УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ КОНСТРУКЦИЙ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИВИЧ ТЕРАПИИ

1. Генетическая конструкция для антиВИЧ терапии, которая включает нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3) и отличающуюся от исходной последовательности SEQ ID N2 множественными синонимичными заменами, обеспечивающими увеличение процента GC пар в составе ДНК последовательности.
2. Генетическая конструкция по п.1, где процент GC пар в последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), составляет от 49 до 64%.
3. Генетическая конструкция по п.1, где в качестве последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), использована последовательность SEQ ID N1.
4. Конструкция по пп.1, 2 или 3, дополнительно включающая молекулярный маркер, представляющий собой ген устойчивости к пуромицину, ген зеленого флуоресцентного белка или другую последовательность для селекции и/или мониторинга модифицированных клеток.
5. Генетическая конструкция по пп.1, 2 или 3, где последовательность, кодирующая модифицированный белок TRIM 5a человека, находится под контролем конститутивного, тканеспецифичного или индуцибельного промотора.
6. Генетическая конструкция по пп.1, 2 или 3, где в качестве промотора используется один из следующих промоторов: промотор гена PGK, гена EF1α, гена UbC, промотор генов МНС класса II, промотор гена Т-клеточного рецептора, промотор гена β-интерферона, промотор гена IL2, промотор гена рецептора IL2 или тетрациклин зависимый промотор.
7. Генетическая конструкция для антиВИЧ терапии, которая включает:
векторную последовательность, обеспечивающую встраивание ДНК последовательностей в геном клетки человека, и
последовательность, кодирующую модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3) и отличающуюся от исходной последовательности SEQ ID N2 множественными синонимичными заменами, обеспечивающими увеличение процента GC пар в составе ДНК последовательности.
8. Генетическая конструкция по п.7, где процент GC пар в последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), составляет от 49 до 64%.
9. Генетическая конструкция по п.7, где в качестве последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), использована последовательность SEQ ID N1.
10. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где последовательность, кодирующая модифицированный белок TRIM5a человека, находится под контролем конститутивного, тканеспецифичного или индуцибельного промотора.
11. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве промотора используется один из следующих промоторов: промотор гена PGK, гена EF1α, гена, UbC, промотор генов МНС класса II, промотор гена Т-клеточного рецептора, промотор гена β-интерферона, промотор гена IL2, промотор гена рецептора IL2 или тетрациклин зависимый промотор.
12. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где последовательность, кодирующая модифицированный белок TRIM5a человека, может быть в прямом или обратном направлении по отношению к вектору.
13. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, дополнительно включающая молекулярный маркер, представляющий собой ген устойчивости к пуромицину, ген зеленого флуоресцентного белка или другую последовательность для селекции и/или мониторинга модифицированных клеток.
14. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе ВИЧ-1, который включает, по меньшей мере, следующие области:
5'-LTR и 3'LTR,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ.
15. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе ВИЧ-1, который включает, по меньшей мере, следующие области:
5'-LTR и 3'LTR,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ,
и где последовательность вектора модифицирована с помощью последовательности SEQ ID N10 перед областью сРРТ.
16. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется самоинактивирующийся лентивирусный вектор, который включает, по меньшей мере, следующие области:
RSV/5'-LTR гибридный промотор,
3'LTR с делецией в области U3,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ.
17. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется самоинактивирующийся лентивирусный вектор, который включает, по меньшей мере, следующие области:
RSV/5'-LTR гибридный промотор,
3'LTR с делецией в области U3,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ,
и где последовательность вектора модифицирована с помощью последовательности SEQ ID N10 перед областью сРРТ.
18. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе одного или нескольких из лентивирусов: ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВИО, вирус иммунодефицита крупного рогатого скота, лентивирус артрита-энцефалита коз, вирус инфекционной анемии лошадей, вирус иммунодефицита кошек, и/или вирус болезни Джембрана, или вектор, созданный на основе спумавируса.
19. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где в качестве вектора используется невирусный вектор, созданный на основе векторной системы транспозон/транспозаза.
20. Генетическая конструкция по пп.7, 8 или 9, где встраивание ДНК последовательности в определенное место хромосомы человека обеспечивается за счет внесения разрыва в заданный участок хромосомы с помощью специфической эндонуклеазы, и последующей гомологичной рекомбинации между векторными последовательностями, входящими в конструкции по пп.7, 8 или 9 и прилегающими к разрыву участками хромосомы.
21. Генетическая конструкция для антиВИЧ терапии, которая включает:
последовательность, кодирующую модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3) и отличающуюся от исходной последовательности SEQ ID N2 множественными синонимичными заменами, обеспечивающими увеличение процента GC пар в составе ДНК последовательности,
и одну или более последовательностей, выбранных из SEQ ID N 7, 8, 9, кодирующих искусственную микроРНК, которая ингибирует экспрессию гена рецептора человека CCR5 (miRNA CCR5).
