Получение тиндализированных, интактных и иммунологически активных клеток lactobacillus rhamnosus GG и способ их качественного и количественного определения

1. Способ подсчета количества мертвых клеток, имеющих интактную клеточную мембрану, в образце тиндализированных бактериальных клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), включающий:
5
7
- получение посредством серийных разведений образца, содержащего тиндализированные бактериальные клетки Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103) в концентрации от 10 до 10 клеток/мл;
- добавление к указанному образцу первого реагента, представляющего собой тиазол оранжевый, и второго реагента, представляющего собой пропидий йодид, с получением раствора;
- добавление к указанному раствору суспензии флуоресцентных микросфер в азиде натрия с получением тестируемого образца;
- осуществление в указанном тестируемом образце общего подсчета клеток, включая живые клетки и мертвые клетки, и подсчета только мертвых клеток посредством проточной цитофлюорометрии;
- подсчет мертвых клеток, присутствующих в тиндализированном образце.
5
7
2. Способ по п. 1, где к 0,5 мл образца, содержащего тиндализированные бактериальные клетки Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103) в концентрации от 10 до 10 клеток/мл, добавляют 2,5 микролитра указанного первого реагента и 1,5 микролитра указанного второго реагента с образованием раствора.
3. Способ по п. 1 или 2, где суспензия флуоресцентных микросфер в азиде натрия содержит микросферы из полистирола, предпочтительно суспензия шариков представляет собой суспензию флуоресцентных микросфер из полистирола в 0,1%-ном растворе азида натрия.
4. Способ по п. 3, где известное количество шариков, составляющее от 10 до 100 мкл, предпочтительно от 40 до 60 мкл, добавляют для обеспечения возможности определения количества клеток.
5. Способ получения тиндализированных бактериальных клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), имеющих интактную клеточную стенку, включающий:
6
10
- получение бактериальной культуры клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), имеющей концентрацию от 1×10 до 1×10 КОЕ/г;
- осуществление над указанной культурой процесса тиндализации с получением культуры тиндализированных бактериальных клеток;
- применение способа подсчета по любому из пп. 1-4.
6. Культура тиндализированных, интактных и иммунологически активных бактериальных клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), полученная способом по п. 5.
7. Применение проточной цитофлюорометрии для подсчета количества тиндализированных мертвых бактериальных клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), имеющих интактную клеточную мембрану, в образце тиндализированных бактериальных клеток Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103).
8. Применение по п. 7, где указанные тиндализированные мертвые бактериальные клетки Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103), имеющие интактную клеточную мембрану, подсчитаны способом по любому из пп. 1-4.