1
ОЧИСТКА ИНГИБИТОРА АЛЬФА ПРОТЕАЗЫ, ПОЛУЧЕННОГО ИЗ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК

1
1. Способ устранения количества красящего агента в растворе, содержащем ингибитор альфа протеиназы (recA1PI), полученном из культуры клеток, включающий инкубирование раствора, содержащего recA1PI, с восстанавливающим агентом и отделение recA1PI от красящего агента.
2. Способ в соответствии с п. 1, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин или DTT.
3. Способ в соответствии с п. 1, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин.
4. Способ в соответствии с п. 1, где концентрация восстанавливающего агента составляет от приблизительно 1 мМ до приблизительно 100 мМ.
5. Способ в соответствии с п. 1, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 10 мМ.
6. Способ в соответствии с п. 1, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 1 мМ.
7. Способ в соответствии с п. 1, где этап восстанавливающего инкубирования осуществляют в течение времени от приблизительно 1 до приблизительно 24 часов.
8. Способ в соответствии с п. 1, где этап восстанавливающего инкубирования осуществляют при температуре от приблизительно 2°C до приблизительно 60°C.
9. Способ в соответствии с п. 1, где восстанавливающий агент представляет собой 10 мМ цистеин, и инкубацию осуществляют в течение ночи при приблизительно комнатной температуре.
10. Способ в соответствии с п. 1, где отделение recA1PI от красящего агента включает хроматографию.
11. Способ в соответствии с п. 10, где хроматография включает ионообменную хроматографию, гидрофобное взаимодействие, гель-фильтрацию, аффинную и иммуноаффинную хроматографию или их комбинации.
12. Способ в соответствии с п. 1, включающий снижение концентрации железа.
13 Способ в соответствии с п. 12, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 2-100 раз.
14. Способ в соответствии с п. 12, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 5-50 раз.
15 Способ в соответствии с п. 12, где концентрация железа составляет 10 мкМ или менее.
16. Способ в соответствии с п. 12, где концентрация железа составляет 1 мкМ или менее.
17. Способ очистки человеческого A1PI, полученного из культуры клеток, из водного раствора, содержащего recA1PI, включающий:
(a) проведение этапа вирусной инактивации раствора, содержащего recA1PI;
(b) пропускание раствора, подвергнутого вирусной инактивации, через анионообменник так, что recA1PI связывается с анионообменником;
(c) элюирование recA1PI из анионообменной смолы с получением анионообменного элюата, содержащего recA1PI;
(d) прибавление восстанавливающего агента к анионообменному элюату, содержащему recA1PI, с получением восстанавливающего раствора;
(e) инкубирование восстанавливающего раствора;
(f) пропускание восстанавливающего раствора через хроматографическую смолу гидрофобного взаимодействия (HIC) так, что recA1PI связывается с HIC смолой; и
(g) элюирование recA1PI из HIC смолы с получением HIC элюата, который содержит recA1PI.
18. Способ в соответствии с п. 17, где вирусная инактивация включает инкубацию с растворителем/детергентом.
19. Способ в соответствии с п. 18, где растворитель прибавляют в количестве, которое находится в интервале от 0,01% до приблизительно 0,5%.
20. Способ в соответствии с п. 18, где детергент прибавляют в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 2,0% веса на объем полученной смеси.
21. Способ в соответствии с п. 18, где инкубация с растворителем/детергентом включает прибавление приблизительно 0,5% полисорбата 20 и приблизительно 0,03% три(н-бутил фосфата) при pH приблизительно 8 и температуре приблизительно 30°C.
22. Способ в соответствии с п. 17, где анионообменник представляет собой смолу на основе четвертичного аммония.
23. Способ в соответствии с п. 22, где смола на основе четвертичного аммония представляет собой Capto™ Q.
24. Способ в соответствии с п. 17, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин (Cys); цистеамин; дитиотреитол (DTT); дитиоэритритол (DTE); глутатион (GSH); 2-меркаптоэтанол (2-ME); 2-меркаптоэтиламин (2-MEA); трис(2-карбоксиэтил)фосфин (TCEP); щавелевую кислоту; муравьиную кислоту, аскорбиновую кислоту; никотинамид аденин динуклеотид (NADH); никотинамид аденин динуклеотид фосфат (NADPH); или их комбинации.
25. Способ в соответствии с п. 17, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин или DTT.
26. Способ в соответствии с п. 17, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин.
27. Способ в соответствии с п. 17, где концентрация восстанавливающего агента составляет от приблизительно от 1 мМ до 100 мМ.
28. Способ в соответствии с п. 17, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 10 мМ.
29. Способ в соответствии с п. 17, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 1 мМ.
30. Способ в соответствии с п. 17, где этап восстанавливающего инкубирования осуществляют в течение приблизительно от 1 до 24 ч.
31 Способ в соответствии с п. 17, где этап восстанавливающего инкубирования осуществляют при температуре от приблизительно 2°C до 60°C.
32. Способ в соответствии с п. 17, где восстанавливающий агент представляет собой 10 мМ цистеин, и инкубацию осуществляют в течение ночи при приблизительно комнатной температуре.
33. Способ в соответствии с п. 17, где HIC смола представляет собой Octyl Sepharose™ или Capto™ Octyl.
34. Способ в соответствии с п. 17, включающий снижение концентрации железа.
35. Способ в соответствии с п. 34, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 2-100 раз.
36. Способ в соответствии с п. 34, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 5-50 раз.
37. Способ в соответствии с п. 34, где концентрация железа составляет 10 мкМ или менее.
38. Способ в соответствии с п. 34, где концентрация железа составляет 1 мкМ или менее.
1
39. Способ очистки ингибитора альфа протеиназы (recA1PI), полученной из культуры клеток, включающий инкубирование раствора, включающего recA1PI, с восстанавливающим агентом и отделение recA1PI от восстанавливающего агента и восстановленных компонентов.
40. Способ в соответствии с п. 39, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин или DTT.
41. Способ в соответствии с п. 39, где восстанавливающий агент представляет собой цистеин.
42. Способ в соответствии с п. 39, где концентрация восстанавливающего агента составляет от приблизительно 1 мМ до приблизительно 100 мМ.
43. Способ в соответствии с п. 39, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 10 мМ.
44. Способ в соответствии с п. 39, где концентрация восстанавливающего агента составляет приблизительно 1 мМ.
45. Способ в соответствии с п. 39, где этап инкубации осуществляют в течение времени от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч.
46. Способ в соответствии с п. 39, где этап инкубации осуществляют при температуре от приблизительно 2°C до приблизительно 60°C.
47. Способ в соответствии с п. 39, где восстанавливающий агент составляет приблизительно 10 мМ цистеина, и инкубацию осуществляют в течение ночи при приблизительно комнатной температуре.
48. Способ в соответствии с п. 39, где отделение recA1PI от восстанавливающего агента и восстановленных компонентов включает хроматографию.
49. Способ в соответствии с п. 48, где хроматография включает ионообменную хроматографию, хроматографию на основе гидрофобного взаимодействия, гель фильтрацию, аффинную, иммуноаффинную хроматографию или их комбинации.
50. Способ в соответствии с п. 39, где восстановленные компоненты включают железо.
51. Способ в соответствии с п. 50, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 2-100 раз.
52. Способ в соответствии с п. 50, где концентрацию железа снижают (то есть, уменьшают) в 5-50 раз.
53. Способ в соответствии с п. 50, где концентрация железа составляет 10 мкМ или менее.
54. Способ в соответствии с п. 50, где концентрация железа составляет 1 мкМ или менее.