Проявление иммунокорригирующего эффекта криоконсервированных клеток фетальной печени разных сроков гестации в условиях развития экспериментальной модели реакции «Трансплантат против хозяина»*

районов (ОР). Количество метафаз, двуядерных лейкоцитов, лейкоцитов с микроядрами, апоптозных клеток оценивали на тех же препаратах в клетках с сохраненной цитоплазмой в промилле (%).

Рассмотрены частоты встречаемости различных цитогенетических аномалий в 8 клеточных популяциях исходной линии R1, отличающихся количеством пассажей после размораживания. Количество хромосом в клетках было относительно стабильным и колебалось от 37 до 42, однако популяции клеток широко варьировали по составу РБ. Во всех исследованных популяциях обнаруживался избыток копий хромосомы 8. Для около половины метафаз характерно присутствие спонтанного дифференциального окрашивания хромосом, без предварительной обработки трипсином (G-бендинг). Частота встречаемости таких клеток уменьшалась с увеличением количества пассажей. Обнаружены выраженные отличия между клеточными популяциями по частотам встречаемости метафаз с ОР, что, по литературным данным, является маркерной особенностью герминативной популяции эмбриональных клеток (Bernardino-Sgherri et al., 2002). В таких метафазах наблюдались сложные межхро-мосомные перестройки по центромерным районам. В общем, для группы сублиний ЭСК R1, при около-диплоидном числе хромосом, типичны выраженная гетерогенность по различным типам цитогенетических аномалий и РБ, темпам клеточного деления, а также по таким эпигенетическим характеристикам, как склонность к образованию эмбриоидных тел, спонтанному G-бендингу и частотам встречаемости клеток с ОР.

Популяции клеток разных пассажей ЭГ G1 отличались друг от друга по числу хромосом, близкому к тет-ра- пента- и гексаплоидным наборам, с относительным увеличением количества диплоидных клеток к 75 пассажу. Выявлены конфигурации метафаз, свидетельствующие о многополюсных митозах и межклеточных слияниях. Наблюдается выраженная гетерогенность клеток по различным вариантам РБ, относительный дефицит копий хромосом 6, 7 и 12 и избыток — хромосомы 11. Во всех исследованных клеточных популяциях присутствовала транслокация t(6;12). Обнаружен новый тип хромосомных аберраций, обусловленный хромосомными разрывами в проксимальных участках. В популяциях клеток ЭГ G1, так же, как и в сублиниях ЭСК R1, выявлена выраженная гетерогенность по эпигенетическим характеристикам: метафазам со спонтанным G-бендингом, частота которых убывает с увеличением времени культивирования клеток, а также клеток с деспирализацией перицентромерных районов хромосом и ОР.

Для 8 групп клеток ЭСК R1 линейноспецифичным была выраженная избыточность количества копий хромосомы 8 при сохранении околодиплоидного набора, для 5 групп — выявление специфики клеток ЭГ G1 — полиплоидизация с формированием множественных межхромосомных транслокаций при постоянном присутствии t(6; 12). Транслокация t(6; 12) объединяет три ключевых гена (Nanog, Тс11, Esrrb) из пяти имеющихся (Esrrb, ТЬхЗ и Тс11, Nanog, 0ct4 и Sox2), блокирующих клеточную дифференцировку и способствующих самокопированию клеток. Хромосомы 8 и 11 несут ключевые гены пути JAK-STAT, контролирующего активацию пролиферации.

Полученные данные свидетельствуют о наличии линейноспецифичных механизмов генерации генетической изменчивости, необходимой для адаптации

клеток к росту в культуральных условиях в недифференцированном состоянии. В то же время, конечный итог такой адаптации приводит к изменению хромосомного баланса в сторону увеличения копийности хромосом, несущих гены активации клеточной пролиферации. Это соответствует селективным условиям культивирования клеток, направленным на поддержание высоких темпов клеточного деления, препятствующих клеточной дифференцировке. В случае ЭСК R1 генерация генетической изменчивости клонов, из которых отбираются наиболее успешно пролиферирующие, включает нарушение распределения хромосом по дочерним клеткам, по-видимому, с участием повышенной частоты формирования РБ, для клеток ЭГ G1 — полиплоидизацию, повышение частоты хромосомных разрывов и обменов. При сходном направлении эволюции клонального состава в сторону поддержания пролиферации, ее механизмы имеют выраженную линейную специфику.

