Инфекционная иммунология

Медицинская Иммунология

2002, Т. 4, №2

©2002, СПб РО РА АКИ

ИНФЕКЦИОННАЯ ИММУНОЛОГИЯ

ИММУННЫЙ ОТВЕТ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ В

Абдулхаев Ф.А*., Мустафин И.Г**., Фазылов В.Х., Хусайнова Ф.М

Казанский государственный медицинский университет,

* Межрегиональный клинико-диагностический центр,

** Центр по профилактике и борьбе со СПИД Республики Татарстан,

Казань, Татарстан

Цель: исследование иммунного ответа у больных хроническим вирусным гепатитом В (ХВГВ) в зависимости от активности инфекционного процесса.

Материалы и методы: исследования проводились у 20 больных детей ХВГВ (в фазе высокой репликации вируса - 7, в фазе умеренной и низкой репликации - 7 и в фазе интеграции - 6 человек). Определение фазы инфекционного процесса проводили по результатам полуколичественного анализа DNA HBV в ПЦР. Контрольную группу составили 15 здоровых детей. Определяли содержание CD3*, CD4+, CD8\ CD 167CD56\ CD3VHLA-DR+, CD19* лимфоцитов на проточном цитофлю-ориметре FACSCalibur (BD, США) с использованием набора реагентов IMK Plus (BD, США).

Результаты. У детей с ХВГВ в фазе высокой репликации (DNA HBV 1:1000 - 1:10000) абсолютное содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD167CD56\ CD37HLA-DR*, CD 19" лимфоцитов было достоверно повышено (р<0,001) по сравнению с группой здоровых детей. При ХВГВ с умеренной и низкой репликацией (DNA HBV ог 1:1 до 1:100) наблюдалось повышенное содержание CD3\ CD16+/56T, CD37HLA-DR* лимфоцитов (р<0,05; р<0,05; р<0,001 соответственно), тогда как в фазу интеграции (DNA HBV не обнаружена) было отмечено увеличение CD3+, CD8+, CD167CD56++ лимфоцитов (р<0,05; р<0,01; р<0,001 соответственно).

При сравнении полученных данных в исследуемых группах больных детей отмечалось достоверное отличие в содержании основных популяций и субпопуляций лимфоцитов и активации Т-лимфоцитов в зависимости от активности хронической HBV инфекции. При высокой репликации повышено содержание всех изученных популяций лимфоцитов, включая активированные Т-лимфоциты, тогда как в фазу интеграции отмечалось увеличение только CD3\ CD8*, CD16+ клеток и не наблюдалось повышения CD37HLA-DR+ лимфоцитов. В фазу низкой и умеренной репликации выявленные изменения характеризовались повышенной активацией Т- лимфоцитов.

Заключение: в зависимости от фазы хронического инфекционного процесса при вирусном гепатите В у детей иммунный ответ характеризуется различной степенью изменений клеточных параметров иммунитета, более выраженных при высокой репликации.

ЦИТОКИНЫ И ИММУННЫЙ ОТВЕТ НА ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

Авдеева Ж.И., Алпатова НА., Калашникова Т.В., Медунинын Н.В.

Государственный научно-исследовательский инсти-тутстандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича, Москва, Россия

Оптимизация вакцинального процесса является перспективным направлением современной иммунологии. Это обусловлено тем, что несмотря на довольно высокую эффективность имеющихся в настоящее время различных вакцин, ни одна из них не дает 100% профилактического и лечебного эффекта. В связи с этим поиск способов повышения эффективности вакцинации, усиления иммуногенных свойств вакцин очень актуален. Цитокины, регулирующие иммунный ответ на любое патогенное воздействие, можно рассматривать в качестве потенциальных иммуноадьювантов.

Задачей данной работы являлась оценка на экспериментальных моделях адьювантных свойств цитокинов, влияния их на протективную активность вакцин против гепатита А и гепатита

В, а также изучение зависимости эффекта исследуемых препаратов от величины использованной дозы и схемы иммунизации.

Стимулирующее действие ряда цитокинов на иммуногенную активность вакцины против гепатита А показано в экспериментах на морских свинках. После 2-х и 3-х кратного введения препаратов средние геометрические титры АТ в группах животных, получивших вместе с вакциной рчТЫР-а, рч1И(3 или комбинацию из рчТЫР-а и рч1РМ-у достоверно (р<0,05) отличались от показателей контрольной группы. Частота сероположительных животных после 2-х кратного введения препаратов в группах с рч1Ы[3, рч!Ь-2 или рчТЫР-а, используемых индивидуально, достигала 100% и достоверно (р<0,05) отличалась от аналогичного показателя в контроле (74%). После 3-го введения препаратов указанный показатель составил 100% во всех группах животных, иммунизированных вакциной в сочетании с цитокинами, и 89% - в контроле.

Повышение иммуногенной активности вакцины против гепатита А и снижение ее иммунизирующей дозы (ИДзо) при сочетанном использовании с рчТШ'-ос отмечено и в экспериментах на мышах. Иммуноадьювантный эффект цитокина проявлялся повышением как частоты выявления, так и уровня специфических антител.

При изучении иммуногенной активности вакцины против гепатита В в экспериментах на мышах отмечены адьювант-ные свойства рчТОТ-(3 при его сочетании с наиболее низкой дозой вакцины (содержание АГ ВГВ - 0,15 мкг/мышь). Формирование антител к АГ ВГВ ири указанной выше дозе наблюдалось у животных опытной группы, в контроле - антитела не выявлялись.

Таким образом, использование цитокинов в качестве адью-вантов открывает новые подходы к созданию более эффективных препаратов для формирования поствакцинального иммунитета.

ИММУННЫЙ СТАТУС НОВОРОЖДЕННЫХ С РАННЕЙ РЕАЛИЗАЦИЕЙ КАНДИД03Н0Й ИНФЕКЦИИ

Амирова В.Р.

Башкирский государственный медицинский университет, Уфа, Россия

Кандидозная инфекция становится все более актуальной проблемой неонатологии. Однако иммунопатогенез данного заболевания в периоде новорожденности изучен недостаточно.

Целью настоящего исследования явилось изучение иммунологической реактивности новорожденных с ранней (в первые 7 суток жизни) реализацией кандидозной инфекции.

Проведено комплексное иммунологическое обследование 51 новорожденного в условиях перинатального центра. Основную группу составили 23 доношенных ребенка с ранней реализацией кожно-слизистого кандидоза. В контрольную группу вошли 28 здоровых младенца.

Для оценки иммунологического статуса в пуповинной крови определяли количественное содержание лейкоцитов, а также относительное и абсолютное содержание Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов/индукторов (CD4+), Т-супрессоров/цитотоксических клеток (CD8+), В-лимфоцитов (CD22+), натуральных киллеров (CD16+), HLA-DR -лимфоцитов в реакции иммунофлюоресцен-ции. Уровни IgA, IgG, IgM определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, IgE - методом ИФА.

Как показали исследования, у новорожденных, развивших в раннем неонатальном периоде кожно-слизистую форму кандидоза, отмечались достоверно низкие по сравнению с младенцами контрольной группы абсолютные показатели содержания лейкоцитов (7,3±0,5х10 /л и 11,3±1,1х10/л, р<0,05), лимфоцитов (2,4±0,2х 10 /л и 4,0±0,3х 10 /л, р<0,01), общего количества зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) преимущественно за счет цитотоксических лимфоцитов (CD8+), что обусловливало у этих детей достоверно более высокий иммунорегуляторный индекс - 1,7±0,1 и 1,4±0,1 (р<0,05). Достоверно более низким в основной группе было и абсолютное количество натуральных киллеров (CD16*) - 0,1± 0,02x10 /л и 0,3±0,09x10 /л (р<0,05). Указанные отклонения показателей, характеризующих клеточное звено иммунитета, были наиболее выраженными у детей с распространенными формами кандидоза. Вместе с тем у детей основной группы выявлено повышение относительного содержания в пуповинной крови эози-нофилов (6,5±1,4% и 3,5± 0,1%, р<0,05), а также IgE (132,7± 19,6 нг/мл и 86,5±7,6 нг/мл, р<0,05), что свидетельствовало об аллергически измененной реактивности младенцев.

Таким образом, ранняя постнатальная реализация кандидозной инфекции происходит на фоне врожденного дисбаланса иммунной системы, характеризующегося депрессией клеточного звена иммунитета с одновременной активацией факторов иммунной системы с гиперэргическими свойствами.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПЕТЕРБУРГЕ: НАЧАЛО ПУТИ

Андрюшкевич Т.В.

ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

В современных исследованиях по истории иммунологии России уделяется недостаточное внимание роли Петербургс-

кой пастеровской станции. Мы поставили перед собой задачу дать объективную оценку ее значения в становлении и развитии отечественной иммунологии. В ноябре 1885 года командир Гвардейского корпуса Принц А. П.Ольденбургский, активно поддерживавший распространение в России медицинских и биологических знаний, предложил военному ветеринарному врачу К.Я. Гельману осуществить опыты прививки возбудителя бешенства, полученного от больной собаки и приступить к разведению “яда”, как тогда называли вирус бешенства, на кроликах, возглавить работы по организации в Петербурге станции “предупредительного лечения водобоязни по способу Луи Пастера. Речь шла о внедрении в России открытого Луи Пастером способа борьбы с водобоязнью.

Изначально персонал Пастеровской станции, которая открылась в Петербурге 13 июля 1886 года, состоял всего из двух человек-К.Я.Гельмана и Н.А.Круглевского. Последний покинул ее в октябре 1886 года, но за этот достаточно короткий промежуток времени успел опубликовать две статьи, посвященные началу внедрения прививок против бешенства в России. После ухода Н.А.Круглевского на его место был назначен врач В.А.Краюшкин, который вплоть до своей смерти возглавлял антирабическую помощь в Петербурге-Петрогра-де. На Петербургскую Пастеровскую станцию являлись за помощью укушенные различными животными люди, и все они, если это требовалось, подвергались прививкам. Отличительной чертой станции стали научные эксперименты. Помимо узкой практической задачи - лечения больных, пострадавших от бешенства животных, К.Я.Гельман, Э.Шперк, В.А.Краюшкин и их помощники приступили к решению фундаментальных проблем общей микробиологии и иммунологии.

Трудно сейчас себе представить все значение открытия К.Я.Гельманом маллеина для специфической диагностики сапа. Впервые ветеринарные врачи получили надежное и безошибочное средство для диагностики не только явных проявлений, но и латентных форм этой инфекции. По инициативе К.Я.Гельмана в стенах Петербургской станции впервые в России были предприняты систематические исследования патогенных микроорганизмов и разработаны меры борьбы с рядом инфекционных заболеваний.

Интенсивно, сверх штата, работал на станции старший врач городской Калинкинской больницы доктор Э.Шперк. Он был исследователем широкого плана. Интересны рассуждения Э.Шперка по иммунитету, в которых он предполагает возможность получения аттенуированных культур микроорганизмов, обладающих полным набором антигенных свойств, но не патогенностью. Лишь спустя полвека этот подход удалось реализовать А.А.Смородинцеву при создании живой гриппозной вакцины. Э.Шперк первым среди иммунологов высказал мысль о зависимости характера иммунного ответа от биологии возбудителя, - идея, которая в настоящее время стала краеугольным камнем теории иммунорегуляции. Кроме того, он разделил понятия антигенности и иммуногенности, а сегодня именно оценка иммуногенности стала ведущим критерием для. вакцинопрофилактики.

После создания в 1890 году Императорского института экспериментальной медицины задачи пастеровской станции стало решать его прививочное отделение. Персонал отделения был усилен помощником заведующего В.Г.Ушаковым. Проведенный впервые анализ отчетов прививочного отделения, которые ежегодно публиковались в “Архиве биологических наук” с 1893 года В.Н.Краюшкиным, а затем В.Г.Ушаковым показывают, что вплоть до середины 1930-х годов Прививочное отделение вело огромную консультативно-методическую работу и подготовку специалистов антирабического профиля в России.

Сравнительный анализ результатов деятельности Петербургской пастеровской станции и других аналогичных учреждений России показывает, что если Одесская бактериологическая станция является первой по времени образования, то по объему проделанной работы все же главное место следует отвести Петербургу. Создание русских пастеровских станций имело большое значение для отечественной медицинской науки и практики. Но только в Петербурге Пастеровская станция переросла в государственное научно-исследовательское учреждение университетского типа. Императорский институт экспериментальной медицины стал для России первым национальным медико-биологическим центром, обеспечившим мощное развитие целого ряда дисциплин, в том числе и иммунологии.

ВЛИЯНИЕ КУЛЬТУРАЛЬНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ (ГЛПС) НА МИТОГЕНЕЗ Т-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА, ЭКСПРЕССИЮ БЕЛКОВ р-53 И bcl-2, FAS и FASL

Ахматова Н.К.. *Сибиряк С.В., *Юсупова Р.Ш., Кулагин В.Ф.

ГУП “Иммунопрепарат”', *Отдел экспериментальной и клинической иммунологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии,

Уфа, Россия

Апоптоз активированных лимфоцитов и пораженных вирусом клеток играет ключевую роль в развитии вирусных инфекций, обеспечивая ограничение и замедление распространения вируса, регулирования специфического иммунного ответа и механизмов цитолиза инфицированных клеток (Rusvi Е., Welsh R., 1995; Welsh R. 2000). Известно, что многие вирусы используют молекулярные механизмы, реализующие клеточную пролиферацию и апоптоз в инфицированном организме, что обеспечивает условия, необходимые для их репликации. Известными ингибиторам» апоптоза, являются белки, инактивирующие р53 - Е1В и Е4ог1'6 аденовирусов, Н6 и Н7 белки вируса папилломы человека, TAG белок вируса SV40. В настоящей работе изучено влияние культурального антигена вируса ГЛПС (штамм Пуумала, 5 - 25 мкг/мл) на митоге-нез, экспрессию белка bcl-2 и р53 (иммуногистохимический метод) в 72-часовых культурах, стимулированных антиСОЗ МКА (2.5 мкг/мл) Т-лимфоцитов периферической крови здоровых доноров (1 группа) и рсконвалесцснтов, переболевших ГЛГ1С 1 - 2 года назад (2 группа), а также мигогепез и мито-ген-индуцнроваиную экспрессию FAS и FASL у пациентов в остром периоде ГЛПС.

Обнаружено, что присутствие в среде культурального антигена вируса ГЛПС обеспечивало слабый комитогенный эффект как у здоровых доноров, так п лиц, переболевших ГЛПС (различия с контрольными культурами статистически недостоверны). Комитогенный эффект наблюдался при использовании 5 мкг/мл культурального антигена и с увеличением концентрации исчезал. Сам культуральный антиген не обладал мнтогенным действием на лимфоциты. Анализ экспрессии bcl-2 не выявил влияния антигена вируса на содержание bcl-2* клеток в культурах. В то же время, в присутствии антигена вируса (5 мкг/мл) содержание р53-позитивных клеток снижалось на 53% в 1 группе и на 57% во второй группе (различия статистически значимы). У больных в острой фазе ГЛПС (3 группа) отмечалось значимое снижение пролиферативного ответа Т-лимфоцитов, при их стимуляции CD3 МКА, а также

снижение митоген-индуцированной экспресии Fas и FasL. Комитогенный эффект культурального антигена вируса у больных 3 группы был выражен более отчетливо. Как у здоровых доноров, так и у больных антиген вызывал отчетливое снижение митоген-индуцированной экспресии FasL и депрессию соотношения FasL+ клетки/Fas* клетки, что косвенно свидетельствует о снижении интенсивности клеточно-автономного апоптоза активированных Т-лимфоцитов.

Судя по полученным результатам, культуральный антиген вируса ГЛПС оказывает непосредственное (не зависящее от специфических иммунных механизмов) влияние на активированные Т-лимфоциты периферической крови человека, угнетает экспрессию р53 в этих клетках, а также активацион-но-индуцированиую экспрессию FasL. Эти механизмы, скорее всего, обеспечивают "выживаемость” активированных Т-лимфоцитов при данной инфекции и могут определять особенности формирования специфического иммунного ответа.

МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ РАДИАЦИОННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

Бархина Т.Г. Али-Риза А.Э.

Научно-исследовательский институт морфологии человека РАМН, Москва, Россия

Общеизвестно, что различные инфекционные заболевания и длительное радиационное воздействие имеют значительное влияние на клеточные популяции иммунной системы. Однако морфологические изменения в этих клетках изучены слабо, не систематизированы, и остается открытым вопрос о характерных и специфических изменениях клеток иммунной системы и их субклеточных структур при данных патологических состояниях.

Целью настоящей работы явилась попытка получить морфологические дифференциально-диагностические критерии изменений лимфоцитов, плазмоцитов, макрофагов, клеток Лангерганса кожи при бактериальных и вирусных инфекциях и при воздействии малых доз радиации.

Материал и методы. С помощью различных методов световой и электронной микроскопии исследовался аутопсийный (32 случая), биопсийный (49 случаев) и операционный материал (15 сл.). В большинстве случаев- это ВИЧ-инфицированный контингент в различных стадиях заболевания. Группа сравнения составила 17 случаев с различными инфекционными заболеваниями. Вторичные заболевания при ВИЧ-инфекции: бактериальные пневмонии, цитомсгаловирусная инфекция (ЦМВ), саркома Капоши. В группе сравнения: грипп, эшерихиоз, сальмонеллез.

Группа пациентов, подвергающихся длительному воздействию малых доз радиации, была представлена работниками горно-химического комбината г. Железногорска с признаками хронического бронхита (21 человек), группа сравнения -жители этого же города (17 человек).

Результаты. Нами установлено, что при бактериальной пневмонии наблюдается активация альвеолярных макрофагов (AM) и лимфоцитов парабронхиальных узлов с соответствующими изменениями ультраструктуры этих клеток. При ВИЧ-инфекции в стадии вторичных заболеваний эти популяции клеток подвергаются значительной деструкции, в особенности при присоединении второй вирусной инфекции; в терминальной же стадии заболевания наблюдаются очаги парциального некроза и появляются мембранно-гранулярные структуры (МГС), тесно контактирующие с вирусными частицами (МГС+ВС), что, на наш взгляд является основным специфи-

ческим критерием ВИЧ-инфекции по сравнению с другими вирусными заболеваниями.

При ВИЧ-инфекции в случаях присоединения саркомы Капоши наблюдается уменьшение количества клеток Лангер-ганса кожи (эпидермальных макрофагов) со значительными изменениями ультраструктуры этих клеток и появлением вирусных частиц, встроенных в цистерны ретикулума. Эти данные имеют серьезные прогностические критерии.

Длительное воздействие малых доз радиации приводит к морфологическим изменениям AM, в большинстве случаев с их полной деструкцией.

Заключение. Комплексное морфологическое исследование клеток иммунной системы человека при патологии позволяет получить дифференциально-диагностические критерии бактериальных и вирусных инфекций и радиационных поражений.

КОРРЕКЦИЯ ВТОРИЧНЫХ НАРУШЕНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОМ ОСТЕОМИЕЛИТЕ

Белохвостикова Т.С.. Кирдей Л.Е., Гаврилова Е.Ю., Промтов М.В., Леонова С.Н., Кирдей Е.Г.

НЦРВХВСНЦ СО РАМН, Иркутск, Россия

Как известно, в процессе репарации костной ткани при переломах существенную роль играют каскадно протекающие реакции иммунной системы, сопровождающиеся индукцией выработки и синтезом большого числа цитокинов. От первичной реакции иммунной системы и, соответственно, индукции определенного спектра цитокинов зависит дальнейшее развитие осложнений. Одним из наиболее тяжелых осложнений “острой” травмы опорно-двигательного аппарата является остеомиелит, развивающийся вследствие недостаточности реакций “гуморального” иммунитета. Ранее нами были изучены иммунопатологические реакции, сопровождающие гнойный процесс костной и окружающих тканей. Было выявлено, что хронический посттравматический остеомиелит сопровождается выраженными аутоиммунными реакциями. Целью настоящего исследования явилось изучение использования комплекса естественных цитокинов неспецифической фазы иммунного ответа, для коррекции иммунопатологических реакций, сопровождающих развитие остеомиелита.

Под нашим наблюдением находились 33 больных хроническим посттравматическим остеомиелитом, поступившим в клинику НЦ РВХ с обострением гнойного процесса. Все больные были разделены на 2 группы. Первая группа являлась контрольной, в нее вошли 17 больных хроническим посттравматическим остеомиелитом (ХТО) длинных костей. Все больные этой группы получали традиционный комплекс лечения: антибактериальную терапию, санирующее оперативное вмешательство. Вторая группа из 16 больных в послеоперационном периоде получала лейкинферон внутримышечно по 10000 ед. через день, всего 10 инъекций (НПФ “Интекор”) Оценку иммунного статуса проводили при поступлении больного в клинику НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН, после оперативного лечения и после проведенного курса иммунокоррекции. При этом определяли общее число лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, количество клеток методом проточной цитофлуориметрии на цитофлуориметре “Beckman Culter”. Исследовали содержание общего числа Т-клеток: CD2*CD3+, Т-субпопуляций: CD4+, CD8*, HLA-DR+, В-клеток: CD19, NK-клеток CD56+, а также уровень Т-лимфоцитов и Т-субпопуляций, чувствительных и резистентных к индукции Е-рецепто-

Табл. СОДЕРЖАНИЕ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХТО ЧЕРЕЗ 1 МЕСЯЦ ПОСЛЕ ИММУНОКОРРЕКЦИИ ЛЕЙКИНФЕРОНОМ

Исследуемые показатели 1 группа 2 группа

Лейкоциты (109/л) 6.57+0.79 7.58±0.8*

Палочкоядерные (%) 3.83+0.89 6.67+1.62

Сегментоядерные(%) 50.17+2.87 51.67+3.8

Эозинофилы (%) 4.6±0.81 4.75+1.07

Моноциты (%) 6.98+1.63 5.91 ±1.21

Лимфоциты (%) 33.14+2.47 30.92±3.13

Лимфоциты (109/л) 2.08+0.19 2.15±0.18

Е-РОК (%) 54.2+3.97 65.9±4.08 *

Е-РОК (109/л) 1.17+0.12 1.49+0.18

Е-РОК т.р. (%) 45.7+6.7 65.4±4.9 *

Е-РОК т.р. (109/л) 1.006+0.18 1,35±0.19

Е-РОК т.ч.(%) 12.2±3.64 4.6±2.2

Е-РОК т.ч. (109/л) 0.26+0.08 0.12±0.06

|д с (г/л) 13.79+0.92 14.67±2.4

1д А (г/л) 2.42±0.33 1.96+0.18

1д м (г/л) 1.05±0.13 1.23+0.1

НСТ сп.% 19.4+3.53 17.4+? Я7

НСТ инд.% 42.9+4.2 39.5±4.6

С03+Н1_А-0Н' (%) 70.62+2.3 70.4±2.6

С03+С056' (%) 71.06+2.2 69.66±2.7

С04ЧЖ(%) 47.47+5.7 41.22+2.5

С08+С04 (%) 27.76±2.1 28.79+2.1

С02+С019 (%) 79.44±2.2 79.23+1.58

С019+С02'(%) 8.68±1.5 6.29+1.01

С056+СРЗ (%) 7.5+1.2 4.7±0.98

Н1А-0П+С03(%) 1.65+0.19 1.04+0.13 *

Н1А-0Р+С03+(%) 19.53±8.9 6.23±1

С03+Н1А-0Н'(Юэ/л) 1,43±0.15 1.56±0.17

С03+С056'(Ю9/л) 1.43+0.15 1.55+0.17

С04+СЭ8 (109/л) 0.84+0.1 0.92+0.1

С08+С04(109/л) 0.57±0.07 0.63+0.08

С02+С019 (109/л) 1.67±0.15 1.86+0.16

С019+С02'(Юэ/л) 0.18±0.037 0.14+0.03

СР56+СОЗ(109/л) 0.12+0.02 0.09+0.02

Н1А-ОР+СОЗ+(Ю9/л) 0.03±0.005 0.02+0.003 *

Н1А-ОЯ+СОЗ-(Ю9/л) 0.39+0.19 0.14+0.002

ра теофиллином. Исследовали также концентрацию сывороточных иммуноглобулинов й, А, М методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, фагоцитарную активность нейт-рофилов по отношению частиц латекса, функциональную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ) в спонтанном и индуцированном вариантах, а также титры гетерогемагглютининов к эритроцитам барана.

В качестве клинических критериев оценки иммунокоррекции использовали показатели среднего пребывания больного в клинике (койко-день), сроки заживления ран, динамику показателей антибиотикорезистентности.

Результаты, полученные через месяц после проведения курса иммунокоррекции, представлены в таблице. Выявлено, что в условиях иммунокоррекции лейкинфероном в период лечения остается высоким содержание лейкоцитов, достовер-

но увеличинается количество Т-клеток (CD3+), количество Етр-РОК. Обращает на себя внимание снижение абсолютного количества активированных HLA-DR*CD3* и относительного числа HLA-DR+CD3 клеток. Из вышеизложенного очевидно, что наряду с активацией функционального состояния Т-кле-гок лейкинферон, содержащий интерферон-сх, обладающий цитостатическими свойствами, существенно ограничивает процессы гиперактивации клеток иммунной системы.

В группе больных, получавших лейкинферон, отмечено быстрое купирование гнойного процесса без нарастания явлений антибиотикорсзистснтности. Побочных реакций на препарат нами не отмечено.

Таким образом, лейкинферон при лечении больных хроническим остеомиелитом проявляет иммуномодулирующие свойства, что позволяет широко использовать лейкинферон в лечении больных хроническим травматическим остеомиелитом.

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ GSTM, CYP1A1 И CYP2E1 У БОЛЬНЫХ ИНФИЛЬТРАТИВНЫМ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ (ИТЛ):

ВОЗМОЖНАЯ АССОЦИАЦИЯ С ИММУНОЛОГИЧЕСКИМИ НАРУШЕНИЯМИ

Бикмаева А.Р., *Сибиряк С.В., Хуснутдинова Э.К.

Лаборатория молекулярной генетики института биохимии и генетики УГ1Ц РАИ,

*Отдел клинической и экспериментальной иммунологии и иммунофармакологии Всероссийского центра глазной и пластической хирургии, г. Уфа, Россия

Неблагоприятное течение туберкулеза легких ассоциируется с преобладанием ТЪ2-типа реагирования иммунной системы, увеличением интенсивности активационного апоптоза лимфоцитов. Несмотря на интенсивные исследования, механизм развития этих нарушений остается неясен. Существенное значение в изменении реактивности лимфоцитов может иметь нарушение внутриклеточного оксидативного гомеоста-ja. Среди систем регуляции редокс-етатуса клетки ключевая роль принадлежит цитохром Р450-зависимым монооксигена-зам, в первую очередь наиболее “опасным”, с точки зрения генерации активных форм кислорода (АФК), изоформам CYP1AI и CYP2E1. Не менее важна и роль ферментов II фазы биотрансформации, в частности, глютатион-5-трансферазы (GST), регулирующей уровень внутриклеточного глютагиона.

В настоящем исследовании изучены иммунный статус и полиморфизм генов CYP1A1, CYP2E1 и GSTjil у больных тяжелыми формами ИТЛ (п=73). Выявленные иммунологические нарушения свидетельствовали о преобладании Th2 -типа реагирования, увеличении интенсивности апоптоза лимфоцитов, гиперэкспрессии Fas и FasL. Результаты генетического анализа иллюстрирует представленная ниже таблица 1.

Частота встречаемости функциональной делеции гена GSTju. 1, мутантных (Ins96) гетеро- и гомозигот CYP2E1 (высокая активность фермента) была существенно выше среди больных ИТЛ нежели в популяции. Степень риска (Odds Ratio, OR) составила, соответственно 3.45 и 6.55.Частота встречаемости мутантных (Ile/Val и Val/Val) геторо- и гомозигот CYP1А1 среди больных ИТЛ значимо не отличалась от популяции. Известно, что в условиях оксидативного внутриклеточного стресса (в том числе и при индукции цитохром Р450-зависимых монооксигеназ) усиливается реактивность системы Fas/FasL апоптоза (Bauer М. Et а!., 1998), рецепторно-опос-редуемый апоптоз, а также некоторые механизмы нерецеп-торпого апоптоза (опосредовано через МАРКр38) (Zhuang Sh. el al., 2000). В свою очередь Thl лимфоциты более чувствительны к активационно - индуцированному апоптозу, нежели ТИ2 клетки (Varadhachary А., 1997).

Таким образом, на основании полученных данных можно предположить, что в результате функциональной делеции гена GST(il или (и) наличия мутантной формы CYP2E1 повышается чувствительность лимфоцитов к окислительным процессам, это, в свою очередь, влечет усиление механизмов рсцепторно-опосредованного и нерецепторного апоптоза, нарушению бгшанса Th 1 /'ГЬ2 клеток в условиях активации клетки обуславливая неблагоприятное течение заболевания.

БАКТЕРИАЛЬНАЯ ИНФЕКЦИЯ И ИММУНОДЕФИЦИТ КАК КЛЮЧЕВЫЕ ФАКТОРЫ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ХАРАКТЕР ТЕЧЕНИЯ И ИСХОД ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

Благовещенский С.В.. Качков И.А., Зубова Ю.Е., Сучков С.В.

Московский областной научно-исследовательский клинический институт, Россия

При хронических инфекциях центральной нервной системы (1ДНС), осложненных развитием абсцессов головного мозга (АГМ) и эмпием, отмечена низкая эффективность антимикробной монотсрапии [Курилин И.А. и со-авт. 1983; Великсон Г.М. и соавторы 1984]. Сегодня данное обстоятельство можно объяснить наличием у большинства инфицирующих бактерий, в первую очередь, St. aureus, Е. coli, Н. influenzae, Т. gondii, L. monocytogenes и других, особых факторов вирулентности, обеспечивающих микробу длительное выживание внутри клетки - мишени и, соответственно, персистенцию и хронизацию инфекционного процесса в ЦНС с последующим формированием АГМ и эмпием [Bakalctz L.O. et al., 1999; Charland N. et al., 2000; Greiffenberg L. et al., 2000; Kielian T. et al., 2001; Schluter D. et al., 2001]. Некоторые из персистирующих в организме хозяина штаммов бактерий способны преодо-

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТОТ ГЕНОТИПОВ

GSTM 1 Популяция п=378 Больные ИТЛ п=70 CYP1A1 Популяция п=42 Больные ИТЛ п=70 CYP2E1 Популяция п=164 Больные ИТЛ п=73

0/0 +/+ х2 Не/Не Ile/Val Val/Val Ins96 (-/-) Ins96 (+/-) Ins96 (+/+) X2

Популяция 44.2 55.8 88.1 9.5 2.4 97 3 0

Больные ИТЛ 74.3 25.7 25.4 82.1 13.8 3.6 83 16 1 15.2

левать гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), используя для этой цели специальные рецепторы сосудистого эндотелия и проникая в ткань головного мозга [Prasadarao N.V. el al., 1996; Prasadarao N.V. et al., 1999; Kim K.S., 2000]. Таким образом, в руках лечащего врача антибактериальная монотерапия при АГМ не может служить абсолютным объектом выбора, тем более, что часто у больных с АГМ, помимо традиционных возбудителей участниками гнойно-септического процесса становятся иные по своей природе инфекционные агенты, например, грибы рода Aspergillus и др., требующие совершенно других методов воздействия [Guppy К. et al., 1998].

В свою очередь, для бактериальных инфекций ЦНС и их осложнений, провоцируемых поступлением в нервную ткань инфицированных клеток, с одной стороны, и реактивацией клеток паренхимы, с другой, характерным является иммунодефицит с преимущественным поражением клеточного звена [Buchanan K.L. et al., 2000; Kielian Т., Hickey W.F., 2000]. Вместе с тем исследования иммунного статуса у пациентов с АГМ проводились, в основном, фрагментарно, и в литературе отсутствует конкретная информация относительно роли иммунологических механизмов в формировании иммунодефицита при внутричерепных гнойных процессах, что является серьезным препятствием на пути к созданию системы иммунологического мониторинга пациентов с АГМ.

В литературе отсутствуют данные по сопоставлению особенностей микробного пейзажа, характерного для АГМ, с иммунологическими сдвигами в крови, хотя известно, что некоторые бактерии способны выключать процессы антигелообразования как прямым, так и опосредованным (через индукцию факторов, препятствующих активации Т-клеток) путем и, тем самым, снижать общий уровень иммунного ответа на возбудитель [Faist Е. et al., 1986; Del Piano M. et al., 1989].

He внесена ясность в целый ряд вопросов, связанных с формированием при АГМ иммунодефицитного состояния, в частности, в вопрос об удельной значимости различных механизмов цитотоксичности и фагоцитоза в процессе взаимодействия и борьбы с инфекционным возбудителем, относительно патогенетической роли про- и противовоспалительных цитокинов в динамике формирования инфекционно-воспалительных очагов и степени хро-низацин процесса в целом, в отношении механизмов апоп-тоза как инфицированных клеток нервной ткани, так и Т-лимфоцитов, циркулирующих в периферической крови. Иными словами, конкретный характер иммунологических нарушений при АГМ до конца не определен, хотя не исключено, что степень выраженности таких нарушений может заметно различаться и по глубине, и по разнообразию и объему у больных с различными этиопатогенсти-ческими особенностями и клиническими формами АГМ.

Важная роль иммунной системы в патогенезе и исходе гнойно-септических заболеваний, в том числе, абсцедирую-щих процессов с различной локализацией не вызывает сомнений [Маянский В.Н., 1992; Philpott D.J. et al., 2001; Raupach

В., Kaufmann S.H.E., 2001]. АГМ в этом плане являются наименее изученной клинической моделью, несмотря на то, что диагностика и лечение внутричерепных абсцессов и эмпием продолжают оставаться в центре самого пристального внимания нейрохирургов. В этой связи весьма актуальным представляется комплексное и широкомасштабное исследование параметров иммунологической реактивности с одновременной оценкой особенностей микробного пейзажа у больных с АГМ на различных стадиях развития процесса.

