БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНОМ
PROTEIN BINDING WITH NKG2D, CD16 AND WITH TUMOR-SPECIFIC ANTIGEN

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Эта заявка испрашивает преимущество и приоритет предварительной патентной заявки США № 62/510137, поданной 23 мая 2017 г., предварительной патентной заявки США № 62/510168, поданной 23 мая 2017 г., предварительной патентной заявки США № 62/510169, поданной 23 мая 2017 г., предварительной патентной заявки США № 62/510167, поданной 23 мая 2017 г., и 62/539425, поданной 31 июля 2017 г., содержание каждой из которых настоящим включено в качестве ссылки в полном объеме для всех целей.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Настоящая заявка содержит список последовательностей, который представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 21 мая 2018 года, имеет имя DFY-018WO.txt и имеет размер 144 кб.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0003] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с NKG2D, CD16, и с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3.
Уровень техники
[0004] Злокачественное новообразование продолжает оставаться серьезной проблемой для здоровья, несмотря на значительные исследовательские усилия и научные достижения для лечения этого заболевания, о которых сообщается в литературе. Некоторые из наиболее часто диагностируемых видов злокачественных новообразований включают рак предстательной железы, рак молочной железы и рак легкого. Рак предстательной железы является наиболее распространенной формой злокачественных новообразований у мужчин. Рак молочной железы остается основной причиной смерти у женщин. Существующие методы лечения этих видов злокачественных новообразований не эффективны для всех пациентов и/или могут иметь существенные побочные эффекты. Другие виды злокачественных новообразований также остаются сложными для лечения с использованием существующих методов лечения.
[0005] Противоопухолевая иммунотерапия желательна, потому что она высокоспецифична и может способствовать разрушению опухолевых клеток с использованием собственной иммунной системы пациента. Слитые белки, такие как биспецифичные белки, рекрутирующие T-клетки, представляют собой противоопухолевые иммунотерапевтические средства, описанные в литературе, которые связываются с опухолевыми клетками и T-клетками для облегчения разрушения опухолевых клеток. Антитела, которые связываются с определенными опухолеспецифическими антигенами и с определенными иммунными клетками, описаны в литературе. См., например, WO 2016/134371 и WO 2015/095412.
[0006] Клетки-натуральные киллеры (NK) являются компонентом врожденной иммунной системы и составляют приблизительно 15% циркулирующих лимфоцитов. NK-клетки проникают практически во все ткани, и первоначально характеризовались своей способностью эффективно уничтожать опухолевые клетки без необходимости предварительной сенсибилизации. Активированные NK-клетки уничтожают клетки-мишени с помощью средств, аналогичных цитотоксическим Т-клеткам, то есть с помощью цитолитических гранул, которые содержат перфорин и гранзимы, а также посредством путей рецепторов клеточной смерти. Активированные NK-клетки также секретируют воспалительные цитокины, такие как IFN-γ и хемокины, которые способствуют рекрутингу других лейкоцитов в ткани-мишени.
[0007] NK-клетки реагируют на сигналы через различные активирующие и ингибирующие рецепторы на своей поверхности. Например, когда NK-клетки встречают здоровые аутоклетки, их активность ингибируется активацией иммуноглобулино-подобных рецепторов (KIR) клеток-киллеров. Альтернативно, когда NK-клетки встречают чужеродные клетки или опухолевые клетки, они активируются через свои активирующие рецепторы (например, NKG2D, NCR, DNAM1). NK-клетки также активируются константной областью некоторых иммуноглобулинов через рецепторы CD16 на их поверхности. Общая чувствительность NK-клеток к активации зависит от суммы стимулирующих и ингибирующих сигналов.
[0008] Человеческий трофобластный гликопротеин 5T4 представляет собой N-гликозилированный трансмембранепротеин. Его экспрессия механистически связана с направленным движением клеток через эпителиальный мезенхимальный переход, с облегчением хемотаксиса CXCL12/CXCR4 и блокированием канонического пути Wnt/бета-катенин, в то же время способствуя передаче сигналов неканонического пути. Эти процессы строго регулируются в процессе развития и в тканях взрослых, но они помогают стимулировать распространение опухолевых клеток. Было показано, что 5T4 имеет очень ограниченную экспрессию в нормальной ткани взрослого человека, но широко распространен во многих злокачественных новообразованиях, включая рак толстой кишки, рак яичников, немелкоклеточный рак легкого, рак почки и рак желудка.
[0009] Неметастатический гликопротеин b (GPNMB) представляет собой трансмембранный белок типа I, который проявляет гомологию с предшественником pmel17, меланоцит-специфическим белком. Сообщалось, что GPNMB экспрессируется в различных типах клеток, включая меланоциты, остеокласты, остеобласты, дендритные клетки. Кроме того, он высоко экспрессируется при различных типах злокачественных новообразований, включая меланому, рак молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, остеосаркому и глиому/глиобластому. Было показано, что GPNMB способствует миграции, инвазии и метастазированию опухолевых клеток.
[0010] Достаточное потребление фолата необходимо в быстро пролиферирующих клетках для одноуглеродной метаболической реакции и биосинтеза, репарации и метилирования ДНК. Фолат может транспортироваться рецепторами фолата, из которых есть четыре члена гликополипептида (FRα, FRβ, FRγ и FRδ). Альфа-изоформа FR-альфа представляет собой гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-заякоренный мембранный белок, обладающий высокой аффинностью, для связывания и координации транспорта активной формы фолата, 5-метилтетрагидрофолата (5-MTF). Сообщалось, что FR-альфа сверхэкспрессируется в солидных опухолях, таких как рак яичников, рак молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, аденокарцинома легкого и опухоли эпителиального происхождения. С другой стороны, распределение FR-альфа в нормальных тканях человека ограничено низким уровнем экспрессии на апикальных поверхностях некоторых органов, таких как почка, легкое и сосудистое сплетение. Исследования показали, что сверхэкспрессия FR-альфа может способствовать росту опухолевых клеток благодаря механизмам, как связанным, так и не зависящим от поглощения фолиевой кислоты.
[0011] Связанный с беременностью белок плазмы-A (PAPPA) представляет собой металлопротеиназу цинка и расщепляет белки, связывающие инсулиноподобный фактор роста. Его протеолитическая функция активируется при связывании коллагена, и считается, что он участвует в локальных пролиферативных процессах, таких как заживление ран и ремоделирование кости. PAPP-A был вовлечен в несколько видов злокачественных новообразований, включая рак легких, молочной железы, яичников и саркому Юинга.
[0012] Глипикан-3 (GPC3), гепарансульфатпротеогликан, экспрессируется в человеческих эмбриональных тканях, но исчезает из большинства тканей взрослого человека, за исключением молочной железы. Несколько сообщений связывают GPC3 со злокачественным новообразованием. Сверхэкспрессия GPC3 была продемонстрирована при гепатоцеллюлярной карциноме, меланоме, опухоли Вильмса, опухоли желточного мешка, светлоклеточной карциноме яичника, раке желудка и раке пищевода.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0013] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3. Такие белки могут взаимодействовать более чем с одним типом рецепторов, активирующих NK, и могут блокировать связывание природных лигандов с NKG2D. В некоторых вариантах осуществления белок может быть агонистом NK-клеток у людей. В некоторых вариантах осуществления белок может быть агонистом NK-клеток у людей и у других видов, таких как грызуны и яванские макаки. Различные аспекты и варианты осуществления изобретения описаны более подробно ниже.
[0014] Соответственно, один аспект изобретения относится к белку, который включает первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D; второй антигенсвязывающий сайт, который связывается с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3; и Fc-домен антитела, его часть, достаточную для связывания CD16, или третий антигенсвязывающий сайт, который связывается с CD16.
H
NAR
[0015] Каждый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи антитела и вариабельный домен легкой цепи антитела (например, расположенный как в антителе или слитый вместе с scFv), или один или более антигенсвязывающих сайтов могут быть однодоменным антителом, таким как антитело VH, такое как верблюжье антитело, или антитело V, подобное тем, которые обнаружены у хрящевых рыб.
[0016] В одном аспекте настоящее изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и к опухолеспецифическому антигену, выбранному из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, и GPC3. NKG2D-связывающий сайт включает вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере, на 90% идентичный аминокислотной последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 85 и SEQ ID NO: 93.
[0017] Первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D, в некоторых вариантах осуществления может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, как например, благодаря присутствию аминокислотной последовательности по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%), идентичной SEQ ID NO: 1, и/или включая аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 105), CDR2 (SEQ ID NO: 106) и CDR3 (SEQ ID NO: 107) SEQ ID NO: 1. Вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, может быть связан с различными вариабельными доменами легкой цепи с образованием сайта связывания NKG2D. Например, первый антигенсвязывающий сайт, который включает вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, может дополнительно включать вариабельный домен легкой цепи, выбранный из любой из последовательностей, связанных с SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 40. Например, первый антигенсвязывающий сайт включает вариабельный домен тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичными SEQ ID NO: 1, и вариабельный домен легкой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичными любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 40.
[0018]Альтернативно, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 41, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 42. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 41 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 43), CDR2 (SEQ ID NO: 44) и CDR3 (SEQ ID NO: 45) SEQ ID NO: 41. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 42 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 46), CDR2 (SEQ ID NO: 47) и CDR3 (SEQ ID NO: 48) SEQ ID NO: 42.
[0019] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 49, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 50. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 49 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 51), CDR2 (SEQ ID NO: 52) и CDR3 (SEQ ID NO: 53) SEQ ID NO: 49. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 50 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 54), CDR2 (SEQ ID NO: 55) и CDR3 (SEQ ID NO: 56) SEQ ID NO: 50.
[0020] Альтернативно, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 57, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 58, например, путем наличия аминокислотных последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58, соответственно. В другом варианте осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 59, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 60. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 59 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 186), CDR2 (SEQ ID NO: 187) и CDR3 (SEQ ID NO: 188) SEQ ID NO: 59. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 60 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 189), CDR2 (SEQ ID NO: 190) и CDR3 (SEQ ID NO: 191) последовательности SEQ ID NO: 60.
[0021] В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 61, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 62. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 61 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 63), CDR2 (SEQ ID NO: 64) и CDR3 (SEQ ID NO: 65) SEQ ID NO: 61. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 62 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 66), CDR2 (SEQ ID NO: 67) и CDR3 (SEQ ID NO: 68) последовательности SEQ ID NO: 62. В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 69, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 70. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 69 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 71), CDR2 (SEQ ID NO: 72) и CDR3 (SEQ ID NO: 73) SEQ ID NO: 69. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 70 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 74), CDR2 (SEQ ID NO: 75) и CDR3 (SEQ ID NO: 76) SEQ ID NO: 70.
[0022] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 77, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 78. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 77 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 79), CDR2 (SEQ ID NO: 80) и CDR3 (SEQ ID NO: 81) SEQ ID NO: 77. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 78 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 82), CDR2 (SEQ ID NO: 83) и CDR3 (SEQ ID NO: 84) SEQ ID NO: 78.
[0023] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 85, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 86. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 85 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 87), CDR2 (SEQ ID NO: 88) и CDR3 (SEQ ID NO: 89) SEQ ID NO: 85. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 86 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 90), CDR2 (SEQ ID NO: 91) и CDR3 (SEQ ID NO: 92) SEQ ID NO: 86.
[0024] В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 93, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 94. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 93 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 95), CDR2 (SEQ ID NO: 96) и CDR3 (SEQ ID NO: 97) SEQ ID NO: 93. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 94 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 98), CDR2 (SEQ ID NO: 99) и CDR3 (SEQ ID NO: 100) последовательности SEQ ID NO: 94.
[0025] В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 101, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 102, как например, путем наличия последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 101 и по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 102, соответственно. В некоторых вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 103, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 104, как например путем наличия последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 103 и , по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 104, соответственно.
[0026] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с 5T4, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 109, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 113. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 109 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 110), CDR2 (SEQ ID NO: 111) и CDR3 (SEQ ID NO: 112) последовательности SEQ ID NO: 109. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 113 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 114), CDR2 (SEQ ID NO: 115) и CDR3 (SEQ ID NO: 116) последовательности SEQ ID NO: 113.
[0027] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с 5T4, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 117, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 121. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 117 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 118), CDR2 (SEQ ID NO: 119) и CDR3 (SEQ ID NO: 120) последовательности SEQ ID NO: 117. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 121 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 122), CDR2 (SEQ ID NO: 123) и CDR3 (SEQ ID NO: 124) последовательности SEQ ID NO: 121.
[0028] Второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с 5T4, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 125, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 129. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 125 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 126), CDR2 (SEQ ID NO: 127) и CDR3 (SEQ ID NO: 128) последовательности SEQ ID NO: 125. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 129 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 130), CDR2 (SEQ ID NO: 131) и CDR3 (SEQ ID NO: 132) последовательности SEQ ID NO: 129.
[0029] Второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с 5T4, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 192, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 196. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 192 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 193), CDR2 (SEQ ID NO: 194) и CDR3 (SEQ ID NO: 195) последовательности SEQ ID NO: 192. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 196 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 197), CDR2 (SEQ ID NO: 198) и CDR3 (SEQ ID NO: 199) последовательности SEQ ID NO: 196.
[0030] Второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с 5T4, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 200, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 204. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 200 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 201), CDR2 (SEQ ID NO: 202) и CDR3 (SEQ ID NO: 203) последовательности SEQ ID NO: 200. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 204 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 205), CDR2 (SEQ ID NO: 206) и CDR3 (SEQ ID NO: 207) последовательности SEQ ID NO: 204.
[0031] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с GPNMB, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 134, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 138. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 134 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 135), CDR2 (SEQ ID NO: 136) и CDR3 (SEQ ID NO: 137) последовательности SEQ ID NO: 134. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 138 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 139), CDR2 (SEQ ID NO: 140) и CDR3 (SEQ ID NO: 141) последовательности SEQ ID NO: 138. Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с GPNMB, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 142, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 146. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 142 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 143), CDR2 (SEQ ID NO: 144) и CDR3 (SEQ ID NO: 145) последовательности SEQ ID NO: 142. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 146 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 147), CDR2 (SEQ ID NO: 148) и CDR3 (SEQ ID NO: 149) последовательности SEQ ID NO: 146.
[0034] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с FR-альфа, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 167, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 171. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 167 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 168), CDR2 (SEQ ID NO: 169) и CDR3 (SEQ ID NO: 170) последовательности SEQ ID NO: 167. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 171 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 172), CDR2 (SEQ ID NO: 173) и CDR3 (SEQ ID NO: 174) последовательности SEQ ID NO: 171.
[0035] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с GPC3, необязательно может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 177, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 181. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 177 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 178), CDR2 (SEQ ID NO: 179) и CDR3 (SEQ ID NO: 180) последовательности SEQ ID NO: 177. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 181 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные CDR1 (SEQ ID NO: 182), CDR2 (SEQ ID NO: 183) и CDR3 (SEQ ID NO: 184) последовательности SEQ ID NO: 181.
[0036] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи, присутствующей в первом антигенсвязывающем сайте.
[0037] В некоторых вариантах осуществления белок включает часть Fc-домена антитела, достаточную для связывания CD16, где Fc-домен антитела содержит шарнирные и CH2-домены и/или аминокислотные последовательности, по меньшей мере, на 90% идентичные аминокислотной последовательности 234-332 последовательности человеческого антитела IgG.
[0038] Предложены составы, содержащие один из этих белков; клетки, содержащие одну или более нуклеиновых кислот, экспрессирующих эти белки, и способы усиления гибели опухолевых клеток с использованием этих белков.
[0039] Другой аспект изобретения относится к способу лечения злокачественного новообразования у пациента. Способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества описанного в настоящем документе полиспецифичного связывающего белка. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием 5T4-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включают любое злокачественное новообразование, экспрессирующее 5T4, например, колоректальный рак, рак яичников, немелкоклеточный рак легких, рак почки и рак желудка. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием GPNMB-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любые злокачественные новообразования, которые экспрессируют GPNMB, например, меланому, рак молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, остеосаркому, глиому и глиобластому. Рак, подлежащий лечению с использованием FR-альфа-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любые злокачественные новообразования, которые экспрессируют FR-альфа, например рак яичников, рак молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, аденокарциному легких и опухоли эпителиального происхождения. Рак, подлежащий лечению с использованием PAPP-A-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любые виды злокачественные новообразования, которые экспрессируют PAPP-A, например, рак легких, рак молочной железы, рак простаты и саркому Юинга. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием GPC3-нацеленных полиспецифических связывающих белков, любые злокачественные новообразования, которые экспрессируют GPC3, например, гепатоцеллюлярную карциному, меланому, опухоль Вильмса, опухоль желточного мешка, светлоклеточную карциному яичника, рак желудка и рак пищевода.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0040] ФИГ. 1 представляет гетеродимерное полиспецифическое антитело. Каждое плечо может представлять собой либо NKG2D-связывающий домен, либо связывающий домен для 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, или GPC3. В некоторых вариантах осуществления NKG2D- и антигенсвязывающие домены могут иметь общую легкую цепь.
[0041] ФИГ. 2 представляет гетеродимерное полиспецифическое антитело. Либо NKG2D-связывающий домен или связывающий домен для 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, или GPC3, может принимать формат scFv (правое плечо).
[0042] ФИГ. 3 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D человека в анализе ИФА.
[0043] ФИГ. 4 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D яванской макаки в анализе ИФА.
[0044] ФИГ. 5 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D мыши в анализе ИФА.
[0045] ФИГ. 6 представляет собой гистограммы, демонстрирующие с помощью проточной цитометрии связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D человека, демонстрируя кратное превышение средней интенсивности флуоресценции (MFI) относительно фона (FOB).
[0046] ФИГ. 7 представляет собой гистограммы, демонстрирующие с помощью проточной цитометрии связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с клетками EL4, экспрессирующими мышиный NKG2D, демонстрируя кратное превышение средней интенсивности флуоресценции (MFI) относительно фона (FOB).
[0047] ФИГ. 8 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом ULBP-6.
[0048] ФИГ. 9 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом MICA.
[0049] ФИГ. 10 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным мышиным NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом Rae-1 дельта.
[0050] ФИГ. 11 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческого NKG2D посредством NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) путем количественного определения процента TNF-α-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки человеческий NKG2D-CD3 дзета.
[0051] ФИГ. 12 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиного NKG2D с помощью NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) путем количественного определения процента TNF-α-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки мышиный NKG2D-CD3 дзета.
[0052] ФИГ. 13 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).
[0053] ФИГ. 14 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).
[0054] ФИГ. 15 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).
[0055] ФИГ. 16 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).
[0056] ФИГ. 17 представляет собой гистограммы, показывающие цитотоксический эффект NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) в отношении опухолевых клеток.
[0057] ФИГ. 18 представляет собой гистограммы, показывающие температуру плавления NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов), измеренную с помощью дифференциальной сканирующей флуориметрии.
[0058] ФИГ. 19А-19С представляет собой гистограммы синергетической активации NK-клеток с использованием связывания CD16 и NKG2D. ФИГ. 19А демонстрирует уровень CD107a; ФИГ. 19В демонстрирует уровень IFN-γγ; ФИГ 19С демонстрирует уровень продуцирования CD107a и IFN-γ. Графики показывают среднее (n=2) ± SD. Данные представляют пять независимых экспериментов с использованием пяти разных здоровых доноров.
[0059] ФИГ. 20 представляет собой TriNKET в форме Triomab, которое представляет собой трифункциональное биспецифичное антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух половинных антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят от двух родительских антител. Форма Triomab может представлять собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 1/2 антитела крысы и 1/2 антитела мыши.
[0060] ФИГ. 21 представляет собой TriNKET в форме общей легкой цепи (LC) KiH, которая включает технологию «выступы-во-впадины» (KIH). KiH представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab, связывающихся с мишенью 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. TriNKET в формате KiH может представлять собой гетеродимерную конструкцию с 2 Fab, связывающимися с мишенью 1 и мишенью 2, и содержит 2 различных тяжелых цепи и общую легкую цепь, которая спаривается с обеими тяжелыми цепями.
[0061] ФИГ. 22 представляет собой TriNKET в форме иммуноглобулина с двумя вариабельными доменами (DVD-Ig™), который объединяет домены, связывающиеся с мишенью двух моноклональных антител через гибкие встречающиеся в природе линкеры с получением четырехвалентной IgG-подобной молекулы. DVD-Ig™ представляет собой гомодимерную конструкцию, в которой вариабельный домен, нацеленный на антиген 2, слит с N-концом вариабельного домена Fab, нацеленного на антиген 1. Конструкция содержит нормальный Fc.
[0062] ФИГ. 23 представляет собой TriNKET в форме интерфейса ортогонального Fab (Орто-Fab), который представляет собой гетеродимерную конструкцию, которая содержит 2 Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Спаривание LC-HC обеспечивается ортогональным интерфейсом. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.
[0063] ФИГ. 24 представляет собой TrinKET в формате 2-в-1 Ig.
[0064] ФИГ. 25 представляет собой TriNKET в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями электростатической регуляции в Fc.
[0065] ФИГ. 26 представляет собой TriNKET в форме с обменом Fab-фрагментами: антитела, которые обмениваются Fab-фрагментами путем замены тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекулы) с парой тяжелых-легких цепей из другой молекулы, с получением биспецифичных антител. KiH представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab, связывающихся с мишенью 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.
