КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ АНАЛИЗЫ ДЛЯ МЕТОДОВ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ

1. Способ для измерения эффективности клеточной терапии или лечения, при этом способ содержит этапы, на которых
инкубируют первое множество клеток с токсичным химическим соединением и кондиционированной средой, при этом кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать клеточную терапию или лечение;
инкубируют, по меньшей мере, второе множество клеток с токсичным химическим соединением и контрольной средой;
определяют жизнеспособность первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток;
сравнивают жизнеспособность первого множества клеток с жизнеспособностью второго множества клеток, за счет этого определяя эффективность клеточной терапии или лечения.
2. Способ по п. 1, в котором эффективность представляет собой отношение жизнеспособности первого множества клеток к жизнеспособности второго множества клеток.
3. Способ для измерения эффективности клеточной терапии или лечения, при этом способ содержит этапы, на которых
инкубируют первое множество клеток с токсичным химическим соединением и кондиционированной средой, при этом кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать клеточную терапию или лечение;
инкубируют, по меньшей мере, второе множество клеток с токсичным химическим соединением и контрольной средой;
определяют жизнеспособность первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток;
определяют активность по апоптозу в первом множестве клеток и, по меньшей мере, во втором множестве клеток;
определяют защитное значение кратного изменения первого множества клеток, при этом защитное значение кратного изменения представляет собой отношение жизнеспособности первого множества клеток к активности по апоптозу в первом множестве клеток;
определяют защитное значение кратного изменения, по меньшей мере, второго множества клеток, при этом защитное значение кратного изменения представляет собой отношение жизнеспособности, по меньшей мере, второго множества клеток к активности по апоптозу, по меньшей мере, во втором множестве клеток; и
определяют эффективность клеточной терапии или лечения, при этом эффективность представляет собой отношение защитного значения кратного изменения первого множества клеток к защитному значению кратного изменения, по меньшей мере, второго множества клеток.
4. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно содержащий этап, на котором сравнивают эффективность клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки, при этом если эффективность превышает предварительно определенное значение отсечки, то клеточная терапия или лечение идентифицируется как достаточно эффективная для назначения исследуемому.
5. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно содержащий этапы, на которых сравнивают эффективность клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки; назначают исследуемому, нуждающемуся в этом, по меньшей мере, одну терапевтически эффективную дозу клеточной терапии или лечения, когда эффективность превышает предварительно определенное значение отсечки.
6. Способ по п. 2 или 3, в котором предварительно определенное значение отсечки составляет приблизительно 2.
7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором клеточная терапия или лечение содержит клетки-предшественники сетчатки глаза (RPC), пигментные эпителиальные клетки сетчатки глаза (RPE), ARPE-19-клетки, нейронные стволовые клетки-предшественники, мезенхимальные стволовые клетки, CD34+-клетки, стволовые клетки-предшественники, лейкоциты, фибробласты либо любое их сочетание.
8. Способ по любому из пп. 1-6, в котором клеточная терапия или лечение содержит экзосомы, извлекаемые из клеток, выбранных из клеток-предшественников сетчатки глаза (RPC), пигментных эпителиальных клеток сетчатки глаза (RPE), ARPE-19-клеток, нейронных стволовых клеток-предшественников, мезенхимальных стволовых клеток, CD34+-клеток, стволовых клеток-предшественников, лейкоцитов, фибробластов и любой комбинации вышеозначенного.
9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором клеточная терапия или лечение содержит RPC.
10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток содержат клетки ретинобластомы (RB), пигментные эпителиальные клетки сетчатки глаза (RPE), ARPE-19-клетки, извлеченные из клеток Мюллера клетки, MIO-M1-клетки, нейрональные клетки, глиальные клетки, фибробласты, неокулярные клетки либо любое их сочетание.
