СЛИТЫЕ БЕЛКИ IL-22- Fc И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Композиция, содержащая слитый белок интерлейкин-22 (IL-22) – Fc, причем слитый белок IL-22 – Fc содержит гликозилированный полипептид IL-22, связанный с Fc-областью антитела линкером, и при этом композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 8 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что полипептид IL-22 является N-гликозилированным.
3 .Композиция по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что полипептид IL-22 гликозилирован в одном или более положениях, соответствующих аминокислотным остаткам Asn21, Asn35, Asn64 и/или Asn143 в SEQ ID NO: 4.
4. Композиция, содержащая слитый белок IL-22 – Fc, причем слитый белок IL-22 – Fc содержит гликозилированный полипептид IL-22, связанный с Fc-областью антитела линкером, при этом полипептид IL-22 гликозилирован в одном или более положениях, соответствующих аминокислотным остаткам Asn21, Asn35, Asn64 и/или Asn143 в SEQ ID NO: 4, и при этом
(a) процент занятости сайтов N-гликозилирования в остатке Asn21 находится в диапазоне от 70 до 90;(b) процент занятости сайтов N-гликозилирования в остатке Asn35 находится в диапазоне от 90 до 100;(c) процент занятости сайтов N-гликозилирования в остатке Asn64 находится в диапазоне от 90 до 100; и/или(d) процент занятости сайтов N-гликозилирования в остатке Asn143 находится в диапазоне от 25 до 35.
5. Композиция по любому из пп. 1–3, отличающаяся тем, что указанная композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 8 до 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
6. Композиция по п. 4, отличающаяся тем, что указанная композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты 8 или 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
7. Композиция по любому из пп. 1–5, отличающаяся тем, что гликозилирование сиаловой кислотой включает N-ацетилнейраминовую кислоту (NANA).
8. Композиция по любому из пп. 1–5, отличающаяся тем, что указанная композиция имеет среднее содержание N-гликолилнейраминовой кислоты (NGNA) менее 1 моля NGNA на моль слитого белка IL-22 – Fc.
9. Композиция по любому из пп. 1–8, отличающаяся тем, что указанная композиция является жидкой композицией.
10. Композиция по любому из пп. 1–9, отличающаяся тем, что
(i) слитый белок IL-22 – Fc имеет максимальную наблюдаемую концентрацию (Cмакс.) от около 8000 нг/мл до около 19000 нг; и/или
(ii) слитый белок IL-22 – Fc имеет площадь под кривой сывороточная концентрация – время, начиная с момента времени 0 и до последнего измеряемого момента времени (ППКпосл.), от около 7000 сутки·нг/мл до около 25000 сутки·нг/мл; и/или
(iii) слитый белок IL-22 – Fc имеет значение клиренса (CL) от около 40 мл/кг/сутки до около 140 мл/кг/сутки.
11. Композиция по п. 10, отличающаяся тем, что Cмакс., ППКпосл и/или CL оценивают после внутривенного введения около 1000 мкг/кг слитого белка IL-22 – Fc мыши CD1.
12. Композиция по любому из пп. 2–11, отличающаяся тем, что полипептид IL-22 содержит N-гликаны, имеющие моноантеннарную, биантеннарную, триантеннарную и/или тетраантеннарную структуру.
13. Композиция по п. 12, отличающаяся тем, что
(i) от около 0,1% до около 2% N-гликанов имеют моноантеннарную структуру;
(ii) от около 10% до около 25% N-гликанов имеют биантеннарную структуру;
(iii) от около 25% до около 40% N-гликанов имеют триантеннарную структуру; и/или (iv) от около 30% до около 51% N-гликанов имеют тетраантеннарную структуру.
14. Композиция по любому из пп. 2–13, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc содержит N-гликаны, содержащие ноль, один, два, три или четыре галактозных фрагмента.
15. Композиция по п. 14, отличающаяся тем, что
(i) от около 9% до около 32% N-гликанов содержат ноль галактозных фрагментов;
(ii) от около 10% до около 20% N-гликанов содержат один галактозный фрагмент;
(iii) от около 8% до около 25% N-гликанов содержат два галактозных фрагмента;
(iv) от около 12% до около 25% N-гликанов содержат три галактозных фрагмента; и/или (v) от около 12 % до около 30% N-гликанов содержат четыре галактозных фрагмента.
