РЕГУЛЯТОРНЫЕ МОЛЕКУЛЫ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ СЕМЯ-СПЕЦИФИЧНОЙ И/ИЛИ СЕМЯ-ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОЙ ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ В РАСТЕНИЯХ

1. Способ получения семя-специфичного и/или семя-предпочтительного растительного промотора высокой экспрессии, содержащий функциональное связывание с промотором одной или более молекул нуклеиновых кислот, усиливающих экспрессию нуклеиновой кислоты (NEENA), гетерологичных по отношению к указанному промотору, содержащих
i) молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую последовательность SEQ ID NO: 1-15, или
ii) молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую последовательность с идентичностью по меньшей мере 80% последовательностям SEQ ID NO: 1-15, или
iii) фрагмент из по меньшей мере 100 последовательных оснований молекулы нуклеиновой кислоты i) или ii), который обладает активностью усиления экспрессии как соответствующая молекула нуклеиновой кислоты, имеющая последовательность SEQ ID NO: 1-15, или
iv) молекулу нуклеиновой кислоты, которая является комплементарной или обратно комплементарной любой из ранее упомянутых молекул нуклеиновой кислоты в соответствии с i) или ii), или
v) молекулу нуклеиновой кислоты, которая может быть получена с помощью ПЦР, применяя олигонуклеотидные праймеры, описанные последовательностями SEQ ID NO: 20-29, 34-41, 44-51 и 54-57, как показано в Таблице 2, или
4
vi) молекулу нуклеиновой кислоты, гибридизующуюся в условиях, эквивалентных гибридизации в 7%-ом додецилсульфате натрия (ДСН), 0.5 М NaPO, 1 мМ ЭДТА при 50°С, с промывкой в 2 X SSC, 0.1% ДСН при 50°С, с молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей по меньшей мере 50 последовательных нуклеотидов нуклеотидной последовательности, усиливающей транскрипцию, описанной SEQ ID NO: 1-15, или с ее комплементом.
2. Способ получения растения или его части с, по сравнению с соответствующим контрольным растением или его частью, усиленной семя-специфичной и/или семя-предпочтительной экспрессией одной или более молекул нуклеиновых кислот, содержащий стадии
a) введения в растение или его часть одной или более NEENA, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 i)-vi),
и
b) функционального связывания указанной одной или более NEENA со семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором и с молекулой нуклеиновой кислоты, находящейся под контролем указанного семя-специфичного и/или семя-предпочтительного промотора, где NEENA является гетерологичной по отношению к указанной молекуле нуклеиновой кислоты.
3. Способ по пп.1 и 2, содержащий стадии
a) введения одной или более NEENA, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 i)-vi), в растение или его часть и,
b) интеграции указанной одной или более NEENA в геном указанного растения или его части, посредством чего указанная одна или более NEENA функционально связывается с эндогенной семя-специфично и/или семя-предпочтительно экспрессируемой нуклеиновой кислотой, гетерологичной по отношению к указанной одной или более NEENA, и при необходимости
с) регенерации растения или его части, содержащих указанную одну или более NEENA, из указанной трансформированной клетки.
4. Способ по пп.1 и 2, содержащий стадии
a) обеспечения экспрессионной конструкции, содержащей одну или более NEENA, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 i)-vi), функционально связанную с семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором и с одной или более молекулами нуклеиновой кислоты, причем последняя является гетерологичной по отношению к указанной одной или более NEENA, и которая находится под контролем указанного семя-специфичного и/или семя-предпочтительного промотора, и
b) интеграции указанной экспрессионной конструкции, содержащей указанную одну или более NEENA, в геном указанного растения или его части, и при необходимости
c) регенерации растения или его части, содержащих указанную одну или более экспрессионную конструкцию, из указанного трансформированного растений или его части.
5. Способ по пп.1 и 2, в котором растение является однодольным растением или двудольным растением.
6. Способ по п.5, в котором растение является двудольным растением.
7. Способ по п.5, в котором растение является однодольным растением.
8. Способ по пп.1 и 2, в котором указанная одна или более NEENA функционально связывается с семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором близко к сайту инициации транскрипции указанной гетерологичной молекулы нуклеиновой кислоты.
9. Способ по п.8, в котором указанная одна или более NEENA функционально связывается с семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором, удаленным от сайта инициации транскрипции указанной гетерологичной молекулы нуклеиновой кислоты на 2500 п.о. или меньше, предпочтительно 2000 п.о. или меньше, более предпочтительно 1500 п.о. или меньше, еще более предпочтительно 1000 п.о. или меньше и наиболее предпочтительно 500 п.о. или меньше.
10. Способ по пп.1 и 2, в котором указанная одна или более NEENA функционально связывается с семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором против хода транскрипции от сайта инициации трансляции молекулы нуклеиновой кислоты, экспрессия которой находится под контролем указанного семя-специфичного и/или семя-предпочтительного промотора.
11. Способ по пп.1 и 2, в котором указанная одна или более NEENA функционально связывается с семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором в пределах 5'UTR молекулы нуклеиновой кислоты, экспрессия которой находится под контролем указанного семя-специфичного и/или семя-предпочтительного промотора.
12. Рекомбинантная экспрессионная конструкция, содержащая одну или более NEENA, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 i)-vi).
13. Рекомбинантная экспрессионная конструкция по п.12, содержащая одну или более NEENA, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты по п.1 i)-vi), функционально связанную с одним или более семя-специфичным и/или семя-предпочтительным промотором и одой или более экспрессируемой молекулой нуклеиновой кислоты, причем последняя является гетерологичной по отношению к указанной одной или более NEENA.
14. Рекомбинантный экспрессионный вектор, содержащий одну или более рекомбинантную экспрессионную конструкцию по любому из пп.12 и 13.
15. Трансгенное растение или его часть, содержащая одну или более гетерологичную NEENA по п.1 i)-vi).
16. Трансгенная клетка или трансгенное растение или его часть, содержащие рекомбинантный экспрессионный вектор по п.14 или рекомбинантную экспрессионную конструкцию по любому из пп.12 и 13.
17. Трансгенная клетка, трансгенное растение или его часть по п.16, выбранные или полученные из группы, состоящей из бактерий, грибов, дрожжей или растений.
18. Трансгенное растение или его часть по п.17, в котором указанное растение или его часть являются двудольным растением.
19. Трансгенное растение или его часть по п.17, в котором указанное растение или его часть являются однодольным растением.
20. Трансгенная клеточная культура, трансгенное семя, части или материал для размножения, полученный из трансгенной клетки или растения или его части по пп.15-19, содержащие указанную гетерологичную NEENA по п.1 i)-vi), рекомбинантную экспрессионную конструкцию по пп.12 или 13, или рекомбинантный вектор по п.14.
21. Применение NEENA по п.1 i)-vi) или рекомбинантной конструкции, или рекомбинантного вектора, как определено в любом из пп.12-14, для усиления экспрессии в растениях или их частях.
22. Применение трансгенной клеточной культуры, трансгенного семени, трансгенного растения, частей или материала для размножения, полученного из трансгенной клетки или растения, по п.20 для получения пищевых продуктов, кормов для животных, семян, фармацевтических средств или химических продуктов тонкого органического синтеза.