Способ терапии и профилактики прогрессирования хронической почечной недостаточности
METHOD FOR THERAPY AND PREVENTION OF PROGRESSION OF CHRONIC RENAL FAILURE

Способ относится к области медицины, а именно к нефрологии, урологии, хирургии и регенеративной медицине.
Ряд урологических (удаление камней почки, особенно при коралловидном или двустороннем нефролитиазе), хирургических (операции на почечных сосудах) и онкологических (нефрэктомия, резекция почки по поводу рака) операций на почке могут сопровождаться развитием острой почечной недостаточности (ОПН) в послеоперационном периоде, которая в дальнейшем при определенных неблагоприятных условиях может переходить в хроническую почечную недостаточность (ХПН). Особенно высока вероятность такого исхода при операциях на единственной или единственно функционирующей почки. Помимо последствий оперативного лечения заболеваний почек ХПН часто развивается в результате длительно текущих хронических заболеваний органов мочевой системы, в частности мочекаменной болезни с развитием рецидивного двустороннего нефрролитиаза (особенно с формированием коралловидных камней), двустороннего пузырно-мочеточникового рефлюкса, мегауретера, хронического пиелонефрита, различных вариантов хронического гломерулонефрита и системных заболеваний (волчаночный нефрит, поражения почек при подагре, ревматизме и др.).
В этих ситуациях важно затормозить прогрессирование ХПН и не допустить ее перехода в терминальную стадию, при которой единственными методами помощи больным являются хронический гемодиализ и трансплантация почки, возможности которых во всем мире не позволяют оказывать помощь всем нуждающимся пациентам.
Терапевтические способы профилактики прогрессирования и лечения ХПН основаны на коррекции образа жизни (физическая активность, коррекция избыточной массы тела), соблюдении специальной диеты и фармакологической терапии (антигипертензивные препараты, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента и его рецепторов, антагонитсты рецепторов минералокортикоидов, блокаторы β-адренорецепторов, при необходимости гипогликемические препараты и средства, снижающие уровень холестерина, препараты улучшающие микроциркуляцию и активирующие клеточный метаболизм (Vanholder R., Van Laecke S., Glorieux G., Verbeke F., Castillo-Rodriguez E., Ortiz A. Deleting Death and Dialysis: Conservative Care of Cardio-Vascular Risk and Kidney Function Loss in Chronic Kidney Disease (CKD). Toxins 2018, 10, 237; doi:10.3390/toxins10060237). Однако терапевтические средства, как правило, помогают на начальных стадиях развития ХПН и по мере увеличения ее тяжести эффективность такой терапии снижается.
В связи с развитием регенеративной медицины интенсивно исследуются возможности клеточной терапии с использованием стволовых клеток различного происхождения для профилактики прогрессирования и лечения ХПН. Наиболее часто используются аутологичные мезенхимные стволовые клетки костного мозга, подкожной жировой клетчатки, (Eirin A., Lerman L.O. Mesenchymal stem cell treatment for chronic renal failure. Stem Cell Research & Therapy 2014, 5:83). Недостатками этого метода являются сложность их культивирования с получением достаточного количества биологического материала, а также возможность их адипогенной, хондрогенной или остеогенной дифференцировка и опасность тромботических осложнений при внутрисосудистом введении.
Разрабатываются методы использования стволовых клеток эмбрионов или плодов животных или человека, обладающих наибольшим пролиферативным потенциалом и способностью к дифференцировке в клетки различных линий, в том числе в клетки почки с формированием органоидных структур (Bantounas I, Ranjzad P, Tengku F, Silajdžić E, Forster D, Asselin MC, Lewis P, Lennon R, Plagge A, Wang Q, Woolf AS, Kimber SJ. Generation of functioning nephrons by implanting human pluripotent stem cell-derived kidney progenitors. Stem Cell Rep. 2018; 10:766-779). Недостатками этого подхода является потенциальная возможность развития ответной иммунной реакции с отторжением пересаженных клеток, опасность развития злокачественных заболеваний, а также наличие проблем юридического и этического характера.
