КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ, СВЯЗАННЫЕ СО СКОНСТРУИРОВАННЫМИ КОНСТРУКЦИЯМИ НА ОСНОВЕ Fc-АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО ДОМЕНА

1. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, предусматривающая усиленную эффекторную функцию, где конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена содержит антигенсвязывающий домен и первый Fc-домен, присоединенный ко второму Fc-домену посредством линкера, при этом конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена обладает усиленной эффекторной функцией в анализе антителозависимой цитотоксичности (ADCC), анализе антителозависимого клеточного фагоцитоза (ADCP) и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC) по сравнению с конструкцией, содержащей один Fc-домен и антигенсвязывающий домен.
2. Полипептид, содержащий антигенсвязывающий домен; линкер; первый мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; второй линкер; второй мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; необязательный третий линкер и необязательный третий мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен, где по меньшей мере один мономер Fc-домена содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа.
3. Полипептид по п. 2, где антигенсвязывающий домен содержит вариабельный домен тяжелой цепи антитела.
4. Полипептид по п. 2, где антигенсвязывающий домен содержит вариабельный домен легкой цепи антитела.
5. Полипептид по п. 2, где первый мономер Fc-домена IgG1 содержит две или четыре мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный, и второй мономер Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа.
6. Полипептид по п. 2, где первый мономер Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа, и второй мономер Fc-домена IgG1 содержит две или четыре мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
7. Полипептид по п. 2, где как первый мономер Fc-домена IgG1, так и второй мономер константного домена IgG содержат мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа.
8. Полипептид по п. 2, содержащий третий линкер и третий мономер Fc-домена IgG1, где каждый из первого мономера Fc-домена IgG1, второго мономера Fc-домена IgG1 и третьего мономера Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа.
9. Полипептид по п. 2, содержащий третий линкер и третий мономер Fc-домена IgG1, где каждый из первого мономера Fc-домена IgG1 и второго мономера Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа, и третий мономер Fc-домена IgG1 содержит две или четыре мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
10. Полипептид по п. 2, содержащий третий линкер и третий мономер Fc-домена IgG1, где каждый из первого мономера Fc-домена IgG1 и третьего мономера Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа, и второй мономер домена IgG1 содержит две или четыре мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
11. Полипептид по п. 2, содержащий третий линкер и третий мономер Fc-домена IgG1, где каждый из второго мономера Fc-домена IgG1 и третьего мономера Fc-домена IgG1 содержит мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа, и первый мономер домена IgG1 содержит две или четыре мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
12. Полипептид по п. 2, где мономеры Fc-домена IgG1, содержащие мутации, обеспечивающие образование сконструированного выступа, дополнительно содержат одну, две или три мутации, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
13. Полипептид по п. 2, где CH2-домены каждого мономера Fc-домена независимо содержат аминокислотную последовательность GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK с не более чем двумя одиночными аминокислотными делециями или заменами.
14. Полипептид по п. 2, где CH3-домены каждого мономера Fc-домена независимо содержат аминокислотную последовательность GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG с не более чем 10 одиночными аминокислотными заменами.
15. Полипептид по п. 2, где антигенсвязывающий домен содержит VH-домен и CH1-домен.
16. Полипептид по п. 15, где антигенсвязывающий домен дополнительно содержит VL-домен.
17. Полипептид по п. 15, где VH-домен содержит группу последовательностей CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, представленных в таблице 1.
18. Полипептид по п. 15, где VH-домен содержит CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 VH-домена, содержащего последовательность антитела, представленного в таблице 2.
19. Полипептид, содержащий антигенсвязывающий домен; линкер; первый мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; второй линкер; второй мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; необязательный третий линкер и необязательный третий мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен, где по меньшей мере один мономер Fc-домена содержит одну, две или три мутации, предусматривающие аминокислотную замену, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
20. Полипептид по п. 19, где первый мономер Fc-домена IgG1 содержит группу из двух мутаций, обеспечивающих изменение заряда на противоположный, выбранных из мутаций в таблице 5, или группу из четырех мутаций, обеспечивающих изменение заряда на противоположный, выбранных из мутаций в таблице 6, и второй мономер Fc-домена IgG1 содержит одну, две или три мутации, предусматривающие аминокислотную замену, обеспечивающие изменение заряда на противоположный, выбранные из таблицы 4.
21. Полипептид, содержащий первый мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; второй линкер; второй мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен; необязательный третий линкер и необязательный третий мономер Fc-домена IgG1, содержащий шарнирный домен, CH2-домен и CH3-домен, где по меньшей мере один мономер Fc-домена содержит одну, две или три мутации, предусматривающие аминокислотную замену, обеспечивающие изменение заряда на противоположный.
22. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) линкер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена; и
d) антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду, второму полипептиду или третьему полипептиду;
где первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена, и при этом конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена предусматривает биологическую активность, которую не демонстрирует конструкция, содержащая один Fc-домен и антигенсвязывающий домен.
23. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) спейсер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена; и
d) антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду, второму полипептиду или третьему полипептиду;
где первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена.
24. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) линкер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена; и
d) первый антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду; и
e) второй антигенсвязывающий домен, присоединенный ко второму полипептиду и/или третьему полипептиду;
где первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена, при этом первый и второй антигенсвязывающие домены связывают разные антигены, и при этом конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена обладает усиленной эффекторной функцией в анализе антителозависимой цитотоксичности (ADCC), анализе антителозависимого клеточного фагоцитоза (ADCP) и/или комплементзависимой цитотоксичности (CDC) по сравнению с конструкцией, содержащей один Fc-домен и антигенсвязывающий домен.
25. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) линкер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена;
d) первый антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду; и
e) второй антигенсвязывающий домен, присоединенный ко второму полипептиду и/или третьему полипептиду;
где первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена, и при этом первый и второй антигенсвязывающие домены связывают разные антигены, и при этом конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена предусматривает биологическую активность, которую не демонстрирует конструкция, содержащая один Fc-домен и антигенсвязывающий домен.
26. Конструкция на основе Fc-антигенсвязывающего домена, содержащая:
a) первый полипептид, содержащий
i) первый мономер Fc-домена,
ii) второй мономер Fc-домена и
iii) спейсер, соединяющий первый мономер Fc-домена и второй мономер Fc-домена;
b) второй полипептид, содержащий третий мономер Fc-домена;
c) третий полипептид, содержащий четвертый мономер Fc-домена; и
d) первый антигенсвязывающий домен, присоединенный к первому полипептиду; и
e) второй антигенсвязывающий домен, присоединенный ко второму полипептиду и/или третьему полипептиду;
где первый мономер Fc-домена и третий мономер Fc-домена объединены с образованием первого Fc-домена, и второй мономер Fc-домена и четвертый мономер Fc-домена объединены с образованием второго Fc-домена, и при этом первый и второй антигенсвязывающие домены связывают разные антигены.