СПОСОБ ЗАБОРА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОФЛОРЫ ВЛАГАЛИЩА
METHOD OF BIOLOGICAL MATERIAL SAMPLING FOR MICROBIAL ANALYSIS OF VAGINAL MICROFLORA

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и акушерству, и может быть использовано для забора биологического материала из влагалища с целью проведения бактериологических исследований, позволяющих определить видовой и количественный состав вагинальной микрофлоры у женщин с дисбиозом влагалища.
Достоверное лабораторное подтверждение дисбиотических изменений во влагалищном биоценозе может быть получено в результате культурального исследования цервико-вагинального секрета (Анкирская А.С. Бактериальный вагиноз. Акушерство и гинекология. - 2005. - №3. - С.10-13).
На сегодняшний день установлена доминирующая роль условно-патогенных бактерий в инфекционной патологии влагалища: показано, что одни и те же микроорганизмы могут быть в одних условиях возбудителями «неспецифических» (оппортунистических) инфекций, а в условиях физиологической нормы являться составной частью индигенной микрофлоры. (Анкирская А.С, Муравьева В.В. Инфекции влагалища: диагностика. Лабораторная диагностика оппортунистических инфекций влагалища. Consilium-medicum, 2005. - Том 7. - №3). В этой связи для выбора тактики ведения и лечения пациенток с оппортунистическими вагинальными инфекциями имеет значение уровень обсемененности влагалища условно-патогенными микроорганизмами. Точная количественная микробиологическая характеристика влагалищной микрофлоры во многом определяется способом взятия биологического материала.
Известен универсальный способ получения материала для генодиагностического исследования влагалищной микрофлоры больших групп женщин, заключающийся в том, что взятие биологического материала влагалища и проведение генамплификационного анализа клеточной ДНК осуществляют с гигиенического тампона, находящегося в контакте с влагалищем не менее 6 часов и помещенного после этого в герметический полимерный контейнер с жидким консервантом, прекращающим рост бактерий, а при проведении генамплификационного анализа тампон отжимают в контейнере 4-5 раз для полноты смыва клеток (патент RU 2209040, 2003 г.).
Известные способы забора материала, потенциально содержащего влагалищную микрофлору, состоят во взятии влагалищного отделяемого со слизистой стерильным ватным зондом-тампоном, микробиологической петлей (Меньшиков В.В. Клиническая и лабораторная аналитика. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М.: Агат-Мед, 2003. - том 4. - С.310-314), цервикальной цитощеткой (Воропаева Е.А., Афанасьев С.С., Кудрявцева М.В. и др. Микроэкология и показатели гуморального иммунитета у женщин с неспецифическими заболеваниями гениталий. Журнал микробиол., 2005. - №3. - С.65-69).
Прототипом изобретения является способ забора цервико-вагинального секрета с использованием бактериологической (калибровочной или микробиологической) петли (Меньшиков В.В. Клиническая и лабораторная аналитика. Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М.: Агат-Мед, 2003. - том 4. - С.310-314).
При заборе влагалищного отделяемого из заднего свода с помощью стерильного ватного зонда-тампона, цервикальной цитощетки является вероятным получение недостаточного объема материала, что может привести к ложноотрицательным результатам при диагностике дисбиоза влагалища. Количество биологического материала в этом случае в определенной мере обусловлено его консистенцией при дисбиозе влагалища, которая может варьировать: при гомогенном водянистом отделяемом гигроскопические свойства ватного тампона, цитощетки позволяют удерживать большее количество секрета, чем в случае с густыми или «творожистыми» выделениями. Более того, сокращенное время экспозиции зонда-тампона, цервикальной цитощетки в заднем своде влагалища также способствует получению материала не в полном объеме. Результаты бактериологического исследования материала, полученного этими способами, дают исключительно качественную или полуколичественную оценку состояния вагинальной микрофлоры.
При заборе материала с помощью бактериологических петель, каждая из которых имеет стандартный диаметр, позволяющий переносить определенный объем жидкости на мениске (объем жидкости с относительно постоянным количеством микроорганизмов), получают недостаточно точную количественную микробиологическую характеристику влагалищной микроэкосистемы в связи с тем, что в отдельных случаях повышенная плотность и вязкость вагинального отделяемого исключает возможность формирования мениска и, следовательно, стандартного дозирования материала.
Недостатком обозначенных выше способов взятия влагалищного отделяемого является отсутствие возможности в процессе получения материала создания условий с пониженным содержанием кислорода, необходимых для выживания факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов, превалирующих при дисбиотических сдвигах в вагинальной микросистеме (Кира Е. Ф. Бактериальный вагиноз. СПб.: ООО «Нева-Люкс», 2001. - С.114-123).
Задачей изобретения является разработка эффективного способа взятия биологического материала из влагалища для бактериологического исследования.
Технический результат - повышение достоверности бактериологического исследования влагалищной микрофлоры за счет забора бактерий пристеночной и просветной области в достаточном количестве, сохранения жизнеспособности факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов в условиях пониженного содержания кислорода в трубке, создаваемого в процессе взятия материала, возможности точного определения объема посевной дозы.