Наиболее близким (прототипом) является способ профилактики и лечения острой постишемической почечной недостаточности (RU 2737802 C2). Комплекс биологических активных пептидов и белков с молекулярной массой от 10 до 250 кДа, представляющий собой активный компонент фармакопейного препарата «Целлекс», хроматографически выделенный из тканей эмбрионов животных или головного мозга эмбрионов свиньи, вводят подкожно перед операцией в дозе 0,015-0,1 мл/кг, с последующим ежедневным введением в течение 10 дней.
Недостатками данного способа являются то, что он предназначен для профилактики и лечения острой почечной недостаточности, развившейся после операций на почке. При этом начало терапии в соответствии с этим способом следует начинать до развития ишемического повреждения почек или на самом раннем этапе развития функциональных нарушений. Его реализация предусмотрена для случаев с исходно нормальной или нерезко нарушенной функции почек, когда кратковременная терапия данным белково-пептидным комплексом, включающим факторы роста, цитокины и ангиогенные факторы, позволяет уменьшить выраженность развивающихся ишемических нарушений и предотвратить их переход в необратимую фазу, ведущую к гибели паренхимы органа и развитию ХПН. В случае уже развившейся ХПН, когда функциональные нарушения приобретают стойкий характер и имеют тенденцию к прогрессированию, требуется более интенсивная терапия в другом режиме и в более высоких дозах для восстановления уже поврежденных клеточных структур, что является основой заявляемого способа.
Техническим решением является повышение эффективности лечения и профилактики прогрессирования хронической почечной недостаточности за счет длительной стимуляции регенераторных процессов в почке при использовании белково-пептидного комплекса, хроматографически выделенного из головного мозга эмбрионов свиньи, содержащий биологически активные пептиды и белки с молекулярной массой от 10 до 250 кДа, являющегося активным компонентом фармакопейного препарата «Целлекс» в более высокой дозе.
Указанные и технические лечебные результаты достигаются за счет того, что также как и в известном способе подкожно вводят комплекс биологических активных пептидов и белков с молекулярной массой от 10 до 250 кДа, представляющий собой активный компонент фармакопейного препарата «Целлекс», хроматографически выделенный из головного мозга эмбрионов свиньи, в дозе 0,1 мл/кг.
Особенность заявляемого способа заключается в том, что терапию фармакопейным препаратом «Целлекс» проводят не менее 30 дней непрерывно или курсами  с длительностью первого курса 20 дней и длительностью последующих курсов по 10 дней с 10-дневными перерывами до нормализации или стойкого улучшения функциональных показателей.
Способ  предполагается использовать при развитии ХПН не только, вызванного операционной травмой, как предусмотрено в способе-прототипе, но при ХПН любой другой этиологии (хроническое воспаление, токсическое повреждение). При этом проводят не менее 3 курсов терапии по 10 дней, причем первый курс может быть увеличен до 20 дней, с 10-дневными перерывами между курсами или осуществляют постоянную терапию в течение 30 дней под контролем биохимических показателей функционального состояния почек. При недостаточной степени улучшения функциональных показателей 10-дневный курс повторяют до достижения нормализации или стойкого улучшения функциональных показателей.
Изобретение поясняется подробным описанием, клиническими примерами, таблицами и иллюстрациями, на которых изображено:
Фиг. 1 - Гистологическая картина ткани почек крыс с моделированием ХПН. а) выраженное склерозирование почечных клубочков с наличием эритроцитарных тромбов в клубочковых капиллярах у крыс с ХПН в контрольной серии; б) малоизмененные клубочки в серии с терапией белково-пептидным комплексом. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400х.
Фиг. 2 - Участок с деструктивно измененными почечными канальцами у крыс с моделированием ХПН без терапии. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 100х.
Фиг. 3 - Очаги интерстициального склероза в ткани почек крыс с моделированием ХПН: а) контрольная группа; б) терапия эмбриональным белково-пептидным комплексом. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 100х.
