Медицинские наночастицы и наноконтейнеры в диагностике и векторной терапии заболеваний ЦНС

МЕДИЦИНСКИЕ НАНОБМОТЕХНОЛОГИМ

Медицинские наночастицы и наноконтейнеры в диагностике и векторной терапии заболеваний ЦНС

В.П.Чехонин12, В.П.Баклаушев12, Д.А.Кузнецов1,3

1Российский государственный медицинский университет им. Н.И.Пирогова, кафедра медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета, Москва (зав. кафедрой - акад. РАМН, проф. В.П.Чехонин);

2Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им. В.П.Сербского,

отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии, Москва

(руководитель отдела - акад. РАМН, проф. В.П.Чехонин);

3Институт химической физики им. Н.Н.Семенова РАН, Москва

В работе подводится итог многолетних исследований по разработке адресных наночастиц и наноконтейнеров для доставки диагностических агентов и лекарств через гематоэнцефалический барьер. Анализируются результаты пре-клинических исследований мицеллярных, иммунолипосомальных наноконтейнеров, а также медицинских наночастиц на основе порфириновых аддуктов фуллерена С60. Испытания на культурах клеток и эксперименты на животных с индуцированной низкодифференцированной глиомой показали высокую селективность иммунолипосомальных наноконтейнеров на основе моноклональных антител к глиофибриллярному кислому белку и коннексину-43 по отношению к клеткам-мишеням в патологическом очаге. Возможность флюоресцентной и магнитно-резонансной визуализации периглиомной зоны, в которой наблюдается наиболее интенсивная инвазия глиомных клеток, позволяет рекомендовать разработанные иммунолипосомальные наноконтейнеры для внедрения в практическую нейрохирургию как для диагностики истинных границ глиомы, так и для доставки лекарственных препаратов в зону глиомной инвазии. Ключевые слова: адресная доставка, наноконтейнеры, медицинские наночастицы, моноклональные антитела, глиома, GFAP, Cx43

Medicinal nanoparticles and nanocontainers in diagnostics and targeted therapy of brain pathology

V.P.Chekhonin12, V.P.Baklaushev12, D.A.Kuznetsov13

1N.I.Pirogov Russian State Medical University,

Department of Medical Nanobiotechnologies of Medical and Biological Faculty, Moscow

(Head of the Department - Acad. of RAMS, Prof. V.P.Chekhonin);

2V.P.Serbskiy State Research Center for Social and Forensic Psychiatry,

Department of Fundamental and Applied Neurobiology, Moscow

(Head of the Department - Acad. of RSMU, Prof. V.P.Chekhonin);

3N.N.Semenov Institute of Chemical Physics, Russian Academy of Sciences, Moscow

The authors summarise the data of many years' investigations of medicinal nanoparticles and nanocontainers for targeted delivery of diagnostic and therapeutic agents across blood brain barrier. Presented are the results of preclinical trials of micellar and immunoliposomal nanocontainers as well as porphyrin-fullerene C60 based medicinal nanoparticles. The preclinical trials revealed a high target-cell specificity of immunoliposomal nanocontainers carrying monoclonal antibodies to glial fibrillar acidic protein and connexin-43 performed both with cell cultures and animals with experimental C6 glioma. The possibility of fluorescent or MRI visualization allow to conclude that liposomal based nanocontainers with antibodies to connexin-43 and GFAP can be used in neurosurgery both for real glioma borders diagnosis and targeted delivery of anticancer drugs in the zone of active glioma invasion.

