СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ НАРУШЕНИЙ ТРОМБОРЕЗИСТЕНТНОСТИ СОСУДИСТОЙ СТЕНКИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
METHOD FOR PREVENTION OF DISTURBED VASCULAR WALL THROMBORESISTANCE IN EXPERIMENT

Изобретение относится к области медицины, экспериментальной биологии, и может быть использовано для профилактики системной дисфункции эндотелия, являющейся важным звеном патогенеза большинства сердечно-сосудистых заболеваний.
Процесс повышения тромборезистентности сосудистой стенки является объективным и актуальным объектом изучения, так как отражает состояние сердечно-сосудистой системы в норме и патологии. Повышение тромборезистентности сосудистой стенки позволяет предотвратить агрегацию тромбоцитов и других форменных элементов крови к стенке сосудов, способствуя профилактике тромботических осложнений. Тромборезистентность сосудов отражает возможности здорового эндотелия синтезировать про- и атромбогенные вещества, при этом синтез атромбогенных факторов должен преобладать, т.е. сосудистая стенка предотвращает чрезмерную активацию гемостатической системы вследствие наличия тромборезистентной поверхности, кроме того, тромборезистентность сосудистой стенки рассматривается как свойство, проявляющееся в способности ограничивать процесс тромбообразования зоной повреждения [см. Петрищев Н.Н. Тромборезистентность сосудов. - СПб.: АНТ-М, 1994. - 130 с.]. Состояние тромборезистентности сосудистой стенки отражает компенсаторные и патогенетические изменения, сопровождающие любой типовой патологический процесс в организме. Здоровый эндотелий препятствует метаболическим нарушениям, способствующим облитерации и тромбированию сосудов, сопровождающим такие заболевания, как атеросклероз и сахарный диабет, улучшает макро- и микроциркуляцию крови, способствует ликвидации гипоксии тканей и заживлению ангиогенных трофических язв [см. Петрищев Н.Н., Шляхто Е.В., Власов Т.Д. Ишемическая адаптация миокарда: патофизиологические механизмы и возможные перспективы практического применения (обзор литературы). Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2003. №5. С.688].
6
12
Сегодня медицине известен большой арсенал средств, способствующих повышению тромборезистентных свойств сосудистой стенки. В основном это препараты химического синтеза - витамин В, В и фолиевая кислота (в комплексе); алпростадил (alprostadil); пентоксифиллин (pentoxifylline); сулодексид (sulodexide) [см. Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система). Под редакцией: А.Г.Чучалина, А.И.Вялкова, Ю.Б.Белоусова, В.В.Яснецова, 2004. Вып.V. - М.: "ЭХО", 2004. - 944 с.]. Широко используется сегодня лекарственная группа дезагрегантов: нестероидные противовоспалительные средства (аспирин), клопидогрель, плавике и др.
Недостатками имеющихся в арсенале медикаментов является широкий спектр противопоказаний (геморрагические диатезы, злокачественные новообразования, язвенные дефекты в желудочно-кишечном тракте, потенцирование эффектов других лекарственных средств, острый инфаркт миокарда, инсульт, кровотечения и др.), а также экономическая доступность, которая варьирует от высокой до низкой (продолжительность лечения препаратами для поддержания эффекта тромборезистентности должна быть пожизненной, особенно при наличии хронической сосудистой патологии (гипертоническая болезнь, ИБС, сахарный диабет и др.)).
Большое число комплексных адаптогенов из растительных продуктов присутствует на российском фармацевтическом рынке, многие из них представлены в виде биологически активных добавок, но каждый из них имеет уникальную рецептуру.
Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ использования БАД к пище "Тонизид" (содержащий по 30 г или 100 г гранул) (см. ТУ 9361-026-20680882-04, продукция ООО "Биолит"), содержащей экстракты корней аралии, женьшеня, родиолы розовой, элеутерококка, листа смородины, березы, травы петрушки кудрявой, которую используют в качестве кардиопротекторного, инотропного и антиаритмического средства [см. Кардиопротекторные, инотропные и антиаритмические свойства комплексного адаптогемного препарата тонизид. Лишманов Ю.Б., Маслов Л.Н., Арбузов А.Г., Крылатов А.В., Платонов А.А., Буркова В.Н., Каюмова Е.А. // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2008. Т.71. №3. С.15-22].
Недостатками прототипа являются большое количество растительных компонентов, которые могут привести к повышению артериального давления, развитию бессонницы, повышенной возбудимости, что необходимо учитывать при назначении пациентам с сердечно-сосудистой патологией.
Задачей предлагаемого технического решения является повышение тромборезистентности сосудов за счет увеличения антиагрегационной активности эндотелия, обусловленной активацией антиоксидантных и противовоспалительных эффектов эпителия сосудов, снижение количества растительных компонентов.
Решение технической задачи достигается тем, что в способе профилактики нарушений тромборезистентности сосудистой стенки в эксперименте, включающем прием препарата растительного происхождения, содержащего родиолу розовую и элеутерококк, согласно изобретению в качестве препарата растительного происхождения используют фитококтейль, который дополнительно содержит солодку голую и девясил высокий, в виде смеси 70% спиртовых настоек родиолы розовой, солодки голой, элеутерококка колючего, девясила высокого, взятых в соотношении 2:2:1:1, с разведенной дистиллированной водой в соотношении 1:50, при этом введение фитококтейля осуществляют крысам через зонд по 1 мл на 150-200 г веса животных с 16.00 до 18.00 часов в течение 15 дней.