Способ осуществляют следующим образом.
С целью лечения ХПН различной этиологии и предупреждения ее прогрессирования белково-пептидный комплекс проводят не менее 3 курсов терапии белково-пептидным комплексом, хроматографически выделенным из головного мозга эмбрионов свиньи по 10 дней в ежедневной дозе 0,1 мл/кг (0,1 мг активных веществ) с 10-дневными перерывами между ними. При исходно выраженных функциональных нарушениях первый курс терапии проводят в течение 20 дней. При необходимости, если после 3 курсов терапии ожидаемого улучшения показателей не достигнуто, проводят дополнительные курсы 10-дневной терапии по той же схеме.
Эффективность заявляемого способа иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Стимулирующее влияние белково-пептидного комплекса на компенсаторную гипертрофию почки при моделировании ХПН.
У 18 крыс моделировали ХПН путем резекции полюсов левой почки и правосторонней нефрэктомии. В результате масса функционирующей почечной паренхимы уменьшалась на 78%. Через 7 дней при биохимическом анализе крови выявляли типичные признаки развития хронической почечной недостаточности с увеличением уровня мочевины крови с 6,1±0,3 до 8,4±0,4 ммоль/л (p<0,01), а креатинина крови с 60±1 до 112±9 мкмоль/л (р<0,001).
В дальнейшем 6 крысам проводили 3 курса терапии белково-пептидным комплексом, выделенным из эмбрионального головного мозга свиньи (каждый курс по 10 дней) в дозе 0,1 мл/кг в день, с 10-дневными перерывами между ними, 6 крысам проводили аналогичную терапию, но первый курс был длительностью 20 дней, а последующие 2 курса - по 10 дней, а 6 крысам никакой терапии не проводили. Через 30 и 60 дней у животных обеих групп удаляли почку и определяли ее массу взвешиванием (по 5 животных в каждой группе).
Результаты показали, что в контрольной группе масса резецированной почки через 1 месяц возрастала с 0,54±0,03 до 1,69±0,03 г., а в группе с терапией белково-пептидным комплексом она возрастала до 1,89±0,06 г в группе с первым курсом в 10 дней и до 1,96±0,04 в группе с первым 20-дневным курсом. Различия между контрольной и обеими опытными группами оказались достоверными при р<0,05, тогда как между двумя опытными группами достоверных различий не выявили. Через 2 месяца в контрольной группе масса органа достоверно уменьшалась по сравнению с предыдущим сроком, составив 1,36±0,09 г. (р<0,05), тогда как в опытных группах масса органа оставалась достоверно большей, составив 1,60±0,06 г. и 1,72±0,04 г. в группах с первым 10-дневным и 20-дневным курсами соответственно (р<0,05).
В результате, масса резецированной почки в контрольных опытах через 1 месяц составляла 68,7% от массы 2 интактных почек, а через 2 месяца - всего 55,3%, тогда как при терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом масса оставшейся почки в эти сроки составила в группе с первым 10-дневным курсом 76,8% и 65,1% соответственно, а с 20-дневным курсом - 79,7% и 70,2% (различия достоверны при р<0,05).
Таким образом, терапия белково-пептидным комплексом, выделенным из мозга эмбрионов свиньи, способствует стимуляции гипертрофии почки после ее резекции и возрастанию ее массы до значений более близких к нормальным значениям функционально активной массы почечной паренхимы по сравнению с контрольными опытами, где эта терапия не проводилась, что создает предпосылки для уменьшения или стабилизации выраженности ХПН. При этом проведение более длительного первого курса терапии (20 дней) способствует более выраженной гипертрофии почки через 2 месяца (на 5%).
Пример 2.
Влияние терапии белково-пептидным комплексом, выделенным из мозга эмбрионов свиньи, в соответствии с заявляемым способом на показатели функционального состояния почки при моделировании ХПН путем резекции ткани почки.
