Влияние иммуномодуляторов на иммунную систему телят

ВЛИЯНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ ТЕЛЯТ

Н.В. Самбуров, Ю.Н. Федоров

Аннотация. Изучено действие иммуномодуляторов стимадена и эраконда на иммунологический статус телят 10-суточного возраста. Представлены данные, свидетельствующие о том, что возрастное иммунодефицитное состояние организма телят эффективно устраняется введением данных препаратов.

Ключевые слова: иммуномодуляторы, иммунодефициты, антиген стимаден, эраконд, лимфоциты, розетки, иммуноглобулины, Т- и В-лимфоциты, Т-хелперы, Т-супрессоры.

В первые 7-10 сут жизни организм новорожденных телят не способен самостоятельно обеспечивать адекватную иммунологическую защиту. В это время происходит переход от относительно защищенного внутриутробного периода развития к внематочному существованию, когда на организм животных оказывают влияние разнообразные факторы окружающей среды [1, 2]. Изучение иммунного статуса организма телят показало наличие первичного (возрастного) иммунодефицитного состояния. Это обусловлено тем, что в эмбриональный пе-

риод отсутствует антигенная стимуляция иммунной системы плода, так как синдесмохори-альная плацента матери практически непроницаема для антигенов. К моменту рождения завершается только антигеннезависимая фаза становления иммунной системы, что ограничивает иммунологическую реактивность новорожденных животных [3, 4, 5,].

Под иммунодефицитами понимают нарушения нормального иммунологического статуса организма, которые вызваны дефектом одно-

Информация об авторах

Самбуров Николай Васильевич, доктор биологических наук, профессор кафедры кормопроизводства и зоогигиены Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И,И. Иванова, Е-таП: samburov_nv@kgsha.ru, тел. (4712) 56-03-06.

Федоров Юрий Николаевич, доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией «Иммунология и биотехнология» Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии.

го или нескольких механизмов иммунного ответа. Они являются результатом снижения функциональной активности клеток неспецифической иммунной системы (моноциты, макрофаги и нейтрофилы) и/или специфической иммунной системы (Т- и В-лимфоциты). Клинические проявления иммунодефицитов ассоциируются с увеличением частоты, тяжести болезней и даже непатогенные микроорганизмы нередко могут стать их причиной [6, 7].

Изменение функциональной активности иммунной системы (иммунокоррекцию, иммуномодуляцию) проводят фармакологическими препаратами. Мишенями для иммуномодуляции являются Т- и В-лимфоциты, моноциты/макрофаги, гранулоциты, продукты их секреции. Иммуномодуляторы подразделяют на три группы: физиологические вещества, препараты, полученные из микроорганизмов и синтетические. Хотя механизмы действия представителей разных групп могут отличаться, в основном они направлены на иммунологическую активизацию клеток и связаны с дисбалансом цитоплазматических нуклеотидов, таких, как циклический аденозин монофосфат (цАМФ), циклический гуанозин монофосфат (цГМФ) [8, 9].

В настоящее время для практического животноводства предлагаю гея иммунотропные препараты разных групп, возникает необходимость в их широкой производственной проверке. С этой целью нами изучено действие эра-конда (препарат, полученный из растительного сырья) и стимадена (препарат синтетического ряда нуклеотидной природы).

Опыты проводили на 15 телятах-аналогах 10-суточного возраста, которых разделили на три группы: две опытные и одна контрольная. Первой назначали стимаден в количестве 1 мл 0,1% раствора внугримышечно в течение 4 суток, второй - эраконд в дозе 2 мл 10% раствора по аналогичной схеме (перед применением препарат разводили 0.5 раствором новокаина из расчета 1:1), третьей (контрольная) равное количество изотонического раствора хлорида натрия. Кровь для оценки иммунологического статуса брали у животных до введения препаратов, а затем через 15, 30 и 60 сугок после их назначения. Иммунологические показатели определяли следующими тестами: определением у-глобулинов, классов иммуноглобулинов, бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК), лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК), относительного и абсолютного

количества Т-лимфоцитов (Е-РОК), В-лимфоцитов (ЕАС-РОК), субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров принятыми в клинической практике методами [10].

