СОЕДИНЕНИЯ ТИЕНОПИРИДАЗИНА, ИХ ПОЛУЧЕНИЕ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
THIENOPYRIDAZINE COMPOUNDS, PREPARING THEM, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING THEM, AND USING THEM

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к фармацевтической химии, в
частности к соединениям тиенопиридазина, способам их приготовления и к содержащим их фармацевтическим композициям и их использованию.
Предпосылки создания изобретения
Рак является основной угрозой для здоровья человека, и причиной возникновения большинства видов рака человека являются внешние экологические факторы. Ежегодно, как минимум, 5 миллионов человек умирают от рака во всем мире. Показатель эффективности лечения до сих пор остается низким, несмотря на то, что в настоящее время имеется ряд методов для лечения рака у пациентов, таких как хирургия, радиотерапия, химиотерапия и т.д. В настоящее время применение химических фармацевтических препаратов для профилактики и лечения рака является одним из наиболее эффективных методов.
Было обнаружено, что соединения тиенопиридазина или соединения их тиеноаналогов обладают противоопухолевой активностью.
В заявке на патент WO 2005105808F, Hoffman-La Roche AG, раскрывается тиенопиридазин в качестве ингибитора IKK (IkB киназ).
В заявке на патент WO 2007124181, Amgen Inc. of USA, раскрывается соединение тиенопиридазина в виде p38 протеазного ингибитора тирозинкиназы.
В заявке на патент WO 03029241, Smithkline Beecham Corporation, раскрывается соединение 2-уреидотиофен, и в заявке на патент WO03028731 раскрывается соединение 3-уреидотиофен, которые являются аналогичными соединениям тиенопиридазина, в качестве ингибиторов СНК1. В заявке на патент WO 2005066163, AstraZeneca АВ, раскрывается модифицированное соединение 3-уреидотиофена в качестве ингибитора СНК1.
В настоящее время химические фармацевтические препараты для профилактики и лечения рака включают ингибиторы рецепторов тирозинкиназы и нерецепторов тирозинкиназы, и их мишени включают VEGFR, EGFR, HER2, SRC, JAK и ТЕК; а также включают ингибиторы серин-треонин киназы, мишенями которой являются МЕК, JNK, с-МЕТ, АКТ, PIM, TIE, PLK и т.д. Соединения в соответствии с настоящим изобретением являются ингибиторами рака и протеинкиназы, в том числе киназы контрольной точки клеточного цикла СНК1/СНК2.
В результате исследований регулирования контрольных точек клеточного цикла было обнаружено, что завершающая экспрессия СНК1 способна реверсировать лекарственную устойчивость раковых клеток, тем самым повышая чувствительность опухолевых клеток к терапии поврежденных ДНК, и существенно повысить активность противораковых фармацевтических препаратов. Кроме того, она позволяет получить фармацевтические препараты избирательного воздействия на опухоли в отношении большинства видов опухолей, обладающих мутационными свойствами в p53 элиминирования контрольной точки G1/S. Настоящее изобретение предусматривает создание новых соединений тиенопиридазина в качестве ингибиторов протеинкиназ новообразований, связанных с факторами роста (в том числе СНК1, СНК2), которые не только обладают противоопухолевым действием, но также способны повышать противоопухолевую эффективность других противоопухолевых фармацевтических препаратов.
Краткое описание изобретения
В соответствии с настоящим изобретением заявитель создал новые соединения, обладающие антипролиферативной активностью (например, противоопухолевой активностью) и использовал их для лечения человека и животных. Настоящее изобретение также относится к способам получения таких соединений, к фармацевтическим композициям, включающим указанные соединения, и к их применению для изготовления фармацевтических препаратов, обеспечивающих достижение антипролиферативного действия у теплокровных животных, таких как человек.
Настоящее изобретение включает фармацевтически приемлемые соли или пролекарства таких соединений, и заявитель также предусматривает создание фармацевтических композиций и способов применения таких соединений для лечения рака в соответствии с настоящим изобретением.
Ожидается, что такие свойства соединений в соответствии с настоящим изобретением имеют практическую ценность для лечения заболеваний, связанных со стагнацией клеточного цикла и клеточной пролиферацией, а именно: рака (солидная опухоль и лейкемия), фибропролиферативных и дифференциативных заболеваний, псориаза, ревматоидного артрита, саркомы Капоши, острых и хронических нефропатий, атеромы, атеросклероза, артериального рестеноза, аутоиммунных болезней, острых и хронических воспалений, болезней костей и глазных болезней с пролиферацией сосудов клетчатки.
В соответствии с одной особенностью настоящего изобретения предусматривается создание соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов,
1-4
в которых R1 и R2 независимо обозначают H или С алкил;
R3 - насыщенное или ненасыщенное 5- или 6-членное кольцо, содержащее N, S или О и их оптические изомеры;
R4 - фенил, монозамещенный или дизамещенный галогеном.
Предпочтительно R1=R2=H.
R3 предпочтительно обозначает насыщенное 5- или 6-членное кольцо, содержащее N, S или О и их оптические изомеры.
R3 предпочтительно обозначает гексагидропиридинил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, тетрагидропирролидинил, тетрагидрофуранил или тетрагидротиенил или их оптические изомеры.
R3 предпочтительно обозначает гексагидропиридинил или его оптические изомеры.
R4 предпочтительно обозначает галофенил, монозамещенный
,
в котором X представляет F, Cl, Br и I.
Более предпочтительно соединения формулы (I) выбраны из группы, включающей: 2-(4-фторфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида
2-(4-бромфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-фторфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-бромфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-фторфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-бромфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(8-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(R-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
2-(4-фторфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-бромфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-фторфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-бромфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-фторфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-бромфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(8-3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(R-3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамида;
R3 предпочтительно обозначает пиридинил, α-пиранил, γ-пиранил, α-тиопиранил, γ-тиопиранил, пирролидинил, фуранил или тиенил и их оптические изомеры.