ФОРМИРОВАНИЕ ИММУННОГО ОТВЕТА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПРИ СМЕШАННОЙ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ У МАТЕРЕЙ

Бочарова И.И.. Кузьменко Л.Э., Аксенов А.Н., Башакин Н.Ф., Малиновская В.В.,

Московский областной НИИ акушерства и гинекологии М3 РФ, НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН

Иммунный гомеостаз плода во многом определяется состоянием здоровья беременной женщины. Наличие смешанной урогенитальной инфекции у матери во время беременности способствует длительной внутриутробной антигенной стимуляции иммунной системы плода, что приводит к нарушению формирования адекватного иммунного ответа новорожденного в раннем неонатальном периоде.

Целью работы явилось изучение влияния смешанной урогенитальной инфекции матери на становление иммунитета у новорожденного путем исследования показателей клеточного и гуморального иммунитета, естественной цитотоксичности, интерферонового статуса (ИФС) и фагоцитоза в раннем неонатальном периоде.

В результате проведенных нами исследований у 156 новорожденных от матерей со смешанной урогенитальной инфекцией отмечена лейкопения, лимфопения ( как в относительных, так и в абсолютных значениях), повышение числа ранних предшественников Т- и В-лимфоцитов (CD38+ кл.-60,2±8,6%), незрелых Т-лимфоцитов (CD7T кл,- 16,9±7,5%) в периферическом кровотоке. Были выявлены нарушения в иммунорегуляции со снижением хелперов-индукторов DC4+ (33,2±3,4%, при контрольных значениях - 41,0±3,8%), уменьшение активированных CD8+ клеток (8,3±0,1%, при контрольных значениях - 13,4±2,5%), числа клеток-продуцентов 1L-2 (CD3+IL27CD3+wi. - 12,0±2,7%, при контрольных значениях - 28,6±5,0%). Иммунорегуляторный индекс (CD4/CD8) варьировал в пределах нормальных значений (1,9±0,2%).

Повышение уровня ЕК (11,9±2,3%, при контрольных значениях 5,8±2,5%) и клеток с фенотипом CD16+CD8*(2,5±0,6%, при контрольных значениях - 1,3±0,4%) к моменту рождения подтверждало внутриутробное антигенное воздействие на плод у инфицированных беременных.

Снижение уровня зрелых В-лимфоцитов (CD20 кл. -3,7±0,4%, при контрольных значениях - 15,0±6,3%) у новорожденных от инфицированных матерей могло отражать нарушение дифференцировки клеток и повышенный апоптоз незрелых В-лимфоцитов на фоне высоких доз антигена.

При первичном инфицировании, а также активации урогенитальной инфекции во время беременности в условиях физиологического иммунодефицита имеет место снижение уровня IgG в крови матери, что обусловливает его низкий уровень у новорожденного, причем самые низкие уровни IgG (от 2,5 г/л до 5,2 г/л, средние значения - 3,4 г/л) были отмечены у новорожденных с тяжелыми формами внутриутробных инфекций. Дефицит материнских IgG в сочетании с незрелостью В-лимфоцитов новорожденного приводит к несостоятельности гуморального звена иммунитета. Повышение уровня lgMfloO,31 г/л ( в контрольной группе-0,1 г/л ) и IgA до 0,12 г/л ( в контрольной группе - 0,02 г/л) в сыворотке крови новорожденных от матерей со смешанной урогенитальной инфекцией связаны с внутриутробным инфицированием.

Повышение числа незрелых форм нейтрофилов (12,4±1,6%) и снижение их фагоцитирующей способности (АФП - 8941±962, в контрольной группе - 11696± 1712) было обусловлено, по-видимому, как общей незрелостью иммунной системы, так и недостаточной выработкой Th 1типа гам-ма-IFN, регулирующего активность фагоцитов.

Интерфероновая система характеризовалась повышением в 2,3 раза “раннего” a-IFN и снижением гамма-IFN в 2 раза по отношению к нормативным значениям. С дефицитом гам-ма-IFN связано снижение экспрессии HLA-DR антигена (4,1 ±0,6%, при контрольных значениях 7,6±1,4% ), что может приводить к нарушениям представления антигена Т- лимфоцитам и сниженной резистентности клеток-мишеней к инфекции.

Таким образом, смешанная урогенитальная инфекция у матери во время беременности неблагоприятно влияет па становление иммунитета у новорожденного, приводя к смещению иммунного процесса в сторону пролиферации и нарушению дифференцировки клеток вследствие внутриутробной антигенной стимуляции с формированием к моменту рождения дефицита Т- и В-систем иммунитета, угнетения фагоцитарной функции нейтрофилов, нарушения функционирования системы IFN.

ВАРИАНТЫ ДИНАМИКИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К TOXOPLASMA GONDII В ОСТРУЮ СТАДИЮ ТОКСОПЛАЗМОЗА

И.нпльев В.В.. Васильева И.С.*

Российская Военно-медицинская академия,

*Санкт-Петербургская государственная педиатрическая академия,

Санкт-Петербург, Россия

Введение. Изучение антителогенеза при токсоплазмозе человека в условиях реализации естественного (перорально-го) пути заражения представляет собой важную задачу. Особое значение знание особенностей динамики специфических антител имеет для определения вероятной давности заражения у беременных, так как трансплацентарная передача инфекции возможна только при заражении во время данной беременности (F. Robert-Gangneux, 2001, М. Paul et al, 2001).

Цель и задачи. Изучение динамики специфических антител к токсоплазмам в процессе развития острой стадии заболевания (“первичного” заражения).

Материалы и методы. В Центре диагностики и лечения токосплазмоза клиники инфекционных болезней ВМедА проведено изучение динамики специфических антител к Т. gondii классов IgM (далее - IgM-tox) и Ig G (далее - IgG-tox) в сыворотке крови 57 пациентов (38 женщин н 19 мужчин). Величину специфических антител определяли не менее 5 раз, с интервалом в 2-4 недели (всего исследовано 296 сывороток) методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-системы фирмы “F. Hoffmann-La Roche”. Пороговым уровнем IgM-tox считалась величина экстинции 100%, показатель более 170% рассматривался как критерий острой стадии заболевания (“первичного” заражения). Погрешность метода не более 2%. Полученные результаты обрабатывались методами параметрической и нспарамстричсс-кой статистики с использованием программы “Statgraphics pro Win 3.0”.

Основные результаты. Выявлено два основных варианта динамики IgM-tox и один - IgG- tox, общий для обоих вариантов IgM-tox. Первый вариант динамики IgM-tox является типичным для острых инфекционных заболеваний, его наблюдали у 39 пациентов (68,4%). Он характеризуется быстрым нарастанием величины экстинции до пика (в течение 3-5 недель), наличием “стационарной фазы” в течение 4-6 недель е последующим снижением показателя ниже порога чувствительности реакции в течение 5-7 недель.

Второй вариант динамики IgM-tox характеризуется тем, что после кратковременного (в течение 1-2 недель) снижения величины экстинции примерно на 25-30% от пикового уровня, показатель нарастает вновь. Второй ник па 10-15% ниже первого и его “стационарная фаза” продолжается 6-7 недель. Последующее снижение величины экстинции более медленно, IgM-tox продолжают обнаруживаться до 12 месяцев после заражения.

Динамика IgG-tox графически напоминает кривую первого варианта динамики IgM-tox, но пиковые концентрации достигаются позже (2-3 месяца после заражения), “стационарная фаза” продолжается более 8 недель, у пациентов со вторым вариантом динамики IgM-tox - более 12 недель. Снижение концентрации IgG-tox начинается значительно позже, чем величины экстинции IgM (не ранее 20 недель). Использованным методом антитела этого класса продолжают определяться в течение многих лет в различных концентрациях, не имеющих корреляции с характером течения инфекционного процесса.

Величины экстинции, концентрации антител и их динамика в острую стадию токсонлазмоза не зависят от пола обследованных, наличия беременности, характера проводимой терапии.

Обсуждение. В большинстве случаев (до 70%) динамика специфических антител классов IgM и IgG к Т. gondii в острую стадию заболевания человека соответствует экспериментальным данным и результатам других исследователей (Р.А. Jcnum, В. Stray-Pedersen, 1998). Заслуживает отдельного внимания двуволновая динамика IgM-tox почти у каждого третьего пациента. Мы считаем, что вторая волна антител связана иммуноопосредованным цитолизом инфицированных клеток с формирующимися цистами, которые образуют брадизо-иты возбудителя. Так как тахизоиты и брадизоиты гетероген-ны по антигенной структуре повторный подъем IgM обусловлен формированием и активацией клона B-IgM лимфоцитов, специфичных именно для антигенов брадизоитов. Такая динамика IgM-tox более характерна для лиц с манифестным течением острой стадии заболевания, что может иметь прогностическое значение.

АП0ПТ03 ФАГОЦИТОВ КАК ОДИН ИЗ ВОЗМОЖНЫХ МЕХАНИЗМОВ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА

Васильева Г.И.. Киселева А.К., Мишанькин М.Б., Козловский В.Н., Мишанькин Б.Н.

Научно-исследовательский противо чул шый ин сп 1 и тут,

Ростов-на-Дону, Россия

Учитывая, что в патогенезе иммунопатологических реакций, обусловленных суперантигенами, к которым относится и холерный токсин (XT), существенную роль играет гибель фагоцитов в результате апоптоза, мы предположили, что описанная нами ранее (Васильева и др., 2000) альтерация макрофагов и нейтрофилов под влиянием XT является следствием этого процесса.

Цель работы - изучение способности XT запускать апоптогенную программу в фагоцитарных клетках. В работе использовали высокоочищенный препарат XT, полученный из штамма 569В Vibrio cholcrac. Потенциальную способность XT вызывать апоптогенную гибель макрофагов и нейтрофилов оценивали несколькими способами: но характерным морфологическим изменениям в клетках при

окраске по Май-Грюнвальду с дополнительным окрашиванием по Романовскому и последующим учетом с помощью светового микроскопа и при окраске прижизненным красителем акридиновым оранжевым с исследованием препаратов с помощью флуоресцентного микроскопа с синим светофильтром, а также по деградации ДНК, выявляемой электрофоретическим методом, и колориметрически с использованием дифениламинового реактива. При окраске гистологическими красителями апоптозные клетки идентифицировали по характерным морфологическим признакам - уменьшению размеров клеток, конденсации цитоплазмы, наличию уплотненного бесструктурного хроматина, разделенного на ряд округлых телец. При использовании в качестве красителя акридинового оранжевого, окрашивающего ДНК в ядрах нормальных клеток в зеленый цвет, а РНК в ядрышках и цитоплазме - в красный, апоптозные клетки дифференцировали от нормальных по проникновению зеленого окрашивания в цитоплазму и наличию зеленых глыбок фрагментированного ядра. Сравнительная оценка результатов, полученных при этих способах окраски, выявила их идентичность и сильную прямую корреляцию. При учете электрофореза в проходящем ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм на трансиллюминаторе выявляли характерную для апоптоза фрагментацию ДНК, а при использовании колориметрического метода оценки нуклеосомных фрагментов ДНК определяли процент фрагментированной ДНК, содержащейся в надосадочной жидкости, от общей ДНК, осажденной при 12000 g (интактный хроматин). Сравнительная оценка результатов электрофоретического и колориметрического методов выявления фрагментов ДНК показала их сильную прямую корреляцию. Исследования, выполненные с применением вышеуказанных четырех методов, продемонстрировали способность XT вызывать апоптоз макрофагов и нейтрофилов как у мышей, так и морских свинок, но более выражен этот эффект у первых, особенно в отношении макрофагов. Следует отметить, что с понижением концентрации препарата повышается доля апоптозных фагоцитов среди погибших клеток и, наоборот, с повышением дозы XT начинает преобладать некротический путь альтерации. Выявленная закономерность подтверждает наблюдения других исследователей (Солнцева и др., 1999; Buechner et al., 1997; Cynthia et al., 1998), отмечающих, что один и тот же препарат в зависимости от тех или иных условий может вызывать как апоптоз, так и некроз. Учитывая, что суперантигенные свойства XT, как и других суперантигенов, проявляются в очень низких концентрациях, а в высоких дозах имеет место их экранирование за счет цитотоксического эффекта этого препарата, можно сделать вывод, что апоптоз иммунокомпе-гентных клеток, индуцированный XT, связан с его супе-рантигенной активностью. Апоптогенный характер наблюдавшихся морфологических изменений при альтерации макрофагов и нейтрофилов подтвержден колориметрически установленной фрагментацией ДНК, выявляемой только при использовании низких доз препаратов (0,01-0,1 мкг/ мл). Результаты этого метода коррелируют с результатами, полученными с помощью электрофоретического и морфологических методов исследования. Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют об участии механизмов активной программированной клеточной гибели в цитотоксическом эффекте XT в отношении макрофагов и нейтрофилов.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 01-04-48299).

ВАРИАНТЫ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИГЕНАМ TOXOPLASMA GONDII У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ТОКСОПЛАЗМОЗОМ

Васильева И.С.. Васильев В.В.*

Санкт-Петербургская государственная педиатрическая академия, Российская Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Формирование гиперчувствительности замедленного типа к антигенам Т. gondii (ГЧЗТ) является одним из ключевых механизмов развития хронической стадии токсоп-лазмоза (Казанцев А.П., 1993, Лобзин Ю.В. с соавт, 2001, Montoya J. et al, 2000). В клинической практике степень выраженности ГЧЗТ определяется в результате постановки и учета внутрикожной пробы (ВКП) с токсоплазмином, что позволяет выделить пациентов, нуждающихся в специфической иммунокоррекции (Васильев В.В., 2001). ВКП проста в исполнении, до сих пор не зарегистрировано ложных результатов (Засухин Д.Н., 1980, Лобзин Ю.В. с соавт, 1997).

Цель и задачи. Изучение вариантов ВКП у больных хроническим токсоплазмозом в различные периоды болезни.

Материалы и методы. Проведено изучение ГЧЗТ у 216 больных хроническим токсоплазмозом (XT) и 30 пациентов с латентной формой заболевания (контрольная группа) путем постановки ВКП с токсоплазмином, разведенным в соотношении 1:10 0,9% раствором хлорида натрия по методике J.Frenkel (1948). У больных XT исследование выполнялось в период обострения болезни и через 6 месяцев после проведения специфической терапии, в контрольной группе - однократно.

Основные результаты. Оценка результатов постановки ВКП позволила выделить ряд вариантов, которые с неодинаковой частотой встречаются у больных XT.

Наиболее часто (39%) через 24 часа после введения 0,1 мл токсоплазменного антигена, разведенного 1:10 (далее -первое разведение), в месте введения определяется эритема диаметром не менее 10 мм, которая не исчезает спустя 48 часов от момента постановки пробы (далее - местная реакция). При осмотре определяется усиление лимфаденита (кроме признаков мезаденита), головной боли, миальгий, артральгий, повышается температура тела до субфебрильных цифр. Указанные проявления в 16% случаев сопровождаются появлением мезаденита. В 26% случаев развитие местной реакции и усиление признаков лимфаденита (без мезаденита) не сопровождаются другими системными проявлениями ГЧЗТ.

В 8% случаев зафиксированы “отсроченные” (появление местной реакции, лимфаденитов, системных проявлений позже 24 часов после постановки ВКП) и “обратные” (положительная местная реакция, сочетающаяся с улучшением общего состояния пациента) реакции, причем в группе пациентов с рецидивирующим течением XT -достоверно чаще (р<0,05).

У всех пациентов контрольной группы результаты ВКП были отрицательными.

Установлено, что результаты ВКП не коррелируют частотой отдельных клинических проявлений у обследованных лиц независимо от перехода заболевания в стойкую ремиссию или наличие повторных обострений, длительностью заболевания, концентрацией специфических антител. При этом результаты ВКП прямо и тесно коррелируют со степенью полисиндромности клинических проявлений. Это явление наблюдалось у пациентов обеих групп. Следовательно, РГЧЗТ при XT имеют системный характер и реализуются не в отдельном органе, а на уровне всего организма.

При исследовании в динамике выявлено, что естественным проявлением динамики ВКП у больных XT при форми-

ровании стойкой ремиссии является уменьшение выраженности реакции (80%) или переход ее в отрицательную (11%). У пациентов с “отсроченными” и “обратными” реакциями ГЧЗТ по результатам местная реакция оставалась положительной.

Обсуждение и выводы. Кластерный анализ показал, что все больные с точки зрения частоты клинических проявлений и характера ВКП разделяются на ряд групп. Одну из них составляют больные с острой стадией токсогшазмоза, другую -больные ХТ е циклическим течением, третью - с рецидивирующим течением ХТ. Регрессионный анализ показал, что на 75% клиническая картина периода обострения ХТ может быть описана клиническими данными (наличие артральгий, гепатолие-нального синдрома, выраженность лимфаденита, состояние желчевыводящих путей) и результатом ВКП. Уже в период обострения тщательный анализ клинических проявлений без применения дорогостоящих иммунологических методов позволяет прогнозировать течение заболевания у трех из четырех пациентов. Необходимо дополнительное исследование для выявления причин существования различных вариантов ВКП и связи их с другими показателями состояния иммунной системы.

ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ УРОВНЕЙ Т^-сс, ^N-7, 11.-4 И ОБЩЕГО 1дЕ ПРИ ИКСОДОВОМ КЛЕЩЕВОМ Б0РРЕЛИ03Е У ДЕТЕЙ

Васильева Ю.П., Железникова Г.Ф., Скрипченко Н.В., Монахова Н.Е., Карчевская Л.В.

Научно-исследовательский институт детских инфекций МЗРФ, Санкт-Петербург, Россия

Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) вызывается спирохетой ВоггеПа и передается с укусом зараженного клеща. Заболевание чаще всего проявляется в виде эритемы, возникающей в месте укуса и сопровождаемой общеинфекционным синдромом. Велика вероятность хронизации процесса с развитием осложнений в виде нейроборрелиоза, артритов, кардитов, вас-кулитов и др. Механизмы хронизации ИКБ изучены недостаточно. В иммунном ответе на антигены боррелий участвуют как клеточные, так и гуморальные реакции, однако сведения о протективной роли ТИ1 - или ТЬ2-подобного ответа противоречивы. Установлено участие провоспалительных цитокинов в развитии эритемы и острофазового ответа, а также в патогенезе поздних осложнений. Однако в отношении роли ТЫР-а данные разноречивы /Федоров Е.С. и др., 1999/.

Цель настоящей работы состояла в сравнении некоторых иммунологических показателей в острую фазу ИКБ с разным исходом - завершившегося полным клиническим выздоровлением или перешедшего в хроническую форму. Под наблюдением находились 22 ребенка в возрасте от 3 до 10 лет, имевшие гладкое течение эритемной формы ИКБ (1-я группа, п=17) или хронизацию процесса (2-я группа, п=5). В сыворотке крови

(первая неделя болезни) с применением стандартных имму-ноферментных тест-систем определяли содержание цитокинов Т№-а, №N-7, 1Ь-4, 1Ь-6, а также общего ^Е. Изучали также концентрации ^М, и методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Различий в содержании ^ трех основных классов мы не обнаружили, 1Е-6 отсутствовал в сыворотке всех пациентов. В таблице представлены показатели, имевшие существенные различия в сравниваемых группах детей.

У детей, имевших клинические признаки хронизации процесса, в первую неделю заболевания были значительно снижены уровни всех трех цитокинов, причем содержание ТЫР-а оказалось существенно ниже “нормы”. Подавление синтеза Т1ЧЕ-а, возможно, явилось критическим механизмом хронизации, так как в первые дни после инфицирования ТЫЕ-ос наиболее эффективен (в эксперименте) в защите от развития бор-релиоза 17л\йпсг ес а!., 1996/.

Одновременная активация клегок-продуцентов 1ЕМ-у (Т111, ЕК) и 1Е-4 (ТИ2) у детей 1-й группы, по-видимому, характеризовала эффективный иммунный ответ, обеспечивающий элиминацию патогена и клиническое выздоровление.

Иммунный статус детей с низким цитокиновым ответом в острую фазу и с дальнейшей хронизацией процесса (2-я группа) имел отличительную особенность в виде “крайних” концентраций общего ^Е в сыворотке крови. Из 5 детей трое имели сниженные относительно “нормы” уровни показателя, а двое, напротив, характеризовались гиперпродукцией ^Е. С учетом известной регуляторной роли ^Е, осуществляемой через ЕсеЯП (С023) на макрофагах и лимфоцитах, можно предположить, что сниженная иммунная реактивность, ведущая к неэффективному иммунному ответу и длительной пер-систенции боррелий, может быть ассоциирована как с недостаточным, так и с избыточным конститутивным уровнем продукции общего ^Е.

Таким образом, прогностическими критериями перехода острого ИКБ в хроническую форму в первую неделю после начала заболевания могут служить такие показатели, как сниженный относительно “нормы” уровень ТЫЕ-а, “нормальное” содержание 1ЕЫ-у и 1Е-4, низкие или, напротив, чрезмерно высокие концентрации общего ^Е в сыворотке крови.

ОСОБЕННОСТИ НАРУШЕНИЯ ОБМЕНА МЕДИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ГЕПАТИТАМИ

Гайковая Л.Б.. Зиновьева Е.Н.

ГОУВПО Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И. И. Мечникова М3 РФ, Россия

В современной литературе синдрому металлопатии уделяется недостаточно внимания. Так, особенности нарушения

№ гр. п ТИР-а, пг/мл ІРИ-у, пг/мл ІІ.-4, пг/мл Число детей с уровнем ІдЕ

>1000 кЕ/л <20 кЕ/л

1 17 296+86 347±109* 242+60* 0/17 1/17

2 5 30±8,3* 116±18 80±37 2/5# 3/5#

Р <0,01 =0,05 <0,05 <0,01# <0,05#

К 10 124±33 92+24 67±28 0/10 0/10

Примечания: К - здоровые дети, *- достоверное (р<0,05) отличие от К, #- по критерию "<р".

обмена меди в подавляющем большинстве рассматриваются с точки зрения болезни Вестфаля-Вильсона-Коновалова. В последние 20 лет интенсивно дискутируется вопрос о связи нарушения метаболизма меди с индийским и неиндийским детскими циррозами. Известно, однако, что указанные дис-метаболические процессы наблюдаются и при хронических гепатитах, по поводу чего имеются достаточно противоречивые данные, так как механизм повреждающего действия меди при хронических “невильсоновских” заболеваниях печени до настоящего времени не изучен и требует дальнейших исследований.

Целью данной работы явилась диагностика нарушения обмена меди и, связанных с ним иммунных, микроциркуля-торных и морфологических нарушений, у больных с хроническими неверифицированными гепатитами. Нами было обследовано 12 пациентов с указанной патологией.

Всем больным проводилось комплексное стандартное обследование, включавшее в себя биохимическое, иммунологическое исследования крови, определение антиоксидантного статуса (АОС), содержания меди и уровня церулоплазмина в сыворотке крови, степени агрегации эритроцитов по методу Скрипкина, вирусологическое исследование, фиброгастроду-оденоскопию (ФГДС), скенирование печени, а также тесты Рейтана на связь чисел и определение колец Кайзсра-Флей-шера на щелевой лампе с целью исключения наследственно обусловленного нарушения метаболизма меди.

В результате проведенного исследования в 100% случаев наблюдалось достоверное повышение сывороточной меди и церулоплазмина (25,4±0,04 ммоль/л; 504,7± 17,04 мг/л, соответственно). При биохимическом исследовании крови у всех пациентов превалировали синдром гипербилирубине-мии, преимущественно прямой фракции, при минимальном цитолитическом процессе. Изменения со стороны гуморального звена иммунитета были неспецифическими и характеризовались снижением уровня иммуноглобулинов в (7,0±0,56 г/л), увеличением циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (151,4± 1,01 ед.), со стороны показателей клеточного иммунитета наблюдалось уменьшение пула С04+ (26,7±0,97%) и С03+(54,3±1,02%). При изучении АОС было выявлено снижение тиолдисульфидного коэффициента (общего, низкомолекулярного и белковых соединений). Оценка степени агрегации эритроцитов показала патологические скопления эритроцитов в виде монетных столбиков. Результаты ультразвукового и радиоизотопного исследований выявили наличие диффузных изменений печени с начальными признаками портальной гипертензии. Колец Кайзера-Флей-шера обнаружено не было. Тесты Рейтана - в пределах нормальных значений. Нами выявлена прямая корреляция между уровнем сывороточной меди и билирубина, уровнем ЦИК и сывороточной медью; обратная корреляция -между состоянием АОС и содержанием меди в сыворотке крови; а также между АОС и ЦИК. При морфологическом исследовании данных больных было установлено сохранение дольковой архитектоники, наличие зернистой, и гидропической дистрофии гепатоцитов, выраженный полиморфизм ядер. Окраска орсеином, являющаяся информативной, при определении отложения меди оказалась положительной у всех обследованных. Наблюдались лимфоидная инфильтрация синусои-дов, слабый фиброз центральных вен. Отличительной особенностью данной категории больных явился тот факт, что в клетках центральных зон было обнаружено скопление гранул пигмента “деградации” желтовато-коричневого цвета (липофусцин). Портальные тракты незначительно расширены и фиброзированы с умеренной лимфо-макрофагальной инфильтрацией.

Таким образом, выявленные изменения обмена сывороточной меди и церулоплазмина при хронических неверифи-цированных гепатитах расширяют представление о патогенетических механизмах хронических заболеваний печени, уточняя особенности развития иммунных, адаптационных, мик-роциркуляторных и морфологических нарушений, играющих немаловажную роль в реализации патологического процесса, и ускоряющих развитие фибротических изменений.

СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ И БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИНЫ “АКТ-ХИБ” У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА В ЗАКРЫТОМ КОЛЛЕКТИВЕ

Горбунов С.Г., Демина А.А., Спирихина Л.В., Орлова Е.В., Ястребова Н.Е.

Центральный НИИ эпидемиологии М3 РФ, Министерство здравоохранения Московской области, НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Россия

Инфекции, обусловленные Haemophilus influenzae типа b (Hib), в последние годы приобретают все большую актуальность во многих странах, в том числе и в России. Известно, что Hib является причиной развития различных клинических форм (менингита, пневмонии, артрита и др.), которых в настоящее время насчитывается более 20. Весьма распространено и носительство Hib среди детей в возрасте до 5 лет, являющихся источником инфекции.

В сложившихся условиях средством специфической профилактики Hib-инфекции может быть вакцинация. Необходимость се включения в Национальный прививочный календарь России продолжает оставаться дискутабельной.

Исходя из этого, целью нашей работы явилось обоснование целесообразности иммунизации детей раннего возраста в закрытых коллективах против Hib-инфекции путем изучения серологической и бактериологической эффективности вакцины “Акт-ХИБ” (“Авентис Пастер”, Франция).

Нами было обследовано и вакцинировано 65 детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет, являющихся воспитанниками Дома ребенка, у которых до и после иммунизации выполняли бактериологический посев слизи из носоглотки на селективную питательную среду “Haemoiine” с последующим тестированием культуры латексным диагностикумом “Slidex Kit-5” (“BioMerieux”, Франция). Одновременно исследовали титры антител к специфическому антигену Hib (PRP) и белку наружной мембраны (ОМР) методом ИФА с помощью тест-си-стем, разработанных в НИИВиС им. И.И.Мечникова и коммерческого набора “Kit-96” (“Fuller”, США).

Установлено, что до иммунизации уровень носигельства Hib в коллективе составил 40,3%, а титр антител к PRP класса IgG в среднем был равен 0,72 мкг/мл. При этом 38,7% детей не имели защитного титра, 48,4% имели титр на уровне минимального защитного (0,2 мкг/мл) и у 12,9% он оказался высоким (1,0 мкг/мл и более). В данном коллективе за предыдущие годы зарегистрировано в среднем 108,5 случая заболеваний, присущих Hib-инфекции. После введения 1 дозы вакцины “Акт-ХИБ” сероконверсия произошла у 84,8% детей, поствакцинальные реакции были слабыми и наблюдались лишь в 6% случаев.

Через 1 месяц после вакцинации уровень носительства снизился в 2,6 раза и составил 15,4%, что прямо коррелировало с серологическими данными. Так титр антител к PRP класса IgG в среднем возрос более, чем в 10 раз и достиг 7,31 мкг/ мл, при этом количество детей с титром ниже минимального защитного сократилось до 15,2%, а у 79,7% титры стали вы-

сокими. Возросли также титры антител класса к РЯР и

к ОМР, соответственно, составлявшие до иммунизации 0,63 и 0,37 ед.опт.пл., а после - 0,87 и 0,45 ед.опт.пл. В течение 1 месяца после вакцинации все дети в коллективе были здоровы.

Таким образом, исходя из полученных данных, целесообразность проведения иммунизации детей раннего возраста в закрытых коллективах против ШЬ-инфекции не вызывает сомнений.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ТРИВАЛЕНТНОЙ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНОЙ {ЖГВ) ДЕТЕЙ ОТ 1 ГОДА ДО 3-Х ЛЕТ В УСЛОВИЯХ ПОЯВЛЕНИЯ НОВОГО АНТИГЕННОГО ВАРИАНТА ВИРУСА ГРИППА А

‘Дешева Ю.А.. 'Григорьева Е.П., 'Донина С.А., 'Баранцева И.Б., Дриневский В.П., 'Найхин А.Н., ‘Руденко Л.Г.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН,

2

Научно-исследовательский институт гриппа РАМН, Санкт- Петербург, Россия

Россия - единственная в мире страна, где ЖГВ, вводимая интраназально, широко применяется в практическом здравоохранении в течение многих лет. ЖГВ производится в 2-х вариантах: взрослый вариант рекомендован для детей от 7 лет, подростков и взрослых, детский вариант - для детей от 3 лет. В 2001 году было выпущено 9600 тыс. доз детского варианта Российской ЖГВ. Тем не менее, вакциннопрофилактика гриппа среди детей раннего возраста остается нерешенной задачей, поскольку для этого возрастного контингента до сих пор применялись только инактивированные вакцины, вводимые парентерально, которые ограничены в способности индуцировать местный и клеточный иммунный ответ.

Задачей настоящего исследования явилось изучение перспектив применения детского варианта ЖГВ среди детей 1-3 лет. Прививки проводились в яслях-садах Ленинградской области. Всего за 2 года исследования было привито 109 детей. Группа плацебо была сформирована из 36 детей, подобранных методом случайной выборки. Для иммунизации применялась тривалентная ЖГВ, включающая реассортантные вакцинные штаммы всех трех циркулирующих в настоящее время разновидностей вируса гриппа: А(НШ1), А(НЗШ) и В. В течение второго года исследования в состав ЖГВ был введен вакцинный штамм А/47/Новая Каледония/99/156(Н1Ж) вместо штамма А/47/Пекин/95/35(НШ1), поскольку господствующей серологической разновидностью данного подтипа стал новый эпидемически актуальный вирус. Поствакцинальный иммунный ответ оценивали по уровню 4-х кратных приростов антител в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с сыворотками крови привитых.

За весь период исследования среди привитых сильных температурных реакций не наблюдалось, а число средних температурных реакций не превышало регламентированных норм. Через 28 дней после двукратной иммунизации в группе серонегативных наибольший уровень сероконверсий наблюдался к вирусу гриппа А(НЗЫ2): 66,7% по даным первого года и 63,6% по данным 2-го года. К вирусу гриппа В сероконвсрсии наблюдались среди 40% серонегативных в первый год исследования и среди 50% - по данным 2-го года. При сравнении с аналогичными показателями у детей 7-9 лег, иммунизированных детским вариантом ЖГВ, статистически досто-

верных различий не обнаружено. К вирусу A(H1N1) в первый год исследования сероконверсии наблюдались среди 19% привитых детей 1-3 лет, что достоверно ниже, чем тот же показатель у детей 7-9 лет, иммунизированных двукратно аналогичной ЖГВ. В следующем году, когда в состав вакцины был включен штамм A/47/Новая Каледония/99/156(НШ1), по отношению к новому антигенному варианту этого подтипа обследованные дети 1-3 лет были иммунологически наивными: у 100% предвакцинальные СГТ антител были <5. Сероконвсрсии к этому компоненту вакцины наблюдались исключительно за счет штаммоспецифических антител к антигенному варианту данного подтипа, циркулировавшему в прошлые годы, при этом уровень 4-х кратных и более приростов не превышал 9%. В то же самое время на примере детей 3-6 лег нами было показано, что иммунный ответ на введение ЖГВ в условиях, когда подавляющее большинство детей являются серонегативными к данному подтипу вируса гриппа А, формируется в большей степени за счет образования специфических секреторных IgA, являющихся важнейшим фактором местного иммунитета.

Таким образом, ЖГВ при введении детям оказалась слабо реактогенной и хорошо переносимой. Ряд количественных параметров гуморального поствакцинального иммунного ответа оказались не ниже аналогичных показателей при сравнении с детьми более старшего возраста, иммунизированными детской ЖГВ. В условиях появления нового антигенного варианта вируса гриппа A(H1N1) напряженость выработки сывороточных антител в отношении этого антигена у детей раннего возраста оказалась наименее выраженной, что подтверждает положение

о зависимости поствакцинального иммунного ответа от уровня восприимчивости, сформировавшегося под влиянием предшествующих контактов с вирусами гриппа.

АП0ПТ03 ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ

Дмитриева Е.В.*, Москалева Е.Ю., Сладкова Л.В., Буеверов А.О.*, Ивашкин В.Т.*, Северин Е.С.*

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова,

* Московский научно-исследовательский институт медицинской экологии, Россия

При вирусных гепатитах в элиминации вирусов важная роль принадлежит системе клеточного иммунитета. Т-лим-фоциты предопределяют нарушение репликации вируса и экспрессии вирусных белков в инфицированной клетке благодаря секреции ряда цитокинов, в частности интерферона-у, TNFa и FasL. ЦТЛ способствуют клиренсу вируса, вызывая лизис инфицированных клеток с помощью перфорин-гранзи-мового комплекса и через систему Fas/FasL в результате взаимодействия активированных лимфоцитов, экспрессирующих Fas-L, с Fas-рецептором клетки-мишени. Связывание растворимого или экспрессированного на поверхности активированных лимфоцитов Fas-L с Fas-рецептором вызывает апоптоз клеток, экспрессирующих этот рецептор. Гепатоциты человека конститутивно экспрессируют Fas, и его экспрессия повышена при хронических гепатитах. Результаты недавних исследований показали, что внутрипеченочные Т-лимфоциты при HBV и 1 ICV-инфекции активированы и экспрессируют FasL. Поэтому можно полагать, что активация системы Fas/FasL при хронических гепатитах может быть причиной поражения ге-патоцитов, однако феноменология развития апоптоза как лимфоцитов, так и гепагоцитов и роль этого процесса в патогенезе хронических вирусных гепатитов до конца не ясна. В связи

с этим целью настоящего исследования явилось изучение уровня апоптоза гепатоцитов и клеток лимфоцитарною инфильтрата в зависимости от экспрессии белков Fas и FasL в ткани печени у больных ХВГ В и С.

