БЛОКАДА CD73

1. Выделенное антитело, которое специфично связывает CD73 человека на поверхности клетки и которое способно нейтрализовать его 5'-эктонуклеотидазную активность.
2. Выделенное антитело по п. 1, отличающееся тем, что указанное антитело связывает димер полипептида CD73 двухвалентным образом.
3. Выделенное антитело по п. 1, отличающееся тем, что указанное антитело по существу не индуцирует интернализацию комплекса антитело-CD73.
4. Выделенное антитело по п. 1 или 2, отличающееся тем, что указанное антитело по существу не демонстрирует связывания через Fc-домен с полипептидом CD16 человека (FcγIII-рецептором).
5. Выделенное антитело, которое специфично связывает CD73 человека и действует как аллостерический ингибитор полипептида CD73 человека, экспрессируемого клеткой.
6. Выделенное антитело по п. 5, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфично связывает полипептид CD73 человека, не вызывая значительной внутриклеточной интернализации указанного полипептида CD73.
7. Выделенное антитело по п. 6, отличающееся тем, что указанное антитело по существу не демонстрирует связывания через Fc-домен с полипептидом CD16 человека (FcγIII-рецептором).
8. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой полноразмерное антитело.
9. Выделенное антитело по любому из пп. 6-8, отличающееся тем, что указанное антитело связывает димер полипептида CD73 двухвалентным образом.
10. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело способно вызывать снижение 5'-эктонуклеотидазной активности CD73, экспрессируемого клеткой, по меньшей мере на 80%.
11. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело способно нейтрализовать 5'-эктонуклеотидазную активность растворимого полипептида CD73 человека.
50
12. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело характеризуется EC для нейтрализации 5'-эктонуклеотидазной активности клеточного CD73, составляющей не более 1 мкг/мл, при этом нейтрализацию ферментативной активности CD73 определяют путем оценки нейтрализации 5'-эктонуклеотидазной активности в клетках MDA-MB-231 путем количественного определения гидролиза АМФ до аденозина.
13. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело связывается с полипептидом CD73, который связан с субстратом, при этом возможно указанный субстрат представляет собой аденозин-5'-(α,β-метилен)дифосфат (АРСР) или АМФ.
14. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело способно нейтрализовать 5'-эктонуклеотидазную активность растворимого димерного полипептида CD73 человека, когда антитело представлено в 10-кратном молярном избытке по отношению к димеру полипептида CD73.
50
15. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело характеризуется EC, определяемой путем проточной цитометрии, составляющей не более 5 мкг/мл, возможно не более 3 мкг/мл, не более 2 мкг/мл, не более 1 мкг/мл или не более 0,05 мкг/мл, для связывания с клетками, полученными для экспрессии на своей поверхности полипептида CD73, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
16. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело способно вызывать снижение 5'-эктонуклеотидазной активности клеточного полипептида CD73 человека более чем на 50%, возможно более чем на 70%, возможно более чем на 80%.
17. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело способно вызывать снижение 5'-эктонуклеотидазной активности полипептида CD73 человека в растворе более чем на 50%, возможно более чем на 70%, возможно более чем на 80%.
18. Выделенное моноклональное антитело, характеризующееся:
a) специфическим связыванием с высокой аффинностью и/или нейтрализацией 5'-эктонуклеотидазной активности полипептидов CD73 человека, экспрессируемых на поверхности клетки;
b) способностью специфично связываться двухвалентным образом с полипептидами CD73 человека;
c) нейтрализацией 5'-эктонуклеотидазной активности полипептида CD73 человека в растворе;
d) отсутствием индуцирования понижающей модуляции и/или интернализации комплекса антитело-CD73; и
e) отсутствием специфического связывания (например, через Fc-домен) с Fcγ-рецептором человека CD16.
19. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело связывает общую антигенную детерминанту, присутствующую на CD73, когда его активный центр не занят/не связан с субстратом, и когда активный центр CD73 занят/связан с субстратом.
20. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело связывает антигенную детерминанту в каждой полипептидной цепи CD73 в димере CD73, при этом указанные антигенные детерминанты присутствуют на общей стороне димера CD73.
21. Антитело, которое связывает антигенную детерминанту в каждой полипептидной цепи CD73 в димере CD73, при этом указанные антигенные детерминанты присутствуют на общей стороне димера CD73.
22. Антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело конкурирует за связывание с полипептидом CD73, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO 1, с антителом, содержащим определяющие комплементарность области (CDR) тяжелой и легкой цепи или вариабельные области тяжелой и легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 11Е1, 8С7, 3С12 и 6Е1; и/или отличающееся тем, что указанное антитело демонстрирует уменьшенное связывание с мутантным полипептидом CD73, содержащим мутацию в 1, 2, 3, 4 или 5 остатках, выбранных из группы, состоящей из: А99, Е129, К133, Е134 и А135 (со ссылкой на SEQ ID NO: 1), в каждом случае относительно связывания указанного антитела и полипептида CD73 дикого типа, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
23. Антитело, которое конкурирует за связывание с полипептидом CD73 последовательности SEQ ID NO: 1 с антителом, содержащим CDR тяжелой и легкой цепи или вариабельные области тяжелой и легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из 11Е1, 8С7, 3С12 и 6Е1, и которое нейтрализует 5'-эктонуклеотидазную активность растворимого полипептида CD73 человека.
24. Антитело, выбранное из группы, состоящей из:
(a) моноклонального антитела, содержащего (i) тяжелую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3, и (ii) легкую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 4;
(b) моноклонального антитела, содержащего (i) тяжелую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3, и (ii) легкую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21;
(c) моноклонального антитела, содержащего (i) тяжелую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 28, и (ii) легкую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 29; и
(d) моноклонального антитела, содержащего (i) тяжелую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 36, и (ii) легкую цепь, содержащую CDR 1, 2 и 3 вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 37.
25. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело связывается с эпитопом, содержащим 1, 2, 3, 4 или 5 остатков, выбранных из группы, состоящей из А99, Е129, К133, Е134 и А135 со ссылкой на SEQ ID NO: 1.
26. Антитело, которое связывает CD73, отличающееся тем, что указанное антитело демонстрирует уменьшенное связывание с мутантным полипептидом CD73, содержащим мутацию в 1, 2, 3, 4 или 5 остатках, выбранных из группы, состоящей из А99, Е129, К133, Е134 и А135 (со ссылкой на SEQ ID NO: 1); в каждом случае относительно связывания указанного антитела и полипептида CD73 дикого типа, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
27. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело связывается с эпитопом, присутствующим на полипептиде CD73 нечеловекообразного примата, при этом возможно указанный нечеловекообразный примат представляет собой яванского макака.
28. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой IgG4-антитело или антитело, содержащее Fc-домен, модифицированный для уменьшения связывания между указанным Fc-доменом и Fcγ-рецептором.
-9
29. Выделенное антитело по любому из предшествующих пунктов, отличающееся тем, что указанное антитело имеет KD меньше 10 М в отношении связывания полипептида CD73.
30. Антитело, полученное путем химеризации или гуманизации антитела по любому из пп. 1-29.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из предшествующих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.
32. Набор, содержащий антитело по любому из предшествующих пунктов, возможно дополнительно содержащий меченое вторичное антитело, которое специфично распознает антитело по любому из предшествующих пунктов.
33. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую и/или легкую цепь антитела по любому из пп. 1-30.
34. Рекомбинантная клетка-хозяин, продуцирующая антитело по любому из пп. 1-30.
35. Способ лечения или предотвращения заболевания у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение указанному пациенту эффективного количества антитела по любому из пп. 1-30 или композиции по п. 31.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанное заболевание представляет собой рак.