Key words: targeted delivery, nanocontainers, medicinal nanoparticles, monoclonal antibodies, glioma, GFAP, Cx43

Разработка новых нейропсихофармакологических препаратов существенно ограничена двумя фундаментальными проблемами: преодолением гематоэнцефаличе-ского барьера и проблемой селективности действующего агента по отношению к клеткам-мишеням в центральной нервной системе [1, 2]. Для решения этих проблем на сегодняшнем этапе развития нейропсихофармакологии особенно перспективным представляется применение нанотехнологических подходов, позволяющих создавать многофункциональные высокоселективные наносистемы, способные доставлять транспортируемый агент сначала в церебральные микрососуды, а затем в интерстициальную жидкость и непосредственно к клеткам-мишеням в головном мозге [3, 4].

Чаще всего наносистемы представляют собой биологически активные вещества, связанные с полимерными на-ночастицами или заключенные в наноконтейнеры, образованные полимерами или низкомолекулярными соединениями. Такие системы повышают растворимость и стабильность активных агентов и обеспечивают их адресную доставку к органам и клеткам-мишеням [4-8]. Некоторые из таких систем уже представлены на фармацевтическом рынке или проходят клинические испытания [9, 10]. Они явились первыми примерами наночастиц-контейнеров и фармакофоров, нашедших практическое применение в медицине - в тех ее областях, которые теперь стали называть наномедициной, нанофармакологией и нанофар-мацией [11].

Мицеллярные наноконтейнеры

Мицеллярные наносистемы в настоящее время достаточно широко применяются для разработки адресных препаратов, способных преодолевать гистогематические барьеры. Некоторые из них, в частности, цитостатические препараты в составе мицеллярных контейнерных лекарственных форм на основе плюроников, успешно прошли клинические испытания и применяются в комбинированной противоопухолевой терапии [12].

Эксперименты, проведенные нами, показали высокую эффективность мицеллярной наноконтейнерной системы для усиления физиологического действия нейролептического препарата [6, 13]. В качестве наноконтейнеров использовались мицеллы, самоорганизующиеся в растворах полимера, имеющего фирменное название «Плюроник Р-85». Это линейный блок-сополимер, состоящий из средней гидрофобной части (полипропиленгликоль), с обоих концов которой присоединены гидрофильные фрагменты (полиэтиленгликоль). В водных растворах молекулы этого вещества самопроизвольно образуют агрегаты, называемые мицеллами, которые имеют гидрофобные централь-

Для корреспонденции:

Баклаушев Владимир Павлович, доцент кафедры медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова, старший научный сотрудник отдела фундаментальной и прикладной нейробиологии Государственного научного центра социальной и судебной психиатрии им. В.П.Сербского Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Телефон: (495)434-1311 E-mail: serpoff@gmail.com

Статья поступила 13.09.2010 г., принята к печати 23.06.2010 г.

ные части и гидрофильные внешние оболочки. Сам по себе этот плюроник в биологическом отношении абсолютно инертен и разрешен для фармакологического применения.

Для придания мицеллярным наноконтейнерам биологической специфичности в мицеллообразующий полимер добавлялось определенное количество плюроника, конъю-гированного с векторными антителами к глиофибриллярно-му кислому протеину (йРДР). При этом образуются смешанные мицеллы, к внешней оболочке которых прикреплены векторные молекулы фрагментов антител. Полная на-ноконтейнерная система образуется после солюбилизации галоперидола в растворе таких мицелл.

Биологическая активность препарата уже после простой солюбилизации в растворе плюроника возрастала пятикратно. Можно предположить, что причиной этого не является специфическое направленно-транспортное действие мицеллярной системы. В данном случае более вероятен неспецифичный общетоксический эффект.

