Морфологические изменения в тимусе крыс репродуктивного периода на фоне введения иммунодепрессанта циклофосфамида

в отношении Escherichia coli и Klebsiella pneumoniae in vitro и in vivo.

2. Аскорбиновая кислота, метилэтилпи-ридинол и N-ацетилцистеин в дозе 80 мг/кг не уменьшают нефротоксичность гентами-цина в условиях бактериального перитонита крыс, вызванного Escherichia coli или Klebsiella pneumoniae.

3. Применение антиоксидантов (аскорбиновой кислоты, метилэтилпиридинола, N-ацетилцистеина) в условиях терапии ген-тамицином не только нерационально, но и противопоказано.

ЛИТЕРАТУРА

1. Камышников B.C. Клинико-биохимичес-кая лабораторная диагностика. Справочник. В 2 т. 2-е изд. Мн.: Интерпрессервис. 2003; 2: 463 с. [Kamyshnikov V.C. Kliniko-biokhimicheskaya laboratornaya diagnostika. Clinical and biochemical laboratory diagnostics. Reference book. In 2 vols. 2nd ed. Minsk: Interpresservis. 2003; 2: 463 p. (In Russ.)]

2. Лакин Г.Ф. Биометрия. Учебное пособие для биологических специальных вузов. 4-е изд., пере-раб. и доп. М.: Высшая школа. 1990; 352 с. [Lakin G.F. Biometriya. (Biometry.) Textbook for biological special higher education institutions. 4th ed., revised and enlarged. Moscow: Vysshaya shkola. 1990; 352 p. (In Russ.)]

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Под ред. Р.У. Хабриева. 2-изд., пере-раб. и доп. М.: Медицина. 2005; 832 с. [Rukovodstvo po eksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novykh farmakologicheskikh veshchestv. (Manual on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances.) Ed. by R.U. Khabriev. 2nd ed., revised and enlarged. Moscow: Meditsina. 2005; 832 p. (In Russ.)]

УДК 612.084: 612.438: 615.277.3

4. Ali B.H. Agents ameliorating or augmenting experimental gentamicin nephrotoxicity: some recent research. Food Chem. Toxicol. 2003; 41: 1447-1452.

5. Banday A.A., Farooq N., Priyamvada S. et al. Time dependent effects of gentamicin on the enzymes of carbohydrate metabolism, brush border membrane and oxidative stress in rat kidney tissues. Life Sci. 2008; 82: 450-459.

6. Ben Ismail T.H., Ali B.H., Bashir A.A. Influence of iron, deferoxamine and ascorbic acid on gentamicin-induced nephrotoxicity in rats. Gen. Pharmacol. 1994; 25 (6): 1249-1252.

7. Cachofeiro V., Goicochea M., de Vinuesa S.G. et al. Oxidative stress and inflammation, a link between chronic kidney disease and cardiovascular disease. Kidney Int. 2008; suppl.: S4-S9.

8. De la Cruz Rodriguez L.C., Araujo C.R., Posleman S.E. et al. Attenuation of gentamicin-induced nephrotoxicity: trimetazidine versus N-acetyl cysteine. J. Appl. Toxicol. 2010; 30 (4): 343-353.

9. Hanaa M., El-Fattah A., El-Sheikh N.M. Evaluation of chemoprotective role of N-acetylcysteine and vitamin E on gentamicin-induced nephrotoxicity. Australian J. Basic Applied Sci. 2012; 6 (3): 263-270.

10. Kohanski M.A., Dwyer D.J., Hayete B. et al. A common mechanism of cellular death induced by bactericidal antibiotics. Cell. 2007; 130: 797-810.

11. Koyner J.L., Sher Ali R., Murray P.T. Antioxidants. Do they have a place in the prevention or therapy of acute kidney injury? Nephron Exp. Nephrol. 2008; 109: e109-e117.

12. Morales A.I., Detaille D., Prieto M. et al. Metformin prevents experimental gentamicin-induced nephropathy by a mitochondria-dependent pathway. Kidney Int. 2010; 77: 861-869.