[0066] ФИГ. 27 представляет собой TriNKET в форме SEED Body, который представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и 2, и FC, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.
[0067] ФИГ. 28 представляет собой TriNKET в форме LuZ-Y, в котором домен лейциновой застежки используется для индуцирования гетеродимеризации двух различных HC. LuZ-Y форма представляет собой гетеродимер, содержащий 2 разных scFab, связывающихся с мишенью 1 и 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается благодаря мотивам лейциновой застежки, слитым с С-концом Fc.
[0068] ФИГ. 29 представляет собой TriNKET в форме Cov-X-Body.
[0069] ФИГ. 30A-30B - представляют собой TriNKET в формах κλ-Body, которые представляют собой гетеродимерные конструкции с двумя различными Fab, слитыми с Fc, стабилизированными мутациями гетеродимеризации: Fab 1, нацеленный на антиген 1, содержит каппа LC, а второй Fab, нацеленный на антиген 2, содержит лямбда LC. ФИГ. 30А является иллюстративным изображением одной формы κλ-Body; ФИГ. 30B является иллюстративным изображением другого κλ-Body.
[0070] ФИГ. 31 представляет собой гетеродимерную конструкцию Oasc-Fab, которая включает Fab, связывающийся с мишенью 1, и scFab, связывающийся с мишенью 2, слитые с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.
[0071] ФИГ. 32 представляет собой DuetMab, который представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 разных Fab, связывающихся с антигеном 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. Fab 1 и 2 содержат различные SS-мостики, которые обеспечивают правильное спаривание легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (HC).
[0072] ФИГ. 33 представляет собой CrossmAb, который представляет собой гетеродимерную конструкцию с 2 различными Fab, связывающимися с мишенью 1 и 2, слитыми с Fc, стабилизированным гетеродимеризацией. Домены CL и CH1 и домены VH и VL переключаются, например, CH1 сливается в одной линии с VL, в то время как CL сливается в одной линии с VH.
[0073] ФИГ. 34 представляет собой Fit-Ig, который представляет собой гомодимерные конструкции, в которых Fab, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа.
[0074] ФИГ. 35 представляет собой кривую, демонстрирующую дозозависимое связывание 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с NKG2D, экспрессируемым на клетках EL4.
[0075] ФИГ. 36 представляет собой кривую, демонстрирующую дозозависимое связывание 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с NKG2D, экспрессируемым на первичных человеческих NK-клетках.
[0076] ФИГ. 37 представляет собой кривую, показывающую дозозависимое связывание 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с 5T4, экспрессируемым на клетках рака поджелудочной железы человека BxPC3.
[0077] ФИГ. 38 представляет собой кривую связывания 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) c 5T4, экспрессируемым на клетках мелкоклеточного рака легких человека H146.
[0078] ФИГ. 39 представляет собой кривую связывания 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с 5T4, экспрессируемым на клетках немелкоклеточного рака легких человека H1975.
[0079] ФИГ. 40 представляет собой кривую связывания 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с 5T4, экспрессируемым на клетках рака толстой кишки человека HCT116.
[0080] ФИГ. 41 представляет собой кривую связывания 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с 5T4, экспрессируемым на клетках рака молочной железы человека MCF7.
[0081] ФИГ. 42 представляет собой кривую дозозависимого связывания 5T4-нацеленных TriNKET и 5T4 моноклональных антител (mAb) с 5T4, экспрессируемым на клетках рака желудка человека N87.
[0082] ФИГ. 43А и ФИГ. 43B представляют собой гистограммы, демонстрирующие, что TriNKET опосредуют более высокий уровень цитотоксичности NK-клеток в отношении 5T4-экспрессирующих клеток немелкоклеточного рака легкого человека H1975, чем родительские моноклональные антитела против 5T4. 6,7 мкг/мл TriNKET или моноклональных антител использовали на ФИГ. 43А. 20 мкг/мл TriNKET или моноклональных антител использовали на ФИГ. 43В. Соотношение эффектор/мишень составляло 10:1.
[0083] ФИГ. 44 представляет собой кривую, демонстрирующую, что TriNKET опосредуют более высокий уровень цитотоксичности NK-клеток в отношении 5T4-экспрессирующих клеток рака молочной железы человека MCF7, чем родительские моноклональные антитела против 5T4. Соотношение эффектор/мишень составляло 10:1.
[0084] ФИГ. 45А и ФИГ. 45B представляют собой гистограммы, демонстрирующие, что TriNKET опосредуют более высокий уровень цитотоксичности NK-клеток в отношении 5T4-экспрессирующих клеток рака желудка человека N87, чем родительские моноклональные антитела против 5T4. Использовали 6,7 мкг/мл TriNKET или моноклональных антител. Соотношение эффектор/мишень составляло 10:1. Для экспериментов на ФИГ. 45А и ФИГ. 45B были использованы NK-клетки, полученные от разных здоровых доноров.
[0085] ФИГ. 46 представляет собой кривую доза-ответ, демонстрирующую, что TriNKET опосредуют более высокий уровень цитотоксичности NK-клеток по отношению к 5T4-экспрессирующим клеткам рака толстой кишки человека HCT116, чем родительские моноклональные антитела против 5T4. Соотношение эффектор/мишень составляло 10:1.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[0086] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах и с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, и GPC3. В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки дополнительно включают дополнительный антигенсвязывающий сайт, который связывается с опухолеспецифическим антигеном. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие полиспецифические связывающие белки, и к терапевтическим способам с использованием таких полиспецифических белков и фармацевтических композиций, для ьаких целей, как для лечения злокачественного новообразования. Различные аспекты изобретения изложены ниже в разделах; однако аспекты изобретения, описанные в одном конкретном разделе, не должны быть ограничены каким-либо конкретным разделом.
[0087] Чтобы облегчить понимание настоящего изобретения, ряд терминов и выражений определены ниже.
[0088] Термин в единственном числе, используемый в настоящем описании, означает «один или более» и включают множественное число, если контекст не является неподходящим.
[0089]Используемый в настоящем описании термин «антигенсвязывающий сайт» относится к части молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена. В антителах человека антигенсвязывающий сайт образуется аминокислотными остатками N-концевых вариабельных («V») областей тяжелой («H») и легкой («L») цепей. Три сильно расходящихся участка в V-областях тяжелой и легкой цепей называются «гипервариабельными областями», которые расположены между более консервативными фланкирующими участками, известными как «каркасные области» или «FR». Таким образом, термин «FR» относится к аминокислотным последовательностям, которые естественным образом находятся между и по соседству с гипервариабельными областями в иммуноглобулинах. В молекуле человеческого антитела три гипервариабельные области легкой цепи и три гипервариабельные области тяжелой цепи располагаются относительно друг друга в трехмерном пространстве с образованием антигенсвязывающей поверхности. Антигенсвязывающая поверхность комплементарна трехмерной поверхности связанного антигена, и три гипервариабельные области каждой из тяжелых и легких цепей обозначаются как «области, определяющие комплементарность» или «CDR». У некоторых животных, таких как верблюды и хрящевые рыбы, антигенсвязывающий сайт образован одной цепью антитела, образующей «однодоменное антитело». Антигенсвязывающие сайты могут существовать в интактном антителе, в антигенсвязывающем фрагменте антитела, который сохраняет антигенсвязывающую поверхность, или в рекомбинантном полипептиде, таком как scFv, с использованием пептидного линкера для соединения вариабельного домена тяжелой цепи с вариабельным доменом легкой цепи в одном полипептиде.
[0090] Используемый в настоящем описании термин «опухолеспецифический антиген» означает любой антиген, включая, но не ограничиваясь этим, белок, гликопротеин, ганглиозид, углевод, липид, который ассоциирован со злокачественным новообразованием. Такой антиген может экспрессироваться на злокачественных клетках или в микроокружении опухоли, как например, на кровеносных сосудах, ассоциированных с опухолью, внеклеточном матриксе, мезенхимальной строме или иммунных инфильтратах.
[0091] Используемые в настоящем описании термины «субъект» и «пациент» относятся к организму, подлежащему лечению способами и композициями, описанными в настоящем документе. Такие организмы предпочтительно включают, но не ограничиваются ими, млекопитающих (например, мышей, обезьян, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, собак, кошек и тому подобное) и, более предпочтительно, включают человека.
[0092] Используемый в настоящем описании термин «эффективное количество» относится к количеству соединения (например, соединения по настоящему изобретению), достаточному для достижения полезных или желаемых результатов. Эффективное количество может быть введено за одно или более введений, применений или дозировок и не предназначено для ограничения конкретным составом или путем введения. Используемый в настоящем описании термин «лечение» включает любой эффект, например уменьшение, снижение, модуляцию, улучшение или устранение, которое приводит к улучшению состояния, заболевания, расстройства и т. п. или ослаблению его симптома.
[0093] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтическая композиция» относится к комбинации активного агента с носителем, инертным или активным, что делает композицию особенно подходящей для диагностического или терапевтического применения in vivo или ex vivo.
[0094] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому из стандартных фармацевтических носителей, таких как фосфатно-буферный солевой раствор, вода, эмульсии (например, такие как эмульсии масло/вода или вода/масло) и различные типы смачивающих агентов. Композиции также могут включать стабилизаторы и консерванты. Для примеров носителей, стабилизаторов и адъювантов см., например, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975].
[0095] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к любой фармацевтически приемлемой соли (например, кислоты или основания) соединения по настоящему изобретению, которая при введении пациенту способна обеспечить соединение по настоящему изобретению или активный метаболит или его остаток. Как известно специалистам в данной области техники, «соли» соединений по настоящему изобретению могут быть получены из неорганических или органических кислот и оснований. Примеры кислот включают, но не ограничиваются ими, соляную, бромводородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, этансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую, бензолсульфоновую кислота и тому подобное. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, хотя сами по себе они не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы при получении солей, полезных в качестве промежуточных соединений при получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.
4
1-4
+
[0096] Примеры оснований включают, но не ограничиваются ими, гидроксиды щелочных металлов (например, натрия), гидроксиды щелочноземельных металлов (например, магния), аммиак и соединения формулы NW, где W представляет собой Cалкил и тому подобное.
+
+
+
4
4
1-4
[0097] Примеры солей включают, но не ограничиваются ими: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, флукогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и тому подобное. Другие примеры солей включают анионы соединений по настоящему изобретению, соединенные с подходящим катионом, таким как Na, NH и NW (где W представляет собой Cалкильную группу), и тому подобное.
[0098] Для терапевтического применения соли соединений по настоящему изобретению рассматриваются как фармацевтически приемлемые. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения.
[0099] Во всем описании, где композиции описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные компоненты, или где процессы и способы описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные стадии, предполагается, что дополнительно существуют композиции по настоящему изобретению, которые состоят по существу или состоят из перечисленных компонентов и что существуют процессы и способы согласно настоящему изобретению, которые состоят по существу или состоят из перечисленных стадий обработки.
[0100] Как правило, если в композиции указан процент, то это процент по массе, если не указано иное. Кроме того, если переменная не сопровождается определением, то предыдущее определение переменной является приоритетным.
I. Белки
[0101] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, И с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, и GPC3. Полиспецифические связывающие белки пригодны в фармацевтических композициях и терапевтических способах, описанных в настоящем документе. Связывание полиспецифического связывающего белка с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетке-натуральном киллере усиливает активность клетки-натурального киллера в отношении разрушения опухолевых клеток, экспрессирующих антиген 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, и/или GPC3. Связывание полиспецифических связывающих белков с клетками, экспрессирующими 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, и GPC3 приводит к тому, что опухолевые клетки приближаются к клетке-натуральному киллеру, что облегчает прямое и косвенное разрушение опухолевых клеток клеткой-натуральным киллером. Дальнейшее описание некоторых примеров полиспецифических связывающих белков приведено ниже.
+
[0102] Первый компонент полиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими рецептор NKG2D, которые могут включать, но не ограничиваются ими, NK-клетки, γδ T-клетки и CD8 αβ T-клетки. При NKG2D-связывании полиспецифические связывающие белки могут блокировать природные лиганды, такие как ULBP6 и MICA, от связывания с NKG2D и активации рецепторов NKG2D.
[0103] Второй компонент полиспецифических связывающих белков связывается с 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A, или GPC3. 5T4-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при колоректальном раке, раке яичников, немелкоклеточном раке легкого, раке почки и раке желудка. GPNMB-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при меланоме, раке молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, остеосаркому, глиому и глиобластому. FR-альфа-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при раке яичников, раке молочной железы, включая трижды негативный рак молочной железы, аденокарциному легкого и опухоли эпителиального происхождения. PAPP-A-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при раке легких, раке молочной железы, раке яичников и саркоме Юинга. GPC3-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, в гепатоцеллюлярной карциноме, меланоме, опухоли Вильмса, опухоли желточного мешка, светлоклеточной карциноме яичника, раке желудка и раке пищевода.
[0104] Третий компонент для полиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими CD16, Fc-рецептор на поверхности лейкоцитов, включая клетки-натуральные киллеры, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, тучные клетки и фолликулярные дендритные клетки.
[0105] Описанные в настоящем документе полиспецифические связывающие белки могут принимать различные форматы. Например, один формат представляет собой гетеродимерное полиспецифическое антитело, которое включает первую тяжелую цепь иммуноглобулина, первую легкую цепь иммуноглобулина и вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и вторую легкую цепь иммуноглобулина (ФИГ. 1). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), первый вариабельный домен тяжелой цепи и необязательный первый домен CH1 тяжелой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина включает первый вариабельный домен легкой цепи и первый константный домен легкой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина вместе с первой тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и, необязательно, второй домен CH1 тяжелой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина включает второй вариабельный домен легкой цепи и второй константный домен легкой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина вместе со второй тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий сайт, который связывается с 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A или GPC3. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (ФИГ.1). В некоторых вариантах осуществления первая легкая цепь иммуноглобулина идентична второй легкой цепи иммуноглобулина.
[0106] Другой примерный формат включает гетеродимерное полиспецифическое антитело, включающее первую тяжелую цепь иммуноглобулина, вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина (ФИГ. 2). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), слитый либо через линкер, либо за счет шарнира антитела с одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), состоящим из вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи, которые спариваются и связываются с NKG2D или связываются с антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина включает второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и, необязательно, домен тяжелой цепи CH1. Легкая цепь иммуноглобулина включает вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина соединяется с легкой цепью иммуноглобулина и связывается с NKG2D или связывается с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (ФИГ. 2).
[0107] Один или более дополнительных мотивов связывания могут быть слиты с С-концом домена СН3 константной области, необязательно через линкерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий сайт может представлять собой одноцепочечную или стабилизированную дисульфидной цепью вариабельную область (scFv), или может образовывать четырехвалентную или трехвалентную молекулу.
[0108] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Triomab, который представляет собой трифункциональное биспецифичное антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух половинных антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят от двух родительских антител.
CH3A
CH3B
[0109] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок представляет собой форму с общей легкой цепью (LC) KiH, в которой используется технология «выступы во впадины» (KIH). KIH включает сконструированные домены CH3 для создания либо «выступа», либо «впадины» в каждой тяжелой цепи для содействия гетеродимеризации. Концепция технологии Fc «выступы-во-впадины (KiH)» заключалась в том, чтобы ввести «выступ» в одном домене CH3 (CH3A) путем замены небольшого остатка на объемный (например, T366W в нумерации EU). Чтобы приспособить «выступ», на другом домене CH3 (CH3B) была создана комплементарная поверхность «впадины» путем замены ближайших соседних к выступу остатков на меньшие (т. е. T366S/L368A/Y407V). Мутация «впадины» была оптимизирована путем структурно-управляемого скрининга фаговой библиотеки (Atwell S, Ridgway JB, Wells JA, Carter P. Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library. Biol. (1997) 270(1):26-35). Рентгенокристаллические структуры вариантов KiH Fc (Elliott JM, Ultsch M, Lee J, Tong R, Takeda K, Spiess C, et al., Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylated half-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3 hydrophobic interaction. J. Mol. Biol. (2014) 426(9):1947-57; Mimoto F, Kadono S, Katada H, Igawa T, Kamikawa T, Hattori K. Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant with improved affinity for FcγRs. Mol. Immunol. (2014) 58 (1): 132-8) продемонстрировали, что гетеродимеризация термодинамически поддерживается гидрофобными взаимодействиями, обусловленными стерической комплементарностью в коровом интерфейсе между CH3-доменами, тогда как интерфейсы выступ-выступ и впадина-впадина не благоприятствуют гомодимеризация вследствие стерических помех и нарушения благоприятных взаимодействий, соответственно.
[0110] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме иммуноглобулина с двумя вариабельными доменами (DVD-Ig™), который объединяет домены связывания мишеней двух моноклональных антител через гибкие природные линкеры с получением четырехвалентной IgG-подобной молекулы.
[0111] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме ортогонального Fab-интерфейса (Орто-Fab). В подходе ortho-Fab IgG (Lewis SM, Wu X, Pustilnik A, Sereno A, Huang F, Rick HL, et al., Generation of bispecific IgG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface. Nat. Biotechnol. (2014) 32 (2): 191-8), региональный дизайн на основе структуры вводит комплементарные мутации в интерфейсе LC и HCVH-CH1 только в одном Fab без каких-либо изменений в другом Fab.
[0112] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок имеет формат 2-в-1 Ig. В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями электростатического взаимодействия в Fc.
[0113] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме κλ-Body, которая представляет собой гетеродимерные конструкции с 2 различными Fab, слитыми с Fc, стабилизированными мутациями гетеродимеризации: Fab1, нацеленный на антиген 1, содержит каппа-LC, тогда как второй Fab, нацеленный на антиген 2, содержит лямбда LC. ФИГ. 30А является примерным представлением одной формы κλ-Body; ФИГ. 30B является примерным представлением другого κλ-Body.
[0114] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме с обменом Fab-фрагментов (антитела, которые обмениваются Fab-фрагментами путем замены тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекулы) на пару тяжелых-легких цепей из другой молекулы, что приводит к получению биспецифичных антител).
[0115] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок имеет форму SEED Body. Сконструированная доменная платформа с обменом цепей (SEED) была разработана для генерирования асимметричных и биспецифичных антителоподобных молекул, что позволяет расширять терапевтические применения природных антител. Эта платформа, сконструированная белками, основана на обмене структурно родственных последовательностей иммуноглобулина в консервативных доменах СН3. Конструкция SEED позволяет эффективно генерировать гетеродимеры AG/GA, в то же время препятствуя гомодимеризации доменов AG и GA SEED CH3. (Muda M. et al., Protein Eng. Des. Sel. (2011, 24 (5): 447-54).
[0116] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме LuZ-Y, в которой домен лейциновой застежки используется для индуцирования гетеродимеризации двух разных HC. (Wranik, BJ. Et al., J. Biol. Chem. (2012), 287: 43331-9).
[0117] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Cov-X-Body. В биспецифических CovX-Body два разных пептида соединяются вместе с использованием разветвленного азетидинонового линкера и сливаются с каркасным антителом в мягких условиях сайтспецифичным образом. В то время как фармакофоры отвечают за функциональную активность, каркас антител обеспечивает длительный период полужизни и Ig-подобное распределение. Фармакофоры могут быть химически оптимизированы или заменены другими фармакофорами для получения оптимизированных или уникальных биспецифичных антител. (Doppalapudi VR et al., PNAS (2010), 107 (52); 22611-22616).
[0118] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в гетеродимерной форме Oasc-Fab, которая включает Fab, связывающийся с мишенью 1, и scFab, связывающийся с мишенью 2, слитые с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.
[0119] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме DuetMab, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab, связывающихся с антигеном 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. Fab 1 и 2 содержат дифференциальные SS-мостики, которые обеспечивают правильное спаривание LC и HC.
[0120] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме CrossmAb, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию с 2 различными Fab, связывающимися с мишенью 1 и 2, слитыми с Fc, стабилизированными гетеродимеризацией. Домены CL и CH1 и домены VH и VL переключаются, например, CH1 сливается в одной линии с VL, в то время как CL сливается в одной линии с VH.
[0121] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Fit-Ig, которая представляет собой гомодимерные конструкции, где Fab, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа.
[0122] В Таблице 1 перечислены пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с NKG2D. NKG2D-связывающие домены могут различаться по своей аффинности связывания с NKG2D, тем не менее, все они активируют человеческие NKG2D и NK-клетки.