Примерно таково же действие и галоперидола, солюби-лизованного в растворах смесей модифицированного плюроника (с окисленными до альдегидов терминальными группами) с немодифицированным полимером. Не меняет величины этого эффекта и введение в систему свободного инсулина. Однако ковалентное присоединение инсулина к модифицированному плюронику (подобно векторным антителам) дополнительно усиливает токсическое действие галоперидола, содержащегося в мицеллах. По-видимому, в этом случае проявляется взаимодействие инсулина с его рецепторами, которые имеются на клетках почти всех типов (в том числе и в ЦНС). Но по этой же причине инсулин не может служить вектором, селективно и специфично нацеливающим транспортную систему на преодоление ГЭБ. Последнее представлялось более вероятным для конъюгатов плюроника с антителами к нейроспецифиче-ским белкам. И действительно, эффект практически 100-кратного снижения величины Ю95 наблюдался при использовании мицеллярных систем доставки галоперидола векторного типа (конъюгаты плюроника с анти-йРДР антителами) по сравнению с аналогичными значениями, полученными для простой солюбилизации этого нейролептика в мицеллах плюроника.

В настоящее время исследования по дизайну адресных мицеллярных наносистем продолжаются в рамках совместного проекта между кафедрой и отделом медицинских нанобиотехнологий РГМУ (руководитель НИР - академик РАМН В.П.Чехонин) и Центром доставки лекарств и наномедицины Медицинского центра университета Небраски в Омахе, США. С американской стороны этот проект возглавляет директор Центра, профессор фармацевтического факультета и Института исследования рака в Медицинском центре университета Небраски, председатель экспертного совета Национального института здоровья США по биоматериалам и биоповерхностям (ВМВ1) профессор А.В.Кабанов.

Липосомальные наноконтейнеры

Наиболее разработанными контейнерами для доставки лекарственных препаратов и генетического материала через гематоэнцефалический барьер являются липосомы [14-16].

Это везикулярные структуры, состоящие из униламелляр-ных или мультиламеллярных липидных бислоев, окружающих внутренние водные компартменты (их размеры составляют от 50 до 200 нанометров). Главными молекулярными компонентами липосом являются липиды, которые при эмульгировании в водной среде образуют систему жировых пузырьков, ограниченных внешней бислойной липид-ной мембраной.

Современные методы позволяют приготовить липосомы, модифицированные инертными гидрофильными полимерами (например - ПЭГ 2000), образующими экранирующую «щетину», длиной 10-20 нм. Такие пэгилированные липосомы становятся «невидимками» (stealth-liposomes) для ретикулоэндо-телиальной системы млекопитающих; они в гораздо меньшей степени, чем непэгилированные липосомы, подвергаются опсонизации, хуже распознаются макрофагами печени и селезенки и поэтому дольше циркулируют в кровотоке (период полувыведения составляет 15 и более часов) [17]. Как правило, заключение в липосомы значительно продлевает среднее время пребывания лекарственного средства в кровотоке, уменьшает выраженность его побочных эффектов и повышает терапевтическую эффективность.

Векторные иммунолипосомы на основе антител

к нейроспецифическим белкам

В наших экспериментах с липосомами в качестве векторных молекул применялись моноклональные антитела к нейроспецифическим белкам (GFAP, MBP, NSE). Эти эксперименты проводились с пэгилированными иммунолипосомами, в которых с одним наноконтейнером размером 70-120 нм было конъюгировано примерно 90 молекул моноклональных антител. Факт связывания липосом с клетками нервной ткани (астроциты, шванновские клетки, ольфакторные ней-роэпителиальные клетки) определялся по появлению специфического красного свечения, обусловленного липидным флюоресцентным индикатором Dil, введенным в состав ли-посомных мембран (рис. 1).

Это свечение появлялось уже при минимальной применявшейся дозе липосом и при самой короткой их инкубации с клеточной культурой, что доказывало адекватность векторной функции приготовленных наноконструкций по их связыванию с антигенами клеток нервной ткани, в частности, с астроцитарным GFAP [1-6, 18-20].

Иммунолипосомы на основе антител к коннексину-43

В качестве векторных антител для адресной доставки иммунолипосом мы испытывали также моноклональные антитела к экстраклеточному фрагменту коннексина-43. Эти антитела, полученные в результате иммунизации мышей рекомбинантным экстраклеточным фрагментом Е2 Сх43, хорошо визуализируют живые Сх43-позитивные клетки глиомы и реактивные астроциты и астробласты [21]. Последний эксперимент проводили с разработанной нами бинарной иммунолипосомальной системой, включающей биотинилированные антитела к Е2 Cx43 и липосомы со стрептавидином (SAv), содержащие красную флюоресцентную метку Dil C18 [22].

