли к смеси и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. После завершения реакции добавляли ледяную воду (40 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 4 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (40 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (120 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии на пластине (элюент: дихлорметан/метанол = 10/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-17-3 (коричневое твердое вещество, 430,00 мг, выход: 16,43%). MS-ESI масса/заряд: 368,8 [M+H], 370,8 [M+H+2].
[249] Стадия 4. Синтез соединения BB-17
+
+
[250] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (390,49 мг, 3,48 ммоль) добавляли к этиленгликолю (15,23 г, 245,36 ммоль), реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота и затем раствор соединения BB-17-3 (430,00 мг, 1,16 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (10,00 мл) медленно добавляли по каплям к смеси и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 48 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли ледяную воду (30 мл), регулировали рН до 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (30 мл×4). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (120 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: дихлорметан/метанол = 10/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения BB-17 (желтое твердое вещество, 150,00 мг, выход: 30,86%). MS-ESI масса/заряд: 417,0 [M+Na], 417,0 [M+Na+2].
[251] Иллюстративный вариант осуществления 18: фрагмент BB-18
[252] Путь синтеза
[253] Стадия 1. Синтез соединения BB-18-2
+
1
3
[254] При 0°C раствор трет-бутоксида калия (7,22 г, 64,31 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляли по каплям к суспензии бромида метилтрифенилфосфония (22,97 г, 64,31 ммоль) в тетрагидрофуране (100 мл), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 часа в атмосфере азота, затем реакционную смесь охлаждали до 0°C и раствор соединения BB-18-1 (10,00 г, 42,87 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляли одной порцией. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 64 часов в атмосфере азота. После завершения реакции последовательно добавляли воду (50 мл) и петролейный эфир (50 мл) и жидкость разделяли. Водную фазу экстрагировали петролейным эфиром (50 мл×2). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (150 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/0-10/1, объемное соотношение) с получением соединения BB-18-2 (бесцветное масло, 5,20 г, выход: 48,56%). MS-ESI масса/заряд: 232,0 [M+H]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,40-7,29 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 4,76 (s, 2H), 3,51 (t, J=5,8 Гц, 4H), 2,19 (t, J=5,8 Гц, 4H).
[255] Стадия 2. Синтез соединения BB-18-3
+
1
3
[256] При -40°C раствор трифторуксусной кислоты (10,25 г, 89,92 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли по каплям к раствору диэтилцинка (1 M, 89,92 мл) в дихлорметане (50 мл), реакционную смесь перемешивали при -40°C в течение 0,5 часа в атмосфере азота и затем раствор дийодметана (24,08 г, 89,92 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли к смеси, реакционную смесь перемешивали при -40°C в течение 0,5 часа в атмосфере азота. Затем добавляли раствор соединения BB-18-2 (5,20 г, 22,48 ммоль) в дихлорметане (10 мл), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли дихлорметан (30 мл) и насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (80 мл) и перемешивали в течение 5 минут с последующим осаждением, фильтрацией и разделением жидкости. Органическую фазу промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении и остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 100/1-10/1, объемное соотношение) с получением желтого масла, которое отделяли с помощью препаративной HPLC снова с получением соединения BB-18-3 (светло-желтое масло, 4,00 г, выход: 47,46%). MS-ESI масса/заряд: 246,0 [M+H]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,40-7,29 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 3,57-3,47 (m, 4H), 1,35 (br s, 4H), 0,34 (s, 4H).
[257] Стадия 3. Синтез соединения BB-18-4
1
6
[258] При комнатной температуре влажный палладий на угле (150,00 мг, чистота: 10%) добавляли к раствору соединения BB-18-3 (1,50 г, 6,11 ммоль) в тетрагидрофуране (15,00 мл) и осуществляли реакцию реакционной смеси в атмосфере водорода (3,5 МПа) и перемешивали при комнатной температуре в течение 40 часов. После завершения реакции реакционную смесь фильтровали с последующим добавлением хлористоводородной кислоты/этилацетата (4 M, 10 мл), перемешивали в течение 15 минут и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения BB-18-4 (желтое твердое вещество, 900,00 мг, выход: 99,76%, гидрохлорид). H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 9,13 (br s, 2H), 3,02 (br s, 4H), 1,54 (t, J=5,0 Гц, 4H), 0,37 (s, 4H).
[259] Стадия 4. Синтез соединения BB-18-5
1
3
[260] При 0°C раствор соединения BB-18-4 (1,20 г, 8,13 ммоль, гидрохлорид) в дихлорметане (20 мл) добавляли по каплям к раствору соединения BB-1-2 (8,54 ммоль, неочищенный продукт) в дихлорметане и смеси дихлорметана (10 мл) и триэтиламина (3,29 г, 32,52 ммоль) (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (20 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 4 M разбавленной хлористоводородной кислоты (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (25 мл×4). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением соединения BB-18-5 (светло-желтое твердое вещество, 1,32 г, выход: 55,91%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,05 (br s, 1H), 3,47-3,40 (m, 4H), 1,52 (s, 9H), 1,50-1,47 (m, 4H), 0,38 (s, 4H).
[261] Стадия 5. Синтез соединения BB-18-6
1
3
[262] При комнатной температуре трифторуксусную кислоту (1,53 г, 13,42 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-19-5 (580,00 мг, 2,00 ммоль) в дихлорметане (3,00 мл) одной порцией, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении с получением соединения BB-18-6 (светло-желтое твердое вещество, 600,00 мг, выход: 98,50%, трифторацетат). H ЯМР (400 MГц, CDCl)δ: 3,23 (t, J=5,5 Гц, 4H), 1,50 (t, J=5,5 Гц, 4H), 0,36 (s, 4H).
[263] Стадия 6. Синтез соединения BB-18-7
1
3
[264] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (1,39 г, 12,42 ммоль) добавляли к раствору соединения BB-18-6 (1,26 г, 4,14 ммоль, трифторацетат) в диметилсульфоксиде (10,00 мл) одной порцией, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем 5-бром-4,6-дихлорпиримидин (1,04 г, 4,55 ммоль) добавляли к реакционной смеси, реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли ледяную воду (20 мл), pH регулировали до 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и смесь экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (120 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью хроматографии на пластине (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением соединения BB-18-7 (желтое масло, 600,00 мг, выход: 35,86%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,53 (s, 1H), 4,40 (br s, 1H), 3,20-3,28 (m, 4H), 1,49-1,55 (m, 4H), 0,35 (s, 4H).
