Сравнительное изучение серологических методов определения уровня специфических антител к вирусу классической чумы свиней

ВЛИЯНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ ОБРАБОТКИ НА БИОБЕЗОПАСНОСТЬ МЯСНЫХ

ПРОДУКТОВ

Юнусов Э.Ш., Пономарев В.Я., Ежкова Г.О.

Резюме

В ходе проведенных исследований установлено, что применение ферментативной обработки привело к увеличению переваримости мясных продуктов, а также к повышению их пищевой и биологической ценности. С точки зрения санитарно-эпидемиологических норм продукты полностью соответствовали предъявляемым требованиям.

EFFECT OF ENZYMATIC TREATMENT ON BIOSAFETY MEAT PRODUCTS

Yunusov E.SH., Ponomarev VY, Yezhkov GO Summary

In the current study found that the use of enzymatic treatment led to an increase in digestibility of meat products, as well as to improve their nutritional and biological value. From the standpoint of sanitary-epidemiological norms products are fully compliant with the requirement.

УДК 619:616.98:578.833.31

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Юсупова Г.Р.

Казанская государственная академия ветеринарной медицины

Ключевые слова: классическая чума свиней, иммуноферментный анализ, реакция непрямой гемагглютинации.

Key words: classical swine fever, immunoassay, indirect

hemagglutination reaction.

Классическая чума свиней (КЧС) является особо опасной болезнью домашних и диких свиней, во многих случаях приводящей к летальному исходу. Она сопровождается лихорадкой, лейкопенией, кровотечениями и др. Болезнь включена в список А Международного эпизоотического бюро. Хотя КЧС ликвидирована во многих европейских странах, вирус все еще угрожает свиноводству, главным образом в связи с его распространенностью в ряде европейских популяций диких свиней

(М^еШо^ег С et а1., 2000). В 1990-х гг. в Европе имело место несколько вспышек КЧС. Наиболее серьезная из них произошла в 1997 г. в Нидерландах (Stegeman А. et а1., 2000).

Благодаря широкомасштабной вакцинации в России эпизоотическая ситуация по КЧС стабилизировалась (Е.А. Непоклонов, 2000; В.И. Жестерев, 2008) и по данным Департамента ветеринарии Минсельхоза России данное заболевание ежегодно регистрируется в РФ спорадически в 5-7 пунктах.

По сообщениям В.В. Куринова (1999, 2003), Р.Х. Юсупова (1994, 2002) определение уровня специфических антител в сыворотке крови свиней с помощью РН и РНГА в вакцинированном стаде важно для оценки иммунного статуса животных и проведения противочумных мероприятий.

Целью наших исследований явилось сравнительное изучение усовершенствованного нами метода иммуноферментного анализа и общепринятой реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) при обнаружении специфических антител у свиней, вакцинированных против чумы.

Материалы и методы. При постановке метода ИФА для определения антител к возбудителю КЧС в сыворотке крови иммунизированных свиней реакцию непрямого твердофазного ИФА проводили по методу, описанному Уо11ег А. et а1. (1977), в нашей модификации (Г.Р. Юсупова, 2009). В лунки планшета для

иммунологической реакции вносили антиген (вирусвакцина против КЧС, штамм «КС») по 100 мкл в 0,01М фосфатно-буферном растворе (рН 8,3) по 5 лунок на каждую пробу сыворотки. Инкубировали 16-18 ч при 20°С и антиген сливали. После трехкратного промывания физиологическим раствором в лунки вносили по 100 мкл иммунных и контрольных сывороток, разведенных в 0,01М фосфатно-солевом буфере (рН 7,3), содержащим 0,05М твин-20 (ТФСБ). Инкубировали 1 ч при 37°С и промывали лунки 3-4 раза раствором 0,5М КаС1, подтитрованным 1М К2НР04 рН 7,3 и содержащем 0,05М твин-20. После удаления остатков раствора в лунки вносили по 100 мкл антивидового конъюгата, разведенного в ТФСБ. После инкубации в течение 2 ч при 37°С промывали, как и прежде и добавляли 100 мкл свежеприготовленного раствора субстрата. Планшет выдерживали в темном месте 30-40 мин при комнатной температуре, а затем реакцию останавливали добавлением 100 мкл 2 NH2S04 в каждую лунку. Учет реакции ИФА проводили на вертикально сканирующем спектрофотометре ТйеЛек тиШБкап (Швейцария). Положительно реагирующими считали пробы сыворотки крови с Кспец + 2 и выше. Уровень антител в сыворотках крови животных одновременно определяли в РНГА в описании А.В. Иванова, Р.Х. Юсупова и др. (2007). Набор препаратов для определения в РНГА специфических антител были получены из лаборатории иммунологии ФГУ «ФЦТРБ-

ВНИВИ». Исследовали 297 проб сывороток крови свиней,

иммунизированных против КЧС вакциной из штамма «КС».

