Особенности биомодификации сырья в технологии пресервов из кукумарии

Известия ТИНРО

2006 Том 144

ТЕХНОЛОГИЯ ОБРАБОТКИ ГИДРОБИОНТОВ

УДК 664.951.7

Т.П.Калиниченко, Т.Н.Слуцкая

ОСОБЕННОСТИ БИОМОДИФИКАЦИИ СЫРЬЯ В ТЕХНОЛОГИИ ПРЕСЕРВОВ ИЗ КУКУМАРИИ

Обоснованы рациональные параметры обработки сырья комплексными препаратами протеаз: Протином, выделенным из гидробионтов, и Протамексом, полученным микробиальным синтезом. Использование приемов биомодификации белков кукумарии сокращает продолжительность термообработки, что обеспечивает экономию энергообеспечения технологического процесса и гарантирует получение легкоусвояемой продукции, увеличивая количество растворимых белковых фракций кукумарии. Разработанная биотехнология пресервов из кукумарии обеспечивает высокое качество, безопасность и стабильность пресервов в хранении при температуре минус 4 °С в течение 6 мес.

Kalinichenko T.P., Slutskaya T.N. Features of raw material biomodification at the technology of preservations from sea cucumber // Izv. TINRO. — 2006. — Vol. 144. — P. 356-364.

Rational parameters of processing of the sea cucumber raw material by complex protease preparations (Protin extracted from hydrobionts, and Protamex produced by microbe synthesis) are proved. Biomodification of the sea cucumber muscle tissue reduces duration of heat treatment that provides economy of electric power for technological process, and provides manufacture of light-assimilating production because of increasing of soluble protein fractions. The developed biotechnology of preserves from sea cucumber provides high quality , safety and stability of the preserves in storage at the temperature minus 4 оС within 6 months.

Изученные особенности химического состава кукумарии свидетельствуют о высокой ценности этого сырья, обусловленной содержанием тритерпеновых гли-козидов — биологически активных веществ, повышающих иммунитет и общую работоспособность организма (Авилов, 2000). В составе белков мышечной ткани ведущее место занимает коллаген, его количество может варьировать в различных видах кукумарии от 50 до 70 % (Лебская, 2001; Saito et al., 2002). Коллаген в настоящее время относят к пищевым волокнам, являющимся необходимой составной частью пищи, способствующей пищеварению (Неклюдов, 2003). Однако определенная жесткость коллагеновых белков требует при производстве пищевой продукции продолжительной термообработки кукумарии до приобретения мягкой консистенции.

Нами установлена возможность сокращения продолжительности гидротермической обработки при условии предварительного изменения нативного состояния белков кукумарии протеолитическими ферментами. Глубина гидролиза белков, достигнутая в процессе ферментолиза протеазами, выделенными из гидробионтов, и составляющая 5,6-6,3 %, обеспечивает сокращение процесса термообра-

ботки на 1 ч (Калиниченко, Слуцкая, 2005). Известно также, что для биомодификации коллагенсодержащего сырья в настоящее время с успехом применяют про-теолитические ферменты, полученные микробиальным синтезом (Антипова, Глотова, 2000).

Целью настоящей работы явилась разработка биотехнологии пресервов из кукумарии. Для биомодификации сырья использовали протеолитические ферментные препараты: Протин, получаемый из пилорических придатков лососевых рыб, и Протамекс, вырабатываемый микроорганизмами рода Bacillus.

Исследования проводили на мышечной ткани кукумарии (Cucumaria japonica), хранившейся при температуре минус 20 оС в течение 2 мес.

Протеолитическую активность ферментных препаратов определяли в соответствии с требованиями ГОСТа 20264.2-88, а также по методу Е.Д.Каверзневой (1971), используя казеинат натрия в качестве субстрата. рН среды 5,5-9,0 создавали фосфатными буферами, рН 10,0-11,0 — универсальным буфером.

Гидролиз белков кукумарии под влиянием ферментных препаратов изучали при рН 6,5, используя для создания среды фосфатно-цитратный буфер, а также в качестве среды взаимодействия дистиллированную воду. Мышечную ткань предварительно измельчали. Фермент-субстратное взаимодействие продолжалось в течение 2 ч, после чего реакцию останавливали трихлоруксусной кислотой, конечная концентрация которой составляла 4 %. Степень протеолиза рассчитывали как отношение количества азота, содержащегося в низкомолекулярных продуктах расщепления белков, образовавшихся за период фермент-субстратного взаимодействия, к количеству азота белковых веществ мышечной ткани кукумарии, и выражали в процентах.

