ПРЕЦИЗИОННЫЕ ГЛИКОКОНЪЮГАТЫ В КАЧЕСТВЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ИНСТРУМЕНТОВ

1. Способ получения гликоконъюгатного иммуногена, включающий:
(a) обеспечение углеводного антигена, ковалентно связанного с алкеном с концевой двойной связью (алкенил-углеводного антигена), при этом указанный алкен с концевой двойной связью может непосредственно конъюгироваться с тиольной группой посредством тиол-еновой реакции;
(b) обеспечение белка-носителя, содержащего одну или более свободных тиольных групп; и
(c) проведение фотокаталитической тиол-еновой реакции для непосредственной конъюгации углеводного антигена с белком-носителем в одной или более свободных тиольных группах с получением, тем самым, гликоконъюгатного иммуногена;
при этом указанный белок-носитель является иммуногенным при введении субъекту, и при этом конъюгация углеводного антигена с белком-носителем увеличивает при введении субъекту иммуногенность углеводного антигена по сравнению с введением неконъюгированного углеводного антигена.
2. Способ по п. 1, в котором алкенил-углеводный антиген является водорастворимым.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят в условиях реакции, позволяющих избежать денатурации белка-носителя и/или поддерживающих активность, антигенность и/или структуру белка-носителя.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят в отсутствие какого-либо органического растворителя, или в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят в присутствии органического растворителя с концентрацией достаточно низкой для избежания денатурации белка-носителя.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят в присутствии катализатора.
6. Способ по п. 5, в котором катализатор представляет собой:
(а) водорастворимый катализатор, такой как водорастворимое азосоединение, образующее свободные радикалы; 2,2'-азобис[2-(2-имидазолин-2-ил)пропан]дигидрохлорид (Vazo 44 или VA-044); 2,2'-азобис(2-амидинопропан)дигидрохлорид (AAPH); металлы или ионы металлов, обладающие активностью фотоинициатора; пероксид; трет-бутилгидропероксид; бензоилпероксид; персульфат аммония; или любое их производное, обладающее активностью фотоинициатора; или
(b) водонерастворимый катализатор, такой как водонерастворимое азосоединение, образующее свободные радикалы, 2,2-диметокси-2-фенилацетофенон (DMPA), азобисизобутиронитрил (AIBN), 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил), 4,4'-азобис(4-цианопентановая кислота) (ACVA), 1,1'-азобис(цианоциклогексан) (ACHN), бис(N,N-диметиламид) диазендикарбоновой кислоты (TMAD); дипиперидид азодикарбоновой кислоты (ADD) или любое их производное, обладающее активностью фотоинициатора.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция включает облучение коротковолновым ультрафиолетовым светом.
8. Способ по п. 7, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция включает облучение при длине волны примерно 254 нм.
9. Способ по любому из пп. 1-6, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция включает облучение длинноволновым ультрафиолетовым светом.
10. Способ по п. 9, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция включает облучение при длине волны примерно 355 нм или 365 нм.
11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция включает взаимодействие от 1 до 200 молярных эквивалентов алкенил-углеводного антигена на свободную тиольную группу белка-носителя; и/или в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят в течение от 10 до 300, от 10 до 270, от 10 до 240, от 10 до 210, от 10 до 180, от 10 до 150, от 10 до 120, от 10 до 90, от 10 до 60 или от 10 до 30 минут и/или в течение времени, достаточного для достижения по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50-кратного снижения общей концентрации свободного тиола в белке-носителе.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором указанную фотокаталитическую тиол-еновую реакцию проводят при pH от примерно 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9 или 4,0 до примерно 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 или 10 и/или при pH, который позволяет избежать денатурации белка-носителя.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором указанный углеводный антиген после конъюгации с белком-носителем не отщепляется от белка-носителя эндогенным ферментом субъекта.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором указанный алкенил-углеводный антиген ковалентно связан с алкеном с концевой двойной связью, и/или углеводный антиген конъюгирован с белком-носителем посредством гликозидной связи, такой как O-гликозидная связь, S-гликозидная связь, N-гликозидная связь или C-гликозидная связь или связь, полученная путем восстановительного аминирования, такая как, между аллиламином и восстанавливающим сахаром.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором углеводный антиген содержит B-клеточный эпитоп и/или вызывает у субъекта гуморальный иммунный ответ; и/или содержит T-клеточный эпитоп, и/или вызывает у субъекта клеточно-опосредованный иммунный ответ.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором углеводный антиген представляет собой или содержит опухолеассоциированный углеводный антиген (TACA).