Более предпочтительно соединение формулы (I) выбраны из группы, включающей:
2-(4-фторфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-фторфенил)-4-(3-α-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-α-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-фторфенил)-4-(3-α-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-α-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(4-фторфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-фторфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-фторфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-бромфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N-метил формамид;
2-(4-хлорфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-N,N-диметил формамид;
2-(3,5-(дихлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид;
В соответствии с другой особенностью настоящего изобретения предусматривается создание фармацевтической композиции для лечения или профилактики опухолевых заболеваний, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или гидраты и фармацевтически приемлемые носители.
Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены локально через легкие, рот, толстую кишку и т.д. в форме раствора, суспензии, аэрозоли, сухого порошка и т.д.; либо могут быть введены систематически, например, перорально в форме таблеток и порошков, либо введено парентерально в форме раствора или суспензии, либо подкожно, либо ректально в форме суппозитория, либо чрескожно.
В соответствии с другой особенностью настоящего изобретения предусматривается применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов при изготовлении лекарственных средств для лечения или профилактики опухолевых заболеваний. При этом указанные опухолевые заболевания включают опухоль шейки матки, опухоль головы и шеи, карциному груди, яичников, легких (немелкоклеточную карциному легких), поджелудочной железы, толстой кишки, простаты или других тканей, а также лейкемии и лимфомы, опухоли центральной и периферической нервной системы и иные опухоли, такие как меланома, фибросаркома и остеосаркома.
В соответствии с дополнительной особенностью настоящего изобретения предусматривается применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов при изготовлении лекарственных средств для лечения или профилактики пролиферативных болезней. При этом пролиферативные болезни включают аутоиммунные, воспалительные, неврологические и сердечно-сосудистые заболевания.
В соответствии с одной особенностью настоящего изобретения предусматривается применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов при изготовлении лекарственных средств, ограничивающих клеточную пролиферацию у человека или животных.
В соответствии с еще одной особенностью настоящего изобретения предусматривается применение соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов при изготовлении лекарственных средств, ингибирующих опухоли или киназы, связанные с факторами роста.
Исходя из вышеуказанных областей применения, дозировка зависит от используемых соединений, способов введения и необходимого лечения в зависимости от заболевания.
В соответствии с последней особенностью настоящего изобретения предусматривается создание способов получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов, при этом способ включает следующие этапы:
в присутствии основания соединение формулы A обрабатывают диалкилоксалатами:
далее обрабатывают гидразином для получения соединения формулы B:
соединение формулы B обрабатывают оксихлоридом фосфора для получения соединения формулы C:
3
2
соединение формулы C реагирует с соединением RCH с Boc защитной группой для получения соединения формулы D:
и далее соединение формулы D реагирует с NHR1R2, затем защитную группу на R3 удаляют и обрабатывают основанием (щелочью) для получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей или гидратов,
1-4
1-4
где R обозначает Cалкил, R1 и R2 независимо обозначают H или Cалкил соответственно; R3 обозначает насыщенное или ненасыщенное 6- или 5-членное кольцо, содержащее N, S или O или их оптические изомеры; R4 обозначает фенил, монозамещенный или дизамещенный галогеном.
Ниже приведено описание процесса синтеза в соответствии с настоящим изобретением:
Процесс синтеза 2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида.
При этом соединение формулы А может быть получено с помощью известных химических способов в данной области, либо приобретено на рынке. После получения соединение формулы A конденсируют диалкилоксалатами, например диэтилоксалатом, в присутствии щелочи, такой как обычное основание (диизопропиламид лития) и обычных органических растворителей, таких как тетрагидрофуран, с целью приготовления соединения Y. Реакция конденсации должна протекать при низкой температуре ввиду присутствия диизопропиламид лития. Специалистам в данной области техники легко получить диизопропиламид лития, который обычно приготавливают свежим при низкой температуре.
2
2
Далее соединение Y реагирует с гидразином, таким как HNNH в спиртовом растворителе для приготовления соединения формулы В.
Соединение формулы В обрабатывают оксихлоридом фосфора для проведения реакции ацилирования и получают соединение формулы С.
Три вышеуказанных этапа относятся к способу синтеза промежуточного вещества соединения тиенопиридазина, получение которого описано F.Hoffman-La Roche AG в WO 2005105808.
3
2
2
3
2
3
2
Соединения RCH с Вое защитной группой получали с помощью известных в данной области техники способов и нагревали при реакционной температуре 80~90°C в присутствии таких катализаторов, как PdCl (dppf), и таких растворителей, как фосфаты / 1,4-диоксан, соединение формулы C вступало в реакцию с RCH, содержащим Вое защитную группу, в течение ночи, в результате чего получали соединение формулы D. В вышеуказанных реакциях соединения RCH необходимо предварительно обработать 9-BBN (см. реакцию сочетания в работе "Suzuki-Miyaura", p.6125-6128, Tetrahedron Letters 45 (2004)).
Соединения формулы D и HNR1R2 подвергали аммонолизу в герметически закрытой емкости с использованием известных способов с помощью реакционных растворителей, таких как 1,4-диоксан, при нагревании при температуре 80°C в течение ночи, далее Вое защитную группу на R3 удаляли в кислой среде для приготовления кислых солей формулы (I), и регулировании значение pH щелочью для приготовления соединений формулы (I).
Сырье для приготовления вышеуказанных соединений получают либо от коммерческих поставщиков, либо изготавливают с помощью известных в данной области техники способов.
Подробное описание изобретения
Ниже, в частности, приведено описание настоящего изобретения со ссылками на примеры. Примеры приведены исключительно для иллюстрации технического решения настоящего изобретения и не должны истолковываться как ограничивающие настоящее изобретение.
Структуру соединений формулы (I) определяют методом ядерно-магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектрометрии; химические сдвиги протонов в спектрах ЯМР измеряют с использованием δ шкалы, и максимальная мультиплетность представлена в следующем виде: s, единичный пик; m, множественный пик. Промежуточное соединение обычно представлено масс-спектрометрией и ЯМР.
