Сравнение циклоспоринов a и d с помощью спектроскопии ЯМР

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. СЕРИЯ ЕСТЕСТВЕННЫЕ НАУКИ

2019, Т. 161, кн. 1 С. 56-65

ISSN 2542-064X

УДК 539.199:543.429.23

doi: 10.26907/2542-064X.2019.1.56-65

СРАВНЕНИЕ ЦИКЛОСПОРИНОВ A И D С ПОМОЩЬЮ СПЕКТРОСКОПИИ ЯМР

П.П. Кобчикова, Ю.О. Згадзай, С.В. Ефимов, В.В. Клочков

Казанский (Приволжский) федеральный университет, г. Казань, 420008, Россия

Изучен природный вариант циклоспорина А - циклоспорин D - методом спектроскопии ЯМР высокого разрешения в неполярном растворе (хлороформе). Проведено полное отнесение полученных сигналов ЯМР :Н и 13С, сравнительный анализ которых с данными по циклоспорину А позволил выявить определенные различия между этими двумя пептидами, наиболее заметные по химическим сдвигам атомов основной цепи остатков 5, 8 и по появлению водородной связи в остатке 1. Циклоспорин D по спектральным параметрам отличается от CsA незначительно, но при этом практически не имеет иммунологической активности. Представленные результаты заполняют пробел в данных ЯМР для вариантов циклоспорина, отличных от CsA, и дают информацию о различиях между вариантами пептидов, которые могут быть ответственны за их различную биологическую активность.

Ключевые слова: ЯМР, циклоспорин, CsA, CsD, химические сдвиги основной цепи, водородная связь

Семейство циклоспоринов включает более 30 циклических пептидов, встречающихся в природе в качестве метаболитов почвенных грибов. Впервые он был выделен из Tolypocladium inflatum Gams [1], также известного как Tolypocladium niveum (O. Rostr.) Bissett [2]; телеоморфная форма этого организма известна как Cordyceps subsessilis Petch [3] или Elaphocordyceps subsessilis (Petch) [4] и является паразитом жесткокрылых.

Циклоспориновая цепь состоит из 11 аминокислотных остатков и замкнута в кольцо. Остаток Bmt (4-methyl-4-[(E)-2-butenyl]-4,N-methyl threonine) или его производные являются уникальным признаком циклоспоринов, его обычно считают первым в цепи; D-Ala находится в позиции 8; остаток 2 является наиболее вариабельным среди всего семейства этих пептидов. Другие различия между возможными вариантами пептидов могут включать замену аминокислот, наличие или отсутствие N-метилирования амидной группы и изменения оптических изомеров отдельных остатков. Синтез этой необычной молекулы не является рибосомным [5-7], поэтому состав синтезируемой смеси зависит от содержания исходных молекул, присутствующих в клетке.

На основе вышесказанного можно заключить, что все циклоспорины схожи по составу и свойствам в отношении их молекулярной массы и гидрофобности,

Аннотация

Введение

но имеют разное воздействие на организм. Циклоспорин D демонстрирует им-муноподавляющие свойства, хотя значительно менее выраженные, чем для варианта А. Таким образом, возникает вопрос о влиянии отдельных аминокислотных замен на физические и биологические свойства циклоспоринов, а также практический вопрос контроля состава лекарственных препаратов.

Спектроскопия ядерного магнитного резонанса, как правило, используется для изучения структуры органических соединений в растворах, в том числе пептидов. Анализируя информацию о межатомных расстояниях [8, 9] и об ориентации межатомных связей [10, 11], можно определить структуру молекул различными методами ЯМР.

1. Экспериментальная часть

Составы циклоспоринов А и D представлены в табл. 1. CsD содержит ва-лин в положении 2 вместо а-аминомасляной кислоты (АЬи2).

Табл. 1

Состав циклоспоринов

Аминокислотная последовательность Брутто-формула CAS no.