13. Selby N.M., Shaw S., Woodier N. et al. Gentamicin-associated acute kidney injury. QJ. Med. 2009; 102: 873-880.

14. Stojiljkovic N., Stoiljkovic M., Randjelovic P. et al. Cytoprotective effect of vitamin C against gentamicin-induced acute kidney injury in rats. Exp. Toxicol. Pathol. 2012; 64 (1-2): 69-74.

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ТИМУСЕ КРЫС РЕПРОДУКТИВНОГО ПЕРИОДА НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ ИММУНОДЕПРЕССАНТА ЦИКЛОФОСФАМИДА

Инесса Венидиктовна Бобрышева* Луганский государственный медицинский университет, г. Луганск, Украина

Поступила 29.02.2016; принята в печать 29.03.2016.

Реферат DOI: 10.17750/KMJ2016-578

Цель. Изучить особенности морфологических преобразований вилочковой железы (тимуса) крыс репродуктивного периода на фоне введения иммунодепрессанта циклофосфамида.

Методы. Препараты тимуса изучали с помощью анализатора изображений на базе микроскопа Olympus СХ-41. В морфофункциональных зонах тимуса определяли относительную площадь (в процентах), занимаемую субкапсулярной, внутренней кортикальной зонами коркового вещества и мозговым веществом долек; плотность расположения клеток, процентное содержание клеточных элементов: лимфобластов, малых, средних и больших лимфоцитов, макрофагов, митотически делящихся, деструктивно изменённых клеток, эпи-телиоретикулоцитов.

Результаты. Установлено статистически значимое уменьшение относительной площади субкапсулярной и внутренней кортикальной зон коркового вещества, а также увеличение данного показателя в мозговом веществе тимической паренхимы через 1-30 сут после введения циклофосфамида. Плотность расположения клеток снижается как в корковом, так и в мозговом веществе. Изменяется цитоархитектоника морфофункциональных

Адрес для переписки: inessa_lug@mail.ru 578

зон вилочковой железы: происходит снижение относительного содержания лимфоцитов, преимущественно молодых форм, а также повышение процентного содержания макрофагов и деструктивно изменённых клеток. Максимальные отклонения изученных параметров зарегистрированы через 1 и 7 сут после введения препарата. Через 60 сут после введения цитостатика морфометрические характеристики морфофункциональных зон тимуса у подопытных крыс не имеют достоверных отличий от данных контрольных животных соответствующего возраста.

Вывод. Однократное введение циклофосфамида приводит к острой инволюции тимуса, выражающейся в уменьшении относительной площади коркового вещества, деформации долек, жировом перерождении органа, снижении относительного содержания лимфоцитов, повышении процентного содержания макрофагов и деструктивно изменённых клеток, что может свидетельствовать о высокой степени реактивности тимуса животных; результаты исследования могут служить морфологическим подтверждением повреждающего действия циклофосфамида на лимфоидную ткань тимуса.

Ключевые слова: крысы, тимус, циклофосфамид.

MORPHOLOGICAL CHANGES IN THE THYMUS OF RATS OF REPRODUCTIVE PERIOD ON THE BACKGROUND OF THE IMMUNOSUPPRESSANT CYCLOPHOSPHAMIDE ADMINISTRATION

I. V. Bobrysheva

Lugansk State Medical University, Lugansk, Ukraine

Aim. To study the features of morphological changes of the thymus gland (thymus) of reproductive period rats amid the administration of the immunosuppressant cyclophosphamide.

Methods. Thymus preparations were studied using an image analyzer based on CX-41 Olympus microscope. The morphological and functional areas of the thymus were determined relative areas (as a percentage) occupied by subcapsular, inner cortical zones of the cortex and thymic lobules medulla; cells distribution density, the percentage of cellular elements: lymphoblasts, small, medium and large lymphocytes, macrophages, mitotically dividing, destructively altered cells epithelioreticulocytes.

Results. A statistically significant reduction in the relative area of subcapsular and inner cortical zones of the cortex, as well as an increase in this parameter in the thymic medullary parenchyma after 1-30 days after administration of cyclophosphamide were found. The cell density is reduced both in the cortex and in the medulla. Cytoarchitectonics of the thymus morphological and functional zones changes: a decrease in relative content of lymphocytes, mainly of young forms, as well as increase in the percentage of macrophages and destructively altered cells occurred. Maximum deviations of studied parameters was recorded after 1 and 7 days after drug administration. In 60 days after cytostatic administration morphometric characteristics of the thymus morphological and functional zones in laboratory rats do not have significant differences from the parameters in control animals of appropriate age.

