СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ УРОЖАЙНОСТИ НИЗКОРОСЛЫХ РАСТЕНИЙ ПУТЕМ МАНИПУЛЯЦИИ МЕТАБОЛИЗМА ГИББЕРЕЛЛИНА
METHODS AND COMPOSITIONS FOR INCREASING YIELD OF STUNTED PLANTS BY MANIPULATION OF GIBBERELLIN METABOLISM

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[1]
Данная заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 62/376298, поданной 17 августа 2016 года, предварительной заявки на патент США № 62/442377, поданной 4 января 2017 года, и предварительной заявки на патент США № 62/502313, поданной 5 мая 2017 года. Каждая из этих предварительных заявок на патент США полностью включена в данный документ посредством ссылки.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[2]

Перечень последовательностей, содержащийся в файле с именем "P34494WO00_SEQ.txt", размер которого составляет 293398 байт (измерено в MS-Windows) и который был создан 17 августа 2017 года, подан в электронном виде и полностью включен в данный документ посредством ссылки.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[3]
Данное описание относится к композициям и способам улучшения признаков, таких как устойчивость к полеганию и повышенный урожай, у однодольных или злаковых растений, включая кукурузу.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[4]
Гиббереллины (гиббереллиновые кислоты или GA (GA - gibberellic acid)) представляют собой гормоны растений, которые регулируют ряд основных процессов роста и развития растений. Манипулирование уровнями GA в полукарликовых сортах пшеницы, риса и сорго привело к увеличению урожайности и сокращению полегания посевов этих злаковых культур в течение 20-го века, что в значительной степени привело к Зеленой революции. Тем не менее успешное увеличение урожайности в других злаковых культурах, таких как кукуруза, не было достигнуто с помощью манипулирования путями GA. В самом деле, некоторые мутации в генах пути GA были связаны с различными нетипичными сортами кукурузы, которые несовместимы с урожайностью, что привело исследователей к поиску полукарликовых, высокоурожайных сортов кукурузы посредством манипулирования путем GA.
[5]
В данной области техники по-прежнему существует потребность в разработке однодольных или злаковых культур, таких как кукуруза, с повышенной урожайностью и/или устойчивостью к полеганию.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[6]
В первом аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом указанная некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA в однодольном или злаковом растении или клетке растения, при этом эндогенный белок оксидазы GA является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 или 33, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[7]
Во втором аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 9, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[8]
В третьем аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, при этом указанный эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 15, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[9]
В четвертом аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA3 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 30 или 33, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[10]
В пятом аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 12, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[11]
Agrobacterium
В шестом аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок в однодольном или злаковом растении или клетке растения, при этом эндогенный белок является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 86, 90, 94, 97, 101, 104, 108, 112, 116, 118, 121, 125, 129, 133 или 136, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении. В дополнительном аспекте данного описания также предложен вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК, описанную в данном документе. В дополнительном аспекте данного описания также предложено трансгенное однодольное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК, описанную в данном документе. В одном аспекте предоставляется трансгенное растение кукурузы, часть растения или клетка растения. В другом аспекте предложен способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата с помощью конструкции рекомбинантной ДНК, описанной в данном документе, и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата. В другом аспекте злаковое растение трансформируется посредством трансформации, опосредованной  или бомбардировкой частицами.
[12]
В седьмом аспекте данного описания предложен способ снижения уровня по меньшей мере одной активной молекулы GA в стебле кукурузного или злакового растения, включающий в себя: супрессию одного или более генов оксидазы GA3 или оксидазы GA20 рекомбинантной конструкцией ДНК в одной или более тканях трансгенного злакового или кукурузного растения.
[13]
В восьмом аспекте данного описания предложено трансгенное кукурузное или злаковое растение, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК, при этом конструкция рекомбинантной ДНК содержит последовательность транскрибируемой ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена по меньшей мере на один эндогенный ген оксидазы GA20 или GA3 для супрессии, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, и при этом трансгенное однодольное или злаковое растение имеет меньшую высоту растения по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[14]
В девятом аспекте данного описания предложено злаковое растение, содержащее мутацию в эндогенном гене оксидазы GA или около него, введенную методом мутагенеза, при этом уровень экспрессии эндогенного гена оксидазы GA снижается или отсутствует в злаковом растении, и при этом злаковое растение имеет меньшую высоту по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[15]
В десятом аспекте данного описания предложено кукурузное или злаковое растение, содержащие геномное редактирование, введенное с помощью целевого метода редактирования генома в локус эндогенного гена оксидазы GA или около него, при этом уровень экспрессии эндогенного гена оксидазы GA снижен или отсутствует по сравнению с контрольным растением, и при этом редактированное злаковое растение имеет меньшую высоту по сравнению с контрольным растением.
[16]
В одиннадцатом аспекте данного описания предложена композиция, содержащая направляющую РНК, при этом направляющая РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере, 25 последовательным нуклеотидам целевой последовательности ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA злакового растения или около него. В одном аспекте композиция дополнительно содержит эндонуклеазу, направляемую РНК.
[17]
В двенадцатом аспекте данного описания предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу направляющей РНК, при этом молекула направляющей РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам целевой последовательности ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения или около него.
[18]
В тринадцатом аспекте данного описания предложена донорная матрица рекомбинантной ДНК содержащая, по меньшей мере, одну гомологичную последовательность, при этом по меньшей мере одна гомологичная последовательность является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК, при этом последовательность целевой ДНК представляет собой геномную последовательность в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения или около него.
[19]
В четырнадцатом аспекте данного описания предложена донорная матрица рекомбинантной ДНК содержащая два гомологичных плеча, включая первое гомологичное плечо и второе гомологичное плечо, при этом первое гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам первой фланкирующей последовательности ДНК, при этом второе гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам второй фланкирующей последовательности ДНК, и при этом первая фланкирующая последовательность ДНК и вторая фланкирующая последовательность ДНК представляют собой геномные последовательности в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения или около него. В одном аспекте дополнительно предоставлена молекула ДНК или вектор, содержащий донорную матрицу рекомбинантной ДНК, описанную в данном документе. В другом аспекте дополнительно предоставлена бактериальная клетка или клетка-хозяин, содержащая донорную матрицу рекомбинантной ДНК, описанную в данном документе. В другом аспекте дополнительно предоставлено кукурузное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК, описанную в данном документе.
[20]
В пятнадцатом аспекте данное описание относится к сконструированной сайт-специфической нуклеазе, которая связывается с целевым сайтом в или рядом с геномным локусом эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте.
[21]
В шестнадцатом аспекте данное описание относится к конструкции рекомбинантной ДНК, содержащей трансген, кодирующий сайт-специфическую нуклеазу, при этом сайт-специфическая нуклеаза связывается с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA однодольного или злакового растения, или около него и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте.
[22]
В семнадцатом аспекте данное описание относится к способу получения трансгенного кукурузного или злакового растения, включающему в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата с помощью донорной матрицы рекомбинантной ДНК, описанной в данном документе, и (b) регенерацию или развитие трансгенного кукурузного или злакового растения из трансформированного эксплантата, при этом трансгенное кукурузное или злаковое растение содержит последовательность вставки донорной матрицы рекомбинантной ДНК.
[23]
В восемнадцатом аспекте данное описание относится к способу получения кукурузного или злакового растения, имеющего геномное редактирование в гене эндогенной оксидазы GA или около него, включающему в себя: (а) введение по меньшей мере в одну клетку эксплантата кукурузного или злакового растения сайт-специфической нуклеазы или молекулы рекомбинантной ДНК, содержащей трансген, кодирующий сайт-специфическую нуклеазу, при этом сайт-специфическая нуклеаза связывается с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA или около него и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте и (b) регенерацию или развитие редактированного кукурузного или злакового растения по меньшей мере из одной клетки эксплантата, содержащей геномное редактирование в гене эндогенной оксидазы GA или около него редактированного однодольного или злакового растения.
[24]
В девятнадцатом аспекте данное описание относится к модифицированному растению кукурузы, имеющему высоту растения менее 2000 мм, менее 1950 мм, менее 1900 мм, менее 1850 мм, менее 1800 мм, менее 1750 мм, менее 1700 мм, менее 1650 мм, менее 1600 мм, менее 1550 мм, менее 1500 мм, менее 1450 мм, менее 1400 мм, менее 1350 мм, менее 1300 мм, менее 1250 мм, менее 1200 мм, менее 1150 мм, менее 1100 мм, менее 1050 мм или менее 1000 мм и один или более из (i) среднего диаметра стебля более 18 мм, более 18,5 мм, более 19 мм, более 19,5 мм, более 20 мм, более 20,5 мм, более 21 мм, более 21,5 мм или более 22 мм, (ii) улучшения устойчивости к полеганию по сравнению с контрольным растением дикого типа, или (iii) повышения устойчивости к засухе по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[25]
В двадцатом аспекте данное описание относится к модифицированному злаковому растению, имеющему уменьшенную высоту растения по сравнению с контрольным растением дикого типа, и (i) увеличенному диаметру стебля по сравнению с контрольным растением дикого типа, (ii) улучшенной устойчивости к полеганию по сравнению с контрольным растением дикого типа, или (iii) улучшенной устойчивости к засухе по сравнению с контрольным растением дикого типа.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[26]
На Фиг. 1 проиллюстрирована уменьшенная высота растений у инбредных растений кукурузы, экспрессирующих конструкцию супрессии оксидазы GA20, через восемь событий трансформации по сравнению с инбредными контрольными растениями;
[27]
На Фиг. 2А проиллюстрирована уменьшенная высота растений в среднем по гибридным растениям кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[28]
На Фиг. 2В проиллюстрировано изображение гибридного контрольного растения дикого типа (слева) рядом с гибридным растением кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20 (справа), имеющим уменьшенную высоту растения;
[29]
На Фиг. 3А проиллюстрирован увеличенный диаметр стебля в среднем по гибридным растениям кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[30]
На Фиг. 3В проиллюстрировано изображение поперечного сечения стебля гибридного контрольного растения дикого типа (слева) рядом с поперечным сечением стебля гибридного растения кукурузы, экспрессирующего конструкцию супрессии оксидазы GA20 (справа), имеющего увеличенный диаметр стебля;
[31]
На Фиг. 4 проиллюстрирован увеличенный сырой вес початка в среднем по гибридным растениям кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[32]
На Фиг. 5 проиллюстрирован увеличенный сырой вес початка в среднем по гибридным растениям кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20, в двух полевых испытаниях по сравнению с гибридными контрольными растениями дикого типа в ответ на случай сильного ветра, который вызвал большее полегание у гибридных контрольных растений;
[33]
На Фиг. 6 проиллюстрирован увеличенный уборочный индекс гибридных растений кукурузы, экспрессирующих конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[34]
На Фиг. 7 проиллюстрировано увеличение средней оценки урожайности зерна гибридных растений кукурузы, экспрессирующих конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[35]
На Фиг. 8 проиллюстрирован увеличенный показатель плодовитости в среднем по гибридным растениям кукурузы, экспрессирующим конструкцию супрессии оксидазы GA20, по сравнению с гибридными контрольными растениями;
[36]
На Фиг. 9 проиллюстрировано изменение высоты растений с течением времени на стадиях развития V11 до R1 между трансгенными растениями кукурузы и контролем;
[37]
18
На Фиг. 10 проиллюстрирован график, сравнивающий измерения соотношений стабильных изотопов кислорода (δO) как показателя устьичной проводимости и уровня воды в ткани листьев на стадии R5 между трансгенными растениями кукурузы и контролем;
[38]
На Фиг. 11 проиллюстрирован график, сравнивающий скорость роста корня во время стадий развития V10 и до R2 между трансгенными и контрольными растениями как в условиях SAP, так и в условиях HD с применением датчиков на разных глубинах почвы, которые обнаруживают изменения в уровнях воды, указывающие на наличие корней на этой глубине;
[39]
На Фиг. 12А проиллюстрированы различия в устьичной проводимости утром и днем между трансгенными растениями кукурузы и контролем в нормальных условиях и в условиях засухи в теплице;
[40]
На Фиг. 12B проиллюстрированы различия в фотосинтезе утром и днем между трансгенными растениями кукурузы и контролем в нормальных условиях и в условиях засухи в теплице;
[41]
На Фиг. 13А проиллюстрированы различия в уровнях экспрессии микроРНК в общей стеблевой ткани или в отдельных сосудистых и несосудистых тканях стебля трансгенных растений кукурузы по сравнению с контролем; а также
[42]
На Фиг. 13B проиллюстрированы различия в уровнях экспрессии транскрипта мРНК оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в общей стеблевой ткани или в отдельных сосудистых и несосудистых тканях стебля трансгенных растений кукурузы по сравнению с контролем.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определения
[43]
Для облегчения понимания описания, несколько терминов и сокращений, применяемых в данном документе, определены ниже следующим образом:
[44]
то есть
Термин "и/или" в случае применения в списке из двух или более предметов означает, что любой из перечисленных предметов может применяться сам по себе или в сочетании с любым одним или более перечисленными предметами. Например, выражение "A и/или B" предназначено для обозначения одного или обоих из A и B,  одного A, одного B или A и B в комбинации. Выражение "A, B и/или C" предназначено для обозначения одного A, одного B, одного C, A и B в комбинации, A и C в комбинации, B и C в комбинации или A, B и C в комбинации.
[45]
Применяемый в данном документе термин "около" предназначен для определения числовых значений, которые он изменяет, и обозначает такое значение как переменную в пределах погрешности. Когда конкретный предел погрешности, такой как стандартное отклонение от среднего значения, не указан, следует понимать, что термин "около" означает тот диапазон, который будет включать указанное значение и диапазон, который будет включен округления в большую или меньшую сторону до этой цифры с учетом значимых цифр.
[46]
Poaceae
Gramineae
Термин "злаковое растение" в контексте данного описания относится к однодольному (monocot) культурному растению, которое относится к семейству злаковых  или  и которое обычно собирают с целью получения его семян, включая, например, пшеницу, кукурузу, рис, просо, ячмень, сорго, овес и рожь.
[47]
Применяемый в данном документе термин "процент идентичности" в отношении двух или более нуклеотидных или белковых последовательностей рассчитывается путем (i) сравнения двух оптимально выровненных последовательностей (нуклеотида или белка) в окне сравнения, (ii) определения количество положений, в которых идентичное основание нуклеиновой кислоты (для нуклеотидных последовательностей) или аминокислотный остаток (для белков) встречается в обеих последовательностях, с целью получения числа совпадающих положений, (iii) деление количества совпадающих положений на общее количество позиций в окне сравнения, а затем (iv) умножение этого коэффициента на 100%, чтобы получить процент идентичности. В целях расчета "процента идентичности" между последовательностями ДНК и РНК урацил (U) последовательности РНК считается идентичным тимину (Т) последовательности ДНК. Если окно сравнения определено как область выравнивания между двумя или более последовательностями (то есть, исключая нуклеотиды на 5' и 3' концах выровненных полинуклеотидных последовательностей или аминокислот на N-конце и С-конце выровненных последовательностей белка, которые не являются идентичными для сравниваемых последовательностей), тогда "процент идентичности" также может упоминаться как "процент идентичности выравнивания". Если "процент идентичности" вычисляется по отношению к эталонной последовательности без указания конкретного окна сравнения, то процент идентичности определяется путем деления числа совпадающих положений в области выравнивания на общую длину эталонной последовательности. Соответственно, для целей данного описания, когда две последовательности (запрашиваемая и предметная) оптимально выровнены (с учетом пробелов в их выравнивании), "процент идентичности" для запрашиваемой последовательности равен количеству идентичных положений между двумя последовательностями поделенному на общее количество положений в запрашиваемой последовательности по всей ее длине (или в окне сравнения), которое затем умножается на 100%.
[48]
например
Признано, что положения остатков белков, которые не являются идентичными, часто отличаются консервативными аминокислотными заменами, где аминокислотные остатки заменены другими аминокислотными остатками с аналогичным размером и химическими свойствами (, зарядом, гидрофобностью, полярностью и тому подобным), и, следовательно, не могут изменить функциональные свойства молекулы. Когда последовательности отличаются консервативными заменами, процент сходства последовательностей может быть откорректирован в сторону увеличения, чтобы скорректировать консервативную природу неидентичной замены(замен). Считается, что последовательности, которые отличаются такими консервативными заменами, имеют "сходство последовательностей" или "сходство". Таким образом, "процент сходства", как применяется в данном документе в отношении двух или более белковых последовательностей, рассчитывается путем (i) сравнения двух оптимально выровненных белковых последовательностей в окне сравнения, (ii) определения количества положений, в которых один и тот же или подобный аминокислотный остаток встречается в обеих последовательностях, с целью получения числа совпадающих положений, (iii) деления количества совпадающих положений на общее количество положений в окне сравнения (или общую длину эталонного или запрашиваемого белка если окно сравнения не указано), а затем (iv) умножение этого коэффициента на 100%, с целью получения процента сходства. Консервативные аминокислотные замены белков известны в данной области техники.
[49]
Nucleic Acids Research
Nucleic Acids Research
Bioinformatics
J. Mol. Biol.
Для оптимального выравнивания последовательностей с целью вычисления их процента идентичности или сходства в данной области техники известны различные попарные или множественные алгоритмы и программы выравнивания последовательностей, такие как ClustalW или Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) и тому подобные, которые могут применяться для сравнения идентичности или сходства последовательностей между двумя или более нуклеотидными, или белковыми последовательностями. Не смотря на то, что в данной области техники известны другие способы выравнивания и сравнения, выравнивание между двумя последовательностями (включая диапазоны процента идентичности, описанные выше) может быть таким, как определено алгоритмом ClustalW или BLAST, см., например, Chenna R. и соавт., ʺMultiple sequence alignment with the Clustal series of programs,ʺ 31: 3497-3500 (2003 год); Thompson JD и соавт., ʺClustal W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice,ʺ  22: 4673-4680 (1994 год); и Larkin MA и соавт., ʺClustal W and Clustal X version 2.0,ʺ  23: 2947-48 (2007 год); и Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, D.J. (1990 год) "Basic local alignment search tool."  215: 403-410 (1990 год), все содержание и описание которых включено в данный документ посредством ссылки.
[50]
В данном документе термин "процент комплементарности", применяется в отношении к двум нуклеотидным последовательностям, является аналогичным концепции процентной идентичности, но относится к проценту нуклеотидов в запрашиваемой последовательности, которая оптимально спаривается основаниями или гибридизуется с нуклеотидами предметной последовательности, когда запрашиваемые и предметные последовательности расположены линейно и оптимально спариваются основаниями без вторичных складывающихся структур, таких как петли, стебли или шпильки. Такой процент комплементарности может быть между двумя цепями ДНК, двумя цепями РНК или цепью ДНК и цепью РНК. "Процент комплементарности" рассчитывается путем (i) оптимального спаривания оснований или гибридизации двух нуклеотидных последовательностей в линейном и полностью вытянутом расположении (то есть, без фолдинга или вторичных структур) через окно сравнения, (ii) определения количества положений этой пары оснований между двумя последовательностями в окне сравнения, с целью получения количества комплементарных положений, (iii) деления количества комплементарных положений на общее количество положений в окне сравнения и (iv) умножения этого коэффициента на 100%, с целью получения процентной комплементарности двух последовательностей. Оптимальное спаривание оснований двух последовательностей может быть определено на основе известных спариваний нуклеотидных оснований, таких как G-C, A-T и A-U, посредством водородных связей. Если "процент комплементарности" вычисляются по отношению к эталонной последовательности без указания конкретного окна сравнения, то процент идентичности определяется путем деления числа дополнительных положений между двумя линейными последовательностями по общей длине эталонной последовательности. Таким образом, для целей данного описания, когда две последовательности (запрашиваемая и предметная) являются оптимально спарены основаниями (с учетом несовпадений или не спаренных основаниями нуклеотидов, но без фолдинга или вторичных структур), "процент комплементарности" для запрашиваемой последовательности равен количеству спаренных основаниями положений между двумя последовательностями, деленному на общее количество положений в запрашиваемой последовательности по всей ее длине (или на количество положений в запрашиваемой последовательности в окне сравнения), которое затем умножается на 100%.
[51]
Термин "функционально связанный" относится к функциональной связи между промотором или другим регуляторным элементом и ассоциированной транскрибируемой последовательностью ДНК или кодирующей последовательностью гена (или трансгена), так что промотор, и тому подобное, действует или функционирует, чтобы инициировать, способствовать, воздействовать, вызывать и/или стимулировать транскрипцию и экспрессию ассоциированной транскрибируемой последовательности ДНК или кодирующей последовательности, по меньшей мере, в определенных клетках, тканях, стадии(ях) развития и/или состоянии(ях).
[52]
Термин "промотор, экспрессирующийся в растении" относится к промотору, который может инициировать, содействовать, влиять, вызывать и/или стимулировать транскрипцию и экспрессию ассоциированной с ним транскрибируемой последовательности ДНК, кодирующей последовательности или ген в растительной клетке или ткани.
[53]
Термин "гетерологичный" в отношении промотора или другой регуляторной последовательности по отношению к ассоциированной полинуклеотидной последовательности (например, транскрибируемой последовательности ДНК или кодирующей последовательности, или гена) представляет собой промотор или регуляторную последовательность, которая функционально не связана с такой ассоциированной полинуклеотидной последовательностью в природе - например, промотор или регуляторная последовательность имеют различное происхождение по сравнению с ассоциированной полинуклеотидной последовательностью, и/или промотор или регуляторная последовательность не встречаются в природе у видов растений, которые должны быть трансформированы промотором или регуляторной последовательностью.
[54]
Термин "рекомбинантный" в отношении к полинуклеотидной (ДНК или РНК) молекуле, белку, конструкции, вектору и тому подобному, относится к полинуклеотидной или белковой молекуле или последовательности, искусственной и обычно не встречающейся в природе, и/или присутствующим в контексте, в котором они обычно не встречаются в природе, включая молекулу полинуклеотида (ДНК или РНК), белок, конструкцию и тому подобное, включая комбинацию двух или более последовательностей полинуклеотида или белка, которые не встречаются в природе вместе, таким же образом без вмешательства человека, что и полинуклеотидная молекула, белок, конструкция и тому подобное, включающие в себя по меньшей мере две полинуклеотидные или белковые последовательности, которые функционально связаны, но гетерологичны по отношению друг к другу. Например, термин "рекомбинантный" может относиться к любой комбинации двух или более последовательностей ДНК или белка в одной и той же молекуле (например, плазмиде, конструкции, векторе, хромосоме, белке и тому подобном), где такая комбинация является искусственной и обычно не встречается в природе. Как применяется в данном определении, фраза "обычно не встречается в природе" означает "не встречается в природе без вмешательства человека". Рекомбинантная полинуклеотидная или белковая молекула, конструкция и тому подобное, может содержать полинуклеотидную или белковую последовательность(и), которая (i) отделена от другой полинуклеотидной или белковой последовательности(тей), которые существуют в природе рядом друг с другом, и/или (ii) является смежной (или примыкает к) с другими полинуклеотидными или белковыми последовательностями, которые не находятся в естественной близости друг от друга. Такая рекомбинантная полинуклеотидная молекула, белок, конструкция и тому подобное, также может относиться к полинуклеотидной или белковой молекуле, или последовательности, которая была генетически сконструирована и/или сконструирована вне клетки. Например, рекомбинантная молекула ДНК может содержать любую сконструированную или искусственную плазмиду, вектор и тому подобное, и может включать линейную или кольцевую молекулу ДНК. Такие плазмиды, векторы и тому подобное, могут содержать различные поддерживающие элементы, включая прокариотическую точку начала репликации и селектируемый маркер, а также один или более трансгенов или экспрессионных кассет, возможно, в дополнение к селектируемому маркерному гену растения и тому подобному.
[55]
В данном документе термин "выделенный" относится, по меньшей мере, к частичному отделению молекулы от других молекул, обычно связанных с ней в ее естественном состоянии. В одном варианте реализации изобретения термин "выделенный" относится к молекуле ДНК, которая отделена от нуклеиновых кислот, которые обычно фланкируют молекулу ДНК в ее естественном состоянии. Например, молекула ДНК, кодирующая белок, который естественным образом присутствует в бактерии, была бы выделенной молекулой ДНК, если бы она не находилась в ДНК бактерии, в которой естественным образом находится молекула ДНК, кодирующая белок. Таким образом, молекула ДНК, слитая или функционально связанная с одной или более другой молекулой(ами) ДНК, с которыми она не может быть связана в природе, например, в результате рекомбинантной ДНК или методов трансформации растений, считается выделенной в данном документе. Такие молекулы считаются выделенными, даже если они интегрированы в хромосому клетки-хозяина или присутствуют в растворе нуклеиновой кислоты с другими молекулами ДНК.
[56]
например,
В данном документе термин "кодирующая область" относится к части полинуклеотида, который кодирует функциональную единицу или молекулу (без ограничения, мРНК, белок или некодирующую последовательность или молекулу РНК).
[57]
например
например
Agrobacterium
например
В данном документе термин "модифицированный" в контексте растения, семени растения, части растения, клетки растения и/или генома растения относится к растению, семени растения, части растения, клетки растения и/или геному растения, содержащему сконструированное изменение в уровне экспрессии и/или кодирующей последовательности одного или более гена(ов) оксидазы GA относительно дикого типа или контрольного растения, семени растения, части растения, клетки растения и/или генома растения, например, через (A) трансгенное событие, включающее в себя супрессирующую конструкцию или транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую РНК, которая нацелена на один или более генов оксидазы GA3 и/или GA20 для супрессии, или (B) событие редактирования генома или мутацию, влияющую (например, уменьшая или устраняя) на уровень экспрессии или активности одного или более эндогенных генов оксидазы GA3 и/или GA20. Более того, термин "модифицированный" может дополнительно относиться к растению, семени растения, части растения, клетки растения и/или геному растения, имеющему одну или более мутаций, влияющих на экспрессию одного или более эндогенных генов оксидазы GA, таких как один или более эндогенных генов оксидазы GA3 и/или GA20, введенных посредством химического мутагенеза, вставки или исключения транспозона, или любого другого известного метода мутагенеза, или введенных посредством редактирования генома. Поэтому, для ясности, модифицированное растение, семя растения, часть растения, клетка растения и/или геном растения включает мутированное, редактированное и/или трансгенное растение, семя растения, часть растения, клетку растения и/или геном растения, имеющие модифицированный уровень экспрессии, профиль экспрессии и/или кодирующую последовательность одного или более генов оксидазы GA по отношению к дикому типу или контрольному растению, семени растения, части растения, клетке растения и/или геному растения. Модифицированные растения или семена могут содержать различные молекулярные изменения, которые влияют на экспрессию гена(ов) оксидазы GA, таких как ген(ы) оксидазы GA3 и/или GA20, включая генетические и/или эпигенетические модификации. Модифицированные растения, части растений, семена и тому подобное, могут быть подвергнуты мутагенезу, редактированию генома или сайт-направленной интеграции (, без ограничения, с помощью способов, применяющих сайт-специфические нуклеазы), генетической трансформации (, без ограничения, с помощью способов трансформации или бомбардировки микрочастицами) или их комбинации. Такие "модифицированные" растения, семена растений, части растений и клетки растений включают растения, семена растений, части растений и клетки растений, которые являются потомками или получены из "модифицированных" растений, семян растений, частей растений и клеток растений, которые сохраняют молекулярное изменение (, изменение уровня экспрессии и/или активности) одного или более генов оксидазы GA. Модифицированные семена, представленные в данном документе, могут дать начало модифицированному растению, представленному в данном документе. Модифицированное растение, семя растения, часть растения, клетка растения или геном растения, представленные в данном документе, могут содержать конструкцию рекомбинантной ДНК или вектор, или геном, как указано в данном документе. "Модифицированный продукт растительного происхождения" может представлять собой любой продукт, изготовленный из модифицированного растения, части растения, клетки растения или хромосомы растения, представленных в данном документе, или любой их части или компонента.
[58]
Как применяется в данном документе, термин "контрольное растение" (или аналогично "контрольное" семя растения, часть растения, клетка растения и/или геном растения) относится к растению (или семени растения, части растения, клетке растения и/или геному растения) которое применяется для сравнения с модифицированным растением (или модифицированным семенем растения, частью растения, клеткой растения и/или геномом растения) и имеет такой же или сходный генетический фон (например, одинаковые родительские линии, гибридное скрещивание, инбредная линия, тестеры, и тому подобное) что и модифицированное растение (или семя растения, часть растения, клетка растения и/или геном растения), за исключением события(ий) трансгенного и/или геномного редактирования, затрагивающих один или более генов оксидазы GA. Например, контрольное растение может быть инбредной линией, которая является такой же инбредной линией, применяемой для изготовления модифицированного растения, или контрольное растение может быть продуктом того же гибридного скрещивания инбредных родительских линий, что и модифицированное растение, за исключением отсутствия в контрольном растении какого-либо трансгенного события(ий) или события(ий) редактирования генома, затрагивающего один или более генов оксидазы GA. В целях сравнения с модифицированным растением, семенами растения, частью растения, клеткой растения и/или геномом растения, "растение дикого типа" (или аналогичным образом семя растения "дикого типа", часть растения "дикого типа", клетка растения "дикого типа" и/или геном растения "дикого типа") относится к нетрансгенному и геномно-нередактированному контрольному растению, семени растения, части растения, клетке растения и/или геному растения. В данном документе термин "контрольное" растение, семя растения, часть растения, клетка растения и/или геном растения может также представлять собой растение, семя растения, часть растения, клетку растения и/или геном растения, имеющие сходный (но не одинаковый или идентичный) генетический фон с модифицированным растением, семенем растения, частью растения, клеткой растения и/или геномом растения, если он считается достаточно подобным для сравнения характеристик или признаков, подлежащих анализу.
[59]
В данном документе термин "целевой сайт" для редактирования генома относится к расположению полинуклеотидной последовательности в геноме растения, которая связывается и расщепляется сайт-специфической нуклеазой, вводящей двухцепочечный разрыв (или одноцепочечный разрыв) в остов нуклеиновой кислоты полинуклеотидной последовательности и/или в ее комплементарную цепь ДНК. Целевой сайт может содержать по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, при по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26, по меньшей мере 27, по меньшей мере 29 или по меньшей мере 30 последовательных нуклеотидов. "Целевой сайт" для РНК-направленной нуклеазы может содержать последовательность либо комплементарной цепи молекулы двухцепочечной нуклеиновой кислоты (ДНК), либо хромосомы в целевом сайте. Сайт-специфическая нуклеаза может связываться с целевым сайтом, например, через некодирующую направляющую РНК (например, без ограничения, CRISPR РНК (crРНК) или одиночную направляющую РНК (sgРНК), как описано далее ниже). Некодирующая направляющая РНК, представленная в данном документе, может быть комплементарной целевому сайту (например, комплементарной либо цепи двухцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, либо хромосоме в целевом сайте). Понятно, что для некодирующей направляющей РНК может не требоваться совершенная идентичность или комплементарность для связывания или гибридизации с целевым сайтом. Например, может допускаться по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7 или по меньшей мере 8 ошибочных спариваний (или более) между целевым сайтом и некодирующей РНК. Термин "целевой сайт" также относится к расположению полинуклеотидной последовательности в геноме растения, которая связана и расщепляется другой сайт-специфической нуклеазой, которая не может направляться некодирующей молекулой РНК, такой как мегануклеаза, нуклеаза с цинковыми пальцами (ZFN) или эффекторная нуклеаза, подобная активаторам транскрипции (TALEN), для введения двухцепочечного разрыва (или одноцепочечного разрыва) в полинуклеотидную последовательность и/или ее комплементарную цепь ДНК. В данном документе термин "целевая область" или "нацеленная область" относится к полинуклеотидной последовательности или области, которая фланкирована двумя или более целевыми сайтами. Без ограничения, в некоторых вариантах реализации изобретения целевая область может быть подвергнута мутации, делеции, вставке или инверсии. В данном документе термин "фланкированный" если применяется для описания целевой области полинуклеотидной последовательности или молекулы, относится к двум или более целевым сайтам полинуклеотидной последовательности или молекулы, окружающей целевую область, с одним целевым сайтом на каждой стороне целевой области. Помимо редактирования генома, термин "целевой сайт" может также применяться в контексте супрессии гена для обозначения части молекулы мРНК (например, "сайта распознавания"), которая комплементарна по меньшей мере части некодирующей молекулы РНК (например, микроРНК, миРНК и тому подобное), кодируемой конструкцией супрессии.
[60]
В данном документе термин "донорная молекула", "донорная матрица" или "молекула донорной матрицы" (совместно именуемые "донорная матрица"), которые могут представлять собой рекомбинантную донорную матрицу ДНК, определяется как молекула нуклеиновой кислоты, имеющая матрицу нуклеиновой кислоты или последовательность вставки для сайт-направленной, направленной вставки или рекомбинации в геном растительной клетки посредством репарации одноцепочечного разрыва или двухцепочечного разрыва ДНК в геноме растительной клетки. Например, "донорная матрица" может применяться для сайт-направленной интеграции трансгена или супрессирующей конструкции, или в качестве матрицы для введения мутации, такой как вставка, делеция и тому подобное, в целевой сайт в пределах генома растения. Предложенный в данном документе метод редактирования целевого генома может включать в себя применение одной или более, двух или более, трех или более, четырех или более, или пяти или более донорных молекул или матриц. "Донорская матрица" может представлять собой одноцепочечную или двухцепочечную молекулу ДНК или РНК, или плазмиду. "Инсерционная последовательность" донорной матрицы представляет собой последовательность, предназначенную для целевой инсерции в геном растительной клетки, которая может иметь любую подходящую длину. Например, инсерционная последовательность донорной матрицы может составлять от 2 до 50000, от 2 до 10000, от 2 до 5000, от 2 до 1000, от 2 до 500, от 2 до 250, от 2 до 100, от 2 до 50, от 2 до 30, от 15 до 50, от 15 до 100, от 15 до 500, от 15 до 1000, от 15 до 5000, от 18 до 30, от 18 до 26, от 20 до 26, от 20 до 50, от 20 до 100, от 20 до 250, от 20 до 500, от 20 до 1000, от 20 до 5000, от 20 до 10000, от 50 до 250, от 50 до 500, от 50 до 1000, от 50 до 5000, от 50 до 10000, от 100 до 250, от 100 до 500, от 100 до 1000, от 100 до 5000, от 100 до 10000, от 250 до 500, от 250 до 1000, от 250 до 5000 или от 250 до 10000 нуклеотидов или пар оснований в длину. Донорская матрица также может иметь по меньшей мере одну гомологичную последовательность или гомологичное плечо, такое как два плеча гомологии, для направления интеграции последовательности мутации или вставки в целевой сайт в геноме растения посредством гомологичной рекомбинации, при этом гомологичная последовательность или гомологичное плечо(и) идентичны или комплементарны, или имеют процент идентичности или процент комплементарности последовательности в целевом сайте или около него в геноме растения. В случае, если донорная матрица содержит гомологичное плечо(и) и последовательность вставки, гомологичное плечо(и) будет фланкировать или окружать последовательность вставки донорной матрицы.
[61]
например
например
например
Agrobacterium tumefaciens
Инсерционная последовательность донорной матрицы может содержать один или более генов, или последовательностей, каждая из которых кодирует транскрибированную некодирующую последовательность РНК или мРНК и/или транслированную последовательность белка. Транскрибируемая последовательность или ген донорной матрицы может кодировать белок или некодирующую молекулу РНК. Инсерционная последовательность донорной матрицы может содержать полинуклеотидную последовательность, которая не содержит функциональный ген или полную последовательность гена (, донорная матрица может просто содержать регуляторные последовательности, такие как последовательность промотора, или только часть гена или кодирующей последовательности) или может не содержать какие-либо идентифицируемые элементы экспрессии гена или любую активно транскрибируемую последовательность гена. Кроме того, донорная матрица может быть линейной или кольцевой и может быть одноцепочечной или двухцепочечной. Донорная матрица может доставляться в клетку в виде "голой" нуклеиновой кислоты (, посредством бомбардировки микрочастицами), в виде комплекса с одним или более агентами доставки (, липосомами, белками, полоксамерами, T-цепью, инкапсулированной с белками и тому подобным) или содержаться в бактериальном или вирусном носителе для доставки, таком как, например,  или геминивирус, соответственно. Инсерционная последовательность донорной матрицы, представленная в данном документе, может содержать транскрибируемую последовательность ДНК, которая может быть транскрибирована в молекулу РНК, которая может быть некодирующей и может или не может быть функционально связана с промотором и/или другой регуляторной последовательностью.
[62]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения донорная матрица может не содержать инсерционную последовательность, а вместо этого содержать одну или более гомологичных последовательностей, которая(ые) включают в себя одну или более мутаций, таких как вставка, делеция, замена и тому подобное, относительно геномной последовательности на целевом сайте в геноме растения, например, в или около гена оксидазы GA3 или оксидазы GA20 в геноме растения. В альтернативном варианте, донорная матрица может содержать инсерционную последовательность, которая не содержит кодирующую или транскрибируемую последовательность ДНК, при этом инсерционная последовательность применяется для введения одной или более мутаций в целевой сайт в геноме растения, например, в или около гена оксидазы GA3 или оксидазы GA20 в геноме растения.
[63]
Донорная матрица, представленная в данном документе, может содержать по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять генов или транскрибируемых последовательностей ДНК. В альтернативном варианте, донорная матрица может не содержать генов. Без ограничения, последовательность гена или транскрибируемая ДНК донорной матрицы может включать в себя, например, ген устойчивости к инсектициду, ген устойчивости к гербицидам, ген эффективности использования азота, ген эффективности использования воды, ген, обеспечивающий пищевую ценность, ДНК-связывающий ген, селектируемый маркерный ген, РНКи или супрессирующую конструкцию, ген фермента сайт-специфической модификации генома, одиночную направляющую РНК системы CRISPR/Cas9, кассету экспрессии на основе геминивируса или векторную систему экспрессии на основе вируса растений. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения инсерционная последовательность донорной матрицы может содержать транскрибируемую последовательность ДНК, которая кодирует некодирующую молекулу РНК, которая может нацеливаться на ген оксидазы GA, такой как ген оксидазы GA3 или оксидазы GA20, с целью супрессии. Донорная матрица может содержать промотор, такой как тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор, конститутивный промотор или индуцибельный промотор. Донорная матрица может содержать лидерную последовательность, энхансер, промотор, сайт инициации транскрипции, 5'-НТО, один или более экзонов, один или более интронов, сайт терминации транскрипции, область или последовательность, 3'-НТО, и/или сигнал полиаденилирования. Лидерная последовательность, энхансер и/или промотор могут быть функционально связаны с последовательностью гена или транскрибируемой ДНК, кодирующей некодирующую РНК, направляющую РНК, мРНК и/или белок.
[64]
В данном документе термин "сосудистый промотор" относится к промотору, экспрессирующемуся в растении, который управляет, вызывает или инициирует экспрессию транскрибируемой последовательности ДНК или трансгена, функционально связанного с таким промотором, в одной или более сосудистой ткани(нях) растения, даже если промотор также экспрессируется в другой несосудистой клетке(ках) или ткани(нях) растения. Такая сосудистая ткань(ни) может содержать одну или более клетку(ки) или ткань(ни) флоэмы, сосудистой паренхимы и/или обкладки сосудисто-волокнистых пучков растения. "сосудистый промотор" отличается от конститутивного промотора тем, что он имеет регулируемый и относительно более ограниченный профиль экспрессии, который включает в себя одну или более сосудистую ткань(ней) растения. сосудистый промотор включает в себя как сосудисто-специфические промоторы, так и сосудисто-предпочтительные промоторы.
[65]
В данном документе термин "листовой промотор" относится к промотору, экспрессирующемуся в растении, который управляет, вызывает или инициирует экспрессию транскрибируемой последовательности ДНК или трансгена, функционально связанного с таким промотором, в одной или более листовой ткани(нях) растения, даже если промотор также экспрессируется в другой не листовой клетке(ках) или ткани(нях) растения. Листовой промотор включает в себя как специфичные для листа промоторы, так и предпочтительные для листа промоторы. "Листовой промотор" отличается от сосудистого промотора тем, что он экспрессируется более преимущественно или исключительно в ткани(нях) листьев растения по сравнению с другими тканями растения, тогда как сосудистый промотор экспрессируется предпочтительно в сосудистой ткани(нях), включая сосудистую ткань(ни) вне листа, такую как сосудистая ткань(ни) стебля или стебля и листьев растения.
[66]
В данном документе термин "промотор, экспрессирующийся в растении" относится к промотору, который управляет, вызывает или инициирует экспрессию транскрибируемой последовательности ДНК или трансгена, функционально связанных с таким промотором, в одной или более растительных клетках или тканях, таких как одна или более клеток, или ткани кукурузы или злаковых растений.
Описание
[67]
Большинство злаковых, производящих зерно, таких как пшеница, рис и сорго, продуцируют как мужские, так и женские структуры в пределах каждого отдельного цветочка метелки (то есть, они имеют единую репродуктивную структуру). Тем не менее, зерновые или кукуруза уникальны среди злаковых культур, поскольку они образуют отдельные мужские (султан) и женские (початок) соцветия. Кукуруза создает полностью сексуально диморфные репродуктивные структуры путем избирательного аборта мужских органов (пыльников) в соцветиях початка и женских органов (семезачаток) в соцветиях султана на ранних стадиях развития. Точно регулируемый синтез и передача сигнала гиббереллина имеет решающее значение для регуляции процесса избирательного аборта, причем женский репродуктивный початок наиболее чувствителен к нарушениям в пути GA. Действительно, фенотип "пыльник початка" является наиболее распространенным репродуктивным фенотипом у мутантов GA кукурузы.
[68]
например
DWARF1
Plant Physiology
В отличие от кукурузы, мутации в путях синтеза или сигнального пути гиббереллина, которые привели к "зеленой революции" в отношении пшеницы, риса и сорго, оказали незначительное влияние на их репродуктивную структуру, поскольку эти виды сельскохозяйственных культур не подвергаются процессу избирательного аборта зерна, несущего метелку во время развития и, таким образом, не чувствительны к нарушениям в уровнях GA. Те же мутации не применялись на кукурузе, потому что нарушение синтеза и сигнального пути GA неоднократно приводило к драматическим искажениям и маскулинизации початка ("пыльник початка") и стерильности (нарушение развития пыльника и микроспор) в султане, вдобавок к экстремальной карликовости в некоторых случаях. См., , Chen, Y. и соавт., "The Maize  Encodes a Gibberellin 3-Oxidase and Is Dual Localized to the Nucleus and Cytosol," 166: 2028-2039 (2014 год). Эти мутантные фенотипы GA (нетипичные) в кукурузе привели к значительному сокращению продукции зерна и снижению урожайности. Дополнительно, образование пыльников в початке увеличивает вероятность грибковых инфекций или инфекций, вызванных насекомыми, что снижает качество зерна, производимого на таких мутантных початках. Передовая селекция для разработки полукарликовых линий кукурузы не увенчалась успехом, а репродуктивные отклонения (в том числе экстремальные карликовые) мутантов GA было трудно преодолеть. Таким образом, те же самые мутации в пути GA, которые привели к "зеленой революции" в других злаковых, еще не были успешными в кукурузе.
[69]
Несмотря на эти предшествующие трудности в достижении более высоких урожаев зерна в кукурузе посредством манипулирования путем GA, авторы данного изобретения обнаружили способ манипулирования уровнями GA в растениях кукурузы таким образом, чтобы уменьшить общую высоту растения и длину междоузлия стебля и увеличить устойчивость к полеганию, но не вызвать репродуктивных отклонений, ранее связанных с мутациями в пути GA кукурузы. Дополнительные данные указывают на то, что эти невысокого роста или полукарликовые растения кукурузы могут также иметь один или более дополнительных признаков, включая увеличенный диаметр стебля, уменьшенный излом стебля, более глубокие корни, увеличенную площадь листьев, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, повышение эффективности использования воды, снижение содержания антоцианов и площади листьев в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна, увеличение урожайности и/или увеличенный уборочный индекс.
[70]
например
например
Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что неполная супрессия гена(ов) оксидазы GA20 или GA3 и/или нацеливание на подмножество одного или более генов оксидазы GA может быть эффективным в достижении невысокого роста, полукарликового фенотипа с повышенной устойчивостью к полеганию, но без репродуктивных отклонений в початке. Дополнительно предлагается, не ограничиваясь теорией, что ограничение супрессии гена(ов) оксидазы GA20 и/или GA3 некоторыми тканями, активно продуцирующими GA, такими как сосудистые и/или листовые ткани растения, может быть достаточным для получения растения невысокого роста с повышенной устойчивостью к полеганию, но без значительных дефектов в репродуктивных тканях. Экспрессия элемента супрессии оксидазы GA20 или GA3 тканеспецифическим или тканепредпочтительным способом может быть достаточной и эффективной для получения растений с низкорослым фенотипом, при этом избегая потенциальных дефектов в репродуктивных тканях, которые ранее наблюдались у мутантов GA в кукурузе (, избегая или ограничивая супрессию гена(ов) оксидазы GA20 в таких репродуктивных тканях). Например, ген(ы) оксидазы GA20 и/или GA3 может быть нацелен на супрессию с применением сосудистого промотора, такого как промотор палочковидного вируса риса тунгро (RTBV - rice tungro bacilliform virus), который управляет экспрессией в сосудистых тканях растений. Как подтверждается в приведенных ниже Примерах, профиль экспрессии промотора RTBV является активным в сосудистых тканях растений кукурузы по сравнению с несосудистыми тканями, что является достаточным для получения полукарликового фенотипа у растений кукурузы, когда он функционально связан с элементом супрессии, нацеленным на ген(ы) оксидазы GA20 и GA3. Снижение уровней активной GA в ткани(ях) кукурузы или злаковых растений, которые производят активную GA, может уменьшить высоту растения и повысить устойчивость к полеганию, а отклонения могут быть предотвращены в этих растениях, если уровни активной GA также не подвергаются значительному воздействию или снижению в репродуктивных тканях, таких как развивающийся женский половой орган или початок растения. Если уровни активной GA могут быть снижены в стебле или междоузлии(ях) кукурузы или злаковых растений без существенного влияния на уровни GA в репродуктивных тканях (, женских или мужских репродуктивных органах или соцветиях), тогда кукуруза или злаковые растения, имеющие уменьшенную высоту растения и повышенную устойчивость к полеганию, могут быть созданы без дефектов в репродуктивных тканях растения.
[71]
Таким образом, в данном документе представлены конструкции рекомбинантной ДНК и трансгенные растения, содержащие элемент или последовательность супрессии оксидазы GA20 или GA3 функционально связанные с промотором, экспрессируемым в растении, который может быть тканеспецифическим или тканепредпочтительным промотором. Такой тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор может управлять экспрессией ассоциированного с ним элемента или последовательности супрессии оксидазы GA, в одной или более ткани(нях) растения, активно продуцирующих GA, для супрессии или снижения уровня активных GA, продуцируемых в этой ткани(нях). Такой тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор может управлять экспрессией, ассоциированной с ним конструкции супрессии оксидазы GA, или трансгена во время одной или более стадии (стадий) вегетативного развития. Такой тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор также может иметь небольшую экспрессию или отсутствие экспрессии в одной или более клетке(ах) или ткани(нях) развивающегося женского полового органа или початка растения с целью избегания возможности возникновения отклонений в этих репродуктивных тканях. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор представляет собой сосудистый промотор, такой как промотор RTBV. Последовательность промотора RTBV представлена в данном документе как SEQ ID NO: 65, а усеченная версия промотора RTBV дополнительно представлена в данном документе как SEQ ID NO: 66.
[72]
Активные или биоактивные гиббереллиновые кислоты (то есть "активные гиббереллины" или "активные GA") известны в данной области техники для данного вида растений, в отличие от неактивных GA. Например, активные GA в кукурузе и высших растениях включают следующее: GA1, GA3, GA4 и GA7. Таким образом, "ткань, продуцирующая активную GA" представляет собой растительную ткань, которая продуцирует одну или более активных GA.
[73]
Помимо супрессии генов оксидазы GA20 в тканях растения, продуцирующих активную GA, с помощью промотора сосудистой ткани, было неожиданно обнаружено, что супрессия одних и тех же генов оксидазы GA20 с помощью различных конститутивных промоторов также может вызывать фенотипы низкого, полукарликового роста у кукурузы, но без каких-либо видимых дефектов в початке. Учитывая, что ранее было показано, что мутации в пути GA вызывают нетипичность в репродуктивных тканях, было неожиданно, что конститутивная супрессия оксидазы GA20 не вызывала сходных репродуктивных фенотипов в початке. Таким образом, дополнительно предлагается, что супрессия одного или более генов оксидазы GA20 могла быть осуществлена с применением конститутивного промотора для создания низкорослой, устойчивой к полеганию кукурузы или злакового растения без каких-либо существенных или наблюдаемых репродуктивных отклонений в растении. Другие неожиданные наблюдения были сделаны, когда та же самая конструкция супрессии оксидазы GA20 была экспрессирована в стебле, листьях или репродуктивных тканях. Как описано дополнительно ниже, направленная супрессия тех же генов оксидазы GA20 в тканях стебля или початка растений кукурузы не приводила к фенотипу невысокого, полукарликового роста. Кроме того, нацеленная экспрессия конструкции супрессии оксидазы GA20 непосредственно в репродуктивных тканях развивающегося початка растений кукурузы с помощью промотора женской репродуктивной ткани (початка) не вызывала каких-либо значительных или наблюдаемых отклонений в початке. Тем не менее, экспрессия той же конструкции супрессии оксидазы GA20 в листовых тканях была достаточной для того, чтобы вызвать фенотип умеренного невысокого роста без существенных или наблюдаемых репродуктивных отклонений в растении.
[74]
Не ограничиваясь какой-либо теорией, предлагается, что низкорослые, полукарликовые фенотипы в кукурузе и других злаковых растениях могут быть результатом достаточного уровня экспрессии супрессирующей конструкции, нацеленной на определенный ген(ы) оксидазы GA в ткани(нях), продуцирующей активную GA растения. По меньшей мере, для направленной супрессии определенных генов оксидазы GA20 в кукурузе, ограничение профиля экспрессии во избежание репродуктивных тканей початка может быть необязательным для избежания репродуктивных отклонений в развивающемся початке. Тем не менее экспрессия конструкции супрессии оксидазы GA20 на низких уровнях и/или в ограниченном количестве растительных тканей может быть недостаточной для того, чтобы вызвать значительную низкорослость, полукарликовый фенотип. Принимая во внимание, что наблюдаемый полукарликовый фенотип с направленной супрессией оксидазы GA20 является результатом укорочения междоузлий стебля растения, является неожиданным, что супрессия генов оксидазы GA20 по меньшей мере в некоторых тканях стебля была недостаточной, чтобы вызвать укорочение междоузлий и уменьшенную высоту растения. Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что супрессия определенного гена(ов) оксидазы GA в ткани(нях) и/или клетке(ах) растения, где вырабатываются активные GA, и не обязательно в ткани(ах) стебля или междоузлия, может быть достаточной для получения полукарликовых растений, даже несмотря на то, что признак низкорослости обусловлен укорочением междоузлий стебля. Учитывая, что GA могут мигрировать через сосудистую систему растения, предполагается, что манипулирование генами оксидазы GA в растительной ткани(нях), где вырабатываются активные GA, может привести к низкорослому, полукарликовому растению, даже если это может быть в значительной степени достигнуто путем супрессии уровня активных GA, продуцируемых не в тканях стебля (то есть вдали от места действия в стебле, где пониженное удлинение междоузлия приводит к полукарликовому фенотипу). В самом деле, было обнаружено, что супрессия определенных генов оксидазы GA20 в листовых тканях вызывает умеренный полукарликовый фенотип у растений кукурузы. Учитывая, что экспрессия конструкции супрессии оксидазы GA20 с несколькими различными "стеблевыми" промоторами не давала полукарликового фенотипа у кукурузы, следует отметить, что экспрессия той же самой конструкции супрессии оксидазы GA20 с помощью сосудистого промотора была эффективной при последовательном создании полукарликового фенотипа с высокой степенью проявления гена через события и зародышевую плазму. Этот полукарликовый фенотип также наблюдался при экспрессии той же конструкции супрессии оксидазы GA20 с применением других сосудистых промоторов.
[75]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены модифицированные злаковые или кукурузные растения, которые имеют, по меньшей мере, один полезный агрономический признак и, по меньшей мере, один женский репродуктивный орган или початок, которые практически или полностью не содержат дефектов. Полезный агрономический признак может включать в себя, например, более короткую высоту растения, более короткую длину междоузлия в одном или более междоузлии(ях), больший (более толстый) диаметр стебля, повышенную устойчивость к полеганию, повышенную устойчивость к засухе, повышенную эффективность использования азота, повышенную эффективность использования воды, более глубокие корни, большую площадь листа, более раннюю сомкнутость полога и/или увеличенную урожайность. Дефекты могут включать мужскую (султан или пыльник) стерильность, уменьшенное количество семян и/или наличие одной или более маскулинизированных или мужских (или подобных мужским) репродуктивных структур в женском органе или початке (например, в пыльнике початка) растения. В данном документе представлен модифицированное злаковое или кукурузное растение, в котором отсутствуют значительные дефекты в репродуктивных тканях растения. Такое модифицированное злаковое или кукурузное растение может иметь женский репродуктивный орган или початок, которые кажутся нормальными по сравнению с контрольным растением или растением дикого типа. Действительно, предлагаются модифицированные злаковые или кукурузные растения, которые содержат, по меньшей мере, один репродуктивный орган или початок, который не имеет или не проявляет, или по существу или полностью лишен отклонений, включая мужскую стерильность, пониженное число зерен, и/или маскулинизированную структуру(ы) в одном или более женских органах или початках. В данном документе женский орган или початок растения, такого как кукуруза, является "по существу свободным" от мужских репродуктивных структур, если мужские репродуктивные структуры отсутствуют или почти отсутствуют в женском органе или початке растения на основании визуального осмотра женского органа или початка на более поздних репродуктивных стадиях. Женский орган или початок растения, такого как кукуруза, является "полностью свободным" от зрелых мужских репродуктивных структур, если мужские репродуктивные структуры отсутствуют или не наблюдаются, или не являются наблюдаемыми в женском органе или початке растения, такого как кукурузное растение, путем визуального осмотра женского органа или початка на более поздних репродуктивных стадиях. Женский орган или початок растения, такого как кукуруза, без существенных отклонений и по существу свободного от мужских репродуктивных структур в початке, может иметь количество зерен на женский орган или початок растения, которое составляет по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,5%, по меньшей мере 99,6%, по меньшей мере 99,7%, по меньшей мере 99,8% или по меньшей мере 99,9% от количества зерен на женский орган или початок дикого типа или контрольного растения. Аналогичным образом, женский орган или початок растения, такого как кукуруза, без существенных отклонений и по существу свободного от мужских репродуктивных структур в початке, может иметь среднюю массу зерен на женский орган или початок растения, которая составляет по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99,5%, по меньшей мере 99,6%, по меньшей мере 99,7%, по меньшей мере 99,8% или по меньшей мере 99,9% от средней массы зерен на женский орган или початок дикого типа или контрольного растения. Женский орган или початок растения, такого как кукуруза, который полностью свободен от зрелых мужских репродуктивных структур, может иметь количество зерен на женский орган или початок растения, которое примерно такое же, что и у дикого типа или контрольного растения. Другими словами, репродуктивное развитие женского органа или початка растения может быть нормальным или практически нормальным. Однако количество зерен на женский орган или початок может зависеть от других факторов, которые влияют на использование ресурсов и развитие растения. Действительно, количество зерен на женский орган или початок растения и/или масса зерен на женский орган или початок растения может быть примерно таким же или больше, чем у дикого типа или контрольного растения.
[76]
например
например
Гормон растений гиббереллин играет важную роль в ряде процессов развития растений, включая прорастание, элонгацию клеток, цветение, эмбриогенез и развитие семян. Определенные биосинтетические ферменты (, оксидаза GA20 и оксидаза GA3) и катаболические ферменты (, оксидаза GA2) в пути GA имеют решающее значение для воздействия на уровни активной GA в тканях растений. Таким образом, в дополнение к супрессии некоторых генов оксидазы GA20, дополнительно предлагается, что супрессия гена оксидазы GA3 конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным образом может также продуцировать растения кукурузы, имеющие низкорослый фенотип и повышенную устойчивость к полеганию, с возможной повышенной урожайностью, но без дефектов в початке. Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения предоставлены конструкции и трансгены, содержащие элемент или последовательность супрессии оксидазы GA3, функционально связанные с конститутивным или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый или листовой промотор. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор представляет собой сосудистый промотор, такой как промотор RTBV. Тем не менее, другие типы тканеспецифических или тканепредпочтительных промоторов могут потенциально применяться для супрессии оксидазы GA3 в тканях, продуцирующих активные GA кукурузы или злаковых растений для получения полукарликового фенотипа без значительных дефектов.
[77]
например
Любой известный в данной области техники способ супрессии целевого гена можно применять для супрессии гена(ов) оксидазы GA в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, включая экспрессию антисмысловых РНК, двухцепочечных РНК (дцРНК) или инвертированных повторов последовательностей РНК, или посредством косупрессии или РНК-интерференции (РНКи) посредством экспрессии малых интерферирующих РНК (миРНК), коротких шпилечных РНК (кшРНК), транс-активных миРНК (та-миРНК) или микро РНК (микроРНК). Кроме того, с целью сайленсинга гена могут применяться смысловые и/или антисмысловые молекулы РНК, которые нацелены на кодирующие и/или некодирующие геномные последовательности или области в пределах или вблизи гена оксидазы GA. Соответственно, любой из этих способов может быть применен для целевой супрессии эндогенного гена(генов) оксидазы (оксидаз) GA20 или оксидазы GA3 тканеспецифическим или тканепредпочтительным способом. См., , публикации патентных заявок США № 2009/0070898, 2011/0296555 и 2011/0035839, содержание и описание которых включено в данный документ посредством ссылки.
[78]
В данном документе термин "супрессия" относится к снижению, уменьшению или устранению уровня экспрессии мРНК и/или белка, кодируемого целевым геном в растении, клетке растения или ткани растения на одной или более стадии(ях) развития растений, по сравнению с уровнем экспрессии такой целевой мРНК и/или белка в контрольном растении, клетке или ткани, или растении, клетке или ткани дикого типа на той же стадии(ях) развития растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения представлено модифицированное или трансгенное растение, имеющее уровень экспрессии гена оксидазы GA20, который снижается по меньшей мере в одной ткани растения по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25% по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с контрольным растением. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения представлено модифицированное или трансгенное растение, имеющее уровень экспрессии гена оксидазы GA3, который снижается по меньшей мере в одной ткани растения по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25% по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с контрольным растением. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения представлено модифицированное или трансгенное растение, имеющее уровень экспрессии гена оксидазы GA20, который снижается по меньшей мере в одной ткани растения на 5% - 20%, 5% - 25%, 5% - 30%, 5% - 40%, 5% - 50%, 5% - 60%, 5% - 70%, 5% - 75%, 5% - 80%, 5% - 90%, 5% - 100%, 75% - 100%, 50% - 100%, 50% - 90%, 50% - 75%, 25% - 75%, 30% - 80% или 10% - 75% по сравнению с контрольным растением. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения представлено модифицированное или трансгенное растение, имеющее уровень экспрессии гена оксидазы GA3, который снижается по меньшей мере в одной ткани растения на 5% - 20%, 5% - 25%, 5% - 30%, 5% - 40%, 5% - 50%, 5% - 60%, 5% - 70%, 5% - 75%, 5% - 80%, 5% - 90%, 5% - 100%, 75% - 100%, 50% - 100%, 50% - 90%, 50% - 75%, 25% - 75%, 30% - 80% или 10% - 75% по сравнению с контрольным растением. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения по меньшей мере одна ткань модифицированного или трансгенного растения, имеющего пониженный уровень экспрессии гена(ов) оксидазы GA20 и/или оксидазы GA3, включает одну или более растительную ткань(и), продуцирующую активную GA, такую как сосудистую и/или листовую ткань(и) растения, в течение одной или более вегетативной стадии(стадий) развития.
[79]
например
например,
В некоторых вариантах реализации изобретения супрессия эндогенного гена оксидазы GA20 или гена оксидазы GA3 является тканеспецифической (, только в листовой и/или сосудистой ткани). Супрессия гена оксидазы GA20 может быть конститутивной и/или специфичной или предпочтительной для сосудистой или листовой ткани. В других вариантах реализации изобретения супрессия гена оксидазы GA20 или гена оксидазы GA3 является конститутивной, а не тканеспецифической. В соответствии с некоторым вариантам реализации изобретения экспрессия эндогенного гена оксидазы GA20 и/или гена оксидазы GA3 снижается в одном или более типах тканей (в листовой и/или сосудистой ткани(нях)) модифицированного или трансгенного растения по сравнению с такой же тканью(тканями) контрольного растения.
[80]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения представлена молекула, конструкция или вектор рекомбинантной ДНК, включающие элемент супрессии, нацеленный на ген(ы) оксидазы GA20 или оксидазы GA3, который функционально связан с экспрессируемым в растении конститутивным или тканеспецифическим, или тканепредпочтительным промотором. Элемент супрессии может содержать транскрибируемую последовательность ДНК длиной по меньшей мере 19 нуклеотидов, например, длиной от около 19 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов или 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов длиной, при этом транскрибируемая последовательность ДНК соответствует, по меньшей мере, части целевого гена оксидазы GA, подлежащего супрессии, и/или комплементарной ей последовательности ДНК. Элемент супрессии может составлять 19-30, 19-50, 19-100, 19-200, 19-300, 19-500, 19-1000, 19-1500, 19-2000, 19-3000, 19-4000 или 19-5000 нуклеотидов в длину. Подавляющий элемент может иметь длину, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22 или по меньшей мере 23 нуклеотида или более (например, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 50, по меньшей мере 100, по меньшей мере 200, по меньшей мере 300, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 1500, по меньшей мере 2000, по меньшей мере 3000, по меньшей мере 4000 или по меньшей мере 5000 нуклеотидов в длину). В зависимости от длины и последовательности элемента супрессии может допускаться одно или более несовпадений последовательностей или некомплементарных оснований без потери супрессии, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более несовпадений, если некодирующая молекула РНК, кодируемая элементом супрессии, все еще способна в достаточной степени гибридизоваться и связываться с целевой молекулой мРНК гена(ов) оксидазы GA20 или оксидазы GA3. Действительно, даже более короткие элементы супрессии РНКи в диапазоне от около 19 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов в длину могут иметь одно или более несовпадений или некомплементарных оснований, но все же быть эффективными в супрессии целевого гена оксидазы GA. Соответственно, смысловая или антисмысловая последовательность элемента супрессии может быть, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной соответствующей последовательности по меньшей мере сегмента или части целевого гена оксидазы GA или его комплементарной последовательности, соответственно.
