СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ТАТ-НОХВ4Н ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КАЧЕСТВЕ СТИМУЛЯТОРА ГЕМОПОЭЗА IN VIVO

1. Способ получения белка ТАТ-НОХВ4Н, включающий следующие этапы:
(a) обеспечение клетки-хозяина, включающей в себя вектор, кодирующий белок;
(b) экспрессия белка в клетке-хозяине;
(c) сбор неочищенного раствора экспрессированного белка;
(d) очистка белка из раствора за счет следующих этапов:
(i) введение раствора в колонну HisTrap;
(ii) промывка колонны HisTrap;
(iii) элюирование частично очищенного белка из колонны HisTrap для получения частично очищенного раствора белка;
(iv) введение частично очищенного раствора белка в колонну MonoSP;
(v) промывка колонны MonoSP;
(vi) элюирование очищенного белка из колонны MonoSP в денатурированной форме;
(e) свертывание элюированного денатурированного белка с использованием гидрофобных соединений за счет следующих этапов:
(i) объединение элюированного денатурированного белка и раствора гидрофобных соединений для получения раствора белка и гидрофобных соединений;
(ii) обессоливание раствора белка и гидрофобных соединений для получения раствора обессоленного белка и гидрофобных соединений;
(iii) удаление гидрофобных соединений из раствора обессоленного белка с использованием ультрафильтрации.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что колонну HisTrap промывают промывающим буферным раствором, содержащим мочевину 8 моль, HEPES 20 ммоль, DTT 0,5 ммоль, NaCl 100 ммоль, рН 8,0 и имидазол 10 ммоль.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что частично очищенный белок из колонны HisTrap элюируют элюирующим буферным раствором, содержащим не менее 50 ммоль имидазола, 8 моль мочевины, 20 ммоль HEPES, 0,5 ммоль DTT, 100 ммоль NaCl, при рН 8,0.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что частично очищенный белок из колонны HisTrap элюируют элюирующим буферным раствором, который содержит имидазол 50-100 ммоль.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что частично очищенный белок из колонны HisTrap элюируют элюирующим буферным раствором, который содержит имидазол 100-250 ммоль.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что колонне MonoSP промывают буферным раствором, содержащим мочевину 4 моль, HEPES 20 ммоль и NaCl 50 ммоль, при рН 6,5.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что очищенный белок из колонны MonoSP элюруют элюирующим буферным раствором, содержащим NaCl 1,5 моль и HEPES 20 ммоль, при рН 8,0.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что гидрофобные соединения включают в себя Triton Х-100, Tween-20 или полибензольные соединения.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что ультрафильтрацию выполняют с использованием трубки центрикона или клеточной мешалки.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что очищенный белок хранят в IMDM или DMEM.
11. Белок ТАТ-НОХВ4Н, полученный способом по п.1.
12. Способ усиления активации HSC из костного мозга в периферийную кровь, включающий в себя:
a) назначение нуждающемуся объекту эффективного количества белка ТАТ-НОХВ4Н, полученного способом по п.1, и
b) обеспечение возможности белку ТАТ-НОХВ4Н увеличивать абсолютное число HSC в костном мозге объекта для усиления активации гематопоэтических стволовых клеток в периферийную кровь объекта.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что нуждающийся объект является донором HSC.
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что нуждающийся объект является пациентом, подвергавшимся аутологической трансплантации HSC.
15. Способ по п.12, отличающийся тем, что нуждающийся объект является пациентом, не восприимчивым к G-CSF.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что объект страдает заболеванием, вызванным наследственным дефицитом HSC.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что объект страдает наследственной гипопластической анемией.
18. Способ по п.12, отличающийся тем, что объект страдает гематологическими нарушениями, солидными опухолями или иммунологическими расстройствами.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что гематологическое нарушение выбрано из группы: лимфома, лейкемия, болезнь Ходжкина или миелопролиферативные нарушения.
20. Способ уменьшения времени выздоровления пациента, прошедшего трансплантацию HSC, облучение или химиотерапию, включающий:
a) назначение нуждающемуся объекту эффективного количества белка ТАТ-НОХВ4Н, полученного способом по п.1, и
b) обеспечение возможности белку ТАТ-НОХВ4Н увеличивать абсолютное число HSC в костном мозге объекта.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что нуждающийся объект является донором HSC.
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что нуждающийся объект является пациентом, подвергшимся аутологической трансплантации HSC.
23. Способ по п.20, отличающийся тем, что нуждающийся объект является пациентом, не восприимчивым к G-CSF.
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что объект страдает заболеванием, вызванным наследственным дефицитом HSC.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что объект страдает наследственной гипопластической анемией.
26. Способ по п.20, отличающийся тем, что объект страдает гематологическими нарушениями, солидными опухолями или иммунологическими расстройствами.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что гематологическое нарушение выбрано из группы: лимфома, лейкемия, болезнь Ходжкина или миелопролиферативные нарушения.