СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЗМАРКЕРНЫХ ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЙ, СИНТЕЗИРУЮЩИХ ЦЕЛЕВОЙ ПРОДУКТ, И РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

1. Способ получения безмаркерных трансгенных растений, синтезирующих целевой продукт, включающий кокультивирование эксплантов растений со штаммом бактерии вида Agrobacterium tumefaciens, несущим рекомбинантную плазмиду с геном целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве рекомбинантной плазмиды используют рекомбинантную плазмиду рВМ, несущую ген целевого продукта и свободную от селективных маркерных генов устойчивости к антибиотикам и гербицидам, помещают трансформированные экспланты растений на среду, не содержащую антибиотики, для инициации побегов, полученные побеги выращивают на свежей среде до фертильных трансгенных растений, несущих целевой ген и имеющих признаки исходного сорта, затем ведут прямую селекцию растений по синтезируемым ими целевым продуктам.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве штамма бактерии вида Agrobacterium tumefaciens используют штамм Agrobacterium tumefaciens LBA4404 (pAL4404), содержащий рекомбинантную плазмиду рВМ.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбор трансформантов ведут после регенерации побегов растений иммуноферментным или вестерн-блот анализом непосредственно, анализируя экстракты молодых проростков растений, образовавшихся на питательной среде, не содержащей антибиотики, и экспрессирующих ген целевого продукта.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что рекомбинантная плазмида рВМ в качестве гена целевого продукта содержит ген, выбранный из ряда: ген, кодирующий поверхностный антиген вируса гепатита В, ген, кодирующий антимикробный пептид млекопитающих цекропин Р1, ген дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis СryIА(b), ген бактериальной ДНК-метилтрансферазы M.EcoRII.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что для трансформации используют растение, выбранное из ряда: табак (Nicotiana), картофель (Solanum), томат (Lycopersicon), масличный рапс (Brassica), капуста (Brassica).
6. Рекомбинантная плазмида рВМ, содержащая ген целевого продукта, репликон широкого круга хозяев RK2 и свободная от селективных маркерных генов устойчивости к антибиотикам и гербицидам, при этом в состав кассеты экспрессии указанной плазмиды входят генетическая конструкция, выбранная из ряда: промотор CaMV 35SS - ген HBsAg - терминатор pACaMV, промотор CaMV 35S - ген cecPl - терминатор pACaMV, промотор TR1' - ген CryIA(b) - терминатор pAocs, промотор pNOS - ген M.EcoRII- терминатор pAnos,
7. Рекомбинантная плазмида по п.6, отличающаяся тем, что в качестве гена целевого продукта она содержит ген, выбранный из ряда: ген, кодирующий антиген вируса гепатита В, ген, кодирующий антимикробный пептид млекопитающих цекропин Р1, ген дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis CryIА(b), ген бактериальной ДНК-метилтрансферазы M.EcoRII.