СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ И АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
AGENTS WITH ANTI-INFLAMMATORY AND ANTIOXIDANT ACTIVITY

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной фармакологии.
В настоящее время в качестве средств, обладающих противовоспалительной активностью, а основном применяются глюкокортикоидные гормоны и нестероидные противовоспалительные средства, например ацетилсалициловая кислота, индометацин и другие, обладающие выраженной противовоспалительной активностью. Однако данные соединения обладают значительными побочными эффектами, такими как иммуносупрессия, геморрагические осложнения, увеличение риска возникновения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и ее осложнений (Каратеев А.Е., Насонова В.А. Проблема НПВП-индуцированной гастропатии: прошлое и настоящее //РМЖ. Приложение "Болезни органов пищеварения. - 2004. - №.1. - С. 36-43; Schacke H., Docke W.D., Asadullah K. Mechanisms involved in the side effects of glucocorticoids// Pharmacology & therapeutics. - 2002. - Т. 96. - №.1. - С. 23-43).
Актуальным является применение в качестве противовоспалительных средств веществ, обладающих антиоксидантной активностью, так как они способны нейтрализовывать свободнорадикальные соединения, активно образующиеся в очаге воспаления.
Известно (RU 2436793 С1, Сорокина и др., 12.20.2011) применение производного урсоловой кислоты в качестве средства, обладающего антиоксидантными, гепатопротекторными и противовоспалительными свойствами. Известно, что производные урсоловой кислоты проявляют высокую биологическую активность, однако недостатком этого соединения является низкая растворимость в полярных и неполярных растворителях, что может приводить к низкой биодоступности.
β
Известно (RU 2487884 С1, Саломатина и др., 07.20.2013) средство, представляющее собой метиловый эфир 2-циано-3,12-диоксо-18 Н-олеан-1(2),11(9)-диен-30-овой кислоты, обладающее антиоксидантной, противовоспалительной активностью. Однако недостатком этого соединения являются его иммуносупрессорные свойства, способные ограничить его потенциальное применение состояниями, при которых актуальна иммуносупрессия.
Известно (RU 2327486 С1, Малиновская и др., 27.06.2008) лекарственное средство для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, обладающее иммуномодулирующим, антивирусным, антибактериальным, антиоксидантным, мембраностабилизирующим, противовоспалительным, антитоксическим свойствами на основе интерферона с антиоксидантным комплексом. Изобретение обеспечивает уменьшение риска осложнений заболеваний, снижение токсического действия антибиотикотерапии и особенностей заболевания, повышение эффективности лечения.
Однако препараты на основе интерферонов обладают значительными побочными эффектами, в особенности со стороны психической сферы (Trask Р.С. et al. Psychiatric side effects of interferon therapy: prevalence, proposed mechanisms, and future directions // Journal of Clinical Oncology. - 2000. - Т. 18. - №. 11. - С. 2316-2326), что существенно ограничивает широту применения средств на основе интерферона.
Известно (RU 2014841 С1, Соколов и др., 30.06.1994) применение дигидрокверцетина (ДГК), препарата флавоноидной природы, не обладающего значительными побочными эффектами, в качестве капилляроукрепляющего, антиоксидантного, противовоспалительного и антигистаминного средства.
Однако данное вещество не является водорастворимым, что отрицательно сказывается на биодоступности и препятствует разработке лекарственных форм для инъекционного введения на основе дигидрокверцетина.
Задача изобретения - расширение арсенала водорастворимых средств флавоноидной природы для снижения уровня воспалительной реакции у лабораторных животных в эксперименте, в чем и состоит технический результат.
Достигается применением комплекса включения 6-[(дивторбутиламино)метил]-ДГК в циклодекстрин (далее КН-14-ЦД) в качестве средства, обладающего противовоспалительной и антиоксидантной активностью.
На фигуре представлена формула соединения 6-[(дивторбутиламино)метил]-дигидрокверцитина. Показано схематическое включение в циклодекстриновую оболочку.
КН-14-ЦД является водорастворимой формой аминометилированного производного флавоноида дигидрокверцетина. Водорастворимость достигается с помощью включения соединения КН-14 (6-[(дивторбутиламино)метил]-ДГК) в оболочку из циклического олигосахарида - циклодекстрина.
Технология изготовления КН-14-ЦД - комплекса включения 6-[(дивторбутиламино)метил]-дигидрокверцитина в циклодекстрин - описана в патенте (RU 2396077 С1, Коротеев A.M., Казиев Г.З. и др., 10.08.2010), а его исследование в статье (Роговский В.С. и др. Влияние комплекса включения аминометилированного производного дигидрокверцетина в циклодекстрин на окисление фибриногена озоном // Химико-фармацевтический журнал. - 2013. - Т. 47. - №.6. - С.10-13).