Conclusion. A single administration of cyclophosphamide leads to acute thymic involution, which is manifested in a decrease in the relative area of the cortex, lobules deformation, organ fatty degeneration, decrease in the relative content of lymphocytes, increase in the percentage of macrophages and destructively modified cells, which may be indicative of a high degree of reactivity of the animals thymus; results of the study may serve as morphologic evidence of the damaging effect of cyclophosphamide on the thymus lymphoid tissue.

Keywords: rats, thymus, cyclophosphamide.

Иммунная система обладает уникальными защитными механизмами, обеспечивающими гомеостаз организма [10]. Ведущая роль в этих процессах принадлежит вилочковой железе (тимусу), которая во многом определяет не только состояние периферических органов иммуногенеза, но и выраженность защитных реакций всего организма. Вместе с тем, тимус активно реагирует на экзогенные и эндогенные воздействия, что проявляется изменениями в его строении и функциях [6, 11].

Для лечения злокачественных опухолей, аутоиммунных заболеваний, в трансплантологии возникает необходимость проведения иммуносупрессивной терапии [1, 2], оказывающей негативное воздействие на различные органы и ткани, в частности на органы иммунной системы [8].

Циклофосфамид — цитостатический препарат, который широко применяют при лечении онкологических и аутоиммунных заболеваний [12, 13], используют для профилактики отторжения трансплантатов. Вместе с тем он обладает большим количеством побочных

эффектов, особенно в отношении клеток с высокой митотической активностью [7].

Несмотря на то обстоятельство, что исследования ряда авторов посвящены изучению строения органов иммунной системы при действии различных иммунотропных препаратов [6, 14], данные о строении тимуса белых крыс при экспериментальной иммуносупрессии представлены лишь в единичных публикациях [5, 6].

Всестороннее исследование влияния иммунотропных препаратов на органы иммунной системы, особенно на тканевом уровне, необходимо для целенаправленного воздействия на нарушенные гистофизи-ологические процессы, что в свою очередь является обязательным условием успешной иммунокоррекции и иммунореабилитации [8]. В свете этого детальное исследование морфофункционального состояния вилоч-ковой железы при иммуносупрессии, вызванной циклофосфамидом, представляет большой интерес как для практической медицины, так и для гистологии, иммунологии и иммуноморфологии.

Цель исследования — изучить особенности морфологических преобразований тимуса крыс репродуктивного периода на фоне введения иммунодепрессанта цикло-фосфамида.

Эксперимент выполнен в сертифицированной гистологической лаборатории кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГУ «Луганский государственный медицинский университет». Исследование проведено на 60 белых беспородных крысах-самцах репродуктивного периода (исходная массой тела животных 130-150 г, возраст 4 мес), полученных из вивария лабораторных животных университета.

Иммуносупрессивное состояние у животных моделировали путём введения цитостатического препарата циклофос-фамида (циклофосфана). Использовали «Циклофосфан-КМП» («Cyclophosphanum-KMP») производства ОАО «Киевмедпре-парат», серии П.07.02/05082. Препарат вводили животным в дозе, приводящей к иммунной депрессии (200 мг/кг массы тела животного) однократно внутримышечно на изотоническом растворе натрия хлорида. Данная модель создания иммунодефицита широко апробирована при проведении иммунологических экспериментальных исследований [5-8].

Контролем служили крысы, получавшие 0,9% раствор натрия хлорида в эквивалентном объёме.

Выведение животных из эксперимента осуществляли через 1, 7, 15, 30 и 60 сут после введения препарата путём декапитации под эфирным наркозом [4]. Эксперимент выполнен с соблюдением правил биоэтики, утверждённых Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986), и одобрен комиссией по вопросам биоэтики ГУ «Луганский государственный медицинский университет» (протокол №1 от 19.01.2013).

Объектом исследования служил тимус. Забор, фиксацию материала и изготовление парафиновых блоков выполняли согласно общепринятым методикам работы с лимфоидными органами [3]. Для изучения структурных компонентов тимуса парафиновые срезы толщиной 4-6 мкм окрашивали гематоксилином-эозином, для идентификации клеток использовали окраску азуром II-эозином [3].

