ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ГРАНУЛЫ, СОДЕРЖАЩИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫЙ КРАХМАЛ, И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ
PHARMACEUTICAL GRANULES, CONTAINING MODIFIED STARCH, AND THEIR THERAPEUTIC APPLICATIONS

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННУЮ ЗАЯВКУ
По данной заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США с серийным № 61/107784, зарегистрированной 23 октября 2008 года, содержание которой включено в данный документ в качестве ссылки.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к применению гранул, включающих расщепленный крахмал в качестве носителя для активного средства, и к способам доставки активных средств, включающим доставку активных веществ через слизистую влагалища.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вагинальная доставка лекарственного средства является перспективным способом местной и системной доставки лекарственного средства. С помощью такого способа доставки можно обойти печеночный барьер, а также можно получить быстрое всасывание благодаря наличию густой сети кровеносных сосудов, окружающих влагалище (NJ. Alexander, E. Baker, M. Kaptein, U. Karck, L. Miller, E. Zampaglione, Fertility и Sterility 82(1) (2004) 1-12; A. Hussain, F. Ahsan, J. Control. Release 103(2) (2005) 301-313). Кроме того, слизистая влагалища обладает значительной проницаемостью для лекарственных средств с высокой молекулярной массой, таких как пептиды и белки (J.L. Richardson, L. Ilium, Penetration enhancement for polypeptides through epithelia. D. Routes of delivery-case-studies. 8. The vaginal route of peptide and protein drug delivery. Adv. Drug Deliv. Rev. 8(2-3) (1992) 341-366). Несмотря на важные свойства влагалища в отношении лекарственной терапии, все еще остается проблемой разработка хорошей системы вагинальной доставки.
Хороший вагинальный состав должен обладать достаточно длительным периодом удержания для обеспечения максимального высвобождения лекарственного средства. Кроме того, равномерное распределение состава по эпителию влагалища важно для достижения быстрого всасывания, а также для обеспечения хорошего эффекта в случае местного лечения. Относительно соблюдения пациентом схемы лечения, желательно легкое введение состава, не доставляющее дискомфортных ощущений группе пользователей.
На рынке присутствуют различные типы составов, каждый из которых обладает своими достоинствами и недостатками. Основная группа форм для вагинальной доставки на рынке представляет собой мягкие лекарственные формы, такие как кремы и гели, содержащие гормоны, антибиотики, противогрибковые средства и т.д. Было показано, что гели и крема являются хорошими системами доставки с простым приготовлением и введением, а также быстрым высвобождением лекарственных средств. Однако такие вагинальные формы, грязные в применении, могут протекать на нижнее белье и доставляют группе пользователей неприятное ощущение (A.C. Broumas, L.A. Basara, Advances in Therapy 17(3) (2000) 159-166; M.E. Bentley, KJM. Morrow, A. Fullem, M.A. Chesney, S.D. Horton, Z. Rosenberg, K.H. Mayer, Family Planning Perspectives 32(4) (2000) 184-188; M. Justin-Temu, F. Damian, R. Kinget, G. Van den Mooter, Journal of Women's Health 13(7) (2004) 834-844). Кроме того, мягкий состав может не обеспечивать точную дозировку вследствие неравномерного распределения и вытекания. Из-за короткого времени удержания может возникать необходимость в многократном нанесении средства (A. Hussain, F. Ahsan, J. Control. Release 103(2) (2005) 301-313). Были отмечены значительные различия между индивидуумами в удержании мягких составов, варьирующем в пределах от 1 до 81% дозы, оставшейся от первоначальной через 24 ч. (B.E. Chatterton, S. Penglis, J.C. Kovacs, B. Presnell, B. Hunt, Int. J. Pharm. 271(1-2) (2004) 137-143). Brown и др. отмечают потерю в пределах 9-97% у женщин в постклимактерическом периоде через два часа после нанесения (J. Brown, G. Hooper, CJ. Kenyon, S. Haines, J. Burt, J.M. Humphries, S.P. Newman, S.S. Davis, R.A. Sparrow, LR. Wilding, Pharm. Res. 14(8) (1997) 1073-1078). Bernhardt и др. выявили очень малое покрытие слизистой влагалища через 24 часа после нанесения бактерицидного вагинального геля C31G (K.T. Barnhart, E.S. Pretorius, K. Timbers, D. Shera, M. Shabbout, D. Malamud, Contraception 71(5) (2005) 357-361).
Вторая группа представляет собой таблетированные составы - лекарственную форму, наиболее часто применяемую для доставки лекарственных средств через рот. Таблетки легко производить, легко упаковывать и они имеют низкую стоимость производства. Однако расщепление традиционных таблеток во влагалище может занимать слишком много времени, а также, вследствие их плотности, таблетки быстро выводятся из влагалища. Этого можно избежать посредством применения биоадгезивных вагинальных таблеток, однако в некоторых исследованиях отмечается потеря и таких биоадгезивных таблеток (J. Voorspoels, M. Casteels, J.P. Remon, M. Temmerman, European Journal of Obstetrics, Gynecology и Reproductive Biology 105(1) (2002) 64-66). Также свечи создают ощущение пачкания, слишком быстрого высвобождаются, и, кроме того, эту лекарственную форму нельзя хранить при высоких температурах. Наиболее часто свечи применяют для подготовки шейки матки перед родами.
Вагинальные кольца представляют собой выступообразные полимерные изделия, наиболее часто на основе силикона, разработанные для контролируемого высвобождения одного или нескольких помещенных внутрь лекарственных средств (NJ. Alexander, E. Baker, M. Kaptein, U. Karck, L. Miller, E. Zampaglione, Fertility и Sterility 82(1) (2004) 1-12). По сравнению с другими системами вагинальной доставки, они предлагают определенные преимущества, включающие аккуратное и точное дозирование. Вагинальные кольца доставляют свои лекарственные средства слишком местно во влагалище, помимо этого не все лекарственные средства можно поместить внутрь изделий и их производство стоит дорого.
Существует необходимость в разработке новых форм вагинальной доставки, гарантирующих необходимое время удержания в сочетании с хорошим распространением по эпителию влагалища. Настоящее изобретение посвящено этой необходимости.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к области эксципиентов, используемых при производстве гранул, способам создания гранул и применения гранул для лечения или улучшения различных состояний и заболеваний посредством вагинального способа введения.
Настоящее изобретение относится к использованию модифицированного крахмала для доставки активных средств посредством вагинального введения. В одном из вариантов осуществления модифицированный крахмал представляет собой кристаллический расщепленный устойчивый к амилазе крахмал. В особенно предпочтительном варианте осуществления фармацевтические гранулы получают с использованием кристаллического расщепленного устойчивого к амилазе крахмала в качестве эксципиента. Одним из способов производства гранул является прессование/сферонизация.
Установлено, что фармацевтические гранулы, полученные с использованием кристаллического расщепленного устойчивого к амилазе крахмала, особенно подходят для вагинальной доставки активных средств. Изобретение относится к композициям и способам лечения или предотвращения различных состояний. Подлежащие лечению состояния включают в качестве неограничивающих примеров вагиноз и вагинит.
Один из вариантов осуществления изобретения относится к вагинальному применению композиции для лечения пациента. Композиция может находиться в форме вагинальных суппозиториев, таблеток или капсул, которые содержат гранулы и активный ингредиент. Предпочтительно гранулы содержат кристаллический расщепленный устойчивый к амилазе крахмал и активный ингредиент. Одним из предпочтительных вариантов осуществления являются сферические гранулы, получаемые посредством прессования/сферонизации и имеющие средний диаметр 300-1000 мкм. Внутрь таких сфер можно помещать многие лекарственные средства. Вагинальная доставка лекарственных средств посредством гранул по изобретению сочетает в себе преимущества быстрого распространения мягкого состава с лучшим временем удержания.