Для оценки апоптоза клеток в ткани печени серийные срезы исследовали с помощью метода TUNEL (Terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick End Labeling) с использованием набора APO-BRDU™ (PharmiiiGen). Иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии Fas и FasL проводили на серийных срезах био-птатов печени больных, фиксированных формалином и залитых в парафин с помощью непрямого стрептавидин-биотн-пероксидазного метода.

В результате проведенных исследований обнаружены значительные различия между группами больных ХВГ В и С. При сравнении уровня экспрессии Fas и FasL на био-птатах печени больных ХВГ В и С основные отличия обнаружены в степени экспрессии исследованных маркеров на клетках лимфоцитарного инфильтрата: при ХВГ С степень экспрессии Fas и FasL внутрипеченочными лимфоцитами достоверно превышает степень экспрессии указанных маркеров клетками инфильтрата печени больных ХВГ В: 2,3±0,2 но сравнению с 0,9±0,2 для Fas и 2,5±0,2 по сравнению с 1,1±0,3 для FasL, соответственно. Гепатоци-ты больных ХВГ в незначительной степени экспрессируют FasL, в отличие от нормальной печени, где исследованного маркера как правило не обнаруживали.

Средний индекс TUNEL-положительных гепатоцитов и клеток лимфоцитарного инфильтрата - клеток в состоянии апоптоза - в биоптатах печени больных ХВГ С достоверно превышал количество таковых при ХВГ В (Таблица).

Обнаружена корреляция уровня TUNEL-положитель-ных гепатоцитов с уровнем экспрессии FasL клетками лимфоцитарного инфильтрата, а также уровня апоптоза гепатоцитов с характером экспрессии Fas на этих клетках. Оказалось, что при ХВГ высокий уровень апоптоза гепатоцитов наблюдается тогда, когда имеет место мембранная локализация этого белка или его накопление в виде зерен. При такой локализации Fas доля TUNEL-положительных гепатоцитов составила 42,5±6,3% в то время как при диффузной гомогенной локализации Fas в цитоплазме эта величина была равна 13,0±5,1% (р<0,002). Мембранная локализация этого белка или его накопление в виде зерен в норме по-видимому свидетельствуют о готовности элиминации таких клеток в случае появления соответствующих апоптогенных стимулов.

Полученные результаты свидетельствуют о гибели значительной части гепатоцитов, по-видимому вирусинфицирован-ных, путем апоптоза и ведущей роли Fas/FasL-взаимодействий в повреждении гепатоцитов при хронических вирусных гепатитах.

ОЦЕНКА МЕСТНЫХ ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БОЛЬНЫХ С ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ

Долгушин И.И.. Третьякова И.Е., Лапошина Л.С., Беляева О.П.

Научно-исследовательский институт иммунологии Челябинской государственной медицинской академии, Челябинск, Россия

Нами изучались показатели местного иммунитета у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области. С этой целью обследовано 25 пациентов клиники челюстно-лицевой хирургии, которые были распределены на 2 группы: 1 группа - больные с воспалительным процессом в глубоких клетчаточиых пространствах; 2 группа - больные с воспалительным процессом в поверхностных клетчаточиых пространствах челюстно-лицевой области (Соловьев М.М., Большаков О.П., 1997г.). Лечение больных проводили по общепринятой схеме-дренирование гнойного очага в сочетании с комплексной медикаментозной терапией.

У пациентов оценивали функциональную активность ней-грофилов раневого экссудата (лизосомальную, фагоцитарную, ИСТ-редуцирующую) (Фрейдлин И.С., 1976г.,Маянский А.С. 1979г.). Цитологические исследования проводили по методу Камаева М.Ф. (1970г.), определяя процентное содержание нейтрофилов, лимфоцитов, макрофагов и фибробластов раневого отделяемого. Обследование проводили на 2, 7, 14 сутки после оперативного лечения, что соответствовало фазам течения раневого процесса.

В результате исследования было установлено, что в 1 группе больных отмечалось достоверное (р<0,05) снижение лизо-сомальной активности нейтрофилов на 7 сутки лечения, с последующим незначительным ростом. Показатели НСТ-те-ста снижались на протяжении всего периода наблюдения. Выраженных изменений фагоцитарной активности выявлено не было. Во 2 группе больных одонтогенной инфекцией не отмечалось динамики фагоцитарных и бактерицидных показателей нейтрофилов раневого экссудата, а лизосомальная активность увеличивалась на 7 сутки, с последующим снижением.

Анализ данных цитологических исследований выявил снижение относительного содержания нейтрофилов, рост числа лимфоцитов, незначительное увеличение числа макрофагов и фибробластов у больных с поражением глубоких клет-чагочных пространств. В группе пациентов с поверхностной локализацией воспаления на фоне умеренного снижения процентного содержания нейтрофилов отмечен достоверно более выраженный рост числа лимфоцитов, макрофагов и фибробластов, чем в 1 группе больных.

УРОВЕНЬ АПОПТОЗА ГЕПАТОЦИТОВ И КЛЕТОК ЛИМФОЦИТАРНОГО ИНФИЛЬТРАТА В БИОПТАТАХ ПЕЧЕНИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ ВИС

Исследуемая группа Уровень апоптоза,%

Гепатоциты Клетки инфильтрата

Хронический вирусный гепатит В 7,6±4,3 11.2+1,8

Хронический вирусный гепатит С 32,0±7,1* 22,2±3,5*

* различия между гепатитом В и С достоверны, р<0.05

Таким образом, анализ цитологичеких и иммунологических данных выявил, что у больных с флегмонами глубоких клет-чаточных пространств челюстно-лицевой области, отмечаются угнетение функциональной активности нейгрофилов раневого отделяемого и слабо выраженные процессы регенерации. С учетом этих результатов пациентам данной группы показано применение местной иммунокорригирующей терапии.

ПОЛИКОМПОНЕНТНАЯ ВАКЦИНА ВП-4 В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Егорова Н.Б.. Курбатова Е.А., Ефремова В.Н., Грубер И.М., Масюкова С.А., Гусейнова З.К.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН,

Москва, Россия

Клинический исход первичной герпетической инфекции (ГИ) в значительной мере определяется иммунным статусом организма. Установлено, что основная роль в формировании противогерпетического иммунитета принадлежит клеточным механизмам, состояние которых во многом определяет как исход первичного инфицирования, так и частоту, тяжесть и распространенность рецидивов заболевания. За последние 30 лет создан ряд химиотерапевтических препаратов, обладающих противогерпетической активностью. Однако клинический опыт их применения показал, что эффективно купируя острые проявления ГИ, эти препараты не предотвращают частоту и тяжесть рецидивов хронической ГИ. Длительная пер-систснция вируса способствует усилению иммунологической недостаточности. В этой связи включение иммунокорригирующих препаратов в комплексную терапию ГИ патогенетически оправдано и обосновано.

В комплексной терапии ГИ в качестве иммуномодулятора нами использована бактериальная поликомпонентная вакцина ВП-4. Под наблюдением было 75 больных ГИ различной локализации, из них у 45 диагностирован генитальный герпес (группа 1). Группу сравнения составили 30 больных, из

них с генитальным герпесом - 23 (группа 2). Больные обеих групп получали химиотерапевтические препараты (базисная терапия). Пациентам 1 группы кроме того вводили подкожно 6-8 кратно ВП-4. Наблюдение за больными в обеих группах проводили 6-18 месяцев. Введение вакцины способствовало снижению частоты и тяжести рецидивов ГИ независимо от локализации проявлений герпеса. Из 75 больных, получавших вакцину, эффекта не было у 7 (9,3±3,3)%, у 22 больных (29,3±5,1)% наблюдали значительное улучшение, что проявлялось в снижении тяжести рецидивов и увеличении ремиссии более чем в 2 раза. У остальных 46 больных (61,4±5,6)% было увеличение ремиссии в 2 раза. В группе сравнения такой динамики не было. В таблице представлена частота рецидивов у больных обеих групп. Видно, что в Гой группе у 27 больных рецидивов не было, или было не более 2-х рецидивов в течение 12 месяцев наблюдения.

Введение вакцины вызывало положительную динамику Т-лимфоцитов с маркерами CD8, CD4 и увеличение IgG в сыворотке крови.

Комбинированный метод лечения ГИ, включающий использование противовирусных препаратов и поликомпоненту ю вакцину В11-4, позволяет добиться длительной клинической ремиссии у значительного числа больных.

ЭКСПРЕССИЯ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ И ЦИТОКИНОВ ПРИ ЧЕТЫРЕХ УРОВНЯХ ИММУННОГО ОТВЕТА У ДЕТЕЙ С ИЕРСИНИОЗНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

Железникова Г.Ф.. Иванова В.В., Васикина Л.И., Монахова Н.Е., Бехтерева М.К.

НИИ детских инфекций Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Энтеропатогенные исрсинии (Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocoliticd), вызывающие иерсиниозную инфекцию (ИИ) у человека, обладают общей плазмидой вирулентности, множеством общих антигенов и тропизмом к лимфоидной ткани пищеварительного тракта, что обусловливает общие черты иммунопатогенеза ИИ.

Табл. ЧАСТО РЕЦИДИВОВ ГИ У БОЛЬНЫХ В ОПЫТНОЙ И КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППАХ

Срок Число №№ иссле- обсле-группы дования дован- Срок исследования Число больных с количеством рецидивов р*

7-12 5-6 3-4 0-2

ных Абс. %+т Абс. %±т Абс. %±т Абс. %±т

1 6 75 ДО 30 40±5,6 30 40±5,6 15 20±4,6 _ _ <0,01

после 6 8,0±3,1 10 13,3±3,9 19 25,3±5 40 53,3+5,7

12 44 до 20 45,4+7,5 20 45,4±7,5 4 9,1 ±4,3 - - <0,01

после 4 9,1 ±4,3 1 2,3±2,3 12 27,3±6,7 27 61,4+7,3

18 22 до 10 45,4± 10,6 10 45,4±10,6 2 9,1 ±6,1 - - <0,01

после 1 4,5±1,1 - - 6 27,3±9,5 15 68,2±9,9

2 6 30 до 14 46,7±9,1 10 33,3±8,6 6 20±7,3 . . >0,05

после 9 30±8,3 9 30±8,3 9 30+8,3 3 10±5,5

12 22 до 13 59,1 ±10,3 5 16,7+7,9 4 18,2+8,2 - - >0,05

после 8 36,4± 10,1 7 31,8±9,9 5 22,7+8,9 2 9,1 ±6,1

18 16 до 9 56,2±12,4 4 25+10,8 3 18,7±9,7 - - >0,05

после 6 37,5+12,0 5 31,2+11,6 4 25± 10,8 1 6,3±6,0

Р* - разность показателей до и после терапии, определенная по Хи-квадрат

При ряде других инфекций (ОРВИ, эпидемический паротит, дифтерия) мы выявили четыре уровня иммунной реактивности, которые реализуются в четырех образцах иммунного ответа с чередующимся балансом клеточных и гуморальных механизмов иммунной защиты (I и III - “клеточные”, II и

IV - “гуморальные” типы).

Целью настоящей работы было выявление и характеристика четырех уровней (типов) иммунного ответа (ИО) у детей, переносящих острую ИИ. Иммунологическое обследование включало определение уровня ИО по динамике пролиферативного ответа Т-лимфоцитов на ФГА (как описано ранее), фенотипирование лимфоцитов с помощью панели моноклональных антител, в том числе против СЭ25 (1Ь-2К) и СБ95 (рецептор апоптоза), иммуноферментное определение Т№-а, 1Ь-6,1РИ-у, 1Ь-4 в сыворотке крови и 1Ь-2 в надосадке 72-часовых культур цельной крови с добавлением ФГА.

В острую фазу ИИ (первая неделя болезни) число “позитивно” активированных СЭ25^ лимфоцитов было достоверно выше “нормы” только у детей с I и III уровнями ИО (“клеточные” типы), что соответствовало и более интенсивной секреции 1Ь-2 в культуре с ФГА. Число клеток с маркером “негативной” активации С095 (Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1998) было существенно повышенным относительно “контроля” у детей с ИИ всех четырех групп, с наименьшей экспрессией при III, а с наибольшей -при IV уровне ИО. Коэффициент баланса “позитивной” и “негативной” активации (СЭ25/С095), вычисленный по средним данным, при I и III типах ИО был близок “контрольному” (0,85) -

0,7 и 0,9 соответственно, тогда как при “гуморальных” II и IV типах он составлял, соответственно, 0,5 и 0,4.

Концентрации провоспалительных цитокинов ТЫР-а, 1Ь-6 и №N-7 у детей с I и III уровнями ответа были достоверно повышены относительно “нормы” и более чем вдвое (по средним данным) превышали аналогичные показатели у детей со

II или с IV уровнем ИО. Напротив, содержание в сыворотке крови цитокина ТИ2 1Ь-4 превалировало у детей двух последних групп, подтверждая “гуморальный” профиль их иммунного ответа. Ориентировочным критерием баланса ТЫ /ТИ2 в иммунном ответе может служить соотношение 1РМ-у/1Ь-4, которое при I и III уровнях составляло 2,6 и 2,3 соответственно, а при II и IV - 0,6 и 0,5 соответственно, при “норме” 1,4.

Таким образом, при ИИ, как и при других изученных ранее инфекциях, иммунный ответ реализуется в 4 вариантах, имеющих характерные черты ТЬ1-подобного (I и III типы) или ТИ2-подобного (II и IV типы) ответа в острую фазу инфекции.

ВЛИЯНИЕ ХИТОЗАНА НА СИСТЕМУ ИММУНОГЕНЕЗА И РЕПАРАТИВНЫЕ ПРОЦЕССЫ

Жоголев К.Д.. Никитин В.Ю., Цыган В.Н., Егоров В.Н.

Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург, Россия

Нами совместно с Санкт-Петербургской Университетской Инновационной Компанией “ЛИТОРАЛЬ” предложена биологически активная добавка к пище (БАД) “ХИТОЗАН Альга плюс”, приготавливаемая из мелкодисперсного порошка хитозана, полученного из панциря камчатского краба и бурых морских водорослей (морская капуста и фукус). “ХИТОЗАН Альга плюс” повышает неспецифическую резистентность организма к действию неблагоприятных факторов среды. Показана его способность стимулировать рост бифидобактерий и полезной кишечной флоры, выявлены противоопухолевые свойства. Аминогруппы хитозана обуславливают его липот-ропные и эмульгирующие свойства, эффективно притягивая жиры и выводя их из организма, тем самым способствуя, снижению уровня холестерина в крови. Кроме того, хитозан обогащает организм биодоступным легкоусвояемым кальцием, что приобретает особое значение при лечении остеопатий различного генеза для регенерации костной ткани. Известны также иммуноадъювантные, противоинфекционные и ранозаживляющие свойства хитозана.

Цели настоящего исследования: экспериментальное изучение влияния хитозана на систему иммуногенеза и репара-тивные процессы; разработка новых иммуномодулирующих препаратов и различных лекарственных форм на основе хитозана.

Производные хитина и хитозана, как и другие полисахариды оказывают выраженное влияние на иммунитет и неспецифические факторы защиты организма. Изучение иммуномодулирующих свойств хитозана показало, что они обусловлены главным образом активизацией фагоцитарной функции макрофагов. Именно этот механизм обеспечивает запуск целого ряда каскадных реакций, активирующих все звенья иммунной системы. Кроме того, хитозан, являясь природным полиэлектролитом, обладает тем же механизмом действия, что и синтетические полиэлектролиты, т.е. обеспечивает более тесное контактное взаимодействие между иммунокомпетентными клетками, что приводит к усилению иммунного ответа.

Тип ИО N С025+% С095+% И-2 ед.опт.пл. Т1МР-а пг/мл И-6 пг/мл 1Р1\1-у пг/мл И-4 пг/мл

1 26 24,9+1,2* 38,1+2,1* 1,32±0,08* 323±32* 138±21* 412±64* 159±44

II 19 17,7± 1,2 35,4+1,5* 0,75±0,06 154±42 77±12 174±23* 293±38*

III 9 23,3±0,9* 26,5±1,4* 0,86±0,07 293±26* 167±15* 321+29* 140± 16*

IV 17 15,8+1,0 42,2±2,1* 0,57+0,04 140 ±47 45±12 155±28 318±29*

Р 1-2 <0,001 - <0,001 <0,01 <0,05 =0,001 <0,05

2-3 <0,001 <0,001 - <0,01 <0,001 <0,001 <0,001

3-4 <0,001 <0,001 <0,01 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001

1-3 - <0,001 <0,001 - - - -

1-4 <0,001 - <0,001 <0,01 <0,001 <0,001 <0,001

2-4 - <0,05 <0,05 - - - -

К 10 18,8±1,8 22,2+1,6 0,66+0,20 124±33 59±27 92±24 67±28

Примечания: К- здоровые дети, * - достоверное отличие от К при р по крайней мере <0,05

Интегральным показателем эффективности воздействия препарата на иммуногенез может служить его влияние на про-тивоинфекционный иммунитет. В результате доклинических испытаний, проведенных на животных (мышах, крысах, кроликах, поросятах), установлено, что препараты хитозана эффективны при бактериальных и вирусных инфекциях, а также при раневой болезни. Данные, полученных при изучении влияния различных лекарственных форм хитозана (растворов, гелей, пленок) на процесс заживления кожной раны у крыс и кроликов, показали, что они обеспечивают достоверное ускорение процесса репарации кожи на 25% по сравнению с контролем.

Хи гозан оказался эффективным стимулятором остеогенеза. Это свойство хитозана было выявлено при его применении в виде губки для устранения экспериментально созданного костного дефекта нижней челюсти у кроликов. Морфо-метричеекое исследование тканевого состава посттравмати-ческого регенерата в различные сроки эксперимента и статистический анализ полученного при морфометрии цифрового материала выявили благоприятное влияние хитозановой губки на регенерацию костной ткани. Отчетливо прослеживается тормозящее действие хитозана на рост соединительной гкани и стимулирующее влияние на пролиферацию клеток высокодифференцированных клеточных структур пластинчатой костной ткани.

Исследование механизмов сгимулируюшего эффекта хитозана при заживлении ран показало, что в основе его лежит активация фазы биологического очищения раны. Главная роль при этом принадлежит повышению функциональной активности фагоцитов: ускорению миграции фагоцитов в рану (очаг воспаления), а также усилению фагоцитарной активности макрофагов вследствие увеличения положительного заряда их поверхностной мембраны, что, является основным механизмом активации начальных фаз фагоцитоза (хемотаксис, адгезия). Изучение цитохимическими методами метаболизма фагоцитирующих клеток показало, что хитозан вызывает достоверное увеличение активности ферментов гликолиза, гек-созомонофосфагного шунта и цикла Кребса. По данным НСТ-теста применение хитозана приводит к достоверной активации кислородзависимых систем бактерицидности макрофагов. Препараты хитозана усиливают антителогенез и увеличивают титры циркулирующих в крови антител.

Использование препаратов хитозана оптимизирует процессы иммуногенеза и остеогенеза, значительно сокращает сроки регенерации тканей. Тормозящее воздействие хитозана на развитие соединительной ткани способствует безрубцовому заживлению ран.

ДИНАМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

Кисина Т.Е.. Кноринг Б.Е., Елькин А.В., Басек Т.С., Арчакова Л.И.

НИИ фтизиопулъмонологии,

Санкт-Петербург, Россия

В настоящее время заболеваемость туберкулезом постоянно растет, появляются новые формы М.tuberculosis, устойчивые к большинству антибиотиков. Вероятность развития болезни при инфицировании в первую очередь зависит от состояния иммунной системы. Первыми клетками, которые взаимодействуют с М. tuberculosis являются фагоциты, от активности которых зависит эффективность элиминации возбудителя.

Ранее нами было показано, что и при инфильтративном, и при фиброзно-кавернозном туберкулезе легких (ИТ и ФКТ соотвественно) наблюдается снижение фагоцитарной активности и респираторного взрыва нейтрофилов. Цель работы заключалась в оценке изменений функциональных возможностей нейтрофилов при туберкулезе легких на фоне проведения интенсивной антибактериальной терапии. Обследовано 12 пациентов (8 человек с инфильгративным туберкулезом и 4 с фиброзно-кавернозным, неуклонно-прогрессирующим, туберкулезом) в динамике заболевания. Активность фагоцитов исследовалась дважды: при поступлении больного в стационар и спустя 1,5-2 месяца от начала лечения. Определялись спонтанный и индуцированный зимозаном НСТ-тест, адгезионная способность (процент клеток прикрепившихся к пластику), и фагоцитоз S. cerevisae (фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) нейтрофилов периферической крови.

Выявлены существенные изменения функциональной активности нейтрофилов в процессе лечения. Исходно сниженный спонтанный НСТ-тсст нейтрофилов у большинства больных (менее 90 единиц ОП в 60% случаев) достигал нормы и повышался при лечении до 200 единиц ОП в 60% случаев. Индуцированный НСТ-тест у всех больных ИТ после лечения нормализовался и колебался в пределах 200-400 единиц ОП. При ФКТ индуцированный НСТ-тест нейтрофилов не менялся, оставаясь стабильно низким (меньше 200 единиц ОП). Адгезионная способность нейтрофилов после лечения значительно возрастала от исходно нормальных значений до высоких (от 30-50% до 60-100% соответственно).

Способность к фагоцитозу более всего была подвержена динамическим изменениям. Изначально сниженное фагоцитарное число достигало нормальных и повышенных значений у большей части больных (меняясь от 27-50% до 60-90%). Активация НСТ-теста и фагоцитоза, стимуляция адгезионной способности нейтрофилов сопровождались положительными клиническими изменениями. Стабильное сохранение низких показателей функциональной активности нейтрофилов наблюдалось у пациентов с неблагоприятной клинической динамикой. Таким образом, состояние нейтрофилов может служить одним из прогностических факторов для оценки эффективности проводимой антибактериальной терапии.

ВЛИЯНИЕ ЗАРАЖЕННОСТИ СКРЕБНЕМ ECHINORHYNCHUS GAD! НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ, БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ НАВАГИ ELEGINUS NAVAGA И ТРЕСКИ GADUS MORHUA MARISALBI БЕЛОГО МОРЯ

Кигашова А.А., Павлова Н.В., Дольникова Г.А., Валовая М.А., Косевич И.А., Саванина Я.В., Гиченок JI.A., Кондратьева И.А.

Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова,

Москва, Россия

В иммунной системе рыб, как и у высших позвоночных животных, представлены врожденные и адаптивные механизмы, однако в системе рыб интенсивнее функционируют врожденные механизмы, обеспечивающие немедленное, но непродолжительное реагирование на внешнее воздействие. К врожденным механизмам иммунитета у рыб относятся в первую очередь лизоцим, а также белки системы комплемента, различные цитокины, С-реактивный белок и другие белки и пептиды. Условия среды обитания представляют собой активные регуляторы работы иммунной системы рыб — не менее важные, чем регуляторы, присущие самому организму.

Целью данной работы было комплексное изучение влияния внешних факторов на иммунитет водных позвоночных животных (наваги и трески) в норме и при патологии. Работа включала: морфо-физиологический анализ; бактериологический анализ; определение гематологических показателей; электрофоретический анализ сывороток крови рыб, определение общей концентрации белка и концентрации лизоцима в сыворотках крови рыб и сравнение различных показателей в норме и при патологии, в качестве контроля брались рыбы, не зараженные паразитами (в случае наваги), и рыбы, минимально зараженные паразитами (в случае трески, что связано с практически стопроцентной зараженностью паразитами трески Белого моря).

При определении формулы крови рыб показано, что у зараженных паразитами рыб по сравнению с незараженными рыбами увеличивается концентрация лейкоцитов в крови, что может свидетельствовать об активации иммунной системы зараженных рыб. Концентрация эритроцитов, скорость оседания эритроцитов и цветовой показатель крови у трески менялись незначительно. У зараженной наваги уменьшалась концентрация эритроцитов, однако цветовой показатель крови при этом не менялся, увеличивалась скорость оседания эритроцитов. С жаберных лепестков наваги и трески выделены три культуры бактерий: по предварительным данным, бактерии с жабр трески отнесены к группе коринеподобных бактерий, а с жабр трески — к группам Bacillus и Pseudomonas. При исследовании сывороток рыб методом электрофореза оказалось, что в сыворотках зараженных паразитами рыб присутствуют новые фракции белков, не обнаруженные у неза-раженных рыб. Было сделано предположение, что фракция с кажущейся молекулярной массой около 14 кДа соответствует лизоциму. Это предположение подтвердили при определении концентрации лизоцима в сыворотках рыб. По сравнению с незараженными или минимально зараженными рыбами у зараженных рыб концентрация лизоцима повышена в четыре раза в случае трески и в 6 раз в случае наваги.

Таким образом, комплексное изучение влияния интенсивности инвазии скребнем Echinorhynchus gadi на гематологические, бактериологические и иммунологические параметры рыб Белого моря — наваги Eleginus navaga и трески Gadus morhua marisalbi показало, что зараженность паразитами приводит к активации врожденных иммунных реакций у рыб и интенсивность иммунных реакций напрямую зависит от степени зараженности рыб.

АП0ПТ03 Т-ЛИМФОЦИТОВ, ИНДУЦИРОВАННЫЙ ХОЛЕРНЫМ токсином

Козловский В.Н., Васильева Г.И.. Мишанькин Б.Н., Киселева А.К., Мишаиькин М.Б.

Научно-исследовательский противочумный институт, Ростов-на-Дону, Россия

Программированная клеточная гибель обеспечивает равновесие клеток в тканях, отмирание ненужных образований в эмбриогенезе, поддерживает генетическую стабильность организма за счет самоуничтожения генетически поврежденных клеток. Предполагают, что программированная клеточная гибель является тем механизмом, при помощи которого различные суперантигены воздействуют на иммунную систему, индуцируя формирование тяжелых аутоиммунных процессов при подавлении апоптоза или развитие иммунодефи-цитных состояний при его активации. Известно, что периферические Т-клетки, несущие P-цепи определенного типа, пос-

ле взаимодействия с суперантигенами могут быть элиминированы в результате апоптоза. Цель настоящей работы - изучение потенциальной апоптогенной активности холерного токсина (ХТ) - суперантигсна возбудителя холеры - в отношении Т-лимфоцитов в качестве одного из механизмов его участия в патогенезе холеры. ХТ получали из штамма У.сЬо1егае 569В путем обработки клеток 8М мочевиной в 0,15М трис-НС1 буфере pH 8,0, содержащем 0,9% №С1, при 37°С в течение 30 мин. Очистку токсина проводили гельфильтрацией через ультрагель А-4 и хроматографией на ДЕ-52- и фосфо-целлюлозе. Фракции, дававшие преципитацию с антитоксической сывороткой, анализировали на чистоту в ПААГ-элек-трофорезе. У полученных препаратов ХТ выявляли наличие суперантигенной активности по их способности вызывать неспецифическую поликлональную активацию Т-лимфоци-тов и зависимости этого эффекта от экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости II класса - 1а-анти-генов - на поверхности вспомогательных клеток, а также по способности индуцировать пролиферацию Т-лимфоцитов только при взаимодействии с вариабельной областью (3-цепи (УР) Т-клеточного рецептора (ТСЯ). Результаты исследований показали, что ХТ обладает вышеперечисленными свойствами и, следовательно, суперантигенной активностью. Изучение потенциальной апоптогенной активности ХТ в отношении Т-лимфоцитов, экспрессирующих соответствующие им УР ТСГ1, выявило глубокое подавление пролиферации (ниже контрольных значений) преактивированных Кон А клеток при взаимодействии их с ХТ в течение 48 час. Индекс подавления при взаимодействии Т-лимфоцитов с ХТ (0,01 мкг/мл) составляли для УР ТСЯ 012(5.511) и Ур ТСЯ 08(Р23.1) 2,9 и 2,7 соответственно. Наблюдаемое явление происходило за счет гибели клеток, подтвержденной определением их жизнеспособности путем окрашивания трипановым синим. Большинство погибших клеток при окраске по Май-Грюнвальду-Ро-мановскому имело морфологические признаки апоптоза -уменьшенные размеры, четко очерченную мембрану с выпячиваниями, фрагментацию ядра. Апоптотическую гибель большинства клеток подтвердили с помощью цитофлюори-метрического анализа, позволяющего выявить долю гиподип-лоидных клеток. Максимальный уровень апоптоза проявлялся при концентрации 0,1 мкг/мл. Следует отметить реципрок-ный характер влияния ХТ на пролиферацию и апоптоз преактивированных Т-лимфоцитов. При этом наблюдалась сильная прямая корреляция между результатами, полученными в РБТЛ, при морфологическом изучении мазков, окрашенных по Май-Грюнвальду-Романовскому, и при проточной цитофлюоримет-рии окрашенных пропидиума йодидом лимфоцитов. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об участии механизмов активной программированной клеточной гибели в делеции клонов Т-лимфоцитов, индуцированной ХТ.

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 01-04-48299).

СОДЕРЖАНИЕ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ, ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ХРОНИЧЕСКОГО ПАНКРЕАТИТА

Кондашова З.Д.. Серова Т.И., Нилова Т.В.

Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии, Москва

В развитии и течении хронического панкреатита (ХП) значительная роль принадлежит интерлейкинам (1Ь) - биологически активным медиаторам межклеточного взаимодействия, регуляторам интенсивности воспалительных, иммунных, ме-

таболических и др.процессов; церулоплазмину (ЦП) - белку острой фазы воспаления, а также ферментам поджелудочной железы.

Цель исследования: изучение содержания цитокинов провоспалителыюго (IЬ-113, 1Г-6, IЬ-8, ТЫРа) и противовоспалительного характера (1Ь-4), ЦП в периферической крови больных ХП в стадии обострения, их соотношения между собой в зависимости ог этиологии, формы заболевания.

Материал и методы: цитокины определяли иммуно-ферментным методом у 70 больных ХГ1 с использованием тест-систем ООО “Протеиновый контур”, “Цитокин” (С.-Петербург). ЦП - с помощью реакции окисления парафе-нилендиамина . Контрольную группу составили 15 здоровых лиц с содержанием 1Ь от 10 до 30 пг/мл; ЦП - 135,3±3,4 мг/л.

Результаты. Повышение содержания 1Ь-1 (3 от 60 до 850 пг/мл, в среднем 337±73 пг/мл, было отмечено в 59,3% случаев; 1Ь-8 - в 55,5% от 80 до 260 пг/мл, в среднем - 117± 18,9 пг/ мл; 1Ь-6 - в 26,3% с колебаниями 60 - 350 пг/мл, с средним показателем 253±41,2 пг/мл; ТЫР-ос - в 28,3% с диапазоном его уровня 60 - 1800 пг/мл, в среднем - 483,6±70,7 пг/мл. Максимальное повышение всех видов провоспалительных цитокинов имело место в группе больных ХГ1 алкогольной этиологии, которое коррелировало с увеличенным содержанием ЦП (М - 217,6± 10,2 мг/л) и липазы (М - 50,3 мк моль / мин/л.). При билиарном ХП резко возрастал уровень 1Ь-1 (3 ( 455 пг/ мл) и Т№-а ( 405 пг/мл); показатели же ЦП были умеренными (160,5 мг/л).У больных ХГ1 неясной этиологии имело место умеренное повышение преимущественно 1Ь-6, 8, ТЫР-а и ЦП (174,6±8,5 мг/л).

При псевдотуморозном ХП содержание вышеуказанных цитокинов было минимальным, в то время как уровень ЦП был значительно повышенным (272,7± 10,2 мг/л).

Содержание 1Ь-4, ограничивающего интенсивность воспаления, было повышено у 64,5% обследованных больных, индивидуальные колебания - от 65 до 2100 пг/мл, в среднем -422,6±85,3 пг/мл. Уровень 1Ь-4 повышен в 65-78% при всех формах XII - алкогольном, “билиарном” ХП и ХП неясной этиологии.

Заключение. Характер цитокинового баланса, его соотношение с уровнем ЦП, у больных XII позволяет судить об активности заболевания, играет роль в выборе лечебных мероприятий.

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИММУНОРЕАБИЛИТАЦИИ ДЕТЕЙ С ГЕРПЕТИЧЕСКИМИ СЕРОЗНЫМИ МЕНИНГИТАМИ

Куртасова Л.М.. Савченко А.А., Ольховский И.А., Шакипа Н.А., Исаков И.В.

Красноярская государственная медицинская академия, Краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД, Красноярск, Россия

В настоящее время не вызывает сомнения способность герпесвирусов вызывать нарушения иммунной системы (Исаков В.А. и соавт., 1999; Львов II.Д. и соавт., 1999; ЯаЛегу МЛ. с( а1., 1999). При этом одним из перспективных направлений, позволяющих оценить функциональное состояние лимфоцитов - основного структурно-функционального элемента иммунной системы, является изучение их метаболических параметров. Действительно, все модуляторы функциональной активности лимфоцитов прежде всего изменяют метаболизм клетки, переключая субстратный поток с одного метаболического пути на дру-

гой, влияя на энергетику клетки и синтетические процессы (Rohde Th. et al., 1995, Boya P. et al., 1999; Nicol C.J. et al„ 2000).