У 30 крыс моделировании ХПН, как описано в примере 1. Через 7 суток всех животных высаживали в обменные клетки для сбора суточной мочи и брали пробу крови из хвостовой вены. Определяли биохимические и расчетные показатели, характеризующие функцию почек (мочевина, креатинин, клубочковая фильтрация, реабсорбция натрия) для подтверждения развития ХПН. Крыс с признаками ХПН делили на 2 группы.
В контрольной группе терапии не проводили. В 1-й опытной группе крысам проводили 3 десятидневных курса терапии белково-пептидным комплексом, выделенным из мозга эмбрионов свиньи, как описано в примере 1. Во 2-й опытной группе проводили непрерывную терапию в течение 30 дней. В 1-й опытной группе через 10, 20, 30, 40, 50 и 60 дней после начала терапии определяли те же показатели функционального состояния почки, что и сразу после моделирования ХПН, а также активность цитоплазматических ферментов, характеризующих выраженность повреждения клеток, в крови (АЛТ, АСТ, ЛДГ, щелочная фосфатаза). Во 2-й опытной группе эти показатели определяли в конце терапии (через 30 дней) и через 30 дней после ее окончания (через 60 дней).
Через 7 суток после моделирования ХПН концентрация мочевины в крови возросла с 6,1±0,2 до 8,4±0,3 ммоль/л, а креатинина крови с 60±2 до 122±4 мкмоль/л. Клубочковая фильтрация при этом снизилась с 1,44±0,09 до 0,63±0,01 мл/мин, а реабсорбция натрия - с 99,3±0,0,3 до 98,6±0,05%. Все эти показатели характеризовали развитие хронической почечной недостаточности. Эти животные были включены в исследование.
Определение показателей функции почек в динамике показало, через что в 1-й опытной группе уровень мочевины и креатинина крови после 10-дневной терапии оказался достоверно ниже, чем в контрольной группе. После 10-дневного перерыва различия между группами нивелировались, но после второго 10-дневного курса терапии (30 суток наблюдения) эти показатели у крыс опытной группы вновь были достоверно ниже, чем в контроле. После 2-го 10-дневоного перерыва (40 суток наблюдения) уровень мочевины в опытной группе оставался достоверно ниже контрольной группы, но концентрация креатинина в крови в обеих группах практически сравнялась. После 3-го курса терапии как концентрация мочевины крови, так и уровень креатинина в контрольной группе сохранялся на стойко повышенных значениях без тенденции к нормализации, тогда как в опытной группе эти показатели были достоверно ближе к норме, как при окончании 10-дневного курса, так и через 10 дней после его прекращения, что свидетельствовало о достигнутой стабилизации функционального состояния почки (Табл. 1). Во 2-й опытной группе через 30 дней терапии и через 30 дней после ее прекращения все показатели достоверно улучшались по сравнению с контрольными опытами. К концу периода наблюдения достоверных различий в функциональных показателях между 1-й и 2-й опытными группами не выявляли.
Динамика величины клубочковой фильтрации в 1-й опытной группе была примерно такой же: к концу каждого из 3 курсов терапии в опытной группе она была более высокой, чем в контроле, приближаясь к нормальным значениям, тогда как в контрольной группе к концу периода наблюдения она существенно снижалась. Различий в динамике канальцевой реабсорбции натрия между опытной и контрольной группами в течение 2 курсов терапии не выявили: значения этого показателя оставались существенно ниже нормы. Однако после 3-го курса терапии этот показатель в опытной группе практически нормализовался, тогда как в контроле он по-прежнему был существенно снижен. Во 2-й опытной группе через 30 и 60 дней после начала терапии функциональные показатели были достоверно лучше, чем в контрольных опытах, но практически не отличались от значений в 1-й опытной группе.