Детали гистологического строения изучали с помощью аппаратно-программно-580

го комплекса, включающего микроскоп Olympus CX-41 и цифровой фотоаппарат Olympus SP 500UZ с использованием компьютерной программы «Morpholog» [9]. Определяли относительную площадь (в процентах), занимаемую субкапсулярной, внутренней кортикальной зонами коркового вещества и мозговым веществом долек. Кроме того, определяли плотность расположения клеток, в том числе лимфоцитов и эпителиоретикулоцитов, на стандартной площади (10 000 мкм2) морфофункциональ-ных зон долек тимуса.

Вычисляли лимфоэпителиальное отношение, представляющее собой отношение количества лимфоцитов к количеству эпи-телиоретикулоцитов на единице площади. Определяли процентное содержание клеточных элементов: лимфобластов, малых, средних и больших лимфоцитов, макрофагов, митотически делящихся, деструктивно изменённых клеток, эпителиоретикулоци-тов в морфофункциональных зонах тимуса. Производили подсчёт изучаемых структур на шести полях зрения каждого среза, анализировали шесть срезов с каждого объекта.

Статистическую обработку данных осуществляли методом вариационной статистики с применением t-критерия Стью-дента. Результаты обработаны при помощи пакета программ Statistica 6.0. Достоверными считали данные с уровнем а-ошибки менее 5% (р <0,05). Результаты представляли в виде среднего арифметического значения (M) и ошибки среднего (m).

Исследование вилочковой железы контрольных животных выявило расширение междольковых соединительнотканных септ, частичное замещение паренхимы жировой тканью, что можно расценить как начальные проявления возрастной инволюции железы.

После введения циклофосфамида на протяжении всего периода наблюдения тимус животных репродуктивного периода сохраняет основные морфологические черты. Вместе с тем воздействие препарата приводит к выраженным изменениям ци-тоархитектоники тимуса на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки наблюдения. Дольки приобретают неправильную полигональную или полулунную форму, имеют меньшие размеры, чем у контрольных крыс. Граница между корковым и мозговым веществом выражена нечётко. Наблюдается инверсия окрашивания слоёв тимических долек. Встречаются дольки с участками, замещёнными жировой тканью.

Рис. 1. Средняя динамика площади сечения морфофункциональных зон тимуса крыс репродуктивного периода после введения циклофосфамида в разные сроки наблюдения (n=60); *статистическая значимость разницы с показателями контрольной группы (p <0,05); n — количество наблюдений

Рис. 2. Динамика плотности расположения тимоцитов в морфофункциональных зонах тимуса крыс репродуктивного периода в контроле и после введения циклофосфамида в разные сроки наблюдения (М; п=60); *статис-тическая значимость различий с показателями контрольной группы (р <0,05); п — количество наблюдений

Наиболее выраженные изменения определяются через 1 и 7 сут после применения цитостатика. Однако через 2 мес гистологическое строение тимуса у крыс с введением циклофосфамида не имеет видимых отличий от такового у животных контрольных групп.

С помощью морфометрического исследования установлены существенные изменения относительной площади субкапсуляр-ной, внутренней кортикальной зон коркового вещества и мозгового вещества тимической паренхимы подопытных животных. Относительная площадь субкапсулярной и внутренней кортикальной зон уменьшается, а мозгового вещества — увеличивается на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки после введения циклофосфамида (р <0,05; рис. 1).

Численная плотность клеток в корковом и мозговом веществе долек тимуса животных, получавших циклофосфамид, снижается по сравнению с контролем на 1-30-е сутки наблюдения. Так, в субкапсулярной зоне плотность расположения клеток уменьшается на 19,2; 17,62; 10,12 и 8,0% соответственно 1-м, 7-м, 15-м и 30-м суткам наблюдения (р <0,05 при сравнении с контрольной группой для всех сроков наблюдения).

