ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ СУХИХ КЕРАТИТОВ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND METHODS OF TREATING DRY-EYE SYNDROME

По настоящей заявке испрашивается приоритет согласно предварительной заявке США №60/949216, поданной 11 июля 2007 г., и предварительной заявке США №61/060032, поданной 9 июня 2008 г., содержание которых вводится в настоящее изобретение полностью с помощью ссылки.
Уровень техники
Сухость глаз, также известная в общем как сухой кератоконъюнктивит, является широко распространенным офтальмологическим расстройством, от которого страдают миллионы американцев каждый год. Сухость глаз является многофакторным заболеванием, связанным с секрецией слезной жидкости и поверхностью глаз, которое вызывает симптомы дискомфорта, нарушения зрения и нестабильности слезной пленки с возможным повреждением поверхности глаза. Оно сопровождается повышенной осмолярностью слезной пленки и воспалением поверхности глаза.
Сухость глаз может поражать индивидуумов с разной степенью тяжести. Сухость глаз, в частности, широко распространена у женщин после менопаузы в результате гормональных изменений после потери способности к деторождению. В легких формах заболевания пациент может испытывать жжение, чувство сухости и постоянное раздражение, подобное тому, которое вызвано маленькими частицами, попадающими между глазным веком и поверхностью глаза. В тяжелых случаях зрение может быть повреждено значительно. Другие заболевания, такие как болезнь Шегрена и рубцующийся пемфигоид, проявляют осложнения с сухостью глаз.
Этиопатогенная классификация сухости глаз была впервые разработана в 1995 г. National Eye Institute/Industry Dry Eye Workshop и затем дополнена в январе 2007 г. определениями. The Ocular Surface, vol.5, no. 2, 75-92 (2007). Основные классы сухости глаз включают сухость глаз при недостатке водной компоненты слезной жидкости и сухость глаз в результате испарения. Сухость глаз при недостатке водной компоненты слезной жидкости включает два основных подкласса, сухость глаз при синдроме Шегрена и сухость глаз, не связанная с синдромом Шегрена (первичные и вторичные дефекты слезной железы, обструкция каналов слезных желез, рефлекторная гипосекреция, блокировка двигательных рефлексов). Сухость глаз в результате испарения, являющаяся результатом избыточной потери воды с подвергаемой внешним воздействиям поверхности глаза при нормальной секреции слезной жидкости, включает подклассы по внутренним причинам (дисфункция мейбомиевой железы, заболевания отверстия века и заболевания века/глазного яблока, низкая частота моргания) и внешним причинам (расстройства и заболевания поверхности глаза, ношение контактных линз, аллергические конъюнктивиты, такие как весенние кератоконъюнктивиты).
Хотя кажется, что сухость глаз может возникать в результате ряда несвязанных патогенных причин, все проявления осложнения обладают общим эффектом, а именно нарушением глазной слезной пленки, что приводит к обезвоживанию подвергаемой внешним воздействиям внешней поверхности и многим симптомам, изложенным выше (Lemp, Report of the national Eye Institute/Industry workshop on Clinical Trials in Dry Eyes, the CLAO Journal, vol.21, no. 4, p.221-231 (1995)).
Практикующие врачи применяют несколько подходов для лечения сухости глаз. Один общий подход заключается в том, что нужно восполнять и стабилизировать глазную слезную пленку, применяя так называемую искусственную слезную жидкость, закапываемую в течение дня. Другие подходы включают применение глазных вставок, которые имитируют глазную жидкость или стимулируют эндогенную секрецию слезной жидкости.
Примеры подхода с применением заменителя слезной жидкости включают применение буферных, изотонических солевых растворов, водных растворов, содержащих растворимые в воде полимеры, которые придают раствору большую вязкость и, таким образом, менее легко стекают с глаз. Слезную пленку также пытаются восстановить добавлением одного или более компонентов слезной пленки, таких как фосфолипиды и масла. Показано, что фосфолипидные композиции являются пригодными для лечения сухости глаз; смотри, например, McCulley and Shine, Tear film structure and dry eye, Contactologio, vol.20(4), p.145-9 (1998). Также известны системы доставки фосфолипидных лекарственных средств, содержащих фосфолипиды, пропелленты и активное вещество, смотри патент США №5174988.
Другой подход включает применение смазочных веществ вместо искусственных слез. Например, в патенте США №4818537 (Guo) описывают применение смазочных композиций на основе липосом и в патенте США №5800807 (Hu et al.) описывают композиции, содержащие глицерин и пропиленгликоль, для лечения сухости глаз.
Хотя при применении данных подходов достигается некоторый успех, проблемы при лечении сухости глаз, тем не менее, остаются. Применение заменителей слезной жидкости, хотя временно и эффективно, обычно требует повторного применения в часы бодрствования пациента. Нередко пациент вынужден применять раствор искусственной слезной жидкости 10-20 раз в течение дня. Данный процесс является не только утомительным и требующим много времени, но он также является потенциально очень дорогим. Сообщают, что временные симптомы сухости глаз, связанные с рефрактивной хирургией, проявляются в некоторых случаях в течение промежутка времени от шести недель до шести месяцев или более после хирургической операции.
Помимо исследований, направленных непосредственно на облегчение симптомов, связанных с сухостью глаз, также ведутся поиски способов и композиций, направленных на лечение состояния, при котором наблюдается сухость глаз. Например, в патенте США №5041434 (Lubkin) описывают применение половых стероидов, таких как конъюгированные эстрогены, для лечения состояний с сухостью глаз у женщин после менопаузы; в патенте США №5290572 (MacKeen) описывают применение мелкоизмельченной композиции, содержащей ионы кальция, для того чтобы стимулировать генерирование слезной пленки передней поверхности глаз; и в патенте США №4966773 (Gressel et al.) описывают применение микрочастиц одного или более ретиноидов для нормализации глазных тканей.
В некоторых печатных сообщениях предполагают, что пациенты, страдающие от синдрома сухости глаз, несоразмерно проявляют отличительные признаки чрезмерного воспаления в соответствующих глазных тканях, таких как слезная и мейбомиевая железа. Описывают применение различных соединений для лечения пациентов с сухостью глаз, таких как стероиды, например, в патенте США №5968912; Marsh, et al., Topical nonpreserved methylprednisolone therapty for keratoconjunctivities sicca in Sjogren syndrome, Ophthalmology, 106(5): 881-816 (1999); Plugfelder et al, в патенте США №6153607; ингибиторы высвобождения цитоксинов (Yanni, J. M.; et al WO0003705 A1), циклоспорин A [Tauber, J. Adv. Exp. Med. Biol. 1998, 438, (Lacrimal Gland, Tear Fiom and Dry Eye Syndromes 2), 969] и 15-HETE (Yanni et al., U.S. Pat. №5696166).
В добавление к сухости глаз, Jak3 ингибиторы могут быть полезны для лечения других глазных заболеваний, связанных с воспалением, включая, но не ограничиваясь, глаукому, увеит, диабетическую ретинопатию и возрастную дегенерацию желтого пятна. При финансируемых CNIB исследованиях было обнаружено, что пациенты, имеющие биомаркер воспаления, антикардиолипин, были в четыре раза более склонны к развитию глаукомы. Ранее Jak3 ингибиторы рекомендовали для лечения диабета, хотя, по-видимому, их не рассматривали в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения диабетической ретинопатии. Cetkovic-Cvrle, M. and Uckun, F. M., Arch Immunol Ther Exp (Warsz), 52(2), 69-82 (2004). Rodrigues обнаружил, что выделение иммуноглобулинов, белков системы комплемента, цитокинов и активированной микроглии в клетках пигментного эпителия сетчатки (RPE) и друзах свидетельствует о роли воспаления в возрастной дегенерации желтого пятна с сухостью глаз. Rodrigues E.B., Ophthalmologica, 221(3):143-52 (2007).
