Иммунологические показатели пуповинной крови новорожденных с поражением центральной нервной системы

© ВАСИЛЬЕВА Л.В. - 2011 УДК: 616-056.3-053.2-07

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ НОВОРОЖДЕННЫХ С ПОРАЖЕНИЕМ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

Людмила Викторовна Васильева

Резюме. Цель нашего исследования состоит в изучении иммунологических показателей пуповинной крови новорожденных с перинатальным поражением центральной нервной системы. Были проведены клинические наблюдения, иммунологические исследования различных классов иммуноглобулинов и субпопуляционного состава лимфоцитов пуповинной крови у 153 детей. Установлено, что выраженность нарушений иммунного статуса новорожденного сопряжена с тяжестью неврологических нарушений в неонатальном периоде.

Ключевые слова: иммунитет, пуповинная кровь, центральная нервная система.

IMMUNOLOGIC INDICES OF FUNIC BLOOD IN NEWBORNS WITH THE DISTURBANCES OF CENTRAL NERVOUS SYSTEM

L.V. Vasilieva

(State Medical Research Institute for Northern Problems of Siberian Division of Russian Academy

of Medical Sciences, Krasnoyarsk)

Summary. The aim of the present research is to study the immune indices in funic blood in newborns with perinatal disturbances of central nervous system. We carried out the clinical observations, immune examination for immune globulins of different classes and subpopulation content of lymphocytes in funic blood in 153 children. We found that the intensity of immune status disturbances in newborns is associated with the severity of neurological disturbances in neonatal period.

Key words: immunity, funic blood, central nervous system.

Иммунная система наряду с центральной нервной системой (ЦНС) участвуют в поддержании гомеостаза организма человека и установлении оптимального баланса во взаимоотношениях с окружающей средой [2,3,4,5,6,7,7,9,10,11]. Однако причинно-следственные связи взаимного влияния ЦНС и иммунной системы остаются мало изученными.

Цель работы. Исследовать иммунологические показатели пуповинной крови новорожденных с перинатальным поражением ЦНС.

Материалы и методы

Были проведены клинические наблюдения, иммунологические исследования различных классов иммуноглобулинов и субпопуляционного состава лимфоцитов пуповинной крови у 153 детей.

Клиническое обследование детей включало в себя сбор анамнестических данных при беседе с родителями с заполнением специально разработанной анкеты, включающей данные по течению беременности, генеалогическому анамнезу, о районе и условиях проживания. Анализ родов и течения периода новорожденности проводились по медицинской документации.

Иммунологическое обследование: на базе двух родильных домов г. Красноярска (родильного дома №5 и родильного дома №6) в 2003-2005 гг. проведен забор пуповинной крови 153 доношенных новорождённых с последующим типированием лимфоцитов, количественным определением цитокинов и иммуноглобулинов.

Дизайн исследования был согласован с этическим комитетом НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН (протокол №3 от 18.10.2010 г.). Все родители заполняли форму добровольного информированного согласия. Все исследования разрешены этическим комитетом НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН. За данными детьми в дальнейшем проведено проспективное наблюдение.

Статистическую значимость различий количественных признаков при отклонении от нормального распределения выборок анализировали с помощью критерия Манна-Уитни (и). Анализ статистической значимости различий качественных признаков проведен с помощью критерия х2 с поправкой Йейтса, а для малых выборок -двусторонний точный критерий Фишера. Для оценки силы связи между признаками использован коэффици-

ент ранговой корреляции Спирмена (г), Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез р=0,05.

Результаты и обсуждение

Все обследованные нами дети были разделены на 3 группы: 1 - дети без патологии ЦНС (здоровые дети), 2 - дети с клиническими проявлениями церебральной ишемии (ЦИ), 3 - дети с сочетанной цереброспинальной патологией (сочетание клинических признаков церебральной ишемии и натальной травмы шейного отдела позвоночника) (СЦСП). Критериями исключения явились наличие у новорожденных внутриутробной инфекции, врожденных пороков развития, синдрома задержки внутриутробного развития, недоношенности. Показатели иммунограммы новорожденных в зависимости от состояния ЦНС представлены в таблице 1.

Из представленных в таблице 1 данных иммунного статуса новорожденных следует, что у детей с перинатальным поражением ЦНС в пуповинной крови в момент родов снижено содержание лейкоцитов, лимфоцитов в сравнении с данными показателями у детей без поражений нервной системы.