[81]
Элемент супрессии или транскрибируемая последовательность ДНК по данному изобретению для целевой супрессии гена(ов) оксидазы GA могут включать одно или более из следующего: (а) последовательность ДНК, которая включает в себя, по меньшей мере, одну антисмысловую последовательность ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной, по меньшей мере, одному сегменту или части целевого гена оксидазы GA; (b) последовательность ДНК, которая включает в себя множество копий по меньшей мере одной антисмысловой последовательности ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или части целевого гена оксидазы GA; (c) последовательность ДНК, которая включает в себя, по меньшей мере, одну смысловую последовательность ДНК, которая включает в себя, по меньшей мере, один сегмент или часть целевого гена оксидазы GA; (d) последовательность ДНК, которая включает в себя множество копий по меньшей мере одной смысловой последовательности ДНК, каждая из которых содержит по меньшей мере один сегмент или часть целевого гена оксидазы GA; (e) последовательность ДНК, которая включает в себя инвертированный повтор сегмента или части целевого гена оксидазы GA и/или транскрибируется в РНК для супрессии целевого гена оксидазы GA путем образования двухцепочечной РНК, при этом транскрибированная РНК включает в себя по меньшей мере одну антисмысловую последовательность ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере к одному сегменту или части целевого гена оксидазы GA и по меньшей мере к одной смысловой последовательности ДНК, которая содержит по меньшей мере один сегмент или часть целевого гена оксидазы GA; (f) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК с целью супрессии целевого гена оксидазы GA путем образования одной двухцепочечной РНК и включает в себя множество последовательных последовательностей антисмысловой ДНК, каждая из которых является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере к одному сегменту или части целевого гена оксидазы GA, и множество последовательных смысловых последовательностей ДНК, каждая из которых содержит по меньшей мере один сегмент или часть целевого гена оксидазы GA; (g) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК с целью супрессии целевого гена оксидазы GA путем образования множества двойных цепей РНК и включает в себя множество последовательностей антисмысловой ДНК, каждая из которых является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или части целевого гена GA, и множество последовательностей смысловой ДНК, каждая из которых содержит, по меньшей мере, один сегмент или часть целевого гена оксидазы GA, при этом множество антисмысловых сегментов ДНК и множество смысловых сегментов ДНК расположены в виде серии инвертированных повторов; (h) последовательность ДНК, которая включает в себя нуклеотиды, полученные из микроРНК, предпочтительно растительной микроРНК; (i) последовательность ДНК, которая включает в себя предшественник микроРНК, который кодирует искусственную микроРНК, комплементарную по меньшей мере одному сегменту или части целевого гена оксидазы GA; (j) последовательность ДНК, которая включает в себя нуклеотиды миРНК; (k) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК-аптамер, способный связываться с лигандом; а также (l) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК-аптамер, способный связываться с лигандом, и ДНК, которая транскрибируется в регуляторную РНК, способную регулировать экспрессию целевого гена оксидазы GA, при этом регуляция целевого гена оксидазы GA зависит от конформации регуляторной РНК, а на конформацию регуляторной РНК аллостерически влияет состояние связывания РНК-аптамера лигандом. Любой из этих элементов супрессии гена, транскрибируемый в одноцепочечную или двухцепочечную РНК, может быть предназначен для супрессии более чем одного целевого гена оксидазы GA, в зависимости от количества и последовательности элемента(ов) супрессии.
[82]
Множественные смысловые и/или антисмысловые элементы супрессии для более чем одной цели оксидазы GA могут быть расположены последовательно в тандеме или расположены в виде тандемных сегментов или повторов, таких как тандемно-инвертированные повторы, которые также могут прерываться одной или более спейсерной последовательностью(ами), а последовательность каждого элемента супрессии может быть нацелена на один или более генов оксидазы GA. Кроме того, смысловая или антисмысловая последовательность элемента супрессии может не полностью совпадать или быть не полностью комплементарной целевой последовательности гена оксидазы GA, в зависимости от последовательности и длины элемента супрессии. Даже более короткие элементы супрессии РНКи от около 19 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов в длину могут иметь одно или более несовпадений или некомплементарных оснований, но все же быть эффективными в супрессии целевого гена оксидазы GA. Соответственно, смысловая или антисмысловая последовательность элемента супрессии может быть, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной соответствующей последовательности по меньшей мере сегмента или части целевого гена оксидазы GA или его комплементарной последовательности, соответственно.
[83]
Для супрессии антисмысловой последовательностью, транскрибируемая последовательность ДНК или элемент супрессии содержит последовательность, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере части или сегменту целевого гена оксидазы GA. Элемент супрессии может содержать множество антисмысловых последовательностей, которые являются комплементарными одной или более частям или сегментам целевого гена(ов) оксидазы GA, или множество копий антисмысловой последовательности, которая комплементарна целевому гену оксидазы GA. Антисмысловая последовательность элемента супрессии может быть, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной последовательности ДНК, которая является комплементарной к, по меньшей мере, сегменту или части целевого гена оксидазы GA. Другими словами, последовательность антисмыслового элемента супрессии может быть, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной целевому гену оксидазы GA.
[84]
Для супрессии гена(ов) оксидазы GA с применением инвертированного повтора или транскрибированной дцРНК, транскрибируемая последовательность ДНК или элемент супрессии могут содержать смысловую последовательность, которая содержит сегмент или часть целевого гена оксидазы GA, и антисмысловую последовательность, которая является комплементарной сегменту или части целевого гена оксидазы GA, при этом смысловые и антисмысловые последовательности ДНК расположены в тандеме. Смысловые и/или антисмысловые последовательности, соответственно, могут быть менее чем на 100% идентичными или комплементарными сегменту, или части целевого гена оксидазы GA, как описано выше. Смысловые и антисмысловые последовательности могут быть разделены спейсерной последовательностью, так что молекула РНК, транскрибируемая с элемента супрессии, образует структуру "стебля", петли или "петли-на-стебле" между смысловой и антисмысловой последовательностями. Вместо этого элемент супрессии может содержать множество смысловых и антисмысловых последовательностей, которые расположены в тандеме, который также может быть разделен одной или более спейсерными последовательностями. Такие элементы супрессии, содержащие множество смысловых и антисмысловых последовательностей, могут быть расположены в виде последовательности смысловых последовательностей, за которыми следует последовательность антисмысловых последовательностей, или в виде последовательности тандемно расположенных смысловых и антисмысловых последовательностей. В альтернативном варианте, одна или более смысловых последовательностей ДНК могут быть экспрессированы отдельно из одной или более антисмысловых последовательностей (то есть, одна или более смысловых последовательностей ДНК могут быть экспрессированы из первой последовательности транскрибируемой ДНК, и одна или более антисмысловых последовательностей ДНК могут быть экспрессированы из второй последовательности транскрибируемой ДНК, при этом первая и вторая последовательности транскрибируемой ДНК экспрессируются в виде отдельных транскриптов).
[85]
Для супрессии гена(ов) оксидазы GA с применением микроРНК транскрибируемая последовательность ДНК или элемент супрессии могут содержать последовательность ДНК, полученную из последовательности микроРНК, естественной для вируса или эукариота, такого как животное или растение, или модифицированной или полученной от такой естественной последовательности микроРНК. Такие естественные или полученные естественным образом последовательности микроРНК могут образовывать структуру "самогибридизации" и служить каркасом для предшественника микроРНК (пре-микроРНК), и могут соответствовать стеблевой области нативной последовательности предшественника микроРНК, такой как естественная (или полученная естественным образом) первичная-микроРНК (перв-микроРНК) или последовательность пре-микроРНК. Однако, в дополнение к этим естественным или полученным естественным образом каркасам или предпроцессированными последовательностям микроРНК, сконструированные или синтетические микроРНК по данному варианту реализации изобретения дополнительно содержат последовательность, соответствующую сегменту или части целевого гена(ов) оксидазы GA. Таким образом, в дополнение к предпроцессированным или каркасным последовательностям микроРНК, элемент супрессии может дополнительно содержать смысловую и/или антисмысловую последовательность, которая соответствует сегменту или части целевого гена оксидазы GA, и/или последовательность, которая является комплементарной ей, не смотря на то, что может допускаться одно или более несовпадений последовательности.
[86]
Genes Dev
Cell
Science STKE
Genes Dev
Сконструированные микроРНК полезны для супрессии целевого гена с повышенной специфичностью. См., например, Parizotto и соавт., . 18:2237-2242 (2004 год), и публикации патентных заявок США № 2004/0053411, 2004/0268441, 2005/0144669 и 2005/0037988, содержание и описание которых включены в данный документ посредством ссылки. микроРНК представляют собой РНК, не кодирующие белок. Когда молекула предшественника микроРНК расщепляется, образуется зрелая микроРНК, длина которой обычно составляет от около 19 до около 25 нуклеотидов (обычно у растений длина составляет от около 20 до около 24 нуклеотидов), например, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов в длину и имеет последовательность, соответствующую гену, нацеленному на супрессию, и/или его комплементу. Зрелая микроРНК гибридизуется с целевыми транскриптами мРНК и направляет связывание комплекса белков с целевыми транскриптами, которые могут функционировать для ингибирования трансляции и/или приводить к деградации транскрипта, таким образом, негативно регулируя или супрессируя экспрессию целевого гена. Предшественники микроРНК также полезны в растениях для направления поэтапного продуцирования миРНК, транс-активных миРНК (та-миРНК), в процессе, который требует РНК-зависимой РНК-полимеразы с целью супрессии целевого гена. См., например, Allen и соавт.,  121:207-221 (2005 год), Vaucheret , 2005:pe43 (2005 год) и Yoshikawa и соавт., ., 19:2164-2175 (2005 год), содержание и описание которых включены в данный документ посредством ссылки.
[87]
микроРНК растений регулируют свои целевые гены путем распознавания и связывания с комплементарной или почти идеально комплементарной последовательностью (сайтом узнавания микроРНК) в целевом транскрипте мРНК с последующим расщеплением транскрипта ферментами РНКазы III, такими как ARGONAUTE1. У растений определенные ошибочные спаривания между данным сайтом распознавания микроРНК и соответствующей зрелой микроРНК, как правило, не допускаются, особенно ошибочные спаривания нуклеотидов в положениях 10 и 11 зрелой микроРНК. Положения в зрелой микроРНК приведены в направлении от 5' до 3'. Совершенная комплементарность между данным сайтом распознавания микроРНК и соответствующей зрелой микроРНК обычно требуется в положениях 10 и 11 зрелой микроРНК. См., например, Franco-Zorrilla и соавт., (2007 год) Nature Genetics, 39:1033-1037; и Axtell и соавт., (2006 год) Cell, 127:565-577.
[88]
Многие гены микроРНК (гены MIR) были идентифицированы и обнародованы в базе данных ("miRBase", доступной в сети по адресу microrna.sanger.ac.uk/sequence; также см., Griffiths-Jones и соавт., (2003 год) Nucleic Acids Res., 31:439-441). Сообщалось, что гены MIR встречаются в межгенных областях, как отдельно, так и в кластерах в геноме, но также могут полностью или частично располагаться в интронах других генов (как кодирующих белок, так и не кодирующих белок). Для обзора биогенеза микроРНК, см., Kim (2005 год) Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 6:376-385. Транскрипция генов MIR может, по меньшей мере, в некоторых случаях, находиться под промоторным контролем собственного промотора гена MIR. Первичный транскрипт, называемый "перв-микроРНК", может быть довольно большим (несколько тысяч пар оснований) и может быть полицистронным, содержать одну или более пре-микроРНК (структуры "самогибридизации", содержащие расположение "петли-на-стебле", которое процессируется до зрелой микроРНК), а также обычный 5' "кэп" и полиаденилированный хвост мРНК. См., например, Фиг. 1 в Kim (2005 год) Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 6:376-385.
[89]
Трансгенная экспрессия микроРНК (будь то встречающаяся в природе последовательность или искусственная последовательность) может быть применена для регуляции экспрессии целевого гена или генов микроРНК. Сайты распознавания микроРНК были подтверждены во всех областях мРНК, включая 5'-нетранслируемую область, кодирующую область, интронную область и 3'-нетранслируемую область, что указывает на то, что положение цели микроРНК или участок распознавания относительно кодирующей последовательности могут не обязательно влиять на супрессию (см., например, Jones-Rhoades and Bartel (2004 год)). Mol. Cell, 14:787-799, Rhoades и соавт., (2002 год) Cell, 110:513-520, Allen и соавт., (2004 год) Nat. Genet., 36:1282-1290, Sunkar and Zhu (2004 год) Plant Cell, 16:2001-2019). микроРНК являются важными регуляторными элементами у эукариот, и трансгенная супрессия с помощью микроРНК является полезным инструментом для манипулирования биологическими путями и ответами. Описание нативных микроРНК, их предшественников, участков распознавания и промоторов приведено в публикации заявки на патент США № 2006/0200878, содержание и описание которой включено в данный документ посредством ссылки.
[90]
например,
Создание искусственной последовательности микроРНК может быть достигнуто путем замены нуклеотидов в стеблевой области предшественника микроРНК последовательностью, комплементарной предполагаемой цели, как продемонстрировано, например, Zeng и соавт., (2002 год) Mol. Cell, 9:1327-1333. Согласно многим вариантам реализации изобретения, целью может быть последовательность гена оксидазы GA20 или гена оксидазы GA3. Один неограничивающий пример общего способа определения нуклеотидных изменений в нативной последовательности микроРНК для получения сконструированного предшественника микроРНК для представляющей интерес цели включает следующие этапы: (а) Выбор уникальной целевой последовательности из по меньшей мере 18 нуклеотидов, специфичных к целевому гену, например, с применением инструментов выравнивания последовательности, таких как BLAST (см., например, Altschul и соавт., (1990 год) J. Mol. Biol., 215:403-410; Altschul и соавт., (1997 год) Nucleic Acids Res., 25:3389-3402); последовательности кДНК и/или геномной ДНК могут применяться для идентификации ортологов целевого транскрипта и любых потенциальных совпадений со сторонними генами, что позволяет избежать непреднамеренного сайленсинга или супрессии нецелевых последовательностей; (b) Анализ целевого гена на наличие нежелательных последовательностей ( совпадений с последовательностями из нецелевых видов) и оценка каждой потенциальной целевой последовательности на содержание GC, оценку Рейнольдса (см. Reynolds и соавт., (2004 год) Nature Biotechnol., 22:326-330), и функциональную асимметрию, характеризующуюся отрицательной разницей в свободной энергии ("ΔΔG") (см., Khvorova и соавт., (2003 год) Cell, 115:209-216). Предпочтительно, могут быть выбраны целевые последовательности (например, 19-меры), которые имеют все или большинство из следующих характеристик: (1) оценка Рейнольдса > 4, (2) содержание GC от около 40% до около 60%, (3 ) отрицательную ΔΔG, (4) концевой аденозин, (5) отсутствие идущих подряд 4 или более одних и тех же нуклеотидов; (6) местоположение около 3'-конца целевого гена; (7) минимальные отличия от транскрипта предшественника микроРНК. В одном аспекте некодирующая молекула РНК, применяемая здесь для супрессии целевого гена (например, гена оксидазы GA20 или GA3), предназначена для того, чтобы иметь целевую последовательность, демонстрирующую одну или более, две или более, три или более, четыре или более, или пять или более из вышеуказанных характеристик. Положения на каждом третьем нуклеотиде элемента супрессии могут влиять на эффективность РНКи; например, алгоритм "siExplorer" общедоступен по адресу rna.chem.tu-tokyo.ac.jp/siexplorer.htm (см., Katoh and Suzuki (2007 год) Nucleic Acids Res., 10.1093/nar/gkl1120); (c) Определение обратного комплемента выбранной целевой последовательности (например, 19-мер) для применения при получении модифицированной зрелой миРНК. Относительно последовательности 19-мера, дополнительный нуклеотид в положении 20 может совпадать с выбранной целью или последовательностью распознавания, а нуклеотид в положении 21 может быть либо неспаренным, чтобы предотвратить распространение сайленсинга на целевом транскрипте, либо спаренным с целевой последовательностью, чтобы способствовать распространению сайленсинга на целевом транскрипте; и (d) Трансформация искусственной микроРНК в растение.
[91]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена молекула, конструкция или вектор рекомбинантной ДНК, включающие транскрибируемую последовательность ДНК или элемент супрессии, кодирующий молекулу микроРНК или предшественника микроРНК, для целевой супрессии гена(ов) оксидазы GA. Такая транскрибируемая последовательность ДНК и элемент супрессии могут содержать последовательность длиной по меньшей мере 19 нуклеотидов, которая соответствует одному или более гену(ам) оксидазы GA, и/или последовательность, комплементарную одному или более гену(ам) оксидазы GA, хотя могут допускаться один или более несоответствий последовательности или неспаренных нуклеотидов.
[92]
Ген(ы) оксидазы GA также может быть супрессирован с применением одной или более малых интерферирующих РНК (миРНК). Путь миРНК включает в себя непоследовательное расщепление более длинного двухцепочечного интермедиата РНК ("РНК-дуплекса") на малые интерферирующие РНК (миРНК). Размер или длина миРНК варьируется от около 19 до около 25 нуклеотидов или пар оснований, но общие классы миРНК включают те, которые содержат 21 или 24 пары оснований. Таким образом, транскрибируемая последовательность ДНК или элемент супрессии могут кодировать молекулу РНК длиной, по меньшей мере, от около 19 до около 25 нуклеотидов (или более), например, по меньшей мере, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов в длину. Таким образом, для супрессии миРНК обеспечивается рекомбинантная молекула, конструкция или вектор ДНК, включающие транскрибируемую последовательность ДНК и элемент супрессии, кодирующий молекулу миРНК для целевой супрессии гена(ов) оксидазы GA. Такая транскрибируемая последовательность ДНК и элемент супрессии могут иметь длину по меньшей мере 19 нуклеотидов и иметь последовательность, соответствующую одному или более гену(ам) оксидазы GA, и/или последовательность, комплементарную одному или более гену(ам) оксидазы GA.
[93]
Ген(ы) оксидазы GA также может быть супрессирован с применением одной или более транс-активных малых интерферирующих РНК (та-миРНК). В пути та-миРНК, микроРНК служат для направления поэтапного процессинга первичных транскриптов миРНК в процессе, который требует РНК-зависимой РНК-полимеразы для получения двухцепочечного предшественника РНК. та-миРНК определяются отсутствием вторичной структуры, целевого сайта микроРНК, который инициирует продукцию двухцепочечной РНК, потребностью в DCL4 и РНК-зависимой РНК-полимеразе (RDR6), а также продуцированием множества идеально последовательных малых РНК, длиной ~21 нуклеотид, с идеально подобранными дуплексами с 2-нуклеотидными 3'-"липкими" концами (см., Allen и соавт., (2005 год) Cell, 121:207-221). Размер или длина та-миРНК варьируется от около 20 до около 22 нуклеотидов или пар оснований, но обычно это 21 пара оснований. Таким образом, транскрибируемая последовательность ДНК или элемент супрессии по данному изобретению могут кодировать молекулу РНК длиной, по меньшей мере, от около 20 до около 22 нуклеотидов, например, длиной 20, 21 или 22 нуклеотида. Таким образом, для супрессии та-миРНК обеспечивается рекомбинантная молекула, конструкция или вектор ДНК, включающие транскрибируемую последовательность ДНК или элемент супрессии, кодирующий молекулу та-миРНК для целевой супрессии гена(ов) оксидазы GA. Такая транскрибируемая последовательность ДНК и элемент супрессии могут иметь длину по меньшей мере 20 нуклеотидов и иметь последовательность, соответствующую одному или более гену(ам) оксидазы GA, и/или последовательность, комплементарную одному или более гену(ам) оксидазы GA. Относительно способов конструирования подходящих каркасов та-миРНК, см., например, патент США № 9,309,512, который включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.
[94]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предлагается рекомбинантная молекула, вектор или конструкция ДНК, включающие транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая связывается или гибридизуется с целевой мРНК в клетке растения, при этом молекула целевой мРНК кодирует ген оксидазы GA20 или GA3, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором. В дополнение к нацеливанию на зрелую последовательность мРНК, некодирующая молекула РНК может вместо этого нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA или транскрипта мРНК, или на последовательность мРНК оксидазы GA, перекрывающую кодирующие и некодирующие последовательности. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения предлагается рекомбинантная молекула, вектор или конструкция ДНК, включающие транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК (предшественник), которая расщепляется или процессируется в зрелую некодирующую молекулу РНК, которая связывается или гибридизуется с целевой мРНК в клетке растения, при этом молекула целевой мРНК кодирует белок оксидазы GA20 или GA3, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором. Для целей данного изобретения "некодирующая молекула РНК" представляет собой молекулу РНК, которая не кодирует белок. Неограничивающие примеры некодирующей молекулы РНК включают микро РНК (микроРНК), предшественника микроРНК, малую интерферирующую РНК (миРНК), предшественника миРНК, малую РНК (длиной 18-26 нуклеотидов) и предшественника, кодирующих то же самое, гетерохроматическую миРНК (гх-миРНК), взаимодействующую с Piwi РНК (piРНК), двухцепочечную РНК, образующую шпильки (дцРНК, образующая шпильки), транс-активную миРНК (та-миРНК), встречающуюся в природе антисмысловую миРНК (nat-миРНК - naturally occurring antisense siRNA) CRISPR РНК (crРНК), tracer (транс-активирующую CRISPR) РНК (tracrРНК), направляющую РНК (нРНК) и одиночную направляющую РНК (онРНК - single-guide RNA).
[95]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения подходящие тканеспецифичные или тканепредпочтительные промоторы для экспрессии элемента супрессии оксидазы GA20 или GA3 могут включать в себя те промоторы, которые управляют или вызывают экспрессию связанного с ним элемента или последовательности супрессии, по меньшей мере, в сосудистой и/или листовой ткани кукурузы или злаковых растений, или, возможно, в другой ткани в случае оксидазы GA3. Экспрессия элемента или конструкции супрессии оксидазы GA, с помощью тканеспецифического или тканепредпочтительного промотора также может происходить в других тканях злаковых или кукурузных растений за пределами сосудистых и листовых тканей, но уровни активной GA в развивающихся репродуктивных тканях растения (особенно в женском репродуктивном органе или початке) предпочтительно не подвергаются значительному уменьшению или воздействию (по сравнению с диким типом или контрольными растениями), так что развитие женского органа или початка может происходить нормально в трансгенном растении без каких-либо отклонений в початке и потери потенциальной урожайности.
[96]
Любые сосудистые промоторы, известные в данной области техники, могут потенциально применяться в качестве тканеспецифического или тканепредпочтительного промотора. Примеры сосудистых промоторов включают в себя промотор RTBV (см., например, SEQ ID NO: 65), известный промотор гена сахарозосинтазы, такой как промотор кукурузной сахарозосинтазы-1 (Sus1 или Sh1) (см., например, SEQ ID NO: 67), промотор паралога гена кукурузы Sh1, промотор сахарозосинтазы (Ss1) ячменя, промотор рисовой сахарозосинтазы-1 (RSs1) (см., например, SEQ ID NO: 68) или промотор рисовой сахарозосинтазы-2 (RSs2) (см., например, SEQ ID NO: 69), известный промотор гена транспортера сахарозы, такой как промотор транспортера рисовой сахарозы (SUT1) (см., например, SEQ ID NO: 70), или различные известные вирусные промоторы, такие как промотор пятнистого вируса желтой коммелины (CoYMV - Commelina yellow mottle virus), промотор большого межгенного региона (LIR - large intergenic region) геминивируса карликовой пшеницы (WDV - wheat dwarf geminivirus), промотор белка оболочки (СР - coat protein) гемивируса полосы кукурузы (MSV - maize streak geminivirus) или рисовый промотор, подобныйжелтой полосе 1 (YS1 - yellow stripe 1) или OsYSL2 (SEQ ID NO: 71), и любой участок функциональной последовательности или усечение любого из вышеуказанных промоторов со сходным профилем экспрессии, такой как усеченный промотор RTBV (см., например, SEQ ID NO: 66).
[97]
Любые листовые промоторы, известные в данной области техники, могут потенциально применяться в качестве тканеспецифического или тканепредпочтительного промотора. Примеры листовых промоторов включают в себя промотор пираватфосфатдикиназы кукурузы или промотор PPDK (pyruvate phosphate dikinase) (см., например, SEQ ID NO: 72), промотор фруктозо-1,6-бисфосфат альдолазы кукурузы или FDA (см., например, SEQ ID NO: 73) и рисовый промотор Nadh-Gogat (см., например, SEQ ID NO: 74) и любую часть функциональной последовательности или усечение любого из вышеуказанных промоторов со сходным профилем экспрессии. Другие примеры листовых промоторов генов однодольных растений включают в себя промотор рибулозофосфаткарбоксилазы (Рубиско) или малой субъединицы Рубиско (RBCS - RuBisCO small subunit), промотор гена, связывающего хлорофилл а/b белка, промотор фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕП-карбоксилазы) и промотор гена Myb, и любую часть функциональной последовательности или усечение любого из этих промоторов со сходным профилем экспрессии.
[98]
Любые другие сосудистые и/или листовые промоторы, известные в данной области техники, также могут быть применены, включая промоторные последовательности из родственных генов (например, последовательности промоторов сахарозосинтазы, транспортера сахарозы и вирусных генов) одного и того же или разных видов растений или вирусов, которые имеют сходный профиль экспрессии. Кроме того, представлены промоторные последовательности с высокой степенью гомологии к любому из вышеперечисленного. Например, сосудистый промотор может содержать последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере, на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 65, 66, 67, 68, 69, 70 и 71, любой части функциональной последовательности или ее усечению, и/или любую последовательность, комплементарную любой из вышеуказанных последовательностей; листовой промотор может содержать, например, последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере, на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 72, 73 и 74, любой части функциональной последовательности или ее усечению, и/или любой последовательности, комплементарной любой из вышеуказанных последовательностей; и конститутивный промотор может содержать последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере, на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82 и 83, любая часть функциональной последовательности или усечение, и/или любой последовательности, комплементарной любой из вышеуказанных последовательностей. Примеры сосудистых и/или листовых промоторов могут дополнительно включать другие известные, сконструированные и/или идентифицированные впоследствии промоторные последовательности, которые, как показано, имеют профиль экспрессии в сосудистой и/или листовой ткани(нях) злакового или кукурузного растения. Кроме того, любой известный или идентифицированный впоследствии конститутивный промотор также может быть применен для экспрессии элемента супрессии оксидазы GA20 или GA3. Общие примеры конститутивных промоторов приведены ниже.
[99]
Как понятно в данной области техники, термин "промотор" может, как правило, относиться к последовательности ДНК, которая содержит сайт связывания РНК-полимеразы, сайт инициации транскрипции и/или ТАТА-бокс и способствует или стимулирует транскрипцию и экспрессию ассоциированной транскрибируемой полинуклеотидной последовательности и/или гена (или трансгена). Промотор может быть синтетическим или искусственным и/или сконструированным, измененным или полученным из известной или встречающейся в природе последовательности промотора. Промотор может представлять собой химерный промотор, содержащий комбинацию двух или более гетерологичных последовательностей. Таким образом, промотор по данному изобретению может включать варианты последовательностей промотора, которые сходны по составу, но не идентичны другим промоторным последовательностям, известным или представленным в данном документе. Промотор может быть классифицирован в соответствии со множеством критериев, касающихся характера профиля экспрессии, ассоциированной кодирующей или транскрибируемой последовательности, или гена (включая трансген), функционально связанных с промотором, таким как конститутивный, специфический к стадии развития, тканеспецифический, индуцибельный и тому подобное. Промоторы, которые управляют экспрессией во всех или почти во всех тканях растения, называют "конститутивными" промоторами. Однако уровень экспрессии с "конститутивным промотором" не обязательно является одинаковым для разных типов тканей и клеток. Промоторы, которые управляют экспрессией в определенные периоды или стадии развития, называются "промоторами, специфическими к стадии развития". Промоторы, которые управляют усиленной экспрессией в определенных тканях растения по сравнению с другими растительными тканями, называют промоторами, "усиленными в определенной ткани" или "тканепредпочтительными промоторами". Таким образом, "тканепредпочтительный" промотор вызывает относительно более высокую или преимущественную, или преобладающую экспрессию в конкретной ткани(нях) растения, но с более низкими уровнями экспрессии в другой ткани(нях) растения. Промоторы, которые экспрессируют в определенной ткани(нях) растения, практически не экспрессируясь в других тканях растения, называют "тканеспецифическими" промоторами. Тканеспецифический или тканепредпочтительный промотор также может быть определен относительно специфической или предпочтительной ткани(ей), в которой он управляет экспрессией ассоциированной транскрибируемой последовательности ДНК или элемента супрессии. Например, промотор, который вызывает специфическую экспрессию в сосудистых тканях, может упоминаться как "сосудисто-специфический промотор", тогда как промотор, который вызывает преимущественную или преобладающую экспрессию в сосудистых тканях, может упоминаться как "сосудисто-предпочтительный промотор". Аналогично, промотор, который вызывает специфическую экспрессию в тканях листьев, может упоминаться как "промотор, специфический к листовой ткани", тогда как промотор, который вызывает преимущественную или преобладающую экспрессию в тканях листьев, может упоминаться как "промотор, предпочтительный к листовой ткани". "Индуцибельный" промотор представляет собой промотор, который инициирует транскрипцию в ответ на стимул окружающей среды, такой как холод, засуха или свет, или другие стимулы, такие как ранение или химическое воздействие. Промотор также может быть классифицирован по своему происхождению, например, гетерологичный, гомологичный, химерный, синтетический и тому подобное. "Гетерологичный" промотор представляет собой промоторную последовательность, имеющую иное происхождение по сравнению с ассоциированной с ним транскрибируемой последовательностью, кодирующей последовательность или ген (или трансген), и/или не встречающуюся в природе у видов растений, подлежащих трансформации, как определено выше.
[100]
Некоторые из оксидаз GA в злаковых растениях состоят из семейства родственных генов оксидазы GA. Например, кукуруза имеет семейство из по меньшей мере девяти генов оксидазы GA20, которые включают оксидазу_1 GA20, оксидазу_2 GA20, оксидазу_3 GA20, оксидазу_4 GA20, оксидазу_5 GA20, оксидазу_6 GA20, оксидазу_7 GA20, оксидазу_8 GA20 и оксидазу_9 GA20. Однако в кукурузе есть только две оксидазы GA3: оксидаза_1 GA3 и оксидаза_2 GA3. Последовательности SEQ ID NO ДНК и белка для каждого из этих генов оксидазы GA20 представлены в Таблице 1, а последовательности SEQ ID NO ДНК и белка для каждого из этих генов оксидазы GA3 представлены в Таблице 2.
Таблица 1. Последовательности ДНК и белка по идентификатору последовательности для генов оксидазы GA20 в кукурузе.
<b>Ген оксидазы GA20</b>
<b>кДНК</b>
<b>Кодирующая последовательность (КДП)</b>
<b>Белок</b>
Оксидаза_1 GA20
SEQ ID NO: 1
SEQ ID NO: 2
SEQ ID NO: 3
Оксидаза_2 GA20
SEQ ID NO: 4
SEQ ID NO: 5
SEQ ID NO: 6
Оксидаза_3 GA20
SEQ ID NO: 7
SEQ ID NO: 8
SEQ ID NO: 9
Оксидаза_4 GA20
SEQ ID NO: 10
SEQ ID NO: 11
SEQ ID NO: 12
Оксидаза_5 GA20
SEQ ID NO: 13
SEQ ID NO: 14
SEQ ID NO: 15
Оксидаза_6 GA20
SEQ ID NO: 16
SEQ ID NO: 17
SEQ ID NO: 18
Оксидаза_7 GA20
SEQ ID NO: 19
SEQ ID NO: 20
SEQ ID NO: 21
Оксидаза_8 GA20
SEQ ID NO: 22
SEQ ID NO: 23
SEQ ID NO: 24
Оксидаза_9 GA20
SEQ ID NO: 25
SEQ ID NO: 26
SEQ ID NO: 27
Таблица 2. Последовательности ДНК и белка по идентификатору последовательности для генов оксидазы GA3 в кукурузе.
<b>Ген оксидазы GA3</b>
<b>кДНК</b>
<b>Кодирующая последовательность (КДП)</b>
<b>Белок</b>
Оксидаза_1 GA3
SEQ ID NO: 28
SEQ ID NO: 29
SEQ ID NO: 30
Оксидаза_2 GA3
SEQ ID NO: 31
SEQ ID NO: 32
SEQ ID NO: 33
[101]
Последовательность геномной ДНК оксидазы_3 GA20 представлена в SEQ ID NO: 34, а последовательность геномной ДНК оксидазы_5 GA20 представлена в SEQ ID NO: 35. Для гена оксидазы_3 GA20, SEQ ID NO: 34 предоставляет 3000 нуклеотидов в 3'-5' направлении от 5'-НТО оксидазы_3 GA20; нуклеотиды 3001-3096 соответствуют 5'-НТО; нуклеотиды 3097-3665 соответствуют первому экзону; нуклеотиды 3666-3775 соответствуют первому интрону; нуклеотиды 3776-4097 соответствуют второму экзону; нуклеотиды 4098-5314 соответствуют второму интрону; нуклеотиды 5315-5584 соответствуют третьему экзону; и нуклеотиды 5585-5800 соответствуют 3'-НТО. SEQ ID NO: 34 также обеспечивает 3000 нуклеотидов в 5'-3' направлении от конца 3'-НТО (нуклеотиды 5801-8800). Для гена оксидазы_5 GA20, SEQ ID NO: 35 обеспечивает 3000 нуклеотидов в 3'-5' направлении от стартового кодона оксидазы_5 GA20 (нуклеотиды 1-3000); нуклеотиды 3001-3791 соответствуют первому экзону; нуклеотиды 3792-3906 соответствуют первому интрону; нуклеотиды 3907-4475 соответствуют второму экзону; нуклеотиды 4476-5197 соответствуют второму интрону; нуклеотиды 5198-5473 соответствуют третьему экзону; и нуклеотиды 5474-5859 соответствуют 3'-НТО. SEQ ID NO: 35 также обеспечивает 3000 нуклеотидов в 5'-3' направлении от конца 3'-НТО (нуклеотиды 5860-8859).
[102]
Последовательность геномной ДНК оксидазы_1 GA3 представлена в SEQ ID NO: 36, а последовательность геномной ДНК оксидазы_2 GA3 представлена в SEQ ID NO: 37. Для гена оксидазы_1 GA3, нуклеотиды 1-29 из SEQ ID NO: 36 соответствуют 5'-НТО; нуклеотиды 30-514 из SEQ ID NO: 36 соответствуют первому экзону; нуклеотиды 515-879 из SEQ ID NO: 36 соответствуют первому интрону; нуклеотиды 880-1038 из SEQ ID NO: 36 соответствуют второму экзону; нуклеотиды 1039-1158 из SEQ ID NO: 36 соответствуют второму интрону; нуклеотиды 1159-1663 из SEQ ID NO: 36 соответствуют третьему экзону; и нуклеотиды 1664-1788 из SEQ ID NO: 36 соответствуют 3'-НТО. Для гена оксидазы_2 GA3, нуклеотиды 1-38 из SEQ ID NO: 37 соответствуют 5-НТО; нуклеотиды 39-532 из SEQ ID NO: 37 соответствуют первому экзону; нуклеотиды 533-692 из SEQ ID NO: 37 соответствуют первому интрону; нуклеотиды 693-851 из SEQ ID NO: 37 соответствуют второму экзону; нуклеотиды 852-982 из SEQ ID NO: 37 соответствуют второму интрону; нуклеотиды 983-1445 из SEQ ID NO: 37 соответствуют третьему экзону; и нуклеотиды 1446-1698 из SEQ ID NO: 37 соответствуют 3'-НТО.
[103]
В дополнение к фенотипическим наблюдениям с нацеливанием на ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, или ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3, с целью супрессии, также наблюдается полукарликовый фенотип с супрессией гена оксидазы_4 GA20. Последовательность геномной ДНК оксидазы_4 GA20 представлена в SEQ ID NO: 38. Для гена оксидазы_4 GA, SEQ ID NO: 38 предоставляет нуклеотиды 1-1416 в 3'-5' направлении от 5'-НТО; нуклеотиды 1417-1543 из SEQ ID NO: 38 соответствуют 5'-НТО; нуклеотиды 1544-1995 из SEQ ID NO: 38 соответствуют первому экзону; нуклеотиды 1996-2083 из SEQ ID NO: 38 соответствуют первому интрону; нуклеотиды 2084-2411 из SEQ ID NO: 38 соответствуют второму экзону; нуклеотиды 2412-2516 из SEQ ID NO: 38 соответствуют второму интрону; нуклеотиды 2517-2852 из SEQ ID NO: 38 соответствуют третьему экзону; нуклеотиды 2853-3066 из SEQ ID NO: 38 соответствуют 3'-НТО; и нуклеотиды 3067-4465 из SEQ ID NO: 38 соответствуют геномной последовательности в 5'-3' направлении от 3'-НТО.
[104]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена молекула, вектор или конструкция рекомбинантной ДНК, содержащие транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, сегменту или части молекулы мРНК (i) экспрессирующиеся из эндогенного гена оксидазы GA и/или (ii) кодирующие эндогенный белок оксидазы GA в растении, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, и при этом растение представляет собой злаковое или кукурузное растение.
[105]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацелена на ген(ы) оксидазы GA20, такой как ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, с целью супрессии, и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из одной или более из SEQ ID NO: 7, 8, 13 и 14. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным одной или более из SEQ ID NO: 9 и 15. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным одной или более из SEQ ID NO: 9 и 15. В дополнение к нацеливанию на зрелую последовательность мРНК (включая одну или обе из нетранслируемых или экзонных последовательностей), некодирующая молекула РНК может дополнительно нацеливаться на интронные последовательности гена или транскрипта оксидазы GA20.
[106]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацелена, с целью супрессии, на ген(ы) оксидазы GA3, и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из одной или более из SEQ ID NO: 28, 29, 31 и 32. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным одному или обоим из SEQ ID NO: 30 и 33. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным одному или обоим из SEQ ID NO: 30 и 33. В дополнение к нацеливанию на зрелую последовательность мРНК (включая одну или обе из нетранслируемых или экзонных последовательностей), некодирующая молекула РНК может дополнительно нацеливаться на интронные последовательности гена или транскрипта оксидазы GA3.
[107]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацелена, с целью супрессии, на ген оксидазы_4 GA20, и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из одной или обоих из SEQ ID NO: 10 и 11. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 12. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 12. В дополнение к нацеливанию на зрелую последовательность мРНК (включая одну или обе из нетранслируемых или экзонных последовательностей), некодирующая молекула РНК может дополнительно нацеливаться на интронные последовательности гена или транскрипта оксидазы GA20.
[108]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК молекулы, вектора или конструкции рекомбинантной ДНК, может представлять собой предшественника микроРНК или миРНК, который процессируется или расщепляется в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК, которая нацеливается на ген оксидазы GA20 или оксидазы GA3.
[109]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения уровни GA могут быть снижены в стебле злакового или кукурузного растения путем нацеливания только на ограниченную подгруппу генов в семействе оксидазы GA с целью супрессии. Не ограничиваясь какой-либо теорией, предлагается, что нацеливание на ограниченное число генов в семействе оксидаз GA с целью супрессии может привести к низкорослому фенотипу и устойчивости к полеганию в трансгенных растениях, но без отклонений в репродуктивных или початковых тканях растения из-за дифференциальной экспрессии среди генов оксидаз GA, достаточной компенсации для супрессии гена(ов) оксидазы GA другим геном(ами) оксидазы GA в этих репродуктивных тканях и/или неполной супрессии целевого гена(ов) оксидазы GA. Таким образом, путем ограничения экспрессии или супрессии гена(ов) оксидазы GA с помощью тканеспецифического или тканепредпочтительного промотора можно избежать не только отклонений, предлагается, что ограниченное подмножество генов оксидазы GA (например, ограниченное количество генов оксидазы GA20) может быть направлено на супрессию, так что другие гены оксидаз GA в пределах того же семейства генов (например, другие гены оксидазы GA20) могут компенсировать потерю экспрессии гена(ов) супрессированной оксидазы GA в этих тканях. Неполная супрессия целевого гена(ов) оксидазы GA также может обеспечить достаточный уровень экспрессии целевого гена(ов) оксидазы GA в одной или более тканях, чтобы избежать отклонений или нежелательных признаков в растении, которые могут негативно повлиять на урожайность, таких как репродуктивные отклонения или чрезмерное сокращение высоты растений. В отличие от мутаций полной потери функции в гене, супрессия может сохранить частичную активность целевого гена. Поскольку разные гены оксидазы GA20 имеют разные профили экспрессии в растениях, нацеливание на ограниченное подмножество генов оксидазы GA20 с целью супрессии может позволить модифицировать определенные признаки, избегая при этом отклонений, ранее связанных с мутантами GA в злаковых растениях. Другими словами, признаки роста, развития и репродуктивные признаки или отклонения, ранее связанные с мутантами GA в кукурузе и других злаковых культурах, могут быть разделены путем нацеливания только на ограниченное количество или подмножество (то есть один или более, но не всех) генов оксидазы GA20 или GA3 и/или неполной супрессии целевого гена оксидазы GA. Посредством трансгенного нацеливания на подмножество одного или более эндогенных генов оксидазы GA3 или GA20 с целью супрессии в растении, можно применять более первазивный профиль экспрессии (например, с конститутивным промотором) для получения полукарликовых растений без значительных репродуктивных отклонений и/или других нежелательных признаков в растении, даже с экспрессией трансгенной конструкции в репродуктивной ткани(нях). В самом деле, в данном документе представлены элементы и конструкции супрессии, которые избирательно нацелены на гены оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 (идентифицированные в приведенной выше Таблице 1) с целью супрессии, которые могут быть функционально связаны с сосудистым, листовым и/или конститутивным промотором.
[110]
например
С конструкцией супрессии, которая нацелена только на ограниченное подмножество генов оксидазы GA20, таких как ген(ы) оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, или которая нацелена на ген(ы) оксидазы оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3, ограничение профиля экспрессии элемента супрессии может быть менее важным для достижения нормального репродуктивного развития злаковых или кукурузных растений и предотвращения отклонений в женском органе или початке из-за компенсации и тому подобного, от других генов оксидазы GA20 и/или GA3. Таким образом, экспрессия конструкции и элемента супрессии, селективно или предпочтительно нацеленных, например, на ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, ген оксидазы_4 GA20 и/или ген оксидазы_1 GA3, и/или оксидазы_2 GA3 в кукурузе, или на аналогичные гены и гомологи в других растениях злаков, может быть вызван различными типами промоторов, экспрессирующимся в растениях, включая конститутивные и тканеспецифичные или тканепредпочтительные промоторы, такие как сосудистый или листовой промотор, которые могут включать в себя, например, промотор RTBV, приведенный выше (, промотор, содержащий последовательность RTBV (SEQ ID NO: 65) или усеченную последовательность RTBV (SEQ ID NO: 66)), и любые другие промоторы, которые управляют экспрессией в тканях, охватывающих большую часть или всю сосудистую и/или листовую ткань(ни) растения. Любой известный или впоследствии идентифицированный конститутивный промотор с достаточно высоким уровнем экспрессии также может быть применен для экспрессии супрессирующей конструкции, нацеленной на подмножество генов оксидазы GA20 и/или GA3 в кукурузе, в частности на ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, ген оксидазы_4 GA20 и/или ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3, или подобные гены и гомологи в других злаковых растениях.
[111]
Примеры конститутивных промоторов, которые могут быть применены в однодольных растениях, таких как злаковые или кукурузные растения, включают в себя, например, различные промоторы гена актина, такие как промотор Актина 1 риса (см., например, Патент США № 5,641,876; см., также SEQ ID NO: 75 или SEQ ID NO: 76) и промотор Актина 2 риса (см., например, Патент США № 6,429,357; см., также, например, SEQ ID NO: 77 или SEQ ID NO: 78), промотор CaMV 35S или 19S (см., например, Патент США № 5,352,605; см., также, например, SEQ ID NO: 79 для CaMV 35S), промотор юбиквитина кукурузы (см., например, Патент США № 5,510,474), полиюбиквитиновый промотор Coix lacryma-jobi (см., например, SEQ ID NO: 80), промотор риса или кукурузы Gos2 (см., например, Pater и соавт., The Plant Journal, 2(6): 837-44 1992 год; см., также, например, SEQ ID NO: 81 для рисового промотора Gos2), промотор FMV 35S (см., например, Патент США № 6,372,211), двойной улучшенный промотор CMV (см., например, Патент США № 5,322,938), промотор MMV (см., например, Патент США № 6,420,547; см., также, например, SEQ ID NO: 82), промотор PCLSV (см., например, Патент США № 5,850,019; см., также, например, SEQ ID NO: 83), промотор Emu (см., например, Last и соавт., Theor. Appl. Genet. 81:581 (1991 год); и Mcelroy и соавт., Mol. Gen. Genet. 231:150 (1991 год)), тубулиновый промотор кукурузы, риса или других видов, промотор нопалинсинтазы (nos), промотор октопинсинтазы (ocs), промотор маннопинсинтазы (mas) или промотор алкогольдегидрогеназы растения (например, Adh1 маиса), любые другие промоторы, включая вирусные промоторы, известные или идентифицированные в данной области техники для обеспечения конститутивной экспрессии в злаковом или кукурузном растении, любые другие конститутивные промоторы, известные в данной области техники, которые можно применять в однодольных или злаковых растениях, и любую часть функциональной последовательности или усечение любого из вышеуказанных промоторов.
[112]
E
T
Достаточный уровень экспрессии транскрибируемой последовательности ДНК, кодирующей некодирующую молекулу РНК, нацеленную на ген оксидазы GA с целью супрессии, может быть необходим для получения низкорослого, полукарликового фенотипа, который является устойчивым к полеганию, поскольку более низкие уровни экспрессии могут быть недостаточными для снижения уровней активной GA в растении в достаточной степени, чтобы повлечь за собой существенный фенотип. Таким образом, могут быть предпочтительными тканеспецифичные и тканепредпочтительные промоторы, которые управляют и тому подобное, умеренным или сильным уровнем экспрессии их ассоциированной транскрибируемой последовательности ДНК в ткани(нях), продуцирующей активную GA растения. Кроме того, такие тканеспецифичные и тканепредпочтительные (промоторы) должны стимулировать и тому подобное, экспрессию ассоциированной с ними транскрибируемой последовательности ДНК в течении одной или более вегетативной стадии(стадий) развития растений, когда растение растет и/или удлиняется, включая одну или более из следующей вегетативной стадии(стадий): V, V1, V2, V3, V4, V5, V6, V7, V8, V9, V10, V11, V12, V13, V14, Vn, V, например, экспрессия по меньшей мере в течении V3-V12, V4-V12, V5-V12, V6-V12, V7-V12, V8-V12, V3-V14, V5-V14, V6-V14, V7-V14, V8-V14, V9-V14, V10-V14, и тому подобное, или в течении любого другого диапазона вегетативных стадий, когда происходит рост и/или удлинение растения.
[113]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения, экспрессируемый растением промотор может предпочтительно стимулировать экспрессию конститутивно или, по меньшей мере, в части сосудистой и/или листовой ткани растения. Различные промоторы, управляющие экспрессией элемента супрессии, нацеленного на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, ген оксидазы_4 GA20, ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 в кукурузе, или подобные гены и гомологи в других злаковых растениях, могут быть эффективными для уменьшения высоты растения и повышения устойчивости к полеганию в различной степени в зависимости от их конкретного профиля и силы экспрессии в растении. Однако некоторые тканеспецифичные и тканепредпочтительные промоторы, управляющие экспрессией элемента супрессии оксидазы GA20 или GA3 в растении, могут не приводить к фенотипу значительно низкого роста или устойчивости к полеганию из-за пространственно-временного профиля экспрессии промотора во время развития растения, и/или количество или сила экспрессии промотора являются слишком низкими или слабыми. Дополнительно, некоторые конструкции супрессии могут только уменьшать и не устранять экспрессию целевого гена(ов) оксидазы GA20 или GA3 при экспрессии в растении и, таким образом, в зависимости от профиля и силы экспрессии данного промотора, профиль и уровень экспрессии конструкции супрессии оксидазы GA20 или GA3 с таким промотором могут быть недостаточными для получения наблюдаемого фенотипа высоты растений и устойчивости к полеганию у растений.
[114]
В соответствии с данными вариантами реализации изобретения предлагается рекомбинантная молекула, вектор или конструкция ДНК, для супрессии одного или более эндогенного гена(ов) оксидазы GA20 или GA3 в растении, содержащие транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, сегменту или части молекулы мРНК, экспрессирующиеся из эндогенного гена оксидазы GA и кодирующие эндогенный белок оксидазы GA в растении, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, и при этом растение представляет собой злаковое или кукурузное растение. Как сказано выше, помимо нацеливания на зрелую последовательность мРНК, некодирующая молекула РНК может дополнительно нацеливаться на интронную последовательность(и) гена или транскрипта оксидазы GA. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться, для супрессии, на ген оксидазы_3 GA20, и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы_3 GA20 для супрессии, может быть комплементарной к, по меньшей мере, 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на ген оксидазы GA20 для супрессии и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 9. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 9.
[115]
Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA вместо или в дополнение к экзонному, 5'-НТО или 3'-НТО гена оксидазы GA. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_3 GA20, может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34 и/или нуклеотидам 3666-3775 или 4098-5314 из SEQ ID NO: 34. Важно отметить, что представленные в данном документе последовательности для гена оксидазы_3 GA20 могут варьироваться в зависимости от разнообразия растений кукурузы, линий и зародышевых плазм из-за полиморфизмов и/или наличия различных аллелей гена. Дополнительно, ген оксидазы_3 GA20 может быть экспрессирован в виде альтернативно сплайсированных изоформ, которые могут приводить к различным мРНК, кДНК и кодирующим последовательностям, которые могут влиять на конструкцию супрессирующей конструкции и некодирующей молекулы РНК. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_3 GA20, может быть более широко определена как содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34.
[116]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена молекула, вектор или конструкция рекомбинантной ДНК для супрессии эндогенного гена оксидазы_5 GA20 в растении, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы_5 GA20 для супрессии, содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы_5 GA20 для супрессии, может быть комплементарной к, по меньшей мере, 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 14. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на ген оксидазы GA20 для супрессии и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 15. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 15.
[117]
Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA вместо или в дополнение к экзонной или нетранслируемой области зрелой мРНК гена оксидазы GA. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_5 GA20, может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 35 и/или нуклеотидам 3792-3906 или 4476-5197 из SEQ ID NO: 35. Представленные в данном документе последовательности для оксидазы_5 GA20 могут варьироваться в зависимости от разнообразия растений кукурузы, линий и зародышевых плазм из-за полиморфизмов и/или наличия различных аллелей гена. Дополнительно, ген оксидазы_5 GA20 может быть экспрессирован в виде альтернативно сплайсированных изоформ, которые могут приводить к различным мРНК, кДНК и кодирующим последовательностям, которые могут влиять на конструкцию супрессирующей конструкции и некодирующей молекулы РНК. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_3 GA20, может быть определена более широко как содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 35.
[118]
В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, предлагается рекомбинантная молекула, вектор или конструкция рекомбинантной ДНК для совместной супрессии эндогенных генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в растении, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК нацелена на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, для супрессии, содержит последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 7 и/или SEQ ID NO: 8, и (ii) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 13 и/или SEQ ID NO: 14. Согласно некоторым из этих вариантов реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, совместно нацеленная на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 для супрессии, может быть комплементарной по меньшей мере 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из (i) SEQ ID NO: 7 (и/или SEQ ID NO: 8) и (ii) SEQ ID NO: 13 (и/или SEQ ID NO: 14). Согласно многим вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, совместно нацеленная на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 для супрессии, содержит последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 9, и (ii) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 15. Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA. Таким образом, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность(ти) одного или обоих гена(ов) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, как указано выше.
[119]
40
G
то есть
то есть
то есть
то есть
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, содержит (i) последовательность, которая является, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной SEQ ID NO: 39, 41, 43 или 45, и/или (ii) последовательность или элемент супрессии, кодирующие некодирующую молекулу РНК, содержащую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичной SEQ ID NO: 40, 42, 44 или 46. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность с одним или более ошибочными спариваниями, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более комплементарных ошибочных спариваний, относительно последовательности целевого сайта или сайта узнавания целевой мРНК гена оксидазы GA20, такой как последовательность, которая почти комплементарна SEQ ID NO: 40, но с одним или более комплементарными ошибочными спариваниями по отношению к SEQ ID NO: 40. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, содержит последовательность, которая на 100% идентична SEQ ID NO: , которая на 100% комплементарна целевой последовательности в кДНК и кодирующих последовательностях оксидазы_3 GA20 (, SEQ ID NO: 7 и 8, соответственно) и/или соответствующей последовательности мРНК, кодируемой эндогенным геном оксидазы_3 GA20. Однако последовательность некодирующей молекулы РНК, кодируемой транскрибируемой последовательностью ДНК, которая на 100% идентична SEQ ID NO: 40, 42, 44 или 46, может быть не полностью комплементарной целевой последовательности в кДНК и кодирующих последовательностях ген оксидазы_5 GA20 ( SEQ ID NO: 13 и 14, соответственно) и/или соответствующей последовательности мРНК, кодируемой эндогенным геном оксидазы_5 GA20. Например, наибольшее комплементарное совпадение между некодирующей молекулой РНК или последовательностью микроРНК в SEQ ID NO: 40 и кДНК, и кодирующими последовательностями гена оксидазы_5 GA20 может включать в себя одно ошибочное спаривание в первом положении SEQ ID NO: 39 (, "C" в первом положении SEQ ID NO: 39 заменяется на "G"; TCCATCATGCGGTGCAACTA). Однако некодирующая молекула РНК или последовательность микроРНК в SEQ ID NO: 40 могут по-прежнему связываться и гибридизоваться с мРНК, кодируемой эндогенным геном оксидазы_5 GA20, несмотря на это небольшое несовпадение.
[120]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения, предлагается рекомбинантная молекула, вектор или конструкция ДНК, для супрессии одного или более эндогенного гена(ов) оксидазы GA3 в растении, содержащие транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, сегменту или части молекулы мРНК, экспрессирующиеся из эндогенного гена оксидазы GA3 и кодирующие эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, и при этом растение представляет собой злаковое или кукурузное растение. Помимо нацеливания на зрелую последовательность мРНК, некодирующая молекула РНК может дополнительно нацеливаться на интронные последовательности гена или транскрипта оксидазы GA3.
[121]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться, для супрессии, на ген оксидазы_1 GA3, и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 29. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы GA3 для супрессии, может быть комплементарной к, по меньшей мере, 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 29. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацеливается на ген оксидазы GA3 для супрессии и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 30. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 30.
[122]
Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA3 вместо или в дополнение к экзонному, 5'-НТО или 3'-НТО гена оксидазы GA. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_1 GA3, может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 36 и/или нуклеотидам 515-879 или 1039-1158 из SEQ ID NO: 36. Представленные в данном документе последовательности для оксидазы_1 GA3 могут варьироваться в зависимости от разнообразия растений кукурузы, линий и зародышевых плазм из-за полиморфизмов и/или наличия различных аллелей гена. Дополнительно, ген оксидазы_1 GA3 может быть экспрессирован в виде альтернативно сплайсированных изоформ, которые могут приводить к различным мРНК, кДНК и кодирующим последовательностям, которые могут влиять на конструкцию супрессирующей конструкции и некодирующей молекулы РНК. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_1 GA3, может быть определена более широко как содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 36.
[123]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться, для супрессии, на ген оксидазы_2 GA3, и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 32. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы GA3 для супрессии, может быть комплементарной к, по меньшей мере, 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 32. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацеливается на ген оксидазы GA3 для супрессии и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 33. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 33.
[124]
Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA3 вместо или в дополнение к экзонному, 5'-НТО или 3'-НТО гена оксидазы GA3. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_2 GA3, может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 37 и/или нуклеотидам 533-692 или 852-982 из SEQ ID NO: 37. Представленные в данном документе последовательности для оксидазы_2 GA3 могут варьироваться в зависимости от разнообразия растений кукурузы, линий и зародышевых плазм из-за полиморфизмов и/или наличия различных аллелей гена. Дополнительно, ген оксидазы_2 GA3 может быть экспрессирован в виде альтернативно сплайсированных изоформ, которые могут приводить к различным мРНК, кДНК и кодирующим последовательностям, которые могут влиять на конструкцию супрессирующей конструкции и некодирующей молекулы РНК. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_2 GA3, может быть определена более широко как содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 37.
[125]
то есть,
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК для нацеливания на ген оксидазы GA3, содержит (i) последовательность, которая является, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной SEQ ID NO: 57 или 59, и/или (ii) последовательность или элемент супрессии, кодирующие некодирующую молекулу РНК, содержащую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичной SEQ ID NO: 58 или 60. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность с одним или более ошибочными спариваниями, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более комплементарных ошибочных спариваний, относительно последовательности целевого сайта или сайта узнавания целевой мРНК гена оксидазы GA3, такой как последовательность, которая почти комплементарна SEQ ID NO: 57 или 59, но с одним или более комплементарными ошибочными спариваниями по отношению к SEQ ID NO: 57 или 59. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, содержит последовательность, которая на 100% идентична SEQ ID NO: 58 или 60, которая на 100% комплементарна целевой последовательности в кДНК и кодирующих последовательностях гена оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3 в кукурузе ( SEQ ID NO: 28, 29, 31 и/или 32) и/или соответствующей последовательности мРНК, кодируемой эндогенным геном оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3.
[126]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может нацеливаться, для супрессии, на ген оксидазы_4 GA20, и содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения некодирующая молекула РНК, нацеленная на ген оксидазы_4 GA20 для супрессии, может быть комплементарной к, по меньшей мере, 19 последовательным нуклеотидам, но не более чем 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарной 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК нацеливается на ген оксидазы GA20 для супрессии и содержит последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 12. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, некодирующая молекула РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным SEQ ID NO: 12.
[127]
Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на интронную последовательность гена оксидазы GA20 вместо или в дополнение к экзонному, 5'-НТО или 3'-НТО гена оксидазы GA20. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_4 GA20, может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 38 и/или нуклеотидам 1996-2083 или 2412-2516 из SEQ ID NO: 38. Представленные в данном документе последовательности для оксидазы_4 GA20 могут варьироваться в зависимости от разнообразия растений кукурузы, линий и зародышевых плазм из-за полиморфизмов и/или наличия различных аллелей гена. Дополнительно, ген оксидазы_4 GA20 может быть экспрессирован в виде альтернативно сплайсированных изоформ, которые могут приводить к различным мРНК, кДНК и кодирующим последовательностям, которые могут влиять на конструкцию супрессирующей конструкции и некодирующей молекулы РНК. Таким образом, некодирующая молекула РНК нацеленная, для супрессии, на ген оксидазы_4 GA20, может быть определена более широко как содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 38.
[128]
то есть
Согласно конкретным вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК для нацеливания на ген оксидазы_4 GA20, содержит (i) последовательность, которая является, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной SEQ ID NO: 61, и/или (ii) последовательность или элемент супрессии, кодирующие некодирующую молекулу РНК, содержащую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичной SEQ ID NO: 62. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность с одним или более ошибочными спариваниями, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более комплементарных ошибочных спариваний, относительно последовательности целевого сайта или сайта узнавания целевой мРНК гена оксидазы GA20, такой как последовательность, которая почти комплементарна SEQ ID NO: 61, но с одним или более комплементарными ошибочными спариваниями по отношению к SEQ ID NO: 61. Согласно конкретному варианту реализации изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, содержит последовательность, которая на 100% идентична SEQ ID NO: 62, которая на 100% комплементарна целевой последовательности в кДНК и кодирующих последовательностях оксидазы_4 GA20 в кукурузе ( SEQ ID NO: 10 или 11), и/или соответствующей последовательности мРНК, кодируемой эндогенным геном оксидазы_4 GA20.
[129]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или ген(ы) оксидазы_5 GA20 для супрессии, при этом последовательность транскрибируемой ДНК является функционально связанной с конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК вызывает снижение или уменьшение уровня экспрессии эндогенного гена(ов) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 в одной или более ткани(нях) растения, трансформированного транскрибируемой последовательностью ДНК. Такая некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 9, и/или (ii) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 15.
[130]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или ген(ы) оксидазы_2 GA3 для супрессии, при этом последовательность транскрибируемой ДНК является функционально связанной с конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК вызывает снижение или уменьшение уровня экспрессии эндогенного гена(ов) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 в одной или более ткани(нях) растения, трансформированного транскрибируемой последовательностью ДНК. Такая некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 30, и/или (ii) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 33.
[131]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы_4 GA20 для супрессии, при этом последовательность транскрибируемой ДНК является функционально связанной с конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК вызывает снижение или уменьшение уровня экспрессии эндогенного гена оксидазы_4 GA20 в одной или более ткани(нях) растения, трансформированного транскрибируемой последовательностью ДНК. Такая некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, может содержать последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 12.
[132]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома, как предложено в данном документе, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень экспрессии эндогенного гена(ов) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 устраняется, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), такой как одна или более сосудистая и/или листовая ткань(и) модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома для снижения или устранения уровня его экспрессии и/или активности, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень одной или более активных GA, таких как GA1, GA3, GA4 и/или GA7, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), таких как одна или более стеблевая, междоузловая, сосудистая и/или листовая ткань(и) или одна или более стеблевая и/или междоузловая ткань(и), модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением.
[133]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома, как предложено в данном документе, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень экспрессии эндогенного гена(ов) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 устраняется, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), такой как одна или более сосудистая и/или листовая ткань(и) модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома для снижения или устранения уровня его экспрессии и/или активности, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень одной или более активных GA, таких как GA1, GA3, GA4 и/или GA7, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), таких как одна или более стеблевая, междоузловая, сосудистая и/или листовая ткань(и) или одна или более стеблевая и/или междоузловая ткань(и), модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением.
[134]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы_4 GA20 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_4 GA20, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома, как предложено в данном документе, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень экспрессии эндогенного гена(ов) оксидазы_4 GA20 устраняется, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), такой как одна или более сосудистая и/или листовая ткань(и) модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформируется рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_4 GA20 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_4 GA20, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома для снижения или устранения уровня его экспрессии и/или активности, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, таким как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом уровень одной или более активных GA, таких как GA1, GA3, GA4 и/или GA7, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), таких как одна или более стеблевая, междоузловая, сосудистая и/или листовая ткань(и) или одна или более стеблевая и/или междоузловая ткань(и), модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением.
