ИНТЕГРАТИВНЫЙ ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ В ДРОЖЖАХ, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА НА ЕГО ОСНОВЕ, ШТАММ ДРОЖЖЕЙ PICHIA PASTORIS - ПРОДУЦЕНТ ЧУЖЕРОДНОГО БЕЛКА

1. Интегративный плазмидный вектор для экспрессии генов в дрожжах, содержащий селективный маркер для отбора трансформантов в клетках E.coli, сайт начала репликации, сайт интеграции и экспрессионную кассету, в состав которой входят промотор, терминатор транскрипции и селективный маркер, отличающийся тем, что в качестве сайта интеграции используют последовательность ДНК, кодирующую область 18S pPHK.
2. Интегративный вектор по п.1, отличающийся тем, что экспрессионная кассета дополнительно содержит сигнальный пептид.
3. Интегративный вектор по п.2, отличающийся тем, что в качестве селективного маркера для отбора трансформантов в клетках E.coli он содержит селективный маркер bla, в качестве сайта начала репликации он содержит pUC ori, в состав экспрессионной кассеты входит промотор GAP, терминатор транскрипции АОХ1 и селективный маркер HIS4, а в качестве сигнального пептида используют ά- амилазный сигнальный пептид.
4. Рекомбинантная плазмида pP10PhyA-Cf для экспрессии гена фитазы PhyA-Cf в дрожжах Pichia pastoris имеющая размер 11250 п.о. и состоящая из элементов:
фрагмент 5' 18S рРНК: 1-269 п.о.;
промотор GAP: 270-1026 п.о.;
ά- амилазный сигнальный пептид: 1029-1295 п.о.;
ген фитазы PhyA-Cf. 1304-2534 п.о.;
терминатор транскрипции 3' АОХ1: 2552-2885 п.о.;
HIS4 ORF: 3279-5813 п.о.;
фрагмент 3' 18S рРНК: 6085-6774 п.о.;
pUC ori: 7974-8648 п.о.;
ген резистентности к ампициллину: 9448-10308 п.о.
5. Рекомбинантная плазмида pP10PhyA-Op для экспрессии гена фитазы PhyA-Op в дрожжах Pichia pastoris имеющая размер 11243 п.о. и состоящая из элементов:
фрагмент 5' 18S рРНК: 1-269 п.о.;
промотор GAP: 270-1026 п.о.;
ά- амилазный сигнальный пептид: 1029-1295 п.о.;
ген фитазы PhyA-Op: 1304-2518 п.о.;
терминатор транскрипции 3' АОХ1: 2552-2885 п.о.;
HIS4 ORF: 3279-5813 п.о.;
фрагмент 3' 18S рРНК: 6085-6774 п.о.;
pUC ori: 7974-8648 п.о.;
ген резистентности к ампициллину: 9448-10308 п.о.
6. Рекомбинантная плазмида pP10PLC-Bc для экспрессии гена фосфолипазы С PLC-Bc в дрожжах Pichia pastoris, имеющая размер 10770 п.о. и состоящая из элементов:
фрагмент 5' 18S рРНК: 1-269 п.о.;
промотор GAP: 270-1026 п.о.;
ά- амилазный сигнальный пептид: 1029-1295 п.о.;
ген фосфолипазы С PLC-Bc: 1304-2054 п.о.;
терминатор транскрипции 3' АОХ1: 2088-2421 п.о.;
HIS40RF: 3279-5813 п.о.;
фрагмент 3' 18S рРНК: 6085-6774 п.о.;
pUC ori: 7974-8648 п.о.;
ген резистентности к ампициллину: 9448-10308 п.о.
7. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris PhyA-Cf-1 ВКПМ Y-3357 - продуцент фитазы PhyA-Cf.
8. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris PhyA-Ор-1 ВКПМ Y-3358 - продуцент фитазы PhyA-Op.
9. Рекомбинантный штамм дрожжей Pichia pastoris PLC-Bc-1 ВКПМ Y-3359 - продуцент фосфолипазы С PLC-Bc.