Процесс получения описываемого соединения проводят в среде деионизированной воды с использованием стехиометрических количеств очищенного 6-[(дивторбутиламино)метил]-дигидрокверцетина (1 моль) и β-циклодекстрина (1 моль). После кипячения горячую реакционную смесь фильтруют через стеклянный фильтр и медленно, в монотонном режиме охлаждают со скоростью охлаждения 0,5-2,0 град/мин в стерильной посуде в присутствии водоотнимающего средства, в результате чего начинается процесс кристаллизации. После чего осуществляют выдержку до завершения процесса кристаллизации (до полной кристаллизации). При этом процесс кристаллизации проводят в условиях полного покоя. Использование указанного режима диктуется необходимостью поддерживания большей скорости роста кристаллов по отношению к скорости образования зародышей кристаллов. В этих условиях образуется кристаллическое комплексное соединение включения КН-14 в β-циклодекстрин, а именно комплекс включения 6-[(дивторбутиламино)метил]-дигидрокверцетина в циклодекстрин. Затем растворитель удаляют декантацией, кристаллы промывают минимальным количеством охлажденной воды, отфильтровывают и проводят двухстадийную вакуумную сушку, а именно сушат последовательно в вакууме водоструйного и масляного насосов. При этом получают комплекс типа «гость-хозяин» с выходом 80% и более (RU 2396077 С1, Коротеев A.M., Казиев Г.З. и др., 10.08.2010).
Испытания снижения уровня воспалительной реакции у лабораторных животных в эксперименте с использованием каррагенана аналогичны описанию в патенте (RU 2514651 С1, 27.04.2014, Платанов и др.) и статье (Christopher J.M. Inflammation protocols. // Methods in Molecular Biology. 2003. - Vol. 225. - P. 115-121).
В опытах на белых неинбредных мышах-самцах массой 20-25 г изучалось действие КН-14-ЦД по снижению уровня воспалительной реакции в модели острого воспаления: каррагенан-индуцированный отек лапки мыши (Christopher J.M. Inflammation protocols. // Methods in Molecular Biology. 2003. - Vol. 225. - P. 115-121). КН-14-ЦД вводился в виде раствора внутрибрюшинно в дозе 0,04 ммоль/кг веса животного в утренние часы за 30 минут до введения каррагенана. Контрольной группой служили животные, получавшие физраствор в аналогичном объеме. При применении КН-14-ЦД у подопытных животных, тестируемых при помощи метода каррагенан-индуцированного отека лапки мыши, выявлены следующие изменения регистрируемого параметра величины отека лапки, по сравнению с контрольной группой. В таблице представлены средние величины показателей.
*
Проводился эксперимент по изучению изменения уровня воспалительной реакции у мышей, получавших КН-14-ЦД в дозе 0,04 ммоль/кг, с помощью метода каррагенан-индуцированного отека. Значение показателя величины отека лапки у подопытной группы, которой вводили исследуемое соединение, достоверно (р<0,05) снизилось по сравнению с контрольной группой на 45% (см. таблицу). Данные представлены в виде средних значений и стандартных ошибок среднего (М±s.e.m.). - различия с контролем статистически значимы (Р<0,05).
Таким образом, КН-14-ЦД снижает уровень воспалительной реакции в методе каррагенан-индуцированного отека лапки мыши, что свидетельствует о наличии у исследуемого соединения противовоспалительного эффекта.
Изучаемое соединение
Величина отека лапки через 3 часа после введения каррагенана, мм
Уменьшение отека лапки через 3 часа после введения каррагенана по сравнению с контролем, %
Контроль (физ. р-р)
1,20±0,11
-
КН-14-ЦД (0,04 ммоль/кг)
0,66±0,07
45<sup>*</sup>
Показатель величины отека лапки через 3 часа после введения каррагенана у подопытной группы, получавшей КН-14-ЦД, достоверно (р<0,05) снижается по сравнению с контрольной группой. Таким образом, КН-14-ЦД снижает уровень воспалительной реакции в методе каррагенан-индуцированного отека лапки мыши, что свидетельствует о наличии у исследуемого вещества противовоспалительного эффекта.
++
++
Проводился эксперимент по изучению антиоксидантной активности с использованием АБТС-теста. Методика эксперимента аналогична описанию в статье (Re R. et al. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay // Free Radical Biology and Medicine, - 1999. - Т. 26. - №.9. - Р. 1231-1237). В раствор катион-радикалов АБТС, приготовленный по методике Ре и соавторов, вносили соединение КН-14-ЦД до получения концентрации 10 мкМ. При этом уменьшение оптической плотности раствора катион-радикалов АБТС, свидетельствующее об антиоксидантной активности, составило 42±4%.
Таким образом, водорастворимая форма КН-14-ЦД обладает как противовоспалительной, так и антиоксидантной активностью.