CsA cyclo[N(Me)Bmt(E)-4AM-Sar-N(Me)Leu-Val- N(Me)Leu-Ala-D-Ala-N(Me)Leu-N(Me)Leu- N(Me)Val] C62H111N11O12 59865-13-3

CsD cyclo [N(Me)Bmt(E) - Fa/-Sar-N(Me)Leu-Val-N(Me)Leu-Ala-D-Ala-N(Me)Leu-N(Me)Leu-N(Me)Val] C63H113N11O12 63775-91-7

ЯМР-спектры регистрировались при температуре 25 °C на спектрометре Bruker Avance III HD 700. В качестве внутреннего стандарта химического сдвига использовался ТМС. Отнесение сигналов проводилось с использованием методик двумерной корреляционной спектроскопии DQF-COSY, TOCSY, HSQC и HMBC.

Области сильного перекрытия сигналов затрудняли идентификацию некоторых атомов, в том числе Mle4 Ha и двух протонов при двойной связи в Bmtl (~5.4 м.д.); атомы Bmtl Hn, Ну и CH2ô также имели близкие сигналы в одной и той же области вместе с некоторыми неэквивалентными протонами CH2 других остатков (1.6-1.7 м.д.). Гетероядерные спектры были необходимы для разрешения этих областей перекрытия, соотнесения групп NCH3 и определения места каждого остатка в 11-членной цепи по сигналам карбонильных атомов углерода.

Гомоядерные 2D-спектры были записаны в спектральном окне 10^10 м.д. с числом точек по временному измерению 2048^512. HSQC-спектр имел пек-тральную ширину 10x140 м.д. (с центром на 65 м.д.) с 2048x512 точками; у HMBC-спектра были следующие параметры: ширина 10x200 м.д. (с центром на 95 м.д.) и число точек 4096x512. Спектр HMBC был оптимизирован для дальнего КССВ между ядрами H и C 6 Гц.

58

П.П. КОБЧИКОВА и др.

2. Результаты

Циклоспорин А был исследован методом ЯМР в различных растворителях. Структурные данные в хлороформе и бензоле были получены Х. Кесслером с соавторами [12, 13].

Рис. 1. Амидная область ЯМР-спектров циклоспоринов CsA (500 МГц) и D (700 МГц) в CDCl3. Стрелки показывают сателлиты 13С-сигнала хлороформа; в нижнем спектре они меньше, так как образец CsA имел более высокую концентрацию. Dal обозначает D-Ala8. Метка Val показывает пик одного из минорных конформеров CsA

Рис. 2. Часть ЯМР-спектров циклоспоринов CsA

На рис. 1 приведены резонансы протонов NN исследованных пептидов в хлороформе. Сигналы остатков 2, А1а7 и Dаl8 появляются почти в одних и тех же областях, в то время как пик Уа15 немного смещается, отличаясь на 0.1 м.д. Сигналы малой интенсивности относятся к дополнительным конформерам, имеющим незначительную концентрацию в равновесии [14], однако в спектре CsD эти второстепенные сигналы практически незаметны.

На рис. 2 представлена средняя область спектров, содержащая семь интенсивных линий групп NCH3. Здесь также не наблюдается никаких дополнительных

Рис. 3. Спектр 1H,13C-HSQC циклоспоринов A (500 MHz) и D (700 MHz) в CDCl3 и 25 °C. Показана область сигналов CHa, а также пик Bmtl CHp

сигналов, которые означали бы присутствие минорных конформеров для CsD. Следовательно, этот вариант циклоспорина присутствует в виде одной молекулярной конформации.

Заметное различие в спектрах, обнаруженное для CsD, заключается в наличии дополнительных сигналов около 3.8 м.д., которые нельзя идентифицировать по экспериментам H, C-HSQC. Однако они имеют корреляцию с Р-протонами Bmtl в COSY и TOCSY, поэтому были отнесены к гидроксильной группе в у-положении. Пиков такого типа в спектре CsA не наблюдается; однако спектр ядерного эффекта Оверхаузера этого пептида содержит широкий сигнал в высо-копольной области (около 1.8 м.д.), который был отнесен к группе ОН, обменивающейся с остаточной водой [14].