Другой вариант осуществления направлен на способ лечения или предотвращения у пациента состояния, включающего в качестве неограничивающих примеров заболевания влагалища. Способ по изобретению подразумевает введение нуждающемуся в этом пациенту композиции, включающей гранулы, полученные из кристаллического расщепленного устойчивого к амилазе крахмала. В предпочтительном варианте осуществления гранулы производят посредством прессования/сферонизации. Композиция будет дополнительно содержать эффективное количество терапевтического средства.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Любое содержание всех процитированных в настоящем описании документов включено в полном объеме в качестве ссылки.
В данной области гранулы используются в качестве носителя для фармакологически активных ингредиентов. Способы производства гранул для фармацевтического применения в обычных (с немедленным высвобождением) или в лекарственных формах с длительным одиночным высвобождением включают прессование/сферонизацию. Благодаря своим реологическим свойствам, при производстве гранул посредством прессования/сферонизации, обычно используется микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) в качестве основного эксципиента. Однако основанные на МКЦ гранулы не разрушаются, и высвобождение лекарственных средств происходит посредством диффузии через нерастворимое инертное вещество. Из-за этого ограничения необходимо разрабатывать альтернативные варианты составов с МКЦ.
Было обнаружено специфическое состояние крахмала как материала, подходящего для использования в качестве эксципиента для гранул, получаемых посредством прессования/сферонизации. Опубликованная патентная заявка США № 2006/0246192. Такой крахмал представляет собой модифицированный крахмал, получаемый посредством ферментативного расщепления богатого амилозой крахмала. После расщепления крахмал восстанавливают и затем выделяют посредством прессования или высушивания. Патент США № 5281276. Этот процесс приводит к выходу кристаллического высокоамилозного материала, состоящего из D-глюкозных остатков (соединенных посредством α-l,4-D-гликозидных связей), упакованного в двуспиральные кристаллические цепочки. Благодаря образованию структуры из двуспиральных кристаллических цепочек, его называют устойчивым крахмалом, потому что α-l,4-D-гликозидные связи между мономерами D-глюкозных остатков недоступны действию α-амилазы в тонкой кишке.
В настоящее время установлено, что разрушение гранул на основе крахмала обеспечивает данную область составами, которые можно преимущественно вводить посредством вагинального введения. Благодаря малому размеру (предпочтительно 300-1000 мкм), нивелирующему гравитационные эффекты, составы сочетают в себе преимущества быстрого распространения мягких составов с лучшим временем удержания по сравнению с таблетками и мягкими формами.
Изобретение относится к области фармацевтических композиций и способов получения фармацевтических композиций, применяемых для лечения состояний влагалища, включая вагинальные инфекции, и к способам лечения состояний влагалища посредством введения указанной композиции. Было установлено, что особые типы крахмала в гранулах из особого крахмала, полученных из кристаллического расщепленного устойчивого к амилазе крахмала, обладают хорошими характеристиками распределения после нанесения во влагалище.
Кристаллические расщепленные устойчивые крахмалы можно получать, как описано в патенте США № 5281276, описание которого включено в настоящий документ в качестве ссылки. Обычно такие крахмалы модифицируют посредством ферментативного расщепления богатого амилозой крахмала. После расщепления крахмал восстанавливают и затем выделяют посредством прессования или высушивания. Этот процесс приводит к выходу кристаллического высокоамилозного материала, состоящего из D-глюкозных остатков (соединенных посредством α-l,4-D-гликозидных связей), упакованного в двуспиральные кристаллические цепочки. Благодаря образованию структуры из двуспиральных кристаллических цепочек, его называют устойчивым крахмалом, потому что α-l,4-D-гликозидные связи между мономерами D-глюкозных остатков недоступны действию α-амилазы в тонкой кишке. Такие крахмалы коммерчески доступны у Henkel Corporation, Bridgewater, NJ под торговой маркой VELOX™ MCS (ранее доступные у National Starch and Chemical Company под коммерческим названием UNI-PURE EX).
В одном из предпочтительных вариантов осуществления гранулы получают посредством прессования/сферонизации. Гранулы типа, описанного для применения в патентной заявке США № 2006/0246192, можно использовать в практическом осуществлении по изобретению, описанному и заявленному в настоящем документе.
Было обнаружено, что получаемые из крахмала гранулы особенно удобны в случае применения для доставки активных средств, включая фармакологически активные вещества лекарственных средств, при вагинальном способе введения. Данное изобретение относится к композициям вагинального применения для введения при необходимости или по желанию пациенту для лечения состояния. Композиция может находиться в форме вагинальных суппозиториев, таблеток или капсул, которые содержат гранулы и активный ингредиент. Альтернативно, посредством подходящего устройства для доставки можно вводить непосредственно гранулы без их заключения в оболочку. Гранулы содержат кристаллический расщепленный устойчивый крахмал и активный ингредиент. Гранулы по изобретению можно преимущественно получать посредством прессования/сферонизации. Необходимо понимать, что применяемые в практическом осуществлении по изобретению гранулы не ограничены гранулами, полученными посредством прессования/сферонизации, но включают другие технологии, такие как, например, ротационный псевдоожиженный слой и грануляцию с усилием сдвига.
Гранулы можно применять как для немедленного, так и для контролируемого высвобождения лекарственных форм, тем самым обеспечивая значительную гибкость схем дозирования и высвобождения лекарственных средств. Благодаря многокомпонентности индивидуальной твердой лекарственной формы, в нее можно объединять два или более активных средств в любых соотношениях. В принципе, можно получать комбинацию продуктов, содержащих несовместимые активные средства или обладающих различающимися профилями высвобождения. Композиции для вагинального применения по изобретению могут содержать индивидуальные активные вещества, но могут содержать и комбинацию двух или более активных веществ.
Изобретение также относится к способу лечения или предотвращения у пациента состояния влагалища. Способ по изобретению подразумевает введение пациенту при необходимости лечения или по желанию композиции, включающие гранулы, получаемые из кристаллического расщепленного устойчивого крахмала. В предпочтительном варианте осуществления гранулы производят посредством прессования/сферонизации. Композиция будет дополнительно содержать эффективное количество терапевтического средства.
Термин "пациент" используется в настоящем документе для включения млекопитающих женского рода, как людей, так и не относящихся к человеку, включая домашних животных, таких как собаки, кошки и лошади, и домашний скот, такой как крупный рогатый скот и свиньи. У людей пациенты включают взрослых, детей и новорожденных.
Термин "лекарственное средство" используется в настоящем документе в самом широком смысле, подразумевающем любое средство, предназначенное для оказания какого-либо терапевтического эффекта. Средство может являться фармакологически активным веществом или нет, но будет "биоактивным веществом" в том смысле, что обладает или, по меньшей мере, подразумевает, действие на организм человека. Средство можно использовать для лечения или коррекции состояния, которое может быть патологическим или нет, т.е. ситуации болезни, патологического состояния. "Лекарственное средство", "биоактивное средство", "препарат", "медикамент", "терапевтическое средство", "физиологическое средство" и "фармацевтическое средство" используют взаимозаменяемо в настоящем документе и включают вещества для применения в диагностике, лечении, смягчении, угнетении, терапии или профилактике состояния или ситуации заболевания или для воздействия на строение или функцию организма. Средства, действующие как, например, смягчающие и увлажняющие, включены в этот термин. Термин "лечение" используется всеобъемлюще для обозначения профилактики, коррекции, лечения и контролирования состояния.