[135]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагается модифицированное или трансгенное растение, которое трансформировано рекомбинантной конструкцией ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 для супрессии, трансформировано конструкцией рекомбинантной ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген(ы) оксидазы_1 GA3, оксидазы_2 GA3 для супрессии, и/или имеет эндогенный ген оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 или оксидазы_5 GA20, отредактированный с помощью целевых методов редактирования генома, для снижения или устранения уровня его экспрессии и/или активности, как представлено в данном документе документе, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным промотором или тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, такой как сосудистый промотор или листовой промотор, и при этом модифицированное или трансгенное растение имеет один или более следующих признаков: полукарликовость или уменьшенную высоту, или рост растения, уменьшенную длину междоузлия стебля, повышенную устойчивость к полеганию и/или увеличенный диаметр стебля. Такое модифицированное или трансгенное растение может не иметь каких-либо значительных репродуктивных отклонений. Модифицированное или трансгенное растение может иметь один или более из следующих дополнительных признаков: уменьшенный излом стебля, более глубокие корни, увеличенную площадь листьев, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, повышение эффективности использования воды, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна, увеличение урожайности и/или увеличенный уборочный индекс. Согласно многим из этих вариантов реализации изобретения уровень экспрессии и/или активности эндогенного гена(ов) оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 или эндогенного гена(ов) оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3, может быть устранен, уменьшен или понижен в одной или более растительных ткани(нях), такой как одна или более сосудистая и/или листовая ткань(и), модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением, и/или уровень одной или более активных GA, таких как GA1, GA3, GA4 и/или GA7, уменьшается или понижается в одной или более растительной ткани(нях), таких как одна или более стеблевая, междоузловая, сосудистая и/или листовая ткань(и), или одна или более стеблевая и/или междоузловая ткань(и), модифицированного или трансгенного растения, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или 100% по сравнению с диким типом или контрольным растением.
[136]
В соответствии со многими вариантами реализации изобретения, описанными в приведенных выше абзацах, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК молекулы, вектора или конструкции рекомбинантной ДНК, может представлять собой предшественника микроРНК или миРНК, который впоследствии может быть процессирован или расщеплен в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК.
[137]
Молекула, конструкция или вектор рекомбинантной ДНК по данному изобретению может содержать транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, таким как конститутивный или сосудистый и/или листовой промотор. Для целей данного изобретения, некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, может включать зрелую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, и/или молекулу-предшественник РНК, которая может процессироваться в растительной клетке в зрелую некодирующую молекулу РНК, такую как микроРНК или миРНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии. В дополнение к связанному с ней промотору последовательность транскрибируемой ДНК, кодирующая некодирующую молекулу РНК для супрессии эндогенного гена оксидазы GA, также может быть функционально связана с одним или более дополнительными регуляторными элементами, такими как энхансер(ы), лидер, сайт инициации транскрипции (TSS - transcription start site), линкер, 5' и 3' нетранслируемая область(и) (НТО), интрон(ы), сигнал полиаденилирования, область терминации или стоп-кодон и тому подобное, которые являются подходящими, необходимыми или предпочтительными для усиления, регуляции или обеспечения возможности экспрессии транскрибируемой последовательности ДНК в клетке растения. Такой дополнительный регуляторный элемент(ы) может быть необязательным и/или применяться для усиления или оптимизации экспрессии последовательности трансгена или транскрибируемой ДНК. Как указано в данном документе, "энхансер" отличается от "промотора" тем, что энхансер обычно не имеет сайта инициации транскрипции, TATA-бокса или эквивалентной последовательности и, следовательно, его недостаточно для запуска транскрипции. В данном документе термин "лидер" может быть определен, как правило, как последовательность ДНК 5'-НТО гена (или трансгена) между сайтом инициации транскрипции (TSS) и 5'-концом транскрибируемой последовательности ДНК, или сайтом инициации кодирующей белок последовательности трансгена.
[138]
Agrobacterium
Rhizobium
В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения предложены способы трансформации растительной клетки, ткани или эксплантата молекулой, или конструкцией рекомбинантной ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК или трансген, функционально связанный с экспрессируемым в растении промотором, для получения трансгенного растения. Последовательность транскрибируемой ДНК может кодировать некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на ген(ы) оксидазы GA для супрессии, или предшественника РНК, который процессируется в зрелую молекулу РНК, такую как микроРНК или миРНК, которая нацелена на один или более ген(ов) оксидазы GA для супрессии. В данной области техники известны многочисленные способы трансформации хромосом или пластид в растительной клетке с помощью молекулы или конструкции рекомбинантной ДНК, которые можно применять в соответствии с вариантами реализации способа по данному изобретению для получения трансгенной растительной клетки и растения. Любой подходящий способ или метод трансформации растительной клетки, известный в данной области техники, может быть применен в соответствии с данными способами. Эффективные способы трансформации растений включают бактериально-опосредованную трансформацию, такую как трансформация, опосредованная  или , и трансформация, опосредованная бомбардировкой частицами или бомбардировкой микрочастицами. В данной области техники известно множество способов трансформации эксплантов с помощью вектора для трансформации посредством бактериально-опосредованной трансформации или бомбардировки микрочастицами, или частицами и последующего культивирования, и тому подобного, данных эксплантов для регенерации или развития трансгенных растений. В данной области техники также известны другие способы трансформации растений, такие как микроинъекция, электропорация, вакуумная инфильтрация, давление, соникация, перемешивание карбиднокремниевого волокна, ПЭГ-опосредованная трансформация и тому подобное.
[139]
Agrobacterium
Способы трансформации растительных клеток и эксплантов хорошо известны специалистам в данной области техники. Способы трансформации растительных клеток путем бомбардировки микрочастицами с частицами, покрытыми рекомбинантной ДНК, представлены, например, в патентах США № 5,550,318; 5,538,880 6,160,208; 6,399,861; и 6,153,812, а опосредованная  трансформация описана, например, в патентах США № 5,159,135; 5,824,877; 5,591,616; 6,384,301; 5,750,871; 5,463,174; и 5,188,958, все из которых включены в данный документ посредством ссылки. Дополнительные способы трансформации растений можно найти, например, в Compendium of Transgenic Crop Plants (2009 год) Blackwell Publishing. Любой подходящий способ трансформации растения, известный или разработанный в данной области техники, может быть применен для трансформации растительной клетки или эксплантата с помощью любой из молекул нуклеиновой кислоты, конструкций или векторов, представленных в данном документе.
[140]
Трансгенные растения, полученные способами трансформации, могут быть химерными или нехимерными для события трансформации в зависимости от применяемых способов и эксплантов. Дополнительно предложены способы экспрессии некодирующей молекулы РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии в одной или более растительных клетках или тканях под контролем экспрессируемого в растении промотора, такого как конститутивный, тканеспецифический, тканепредпочтительный, сосудистый и/или листовой промотор, как представлено в данном документе. Такие способы могут быть применены для создания трансгенных растений злаков или кукурузы, имеющих более низкий рост, полукарликовость, уменьшенную длину междоузлия, увеличенный диаметр стебля и/или улучшенную устойчивость к полеганию. Такие трансгенные злаковые или кукурузные растения могут также иметь другие признаки, которые могут быть полезными для урожайности, например, уменьшенный излом стебля, более глубокие корни, увеличенную площадь листьев, более раннюю сомкнутость полога, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, повышение эффективности использования воды, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, снижение содержания антоцианов и/или площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна, увеличение урожайности и/или увеличенный уборочный индекс по сравнению с диким типом или контрольным растением. В данном документе термин "уборочный индекс" относится к массе собранного зерна, деленной на общую массу надземной биомассы растения на уборочной площади.
[141]
например
например
например
например
Трансгенные растения, экспрессирующие трансгенную или некодирующую молекулу РНК оксидазы GA, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, могут иметь более раннюю сомкнутость полога (, приблизительно на один день более раннюю или на 12-48 часов, на 12-36 часов, на 18-36 часов или на около 24 часа более раннюю сомкнутость полога), чем растение дикого типа или контрольное растение. Хотя трансгенные растения, экспрессирующие трансгенную или некодирующую молекулу РНК оксидазы GA, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, могут иметь более низкую высоту початка, чем растение дикого типа или контрольное растение, высота початка обычно может быть не менее 18 сантиметров над землей. Трансгенные растения, экспрессирующие некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, могут иметь большую биомассу и/или площадь листьев на одной или более поздних вегетативных стадиях (, V8-V12), чем растение дикого типа или контрольное растение. Трансгенные растения, экспрессирующие трансгенную или некодирующую молекулу РНК оксидазы GA, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, могут иметь более глубокие корни на более поздних вегетативных стадиях при выращивании в поле, чем растение дикого типа или контрольное растение, что может быть связано с повышенной скоростью роста корня. Эти трансгенные растения могут достигать глубины 90 см под землей раньше (, на 10-25 дней раньше, на 15-25 дней раньше или на около 20 дней раньше), чем растение дикого типа или контрольное растение, что может происходить в результате вегетативного и репродуктивного перехода растения (, на V16/R1 через около 50 дней после посадки, в отличие от через около 70 дней после посадки для контрольных растений).
[142]
например
Клетка(и) реципиента или цели эксплантата или клеточные цели для трансформации включают, но без ограничений, клетку семени, клетку плода, клетку листа, семядольную клетку, клетку гипокотиля, клетку меристемы, клетку эмбриона, клетку эндосперма, корневую клетку, клетку проростка, стволовую клетку, клетку стручка, клетку цветка, клетку соцветия, клетку стебля, клетку цветоножки, клетку пестика, клетку стигмы, клетку рецептакула, клетку лепестка, клетку чашелистника, пыльцевую клетку, клетку пыльника, клетку тычиночной нити, клетку завязи, клетку семезачатка, клетку перикарпа, клетку флоэмы, клетку почки, клетку каллуса, хлоропласт, устьичную клетку, клетку трихомы, клетку корневого волоска, клетку корнеплода или клетку сосудистой ткани, семя, эмбрион, меристему, семядоль, гипокотиль, эндосперм, корень, побег, стебель, узел, каллус, клеточную суспензию, протопласт, цветок, лист, пыльцу, пыльник, завязь, семезачаток, перикарп, почку и/или сосудистую ткань или любую трансформируемую часть любого из вышеперечисленного. Для трансформации растений любые целевые клетки, ткань(и), эксплантат(ы) и тому подобное, которые могут быть применены для получения вектора с целью трансформации рекомбинантной ДНК или молекулы по данному изобретению, могут в совокупности называться "эксплантат" для трансформации. Предпочтительно трансформируемая или трансформированная клетка, или ткань эксплантата может быть дополнительно развита или регенерирована в растение. Любая клетка или эксплантат, из которых можно выращивать или регенерировать плодородное растение, рассматривается в качестве полезной клетки-реципиента или эксплантата для практического применения данного описания (то есть, в качестве целевого эксплантата для трансформации). Каллус может быть инициирован или создан из различных тканевых источников, включая, но без ограничения, эмбрионы или части эмбрионов, неэмбриональные ткани семян, апикальные меристемы проростков, микроспоры и тому подобное. Любые клетки, которые способны пролиферировать как каллус, могут служить клетками-реципиентами для трансформации. Способы трансформации и материалы для получения трансгенных растений (, различные среды и реципиентные целевые клетки или эксплантаты и способы трансформации и последующая регенерация в трансгенные растения) известны в данной области техники.
[143]
in vitro
Трансформация целевого растительного материала или эксплантата может быть осуществлена в культуре ткани на питательной среде, например, смеси питательных веществ, которые позволяют клеткам расти  или клеточной культуре. Как известно в данной области техники, трансформированные эксплантаты, клетки или ткани могут быть подвергнуты дополнительным этапам культивирования, таким как индукция каллуса, отбор, регенерация и тому подобное. Трансформация также может осуществляться без создания или применения ткани каллуса. Трансформированные клетки, ткани или эксплантаты, содержащие вставку или событие рекомбинантной последовательности ДНК, можно выращивать, развивать или регенерировать в трансгенные растения в культуре, пробках или почве в соответствии со способами, известными в данной области техники. Трансгенные растения могут быть затем скрещены с собой или другими растениями для получения трансгенных семян и потомства. Трансгенное растение также может быть получено путем скрещивания первого растения, содержащего последовательность рекомбинантной ДНК или событие трансформации, со вторым растением, в котором отсутствует вставка. Например, конструкция или последовательность рекомбинантной ДНК может быть введена в первую линию растений, которая поддается трансформации, которая затем может быть скрещена со второй линией растений с целью интрогрессии конструкции или последовательности рекомбинантной ДНК во вторую линию растений. Потомство этих скрещиваний может быть затем обратно скрещено в более желательную линию множество раз, например, через 6-8 поколений или обратных скрещиваний, чтобы получить потомства растения с по существу тем же генотипом, что и у исходной родительской линии, но для введения конструкции или последовательности рекомбинантной ДНК.
[144]
Представленное в данном документе трансгенное или отредактированное растение, часть растения, клетка или эксплантат могут относиться к элитному сорту или элитной линии. Элитный сорт или элитная линия относится к сорту, полученному в результате селекции и отбора для обеспечения превосходных агрономических характеристик. Представленное в данном документе трансгенное или отредактированное растение, клетка или эксплантат может представлять собой гибридное растение, клетку или эксплантат. Как подразумевается в данном документе "гибрид" создается путем скрещивания двух растений из разных сортов, линий, инбредов или видов, так что потомство содержит генетический материал от каждого родителя. Специалисты в данной области признают, что могут быть получены гибриды более высокого порядка. Например, первый гибрид может быть получен путем скрещивания сорта A с сортом B, чтобы создать гибрид A x B, и второй гибрид может быть получен путем скрещивания сорта C с сортом D, чтобы создать гибрид C x D. Первый и второй гибриды могут быть далее скрещены для создания гибрида высшего порядка (A x B) x (C x D), содержащего генетическую информацию от всех четырех родительских сортов.
[145]
то есть
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предлагается модифицированное растение, содержащее элемент супрессии оксидазы GA, который нацелен на два или более генов оксидазы GA для супрессии, или комбинацию двух или более элемента(ов) супрессии оксидазы GA и/или редактирования гена(ов). Конструкция или вектор рекомбинантной ДНК может содержать одну кассету или элемент супрессии, содержащий транскрибируемую последовательность ДНК, сконструированную или выбранную для кодирования некодирующей молекулы РНК, которая является комплементарной распознаванию мРНК или целевой последовательности двух или более генов оксидазы GA, включая по меньшей мере первый ген оксидазы GA и второй ген оксидазы GA,  мРНК целевых генов оксидазы GA имеют идентичную или почти идентичную (или подобную) последовательность, так что один элемент супрессии и кодированная некодирующая молекула РНК могут нацеливаться на каждый из целевых генов оксидазы GA для супрессии. Например, экспрессионная кассета и конструкция супрессии представлены в данном документе, включают транскрибируемую последовательность ДНК, которая кодирует одну некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 для супрессии.
[146]
Согласно другим вариантам реализации изобретения конструкция рекомбинантной ДНК или вектора могут содержать два или более элемента супрессии или последовательности, которые могут быть объединены вместе в конструкции или векторе либо в тандеме в одной экспрессионной кассете, либо по отдельности в двух или более экспрессионных кассетах. Конструкция или вектор рекомбинантной ДНК может содержать одну экспрессионную кассету или элемент супрессии, содержащие последовательность транскрибируемой ДНК, которая кодирует некодирующую молекулу РНК, содержащую две или более целевые последовательности, расположенные в тандеме, включая, по меньшей мере, первую целевую последовательность и вторую целевую последовательность, при этом первая целевая последовательность является комплементарной распознаванию мРНК или целевому сайт первого гена оксидазы GA, а вторая целевая последовательность комплементарна распознаванию мРНК или целевого сайту второго гена оксидазы GA, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК является функционально связанной с экспрессируемым в растении промотором. Промотор, экспрессируемый в растении может быть конститутивным промотором или тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, как представлено в данном документе. Некодирующая молекула РНК может быть экспрессирована в виде пре-микроРНК, которая процессируется в две или более зрелые микроРНК, включая, по меньшей мере, первую зрелую микроРНК и вторую микроРНК, при этом первая микроРНК содержит целевую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту первого гена оксидазы GA, а вторая микроРНК содержит целевую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту второго гена оксидазы GA.
[147]
В соответствии с другими вариантами реализации изобретения конструкция рекомбинантной ДНК или вектор могут содержать две или более экспрессионные кассеты, включая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, при этом первая экспрессионная кассета содержит первую транскрибируемую последовательность ДНК, функционально связанную с первым промотором, экспрессируемым в растении, и вторая экспрессионная кассета содержит вторую транскрибируемую последовательность ДНК, функционально связанную со вторым промотором, экспрессируемым в растении, при этом первая транскрибируемая последовательность ДНК кодирует первую некодирующую молекулу РНК, содержащую целевую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту первого гена оксидазы GA, и вторая транскрибируемая последовательность ДНК кодирует вторую некодирующую молекулу РНК, содержащую целевую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту второго гена оксидазы GA. Каждый из первого и второго промоторов, экспрессируемых в растении, может быть конститутивным промотором или тканеспецифичным, или тканепредпочтительным промотором, как предусмотрено в данном документе, и первый и второй промоторы, экспрессируемые в растении могут быть одинаковыми или разными промоторами.
[148]
В соответствии с другими вариантами реализации изобретения два или более элемента супрессии или конструкции, нацеленную на ген(ы) оксидазы GA и/или редактирование(я) гена оксидазы GA, могут быть объединены в модифицированном растении путем скрещивания двух или более растений вместе в одном или более поколениях для получения модифицированного растения, имеющего желаемую комбинацию элемента(ов) супрессии и/или редактирование(я) генов. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения первое модифицированное растение, содержащее элемент или конструкцию супрессии, нацеленную на ген(ы) оксидазы GA (или редактирование гена оксидазы GA), может быть скрещено со вторым модифицированным растением, содержащим элемент или конструкцию супрессии, нацеленную на ген(ы) оксидазы GA (или редактирование гена оксидазы GA), так что может быть получено модифицированное растение потомства, содержащее первый элемент или конструкцию супрессии и второй элемент или конструкцию супрессии, элемент или конструкцию супрессии и редактирование гена оксидазы GA, или редактирование первого гена оксидазы GA и редактирование второго гена оксидазы GA. В альтернативном варианте, модифицированное растение, содержащее два или более элементов или конструкций супрессии, нацеленных на ген(ы) оксидазы GA и/или редактирование гена(ов) оксидазы GA, может быть осуществлено посредством (i) котрансформации первого элемента или конструкции супрессии и второго элемента или конструкции супрессии (каждый из которых нацелен на ген оксидазы GA для супрессии), (ii) трансформации модифицированного растения вторым элементом или конструкцией супрессии, при этом модифицированное растение уже содержит первый элемент или конструкцию супрессии, (iii) трансформации модифицированного растения с помощью элемента или конструкции супрессии, при этом модифицированное растение уже содержит отредактированный ген оксидазы GA, (iv) трансформации модифицированного растения конструкцией(ями) для внесения одного или более изменений в ген(ы) оксидазы GA, при этом модифицированное растение уже содержит элемент или конструкцию супрессии или (v) трансформации с помощью конструкции(ий) для внесения двух или более изменений в ген(ы) оксидазы GA.
[149]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены модифицированные растения, содержащие две или более конструкций, нацеленных на ген(ы) оксидазы GA для супрессии, включая первую конструкцию рекомбинантной ДНК и вторую конструкцию рекомбинантной ДНК, при этом первая конструкция рекомбинантной ДНК содержит первую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую первую некодирующую молекулу РНК, которая является комплементарной распознаванию мРНК или целевой последовательности первого гена оксидазы GA, и вторая конструкция рекомбинантной ДНК содержит вторую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую вторую молекулу некодирующей РНК, которая является комплементарной распознаванию мРНК или целевой последовательность второго гена оксидазы GA. Первая и вторая конструкции рекомбинантной ДНК могут быть помещены в один вектор и трансформированы в растение как одно событие трансформации или представлены в отдельных векторах или конструкциях, которые могут быть трансформированы в виде отдельных событий трансформации. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения первый ген оксидазы GA может представлять собой ген оксидазы_3 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3, первая некодирующая молекула РНК является комплементарной последовательности распознавания или целевой последовательности мРНК, экспрессируемой из такого гена оксидазы GA, а второй ген оксидазы GA может представлять собой ген оксидазы_3 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, первый и второй гены оксидазы GA могут быть одинаковыми или разными генами оксидазы GA. В альтернативном варианте, второй ген оксидазы GA может представлять собой другой ген оксидазы GA, такой как ген оксидазы_1 GA20, оксидазы_2 GA20, оксидазы_6 GA20, оксидазы_7 GA20, оксидазы_8 GA20 или оксидазы_9 GA20, а вторая некодирующая молекула РНК является комплементарной к последовательности распознавания или целевой последовательности мРНК, экспрессируемой из такого гена оксидазы GA.
[150]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены модифицированные растения, содержащие конструкцию рекомбинантной ДНК, нацеленную на гены оксидазы GA для супрессии, включающую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая содержит две или более нацеливающих последовательностей, расположенных в тандеме, включая, по меньшей мере, первую нацеливающую последовательность, которая комплементарна последовательности распознавания мРНК или целевой последовательности первого гена оксидазы GA, и вторую нацеливающую последовательность, которая комплементарна последовательности распознавания мРНК или целевой последовательности второго гена оксидазы GA. Некодирующая молекула РНК может быть экспрессирована в виде пре-микроРНК, которая процессирует в две или более зрелые микроРНК, включая, по меньшей мере, первую зрелую микроРНК и вторую микроРНК, при этом первая микроРНК содержит первую нацеливающую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту первого гена оксидазы GA, а вторая микроРНК содержит вторую нацеливающую последовательность, которая комплементарна распознаванию мРНК или целевому сайту второго гена оксидазы GA. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения первый ген оксидазы GA может представлять собой ген оксидазы_3 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3, первая некодирующая молекула РНК является комплементарной последовательности распознавания или целевой последовательности мРНК, экспрессируемой из такого гена оксидазы GA, а второй ген оксидазы GA может представлять собой ген оксидазы_3 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, первый и второй гены оксидазы GA могут быть одинаковыми или разными генами оксидазы GA. В альтернативном варианте, второй ген оксидазы GA может представлять собой другой ген оксидазы GA, такой как ген оксидазы_1 GA20, оксидазы_2 GA20, оксидазы_6 GA20, оксидазы_7 GA20, оксидазы_8 GA20 или оксидазы_9 GA20, а вторая некодирующая молекула РНК является комплементарной к последовательности распознавания или целевой последовательности мРНК, экспрессируемой из такого гена оксидазы GA.
[151]
В описанных выше сценариях расположения и независимо от того, объединены ли целевые последовательности в тандем в одной транскрибируемой последовательности ДНК (или в экспрессионной кассете) или в отдельных транскрибируемых последовательностях ДНК (или экспрессионных кассетах), второй ген оксидазы GA может быть геном оксидазы GA, отличным от гена оксидазы_3 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 или гена оксидазы_2 GA3, такого как ген оксидазы_1 GA20, оксидазы_2 GA20, оксидазы_6 GA20, оксидазы_7 GA20, оксидазы_8 GA20 или оксидазы_9 GA20. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения вторая нацеливающая последовательность некодирующей молекулы РНК может быть, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из любого одного или более из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25, и/или 26. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения вторая нацеливающая последовательность некодирующей молекулы РНК может быть комплементарной, по меньшей мере 19 последовательным нуклеотидам, но не более 27 последовательным нуклеотидам, например, комплементарна 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 последовательным нуклеотидам из любого одного или более из SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25 и/или 26. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, вторая нацеливающая последовательность некодирующей молекулы РНК является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA в растении, который является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным любому одной или более из SEQ ID NO: 3, 6, 18, 21, 24 и/или 27. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения, вторая нацеливающая последовательность некодирующей молекулы РНК может содержать последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% подобным одной или более из SEQ ID NO: 3, 6, 18, 21, 24 и/или 27.
[152]
Agrobacterium-опосредованной
Rhizobia-опосредованной
Молекула или конструкция рекомбинантной ДНК по данному изобретению может содержать или быть включена в вектор для трансформации ДНК для применения в трансформации целевой клетки растения, ткани или эксплантата. Такой вектор для трансформации может обычно содержать последовательности или элементы, необходимые или полезные для эффективной трансформации, в дополнение к по меньшей мере одной последовательности трансгена, экспрессионной кассеты и/или транскрибируемой ДНК, кодирующей ген оксидазы GA или некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии. Для ,  или другой бактериально-опосредованной трансформации вектор для трансформации может содержать участок или область сконструированной транспортной ДНК (или Т-ДНК), имеющие две граничные последовательности, левую границу (LB- left border) и правую границу (RB - right border), фланкирующих по меньшей мере транскрибируемую последовательность ДНК или трансген, так что вставка Т-ДНК в геном растения создает событие трансформации для транскрибируемой последовательности ДНК, трансгена или экспрессионной кассеты. Таким образом, транскрибируемая последовательность ДНК, трансген или экспрессионная кассета, кодирующая некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, может быть расположена между левой и правой границами Т-ДНК, возможно, вместе с дополнительным трансгеном(ами) или экспрессионной кассетой(ами), такими как трансген селектируемого растением маркера и/или другой ген(ы) агрономического интереса, который может придавать растению признак или фенотип агрономического интереса. Согласно альтернативным вариантам реализации изобретения транскрибируемая последовательность ДНК, трансген или экспрессионная кассета, кодирующая некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, и трансген селектируемого растением маркера (или другой ген агрономического интереса) могут присутствовать в отдельных сегментах Т-ДНК на одной и той же или другой молекуле(ах) рекомбинантной ДНК, например, для котрансформации. Вектор или конструкция для трансформации может дополнительно содержать прокариотические поддерживающие элементы, которые могут быть расположены в векторе вне области(ей) Т-ДНК.
[153]
0
nptII
aph IV
aadA
aac3
aacC4
bar
pat
DMO
aroA
EPSPS
uidA
nptII
aph IV
aadA
aac3, aacC4, bar, pat, DMO, EPSPS, aroA,
Трансген селектируемого растением маркера в векторе или конструкции для трансформации по данному изобретению может быть применен для помощи в селекции трансформированных клеток или ткани вследствие присутствия селекционного агента, такого как антибиотик или гербицид, при этом трансген селектируемого растением маркера обеспечивает толерантность или устойчивость к селективному агенту. Таким образом, селектируемый агент может оказывать влияние или способствовать выживанию, развитию, росту, пролиферации и тому подобного, трансформированных клеток, экспрессирующих трансген селектируемого растением маркера, например, для увеличения доли трансформированных клеток или тканей в растении R. Обычно применяемые гены селектируемого растением маркера включают в себя, например, гены, обеспечивающие толерантность или устойчивость к антибиотикам, таким как канамицин и паромомицин (), гигромицин B (), стрептомицин или спектиномицин () и гентамицин ( и ) или те, которые обеспечивают толерантность или устойчивость к гербицидам, таким как глюфосинат ( или ), дикамба () и глифосат ( или ). Можно также применять гены скрининга растений, которые обеспечивают возможность визуального скрининга трансформантов, такие как люцифераза или зеленый флуоресцентный белок (ЗФБ), или ген, экспрессирующий бета-глюкуронидазу или ген (GUS) , для которого известны различные хромогенные субстраты. В некоторых вариантах реализации изобретения вектор или полинуклеотид, представленный в данном документе, содержит по меньшей мере один селектируемый маркерный ген, выбранный из группы, состоящей из , , , ЗФБ и GUS. Трансформация растений может также проводиться без селекции во время одного или более этапов, или стадий культивирования, развития или регенерации трансформированных эксплантатов, тканей, растений и/или частей растения.
[154]
Согласно данным вариантам реализации изобретения способы трансформации растительной клетки, ткани или эксплантата с помощью молекулы или конструкции рекомбинантной ДНК могут дополнительно включать сайт-направленную или целевую интеграцию. В соответствии с этими способами часть молекулы донорной матрицы рекомбинантной ДНК (то есть, последовательности вставки) может быть вставлена или интегрирована в желаемом сайте или локусе в геноме растения. Последовательность вставки донорной матрицы может содержать трансген или конструкцию, такую как последовательность трансгена или транскрибируемой ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии. Донорская матрица также может иметь один или два плеча гомологии, фланкирующих последовательность вставки, чтобы способствовать целевому событию вставки посредством гомологичной рекомбинации и/или репарации, направляемой гомологией. Каждое гомологичное плечо может являться, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК в геноме однодольного или злакового растения. Таким образом, молекула рекомбинантной ДНК по данному изобретению может содержать донорную матрицу для сайт-направленной или нацеленной интеграции трансгена или конструкции, такой как последовательность трансгена или транскрибируемой ДНК, кодирующая некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии в геноме растения.
[155]
Любой сайт или локус в геноме растения могут потенциально быть выбраны для сайт-направленной интеграции последовательности трансгена, конструкции или транскрибируемой ДНК, представленной в данном документе. Для сайт-направленной интеграции сначала можно сделать двухцепочечный разрыв (ДЦР) или одноцепочечный разрыв в выбранном геномном локусе с помощью сайт-специфической нуклеазы, такой как, например, нуклеаза с цинковыми пальцами, сконструированная или нативная мегануклеаза, TALE-эндонуклеаза или РНК-направленная эндонуклеаза (например, Cas9 или Cpf1). Для сайт-направленной интеграции может быть применен любой способ, известный в данной области техники. В присутствии молекулы донорной матрицы с последовательностью вставки, ДЦР или одноцепочечный разрыв может затем быть восстановлен с помощью гомологичной рекомбинации между гомологичным плечом(ами) донорной матрицы и геномом растения или с помощью негомологичного соединения концов (НГСК), что приводит к сайт-направленной интеграции последовательности вставки в геном растения для создания события целевой вставки в сайт ДЦР или одноцепочечного разрыва. Таким образом, может быть достигнута сайт-специфическая вставка или интеграция трансгена, конструкции или последовательности.
[156]
Введение ДЦР или одноцепочечного разрыва также может быть применено для введения целевых мутаций в геном растения. В соответствии с этим подходом мутации, такие как делеции, вставки, инверсии и/или замены, могут быть введены в целевой сайт посредством несовершенного восстановления ДЦР или одноцепочечного разрыва с целью вызвать нокаут или нокдаун гена оксидазы GA. Такие мутации могут быть получены путем несовершенного восстановления целевого локуса даже без применения молекулы донорной матрицы. "Нокаут" гена оксидазы GA может быть достигнут путем индукции ДЦР или одноцепочечного разрыва в эндогенном локус гена оксидазы GA или около него, что приводит к отсутствию экспрессии белка оксидазы GA или экспрессии нефункционального белка, тогда как "нокдаун" гена оксидазы GA может быть достигнут аналогичным образом путем индукции ДЦР или одноцепочечного разрыва в эндогенном локусе гена оксидазы GA или около него, который несовершенно восстанавливается в сайте, который не влияет на кодирующую последовательность гена оксидазы GA таким образом, чтобы исключить функцию кодируемого белка оксидазы GA. Например, сайт ДЦР или одноцепочечного разрыва внутри эндогенного локуса может находиться в 3'-5' направлении или 5'-области гена оксидазы GA (например, последовательности промотора и/или энхансера), с целью влияния или уменьшения его уровеня экспрессии. Подобным образом, такие целевые нокаут или нокдаун мутации гена оксидазы GA могут создаваться с помощью молекулы донорной матрицы для направления конкретной или желаемой мутации в целевой сайт или около него, посредством репарации ДЦР или одноцепочечного разрыва. Молекула донорной матрицы может содержать гомологичную последовательность с последовательностью вставки или без нее и содержать одну или более мутаций, таких как одна или более делеций, вставок, инверсий и/или замен, относительно целевой геномной последовательности в сайте ДЦР или одноцепочечного разрыва или около него. Например, целевые нокаут мутации гена оксидазы GA могут быть достигнуты путем удаления или инвертирования по меньшей мере части гена или путем введения сдвига рамки считывания или преждевременного стоп-кода в кодирующую последовательность гена. Удаление части гена оксидазы GA также может быть осуществлено путем создания ДЦР или одноцепочечного разрыва в двух целевых сайтах, что приводит к делеции промежуточной целевой области, фланкированной целевыми сайтами.
[157]
например
Plant Biotechnol Rep
Trends Biotechnol.
Сайт-специфическая нуклеаза, представленная в данном документе, может быть выбрана из группы, состоящей из нуклеазы c цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеазы, РНК-направленной эндонуклеазы, TALE-эндонуклеазы (TALEN), рекомбиназы, транспозазы или любой их комбинации. См., , Khandagale K., и соавт., "Genome editing for targeted improvement in plants,",  10: 327-343 (2016 год); и Gaj T., и соавт., "ZFN, TALEN and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering", 31(7): 397-405(2013), содержание и описание которых включены в данный документ посредством ссылки. Рекомбиназа может представлять собой сериновую рекомбиназу, присоединенную к мотиву распознавания ДНК, тирозиновую рекомбиназу, присоединенную к мотиву распознавания ДНК или другой фермент рекомбиназы, известный в данной области техники. Рекомбиназа или транспозаза может представлять собой ДНК-транспозазу или рекомбиназу, присоединенную к ДНК-связывающему домену. Тирозиновая рекомбиназа, присоединенная к мотиву распознавания ДНК, может быть выбрана из группы, состоящей из рекомбиназы Cre, рекомбиназы Flp и рекомбиназы Tnp1. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения рекомбиназа Cre или рекомбиназа Gin,представленные вданном документе, связаны с ДНК-связывающим доменом цинкового пальца. В другом варианте реализации изобретения сериновая рекомбиназа, присоединенная к мотиву распознавания ДНК, представленному в данном документе, выбрана из группы, состоящей из интегразы PhiC31, интегразы R4 и интегразы TP-901. В другом варианте реализации изобретения транспозаза ДНК, присоединенная к ДНК-связывающему домену, предоставленному в данном документе, выбрана из группы, состоящей из TALE-piggyBac и TALE-Mutator.
[158]
Thermus thermophilus
Pyrococcus furiosus
Natronobacterium gregoryi
В соответствии с вариантами реализации данного описания РНК-направленная эндонуклеаза может быть выбрана из группы, состоящей из Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (также известных как Csn1 и Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY, их гомологов или модифицированных версий, Argonaute (неограничивающие примеры белков Argonaute, включают  Argonaute (TtAgo),  Argonaute (PfAgo),  Argonaute (NgAgo) и их гомологи или модифицированные версии. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения РНК-направленная эндонуклеаза может представлять собой фермент Cas9 или Cpf1.
[159]
В одном аспекте сайт-специфическая нуклеаза, предоставленная в данном документе, выбрана из группы, состоящей из нуклеазы с цинковыми пальцами, мегануклеазы, РНК-направленной нуклеазы, нуклеазы TALE, рекомбиназы, транспозазы или любой их комбинации. В другом аспекте сайт-специфическая нуклеаза, представленная в данном документе, выбрана из группы, состоящей из Cas9 или Cpf1. В другом аспекте сайт-специфическая нуклеаза, предоставленная в данном документе, выбрана из группы, состоящей из Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY их гомолога или их модифицированной версии. В другом аспекте предоставленная в данном документе РНК-направленная нуклеаза выбрана из группы, состоящей из Cas9 или Cpf1. В другом аспекте предоставленная в данном документе РНК-направленная нуклеаза выбрана из группы, состоящей из Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY их гомолога или их модифицированной версии. В другом аспекте способ и/или композиция, представленная в данном документе, содержит, по меньшей мере одну, по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять сайт-специфических нуклеаз. В еще одном аспекте способ и/или композиция, представленная в данном документе, содержит, по меньшей мере одну, по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять полинуклеотидов, кодирующих по меньшей мере одну, по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять сайт-специфических нуклеазы.
[160]
то есть,
например
Quant Biol.
то есть,
Для РНК-направленных эндонуклеаз дополнительно предоставлена молекула направляющей РНК (нРНК), которая направляет эндонуклеазу в целевой сайт в геноме растения посредством спаривания оснований или гибридизации, чтобы вызвать ДЦР или одноцепочечный разрыв в целевом сайте или около него. нРНК может трансформироваться или вводиться в растительную клетку или ткань (возможно, вместе с нуклеазой или кодирующей нуклеазу молекулой, конструкцией или вектором ДНК) в виде молекулы нРНК или в виде молекулы, конструкции или вектора рекомбинантной ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую направляющую РНК функционально связанную с экспрессируемым в растении промотором. Как понятно в данной области техники, "направляющая РНК" может включать в себя, например, CRISPR РНК (crРНК), одноцепочечную направляющую РНК (sgРНК) или любую другую молекулу РНК, которая может направлять или устремлять эндонуклеазу к конкретному целевому сайту в геноме. "Одноцепочечная направляющая РНК" (или "sgРНК") представляет собой молекулу РНК, содержащую crРНК, ковалентно связанную с tracrРНК линкерной последовательностью, которая может быть экспрессирована в виде одного транскрипта или молекулы РНК. Направляющая РНК содержит направляющую или нацеливающую последовательность, которая идентична или комплементарна целевому сайту в геноме растения, например, в гене оксидазы GA или около него. Мотив, прилегающий к протоспейсеру (PAM - protospacer-adjacent motif) может присутствовать в геноме, непосредственно примыкающим и расположенным выше 5'-конца последовательности геномного целевого сайта, комплементарно нацеливающей последовательности, направляющей РНК,  непосредственно в 5'-3' направлении (3') к смысловой (+) цепи геномного целевого сайта (относительно целевой последовательности направляющей РНК), как известно в данной области техники. См., , Wu, X. и соавт., ʺTarget specificity of the CRISPR-Cas9 system, ʺ2(2): 59-70 (2014 год), содержание и описание которых включено в данный документ посредством ссылки. Геномная последовательность PAM на смысловой (+) цепи, прилегающей к целевому сайту (относительно нацеливающей последовательности направляющей РНК), может содержать 5'-NGG-3'. Тем не менее, соответствующая последовательность направляющей РНК ( непосредственно в 5'-3' направлении (3') к нацеливающей последовательности направляющей РНК), как правило, может быть не комплементарной геномной последовательности PAM. Направляющая РНК обычно может представлять собой некодирующую молекулу РНК, которая не кодирует белок. Направляющая последовательность направляющей РНК может иметь длину по меньшей мере 10 нуклеотидов, например, 12-40 нуклеотидов, 12-30 нуклеотидов, 12-20 нуклеотидов, 12-35 нуклеотидов, 12-30 нуклеотидов, 15-30 нуклеотидов, 17- 30 нуклеотидов или 17-25 нуклеотидов, или около 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более нуклеотидов в длину. Направляющая последовательность может быть, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14 по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам последовательность ДНК в геномном целевом сайте.
[161]
например
например
Для редактирования генома в гене оксидазы_3 GA20 или около него с помощью РНК-направленной эндонуклеазы можно применять направляющую РНК, содержащую направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34 или последовательности, комплементарной ей (, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34 или последовательности, комплементарной ей). Для редактирования генома в гене оксидазы_5 GA20 или около него с помощью РНК-направленной эндонуклеазы можно применять направляющую РНК, содержащую направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 35 или последовательности, комплементарной ей (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 35 или последовательности, комплементарной ей). В данном документе термин "последовательный" в отношении полинуклеотидной или белковой последовательности означает отсутствие делеций или пробелов в последовательности.
[162]
например
Для мутаций нокдауна (и, возможно, нокаута) посредством редактирования генома, РНК-направленная эндонуклеаза может быть нацелена на последовательность, расположенную в 3'-5' направлении или в 5'-3' направлении, такую как последовательность промотора и/или энхансера, или интрон, последовательность 5'НТО и/или 3'НТО гена оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20, для мутации одной или более промоторных и/или регуляторных последовательностей гена и влияет на уровень его экспрессии или снижает его. Для нокдауна (и, возможно, нокаута) гена оксидазы_3 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-3096 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3666-3775 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 4098-5314 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 5585-5800 из SEQ ID NO: 34 или диапазоне нуклеотидных последовательностей 5801-8800 из SEQ ID NO: 34, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-3096, 3666-3775, 4098-5314, 5585-5800, 5801-8800, или 5585-8800 из SEQ ID NO: 34, или последовательности, комплементарной им).
[163]
например
Для нокдауна (и, возможно, нокаута) гена оксидазы_5 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-3000 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-3000 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3792-3906 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 4476-5197 из SEQ ID NO: 35 или диапазоне нуклеотидных последовательностей 5860-8859 из SEQ ID NO: 35, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-3000, 3792-3906, 4476-5197 или 5860-8859 из SEQ ID NO: 35, или последовательности, комплементарной им).
[164]
Для мутаций нокдауна (и, возможно, нокаута) посредством редактирования генома, РНК-направленная эндонуклеаза может быть нацелена на кодирующую и/или интронную последовательность гена оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20, чтобы потенциально устранить экспрессию и/или активность функционального белка оксидазы GA из гена. Однако в некоторых случаях может быть достигнут нокаут экспрессии гена оксидазы GA путем нацеливания на последовательность(и) гена в 3'-5' направлении и/или 5'НТО или на другие последовательности в геномном локусе гена или около него. Таким образом, нокаут экспрессии гена оксидазы GA может быть достигнут путем нацеливания на геномную последовательность в сайте или локусе, или около него, целевого гена оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20, в 3'-5' направлении или в 5'-3' направлении последовательности, такой как последовательность промотора и/или энхансера или последовательность интрона, 5'НТО и/или 3'НТО гена оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20, как описано выше для нокдауна гена оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20.
[165]
например
Для нокаута (и, возможно, нокдауна) гена оксидазы_3 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 3097-5584 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3097-3665 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3776-4097 из SEQ ID NO: 34, диапазоне нуклеотидных последовательностей 5315-5584 из SEQ ID NO: 34, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 3097-5584, 3097-3665, 3097-3775, 3665-4097, 3776-4097, 3776-5314, 4098-5584 или 5315-5584 из SEQ ID NO: 34, или последовательности, комплементарной им).
[166]
например
Для нокаута (и, возможно, нокдауна) гена оксидазы_5 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 3001-5473 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3001-3791 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 3907-4475 из SEQ ID NO: 35, диапазоне нуклеотидных последовательностей 5198-5473 из SEQ ID NO: 35, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 3001-5473, 3001-3791, 3001-3906, 3792-4475, 3907-4475, 3907-5197, 4476-5473 или 5198-5473 из SEQ ID NO: 35, или последовательности, комплементарной им).
[167]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения предложена направляющая РНК для нацеливания на эндогенный ген оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21 или более последовательным нуклеотидам из любого одного или более из SEQ ID NO: 138-167.
[168]
например
Для редактирования генома в гене оксидазы_4 GA20 или около него с помощью РНК-направленной эндонуклеазы можно применять направляющую РНК, содержащую направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 38 или последовательности, комплементарной ей (, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 38 или последовательности, комплементарной ей).
[169]
например
Для мутаций нокдауна (и, возможно, нокаута) посредством редактирования генома, РНК-направленная эндонуклеаза может быть нацелена на кодирующую и/или интронную последовательность гена оксидазы_4 GA20, чтобы потенциально устранить экспрессию и/или активность функционального белка оксидазы_4 GA20 из гена. Для гена оксидазы_4 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1544-2852 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 1544-1995 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 2084-2411 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 2517-2852 из SEQ ID NO: 38, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1544-2852, 1544-1995, 1544-2083, 1996-2411, 2084-2411, 2084-2516, 2412-2852 или 2517-2852 из SEQ ID NO: 38, или последовательности, комплементарной им).
[170]
например
Для мутаций нокдауна (и, возможно, нокаута) посредством редактирования генома, РНК-направленная эндонуклеаза может быть нацелена на последовательность, расположенную в 3'-5' направлении или в 5'-3' направлении, такую как последовательность промотора и/или энхансера, или интрон, последовательность 5'НТО и/или 3'НТО гена оксидазы_4 GA20, для мутации одной или более промоторных и/или регуляторных последовательностей гена и влияет на уровень его экспрессии или снижает его. Для нокдауна гена оксидазы_3 GA20 в кукурузе может быть применена направляющая РНК, содержащая направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-1416 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 1417-1543 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 1996-2083 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 2412-2516 из SEQ ID NO: 38, диапазоне нуклеотидных последовательностей 2853-3066 из SEQ ID NO: 38 или диапазоне нуклеотидных последовательностей 3067-4465 из SEQ ID NO: 38, или последовательности, комплементарной им (, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более последовательным нуклеотидам в диапазоне нуклеотидных последовательностей 1-1416, 1417-1543, 1-1543, 1996-2083, 2412-2516, 2853-3066, 3067-4465 или 2853-4465 из SEQ ID NO: 38, или последовательности, комплементарной им).
[171]
В дополнение к направляющей последовательности направляющая РНК может дополнительно содержать одну или более другую структурную или каркасную последовательность(и), которые могут связываться или взаимодействовать с РНК-направленной эндонуклеазой. Такие каркасные или структурные последовательности могут дополнительно взаимодействовать с другими молекулами РНК (например, tracrРНК). В данной области техники известны способы и методы конструирования нацеливающих конструкций и направляющих РНК для редактирования генома и сайт-направленной интеграции в целевом сайте в геноме растения с применением РНК-направленной эндонуклеазы.
[172]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения предложены конструкции и векторы рекомбинантной ДНК, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу, такую как нуклеаза с цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеаза, РНК-направленная эндонуклеаза, TALE-эндонуклеаза (TALEN) рекомбиназа или транспозаза, при этом кодирующая последовательность функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении. Для РНК-направленных эндонуклеаз, дополнительно предложены конструкции и векторы рекомбинантной ДНК, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК, при этом направляющая РНК содержит направляющую последовательность достаточной длины, имеющую процентную идентичность или комплементарность к целевому сайту в геноме растения, например, в целевом гене оксидазы GA или около него. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения полинуклеотидная последовательность конструкции и вектора рекомбинантной ДНК, которая кодирует сайт-специфическую нуклеазу или направляющую РНК, может быть функционально связана с экспрессируемым в растении промотором, таким как индуцибельный промотор, конститутивный промотор, тканеспецифический промотор и тому подобное.
[173]
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения, конструкция или вектор рекомбинантной ДНК могут содержать первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК, которые могут быть введены в клетку растения вместе с помощью методов трансформации растения. В альтернативном варианте могут быть предоставлены две конструкции или векторы рекомбинантной ДНК, включая первую конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК и вторую конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК, которые могут быть введены в клетку растения вместе или последовательно с помощью методов трансформации растений, при этом первая конструкция или вектор рекомбинантной ДНК содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу, а вторая конструкция или вектор рекомбинантной ДНК содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения конструкция или вектор рекомбинантной ДНК, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу, может быть введена с помощью методов трансформации растений в клетку растения, которая уже содержит (или трансформирована ею) конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК. В альтернативном варианте, конструкция или вектор рекомбинантной ДНК, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК, может быть введена с помощью методов трансформации растения в клетку растения, которая уже содержит (или трансформирована ею) конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу. В соответствии с еще одним дополнительным вариантом реализации изобретения первое растение, содержащее (или трансформированное) конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую сайт-специфическую нуклеазу, может быть скрещено со вторым растением, содержащим (или трансформированным) конструкцию или вектор рекомбинантной ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую направляющую РНК. Такие конструкции или векторы рекомбинантной ДНК могут быть временно трансформированы в клетку растения или стабильно трансформированы, или интегрированы в геном клетки растения.
[174]
например,
Agrobacterium-опосредованной
например,
Agrobacterium
например,
Agrobacterium
В одном аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие сайт-специфическую нуклеазу, и, необязательно, одну или более, две или более, три или более, или четыре или более нРНК предоставляются растительной клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или  трансформацией). В одном аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие нуклеазу Cas9, и, необязательно, одну или более, две или более, три или более, или четыре или более нРНК предоставляются растительной клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или -опосредованной трансформацией). В другом аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие Cpf1, и, необязательно, одну или более, две или более, три или более, или четыре или более crРНК предоставляются клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, вирусной трасфекцией, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или -опосредованной трансформацией).
[175]
Некоторые сайт-специфические нуклеазы, такие как рекомбиназы, нуклеазы с цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеазы и TALEN, не являются РНК-направленными и вместо этого полагаются на свою белковую структуру для определения своего целевого сайта для того, чтобы вызвать ДЦР или одноцепочечный разрыв, или они слиты, связаны или присоединены к ДНК-связывающему белковому домену или мотиву. Структура белка сайт-специфической нуклеазы (или слитого/присоединенного/связанного ДНК-связывающего домена) может нацеливать сайт-специфическую нуклеазу на целевой сайт. Согласно многим из этих вариантов реализации изобретения, не-РНК-направленные сайт-специфические нуклеазы, такие как рекомбиназы, нуклеазы с цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеазы и TALEN, могут быть спроектированы, сконструированы и изготовлены в соответствии с известными способами для нацеливания и связывания с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузы или злакового растения или около него, такого как ген оксидазы_3 GA20 или ген оксидазы_5 GA20 в кукурузе, с целью создания ДЦР или одноцепочечного разрыва в таком геномном локусе для нокаута или нокдауна экспрессии гена оксидазы GA путем восстановления ДЦР или одноцепочечного разрыва. Например, сконструированная сайт-специфическая нуклеаза, такая как рекомбиназа, нуклеаза с цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеаза или TALEN, может быть сконструирована для нацеливания и связывания с (i) целевым сайтом в геноме растения, соответствующим последовательности из SEQ ID NO: 34 или его комплементарной последовательности, с целью создания ДЦР или одноцепочечного разрыва в геномном локусе гена оксидазы_3 GA20, (ii) целевым сайтом в геноме растения, соответствующим последовательности из SEQ ID NO: 35 или его комплементарной последовательности, с целью создания ДЦР или одноцепочечного разрыва в геномном локусе гена оксидазы_5 GA20, или (iii) целевым сайтом в геноме растения, соответствующим последовательности из SEQ ID NO: 38 или его комплементарной последовательности, с целью создания ДЦР или одноцепочечного разрыва в геномном локусе гена оксидазы_4 GA20, что может затем привести к созданию мутации или вставке последовательности в сайт ДЦР или одноцепочечного разрыва через механизмы клеточной репарации, которые могут направляться донорной молекулой или матрицей.
[176]
данном
FRT
Saccharomyces cerevisiae
FRT
FRT
FRT
FRT
FRT
системе
В одном аспекте описанная в данном документе методика целевого редактирования генома может включать применение рекомбиназы. В некоторых вариантах реализации изобретения тирозиновая рекомбиназа, присоединенная, и тому подобное, к мотиву или домену распознавания ДНК, может быть выбрана из группы, состоящей из рекомбиназы Cre, рекомбиназы Flp и рекомбиназы Tnp1. В одном аспекте Cre-рекомбиназа или Gin-рекомбиназа,представленные в документе, могут быть связаны с ДНК-связывающим доменом с цинковыми пальцами. Система сайт-направленной рекомбинации Flp- может происходить из 2-микронной плазмиды пекарских дрожжей . В этой системе рекомбиназа Flp (флиппаза) может рекомбинировать последовательности между целевыми сайтами распознавания флиппазой (- flippase recognition target). -сайты содержат 34 нуклеотида. Flp может связываться с "плечами" сайтов (одно плечо находится в обратной ориентации) и расщепляет сайт с любого конца промежуточной последовательности нуклеиновой кислоты. После расщепления Flp может рекомбинировать последовательности нуклеиновых кислот между двумя сайтами . Cre-lox представляет собой систему сайт-направленной рекомбинации, полученную из бактериофага P1, которая аналогична рекомбинации Flp-FRT. Cre-lox можно применять для инвертирования последовательности нуклеиновой кислоты, удаления последовательности нуклеиновой кислоты или транслокации последовательности нуклеиновой кислоты. В этой системе рекомбиназа Cre может рекомбинировать пару последовательностей нуклеиновой кислоты lox. Lox-сайты содержат 34 нуклеотида, причем первый и последний 13 нуклеотиды (плечи) являются палиндромными. Во время рекомбинации белок Cre рекомбиназы связывается с двумя сайтами lox на разных нуклеиновых кислотах и расщепляется в сайтах lox. Расщепленные нуклеиновые кислоты сплайсируются вместе (реципрокно транслоцируются) и рекомбинация завершается. В другом аспекте предоставленный в данном документе сайт lox представляет собой сайт loxP, lox 2272, loxN, lox 511, lox 5171, lox71, lox66, M2, M3, M7 или M11.
[177]
например
FokI
например
например
например,
например
FokI
ZFN представляют собой синтетические белки, состоящие из сконструированного ДНК-связывающего домена цинкового пальца, слитого с доменом расщепления (или полудоменом расщепления), который может быть получен из эндонуклеазы рестрикции (, ). ДНК-связывающий домен может быть каноническим (C2H2) или неканоническим (, C3H или C4). ДНК-связывающий домен может содержать один или более цинковых пальцев (, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более цинковых пальцев) в зависимости от целевого сайта. Несколько цинковых пальцев в ДНК-связывающем домене могут быть разделены линкерной последовательностью(ями). ZFN могут быть сконструированы для расщепления практически любого участка двухцепочечной ДНК путем модификации ДНК-связывающего домена цинкового пальца. ZFN образуют димеры из мономеров, состоящих из неспецифического домена расщепления ДНК (полученного из нуклеазы FokI), слитого с ДНК-связывающим доменом, содержащим набор цинковых пальцев, сконструированных для связывания последовательности ДНК целевого сайта. ДНК-связывающий домен ZFN обычно может состоять из 3-4 (или более) цинковых пальцев. Аминокислоты в положениях -1, +2, +3 и +6 относительно начала α-спирали цинкового пальца, которые способствуют сайт-специфическому связыванию с целевым сайтом, могут быть изменены и настроены для соответствия конкретной целевой последовательности. Другие аминокислоты могут образовывать основный консенсусный каркас для генерации ZFN с различной специфичностью последовательности. Способы и правила конструирования ZFN для нацеливания и связывания с конкретными целевыми последовательностями известны в данной области техники. См., , заявки на патент США № 2005/0064474, 2009/0117617 и 2012/0142062, содержание и описание которых включены в данный документ посредством ссылки. Для нуклеазного домена может потребоваться димеризация для расщепления ДНК, и поэтому необходимы два ZFN с их С-концевыми областями для связывания противоположных цепей ДНК сайта расщепления (разделенных 5-7 п.о.). Мономер ZFN может разрезать целевой сайт, если два ZF-связывающих сайта являются палиндромными. Применяемый в данном документе ZFN является широким и включает мономерный ZFN, который может расщеплять двухцепочечную ДНК без помощи другого ZFN. Термин ZFN может также применяться для обозначения одного или обоих членов пары ZFN, которые сконструированы для совместной работы по расщеплению ДНК в одном и том же сайте.
[178]
например,
Agrobacterium
Не ограничиваясь какой-либо научной теорией, поскольку специфичность ДНК-связывающих доменов цинкового пальца может быть изменена с применением одного из различных способов, теоретически могут быть созданы индивидуальные ZFN для нацеливания практически на любую целевую последовательность (например, на ген оксидазы GA или около него в геноме растения). Общедоступные способы конструирования доменов с цинковыми пальцами включают в себя Context-dependent Assembly (CoDA), Oligomerized Pool Engineering (OPEN) или Modular Assembly. В одном аспекте способ и/или композиция, предоставленные в данном документе, включают одну или более, две или более, три или более, четыре или более, или пять или более ZFN. В другом аспекте ZFN, предоставленный в данном документе, способен генерировать целевой ДЦР или одноцепочечный разрыв. В одном аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие один или более, два или более, три или более, или четыре или более, или пять или более ZFN предоставляются клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, вирусной трасфекцией, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или -опосредованной трансформацией). ZFN могут быть введены в виде белков ZFN, в виде полинуклеотидов, кодирующих белки ZFN, и/или в виде комбинаций белков и полинуклеотидов, кодирующих белок.
[179]
I-CreI
I-CeuI
I-MsoI
I-SceI
I-AniI
I-DmoI
например,
Agrobacterium
Мегануклеазы, которые обычно идентифицируются у микробов, такие как семейство хоуминг-эндонуклеаз LAGLIDADG, являются уникальными ферментами с высокой активностью и длинными последовательностями распознавания (>14 п.о.), что приводит к сайт-специфическому расщеплению целевой ДНК. Сконструированные версии встречающихся в природе мегануклеаз обычно имеют удлиненные последовательности распознавания ДНК (например, от 14 до 40 п.о.). Согласно некоторым вариантам реализации изобретения, мегануклеаза может содержать каркасный или основной фермент, выбранный из группы, состоящей из , , , ,  и . Конструирование мегануклеаз может быть более сложным, чем ZFN и TALEN, потому что функции распознавания и расщепления ДНК мегануклеазами тесно связаны в одном домене. Специализированные способы мутагенеза и скрининга высокой производительности были применены для создания новых вариантов мегануклеазы, которые распознают уникальные последовательности и обладают улучшенной нуклеазной активностью. Таким образом, мегануклеаза может быть выбрана или сконструирована для связывания с геномной целевой последовательностью в растении, например, в геномном локусе гена оксидазы GA или около него. В одном аспекте способ и/или композиция, предоставленные в данном документе, включают одну или более, две или более, три или более, четыре или более, или пять или более мегануклеаз. В другом аспекте мегануклеаза, предоставленная в данном документе, способна генерировать целевой ДЦР. В одном аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие одну или более, две или более, три или более, или четыре или более, или пять или более мегануклеаз предоставляются клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, вирусной трасфекцией, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или -опосредованной трансформацией).
[180]
FokI
мономеры
FokI
FokI
FokI
FokI
TALEN представляют собой искусственные ферменты рестрикции, полученные путем слияния ДНК-связывающего домена эффектора, подобного активаторам транскрипции (TALE) с нуклеазным доменом (например, ). Когда каждый член пары TALEN связывается с сайтами ДНК, фланкирующими целевой сайт, FokI димеризуются и вызывают разрыв двухцепочечной ДНК в целевом сайте. Помимо домена расщепления дикого типа, варианты домена расщепления с мутациями были разработаны для улучшения специфичности расщепления и активности расщепления. Домен  функционирует как димер, требуя двух конструкций с уникальными ДНК-связывающими доменами для сайтов в целевом геноме с правильной ориентацией и расстоянием. Как количество аминокислотных остатков между ДНК-связывающим доменом TALEN и доменом расщепления ,так и количество оснований между двумя отдельными сайтами связывания TALEN являются параметрами для достижения высоких уровней активности.
[181]
PvuII
MutH
TevI
FokI, AlwI, MlyI, SbfI, SdaI, StsI, CleDORF, Clo051
Pept071
FokI
TALEN представляют собой искусственные ферменты рестрикции, полученные путем слияния ДНК-связывающего домена эффектора, подобного активаторам транскрипции (TALE), с нуклеазным доменом. В некоторых аспектах нуклеаза выбрана из группы, состоящей из , , , и . Когда каждый член пары TALEN связывается с сайтами ДНК, фланкирующими целевой сайт, мономеры  димеризуются и вызывают разрыв двухцепочечной ДНК в целевом сайте. Термин TALEN, применяемый в данном документе, является широким по значению и включает мономерный TALEN, который может расщеплять двухцепочечную ДНК без помощи другого TALEN. Термин TALEN также относится к одному или обоим членам пары TALEN, которые работают вместе для расщепления ДНК в одном и том же сайте.
[182]
Эффекторы, подобные активаторам транскрипции (TALE - transcription activator-like effector), могут быть сконструированы так, чтобы связывать практически любую последовательность ДНК, например, в геномном локусе гена оксидазы GA в растении или около него. TALE имеет центральный ДНК-связывающий домен, состоящий из 13-28 повторных мономеров 33-34 аминокислот. Аминокислоты каждого мономера высококонсервативны, за исключением гипервариабельных аминокислотных остатков в положениях 12 и 13. Две вариабельные аминокислоты называются повторяющимися вариабельными диостатками (RVD - repeat-variable diresidue). Аминокислотные пары NI, NG, HD и NN RVD предпочтительно распознают аденин, тимин, цитозин и гуанин/аденин соответственно, а модуляция RVD может распознавать последовательные основания ДНК. Эта простая связь между аминокислотной последовательностью и распознаванием ДНК позволила создать специфические ДНК-связывающие домены путем выбора комбинации повторяющихся сегментов, содержащих соответствующие RVD.
[183]
FokI
FokI
FokI
FokI
PvuII, MutH
TevI
FokI
FokI
PvuII
см.,
и соавт
PLoS One
MutH
см.,
и соавт
Nucleic Acids Research
TevI
см.,
и соавт
Nature Communications
Помимо домена расщепления дикого типа, варианты домена расщепления с мутациями были разработаны для улучшения специфичности расщепления и активности расщепления. Домен  функционирует как димер, требуя двух конструкций с уникальными ДНК-связывающими доменами для сайтов в целевом геноме с правильной ориентацией и расстоянием. Как количество аминокислотных остатков между ДНК-связывающим доменом TALEN и доменом расщепления так и количество оснований между двумя отдельными сайтами связывания TALEN являются параметрами для достижения высоких уровней активности. Домены расщепления и cleavage являются полезными альтернативами вариантам и для применения с TALE. функционирует как высокоспецифичный домен расщепления, когда соединен с TALE ( Yank ., 2013 год. . 8: e82539).  способен вводить специфические для цепи одноцепочечные разрывы в ДНК ( Gabsalilow ., 2013 год. . 41: e83).  вводит двухцепочечные разрывы в ДНК в целевых сайтах (Beurdeley ., 2013 год. . 4: 1762).
[184]
См
и соавт., Nucleic Acids Research
и соавт
Nucleic Acids Research
.
например,
Agrobacterium
например
Взаимосвязь между аминокислотной последовательностью и распознаванием ДНК связывающего домена TALE позволяет конструировать белки. Программные обеспечения, такие как DNA Works, могут применяться для разработки конструкций TALE. Другие способы конструирования конструкций TALE известны специалистам в данной области техники. ., Doyle (2012 год)40: W117-122.; Cermak ., (2011 год)39:e82; и tale-nt.cac.cornell.edu/about. В одном аспекте способ и/или композиция, предоставленные в данном документе, включают один или более, два или более, три или более, четыре или более, или пять или более TALEN. В другом аспекте TALEN, предоставленный в данном документе, способен генерировать целевой ДЦР. В одном аспекте векторы, содержащие полинуклеотиды, кодирующие один или более, два или более, три или более, или четыре или более, или пять или более TALEN предоставляются клетке с помощью способов трансформации, известных в данной области техники (без ограничений, вирусной трасфекцией, бомбардировкой частицами, ПЭГ-опосредованной трансфекцией протопласта или -опосредованной трансформацией). См., , заявки на патент США № 2011/0145940, 2011/0301073 и 2013/0117869, содержание и описание которых включены в данный документ посредством ссылки.
