Платформа с клетками-предшественниками человека для поиска активных веществ лекарственных препаратов

1. Система для прогнозирования способности любой мелкой молекулы вызывать дифференцировку клеток и ее функциональности включает:
(a) диагностический планшет со множеством чашек, покрытых активными мезенхимными стволовыми клетками-предшественниками;
(b) среду для выращивания;
(c) множество сред, вызывающих дифференцировку;
(d) пробу для положительного контроля, подходящую для такой используемой вызывающей дифференцировку среды; и
(e) средство для прогноза функциональности испытуемой молекулы.
2. Система по п. 1, в которой используемое количество испытуемой молекулы должно быть между 5 и 20 mM в диметилсульфоксиде (DMSO).
3. Система по п. 1, которая используется для прогнозирования способности мелких молекул регенерировать/дифференцировать остеоциты, хондроциты, адипоциты, бета-клетки поджелудочной железы, кардиомиоциты, клетки эпителия и аналогичные им клетки из мезенхимных стволовых клеток.
4. Система по п. 1, в которой диагностический планшет содержит от 12 до 24 чашек.
5. Система по п. 1, в которой среда для выращивания в этом исследовании включает минимальную необходимую поддерживающую среду Dulbecco (DMEM) и эпидермальный фактор роста (EGF).
6. Система по п. 1, в которой среду, вызывающую дифференцировку, выбирают из группы, включающей среду для нейрогенной дифференцировки (C28015)(Promega), среду для дифференцировки адиноцитов (AL521)(Himedia), среду для дифференцировки эпителиальных клеток (ax0035)(Axol), диметилсульфоксид DMSO, среду для дифференцировки остеоцитов (AL522)(Himedia), среду для дифференцировки бета-клеток, среду для кардиомиогенной дифференцировки (A25042SA)(Gibco) и аналогичные им, в зависимости от прогнозируемой функциональности испытуемой молекулы.
7. Система по п. 6, в которой средство положительного контроля, используемого для перечисленных сред для дифференцировки, следует выбирать из группы, включающей форсколин (Tocris) для нейрогенной дифференцировки, аскорбиновую кислоту (Lonza) для адипогенной дифференцировки, вальпроевую кислоту (Sigma) для дифференцировки эпителиальных клеток, кверцетингидрат (TCI chemicals) как среду для дифференцировки остеоцитов, 5-йодотуберцидин (Sigma) как среду для дифференцировки бета-клеток и форболмиристатацетат (Sigma) для кардиомиогенной дифференцировки.
8. Способ проведения исследования с целью прогноза способности молекулы вызывать дифференцировку и ее функциональности, включающий следующие шаги:
(a) воздействие на диагностический планшет испытуемой молекулой (SM1; SM2) в стерильном DMSO. SM1 - мелкая молекула 1; SM2 - мелкая молекула 2;
(b) пополнение чашек на планшете 10 mM испытуемой молекулы каждые 72 часа;
(c) мониторирование фенотипа клеток посредством прогностического метода путем сравнения их с пробами для положительного контроля, используемыми в исследовании;
(d) оценка генотипа клеток, дифференцированных под воздействием испытуемой молекулы, и сравнением их с контрольными пробами.
(e) оценка токсичности испытуемой молекулы на системе полученных от человека стволовых клеток; и
(f) получение LD50 (летальной дозы) для испытуемой молекулы на диагностической системе с использованием полученных от человека стволовых клеток.
9. Система для прогнозирования противоракового свойства химического соединения включающая:
(a) диагностическую платформу со множеством чашек, покрытых активными взятыми у пациента специфическими клетками-предшественниками/стволовыми клетками опухоли и активными мезенхимными стволовыми клетками-предшественниками.
(b) платформу для выявления лекарственного вещества с использованием полученных от пациента специфических раковых клеток и опухолевой системы, выращенной на ксенотрансплантатах, полученных от пациента.
(c) поверхность для отбора лекарственного вещества, обладающую двумя свойствами: диагностировать соответствие молекул своему назначению и их токсичность.