Лекарственное средство присутствует в композиции по изобретению в терапевтически эффективном количестве, т.е. количестве, эффективном для обеспечения приближенного к желаемому терапевтическому результату при лечении состояния, для которого предназначен препарат по данному изобретению. Эффективное количество лекарственного средства означает нетоксическое, но достаточное количество лекарственного средства для обеспечения указанного эффекта в течение определенного периода времени. Количество, составляющее терапевтически эффективное количество, различается в зависимости от особенности лекарственного средства или средства, заключенного в композицию, требующего лечения состояния, различных лекарственных средств, вводимых совместно с выбранным лекарственным средством, требуемой длительности лечения и других подобных факторов. Такое количество легко определяется опытным практиком.
Лекарственные средства, которые можно включать в композицию по изобретению, включают вещества, способные оказывать местное или системное действие. Области возможного применения композиции по изобретению включают лекарственные средства или другие средства для лечения бактериальных и грибковых инфекций, вагинальный зуд, сухость влагалища и высокую кислотность влагалища. Необходимо понимать, что этот список не является исчерпывающим и приведен с единственной целью показать состояния, которые можно лечить посредством композиций и способов по изобретению.
Bacteroides
Peptostreptococcus
Peptococcus
Mobiluncus G. vaginalis
Trichomonas vaginalis
Candida
Candida albicans
Бактериальный вагиноз и схожая симптоматика в области влагалища, как правило, вызываются замещением лактобацилл на огромное количество анаэробных бактерий. Анаэробные бактерии, вызывающие симптомы инфекции, включают , ,  и . Симптомы вагинита обычно характерны для местной инфекции  или  (в особенности, ). Симптомы включают зуд, выделения, сухость и могут включать болезненность полового акта. Подобные состояния могут вызываться или провоцироваться диабетом, недостаточностью паращитовидных желез, нарушением защитного барьера организма, лечением кортикостероидами, лечением антибиотиками широкого спектра, оральными лекарственными контрацептивами и беременностью.
Композиции по изобретению также можно использовать для лечения воспалительного заболевания тазовых органов или для лечения инфекций, возникающих после гинекологических операций, родов, абортов и инфекций, связанных с применением внутриматочных приспособлений для предотвращения беременности. Также посредством композиций по изобретению можно лечить такие состояния, как низкая влажность влагалища или вагинальная сухость, кислотность влагалища и атрофия влагалища.
В данном изобретении можно задействовать множество совместимых с крахмалом активных средств. Конкретное происхождение активного ингредиента не является критическим, и можно использовать фармацевтические и нефармацевтические активные ингредиенты.
Примеры фармацевтических препаратов, которые можно вводить в соответствии с изобретением, включают в качестве неограничивающих примеров аминокислоты, такие как валин, лейцин и треонин, олигопептиды, полипептиды и противогрибковые лекарственные средства, такие как Fluconazole, Terconazole, Tioconazole, Butoconazole, Ketoconazole, Itraconazole, Econazole, Miconazole и Cannitracin, анальгетики, стероиды, половые гормоны, пробиотики вагинальной флоры и другие средства, такие как, например, гиалуроновая кислота. Необходимо понимать, что средства для введения равным образом включают их фармацевтически применимые соли.
В практическом осуществлении изобретения кристаллический расщепленный крахмал используют в качестве эксципиента, и в одном из предпочтительных вариантов осуществления в качестве основного эксципиента при получении фармацевтических гранул, которые по требованию можно производить посредством прессования-сферонизации. Подобные эксципиенты применимы для любых сухих лекарственных форм, включая таблетки и капсулы, как для немедленного, так и для замедленного высвобождения. Эксципиенты из крахмала можно использовать в качестве полного замещения микрокристаллической целлюлозы или можно использовать в качестве частичного замещения в сочетании с микрокристаллической целлюлозой и/или другими производными целлюлозы.
Термин "лекарственная форма" истолковывается в настоящем документе в самом широком смысле, подразумевающем не только фармацевтические лекарственные формы, использующие эксципиенты для доставки активных средств(а) и включающие в себя таблетки (с немедленным высвобождением, замедленным высвобождением, контролируемым высвобождением, модифицированным высвобождением и шипучие), капсулы, шарики и гранулы, но также нефармацевтические формы этих продуктов.
Контролируемое высвобождение, как применяют в настоящем документе, подразумевает способ и композицию для создания активного ингредиента, доступного биологической системе организма. Контролируемое высвобождение включает использование мгновенного высвобождения, отсроченного высвобождения и замедленного высвобождения. "Мгновенное высвобождение" относится к немедленному высвобождению в биосистеме организма. "Отсроченное высвобождение" означает, что активный ингредиент создают недоступным организму в течение определенной задержки времени после введения. "Замедленное высвобождение", как правило, относится к высвобождению активного ингредиента в том случае, когда концентрация доступного организму активного ингредиента сохраняется на определенном уровне в течение периода времени. Способы реализации каждого типа высвобождения могут различаться. Например, активный ингредиент можно физически и/или химически ассоциировать с поверхностно-активным веществом, хелатирующим средством и т.д. Альтернативно, активный ингредиент можно маскировать покрытием, наслоением и т.д. Независимо от способа реализации необходимой схемы высвобождения, настоящее изобретение подразумевает доставку с системой контролируемого высвобождения, использующей один или несколько способов "высвобождения" и композиций.
Термин "гранула" используют в настоящем документе для обозначения, главным образом, сферической твердой частицы, диаметр которой может колебаться приблизительно от 100 мкм до приблизительно 3 мм.
"Эксципиент" используют в настоящем документе для включения, в дополнение к компоненту модифицированного крахмала, носителей, наполнителей и любых других фармакологически инертных ингредиентов. Типичная лекарственная форма, необязательно, будет состоять из инертных материалов, обозначаемым как эксципиенты, в дополнение к активному ингредиенту, присутствующему в количествах, достаточных для получения требуемого фармакологического эффекта. Эти эксципиенты, как правило, классифицируют согласно их функциям, как, например, наполнители (также называемые средствами, заполняющими объем, и разбавляющими веществами), носители, которые связывают ингредиенты друг с другом, носители-наполнители, выполняющие обе эти функции, и дезинтегрирующие средства, которые помогают лекарственной форме распадаться и высвобождать активный ингредиент при помещении в жидкую среду. Использование модифицированного крахмала в качестве "основного" эксципиента означает, что компонент крахмала находится в большем количестве по отношению к любому другому используемому эксципиенту. Использование модифицированного крахмала в качестве первостепенного эксципиента означает содержание компонентов крахмала более 50% от общей массы эксципиентов, за исключением воды или другого технологического растворителя, который удаляют посредством высушивания. Термин "расщепленный крахмал" применяют в настоящем документе для обозначения любого крахмала, который ферментативно гидролизован посредством, по меньшей мере, одного фермента, способного разрушать 1,6-связи молекулы крахмала.
Термин "амилоидный" или "низкоамилозный" крахмал используют для обозначения крахмала, содержащего менее 10% амилозы от массы сухого крахмала.
Термин "амилозосодержащий" крахмал используют для обозначения крахмала, содержащего, по меньшей мере, 10% амилозы от массы сухого крахмала.
Термин "высокоамилозный" используют для обозначения крахмала, содержащего, по меньшей мере, 50% амилозы от массы сухого крахмала.