Пример 1:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1: Синтез 5-бромо-тиофен-3-муравьиной кислоты
Тиофен-3 -муравьиную кислоту (12,6 г) и AcOH (96 мл) помещали в реакционную колбу (250 мл) и растворяли после перемешивания при комнатной температуре, далее в реакционную колбу добавляли раствор HBr (8 мл), и реакционная масса быстро меняла цвет на светло-желтый. Далее в колбу по порциям добавляли бромид-пербромид пиридиния (27 г) при комнатной температуре. После добавления реакционную массу перемешивали при комнатной температуре, и завершение реакции отслеживали методом ВЭЖХ. Вышеуказанную смесь вливали в охлажденную воду после завершения реакции, перемешивали в течение 30 минут, фильтровали до образования порошкообразного твердого вещества белого цвета, порошкообразное вещество белого цвета кристаллизовали горячей водой, фильтровали, высушивали и получали кристалл 5-бромо-тиофен-3-муравьиной кислоты (10,8 г), содержание (92%) измеряли методом ВЭЖХ.
2
Реакционную колбу (500 мл) заполняли тиофен-3-муравьиной кислотой (12,5 г) и AcOH (83 мл), перемешивали при комнатной температуре, растворяли и получали бесцветную прозрачную жидкость. Раствор Br (5,4 мл) в AcOH (100 мл) помещали в воронку постоянного давления, по каплям добавляли в реакционную колбу при комнатной температуре и выдерживали при температуре ниже 25°C. После добавления реакцию проводили при комнатной температуре в течение ночи. На следующий день реакционную смесь вливали в охлажденную воду, перемешивали в течение 30 минут и фильтровали для приготовления порошкообразного твердого вещества белого цвета. Порошкообразное вещество белого цвета кристаллизовали горячей водой, фильтровали, высушивали и получали кристалл белого цвета 5-бромо-тиофен-3-муравьиной кислоты (10 г), содержание (92%) измеряли методом ВЭЖХ.
Этап 2: Синтез 5-бромо-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира
5-бромо-тиофен-3-муравьиную кислоту (18,5 г), полученную на предыдущем этапе, абсолютный этанол (150 мл) и концентрированную серную кислоту (5 мл) помещали в трехгорловую колбу (500 мл), нагревали при дефлегмировании и выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя после завершения реакции. Далее добавляли этилацетат (100 мл) и насыщенный рассол (200 мл), перемешивали и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали дважды этилацетатом (25 мл 2). Органическую фазу объединяли и перемещали в делительную воронку. В делительную воронку добавляли раствор карбоната натрия (10%) для регулирования значения рН ≈8 и затем отделяли, органическую фазу промывали насыщенным раствором до достижения значения рН 7, высушивали в течение ночи безводным сульфатом магния, фильтровали на следующий день, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали светло-желтую маслянистую жидкость 5-бромо-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфир (15 г).
Этап 3: Синтез 4-хлорфени л борной кислоты
4-бромхлорбензол (70,6 г) помещали в четырехгорловую колбу, соединенную с механической мешалкой, двумя воронками постоянного давления и температурным зондом. Толуол (588,3 мл) и тетрагидрофуран (ТГФ) (147 мл) добавляли при перемешивании при комнатной температуре в атмосфере аргона и растворяли до приготовления бесцветной прозрачной жидкости. Далее соответственно добавляли триизопропилборат (109,2 мл) и n-бутиллитий (176,4 мл, 2,5 М в гексане) в две воронки постоянного давления, понижали внутреннюю температуру ниже -78°C, далее по каплям добавляли раствор n-бутиллития в колбу при регулировании расхода капель жидкости для поддержания внутренней температуры ниже -78°C. После добавления смесь выдерживали при указанной температуре в течение 1 часа, затем по каплям добавляли в смесь триизопропилборат при температуре ниже -78°C и выдерживали при указанной температуре в течение 1 часа после добавления, далее охлаждающую систему удаляли для обеспечения естественного нагрева до -20°C. К смеси добавляли раствор HCl (360,4 мл, 2,2 М) для ее нагрева до приблизительно 10°C и затем выдерживали для разделения слоев. Водную фазу повторно экстрагировали толуолом (58,8 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли и промывали насыщенным рассолом до достижения значения pH 7 с целью приготовления бесцветной прозрачной жидкости, высушивали ангидридным сульфатом натрия, фильтровали, выпаривали при пониженном давлении для удаления большей части растворителей, в результате чего происходило осаждение твердого вещества белого цвета, которое фильтровали для получения кристаллов 4-хлорфенилборной кислоты (48 г).
Этап 4: Синтез 5-(4-хлорфенил)-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфира
3
4
5-(4-хлорфенил)-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфир (10,5 г), 4-хлорфенилборную кислоту (6 г), Pd[Р(Ph)] (1,5 г), карбонат натрия (7,5 г) и смесь растворителя толуол:вода:EtOH (4:2:1, об./об.) поочередно добавляли в трехгорловую колбу (500 мл) и нагревали при дефлегмировали в течение 3 часов, при этом протекание реакции отслеживали методом ТПХ. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу повторно экстрагировали толуолом (35 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия в течение ночи, фильтровали на следующий день, затем выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителей, получали светло-желтую вязкую жидкость, выдерживали ее для получения комковатого твердого вещества, рекристаллизовывали чистым EtOH и получали кристаллы 5-(4-хлорфенил)-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира (8,6 г).
1
НЯМР (500 MNz, DMSO (диметилсульфоксид)), δ 8,30 (sc, 1Н), 7,81 (s, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,46 (m, 2H), 4,27 (m, 2H), 1,30(m, 3H).
Этап 5:
Синтез 5-(4-хлорфенил)-2-этоксиоксалил-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира
Получение диизопропиламид лития (LDA): ТГФ (252,6 мл) и N,N-диизопропиламин (79 мл) помещали в трехгорловую колбу (1000 мл) в атмосфере аргона, n-бутиллитий (302,8 мл, 1,6 M в гексане) помещали в воронку постоянного давления (500 мл), по каплям подавали в колбу при внутренней температуре ниже -20°C в процессе интенсивно протекающей экзотермической реакции и поддерживали внутреннюю температуру в пределах -20°C~-30°C при контроле расхода добавляемой по каплям жидкости; после добавления вышеуказанная смесь естественно нагревалась до комнатной температуры, и ее непосредственно использовали при проведении последующей реакции конденсации.
