Масс-спектрометрический анализ сыворотки крови больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи

РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ, № 4, 2013

эндотелиальных маркеров служила контрольная группа из 25 практически здоровых людей, сопоставимых по полу и возрасту с пациентами обеих групп. Оценка данных маркеров в плазме крови осуществлялась методом ИФА с применением моно- и поликлональных антител к эндотелин-1 с использованием набора реагентов «Biomedica ESTOCK (Endothelin stock)».

Статистическая обработка проводилась с помощью программы Statistica 6.0.

Результаты и обсуждение. Проведено изучение взаимосвязи тяжести состояния больных в анализируемых подгруппах с уровнем маркеров эндотелио-за в крови. В контрольной группе показатели уровня эндотелина-1 были 0,34 ± 0,08 фмоль/мл. В 1-е сутки до начала лечения среднее значение уровня эндотелина-1 в 1-й группе (в которой APACHE II составила 6,21 ± 0,21 балла), было больше на 0,81 фмоль/мл, чем в контрольной группе, и составило 1,15 ± 0,12 фмоль/мл (p < 0,001), во 2-й группе (во второй подгруппе состояние было тяжелее по шкале APACHE II на 3,53 (p < 0,001) балла) эта величина была больше на 0,69 фмоль/мл и составила 1,03 ± 0,16 фмоль/мл. Уровень эндотелина-1 в 1-й группе был больше на 0,12 фмоль/мл, чем во 2-й группе, различия между группами статистически значимы (p < 0,001). На 3—5-е сутки после проведенного хирургического лечения уровень эндотелина-1 в 1-й группе (тяжесть по шкале APACHE II увеличилась на 1,31 (p< 0,001) балла) уменьшился на 0,13 фмоль/ мл, что составило 1,02 ± 0,08 фмоль/мл, оставаясь выше показателя в контрольной группе на 0,68 фмоль/мл (p < 0,001). Во 2-й группе (тяжесть состояния по шкале APACHE II увеличилась на 6,89 (p < 0,001) балла) показатели уровня эндотелина -1 уменьшились на 0,1 фмоль/мл и составили 1,02 + 0,14 фмоль/мл, что было больше в контрольной группе на 0,67 фмоль/мл (p < 0,001). Показатель уровня эндотелина-1 в обеих группах был идентичен и составлял 1,02 фмоль/мл, а разница между подгруппами больных по шкале APACHE II к этому периоду составила 9,1 (p < 0,001) балла.

Эта тенденция сохранялась и на 7—10 сутки: в 1-й группе больных (по сравнению с 3—5-м сутками тяжесть состояния по шкале APACHE II в 1-й группе уменьшилась на 1,51 (p < 0,001) балла) уровень эндо-телина-1 по отношению к 3—5-м суткам уменьшился на 0,44 фмоль/мл и составил 0,58 ± 0,02 фмоль/ мл, что по-прежнему было выше, чем в контрольной группе, на 0,24 фмоль/мл (p < 0,01). Во 2-й группе (тяжесть состояния по APACHE II уменьшилась на 1,41 (p > 0,5) балла) наблюдалось увеличение уровня эндотелина -1 на 0,46 фмоль/мл и составил1,48 ± 0,09 фмоль/мл, что больше показателя в контрольной группе на 1,14 фмоль/мл (p < 0,001). Уровень эндо-телина-1 в 1-й группе был меньше на 0,9 фмоль/мл, чем во 2-й группе пациентов (p < 0,001). По отношению к 1-му дню госпитализации отмечено статистически незначимое снижение тяжести заболевания в 1-й группе - на 0,19 (p > 0,5) баллов, при этом во 2-й группе, напротив, происходило ее увеличение - на 5,48 (p < 0,001) балла, что оказалось статистически значимым.

Заключение. Маркеры эндотелиоза позволяют оценить тяжесть состояния больных раком панкрето-билиарной зоны, осложненным механической желтухой и риск их летальности, а также прогнозировать течение острого холангита.