22. Генетическая конструкция по п.21, где процент GC пар в последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), составляет от 49 до 64%.
23. Генетическая конструкция по п.21, где в качестве последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), использована последовательность SEQ ID N1.
24. Генетическая конструкция по пп.21-23, дополнительно включающая последовательность SEQ ID N4, кодирующую РНК шпильку, аналогичную TAR-последовательности (TAR), и/или антисмысловую последовательность к участку гена env ВИЧ SEQ ID N5 (а/s env).
25. Генетическая конструкция по пп.21-23, где, по меньшей мере, одна из последовательностей: микроРНК CCR5 и/или последовательность, кодирующая модифицированный белок TRIM 5α человека, находится под контролем конститутивного, тканеспецифичного или индуцибельного промотора.
26. Генетическая конструкция по пп.21, 22 или 23 где в качестве промотора используется один из следующих промоторов: промотор гена PGK, гена EF1α, гена, UbC, промотор генов МНС класса II, промотор гена Т-клеточного рецептора, промотор гена β-интерферона, промотор гена IL2, промотор гена рецептора IL2, тетрациклин зависимый промотор или промотор РНК полимеразы III.
27. Конструкция по пп.21-23, дополнительно включающая молекулярный маркер, представляющий собой ген устойчивости к пуромицину, ген зеленого флуоресцентного белка или другую последовательность для селекции и/или мониторинга модифицированных клеток.
28. Генетическая конструкция для антиВИЧ терапии, которая включает:
векторную последовательность, обеспечивающую встраивание ДНК последовательностей в геном клетки человека,
последовательность, кодирующую модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3) и отличающуюся от исходной последовательности SEQ ID N2 множественными синонимичными заменами, обеспечивающими увеличение процента GC пар в составе ДНК последовательности,
и одну или более последовательностей, выбранных из SEQ ID N 7, 8, 9, кодирующих искусственную микроРНК, которая ингибирует экспрессию гена рецептора человека CCR5 (miRNA CCR5).
29. Генетическая конструкция по п.28, где процент GC пар в последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), составляет от 49 до 64%.
30. Генетическая конструкция по п.28, где в качестве последовательности, кодирующей модифицированный белок TRIM 5α человека (SEQ ID N3), использована последовательность SEQ ID N1.
31. Генетическая конструкция по пп.28-30, дополнительно включающая последовательность SEQ ID N4, кодирующую РНК шпильку, аналогичную TAR-последовательности (TAR), и/или антисмысловую последовательность к участку гена env ВИЧ SEQ ID N5 (а/s env).
32. Генетическая конструкция по пп.28-30, где, по меньшей мере, одна из последовательностей: микроРНК CCR5 и/или последовательность, кодирующая модифицированный белок TRIM 5α человека, находится под контролем конститутивного, тканеспецифичного или индуцибельного промотора.
33. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве промотора используется один из следующих промоторов: промотор гена PGK, гена EF1α, гена, UbC, промотор генов МНС класса II, промотор гена Т-клеточного рецептора, промотор гена β-интерферона, промотор гена IL2, промотор гена рецептора IL2, тетрациклин зависимый промотор или промотор РНК-полимеразы III.
34. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе ВИЧ-1, который включает, по меньшей мере, следующие области:
5'-LTR и 3'LTR,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ.
35. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе ВИЧ-1, который включает, по меньшей мере, следующие области:
5'-LTR и 3'LTR,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ
и где последовательность вектора модифицирована с помощью последовательности SEQ ID N1 перед областью сРРТ
36. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется самоинактивирующийся лентивирусный вектор, который включает, по меньшей мере, следующие области:
RSV/5'-LTR гибридный промотор,
3'LTR с делецией в области U3,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ.
37. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется самоинактивирующийся лентивирусный вектор, который включает, по меньшей мере, следующие области:
RSV/5'-LTR гибридный промотор,
3'LTR с делецией в области U3,
участок связывания специфической тРНК (PBS),
упаковочный сигнал (Ψ),
rev-отвечающий элемент (RRE),
посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WPRE),
область сРРТ,
и где последовательность вектора модифицирована с помощью последовательности SEQ ID N1 перед областью сРРТ.
38. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе одного или нескольких из лентивирусов: ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВИО, вирус иммунодефицита крупного рогатого скота, лентивирус артрита-энцефалита коз, вирус инфекционной анемии лошадей, вирус иммунодефицита кошек, и/или вирус болезни Джембрана, или вектор, созданный на основе спумавируса.
39. Генетическая конструкция по пп.28-30, где в качестве вектора используется невирусный вектор, созданный на основе векторной системы транспозон/транспозаза.
40. Генетическая конструкция по пп.28-30, где встраивание ДНК последовательности в определенное место хромосомы человека обеспечивается за счет внесения разрыва в заданный участок хромосомы с помощью специфической эндонуклеазы, и последующей гомологичной рекомбинации между векторными последовательностями, входящими в конструкции по пп.28, 29 или 30 и прилегающими к разрыву участками хромосомы.