Реакция конденсации: 5-(4-хлорфенил)-3-тиофен-муравьиноэтиловый эфир (28,7 г), ТГФ (1084 мл) и диэтилоксалат (29,7 мл) помещали в четырехгорловую колбу (2000 мл), соединенную с механической мешалкой, двумя воронками постоянного давления и температурным зондом. Смесь перемешивали при комнатной температуре и растворяли до получения прозрачной жидкости светло-желтого цвета. Раствор диизопропиламид лития, приготовленный на предшествующем этапе, перемещали в воронку постоянного давления, охлаждали до температуры ниже -78°C, диизопропиламид лития по каплям добавляли в колбу в атмосфере аргона при температуре ниже -78°C, регулируя при этом расход подаваемой по каплям жидкости; после добавления завершение реакции отслеживали методом ТПХ. После завершения реакции добавляли раствор HCl (2,2 M) в колбу и регулировали значение рН ≈3, при этом цвет реакционной жидкости изменялся с красновато-коричневого на оранжевый. Температуру повышали до приблизительно 0°C, затем добавляли твердый NaCl, перемешивали до растворения и выдерживали до расслоения слоев. Водную фазу повторно экстрагировали ТГФ (143,5 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли и промывали насыщенным рассолом два раза, далее регулировали значение рН ≈8 разведенным раствором карбоната натрия; наконец, промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя для получения вязкой жидкости светло-желтого цвета, выдерживали ее при комнатной температуре для постепенного преобразования в твердое вещество и рекристаллизовывали EtOH для получения чистого продукта - 5-(4-хлорфенил)-2-этоксиоксалил-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфир (кристаллы оранжевого цвета, 25,5 г).
1
3
НЯМР (500 MHz, CDCl), δ 7,61 (s, 1H), 7,59 (m, 2Н), 7,42(m, 2Н), 4,37 (m, 4Н), l,39 (m, 6Н).
Этап 6:
Синтез 2-(4-хлорфенил)-4-оксо-4,5-дигидро-тиеро[2,3-d] пиридазинил-7-муравьиноэтилового эфира
Кристаллы 5-(4-хлорфенил)-2-этоксиоксалил-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира (3,0 г) и абсолютный этанол (45 мл) помещали в реакционную колбу (100 мл), перемешивали при комнатной температуре и получали суспензию желтого цвета. Гидрат гидразина (0,75 мл) помещали в воронку постоянного давления, перемешивали в течение 10 минут и по каплям добавляли в реакционную колбу. Суспензию желтого цвета растворяли до получения прозрачной жидкости, вышеуказанную смесь нагревали при 70°C, в колбе при повышении температуры происходило постепенное осаждение твердого вещества желтого цвета, и при этом возрастала вязкость реакционной жидкости. Реакционную смесь выдерживали в течение 1 часа, затем охлаждали до комнатной температуры, фильтровали для получения твердого вещества фисташкового цвета, твердое вещество фисташкового цвета промывали смесью гексана и дихлорметана (1:1) (15 мл, 2 раза) и метанола и дихлорметана (1:1) (15 мл, 2 раза), высушивали при пониженном давлении и получали 2-(4-хлорфенил)-4-оксо-4,5-дигидро-тиеро[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (2,75 г).
Этап 7:
Синтез
4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтилового эфира
2-(4-хлорфенил)-4-оксо-4,5-дигидро-тиеро[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтилового эфира (1,5 г) и хлорокись фосфора (22,5 мл) помещали в трехгорловую колбу (100 мл), нагревали при 95°C в течение 3 часов и растворяли до получения раствора темно-красно-коричневого цвета. После завершения реакции раствор охлаждали до комнатной температуры и выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получения вязкой жидкости шоколадно-коричневого цвета. К жидкости добавляли тетрагидрофуран и насыщенный рассол, перемешивали, в результате чего происходило осаждение твердых частиц желтого цвета, затем фильтровали, выдерживали для разделения слоев и повторно экстрагировали; с помощью разведенного раствора карбоната натрия регулировали значение рН ≈9, далее органическую фазу объединяли; наконец, промывали насыщенным раствором до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали, обесцвечивали активированным углем при дефлегмировании и получали жидкость светло желто-зеленого цвета; жидкость выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (светло-зеленое хлопьевидное твердое вещество, 1,0 г).
1
3
HЯМР (500 MHz, CDCl), δ 7,74 (m, 3H), 7,59(m, 2Н), 4,65(m, 2Н), 1,55(m, 3H). HRMS (масс-спектроскопия высокого разрешения) MW=351,98.
Этап 8: Синтез N-Boc-3-метиленпиперидина
Иодид трифенилметилфосфония (22,14 г) и толуол (135 мл) помещали в трехгорловую колбу (500 мл), перемешивали при комнатной температуре и получали молочно-белую суспензию, которая быстро изменяла свой цвет на оранжевый после добавления трет-бутанолата калия (5,31 г). Далее помещали N-Boc-3-пиперидон (6,0 г) в толуоле (66 мл) в воронку постоянного давления и по каплям подавали в колбу в атмосфере аргона при очевидном протекании экзотермической реакции, выдерживали при комнатной температуре 30°C, и после добавления завершение реакции отслеживали методом ТПХ. После завершения реакции смесь фильтровали, затем промывали насыщенным рассолом (200 мл, 2 раза), регулировали значение рН ≈3 разведенной HCl (1М), далее промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали и получали прозрачную жидкость желтого цвета. Прозрачную жидкость желтого цвета очищали на силикагеле методом хроматографии (элюирующая жидкость: петролейный эфир:этилацетат=15:1) и получали маслянистую жидкость желтого цвета -N-Boc-3-метиленпиперидин (4,2 г).
1
3
HЯМР (400 MHz, CDCl), 5 4,83 (s, 1H), 4,76 (s, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,45 (m, 2H), 2,26 (m, 2H) l,64 (s, 2H), l,51 (s, 9H).