Обследованы 15 детей в возрасте 3-6 лет в динамике через 6 месяцев после перенесенного герпетического серозного менингита. Контрольную группу составляли 35 здоровых детей аналогичного возраста. Общую фракцию лимфоцитов периферической крови выделяли по общепринятому методу в градиенте плотности фиколла-верогра-фина. Методом непрямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами серии CD фирмы “ДАКО” определяли CD3*-, CD4+-, CD8*- и СШ9+-лимфоциты. Содержание иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови изучали методом радиальной иммунодиффузии в геле. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (ГЗФДГ), прямой и обратной реакции лактатдегидрогена-зы (ЛДГ и Обр.ЛДГ), прямой и обратной реакции малат-дегидрогеназы (МДГ и Обр.МДГ), малик-фермента (НАДФМДГ), прямых и обратных реакций НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ, НАДФГДГ, Обр.НАДГДГ и Обр.НАДФГДГ), НАД- и НАДФ-зависи-мых изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ, НАДФИЦДГ) и глутатионредуктазы (ГР) в лимфоцитах крови осуществляли биолюминесцснтным методом по А.А. Савченко и Л.Н. Сунцовой (1989).

Анализ иммунологических результатов исследования показал статистически значимое снижение процентного и абсолютного содержания С04+-лимфоцитов в периферической крови, иммунорегуляторного индекса и концентрации Ig А в сыворотке крови у наблюдаемых детей по сравнению с величинами контрольной группы.

Результаты полученных данных установили изменения ферментного статуса лимфоцитов крови у наблюдаемых больных, которые проявлялись высокой активностью Г6ФДГ, падением уровня ГЗФДГ до 0,01 ±0,001 (в контроле - 2,27±0,22; Р<0,001), повышением в 2,3 раза НАДИЦДГ (Р<0,001) и в 4,9 раза НАДФИЦДГ (Р<0,001) на фоне резкого снижения активности МДГ (3,93±0,41; в контроле 20,30± 1,96; Р<0,001). Кроме того, отмечалось повышенное использование продуктов аминокислотного обмена в реакциях цикла Кребса за счет увеличенной активности НАДГДГ и НАДФГДГ с одновременным ингибированием оттока интермедиатов с лимонного цикла на метаболические пути аминокислотного обмена (Обр.НАДГДГ 1,81 ±0,10; в контроле - 1 88,70± 17,58 Р<0,001; Обр.НАДФГДГ 96,97±9,51; в контроле - 174,61±17,47; Р<0,001). В то же время обнаружено повышение потока субстратов на начальных стадиях гликолиза и снижение шунтирования медленных участков цикла Кребса малик-ферментом. Необходимо отметить высокий уровень ГР (63,78±6,41; в контроле - 11,87± 1,40; Р<0,001). Между тем, известно о непосредственной модуляции глутатионом пролиферативной активности лимфоцитов (Matsuda S. et al., 2000; Bansal M.P., Sood S., 2001).

Таким образом, полученные данные убедительно показали, что у детей, перенесших герпетический серозный менингит, на фоне структурной перестройки циркулирующего пула лимфоцитов длительно сохраняются метаболические изменения в иммунокомпстентных клетках. Данное обстоятельство диктует необходимость включения метаболической коррекции, направленной на восстановление внутриклеточного обмена лимфоцитов в комплекс им-мунореабилитационных мероприятий у данной категории больных.

ОЦЕНКА МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ С ГНОЙНО-ВОСПАЛИТАЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ ПРИ РАЗЛИЧНОЙ СТЕПЕНИ ПРОЯВЛЕНИЯ СИНДРОМА ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ.

Латюшина Л.С.

Научно-исследовательский институт иммунологии Челябинской государственной медицинской академии, Челябинск, Россия

Задачей нашего исследования было изучение местного иммунитета у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области при различной степени проявления интоксикационного синдрома. С этой целью обследовано 22 пациента челюстно-лицевого стационара, которые были распределены на 3 группы - с I (низкой), II (средней) и

III (высокой) степенью эндогенной интоксикации (Губин М.А., 1996 г.). Распределение по группам проводилось на основании клинического ( жалобы, анамнез, изучение общего и местного статуса), лабораторного ( клинические и биохимические исследования крови), иммунологического (определение степени иммунодефицита) обследования и определения лейкоцитарного индекса интоксикации по Кальф-Калифу.

Лечение больных проводилось по общепринятой схеме: дренирование гнойного очага, комплексная медикаментозная терапия.

Для оценки местного иммунитета у пациентов определяли функциональную активность нейтрофилов раневого экссудата ( лизосомальную, фагоцитарную, НСТ-редуцирую-щую). Исследования проводили на 2, 7, 14 сутки после оперативного вмешательства.

В результате исследования было установлено, что у больных 1 группы (с I степенью интоксикации) на протяжении всего периода наблюдения не выявлены изменения лизосо-мальной активности нейтрофилов раневого отделяемого. Отмечался рост фагоцитарной и НСТ-редуцирующей активности, с последующим снижением.

Во 2 группе (со II степенью интоксикации) обнаружен рост лизосомалыюй активности, с последующим значительным снижением. На протяжении всего периода наблюдения установлен рост фагоцитарной активности и снижение показателей НСТ- теста.

В 3 группе больных (с III степенью интоксикации) отмечено снижение лизосомалыюй и фагоцитарной активное™ нейтрофилов раневого экссудата, с последующим незначительным ростом, а также выраженное снижение НСТ-редуцирующей активности нейтрофилов на протяжении всего времени наблюдения.

Таким образом, анализ данных местного иммунитета у больных с флегмонами лица и шеи выявил угнетение функциональной активности нейтрофилов раневого отделяемого, наиболее выраженное у больных с высокой степенью эндогенной интоксикации. Учитывая результаты исследоваданным пациентам рекомендовано в комплексную терапию включать местное иммунокорригирующее лечение.

ЧАСТОТА ВЫЯВЛЕНИЯ РЕПЛИКАТИВНЫХ ФАЗ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ С ПОМОЩЬЮ ПЦР

Лубянская Т.Г.. Лесовская Т.Г., Кожевникова Н.Э., Холоденко М.Г., Волощенко Л.Г., Стрешная Н.В., Георгиева Е.А.

Обследовано 3210 гастроэнтерологических больных на наличие маркеров вирусов гепатитов В и С. Они выявлены у

325 больных (10,7%). Наличие в сыворотке крови антител к вирусу гепатита С (аНС) обнаружено у 150 чел., что составило 4,7%. Поверхностный антиген вируса гепатита В (HBs ag) найден у 166 чел., это составило 5,2% от числа обследованных больных. Одновременно HBs ag и аНС обнаружены у 9 больных (0,3%).

Полиразмерная цепная реакция проведена 110 больным. DNA HBV определена у 11 чел., (10% от числа больных с HBs ag). RNA HCV найдена у 38 пациентов с аНС (34,5%).

Данные исследования позволили верифицировать и уточнить диагноз хронического вирусного гепатита следующим образом:

1. Хронический гепатит В, фаза репликации вируса у 35 чел. (10%).

2. Хронический гепатит В, фаза интеграции вируса у 35 чел. (31,5%).

3. Хронический гепатит С, фаза репликации вируса у 38 пациентов (34,2%).

4. У 26 больных (23,4%) с аНС и отрицательной РНК HCV диагноз гепатита был снят. Установленные этиологические факторы наряду с биохимическими показателями явились основанием для назначения соответствующей этиотропной противовирусной терапии. Она назначалась при повышении уровня АЛТ и ACT в 2 раза и выше превышающих нормальные цифры.

Выводы: иммунологические и вирусологические методы исследования являются определяющими в диагностике и подборе терапии для больных с хроническими вирусными гепатитами.

ВЛИЯНИЕ АМИКСИНА НА АКТИВНОСТЬ СЫВОРОТОЧНОГО ИНТЕРФЕРОНА ПРИ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Львов Н.И., Пак Н.Н, Войцеховская Е.М., Парц Н.В., Голованова А.К..

Военно-медицинская академия,

ГНИЦ (МБЗ) ГНИИ МО РФ, НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Эпидемиологические (повсеместная распространенность, полиэтиологичность, уникальная изменчивость вирусов гриппа) и патогенетические (цитопатическое действие на эпителиальные и иммунокомпетентные клетки, угнетение механизмов местной и общей защиты организма) особенности острых респираторных заболеваний обусловливают необходимость применения универсальных противовирусных препаратов с иммуномодулирующим действием - индукторов эндогенного интерферона, в частности амиксина.

Цель и задачи. Исследовать активность сывороточного интерферона у больных острыми респираторными заболеваниями различной этиологии на фоне перорального приема индуктора эндогенного интерферона амиксина.

Материалы и методы. Активность сывороточного интерферона исследована у 55 больных острыми респираторными заболеваниями. Интерферон (1FN, ЕД/мл) в сыворотке крови определяли микрометодом по подавлению цитопа-гического действия (ЦПД) тест-вируса энцефаломиокардита мышей (ЭМКМ) на клеточной культуре. Кровь для исследования забирали в начале заболевания (до назначения амиксина, 1-3 день болезни - 1 период), в периоде ранней реконвалесценции (после курса амиксина, 5-7 день болезни - И период) и при выписки (9-11 день болезни - 111 период).

Активность 1РМ

Количество больных по периодам болезни, абсолютное число

0-2 13 30,9% 12 24,0% 14 25,4%

4-8 17 40,5% 21 42,0% 27 49,2%

16-128 12 28,6% 17 34,0% 14 25,4%

Этиологию ОРЗ определяли в реакции торможения гемагглю-тинации (РТГА), реакции связывания комплемента (РСК) и им-муноферментном анализе (ИФА). В РТГА определяли титры антител к антигенам вирусов гриппа А и В, парагриппа I, II и III типов, в РСК - аденовирусной, РС- и хламидийной инфекций, в ИФА - содержание антител классов 1цМ и 1цО к антигенам вирусов гриппа А и В, парагриппа I и III типов, адено- и РС-вирусов. За диагност ически достоверное принимали 4-кратное и более увеличение титров антител в РТГА, РСК в динамике заболевания.

Амиксин (0,125 г) больные ОРЗ принимали внутрь по схеме: в 1 и 2 день - 2 таблетки 1 раз/день, в 4 и 6 день - по 1 таблетки 1 раз/день.

Математическое обеспечение решения задач исследования проводилось с использованием пакета прикладных программ ‘^аПвЦса Гог \Vindows”, версия 5,0.

Основные результаты. Этиология ОРЗ установлена у 54 больных (98,2%): грипп А - 25 больных (45,5%), грипп В - 10 (18,2%), парагрипп - 10 (18,2%), аденовирусная инфекция-8 (14,5%), хламидийная инфекция - 1 (1,8%). У 1 больного (1,8%) этиология ОРЗ не установлена.

Распределение больных ОРЗ по активности сывороточного интерферона в динамике заболевания представлена в таблице.

Как видно из таблицы, относительная частота встречаемости случаев низкой (0-2 ЕД/мл) и высокой (16-128 ЕД/мл) активности интерферона в динамике заболевания не претерпела достоверных различий (р>0,05). Наблюдается лишь тенденция к снижению относительной частоты встречаемости этих случаев. В то же время относительная частота встречаемости случаев нормальной (4-8 ЕД/мл) активности сывороточного интерферона возросла на 8,7% (р<0,05). Ввиду малого количества наблюдений не установлено различий образования интерферона в зависимости от этиологии ОРЗ.

Заключение. Представленные данные могут свидетельствовать об иммунокорригирующем влиянии амиксина при использовании его в терапии ОРЗ, что проявляется в увеличении относительной частоты встречаемое™ случаев нормальной активности эндогенного 1ИМа.

МУКОЗНЫЙ ИММУНИТЕТ И МУКОЗНЫЕ ВАКЦИНЫ

Ляшенко В.А.

НИИ вирусологии, Москва, Россия

Понятие о местном иммунитете и непарэнтеральных способах иммунизации не являются новыми, но термин “Мукоз-ный иммунитет” прочно вошёл в научный обиход лишь в последние 10-15 лет. Это произошло в результате углублённого изучения феномена и оценки его важности в общей схеме защиты организма от инфекционных заболеваний.

Следует отметить, что количество лимфоцитов, связанных со слизистой респираторного и моче-полового тракта, а также - кишечника (включая Пейеровы бляшки), сравним с их количеством в селезёнке и крупных периферических лимфоузлах.

Мукозный иммунитет качественно отличен от “инъекционного”. Прежде всего, с ним связано образование ^А-анти-тел, которые являются средством защиты слизистой в области их образования, но также поступают и в циркуляцию. Индукция синтеза ^А-антител связана с интерлейкинами, образуемыми Т-хелперами второго типа. Следовательно, последние преобладают в “местном” иммунном процессе.

В лимфоидных скоплениях, связанных со слизистой, лимфоциты могут отличаться по набору некоторых основных маркеров от таковых, находящихся в периферических лимфоузлах.

Ещё интереснее аналогичные различия в наборе специфичностей рецепторов лимфоцитов. Например, для популяции лимфоцитов, связанных со слизистой кишечника, характерно повышение количества клеток, отвечающих на супе-рантигеиы некоторых бактерий.

Наблюдение, которое позволило говорить о мукозной иммунной системе, заключалось в том, что возбуждение иммунной реакции в одном из отделов слизистой оболочки сопровождается миграцией лимфоцитов-предшественников эффек-торных клеток в другие сё отделы. Так, внося мукозную вакцину в носоглотку подопытного животного, можно наблюдать появление специфических 19А в урогенитальном тракте.

Естественный процесс защиты от многих патогенных микроорганизмов начинается со становления мукозного иммунитета, хотя в качестве свидетелей защиты мы обычно использует циркулирующие ^М и 1§0-антитсла. Создание и использование мукозных вакцин различного типа представляется весьма перспективным. Количество экспериментальных вариантов таких вакцин в последние годы растет очень быстро. Более того, детская “вакцина будущего” представляется как мукозная, скорее всего - оральная вакцина. Среди предложенных вариантов есть такие современные, как ДНК-вакцины или живые рекомбинантные - апатогенный вирус иди бакгерия, синтезирующие про-тективный антиген гепатита или ВИЧ-инфекции.

Для неживых мукозных вакцин против различных инфекций предложены некоторые новые адъюванты и вещества-протекторы, защищающие иммуноген от действия кислоты и ферментов в желудочно-кишечном тракте. Нередко в качестве адъюванта предлагается компонент молекулы холерного токсина, повышающего проницаемость слизистой желудочно-кишечного тракта для используемого иммуногена.

И всё же в практике мукозальные вакцины почти не используются. Через рот вводится вакцина против полиомиелита, инграназально - в некоторых случаях - вакцина против гриппа. Неожиданный “прорыв” в этом направлении произошёл при внедрении в практику лечебных бактериальных препаратов, десенсибилизирующих, но и иммунизирующих как вакцины. В России применяются импортные бронхомунал и рибомунил

- через рот, а также поликомпонентный ИРС-19 - для орошения носоглотки. Отечественная лечебная вакцина ВП-4 вводится как на слизистую носа и рта, гак и инъекционным путём... Возможно, “звёздный час” мукозных вакцин уже не далёк.

В заключение - вопрос для дискуссии - нельзя ли вводить некоторые вакцины одновременно на слизистую и подкожно? Для усиления эффекта?

ИЗУЧЕНИЕ СОСТОЯНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ, СТРАДАЮЩИХ ХРОНИЧЕСКИМИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЁГКИХ

Ляшова В.Н.. Ястребова Н.Е., Маркина О.А.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН, Москва, Россия

Целью настоящего исследования была оценка роли Haemofylus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis в обострении ХНЗЛ. Оценку активности Ig G и Ig М антител (АТ) проводили с помощью ИФА. В работе использованы иммуносорбенты на основе дезинтегратов R-форм Н. influenzae, S.pneumoniae, М.catarrhalis, сыворотки 103 доноров станции переливания крови, 155 сывороток больных различными ХНЗЛ детей в возрасте 1,5-15 лет. В качестве контроля сравнения использовали пул сывороток 100 здоровых доноров. Рабочее разведение сывороток для определения Ig G АТ составляло 1:1600, для определения Ig М АТ - от 1:200 до 1:800. Значение разности оптической плотности между анализируемой сывороткой и отрицательным контролем равное или превышающее 0,3 считали положительным. Схема проведения ИФА была общепринятой. Чувствительность теста была снижена за счет использования в качестве контроля сравнения пула сывороток взрослых. Доля положительно реагирующих сывороток с антигенами Н.influenzae, S.pneumoniae, М.catarrhalis среди доноров станции переливания крови составила 2,9%. Остальные 97,1% сывороток не содержали повышенного уровня антител к трём видам бактерий. Среди 155 сывороток больных ХНЗЛ детей доля серопозитивных сывороток в 12 раз превышала аналогичный показатель сывороток здоровых людей. Эти данные свидетельствуют о значимости трёх видов условно-патогенных бактерий (УПБ) в этиологии ХНЗЛ, что соответствует литературным данным. Среди позитивных сывороток наибольшую долю составляли сыворотки, в которых регистрировали только положительные реакции с антигенами S.pneumoniae - 25%. Доля положительных сывороток с антигенами Н. influenzae была ниже и составила 19,6%, а сывороток с высокой активностью антител к антигенам М.catarrhalis - 14,2%. В остальных позитивных образцах регистрировали сочетания высоких уровней АТ к S.pneumoniae и М.catarrhalis - 14,2%, к Н.influenzae и

S.pneumoniae - 10,7%, к Н.influenzae и М.catarrhalis - 5,3%. Высокая активность АТ ко всем трём возбудителям составила 10,7%. Полученные с помщью ИФА результаты свидетельствуют о том, что причиной обострения ХНЗЛ могут быть инфекции, вызванные как отдельным УПБ, так и микст-инфекции. Результаты определения специфических IgG и IgM АТ в сыворотках 32 больных хронической пневмонией (ХП) показали наиболее частую регистрацию положительных реакций IgM АТ с антигенами S.pneumoniae и М.catarrhalis. У этих же больных уровень IgG АТ к Н.influenzae превышал уровень IgM АТ. У больных хроническим бронхитом (ХБ) наблюдалась таже тенденция. В сыворотках крови больных бронхиальной астмой (БА) активность IgG и IgM АТ носила другой характер. Активность IgG АТ к S.pneumoniae была выше активности IgM АТ, высокая активность IgM АТ к

Н.influenzae была выше активности IgG АТ, а активность IgG и IgM АТ к M.catarrhalis была равной. Высокую активность IgM АТ к S.pneumoniae и M.catarrhalis можно связать со значением данных видов УПБ в обострении заболеваний. При обстрении БА, вероятно, большую роль играет Н.influenzae. Таким образом, результаты ИФА позволили подтвердить важную роль Н.influenzae, S.pneumoniae, M.catarrhalis в патоге-

незе ХНЗЛ. Обострение ХНЗЛ могут обуславливать как отдельные микроорганизмы, так и их сочетания. Выявлены особенности иммунного ответа при различных нозологических формах ХНЗЛ. При обострении ХП и ХБ ведущую роль играют S.pneumoniae и M.catarrhalis, а при БА- Н.influenzae.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА И АКТИВНОСТИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ У ДЕТЕЙ

Мартынова Г.П.. Савченко А.А., Котова Я.А.

Красноярская государственная медицинская академия, Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

В инфекционной патологии детского возраста острые кишечные инфекции занимают ведущее место. В отличие отряда других регионов, на территории Красноярского края преобладают инвазивные формы: шигеллез, сальмонеллез, кишечный иерсиниоз. Динамичное наблюдение за детьми больными острыми кишечными инфекциями в течение 10 последних лет указывает на значительное утяжеление их клинической картины, увеличение удельного веса затяжных форм, негладкого течения болезни. Вероятно, причинами выявленных особенностей являются не только изменение этиологической структуры заболеваний, ухудшение преморбидного фона детей и социального уровня семей, но и изменение иммунологической реактивности организма заболевшего ребенка. Реактивность иммунной системы в значительной степени определяет тяжесть любого инфекционного процесса. При этом, функциональная активность иммунокомпетентных клеток в значительной степени обусловлены их обменом веществ.

Целью данного исследования явилось изучение иммунного статуса и активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови в зависимости от степени тяжести острой кишечной инфекции у детей.

Всего обследовано 243 детей с острой кишечной инфекцией: в возрасте 1 - 3 лет (139 детей) и 4 - 7 лет (104 ребенка). В обеих возрастных группах преобладали шигеллез (45,1% у детей 1 - 3 лет и 65,4% у детей 4-7 лет) и сальмонеллез (16,7% и 13,6%, соответственно). По тяжести заболевания всех больных разделили на 3 группы: с легкой степенью тяжести, со среднетяжелой степенью и с тяжелой степенью. В качестве контроля обследовано 75 здоровых ребенка в возрасте 1

- 3 лет и 55 детей 4-7 лет. Популяционный и субпопуляци-онный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител CD3, CD4, CD8, CD 16 и CD72.. Концентрацию иммуноглобулинов класса А, М, G определяли методом иммунодиффузии по Манчини. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови оценивали турбидиметрическим методом. Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови осуществляли биолюминесцентным методом.

Обнаружено, что у детей 1-3 лет с острой кишечной инфекцией пропорционально увеличению степени тяжести снижается концентрация лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови, а также абсолютные концентрации CD3+-, CD4+-, CD8+- и С016+-лимфоцитов. Кроме того, с увеличением степени тяжести инфекционного процесса у детей данной возрастной группы снижается концентрация IgM и IgG в сыворотке крови. При исследовании метаболизма иммунокомпетентных клеток у детей с острой кишечной инфекцией в младшей возрастной группе ус-

тановлено последовательное увеличение в зависимости от степени тяжести активности глицерол-3-фосфатдегидрогеназы, анаэробной реакции лактатдегидрогеназы (ЛДГ), но при снижении уровня малик-фермента. У больных детей старшей возрастной при увеличении степени тяжести выявляется пропорциональное снижение относительной концентрации СЭЗ+-лимфоцитов, а также процентного и абсолютного содержания С04+-клеток. Кроме того, вместе со степенью тяжести инфекционного процесса у детей 4 -7 лет повышается относительная концентрация СОКУ-клеток и снижается содержание ЦИК в сыворотке крови. При исследовании активности НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови обнаружено пропорциональное степени тяжести повышение активности аэробной реакции ЛДГ и изоцитрагдегидрогеназы, но при снижении уровня НАДН-зави-симой реакции малатдегидрогеназы.

Таким образом, у детей с различной степенью тяжести острого инфекционного процесса двух возрастных групп выявляются различные нарушения метаболизма лимфоцитов. Так, у детей младшей возрастной группы при увеличении степени тяжести заболевания в лимфоцитах крови повышается интенсивность анаэробного пути окисления глюкозы, прежде всего за счет притока на гликолиз продуктов липидного катаболизма. При этом, снижается активность ключевого фермента анаболизма липидов. В то же время, у детей старшей возрастной группы при увеличении степени тяжести инфекционного процесса прежде всего повышается активности ферментов, определяющих интенсивность аэробных реакций. С помощью нейросетевого анализа доказано взаимосвязь различий нарушения внутриклеточного метаболизма лимфоцитов и особенностями иммунного статуса.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ КОРЕВОГО ВАКЦИНАЛЬНОГО ПРОЦЕССА У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

Марцишевская Е.А.. Хари г С.М., Железникова Г.Ф.

Детский консультативно-диагностический центр Приморского района,

НИИ детских инфекций М3 РФ,

Санкт-Петербург, Россия

Вакцинопрофилактика детей с бронхиальной астмой (БА), особенно живыми вирусными вакцинами, вызывающими ослабленный инфекционный процесс, представляет известную медицинскую проблему. Однако число работ, посвященных иммунологии вакцинального процесса у детей с БА не многочисленно, а результаты, полученные авторами - разноречивы.

Цель работы - оценить исходные иммунологические показатели у детей с БА различной степени тяжести и динамику этих показателей после коревой иммунизации.

Материалы и методы. Обследовано и вакцинированно против кори 59 детей с БА (с легкой формой - 17 человек, со среднетяжелой - 30 чел., с тяжелой - 12 чел.) и 22 здоровых ребенка. Группы были сопоставимы по полу, возрасту (6-16 лег), количеству полученных прививок. За всеми привитыми проводили клиническое наблюдение в течение 1 месяца после иммунизации. Лабораторное обследование включало определение уровней: ^А, М, в (по МапсЫт), общего 1§Е, 1ИР, 1Ь-4, ТЫБ-а в сыворотке (ИФА) до иммунизации, на 14 и 30 дни после нее.

Результаты. У всех детей с БА, вне зависимости от степени тяжести заболевания, по сравнению со здоровыми, достоверно повышено содержание (877±111 и 123±31 кЕ/л соответственно, р<0,01), снижены концентрации ^М

(0,83±0,04 и 1,11 ±0,11 г/л соответственно, р<0,05) и (7,67±0,2 и 10,1 ±0,74 г/л соответственно, р<0,01). С увеличением тяжести БА уровень ^Е увеличивался (при легкой БА -430±88 кЕ/л, при среднетяжелой - 931 ± 149кЕ/л, р<0,01, при тяжелой - 1099± 193 кЕ/л, р<0,001), а продукция ^А снижалась (1,34±0,13 г/л, 1,28±0,08 г/л, 1,18±0,17 г/л соответственно), т.е. усугублялась имеющая место дисиммуноглобулине-мия. Выявлена корреляция увеличения продукции ^Е, снижения уровня 1Е-4 и ^А с тяжестью заболевания, что позволило расценивать эти показатели как иммунологический критерий степени тяжести БА. Через 1 месяц после коревой вакцинации у детей с БА имелась тенденция к снижению уровня ^Е, что свидетельствовало об отсутствии неспецифического сенсибилизирующего эффекта вакцины. Отмечалось увеличение уровней 1Ь-1Р и 1Е-4 на 14 день поствакцинального периода (ПВГ1) (в 1,5 и, 2 раза соответственно), с последующим возвращением к исходным значениям. В отличие от детей с БА, в группе сравнения наблюдалось снижение синтеза ТЫГ-а (с 35±26 пкг/мл до 3±4 пкг/мл). Ревакцинация детей с БА, сопровождалась более слабой активацией клеток - продуцентов цитокинов, что свидетельствовало о вторичном характере иммунного ответа.

Клинически выраженный вакцинальный процесс, в отличие от бессимптомного, сопровождался нарастанием к 14 дню концентрации 1Е-ф (с 455±279 до 840±655 и с 319± 103 до 284±117 нкг/мл соответственно) и ^Е (с 937±315 до 1268± 288 и с 701 ± 104 до 679±99 кЕ/л соответственно). При осложненном течении ПВП (наслоении ОРВИ) выявлялось исходно более низкое содержание ^А (1,01 ±0,4 и 1,49±0,1 г/л соответственно, р<0,05) и (5,6± 1,09 и 8,12±0,25 г/л соответственно). При обострении БА в ПВП, исходно отмечалось более высокое содержание ^Е (1251 ±74 и 701 ± 104 кЕ/л, р<0,05) при низком уровне - ^А (0,91 ±0,1 и 1,49±0,1г/л, р<0,05) и 1Ь-4 (358±41 и 640±431 пкг/мл).

Таким образом, изучение иммунного статуса детей с БА подтвердило атопический характер заболевания, проявляющийся гиперпродукцией ^Е, дисиммуноглобулииемией. Установлено, что исходные иммунологические показатели (высокая концентрация ^Е при низком уровне 1Е-4 и ^А) являются маркером тяжести заболевания и прогностическим критерием возможного обострения в ПВП. Низкая концентрация ^А и у детей с БА способствует наслоению ОРВИ в ПВП. Несмотря на различия динамики иммунологических показателей у детей с БА и здоровых, обнаружено возвращение их к исходным значениям на 30-й день ПВП у детей обеих групп. Следовательно, антигенная стимуляция в виде коревой вакцины не оказывала патологического воздействия на иммунный статус детей с БА.

ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА ПНЕВМОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ В КОЛЛЕКТИВАХ МОЛОДЫХ ЛЮДЕЙ С ВЫСОКИМ РИСКОМ РАЗВИТИЯ ПНЕВМОНИЙ

Мосягии В.Д., Жоголсв С.Д.. Мельниченко П.И., Огарков П.И.

Государственный институт усовершенствования врачей МО РФ,

Москва, Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург, Россия

Введение. В последние годы в коллективах военнослужащих значительно возросла заболеваемость пневмониями. Особенно высокий уровень заболеваемости пневмониями регистрируется среди новобранцев в военных учебных отрядах. Нами было установлено, что ведущую роль в этиологии пнев-

моний среди военнослужащих играет Streptococcus pneumoniae, и поэтому представлялось перспективным применение пневмококковой вакцины для их профилактики.

Цель исследования. Изучение эпидемиологической эффективности пневмококковой вакцины в воинском коллективе с высоким риском развития пневмоний.

Материалы и методы. Исследование проводили в военном учебном отряде, где обновление коллектива происходит каждые полгода. Ежегодно в отряде регистрировался высокий уровень заболеваемости пневмониями в зимний период после ноябрьского приема пополнения и менее значительный подъем заболеваемости в июне, после майского приема пополнения. 492 новобранца в возрасте 18-20 лет, прибывших в конце мая, были привиты пневмококковой вакциной “Писв-мо-23” в день прибытия. Вакцина вводилась внутримышечно однократно в дозе 0,5 мл. Контрольная группа состояла из 486 военнослужащих, находившихся в аналогичных условиях.

Результаты. За 5 месяцев наблюдения уровень заболеваемости пневмониями среди привитых оказался в 1,8 раза меньше (р<0,01), чем в контрольной группе, ОРЗ - в 1,2 раза меньше (0,05<р<0,25), острыми синуситами в 6,1 раза меньше (р<0,001), острыми отитами в 2 раза меньше (0,05<р<0,1). Как и ожидалось, наиболее высокая заболеваемость пневмониями регистрировалась в 1-ый месяц после прибытия пополнения. Причем если в период выработки поствакцинального иммунитета (первые 2 недели) уровень заболеваемости пневмониями среди привитых был только в 1,3 раза меньше, чем среди непривитых, то на протяжении 3-4 недели после прибытия заболеваемость пневмониями в группе привитых оказалась в 16,2 раза меньше, чем в контрольной группе (р<0,001).

Заключение. Применение пневмококковой вакцины “Пневмо-23” в войсках является эффективным методом профилактики вспышек пневмоний среди новобранцев.

ИЗУЧЕНИЕ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Мустафин И.Г.. *Бойчук С.В., Хамзина Р.В., Романенко О.М.

Республиканский Центр по профилактике и борьбе со СПИДом М3 РТ,

*Казанский государственный медицинский Университет, Россия

Введение. Механизмы развития вторичного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции остаются до конца неизученными, а результаты исследований разных авторов - противоречивыми, в частности, в исследовании возможного апопготическо-го пути гибели С04*лимфоцитов.

Цель исследования. Изучение некоторых аспектов аиоп-тоза лимфоцитов периферической крови при ВИЧ-инфекции.

Материалы и методы. Исследовали лимфоциты периферической крови 12 доноров и 15 больных ВИЧ-инфекцией, находящихся на стадиях НА и 11Б. Мононуклеарные клетки выделяли на градиенте плотности Ficoll-Paque™ PLUS (Amersham Pharmacia) и культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% ЭТС, L-глутамина и антибиотиков. Клетки инкубировали в СО^-инкубаторе в течение 3-х суток. В качестве индуктора апоптоза использовали дексамстазон (Дн) в концентрациях Ю"4 и 10-6 М. Апоптоз лимфоцитов оценивали методом проточной цитофлуориметрии (FACSCalibur, BD) по величине митохондриального потенциала с помощью флуорохромов CMX-Ros и DiOC6, экспрессии на наружной мембране клеток фосфатидилсерина (ФС) с помощью флуорохрома МС 540. Экспрессию молекулы апоптоза Fas/APO-l(CD95) на CD4 и

CD8 лимфоцитах определяли методом двухцветного окрашивания с помощью моноклональных антител CD95, меченных РЕ и CD4, CD8, меченных FITC.

Результаты исследований. Содержание CD4 и CD8 лимфоцитов, экспрессирующих молекулу апоптоза Fas/APO-1 (CD95), отличалось в группе больных ВИЧ-инфекцией и зависело от стадии заболевания и содержания абсолютного количества CD4 лимфоцитов. В стадию ПБ количество CD4 / CD95 лимфоцитов составило 63,12±4,05% среди CD4 клеток и было достоверно выше, чем у больных в стадию ПА (р<0,05). При этом содержание CD8 лимфоцитов, экспрессирующих Fas/APO-l(CD95), достоверно не отличалось в исследуемых группах больных. Исследование спонтанного апоптоза лимфоцитов, оцениваемого по снижению митохондриального потенциала и экспрессии фосфатидилсерина не выявило отличий между группой доноров и больных ВИЧ-инфекцией. Однако оценка индуцированного апоптоза лимфоцитов показала, что у части больных с ВИЧ-инфекцией независимо от ста-дии заболевания и содержания CD4 /CD95 , CD8 / CD95 клеток количество лимфоцитов с низким митохондриальным потенциалом и повышенной экспрессией ФС было выше по сравнению с контролем.

Выводы. Чувствительность лимфоцитов периферической крови у больных с ВИЧ-инфекцией в стадии ПА и ПБ к дскса-ме газон-индуцированному апоптозу не зависит от активности инфекционного процесса и наличия молекулы апоптоза на основных субпопуляциях Т-лимфоцитов.

ИММУННЫЙ ОТВЕТ НА ЖИВУЮ ГРИППОЗНУЮ ВАКЦИНУ

Найхин А.Н.. Рекстин А.Р., Донина С.А., Баранцева И.Б., Дешева Ю.А., Григорьева Е.П., Руденко Л.Г.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Грипп наносит в глобальном масштабе значительный урон экономике и здоровью населения. На сегодняшний день самым эффективным методом борьбы с этой инфекцией является вакцинация. В США и странах Запада более 30 лет применяется инактивированная гриппозная вакцина (ИГВ). Альтернативной ИГВ является живая холодоадаптированная рсассортантная гриппозная вакцина (ЖХГВ), разработанная в середине 80-х годов в отделе вирусологии им. А.А. Смородинцева НИИЭМ РАМН. Реассортантные вакцинные штаммы ЖХГВ содержат 2 гена от дикого вирулентного вируса, кодирующие поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу), и 6 генов от аттенуированного донора аттенуации, кодирующие внутренние белки. В середине 90-х годов подобная вакцина разработана в США, но с другими донорами аттенуации.