Так, например, у детей с поражением ЦНС было статистически значимо снижено абсолютное содержание лейкоцитов. Причем, обращает на себя внимание, прогрессирующее снижение количества циркулирующих лейкоцитов в зависимости от выраженности поражения нервной системы. Следует отметить статистически значимое снижение абсолютного содержания лимфоцитов у детей с клиническими проявлениями церебральной ишемии в сравнении со здоровыми детьми.

При исследовании нами найдено снижение показателей СБ3+, СБ4+, СБ8+, СБ26+ лимфоцитов, что свидетельствует о супрессии Т-клеточного иммунитета. Вероятно, врожденное угнетение клеточного иммунитета связано с формированием клинических проявлений сочетанной цереброспинальной патологии. Так, например, нами выявлена взаимосвязь содержания СБ8+ лимфоцитов с проявлениями сочетанной цереброспинальной травмы. У здоровых детей абсолютное содержание СБ8+ лимфоцитов выше, чем у новорожденных с цереброспинальной патологией (р=0,01). Вероятно, повышенное содержание Т-супрессоров у новорожденных детей с транзиторными нарушениями гемоликво-

Таблица l

Взаимосвязь показателей иммунограммы пуповинной крови у обследованных детей с наличием перинатальной патологии ЦНС

Параметр Здоровые дети (n=73) Дети с ЦИ (n=71) Дети с СЦСП (n=9) P

1 2 3

Лейкоциты 13,65 11,5 8,3 1-2<G,G2

x1G9 (9,6-15,4) (6,1-13,7) (7-9,3) 1-3=G,G25

Лимфоциты 42G8,25 3678,3 3441 1-2=G,G41

кл/мкл

CD3+ % 61 (5G,5-66) 58 (51-68) 42 (41-54) 1-3=G,G26

CD3+ 2497 2357,5 16G8 1-3=G,GG8

кл/мкл

CD4+ 1827 1671,5 983 1-3=G,G16

кл/мкл

CD8+ 732 663 478 1-3=G,G17

кл/мкл

CD16+CD56+ 26 27 34 1-3=G,G19

% (14-32) (14-33) (34-39) 2-3<G,G3

CD26+ 46 42 36 1-3=G,G27

%

igE 3,25 3,15 6,2 1-3<G,G2

Me/л (1,7-4,4) (1,6-4,1) (3,6-15,1) 2-3=G,G18

CD26+ 1985 1725 963 1-2=G,G33

(кл/мкл) (1467,4-2499,3) (1 G53,7-2259) (841,3-1436,2) 1-3=G,GG7 2-3=G,G42

IFN+CD69+ 18,4 17,7 5,4 1-3=G,G37

родинамики в раннем периоде адаптации уравновешивает мощное активирующее воздействие на иммунную систему ребенка и препятствует развитию аутоиммунных реакций на нейроспецифические белки [4].

Таким образом, клинически цереброспинальная патология проявляется у детей со сниженным содержанием Т-супрессоров.

Кроме того, нами установлено, что на фоне снижения показателей Т-клеточного иммунитета (снижение СБ3+, СБ4+, СБ8+, СБ26+ лимфоцитов) у новорождённых с нарушениями со стороны ЦНС отмечалось значительное повышение естественных киллеров (СБ16+СБ56+), в отличие от этого показателя у здоровых детей, р=0,01. Полученные нами результаты не противоречат исследованию М.Э. Беликовой и соавт. (2006), которые исследовали экспрессию маркёров активации иммуноком-петентных клеток у доношенных новорождённых с тяжёлыми перинатальными поражениями ЦНС и с инфекционно-воспалительными заболеваниями и установили у всех детей основной группы на фоне снижения показателей Т-клеточного иммунитета (снижение СБ3+, СБ4+, СБ8+ лимфоцитов) значительное повышение естественных киллеров (СБ16+ СБ56+).

Данные о содержании СБ16+СБ56+ клеток пуповинной крови новорожденных в зависимости от пери-

натальных нарушений ЦНС представлены на рисунке 1.

Из представленного рисунка 1 видно, что у детей с поражением ЦНС было статистически значимо повышено относительное содержание СБ16+СБ56+ клеток пуповинной крови новорожденных. Причем, обращает на себя внимание, выраженное повышение количества естественных киллерных клеток у детей с сочетанным цереброспинальным поражением ЦНС.

Вероятно, в условиях воздействия на организм плода и новорожденного большого количества антигенов естественные киллерные клетки (СБ16+СБ56+) выполняют защитную функцию [1].