В отношении уровня ферментемии терапия эмбриональным белково-пептидным комплексом при обоих вариантах терапии сопровождалась более низкими значениями активности ферментов в крови по сравнению с контролем в отношении всех изученных ферментов, за исключением щелочной фосфатазы. Различия были особенно выражены в конце периода наблюдения (после 3 курсов терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом или в течение 1 месяца после 30-дневной непрерывной терапии). Более низкая активность ферментов в крови свидетельствует о лучшей сохранности клеток почки и сохранении барьерных свойств клеточных мембран, что препятствует выходу цитоплазматических ферментов за пределы клеток и попаданию их в кровь.
Данный пример иллюстрирует, что без терапевтических мероприятий происходит прогрессивное ухудшение изученных показателей, что свидетельствует о прогрессировании ХПН. Стабилизация этих показателей на фоне терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом, как при использовании прерывистой курсовой терапии, так и при непрерывной терапии, доказывает отсутствие прогрессирования ХПН.
Пример 3.
Влияние увеличение длительности первого курса терапии белково-пептидным комплексом, выделенным из мозга эмбрионов свиньи, до 20 дней на показатели функционального состояния почки при моделировании ХПН.
У 12 крыс моделировали ХПН, как описано в примере. В дальнейшем им проводили курсовую терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом, как описано в примере 2, но у 6 крыс первый курс терапии был длительностью 10 дней, а у других 6 крыс - длительностью 20 дней. В последующем всем крысам проводили еще по 2 10-дневных курса с интервалом в 10 дней. Функциональные показатели, характеризующие функциональное состояние почек определяли сразу после окончания терапии
После завершения последнего курса (через 60 и 70 дней) определяли биохимические показатели выраженности ХПН (Табл. 2).
Результаты показали, что увеличение длительности первого курса терапии с 10 до 20 дней сопровождается более выраженной тенденцией улучшения функциональных показателей почки. В отношении уровня мочевины крови и реабсорбции натрия в почечных канальцах уже после завершения 1-го курса отмечено достоверное более выраженное улучшение этих показателей, а в отношении уровня креатинина крови и величины клубочковой фильтрации более выраженное их улучшение достигнуто после завершения 2-го курса терапии и сохранялось в дальнейшем.
Таким образом, увеличение длительности первого курса терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом с 10 до 20 дней ускоряет темп восстановления функционального состояния поврежденной почки, что особенно важно при исходно выраженных функциональных нарушениях.
Пример 4.
Влияние терапии эмбриональным белково-пептидным комплексов на выраженность ХПН, вызванной хроническим пиелонефритом.
9
У 20 беспородных крыс-самой вызывали развитие хронического пиелонефрита по следующей методик: под наркозом производили выделение обеих мочеточников из окружающих тканей от почечной лоханки до мочевого пузыря, что вызывали ухудшение транспорта мочи по мочевым путям. Через 1 неделю катетеризировали мочевой пузырь и внутрипузырно вводили 1 мл суспензии культуры E.coli в титре 10 микробных тел в 1 мл. Поскольку объем вводимой взвеси превышал функциональную емкость мочевого пузыря крыс (0,5=0,7 мл) то из-за резкого повышения внутрипузырного давления происходил заброс инфекционного агента в почку (пузырно-ренальный рефлюкс), что инициировало воспалительный процесс в почке. Процедуру выполняли 3-кратно с 7-дневным интервалом, что приводило к развитию хронического пиелонефрита, который подтверждался воспалительным изменениями в моче (щелочная моча, лейкоцитурия, бактериурия) и ухудшением функции почек (протеинурия, повышение уровня мочевины и креатинина крови. В дальнейшем за крысами наблюдали в течение 2 недель и при стабильном ухудшении показателей констатировали развитие ХПН (таблица 3).
В опытной группе 10 крысам с ХПН проводили терапию эмбриональным белково-пептидным комплексом в дозе 0,1 мл/кг в течение 20 дней 1-го курса и последующих двух 10-дневных курсов с 10-дневными перерывами между ними в соответствии с заявляемым способом. У контрольных 10 крыс терапии не проводили. Через 10 дней после завершения последнего курса определяли биохимические показатели крови, характеризующие функциональное состояние почек и проводили общий анализ мочи.
