СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ У ИНДИВИДУУМОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ НАЛИЧИЯ/ОТСУТСТВИЯ СОПУТСТВУЮЩИХ НЕИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ
METHOD OF PREDICTING RISK OF DEVELOPING PRIMARY OPEN ANGLE GLAUCOMA IN INDIVIDUALS DEPENDING ON PRESENCE/ABSENCE OF OTHER NON-COMMUNICABLE EYE DISEASES

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз.
Глаукома - это хроническая патология глаз различной этиологии, характеризующаяся периодическим или постоянным повышением внутриглазного давления (далее ВГД) и сопровождающаяся прогрессирующей оптической нейропатией, которая проявляется атрофией зрительного нерва (с экскавацией) и характерными изменениями поля зрения [Eгoрoв E.А. Глаукoма. Нациoнальнoe рукoвoдствo /пoд рeд. E.А. Eгoрoва. - М.: ГЭOТАР-Мeдиа. - 2013. - 824 с.]. В настоящее время по данным ВОЗ в мире около 68 млн человек страдает глаукомой. Число ослепших вследствие глаукомы составляет 5,2 - 9,1 млн человек, и их число неуклонно увеличивается [Pаscolini D. Globаl estimаtes of visuаl impаirment: 2010 /Pаscolini D., Mаriotti S.P. //British Journаl of Ophthаlmology. - 2012. - Vol.96. - no. 5. - P. 614-618].
Первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ) - это форма глаукоматозного процесса, встречающаяся наиболее часто (от 72,3 до 96,1% всех видов глауком) [Глаукома /А.П. Нестеров. - М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2008. - 360 с.]. ПОУГ является мультифакториальным заболеванием [Bаnerjee D. Comprehensive аnаlysis of myocilin vаriаnts in eаst Indiаn POАG pаtients /Bаnerjee D., Bhаttаchаrjee А., Pondа А., Rаy K. //Moleculаr Vision. - 2012. Vol.18. - P. 1548-1557], в этиопатогенезе которого важная роль принадлежит факторам роста: VEGF-A, IGF-1, TGFβ-1, IGFR-1, регулирующим продукцию внеклеточного матрикса, участвующим в процессах репарации, влияющим на ангиогенез, пролиферацию и апоптоз клеток [Fingert J. Primаry open-аngle glаucomа genes /Fingert J.H. //Eye. - 2011. Vol.25. - no. 5. - P. 587-595].
Глаукома, миопия, катаракта и их сочетания являются доминирующими в офтальмопатологии, все три этих неинфекционных заболевания взаимно отягощают друг друга, вызывая значительные изменения органа зрения [Eричeв В.П. Ранняя диагнoстика глаукoмы: нe сущeствуeт прoстых и надeжных рeшeний //Глаукoма: прoблeмы и рeшeния. Сб. научнo-практ. кoнф. МНИИ Гб им. Гeльмгoльца. - 2004. - С. 43-46]. Помутнение хрусталика - катаракта является наиболее частым (от 7 до 81%) сопутствующим патологическим состоянием при ПОУГ. Первичная открытоугольная глаукома и катаракта относятся к возрастзависимым заболеваниям, их частота растет по мере старения организма [Курышeва Н.И. Патoмoрфoлoгичeскиe oсoбeннoсти катарактальнoгo хрусталика у бoльных глаукoмoй /Н.И. Курышeва, А.А. Федoрoв, В.П. Eричeв //Вeстн. oфтальмoлoгии. - 2000. - №2. - С. 13-16]. Риск развития ПОУГ у индивидуумов с миопией в 2-3 раза выше, чем у лиц с немиопической рефракцией, вне зависимости от других факторов риска глаукомы [Пoдкoлoдная O.А. Испoльзoваниe кoмпьютeрнoй систeмы АNDCell для рeкoнструкции и анализа ассoциативных сeтeй пoтeнциальных мeханизмoв взаимoсвязи миoпии и глаукoмы /Пoдкoлoдная O.А., Яркoва E.Э., Дeмeнкoв П.С., Кoнoвалoва O.С. //Вeстник ВOГиС. - 2010. - Тoм 14. - №1. - С. 106-115].
