РАСТВОРИТЕЛЬ МАЛОРАСТВОРИМЫХ В ВОДЕ СОЕДИНЕНИЙ
SOLVENT OF COMPOUNDS POORLY SOLUBLE IN WATER

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано в качестве растворителя для доклинических и клинических испытаний впервые синтезированных соединений, создания новых лекарственных средств.
Существует большое разнообразие органических растворителей, традиционно применяемых для растворения малорастворимых в воде химических веществ с целью анализа их биологической активности.
Наиболее близким аналогом изобретения является биполярный апротонный растворитель - диметилсульфоксид, широко используемый в качестве растворителя, в том числе малорастворимых в воде химических соединений [Dimethyl sulfbxide (dmso) a "new" clean, unique, superior solvent / American Chemical Society. - Annual meeting. - August 20-24, 2000].
Задачей изобретения является расширение арсенала растворителей малорастворимых в воде соединений для определения показателей и спектра биологической активности на этапах доклинических и клинических испытаний потенциальных лекарственных средств.
Технический результат - получение растворителя, позволяющего определять показатели и спектр биологической активности новых соединений химической природы на этапах доклинических и клинических испытаний, не изменяющего основные биологические константы и обладающего биологической инертностью.
Указанный технический результат достигается тем, что в качестве растворителя для малорастворимых в воде соединений применяют жировую эмульсию для парентерального питания, содержащую в 1 л раствора:
масло соевое (рафинированное) - 30 г,
триглицериды со средней длиной цепи - 30 г,
масло оливковое (рафинированное)- 25 г,
рыбий жир очищенный- 15 г.

Известна 20% жировая эмульсия для парентерального питания SMOFlipid фирмы Fresenius Kabi, Германия, которая является источником энергии и незаменимых жирных кислот, в т.ч. омега-3-жирных кислот, и содержит на 1 л раствора:
- масло соевое (рафинированное) - 60 г,
- триглицериды со средней длиной цепи - 60 г,
- масло оливковое (рафинированное)- 50 г,
- рыбий жир очищенный - 30 г; а также вспомогательные вещества: фосфолипиды яичного желтка, глицерол безводный, D,L-α-токоферол, натрия олеат, натрия гидроксид (для поддержания уровня рН 8), вода для инъекций [http://grls.rosminzdrav.ru/Grls_View.aspx?idReg=6659&t=cf01452f-40fb-4а9е-8с46-14b7db6e9715].

Предлагаемый растворитель малорастворимых в воде соединений получают путем разведения 20% жировой эмульсии для парентерального питания SMOFlipid дистиллированной стерильной водой в соотношении 1:1 (vol/vol). Таким образом, предлагаемая в качестве растворителя малорастворимых в воде соединений жировая эмульсия для парентерального питания содержит на 1 л раствора:
- масло соевое (рафинированное) - 30 г,
- триглицериды со средней длиной цепи - 30 г,
- масло оливковое (рафинированное)- 25 г,
- рыбий жир очищенный - 15 г; а также вспомогательные вещества: фосфолипиды яичного желтка, глицерол безводный, D,L-α-токоферол, натрия олеат, натрия гидроксид, вода для инъекций.
Определение растворяющей способности заявленного растворителя.
Определение растворяющей способности традиционных растворителей и жировой эмульсии оценивали по растворимости малорастворимых в воде веществ. В качестве малорастворимых веществ были выбраны ацетилсалициловая кислота (2-ацетилоксибензойная кислота, Фармацевтичеекая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай), бензойная кислота (бензойная кислота, ООО Научно-производственная Камская Химическая Компания, Россия), парааминобензойная кислота (4-аминобензойная кислота, Yurui Chemical Co., Ltd, Китай), папаверина гидрохлорид (6,7-Диметокси-1-(3,4-диметоксибензил)-изохинолина гидрохлорид, ОАО «Дальхимфарм», Россия), эстрадиола дипропионат (Эстратриен-1,3,5(10)-диола-3,17 b дипропионат. Фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай).
Пример 1. Применение жировой эмульсии для парентерального питания в качестве растворителя.
-3
Способность растворять малорастворимые в воде вещества изучили для дистиллированной воды, 95% (vol/vol) диметилсульфоксида (ДМСО), N,N-диметилформамида (ДМФА), этанола и раствора жировой эмульсии для парентерального питания заявленного состава. Концентрация малорастворимых в воде веществ после растворения должна составить 2×10 М/л. Объем растворителя - 1 мл. Растворение проходило в стандартных условиях (SATP) - при атмосферном давление 750,06 мм рт.ст. и температуре 25°С.
Установлено, что в данных условиях растворения все исследуемые малорастворимые в воде вещества выпадают в осадок при растворении в дистиллированной воде. Парааминобензойная кислота (ПАСК), бензойная кислота, папаверина гидрохлорид (ПГ) растворяются в 95% этаноле. Этанол способен растворить данное количество ацетилсалициловой кислоты (АСК) и эстрадиола дипропионата только при нагревании, что не соответствует условиям SATP, и при возвращении к исходным показателям вещества выпадают в осадок. Остальные растворители, включая заявленный, равнозначно эффективно растворили выбранные малорастворимые в воде вещества (табл.1).
Биологическая активность растворителей и их влияние на биологические константы в условиях доклинических и клинических испытаний потенциальных лекарственных средств.
Согласно инструкции [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М., 2005. - С.461-476.] растворители, обладающие собственной биологической активностью, не должны применяться в качестве растворяющей среды для изучения эффектов потенциальных лекарственных средств. Однако высокая растворяющая способность ряда широко применяемых растворителей сочетается с их высокой биологической активностью.
Биологическая активность растворителей была изучена на способности препятствовать коагуляции бестромбоцитарной плазмы.