Г.В. Какурин, И.В. Кондакова, Д.А.Шишкин, Е.Л.Чойнзонов, О.В. Черемисина

МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ПЛОСКОКЛЕТОЧНЫМИ КАРЦИНОМАМИ ГОЛОВЫ И ШЕИ

«Научно-исследовательский институт онкологии» СО РАМН, г. Томск, Россия

Цель исследования — провести масс-спектро-метрический анализ сыворотки крови больных с плоскоклеточной карциномой головы и шеи (ПКГШ) в сравнении с группой здоровых лиц для выявления потенциальных маркеров прогноза заболевания.

Материал и методы. Материалом для исследования явилась сыворотка крови 10 здоровых (контрольная группа) и 20 больных ПКГШ (10 человек T3—4N1—2M0, 10 человек T1—2N0M0), до лечения. Средний возраст больных 53 ± 5,3 года. Про-теазную активность сыворотки крови ингибиро-вали с помощью набора Protease Inhibitor Cocktail ("Sigma", США). Очищенная от альбумина и IgG сыворотка крови с помощью колонок Albumin & IgG Depletion SpinTrap ("GE Healthcare", США) подвергалась денатурирующему гель-электрофорезу в градиентном ПААГ (6—15%). Для обнаружения белковых полос в геле использовали окраску Coomassie R-250. Интересующие участки ПААГ-геля вырезали и подвергали протеолизу по методу J. Rosenfeld. Для масс-спектрометрического анализа смесь пептидов элюировали с микроколонок C18 ZipTips ("Millipore Corporation", MA) на мишень приборной пластины масс-спектрометра UltraFlexIII TOF/TOF ("Bruker", США). Идентификацию полученных спектров проводили с использованием алгоритма Mascot, Biotools 3.2 ("BrukerDaltonics", Германия).

Результаты и обсуждение. Для масс-спектро-метрического анализа выбирались белковые полосы в гелях, имеющие различия в интенсивности окраски в группах здоровых и больных ПКГШ с метастазами и без метастазов. Сравнение элек-трофореграмм сыворотки крови здоровых и больных ПКГШ без метастазов выявило различия в интенсивности окрашивания белковых полос массой 10, 25, 50, 75 кД. Интенсивность окрашивания белковых полос массой 10, 12, 15, 18, 40, 100 кД была выше в группе больных с метастазами, чем в группах здоровых и пациентов ПКГШ без метастазов. Масс-спектрометрический анализ белков из выделенных бендов идентифицировал аполипопротеины А1 и А2 (Аро1, Аро2), транс-тиретин, серотрасферрин, протеинфосфатазу 1В, комплемент С3, субъединицы гемоглобина а и ß, матриксный экстрацеллюлярный фосфогликопро-теин (MEPE), сывороточный амилоид А (САА), а2-макроглобулин, динеина тяжелую цепь 3, аде-нилилциклазаассоциированный белок-1 (CAP1), миозин-15 (см. таблицу).

ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИИ

Масс-спектрометрический анализ белков

Идентифицированный белок ID Mоле-кулярная масса Score Sequence Coverag, %

Apolipoprotein A-I APOA1 HUMAN 30 759 200 68

Apolipoprotein A-II APOA2 HUMAN 11 282 81 58

Hemoglobin subunit alpha HBA HUMAN 15 305 68 49

Hemoglobin subunit beta HBB HUMAN 16 102 149 85

Serum amyloid A protein SAA HUMAN 13 524 89 71

Adenylyl cyclase-associated protein 1 CAP1 HUMAN 51 823 73 30

Alpha-2-macroglobulin A2MG HUMAN 163 189 70 20

Ashwin ASHWN HUMAN 25 843 68 36

Matrix extracellular phosphoglycoprotein MEPE HUMAN 58 384 60 26

Serotransferrin TRFE HUMAN 79 280 60 32

Protein phosphatase 1B PPM1B HUMAN 52 609 63 39

Complement C3 CO3 HUMAN 188569 64 26

Увеличение уровня Аро1, Аро2, транстиретина, серотрансферрина, САА и комплемента С3 при опухолях различной локализации подтверждается данными литературы и отражает реакцию организма на развитие патологического процесса. Транстиретин (преальбумин) — белок острой фазы, относящийся к фракции альбуминов, его основная функция транспорт тироксина и трийодтиронина (Северин Е.С., 2003). При различных заболеваниях рассчитывается прогностический индекс воспаления и состояния питания (Лейдерман И.Н., 2012). По данным масс-спектрометрического анализа CAP1 входит в панель предполагаемых белков-маркеров для дифференциального анализа при раке полости рта (Thiel U. , 2011). САА известен как маркер повреждения ткани и воспаления, относится к белкам острой фазы и предлагается в комбинации с гаптоглобином и комплементом С3 для дифференциальной диагностики рака различных локализаций (Dowling P. , 2012]). Белок MEPE участвует в минерализации костей и является членом семейства белков SIBLING. SIBLING участвуют в модуляции адгезии клеток, в регуляции металлопротеи-наз ММП 2, 3, 9, что коррелирует с плохим прогнозом заболевания (Fisher L. , 2004). Высокая экспрессия МЕРЕ наблюдается в опухолях (чаще мезенхималь-ного происхождения), вызывающих онкогенную остеомаляцию (Imanishi Y., 2012). Причастность белков SIBLING ко многим звеньям прогрессии опухолевого роста делает их потенциальными кандидатами в качестве эффективных биомаркеров. Известно, что протеинфосфатаза 1В (PPMlB, PP2CB) участвует в МАРК-киназном сигнальном пути регуляции многих клеточных процессов, включающих регуляцию пролиферации (TAKÍ^-NFkB путь), транскрипции и апоп-тоза (WNT-сигнальный путь) (http://www.genome.jp).

Белок Ashwin входит в состав тРНК-лигазного комплекса, участвующего в сплайсинге тРНК (Popow J., 2011).

Заключение. Выявлены различия в электрофорети-ческом распределении белков сыворотки крови у больных ПКГШ в отличие от группы здоровых. Изменения в белковом спектре могут быть обусловлены появлением белков, свойственных как прогрессии ПКГШ, так и сопутствующим заболеваниям. В сывороточном протеоме больных ПКГШ представлены белки, участвующие в различных клеточных процессах, которые могут быть предложены для дальнейшего изучения в качестве потенциальных маркеров опухолевой прогрессии. Так как в настоящее время нет данных о характере изменения протеома во взаимосвязи с клинико-морфологическими характеристиками опухолевого процесса при ПКГШ, это направление исследований является одним их актуальных в онкопротеомике.

С.М. Корнеев, Н.Э. Косых

ФИНАНСОВО-ЭКОНОМИЧЕСКИЕ ПОТЕРИ В РЕЗУЛЬТАТЕ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОЙ СМЕРТНОСТИ НАСЕЛЕНИЯ ХАБАРОВСКОГО КРАЯ ОТ РАКА ЛЕГКОГО ЗА ПЕРИОД С 2000 ПО 2010 Г.

Дальневосточный государственный медицинский университет, г. Хабаровск, Россия

На основании разработанного нами метода определения финансово-экономических потерь в результате преждевременной смертности населения от отдельных нозологических форм злокачественных новообразований и материалам проведенного онкоэпидемиологиче-ского исследования представлены данные о величине финансовых потерь региона в результате преждевременной смертности населения от рака легкого за период с 2000 по 2010 г.

Материал и методы. В свое исследование мы включили все случаи летальных исходов от злокачественных новообразований (ЗН) с 2000 по 2010 г., по данным врачебных свидетельств о смерти. Рассчитаны потерянные годы потенциальной жизни в результате преждевременной смертности от рака легкого и на основе метода расчета финансово-экономических потерь рассчитаны погодичные показатели невоспроизведенного дохода территории в результате преждевременной смертности от рака легкого с учетом динамики численности населения и динамики валового регионального продукта Хабаровского края за изучаемый период времени.

Результаты и обсуждение. В структуре смертности от ЗН на территории Хабаровского края рак легкого занимает первое место у мужчин и третье у женщин. Среднегодовые стандартизованные показатели смертности от рака легкого составили 66,8 и 8,0 на 100 000 мужчин и женщин соответственно. Общие потери «трудовых лет» за период исследования для лиц обоего пола составили 14 791 человеко-год жизни, при этом зарегистрирован достоверный рост (p > 0,01) погодичных показателей потерянных «трудовых лет» с течением времени. Используя разработанную методику определения величины финансово-экономических потерь в результате