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к способу лечения сухости глаз, который включает введение млекопитающему композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество ингибитора янус-киназы-3 ("Jak3"). В одном аспекте Jak3 ингибиторы являются соединением формулы I:
,
где
1
R представляет собой группу формулы
,
в которой y равен 0, 1 или 2;
4
4
1
6
1
6
2
6
2
6
1
4
1
6
1
6
1
6
2
2
6
2
6
1
6
3
10
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
R выбирают из группы, состоящей из водорода, (С-C)алкила, (C-C)алкилсульфонила, (C-C)алкенила, (C-C)алкинила, в которых алкильная, алкенильная и алкинильная группы необязательно замещены дейтерием, гидрокси, амино, трифторметилом, (C-C)алкокси, (C-C)ацилокси, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, циано, нитро, (C-C)алкенилом, (C-C)алкинилом или (C-C)ациламино; или R представляет собой (C-C)циклоалкил, в котором циклоалкильную группа необязательно замещена дейтерием, гидрокси, амино, трифторметилом, (C-C)ацилокси, (C-C)ациламино, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, циано, циано(C-C)алкилом, трифторметил(C-C)алкилом, нитро, нитро(C-C)алкилом или (C-C)ациламино;
5
15
16
15
16
15
16
15
16
15
16
15
16
15
16
2
9
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
m
m
m
1
6
m
m
1
6
1
6
R представляет собой (C-C)гетероциклоалкил, в котором гетероциклоалкильные группы должны быть замещены 1-5 карбокси, циано, амино, дейтериями, гидрокси, (C-C)алкилами, (C-C)алкокси, галогенами, (C-C)ацилами, (C-C)алкиламино, амино(C-C)алкилами, (C-C)алкокси-CO-NH, (C-C)алкиламино-CO-, (C-C)алкенилами, (C-C)алкинилами, (C-C)алкиламино, амино(C-C)алкилами, гидрокси(C-C)алкилами, (C-C)алкокси(C-C)алкилами, (C-C)ацилокси(C-C)алкилами, нитро, циано(C-C)алкилами, галоген(C-C)алкилами, нитро(C-C)алкилами, трифторметилами, трифторметил(C-C)алкилами, (C-C)ациламино, (C-C)ациламино(C-C)алкилами, (C-C)алкокси(C-C)ациламино, амино(C-C)ацилами, амино(C-C)ацил(C-C)алкилами, (C-C)алкиламино(C-C)ацилами, ((C-C)алкил)амино(C-C)ацилами, RRN-CO-O-, RRN-CO-(C-C)алкилами, (C-C)алкил-S(O), RRNS(O), RRNS(O), (C-C)алкилами, RS(O)RN, RS(O)RN(C-C)алкилами, где m равно 0, 1 или 2 и каждый из R и R независимо выбирают из водорода или (C-C)алкила; или группу формулы
,
где a равно 0, 1, 2, 3 или 4; каждый b, c, e, f и g независимо равен 0 или 1; d равно 0, 1, 2 или 3;
n
X представляет собой S(O), где n равно 0, 1 или 2; кислород, карбонил или -C(=N-циано);
n
n
Y представляет собой S(O), где n равно 0, 1 или 2; или карбонил; и Z представляет собой карбонил, C(O)O-, C(O)NR- или S(O), где n равно 0, 1 или 2;
6
7
8
9
10
11
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
каждый R, R, R, R, R и R независимо выбирают из группы, состоящей из водорода или (C-C)алкила, необязательно замещенного дейтерием, гидрокси, амино, трифторметилом, (C-C)ацилокси, (C-C)ациламино, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, циано, циано(C-C)алкилом, трифторметил(C-C)алкилом, нитро, нитро(C-C)алкилом или (C-C)ациламино;
12
15
16
15
16
15
15
15
15
16
15
16
15
16
15
16
15
16
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
6
2
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
m
1
6
m
1
6
m
m
1
6
m
m
1
6
1
6
R представляет собой карбокси, циано, амино, оксо, дейтерий, гидрокси, трифторметил, (C-C)алкил, трифторметил(C-C)алкил, (C-C)алкокси, галоген, (C-C)ацил, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, амино(C-C)алкил, (C-C)алкокси-CO-NH, (C-C)алкиламино-CO-, (C-C)алкенил, (C-C)алкинил, (C-C)алкиламино, гидрокси(C-C)алкил, (C-C)алкокси(C-C)алкил, (C-C)ацилокси(C-C)алкил, нитро, циано(C-C)алкил, галоген(C-C)алкил, нитро(C-C)алкил, трифторметил, трифторметил(C-C)алкил, (C-C)ациламино, (C-C)ациламино(C-C)алкил, (C-C)алкокси(C-C)ациламино, амино(C-C)ацил, амино(C-C)ацил(C-C)алкил, (C-C)алкиламино(C-C)ацил, ((C-C)алкил)амино(C-C)ацил, RRN-CO-O-, RRN-CO-(C-C)алкил, RC(O)NH, ROC(O)NH, RNHC(O)NH, (C-C)алкил-S(O), (C-C)алкил-S(O)-(C-C)алкил, RRNS(O), RRNS(O) (C-C)алкил, RS(O)RN, RS(O)RN(C-C)алкил, где m равно 0, 1 или 2 и каждый R и R независимо выбирают из водорода или (C-C)алкила;
2
3
2
3
2
6
2
6
6
1
6
1
10
1
6
1
6
1
6
2
5
9
2
9
3
9
1
10
1
10
1
10
1
6
1
6
2
1
10
1
6
1
10
1
6
6
10
1
6
6
10
1
6
1
6
1
6
5
9
2
9
6
10
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
10
1
6
1
6
1
10
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
5
9
1
6
1
6
2
6
10
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
6
10
1
6
5
9
1
6
1
6
1
6
1
6
1
6
6
10
6
10
6
10
1
6
1
6
1
6
1
6
5
9
2
9
каждый R и R независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, дейтерия, амино, галогена, гидрокси, нитро, карбокси, (C-C)алкенила, (C-C)алкинила, трифторметила, трифторметокси, (CrC)алкила, (C-C)алкокси, (C-C)циклоалкила, в которых алкильную, алкокси или циклоалкильную группу необязательно замещают 1-3 группами, выбранными из галогена, гидрокси, карбокси, амино(C-C)алкилтио, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, (C-C)гетероарила, (C-C)гетероциклоалкила, (C-C)циклоалкила или (C-C)арила; или каждый R и R независимо представляет (C-C)циклоалкил, (C-C)циклоалкокси, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, (C-C)ариламино, (C-C)алкилтио, (C-C)арилтио, (C-C)алкилсульфинил, (C-C)арилсульфинил, (C-C)алкилсульфонил, (C-C)арилсульфонил, (C-C)ацил, (C-C)алкокси-CO-NH-, (C-C)алкиламино-CO-, (C-C)гетероарил, (C-C)гетероциклоалкил или (C-C)арил, в которых гетероарильную, гетероциклоалкильную и арильную группы необязательно замещают 1-3 галогенами, (C-C)алкилами, (C-C)алкил-CO-NH-, (C-C)алкокси-CO-NH-, (C-C)алкил-CO-NH-(C-C)алкилами, (C-C)алкокси-CO-NH-(C-C)алкилами, (C-C)алкокси-CO-NH-(C-C)алкокси, карбокси, карбокси(C-C)алкилами, карбокси(C-C)алкокси, бензилоксикарбонил(C-C)алкокси, (C-C)алкоксикарбонил(C-C)алкокси, (C-C)арилами, амино, амино(C-C)алкилами, (C-C)алкоксикарбониламино, (C-C)арил(C-C)алкоксикарбониламино, (C-C)алкиламино, ((C-C)алкил)амино, (C-C)алкиламино(C-C)алкилами, ((C-C)алкил)амино(C-C)алкилами, гидрокси, (C-C)алкокси, карбокси, карбокси(C-C)алкилами, (C-C)алкоксикарбонилами, (C-C)алкоксикарбонил(C-C)алкилами, (C-C)алкокси-CO-NH-, (C-C)алкил-CO-NH-, циано, (C-C)гетероциклоалкилами, амино-CO-NH-, (C-C)алкиламино-CO-NH, ((C-C)алкил)амино-CO-NH-, (C-C)ариламино-CO-NH-, (C-C)гетероариламино-CO-NH-, (C-C)алкиламино-CO-NH-(C-C)алкилами, ((C-C)алкил)амино-CO-NH-(C-C)алкилами, (C-C)ариламино-CO-NH-(C-C)алкилами, (C-C)гетероариламино-CO-NH-(C-C)алкилами, (C-C)алкилсульфонилами, (C-C)алкилсульфониламино, (C-C)алкилсульфониламино(C-C)алкилами, (C-C)арилсульфонилами, (C-C)арилсульфониламино, (C-C)арилсульфониламино(C-C)алкилами, (C-C)алкилсульфониламино, (C-C)алкилсульфониламино(C-C)алкилами, (C-C)гетероарилами или (C-C)гетероциклоалкилами, или их фармацевтически приемлемыми солями.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения глаукомы, увеита, диабетической ретинопатии и возрастной дегенерации желтого пятна, включающему введение млекопитающему композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество Jak3 ингибитора, являющегося соединением формулы I.
