ГЕНЫ GRG23 И GRG51, ПРИДАЮЩИЕ УСТОЙЧИВОСТЬ К ГЕРБИЦИДАМ

1. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из:
a) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1, 3, или 5, или комплементарную таковой;
b) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, 3, или 5, или комплементарную таковой;
c) нуклеотидной последовательности устойчивости к гербициду вставки ДНК плазмиды, депонированной под Номером Доступа NRRL B-30888 или B-30949, или комплементарной таковой;
d) молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 4, или 6; и
е) молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, обладающий по меньшей мере 80% идентичностью аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, 4 или 6.
2. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеотидная последовательность является синтетической последовательностью, которая была сконструирована для экспрессии в растении.
3. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.
4. Вектор по п.3, дополнительно содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую гетерологичный полипептид.
5. Клетка-хозяин, которая содержит вектор по п.3.
6. Клетка-хозяин по п.5, которая является бактериальной клеткой-хозяином.
7. Клетка-хозяин по п.5, которая является растительной клеткой.
8. Трансгенное растение, содержащее клетку-хозяина по п.7.
9. Растение по п.8, где указанное растение выбрано из группы, состоящей из кукурузы, сорго обыкновенного, пшеницы, подсолнечника, томата, крестоцветных, перцев, картофеля, хлопка, риса, сои, сахарной свеклы, сахарного тростника, табака, ячменя и масличных культур.
10. Трансформированное семя растения по п.8.
11. Изолированный полипептид, выбранный из группы, состоящей из:
a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, 4 или 6;
b) полипептида, кодируемого нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, 3 или 5;
c) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, 4 или 6, где указанный полипептид имеет активность устойчивости к гербициду;
d) полипептида, который кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, 3 или 5, где указанный полипептид имеет активность устойчивости к гербициду; и,
e) полипептида, который кодируется нуклеотидной последовательностью устойчивости к гербициду вставки ДНК плазмиды, депонированной под Номером Доступа NRRL B-30888 или NRRL B-30949.
12. Полипептид по п.11, дополнительно содержащий геторологичную аминокислотную последовательность.
13. Способ получения полипептида с активностью устойчивости к гербициду, включающий культивирование клетки-хозяина по п.5 в условиях, в которых молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, экспрессируется, где указанный полипептид выбран из группы, состоящей из:
a) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 4 или 6;
b) полипептида, кодируемого последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:1, 3 или 5;
c) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с полипептидом с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:2, 4 или 6, где указанный полипептид имеет активность устойчивости к гербициду;
d) полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичность последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:1, 3 или 5, где указанный полипептид имеет активность устойчивости к гербициду; и,
e) полипептида, который кодируется нуклеотидной последовательностью устойчивости к гербициду вставки ДНК плазмиды, депонированной под Номером Доступа NRRL B-30888 или NRRL B-30949.
14. Способ придания растениям устойчивости к гербициду, включающий трансформацию указанного растения ДНК-конструкцией, содержащей промотор, который управляет экспрессией в растительной клетке, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, по меньшей мере на 80% идентичной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, 3 или 5; и регенерацию трансформированного растения.
15. Способ по п.14, где указанным гербицидом является глифосат.
16. Растение, имеющее стабильно встроенную в его геном ДНК-конструкцию, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок, имеющий активность устойчивости к гербициду, где указанная нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из:
a) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, 3 или 5;
b) нуклеотидной последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичность последовательности с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1, 3 или 5, где указанная нуклеотидная последовательность кодирует полипептид, обладающий активностью устойчивости к гербициду;
c) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, 4 или 6;
d) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, имеющий по меньшей мере 80% идентичность аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID No: 2, 4 или 6, где указанный полипептид обладает активностью устойчивости к гербициду; и,
e) нуклеотидной последовательности устойчивости к гербициду вставки ДНК плазмиды, депонированной под Номером Доступа NRRL B-30888 или NRRL B-30949;
где указанная нуклеотидная последовательность является функционально связанной с промотором, который управляет экспрессией кодирующей последовательности в растительной клетке.
17. Растение по п.16, где указанным растением является растительная клетка.
m
i
m
18. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует устойчивый к глифосату фермент EPSPS, где указанный устойчивый к глифосату фермент EPSPS обладает К в отношении фосфоенолпирувата (РЕР) от приблизительно 1 до приблизительно 150 мкМ, и K (глифосат)/К (PEP) от приблизительно 500 до приблизительно 1000.
m
i
m
19. Растение, имеющее стабильно встроенную в его геном ДНК-конструкцию, содержащую нуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид EPSPS, где указанный полипептид EPSPS обладает К в отношении РЕР от приблизительно 1 до приблизительно 150 мкM, и K (глифосат)/К (PEP) от приблизительно 500 до приблизительно 1000, где указанное растение проявляет устойчивость к глифосатному гербициду.
20. Растение по п.19, где указанным растением является растение сои.
21. Растение по п.19, где указанным растением является зерновое растение.
22. Растение по п. 19, где указанное растение выбрано из группы, состоящий из кукурузы, сорго обыкновенного, пшеницы, подсолнечника, томата, крестоцветных, перцев, картофеля, хлопка, риса, сои, сахарной свеклы, сахарного тростника, табака, ячменя и масличных культур.
23. Способ измерения высвобождения фосфата посредством фермента, включающий инкубирование указанного фермента в присутствии субстрата фермента и одного или нескольких компонентов реакции, выбранных из группы, состоящей из:
a) ксантиноксидазы в концентрации по меньшей мере 1 Е/мл;
b) пуриннуклеозидфосфорилазы в концентрации большей, чем 0,1 Е/мл; и,
c) N-ацетил-3,7-дигидроксифеноксазина в концентрации большей, чем 100 мкМ,
где высвобождение фосфата связано с образованием флуоресцентного соединения резоруфина.
24. Способ по п.23, где указанный фермент представляет собой EPSPS.