КОСМЕТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА HARUNGANA MADAGASCARIENSIS
COSMETIC APPLICATION OF HARUNGANA MADAGASCARIENSIS EXTRACT

Настоящее изобретение относится к косметическому применению экстракта харонги мадагаскарской (Harungana madagascariensis) или композиции, содержащей указанный экстракт, в частности, для замедления или для борьбы со старением кожи и/или с проявлением признаков старения кожи. Настоящее изобретение относится также к применению этого экстракта или этой композиции для усиления синтеза коллагена, а также для защиты кожных белков от гликирования.
2
Кожа является особым органом человеческого тела. При малой толщине она имеет очень большую протяженность, так как покрывает всю поверхность тела и у взрослого человека в совокупности занимает поверхность примерно 1,6 м. Ее функция заключается в защите глубоких тканей от внешней среды, как на уровне физического проникновения инородных тел, так и на уровне иммунитета, регулирования температуры и потери жидкости. Наконец, механические напряжения, которым она постоянно подвергается, вынуждают ее иметь, больше чем любой другой орган, твердую и целостную структуру в сочетании с высокой эластичностью. Несмотря на некоторые различия внешнего вида в зависимости от анатомической локализации, кожа всегда имеет одинаковую базовую морфологическую структуру. На своей поверхности она состоит из эпидермиса, дальше в глубину из дермы и дермоэпидермального соединения, которое их разделяет и связывает.
Роль дермы заключается в поддержании эластичности и прочности кожи. Это плотная, волокнистая и эластичная соединительная ткань, находящаяся на жировом слое, называемом гиподермой, внутри которой находятся мезенхимальные клетки, фибробласты. Они ответственны за синтез составляющих внеклеточного матрикса, который их окружает, представляющего собой подлинную опорную ткань кожи. Структура внеклеточного матрикса определяется переплетением волокон, состоящих из коллагенового пучка и эластичных волокон (эластин и фибриллин), в виде волн, параллельных поверхности кожи.
Помимо своей физической роли поддержки эпидермиса дерма обеспечивает другие важные функции. Ее значительная васкуляризация позволяет ей осуществлять обмен веществ с эпидермисом. Она также позволяет дерме обогащаться иммунными клетками типа макрофагов и дендритными клетками, играющими важную роль в иммунной защите кожи. Кроме того, дерма представляет собой пронизанную нервными клетками ткань, содержащую чувствительные рецепторы, ответственные за осязание. Наконец, она участвует в процессах заживления и регуляции пролиферации и дифференциации кератиноцитов, синтезируя цитокины и растворимые факторы роста для эпидермиса.
Коллаген придает коже прочность на давление и растяжение. Эластин позволяет коже растягиваться и возвращаться в исходное состояние после деформации. Он придает упругость кожному покрытию. Межклеточный матрикс содержит также протеогликаны и гликозаминогликаны, которые образуют очень гидратированное межклеточное вещество, в которое погружены волокнистые белки. Наконец, гликопротеины структуры обеспечивают границу раздела между матриксом и клетками, связывая мембранные интегрины.
Межклеточный матрикс кожи представляет собой интерстициальное вещество, которое окружает кожные структуры и поддерживает эпидермис. В системе волокнистых белков коллаген является основным нерастворимым компонентом, который вносит вклад в механические свойства кожи. Коллагеновые волокна дермы образованы соответственно из коллагена I и коллагена III, расположенных вокруг оси, состоящей из коллагена V. Эти коллагены относятся к группе фибриллярных коллагенов. У взрослых коллагена I в среднем содержится в шесть раз больше, чем коллагена III.
Фибриллы коллагена I имеют очень высокую прочность на растяжение и поэтому могут вытягиваться без разрывов. Эти фибриллы располагаются рядом друг с другом параллельными рядами, называемыми коллагеновыми волокнами. Коллаген III состоит из трех цепей альфа 1 (III), он является преобладающим в фетальной коже и эластичных структурах. Доля коллагена I повышается с приближением к гиподерме. Межклеточный матрикс содержит также фибронектин, ламинин, эластин, а также межклеточное вещество протеогликанов.
Несмотря на высокую стабильность этих составляющих, межклеточный матрикс является динамической структурой, образуемой по большей части локально клетками соединительной ткани. В этом контексте, важную роль в поддержании и регенерации этой ткани играют фибробласты. Их способность синтезировать и разлагать коллаген и другие молекулы межклеточного матрикса, или же организовывать или ориентировать волокна, является критической в гомеостазе кожной ткани.