К концу периода наблюдения 2 крысы контрольной группы умерли от обострения ХПН, тогда как в опытной группе все животные выжили (выживаемость 80% в контроле и 100% в опыте).
В общем анализе мочи выживших крыс в контрольной группе сохранялись выраженные воспалительные изменения, тогда как при терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом признаки активности воспалительного процесса существенно уменьшились (таблица 4).
рН мочи нормализовался, выраженность лейкоцитурии, протеинурии и бактериурии достоверно уменьшилась. При этом уровни мочевины и креатинина крови приблизились к нормальным значениям.
Таким образом, заявляемый способ оказывает выраженное терапевтическое действие при ХПН, вызванной длительным течением хронического пиелонефрита, способствуя снижению летальности животных и улучшению всех функциональных показателей.
Пример 5.
Влияние терапии эмбриональным белково-пептидным комплексов на выраженность ХПН, вызванной токсическим повреждением почек.
У 10 крыс вызывали токсическое повреждение почек путем ежедневного внутрибрюшинного введения гентамицина в дозе 100 мг/кг в течение 5 дней. Через 1 месяц подтверждали развитие ХПН по стойкому увеличению концентрации мочевины и креатинина в крови животных. В дальнейшем 5 крысам проводили терапию эмбриональным белково-пептидным комплексом, как описано в примере 4, а другим 5 крысам терапии не проводили. После завершения курса терапии (через 2 месяца) у животных обеих групп определяли показатели функционального состояния почек (таблица 5).
Результаты исследования показатели, что в группе крыс, леченых белково-пептидным комплексом, все функциональные показатели оказались ближе к нормальным значения, а показатель канальцевой реабсорбции натрия даже полностью нормализовался.
Таким образом, заявляемый способ терапии белково-пептидным комплексом позволяет уменьшить развитие функциональных расстройств при ХПН токсической этиологии.
Пример 6.
Влияние терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом на выраженность склеротических процессов в почке при моделировании ХПН.
Основной причиной развития и прогрессирования ХПН является уменьшение массы функционально активной паренхимы органа ниже критического уровня в результате прогрессирования патологического процесса. Погибшая паренхима органа замещается соединительной тканью, которая выявляется при гистологическом исследовании в виде очагового или диффузного склероза.
С целью изучения влияния эмбрионального белково-пептидного комплекса на процесс склерозирования почки при развитии ХПН у 12 крыс моделировали ХПН, как описано в примере 5. При этом у 6 крыс провели терапию эмбриональным белково-пептидным комплексом в объеме 3 десятидневных курсов с 10-дневными перерывали между ними, а у 6 других крыс терапии не проводили. Через 2 месяца удаляли почки и проводили их гистологическое исследование.
Результаты исследования показали, что в обеих группах происходило склерозирование ряда клубочков и канальцев, а также формирования очагов склероза в межканальцевой интерстициальной ткани (Табл. 6).
При этом количество склерозированных клубочков и степень их сморщивания оказались меньше в серии опытов, в которых проводили терапию эмбриональным белково-пептидным комплексом. В сморщенных клубочках контрольных животных выявляли обеднение капиллярного русла с заполнением просвета капилляров эритроцитарными тромбами (Фиг. 1а). Просвет капсулы Шумлянского-Боумена выглядел спавшим, что указывало на сниженную фильтрационную функцию этих клубочков. В опытной группе животных капиллярная сеть клубочков сохранялась и четко выявлялся просвет капсулы Шумлянского-Боумена (Фиг. 1б).
В контрольных опытах выявляли участки с комплексом разрушенных почечных канальцев, практически лишенных эпителиальной выстилки (Фиг. 2), тогда как в опытной группе таких участков не выявляли.