Полученные пэгилированные липосомы характеризовались по диаметру и концентрациям суммарных липидов и

белка (в образце липосом с пришитым стрептавидином). Диаметр липосом, определенный методом фотодинамического рассеивания, находился в пределах 80-100 нм. Средняя концентрация липидов в полученных липосомаль-ных препаратах составляла 20,5 ± 1,1 мг/мл, концентрация стрептавидина в готовой эмульсии соответствующих липосом была равна 0,4 мг/мл.

Эксперимент с двухкомпонентной системой направленного транспорта показал специфическую флюоресценцию Dil в препаратах глиомных клеток, последовательно инкубированных с биотинилированными антителами к Е2 Сх43 и липосомами со стрептавидином и флюоресцентной меткой (рис. 2А). Интенсивная красная флюоресценция Сх43-положительных клеток глиомы С6 свидетельствовала о селективной адгезии векторных липосом с SAv и Dil на мембранах этих клеток.

Прединкубация клеток с избытком небиотинилирован-ных антител к Сх43 почти полностью блокировала появление флюоресценции после добавления биотинилированных антител и липосом с SAv (рис. 2В). В контрольных лунках с неспецифическими биотинилированными антителами и векторными липосомами с SAv (рис. 2C), также как при применении невекторных липосом (рис. 2D), специфической флюоресценции не наблюдалось ни в одной из трех серий эксперимента.

Разработанная нами двухкомпонентная система на основе биотинилированных антител к экстраклеточному фрагменту Сх43 и пэгилированных липосом со стрептавидином показала высокую селективность по отношению к Сх43-положительным клеткам глиомы in vitro. Полученные результаты дают основания предполагать, что эта бинарная система может применяться для направленного транспорта диагностических и терапевтических агентов к Сх43-поло-жительным клеткам глиомы in vivo.

Адресная доставка иммунолипосом в системах in vivo

Визуализацию иммунолипосомальных контейнеров после внутривенного введения крысам с индуцированной внутри-мозговой глиомой выполняли двумя методами: с помощью сканирующей лазерной конфокальной микроскопии (совместно с Е.Б.Цитриным, НИИ биологии развития РАН) и с помощью МРТ (совместно с ЦМТС МГУ им. М.В.Ломоносова, руководитель - д.ф-м.н., проф. Ю.А.Пирогов). В качестве маркеров иммунолипосомальных наноконтейнеров применяли устойчивый в биологических системах липофиль-ный флюорофор Dil C18 и хорошо известный Т1-контраст Gd-DTPA для иммунофлюоресценции и МРТ соответственно. В роли векторных молекул выступали уже описанные выше моноклональные антитела к GFAP и антитела к экстраклеточному фрагменту коннексина-43. Спустя 48 ч после их внутривенного введения в бедренную вену часть животных усыпляли, извлекали мозг, готовили срезы и исследовали флюоресценцию в области глиомы и периту-морального вала. Второй группе крыс выполняли прижизненную МРТ.

Флюоресцентный анализ срезов мозга после внутривенного введения иммунолипосом крысам с экспериментальной глиомой выявил их накопление в области перитумо-рального астроглиального вала (рис. 3А, B). Точно так же и

Рис. 1. Визуализация шванновских клеток с помощью векторных липосом.

А, В - Dil-пэгилированные иммунолипосомы с антителами к MBP в течение 3(А) и 6(В) ч; С, D - неспецифические иммунолипосомы (х400).

на МРТ было обнаружено усиление Т1-сигнала в перитумо-ральной области, в месте максимальной экспрессии антигенов-мишеней (рис. 3 C, D).

