Сравнительная характеристика цитологических методов оценки степени дифференцировки буккальных эпителиоцитов у подростков

остром пиелонефрите была выше, чем при хроническом.

Таким образом, штаммы уропатогенных микроорганизмов обладают способностью к хемотаксису, то есть имеют один из факторов вирулентности, так как этот механизм дает возможность микробам находить тканевые мишени организма хозяина. Наибольшим сродством штаммы обладали к тканям мочевого тракта и кишечника. Активность штаммов зависела от того, при какой форме заболевания были выделены исследуемые культуры.

ЛИТЕРАТУРА

1. Антибактериальная терапия острого цистита и пиелонефрита взрослых /Н. А. Лопаткин, И. И. Деревянко, Л. С. Страчунский и др. // Антибиотики и химиотерапия. - 2000. - Т. 45, №4. - Р. 30 - 34.

2. Коровина Н. А. Диагностическое значение лабораторных и инструментальных методов исследования при пиелонефрите у детей раннего возраста /Н. А. Коровина, А. Н. Астафьева, И. А. Машковцева //Педиатрия. - 1993. - №3. -Р. 89 - 94.

3. Лихолетов С. М. Методические аспекты изучения хемотаксиса бактерий /С. М. Лихолетов, А. Н. Ахмедов, В. А. Жаркова //Лаб. дело. - 1986. - №7. - Р. 142 - 143.

4. Хемотаксис Yersinia pseudotuberculosis как механизм поиска тканевых мишеней организма хозяина /В. С. Венедиктов, Н. Ф. Тимченко, Ф. Ф. Антоненко, В. И. Степаненко //Журн. микробиологии, эпидемиологии иммунологии. - 1988. -№5. - Р. 77 - 80.

Поступила 13.03.07

D. Ch. Urazbayeva

RESEARCH OF HEMOTAXIS OF UROPATHOGENIC MICROORGANISMS

The factor of patogenicity of microorganisms - hemotaxis was studied. Was achieved that the activity of this process depending on the fom of bioptat and on sharpness of the illness.

Д. Ч. Уразбаева

УРОПАТОГЕНД1 МИКРООРГАНИЗМДЕР ХЕМОТАКСИС1Н ЗЕРТТЕУ

Уропатогендi микроорганизмдердН патогендтк факторлары зерттелдi - хемотаксис. Бул процестН белсендтИ биоптат тYрi мен аурудын жедел ету^е байланысты екендИ керсеттген.

А. В. Куркин, Д. Х. Рыбалкина

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ СТЕПЕНИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ БУККАЛЬНЫХ ЭПИТЕЛИОЦИТОВ У ПОДРОСТКОВ

Кафедра гистологии с топографической анатомией и оперативной хирургией Карагандинской государственной медицинской академии

Буккальный эпителий, являясь частью мукозальной системы, способен продуцировать ряд цитокинов и хемокинов, простагландины, экспрессировать антигенпредставляющие молекулы, индуцировать секрецию антимикробных пептидов и др. [1, 2, 8]. Поэтому буккальные эпителиоциты могут быть индикатором местных и общих нарушений гомеостаза. Существуют различные критерии идентификации эпителиальных клеток в эксфолиативной диагностике слизистой ротовой полости [4, 6]. Все они подразделяются на две категории: оценку визуальную и цитомор-фометрическую путем определения ядерно-цито-плазматического отношения. Изменения диффе-ренцировки эпителия предлагается учитывать при скрининговой оценке состояния здоровья, стрессирующих воздействий, вредных факторов внешней среды, соматической патологии [5, 7]. В литературе в основном освещены цитологиче-

ские параметры буккальных эпителиоцитов в норме и их изменения при отдельных патологических состояниях у взрослого контингента населения [3, 7]. Показатели дифференцировки бук-кального эпителия у подростков путем визуальной и цитоморфометрической дефиниции требуют специального изучения.