Анализ лабораторных исследований показал, что возрастной иммунодефицит телят эффективно устраняется введением эраконда и стимадена. Так, при изучении прогеинограммы сыворотки крови наблюдали изменение уровня общего белка и фракции у-глобулинов. К 25 сут жизни у опытных животных по сравнению с контролем концентрация общего белка была выше на 5% и такая тенденция сохранялась до конца опыта (Р<0,001). Стимаден и эраконд достоверно увеличивали фракцию у-глобулинов в течение всего срока наблюдения. По сравнению с фоновыми значениями прирост этой фракции в крови гелят опытных групп на 60 сут опыта составил 103,3... 106,4% (Р<0,001), у контрольных животных отмечали снижение концентрации у-глобулинов на 0,12 г/л.

Уровень в крови телят опытных групп изменялся следующим образом. В первые 15 сут опыта по сравнению с фоновым отмечали снижение на 0,16-0,24 г/л. Тогда как в контроле снижение было более существенным. У животных обработанных иммуномодуляторами, концентрация 1цС по сравнению с контролем была выше на 32,2-30,8 % (таблица 1).

К 25-суточному возрасту уровень 1^3 по сравнению с показателями на 10 суг повышался на 1,47 и 1,45 г/л, а в кошроле прирост составил лишь 0,53 г/л. Такая каргина была характерна в течение всего опы-ла. На 60 сут наблюдений содержание 1§С у животных 1 и И фупп было на 30,8 и 37,8% выше чем в контрольной группе (Р<0,001).

Анализируя динамику содержания в

крови телят видно, что иммуномодуляторы оказали свое влияние уже в первые 15 сут опыта. Достоверная разница в содержании по

сравнению с контролем сохранялась как через 30, так и через 60 сут после введения препаратов.

Характер изменений уровня БАСК в ответ на введение стимадена и эраконда зависел от фоновых показателей. У телят 1 группы, которые имели фоновый уровень в 29,25±0,25%, увеличение активности через 15 сут составило 4,2%. Более выраженное влияние отмечено во второй группе (8,6%). Разница в показателях между опытными и контрольными животными на 15 суг опыта составила в 4,7 и 6,4% (Р<0,05). Наибольший эффект от введения иммуномодуляторов проявился через 30 суток. К этому

Таблица 1 - Гуморальные факторы иммунитета у телят

Показатели Г руппа Фон В течение опыта, через

15 30 60

I 15,38±0,69 15,22±0,84* 16,69±0,55*** 16,71±0,54***

ДО, г/л II 15,29±0,66 15,05±0,89* 16,50±0,62** 16,79±0,53***

III 15,09±0,93 11,51 ±0,93 12,04±0,71 12,18±0,65

I 1,84±0,16 2,49±0,15** 2,80±0,08*** 2,82±0,07ф**

^М, г/л II 1,90±0,15 2,49±0,14** 2,79±0,09*** 2,80±0,06***

III 1,31 ±0,09 1,88±0,09 1,91 ±0,07 2,05±0,04

I 29,25±0,25 30,48±0,16* 51,14±2,21*** 62,27±1,28***

БАСК,% II 28,50±0,25 30,95±0,39* 49,48±1,72*** 55,44±1,29***

III 28,31±0,27 29,10±0,20 34,85± 1,10 42,02±1,72

I 21,50±0,09 24,41±0,10*** 28,82±0,06*** 35,73±0,12***

ЛАСК,% II 21,40±0.02 25,70±0,05*** 30,06±0,04*** 34,40±0,15***

III 19,81 ±0,01 21,90±0,04 24,20±0,05 32,05±0,08

Примечание: * Р<0,05;

** Р<0,01;

*** Р<0,001

времени БАСК от фонового уровня повысилась у телят I и II групп соответственно на 21,89 и 20,98%, а у контрольных животных лишь на 6,54%. Животные опытных групп имели показатели БАСК достоверно выше, чем в контроле в этот период, а также и на 60 сут опыта (Р<0,001).