Рациональные параметры ферментолиза устанавливали, проводя ферменти-рование филе кукумарии и используя концентрации протеаз 5-100 протеолити-ческих единиц (ПЕ) на 100 г сырья, продолжительность ферментолиза варьировали от 0,5 до 2,0 ч.

Количество общего азота, азота низкомолекулярных азотсодержащих веществ в сырье и в пресервах, а также азота отдельных белковых фракций определяли на автоматическом анализаторе азота Kjeltec Auto Analyser (Швеция).

Исследование изменений фракционного состава белков мышечной ткани кукумарии под влиянием протеаз проводили после ферментирования филе препаратом Протамекс в течение 2 ч при концентрации 30 ПЕ на 100 г кукумарии, филе после гидротермической обработки в течение 1,5 ч измельчали. Для извлечения отдельных белковых фракций использовали дистиллированную воду, 7,5 %-ный раствор хлорида натрия и 0,05 %-ный раствор гидроокиси натрия. Выделение белковых фракций проводили при температуре 4 оС. Для сравнения определяли фракционный состав белков сырой и вареной в течение 2,5 ч куку-марии без предварительного ферментирования.

Исследование химических характеристик сырья и пресервов осуществляли по стандартным методикам (Лазаревский, 1975). Определение рН проводили на рН-метре Microprocessor рН Meter рН 210 (Hanna instruments), микробиологические исследования — в соответствии с требованиями "Инструкция по сани-тарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных" (1991).

Несмотря на различные источники получения ферментных препаратов, которые были использованы в данной работе, температурные оптимумы их протео-литической активности близки (рис. 1). Максимальную активность протеазы Протамекса проявляют при 55 оС, Протина — 50 оС. Установлено, что оптимальным значением рН среды для Протамекса является 7,0, для Протина — 9,0. Сдвиг оптимума рН для Протина в щелочную сторону объясняется особенностями протеолитических ферментов гидробионтов (Пивненко, 1997). При рН 6,5 — значении, свойственном мышечной ткани кукумарии, — активность препаратов

остается высокой и составляет 70 % (Протин) и 87 % (Протамекс) активности при оптимальном значении рН (рис. 2), следовательно, проведение процесса фер-ментирования кукумарии возможно без изменения рН среды взаимодействия.

Рис. 1. Изменение протеолитической активности ферментных препаратов в зависимости от температуры при рН 6,5: 1 — Протин, 2 — Протамекс

Fig. 1. Change of proteolytic activity of enzyme preparations depending on temperature at рН 6.5: 1 — Protin, 2 — Protamex

Температура, град

Рис. 2. Протеолити-ческая активность фермен-

1 тных препаратов в зависи-

2 мости от рН среды: 1 — Протин,2 — Протамекс

Fig. 2. Proteolytic activity of enzyme preparations depending on рН of environment: 1 — Protin, 2 — Protamex

Изучение гидролиза белков кукумарии под влиянием протеаз при тонком измельчении мышечной ткани позволило установить, что под действием ферментов препарата Протин степень протеолиза может составить более 80 %, тогда как под влиянием Протамекса при оптимальной температуре — немногим более 50 % (рис. 3). Это может объясняться тем, что субстратная специфичность ферментов, полученных микробиальным синтезом, отличается от препаратов из животных тканей или тканей гидробионтов (Пивненко, 1997). Существенное увеличение степени протеолиза с ростом количества Протамекса происходит до его концентрации 50 ПЕ/100 г субстрата. Дальнейшее увеличение дозы препарата незначительно изменяет степень гидролиза белков кукумарии, вероятно, из-за насыщенности доступных для ферментов этого препарата пептидных связей субстрата, поскольку известно, что ферментативная реакция проходит при условии совпадения пространственных конфигураций субстрата и субстратного центра фермента (Филиппович, 1993).