Количество тимоцитов на единице площади препарата меньше по сравнению с контролем в те же сроки наблюдения на 19,88; 18,91; 10,99 и 9,06% (рис. 2), а эпите-лиоретикулоцитов — на 15,34% (1-е сутки), 10,51% (7-е сутки) и 5,45% (15-е сутки) (р <0,05 при сравнении с контрольной груп-

Рис. 3. Динамика изменения лимфоэпителиального индекса в морфофункциональных зонах тимуса крыс репродуктивного периода в контроле и после введения циклофосфамида в разные сроки наблюдения (М; п=60); *ста-тистическая значимость различий с показателями контрольной группы (р <0,05); п — количество наблюдений

пой для всех сроков наблюдения).

Лимфоэпителиальный индекс снижен относительно контрольных показателей на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки на 5,35; 9,3; 5,96 и 6,81% (рис. 3). 582

Динамика общего количества клеток, тимоцитов и эпителиоретикулоцитов на единице площади внутренней кортикальной зоны аналогична таковой в субкапсулярной зоне. Различия между показателями плот-

ности расположения клеток подопытных и контрольных животных составляют 39,42; 41,0; 31,25 и 22,57% соответственно на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки наблюдения.

Численная плотность тимоцитов по сравнению с контролем снижена в те же сроки наблюдения на 41,32; 42,86; 33,66 и 24,51% (см. рис. 2), эпителиоретикулоци-тов — на 13,78% (1-е сутки), 17,55% (7-е сутки) и 2,09% (15-е сутки). Лимфоэпите-лиальный индекс был ниже контрольных показателей на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки на 31,98*; 30,71*; 32,23* и 23,75%* соответственно (см. рис. 3).

В мозговом веществе в сравнении с контролем на 1-е, 7-е и 15-е сутки после введения циклофосфамида показатель общего количества клеток на единице площади у подопытных животных был меньше показателей контрольной группы на 35,26; 40,14 и 12,3%. Различия между показателем численной плотности тимоцитов у животных экспериментальной и контрольной групп выявлены через 1, 7, 15 и 30 сут после введения цитостатика. Разница составляет 38,42; 44,46; 19,9 и 11,8% соответственно срокам наблюдения (см. рис. 2). Лимфоэпителиаль-ный индекс снижен в аналогичные сроки на 28,44; 38,86; 41,60 и 39,73% по сравнению с показателями контрольной группы (см. рис. 3).

При изучении цитоархитектоники ти-мических долек экспериментальных животных также отмечены определённые изменения их клеточного состава. В суб-капсулярной зоне в сравнении с контролем на 1-30-е сутки наблюдения зарегистрировано снижение относительного содержания лимфоцитов, преимущественно молодых форм. Процентное содержание лимфоблас-тов в сравнении с контрольной группой снижается через 1, 7, 15 и 30 сут после введения цитостатика на 24,85; 25,08; 21,05 и 13,87%, больших лимфоцитов — на 32,0; 29,82; 25,08 и 18,06%.

Вместе с тем отмечается повышение процентного содержания макрофагов на 33,94; 34,42; 48,65 и 17,86% на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки наблюдения. По сравнению с контрольными данными статистически значимо возрастает содержание деструктивно изменённых клеток — на 28,10% (1-е сутки), 32,20% (7-е сутки), 37,62% (15-е сутки) и 20,98% (30-е сутки). Митотически делящиеся клетки практически не встречаются.

Относительное содержание эпителио-ретикулоцитов выше контрольных показа-

телей на 45,48; 47,64; 42,51 и 35,87% на 1-е, 7-е, 15-е и 30-е сутки наблюдения. На 60-е сутки после введения препарата этот показатель отличается от такового в группе контрольных животных на 11,05% (разница показателей групп не имеет статистической значимости).

Лимфоцитарная популяция внутренней кортикальной зоны представлена в основном средними и малыми лимфоцитами. Несмотря на уменьшение содержания клеточных элементов в корковом веществе после введения животным циклофосфамида, самым представительным классом клеток являются малые лимфоциты. Их относительное содержание уменьшается в течение 1-х, 7-х, 15-х и 30-х суток наблюдения на 32,01; 29,0; 20,68 и 12,0% соответственно. Уменьшено содержание и средних лимфоцитов: показатели отстают от контрольных на 13,06; 11,7; 8,09 и 7,01% через 1, 7, 15 и 30 сут наблюдения.

