ХРОМАТОГРАФИЯ ПЕРЕГРУЗКИ И ЭЛЮИРОВАНИЯ

1. Способ очистки полипептида из композиции, содержащей полипептид и одну или более примесей, включающий
a) загрузку композиции на хроматографический материал в количестве, превышающем динамическую связывающую способность указанного хроматографического материала для указанного полипептида,
b) элюирование указанного полипептида с указанного хроматографического материала в условиях, где одна или более примесей остаются связанными с указанным хроматографическим материалом, и
c) объединение фракций, содержащих указанный полипептид, в выходящем потоке хроматографии со стадий а) и b).
2. Способ по п. 1, где указанный полипептид представляет собой антитело или иммуноадгезин.
3. Способ по п. 2, где указанный полипептид представляет собой иммуноадгезин.
4. Способ по п. 2, где указанный полипептид представляет собой антитело.
5. Способ по п. 4, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
6. Способ по п. 5, где указанное моноклональное антитело представляет собой химерное антитело, гуманизированное антитело или антитело человека.
7. Способ по п. 5, где указанное моноклональное антитело представляет собой моноклональное IgG-антитело.
8. Способ по п. 4, где указанное антитело представляет собой антигенсвязывающий фрагмент.
2
9. Способ по п. 8, где указанный антигенсвязывающий фрагмент представляет собой Fab-фрагмент, Fab′-фрагмент, F(ab′)-фрагмент, scFv, ди-scFv, би-scFv, тандемный (ди, три)-scFv, Fv, sdAb, трифункциональное антитело, BiTE, диантитело или триантитело.
10. Способ по п. 1, где указанный полипептид представляет собой фермент, гормон, слитый белок, Fc-содержащий белок, иммуноконъюгат, цитокин или интерлейкин.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где по меньшей мере одна указанная примесь представляет собой любое одно или более из белка яичника китайского хомячка (CHOP), белка клетки-хозяина (НСР), вымываемого белка А, карбоксипептидазы В, нуклеиновых кислот, ДНК, вариантов продукта, агрегированного белка, компонента клеточной культуральной среды, гентамицина, полипептидного фрагмента, эндотоксина и примеси вируса.
12. Способ по любому из пп. 1-10, где указанный хроматографический материал представляет собой материал смешанной формы, анионообменный материал, материал гидрофобного взаимодействия или аффинный материал.
13. Способ по любому из пп. 1-10, где плотность загрузки составляет приблизительно от 50 г/л до приблизительно 2000 г/л.
14. Способ по п. 13, где плотность загрузки составляет приблизительно от 200 г/л до приблизительно 1000 г/л.
15. Способ по любому из пп. 1-10, где указанную композицию загружают на хроматографический материал на уровне приблизительной динамической связывающей способности хроматографических материалов в отношении одной или более примесей.
16. Способ по любому из пп. 1-10, где указанную композицию загружают на хроматографический материал на уровне, в 20 раз превышающем динамическую связывающую способность указанного хроматографического материала в отношении указанного полипептида.
17. Способ по любому из пп. 1-10, где коэффициент распределения хроматографического материала в отношении полипептида превышает 30.
18. Способ по п. 17, где коэффициент распределения хроматографического материала в отношении полипептида превышает 100.
19. Способ по любому из пп. 1-10, где указанный способ дополнительно включает применение загрузочного буфера и буфера для элюирования.
20. Способ по п. 19, где указанный буфер для элюирования имеет проводимость, меньшую, чем проводимость загрузочного буфера.
21. Способ по п. 20, где указанный загрузочный буфер имеет проводимость приблизительно от 4,0 мСм до приблизительно 7,0 мСм.
22. Способ по п. 20, где указанный буфер для элюирования имеет проводимость приблизительно от 0,0 мСм до приблизительно 7,0 мСм.
23. Способ по п. 19, где указанный буфер для элюирования имеет проводимость, превышающую проводимость загрузочного буфера.
24. Способ по п. 23, где указанный загрузочный буфер имеет проводимость приблизительно от 4,0 мСм до приблизительно 10,0 мСм.
25. Способ по п. 23, где указанный загрузочный буфер имеет проводимость приблизительно от 4,0 мСм до приблизительно 7,0 мСм.
26. Способ по п. 23, где указанный буфер для элюирования имеет проводимость приблизительно от 5,5 мСм до приблизительно 17,0 мСм.
27. Способ по п. 19, где проводимость указанного буфера для элюирования снижается в градиенте приблизительно от 5,5 мСм до приблизительно 1,0 мСм приблизительно в 10 объемах колонки (CV).
28. Способ по п. 19, где проводимость указанного буфера для элюирования снижается в градиенте приблизительно от 5,5 мСм до приблизительно 1,0 мСм приблизительно в 15 CV.
29. Способ по п. 19, где проводимость указанного буфера для элюирования снижается в градиенте приблизительно от 10,0 мСм до приблизительно 1,0 мСм приблизительно в 5 CV.
30. Способ по п. 19, где проводимость указанного буфера для элюирования снижается в градиенте приблизительно от 10,9 мСм до приблизительно 1,0 мСм приблизительно в 10 CV.
31. Способ по п. 19, где указанный буфер для элюирования имеет рН, меньше чем рН указанного загрузочного буфера.
32. Способ по п. 31, где указанный загрузочный буфер имеет рН приблизительно от 4 до приблизительно 9.
33. Способ по п. 31, где указанный буфер для элюирования имеет рН приблизительно от 4 до приблизительно 9.
34. Способ по п. 19, где указанный буфер для элюирования имеет рН, превышающий рН указанного загрузочного буфера.
35. Способ по п. 34, где указанный загрузочный буфер имеет рН приблизительно от 4 до приблизительно 9.
36. Способ по п. 34, где указанный буфер для элюирования имеет рН приблизительно от 4 до приблизительно 9.
37. Способ по любому из пп. 1-10, где указанная композиция представляет собой элюент аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, хроматографии смешанного режима или хроматографии гидрофобного взаимодействия.
38. Способ по п. 37, где указанная аффинная хроматография представляет собой хроматографию с белком А.
39. Способ по любому из пп. 1-10, где указанный полипептид дополнительно очищают.
40. Способ по п. 39, где указанный полипептид дополнительно очищают посредством фильтрации вируса.
41. Способ по п. 39, где указанный полипептид дополнительно очищают с помощью одной или более из аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, хроматографии смешанного режима и хроматографии гидрофобного взаимодействия.
42. Способ по любому из пп. 1-10, где указанный полипептид дополнительно концентрируют.
43. Способ по п. 42, где указанный полипептид концентрируют с помощью ультрафильтрации, диафильтрации или комбинации ультрафильтрации и диафильтрации.
44. Способ по п. 39, дополнительно включающий комбинирование указанного полипептида с фармацевтически приемлемым носителем.