Проведение ферментирования филе кукумарии при оптимальной для действия препаратов температуре показало, что при этом происходит тепловая денатурация коллагеновых белков кукумарии. Процесс сокращения коллагена при нагревании сопровождается существенным уменьшением длины, что можно объяс-

.а н

(J

о я м s н и

я «

я а 5

ai

sS H

s 4 о

и H

о a К

120

100

5,5

6,5

7,5

9,5

10,5 РН

нить частичным разрушением поперечных межцепочечных водородных связей (Неклюдов, 2003). Следствием этого, вероятно, является уменьшение доступности пептидных связей для действия протеаз, что приводит в процессе ферментирова-ния при интенсивном размягчении поверхностного слоя к тому, что внутренние слои филе кукумарии остаются плотными. Поэтому далее проводили исследования по обоснованию температурных условий ферментации, позволяющих избежать тепловой денатурации коллагена и достичь необходимой и достаточной степени протеолиза.

Рис. 3. Изменение степени протеолиза измельченной мышечной ткани кукумарии в зависимости от концентрации ферментных препаратов: 1 — Протин, 2 — Прота-мекс

Fig. 3. Changes of proteolysis degree crushed of sea cucumber muscle tissue depending on concentration of enzyme preparations: 1 — Protin, 2 — Protamex

2  i

25 50 75 100 125 150 175 200 Доза протеаз, ПЕ/100 г

Известно, что температура коагуляции белков кукумарии, определенная по изменениям тепловой дегидратации тканей (Афанасьева, 2003), составляет 45 оС. Проведение процесса ферментации при температуре ниже точки коагуляции — 40 оС — показало, что и при этом в процессе ферментолиза происходят тепловая денатурация и сокращение тканей кукумарии. Поэтому, чтобы избежать теплового сокращения белков кукумарии, ферментирование филе кукумарии в дальнейшем проводили без нагревания.

Установлено, что необходимая доза препарата, обеспечивающая степень протеолиза 6,0 %, составляет 300 ПЕ Протамекса и 900 ПЕ Протина на 1 кг сырья (рис. 4). Гидромодуль, при котором происходит полное покрытие сырья ферментным раствором, составляет 1: 1. С целью активирования протеаз целесообразно растворять ферментный препарат в воде, имеющей температуру 50 ± 5 оС, с тем чтобы при соединении с субстратом температура не превышала 30 оС, при этом продолжительность ферментирования составляет 2 ч.

Рис. 4. Степень протеолиза филе кукумарии в зависимости от концентрации ферментных препаратов: 1 — Протин, 2 — Протамекс

Fig. 4. Proteolysis degree of sea cucumber fillet depending on concentration of enzyme preparations: 1 — Protin, 2 — Protamex

55

80

Доза протеаз, ПЕ/100 г

Биомодификация сырья при установленных рациональных параметрах фер-ментирования обеспечивает сокращение продолжительности последующей гидротермической обработки на 40 % по сравнению с кукумарией без ферментативной обработки, что позволяет существенно снизить энергопотребление при производстве пресервов.

Изучение изменений фракционного состава белков мышечной ткани куку-марии показало, что обработка протеазами, обеспечивая частичную деструкцию белков, приводит к увеличению количества водо-, соле- и щелочерастворимых белковых фракций мышечной ткани кукумарии. Количество белков, растворимых в воде, увеличивается в ферментированной мышечной ткани кукумарии в 2,73,0 раза, количество белков, растворимых в солевых и щелочных растворах, — в 2,5-2,7 раза по сравнению с неферментированной кукумарией (рис. 5). Общее количество растворимых белковых веществ составило в вареной без фер-ментирования кукумарии 19,1 %, в вареной после обработки протеазами — 51,2 %. Увеличение количества растворимых белковых веществ после обработки тканей гидробионтов протеазами обнаружено и другими исследователями. Так, ферментирование бланшированных тканей анадары увеличивает количество растворимых белковых веществ, снижая количество нерастворимых на 26 % (Зюзьгина, 2004).

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

Рис. 5. Соотношение белковых фракций мышечной ткани кукумарии: I — вареная без фермен-тирования, II — вареная ферментированная; 1 — низкомолекулярная фракция, 2 — водорастворимая, 3 — солера-створимая, 4 — ще-лочерастворимая фракция

Fig. 5. Ratio of protein fractions of sea cucumber muscle tissue: I — boil without fermentation, II — boil fermenta-salt-soluble fraction, 4 —

Фракции

tion; 1 — low molecular fraction, 2 — water-soluble fraction, 3 — alkaline-soluble fraction

Таким образом, установлено, что обработка протеазами обеспечивает переход из нерастворимой в растворимую форму более 30 % белков кукумарии.