Таким образом, в результате проведенных исследований была впервые создана и испытана в экспериментах in vivo иммунолипосомальная система адресной доставки в пери-туморальную зону внутримозговой глиомы на основе моно-клональных антител к Сх43 и GFAP. Эта система может применяться для доставки диагностических зондов с целью определения истинных размеров глиомы, а также доставки

Рис. 2. Накопление векторных липосом на мембранах живых Сх43-положительных клеток глиомы С6.

Д - биотинилированные апй-Е2 Сх43 антитела + липосомы со стрептавидином; В - конкурентное ингибирование связывания биотинилированных антител клетками-мишенями путем предин-кубации с избытком небиотинилированных антител к Е2 Сх43; С - биотинилированные неспецифические иммуноглобулины мыши + липосомы со стрептавидином; й - биотинилированные моноклональные антитела к Е2 Сх43 + липосомы без стрептави-дина (х630).

цитостатических препаратов и генотерапевтического материала в наиболее «горячие» участки инвазии в перитумо-ральной зоне.

Порфириновые аддукты фуллерена С60

Одним из самых «молодых» научных направлений кафедры медицинских нанобиотехнологий МБФ РГМУ является создание и изучение углеродных катионообменных наноча-стиц медицинского назначения [23]. Исследования углеродных нанокатионитов являются логическим продолжением нового научного направления, названного «спин-селективная биохимия», основы которого были заложены в Институте химической физики им. Н.Н.Семенова академиком РАН А.Л.Бучаченко в результате обнаружения магнитных изотопных эффектов в биологических системах [24]. В частности, им было впервые показано, что магнитный изотоп магния 25Mg, в отличие от наиболее распространенного немагнитного изотопа 24Mg, является специфическим гиперактиватором большинства Мд2+-зависимых реакций синтеза АТФ в клетке. Примечательно, что гиперактивация энергетического метаболизма ионами 25Мд2+ требует незначительного количества этих ионов и имеет место даже при отсутствии кислорода (глубокая тканевая гипоксия и ишемия). Следует отметить, что тканевая гипоксия и последующая за ней ишемия являются центральными патогенетическими механизмами в развитии двух наиболее значимых в медико-социальном отношении заболеваний: инфаркта миокарда и ишемического инсульта. Таким образом, актуальность создания адресного индуктора синтеза АТФ в условиях гипоксии огромна.

В условиях глубокой тканевой гипоксии запасным путем регенерации АТФ является фосфорилирование АДФ, ката-

Рис. 3. Визуализация иммунолипосомальных наноконтейнеров, доставленных в перитуморальную зону после внутривенного введения их крысам с экспериментальной глиомой с флюоресцентной (А,В) и парамагнитной - Э^РТРА (С,Р) метками.

А - иммунолипосомы на основе антител к ЭРДР, визуализированные с помощью сканирующей лазерной конфокальной микроскопии; В - невекторные иммунолипосомы. Бар = 50 мкм; С - визуализация глиомы с помощью МРТ после внутривенного введения Т1-контраста Э^йТРА; й - визуализация перитуморальной зоны с помощью МРТ после внутривенного введения иммунолипосом с Э^йТРА.

лизируемое ферментами семейства киназ, в частности, креатинкиназой. И субстратный, и окислительный пути фосфорилирования являются Мд2+-зависимыми процессами и поэтому могут быть ускорены вплоть до 2,5 раз уль-трамикроколичествами 25Мд2+. Простое «эндоосмотическое давление» вызывает замещение одного изотопа Мд другим (25Мд, также как 24Мд и 26Мд - стабильные изотопы) в активном сайте креатинкиназы, наиболее эффективном участнике резервного синтеза АТФ, что приводит к значительной интенсификации образования АТФ в очаге гипоксии.