Цель исследования - сравнить возможности визуальной и цитоморфометрической оценки степени дифференцировки эпителиоцитов слизистой щеки у подростков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектами исследования послужили мазки со слизистой части щеки, полученные у детей от 13 до 16 лет мужского пола, с гигиенической оценкой состояния полости рта, индексом О'Лири в пределах нормы.

Мазок брали в 0900-1100 часов утра в области максиллярной зоны щеки, выше линии смыкания зубов. Соскобы эпителия переносили на предметные стекла, высушивали и фиксировали в спирте-ацетоне (1:1, 5 мин), окрашивали по Май-Грюнвальду (15 мин), а затем - по Романов-скому-Гимзе в течение 30 мин. На мазках при микроскопировании с увеличением х400 визуально определяли эпителиальные клетки согласно классификации стадий дифференцировки [6]. Затем в клетках определенной стадии дифферен-цировки цитометрически при помощи программы PhotoM1.2 определяли площадь клеток, их ядер и ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО).

Всего цитоморфометрическому исследованию подверглось 16 045 эпителиальных клеток. Статистический анализ полученных данных проводили с помощью профессионального пакета статистических программ БИвоА: «Бй^йса-б» методами вариационной статистики. На основании цито-метрической оценки данных построена гистограмма процентного распределения клеток по степени дифференцировки эпителиоцитов, относительного ядерно-цитоплазматического отношения.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В исследуемом материале содержались эпителиоциты 3, 4, 5 и 6 степеней дифференцировки (рис. 1).

При визуальной оценке эпителиоциты 3 стадии отличались округлой или овальной формой. Цитоплазма этих клеток по тинкториальным свойствам характеризовалась умеренной базо-фильностью. Округлые ядра выделялись хорошо выявляющимся хроматином, нежно-сетчатого характера. В цитограмме эпителиоциты 3 стадии составляли 2,0±0,10%. Клетки 4 стадии диффе-ренцировки имели полигональную конфигурацию. Цитоплазма клеток гомогенно прокрашивалась до серо-голубого цвета, на слабобазофиль-ном фоне выявлялись участки оксифильности, что указывает на появление признаков кератини-зации. Ядра эпителиоцитов данной стадии уменьшались по величине. Структура ядер была более грубой, на поле хроматиновой сети могли наблюдаться насыщенно окрашенные глыбки хроматина. Количество клеток 4 стадии составило 23,3±0,50%. Буккальные эпителиоциты 5 стадии также имели полигональную форму, иногда с широкими выростами. Тон цитоплазмы варьировал от слабобазофильного до слабооксифильно-го. Интенсивно и диффузно прокрашенные ядра клеток, что свидетельствовало о процессах ка-риопикноза, еще больше уменьшаясь в размерах, приобретали овальную или неправильную форму. Количество эпителиоцитов 5 стадии в цито-грамме составляло 70,6±1,08%. Безъядерные клетки 6 стадии дифференцировки (4,1±0,16%), бледно-серого цвета отличались неправильной конфигурацией, были нередко вокуолизированы.

При цитоморфометрической оценке клетки 3 стадии дифференцировки имели площадь от 766,18 мкм2 до 4336,19 мкм2, составляя в среднем 1926,9±41,52 мкм2. Площадь ядер варьирует от 63,82 мкм2 до 182,59 мкм2, в среднем составляя 91,1±1,44 мкм2. Ядерно-цитоплазматическое