[185]
то есть
В данном документе термин "целевой метод редактирования генома" относится к любому способу, протоколу или методу, которые позволяют осуществлять точное и/или целевое редактирование определенного местоположения в геноме растения (, редактирование в значительной степени или полностью не случайным образом) с применением сайт-специфической нуклеазы, такой как мегануклеаза, нуклеаза с цинковыми пальцами (ZFN), РНК-направленная эндонуклеаза (например, система CRISPR/Cas9), эндонуклеаза TALE (TALEN), рекомбиназа или транспозаза. В данном документе термин "редактирование" или "редактирование генома" относится к созданию целевой мутации, делеции, инверсии или замены по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 75, по меньшей мере 100, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500, по меньшей мере 5000, по меньшей мере 10000 или по меньшей мере 25000 нуклеотидов последовательности нуклеиновой кислоты эндогенного генома растения. В данном документе термин "редактирование" или "редактирование генома" также охватывает целевую вставку или сайт-направленную интеграцию по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 75, по меньшей мере 100, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 750, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 1500, по меньшей мере 2000, по меньшей мере 2500, по меньшей мере 3000, по меньшей мере 4000, по меньшей мере 5000, по меньшей мере 10000 или по меньшей мере 25 000 нуклеотидов в эндогенном геноме растения. "Редактирование" или "геномное редактирование" в единственном числе относится к одной такой целевой мутации, делеции, инверсии, замене или вставке, тогда как "редактирования" или "геномные редактирования" относится к двум или более целевой мутации(ям), делеции(ям), инверсии(ям), замене(ам) и/или вставке(ам), причем каждое "редактирование" вводится с помощью целевого метода редактирования генома.
[186]
например
Учитывая, что супрессия генов оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 в кукурузе приводит к образованию растений с меньшей высотой и длиной междоузлия в дополнение к другим полезным признакам, предполагается, что экспрессия одного или обоих этих генов может быть уменьшена или устранены путем геномного редактирования одного или более этого гена(ов) с целью обеспечения сходных полезных признаков для растений кукурузы. Дополнительно, учитывая, что конститутивная экспрессия конструкций супрессии, нацеленных на эти гены оксидазы GA20, продуцирует растения кукурузы, обладающие полезными признаками низкого роста без отклонений в початке, и что экспрессия непосредственно в репродуктивных тканях початка также не приводит к появлению репродуктивных отклонений, предполагается, что один или оба из этих генных локусов могут быть отредактированы с целью нокдауна или нокаута их экспрессии для получения сходных эффектов у растений кукурузы. Подходы редактирования целевых генов могут быть применены для модификации последовательности промотора и/или регуляторной области(ей) одного или более генов оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 с целью нокдауна или нокаута экспрессии этого гена(ов), например, посредством целевых делеций, вставок, мутаций или других изменений последовательности. Действительно, промотор и/или регуляторная область(и) или последовательность(и), или 5'-НТО, 3'-НТО, и/или интронная последовательность(и) одного или более генов оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 могут быть в значительной степени удалены или мутированы. В альтернативном варианте, все или часть кодирующей (экзон), 5'-НТО, 3'-НТО и/или интронной последовательности(ей) одного или более генов оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 могут быть редактированы, удалены, мутированы или иным образом модифицированы для нокдауна или нокаута экспрессии, или активности этого гена(ов). Такие целевые модификации в локусах генов оксидазы_3 GA20 оксидазы_4 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 могут быть достигнуты с применением любой подходящей технологии редактирования генома, известной в данной области техники, например, путем восстановления двухцепочечного разрыва (ДЦР) или одноцепочечного разрыва, введенного сайт-специфической нуклеазой, такой как, например, нуклеаза с цинковыми пальцами, сконструированная или нативная мегануклеаза, TALE-эндонуклеаза или РНК-направленная эндонуклеаза (, Cas9 или Cpf1). Такое восстановление ДЦР или одноцепочечного разрыва может привести к спонтанным или стохастическим делециям, добавлениям, мутациям и тому подобному, в целевом сайте, где был введен ДЦР или одноцепочечный разрыва, или репарация сайта может включать в себя применение молекулы донорной матрицы с целью направить или вызвать предпочтительную или специфическую делецию, добавление, мутацию и тому подобное, в целевом сайте.
[187]
Как указано в данном документе, растение, трансформированное молекулой рекомбинантной ДНК или вектором для трансформации, содержащими трансген, кодирующий транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, может включать в себя различные однодольные растения или злаковые растения, такие как кукуруза и другие однодольные или злаковые растения, которые имеют отдельные мужские и женские цветки (аналогично кукурузе) и, таким образом, могут быть восприимчивы к отклонениям в женских репродуктивных органах, структурах или тканях с мутациями в пути GA.
[188]
Данные композиции и способы могут быть дополнительно применимы к другим злаковым растениям, которые выиграли бы от уменьшенной высоты растения и/или повышенной устойчивости к полеганию. Такие растения могут быть трансформированы молекулами или конструкциями рекомбинантной ДНК для супрессии одного или более эндогенных генов оксидазы GA20 и/или GA3 в растении в соответствии со способами и подходами, представленными в данном документе, с целью получения злакового растения, которое может быть короче и/или устойчивым к полеганию. Действительно, злаковое растение, эктопически экспрессирующее транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA для супрессии, может иметь множество полезных признаков, таких как более низкий рост или высоту растения, более короткую длину междоузлия, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, в дополнение к другим улучшенным признакам, связанным с урожайностью и/или устойчивостью к засухе, как предусмотрено в данном документе, относительно растения дикого типа или контрольного растения, не имеющего последовательности трансгена или транскрибируемой ДНК. Как описано дополнительно ниже, растения злаковых культур, которые уже были модифицированы с целью увеличения урожайности и устойчивости к полеганию посредством мутаций в пути GA, такие как пшеница, рис, просо, ячмень и сорго, могут вместо этого трансформироваться молекулой или конструкцией рекомбинантной ДНК как предусмотрено в данном документе. В отличие от многих мутаций пути GA в этих культурах, которые могут быть рецессивными, трансгенные конструкции, экспрессирующие элемент супрессии, нацеленный на эндогенный биосинтетический ген оксидазы GA в этих культурах, могут быть доминантными, даже если они гемизиготны или присутствуют в растении в виде единственной копии. Таким образом, растения, которые могут быть трансформированы молекулой рекомбинантной ДНК или конструкцией, экспрессирующей конструкцию супрессии, могут потенциально включать различные однодольные или злаковые культуры. Наличие доминантного трансгенного локуса, вызывающего полукарликовый, устойчивый к полеганию фенотип может быть преимущественным и предпочтительным по сравнению с рецессивным мутантным аллелем для того же фенотипа из-за преимуществ в селекции и интеграции признаков.
[189]
Sorghum bicolor
Oryza sativa
Setaria italica
Triticum aestivum
Hordeum vulgare
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения дополнительно предлагается, чтобы гены оксидазы GA в других растениях злаковых имеющие наибольшую идентичность/сходство последовательностей с генами оксидазы_3 GA20, оксидазы_4 GA20, оксидазы_5 GA20, оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 в кукурузе, которые как показано данном документе, вызывают фенотип короткого роста, полукарликовость и другие полезные признаки при супрессированы с помощью конструкции рекомбинантной ДНК для супрессии, также могут быть целями для супрессии с целью получения трансгенных растений злаков, имеющих сходные фенотипы полукарликовости и/или устойчивости к полеганию. В Таблице 3 представлен список генов оксидазы GA из других злаковых растений (сорго - ; рис - ; просо итальянское - ; пшеница - ; и ячмень - ), имеющих высокую степень идентичности последовательности с одним из генов оксидазы GA в кукурузе, который при супрессии приводит к низкорослому, полукарликовому фенотипу.
Таблица 3. Гомологи генов оксидазы GA кукурузы из других растений злаковых культур.
<b>Название гена</b>
<b>Вид злаковой культуры</b>
<b>Гомолог в кукурузе</b>
<b>кДНК</b><b>(SEQ ID NO)</b>
<b>КДП</b><b>(SEQ ID NO)</b>
<b>Белок</b><b>(SEQ ID NO)</b>
<b>Геномный</b><b>(SEQ ID NO)</b>
GA20оксидаза 2
<i>Sorghum bicolor</i>
GA20 Ox_3/GA20 Ox_5
84
85
86
87
GA20оксидаза 2-подобная
<i>Setaria</i><i>italica</i>
GA20 Ox_3/GA20 Ox_5
88
89
90
91
GA20оксидаза 2
<i>Oryza</i><i>sativa</i>
GA20 Ox_3/GA20 Ox_5
92
93
94
95
GA20оксидаза-D2
<i>Triticum aestivum</i>
GA20 Ox_3/GA20 Ox_5
<b>---</b>
96
97
98
диоксигеназа Fe2OG
<i>Hordeum vulgare</i>
GA20 Ox_3/GA20 Ox_5
99
100
101
<b>---</b>
Вероятно, 2-ODD
<i>Sorghum bicolor</i>
GA20 Ox_4
102
103
104
105
флавонолсинтаза/флаванон 3-гидроксилазоподобная
<i>Setaria</i><i>italica</i>
GA20 Ox_4
106
107
108
109
нарингенин, 2-оксоглутарат 3-диоксигеназа
<i>Oryza</i><i>sativa</i>
GA20 Ox_4
110
111
112
113
диоксигеназа Fe2OG
<i>Triticum aestivum</i>
GA20 Ox_4
114
115
116
117
диоксигеназа Fe2OG
<i>Hordeum vulgare</i>
GA20 Ox_4
<b>---</b>
<b>---</b>
118
<b>---</b>
GA3-бета-диоксигеназа 2-2
<i>Sorghum bicolor</i>
GA3 Ox_1/GA3 Ox_2
119
120
121
122
GA3-бета-диоксигеназа 2-2-подобная
<i>Setaria</i><i>italica</i>
GA3 Ox_1/GA3 Ox_2
123
124
125
126
GA3-бета-диоксигеназа 2-3
<i>Oryza</i><i>sativa</i>
GA3 Ox_1/GA3 Ox_2
127
128
129
130
GA3-бета-гидроксилаза
<i>Hordeum vulgare</i>
GA3 Ox_1/GA3 Ox_2
131
132
133
<b>---</b>
GA3ox-D2 белок
<i>Triticum aestivum</i>
GA3 Ox_1/GA3 Ox_2
134
135
136
137
[190]
В соответствии с другим аспектом данного изобретения, молекула, вектор или конструкция рекомбинантной ДНК предоставлена для супрессии эндогенного гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) в злаковом растении, причем молекула, вектор или конструкция рекомбинантной ДНК, содержат транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является (i) по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам любого одного или более из SEQ ID NO: 84, 85, 87, 88, 89, 91, 92, 93, 95, 96, 98, 99, 100, 102, 103, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 113, 114, 115, 119, 120, 122, 123, 124, 126, 127, 128, 130, 131, 132, 134, 135 и/или 137, и/или (ii) по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей белок в злаковом растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным любому одной или более из SEQ ID NO: 86, 90, 94, 97, 101, 104, 108, 112, 116, 118, 121, 125, 129, 133 и/или 136. Аналогично, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на эндогенный ген оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) в злаковом растении, имеющий процентную идентичность с геном(ами) оксидазы GA, который, как показано, влияет на высоту растения кукурузы. Таким образом, дополнительно предоставляется некодирующая молекула РНК, содержащая последовательность, которая является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок в злаковом растении, который является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным любому одной или более из SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 и/или 33. Как упомянуто выше, некодирующая молекула РНК может нацеливаться на последовательность экзона, интрона и/или НТО гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA).
[191]
Sorghum bicolor
Кроме того, предоставлены способы введения или трансформации в растение зерна, часть растения или клетку растения любой из вышеупомянутых конструкций, векторов или конструкций в соответствии с любым из способов, описанных в данном документе, которые могут быть сконструированы любым подходящим способом, описанным в данном документе, включая различные укладки или совместные нацеливающие расположения, а также модифицированные злаковые растения, части растений, ткани растений и клетки растений, полученные таким образом и/или содержащие любую такую молекулу, вектор или конструкцию рекомбинантной ДНК. Поскольку некодирующая молекула РНК, экспрессируемая из вышеуказанных конструкций, будет сконструирована для нацеливания на эндогенный ген оксидазы GA, растение зерна, трансформированное такими молекулами, векторами или конструкциями рекомбинантной ДНК, должно предпочтительно соответствовать виду происхождения для целевой последовательности или близкородственным видам, штаммам, зародышевым плазмам, линиям и тому подобному. Например, конструкция супрессии, комплементарная SEQ ID NO: 84, должна применяться для трансформации растения сорго, такого как растение  или, возможно, родственных видов сорго, штаммов и тому подобного, которые, как ожидается, будут иметь близкородственную или сходную последовательность гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA).
[192]
Геномные последовательности для каждого из указанных выше генов из растений злаков дополнительно представлены в Таблице 3, и могут быть применены для нацеливания этих генов для редактирования генома в соответствии с любым известным методом. Любая сайт-специфическая нуклеаза и способ могут быть применены, как описано в данном документе, для создания ДЦР или одноцепочечного разрыва для гена в геномном локусе или около него, который может быть репарирован неидеально или посредством опосредованной матрицей рекомбинации с целью создания мутаций и тому подобного, в гене или около него. Подходящие нуклеазы могут быть выбраны из группы, состоящей из нуклеазы c цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеазы, РНК-направленной эндонуклеазы, TALE-эндонуклеазы (TALEN), рекомбиназы, транспозазы или любой их комбинации. Для РНК-направленной эндонуклеазы может быть применена конструкция или вектор рекомбинантной ДНК, содержащие направляющую РНК, для направления нуклеазы в целевой сайт. Соответственно, направляющая РНК для редактирования гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) в злаковой культуре может содержать направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25 или более последовательным нуклеотидам любого одного или более из SEQ ID NO: 84, 85, 87, 88, 89, 91, 92, 93, 95, 96, 98, 99, 100, 102, 103, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 113, 114, 115, 119, 120, 122, 123, 124, 126, 127, 128, 130, 131, 132, 134, 135 и/или 137. Для сайт-специфических нуклеаз, которые не являются РНК-направленными, таких как нуклеаза с цинковыми пальцами (ZFN), мегануклеаза, TALE-эндонуклеаза (TALEN), рекомбиназа и/или транспозаза, специфичность геномной цели для редактирования определяется структурой белка, в частности, его ДНК-связывающим доменом. Такие сайт-специфические нуклеазы могут быть выбраны, разработаны или сконструированы так, чтобы связывать и разрезать желаемый целевой сайт в любом из вышеуказанных генов оксидазы (или оксидаза-подобного GA) в геноме злакового растения. Подобно трансформации с помощью конструкции супрессии, злаковое растение, трансформированное определенной направляющей РНК или молекулой, вектором или конструкцией рекомбинантной ДНК, кодирующими направляющую РНК, предпочтительно должно быть видом, в котором существует целевая геномная последовательность или близкородственным видом, штаммом, зародышевой плазмой, линией и тому подобным, так что направляющая РНК способна распознавать и связываться с нужным целевым сайтом разрезания.
[193]
Дополнительно предоставлены способы введения или трансформации в злаковом растении, части растения или клетке растения любой направляющей РНК, описанной выше, или любой конструкции, вектора или конструкции, кодирующей такую направляющую РНК, возможно, в дополнение к РНК-направленной нуклеазе, согласно любому из описанных в данном документе способов, а также модифицированным растениям злаков, частям растений, тканям растений и клеткам растений, полученным таким образом и/или содержащим любую такую молекулу, вектор или конструкцию рекомбинантной ДНК и/или отредактированный ген оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA). Модифицированные растения злаков, имеющие отредактированный ген оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) и/или элемент супрессии, нацеленный на ген оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA), могут иметь один или более полезных признаков, представленных в данном документе, таких как более низкая высота растения, более короткая длина междоузлия, увеличенный диаметр стебля, улучшенная устойчивость к полеганию и/или устойчивость к засухе по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не имеющим какого-либо такого элемента редактирования или супрессии. В дополнение к редактированию генома мутации в гене оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) могут быть введены с помощью других методов мутагенеза, как описано в данном документе.
[194]
0
1
В соответствии с другим аспектом данного изобретения предоставляется трансгенное растение(я), растительная клетка(и), семя(ена) и часть(и) растения, содержащее событие трансформации или вставку в геном, по меньшей мере, одной его растительной клетки, при этом событие трансформации или вставка содержит последовательность, конструкцию или экспрессионную кассету рекомбинантной ДНК, содержащую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA с целью супрессии, при этом последовательность транскрибируемой ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, таким как конститутивный, сосудистый и/или листовой промотор. Такое трансгенное растение может быть получено любым подходящим способом трансформации, как указано выше, для получения трансгенного растения R, которое затем может быть самоопылено или скрещено с другими растениями, чтобы производить семена R и последующие поколения потомства и семян посредством дополнительных скрещиваний и тому подобного. Варианты реализации данного описания дополнительно включают в себя растительную клетку, ткань, эксплантат, часть растения и тому подобное, содержащую одну или более трансгенных клеток, имеющих событие трансформации или геномную вставку рекомбинантной ДНК или полинуклеотидной последовательности, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген оксидазы GA с целью супрессии.
[195]
Трансгенные растения, клетки растений, семена и части растений по данному изобретению могут быть гомозиготными или гемизиготными для трансгенного события или вставки транскрибируемой последовательности ДНК с целью супрессии гена оксидазы GA в геноме, по меньшей мере, одной его растительной клетки, или событие целевого редактирования генома, таким образом растения, клетки растения, семена и части растения в соответствии с данными вариантами реализации изобретения могут содержать любое количество копий такого трансгенного события(ий), вставки(ок) и/или редактирования(ий). Дозу или количество экспрессии трансгенной или транскрибируемой последовательности ДНК можно изменять по ее зиготности и/или количеству копий, что может влиять на уровень или степень фенотипических изменений в трансгенном растении и тому подобное. Как указано выше, трансгенные растения, представленные в данном документе, могут включать в себя различные однодольные или злаковые растения и даже сельскохозяйственные растения, такие как пшеница, рис и сорго, уже имеющие повышенный урожай и/или устойчивость к полеганию вследствие предшествующих селекционных усилий и мутаций пути GA в этих растениях. Преимущества применения трансгенной или транскрибируемой последовательности ДНК для экспрессии элемента супрессии, нацеленного на ген биосинтетической оксидазы GA, включают не только способность ограничивать экспрессию тканеспецифическим или тканепредпочтительным образом, но также и потенциальное доминирование (например, доминантно-негативные эффекты) одиночной или гемизиготной копии транскрибируемой последовательности ДНК, что приводит к полезным признакам или фенотипам низкорослости, полукарликовости у сельскохозяйственных растений. Таким образом, молекулы или конструкции рекомбинантной ДНК по данному изобретению могут быть применены для создания полезных признаков у множества однодольных или злаковых растений без отклонений с применением только одной копии трансгенного события, вставки или конструкции. В отличие от ранее описанных мутаций или аллелей в пути GA, которые являются рецессивными и требуют, чтобы растения были гомозиготными по мутантному аллелю, растения, трансформированные GA-модифицирующими трансгенами и супрессирующими конструкциями по данному изобретению, могут улучшать признаки, урожайность и усилия по селекции, облегчая производство гибридных злаковых растений, поскольку им требуется только одиночная или гемизиготная копия трансгенной или супрессирующей конструкции.
[196]
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное или модифицированное злаковое или кукурузное растение, содержащее трансген гена оксидазы GA или последовательность транскрибируемой ДНК для супрессии эндогенного гена оксидазы GA или геномно редактированного гена оксидазы GA, может быть дополнительно охарактеризовано как имеющее один или более полезных признаков, таких как более низкий рост или высота полукарликового растения, уменьшенная длина междоузлия, увеличенный диаметр стебля, улучшенная устойчивость к полеганию, уменьшенный излом стебля, более глубокие корни, увеличенная площадь листьев, более ранняя сомкнутость полога, повышенное содержание воды в листьях и/или более высокая устьичная проводимость в условиях ограничения воды, снижение содержания и/или площади антоцианов в листьях в нормальных или стрессовых условиях, ограничивающих азот или воду, улучшенные признаки, связанные с урожайностью, включая более крупный женский репродуктивный орган или початок, увеличение массы початка, индекса сбора урожая, урожайности, увеличение количества зерна и/или увеличение массы зерна, по отношению к растению дикого типа или контрольному растению. Такое трансгенное злаковое или кукурузное растение может дополнительно иметь повышенную устойчивость к стрессу, такую как повышенная устойчивость к засухе, повышенное использование азота и/или устойчивость к посадке с высокой плотностью.
[197]
0
0
Для целей данного описания термин "растение" включает в себя эксплантат, часть растения, рассаду, проросток или целое растение на любой стадии регенерации или развития. В данном документе термин "трансгенное растение" относится к растению, геном которого был изменен в результате интеграции или вставки молекулы, конструкции или последовательности рекомбинантной ДНК. Трансгенное растение включает в себя растение R развитое или регенерированное из первоначально трансформированной растительной клетки(ок), а также потомство трансгенных растений в более поздних поколениях или скрещивание с трансгенным растением R. В данном документе термин "часть растения" может относиться к любому органу или неизмененной ткани растения, таким как меристема, орган/структура побега (например, лист, стебель или узел), корень, цветок или цветковый орган/структура (например, верховой лист, чашелистник, лепесток, тычинка, плодолистик, пыльник и семезачаток), семена (например, эмбрион, эндосперм и оболочка семени), плод (например, зрелая завязь), росток или другие ткани растения (например, сосудистая ткань, эпидермис, основная паренхима и тому подобное) или любой их части. Части растений по данному изобретению могут быть жизнеспособными, нежизнеспособными, регенерируемыми и/или нерегенерируемыми. "Ростком" может быть любая часть растения, которая может прорасти в целое растение.
[198]
0
0
Согласно данным вариантам реализации изобретения растительная клетка, трансформированная конструкцией или молекулой, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК с целью супрессии эндогенного гена оксидазы GA, или конструкцией, применяемой для редактирования генома, может включать в себя любую растительную клетку, которая является компетентной для трансформации, как понятно в данной области техники, основанной на способе трансформации, такой как меристемная клетка, эмбриональная клетка, каллусная клетка и тому подобное. В данном документе "трансгенная растительная клетка" просто относится к любой растительной клетке, которая трансформирована стабильно интегрированной молекулой, конструкцией или последовательностью рекомбинантной ДНК. Трансгенная растительная клетка может включать в себя первоначально трансформированную растительную клетку, трансгенную растительную клетку регенерированного или развитого растения R, трансгенную растительную клетку, культивируемую из другой трансгенной растительной клетки, или трансгенную растительную клетку из любого потомственного растения или потомка трансформированного растения R, включая клетку(и) семени растения или эмбриона, или культивируемую растительную клетку, клетку каллуса и тому подобное.
[199]
Варианты реализации данного описания дополнительно включают в себя способы создания или получения трансгенных или модифицированных растений, такие как трансформация, редактирование генома, скрещивание и тому подобное, при этом способ включает в себя введение молекулы, конструкции или последовательности рекомбинантной ДНК, содержащей трансген оксидазы GA или транскрибируемую последовательность ДНК для супрессии эндогенного гена оксидазы GA в клетке растения или редактирования геномного локуса эндогенного гена оксидазы GA, а затем регенерацию или развитие трансгенного или модифицированного растения из трансформированной или редактированной растительной клетки, что может быть выполнено под давлением отбора в пользу трансгенного события. Такие способы могут включать в себя трансформацию клетки растения молекулой, конструкцией или последовательностью рекомбинантной ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК для супрессии эндогенного гена оксидазы GA и отбор растения, имеющего один или более измененных фенотипов или признаков, таких как один или более из следующих признаков на одной или более стадиях развития: более низкий рост или высота полукарликового растения, уменьшенная длина междоузлия в одном или более междоузлии(ях), увеличенный диаметр стебля, улучшенная устойчивость к полеганию, уменьшенный излом стебля, более глубокие корни, увеличенная площадь листьев, более ранняя сомкнутость полога, повышенное содержание воды в листьях и/или более высокая устьичная проводимость в условиях ограничения воды, снижение содержания и/или площади антоцианов в листьях в нормальных или стрессовых условиях, ограничивающих азот или воду, улучшенные признаки, связанные с урожайностью, включая более крупный женский репродуктивный орган или початок, увеличение массы початка, индекса сбора урожая, урожайности, увеличение количества зерна и/или увеличение массы зерна, повышенная устойчивость к стрессу, такая как повышенная устойчивость к засухе, повышенное использование азота и/или повышенная устойчивость к посадке с высокой плотностью по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением.
[200]
В соответствии с другим аспектом данного изобретения предложены способы для посадки модифицированного или трансгенного растения(ий), представленных в данном документе, с нормальной/стандартной или высокой плотностью посадки в поле. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения урожай культурного растения на гектар (или на площадь земли) может быть увеличен путем посадки модифицированного или трансгенного растения(ий) по данному изобретению с более высокой плотностью посадки в поле. Как описано в данном документе, модифицированные или трансгенные растения, экспрессирующие транскрибируемую последовательность ДНК, которая кодирует некодирующую молекулу РНК, нацеленную на эндогенный ген оксидазы GA с целью супрессии, или имеющие редактированный ген оксидазы GA, могут иметь уменьшенную высоту растения, более короткое междоузлие(лия), увеличенный диаметр стебля и/или повышенную устойчивость к полеганию. Предполагается, что модифицированные или трансгенные растения могут переносить условия посадки с высокой плотностью, поскольку увеличение диаметра стебля может противостоять полеганию, а более короткая высота растения может обеспечивать повышенную проницаемость света для нижних листьев в условиях посадки с высокой плотностью. Таким образом, модифицированные или трансгенные растения, представленные в данном документе, могут быть посажены с более высокой плотностью с целью увеличения урожайности с гектара (или площади земли) в поле. Для пропашных культур более высокая плотность посадки может быть достигнута путем высадки большего количества семян/растений на длину ряда и/или путем уменьшения расстояния между рядами.
[201]
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения модифицированное или трансгенное растение может быть посажено с плотностью в поле (количество растений на площадь земли/поля), которая является, по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 50%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225% или 250% выше, чем нормальная плотность посадки для этого сельскохозяйственного растения в соответствии со стандартной агрономической практикой. Модифицированное или трансгенное растение может быть посажено с плотностью посадки в поле по меньшей мере 93 480 растений на гектар, по меньшей мере 98 400 растений на гектар, по меньшей мере 103 320 растений на гектар, по меньшей мере 108 240 растений на гектар, по меньшей мере 110 700 растений на гектар, по меньшей мере 113 160 растений на гектар, по меньшей мере 118 080 растений на гектар, по меньшей мере 123 000 растений на гектар, по меньшей мере 127 920 растений на гектар, по меньшей мере 132 840 растений на гектар или по меньшей мере 137 760 растений на гектар. Например, растения кукурузы могут быть посажены с более высокой плотностью посадки, например, в диапазоне от около 93 480 растений на гектар до около 147 600 растений на гектар или от около 98 400 растений на гектар до около 142 680 растений на гектар, или от около 103 320 растений на гектар до около 142 680 растений на гектар, или от около 98 400 растений на гектар до около 110 700 растений на гектар, или от около 110 700 растений на гектар до около 123 000 растений на гектар, или от около 123 000 растений на гектар до около 142 680 растений на гектар, или от около 127 920 растений на гектар до около 137 760 растений на гектар, или около 93 480 растений на гектар, около 103 320 растений на гектар, около 113 160 растений на гектар или около 118 080 растений на гектар, около 123 000 растений на гектар или около 127 920 растений на гектар, или около 132 840 растений на гектар, в отличие от стандартного диапазона плотности посадки, например, от около 44 280 растений на гектар до около 93 480 растений на гектар.
[202]
В соответствии с вариантами реализации данного описания предлагается модифицированное растение(я) кукурузы, которые включают в себя (i) высоту растения менее чем 2000 мм, менее чем 1950 мм, менее чем 1900 мм, менее чем 1850 мм, менее чем 1800 мм, менее чем 1750 мм, менее чем 1700 мм, менее чем 1650 мм, менее чем 1600 мм, менее чем 1550 мм, менее чем 1500 мм, менее чем 1450 мм, менее чем 1400 мм, менее чем 1350 мм, менее чем 1300 мм, менее чем 1250 мм, менее чем 1200 мм, менее чем 1150 мм, менее чем 1100 мм, менее чем 1050 мм или менее чем 1000 мм и/или (ii) средний диаметр стебля по меньшей мере 18 мм, по меньшей мере 18,5 мм, по меньшей мере 19 мм, по меньшей мере 19,5 мм, по меньшей мере 20 мм, по меньшей мере 20,5 мм, по меньшей мере 21 мм, по меньшей мере 21,5 мм и по меньшей мере 22 мм. Другими словами, предлагаются модифицированное растение(я) кукурузы, которые имеют высоту растений менее чем 2000 мм, менее чем 1950 мм, менее чем 1900 мм, менее чем 1850 мм, менее чем 1800 мм, менее чем 1750 мм, менее чем 1700 мм, менее чем 1650 мм, менее чем 1600 мм, менее чем 1550 мм, менее чем 1500 мм, менее чем 1450 мм, менее чем 1400 мм, менее чем 1350 мм, менее чем 1300 мм, менее чем 1250 мм, менее чем 1200 мм, менее чем 1150 мм, менее чем 1100 мм, менее чем 1050 мм или менее чем 1000 мм и/или средний диаметр стебля более 18 мм, более 18,5 мм, более 19 мм, более 19,5 мм, более 20 мм, более 20,5 мм, более 21 мм, более 21,5 мм или более 22 мм. Любой такой признак или диапазон высоты растения, выражается в миллиметрах (мм), может быть преобразован в другую единицу измерения на основе известных преобразований (например, один дюйм равен 2,54 см или 25,4 миллиметра, а миллиметры (мм), сантиметры (см) и метры (м) отличаются только на одну или более степеней от десяти). Таким образом, любое измерение, представленное в данном документе, дополнительно описано в терминах любых других сопоставимых единиц измерения в соответствии с известными и установленными преобразованиями. Однако точная высота растения и/или диаметр стебля модифицированного растения кукурузы могут зависеть от окружающей среды и генетического фона. Таким образом, изменение высоты растения и/или диаметра стебля модифицированного растения кукурузы вместо этого может быть описано в терминах минимальной разницы или процентного изменения относительно контрольного растения. Модифицированное растение кукурузы может дополнительно содержать, по меньшей мере, один початок, который по существу не содержит мужских репродуктивных тканей или структур, или других отклонений.
[203]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены модифицированные растения кукурузы, которые имеют высоту растения на поздних вегетативных и и/или репродуктивных стадиях развития (например, на стадии R3) от 1000 мм до 1800 мм, от 1000 мм до 1700 мм, от 1050 до 1700 мм, от 1100 до 1700 мм, от 1150 до 1700 мм, от 1200 до 1700 мм, от 1250 до 1700 мм, от 1300 до 1700 мм, от 1350 до 1700 мм, от 1400 мм и 1700 мм, от 1450 мм до 1700 мм, от 1000 мм до 1500 мм, от 1050 мм до 1500 мм, от 1100 мм до 1500 мм, от 1150 мм до 1500 мм, от 1200 мм до 1500 мм, от 1250 мм до 1500 мм, от 1300 до 1500 мм, от 1350 до 1500 мм, от 1400 до 1500 мм, от 1450 до 1500 мм, от 1000 до 1600 мм, от 1100 до 1600 мм, от 1200 мм до 1600 мм, от 1300 до 1600 мм, от 1350 до 1600 мм, от 1400 до 1600 мм, от 1450 мм до 1600 мм, от 1000 мм до 2000 мм, от 1200 мм до 2000 мм, от 1200 мм до 1800 мм, от 1300 мм до 1700 мм, от 1400 мм до 1700 мм, от 1400 мм до 1600 мм, от 1400 мм до 1700 мм, от 1400 до 1800 мм, от 1400 до 1900 мм, от 1400 до 2000 мм или от 1200 до 2500 мм, и/или средний диаметр стебля от 17,5 до 22 мм, от 18 мм до 22 мм, от 18,5 до 22 мм, от 19 до 22 мм, от 19,5 до 22 мм, от 20 до 22 мм, от 20,5 до 22 мм, от 21 до 22 мм, от 21,5 до 22 мм, от 17,5 до 21 мм, от 17,5 до 20 мм, от 17,5 до 19 мм, от 17,5 до 18 мм, от 18 до 21 мм, от 18 до 20 мм или от 18 мм до 19 мм. Модифицированное растение кукурузы может быть по существу не содержащим отклонений, таких как мужские репродуктивные ткани или структуры в одном или более початках модифицированного растения кукурузы.
[204]
Согласно вариантам реализации данного изобретения представлены модифицированные растения кукурузы, которые имеют (i) высоту растения, которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70% или по меньшей мере на 75% меньше, чем высота растения дикого типа или контрольного растения и/или (ii) диаметр стебля, который является, по меньшей мере на 5%, меньшей мере на 10%, меньшей мере на 15%, меньшей мере на 20%, меньшей мере на 25%, меньшей мере на 30%, меньшей мере на 35%, меньшей мере на 40%, меньшей мере на 45%, меньшей мере на 50%, меньшей мере на 55%, меньшей мере на 60%, меньшей мере на 65%, меньшей мере на 70%, меньшей мере на 75%, меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или, по меньшей мере, на 100% больше диаметра стебля растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с вариантами реализации данного изобретения модифицированное растение кукурузы может иметь уменьшенную высоту растения, которая является не более чем на 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% или 60% короче, чем высота растения дикого типа или контрольного растения, и/или диаметр стебля, который является менее чем (или не более чем) на 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% больше, чем диаметр стебля растения дикого типа или контрольного растения. Например, модифицированное растение может иметь (i) высоту растения, которая является по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15% или по меньшей мере на 20% меньше или короче (то есть короче более чем или ровно на 10%, 15% или 20%), но не более чем на 50% короче, чем у растения дикого типа или контрольного растения, и/или (ii) диаметр стебля, который является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10% или по меньшей мере на 15% больше, но не более чем на 30%, 35% или 40% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения. По определению, фразы "по меньшей мере на 20% короче" и "короче более чем или ровно на 20%" исключают, например, на 10% короче. Аналогично, по определению, фраза "не более чем на 50% короче" исключает на 60% короче; фраза "по меньшей мере на 5% больше" исключает на 2% больше; и фраза "не более чем на 30% больше" исключает на 40% больше.
[205]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения представлены модифицированные растения кукурузы, которые имеют высоту от 5% до 75%, от 5% до 50%, от 10% до 70%, от 10% до 65%, от 10% до 60%, от 10% до 55%, от 10% до 50%, от 10% до 45%, от 10% до 40%, от 10% до 35%, от 10% до 30%, от 10% до 25%, от 10% до 20%, от 10% до 15%, от 10% до 10%, от 10% до 75%, от 25% до 75%, от 10% до 50%, от 20% до 50%, от 25% до 50%, от 30% до 75%, от 30% до 50%, от 25% до 50%, от 15% до 50%, от 20% до 50%, от 25% до 45% или от 30% до 45% меньше чем высота растения дикого типа или контрольного растения и/или диаметр стебля от 5% до 100%, от 5% до 95%, от 5% до 90%, от 5% до 85%, от 5% до 80%, от 5% до 75%, от 5% до 70%, от 5% до 65%, от 5% до 60%, от 5% до 55%, от 5% до 50%, от 5% до 45%, от 5% до 40%, от 5% до 35%, от 5% до 30%, от 5% до 25%, от 5% до 20%, от 5% до 15%, от 5% до 10%, от 10% до 100%, от 10% до 75%, от 10% до 50%, от 10% до 40%, от 10% до 30%, от 10% до 20%, от 25% до 75%, от 25% до 50%, от 50% до 75%, от 8% до 20% или от 8% до 15% больше чем диаметр стебля растения дикого типа или контрольного растения.
[206]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения представлены модифицированные растения кукурузы, которые содержат среднюю длину междоузлия (или длину междоузлия минус-2 и/или длину междоузлия минус-4 относительно положения початка), которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70% или по меньшей мере на 75% меньше той же или средней длины междоузлия растения дикого типа или контрольного растения. "Минус-2 междоузлия" растения кукурузы относится ко второму междоузлию под початком растения, а "минус-4 междоузлия" растения кукурузы относится к четвертому междоузлию ниже початка растения. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагаются модифицированные растения кукурузы, которые имеют среднюю длину междоузлия (или длину минус-2 междоузлия и/или минус-4 длину междоузлия относительно положения початка), которая на от 5% до 75%, от 5% до 50%, от 10% до 70%, от 10% до 65%, от 10% до 60%, от 10% до 55%, от 10% до 50%, от 10% до 45%, от 10% до 40%, от 10% до 35%, от 10% до 30%, от 10% до 25%, от 10% до 20%, от 10% до 15%, от 10% до 10%, от 10% до 75%, от 25% до 75%, от 10% до 50%, от 20% до 50%, от 25% до 50%, от 30% до 75%, от 30% до 50%, от 25% до 50%, от 15% до 50%, от 20% до 50%, от 25% до 45% или от 30% до 45% меньше, чем одинаковая или средняя длина междоузлия растения дикого типа или контрольного растения.
[207]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения представлены модифицированные растения кукурузы, которые содержат массу початка (индивидуально или в среднем), которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 100% большей, чем масса початка растения дикого типа или контрольного растения. Модифицированное растение кукурузы, представленное в данном документе, может содержать массу початка, которая на от 5% до 100%, от 5% до 95%, от 5% до 90%, от 5% до 85%, от 5% до 80%, от 5% до 75%, от 5% до 70%, от 5% до 65%, от 5% до 60%, от 5% до 55%, от 5% до 50%, от 5% до 45%, от 5% до 40%, от 5% до 35%, от 5% до 30%, от 5% до 25%, от 5% до 20%, от 5% до 15%, от 5% до 10%, от 10% до 100%, от 10% до 75%, от 10% до 50%, от 25% до 75%, от 25% до 50% или от 50% до 75% больше, чем масса початка растения дикого типа или контрольного растения.
[208]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предлагаются модифицированные растения кукурузы или злаковые растения, которые имеют уборочный индекс, по меньшей мере 0,57, по меньшей мере 0,58, по меньшей мере 0,59, по меньшей мере 0,60, по меньшей мере 0,61, по меньшей мере 0,62, по меньшей мере 0,63 по меньшей мере 0,64 или по меньшей мере 0,65 (или выше). Модифицированное растение кукурузы может иметь уборочный индекс от 0,57 до 0,65, от 0,57 до 0,64, от 0,57 до 0,63, от 0,57 до 0,62, от 0,57 до 0,61, от 0,57 до 0,60, от 0,57 до 0,59, от 0,57 до 0,58, от 0,58 до 0,65, от 0,59 до 0,65 или от 0,60 до 0,65. Модифицированное растение кукурузы может иметь уборочный индекс, который является, по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8% по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 11%, по меньшей мере на 12%, по меньшей мере на 13%, по меньшей мере на 14%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45% или по меньшей мере на 50% больше, чем уборочный индекс растения дикого типа или контрольного растения. Модифицированные растения кукурузы могут иметь уборочный индекс, который от 1% до 45%, от 1% до 40%, от 1% до 35%, от 1% до 30%, от 1% до 25%, от 1% до 20%, от 1% до 15%, от 1% до 14%, от 1% до 13%, от 1% до 12%, от 1% до 11%, от 1% до 10%, от 1% до 9%, от 1% до 8%, от 1% до 7%, от 1% до 6%, от 1% до 5%, от 1% до 4%, от 1% до 3%, от 1% до 2%, от 5% до 15%, от 5% до 20%, от 5% до 30% или от 5% до 40% больше, чем уборочный индекс растения дикого типа или контрольного растения.
[209]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены модифицированные растения кукурузы или злаковые растения, которые имеют урожайность, повышенную по меньшей мере на 0,0627 тонн на гектар, по меньшей мере 0,1254 тонн на гектар, по меньшей мере 0,1881 тонн на гектар, по меньшей мере 0,2508 тонн на гектар не менее 0,3135 тонн на гектар, по меньшей мере 0,3762 тонн на гектар, по меньшей мере 0,4389 тонн на гектар, по меньшей мере 0,5016 тонн на гектар, по меньшей мере 0,5643 тонн на гектар или по меньшей мере 0,627 тонн на гектар относительно растения дикого типа или контрольного растения. Модифицированные растения кукурузы могут иметь увеличение урожайности от 0,0627 до 0,627, от 0,0627 до 0,5016, от 0,1254 до 0,5016, от 0,1254 до 0,3762, от 0,1254 до 0,3135, от 0,15675 до 0,28215 или от 0,1881 до 0,2508 тонн на гектар. Модифицированное растение кукурузы может иметь урожайность, повышенную по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 11%, по меньшей мере на 12%, по меньшей мере на 13%, по меньшей мере на 14%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20% или по меньшей мере на 25%, чем урожайность растения дикого типа или контрольного растения. Модифицированная кукуруза может иметь урожайность от 1% до 25%, от 1% до 20%, от 1% до 15%, от 1% до 14%, от 1% до 13%, от 1% до 12%, от 1% до 11%, от 1% до 10%, от 1% до 9%, от 1% до 8%, от 1% до 7%, от 1% до 6%, от 1% до 5%, от 1% до 4%, от 1% до 3%, от 1% до 2%, от 5% до 15%, от 5% до 20%, от 5% до 25%, от 2% до 10%, от 2% до 9%, от 2% до 8%, от 2% до 7%, от 2% до 6%, от 2% до 5% или от 2% до 4% больше, чем урожайность растения дикого типа или контрольного растения.
[210]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложено модифицированное злаковое или кукурузное растение, которое имеет частоту полегания, которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или на 100% меньше или ниже, чем у растения дикого типа или контрольного растения. Модифицированные злаковые или кукурузные растения могут иметь частоту полегания от 5% до 100%, от 5% до 95%, от 5% до 90%, от 5% до 85%, от 5% до 80%, от 5% до 75%, от 5% до 70%, от 5% до 65%, от 5% до 60%, от 5% до 55%, от 5% до 50%, от 5% до 45%, от 5% до 40%, от 5% до 35%, от 5% до 30%, от 5% до 25%, от 5% до 20%, от 5% до 15%, от 5% до 10%, от 10% до 100%, от 10% до 75%, от 10% до 50%, от 10% до 40%, от 10% до 30%, от 10% до 20%, от 25% до 75%, от 25% до 50% или от 50% до 75% меньше или ниже, чем у растения дикого типа или контрольного растения. Кроме того, представлены популяции злаковых или кукурузных растений, обладающие повышенной устойчивостью к полеганию и пониженной частотой полегания. Предложены популяции модифицированных злаковых или кукурузных растений, имеющие частоту полегания, которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или на 100% меньше или ниже, чем у популяции растений дикого типа или контрольных растений. Популяция модифицированных растений кукурузы может иметь частоту полегания от 5% до 100%, от 5% до 95%, от 5% до 90%, от 5% до 85%, от 5% до 80%, от 5% до 75%, от 5% до 70%, от 5% до 65%, от 5% до 60%, от 5% до 55%, от 5% до 50%, от 5% до 45%, от 5% до 40%, от 5% до 35%, от 5% до 30%, от 5% до 25%, от 5% до 20%, от 5% до 15%, от 5% до 10%, от 10% до 100%, от 10% до 75%, от 10% до 50%, от 10% до 40%, от 10% до 30%, от 10% до 20%, от 25% до 75%, от 25% до 50% или от 50% до 75% меньше или ниже, чем у популяции растений дикого типа или контрольных растений, что может быть выражено как среднее значение для определенного числа растений или посевной площади равной плотности.
[211]
Согласно вариантам реализации данного изобретения предлагаются модифицированные растения кукурузы, имеющие значительно уменьшенную или пониженную высоту растения (например, 2000 мм или менее) и значительно увеличенный диаметр стебля (например, 18 мм или более) по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения уменьшение или понижение высоты растения и увеличение диаметра стебля могут находиться в пределах любого из диапазонов высоты, диаметра или процента, указанных в данном документе. Такие модифицированные растения кукурузы, имеющие уменьшенную высоту растения и увеличенный диаметр стебля относительно растения дикого типа или контрольного растения, могут быть трансформированы транскрибируемой последовательностью ДНК, кодирующей некодирующую молекулу РНК, которая нацелена по меньшей мере на один ген оксидазы GA20 и/или по меньшей мере один ген оксидазы GA3 с целью супрессии. Модифицированные растения кукурузы, имеющие значительно уменьшенную высоту растения и/или значительно увеличенный диаметр стебля по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, могут дополнительно иметь по меньшей мере один початок, который по существу не содержит мужских репродуктивных тканей или структур и/или других отклонений. Модифицированные растения кукурузы, имеющие значительно уменьшенную высоту растения и/или увеличенный диаметр стебля относительно растения дикого типа или контрольного растения, могут иметь пониженную активность одного или более гена(ов) оксидазы GA20 и/или оксидазы GA3 в одной или более ткани(нях) растения, такой как одна или более сосудистая и/или листовая ткань(ни) растения, относительно одной и той же ткани(ней) растения дикого типа или контрольного растения. Согласно многим вариантам реализации изобретения модифицированные растения кукурузы могут содержать, по меньшей мере, одну полинуклеотидную или транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, функционально связанную с промотором, который может быть конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором, при этом некодирующая молекула РНК направлена, по меньшей мере, на один ген(ы) оксидазы GA20 и/или оксидазы GA3 с целью супрессии, как предусмотрено в данном документе. Некодирующая молекула РНК может представлять собой микроРНК или миРНК или молекулу-предшественника микроРНК или миРНК. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения модифицированные растения кукурузы, имеющие значительно уменьшенную высоту растения и/или увеличенный диаметр стебля относительно растения дикого типа или контрольного растения, могут дополнительно иметь повышенный уборочный индекс и/или повышенную устойчивость к полеганию по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением.
[212]
Модифицированные растения кукурузы или злаковые растения, имеющие значительно уменьшенную высоту растения и/или значительно увеличенный диаметр стебля по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, могут содержать мутацию (например, вставку, делецию, замену и тому подобное) в гене оксидазы GA, введенную с помощью технологии редактирования генов или другой техники мутагенеза, при этом экспрессия гена оксидазы GA снижена или устранена в одной или более тканях модифицированного растения. Такие модифицированные растения кукурузы, имеющие уменьшенную высоту растения и/или увеличенный диаметр стебля относительно растения дикого типа или контрольного растения, могут дополнительно иметь повышенный уборочный индекс и/или повышенную устойчивость к полеганию относительно растения дикого типа или контрольного растения. Такие модифицированные растения кукурузы могут быть практически свободны от отклонений, таких как мужские репродуктивные ткани или структуры и/или другие отклонения в, по меньшей мере, одном початке модифицированных растений. Методы мутагенеза растения (исключая редактирование генома) могут включать в себя химический мутагенез (то есть, обработку химическим мутагеном, таким как азид, гидроксиламин, азотистая кислота, акридин, аналог нуклеотидного основания или алкилирующий агент - например, EMS (этилметансульфонат), MNU (N-метил-N-нитрозомочевина) и тому подобное), физический мутагенез (например, гамма-лучи, рентгеновское излучение, ультрафиолетовое излучение, ионный пучок, другие формы излучения и тому подобное) и инсерционный мутагенез (например, транспозон или вставка Т-ДНК).Растения или различные части растения, ткани растения или клетки растения могут подвергаться мутагенезу. Обработанные растения могут быть воспроизведены для сбора семян или получения потомства растения, а обработанные части растения, ткани растения или клетки растения могут развиваться или регенерироваться в растения или другие ткани растения. Мутации, полученные с помощью методов химического или физического мутагенеза, могут включать в себя мутации сдвига рамки считывания, миссенс- или нонсенс-мутации, приводящие к потере функции или экспрессии целевого гена, такого как ген оксидазы GA3 или GA20.
[213]
например
Plant
Physiol
Один способ мутагенеза гена называется "TILLING" (для нацеливания на индуцированные локальные поражения в геномах), при котором мутации создаются в растительной клетке или ткани, предпочтительно в семени, репродуктивной ткани или зародышевой линии растения, например, применяя мутаген, такой как обработка EMS. Полученные растения выращивают и самоопыляют, а потомство применяют для приготовления образцов ДНК. ПЦР-амплификация и сиквенирование последовательности нуклеиновой кислоты гена оксидазы GA могут быть применены для определения того, имеет ли мутированное растение мутацию в гене оксидазы GA. Растения, имеющие мутации в гене оксидазы GA, могут затем быть проверены на измененный признак, такой как уменьшенная высота растения. В альтернативном варианте, подвергнутые мутагенезу растения могут быть проверены на измененный признак, такой как уменьшенная высота растения, и затем ПЦР-амплификация и сиквенирование последовательности нуклеиновой кислоты гена оксидазы GA могут быть применены для определения того, имеет ли растение с измененным признаком также мутацию в гене оксидазы GA. См., , Colbert и соавт., 2001 год,  126:480-484; и McCallum и соавт., 2000 год, Nature Biotechnology 18:455-457. TILLING может применяться для идентификации мутаций, которые изменяют экспрессию гена или активность белков, кодируемых геном, которые могут применяться для введения и отбора целевой мутации в гене оксидазы GA растения кукурузы или злакового растения.
[214]
например
например
Кукурузные или злаковые растения, которые были подвергнуты мутагенезу или обработке с целью редактирования генома, могут быть подвергнуты скринингу и отобраны на основе наблюдаемого фенотипа (, любого фенотипа, описанного в данном документе, такого как более короткая высота растения, увеличенный диаметр стебля и тому подобное), или применения селекционного агента с селектируемым маркером (например, гербицидом и тому подобным), скринируемым маркером или молекулярным методом (, более низкие уровни GA, более низкие уровни транскрипта или оксидазы GA, наличие трансгена или транскрибируемой последовательности и тому подобное). Такие методы скрининга и/или отбора могут быть применены для идентификации и отбора растений, имеющих мутацию в гене оксидазы GA, которая приводит к желаемому фенотипу растений.
[215]
В соответствии с вариантами реализации данного описания предлагается популяция модифицированных растений кукурузы или злаковых растений, при этом популяция модифицированных растений кукурузы или злаковых растений имеет среднюю высоту растения, которая является значительно меньшей, и/или средний диаметр стебля, который является значительно большим, чем популяция растений дикого типа или контрольных растений. Популяция модифицированных растений кукурузы или злаковых растений может иметь общую родословную с одним модифицированным растением кукурузы или злаковых растений и/или иметь одну совместную вставку, событие или редактирование конструкции для супрессии трансгенной оксидазы GA. Модифицированные растения кукурузы в популяции модифицированных растений кукурузы, как правило, могут содержать, по меньшей мере, один початок, который по существу не содержит мужских репродуктивных тканей или структур и/или других отклонений. Популяция модифицированных растений кукурузы или злаковых растений может иметь повышенную устойчивость к полеганию в среднем или на число растений или полевых площадей, чем популяция растений дикого типа или контрольных растений. Популяция модифицированных растений кукурузы или злаковых растений может иметь частоту полегания, которая является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%,по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или на 100% меньше (или ниже), чем у популяции контрольных растений кукурузы или злаковых. Популяция модифицированных растений кукурузы может иметь уборочный индекс по меньшей мере 0,57 или более.
[216]
например
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предлагаются модифицированные растения кукурузы или злаковых, имеющие пониженное содержание гиббереллина (в активной форме), по меньшей мере, в ткани(ях) стебля и междоузлия, таких как ткань(и) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистая ткань(и), по сравнению с той же тканью(ями) растений дикого типа или контрольных растений. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения предлагаются модифицированные растения кукурузы или злаковые растения, имеющие значительно уменьшенную высоту растения и/или значительно увеличенный диаметр стебля по сравнению с растениями дикого типа или контрольными растениями, при этом модифицированные кукурузные или злаковые растения дополнительно имеют значительно сниженный или пониженный уровень(и) активных гиббереллинов или активных GA (, одного или более из GA1, GA3, GA4 и/или GA7) в одной или более ткани(ей) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(ях) относительно одной и той же ткани(ей) растений дикого типа или контрольных растений. Например, уровень одной или более активных GA в ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях) модифицированного кукурузного или злакового растения может являться, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 100% меньше или ниже, чем в той же ткани(нях) растения дикого типа или контрольного растения.
[217]
например
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения модифицированное кукурузное или злаковое растение может содержать уровень(и) активного гиббереллина (GA) (, одна или более из GA1, GA3, GA4 и/или GA7) в одной или более ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях), который на от 5% до 50%, от 10% до 100%, от 20% до 100%, от 30% до 100%, от 40% до 100%, от 50% до 100%, от 60% до 100%, от 70% до 100%, от 80% до 100%, от 80% до 90%, от 10% до 90%, от 10% до 80%, от 10% до 70%, от 10% до 60%, от 10% до 50%, от 10% до 40%, от 10% до 30%, от 10% до 20%, от 50% до 100%, от 20% до 90%, от 20% до 80%, от 20% до 70%, от 20% до 60%, от 20% до 50%, от 20% до 40%, от 20% до 40%, от 20% до 30%, от 30% до 90%, от 30% до 80%, от 30% до 70%, от 30% до 60%, от 30% до 50%, от 30% до 40%, от 40% до 90% от 40% до 80%, от 40% до 70%, от 40% до 60%, от 40% до 50%, от 50% до 90%, от 50% до 80%, от 50% до 70%, от 50% до 60%, от 60% до 90%, от 60% до 80%, от 60% до 70%, от 70% до 90% или от 70% до 80% меньше или (или ниже), чем в той же ткани(нях) растения кукурузы дикого типа или контрольного растения. Модифицированное кукурузное или злаковое растение, имеющее пониженный уровень(и) активного гиббереллина (GA) в одной или более ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях), может также по существу не содержать отклонений, таких как мужские репродуктивные ткани или структуры и/или другие отклонения по меньшей мере в одном початке модифицированного растения кукурузы.
[218]
В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предлагаются модифицированные кукурузные или злаковые растения, имеющие значительно пониженный или устраненный уровень экспрессии одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA3 и/или GA20 в одной или более ткани(нях), такой как одна или более ткань(и) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистая ткань(и) модифицированных растений, по сравнению с той же тканью(ми) растений дикого типа или контрольных растений. Согласно многим вариантам реализации изобретения предлагается модифицированное кукурузное или злаковое растение, содержащее значительно уменьшенную высоту растения и/или значительно увеличенный диаметр стебля по сравнению с растениями дикого типа или контрольными растениями, при этом модифицированное кукурузное или злаковое растение имеет значительно сниженный или устраненный уровень экспрессии одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA20 и/или оксидазы GA3 в одной или более ткани(нях), такой как одна или более ткань(и) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистая ткань(и) модифицированного растения, по сравнению с той же тканью(ми) растений дикого типа или контрольных растений. Например, модифицированное кукурузное или злаковое растение имеет значительно сниженный или устраненный уровень экспрессии транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20, и/или значительно сниженный или устраненный уровень экспрессии транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы_1 GA3 и/или оксидазы_2 GA3 в одной или более ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях) модифицированного растения, по сравнению с той же тканью(ми) растений дикого типа или контрольных растений. Например, уровень одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA3 и/или оксидазы GA20 или одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) в одной или более ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях) модифицированного растения кукурузы может являться, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 100% меньше или ниже, чем в той же ткани(нях) растения дикого типа или контрольного кукурузного или злакового растения.
[219]
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения модифицированное кукурузное или злаковое растение может содержать уровень(и) одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA3 и/или GA20, одного или более транскрипта(ов) и/или белка(ов) гена оксидазы GA (или оксидаза-подобного GA) в одной или более ткани(нях) стебля, междоузлия, листа и/или сосудистой ткани(нях), который на от 5% до 50%, от 10% до 100%, от 20% до 100%, от 30% до 100%, от 40% до 100%, от 50% до 100%, от 60% до 100%, от 70% до 100%, от 80% до 100%, от 80% до 90%, от 10% до 90%, от 10% до 80%, от 10% до 70%, от 10% до 60%, от 10% до 50%, от 10% до 40%, от 10% до 30%, от 10% до 20%, от 50% до 100%, от 20% до 90%, от 20% до 80%, от 20% до 70%, от 20% до 60%, от 20% до 50%, от 20% до 40%, от 20% до 40%, от 20% до 30%, от 30% до 90%, от 30% до 80%, от 30% до 70%, от 30% до 60%, от 30% до 50%, от 30% до 40%, от 40% до 90% от 40% до 80%, от 40% до 70%, от 40% до 60%, от 40% до 50%, от 50% до 90%, от 50% до 80%, от 50% до 70%, от 50% до 60%, от 60% до 90%, от 60% до 80%, от 60% до 70%, от 70% до 90% или от 70% до 80% меньше или ниже, чем в той же ткани(нях) растения дикого типа или контрольного кукурузного или злакового растения. Модифицированное кукурузное или злаковое растение, имеющее пониженный или устраненный уровень экспрессии по меньшей мере одного гена(ов) оксидазы GA20 и/или оксидазы GA3 в одной или более ткани(нях), может также по существу не содержать отклонений, таких как мужские репродуктивные ткани или структуры и/или другие отклонения по меньшей мере в одном початке модифицированного растения кукурузы.
[220]
Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предлагаются способы, включающие в себя снижение или устранение экспрессии по меньшей мере одного гена оксидазы GA20 и/или по меньшей мере одного гена оксидазы GA3 в злаковом растении, например в одной или более ткани стебля, междоузлия, сосудистой и/или листовой ткани злакового растения, при этом экспрессия по меньшей мере одного гена оксидазы GA20 и/или по меньшей мере одного гена(ов) оксидазы GA3 существенно не изменяется или изменяется по меньшей мере в одной репродуктивной ткани растения, и/или при этом уровень(и) одной или более активных GA существенно не изменен или изменен по меньшей мере в одной репродуктивной ткани растения по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. Согласно многим вариантам реализации изобретения уровень(и) экспрессии по меньшей мере одного гена оксидазы GA20 или оксидазы GA3 снижается или устраняется по меньшей мере в одной ткани модифицированного растения с помощью конструкции рекомбинантной ДНК, содержащей транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую элемент супрессии гена оксидазы GA20 или оксидазы GA3, такой как по меньшей мере одна зрелая микроРНК или предшественник микроРНК, который процессируется в зрелую микроРНК, при этом микроРНК способна снижать или супрессировать уровень экспрессии по меньшей мере одного гена оксидазы GA20 или оксидазы GA3, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с конститутивным, тканеспецифичным или тканепредпочтительным промотором.
[221]
например
например,
Предлагаются способы и методы для скрининга и/или идентификации клеток или растений и тому подобного, на предмет наличия целевых изменений или трансгенов и отбора клеток или растений, содержащих целевые изменения или трансгены, которые могут основываться на одном или более фенотипах, или признаках, или на наличие или отсутствие молекулярного маркера или полинуклеотидной или белковой последовательности в клетках или растениях. Нуклеиновые кислоты могут быть выделены и обнаружены с применением методов, известных в данной области техники. Например, нуклеиновые кислоты могут быть выделены и обнаружены с применением, без ограничения, технологии рекомбинантных нуклеиновых кислот и/или полимеразной цепной реакции (ПЦР). Общие методы ПЦР описаны, например, в PCR Primer: A Laboratory Manual, Dieffenbach & Dveksler, Ред., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995 год. Методы рекомбинантных нуклеиновых кислот включают в себя, например, расщепление эндонуклеазой рестрикции и лигирование, которые могут быть применены для выделения нуклеиновой кислоты. Выделенные нуклеиновые кислоты также могут быть химически синтезированы либо в виде одной молекулы нуклеиновой кислоты, либо в виде ряда олигонуклеотидов. Полипептиды могут быть очищены из природных источников (, биологического образца) известными способами, такими как ионообменная ДЭАЭ (диэтиламиноэтил), гельфильтрационная хроматография и хроматография на гидроксиапатите. Полипептид также может быть очищен, например, путем экспрессии нуклеиновой кислоты в экспрессионном векторе. Кроме того, очищенный полипептид может быть получен химическим синтезом. Степень чистоты полипептида может быть измерена с применением любого подходящего способа,  колоночной хроматографии, электрофореза в полиакриламидном геле или анализа с помощью ВЭЖХ. Любой способ, известный в данной области техники, может применяться для скрининга и/или идентификации клеток, растений и тому подобного, имеющих трансген или редактирование генома в своем геноме, способ может быть основан на любой подходящей форме визуального наблюдения, отбора, молекулярного метода и тому подобного.
[222]
и соавт.
В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются способы обнаружения рекомбинантных нуклеиновых кислот и/или полипептидов в клетках растений. Например, нуклеиновые кислоты могут быть обнаружены с применением гибридизационных зондов или путем производства ампликонов с применением ПЦР с праймерами, как известно в данной области техники. Гибридизация между нуклеиновыми кислотами обсуждается в Sambrook  (1989 год, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2-е изд., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, штат Нью-Йорк). Полипептиды могут быть обнаружены с применением антител. Методы обнаружения полипептидов с применением антител включают твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA), вестерн-блоты, иммунопреципитацию, иммунофлуоресценцию и тому подобное. Антитело, представленное в данном документе, может представлять собой поликлональное антитело или моноклональное антитело. Антитело, обладающее специфической аффинностью связывания с полипептидом, представленным в данном документе, может быть получено с применением способов, известных в данной области техники. Антитело или гибридизационный зонд могут быть прикреплены к твердой подложке, такой как пробирка, планшет или лунка, с применением способов, известных в данной области техники.
[223]
например
Обнаружение (, продукта амплификации, комплекса гибридизации, полипептида) может быть осуществлено с применением детектируемых меток, которые могут быть присоединены или связаны с гибридизационным зондом или антителом. Термин "метка" предназначен для применения как прямых меток, так и непрямых меток. Детектируемые метки включают ферменты, простетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы, биолюминесцентные материалы и радиоактивные материалы.