Экспериментальная работа выполнена на крови здоровых доноров-мужчин. Средний возраст доноров составил 18-24 года. Забор крови проводился из кубитальной вены с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer (Dickinson and Company, США). Образцы бестромбоцитарной плазмы получали центрифугированием цитратной крови при 300g в течение 15 минут.
При изучении влияния растворителей на коагуляционный компонент гемостаза в кювету с обедненной тромбоцитами плазмой вводили при постоянном перемешивании 10 мкл раствора исследуемого вещества и инкубировали в течение 5 минут при температуре 37°С. Далее определяли коагуляционную активность растворителей in vitro стандартными клоттинговыми тестами на турбодиметрическом гемокоагулометре Solar CGL (Беларусь). В связи с исходной разницей оптической плотности липидных эмульсий и плазмы крови определение данных показателей для взвеси липидных эмульсий проводили на механическом коагулометре АСКа 2-01-"Астра" (Россия). Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М.: Медицина, 2005. - 327 с.].
Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Вилка. Для описания групп использованы медиана и межквартильный интервал. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.
Пример 2. Коагуляционная активность растворителей.
Результаты проведенных исследований демонстрируют, что все традиционные растворители значительно удлиняют время свертывания бестромбоцитарной плазмы. 95% (vol/vol) раствор ДМСО удлиняет время АПТВ в среднем на 50% в сравнении с контролем. ДМФА в исходной концентрации пролонгирует все определяемые показатели более чем на 200% в сравнении с контролем. 95% этиловый спирт проявляет антикоагуляционную активность по всем изучаемым показателям, удлиняя определяемые показатели в среднем на 5%. Раствор жировой эмульсии для парентерального питания на показатели свертывания бестромбоцитарной плазмы влияния не оказывал.
Таким образом, заявленное средство для растворения химических веществ характеризуется хорошей растворяющей способностью, сравнимой с аналоговыми растворителями. Длительное использование липидных эмульсий в качестве средств нутритивной поддержки позволили убедиться в биологической инертности, безопасности и отсутствии биологической активности как при болюсном, так и при длительном применении [Traul, К.А. Review of the toxicologic properties of medium-chain triglycerides / K.A. Traul, A. Driedger, D.L. Ingle, D. Nakhasi // Food Chem. Toxicol. - 2000. - Vol.38. - P. 79-98]. На примере свертывания бестромбоцитарной плазмы выявлено отсутствие влияния жировой эмульсии для парентерального питания на показатели АПТВ, ПВ и концентрации фибриногена.