Результаты исследований. Опыты показали, что при исследовании сывороток крови 112 свиноматок через 30 дней после иммунизации их против КЧС с применением вакцины из штамма «КС» специфические антитела к вирусу обнаруживались в ИФА и РНГА. При этом из 112 исследованных животных в ИФА специфические антитела в титре 1:638±11,2 были обнаружены у 105 (93,75%), а в РНГА у этих же животных антитела выявлялись в титре 1:68,7±12,3. У 7 свиноматок этой же группы антитела обнаружены в ИФА и РНГА 1:95±10,5 и 1:9,1±2,0 соответственно.

Были исследованы сыворотки крови 20 поросят сосунов в 15-17дневном возрасте, полученные от свиноматок, иммунизированных против чумы вакциной «КС» за 1,5 и 2 мес. до опороса.

Установлено, что у поросят-сосунов специфические антитела методом ИФА выявлены в титре 1:95±10,5, в РНГА 1:9,1±2,0 во всех исследованных пробах. Эти данные указывают, что иммунизированные свиноматки передают с молозивом своему потомству специфические антитела в титрах, обеспечивающих их защиту от вируса КЧС.

Заключение. Серологические методы (ИФА и РНГА) являются доступными и практичными средствами для определения эффективности вакцинопрофилактики при классической чуме свиней.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Иванов, А.В. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации классической чумы свиней /

A.В.Иванов, Р.Х.Юсупов и др.// Казань, 2007. - 18 с. 2. Куриннов, В.В. Сравнительное исследование напряженности иммунитета против классической чумы свиней промышленных свинокомплексов /

B.В.Куринноы // Вет.газета. - 2003. - № 10. - С.7. 3. Куриннов, В.В.

Эпизоотологические, клинические и диагностические исследования при КЧС / В.В.Куриннов // Докл. Россельхозакадемии. - 1999. - № 1. - С.42. 4. Непоклонов, Е.А. Дисс... д.б.н. - Москва, 2000. 5. Юсупов, Р.Х. Иммунологический мониторинг системе защиты животных от инфекционных болезней / Р.Х. Юсупов // Матер. Всерос. науч.-произв. конф. - Чебоксары, 1994. - С.499-500. 6. Юсупов, Р.Х.

Вакцинопрофилактика классической чумы свиней / Р.Х.Юсупов,

C.Р.Янбарисова, Р.А.Нуриев // Вет.врач. - 2002. - № 4. - С.66. 7. Юсупова, Г.Р. Разработка метода иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антител к вирусу классической чумы свиней / Г.Р.Юсупова // Вет.врач. - 2009. - № 1. - С.28-30. 8. Mittelholzer C. et al. Analysis of classical swine fever virus replication kinetics allows differentiation of highly virulent from avirulent strains // Vet. Microbiol. - 2000. - N 74. - p. 293-308. 9. Stegeman A. et al. The 1997-1998 epidemic of classical swine fever in the Netherlands // Vet. Microbiol. - 2000. - N 73. - p. 183-196. 10. Voller A. et al.

Enzym immunoassay with special reberence to ELISA techniques // J. Clin. Path. - 1977. - N 35. - p. 507-520.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ

СВИНЕЙ

Юсупова Г.Р.

Резюме

Серологические методы (ИФА и РНГА) являются доступными и практичными средствами для определения эффективности вакцинопрофилактики при классической чуме свиней.

COMPARATIVE STUDY OF SEROLOGICAL METHODS DETERMINATION OF SPECIFIC ANTIBODIES TO CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS

Yusupova G.R.

Summary

Serological methods (ELISA and Phragmites) are affordable and practical means for determining the effectiveness of vaccination with classical swine fever.