Количество и распространенность очагов интерстициального склероза также оказалась меньше в опытах с терапией эмбриональным комплексом. Очаги интерстициального склероза в почках крыс контрольной группы были более массивными и были окружена канальцами с дистрофически измененным эпителием (Фиг. 3 а), тогда как при терапии эмбриональным комплексом очаги склероза небольшого размера окружали канальцы с сохраненной эпителиальной выстилкой (Фиг. 3 б).
Менее выраженный процесс склерозирования клубочков, канальцев и интерстициальной ткани в результате терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом свидетельствует об уменьшении повреждения клеточных структур почки в процессе развития ХПН и об уменьшения риска прогрессирования.
Пример 7.
Влияние эмбрионального белково-пептидного комплекса на накопление уремических нейротоксинов при ХПН.
Одним из признаков тяжести ХПН является степень накопления в крови уремических токсинов, негативно влияющих на функцию центральной нервной системы. Такими токсинами являются 3-индоксил сульфат и р-толил сульфат.
В экспериментах на 20 крысах-самцах, которых моделировали ХПН в разных вариантах: у 10 использовали модель резекции 4/5 массы почек (как описано в примере 1), а у других 10 крыс - модель токсического повреждения, как описано в примере 5.
У 5 крыс каждой группы никакой терапии не проводили, а у других 5 крыс провели три 10-дневных курса терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом с 10-дневным перерывом, как описано в примере 1. Через 2 месяца после моделирования ХПН брали пробы крови из хвостовой вены и в сыворотке определяли концентрацию 3-индоксил сульфата и р-толил сульфата с использованием методов жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (таблица 7).
В опытах с резекцией почки у крыс контрольной серии (без терапии) концентрация токсинов значительно возрастала: для 3-индоксил сульфата в 2,5 раза - с 935±123 нг/мл до 2504±141 нг/мл, а для р-толил сульфата в 10 раз - с 42±4 нг/мл до 426±38 нг/мл. В серии опытов с терапией эмбриональным белково-пептидным комплексом повышение уровня токсинов было достоверно меньше - концентрация 3-индоксил сульфата возрастала до 1790±132 нг/мл, а уровень р-толил сульфата - до 173±24 нг/мл (достоверность различий по сравнению с контролем - p<0,01). В опытах с токсической моделью ХПН выявлялась примерно такая же картина. В контрольной серии уровень 3-индоксил-сульфата возрастал до 2848±133 нг/мл, а концентрация р-толил-сульфата - до 633±42 нг/мл. В опытной серии с терапией эмбриональным белково-пептидным комплексом степень возрастания оказалась достоверно меньшей: до 1831±144 нг/мл и 215±22 нг/мл соответственно.
Менее выраженное накопление уремических нейротоксинов при моделировании ХПН различной этиологии в опытах с терапией эмбриональным белково-пептидным комплексом свидетельствует о торможении прогрессирования ХПН под действием препарата и об уменьшении потенциальных осложнений ХПН со стороны центральной нервной системы.
Пример 8.
Сравнение эффективности заявляемого способа лечения ХПН со способом-прототипом.
У 15 крыс моделировали ХПН, как описано в примере 1. У 5 крыс проводили терапию белково-пептидным комплексом, в соответствии с заявляемым способом с проведением 3 курсов терапии по 10 дней с ежедневным введением препарата в дозе 0,1 мл/кг с 10-дневными перерывами между ними), у 5 крыс проводили аналогичную терапию, но первый курс был длительностью в 20 дней, а у 5 контрольных крыс проводили один 10-дневный курс с ежедневным введением препарата в дозе 0,015 мл/кг (способ-прототип).
Через 3 месяца определяли биохимические показатели крови и мочи, характеризующие функциональное состояние почки (Табл. 8).
В отдаленном периоде (через 3 месяца) в группе, где для терапии животных использовали способ-прототип средние значения показателей отражали сохранение выраженных нарушений функции почки, что проявлялось в полиурии, повышенной концентрации мочевины и креатинина в крови и сниженным уровнем клубочковой фильтрации. Лишь средние значения уровня канальцевой реабсорбции натрия при этом сроке наблюдения нормализовались.