Таблица 1
Клоны
Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи
Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи
ADI-27705
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)CDR1 (SEQ ID NO:105) -GSFSGYYWSCDR2 (SEQ ID NO:106) -EIDHSGSTNYNPSLKSCDR3 (SEQ ID NO:107) -ARARGPWSFDP
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:2)
ADI-27724
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:4)
ADI-27740(A40)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:5)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:6)
ADI-27741
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSNSYYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8)
ADI-27743
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:9)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:10)
ADI-28153
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWGFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:11)
ELQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYCQQSYDIPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:12)
ADI-28226(C26)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:14)
ADI-28154
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:15)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:16)
ADI-29399
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:17)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:18)
ADI-29401
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:19)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDIYPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:20)
ADI-29403
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:21)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSYPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:22)
ADI-29405
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:24)
ADI-29407
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSFPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:26)
ADI-29419
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSFSTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:28)
ADI-29421
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:29)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESYSTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:30)
ADI-29424
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:31)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSFITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:32)
ADI-29425
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:33)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSYPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:34)
ADI-29426
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:35)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:36)
ADI-29429
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:37)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYELYSYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:38)
ADI-29447(F47)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:39)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDTFITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:40)
ADI-27727
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDSSIRHAYYYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:41)CDR1 (SEQ ID NO:43) -GTFSSYAISCDR2 (SEQ ID NO:44) -GIIPIFGTANYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:45) -ARGDSSIRHAYYYYGMDV
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPITFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:42)CDR1 (SEQ ID NO:46) -KSSQSVLYSSNNKNYLACDR2 (SEQ ID NO:47) -WASTRESCDR3 (SEQ ID NO:48) -QQYYSTPIT
ADI-29443(F43)
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSDRFHPYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:49)CDR1 (SEQ ID NO:51) -GSISSSSYYWGCDR2 (SEQ ID NO:52) -SIYYSGSTYYNPSLKSCDR3 (SEQ ID NO:53) -ARGSDRFHPYFDY
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQFDTWPPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:50)CDR1 (SEQ ID NO:54) -RASQSVSRYLACDR2 (SEQ ID NO:55) -DASNRATCDR3 (SEQ ID NO:56) -QQFDTWPPT
ADI-29404(F04)
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:57)
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCEQYDSYPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:58)
ADI-28200
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGRKASGSFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:59)CDR1 (SEQ ID NO:186) - GTFSSYAISCDR2 (SEQ ID NO:187) - GIIPIFGTANYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:188) - ARRGRKASGSFYYYYGMDV
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKPLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:60)CDR1 (SEQ ID NO:189) - ESSQSLLNSGNQKNYLTCDR2 (SEQ ID NO:190) - WASTRESCDR3 (SEQ ID NO:191) - QNDYSYPYT
ADI-29379(E79)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAPNYGDTTHDYYYMDVWGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:61)CDR1 (SEQ ID NO:63) - YTFTSYYMHCDR2 (SEQ ID NO:64) - IINPSGGSTSYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:65) - ARGAPNYGDTTHDYYYMDV
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDDWPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:62)CDR1 (SEQ ID NO:66) - RASQSVSSNLACDR2 (SEQ ID NO:67) - GASTRATCDR3 (SEQ ID NO:68) - QQYDDWPFT
ADI-29463(F63)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTGEYYDTDDHGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:69)CDR1 (SEQ ID NO:71) - YTFTGYYMHCDR2 (SEQ ID NO:72) - WINPNSGGTNYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:73) - ARDTGEYYDTDDHGMDV
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDDYWPPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:70)CDR1 (SEQ ID NO:74) - RASQSVSSNLACDR2 (SEQ ID NO:75) - GASTRATCDR3 (SEQ ID NO:76) - QQDDYWPPT
ADI-27744(A44)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGYYDSGAGDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:77)CDR1 (SEQ ID NO:79) - FTFSSYAMSCDR2 (SEQ ID NO:80) - AISGSGGSTYYADSVKGCDR3 (SEQ ID NO:81) - AKDGGYYDSGAGDY
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSYPRTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:78)CDR1 (SEQ ID NO:82) - RASQGIDSWLACDR2 (SEQ ID NO:83) - AASSLQSCDR3 (SEQ ID NO:84) - QQGVSYPRT
ADI-27749(A49)
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:85)CDR1 (SEQ ID NO:87) - FTFSSYSMNCDR2 (SEQ ID NO:88) - SISSSSSYIYYADSVKGCDR3 (SEQ ID NO:89) - ARGAPMGAAAGWFDP
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:86)CDR1 (SEQ ID NO:90) - RASQGISSWLACDR2 (SEQ ID NO:91) - AASSLQSCDR3 (SEQ ID NO:92) - QQGVSFPRT
ADI-29378(E78)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGAGFAYGMDYYYMDVWGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:93)CDR1 (SEQ ID NO:95) - YTFTSYYMHCDR2 (SEQ ID NO:96) - IINPSGGSTSYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:97) - AREGAGFAYGMDYYYMDV
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSDNWPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:94)CDR1 (SEQ ID NO:98) - RASQSVSSYLACDR2 (SEQ ID NO:99) - DASNRATCDR3 (SEQ ID NO:100) - QQSDNWPFT
[0123] Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 101, может спариваться с вариабельным доменом легкой цепи, определенным SEQ ID NO: 102, с образованием антигенсвязывающего сайта, который может связываться с NKG2D, как проиллюстрировано в патенте США 9273136.
SEQ ID NO:101
QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIRYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRGLGDGTYFDYWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:102:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGKAPKLLIYYDDLLPSGVSDRFSGSKSGTSAFLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVL
[0124] Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 103, может спариваться с вариабельным доменом легкой цепи, определенным SEQ ID NO: 104, с образованием антигенсвязывающего сайта, который может связываться с NKG2D, как проиллюстрировано в патенте США 7879985.
SEQ ID NO:103
QVHLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSDDSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGHISYSGSANYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCANWDDAFNIWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO:104
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
[0125] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и антигеном 5T4. В Таблице 2 перечислены некоторые иллюстративные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с 5T4.
Таблица 2
Клоны
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
5T4 антитело(публикация патента No. WO2006015882)
EVQLQQSGPDLVKPGASVKISCKASGYSFTGYYMHWVKQSPGKGLEWIGRINPNNGVTLYNQKFKDKATLTVDKSSTTAYMELRSLTSEDSAVYYCARSTMITNYVMDYWGQGTSVTVSSA(SEQ ID NO:109)CDR1 (SEQ ID NO:110) - GYSFTGYCDR2 (SEQ ID NO:111) - NPNNGVCDR3 (SEQ ID NO:112) - STMITNYVMDY
SIVMTQTPTSLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLISYTSSRYAGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSVQAEDAAVYFCQQDYNSPPTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:113)CDR1(SEQ ID NO:114) - QSVSNDVACDR2 (SEQ ID NO:115) - YTSSRYACDR3 (SEQ ID NO:116) - QQDYNSPPT
5T4 антитело(публикация патента США No. 20130011418)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNFGMNWVRQAPGKGLEWVAWINTNTGEPRYAEEFKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDWDGAYFFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:117)CDR1 (SEQ ID NO:118) - GYTFTNFCDR2 (SEQ ID NO:119) - NTNTGECDR3 (SEQ ID NO:120) - DWDGAYFFDY
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGKAPKLLIYFATNRYTGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQDYSSPWTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:121)CDR1 (SEQ ID NO:122) - QSVSNDVACDR2 (SEQ ID NO:123) - FATNRYTCDR3 (SEQ ID NO:124) - QQDYSSPWT
5T4 антитело(публикация патента No. WO2016022939)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTLSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRYSNYVGWFDPWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:125)CDR1 (SEQ ID NO:126) - GFTFSSYWCDR2 (SEQ ID NO:127) - ISGSGGSTCDR3 (SEQ ID NO:128) - ARDRYSNYVGWFDP
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTLWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:129)CDR1 (SEQ ID NO:130) - QSISSYCDR2 (SEQ ID NO:131) - AASCDR3 (SEQ ID NO:132) - QQSYSTLWT
5T4 антитело (5T4A) (публикация патента No. WO2013041687)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMNWVRQAPGKGLEWVGEIRLKSDKYATYYAESVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNNLKTEDTGVYYCARRRGYYGSAYGMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:192)CDR1 (SEQ ID NO:193) - NYWMNCDR2 (SEQ ID NO:194) - EIRLKSDKYATYYAESVKGCDR3 (SEQ ID NO:195) - RRGYYGSAYGMDY
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKAPKILIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGKDFTFTISSLQPEDIATYYCLQYDFLPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:196)CDR1 (SEQ ID NO:197) - KASQDINSYLSCDR2 (SEQ ID NO:198) - RANRLVDCDR3 (SEQ ID NO:199) - LQYDFLPLT
5T4 антитело (5T4R) (публикация патента No. WO2017072207)
EVHLLESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSDAMHWVRQAPGKGLEWVSGVSGSGGSPYYADSVKGRFTISRDDSKTTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATGGSIAGSYYYYPMDVWGQGTTV TVSS (SEQ ID NO:200)CDR1 (SEQ ID NO:201) - SDAMHCDR2 (SEQ ID NO:202) - GVSGSGGSPYYADSVKGCDR3 (SEQ ID NO:203) - GGSIAGSYYYYPMDV
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQIGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:204)CDR1 (SEQ ID NO:205) - QASQDISNYLNCDR2 (SEQ ID NO:206) - AASTLQICDR3 (SEQ ID NO:207) - QQANSFPLT
[0126] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые могут связываться с 5T4, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 133.
SEQ ID NO:133
MPGGCSRGPAAGDGRLRLARLALVLLGWVSSSSPTSSASSFSSSAPFLASAVSAQPPLPDQCPALCECSEAARTVKCVNRNLTEVPTDLPAYVRNLFLTGNQLAVLPAGAFARRPPLAELAALNLSGSRLDEVRAGAFEHLPSLRQLDLSHNPLADLSPFAFSGSNASVSAPSPLVELILNHIVPPEDERQNRSFEGMVVAALLAGRALQGLRRLELASNHFLYLPRDVLAQLPSLRHLDLSNNSLVSLTYVSFRNLTHLESLHLEDNALKVLHNGTLAELQGLPHIRVFLDNNPWVCDCHMADMVTWLKETEVVQGKDRLTCAYPEKMRNRVLLELNSADLDCDPILPPSLQTSYVFLGIVLALIGAIFLLVLYLNRKGIKKWMHNIRDACRDHMEGYHYRYEINADPRLTNLSSNSDV
[0127] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и антигеном GPNMB. В Таблице 3 перечислены некоторые иллюстративные пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с GPNMB.
Таблица 3
Клоны
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
GPNMB антитело(публикация патента No. WO2006071441)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSFNYYWSWIRHHPGKGLEWIGYIYYSGSTYSNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLTLSSVTAADTAVYYCARGYNWNYFDYWGQGTLVTVSSA(SEQ ID NO:134)CDR1 (SEQ ID NO:135) - GGSISSFNYCDR2 (SEQ ID NO:136) -YYSGSCDR3 (SEQ ID NO:137) -GYNWNYFDY
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVDNNLVWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:138)CDR1(SEQ ID NO:139) - QSVDNNLVCDR2 (SEQ ID NO:140) -GASTRATCDR3 (SEQ ID NO:141) - QQYNNWPPWT
GPNMB антитело(Патент США No. 9115196)
MAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTPhrSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGPNTWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:142)CDR1 (SEQ ID NO:143) - SSYAICDR2 (SEQ ID NO:144) - GIIPIFGTANYAQKFQGCDR3 (SEQ ID NO:145) - GPNT
LDVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVGAGDVGVYYCMETLQTHPTFGQGTKVGIKR(SEQ ID NO:146)CDR1 (SEQ ID NO:147) - RSSQSLLHSNGYNYLDCDR2 (SEQ ID NO:148) - LGSNRASCDR3 (SEQ ID NO:149) - METLQTHPT
[0128] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые могут связываться с GPNMB, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 150.
SEQ ID NO:150
MECLYYFLGFLLLAARLPLDAAKRFHDVLGNERPSAYMREHNQLNGWSSDENDWNEKLYPVWKRGDMRWKNSWKGGRVQAVLTSDSPALVGSNITFAVNLIFPRCQKEDANGNIVYEKNCRNEAGLSADPYVYNWTAWSEDSDGENGTGQSHHNVFPDGKPFPHHPGWRRWNFIYVFHTLGQYFQKLGRCSVRVSVNTANVTLGPQLMEVTVYRRHGRAYVPIAQVKDVYVVTDQIPVFVTMFQKNDRNSSDETFLKDLPIMFDVLIHDPSHFLNYSTINYKWSFGDNTGLFVSTNHTVNHTYVLNGTFSLNLTVKAAAPGPCPPPPPPPRPSKPTPSLATTLKSYDSNTPGPAGDNPLELSRIPDENCQINRYGHFQATITIVEGILEVNIIQMTDVLMPVPWPESSLIDFVVTCQGSIPTEVCTIISDPTCEITQNTVCSPVDVDEMCLLTVRRTFNGSGTYCVNLTLGDDTSLALTSTLISVPDRDPASPLRMANSALISVGCLAIFVTVISLLVYKKHKEYNPIENSPGNVVRSKGLSVFLNRAKAVFFPGNQEKDPLLKNQEFKGVS
[0129] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и антигеном FR-альфа. В Таблице 4 перечислены некоторые иллюстративные пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с FR-альфа.
Таблица 4
Клоны
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
FR-альфа антитело(Публикация патента No. WO2005080431)
EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCSASGFTFSGYGLSWVRQAPGKGLEWVAMISSGGSYTYYADSVKGRFAISRDNAKNTLFLQMDSLRPEDTGVYFCARHGDDPAWFAYWGQGTPVTVSSA(SEQ ID NO:151)CDR1 (SEQ ID NO:152) - GFTFSGYCDR2 (SEQ ID NO:153) - SSGGSYCDR3 (SEQ ID NO:154) - HGDDPAWFAY
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSVSSSISSNNLHWYQQKPGKAPKPWIYGTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSYPYMYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:155)CDR1(SEQ ID NO:156) - SSISSNNLHCDR2 (SEQ ID NO:157) - GTSNLASCDR3 (SEQ ID NO:158) - QQWSSYPYMYT
FR-альфа антитело(Патент США No. 8557966)
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKASGYTFTGYFMNWVKQSPGQSLEWIGRIHPYDGDTFYNQKFQGKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDFAVYYCTRYDGSRAMDYWGQGTTVTVSSA(SEQ ID NO:159)CDR1 (SEQ ID NO:160) - GYTFTGYCDR2 (SEQ ID NO:161) - HPYDGDCDR3 (SEQ ID NO:162) - YDGSRAMDY
DIVLTQSPLSLAVSLGQPAIISCKASQSVSFAGTSLMHWYHQKPGQQPRLLIYRASNLEAGVPDRFSGSGSKTDFTLTISPVEAEDAATYYCQQSREYPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:163)CDR1 (SEQ ID NO:164) - QSVSFAGTSLMHCDR2 (SEQ ID NO:165) - RASNLEACDR3 (SEQ ID NO:166) - QQSREYPYT
FR-альфа антитело(Патент США No. 8388972)
NVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCTTSGFTFGDYAMIWARQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYDFWSGMDVWGKGTTVTVSS(SEQ ID NO:167)CDR1 (SEQ ID NO:168) - GFTFGDYCDR2 (SEQ ID NO:169) - SSSSSYCDR3 (SEQ ID NO:170) - ERYDFWSGMDV
EIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSFLGINLIHWYQQKPGQPPKLLIYQASNKDTGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCLQSKNFPPYTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:171)CDR1 (SEQ ID NO:172) - ESVSFLGINLIHCDR2 (SEQ ID NO:173) - QASNKDTCDR3 (SEQ ID NO:174) - SKNFPPYT
[0130] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые могут связываться с FR-альфа, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 175.
SEQ ID NO:175
MAQRMTTQLLLLLVWVAVVGEAQTRIAWARTELLNVCMNAKHHKEKPGPEDKLHEQCRPWRKNACCSTNTSQEAHKDVSYLYRFNWNHCGEMAPACKRHFIQDTCLYECSPNLGPWIQQVDQSWRKERVLNVPLCKEDCEQWWEDCRTSYTCKSNWHKGWNWTSGFNKCAVGAACQPFHFYFPTPTVLCNEIWTHSYKVSNYSRGSGRCIQMWFDPAQGNPNEEVARFYAAAMSGAGPWAAWPFLLSLALMLLWLLS
[0131] Антигенсвязывающие сайты, которые связываются с PAPP-A, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 176.
SEQ ID NO:176
MRLWSWVLHLGLLSAALGCGLAERPRRARRDPRAGRPPRPAAGPATCATRAARGRRASPPPPPPPGGAWEAVRVPRRRQQREARGATEEPSPPSRALYFSGRGEQLRLRADLELPRDAFTLQVWLRAEGGQRSPAVITGLYDKCSYISRDRGWVVGIHTISDQDNKDPRYFFSLKTDRARQVTTINAHRSYLPGQWVYLAATYDGQFMKLYVNGAQVATSGEQVGGIFSPLTQKCKVLMLGGSALNHNYRGYIEHFSLWKVARTQREILSDMETHGAHTALPQLLLQENWDNVKHAWSPMKDGSSPKVEFSNAHGFLLDTSLEPPLCGQTLCDNTEVIASYNQLSSFRQPKVVRYRVVNLYEDDHKNPTVTREQVDFQHHQLAEAFKQYNISWELDVLEVSNSSLRRRLILANCDISKIGDENCDPECNHTLTGHDGGDCRHLRHPAFVKKQHNGVCDMDCNYERFNFDGGECCDPEITNVTQTCFDPDSPHRAYLDVNELKNILKLDGSTHLNIFFAKSSEEELAGVATWPWDKEALMHLGGIVLNPSFYGMPGHTHTMIHEIGHSLGLYHVFRGISEIQSCSDPCMETEPSFETGDLCNDTNPAPKHKSCGDPGPGNDTCGFHSFFNTPYNNFMSYADDDCTDSFTPNQVARMHCYLDLVYQGWQPSRKPAPVALAPQVLGHTTDSVTLEWFPPIDGHFFERELGSACHLCLEGRILVQYASNASSPMPCSPSGHWSPREAEGHPDVEQPCKSSVRTWSPNSAVNPHTVPPACPEPQGCYLELEFLYPLVPESLTIWVTFVSTDWDSSGAVNDIKLLAVSGKNISLGPQNVFCDVPLTIRLWDVGEEVYGIQIYTLDEHLEIDAAMLTSTADTPLCLQCKPLKYKVVRDPPLQMDVASILHLNRKFVDMDLNLGSVYQYWVITISGTEESEPSPAVTYIHGSGYCGDGIIQKDQGEQCDDMNKINGDGCSLFCRQEVSFNCIDEPSRCYFHDGDGVCEEFEQKTSIKDCGVYTPQGFLDQWASNASVSHQDQQCPGWVIIGQPAASQVCRTKVIDLSEGISQHAWYPCTISYPYSQLAQTTFWLRAYFSQPMVAAAVIVHLVTDGTYYGDQKQETISVQLLDTKDQSHDLGLHVLSCRNNPLIIPVVHDLSQPFYHSQAVRVSFSSPLVAISGVALRSFDNFDPVTLSSCQRGETYSPAEQSCVHFACEKTDCPELAVENASLNCSSSDRYHGAQCTVSCRTGYVLQIRRDDELIKSQTGPSVTVTCTEGKWNKQVACEPVDCSIPDHHQVYAASFSCPEGTTFGSQCSFQCRHPAQLKGNNSLLTCMEDGLWSFPEALCELMCLAPPPVPNADLQTARCRENKHKVGSFCKYKCKPGYHVPGSSRKSKKRAFKTQCTQDGSWQEGACVPVTCDPPPPKFHGLYQCTNGFQFNSECRIKCEDSDASQGLGSNVIHCRKDGTWNGSFHVCQEMQGQCSVPNELNSNLKLQCPDGYAIGSECATSCLDHNSESIILPMNVTVRDIPHWLNPTRVERVVCTAGLKWYPHPALIHCVKGCEPFMGDNYCDAINNRAFCNYDGGDCCTSTVKTKKVTPFPMSCDLQGDCACRDPQAQEHSRKDLRGYSHG
[0132] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и антигеном GPC3. В Таблице 5 перечислены некоторые иллюстративные пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с GPC3.
Таблица 5
Клоны
Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи
Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
GPC3 антитело(Публикация патента No. WO2004022739)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYEMHWVRQAPGQGLEWMGALDPKTGDTAYSQKFKGRVTLTADKSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCTRFYSYTYWGQGTLVTVSSA(SEQ ID NO:177)CDR1 (SEQ ID NO:178 - GYTFTDYCDR2 (SEQ ID NO:179) - DPKTGDCDR3 (SEQ ID NO:180) - FYSYTY
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVHSNRNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQNTHVPPTFGQGTKLEIKR(SEQ ID NO:181)CDR1(SEQ ID NO:182) - QSLVHSNRNTYLHCDR2 (SEQ ID NO:183) - KVSNRFSCDR3 (SEQ ID NO:184) - SQNTHVPPT
[0133] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые могут связываться с GPC3, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 185.