"Клейстеризация", как применяют в настоящем документе, обозначает процесс, посредством которого крахмал разваривается и теряет свою гранулярную структуру. "Гранулярная" относится к структуре натурального крахмала, при которой крахмал не растворим в воде (хотя бы, по меньшей мере, частично кристаллизован) и образует двойное лучепреломление и характерный мальтийский крест в поляризованном свете. В высокоамилозных крахмалах некоторые натуральные гранулы не образуют мальтийский крест, особенно волокнистые гранулы. В процессе клейстеризации, как применяют в настоящем документе, крахмал теряет свою способность к двойному лучепреломлению, а также образованию мальтийского креста, характерного для его естественного состояния.
"Кристаллический" крахмал используют для обозначения крахмала, который является кристаллическим, или вследствие его гранулярной природы, или благодаря тому, что клейстеризованный крахмал можно рекристаллизовать способами, известными в данной области.
Настоящее изобретение относится к способам лечения, профилактики или другой коррекции состояния влагалища, характеризующегося, например, медленным ростом клеток влагалища, плохой дифференцировкой клеток влагалища, атрофией влагалища и низкой влажностью влагалища. Композиции по изобретению могут доставлять средства, увлажняющие влагалище, и способы увлажнения влагалища для уменьшения сухости влагалища и восстановления здорового состояния эпителия влагалища, а также для лечения симптомов, включая сухость влагалища, дискомфорт, зуд, болезненность полового акта, инфекции (грибковые, бактериальных и вирусные), воспаление, язвы, выделения и кровотечение.
Лечение или обработку состояния влагалища используют для обозначения облегчения или уменьшения, по меньшей мере, одного симптома, обычно ассоциированного с состоянием влагалища. Лечение также включает облегчение или уменьшение более чем одного симптома. В идеальном случае лечение позволяет, например, практически устранить один или несколько симптомов, ассоциированных с состоянием влагалища.
Лечение можно также направлять на создание здоровой среды в матке, например, при вагинальном введении прогестерона с целью лечения бесплодия.
Лечение можно также направлять на использование эпителия влагалища в качестве места введения для системной доставки лекарственных средств.
Вводимое количество будет различаться в зависимости от различных факторов, включая в качестве неограничивающих примеров заболевание, вес, физическое состояние, здоровье, возраст пациента, а также от назначения средства в качестве профилактики или лечения. Подобные факторы можно легко установить на животных, моделирующих клинические заболевания, или в других тест-системах, существующих в данной области.
Композиции по изобретению можно вводить в профилактических, терапевтических и/или гигиенических целях. Введение производят непосредственно на эпителиальную выстилку слизистых оболочек. Например, композиции по изобретению можно наносить непосредственно на слизистые оболочки. Слизистые оболочки включают вагинальную, урогенитальную и ректальную. Оболочки урогенитального тракта, которые можно обрабатывать композициями и способами по изобретению, включают оболочки прямой кишки, уретры, мочеточника, влагалища, шейки матки, матки и т.д. В большинстве вариантов осуществления изобретения эпителиальная выстилка является вагинальной.
Введение терапевтического средства в соответствии с настоящим изобретением может проводиться в однократной дозе, в нескольких дозах, продолжительным или дробным образом, в зависимости, например, от физиологического состояния реципиента, терапевтического или профилактического назначения введения и других факторов, известных опытным практикам. Для предотвращения некоторых состояний или заболеваний (например, атрофии влагалища) введение композиции по изобретению может продолжаться в течение неопределенного периода времени, например, с регулярными интервалами в течение всей жизни. Альтернативно, композиции по изобретению можно вводить в течение установленного периода времени или серией кратных доз. Как правило, подразумевается местное введение.
Композиции получают посредством соединения активных ингредиентов в подходящих концентрациях. Можно необязательно добавлять другие активные вещества или неактивные средства, выбранные специалистом в данной области. Абсолютный вес данного активного средства, включенного в единицу дозы, может значительно различаться.
Простые лекарственные формы обычно получают посредством помещения гранул в твердый желатин или HPMC капсулы, посредством упаковки гранул в таблетки или посредством помещения гранул в соответствующее приспособление для введения, подходящее для вагинального введения.
Композиции по изобретению можно вводить в виде приспособления или носителя, такого как прокладка во влагалище, или посредством аппликатора типа спринцовки или шприца, таблетки, свечи, маточного колпачка, пудры/талька или другого твердого, растворенного, жидкого вещества, спрея, аэрозоля, клизмы, мази, тампона, пенки, крема, геля, пасты, микрокапсул(ы), вагинальной губки, вагинального кольца, контролируемого высвобождения состава, замедленного высвобождения состава или биоадгезивного геля.
Активные ингредиенты можно использовать в сочетании с другими терапевтическими средствами, например противогрибковыми средствами, противовирусными средствами, противомикробными средствами, обезболивающими, противовоспалительными средствами, витаминами (например, витамином B, C или E), алоэ вера и т.п., как для состояний, описываемых в настоящем документе, так и для других состояний.
Крахмалы, используемые для получения кристаллического расщепленного устойчивого к амилазе крахмала, каждый из которых может подходить для применения по настоящему документу, включают любые крахмалы, выделенные из любого натурального источника. Натуральный крахмал, как применяют в настоящем документе, является одним из находящихся в природе. Также приемлемы крахмалы, выделенные из растения, полученного посредством стандартных методик селекции, включающих гибридизацию, транслокацию, инверсию, трансформацию или любые другие способы генной или хромосомной инженерии для внесения новых разнообразий. Кроме того, по настоящему изобретению также применимы крахмалы, выделенные из растения, выведенного с помощью искусственных мутаций и изменений указанных выше родовых групп, которые можно осуществлять посредством известных стандартных способов мутационной селекции.
Типичными источниками крахмалов являются злаки, клубни, бобы, корни и плоды. Натуральным источником могут являться: кукуруза (маис), горох, картофель, батат, банан, ячмень, пшеница, рис, овес, саго, щирица, тапиока (маниок), арроурут, карина и сорго, а также их низко- и высокоамилозные варианты. В одном из вариантов осуществления высокоамилозный крахмал содержит, по меньшей мере, 70%, в еще одном варианте осуществления, по меньшей мере, 80%, и в дополнительном варианте осуществления, по меньшей мере, 90% амилозы от массы сухого крахмала. В одном из приемлемых вариантов осуществления крахмал представляет собой амилозосодержащий крахмал и в другом - высокоамилозный крахмал, по меньшей мере, с 70% амилозы по массе.
Исходный крахмал можно переводить в водную массу и нагревать при температуре и давлении, достаточных для процесса клейстеризации. Хотя клейстеризацию можно получать любым известным в данной области способом, предпочтительным способом является пропускание крахмальной массы через печь с горячим потоком. Печи с потоком хорошо известны в промышленности и состоят из нагревающей камеры, в которой крахмальная масса контактирует с горячим паром при повышенных температурах. В одном из вариантов осуществления завершение клейстеризации определяют визуально по полному исчезновению гранулярной структуры.
Процесс клейстеризации полностью или частично разрушает ассоциативное связывание молекул крахмала внутри гранулы нативного крахмала. Это подготавливает молекулы крахмала к расщеплению, делая их более доступными расщепляющему ферменту, что приводит к более однородным молекулам расщепленного крахмала.
После клейстеризации крахмала затем его можно подготовить к ферментативному расщеплению посредством доведения твердого содержимого крахмала до максимально возможного уровня твердости (сохраняя минимальное количество воды и упрощая последующее высушивание крахмала). Если крахмал получают посредством адекватного перемешивания для равномерного распределения фермента и крахмала повышенной твердости, то можно использовать системы с крахмалом повышенной твердости.