11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток содержат RB-клетки.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток содержат, по меньшей мере, приблизительно от 1000 RB-клеток, по меньшей мере, приблизительно до 250000 RB-клеток, по меньшей мере, приблизительно от 10 мкл, по меньшей мере, приблизительно до 40 мкл среды.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток содержат, по меньшей мере, приблизительно 25000 RB-клеток, по меньшей мере, приблизительно в 25 мкл среды.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток инкубируются, по меньшей мере, с приблизительно от 50 мкл, по меньшей мере, приблизительно до 100 мкл кондиционированной среды и контрольной среды, соответственно.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток инкубируются, по меньшей мере, с приблизительно 75 мкл кондиционированной среды и контрольной среды, соответственно.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором токсичное химическое соединение индуцирует апоптоз.
17. Способ по любому из пп. 1-16, в котором токсичное химическое соединение представляет собой бутират натрия.
18. Способ по п. 17, в котором бутират натрия присутствует с концентрацией приблизительно от 2 ммоль приблизительно до 32 ммоль.
19. Способ по п. 18, в котором бутират натрия присутствует с концентрацией приблизительно в 16 ммоль.
20. Способ по любому из пп. 1-19, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток инкубируются в течение периода времени, по меньшей мере, приблизительно от 1 часа, по меньшей мере, приблизительно до 72 ч.
21. Способ по любому из пп. 1-20, в котором первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток инкубируются в течение периода времени, по меньшей мере, приблизительно в 46 часов.
22. Способ по любому из пп. 1-21, в котором определение жизнеспособности первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток содержит этап, на котором измеряют метаболическую емкость первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток.
23. Способ по п. 22, в котором метаболическая емкость измеряется с использованием количественного анализа на основе люминесценции.
24. Способ по п. 23, в котором количественный анализ на основе люминесценции содержит этапы, на которых
инкубируют первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток с резазурином (натриевой солью в виде 7-гидрокси-3H-феноксазин-3-он 10-оксида) в течение периода, по меньшей мере, приблизительно в 1 час; и
измеряют люминесценцию первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток.
25. Способ по п. 23, в котором количественный анализ на основе люминесценции представляет собой количественный анализ жизнеспособности клеток на основе CellTiter-Blue.
26. Способ по п. 25, в котором, по меньшей мере, приблизительно 20 мкл разбавленного 1:4 реагента на основе CellTiter-Blue добавляются в первое множество клеток и, по меньшей мере, во второе множество клеток.
27. Способ по любому из пп. 3-26, в котором активность по апоптозу в первом множестве клеток и, по меньшей мере, во втором множестве клеток измеряется с использованием количественного анализа на основе люминесценции.
28. Способ по п. 27, в котором количественный анализ на основе люминесценции содержит этапы, на которых
инкубируют первое множество клеток и, по меньшей мере, второе множество клеток с подложкой на основе люминогенной каспазы-3/7, по меньшей мере, в течение приблизительно 1 часа; и
измеряют люминесценцию первого множества клеток и, по меньшей мере, второго множества клеток.
29. Способ по п. 28, в котором подложка на основе люминогенной каспазы-3/7 содержит тетрапептидную последовательность DEVD, которая расщепляется посредством каспазы 3 или каспазы 7, за счет этого формируя подложку на основе люциферазы.
30. Способ по п. 27, в котором количественный анализ на основе люминесценции представляет собой систему количественного анализа на основе Caspase-Glo 3/7.
31. Способ по п. 30, в котором, по меньшей мере, приблизительно 120 мкл реагента для количественного анализа на основе Caspase-Glo 3/7 добавляются в первое множество клеток и, по меньшей мере, во второе множество клеток.