отношение было в диапазоне от 0,025 до 0,165, составляя в среднем 0,054±0,0013. Эпителиоци-ты 4 стадии дифференцировки характеризовались площадью клеток от 769,68 мкм2 до 5279,80 мкм2, среднее значение площади по сравнению с 3 стадией дифференцировки составило 2182,9±13,03 мкм2 (р<0,001). Ядра клеток были меньше в размере, площадь ядер варьировала от 40,32 мкм2 до 152,10 мкм2, составляя в среднем 79,7±0,30 мкм2 (р<0,001, по сравнению с 3 стадией дифференцировки). Ядерно-цитоплазмати-ческое отношение варьировала от 0,018 до 0,093, было ниже по сравнению с 3 стадией и составило 0,041±0,0002 (р<0,001). Эпителиоци-ты 5 стадии дифференцировки имели площадь клеток от 605,08 мкм2 до 8455,31 мкм2, составляя в среднем 2247,4±8,42 мкм2 (повышаясь по сравнению с 4 стадией; р<0,001). Площадь ядер поверхностных клеток была еще меньше по сравнению с изученными стадиями (р<0,001) и составила от 22,99 мкм2 до 142,59 мкм2, в среднем -58,8±0,16 мкм2. Ядерно-цитоплазматическое отношение варьировало от 0,009 до 0,090, составляя в среднем 0,030±0,0001 (достоверно уменьшаясь при сопоставлении с 4 стадией; р<0,001). Средняя площадь клеток 6 стадии дифференци-ровки была от 578,16 мкм2 до 3741,15 мкм2, составляя в среднем 1197,7±7,59 мкм2.

Проанализировано содержание эпителиальных клеток различной степени дифференци-ровки в заданном диапазоне ядерно-цитоплазма-тичекого отношения (рис. 2).

Выявлено, что при ЯЦО от 0,01 и ниже встречаются эпителиоциты только 5 степени дифференцировки. Они также значительно преобладают в популяции клеток с ЯЦО от 0,02 до 0,03, составляя 88,5±0,43 и 81,0±0,58% соответственно. При ЯЦО от 0,08 и выше преобладают эпителиоциты 3 степени дифференцировки, составляя 71,4±4,12 и 75,0±3,77%. При значениях ЯЦО от 0,04 до 0,07 встречаются клетки 3, 4 и 5 стадий дифференцировки.

Таким образом, визуальная оценка степени дифференцировки буккальных эпителиоцитов является более точной, чем определение ее по ядерно-цитоплазматическому отношению. Это связано с тем, что при визуальной оценке, наряду с масштабом цитоплазмы клеток и ядер, учитываются и их тинкториальные свойства. Следовательно, для внедрения компьютерного метода оценки степени дифференцировки дополнительно к цитоморфометрии необходимо также прово-

\ -V ' %

Рис. 1. Буккальные эпителиоциты 3, 4, 5 и 6 стадий дифференцировки. Окр.: по Романовскому-Гимзе. Ув.: х 400

Медицина и экология, 2007, 2

3- стадия дифференцировки, % кл.  4- I стадия дифференцировки, % кл.

5-. . я стадия дифференцировки, % кл.

Рис. 2. Содержание буккальных эпителиоцитов 3, 4 и 5 стадий дифференцировки в заданном диапазоне ЯЦО

дить денситометрию компонентов клетки, в частности, измерение оптической плотности ядра клетки и колориметрию для оценки базо- и окси-филии цитоплазмы.

ВЫВОДЫ

1. По значению ЯЦО в диапазоне от 0,040,07 определить степень дифференцировки эпителиоцитов поверхностного и шиповатого слоев эпителия слизистой ротовой полости не представляется возможным.

2. При ЯЦО до 0,03 с ошибкой в 10-15% определяются эпителиоциты поверхностного слоя, которые относятся к 5 степени дифферен-цировки.

3. При ЯЦО от 0,08 и выше выявляются эпителиоциты 3 степени дифференцировки, которые относятся к эпителиоцитам шиповатого слоя, с ошибкой до 25%.

ЛИТЕРАТУРА 1. Буккальные эпителиоциты как инструмент клинико-лабораторных исследований /М. А. Аба-джиди, Т. В. Махрова, И. В. Маянская и др. //Ни-

жегород. мед. журн. - 2003. - №3-4. - С. 8 - 12.