Специально для адресной доставки 25Мд2+ в очаги гипоксии была осуществлена сначала теоретическая разработка, а затем синтез и практические испытания нанокатиони-та на основе фуллерена С60. В результате этих исследований создан новый класс медицинских наночастиц (нанока-тионитов), представленных порфириновыми аддуктами фуллерена С60, структура, методы синтеза и способы применения которых в фармакологии и биотехнологическом получении новых лекарств защищены шестью международными патентами в США, Германии (ЕС) и КНР.

Один из представителей этого класса - новый лекарственный препарат, обладающий катионитными свойствами, является моноаддуктом железосодержащего порфи-рина с классическим бакминстерфуллереном - бакминс-терфуллерен(С60)-2-(бутадиен-1-ил)-тетра-(о-у-аминобу-тирил-о-фталил)-ферропорфирином [25]. Основываясь на методике синтеза, его назвали «Порфиллерен МС16» или РМС16. Этот препарат представляет собой низкотоксичные (ЛД50 = 896 мг/кг, крысы, в/в), амфифильные (растворимость в воде 430 мг/мл, pH 7,40), способные к образованию кластеров мембранотропные наночастицы размером 1,8 нм. В 2009 г. РМС16 прошел полный цикл доклинических испытаний и разрешен к использованию в КНР в ветеринарной практике как средство, значительно понижающее зависимость энергетического метаболизма в клетках миокарда от содержания в них молекулярного кислорода.

Помимо размера, сопоставимого с размером молекулы АТФ, наночастица РМС16 удовлетворяет двум важным фармакологическим требованиям. Во-первых, ее структура позволяет осуществлять так называемое «умное высвобождение» магния in vivo, то есть высвобождение магния в ответ на тканевой ацидоз, вызванный гипоксией. Во-вторых, порфириновый домен РМС16 определяет тканевую и субклеточную селективность в результате взаимодействия с порфириновыми рецепторами, локализованными на мембранах митохондрий кардиомиоцитов (Kano K., 2004), лимфобластов и нейронов. Это позволило осуществить направленную доставку наночастиц в митохондрии этих клеток (Buchachenko A.L., Kuznetsov D.A., 2007).

Благодаря способности обеспечивать адресную доставку катионов парамагнитного изотопа 25Мд к местам локализации тканеспецифических митохондриальных порфиринс-вязывающих белков, РМС16 является первым и пока единственным фармакологическим агентом, позволяющим избирательно использовать магнитный изотопный эффект 25Мд для гиперактивации синтеза нуклеозидтрифосфатов (АТФ, ГТФ) в страдающих от гипоксии миокардиоцитах, нейронах, лимфоцитах и лимфобластах.

Заключение

Успешные зарубежные и отечественные исследования, проведенные в последние десятилетия, позволили разработать многочисленные инновационные подходы к адресной доставке лекарственных средств в ЦНС. Некоторые из них имеют хорошие клинические перспективы. Тем не менее, даже само разнообразие этих подходов свидетельствует о той сложности, которая характерна для проблемы транспорта терапевтического или визуализирующего агента через ГЭБ. Стало очевидным, что по-настоящему эффективными могут оказаться только комплексные подходы. Наиболее перспективным в этом плане представляется создание наноконтейнерных систем, конъюгированных с иммунохимическими, биохимическими и/или другими молекулярно-биологическими векторами.

Преклинические испытания иммунолипосомальных наноконтейнерных систем на основе моноклональных антител к GFAP и к экстраклеточному фрагменту коннекси-на-43 показали их высокую селективность по отношению к Сх43-позитивным клеткам глиомы и периглиомного пространства как в экспериментах in vitro, так и in vivo на животных с индуцированной глиомой. Возможность флюоресцентной и магнитно-резонансной визуализации наиболее инвазивных клеток периглиомного пространства дает основания для перевода исследований по иммунолипосо-мальным наноконтейнерным системам в стадию клинических испытаний.