В значительной степени возрастает количество макрофагов и эпителиоретикуло-цитов. Их содержание на протяжении всего периода наблюдения превышает данные контрольной группы животных в несколько раз. В сравнении с контролем возрастает и относительное содержание клеток с признаками деструкции.

Изменение клеточного состава мозгового вещества после введения животным ци-тостатика проявляется снижением относительного содержания малых лимфоцитов с некоторым увеличением процента средних форм клеток. Содержание малых лимфоцитов по сравнению с контрольными значениями уменьшается на 20,06; 14,6; 10,4 и 7,5% через 1, 7, 15 и 30 сут наблюдения.

Об усилении фагоцитарной активности свидетельствует увеличение количества макрофагов. Так, на 1-е сутки их количество превышает контрольные значения на 14,47%, на 7-е сутки — на 11,75%, на 15-е — на 8,14%, а к 30-м суткам этот показатель отличается от контроля всего на 6,00%. Ми-тотически делящиеся клетки встречаются редко. Значительно повышается содержание клеток с признаками деструктивных изменений.

Через 60 сут после введения препарата морфометрические характеристики морфо-функциональных зон вилочковой железы у подопытных крыс не имеют достоверных отличий от данных контрольных животных соответствующего возраста.

Полученные результаты могут свиде-

583

тельствовать о высокой степени реактивности тимуса животных репродуктивного периода после иммуносупрессии, что проявляется изменением изученных морфо-метрических параметров по сравнению с контрольными данными в ранние сроки наблюдения (1-30-е сутки), тогда как через более длительный промежуток времени (60 сут) различия между сравниваемыми параметрами нивелируются. Подобная динамика морфологических изменений указывает на развитие акцидентальной инволюции тимуса, которая ускоряет инволю-тивные процессы.

Вероятно, имеет место токсическое влияние циклофосфамида на костный мозг, обусловливающее нарушение поступления клеток-предшественников в тимус и, как следствие, относительное уменьшение числа лимфоцитов, преимущественно молодых форм, а также увеличение относительного содержания макрофагов, деструктивно изменённых и митотически делящихся клеток.

Кроме того, подобные изменения могут быть обусловлены подавлением пролифе-ративной активности лимфоцитов, их массовым выбросом в периферическое русло и частичным цитолитическим эффектом циклофосфамида.

ВЫВОДЫ

1. Опираясь на полученные экспериментальные данные, можно заключить, что однократное введение циклофосфамида в дозе 200 мг/кг приводит к острой инволюции тимуса, выражающейся в уменьшении относительной площади коркового вещества, деформации долек, жировом перерождении органа, снижении относительного содержания лимфоцитов, преимущественно молодых форм, а также повышении процентного содержания макрофагов и деструктивно изменённых клеток.

2. Статистически значимое изменение показателей животных экспериментальной группы относительно контрольных данных установлено на 1-30-е сутки наблюдения. Максимальные отклонения изученных параметров зарегистрированы через 1 и 7 сут после введения препарата. Через 60 сут после введения цитостатика морфометри-ческие характеристики морфофункцио-нальных зон тимуса у подопытных крыс не имеют достоверных отличий от данных контрольных животных.

3. Результаты исследования могут слу-

жить морфологическим подтверждением повреждающего действия циклофосфами-да (циклофосфана) на лимфоидную ткань тимуса. Полученные данные расширяют представления об адаптационных возможностях тимуса при иммуносупрессивном воздействии на организм.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бондарчук А.О. Морфологические аспекты протекторного влияния бензофурокаина на структуру тощей кишки крыс, изменённую циклофосфамидом, в отдалённые сроки. Ж. анатом. и гистопатол. 2013; 2 (2): 51-55. [Bondarchuk A.O. Morphological aspects of protective influence of benzofurokainum on the structure of rats jejunum, changed by cyclophosphamide, at long-terms. Zhurnal anatomii i gistopatologii. 2013; 2 (2): 51-55. (In Russ.)]

2. Бондарь Г.В., Антипова С.В. Лекции по клинической онкологии. Луганск: Луганская областная типография. 2009; 585 с. [Bondar' G.V., Antipova S.V. Lektsii po klinicheskoy onkologii. (Lectures on clinical oncology.) Lugansk: Lugansk regional printing office. 2009; 585 p. (In Russ.)]