Альтернативно, можно использовать способ подготовки к ферментативному расщеплению, известный в данной области. Например, клейстеризация не является необходимой, если использовать фермент, способный взаимодействовать с гранулярным крахмалом. Другим примером является использование твердых частиц в однофазном процессе, как изложено в патенте США № 6054302. Еще одним альтернативным примером служит использование фермента, закрепленного на твердой подложке.
Можно регулировать температуру и pH крахмала для обеспечения оптимальной активности фермента. Эти параметры будут различаться в зависимости от типа и источника используемого фермента, концентрации фермента, концентрации субстрата и наличия или отсутствия ингибиторов.
Для использования по данной заявке подходят любые расщепляющие ферменты (или сочетания таких ферментов). Используемые в настоящем изобретении ферменты включают в качестве неограничивающих примеров эндо-альфа-1,6-глюканогидролазы, такие как пуллуланаза, изоамилаза или любой другой эндофермент, способный расщеплять 1,6-связи молекулы крахмала. В одном из вариантов осуществления фермент не только расщепляет 1,6-связи крахмала, но также сохраняет 1,4-связи практически нетронутыми. В одном из вариантов осуществления используемый фермент является пуллуланазой. В другом варианте осуществления используемый фермент является изоамилазой.
Ферментативный гидролиз основы крахмала осуществляют с применением известных в данной области способов. Количество используемого фермента зависит от самого фермента, т.е. типа, источника и активности, и используемого основного материала, а также требуемой степени гидролиза. В одном из вариантов осуществления используют фермент в количестве приблизительно от 0,01 до приблизительно 1,0%, и в другом приблизительно от 0,01 до 0,3% по массе крахмала.
Оптимальные для активности фермента параметры будут различаться в зависимости от используемого фермента.
Степень ферментативного расщепления зависит от факторов, известных в данной области, включающих тип используемого фермента, концентрацию фермента, концентрацию субстрата, pH, температуру, наличия или отсутствия ингибиторов, и уровня и типа модификации. Эти параметры можно регулировать для оптимизации степени расщепления основы крахмала.
Bacillus
Bacillus
В одном из вариантов осуществления используемый фермент является пуллуланазой или пуллалан-6-глюканогидролазой, термостабильным ферментом, получаемым из вида . Пуллуланаза катализирует гидролиз альфа-1,6-связей в амилопектине при условии наличия, по меньшей мере, двух остатков глюкозы в боковой цепи. При pH 5,0 температура водного коллоидного раствора крахмала в процессе ферментативного расщепления пуллуланазой  должна находиться в интервале 25-75°C. Если требуется меньшее время обработки, то оптимальный диапазон температуры следует поддерживать в верхней части данного интервала от 60 до 75°C (или еще выше, если расщепляющий фермент термически стабилен при более высокой температуре), или можно использовать высокую концентрацию фермента.
В отношении других параметров ферментативной реакции диапазон предпочтительной и оптимальной температуры будет изменяться при изменении параметров, влияющих на активность фермента, таких как концентрация субстрата и pH, и это может определяться специалистом. Можно добавлять буферы, такие как ацетаты, фосфаты, цитраты или соли других слабых кислот, для поддержания на оптимальном уровне pH на протяжении всего расщепления.
Оптимальные концентрации фермента и субстрата контролируют по уровню ферментативной активности, которая меняется в зависимости от источника фермента, поставщика фермента и концентрации фермента, содержащегося в коммерчески доступных партиях.
Ферментативной обработке можно позволять продолжаться до наступления необходимого уровня расщепления, и в одном из вариантов осуществления до наступления практически полного расщепления; при этом дополнительное расщепление не будет происходить при использовании данного конкретного фермента и других параметров. При необходимости, степень расщепления можно измерять посредством любого известного в данной области способа измерения степени ферментативного расщепления молекул крахмала. Ферментативную реакцию продолжают до полного расщепления крахмала. Как правило, ферментативная реакция занимает от приблизительно 1 до приблизительно 24 часов, в частности от приблизительно 4 до приблизительно 12 часов. Время реакции зависит от типа используемого крахмала, количества используемого фермента и параметров реакции в виде процента твердого вещества, pH и температуры.
Степень гидролиза можно отслеживать и определять способами, хорошо известными в данной области, посредством измерения концентрации оставшихся групп, высвобожденных альфа-1,6-D-глюканогидролазной активностью. Другие подходы, такие как мониторинг изменения вязкости, качественной реакции с йодом или изменение молекулярной массы, можно использовать для определения конечной точки реакции. Когда крахмал полностью расщеплен, наблюдаемые показатели перестанут изменяться. Обычно крахмал расщеплен полностью в том случае, если он расщеплен, по меньшей мере, приблизительно на 95%, более конкретно, по меньшей мере, приблизительно на 98%, наиболее конкретно, по меньшей мере, приблизительно на 99% по массе. Расщепленный крахмал обычно имеет среднюю длину цепочек в 14-25 остатков глюкозы и приблизительно менее 0,2%, в частности, приблизительно менее 0,1% альфа-1,6-D-гликозидных связей. Повышенное расщепление обычно приводит к более кристаллизованному продукту крахмала.
Bacillus
После достижения необходимого уровня расщепления крахмала можно инактивировать фермент, например, посредством pH или нагревания. Например, пуллуланаза  быстро инактивируется при температуре свыше приблизительно 70°C; таким образом, реакцию, включающую пуллуланазу, можно легко остановить посредством повышения температуры коллоидного раствора крахмала, по меньшей мере, до 75°C приблизительно на 15 минут. Альтернативно, фермент можно инактивировать посредством снижения значения pH коллоидного раствора крахмала ниже 3,0 и поддержания такого pH приблизительно в течение 30 минут.
После расщепления и инактивации фермента крахмал можно кристаллизовать известными в данной области способами, такими как осаждение. Это можно осуществлять любым известным в данной области способом и обычно осуществляют посредством отстаивания крахмала, и в одном из вариантов осуществления осуществляют посредством отстаивания крахмала при температурах ниже комнатных, как, например, в холодильнике.
Крахмал можно выделять известными в данной области способами, в частности посредством прессования, фильтрации, центрифугирования или сушки, включая сушку распылением, сублимационную сушку, термическую сушку или воздушную сушку, более конкретно посредством фильтрации или термической сушки и в одном конкретном варианте осуществления посредством прессования или термической сушки. Можно проводить частичную сушку, например, до 60%-80% твердого вещества, и затем высушивать оставшийся продукт. Альтернативно, крахмал можно высушивать до 100% твердого вещества, обычно с 10-15% влажности от массы сухого крахмала. Важно контролировать процесс кристаллизации, главным образом, контролируя осаждение и сушку, в целях получения необходимой степени кристаллизации, которая важна по настоящему изобретению. Также важно, чтобы метод сушки и другие последующие за кристаллизацией процессы, главным образом, не разрушали кристаллы.
Размер частиц высушенного порошка можно регулировать, применяя известные в данной области способы, включая без ограничения спекание. В процессе производства размер частиц высушенного порошка можно контролировать известными в данной области способами с получением в одном из вариантов осуществления среднего (значения) размера частиц, по меньшей мере, приблизительно 25 мкм, и не более приблизительно 90 мкм.
Необязательно, можно регулировать содержание влаги для достижения улучшенной текучести и плотности. Кристаллизацию можно контролировать известными в данной области способами, как, например, посредством контроля осаждения и сушки, в целях получения необходимой степени кристаллизации. Крахмал должен быть, по меньшей мере, частично кристаллизованным для проведения процесса сферонизации.
