СОСТАВЫ НА ОСНОВЕ МОДИФИЦИРОВАННОГО НУКЛЕОЗИДА, НУКЛЕОТИДА И НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

1. Фармацевтическая или диагностическая композиция, содержащая состав, содержащий модифицированную мРНК, кодирующую целевой полипептид.
2. Фармацевтическая или диагностическая композиция по п. 1, где фармакологический эффект
(a) больше, чем фармакологический эффект, связанный с терапевтическим агентом, который, как известно, вызывает указанный фармакологический эффект;
(b) больше, чем фармакологический эффект, вызванный композицией, содержащей свободную модифицированную мРНК, кодирующую целевой полипептид;
(c) больше, чем фармакологический эффект, вызванный композицией, содержащей немодифицированную мРНК, кодирующую целевой полипептид; или
(d) приводит к терапевтически эффективному результату при заболевании, расстройстве, состоянии или инфекции, и предпочтительно выбран из группы, состоящей из изменения количества клеток, изменения химических реакций в сыворотке, изменения активности ферментов, повышения уровня гемоглобина и повышения уровня гематокрита.
3. Способ получения целевого полипептида в клетке млекопитающего in vitro, включающий приведение в контакт указанной клетки или ткани млекопитающего с буферным составом, содержащим модифицированную мРНК, кодирующую целевой полипептид.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что буферный состав
(a) выбран из группы, состоящей из раствора соли, буферизованного фосфатом раствора соли и раствора Рингера с лактатом; или
(b) содержит кальций в концентрации 1-10 мМ.
5. Фармацевтическая или диагностическая композиция по п. 1 или способ по п. 3, отличающийся тем, что модифицированная мРНК содержит очищенный транскрипт для транскрипции.
6. Фармацевтическая или диагностическая композиция по п. 5 или способ по п. 3 или 5, где состав выбран из группы, состоящей из: наночастиц, микросфер поли(молочной-со-гликолевой кислоты) (ПМГК), липидоида, липоплекса, липосомы, полимеров, углеводов (в том числе, простых сахаров), катионных липидов, фибринового геля, фибринового гидрогеля, фибринового клея, фибринового герметика, фибриногена, тромбина, быстро элиминирующихся липидных наночастиц (бэЛНЧ) и их комбинации.
7. Способ по п. 6, где состав, содержащий модифицированную мРНК, представляет собой наночастицу, причем указанная наночастица содержит по меньшей мере один липид, где предпочтительно
(a) липид выбран из группы, состоящей из ДЛин-ДМА, ДЛин-K-ДМА, 98N12-5, С12-200, ДЛин-МС3-ДМА, ДЛин-KC2-ДМА, ДОДМА, ПМГК, ПЭГ, ПЭГ-ДМГ и пегилированных липидов;
(b) липид представляет собой катионный липид, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из ДЛин-ДМА, ДЛин-K-ДМА, ДЛин-МС3-ДМА, ДЛин-KC2-ДМА и ДОДМА;
(c) массовое соотношение липида и модифицированной мРНК составляет от 10:1 до 30:1; где предпочтительно средний размер наночастицы для состава в форме наночастицы, содержащей модифицированную мРНК, составляет 60-225 нм, где предпочтительно индекс полидисперсности для состава в форме наночастицы, содержащей модифицированную мРНК, составляет от 0,03 до 0,15, где предпочтительно состав в форме наночастицы, содержащий модифицированную мРНК, дополнительно содержит фузогенный липид, холестерин и ПЭГ-липид, состав в форме наночастицы, предпочтительно содержащий модифицированную мРНК, имеет молярное соотношение 50:10:38,5:1,5-3,0 (катионный липид:фузогенный липид:холестерин:ПЭГ-липид), где ПЭГ-липид выбран из ПЭГ-к-ДМПО и ПЭГ-ДМГ, и фузогенный липид представляет собой ДСФХ; или
(d) зета-потенциал липида составляет от -10 до +10 при рН 7,4.