SEQ ID NO:185
MAGTVRTACLVVAMLLSLDFPGQAQPPPPPPDATCHQVRSFFQRLQPGLKWVPETPVPGSDLQVCLPKGPTCCSRKMEEKYQLTARLNMEQLLQSASMELKFLIIQNAAVFQEAFEIVVRHAKNYTNAMFKNNYPSLTPQAFEFVGEFFTDVSLYILGSDINVDDMVNELFDSLFPVIYTQLMNPGLPDSALDINECLRGARRDLKVFGNFPKLIMTQVSKSLQVTRIFLQALNLGIEVINTTDHLKFSKDCGRMLTRMWYCSYCQGLMMVKPCGGYCNVVMQGCMAGVVEIDKYWREYILSLEELVNGMYRIYDMENVLLGLFSTIHDSIQYVQKNAGKLTTTIGKLCAHSQQRQYRSAYYPEDLFIDKKVLKVAHVEHEETLSSRRRELIQKLKSFISFYSALPGYICSHSPVAENDTLCWNGQELVERYSQKAARNGMKNQFNLHELKMKGPEPVVSQIIDKLKHINQLLRTMSMPKGRVLDKNLDEEGFESGDCGDDEDECIGGSGDGMIKVKNQLRFLAELAYDLDVDDAPGNSQQATPKDNEISTFHNLGNVHSPLKLLTSMAISVVCFFFLVH
[0134] Внутри Fc-домена связывание CD16 опосредуется шарнирной областью и доменом CH2. Например, в человеческом IgG1 взаимодействие с CD16, главным образом, сосредоточено на аминокислотных остатках Asp 265 - Glu 269, Asn 297 - Thr 299, Ala 327 - Ile 332, Leu 234 - Ser 239 и углеводном остатке N-ацетил-D -глюкозамин в домене СН2 (см. Sondermann et al., Nature, 406 (6793): 267-273). На основе известных доменов мутации могут быть выбраны для усиления или уменьшения аффинности связывания с CD16, например, с использованием представленных на фаге библиотек или библиотек кДНК, представленных на поверхности дрожжей, или могут быть сконструированы на основе известной трехмерной структуры взаимодействия.
[0135] Сборка гетеродимерных тяжелых цепей антител может быть осуществлена путем экспрессии двух разных последовательностей тяжелых цепей антител в одной и той же клетке, что может привести к сборке гомодимеров каждой тяжелой цепи антитела, а также сборке гетеродимеров. Стимулирование преимущественной сборки гетеродимеров может быть достигнуто путем включения различных мутаций в домен СН3 каждой константной области тяжелой цепи антитела, как показано в US13/494870, US16/028850, US11/533709, US12/875015, US13/289934, US14/773418, US12/811207, US13/866756, US14/647480, US14/830336. Например, мутации могут быть сделаны в домене CH3 на основе человеческого IgG1 и включают различные пары аминокислотных замен в первом полипептиде и втором полипептиде, которые позволяют этим двум цепям селективно гетеродимеризоваться друг с другом. Положения аминокислотных замен, показанные ниже, пронумерованы в соответствии с индексом EU, как в Kabat.
[0136] В одном сценарии аминокислотная замена в первом полипептиде заменяет исходную аминокислоту более крупной аминокислотой, выбранной из аргинина (R), фенилаланина (F), тирозина (Y) или триптофана (W) и, по меньшей мере, одна аминокислотная замена во втором полипептиде заменяет исходную аминокислоту (аминокислоты) меньшей аминокислотой(аминокислотами), выбранной из аланина (A), серина (S), треонина (T) или валина (V), так что более крупная аминокислотная замена (выпуклость) вписывается в поверхность более мелких аминокислотных замен (полость). Например, один полипептид может включать замену T366W, а другой может включать три замены, включая T366S, L368A и Y407V.
[0137] Вариабельный домен тяжелой цепи антитела по изобретению необязательно может быть связан с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 90% идентичной константной области антитела, такой как константная область IgG, включая шарнирные домены, домены СН2 и СН3 с доменом СН1 или без него. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области человеческого антитела, такой как константная область человеческого IgG1, константная область IgG2, константная область IgG3 или константная область IgG4. В некоторых других вариантах осуществления аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области антитела другого млекопитающего, такого как кролик, собака, кошка, мышь или лошадь. Одна или более мутаций могут быть включены в константную область по сравнению с константной областью человеческого IgG1, например, в Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 и/или K439. Типичные замены включают, например, Q347E, Q347R, Y349S, Y349K, Y349T, Y349D, Y349E, Y349C, T350V, L351K, L351D, L351Y, S354C, E356K, E357Q, E357L, E357W, K360E, K360W, Q362E, S364K, S364E, S364H, S364D, T366V, T366I, T366L, T366M, T366K, T366W, T366S, L368E, L368A, L368D, K370S, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, T394W, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I , Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D, и K439E.
[0138] В некоторых вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в CH1 константной области человеческого IgG1, могут находиться в аминокислоте V125, F126, P127, T135, T139, A140, F170, P171 и/или V173. В некоторых вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в Cκ константной области человеческого IgG1, могут находиться в аминокислоте E123, F116, S176, V163, S174 и/или T164.
[0139] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в Таблице 6.
Таблица 6
Первый полипептид
Второй полипептид
Набор 1
S364E/F405A
Y349K/T394F
Набор 2
S364H/D401K
Y349T/T411E
Набор 3
S364H/T394F
Y349T/F405A
Набор 4
S364E/T394F
Y349K/F405A
Набор 5
S364E/T411E
Y349K/D401K
Набор 6
S364D/T394F
Y349K/F405A
Набор 7
S364H/F405A
Y349T/T394F
Набор 8
S364K/E357Q
L368D/K370S
Набор 9
L368D/K370S
S364K
Набор 10
L368E/K370S
S364K
Набор 11
K360E/Q362E
D401K
Набор 12
L368D/K370S
S364K/E357L
Набор 13
K370S
S364K/E357Q
Набор 14
F405L
K409R
Набор 15
K409R
F405L
[0140] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в Таблице 7.
Таблица 7
Первый полипептид
Второй полипептид
Набор 1
K409W
D399V/F405T
Набор 2
Y349S
E357W
Набор 3
K360E
Q347R
Набор 4
K360E/K409W
Q347R/D399V/F405T
Набор 5
Q347E/K360E/K409W
Q347R/D399V/F405T
Набор 6
Y349S/K409W
E357W/D399V/F405T
[0141] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующего набора замен, показанного в Таблице 8.
Таблица 8
Первый полипептид
Второй полипептид
Набор 1
T366K/L351K
L351D/L368E
Набор 2
T366K/L351K
L351D/Y349E
Набор 3
T366K/L351K
L351D/Y349D
Набор 4
T366K/L351K
L351D/Y349E/L368E
Набор 5
T366K/L351K
L351D/Y349D/L368E
Набор 6
E356K/D399K
K392D/K409D
[0142] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена в каждой полипептидной цепи может быть выбрана из Таблицы 9.
Таблица 9
Первый полипептид
Второй полипептид
L351Y, D399R, D399K, S400K, S400R, Y407A, Y407I, Y407V
T366V, T366I, T366L, T366M, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и T411E
[0143] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена может быть выбрана из следующего набора замен в Таблице 10, где положение(я), указанное в столбце «Первый полипептид», заменено любой известной отрицательно заряженной аминокислотой, и положение(я), указанное в столбце «Второй полипептид», заменено любой известной положительно заряженной аминокислотой.
Таблица 10
Первый полипептид
Второй полипептид
K392, K370, K409, или K439
D399, E356, или E357
[0144] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена может быть выбрана из следующего набора в Таблице 11, где положение(я), указанное в столбце «Первый полипептид», заменено любой известной положительно заряженной аминокислотой, и указанное положение(я), указанное в столбце «Второй полипептид», заменено любой известная отрицательно заряженной аминокислотой.
Таблица 11
Первый полипептид
Второй полипептид
D399, E356, или E357
K409, K439, K370, или K392
[0145] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующего набора в Таблице 12.
Таблица 12
Первый полипептид
Второй полипептид
T350V, L351Y, F405A, и Y407V
T350V, T366L, K392L, и T394W
[0146] Альтернативно или дополнительно, структурная стабильность гетеромультимерного белка может быть повышена путем введения S354C либо на первой, либо на второй полипептидной цепи, и Y349C на противоположной полипептидной цепи, которая образует искусственный дисульфидный мостик внутри интерфейса двух полипептидов.
[0147] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в положении T366, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, L368 и Y407.
[0148] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, L368 и Y407, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в положении T366.
[0149] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, E357 , S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411.
[0150] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411.
[0151] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411.
[0152] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407.
[0153] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, Y349, K360 и K409, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405.
[0154] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, K360, Q347 и K409.
[0155] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из D356, E357 и D399.
[0156] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из D356, E357 и D399, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439.
[0157] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409.
[0158] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399.
[0159] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой S354C, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой Y349C.
[0160] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой Y349C, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой S354C.
[0161] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами K360E и K409W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами O347R, D399V и F405T.
[0162] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами O347R, D399V и F405T, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами K360E и K409W.
[0163] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой T366W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T366S, T368A и Y407V.
[0164] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T366S, T368A и Y407V, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой T366W.
[0165] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, L351Y, F405A и Y407V, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, T366L, K392L и T394W.
[0166] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, T366L, K392L и T394W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, L351Y, F405A и Y407V.
[0167] Полиспецифические белки, описанные выше, могут быть получены с использованием технологии рекомбинантных ДНК, хорошо известных специалисту в данной области. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая первую тяжелую цепь иммуноглобулина, может быть клонирована в первый экспрессирующий вектор; вторая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вторую тяжелую цепь иммуноглобулина, может быть клонирована во второй экспрессирующий вектор; третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь иммуноглобулина, можно клонировать в третий экспрессирующий вектор; и первый, второй и третий экспрессирующие векторы могут стабильно трансфецироваться вместе в клетки-хозяева для продуцирования мультимерных белков.
[0168] Для достижения наибольшего выхода полиспецифического белка можно изучить различные соотношения первого, второго и третьего экспрессирующего вектора, чтобы определить оптимальное соотношение для трансфекции в клетки-хозяева. После трансфекции отдельные клоны могут быть выделены для генерации банка клеток с использованием методов, известных в данной области, таких как лимитированное разведение, ИФА, FACS, микроскопия или Clonepix.
[0169] Клоны можно культивировать в условиях, подходящих для масштабирования для биореактора и поддержания экспрессии полиспецифического белка. Полиспецифические белки могут быть выделены и очищены с использованием методов, известных в данной области, включая центрифугирование, глубинную фильтрацию, лизис клеток, гомогенизацию, замораживание-оттаивание, аффинную очистку, гель-фильтрацию, ионообменную хроматографию, обменную хроматографию гидрофобного взаимодействия и смешанный режим хроматографии.
II. Характеристика полиспецифических белков
[0170] Полиспецифические белки, описанные в настоящем документе, включают в себя NKG2D-связывающий сайт и CD16-связывающий сайт и опухолеспецифический антиген, выбранный из 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3. В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки связываются одновременно с клетками, экспрессирующими NKG2D и/или CD16, такими как NK-клетки, и опухолевыми клетками, экспрессирующими любой из вышеуказанных антигенов. Связывание полиспецифических белков с NK-клетками может повышать активность NK-клеток в отношении разрушения опухолевых клеток.
[0171] В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки связываются с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3 с аффинностью как у соответствующего моноклонального антитела. В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки более эффективны в уничтожении опухолевых клеток, экспрессирующих антигены, чем соответствующие родительские моноклональные антитела.
[0172] В некоторых вариантах осуществления описанные в настоящем документе полиспецифические белки, которые включают в себя NKG2D-связывающий сайт и связывающий сайт для опухолеспецифического антигена, выбранного из 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3, активировать первичные NK-клетки человека при совместном культивировании с клетками, экспрессирующими 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3, соответственно. Активация NK-клеток отмечена увеличением дегрануляции CD107a и продуцированием цитокинов IFNγ. Кроме того, по сравнению с соответствующим родительским моноклональным антителом, полиспецифические белки могут демонстрировать превосходную активацию человеческих NK-клеток в присутствии клеток, экспрессирующих 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3.
[0173] В некоторых вариантах осуществления описанные в настоящем документе полиспецифические белки, которые включают в себя NKG2D-связывающий сайт и связывающий сайт для опухолеспецифического антигена, выбранного из 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3, усиливают цитотоксическую активность покоящихся и IL-2-активированных NK-клеток человека при совместном культивировании с клетками, экспрессирующими 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3, соответственно.
[0174] В некоторых вариантах осуществления по сравнению с соответствующим родительским моноклональным антителом, которое связывается с 5Т4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A или GPC3, полиспецифичные белки обладают преимуществом в опосредовании цитотоксичности NK-клеток в отношении опухолевых клеток, которые экспрессируют 5T4, GPNMB, FR-альфа, PAPP-A и GPC3, на умеренном и низком уровне, соответственно.
III. Терапевтические применения
[0175] Изобретение относится к способам лечения злокачественного новообразования с использованием полиспецифического связывающего белка, описанного в настоящем документе, и/или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. Способы могут быть использованы для лечения различных видов злокачественных новообразований, клетки которых экспрессируют 5T4, GPNMB, FR-alpha, PAPP-A и GPC3. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью GPNMB-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть меланома, рак молочной железы, в том числе трижды негативный рак молочной железы, остеосаркома, глиома, орлиобластома. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью FR-альфа-нацеленных полиспецифических связывающих белков могут быть злокачественная меланома, рак предстательной железы, хронический лимфобластный лейкоз, гематологические злокачественные новообразования, рак яичников, трижды негативный рак молочной железы, немелкоклеточный рак легкого или колоректальный рак. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью PAPP-A-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть рак яичников, рак молочной железы, в том числе трижды негативный рак молочной железы, аденокарцинома легкого, опухоли эпителиального происхождения. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью GPC3-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, опухоль Вильмса, опухоль желточного мешка, светлоклеточная карцинома яичника, рак желудка, рак пищевода.
[0176] В некоторых других вариантах осуществления злокачественное новообразование, подлежащее лечению, включает рак мозга, ректальный рак, и рак матки. Еще в других вариантах осуществления злокачественное новообразование представляет собой плоскоклеточную карциному, аденокарциному, мелкоклеточную карциному, меланому, нейробластому, саркому (например, ангиосаркому или хондросаркому), рак гортани, рак околоушной железы, рак желчных путей, рак щитовидной железы, акрально-лентигинозную меланому, актинический кератоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, аденоидно-кистозную карциному, аденому, аденосаркому, железисто-плоскоклеточную карциному, рак анального канала, анальный рак, ректальный рак, астроцитарную опухоль, карциному бартолиновой железы, базальноклеточную карциному, рак печени, рак костей, рак костного мозга, рак бронхов, карциному бронхиальной железы, карциноид, холангиокарциному, хондосаркому, хориодпапиллому/карциному, хронический лимфолейкоз, хронический миелоидный лейкоз, светлоклеточную карциному, рак соединительной ткани, цистаденому, рак пищеварительной системы, рак двенадцатиперстной кишки, рак эндокринной системы, опухоль эндодермальной пазухи, гиперплазию эндометрия, стромальную саркому эндометрия, эндометриоидную аденокарциному, эндотелиальный рак, эпендимальный рак, эпителиально-клеточный рак, саркому Юинга, рак глаз и глазной орбиты, рак женских половых органов, фокальную нодулярную гиперплазию, рак желчного пузыря, рак полости желудка, рак дна желудка, гастриному, глиобластому, глюкагоному, рак сердца, гемангибластомы, гемангиоэндотелиому, гемангиомы, печеночную аденому, печеночный аденоматоз, гепатобилиарный рак, гепатоцеллюлярную карциному, болезнь Ходжкина, рак подвздошной кишки, инсулиному, интраэпителиальную неоплазию, интраэпителиальную плоскоклеточную неоплазию, рак внутрипеченочных желчных протоков, инвазивную плоскоклеточную карциному, рак тонкой кишки, рак соединительной ткани, саркому Капоши, рак малого таза, крупноклеточный рак, рак толстой кишки, лейомиосаркому, лентиго-меланому, лимфому, рак мужских половых органов, злокачественную меланому, злокачественные мезотелиальные опухоли, медуллобластому, медуллоэпителиому, менингеальный рак, мезотелиальный рак, метастатический рак, рак полости рта, мукоэпидермоидную карциному, множественную миелому, рак мышц, рак носового канала, рак нервной системы, нейроэпителиальную аденокарциному, нодулярную меланому, неэпителиальный рак кожи, неходжкинскую лимфому, овсяно-клеточный рак, олигодендроглиальный рак, рак полости рта, остеосаркому, папиллярную серозную аденокарциному, опухоли гипофиза, плазмоцитому, псевдосаркому, легочную бластому, рак прямой кишки, почечно-клеточный рак, рак дыхательной системы, ретинобластому, рабдомиосаркому, саркому, серозную карциному, рак пазухи, рак кожи, мелкоклеточный рак, рак тонкого кишечника, рак мягких тканей, соматостатин-секретирующую опухоль, рак позвоночника, плоскоклеточную карциному, рак поперечно-полосатых мышц, субмезотелиальный рак, меланому поверхностного распространения, Т-клеточный лейкоз, рак языка, недифференцированный рак, рак мочеточника, рак мочеиспускательного канала, рак мочевого пузыря, рак мочеполовой системы, рак шейки матки, рак тела матки, увеальную меланому, рак влагалища, бородавчатый рак, Випому, рак вульвы, хорошо дифференцированную карциному или опухоль Вильмса.
[0177] В некоторых других вариантах осуществления злокачественное новообразование, подлежащее лечению, представляет собой неходжкинскую лимфому, такую как В-клеточная лимфома или Т-клеточная лимфома. В некоторых вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой В-клеточную лимфому, такую как диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, первичная средостенная В-клеточная лимфома, фолликулярная лимфома, малкоклеточная лимфоцитарная лимфома, лимфома мантийных клеток, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, B-клеточная лимфома экстранодальной маргинальной зоны, B-клеточная лимфома узловой маргинальной зоны, B-клеточная лимфома маргинальной зоны селезенки, лимфома Беркитта, лимфоплазмоцитарная лимфома, волосатоклеточный лейкоз или лимфома первичной центральной нервной системы (ЦНС). В некоторых других вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой Т-клеточную лимфому, такую как лимфобластная лимфома предшественников Т-клеток, периферическая Т-клеточная лимфома, кожная Т-клеточная лимфома, ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома, экстранодальная лимфома клеток-натуральных киллеров/Т-клеток, узловая Т-клеточная лимфома, кожная Т-клеточная лимфома, Т-клеточная лимфома энтеропатического типа, Т-клеточная лимфома типа подкожного панникулита, анапластическая крупноклеточная лимфома или узловая Т-клеточная лимфома.
IV. Комбинированная терапия
[0178] Еще один аспект изобретения предусматривает комбинированную терапию. Полиспецифический связывающий белок, описанный в настоящем документе, может использоваться в комбинации с дополнительными терапевтическими агентами для лечения злокачественного новообразования.
[0179] Типичные терапевтические агенты, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, включают, например, облучение, митомицин, третиноин, рибомустин, гемцитабин, винкристин, этопозид, кладрибин, митобронит, метотрексат, доксорубицин, карбоквон, пентостатин, нитракрин, зиностатин, цетрореликс, летрозол, ралтитрексед, даунорубицин, фадрозол, фотемустин, тималфазин, собузоксан, недаплатин, цитарабин, бикалутамид, винорелбина, веснаринон, аминоглютетимид, амсакрин, проглумид, эллиптиния ацетат, кетансерин, доксифлуридин, этретинат, изотретиноин, стрептозоцин, нимустин, виндезины, флутамид, дрогенил, бутоцин, кармофур, разоксан, сизофилан, карбоплатин, митолактол, тегафур, ифосфамид, преднимустин, пицибанил, левамизол, тенипозид, импросульфан, эноцитабин, лизурид, оксимететолон, тамоксифен, прогестерон, мепитиостан, эпитиостанол, форместан, интерферон альфа, интерферон-2 альфа, интерферон-бета, интерферон-гамма, колониестимулирующий фактор-1, колониестимулирующий фактор-2, денилейкин дифитокс, интерлейкин-2, фактор высвобождения лютеинизирующего гормона и вариации вышеупомянутых агентов, которые могут проявлять дифференциальное связывание с их родственным рецептором, а также увеличивать или уменьшать период полужизни в сыворотке.
[0180] Дополнительный класс агентов, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, относится к ингибиторам иммунной контрольной точки. Типичные ингибиторы иммунной контрольной точки включают агенты, которые ингибируют один или более из (i) антигена 4 (CTLA-4), ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами, (ii) белка 1 программированной клеточной смерти (PD1), (iii) PDL1, (iv) LAG-3, (v) B7-H3, (vi) B7-H4 и (vii) TIM3. Ингибитор CTLA4 ипилимумаб был одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США для лечения меланомы.
[0181] Другие агенты, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, представляют собой агенты моноклональных антител, которые нацелены на мишени, отличные от контрольных точек (например, герцептин), и нецитотоксические агенты (например, ингибиторы тирозинкиназы).
[0182] Другие категории противоопухолевых агентов включают, например: (i) ингибитор, выбранный из ингибитора ALK, ингибитора ATR, антагониста A2A, ингибитора репарации исключения оснований, ингибитора Bcr-Abl тирозинкиназы, ингибитора тирозинкиназы Брутона, ингибитора CDC7, ингибитора CHK1, ингибитора циклин-зависимой киназы, ингибитора DNA-PK, ингибитора как DNA-PK, так и mTOR, ингибитора DNMT1, ингибитора DNMT1 плюс 2-хлор-дезоксиаденозин, ингибитора HDAC , ингибитора сигнального пути Hedgehog, ингибитора IDO, ингибитора JAK, ингибитора mTOR, ингибитора MEK, ингибитора MELK, ингибитора MTH1, ингибитора PARP, ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, ингибитора обоих PARP1 и DHODH, протеосомного ингибитора, ингибитора топоизомеразы-II, ингибитора тирозинкиназы, ингибитора VEGFR и ингибитора WEE1; (ii) агонист OX40, CD137, CD40, GITR, CD27, HVEM, TNFRSF25 или ICOS; и (iii) цитокин, выбранный из IL-12, IL-15, GM-CSF и G-CSF.