В другом варианте осуществления продукт крахмала выделяют посредством добавления неорганической соли в коллоидный раствор крахмала и инкубации смеси при 50-100°C. Соль может являться любой известной солью, не влияющей на осаждение крахмала и помогающей вытягивать воду из клейстера, способствуя соединению линейных молекул крахмала. Подходящие соли включают в качестве неограничивающих примеров сульфат натрия, сульфат аммония или сульфат магния и хлорид натрия. В одном из вариантов осуществления соли добавляют в инактивированную массу крахмала с минимальным содержанием твердого вещества 10%.
Крахмалы также могут быть конвертированными и включают в качестве неограничивающих примеров жидкие или низкокипящие крахмалы, получаемые посредством окисления, кислотного гидролиза и ферментативного гидролиза. Эти процессы хорошо известны в данной области, и их можно выполнять до или после расщепления.
Затем, до или после ферментативного гидролиза, крахмал можно также модифицировать. Подобная модификация может являться физической, ферментативной или химической модификацией. Физическая модификация включает сдвиговую деформацию или термическое ингибирование, например, посредством процесса, описанного в патенте США № 5725676.
Химическая модификация включает в качестве неограничивающих примеров поперечное связывание, ацетилирование и органическую этерификацию, гидроксиалкилирование, фосфорилирование и неорганическую этерификацию, катионные, анионные, неионные и цвиттер-ионные модификации и сукцинирование. Подобные модификации описаны в данной области, например, в Modified Starches: Properties and Uses, Ed. Wurzburg, CRC Press, Inc., Florida (1986).
Любой основной крахмал, обладающий подходящими свойствами для применения по настоящему изобретению, можно очистить любым известным в данной области способом посредством удаления из крахмала естественных для полисахаридов или образующихся в процессе производства запахов и цветов. Подходящие способы очистки для обработки крахмалов описаны в данной области и включают в качестве неограничивающих примеров технику щелочной промывки. Такие способы очистки также применимы для расщепленного крахмала.
Если требуется очистка композиции расщепленного крахмала, то примеси и побочные продукты реакции можно удалять посредством диализа, фильтрации, центрифугирования или любого другого известного в данной области способа выделения и концентрирования композиций крахмала. Например, деструктурированный крахмал можно промывать с применением известных в данной области способов удаления фракций с низкой молекулярной массой, таких как олигосахариды, приводящих к получению более кристаллизованного крахмала. В одном из вариантов осуществления выделяют и кристаллизуют узкий диапазон молекулярных масс, что приводит к получению более кристаллизованного крахмала.
В полученном растворе обычно подводят pH до необходимого значения согласно конечному назначению. В основном, pH подводят с применением известных в данной области способов до значений приблизительно от 5,0 до приблизительно 7,5 и в одном из вариантов осуществления приблизительно от 6,0 до приблизительно 7,0. Любые осаждающиеся из коллоидного раствора крахмала короткие цепочки амилозы можно затем растворять или удалять.
Кристаллический расщепленный крахмал, описываемый в настоящем документе в качестве фармацевтического эксципиента, обладает уникальными свойствами для обработки прессованием-сферонизацией, процесс которых обычно включает следующие стадии:
a) смешивание одного или нескольких расщепленных крахмалов и необязательно других эксципиентов и/или одного или нескольких активных средств с получением однородной смеси в виде сухого порошка, в который добавляют подходящее количество жидкости с получением влажной пластично деформируемой массы;
b) прессование полученной на стадии a) смеси через перфорированное сито с целью получения цилиндрических заготовок, имеющих требуемую длину и диаметр;
c) сферонизация заготовок с целью получения продукта в форме сферических гранул;
d) высушивание гранул;
e) дополнительное помещение, по меньшей мере, одного активного средства на поверхность гранул; и
f) дополнительное покрытие гранул.
Крахмал можно использовать в качестве единственного эксципиента или в сочетании с микрокристаллической целлюлозой и/или другими производными целлюлозы. В одном из вариантов осуществления расщепленный крахмал используют в количестве от 10 до 100%, в другом варианте осуществления от 25 до 95%, и в третьем варианте осуществления от 60 до 90% по массе от сухой основы пластично деформируемой массы. В другом варианте осуществления расщепленный крахмал используют в качестве основного эксципиента (более 50% от массы эксципиентов) и используют в сочетании со связующим веществом; связующее вещество присутствует в количестве порядка 8% по массе от сухой основы пластично деформируемой массы.
В одном из вариантов осуществления связующие вещества добавляют в состав в количестве до приблизительно 25%, и в другом варианте осуществления в количестве до приблизительно 15%, и в еще одном варианте осуществления в количестве до приблизительно 8%, все по массе от веса сухой основы пластично деформируемой массы, для содействия материалу в преодолении сил трения при сферонизации, что приводит к получению гранул большего размера. В одном из вариантов осуществления связующие вещества находятся в количестве 4-8% по массе от сухого веса пластично деформируемой массы. Связующие вещества включают вещества, широко известные в данной области, и в одном из вариантов осуществления выбраны из группы, состоящей из гидроксипропилметилцеллюлозы, высушенного в барабане амилоидного кукурузного крахмала, гидроксипропилцеллюлозы и поливинилпирролидона, и в другом из гидроксипропилметилцеллюлозы и высушенного в барабане кукурузного крахмала.
Необязательно, можно добавлять пластификатор для улучшения поверхностных свойств гранул, и в одном из вариантов осуществления его добавляют в количестве до 30%, в одном из вариантов осуществления в количестве до 25%, и в другом до 15%, по массе от сухой основы пластично деформируемой массы, в одном из аспектов по изобретению пластификатор представляет собой многоатомный спирт и в другом сорбит.
Жидкость, добавляемая для формирования влажной массы для прессования, может включать любое жидкое вещество или комбинацию (раствор или эмульсию) жидкостей с нормальным фармацевтическим применением, способных увлажнять порошковую смесь, как, например, вода, водные растворы, имеющие различный pH, органические растворители с нормальным фармацевтическим применением (например, спирты, хлорированные растворители и масла). В одном из вариантов осуществления жидкость представляет собой воду. Влажную массу можно получать посредством любого известного в данной области устройства, включая в качестве неограничивающих примеров планетарную мешалку, мешалку с большими сдвиговыми усилиями, многолопастный смеситель или непрерывный гранулятор.
Жидкость добавляют в любом требуемом количестве, обычно в количестве от 20 до 55%, и еще более часто приблизительно от 30 до 45% по массе от сухого веса пластично деформируемой массы.
В одном из аспектов изобретения, активное средство и/или эксципиенты можно растворять, диспергировать и/или превращать в эмульсию в подобных жидкостях.
Влажную массу продавливают через перфорированное сито с целью получения заготовок (цилиндрических нитей). Пора сита определяет диаметр заготовок и в одном из вариантов осуществления составляет приблизительно от 0,2 мм до 3 мм и в другом приблизительно от 0,5 мм до приблизительно 2 мм. Прессование можно осуществлять посредством одношнекового, двухвинтового экструдера или типа "решето", "вальцового экструдера", "поршневого экструдера" или любых других фармацевтически приемлемых способов получения заготовок. В одном из вариантов осуществления данного изобретения можно использовать двухвинтовой коаксиальный экструдер.
В одном из аспектов изобретения продавленную массу можно снова объединять перед сферонизацией с целью получения заготовок повышенной плотности.
Полученные прессованием заготовки затем сферонизируют. Устройство для сферонизации состоит из полого цилиндра с горизонтальной вращающейся платформой. Заготовки разрываются на короткие кусочки, которые превращаются в гранулы на наружной стороне вращающейся платформы, и в одном из аспектов изобретения при скорости вращения в диапазоне от приблизительно 200 об/мин до приблизительно 2000 об/мин. Гранулы можно высушивать любым фармацевтически приемлемым способом, таким как высушивание при комнатной температуре, и это можно осуществлять в любом известном в данной области аппарате, включая в качестве неограничивающих примеров печь, псевдоожиженный слой или микроволновую печь.