16. Композиция по любому из пп. 2–15, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc содержит N-гликаны, содержащие ноль, один, два, три или четыре фрагмента сиаловой кислоты.
17. Композиция по п. 16, отличающаяся тем, что
(i) от около 12% до около 35% N-гликанов содержат ноль фрагментов сиаловой кислоты;
(ii) от около 10% до около 30% N-гликанов содержат один фрагмент сиаловой кислоты;
(iii) от около 10% до около 30% N-гликанов содержат два фрагмента сиаловой кислоты;
(iv) от около 10% до около 30% N-гликанов содержат три фрагмента сиаловой кислоты; и/или
(v) от около 1% до около 20% N-гликанов содержат четыре фрагмента сиаловой кислоты.
18. Композиция по любому из пп. 2–17, отличающаяся тем, что (i) полипептид IL-22 содержит от около 0% до около 10% N-гликанов, содержащих концевой маннозный фрагмент; и/или (ii) полипептид IL-22 содержит от около 30% до около 55% N-гликанов, содержащих концевой N-ацетилглюкозаминный (GlcNAc) фрагмент.
19. Композиция по п. 18, отличающаяся тем, что N-гликаны содержат один, два, три или четыре концевых GlcNAc-фрагмента.
20. Композиция по п. 19, отличающаяся тем, что
(i) от около 1% до около 20% N-гликанов содержат один концевой GlcNAc-фрагмент;
(ii) от около 1% до около 20% N-гликанов содержат два концевых GlcNAc-фрагмента;
(iii) от около 5% до около 25% N-гликанов содержат три концевых GlcNAc-фрагмента; и/или
(iv) от около 0% до около 15% N-гликанов содержат четыре концевых GlcNAc-фрагмента.
21. Композиция по любому из пп. 2–20, отличающаяся тем, что (i) полипептид IL-22 содержит от около 20% до около 45% N-гликанов, содержащих концевой галактозный (Gal) фрагмент; и/или (ii) N-гликаны содержат один, два или три концевых Gal-фрагмента.
22. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что
(i) от около 15% до около 30% N-гликанов содержат один концевой Gal-фрагмент;
(ii) от около 1% до около 15% N-гликанов содержат два концевых Gal-фрагмента; и/или
(iii) от около 0,1% до около 6% N-гликанов содержат три концевых Gal-фрагмента.
23. Композиция по любому из пп. 2–22, отличающаяся тем, что: (i) полипептид IL-22 содержит N-гликаны, содержащие галактозо-N-ацетилглюкозаминные (LacNAc) повторы; (ii) полипептид IL-22 содержит N-гликаны, содержащие фукозилированные N-гликаны; и/или (iii) полипептид IL-22 содержит N-гликаны, содержащие афукозилированные N-гликаны.
24. Композиция по любому из пп. 1–23, отличающаяся тем, что Fc-область не является гликозилированной.
25. Композиция по п. 24, отличающаяся тем, что: (i) аминокислотный остаток в позиции 297 по EU-индексу Fc-области представляет собой Gly или Ala; и/или (ii) аминокислотный остаток в позиции 299 по EU-индексу Fc-области представляет собой Ala, Gly или Val.
26. Композиция по любому из пп. 1–25, отличающаяся тем, что Fc-область содержит CH2- и CH3-домен IgG1 или IgG4.
27. Композиция по п. 26, отличающаяся тем, что Fc-область содержит CH2- и CH3-домен IgG4.
28. Композиция по любому из пп. 1–27, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95 % идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:8.
29. Композиция по любому из пп. 1–28, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:16 или состоит из нее.
30. Композиция по любому из пп. 1–29, отличающаяся тем, что полипептид IL-22 представляет собой человеческий полипептид IL-22.
31. Композиция по п. 30, отличающаяся тем, что полипептид IL-22 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4.
32. Композиция по любому из пп. 1–31, отличающаяся тем, что линкер состоит из аминокислотной последовательности RVESKYGPP (SEQ ID NO: 44).
33. Композиция по любому из пп. 1–32, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc связывается с рецептором IL-22.
34. Композиция п. 33, отличающаяся тем, что рецептор IL-22 представляет собой рецептор человеческого IL-22.