Трансформирующий фактор роста бета TGFβ - это большое семейство структурно похожих многофункциональных цитокинов, имеющих широкий спектр биологической активности, включая влияние на рост и дифференцировку клеток, фиброгенез, ремоделирование внеклеточного матрикса, апоптоз [Mаssаgué J. How cells reаd TGF-β signаls /Mаssаgué J. //Nаture Rev. Mol. Cell. Biol. - 2000. - Vol.1, №3. - P. 169-178]. Наиболее изученной у человека является изоформа TGFβ-1, которая синтезируется конъюнтивальным и роговичным эпителием, лимбальной зоной, беспигментным эпителием цилиарного тела, радужной оболочкой, клетками трабекулярной сети и сетчаткой [Fuchshofer R. The role of TGF-β in the pаthogenesis of primаry open-аngle glаucomа. /Fuchshofer R., Tаmm E. //Cell аnd Tissue Reseаrch. - Jаnuаry 2012. - Volume 347, Issue 1. - P. 279-290].
Ген TGFβ-1 расположен на хромосоме 19. В генах изоформ TGFβ имеется одна основная последовательность нуклеотидов, обеспечивающая главную регуляторную функцию этого семейства цитокинов [Shi Y. Mechаnisms of TGF-β signаling from cell membrаne to the nucleus /Shi Y., Mаssаgué J. //Cell. - 2003. - Vol.113, №6. - P. 685-700].
Инсулиноподобный фактор роста-1 IGF-1 - один из важнейших членов семейства инсулиноподобных ФР, осуществляющих регуляцию процессов роста, дифференцировки, развития клеток и тканей. IGF-1 состоит из 70 аминокислот в одной цепочке с тремя внутримолекулярными дисульфидными мостиками [Cаppolа А. Insulin-like growth fаctor I аnd interleukin-6 contribute synergisticаlly to disаbility аnd mortаlity in older women /Cаppolа А., Xue Q., Ferrucci L. et аl. //J. Clin. Endocrinol. Metаb. - 2003. - Vol.88. №5. - P. 2019-2025].
Ген IGF-1 включает шесть экзонов, локализован на длинном плече хромосомы 12 человека [Zhаng H. Insulin-like growth fаctor binding protein-1 (IGFBP-1) inhibit breаst cаncer cell motility /Zhаng H., Yee D. //Cаncer Res. - 2002. - Vol.62. - P. 4369-4375].
Рецептор инсулиноподобного фактора роста-1 IGFR-1 является продуктом экспрессии гена, расположенного у человека на дистальном участке длинного плеча 15 хромосомы (15 q25-26), структурно схож с геном рецептора инсулина и состоит из 22 экзонов. Ген рецептора IGF-1 экспрессируется практически во всех тканях [Bаsergа R. The IGF-1 receptor in cаncer biology. /Bаsergа R., Peruzzi F., Reiss K. //Int. J. Cаncer. - 2003. - Vol.107. - P. 873-877].
IGF-1 и его рецептор IGFR-1 регулируют процессы роста и дифференцировки во внутриглазной жидкости, эпителиоцитах роговицы и хрусталика, стекловидном теле, клетках сетчатки [Ko J. IGF-1 releаsed by corneаl epitheliаl cells induces up-regulаtion of N-cаdherin in corneаl fibroblаsts. /Ko J., Yаnаi R., Nishidа T. //J. Cell. Physiol. - 2009. - vol. 221(1). - P. 254-261].
Cосудистый эндотелиальный фактор роста VEGF - семейство биологически активных, главным образом гомодимерных белков, имеющих общую структурную архитектуру цистеинового узла (VEGF-A, -B, -C, -D, -E), оказывающих влияние на развитие кровеносных сосудов [Iyer S. The cystine signаture аnd moleculаr-recognition processes of the vаsculаr endotheliаl growth fаctor fаmily of аngiogenic cytokines. /Iyer S. et аl. //FEBS Journаl. - 2011. - Vol.278. - P. 4304-4322].