[224]
например
in situ
Скрининг и отбор модифицированных, редактированных или трансгенных растений или клеток растений могут проводиться с помощью любых методологий, известных специалистам в области молекулярной биологии. Примеры методик скрининга и отбора включают, но без ограничений, Саузерн-анализ, ПЦР-амплификацию для выявления полинуклеотида, нозерн-блоттинг, защиту от РНКазы, достройку праймера, ОТ-ПЦР-амплификацию для обнаружения РНК-транскриптов, сиквенирование по Сенгеру, технологии сиквенирования следующего поколения (, Illumina, PacBio, Ion Torrent™ и тому подобные), ферментные анализы для определения ферментативной или рибозимной активности полипептидов и полинуклеотидов, а также гель-электрофорез белков, вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию и иммуноферментный анализ для выявления полипептидов. Другие методы, такие как гибридизация , окрашивание ферментов и иммуноокрашивание, также могут быть применены для обнаружения присутствия или экспрессии полипептидов и/или полинуклеотидов. Способы выполнения всех упомянутых методов известны в данной области техники.
ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[225]
В следующих абзацах перечислено подмножество иллюстративных вариантов реализации изобретения.
[226]
Вариант реализации изобретения 1. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 9, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[227]
Вариант реализации изобретения 2. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 8.
[228]
Вариант реализации изобретения 3. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или растительной клетке, причем эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 15.
[229]
Вариант реализации изобретения 4. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 3, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 14.
[230]
Вариант реализации изобретения 5. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[231]
Вариант реализации изобретения 6. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 5, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит один из следующих: промотор сахарозосинтазы, промотор транспортера сахарозы, промотор Sh1, промотор пятнистого вируса желтой коммелины (CoYMV - Commelina yellow mottle virus), промотор большого межгенного региона (LIR - large intergenic region) геминивируса карликовой пшеницы (WDV - wheat dwarf geminivirus), промотор белка оболочки (СР - coat protein) гемивируса полосы кукурузы (MSV - maize streak geminivirus), рисовый промотор, подобный желтой полосе 1 (YS1 - yellow stripe 1) или рисовый промотор желтой полосы 2 (OsYSL2).
[232]
Вариант реализации изобретения 7. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 5, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичной одной или более из SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71, или ее функциональной части.
[233]
Вариант реализации изобретения 8. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[234]
Вариант реализации изобретения 9. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 8, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66, или ее функциональной части.
[235]
Вариант реализации изобретения 10. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[236]
Вариант реализации изобретения 11. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 10, отличающаяся тем, что листовой промотор включает один из следующего: промотор Рубиско, промотор PPDK, промотор FDA, промотор Nadh-Gogat, промотор гена белка, связывающего хлорофилл а/b, промотор фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕП-карбоксилазы) или промотор гена Myb.
[237]
Вариант реализации изобретения 12. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 10, отличающаяся тем, что листовой промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 или SEQ ID NO: 74, или ее функциональной части.
[238]
Вариант реализации изобретения 13. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[239]
Вариант реализации изобретения 14. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 13, отличающаяся тем, что конститутивный промотор выбран из группы, состоящей из: промотора актина, промотора 35S или 19S CaMV, растительного промотора убиквитина, растительного промотора Gos2, промотора FMV, промотора CMV, промотора MMV, промотора PCLSV, промотора Emu, промотора тубулина, промотора нопалинсинтазы, промотора октопинсинтазы, промотора маннопинсинтазы или алкогольдегидрогеназы маиса, или их функциональной части.
[240]
Вариант реализации изобретения 15. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 13, отличающаяся тем, что конститутивный промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83, или ее функциональной части.
[241]
Вариант реализации изобретения 16. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК представляет собой предшественника микроРНК или миРНК, который процессирован или расщеплен в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК.
[242]
Вариант реализации изобретения 17. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1.
[243]
Вариант реализации изобретения 18. Трансгенное злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1.
[244]
Вариант реализации изобретения 19. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения: более короткую высоту растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[245]
Вариант реализации изобретения 20. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[246]
Вариант реализации изобретения 21. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения дикого типа.
[247]
Вариант реализации изобретения 22. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что диаметр стебля трансгенного растения на одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем диаметр стебля на одном или более междоузлиях контрольного растения дикого типа.
[248]
Вариант реализации изобретения 23. Трансгенное злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 18, отличающееся тем, что трансгенное злаковое растение представляет собой растение кукурузы, и при этом диаметр стебля трансгенного растения кукурузы на одном или более из первого, второго, третьего и/или четвертого междоузлия, расположенного ниже початка, является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у того же междоузлия контрольного растения дикого типа.
[249]
Вариант реализации изобретения 24. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[250]
Вариант реализации изобретения 25. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 18, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[251]
Вариант реализации изобретения 26. Трансгенное кукурузное растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1.
[252]
Вариант реализации изобретения 27. Способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата конструкцией рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1 и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата.
[253]
Agrobacterium
Вариант реализации изобретения 28. Способ по варианту реализации изобретения 25, отличающийся тем, что злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной  трансформации или бомбардировки частицами.
[254]
Вариант реализации изобретения 29. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 96%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, по меньшей мере, на 99%, по меньшей мере, на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 15, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[255]
Вариант реализации изобретения 30. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 14.
[256]
Вариант реализации изобретения 31. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[257]
Вариант реализации изобретения 32. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 31, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит один из следующих: промотор сахарозосинтазы, промотор транспортера сахарозы, промотор Sh1, промотор пятнистого вируса желтой коммелины (CoYMV - Commelina yellow mottle virus), промотор большого межгенного региона (LIR - large intergenic region) геминивируса карликовой пшеницы (WDV - wheat dwarf geminivirus), промотор белка оболочки (СР - coat protein) гемивируса полосы кукурузы (MSV - maize streak geminivirus), рисовый промотор, подобный желтой полосе 1 (YS1 - yellow stripe 1) или рисовый промотор желтой полосы 2 (OsYSL2).
[258]
Вариант реализации изобретения 33. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 31, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71, или ее функциональной части.
[259]
Вариант реализации изобретения 34. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[260]
Вариант реализации изобретения 35. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 34, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66, или ее функциональной части.
[261]
Вариант реализации изобретения 36. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[262]
Вариант реализации изобретения 37. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 36, отличающаяся тем, что листовой промотор включает в себя один из следующего: промотор Рубиско, промотор PPDK, промотор FDA, промотор Nadh-Gogat, промотор гена белка, связывающего хлорофилл а/b, промотор фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕП-карбоксилазы) или промотор гена Myb.
[263]
Вариант реализации изобретения 38. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 36, отличающаяся тем, что листовой промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 или SEQ ID NO: 74, или ее функциональной части.
[264]
Вариант реализации изобретения 39. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[265]
Вариант реализации изобретения 40. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 39, отличающаяся тем, что конститутивный промотор выбран из группы, состоящей из: промотора актина, промотора 35S или 19S CaMV, растительного промотора юбиквитина, растительного промотора Gos2, промотора FMV, промотора CMV, промотора MMV, промотора PCLSV, промотора Emu, промотора тубулина, промотора нопалинсинтазы, промотора октопинсинтазы, промотора маннопинсинтазы или алкогольдегидрогеназы маиса, или их функциональной части.
[266]
Вариант реализации изобретения 41. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 39, отличающаяся тем, что конститутивный промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83, или ее функциональной части.
[267]
Вариант реализации изобретения 42. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК представляет собой предшественника микроРНК или миРНК, который процессирован или расщеплен в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК.
[268]
Вариант реализации изобретения 43. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29.
[269]
Вариант реализации изобретения 44. Трансгенное злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29.
[270]
Вариант реализации изобретения 45. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения: более короткую высоту растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[271]
Вариант реализации изобретения 46. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[272]
Вариант реализации изобретения 47. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения дикого типа.
[273]
Вариант реализации изобретения 48. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что диаметр стебля трансгенного растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем диаметр стебля в одном или более междоузлиях контрольного растения дикого типа.
[274]
Вариант реализации изобретения 49. Трансгенное злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 44, отличающееся тем, что трансгенное злаковое растение представляет собой растение кукурузы, и при этом диаметр стебля трансгенного растения кукурузы в одном или более из первого, второго, третьего и/или четвертого междоузлия, расположенного ниже початка, является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у того же междоузлия контрольного растения дикого типа.
[275]
Вариант реализации изобретения 50. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[276]
Вариант реализации изобретения 51. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 44, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[277]
Вариант реализации изобретения 52. Трансгенное кукурузное растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29.
[278]
Вариант реализации изобретения 53. Способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата конструкцией рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 29, и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата.
[279]
Вариант реализации изобретения 54. Способ по варианту реализации изобретения 29, отличающийся тем, что злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной Agrobacterium трансформации или бомбардировки частицами.
[280]
Вариант реализации изобретения 55. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA3 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA3 является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 30 или 33, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[281]
Вариант реализации изобретения 56. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 28, 29, 31 или 32.
[282]
Вариант реализации изобретения 57. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[283]
Вариант реализации изобретения 58. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 57, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит один из следующих: промотор сахарозосинтазы, промотор транспортера сахарозы, промотор Sh1, промотор пятнистого вируса желтой коммелины (CoYMV - Commelina yellow mottle virus), промотор большого межгенного региона (LIR - large intergenic region) геминивируса карликовой пшеницы (WDV - wheat dwarf geminivirus), промотор белка оболочки (СР - coat protein) геминивируса полосы маиса (MSV - maize streak geminivirus), рисовый промотор, подобный желтой полосе 1 (YS1 - yellow stripe 1) или рисовый промотор желтой полосы 2 (OsYSL2).
[284]
Вариант реализации изобретения 59. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 57, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71, или ее функциональной части.
[285]
Вариант реализации изобретения 60. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[286]
Вариант реализации изобретения 61. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 60, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66, или ее функциональной части.
[287]
Вариант реализации изобретения 62. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[288]
Вариант реализации изобретения 63. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 62, отличающаяся тем, что листовой промотор включает в себя один из следующего: промотор Рубиско, промотор PPDK, промотор FDA, промотор Nadh-Gogat, промотор гена белка, связывающего хлорофилл а/b, промотор фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕП-карбоксилазы) или промотор гена Myb.
[289]
Вариант реализации изобретения 64. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 62, отличающаяся тем, что листовой промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 или SEQ ID NO: 74, или ее функциональной части.
[290]
Вариант реализации изобретения 65. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[291]
Вариант реализации изобретения 66. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 65, отличающаяся тем, что конститутивный промотор выбран из группы, состоящей из: промотора актина, промотора 35S или 19S CaMV, растительного промотора юбиквитина, растительного промотора Gos2, промотора FMV, промотора CMV, промотора MMV, промотора PCLSV, промотора Emu, промотора тубулина, промотора нопалинсинтазы, промотора октопинсинтазы, промотора маннопинсинтазы или алкогольдегидрогеназы маиса, или их функциональной части.
[292]
Вариант реализации изобретения 67. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 65, отличающаяся тем, что конститутивный промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83, или ее функциональной части.
[293]
Вариант реализации изобретения 68. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК представляет собой предшественника микроРНК или миРНК, который процессирован или расщеплен в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК.
[294]
Вариант реализации изобретения 69. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55.
[295]
Вариант реализации изобретения 70. Трансгенное злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55.
[296]
Вариант реализации изобретения 71. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения: более короткую высоту растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[297]
Вариант реализации изобретения 72. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[298]
Вариант реализации изобретения 73. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения дикого типа.
[299]
Вариант реализации изобретения 74. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что диаметр стебля трансгенного растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем диаметр стебля в одном или более междоузлиях контрольного растения дикого типа.
[300]
Вариант реализации изобретения 75. Трансгенное злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 70, отличающееся тем, что трансгенное злаковое растение представляет собой растение кукурузы, и при этом диаметр стебля трансгенного растения кукурузы в одном или более из первого, второго, третьего и/или четвертого междоузлия, расположенного ниже початка, является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у того же междоузлия контрольного растения дикого типа.
[301]
Вариант реализации изобретения 76. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[302]
Вариант реализации изобретения 77. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 70, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[303]
Вариант реализации изобретения 78. Трансгенное кукурузное растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55.
[304]
Вариант реализации изобретения 79. Способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата конструкцией рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 55, и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата.
[305]
Вариант реализации изобретения 80. Способ по варианту реализации изобретения 79, отличающийся тем, что злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной Agrobacterium трансформации или бомбардировки частицами.
[306]
Вариант реализации изобретения 81. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA20 в однодольном или злаковом растении или клетке растения, эндогенный белок оксидазы GA20 является, по меньшей мере, на 80%, по меньшей мере, на 85%, по меньшей мере, на 90%, по меньшей мере, на 95%, по меньшей мере, на 96%, по меньшей мере, на 97%, по меньшей мере, на 98%, по меньшей мере, на 99%, по меньшей мере, на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 12, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[307]
Вариант реализации изобретения 82. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 10 или 11.
[308]
Вариант реализации изобретения 83. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[309]
Вариант реализации изобретения 84. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 83, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит один из следующих: промотор сахарозосинтазы, промотор транспортера сахарозы, промотор Sh1, промотор пятнистого вируса желтой коммелины (CoYMV - Commelina yellow mottle virus), промотор большого межгенного региона (LIR - large intergenic region) геминивируса карликовой пшеницы (WDV - wheat dwarf geminivirus), промотор белка оболочки (СР - coat protein) геминивируса полосы маиса (MSV - maize streak geminivirus), рисовый промотор, подобный желтой полосе 1 (YS1 - yellow stripe 1) или рисовый промотор желтой полосы 2 (OsYSL2).
[310]
Вариант реализации изобретения 85. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 83, отличающаяся тем, что сосудистый промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 71, или ее функциональной части.
[311]
Вариант реализации изобретения 86. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[312]
Вариант реализации изобретения 87. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 86, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 65 или SEQ ID NO: 66, или ее функциональной части.
[313]
Вариант реализации изобретения 88. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[314]
Вариант реализации изобретения 89. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 88, отличающаяся тем, что листовой промотор включает в себя один из следующего: промотор Рубиско, промотор PPDK, промотор FDA, промотор Nadh-Gogat, промотор гена белка, связывающего хлорофилл а/b, промотор фосфоенолпируваткарбоксилазы (ФЕП-карбоксилазы) или промотор гена Myb.
[315]
Вариант реализации изобретения 90. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 88, отличающаяся тем, что листовой промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 или SEQ ID NO: 74, или ее функциональной части.
[316]
Вариант реализации изобретения 91. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[317]
Вариант реализации изобретения 92. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 91, отличающаяся тем, что конститутивный промотор выбран из группы, состоящей из: промотора актина, промотора 35S или 19S CaMV, растительного промотора юбиквитина, растительного промотора Gos2, промотора FMV, промотора CMV, промотора MMV, промотора PCLSV, промотора Emu, промотора тубулина, промотора нопалинсинтазы, промотора октопинсинтазы, промотора маннопинсинтазы или алкогольдегидрогеназы маиса, или их функциональной части.
[318]
Вариант реализации изобретения 93. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 91, отличающаяся тем, что конститутивный промотор содержит последовательность ДНК, которая является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% одной или более из SEQ идентичной одной или более из SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83, или ее функциональной части.
[319]
Вариант реализации изобретения 94. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК, кодируемая транскрибируемой последовательностью ДНК представляет собой предшественника микроРНК или миРНК, который процессирован или расщеплен в растительной клетке с образованием зрелой микроРНК или миРНК.
[320]
Вариант реализации изобретения 95. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81.
[321]
Вариант реализации изобретения 96. Трансгенное злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81.
[322]
Вариант реализации изобретения 97. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения: более короткую высоту растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[323]
Вариант реализации изобретения 98. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[324]
Вариант реализации изобретения 99. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения дикого типа.
[325]
Вариант реализации изобретения 100. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что диаметр стебля трансгенного растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем диаметр стебля в одном или более междоузлиях контрольного растения дикого типа.
[326]
Вариант реализации изобретения 101. Трансгенное злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 96, отличающееся тем, что трансгенное злаковое растение представляет собой растение кукурузы, и при этом диаметр стебля трансгенного растения кукурузы в одном или более из первого, второго, третьего и/или четвертого междоузлия, расположенного ниже початка, является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у того же междоузлия контрольного растения дикого типа.
[327]
Вариант реализации изобретения 102. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[328]
Вариант реализации изобретения 103. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 96, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[329]
Вариант реализации изобретения 104. Трансгенное кукурузное растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81.
[330]
Вариант реализации изобретения 105. Способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата конструкцией рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81, и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата.
[331]
Вариант реализации изобретения 106. Способ по варианту реализации изобретения 105, отличающийся тем, что злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной Agrobacterium трансформации или бомбардировки частицами.
[332]
Вариант реализации изобретения 107. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 1, 29, 55 или 81, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок оксидазы GA в однодольном или злаковом растении или растительной клетке, причем эндогенный белок оксидазы GA является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным одной или более из SEQ ID NO: 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30 и 33.
[333]
Вариант реализации изобретения 108. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 107, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из одного или более SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 7, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25, 26, 28, 29, 31, и 32.
[334]
Вариант реализации изобретения 109. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей эндогенный белок в однодольном или злаковом растении или клетке растения, при этом эндогенный белок является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 86, 90, 94, 97, 101, 104, 108, 112, 116, 118, 121, 125, 129, 133 или 136, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[335]
Вариант реализации изобретения 110. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 84, 85, 87, 88, 89, 91, 92, 93, 95, 96, 98, 99, 100, 102, 103, 105, 106, 107, 109, 110, 111, 113, 114, 115, 119, 120, 122, 123, 124, 126, 127, 128, 130, 131, 132, 134, 135 или 137.
[336]
Вариант реализации изобретения 111. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[337]
Вариант реализации изобретения 112. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[338]
Вариант реализации изобретения 113. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[339]
Вариант реализации изобретения 114. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109, отличающаяся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[340]
Вариант реализации изобретения 115. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 81.
[341]
Вариант реализации изобретения 116. Трансгенное злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 109.
[342]
Вариант реализации изобретения 117. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 116, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[343]
Вариант реализации изобретения 118. Трансгенное злаковое растение по варианту реализации изобретения 116, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[344]
Вариант реализации изобретения 119. Способ получения трансгенного злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата конструкцией рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 116, и (b) регенерацию или развитие трансгенного злакового растения из трансформированного эксплантата.
[345]
Вариант реализации изобретения 120. Способ по варианту реализации изобретения 119, отличающийся тем, что злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной Agrobacterium трансформации или бомбардировки частицами.
[346]
Вариант реализации изобретения 121. Способ снижения уровня по меньшей мере одной активной молекулы GA в стебле кукурузы или злакового растения, включающий в себя: супрессию одного или более генов оксидазы GA3 или оксидазы GA20 рекомбинантной конструкцией ДНК в одной или более тканях трансгенного злакового или кукурузного растения.
[347]
Вариант реализации изобретения 122. Способ по варианту реализации изобретения 121, отличающийся тем, что конструкция рекомбинантной ДНК кодирует некодирующую молекулу РНК, которая нацелена на один или более генов оксидазы GA3 или GA20 с целью супрессии, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[348]
Вариант реализации изобретения 123. Способ по варианту реализации изобретения 122, отличающийся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[349]
Вариант реализации изобретения 124. Способ по варианту реализации изобретения 122, отличающийся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[350]
Вариант реализации изобретения 125. Способ по варианту реализации изобретения 122, отличающийся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[351]
Вариант реализации изобретения 126. Способ по варианту реализации изобретения 122, отличающийся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[352]
Вариант реализации изобретения 127. Способ по варианту реализации изобретения 121, отличающийся тем, что трансгенное растение кукурузы или зерна представляет собой растение кукурузы.
[353]
Вариант реализации изобретения 128. Трансгенное растение кукурузы или зерна, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК, при этом конструкция рекомбинантной ДНК содержит последовательность транскрибируемой ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая нацелена по меньшей мере на один эндогенный ген оксидазы GA20 или GA3 с целью супрессии, при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении, и при этом трансгенное однодольное растение или злаковое растение имеет меньшую высоту растения по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[354]
Вариант реализации изобретения 129. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих дополнительных признаков относительно контрольного растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и увеличение плодовитости.
[355]
Вариант реализации изобретения 130. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения.
[356]
Вариант реализации изобретения 131. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что диаметр стебля трансгенного растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у контрольного растения.
[357]
Вариант реализации изобретения 132. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 128, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения.
[358]
Вариант реализации изобретения 133. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 128, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения.
[359]
Вариант реализации изобретения 134. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 128, отличающееся тем, что трансгенное растение не имеет каких-либо значительных отклонений в по меньшей мере одном женском органе или початке.
[360]
Вариант реализации изобретения 135. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по любому из вариантов реализации изобретения 128, отличающееся тем, что трансгенное злаковое растение представляет собой растение кукурузы, и при этом некодирующая молекула РНК нацелена на эндогенный ген(ы) оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 с целью супрессии.
[361]
Вариант реализации изобретения 136. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой сосудистый промотор.
[362]
Вариант реализации изобретения 137. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой промотор RTBV.
[363]
Вариант реализации изобретения 138. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой конститутивный промотор.
[364]
Вариант реализации изобретения 139. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что промотор, экспрессируемый в растении представляет собой листовой промотор.
[365]
Вариант реализации изобретения 140. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих дополнительных признаков относительно контрольного растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и увеличение плодовитости.
[366]
Вариант реализации изобретения 141. Злаковое растение, содержащее мутацию в эндогенном гене оксидазы GA или около него, введенную методом мутагенеза, при этом уровень экспрессии эндогенного гена оксидазы GA снижается или отсутствует в злаковом растении, и при этом злаковое растение имеет меньшую высоту по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[367]
Вариант реализации изобретения 142. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что злаковое растение, содержащее мутацию, имеет один или более из следующих дополнительных признаков относительно контрольного растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и увеличение плодовитости.
[368]
Вариант реализации изобретения 143. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что высота злакового растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения.
[369]
Вариант реализации изобретения 144. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что диаметр стебля злакового растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у контрольного растения.
[370]
Вариант реализации изобретения 145. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля злакового растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения.
[371]
Вариант реализации изобретения 146. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля злакового растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения.
[372]
Вариант реализации изобретения 147. Злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что злаковое растение не имеет каких-либо существенных отклонений в по меньшей мере одном женском органе или початке.
[373]
Вариант реализации изобретения 148. злаковое растение по варианту реализации изобретения 141, отличающееся тем, что злаковое растение представляет собой кукурузное растение.
[374]
Вариант реализации изобретения 149. Кукурузное или злаковое растение, содержащие геномное редактирование, введенное с помощью целевого метода редактирования генома в локус эндогенного гена оксидазы GA или около него, при этом уровень экспрессии эндогенного гена оксидазы GA снижен или отсутствует по сравнению с контрольным растением, и при этом редактированное злаковое растение имеет меньшую высоту по сравнению с контрольным растением.
[375]
Вариант реализации изобретения 150. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что редактированное растение имеет один или более из следующих дополнительных признаков относительно контрольного растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и увеличение плодовитости.
[376]
Вариант реализации изобретения 151. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что высота редактированного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения.
[377]
Вариант реализации изобретения 152. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что диаметр стебля редактированного растения в одном или более междоузлиях стебля является, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% больше, чем у контрольного растения.
[378]
Вариант реализации изобретения 153. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля редактированного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения.
[379]
Вариант реализации изобретения 154. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что уровень одной или более активной GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля редактированного растения является по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже, чем у той же ткани междоузлия контрольного растения.
[380]
Вариант реализации изобретения 155. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что редактированное растение не имеет каких-либо существенных отклонений в по меньшей мере одном женском органе или початке.
[381]
Вариант реализации изобретения 156. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что геномное редактирование вводят с применением мегануклеазы, нуклеазы c цинковыми пальцами (ZFN), РНК-направленной эндонуклеазы, TALE-эндонуклеазы (TALEN), рекомбиназы или транспозазы.
[382]
Вариант реализации изобретения 157. Редактированное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 149, отличающееся тем, что геномное редактирование включает замену, делецию, вставку или инверсию одного или более нуклеотидов относительно последовательности эндогенного гена оксидазы GA в контрольном растении.
[383]
Вариант реализации изобретения 158. Композиция, содержащая направляющую РНК, при этом направляющая РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной или комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере, 25 последовательным нуклеотидам целевой последовательности ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA растения зерна или около него.
[384]
Вариант реализации изобретения 159. Композиция по варианту реализации изобретения 158, отличающаяся тем, что молекула направляющей РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34, 35 или 38 или последовательности, комплементарной им.
[385]
Вариант реализации изобретения 160. Композиция по варианту реализации изобретения 158, отличающаяся тем, что молекула направляющей РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%,по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 или 137 или последовательности, комплементарной им.
[386]
Вариант реализации изобретения 161. Композиция по варианту реализации изобретения 158, дополнительно включающая в себя эндонуклеазу, направляемую РНК.
[387]
Вариант реализации изобретения 162. Композиция по варианту реализации изобретения 161, отличающаяся тем, что РНК-направленная эндонуклеаза в присутствии молекулы направляющей РНК вызывает двухцепочечный разрыв или одноцепочечный разрыв в целевой последовательности ДНК или около него в геноме злакового растения.
[388]
Вариант реализации изобретения 163. Композиция по варианту реализации изобретения 161, отличающаяся тем, что РНК-направленная эндонуклеаза выбрана из группы, состоящей из Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn1, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx12, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, CasX, CasY, Argonaute и любых их гомологов или модифицированных версий, имеющих активность РНК-направленной эндонуклеазы.
[389]
Вариант реализации изобретения 164. Композиция по варианту реализации изобретения 158, дополнительно включающая в себя донорную матрицу рекомбинантной ДНК содержащую, по меньшей мере, одну гомологичную последовательность или гомологичное плечо, при этом, по меньшей мере, одна гомологичная последовательность или гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК, при этом последовательность целевой ДНК представляет собой геномную последовательность в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузы или злакового растения или около него.
[390]
Вариант реализации изобретения 165. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу направляющей РНК, при этом молекула направляющей РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам целевой последовательности ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузы или злакового растения или около него.
[391]
Вариант реализации изобретения 166. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что направляющая РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34, 35 или 38 или последовательности, комплементарной им.
[392]
Вариант реализации изобретения 167. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что молекула направляющей РНК содержит направляющую последовательность, которая является, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24 или, по меньшей мере 25 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 или 137 или последовательности, комплементарной им.
[393]
Вариант реализации изобретения 168. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что последовательность транскрибируемой ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[394]
Вариант реализации изобретения 169. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что молекула направляющей РНК представляет собой CRISPR РНК (crРНК) или одноцепочечную направляющую РНК (онРНК).
[395]
Вариант реализации изобретения 170. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что направляющая РНК содержит последовательность, комплементарную последовательности мотива, прилегающего к протоспейсеру (PAM), присутствующую в геноме злакового растения, непосредственно прилегающую к последовательности целевой ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA или около него.
[396]
Вариант реализации изобретения 171. Конструкция рекомбинантной ДНК по любому варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что последовательность PAM содержит каноническую последовательность 5'-NGG-3'.
[397]
Вариант реализации изобретения 172. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165, отличающаяся тем, что ген эндогенной оксидазы GA кодирует белок, который является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 9, 12 или 15.
[398]
Вариант реализации изобретения 173. Молекула ДНК, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165.
[399]
Вариант реализации изобретения 174. Вектор для трансформации, содержащий конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165.
[400]
Вариант реализации изобретения 175. Бактериальная клетка, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165.
[401]
Вариант реализации изобретения 176. Кукурузное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165.
[402]
Вариант реализации изобретения 177. Композиция, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 165.
[403]
Вариант реализации изобретения 178. Композиция по варианту реализации изобретения 177, дополнительно включающая в себя эндонуклеазу, направляемую РНК.
[404]
Вариант реализации изобретения 179. Композиция по варианту реализации изобретения 177, отличающаяся тем, что РНК-направленная эндонуклеаза выбрана из группы, состоящей из Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9, Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, Argonaute и их гомологов или модифицированных версий, имеющих активность РНК-направленной эндонуклеазы.
[405]
Вариант реализации изобретения 180. Композиция по варианту реализации изобретения 177, дополнительно включающая в себя вторую конструкцию рекомбинантной ДНК, содержащую вторую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую эндонуклеазу, направляемую РНК.
[406]
Вариант реализации изобретения 181. Композиция по варианту реализации изобретения 177, включающая в себя молекулу ДНК или вектор, содержащие конструкцию рекомбинантной ДНК и вторую конструкцию рекомбинантной ДНК.
[407]
Вариант реализации изобретения 182. Композиция по варианту реализации изобретения 177, включающая в себя первую молекулу ДНК или вектор и вторую молекулу ДНК или вектор, при этом первая молекула или вектор ДНК содержит конструкцию рекомбинантной ДНК, кодирующую молекулу направляющей РНК, а вторая молекула или вектор ДНК содержит вторую конструкцию рекомбинантной ДНК, кодирующую эндонуклеазу, направляемую РНК.
[408]
Вариант реализации изобретения 183. Композиция по варианту реализации изобретения 177, дополнительно включающая в себя донорную матрицу рекомбинантной ДНК содержащую, по меньшей мере, одну гомологичную последовательность или гомологичное плечо, при этом, по меньшей мере, одна гомологичная последовательность или гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК, при этом последовательность целевой ДНК представляет собой геномную последовательность в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузы или злакового растения или около него.
[409]
Вариант реализации изобретения 184. Донорная матрица рекомбинантной ДНК содержащая, по меньшей мере, одну гомологичную последовательность, при этом по меньшей мере одна гомологичная последовательность является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК, при этом последовательность целевой ДНК представляет собой геномную последовательность в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузы или злакового растения или около него.
[410]
Вариант реализации изобретения 185. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 184, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одна гомологичная последовательность содержит, по меньшей мере, одну мутацию относительно комплементарной цепи последовательности целевой ДНК в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA или около него.
[411]
Вариант реализации изобретения 186. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 185, отличающаяся тем, что, по меньшей мере, одна мутация включает замену, делецию, вставку или инверсию одного, или более нуклеотидов относительно комплементарной цепи последовательности целевой ДНК.
[412]
Вариант реализации изобретения 187. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 184, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна гомологичная последовательность является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной или комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам SEQ ID NO: 34, 35 или 38, или последовательности, комплементарной им.
[413]
Вариант реализации изобретения 188. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 184, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна гомологичная последовательность является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной или комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 или 137, или последовательности, комплементарной им.
[414]
Вариант реализации изобретения 189. Донорная матрица рекомбинантной ДНК содержащая два гомологичных плеча, включая первое гомологичное плечо и второе гомологичное плечо, при этом первое гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам первой фланкирующей последовательности ДНК, при этом второе гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам второй фланкирующей последовательности ДНК, и при этом первая фланкирующая последовательность ДНК и вторая фланкирующая последовательность ДНК представляют собой геномные последовательности в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения или около него.
[415]
Вариант реализации изобретения 190. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189, дополнительно содержащая последовательность вставки, расположенную между первым гомологичным плечом и вторым гомологичным плечом.
[416]
Вариант реализации изобретения 191. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189, отличающаяся тем, что последовательность вставки содержит, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 200, по меньшей мере 300, по меньшей мере 400, по меньшей мере 500, по меньшей мере 750, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 нуклеотидов.
[417]
Вариант реализации изобретения 192. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189, отличающаяся тем, что каждое гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичным или комплементарным, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34, 35 или 38, или последовательности, комплементарной им.
[418]
Вариант реализации изобретения 193. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189, отличающаяся тем, что каждое гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичным или комплементарным, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 или 137, или последовательности, комплементарной им.
[419]
Вариант реализации изобретения 194. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189, отличающаяся тем, что один или более нуклеотидов, присутствующих в геноме однодольного или злакового растения между первой фланкирующей последовательностью ДНК и второй фланкирующей последовательностью ДНК, отсутствуют в молекуле донорной матрицы рекомбинантной ДНК между первым гомологичным плечом и вторым гомологичным плечом.
[420]
Вариант реализации изобретения 195. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 194, отличающаяся тем, что, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 200, по меньшей мере 300, по меньшей мере 400, по меньшей мере 500, по меньшей мере 750, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 нуклеотидов, присутствующих в геноме однодольного или злакового растения между первой и второй фланкирующими последовательностями ДНК, отсутствуют в молекуле донорной матрицы рекомбинантной ДНК между первым и вторым гомологичными плечами.
[421]
Вариант реализации изобретения 196. Молекула или вектор ДНК, содержащие донорную матрицу рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189.
[422]
Вариант реализации изобретения 197. Бактериальная клетка или клетка-хозяин, содержащая донорную матрицу рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189.
[423]
Вариант реализации изобретения 198. Кукурузное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 189.
[424]
Вариант реализации изобретения 199. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза, которая связывается с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA кукурузного или злакового растения, или рядом с ним и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте.
[425]
Вариант реализации изобретения 200. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 199, отличающаяся тем, что сайт-специфическая нуклеаза представляет собой мегануклеазу или хоуминг-эндонуклеазу.
[426]
I-CreI
I-CeuI
I-MsoI,
,
I-DmoI
Вариант реализации изобретения 201. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 200, отличающаяся тем, что сконструированная мегануклеаза или хоуминг-эндонуклеаза включает фермент остова или основной фермент, выбранный из группы, состоящей из , ,  I-SceI I-AniI и .
[427]
Вариант реализации изобретения 202. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 199, отличающаяся тем, что сайт-специфическая нуклеаза представляет собой нуклеазу с цинковыми пальцами (ZFN), содержащую ДНК-связывающий домен и домен расщепления.
[428]
FokI
Вариант реализации изобретения 203. Сконструированная нуклеаза с цинковыми пальцами по варианту реализации изобретения 202, отличающаяся тем, что домен расщепления представляет собой домен нуклеазы .
[429]
Вариант реализации изобретения 204. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 199, отличающаяся тем, что сайт-специфическая нуклеаза представляет собой эффекторную нуклеазу, подобную активаторам транскрипции (TALEN), содержащую ДНК-связывающий домен и домен расщепления.
[430]
PvuII
MutH
TevI
FokI
AlwI
MlyI
SbfI
SdaI
StsI
CleDORF
Clo051
Pept071
Вариант реализации изобретения 205. Сконструированный TALEN по варианту реализации изобретения 204, отличающийся тем, что домен расщепления выбран из группы, состоящей из нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена , нуклеазного домена  и нуклеазного домена .
[431]
Вариант реализации изобретения 206. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 199, отличающаяся тем, что целевой сайт, связанный сайт-специфической нуклеазой, является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичным или комплементарным, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 34, 35 или 38, или последовательности, комплементарной им.
[432]
Вариант реализации изобретения 207. Сконструированная сайт-специфическая нуклеаза по варианту реализации изобретения 199, отличающаяся тем, что целевой сайт, связанный сайт-специфической нуклеазой, является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичным или комплементарным, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам из SEQ ID NO: 87, 91, 95, 98, 105, 109, 113, 117, 122, 126, 130 или 137, или последовательности, комплементарной им.
[433]
Вариант реализации изобретения 208. Конструкция рекомбинантной ДНК, содержащая трансген, кодирующий сайт-специфическую нуклеазу, при этом сайт-специфическая нуклеаза связывается с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA однодольного или злакового растения, или около него и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте.
[434]
Вариант реализации изобретения 209. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 208, отличающаяся тем, что трансген функционально связан с промотором, экспрессируемым в растении.
[435]
Вариант реализации изобретения 210. Конструкция рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 208, отличающаяся тем, что сайт-специфическая нуклеаза представляет собой мегануклеазу или хоуминг-эндонуклеазу, нуклеазу с цинковыми пальцами или эффекторную нуклеазу, подобную активаторам транскрипции (TALEN).
[436]
Вариант реализации изобретения 211. Молекула или вектор ДНК, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 208.
[437]
Вариант реализации изобретения 212. Бактериальная клетка или клетка-хозяин, содержащая конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 208.
[438]
Вариант реализации изобретения 213. Кукурузное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащее конструкцию рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 208.
[439]
Вариант реализации изобретения 214. Донорная матрица рекомбинантной ДНК, содержащая по меньшей мере одно гомологичное плечо и последовательность вставки, при этом по меньшей мере одно гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарным, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности геномной ДНК кукурузного или злакового растения, и при этом последовательность вставки содержит конструкцию рекомбинантной ДНК, содержащую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК нацелена, с целью супрессии, на один или более эндогенных генов оксидазы GA20 или GA3 в однодольном или злаковом растении или в растительной клетке, и при этом транскрибируемая последовательность ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[440]
Вариант реализации изобретения 215. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 214, отличающаяся тем, что по меньшей мере одно гомологичное плечо содержит два гомологичных плеча, включая в себя первое гомологичное плечо и второе гомологичное плечо, при этом первое гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам первой фланкирующей последовательности ДНК, а второе гомологичное плечо содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам второй фланкирующей последовательности ДНК, при этом первая фланкирующая последовательность ДНК и вторая фланкирующая последовательность ДНК представляют собой геномные последовательности в одном и том же геномном локусе однодольного или злакового растения или около него, и при этом последовательность вставки расположена между первым гомологичным плечом и вторым гомологичным плечом и содержит конструкцию рекомбинантной ДНК, содержащую транскрибируемую последовательность ДНК, кодирующую некодирующую молекулу РНК.
[441]
Вариант реализации изобретения 216. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 215, отличающаяся тем, что последовательность транскрибируемой ДНК функционально связана с промотором, экспрессируемым в растении.
[442]
Вариант реализации изобретения 217. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 215, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей белок оксидазы GA, который является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 9, 12, 15, 30 или 33.
[443]
Вариант реализации изобретения 218. Донорная матрица рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 215, отличающаяся тем, что некодирующая молекула РНК содержит последовательность, которая является, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной, по меньшей мере, 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей белок оксидазы GA, который является, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% идентичным SEQ ID NO: 86, 90, 94, 97, 101, 104, 108, 112, 116, 118, 121, 125, 129, 133 или 136.
[444]
Вариант реализации изобретения 219. Композиция, содержащая донорную матрицу рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 214.
[445]
Вариант реализации изобретения 220. Бактериальная клетка или клетка-хозяин, содержащая донорную матрицу рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 214.
[446]
Вариант реализации изобретения 221. Трансгенное кукурузное или злаковое растение, часть растения или клетка растения, содержащие последовательность вставки донорной матрицы рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 214.
[447]
Вариант реализации изобретения 222. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 214, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения: более короткую высоту растения, увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[448]
Вариант реализации изобретения 223. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 222, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет более короткую высоту растения и/или улучшенную устойчивость к полеганию.
[449]
Вариант реализации изобретения 224. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 222, отличающееся тем, что высота трансгенного растения является, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35% или по меньшей мере на 40% ниже чем у контрольного растения.
[450]
Вариант реализации изобретения 225. Трансгенное кукурузное или злаковое растение по варианту реализации изобретения 222, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля трансгенного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения.
[451]
Вариант реализации изобретения 226. Способ получения трансгенной кукурузы или злакового растения, включающий в себя: (а) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата с помощью указанной донорной матрицы рекомбинантной ДНК по варианту реализации изобретения 215, и (b) регенерацию или развитие трансгенной кукурузы или злакового растения из трансформированного эксплантата, при этом трансгенное кукурузное или злаковое растение содержит последовательность вставки донорной матрицы рекомбинантной ДНК.
[452]
Вариант реализации изобретения 227. Способ по варианту реализации изобретения 226, отличающийся тем, что однодольное или злаковое растение трансформируется с помощью опосредованной Agrobacterium трансформации или бомбардировки частицами.
[453]
Вариант реализации изобретения 228. Способ получения кукурузного или злакового растения, имеющего геномное редактирование в эндогенном гене оксидазы GA или около него, включающий в себя: (а) введение по меньшей мере в одну клетку эксплантата кукурузного или злакового растения сайт-специфической нуклеазы или молекулы рекомбинантной ДНК, содержащей трансген, кодирующий сайт-специфическую нуклеазу, при этом сайт-специфическая нуклеаза связывается с целевым сайтом в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA или около него и вызывает двухцепочечный или одноцепочечный разрыв в целевом сайте и (b) регенерацию или развитие редактированной кукурузного или злакового растения по меньшей мере из одной клетки эксплантата, содержащей геномное редактирование в эндогенном гене оксидазы GA или около него отредактированного однодольного или злакового растения.
[454]
Вариант реализации изобретения 229. Способ по варианту реализации изобретения 228, отличающийся тем, что этап введения (a) дополнительно содержит введение донорной матрицы ДНК, содержащей, по меньшей мере, одну гомологичную последовательность или гомологичное плечо, при этом, по меньшей мере, одна гомологичная последовательность или гомологичное плечо является, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарной, по меньшей мере 20, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 35, по меньшей мере 40, по меньшей мере 45, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 70, по меньшей мере 80, по меньшей мере 90, по меньшей мере 100, по меньшей мере 150, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 2500 или по меньшей мере 5000 последовательным нуклеотидам последовательности целевой ДНК, при этом последовательность целевой ДНК представляет собой геномную последовательность в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA однодольного или злакового растения или около него.
[455]
Вариант реализации изобретения 230. Способ по варианту реализации изобретения 228, дополнительно включающий в себя: (c) отбор редактированного кукурузного или злакового растения.
[456]
Вариант реализации изобретения 231. Способ по варианту реализации изобретения 230, отличающийся тем, что этап отбора (c) включает в себя определение, был ли редактирован локус эндогенного гена оксидазы GA с применением молекулярного анализа.
[457]
Вариант реализации изобретения 232. Способ по варианту реализации изобретения 230, отличающийся тем, что этап отбора (c) включает в себя определение, был ли редактирован локус эндогенного гена оксидазы GA путем наблюдения фенотипа растения.
[458]
Вариант реализации изобретения 233. Способ по варианту реализации изобретения 231, отличающийся тем, что фенотип растения представляет собой уменьшение высоты растения относительно контрольного растения.
[459]
Вариант реализации изобретения 234. Способ по варианту реализации изобретения 228, отличающийся тем, что этап введения (а) создает по меньшей мере одну мутацию в геномном локусе эндогенного гена оксидазы GA или около него, и при этом мутация включает замену, делецию, вставку или инверсию одного, или более нуклеотидов относительно последовательности геномной ДНК контрольного растения.
[460]
Вариант реализации изобретения 235. Модифицированное растение кукурузы, имеющее высоту растения менее чем 2000 мм, менее чем 1950 мм, менее чем 1900 мм, менее чем 1850 мм, менее чем 1800 мм, менее чем 1750 мм, менее чем 1700 мм, менее чем 1650 мм, менее чем 1600 мм, менее чем 1550 мм, менее чем 1500 мм, менее чем 1450 мм, менее чем 1400 мм, менее чем 1350 мм, менее чем 1300 мм, менее чем 1250 мм, менее чем 1200 мм, менее чем 1150 мм, менее чем 1100 мм, менее чем 1050 мм или менее чем 1000 мм и либо (i) средний диаметр стебля более 18 мм, более 18,5 мм, более 19 мм, более 19,5 мм, более 20 мм, более 20,5 мм, более 21 мм, более 21,5 мм или более 22 мм, (ii) улучшение устойчивости к полеганию по сравнению с контрольным растением дикого типа, либо (iii) повышение устойчивости к засухе по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[461]
Вариант реализации изобретения 236. Модифицированное кукурузное растение по варианту реализации изобретения 235, отличающееся тем, что кукурузное растение имеет один или более из следующих признаков относительно контрольного растения дикого типа: увеличенный диаметр стебля, улучшенную устойчивость к полеганию, более глубокие корни, увеличенную площадь листа, более раннюю сомкнутость полога, более высокую устьичную проводимость, более низкую высоту початка, повышенное содержание влаги в листве, повышение устойчивости к засухе, повышение эффективности использования азота, снижение содержания антоцианов и площади антоцианов в листьях в нормальных условиях или стрессовых условиях, вызванных ограниченным количеством азота или воды, увеличение массы початка, увеличение уборочного индекса, увеличение урожая, увеличение количества зерна, увеличение массы зерна и/или увеличение плодовитости.
[462]
Вариант реализации изобретения 237. Модифицированное кукурузное растение по варианту реализации изобретения 235, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в по меньшей мере одной ткани междоузлия стебля кукурузного растения ниже, чем в той же ткани междоузлия контрольного растения дикого типа.
[463]
Вариант реализации изобретения 238. Модифицированное злаковое растение, имеющее уменьшенную высоту растения по сравнению с контрольным растением дикого типа, и (i) увеличенный диаметр стебля по сравнению с контрольным растением дикого типа, (ii) улучшенную устойчивость к полеганию по сравнению с контрольным растением дикого типа, или (iii) улучшенную устойчивость к засухе по сравнению с контрольным растением дикого типа.
[464]
Вариант реализации изобретения 239. Модифицированное злаковое растение по варианту реализации изобретения 238, отличающееся тем, что уровень одной или более активных GA в стебле злакового растения ниже, чем в контрольном растении дикого типа.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Уменьшение высоты растений у инбредных линий кукурузы через события трансформации по элементу супрессии оксидазы GA20.
[465]
Agrobacterium
Линия инбредных растений кукурузы была трансформирована с помощью опосредованной  трансформации вектором трансформации, имеющим экспрессионную конструкцию, включающую транскрибируемую последовательность ДНК с последовательностью (SEQ ID NO: 39), кодирующей нацеливающую последовательность (SEQ ID NO: 40) микроРНК под контролем промотора палочковидного вируса риса тунгро (RTBV) (SEQ ID NO: 65), который, как известно, вызывает экспрессию в сосудистых тканях растений. МикроРНК, кодируемая данной конструкцией, содержит последовательность РНК, нацеленную на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в растениях кукурузы с целью супрессии. С помощью данной конструкции было проведено несколько событий трансформации, и эти трансформанты были протестированы в теплице, чтобы определить, не уменьшилась ли у них высота растений по сравнению с нетрансгенными контрольными растениями дикого типа. Как проиллюстрировано на Фиг. 1, значительное уменьшение высоты растений регулярно наблюдалось у трансгенных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии, через несколько событий трансформации (см. 1-8 события) по сравнению с контрольными растениями дикого типа (ДТ). Высота растений для каждого из событий трансформации была рассчитана как среднее значение для приблизительно 10 растений для каждого события и сравнена со средней высотой контрольных растений. Среднеквадратические ошибки, представленные в виде планок погрешностей на Фиг. 1, были рассчитаны для каждого события и контрольных растений. Более того, развитие початка у каждого из этих трансформантов было нормальным.
[466]
Как видно из результатов данного эксперимента, средняя высота растений у растений, экспрессирующих микроРНК, нацеленную на супрессию генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, последовательно снижалась в течение нескольких событий до 35% по сравнению с контрольными растениями. Эти данные подтверждают вывод о том, что эффекты, наблюдаемые с данной конструкцией супрессии, не обусловлены вставкой конструкции в какой-либо один локус в геноме растения.
[467]
Эти данные дополнительно указывают на то, что экспрессия данной конструкции для супрессии оксидазы GA20 при использовании сосудистого промотора RTBV эффективна для создания данных фенотипов высоты растений. Кроме того, ранние данные на растениях кукурузы R0, конститутивно экспрессирующих ту же конструкцию супрессии оксидазы GA20 под контролем различных конститутивных промоторов, также дают низкорослые растения (см. Пример 15 ниже). Таким образом, экспрессия конструкции супрессии, нацеленной на оксидазу GA20, может быть эффективной для уменьшения высоты растения и обеспечения других полезных признаков, связанных с урожайностью и препятствующих полеганию, описанных в данном документе, учитывая, что различные профили экспрессии, включая сосудистую и конститутивную экспрессию, обеспечивают сходные фенотипы высоты растений без видимых отклонений початков.
Пример 2.
Уменьшенная высота растений у гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20.
[468]
Гибридные растения кукурузы, имеющие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, также показали уменьшенную высоту растений по сравнению с контрольными растениями дикого типа при выращивании в полевых условиях. Вычисляли среднюю высоту растения трансгенных гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20, на 10 микроучастках и сравнивали со средней высотой растения контрольных гибридных растений кукурузы дикого типа (нетрансгенных) на 32 микроучастках. Каждая микроучасток для трансгенного и нетрансгенного контроля включала приблизительно 6 растений, хотя фактическое количество растений на участок могло варьироваться в зависимости от количества растений, которые прорастают и развиваются в растения, имеющие початки. Как проиллюстрировано Фиг. 2А, значительное уменьшение средней высоты растений наблюдалось у трансгенных гибридных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии (гибрид SUP-GA20ox), по сравнению с гибридными растениями кукурузы дикого типа (контроль). Среднеквадратические ошибки, представленные в виде планок погрешностей на Фиг. 2А, были рассчитаны для трансгенных гибридов и контрольных растений. Изображение гибридного контрольного растения (слева) рядом с трансгенным гибридным растением, экспрессирующим элемент супрессии оксидазы GA20 (справа), дополнительно приведено на Фиг. 2B.
[469]
В данном эксперименте средняя высота выращенных в поле гибридных растений кукурузы, экспрессирующих микроРНК, нацеленных на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, уменьшилась примерно на 40% по сравнению с контрольными гибридными растениями дикого типа. Эти данные свидетельствуют, что фенотип высоты растений присутствует у гибридных растений кукурузы в дополнении к инбредным линиям. Тем не менее, общая биомасса в данном эксперименте оказалась нейтральной у полукарликовых растений кукурузы по сравнению с контролями.
Пример 3. Увеличенный диаметр стебля у гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20.
[470]
Гибридные растения кукурузы, имеющие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, также продемонстрировали увеличенный диаметр стебля по сравнению с контрольными растениями дикого типа при выращивании в полевых условиях. Диаметр стебля измеряли на втором междоузлие ниже первичного початка. Рассчитывали средний диаметр стебля трансгенных гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20, на 8 микроучастках и сравнивали со средним диаметром стебля контрольных гибридных растений кукурузы дикого типа (нетрансгенных) на 8 микроучастках. Каждая микроучасток включала около 6 растений. Как проиллюстрировано на Фиг. 3А, значительное увеличение среднего диаметра стебля наблюдалось у трансгенных гибридных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии (гибрид SUP-GA20ox), по сравнению с гибридными растениями кукурузы дикого типа (контроль). Среднеквадратические ошибки, представленные в виде планок погрешностей на Фиг. 3А, были рассчитаны для трансгенных гибридов и контрольных растений. Изображение поперечного среза стебля гибридного контрольного растения (контроль; слева) приведено рядом с поперечным срезом стебля трансгенного гибридного растения, экспрессирующего элемент супрессии оксидазы GA20 (SUP_GA20ox; справа), далее изображено на Фиг. 3B.
[471]
В данном эксперименте средний диаметр стебля выращенных в поле гибридных растений кукурузы, экспрессирующих микроРНК, нацеленные на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, увеличился примерно на 13% по сравнению с контрольными гибридными растениями дикого типа. Эти данные демонстрируют, что гибридные растения кукурузы, экспрессирующие микроРНК оксидазы GA20, могут иметь более толстые стебли в дополнение к фенотипу с уменьшенной высотой растений.
Пример 4. Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, имели увеличенный сырой вес початка.
[472]
Гибридные растения кукурузы, содержащие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, также продемонстрировали увеличенный сырой вес початка по сравнению с контрольными растениями дикого типа при выращивании в полевых условиях. Рассчитывали средний вес сырого початка на участок трансгенных гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20, на 24 микроучастках и сравнивали со средним весом сырого початка гибридных контрольных растений кукурузы (нетрансгенных) на 8 микроучастках. Опять же, каждая микроучасток включала около 6 растений. Как изображено на Фиг. 4, увеличение среднего веса сырого початка на участок наблюдалось у трансгенных гибридных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии (гибрид SUP-GA20ox), по сравнению с гибридными растениями кукурузы дикого типа (контроль), и развитие початка и зерна было нормальным. Стандартные отклонения для данного эксперимента, представленные в виде планок погрешностей на Фиг. 4, были рассчитаны для трансгенных гибридов и контрольных растений. Как проиллюстрировано на Фиг. 5, аналогичные результаты были получены на другом сайте для полевых испытаний, который также подвергся повреждению от ветра.
[473]
В данном эксперименте средний вес сырого початка выращенных в поле гибридных растений кукурузы, экспрессирующих микроРНК, нацеленные на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, был увеличен по сравнению с контрольными гибридными растениями дикого типа, что указывает на то, что эти трансгенные растения могут дополнительно иметь улучшенные признаки, связанные с урожайностью. Тем не менее, эти результаты основаны на данных наблюдений без крупномасштабного статистического сравнения с контролями, и показатели урожайности следует испытывать в условиях выращивания на обширных полях.
Пример 5. Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, проявляли повышенную устойчивость к полеганию.
[474]
В месте проведения полевых испытаний повреждение ветром гибридных растений кукурузы перед цветением показало повышенную устойчивость к полеганию растений, экспрессирующих конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, по сравнению с контрольными гибридными растениями дикого типа. В то время как гибридные контрольные растения дикого типа (нетрансгенные) были визуально положенными в ответ на данное сильное ветровое воздействие, трансгенные гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, на соседнем поле, показали устойчивость к полеганию. Чтобы оценить эффекты устойчивости к полеганию гибридными растениями кукурузы, экспрессирующими конструкцию супрессии оксидазы GA20, средний вес сырых початков на участок у трансгенных гибридных растений кукурузы, супрессирующих оксидазу GA20, в двух местах полевых испытаний, подверженных полеганию, сравнивали со средним весом сырых початков гибридных контрольных растений дикого типа. Данные, собранные в этих двух исследованиях, показали, что гибридные контрольные растения имели сниженный средний вес сырого початка примерно на 57% и 81%, соответственно для двух исследований, по сравнению с гибридными растениями, экспрессирующими конструкцию супрессии оксидазы GA20.
[475]
Визуальное наблюдение того, что гибридные трансгенные растения кукурузы, супрессирующие оксидазу GA20, имели повышенную устойчивость к полеганию в сравнении с нетрансгенными контрольными растениями, наряду с увеличением среднего веса сырого початка в данных испытаниях с трансгенными растениями, супрессирующими оксидазу GA20, показывают, что повышенная устойчивость к полеганию может объяснять увеличение среднего веса сырого початка. Таким образом, повышенная устойчивость к полеганию у растений, супрессирующих оксидазу GA20, может дополнительно увеличить потенциал урожайности/стабильность этих трансгенных растений кукурузы благодаря противостоянию эффектам полегания во время суровых погодных явлений.
Пример 6. Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, показали увеличение индекса урожайности.
[476]
Гибридные растения кукурузы, содержащие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, дополнительно продемонстрировали увеличение индекса урожайности по сравнению с контрольными растениями дикого типа при выращивании в полевых условиях. Индекс урожайности трансгенных гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20, определяли для растений, выращенных на 8 микроучастках, и сравнивали с нетрансгенными гибридными контрольными растениями кукурузы. Каждая микроучасток включала около 6 растений. Как проиллюстрировано на Фиг. 6, значительное увеличение индекса урожайности наблюдалось у трансгенных гибридных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии (гибрид SUP-GA20ox), по сравнению с гибридными растениями кукурузы дикого типа (контроль). Среднеквадратические ошибки, представленные в виде планок погрешностей на Фиг. 6, были рассчитаны для трансгенных гибридов и контрольных растений.
[477]
В данном эксперименте индекс урожайности выращенных в поле гибридных растений кукурузы, экспрессирующих микроРНК, нацеленные на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, увеличился примерно на 11% по сравнению с контрольными гибридными растениями дикого типа. Данное увеличение индекса урожайности было дополнительно связано с уменьшением веса соломы по сравнению с контрольными растениями дикого типа, однако у трансгенных растений не наблюдалось различий в общем сухом весе биомассы.
Пример 7. Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, показали увеличение средней оценки урожайности зерна.
[478]
2
Средняя оценка урожайности зерна для гибридных растений кукурузы, экспрессирующих элемент супрессии оксидазы GA20 (идентифицированный в Примере 1), была рассчитана для 16 микроделянок на поле (с приблизительно 6 растениями на участок). Рассчитанная средняя оценка урожайности зерна для этих трансгенных гибридных растений кукурузы, супрессирующих оксидазу GA20, увеличилась примерно на 15% по сравнению с контрольными гибридными растениями кукурузы (Фиг. 7). Оценка урожайности зерна являет собой показатель, который представляет общую оценку ожидаемой урожайности, основанную на показателях признаков початка. Оценка урожайности зерна получена из початков, собранных вручную на небольших участках, и единицами измерения являются кг/га (вместо буш/акр). Оценка урожайности зерна (кг/га) рассчитывается по формуле (количество зерна на единицу площади (зерен/м) × вес одного зерна (мг) × 15,5%/100).
Пример 8. Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20, имели увеличение среднего показателя плодовитости.
[479]
Гибридные растения кукурузы, экспрессирующие элемент супрессии оксидазы GA20 (идентифицированный в Примере 1), также показали в эксперименте на микроучастке, что они обладают повышенной плодовитостью и вторичными початками по сравнению с нетрансгенными гибридными контрольными растениями. Оценка плодовитости была определена по 10 микроучастках трансгенных гибридных растений кукурузы в поле (приблизительно 6 растений на участок). Как проиллюстрировано на Фиг. 8, средний показатель плодовитости трансгенных гибридных растений кукурузы, супрессирующих оксидазу GA20, составлял 3, тогда как средний показатель плодовитости контрольных растений составлял 1. Для определения оценки плодовитости растения анализировали на развитие вторичных початков на стадии развития R1. Растения оценивали по следующей шкале: 1=образование небольшого вторичного початка или его отсутствие; 2=выметывания пестичных столбиков видно на вторичном початке; 3=развитый вторичный початок возникал из листового влагалища початка; и 4=хорошее развитие вторичного початка, подобного первичному початку. Сбор урожая в конце сезона также показал, что по крайней мере некоторые вторичные початки были продуктивными с нормально развитыми зернами.
Пример 9.
Обширные исследования урожайности и признаков на поле с гибридными растениями кукурузы, трансформированными конструкцией супрессии оксидазы GA20.
[480]
Конструкция супрессии оксидазы GA20, описанная в Примере 1, была трансформирована в коммерческую женскую инбредную линию кукурузы, и был создан ряд событий трансформации. Трансформированные растения выращивали и самоопыляли для накопления достаточного количества семян, а затем скрещивали с различными коммерческими мужскими инбредными линиями кукурузы для получения гибридных растений кукурузы. Каждая отдельная мужская инбредная линия, применяемая для получения мужского-женского гибрида, называется тестером. Затем гибридные растения кукурузы с различными тестерами выращивали на обширных полях в полевых условиях в соответствии со стандартной агрономической практикой (SAP - standard agronomic practice). Плотность посадки для SAP составляла 83 640 растений на гектар с интервалом 76 сантиметров.
[481]
Для полевых испытаний, четыре различных события трансформации, экспрессирующих конструкцию супрессии оксидазы GA20, были скрещены с двумя различными линиями коммерческого тестера. Затем гибридные растения кукурузы были протестированы в 16 географических точках в 6 штатах США на Среднем Западе. Урожай трансгенных гибридных растений кукурузы в этих местах рассчитывали и сравнивали с урожаем нетрансгенных гибридных контрольных растений кукурузы. В Таблице 4 представлена разница урожайности в тоннах/гектар между трансгенными гибридными растениями кукурузы для каждого события по сравнению с нетрансгенным контролем. Отрицательное число указывает на снижение урожая. Различия по урожайности со статистическим значением p менее 0,2 указаны в Таблице 4 жирным шрифтом и курсивом. Эта запись также применяется для указания статистической значимости для оставшихся таблиц в этих примерах, если не указано иное. Как показано в Таблице 4 под заголовком SAP, значительное увеличение урожайности наблюдалось у трансгенных гибридных растений кукурузы, экспрессирующих супрессирующую конструкцию (трансгенные растения) в условиях SAP, относительно гибридных растений кукурузы дикого типа (Контроль). Значительное увеличение урожайности наблюдалось по 4 трансгенным событиям и 2 контрольным линиям.
[482]
Сравнимое обширное исследование урожайности было проведено в условиях высокой плотности (HD), с 103 320 растений на гектар и расстоянием между рядами 76 сантиметров, и в сравнении со стандартной агрономической практикой (SAP). Различия в урожайности в условиях HD представлены в Таблице 4 под заголовком HD. Смешанные результаты были получены в этих условиях высокой плотности с урожаем, варьирующимся в зависимости от событий и тестеров. Тем не менее увеличение урожая наблюдалось для двух событий с одним из двух тестеров, и остается возможность для более высокого урожая через большее количество зародышевой плазмы в различных условиях высокой плотности.
<b>Таблица 4. Разница в обширной урожайности между трансгенными растениями и контролем при SAP и HD</b>
<b>SAP</b>
<b>HD</b>
<b>Тестер-1</b>
<b>Тестер-2</b>
<b>По Тестерам</b>
<b>Тестер-1</b>
<b>Тестер-2</b>
<b>По Тестерам</b>
<b>По Событиям</b>
0,23
0,24
0,25
0,22
<b></b><b><i>-0,67</i></b><b></b>
-0,24
Событие 1
<b></b><b><i>0,47</i></b><b></b>
0,17
<b></b><b><i>0,32</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0,47</i></b><b></b>
-0,27
0,08
Событие 2
0,20
<b></b><b><i>0,44</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0,35</i></b><b></b>
-0,32
<b></b><b><i>-0,93</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,65</i></b><b></b>
Событие 3
0,14
0,11
0,13
<b></b><b><i>0,48</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,56</i></b><b></b>
-0,04
Событие 4
0,11
0,29
0,21
0,19
<b></b><b><i>-0,89</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,38</i></b><b></b>
[483]
Испытания признаков также проводились в полях с целью измерения ряда признаков развития и репродуктивных признаков. Эти испытания проводились с нормальной плотностью (SAP), как описано выше, и в условиях посадки сверхвысокой плотности (UHD) 132 840 растений на гектар с расстоянием между рядами 50 сантиметров. Испытания проводились на гибридных растениях кукурузы с 7 событиями трансформации и 3 тестерами, и данные для каждого тестера были объединены по 7 событиям.
[484]
Таблица 5 суммирует результаты испытаний признаков на гибридных растениях кукурузы. Измерением является либо разница в процентах, либо разница в днях или количестве листьев между трансгенными растениями и контролем. Где это уместно, стадия развития, такая как R3 и тому подобное, на которой было выполнено измерение, указана в скобках под столбцом "Название Признака". Сбрасывание пыльцы измеряется с точки зрения количества дней от прорастания до 50% растений, сбрасывающих пыльцу. Появление выметывания пестичных столбиков измеряют по количеству дней от прорастания до 50% растений, выметывающих пестичные столбики. Интервал между сбрасыванием пыльцы и выметыванием пестичных столбиков представляет собой измерение количества дней от 50% растений, сбрасывающих пыльцу до выметывания пестичных столбиков. Сила стебля представляет собой меру силы, при которой сегмент стебля ломается в поперечном направлении с применением специального инструмента для ломания стебля. Индекс площади листьев (LAI - leaf area index) представляет собой безразмерную величину, характеризующую протяженность полога растения, определяемую как площадь одностороннего зеленого листа на единицу площади поверхности земли в пределах пространства широколиственного полога.