Этап 9: Синтез 4-(1-Вос-3-пиперидинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтилового эфира
N-Boc-3-метиленпиразидин (0,4 г) помещали в трехгорловую колбу в атмосфере аргона и охлаждали до 0°C. Раствор 9-BBN (12 мл, 0,5М в ТГФ) впрыскивали в реакционную колбу с помощью шприца, выдерживали в течение 30 минут, затем нагревали до комнатной температуры в течение 2 часов и выпаривали для удаления растворителя при пониженном давлении (25°C). 1,4-диоксан (20 мл), PdCl (dppf) (0,05 г), фосфат калия (0,32 г) и 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир помещали в реакционную колбу и нагревали при 90°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры на следующий день, затем добавляли охлажденную воду (50 мл) и этилацетат (50 мл), перемешивали в течение приблизительно 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 3 раза, органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом магния и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии (этилацетат: петролейный эфир=1:5), получали вязкую жидкость оранжевого цвета (0,6 г), добавляли этанол (2 мл) к жидкости, кристаллизовали в холодильнике и получали твердое вещество - 4-(1-Boc-3-пиперидинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (0,3 г).
1
НЯМР (400 MHz, DMSO (диметилсульфоксид)), δ 8,90 (s, 1H), 8,03 (m, 2H), 7,63 (m, 2H), 4,54 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,32 (m, 2H), 3,28 (m, 1H), 2,82 (m, 2H), 2,09 (s, 1H), l,78 (s, 1H), 1,64 (s, 1H), l,44 (m, 3H), 1,39 (s, 1H), 1,32(s, 9H).
MS(EI):515(M+), 486, 458, 442, 414, 334, 332, 306, 304, 149, 57.
Этап 10: Синтез
4-(1-Boc-3-пиперидинметил)-2(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d] пиридазина
3
2
4-(1-Вос-3-пиперидинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (0,3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NH.HO (5 мл) помещали в герметичную запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи.
Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли и регулировали значение pH ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом магния и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии (этилацетат: петролейный эфир=1:5) и получали твердое вещество 4-(1-Вос-3-пиперидинметил)-2(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d]пиридазин (0,22 г).
1
2
3
HЯМР (500 МН, CDCl), δ 8,10 (s, 1H), 7,77 (m, 2Н), 7,66 (s, 1Н), 7,48 (m, 2H), 5,90 (s, 1H), 4,05 (s, 1Н), 3,88 (m, 1Н), 3,31 (m, 1Н), 3,21 (m, 1Н), 2,81 (m, 2Н), 2,28 (s, 1Н), 1,81 (s, 1H), 1,67 (s, 3H), 1,39 (s, 9Н).
MS(ESI):487(M+1).
Этап 11:
Синтез 2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорида
4-(1-Вос-3-шшеридинметил)-2(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d]пиридазин (200 г) и этилацетат (4 мл) помещали в одногорловую колбу (25 мл), растворяли до прозрачного раствора светло-желтого цвета, добавляли HCl (4 мл, 3 М), в результате чего раствор быстро преобразовывался в суспензию белого цвета, нагревали при 30°C в течение 1 часа, в результате чего суспензия становилась прозрачной и завершение реакции отслеживали методом реакционной тарелки; после завершения реакции смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали твердое вещество -2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг).
1
HЯМР (500 MHz, DMSO (диметилсульфоксид)), δ 9,51 (m, 1H), 9,09 (m, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,08 (m, 2Н), 7,62 (m, 2Н), 3,45 (m, 2Н), 3,4 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 2,79 (m, 2Н), 2,52 (m, 1H), 1,81 (m, 2Н), 1,77 (m, 1H), 1,42 (m, 1H).
MS(ESI):387(M+1).
Этап 12:
Синтез 2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг) помещали в одногорловую колбу, затем добавляли в воду (5 мл), по каплям добавляли карбонат натрия до достижения значения рН 9~10 и перемешивали в течение 30 минут. Вышеуказанную смесь экстрагировали этилацетатом, промывали водой, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (70 мг).
Пример 2
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамида
Этап 1:
3
DMPU (1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон) (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромометилтетрагидропирану (24,75 g, 0,138 моль), и затем медленно добавляли по каплям Et2Zn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ, и реакция протекала при 45°C в течение 4 часов. Вышеуказанную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали
4-(3-тетрагидропиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):417(M+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-тетрагидропиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл), нагревали при 80°C в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры в течение ночи, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза. Органическую фазу объединяли, регулировали значение рН ≈3 с помощью раствора 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество 2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS (ESI):388(М+1)
Пример 3
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
2
DMPU (225 мл), FeCl3(0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметил тетрагидротиапирану (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно добавляли EtZn (106,8 мл) при 40-45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-тетрагидропиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):433(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-тетрагидропиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл), нагревали при 80°C в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали эти л ацетатом 2 раза. Органическую фазу объединяли, регулировали значение рН ≈3 с помощью раствора 1М НС1, затем промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS (ESI):404(М+1)
Пример 4
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к N-Boc-2-бромметил пиперидину (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl(dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):516(M+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение pH ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):487(M+1)
Этап 3:
4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-2(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d]пиридазин (200 мг) и этилацетат (4 мл) помещали в одногорловую колбу (25 мл) и растворяли до получения прозрачного раствора светло-желтого цвета. Добавляли раствор HCl (4 мл, 3 М), в результате чего смесь превращалась в суспензию белого цвета, ее нагревали при 30°C в течение 1 часа, и суспензия белого цвета становилась прозрачной. Завершение реакции отслеживали методом реакционной тарелки. После завершения реакции растворитель выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг).
MS(ESI):423(М+1)
Этап 4:
2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг) помещали в одногорловую колбу, затем добавляли воду (5 мл), по каплям добавляли карбонат натрия до достижения рН 9~10 и перемешивали в течение 30 минут. Вышеуказанную смесь экстрагировали этилацетатом, промывали, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (70 мг).
MS(ESI):387(М+1)
Пример 5
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl(0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к N-Boc-4-бромметил пиперидину (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно добавляли по каплям EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl2(dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли по каплям реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-4-пиперидинметил)-тиено [2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS (ESI):515(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до pH ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2(4-хлорфенил)-4-N-Boc-4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS (ESI):487(М+1)
Этап 3:
4-(N-Boc-4-пиперидинметил)-2-(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d]пиридазин (200 m г) и этилацетат (4 мл) помещали в одногорловую колбу (25 мл) и растворяли до получения прозрачного раствора светло-желтого цвета. Добавляли раствор HCl (4 мл, 3 M), в результате чего смесь превращалась в суспензию белого цвета, ее нагревали при 30°C в течение 1 часа, и суспензия белого цвета становилась прозрачной. Завершение реакции отслеживали методом реакционной тарелки. После завершения реакции смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг).