Важнейшим критерием качества любых вакцин является их иммуногенность. Потенциально на иммуногенные свойства вакцин могут влиять три главных фактора: 1) технологические особенности приготовления вакцинных штаммов;

2) возраст вакцинируемых людей, отражающий возрастную эволюцию иммунной системы; 3) способность препарата индуцировать иммунный ответ преимущественно по клеточному (Thl) или гуморальному (Th2) типу. Задачей настоящего исследования явилось изучение связи этих факторов с количественными показателями клеточного и гуморального иммунного ответа на отечественную ЖХГВ.

Материалы и методы. Экспериментальную гриппозную инфекцию воспроизводили на мышах линии BALB/C. Вводи-

ли три вируса гриппа A

- и ТЬ2(1Ь-4)-маркерные цитокины в надосадке культур лимфоцитов периферической крови (ИФА), апоптоз лимфоцитов (АПЛ) в аннексин-пропидисвом тесте (проточная цитофлюо-риметрия) и функциональную активность ЦТЛ.

Результаты. ПТВ, АТВ и ГР вызывали снижение ПАЛ на ранних сроках репликации (24-48 ч). Однако, в отличие от ПТВ, для АТВ и ГР этот феномен носил тразиторный и менее выраженный характер. Обнаружено резкое увеличение АПЛ при введении ПТВ и очень кратковременное и менее интенсивное возрастание этого показателя при инокуляции АТВ и ГР. Между ПАЛ и АПЛ наблюдалась обратная зависимость. ГР активно индуцировал ЦТЛ памяти. ЖХГВ имела преимущество перед ИГВ в индукции местного и клеточного иммунитета у молодых и пожилых людей. ЖХГВ активно стимулировала продукцию Thl -маркерных цитокинов как у молодых, так и пожилых лиц, тогда как ИГВ - только у молодых. Оба препарата обладали слабыми индуктивными свойствами в отношении Т112-маркерного цитокина у людей обеих возрастных групп.

Выводы. В отличие от ПТВ, АТВ и ГР не вызывают апоп-тотического активного подавления пролиферативных иммунных реакций организма и функциональной активности ЦТЛ. ЖХГВ лучше, чем ИГВ индуцирует клеточный и локальный иммунитет у пожилых лиц, а также вызывает более сбалансированный иммунный ответ с точки зрения ТЫ/ТЬ2-дихото-мии у молодых и пожилых людей.

ОСОБЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО ОТВЕТА И СОСТОЯНИЯ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ С

Никитин В.Ю.. Жданов К.В., Сухина И.А.

Военно-Медицинская Академия,

Санкт-Петербург, Россия

Введение. Известно, что нейтрализующие антитела играют существенную роль в вирусной элиминации. Нсспецифи-ческий гуморальный ответ при хроническом гепатите С (ХГС), так же как и специфический, может вызывать иммунопатологические реакции. Как правило, это проявляется увеличением уровня сывороточных иммуноглобулинов. Врожденный или приобретенный дефицит системы комплемента часто приводит к развитию криоглобулинемии и аутоиммунных процессов при ХГС, т.к. система комплемента отвечает за элиминацию иммуноглобулиновых агрегатов.

Цель исследования. Целью работы являлось изучение особенностей гуморального ответа и состояния системы комплемента у больных ХГС в зависимости от формы течения болезни и длительности инфекции.

Материалы и методы. Объектом настоящего исследования являлись пациенты, хронически инфицированные вирусом ГС (из 57 человек у 31 диагностированы латентные формы). Контрольную группу составляли здоровые лица (п =11). Были проведены молекулярно-генетические исследования крови с использованием ПЦР и последующим генотипирова-

нисм вируса ГС, клинический осмотр больных по органам и системам, УЗИ органов брюшной полости, общсклинический и биохимический анализ крови, пункционная биопсия печени с последующим проведением иммуногистологического и иммуногистохимического исследований биоптатов тканей. На основании этих данных больные ХГС были разделены на группы: 1) по форме течения болезни; 2) длительности инфекции; 3) активности патологического процесса в печени; 3) уровню аланинаминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови; 4) по генотипу НСУ. Определение уровня основных классов иммуноглобулинов (^Е, 1§А, 1цМ, 1§0), подклассов 1§0 ( ^01, 1цС2,1§03,1я04) и компонентов комплемента (СЗ, С4, С5) в сыворотке крови проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Основные результаты. В результате исследований установлено:

1) В общем, 16% больных ХГС имели повышенный уровень ^Е и 41% - ^А, 55% - ^М, у 42% больных ХГС наблюдался пониженный уровень С5 компонента комплемента. Больные ХГС относительно контрольной группы имели достоверно более высокие средние значения уровней ^А и 1ёМ (р<0,05).

2) Как оказалось, наиболее низкий уровень С5 компонента комплемента был выявлен у больных с латентной формой ХГС и с нормальным уровнем АлАТ (р<0,01). У пациентов с манифестными безжелтушными формами и с повышенным уровнем АлАТ наблюдался более высокий уровень С5 компонента комплемента по сравнению с ними, но достоверно более низкий, чем в контрольной группе (р<0,05).

3) В группе с продолжительностью инфекции 0,5-5 лет пациенты, относительно контрольной группы, имели повышенный уровень ^А и ^М (р<0,05). Тогда как, в группе с длительностью болезни 6-10 лет отмечались не только более высокие уровни ^А и ^М, но так же и 1§0 и его подклассов 1ёС1,1ё02 (р<0,05).

4) В группа с генотипом 2 НСУ наблюдались достоверно более высокие средние значения 1§А и 1§М (р<0,05), а в группе с генотипом 3 НСУ - 1§М, и его подкласса 1§в4 (р<0,05), по сравнению с контролем.

5) Больные ХГС по степени активности патологического процесса в печени были разделены на 2 группы: ГА1 (гепатит с минимальной активностью; ИГА=1-3) и ГА2 (гепатит со сла-бовыраженной активностью; ИГА=4-8). Анализ данных по этим группам показал, что в группе ГА2 отмечались более высокие уровни ^А и ^М относительно контроля. В группе Г'А 1 не наблюдалось достоверного отклонения от средних значений контрольной группы по всем показателям.

Заключение. Исследования показали, что у значительного числа больных ХГС повышен уровень ^М и ^А и понижен уровень С5 компонента комплемента, а после 6-ти лет течения инфекции идет нарастание уровней и его подклассов и ^в2. Это косвенно доказывает возможность развития иммунопатологических реакций при хронической НСУ-инфекции.

ДИНАМИКА ФОРМИРОВАНИЯ ПР0ТИВ0К0РЕВ0Г0 ИММУНИТЕТА В РАЗНЫХ КЛИМАТОГЕОГРАФИЧЕСКИХ ЗОНАХ

Новицкий И.А.

Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

Существует две точки зрения относительно эффективности ревакцинации живой коревой вакциной (ЖКВ): первая-

после ревакцинации против кори не происходит длительной циркуляции антител в высоких титрах, вторая- ревакцинация против кори сопровождается длительной циркуляцией про-тивокоревых антител. В настоящее время известно, что эффективность ревакцинации против кори существенно отличается в разных климатогеографических зонах.

Цель исследовании: изучить особенности иммунного реагирования населения, проживающего в разных регионах, на вирусные антигены ЖКВ. Основная задача исследования состояла в изучении динамики противокоревого иммунитета после ревакцинации ЖКВ населения, проживающего в средних широтах и на Крайнем Севере.

Обследованы две группы лиц, проживающих на Крайнем Севере (Таймырский АО) и в средних широтах (г.Красноярск)-209 и 255 человек соответственно. Исследования проводили перед ревакцинацией ЖКВ, через 1 и 8 месяцев, а также через 1-2 и более лет после ее проведения. Противокоревые антитела определялись с помощью реакции торможения гемаг-глютинации- антигемагглютинины (АГА) и торможения прямого гемолиза- антигемолизины (АГЛ).

Перед ревакцинацией ЖКВ в г.Красноярске выявлено 5,5% восприимчивых (титр АГА <1:10) к вирусу кори лиц, тогда как в Таймырском АО таких лиц было зарегистрировано уже 21,7%. Показатель средней геометрической титров противо-коревых АГА был значительно выше в г.Красноярске, чем в Таймырском АО - 4,59 против 3,33 1о§2 (Р<0,001). В г.Красноярске до ревакцинации выявлен более высокий процент детей с высокими титрами АГЛ (>1:320), чем в Таймырском АО- 13,6% против 0,9%. В этом городе также выявлено 15,5% детей, не имеющих в сыворотках крови противокоревые АГЛ. Уже через 1 месяц после ревакцинации ЖКВ в г.Красноярске и Таймырском АО зарегистрировано снижение количества восприимчивых к вирусу кори до 0,9 и 4,7% (Р<0,001). Также через 1 месяц после ревакцинации ЖКВ происходит увеличение количества лиц, имеющих в сыворотке крови противокоревые АГА в титре >1:320- от 2,2 до 20,9% (Р<0,001) в г.Красноярске и от 1,9 до 10,4% (Р<0,05) в Таймырском АО, что свидетельствует о выраженном синтезе этого вида антител. Показатель средней геометрической титров противокоревых АГА в г.Красноярске и Таймырском АО также увеличился: соответственно от 4,59 до 6,14 ^2 (Р<0,001) и от 3,33 до 5,33 1о«2 (Р<0,01). В г.Красноярске выявлено 32,2% детей с низкими титрами АГЛ против 17,0% детей с такими титрами антител в Таймырском АО. Обращает на себя внимание более высокий процент детей в Таймырском АО с высокими титрами АГЛ, чем в средних широтах- 18,9 против 2,7% (Р<0,01). Показатель средней геометрической титров АГЛ в Таймырском АО определялся на более высоком уровне, чем в г.Красноярске- 6,26 против 5,62 \о%2 (Р<0,01). При удлинении поствакци-нального периода до 8 месяцев в г.Красноярске статистически достоверного изменения показателей АГА не выявлено. В то же время, в Таймырском АО зарегистрировано увеличение количества лиц от 13,2 до 25,5% (Р<0,05), имеющих в сыворотке крови противокоревые АГА в титрах 1:10-1:20. Показатель средней геометрической титров противокоревых АГА при этом уменьшился от 5,33 до 4,5 1о§2 (Р<0,01). Показатель средней геометрической титров АГЛ через 8 месяцев после ревакцинации ЖКВ определялся на более высоком уровне в г.Красноярске, чем в Таймырском АО- 5,87 против 5,49 ^2 (Р<0,01). В Таймырском АО зарегистрирован рост количества ссроне-гативных лиц (не определяются АГА) при увеличении поствак-цинального периода от 1 до 13 лет- от 1,9 до 11,4% (Р<0,05). При этом уменьшилась группа детей с титрами АГА 1:40-1:160- от 65,4 до 24,3% (Р<0,001) и увеличилась с титрами 1:10-1:20- от 23,1 до 61,4% (Р<0,001), а также уменьшились

показатели средней геометрической титров АГА от 4,46 до 2,81 log2 (Р<0,001). Уровень противокоревых антигемолизинов (АГЛ) снизился в первые 6 лет после ревакцинации ЖКВ, тогда как в поствакцинальный период 7-14 лет он оставался неизменным. В средних широтах (г.Красноярск) уровень противокоревых АГА снижался в первые два года, а АГЛ в первые 4 года после ревакцинации ЖКВ. В более поздний поствакцинальный период нами не выявлено статистически достоверного изменения показателей иммунитета.

Таким образом, представленные выше материалы исследований, позволяют сделать заключение о более высоком уровне противокоревого иммунитета и более медленных темпах его снижения после ревакцинации ЖКВ в средних широтах (г.Красноярск), чем на Крайнем Севере (Таймырский АО).

ИЗМЕНЕНИЯ ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ СО ВТОРИЧНЫМИ МЕНИНГОЭНЦЕФАЛИТАМИ НЕЙРОВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Нурмухамедова М.А.

Ташкентский Педиатрический медицинский институт, Узбекистан

Целью нашего исследования явилось изучение изменений показателей иммунитета и клинического течения у детей с последствиями ранее перенесенного менингоэнцефалита, острой респираторной вирусной этиологии. Материалом для работы послужили результаты клинического наблюдения и иммунологического обследования 29 больных детей (мальчиков - 18, девочек - 11) в возрасте от 1 до 10 лет, находившихся на лечении в отделении неврологии ТашПМИ. Большинство больных детей является жителями сельской местности, что отражает общие тенденции эпидемии-инфекции в современных условиях. Самыми типичными неврологическими проявлениями данной патологии в наших наблюдениях были судороги - у 16 больных, поражение черепно-мозговых нервов -у 10 больных, нарушение двигательной функции - у 12 больных. Нарушение высшей корковой функции различной выраженности отмечено у 18 больных. Практически все больные дети в остром ‘периоде находились в реанимационных отделениях по месту жительства (87%). Средний срок пребывания в реанимации составлял 7 дней .

Все больные дети были тщательно обследованы по общеклиническим, неврологическим и иммунологическим параметрам. Контрольную группу составили 15 здоровых детей того же возраста.

Оценка иммунитета включала одномоментное определение следующих показателей: субпопуляций лимфоцитов в лимфацитотоксическом тесте с использованием моноклональных антител CD3* (Т-лимфоциты), CD4+ (Т-хел-перы индукторы), CD8+ (Т-супрессоры цитотоксические) в реакции непрямого розеткообразования, концентрацию иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии.

Иммунный статус в этой группе больных детей характеризовался достоверным снижением CD3* клеток как относительного, так и абсолютного значений в сравнении с контрольной группой; также отмечено достоверное снижение количественного содержания CD4*, CD8* клеток. При анализе суб-популяционного состава лимфоцитов количество CD4+ было ниже 25%. Содержание CD8+ колебалось в пределах 10-22%. Количественное содержание CD16* клеток имело выраженную тенденцию к возрастанию. В гуморальном звене иммунитета отмечено достоверное повышение количества CD20* лимфоцитов, при том ,что уровень иммуноглобулинов А,М достовер-

но снижен в сравнении с контрольной группой. Фагоцитарная активность нейтрофилов в глубоком дефиците относительного содержания данных клеток в кнтрольной группе.

Таким образом, уменьшение числа Т-лимфоцитов, субпопуляций, дефицит гуморального звена указывают на формирование вторичной иммунной недостаточности, а также позволяют обоснованно дополнять базисную терапию коррекцией в иммунорегуляторном звене.

ЭПИТОПНОЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ КАРТИРОВАНИЕ ОБОЛОЧЕЧНЫХ ГЛИКОПРОТЕИНОВ ВИРУСА ГЕПАТИТА С

Оленина JI.B.. Колесанова Е.Ф., Кузьмина Т.И., Соболев Б.Н., Николаева Л.И., Кураева Т.Е., Арчаков А.И.

Государственное Учреждение Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.И. Ореховича РАМН,

Москва, Россия

Вирус гепатита С (ВГС) является основным этиологическим фактором парентерально распространяемых вирусных гепатитов человека, тем самым обусловливая необходимость его изучения и создания противовирусной вакцины. Оболочечные гликопротси-ны ВГС ответственны за критические этапы вирусной репликации - связывание с клеточными рецепторами и проникновение вируса в клетку-хозяина, и именно против этих белков могут вырабатываться вирус-нейтрализующие антитела. Но функциональное картирование оболочечных гликонротеинов вируса Е1 и Е2 затруднено вследствие высокой вариабельности их аминокислотного состава и высокой антигенной изменчивости, а также экспериментальных трудностей при получении высокоочищенных препаратов оболочечных гликопротеинов, обладающих правильным гликозилированием и нативной конформацией. Анализ выровненных аминокислотных последовательностей Е1 и Е2 позволил нам выявить в них восемь высоко консервативных участков. Нами предложен подход, основанный на предварительном отборе протяженных высоко консервативных участков в последовательностях Е1 и Е2, сохраняющихся неизменными для различных изоля-тов вируса, и отборе фрагментов из гипервариабельного участка 1 (HVR1) наиболее близких к консенсусной последовательности HVR1. Мы синтезировали на полиэтиленовых иглах 180 отщепляемых биотинилированных октапептидов, 48 из которых перекрывали высоко-консервативные учас тки с шагом сдвига в один аминокислотный остаток, остальные перекрывали учас ток HVR1 с шагом сдвига в два остатка. Пептиды из консервативных участков были тестированы на взаимодействие с группами сывороток крови ВГС-инфицированных пациентов в острой и хронической фазах инфекции, а также с сыворотками здоровых доноров в EL1SA. Выявлено два иммунодоминантных участка, один из которых в белке Е1 был картирован ранее с помощью более длинных пептидов. Применение перекрываюшлхея октапептидов позволило нам провести более точное картирование этого ранее найденного эпитопа. Второй пммунодоминантный участок в составе белка Е2 был обнаружен впервые в настоящей работ е. Эксперименты по конкурентному ингибированию позволили нам выявить в нем два частично перекрывающихся непрерывных эпитопа. Обнаружены также три минорных эпитопа, не описанных ранее. Один из них содержит участок с наибольшим локальным положительным зарядом среди последовательности Е2 белка. Проведенный нами сравнительный анализ выявил различия в иммуно-реактивности пептидов с группами сывороток пациентов в разных фазах заболевания. По литературным данным гликозаминог-ликан клеточной поверхности гепарансульфат является одним из

клеточных рецепторов для ВГС, но участки оболочечных белков, ответственные за это взаимодействие, не картированы. Все синтезированные пептиды были тестированы нами на связывание с гепарином (растворимым аналогом гепарансульфата), иммобилизованным в лунках иммунологических планшетов с помощью разработанной нами методики анализа. Мы впервые определили два коротких участка в составе консервативных областей белка Е2 и выявили набор октапептидых фрагментов из НУК1 участка, способных к взаимодействию с гепарином. Полученные результаты позволяют заявить о наличии нескольких участков взаимодействия с гепарансульфатом в составе белка Е2, одним из которых является и НУИЕ Сопоставление данных по эпитопному и функциональному картированию позволит выявить участки оболочечных белков, перспективные для создания противовирусных вакцин. Работа выполнена в рамках Межведомственной научно-технической программы “Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего”, договор №01.02/137.

ПАРАМИКСОВИРУСЫ ПТИЦ В ПАТОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА

Паньшин А., Тендлер Е.

Медицинский центр РАМБАМ, Хайфа,

Ветеринарный институт им. Кимропа,

Бейт Даган, Израиль

В настоящее время общепринятым является мнение о незначительной роли парамиксовирусов птиц (ППМВ) в патологии человека. Из девяти серотипов этих вирусов только два, ППМВ-

1 и ППМВ-2, были выделены от человека, однако было показано, что только один из них - ППМВ-1 представляет определенную опасность для людей, вызывая относительно легкие формы конъюнктивита. По литературным данным частота обнаружения антител к ППМВ-1 в отдельных группах населения может достигать 20-40%, т.е. достаточно высокий процент людей контактирует с данным видом вируса. Поскольку ППМВ-1 обладает выраженным иммуномодулирующим действием, можно предположить, что этот вирус может играть определенную роль в развитии заболеваний, связанных с изменениями иммунного гомеостаза. С целью проверки этого предположения сыворотки крови от 487 больных, проходивших лечение в медицинском центре РАМБАМ, были изучены на наличие антител к ППМВ. Установлено, что антитела к ППМВ-1 почти в два раза чаще встречаются у больных, проживающих в сельской местности, по сравнению с больными, проживающими в городах. Достоверной корреляции между каким-либо заболеванием и уровнем антител к ППМВ установить не удалось. Однако у больных ревматоидным артритом констатирована определенная тенденция к увеличению частоты обнаружения подобных антител, а у онкологических больных - обратная тенденция.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ СТАНДАРТНОЙ ИММУНОГРАММЫ НА МОДЕЛИ АНАЛИЗА ИММУНОТРОПНОГО ЭФФЕКТА НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ (НИЛИ) ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ ТУБЕРКУЛЕЗА ПОЧЕК

Пармон Э.М.1. Борткевич Л.Г.2, Лавор З.В.1, Позднякова А.С.3, Шпаковская Н.С.1

НИИ пульмонологии и фтизиатрии М3 РБ, Белорусский Зеленый Крест,

МАГ10 М3, РБ, Минск, Республика Беларусь

Цель настоящей работы состояла в исследовании возможности использования данных иммунологического ана-

лиза системного Т- и В-клеточного антигеинезависимого иммунитета для характеристики локального иммунитета в очаге туберкулезного воспаления и его динамики в ответ на воздействие НИЛИ. В основную группу вошли 54 впервые выявленные больные, у 14 (26%) выявлен туберкулезный папиллит, у 19 (35%) кавернозный туберкулез почек, у 21 (39%) - поликавернозный туберкулез почек. Группа сравнения включала 57 больных, для которых проведена комплексная противотуберкулезная терапия без лазерного воздействия. Изучение иммунологических показателей проведено до и через 1 и 3 месяца после 10 процедур сочетанного наружного лазерного облучения проекции почек и ВЛОК общепринятыми методами клинической иммунологии, а именно, определение в составе периферической крови суммарных и “активных’Т (CD3 ), Т-хелперных (CD4 ), Т-цитотоксических (CD8 ), В (CD22 ) лимфоцитов, основных классов иммуноглобулинов (А, М, G), фагоцитарной активности моноцитов и нейтрофиль-ных гранулоцитов.

Учитывая различные исходные значения показателей в контрольной и основной группах, нами была введена величина относительного индекса нормы (ОИН), дискриминирующая различия показателей между контрольной и основной группой до начала лечения. Содержание Т-лим-фоцитов в периферической крови больных нефротуберку-лезом снижено у 57-91% в зависимости от формы процесса. Через 1 и 3 месяца после НИЛИ у больных туберкулезным папиллитом и кавернозным туберкулезом почек на фоне клинического улучшения наблюдалось достоверное снижение данного показателя. Мы считаем, что в результате локального воздействия НИЛИ активизировался хемотаксис Т-лимфоцитов в очаг воспаления, где в регионарных лимфатических узлах происходило формирование локального иммунного ответа на микобактерии туберкулеза. Через 3 месяца после НИЛИ при поликавернозном нефротуберкулезе повышение числа периферических 'T-ЛИМФОЦИТОВ в основной группе в сравнении с контрольной. расценивалось нами как стабилизирующий эффект НИЛИ на Т-клеточный иммунный ответа, создающий более благоприятный фон для хирургического удаления инфицированной почки. Обнаружено нарастание относительного и абсолютного уровня “активных” Т-лимфоцитов, т.е. более интенсивно экспрессирующих LFA-2 адгезивную молекулу, участвующую в качестве костиму-лятора в процессе презентации антигена. Этот факт косвенно свидетельствует о стимуляции под действием НИЛИ специфического клеточного иммунного ответа. С другой стороны, снижение в периферической крови количества иммунофенотипов CD4 и CD8 Т-лимфоцитов, а также активно фагоцитирующих моноцитов у больных основной группы интерпретируется нами как результат активации при воздействии НИЛИ хоминга хелперных и прецитоток-сических лимфоцитов в регионарные лимфатические узлы и их участия в разрешении туберкулезной гранулемы путем повышения внутриклеточных киллерных функций макрофагов. Анализ ОИН выявил своеобразную динамику содержания В-лимфоцитов и иммуноглобулинов в периферической крови в зависимости от сроков после воздействия НИЛИ и формы инфекции. Перераспределение иммуноцитов из периферической крови в очаг ГЗТ-вос-паления и способность их специфически взаимодействовать с микобактериями туберкулеза является не только противовоспалительным фактором, но и предотвращает метастазирование возбудителя болезни, что приводит к резорбции специфических гранулем в почечной ткани.

ИЗУЧЕНИЕ у8 Т КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

Петров А.В.. Пигарева Н.В., Бендт И.В.

Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, Россия

В последние годы интенсивно изучается роль у5 Т-лим-фоцитов в патогенезе инфекций, вызываемых внутриклеточными возбудителями и, в частности, туберкулеза. Описаны продуцируемые микобактериями непептидные вещества, содержащие несколько фосфатных остатков, которые являются специфическими антигенами для Уу9У82 у8 Т-клеток, основной субпопуляции у8 Т-лимфоцитов периферической крови человека. Прототипом подобных веществ является изопенте-нилпирофосфат (ИПФ). В то же время в отечественной практике функциональная и количественная оценка системы у8 Т-клеток у больных практически не проводится из-за отсутствия доступных методик, а клиническое значение показателей этого звена иммунитета остается неизученным.

Целыо данной работы была апробация методики, направленной на оценку функциональной активности у5 Т-кле гок, и изучение системы у8 Т-лимфоцитов у больных туберкулезом легких.

Обследовано 29 больных туберкулезом легких, проходивших лечение в институте фтизиопульмонологии г. Санкт-Петербурга. Забор периферической крови проводился до начала лечения и через 1 неделю, 1 и 3 месяца. С помощью проточной цигофлюориметрии в цельной крови определялась экспрессия маркеров основных субпопуляций иммунокомпетент-ных клеток, а также у8 Т-клеток. Для оценки пролиферативных свойств у8 Т-лимфоцитов мононуклеары периферической крови инкубировались с ИПФ (10 мМ/л) в присутствии низких концентраций рекомбинантного интерлейкина-2 (1Ь-2). Интенсивность пролиферации оценивалась по включению -’Н-тимидина на 5 сутки, затем рассчитывался индекс стимуляции (ИС) как отношение интенсивности включения метки в опытных лунках по отношению к контролю. При длительной инкубации с ИПФ и 1Ь-2 генерировались линии у8 Т клеток, клеточный состав которых исследовался на проточном цитофлюориметре.

Учитывая данные зарубежных авторов, а также результаты собственных исследований пролиферации клеток крови от нормальных доноров при инкубации с ИПФ, нормальным значением ИС считали 4 ед. Сниженный показатель ИС был выявлен у 57% больных до лечения, 74% через неделю и 53% через месяц от начала лечения. Обнаружено также, что ИС при инкубации с ИПФ достоверно коррелировал с количеством у8 Т-клеток периферической крови (г=0.567, р<0.01) и содержанием у8 Т-лимфоцитов в полученных линиях (г=0.555, р<0.01). При этом средний уровень у8 клеток в периферической крови и выделенных линиях у больных с нормальным ИС (3.69% и 91.9%) был достоверно выше соответствующего показателя в группе больных с пониженным ИС (2.15% и 52.4, 1=0.017 и 0.0001 соответственно). Интересной находкой была достоверная сильная обратная корреляция экспрессии С025 и показателей системы у8 клеток. Достоверных изменений исследованных показателей в динамике отмечено не было.

Полученные данные свидетельствуют о том, что предложенный тест функциональной активности у8 Т-клеток достоверно отражает количество у8 Т-лимфоцитов в периферической крови и может быть использован для оценки этого звена иммунитета. У большинства больных выявлено снижение пролиферации в тесте с ИПФ, что соответствует данным зарубеж-

ных авторов, указывающих на уменьшение количества Vy9V82 у8 Т-клеток у большинства больных туберкулезом легких. Мы проводим дальнейшие исследования для изучения связи показателей системы у8 клеток с клиническими данными.

ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ НА РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Рахманова А.Г.. Сизова Н.В., Москвина Е.А.

Санкт-Петербургская Медицинская академия последипломного образования, Россия

Введение. Нарушение иммунных функций под влиянием ВИЧ состоит в истощении субпопуляций Т-клеток CD4 и угнетении их реакций на антигены, митогены, аллоантигены и антитела анти-СОЗ с параллельным снижением продукции IL-2 и другими изменениями продукции цитокинов. В результате этих нарушений утрачивается способность цитотокси-ческих Т-клеток к ВИЧ-специфичному ответу и некоторые ан-тигенпрезентирующие клеточные функции. При этом возрастает число активированных и ареактивных Т-клеток CD8, повышается содержание |3,-микроглобулина и неоптерина в сыворотке, присходит поликлональная В-клеточная активация с появлением В-лимфоцитов, невосприимчивых к действию Т-независимых В-клеточных активаторов, возрастает образование аутоантител и иммунных комплексов.

Цель и задачи. Сопоставить уровень CD4 и CD8 -лимфоцитов у больных ВИЧ-инфекцией со стадией заболевания и проследить возможные естественные колебания этих показателей.

Материалы и методы. Было обследовано 130 ВИЧ-ин-фицированных пациентов дневного стационара городской инфекционной больницы №30 им. С.П.Боткина, находящихся на разных стадиях заболевания. Все обследуемые нами лица являлись жителями Санкт-Петербурга.

Диагноз ВИЧ-инфекции устанавливался на основании общепринятых клинических и эпидемиологических данных,

который был подтвержден обнаружением специфических АТ к ВИЧ и его отдельным белкам в реакциях ИФА и иммуно-блоттинга. У всех обследуемых, заболевание было обусловлено ВИЧ первого типа.

Иммунологическое исследование проводилось с помощью метода проточной цитометрии.

Основные результаты. При анализе полученных данных оказалось, что 64 (50%)пациента имели уровень CD4 выше 500 кл в мл.75,8% из них имели срок инфицирования до 2-х лет, у 16(12,1%) срок инфицирования от 2 до 4-х лет, 12 (9%) человека имели срок инфицирования более 7 лег. Эти 3 пациента составили от общего количества 4,6%. У 23 (34,8%)па-циентов уровень CD4 составил от 200 до 500 клеток , у 10 (15,2%) больных количество CD4 было меньше 200. Сопоставлялся уровень CD4 и CD8 -лимфоцитов с клиническими данными. Полученные результаты представлены в таблице.

Заключение. Таким образом мы смогли проследить возможные естественные колебания CD4 и CD8 -лимфоцитов. Самое большое различие было 20%. Среднее же значение количества CD4 изменилось на 6,7%.

+

Количество CD4 четко коррелирует с клиническими стадиями Российской классификации В.И.Покровского.

ОППОРТУНИСТИЧЕСКИЕ ИНФЕКЦИИ В КЛИНИКЕ ВРАЧА-ИНТЕРНИСТА

Редькина В.Ю.. Редькин Ю.В., Зайкова Э.Ф.

Омская государственная медицинская академия, Омск, Россия

В последние 10 лет оппортунистические инфекции представляют серьезную медико-социальную проблему в связи с их широким распространением и крайне неблагоприятным влиянием на уровень здоровья и воспроизводство населения. Наибольшую значимость имеют токсоплазмоз, цитомегало-вирусная инфекция и инфекция, вызванная вирусом простого герпеса 1 и 2 типа. В 60% случаев первое обращение больно-

Стадии по Покровскому О о -U + О о со +

% абс. % абс.

2Б 33,5+3,7 682+90 38,3±2,9 700±97

min-max

станд.откл. 9,8 237 6,6 217

2В 32,4±1,6 796+74 41,5±3,2 1063±130

min-max

станд.откл. 7,0 331 10,7 432

ЗА 25,3±1,7 450±37 48,6+2,8 1015+100

min-max

станд.откл. 8,0 179 13,3 478

ЗБ 12,6+2,3 196±29 68,0±3,7 1358±425

min-max

станд.откл. 5,7 71 9,1 1041

ЗВ 5,2+2,2 48,6+19,4 61,6+4,2 815+233

min-max

станд.откл. 5,0 43 8,3 467

Р< 0,05

го происходит к врачу-терапевту. Однако до сих пор отсутствуют алгоритмы клинической диагностики перечисленных инфекций, гак как не описаны границы их клинико-лабораторного полиморфизма у жителей Западной Сибири.

Нами было обследовано 230 больных токсоплазмозом, ЦМВИ, инфекцией, вызванной ВПГ 1 и 2 типа и микст-инфекцией на базе городской клинической инфекционной больницы №1, Омского регионального центра по профилактике и борьбе со СПИДом и Областного диагностического центра. Средний возраст обследованных составил 32,4 года. Использовались гематологические (развернутый анализ крови с исследованием адаптационно-компенсаторных реакций по Гар-кави), иммунологические (CD4, CD8, CD16, CD19, CD22. CD95, исследование уровней сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А, Е методом Манчини, тест для фагоцитов с нитросиним тетразолием, ЦИК по Дижону и Хашковой, исследование фагоцитоза с латексом, гемолитической активности комплемента в тесте СН50 и его компонентов, РБТЛ, определение уровня альфа-интерферона сыворотки крови, TNF-альфа, IL-2 с помощью моноклональных антител), инструментальные (ФГДС, абдоминальное УЗИ, рентгенография легких), серологические (ИФА, РСК, РИФ) методы и статистические приемы (вариационный, корреляционный, дискри-минативный анализ, оценка достоверности параметрическими и непараметрическими критериями).

У всех больных регистрировались расстройства нервной регуляции, проявляющиеся астено-вегетагивным синдромом, потливость - у 38%, расстройства аппетита - у 27%, тошнота, не связанная с приемом пищи - у 23% больных . 12% пациентов предъявляли жалобы на снижение массы тела более чем на 10% от исходной за 6 и менее месяцев или ее немотивированное повышение за тот же срок при прежнем аппетите. Боли в крупных суставах и мышцах преимущественно нижних конечностей и плечевого пояса регистрировались у 15% больных и носили асимметричный летучий характер. У трети больных основной и зачастую единственной жалобой, заставлявшей обращаться за медицинской помощью, была длительная субфебрильная лихорадка неясного генсза. У 23,6% больных эндоскопически был обнаружен эрозивный гастрит, 18% больных имели увеличенную печень, 12% - увеличенную селезенку, и 87% - увеличенные лимфатические узлы одной или нескольких групп. Наиболее четко указанные признаки выявлялись у больных микст-инфекцией, средний возраст которых был также сравнительно выше. Количественная оценка описанных симптомов выявила прямую корреляцию с глубиной нарушений иммунного статуса больных. При общей тенденции во всех группах к клеточному иммунодефициту, проявляемость данного признака также была максимальной у больных микст-инфекцией. Клеточно-гуморальный

дисбаланс сопровождался параллельным снижением интегративных функций фагоцитов. Практически для всех больных был характерен полный иммунокомплексный синдром при отчетливой дисиммуноглобулинемии и повышении уровня гетерофильных антител. У значительного числа больных (45%) имелись признаки аутоиммунизации (гипер-1§М-емия, сенсибилизация лимфоцитов к антигенам кишки, щитовидной железы, головного мозга) на фоне снижения уровня общего интерферона и всех его фракций. Частота данного феномена была выше в группе больных микст-инфекцией и зависела от давности заболевания.