При старении некоторые аномалии коммуникации между клетками и окружающим матриксом могут привести к избыточным качественным и количественным изменениям структуры межклеточного матрикса. Например, в ходе старения снижается отношение коллагена I к коллагену III. Наблюдается также экспоненциальное увеличение числа химических мостиковых связей между волокнами коллагена вследствие неферментативной реакции гликирования Майара.
Образование химических мостиковых связей у старого коллагена приводит к повышению жесткости волокон, что делает их более стойкими к атакам коллагеназ и свободных радикалов. Таким образом, их деградация и обновление замедляются.
Гликирование зависит от возможности встречи циркулирующих молекул глюкозы и свободных аминогрупп, присутствующих либо на конце N-терминальных полипептидных цепей, либо на боковых цепях лизина. Биохимический механизм этой реакции хорошо известен и включает две стадии: раннюю стадию (инициирование), представляющую собой реакцию восстановительных сахаров (глюкоза, фруктоза) с концевыми или боковыми аминогруппами белков - компонентов ткани с образованием соединений, называемых "основания Шиффа". Эти соединения стабилизируются затем путем перегруппировки Амадори в аминокетоны. За этой стадией идет медленная стадия (рост и обрыв), на которой группы аминокетона окисляются до дезоксиозона в присутствии кислорода и реагируют с другими основными аминокислотами, такими как аргинин или лизин, принадлежащими другим белкам (альбумин, липопротеины, иммуноглобулин). Результатом является образование комплексов с конечными мостиковыми связями типа циклов пентозидина или фуроил-6,3-фуранил-1,4-имидазола.
Реакция гликирования белков является основным процессом стимулированного старения кожи. Действительно, она приводит к образованию необратимых перекрестных связей между белками, которые накапливаются с возрастом или в патологических состояниях (диабет, оксидативный стресс и т.д.).
Гликированные белки, соединенные мостиковой связью, теряют свою биологическую функциональность; ткани становятся жесткими и склеротируются.
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что экстракт Harungana madagascariensis или композиция, содержащая такой экстракт, защищает кожу от старения, способствуя синтезу коллагена и защищая кожные белки от гликирования. Таким образом, экстракт Harungana madagascariensis можно использовать как средство от старения кожи, как активное средство, способствующее синтезу коллагена и/или как средство от гликирования.
Harungana madagascariensis представляет собой дерево семейства hypericaceae, широко распространенное на Мадагаскаре.
Это растение обычно используется в качестве желтого красителя и в терапевтических целях, в частности как антибактериальное и противовоспалительное средство.
Согласно настоящему изобретению, предпочтительно используют экстракт Harungana madagascariensis или косметическую композицию, содержащую такой экстракт.
Экстракт предпочтительно является экстрактом листьев Harungana madagascariensis. Предпочтительно, этот экстракт является водным экстрактом, он предпочтительно стабилизован глицерином. Предпочтительно он представляет собой водный экстракт, полученный способом, включающим по меньшей мере следующие стадии:
- сушка листьев;
- водная экстракция листьев;
- выдерживание, затем фильтрация;
- выпаривание экстракционного растворителя,
- корректировка концентрации (добавление глицерина).
Экстракт Harungana madagascariensis, используемый согласно изобретению, представляет собой вязкую красно-коричневую жидкость с характерным запахом. Он имеет следующие аналитические характеристики:
pH (1% в воде): 4-6
плотность при 20°C: 1,2-1,4
коэффициент преломления: 1,4-1,6
отношение растение/экстракт = 10/4
Предпочтительно, косметическая композиция согласно изобретению содержит от 0,01 до 10% экстракта Harungana madagascariensis в расчете на сухой вес, от полного веса композиции. Предпочтительно, композиция содержит от 0,01 до 5% экстракта Harungana madagascariensis в расчете на сухое вещество, от полного веса композиции.
Композиции согласно изобретению могут также содержать один или несколько рецептурных агентов или обычных добавок, известных и широко применяемых в косметических и дерматологических композициях, таких, например, но без ограничений, как смягчающие средства, красители, пленкообразователи, ПАВы, отдушки, консерванты, эмульгаторы, масла, гликоли, УФ-фильтры и витамины, как витамин E, УФ-фильтры и т.д. Благодаря своим знаниям в области косметики специалист сможет определить, какие рецептурные агенты следует добавить в композиции по изобретению и в каких количествах, в зависимости от желаемых свойств.
Композиции согласно изобретению могут находиться в любой форме, известной специалисту в области косметологии и дерматологии, без других галеновых ограничений, кроме нанесения на лицо и на тело. Предпочтительно, композиции согласно изобретению находятся в виде геля, крема, лосьона, масла, молочка, спрея и т.д.