Использование расщепленных крахмалов обеспечивает выход более 80% и в одном из вариантов осуществления более 90%. Под выходом понимают процент продавленной композиции, которая приводит к получению применимых гранул, т.е. гранул, которые представляют собой достаточно твердые сферические частицы с диаметром в диапазоне приблизительно от 100 мкм до приблизительно 3 мм. В одном из вариантов осуществления диаметр гранул варьирует приблизительно от 0,70 до 1,40 мм. Из полученных гранул можно удалять мелкие фракции и гранулы с неподходящими размерами посредством технических приемов, известных в данной области, таких как просеивание.
Как правило, гранулы обладают коэффициентом отношения длины и высоты, равным приблизительно 1-1,3, и обладают хрупкостью гранул менее 2%, более часто менее 0,5%. Коэффициент отношения длины и высоты гранулы означает отношение наибольшего и наименьшего диаметров гранулы. Хрупкость означает склонность гранул к расслоению в процессе обработки, приводящему к появлению пыли.
Гранулы можно использовать в натуральном виде или можно покрывать. В одном из вариантов осуществления их покрывают активным средством, одинаковым или отличающимся от активного средства внутри гранул. В другом варианте осуществления гранулы покрывают в технических целях, которые включают в качестве неограничивающих примеров получение эффекта контролируемого высвобождения, увеличение срока хранения или в целях маркировки. Дополнительное покрытие может содержать активное средство, а также, по меньшей мере, один функциональный ингредиент.
Активные средства можно распределять внутри гранул и/или их можно наносить на поверхность гранул посредством широко используемых в фармацевтических областях технических приемов, включая в качестве неограничивающих примеров сушку с распылением и покрытие.
В случае, когда активные вещества распределяют внутри микрочастиц, они обычно составляют приблизительно от 0,1% до приблизительно 95% массы микрочастиц.
Для придания составу удовлетворительных параметров получения, расщепления или других характеристик в фармацевтическую лекарственную форму можно добавлять дополнительные фармацевтические эксципиенты, известные в данной области. Такие эксципиенты включают в качестве неограничивающих примеров усилители плавучести, поверхностно-активные вещества, смазывающие вещества и вещества, способствующие скольжению, дезинтегрирующие средства и красители. Эти эксципиенты хорошо известны в данной области и ограничены только совместимостью и требуемыми характеристиками.
Смазывающие вещества и вещества, способствующие скольжению, включают тальк, стеарат магния, стеарат кальция, стеариновую кислоту, глицерилбегенат, глицерина моностеарат, минеральное масло, полиэтиленгликоль, стеарилфумарат натрия, растительное масло, стеарат цинка и диоксид кремния.
Подходящие по настоящему изобретению дезинтегрирующие средства включают крахмалы, альгины, декстрины, кроскармеллозу, кросповидон, крахмала гликолят натрия, лаурилсульфат натрия, полакрилин калия и метилцеллюлозу.
Если необходимый конечный продукт отличается по способу фармацевтической дозировки, то в нем могут присутствовать альтернативные добавки, известные в данной области.
Необходимо понимать, что для формирования гранул можно использовать другие известные в данной области способы грануляции с большим усилием сдвига, которые включают псевдоожиженный слой и ротогрануляцию, центробежный гранулятор или грануляцию с большим усилием сдвига.
ПРИМЕРЫ
Следующие примеры, которые никоим образом не следует расценивать в качестве ограничивающих, представлены для иллюстрации и объяснения настоящего изобретения. Все используемые проценты основаны на соотношении вес./вес.
Пример 1
Получали образцы A, B и C, содержащие 50% метронидазола, 25% нитрата миконазола и 20% медроксипрогестеронацетата соответственно и имеющие композиции, представленные в таблице 1. Композиции также содержали воду, добавленную в необходимом количестве.
<b>Таблица 1</b>
Ингредиент
Образец A(% вес/вес)
Образец B(% вес/вес)
Образец С(% вес/вес)
Активное вещество:МетронидазолНитрат миконазолаМедроксипрогестеронацетат
50
25
20
Гидроксипропилметилцеллюлоза (HPMC)(Methocel E15L/EP Pharm, Colorcon)
7
4,5
6
Сорбит
4,3
11,25
10,5
Модифицированный крахмал(VELOX™ MCS, Henkel Corp.)
38,7
59,25
63,5
Гранулы получали посредством смешивания лекарственных средств, HPMC, сорбита и модифицированного крахмала. Затем порошковую смесь гранулировали в течение 10 минут при 60 об/мин в планетарной мешалке с К-образным смесителем с использованием деминерализованной воды в качестве грануляционной жидкости. Количество воды определяли в ходе предварительных испытаний и на основании количеств, приводящих к наибольшему выходу. Воду добавляли в течение первых 30 секунд стадии получения влажной массы. Для обеспечения однородного распределения воды в процессе получения влажной массы регулярно удаляли материал, прилипающий к стенкам смесителя. Влажную массу продавливали при скорости прессования 50 об/мин посредством одношнекового экструдера (Лаб. модель купольного экструдера DELL, Fuji Paudal, Tokyo, Japan), оборудованного полусферической прессовальной сеткой (толщина: 1,2 мм, диаметр перфорации: 1 мм). Заготовки сферонизировали в течение 3 мин в сферонизаторе, оснащенном фрикционной пластиной с сетчатой геометрией (Caleva Model 15, Caleva, Sturminster Newton, Dorset, UK). Гранулы высушивали в течение 20 мин при 60°C в сушилке с псевдоожижженным слоем (Uniglatt, Glatt, Binzen, Germany).
После высушивания гранул индивидуальные лекарственные формы получали посредством помещения гранул в твердые желатиновые капсулы, посредством помещения гранул в капсулы HPMC, посредством упаковки гранул в таблетки или посредством помещения гранул в устройство, предназначенное для подходящего вагинального введения.
Пример 2
in vivo
В этом примере анализировали нераспадающиеся гранулы из микрокристаллической целлюлозы (МКЦ) и распадающиеся гранулы на основе крахмала по их поведению  (распределение и удержание во влагалище). Гранулы также сравнивали с порошковым составом.
Материалы
В качестве нераспадающихся гранул использовали гранулы микрокристаллической целлюлозы (МКЦ) (Cellets 500 mkm, Pharmatrans-Sanaq, Basel, Switzerland).
Высокоамилозный кристаллический и устойчивый крахмал (VELOX™ MCS, Henkel Corporation, New Jersey, USA) использовали в качестве главного эксципиента (84,9%) гранул на основе крахмала.
В качестве связующего вещества использовали гидроксипропилметилцеллюлозу (HPMC) (Methocel El 5 LV EP Pharm, Colorcon, Dartford, UK) (4,9%) и добавляли сорбит (Sorbidex P 16616, Cerestar, Vilvoorde, Belgium) (10,2%) для изменения консистенции влажной массы (A. Dukic, R. Mens, P. Adriaensens, P. Foreman, J. Гелan, J.P. Remon, C. Vervaet, Eur. J. Pharm. Biopharm. 66(1) (2007) 83-94).
В качестве грануляционной жидкости использовали деминерализованную воду.
В качестве маркера для быстрого обнаружения и подсчета использовали рибофлавина натрия фосфат (Certa, Braine l'Alleud, Belgium) с концентрацией 5%.