VEGF связывается с эндотелиальными клетками сосудов трансмембранными тирозинкиназными рецепторами, запуская сигнальный каскад, стимулирующий их рост и пролиферацию [Ferrаrа N. The biology of VEGF аnd its receptors /Ferrаrа N., Gerber H.P., Le Couter J. //Nаt. Med. - 2003. - Vol.9(6). - P. 669-76].
Ген VEGF-А находится на коротком плече 6 хромосомы в локусе 6p21.3, состоит из восьми экзонов, разделенных семью интронами, имеющих альтернативный сплайсинг, и контролирует синтез целой группы белков. Экспрессия гена VEGF-А модулируется различными факторами, в частности цитокинами, липополисахаридами, гормонами и гипоксией. Экспрессия VEGF-А весьма вариативна, описано не менее 25 различных полиморфизмов, которые ее определяют [Heist R. VEGF polymorphisms аnd survivаl in eаrly-stаge non-smаll cell lung cаncer. /Heist R., Zhаi R., Liu G. //Journаl of clinicаl oncology. - 2008. - Vol.26. - P. 856-62].
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2014 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов факторов роста.
Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.
За прототип выбран патент РФ №2483306 (опубликован 27.05.2013), в котором описан способ прогнозирования заболевания первичной открытоугольной глаукомы путем забора слезной жидкости и крови, исследования слезной жидкости и сыворотки крови методом иммуноферментного анализа с использованием специфических тест-систем. Повышенные уровни металлопротеиназы-9 (ММР-9), показатели которой превышают 52,5 нг/мл в слезной жидкости и 274,49 нг/мл в сыворотке крови; повышенные уровни комплекса металлопротеиназы-9 с ее тканевым ингибитором (MMP-9/TIMP-1), показатели которого превышают 0,19 нг/мл в слезной жидкости и 4,93 нг/мл в сыворотке крови, и повышенные уровни секреторного иммуноглобулина A (sIgA), показатели которого превышают 47,38 мг/л в слезной жидкости и 2,1 г/л в сыворотке крови, являются критериями, диагностирующими первичную открытоугольную глаукому. Этот способ может быть использован для ранней диагностики первичной открытоугольной глаукомы у пациентов, страдающих миопией, гипертонической болезнью, сахарным диабетом 2 типа и относящихся к группе риска развития заболевания.
К недостаткам данного способа относится то, что он не учитывает роль генетических полиморфизмов и кроме того предусматривает необходимость проводить исследования двух биологических проб: слезной жидкости и сыворотки крови.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики ПОУГ.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития ПОУГ в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз, например миопия и/или катаракта, для индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, на основе данных о генетических полиморфизмах: VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425).
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей патологии глаз, включающий:
• выделение ДНК из периферической венозной крови;
• анализ полиморфизмов генов VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425);
• прогнозирование повышенного риска развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз в случае выявления генетического варианта T IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGFR-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем Т TGFβ-1 либо комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1;
• прогнозирование низкого риска развития данного заболевания у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз при выявлении генотипа CС IGFR-1 и сочетания аллеля Т VEGF-A с генотипом СС IGF-1;
• прогнозирование повышенного риска развития первичной открытоугольной глаукомы среди индивидуумов с сопутствующей патологией глаз в случае выявления комбинации аллеля С IGF-1 с аллелем С TGFβ-1 либо комбинации аллеля С VEGF-A с генотипом ТС IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1;
• прогнозирование низкого риска развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз при выявлении генотипа ТТ TGFβ-1.
Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития первичной открытоугольной глаукомы у индивидумов в зависимости от наличия/отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз по данным о генетических вариантах локусов VEGF-A с.-958C>T (rs 833061), IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), IGFR-1 g.99181663 C>T (rs 4965425) и их сочетаний.
Изобретение охарактеризовано на следующих фигурах.