Увеличение ЛАСК в первые 15 сут эксперимента у опытных телят составило 13,5% (I группа) и 20,1% (II фуппа), тогда как в контроле лишь 10,6%. Такая тенденция сохранялась в течение всего опытного периода. На 30 суг опыта показатели животных опытных фупп превышали контроль на 4,62% и 5,86% (Р<0,001). К 60 суг опыта, ЛАСК опытных телят превышала таковые контрольных в 1,11 -1,07 раза (Р<0,001).

Фоновые значения абсолютного количества Т-клеток у животных всех групп были практически одинаковыми (таблица 2). В I группе максимальное увеличение количества Т-лимфоцитов (0,12- 109/л) наблюдали на 30 сут после введения стимадена, что на 0,55-10 /л больше, чем у контрольных животных (Р<0,05). При использовании эраконда абсолютное число Т-клеток увеличивалось до 1,98±0,16109/л, что превышало показатель контрольной группы на 0,64-109/л (Р<0,05). На 60 суг опыта абсолютное количество Т-лимфоцитов у опытных телят в сравнении с контролем было соответственно выше на 0,46 и 0,75-109/л (Р<0,05). При этом наблюдали повышение содержания Т-хелперов у опытных животных в течение всего периода исследований. На 15,30 и 60 суг после введения иммуномодуляторов у телят I и II групп абсолютное количество Т-хелперов и их относительная величина к обще-

му числу лимфоцитов была равной соответственно 131±0,06- 109/л или 21,ЗОЯ),52%, 1,2^0,05-109/л или 20,85±0,46%, 1,3 5±0,07- 109/л или

24,28±0,42%, 1,40±0,09-109/л или 24,52±0,73% и

1,23±0,05- 109/л или 23,13±0,45%, 1,44±0,08-109/л или 24,88±0,62%. К 15 сут после введения препаратов абсолютное число Т-хелперов у животных опытных фупп в сравнении с контрольными было выше на 0,21 и 0,19-109/л, еще более заметную разницу наблюдали на 30 сут 0,53 и 0,58- 109/л, которая сохранялась и до следующего контрольного периода (Р<0,05).

Картина Е-розеток, образованных Т-лимфо-цитами теленка с эритроцитами барана до и после иммуномодуляции, показана на микрофотографиях. На первой (рисунок 1) в поле зрения микроскопа зафиксирована две Е-розет-ки Т-лимфоцитов. После введения иммунокорректоров количество розеток Т-лимфоцитов в одном поле зрения микроскопа увеличивается до пяти (рисунок 2).

Относительное содержание Т-супрессоров у телят опытных групп через 15 сут после введения стимадена и эраконда понизилось соответственно на 0,43 и 0,46. Индекс Т-х/Т-с (имму-норегуляторный) более заметно повышался у животных II фуппы и контроле.

Отмечено влияние иммуномодуляторов и на абсолютное количество В-клеток. До обработки их количество находилось в пределах 0,44-0,4810%. (таблица 2). Картина комплементарного розеїхооб-разования В-лимфоцитов показана на микрофотографии (рисунок 3). На ней в поле зрения микроскопа зафиксирована одна розетка.