Конкретные соединения формулы I включают соединения, где указанное соединение выбирают из группы, состоящей из:
метил[4-метил-1-(пропан-1-сульфонил)пиперидин-3-ил]-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амина;
метилового эфира 4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоновой кислоты;
3,3,3-трифтор-1-{4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}пропан-1-она;
диметиламида 4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоновой кислоты;
этилового эфира ({4-Метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбонил}амино)уксусной кислоты;
3-{4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила;
3,3,3-трифтор-1-{4-метил-3-[метил-(5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}пропан-1-она;
1-{4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-бут-3-ин-1-она;
1-{3-[(5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)метиламино]-4-метилпиперидин-1-ил}пропан-1-она;
1-{3-[(5-фтор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)метиламино]-4-метилпиперидин-1-ил}-пропан-1-она;
N-циано-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-амино]-N'-пропилпиперидин-1-карбоксамидина и
N-циано-4,N',N'-триметил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-карбоксамидина.
В конкретном варианте осуществления Jak3 ингибитор представляет собой 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил (CP0690550), который имеет структуру:
В одном аспекте настоящего изобретения введение Jak3 ингибитора значительно увеличивает объем секретируемой слезной жидкости по сравнению с объемом секретируемой слезной жидкости без обработки в течение двух дней. В следующем аспекте настоящего изобретения введение Jak3 ингибитора увеличивает объем секретируемой слезной жидкости, по меньшей мере, на 30% по сравнению с первоначальным объемом слезной жидкости в течение первых двух дней введения. В следующем аспекте введение Jak3 ингибитора увеличивает объем секретируемой слезной жидкости, по меньшей мере, на 50% по сравнению с первоначальным объемом слезной жидкости в течение первых двух дней введения. В следующем аспекте настоящего изобретения введение Jak3 ингибитора увеличивает объем секретируемой слезной жидкости, по меньшей мере, на 100% по сравнению с первоначальным объемом слезной жидкости в течение первых двух дней введения. В другом варианте осуществления Jak3 ингибитор увеличивает объем секретируемой слезной жидкости до уровня, сравнимого с уровнем при нормальной секреции слезной жидкости. В следующем аспекте настоящего варианта осуществления Jak3 ингибитор увеличивает объем секретируемой слезной жидкости до уровня, сравнимого с уровнем при нормальной секреции слезной жидкости в течение 8 дней первоначальной обработки.
В альтернативном варианте осуществления настоящее изобретение включает восстановление нормальной секреции слезной жидкости у млекопитающего, включающее введение млекопитающему композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество ингибитора янус-киназы-3 ("Jak3"). В одном аспекте данного варианта осуществления JAK3 ингибитор представляет собой 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил (СР0690550).
В другом аспекте настоящего изобретения, Jak3 ингибитор вводят не более чем дважды в день (BID). В следующем аспекте Jak3 ингибитор вводят один раз в день (QD).
В следующем аспекте настоящего изобретения композицию вводят местно на поверхность глаз.
В другом аспекте настоящего изобретения фармацевтически эффективное количество Jak3 ингибитора составляет от 0,0001% до меньше чем 1,0 мас.%. В следующем аспекте количество Jak3 ингибитора составляет от 0,0003% до меньше чем 0,1 мас.%. В другом аспекте настоящего изобретения количество Jak3 ингибитора составляет от 0,0003 до 0,03 мас.%. В еще другом аспекте количество Jak3 ингибитора составляет от 0,003 до 0,005 мас.%. В еще другом аспекте количество Jak3 ингибитора составляет от 0,01 до 0,03 мас.%. В еще следующем варианте осуществления количество Jak3 ингибитора составляет приблизительно 0,003 мас.%, 0,005 мас.%, 0,01 мас.% или 0,03 мас.%.
В другом аспекте настоящего изобретения офтальмологическая композиция для местного применения, кроме того, содержит агент, регулирующий тоничность, и буфер. В еще следующем аспекте настоящего изобретения агент, регулирующий тоничность, представляет собой или простой сахар, или сахарный спирт. В еще другом аспекте настоящего изобретения буфер выбирают из фосфата или цитрата.
В еще другом аспекте настоящего изобретения композиция, кроме того, содержит поверхностно-активное вещество. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения поверхностно-активное вещество выбирают из TritonX114 и тилоксапола. В следующем аспекте данного варианта осуществления композиция, кроме того, содержит стабилизирующий полимер. В еще следующем аспекте настоящего изобретения стабилизирующий полимер представляет собой карбомер 974 p.
Краткое описание чертежей
На фигуре 1 показана секреция слезной жидкости у MRL/lpr мыши ("мышь с сухостью глаз") относительно контрольной C57 мыши, как обсуждается в примере 1 ниже.
На фигуре 2 показана секреция слезной жидкости у мыши с сухостью глаз относительно C57 мыши при введении Jak3 ингибитора, 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (CP0690550).
На фигуре 3 показана секреция слезной жидкости при введении Jak3 ингибитора CP0690550 по сравнению с Restasis, являющимся лидирующим на рынке лекарственным средством для лечения сухости глаз.
На фигуре 4 показаны дозозависимые эффекты СР690550 при концентрациях 0,003 мас.%, 0,01 мас.% и 0,03 мас.% в среде композиции 1, по сравнению с контрольными группами с нормальной секрецией слезной жидкости и с сухостью глаз.
На фигуре 5 показаны дозозависимые эффекты СР690550 при концентрациях 0,001 мас.% и 0,003 мас.% в среде композиции 3, по сравнению с контрольными группами с нормальной секрецией слезной жидкости и с сухостью глаз.
На фигуре 6 показаны дозозависимые эффекты СР690550 при концентрациях 0,001 мас.%, 0,003 мас.% и 0,01 мас.% в среде композиции 4, по сравнению с контрольными группами с нормальной секрецией слезной жидкости и с сухостью глаз.
На фигуре 7 показаны дозозависимые эффекты СР690550 при концентрациях 0,003 мас.% и 0,01 мас.% в среде композиции 3 в модели мыши с искусственно вызванной сухостью глаз, по сравнению с контрольной группой с нормальной секрецией слезной жидкости и с группой применения среды.
На фигуре 8 показаны дозозависимые эффекты СР690550 при концентрациях 0,003 мас.% и 0,005 мас.% в среде композиции 5 в модели мыши с искусственно вызванной сухостью глаз, по сравнению с контрольной группой с нормальной секрецией слезной жидкости и с группой применения среды.
Подробное описание настоящего изобретения
Согласно настоящему изобретению ингибиторы янус-киназы-3 (Jak3) вводят млекопитающему, страдающему от сухости глаз, и в частности, человеку, страдающему от сухости глаз. В одном аспекте Jak3 селективные ингибиторы настоящего изобретение обладают селективностью при ингибировании Jak3 по сравнению с другими протеинтирозинкиназами, в частности, с близкородственным членом семейства, Jak2. Причина состоит в том, что Jak2 контролирует передачу сигнала посредством рецепторов эритропоэтина (EPO), колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF), колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов (GM)-CSF и тромбопоэтина (TPO). Более того, недостаток Jak2 является летальным для зародыша в результате нарушенного эритропоэза. Можно было бы ожидать, что значительное фармакологическое ингибирование Jak2 in vivo приводило бы в результате к анемии, тромбоцитопении и лейкемии. Pesu et al., Immunological Reviews 203, 127-142 (2005). При ферментных концентрациях Jak3 ингибиторы настоящего изобретения являются, по меньшей мере, в 10 раз более эффективными относительно Jak3 по сравнению с Jak2 и являются в 3000 раз более специфичными по сравнению с другими киназами.
Настоящее изобретение относится к способу лечения сухости глаз, включающему введение млекопитающему композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество ингибитора янус-киназы-3 ("Jak3"), имеющего формулу I и/или конкретных вариантов осуществления, как описано выше. Jak3 ингибиторы описывают в патентах США №6627754 и 7091208, содержание которых вводится в настоящее изобретение с помощью ссылки. Конкретный вариант осуществления настоящего изобретения включает введение пациенту фармацевтически эффективного количества 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила.
Термин "алкил", как применяют в настоящем изобретении, если не указано особо, включает насыщенные одновалентные углеводородные радикалы, содержащие прямые или разветвленные фрагменты или их комбинации.
Термин "алкокси", как применяют в настоящем изобретении, включает O-алкильные группы, в которых "алкил" определен выше.
Термин "галоген", как применяют в настоящем изобретении, если не указано особо, включает фтор, хлор, бром или йод.