35. Композиция п. 34, отличающаяся тем, что рецептор человеческого IL-22 содержит гетеродимер, состоящий из полипептида IL-22R1 и полипептида IL-10R2.
36. Композиция п. 35, отличающаяся тем, что полипептид IL-22R1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82, а полипептид IL-10R2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:84.
37. Композиция по любому из пп. 1–36, отличающаяся тем, что слитый белок IL-22 – Fc состоит из двух одноцепочечных единиц, связанных двумя межцепочечными дисульфидными мостиками, причем каждая одноцепочечная единица состоит из человеческого слитого белка IL-22, содержащего IL-22, слитый с Fc-областью человеческого иммуноглобулина IgG4.
38. Композиция по любому из пп. 1–37, отличающаяся тем, что указанная композиция является фармацевтической композицией.
39. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что указанная композиция является водной и/или стерильной.
40. Композиция по п. 38 или 39, дополнительно содержащая дополнительный терапевтический агент.
41. Композиция по любому из пп. 38–40, дополнительно содержащая желирующий агент.
42. Способ лечения воспалительного заболевания кишечника (ВЗК) у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что ВЗК представляет собой язвенный колит или болезнь Крона.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что ВЗК представляет собой язвенный колит.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что язвенный колит представляет собой умеренный или тяжелый язвенный колит.
46. Способ по п. 43, отличающийся тем, что ВЗК представляет собой болезнь Крона.
47. Композиция, содержащая слитый белок интерлейкин (IL)-22 – Fc по любому из пп. 1–41 для применения в качестве лекарственного средства.
48. Композиция, содержащая слитый белок интерлейкин (IL)-22 – Fc по любому из пп. 1–41, для применения при(i) лечении воспалительного заболевания кишечника (ВЗК),(ii) ингибировании микробной инфекции в кишечнике, сохранении бокаловидных клеток в кишечнике во время микробной инфекции, повышении целостности эпителиальных клеток, пролиферации эпителиальных клеток, дифференцировки эпителиальных клеток, миграции эпителиальных клеток или заживлении эпителиальных ран в кишечнике,(iii) лечении острого поражения почек или острого панкреатита,(iv) ускорении или улучшении заживления ран у нуждающегося в этом субъекта,(v) предотвращении или лечении сердечно-сосудистых заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, болезнь коронарных капилляров, инсульт, болезнь сонных артерий, болезнь периферических артерий или хроническое заболевание почек,(vi) лечении метаболического синдрома или(vii) лечении острой эндотоксемии или сепсиса.
49. Применение композиции, содержащей слитый белок интерлейкин (IL)-22 – Fc по любому из пп. 1–41, для приготовления лекарственного средства для применения при(i) лечении воспалительного заболевания кишечника (ВЗК),(ii) ингибировании микробной инфекции в кишечнике, сохранении бокаловидных клеток в кишечнике во время микробной инфекции, повышении целостности эпителиальных клеток, пролиферации эпителиальных клеток, дифференцировки эпителиальных клеток, миграции эпителиальных клеток или заживлении эпителиальных ран в кишечнике,(iii) лечении острого поражения почек или острого панкреатита,(iv) ускорении или улучшении заживления ран у нуждающегося в этом субъекта,(v) предотвращении или лечении сердечно-сосудистых заболеваний, таких как ишемическая болезнь сердца, болезнь коронарных капилляров, инсульт, болезнь сонных артерий, болезнь периферических артерий или хроническое заболевание почек,(vi) лечении метаболического синдрома или(vii) лечении острой эндотоксемии или сепсиса.
50. Способ ингибирования микробной инфекции в кишечнике, сохранения бокаловидных клеток в кишечнике во время микробной инфекции, повышения целостности эпителиальных клеток, пролиферации эпителиальных клеток, дифференцировки эпителиальных клеток, миграции эпителиальных клеток или заживления эпителиальных ран в кишечнике у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
51. Способ лечения острого поражения почек или острого панкреатита у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
52. Способ ускорения или улучшения заживления ран у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
53. Способ предотвращения или лечения сердечно-сосудистого патологического состояния у нуждающегося в этом субъекта, причем состояние включает патологию образования атеросклеротических бляшек, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
54. Способ лечения метаболического синдрома у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
55. Способ лечения острой эндотоксемии или сепсиса, или и того, и другого у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту композиции по любому из пп. 1–41.