32. Способ по любому из пп. 3-31, дополнительно содержащий этапы, на которых
инкубируют, по меньшей мере, третье множество клеток с токсичным химическим соединением и неактивной кондиционированной средой, при этом неактивная кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать неактивную клеточную терапию или лечение;
определяют жизнеспособность, по меньшей мере, третьего множества клеток;
определяют активность по апоптозу, по меньшей мере, в третьем множестве клеток;
определяют защитное значение кратного изменения, по меньшей мере, третьего множества клеток, при этом защитное значение кратного изменения представляет собой отношение жизнеспособности к активности по апоптозу;
определяют эффективность неактивной клеточной терапии или лечения, при этом эффективность представляет собой отношение защитного значения кратного изменения, по меньшей мере, третьего множества клеток к защитному значению кратного изменения, по меньшей мере, второго множества клеток;
сравнивают эффективность неактивной клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки, при этом если эффективность неактивной клеточной терапии меньше или равна предварительно определенному значению отсечки, то способ идентифицируется в качестве допустимого.
33. Способ по любому из пп. 1, 2 и 4-31, дополнительно содержащий этапы, на которых
инкубируют, по меньшей мере, третье множество клеток с токсичным химическим соединением и неактивной кондиционированной средой, при этом неактивная кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать неактивную клеточную терапию или лечение;
определяют жизнеспособность, по меньшей мере, третьего множества клеток;
сравнивают жизнеспособность третьего множества клеток с жизнеспособностью второго множества клеток, за счет этого определяя эффективность неактивной клеточной терапии или лечения; и
сравнивают эффективность неактивной клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки, при этом если эффективность неактивной клеточной терапии меньше или равна предварительно определенному значению отсечки, то способ идентифицируется в качестве допустимого.
334. Способ по п. 32 или 33, в котором неактивная клеточная терапия или лечение содержит кожные T-лимфоциты, HuT78-клетки либо любое их сочетание.
35. Способ по любому из пп. 3-32 и 34, дополнительно содержащий этапы, на которых
инкубируют, по меньшей мере, третье множество клеток с токсичным химическим соединением и активной кондиционированной средой, при этом активная кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать активную клеточную терапию или лечение;
определяют жизнеспособность, по меньшей мере, третьего множества клеток;
определяют активность по апоптозу, по меньшей мере, в третьем множестве клеток;
определяют защитное значение кратного изменения, по меньшей мере, третьего множества клеток, при этом защитное значение кратного изменения представляет собой отношение жизнеспособности к активности по апоптозу;
определяют эффективность активной клеточной терапии или лечения, при этом эффективность представляет собой отношение защитного значения кратного изменения, по меньшей мере, третьего множества клеток к защитному значению кратного изменения, по меньшей мере, второго множества клеток; и
сравнивают эффективность активной клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки, при этом если эффективность активной клеточной терапии превышает предварительно определенное значение отсечки, то способ идентифицируется в качестве допустимого.
36. Способ по любому из пп. 1, 2, 4-31 и 33-34, дополнительно содержащий этапы, на которых:
инкубируют, по меньшей мере, третье множество клеток с токсичным химическим соединением и активной кондиционированной средой, при этом активная кондиционированная среда содержит среду, используемую для того, чтобы культивировать активную клеточную терапию или лечение;
определяют жизнеспособность, по меньшей мере, третьего множества клеток;
сравнивают жизнеспособность третьего множества клеток с жизнеспособностью второго множества клеток, за счет этого определяя эффективность активной клеточной терапии или лечения; и
сравнивают эффективность активной клеточной терапии или лечения с предварительно определенным значением отсечки, при этом если эффективность активной клеточной терапии превышает предварительно определенное значение отсечки, то способ идентифицируется в качестве допустимого.
37. Способ по п. 35 или 36, в котором активная клеточная терапия содержит пигментные эпителиальные клетки сетчатки глаза (RPE), ARPE-19-клетки, фибробласты, CCD-1112Sk-клетки либо любое их сочетание.
38. Способ по любому из пп. 1-37, в котором контрольная среда содержит стандартную среду.
39. Способ по любому из пп. 1-38, в котором клеточная терапия или лечение служит для лечения заболевания или состояния сетчатки глаза.