Отнесение сигналов было выполнено на основе гомоядерной и гетероядер-ной корреляционной спектроскопии (DQF-COSY, TOCSY, HSQC и HMBC). Гомоядерные спектры позволили определить отдельные спиновые системы лейцина, аланина, валина и других аминокислот. Отдельные остатки одного и того же типа различались с помощью спектров HSQC и HMBC, которые позволяли

60

П.П. КОБЧИКОВА и др.

Табл. 2

Химические сдвиги атомов основной цепи и значения RMSD относительно циклоспорина А, м.д. Остаток 2 не был включен в расчеты RMSD

№ остатка CsA CsD

Са На С' Са На С'

1 58.97 5.461 170.6 59.00 5.555 170.7

2 48.94 5.021 174.0 59.97 4.748 173.9

3 50.50 4.725 171.4 50.52 4.722 171.2

3.198 3.183

4 55.63 5.334 170.2 55.57 5.322 170.0

5 55.56 4.646 174.0 55.63 4.614 173.8

6 55.48 4.973 171.8 55.34 4.972 171.5

7 47.77 4.511 171.4 48.58 4.532 171.0

8 45.33 4.820 173.7 45.12 4.835 173.4

9 48.35 5.687 170.5 48.25 5.698 170.3

10 57.69 5.069 170.3 57.64 5.060 170.1

11 58.06 5.119 173.7 57.86 5.131 173.6

RMSD 0.042 0.0101 0.08

отслеживать аминокислотную последовательность по сигналам углерода 13СО; они также были полезны для нахождения перекрывающихся сигналов и концевых групп СН3 боковых цепей. Спектры HSQC двух видов циклоспорина (область сигналов СНа-групп) показаны на рис. 3. Как видно, положение большинства сигналов изменяется незначительно.

Полученные спектры HSQC для циклоспоринов А и D оказались близки. Замена второго остатка другой аминокислотой влияет главным образом на химические сдвиги основной цепи в положениях 2, его соседях 1 и 3 и в более отдаленных положениях Уа15 и D-Ala8. Общее отличие между конформациями может быть описано среднеквадратичным отклонением RMSD между химическими сдвигами атомов основной цепи (Са, На, С'), исключая остаток 2:

, ч 0 5

RMSD Гу&^ОА)): ^ и

V X

где I = 1, 3, 4, ... п, и п = 10 (для углеродов) или 11 (для а-протонов). Химические сдвиги атомов и соответствующие значения RMSD, рассчитанные с использованием С8А, взятого в качестве эталона, приведены в табл. 2.

Согласно исследованиям методом инфракрасной спектроскопии [15], цик-лоспорины А и D демонстрируют очень похожее поведение. Их спектры в неполярных средах выглядят почти одинаково; Н-связи постепенно ослабляются по мере того, как растворитель становится более полярным (ацетонитрил, ДМСО), но общая Р-структура молекулы остаётся неизменной. Наши исследования подтверждают, что конфигурация пептидных цепей основного конфор-

мера С8А и CsD в неполярной среде должна быть одинакова - на это указыва-

1и 13г>

ют совпадающие химические сдвиги ядер Н и С.

Однако корреляция между химическим составом и структурными свойствами (наличие определенных аминокислот, общая молекулярная укладка, тип

изгибов ß-структуры и т. д.), с одной стороны, и биологическим действием, с другой, не является прямой. Прежде всего, циклоспорины проявляют широкий спектр активности, который не ограничивается подавлением активности лимфоцитов. В иммуносупрессорных тестах (ингибирование пролиферации лимфоцитов и реакция «трансплантат против хозяина») CsA показал заметную активность в отличие от CsD [16].

Заключение

Циклоспорин А и его природный вариант CsD были исследованы методом ЯМР-спектроскопии. Они проявляют различное биологическое действие: CsA является наиболее эффективным в подавлении лимфоцитов, в то время как CsD обладает более слабым иммуноподавляющим эффектом. Поскольку молекулярная структура должна быть ключевым фактором, определяющим биологическое действие, мы попытались выявить сходства или различия между молекулами циклоспорина, которые могли бы объяснить их свойства.