Авторы изобретения показали, что экстракт Harungana madagascariensis, используемый согласно изобретению, а также содержащая его косметическая композиция могут использоваться для облегчения синтеза коллагена или же для защиты белков кожи от гликирования.
Как следствие, экстракт Harungana madagascariensis или содержащая его косметическая композиция согласно изобретению могут использоваться для предотвращения, для замедления, для борьбы против, для лечения или для ослабления старения кожи и/или проявлений признаков старения кожи.
Под признаками старения кожи понимаются складки, морщинки, ослабление тонуса кожи, потеря упругости кожных волокон, увядшая кожа, истонченная кожа и тусклая кожа и/или кожа без сияния.
Благодаря своему действию на стимулирование синтеза коллагена в коже экстракт Harungana madagascariensis, согласно одному предпочтительному варианту изобретения, может применяться для противодействия проявлениям старения кожи, в частности для разглаживания складок и морщин, и/или для восстановления плотности увядшей или истонченной кожи.
Экстракт Harungana madagascariensis, используемый согласно изобретению, и содержащая его косметическая композиция могут также применяться для восстановления плотности, и/или для укрепления, и/или для тонизирования кожи.
Экстракт Harungana madagascariensis согласно изобретению и содержащую его косметическую композицию используют путем нанесения на кожу, это может быть кожа лица или тела.
Когда речь идет о коже лица, предпочтительно имеется в виду кожа на лице, шее, области декольте и/или контура глаз.
Согласно одному частному варианту, экстракт Harungana madagascariensis согласно изобретению и содержащую его косметическую композицию наносят на кожу тела для ее уплотнения и/или тонизирования, например, в рамках снижения массы тела.
Нижеследующие примеры относятся, с одной стороны, к оценке эффекта экстракта Harungana madagascariensis на синтез коллагена I и его действия против гликирования белков, а с другой стороны, они относятся к композициям по настоящему изобретению.
В примерах даны ссылки на следующие фигуры, на которых:
-5
- Фигура 1 показывает иммунофлуоресценцию коллагена I (TRITC) для контроля (блок A), положительного контроля - ретинол концентрацией 10 M (блок B) и для разных концентраций экстракта Harungana madagascariensis: 0,001% (блок C), 0,005% (блок D) и 0,01% (блок E) (Обследование во флуоресцентный оптический микроскоп с увеличением x200).
- Фигура 2 показывает экспрессию коллагена I, выраженную в единицах флуоресценции на ядро.
I. Оценка активности экстракта Harungana madagascariensis в отношении секреции коллагена типа I
A. Материал и способ
-5
2
Фибробласты засевают в планшеты на 6 лунок со стеклянными пластинками из расчета 70000 клеток на чашку в минимальной эссенциальной среде (MEM). Через 48 ч клетки обрабатывают или нет (контроль) экстрактом Harungana madagascariensis концентрацией 0,001%, 0,005% и 0,01% (в качестве положительного контроля используют ретинол концентрацией 10М) и инкубируют в сушильном шкафу в течение 72 часов при 37°C в атмосфере 5% CO.
Затем каждый слой клеток промывают, фиксируют метанолом (-20°C), прежде чем приступить к обнаружению коллагена типа I.
Клетки инкубируют с первыми антителами, направленными против интересующего белка, затем со вторыми антителами, направленными против первых антител, в сочетании с флуорохромом TRITC (тетраметил родамин изотиоцианат, производное родамина). Время инкубирования между разными антителами составляет один час. Ядра клеток обнаруживают посредством мечения диаминидофенилиндолом (Dapi).
Пластинки устанавливают на предметное стекло, затем обследуют во флуоресцентный микроскоп (Nikon Eclipse 50i). Делают снимки нескольких полей клеточной популяции. Флуоресцентные изображения TRITC указывают области локализации интересующих белков. Флуоресцентные изображения DAPI указывают ядра клеток и, тем самым, число клеток на одном поле. Негативы, какие показаны на фигуре 1, анализировали на компьютерной программе анализа изображений NIS Elements (Nikon).
B. Результаты
Эти исследования демонстрируют, что экстракт Harungana madagascariensis существенно стимулирует, в зависимости от дозы, синтез коллагена типа I посредством фибробластов. Экстракт Harungana madagascariensis облегчает синтез главного компонента внеклеточного матрикса, коллагена типа I. Таким образом, эти свойства придают экстракту противовозрастное действие.
