СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЗАРАЖЕНИЯ ОБРАЗЦА КРОВИ И ТКАНИ

1. Устройство для выявления бактериального заражения образца, содержащее
1) абсорбирующую мембрану, позволяющую жидкому образцу пройти заданный путь;
2) первую популяцию связывающих агентов, содержащую
i) антитела или их антиген связывающие участки, которые специфически связываются с грам-отрицательным бактериальным антигеном, имеют широкую специфичность к грам-отрицательным бактериям и детектируемо помечены первой молекулой-репортером,
ii) антитела или их антиген связывающие участки, которые специфически связываются с грам-положительным бактериальным антигеном, имеют широкую специфичность к грам-положительным бактериям и детектируемо помечены второй молекулой-репортером, или
iii) и i) и ii)
причем первая популяция связывающих агентов расположена на заданном пути, но не связана с абсорбирующей мембраной; и
3) вторую популяцию связывающих агентов, иммобилизированных на заранее определенном участке абсорбирующей мембраны и на заданном пути, причем наложение жидкого образца на абсорбирующую мембрану
а) заставляет грам-отрицательный бактериальный антиген и/или грам-положительный бактериальный антиген при его наличии в жидком образце пройти вдоль заданного пути внутри устройства;
б) допускает связывание первой популяции связывающих агентов с грам-отрицательным бактериальным антигеном и/или грам-положительным бактериальным антигеном с образованием комплекса связывающий агент - антиген; и
в) допускает дальнейшее движение комплекса вдоль заданного пути к заранее определенному участку и связывание иммобилизированной второй популяции связывающих агентов,
с образованием детектируемо помеченного заранее определенного участка на абсорбирующей мембране.
2. Устройство по п.1, дополнительно содержащее средства для физической или химической обработки жидкого образца для экспонирования сайтов связывания на грам-отрицательном бактериальном антигене и/или на грам-положительном бактериальном антигене до нанесения обработанного образца на абсорбирующую мембрану.
3. Устройство по п.2, в котором средства для обработки жидкого образца включают детергент, основной раствор, кислый раствор, EDTA, EGTA, ион металла, анион, катион, поверхностно-активное вещество, хелатирующее вещество и/или фермент.
4. Устройство по п.1, в котором антитела, которые специфически связываются с грам-отрицательным бактериальным антигеном, специфически связываются со структурой липополисахарида (LPS) грам-отрицательных бактерий, а антитела, которые специфически связываются с грам-положительным бактериальным антигеном, специфически связываются со структурой липотейхоевой кислоты (LTA) грам-положительных бактерий.
5. Устройство по п.1, в котором антитела, которые специфически связываются с грам-отрицательным бактериальным антигеном, и антитела, которые специфически связываются с грам-положительным бактериальным антигеном специфически связываются с кросс-генной мишенью на поверхности бактериальной клетки.
6. Устройство по п.1, в котором первая молекула-репортер и вторая молекула-репортер являются одинаковыми или разными.
7. Устройство по п.6, в котором по меньшей мере одну из первой и второй молекулы-репортера выбирают из группы, состоящей из молекулы с ферментативной активностью, молекулы, меченой радиоактивным изотопом, слитой молекулы, флуорогенной молекулы, золи металла, латексной частицы, хроматической молекулы или красителя и молекулы, которая специфически связана вторичным связывающим агентом.
8. Устройство по п.1, в котором иммобилизированная вторая популяция связывающих агентов связывается с
1) общим эпитопом первой популяции связывающих агентов;
2) грам-отрицательным бактериальным антигеном и/или грам-положительным бактериальным антигеном, или
3) с кросс-генной мишенью на поверхности бактериальной клетки.
9. Устройство по п.8, в котором антитела, которые специфически связываются с грам-отрицательным бактериальным антигеном, и антитела, которые специфически связываются с грам-положительным бактериальным антигеном являются мышиными антителами, а иммобилизированная вторая популяция связывающих агентов специфически связывается с мышиными детерминантами на константном участке мышиных антител.
10. Устройство по п.1, отличающееся тем, что донорскую кровь или продукт крови выбирают из группы, состоящей из цельной крови, лейкоцитов, кроветворных стволовых клеток, тромбоцитов, эритроцитов, плазмы и сыворотки.
6
11. Устройство по п.1, отличающееся тем, что клинически релевантное количество составляет более, чем 1·10 колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий на мл донорской крови, продуктов донорской крови или жидкости.
5
12. Устройство по п.1, отличающееся тем, что клинически релевантное количество составляет более, чем 1·10 колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий на мл донорской крови, продуктов донорской крови или жидкости.
13. Устройство по п.1, отличающееся тем, что антитела или их антигенсвязывающие участки выбирают из группы, состоящей из человеческих антител, гуманизированных антител, мышиных антител, моноклональных антител, поликлональных антител, одноцепочечных антител, химерных антител, производных антитела и антигенсвязывающих участков антитела.
14. Способ выявления бактериального заражения донорской крови или продукта крови или донорской ткани от донора-млекопитающего, хранящейся в жидкости, включающий смешивание образца крови, продукта крови или жидкости с множеством окрашенных гранул латекса, покрытых антителом или антиген-связывающим участком, выбранным из
а) антитела или его антиген-связывающего участка, которые специфически связываются с LPS на грам-отрицательной бактерии;
б) антитела или его антиген-связывающего участка, которые специфически связываются с LTA на грам-положительной бактерии;
в) антитела или его антиген-связывающего участка как из а), так и из б), в условиях, которые позволяют связывание антитела или его антиген-связывающего участка с антигеном и визуальное обнаружение окрашенных гранул латекса, причем визуализация гранул указывает на наличие клинически релевантного уровня бактериального загрязнения.
15. Способ по п.14, при котором образец обрабатывают до смешивания для экспонирования сайтов связывания на LPS грам-отрицательной бактерии и/или на LTA грам-положительной бактерии.
16. Способ по п.14, при котором образец представляет собой донорскую кровь, продукт крови донора или жидкость, разбавленную буферным/экстрагирующим агентом.
17. Способ по п.14, при котором донор-млекопитающее представляет собой человека или домашнее млекопитающее животное.
18. Способ по п.14, дополнительно включающий улавливание окрашенных латексных гранул на субстрате с использованием иммобилизированного связывающего агента, который связывается с
1) общим эпитопом антител или их антиген-связывающих участков;
2) LPS на грамм-отрицательной бактерии и/или LTA на грам-положительной бактерии; или
3) с кросс-генной мишенью на поверхности бактериальной клетки.
19. Способ по п.14, отличающийся тем, что донорскую кровь или продукт крови выбирают из группы, состоящей из цельной крови, лейкоцитов, кроветворных стволовых клеток, тромбоцитов, эритроцитов, плазмы и сыворотки.
6
20. Способ по п.14, отличающийся тем, что клинически релевантное количество составляет более, чем 1·10 колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий на мл донорской крови, продуктов донорской крови или жидкости.
5
21. Способ по п.14, отличающийся тем, что клинически релевантное количество составляет более, чем 1·10 колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий на мл донорской крови, продуктов донорской крови или жидкости.
22. Способ по п.14, отличающийся тем, что антитела или их антигенсвязывающие участки выбирают из группы, состоящей из человеческих антител, гуманизированных антител, мышиных антител, моноклональных антител, поликлональных антител, одноцепочечных антител, химерных антител, производных антитела и антигенсвязывающих участков антитела.