[0183] Белки по изобретению также можно использовать в качестве дополнения к хирургическому удалению первичного поражения.
[0184] Количество полиспецифического связывающего белка и дополнительного терапевтического агента и относительные сроки введения могут быть выбраны для достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта. Например, при назначении комбинированной терапии пациенту, нуждающемуся в таком введении, терапевтические агенты в комбинации или фармацевтическую композицию или композиции, содержащие терапевтические агенты, можно вводить в любом порядке, таком как, например, последовательно, одновременно, вместе, одновременно и тому подобное. Кроме того, например, полиспецифический связывающий белок может быть введен в течение времени, когда дополнительный терапевтический агент(ы) оказывает свое профилактическое или терапевтическое действие, или наоборот.
V. Фармацевтические композиции
[0185] Настоящее раскрытие также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат терапевтически эффективное количество белка, описанного в настоящем документе. Композиция может быть приготовлена для использования в различных системах доставки лекарственных средств. Одно или более физиологически приемлемых вспомогательных веществ или носителей также могут быть включены в композицию для подходящего состава. Подходящие составы для использования в настоящем раскрытии есть в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed., 1985. Для краткого обзора способов доставки лекарственных средств см., например, Langer (Science 249: 1527-1533, 1990).
[0186] Композиция для внутривенной доставки лекарственного средства по настоящему изобретению может содержаться в пакете, ручке или шприце. В некоторых вариантах осуществления пакет может быть соединен с каналом, содержащим трубку и/или иглу. В определенных вариантах осуществления состав может представлять собой лиофилизированный состав или жидкий состав. В определенных вариантах осуществления состав может быть заморожен-высушен (лиофилизирован) и может содержаться примерно в 12-60 флаконах. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть лиофилизирована, и 45 мг лиофилизированной композиции может содержаться в одном флаконе. В некоторых вариантах осуществления примерно 40-100 мг лиофилизированной композиции может содержаться в одном флаконе. В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный состав из 12, 27 или 45 флаконов объединяют для получения терапевтической дозы белка в составе внутривенного лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно от 250 мг/флакон примерно до 1000 мг/флакон. В определенных вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно 600 мг/флакон. В некоторых вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно 250 мг/флакон.
[0187] Белки настоящего раскрытия может существовать в жидкой водной фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество белка в буферном растворе с образованием композиции.
[0188] Эти композиции могут быть стерилизованы обычными методами стерилизации или могут быть стерильно отфильтрованы. Полученные водные растворы могут быть упакованы для использования как есть или лиофилизированы, причем лиофилизированный препарат объединяют со стерильным водным носителем перед введением. РН препаратов обычно составляет от 3 до 11, более предпочтительно от 5 до 9 или от 6 до 8, и наиболее предпочтительно от 7 до 8, например от 7 до 7,5. Полученные композиции в твердой форме могут быть упакованы в виде нескольких однодозовых единиц, каждая из которых содержит фиксированное количество вышеупомянутого агента или агентов. Композиция в твердой форме также может быть упакована в контейнер для гибкого количества.
[0189] В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к составу с увеличенным сроком хранения, включающему белок по настоящему изобретению, в сочетании с маннитом, моногидратом лимонной кислоты, цитратом натрия, дигидратом динатрийфосфата, дигидратом дигидрофосфата натрия, хлоридом натрия, полисорбатом 80, вода и гидроксидом натрия.
[0190] В некоторых вариантах осуществления готовят водный состав, включающий белок по настоящему изобретению в рН-буферном растворе. Буфер данного изобретения может иметь рН в диапазоне примерно от 4 примерно до 8, например, примерно от 4,5 примерно до 6 или примерно от 4,8 примерно до 5,5, или может иметь рН примерно от 5 примерно до 5,2. Диапазоны, промежуточные по отношению к указанным выше значениям pH, также должны быть частью этого раскрытия. Например, диапазоны значений, использующие комбинацию любого из приведенных выше значений в качестве верхнего и/или нижнего пределов, предназначены для включения. Примеры буферов, которые будут контролировать рН в этом диапазоне, включают ацетатные (например, ацетат натрия), сукцинатные (такие как сукцинат натрия), глюконатные, гистидиновые, цитратные и другие буферы органических кислот.
[0191] В определенных вариантах осуществления композиция включает буферную систему, которая содержит цитрат и фосфат для поддержания рН в диапазоне примерно от 4 примерно до 8. В некоторых вариантах осуществления диапазон рН может составлять примерно от 4,5 примерно до 6, или примерно от рН 4,8 примерно до 5,5, или в диапазоне рН примерно от 5 примерно до 5,2. В некоторых вариантах осуществления буферная система включает моногидрат лимонной кислоты, цитрат натрия, дигидрат динатрийфосфата и/или дигидрат дигидрофосфата натрия. В некоторых вариантах осуществления буферная система включает в себя примерно 1,3 мг/мл лимонной кислоты (например, 1,305 мг/мл), примерно 0,3 мг/мл цитрата натрия (например, 0,305 мг/мл), примерно 1,5 мг/мл динатрийфосфата. дигидрат (например, 1,53 мг/мл), примерно 0,9 мг/мл дигидрата дигидрофосфата натрия (например, 0,86) и примерно 6,2 мг/мл хлорида натрия (например, 6,165 мг/мл). В некоторых вариантах осуществления буферная система включает от 1 до 1,5 мг/мл лимонной кислоты, от 0,25 до 0,5 мг/мл цитрата натрия, от 1,25 до 1,75 мг/мл дигидрата динатрийфосфата, от 0,7 до 1,1 мг/мл дигидрата дигидрофосфата натрия, и от 6 до 6,4 мг/мл хлорида натрия. В некоторых вариантах осуществления pH композиции доводят с помощью гидроксида натрия.
[0192] Полиол, который действует как тонизирующий агент и может стабилизировать антитело, также может быть включен в состав. Полиол добавляют к составу в количестве, которое может варьироваться в зависимости от желаемой изотоничности состава. В некоторых вариантах осуществления водная композиция может быть изотонической. Количество добавляемого полиола также может быть изменено по отношению к молекулярной массе полиола. Например, может быть добавлено меньшее количество моносахарида (например, маннита) по сравнению с дисахаридом (таким как трегалоза). В некоторых вариантах осуществления полиол, который может быть использован в составе в качестве средства для повышения тоничности, представляет собой маннит. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно от 5 примерно до 20 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно 7,5-15 мг/мл. В некоторых вариантах концентрация маннита может составлять примерно 10-14 мг/мл. В определенных вариантах концентрация маннита может составлять примерно 12 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления полиол сорбит может быть включен в состав.
[0193] Детергент или поверхностно-активное вещество также могут быть добавлены в состав. Типичные детергенты включают неионогенные детергенты, такие как полисорбаты (например, полисорбаты 20, 80 и т. д.) или полоксамеры (например, полоксамер 188). Количество добавляемого детергента таково, что оно уменьшает агрегацию антитела в составе и/или сводит к минимуму образование частиц в составе, и/или уменьшает адсорбцию. В определенных вариантах осуществления состав может включать поверхностно-активное вещество, которое представляет собой полисорбат. В некоторых вариантах осуществления композиция может содержать детергент полисорбат 80 или Tween 80. Tween 80 - это термин, используемый для описания полиоксиэтилен (20) сорбитанмоноолеата (см. Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th ed., 1996). В некоторых вариантах осуществления композиция может содержать примерно от 0,1 примерно до 10 мг/мл полисорбата 80 или примерно от 0,5 примерно до 5 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления в композицию можно добавлять примерно 0,1% полисорбата 80.
[0194] В некоторых вариантах осуществления белковый продукт по настоящему изобретению приготовлен в виде жидкой композиции. Жидкий состав может быть представлен в концентрации 10 мг/мл во флаконе любого типа USP/Ph Eur типа I 50R, закрытом резиновой пробкой и запечатанном с использованием алюминиевого обжимного уплотнения. Пробка может быть изготовлена из эластомера, соответствующего USP и Ph Eur. В некоторых вариантах осуществления флаконы могут быть заполнены 61,2 мл раствора белкового продукта, чтобы обеспечить экстрагируемый объем 60 мл. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция может быть разбавлена 0,9% солевым раствором.
[0195] В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция белков по изобретению может быть приготовлена в виде раствора с концентрацией 10 мг/мл в комбинации с сахаром на стабилизирующем уровне. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция может быть приготовлена в водном носителе. В некоторых вариантах осуществления стабилизатор может быть добавлен в количестве, не превышающем того, которое может привести к вязкости, нежелательной или непригодной для внутривенного введения. В некоторых вариантах осуществления сахар может представлять собой дисахариды, например сахарозу. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция также может включать один или более из буферного агента, поверхностно-активного вещества и консерванта.
[0196] В некоторых вариантах осуществления pH жидкого состава может быть установлено путем добавления фармацевтически приемлемой кислоты и/или основания. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может представлять собой соляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления основание может представлять собой гидроксид натрия.
3
[0197] В дополнение к агрегации, дезамидирование является распространенным вариантом продукта пептидов и белков, который может возникать во время ферментации, сбора/осветления клеток, очистки, хранения лекарственного вещества/лекарственного продукта и во время анализа образца. Дезамидирование представляет собой потерю NH из белка с образованием промежуточного сукцинимида, который может подвергаться гидролизу. Промежуточный сукцинимид приводит к снижению массы исходного пептида на 17 дальтон. Последующий гидролиз приводит к увеличению массы на 18 дальтон. Выделение промежуточного сукцинимида затруднено из-за нестабильности в водных условиях. По существу, дезамидирование обычно определяется как увеличение массы на 1 дальтон. Дезамидирование аспарагина приводит к получению аспарагиновой или изоаспарагиновой кислоты. Параметры, влияющие на скорость дезамидирования, включают pH, температуру, диэлектрическую постоянную растворителя, ионную силу, первичную последовательность, локальную конформацию полипептида и третичную структуру. Аминокислотные остатки, соседствующие с Asn в пептидной цепи, влияют на скорости дезамидирования. Gly и Ser, следующие за Asn в белковых последовательностях, приводят к более высокой чувствительности к дезамидированию.
[0198] В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция белков по настоящему изобретению может быть сохранена в условиях pH и влажности для предотвращения дезаминирования белкового продукта.
[0199] Представляющий интерес водный носитель в настоящем описании является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции. Иллюстративные носители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.
[0200] Консервант необязательно может быть добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.
[0201] Внутривенные (IV) составы могут быть предпочтительным путем введения в конкретных случаях, например, когда пациент находится в больнице после трансплантации, получая все лекарственные средства посредством IV пути. В некоторых вариантах осуществления жидкую композицию разбавляют 0,9% раствором хлорида натрия перед введением. В некоторых вариантах осуществления разбавленный лекарственный продукт для инъекций является изотоническим и пригодным для введения путем внутривенной инфузии.
[0202] В некоторых вариантах осуществления соли или буферные компоненты могут быть добавлены в количестве 10-200 мМ. Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различных известных кислот (неорганических и органических) с металлами или аминами, образующими основание. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой фосфатный буфер. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой глицинатный, карбонатный, цитратный буферы, и в этом случае ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.
[0203] Консервант может быть необязательно добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.
[0204] Представляющий интерес водный носитель в настоящем описании является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции. Иллюстративные носители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.
[0205] Белки по настоящему раскрытию могут существовать в лиофилизированной композиции, включающей белки и лиопротектор. Лиопротектором может быть сахар, например дисахариды. В некоторых вариантах осуществления ликопротектор может представлять собой сахарозу или мальтозу. Лиофилизированный состав может также включать один или более из буферного агента, поверхностно-активного вещества, наполнителя и/или консерванта.
[0206] Количество сахарозы или мальтозы, полезное для стабилизации лиофилизированного лекарственного продукта, может быть в массовом соотношении по меньшей мере 1:2 белка к сахарозе или мальтозе. В некоторых вариантах осуществления массовое соотношение белок/сахароза или мальтоза может составлять от 1:2 до 1:5.
[0207] В некоторых вариантах осуществления pH композиции перед лиофилизацией может быть установлено путем добавления фармацевтически приемлемой кислоты и/или основания. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может представлять собой соляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемым основанием может быть гидроксид натрия.
[0208] Перед лиофилизацией pH раствора, содержащего белок по настоящему изобретению, можно доводить в диапазоне от 6 до 8. В некоторых вариантах осуществления диапазон pH для лиофилизированного лекарственного продукта может составлять от 7 до 8.
[0209] В некоторых вариантах осуществления соли или буферные компоненты могут быть добавлены в количестве 10-200 мМ. Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различных известных кислот (неорганических и органических) с металлами или аминами, образующими основание. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой фосфатный буфер. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой глицинатный, карбонатный, цитратный буферы, и в этом случае ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.
[0210] В некоторых вариантах осуществления может быть добавлен «наполнитель». «Наполнитель» представляет собой соединение, которое добавляет массу к лиофилизированной смеси и способствует физической структуре лиофилизированной таблетки (например, облегчает производство по существу однородной лиофилизированной таблетки, которая поддерживает структуру с открытыми порами). Иллюстративные наполнители включают маннит, глицин, полиэтиленгликоль и сорбит. Лиофилизированные составы по настоящему изобретению могут содержать такие наполнители.
[0211] Консервант может быть необязательно добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.
[0212] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт может состоять из водного носителя. Представляющий интерес водный носитель настоящего описания является фармацевтически приемлемым (например, безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции после лиофилизации. Иллюстративные разбавители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.
[0213] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт по настоящему изобретению восстанавливается либо стерильной водой для инъекций, USP (SWFI), либо 0,9% инъекцией хлорида натрия, USP. Во время восстановления лиофилизированный порошок растворяется в растворе.
[0214] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный белковый продукт по настоящему изобретению состоит из примерно 4,5 мл воды для инъекций и разбавляется 0,9% солевым раствором (раствор хлорида натрия).
[0215] Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях могут варьироваться так, чтобы получить количество активного ингредиента, которое эффективно для достижения искомого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и режима введения, без токсичности для пациента.
[0216] Конкретная доза может представлять собой унифицированную дозу для каждого пациента, например, 50-5000 мг белка. Альтернативно, доза для пациента может быть адаптирована к приблизительной массе тела или площади поверхности пациента. Другие факторы в определении подходящей дозировки могут включать заболевание или состояние, которое подлежит лечению или предотвращению, тяжесть заболевания, способ введения, а также возраст, пол и состояние здоровья пациента. Специалисты в данной области обычно проводят дальнейшее уточнение расчетов, необходимых для определения подходящей дозировки для лечения, особенно в свете информации о дозировке и анализах, раскрытых в настоящем документе. Дозировка также может быть определена путем использования известных анализов для определения доз, используемых в сочетании с соответствующими данными доза-ответ. Дозировка индивидуального пациента может быть скорректирована по мере наблюдения за развитием заболевания. Уровни в крови нацеливающей конструкции или комплекса у пациента могут быть измерены, чтобы увидеть, нужно ли корректировать дозировку для достижения или поддержания эффективной концентрации. Фармакогеномика может быть использована для определения того, какие нацеливающие конструкции и/или комплексы и их дозы наиболее вероятно будут эффективны для данного индивидуума (Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimer et al. Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001).
[0217] Как правило, дозы на основе массы тела, составляют примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мг на кг массы тела, например, примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 1 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 0,1 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 1 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 10 мг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 10 мг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 50 мг примерно до 100 мг/кг массы тела.
[0218] Дозы могут вводиться один или более раз в день, еженедельно, ежемесячно или ежегодно, или даже один раз каждые 2-20 лет. Специалисты в данной области техники могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основании измеренного времени удерживания и концентраций нацеливающей конструкции или комплекса в жидкостях или тканях организма. Введение по настоящему изобретению может быть внутривенным, внутриартериальным, внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным, внутриплевральным, интратекальным, внутриполостным, путем перфузии через катетер или путем прямой внутриклеточной инъекции. Это может осуществляться один или более раз в день, один или более раз в неделю, один или более раз в месяц и один или более раз в год.
[0219] Вышеприведенное описание описывает множество аспектов и вариантов осуществления изобретения. В заявке на патент конкретно рассматриваются все комбинации и перестановки аспектов и вариантов осуществления.
ПРИМЕРЫ
[0220] Настоящее изобретение теперь в целом описано, оно будет более понятно с помощью ссылок на следующие примеры, которые включены только в целях иллюстрации некоторых аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения и не предназначены для ограничения изобретения каким-либо образом.
Пример 1 - NKG2D-связывающие домены связываются с NKG2D
NKG2D-связывающие домены связываются с очищенным рекомбинантным NKG2D
[0221] Последовательности нуклеиновых кислот эктодоменов NKG2D человека, мыши или яванской макаки были слиты с последовательностями нуклеиновых кислот, кодирующими Fc-домены IgG1 человека, и введены в клетки млекопитающих для экспрессии. После очистки слитые белки NKG2D-Fc были адсорбированы в лунках микропланшетов. После блокирования лунок бычьим сывороточным альбумином для предотвращения неспецифического связывания, NKG2D-связывающие домены титровали и добавляли в лунки, на которые предварительно адсорбировали слитые белки NKG2D-Fc. Связывание первичного антитела определяли с использованием вторичного антитела, которое конъюгировано с пероксидазой хрена и специфически распознает легкую цепь каппа человека, чтобы избежать перекрестной реактивности Fc. 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (TMB), субстрат для пероксидазы хрена, добавляли в лунки для визуализации сигнала связывания, поглощение которого измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. Клон NKG2D-связывающего домена, контроль изотипа или положительный контроль (включая вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104 или антимышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные в eBioscience) добавляли в каждую лунку.
[0222] Контроль изотипа показал минимальное связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc, в то время как положительный контроль наиболее сильно связывался с рекомбинантными антигенами. NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, демонстрировали связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc человека, мыши и яванской макаки, хотя с разными аффинностями от клона к клону. Как правило, каждый анти-NKG2D-клон связывается с рекомбинантным NKG2D-Fc человека (ФИГ. 3) и яванской макаки (ФИГ. 4) с аналогичной аффинностью, но с более низкой аффинностью к рекомбинантному NKG2D-Fc мыши (ФИГ. 5).
NKG2D-связывающие домены связываются с клетками, экспрессирующими NKG2D
[0223] Клеточные линии мышиной лимфомы EL4 были сконструированы для экспрессии химерного антигенного рецептора NKG2D и сигнального домена CD3-дзета человека или мыши. NKG2D-связывающий клон, изотипический контроль или положительный контроль использовали в концентрации 100 нМ для окрашивания внеклеточного NKG2D, экспрессированного на клетках EL4. Связывание антител определяли с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии и рассчитывали превышение относительно фона (fold-over-background) (FOB) с использованием средней интенсивности флуоресценции (MFI) NKG2D-экспрессирующих клеток по сравнению с родительскими клетками EL4.
[0224] NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, связывались с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D человека и мыши. Антитела положительного контроля (включая вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104 или анти-мышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные на eBioscience) давали лучший сигнал связывания FOB. Аффинность связывания NKG2D для каждого клона была сходной между клетками, экспрессирующими NKG2D человека (ФИГ. 6) и мыши (ФИГ. 7).
Пример 2 - NKG2D-связывающие домены блокируют связывание природного лиганда с NKG2D
Конкуренция с ULBP-6
[0225] Рекомбинантные белки NKG2D-Fc человека адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для снижения неспецифического связывания. Насыщенную концентрацию ULBP-6-His-биотин добавляли в лунки с последующим добавлением клонов NKG2D-связывающего домена. После 2-часовой инкубации лунки промывали и ULBP-6-His-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми NKG2D-Fc, детектировали стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена и субстратом TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту ULBP-6-His-биотина, который блокировался от связывания с белками NKG2D-Fc в лунках. Антитело положительного контроля (включая вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание ULBP-6 с NKG2D, в то время как изотипический контроль показал небольшую конкуренцию с ULBP-6 (ФИГ. 8).
Последовательность ULBP-6 представлена SEQ ID NO: 108
MAAAAIPALLLCLPLLFLLFGWSRARRDDPHSLCYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTMAWKAQNPVLREVVDILTEQLLDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSIDGQTFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKDVAMSFHYISMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAPLAMSSGTTQLRATATTLILCCLLIILPCFILPGI (SEQ ID NO:108)
Конкуренция с MICA
[0226] Рекомбинантные белки MICA-Fc человека адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для уменьшения неспецифического связывания. NKG2D-Fc-биотин добавляли в лунки, за которыми следовало добавление NKG2D-связывающих доменов. После инкубации и промывания NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми MICA-Fc, детектировали с использованием субстрата стрептавидин-HRP и TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту NKG2D-Fc-биотина, который блокировался от связывания с MICA-Fc в лунках. Антитело позитивного контроля (включая вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание MICA с NKG2D, в то время как изотипический контроль показал небольшую конкуренцию с MICA (ФИГ. 9).