Соединения настоящего изобретения могут содержать двойные связи. При наличии двойных связей соединения настоящего изобретения существуют в цис и транс конфигурациях и в виде их смесей.
Если не указано особо, алкильная и алкенильная группы, относящиеся к настоящему изобретению, также как алкильные фрагменты других групп, относящихся к настоящему изобретению (например, алкокси), могут быть линейными или разветвленными, и они могут также быть циклическими (например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил или циклогептил) или быть линейными или разветвленными и содержать циклические фрагменты. Если не указано особо, галоген включает фторид, хлорид, бромид и йодид.
2
9
2
9
3
(C-C)Гетероциклоалкил, при применении в настоящем изобретении, относится к пирролидинилу, тетрагидрофуранилу, дигидрофуранилу, тетрагидропиранилу, пиранилу, тиопиранилу, азиридинилу, оксиранилу, метилендиоксилу, хроменилу, изоксалидинилу, 1,3-оксазолидин-3-илу, изотиазолидинилу, 1,3-тиазолидин-3-илу, 1,2-пиразолидин-2-илу, 1,3-пиразолидин-1-илу, пиперидинилу, тиоморфолинилу, 1,2-тетрагидротиазин-2-илу, 1,3-тетрагидротиазин-3-илу, тетрагидротиадиазинилу, морфолинилу, 1,2-тетрагидродиазин-2-илу, 1,3-тетрагидродиазин-1-илу, тетрагидроазепинилу, пиперазинилу, хроманилу и т.д. Специалисту в данной области техники ясно, что связь указанных (C-C)гетероциклоалкильных колец осуществляется через атом углерода или гетероатом азота с sp гибридизацией.
2
9
2
9
3
(C-C)Гетероарил, при применении в настоящем изобретении, относится к фурилу, тиенилу, тиазолилу, пиразолилу, изотиазолилу, оксазолилу, изоксазолилу, пирролилу, триазолилу, тетразолилу, имидазолилу, 1,3,5-оксадиазолилу, 1,2,4-оксадиазолилу, 1,2,3-оксадиазолилу, 1,3,5-тиадиазолилу, 1,2,3-тиадиазолилу, 1,2,4-тиадиазолилу, пиридилу, пиримидилу, пиразинилу, пиридазинилу, 1,2,4-триазинилу, 1,2,3-триазинилу, 1,3,5-триазинилу, пиразоло[3,4-b]пиридинилу, циннолинилу, птеридинилу, пуринилу, 6,7-дигидро-5H-[1]пиридинилу, бензо[b]тиофенилу, 5,6,7,8-тетрагидрохинолин-3-илу, бензоксазолилу, бензотиазолилу, бензизотиазолилу, бензизоксазоилу, бензимидазолилу, тианафтенилу, изотианафтенилу, бензофуранилу, изобензофуранилу, изоиндолилу, индолилу, индолизинилу, индазолилу, изохинолилу, хинолил, фталазинилу, хиноксалинилу, хиназолинилу, бензоксазинилу и т.д. Специалисту в данной области техники ясно, что связь указанных (C-C)гетероциклоалкильных колец осуществляется через атом углерода или гетероатом азота с sp гибридизацией.
6
10
(C-C)Арил, при применении в настоящем изобретении, относится к фенилу или нафтилу.
Предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 0; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 0; d равно 1; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1 ; X представляет собой карбонил; c равно 1; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет -C(=N=циано)-; c равно 1; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 0; c равно 0; d равно 0; e равно 0; f равно 0; g равно 1; и Z представляет собой -C(O)-O-.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); n равно 2; c равно 0; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); n равно 2; c равно 0; d равно 2; e равно 0; f равно 1; g равно 1; и Z представляет собой карбонил.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); n равно 2; c равно 0; d равно 2; e равно 0; f равно 1; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 1; d равно 0; e равно 1; Y представляет собой S(O); n равно 2; f равно 0; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); n равно 2; c равно 1; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 1; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 1; d равно 0; e равно 0; f равно 0; и g равно 0.
n
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); c равно 0; d равно 1; e равно 1; Y представляет собой S(O); n равно 2; f равно 0; и g равно 0.
n
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой S(O); c равно 0; d равно 1; e равно 1; Y равно S(O); n равно 2; f равно 1; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой кислород; c равно 0; d равно 1; e равно 1; Y представляет собой S(O); n равно 2; f равно 1; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой кислород; c равно 0; d равно 1; e равно 1; Y представляет собой S(O); n равно 2; f равно 0; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 1; d равно 1; e равно 1; Y представляет собой S(O); f равно 0; и g равно 0.
n
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где a равно 0; b равно 1; X представляет собой карбонил; c равно 1; d равно 1; e равно 1; Y представляет собой S(O); n равно 2; f равно 1; и g равно 0.
12
1
6
1
6
1
6
1
6
2
2
6
1
6
1
6
m
Дополнительные предпочтительные соединения формулы I включают соединения, где R представляет собой циано, трифторметил, (С-C)алкил, трифторметил(С-C)алкил, (С-C)алкиламино, ((С-C)алкил)амино, (C-C)алкинил, циано(С-C)алкил, (С-C)алкил-S(O), где m равно 0, 1 или 2.
Композиции, вводимые согласно настоящему изобретению, содержат фармацевтически эффективное количество одного или более из указанных Jak3 ингибиторов. Как применяют в настоящем изобретении, "фармацевтически эффективное количество" является количеством, которое является достаточным для того, чтобы ослабить или устранить признаки симптомов сухости глаз или других расстройств, требующих увлажнения глаз. Эффективную дозу можно вводить одним или более введениями.
Как ясно из клинического контекста, введение эффективного количества лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции можно осуществлять отдельно или совместно с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, "эффективное количество" или "эффективную дозу" можно рассматривать в контексте введения одного или более терапевтических агентов, и отдельный агент можно рассматривать в качестве вводимого в эффективном количестве, если совместно с одним или более другими агентами можно достичь или достигается требуемый результат.
Как применяют в настоящем изобретении, "лечение" является подходом для получения лечебного или требуемого результатов, включая клинические результаты. Для целей настоящего изобретения лечебный или требуемый клинические результаты включают, но не ограничиваются, ослабление и/или устранение признаков симптомов сухости глаз или других расстройств, требующих увлажнения глаз.
Большинство практикующих врачей диагностируют и лечат синдром сухости глаз на основании одних симптомов (JAMA 2001; 286:2114-9). Ответы на анкету для диагностирования сухости глаз McMonnies & HO можно применять в качестве средства для определения симптомов сухости глаз (значение большее, чем 14,5 соответствует диагнозу о наличии сухости глаз). Тем не менее, лаборатория по сухости глаз национального института глазных болезней определяет 'симптомы дискомфорта глаз' в качестве только одного аспекта 'сухости глаз'. Анализ наблюдаемого недостатка слезной жидкости или возможности избыточного испарения слезной жидкости и повреждения подвергаемой внешнему воздействию поверхности глаз может давать подтверждение диагноза 'сухости глаз'.
Как применяют в настоящем изобретении, "значительно увеличивает секрецию слезной жидкости" обозначает статистически значимое (т.е. p<0,05) увеличение секреции слезной жидкости, как измерено стандартными офтальмологическими способами, такими как тест Ширмера или фенольный тест с применением красной нити, тест на время разрыва слезной пленки с флуоресцеином, или любой из тестов, описанный ниже.
Самыми распространенными тестами на сухость глаз являются тесты на время разрыва слезной пленки, тест Ширмера и окрашивание флуоресцеином, хотя данные тесты не являются исчерпывающими. Ниже приведены известные тесты на определение сухости глаз и предельные значения, отражающие возможность применения данных тестов для диагностирования сухости глаз:
Таблица 1
Тест
Аномальные предельные значения для диагностирования сухости глаз
Тест Ширмера I
Меньше чем или равно 5 мм смачиванию в течение 5 минут
Фенольный тест с применением красной нити
Меньше чем 9 мм
Тест на время разрыва слезной пленки
Меньше чем или равно 10 секундам
Тест на окрашивание флуоресцеином
Больше чем 3, но меньше 15
Тест на окрашивание бенгальским розовым
Больше чем 3, но меньше 18
Тест на осмолярность слезной пленки
Меньше чем или равно 312 мОсм/л
Метод импрессионной цитологии
Больше чем 1
Метод цитологии с применением специальной щеточки
Больше чем 1
Тест на лактоферрин в слезной жидкости
Меньше чем 1 или равно 0,9 мкг/мл
Тест Ширмера I
В тесте Ширмера I измеряют количество слез, которое секретировано глазом: слезы собирают в течение приблизительно 5 минут или около того, что позволяет офтальмологу определить является ли секретированное количество достаточным для поддержания глаза в здоровом состоянии или нет. Если секретировано небольшое количество слезной жидкости, можно диагностировать сухость глаз в результате недостатка слезной жидкости. Если секретировано достаточное количество слезной жидкости, но у пациента все еще сохраняются симптомы дискомфорта глаз, затем можно диагностировать сухость глаз в результате испарения.