Таблица 5. Различия в признаках между трансгенными и контрольными растениями в SAP и UHD.
<b>76 см SAP</b>
<b>50 см UHD</b>
<b>Измерение</b>
<b>Название Признака</b>
Тестер-1
Тестер-2
Тестер-3
Тестер-1
Тестер-2
Тестер-3
<i>% Разницы</i>
Высота растения (R3)
<b></b><b><i>-46</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-47,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-45,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-38,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-42,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-41,6</i></b><b></b>
Высота растения ниже 1,82 метров
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
Высота початка (R3)
<b></b><b><i>-35,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-39,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-38,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-48,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-51,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-48,4</i></b><b></b>
Высота початка выше 45 сантиметров
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<b></b><b><i>ДА</i></b><b></b>
<i></i>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<i>% Разницы</i>
Длина междоузлия (початок минус 2) (R3)
<b></b><b><i>-34,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-34,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-34</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-44,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-36,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-42,3</i></b><b></b>
Длина междоузлия (початок минус 4) (R3)
<b></b><b><i>-54,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-49,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-54,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-60,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-55,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-59,4</i></b><b></b>
Диаметр стебля (2 узла ниже початка) (R3)
4,4
5,8
4,5
<b></b><b><i>37,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>43,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>35,5</i></b><b></b>
Диаметр стебля (4 узла ниже початка) (R3)
3,9
-1,6
1
<b></b><b><i>16,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>15,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>16,5</i></b><b></b>
Прочность стебля 2-го узла ниже початка (R5)
10,2
0,1
0,7
<b></b><b><i>50,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>115</i></b><b></b>
<i>Н/Д</i>
Прочность стебля 4-го узла ниже початка (R5)
-13,6
<b></b><b><i>-22,3</i></b><b></b>
-11,5
<b></b><b><i>13,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>78,4</i></b><b></b>
<i>Н/Д</i>
<i></i>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<i>Дней</i>
Интервал между сбрасыванием пыльцы и выметыванием пестичных столбиков
<b></b><b><i>-0,88</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,33</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,07</i></b><b></b>
Сбрасывание пыльцы
<b></b><b><i>1,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0,75</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0,13</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,21</i></b><b></b>
<b></b><b><i>0,31</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,91</i></b><b></b>
Появление выметывания пестичных столбиков
<b></b><b><i>0,63</i></b><b></b>
-0,25
<b></b><b><i>-0,38</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,26</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,06</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,03</i></b><b></b>
<i></i>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<i>Число</i>
Зеленый лист № (R4)
<b></b><b><i>-1,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,4</i></b><b></b>
Зеленый лист № (R5)
<b></b><b><i>-1,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-2,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-1,7</i></b><b></b>
Зеленый лист № (7 дней после R5)
-0,5
<b></b><b><i>-0,4</i></b><b></b>
-0,3
<b></b><b><i>-1,1</i></b><b></b>
-0,3
<b></b><b><i>-0,6</i></b><b></b>
Зеленый лист № (14 дней после R5)
<b></b><b><i>-0,2</i></b><b></b>
-0,4
-0,2
<b></b><b><i>-0,7</i></b><b></b>
-0,3
<b></b><b><i>-0,3</i></b><b></b>
<i></i>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<i>% Разницы</i>
Индекс площади листьев (V6)
<b></b><b><i>30,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>33,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>51,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-33,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-14,8</i></b><b></b>
-16,6
Индекс площади листьев (V8)
<b></b><b><i>20,1</i></b><b></b>
-1,4
15,4
<b></b><b><i>37,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>29,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>32,5</i></b><b></b>
Индекс площади листьев (V10)
10,7
2
8,5
<b></b><b><i>25,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>27,9</i></b><b></b>
-7,7
Индекс площади листьев (V12)
2,3
-5,4
3,6
<b></b><b><i>20,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>19</i></b><b></b>
<b></b><b><i>15,7</i></b><b></b>
[485]
Как показано в Таблице 5, у трансгенных растений по сравнению с контролем наблюдалось значительное уменьшение высоты растения, высоты початка и длины междоузлия. Трансгенные растения постоянно демонстрируют высоту растений ниже 1,82 метра и высоту початков выше 45 сантиметров, что позволяет собирать урожай без внесения изменений в оборудование. В этом эксперименте наблюдалось увеличение диаметра стебля, особенно в условиях с более высокой плотностью посадки.
[486]
Таблица 6 суммирует результаты испытания признаков початка для гибридной кукурузы. Испытания проводились на гибридных растениях кукурузы с 7 событиями трансформации и 3 тестерами, и данные для каждого тестера были объединены по 7 событиям. Измерения представляют собой разницу в процентах дельты между трансгенными растениями и контролем. Где это уместно, стадия развития, такая как R3 и тому подобное, на которой было выполнено измерение, указана в скобках под столбцом "Название Признака". Площадь початка представляет собой средний размер початка на графике с точки зрения площади с двухмерного изображения, полученного при визуализации початка, включая зерна и свободное пространство. Диаметр початка представляет собой средний размер диаметра початка, измеренный как максимальная "широкая" ось початка по его самому широкому сечению. Длина початка представляет собой средний размер длины початка, измеренный от кончика початка по прямой линии до основания узла початка. Кончик початка void_pct представляет собой средний размер процента площади свободного пространства в верхней 30% области початка, с двухмерного изображения, полученного при визуализации початка, включая зерна и свободное пространство. Свободное пространство початка представляет собой средний размер процента площади свободного пространства на початке, с двухмерного изображения, измеренного при визуализации початка, включая зерна и свободное пространство. Оценка урожайности зерна определена в Примере 7. Зерна на единицу площади измеряются как среднее значение числа зерен на единицу площади поля. Початки собирали с заданной длины ряда, обычно одного метра, и обмолачивали и объединяли для подсчета зерен, а затем количество пересчитывали в общее количество зерен на единицу площади поля. Вес одного зерна измеряли как среднее значение веса на зерно. Это рассчитывалось как соотношение (масса образца зерна отрегулированная до 15,5% влажности)/(количество образца зерна). Зерна на початок представляют собой среднее значение количества зерен на початок. Это рассчитывалось как (общий вес зерна/(единичный вес зерна* общее количество початков), где общий вес зерна и общее количество початков измеряются по образцам початка на площади от 0,19 до 10 квадратных метров.
<b>Таблица 6. Различия в признаках початка между трансгенными и контрольными растениями, под SAP и UHD.</b>
<b>76 см SAP</b>
<b>50 см UHD</b>
<b> Название</b><b>Признака</b>
Тестер-1
Тестер-2
Тестер-3
Тестер-1
Тестер-2
Тестер-3
Область початка (R6) (см<sup>2</sup>)
<b></b><b><i>5,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>11,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>4,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>14,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>16,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>8,8</i></b><b></b>
Диаметр початка (R6) (мм)
<b></b><b><i>-2,2</i></b><b></b>
-0,7
<b></b><b><i>-2,5</i></b><b></b>
-1,7
1,3
-1,8
Длина початка (R6) (см)
<b></b><b><i>7,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>12,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>7,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>15,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>14,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>11,1</i></b><b></b>
Кончик початка свободное пространство_pct (R6) (%)
-9,1
-1,1
7,7
-5.8
24
11,1
Свободное место в початке (R6) (%)
-3,3
1,9
9,5
-6,7
10
16,4
Оценка урожайности зерна (R6) (кг/га)
2,8
-4,6
-5,0
0,2
19,2
0,9
Зерна на единицу площади (R6) (зерна/м<sup>2</sup>)
-0,7
-9,8
-6,7
<b></b><b><i>11,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>34,4</i></b><b></b>
9
Зерен на початок (R6) (количество)
-3,2
0,5
-3,5
<b></b><b><i>19,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>35,2</i></b><b></b>
6,5
Вес одного зерна (R6) (мг)
1,8
5,1
1,1
<b></b><b><i>-10,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-12,3</i></b><b></b>
-7,5
[487]
Как показано в Таблице 6, наблюдалось значительное увеличение площади початка и длины початка в этих экспериментах для трансгенных растений по сравнению с контролем. Также было заметно уменьшение диаметра початка. В этом эксперименте оценка урожайности зерна была в основном нейтральной между трансгенными растениями и контролем.
[488]
Дополнительные данные были собраны в полевых условиях со стандартной плотностью по 8 событиям, скрещенным с одним тестером, что свидетельствует об уменьшении высоты растения, высоты початка и длины междоузлия, а также увеличении диаметра стебля и уборочного индекса по сравнению с контролем (данные не показаны). Высоту растений измеряли от земли до самого верхнего листа с язычком на стадии R3. Высота початка измерялась от земли до узла початка на стадии R3. Диаметр стебля измеряли в середине 2-го узла стебля ниже початка, если не указано иное. Эти данные продемонстрировали высокую пенетрантность признаков высоты растений и стебля по событиям, хотя увеличение плодовитости (или количества вторичных початков) не было значительным или выраженным в этих исследованиях.
[489]
В отдельном эксперименте рост высоты растения измеряли от стадии V11 до стадии R1 и далее. На Фиг. 9 проиллюстрированы различия в высоте растений между трансгенными растениями и контролем за этот период времени. На фигуре нарисованы пунктирные линии для высоты 5 футов и 6 футов для справки.
Пример 10. Трансгенные растения проявляли улучшенные признаки в стрессовых условиях, вызванных недостатком азота и воды в условиях контролируемой среды.
[490]
Этот пример иллюстрирует усиленную реакцию на стресс, вызванный недостатком воды и азота у трансгенных растений кукурузы, имеющих конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, по сравнению с контролем в автоматизированной теплице (АТ) или в поле, как указано. Устройство и способы автоматического фенотипического анализа растений в АТ описаны, например, в публикации патента США № 2011/0135161, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
[491]
В условиях АТ растения кукурузы тестировали в пяти различных условиях, включая отсутствие стресса, стрессовые условия слабого и умеренного дефицита азота и умеренного дефицита воды. Растения кукурузы выращивали в особых стрессовых условиях, приведенных в Таблице 7.
<b>Таблица 7. Описание пяти условий роста в АТ.</b>
<b>Условия</b>
<b>Объемное содержание воды (ОСВ) </b>
<b>Концентрация азота</b>
Отсутствие стресса
50%
8 мМ
Водный дефицит: мягкий
40%
8 мМ
Водный дефицит: умеренный
35%
8 мМ
Дефицит азота: мягкий
50%
6 мМ
Дефицит азота: умеренный
50%
4 мМ
[492]
Дефицит воды определяются как удельное объемное содержание воды (ОСВ), которое ниже, чем ОСВ растения, не подверженного стрессу. Например, растение, не подверженное стрессу можно поддерживать при 50% ОСВ, а ОСВ для анализа дефицита воды можно определить между 35% и 40% ОСВ. Данные были собраны с применением визуализации в видимом свете и гиперспектральной визуализации, а также непосредственного измерения массы горшка и количества воды и питательных веществ, ежедневно вносимых к отдельным растениям. Дефицит азота определяется (частично) как удельная концентрация азота в мМ, которая ниже концентрации азота в растении, не подверженном стрессу. Например, растение, не подверженное стрессу может поддерживаться при 8 мМ азота, тогда как концентрация азота, применяемая в анализе дефицита азота, может поддерживаться в концентрации от 4 до 6 мМ.
[493]
2
Для проверки было измерено до десяти параметров. Измерения на основе визуализации в видимом свете: высота растения, биомасса и площадь полога. Высота растения (PlntH) относится к расстоянию от вершины горшка до самой высокой точки растения, полученному из бокового изображения (мм). Биомасса (Bmass) определяется как расчетный сырой вес побегов (г) растения, полученная из изображений, полученных с разных углов. Площадь полога (Cnop) определяется как площадь листа, если смотреть сверху вниз (мм). Оценка и площадь антоциана, оценка и концентрация хлорофилла и оценка содержания воды были измерены с помощью гиперспектральной визуализации. Оценка антоцианов (AntS) представляет собой оценку антоцианов в листовом пологе, полученную из гиперспектральной визуализации сверху вниз. Область антоцианов (AntA) представляет собой оценку антоцианов в стебле, полученную из гиперспектральной визуализации при виде сбоку. Оценка хлорофилла (ClrpS) и концентрация хлорофилла (ClrpC) являются измерениями хлорофилла в листовом пологе, полученными из гиперспектральной визуализации сверху вниз, где оценка хлорофилла измеряется в относительных единицах, а концентрация хлорофилла измеряется в единицах частей на миллион (чнм). Содержание воды в листве (FlrWtrCt) представляет собой измерение воды в листовом пологе, полученное из гиперспектральной визуализации сверху вниз. Коэффициент полезного использования воды (WUE - Water Use Efficiency) определяется из граммов растительной биомассы на литр добавленной воды. Внесенная вода (WtrAp) представляет собой прямое измерение воды, добавленной в горшок (горшок без отверстия) в ходе эксперимента. Эти физиологические эксперименты были организованы таким образом, чтобы тестируемые трансгенные растения сравнивались с контролем. Трансгенные растения с двумя событиями трансформации измеряли по сравнению с контролем. Все данные представлены в процентном различии дельты трансгенного растения по отношению к контролю. Точка измерения со статистическим p-значением <0,1 показана жирным курсивом. Другие точки измерений имеют p-значение >0,1.
[494]
В Таблице 8 приведены результаты испытания признаков в АТ, измеренных через 21 день после посадки на вегетативной стадии, тогда как в Таблице 9 приведены результаты испытаний признаков в АТ, измеренных через 55 дней после посадки на репродуктивной стадии, у трансгенных растений, имеющих одно из двух событий конструкции супрессии оксидазы GA20, описанной в Примере 1, относительно контрольных растений.
Таблица 8. Трансгенные растения против контрольных растений в теплице в нормальных и стрессовых условиях, через 21 день после посадки.
<b>Событие 1</b>
<b></b>
<b>Событие 2</b>
<b>Отсутствие стресса</b>
<b>Дефицит азота</b>
<b>Водный дефицит</b>
<b></b>
<b>Отсутствие стресса</b>
<b>Дефицит азота</b>
<b>Водный дефицит</b>
<b>Название Признака </b>
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Высота растения
<b></b><b><i>-17,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-20,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-19</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-21,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-20,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-16,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-19,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-21,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-22,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-21,3</i></b><b></b>
Биомасса
-0,06
<b></b><b><i>-8,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>5,61</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-7,48</i></b><b></b>
<b></b><b><i>8,47</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
-0,32
<b></b><b><i>-8.11</i></b><b></b>
-1,77
<b></b><b><i>-6,45</i></b><b></b>
-1,48
Площадь полога
0,79
<b></b><b><i>-7,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>11,4</i></b><b></b>
1,45
<b></b><b><i>16,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
0,36
<b></b><b><i>-4,84</i></b><b></b>
<b></b><b><i>5,62</i></b><b></b>
4,38
2,75
Содержание влаги в листве
<b></b><b><i>18,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>23</i></b><b></b>
<b></b><b><i>16,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>55</i></b><b></b>
10,1
<b></b><b><i>8,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>30,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>15,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>55,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>21,4</i></b><b></b>
Площадь антоцианов
<b></b><b><i>-38,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-28,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-35,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-41</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-55,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-42,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-39,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-35,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-46</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-26</i></b><b></b>
Оценка антоцианов
-10,21
-14,5
-2,9
<b></b><b><i>129,5</i></b><b></b>
2,4
<b></b><b><i>78,1</i></b><b></b>
4,5
3,3
<b></b><b><i>119,6</i></b><b></b>
-2,5
Концентрация хлорофилла
1,2
0,68
0,04
<b></b><b><i>-5,84</i></b><b></b>
3,27
<b></b><b><i>-8,56</i></b><b></b>
-2,03
-3,46
-4,14
2,05
<b>Таблица 9. Трансгенные растения против контрольных растений в теплице в нормальных и стрессовых условиях, через 55 дней после посадки. </b>
<b>Событие 1</b>
<b></b>
<b>Событие 2</b>
<b>Отсутствие стресса</b>
<b>Дефицит азота</b>
<b>Водный дефицит</b>
<b></b>
<b>Отсутствие стресса</b>
<b>Дефицит азота</b>
<b>Водный дефицит</b>
<b>Название Признака </b>
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Легкий
Умеренный
Высота растения
<b></b><b><i>-31,9</i></b><b></b>
<i>Н/Д</i>
<i>Н/Д</i>
<b></b><b><i>-40,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-25,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-33,3</i></b><b></b>
<i>Н/Д</i>
<i>Н/Д</i>
<b></b><b><i>-41,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-29,6</i></b><b></b>
Биомасса
<b></b><b><i>-26,1</i></b><b></b>
<i>Н/Д</i>
<i> Н/Д</i>
<b></b><b><i>-25,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-5,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-26,1</i></b><b></b>
<i>Н/Д </i>
<i>Н/Д </i>
<b></b><b><i>-26,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-13,7</i></b><b></b>
Масса початка
<b></b><b><i>60,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>28,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>36</i></b><b></b>
10,7
<b></b><b><i>203,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>75,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>40,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>33,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>23,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>109,9</i></b><b></b>
Вес соломы
<b></b><b><i>-12,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-12,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-15,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-13,7</i></b><b></b>
0
<b></b><b><i>-12,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-11,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-22,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-11,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-6,8</i></b><b></b>
Уборочный индекс
<b></b><b><i>74,6</i></b><b></b>
<b></b><b><i>42,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>60,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>25,9</i></b><b></b>
<b></b><b><i>192</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>90,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>54,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>65</i></b><b></b>
<b></b><b><i>35,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>120,5</i></b><b></b>
Внесенная вода
<b></b><b><i>-8</i></b><b></b>
<i>Н/Д </i>
<i>Н/Д</i>
<b></b><b><i>-16,8</i></b><b></b>
<b></b><b><i>3,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-11,3</i></b><b></b>
<i>Н/Д </i>
<i>Н/Д</i>
<b></b><b><i>-16,3</i></b><b></b>
-2,3
WUE
<b></b><b><i>-19,2</i></b><b></b>
<i>Н/Д </i>
<i>Н/Д </i>
<b></b><b><i>-10,1</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-8,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i></i></b><b></b>
<b></b><b><i>-16,5</i></b><b></b>
<i>Н/Д </i>
<i>Н/Д </i>
<b></b><b><i>-12,5</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-11,3</i></b><b></b>
[495]
Как показано в Таблице 8, по сравнению с контролем трансгенные растения проявляли некоторые улучшенные признаки, связанные со стрессоустойчивостью, и сохраняли другие положительные признаки в условиях стресса. Высота растений значительно уменьшилась во всех обработках и не была затронута стрессовым состоянием. Площадь биомассы и полога была нейтральной в условиях отсутствия стресса, но увеличилась в более тяжелых стрессовых условиях. Содержание влаги в листве значительно увеличилось в условиях отсутствия стресса и стрессовых условиях, что указывает на то, что трансгенные растения удерживают больше воды в тканях листьев. Площадь антоцианов значительно уменьшилась в условиях отсутствия стресса и стрессовых условиях, что указывает на отсутствие дефицита азота у трансгенных растений.
[496]
Как показано в Таблице 9, по сравнению с контролем, у трансгенных растений наблюдалось значительное уменьшение в признаках внесенной воды, WUE, биомассы и массы стебля, что указывает на то, что у трансгенных растений была улучшена эффективность использования воды, причем растениям с более низкой биомассой требуется меньше воды. Уборочный индекс значительно возрос в условиях отсутствия стресса и стрессовых условиях.
Пример 11. Трансгенные растения проявляли повышенную устойчивость к засухе, устьичную проводимость и скорость роста корня на репродуктивных стадиях как при стандартной, так и при высокой плотности посадки в поле.
[497]
18
18
18
Прямые наблюдения были сделаны по уменьшению скручивания листьев в трансгенных растениях кукурузы, имеющих конструкцию супрессии оксидазы GA20 из Примера 1, в условиях засухи в полевых условиях по сравнению с контрольными растениями. Скручивание листьев кукурузы происходит, когда потенциал воды в листьях падает ниже порога примерно -1,1 МПа. Устьичная проводимость также уменьшается при водном стрессе. Стабильные соотношения изотопов кислорода (δO) применялись в качестве показателя устьичной проводимости, которые обратно пропорциональны устьичной проводимости. Значительное снижение δO, и таким образом, значительное увеличение устьичной проводимости трансгенных растений по сравнению с контролем наблюдалось в образцах листьев початка, собранных на стадии R5 (см. Фиг. 10). Данные были взяты из трансгенных растений за два события трансформации и усреднены по 10 тестерам с 2 повторениями на тестер. Увеличение δO в листьях контрольных растений указывает на то, что устьичная проводимость была ниже для контроля. В сочетании с уменьшением скручивания листьев, наблюдаемым в полевых условиях, значительное увеличение устьичной проводимости в листьях трансгенных растений в результате испытаний на урожайность в 15 из 16 полевых местоположений указывает на улучшение состояния влаги в листьях во время позднего вегетационного роста трансгенных растений.
[498]
Эффективное поглощение воды корнями является важным фактором роста растений. Чтобы измерить прогресс в развитии глубины укоренения, емкостные датчики влажности почвы Sentek SOLO были установлены на стадии V4 в ряду между растениями в одном полевом местоположении. Влажность почвы ежечасно измеряли емкостными датчиками на глубинах 10, 20, 30, 50, 70, 90, 120 и 150 см от уровня земли. Глубина фронта укоренения определялась наличием суточных структур при истощении влаги в почве, зафиксированных датчиками. Корневая активность уже присутствовала на глубине 10, 20 и 30 см во время установки на стадии V4. Мы обнаружили первое появление истощения влаги в почве на глубинах 50, 70 и 90 см. Почва на глубине 120 и 150 см была насыщена в течение всего периода вегетации. Хотя рост корней, возможно, достиг этих глубин, мы не смогли обнаружить активность корней на этих глубинах для этого эксперимента из-за невозможности обнаружить истощение влаги в почве в насыщенной зоне. На Фиг. 11 проиллюстрировано время (дни после посадки) для фронтального корня растения, необходимое для достижения различных глубин на оси Y. Линии с кружками предназначены для растений с шагом междурядий 76 сантиметров и густотой посадки 83 640 растений на гектар, а линии с квадратами - для растений с шагом междурядий 50 сантиметров и густотой посадки 135 300 растений на гектар. Стадии роста показаны на оси X.
[499]
Как проиллюстрировано на Фиг. 11, рост корня в этом эксперименте был сходным между трансгенными и контрольными растениями вплоть до V12, причем корни достигали глубины 50 и 70 см через около 30 и 36 дней после посадки, соответственно. Однако корни трансгенных растений достигли глубины 90 см в R1 или раньше (то есть, через около 50 дней после посадки), или на около 20 дней раньше, чем корни контрольных растений. Трансгенные растения проявляли повышенную скорость фронта укоренения после стадии V11/V12, что может привести к усилению предотвращения засухи в критический период развития растения во время цветения. Это увеличение скорости фронта укоренения может позволить трансгенным растениям использовать более глубокие запасы почвенной воды в течение критического периода на стадии R1, что позволяет избежать, уменьшить или минимизировать влияние засухи на цветение и опыление. Улучшенное опыление в условиях засухи может улучшить набор зерен и потенциал урожайности.
[500]
Чтобы дополнить приведенный выше полевой эксперимент с датчиками влажности, скорость корневого фронта для трансгенных растений кукурузы, имеющих конструкцию супрессии оксидазы GA20 из Примера 1 (n=10), была измерена в эксперименте с корневым ящиком и сравнена с контрольными растениями дикого типа (n=9). Корневые ящики из плексигласа (1,5 метра в высоту и пятнадцать на двадцать сантиметров в поперечном сечении; толщина стенок 1,25 сантиметра) были заполнены смесью # 10 полевая почва/вермикулит/перлит (соотношение 1:1:1) и применялись для визуализации корней каждого растения. Максимальная глубина укоренения в каждом ящике измерялась через равные промежутки времени после посадки (примерно каждые два дня). В этом эксперименте средняя глубина фронтового корня трансгенных растений была последовательно больше или глубже, чем у контрольных растений ДТ, начиная с около 21-го дня после посадки (то есть примерно на стадии V4) и продолжая, по крайней мере, до 34 дня после посадки, когда измерения были остановлены (данные не показаны). Это наблюдение в корневых ящиках с контролируемой средой согласуется с увеличенной глубиной корней, наблюдаемой с помощью датчиков влажности в полевых условиях, и показывает, что более глубокие корни могут возникать на более ранних стадиях развития, хотя различия в глубине корней не были обнаружены в полевом эксперименте до окончания стадии V11/V12.
[501]
Хотя признаки корня, измеренные в экспериментах с контролируемой средой, описанных в Примере 14 ниже, как правило, не показывают существенной разницы в глубине корня (или показывают только минимальную разницу), эксперимент с вермикулитом в Примере 14 проводился на стадии V3 до того, как различие в глубине корня наблюдалось в эксперименте с корневым ящиком в этом Примере 11 (то есть, начиная со стадии V4), и хотя эксперимент с аэропонным аппаратом в Примере 14 проводился на стадии V5, аэропоническая система не имеет какого-либо взаимодействия растения с почвой (в отличие от эксперимента с вермикулитом), которое может повлиять на нормальный (или более естественный) рост и развитие корней.
Пример 12. Трансгенные растения имеют более высокую устьичную проводимость в нормальных условиях и в условиях засухи и поддерживают более высокую способность фотосинтеза в условиях стресса от засухи.
[502]
В теплице также измеряли уровни устьичной проводимости и фотосинтеза в листьях при нормальных условиях и условиях засухи. Для этого эксперимента трансгенные растения с конструкцией супрессии оксидазы GA20 из Примера 1 и контрольные растения дикого типа подвергали хорошему поливу (1500 мл воды в день) или воздействию ограниченного количества воды/хронической засухи (1000 мл воды в день). Двадцать (20) повторений контрольных растений дикого типа и десять (10) повторений на событие (всего два события) для конструкции супрессии оксидазы GA20 подвергали хорошему поливу, и сто сорок (140) повторений контрольных растений дикого типа и семьдесят (70) повторений на событие (всего два события) для конструкции супрессии оксидазы GA20 подвергали воздействию ограниченного количества воды/хронической засухи. Пограничные растения соответствующей высоты (гибриды для растений ДТ и инбреды для трансгенных растений) были размещены по периметру экспериментальных растений в теплице для нормализации эффектов затенения. Суточные измерения устьичной проводимости и фотосинтеза проводились утром и днем с помощью устройства LI-COR на стадии V12 в соответствии с инструкциями производителя. Как проиллюстрировано на Фиг. 12A, было установлено, что устьичная проводимость была постоянно выше для трансгенных растений как в условиях хорошего полива, так и в условиях засухи в оба момента времени дня. Также наблюдалось, что у трансгенных растений было меньше скручивание листьев в условиях засухи. Как дополнительно проиллюстрировано на Фиг. 12B, более высокая скорость фотосинтеза также наблюдалась в ответ на условия засухи, которая существенно не реагировала на увеличение солнечного света во второй половине дня, в отличие от контрольных растений, которые показали снижение скорости фотосинтеза днем, особенно в условиях засухи.
[503]
Эти результаты (в сочетании с отдельными полевыми наблюдениями выше) демонстрируют, что трансгенные растения с конструкцией супрессии оксидазы GA20 не только имели более высокий газообмен и фотосинтез в листе, но поддерживали более высокий газообмен и фотосинтез в листе в ответ на условия ограничения воды/хронической засухи. Дополнительно было отмечено, что у трансгенных растений температура листьев была ниже, чем у контрольных растений (данные не показаны). Таким образом, предсказано, что трансгенные растения, экспрессирующие конструкцию супрессии оксидазы GA20, могут обладать большей устойчивостью к засухе и способностью поддерживать фотосинтез в условиях ограничения воды по сравнению с контролями. Не ограничиваясь теорией, дополнительно предлагается, что более глубокие корни, наблюдаемые для трансгенных растений с конструкцией супрессии оксидазы GA20 (особенно на поздних вегетативных и ранних репродуктивных стадиях), могут способствовать устойчивости к засухе этих трансгенных растений.
Пример 13. Трансгенные растения проявляли репродуктивные признаки, сравнимые с контрольными в тепличных условиях.
[504]
Трансгенные растения кукурузы, имеющие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, а также контрольные растения выращивали в горшках в теплице до репродуктивной стадии R1, а репродуктивные признаки измеряли на стадиях V8 и R1. Данные были взяты для трансгенных растений двух событий трансформации (Таблица 10). Данные представлены либо с точки зрения разницы в количестве дней, либо в виде процентной разницы для трансгенных растений по сравнению с контролем дикого типа, причем существенные изменения выделены жирным шрифтом. Названия признаков определены в Примерах 9 и 10 выше. Конкретные наблюдения за признаками и классами признаков цветения, незрелого початка, зрелого початка и султана суммированы в таблице. В целом, репродуктивное развитие у трансгенных растений было почти эквивалентно контрольным растениям с небольшими или незначительными изменениями.
<b>Таблица 10. Тепличные репродуктивные признаки трансгенных растений против контроля.</b>
<b>Класс</b>
<b>Признак</b>
<b>Событие</b><b>1</b>
<b>Событие 2</b>
<b>Наблюдения</b>
Развитие (R1)
Высота растения
<b></b><b><i>-17,60%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-14%</i></b><b></b>
Более короткое растение
Количество верхушек листа
<b></b><b><i>2%</i></b><b></b>
1,10%
Незначительное увеличение числа листьев (0,3)
Цветение (R1)
Дни до 50% выметывания пестичных столбиков и 50% сбрасывания пыльцы
<b></b><b><i>-0,4 дня</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-0,5 дня</i></b><b></b>
Немного замедленное время сбрасывания пыльцы с нормальным временем выметывания пестичных столбиков; более низкое ASI
Дней до 50% сбрасывания пыльцы
<b></b><b><i>1,10%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>1,10%</i></b><b></b>
Дней до 50% видимой кисти нитей рыльца
0,40%
-0,10%
Незрелый початок (V8)
Диаметр незрелого початка у основания
<b></b><b><i>-28,50%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-22,60%</i></b><b></b>
Медленное начало развития початка
Длина междоузлия незрелого початка
-6,10%
-4,20%
Длина незрелого початка
<b></b><b><i>-42%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-31%</i></b><b></b>
Незрелые семена/рядВдоль
<b></b><b><i>-38,70%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-29,70%</i></b><b></b>
Зрелый початок (R1)
Семена/Ряд Продольно
-1%
-0,40%
Правильное развитое зрелого початка
Номер ряда семени
2,20%
0%
Общее количество цветочков
1,10%
-0,50%
Количество междоузлий стержня початка кукурузы
-3,60%
0,10%
Султан (R1)
Количество ветвей султана
-5,40%
-3,80%
Правильно развившийся султан, но с более коротким первым междоузлием
Количество ветвей первичного бокового султана
<b></b><b><i>-10,40%</i></b><b></b>
-9,10%
Количество ветвей вторичного бокового султана
-17,60%
-13,70%
Плотность вторичной оси цветочка
-8,50%
-0,40%
Длина междоузлия первого султана
<b></b><b><i>-34,10%</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-32,70%</i></b><b></b>
Пример 14. Корневые признаки трансгенных и контрольных растений в тепличных условиях.
[505]
Трансгенные растения, имеющие конструкцию супрессии оксидазы GA20, описанную в Примере 1, и контрольные растения выращивали в теплице на среде с вермикулитом до стадии V3 или в аэропонном аппарате до стадии V5. Растения были извлечены, а корни промыты для непосредственного или оптического измерения корневых признаков. Трансгенные растения с 4 событиями трансформации были протестированы в сравнении с контролем. Результаты измерений суммированы в Таблицах 11 и 12 для растений, выращенных на вермикулитовой среде, или в аэропонном аппарате для роста, соответственно. Количество точек ветвления корня измеряет количество концевых точек ветвления корня растения посредством визуализации корня растения. Изображение корневой системы было представлено в виде наброска для измерения длины корня. Было получено до 40 изображений под разными углами вокруг вертикальной оси корня, и измерения были усреднены по изображениям. Общая длина корня измеряет совокупную длину корней растения, как если бы все корни были выстроены в ряд, путем визуализации корневой системы растения. Изображение корневой системы было представлено в виде наброска для измерения длины корня. Было получено до 40 изображений под разными углами вокруг вертикальной оси корня, и измерения были усреднены по изображениям. Данные в Таблицах 11 и 12 представлены в процентном различии дельты трансгенных растений по сравнению с контролем со значительными изменениями, представленными жирным шрифтом.
<b>Таблица 11. Черты тепличных корней трансгенных растений по сравнению с контролем на V3, в среде с вермикулитом</b>
<b>Событие 1</b>
<b>Событие 2</b>
<b>Событие 3</b>
<b>Событие 4</b>
<b>Средний диаметр корня</b>
<b></b><b><i>-12,2</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-9,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-13,8</i></b><b></b>
-5,9
<b>Количество точек ветвления корня</b>
<b></b><b><i>12,6</i></b><b></b>
5,8
<b></b><b><i>11,7</i></b><b></b>
-0,4
<b>Сухая масса корня </b>
1
-5,6
-7,1
-5
<b>Площадь поверхности корня </b>
2,2
-6,2
-6
0
<b>Общая длина корня </b>
<b></b><b><i>10</i></b><b></b>
-1,9
3
1,4
<b>Высота растения</b>
<b></b><b><i>-15,7</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-14,4</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-12,3</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-17,3</i></b><b></b>
<b>Сухая масса побега </b>
-3,6
-2
-4,5
-7,7
<b>Соотношение побега к корню</b>
-1,5
3,4
1,8
-3,4
<b>Таблица 12. Признаки тепличных корней трансгенных растений по сравнению с контролем на V5, в аэропонном аппарате. </b>
<b>Событие 1</b>
<b>Событие 2</b>
<b>Событие 3</b>
<b>Событие 4</b>
<b>Количество точек ветвления корня</b>
-6,18
5,01
5,63
6,38
<b>Общая длина корня</b>
-1,47
5,43
2,46
6,92
<b>Средняя ширина корня</b>
-1,12
-5,05
-5,23
-3,56
<b>Корневой объем</b>
-1,1
-4,21
-8,47
-1,09
<b>Сухая масса корня </b>
5,21
-7,51
-2,61
4,52
<b>Площадь поверхности корня</b>
-1,51
0,93
-2,71
3,06
<b>Высота растения</b>
<b></b><b><i>-13,84</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-16,29</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-14,02</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-12,83</i></b><b></b>
<b>Сухая масса побега </b>
<b></b><b><i>-9,04</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-16,58</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-11,58</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-7,06</i></b><b></b>
<b>Общий сухой вес </b>
-4,41
<b></b><b><i>-14,19</i></b><b></b>
-8,54
-3,24
<b>Соотношение побег/корень</b>
<b></b><b><i>-17,16</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-13,13</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-10,17</i></b><b></b>
<b></b><b><i>-13,52</i></b><b></b>
[506]
Как показано в Таблицах 11 и 12, у трансгенных растений наблюдалось значительное уменьшение высоты растений на стадиях V3 и V5, но в этих экспериментах между трансгенными и контрольными растениями наблюдались только незначительные изменения в общей структуре корней.
Пример 15. Фенотипические наблюдения трансгенных растений с альтернативными промоторами.
[507]
В Примерах 1-14 трансгенные растения содержали элемент супрессии оксидазы GA20, функционально связанный с промотором RTBV. Растения кукурузы также трансформировали тем же элементом супрессии, функционально связанным с различными другими промоторами, чтобы проверить, как различные профили экспрессии элемента супрессии оксидазы GA20 могут влиять на высоту растения и другие фенотипы.
[508]
Трансгенные растения (растения R0), регенерированные из эксплантов, трансформированных конструкциями, функционально связанными с различными промоторами, наблюдали на стадии роста R5 в теплице, а початки наблюдали после того, как их снимали для просушки. Различные протестированные промоторы указаны в Таблице 13. Наблюдения проводились для растений с множественными событиями трансформации для каждой конструкции, содержащей разные промоторы по сравнению с контрольными растениями той же линии скрещивания без конструкции супрессии оксидазы GA20. Результаты этих наблюдений суммированы в Таблице 13 по событиям трансформации для каждой конструкции.
Таблица 13. Обобщенные результаты наблюдений R0 трансгенных растений с конструкцией супрессии микроРНК для оксидазы GA20 под контролем различных промоторов.
<b></b><b><u>Название промотора</u></b><b></b>
<b></b><b><u>Профиль экспрессии</u></b><b></b>
<b></b><b><u>Данные наблюдений</u></b><b></b><b></b><b><u>растений R0</u></b><b></b>
Промотор RTBV
сосудисто усиленный
короткие; без отклонений
Промотор e35S CAMV
конститутивный
некоторые короткие (переменные); без отклонений
полиюбиквитиновый промотор Coix lacryma-jobi
конститутивный
некоторые короткие (переменные); без отклонений
промотор актина риса
конститутивный
некоторые короткие (переменные); без отклонений
промотор риса Gos2
конститутивный
некоторые короткие (переменные); без отклонений
Энхансер+промотор RTBV
конститутивный
короткие; без отклонений
C1
конститутивный
Короткие
промотор PPDK кукурузы
усиленный в листьях, высокий
средне-короткие; без отклонений
промотор FDA кукурузы
усиленный в листьях, средний
некоторые короткие (переменные); без отклонений
промотор Nadh-Gogat риса
усиленный в листьях, низкий
средне-короткие; без отклонений
промотор риса Cyp2
сосудисто усиленный
некоторые короткие (переменные); без отклонений
V1
сосудисто усиленный
короткие; без отклонений
V2
сосудисто усиленный
нормальной высоты;без отклонений
V3
сосудисто усиленный
нормальной высоты;без отклонений
промотор MMV.FLT
усиленный в стебле, высокий
нормальной высоты;без отклонений
S1
усиленный в стебле, средний
нормальной высоты;без отклонений
S2
усиленный в стебле, средний
нормальной высоты;без отклонений
S3
усиленный в стебле, средний
нормальной высоты;без отклонений
промотор SETit.Ifr
усиленный в корне, высокийсосудисто усиленный
средне-короткие;без отклонений
промотор Rcc3 риса
усиленный в корне, низкий
нормальной высоты;без отклонений
Промотор Expb риса
усиленный в початке, высокий
нормальной высоты;без отклонений
промотор H2a кукурузы
усиленный в початке, низкий
нормальной высоты;без отклонений
[509]
Как показано в Таблице 13, по сравнению с контролями, трансгенные растения R0 с конструкцией супрессии оксидазы GA20 не демонстрировали каких-либо существенных отклонений при наблюдении за всеми протестированными промоторами. Даже экспрессия непосредственно в репродуктивных тканях початка не вызывала заметных отклонений. Высота растений была явно уменьшена не только для конструкции промотора RTBV (в предыдущих Примерах), но также и у трансгенных растений, имеющих одинаковую конструкцию супрессии оксидазы GA20, функционально связанную с различными конститутивными промоторами, листовыми промоторами на разных уровнях экспрессии, некоторыми сосудистыми промоторами и корневым промотором с высоким уровнем экспрессии. Был протестирован сконструированный промотор с конститутивной экспрессией (С1), связанный с конструкцией супрессии оксидазы GA20, и также было обнаружено, что он вызывает фенотип короткого роста. Аналогично, было обнаружено, что, по меньшей мере, один сконструированный промотор с сосудистой экспрессией (V1), связанный с конструкцией для супрессии оксидазы GA20, вызывает фенотип короткого роста в дополнение к сосудистому промотору Cyp2 риса, хотя растения с двумя другими сконструированными сосудистыми промоторами (V2, V3) и тремя сконструированными промоторами стебля (S1, S2, S3) не имели уменьшенной высоты растения. Однако изменение последовательности терминатора транскрипции для конструкции супрессии оксидазы GA20 под контролем промотора RTBV не изменило фенотип короткого роста (не показано в Таблице 11). Применяемый в данном документе термин "средне-короткий" относится к умеренному уменьшению высоты растения (относительно уменьшения высоты растения, наблюдаемого с промотором RTBV), а наблюдение "некоторых коротких" означает, что были некоторые различия в степени уменьшения высоты растения.
[510]
Эти результаты показывают, что экспрессия элемента супрессии оксидазы GA20 конститутивными промоторами неизменно приводила к фенотипу короткого роста, хотя с этими конститутивными промоторами наблюдалась некоторая изменчивость в фенотипах высоты растений. Аналогичным образом, комбинация промотора RTBV с энхансерным элементом для преобразования профиля экспрессии из сосудистого в конститутивный по-прежнему вызывает фенотип короткого роста (что указывает на достаточность промотора RTBV). Несколько сосудистых промоторов, включая промотор RTBV, продуцировали фенотип с коротким ростом, но пара других сконструированных сосудистых промоторов не продуцировала фенотип с коротким ростом, что может быть связано с более низким уровнем экспрессии с этими промоторами. Ни один из промоторов стебля не продуцировал фенотип короткого роста, что указывало на то, что экспрессии конструкции супрессии GA20 в стебле было недостаточно для получения этого фенотипа. Удивительно, но экспрессия конструкции супрессии GA20 в листе постоянно приводила к фенотипам короткого роста с различными уровнями экспрессии, хотя результаты были в определенной степени вариабельными. Эти данные указывают на то, что производство активных GA в ткани листьев способствует росту растений и, в конечном итоге, высоте растений, даже если такой вертикальный рост происходит в стебле растения. Экспрессия конструкции супрессии оксидазы GA20 с различными корневыми промоторами, как правило, не давала фенотипа короткого роста, хотя один корневой промотор действительно продуцировал умеренный фенотип, что может быть связано с дополнительной экспрессией в надземных растительных тканях.
[511]
Coix lacryma-jobi
Затем растения R0 самоопылялись и полученные семена выращивали в рассаднике для получения гомозиготного инбредного потомства растений (растения R1). Наблюдения за потомками трансгенных растений R1 с некоторыми промоторными конструкциями (по меньшей мере, 4 события трансформации на конструкцию) проводили на стадии развития R1 по сравнению с контрольными растениями той же линии скрещивания без конструкции супрессии оксидазы GA20. Как и растения R0, было обнаружено, что растения потомков R1, экспрессирующие конструкцию супрессии оксидазы GA20 с каждым из промоторов RTBV, CAMV e35S и полиюбиквитиновым промотором  имеют низкорослый, полукарликовый фенотип, без каких-либо существенных отклонений.
Пример 16. Фенотипические наблюдения трансгенных растений кукурузы с конструкциями, нацеленными на различные гены оксидазы GA.
[512]
Приведенные выше Примеры демонстрируют, что микроРНК-экспрессирующая конструкция, нацеленная на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 для супрессии, и функционально связанная с экспрессируемым в растении сосудистым, конститутивным и/или листовым промотором, может быть применена для создания короткорослого, полукарликового кукурузного растения. Чтобы проверить, как нацеливание на различные гены оксидазы GA20 или GA3, или разные части генов оксидазы_3 GA20 и/или оксидазы_5 GA20 для супрессии, может повлиять на высоту растения, было создано несколько конструкций и трансформировано в растения кукурузы. Конструкции также были созданы с той же нацеливающей последовательностью, что и в приведенных выше Примерах, но с другой последовательностью остова микроРНК (две из микроРНК кукурузы, одна из микроРНК сои и одна из микроРНК хлопка - конструкция в приведенных выше Примерах применяла рисовую последовательность остова микроРНК). В Таблице 14 приведен список этих дополнительных конструкций супрессии, а также наблюдения за трансгенными растениями R0 в теплице, содержащими эти конструкции (по сравнению с контрольными растениями дикого типа). Конструкции, нацеленные на (i) оксидазу_1 GA20/оксидазу_2 GA20, (ii) оксидазу_3 GA20/оксидазу_9 GA20, (iii) оксидазу_7 GA20/оксидазу_8 GA20 и (iv) оксидазу_3 GA20/оксидазу_5 GA20 (с разными остовами микроРНК), каждая из которых кодируется микроРНК с одной последовательность нацеливания, комплементарной обоим целевым генам, в то время как наборы (i) отдельных последовательностей, нацеленных на оксидазу_3 GA20 и оксидазу_5 GA20, (ii) отдельных последовательностей, нацеленных на оксидазу_4 GA20 и оксидазу_6 GA20, и (iii) отдельных последовательностей, нацеленных на оксидазу_4 и оксидазу_7/8 GA20, каждая экспрессировалась в виде одной пре-микроРНК с двумя последовательностями нацеливания, расположенными в тандеме, которые расщепляются и разделяются на две зрелые микроРНК. В Таблице 14 представлена последовательность, нацеленная на микроРНК, и последовательность кДНК, комплементарная последовательности, нацеленной на микроРНК. Для конструкции оксидаза_1 GA20/оксидазы_2 GA20 звездочка (*) указывает на то, что длина выравнивания между последовательностью нацеливания микроРНК и целью мРНК или сайтом узнавания была короче (17 против 20 нуклеотидов) для оксидазы_1 GA20, чем для оксидазы_2 GA20. Аналогично для конструкции оксидазы_3 GA20/оксидазы_9 GA20 звездочка (*) указывает на то, что длина выравнивания между последовательностью нацеливания микроРНК и целью мРНК или сайтом узнавания была короче (17 против 20 нуклеотидов) для оксидазы_9 GA20, чем для оксидазы_3 GA20. Для каждой из конструкций, перечисленных в Таблице 14, значительных отклонений не наблюдалось, за исключением наблюдений, представленных в таблице.
Таблица 14. Обобщенные результаты наблюдений R0 трансгенных растений кукурузы с конструкциями супрессии микроРНК, нацеленными на различные гены оксидазы GA.
<b>Целевой ген(ы)</b><b>(Конструкция/Промотор)</b>
<b>мРНК</b><b>Целевая область</b>
<b>Целевая последовательность кДНК (SEQ ID NO)</b>
<b>Целевая последовательность микроРНК (SEQ ID NO)</b>
<b>Наблюдения</b>
Оксидаза_1 GA20 иОксидаза_2 GA20(<i>промотор RTBV</i>)
1: экзон*2: экзон
47
48
Все события - высокие (ДТ)
Оксидаза_3 GA20 иОксидаза_9 GA20(<i>промотор RTBV</i>)
3: экзон9: экзон*
49
50
Все события - высокие (ДТ)
Оксидаза_7 GA20 иОксидаза_8 GA20(<i>промотор RTBV</i>)
экзон
51
52
Все события - высокие (ДТ)
Оксидаза_3 GA20(<i>Отдельный</i>; промотор <i>RTBV</i><i>и 35S</i>)
НТО
53
54
События <u>немного короче</u>(~ 6 сантиметров против ДТ)
Оксидаза_5 GA20(<i>Отдельный</i>; промотор <i>RTBV</i><i>и 35S</i>)
НТО
55
56
Все события - высокие (ДТ)
Оксидаза_3 GA20 иОксидаза_5 GA20(<i>Отдельный; тандемный набор</i>)
3: НТО
53
54
Все события - <u>короче</u>
5: НТО
55
56
Оксидаза_3 GA20 иОксидаза_5 GA20(<i>Разные остова микроРНК</i>)(<i>промотор RTBV</i>)
3/5: экзоны
39
40
Все события/конструкции - <u>короче</u>
Оксидаза_1 GA3(<i>промотор RTBV</i>)
НТО
57
58
Все события - высокие (ДТ)(наблюдалось только 3 события)
Оксидаза_1 GA3(промотор <i>CAMV e35S </i>)
НТО
57
58
Некоторые события - <u>короче</u>
Оксидаза_2 GA3(<i>промотор RTBV</i>)
экзон
59
60
Все события - <u>короче</u>(более темные зеленые листья)
Оксидаза_2 GA3(промотор <i>CAMV e35S </i>)
экзон
59
60
Некоторые события - <u>короче</u>
Оксидаза_4 GA20 иОксидаза_6 GA20(<i>Отдельный; тандемный набор</i>)
4: экзон
61
62
Некоторые события -умеренно <u>короче </u>(~ 20%)
6: экзон
63
64
Оксидаза_4 GA20 иОксидаза_7/8 GA20(<i>Отдельный; тандемный набор</i>)
4: экзон
61
62
Некоторые события -умеренно <u>короче</u> (~ 20%)
7/8: экзон
51
52
[513]
Наблюдения, обобщенные в Таблице 14, демонстрируют, что нацеливание на некоторые другие гены оксидазы GA20 не приводило к низкорослому, полукарликовому фенотипу. Ни одна из конструкций, нацеленных на (i) родственные гены оксидазы_1 GA20 и оксидазы_2 GA20, (ii) родственные гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_9 GA20, (iii) родственные гены оксидазы_7 GA20 и оксидазы_8 GA20 или (iv) только ген оксидазы_9 GA20 не приводила к наблюдаемому низкорослому, полукарликовому фенотипу у растений R0. Напротив, те конструкции, которые кодируют одну микроРНК, совместно нацеленную на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в трансгенных растениях R0 и R1, действительно давали низкорослый, полукарликовый фенотип, даже если применялась другая последовательность терминации транскрипции или разные остова микроРНК (всего из 5 протестированных последовательностей остова микроРНК). Кроме того, нацеливание на различные последовательности генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 все еще приводит к получению полукарликовых растений. Интересно, что конструкции супрессии, которые были сконструированы для нацеливания на каждый из генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 по отдельности, не продуцировали низкорослый, полукарликовый фенотип, в отличие от конструкций, совместно нацеленных на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, хотя конструкция, отдельно нацеленная на ген оксидазы_3 GA20, действительно вызывала небольшое уменьшение высоты растения. Тем не менее, трансгенные растения, имеющие тандемный векторный набор конструкций супрессии, отдельно нацеленных на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, действительно продуцировали низкорослый, полукарликовый фенотип, подобно конструкциям, кодирующим одну микроРНК, совместно нацеленную на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20. Эти данные демонстрируют, что низкорослый, полукарликовый фенотип наблюдается с конструкциями, нацеленными как на гены оксидазы_3 GA20, так и на гены оксидазы_5 GA20, но полный полукарликовый фенотип не наблюдается при нацеливании на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 по отдельности для супрессии (только небольшое уменьшение высоты при нацеливании на оксидазу_3 GA20 и отсутствие фенотипа высоты растения при нацеливании на оксидазу_5 GA20). Кроме того, как описано, фенотип высоты растения не наблюдался при нацеливании на ген(ы) оксидазы_1 GA20, оксидазы_2 GA20, оксидазы_6 GA20, оксидазы_7 GA20, оксидазы_8 GA20 и/или оксидазы_9 GA20.
[514]
Помимо генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, наблюдалось умеренное уменьшение высоты растений в трансгенных растениях R0 с конструкцией супрессии, включающей две целевые последовательности в тандеме, комплементарном совместной цели: (i) гены оксидазы_4 GA20 и оксидазы_6 GA20 или (ii) гены оксидазы_4 GA20, оксидазы_7 GA20 и оксидазы_8 GA20 - одна из двух целевых последовательностей направлена как на гены оксидазы_7 GA20, так и на гены оксидазы_8 GA20. Учитывая, что отдельная конструкция, которая нацелена на гены оксидазы_7 GA20 и оксидазы_8 GA20, не продуцировала фенотип высоты растения, а конструкция супрессии, нацеленная на гены оксидазы_4 GA20 и ген оксидазы_6 GA20, продуцировала фенотип высоты растения, который был сходен с конструкцией супрессии нацеленной на гены оксидазы_4 GA20, оксидазы_7 GA20 и оксидазы_8 GA20, предполагается, что нацеливание на ген оксидазы_4 GA20 в значительной степени (если не полностью) отвечает за фенотип высоты растений, наблюдаемый у этих трансгенных растений. Кроме того, трансгенные растения кукурузы с конструкциями, нацеленными на гены оксидазы_1 GA3 или оксидазы_2 GA3, также продемонстрировали снижение высоты растения, хотя в этом фенотипе была некоторая изменчивость в зависимости от конститутивного промотора. Таким образом, в дополнение к генам оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, гены оксидазы_4 GA20, оксидазы_1 GA3 и оксидазы_2 GA3 также могут быть целью для супрессии с целью получения низкорослых, полукарликовых растений.
Пример 17. Фенотипические наблюдения растений кукурузы, имеющих редактированный ген оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20.
[515]
В дополнение к вышеупомянутым конструкциям супрессии в эндогенных генах оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в растениях кукурузы были созданы несколько мутаций путем редактирования генома для проверки фенотипического эффекта нокаута каждого из этих генов. Для каждого из генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 была создана серия из десяти одноцепочечных направляющих РНК (sgРНК), кодирующих нацеливающие конструкции, которые нацелены на разные позиции вдоль геномной последовательности для каждого гена. Была создана дополнительная серия из десяти sgРНК, каждая из которых нацелена на оба гена оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в одинаковых или разных положениях вдоль геномной последовательности для каждого гена. Целевые изменения в геноме были сделаны путем доставки sgРНК вместе с экспрессией белка Cas9 эксплантам кукурузы, чтобы вызвать появление ДЦР или одноцепочечный разрыв в геномного целевом сайте для нRNA или около него, который затем может быть неправильно репарирован с целью введения мутации в целевом сайте или около него. Присутствие мутации было впоследствии подтверждено с помощью анализа ПДРФ (полиморфизма длин рестрикционных фрагментов) и/или сиквенированием растений. В приведенной ниже Таблице 15 представлен список протестированных конструкций направляющих РНК (нРНК), которые могут быть применены для редактирования генома одного или обоих гена(ов) оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 с помощью РНК-направленной эндонуклеазы. Эти конструкции направляющих РНК, как правило, предназначены для нацеливания на кодирующие последовательности генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, но некоторые из комбинированных целевых конструкций могут вместо этого нацеливаться на последовательность НТО одного из двух генов. Эти нРНК могут быть применены с подходящей эндонуклеазой для получения двухцепочечного разрыва (ДЦР) или одноцепочечного разрыва в геноме в геномном целевом сайте, или около него, соответствующей нРНК, который может быть несовершенно репарирован, с целью создания мутации (например, вставки, делеции, замены и тому подобного). Трансгенные растения, которые были гомозиготными по редактированному гену оксидазы_3 GA20 или гомозиготными по редактированному гену оксидазы_5 GA20, были получены из нескольких конструкций (см., жирный текст). События также генерировались из конструкций, предназначенных для редактирования обоих генов. Для конструкций, совместно нацеленных на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, координаты кодирующей последовательности (CDS) приведены в отношении одного из двух генов, указанных в скобках. Таблица 15 далее показывает, какие конструкции произвели события редактирования генов, были ли эти события гомозиготными или гетерозиготными в растениях R0, а числа±в скобках указывают вероятное изменение последовательности с мутацией (например, +1 означает вставку 1 нуклеотида и тому подобное, и более крупные или более сложные инделы помечены как "дел." или "вставка"). Для комбинированного нацеливания на оксидазу_3 GA20 и оксидазу_5 GA20 идентичность мутированного гена также указана в скобках. В соответствии с результатами для конструкций супрессии, трансгенные растения, гомозиготные по редактированному гену оксидазы_3 GA20 или оксидазы_5 GA20, не имели низкорослого, полукарликового фенотипа, а имели нормальную высоту растения относительно контрольных растений (см., конструкции оксидазы_3-D GA20 и оксидазы_3-G GA20, а также конструкции оксидазы_5-B GA20 и оксидазы_5-G GA20 в Таблице 15), что указывает на то, что нокаут только одного из этих генов недостаточен для получения полукарликового фенотипа.
Таблица 15. Направляющие РНК (нРНК) нацеленные на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 с целью редактирования.
<b>Генная цель нРНК</b>
<b>Последовательность нацеливания нРНК</b><b>(SEQ ID NO)</b>
<b>Координаты CDS гена</b>
<b>Созданные события</b>
Оксидаза_3-A GA20
138
552-572
<b>---</b>
Оксидаза_3-B GA20
139
879-899
<b>---</b>
Оксидаза_3-C GA20
140
147-167
<b>---</b>
Оксидаза_3-D GA20
141
526-546
1. <b>гомозиготный</b> (-1)2. гетерозиготный (-1)3. биаллельный (-2, +1)
Оксидаза_3-E GA20
142
446-466
<b>---</b>
Оксидаза_3-F GA20
143
2227-2247
<b>---</b>
Оксидаза_3-G GA20
144
548-568
1. <b>гомозиготный</b> (+1)2. гетерозиготный (-1)3. биаллельный (+1, -1)
Оксидаза_3-H GA20
145
547-567
<b>---</b>
Оксидаза_3-I GA20
146
43-63
<b>---</b>
Оксидаза_3-J GA20
147
548-567
<b>---</b>
Оксидаза_5-A GA20
148
356-376 (+)
1. гетерозиготный (-1)
Оксидаза_5-B GA20
149
99-119
1. <b>гомозиготный</b> (-1)2. гетерозиготный (+1)3. гетерозиготный (+1, -7)4. гетерозиготный (-3, -1)
Оксидаза_5-C GA20
150
369-389
<b>---</b>
Оксидаза_5-D GA20
151
48-68
<b>---</b>
Оксидаза_5-E GA20
152
356-376 (-)
<b>---</b>
Оксидаза_5-F GA20
153
748-768
1. гетерозиготный (-1, +1)
Оксидаза_5-G GA20
154
770-790
1. <b>гомозиготный</b> (-1)2. <b>гомозиготный</b> (-1)
Оксидаза_5-H GA20
155
10-30
<b>---</b>
Оксидаза_5-I GA20
156
262-282
<b>---</b>
Оксидаза_5-J GA20
157
768-788
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-A GA20
158
290..310(Ox_3 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-B GA20
159
289..309(Ox_3 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-C GA20
160
270..290(Ox_5 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-D GA20
161
49..69(Ox_3 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-E GA20
162
265..285(Ox_5 GA20)
1. гетерозиготный (Ox5, +1)
Оксидаза_3/5-F GA20
163
419..439(Ox_3 GA20)
1. гетеро (Ox3, +1, -1)гетеро (Ox5, +1, дел.)2. гетеро (Ox3, +1, дел.)гетеро (Ox5, +1, вставка)
Оксидаза_3/5-G GA20
164
110..130(Ox_3 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-H GA20
165
634..654(Ox_5 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-I GA20
166
98..118(Ox_5 GA20)
<b>---</b>
Оксидаза_3/5-J GA20
167
517..537(Ox_5 GA20)
<b>---</b>
Пример 18. Конструкция супрессии, нацеленная на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, снижает уровни транскриптов оксидазы GA20 и уровни активной GA в растении.
[516]
Чтобы определить, как уровни транскрипта оксидазы GA20 были затронуты в трансгенных растениях с помощью конструкции супрессии, нацеленной на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20, целые ткани из различных частей трансгенных растений, выращенных в теплице, были взяты на разных вегетативных стадиях (V3, V8 и V14), а уровни транскриптов мРНК для каждого из генов оксидазы GA20 анализировали с применением анализа TaqMan. Для этих экспериментов суммарную РНК экстрагировали с применением набора для экстракции РНК от Zymo Research™ и обрабатывали ДНКазой Turbo™ для уменьшения загрязнения геномной ДНК. Затем РНК подвергали обратной транскрипции с целью получения двухцепочечной кДНК. Количественную ПЦР с обратной транскрипцией проводили с применением геноспецифических праймеров и меченных FAM зондов TaqMan в Bio-Rad CFX96 Real Time System. Метрики контроля качества рассчитывались с применением тканеспецифических стандартов для определения эффективности кПЦР и суммарной РНК, которая не подвергалась обратной транскрипции для учета остаточного загрязнения геномной ДНК. Разница между пороговыми значениями цикла для генов, представляющих интерес против нормализующих генов определяла относительное количество каждого транскрипта гена в каждой ткани. Эта относительная величина была рассчитана с применением одного (18S) или среднего геометрического двух (18S и ELF1A) нормализующих генов.
[517]
то есть
В этом эксперименте уровень транскрипта оксидазы_3 GA20 был снижен в большинстве вегетативных тканей на этих стадиях, включая ткань листьев и стеблей в V3, ткань междоузлия в V8 и ткань листьев и междоузлия в V14, хотя уровень транскрипта оксидазы_3 GA20 в корне V3 и листе V8 оказался неизменным (данные не показаны). Кроме того, уровень транскрипта оксидазы_5 GA20 для этого эксперимента в целом оставался неизменным в тестируемых вегетативных тканях (данные не показаны), хотя уровень экспрессии транскрипта оксидазы_5 GA20 был относительно низким в этих тканях. Ни оксидаза_3 GA20, ни оксидаза_5 GA20 не были значительно снижены в образцах тканей корня трансгенных растений. Уровень транскриптов каждого из других генов оксидазы GA20 ( подтипы 1, 2, 4 и 6-9), как правило, не изменялся или увеличивался в некоторых тканях трансгенных растений.
[518]
Аналогичный эксперимент был проведен с репродуктивными тканями трансгенных растений, экспрессирующих ту же самую конструкцию супрессии. Цельные ткани из различных частей трансгенных растений, выращенных в теплице, отбирали на разных репродуктивных стадиях (R1 и R3), а уровни транскриптов мРНК для каждого из генов оксидазы GA20 анализировали с применением анализа TaqMan. В этом эксперименте уровни транскриптов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 были в основном неизменными в R1 листьев, початков, султанов и междоузлий и в R3 листьев и междоузлий по сравнению с контролями (данные не представлены). Результаты для других генов оксидазы GA20 были в основном смешанными или нейтральными (данные не показаны).
[519]
Эти данные показывают, что уровень транскриптов оксидазы_3 GA20 в трансгенных растениях кукурузы во время вегетативных стадий, как правило, снижены в этом эксперименте, но, по-видимому, практически не изменялся по сравнению с контрольными тканями растений на более поздних репродуктивных стадиях. Хотя явного снижения уровня транскриптов гена оксидазы_5 GA20 в этих трансгенных растительных тканях обычно не наблюдалось, уровень экспрессии этого гена был относительно низким. Таким образом, изменения в уровне его экспрессии, возможно, было трудно обнаружить с помощью этого способа. Кроме того, конструкция супрессии, по-видимому, специфична для целевых генов оксидазы GA20, поскольку в этом эксперименте не наблюдалось последовательного снижения уровня экспрессии ни для одного из других генов оксидазы GA20.