А.Н. Гольцев, Т.Г. Дубрава, Е.Д. Луценко,

Л.В. Останкова, И.Ю. Мацевитая, М.В. Останков,

М.А. Сироус, Е.А. Порожан, К.А. Гольцев,

А.Ю. Димитров

Проявление иммунокорригирующего эффекта криоконсервированных клеток фетальной печени разных сроков гестации в условиях развития экспериментальной модели реакции «трансплантат против хозяина»*

Институт проблем криобиологии и криомедицины

НАН Украины, Харьков, Украина

A.N. Goltsev, T.G. Dubrava. ED. Lutsenko, L.V. Ostankova,

I.Yu Matsevitaya, M.V. Ostankov, M.A. Sirous, E.A. Porozhan,

K.A. Goltsev, A.Yu. Dimitrov

Manifestation of immune correcting effect of cryopreserved cells of fetal liver of different gestation terms under development conditions of experimental model of graft versus ghost reaction

В работе проведена сравнительная оценка иммунокорригирующей активности криоконсервированных и нативных клеток фетальной печени (КФП) разных сроков гестации в экспериментальной модели локальной РТПХ (лРТПХ). Индукцию лРТПХ проводили на мышах линии C57BI/6 путем подкожного введения в подушечку задней лапы клеток лимфоузлов (ЛУ) линии СВА/Н. Через 1 сут. после инициации лРТПХ мышам внутривенно вводили нативные (нКФП) или криоконсерви-рованные (кКФП) КФП 14-х или 18-х сут. гестации мышей линии СВА. На 5-е сут. после инициации патологии оценивали следующие показатели: индекс РТПХ, содержание Treg (FoxP3+, С04+С025+клеток) лимфоузлов (ЛУ) на проточном цитофлуориметре FACS Calibur (Becton Dickinson, USA), экспрессию гена tgf-p — методом ПЦР; содержание ИЛ-2, ИЛ-10, ФНО-— в сыворотке крови животных — иммуноферментным методом на анализаторе Stat Fax 2100 (USA). Установлено, что при индукции лРТПХ манифестируются признаки характерные для патологий аутоиммунного генеза. В условиях развития лРТПХ, КФП минимизируют клинические признаки патологии и интенсивность развития иммуновоспалительной реакции. Терапевтическая активность КФП в большей степени коррелировала с содержанием в ЛУ FOXP3+ клеток и экспрессией гена

* Статья опубликована полностью в рубрике «Оригинальные исследования».

tgf-p, но не содержанием CD4+CD25+ клеток и степенью их флуоресценции. По мере увеличения срока гестации с 14 пкд к 18 пкд иммуннокорригирующая активность КФП снижалась. Однако после криоконсервирования КФП-18 приобретали иммунокорригирующую активность нКФП-14.

А.С. Григорьян \ Е.В. Киселёва а, Д.В. Штанский3,

М.Р. Филонов 3, Т.К. Хамраев \ А.К. Топоркова \

А.Б. Гастиев 4, Ш. Фаркашди 5 Новый тип тканеинженерной конструкции на основе политетрафторэтилена с наноструктурированным многофункциональным биосовместимым нерезорбируемым покрытием*

1 ФГУ «Центральный научно-исследовательский институт стоматологии и челюстно-лицевой хирургии Росмедтехнологий», Москва, Россия

2 Институт биологии развития им. НК. Кольцова РАН,

Москва, Россия

3 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Государственный технологический университет «Московский институт стали и сплавов», Москва, Россия

4 Российская медицинская академия последипломного образования, Москва, Россия

5 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия

A.S. Grigoryan, E.V. Kiseleva, М.P. Filonov, Т.К. Khamraev,

A.K Toporkova, A.B. Gastiev, Sh. Farkashdi A novel type of a polytetrafluorethylene-based tissue-engineered construction with nanopattered multifunctional biocompatible nonresorbed coating