Известно, что коллагены и эластины плохо перевариваются пищеварительными ферментами. Основным препятствием для расщепления этих белков являются особенности третичной структуры (Покровский, 1974). Известно также, что растворение, усиление набухания, разрыхление белковых молекул благоприятствуют перевариванию (Покровский, 1974). Таким образом, ферментативная обработка кукумарии, переводя значительную часть белков в растворимое состояние, способствует получению продукта, перевариваемого ферментной системой пищеварительных органов человека лучше, чем продукция из необработанной протеазами кукумарии. Это не противоречит результатам изучения in vitro пере-вариваемости белков, обработанных пищеварительными протеолитическими ферментами, которая выше, чем необработанных (Журавская, Изотов, 2002).

В настоящее время перспективным направлением считают создание комбинированных продуктов, удовлетворяющих дифференцированным требованиям рационального питания. Введение овощных добавок и их смесей в производство комбинированных изделий дает возможность улучшить их пищевые качества, повысить пищевую и кулинарную ценность (Антипова и др., 2003). Введение овощей в продукты из гидробионтов считают перспективным направлением в развитии функциональных продуктов питания из рыбного сырья (Студенцова, 2003), поэтому в рецептуру пресервов из кукумарии внесли обжаренные лук и морковь, как овощи, оптимально сочетающиеся по вкусовым качествам с кукума-рией. Кроме того, исходили из требования, вытекающего из определения пресервов, по которому они должны содержать не менее 55 % морепродукта. Оценивали вкусовые качества пресервов, в которых варьировали количество вносимых лука, моркови, соуса. При разработке рецептур соусов варьировали количество соли, сахара, томат-пасты, пряностей. Использовали соуса: томатный, томатно-май-онезный, майонезный. Количество соли регулировали с учетом того, что употребление поваренной соли должно быть умеренным в течение всей жизни независимо от вида и условий труда, и одним из способов уменьшения доли потребляемой поваренной соли является разработка продуктов с пониженным содержанием до органолептического порога при сохранении качества и санитарной безопасности пищи (Иванова, Касьянов, 2002).

Анализ пресервов из кукумарии, производимых различными предприятиями, показал, что отсутствуют пресервы типа "икра", в которых составляющие продукты равномерно измельчены. Нами разработана технология именно этого типа пресервов. Разработанные рецептуры пресервов из кукумарии с овощами и используемых соусов представлены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Рецептура пресервов из кукумарии с овощами в соусе на 1000 учетных банок, кг

Table 1

Receptive of the preserves from sea cucumber with vegetables in sauce on 1000 registration jars, kg

_Компонент_Норма закладки

Кукумария вареная измельченная 196,35

Соус 126,3

Лук обжаренный измельченный 17,0

Морковь обжаренная измельченная 17,0

Бензойнокислый натрий 0,35

Выход с учетом 2 % потерь на фасование_357,0_

Таблица 2

Рецептуры соусов на 1000 учетных банок, кг

Table 2

Receptive of sauces on 1000 registration jars, kg

Соус

Компонент томатный майонезный томатно-майонезный

Майонез - 65,3 66,5

Растительное масло 5,5 - 2,8

Соль 1,85 1,6 0,9

Сахар-песок 0,6 0,8 0,3

Перец душистый 0,01 - 0,005

Перец черный 0,02 - 0,01

Лавровый лист 0,02 - 0,01

Вода 100,0 65,3 50,0

Выход с учетом 5 %

потерь на розлив 133,0 133,0 133,0

Технологию производства пресервов из кукумарии разрабатывали таким образом, чтобы производители имели возможность выбора: производить пресервы, используя биомодификацию сырья, или изготавливать пресервы без обработки сырья протеазами перед термообработкой.

Разработанный регламент производства пресервов из кукумарии с овощами в соусах включает следующие стадии.

— Размораживание кукумарии до температуры плюс 1 оС.

— Приготовление раствора ферментного препарата в воде, имеющей температуру 50 ± 5 оС из расчета 300 ПЕ Протамекса или 900 ПЕ Протина на 1 кг сырья; соотношение кукумария : ферментный раствор 1 : 1.