[520]
В отдельном эксперименте уровни экспрессии оксидазы GA20 были определены в тканях стебля трансгенных растений, экспрессирующих конструкцию супрессии из предыдущих Примеров (нацеленную на гены оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 для супрессии под контролем промотора RTBV), по сравнению с контролем дикого типа. Образцы тканей отбирали из стеблей V3-V6, и части этих стеблей дополнительно рассекали для отделения сосудистых и несосудистых тканей с целью определения уровней дифференциальной экспрессии среди этих тканей. Уровни экспрессии транскрипта определяли с применением метода РНК-сиквенирования (RNA-Seq) для количественного сравнения между тканями трансгенного растения и растения дикого типа. Данные, представленные на Фиг. 13А получены из трансгенных растений, имеющих одно из двух событий, и контрольных растений дикого типа, имеющих одну из двух зародышевых плазм, причем каждый столбец на Фиг. 13А, представляет одно из двух трансгенных событий или гермоплазм, соответственно. Для этих экспериментов отдельные сосудистые пучки отделяли от остальной ткани стебля образцов и подвергали отдельному анализу. Как проиллюстрировано на Фиг. 13А, микроРНК, экспрессируемая конструкцией супрессии, была обнаружена в общей стеблевой ткани растения ("общая", то есть, без разделения сосудистой и несосудистой ткани), а также в отделенной сосудистой ("Сосуд") и несосудистой ("Несосуд") тканях из общего образца стебля. Однако уровень экспрессии микроРНК был значительно выше в сосудистой, чем в несосудистой ткани, что указывает на сосудистый профиль экспрессии промотора RTBV.
[521]
Общие образцы стебля и отделенные сосудистые и несосудистые образцы также анализировали в аналогичном эксперименте RNA-Seq для измерения и сравнения уровней транскриптов гена оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в трансгенных растениях по сравнению с контрольными растениями дикого типа (наряду с другими генами оксидазы GA20), хотя для каждого типа ткани показан только один образец дикого типа. Для этих экспериментов ткань стебля из контрольных или трансгенных растений (два события) разрезали на отдельные сосудистые пучки и несосудистые ткани, как описано выше. Общая sРНК и мРНК были сиквенированы для каждого образца, и данные были проанализированы и сравнены с применением анализа главных компонентов.
[522]
Как проиллюстрировано на Фиг. 13B, уровни транскрипта гена оксидазы_3 GA20 были значительно снижены в общей стволовой ткани (Общая) и в отдельных сосудистых тканях стебля (Сосуд) трансгенных растений (ТР) по сравнению с контролями дикого типа (ДТ), но оставались неизменными в отделенной несосудистой (Несосуд) ткани. Однако уровни транскриптов гена оксидазы_5 GA20 были значительно снижены в общей ткани стебля (Общая), но относительно не изменились в отделенных сосудистых (Сосуд) и несосудистых (Несосуд) тканях трансгенных растений, хотя наблюдалась тенденция к снижению для транскрипта оксидазы_5 GA20 в образцах сосудистой (Сосуд) ткани из трансгенных растений. Уровень экспрессии гена оксидазы_5 GA20 был низким, особенно в несосудистых тканях. Все другие гены оксидазы GA20 не показали значительного снижения уровней транскриптов в анализируемых тканях трансгенных растений, хотя пара генов оксидазы GA20 показала небольшую тенденцию к повышению уровня их экспрессии. Эти данные дополнительно демонстрируют, что уровни экспрессии генов оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 снижаются в разной степени в одной или более тканях трансгенных растений, имеющих конструкцию супрессии относительно контролей. Действительно, более высокая экспрессия микроРНК и более сильная супрессия эндогенного гена оксидазы_3 GA20 в сосудистых тканях согласуется с сосудистым профилем экспрессии промотора RTBV и, возможно, более высокие уровни экспрессии гена оксидазы_3 GA20 в сосудистых против несосудистых тканей растений дикого типа. Аналогичный профиль наблюдается также для гена оксидазы_5 GA20, хотя и не настолько выраженный, как у оксидазы_3 GA20 между сосудистыми и несосудистыми тканями.
[523]
Низкорослый, полукарликовый феномен, наблюдаемый с супрессией оксидазы GA20 в трансгенных растениях, вероятно, опосредован снижением уровня активных GA, присутствующих в тканях стебля или междоузлия и/или в тканях растений, которые продуцируют активные GA. Чтобы определить уровни активных GA (особенно G1, G3 и G4) относительно других неактивных форм гормона, уровни GA измеряли в различных образцах ткани, взятых у контрольных растений трансгенного и дикого типа на разных стадиях развития. Для этих экспериментов свежезамороженные образцы для каждой ткани измельчали и распределяли в 96-луночные стеклянные пробирки вместе с внутренними стандартами. Образцы экстрагировали с применением растворителя метанол:вода:уксусная кислота (80:19:1 об./об.) два раза в течение 4 часов при 4°С. Растворитель выпаривали из экстракта почти до сухости, применяя многоканальный SPE с азотом. Образцы дополнительно очищали с применением картриджа SPE. После очистки образцы обрабатывали с применением стандартного способа ЖХ-МС/МС с масс-спектр измерительными приборами Shimadzu Nexera UPLC и SCIEX triple quad 5500. Хроматографы были проанализированы и определены количественно с применением внутренних стандартов.
[524]
Два набора экспериментов были выполнены с образцами, взятыми из различных тканей вегетативной стадии растения. Как показано в Таблице 16 для одного эксперимента в теплице, сниженные уровни активных GA (GA1, GA3 и GA4) наблюдались в различных тканях трансгенных растений на разных вегетативных стадиях. Данные в Таблице 16 представлены в виде числа трансгенных растений, имеющих значительное изменение количества каждого гормона GA для данной ткани ("U"=вверх или увеличен; "D"=вниз или уменьшен; "N"=нейтральный или без изменений и "Т"=общее количество растений). GA, которые демонстрировали, по крайней мере, частичное уменьшение в образцах ткани, выделены жирным шрифтом. Активная GA1 была снижен в тканях листьев и междоузлий на стадии V8 и в ткани междоузлий на стадии V14, а активная GA4 была уменьшена в стебле V3 и междоузлиях V8 и V14. Однако активная GA3 не была заметно уменьшена в этом эксперименте. Другие неактивные формы GA были изменены в различных тканях трансгенных растений, как показано в Таблице 16. В целом, GA, которые находятся в 5'-3' направлении генов оксидазы GA20 в пути гиббереллиновой кислоты (например, GA9, GA20 и GA34), имеют тенденцию к снижению, тогда как GA, которые находятся в 3'-5' направлении генов оксидазы GA20, имеют тенденцию к повышению (например, GA12 и GA53), что может быть связано с более низкой активностью генов оксидазы GA, вызывающих накопление предшественников GA в 3'-5' направлении. Эти данные согласуются с супрессией активности оксидазы GA20 в этих тканях и более низким уровнем активных гормонов GA в стебле и листьях трансгенных растений.
[525]
В отдельном эксперименте аналогичные измерения гормонов GA были взяты из различных тканей растений во время вегетативных стадий развития. Как показано в Таблице 17 для эксперимента с применением тканей, взятых у растений в теплице и поле, пониженные уровни одной или более активных GA (GA1, GA3 и GA4) наблюдались в листьях и междоузлиях трансгенных растений на стадиях V3 и V8. Образцы листьев на стадии V8 для этого эксперимента были взяты у растений в поле, в отличие от других образцов, взятых у растений в теплице. Данные в Таблице 17 отображаются аналогично тому, как описано в Таблице 16. Другие неактивные формы GA были изменены в различных тканях трансгенных растений, как показано в Таблице 17. Подобно наблюдениям, изложенным выше, GA, которые находятся в 5'-3' направлении генов оксидазы GA20 в пути гиббереллиновой кислоты (например, GA9, GA20 и GA34), имеют тенденцию к снижению, тогда как GA, которые находятся в 3'-5' направлении генов оксидазы GA20, имеют тенденцию к повышению (например, GA12 и GA53). Эти данные снова согласуются с супрессией активности оксидазы GA20 в этих тканях и более низким уровнем активных гормонов GA в стебле и листьях трансгенных растений.
[526]
Супрессия генов оксидазы оксидазы_3 GA20 и оксидазы_5 GA20 в трансгенных растениях кукурузы снижает уровни целевых транскриптов оксидазы GA в различных тканях, включая стебель, междоузлие сосудистые ткани и листья, и супрессия этих генов оксидазы GA20 также дополнительно связана со снижением уровней активных GA в тканях трансгенного растения, включая стебель и междоузлия, которые являются местом воздействия на рост растений на вегетативных стадиях и, в конечном счете, на высоту растений на более поздних вегетативных и репродуктивных стадиях. Аналогично наблюдениям, что уровни транскрипта оксидазы GA20 в тканях репродуктивной стадии в основном не изменяются или смешиваются, уровни гормонов GA, включая активные GA, также в основном не изменяются или смешиваются в тканях репродуктивной стадии (данные не показаны).
[527]
После подробного изложения данного описания будет очевидно, что возможны модификации, варианты и эквивалентные варианты реализации изобретения без отклонения от сущности и объема данного описания, как описано в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения. Кроме того, следует понимать, что все примеры в данном описании представлены в качестве неограничивающих примеров.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110>  Monsanto Technology LLC
Allen, Edwards M.
Boddu, Jayanand
Dietrich, Charles R.
Goldshmidt, Alexander
Howell, Miya
Kosola, Kevin R.
Neelam, Anil
Slewinski, Thomas L.
Venkatesh, Tyamagondlu V.
Wang, Huai
<120>  СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ УРОЖАЙНОСТИ НИЗКОРОСЛЫХ
РАСТЕНИЙ ПУТЕМ МАНИПУЛЯЦИИ МЕТАБОЛИЗМА ГИББЕРЕЛЛИНА
<130>  P34494WO00
<150>  США 62/376,298
<151>  2016-08-17
<150>  США 62/442,377
<151>  2017-01-04
<150>  США 62/502,313
<151>  2017-05-05
<160>  167
<170>  PatentIn версия 3,5
<210>  1
<211>  1741
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  1
gacggtagtt ttcatctaaa gtttattctt cgtcacatgg gatggccgtt tgcttgtttg       60
ttgcttccgg gaggcggtgg tgaattgaag cagatcgaca agcatggctg cccactggtc      120
tcgatcgatc ggcctgccat gccatgccat gccactagag tccgtcctga ctggccgccc      180
gttcccccgt ataaaaaggc aggcaggcag gcagagcggg gacgagcaag caagcagttg      240
cagttgcagc ggcctcctcc tctgcttcct ccctcctcct cctcaccatg gtgctggctg      300
cgcacgatcc ccctcccctt gtgttcgacg ctgcccgcct gagcggcctc tccgacatcc      360
cgcagcagtt catctggccg gcggacgaga gccccacccc ggactccgcc gaggagctgg      420
ccgtgccgct catcgacctc tccggggacg ccgccgaggt ggtccggcag gtccggcgcg      480
cctgcgacct gcacggcttc ttccaggtgg tggggcacgg catcgacgcg gcgctgacgg      540
cggaggccca ccgctgcatg gacgccttct tcacgctgcc gctcccggac aagcagcgcg      600
cgcagcgccg ccagggggac agctgcggct acgccagcag cttcacgggc cggttcgcgt      660
ccaagctgcc ctggaaggag acgctgtcgt tccgctacac cgacgacgac gacggcgaca      720
agtccaagga cgtcgtggcg tcctacttcg tggacaagct gggcgagggg taccggcacc      780
acggggaggt gtacgggcgc tactgctctg agatgagccg tctgtcgctg gagctcatgg      840
aggtgctagg cgagagcctg ggcgtgggcc ggcgccactt ccggcgcttc ttccagggga      900
acgactccat catgcgcctc aactactacc cgccgtgcca gcggccctac gacacgctgg      960
gcacggggcc gcattgcgac cccacgtcgc tcaccatcct gcaccaggac gacgtgggcg     1020
gactccaggt gttcgacgcc gccacgctcg cgtggcgctc catcaggccc cgcccgggcg     1080
ccttcgtcgt caacatcggc gacaccttca tggcgctctc caacgggcgc tacaggagct     1140
gcctccaccg cgccgtcgtc aacagccggg tggcacgccg ctcgctcgcc ttcttcctgt     1200
gcccggagat ggacaaggtg gtcaggccgc ccaaggagct ggtggacgac gccaacccga     1260
gggcgtaccc ggacttcacg tggaggacgc tgctggactt caccatgagg cactacaggt     1320
cggacatgag gacgctcgag gccttctcca actggctcag caccagtagc aatggcggac     1380
agcacctgct ggagaagaag taggcatgct atttgggtat ggaagatggt ggatgtaagc     1440
aaacaaagcc aaattaagca gagtaggtta attaaggttg gctgatgatc catttaggga     1500
aggagctgat ctccctgact ccctcctcca attttctcaa ccaaatttat atagtataat     1560
aataataata aaatagcaag taatagttgt atcgtattat tattaattaa tttattagct     1620
ggtaggcaag tagtattaaa taccatttgt agtacgatgg gcgtatttct attttggcgt     1680
tttgctctgt gttttttgac gtttcctttg gatttggggg gacctcagat cagctcggcc     1740
t                                                                     1741
<210>  2
<211>  1116
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  2
atggtgctgg ctgcgcacga tccccctccc cttgtgttcg acgctgcccg cctgagcggc       60
ctctccgaca tcccgcagca gttcatctgg ccggcggacg agagccccac cccggactcc      120
gccgaggagc tggccgtgcc gctcatcgac ctctccgggg acgccgccga ggtggtccgg      180
caggtccggc gcgcctgcga cctgcacggc ttcttccagg tggtggggca cggcatcgac      240
gcggcgctga cggcggaggc ccaccgctgc atggacgcct tcttcacgct gccgctcccg      300
gacaagcagc gcgcgcagcg ccgccagggg gacagctgcg gctacgccag cagcttcacg      360
ggccggttcg cgtccaagct gccctggaag gagacgctgt cgttccgcta caccgacgac      420
gacgacggcg acaagtccaa ggacgtcgtg gcgtcctact tcgtggacaa gctgggcgag      480
gggtaccggc accacgggga ggtgtacggg cgctactgct ctgagatgag ccgtctgtcg      540
ctggagctca tggaggtgct aggcgagagc ctgggcgtgg gccggcgcca cttccggcgc      600
ttcttccagg ggaacgactc catcatgcgc ctcaactact acccgccgtg ccagcggccc      660
tacgacacgc tgggcacggg gccgcattgc gaccccacgt cgctcaccat cctgcaccag      720
gacgacgtgg gcggactcca ggtgttcgac gccgccacgc tcgcgtggcg ctccatcagg      780
ccccgcccgg gcgccttcgt cgtcaacatc ggcgacacct tcatggcgct ctccaacggg      840
cgctacagga gctgcctcca ccgcgccgtc gtcaacagcc gggtggcacg ccgctcgctc      900
gccttcttcc tgtgcccgga gatggacaag gtggtcaggc cgcccaagga gctggtggac      960
gacgccaacc cgagggcgta cccggacttc acgtggagga cgctgctgga cttcaccatg     1020
aggcactaca ggtcggacat gaggacgctc gaggccttct ccaactggct cagcaccagt     1080
agcaatggcg gacagcacct gctggagaag aagtag                               1116
<210>  3
<211>  371
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  3
Met Val Leu Ala Ala His Asp Pro Pro Pro Leu Val Phe Asp Ala Ala
1. 5                   10                  15
Arg Leu Ser Gly Leu Ser Asp Ile Pro Gln Gln Phe Ile Trp Pro Ala
20                  25                  30
Asp Glu Ser Pro Thr Pro Asp Ser Ala Glu Glu Leu Ala Val Pro Leu
35                  40                  45
Ile Asp Leu Ser Gly Asp Ala Ala Glu Val Val Arg Gln Val Arg Arg
50                  55                  60
Ala Cys Asp Leu His Gly Phe Phe Gln Val Val Gly His Gly Ile Asp
65                  70                  75                  80
Ala Ala Leu Thr Ala Glu Ala His Arg Cys Met Asp Ala Phe Phe Thr
85                  90                  95
Leu Pro Leu Pro Asp Lys Gln Arg Ala Gln Arg Arg Gln Gly Asp Ser
100                 105                 110
Cys Gly Tyr Ala Ser Ser Phe Thr Gly Arg Phe Ala Ser Lys Leu Pro
115                 120                 125
Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Arg Tyr Thr Asp Asp Asp Asp Gly Asp
130                 135                 140
Lys Ser Lys Asp Val Val Ala Ser Tyr Phe Val Asp Lys Leu Gly Glu
145                 150                 155                 160
Gly Tyr Arg His His Gly Glu Val Tyr Gly Arg Tyr Cys Ser Glu Met
165                 170                 175
Ser Arg Leu Ser Leu Glu Leu Met Glu Val Leu Gly Glu Ser Leu Gly
180                 185                 190
Val Gly Arg Arg His Phe Arg Arg Phe Phe Gln Gly Asn Asp Ser Ile
195                 200                 205
Met Arg Leu Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Gln Arg Pro Tyr Asp Thr Leu
210                 215                 220
Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro Thr Ser Leu Thr Ile Leu His Gln
225                 230                 235                 240
Asp Asp Val Gly Gly Leu Gln Val Phe Asp Ala Ala Thr Leu Ala Trp
245                 250                 255
Arg Ser Ile Arg Pro Arg Pro Gly Ala Phe Val Val Asn Ile Gly Asp
260                 265                 270
Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg Tyr Arg Ser Cys Leu His Arg
275                 280                 285
Ala Val Val Asn Ser Arg Val Ala Arg Arg Ser Leu Ala Phe Phe Leu
290                 295                 300
Cys Pro Glu Met Asp Lys Val Val Arg Pro Pro Lys Glu Leu Val Asp
305                 310                 315                 320
Asp Ala Asn Pro Arg Ala Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Arg Thr Leu Leu
325                 330                 335
Asp Phe Thr Met Arg His Tyr Arg Ser Asp Met Arg Thr Leu Glu Ala
340                 345                 350
Phe Ser Asn Trp Leu Ser Thr Ser Ser Asn Gly Gly Gln His Leu Leu
355                 360                 365
Glu Lys Lys
370
<210>  4
<211>  1517
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  4
caggaataaa ataagcctcc gcccggcttc gttgcatcca cgcacgcagc aagcgatcgg       60
atttcgccag catggcggcg gcggccgtgg tgttcgacgc cgaggcgctg agccgggagg      120
agcacatccc ggcgcagttc gtgtggccca ccgaggagcg ggcgccggcg ggcggcgtgg      180
aggaggtcgc catccccgtg gtcgacctcg gcgagttcct ccgccgcggg gtgctcccgc      240
gcggcgtggc ggaggcgtgc gagcgccacg gcgtcttcca ggtggtgaac cacggcgtgg      300
gcgccgcgct gctcgccgag gcctaccgct gttgcgacgc cttttacgcg ctcccgctcg      360
cggacaagca gcgcgcgcag cgccggcacg gggagaacca cggctacgcc agcagcttca      420
cgggccgctt ccactgctgc ctgccgtgga aggagacgct gtccttcaac tgccccgccg      480
gtgccgggac tgcgcgcgcc gtcgtcggct acttcgtcga cgtcctcggc gaggactacc      540
gccacatggg ggaggtgtac caggagtact gcgacgcgat gacgcgtctg gcgctggacg      600
tgacggaggt gctggcggca gcgctggggc tggaccgcgg cgcactgcgc ggcttcttcg      660
agggcggcga ctccgtcatg cggctgaacc actacccggc gtgccggcag ccgcacctga      720
cgctggggac gggcccgcac cgggacccga cgtcgctgac gctgctgcac caggacgacg      780
tgggcgggct gcaggtgcgc gccggcggcg ggccgtggcg cgcggtgcgg ccccgcgcgg      840
acgcgttcgt ggtcaacatt ggcgacacct tcgccgcgct caccgacggg cgtcacacca      900
gctgcctgca ccgcgccgtg gtgaccggcg gcggctcccg ccggtcgctc gccttcttcc      960
tcaacccgcc gctggaccgc gtcgtccgcc cgccgggcgc gctcctccag gagaacaagc     1020
aggcgggccg cccgcgcgcg ttcccggact tcacgtggcg cgagttcctc gagttcacgc     1080
agaagcacta ccggtcggac gcgggcacca tggacgcctt cgtgtcgtgg atcgcgggag     1140
gccgccgcca ccatggcgga caggaggagg gcaactgaga tcgatgcatc tctagctgta     1200
ggcagcagcg cagcagctac caagaataat ggccggcgac ggagatgcag ctacgacgca     1260
caaataaatt gagtgtttgt ggtacaataa ggacgaggac gatcaatggc gacctgtaac     1320
cggtgcagtt ttagttaatc tttcatggcg atatggcatt aaccaatcgt tggtgtaaaa     1380
tgcgtgcatg ctttgcatgc caatgttggc catgtgatgg cacagcgtga gtgtagctca     1440
cccaccgtga caacgtgcta atttcgtgtg gtcctagata ccaaggtcgt ctaatgaact     1500
tgatggattg atgattt                                                    1517
<210>  5
<211>  1107
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  5
atggcggcgg cggccgtggt gttcgacgcc gaggcgctga gccgggagga gcacatcccg       60
gcgcagttcg tgtggcccac cgaggagcgg gcgccggcgg gcggcgtgga ggaggtcgcc      120
atccccgtgg tcgacctcgg cgagttcctc cgccgcgggg tgctcccgcg cggcgtggcg      180
gaggcgtgcg agcgccacgg cgtcttccag gtggtgaacc acggcgtggg cgccgcgctg      240
ctcgccgagg cctaccgctg ttgcgacgcc ttttacgcgc tcccgctcgc ggacaagcag      300
cgcgcgcagc gccggcacgg ggagaaccac ggctacgcca gcagcttcac gggccgcttc      360
cactgctgcc tgccgtggaa ggagacgctg tccttcaact gccccgccgg tgccgggact      420
gcgcgcgccg tcgtcggcta cttcgtcgac gtcctcggcg aggactaccg ccacatgggg      480
gaggtgtacc aggagtactg cgacgcgatg acgcgtctgg cgctggacgt gacggaggtg      540
ctggcggcag cgctggggct ggaccgcggc gcactgcgcg gcttcttcga gggcggcgac      600
tccgtcatgc ggctgaacca ctacccggcg tgccggcagc cgcacctgac gctggggacg      660
ggcccgcacc gggacccgac gtcgctgacg ctgctgcacc aggacgacgt gggcgggctg      720
caggtgcgcg ccggcggcgg gccgtggcgc gcggtgcggc cccgcgcgga cgcgttcgtg      780
gtcaacattg gcgacacctt cgccgcgctc accgacgggc gtcacaccag ctgcctgcac      840
cgcgccgtgg tgaccggcgg cggctcccgc cggtcgctcg ccttcttcct caacccgccg      900
ctggaccgcg tcgtccgccc gccgggcgcg ctcctccagg agaacaagca ggcgggccgc      960
ccgcgcgcgt tcccggactt cacgtggcgc gagttcctcg agttcacgca gaagcactac     1020
cggtcggacg cgggcaccat ggacgccttc gtgtcgtgga tcgcgggagg ccgccgccac     1080
catggcggac aggaggaggg caactga                                         1107
<210>  6
<211>  368
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  6
Met Ala Ala Ala Ala Val Val Phe Asp Ala Glu Ala Leu Ser Arg Glu
1. 5                   10                  15
Glu His Ile Pro Ala Gln Phe Val Trp Pro Thr Glu Glu Arg Ala Pro
20                  25                  30
Ala Gly Gly Val Glu Glu Val Ala Ile Pro Val Val Asp Leu Gly Glu
35                  40                  45
Phe Leu Arg Arg Gly Val Leu Pro Arg Gly Val Ala Glu Ala Cys Glu
50                  55                  60
Arg His Gly Val Phe Gln Val Val Asn His Gly Val Gly Ala Ala Leu
65                  70                  75                  80
Leu Ala Glu Ala Tyr Arg Cys Cys Asp Ala Phe Tyr Ala Leu Pro Leu
85                  90                  95
Ala Asp Lys Gln Arg Ala Gln Arg Arg His Gly Glu Asn His Gly Tyr
100                 105                 110
Ala Ser Ser Phe Thr Gly Arg Phe His Cys Cys Leu Pro Trp Lys Glu
115                 120                 125
Thr Leu Ser Phe Asn Cys Pro Ala Gly Ala Gly Thr Ala Arg Ala Val
130                 135                 140
Val Gly Tyr Phe Val Asp Val Leu Gly Glu Asp Tyr Arg His Met Gly
145                 150                 155                 160
Glu Val Tyr Gln Glu Tyr Cys Asp Ala Met Thr Arg Leu Ala Leu Asp
165                 170                 175
Val Thr Glu Val Leu Ala Ala Ala Leu Gly Leu Asp Arg Gly Ala Leu
180                 185                 190
Arg Gly Phe Phe Glu Gly Gly Asp Ser Val Met Arg Leu Asn His Tyr
195                 200                 205
Pro Ala Cys Arg Gln Pro His Leu Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Arg
210                 215                 220
Asp Pro Thr Ser Leu Thr Leu Leu His Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu
225                 230                 235                 240
Gln Val Arg Ala Gly Gly Gly Pro Trp Arg Ala Val Arg Pro Arg Ala
245                 250                 255
Asp Ala Phe Val Val Asn Ile Gly Asp Thr Phe Ala Ala Leu Thr Asp
260                 265                 270
Gly Arg His Thr Ser Cys Leu His Arg Ala Val Val Thr Gly Gly Gly
275                 280                 285
Ser Arg Arg Ser Leu Ala Phe Phe Leu Asn Pro Pro Leu Asp Arg Val
290                 295                 300
Val Arg Pro Pro Gly Ala Leu Leu Gln Glu Asn Lys Gln Ala Gly Arg
305                 310                 315                 320
Pro Arg Ala Phe Pro Asp Phe Thr Trp Arg Glu Phe Leu Glu Phe Thr
325                 330                 335
Gln Lys His Tyr Arg Ser Asp Ala Gly Thr Met Asp Ala Phe Val Ser
340                 345                 350
Trp Ile Ala Gly Gly Arg Arg His His Gly Gly Gln Glu Glu Gly Asn
355                 360                 365
<210>  7
<211>  1522
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  7
gcacactcgc agctcgcaca tctcatggtg tcctaagaac ggcaagagcc agctctgcct       60
agcagcagcg cacagccaca tccatggacg ccagcccgac cccaccgctc cccctccgcg      120
ccccaactcc cagcattgac ctccccgctg gcaaggacag ggccgacgcg gcggctaaca      180
aggccgcggc tgtgttcgac ctgcgccggg agcccaagat cccggagcca ttcctgtggc      240
cgcacgaaga ggcgcggccg acctcggccg cggagctgga ggtgccggtg gtggacgtgg      300
gcgtgctgcg caatggcgac ggcgcggggc tccgccgcgc cgcggcgcaa gtggcggcgg      360
cgtgcgcgac gcacgggttc ttccaggtgt gcgggcacgg cgtggacgcg gcgctggggc      420
gcgccgcgct ggacggcgcc agcgacttct tccggctgcc gctggctgag aagcagcggg      480
cccggcgcgt ccccggcacc gtgtccgggt acacgagcgc gcacgccgac cggttcgcgt      540
ccaagctccc ctggaaggag accctgtcct tcggcttcca cgacggcgcc gcggcgcccg      600
tcgtcgtgga ctacttcacc ggcaccctcg gccaagattt cgagccagtg gggcgggtgt      660
accagaggta ctgcgaggag atgaaggagc tgtcgctgac gatcatggag ctgctggagc      720
tgagcctggg cgtggagcgc ggctactacc gggagttctt cgaggacagc cgctccatca      780
tgcggtgcaa ctactacccg ccgtgcccgg tgccggagcg cacgctgggc acgggcccgc      840
actgcgaccc cacggcgctg accatcctcc tgcaggacga cgtcggcggg ctggaggtcc      900
tggtggacgg cgagtggcgc cccgtccggc ccgtcccagg cgccatggtc atcaacatcg      960
gcgacacctt catggcgctg tccaacgggc ggtacaagag ctgcctgcac cgcgcggtgg     1020
tgaaccggcg gcaggagcgg caatcgctgg ccttcttcct gtgcccgcgc gaggaccggg     1080
tggtgcgccc gccggccagc gccgcgccgc ggcagtaccc ggacttcacc tgggccgacc     1140
tcatgcgctt cacgcagcgc cactaccgcg ccgacacccg cacgctggac gccttcaccc     1200
gctggctctc ccacggcccg gcggcggcgg ctccctgcac ctaacgagcc ggccgtctct     1260
ttcgccgggg cccgcgcggg gttcgcccac gtggtgatca ggtggcagac atgtggccca     1320
cgggccccgc gccgccttcc ccatttttgg acgaccctac tgctactact actagtgtac     1380
atatgcaaaa aaatacatat atatataggt actttctcta atatttttat atataagcaa     1440
ggcggcctgg tgttcttttc tttgttttgt cgacaactgt ttgatcccat cctatggacg     1500
atggatagtt caatgtttgt ac                                              1522
<210>  8
<211>  1161
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  8
atggacgcca gcccgacccc accgctcccc ctccgcgccc caactcccag cattgacctc       60
cccgctggca aggacagggc cgacgcggcg gctaacaagg ccgcggctgt gttcgacctg      120
cgccgggagc ccaagatccc ggagccattc ctgtggccgc acgaagaggc gcggccgacc      180
tcggccgcgg agctggaggt gccggtggtg gacgtgggcg tgctgcgcaa tggcgacggc      240
gcggggctcc gccgcgccgc ggcgcaagtg gcggcggcgt gcgcgacgca cgggttcttc      300
caggtgtgcg ggcacggcgt ggacgcggcg ctggggcgcg ccgcgctgga cggcgccagc      360
gacttcttcc ggctgccgct ggctgagaag cagcgggccc ggcgcgtccc cggcaccgtg      420
tccgggtaca cgagcgcgca cgccgaccgg ttcgcgtcca agctcccctg gaaggagacc      480
ctgtccttcg gcttccacga cggcgccgcg gcgcccgtcg tcgtggacta cttcaccggc      540
accctcggcc aagatttcga gccagtgggg cgggtgtacc agaggtactg cgaggagatg      600
aaggagctgt cgctgacgat catggagctg ctggagctga gcctgggcgt ggagcgcggc      660
tactaccggg agttcttcga ggacagccgc tccatcatgc ggtgcaacta ctacccgccg      720
tgcccggtgc cggagcgcac gctgggcacg ggcccgcact gcgaccccac ggcgctgacc      780
atcctcctgc aggacgacgt cggcgggctg gaggtcctgg tggacggcga gtggcgcccc      840
gtccggcccg tcccaggcgc catggtcatc aacatcggcg acaccttcat ggcgctgtcc      900
aacgggcggt acaagagctg cctgcaccgc gcggtggtga accggcggca ggagcggcaa      960
tcgctggcct tcttcctgtg cccgcgcgag gaccgggtgg tgcgcccgcc ggccagcgcc     1020
gcgccgcggc agtacccgga cttcacctgg gccgacctca tgcgcttcac gcagcgccac     1080
taccgcgccg acacccgcac gctggacgcc ttcacccgct ggctctccca cggcccggcg     1140
gcggcggctc cctgcaccta a                                               1161
<210>  9
<211>  386
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  9
Met Asp Ala Ser Pro Thr Pro Pro Leu Pro Leu Arg Ala Pro Thr Pro
1. 5                   10                  15
Ser Ile Asp Leu Pro Ala Gly Lys Asp Arg Ala Asp Ala Ala Ala Asn
20                  25                  30
Lys Ala Ala Ala Val Phe Asp Leu Arg Arg Glu Pro Lys Ile Pro Glu
35                  40                  45
Pro Phe Leu Trp Pro His Glu Glu Ala Arg Pro Thr Ser Ala Ala Glu
50                  55                  60
Leu Glu Val Pro Val Val Asp Val Gly Val Leu Arg Asn Gly Asp Gly
65                  70                  75                  80
Ala Gly Leu Arg Arg Ala Ala Ala Gln Val Ala Ala Ala Cys Ala Thr
85                  90                  95
His Gly Phe Phe Gln Val Cys Gly His Gly Val Asp Ala Ala Leu Gly
100                 105                 110
Arg Ala Ala Leu Asp Gly Ala Ser Asp Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala
115                 120                 125
Glu Lys Gln Arg Ala Arg Arg Val Pro Gly Thr Val Ser Gly Tyr Thr
130                 135                 140
Ser Ala His Ala Asp Arg Phe Ala Ser Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr
145                 150                 155                 160
Leu Ser Phe Gly Phe His Asp Gly Ala Ala Ala Pro Val Val Val Asp
165                 170                 175
Tyr Phe Thr Gly Thr Leu Gly Gln Asp Phe Glu Pro Val Gly Arg Val
180                 185                 190
Tyr Gln Arg Tyr Cys Glu Glu Met Lys Glu Leu Ser Leu Thr Ile Met
195                 200                 205
Glu Leu Leu Glu Leu Ser Leu Gly Val Glu Arg Gly Tyr Tyr Arg Glu
210                 215                 220
Phe Phe Glu Asp Ser Arg Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro
225                 230                 235                 240
Cys Pro Val Pro Glu Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro
245                 250                 255
Thr Ala Leu Thr Ile Leu Leu Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Glu Val
260                 265                 270
Leu Val Asp Gly Glu Trp Arg Pro Val Arg Pro Val Pro Gly Ala Met
275                 280                 285
Val Ile Asn Ile Gly Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg Tyr
290                 295                 300
Lys Ser Cys Leu His Arg Ala Val Val Asn Arg Arg Gln Glu Arg Gln
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ala Phe Phe Leu Cys Pro Arg Glu Asp Arg Val Val Arg Pro
325                 330                 335
Pro Ala Ser Ala Ala Pro Arg Gln Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Ala Asp
340                 345                 350
Leu Met Arg Phe Thr Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Thr Arg Thr Leu
355                 360                 365
Asp Ala Phe Thr Arg Trp Leu Ser His Gly Pro Ala Ala Ala Ala Pro
370                 375                 380
Cys Thr
385
<210>  10
<211>  1457
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  10
taatcacctc atcacaggtc cccccagcct cactctcgcg ccggctcaag gtacattgcg       60
tgtcctagcc aagacacgca gctcatctca gcctcacacg cacagcaaga gcgaggcgtg      120
attcgccatg ggcggcctca ctatggacca ggccttcgtg caggcccccg agcaccgccc      180
caagcccatc gtcaccgagg ccaccggcat ccctctcatc gacctctcgc ctctggccgc      240
cagcggcggc gccgtggacg cgctggccgc cgaggtgggc gcggcgagcc gggactgggg      300
cttcttcgtg gtcgtgggcc acggcgtgcc cgcagagacc gtggcgcgcg cgacggaggc      360
gcagcgagcg ttcttcgcgc tgccggcaga gcggaaggcc gccgtgcgga ggaacgaggc      420
ggagccgctc gggtactacg agtcggagca caccaagaac gtgagggact ggaaggaggt      480
gtacgacctc gtgccgcgcg agccgccgcc gccggcagcc gtggccgacg gcgagcttgt      540
gttcgataac aagtggcccc aggatctacc gggcttcaga gaggcgctgg aggagtacgc      600
gaaagcgatg gaagagctgg cgttcaagct gctggagctg atcgcccgga gcctgaagct      660
gaggcccgac cggctgcacg gcttcttcaa ggaccagacg accttcatcc ggctgaacca      720
ctaccctcct tgcccgagcc ccgacctggc cctcggcgtg gggcggcaca aggacgccgg      780
cgccctgacc atcctgtacc aggacgacgt cggggggctc gacgtccggc ggcgctccga      840
cggcgagtgg gtccgcgtca ggcccgtgcc cgactcgttc atcatcaacg tcggcgacct      900
catccaggta cgagagcgcg gagcaccggg tgtcggtgaa ctcggcgagg gagaggttct      960
ccatgcccta cttcttcaac ccggcgacct acaccatggt ggagccggtg gaggagctgg     1020
tgagcaagga cgatccgccc aggtacgacg cctacaactg gggcgacttc ttcagcacca     1080
ggaagaacag caacttcaag aagctcaacg tggagaacat tcagatcgcg catttcaaga     1140
agagcctcgt cctcgcctaa ctactgctac tgctaggatc catgccattg ccatgtcgtc     1200
ttcagattca gagcacgcca tgtcgtcgct agcttcgtgg tagaacaaat aatgatgtgc     1260
gtgctgtgtg taagcatgga tatggatgtg aatatgtaat atgatgagca ctcctacttt     1320
ggtatgtttg ggaataacag acttgtgttg gtctggttca ttatttgtaa gaaaatcaaa     1380
aagagttagt agggcaggag gctaaccaca gtcatgctgc accacatccc tggtggaaag     1440
ctggccgggt tacgcta                                                    1457
<210>  11
<211>  1116
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  11
atgggcggcc tcactatgga ccaggccttc gtgcaggccc ccgagcaccg ccccaagccc       60
atcgtcaccg aggccaccgg catccctctc atcgacctct cgcctctggc cgccagcggc      120
ggcgccgtgg acgcgctggc cgccgaggtg ggcgcggcga gccgggactg gggcttcttc      180
gtggtcgtgg gccacggcgt gcccgcagag accgtggcgc gcgcgacgga ggcgcagcga      240
gcgttcttcg cgctgccggc agagcggaag gccgccgtgc ggaggaacga ggcggagccg      300
ctcgggtact acgagtcgga gcacaccaag aacgtgaggg actggaagga ggtgtacgac      360
ctcgtgccgc gcgagccgcc gccgccggca gccgtggccg acggcgagct tgtgttcgat      420
aacaagtggc cccaggatct accgggcttc agagaggcgc tggaggagta cgcgaaagcg      480
atggaagagc tggcgttcaa gctgctggag ctgatcgccc ggagcctgaa gctgaggccc      540
gaccggctgc acggcttctt caaggaccag acgaccttca tccggctgaa ccactaccct      600
ccttgcccga gccccgacct ggccctcggc gtggggcggc acaaggacgc cggcgccctg      660
accatcctgt accaggacga cgtcgggggg ctcgacgtcc ggcggcgctc cgacggcgag      720
tgggtccgcg tcaggcccgt gcccgactcg ttcatcatca acgtcggcga cctcatccag      780
gtacgagagc gcggagcacc gggtgtcggt gaactcggcg agggagaggt tctccatgcc      840
ctacttcttc aacccggcga cctacaccat ggtggagccg gtggaggagc tggtgagcaa      900
ggacgatccg cccaggtacg acgcctacaa ctggggcgac ttcttcagca ccaggaagaa      960
cagcaacttc aagaagctca acgtggagaa cattcagatc gcgcatttca agaagagcct     1020
cgtcctcgcc taactactgc tactgctagg atccatgcca ttgccatgtc gtcttcagat     1080
tcagagcacg ccatgtcgtc gctagcttcg tggtag                               1116
<210>  12
<211>  371
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  12
Met Gly Gly Leu Thr Met Asp Gln Ala Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Pro Lys Pro Ile Val Thr Glu Ala Thr Gly Ile Pro Leu Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Ala Ala Ser Gly Gly Ala Val Asp Ala Leu Ala Ala
35                  40                  45
Glu Val Gly Ala Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe Val Val Val Gly
50                  55                  60
His Gly Val Pro Ala Glu Thr Val Ala Arg Ala Thr Glu Ala Gln Arg
65                  70                  75                  80
Ala Phe Phe Ala Leu Pro Ala Glu Arg Lys Ala Ala Val Arg Arg Asn
85                  90                  95
Glu Ala Glu Pro Leu Gly Tyr Tyr Glu Ser Glu His Thr Lys Asn Val
100                 105                 110
Arg Asp Trp Lys Glu Val Tyr Asp Leu Val Pro Arg Glu Pro Pro Pro
115                 120                 125
Pro Ala Ala Val Ala Asp Gly Glu Leu Val Phe Asp Asn Lys Trp Pro
130                 135                 140
Gln Asp Leu Pro Gly Phe Arg Glu Ala Leu Glu Glu Tyr Ala Lys Ala
145                 150                 155                 160
Met Glu Glu Leu Ala Phe Lys Leu Leu Glu Leu Ile Ala Arg Ser Leu
165                 170                 175
Lys Leu Arg Pro Asp Arg Leu His Gly Phe Phe Lys Asp Gln Thr Thr
180                 185                 190
Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro Cys Pro Ser Pro Asp Leu Ala
195                 200                 205
Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala Gly Ala Leu Thr Ile Leu Tyr
210                 215                 220
Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Asp Val Arg Arg Arg Ser Asp Gly Glu
225                 230                 235                 240
Trp Val Arg Val Arg Pro Val Pro Asp Ser Phe Ile Ile Asn Val Gly
245                 250                 255
Asp Leu Ile Gln Val Arg Glu Arg Gly Ala Pro Gly Val Gly Glu Leu
260                 265                 270
Gly Glu Gly Glu Val Leu His Ala Leu Leu Leu Gln Pro Gly Asp Leu
275                 280                 285
His His Gly Gly Ala Gly Gly Gly Ala Gly Glu Gln Gly Arg Ser Ala
290                 295                 300
Gln Val Arg Arg Leu Gln Leu Gly Arg Leu Leu Gln His Gln Glu Glu
305                 310                 315                 320
Gln Gln Leu Gln Glu Ala Gln Arg Gly Glu His Ser Asp Arg Ala Phe
325                 330                 335
Gln Glu Glu Pro Arg Pro Arg Leu Thr Thr Ala Thr Ala Arg Ile His
340                 345                 350
Ala Ile Ala Met Ser Ser Ser Asp Ser Glu His Ala Met Ser Ser Leu
355                 360                 365
Ala Ser Trp
370
<210>  13
<211>  1733
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  13
atgaggccgc gcctccctcc aaatgttccc tccctgcctt cgtctttgtc gttgctcgca       60
aactccctgt cctcccctgt tacaaatacc cccacccgcc cggacagctt ccctgcatac      120
ttgcagctcg cacatctcat ggtgtcgcag gaacgacaag agccagctgt gcctagcagc      180
agcagcagca gcgccaagcg cgcagccacg tccatggacg ccagcccggc cccgccgctc      240
ctcctccgcg cccccactcc cagccccagc attgacctcc ccgctggcaa ggacaaggcc      300
gacgcggcgg ccagcaaggc cggcgcggcc gtgttcgacc tgcgccggga gcccaagatc      360
cccgcgccat tcctgtggcc gcaggaagag gcgcggccgt cctcggccgc ggagctggag      420
gtgccgatgg tggacgtggg cgtgctgcgc aatggcgacc gcgcggggct gcggcgcgcc      480
gcggcgcagg tggccgcggc gtgcgcgacg cacgggttct tccaggtgtg cgggcacggc      540
gtggacgcgg cgctggggcg cgccgcgctg gacggcgcca gcgacttctt ccggctgccg      600
ctcgccgaga agcagcgcgc ccggcgcgtc cccggcaccg tgtccgggta cacgagcgcg      660
cacgccgacc ggttcgcggc caagctcccc tggaaggaga ccctgtcgtt cggctaccac      720
gacggcgccg cgtcgcctgt cgtcgtggac tacttcgtcg gcaccctcgg ccaggatttc      780
gagccaatgg ggtgggtgta ccagaggtac tgcgaggaga tgaaggagct gtcgctgacg      840
atcatggagc tgctggagct gagcctgggc gtggagctgc gcggctacta ccgggagttc      900
ttcgaggaca gccggtccat catgcggtgc aactactacc cgccgtgccc ggagccggag      960
cgcacgctgg gcacgggccc gcactgcgac cccacggcgc tcaccatcct cctgcaggac     1020
gacgtgggcg ggctggaggt gctggtggac ggtgagtggc gccccgtccg gcccgtcccg     1080
ggcgccatgg tcatcaacat cggcgacacc ttcatggcgc tgtcgaacgg gaggtacaag     1140
agctgcctgc accgcgcggt ggtgaaccag cggcgggcgc ggcggtcgct ggccttcttc     1200
ctgtgcccgc gcgaggaccg ggtggtgcgc ccgccggcca gtgctgcgcc gcggcgctac     1260
ccggacttca cctgggccga cctcatgcgc ttcacgcagc gccactaccg cgccgacacc     1320
cgcacgctgg acgccttcac ccgctggctc tcccacggcc cggcccaggc ggcggcgcct     1380
ccctgcacct agcgagccgg gccaaggccg tctctttcgc cccacgtgcg cgcccagctg     1440
ggcaggtggc cagacacgcg gcccgcgggc cccgcgccgc cttgccattt tttgacgctg     1500
gccctactgc tgtgctacta gtgtacatat gcaagagtac atatatatat atatatatac     1560
gtattttcta tatattatat ataaaagcaa ggcggcccgg tgcccttctc ttgttttgtc     1620
cacaactgtt tgatcccatt attctatgga ccatggatac ttcaatgttt gtactaagac     1680
cgtgaacgtg ggattctttt ccttcctctg tgttttttct gagaaaaatt aaa            1733
<210>  14
<211>  1392
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  14
atgaggccgc gcctccctcc aaatgttccc tccctgcctt cgtctttgtc gttgctcgca       60
aactccctgt cctcccctgt tacaaatacc cccacccgcc cggacagctt ccctgcatac      120
ttgcagctcg cacatctcat ggtgtcgcag gaacgacaag agccagctgt gcctagcagc      180
agcagcagca gcgccaagcg cgcagccacg tccatggacg ccagcccggc cccgccgctc      240
ctcctccgcg cccccactcc cagccccagc attgacctcc ccgctggcaa ggacaaggcc      300
gacgcggcgg ccagcaaggc cggcgcggcc gtgttcgacc tgcgccggga gcccaagatc      360
cccgcgccat tcctgtggcc gcaggaagag gcgcggccgt cctcggccgc ggagctggag      420
gtgccgatgg tggacgtggg cgtgctgcgc aatggcgacc gcgcggggct gcggcgcgcc      480
gcggcgcagg tggccgcggc gtgcgcgacg cacgggttct tccaggtgtg cgggcacggc      540
gtggacgcgg cgctggggcg cgccgcgctg gacggcgcca gcgacttctt ccggctgccg      600
ctcgccgaga agcagcgcgc ccggcgcgtc cccggcaccg tgtccgggta cacgagcgcg      660
cacgccgacc ggttcgcggc caagctcccc tggaaggaga ccctgtcgtt cggctaccac      720
gacggcgccg cgtcgcctgt cgtcgtggac tacttcgtcg gcaccctcgg ccaggatttc      780
gagccaatgg ggtgggtgta ccagaggtac tgcgaggaga tgaaggagct gtcgctgacg      840
atcatggagc tgctggagct gagcctgggc gtggagctgc gcggctacta ccgggagttc      900
ttcgaggaca gccggtccat catgcggtgc aactactacc cgccgtgccc ggagccggag      960
cgcacgctgg gcacgggccc gcactgcgac cccacggcgc tcaccatcct cctgcaggac     1020
gacgtgggcg ggctggaggt gctggtggac ggtgagtggc gccccgtccg gcccgtcccg     1080
ggcgccatgg tcatcaacat cggcgacacc ttcatggcgc tgtcgaacgg gaggtacaag     1140
agctgcctgc accgcgcggt ggtgaaccag cggcgggcgc ggcggtcgct ggccttcttc     1200
ctgtgcccgc gcgaggaccg ggtggtgcgc ccgccggcca gtgctgcgcc gcggcgctac     1260
ccggacttca cctgggccga cctcatgcgc ttcacgcagc gccactaccg cgccgacacc     1320
cgcacgctgg acgccttcac ccgctggctc tcccacggcc cggcccaggc ggcggcgcct     1380
ccctgcacct ag                                                         1392
<210>  15
<211>  463
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  15
Met Arg Pro Arg Leu Pro Pro Asn Val Pro Ser Leu Pro Ser Ser Leu
1. 5                   10                  15
Ser Leu Leu Ala Asn Ser Leu Ser Ser Pro Val Thr Asn Thr Pro Thr
20                  25                  30
Arg Pro Asp Ser Phe Pro Ala Tyr Leu Gln Leu Ala His Leu Met Val
35                  40                  45
Ser Gln Glu Arg Gln Glu Pro Ala Val Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser
50                  55                  60
Ala Lys Arg Ala Ala Thr Ser Met Asp Ala Ser Pro Ala Pro Pro Leu
65                  70                  75                  80
Leu Leu Arg Ala Pro Thr Pro Ser Pro Ser Ile Asp Leu Pro Ala Gly
85                  90                  95
Lys Asp Lys Ala Asp Ala Ala Ala Ser Lys Ala Gly Ala Ala Val Phe
100                 105                 110
Asp Leu Arg Arg Glu Pro Lys Ile Pro Ala Pro Phe Leu Trp Pro Gln
115                 120                 125
Glu Glu Ala Arg Pro Ser Ser Ala Ala Glu Leu Glu Val Pro Met Val
130                 135                 140
Asp Val Gly Val Leu Arg Asn Gly Asp Arg Ala Gly Leu Arg Arg Ala
145                 150                 155                 160
Ala Ala Gln Val Ala Ala Ala Cys Ala Thr His Gly Phe Phe Gln Val
165                 170                 175
Cys Gly His Gly Val Asp Ala Ala Leu Gly Arg Ala Ala Leu Asp Gly
180                 185                 190
Ala Ser Asp Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala Glu Lys Gln Arg Ala Arg
195                 200                 205
Arg Val Pro Gly Thr Val Ser Gly Tyr Thr Ser Ala His Ala Asp Arg
210                 215                 220
Phe Ala Ala Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Gly Tyr His
225                 230                 235                 240
Asp Gly Ala Ala Ser Pro Val Val Val Asp Tyr Phe Val Gly Thr Leu
245                 250                 255
Gly Gln Asp Phe Glu Pro Met Gly Trp Val Tyr Gln Arg Tyr Cys Glu
260                 265                 270
Glu Met Lys Glu Leu Ser Leu Thr Ile Met Glu Leu Leu Glu Leu Ser
275                 280                 285
Leu Gly Val Glu Leu Arg Gly Tyr Tyr Arg Glu Phe Phe Glu Asp Ser
290                 295                 300
Arg Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Pro Glu Pro Glu
305                 310                 315                 320
Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro Thr Ala Leu Thr Ile
325                 330                 335
Leu Leu Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Glu Val Leu Val Asp Gly Glu
340                 345                 350
Trp Arg Pro Val Arg Pro Val Pro Gly Ala Met Val Ile Asn Ile Gly
355                 360                 365
Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Cys Leu His
370                 375                 380
Arg Ala Val Val Asn Gln Arg Arg Ala Arg Arg Ser Leu Ala Phe Phe
385                 390                 395                 400
Leu Cys Pro Arg Glu Asp Arg Val Val Arg Pro Pro Ala Ser Ala Ala
405                 410                 415
Pro Arg Arg Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Ala Asp Leu Met Arg Phe Thr
420                 425                 430
Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Thr Arg Thr Leu Asp Ala Phe Thr Arg
435                 440                 445
Trp Leu Ser His Gly Pro Ala Gln Ala Ala Ala Pro Pro Cys Thr
450                 455                 460
<210>  16
<211>  1510
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  16
aaagagcgcg cgacggcggc ccctgggaga gccatgcgag actggaggcg gaaccgcgca       60
cgacaccaag ctgccgcgcc ggactgctgc acgcaagcgc agcgcaggac cgaccgacct      120
ccgtaggcac gcacggcgcc ggcggcatgg cggagcacct cctgtcgacg gccgtgcacg      180
acacgctgcc ggggagctac gtgcggccgg agccggagcg cccgcgcctc gcggaggtcg      240
tgaccggcgc gcgcatcccc gtcgtggacc tgggcagccc cgaccgcggc gcggtcgtgg      300
ccgccgtcgg cgacgcctgc cgctcgcacg gcttcttcca ggtcgtcaac cacgggatac      360
acgccgccct ggtcgcggcg gtgatggccg cggggcgcgg cttcttccgg ctgccccccg      420
aggagaaggc caagctctac tccgacgacc ccgccaggaa gatccggctg tccaccagct      480
tcaacgtgcg caaggagacg gtgcacaact ggcgcgacta cctccgcctg cactgccatc      540
ccctcgacga gttcctgccc gattggccgt ccaacccgcc cgatttcaag gagaccatgg      600
gcacctactg caaggaggtc cgggagctcg ggttcaggct gtacgccgcg atctcggaga      660
gcctgggcct agaggcgagc tacatgaagg aagcgctggg ggagcaggag cagcacatgg      720
cggtcaactt ctacccgccg tgcccggagc cggagctcac ctacggcctc ccggcgcaca      780
ccgaccccaa cgcgctcacc atcctgctca tggacccgga cgtcgccggc ctgcaggtgc      840
tccacgccgg ccagtgggtc gccgtcaacc cgcagcccgg cgcgctcatc atcaacatcg      900
gcgaccagct gcaggcgctg agcaacgggc agtaccggag cgtgtggcac cgcgcggtgg      960
tgaactcgga ccgggagcgc atgtccgtgg cgtcgttcct gtgcccgtgc aaccacgtcg     1020
tgctcggccc cgcgcggaag ctcgtcaccg aggacacccc ggccgtgtac aggaactaca     1080
cgtacgacaa gtactacgcc aagttctgga gcaggaacct ggaccaggag cactgcctcg     1140
agctcttcag aacctagcga atcggatacg gatggatgga tacattacat acgcgccctc     1200
tgtttttctc catgacgtta gaagaacacg ttctgcaatg tttgtccatt caaggtggta     1260
tcaatcaagg ctgtggtcgt tgcaattctt ccgctccata tacatgatta aatgctttga     1320
aagaaaaaga aaaaaaagaa acacaagtat tatggcacta ctagtgtttt taggaacaag     1380
gaaagagggg ttgcccctgc tggctatata tattaaatat aaataaaggt aaggctgtag     1440
acattggtga ataagagaaa gtatttgagt ttctctattg tcactccaga acagactcct     1500
ttgcctcgat                                                            1510
<210>  17
<211>  1011
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  17
atggcggagc acctcctgtc gacggccgtg cacgacacgc tgccggggag ctacgtgcgg       60
ccggagccgg agcgcccgcg cctcgcggag gtcgtgaccg gcgcgcgcat ccccgtcgtg      120
gacctgggca gccccgaccg cggcgcggtc gtggccgccg tcggcgacgc ctgccgctcg      180
cacggcttct tccaggtcgt caaccacggg atacacgccg ccctggtcgc ggcggtgatg      240
gccgcggggc gcggcttctt ccggctgccc cccgaggaga aggccaagct ctactccgac      300
gaccccgcca ggaagatccg gctgtccacc agcttcaacg tgcgcaagga gacggtgcac      360
aactggcgcg actacctccg cctgcactgc catcccctcg acgagttcct gcccgattgg      420
ccgtccaacc cgcccgattt caaggagacc atgggcacct actgcaagga ggtccgggag      480
ctcgggttca ggctgtacgc cgcgatctcg gagagcctgg gcctagaggc gagctacatg      540
aaggaagcgc tgggggagca ggagcagcac atggcggtca acttctaccc gccgtgcccg      600
gagccggagc tcacctacgg cctcccggcg cacaccgacc ccaacgcgct caccatcctg      660
ctcatggacc cggacgtcgc cggcctgcag gtgctccacg ccggccagtg ggtcgccgtc      720
aacccgcagc ccggcgcgct catcatcaac atcggcgacc agctgcaggc gctgagcaac      780
gggcagtacc ggagcgtgtg gcaccgcgcg gtggtgaact cggaccggga gcgcatgtcc      840
gtggcgtcgt tcctgtgccc gtgcaaccac gtcgtgctcg gccccgcgcg gaagctcgtc      900
accgaggaca ccccggccgt gtacaggaac tacacgtacg acaagtacta cgccaagttc      960
tggagcagga acctggacca ggagcactgc ctcgagctct tcagaaccta g              1011
<210>  18
<211>  336
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  18
Met Ala Glu His Leu Leu Ser Thr Ala Val His Asp Thr Leu Pro Gly
1. 5                   10                  15
Ser Tyr Val Arg Pro Glu Pro Glu Arg Pro Arg Leu Ala Glu Val Val
20                  25                  30
Thr Gly Ala Arg Ile Pro Val Val Asp Leu Gly Ser Pro Asp Arg Gly
35                  40                  45
Ala Val Val Ala Ala Val Gly Asp Ala Cys Arg Ser His Gly Phe Phe
50                  55                  60
Gln Val Val Asn His Gly Ile His Ala Ala Leu Val Ala Ala Val Met
65                  70                  75                  80
Ala Ala Gly Arg Gly Phe Phe Arg Leu Pro Pro Glu Glu Lys Ala Lys
85                  90                  95
Leu Tyr Ser Asp Asp Pro Ala Arg Lys Ile Arg Leu Ser Thr Ser Phe
100                 105                 110
Asn Val Arg Lys Glu Thr Val His Asn Trp Arg Asp Tyr Leu Arg Leu
115                 120                 125
His Cys His Pro Leu Asp Glu Phe Leu Pro Asp Trp Pro Ser Asn Pro
130                 135                 140
Pro Asp Phe Lys Glu Thr Met Gly Thr Tyr Cys Lys Glu Val Arg Glu
145                 150                 155                 160
Leu Gly Phe Arg Leu Tyr Ala Ala Ile Ser Glu Ser Leu Gly Leu Glu
165                 170                 175
Ala Ser Tyr Met Lys Glu Ala Leu Gly Glu Gln Glu Gln His Met Ala
180                 185                 190
Val Asn Phe Tyr Pro Pro Cys Pro Glu Pro Glu Leu Thr Tyr Gly Leu
195                 200                 205
Pro Ala His Thr Asp Pro Asn Ala Leu Thr Ile Leu Leu Met Asp Pro
210                 215                 220
Asp Val Ala Gly Leu Gln Val Leu His Ala Gly Gln Trp Val Ala Val
225                 230                 235                 240
Asn Pro Gln Pro Gly Ala Leu Ile Ile Asn Ile Gly Asp Gln Leu Gln
245                 250                 255
Ala Leu Ser Asn Gly Gln Tyr Arg Ser Val Trp His Arg Ala Val Val
260                 265                 270
Asn Ser Asp Arg Glu Arg Met Ser Val Ala Ser Phe Leu Cys Pro Cys
275                 280                 285
Asn His Val Val Leu Gly Pro Ala Arg Lys Leu Val Thr Glu Asp Thr
290                 295                 300
Pro Ala Val Tyr Arg Asn Tyr Thr Tyr Asp Lys Tyr Tyr Ala Lys Phe
305                 310                 315                 320
Trp Ser Arg Asn Leu Asp Gln Glu His Cys Leu Glu Leu Phe Arg Thr
325                 330                 335
<210>  19
<211>  1387
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  19
gttttctttt tgaacgtaac tgacagaagc tatctgccta gctacggcgt gtcggttgct       60
tgtctcacca aagcagcgac atggaagcct gacagctcgt cgcgtcgcgc catttccacc      120
caacaaagcg gcggcgccag cacgcactgc ttctgcttgt gcgtgctcct ccgttccggg      180
cacgcctcta aagtctatac agcctcgaat ccatcccggc cgccgctcct gggggatact      240
acagcgagcc gaagcgggga tggcggagat ccctgtgatc gacctgcgcg tcgccggctc      300
ggcggccgag gagtccgcgc ggctgcgggc cgcgtgcgag cgcctgggct gcttccgggt      360
gaccggccac ggcgtgccct cggtgctcct ggcagagatg aaggccgccg tgcgcgcgct      420
cttcgacctc cccgacgacg ccaagcgccg caacgccgac gtcatcaccg gcagcggcta      480