[265] Стадия 7. Синтез соединения BB-18
1
3
[266] При комнатной температуре трет-бутоксид калия (353,46 мг, 3,15 ммоль) добавляли к раствору этиленгликоля (16,03 г, 258,27 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (3,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 0,5 часа в атмосфере азота, затем раствор соединения BB-18-7 (400,00 мг, 1,05 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (5,00 мл) добавляли к реакционному раствору и реакционную смесь нагревали до 110°C и перемешивали в течение 40 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли ледяную воду (30 мл), доводили до pH 5-6 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью хроматографии (элюент: этилацетат/петролейный эфир = 1/1, объемное соотношение) с получением соединения BB-18 (желтое масло, 180,00 мг, выход: 42,09%). H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,37 (s, 1H), 4,61-4,56 (m, 2H), 4,01-3,97 (m, 2H), 3,54-3,47 (m, 4H), 1,52-1,45 (m, 4H), 0,36-0,31 (m, 4H).
[267] Вариант осуществления 1: WX001
[268] Путь синтеза
[269] Стадия 1. Синтез соединения WX001-2
1
3
[270] При 0°C дихлорсульфоксид (58,11 г, 488,46 ммоль, 35,43 мл) медленно добавляли по каплям к раствору соединения WX001-1 (80 г, 444,06 ммоль) в метаноле (400 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 0,5 часа) и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток добавляли в воду (300 мл) и экстрагировали этилацетатом (300 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (300 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали, и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением соединения WX001-2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 6,80-6,71 (m, 3H), 5,94 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,55 (s, 2H).
[271] Стадия 2. Синтез соединения WX001-3
1
3
[272] При 0°C раствор соединения WX001-2 (35 г, 180,24 ммоль) в диметилкарбонате (118,51 г, 1,32 моль, 110,76 мл) медленно добавляли по каплям к смеси раствора гидрида натрия (10,81 г, 270,36 ммоль, чистота: 60%) в диметилкарбонате (118,51 г, 1,32 моль, 110,76 мл) (время добавления по каплям составляло приблизительно 1 час), реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции добавляли ледяную воду (500 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (300 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (300 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-5/1, объемное соотношение) с получением соединения WX001-3. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,00-6,93 (m, 1H), 6,85-6,77 (m, 2H), 5,98 (s, 2H), 4,58 (s, 1H), 3,78 (s, 6H).
[273] Стадия 3. Синтез соединения WX001-4
[274] При 0°C блок натрия (10,94 г, 475,78 ммоль) добавляли порциями к безводному метанолу (150 мл), реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота и затем раствор соединения WX001-3 (40 г, 158,59 ммоль) в метаноле (100 мл) добавляли к реакционному раствору. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота, затем формамидинацетат (19,81 г, 190,31 ммоль) добавляли к реакционному раствору одной порцией и реакционную смесь дополнительно перемешивали при комнатной температуре в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавлял 2 M разбавленную хлористоводородную кислоту (200 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут, во время чего осаждали большое количество белого твердого вещества. Реакционную смесь фильтровали, осадок на фильтре промывали метанолом (50 мл×2) и осадок на фильтре собирали и высушивали под вакуумом с получением соединения WX001-4.
[275] Стадия 4. Синтез соединения WX001-5
1
3
[276] При комнатной температуре соединение WX001-4 (24 г, 103,36 ммоль) добавляли к оксихлориду фосфора (594,00 г, 3,87 моль, 360,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 5 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, реакционный раствор медленно выливали в ледяную воду (1000 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа и затем экстрагировали этилацетатом (1000 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (1000 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1, объемное соотношение) с получением соединения WX001-5. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,78 (s, 1H), 6,96 (d, J=8,3 Гц, 1H), 6,78 (dd, J=2,5, 4,0 Гц, 2H), 6,09 (s, 2H).
[277] Стадия 5. Синтез соединения WX001-6
1
3
[278] При комнатной температуре соединение 2-(5-бромпиримидин-2-ил)оксиэтанол (8,06 г, 36,79 ммоль) и соединение WX001-5 (11 г, 40,88 ммоль) растворяли в толуоле (100 мл), затем смесь охлаждали до 0°C, трет-бутоксид калия (9,17 г, 81,76 ммоль) добавляли по частям и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 0,5 часа в атмосфере азота. После завершения реакции 0,5 M разбавленную хлористоводородную кислоту (100 мл) добавляли к реакционному раствору и смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 5/1, объемное соотношение) с получением соединения WX001-6. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,54-8,48 (m, 3H), 6,86-6,74 (m, 3H), 6,02 (s, 2H), 4,80-4,74 (m, 2H), 4,73-4,64 (m, 2H).
[279] Стадия 6. Синтез соединения WX001
+
+
1
6
[280] При комнатной температуре соединение сульфамида (1,52 г, 15,83 ммоль) и соединение WX001-6 (6,5 г, 14,39 ммоль) растворяли в диметилсульфоксиде (100 мл) и затем карбонат калия (5,97 г, 43,17 ммоль) и тригидрат фторида тетрабутиламмония (9,08 г, 28,78 ммоль) добавляли одной порцией. Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 5 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли 0,5 M разбавленную хлористоводородную кислоту (100 мл) и воду (500 мл) и экстрагировали этилацетатом (400 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (500 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 3/1, затем дихлорметан/этилацетат = 5/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX001. MS-ESI масса/заряд: 510,8 [M+H], 512,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, DMSO_d) δ: 9,29 (s, 1H), 8,72 (s, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,21 (s, 2H), 6,91 (d, J=7,8 Гц, 1H), 6,76-6,61 (m, 2H), 6,05 (s, 2H), 4,69-4,62 (m, 2H), 4,62-4,54 (m, 2H).
[281] Вариант осуществления 2: WX002
[282] Путь синтеза
[283] Стадия 1. Синтез соединения WX002-2
1
3
При комнатной температуре соединение WX002-1 (8,00 г, 37,37 ммоль), бис(пинаколато)дибор (11,39 г, 44,84 ммоль) и ацетат калия (7,33 мг, 74,74 ммоль) добавляли к 1,4-диоксану (100,00 мл), затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (5,47 г, 7,47 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. В остаток добавляли воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 20/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX002-2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,92 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,89 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,78 (d, J=8,0 Гц, 1H), 1,30 (s, 12H).