Таблица 2 - Клеточные факторы иммунитета у телят

Показатели Г руппа Фон В течение опыта, через

15 30 60

I 10,37*0,39 9,83*0,37 9,44*0,35 9,24*0,22

Лейкоциты,

II 10,63±0,59 10,08±0,38 9,95*0,37 10,20*0,17

Ю*/л

III Ю,30±0,59 7,47±0,21 7,63*0,33 7,80*0,18

Лимфоциты, I 62,50*1,19 60,0±0,75 58,7*1,04 57,5*0,82

% II 61,45±0,63 60,4±0,96 57,5*0,68 56,6*0,76

III 60,04*0,71 59,7± 1,00 56,8*0,79 56,6*0,41

I 6,48*0,79 5,90±0,56 5,54*0,70 5,31*0,42

Лимфоциты, 109/л II 6,53*0,61 6,09±0,67 5,72*0,53 5,77*0,47

III 6,38*0,65 5,38*0,61 4,33*0,56 4,41*0,30

I 1,77*0,14 1,85*0,16 1,89*0,11 1,73*0,12

Т-лимфоциты,

II 1,79*0,13 1,81*0,17 1,98*0,16 2,02*0,24

Ю’/л

III 1,76*0,15 1,80*0,22 1,34*0,18 1,27*0,13

1 20,24*0,61 21,30*0,52 24,28*0,42 23,13*0,45

Т- хслперы,

II 19,70*0,44 20,85*0,46 24,52*0,73 24,88*0,62

Е-РОК,%

III 17,23*0,48 17,99*0,38 18,89*0,36 17,51*0,51

Т-хелперы, I 1,26*0,04 1,31*0,06 1,35*0,07 1,23*0,05

Ю’/л II 1,27*0,06 1,29*0,05 1,40*0,09 1,44*0,08

III 0,97±0,02 1,10*0,07 0,82*0,03 0,77*0,01

1 ' 8,70±1,17 8,27*1,32 9,92*0,98 9,54±0,77

Т-супрсссоры,

II 8,51*1,14 8,05*1,13 10,01*1,04 10,16*0,65

Е-РОК.%

III 11,51 ± 1,31 11,02*1,29 12,08*1,07 11,20*0,82

I 0,51 ±0,02 0,54*0,04 0,55*0,08 0,50*0,02

Т-супрессоры,

II 0,52*0,06 0,53*0,06 0,57*0,05 0,57*0,06

109/л

III 0,62*0,09 0,70*03 0,52*0,03 0,43*0,08

Индекс I 2,47*0,31 2,43*0,29 2,45*0,33 2,46*0,48

II 2,44±0,43 2,43*0,37 2,46*0,29 2,53*0,35

Т-х/Т-с

III 1,56±0,19 1,57*0,14 1,58*0,21 1,79±0,17

I 0,44*0,06 0,52*0,03 0,58*0,08 0.83*0,04

В-лимфоциты, 1,04*0,03

II 0,48*0,09 0,57*0,06 0,67*0,07

Ю’/л

III 0.45±0,05 0,38*0,04 0,40*0,02 0,60*0,08

I 4,02*0,21 3,56*0,14 3,26±0,22 2,08±0,11

Индекс Т/В II 3,73*0,17 3,18*0,16 2,96*0,26 1,94*0,08

III 3,91*0,23 4,74*0,31 3,35*0,30 2,12*0,13

I 5,86*0,34 5,31*0,33 4,99*0,36 5,34*0,26

Лейко-Т-

клеточимй индекс II 5,94±0,21 5,57*0,32 5,03*0,48 5,05*0,35

(ЛТИ) III 5,85±0,18 4,15*0,26 5,69*0,54 6,14*0,49

I 18,9±0,66 23,57*0,61 16,28*0,46 11,13*0,63

Лейко-В-

клеточный индекс 11 17,68±0,53 22,15*0,43 14,85*0,64 9,81*0,21

(ЛВИ) III 19,66±0,78 22,89*0,31 19,08*0,58 13,0*0,18

Через 15 сут количество В-лимАоцитов в I микроскопа уже насчитывается пять розеток В-

группе увеличилось до 0,52±0,0310 /л, во II до клеток (рисунок 4). И в дальнейшем более вы-

0,57±0,06-109/л, что по сравнению с контролем сокие показатели количественного содержания

больше соответственно на 0,14* 109/л и 0,19- В-клеток в крови сохранялись у телят опытных

109/л (Р<0,05). Это заметно и по изменившейся групп. К 30 суг после инъекции иммуномоду-

картине мазков крови, в одном поле зрения ляторов телята I группы имели в крови

0,58±0,08-109/л В-лимфоцитов или на 0,18* 109/л больше чем в контрольной группе, а 2 группы на 0,27 109/л (Р<0,01). В последующие 30 сут абсолютное количество В-клеток у животных I группы увеличилось еще на 0,25 109/л, II группы на 0,44109/л, что выше чем у контрольных животных, соответственно, в 1,38 и 1,73 раза (Р<0,05).