8. Способ по п. 6, где состав, содержащий модифицированную мРНК, представляет собой микросферы поли(молочной-со-гликолевой кислоты) (ПМГК), где предпочтительно размер микросфер состава ПМГК в форме микросфер, содержащих модифицированную мРНК, составляет от 4 до 20 мкм, где предпочтительно состав в форме микросфер ПМГК, содержащих модифицированную мРНК, в течение 48 ч высвобождается менее 50% модифицированной мРНК, где предпочтительно состав в форме микросфер ПМГК, содержащих модифицированную мРНК, стабилен в сыворотке крови, стабильность предпочтительно определяют относительно свободной модифицированной мРНК в 90%-ной сыворотке крови, где предпочтительно массовый процент нагрузки составляет по меньшей мере 0,05%, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,2%, по меньшей мере 0,3% или по меньшей мере 0,4%, где предпочтительно эффективность инкапсуляции модифицированной мРНК в микросферы ПМГК составляет по меньшей мере 50%, где предпочтительно эффективность инкапсуляции модифицированной мРНК в микросферы ПМГК составляет по меньшей мере 70%; где предпочтительно эффективность инкапсуляции модифицированной мРНК в микросферы ПМГК составляет по меньшей мере 90%; где эффективность инкапсуляции модифицированной мРНК в микросферы ПМГК составляет по меньшей мере 97%.
9. Способ по п. 6, где состав дополнительно содержит вторую и, необязательно, третью модифицированные мРНК.
10. Способ по п. 6, где состав, содержащий модифицированную мРНК, содержит быстро элиминирующуюся липидную наночастицу, где предпочтительно быстро элиминирующаяся липидная наночастица включает бэЛНЧ-липид, фузогенный липид, холестерин и ПЭГ-липид в молярном соотношении 50:10:38,5:1,5 (бэЛНЧ липид:фузогенный липид:холестерин:ПЭГ-липид), где предпочтительно фузогенный липид представляет собой ДСФХ, и ПЭГ-липид представляет собой ПЭГ-к-ДМПО, где предпочтительно бэЛНЧ-липид выбран из группы, состоящей из: ДЛин-ДМА со внутренним эфиром, ДЛин-ДМА с концевым эфиром, ДЛин-МС3-ДМА-со внутренним эфиром и ДЛин-МС3-ДМА с концевым эфиром, где предпочтительно массовое соотношение общих липидов и модифицированной мРНК составляет от 10:1 до 30:1.
11. Способ по п. 6, отличающийся тем, что состав, содержащий модифицированную мРНК, содержит липидоид, причем липид выбран из группы, состоящей из С12-200 и 98N12-5.
12. Способ по п. 6, отличающийся тем, что состав, содержащий модифицированную мРНК, представляет собой полимер, и указанный полимер покрыт, охвачен, окружен, к нему прилагается или он содержит слой гидрогеля или хирургического герметика, где предпочтительно полимер выбран из группы, состоящей из ПМГК, этиленвинилацетата, полоксамера и GELSITE, предпочтительно, дополнительно содержит дополнительный слой полимера, гидрогеля или хирургического герметика.
13. Способ по п. 6, где модифицированная мРНК содержит по меньшей мере один 5′ к концевой кэп, выбранный из группы, состоящей из Сар0, Cap1, ARCA, инозина, N1-метил-гуанозина, 2′-фтор-гуанозина, 7-деаза-гуанозина, 8-оксо-гуанозина, 2-амино-гуанозина, LNA-гуанозина и 2-азидо-гуанозина, где предпочтительно 5′ концевой кэп представляет собой Cap1, где предпочтительно модифицированная мРНК содержит по меньшей мере две модификации, где по меньшей мере две модификации независимо выбраны из группы, состоящей из 5-метилцитидина, псевдоуридина и 1-метил-псевдоуридина.