На основании полученных данных создан диагностический алгоритм для врача-интерниста, который поможет ему сократить диагностический поиск при встрече с оппортунистической инфекцией и предупредить развитие се тяжких осложнений.

СПОНТАННАЯ И МИТОГЕНИНДУЦИРОВАННАЯ ПРОДУКЦИЯ И-1, И-2, И-8, ^-у У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТОМ В

Ризопулу А.П.. Гариб Ф.Ю.*, Арипова Т.У.

Институт иммунологии АН РУз, *НИИ вакцин и сывороток ГАК “Узфармпром ”, Ташкент, Узбекистан

Целью настоящего исследования было определить экспрессию активационных маркеров лимфоцитов, спонтанную и митогениндуцированную продукцию важнейших цитоки-нов у больных с ХГВ.

Изучена характеристика спонтанной и миюгениндуциро-ванной продукции цитокинов крови (в супернатантах) у 15 больных ХГВ в возрасте от 17-45 лет. В качестве контроля использованы данные, полученные параллельно у 7 здоровых людей аналогичного возраста. Продукция цитокинов - II,-1 (5, ІІ.-8 и ІБИ-у лейкоцитами крови определялась с использва-нием тест-систем, разработанных ТОО “Цитокин”, 1Ь-2 - ТОО "Протеиновый контур” (Санкт-Петербург), основанный на "сэндвич”-методе твердофазного иммуноферментного анализа. Для индукции цитокинов ІЬ-ір, 1Ь-8, 1ИЧ-а и ІИЧ-у был использован ЛПС, 1Ь-2 -ФГА.

Фенотип основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови изучали по идентификации на их поверхности дифференцировочиых рецепторов в иммунофлюоресцентном тесте с применением моноклональных антител - ЬТ.

Диагноз у всех больных был подтвержден обнаружением специфических маркеров гепатита В в сыворотке крови и данным и ультразвукового исследования печени.

Табл. СПОНТАННАЯ И МИТОГЕНИНДУЦИРОВАННАЯ ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ В КРОВИ У БОЛЬНЫХ ХГВ (М±т, пг/мл).

Показатель Больные Контроль

IL-1P спонтан. 1985+255** 580±107

Индуцирован. 7920+956** 2540 +371

IL-2 - спонтан. 2,81+0,7 1,7*0,1

Индуцирован. 3,4±0,2* 5,9+0,4

IL-8 - спонтан 4376±688** 1450±183

Индуциров 10828±1490** 6300+975

IFNy - спонтан. 22,0±2,5* 48,0+4,9

Индуциров. 37,4+3,8* 92,5+11,5

Примечание: достоверность различий с контролем *- Р<0,05; ** - Р<0,001.

Результаты показали, что у пациентов с ХГВ обнаружена гиперцитокинемия провоспалительных цитокинов с наиболее резким увеличением 1L-8 (Табл).

Установлено, что у пациентов с гепатитом резко повышается спонтанная способность клеток периферической крови продуцировать большинство цитокинов, что является признаком их активации in vivo. Исключение составляет IFN-у и IL-

2. Так, спонтанная продукция IL-2 при гепатите незначительно повышена, при том, что ФГА-индуцированный синтез IL-

2 был достоверно снижен у больных (Р<0,05).

Продукция IFN-y была снижена в 2,2 раза (Р<0,001). Индукция митогеном способствовала усилению секреции IFN-y параллельно в обеих исследованных группах, но у больных ХГВ она усилилась в 1,7 раза, тогда как у здоровых возросла в 1,9 раза, что, очевидно свидетельствует о снижении резервного потенциала иммунокомпетентных клеток больных.

Уровень спонтанной продукции IL-1J3 клетками периферической крови у обследованных больных был достоверно выше уровня здоровых доноров. Однако содержание IL-1P в сыворотке крови превышало норму только у части обследованных больных, тогда как увеличение концентрации IL-8 отмечено у 100% обследованных. Интересно, что спонтанная продукция 1L-8 превышает значения контроля в 3 раза, тогда как индуцированная в 1,7 раза (Р<0,001).

Установлено снижение процента клеток, экспрессирующих молекулы CD3* - на 36%, CD4* - на 31,2%, CD8+ - на 19% и CD25* - на 24,7% на лимфоцитах крови, тогда как экспрессия CD 16* была увеличена на 17,2% у больных по сравнению с контролем.

При этом экспрессия антигенов CD4’ и CD 16* достоверно (Р<0,05) отличалась от показателей нормы. Параллельно отмечается снижение числа клеток с рецепторами к 1L-2, отражающееся снижением CD25* клеток на 22,5% по сравнению с контролем.

Таким образом, полученные данные о снижении продукции 1L-2 и IFN-y свидетельствуют о недостаточности клеточного звена иммунитета, что согласуется с результатами анализа числа клеток, экспрессирующих зрелые маркеры Т-лим-фоцитов, а повышение IL-1 (3 и 1L-8 является отражением активности воспалительного процесса.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА И АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ АИВ

Родина Д.В.. Савченко А.А.,

Цуканов В.В., Акопова Ю.С.

Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

В настоящее время уже не вызывает сомнений ключевая роль иммунной системы в развитии инфекционных заболеваний. Вместе с тем, иммунологический анализ не всегда позволяет убедительно показать наличие или отсутствие иммунодефицита, охарактеризовать механизмы и уровень повреждения различных звеньев иммунной системы. В связи с этим в последнее время все чаще появляются работы, в которых отмечается необходимость внедрения патогенетических принципов оценки функционирования иммунной системы. С этой точки зрения изучение метаболических показателей лимфоцитов определяется как перспективное направление, позволяющее характеризовать уровень иммунореак-тивносги. Целью исследования явилось сравнительное изучение иммунологических показателей и активности метабо-

лических ферментов лимфоцитов крови у больных гепатитами А и В.

Всего обследовано 153 человека в возрасте 23-45 лет. Среди них 74 здоровых человека, 20 обследуемых с острым вирусным гепатитом А (ВГА) и 59 больных с острым вирусным гепатитом В (ВГВ). Диагноз острый вирусный гепатит устанавливался при помощи стандартных клинико-биохимических методов обследования больных, находящихся в инфекционном стационаре, и верифицировался обнаружением с помощью иммуноферментных методов и метода полимеразноцепной реакции специфических маркеров вирусных инфекций (Ig М к вирусу гепатита A, HbsAg, HbeAg, HbcorAg, ДНК вируса гепатита В). Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к CD3, CD4 и CD8. Концентрацию иммуноглобулинов класса А, М и G в сыворотке определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах проводили биолюминесцентным методом.

Обнаружено, что по исследуемым иммунологическим параметрам крови между группами больных ВГА и ВГВ выявляются значительные различия. Так, выраженное снижение относительной концентрации С08*-лимфоцитов (относительно здоровых обследуемых и больных ВГВ) приводит к повышению величины иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4+/CD8+-wictok). Кроме того, у лиц с ВГА выявляется увеличение абсолютного количества лимфоцитов в крови и концентрации Ig А и lg М в сыворотке. У больных ВГВ обнаружено менее выраженное снижение процентного содержания С08+-лимфоцитов и повышение концентрации lg М в сыворотке. При исследовании активности метаболических ферментов в лимфоцитах крови у больных ВГА и ВГВ также выявлены значительные особенности. Причем более выраженные изменения величин исследуемых метаболических параметров иммунокомпетентных клеток выявляются у больных ВГА. Так, только у больных ВГА в лимфоцитах крови относительно аналогичных параметров здоровых людей выявляется снижение активности лактатдегидрогеназы, а также повышение уровня НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы. При этом, все статистически достоверные различия между уровнями исследуемых оксидоредуктаз лимфоцитов у больных ВГА и ВГВ связаны либо с более выраженными изменениями активности у первых, либо с отсутствием изменений по данному параметру у вторых относительно показателей здоровых людей. Так, у больных ВГА и ВГВ в лимфоцитах крови выявляется повышение активности глицерол-3-фосфатдегид-рогеназы и снижение уровней глюкозо-6-фосфатдегидрогена-зы, малатдегидрогеназы, глутаматдегидрогеназы и глутатион-редуктазы. Таким образом, при изучении иммунологических показателей крови и активности метаболических ферментов лимфоцитов у больных ВГА и ВГВ обнаружена значительные различия. Более выраженное снижение Т-супрессоров у больных ВГА определяет повышение величины иммунорегуляторного индекса и, соответственно, повышение функциональной и регуляторной активности клеточного иммунитета. Реакция иммунной системы у больных ВГВ менее выражена, что, по-видимому, и определяет вероятность хронизации инфекционного процесса. Исследование метаболизма иммунокомпетентных клеток показало, что более выраженное снижение активности ферментов, определяющих энергетические процессы в лимфоцитах больных ВГА, сопровождаются повышением уровней дегидрогеназ, которые в какой-то мере компенсируют нарушения метаболических реакций. В то же время у больных ВГВ в лимфоцитах крови выявляется менее

выраженные нарушения активности ферментов, определяющих энергетические реакции, но, при этом, отсутствуют и компенсирующие процессы.

ПРИМЕНЕНИЕ ВАКЦИНЫ Р№иМО-23 ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ОБСТРУКТИВНЫХ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ У ДЕТЕЙ

Рыжов А.А.. Костинов М.П., Волков И.К., Катосова Л.К.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И.Мечникова РАМН, Москва, Россия

В последнее время, в связи с разработкой специфической диагностики, получены новые данные о распространенности и клинических проявлениях инфекции, вызванной пневмококком и другими бактериями. Они являются часто встречающимися представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и считаются условно патогенными, однако при наличии очага хронической инфекции способны вызвать обострение основного заболевания. Эти бактерии в последнее время приобретают устойчивость к широкому спектру антибактериальных препаратов, что в настоящее время является серьезной проблемой в лечении и профилактике обострений хронических заболеваний бронхолегочного аппарата, обусловленных пневмококком. В связи с этим вакциноп-рофилактика играет важную роль в профилактике обострений и снижении числа и тяжести ОРВИ у больных с данными заболеваниями. По результатам исследований, опубликованным в международной литературе, применение полисахаридной пневмококковой вакцины позволяет добиться не менее чем 65% эффективности в профилактике осложнений и обострений хронических заболеваний бронхолегочного аппарата.

Целью исследования явилось применение бактериального вакцинного препарата “Пневмо 23” в этапном лечении детей с хроническими обструктивными заболеваниями бронхолегочного аппарата.

Исходя из этого на базе НИИ педиатрии НЦЗД РАМН нами была отобрана группа из 18 детей в возрасте от 2,5 до 16 лет с различными хроническими бронхолегочными заболеваниями среди них: хронический бронхит у 9 чел., хроническая пневмония у 5 чел., врожденный порок развития бронхов у 3 чел., муковисцидоз у 1 чел. В мокроте данных больных высевался пневмококк в ассоциации с гемофильной палочкой. На фоне базисной терапии, которая включала в себя антибактериальные и муколитические средства была достигнута клиническая ремиссия заболевания. И в начале периода ремиссии перед выпиской из стационара эти дети были провакцинирован-ны препаратом Рпеишо-23.

Период наблюдения в большинстве случаев составил год. За это время было отмечено: снижение заболеваемости ОРВИ в 1,5 раза (с 4-6 до 2-3 раз в год) по сравнению с данными за предыдущий год у 16 (88%) детей. Следует подчеркнуть, что у

12 (67%) детей за прошедший год обострений основного заболевания не было, у 6 (34%), имевших в прошлом году 2-3 обострения в этом году было зарегистрировано по 1 обострению, причем двое из них не нуждались в госпитализации. Четверо детей (23%) проходили курс лечения в стационаре. При повторных посевах мокроты пневмококк у них обнаружен не был.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о клинической эффективности применения вакцины Рпсито-23 в комплексной реабилитации больных хроническими бронхолегочными заболеваниями, поскольку при этом отмечено снижение заболеваемости ОРВИ, уменьшение потребности в антибиотиках, снижение частоты и тяжести обострений и уменьшение случаев госпитализации.

КАТИОННЫЕ БЕЛКИ И ПЕПТИДЫ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ ПРИ РАЗНЫХ ФОРМАХ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

Сахарова И.Я.. Алешина Г.М., Иванова Л.А., Кноринг Б.Е., Кокряков В.Н., Корнева Е.А.

ГУ Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии М3 РФ, ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Целью настоящей работы является изучение защитных факторов системы нейтрофильных гранулоцитов и их связь с особенностями клеточного иммунного ответа при разных формах туберкулеза легких.

Клинико-иммунологическое обследование выполнено у 51 больного, находившегося в клиниках института с различными формами туберкулеза легких:

- инфильтративный туберкулез (ИТ) - 33 случая;

- фиброзно-кавернозный туберкулез (ФКТ) - 15 случаев;

- казеозная пневмония - 3 случая.

Комплексное обследование больных включало оценку следующих показателей:

- внутриклеточное содержание антимикробных катионных белков и пептидов в нейтрофилах по лизосомалько-катион-ному тесту (ЛКТ);

-внеклеточное содержание катионных белков нейтрофи-лов лактоферрина (ЛФ) и миелопероксидазы (МПО) в сыворотке крови с помощью ИФА;

-уровень специфического клеточного ответа на туберкулезный антиген по выраженности пролиферативного ответа мононуклеаров периферической крови (РБТЛ) на контакт с туберкулином (ППД) и фитогемагглютинином (ФГА);

-определение популяций и субпопуляций лимфоцитов (С04+, С08*, СБ20+, С025+, СБ16+);

-уровень индуцированной ФГА или ППД продукции 1Ь-2 мононуклеарами периферической крови - биологическим методом с применением 1Ь-2-зависимой линии СТ1Х-2.

Показатели Клинические формы

ИТ ФКГ Казеозная пневмония Норма

ЛКТ 1,44±0,03* 1,42+0,03* 1,14±0,19 1,52±0,04

ЛФ (нг/мл) 8136±1230 6384+974* 14975+4243 1022±135

МПО (нг/мл) 1807±297** 908±116* 2238±838 165+14

* - достоверные отличия от группы Казеозная пневмония ** - достоверные отличия от группы ФКТ

Проведенные исследования показали, что для разных форм туберкулеза легких характерны различные уровни внутриклеточного и внеклеточного содержания катионных белков и пептидов нейтрофильных гранулоцитов. При казеозной пневмонии, которая характеризуется крайне тяжелым неблагоприятным течением туберкулезного процесса, отмечается максимальное достоверное снижение внутриклеточного содержания катионных белков в сравнении с другими пациентами и достоверное повышение внеклеточного содержания ЛФ и МПО по сравнению с группой ФКТ.

Выявлено достоверное снижение содержания МПО в сыворотке крови больных ФКТ по сравнению с группой ИТ. Установлено наличие достоверной отрицательной коррелятивной связи между содержанием МПО в сыворотке крови больных ФКТ и внутриклеточным содержанием катионных белков и пептидов в нейтрофилах (Я=-0.54), которая не наблюдается у больных других групп.

Анализ коррелятивных связей, выполненный для всех обследованных больных, выявил прямую корреляцию показателей ЛКТ и концентрацией МПО в сыворотке крови с процентным содержанием СЭ16+ лимфоцитов (натуральных киллеров) в периферической крови (11=0,37 и Я=0,41 соответственно). Обратная коррелятивная связь обнаружена между значениями ЛФ и МПО в сыворотке крови и показателями РБТЛ с ФГА (Я=-0,41 и Я=-0,32 соответственно) и уровнем индуцированной туберкулином продукции 1Ь-2 (К=-0,39 и Я— 0,48 соответственно), а также между содержанием ЛФ и показателями РБТЛ с ППД (К=-0,30). Я - коэффициент корреляции по Спирмену.

Работа поддержана грантом РГНФ № 00-06-00202а

ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ЕМКОСТЬ КОМПЛЕМЕНТА КАК ПОКАЗАТЕЛЬ ПРОГНОЗА ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ У НАРКОМАНОВ

Сенчик Е.Ф., Галебская Л.В., Беляева Т.В.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова, кафедра инфекционных болезней и эпидемиологии и кафедра биохимии, Санкт-Петербург, Россия

В механизмах неепецифической реактивности организма, в частности при развитии инфекционного процесса, большое значение имеет система комплемента. Динамичная, быстро-реагирующая протеолитическая система крови - система комплемента может служить индикатором состояния человеческого организма. Комплемент функционирует в системе саморазрушения, поскольку в ходе его активации компоненты системы подвергаются гидролизу или входят в состав комплекса мембранной атаки. Нормальный уровень компонентов системы восполняется за счет белкового синтеза, осуществляемого главным образом печенью. Показателем “резерва” компонентов комплемента в крови является гемолитическая емкость комплемента (ГЕК). Этот показатель отражает потенциал системы и измеряется максимальным количеством гете-рологичных эритроцитов, полностью лизируемых единицей объема биологической жидкости.

Целью работы было исследование состояния комплемента при вирусных гепатитах. Под наблюдением находилось 112 больных, госпитализированных в городскую инфекционную больницу им. С.П. Боткина и городской наркологический диспансер с диагнозом вирусный гепатит на фоне наркомании. Больные были распределены на 4 группы: острый вирусный гепатит А - 18 человек, острый вирусный гепатит В - 35 чело-

век, хронический вирусный гепатит С - 35 человек, хронический микствирусный гепатит В+С - 24 человека. Диагноз вирусного гепатита устанавливали на основании анамнестических, клинических, эпидемиологических данных и подтверждали биохимическими, вирусологическими и в ряде случаев морфологическими исследованиями. В качестве контрольной группы обследовали 20 здоровых доноров. В сыворотке крови больных и контрольной группы определяли гемолитическую емкость комплемента. У всех обследованных величина ГЕК находилась в диапазоне от 1 до 6 порций стандартной взвеси кроличьих эритроцитов на 0,1 мл сыворотки крови. При анализе распределения ГЕК по третям диапазона вариаций показателя обнаружено, что у подавляющего большинства (85%) здоровых доноров уровень ГЕК соответствовал средней трети диапазона (3-4 порции эритроцитов), а у меньшей части (15%) - ее верхней трети (5-6 порций). Ни у одного человека из контрольной группы не было выявлено уровней ГЕК, соответствующих нижней трети диапазона. У больных вирусным гепатитом, как при остром, так и при хроническом процессе, наблюдали существенный сдвиг распределения показателя влево, т.е. в сторону уменьшения ГЕК. При этом наибольшее число случаев выявления низких значений ГЕК (у 29% больных) было обнаружено при хронической микст В+С вирусной инфекции, характеризующейся наиболее неблагоприятным прогнозом. У одного из пациентов этой группы значение ГЕК, определенное на 19-й день болезни, было минимальным. В этот же период у него также было отмечено уменьшение концентрации протромбина крови до 45% и снижение активности АЛТ по отношению к уровню, определенному при поступлении, что является отражением нарушения синтетической функции печени. Несмотря на проводимую интенсивную терапию, на 23 день болезни пациент скончался при выраженных явлениях печеночной недостаточности.

Полученные при проведении данного исследования результаты свидетельствуют о возможности использования показателя ГЕК для оценки белок синтетической функции печени и уточнения прогноза вирусного гепатита.

ДИНАМИКА И-10 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У ДЕТЕЙ С ПЕРВИЧНЫМИ ФОРМАМИ ТУБЕРКУЛЕЗА

Середа В.Г.. Маркелова Е.В.*

Приморская детская туберкулезная больница, владивостокский государственный медицинский университет, г. Владивосток, Россия

В последние годы получены многочисленные свидетельства цитокиновой регуляции как нормального, так и патологического измененного иммунного ответа. Одним из основных маркеров ТЬ2 лимфоцитов является 1Ь-10. Считается, что избыток 1И0 ведет к снижению противоинфекционной защиты.

Целью настоящего исследования явился анализ уровня

11.-10 в сыворотке крови у детей в динамике заболевания. Обследованы дети и подростки в возрасте от 4 до 17 лет: 88 человек с первичными формами туберкулеза (ПТ) и 48 ту-бинфицированных детей (ТИ). Диагноз выставлялся на основании анамнеза, туберкулинодиагностики, клинико - рентгенологических данных. Лечение проводилось по стандартной схеме терапии первичного туберкулеза 3 - 4 противотуберкулезными препаратами, на фоне патогенетической терапии. Им-муннокоррегирующая терапия не проводилась. Уровень 1Ь-10 в сыворотке крови определялся методом твердофазного им-муноферментного анализа с помощью наборов

Табл. 1 СОДЕРЖАНИЕ IL-10 В СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ

Группы наблюдения п % больных с уровнем IL-10 0,01-0,09 пг/мл Уровень IL-10 выше 0,1 nr/vu

% больных Low. Quart. Median Up. Quart.

ТИ 48 48% 50% 3,2 16,8 67,9

ПТ, 1 наблюдение 58 41% 57% 1,4 9,0 75,8

ПТ, 2 наблюдение 35 63% 34% 26,2 81,8 150,7

diagnostics Inc.” (USA), в соответствии с прилагаемой инструкцией. В группе детей с ПТ обследование осуществлялось при установлении диагноза активного туберкулеза (1 наблюдение) и через 2-4 мес от начала проводимой терапии (2 наблюдение). Группа ТИ обследовалась однократно. Данные обрабатывались методами непараметрического статистического анализа. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Наличие IL-10 в сыворотке крови обнаружено у 98% как у инфицированных, так и больных туберкулезом детей. Как оказалось уровень IL-10 в сыворотке крови детей с ПТ, при постановке диагноза был ниже по сравнению с практически здоровыми тубинфицированными детьми (р<0,05). Однако отмечался меньший процент больных с низким содержанием IL-10 (табл.1).

В процессе лечения количество больных с уровнем IL-10 в крови 0,01 - 0,09 пг/мл увеличивается на 20%. Но в тоже время у 34% больных содержание IL-10 значительно возрастает по сравнению с показателями до лечения (р<0,01), и в 3 раза превышает уровень этого интерлейкина у инфицированных.

Дальнейший мониторинг уровня IL-10 позволит уточнить его патогенетическую роль и возможность использования этого показателя в качестве критерия эффективности проводимой терапии.

НАРУШЕНИЯ ИММУНИТЕТА КАК ФАКТОР ФОРМИРОВАНИЯ ОФТАЛЬМОПАТОЛОГИИ У БОЛЬНЫХ, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСОМ ГЕПАТИТА В. ОБОСНОВАНИЕ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ

Слепова О.С.. Кушнир В.Н.

Научно-исследовательский институт глазных болезней им.Гельмгольца, Москва, Гос. Университет медицины и фармации им. Тестемицану, Кишинев, Молдова

Известно, что нарушения иммунитета могут явиться как предпосылкой, так и следствием хронического инфекционного процесса, вызванного длительно персистирующими в организме возбудителями, в частности - офтальмотропными вирусами, к которым в последние годы стали причислять и вирус гепатита В (HBV).

Цель работы: исследование роли иммунологических факторов в формировании различных клинических форм HBV-ассоциированной офтальмопатологии; определение показаний и оценка эффективности иммунокорригирующей терапии.

Материалы и методы. Наблюдались 347 больных: кератиты и кератоувеиты (93 чел., 102 глаза); эндогенные увеиты (128 чел., 206 глаз), катаракты (за исключением старческих;

126 чел., 229 глаз). Основную группу составили 204 пациента: 114-е хроническим HBV-гепатитом (ХГ), 50- бессимптомные вирусоносители (HBsAg-серопозитивные), 40- с ХГ неясной этиологии. В группы сопоставления вошли 143 пациента с теми же формами офтальмопатологии, у которых маркеры вирусов гепатита (В и других) и признаки заболевания печени отсутствовали. Контрольная группа- 150 практически здоровых доноров. Исследовали: сыворотку и лейкоциты крови, слезную жидкость. Определяли: Т-клетки (CD3 ,CD4+, CD8+); Ig G,A,M; ЦИК; цитокины (TNF-a, IL-1 (3, IFN-a); антитела (IgG и IgM) к S-антигену сетчатки, ДНК, миелину, коллагену, печени.

Результаты. Характерным для большинства HBV-инфици-рованных пациентов, независимо от клинической формы офтальмопатологии, явились: ослабление Т- иммунитета (снижение абсолютного числа Т-клеток и Т-хелперов), сывороточные гаммапатии, повышение уровней ЦИК и TNF-a в сыворотке; дефицит IgA и усиление секреции IgG в слезной жидкости; ослабление способности к системной и местной продукции IFN-a. Обнаружен ряд особенностей в проявлениях иммунопатологии при различных клинических формах глазных заболеваний и их зависимость от наличия и тяжести поражения печени, стадии инфекционного процесса в целом. Наиболее глубокие нарушения иммунитета наблюдались при увеитах, ассоциированных с HBV-ХГ: выраженные сдвиги по всем параметрам Т-клеточного звена, нарушение баланса CD4/CD8 со снижением (в 68% случаев) или повышением (в 27%) иммуно-регуляторного индекса; системная гиперпродукция TNF-a; аутоиммунные реакции, направленные против сетчатки; межор-ганная аутоиммунизация; гиперсекреция IgM и IgG в слезной жидкости. У больных с увеитами и ХГ неустановленной этиологии направленность иммунологических сдвигов была в целом аналогичной, но по большинству параметров менее выраженной. HBV-ассоциированные кератиты отличались от остальных клинических и этиологических групп гиперсекрецией TNF-a в слезной жидкости и расбалансировкой местной (дефицит) и системной (избыток) продукции IgA. При осложненных катарактах, наблюдавшихся преимущественно у реконва-лссцентов или бессимптомных вирусоносителей, нарушения иммунитета выявлялись значительно реже, чем при воспалительных заболеваниях глаз, и в основном были локальными. Полученные данные учитывали при разработке дифференцированных схем лечения. В комплексе с традиционной терапией (симптоматические средства, кортикостероиды) применяли имунофан (местно и/или системно). Препарат способствовал активизации местного и системного противовирусного иммунитета (выработка IFN-a, подъем уровня IgA в слезной жидкости), подавлению продукции провоспалительного цитокина -TNF-a, ослаблению аутоиммунных реакций, нормализации показателей Т- и В-иммунитета; исчезновению маркеров активной HBV-инфекции в сыворотке и слезной жидкости. В итоге: вдвое сократились сроки лечения кератитов и увеитов, уменьшились частота рецидивов (ремиссия более 1 года -у 97% больных) и число поствоспалительных и послеопераци-

онных (при катарактах) осложнений, повысились функциональные результаты.

Заключение. Иммунопатологические реакции, характерные для HBV-инфицированных больных, могут проявиться на уровне глаз и способствовать формированию офтальмопатологии. Характер, глубина и соотношение местных и системных нарушений иммунитета в значительной степени определяют развитие той или иной формы глазного заболевания и его тяжесть. Лечение (и профилактика) HBV-ассоции-рованных форм офтальмопатологии требует обязательного применения иммунокорригирующих средств и клинико-им-мунологического мониторинга.

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ РАСПРОСТРАНЕННЫМ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

Смирнов В.Ю.. Греймер М.С., Баласанинц Г.С., Журавлев В.Ю., Торкагюк Е.А.

Кафедра фтизиатрии МАПО, Санкт-Петербург, Россия

При распространенном нолидеструктивном туберкулезе легких имеют место глубокие и разнообразные нарушения иммунитета. Нами было изучено состояние системы фагоцитоза у таких больных по абсолютному и относительному содержанию основных клеток-фагоцитов крови - моноцитов и нейтрофилов, а также уровням IL-1 и IL-8, отражающих функциональную активность этих клеток. Объектом изучения стали 60 больных казеозной пневмонией (КП - 1 группа), как наиболее тяжелой формой туберкулеза легких, характеризующейся казеозным расплавлением легочной ткани и 100 больных распространенным инфильтративиым туберкулезом легких-лобитом (ИТ -2 группа), при котором, несмотря на схожесть клинико-рентгенологической картины, преобладает экссудативный тип воспалительной реакции в легких.

Исследования показали, что абсолютное и относительное содержание моноцитарных клеток в группах не различалось, колеблясь вокруг верхней границы нормы по относительным показателям. Абсолютный уровень клеток в обеих группах был достоверно выше нормы. Изучение содержания палочкоядерных нейтрофилов в 1-ой группе обнаружило значительное повышение относительного (в 2,5 раза) и абсолютного (в 5 раз) уровня клеток относительно нормы. У больных ИТ показатели, несмотря на превышение нормы, были в 2 раза ниже данных 1-ой группы (р<0.05).

Уровень IL-1 в 1 группе колебался в широком диапазоне. Однако при ЛГ1С индукции у 43,4% больных выброс был ниже 1000 пг/мл, т.е. ниже нижней границы нормы (N - 1000-5000 нг/мл). У остальных больных этой группы содержание ЛПС индуцированного 1L-1 определяли в пределах нижней трети нормы, что указывало на слабую функциональную активность моноцитов-макрофагов при КП. В то же время, спонтанная продукция клетками IL-1 у всех больных колебалась в интервалах от 312 до 1400 нг/мл (N - 0), отражая извращенный характер нарушений. У больных 2 группы индукция клеток ЛПС характеризовалась значительным выбросом 1L-1 у 34,7% больных, превышая верхнюю границу нормы, что соответствовало, по-видимому, интенсивности функционирования моноци-гов-макрофагов при ИТ. Спонтанная продукция IL-1 при ИТ, а также содержание цитокина в сыворотке, в отличие от показателей 1 группы, были умеренно повышены (в норме оба показателя равны 0).

Уровень IL-8, индуцированного ЛПС, в у 48,6% больных 1 группы был обнаружен выше верхней границы нормы

(N-1000-5000 пг/мл), но не превышал 8000 нг/мл. У остальных больных КП показатели колебались в пределах нормы. Спонтанная продукция IL-8 (N-0) в среднем составляла 3193,7-1881,8 пг/мл, в сыворотке цитокин определяли в пределах 678,0-239.4 пг/мл (N-0). У больных 2 группы ЛПС индуцированная и спонтанная продукция 1L-8 более чем в 2 и 4 раза соответственно превышала данные 1 группы (р<0,05), тогда как в сыворотке отмечался незначительный подъем содержания цитокина.

Эти данные указывали, что в 1 группе, несмотря на значительное содержание нейтрофильных клеток, функциональная активность их нерезко выражена. Более того, имеет место определенная дисгармония продукции 1L-8. У больных 2 группы содержание IL-8 было существенно выше. Не исключено, что цитокин, активизируя систему нейтрофилов, клеток, чья роль в развитии экссудативных реакций несомненна, предопределяет развитие экссудативного типа тканевой реакции.

Таким образом, изучение уровня клеток-фагоцитов и их функциональной активности у больных КП и ИТ выявило разнонаправленность изменений. При КП имела место реакция угнетения функциональной активности фагоцитов при сохранении или даже повышении их количества. У больных И'Г напряженное функционирование фагоцитарной системы сочеталось с незначительным подъемом количества клеток.

Возможно, увеличение количества фагоцитирующих клеток вторично и наступает при определенном истощении функциональных возможностей клеток-фагоцитов.

ИЗМЕНЕНИЯ ЧИСЛЕННОСТИ CD4+CD8+ И CD4 CD8 ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПОСЛЕ ВИРУСНОЙ ИММУНИЗАЦИИ

Снопов С.А., Розанов Ю.М., Харит С.М.*

Институт цитологии РАН, *Институт детских инфекций М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Среди различных типов периферических лимфоцитов имеются клетки, одновременно экспрессирующие маркеры CD4 и CD8. Роль этих клеток в иммунитете изучена недостаточно. Доля их в крови человека обычно составляет не более 2-3% всех лимфоцитов, возрастает при некоторых инфекционных и пролиферативных процессах, но может быть стабильно высокой (на уровне 20-30%) и у отдельных здоровых индивидуумов. Некоторые авторы видят в этом свидетельство увеличения выхода в кровь из тимуса незрелых CD4+CD8+ клеток. Больше данных свидетельствует, однако, в пользу того, что лимфоциты с таким фенотипом в крови, напротив, - зрелые, приобретшие второй маркер после антигенной стимуляции и по многим параметрам соответствующие эффекторным клеткам памяти. В крови человека определяется и другая минорная популяция (обычно не более 1-3%) лимфоцитов с фенотипом CD3*CD4 CD8 , которые задействованы, как предполагается, в алло- и аутоиммунных реакциях, обладают цито-токсическими и регуляторными свойствами и, кроме того, тоже имеют маркеры и функциональные атрибуты, присущие клеткам памяти. В настоящей работе нам удалось получить новые данные об участии обеих минорных популяций Т-лим-фоцитов в инфекционном иммунитете. При фенотипировании лимфоцитов методом иммуноцитометрии у часто болеющих детей 1.5-4 лет мы нередко встречались со случаями, когда сумма клеток с раздельно определявшимися маркерами CD4 и CD8 существенно не соответствовала численности СОЗ*лимфоцитов. Так, в одной из серий наблюдений мы обследовали 13 детей после полиомиелитной ревакцинации,

сочетавшейся с первичной коревой вакцинацией. Через 24 ч после такой иммунизации мы обнаружили у всех детей возрастание суммарного процента CD4- и СВ8-позитивных клеток, который значительно превысил количество СОЗ-позитив-ных (на 3 - 44%, в среднем, 20.2±3.6%, р = 0.00008). Такое возрастание было кратковременным, и через 72 ч после вакцинации сумма CD4+ и CD8+клеток уже не превышала, а через 168 ч становилась меньше количества СБЗ^лимфоцитов у 10 детей (на 1 -27%, в среднем 7.9±2.5%, р = 0.006). Мы предположили, что стали свидетелями быстрого и обратимого увеличения популяции периферических Т-клеток, соэкспресси-рующих CD4 и CD8, индуцированного вторичным ответом на вирусы полиомиелитной вакцины. Для проверки такого предположения в следующей серии наблюдений мы использовали методику одновременного иммунофлюоресцентного окрашивания обоих маркеров и, действительно, у 5 из 8 детей, получивших полиомиелитную ревакцинацию, обнаружили через 24 часа возрастание как относительного, так и абсолютного числа CD4+CD8+ клеток (до 2 - 29% всех лимфоцитов или 100 - 1330 в 1 мкл). Через 72 ч и 168 ч число таких клеток у четверых детей существенно снижалось до уровня, близкого к исходному, а у одного - оставалось повышенным. У остальных 3 детей, вакцинированных только полиомиелитной вакциной, и еще у 5 из 11 детей, получивших одновременно с ней и коревую вакцину в этой серии наблюдений, возрастание абсолютного числа CD4+CD8+ клеток (в 1.2 - 2.6 раза, в среднем 1.8±0.2) выявлялось не на 1-е, а на 3-и или 7-е сутки и оказывалось недостоверным для всех обследованных на каждом из этих сроков. Мы считаем, что важным фактором, предрасполагавшим к быстрому увеличению в крови численности С04+С08+лимфоцитов после вакцинации, являлось предшествующее состояние иммунитета, которое у всех детей первой серии наблюдений было модулировано перенесенным ими за неделю до вакцинации инфекционным рино-конъюнктивитом и, вероятно, стимулировало пролиферацию готовых к ней клеток данного типа. Тот факт, что у этих детей вслед за возрастанием суммарного числа CD4 и CD8 происходило достоверное снижение его до значений ниже численности CD3+wictok к 7 суткам после вакцинации, свидетельствовал об увеличении в крови доли Т-лимфоцитов, не экп-рессирующих маркеры CD4 и CD8. Сопоставляя такую динамику их экспрессии с сообщениями о наличии признаков клеток памяти у периферических CD4+CD8+ и CD4 CD8' Т-лим-фоцитов, мы предполагаем, что часть клеток первой популяции, быстро пролиферировавшая после вторичной вирусной иммунизации, за несколько дней утрачивала оба этих маркера, приобретая фенотип CD4 CD8 . Представленные наблюдения могут оказаться полезными при изучении механизмов реализации иммунологической памяти.