При этом в группе с терапией эмбриональным белково-пептидным комплексом в соответствии с заявляемым способом средние значения диуреза были значительно ближе к норме, а концентрация мочевины крови, величина клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции натрия вернулись к нормальным значениям. Увеличение длительности первого курса терапии с 10 до 20 дней несколько улучшало результаты, способствуя более выраженной нормализации диуреза, мочевины и креатинина крови, а также клубочковой фильтрации, но различия между этими подгруппами оказались недостоверными, за исключением степени снижения уровня мочевины, которая оказалась достоверно больше (p<0,05) в опытах с 20-дневным первым курсом терапии.
Анализ индивидуальных значений показателей для каждого животного показал, что отличия от нормы через 3 месяца в контрольной группе (способ-прототип) сохранялись у большего числа животных, чем у животных опытной группы (Табл. 9). У всех 5 крыс этой группы сохранялась полиурия с повышением уровня мочевины и креатинина крови при сниженных значениях клубочковой фильтрации. Лишь канальцевая реасборбция натрия нормализовалась у 3 из 5 животных. Таким образом по совокупности показателей, признаки ХПН сохранились у всех 5 крыс этой серии опытов.
В группе животных, леченых по заявляемому способу, у всех крыс произошла полная нормализация уровня мочевины крови и канальцевой реабсорбции натрия, у 40% крыс нормализация диуреза, у 20% нормализация уровня креатинина крови и у 60% нормализация клубочковой фильтрации.
Эти данные свидетельствуют, что при использовании заявляемого способа терапии ХПН сохранялась лишь у 40% крыс этой группы (комбинация увеличенного диуреза, повышенного уровня креатинина крови и снижение клубочковой фильтрации). Таким образом, заявляемый способ оказывает более выраженный терапевтический эффект при лечении ХПН.
Пример 9.
Доказательство эффективности проведения дополнительных курсов терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом
У 4 животных, у которых сохранились признаки ХПН после 3 курсов терапии эмбриональным белково-пептидным комплексом провели дополнительный 10-дневный курс терапии в ежедневной дозе 0,1 мл/кг с определением функциональных показателей через 10 дней после прекращения терапии. Результаты исследования показали, что дополнительный курс терапии у всех животных привел к нормализации диуреза и величины клубочковой фильтрации. Концентрация креатинина крови у 3 крыс снизилась до нормальных значений (в том числе у 2, у которых первоначальный курс был длительностью в 20 дней), а у одного животного, хоть и снизилась, но оставалась немного выше нормы (68 по сравнению с 60±2 мкмоль/л).
Данный пример иллюстрирует, что при недостаточном эффекте 3 курсов терапии в отношении улучшения показателей функционального состояния почек при ХПН проведение дополнительных курсов позволяет улучшить функциональные показатели.
Таким образом, все представленные примеры свидетельствуют о высокой эффективности заявляемого способа в качестве метода терапии ХПН различной этиологии, в том числе за счет уменьшения функционально активной массы органа, инфекционного и токсического генеза, и профилактики ее прогрессирования. Заявляемый способ имеет существенные преимущества перед известными способами, обеспечивает высокие функциональные результаты, не требует культивирования стволовых клеток при возможности немедленного использования готового препарата, а также устраняет имеющиеся этические и юридические проблемы, которые имеются при использовании традиционной клеточной терапии.
Предложенный способ позволяет эффективно осуществлять терапию ХПН различной этиологии и препятствует ее прогрессированию, способствуя улучшению или стабилизации показателей функционального состояния почек за счет активации регенерации поврежденных почечных структур (клубочков и канальцев). При этом данный способ обеспечивает профилактику развития неврологических расстройств, вызванных ХПН за счет уменьшения накопления в крови нейротоксических соединения, в частности, 3-индоксил сульфата и р-толил сульфата.