СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ЛЕЙКОЗНОГО ПРОЦЕССА
METHOD TO STABILISE LEUCOSIS PROCESS

Изобретение относится к ветеринарной лейкозологии, касается способа стабилизации лейкозного процесса у животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), и может быть использовано в комплексе мероприятий по борьбе с лейкозом для повышения длительности эксплуатации высокопродуктивных животных при отсутствии прогрессирования болезни.
Лейкоз крупного рогатого скота является хронической болезнью вирусной природы и экологически опасной для человека. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров в возрасте 4-7 лет с ослабленными защитно-приспособительными реакциями. Лейкоз причиняет животноводству значительный экономический ущерб, который выражается в недополучении молока и приплода, преждевременной выбраковке коров и быков-производителей, утилизации туш больных животных, нарушении воспроизводительной функции больных коров, ограничении хозяйственной деятельности в связи с неблагополучием. Подсчитано, что животные, инфицированные вирусом лейкоза, имеют молочную продуктивность на 12,7% и содержание жира в молоке на 0,09% ниже, чем у серонегативных. Кроме этого омоложение оздоравливаемого стада за счет выведения из товарного производства полновозрастных коров и замены их нетелями снижает валовое производство молока на 6%. Лейкозная патология сильно подрывает племенную работу, наносится невосполнимый ущерб селекции и выращиванию чистопородных высокопродуктивных животных. Из-за ограничений по лейкозу племенные хозяйства не могут реализовать ценных в генетическом отношении бычков и телочек, по существу, они превращаются в товарных производителей молока. Удельная величина ущерба от лейкоза на одно животное достигает 1,48 тыс. руб. /1/
Развитию болезни способствуют не только генетическая предрасположенность и дефекты иммунитета, но и сниженная естественная резистентность и иммунологическая реактивность, особенно параметры клеточной системы. Нарушение неспецифических защитных механизмов может привести к расстройству клеточного взаимодействия, необходимого для индукции иммунного ответа. Восстановление активности иммунной системы и естественной резистентности до физиологической нормы повышает иммунобиологические и защитные свойства организма животных в отношении лейкозного процесса.
Коррекцию клеточных и гуморальных факторов активности иммунной системы и естественной резистентности обеспечивает использование (i) комбинации иммуномодуляторов Т- и В-активина /2/, (ii) коррегирующего препарата, содержащего Т- и В-активины /3/, (iii) комбинации иммуномодулятора цитоден и пробиотика интестевит /4/, (iiii) лигфола /5/. При введении известных препаратов телятам раннего возраста в большей или меньшей степени повышается устойчивость к инфекции ВЛКРС.
Задачей изобретения является разработка способа стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных.
Технический результат заключается в сохранении продуктивного здоровья инфицированных ВЛКРС высокопродуктивных животных, продлении сроков их эксплуатации и повышении качества животноводческой продукции.
Возможность хронизации лейкозного процесса обусловлена патогенетическими особенностями ВЛКРС, в частности его способностью персистировать в организме животного без клинического проявления. Из-за отсутствия цитопатогенного действия ВЛКРС, находясь в цитоплазме лимфоцита, не причиняет клетке видимого вреда. При ослаблении иммунологического контроля ВЛКРС проникает в ядерный аппарат клетки, внедряя в него свою РНК-информацию, запуская механизм превращения нормальной клетки в лейкозную /6/.
Поставленная задача решается тем, что инфицированным ВЛКРС животным 12-15-месячного возраста внутримышечно вводят лигфол по оригинальной схеме.
Способ осуществляется следующим образом.
Инфицированным ВЛКРС телкам 12-15-месячного возраста препарат лигфол вводят внутримышечно двумя последовательными 3-месячными курсами 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол (первый курс) и 15,0 мл/гол (второй курс).