Кроме того, нами установлено, что у здоровых детей содержание ]£Е ниже, а количество клеток, синтезирующих ИНФ-у+, выше, чем у новорожденных с цереброспинальной травмой. В то же время у детей с более легкими поражениями ЦНС увеличение плазменной концентрации ]£Е было не характерно.

Таким образом, выраженность нарушений иммунного статуса новорожденного сопряжена с тяжестью неврологических нарушений в неонатальном периоде. Вероятно, антигенная нагрузка больше у новорожденных детей с патологией ЦНС. Выявленный дисбаланс в системе ТЫ/^Ъ2 - лимфоцитов (пониженное содержание СБ26+ лимфоцитов,

высокие концентрации ]£Е и снижение содержания клеток, синтезирующих ИНФ-у+) стимулирует аутоиммунный ответ на попадание в кровь мозговых аутоантигенов в результате травматического повреждения ЦНС и способствует уязвимости мозга.

Примечание: * - значимость отличий с детьми с сочетанной цереброспинальной патологией. ЦИ - церебральная ишемия; СЦСП - сочетанная цереброспинальная патология.

Рис. 1. Связь содержание СП16+СЭ56+ клеток пуповинной крови новорожденных с перинатальными нарушениями ЦНС.

ЛИТЕРАТУРА

1. Беликова М.Э. Особенности иммунного ответа у новорожденных детей с сочетанной патологией - с тяжелыми перинатальными поражениями ЦНС и с инфекционновоспалительными заболеваниями // Мед. иммунология. -2006. - Т. 8. №2-3. - С.305-306.

2. Малашхия Ю.А. Проблемы неврологической и иммунологической памяти и перспективы реабилитации (Основы и концепция) // Journal on Immunorehabilitation. - 1996. - №2.

- P.53-58.

3. Сепиашвили Р.И. Мозг - один из центральных органов иммунной системы // International Journal on Immunorehabilitation. - 1995. - №1. - P.3-17.

4. Таболин В.А., Володин Н.Н., Дегтярева М.В. и др. Актуальные вопросы перинатальной иммунологии. Int. J. on

1шшипогеЬаЫ1йа1:юп. - 1997. - №6. - Р.112-122.

5. Терехов О.П. Иммунная система - эндогенная система питания многоклеточных организмов // Иммунология. -2005. - №1. - С.59-61.

6. Федотова Т.А. Основные аспекты формирования хронической иммунной недостаточности и/или иммунопатологии у детей и подростков // Мед. иммунология. - 2006. - Т. 8. № 1. - С.101-104.

7. Харченко Е.П. Иммунная привилегия мозга: новые факты и проблемы. Иммунология. - 2006. - №1. - С.51-52.

8. Чехонин В.П. Элиминация нейроспецифических белков из ЦНС (патогенетические и методические аспекты) // Вестник РАМН. - 2006. - №6. - С.3-12.

9. Ярилин А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе. Контроль численности лимфоцитов // Иммунология.

- 2004. - №5. - C.312-318.

10. Richardson B.S., Bocking A.D. Metabolic and circulatory adaptation to chronic hypoxia in the fetus // Comp Biochem Physiol and Mol Integ Physiol. - 1998. - Vol. 3. - P717-723.

11. Pierpaoli W., Kopp H., Muller J., et al. Interdependence between neuroendocrine programming and the generation of immune recognition in ontogeny // Cell. Immunol. - 1977. - Vol. 29. №1. - P16-27.

Информация об авторах: 660022, Россия, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, 3г, тел.: (391) 228-06-83, 228-06-81, 228-06-62, e-mail: impn@impn.ru, Васильева Людмила Викторовна - старший научный сотрудник, к.м.н.

© СУКАЧ М.С., ДОЛГИХ В.Т. - 2011 УДК 616.37-002.4-681.539.3:615.375

ВЛИЯНИЕ АДЕМЕТИОНИНА НА СИСТЕМНУЮ ГЕМОДИНАМИКУ И ВЯЗКОСТЬ КРОВИ ПРИ ПАНКРЕОНЕКРОЗЕ

Михаил Сергеевич Сукач, Владимир Терентьевич Долгих

Резюме. Изучено влияние адеметионина на системную гемодинамику и вязкость крови у белых крыс при пан-креонекрозе. Панкреонекроз моделировали введением в поджелудочную железу аутожёлчи из расчета 0,15 мл/кг массы тела. Адеметионин вводили внутрибрюшинно в дозе 11,4 мг/кг через 5 мин после моделирования панкреоне-кроза. Установлено, что при панкреонекрозе формируется гипердинамический тип кровообращения, повышается вязкость крови за счет увеличения вязкости эритроцитов. На фоне адеметионина уменьшается выраженность ги-пердинамического синдрома, снижается вязкость крови.

