ПРИМЕНЕНИЕ METI-ГЕНА BACILLUS ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ПРОДУЦИРОВАНИЯ МЕТИОНИНА В МИКРООРГАНИЗМАХ

1. Рекомбинантный метионин-продуцирующий микроорганизм, который экспрессирует гетерологичный metI-ген.
2. Микроорганизм по п.1, в котором metI-ген происходит из рода Bacillus.
3. Микроорганизм по п.1, в котором metI-ген является metI-геном Bacillus subtilis.
4. Микроорганизм по любому из пп.1-3, который принадлежит к роду Corynebacterium.
5. Микроорганизм по любому из пп.1-3, который является Corynebacterium glutamicum.
6. Микроорганизм по любому из пп.1-3, который включает дерегулированный MetI.
7. Микроорганизм по п.6, в котором дерегулирование MetI достигается конститутивной экспрессией metI-гена от промотора и/или сайта связывания рибосомы, который в природных условиях не связан с упомянутым metI-геном.
8. MetI-экспрессионная кассета, включающая metI, функционально сцепленный с гетерологичным промотором и необязательно сайт рибосомного связывания.
15
497
1284
3119
R
L
9. MetI-экспрессионная кассета по п.8, в котором промотором является P, Р, P, P, λP или λP.
10. Вектор, включающий кассету по любому из пп.8-9.
11. Микроорганизм, включающий кассету по любому из пп.8-9.
12. Микроорганизм, включающий вектор по п.10.
13. Способ получения метионина, включающий культивирование микроорганизма по любому из пп.1 или 7 в условиях, при которых продуцируется метионин.
14. Способ по п.13, дополнительно включающий, по крайней мере, частичную очистку метионина.
15. Способ увеличения способности продуцировать метионин метионин-продуцирующим микроорганизмом, включающий экспрессирование гетерологичного MetI в данном микроорганизме, так что объем продуцирования метионина увеличивается.
16. Способ увеличения способности продуцировать метионин микроорганизмом, в котором одна или более стадия биосинтеза метионина подвергается обратному ингибированию метионином, включающий экспрессирование гетерологичного MetI в данном микроорганизме для ослабления обратного ингибирования метионином, тем самым, увеличивая способность продуцировать метионин.
17. Способ по п.16, в котором объем продуцирования метионин увеличен, по крайней мере, на 20% относительно контрольного микроорганизма.
18. Способ по п.16, в котором объем продуцирования метионин увеличен, по крайней мере, на 30% относительно контрольного микроорганизма.
19. Способ по п.16, в котором объем продуцирования метионин увеличен, по крайней мере, на 40% относительно контрольного микроорганизма.
20. Способ по любому из пп.17-19, в котором контрольный микроорганизм не включает MetI-фермент.
21. ДНК-последовательность, которая способна к интеграции в crtEb-локусе Corynebacterium glutamicum (crtEb-интеграционная кассета), включающая:
a) первую ДНК-последовательность;
b) вторую ДНК-последовательность, и
c) третью гетерологичную ДНК-последовательность, расположенную между первой и второй ДНК-последовательностями,
где первая и вторая ДНК-последовательности, каждая, гомологичны разной части оперона каротеноидного биосинтеза С.glutamicum, а третья ДНК-последовательность способна прерывать crtEb-ген штамма С.glutamicum "Campbelling in"- и "Campbelling out" - производными этого штамма.
22. ДНК-последовательность по п.21, где гетерологичная ДНК-последовательность включает экспрессионную кассету, включающую metI-ген.
23. Вектор, включающий ДНК-последовательность по любому из пп.21-22.
24. Микроорганизм, включающий вектор по п.23 или часть указанного вектора.
25. Способ получения ликопена, включающий культивирование организма, трансформированного интеграционной кассетой по п.21 в условиях, при которых продуцируется ликопен.
26. Способ по п.25, в котором микроорганизмом является Corynebacterium.
27. ДНК-последовательность, которая способна к интеграции в локусе marR-гена каротеноидного биосинтеза Corynebacterium glutamicum, включающая:
a) первую ДНК-последовательность;
b) вторую ДНК-последовательность, и
c) третью гетерологичную ДНК-последовательность, расположенную между первой и второй ДНК-последовательностями,
где первая и вторая ДНК-последовательности, каждая, гомологичны разной части оперона каротеноидного биосинтеза С.glutamicum, и упомянутая ДНК-последовательность способна прерывать marR-ген штамма С.glutamicum "Campbelling in"- и "Campbelling out" - производными этого штамма, и необязательно,
d) как часть упомянутой третьей ДНК-последовательности, конститутивный промотор, который функционально соединен с первым геном указанного оперона каротеноидного биосинтеза, так что после интеграции в геном штамма С.glutamicum этот оперон каротеноидного биосинтеза транскрибируется от упомянутого конститутивного промотора.