56. Способ, композиция или применение по любому из пп. 42–55, отличающиеся тем, что композицию вводят внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местным образом.
57. Способ, композиция или применение по любому из пп. 42–56, отличающиеся тем, что субъекту совместно вводят по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент.
58. Способ получения композиции, содержащей слитый белок IL-22 – Fc, включающий
культивирование культуры инокуляционной системы, содержащей множество клеток-хозяев, в среде для выработки в условиях, подходящих для образования вырабатывающей культуры, в течение по меньшей мере 10 суток, причем клетки-хозяева содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок IL-22 – Fc, при этом слитый белок IL-22 – Fc содержит полипептид IL-22, связанный с Fc-областью линкером, причем клетки-хозяева экспрессируют слитый белок IL-22 – Fc, с получением, таким образом, композиции, содержащей слитый белок IL-22 – Fc,
при этом указанный полипептид IL-22 является гликозилированным, и при этом указанная композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 6 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
59. Способ по п. 58, отличающийся тем, что длительность культивирования составляет по меньшей мере 11 суток, по меньшей мере 12 суток или по меньшей мере 13 суток.
60. Способ по п. 58 или 59, отличающийся тем, что длительность культивирования составляет 12 суток.
61. Способ по любому из пп. 58–60, дополнительно включающий создание культуры посевной системы путем культивирования клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок IL-22 – Fc, в среде для посевной системы в условиях, подходящих для образования культуры посевной системы, перед культивированием культуры инокуляционной системы в среде для выработки.
62. Способ по п. 61, дополнительно включающий инокуляцию культуры посевной системы в среду для инокуляции в условиях, подходящих для образования культуры инокуляционной системы, перед культивированием культуры инокуляционной системы в среде для выработки.
63. Способ по любому из пп. 58–62, отличающийся тем, что клетки-хозяева являются эукариотическими клетками-хозяевами.
64. Способ по п. 63, отличающийся тем, что эукариотические клетки-хозяева являются клетками-хозяевами млекопитающего.
65. Способ по п. 64, отличающийся тем, что клетки-хозяева млекопитающего являются клетками яичника китайского хомяка (CHO).
66. Способ по любому из пп. 58–65, дополнительно включающий сбор клеточной культуральной жидкости, содержащей слитый белок IL-22 – Fc, из вырабатывающей культуры.
67. Способ по п. 66, отличающийся тем, что сбор клеточной культуральной жидкости включает: (i) охлаждение вырабатывающей культуры; (ii) удаление клеток-хозяев из среды для выработки путем центрифугирования для образования клеточной культуральной жидкости; и/или (iii) фильтрацию клеточной культуральной жидкости.
68. Способ по любому из пп. 58–67, дополнительно включающий очистку слитого белка IL-22 – Fc в клеточной культуральной жидкости.
69. Способ по п. 68, отличающийся тем, что очистка слитого белка IL-22 – Fc включает следующие подэтапы:
(i) приведение клеточной культуральной жидкости в контакт с аффинной хроматографической твердой фазой, необязательно, промывку аффинной хроматографической твердой фазы промывочным буфером, элюирование слитого белка IL-22 – Fc из аффинной хроматографической твердой фазы первым элюирующим буфером с образованием аффинного пула и, необязательно, инактивацию вирусов в аффинном пуле;
(ii) приведение аффинного пула в контакт с анионообменной хроматографической твердой фазой, необязательно, промывку анионообменной хроматографической твердой фазы первым уравновешивающим буфером, элюирование слитого белка IL-22 – Fc из анионообменной хроматографической твердой фазы вторым элюирующим буфером с образованием анионообменного пула и, необязательно, фильтрацию анионообменного пула для удаления вирусов; и
(iii) приведение анионообменного пула в контакт с твердой фазой для хроматографии с гидрофобным взаимодействием и сбор проточного материала с образованием пула очищенного продукта, содержащего слитый белок IL-22 – Fc, и, необязательно, промывку твердой фазы для хроматографии с гидрофобным взаимодействием вторым уравновешивающим буфером, сбор проточного материала и добавление его к пулу очищенного продукта.