Конкуренция с Rae-1 дельта
[0227] Рекомбинантный мышиный Rae-1delta-Fc (приобретенный у R & D Systems) адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для снижения неспецифического связывания. Мышиный NKG2D-Fc-биотин добавляли в лунки с последующим добавлением NKG2D-связывающих доменов. После инкубации и промывания NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми Rae-1delta-Fc, детектировали с использованием субстрата стрептавидин-HRP и TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту NKG2D-Fc-биотина, который блокировался от связывания с лунками, покрытыми Rae-1delta-Fc. Положительный контроль (включая вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 47-50 или анти-мышиных клонов NKG2D MI-6 и CX-5, доступных на eBioscience) и различные клоны NKG2D-связывающего домена блокировали связывание Rae-1-дельта с мышиным NKG2D, в то время как антитело изотипического контроля демонстрировало небольшую конкуренцию с Rae-1delta (ФИГ. 10).
Пример 3 - клоны NKG2D-связывающего домена активируют NKG2D
[0228] Последовательности нуклеиновой кислоты NKG2D человека и мыши были слиты с последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующими сигнальный домен CD3 дзета, с получением конструкций химерного антигенного рецептора (CAR). Конструкции NKG2D-CAR затем клонировали в ретровирусный вектор с использованием сборки Гибсона и трансфицировали в клетки expi293 с получением ретровируса. Клетки EL4 инфицировали вирусами, содержащими NKG2D-CAR вместе с 8 мкг/мл полибрена. Через 24 часа после инфекции уровни экспрессии NKG2D-CAR в клетках EL4 анализировали проточной цитометрией и отбирали клоны, которые экспрессируют на высоком уровне NKG2D-CAR на клеточной поверхности.
[0229] Чтобы определить, активируют ли NKG2D-связывающие домены NKG2D, их адсорбировали в лунки микропланшета, и клетки NKG2D-CAR EL4 культивировали в лунках, покрытых фрагментом антитела, в течение 4 часов в присутствии брефельдина-A и монензина. Внутриклеточное продуцирование TNF-α, индикатора активации NKG2D, анализировали с помощью проточной цитометрии. Процент TNF-α-положительных клеток был нормализован по отношению к клеткам, обработанным положительным контролем. Все NKG2D-связывающие домены активировали как NKG2D человека (ФИГ. 11), так и мыши (ФИГ. 12).
Пример 4 - NKG2D-связывающие домены активируют NK-клетки
Первичные человеческие NK-клетки
-
+
-
+
+
+
[0230] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки (CD3CD56) выделяли с использованием отрицательного отбора с помощью магнитных гранул из PBMC, и чистота выделенных NK-клеток обычно составляла> 95%. Затем выделенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл IL-2, в течение 24-48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированный с флуорофором антитело против CD107a, брефелдин-А и монензин. После культивирования NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител, конъюгированных с флуорофором, против CD3, CD56 и IFN-γ. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3CD56 для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества CD107a/IFN-γ-двойных положительных клеток свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет рекрутирования двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (например, вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO:101, или вариабельный домен легкой цепи, представленный SEQ ID NO:104) показали более высокий процент NK-клеток, становящихся CD107a и IFN-γ, чем изотипический контроль (ФИГ. 13 и ФИГ. 14 представляют два независимых эксперимента, в каждом из которых использовали разных доноров PBMC для приготовления NK-клеток).
Первичные мышиные NK-клетки
-
+
-
+
+
+
[0231] Селезенки получали от мышей C57Bl/6 и измельчали через сито для клеток 70 мкм для получения суспензии отдельных клеток. Клетки осаждали и ресуспендировали в лизирующем буфере ACK (приобретенном у Thermo Fisher Scientific # A1049201; 155 мМ хлорида аммония, 10 мМ бикарбоната калия, 0,01 мМ EDTA) для удаления эритроцитов. Оставшиеся клетки культивировали с 100 нг/мл человеческого IL-2 (hIL-2) в течение 72 часов, а затем собирали и готовили для выделения NK-клеток. NK-клетки (CD3NK1.1) затем выделяли из клеток селезенки с использованием метода отрицательного истощения с использованием магнитных гранул с чистотой> 90%. Очищенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл мышиного IL-15 (mIL-15), в течение 48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированный с флуорофором антитело против CD107a, брефелдин-А и монензин. После культивирования в лунках, покрытых NKG2D-связывающим доменом, NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител, конъюгированных с флуорофором, против CD3, NK1.1 и IFN-γ. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3NK1.1 для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества CD107a/IFN-γ-двойных положительных клеток свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет вовлечения двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (выбранный из анти-мышиных NKG2D-клонов MI-6 и CX-5, доступных в eBioscience) показали более высокий процент NK-клеток, становящихся CD107a и IFN-γ, чем изотипический контроль (ФИГ. 15 и ФИГ. 16 представляют два независимых эксперимента, в каждом из которых использовали разных мышей для приготовления NK-клеток).
Пример 5 - NKG2D-связывающие домены обеспечивают цитотоксичность опухолевых клеток-мишеней
5
[0232] Анализы активации первичных NK-клеток человека и мыши демонстрируют повышенный уровень маркеров цитотоксичности для NK-клеток после инкубации с NKG2D-связывающими доменами. Чтобы определить, приводит ли это к усилению лизиса опухолевых клеток, был использован клеточный анализ, в котором каждый NKG2D-связывающий домен превращался в моноспецифическое антитело. Fc-область использовали в качестве одного нацеливающего фрагмента, тогда как Fab-область (NKG2D-связывающий домен) действовала как другой нацеливающий фрагмент для активации NK-клеток. Клетки THP-1, которые имеют человеческое происхождение и экспрессируют на высоком уровне Fc-рецепторы, использовали в качестве опухолевой мишени и использовали набор для цитотоксичности Perkin Elmer DELFIA. Клетки THP-1 метили реагентом BATDA и ресуспендировали в количестве 10/мл в культуральной среде. Меченые клетки THP-1 затем объединяли с антителами NKG2D и выделенными мышиными NK-клетками в лунках микропланшета при 37°С в течение 3 часов. После инкубации удаляли 20 мкл культурального супернатанта, смешивали с 200 мкл раствора европия и инкубировали при встряхивании в течение 15 минут в темноте. Флуоресценцию измеряли во времени с помощью планшет-ридера PheraStar, оборудованного модулем флуоресценции с разрешением по времени (возбуждение 337 нм, излучение 620 нм), и специфический лизис рассчитывали в соответствии с инструкциями набора.
[0233] Положительный контроль, ULBP-6 - естественный лиганд для NKG2D, показал повышенный специфический лизис клеток-мишеней THP-1 мышиными NK-клетками. Антитела NKG2D также увеличивали специфический лизис клеток-мишеней THP-1, тогда как антитело изотипического контроля показало снижение специфического лизиса. Пунктирная линия указывает на специфический лизис клеток THP-1 мышиными NK-клетками без добавления антител (ФИГ. 17).
Пример 6 - антитела NKG2D показывают высокую термостабильность
[0234] Температуру плавления NKG2D-связывающих доменов анализировали с использованием дифференциальной сканирующей флуориметрии. Экстраполированные кажущиеся температуры плавления являются высокими по сравнению с типичными антителами IgG1 (ФИГ. 18).
Пример 7. Синергическая активация человеческих NK-клеток путем перекрестного связывания NKG2D и CD16.
Анализ активации первичных человеческих NK-клеток
-
+
5
5
+
-
2
[0235] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки очищали из РВМС с использованием отрицательных магнитных гранул (StemCell # 17955). NK-клетки были> 90% CD3CD56, как определено проточной цитометрией. Затем клетки наращивали 48 часов в среде, содержащей 100 нг/мл hIL-2 (Peprotech # 200-02), перед использованием в анализах активации. Антитела наносили на 96-луночный планшет с плоским дном в концентрации 2 мкг/мл (анти-CD16, Biolegend # 302013) и 5 мкг/мл (анти-NKG2D, R & D # MAB139) в 100 мкл стерильного PBS в течение ночи при 4°С с последующим тщательным промыванием лунок для удаления избытка антител. Для оценки дегрануляции IL-2-активированные NK-клетки ресуспендировали в количестве 5х10 клеток/мл в культуральной среде, дополненной 100 нг/мл hIL2 и 1 мкг/мл APC-конъюгированного анти-CD107a mAb (Biolegend # 328619). Затем на планшеты, покрытые антителами, добавляли 1х10 клеток/лунку. Ингибиторы транспорта белка Брефельдин А (BFA, Biolegend # 420601) и Монензин (Biolegend # 420701) добавляли в конечном разведении 1:1000 и 1:270, соответственно. Посеянные клетки инкубировали в течение 4 часов при 37°С в 5% СО. Для внутриклеточного окрашивания IFN-γ NK-клетки метили анти-CD3 (Biolegend # 300452) и анти-CD56 mAb (Biolegend # 318328), а затем фиксировали и пермеабилизовали и метили анти-IFN-γ mAb (Biolegend # 506507). NK-клетки анализировали на экспрессию CD107a и IFN-γ методом проточной цитометрии после гейтинга живых CD56CD3клеток.
[0236] Чтобы исследовать относительную эффективность комбинации рецепторов, проводили перекрестное связывание NKG2D или CD16 и совместное связывание обоих рецепторов посредством стимулирования в состоянии, связанном с планшетом. Как показано на Фигуре. 19 (ФИГ. 19A-19C), комбинированное стимулирование CD16 и NKG2D приводило к сильно повышенным уровням CD107a (дегрануляция) (ФИГ. 19A) и/или к продуцированию IFN-γ (ФИГ. 19B). Пунктирные линии представляют аддитивный эффект отдельных стимулирований каждого рецептора.
[0237] Уровни CD107a и внутриклеточное продуцирование IFN-γ активированных IL-2 NK-клеток анализировали через 4 часа стимулирования, связанного с планшетом, с помощью анти-CD16, анти-NKG2D или комбинацией обоих моноклональных антител. Графики показывают среднее (n=2) ± SD. ФИГ. 19А демонстрирует уровень CD107a; ФИГ. 19B демонстрирует уровень IFN-γ; ФИГ.19C демонстрирует уровень CD107a и IFN-γ. Данные, показанные на ФИГ. 19А-19С представляют пять независимых экспериментов с использованием пяти различных здоровых доноров.
Пример 8 - TriNKET связываются с NKG2D человека
[0238] Первичные человеческие NK-клетки и клеточные линии мышиной лимфомы EL4, сконструированные для экспрессии NKG2D человека, использовали для тестирования аффинности связывания триспецифических связывающих белков (TriNKET) с NKG2D. Каждый из тестируемых TriNKET содержит NKG2D-связывающий домен, опухолеспецифический антигенсвязывающий домен (например, 5T4-связывающий домен) и Fc-домен, который связывается с CD16, как показано на ФИГ. 1. TriNKET разводили до 20мкг/мл и затем разводили последовательно. Связывание TriNKET или родительских моноклональных антител 5Т4 с NKG2D определяли, используя конъюгированные с флуорофором вторичные антитела против человеческого IgG. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии и рассчитывали превышение относительно фона (fold-over-background) (FOB) путем нормализации средней интенсивности флуоресценции (MFI) к контролю окрашивания человеческого рекомбинантного IgG1.
[0239] Протестированные моноклональные антитела против 5T4 включают 5T4R (включая SEQ ID NO: 200-207) и 5T4A (включая SEQ ID NO: 192-199). Тестируемые TriNKET включают A49-TriNKET-5T4R, который включает 5T4-связывающий домен из моноклонального антитела 5T4R и NKG2D-связывающий домен из клона ADI-27749; и A49-TriNKET-5T4A, который включает 5T4-связывающий домен из моноклонального антитела 5T4A и NKG2D-связывающий домен из клона ADI-27749. ФИГ. 35 демонстрирует, что TriNKET, каждый из которых включает 5T4-связывающий домен и отдельный NKG2D-связывающий домен, связываются с NKG2D на клетках EL4 дозозависимым образом. Фиг. 36 демонстрирует, что TriNKET связываются с NKG2D на первичных человеческих NK-клетках дозозависимым образом, в то время как моноклональные антитела против 5T4, 5T4R и 5T4A, не связываются.
Пример 9 - Оценка связывания TriNKET с опухолеспецифическим антигеном, экспрессируемым клеткой
[0240] Человеческие опухолевые клеточные линии (BxPC3, H146, H1975, HCT116, MCF7 и N87), экспрессирующие опухолеспецифический антиген 5Т4, использовали для анализа связывания 5Т4-нацеленных TriNKET с антигеном. TriNKET или родительские моноклональные антитела против 5Т4 инкубировали с каждой из клеточных линий и связывание детектировали с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Проточную цитометрию использовали для анализа связывания TriNKET или моноклональных антител против 5Т4 с клетками, и рассчитывали превышение относительно фона (FOB) путем нормализации средней интенсивности флуоресценции (MFI) к контролю окрашивания рекомбинантного человеческого IgG1.
[0241] Как A49-TriNKET-5T4R, так и A49-TriNKET-5T4A связывались с 5T4, экспрессированным на клетках рака поджелудочной железы человека BxPC3 (ФИГ. 37), на клетках мелкоклеточного рака легкого человека H146 (ФИГ. 38), клетках немелкоклеточного рака легкого H1975 (ФИГ. 39), клетках рака толстой кишки человека HCT116 (ФИГ. 40), клетках рака молочной железы человека MCF7 (ФИГ. 41) и клетках рака желудка человека N87 (ФИГ 42).
[0242] Результаты продемонстрировали, что A49-TriNKET-5T4R выявил более высокие максимальное связывание и аффинность связывания, чем родительское моноклональное антитело против 5T4R. Контрольный TriNKET содержит сайт связывания для опухолевого антигена, отличного от 5T4, и NKG2D-связывающий домен из клона ADI-27749.
Пример 10 - TriNKET повышают цитотоксичность человеческих NK-клеток по отношению к опухолевым клеткам.
[0243] Для тестирования способности человеческих NK-клеток лизировать опухолевые клетки в присутствии TriNKET использовали клетки линии NK-клеток человека KHYG-1 или первичные NK-клетки.
-
+
[0244] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки (CD3CD56) выделяли с использованием отрицательного отбора с помощью магнитных гранул из PBMC, и чистота выделенных NK-клеток обычно составляла> 90%. Выделенные NK-клетки оставляли на ночь без цитокина. Эти NK-клетки использовали на следующий день в анализах на цитотоксичность.
[0245] KHYG-1 поддерживали в 10% HI-FBS-RPMI-1640 с 10 нг/мл цитокина IL-2. Клетки KHYG-1 собирали из культуры за день до использования, клетки отмывали от среды, содержащей цитокин IL-2и ресуспендировали в 10% HI-FBS-RPMI-1640 в течение ночи без цитокина IL-2.
6
5
5
6
2
[0246] Все анализы цитотоксичности готовили следующим образом: клетки человеческих опухолевых клеточных линий, экспрессирующих интересующую мишень (например, 5Т4-положительные опухолевые клетки), собирали из культуры, клетки промывали PBS и ресуспендировали в ростовой среде в количестве 10/мл для мечения реагентом ацетометилового лиганда, усиливающего флуоресценцию (BATDA) (Perkin Elmer AD0116). Следовали инструкциям производителя по мечению клеток-мишеней. После мечения клетки промывали 3 раза PBS и ресуспендировали в количестве 0,5-1,0х10/мл в культуральной среде. Для приготовления фоновых лунок отбирали аликвоту меченых клеток, и клетки извлекали из среды. 100 мкл среды осторожно добавляли в лунки в трех экземплярах, чтобы не повредить осажденные клетки. 100 мкл BATDA-меченных клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета. Лунки предохраняли для спонтанного высвобождения из клеток-мишеней, и лунки были подготовлены для максимального лизиса клеток-мишеней путем добавления 1% Triton-X. Моноклональные антитела и TriNKET против интересующей опухоли-мишени (например, A49-TriNKET-5T4R) разводили в культуральной среде, и 50 мкл разведенных моноклональных антител и TriNKET добавляли в соответствующие лунки. Клетки KHYG-1 промывали и ресуспендировали в количестве 10-2,0х10/мл в культуральной среде в зависимости от соотношения эффекторной клетки к клетке-мишени 10:1. 50 мкл NK-клеток добавляли в каждую лунку планшета, чтобы получить в общей сложности 200 мкл культурального объема. Планшет инкубировали при 37°C с 5% CO в течение 2-3 часов, прежде чем проводить анализ. После культивирования в течение 3-4 часов планшет извлекали из инкубатора, и клетки осаждали центрифугированием при 200g в течение 5 минут. 20 мкл культурального супернатанта переносили в чистый микропланшет, предоставленный производителем, и 200 мкл раствора европия при комнатной температуре добавляли в каждую лунку. Планшет защищали от света и инкубировали на шейкере для планшетов при 250 об/мин в течение 15 минут. Планшет считывался с использованием инструментов Victor 3 или SpectraMax i3X. % специфического лизиса рассчитывали следующим образом: %Специфического лизиса = ((Экспериментальное высвобождение - спонтанное высвобождение)/(Максимальное высвобождение - спонтанное высвобождение)) * 100%.
Анализ цитотоксичности с высвобождением LDH:
3
5
6
2
2
[0247] Опухолевые клеточные линии человека, экспрессирующие интересующую мишень, собирали из культуры, высевали при 5 × 10 клеток/лунку в 96-луночный планшет и культивировали в течение ночи при 37°C с 5% CO. Были включены следующие контроли: контроль без клеток для определения фона культуральной среды, контроль спонтанного высвобождения LDH эффекторных клеток, содержащий необработанные эффекторные клетки, контроль спонтанного высвобождения LDH клеток-мишеней, содержащий необработанные клетки-мишени, и контроль максимального высвобождения LDH клеток-мишеней с помощью раствора для лизиса добавляли перед цитотоксическим реагентом. Моноклональные антитела или TriNKET против интересующей опухоли-мишени разводили в культуральной среде, 50 мкл разведенных mAb или TriNKET (например, A49-TriNKET-5T4R) добавляли в соответствующие лунки. Покоящиеся NK-клетки собирали из культуры, клетки отмывали и ресуспендировали при 10-2×10/мл в культуральной среде в зависимости от желаемого соотношения E:T. 50 мкл NK-клеток добавляли в каждую лунку планшета, чтобы получить общий объем культуры 200 мкл. Планшет инкубировали при 37°С с 5% СО в течение 3-4 часов, прежде чем проводить анализ.
[0248] После культивирования в течение 3-4 часов планшет извлекали из инкубатора и в каждую лунку добавляли 50 мкл цитотоксического реагента. Планшет защищали от света и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. 50 мкл стоп-раствора добавляли в каждую лунку. Планшет считывали на поглощение при 490 нм с использованием приборов Victor 3 или SpectraMax i3X. % Специфического лизиса рассчитывали следующим образом:
% специфического лизиса = (Экспериментальное высвобождение LDH - Спонтанное Эффектора - Спонтанное Мишени) / (Максимальное Высвобождение Мишени - Спонтанное Высвобождение Мишени) * 100%
[0249] TriNKET, нацеленные на 5T4, опосредовали цитотоксичность NK-клеток человека по отношению к 5T4-положительным клеткам H1975 немелкоклеточного рака легкого. Как показано на ФИГ. 43A-43B, TriNKET опосредовали более эффективное уничтожение опухолевых клеток-мишеней, чем их родительские 5T4 моноклональные антитела. Были протестированы две различные концентрации моноклональных антител TriNKET или 5T4. Как показано на ФИГ. 43А, 6,7 мкг/мл TriNKET имели более высокий процент специфического лизиса, чем 6,7 мкг/мл антител 5Т4. Как показано на ФИГ. 43B, 20 мкг/мл TriNKET имели более высокий процент специфического лизиса, чем 20 мкг/мл антител 5T4.
[0250] TriNKET, нацеленные на 5T4, опосредовали цитотоксичность NK-клеток человека по отношению к 5T4-положительным клеткам MCF7 рака молочной железы человека. Как показано на ФИГ. 44, TriNKET опосредовали более эффективное уничтожение опухолевых клеток-мишеней, чем их родительские 5T4 моноклональные антитела.
[0251] TriNKET, нацеленные на 5T4, опосредовали цитотоксичность NK-клеток человека по отношению к 5T4-положительным N87 клеткам рака желудка человека. Как показано на ФИГ. 45А и ФИГ. 45B, 6,7 мкг/мл TriNKET опосредовали более эффективное уничтожение опухолевых клеток-мишеней, чем их родительские 5T4 моноклональные антитела.
[0252] TriNKET, нацеленные на 5T4, опосредовали цитотоксичность NK-клеток человека по отношению к 5T4-положительным клеткам HCT116 рака толстой кишки человека. Как показано на ФИГ. 46, TriNKET обеспечивал более эффективное уничтожение опухолевых клеток-мишеней, чем его родительское 5T4 моноклональное антитело.
ВКЛЮЧЕНИЕ С ПОМОЩЬЮ ССЫЛКИ
[0253] Полное раскрытие каждого из патентных документов и научных статей, упомянутых в настоящем документе, включено в качестве ссылки для всех целей.