28. ДНК-последовательность по п.27, где гетерологичная ДНК-последовательность включает metI-ген.
29. Вектор, включающий ДНК-последовательность по любому из пп.27-28.
30. Микроорганизм, включающий вектор по п.29 или часть этого вектора.
31. Способ получения увеличенных уровней желаемого каротеноида, включающий культивирование микроорганизма, трансформированного ДНК-последовательностью по п.27 в условиях, при которых продуцируются увеличенные уровни желаемого каротеноида.
32. Способ по п.31, в котором желаемым каротеноидом является ликопен.
33. Способ по п.31, в котором микроорганизмом является Corynebacterium.
34. Вектор, включающий интеграционную кассету, выбранную из marR-интеграционной кассеты и crtЕb-интеграционной кассеты.
35. Микроорганизм, включающий вектор по п.34.
36. Способ получения, по крайней мере, двух химических соединений в ферментационном процессе, в котором первое химическое соединение, которое получают, не является каротеноидом, а второе химическое соединение, которое получают, включает каротеноид.
37. Способ по п.36, в котором первое химическое соединение является аминокислотой.
38. Способ по п.37, в котором аминокислоту выбирают из группы, состоящей из метионина, лизина, глутаминовой кислоты, треонина, изолейцина, фенилаланина, тирозина, триптофана, аланина, цистеина, гомосерина, гомоцистеина и лейцина.
39. Способ по п.36, в котором упомянутое первое химическое соединение является водорастворимым соединением.
40. Способ по п.39, в котором упомянутое первое химическое соединение выбирают из группы, состоящей из молочной кислоты, 1,2-пропандиола, 1,3 пропандиола, этанола, метанола, пропанола, ацетона, бутанола, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, лимонной кислоты, итаконовой кислоты, глюкозамина, глицерина, сахара, витамина, терапевтического протеина, исследовательского протеина, промышленного протеина, ферментов, терапевтического фермента, исследовательского фермента, промышленного протеинового фермента и их солей.
41. Способ по п.36, в котором упомянутым химическим соединением является газ.
42. Способ по п.41, в котором газ является метаном или водородом.
43. Способ получения каротеноидного соединения, которое является сопутствующим продуктом ферментационного способа получения аминокислоты, включающий культивирование микроорганизма, сконструированного для продуцирования как повышенных уровней аминокислоты, так и каротеноидного соединения.
44. Способ по п.43, в котором культивирование микроорганизма включает разделение культуры, по крайней мере, на два компонента, один из которых обогащен аминокислотой, а другой обогащен каротеноидом.
45. Способ по п.43, в котором аминокислота выбрана из метионина, лизина, глутаминовой кислоты, треонина, изолейцина, фенилаланина, тирозина, триптофана, аланина, цистеина, гомосерина, гомоцистеина и лейцина.
46. Способ по любому из пп.43-45, в котором каротеноид выбирают из декапреноксантина, ликопена, β-каротина, лютеина, астаксантина, кантаксантина, биксина и зеаксантина.
47. Микроорганизм, сконструированный для сверхпродуцирования первого химического соединения, которое не является каротеноидом, и второго химического соединения, которое включает каротеноидное соединение.
48. Микроорганизм по п.47, в котором упомянутое первое химическое соединение является аминокислотой.
49. Микроорганизм по п.47, в котором первое химическое соединение является аминокислотой, выбранной из метионина, лизина, глутаминовой кислоты, треонина, изолейцина, фенилаланина, тирозина, триптофана, аланина, цистеина и лейцина, а второе химическое соединение выбрано из декапреноксантина, ликопена, β-каротина, лютеина, астаксантина, кантаксантина, биксина и зеаксантина.
50. Микроорганизм по п.47, в котором упомянутое первое химическое соединение выбрано из метана, водорода, молочной кислоты, 1,2-пропандиола, 1,3 пропандиола, этанола, метанола, пропанола, ацетона, бутанола, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, лимонной кислоты, итаконовой кислоты, глюкозамина, глицерина, сахаров, витаминов, терапевтических ферментов и протеинов, исследовательских ферментов и протеинов, промышленных ферментов и протеинов, их солей, а второе химическое соединение выбрано из декапреноксантина, ликопена, β-каротина, лютеина, астаксантина, кантаксантина, биксина и зеаксантина.
51. Рекомбинантный микроорганизм, способный продуцировать тонкое серосодержащее химическое соединение, включающий гетерологичный metI-ген.
52. Способ получения тонкого серосодержащего химического соединения, включающий культивирование микроорганизма по п.1 или 7 в условиях, при которых продуцируется тонкое серосодержащее химическое соединение.