[284] Стадия 2. Синтез соединения WX002-3
+
1
3
[285] При комнатной температуре соединение BB-2 (250,00 мг, 732,75 мкмоль) и соединение WX002-2 (287,04 мг, 1,10 ммоль) добавляли в 1,4-диоксан (15,00 мл), затем добавляли раствор карбоната калия (303,82 мг, 2,20 ммоль) в воде (5,00 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа в атмосфере азота и затем [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (160,85 мг, 219,83 мкмоль) добавляли к смеси. Реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 11 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), экстрагировали этилацетатом (20 мл×1) и органическую фазу отбрасывали. Водную фазу доводили до pH 5-6 с помощью 3 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 10/1-1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX002-3. MS-ESI масса/заряд: 395,9 [M+H].H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 9,01 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,31 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,06 (s, 1H), 5,52 (t, J=6,0 Гц, 1H), 4,44 (t, J=4,4 Гц, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,08-2,98 (m, 2H), 2,58 (br s, 1H), 1,15 (t, J =7,2 Гц, 3H).
[286] Стадия 3. Синтез соединения WX002
4
3
3
2
3
+
+
1
[287] При комнатной температуре гидрид натрия (194,20 мг, 4,86 ммоль, чистота: 60%) добавляли в безводный тетрагидрофуран (20,00 мл), затем добавляли раствор соединения WX002-3 (240,00 мг, 606,89 мкмоль) в безводном N,N-диметилформамиде (1 мл) и раствор 5-бром-2-хлорпиримидина (234,78 мг, 1,21 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (1 мл), реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (30 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной HPLC (подвижная фаза: ацетонитрил/вода; основная система: NHHCO и NH·HO) с получением целевого соединения WX002. MS-ESI масса/заряд: 552,0 [M+H], 554,0 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 9,08 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,43 (s, 2H), 8,04 (d, J=2,0 Гц, 2H), 7,34 (dd, J=8,5, 1,3 Гц, 1H), 6,87 (br s, 1H), 5,58 (s, 1H), 4,74 (t, J=4,4 Гц, 2H), 4,62 (t, J=4,4 Гц, 2H), 3,15-3,02 (m, 2H), 1,21 (t, J=7,3 Гц, 3H).
[288] Ссылаясь на способ синтеза в варианте осуществления 2 (BB-2 на стадии 2 было заменено соответствующей структурой во фрагменте 2) синтезировали варианты осуществления в таблице 1.
Таблица 1. Варианты осуществления 3-7 - структурная формула
[289] Данные LCMS и H ЯМР для каждого варианта осуществления показаны в таблице 2.
Таблица 2. Варианты осуществления 3-7 - данные ЯМР и LCMS
[290] Вариант осуществления 8: WX008
[291] Путь синтеза
[292] Стадия 1. Синтез соединения WX008-2
1
3
[293] При комнатной температуре соединение WX008-1 (3,00 г, 14,92 ммоль), бис(пинаколато)дибор (7,58 г, 29,84 ммоль) и ацетат калия (4,39 г, 44,76 ммоль) добавляли к 1,4-диоксану (30,00 мл), затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (3,28 г, 4,48 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. В остаток добавляли воду (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении и остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/0-100/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX008-2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,38 (dd, J=7,8, 0,8 Гц, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,85 (d, J=7,8 Гц, 1H), 5,97 (s, 2H), 1,35 (s, 12H).
[294] Стадия 2. Синтез соединения WX008-3
+
[295] При комнатной температуре соединение BB-3 (300,00 мг, 844,57 мкмоль), соединение WX008-2 (419,04 мг, 1,69 ммоль) и фосфат калия (537,83 мг, 2,53 ммоль) добавляли к N,N-диметилформамиду (20,00 мл), затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (185,39 мг, 253,37 мкмоль). Реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), экстрагировали этилацетатом (20 мл×1) и органическую фазу отбрасывали. Водную фазу доводили до pH 5-6 с помощью 3 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии на пластине (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX008-3. MS-ESI масса/заряд: 397,0 [M+H].
[296] Стадия 3. Синтез соединения WX008
+
+
1
3
[297] При комнатной температуре гидрид натрия (145,30 мг, 3,63 ммоль, чистота: 60%) добавляли к безводному тетрагидрофурану (20 мл), затем к ним добавляли раствор соединения WX008-3 (180,00 мг, 454,06 мкмоль) в безводном N,N-диметилформамиде (1 мл) и раствор 5-бром-2-хлорпиримидина (175,66 мг, 908,13 мкмоль) в безводном тетрагидрофуране (1 мл). Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (30 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной HPLC (подвижная фаза: ацетонитрил/вода; нейтральная система) с получением целевого соединения WX008. MS-ESI масса/заряд: 552,8 [M+H], 554,8 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,49 (s, 2H), 8,43 (s, 1H), 6,87 (d, J=8,3 Гц, 1H), 6,73-6,68 (m, 2H), 6,03 (s, 2H), 5,61 (t, J=6,2 Гц, 1H), 4,73 (q, J=5,0 Гц, 2H), 4,64 (t, J=4,8 Гц, 2H), 2,96 (q, J=6,8 Гц, 2H), 1,64-1,57 (m, 2H), 0,94 (t, J=7,4 Гц, 3H).
[298] Ссылаясь на способ синтеза в варианте осуществления 8 (BB-3 на стадии 2 было заменено соответствующей структурой во фрагменте 2) синтезировали варианты осуществления в таблице 3.
Таблица 3. Варианты осуществления 9-22 - структурная формула
[299] Данные LCMS и H ЯМР для каждого варианта осуществления показаны в таблице 4.
Таблица 4. Варианты осуществления 9-22 - данные ЯМР и LCMS
[300] Вариант осуществления 23 и вариант осуществления 24: WX023 и WX024
[301] Путь синтеза
[302] Соединение WX021 (500,00 мг, 839,74 мкмоль) разделяли посредством сверхкритической жидкостной хроматографии (условия разделения, колонка: Chiralpak AD-3 50 * 4,6 мм, внутренний диаметр 3 мкм; подвижная фаза: A: диоксид углерода; B: изопропанол (0,05% диэтиламин), 40%; температура колонки: 40°C; длина волны: 220 нм) с получением образца со временем удерживания 1,149 мин. в виде WX023 (ee%: 100%) и образец со временем удерживания 3,199 мин в виде WX024 (ee%: 100%).