17. Способ по п. 16, в котором TACA представляет собой, получен из или содержит: Tn, S-Tn, антиген Томсена-Фриденрайха (TF), (2,3)-S-TF, (2,6)-S-TF, Globo H, GD2, GD3, GM2, GM3, N-гликолил-GM3, Lea, sLea, Lex, sLex или любую их комбинацию.
18. Способ по любому из пп. 1-17, в котором указанная фотокаталитическая тиол-еновая реакция конъюгирует по меньшей мере два углеводных антигена, выбранных из одного и того же углеводного антигена или более одного типа углеводного антигена, с белком-носителем с получением, тем самым, поливалентного гликоконъюгатного иммуногена.
19. Способ по п. 18, в котором указанный поливалентный гликоконъюгатный иммуноген включает 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более одинаковых или разных типов углеводных антигенов, конъюгированных с белком-носителем.
20. Способ по любому из пп. 1-19, в котором углеводный антиген представляет собой или содержит вирусный полисахаридный антиген или бактериальный капсульный полисахарид (CPS).
21. Способ по п. 20, в котором бактериальный CPS представляет собой, получен из или содержит серотип пневмококкового и/или стрептококкового полисахарида, менингококковый CPS или гриппозный CPS (например, гриппа типа a или b).
22. Способ по любому из пп. 1-21, в котором углеводный антиген в (а) связан с алкеном с концевой двойной связью посредством линкера.
23. Способ по любому из пп. 1-22, в котором белок-носитель содержит один или более цистеиновых остатков, содержащих одну или более свободных тиольных групп, или необязательно сконструирован с возможностью добавления одного или более дополнительных цистеиновых остатков, например, в амино-конец, карбокси-конец или доступное для растворителя положение белка-носителя.
24. Способ по любому из пп. 1-23, в котором белок-носитель содержит человеческий T-клеточный эпитоп и/или вызывает у субъекта клеточно-опосредованный иммунный ответ.
25. Способ по любому из пп. 1-24, в котором белок-носитель представляет собой, получен из или содержит: столбнячный анатоксин (TT), дифтерийный анатоксин (DT), перекрестно реагирующий материал 197 (CRM197), комплекс менингококковых белков наружной мембраны (OMPC), белок D гемофильной палочки (HiD), цитокин, иммуногенный пептид, такой как столбнячный токсин 831-844 (SEQ ID NO: 1 или 2), альбумин (такой как бычий сывороточный альбумин или человеческий сывороточный альбумин) или их иммуногенный фрагмент.
26. Способ по любому из пп. 1-25, в котором:
i) белок-носитель, перед или одновременно с проведением фотокаталитической тиол-еновой реакции, предварительно обрабатывают с помощью восстанавливающего агента, такого как дитиотреитол (DTT), трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP), 2-меркаптоэтиламин-HCl или 2-меркаптоэтанол;
(ii) белок-носитель, перед или одновременно с проведением фотокаталитической тиол-еновой реакции, предварительно обрабатывают тиолирующим агентом, таким как 2-имминотиолан или N-гидроксисукцинимид дитиопропионат (DPS);
(iii) белок-носитель, перед или одновременно с проведением фотокаталитической тиол-еновой реакции, предварительно обрабатывают тиолирующим агентом, таким как 2-имминотиолан или N-гидроксисукцинимид дитиопропионат (DPS), а затем предварительно обрабатывают с помощью восстанавливающего агента;
(iv) белок-носитель представляет собой белок, содержащий один или более дисульфидных мостиков, и при этом один или более дисульфидных мостиков остаются незатронутыми после проведения указанной фотокаталитической тиол-еновой реакции;
(v) белок-носитель представляет собой белок, содержащий один или более дисульфидных мостиков, и при этом указанный белок-носитель предварительно обрабатывают с помощью восстанавливающего агента для подвергания одной или более дополнительных свободных тиольных групп конъюгации с углеводным антигеном; или
(iv) белок-носитель представляет собой белок, содержащий один или более дисульфидных мостиков, и при этом указанный белок-носитель предварительно обрабатывают с помощью тиолирующего агента (такого как 2-имминотиолан или N-гидроксисукцинимид дитиопропионат (DPS)) для подвергания одной или более дополнительных свободных тиольных групп конъюгации с углеводным антигеном, а затем предварительно обрабатывают с помощью восстанавливающего агента.