Данный способ позволит повысить тромборезистентность сосудов и снизить количества растительных компонентов.
Сущность способа поясняется таблицей, в которой представлены показатели антиагрегационного АДФ-индуцированного действия фрагментов сосудистой стенки интактных крыс и крыс, получавших фитококтейль (n=40).
Способ профилактики нарушений тромборезистентности сосудистой стенки в эксперименте осуществляют следующим образом.
Режим приема и дозы фитококтейля подобраны на основании результатов экспериментальных исследований, проведенных на интактных крысах линии Вистар.
Исследования проведены на здоровых крысах-самцах линии Вистар массой 150-200 грамм (по 20 животных в двух сериях экспериментов), находившихся на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к воде, естественным световым режимом. Крысы первой группы получали через зонд 1 мл физ. раствора (контрольная группа), крысы 2-й (опытной) группы получали фитококтейль в виде смеси 70% спиртовых настоек родиолы розовой, солодки голой, элеутерококка колючего, девясила высокого, взятых в соотношении 2:2:1:1, с разведенной дистиллированной водой в соотношении 1:50, при этом введение фитококтейля осуществляли крысам через зонд по 1 мл на 150-200 г веса животных с 16.00 до 18.00 часов в течение 15 дней.
н
Исследования агрегации тромбоцитов проведены турбидиметрическим методом Борна с применением агрегометра класса Solar. Использовали стандартный индуктор - АДФ в концентрации (10 мкг/мл). Оценивали: степень агрегации (СтА) - максимальный уровень светопропускания плазмы после внесения индуктора (%); время начала агрегации (ВА) - время начала подъема кривой агрегации (мин/сек); время агрегации (ВА) - время максимальной агрегации (мин/сек); скорость агрегации (СкА) - изменения светопропускания плазмы после внесения индуктора (%/мин).
Эксперименты по изучению воздействия ФК на тромборезистентные свойства сосудистой стенки проводили следующим образом. У крыс под наркозом извлекали грудной отдел аорты, ополаскивали его в трис-HCl буферном растворе (0,05 М, рН 7,5) при 4°С и разрезали вдоль [Климанова Е.В. [и др.] Влияние рентгеноконтрастных средств на тромборезистентные свойства сосудистой стенки // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2009. Т.72. №2. С.41-43]. Кусочки стенки аорты длиной около 0,4 см инкубировали с богатой тромбоцитами плазмой в течение 10 минут, затем определяли антиагрегационную активность интимы, о которой судили по степени торможения процесса АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. В качестве контроля использовали стенку сосуда интактных крыс (1 группы). Статистическую обработку результатов производили методом вариационной статистики с использованием компьютерной программы статистического анализа Microsoft Excel и Statistica 6.0 (критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали ≤0,05).
На фоне приема фитококтейля степень и скорость агрегации тромбоцитов (СтА и СкА) были достоверно (р<0,05) повышены по сравнению с контролем (крысы, которые принимали физраствор (таблица)). При предварительной инкубации богатой тромбоцитами плазмы с фрагментом интактной аорты агрегационная активность тромбоцитов снизилась в 1 группе на 26,2%, на фоне приема ФК на 56%. Скорость агрегации у крыс 1 группы снижалась на 32,9%, в то время как при использовании ФК на 63,3%.
Получены следующие результаты: 15-дневный прием фитококтейля привел к повышению тромборезистентных свойств аорты почти в 2 раза - степень агрегации тромбоцитов снизилась на 56%, скорость агрегации - на 63,3%, в то время как в контрольной группе сравнения аналогичные показатели характеризовались снижением на 26,2% и 32,9% соответственно.
Использование предлагаемого способа профилактики нарушения тромборезистентности сосудистой стенки в эксперименте позволит по сравнению с прототипом снизить риск развития тромбозов в эксперименте при различных патологических состояниях и снизить дозу используемых растительных компонентов при выраженном биологическом эффекте.
Таблица
Показатели антиагрегационного АДФ-индуцированного действия фрагментов сосудистой стенки интактных крыс и крыс, получавших фитококтейль (n=40)
Показатели агрегации
Контроль - 1 группа
2 группа - фитококтейль
Исходные
Инкубация с аортой
Исходные
Инкубация с аортой
СтА, %
23,4±4,31
17,26±3,75
44,23±4,9 <sup>))</sup>
19,44±1,68*
СкА, %/мин
20,38±3,79
13,66±1,23**
41,75±6,18<sup>))</sup>
15,76±1,39*
ВА<sub>н</sub>, мин/сек
7,4±0,87
11,4±1,47**
5,1±1,64
8,6±1,02**
ВА, мин/сек
234,0±36,33
219±54,3
247±8,92
194,2±25,21**
Примечание: степень агрегации (СтА); время начала агрегации (ВА<sub>н</sub>); время агрегации (ВА); скорость агрегации (СкА); *р<0,001, **р<0,05 (к исходным данным); <sup>)</sup>р<0,001, <sup>))</sup>р<0,01, <sup>)))</sup>р<0,05 (исходные к 1 группе), *) р<0,001 (инкубированные к 1 группе).