В тесте Ширмера I полоску фильтровальной бумаги с размерами 35 мм × 5 мм применяют для измерения количества слез, которое секретировано в течение 5 минут. Полоску помещают в месте соединения средней и латеральных третей нижнего глазного века при естественном освещении. Пациенту дают указания, чтобы он смотрел вперед и моргал с нормальной частотой в течение испытания. Тест, дающий отрицательный результат (более чем 10 мм смачивание фильтровальной бумаги в течение 5 минут), обозначает то, что пациент секретирует нормальное количество слезной жидкости. Пациенты с сухостью глаз имеют величины смачивания, меньшие, чем 5 мм в течение 5 минут.
Важное ограничение теста Ширмера заключается в том, что существует значительная изменчивость в результатах испытаний, выполненных в различное время и разными врачами. В действительности данный тест обычно применяют для диагностики пациентов с тяжелой формой сухости глаз.
Вокруг теста Ширмера I ведется полемика. Когда не применяют анестезирующие глазные капли, то считают, что данный тест позволяет измерять базальную и рефлекторную секрецию слезной жидкости. При применении анестезирующих глазных капель считают, что данный тест позволяет измерять только базальную секрецию слезной жидкости. Существует неопровержимый довод предполагать, что количества слезной жидкости, измеренные данными двумя различными способами, могут отличаться незначительно между базальной и рефлекторной секрецией слезной жидкости. Большинство врачей проводят данный тест после применения анестезирующих глазных капель для заморозки глаза. Однако лаборатория по сухости глаз Национального института глазных болезней рекомендует не применять анестезирующие глазные капли перед проведением данного теста. Предельное значение является одинаковым, применяют ли анестезирование или нет. Для измерения рефлекторной секреции глазной жидкости можно проводить тест Ширмера II. Тест Ширмера II проводят раздражением слизистой оболочки носа ватной палочкой перед измерением секреции слезной жидкости.
В качестве альтернативы тестам Ширмера I или II, которые некоторые практикующие врачи считают чрезмерно инвазивными и имеющими малую ценность при диагностировании слабо выраженной и умеренной сухости глаз, можно применять фенольный тест с применением красной нити (Quick Zone). Применяют хлопчатобумажную нить, пропитанную феноловым красным. Феноловый красный является чувствительным к pH и изменяет свой цвет с желтого на красный при смачивании слезной жидкостью. Согнутый конец нити длиной 70 мм помещали в нижний свод конъюнктивы. Через 15 секунд длину участка с измененным цветом нити - отражающего длину нити, смоченную слезной жидкостью, измеряли в миллиметрах. Длина смоченного участка нити должна обычно составлять от 9 мм до 20 мм. Пациенты с сухостью глаз имеют длины участков смачивания, меньшие, чем 9 мм.
Время разрыва слезной пленки (BUT)
У пациентов с сухостью глаз слезная пленка является нестабильной и разрывается быстрее. Следовательно, время разрыва слезной пленки у пациентов, которые страдают от сухости глаз, является более коротким. Тест на определение времени разрыва пленки с применением флуоресцеина (FBUT) применяют чаще всего. Полоску с флуоресцеином применяют на своде нижнего века и затем удаляют. Пациента просили моргнуть три раза и затем смотреть прямо, вперед, не моргая. Пленку слезной жидкости наблюдали под светом, прошедшим через кобальтовый светофильтр щелевой лампы, и время, которое прошло между последним морганием и появлением первого разрыва в слезной пленки, фиксировали с помощью секундомера (разрыв виден в виде черного пятна на голубой поверхности). BUT с применением флуоресцеина, меньшее чем 10 секунд или менее, указывает на наличие сухости глаз.
Чтобы преодолеть ограничения, вызванные потенциальной инвазивностью FBUT теста, разрабатываются неинвазивные способы определения времени разрыва слезной пленки (NIBUT). Их называют неинвазивными, т.к. к глазу не прикасаются. Приборы, такие как кератометр, ручной кератоскоп или тиаскоп, требуются для измерения NIBUT. Фазу перед разрывом, которая предшествует реальному разрыву слезной пленки, можно наблюдать некоторыми способами. Данную фазу перед разрывом называют временем утоньшения слезной пленки (TTT). Измерение осуществляют наблюдением искажения (TTT) и/или разрыва (NIBUT) метки кератометра (отраженное изображение решетки кератометра). Практикующий врач фокусирует и осматривает четкие метки и затем записывает время, потраченное на искажение (TTT) и/или разрыв (NIBUT) изображения метки. NIBUT измерения являются более долгими, чем измерения времени разрыва слезной пленки с применением флуоресцеина. NIBUT величины, меньшие, чем 15 секунд, указывают на наличие сухости глаз. TTT/NIBUT тест считают более благоприятным для пациента, воспроизводимым и точным.
Как применяют в настоящем изобретении, введение "совместно" включает одновременное введение и/или введение в различные моменты времени. Введение совместно также включает введение в виде одной композиции или введение в виде отдельных композиций. В настоящем изобретении подразумевается, что введение совместно включает любые обстоятельства, в которых Jak3 ингибитор и другой агент вводят индивидууму, что может осуществляться одновременно и/или раздельно. Как далее обсуждается в настоящем изобретении, ясно, что Jak3 ингибитор и другой агент можно вводить с различными частотами дозирования или интервалами. Например, Jak3 ингибитор можно вводить ежедневно, тогда как другой агент можно вводить менее часто. Ясно, что Jak3 ингибитор и другой агент можно вводить, применяя одинаковые пути введения или различные пути введения.
"Индивидуум" (альтернативно называемый "субъект") является млекопитающим, более предпочтительно человеком. "Млекопитающее" включает, но не ограничивается, сельскохозяйственных животных (таких как коровы), спортивных животных, домашних животных (таких как кошки, собаки, лошади), приматов, мышей и крыс.
Термин "восстановление нормальной секреции слезной жидкости" относится к устранению симптомов сухости глаз, как описано в стандартных офтальмологических методиках, такому как величина отклика, меньшая, чем 14,5 в анкете на диагностирование симптомов сухости глаз McMonnies & Ho и/или результаты тестов (т.е. тестов Ширмера, тестов с применением фенолового красного, тестов с применением флуоресцеина и т.д., как представлено в таблице 1), которые находятся в области значений переменной, соответствующей нормальному состоянию.
Согласно способам настоящего изобретения композицию, содержащую один или более из специфических Jak3 ингибиторов и фармацевтически приемлемый носитель для местного офтальмологического введения или имплантации в конъюнктивальный мешок или переднюю камеру глаза, вводят нуждающемуся в лечении млекопитающему. Композиции составляют согласно способу известным в данной области техники, для конкретного пути требуемого введения.
Обычно для композиций, предназначенных для местного введения в глаз в форме глазных капель или глазных мазей, суммарное количество Jak3 ингибитора будет составлять приблизительно от 0,0001 до меньше чем 1,0 мас.%. Предпочтительный диапазон количества Jak3 ингибитора составляет от 0,0003 до меньше чем 0,1 мас.%, тогда как даже более предпочтительный диапазон количества Jak3 ингибитора составляет от 0,003 до 0,03 мас.%. Другой предпочтительный диапазон количества Jak3 ингибитора составляет от 0,005 до 0,05 мас.%, и еще более предпочтительный диапазон составляет от 0,01 до 0,03 мас.%.
Предпочтительно композиции, вводимые согласно настоящему изобретению, будут составлять в виде растворов, суспензий, эмульсий и других дозированных форм для местного введения. Водные растворы являются обычно предпочтительными из-за легкости приготовления, также как способности пациента легко вводить данные композиции посредством закапывания одной-двух капель раствора в пораженные глаза. Однако композиции могут также быть суспензиями, вязкими или полувязкими гелями или другими типами твердых или полутвердых композиций. Суспензии могут быть предпочтительными для Jak3 ингибиторов, которые являются умеренно растворимыми в воде.