Было установлено, что химические сдвиги в основных и боковых цепях пептидов близки с небольшими относительными различиями. Остатки 1 и 5 были наиболее чувствительными к аминокислотному замещению в положении 2. Среднеквадратичное отклонение химических сдвигов Ca CsD от соответствующих значений для CsA составляет примерно 0,04 м.д., а все индивидуальные различия находятся в пределах уровня 0.25 м.д. (за исключением остатка 2). RMSD для Ha не превышает 0.01 м.д. Таким образом, структуры двух пептидов различаются незначительно, и более слабое биологическое действие CsD можно отнести к потере аминокислоты Abu в положении 2.

Другие различия, которые можно обнаружить по спектрам ЯМР, заключаются в относительной конформационной чистоте CsD в хлороформе при комнатной температуре, а также в появлении отчетливых сигналов гидроксильных групп (в Bmtl в CsD). Дополнительная Н-связь делает протон ОН-группы недоступным для растворителя, благодаря чему он наблюдается в спектре ЯМР; она же может стабилизировать структуру. Дополнительная жёсткость цепи, выражающаяся в отсутствии минорных конформеров, может быть также причиной сниженной биологической активности этого пептида. Однако необходимо учитывать, что конформационная подвижность зависит не только от свойств самого соединения, но и от используемого растворителя [17]. Необходима дополнительная подробная информация о пространственной структуре, чтобы прояснить, как изменяются ориентации основной и боковых цепей и как это может повлиять на физиологическое действие циклоспорина.

Благодарности. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (проект № 18-73-10088). Использовано оборудование Федерального центра коллективного пользования (ФЦКП ФХИ).

Литература

1. Gams W. Tolypocladium, eine Hyphomycetengattung mit geschwollenen // Phialiden.

Persoonia. - 1971. - V. 6. - P. 185-191.

2. Bissett J. Notes on Tolypocladium and related genera // Can. J. Bot. - 1983. - V. 61. -P. 1311-1329.

3. Hodge K.T., Krasnoff S.B., Humber R.A. Tolypocladium inflatum is the anamorph of Cordyceps subsessilis // Mycologia. - 1996. - V. 88. -P. 715-719.

4. Sung G.-H., Hywel-Jones N.L., Sung J.-M., Luangsa-Ard J.J., Shrestha B., Spatafora J. W. Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi // Stud. Mycol. -2007. - V. 57. - P. 5-59. - doi: 10.3114/sim.2007.57.01.

5. Lawen A., Zocher R. Cyclosporin synthetase: The most complex peptide synthesizing multienzyme polypeptide so far described // J. Biol. Chem. - 1990. - V. 265, No 19. -P. 11355-11360.

6. Hoppert M., Gentzsch C., Schorgendorfer K. Structure and localization of cyclosporin synthetase, the key enzyme of cyclosporin biosynthesis in Tolypocladium inflatum // Arch. Microbiol. - 2001. - V. 176, No 4. - P. 285-293. - doi: 10.1007/s002030100324.

7. Survase SA., Kagliwal L.D., Annapure U.S., Singhal R.S. Cyclosporin A - A review on fermentative production, downstream processing and pharmacological applications // Biotech-nol. Adv. - 2011. - V. 29, No 4. - P. 418-435. - doi: 10.1016/j.biotechadv.2011.03.004.

8. Blokhin D.S., Efimov S.V., Klochkov A.V., Yulmetov A.R., Filippov A.V., Antzutkin O.N., AganovA.V., Klochkov V.V. Spatial structure of the decapeptide Val-Ile-Lys-Lys-Ser-Thr-Ala-Leu-Leu-Gly in water and in a complex with sodium dodecyl sulfate micelles // Appl. Magn. Reson. - 2011. - V. 41, No 2-4. - P. 267-282. - doi: 10.1007/s00723-011-0257-x.

9. Usachev K.S., Filippov A.V., Khairutdinov B.I., Antzutkin O.N., Klochkov V.V. NMR structure of the arctic mutation of the alzheimer's AP(1-40) peptide docked to SDS micelles // J. Mol. Struct. - 2014. - V. 1076. - P. 518-523. - doi: 10.1016/j.molstruc.2014.08.030.