Предлагаемый способ иллюстрируется следующими чертежами: на фиг.1 изображен общий вид используемого устройства для забора в собранном виде; на фиг.2 - забор влагалищного отделяемого с помощью устройства.
Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Взятие биологического материала из влагалища осуществляют до мануального исследования после введения зеркал из заднего свода или патологически измененных участков слизистой оболочки. Используют устройство, содержащее гибкую прозрачную полипропиленовую трубку 1 общей длиной 275 мм, на рабочем конце 2 которой имеется отверстие 3 с внешним диаметром 2,6 мм, а внутри трубки по всей длине подвижно размещен пластиковый поршень 4, предназначенный для создания отрицательного давления при заборе материала, кроме того, он используется для выталкивания извлеченного материала в пробирку. Не касаясь стенок влагалища, устройство вводят в задний свод и, придерживая его одной рукой, другой потягиванием перемещают поршень, в результате чего образуется вакуум, и освобождающаяся полость трубки наполняется биологическим материалом. В дальнейшем поворачивают устройство 2-3 раза вокруг продольной оси в боковых направлениях, для того, чтобы собрать максимальный объем материала. Перемещая внутренний поршень к рабочему концу, опорожняют трубку и помещают полученный материал в пробирку с транспортной средой или буферным раствором.
Предлагаемый способ получения биологического материала из влагалища обеспечивает забор бактерий пристеночной и просветной области в достаточном количестве. Отрицательное давление в трубке создает благоприятные условия (с пониженным содержанием кислорода в среде) для выживания факультативно- и облигатно-анаэробных микроорганизмов в процессе взятия материала. Кроме того, способ взятия материала с помощью данного устройства позволяет получать точные объемы влагалищного отделяемого для определения исходных соотношений между ассоциантами в микробных патобиоценозах, повышая тем самым достоверность бактериологического метода в диагностике оппортунистических инфекций влагалища.
Приводим пример клинического использования предлагаемого способа.
Пациентка А., 1980 г.р., обратилась к акушеру-гинекологу с жалобами на обильные гноевидные выделения из половых путей в течение двух дней, чувство жжения и зуда во влагалище после незащищенного полового контакта.
Из гинекологических заболеваний: эктопия шейки матки - криодеструкция в 23 года. Из общих заболеваний: хронический гастродуоденит, стадия ремиссии. Менструальная функция без особенностей. В анамнезе беременностей не было. Половая жизнь с 19 лет, вне брака. В течение последних 4 лет замужем, половая жизнь в браке, с целью контрацепции применяет презерватив.
При осмотре общее состояние удовлетворительное.
Status genitalis: Наружные половые органы развиты правильно, оволосение по женскому типу. Данные осмотра в зеркалах: шейка матки конической формы. Имеется гиперемия и отечность слизистой оболочки влагалища и шейки матки, вагинальное отделяемое в повышенном количестве, желтоватого цвета, гомогенной консистенции, вязкое, без запаха. Per vaginum: Влагалище узкое. Своды свободные, симметричные. Тело матки в anteversio-flexio, нормальных размеров, по средней линии, плотное, подвижное, безболезненное. Придатки с обеих сторон не пальпируются, область их безболезненна.
С целью установления диагноза проведены следующие диагностические мероприятия: взят мазок из заднего свода влагалища, эпителиальный соскоб из цервикального канала и уретры для ПЦР-диагностики, получено отделяемое из заднего свода влагалища предлагаемым устройством и микробиологичекой петлей (диаметром 3 мм) для бактериологического исследования.
В мазке по Граму: лейкоциты в большом количеств в п/з, эпителиальные клетки в умеренном количестве, грамвариабельная флора в большом количестве, «ключевые» клетки не обнаружены. М.hominis, U.urealyticum, С.trachomatis, Т.vaginalis, N.gonorrhoeae из цервикального канала, уретры, методом ПЦР не выявлены. В результате обследования был установлен предварительный диагноз: Острый неспецифический вагинит.
Данные бактериологического исследования, полученные при взятии материала предлагаемым устройством и микробиологичекой петлей, значительно отличались (таблица 1): в первом случае выявлены более высокие уровни обсемененности вагинального биоценоза условно-патогенными микроорганизмами и отражена истинная картина степени выраженности дисбиотического процесса во влагалище.
Пациентке было проведено антибактериальное лечение согласно результатам бактериологического исследования.
Предлагаемый способ получения биологического материала из влагалища был использован у 73 больных, что позволило значительно повысить достоверность бактериологического исследования влагалищной микрофлоры и шире внедрить его в клиническую практику.
Таблица 1.
Сравнительная количественная и видовая характеристика влагалищной микрофлоры пациентки А в зависимости от способа получения биологического материала для бактериологического исследования
Вид микроорганизмов
Степень обсемененности (lg КОЕ/мл)
забор влагалищного отделяемого предлагаемым способом
забор влагалищного отделяемого калиброванной петлей (диаметром 3 мм)
Lactobacillus spp.
9
7,84
S. agalactiae
11,4
6,6
E. faecium
7,17
4,92
A. viridans
6,35
не выведен
G. vaginalis
3
не выведен