— Ферментирование в течение 2 ч при периодическом перемешивании при комнатной температуре.

— Обработка в котле при кипячении биомодифицированного сырья в течение 1,5 ч, без обработки сырья протеазами — 2,5 ч; затем охлаждение и стекание.

— Подготовка овощей (обжаривание и измельчение). Приготовление соуса.

— Измельчение вареной кукумарии.

— Смешивание измельченной кукумарии с обжаренными измельченными овощами и соусом согласно рецептуре, затем термообработка и внесение консерванта.

— Фасование.

Для расфасовывания пресервов предложена стеклянная упаковка в связи с ее гигиеничностью, декоративностью, удобством потребления продукта. Закатывание банки по типу "твистофф" легко, удобно и позволяет провести герметичную укупорку непосредственно после фасования, в горячем виде (Анфилов, Ман-гутова, 2003).

Пресервы хранили при температуре, принятой для хранения этого класса продуктов и составляющей минус 4-6 оС.

Изучение экспериментальных образцов пресервов из кукумарии, приготовленных с использованием приемов биотехнологии, и пресервов, приготовленных без предварительной обработки сырья протеолитическими ферментами, в процессе хранения позволило установить, что вкусовые качества, а также внешний вид, цвет, запах пресервов не изменяются на протяжении хранения в течение 6 мес. Высокое качество пресервов подтверждается химическими показателями, которые остаются стабильными (табл. 3). Накопление азота летучих оснований за весь срок хранения составляет не более 1,2 мг/100 г, небелковых азотсодержащих веществ — 33 мг/100 г продукта. Незначительные изменения в белковой составляющей кукумарии практически не отражаются на рН и общей кислотности пресервов. Некоторые колебания значений не свидетельствуют о какой-либо тенденции в процессе хранения. Остаточная активность протеаз в готовом продукте отсутствует.

Микробиологические исследования пресервов, проводимые в процессе хранения, позволили доказать, что разрабатываемая технология гарантирует микробиологическую безопасность продукции в течение 6 мес. Установлено, что в процессе хранения происходит отмирание микрофлоры, поскольку уменьшается количество колониеобразующих единиц мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в 1 г пресервов до полного их отсутствия.

Известна фунгицидная активность гликозидов, входящих в состав тканей кукумарии, которую связывают с взаимодействием гликозидов со стеринами клеточных мембран микрогрибов (Anisimov е! а1., 1980). Установлено также, что в высоких концентрациях гликозиды голотурий проявляют не только антифун-гальную, но и антибактериальную активность (Попов, 1983), что позволяет предположить возможность того, что гликозиды кукумарии способствуют уменьшению количества микроорганизмов в пресервах в процессе хранения.

Химическая характеристика пресервов из кукумарии с овощами в

The chemical characteristic of the preserves from sea cucumber with vegetables in the sauces

Таблица 3 соусах

Table 3

Обработка сырья

Без

ферменти-рования

Ферменти-рование

Срок Вода, ^общ' N , л.о Общая

Соус хранения, мес % % мг/100 г мг/100 г рН кислотность, %

Томатный 1 6 81,0 83,0 1,455 1,345 282 296 14,9 15,6 6,3 6,1 0,06 0,05

Томатно- 1 69,9 1,260 265 12,6 6,3 0,06

майонезный 6 69,8 1,050 272 12,2 6,1 0,05

Майонезный 1 6 72,4 72,9 1,290 1,115 223 222 10,3 10,2 6,2 6,1 0,06 0,04

Томатный 1 6 83,5 83,8 1,435 1,340 275 308 13,8 15,0 6,3 6,2 0,06 0,04

Томатно- 1 69,9 1,253 270 11,5 6,3 0,06

майонезный 6 71,0 1,240 285 10,9 6,2 0,05

Майонезный 1 6 71,5 71,3 1,315 1,315 249 253 9,2 9,5 6,3 6,2 0,06 0,04

Таким образом, разработана биотехнология пресервов из кукумарии с овощами в соусах. Использование приемов биомодификации сырья с помощью про-теолитических ферментов обеспечивает экономию энергообеспечения технологического процесса и получение легкоусвояемой продукции. Качество пресервов не изменяется на протяжении 6 мес хранения при температуре минус 4-6 °С, химические показатели подтверждают стабильность, а микробиологические — свидетельствуют о том, что разработанная биотехнология гарантирует безопасность вырабатываемой продукции.