10. Usachev K.S., Filippov A.V., Antzutkin O.N., Klochkov V.V. A combination of the RDC method and NOESY NMR spectroscopy for structural determination of the Alzheimer's amyloid AP10-35 peptide in solution and in SDS micelles // Eur. Biophys. J. - 2013. -V. 42, No 11-12. - P. 803-810. - doi: 10.1007/s00249-013-0928-7.

11. KlochkovA.V., KhairutdinovB.I., TagirovM.S., Klochkov V.V. Determination of the spatial structure of glutathione by residual dipolar coupling analysis // Magn. Res. Chem. -2005. - V. 43, No 11. - P. 948-951. - doi: 10.1002/mrc.1650.

12. Kessler H., Loosli H.-R., Oschkinat H. Peptide conformations. Part 30. Assignment of the :H-, 13C-, and 15N NMR spectra of cyclosporin A in CDCl3 and C6D6 by a combination of homo- and heteronuclear two-dimensional techniques // Helv. Chim. Acta. - 1985. -V. 68, No 3. - P. 661-681. - doi: 10.1002/hlca.19850680318.

13. Loosli H.-R., Kessler H., Oschkinat H., Weber H.-P., Petcher T.J., Widmer A. Peptide conformations. Part 31. The conformation of cyclosporin a in the crystal and in solution // Helv. Chim. Acta. - 1985. - V. 68, No 3. - P. 682-704. - doi: 10.1002/hlca. 19850680319.

14. Efimov S.V., Karataeva F.Kh., Aganov A.V., Berger S., Klochkov V.V. Spatial structure of cyclosporin A and insight into its flexibility //J. Mol. Struct. - 2013. - V. 1036. - P. 298304. - doi: 10.1016/j.molstruc.2012.11.005.

15. Bodack L.A., Freedman T.B., Chowdhry B.Z., Nafie L.A. Solution conformations of cy-closporins and magnesium-cyclosporin complexes determined by vibrational circular di-chroism // Biopolymers. - 2004. - V. 73, No 2. - P. 163-177. - doi: 10.1002/bip.10513.

16. Sadeg N., Pham-Huy C., Claude J.-R., Rucay P., Bismuth H., Righenzi S., Halle-Pannenko O., Duc H.-T. In vitro and in vivo comparative studies on immunosuppressive properties of cyclosporines A, C, D and metabolites M1, M17 and M21 // Immunophar-macol. Immunotoxicol. - 1993. - V. 15, No 2-3. - P. 163-177.

17. Khodov I.A., Efmov S.V., Klochkov V.V., Alper G.A., Batista de Carvalho L.A.E. Determination of preferred conformations of ibuprofen in chloroform by 2D NOE spectroscopy // Eur. J. Pharm. Sci. - 2014. - V. 65. - P. 65-73. - doi: 10.1016/j.ejps.2014.08.005.

Поступила в редакцию 28.01.19

Кобчикова Полина Павловна, студент Института физики Казанский (Приволжский) федеральный университет ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия E-mail: pollymoon@ya.ru

Згадзай Юрий Олегович, аспирант Института физики, младший научный сотрудник НИЛ «Реологические и термохимические исследования»

Казанский (Приволжский) федеральный университет ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия E-mail: yurchubuk@yandex.ru

Ефимов Сергей Владимирович, кандидат физико-математических наук, старший научный сотрудник научной лаборатории ЯМР

Казанский (Приволжский) федеральный университет ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия E-mail: Sergej.Efimov@kpfu.ru

Клочков Владимир Васильевич, доктор химических наук, профессор кафедры медицинской физики

Казанский (Приволжский) федеральный университет ул. Кремлевская, д. 18, г. Казань, 420008, Россия E-mail: Vladimir.Klochkov@kpfu.ru

ISSN 2542-064X

UCHENYE ZAPISKI KAZANSKOGO UNIVERSITETA. SERIYA ESTESTVENNYE NAUKI

2019, vol. 161, no. 1, pp. 56-65

doi: 10.26907/2542-064X.2019.1.56-65

Comparison of the Cyclosporine Variants A and D by NMR Spectroscopy

P.P. Kobchikova , Yu.O. Zgadzay , S.V. Efimov , V.V. Klochkov Kazan Federal University, Kazan, 420008 Russia E-mail: pollymoon@ya.ru, yurchubuk@yandex.ru, Sergej.Efimov@kpfu.ru, Vladimir.Klochkov@kpfu. ru