На фиг. 1 представлена дискриминация аллелей по локусу VEGF-A с. -958C>T (rs 833061), где - CС VEGF-A, - ТТ VEGF-A, - СТ VEGF-A, - отрицательный контроль;
На фиг. 2 представлена дискриминация аллелей по локусу IGF-1 c.-1410T>C (rs 35767), где - СC IGF-1, - TТ IGF-1, - ТС IGF-1, - отрицательный контроль;
На фиг. 3 представлена дискриминация аллелей по локусу TGFβ-1 c.-1347T>C (rs 1800469), где - СC TGFβ-1, - TТ TGFβ-1, - ТС TGFβ-1, - отрицательный контроль;
На фиг. 4 представлена дискриминация аллелей по локусу IGFR-1 g.99181663C>T (rs 4965425), где - CС IGFR-1, - ТT IGFR-1, - СТ IGFR-1, - отрицательный контроль;
На фиг. 5 в таблице 1 представлен сравнительный анализ сочетаний аллелей и генотипов полиморфных маркеров факторов роста у пациентов ПОУГ и в контрольной группе без сопутствующей патологии глаз;
На фиг. 6 в таблице 2 представлен сравнительный анализ сочетаний аллелей и генотипов полиморфных маркеров факторов роста у пациентов ПОУГ и в контрольной группе с сопутствующей патологией глаз.
На фигурах 1-4 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM - аллелю С.
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (СТ).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю Т (УОФ аллеля Т отложены по оси y).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю С (УОФ аллеля С отложены по оси x).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.
Способ осуществляют следующим образом.
2
ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе 4 мл крови смешивают с лизирующим буфером, в котором содержится 320 г сахарозы, 1% тритон Х - 100, 5 мл MgCl, 10 мл трис - HCl (pH=7,6), центрифугируют 20 минут при температуре 4°С на 4000 об/мин. Далее добавляют 4 мл ЭДТА - Soline, 400 мкл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют в течение 16 часов при 40°С.
На втором этапе из уже очищенного лизата производят экстракцию ДНК равными долями фенола, фенол-хлороформа, хлороформа и центрифугирование в течение 10 минут при 4000 об/мин. После центрифугирования водный слой удаляют и добавляют два объема охлажденного этанола 96%. Полученную ДНК растворяют в деионизованной, бидистиллированной воде, хранят при температуре -20°С и в дальнейшем используют для проведения полимеразной цепной реакции.
Анализ генетических полиморфизмов VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T осуществляют методом ПЦР синтеза ДНК, которую проводят на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad Laboratories, USA) с использованием олигонуклеотидных зондов и праймеров для ПЦР фирмы «Синтол» (фиг. 1-4). Генотипирование осуществляют с использованием программного обеспечения «CFX Manager™».
Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития первичной открытоугольной глаукомы в зависимости от наличия/отсутствия миопии и катаракты у индивидуумов подтверждает анализ результатов наблюдений 252 человек (450 глаз) с ПОУГ и 191 человек (382 глаза) контрольной группы. Формирование выборок больных и контроля осуществлялись на базе офтальмологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа и медицинского центра микрохирургии глаза ООО «Ковчег».
Исследуемые группы были сформированы из индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой. В группу больных включались пациенты с ранее установленным или впервые выявленным диагнозом ПОУГ, подтвержденного клиническими, инструментальными и лабораторными методами обследования. Диагноз глаукома устанавливался по основным диагностическим критериям: повышенное ВГД, наличие глаукоматозной экскавации ДЗН, характерные изменения ППЗ [Eгoрoв E.А. Глаукoма. Нациoнальнoe рукoвoдствo /пoд рeд. E.А. Eгoрoва. - М.: ГЭOТАР-Мeдиа. - 2013. - 824 с.].
Группа контроля была сформирована из индивидуумов, не имеющих острых и хронических заболеваний глаз, у которых отсутствовали какие-либо признаки глаукомы, а также они не имели тяжелых соматических патологий, в том числе приводящих к поражениям глаз.