Авторы искренне признательны к.м.н. Г.М.Юсубалиевой, д.м.н. О.И.Гуриной, к.б.н. Н.Ф.Гриненко, д.б.н., проф. И.В.Викторову, к.б.н. И.П.Лазаренко, К.П.Ионовой (Отдел фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГУ ГНЦ ССП им. В.П.Сербского) за помощь на различных этапах исследований; д.х.н. Ю.С.Скоблову, С.Ю.Третьяковой, В.И.Вахниной (Радиоизотопный блок Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН) за помощь в работе с радиоактивными изотопами; к.б.н. Р.И.Дмитриеву (Группа мембранных биоэнергетических систем Института биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН) за помощь в получении рекомби-нантного экстраклеточного фрагмента Cx43 и доктору Е.Б. Цитрину (Группа оптических исследований Института биологии развития им. Н.К.Кольцова РАН) за неоценимую помощь в выполнении сканирующей лазерной конфокальной микроскопии.

Литература

1. Чехонин В.П., Дмитриева Т.Б., Жирков Ю.А. Направленная доставка лекарственных средств в мозг // Вестн. РАМН. - 2006. - № 8. - С.30-37.

2. Чехонин В.П., Гурина О.И., Дмитриева Т.Б. Моноклональные антитела к ней-роспецифическим белкам. - М.: Медицина, 2007.

3. Nanotechnology in biology and medicine. Methods, devices, and applications. -Ed. by Tuan Vo-Dinh CRC Press. - London, 2006.

4. Kabanov A.V., Gendelman H.E. Nanomedicine in the diagnosis and therapy of neurodegenerative disorders // Prog. Polym. Sci. - 2007. - V. 32. - P. 1054-1082.

5. Nayak S., Lyon. L.A. Soft nanotechnology with soft nanoparticles // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. - 2005. - V. 44. - P. 7686-7708.

6. Чехонин В.П., Жирков Ю.А., Кабанов А.В. и др. Использование антител к нейроспецифическим белкам для направленного транспорта психотропных средств через гематоэнцефалический барьер. - В кн.: Иммунохимический анализ нейроспецифических белков. - М.: Медицина, 2000.- С. 275-289.

7. Torchilin V.P. Micellar nanocarriers: Pharmaceutical Perspectives // Pharm. Res. -2007. - V.24. - P.1-16.

8. Kabanov A., Zhu J., Alakhov V. Pluronic block copolymers for gene delivery // Adv. Genet. - 2005. - V. 53. - P.231-261.

9. Duncan R. Polymer conjugates as anticancer nanomedicines // Nat. Rev. Cancer. -2006. - V. 6. - P.688-701.

10. Papaldo P., Fab A., Ferretti G. et al. A phase II study on metastatic breast cancer patients treated with weekly vinorelbine with or without trastuzumab according to HER2 expression: Changing the natural history of HER2-positive disease // Ann. Oncol. — 2006. - V. 17. - P.630-636.

11. Ebbesen M., Jensen T.G. Nanomedicine: Techniques, potentials, and ethical implications // J. Biomed. Biotechnol. - 2006. - V. 2006. - P.1-11.

12. Danson S., Ferry D., Alakhov V. et al. Phase I dose escalation and pharmacokinetic study of pluronic polymer-bound doxorubicin (SP1049C) in patients with advanced cancer // Br. J. Cancer. - 2004. - V. 90. -P. 2085-2091.

13. Kabanov A.V., Batrakova E.V., Chekhonin V.P et al. A new class of drug carriers: Micelles of poly(oxyethylene)-poly(oxypropylene) block copolymers as micro containers for drug targeting from blood in brain // J. Controlled Release. - 1992. -V.22. - P.141-158.

14. Huwyler J., Wu D., Pardridge W.M. Brain drug delivery of small molecules using immunoliposomes // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 1996. - V. 93. - P. 14164-14169.