II. Оценка экстракта Harungana madagascariensis в отношении защиты от реакции гликирования белков
Для оценки эффекта экстракта Harungana madagascariensis привлекали модель in vitro. Она основана на измерении образования производных реакции гликирования между свободными аминогруппами бычьего альбумина и глюкозой. Некоторые из этих производных, представляющие собой конечные продукты глубокого гликирования, являются флуоресцентными. Реакцию оценивают через 8 дней инкубирования. Параллельно испытывают эталонную молекулу аминогуанидин.
A. Материалы и способ
Исследуемая система представляет собой реакционную смесь, содержащую бычий альбумин (0,5 г/мл) и глюкозу (500 мМ) в фосфатном буфере (0,2 M, pH=7,4).
Продукты смешивают с исследуемой системой в стерильных пробирках, пробирки покрывают бумагой с алюминиевым покрытием (реакция должна идти без доступа света). Для экспериментальных условий, когда некоторые реагенты или продукты будут отсутствовать, следует дополнить объем пробирки достаточным количеством воды MilliQ.
Пробирки закрывают парафильмом (реакция должна идти без доступа кислорода), после чего разные реакционные смеси помещают в сушильный шкаф при температуре 37°C на 8 суток.
Через 8 дней инкубирования отбирают 100 мкм из каждой пробирки и переносят в черный 96-луночный планшет. Затем считывают данные о флуоресценции на приборе FLUOstar (BMG) (возбуждение на 355 нм, излучение на 460 нм).
B. Результаты
Результаты представлены в следующей таблице, они выражены в условных единицах флуоресценции. Флуоресценцию, относящуюся к образцам "продукт + бычий альбумин" (= интерференция) вычитают из данных "продукт + бычий альбумин + глюкоза".
Эта таблица показывает образование перекрестных связей гликирования, выраженное в условных единицах флуоресценции (S.E = исследуемая система, т.е. реакционная смесь, содержащая бычий альбумин (0,5 г/мл) и глюкозу (500 мМ), в фосфатном буфере (0,2 M, pH=7,4)).
Условные единицы флуоресценции
Защита (%)
S.E.
37673
/
S.E. + аминогуанидин 10 мМ
0
100
S.E. + Harungana madagascariensis 0,001%
24737
34
S.E. + Harungana madagascariensis 0,005%
28132
25
S.E. + Harungana madagascariensis 0,01%
14894
60
Через 8 дней инкубирования бычьего альбумина с избытком глюкозы наблюдалось образование перекрестных связей гликирования. Образование этих связей оценивали, используя флуоресцентные свойства продукта присоединения бычьего альбумина и глюкозы.
Экстракт Harungana madagascariensis, присутствующий в исследуемой системе, довольно существенно препятствует образованию перекрестных связей между бычьим альбумином и глюкозой.
III. Примеры рецептур
Процентные содержания указаны в весовых процентах от полного веса композиции.
Гель для чистки лица
%
гекторит
1,50
гликоли
2,00
ксантановая камедь
0,25
лауретсульфат натрия
3,00
стеарил натрия и кокоилглутамат натрия
7,00
масло сального дерева
0,50
кокоамфоацетат натрия
10,00
гликоль дистеарат
4,00
LANETTE SX
9,00
Harungana madagascariensis
0,50
консерванты
достат. кол-во
динатрий-EDTA
0,10
отдушка
достат. кол-во
вода деминерализованная
достат. кол-во до 100
Тонизирующий лосьон
%
ксантановая камедь
0,15
карбомер
0,15
биосахариды, смола-1
10,00
LUBRAJEL
10,00
Harungana madagascariensis
1,00
ПЕГ-40 гидрогенизированное касторовое масло
0,40
консерванты
достат. кол-во
отдушка
достат. кол-во
вода деминерализованная
достат. кол-во до 100
Ночной крем от старения
%
цетеариловый спирт и цетеариловый глюкозид
4,50
глицерил стеарат и стеарат ПЭГ-100
2,00
стеарет-21
0,50
гидрированные кокоглицериды
2,00
каприловые/каприновые триглицериды
8,00
масло сального дерева
2,00
диметикон
0,50
карбомер
0,30
гликоли
5,00
SEPIGEL 305
0,30
Harungana madagascariensis
3,00
гидроксид натрия
0,08
консерванты
достат. кол-во
отдушка
достат. кол-во
вода деминерализованная
достат. кол-во до 100
Сыворотка от старения
%
COVACRYL MV 60
0,70
FUCOGEL
8,00
Harungana madagascariensis
5,00
гликоли
10,00
консерванты
достат. кол-во
отдушка
достат. кол-во
вода деминерализованная
достат. кол-во до 100