ЭКВИВАЛЕНТЫ
[0254] Изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие изобретение, описанное в настоящем документе. Таким образом, объем изобретения обозначен прилагаемой формулой изобретения, а не предшествующим описанием, и все изменения, которые входят в значение и диапазон эквивалентности формулы изобретения, предназначены для включения в нее.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ADIMAB, LLC.
<120> БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ АНТИГЕНОМ
<130> DFY-018WO
<140>
<141>
<150> 62/539,425
<151> 2017-07-31
<150> 62/510,137
<151> 2017-05-23
<150> 62/510,168
<151> 2017-05-23
<150> 62/510,169
<151> 2017-05-23
<150> 62/510,167
<151> 2017-05-23
<160> 207
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 3
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85                  90                  95
Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 5
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Tyr Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 7
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Tyr Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 9
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 11
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 11
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 12
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ile Pro Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105
<210> 13
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Ile
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 15
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 17
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 19
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ile Tyr Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 21
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 21
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 23
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 25
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Phe Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 27
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 27
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Phe Ser Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 29
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Tyr Ser Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 31
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 31
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Phe Ile Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 33
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 33
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Tyr Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 35
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 37
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 37
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Leu Tyr Ser Tyr
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 39
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 39
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 40
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 41
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 42
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 42
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20                  25                  30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85                  90                  95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210> 43
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 43
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210> 44
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 44
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 45
<211> 18
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 45
Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
1               5                   10                  15
Asp Val
<210> 46
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 46
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Ala
<210> 47
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 47
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210> 48
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 48
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1               5
<210> 49
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 49
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20                  25                  30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35                  40                  45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85                  90                  95
Cys Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 50
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 50
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 51
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 51
Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1               5                   10
<210> 52
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 52
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
<210> 53
<211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 53
Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210> 54
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210> 55
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 55
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210> 56
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 56
Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro Thr
1               5
<210> 57
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 57
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 106
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 59
<211> 126
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
100                 105                 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 60
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 60
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20                  25                  30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85                  90                  95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100                 105                 110
Lys
<210> 61
<211> 126
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr
100                 105                 110
Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 62
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 62
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 63
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 63
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210> 64
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 64
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 65
<211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 65
Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210> 66
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 66
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1               5                   10
<210> 67
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 67
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1               5
<210> 68
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 68
Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe Thr
1               5
<210> 69
<211> 124
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp
100                 105                 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 70
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 70
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 71
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 71
Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His
1               5
<210> 72
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 72
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 73
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 73
Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp
1               5                   10                  15
Val
<210> 74
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 74
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala
1               5                   10
<210> 75
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 75
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1               5
<210> 76
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 76
Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro Thr
1               5
<210> 77
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 77
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 78
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 78
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 79
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 79
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1               5
<210> 80
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 80
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 81
<211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 81
Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr
1               5                   10
<210> 82
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 82
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210> 83
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 83
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210> 84
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 84
Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg Thr
1               5
<210> 85
<211> 122
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp
100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 86
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 86
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 87
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 87
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1               5
<210> 88
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 88
Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 89
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 89
Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro
1               5                   10                  15
<210> 90
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 90
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1               5                   10
<210> 91
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 91
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
<210> 92
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 92
Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr
1               5
<210> 93
<211> 125
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met
100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 94
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 94
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 95
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 95
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1               5
<210> 96
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 96
Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 97
<211> 18
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 97
Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met
1               5                   10                  15
Asp Val
<210> 98
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 98
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210> 99
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 99
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1               5
<210> 100
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 100
Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe Thr
1               5
<210> 101
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 101
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 102
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 102
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20                  25                  30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85                  90                  95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105                 110
<210> 103
<211> 115
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 103
Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Asn Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85                  90                  95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 105
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 105
Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser
1               5
<210> 106
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 106
Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
<210> 107
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 107
Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro
1               5                   10
<210> 108
<211> 246
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 108
Met Ala Ala Ala Ala Ile Pro Ala Leu Leu Leu Cys Leu Pro Leu Leu
1               5                   10                  15
Phe Leu Leu Phe Gly Trp Ser Arg Ala Arg Arg Asp Asp Pro His Ser
20                  25                  30
Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg
35                  40                  45
Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr
50                  55                  60
Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys
65                  70                  75                  80
Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu
85                  90                  95
Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn
100                 105                 110
Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu
115                 120                 125
Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp
130                 135                 140
Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr
145                 150                 155                 160
Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys
165                 170                 175
Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly
180                 185                 190
Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser
195                 200                 205
Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser Gly Thr Thr Gln Leu Arg Ala
210                 215                 220
Thr Ala Thr Thr Leu Ile Leu Cys Cys Leu Leu Ile Ile Leu Pro Cys
225                 230                 235                 240
Phe Ile Leu Pro Gly Ile
245
<210> 109
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 109
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Ser Thr Met Ile Thr Asn Tyr Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala
115                 120
<210> 110
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 110
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
1               5
<210> 111
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 111
Asn Pro Asn Asn Gly Val
1               5
<210> 112
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 112
Ser Thr Met Ile Thr Asn Tyr Val Met Asp Tyr
1               5                   10
<210> 113
<211> 108
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 113
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Thr Ser Leu Leu Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Ser Tyr Thr Ser Ser Arg Tyr Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ala Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Pro
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100                 105
<210> 114
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 114
Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala
1               5
<210> 115
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 115
Tyr Thr Ser Ser Arg Tyr Ala
1               5
<210> 116
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 116
Gln Gln Asp Tyr Asn Ser Pro Pro Thr
1               5
<210> 117
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro Arg Tyr Ala Glu Glu Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 118
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 118
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
1               5
<210> 119
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 119
Asn Thr Asn Thr Gly Glu
1               5
<210> 120
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 120
Asp Trp Asp Gly Ala Tyr Phe Phe Asp Tyr
1               5                   10
<210> 121
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 121
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20                  25                  30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Phe Ala Thr Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 122
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 122
Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala
1               5
<210> 123
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 123
Phe Ala Thr Asn Arg Tyr Thr
1               5
<210> 124
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 124
Gln Gln Asp Tyr Ser Ser Pro Trp Thr
1               5
<210> 125
<211> 121
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Asn Tyr Val Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 126
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 126
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1               5
<210> 127
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 127
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1               5
<210> 128
<211> 14
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 128
Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Asn Tyr Val Gly Trp Phe Asp Pro
1               5                   10
<210> 129
<211> 107
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 129
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Trp
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 130
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 130
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1               5
<210> 131
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 131
Ala Ala Ser
1
<210> 132
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 132
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Leu Trp Thr
1               5
<210> 133
<211> 420
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 133
Met Pro Gly Gly Cys Ser Arg Gly Pro Ala Ala Gly Asp Gly Arg Leu
1               5                   10                  15
Arg Leu Ala Arg Leu Ala Leu Val Leu Leu Gly Trp Val Ser Ser Ser
20                  25                  30
Ser Pro Thr Ser Ser Ala Ser Ser Phe Ser Ser Ser Ala Pro Phe Leu
35                  40                  45
Ala Ser Ala Val Ser Ala Gln Pro Pro Leu Pro Asp Gln Cys Pro Ala
50                  55                  60
Leu Cys Glu Cys Ser Glu Ala Ala Arg Thr Val Lys Cys Val Asn Arg
65                  70                  75                  80
Asn Leu Thr Glu Val Pro Thr Asp Leu Pro Ala Tyr Val Arg Asn Leu
85                  90                  95
Phe Leu Thr Gly Asn Gln Leu Ala Val Leu Pro Ala Gly Ala Phe Ala
100                 105                 110
Arg Arg Pro Pro Leu Ala Glu Leu Ala Ala Leu Asn Leu Ser Gly Ser
115                 120                 125
Arg Leu Asp Glu Val Arg Ala Gly Ala Phe Glu His Leu Pro Ser Leu
130                 135                 140
Arg Gln Leu Asp Leu Ser His Asn Pro Leu Ala Asp Leu Ser Pro Phe
145                 150                 155                 160
Ala Phe Ser Gly Ser Asn Ala Ser Val Ser Ala Pro Ser Pro Leu Val
165                 170                 175
Glu Leu Ile Leu Asn His Ile Val Pro Pro Glu Asp Glu Arg Gln Asn
180                 185                 190
Arg Ser Phe Glu Gly Met Val Val Ala Ala Leu Leu Ala Gly Arg Ala
195                 200                 205
Leu Gln Gly Leu Arg Arg Leu Glu Leu Ala Ser Asn His Phe Leu Tyr
210                 215                 220
Leu Pro Arg Asp Val Leu Ala Gln Leu Pro Ser Leu Arg His Leu Asp
225                 230                 235                 240
Leu Ser Asn Asn Ser Leu Val Ser Leu Thr Tyr Val Ser Phe Arg Asn
245                 250                 255
Leu Thr His Leu Glu Ser Leu His Leu Glu Asp Asn Ala Leu Lys Val
260                 265                 270
Leu His Asn Gly Thr Leu Ala Glu Leu Gln Gly Leu Pro His Ile Arg
275                 280                 285
Val Phe Leu Asp Asn Asn Pro Trp Val Cys Asp Cys His Met Ala Asp
290                 295                 300
Met Val Thr Trp Leu Lys Glu Thr Glu Val Val Gln Gly Lys Asp Arg
305                 310                 315                 320
Leu Thr Cys Ala Tyr Pro Glu Lys Met Arg Asn Arg Val Leu Leu Glu
325                 330                 335
Leu Asn Ser Ala Asp Leu Asp Cys Asp Pro Ile Leu Pro Pro Ser Leu
340                 345                 350
Gln Thr Ser Tyr Val Phe Leu Gly Ile Val Leu Ala Leu Ile Gly Ala
355                 360                 365
Ile Phe Leu Leu Val Leu Tyr Leu Asn Arg Lys Gly Ile Lys Lys Trp
370                 375                 380
Met His Asn Ile Arg Asp Ala Cys Arg Asp His Met Glu Gly Tyr His
385                 390                 395                 400
Tyr Arg Tyr Glu Ile Asn Ala Asp Pro Arg Leu Thr Asn Leu Ser Ser
405                 410                 415
Asn Ser Asp Val
420
<210> 134
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 134
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Phe
20                  25                  30
Asn Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg His His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35                  40                  45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Ser Asn Pro Ser
50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ser Leu Thr Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85                  90                  95
Cys Ala Arg Gly Tyr Asn Trp Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115                 120
<210> 135
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 135
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Phe Asn Tyr
1               5
<210> 136
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 136
Tyr Tyr Ser Gly Ser
1               5
<210> 137
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 137
Gly Tyr Asn Trp Asn Tyr Phe Asp Tyr
1               5
<210> 138
<211> 109
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 138
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Asn Asn
20                  25                  30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85                  90                  95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100                 105
<210> 139
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 139
Gln Ser Val Asp Asn Asn Leu Val
1               5
<210> 140
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 140
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1               5
<210> 141
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 141
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1               5                   10
<210> 142
<211> 117
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 142
Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
1               5                   10                  15
Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Pro His
20                  25                  30
Arg Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
35                  40                  45
Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr
50                  55                  60
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr
65                  70                  75                  80
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
85                  90                  95
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Pro Asn Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 143
Ser Ser Tyr Ala Ile
1               5
<210> 144
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 144
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 145
<211> 4
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 145
Gly Pro Asn Thr
1
<210> 146
<211> 114
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 146
Leu Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro
1               5                   10                  15
Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His
20                  25                  30
Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35                  40                  45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val
50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65                  70                  75                  80
Ile Ser Arg Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Glu
85                  90                  95
Thr Leu Gln Thr His Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Gly Ile
100                 105                 110
Lys Arg
<210> 147
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 147
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1               5                   10                  15
<210> 148
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 148
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1               5
<210> 149
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 149
Met Glu Thr Leu Gln Thr His Pro Thr
1               5
<210> 150
<211> 572
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 150
Met Glu Cys Leu Tyr Tyr Phe Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ala Ala Arg
1               5                   10                  15
Leu Pro Leu Asp Ala Ala Lys Arg Phe His Asp Val Leu Gly Asn Glu
20                  25                  30
Arg Pro Ser Ala Tyr Met Arg Glu His Asn Gln Leu Asn Gly Trp Ser
35                  40                  45
Ser Asp Glu Asn Asp Trp Asn Glu Lys Leu Tyr Pro Val Trp Lys Arg
50                  55                  60
Gly Asp Met Arg Trp Lys Asn Ser Trp Lys Gly Gly Arg Val Gln Ala
65                  70                  75                  80
Val Leu Thr Ser Asp Ser Pro Ala Leu Val Gly Ser Asn Ile Thr Phe
85                  90                  95
Ala Val Asn Leu Ile Phe Pro Arg Cys Gln Lys Glu Asp Ala Asn Gly
100                 105                 110
Asn Ile Val Tyr Glu Lys Asn Cys Arg Asn Glu Ala Gly Leu Ser Ala
115                 120                 125
Asp Pro Tyr Val Tyr Asn Trp Thr Ala Trp Ser Glu Asp Ser Asp Gly
130                 135                 140
Glu Asn Gly Thr Gly Gln Ser His His Asn Val Phe Pro Asp Gly Lys
145                 150                 155                 160
Pro Phe Pro His His Pro Gly Trp Arg Arg Trp Asn Phe Ile Tyr Val
165                 170                 175
Phe His Thr Leu Gly Gln Tyr Phe Gln Lys Leu Gly Arg Cys Ser Val
180                 185                 190
Arg Val Ser Val Asn Thr Ala Asn Val Thr Leu Gly Pro Gln Leu Met
195                 200                 205
Glu Val Thr Val Tyr Arg Arg His Gly Arg Ala Tyr Val Pro Ile Ala
210                 215                 220
Gln Val Lys Asp Val Tyr Val Val Thr Asp Gln Ile Pro Val Phe Val
225                 230                 235                 240
Thr Met Phe Gln Lys Asn Asp Arg Asn Ser Ser Asp Glu Thr Phe Leu
245                 250                 255
Lys Asp Leu Pro Ile Met Phe Asp Val Leu Ile His Asp Pro Ser His
260                 265                 270
Phe Leu Asn Tyr Ser Thr Ile Asn Tyr Lys Trp Ser Phe Gly Asp Asn
275                 280                 285
Thr Gly Leu Phe Val Ser Thr Asn His Thr Val Asn His Thr Tyr Val
290                 295                 300
Leu Asn Gly Thr Phe Ser Leu Asn Leu Thr Val Lys Ala Ala Ala Pro
305                 310                 315                 320
Gly Pro Cys Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Arg Pro Ser Lys Pro Thr
325                 330                 335
Pro Ser Leu Ala Thr Thr Leu Lys Ser Tyr Asp Ser Asn Thr Pro Gly
340                 345                 350
Pro Ala Gly Asp Asn Pro Leu Glu Leu Ser Arg Ile Pro Asp Glu Asn
355                 360                 365
Cys Gln Ile Asn Arg Tyr Gly His Phe Gln Ala Thr Ile Thr Ile Val
370                 375                 380
Glu Gly Ile Leu Glu Val Asn Ile Ile Gln Met Thr Asp Val Leu Met
385                 390                 395                 400
Pro Val Pro Trp Pro Glu Ser Ser Leu Ile Asp Phe Val Val Thr Cys
405                 410                 415
Gln Gly Ser Ile Pro Thr Glu Val Cys Thr Ile Ile Ser Asp Pro Thr
420                 425                 430
Cys Glu Ile Thr Gln Asn Thr Val Cys Ser Pro Val Asp Val Asp Glu
435                 440                 445
Met Cys Leu Leu Thr Val Arg Arg Thr Phe Asn Gly Ser Gly Thr Tyr
450                 455                 460
Cys Val Asn Leu Thr Leu Gly Asp Asp Thr Ser Leu Ala Leu Thr Ser
465                 470                 475                 480
Thr Leu Ile Ser Val Pro Asp Arg Asp Pro Ala Ser Pro Leu Arg Met
485                 490                 495
Ala Asn Ser Ala Leu Ile Ser Val Gly Cys Leu Ala Ile Phe Val Thr
500                 505                 510
Val Ile Ser Leu Leu Val Tyr Lys Lys His Lys Glu Tyr Asn Pro Ile
515                 520                 525
Glu Asn Ser Pro Gly Asn Val Val Arg Ser Lys Gly Leu Ser Val Phe
530                 535                 540
Leu Asn Arg Ala Lys Ala Val Phe Phe Pro Gly Asn Gln Glu Lys Asp