Описана методика получения тканеинженерной конструкции на основе высокопористого политетрафтор-этилена (ПТФЗ) с наноструктурированным многофункциональным биосовместимым нерезорбируемым покрытием (МБНП) состава Ti-Ca-P-C-0-N. Показано, что на подложке из ПТФЗ с МБНП происходит активная адгезия и пролиферация стромальных муль-типотентных клеток жировой ткани. В условиях остеогенной стимуляции происходит интенсивное комми-тирование клеток, позволяющее получить популяцию преостео-бластически дифференцированных элементов, что было подтверждено положительной иммуно-гистохимической реакцией на остеопонтин и остео-нектин. В опытах in vivo на модели экспериментально воспроизведенных критических дефектов свода черепа у кроликов проведена оценка влияния трансплантации тканеинженерных конструкций на основе высокопористого ПТФЗ с МБНП состава Ti-Ca-P-C-0-N, на поверхности которых культивированы аутогенные стро-мальные клетки из жировой ткани на формирование костного регенерата. Через 3 и 6 мес. после трансплантации под тканеинженерной конструкцией показано формирование костного регенерата, полностью закрывавшего дефект.

В.И. Грищенко 1, И.А. Криворучко а, К.А. Гольцев 1,

О.Ю. Кожина 1, А.Н. Гольцев 1 Экспериментальное обоснование применения пуповинной крови для лечения послеоперационных осложнений

1 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, Харьков, Украина

2 Харьковский государственный медицинский университет, Харьков, Украина

cryopato@rambler.ru

V.l. Grischenko, I.A. Kryvoruchko, КА. Goltsev, O.U. Kozhina,

A.N. Goltsev

Experimental substantiation of cord blood application for treatment of post-operative complications

Как свидетельствуют данные литературы, послеоперационные гнойные осложнения являются результатом стресс-индуцированного угнетения функции иммунной системы (ИС) организма. При этом речь может идти не только об осложнениях как следствие экспансии инфекционных начал, но также в результате минимизации трофического потенциала клеток ИС и разба-лансировки взаимодействия в нейро- иммуно- эндокринном блоке. В связи с этим очевидна необходимость поиска препаратов, обладающих полифункциональным лечебным эффектом в таких ситуациях.

Цель работы: оценить состояние ИС и частоту развития послеоперационных осложнений у крыс с острым гнойным перитонитом (ОГП) после лечения препаратом пуповинной крови «Гемокорд».

Материал и методы. Эксперименты проведены на крысах линии Вистар в соответствии с правилами «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых в научных целях» (Страсбург, 1985). Крысы были распределены на 4 группы: 1 — крысам проводили лапаротомию и релапаротомию; 2 — моделировали ОГП без терапии; 3 — крысам с ОГП вводили антибиотик во время операции; 4 (основная) — крысам с ОГП вводили «Гемокорд», который был получен и производится в ИПКиК НАН Украины. В работе использовали иммунологические, цитоморфологические и биохимические методы исследования. Оценку всех показателей проводили на 1, 3, 5 и 7 сут. после операции.

Результаты и обсуждение. Во всех группах оперированных крыс наблюдали отклонения показателей клеточного (КЗИ) и гуморального (ГЗИ) звена ИС. В первую очередь это касалось общих Т-клеток (CD3+) и Т-регуляторных (CD4+/CD25 + ) клеток, перитонеальных Мас-1 + мононуклеаров и содержания циклических иммунных комплексов (ЦИК). Все животные с ОГП без лечения (2 группа) погибли к 3 сут. на фоне выраженного дисбаланса ИС. У крыс 3 группы прослеживалась четкая тенденция к улучшению показателей КЗИ и ГЗИ. Однако у крыс, которым вводили «Гемокорд», эта динамика была более выражена, а показатели были значительно ближе к интактному контролю. Важно отметить, что все показатели ИС на 7 сут. в 4 группе в наибольшей степени улучшились в сравнении с животными других групп, что коррелировало с показателями их выживаемости.

* Статья опубликована полностью в рубрике «Оригинальные исследования».