15. Shi N., Zhang Y., Zhu C. et al. Brain-specific expression of an exogenous gene after i.v. administration // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. - 2001. - V. 98. - P. 12754-12759.

16. Aoki H., Kakinuma K., Morita K. et al. Therapeutic efficacy of targeting chemotherapy using local hyperthermia and thermosensitive liposome: evaluation of drug distribution in a rat glioma model // Int. J. Hyperthermia. - 2004. - V. 20. - P. 595-605.

17. Mora M., Sagrista M.-L., Trombetta D. et al. Design and characterization of liposomes containing long-chain N-acylPEs for brain delivery: Penetration of liposomes incorporating GM1 into the rat brain // Pharm. Res. - 2002. - V. 19. -P.1430-1438.

18. Чехонин В.П., Жирков Ю.А., Гурина О.И. и др. ПЭГилированные иммуно-липосомы, специфичные к астроцитам // Доклады РАН. - 2003. - Т. 391. -№ 6. - С. 1-7.

19. Chekhonin V.P., Zhirkov Yu.A., Gurina O.I. et al. PEG-lated immunoliposomes directed against brain astrocytes // Drug Delivery. - 2005. - V.12. - P. 16.

20. Chekhonin V.P., Gurina O.I., Lokhonina A.V., Ryabinina A.E., Maksimova M.A., Semenova A.V., Shvets V.I. PEG-treated immunoliposomes specific for the Schwann cells of neural tissue // Dokl. Biochem. Biophys. - 2007. - V.417. -P. 343-345.

21. Baklaushev V.P., Gurina O.I., Yusubalieva G.M., Grinenko N.F., Cytrin E.B., Victorov

1.V., Chekhonin V.P. Immunofluorescent analysis of connexin-43 using monoclonal antibodies to its extracellular domain // Bull. Exp. Biol. Med. -2009, Oct. -V.148(4). - P.725-730.

22. Chekhonin V.P., Baklaushev V.P., Gurina O.I., Grinenko N.F., Yusubalieva G.M., Ryabinina A.E. A binary immunoliposomal system directed to Cx43-positive glioma cells // Drug Delivery Technology. -2010, March. - V.10. - №

2. - P.42 - 47.

23. Amirshahi N., Alyautdin R.N., Sarkar S., Rezayat S.M., Orlova M.A., Trushkov I.V., Buchachenko A.L., Kuznetsov D.A. Fullerene-based low toxic nanocationite particles (porphyrin adducts of cyclohexyl fullerene-C(60)) to treat hypoxia-induced mitochondrial dysfunction in mammalian heart muscle // Arch. Med. Res. - 2008. - V.6. - P.549-559.

24. Buchachenko A.L., Kuznetsov D.A. Magnetic field affects enzymatic ATP synthesis // J. Am. Chem. Soc. - 2008, Oct. 1. - V.130 (39). - P.12868-12869.

25. Rezayat S.M., Boushehri S.V. et al. The porphyrin-fullerene nanoparticles to promote the ATP overproduction in myocardium: 25Mg2+-magnetic isotope effect // Eur. J. Med. Chem. - 2009 Apr. - V.44 (4). - P.1554-1569.

Информация об авторах:

Чехонин Владимир Павлович, академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета Российского государственного медицинского

университета им. Н.И.Пирогова, руководитель отдела фундаментальной

и прикладной нейробиологии ГНЦ социальной

и судебной психиатрии им. В.П.Сербского

Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1

Телефон: (495) 434-1311

E-mail: chekhoninnew@mail.ru

Кузнецов Дмитрий Анатольевич, доктор биологических наук, профессор кафедры медицинских нанобиотехнологий медико-биологического факультета Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова, заведующий лабораторией углеродных наноструктур Института химической физики им. Н.Н.Семенова РАН Адрес: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1 Телефон: (495) 434-1311 E-mail: kuznano@mail.ru