[303] Вариант осуществления 25: WX025
[304] Путь синтеза
[305] Стадия 1. Синтез соединения WX025-2
1
3
[306] При комнатной температуре соединение WX025-1 (400,00 мг, 2,03 ммоль), бис(пинаколато)дибор (618,60 мг, 2,44 ммоль), ацетат калия (597,72 мг, 6,09 ммоль) и [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (297,09 мг, 406,03 мкмоль) добавляли в диоксан (20,00 мл), реакционную смесь нагревали до 100°C и перемешивали в течение 15 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, растворитель удаляли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX025-2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,70 (s, 1H), 7,99-7,98 (m, 1H), 7,51 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,37 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,48 (s, 1H), 1,36 (s, 12H).
[307] Стадия 2. Синтез соединения WX025-3
+
[308] При комнатной температуре соединение BB-3 (300,00 мг, 844,57 мкмоль), соединение WX025-2 (309,24 мг, 1,27 ммоль), [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (123,59 мг, 168,91 мкмоль) и карбонат калия (350,18 мг, 2,53 ммоль) добавляли к смеси диоксана (20,00 мл) и воды (2,00 мл) и реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл), доводили до pH 5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток подвергали препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/2, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX025-3. MS-ESI масса/заряд: 393,0 [M+H].
[309] Стадия 3. Синтез соединения WX025
4
3
3
2
3
+
+
1
[310] При комнатной температуре раствор соединения WX025-3 (180,00 мг, 346,76 мкмоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) и раствор 5-бром-2-хлорпиримидина (67,07 мг, 346,76 мкмоль) в тетрагидрофуране (1 мл) добавляли к смеси гидрида натрия (83,08 мг, 2,08 ммоль, чистота: 60%) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) одной порцией. Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (50 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной HPLC (подвижная фаза: ацетонитрил/вода; основная система: NHHCOи NH·HO) с получением целевого соединения WX025. MS-ESI масса/заряд: 549,0 [M+H], 551,0 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,53 (s, 1H), 8,46-8,44 (m, 3H), 8,03 (s, 1H), 7,62 (d, J=9,2 Гц, 1H), 6,98 (d, J=9,2 Гц, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,64 (s, 1H), 4,78-4,76 (m, 2H), 4,67-4,65 (m, 2H), 3,02-3,00 (m, 2H), 1,65-1,63 ( m, 2H), 0,99 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[311] Ссылаясь на способ синтеза в варианте осуществления 25 (BB-3 на стадии 2 было заменено соответствующей структурой во фрагменте 2) синтезировали варианты осуществления в таблице 5.
Таблица 5. Варианты осуществления 26-27 - структурная формула
[312] Данные LCMS и H ЯМР для каждого варианта осуществления показаны в таблице 6.
Таблица 6. Варианты осуществления 26-27 - данные ЯМР и LCMS
[313] Вариант осуществления 28: WX028
[314] Путь синтеза
[315] Стадия 1. Синтез соединения WX028-2
1
3
[316] При комнатной температуре соединение WX028-1 (2,00 г, 10,15 ммоль), бис(пинаколато)дибор (3,87 г, 15,23 ммоль) и ацетат калия (2,99 г, 30,45 ммоль) добавляли к ацетонитрилу (30,00 мл), затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (1,11 г, 1,52 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. В остаток добавляли воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (80 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир) с получением целевого соединения WX028- 2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,99 (s, 1H), 7,72-7,69 (m, 1H), 7,69 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,64-7,61 (m, 1H), 6,80 (d, J=1,2 Гц, 1H), 1,39 (s, 12H).
[317] Стадия 2. Синтез соединения WX028-3
1
3
[318] При комнатной температуре влажный палладий на угле (50,00 мг, чистота: 10%) добавляли к раствору соединения WX028-2 (1,50 г, 6,15 ммоль) в метаноле (30,00 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при комнатной температуре в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм). После завершения реакции реакционную смесь фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения WX028-3. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,32 (d, J=7,0 Гц, 1H), 7,21 (m, 2H), 4,55 (t, J=8,5 Гц, 2H), 3,22 (t, J=8,5 Гц, 2H), 1,34 (s, 12H).
[319] Стадия 3. Синтез соединения WX028-4
+
[320] При комнатной температуре раствор карбоната калия (254,51 мг, 1,84 ммоль) в воде (2,00 мл) и [(бис(1-адамантил)-N-н-бутилфосфин]-2-(2-аминобифенил)]дихлорпалладий (40,00 мг) добавляли к раствору соединения BB-18 (250,00 мг, 613,83 мкмоль) и соединения WX028-3 (226,60 мг, 920,74 мкмоль) в диоксане (20,00 мл). Реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение 16 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. Затем к смеси добавляли воду (15 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (20 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (60 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX028-4. MS-ESI масса/заряд: 447,2 [M+H].
[321] Стадия 4. Синтез соединения WX028
+
+
1
3
[322] При комнатной температуре раствор соединения WX028-4 (220,00 мг, 492,70 мкмоль) в N,N-диметилформамиде и 5-бром-2-хлорпиримидине (190,61 мг, 985,40 мкмоль) добавляли к смеси гидрида натрия (300,00 мг, 7,50 ммоль, чистота: 60%) в безводном тетрагидрофуране (15,00 мл) одной порцией. Реакционную смесь нагревали до 75°C и перемешивали в течение 1,5 часа в атмосфере азота. После завершения реакции раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (20 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (30 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX028. MS-ESI масса/заряд: 603,1 [M+H], 605,1 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,48 (s, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,23 (d, J=7,5 Гц, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,69 (d, J=7,5 Гц, 1H), 6,63 (s, 1H), 4,74-4,70 (m, 2H), 4,66-4,64 (m, 2H), 4,63-4,59 (m, 2H), 3,49-3,44 (m, 4H), 3,25 (t, J=8,5 Гц, 2H), 1,48-1,44 (m, 4H), 0,34 (s, 4H).
[323] Ссылаясь на способ синтеза в варианте осуществления 28 (BB-18 на стадии 3 было заменено соответствующей структурой во фрагменте 2) синтезировали варианты осуществления в таблице 7.
Таблица 7. Варианты осуществления 29-32 - структурная формула
[324] Данные LCMS и H ЯМР для каждого варианта осуществления показаны в таблице 8.