ОСОБЕННОСТИ ЭНДОКРИННОГО И ИММУННОГО СТАТУСОВ У МУЖЧИН ПРИ ГЕРПЕТИЧЕСКОМ КЕРАТИТЕ

Сперанский В.В.. Зайнутдинова Г.Х.

ЦНИЛ Башкирского Госмедуниверситета, Уфимский НИИ глазных болезней, Россия

Одной из причин тяжелого рецидивирующего течения гер-певирусных кератитов (ГК) является системный иммунодефицит (Ю.Ф.Майчук, 2000). Чаще, тяжелее и длительнее этим заболеванием страдают мужчины (В.Б.Мальханов, 1997).

Целью нашего исследования являлись оценка состояния и установление взаимосвязи функций эндокринной и иммунной систем при герпетических кератитах у мужчин.

Под наблюдением находилось 40 мужчин, в возрасте 21-78 лет, из них 14-е поверхностными и 26 - с глубокими поражениями роговицы глаза. Исследования проведены в острый период заболевания и в период ранней реконвалесценции.

При оценке полученных данных придерживались нормативов, прилагаемых к диагностическим тест - наборам для радиоиммунного анализа, соответственно равных для тестостерона сыворотки крови 8-32 нмоль/л (в среднем 20,0 нмоль/ л), кортизола-150-660 нмоль/л (в среднем 378 нмоль/л), аль-достерона - 27,74-291,3 нмоль/л (в среднем 159,52 нмоль/л). Результаты обрабатывали статистически с расчетом t-критерия Стъюдента и коэффициента корреляции (г при t> 2,0).

В результате проведенных исследований выявлено снижение среднего уровня тестостерона в крови у 36 (90%) мужчин в разгар заболевания (р<0,05). Уровень гормонауіб (40%) был ниже 8,0 нмоль/л.

11а стадии ранней реконвалесценции уровень тестостерона оставался, по-прежнему, пониженным у 35 (87,5%) больных, в том числе у 21 (52,5%) был ниже 8,0 нмоль/л и при этом в 3 раза чаще наблюдался при глубоких формах ГК.

Содержание кортизола в крови у этих же больных в острый период болезни не отличалось от средних значений у здоровых лиц, но имело тенденцию к понижению на стадии ранней реконвалесценции.

Средний уровень альдостерона в остром периоде заболевания был в пределах диапазона нормы, при выздоровлении имелась тенденция к повышению при глубоких и к понижению - при поверхностных формах ГК.

Анализ показателей, характеризующих клеточное звено иммунитета данной группы больных, выявил достоверное снижение содержания Т-хелперов/индукторов (CD4+) до 37,0±2,3%; иммунорегуляторного индекса (CD4/CD8) -до 1,4±0,2; повышение С095-позитивных лимфоцитов -до 40,5±4,0%; тенденцию к повышению CD8+ и CD16+ по сравнению с нормой.

Установлена прямая корреляционная связь между уровнем экспрессии CD4* и кортизолом в остром периоде ГК и обратная - между CD95\ кортизолом и тестостероном в периоде реконвалесценции. Выявлена также прямая корреляционная связь между уровнями CD4+, кортизолом и альдостероном; между уровнем экспрессии CD95+, кортизолом и тестостероном при глубоких формах ГК.

ЦИТОКИНОВЫЙ ОТВЕТ ПРИ ОСТРОМ РАССЕЯННОМ ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТЕ У ДЕТЕЙ

Старшинов Я.Ю.. Железникова Г.Ф., Скрипченко Н.В., Монахова Н.Е., Карчевская JI.B., Иванова Г.П.

Научно-исследовательский институт детских инфекций М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Острый рассеянный энцефаломиелит (ОРЭМ) - это заболевание неясной этиологии, протекающее с поражением головного и/или спинного мозга, характеризующееся множественной неврологической симптоматикой и появлением очагов демиелинизации. Дискутируется значение инфекционного агента и роль аутоиммунных реакций на основной белок миелина (ОБМ) в патогенезе ОРЭМ. Ие выяснена роль про-воспалительных (TNF-a, IFN-y) и антивоспалительных (1L-4) цитокинов в патогенезе ОРЭМ, остаются неизвестными иммунологические механизмы выздоровления или, наоборот, хронизации процесса с возможным переходом в рассеянный склероз.

№ Ф.И. возраст IFN-y сыв. IL-4 сыв. IL-4* TNF-a сыв. TNF-a* IgE кЕ/л РБТЛ,%

СП ФГА

1 О.И., 13 л 710 23 0 41 360 10 3 68

2 Д.Н., 6 л 437 30 0 31 0 47 3 74

3 P.M., 3 г 740 3 25 20 25 200 1 68

4 Ш.О., 11 л 203 620 95 260 480 766 5 62

Примечание: * - спонтанный синтез в культуре.

Цель настоящей работы состояла в выявлении особенностей цитокинового и иммунного ответа у детей с разным исходом ОРЭМ. У 4 детей в конце первого месяца болезни изучили содержание в крови и спонтанный синтез in vitro TNF-a, IFN-y, IL-4 (пг/мл) и уровень общего IgE в ИФА, наличие ГЗТ к ОБМ (в РТМЛ) и пролиферативный ответ Т-лим-фоцитов на ФГА. В таблице представлены индивидуальные данные. Трое детей (№1-3) имели благоприятный исход заболевания с полным восстановлением функций ЦНС, тогда как четвертый ребенок (Ш.О.) перенес многоволновый процесс без полного выздоровления.

У троих детей с ОРЭМ, завершившимся полным выздоровлением, на 29-37-й день болезни были активированы клетки-продуценты IFN-y (НК, Till, CD8), но не клетки-проду-центы IL-4 (Th2). Уровень общего IgE был в пределах возрастной "нормы”, ответ Т-лимфоцитов на ФГА также не отличался от “нормального” (65-85% бластов). Все это свидетельствовало о клеточном профиле иммунного ответа, что подтверждало наличие ГЗТ к ОБМ у 2 из этих детей.

Напротив, у ребенка Ш.О. с многоволновым течением процесса цитокиновый системный ответ характеризовался преобладанием антивоспалительного цитокина Th2 IL-4 над IFN-y при относительно высоком уровне в крови TNF-a. В культуре мононуклеаров была повышена спонтанная продукция как TNF-a, так и IL-4. Особенностью этого ребенка был высокий сывороточный уровень общего IgE, что обычно коррелирует с интенсивным синтезом IL-4 и активацией Th2. Недостаточную выраженность клеточного ответа иллюстрирует сниженный относительно “нормы” ответ Т-клеток на ФГА. Выраженная ГЗТ к ОБМ развилась у Ш.О. только на 4-м месяце болезни.

Обсуждая эти предварительные результаты, можно высказать предположение, что конец первого месяца от начала ОРЭМ является критическим сроком развития протективных механизмов иммунной защиты при данном заболевании, определяющим характер дальнейшего течения процесса. Эффективный иммунный ответ, по представленным данным, включает выраженную продукцию IFN-y как главного медиатора клеточного ответа, но не IL-4 - маркера активации TU2 и гуморальной формы ответа. Следует заметить, что клиническое улучшение у ребенка с подоетрым течением болезни (Ш.О.) наступило только после нескольких эпизодов обострения, сопровождавшихся активацией клеточного иммунитета. Благоприятный характер Thl-подобного иммунного ответа свидетельствует, скорее, в пользу инфекционной (вирусной?), а не аутоиммунной природы данного заболевания. Именно вирусная или другая внутриклеточная инфекция требует для своего разрешения специфического клеточного ответа, тогда как аутореактивные Thl-клоны рассматриваются как ключевой фактор патогенеза аутоиммунных заболеваний. Вероятно, ГЗТ к ОБМ при ОРЭМ представляет собой реакцию иммунной системы на воспаление в ЦНС.

ИММУННЫЙ ОТВЕТА НА АНТИГЕНЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ ТУБЕРКУЛЕЗА У РАЗНЫХ ГРУПП НАСЕЛЕНИЯ И КОНТИНГЕНТА ПЕНИТЕНЦИАРНЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ

Суркова Л.К., Яковлева Л.Ф., Аганова Е.Г., Лысенко А.П., Богданович С.В.

Научно-исследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии М3 РБ,

БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского,

Минск, Республика Беларусь

Цель исследования. Изучение уровня гуморального иммунного ответа па антигены возбудителя туберкулеза у контингента пенитенциарных учреждений (ПУ) и разных групп населения.

Материалы и методы. Методом ИФА в сыворотках крови определяли специфические антитела с использованием набора “ИФА-ТУБ” (НПЦ “Красная капля”).

Результаты исследований. Результаты оценки чувствительности и специфичности набора “ИФА-ТУБ” представлены в табл. 1.

Табл. 1. ПОКАЗАТЕЛИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ НАБОРА ИФА-ТУБ

Обследованные группы Исследовано Реагировало

Здоровые лица 30 2

Контингент ПУ, больные туберкулезом 93 58

Таким образом, положительный результат при определении специфических антител с помощью набора “ИФА-ТУБ” с вероятностью 62,4% свидетельствовал об активном туберкулезном процессе.

С использованием набора” ИФА-ТУБ” проведены исследование сывороток крови групп населения с разным риском туберкулезной инфекции (табл. 2).

По числу положительных реакций группа пациентов с нетуберкулезной патологией достоверно отличалась от группы клинически здоровых животноводов. В свою очередь группа заключенных достоверно превышала по указанному пока-

Табл. 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ РАЗНЫХ ГРУПП

Обследованные группы Число проб Положительный результат, абс.

Пациенты с нетуберкулезной патологией 1146 30

Животноводы хозяйства неблагополучного по туберкулезу крупного рогатого скота 120 4

Контингент ПУ 358 42

зателю предыдущие группы. У 11,7% заключенных регистрировался выраженный гуморальный иммунный ответ на антигены возбудителя туберкулеза, что свидетельствовало об активном инфекционном процессе у контингента ПУ.

Заключение. Высокая специфичность иммунодиагностики туберкулеза, а также достаточно высокая чувствительность набора “ИФА-ТУБ” обеспечивает получение своевременной и достоверной информации об уровне инфицирования отдельных групп населения.

Периодическое обследование населения с помощью серологических методов в комплексе с флюорографией целесообразно использовать для формирования групп риска, подлежащих углубленному наблюдению по туберкулезу и ранней химиопрофилактики болезни.

УРОВЕНЬ Р24-АНТИГЕНЕМИИ - АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ ПРОГНОСТИЧЕСКИЙ МАРКЕР ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Саухат С.Р., Шемшура А.Б.. Сазыкина О.В., Рындич А.А., Свечникова JI.B., Терновой М.В.

Южный окружной центр М3 РФ по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, Ростовский областной центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями, Ростов-на-Дону, Россия

Продолжающийся рост числа ВИЧ-инфицированных в России, а также неуклонное увеличение доли лиц с манифестными формами заболевания делает весьма актуальным внедрение в повседневную лабораторную практику высокочувствительных и доступных методов прогнозирования и оценки эффективности терапии ВИЧ-инфекции. В отличие от дорогостоящих и трудоемких молекулярно-генетических методик, в последнее время разработаны относительно недорогие и простые в исполнении технологии количественного определения р24 антигена в формате ИФА, позволяющие с достаточной степенью точности определять интенсивность репликации ВИЧ in vivo (Ledergerber В., 2000; Polywka S., 2001). В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение возможности использования 1CD boosted-amplification модификации ИФА для определения р24-антигенемии как альтернативного прогностического критерия при ВИЧ-инфекции.

Обследовано 40 больных в возрасте 17-35 лет, инфицированных как половым, так и парентеральным путем различными субтипами ВИЧ-1 (А и G), находящихся в стадии первичных проявлений (26, 2в) (16 чел.) и вторичных заболеваний

(За, 36, Зв) (24 чел.). Исследование параметров иммунного статуса включало: определение уровня р24-антигенемии с помощью тест-системы Organon Teknika, изучение содержания основных популяций и субпопуляций лимфоцитов (CD3,

4, 8, 16, 20) методом непрямой иммунофлуоресценции, определение количества клеток, экспрессирующих маркеры поздней активации (HLA DR) и готовности к апоптозу (CD95), исследование интенсивности апоптоза лимфоцитов по степени межнуклеосомной деградации ДНК, изучение функциональной активности нейтрофилов и макрофагов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте и по экспрессии Fey- и СЗь-рецспторов, определение концентрации иммуноглобулинов А, М, G и ЦИК в сыворотке крови.

Установлено, что по мере прогрессирования заболевания у больных в стадии вторичных заболеваний, по сравнению с пациентами в стадии первичных проявлений, на фоне достоверного снижения содержания CD3+- и С04*-лимфоцитов и повышения С08*-субпопуляции, отмечалось увеличение количества HLA DR+- (с 15,5±3,6% до 26,9±7,1%), СБ95+-кле-ток (с 5,7±2,5% до 12,9±6,2%) и усиление степени межнуклеосомной деградации ДНК лимфоцитов (с 11,7±2,5% до 53,9±6,2%). Выявленные изменения сопровождались нарастанием гипергаммаглобулинемии всех трех классов и нарастанием количества ЦИК в сыворотке крови. Со стороны мак-рофагального и нейтрофильного звена зарегистрировано повы-шение экспрессии мембранных Fcy-рецепторов (Мф. с 16,2±1,6% до 28,9±7,1%; Нф. с 58,0±4,3% до 64,5±5,2%) и

С,Ь-рецепторов (Мф. с 24,3±2,7% до 35,2±4,1%; Нф. с <54,1 ±3,2% до 78,8±6,1%), усиление спонтанного кислород-зависимого метаболизма при снижении резервных метаболических возможностей клеток. Уровень р24-антигенемии увеличивался по мере прогрессирования заболевания (с 24±1,2 pg/ml до 55±2,3 pg/ml).

Анализ особенностей иммунного статуса у пациентов с различной скоростью прогрессирования инфекционного процесса выявил более выраженные неблагоприятные изменения клеточного и гуморального звена иммунитета при быстрой прогрессии заболевания (более низкое количество С04+-клеток и соотношение CD4/CD8, на фоне усиления апоптоза лимфоцитов, достоверно более высокая концентрация иммуноглобулинов и ЦИК), что сопровождалось неадекватной активацией макрофагально-го звена. В этой группе ВИЧ-инфицированных отмечалось достоверно более высокое содержание р24-антигена в плазме крови, по сравнению с группой с медленным прогрессированием (32±2,3 pg/ml и 64±5,2 pg/ml, соответственно).

Таким образом, уровень р24-антигенемии, определяемой с помощью ICD boosted-amplification модификации ИФА, коррелирует со степенью иммуносупрессии и скоростью прогрессии ВИЧ-инфекции и может использоваться как альтернативный прогностический маркер.

ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ВП-4 НА ПОКАЗАТЕЛИ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА

Сходова С.А.. Краснопрошина Л.И., Баталова Т.Н., Понурина Р.Л., Козлов J1.B.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН,

Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского М3 РФ, Россия

Ранее нами было установлено иммуномодулирующее действие вакцины ВП-4 на уровень лимфоцитов и иммуноглобулинов у детей с бронхолегочной патологией.

Целью настоящей работы является изучение действия ВП-4 па уровень антител к антигенам, входящим в состав вакцины (Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus и Escherichia coli) в слюне пациентов, получавших В11-4 вакцину назально-оральным методом. Под наблюдением находились 8 детей в возрасте от 4 до 12 лег и 5 взрослых. Схема применения ВП-4 состояла из 3 назальных и 6-7 перо-ральных введений препарата с интервалом 3-4 дня. Длительность курса (26+ 4) дня. Слюну и образцы сыворотки собирали до и че-рсз 7-10 дней после окончания вакцинотерапии ( у детей), у взрослых дополни-тельно через 1, 2, 3 месяца. Образцы слюны исследовали на наличие иммуноглобулинов класса G, А, М и антител к антигенам вакцины изотипа G, А, М с помощью метода ELISA. Уровень IgG, IgA, IgM до и после вакцинации находи-лись в пределах возрастной нормы. Антитела изотипа IgG к антигену St.aureus определялись в слюне пациентов до вакцинации не более чем у 50% лиц в низких титрах ( 1/2 - 1/32 ), после вакцинации их титр не возрастал, антитела изо-типа IgG к антигенам Kl.pneumoniae , Proteus vulgaris определялись у 80% привитых в титрах (1/2 -1/16), антитела к E.coli - в 100% случаев в низких титрах. Титры антител к антигенам вакцины изотипа IgM определялись в титрах (1/8 - 1/128) у 90% лиц. Наиболее интересные результаты были получены относительно антител изотипа Ig A+sIgA. Их уровень к антигену St.aureus колебался от 1/128 до 1/512 после вакцинации - возрастал в 2 раза. Аналогичная динамика была получена в отношении ангигел изотипа IgA+sIgA к E.coli, KL pneumoniae, Proteus vulgaris, но при этом уровень этих антител был несколько ниже. После вакцинации их уровень возрастал незначительно.

Следовательно, в слюне содержатся главным образом антитела изотипа IgA, при этом их уровень превышает уровни антител изотипа IgM и IgG не менее чем на 2 порядка. Вместе с тем, при иммунизации взрослых пациентов вакциной ВП-4 уровень антител в сыворотке к составляющим вакцину антигенам изотипов Ig G, IgA, IgM не увеличивался в процессе вакцинации. Это косвенно свидетельствует о местном синтезе антител иммунокомпетентными клетками слизистой.

ЭКСПРЕССИЯ АДГЕЗИВНЫХ И АКТИВАЦИОННЫХ МАРКЕРОВ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ С.

Тарасюк В.В.. Черношей Д.А., Жмуровская Л.С., Титов Л.П.

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии,

Минск, Беларусь

Введение. В связи с ростом заболеваемости вирусным гепатитом С (ВГС) наблюдается постоянный интерес исследователей к изучению различных этапов развития клеточного иммунного ответа при данной патологии, как для вскрытия механизмов патогенеза заболевания, так и для прогнозирования течения и исхода инфекционного процесса, а также контроля проводимой терапии. Неспособность иммунной системы элиминировать вирус базируется на снижении эффективности ряда процессов иммунного ответа. При ВГС иммуно-зависимое воспаление локализуется в печени - органе, клетки которого имеют определенное сродство с иммунокомпетентными клетками (ИКК). Важным является миграция и активация CD4+ ThI типа и С08+-цитотоксических лимфоцитов, а механизмы активации и реализация этих функций ви-русспецифическими клонами в определенной мере зависит от степени экспрессии молекул адгезии и активации. В форми-

ровании анергии (неотвечаемости организма) и неэффективности противовирусного иммунного ответа важную роль также играют механизмы костимуляции и апоптоза. Выявление молекулярно-клеточных механизмов активации ИКК и апоптоза является важным направлением иммунологии гепатитов.

Цель исследования. Изучение экспрессии адгезивных и активационных маркеров лимфоцитами периферической крови больных вирусным гепатитом С.

Материалы и методы. Обследована периферическая кровь больных острым (38) и хроническим (42) г епатитом С. Параметры клеточного иммунитета оценены иммунофеноти-пированием CD - антигенов к CD3, 4, 8, 1 lb, 25, 95 и HLA-DR с помощью соответствующих моноклональных антител (МедБиоСпектр, Москва). Учет реакции проводили с помощью проточного цитофлуориметра FACSCalibur (“Becton Dickinson”, США). Контрольную группу составили 25 здоровых лиц. Статистические расчеты выполнялись с применением пакета прикладных программ STATISTICA for WINDOWS 97 (StatSoft Inc, USA).

Результаты. У больных острым гепатитом С значительно повышена экспрессия молекулы межклеточной адгезии (CD1 lb), маркеров активации ИКК (CD25 и HLA-DR) и апоптоза (CD95) - до 1 9,3 1± 1,63, 11,00±0,80; 13,63±1,29 и 37,19±3,01 соответственно; р<0,05 по сравнению с группой контроля. При хроническом гепатите С экспрессия адгезивных и активационных маркеров умеренно повышена. Экспрессия CDllb указывает на стимуляцию иммунных клеток медиаторами, высвобождающимися в результате развития инфекции, что, вероятно, отражает степень выраженности воспалительных реакций в организме больного. Экспрессия раннего и позднего маркеров активации (CD25, HLA-DR) позволяет предположить, что МПК представляют собой достаточно активные зрелые ИКК, способные экспрессировать ТРК, молекулы адгезии и рецепторы цитокинов. Однако, экспрессия рецептора апоптоза (CD95 ) на МПК больных ВГС значительно повышена (р<0,05) по сравнению с контрольной группой, что отражает процессы избыточной и неэффективной поликлональной стимуляции лимфоцитов крови. Исходя из вышесказанного, нами для характеристики сочетанной экспрессии ИКК молекул апоптоза и активации и их дисбаланса вводятся индексы апоптоза: 1)CD95/CD25 и 2)CD95/HLA-DR. При ОГС соотношение CD95/CD25 достоверно увеличено по сравнению с контролем (р<0,05), а при ХГС данный индекс повышен практически в 3 раза (р<0,001), что свидетельствует

о повышенной и, вероятно, “неправильной” активации МПК. При этом соотношение CD95/HLA-DR как при ОГС, так и при ХГС повышается незначительно, по сравнению с CD95/CD25, но различия с контролем также достоверны (р<0,05). Эти показатели могут иметь прогностическое значение для оценки прогноза и исхода заболевания, эффективности терапии.

Заключение. Степень угнетения активационной и адгезивной способности иммунных клеток периферической крови является признаком патогенетически важного дефекта иммунного ответа и перспективным прогностическим критерием хронизации вирусного гепатита С. Чрезмерная экспрессия CD95 па ИКК указывает на развитие иммунного ответа по пути апоптоза, что может играть важную роль в формировании вирусспецифической аиергии иммунной системы и неэффективности противовирусного ответа при ВГС. Патогенетическая роль С095-зависимых механизмов гибели лимфоцитов носит двойственный характер: с одной стороны это ограничение иммунного воспаления и циготоксичности в отношении гепатоцитов, с другой стороны - уменьшение интенсивности противовирусного иммунитета и ускользание вируса от эффекторных механизмов иммунной системы.

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ И СИСТЕМЫ ИНТЕРФЕРОНА У НАРКОМАНОВ С МАРКЕРАМИ НВУ И НСУ ИНФЕКЦИИ

Тефанова В.. Приймяги Л., Талло Т.

Институт экспериментальной и клинической медицины,

Таллинн, Эстония

Изменение активности и функциональных резервов нейт-рофильных гранулоцитов (НГ) периферической крови отражают защитные и адаптационные возможности организма при инфекционном процессе, в том числе и вирусной природы. Система интерферона (1РИ) является интегральной частью иммунной системы, и уровнем продукции интерферонов в значительной мере определяется полноценность ответной реакции организма на вирусную инфекцию. Установлено воздействие различных наркотических средств, и особенно их суррогатов, на иммунную систему, при этом органом- мишенью служит печень.

Цель работы - оценить функциональную активность НГ периферической крови и системы интерферона у потребителей внутривенных наркотиков, инфицированных вирусами гепатита В (НВУ) и С (НСУ).

Материалы и методы. Обследовано 47 мужчин-нарко-манов, использующих внутривенное введение наркотических веществ, преимущественно из группы опиатов и эфедрона, в возрасте 18-41 года. Продолжительность наркомании в 70% случаев составила в среднем от 1,5 до 5 лет. Смешанная форма инфицирования (одновременное выявление специфических маркеров НВУ инфекции и антител к вирусу гепатита С) была диагностирована у 76,6% обследованных. Маркеры хронической НВУ инфекции с низкой репликативной активностью (HBsAg+/aHBcIgM+//aHBew') определялись в 23,7% случаев. Только 7 (14,9%) наркоманов не имели маркеров НВУ и НСУ

Определение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов проводили по следующим показателям: адгезивной способности НГ, активности ферментов миелоперок-сидазы (МПО) и кислой фосфатазы (КФ) и бактерицидному потенциалу клеток (НСТ-тест) в покое и при стимуляции оп-сонизированным зимозаном. Результаты учитывали спсктро-фотометрически. Фагоцитарную активность НГ оценивали в тесте с латексом.

Показатели интерферонового статуса (а-, у- и сывороточный 1ПМ) определяли в пробах цельной крови. В качестве индуктора а-1ПЧ использовали вирус Сендай с активностью 1280 ГЕ/мл, для индукции y-IFN - фитогемаплютинин Р (5 мкг/мл). Титрование 1Р1Ч проводили микрометодом, используя перевиваемую линию клеток человека Ь-41 и вирус энцефаломиокардита в качестве тест-вируса.

Результаты исследования выявили уменьшение процента фагоцитирующих нейтрофильных гранулоцитов при сохранении их поглотительной способности у половины обследованных наркоманов, независимо от наличия или отсутствия инфицированное™ вирусами гепатита В и/или С. Показатели адгезии были достоверно выше, чем в контроле (Р<0,05), только у лиц без маркеров НВУ или НСУ. Нарушение метаболической активности нейтрофилов периферической крови отражают низкий уровень спонтанной и стимулированной активности, как КФ (Р<0,001) у всех обследованных, так и МПО - у большинства наркоманов, независимо от профиля маркеров и активности НВУ или НСУ инфекции. Статистически значимое (Р<0,001) снижение показателей стимулированного НСТ - теста и индекса стимуляции свидетельствует

об уменьшении бактерицидных резервов фагоцитирующих клеток у всех обследованных наркоманов.

Сравнительный анализ показателей интерферонового статуса выявил достоверное (Р<0,05) снижение уровня продукции а- и у- IFN только у наркоманов с маркерами активной хронической НВУ инфекции и антителами к вирусу гепатита

С, как по сравнению с контролем, так и с группами инфицированных и неинфицированных НВУ и НСУ лиц. У неинфи-цированных наркоманов показатели продукции IFN не отличались от таковых у лиц контрольной группы. Содержание циркулирующего в сыворотке крови IFN у всех инфицированных наркоманов было достоверно (Р<0,05) выше, чем в контроле.

Заключение. Выявленные изменения функциональной активности нейтрофилов периферической крови у наркоманов носили неспецифический характер и были обусловлены не только наличием маркеров инфицированное™ вирусами гепатитов В и/или С, но и токсическим воздействием употребляемых наркотических веществ. Сопутствующая наркомания не оказывала существенного влияния на функциональное состояние системы интерферона при длительности приема опиатов и эфедрона не более 5 лет. Уровень продукции а-и у- IFN зависел, преимущественно, от активности инфекционного процесса.

АНТИГЕННЫЕ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ПЕПТИДОВ-ИМИТАТОРОВ ЭПИТОПА БЕЛКА GP41 ВИЧ-1, УЗНАВАЕМОГО НЕЙТРАЛИЗУЮЩИМИ АНТИТЕЛАМИ 2F5

Туманова О. [О.. Кувшинов В. Н., Ильичев А. А.

Научно-исследовательский институт биоинженерии, ГНЦ ВБ “Вектор",

Кольцово, Новосибирская обл., Россия

Уникальные возможности для поиска пептидов-имитаторов природных антигенов предоставляют пептидные фаговые библиотеки, включающие все возможные пептиды, экспонированные в составе одного из поверхностных белков нитчатого бактериофага (fd, М13 и др). Пептиды-ими-таторы могут не только перекрестно реагировать с антителами к различным изолятам вируса, но и индуцировать при иммунизации образование антител, обладающих протектив-ной активностью по отношению к широкому спектру вирусных изолятов.

Целью данного исследования является поиск пептидов-имитаторов эпитопа белка gp41 ВИЧ-1, узнаваемого вирус-нейтрализующими МКА 2F5, изучение их иммуногенных свойств, а также определение нейтрализующей активности антисывороток in vitro.

Результаты. Аффинную селекцию пептидов-имитаторов из фаговой пептидной библиотеки проводили е вируснейт-рализующими моноклональными антителами 2F5, узнающими консервативный для генетически различных изолятов ВИЧ-1 эпитоп белка gp41. Эпитоп считается одним из наиболее перспективных для создания вакцины. Из обогащенной фаговой библиотеки после проведения каждого раунда аффинной селекции отбирали индивидуальные фаговые клоны. Специфичность связывания выделенных фагов с МКА подтверждали методом иммуноферментного анализа (ИФА). Из 157 клонов по результатам ИФА было отобрано 115 фаговых клонов. Проведено секвенирование одноцепочечной ДНК 64 клонов.

Изучение иммуногенных свойств пептидов. Для иммунизации кроликов было выбрано три бактериофага, экс-

Табл. 1. НЕЙТРАЛИЗУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ СЫВОРОТОК КРОЛИКОВ

Пептиды, использованные для иммунизации Номер кролика % ингибирования белка р24 в опыте относительно контроля при разных разведениях вируса

1:10 1:1000

РЮ\Л/5РОР\Л/515Е1т 1 69.84 89.79

(первая группа) 2 68.10 86.57

И^РР^ОМ/Ш1 1 87.49 83.85

(вторая группа) 2 0 59.21

урсуамсошшю (третья группа) 1 - 0

попирующих в составе минорного белка оболочки следующие пептиды: RDWSFDRWSLSEFWL

Через 21 неделю от начала иммунизации титр специфических anTH-gp41 антител у кроликов первой группы составил 1:800 и 1:50, а у кроликов второй и третьей групп 1:50.

Нейтрализация ВИЧ-1 in vitro. Реакцию нейтрализации проводили с сыворотками кроликов при постоянном разведении сывороток (1:10) и различных разведениях вируса (ВИЧ-

1 ГКВ-4046 ,1:10 и 1:1000) на культуре чувствительных клеток МТ-4. В качестве отрицательного контроля в каждом эксперименте использовали сыворотку того же животного, отобранную до начала иммунизации (табл. 1).

Как видно из таблицы, сыворотки кроликов первой и второй групп содержат антитела, способные нейтрализовать ВИЧ-1.

Заключение. Таким образом было показано, что с помощью техники фагового дисплея можно получать пептиды, имитирующие эпитопы ВИЧ-1 по антигенным и иммуноген-пым свойствам, в том числе по способности индуцировать образование нейтрализующих антител. Эго позволяет, не изучая особенностей антигенной структуры вируса, экспериментально выбирать пептиды-кандидаты в полиэпитопную вакцину против ВИЧ-1.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРИ РАЗНЫХ ФОРМАХ ПЕРВИЧНОЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Тюлькова Т.Е., Подклетнова Л.Ф., Чебышева Е.В., Кашуба Э.А.. Чугаев Ю.П., Шуравина М.Г.

ПНИЛ ЮУО РАМН,

Городская иммуноаллергологическая поликлиника, Тюменская медицинская академия,

Областной противотуберкулезный диспансер (ОПТД),

Тюмень, Россия

Введение. С 1991 по 2000 год существенно ухудшились эпидемиологические показатели по туберкулезу (ТБ) среди детей: заболеваемость увеличилась в 2-2,5, а показатель риска ежегодного инфицирования МБ'Г в 1,5-2 раза. В распознавании М. tuberculosis (МБТ) включаются многие рецепторы, в частности, рецептор CD 14. Компоненты клеточной стснки

МБТ побуждают макрофаги к секреции провоспалитсльных цитокинов, уровень которых отражает запуск иммунных механизмов в борьбе с инфекционным агентом и формирование пути развития туберкулезной инфекции.

Цель исследовании. Выявить возможные механизмы, приводящие к активации туберкулезной инфекции и критерии перехода доклинических форм иифицированиости МБТ в локальный туберкулез.

Материалы и методы исследования. Экспрессию рецептора (СО 14) на моноцитах определяли методом проточной цитофлюорометрии, концентрацию цитокинов (IЬ-1 (3 и Т!4^-а) - методом ИФА (“Протеиновый контур”, СПб). Иммунологическое обследование проведено у детей 3-х групп:

1-ая группа имела вираж туберкулиновой пробы и получала специфическую химиопрофилактику у фтизиатра, п= 19;

-2-ая группа имела постепенное нарастание туберкулиновой пробы более 2-х лет, п=20;

-3-я группа с легочным туберкулезом, получавшие специфическую химиотерапию в ОПТД, п=22.