27. Способ по любому из пп. 1-26, в котором общее количество углеводных антигенов, содержащихся в гликоконъюгатном иммуногене, равно количеству свободных тиольных групп, доступных на белке-носителе до конъюгации.
28. Способ по любому из пп. 1-27, в котором гликоконъюгатный иммуноген вызывает при введении субъекту клеточно-опосредованный иммунный ответ на углеводный антиген.
29. Способ по любому из пп. 1-28, дополнительно включающий: (d) очистку гликоконъюгатного иммуногена.
30. Способ получения гликоконъюгатной вакцины или композиции, запускающей адаптивный иммунный ответ, включающий объединение гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, с фармацевтически приемлемым носителем и/или адъювантом.
31. Способ по п. 30, в котором адъювант представляет собой или содержит: неорганическое соединение, минеральное масло, производное микроорганизма, растительное производное, цитокин, сквален, квасцы, гидроксид алюминия, фосфат алюминия, гидроксид фосфата кальция, агонист толл-подобных рецепторов, иммуностимулирующий полинуклеотид (такой как CPG), иммуностимулирующий липид, адъювант Фрейнда, адъювант Риби, QS-21, мурамил-дипептид, TiterMax, Steviune, Stimune или любую их комбинацию.
32. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более углеводных антигенов и иммуногенный белок-носитель, содержащий один или более доступных для растворителя цистеиновых остатков, при этом один или более углеводных антигенов связаны с иммуногенным белком-носителем в одном или более доступных для растворителя цистеиновых остатков, и при этом конъюгация одного или более углеводных антигенов с иммуногенным белком-носителем увеличивает при введении субъекту иммуногенность одного или более углеводных антигенов по сравнению с введением неконъюгированного углеводного антигена.
33. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 32, отличающийся тем, что один или более углеводных антигенов связаны с одним или более доступными для растворителя цистеиновыми остатками посредством линкера.
34. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 32, отличающийся тем, что один или более углеводных антигенов связаны с линкером посредством связи, как определено в п. 13 или 14.
35. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-34, отличающийся тем, что один или более углеводных антигенов определен/определены в пп. 2, 15, 16, 17, 20 или 21.
36. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-35, представляющий собой поливалентный гликоконъюгатный иммуноген, как определено в пп. 18 или 19.
37. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-36, отличающийся тем, что белок-носитель представляет собой белок, определенный в пп. 23, 24, 25 или 26.
38. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-37, отличающийся тем, что общее количество углеводных антигенов, содержащихся в гликоконъюгатном иммуногене, равно количеству доступных для растворителя цистеиновых остатков на белке-носителе.
39. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-38, который при введении субъекту вызывает клеточно-опосредованный иммунный ответ на углеводный антиген.
40. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-39, полученный способом по любому из пп. 1-29.
41. Гликоконъюгатная вакцина, полученная способом по п. 30 или 31 и/или содержащая синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-40 и фармацевтически приемлемый носитель и/или адъювант.
42. Гликоконъюгатная вакцина по п. 41, представляющая собой профилактическую вакцину или терапевтическую вакцину.
43. Способ иммунизации, вакцинации или лечения субъекта, включающий введение субъекту гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, гликоконъюгатной вакцины, полученной способом по п. 30 или 31, синтетического гликоконъюгатного иммуногена по любому из пп. 32-40 или гликоконъюгатной вакцины по п. 41 или 42.
44. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 32-40 или гликоконъюгатная вакцина по п. 41 или 42 для применения при иммунизации, вакцинации или лечении субъекта, страдающего от заболевания, или для обнаружения наличия антитела, которое специфически связывается с гликоконъюгатом, или для обнаружения указанной иммунизации, вакцинации или лечения (например, в биологическом образце, взятом у субъекта).
45. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более сахарных антигенов, ковалентно связанных с одной или более свободными тиольными группами белка-носителя посредством линкера, при этом каждый линкер имеет структуру:
где
SA представляет собой сахарный антиген или его часть;
S-PC представляет собой белок-носитель;
1
2
X представляет собой O, S, NR или CH;
1
3
R представляет собой -H, -COH, -COCH или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5; и
2
R представляет собой H или Me;
или его стереоизомер.
46. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более сахарных антигенов, ковалентно связанных с одной или более свободными тиольными группами белка-носителя посредством линкера, при этом каждый линкер имеет структуру:
где
SA представляет собой сахарный антиген или его часть;
S-PC представляет собой белок-носитель;
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5;
3
4
3
4
2
2
2
каждый R и R представляет собой атом водорода и m равен 1, 2, 3, 4 или 5, или R и R вместе образуют радикал -CO-CH- или радикал -CO-CH-CH- с карбонилом, связанным с атомом азота, и m равен 1;
или его стереоизомер.
47. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более сахарных антигенов, ковалентно связанных с одной или более свободными тиольными группами белка-носителя посредством линкера, при этом указанный синтетический гликоконъюгатный иммуноген имеет структуру
где
y равен по меньшей мере 1;
SA выбран из группы, состоящей из одного или более сахарных антигенов или их иммуногенных частей, при этом когда y больше 1, SA являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
z
[S]-PC представляет собой белок-носитель, содержащий один или более атомов серы, источником которых является одна или более свободных тиольных групп;
z по меньшей мере равен 1 и по меньшей мере равен y; и
L представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из линкеров, имеющих структуру:
где
1
2
X представляет собой O, S, NR или CH;
1
3
R представляет собой -H, -COH, -COCH или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5; и
2
R представляет собой H или Me; и
когда y больше 1, L являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
или его стереоизомер.
48. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более сахарных антигенов, ковалентно связанных с одной или более свободными тиольными группами белка-носителя посредством линкера, при этом указанный синтетический гликоконъюгатный иммуноген имеет структуру:
где
y равен по меньшей мере 1;
SA выбран из группы, состоящей из сахарных антигенов или их иммуногенных частей, при этом когда y больше 1, SA являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
z
[S]-PC представляет собой белок-носитель, содержащий один или более атомов серы, источником которых являются z свободных тиольных групп;
z по меньшей мере равен y; и
L представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из линкеров, имеющих структуру:
где
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5;
3
4
3
4
2
2
2
каждый R и R представляет собой атом водорода и m равен 1, 2, 3, 4 или 5, или R и R вместе образуют радикал -CO-CH- или радикал -CO-CH-CH- с карбонилом, связанным с атомом азота, и m равен 1; и
когда y больше 1, L являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
или его стереоизомер.
49. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген, содержащий один или более сахарных антигенов, ковалентно связанных с одной или более свободными тиольными группами белка-носителя посредством линкера, при этом указанный синтетический гликоконъюгатный иммуноген имеет структуру
где
y равен по меньшей мере 1;
SA выбран из группы, состоящей из сахарных антигенов или их иммуногенных частей, при этом когда y больше 1, SA являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
z
[S]-PC представляет собой белок-носитель, содержащий один или более атомов серы, источником которых являются z свободных тиольных групп;
z по меньшей мере равен y; и
L представляет собой линкер, выбранный из группы, состоящей из линкеров, имеющих структуру
где
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5;
r равен 1, 2, 3, 4 или 5;
5
Rпредставляет собой S-PC, ковалентную связь или радикал со структурой
3
4
3
4
2
2
2
где каждый R и R представляет собой атом водорода и m равен 1, 2, 3, 4 или 5, или R и R вместе образуют радикал -CO-CH- или радикал -CO-CH-CH- с карбонилом, связанным с атомом азота, и m равен 1; и
когда y больше 1, L являются одинаковыми или отличаются друг от друга;
или его стереоизомер
50. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 49, отличающийся тем, что линкер имеет структуру
где
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5; и
r равен 1, 2, 3, 4 или 5.
51. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 49, отличающийся тем, что линкер имеет структуру
где
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5; и
r равен 1 или 2.
52. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 49, отличающийся тем, что линкер имеет структуру
где
1
2
X представляет собой S, NR, CH или O;
1
R представляет собой -H, -COH, -COMe или -COEt;
n равен 1, 2, 3, 4 или 5;
2
R представляет собой H или Me;
q равен 1, 2, 3, 4 или 5; и
r равен 1 или 2.
53. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 47-52, отличающийся тем, что y представляет собой целое число, изменяющееся от 1 до 50, от 1 до 40, от 1 до 30, от 1 до 20 или от 1 до 10.
54. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 45-53, отличающийся тем, что указанный сахарный антиген представляет собой углеводный антиген, определенный в пп. 15, 16, 17, 20 или 21.
55. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 45-54, отличающийся тем, что указанный белок-носитель представляет собой белок-носитель, определенный в пп. 23, 24 или 25.
56. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 45-55, представляющий собой поливалентный гликоконъюгатный иммуноген.
57. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по п. 56, отличающийся тем, что указанный поливалентный гликоконъюгатный иммуноген включает 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или более одинаковых или разных типов углеводных антигенов, конъюгированных с белком-носителем.
58. Синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 45-57, отличающийся тем, что гликоконъюгатный иммуноген вызывает при введении субъекту клеточно-опосредованный иммунный ответ на углеводный антиген.
59. Вакцина, содержащая синтетический гликоконъюгатный иммуноген по любому из пп. 45-58 и фармацевтически приемлемый носитель и/или адъювант.
60. Вакцина по п. 59, отличающаяся тем, что адъювант определен в п. 31.
61. Применение гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, или синтетического гликоконъюгатного иммуногена, определенного в любом из пп. 32-40 и 45-58, для получения вакцины.
62. Применение гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, гликоконъюгатной вакцины, полученной способом по п. 30 или 31, синтетического гликоконъюгатного иммуногена, определенного в любом из пп. 32-40 и 45-58, или вакцины по п. 59 или 60 для лечения субъекта, имеющего заболевание, связанное с повышенной экспрессией указанного одного или более углеводных или сахарных антигенов.
63. Применение гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, гликоконъюгатной вакцины, полученной способом по п. 30 или 31, синтетического гликоконъюгатного иммуногена, определенного в любом из пп. 32-40 и 45-58, или вакцины по п. 59 или 60 для продуцирования антитела, которое специфически связывается с гликоконъюгатным иммуногеном.
64. Применение гликоконъюгатного иммуногена, полученного способом по любому из пп. 1-29, гликоконъюгатной вакцины, полученной способом по п. 30 или 31, синтетического гликоконъюгатного иммуногена, определенного в любом из пп. 32-40 и 45-58, для обнаружения антитела, которое специфически связывается с гликоконъюгатным иммуногеном.
65. Способ получения гликоконъюгата, включающий:
(a) обеспечение углеводного антигена, ковалентно связанного с алкеном с концевой двойной связью (алкенил-углеводного антигена), при этом указанный алкен с концевой двойной связью может непосредственно конъюгироваться с тиольной группой посредством тиол-еновой реакции;
(b) обеспечение конъюгатного материала, подходящего для конъюгации с углеводным антигеном посредством тиол-еновой реакции, как описано в настоящем документе, при этом указанный конъюгатный материал содержит одну или более свободных тиольных групп; и
(c) проведение фотокаталитической тиол-еновой реакции для непосредственной конъюгации углеводного антигена с конъюгатным материалом в одной или более свободных тиольных группах с получением, тем самым гликоконъюгата.
66. Способ по п. 65, в котором конъюгатный материал представляет собой или содержит полимер, полипептид, белок-носитель, определенный в любом из предшествующих пунктов, твердую подложку, частицу или любой другой материал, содержащий свободную тиольную группу, подходящую для конъюгации с углеводным антигеном посредством тиол-еновой реакции, как описано в настоящем документе.
67. Способ по п. 65 или 66, дополнительно включающий один или более признаков, определенных в любом из пп. 1-64.
68. Применение гликоконъюгата, полученного способом по любому из пп. 65-67, для обнаружения или скрининга на наличие антитела, которое специфически связывается с углеводным антигеном или циркулирующей опухолевой клеткой, содержащей углеводный антиген, или для обнаружения присутствия антител, полученных в результате иммунизации или вакцинации с применением углеводного антигена.
69. Применение по п. 68, при котором обнаружение или скрининг осуществляют с помощью любого подходящего способа обнаружения, такого как иммуносорбентный анализ, ELISA (иммуноферментный анализ), микроматричный анализ или иммуноблот-анализ.
70. Способ лечения субъекта, включающий введение гликоконъюгата или гликоконъюгатного иммуногена, определенного в любом из предыдущих пунктов или полученного способом, определенным в любом из предыдущих пунктов, для создания у указанного субъекта иммунного ответа на углеводный антиген и скрининг биологического образца, взятого у указанного субъекта, на наличие антител, которые специфически связываются с углеводным антигеном.
71. Способ по п. 70, дополнительно включающий один или более признаков, описанных в предыдущих пунктах.