Ключевые слова: панкреонекроз, системная гемодинамика, вязкость крови, адеметионин, адеметионин.

EFFECT OF ADEMETIONINE ON SYSTEMIC HEMODYNAMICS AND BLOOD VISCOSITY IN PANCREONECROSIS

M.S. Sukach, V.T. Dolgih

Summary. The effect of ademetionine on systemic hemodynamics and blood viscosity in white rats with necrotizing pancreatitis has been investigated. Pancreatonecrosis simulated the introduction of the pancreas autobile at a dose of 0.15 ml/ kg body weight. Ademetionine was injected intraperitoneally at a dose of 11.4 mg/kg 5 minutes after the model of pancreatic necrosis. It has been revealed that in pancreatic necrosis hyperdynamic type of circulation forms, blood viscosity increases by increasing the viscosity of red blood cells. On the background of ademetionine the severity of the hyperdynamic syndrome decreases, blood viscosity decreases.

Key words: pancreatic necrosis, systemic hemodynamics, blood viscosity, ademetionine.

Панкреонекроз в структуре ургентной хирургии органов брюшной полости занимает на одно из первых мест [1,7,16]. Летальность при панкреонекрозе, особенно инфицированном, колеблется от 20 до 85% [10,13]. Ведущим патогенетическим фактором летальности при инфицированном панкреонекрозе является полиорганная недостаточность [7,15], вызванная абдоминальным сепсисом [11,12]. Характерно, что в синдром полиорганной недостаточности одинаково часто вовлекаются сердечно-сосудистая и нервная системы, почки и печень [3]. Особенно усугубляет тяжесть общего состояния больных острая печеночная недостаточность. В основе патогенеза поражения клеток печени, как органа-мишени, лежит чрезмерная активация процессов липопероксидации, нарушение биоэнергетики и электролитного баланса гепатоцитов [6], что приводит к интоксикации, активации свободнорадикального окисления, бактериемии, вторичному иммунодефициту [7,10]. Печень становится первым органом-мишенью, принимающим основной удар панкреатогенной токси-немии вследствие попадания в кровь воротной вены активированных панкреатических и лизосомальных ферментов, продуктов распада тканей поджелудочной железы, компонентов калликреин-кининовой системы [14]. В этой связи представляется актуальным изучить эффективность использования гепатопротектора аде-метионин, активным компонентом которого является адеметионин - физиологический субстрат многих биологических реакций, эндогенно синтезируемый из метионина и аденозина [5], при экспериментальном панкреонекрозе. Не исключено, что адеметионин, защищая печень от панкреатогенной токсинемии, позволит уменьшить панкреатогенные гемодинамические нарушения [2].

Материалы и методы

Эксперименты проведены на 74 беспородных крысах-самцах, наркотизированных этиловым эфиром. Животных распределили на 3 группы: I - контрольная группа (п=10); ІІ - основная группа (п=38); III - группа сравнения (п=26). Минимальный объём выборки для каждой из групп, обеспечивающий достоверность выводов, рассчитывали по формуле Е Lopez-Jimenez и соавт. (1998). У животных основной группы и группы сравнения моделировали панкреонекроз введением в поджелудочную железу аутожёлчи (0,15 мл/кг). Исследования проведены 2 этапа. На первом этапе через 6 час (подгруппа П6), 24 час (подгруппа П24) и 48 час (подгруппа П48) после моделирования панкреонекро-за исследовали параметры системной гемодинамики и вязкости крови. На втором этапе с учетом того, что важнейшими патогенетическими факторами нарушения системной гемодинамики при панкреонекрозе являются эндотоксемия, ацидоз, гипоксия, в том числе гипоксическое повреждение печени, животным группы сравнения через 5 мин после моделирования пан-креонекроза вводили адеметионин из расчета 11,4 мг/ кг и в эти же сроки: через 6 час (подгруппа Ш6), 24 час (подгруппа Ш24) и 48 час (подгруппа Ш48) изучали те же самые параметры, что и у животных основной группы. Опыты осуществлялись в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства высшего и среднего специального образования СССР № 742 от 13.11.1984 г.). Животных выводили из эксперимента, согласно положениям, рекомендованным Международным комитетом по науке о лабораторных животных, поддержанным ВОЗ.