70. Способ по п. 69, отличающийся тем, что очистка слитого белка IL-22 – Fc дополнительно включает один или более следующих подэтапов:
(iv) концентрация пула очищенного продукта с образованием пула концентрированного продукта;
(v) ультрафильтрация пула очищенного продукта;
(vi) замена буфера пула концентрированного продукта с образованием пула ультрафильтрации и диафильтрации (УФДФ), содержащего слитый белок IL-22 – Fc; и/или
(vii) кондиционирование пула УФДФ рецептурным буфером с образованием кондиционированного пула УФДФ, содержащего слитый белок IL-22 – Fc.
71. Способ по п. 69 или 70, отличающийся тем, что подэтап (i) дополнительно включает инактивацию вирусов путем добавления в клеточную культуральную жидкость детергента перед приведением клеточной культуральной жидкости в контакт с аффинной колонкой.
72. Способ по любому из пп. 58–71, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает повышение содержания сиаловой кислоты в композиции.
73 .Способ по п. 72, отличающийся тем, что указанная композиция имеет исходное среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 6 до 8 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
74 Способ по п. 72, отличающийся тем, что указанная композиция имеет исходное среднее содержание сиаловой кислоты 6, 7 или 8 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
75. Способ по любому из пп. 72–74, отличающийся тем, что указанный способ включает повышение среднего содержания сиаловой кислоты до диапазона от 8 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
76. Способ по любому из пп. 62–75, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает повышение среднего содержания сиаловой кислоты до диапазона от 8 до 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
77. Способ по любому из пп. 70–76, отличающийся тем, что аффинная хроматографическая твердая фаза содержит смолу с протеином A, смолу с протеином G или смолу с рецептором IL-22.
78. Способ по п. 77, отличающийся тем, что смола с протеином A представляет собой смолу MABSELECT SURE.
79. Способ по любому из пп. 70–78, отличающийся тем, что анионообменная хроматографическая твердая фаза содержит сильный анионный обменник со смолой с мультимодальной функциональностью.
80. Способ по п. 79, отличающийся тем, что анионообменная хроматографическая твердая фаза содержит клейкую смолу CAPTO™.
81. Способ по любому из пп. 58–80, отличающийся тем, что указанная композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты от 8 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
82. Способ по любому из пп. 58–81, отличающийся тем, что указанная композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты от 8 до 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
83. Способ по любому из пп. 58–82, отличающийся тем, что слитый белок IL-22 – Fc состоит из двух одноцепочечных единиц, связанных двумя межцепочечными дисульфидными мостиками, причем каждая одноцепочечная единица состоит из человеческого слитого белка IL-22, содержащего IL-22, слитый с Fc-областью человеческого иммуноглобулина IgG4.
84. Композиция, полученная способом по любому из пп. 58–83.
85. Композиция по п. 84, отличающаяся тем, что указанная композиция является фармацевтической композицией.
86. Способ отбора партии, содержащей слитый белок IL-22 – Fc, для выпуска, включающий следующие этапы:
(a) получение партии, содержащей слитый белок IL-22 – Fc;
(b) оценку уровней сиаловой кислоты в партии; и
(c) отбор партии для выпуска, если указанная партия имеет среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 8 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
87. Способ по п. 86, отличающийся тем, что этап (c) включает отбор партии для выпуска, если указанная партия имеет среднее содержание сиаловой кислоты от 8 до 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
88. Способ по п. 86 или 87, отличающийся тем, что этап (c) включает отбор партии для выпуска, если указанная партия имеет среднее содержание сиаловой кислоты 8 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
89. Способ по п. 86 или 87, отличающийся тем, что этап (c) включает отбор партии для выпуска, если указанная партия имеет среднее содержание сиаловой кислоты 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
90. Способ по любому из пп. 86–89, отличающийся тем, что этап (b) включает применение высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии (УВЭЖХ), капиллярного электрофореза или колориметрического анализа для оценки уровней сиаловой кислоты в партии.
91. Способ по п. 90, отличающийся тем, что этап (b) включает оценку уровней сиаловой кислоты с помощью ВЭЖХ.