545                 550                 555                 560
Pro Leu Leu Lys Asn Gln Glu Phe Lys Gly Val Ser
565                 570
<210> 151
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 151
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20                  25                  30
Gly Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Met Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Ala Arg His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala
115                 120
<210> 152
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 152
Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
1               5
<210> 153
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 153
Ser Ser Gly Gly Ser Tyr
1               5
<210> 154
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 154
His Gly Asp Asp Pro Ala Trp Phe Ala Tyr
1               5                   10
<210> 155
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 155
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Ile Ser Ser Asn
20                  25                  30
Asn Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp
35                  40                  45
Ile Tyr Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro
85                  90                  95
Tyr Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100                 105                 110
<210> 156
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 156
Ser Ser Ile Ser Ser Asn Asn Leu His
1               5
<210> 157
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 157
Gly Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1               5
<210> 158
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 158
Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Tyr Met Tyr Thr
1               5                   10
<210> 159
<211> 119
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 159
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20                  25                  30
Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35                  40                  45
Gly Arg Ile His Pro Tyr Asp Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50                  55                  60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala His
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala
115
<210> 160
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 160
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
1               5
<210> 161
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 161
His Pro Tyr Asp Gly Asp
1               5
<210> 162
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 162
Tyr Asp Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr
1               5
<210> 163
<211> 112
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 163
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Gln Pro Ala Ile Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20                  25                  30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro
35                  40                  45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala Gly Val Pro Asp
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Lys Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85                  90                  95
Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100                 105                 110
<210> 164
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 164
Gln Ser Val Ser Phe Ala Gly Thr Ser Leu Met His
1               5                   10
<210> 165
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 165
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ala
1               5
<210> 166
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 166
Gln Gln Ser Arg Glu Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210> 167
<211> 120
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 167
Asn Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ile Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Arg Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Met Asp Val Trp Gly Lys
100                 105                 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 168
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 168
Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
1               5
<210> 169
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 169
Ser Ser Ser Ser Ser Tyr
1               5
<210> 170
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 170
Glu Arg Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Met Asp Val
1               5                   10
<210> 171
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 171
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Phe Leu
20                  25                  30
Gly Ile Asn Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35                  40                  45
Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asn Lys Asp Thr Gly Val Pro Ala
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Ala Asn Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Lys
85                  90                  95
Asn Phe Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg
<210> 172
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 172
Glu Ser Val Ser Phe Leu Gly Ile Asn Leu Ile His
1               5                   10
<210> 173
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 173
Gln Ala Ser Asn Lys Asp Thr
1               5
<210> 174
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 174
Ser Lys Asn Phe Pro Pro Tyr Thr
1               5
<210> 175
<211> 257
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 175
Met Ala Gln Arg Met Thr Thr Gln Leu Leu Leu Leu Leu Val Trp Val
1               5                   10                  15
Ala Val Val Gly Glu Ala Gln Thr Arg Ile Ala Trp Ala Arg Thr Glu
20                  25                  30
Leu Leu Asn Val Cys Met Asn Ala Lys His His Lys Glu Lys Pro Gly
35                  40                  45
Pro Glu Asp Lys Leu His Glu Gln Cys Arg Pro Trp Arg Lys Asn Ala
50                  55                  60
Cys Cys Ser Thr Asn Thr Ser Gln Glu Ala His Lys Asp Val Ser Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Arg Phe Asn Trp Asn His Cys Gly Glu Met Ala Pro Ala Cys
85                  90                  95
Lys Arg His Phe Ile Gln Asp Thr Cys Leu Tyr Glu Cys Ser Pro Asn
100                 105                 110
Leu Gly Pro Trp Ile Gln Gln Val Asp Gln Ser Trp Arg Lys Glu Arg
115                 120                 125
Val Leu Asn Val Pro Leu Cys Lys Glu Asp Cys Glu Gln Trp Trp Glu
130                 135                 140
Asp Cys Arg Thr Ser Tyr Thr Cys Lys Ser Asn Trp His Lys Gly Trp
145                 150                 155                 160
Asn Trp Thr Ser Gly Phe Asn Lys Cys Ala Val Gly Ala Ala Cys Gln
165                 170                 175
Pro Phe His Phe Tyr Phe Pro Thr Pro Thr Val Leu Cys Asn Glu Ile
180                 185                 190
Trp Thr His Ser Tyr Lys Val Ser Asn Tyr Ser Arg Gly Ser Gly Arg
195                 200                 205
Cys Ile Gln Met Trp Phe Asp Pro Ala Gln Gly Asn Pro Asn Glu Glu
210                 215                 220
Val Ala Arg Phe Tyr Ala Ala Ala Met Ser Gly Ala Gly Pro Trp Ala
225                 230                 235                 240
Ala Trp Pro Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Met Leu Leu Trp Leu Leu
245                 250                 255
Ser
<210> 176
<211> 1627
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 176
Met Arg Leu Trp Ser Trp Val Leu His Leu Gly Leu Leu Ser Ala Ala
1               5                   10                  15
Leu Gly Cys Gly Leu Ala Glu Arg Pro Arg Arg Ala Arg Arg Asp Pro
20                  25                  30
Arg Ala Gly Arg Pro Pro Arg Pro Ala Ala Gly Pro Ala Thr Cys Ala
35                  40                  45
Thr Arg Ala Ala Arg Gly Arg Arg Ala Ser Pro Pro Pro Pro Pro Pro
50                  55                  60
Pro Gly Gly Ala Trp Glu Ala Val Arg Val Pro Arg Arg Arg Gln Gln
65                  70                  75                  80
Arg Glu Ala Arg Gly Ala Thr Glu Glu Pro Ser Pro Pro Ser Arg Ala
85                  90                  95
Leu Tyr Phe Ser Gly Arg Gly Glu Gln Leu Arg Leu Arg Ala Asp Leu
100                 105                 110
Glu Leu Pro Arg Asp Ala Phe Thr Leu Gln Val Trp Leu Arg Ala Glu
115                 120                 125
Gly Gly Gln Arg Ser Pro Ala Val Ile Thr Gly Leu Tyr Asp Lys Cys
130                 135                 140
Ser Tyr Ile Ser Arg Asp Arg Gly Trp Val Val Gly Ile His Thr Ile
145                 150                 155                 160
Ser Asp Gln Asp Asn Lys Asp Pro Arg Tyr Phe Phe Ser Leu Lys Thr
165                 170                 175
Asp Arg Ala Arg Gln Val Thr Thr Ile Asn Ala His Arg Ser Tyr Leu
180                 185                 190
Pro Gly Gln Trp Val Tyr Leu Ala Ala Thr Tyr Asp Gly Gln Phe Met
195                 200                 205
Lys Leu Tyr Val Asn Gly Ala Gln Val Ala Thr Ser Gly Glu Gln Val
210                 215                 220
Gly Gly Ile Phe Ser Pro Leu Thr Gln Lys Cys Lys Val Leu Met Leu
225                 230                 235                 240
Gly Gly Ser Ala Leu Asn His Asn Tyr Arg Gly Tyr Ile Glu His Phe
245                 250                 255
Ser Leu Trp Lys Val Ala Arg Thr Gln Arg Glu Ile Leu Ser Asp Met
260                 265                 270
Glu Thr His Gly Ala His Thr Ala Leu Pro Gln Leu Leu Leu Gln Glu
275                 280                 285
Asn Trp Asp Asn Val Lys His Ala Trp Ser Pro Met Lys Asp Gly Ser
290                 295                 300
Ser Pro Lys Val Glu Phe Ser Asn Ala His Gly Phe Leu Leu Asp Thr
305                 310                 315                 320
Ser Leu Glu Pro Pro Leu Cys Gly Gln Thr Leu Cys Asp Asn Thr Glu
325                 330                 335
Val Ile Ala Ser Tyr Asn Gln Leu Ser Ser Phe Arg Gln Pro Lys Val
340                 345                 350
Val Arg Tyr Arg Val Val Asn Leu Tyr Glu Asp Asp His Lys Asn Pro
355                 360                 365
Thr Val Thr Arg Glu Gln Val Asp Phe Gln His His Gln Leu Ala Glu
370                 375                 380
Ala Phe Lys Gln Tyr Asn Ile Ser Trp Glu Leu Asp Val Leu Glu Val
385                 390                 395                 400
Ser Asn Ser Ser Leu Arg Arg Arg Leu Ile Leu Ala Asn Cys Asp Ile
405                 410                 415
Ser Lys Ile Gly Asp Glu Asn Cys Asp Pro Glu Cys Asn His Thr Leu
420                 425                 430
Thr Gly His Asp Gly Gly Asp Cys Arg His Leu Arg His Pro Ala Phe
435                 440                 445
Val Lys Lys Gln His Asn Gly Val Cys Asp Met Asp Cys Asn Tyr Glu
450                 455                 460
Arg Phe Asn Phe Asp Gly Gly Glu Cys Cys Asp Pro Glu Ile Thr Asn
465                 470                 475                 480
Val Thr Gln Thr Cys Phe Asp Pro Asp Ser Pro His Arg Ala Tyr Leu
485                 490                 495
Asp Val Asn Glu Leu Lys Asn Ile Leu Lys Leu Asp Gly Ser Thr His
500                 505                 510
Leu Asn Ile Phe Phe Ala Lys Ser Ser Glu Glu Glu Leu Ala Gly Val
515                 520                 525
Ala Thr Trp Pro Trp Asp Lys Glu Ala Leu Met His Leu Gly Gly Ile
530                 535                 540
Val Leu Asn Pro Ser Phe Tyr Gly Met Pro Gly His Thr His Thr Met
545                 550                 555                 560
Ile His Glu Ile Gly His Ser Leu Gly Leu Tyr His Val Phe Arg Gly
565                 570                 575
Ile Ser Glu Ile Gln Ser Cys Ser Asp Pro Cys Met Glu Thr Glu Pro
580                 585                 590
Ser Phe Glu Thr Gly Asp Leu Cys Asn Asp Thr Asn Pro Ala Pro Lys
595                 600                 605
His Lys Ser Cys Gly Asp Pro Gly Pro Gly Asn Asp Thr Cys Gly Phe
610                 615                 620
His Ser Phe Phe Asn Thr Pro Tyr Asn Asn Phe Met Ser Tyr Ala Asp
625                 630                 635                 640
Asp Asp Cys Thr Asp Ser Phe Thr Pro Asn Gln Val Ala Arg Met His
645                 650                 655
Cys Tyr Leu Asp Leu Val Tyr Gln Gly Trp Gln Pro Ser Arg Lys Pro
660                 665                 670
Ala Pro Val Ala Leu Ala Pro Gln Val Leu Gly His Thr Thr Asp Ser
675                 680                 685
Val Thr Leu Glu Trp Phe Pro Pro Ile Asp Gly His Phe Phe Glu Arg
690                 695                 700
Glu Leu Gly Ser Ala Cys His Leu Cys Leu Glu Gly Arg Ile Leu Val
705                 710                 715                 720
Gln Tyr Ala Ser Asn Ala Ser Ser Pro Met Pro Cys Ser Pro Ser Gly
725                 730                 735
His Trp Ser Pro Arg Glu Ala Glu Gly His Pro Asp Val Glu Gln Pro
740                 745                 750
Cys Lys Ser Ser Val Arg Thr Trp Ser Pro Asn Ser Ala Val Asn Pro
755                 760                 765
His Thr Val Pro Pro Ala Cys Pro Glu Pro Gln Gly Cys Tyr Leu Glu
770                 775                 780
Leu Glu Phe Leu Tyr Pro Leu Val Pro Glu Ser Leu Thr Ile Trp Val
785                 790                 795                 800
Thr Phe Val Ser Thr Asp Trp Asp Ser Ser Gly Ala Val Asn Asp Ile
805                 810                 815
Lys Leu Leu Ala Val Ser Gly Lys Asn Ile Ser Leu Gly Pro Gln Asn
820                 825                 830
Val Phe Cys Asp Val Pro Leu Thr Ile Arg Leu Trp Asp Val Gly Glu
835                 840                 845
Glu Val Tyr Gly Ile Gln Ile Tyr Thr Leu Asp Glu His Leu Glu Ile
850                 855                 860
Asp Ala Ala Met Leu Thr Ser Thr Ala Asp Thr Pro Leu Cys Leu Gln
865                 870                 875                 880
Cys Lys Pro Leu Lys Tyr Lys Val Val Arg Asp Pro Pro Leu Gln Met
885                 890                 895
Asp Val Ala Ser Ile Leu His Leu Asn Arg Lys Phe Val Asp Met Asp
900                 905                 910
Leu Asn Leu Gly Ser Val Tyr Gln Tyr Trp Val Ile Thr Ile Ser Gly
915                 920                 925
Thr Glu Glu Ser Glu Pro Ser Pro Ala Val Thr Tyr Ile His Gly Ser
930                 935                 940
Gly Tyr Cys Gly Asp Gly Ile Ile Gln Lys Asp Gln Gly Glu Gln Cys
945                 950                 955                 960
Asp Asp Met Asn Lys Ile Asn Gly Asp Gly Cys Ser Leu Phe Cys Arg
965                 970                 975
Gln Glu Val Ser Phe Asn Cys Ile Asp Glu Pro Ser Arg Cys Tyr Phe
980                 985                 990
His Asp Gly Asp Gly Val Cys Glu  Glu Phe Glu Gln Lys  Thr Ser Ile
995                 1000                 1005
Lys Asp  Cys Gly Val Tyr Thr  Pro Gln Gly Phe Leu  Asp Gln Trp
1010                 1015                 1020
Ala Ser  Asn Ala Ser Val Ser  His Gln Asp Gln Gln  Cys Pro Gly
1025                 1030                 1035
Trp Val  Ile Ile Gly Gln Pro  Ala Ala Ser Gln Val  Cys Arg Thr
1040                 1045                 1050
Lys Val  Ile Asp Leu Ser Glu  Gly Ile Ser Gln His  Ala Trp Tyr
1055                 1060                 1065
Pro Cys  Thr Ile Ser Tyr Pro  Tyr Ser Gln Leu Ala  Gln Thr Thr
1070                 1075                 1080
Phe Trp  Leu Arg Ala Tyr Phe  Ser Gln Pro Met Val  Ala Ala Ala
1085                 1090                 1095
Val Ile  Val His Leu Val Thr  Asp Gly Thr Tyr Tyr  Gly Asp Gln
1100                 1105                 1110
Lys Gln  Glu Thr Ile Ser Val  Gln Leu Leu Asp Thr  Lys Asp Gln
1115                 1120                 1125
Ser His  Asp Leu Gly Leu His  Val Leu Ser Cys Arg  Asn Asn Pro
1130                 1135                 1140
Leu Ile  Ile Pro Val Val His  Asp Leu Ser Gln Pro  Phe Tyr His
1145                 1150                 1155
Ser Gln  Ala Val Arg Val Ser  Phe Ser Ser Pro Leu  Val Ala Ile
1160                 1165                 1170
Ser Gly  Val Ala Leu Arg Ser  Phe Asp Asn Phe Asp  Pro Val Thr
1175                 1180                 1185
Leu Ser  Ser Cys Gln Arg Gly  Glu Thr Tyr Ser Pro  Ala Glu Gln
1190                 1195                 1200
Ser Cys  Val His Phe Ala Cys  Glu Lys Thr Asp Cys  Pro Glu Leu
1205                 1210                 1215
Ala Val  Glu Asn Ala Ser Leu  Asn Cys Ser Ser Ser  Asp Arg Tyr
1220                 1225                 1230
His Gly  Ala Gln Cys Thr Val  Ser Cys Arg Thr Gly  Tyr Val Leu
1235                 1240                 1245
Gln Ile  Arg Arg Asp Asp Glu  Leu Ile Lys Ser Gln  Thr Gly Pro
1250                 1255                 1260
Ser Val  Thr Val Thr Cys Thr  Glu Gly Lys Trp Asn  Lys Gln Val
1265                 1270                 1275
Ala Cys  Glu Pro Val Asp Cys  Ser Ile Pro Asp His  His Gln Val
1280                 1285                 1290
Tyr Ala  Ala Ser Phe Ser Cys  Pro Glu Gly Thr Thr  Phe Gly Ser
1295                 1300                 1305
Gln Cys  Ser Phe Gln Cys Arg  His Pro Ala Gln Leu  Lys Gly Asn
1310                 1315                 1320
Asn Ser  Leu Leu Thr Cys Met  Glu Asp Gly Leu Trp  Ser Phe Pro
1325                 1330                 1335
Glu Ala  Leu Cys Glu Leu Met  Cys Leu Ala Pro Pro  Pro Val Pro
1340                 1345                 1350
Asn Ala  Asp Leu Gln Thr Ala  Arg Cys Arg Glu Asn  Lys His Lys
1355                 1360                 1365
Val Gly  Ser Phe Cys Lys Tyr  Lys Cys Lys Pro Gly  Tyr His Val
1370                 1375                 1380
Pro Gly  Ser Ser Arg Lys Ser  Lys Lys Arg Ala Phe  Lys Thr Gln
1385                 1390                 1395
Cys Thr  Gln Asp Gly Ser Trp  Gln Glu Gly Ala Cys  Val Pro Val
1400                 1405                 1410
Thr Cys  Asp Pro Pro Pro Pro  Lys Phe His Gly Leu  Tyr Gln Cys
1415                 1420                 1425
Thr Asn  Gly Phe Gln Phe Asn  Ser Glu Cys Arg Ile  Lys Cys Glu
1430                 1435                 1440
Asp Ser  Asp Ala Ser Gln Gly  Leu Gly Ser Asn Val  Ile His Cys
1445                 1450                 1455
Arg Lys  Asp Gly Thr Trp Asn  Gly Ser Phe His Val  Cys Gln Glu
1460                 1465                 1470
Met Gln  Gly Gln Cys Ser Val  Pro Asn Glu Leu Asn  Ser Asn Leu
1475                 1480                 1485
Lys Leu  Gln Cys Pro Asp Gly  Tyr Ala Ile Gly Ser  Glu Cys Ala
1490                 1495                 1500
Thr Ser  Cys Leu Asp His Asn  Ser Glu Ser Ile Ile  Leu Pro Met
1505                 1510                 1515
Asn Val  Thr Val Arg Asp Ile  Pro His Trp Leu Asn  Pro Thr Arg
1520                 1525                 1530
Val Glu  Arg Val Val Cys Thr  Ala Gly Leu Lys Trp  Tyr Pro His
1535                 1540                 1545
Pro Ala  Leu Ile His Cys Val  Lys Gly Cys Glu Pro  Phe Met Gly
1550                 1555                 1560
Asp Asn  Tyr Cys Asp Ala Ile  Asn Asn Arg Ala Phe  Cys Asn Tyr
1565                 1570                 1575
Asp Gly  Gly Asp Cys Cys Thr  Ser Thr Val Lys Thr  Lys Lys Val
1580                 1585                 1590
Thr Pro  Phe Pro Met Ser Cys  Asp Leu Gln Gly Asp  Cys Ala Cys
1595                 1600                 1605
Arg Asp  Pro Gln Ala Gln Glu  His Ser Arg Lys Asp  Leu Arg Gly
1610                 1615                 1620
Tyr Ser  His Gly
1625
<210> 177
<211> 116
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20                  25                  30
Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35                  40                  45
Gly Ala Leu Asp Pro Lys Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Ser Gln Lys Phe
50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser Ala
115
<210> 178
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 178
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
1               5
<210> 179
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 179
Asp Pro Lys Thr Gly Asp
1               5
<210> 180
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 180
Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr
1               5
<210> 181
<211> 113
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400> 181
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20                  25                  30
Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Asn
85                  90                  95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100                 105                 110
Arg
<210> 182
<211> 13
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 182
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His
1               5                   10
<210> 183
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 183
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210> 184
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 184
Ser Gln Asn Thr His Val Pro Pro Thr
1               5
<210> 185
<211> 580
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 185
Met Ala Gly Thr Val Arg Thr Ala Cys Leu Val Val Ala Met Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Asp Phe Pro Gly Gln Ala Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Asp
20                  25                  30
Ala Thr Cys His Gln Val Arg Ser Phe Phe Gln Arg Leu Gln Pro Gly
35                  40                  45
Leu Lys Trp Val Pro Glu Thr Pro Val Pro Gly Ser Asp Leu Gln Val
50                  55                  60
Cys Leu Pro Lys Gly Pro Thr Cys Cys Ser Arg Lys Met Glu Glu Lys
65                  70                  75                  80
Tyr Gln Leu Thr Ala Arg Leu Asn Met Glu Gln Leu Leu Gln Ser Ala
85                  90                  95
Ser Met Glu Leu Lys Phe Leu Ile Ile Gln Asn Ala Ala Val Phe Gln
100                 105                 110
Glu Ala Phe Glu Ile Val Val Arg His Ala Lys Asn Tyr Thr Asn Ala
115                 120                 125
Met Phe Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Leu Thr Pro Gln Ala Phe Glu Phe
130                 135                 140
Val Gly Glu Phe Phe Thr Asp Val Ser Leu Tyr Ile Leu Gly Ser Asp
145                 150                 155                 160
Ile Asn Val Asp Asp Met Val Asn Glu Leu Phe Asp Ser Leu Phe Pro
165                 170                 175
Val Ile Tyr Thr Gln Leu Met Asn Pro Gly Leu Pro Asp Ser Ala Leu
180                 185                 190
Asp Ile Asn Glu Cys Leu Arg Gly Ala Arg Arg Asp Leu Lys Val Phe
195                 200                 205
Gly Asn Phe Pro Lys Leu Ile Met Thr Gln Val Ser Lys Ser Leu Gln
210                 215                 220
Val Thr Arg Ile Phe Leu Gln Ala Leu Asn Leu Gly Ile Glu Val Ile
225                 230                 235                 240
Asn Thr Thr Asp His Leu Lys Phe Ser Lys Asp Cys Gly Arg Met Leu
245                 250                 255
Thr Arg Met Trp Tyr Cys Ser Tyr Cys Gln Gly Leu Met Met Val Lys
260                 265                 270
Pro Cys Gly Gly Tyr Cys Asn Val Val Met Gln Gly Cys Met Ala Gly
275                 280                 285
Val Val Glu Ile Asp Lys Tyr Trp Arg Glu Tyr Ile Leu Ser Leu Glu
290                 295                 300
Glu Leu Val Asn Gly Met Tyr Arg Ile Tyr Asp Met Glu Asn Val Leu
305                 310                 315                 320
Leu Gly Leu Phe Ser Thr Ile His Asp Ser Ile Gln Tyr Val Gln Lys
325                 330                 335
Asn Ala Gly Lys Leu Thr Thr Thr Ile Gly Lys Leu Cys Ala His Ser
340                 345                 350
Gln Gln Arg Gln Tyr Arg Ser Ala Tyr Tyr Pro Glu Asp Leu Phe Ile
355                 360                 365
Asp Lys Lys Val Leu Lys Val Ala His Val Glu His Glu Glu Thr Leu
370                 375                 380
Ser Ser Arg Arg Arg Glu Leu Ile Gln Lys Leu Lys Ser Phe Ile Ser
385                 390                 395                 400
Phe Tyr Ser Ala Leu Pro Gly Tyr Ile Cys Ser His Ser Pro Val Ala
405                 410                 415
Glu Asn Asp Thr Leu Cys Trp Asn Gly Gln Glu Leu Val Glu Arg Tyr
420                 425                 430
Ser Gln Lys Ala Ala Arg Asn Gly Met Lys Asn Gln Phe Asn Leu His
435                 440                 445
Glu Leu Lys Met Lys Gly Pro Glu Pro Val Val Ser Gln Ile Ile Asp
450                 455                 460
Lys Leu Lys His Ile Asn Gln Leu Leu Arg Thr Met Ser Met Pro Lys
465                 470                 475                 480
Gly Arg Val Leu Asp Lys Asn Leu Asp Glu Glu Gly Phe Glu Ser Gly
485                 490                 495
Asp Cys Gly Asp Asp Glu Asp Glu Cys Ile Gly Gly Ser Gly Asp Gly
500                 505                 510
Met Ile Lys Val Lys Asn Gln Leu Arg Phe Leu Ala Glu Leu Ala Tyr
515                 520                 525
Asp Leu Asp Val Asp Asp Ala Pro Gly Asn Ser Gln Gln Ala Thr Pro
530                 535                 540
Lys Asp Asn Glu Ile Ser Thr Phe His Asn Leu Gly Asn Val His Ser
545                 550                 555                 560
Pro Leu Lys Leu Leu Thr Ser Met Ala Ile Ser Val Val Cys Phe Phe
565                 570                 575
Phe Leu Val His
580
<210> 186
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 186
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1               5
<210> 187
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 187
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 188
<211> 19
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 188
Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
1               5                   10                  15
Met Asp Val
<210> 189
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 189
Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1               5                   10                  15
Thr
<210> 190
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 190
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1               5
<210> 191
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид
<400> 191
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1               5
<210>  192
<211>  124
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  192
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asp Lys Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu
50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65                  70                  75                  80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Gly Val Tyr
85                  90                  95
Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Ala Tyr Gly Met Asp
100                 105                 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  193
<211>  5
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  193
Asn Tyr Trp Met Asn
1               5
<210>  194
<211>  19
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  194
Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asp Lys Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210>  195
<211>  13
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  195
Arg Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Ala Tyr Gly Met Asp Tyr
1               5                   10
<210>  196
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  196
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ile Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Lys Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Phe Leu Pro Leu
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  197
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  197
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1               5                   10
<210>  198
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  198
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1               5
<210>  199
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  199
Leu Gln Tyr Asp Phe Leu Pro Leu Thr
1               5
<210>  200
<211>  124
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  200
Glu Val His Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Asp
20                  25                  30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Val Ser Gly Ser Gly Gly Ser Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Thr Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Thr Gly Gly Ser Ile Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Pro Met Asp
100                 105                 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210>  201
<211>  5
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  201
Ser Asp Ala Met His
1               5
<210>  202
<211>  17
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  202
Gly Val Ser Gly Ser Gly Gly Ser Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>  203
<211>  15
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  203
Gly Gly Ser Ile Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Pro Met Asp Val
1               5                   10                  15
<210>  204
<211>  107
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  204
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ile Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210>  205
<211>  11
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  205
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1               5                   10
<210>  206
<211>  7
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  206
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ile
1               5
<210>  207
<211>  9
<212>  Белок
<213>  Искусственная последовательность
<220>
<223>  Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид
<400>  207
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr
1               5
<---