Received January 28, 2019 Abstract

A natural variant of cyclosporine A, cyclosporine D, has been studied using high-resolution NMR spectroscopy in a non-polar solution (chloroform). A complete assignment of the 'H and 13C NMR signals has been made. A comparative analysis of the obtained spectra with the data on cyclosporine A has revealed certain differences between these two peptides, which are most noticeable in the chemical shifts of the atoms of the main chain of residues 5, 8 and the appearance of the hydrogen bond in residue 1. Cyclosporine D is slightly different from CsA in its spectral parameters, but it shows practically no immunological activity. The presented results fill in the gap in the NMR data for cyclosporine variants other

than CsA and provide more details about the differences between the peptide variants that may be responsible for their different biological activity.

Keywords: NMR, cyclosporine, CsA, CsD, backbone chemical shifts, hydrogen bond

Acknowledgements. The work was supported by the Russian Science Foundation (project no. 1873-10088). The equipment of the Center of Shared Facilities for Physical and Chemical Research of Substances and Materials was used.

Figure Captions

Fig. 1. The amide region of the NMR spectra of cyclosporines CsA (500 MHz) and D (700 MHz) in CDCl3. The arrows show the 13C chloroform signal satellites; in the lower spectrum, they are smaller, because the CsA sample had a higher concentration. Dal is D-Ala8. The Val* mark shows the peak of one of the CsA minor conformers.

Fig. 2. Part of the NMR spectra of cyclosporines CsA (500 MHz) and D (700 MHz) in CDCl3 showing

signals from the N-methyl groups and some signals from threonine (Bmt) and sarcosine (Sar). Fig. 3. Spectrum 'H, 13C-HSQC of cyclosporines A (500 MHz) and D (700 MHz) in CDCl3 and 25°C. The region of CHa signals is shown, as well as the Bmt1 CHp peak.

References

1. Gams W. Tolypocladium, eine Hyphomycetengattung mit geschwollenen. Phialiden. Persoonia, 1971, vol. 6, pp. 185-191.

2. Bissett J. Notes on Tolypocladium and related genera. Can. J. Bot., 1983, vol. 61, pp. 1311-1329.

3. Hodge K.T., Krasnoff S.B., Humber R.A. Tolypocladium inflatum is the anamorph of Cordyceps subsessilis. Mycologia, 1996, vol. 88, pp. 715-719.

4. Sung G.-H., Hywel-Jones N.L., Sung J.-M., Luangsa-Ard J.J., Shrestha B., Spatafora J.W. Phylo-genetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi. Stud. Mycol., 2007, vol. 57, pp. 5-59. doi: 10.3114/sim.2007.57.01.

5. Lawen A., Zocher R. Cyclosporin synthetase: The most complex peptide synthesizing multienzyme polypeptide so far described. J. Biol. Chem., 1990, vol. 265, no. 19, pp. 11355-11360.

6. Hoppert M., Gentzsch C., Schorgendorfer K. Structure and localization of cyclosporin synthetase, the key enzyme of cyclosporin biosynthesis in Tolypocladium inflatum. Arch. Microbiol., 2001, vol. 176, no. 4, pp. 285-293. doi: 10.1007/s002030100324.

7. Survase S.A., Kagliwal L.D., Annapure U.S., Singhal R.S. Cyclosporin A - A review on fermentative production, downstream processing and pharmacological applications. Biotechnol. Adv., 2011, vol. 29, no. 4, pp. 418-435. doi: 10.1016/j.biotechadv.2011.03.004.

8. Blokhin D.S., Efimov S.V., Klochkov A.V., Yulmetov A.R., Filippov A.V., Antzutkin O.N., Aganov A.V., Klochkov V.V. Spatial structure of the decapeptide Val-Ile-Lys-Lys-Ser-Thr-Ala-Leu-Leu-Gly in water and in a complex with sodium dodecyl sulfate micelles. Appl. Magn. Reson., 2011, vol. 41, nos. 2-4, pp. 267-282. doi: 10.1007/s00723-011-0257-x.