Композиции, вводимые согласно настоящему изобретению, могут также содержать различные другие ингредиенты, включая, но не ограничиваясь, агенты, регулирующие тоничность, буферы, поверхностно-активные вещества, стабилизирующий полимер, консерванты, сорастворители и агенты, увеличивающие вязкость. Предпочтительные фармацевтические композиции настоящего изобретения содержат ингибитор с агентом, регулирующим тоничность, и буфером. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут, кроме того, необязательно содержать поверхностно-активное вещество и/или паллиативное средство и/или стабилизирующий полимер.
Различные агенты, регулирующие тоничность, можно применять для регулирования тоничности композиции, предпочтительно до тоничности натуральной слезной жидкости для офтальмологических композиций. Например, можно добавлять к композиции до приблизительно физиологической тоничности хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, хлорид кальция, простые сахара, такие как декстроза, фруктоза, галактоза, и/или простые полиолы, такие как сахарные спирты, маннит, сорбит, ксилит, лактит, изомальт, мальтитол, и гидрогенизированный гидролизат крахмала. Данное количество агента, регулирующего тоничность, будет изменяться в зависимости от конкретного агента, который нужно добавлять. Однако обычно композиции будут содержать агент, регулирующий тоничность, в количестве, достаточном для того, чтобы придать конечной композиции офтальмологически приемлемую осмолярность (обычно, приблизительно 150-450 мОсм, предпочтительно 250-350 мОсм и более предпочтительно приблизительно 290 мОсм). Обычно агенты, регулирующие тоничность, настоящего изобретения будут присутствовать в количествах в диапазоне от 2 до 4 мас.%. Предпочтительные агенты, регулирующие тоничность, настоящего изобретения включают простые сахара или сахарные спирты. Конкретным вариантом осуществления настоящего изобретения является D-маннит.
Подходящую буферную систему (например, фосфат натрия, ацетат натрия, цитрат натрия, борат натрия или борную кислоту) можно добавлять к композиции для того, чтобы предотвратить медленное изменение pH при условиях хранения. Конкретная концентрация будет изменяться в зависимости от применяемого агента. Однако предпочтительно буфер будут выбирать так, чтобы поддерживать конечный pH в диапазоне pH 5-8, и более предпочтителен конечный pH в диапазоне pH 5-7.
Поверхностно-активные вещества можно необязательно применять для доставки более высоких концентраций ингибитора. Поверхностно-активные вещества действуют, солюбилизируя ингибитор и стабилизируя коллоидную дисперсию, такую как раствор мицелл, микроэмульсия, эмульсия и суспензия. Примеры поверхностно-активных веществ, которые можно необязательно применять, включают полисорбат, полоксамер, полиозил 40 стеарат, полиоксил касторовое масло, тилоксапол, тритон и монолаурат сорбитана. Предпочтительные поверхностно-активные вещества, которые применяют в настоящем изобретении, обладают гидрофильно-липофильным балансом "HLB" в диапазоне 12,4-13,2 и являются приемлемыми для офтальмологического применения, такие как ТритонХ114 и тилоксапол.
Композиции, составленные для лечения заболеваний и расстройств с сухостью глаз, могут содержать водные носители, предназначенные для оказания немедленного, кратковременного облегчения состояний с сухостью глаз. Данные носители можно смешивать в качестве фосфолипидного носителя или носителя для искусственной слезной жидкости, или их смеси. Как применяют в настоящем изобретении, "фосфолипидный носитель" и "носитель для искусственной слезной жидкости" относится к водным композициям, которые: (i) содержат один или более фосфолипидов (в случае фосфолипидных носителей) или другие соединения, которые смазывают, "увлажняют", тождественны по консистенции эндогенной слезной жидкости, способствуют накоплению естественной слезной жидкости или, иначе, оказывают временное облегчение симптомов сухости глаз и состояний при глазном введении; (ii) являются безопасными; и (iii) обеспечивают подходящей средой для доставки для местного введения эффективного количества одного или более специфических Jak3 ингибиторов. Примеры композиций искусственной слезной жидкости, пригодных в качестве носителей искусственной слезной жидкости, включают, но не ограничиваются ими, имеющиеся в продаже продукты, такие как Visine Pure Tears , Visine Tears Natural Tears Formula  (Johnson & Johnson) Tears Naturale , Tears Naturale II , Tears Naturale Free , Bion Tears  (Alcon Laboratories, Inc. Forth Worth, TX.), Refresh Tears , Refresh Endura , Refresh Plus  (Allergan Inc.). Примеры композиций с фосфолипидными носителями включают композиции, описанные в патентах США №4804539 (Guo et al.), 4883658 (Holly), 4914088 (glonek), 5075104 (Gressel et al.), 5278151 (Korb et al.), 5294607 (Glonek et al.), 5371108 (Korb et al.), 5578586 (Glonek et al.); в настоящее изобретение с помощью ссылки вводят те части вышеуказанных патентов, в которых описывают фосфолипидные композиции, пригодные в качестве фосфолипидных носителей настоящего изобретения.
В данной области техники известны паллиативные соединения, предназначенные для смазывания, "увлажнения", тождественные по консистенции эндогенной слезной жидкости, способствующие накоплению естественной слезной жидкости или, иначе, оказывающие временное облегчение симптомов сухости глаз и состояний при глазном введении. Данные паллиативные агенты могут в некоторых случаях выполнять двойную функцию в качестве агента, регулирующего тоничность, такие как мономерные полиолы (глицерин, пропиленгликоль, этиленгликоль). Паллиативные соединения могут увеличивать вязкость композиции, и они включают, но не ограничиваются ими: мономерные полиолы, полимерные полиолы, такие как полиэтиленгликоль, гидроксипропилметилцеллюлоза ("HPMC"), натрий карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза ("HPC"), декстраны, такие как декстран 70; водорастворимые белки, такие как желатин; и виниловые полимеры, такие как поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, повидон, и карбомеры, такие как карбомер 941, карбомер 940, карбомер 971P, карбомер 974P.
Дополнительными агентами, которые можно добавлять к офтальмологическим композициям настоящего изобретения, являются средства, уменьшающие раздражение, которые действуют как стабилизирующий полимер. Стабилизирующий полимер должен быть ионно-заряженым полимером, предпочтительно применяемым для местного глазного введения, более конкретно полимером, который несет отрицательный заряд на своей поверхности, который может обладать дзета-потенциалом, равным (-)10-50 мВ, для физической стабильности, и способный образовывать дисперсию в воде (т.е. водорастворимый). Предпочтительным стабилизирующим полимером настоящего изобретения мог бы быть полиэлектролит или полиэлектролиты, если больше чем один, из семейства полиакрилатов с поперечными сшивками, таких как карбомеры и Pemulen, особенно карбомер 974р (полиакриловая кислота), при концентрации 0,1-0,5 мас.%. Как уже отмечалось, карбомеры могут также действовать в качестве паллиативного соединения.
Другие соединения можно также добавлять к офтальмологическим композициям настоящего изобретения для того, чтобы увеличить вязкость носителя. Примеры агентов, увеличивающих вязкость, включают, но не ограничиваются ими: полисахариды, такие как гиалуроновые кислоты и их соли, хондроитинсульфат и его соли, декстраны, различные полимеры семейства целлюлозы; виниловые полимеры; и полимеры, являющиеся производными акриловой кислоты. Обычно композиции с фосфолипидным носителем или носителем для искусственной слезной жидкости будут обладать вязкостью от 1 до 400 сантипуазов ("cps").
Офтальмологические продукты для местного применения обычно упаковывают в многодозовые формы. Таким образом, требуются консерванты для предотвращения микробного заражения в процессе применения. Подходящие консерванты включают: бензалконийхлорид, хлорбутанол, бензододецинийбромид, метилпарабен, пропилпарабен, фенилэтиловый спирт, эдентат динатрия, сорбиновую кислоту, поликватерний-1 или другие агенты, известные специалистам в данной области техники. Данные консерванты обычно применяют при концентрации от 0,001 до 1,0% в/об. Композиции единичной дозы настоящего изобретения будут стерильными, но обычно не содержащими консервантов. Такие композиции, следовательно, обычно не содержат консервантов.
Предпочтительные композиции настоящего изобретения предназначены для введения человеку, страдающему от сухости глаз или симптомов сухости глаз. Предпочтительно данные композиции будут вводить местно. Обычно дозы, применяемые для вышеописанных целей, будут изменяться, но будут составлять эффективное количество для устранения или облегчения состояний с сухостью глаз. Обычно 1-2 капли данных композиций будут вводить один или более раз в день. Предпочтительно данные композиции будут вводить один (QD) или два (BID) раза в день.
Примеры композиций для глазных капель даны в примере 2 ниже.