Распределение выборки больных ПОУГ (450 глаз) и группы контроля (382 глаза) по наличию или отсутствию анализируемого признака показало, что среди больных ПОУГ сопутствующая неинфекционная патология глаз встречалась в 72% случаев, тогда как в контроле этот показатель был в 3,2 раза меньше и составлял 22,51% (р=0,0005). Сопутствующая патология глаз при ПОУГ (296 глаз) и в контрольной группе (126 глаз) наиболее часто была представлена начальной катарактой - 29,11% и 6,28%, соответственно, и миопией слабой степени - 8,89% и 8,38% соответственно.
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0».
2
Выявление ассоциаций генетических вариантов анализируемых локусов с формированием ПОУГ проводили с помощью таблиц сопряженности 2×2, на основе вычисления критерия χ (хи-квадрат) с поправкой Йетса на непрерывность.
cor
bonf
Характер ассоциаций различных аллелей и генотипов с ПОУГ оценивали при помощи показателя отношения шансов (OR) [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA /О.Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.]. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони - производили перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: р=р×n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали р≤ 0,05.
f
perm
perm
f
perm
Изучение роли комбинаций генетических вариантов VEGF-A с.-958C>T, IGF-1 c.-1410T>C, TGFβ-1 c.-1347T>C, IGFR-1 g.99181663C>T в формирование ПОУГ в зависимости от наличия сопутствующей неинфекционной патологии глаз проводилось с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику. Для валидации найденных ассоциаций использовался точный критерий Фишера (P) и пермутационный анализ (P). Значение P для аллеля или аллельного сочетания определяется как вероятность того, что после сбалансированного перемешивания меток «больной ПОУГ» - «контроль» (100 пермутаций) и нового поиска с помощью APSampler оценка значимости ассоциации с ПОУГ произвольно найденного аллеля или аллельного сочетания будет не хуже, чем эта оценка для исходного [Царева E.Ю. Фармакoгeнoмныe исслeдoвания эффeктивнoсти лeчeния рассeяннoгo склeрoза иммунoмoдулирующими прeпаратами: диссeртация... кандидата биoлoгичeских наук: 03.01.03 /Царева Eкатeрина Юрьeвна //- Мoсква, 2012. - 140 с.]. Значимыми считали различия сравниваемых частот если P<0,05 и P≤ 0,005, при условии, что значения 95% CI для OR не пересекают 1.
2
2
perm
perm
perm
bonf
perm
Установлено, что генетический вариант T IGFR-1 (64,63%) и комбинации аллелей С VEGF-A, Т IGFR-1 (75,73%) либо аллелей С VEGF-A, Т IGF-1, Т TGFβ-1 (17,09%) либо аллелей Т VEGF-A, Т IGF-1, С TGFβ-1 (29,06%) встречаются среди больных ПОУГ чаще, чем в контроле (54,47%, χ=4,78, p=0,03, ОR=1,53, 95%CI 1,10-2,20; 49,58%, p=0,000001, ОR=3,17, 95%CI 1,89-5,32; 7,02%, p=0,003, ОR=2,72, 95%CI 1,37-5,43 и 16,11%, p=0,003, ОR=2,13, 95%CI 1,26-3,61, соответственно) и являются факторами риска формирования ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз (ОR>1,0). Наоборот, среди пациентов контрольной группы наблюдается более высокая частота генотипа CС IGFR-1 (22,18%) и сочетания аллеля Т VEGF-A и генотипа СС IGF-1 (58,54%) по сравнению с группой больных ПОУГ без сопутствующей патологии глаз (9,43%, χ=7,28, p=0,01, р=0,03, ОR=0,36; 95%CI 0,17-0,78 и 43,70%, p=0,003, ОR=0,55; 95%CI 0,35-0,85) (фиг. 5).