Таблица 8. Варианты осуществления 29-32 - данные ЯМР и LCMS
[325] Вариант осуществления 33: WX033
[326] Путь синтеза
[327] Стадия 1. Синтез соединения WX033-2
1
3
[328] При комнатной температуре соединение WX033-1 (2,50 г, 12,69 ммоль), бис(пинаколато)дибор (6,44 г, 25,38 ммоль) и ацетат калия (3,74 г, 38,07 ммоль) добавляли к N,N-диметилформамиду (20,00 мл), затем добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (1,86 г, 2,54 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли воду (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью колоночной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 30/1-20/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX033-2. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,14 (s, 1H), 7,79 (d, J=8,3 Гц, 1H), 7,64 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,53 (d, J=8,3 Гц, 1H), 6,79 (d, J=1,5 Гц, 1H), 1,39 (s, 12H).
[329] Стадия 2. Синтез соединения WX033-3
1
3
[330] При комнатной температуре соединение WX033-2 (500,00 мг, 2,05 ммоль) растворяли в метаноле (30,00 мл), затем добавляли влажный палладий на угле (200,00 мг, чистота: 10%) и реакционную смесь нагревали до 40°C и перемешивали в течение 48 часов в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм). После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через диатомит и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении с получением целевого соединения WX033-3. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 7,62 (s, 1H), 7,60-7,50 (m, 1H), 6,78-6,77 (m, 1H), 4,60-4,56 (t, J=8,8 Гц, 2H), 3,22-3,17 (t, J=8,8 Гц, 2H), 1,33(s, 12H).
[331] Стадия 3. Синтез соединения WX033-4
+
[332] При комнатной температуре соединение BB-3 (500,00 мг, 703,81 мкмоль), соединение WX033-3 (259,82 мг, неочищенный продукт), карбонат калия (291,82 мг, 2,11 ммоль) и [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (103,00 мг, 140,76 мкмоль) добавляли к смеси диоксана (20,00 мл) и воды (2,00 мл). Реакционную смесь нагревали до 80°C и перемешивали в течение 10 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. К остатку добавляли воду (100 мл), доводили до pH 5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX033-4. MS-ESI масса/заряд: 395,0 [M+H].
[333] Стадия 4. Синтез соединения WX033
+
+
1
3
[334] При комнатной температуре раствор соединения WX033-4 (140,00 мг, 314,28 мкмоль) в N,N-диметилформамиде (2,00 мл) и раствор 5-бром-2-хлорпиримидина (121,58 мг, 628,56 мкмоль) в тетрагидрофуране (1 мл) последовательно добавляли к раствору гидрида натрия (75,43 мг, 1,89 ммоль, чистота: 60%) в безводном тетрагидрофуране (20,00 мл) одной порцией. Реакционную смесь нагревали до 70°C и перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота. После завершения реакции смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (50 мл), доводили до pH 4-5 с помощью 1 M разбавленной хлористоводородной кислоты и экстрагировали этилацетатом (50 мл×3). Органические фазы объединяли, промывали с помощью насыщенного солевого раствора (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении. Остаток отделяли с помощью препаративной хроматографии (элюент: петролейный эфир/этилацетат = 1/1, объемное соотношение) с получением целевого соединения WX033. MS-ESI масса/заряд: 551,1 [M+H], 553,1 [M+H+2]. H ЯМР (400 MГц, CDCl) δ: 8,50 (s, 2H), 8,43 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,01-6,97 (m, 2H), 6,83-6,78 (m, 1H), 5,65 (s, 1H), 4,73-4,71 (m, 2H), 4,65-4,61 (m, 4H), 3,25-3,20 (m, 2H), 2,98-2,93 (m, 2H), 1,60-1,56 (m, 2H), 0,96 (t, J=7,6 Гц, 3H).
[335] Ссылаясь на способ синтеза в варианте осуществления 33 (BB-3 на стадии 3 было заменено фрагментом 2), синтезировали вариант осуществления в таблице 9.
Таблица 9. Вариант осуществления 34 - структурная формула
[336] Данные LCMS и H ЯМР для варианта осуществления показаны в таблице 10.
Таблица 10. Вариант осуществления 34 - данные ЯМР и LCMS
A
[337] Экспериментальный вариант осуществления 1. Тест in vitro антагонистического эффекта в отношении рецептора ET человека
[338] Цель эксперимента.
A
A
A
2+
[339] Антагонистическую активность соединений в отношении эндогенно экспрессируемых рецепторов ET человека в клетках SK-N-MC оценивали с помощью измерения эффекта соединений в отношении изменений цитоплазматического сигнала иона Ca, индуцированного антагонистами рецептора ET человека, с применением способов обнаружения с помощью флуоресценции. Функциональную активность антагонистического эффекта рецептора ET тестировали в Eurofins-Cerep SA в соответствии со стандартными процедурами.
[340] Протокол эксперимента
4
[341] 1. Клетки суспендировали в модифицированном по Дульбекко растворе среды Игла (DMEM, Invitrogen) с добавлением 1% FCSd, затем распределяли в 384-луночный планшет (100 мкл/лунка) при плотности 5×10 клеток/лунка.
[342] 2. Пробенецид в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS, Invitrogen) с добавлением 20 мM 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновой кислоты (Hepes, Invitrogen) (pH 7,4) смешивали с флуоресцентным зондом (Fluo4 NW, Invitrogen), смесь добавляли в каждую лунку, затем уравновешивали клетками при 37°C в течение 60 минут и затем уравновешивали клетками при 22°C в течение 15 минут.
2+
[343] 3. Тестовый планшет помещали в микропланшет-ридер (CellLux, PerkinElmer), добавляли раствор DMSO или буфер HBSS с подходящей концентрацией тестируемого соединения и положительный контроль и 1 нM эндотелин-1 или буфер HBSS (основной контроль) добавляли через 5 минут и затем измеряли изменение интенсивности флуоресценции, пропорциональное концентрации ионов Ca в свободных клеточных лизосомах.
[344] 4. Результаты показаны в виде процента ингибирования ответа контроля на 1 нM эндотелин-1.
50
[345] 5. Стандартным положительным контролем был BQ-123, несколько концентраций тестировали в каждом эксперименте. Данные анализировали с применением Prism для получения кривой концентрация-ответ и рассчитывали значения IC соединений.
A
[346] Экспериментальный вариант осуществления 2. Тест in vitro антагонистических эффектов в отношении рецептора ET человека
[347] Цель эксперимента.