9. Usachev K.S., Filippov A.V., Khairutdinov B.I., Antzutkin O.N., Klochkov V.V. NMR structure of the arctic mutation of the alzheimer's AP(1-40) peptide docked to SDS micelles. J. Mol. Struct., 2014, vol. 1076, pp. 518-523. doi: 10.1016/j.molstruc.2014.08.030.

10. Usachev K.S., Filippov A.V., Antzutkin O.N., Klochkov V.V. A combination of the RDC method and NOESY NMR spectroscopy for structural determination of the Alzheimer's amyloid AP10-35 peptide in solution and in SDS micelles. Eur. Biophys. J., 2013, vol. 42, nos. 11-12, pp. 803-810. doi: 10.1007/s00249-013-0928-7.

11. Klochkov A.V., Khairutdinov B.I., Tagirov M.S., Klochkov V.V. Determination of the spatial structure of glutathione by residual dipolar coupling analysis. Magn. Res. Chem., 2005, vol. 43, no. 11, pp. 948-951. doi: 10.1002/mrc.1650.

12. Kessler H., Loosli H.-R., Oschkinat H. Peptide conformations. Part 30. Assignment of the 'H-, 13C-, and 15N NMR spectra of cyclosporin A in CDCl3 and C6D6 by a combination of homo- and hetero-nuclear two-dimensional techniques. Helv. Chim. Acta, 1985, vol. 68, no. 3, pp. 661-681. doi: 10.1002/hlca. 19850680318.

13. Loosli H.-R., Kessler H., Oschkinat H., Weber H.-P., Petcher T.J., Widmer A. Peptide conformations. Part 31. The conformation of cyclosporin a in the crystal and in solution. Helv. Chim. Acta, 1985, vol. 68, no. 3, pp. 682-704. doi: 10.1002/hlca.19850680319.

14. Efimov S.V., Karataeva F.Kh., Aganov A.V., Berger S., Klochkov V.V. Spatial structure of cyclosporin A and insight into its flexibility. J. Mol. Struct., 2013, vol. 1036, pp. 298-304. doi: 10.1016/j.molstruc.2012.11.005.

15. Bodack L.A., Freedman T.B., Chowdhry B.Z., Nafie L.A. Solution conformations of cyclosporins and magnesium-cyclosporin complexes determined by vibrational circular dichroism. Biopolymers, 2004, vol. 73, no. 2, pp. 163-177. doi: 10.1002/bip.10513.

16. Sadeg N., Pham-Huy C., Claude J.-R., Rucay P., Bismuth H., Righenzi S., Halle-Pannenko O., Duc H.-T. In vitro and in vivo comparative studies on immunosuppressive properties of cyclosporines A, C, D and metabolites M1, M17 and M21. Immunopharmacol. Immunotoxicol., 1993, vol. 15, nos. 2-3, pp. 163-177.

17. Khodov I.A., Efimov S.V., Klochkov V.V., Alper G.A., Batista de Carvalho L.A.E. Determination of preferred conformations of ibuprofen in chloroform by 2D NOE spectroscopy. Eur. J. Pharm. Sci., 2014, vol. 65, pp. 65-73. doi: 10.1016/j.ejps.2014.08.005.

Для цитирования: Кобчикова П.П., Згадзай Ю.О., Ефимов С.В., Клочков В.В. Сравнение циклоспоринов A и D с помощью спектроскопии ЯМР // Учен. зап. Казан. ун-та. Сер. Естеств. науки. - 2019. - Т. 161, кн. 1. - С. 56-65. - doi: 10.26907/2542-064X.2019.1.56-65.

For citation: Kobchikova P.P., Zgadzay Yu.O., Efimov S.V., Klochkov V.V. Comparison of the cyclosporine variants A and D by NMR spectroscopy. Uchenye Zapiski Kazanskogo Uni-versiteta. Seriya Estestvennye Nauki, 2019, vol. 161, no. 1, pp. 56-65. doi: 10.26907/2542-064X.2019.1.56-65.