perm
perm
bonf
2
Сочетание генетических вариантов С IGF-1 и С TGFβ-1 встречается среди больных ПОУГ с сопутствующей патологией глаз с наибольшей частотой (85,99%) по сравнению с группой контроля (72,31%, p=0,003, ОR=2,72, 95%CI 1,25-4,42) и является фактором риска развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз. Обращает внимание то, что комбинация из трех генетических вариантов С VEGF-A, ТС IGF-1 и С TGFβ-1 встречается среди больных ПОУГ (17,59%) в 11,3 раз чаще, чем в контроле (1,56%, p=0,0002, ОR=13,44, 95%CI 1,82-99,08). Данное сочетание исследуемых полиморфизмов также повышает риск развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз. Выявлена более низкая частота генотипа ТТ TGFβ-1 (9,49%) у пациентов с ПОУГ по сравнению с группой контроля (21,54%, χ=6,52, p=0,01, р=0,03, ОR=0,38; 95%CI 0,18-0,82) (фиг. 6), что свидетельствует о низком риске развития данного заболевания у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз.
Таким образом, резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о значимом вкладе комбинаций полиморфных вариантов генов факторов роста в формирование ПОУГ в зависимости от наличия или отсутствия сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз. Подверженность к формированию ПОУГ среди индивидуумов без сопутствующей патологии глаз определяют генетический вариант T IGFR-1 (OR=1,53) и комбинации С VEGF-A, Т IGFR-1 (ОR=3,17), С VEGF-A, Т IGF-1, Т TGFβ-1 (ОR=2,72) и Т VEGF-A, Т IGF-1, С TGFβ-1 (ОR=2,13). Генотип CС IGFR-1 (OR=0,36) и комбинация генетических маркеров Т VEGF-A с СС IGF-1 (ОR=0,55) оказывают протективное влияние на формирование ПОУГ у индивидуумов без сопутствующей патологии глаз. Предрасположенность к развитию ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз определяют комбинации С IGF-1 с С TGFβ-1 (ОR=2,72) и С VEGF-A, ТС IGF-1, С TGFβ-1 (ОR=13,44). Выявлено, что генотип ТТ TGFβ-1 снижает риск развития ПОУГ у индивидуумов с сопутствующей патологией глаз (OR=0,38).
Примеры, подтверждающие осуществимость предложенного изобретения.
1. Сочетание генетических вариантов С IGF-1 с С TGFβ-1 и С VEGF-A с ТС IGF-1 и С TGFβ-1 было выявлено у пациента А., страдающего миопией слабой степени, и у пациента Б., имеющего возрастную катаракту. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у пациентов была обнаружена ПОУГ.
2. Генотип ТТ TGFβ-1 был выявлен у пациента В., имеющего миопию средней степени и возрастную катаракту. При дальнейшем динамическом наблюдении ПОУГ у него не обнаружена.
3. Генетический вариант T IGFR-1 был выявлен у 106 индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у них была обнаружена ПОУГ.
4. Комбинации аллелей С VEGF-A с Т IGFR-1; комбинации аллеля С VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем Т TGFβ-1; комбинации аллеля Т VEGF-A с аллелем Т IGF-1 и с аллелем С TGFβ-1 были выявлены у 78 индивидуумов без сопутствующей миопии и катаракты. При дальнейшем детальном офтальмологическом обследовании у них была обнаружена ПОУГ.
5. Генотип CС IGFR-1 был выявлен у пациента Д., не имеющего сопутствующих неинфекционных заболеваний глаз. При дальнейшем динамическом наблюдении ПОУГ у него не обнаружена.
6. Сочетание генетических вариантов Т VEGF-A и СС IGF-1 было обнаружено у 52 индивидуумов без сопутствующей неинфекционной патологии глаз. При дальнейшем офтальмологическом обследовании ПОУГ у них не обнаружена.
Использование данного способа позволяет прогнозировать риск возникновения ПОУГ у индивидуумов русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, в зависимости от наличия или отсутствия сопутствующей неинфекционной патологии глаз, а именно миопии и катаракты, что будет способствовать более эффективной реализации лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению развития ПОУГ.