B
B
2+
[348] Антагонистическую активность соединения в отношении рецепторов ET человека, экспрессируемых в трансфицированных клетках CHO, оценивали с помощью измерения эффекта соединения в отношении изменений цитоплазматического сигнала иона Ca, индуцированного антагонистами рецептора ET человека. Функциональную активность антагонистического эффекта рецептора ETB тестировали в Eurofins-Cerep SA в соответствии со стандартными процедурами.
[349] Протокол эксперимента
4
[350] 1. Клетки суспендировали в буфере DMEM (Invitrogen), и затем распределяли в 384-луночный планшет (100 мкл/лунка) при плотности 3×10 клеток/лунка;
[351] 2. Пробенецид в буфере HBSS (Invitrogen) с добавлением 20 мM Hepes (Invitrogen) (pH 7,4) смешивали с флуоресцентным зондом (Fluo4 NW, Invitrogen), смесь добавляли в каждую лунку, затем уравновешивали клетками при 37°C в течение 60 минут и затем уравновешивали клетками при 22°C в течение 15 минут;
2+
[352] 3. Тестовый планшет помещали в микропланшет-ридер (CellLux, PerkinElmer), добавляли раствор DMSO или буфер HBSS с подходящей концентрацией тестируемого соединения и положительный контроль и 0,3 нM эндотелин-1 или буфер HBSS (основной контроль) добавляли через 5 минут и затем измеряли изменение интенсивности флуоресценции, пропорциональное концентрации ионов Ca в свободных клеточных лизосомах.
[353] 4. Результаты показаны в виде процента ингибирования ответа контроля на 0,3 нM эндотелин-1.
50
[354] 5. Стандартным положительным контролем был BQ-788, несколько концентраций тестировали в каждом эксперименте. Данные анализировали с применением Prism для получения кривой концентрация-ответ и рассчитывали значения IC соединений.
A
B
B
Таблица 11. Антагонистическая активность in vitro соединений по настоящему изобретению в отношении рецепторов ET и ET человека и их селективность в отношении ET
[355] Вывод
A
A
B
[356] Все соединения по настоящему изобретению проявляют очень высокую антагонистическую активность в отношении рецепторов ET человека in vitro. Селективность соединений по настоящему изобретению в отношении ET и ET является более чем 10000-кратной.
Экспериментальный вариант осуществления 3. Анализ прегнан-X-рецептора человека (PXR)
[357] Цель эксперимента.
[358] Был оценен эффект соединений в отношении индукции PXR-опосредованной экспрессии CYP3A.
[359] Экспериментальные материалы и устройства
[360] Протокол эксперимента
[361] 1. Клетки DPX2 размораживали в стерильных условиях.
2
[362] 2. Раствор клеток DPX2 распределяли в 96-луночном планшете (100 мкл/лунка) и планшет помещали в инкубатор при 5% CO/37°C на ночь.
[363] 3. Количественную питательную среду размораживали на водяной бане при 37°C. Положительный контроль рифампина размораживали при комнатной температуре. Ряд тестируемых соединений и разведений положительного контроля получали в количественной питательной среде. Клетки осторожно аспирировали из каждой лунки, не нарушая клетки во время аспирации, и среду отбрасывали. 100 мкл каждой концентрации тестируемого соединения переносили в предварительно меченые лунки. Операции для группы положительного контроля и холостой группы были одинаковыми. Планшет помещали обратно в инкубатор на 24 часа выдержки.
[364] 4. Тест в отношении активности фермента:
(1) 7 мкл Luciferin-IPA добавляли к 7 мкл количественной питательной среды, смесь смешивали путем переворачивания и выливали в резервуар с реагентом Luciferin-IPA.
(2) 96-луночный планшет вынимали из инкубатора и среду осторожно аспирировали из каждой лунки. 50 мкл реагента Luciferin-IPA добавляли в каждую лунку и клеточный планшет помещали обратно в инкубатор на 60 минут.
(3) Во время инкубации буфер P450-Glo выливали в реагент для обнаружения люциферина и смесь перемешивали путем переворачивания.
(4) 96-луночный планшет вынимали из инкубатора и 40 мкл раствора из каждой лунки переносили в соответствующий белый 96-луночный планшет и соответствующее положение каждой лунки соответствовало исходному клеточному планшету.
TM
TM
(5) После переноса раствора P450-Glo в параллельный планшет, 10 мл буфера для титрования клеток (буфер CTF) переносили в стерильную коническую пробирку объемом 15 мл с последующим добавлением 5 мкл реагента CellTiter-Fluor и смесь смешивали путем переворачивания.
TM
(6) Использовали многоканальную пипетку для жидкости, 100 мкл реагента CellTiter-Fluor осторожно добавляли в 96-луночный планшет, где клетки первоначально культивировали, и затем клеточный планшет помещали обратно в инкубатор на 60 минут.
(7) В каждую лунку параллельного планшета добавляли 40 мл реагента для обнаружения люциферина/буфера P450-Glo, перемешивали и инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре.
(8) После инкубации с реагентом для обнаружения люциферина в течение 20 минут фотометр (установленное на 1-5 секунд время считывания) применяли для измерения люминесценции каждой лунки белого 96-луночного планшета. Следует использовать относительно высокие настройки усиления.
TM
TM
(9) Буфер для обнаружения люциферазы ONE-Glo добавляли к реагенту для обнаружения ONE-Glo и смесь перемешивали путем переворачивания.
(10) После инкубирования в течение 60 минут при 37°C исходный 96-луночный планшет вынимали из инкубатора. Ридер устанавливали на режим флуоресценции, длину волны возбуждения устанавливали на 380-400 нм, длину волны излучения устанавливали на 505 нм и определяли интенсивность флуоресценции каждой лунки.
TM
(11) Клеточный планшет извлекали из ридера для ферментов и в каждую лунку добавляли 100 мкл реагента для обнаружения ONE-Glo. Смесь смешивали путем встряхивания планшетов и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут.
(12) Ридер для ферментов настраивали на 5 секунд для предварительного встряхивания и на 5 секунд для считывания лунок и интенсивность флуоресценции измеряли в каждой лунке. Должны использоваться настройки усиления (чувствительности) инструмента.
[365] 5. Эффект активации лекарственного средства в отношении PXR отражался кратностью индукции, т.е. кратностью индукции каждой группы = значение активности люциферазы в группе обработки лекарственным средством/значение активности люциферазы в контрольной группе с обработкой растворителем, и кратность индукции использовали для предсказания эффекта индукции в отношении CYP3A4.