Результаты и обсуждение. Выявлено, что в 1-й группе наблюдалось достоверное относительно нормы снижение экспрессии рецептора С014 59,17±3,5% (р<0,01), во 2-ой и 3-ей группах этот показатель приближался к норме (73±6,17% и 83,77±1,84% соответственно). Содержание в сыворотке Т№-(X в исследуемых нами группах детей было достоверно выше нормальных показателей: в 1-ой 1301 ±521 пг/мл, во 2-ой -713±201 пг/мл и в 3-ей -546±153 пг/мл. Отличие данного показателя (р<0,01) установлено между 1-й и 3-й группами. Достоверно высокий относительно контроля уровень 1Ь-1 выявлен у детей 2-ой и 3-ей групп 1483±283 и 852± 178 пг/мл соответственно (р<0,01), и несколько меньше в 1-ой 562±327 пг/мл. Обращает на себя внимание обратная зависимость между уровнем экспрессии 0314 на моноцитах и концентрацией Т№-ос. У детей 3 группы прн увеличение экспрессии С014 происходит снижение концентрации ТЫР-а. В то же время в 1-й группе при низкой экспрессии СО 14 концентрация Т1МР-а повышалась (р<0,01). Иная зависимость наблюдалась между С014 и концентрацией 1Ь-1р. Во 2-ой группе при среднем уровне экспрессии СО-14 содержание 1Ь-1(3 был максимально высоким. В группе 1 снижение экспрессии СО-14 одновременно сопровождалось также понижением уровня 1Ь-1р, а п группе 3 при высоком уровне СО-14 определялись средние значения 1Ь-1 (3.

Заключение. Таким образом, проведенное исследование выявило, что одним из возможных механизмов перехода доклинических форм инфицированное™ МБТ (1-я и 2-я группы) в локальный туберкулез является высокий уровень экспрессии на моноцит ах СО-14 при умеренном повышении концентрации 1Ь-1 (3 и ТЫК-ос.

ПАРАМЕТРЫ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ДИНАМИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРОЦЕССА

Тярасова К.Г.. Ситкевич Р.В., Браженко Н.А., Галебская Л.В., Бельтюков П.П., Паукер М.Н.

Санкт- Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия

Целью исследования явилось выяснение закономерностей изменения некоторых показателей гуморального иммунитета в ходе развития туберкулезной инфекции. Обследованы две группы больных: у больных I группы туберкулез был выявлен менее чем за 2 месяца до обследования, и продолжительность общепринятой химиотерапии не превышала этот срок; больные II группы находились на лечении в течение 6-12 месяцев. В сыворотке крови обследованных и контрольных лиц определяли концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом преципитации ПЭГ-6000, а также параметры активации системы комплемента с помощью кинетического метода. При определении активности комплемента регистрировали величину индукционного периода комплемент-зависимого лизиса эритроцитов кролика и скорость гемолиза. У вновь выявленных больных туберкулезом (I группа) наблюдалось трехкратное, по сравнению с нормой, повышение уровня ЦИК и признаки активации комплемента, проявляющиеся в уменьшении индукционного периода. У многих больных этой группы комплемснт-зависимый гемолиз начинался сразу после добавления гетсрологичных клеток, т.е. индукционный период был близок к нулю.

При оценке параметров функциональной активности СЗ компонента комплемента в опытах с применением реагента для определения СЗ в сыворотках больных I группы также было выявлено достоверное уменьшение продолжительности иидукцион-ного периода по сравнению с сыворотками группы контрольных лиц. Быстрая сборка комплексов мембранной атаки, однако, не сопровождалась заметным увеличением скорости гемолиза. У больных II группы уровень ЦИК также был увеличен, но в меньшей степени, чем при вновь выявленном туберкулезе. Параметры активации комплемента у больных II фуппы не отличались от контроля. При проведении корреляционного анализа установлено, что в отличие от здоровых доноров, у которых имеется обратная зависимость в величинах индукционного периода и уровня ЦИК, в обеих группах больных туберкулезом эти параметры оказались независимыми.

Полученные данные позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, на ранних стадиях туберкулезного процесса выявлено резкое уменьшение индукционного периода ком-племенг-зависимого гемолиза, не имеющее четкой корреляции с повышением уровня ЦИК. Во-вторых, в процессе лечения заболевания наблюдается нормализация параметров гуморального иммунитета.

ГЕПАТИТ Е В РАЗЛИЧНЫХ ГРУППАХ НАСЕЛЕНИЯ ЭНДЕМИЧНЫХ И НЕЭНДЕМИЧНЫХ РЕГИОНОВ

Федорова О.Е.*, Алаторцева Г.И., Замятина Н.С.*, Борзых О.А., Павлов Н.Н., Кузина Л.Е., Гольцов В.А., Кузин С.Н., Зверев В.В.

НИИ вирусных препаратов им. О. Г.Анджапаридзе РАМН, *Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН,

Москва, Россия

Гепатит Е (ГЕ) считается эндемичным заболеванием для стран с жарким климатом с неадекватными условиями водо-

снабжения и канализации. В странах с умеренным климатом ГЕ регистрируется в виде редких случаев, связанных с завозом из эндемичных регионов. Установлено, что антитела к вирусу гепатита Е (анти-ВГЕ) присутствуют у населения других районов мира, включая индустриально развитые страны, где частота антител у здоровых лиц составляет 1-3%.

Целью настоящей работы являлось изучение распространения антител к вирусу гепатита Е (анти-ВГЕ) в различных группах населения эндемичных и неэндемичных районов с использованием наборов для выявления анти-ВГЕ “Abbott Diagnostika” (Германия) и “ВГЕ-скрин” (НИИ вирусных препаратов РАМН), созданных на основе генно-инже-нерных аналогов структурных белков вируса гепатита Е (ВГЕ). В популяции европейской части России, считающейся неэдемичной для ГЕ, частота анти-ВГЕ составила 1,7%. В определенных категориях больных с поражениями печени и при заболеваниях, не связанных с первичным поражением печени, частота анти-ВГЕ, была значительно выше. Эти группы составили регулярные доноры крови с повышенным уровнем ферментов печени (5,3%), больные с психическими расстройствами (11,9%), заключенные с длительным сроком пребывания в местах лишения свободы (8,0%), ВИЧ-инфи-цированные (11,1%), больные гемофилией (4,8%) и медицинские работники (5,1%). Наиболее часто анти-ВГЕ выявлялись у больных с аутоиммунными поражениями печени: при аутоиммунном гепатите (12,2%) и при первичном циррозе печени (41,4%).

Частота обнаружения анти-ВГЕ у жителей Якутии оказалась следующей: у доноров крови - 0,0%; у медицинских работников - 6,0%; у больных отделения гастроэнтерологии -

1,4%; у больных венерическими заболеваниями - 3,5%.

При обследовании населения эндемичного района Киргизии частота обнаружения анти-ВГЕ была значительно выше, чем в неэндемичных регионах. У детей школьного возраста она составила 14,0%; у здоровых взрослых - 9,6%; у больных вирусным гепатитом -12,7%; у лиц после нескольких гемодиализов - 53,6%; у больных гепатитом неизвестной этиологии - 37,6%.

АП0ПТ03 И ПРОЛИФЕРАЦИЯ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК ПРИ ФОРМИРОВАНИИ ИММУННОГО ОТВЕТА К ХОЛЕРЕ ПО ДАННЫМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛЮОРИМЕТРИИ

Фирстова В.В., Щуковская Т.Н., Кравцов А.Л., Лоцманова Е.Ю., Емельянова Н.В., Резников Ю.Б., Кутырев В.В.

Российский научно-исследовательский противочумный институт “Микроб”,

Саратов, Россия

В результате стимулирующего сигнала иммунокомпетен-тные клетки могут выбрать позитивную (пролиферация, диф-ференцировка и т.д.) или негативную (апоптоз) формы ответа. Для формирования полноценного иммунного ответа на чужеродные антигены в организме должен поддерживаться баланс между апоптотическими и пролиферирующими клетками иммунной системы.

Методом импульсной проточной цитофлуориметрии учитывали содержание апопототических и пролиферующих клеток крови, селезенки, костного мозга кроликов после иммунизации их холерной бивалентной химической таблетирован-ной вакциной (Россия, Саратов, РосНИПЧИ “Микроб”), ави-рулентным штаммом V.cholerae eltor КМ-184, холерной вакциной Cholcrae-Imstoff (Swiss Serum Institute), а также после

заражения вирулентным штаммом У.сЫЯегае еНог Р-3122 внут-рикишечно методом К1ТАЯО.

Холерная бивалентная химическая таблетированная вакцина не вызывала нарушения иммунологического гомеостаза вакцинированного организма и обеспечивала 100% защиту кроликов от холерной инфекции. В сроки, соответствующие полностью сформированному противохолерному иммунитету в ответ на иммунизацию вакцинами Ус1ю1егае еког КМ-184 и С1ю1егае-1т$и)1Т, в крови животных наблюдалось значительное количество апоптотических лейкоцитов. Соответственно, эффективная защита, при моделирования холерной инфекции на этих кроликах, наблюдалась в 80 - 60% случаев.

Иммунизация кроликов холерная бивалентная вакцина обеспечивала 100% выживаемость (120 ч) экспериментальных животных после заражения их вирулентным штаммом У.с1ю1егае еког Р-3122.

Кролики, иммунизированные авирулентным штаммом Ус1ю1егае еког КМ-184 также характеризовались достаточно высоким уровнем защиты в КГГАНО-модели (80%) экспериментальных животных от холерной инфекции. У зараженных холерой иммунных кроликов отмечалось увеличение пролиферирующих спленоцитов и клеток костного мозга.

После иммунизации животных холерной бивалентной химической таблетированной вакциной с последующим заражением кроликов холерой количество пролиферирующих клеток селезенки составило 39,03±1,3%, костного мозга -52,45±2,1%, а при иммунизации вакцинным штаммом Ус1ю1егае еког КМ-184 - 48,2±5,2% и 61,06±6,7%, соответственно.

Полученные данные свидетельствуют о возможности разработки нового подхода к оценке повреждающего и стимулирующего действия препаратов для оценки иммунобиологических свойств вакцин.

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ГЛАЗ

Хокканен В.М.. Симбирцев А.С., Соловьева М.В., Ионова О.Г.

ГУ Санкт-Петербургский НИИ фтизиопульмонологии Минздрава России, ГНЦ ГНИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург

Туберкулез глаз (ТГ) является проявлением общей туберкулезной инфекции с развитием специфической гранулемы, формирующейся в результате иммунологического конфликта, в тканях глаза. Поэтому, изучение общего иммунного статуса у больных туберкулезными поражениями глаз является актуальным.

Цель работы - изучение количественных и функциональных показателей клеток иммунного ответа у больных ТГ в различных фазах активности процесса.

Материалы и методы. Больные ТГ, у которых определяли функциональную активность Т-лимфоцитов (СБЗ , СЭ4 ,С08 ,СЭ16 ,С025 ), индуцированную продукцию 1Ь-2, 1Ь-8, уровень противотуберкулезных антител в РГ1К, РПГ, ИФА. Рассматривались средние величины показателей в группах исследования с использованием параметрического критерия Сгыодента.

Основные результаты. Обследованы 27 больных с ТГ, обоего пола в возрасте от 19 до 60 лет. По фазе активности туберкулезного воспаления больные были разделены на 3 группы: 1 группа - активная фаза (13 человек), 2 группа - фаза затихания (7 человек), 3 группа - неактивная фаза (7 человек).

Сравнительный анализ популяционного состава лимфоцитов периферической крови у больных в различных фазах активности процесса показал достоверное увеличение содержания CD3+ зрелых лимфоцитов у больных при переходе специфического воспаления из активной фазы в неактивную (59±0,5 и 70±0,3 соответственно). Количество клеток с фенотипом CD4 сохранялось на одном уровне во всех группах (36±0,3; 36,5±0,2; 31±0,8), число CD8 в 1 и 2 группах было снижено (24±0,8 и 19,7±0,3 соответственно), в 3 группе - в пределах нормы. Индекс регуляции CD4 /CD8 у больных ТГ в активной фазе и фазе затихания в большинстве случаев был на уровне физиологической нормы, но определялось достоверное его снижение у больных с неактивным процессом (0,74±0,9). Изменений показателей рецепторов к IL-2 (CD25 ) и количества NK- клеток (CD 16 ) во всех группах не отмечалось. Индуцированная продукция 1L-2 во всех группах сохранялась в рамках нормальных величин, а индуцированная продукция IL-8 была повышена и наблюдалась тенденция к ее увеличению при переходе воспалительного процесса в неактивную фазу (1 группа - 6321 ±0,2; 2 группа - 7900±0,6;

3 группа - 8572±0,5).

Противотуберкулезные антитела в реакции РПК были повышены в несколько раз во 2 и 3 группах, в реакции РПГ -лишь у больных ТГ в фазе затихания.

Таким образом, наиболее информативными показателями, отражающими характер воспаления у больных ТГ являются CD3 , CD4 /CD8 , интерлейкин-8, а также РПК и РПГ. Эти данные, определяемые в динамике, в совокупности с клинической офтальмологической картиной, могут способствовать прогнозированию течения заболевания и своевременной коррекции противотуберкулезной терапии.

СЫВОРОТОЧНЫЙ УРОВЕНЬ РАСТВОРИМЫХ ФОРМ HLA-DR АНТИГЕНОВ ПРИ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ G

Худякова Н.Е.. Птицына Ю.С., Новиков Д.В., Мартынова Т.Г., Новиков В.В.

Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной, Нижний Новгород, Россия

Введение. Иммунный ответ на вирус гепатита G (HGV) характеризуется особенностями, механизм реализации которых остается не изученным. Показано, что РНК вируса обнаруживается в крови инфицированных лиц чаще всего в отсутствие антител к поверхностному белку Е2 (анти-Е2), при этом псрсистенция вируса в отсутствие антител может длиться годами. При сероконверсии, приводящей к появлению анти-Е2-антитсл, как правило, происходит исчезновение РНК вируса. Иммунологические механизмы такого “переключения”, вероятно, ответственны за элиминацию вируса из организма. Экспрессирующиеся на поверхности профессиональных антиген-презентирующих клеток антигены главного комплекса гистосовместимости II класса играют центральную роль в формировании Т-хелперного звена иммунного ответа. Растворимые формы HLA-DR молекул (sHLA-DR) циркулируют в биологических жидкостях и имеют важное иммунорегуляторное значение, ограничивая иммунный ответ, реализуемый Т-хел-перным звеном. Сывороточный уровень sHLA-DR антигенов изменяется при заболеваниях различной природы.

Цель и задачи. Целью данной работы являлось определение содержания sHLA-DR в сыворотке крови больных вирусным гепатитом G.

Материалы и методы. Были исследованы образцы сыворотки крови больных вирусным гепатитом G в трех группах:

1). РНК НСУ\ анти-Е2 (п=67); 2). РНК НОУ+, анти-Е2+ (п=8);

3). РНК НОУ, анти-Е2+ (п=15). Сравнение проводили с контрольной группой здоровых доноров (п=54), у которых не было выявлено ни РНК НОУ, ни антител к Е2-гликопротеину вируса гепатита О, а также с группой доноров, отрицательных по анти-Е2 (п=198). Наличие РНК НОУ исследовали с помощью ПЦР. Содержание яНЬЛ-ЭЯ определяли, используя разработанный авторами иммуноферментный способ с применением моноклональных и поликлональных антител. Концентрацию растворимых антигенов БНЬА-Вк оценивали, переводя единицы оптической плотности в условные единицы (и/ш1). Статистическую обработку данных проводили с помощью непараметрических методов анализа.

Основные результаты. У РНК НСУ+, анти-Е2 больных выявлено статистически достоверное повышение уровня яНЬЛ-ЭЯ молекул в сравнении как с группой РЫК НвУ, анти-Е2‘ доноров, так и с группой отрицательных по анти-Е2 доноров, у которых РНК НОУ не определяли. При этом контрольные группы статистически достоверно не различались, несмотря на то, что во второй контрольной группе уровень яНЬА-ОК был в 1,5 раза выше, чем в первой. Различия, видимо, связаны с возможным присутствием во второй группе доноров, положительных по РНК НОУ, частота встречаемости таких доноров по литературным данным колеблется в пределах от 2 до 8%. У больных гепатитом в, имеющих в крови как РНК НОУ, так и анти-Е2, уровень яНЬЛ-ЭЯ молекул сохранялся в пределах нормы. Группа РНК НОУ*, анти-Е2+лиц также имела нормальную концентрацию яНЬА-ОЯ молекул.

Заключение. Обнаружен повышенный уровень яНЬА-ОЯ молекул в крови РНК НОУ+, анти-Е2‘ больных гепатитом О, что свидетельствует о возможном участии растворимой формы НЬА-ОЯ молекул в реализации молекулярных механизмов иммунного ответа на НвУ и в формировании особенностей течения вирусного гепатита в.

ЧАСТОТА НАРУШЕНИЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК ПРИ ВПЕРВЫЕ ВЫЯВЛЕННОМ ТУБЕРКУЛЁЗЕ ЛЕГКИХ

Чернушенко Е.Ф., Кадан Л.П., Ильинская И.Ф., Подгайная Е.А.

Институт фтизиатрии и пульмонологии АМН, Киев, Украина

В начале XXI столетия туберкулез продолжает оставаться актуальной проблемой медицины. Известно, что решающая роль в патогенезе туберкулеза принадлежит иммунологическим механизмам, которые обусловливают характер заболевания и особенности его клинического течения. Фагоцитирующие клетки (ФК) принимают участие в иммунном ответе на всех его этапах - от поглощения возбудителей, их переваривания, презентации антигенов лимфоцитам и продукции цито-кинов, до элиминации поврежденных клеток и циркулирующих иммунных комплексов. Целью нашего исследования было выяснение частоты нарушений функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) и моноцитов (Мц) периферической крови у больных впервые выявленным туберкулёзом легких. Для этого 45 пациентам при поступлении и при выписке из стационара проводилось иммунологическое обследование. В качестве контроля обследовано 17 практически здоровых лиц.

Ранее нами проведено сравнительное изучение реакций ФК периферической крови на неспецифические (латекс) и специфические (вакцина БЦЖ) для данной патологии объекты фагоцитоза. Показано, что применение БЦЖ позволяет

регистрировать динамику изменений функциональной активности, сохранения или истощения резервных возможностей клеток в процессе лечения. Была определена группа методов, наиболее информативных для оценки функционального состояния ФК и их резервных возможностей, которая использовалась в данном исследовании: оценивали способность НГ и Мц фагоцитировать микобактерии, опсонированные аутосывороткой больного и уровень активации в этих клетках кис-лородзависимого метаболизма после поглощения. Кроме того определяли содержание кислой фосфатазы в Мц, щелочной фосфатазы и катионных белков в НГ.

Установлено, что недостаточность функциональной активности ФК встречается у 97,7% обследованных больных и, несмотря на успешно проведенную противотуберкулезную терапию, остается у 62,5% пациентов. Наиболее часто регистрируется недостаточность фагоцитоза: нейтрофилоциты 37,5% и моноциты 53,1% больных неспособны полноценно поглощать БЦЖ. Снижается продукция метаболитов кислорода и активность фермента миелопероксидазы, что косвенно свидетельствует об ослаблении бактерицидных свойств фагоцитов.

Показано, что изолированная недостаточность ФК встречается чрезвычайно редко. Как правило, она сочетается с нарушениями в других звеньях иммунитета, а наиболее часто -это тотальный иммунодефицит с вовлечением как фагоцитирующих, так и лимфоидных клеток.

Сохранение, и даже усугубление у некоторых больных иммунологической недостаточности после завершения курса противотуберкулёзной терапии, позволяют предположить, что восстановление иммунологических показателей происходит позже, чем исчезновение клинических признаков болезни. Это может быть функциональное истощение клеток, но не исключено, что у этих лиц есть истинная (врожденная или приобретенная) недостаточность фагоцитов. В любом случае необходимо дальнейшее наблюдение за такими больными, так как, на наш взгляд, у них существует повышенный риск рецидива заболевания.

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РЕЦИДИВИРУЮЩИМ ГЕРПЕСОМ И ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ

Чесноков А.Б.. Савченко А.А., Ранкина Н.Ю., Шакина Н.А., Дорохина Н.А.

Краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД, Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

На первых этапах инфекции, когда в процесс еще не вступили Т-лимфоциты, именно макро- и микрофаги (в частности, лейкоциты крови) обеспечивают прогивоинфекционную защиту. Причем функция этих клеток у больных рецидивирующим герпесом и лиц инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) инфекции изучена недостаточно. Целью данного исследования явилось сравнительное изучение функциональной активности лейкоцитов у больных с рецидивирующей герпесвирусной инфекцией и ВИЧ-инфицированных лиц.

Обследованы ВИЧ-инфицированные лица и больные с манифестными проявлениями рецидивирующего герпеса. Первичный скрининг с целью выявления ВИЧ-инфицированных проводился на тест-системах “Скрин-ВИЧ” (Россия). Подтверждающая диагностика инфекции ВИЧ проводилась на тест-системах “ЭКОлаб-Вироностика IV” (Нидерланды).

Для подтверждения специфичности иммуноферментного анализа использовался метод иммунного блота фирмы Sanofi Diagnostics Pasteur (Франция). Диагноз рецидивирующей герпесвирусной инфекции устанавливался клинически и подтверждался обнаружением специфических к вирусу простого герпеса (ВГ1Г) иммуноглобулинов класса М и наличием антигена ВПГ в мазках-отпечатках с поверхности эрозий. Хе-милюминссцентный анализ функциональной активности лейкоцитов крови производился по методу De Sole P. et al. в модификации.

Обнаружено, что у ВИЧ-инфицированных статистически достоверно увеличена интенсивность пика спонтанной хеми-люминесценции лейкоцитов, при соответствующем повышении угла наклона кривой, угла падения и ес площади, но при снижении времени выхода на максимум. Параметры зимозан-индуцированной хемилюминееценции у лиц данной группы также достоверно превышают аналогичные показатели здоровых людей, но при отсутствии статистически достоверного снижения времени выхода на максимум. Выраженность продукции активных форм кислорода клетками белой крови при индукции зимозаном у лиц, инфицированных ВИЧ, значительно превышает повышенные показатели спонтанной хсмилю-минесценции.

У больных с рецидивирующей герпесвирусной инфекцией обнаружено снижение времени выхода на максимум и площади кривой спонтанной хемилюминееценции лейкоцитов крови, а также угла подъема и падения. Однако эти изменения относительно аналогичных показателей здоровых людей были не настолько выражены как у ВИЧ-инфицированных обследованных, что привело к появлению статистически достоверных различий и с группой лиц с ВИЧ-инфекцией. Кроме того, было установлено, что параметры зимозан-индуци-рованной хемилюминееценции клеток белой крови слабее отличаются от соответствующих параметров здоровых людей, но значительно отличаются от показателей ВИЧ-инфицированных лиц. Таким образом, функциональная активность лейкоцитов крови у ВИЧ-инфицированных лиц и больных с рецидивирующей герпесвирусной инфекцией превышает' аналогичные показатели здоровых людей, что определяется, прежде всего, ролью неспецифического иммунитета при вирусной инфекции. Однако, по данным хемилюминссцентного анализа повышение функциональной активности лейкоцитов у лиц с различными вирусными инфекциями неодинаково. Если у лиц с ВИЧ-инфекцией активируется как спонтанная, так и зимозан-индуцированная хемилюминесценция клеток белой крови, то у больных с рецидивирующей герпесвирусной инфекцией выявляется преимущественное увеличение интенсивности только спонтанной хемилюминесцснтной реакции.

ОСОБЕННОСТИ ДИНАМИКИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА ПОЛОСТИ РТА У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПАРОДОНТА СОЧЕТАЮЩИМИСЯ С ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЖЕЛУДКА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ

Нейзберг Д.М., Стюф И.Ю.*, Шабанова Л.Ф.*

Кафедра терапевтической стоматологии СПб ГМУ им. акад. И.П. Павлова,

* Кафедра клинической лабораторной диагностики СПбМАПО, Санкт-Петербург, Россия

Среди общей патологии, оказывающей значимое влияние на течение хронического генерализованного пародонтита (ХГГ1), важное место отводится язвенной болезни желудка и

двенадцатиперстной кишки (ЯБЖДК). Одними из основных причин осложненного течения ХГП при этой патологии называются иммунологические нарушения и возможное инфицирование полости рта Helicobacter pylori (HP).

Целью нашего исследования стала оценка динамики некоторых показателей местного иммунитета у больных с НР-ассоциированными ЯБЖДК и ХГП в процессе эрадикацион-ной терапии. Нами обследованы 37 пациентов с ХГП средней степени тяжести, сочетающимся с ЯБЖДК, которая в 100% была ассоциированна с HP инфекцией. Из 37 обследованных у 19 пациентов (51%) был обнаружен HP в полости рта методом полимеразной цепной реакции. Визуализация специфического фрагмента ДНК выполнялась элсктрофоретичсски с окрашиванием продукта реакции этидиум бромидом. Кроме того, нами были изучены такие факторы местного иммунитета полости рта как содержание в смешанной нестимулиро-ванной слюне лизоцима, slgA, IgG, IgE, IgM до и после проведения эрадикационой терапии. Для оценки пародонтально-го статуса применялись пародонтальные гигиенические индексы (Silncss-Loe, Федорова-Володкиной).

Все 37 обследованных пациентов получали эрадикацион-ную терапию по стандартным 7 и 10 дневным схемам. Из 19 HP-позитивных пациентов были составлены две основные группы в зависимости от последующей терапии. Пациентам первой группы (13 человек) с целью эрадикации HP в полости рта назначались ротовые ванночки с антибактериальными агентами хлоргексиднном биглюконатом 0.05% и метрогилом, что соответствует рекомендациям Российской группы по изучению HP (применение не менее двух антибактериальных агентов одновременно). Вторая группа (7 больных) по различным причинам не проводили эрадикационную терапию в полости рта. Контрольную группу составили 17 пациентов, у которых HP в полости рта обнаружен не был. У пациентов первой группы наблюдалась эрадикация HP в полости рта и в желудке, что подтверждено результатами повторных исследований. У 5 из 7 пациентов второй группы, после курса эрадикационной терапии, при повторных пробах вновь обнаруживался HP, что может быть связанно с отсутствием необходимой эрадикационной терапии в полости рта и обуславливать различие между группами по уровню редукции пародонгологических индексов. Статистически значимое различие было получено при сравнении таких показателей местного иммунитета полости рта как лизоцим, slgA, IgG в 1 и 2 г руппах после лечения. До лечения среднее содержание лизоцима в обеих группах составило 62,7±1,8, a slgA 32,7±2,11. После проведения эрадикационной терапии в первой группе содержание лизоцима 80±2,8, a slgA 67,4±3,38, а во второй - 65,0±1,27 и 41,i±2,6 соответственно (%% р=0.,0001). Такой характер динамики клинических и иммунологических показателей, определяет прогностическую значимость оценки местных защитных факторов полости рта при генерализованном пародонтите. Вероятно, влияние НР-ассоци-ированной патологии желудочно-кишечного тракта усугубляет дисбаланс снижением содержания IgA, еще более выраженным при наличии HP инфекции в полости рта. Это в свою очередь приводит к мобилизации защитных механизмов полости рта, что выражается в компенсаторном повышении активности лизоцима. Такая компенсаторная реакция оказывается относительно достаточной до момента присоединения HP инфекции в полости рта. При отсутствии эрадикационной терапии HP в полости рта результат сочетанного воздействия выражается нарастающим дисбалансом местных защитных факторов, что приводит к её декомпенсации и дальнейшему прогрессированию ХГП. Результатом исследования стала выработка алгоритма диагностики и эрадикации HP в полости рта для паро-донтологов и гастроэнтерологов.

ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ СЫВОРОТКИ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

Шульпекова Ю., Маммаев С., Лукина Е.А., Левина А.А., Ивашкин В.Т.

Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова, Гематологический научный центр РАМН,

Москва, Россия

Провоспалительные цитокины IL-1 (3, IL-6, TNFoc, цито-кины GM-CSF и TGF(31 тесно вовлечены в патогенез повреждения печени и развития системной воспалительной реакции при хроническом вирусном гепатите С (ХВГ С).

Материалы и методы. Обследованы 42 больных ХВГ С (15-78 лет). 30(71 %) больным проведена биопсия печени (степень гистологической активности оценивалась по Knodell, степень выраженность фиброза - по Desmet). Методом EL1S А определяли сывороточную концентрацию IL-ф, IL-6, TNFoc, GM-CSF и TGF(3l (“R&D systems”, США; “Immunotech”, Франция; “Протеиновый контур”, СПб). Контрольную группу составили 25 практически здоровых лиц.

Результаты. Уровень IL-ip (5,75±0,53 vs 5,31 ±0,85 пг/мл) и IL-6 (8,16±1,56 vs 7,1 ±1,4 пг/мл) у больных ХВГ С не отличался от контроля. Содержание TNFoc (27,01±3,90 vs 20,78±4,0 пг/мл), GM-CSF (14,9±2,8 vs 5,8±1,1 пг/мл) и TGF(3l (2645,1±443,6 vs 1115,4±125,1 пг/мл) у больных ХВГ С было достоверно повышено. Выявлена достоверная связь между концентрацией IL-6, TNFoc и выраженностью лихорадки (г= 0,36 и г= 0,46); IL-6, TNFoc и степенью увеличения селезенки (г=0,31 и г= 0,29); GM-CSF и индексом гистологической активности (г= 0,53), TGFpi и индексом гистологической активности (г= -0,59); GM-CSF и TGF(3l (г= -0,65).

Заключение. Цитокиновый профиль сыворотки крови больных ХВГ С имеет достоверные связи с рядом клинических и морфологических параметров, что свидетельствует о клинической информативности определения сывороточной концентрации цитокинов IL-6, TNFa, GM-CSF, TGFfil и целесообразности использования данных показателей для дополнительной характеристики особенностей течения ХВГ С.

ДИНАМИКА ФОРМИРОВАНИЯ НИЗКОАВИДНЫХ АНТИТЕЛ У НОВОРОЖДЕННЫХ ПРИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Эбралилзс Л.К.. Ведунова С.Л.,|Мальцева Н.Н.

Научно-исследовательский институт вирусных препаратов им. О.Г.Анджапаридзе, РАМН,

Москва, Россия

Цитомегаловирусная инфекция является одной из наиболее частых причин врожденной патологии плода и встречается у 0,2-3% новорожденных детей. При этом лишь у 10% инфицированных детей после рождения имеются клинические проявления инфекции, что не позволяет установить диагноз без применения лабораторных методов исследования. В последнее время значительно расширился арсенал методов для диагностики и изучения формирования иммунного ответ а при подозрении на врожденную цитомегаловирусную инфекцию. В настоящей работе обобщены результаты использования отечественной иммуноферментной тест-системы на основе выявления низкоавидных иммуноглобулинов G (IgG), разработанной в НИИ вирусных препаратов РАМН, для диагностики ЦМВИ у новорожденных детей.

Были исследованы сыворотки от 83 новорожденных детей в возрасте от 2-х недель до 1 года с подтвержденной внутриутробной цигомегаловирусной инфекцией и их матерей. При обследовании детей в возрасте 2-3 недель наблюдалось два варианта иммунного ответа. В первом случае индекс авид-ности (ИА) антител значительно превышал регламентируемый уровень(30%) и варьировал в пределах от 80% до 100%, что, по-видимому, связано с инфицированием матерей ЦМВ в первой половине беременности и экранированием иммунного ответа ребенка материнскими, трансплацентарно приобретенными высокоавидными антителами. Повторное обследование сывороток детей этой группы через 3 недели показало снижение индекса авидности антител до 25-28%.

Другой вариант иммунного ответа у детей раннего возраста характеризовался наличием низкоавидных антител (ИА ниже 30%) и, по-видимому, был связан с инфицированием матерей в более поздние сроки беременности. Это подтверждается тем, что в сыворотках матерей были выявлены низко-авидные антитела. В динамике наблюдения на более поздних сроках заболевания отмечено повышение ИА антител, что может свидетельствовать о формировании в организме инфицированных детей пула лимфоцитов, синтезирующих высо-коавидные антитела к ЦМВ.

Таким образом, метод определения уровня низкоавидных антител в ИФА в сочетании с результатами серологического и клинического обследования является надежным критерием для подтверждения врожденной ЦМВИ.

ДИАГНОСТИКА ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ НОВОРОЖДЕННЫХ МЕТОДОМ ВЫЯВЛЕНИЯ НИЗКОАВИДНЫХ АНТИТЕЛ

Эбралидзе Л.К.. Ведунова С.Л.,

Научно-исследовательский институт вирусных препаратов им.О.Г.Анджапаридзе, РАМН,

Москва, Россия

Учитывая актуальность ранней расшифровки этиологии заболевания при подозрении на герпетическую инфекцию у новорожденных, были проведены исследования по усовершенствованию лабораторной диагностики с использованием метода выявления низкоавидных “ранних” антител класса в (НААт). В предварительных строго контролируемых экспериментах на группе больных с подтвержденной герпетической инфекцией было установлено, что индекс авидности НААт меньше 30% свидетельствует о наличии острой первичной герпетической инфекции. При рецидивирующем течении заболевания индекс авидности в острой стадии заболевания составляет от 30 до 40%. Показатель авидности выше 41% указывает на наличие анамнестических, высокоавидных антител.

На основании комплексного обследования 6036 новорожденных и их матерей герпетическая инфекция была подтверждена у 5% новорожденных. У недоношенных детей герпетическая инфекция отмечалась в более высоком проценте случаев - у 132 из 2660 обследованных(4,9%) по сравнению с детьми, родившимися в срок - только у 26 из 3376 детей (0,77%). У 210 новорожденных возбудителем инфекции являлся ВГП-2 типа. У 225 новорожденых подтверждена внутриутробная герпетическая инфекция. Из них у 94 новорожденных и их матерей индекс авидности находился в пределах 15-32%. У остальных обследованных новорожденных низкоавидные антитела маскировались трансплацентарно приобретенными антителами. ИА был ниже материнских, находился в пределах 40-50%.

Мальцева Н.Н.

Через 1-2 недели отмечалось снижение этого показателя до 15-30%. У 64 новорожденных первые признаки герпетической инфекции были отмечены только после 30-х суток жизни, что связано с постнатальным инфицированием. Как правило, эти дети рождены от матерей с низким уровнем протсктивных антител к ВГП-1 типа (в пределах 1:100 - 1:400). В динамике наблюдения у них отмечалось 4-х и более кратное нарастание титров антител и появле-

ние маркеров острой инфекции к ВГП-1 типа с индексом авидности от 10 до 35%.

Таким образом, использование метода выявления низко-авидных антител позволило значительно расширить информативность серологического обследования при подозрении на наличие герпетической инфекции и предупреждения внутриутробного и постнатального инфицирования новорожденных.