92. Способ регуляции содержания сиаловой кислоты в композиции, содержащей слитый белок IL-22 – Fc, причем слитый белок IL-22 – Fc содержит гликозилированный полипептид IL-22, связанный линкером с Fc-областью антитела, включающий
культивирование культуры инокуляционной системы, содержащей множество клеток-хозяев, в среде для выработки в условиях, подходящих для образования вырабатывающей культуры, в течение по меньшей мере 10 суток, причем клетки-хозяева содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок IL-22 – Fc, и экспрессируют слитый белок IL-22 – Fc, при этом композиция имеет среднее содержание сиаловой кислоты в диапазоне от 6 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc; и
повышение среднего содержания сиаловой кислоты в композиции до диапазона от 8 до 12 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc, с регуляцией, таким образом, содержания сиаловой кислоты в композиции.
93. Способ по п. 92, отличающийся тем, что указанный способ включает повышение среднего содержания сиаловой кислоты в композиции до диапазона от 8 до 9 молей сиаловой кислоты на моль слитого белка IL-22 – Fc.
94. Способ по п. 92 или 93, отличающийся тем, что повышение среднего содержания сиаловой кислоты включает сбор клеточной культуральной жидкости, содержащей слитый белок IL-22 – Fc, из вырабатывающей культуры.
95. Способ по п. 94, отличающийся тем, что сбор клеточной культуральной жидкости включает: (i) охлаждение вырабатывающей культуры; (ii) удаление клеток-хозяев из среды для выработки путем центрифугирования для образования клеточной культуральной жидкости; и/или (iii) фильтрацию клеточной культуральной жидкости.
96. Способ по п. 94 или 95, отличающийся тем, что повышение среднего содержания сиаловой кислоты в композиции дополнительно включает очистку слитого белка IL-22 – Fc в клеточной культуральной жидкости.
97. Способ по п. 96, отличающийся тем, что очистка слитого белка IL-22 – Fc включает следующие подэтапы:
(i) приведение клеточной культуральной жидкости в контакт с аффинной хроматографической твердой фазой, необязательно, промывку аффинной хроматографической твердой фазы промывочным буфером, элюирование слитого белка IL-22 – Fc из аффинной хроматографической твердой фазы первым элюирующим буфером с образованием аффинного пула и, необязательно, инактивацию вирусов в аффинном пуле;
(ii) приведение аффинного пула в контакт с анионообменной хроматографической твердой фазой, необязательно, промывку анионообменной хроматографической твердой фазы первым уравновешивающим буфером, элюирование слитого белка IL-22 – Fc из анионообменной хроматографической твердой фазы вторым элюирующим буфером с образованием анионообменного пула и, необязательно, фильтрацию анионообменного пула для удаления вирусов; и
(iii) приведение анионообменного пула в контакт с твердой фазой для хроматографии с гидрофобным взаимодействием и сбор проточного материала с образованием пула очищенного продукта, содержащего слитый белок IL-22 – Fc, и, необязательно, промывку твердой фазы для хроматографии с гидрофобным взаимодействием вторым уравновешивающим буфером, сбор проточного материала и добавление его к пулу очищенного продукта.
98. Способ по п. 97, отличающийся тем, что очистка слитого белка IL-22 – Fc дополнительно включает один или более следующих подэтапов:
(iv) концентрация пула очищенного продукта с образованием пула концентрированного продукта;
(v) ультрафильтрация пула очищенного продукта;
(vi) замена буфера пула концентрированного продукта с образованием пула ультрафильтрации и диафильтрации (УФДФ), содержащего слитый белок IL-22 – Fc; и/или
(vii) кондиционирование пула УФДФ рецептурным буфером с образованием кондиционированного пула УФДФ, содержащего слитый белок IL-22 – Fc.
99. Способ по п. 97 или 98, отличающийся тем, что подэтап (i) дополнительно включает инактивацию вирусов путем добавления в клеточную культуральную жидкость детергента перед приведением клеточной культуральной жидкости в контакт с аффинной колонкой.
100. Способ по любому из пп. 97–99, отличающийся тем, что аффинная хроматографическая твердая фаза содержит смолу с протеином A, смолу с протеином G или смолу с рецептором IL-22.
101. Способ по п. 100, отличающийся тем, что смола с протеином A представляет собой смолу MABSELECT SURE.
102. Способ по любому из пп. 97–101, отличающийся тем, что анионообменная хроматографическая твердая фаза содержит сильный анионный обменник со смолой с мультимодальной функциональностью.
103. Способ по п. 102, отличающийся тем, что анионообменная хроматографическая твердая фаза содержит клейкую смолу CAPTO™.