50
[366] Положительным контролем был рифампицин, при этом в каждом эксперименте тестировали шесть концентраций. Данные анализировали с применением Prism для получения кривой концентрация-ответ и рассчитывали значение EC соединения.
[367] Результаты экспериментов
[368] Результаты испытания показаны в таблице 12.
Таблица 12. Результаты эффекта индукции соединения по настоящему изобретению в отношении PXR-опосредованной экспрессии CYP3A
[369] Вывод
[370] Соединение WX013 по настоящему изобретению характеризуется относительно слабым эффектом индукции в отношении PXR-опосредованной экспрессии CYP3A, а соединение мацитентан характеризуется относительно сильным эффектом индукции в отношении PXR-опосредованной экспрессии CYP3A. Следовательно, в характеристическом эксперименте PXR-опосредованной индукции экспрессии CYP3A, WX013 превосходит мацитентан.
[371] Экспериментальный вариант осуществления 4. Анализ ингибирования изозимов печеночного микросомального цитохрома P450 человека
[372] Цель эксперимента
[373] Целью данного анализа была оценка ингибирующей активности образцов в отношении изозимов печеночного микросомального цитохрома P450 человека (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 и CYP3A4) с применением субстрата зонда 5-в-1 изозима CYP.
[374] Протокол эксперимента
50
[375] Смешанные микросомы печени человека (HLM) приобретали у Corning Inc. (Steuben, Нью Йорк, США) и хранили при температуре ниже -80℃ перед применением. Рабочий раствор тестируемого соединения, который разбавляли до серийных концентраций, добавляли в инкубационную систему, содержащую микросомы печени человека, субстраты зондов и кофакторы циркулирующей системы, и в качестве контроля активности фермента использовали контроль, содержащий растворитель без тестируемого соединения (100%). Концентрацию метаболита, продуцируемого субстратом зонда в образце, определяли способом жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS). Нелинейный регрессионный анализ проводили по средней процентной активности в зависимости от концентрации субъектов с использованием SigmaPlot (V.11). Значение IC рассчитывали с помощью трехпараметрического или четырехпараметрического обратно-логарифмического уравнения.
[376] Результаты экспериментов
[377] Результаты теста показаны в таблице 13.
Таблица 13. Результаты ингибирования соединений по настоящему изобретению в отношении изозимов печеночного микросомального цитохрома P450 человека
[378] Вывод
[379] Соединения WX005, WX013 и WX025 по настоящему изобретению характеризуются очень слабыми ингибирующими эффектами в отношении пяти основных изозимов CYP. Мацитентан характеризуется слабыми ингибирующими эффектами в отношении четырех основных изозимов CYP и умеренными ингибирующими эффектами в отношении изозимов CYP2C9. Следовательно, WX005, WX013 и WX025 превосходили мацитентан в характеристическом эксперименте в отношении ингибирования пяти основных изозимов печеночного микросомального цитокина P450 человека.
[380] Экспериментальный вариант осуществления 5. Тест на ингибирование соединения в отношении насосов для переноса желчных кислот (BSEP)
[381] Цель эксперимента
[382] В данном эксперименте оценивается, оказывает ли тестируемое соединение ингибирующий эффект во время процесса переноса насосом для переноса желчной соли (BSEP) с применением LC/MS/MS для определения способности абсорбции насоса переноса желчной соли (BSEP) к субстрату таурина TCA.
[383] Экспериментальные материалы
[384] Получение раствора
[385] 1. Буфер A:
3
3
2
50 мМ[386]  HEPES с pH 7,4, 100 мM KNO, 10 мM Mg(NO), сахароза 50 мM.
[387] 2. Буфер B:
3
3
2
[388] 10 мM TRIS с pH 7,4, 100 мM KNO, 10 мM Mg(NO), сахароза 50 мM.
[389] 3. Буфер ATP:
[390] полученный с буфером A, 8,16 мM ATP и 4,08 мкM таурохолевой кислоты содержались в 12 мл буфера A.
[391] 4. Буфер AMP:
[392] полученный с буфером A, 8,16 мM AMP, 4,08 мкM таурохолевой кислоты и 12 мл буфера A содержались в буфере A.
[393] 5. Раствор везикул BSEP-Hi5-VT:
[394] раствор, содержащий 5 мг/мл BSEP-Hi5-VT, получали с буфером A.
[395] Получение образца
[396] 1. Соединение разбавляли до 100 мM с помощью DMSO; затем последовательно разбавляли в 3 раза для 11-точечного разведения; при этом минимальная концентрация составляла 0,169 мкM.
[397] 2. Положительный эталонный глибурид разбавляли до 20 мM с помощью DMSO; затем последовательно разбавляли в 2 раза для 11-точечного разведения; минимальная концентрация составляла 19,5 мкM.
[398] Протокол эксперимента
[399] 1. 0,3 мкл раствора соединения в DMSO или разбавленный раствор DMSO переносили в соответствующие лунки планшета с соединением, используя ECHO соответственно.
[400] 2. 14,7 мкл буфера ATP добавляли к соединению и соответствующим лункам с нулевым процентным эффектом (ZPE) соответственно.
[401] 3. 14,7 мкл буфера AMP добавляли в соответствующие лунки со 100% эффектом (HPE) соответственно.
[402] 4. Планшет встряхивали в течение 10 минут при 25°C.
[403] 5. 15 мкл раствора везикул BSEP-Hl5-VT добавляли во все лунки соответственно и планшет встряхивали в течение еще 40 минут при 25°C.
[404] 6. 5 мкл 0,5 M раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) добавляли сразу же во все лунки с последующим добавлением 65 мкл буфера B и всю реакцию завершали.
[405] 7. 95 мкл жидкости переносили на фильтровальный планшет с планшета с соединением в конце реакции с использованием прибора.
[406] 8. После помещения планшета для получения жидкости под фильтровальный планшет жидкость удаляли с применением центрифуги и полученную из планшета жидкость отбрасывали.
[407] 9. 90 мкл буфера B добавляли в фильтровальный планшет. После помещения планшета для получения жидкости под фильтровальный планшет жидкость удаляли с применением центрифуги и полученную из планшета жидкость отбрасывали и фильтровальный планшет промывали всего три раза.
[408] 10. Фильтровальный планшет высушивали в течение ночи.