37. Способ лечения или предотвращения рака у нуждающегося в этом пациента, при этом указанный способ включает введение указанному пациенту эффективного количества антитела, связывающего CD73 человека на поверхности клетки и способного нейтрализовать его 5'-эктонуклеотидазную активность, при этом указанное антитело содержит Fc-домен, модифицированный для уменьшения связывания между указанным Fc-доменом и Fcγ-рецептором.
38. Антитело по любому из пп. 1-30, отличающееся тем, что Fc-домен содержит одну или более замен аминокислот, обеспечивающих снижение чувствительности к расщеплению протеазами, при этом возможно указанные замены включают замену одного, двух, трех или более остатков в остатках 233-238 (нумерация ЕС).
39. Антитело по любому из пп. 1-30, отличающееся тем, что указанное антитело представляет собой IgG1 и содержит одну, две или три замены в остатках 234, 235 и 331 или 234, 235 и 322 (нумерация ЕС).
40. Способ по любому из пп. 35-37, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой IgG1 и содержит одну, две или три замены в остатках 234, 235 и 331 или 234, 235 и 322 (нумерация ЕС).
41. Способ повышения активности Т-клеток у субъекта, страдающего раком, при этом указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества антитела по любому из пп. 1-30, 38 или 39, или композиции по п. 31.
42. Способ уменьшения аденозин-опосредуемого ингибирования активности Т-клеток у субъекта, страдающего раком, при этом указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества антитела по любому из пп. 1-30, 38 или 39, или композиции по п. 31.
43. Способ повышения активности Т-клеток в микроокружении опухоли у субъекта, при этом указанный способ включает введение указанному субъекту эффективного количества антитела по любому из пп. 1-30, 38 или 39, или композиции по п. 31.
44. Способ лечения или предотвращения рака у нуждающегося в этом индивидуума, при этом указанный способ включает:
a) определение CD73-полипептидного статуса клеток в окружении опухоли, возможно внутри опухоли и/или в прилегающей ткани, возможно клетках опухоли, и
b) при определении, что окружение опухоли содержит клетки, экспрессирующие полипептид CD73, возможно на уровне, повышенном по сравнению с эталонным уровнем, введение указанному индивидууму антитела по любому из пп. 1-30, 38 или 39, или композиции по п. 31.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что определение CD73-полипептидного статуса в окружении опухоли включает получение от индивидуума биологического образца, содержащего раковую ткань и/или прилегающую ткань, приведение указанных клеток в контакт с антителом, которое связывает полипептид CD73, и детектирование клеток, экспрессирующих CD73.
50
46. Способ по любому из пп. 35-37, 40-45, отличающийся тем, что антитело анти-CD73 вводят по меньшей мере один раз в количестве, эффективном для достижения концентрации в крови (сыворотке) или ткани опухоли, которая соответствует по меньшей мере EC для нейтрализации ферментативной активности CD73.
50
47. Способ лечения заболевания у индивидуума, при этом указанное лечение включает введение указанному индивидууму антитела анти-CD73, которое нейтрализует ферментативную активность CD73, в течение по меньшей мере одного цикла введения, в котором антитело анти-CD73 вводят по меньшей мере один раз в количестве, эффективном для достижения концентрации в крови (сыворотке) или ткани опухоли, которая соответствует по меньшей мере EC для нейтрализации ферментативной активности CD73.
48. Способ по любому из пп. 37, 40-47, отличающийся тем, что нейтрализацию ферментативной активности CD73 определяют путем оценки нейтрализации 5'-эктонуклеотидазной активности в клетках MDA-MB-231 путем количественного определения гидролиза АМФ до аденозина.
49. Способ по любому из пп. 37, 40-48, отличающийся тем, что опухоль или рак представляет собой солидную опухоль.
50. Способ по любому из пп. 37, 40-48, отличающийся тем, что опухоль или рак представляет собой лейкоз, рак мочевого пузыря, глиому, глиобластому, рак яичников, меланому, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, рак пищевода или рак молочной железы.