MS(ESI):423(M+1)
Этап 4:
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид помещали в одногорловую колбу (25 мл), затем добавляли воду (5 мл), по каплям добавляли карбонат натрия до достижения рН 9~10 и перемешивали в течение 30 минут. Вышеуказанную смесь экстрагировали этилацетатом, промывали, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (70 мг).
MS(ESI):387(М+1)
Пример 6:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к N-Boc-3-бромметил пирролу (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-3-тетрагидропирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):502(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
2-(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-3-тетрагидропирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до pH ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2(4-хлорфенил)-4-(N-Boc-3-тетрагидропиррол метил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):473(М+1)
Этап 3:
4-(N-Boc-3-тетрагидропирролметил)-2(4-хлорфенил)-7-аминокарбонил-тиено[2,3-d]пиридазин (200 мг) и этилацетат (4 мл) помещали в одногорловую колбу (25 мл) и растворяли до получения прозрачного раствора светло-желтого цвета. Добавляли раствор HCl (4 мл, 3 M), в результате чего смесь превращалась в суспензию белого цвета, ее нагревали при 30°C в течение 1 часа, и суспензия белого цвета становилась прозрачной. Завершение реакции отслеживали методом реакционной тарелки. После завершения реакции раствор выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-
4-(3-тетрагидропирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг).
MS(ESI):409(M+1)
Этап 4:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид помещали в одногорловую колбу (25 мл), затем добавляли воду (5 мл), по каплям добавляли карбонат натрия до достижения рН 9~10 и перемешивали в течение 30 минут. Смесь экстрагировали этилацетатом, промывали, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидропирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (70 мг).
MS (ESI): 373(М+1)
Пример 7:
2-(4-хлорфенил)4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к N-Boc-3-бромметилтетрагидрофурану (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl(dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-тетрагидропиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):403(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-тетрагидрофуранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидрофуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):374(М+1)
Пример 8:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметил тетрагидротиофену (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-тетрагидротиофенметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено [2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):419(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-тетрагидротиофенметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(3-тетрагидротиофен метил)-тиено [2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):389(М+1)
Пример 9
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметил пиридину (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для отделения жидкости. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали
4-(3-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):410(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):381(М+1)
Пример 10:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-пиранметил)-тиено[23-d]пиридазинил-7-формамид
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметилпирану (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-α-пиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):412(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-α-пиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-(1]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-пиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):383(М+1)
Пример 11:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-тиапиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметилтиопирану (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев.
2
4
Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-α-тиопиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):428(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-α-тиопиранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество 2-(4-хлорфенил)-4-(3-α-тиопиранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):399(М+1)
Пример 12:
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 2-бромметилпиридину (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(2-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):410(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(2-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество 2-(4-хлорфенил)-4-(2-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):381(М+1)
Пример 13:
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 4-бромметилпиридину (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(4-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):410(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(4-пиридинметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество
2-(4-хлорфенил)-4-(4-пиридинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):38ЦМ+1)
Пример 14:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметилпирролу (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-пирролметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтило вый эфир (25 г).
MS(ESI):398(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-пирролметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(3-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):369(М+1)
Пример 15:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметилфурану (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-фуранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):399(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-фуранметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество
2-(4-хлорфенил)-4-(3-фуранметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):370(М+1)
Пример 16:
2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиафенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 3-бромметилтиофену (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил) -тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(3-тиофенметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьино-этиловый эфир (25 г).
MS(ESI):415(M+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(3-тиофенметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(3-тиофенметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):386(М+1)
Пример 17:
2-(4-хлорфенил)-4-(2-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
2
DMPU (225 мл), FeCl (0,75 г) и CuCl (0,3 г) добавляли к 2-бромметилпирролу (24,75 г, 0,138 моль), затем медленно по каплям добавляли EtZn (106,8 мл) при 40~45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (810 мл) и PdCl (dppf) (5,09 г) добавляли к 4-хлоро-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (500 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (500 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-(2-пирролметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (25 г).
MS(ESI):398(М+1)
Этап 2:
3·
2
2
4
4-(2-пирролметил)-2-(4-хлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (3 г), 1,4-диоксан (5 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (25 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным NaSO и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом хроматографии и получали твердое вещество - 2-(4-хлорфенил)-4-(2-пирролметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (2 г).
MS(ESI):369(М+1)
Пример 18:
2-(3,5-дихлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид
Этап 1:
3
4
5-бромо-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфир (10,5 г), 3,5-дихлорфбензол борную кислоту (6 г), Pd[Р(Ph)] (1,5 г), карбонат натрия (7,5 г) и смесь (347 мл) растворителя толуол:вода: EtOH (4:2:1, об./об.) поочередно добавляли в трехгорловую колбу (500 мл) и нагревали при дефлегмировали в течение 3 часов, при этом протекание реакции отслеживали методом ТПХ. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали толуолом (35 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия в течение ночи, фильтровали на следующий день, затем выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя, получали светло-желтую вязкую жидкость, выдерживали ее для конденсации в твердой фазе, рекристаллизовывали чистым EtOH и получали кристаллы 5-(3,5-дихлорфенил)-3-тиофен муравьиноэтилового эфира (8,6 г).
Этап 2:
Приготовление диизопропиламид лития (LDA): ТГФ (252,6 мл) и N,N-диизопропиламин (79 мл) помещали в трехгорловую колбу (1000 мл) в атмосфере аргона, n-бутиллитий (302,8 мл, 1,6 M в гексане) помещали в воронку постоянного давления (500 мл), по каплям подавали в колбу при внутренней температуре ниже -20°C в процессе интенсивно протекающей экзотермической реакции и поддерживали внутреннюю температуру в пределах -20°C~-30°C при контроле расхода добавляемой по каплям жидкости; после добавления реакционная смесь естественно нагревалась до комнатной температуры, и далее ее непосредственно использовали при проведении последующей реакции конденсации.