Пример 1: 1-{4-Метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}этанон и 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил.
Способ A: (1-Бензил-4-метилпиперидин-3-ил)метиламин
2
4
К перемешиваемому раствору 1-бензил-4-метилпиперидин-3-она (2,3 грамма, 11,5 ммоль), полученного способами Lorio, M.A. и Damia, G., Tetrahedron, 26, 5519 (1970) и Grieco et al., Journal of the American Chemical Society, 107, 1768 (1985), (модифицированный, с применением 5% метанола в качестве сорастворителя), (обе статьи вводятся полностью с помощью ссылки), растворенному в 23 мл 2 M метиламина в тетрагидрофуране, добавляли 1,4 мл (23 ммоль) уксусной кислоты, и полученную в результате смесь перемешивали в плотно закрытой пробирке в течение 16 часов при комнатной температуре. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (4,9 грамма, 23 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в плотно закрытой пробирке в течение 24 часов, после чего реакцию прекращали добавлением 1 н. гидроксида натрия (50 мл). Затем реакционную смесь экстрагировали 3×80 мл эфира, объединенные эфирные слои сушили над сульфатом натрия (NaSO) и концентрировали досуха в вакууме, получая 1,7 грамма (69%) указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. LRMS: 219,1 (M+1).
Способ B: (1-Бензил-4-метилпиперидин-3-ил)метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амин
Раствор 4-хлорпирроло[2,3-d]пиримидина (2,4 грамма, 15,9 ммоль), полученного способом Davoll, J. Am. Chem. Soc, 82, 131 (1960), (которая вводится полностью с помощью ссылки), и продукт способа A (1,7 грамма, 7,95 ммоль), растворенный в 2 эквивалентах триэтиламина, нагревали в плотно закрытой пробирке при 100°C в течение 3 дней. После охлаждения до комнатной температуры и концентрирования при пониженном давлении остаток очищали флэш-хроматографией (силикагель; 3% метанол в дихлорметане), получая 1,3 грамма (50%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. LRMS: 336,1 (M+1).
Способ C: Метил(4-метилпиперидин-3-ил)-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амин
К продукту из способа B (0,7 грамма, 2,19 ммоль), растворенному в 15 мл этанола, добавляли 1,5 мл 2 н. хлороводородной кислоты и реакционную смесь дегазировали продуванием азотом. Затем к реакционной смеси добавляли 0,5 грамма 20% гидроксида палладия на угле (50% воды) (Aldrich) и полученную в результате смесь встряхивали (Parr-Shaker) в атмосфере 50 фунт/кв.дюйм водорода при комнатной температуре в течение 2 дней. Отфильтрованную через целит реакционную смесь концентрировали досуха в вакууме и остаток очищали флэш-хроматографией (силикагель; 5% метанола в дихлорметане), получая 0,48 грамма (90%) указанного в заголовке соединения. LRMS: 246,1 (M+1).
Способ D: 1-(4-Метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил]этанон
3
3
К перемешиваемому раствору продукта способа C (0,03 грамма, 0,114 ммоль), растворенного в 5 мл смеси 10:1 дихлорметан/пиридин, добавляли (0,018 грамма, 0,228 ммоль) ацетилхлорид и полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Затем реакционную смесь распределяли между дихлорметаном и насыщенным раствором бикарбоната натрия (NaHCO). Органический слой промывали снова насыщенным раствором NaHCO, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха в вакууме. Остаток очищали препаративной тонкослойной хроматографией (PTLC) (силикагель; 4% метанола в дихлорметане), получая 0,005 мг (15%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. LRMS: 288,1 (M+1).
Способ E: Синтез 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила (CP0690550)
Указанное в заголовке соединение 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрил (CP0690550) получали, применяя стандартную модификацию способов A-D, описанных выше.
Способ F: Получение цитратной соли 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила
Цитратную соль получали, применяя способы, описанные в WO 2007/012953. В чистый, сухой, продутый азотом 500-мл реактор загружали метил-4(-метилпиперидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амин (25,0 г, 0,102 моль) и хлористый метилен (250 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение минимум 2,5 часов. В чистый, сухой, продутый азотом 1-л реактор загружали цианоуксусную кислоту (18,2 г, 0,214 моль), хлористый метилен (375 мл) и триэтиламин (30,1 мл, 0,214 моль). Смесь охлаждали до -15-5,0°C в течение одного часа и добавляли триметилацетилхлорид (25,6 мл, 0,204 ммоль) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. Реакцию выдерживали в течение минимум 2,5 часов, затем добавляли раствор амина с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. После перемешивания в течение 1 часа смесь нагревали до комнатной температуры и добавляли 1 M гидроксид натрия (125 мл). Органический слой промывали водой (125 мл). Раствор хлористого метилена вытесняли ацетоном до объема 500 мл и достигали температуры, равной 55-65°C. Добавляли к смеси воду (75 мл), поддерживая температуру, равной 55-65°C. Добавляли к смеси раствор лимонной кислоты (20,76 г, 0,107 моль) в воде (25,0) и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение минимум 5 часов и затем полученное в результате твердое вещество выделяли фильтрацией и промывали ацетоном (2×75 мл), который пропускали через фильтр. Соль загружали в чистый, сухой, продутый азотом 1-л реактор с 2B этанолом (190 мл) и водой (190 мл). Суспензию нагревали при 75-85°C в течение минимум 4 часов. Смесь охлаждали до 20-30°C и перемешивали в течение дополнительных 4 часов. Твердый остаток выделяли фильтрацией и промывали 2B этанолом (190 мл). После сушки в вакуумной печи при 50°C со слабым поддувом азота, выделяли 34,6 г (67,3%) указанного в заголовке соединения.
1
6
q
H ЯМР (500 МГц, ДМСО-д): δ 8,14 (с, 1H), 7,11 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,57 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,96 (кв, J=6,0 Гц, 1H), 4,00-3,90 (м, 2H), 3,80 (м, 2H), 3,51 (м, 1H), 3,32 (с, 3H), 2,80 (Ab, J=15,6 Гц, 2H), 2,71 (Abq, J=15,6 Гц, 2H), 2,52-2,50 (м, qH), 2,45-2,41 (м, 1H), 1,81 (м, 1H), 1,69-1,65 (м, 1H), 1,04 (д, J=6,9 Гц, 3H).
Способ G: Получение свободного основания 3-((3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил)-3-оксопропионитрила
Цитратную соль 3-{(3R,4R)-4-метил-3-[метил-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино]пиперидин-1-ил}-3-оксопропионитрила, полученную в способе F выше, обрабатывали 1 M гидроксидом натрия в дихлорметане, получая соответствующее свободное основание. Затем свободное основание кристаллизовали из метанола и воды, получая кристаллическую форму свободного основания.
Пример 2: Фармацевтические композиции
Пример 2a: Композиции
В таблице 2, ниже, представлены различные фармацевтические композиции, содержащие ингибитор CP0690550.
Таблица 2
Код композиции
Описание композиции
Композиция 1
50 мМ pH 7,4 фосфатный буфер, 0,05% Tween 80, 0,5% NaCl
Композиция 2
50 мМ pH 7,4 фосфатный буфер, 0,36% HPMC, 0,2% глицерин, 1% PEG400, 0,35% NaCl
Композиция 3
5 мМ pH 7,4 фосфатный буфер, 0,36% HPMC, 0,2% глицерин, 1% PEG400, 5% кремофор ELP, 4,3% маннит
Композиция 4
10 мМ pH 5,8 цитратный буфер, 4,5% маннит
Композиция 5
10 мМ pH 5,8 цитратный буфер, 4,2% маннит, 0,36% HPMC, 0,2% глицерин
Композиция 6
0,3% тилоксапол (неионное поверхностно-активное вещество), 0,5% карбопол974Р (анионный полимерный стабилизатор), 2,25% D-маннит, pH 6,5 фосфатный буфер при 50 мМ концентрации, 230 мОсм/кг
Композиция 7
0,3% тилоксапол (неионное поверхностно-активное вещество), 0,1% карбопол974Р (анионный полимерный стабилизатор), 2,25% D-маннит, pH 6,5 фосфатный буфер при 50 мМ концентрации, 230 мОсм/кг
Пример 2b: Получение
Получали каждую из вышеуказанных композиций 1-5, содержащую Jak3 ингибитор СР0690550 в трех дозовых количествах: 0,001 мас.%, 0,003 мас.% и 0,01 мас.%. Композицию 5 также получали с Jak3 ингибитором СР9690550 в количестве 0,005 мас.% (смотри фигуру 8). Получали композиции 6 и 7, содержащие Jak3 ингибитор в количестве 0,03 мас.%.