Препарат лигфол - самопролонгированный препарат, действующим началом которого являются гуминовые вещества. В основе фармакологической активности лигфола лежат противоопухолевые и иммунооксидантные механизмы /7/. Эффективность лигфола в качестве средства неспецифической иммунотерапии опухолевых заболеваний у собак составила 47,6% /8/. Противоопухолевое действие лигфола обусловлено нарушением обменных процессов в тканях опухоли, снижением активности патологических ферментов, стимулирующих рост и неконтролируемое размножение клеток и активизацией образования нормальных ферментов /9, 10/.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. По принципу аналогов (возраст, живая масса, клиническое состояние, иммунологический статус) формировали две группы телок 12-15-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза (положительный результат в РИД с гликопротеидным антигеном ВЛКРС) по 10 голов в каждой. Животным первой группы (опыт) внутримышечно вводили лигфол в дозе 10,0 мл/гол трехкратно с интервалом в 30 дней и в дозе 15,0 мл/гол по той же схеме. Животным второй группы (контроль) внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме опытной группы. Обе группы животных находились на одном скотном дворе с одинаковыми условиями кормления и ухода. Для оценки состояния животных учитывали серологические, гематологические, иммунобиохимические и весовые показатели до начала и через 6 месяцев после начала опыта. Результаты представлены в таблицах 1 и 2 (в таблицу 1 не включены иммунобиологические показатели, по которым не выявлено математически достоверной разницы, в частности, уровни γ-, β-глобулинов, содержание общего белка, альбуминов, общего холестерина, уровни триглицеридов общих, β-липопротеидов, иммуноглобулинов G, А, М). Эндогенную интоксикацию оценивали по уровню высокомолекулярных веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ), представляющих собой небелковые производные различной природы, в частности мочевины, креатинина, мочевой кислоты, глюкозы, молочной и других органических кислот, аминокислот, жирных кислот, холестерина, фосфолипидов, продуктов свободнорадикального окисления, промежуточного метаболизма, нуклепротеидного обмена и т.д., накопление которых в концентрациях, превышающих нормальные, является фактором нарушения гомеостаза.
Таблица 1
Серологические, гематологические, иммунобиохимические показатели животных опытной и контрольной групп
Показатели
Опытная группа (n=10)
Контрольная группа (n=10)
до начала опыта
через 6 месяцев
до начала опыта
через 6 месяцев
РИД
Положит.
Положит.
Положит.
Положит.
Титр антител к антигенам ВЛКРС (min-max)
1:4-1:96
1:2-1:4
1:8-1:30
1:16-1:32
Ср. геом. титров антител log<sub>2</sub>
24,0±1,23
3,0±0,97*
16,0±1,11
25,0±1,58*
Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л
10,59±1,34
8,75±0,71
10,14±1,29
12,0±2,2
Лимфоцитов, %
75,6±3,2
67,5±7,9
70,4±3,5
74,7±3,0
Лимфоциты, 10<sup>9</sup>/л
7,83±1,27
6,05±1,1
7,3±1,3
8,9±1,97
ВНСММ, у.е.
17,3±0,44
14,58±0,37*
14,75±0,98
18,68±1,26*
Нейтрофилы сегментоядерные, %
17,1±2,49
25,75±5,36*
18,2±2,97
13,4±3,5*
Примечание: * - разница между опытной и контрольной группами достоверна (Р<0,95; 0,99).
Таблица 2
Весовые показатели животных опытной (10 голов) и контрольной (10 голов) групп
№ животного
Живая масса животных, кг
Привес живой массы, %
Опытная группа
Контрольная группа
Опытная группа
Контрольная группа
До опыта
После опыта
До опыта
После опыта
1
210,0
260,0
215,0
250,0
23,8
16,3
2
230,0
275,0
240,0
270,0
17,4
12,5
3
245,0
290,0
250,0
280,0
18,4
14,3
4
240,0
280,0
230,0
265,0
16,7
15,2
5
250,0
290,0
250,0
285,0
16,0
14,0
6
255,0
295,0
260,0
285,0
15,7
9,6
7
250,0
290,0
240,0
275,0
16,0
14,6
8
240,0
305,0
260,0
295,0
27,1
13,5
9
235,0
270,0
225,0
255,0
14,9
13,3
10
250,0
300,0
235,0
270,0
20,0
14,9
2
2
9
9
9
9
9
Как видно из таблицы 1, у животных опытной группы средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС уменьшилась с 24,0±1,23 до 3,0±0,97 log, показатели крови по абсолютному числу лейкоцитов и лимфоцитов крови снизились с 10,59±1,34 до 8,75±0,71 10/л и с 7,83±1,27 до 6,05±1,1 10/л соответственно, что свидетельствовало о стабилизации лейкозного процесса, т.е. отсутствии перехода бессимптомной стадии лейкозного процесса в гематологическую со снижением эндогенной интоксикации (концентрация ВНСММ - с 17,3 до 14,58 у.е.) и повышением процента сегментоядерных нейтрофилов с 17,1±2,49 до 25,75±5,36. У животных контрольной группы через 6 месяцев после начала опыта отмечалась положительная динамика развития лейкозного процесса: средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС повысилась с 16,0±1,11 до 25,0±1,58 log, абсолютное число лейкоцитов и лимфоцитов - с 10,14±1,29 до 12,0±2,2 10/л и с 7,3±1,3 до 8,9±1,97 10/л соответственно, содержание ВНСММ - с 14,75±0,98 до 18,68±1,26 у.е., при этом процент сегментоядерных нейтрофилов снижался с 18,2±2,97 до 13,4±3,5. Прирост живой массы в опытной группе был ниже, чем в опытной группе (таблица 2). Отмеченные изменения указывали на развитие лейкозного процесса и переход ряда животных в категорию подозрительных на лейкоз животных, характеризующуюся повышением абсолютного количества лимфоцитов в данной возрастной группе до 9,0-11,0 10/л.