Реакция конденсации: 5-(3,5-дихлорфенил)-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира (28,7 г), ТГФ (1084 мл) и диэтилоксалат (29,7 мл) помещали в четырехгорловую колбу (2000 мл), соединенную с механической мешалкой, двумя воронками постоянного давления (500 мл) и температурным зондом. Смесь перемешивали при комнатной температуре и растворяли до получения прозрачной жидкости светло-желтого цвета. Раствор диизопропиламид лития, приготовленный на предшествующем этапе, перемещали в воронку постоянного давления в атмосфере аргона, охлаждали и добавляли по каплям диизопропиламид лития в колбу при внутренней температуре ниже -78°C и поддерживали внутреннюю температуру ниже -78°C, регулируя при этом расход подаваемой по каплям жидкости. После добавления завершение реакции отслеживали методом ТПХ. После завершения реакции добавляли раствор HCl (2,2 М) в колбу и регулировали значение рН ≈3, при этом цвет реакционной жидкости изменялся с красновато-коричневого на оранжевый. Температуру повышали до приблизительно 0°C, затем добавляли твердый NaCl, перемешивали до растворения и выдерживали до расслоения слоев. Водную фазу повторно экстрагировали ТГФ (143,5 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли и промывали насыщенным рассолом два раза, далее регулировали значение рН ≈8 разведенным раствором карбоната натрия; наконец, промывали насыщенным рассолом до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя для получения вязкой жидкости светло-желтого цвета, выдерживали ее при комнатной температуре для постепенной конденсации с образованием твердого вещества и рекристаллизовывали EtOH для получения чистого продукта - 5-(3,5-дихлорфенил)-2-этоксиоксалил-тиофен-3-муравьиноэтиловый эфир (кристаллы оранжевого цвета, 25,5 г).
Этап 3:
Кристаллы
5-(3,5-дихлорфенил)-2-этоксиоксалил-тиофен-3-муравьиноэтилового эфира (3,0 г) и абсолютный этанол (45 мл) помещали в реакционную колбу (100 мл), перемешивали при комнатной температуре и получали суспензию желтого цвета. Гидрат гидразина (0,75 мл) помещали в воронку постоянного давления, перемешивали в течение 10 минут и по каплям добавляли в реакционную колбу. Суспензию желтого цвета растворяли до получения прозрачной жидкости, нагревали при 70°C, в колбе при повышении температуры происходило постепенное осаждение твердого вещества желтого цвета, и при этом возрастала вязкость реакционной жидкости. Реакционную смесь выдерживали в течение 1 часа, затем охлаждали до комнатной температуры, фильтровали для получения твердого вещества фисташкового цвета, твердое вещество фисташкового цвета промывали смесью гексана и дихлорметана (1:1) (15 мл, 2 раза) и метанола и дихлорметана (1:1) (15 мл, 2 раза) соответственно, высушивали при пониженном давлении и получали
2-(3,5-дихлорфенил)-4-оксо-4,5-дигидро-тиеро[2,3-d]пиридазин-7-муравьиноэтиловый эфир (2,75 г).
Этап 4:
2-(3,5-дихлорфенил)-4-оксо-4,5-дигидро-тиеро[2,3-d]пиридазин-7-муравьиноэтиловый эфир (1,5 г) и хлорокись фосфора (22,5 мл) помещали в трехгорловую колбу (100 мл), нагревали при 95°C в течение 3 часов и постепенно растворяли до получения раствора темно-красно-коричневого цвета. После завершения реакции раствор охлаждали до комнатной температуры и выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получения вязкой жидкости шоколадно-коричневого цвета. К жидкости добавляли тетрагидрофуран и насыщенный рассол при перемешивании, в результате чего происходило осаждение твердых частиц желтого цвета, затем фильтровали, выдерживали для разделения слоев, повторно экстрагировали и с помощью разведенного раствора карбоната натрия регулировали значение рН ≈9, далее органическую фазу объединяли, промывали насыщенным раствором до достижения значения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия, фильтровали, обесцвечивали активированным углем при дефлегмировании и получали жидкость светло желто-зеленого цвета; жидкость выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 4-хлоро-2-(3,5-дихлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (хлопьевидное твердое вещество светло-зеленого цвета, 1,0 г).
Этап 5:
3
2
DMPU (5 мл), FeCl (0,017 г) и CuCl (0,007 г) добавляли к N-Boc-3-бромметилпиперидину (0,55 г), затем медленно по каплям добавляли EtZn (2,5 мл) при 40-45°C в течение 45 минут и получали реагент цинка.
2
2
4
ТГФ (18 мл) и PdCC (dppf) (0,12 г) добавляли к 4-хлоро-2-(3,5-дихлорфенил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловому эфиру (30 г), затем по каплям добавляли реагент цинка к раствору ТГФ при 45°C в течение 4 часов. Реакционную смесь вливали в насыщенный рассол, фильтровали после перемешивания в течение 15 минут и выдерживали для разделения слоев. Водную фазу экстрагировали ТГФ (80 мл, 2 раза). Органическую фазу объединяли, промывали насыщенным рассолом (80 мл, 3 раза), высушивали безводным NaSO, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(3,5-дихлорфенил)-4-(N-Boc-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (0,5 г).
Этап 6:
3·
2
2-(3,5-дихлорфенил)-4-(N-Boc-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-муравьиноэтиловый эфир (0,5 г), 1,4-диоксан (1,0 мл) и NHHO (5 мл) помещали в герметично запаянную пробирку (5 мл) и нагревали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, перемещали в делительную воронку на следующий день, добавляли этилацетат, подвергали вибрации и выдерживали для разделения слоев. Водный слой повторно экстрагировали этилацетатом 2 раза, органическую фазу объединяли, регулировали значение до рН ≈3 раствором 1М HCl, затем промывали насыщенным рассолом до достижения рН 7, высушивали безводным сульфатом натрия и фильтровали. Отфильтрованную жидкость очищали на силикагеле методом флэш-хроматографии и получали твердое вещество 2(3,5-дихлорфенил)-4-(N-Boc-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (0,3 г).