3. Волошин М.А., Чайковський Ю.Б., Кущ О.Г. Основи iмунологii та iмуноморфологii. Запорiжжя — Кш'в. 2010; 170 с. [Voloshin M.A., Chaykovs'kiy Yu.B., Kushch O.G. Osnovi imunologii ta imunomorfologii. (Basics of immunology and immunomorphology.) Zaporizhzhya — Kiiv. 2010; 170 p. (In Russ.)]

4. Западнюк В.И., Западнюк И.П., Захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. К.: Вища школа. 1983; 254 с. [Zapadnyuk V.I., Zapadnyuk I.P., Zakhariya E.A. Laboratornye zhivotnye. Razvedenie, soderzhanie, ispol'zovanie v eksperimente. (Laboratory animals. Breeding, care, use in the experiment.) Kiev: Vishcha shkola. 1983; 254 p. (In Russ.)]

5. Захаров А.А. Особенности ультрамикроскопического строения тимуса половозрелых белых крыс после иммуносупрессии. Укр. морфологiчний альманах. 2008; 6 (1): 77-79. [Zakharov A.A. Ultrastructural features of thymus structure of mature white rats after immunosupression. Ukrai'ns'kiy morfologichniy al'manakh. 2008; 6 (1): 77-79. (In Russ.)]

6. Кащенко С.А., Захаров А.А. Органометричес-кие особенности строения тимуса белых крыс после иммуностимуляции и иммуносупрессии. Укр. журнал клiнiчноi та лабораторноi медицини. 2009; 4 (3): 50-52. [Kashchenko S.A., Zakharov A.A.. Organometric features of thymus structure of white rats after immunostimulation and immunosupression. Ukrains'kiy zhurnal klinichnoy ta laboratornoy meditsini. 2009; 4 (3): 50-52. (In Russ.)]

7. Лосева Л.Ф., Доненко Ф.В., Лебединская О.В. и др. Некоторые особенности фармакодинамики цик-лофосфана у экспериментальных животных. Мед. иммунол. 2011; 13 (4-5): 52. [Loseva L.F., Donenko F.V., Lebedinskaya O.V. et al. Some features of the cyclophosphamide pharmacodynamics in experimental animals. Meditsinskaya immunologiya. 2011; 13 (4-5): 52. (In Russ.)]

8. Михайлова М.Н., Меркулова Л.М., Струч-ко Г.Ю. Использование имунофана для коррекции изменений гематологических показателей, вызванных циклофосфаном. Inter. J. Immunorehabilitation. 2003; 5 (2): 230. [Mikhaylova M.N., Merkulova L.M.,

Struchko G.Yu. Using imunofan for correction of changes in hematological parameters caused by cyclophosphamide.

International Journal on Immunorehabilitation. 2003; 5 (2): 230. (In Russ.)]

9. Овчаренко В.В., Маврич В.В. Комп'ютерна про-грама для морфометричних дослiджень «Morpholog». Сввдоцтво про реестращю авторського права на TBip №9604, дата реестраци 19.03.2004. [Ovcharenko V.V., Mavrich V.V. Computer software for morphometric studies «Morpholog». Certificate of registration of copyright №9604, registration date 19.03.2004. (In Russ.)]

10. Сепиашвили Р.И. Функциональная система иммунного гомеостаза. Аллергол. и иммунол. 2003; 4 (2): 5-14. [Sepiashvili R.I. A functional system of immune homeostasis. Allergologiya i immunologiya. 2003; 4 (2): 5-14. (In Russ.)]

11. Стручко Г.Ю., Меркулова Л.М., Москвичёв Е.В.

и др. Морфологические изменения тимуса после применения полиоксидония. Фундаментал. исслед. 2012; 5 (1): 197-202. [Struchko G.Y., Merkulova L.M., Moskvichev E.V. et al. Morphological changes of thymus after use polioxidonium. Fundamental'nye issledovaniya. 2012; 5 (1): 197-202. (In Russ.)]

12. Gladstone D.E., Zamkoff K.W., Krupp L. et al. High-dose cyclophosphamide for moderate to severe refractory multiple sclerosis. Arch. Neurol. 2006; 63 (10): 1388-1393.