Литература

Авилов С.А. Тритерпеновые гликозиды голотурий отряда Dendrochirotida: Авто-реф. дис. ... д-ра хим. наук. — Владивосток: ТИБОХ ДВО РАН, 2000. — 62 с.

Антипова Л.В., Глотова И.А. Получение коллагеновых субстанций на основе вторичного сырья мясной промышленности // Изв. вузов. Пищевая технология. — 2000. — № 5-6. — С. 17-21.

Антипова Л.В., Толпыгина И.Н., Батищев В.В. Функциональные продукты на основе рыбного фарша и овощей // Изв. вузов. Пищевая технология. — 2003. — № 1. — С. 32-34.

Анфилов О.В., Мангутова Л.И. Будущее за упаковкой "ЕВРОТВИСТ" // Масла и жиры. — 2003. — № 6. — С. 13.

Афанасьева А.Е. Технология производства сушеной кукумарии // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2003. — № 8. — С. 194-198.

ГОСТ 20264.2-88 Препараты ферментные. Метод определения протеолитичес-кой активности. — М.: Изд-во стандартов, 1988.

Журавская Н.К., Изотов О.В. Технология производства быстрозамороженных мясных рубленых полуфабрикатов с использованием протеолитических ферментов и растительных наполнителей // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2002. — № 12. — С. 26-29.

Зюзьгина А.А. Биотехнология пищевой продукции из анадары и осьминога: Авто-реф. дис. . канд. техн. наук. — Владивосток: ТИНРО-центр, 2004. — 24 с.

Иванова Е.Е., Касьянов Г.И. Снижение содержания соли в рыбных продуктах как важный фактор здорового питания // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2002. — № 4. — С. 8-10.

Инструкция по санитарно-микробиологическому контролю производства пищевой продукции из рыбы и морских беспозвоночных. — Л.: ГИПРОРЫБ-ФЛОТ, 1991. — 94 с.

Каверзнева Е.Д. Стандартный метод определения протеолитической активности для комплексных препаратов протеиназ // Приклад. биохим. и микробиол. — 1971. — Т. 7, вып. 2. — С. 225-228.

Калиниченко Т.П., Слуцкая Т.Н. Биотехнологическая модификация мышечной ткани кукумарии // Хранение и переработка сельхозсырья. — 2005. — № 5. — С. 40-42.

Лазаревский А.А. Технохимический контроль в рыбообрабатывающей промышленности. — М.: Пищепромиздат, 1975. — 518 с.

Лебская Т.К. Комплексная переработка баренцевоморской кукумарии // Рыб. хоз-во. — 2001. — № 6.

Неклюдов А.Д. Пищевые волокна животного происхождения. Коллаген и его фракции как необходимые компоненты новых и эффективных пищевых продуктов // Приклад. биохим. и микробиол. — 2003. — Т. 39, № 3. — С. 261-272.

Пивненко Т.Н. Субстратная специфичность панкреатических сериновых протеи-наз различного происхождения // Изв. ТИНРО. — 1997. — Т. 120. — С. 14-22.

Покровский А.А. Роль биохимии в развитии науки о питании. — М.: Наука, 1974. — 127 с.

Попов А.М. Изучение мембранотропной активности некоторых тритерпеновых гликозидов: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. — Владивосток, 1983. — 24 с.

Студенцова Н.А. Перспективы развития функциональных продуктов питания из рыбного сырья // Рыб. хоз-во. — 2003. — № 4. — С. 57-59.

Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. — М.: Высш. шк., 1993. — 496 с.

Anisimov M.M., Prokofieva N.G., Korotkikh L.Y. et al. Comparative study of Cytotoxic Activity of triterpene glycosides from marine organisms // Toxicon. — 1980. — Vol. 18. — P. 221-223.

Saito M., Kunisaki N., Urano N., Kimura S. Collagen as the Major Edible Component of Sea Cucumber (Stichopus japonicus) // Food Chemistry and Toxicology. — 2002. — Vol. 67, № 4.

Поступила в редакцию 28.11.05 г.