Индекс Т/В у животных опытных групп имел тенденцию к снижению в течение всего периода наблюдений, у животных контрольной группы аналогичные изменения установлены только на 30 и 60 сутки.

Лейко-Т-клеточный индекс (ЛТИ) у телят I и II групп колебался от 4,99 до 5,57. Повышение ЛТИ до 6,14 наблюдали у животных III группы на 60 сут опыта. Лейко-В-клеточный индекс (ЛВИ) в первые 15 сут опытного периода повышался у животных всех групп. В даль-

нейшем происходило его постепенное снижение. Для телят опытных групп характерен более низкий ЛВИ:11,13 и 9,81 против 13,0 в контроле.

Таким образом, результаты исследований обосновывают целесообразность применения изученных иммуномодулирующих препаратов в критические периоды постнатального онтогенеза телят для коррекции иммунологического статуса их организма. Наблюдаемые изменения в количественном составе В-клеток, по-видимому, являются результатом активации Т-хелперов, оказывающих, как известно, стимулирующее влияние на лимфопоэз и дифферснцировку В-лимфоцитов. Использование иммуногропных препаратов открывает принципиально новые возможности коррекции у животных иммунодефицит! 1ых состояний различного генеза.

Рисунок 1 - Розетки Т-лимфоцитов крови телят до иммуномодуляции

Рисунок 2 - Розетки Т-лимфоцитов крови телят после иммуномодуляции

Рисунок 3 - Розетки В-лимфоцитов крови телят до иммуномодуляции

Рисунок 4 - Розетки В-лимфоцитов крови телят после иммуномодуляции

Список использованных источников

1 Федоров, Ю.Н. Факторы иммунологической защиты у новорожденных животных / Ю.Н. Федоров, М.Ю. Горбунова// Бюлл. ВИ-ЭВ, 1982, 47.- С. 60-62.

2 Федоров, Ю.Н. Иммунопрофилактика болезней новорожденных животных/ Ю.Н. Федоров // С.-х. биология.- 1988.- №2.

3 Жаков, М.С. Особенности иммунного ответа организма на вирусные и бактериальные антигены в зависимости от зрелости иммунной системы. Достижения ветеринарной науки и передового опыта - животноводству/ М.С. Жаков, И.М. Карпуть. - Минск, 1981.- Т. 6. -С. 20-22.

4 Самбуров, Н.В. О формировании иммунобиологического статуса черно-пестрых телок голштинской популяции / Н.В. Самбуров // С.-х. биология.- 2000.- №6.-С. 95-99.

5 Watson D.l. Immunological functions of the mammary gland and its secretion. Comparative review // Aust. J. Sci., 1980, Т. 33.-P. 403-422.

6 Квачев, Г.В. Иммунодефицитные состояния и их коррекция у сельскохозяйственных животных/ Г.В. Квачев, А.Ю Кассич // С.-х. биология.- 1991.-№2.-С. 105-114.

7 Федоров, Ю.Н. Иммунодефициты домашних животных/ Ю.Н. Федоров.-М., 1996.-95 с.

8 Floch F. Immunostimulators. Progr. Res., Oxford. 1982.-P. 133-180.

9 Федоров, Ю.Н. Иммунокоррекция: применение и механизм действия иммуномодулирующих препаратов / Ю.Н. Федоров // Ветеринария.- 2005.- №2.-С. 3-6.

10 Карпуть, И.М. Иммунология и иммунопатология болезней молодняка/ И.М. Карпуть.-Минск: Ураджай, 1993.-288 с.