Изменения по ряду показателей позволило сделать вывод о нарушении метаболических и биохимических процессов на клеточном уровне, что свидетельствовало о развитии инфекционного процесса в контрольной группе.
Пример 2. По принципу аналогов формировали 3 группы телок 12-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза по 10 голов в каждой. Животным первой группы внутримышечно вводили лигфол в соответствии с изобретением, животным второй группы внутримышечно вводили лигфол в дозе 5,0 мл/гол. пятикратно с интервалом в 7 дней и в дозе 10,0 мл/гол, трехкратно с интервалом в 30 дней. Животным третьей группы внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме, как в первой группе. Животные всех трех групп проверялись по серологическому тесту, гематологическому обследованию периферической крови и биохимическим исследованиям сыворотки крови. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Серологические, гематологические и биохимические показатели животных трех групп.
Показатели
1-я группа
2-я группа
3-я группа
РИД
<img file="00000001.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000002.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000003.tif" he="12" wi="30" img-content="undefined" img-format="tif" />
Ср. геом. титров антител log<sub>2</sub>
<img file="00000004.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000005.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000006.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лейкоциты, 10<sup>9</sup>/л
<img file="00000007.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000008.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000009.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лимфоциты, %
<img file="00000010.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000011.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000012.tif" he="11" wi="21" img-content="undefined" img-format="tif" />
Лимфоциты, 10<sup>9</sup>/л
<img file="00000013.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000014.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000015.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
ВНСММ, у.е.
<img file="00000016.tif" he="11" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000017.tif" he="11" wi="9" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000018.tif" he="11" wi="11" img-content="undefined" img-format="tif" />
Нейтрофилы сегментоядерные, %
<img file="00000019.tif" he="11" wi="26" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000020.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
<img file="00000021.tif" he="11" wi="23" img-content="undefined" img-format="tif" />
Примечание: в числителе показатели до начала опыта, в знаменателе - после окончания опыта.
Проведенные исследования показали, что применение лигфола в группах 1 и 2 обеспечивало положительную динамику основного гематологического показателя, однако эта динамика наиболее выражена в первой группе. Динамика анализируемых показателей в первой группе свидетельствовала о стабилизации лейкозного процесса, во второй группе - сдерживание лейкозного процесса с сохранением риска перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую, а в третьей группе - о развитии лейкозного процесса (таблица 3).
Результатами исследований подтверждена возможность стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных заявляемым способом. С одной стороны, предотвращение перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую позволяет рассматривать животных как инфицированных, а не больных, а с другой - стабилизация онкологической болезни может быть единственно ожидаемым эффектом в исследовании новых типов противоопухолевых препаратов и рассматривается как показатель эффективности лечения /11/.
Источники информации
1. Гаврилова Г.А. Диагностика скрытых форм лейкоза крупного рогатого скота: метод, рекомендации. Благовещенск, 2009. - 13 с.
2. Александров И.Д., Потатуркин И.К., Сидоренко Н.М. и др. Иммуномодулирующая роль Т- и В-активинов и естественная резистентность у телят раннего возраста// Новые фармакологические средства в ветеринарии: матер. 8-й межвуз. науч.-практич. конф., СПб - СПб: Гос. акад. вет. мед., 1996. - С.61-62.
3. Патент РФ №2188655, 2002.
4. Ермолаев С.В. Эколого-эпизоотологический анализ крупного рогатого скота в разных условиях Среднего Урала: автореф. дис… канд. вет. наук: 16.00.03. - Барнаул. 2000. - С.20-21.
5. Патент РФ №2320357, 2008.
6. Смирнов П.Н. Болезнь века - лейкоз крупного рогатого скота. - Новосибирск, 2007. - 300 с.
7. Наставление по применению лигфола в качестве адаптогена и стресс-корректора в ветеринарии: утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 03.05.2001, №13-4-03-0063.
8. Беркович A.M., Бузлама B.C., Мещеряков Н.П. Лигфол - адаптоген и стресс-корректор нового поколения. Повышение продуктивного здоровья животных. - Воронеж: Кварта, 2003. - 148 с.
9. Григоренко В.Б. Лигфол - механизм действия, клиническое применение, некоторые выводы // Ветеринарная жизнь. - 2006. - №4.
10. WO 95/08335, 1995.
11. Markman M. Challenges associated with evaluating the clinical utility of noncitotoxic pharmacological agents in oncology // J. Cancer Res. Clinic. Oncol., 1997. - Vol.123. - P.581-582.