2. Быков В. Л. Функциональная морфология эпителиального барьера слизистой оболочки полости рта. //Стоматология. - 1997. - №3 - С. 12

- 17.

3. Возрастные морфофункциональные особенности слизистой оболочки полости рта /В. В. Паникаровский, А. С. Григорьян, Л. Н. Качуров-ская, З. П. Антипова //Стоматология. - 1989. -№1. - С. 6 - 11.

4. Оценка уровня дифференцировки клеток эпителия в отпечатках с разных участков слизистой оболочки полости рта здоровых людей /Г. В. Банченко, О. Г. Акопян, А. А. Агаджанян, И. А. Быкова //Стоматология. - 1997. - №1. - С. 12 -14.

5. Оценка цитологического и цитогенетиче-ского статуса слизистых оболочек полости носа и рта человека: Метод. рекомендации /Н. Н. Беляева, Л. П. Сычева, В. С. Журков и др. - М., 2005. -39 с.

6. О цитологической оценке состояния слизистой оболочки полости рта в норме и при патологии /Р. И. Юй, М. Ж. Ергазина, С. А. Семченкова и др. //Вопр. морфологии и клиники. - 2003. - №9.

- С. 353 - 356.

7. Хусаинова И. С. Оценка цитологических показателей буккального эпителия для диагностики функционального состояния человека / И. С. Хусаинова, И. Ю. Варвулева, Н. А. Кожина // Клинич. лаб. диагностика. - 1997. - №3. -С. 10 - 12.

8. Insights into the dynamic properties of keratin intermediate filaments in ewing epithelial cells /Joon Kylong Han, Joon Miri, Moir Robert D. et al. //The Journal of Cell Biology. - 2001. - №3. -С. 503 - 516.

Поступила 29.03.07

A. V. Kurkin, D. Kh. Rybalkina

COMPARATIVE CHARACTERISTICS OF THE CYTOLOGIC METHODS OF ESTIMATION OF THE BUCCAL EPITHELIUM CELLS DEGREE OF DIFFERENTIATION IN CHILDREN

A visual estimation of the buccal epithelium degree of differentiation is more precise then to estimate the stage of differentiation of the buccal epithelium by the karyoplasmic index. If the karyoplasmic index is equal to 0,01 or lower then it only the epitheliocytes of the 5 degree of differentiation can be found. The cells of the 5 stage also prevail among the cells with the karyoplasmic index about 0,02-0,03. In case the karyoplasmic index varies from 0,04 to 0,07 it is possible to find the buccal epithelium cells of the 3, 4 or 5 stages of differentiation. If the karyoplasmic index is about 0,08 or higher mainly the epithelial cells of the 3 degree can be found.

А. В Куркин, Д. Х. Рыбалкина

ЖАСеСП1Р1МДЕРДЕ БУККАЛДЫ ЭПИТЕЛИОЦИТТЕРД1Ц ДИФФЕРЕНСАЦИЯ Д6РЕЖЕС1Н БАРАЛАУДЫЦ ЦИТОЛОГИЯЛЫК 6Д1СТЕР1Н1Ц САЛЫСТЫРМАЛЫ СИПАТТАМАСЫ

Буккалды эпителиоциттердщ дифференсациясынын дэрежеан визуалды баFалау, оны ядролык-цитоплазмалык аракатынаспен аныктауFа д^рек болып табылады. ЯЦА 0,0l жэне темен кез^де диффе-ренсациянын тек 5^i дэрежеандеп эпителиоциттер кездеседк Олар сонымен катар ЯЦА 0,02-ден 0,03 болатын жасушалар катарында да айтарлыктай Yстем болады. ЯЦА 0,04-тен 0,07-ге де^н болатын керсет-кштерде дифференсациянын 3-ш^ 4^i жэне 5^i сатысындаFы жасушалар кездеседк ЯЦА 0,08 жэне жоFары кез^де дифференсациянын 3^i сатысындаFы эпителиоциттер басым болады.