ЭЛЕМЕНТЫ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ В КЛЕТКЕ-ХОЗЯИНЕ

1. Рекомбинантный бакуловирус, содержащий
[1] последовательность нуклеиновой кислоты, обеспечивающую экспрессию белков IE-1, IE-0 и/или их фрагментов, функционирующих в качестве регуляторов транскрипции, на уровне, превышающем эндогенный уровень, причем нуклеиновую кислоту выбирают из группы, состоящей из:
(a) нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 1-5;
(b) последовательности нуклеиновой кислоты, обладающей по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 1-5, и кодирующей белок, который может функционировать как регулятор транскрипции в рекомбинантном бакуловирусе;
(c) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 6-9; и
(d) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% сходством с аминокислотной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 6-9 и способной функционировать как регулятор транскрипции в рекомбинантном бакуловирусе;
[2] при этом рекомбинантный бакуловирус дополнительно содержит по меньшей мере одну рекомбинантную гомологичную область (hr) в качестве энхансерной области, функционально связанную с любым промотором, подходящим для управления экспрессией рекомбинантных белков;
[3] при этом промотор, функционально связанный с гомологичной областью (hr), выбран из группы нуклеиновых кислот, включающей:
(а) нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность,
указанную в любой из SEQ ID NO: 10-16; и
последовательность нуклеиновой кислоты, способную функционировать в качестве промотора в рекомбинантном бакуловирусе и обладающую по меньшей мере 70%. предпочтительно по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 10-16.
2. Рекомбинантный бакуловирус по п. 1, отличающийся тем. что рекомбинантная гомологичная область (hr) является последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 27 (hrl).
3. Рекомбинантный бакуловирус по п. 2, отличающийся тем, что промотор, функционально связанный с гомологичной областью (hr), выбран из группы нуклеиновых кислот, включающей:
(a) нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, указанную в любой из SEQ ID NO: 10-16; и
(b) последовательность нуклеиновой кислоты, способную функционировать в качестве промотора в рекомбинантном бакуловирусе и обладающую по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью с нуклеотидной последовательностью, указанной в любой из SEQ ID NO: 10-16.
4. Рекомбинантный бакуловирус по любому из пп. 1-3, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую комбинации рекомбинантных промоторов, последовательностей, кодирующих регуляторы транскрипции, и энхансерных областей, выбранных из группы, включающей SEQ ID NO: 17-26.
5. Рекомбинантный бакуловирус по любому из пп. 1-3. дополнительно содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую рекомбинантный белок, причем указанная нуклеотидная последовательность функционально связана с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, охарактеризованных в пп. 1-3.
6. Рекомбинантный бакуловирус по п. 4, дополнительно содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую рекомбинантный белок, причем указанная нуклеотидная последовательность функционально связана с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, охарактеризованных в п. 4.
7. Вектор переноса, подходящий для получения рекомбинантного бакуловируса по любому из пп. 1-6, содержащий указанную последовательность для экспрессии белков IE-0, IE-1 и/или их фрагментов, функционирующих в качестве регуляторов транскрипции, на уровне, превышающем эндогенный уровень, дополнительно содержащую нуклеотидную последовательность, подходящую для интеграции или транспозиции в бакуловирус.
8. Клонирующий вектор, подходящий для получения рекомбинантного бакуловируса по любому из пп. 1-6 или вектора переноса по п. 7, содержащий указанную последовательность для экспрессии белков IE-0, IE-1 и/или их фрагментов, функционирующих в качестве регуляторов транскрипции, на уровне, превышающем эндогенный уровень, который также подходит для репликации у бактерий.
9. Последовательность нуклеиновой кислоты, подходящая для получения рекомбинантного бакуловируса по пп. 1-6, вектора переноса по п. 7 или клонирующего вектора по п. 8, содержащая указанную последовательность для экспрессии белков IE-0, IE-1 и/или их фрагментов, функционирующих в качестве регуляторов транскрипции, на уровне, превышающем эндогенный уровень.
10. Клетка-хозяин, инфицированная, трансфицированная, трансдуцированная или трансформированная рекомбинантным бакуловирусом по любому из пп. 1-6, вектором переноса по п. 7, клонирующим вектором по п. 8 или нуклеотидной последовательностью но п. 9.
11. Инфицированная, трансфицированная, трансдуцированная или трансформированная клетка-хозяин по п. 10, характеризующаяся тем, что является линией клеток насекомого.
12. Инфицированная. трансфицированная, трансдуцированная или трансформированная клетка-хозяин по п. 11, характеризующаяся тем. что происходит от насекомого, принадлежащего к роду Lepidoptera или Diptera.
13. Инфицированная, трансфицированная, трансдуцированная или трансформированная клетка-хозяин по п. 12, характеризующаяся тем, что происходит от Trichoplusia ni, Spodoptera frugiperda, Ascalapha odorata, Bombyx mori, Drosophila melanogaster или Aedes aegypti.
14. Инфицированная. трансфицированная, трансдуцированная или трансформированная клетка-хозяин по п. 13, характеризующаяся тем, что является линией клеток, выбранной из группы, состоящей из Hi-5™, Sf9, Sf21, BTI-Tn5B-1, Tn368, ExpresSf+, BTI-TnAo38, АТС-10 и линии Шнайдера 2 Drosophila.
15. Способ продукции рекомбинантного белка, включающий инфицированную, тансфицированную, трансдуцированную или трансформированную клетку-хозяина по любому из пп. 10-14 и выделение и очистку рекомбинантного белка общепринятыми средствами.
16. Применение вектора переноса по п. 7 для получения рекомбинантного бакуловируса по любому из пп. 1-6.
17. Применение клонирующего вектора по п. 8 для получения рекомбинантного бакуловируса по любому из пп. 1-6 или вектора переноса по п. 7.
18. Применение нуклеотидной последовательности по п. 9 для получения рекомбинантного бакуловируса по пп. 1-6, вектора переноса по п. 7 или клонирующего вектора по п. 8.