Получение гранул на основе крахмала
Гранулы на основе крахмала получали посредством прессования/сферонизации. Сухое смешивание проводили в течение 15 мин в мешалке Turbula (модель T2A, W.A.Bachofen, Basel, Switzerland). Смесь порошков гранулировали с деминерализованной водой в течение 10 мин посредством планетарной мешалки (Kenwood Chef, Hampshire, UK) с К-образным смесителем. Воду добавляли в течение первых 30 секунд стадии получения влажной массы. Для обеспечения однородного распределения воды в процессе получения влажной массы регулярно удаляли материал, прилипающий к стенкам смесителя. Влажную массу продавливали при скорости прессования 50 об/мин посредством одношнекового экструдера (Лаб. модель купольного экструдера DELL, Fuji Paudal, Tokyo, Japan), оборудованного полусферической прессовальной сеткой с 0,4 мм отверстиями. Заготовки сферонизировали в сферонизаторе, оснащенном фрикционной пластиной с сетчатой геометрией (Caleva Model 15, Caleva, Sturminster Newton, Dorset, UK). Время сферонизации составило 3 мин и скорость сферонизации 1000 об/мин. Гранулы высушивали в течение ночи в сушке (Memmert, Schwabach, Germany) при 40°C. Посредством просеивающей машины (Retsch, Haan, Germany) выделяли фракцию 315-800 мкм.
Получение порошкового состава
10% лактозы (α-Pharma, Braine-l'Alleud, Belgium)/20% обезжиренного молока (Difco, Becton Dickinson, MA, USA) растворяли в деминерализованной воде, наливали в чашки Петри и высушивали в замороженном виде с помощью сублимационной сушилки Amsco Finn Aqua GT4. Смесь замораживали до -45°C в течение 175 мин при 1000 мбар. Осуществляли первичное высушивание при -15°C и давлении в диапазоне 0,8-1 мбар в течение 13 ч, с последующим вторичным высушиванием при повышенной температуре (10°C) и сниженном давлении (0,1-0,2 мбар) в течение 7 ч.
Клинические испытания проводили на здоровых добровольцах. Давших согласие женщин обследовали согласно стандартному протоколу для исключения гинекологических и системных заболеваний, включая цервико-вагинальные инфекции или нарушения микрофлоры. Участники исследования следовали строгому протоколу, который включал большой список действий, от которых они должны были воздерживаться для исключения влияний на вагинальный состав, включая воздержание от полового акта в течение 48 часов до введения и 24 часов после введения продукта, отказ от использования вагинальных гигиенических средств (спрей, пенка и т.д.) и отсутствие депиляции лобковых волос. Во избежание влияния менструального или сопутствующего кровотечения во время проведения исследований участники подвергались продолжительной схеме лечения оральными контрацептивами.
Сравнивали два состава гранул и один состав порошка: неразрушающиеся гранулы из МКЦ, быстроразрушающиеся гранулы из крахмала и порошок, высушенный сублимацией. Они были загружены в растворимые капсулы и введены в верхний свод влагалища. Всех добровольцев после введения оставляли лежать в течение 3 или 6 ч, и подвергали кольпоскопии через 3 или 6 ч и спустя 24 ч.
in vivo
Поведение гранул  оценивали посредством кольпоскопия по фотографиям, целиком захватывающим влагалищную часть шейки матки и слизистую влагалища. В процессе кольпоскопии делались мазки из трех областей: свода, средней части слизистой влагалища и около отверстия влагалища; проводили оценку распространения вагинального состава и определяли процент рибофлавина натрия фосфата (РНФ) в мазках, взятых у свода, в средней части влагалища и около отверстия. В некоторых случаях капсулы хотя и хорошо прикреплялись к слизистой влагалища и смягчались под действием секрета влагалища, но к моменту первой кольпоскопии еще не высвобождали свое содержимое. В таком случае высвобождение осуществляли осторожным прикосновением влагалищным зеркалом к смягченной капсуле.
Результаты демонстрируют, что через 3 ч неразрушающиеся гранулы из МКЦ собирались вместе вокруг свода, и не происходило их распространения по боковым стенкам к отверстию влагалища. После 24 ч небольшое количество гранул (<50) находилось, главным образом, только в области средней части влагалища и вокруг отверстия. Добровольцы замечали основное выведение гранул между 5-7 ч после введения, в основном при посещении туалета и душа. Chatterton и др. также отмечают основную потерю состава с вагинальным кремом во время мочеиспускания (B.E. Chatterton, S. Penglis, J.C. Kovacs, B. Presnell, B. Hunt, Int. J. Pharm. 271(1-2) (2004) 137-143). Таким образом, несмотря на небольшой размер частиц и сферическую форму гранул из МКЦ, не было получено их хорошее распределение и удержание.
Гранулы на основе крахмала также собирались вокруг свода через 6 ч после введения, однако уже отмечалось начало расщепления и распределения гранул. После 24 ч почти у всех добровольцев наблюдалось разрушение гранул с полным покрытием слизистой влагалища. Анализ мазков показал, что через 6 ч РНФ выявлялся лишь исключительно вокруг свода, однако через 24 ч РНФ находили на своде, средней части влагалища и около отверстия, хотя наибольшая концентрация сохранялась вокруг свода (таблицы 2 и 3).
Состав с порошком полностью распределялся вокруг свода через 6 ч, однако отмечалось некоторое распространение на переднюю и заднюю стенки средней части влагалища (таблицы 4 и 5). Никакого покрытия боковых стенок не наблюдали. Кольпоскопия спустя 24 ч показала очень небольшое количество порошка, меченного РНФ. После распределения порошок вел себя как жидкость и быстро удалялся из влагалища.
<b>Таблица 2</b><b>% РНФ, найденного через 6 часов</b>
Гранулы
Свод
Среднее влагалище
Отверстие
Общее
Доброволец 1
0,14
0,01
0,00
0,15
Доброволец 2
0,00
0,00
0,00
0,00
Доброволец 3
0,60
0,00
0,00
0,60
Доброволец 4
0,00
0,00
0,00
0,00
Доброволец 5
0,48
0,02
0,00
0,49
Среднее
0,24
0,01
0,00
0,25
<b>Таблица 3</b><b>% РНФ, найденного через 24 часов</b>
Гранулы
Свод
Среднее влагалище
Отверстие
Общее
Доброволец 1
0,70
0,25
0,04
0,99
Доброволец 2
0,49
0,10
0,10
0,69
Доброволец 3
0,15
0,02
0,00
0,17
Доброволец 4
0,14
0,01
0,00
0,15
Доброволец 5
0,34
0,13
0,02
0,49
Среднее
0,37
0,10
0,03
0,50
<b>Таблица 4</b><b>% РНФ, найденного через 6 часов</b>
Порошок
Свод
Среднее влагалище
Отверстие
Общее
Доброволец 1
0,30
0,05
0,00
0,35
Доброволец 2
0,04
0,00
0,00
0,04
Доброволец 3
0,47
0,15
0,17
0,79
Доброволец 4
0,01
0,04
0,02
0,07
Доброволец 5
0,82
0,00
0,00
0,82
Среднее
0,33
0,05
0,04
0,41
Таблица 5
<b>% РНФ, найденного через 24 часов</b>
Порошок
Свод
Среднее влагалище
Отверстие
Общее
Доброволец 1
0,07
0,01
0,00
0,08
Доброволец 2
0,00
0,00
0,00
0,00
Доброволец 3
0,05
0,02
0,00
0,07
Доброволец 4
0,03
0,03
0,00
0,06
Доброволец 5
0,29
0,08
0,00
0,37
Среднее
0,09
0,03
0,00
0,12