ТЕРМОСТАБИЛЬНАЯ ЦЕЛЛЮЛАЗА ИЗ TRICHODERMA

1. Клетка-хозяин Trichoderma, содержащая:
модификацию, где модификация, по существу, снижает или предотвращает продукцию термостабильной эндоглюканазы V (EGV) клеткой-хозяином Trichoderma, и
представляющую интерес экзогенную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую представляющий интерес полипептид, функционально связанную с промотором, в результате чего каждый из по меньшей мере одного эндогенного полипептида и представляющего интерес полипептида экспрессируется in vivo клеткой-хозяином Trichoderma.
2. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где модификация включает одно или несколько удалений или разрушений нуклеотидов, вовлеченных в экспрессию EGV.
3. Клетка-хозяин Trichoderma по п.2, где разрушение или удаление включает удаление или разрушение кодирующего гена, или кодирующего участка, или промотора, или регуляторных элементов для экспрессии EGV.
4. Клетка-хозяин Trichoderma по п.3, где удаление или разрушение включает удаление или разрушение egl5.
5. Клетка-хозяин Trichoderma по п.4, где удаление или разрушение включает разрушение egl5.
6. Клетка-хозяин Trichoderma по п.4, где удаление или разрушение включает удаление egl5.
7. Клетка-хозяин Trichoderma по п.6, где egl5 удален путем гомологичной рекомбинации.
8. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где эндогенный полипептид представляет собой целлюлазу, гемицеллюлазу, протеазу или их комбинации.
9. Клетка-хозяин Trichoderma по п.8, где термолабильный фермент представляет собой целлюлазу или гемицеллюлазу.
10. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где Trichoderma представляет собой T. reesei.
11. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где представляющий интерес полипептид представляет собой гидрофобин II.
12. Клетка-хозяин Trichoderma по п.10, где представляющий интерес полипептид представляет собой гидрофобин II.
13. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где представляющий интерес полипептид является термостабильным.
14. Клетка-хозяин Trichoderma по п.1, где представляющий интерес полипептид является чувствительным к нагреванию или термолабильным.
15. Способ получения представляющего интерес полипептида в модифицированной клетке-хозяине Trichoderma по любому из пп.1-12, где представляющий интерес полипептид является термостабильным, включающий:
инкубирование модифицированной клетки-хозяина в среде, подходящей для того, чтобы модифицированная клетка-хозяин продуцировала представляющий интерес термостабильный полипептид и эндогенный полипептид, в результате чего каждый из эндогенного полипептида и представляющего интерес термостабильного полипептида экспрессируется модифицированной клеткой-хозяином; и
воздействие на представляющий интерес термостабильный полипептид и эндогенный полипептид повышенной температурой,
где повышенная температура является достаточной для того, чтобы, по существу, инактивировать эндогенный полипептид, но недостаточной для инактивации представляющего интерес термостабильного полипептида и EGV, если они присутствовали;
в результате чего представляющий интерес термостабильный полипептид продуцируется в активной или функциональной форме, по существу, при отсутствии активности эндогенного полипептида.
16. Способ по п.15, дополнительно включающий выделение белковой смеси из модифицированной клетки-хозяина Trichoderma перед этапом воздействия на представляющий интерес полипептид и эндогенный полипептид повышенной температурой.
17. Способ по п.15, где модифицированная клетка-хозяин экспрессирует экзоцеллобиогидролазу, эндоглюканазу, β-глюкозидазу или их комбинации.
18. Способ по п.15, где представляющий интерес термостабильный полипептид является обратимо денатурируемым при нагревании.
19. Способ по п.15, где повышенной температурой является температура приблизительно 90°C или более.
20. Способ по п.15, где воздействие повышенной температурой происходит в течение приблизительно 5 минут или дольше.
21. Способ по п.15, где воздействие повышенной температуры происходит в течение приблизительно 60 мин или дольше.
22. Способ контроля активности представляющего интерес полипептида, экспрессируемого модифицированными клетками-хозяевами Trichoderma по любому из пп.1-10, где представляющий интерес полипептид является чувствительным к нагреванию или термолабильным, причем указанный способ включает воздействие на представляющий интерес чувствительный к нагреванию или термолабильный полипептид и эндогенный полипептид повышенной температурой,
где повышенная температура является достаточной для инактивации эндогенного полипептида и чувствительного к нагреванию или термолабильного полипептида.
23. Способ по п.22, где эндогенный полипептид представляет собой целлюлазу.
24. Способ по п.22, дополнительно включающий перед воздействием на представляющий интерес чувствительный к нагреванию или термолабильный полипептид повышенной температурой приведение в контакт представляющего интерес полипептида с соединением, на которое действует представляющий интерес полипептид.
25. Способ по п.23, дополнительно включающий перед воздействием на представляющий интерес чувствительный к нагреванию или термолабильный полипептид повышенной температурой приведение в контакт представляющего интерес полипептида с одним или несколькими соединениями, на которые действуют целлюлаза и представляющий интерес полипептид.
26. Композиция ферментационного бульона, полученная или получаемая из клетки-хозяина нитчатого гриба и содержащая гидрофобин II, причем указанный ферментационный бульон, по существу, не обладает целлюлазной и/или маннаназной активностью, и где гидрофобин II продуцируется в модифицированной клетке-хозяине Trichoderma по любому из п.11 или 12.
27. Композиция ферментационного бульона, полученная или получаемая из модифицированного Trichoderma по любому из пп.1-10.
28. Способ контроля активности представляющего интерес полипептида в ферментационном бульоне по п.27, где представляющий интерес полипептид является чувствительным к нагреванию или термолабильным, причем указанный способ включает воздействие на ферментационный бульон повышенной температурой, достаточной для инактивации эндогенного полипептида и чувствительного к нагреванию или термолабильного полипептида.
29. Способ по п.28, где эндогенный полипептид представляет собой целлюлазу.
30. Способ по п.28, дополнительно включающий перед воздействием на ферментационный бульон повышенной температурой приведение в контакт ферментационного бульона с представляющим интерес соединением, на которое действует представляющий интерес полипептид.
31. Способ по п.29, дополнительно включающий перед воздействием на ферментационный бульон повышенной температурой приведение в контакт ферментационного бульона с одним или несколькими соединениями, на которые действуют целлюлаза и представляющий интерес полипептид.
32. Способ контроля активности целлюлазы, присутствующей в композиции, полученной из модифицированных клеток-хозяев Trichoderma по любому из пп.1-10, где композиция содержит по меньшей мере один целлюлазный фермент помимо EGV, причем указанный способ включает воздействие на композицию повышенной температурой, достаточной для инактивации представляющего интерес полипептида, и где после воздействия на композицию повышенной температурой композиция, по существу, не обладает целлюлазной активностью.
33. Способ по п.32, где представляющий интерес полипептид является чувствительным к нагреванию или термолабильным.
34. Способ по п.32, где представляющий интерес полипептид является устойчивым к нагреванию или термостабильным.
35. Способ по п.32, где воздействие на композицию повышенной температурой выполняют в пищевом продукте или напитке.
36. Способ по п.32, где повышенная температура не превышает приблизительно 100°C.
37. Способ по п.32, где композиция, полученная из модифицированных клеток-хозяев Trichoderma, представляет собой содержащий гидрофобин ферментационный бульон.