СТАБИЛЬНАЯ РЕКОМБИНАНТНАЯ АДЕНОЗИНДЕАМИНАЗА

1. Рекомбинантная аденозиндеаминаза, в которой окисляемый аминокислотный остаток, экспрессируемый в аденозиндеаминазе дикого типа, заменен неокисляемым аминокислотным остатком.
2. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.1, где окисляемый аминокислотный остаток является цистеином, метионином или триптофаном, при этом неокисляемый аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из аланина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, фенилаланина, глицина, гистидина, изолейцина, лизина, лейцина, аспарагина, пролина, глутамина, аргинина, серина, треонина, валина, тирозина, 2-аминоадипиновой кислоты, 3-аминоадипиновой кислоты, бета-аланина, бета-аминопропионовой кислоты, 2-аминомасляной кислоты, 4-аминомасляной кислоты, пиперидиновой кислоты, 6-аминокапроновой кислоты, 2-аминогептановой кислоты, 2-аминоизомасляной кислоты, 3-аминоизомасляной кислоты, 2-аминопимелиновой кислоты, 2,4-диаминомасляной кислоты, десмозина, 2,2'-диаминопимелиновой кислоты, 2,3-диаминопропионовой кислоты, н-этилглицина, н-этиласпарагина, гидроксилизина, алло-гидроксилизина, 3-гидроксипролина, 4-гидроксипролина, изодесмозина, алло-изолейцина, н-метилглицина, саркозина, н-метилизолейцина, 6-н-метиллизина, н-метилвалина, норвалина, норлейцина и альфа-орнитина.
3. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.1, где неокисляемый аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из серина, аланина, аспарагина, глутамина, глицина, изолейцина, лейцина, фенилаланина, треонина, тирозина и валина.
4. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.1, где неокисляемый аминокислотный остаток является серином.
5. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.2, где окисляемый цистеин расположен в приблизительно 74 положении зрелого белка.
6. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.5, которая является рекомбинантной аденозиндеаминазой человека или рекомбинантной бычьей аденозиндеаминазой.
7. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.6, которая транслирована с молекулы ДНК согласно SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:4.
8. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.6, которая включает SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3.
198
245
351
9. Рекомбинантная аденозиндеаминаза по п.8, которая включает SEQ ID NO:1 с аминокислотной заменой, выбранной из группы, состоящей из Gln вместо Lys; Ala вместо Thr; Arg вместо Gly, а также их комбинаций.
10. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой, где аденозиндеаминаза является рекомбинантной аденозиндеаминазой по п.1.
11. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.10, где полиалкиленоксид является полиэтиленгликолем.
12. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.11, где полиэтиленгликоль конъюгирован с рекомбинантной аденозиндеаминазой через линкер, выбранный из группы, состоящей из сукцинимидилкарбонатного, тиазолидинтионового, уретанового и амидного линкеров.
13. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.11, где, полиэтиленгликоль ковалентно присоединен к эпсилон-аминогруппе Lys рекомбинантной аденозиндеаминазы.
14. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.11, где рекомбинантная аденозиндеаминаза включает одну или несколько цепей полиэтиленгликоля, присоединенных к эпсилон-аминогруппам одного или нескольких остатков Lys рекомбинантной аденозиндеаминазы.
15. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.11, где рекомбинантная аденозиндеаминаза включает от приблизительно 11 до приблизительно 18 цепей полиэтиленгликоля, присоединенных к эпсилон-аминогруппам одного или нескольких остатков Lys рекомбинантной аденозиндеаминазы.
16. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.11, где полиэтиленгликоль конъюгирован с рекомбинантной аденозиндеаминазой через сукцинимидилкарбонатный линкер.
17. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.10, где полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу от приблизительно 2000 до приблизительно 100000.
18. Конъюгат полиалкиленоксида с аденозиндеаминазой по п.10, где полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу от приблизительно 4000 до приблизительно 45000.
19. Способ лечения аденозиндеаминаза-опосредованного заболевания у млекопитающих, включающий введение эффективного количества рекомбинантной аденозиндеаминазы по п.1.
20. Способ по п.19, где аденозиндеаминаза-опосредованное заболевание является тяжелым комбинированным иммунным дефицитом.
21. Способ очистки рекомбинантной аденозиндеаминазы по п.10, включающий очистку белка с помощью ионообменной хроматографии.
22. Способ очистки рекомбинантной аденозиндеаминазы по п.10, которая включает SEQ ID NO:1, включающий очистку белка с помощью хроматографии гидрофобного взаимодействия.
23. Рекомбинантная аденозиндеаминаза, полученная способом по п.21.
24. Рекомбинантная аденозиндеаминаза, полученная способом по п.22.
25. Выделенная ДНК, которая кодирует рекомбинантную аденозиндеаминазу, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:3.
198
245
351
26. Выделенная ДНК по п.25, где рекомбинантная аденозиндеаминаза имеет аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из Gln вместо Lys; Ala вместо Thr; Arg вместо Gly, а также их комбинаций.