13. Nakahara T., Uchi H., Lesokhin A.M. et al. Cyclophosphamide enhances immunity by modulating the balance of dendritic cell subsets in lymphoid organs. Blood. 2010; 115 (22): 4384-4392.

14. Prakash Gupta V., Singh S.M., Singh M.P. et al. Effect of intrauterine exposure of murino fetus to cyclophosphamide on development of thymus. Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2007; 29 (1): 17-30.

УДК 612.753: 616.71-001.5-089.227.84: 616.718.5-031: 612.089.61

МОРФОМЕТРИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОСТЕОСИНТЕЗА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИМПЛАНТАТОВ С ПОКРЫТИЕМ НИТРИДАМИ

ТИТАНА И ГАФНИЯ

Дмитрий Эдуардович Цыплаков1, Анастасия Эрастовна Изосимова2, Фаина Владимировна Шакирова2, Ильдар Фуатович Ахтямов1*, Эльмира Биктемировна Гатина1

1 Казанский государственный медицинский университет, г. Казань, Россия;

2Казанская государственная академия ветеринарной медицины, г. Казань, Россия

Поступила 04.02.2016; принята в печать 01.03.2016.

Реферат DOI: 10.17750/KMJ2015-585

Цель. Сравнительная морфологическая оценка репаративных процессов в костной и окружающих мягких тканях при интрамедуллярном остеосинтезе имплантатами из медицинской стали и имплантатами из медицинской стали с покрытием нитридами титана.

Методы. Экспериментальной моделью служили 40 кроликов, которым проводили открытую остеотомию большеберцовой кости с последующим ретроградным введением имплантата в костномозговой канал. Использовали спицы диаметром 2 мм из стали 12Х18Н9Т с покрытием нитридами титана и гафния. В контрольной группе использовали аналогичные спицы без покрытия. Гистологические срезы фрагментов костной ткани и послеоперационной раны, изъятых для морфологического исследования на 10-е, 30-е, 60-е и 180-е сутки от начала эксперимента, окрашивали гематоксилином и эозином, а также пикрофуксином по Ван-Гизону.

Результаты. Процентное соотношение лейкоцитарно-некротических масс на 10-е сутки составляло 3,5±0,2% в опытной группе и 6,0±0,4% в группе сравнения (p <0,05). В большинстве случаев происходило неос-ложнённое заживление перелома с началом формирования пластинчатой кости на 30-е сутки эксперимента. В группе сравнения зарегистрировано наличие большего объёма хрящевой ткани по отношению к опытной группе: 12,4±1,9 и 5,0±0,3% соответственно — на 10-е сутки, 10,7±0,8 и 4,0±0,4% — на 30-е сутки (p <0,05). Участки рассасывания хрящевой ткани сохранялись в группе сравнения и на 60-е сутки. Больший объём покрывающего рубец эпителия уже на 10-е сутки был выявлен в опытной группе (9,3±0,5% против 5,0±0,3%, p <0,05). Для группы сравнения было характерным длительное сохранение рубцовой ткани без признаков реорганизации.

Вывод. Остеосинтез с применением спиц с покрытием нитридами титана и гафния способствует уменьшению воспалительной реакции в окружающих тканях, ускоряет процесс репаративной регенерации, обеспечивая более раннюю эпителизацию раны и снижая вероятность развития осложнений в виде неполного закрытия дефекта костной ткани.

Ключевые слова: остеосинтез, имплантат, нитрид титана, нитрид гафния, регенерация.

MORPHOMETRIC JUSTIFICATION OF OSTEOSYNTHESIS USING IMPLANTS COATED WITH TITANIUM AND HAFNIUM NITRIDES

D.E. Tsyplakov1, A.E. Izosimova2, F.V Shakirova2, I.F. Akhtyamov1, E.B. Gatina1

'Kazan State Medical University, Kazan, Russia;

2Kazan State Medical Academy of Veterinary Medicine, Kazan, Russia

Aim. To perform comparative and morphological assessment of the reparative processes in the bone and the surrounding soft tissues during intramedullary osteosynthesis using stainless steel implants and titanium nitride coated stainless steel implants.

Адрес для переписки: yalta60@mail.ru

© 38. «Казанский мед. ж.», №4