Вышеуказанные композиции получали добавлением требуемого количества агента, регулирующего тоничность (гипромеллоза или маннит, при наличии), в колбу, нагреванием до приблизительно 50°С в половине конечного объема буфера (фосфатный или цитратный буфер, как показано). После нагревания порции ингибитора СР690550, взвешивали и растворяли дополнительные эксципиенты (глицерин, полиэтиленгликоль 400, при наличии). Отмеряли и добавляли порцию свободного основания Jak3 ингибитора в качестве исходного раствора. Добавляли очищенную воду до 100%. Смесь перемешивали в течение 5 минут для гомогенизации и затем фильтровали через стерилизующий мембранный фильтр в стерильный приемник. При необходимости рН регулировали добавлением 1,0 М NaOH.
Композиции 6 и 7 представляют офтальмологические композиции, в которых присутствуют наибольшие количества ингибитора СР690550 (0,03 мас.%). В добавление к агенту, регулирующему тоничность, и буферу данные композиции с высокой концентрацией будут также содержать поверхностно-активное вещество и необязательно стабилизирующий полимер. Предпочтительные поверхностно-активные вещества настоящего изобретения включают TritonX114 и тилоксапол. Предпочтительные стабилизирующие полимеры включают карбомер 974p.
Получение композиций 6 и 7 осуществляли вначале диспергированием карбомера в буфере, содержащем поверхностно-активное вещество, при 10X их конечной концентрации (например, 3% тилоксапол в 50 мМ фосфатном буфере при pH 6,5 с 2,5% D-маннитом и 5% карбомером 974p). Jak3 ингибитор CP690550 диспергировали в первичном концентрате также при 10X его конечной концентрации. Затем смесь гомогенизировали, причем конечную композицию получали 10x разбавлением отфильтрованного первичного концентрата в подходящем буфере.
Пример 3: Действие селективного Jak3 ингибитора на секрецию слезной жидкости у MRL/lpr (Сухость глаз) мышей
Для изучения степени секреции слезной жидкости с течением времени 10 MRL/lpr мышей и 5 подобранных по возрасту C57 Black/6 контрольных мышей возрастом 8 недель приобретали в лаборатории Джексона (Bar Harbor, ME, USA). Вид мышей MRL/lpr имеет мутацию, которая делает их предрасположенными к сухости глаз, аналогичной синдрому Шегрена.
Исходный объем слезной жидкости устанавливали измерением объема слезной жидкости 4 раза в течение одной недели для доказательства того, что сухость глаз присутствует у MRL/lpr мышей по сравнению с C57 мышами. Секрецию слезной жидкости измеряли хлопчатобумажной нитью (Quick Zone), удерживаемой пинцетом, и применяли на глазной поверхности в углу глазной щели в течение 15-30 секунд. Смачивание нити измеряли в миллиметрах. Результаты измерений секреции слезной жидкости MRL/lpr мышей по сравнению с С57 контрольными мышами показаны на фигуре 1.
Животных (5-10 мышей в группе) обрабатывали 2 мкл одной из сред (фосфатный буферный солевой раствор, PBS, содержащий 0,05 мас.% Tween 80) или 0,1 мас.% СР-690550 дважды в день в течение двух недель. С57 мыши также получали среду. Объем слезной жидкости измеряли на 2, 3 и 6 дни. Действие СР-690550 на секрецию слезной жидкости у MRL/lpr мышей показано на фигуре 2.
Как показано на фигуре 2, СР0690550 способен значительно увеличивать объем секретируемой слезной жидкости в первые 2 дня применения. В частности, СР690550 увеличивает объем секретируемой слезной жидкости более чем на 100% от первоначального объема секретируемой слезной жидкости у мышей с сухостью глаз в первые 2 дня применения.
Пример 4: Сравнительные данные для сравнения СР-690550 с Restasis
Измерение объема секретируемой слезной жидкости проводили, применяя нить, пропитанную феноловым красным (Quick Zone), и измерение исходного объема проводили перед применением каждого лекарственного средства. Лекарственные средства или среды применяли при концентрации 2 мкл два раза в день.
Обработанных средой нормальных мышей C57black/6 и MRL/lpr мышей с сухостью глаз применяли в качестве нормального контроля и контроля при сухости глаз, соответственно. Средой для СР690550 был фосфатный буферный солевой раствор, PBS, содержащий 0,05% Tween 80.
Эксперимент для сравнения эффективности СР690550 и Restasis проводили, применяя Restasis (циклоспорин 0,05%) и СР-690550 при концентрации 0,01%, применяемые дважды в день в течение W дней. Контрольных животных, включающих нормальных C57Black/6 мышей и MRL/lpr мышей, обрабатывали PBS средой, и MRL/lpr мышей обрабатывали Refresh Endura (среда для Restasis) (5-10 мышей в группе). Сравнение секреций слезной жидкости СР-690550 и Restasis представлено на фигуре 3.
Как показано на фигуре 3, СР690550 имеет гораздо более быструю скорость реакции по сравнению с Restasis и показывает значительное увеличение объема секретируемой слезной жидкости по сравнению с Restasis.
Кроме того, из фигур 3 и 4 видно, что введение СР690550, в конце концов, увеличивает объем секретируемой слезной жидкости до уровня, сравнимого с уровнем при нормальной секреции слезной жидкости (в пределах 5-10% секреции слезной жидкости "нормальными" С 57 мышами).
Пример 5: Скорости ответной реакции на введения СР690550 у MRL/lpr мышей
Как в примере 4 выше, обработанных средой нормальных мышей C57black/6 и MRL/lpr мышей с сухостью глаз (5-10 мышей в группе) применяли в качестве нормального контроля и контроля при сухости глаз, соответственно. Средами для СР690550 были составы 1, 3 и 4, как показано в примере 2 выше. Jak3 ингибитор СР690550 применяли при концентрациях 0,003 мас.%, 0,01 мас.% и 0,03 мас.%, как рассчитано для концентрации свободного основания. Обработку для композиции 1 проводили в течение двух недель при объеме 2 мкл дважды в день. Обработку для композиции 3 и 4 проводили в течение двух недель при объеме 1 мкл один раз в день.
На фигуре 4 показано, что в течение 8 дней введение CP69055U в среде композиции 1 при концентрации 0,01 мас.% дважды в день увеличивает секрецию слезной жидкости до уровня, сравнимого с уровнем нормальной секреции слезной жидкости (в пределах 5-10% секреции слезной жидкости С57 нормальными мышами). Аналогично, на фигурах 5 и 6 показаны скорости ответной реакции на введения СР690550 в среде композиций 3 и 4. При всех сравнениях значительное увеличение секреции слезной жидкости наблюдалось на 2 день после обработки.
Пример 6: Модель мышей с искусственно вызванной сухостью глаз
Получали инъекционный раствор, содержащий 2,5 мг/мл скополамина (sigma) в солевом растворе для инъекций (1-1,5 мл на животное). Нормальным С57 мышам (200-250) мкл скополамина вводили четыре раза каждые 2,5 часа в чередующиеся задние части. Мышей помещали в специальные клетки (с отверстиями спереди и сзади) и помещали в чехол. Вентиляторы помещали перед каждой клеткой и включали на 16 ночных часов в течение пяти дней.
Измерения проводили ежедневно. Через 5 дней считали, что у всех животных вызвана сухость глаз.
Как в примерах 4 и 5 выше, животных обрабатывали лекарственным средством или средой при объеме 1 мкл один раз в день в течение 2 недель. Обработанных средой С57 black/6 мышей и мышей с искусственно вызванной сухостью глаз (5-10 мышей в группе) обрабатывали композициями 3 и 5, полученными в примере 2 выше. На фигурах 7 и 8 показано, что значительное увеличение секреции слезной жидкости наблюдается после 2 дней обработки. После 4 дней обработки композиции, содержащие 0,01 мас.% СР0690550 ингибитора в композиции 3 и 0,003 мас.% СР690550 ингибитора в композиции 5, доводили величину секреции слезной жидкости до нормальных значений.
Настоящее изобретение описывается со ссылкой на определенные предпочтительные варианты осуществления; однако ясно, что оно может быть воплощено в других конкретных формах или их вариантах, не выходя за пределы его специфических или ключевых характеристик. Следовательно, варианты осуществления, описанные выше, рассматриваются в качестве иллюстративных во всех отношениях и неограничивающих, причем объем настоящего изобретения отражен в прилагаемой формуле изобретения, а не в предшествующем описании.