Этап 7:
2(3,5-дихлорфенил)-4-(N-Boc-3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (200 г) и этилацетат (4 мл) помещали в одногорловую колбу (25 мл) и растворяли до получения прозрачного раствора светло-желтого цвета. Добавляли раствор HCl (4 мл, 3 М), в результате чего смесь превращалась в суспензию белого цвета, ее нагревали при 30°C в течение 1 часа, и суспензия белого цвета становилась прозрачной. Завершение реакции отслеживали методом реакционной тарелки, после завершения реакции смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали твердое вещество 2-(3,5-дихлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг).
Этап 8:
2-(3,5-дихлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид гидрохлорид (100 мг) помещали в одногорловую колбу (25 мл), затем добавляли воду (5 мл) и по каплям при постоянном перемешивании в течение 30 минут добавляли карбонат натрия до достижения значения рН 9~10. Смесь экстрагировали этилацетатом, промывали водой, выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали 2-(3,5-дихлорфенил)-4-(3-пиперидинметил)-тиено[2,3-d]пиридазинил-7-формамид (70 мг).
MS(ESI):421(M+1)
Пример 19:
Технология получения фармацевтического состава
1. Для инъекций
(1) Состав
Соединение II
50 г 2250 г
Хлорид натрия
Вода для инъекций
250000 мл
Для получения:
1000 флаконов
(2) Получение
Соединение II помещали в резервуар в соответствии с составом, добавляли воду для инъекций (приблизительно 200000 мл) до полного растворения. Затем добавляли хлорид натрия в соответствии с составом и далее продолжали добавлять достаточное количество хлорида натрия до полного растворения. Значение рН регулировали до 4,0~5,0. В течение 30 минут добавляли активированный уголь (250 г), а затем он был удален с помощью фильтрующей декарбонизации. Затем смесь разливали по 250-мл флаконам после прецизионной фильтрации с помощью титаново-стержневого фильтра. Раствор для инъекций изготавливают после стерилизации воды при 115°C в течение 30 минут.
2. Таблетки
(1) Состав
Соединение XXXIII
50 г
Крахмал
160 г
Гидроксипропилцеллюлоза
39 г
Поливидон K30 (5%)
достаточное количество
Натрий-карбоксиметилкрахмал
10,4 г
Стеарат магния
1,3 г
Для изготовления:
1000 таблеток
(2) Получение
Соединение XXXIII, крахмал и гидроксипропилцеллюлозу засыпали в бункер гранулятора с псевдоожиженным слоем, нагревали до 38°С~45°С, открыв трубопровод горячего воздуха для предварительного смешивания материала в течение 5 минут. Приемлемый водный раствор поливидона К30 (5%) распыляли для гранулирования, температуру материала регулировали в пределах 55°С-60°С, материал высушивали в течение 10 минут и смешивали с натрий-карбоксиметилкрахмалом и стеаратом магния для таблетирования после гранулирования.
3 Капсулы
(1) Состав
Соединение XXXXIV
50 г
Лактоза
194,4 г
Натрий-карбоксиметилкрахмал
7,8 г
Коллоидный диоксид кремния
5,2 г
Стеарат магния
2,6 г
Для получения:
1000 капсул
(2) Получение
Соединение XXXXIV, лактозу, натрий-карбоксиметилкрахмал и коллоидный диоксид кремния помещали в смеситель в соответствии с составом и перемешивали в течение 60 минут до достижения его однородности. Далее добавляли стеарат магния в соответствии с составом, перемешивали в течение 10 минут и заполняли смесью обычные желатиновые пластические оболочки.
В отношении ряда вышеуказанных соединений были проведены испытания in vitro и in vivo на выявление их противоопухолевой активности. При проведении указанных испытаний цитотоксичность проверяли in vitro методами SRB и МТТ в течение 72 часов. Данные по специфической активности обобщены в таблице 1. Данные о воздействии соединения на ингибирование роста саркомы S180 у мышей обобщены в таблице 2. Данные об эффективности соединений при лечении пересаженной раковой опухоли толстой кишки НТ-99 «голым» мышам обобщены в таблице 3.
Таблица 1
Противораковая активность соединени IC50 (мкМ) in vitro
№ п/п
Соединение №
Недиференцированная аденокарцинома желудка человека (BGC-823)
Рак толстой кишки человека НТ-29
Рак легких мышей (3LL)
Рак яичника человека (A2780)
1
I
3,35
4,22
1,40
6,40
2
11
4,47
7,4
3,32
6,20
3
VI
5,86
7,53
2,55
1,54
4
XI
9,24
10,70
8,43
11,85
5
XIII
2,62
0,73
1,24
1,18
6
XIV
30,46
16,76
8,59
6,01
7
XV
2,25
804
8
XXI
8,68
9
XXIII
>100
5,57
>100
>100
10
XXVI
24,58
>100
>100
>100
11
XXXIV
74,50
>100
50,64
>100
12
XXXVIII
8,17
1,33
3,13
3,13
13
XXXXVI
11,11
>100
>100
30,29
14
XXXXXVIII
16,4
21,8
21,4
13,9
15
XXXXXXIX
17,02
9,48
3,31
7,11
16
ххххххх
5,45
>100
>100
>100
Из вышеприведенных таблиц видно, что соединения в соответствии с настоящим изобретением не только обладают противоопухолевым эффектом, но также позволяют повысить противоопухолевую эффективность цитотоксических противоопухолевых средств, таких как Gemcitabine, СРТ-11, ADR и т.д.
Несмотря на то, что описание настоящего изобретения приведено со ссылками на вышеуказанные примеры осуществления настоящего изобретения, очевидно, что настоящее изобретение не ограничено такими предпочтительными примерами осуществления и вышеизложенными процедурами. Примеры осуществления изобретения и процедуры были выбраны и описаны для основательного пояснения принципов изобретения и его практического применения, чтобы позволить специалистам в данной области техники наиболее эффективно использовать настоящее изобретение. Специалистам в данной области техники должно быть очевидно, что и изобретение могут быть внесены различные изменения, не выходящие за пределы его объема и существа. Таким образом, изобретение предусматривает охват всех альтернативных структур и эквивалентов, не выходящих за пределы существа и объема настоящего изобретения в соответствии с определениями, содержащимися исключительно в прилагаемой формуле и эквивалентов к ней.