[409] 11. На следующий день 80 мкл раствора метанола/воды (80/20, объемное соотношение) добавляли в фильтровальный планшет.
[410] 12. Планшет встряхивали в течение 15 минут после того, как фильтровальный планшет был присоединен к мембране.
[411] 13. Новый планшет для получения жидкости помещали под фильтровальный планшет и фильтровальный планшет центрифугировали в течение 5 минут и все жидкости в фильтровальном планшете фильтровали в планшет для получения.
[412] 14. 15 мкл раствора внутреннего стандарта добавляли в каждую лунку планшета для получения жидкости и планшет герметизировали мембраной.
[413] 15. Содержание таурохолевой кислоты в планшете для получения определяли с применением LC/MS/MS.
50
[414] В каждом эксперименте тестировали несколько концентраций. Данные анализировали с применением Prism для получения кривой концентрация-ответ и рассчитывали значения IC соединений.
[415] Результаты экспериментов.
[416] Экспериментальные результаты показаны в таблице 14.
Таблица 14. Ингибирующий эффект соединения по настоящему изобретению в отношении насосов для переноса желчных кислот (BSEP)
[417] Вывод
[418] Ингибирующий эффект соединения WX013 по настоящему изобретению в отношении насосов для переноса желчных кислот (BSEP) был чрезвычайно слабым, но ингибирующий эффект мацитентана был сильным. Следовательно, ингибирующий эффект WX013 в отношении насосов для переноса желчных кислот был намного слабее, чем у макитентана, что значительно снижало риск развития гепатотоксичности.
[419] Экспериментальный вариант осуществления 6. Оценка фармакокинетики соединений на крысах
[420] Цель эксперимента
[421] В данном исследовании в качестве тестируемых животных были отобраны самцы крыс SD и концентрация лекарственного средства в плазме крови крыс в различные моменты времени посредством внутривенной инъекции или перорального введения в желудок тестируемого соединения была количественно измерена с применением способа LC/MS/MS для оценки фармакокинетической характеристики тестируемых соединений у крыс.
[422] Экспериментальные материалы
[423] Крысы Sprague Dawley (SD) (самцы, 200-300 г, возраста 7-10 недель, Beijing Viton Lihua или Shanghai Slake).
[424] Протокол эксперимента
TM
[425] Прозрачный раствор тестируемого соединения вводили крысам SD через хвостовую вену (голодание в течение ночи) или вводили перорально через желудочный зонд (голодание в течение ночи). Для внутривенного введения 200 мкл крови из яремной вены собирали путем пункции вены в момент времени 0 часов (до введения дозы) и в моменты времени 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы, которую затем помещали в антикоагулянтную пробирку с добавлением EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Смесь в антикоагулянтной пробирке перемешивали вихревым способом для тщательного перемешивания при 4°C и затем центрифугировали при 13000 об./мин. в течение 10 минут для сбора плазмы крови. Для перорального введения через желудочный зонд 200 мкл крови из яремной вены собирали путем пункции вены в момент времени 0 часов (до введения дозы) и в моменты времени 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы, которую затем помещали в антикоагулянтную пробирку с добавлением EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Смесь в антикоагулянтной пробирке перемешивали вихревым способом для тщательного перемешивания и затем центрифугировали при 13000 об./мин. в течение 10 минут для сбора плазмы крови. Концентрацию лекарственного средства в плазме крови измеряли с помощью метода LC/MS/MS и соответствующие фармакокинетические параметры рассчитывали с применением программного обеспечения для фармакокинетики WinNonlin версии 6.3 (Pharsight, Paul View, Калифорния) в линейном логарифмическом трапециевидном способе без пространственной модели.
[426] Результаты экспериментов
[427] Экспериментальные результаты показаны в таблице 15.
Таблица 15. Фармакокинетические параметры соединений по настоящему изобретению для крыс
[428] Вывод
[429] Соединения WX001 и WX013 по настоящему изобретению характеризуются низкой скоростью выведения из плазмы крови (<5 мл/мин/кг) и высокой пероральной биодоступностью (>70%) у крыс.
[430] Экспериментальный вариант осуществления 7. Оценка фармакокинетики соединений у собак породы бигль
[431] Цель эксперимента
[432] В данном исследовании в качестве тестируемых животных были отобраны самцы породы бигль и концентрация лекарственного средства в плазме крови собак породы бигль в различные моменты времени посредством внутривенной инъекции или пероральной перфузии для введения в желудок тестируемого соединения была количественно измерена с применением способа LC/MS/MS для оценки фармакокинетической характеристики тестируемых соединений у собак породы бигль.
[433] Экспериментальные материалы
[434] Собака породы бигль (самец, 6-15 кг, возрастом более 6 месяцев, Beijing Marshall Biotechnology Co., Ltd.).
[435] Протокол эксперимента
TM
[436] Прозрачный раствор тестируемого соединения вводили внутривенно собакам породы бигль (голодание в течение ночи) или вводили собакам породы бигль перорально через желудочный зонд (голодание в течение ночи). Для внутривенного введения 500 мкл крови собирали из периферических сосудов в момент времени 0 часов (до введения дозы) и в моменты времени 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы, которую затем помещали в антикоагулянтную пробирку с добавлением EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Для перорального введения в желудок 500 мкл крови собирали из периферических сосудов в момент времени 0 часов (до введения дозы) и в моменты времени 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 и 24 часа после введения дозы, которую затем помещали в антикоагулянтную пробирку с добавлением EDTA-K2 Смесь в антикоагулянтной пробирке перемешивали вихревым способом для тщательного перемешивания и затем центрифугировали при 13000 об./мин. в течение 10 минут для сбора плазмы крови. Концентрацию лекарственного средства в плазме крови измеряли с помощью метода LC/MS/MS и соответствующие фармакокинетические параметры рассчитывали с применением программного обеспечения для фармакокинетики WinNonlin версии 6.3 (Pharsight, Paul View, Калифорния) в линейном логарифмическом трапециевидном способе без пространственной модели.
[437] Результаты экспериментов
[438] Экспериментальные результаты показаны в таблице 16.
Таблица 16. Фармакокинетические параметры соединений по настоящему изобретению для собак породы бигль
[439] Вывод
[440] Соединения WX001 и WX013 по настоящему изобретению характеризуются низкой скоростью выведения из плазмы крови (<5 мл/мин/кг) и высокой пероральной биодоступностью (>50%) у собак породы бигль.