cgtcgccccc agcccgacca acccgctcta cgaggccttc gggctcctcg acgccgccgt      540
gcccaccgac gtcgacgcct tttgcgcgct cctcgacgcg ccgcccaaca tcagggagac      600
cgtcaaggcc tacgcggaga agatgcacga tgtgatcgtt ggcgtcgccc gcgagctggc      660
gtctagcctg gggctagtcg aggagcactc gttccaggac tggccgtgcc agttccgcat      720
caacaggtac aactacacgc gggagacggt gggctcctcc ggcgtgcaga cccacacgga      780
ctcgggcttc ctcaccgtgc tccatgagga cgagtgtgtc ggcggcctcg aggtcctgga      840
cccgggcacc ggcgagttcg tgcccgtgga ccccgtcgcg ggctcctttc tcgtaaacat      900
cggcgacgtc ggcacggcgt ggagcaacgg gaggctgcac aacgtgaagc accgggtgcg      960
gtgcgtcgca cccgtgccgc gcatctccat cgccatgttc ctgctcgcac ccaaggacga     1020
cagcgtgagc gcaccggcgg cgttcgtgga cgcggaccac ccgcgcaggt acaaggtgtt     1080
caactacaac gactatcgga ggctcagact gtccaccggc gagcacgcag gcgaggcgct     1140
cgcacggatg gcggcgtgac gtggctggag ctgcaaattg gattggaagc cgagacaagc     1200
cgttagttat ttaccatgcc cgtgcgttca ccgcacacaa tcatattcaa aagccataaa     1260
ataaaaaata attttaatat cagtcaacat atggtttaaa tatcatatgg agtacaatat     1320
tccgaatttt tttttgtaat ttagtctgtc ttttgaaaaa aatgcacatc tagacctccg     1380
gatgact                                                               1387
<210>  20
<211>  900
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  20
atggcggaga tccctgtgat cgacctgcgc gtcgccggct cggcggccga ggagtccgcg       60
cggctgcggg ccgcgtgcga gcgcctgggc tgcttccggg tgaccggcca cggcgtgccc      120
tcggtgctcc tggcagagat gaaggccgcc gtgcgcgcgc tcttcgacct ccccgacgac      180
gccaagcgcc gcaacgccga cgtcatcacc ggcagcggct acgtcgcccc cagcccgacc      240
aacccgctct acgaggcctt cgggctcctc gacgccgccg tgcccaccga cgtcgacgcc      300
ttttgcgcgc tcctcgacgc gccgcccaac atcagggaga ccgtcaaggc ctacgcggag      360
aagatgcacg atgtgatcgt tggcgtcgcc cgcgagctgg cgtctagcct ggggctagtc      420
gaggagcact cgttccagga ctggccgtgc cagttccgca tcaacaggta caactacacg      480
cgggagacgg tgggctcctc cggcgtgcag acccacacgg actcgggctt cctcaccgtg      540
ctccatgagg acgagtgtgt cggcggcctc gaggtcctgg acccgggcac cggcgagttc      600
gtgcccgtgg accccgtcgc gggctccttt ctcgtaaaca tcggcgacgt cggcacggcg      660
tggagcaacg ggaggctgca caacgtgaag caccgggtgc ggtgcgtcgc acccgtgccg      720
cgcatctcca tcgccatgtt cctgctcgca cccaaggacg acagcgtgag cgcaccggcg      780
gcgttcgtgg acgcggacca cccgcgcagg tacaaggtgt tcaactacaa cgactatcgg      840
aggctcagac tgtccaccgg cgagcacgca ggcgaggcgc tcgcacggat ggcggcgtga      900
<210>  21
<211>  299
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  21
Met Ala Glu Ile Pro Val Ile Asp Leu Arg Val Ala Gly Ser Ala Ala
1. 5                   10                  15
Glu Glu Ser Ala Arg Leu Arg Ala Ala Cys Glu Arg Leu Gly Cys Phe
20                  25                  30
Arg Val Thr Gly His Gly Val Pro Ser Val Leu Leu Ala Glu Met Lys
35                  40                  45
Ala Ala Val Arg Ala Leu Phe Asp Leu Pro Asp Asp Ala Lys Arg Arg
50                  55                  60
Asn Ala Asp Val Ile Thr Gly Ser Gly Tyr Val Ala Pro Ser Pro Thr
65                  70                  75                  80
Asn Pro Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Leu Asp Ala Ala Val Pro Thr
85                  90                  95
Asp Val Asp Ala Phe Cys Ala Leu Leu Asp Ala Pro Pro Asn Ile Arg
100                 105                 110
Glu Thr Val Lys Ala Tyr Ala Glu Lys Met His Asp Val Ile Val Gly
115                 120                 125
Val Ala Arg Glu Leu Ala Ser Ser Leu Gly Leu Val Glu Glu His Ser
130                 135                 140
Phe Gln Asp Trp Pro Cys Gln Phe Arg Ile Asn Arg Tyr Asn Tyr Thr
145                 150                 155                 160
Arg Glu Thr Val Gly Ser Ser Gly Val Gln Thr His Thr Asp Ser Gly
165                 170                 175
Phe Leu Thr Val Leu His Glu Asp Glu Cys Val Gly Gly Leu Glu Val
180                 185                 190
Leu Asp Pro Gly Thr Gly Glu Phe Val Pro Val Asp Pro Val Ala Gly
195                 200                 205
Ser Phe Leu Val Asn Ile Gly Asp Val Gly Thr Ala Trp Ser Asn Gly
210                 215                 220
Arg Leu His Asn Val Lys His Arg Val Arg Cys Val Ala Pro Val Pro
225                 230                 235                 240
Arg Ile Ser Ile Ala Met Phe Leu Leu Ala Pro Lys Asp Asp Ser Val
245                 250                 255
Ser Ala Pro Ala Ala Phe Val Asp Ala Asp His Pro Arg Arg Tyr Lys
260                 265                 270
Val Phe Asn Tyr Asn Asp Tyr Arg Arg Leu Arg Leu Ser Thr Gly Glu
275                 280                 285
His Ala Gly Glu Ala Leu Ala Arg Met Ala Ala
290                 295
<210>  22
<211>  1496
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  22
gtcggtctct tgtctcacca aaccggcgac atggtacatg gaggccagcc cgtcgcttgg       60
cgccacaagt ctcggtgccg tccgtccgac aagcggcgcc agcgcacgct ggctgctcgt      120
gcacgcctct aaatacggcc ccggacccgc caccaagcga aggccaatcc cgtccgccgc      180
cccccaccaa ccacgaacca cgcaagcgaa cccggccggc gcggggcagc ggcgatggcg      240
gagatcccgg tgatcgacct gcgcctcgcc ggctcgtcgc ccgacgagtc ggcgcggctg      300
cgcgacgcgt gcgagcgcct gggctgcttt cgggtgaccg gccacggcgc gcccgcgggg      360
ctcctggccg acatgaaggc cgccgtgcgc gcgctcttcg acctccccga cgacgccaag      420
cgccgcaacg ccgacgtcat ccccggcagc ggctacgtcg cgccctgccc cgccaacccg      480
ctctacgagg ccttcgggct cctcgacgcc gccgcgcccg ccgacgtcga cgccttctgc      540
gcgcgcctcg acgcgccgcc caaagtcagg gagaccgtca agacctacgc ggagaagatg      600
cacgacgtga tcgtcggcgt cgccggcgag ctggccacca gcctggggct gggcctggag      660
gagcactcgt tccaggactg gccgtgccag ttccgcatca acaggtacaa ctacacgcag      720
gagacggtgg gctcctccgg cgtgcagacc cacacggact cgggcttcct caccgtgctc      780
caggaggacg agtgcgtcgg cggcctcgag gtgctggacc ccgccgccgg tgagttcgtg      840
cccgtggacc ccgtcgccgg ctccttcctc gtcaacatcg gcgacgtcgg cacggcgtgg      900
agcaacggga ggctccacaa cgtgaagcac cgggtgcggt gcgtcgcgcc cgtgccgcgc      960
atctccatcg ccatgttcct gctggcgccc aaggacgacc gcgtgagcgc cccggaggcg     1020
ttggtcgacg cgggccaccc gcgtcggtac aagccgttca actacgacga ctaccggagg     1080
ctccggctgt ccaccggcga gcgcgcaggc gaggcgctcg cgcggatggc ggcgtgatgt     1140
cgtcacgcac gtgcaagccg ttaattatag gctcgcgcat gcatacgcct acacgagagg     1200
ttgtctcgtt aagccgttct attaaaatgt gtgggggaga aagatgacta ccgtggtgcc     1260
atgtggattg ctatcgggtc tgatcaataa aatcttgcaa cacttgcacg tgcgattcca     1320
tatcctagca cgggtgggcg ccacgctagt aggtagagac cggagcggcc aaaaaatggc     1380
tacagcacca gtaggtgaac tctcaagcaa cactggctat cccacttctg acgttgtctc     1440
tctcatcact atgtatgacc agcgaatgaa gtgtttaaaa atctgacgcc gtgaaa         1496
<210>  23
<211>  903
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  23
atggcggaga tcccggtgat cgacctgcgc ctcgccggct cgtcgcccga cgagtcggcg       60
cggctgcgcg acgcgtgcga gcgcctgggc tgctttcggg tgaccggcca cggcgcgccc      120
gcggggctcc tggccgacat gaaggccgcc gtgcgcgcgc tcttcgacct ccccgacgac      180
gccaagcgcc gcaacgccga cgtcatcccc ggcagcggct acgtcgcgcc ctgccccgcc      240
aacccgctct acgaggcctt cgggctcctc gacgccgccg cgcccgccga cgtcgacgcc      300
ttctgcgcgc gcctcgacgc gccgcccaaa gtcagggaga ccgtcaagac ctacgcggag      360
aagatgcacg acgtgatcgt cggcgtcgcc ggcgagctgg ccaccagcct ggggctgggc      420
ctggaggagc actcgttcca ggactggccg tgccagttcc gcatcaacag gtacaactac      480
acgcaggaga cggtgggctc ctccggcgtg cagacccaca cggactcggg cttcctcacc      540
gtgctccagg aggacgagtg cgtcggcggc ctcgaggtgc tggaccccgc cgccggtgag      600
ttcgtgcccg tggaccccgt cgccggctcc ttcctcgtca acatcggcga cgtcggcacg      660
gcgtggagca acgggaggct ccacaacgtg aagcaccggg tgcggtgcgt cgcgcccgtg      720
ccgcgcatct ccatcgccat gttcctgctg gcgcccaagg acgaccgcgt gagcgccccg      780
gaggcgttgg tcgacgcggg ccacccgcgt cggtacaagc cgttcaacta cgacgactac      840
cggaggctcc ggctgtccac cggcgagcgc gcaggcgagg cgctcgcgcg gatggcggcg      900
tga                                                                    903
<210>  24
<211>  300
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  24
Met Ala Glu Ile Pro Val Ile Asp Leu Arg Leu Ala Gly Ser Ser Pro
1. 5                   10                  15
Asp Glu Ser Ala Arg Leu Arg Asp Ala Cys Glu Arg Leu Gly Cys Phe
20                  25                  30
Arg Val Thr Gly His Gly Ala Pro Ala Gly Leu Leu Ala Asp Met Lys
35                  40                  45
Ala Ala Val Arg Ala Leu Phe Asp Leu Pro Asp Asp Ala Lys Arg Arg
50                  55                  60
Asn Ala Asp Val Ile Pro Gly Ser Gly Tyr Val Ala Pro Cys Pro Ala
65                  70                  75                  80
Asn Pro Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Leu Asp Ala Ala Ala Pro Ala
85                  90                  95
Asp Val Asp Ala Phe Cys Ala Arg Leu Asp Ala Pro Pro Lys Val Arg
100                 105                 110
Glu Thr Val Lys Thr Tyr Ala Glu Lys Met His Asp Val Ile Val Gly
115                 120                 125
Val Ala Gly Glu Leu Ala Thr Ser Leu Gly Leu Gly Leu Glu Glu His
130                 135                 140
Ser Phe Gln Asp Trp Pro Cys Gln Phe Arg Ile Asn Arg Tyr Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Gln Glu Thr Val Gly Ser Ser Gly Val Gln Thr His Thr Asp Ser
165                 170                 175
Gly Phe Leu Thr Val Leu Gln Glu Asp Glu Cys Val Gly Gly Leu Glu
180                 185                 190
Val Leu Asp Pro Ala Ala Gly Glu Phe Val Pro Val Asp Pro Val Ala
195                 200                 205
Gly Ser Phe Leu Val Asn Ile Gly Asp Val Gly Thr Ala Trp Ser Asn
210                 215                 220
Gly Arg Leu His Asn Val Lys His Arg Val Arg Cys Val Ala Pro Val
225                 230                 235                 240
Pro Arg Ile Ser Ile Ala Met Phe Leu Leu Ala Pro Lys Asp Asp Arg
245                 250                 255
Val Ser Ala Pro Glu Ala Leu Val Asp Ala Gly His Pro Arg Arg Tyr
260                 265                 270
Lys Pro Phe Asn Tyr Asp Asp Tyr Arg Arg Leu Arg Leu Ser Thr Gly
275                 280                 285
Glu Arg Ala Gly Glu Ala Leu Ala Arg Met Ala Ala
290                 295                 300
<210>  25
<211>  1614
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  25
accacacgaa ttgcacatct ccacagctca cgattccaac actagctaca tatatatgta       60
gctttctagg ctactatata cactcaccac caagtgtgaa gtgtgtatat atagtgacag      120
ctactgcaat atatacatac gcgtcaccta tatattagcc aagctagcta tatgagcttg      180
gttgcggcgc caatggcgat cgtcgacgtg gccaacgccc agctgcagca agcagcagca      240
gcagctgcca agaaagacga ggacggccat gagcagcagg agtcgtccta cgactacggc      300
gcgctgatga aaggcgtgag gcacctgtcg gacagcggca ttaccaggct gcccgacagg      360
tacgtcctgc ccgcgtccga ccgccccggc gtccttgccg tctcgtcgtc cgtggcgggc      420
agcggcaggg tcaagctccc tgtcgtcaac ctcgccggcc tccgcgaccc ctgccagcgc      480
gccgccgtgc tggccacgct cgacgccgcg tgccgggagt acggcttctt tcaggtggta      540
aaccacgggt tcgggagcga cgtgagcggc gggatgctgg acgtggcgca gcgcttcttc      600
gagctgccgc tggccgagcg agcgcggcac atgtcggcgg acgtgcgggc gccggtgcgc      660
tacggcacca gcttcaacca ggccaaggac gacgtgctct gctggcgcga cttcctcaag      720
ctcgtctgcc agccgctgca ggcggtgctc ccgtactggc cccagcagcc ggcggacctc      780
agggacgtgg ccaccaggta cgccacggcg agccaccggc tgttcatgga ggtcatggag      840
gcggcgctgg aggccctggg catccccacg gccggcggcg tgctcgggga gctggcagcg      900
tcgtcgtcgc acatgatgac ggtgaactgc tacccggcgt gcccgcagcc tgagctcacg      960
ctggggatgc cctcgcactc ggactacggc ctcttcacgt tcgtcctgca ggaccacgtc     1020
gagggcctcc aggtcatgca cgacggccgc tggctcacca tcgaccccat cccgggatcg     1080
ttcgtcgtca acgtcggcga ccacctagag atctacagca acgggcggta caagagcgcg     1140
ctgcaccggg tgcacgtgaa ctccacgcgg ccgcgcatct cggtggcgtc gttccacagc     1200
ctgccggcgg agcgagtgat cgggccggcg ccggagctgg tggacgacga ggccggcaac     1260
ccgcggcggt acatggacac cgacttcgct accttcctcg cctacctcgc atccgcggac     1320
ggcaagaaca agaccttcct ccagtcaagg aagctgcctg ctgctgctcc tccatgcctc     1380
tagctaacta gatagctgct tattaatctg acagaataaa attaatcagt tcagcgcaca     1440
attccacaag cgaaaacaaa cctggatttg ttttaattag ctctgccctt cattattaca     1500
ttcaagctag ctcttggtca acgcatgcac acaagcttga gcattgactg gtcccttttc     1560
aatcggttgc attgtactcc ctccgtacca aaattggttg tcgctatagt attt           1614
<210>  26
<211>  1212
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  26
atgagcttgg ttgcggcgcc aatggcgatc gtcgacgtgg ccaacgccca gctgcagcaa       60
gcagcagcag cagctgccaa gaaagacgag gacggccatg agcagcagga gtcgtcctac      120
gactacggcg cgctgatgaa aggcgtgagg cacctgtcgg acagcggcat taccaggctg      180
cccgacaggt acgtcctgcc cgcgtccgac cgccccggcg tccttgccgt ctcgtcgtcc      240
gtggcgggca gcggcagggt caagctccct gtcgtcaacc tcgccggcct ccgcgacccc      300
tgccagcgcg ccgccgtgct ggccacgctc gacgccgcgt gccgggagta cggcttcttt      360
caggtggtaa accacgggtt cgggagcgac gtgagcggcg ggatgctgga cgtggcgcag      420
cgcttcttcg agctgccgct ggccgagcga gcgcggcaca tgtcggcgga cgtgcgggcg      480
ccggtgcgct acggcaccag cttcaaccag gccaaggacg acgtgctctg ctggcgcgac      540
ttcctcaagc tcgtctgcca gccgctgcag gcggtgctcc cgtactggcc ccagcagccg      600
gcggacctca gggacgtggc caccaggtac gccacggcga gccaccggct gttcatggag      660
gtcatggagg cggcgctgga ggccctgggc atccccacgg ccggcggcgt gctcggggag      720
ctggcagcgt cgtcgtcgca catgatgacg gtgaactgct acccggcgtg cccgcagcct      780
gagctcacgc tggggatgcc ctcgcactcg gactacggcc tcttcacgtt cgtcctgcag      840
gaccacgtcg agggcctcca ggtcatgcac gacggccgct ggctcaccat cgaccccatc      900
ccgggatcgt tcgtcgtcaa cgtcggcgac cacctagaga tctacagcaa cgggcggtac      960
aagagcgcgc tgcaccgggt gcacgtgaac tccacgcggc cgcgcatctc ggtggcgtcg     1020
ttccacagcc tgccggcgga gcgagtgatc gggccggcgc cggagctggt ggacgacgag     1080
gccggcaacc cgcggcggta catggacacc gacttcgcta ccttcctcgc ctacctcgca     1140
tccgcggacg gcaagaacaa gaccttcctc cagtcaagga agctgcctgc tgctgctcct     1200
ccatgcctct ag                                                         1212
<210>  27
<211>  403
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  27
Met Ser Leu Val Ala Ala Pro Met Ala Ile Val Asp Val Ala Asn Ala
1. 5                   10                  15
Gln Leu Gln Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala Lys Lys Asp Glu Asp Gly
20                  25                  30
His Glu Gln Gln Glu Ser Ser Tyr Asp Tyr Gly Ala Leu Met Lys Gly
35                  40                  45
Val Arg His Leu Ser Asp Ser Gly Ile Thr Arg Leu Pro Asp Arg Tyr
50                  55                  60
Val Leu Pro Ala Ser Asp Arg Pro Gly Val Leu Ala Val Ser Ser Ser
65                  70                  75                  80
Val Ala Gly Ser Gly Arg Val Lys Leu Pro Val Val Asn Leu Ala Gly
85                  90                  95
Leu Arg Asp Pro Cys Gln Arg Ala Ala Val Leu Ala Thr Leu Asp Ala
100                 105                 110
Ala Cys Arg Glu Tyr Gly Phe Phe Gln Val Val Asn His Gly Phe Gly
115                 120                 125
Ser Asp Val Ser Gly Gly Met Leu Asp Val Ala Gln Arg Phe Phe Glu
130                 135                 140
Leu Pro Leu Ala Glu Arg Ala Arg His Met Ser Ala Asp Val Arg Ala
145                 150                 155                 160
Pro Val Arg Tyr Gly Thr Ser Phe Asn Gln Ala Lys Asp Asp Val Leu
165                 170                 175
Cys Trp Arg Asp Phe Leu Lys Leu Val Cys Gln Pro Leu Gln Ala Val
180                 185                 190
Leu Pro Tyr Trp Pro Gln Gln Pro Ala Asp Leu Arg Asp Val Ala Thr
195                 200                 205
Arg Tyr Ala Thr Ala Ser His Arg Leu Phe Met Glu Val Met Glu Ala
210                 215                 220
Ala Leu Glu Ala Leu Gly Ile Pro Thr Ala Gly Gly Val Leu Gly Glu
225                 230                 235                 240
Leu Ala Ala Ser Ser Ser His Met Met Thr Val Asn Cys Tyr Pro Ala
245                 250                 255
Cys Pro Gln Pro Glu Leu Thr Leu Gly Met Pro Ser His Ser Asp Tyr
260                 265                 270
Gly Leu Phe Thr Phe Val Leu Gln Asp His Val Glu Gly Leu Gln Val
275                 280                 285
Met His Asp Gly Arg Trp Leu Thr Ile Asp Pro Ile Pro Gly Ser Phe
290                 295                 300
Val Val Asn Val Gly Asp His Leu Glu Ile Tyr Ser Asn Gly Arg Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Ser Ala Leu His Arg Val His Val Asn Ser Thr Arg Pro Arg Ile
325                 330                 335
Ser Val Ala Ser Phe His Ser Leu Pro Ala Glu Arg Val Ile Gly Pro
340                 345                 350
Ala Pro Glu Leu Val Asp Asp Glu Ala Gly Asn Pro Arg Arg Tyr Met
355                 360                 365
Asp Thr Asp Phe Ala Thr Phe Leu Ala Tyr Leu Ala Ser Ala Asp Gly
370                 375                 380
Lys Asn Lys Thr Phe Leu Gln Ser Arg Lys Leu Pro Ala Ala Ala Pro
385                 390                 395                 400
Pro Cys Leu
<210>  28
<211>  1863
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  28
tgccaccata ccactagtgc aaggtcctag atttacactt ggtgctacac cttgcttcgc       60
ccccttcctt ccttccttcc ttccttccct ccttccttgg tctctaggca gctagcagtg      120
tggtgctgct gccggccgcc tattggccgc ctgggactgg gatccattaa ttactgcgcg      180
cgcgcggcta accaaccaat cccagcgtgc gtaatctatt gcccacatgc cgacgccgtc      240
gcacctcaac aagaacccgc gctacctgga cttccgggcg gcgcggcggg tgccggagtc      300
gcacgcctgg ccgggcctgc acgaccaccc cgtcgtggac ggcggcgcgc cgggccccga      360
cgccgtgccg gtggtggacc tgggcgccgc ggacccggcg ccggcgccgg cggcggcggt      420
ggcccgcgcc gccgagcaat ggggcgcgtt cctgctcacg ggccacggcg tccccgcgga      480
cctgctggcg cgcgtggagg accggatcgc caccatgttc gcgctgccgg ccgacgacaa      540
gatgcgcgcc gtgcgcgggc ccggcgacgc ctgcggctac ggctccccgc ccatctcctc      600
cttcttctcc aagtgcatgt ggtccgaggg ctacaccttc tcgccggcct ccctccgcgc      660
cgacctccgc aagctctggc ccaaggccgg cgacgactac accagcttct gtgatgtgat      720
ggaggagttc cacaagcaca tgcgcgccct cgcggacaag ctgctggagc tgttcctcat      780
ggcgctgggg ctcaccgacg agcaggccag cgccgtcgag gccgagcgga ggatcgccga      840
gacgatgacc gccaccatgc atctcaactg gtacccgagg tgcccggacc cgcggcgcgc      900
gctggggctg atcgcgcaca ccgactcggg cttcttcacc ttcgtgatgc agagcctcgt      960
gcccgggctg cagctcttcc gccacgcccc ggaccggtgg gtggcggtgc cggccgtgcc     1020
gggcgccttc gtcgtcaacg tgggcgacct cttccacatc ctcaccaacg gccggttcca     1080
cagcgtgtac caccgcgccg tcgtgaaccg ggacctcgac aggatctcgc tcggctactt     1140
cctcggcccg ccgccgcacg ccaaggtggc gccgctgcgc gaggccgtgc cgcccggccg     1200
ggcccccgcg taccgcgccg tcacgtggcc cgagtacatg ggcgtccgca agaaggcctt     1260
caccaccggc gcctccgcgc tcaagatggt cgccctcgcc gccgccgccg acctcgacga     1320
cgacggcgac gccgccgtcg tccatcagca gcagcagcta gtcgtctcgt cgtagccgag     1380
accgatcgcc ggagactgat gctgatgatg atgcatatat acatgagaga aatcgtcgag     1440
tagactagcc gattgcaaaa gcaaccccag ctgccgaaac ctggcatatc gatcccattc     1500
tctgctgcgc acatgtatgc atgcatgcgc ttcgtccgtt cgactcgtgt gtgcttgctt     1560
gcttgcgcgt gcagcagaac taattccgtt ccgcagctag ctgctctgct ctgctctgct     1620
ggaatgtaat taagtagtag tatatggtag tagagaaaag attagctagg cgatcgatat     1680
agatgacggg ccggggaaga agacgaatta attaagatcg atcgacgacg acgagctgtg     1740
cgtggctggc tgtgttcttc tctagcctag ttacagaggc cggctgctgc tgcttccaat     1800
cgggctgctt gtcgctactg acgatcgtta gtggatccat taactaatct ggaattctgg     1860
att                                                                   1863
<210>  29
<211>  1149
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  29
atgccgacgc cgtcgcacct caacaagaac ccgcgctacc tggacttccg ggcggcgcgg       60
cgggtgccgg agtcgcacgc ctggccgggc ctgcacgacc accccgtcgt ggacggcggc      120
gcgccgggcc ccgacgccgt gccggtggtg gacctgggcg ccgcggaccc ggcgccggcg      180
ccggcggcgg cggtggcccg cgccgccgag caatggggcg cgttcctgct cacgggccac      240
ggcgtccccg cggacctgct ggcgcgcgtg gaggaccgga tcgccaccat gttcgcgctg      300
ccggccgacg acaagatgcg cgccgtgcgc gggcccggcg acgcctgcgg ctacggctcc      360
ccgcccatct cctccttctt ctccaagtgc atgtggtccg agggctacac cttctcgccg      420
gcctccctcc gcgccgacct ccgcaagctc tggcccaagg ccggcgacga ctacaccagc      480
ttctgtgatg tgatggagga gttccacaag cacatgcgcg ccctcgcgga caagctgctg      540
gagctgttcc tcatggcgct ggggctcacc gacgagcagg ccagcgccgt cgaggccgag      600
cggaggatcg ccgagacgat gaccgccacc atgcatctca actggtaccc gaggtgcccg      660
gacccgcggc gcgcgctggg gctgatcgcg cacaccgact cgggcttctt caccttcgtg      720
atgcagagcc tcgtgcccgg gctgcagctc ttccgccacg ccccggaccg gtgggtggcg      780
gtgccggccg tgccgggcgc cttcgtcgtc aacgtgggcg acctcttcca catcctcacc      840
aacggccggt tccacagcgt gtaccaccgc gccgtcgtga accgggacct cgacaggatc      900
tcgctcggct acttcctcgg cccgccgccg cacgccaagg tggcgccgct gcgcgaggcc      960
gtgccgcccg gccgggcccc cgcgtaccgc gccgtcacgt ggcccgagta catgggcgtc     1020
cgcaagaagg ccttcaccac cggcgcctcc gcgctcaaga tggtcgccct cgccgccgcc     1080
gccgacctcg acgacgacgg cgacgccgcc gtcgtccatc agcagcagca gctagtcgtc     1140
tcgtcgtag                                                             1149
<210>  30
<211>  382
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  30
Met Pro Thr Pro Ser His Leu Asn Lys Asn Pro Arg Tyr Leu Asp Phe
1. 5                   10                  15
Arg Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Ser His Ala Trp Pro Gly Leu His
20                  25                  30
Asp His Pro Val Val Asp Gly Gly Ala Pro Gly Pro Asp Ala Val Pro
35                  40                  45
Val Val Asp Leu Gly Ala Ala Asp Pro Ala Pro Ala Pro Ala Ala Ala
50                  55                  60
Val Ala Arg Ala Ala Glu Gln Trp Gly Ala Phe Leu Leu Thr Gly His
65                  70                  75                  80
Gly Val Pro Ala Asp Leu Leu Ala Arg Val Glu Asp Arg Ile Ala Thr
85                  90                  95
Met Phe Ala Leu Pro Ala Asp Asp Lys Met Arg Ala Val Arg Gly Pro
100                 105                 110
Gly Asp Ala Cys Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe Ser
115                 120                 125
Lys Cys Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ala Ser Leu Arg
130                 135                 140
Ala Asp Leu Arg Lys Leu Trp Pro Lys Ala Gly Asp Asp Tyr Thr Ser
145                 150                 155                 160
Phe Cys Asp Val Met Glu Glu Phe His Lys His Met Arg Ala Leu Ala
165                 170                 175
Asp Lys Leu Leu Glu Leu Phe Leu Met Ala Leu Gly Leu Thr Asp Glu
180                 185                 190
Gln Ala Ser Ala Val Glu Ala Glu Arg Arg Ile Ala Glu Thr Met Thr
195                 200                 205
Ala Thr Met His Leu Asn Trp Tyr Pro Arg Cys Pro Asp Pro Arg Arg
210                 215                 220
Ala Leu Gly Leu Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe Val
225                 230                 235                 240
Met Gln Ser Leu Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg His Ala Pro Asp
245                 250                 255
Arg Trp Val Ala Val Pro Ala Val Pro Gly Ala Phe Val Val Asn Val
260                 265                 270
Gly Asp Leu Phe His Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val Tyr
275                 280                 285
His Arg Ala Val Val Asn Arg Asp Leu Asp Arg Ile Ser Leu Gly Tyr
290                 295                 300
Phe Leu Gly Pro Pro Pro His Ala Lys Val Ala Pro Leu Arg Glu Ala
305                 310                 315                 320
Val Pro Pro Gly Arg Ala Pro Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu
325                 330                 335
Tyr Met Gly Val Arg Lys Lys Ala Phe Thr Thr Gly Ala Ser Ala Leu
340                 345                 350
Lys Met Val Ala Leu Ala Ala Ala Ala Asp Leu Asp Asp Asp Gly Asp
355                 360                 365
Ala Ala Val Val His Gln Gln Gln Gln Leu Val Val Ser Ser
370                 375                 380
<210>  31
<211>  1439
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  31
gacctccatt ttgattatct ctatcctgta cgtgccgaga gtccttcaaa gccgacgacg       60
agacgacgat gcagtcgtcg tcgtcatcag cctcgacgcc ggctgccgct tccggcctcg      120
tcttcgatct cgggtctgcg gcgggcgtgc cggagacaca cgcgtggccg ggggtgaacg      180
agtacccgtc ggtggagtcc gctggccgcg acgtggtccc ggtggtggac atgggggtgg      240
cctgcccgga cgcgacgcgg gcgttggcgc gcgccgcaga cgagtggggc gtgtttctgc      300
tcgtcggcca cggcgtgccc cgggaagtgg cggcgcgtgc cgaggagcag gtcgcgcgcc      360
tgttcgtgct cccggctcct gacaaggccc gcgcggggcg ccgccccggg gagcccacgg      420
ccaccggcta cggcaggccg cccctggcac tccgcttctc caagctcatg tggtccgagg      480
ggtacacgtt ccgcgccgcc accgtccgcg aagagttccg ccgcgtctgg cccgacggcg      540
gcgacgacta cctccgcttc tgcgacgtga tggaggagta cgacagagag atgagggctc      600
tcggtggcag gctgctcgac ctcttcttca tggcgctcgg cctcaccgac gtccagttcg      660
ccaccggcga gacggagcgg aggatccgcg agacctggac ggcgacgatg cacccaatcc      720
tgtgtccgga accggagcgc gccatcgggc tgacggcgca cacggactcg ggcttcatca      780
cgctcatcat gcagagcccc gtgcccgggc tgcagctgct ccgccgcggg ccggaccggt      840
gggtgacggt gccggcgccg ccgggcgcgc tcatcgtcat gctcggcgac ctgttccagg      900
tgctcacgaa cggccgcttc cggagcccta tccaccgcgc cgtcgtaagc cgagagcgcg      960
agcggatctc cgtgccctac ttcctctgcc cgccggagga catgacggtg gcgccgctcg     1020
cgtccgctct gctgccgggg aggaaggccg tgttccgggc cgtgacgtgg ccagagtaca     1080
tggaggtcaa gcacaaggtg ttcggcacgg atgcgccggc cctggagatg ctgcagctgc     1140
aggtggatga ggaagaacaa ggtgaaaggg ccgccaccac ctaagcccta aggaactact     1200
agctgaatcc ataaactaat aaagaattcg tgaataaggg cgttggaaga ctggacacaa     1260
cacaagagag ttgctatata tcgtatttct gaaatttaag gcaaatatct tagttaaaaa     1320
actggtatat ttaaatagac aatatatatc taaaataaag atagttcacc atttttacgg     1380
tcgaacaatg ataaagttat atattgtctg aatagtaaca aattaaagat ttccaggag      1439
<210>  32
<211>  1116
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  32
atgcagtcgt cgtcgtcatc agcctcgacg ccggctgccg cttccggcct cgtcttcgat       60
ctcgggtctg cggcgggcgt gccggagaca cacgcgtggc cgggggtgaa cgagtacccg      120
tcggtggagt ccgctggccg cgacgtggtc ccggtggtgg acatgggggt ggcctgcccg      180
gacgcgacgc gggcgttggc gcgcgccgca gacgagtggg gcgtgtttct gctcgtcggc      240
cacggcgtgc cccgggaagt ggcggcgcgt gccgaggagc aggtcgcgcg cctgttcgtg      300
ctcccggctc ctgacaaggc ccgcgcgggg cgccgccccg gggagcccac ggccaccggc      360
tacggcaggc cgcccctggc actccgcttc tccaagctca tgtggtccga ggggtacacg      420
ttccgcgccg ccaccgtccg cgaagagttc cgccgcgtct ggcccgacgg cggcgacgac      480
tacctccgct tctgcgacgt gatggaggag tacgacagag agatgagggc tctcggtggc      540
aggctgctcg acctcttctt catggcgctc ggcctcaccg acgtccagtt cgccaccggc      600
gagacggagc ggaggatccg cgagacctgg acggcgacga tgcacccaat cctgtgtccg      660
gaaccggagc gcgccatcgg gctgacggcg cacacggact cgggcttcat cacgctcatc      720
atgcagagcc ccgtgcccgg gctgcagctg ctccgccgcg ggccggaccg gtgggtgacg      780
gtgccggcgc cgccgggcgc gctcatcgtc atgctcggcg acctgttcca ggtgctcacg      840
aacggccgct tccggagccc tatccaccgc gccgtcgtaa gccgagagcg cgagcggatc      900
tccgtgccct acttcctctg cccgccggag gacatgacgg tggcgccgct cgcgtccgct      960
ctgctgccgg ggaggaaggc cgtgttccgg gccgtgacgt ggccagagta catggaggtc     1020
aagcacaagg tgttcggcac ggatgcgccg gccctggaga tgctgcagct gcaggtggat     1080
gaggaagaac aaggtgaaag ggccgccacc acctaa                               1116
<210>  33
<211>  371
<212>  ПРТ
<213>  Zea mays
<400>  33
Met Gln Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ser Thr Pro Ala Ala Ala Ser Gly
1. 5                   10                  15
Leu Val Phe Asp Leu Gly Ser Ala Ala Gly Val Pro Glu Thr His Ala
20                  25                  30
Trp Pro Gly Val Asn Glu Tyr Pro Ser Val Glu Ser Ala Gly Arg Asp
35                  40                  45
Val Val Pro Val Val Asp Met Gly Val Ala Cys Pro Asp Ala Thr Arg
50                  55                  60
Ala Leu Ala Arg Ala Ala Asp Glu Trp Gly Val Phe Leu Leu Val Gly
65                  70                  75                  80
His Gly Val Pro Arg Glu Val Ala Ala Arg Ala Glu Glu Gln Val Ala
85                  90                  95
Arg Leu Phe Val Leu Pro Ala Pro Asp Lys Ala Arg Ala Gly Arg Arg
100                 105                 110
Pro Gly Glu Pro Thr Ala Thr Gly Tyr Gly Arg Pro Pro Leu Ala Leu
115                 120                 125
Arg Phe Ser Lys Leu Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Arg Ala Ala
130                 135                 140
Thr Val Arg Glu Glu Phe Arg Arg Val Trp Pro Asp Gly Gly Asp Asp
145                 150                 155                 160
Tyr Leu Arg Phe Cys Asp Val Met Glu Glu Tyr Asp Arg Glu Met Arg
165                 170                 175
Ala Leu Gly Gly Arg Leu Leu Asp Leu Phe Phe Met Ala Leu Gly Leu
180                 185                 190
Thr Asp Val Gln Phe Ala Thr Gly Glu Thr Glu Arg Arg Ile Arg Glu
195                 200                 205
Thr Trp Thr Ala Thr Met His Pro Ile Leu Cys Pro Glu Pro Glu Arg
210                 215                 220
Ala Ile Gly Leu Thr Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Ile Thr Leu Ile
225                 230                 235                 240
Met Gln Ser Pro Val Pro Gly Leu Gln Leu Leu Arg Arg Gly Pro Asp
245                 250                 255
Arg Trp Val Thr Val Pro Ala Pro Pro Gly Ala Leu Ile Val Met Leu
260                 265                 270
Gly Asp Leu Phe Gln Val Leu Thr Asn Gly Arg Phe Arg Ser Pro Ile
275                 280                 285
His Arg Ala Val Val Ser Arg Glu Arg Glu Arg Ile Ser Val Pro Tyr
290                 295                 300
Phe Leu Cys Pro Pro Glu Asp Met Thr Val Ala Pro Leu Ala Ser Ala
305                 310                 315                 320
Leu Leu Pro Gly Arg Lys Ala Val Phe Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu
325                 330                 335
Tyr Met Glu Val Lys His Lys Val Phe Gly Thr Asp Ala Pro Ala Leu
340                 345                 350
Glu Met Leu Gln Leu Gln Val Asp Glu Glu Glu Gln Gly Glu Arg Ala
355                 360                 365
Ala Thr Thr
370
<210>  34
<211>  4095
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  34
taaatttgtg atccttgtga agttgttata tcatgaattg tgaacttgtt gcatttgtga       60
tcttttgtca actttgttgt attgtgaagt ttgatatgtt taccgatcgt attttagatt      120
tcgatcgtta ccggtgtatt ttccgcacca aacttttgtt tccgatgttt tcgaaatacc      180
gatatcgttt ccgtttctat agttaccctt ttcaatttta tttccgatta aaaatatgaa      240
aacggtaatg gttttagtgt ttatcgaccg ttttcatctc taatcatccc tgccggtgaa      300
gtttaatttt tcccttggct aaagagatgc aagctgctgt aaaatacgtt aaaacaggca      360
aggcagcccc agcagccagc atcgcgtgcc cgtctatgta catcagtgga tacgtagcat      420
ctctagtgag taatataacg attgcatttg gctggaggac gtatgttata taagtatgtc      480
atttaccagt tgcattagta tcttccctaa ctcctataat aactctcttc gtggaatgga      540
cgtagacgta tgctatataa gtattaaaaa atagtttttt aagctggtgt cctcaatttt      600
gctattgttc tcgtttttat ctttagttgt gtcacaaatt taatccgtac aacaaatcaa      660
aaataccata cccttcttat attaattttc taacataaca tttgtttaga tattttcagt      720
cgtgaaaata caattctaat tctaacgtcg tagtatcaaa tcaaaccatc cagaatttga      780
ccaagcttaa ttataaaaaa tataaaattt atgatactga atagatagca ttagatttgt      840
tatataatat atttttataa aataccattt ttatggtata aatattggta ctcctttact      900
ttaaactata gatagttttg actaaggatg caactagaat tgcatcctct tttcactgca      960
ccttcattag ttttaatatt tatttagatg ggcccttgca aactgtagat atcatctctt     1020
gcaacattct ttctatagca ccacgaaaat gtattgcggc tttgaaatta taattgaatt     1080
agttgtatca tttctttcac cgatgcgtta aattcaaaat taagtgttat atttcttcat     1140
aatttgttaa atatatagac cctataatcc accattattt actataatag catacattaa     1200
cattggtttt agcctacact acgacactcg aggcattgaa ttttcctcta tcaaagaatt     1260
atatgtgtag tagtattgtt cttgacaaaa agggggatta aaattaaact accaatattg     1320
atacttatct tatcacatcc atgaatacaa tcaacactct tacaaaagat aagatacaag     1380
attaaaaagt accatgataa tacattaaga ttattagcaa tgcattaaat taaataaatg     1440
tgcaagtgaa tcatgatttt agttttatct attttacttt taaaatatga tattctctga     1500
ctacttctaa gcataaatgt gattctaagt catgaccgat cgtgcttatt cagaaaaatg     1560
aaggagacac agatttctat aaaaaaaggt tgtcatggga ctattgggtc aaccatctta     1620
ttcatttggg aaaataagtt tagaacacat caacccattt tagatgttga gtttggccct     1680
aatggtccat tgaccttact tttgtgggtt gacatagacc atctatccca agttattgtt     1740
gtgtcacatt ccctgatatc atgaatctat attttagctt tccgttttca tatttttagt     1800
cgttacatat tttttatccg cgtactagat taaaactcta gttgttgcaa tacattttgt     1860
tcattttttt ctatttcttc tttactaaca acatattcta gttcctagct acattcttaa     1920
gtaccatagt gctataaaca ttttttatcc tacattattc cacttaagaa attgaatttt     1980
ctgcataaaa aaattatatg tccagtagtg ttgtcttata aaagcataaa gtgattaaaa     2040
ttaaaaccat tattgatatc ttatttttca aaaaaaaata taagcttata gaaagtgaat     2100
taatttcatg gtaaattaat atagtttaaa ttgaattatt agtgttatta ctatgtttat     2160
tatcaatgaa acatttttca tggttgatat aacttagtgt tacttatttt agtatttttt     2220
atataattct agttaacttt tagtttttga tttaaaaaaa cgagaattgt gtccttttgt     2280
ggagtgagta taaagaaagt aatatctgtt catcataatt tggtttttta aggtacgtga     2340
aacttgcttt atatttggac tcaagctatg tctaaataca tagtaaaaaa gcaatatttc     2400
tagaaaagac aaaacatctt ataatttaga atcaaggaaa tatatagatt ttatgtgcag     2460
tgagaagcca tttacaatgg aacgttcaac gttgggccaa tagatatttt gcgatatgat     2520
gatgggcata tttttgcatg gttgtccctc cactagctat agtttgatga tacgatacgc     2580
tgcacacacc attgggttgt accatgttag tgtagcaaca gtagaaaccc aattgtggcc     2640
gtgaaccatg ataatactag gtagagtgct agctagaggt ttcaggctat tgatgcgtga     2700
attaaacttt ctgttgtgtt gcgaggaaac gagtattgtg aaatatttga aacggttttt     2760
tttgtgaaag atttgaaacg gtatttttgt tgtgaaataa agatcaaggc taaataaatt     2820
caaactaata aaacatatta attgacggcc tgaagccccc gcccccatgg ccccatgcca     2880
tagcatcagg tcccacatga catgaggccg cgcctccctc tatgttggct ccctgccttc     2940
gccgttgtcg tcgctcccga actccctctc ctcccctgtt acaaataccc ccacccgccc     3000
ggacagcttc cctgcacact cgcagctcgc acatctcatg gtgtcctaag aacggcaaga     3060
gccagctctg cctagcagca gcgcacagcc acatccatgg acgccagccc gaccccaccg     3120
ctccccctcc gcgccccaac tcccagcatt gacctccccg ctggcaagga cagggccgac     3180
gcggcggcta acaaggccgc ggctgtgttc gacctgcgcc gggagcccaa gatcccggag     3240
ccattcctgt ggccgcacga agaggcgcgg ccgacctcgg ccgcggagct ggaggtgccg     3300
gtggtggacg tgggcgtgct gcgcaatggc gacggcgcgg ggctccgccg cgccgcggcg     3360
caagtggcgg cggcgtgcgc gacgcacggg ttcttccagg tgtgcgggca cggcgtggac     3420
gcggcgctgg ggcgcgccgc gctggacggc gccagcgact tcttccggct gccgctggct     3480
gagaagcagc gggcccggcg cgtccccggc accgtgtccg ggtacacgag cgcgcacgcc     3540
gaccggttcg cgtccaagct cccctggaag gagaccctgt ccttcggctt ccacgacggc     3600
gccgcggcgc ccgtcgtcgt ggactacttc accggcaccc tcggccaaga tttcgagcca     3660
gtggggtgag taaagaagaa gatggcgccg aatttacatt tataagtagg accagcagaa     3720
gcccctgccc ctgggggcct tagcattgca ttcgactgat gaatacgcat ggcaggcggg     3780
tgtaccagag gtactgcgag gagatgaagg agctgtcgct gacgatcatg gagctgctgg     3840
agctgagcct gggcgtggag cgcggctact accgggagtt cttcgaggac agccgctcca     3900
tcatgcggtg caactactac ccgccgtgcc cggtgccgga gcgcacgctg ggcacgggcc     3960
cgcactgcga ccccacggcg ctgaccatcc tcctgcagga cgacgtcggc gggctggagg     4020
tcctggtgga cggcgagtgg cgccccgtcc ggcccgtccc aggcgccatg gtcatcaaca     4080
tcggcgacac cttca                                                      4095
<210>  35
<211>  7404
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  35
cctattttgt gtctaatact cttcttatat taattgtttg gtcaaacttt agataaattt       60
gactaatgat gcaattaaaa ctgcatcacc tttactaagg tactgcttta tatgtttcga      120
caaaattttc aattattctc tatgtgtttt aatctttgcg ctacacctcc attgatttaa      180
atactcattt attttaaacc ataacttaaa ttatatcgga tctttgcatc ctttctatgg      240
caccatacat gaatcgatat tttggctgca aatttttaat catgttagtt ttagcatttt      300
ttcatatcca tgtgttaagt ttgaatcatg tgttgttttt atataattta ttgaaaatat      360
agatcctaaa cttcactaat acttacaaca atagcatcat catgtgtttt aatccacgcc      420
acaacactca aggcattgaa ttttcttcta ccaaagagtt gtatgtgtgt attgttcttt      480
aaaaaataga gtgattataa ttaaactacc agtattcata tgtaaaatgt atagacatct      540
aaaataaaat ttgcaaaaaa cattgttgca gactttcaat ataattaaga atgggtttta      600
gggtcatgat atatggtttg ttaaagaaac ttgttttttt ttgcaattga taaactataa      660
aatacatttt cactattgtg tgcatatgta cttggtatac atagtggcat atatcatttt      720
tgtttacttt gaggtttgaa ttatctatgt taaaattgga taacatagat acattggtgt      780
gcgtcctttg gcccatttac ttgactgagg agcaatacta taaagtaaaa catatttgga      840
tattttatct taaactccta gcataatatt gatttaatta tgaacaaata tatgtttagg      900
tgatagtttc atgggtggta aactatataa gaaggcttac catgatcttt gcaaactcta      960
ggctatgaaa gagttccatg atttgtctta gaagcataga caaaacagtg ataatgatct     1020
aaatcacact tatggcactg atgaccatat atgcaaagct aaatgcatgt taagttgtat     1080
tatatcatat gtttacaatg actatcgcat ataacgagga atacattgtc tatatagata     1140
gctattactg tagtagtgcc aaatgttgga caacatgaat cataatcttc aaacctagag     1200
aaattgtagt cagtcgtaca catatcgtct agtaagttgt ctatactttt tatttattgt     1260
atcaaatttt attgttatct tgcttgcttg tttgtttgta ccatagacac aatatggtca     1320
aaaagtggtc aatcgattcg aagaagattg caattgacga gtgctaacag ttgatccttt     1380
tgttgtgcac gctagcggag tagcatgaaa agagtaaaat atgaaattag cgttctaaac     1440
tgtttgtgct ataggtactt cgtatttaat ggagtgacta actataggaa ggtgagagct     1500
cagaagtcag caccctcaca cagagttcta gagttagtgg tcatcgaacc acgacaaact     1560
acatgatgag cagaagaggc aacatcaaga ctatgatcaa tagtttcggg tcaatgaatg     1620
acatcgtgat gagtatttat ctaactatat agaacaacaa cacatgatgt tttaagtaag     1680
ttcaactgat cttctattgc tatctttaag tatttaacgt agcgaataat gttttatcta     1740
tttcattcat aaataatgtt gtgacaaaag gggataacca tcacttttac catgttctag     1800
ataccacaac catctccacc atcataatgg gttcttcatt ggtgcttgga cctcaaataa     1860
tcatatctat agccaactta gctcaattct aataaaatta ggcaacttgg cttcattgta     1920
gcaaaaatag ccaacttagc tcaattttat ctaaacttag ctaatctagc acaacttaga     1980
tcaatattag gaaaaactaa tcaatctaat ctagctcaac tatagcgaaa gatagatatt     2040
gtagcataac ttagtagatc tatctcaaat tttagcaaaa actaatcaat ttagataaac     2100
tctataaaat tttaatcatt atgacttatt tccaactaat tgtaacttgc atgattttta     2160
tgttccttct ttataattag caacacctaa agacacgaat gatgaggggt ctaacgcatt     2220
cattaaccag ttgttaaata atactctagg tagatgataa gaactctaat tattctatga     2280
atctaagcta aaagatgttt aatatttaag tattggtgtt tattatgtta tttagaacga     2340
ttcatgttac ttaaagattt gttatgattt ttaaatatga ttatgataat ttatgtggtg     2400
tggattaact tgtgaacata tgtgatgtag atgaatatgt atgttgtgga tggaaccata     2460
tgaatatata tacacactca tatactattc gttggtgtag gtaaagcttc atccatcggt     2520
aattactaaa tggtcttcag tcattaccac taggtgaagc ttcacacgac cgataattat     2580
tgaagaacgc tcattaattt ccggtaatgg cttattggcc ttcactagtc ggtgaaaatt     2640
agctattttt ataccaataa aaattagcta atatatgtaa accaggtcta atttttatgg     2700
gcctcttacc gaccaaaatt gattagatta ttgttacaat agttttagtc aaaagctagc     2760
tatgctataa aaattttgaa ttaaagtgag tttcgtaata aaaattgcat acttttaaaa     2820
taaaataatt aaaaaacagt ttttagaaat acaatcaaac accttatgct ataaaaaaat     2880
tgtaatgtac ctacaaatat ataatacttt actttaaaat aggcctgtgc cttctcggct     2940
ctatatgggc tgcctccaac gaagcgccat ggccatgggc tccactgtgt cgggtcccac     3000
atgaggccgc gcctccctcc aaatgttccc tccctgcctt cgtctttgtc gttgctcgca     3060
aactccctgt cctcccctgt tacaaatacc cccacccgcc cggacagctt ccctgcatac     3120
ttgcagctcg cacatctcat ggtgtcgcag gaacgacaag agccagctgt gcctagcagc     3180
agcagcagca gcgccaagcg cgcagccacg tccatggacg ccagcccggc cccgccgctc     3240
ctcctccgcg cccccactcc cagccccagc attgacctcc ccgctggcaa ggacaaggcc     3300
gacgcggcgg ccagcaaggc cggcgcggcc gtgttcgacc tgcgccggga gcccaagatc     3360
cccgcgccat tcctgtggcc gcaggaagag gcgcggccgt cctcggccgc ggagctggag     3420
gtgccgatgg tggacgtggg cgtgctgcgc aatggcgacc gcgcggggct gcggcgcgcc     3480
gcggcgcagg tggccgcggc gtgcgcgacg cacgggttct tccaggtgtg cgggcacggc     3540
gtggacgcgg cgctggggcg cgccgcgctg gacggcgcca gcgacttctt ccggctgccg     3600
ctcgccgaga agcagcgcgc ccggcgcgtc cccggcaccg tgtccgggta cacgagcgcg     3660
cacgccgacc ggttcgcggc caagctcccc tggaaggaga ccctgtcgtt cggctaccac     3720
gacggcgccg cgtcgcctgt cgtcgtggac tacttcgtcg gcaccctcgg ccaggatttc     3780
gagccaatgg ggtaagtaag gtagtaagaa ggagcgccgg tttacattta ccgcacgtcg     3840
gcgtgcggtc gagtcgggac tcgggagacg tatgaacccc cgtcccgtcc catgcatgtg     3900
tggcaggtgg gtgtaccaga ggtactgcga ggagatgaag gagctgtcgc tgacgatcat     3960
ggagctgctg gagctgagcc tgggcgtgga gctgcgcggc tactaccggg agttcttcga     4020
ggacagccgg tccatcatgc ggtgcaacta ctacccgccg tgcccggagc cggagcgcac     4080
gctgggcacg ggcccgcact gcgaccccac ggcgctcacc atcctcctgc aggacgacgt     4140
gggcgggctg gaggtgctgg tggacggtga gtggcgcccc gtccggcccg tcccgggcgc     4200
catggtcatc aacatcggcg acaccttcat ggtaacgaaa cgaaagcgct cgctcctctg     4260
ttttccttgg ccgctcttgt cctgtgtgta tattcagttg agctctctct gtgctgttat     4320
ttcccgaatc ctagtggacc taaacgggca ggttattaca gcacgcacac gtaggcatgt     4380
catgtagcta gtacatacat agcgatgccg atgcaaatgc aatagagaca tgcgttcgag     4440
ttggttccta tctcggcggg ctacggcagg tacacgcggc cgcggcgcgc tctctctagt     4500
ctatccgcgg ccgcgcccag gccgatcgag gcttccgggg gagagttgcg acaagagaac     4560
ggaccgaggg ggtcggctag cggtagcaag ttccctgttg gtttgtggcg ttggagcgtt     4620
gcggagaggc ttgcgcggcg gcggggacgt cgacggggac gtggcgggga gacgatacga     4680
tgggtgccgg gcaggtttcc gaattccaaa cgtttttgtg gcgtgcgtcc atggggcgcc     4740
cccaaacttc ggacgtttcc ggcgctccaa caaatcttct cgcttcacac gtcaccgtcg     4800
tcccggattc atttgcctcg tcgctccacc attcgctgct ctcctctcca cgtactctta     4860
ccctgacctt tgggaaagaa ctgaacattc gagatgcaca acagttcaaa tataacatat     4920
gcagcacaag atcgttcgac tgctatccga caagccaaca acgtgcccag tagaactgaa     4980
tgtacctgtg atttccagca ctaacttaca gcaacgttgt gaaaaaacaa aaacgaaaac     5040
aaacggcaga aaaaacagat gtattgttct acagttacac caaatatttt ctggtccttt     5100
cagcaccaac aagagccata cgcatatcta gaagacaaaa ttcctctaat ttcaccccta     5160
cgtggtagca gttcctcctc aacacagttc acgtgctagc gtcgagttct ttgggccgcc     5220
acatcgactt ctcgacgcag agcaggccct cgctgccctt ggtgtaggtc atccgcacct     5280
cccactgcac ggacttggcc atgctctcca gctcatttat cgtgtccgcg gtgtccctca     5340
cgatcagctt gccctgtggc ctcagtacac ggtcgacctc ggcgaaaact gcagccagtt     5400
tgcatctgta aacaggcaac acagattttt agtatctaaa acactgcagg caaacgccac     5460
aggttttagt cgcaagaagc aataaaagca tgcaaacaat gctacgtgta cgtatcaaag     5520
gaacatgtca aaactcgttg catgaacgat cattgatgtt tccttgctga actagtcaca     5580
tcagtctgct tcaacttctg ggtttcacta gtagatatac cagaagggta gaataatgtg     5640
aagagcaaga aatacagacc tctttctgag ctttgagaac agatggtccg cgtgcagaag     5700
gtcatacgtt cttgggtaag tgctgaaaga ctcgcaccag tcatggtaca tgccaaacaa     5760
accgcgctcg tagatgatgg gcagcgtgtc tggtgaatcg atcggcacga tattcatgac     5820
ccagaccttt tggtccctca gagctgcagc aaaactgcca tgcaacaatg taaagcatta     5880
gtcaagaaga aggtgtacag tgcatttctc cttgtcaaca gtcttcagta acaaaaaaaa     5940
agtgttatgc ttgactgaat ctttcaaaga aatatgcttg atgacttatg gtggacaagt     6000
tgcctgttat agtgttatgt tttaattaac tatgtgccag cttgggtaac tagtagttat     6060
gtagtgtgat ctgaattacc aaaatataaa taaataaata aacatgccca agaaactacg     6120
aaaaccattt acttaccctc catagacagc tctcatgtcc atgacatttc tcactttgga     6180
ccagtcaatt cccatgccat tcacatacga tttacttaca acccgtttcc agtgggcatt     6240
atctgcctca aaatcttcat ttgcaggctt tccatagaca ccaaccttgg aaccatcaat     6300
ccagaaaggg gtcttctcaa gcctttgcgg ccataactct ggccattttg atcctcggac     6360
ttttgagcca ccaggcagtt tgtgcatgca tgcttccaac ggtacattcc tgcaaatcaa     6420
aaggctgtgt aagcaaagca gagaagcact tttctccatt gaaaatatac tcttctcaaa     6480
gaaccgaaac cataccaagc agcatctgca tcatcagatt ccttgcacaa tggcgggctg     6540
ttttcagatc ttttctcata gcaaatattg tccattggtt tctgatatat gaccatacca     6600
acttggttta acttatcctt agtcttgttg accatcttcc agcacatgga ctttgtcaaa     6660
gtagacatgg ctgaaaaggg tatgtggcca catgttatgt tagaaataaa attcaatttt     6720
gaacagttgg tccatagcat gtattttgaa caaatgcaat ccttctccat ccatgaaaga     6780
agttgaccct tcatacttag gattattcag tactttcact catgtctgct gaatttgttc     6840
tcttggtagt tgctatacaa gaaaggggga agtacagagt agctaaactt atacaagcta     6900
tagtctgata tttgtatgaa acataaattt tggtatggat gtcttattaa aatgggaggt     6960
tgtataatat ttttctagcc tacctcaact tgcttgagac taaaaggctt tgttgttgtt     7020
gttgaggctg tatggtgctt tgactttaca aatcaagtta tcagctaccc tacttatgga     7080
tatacacctc tcataaaatg atggtaagaa gtttcgatat gtcacattaa cataagaact     7140
tcattcagtt agggtacaac gaagttaagt agttacggaa ataccattcc aaatctcaac     7200
atcctctggg agcttttggt aaacaggagt ggcagaccag acaaagtaac caccagggcg     7260
taacaagcgg ttcaattcca gcaaaagcat gccacctaaa agtagcgagc cagcaataag     7320
attcagttct atagcaaatc aataaatgaa aggaggacat gtcaatatgt aaccagcagg     7380
acaaaccttc gatgtgccaa ggga                                            7404
<210>  36
<211>  1788
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  36
aatcccagcg tgcgtaatct attgcccaca tgccgacgcc gtcgcacctc aacaagaacc       60
cgcgctacct ggacttccgg gcggcgcggc gggtgccgga gtcgcacgcc tggccgggcc      120
tgcacgacca ccccgtcgtg gacggcggcg cgccgggccc cgacgccgtg ccggtggtgg      180
acctgggcgc cgcggacccg gcgccggcgc cggcggcggc ggtggcccgc gccgccgagc      240
aatggggcgc gttcctgctc acgggccacg gcgtccccgc ggacctgctg gcgcgcgtgg      300
aggaccggat cgccaccatg ttcgcgctgc cggccgacga caagatgcgc gccgtgcgcg      360
ggcccggcga cgcctgcggc tacggctccc cgcccatctc ctccttcttc tccaagtgca      420
tgtggtccga gggctacacc ttctcgccgg cctccctccg cgccgacctc cgcaagctct      480
ggcccaaggc cggcgacgac tacaccagct tctggtacgt tgcgttgcgt gcttgtgtgc      540
gcgcacacct gccgaccgcg gccacaccgt acgcaaccca cgcgtacgta cgtgcgctag      600
ctacctgctt cgctcgcttc gctcctctcg cctcgccatg catatgcacg tacggccgta      660
caggtacagc agcaggtcac acgcacgaac gcacgcacgc accagcaccg atatgataca      720
tcatcgacgt gtcgtccccc cgtctaaggc catgcatgca tgcaagcacg cctagctagc      780
ccttttggct tgctagctga cgaggggagc taggacgagc atacttactg tgcgcgtcat      840
gctcaattgc tcacactata ctactacttg ttactacagt gatgtgatgg aggagttcca      900
caagcacatg cgcgccctcg cggacaagct gctggagctg ttcctcatgg cgctggggct      960
caccgacgag caggccagcg ccgtcgaggc cgagcggagg atcgccgaga cgatgaccgc     1020
caccatgcat ctcaactggt gggtatatat tattgtctgt catgttgtcg tcgtcgtacg     1080
cgttgcggtt gggtgtacat gtatataaca caaacaacaa aaaactaacg ccgtgccgac     1140
gacgacgacg atcatcaggt acccgaggtg cccggacccg cggcgcgcgc tggggctgat     1200
cgcgcacacc gactcgggct tcttcacctt cgtgatgcag agcctcgtgc ccgggctgca     1260
gctcttccgc cacgccccgg accggtgggt ggcggtgccg gccgtgccgg gcgccttcgt     1320
cgtcaacgtg ggcgacctct tccacatcct caccaacggc cggttccaca gcgtgtacca     1380
ccgcgccgtc gtgaaccggg acctcgacag gatctcgctc ggctacttcc tcggcccgcc     1440
gccgcacgcc aaggtggcgc cgctgcgcga ggccgtgccg cccggccggg cccccgcgta     1500
ccgcgccgtc acgtggcccg agtacatggg cgtccgcaag aaggccttca ccaccggcgc     1560
ctccgcgctc aagatggtcg ccctcgccgc cgccgccgac ctcgacgacg acggcgacgc     1620
cgccgtcgtc catcagcagc agcagctagt cgtctcgtcg tagccgagac cgatcgccgg     1680
agactgatgc tgatgatgat gcatatatac atgagagaaa tcgtcgagta gactagccga     1740
ttgcaaaagc aaccccagct gccgaaacct ggcatatcga tcccattc                  1788
<210>  37
<211>  1698
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  37
cgtgccgaga gtccttcaaa gccgacgacg agacgacgat gcagtcgtcg tcgtcatcag       60
cctcgacgcc ggctgccgct tccggcctcg tcttcgatct cgggtctgcg gcgggcgtgc      120
cggagacaca cgcgtggccg ggggtgaacg agtacccgtc ggtggagtcc gctggccgcg      180
acgtggtccc ggtggtggac atgggggtgg cctgcccgga cgcgacgcgg gcgttggcgc      240
gcgccgcaga cgagtggggc gtgtttctgc tcgtcggcca cggcgtgccc cgggaagtgg      300
cggcgcgtgc cgaggagcag gtcgcgcgcc tgttcgtgct cccggctcct gacaaggccc      360
gcgcggggcg ccgccccggg gagcccacgg ccaccggcta cggcaggccg cccctggcac      420
tccgcttctc caagctcatg tggtccgagg ggtacacgtt ccgcgccgcc accgtccgcg      480
aagagttccg ccgcgtctgg cccgacggcg gcgacgacta cctccgcttc tggtacgtac      540
gagcgccatg tcacgtgctt gtgctttcat gcctcgtacc gtcgtcgtgc tgtacgtgtt      600
atgtttatcg gccggtacgt cacgcgtgct acactggtta acgacgtgag cgtgcccacg      660
ttgactgcat gcatgtgcat gcgcgcgccc agcgacgtga tggaggagta cgacagagag      720
atgagggctc tcggtggcag gctgctcgac ctcttcttca tggcgctcgg cctcaccgac      780
gtccagttcg ccaccggcga gacggagcgg aggatccgcg agacctggac ggcgacgatg      840
cacccaatcc tgtacgtacg tcaaaaacga atatctgacc aatgcaaacg tttttctgca      900
atgccagtca tccactcatc ctgtacgtac ctctggactc tgcttgtcca tctactgatg      960
acacgtatgg taggtacccc aggtgtccgg aaccggagcg cgccatcggg ctgacggcgc     1020
acacggactc gggcttcatc acgctcatca tgcagagccc cgtgcccggg ctgcagctgc     1080
tccgccgcgg gccggaccgg tgggtgacgg tgccggcgcc gccgggcgcg ctcatcgtca     1140
tgctcggcga cctgttccag gtgctcacga acggccgctt ccggagccct atccaccgcg     1200
ccgtcgtaag ccgagagcgc gagcggatct ccgtgcccta cttcctctgc ccgccggagg     1260
acatgacggt ggcgccgctc gcgtccgctc tgctgccggg gaggaaggcc gtgttccggg     1320
ccgtgacgtg gccagagtac atggaggtca agcacaaggt gttcggcacg gatgcgccgg     1380
ccctggagat gctgcagctg caggtggatg aggaagaaca aggtgaaagg gccgccacca     1440
cctaagccct aaggaactac tagctgaatc cataaactaa taaagaattc gtgaataagg     1500
gcgttggaag actggacaca acacaagaga gttgctatat atcgtatttc tgaaatttaa     1560
ggcaaatatc ttagttaaaa aactggtata tttaaataga caatatatat ctaaaataaa     1620
gatagttcac catttttacg gtcgaacaat gataaagtta tatattgtct gaatagtaac     1680
aaattaaaga tttccagg                                                   1698
<210>  38
<211>  4095
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  38
cggtctaagt gaccgtttga gagaggaaaa gggttgaaag agacccggtc tttgtgacca       60
cctcaacggg gagtaggttt ataagaaccg aacctcggta aaacgaatca ccgtgtcatc      120
cgccttattt gcttgtgatt tgttttcgcc ctctctttcg gactcgttta tatttctaac      180
gctaaccccg acttgtagtt gtgcttaaag tttgtaaatt tcagattcgc cctattcacc      240
ccctctaggc gactttcata taaatattgg gagaaatatg aaaaacaaat gaaggtcgaa      300
cgagtcagag acaccataaa aaagaggtcg tcttaactag ggtgctaaac ctcaacattg      360
tagtagatct tagtactgag tttgacatct ttgacaccaa caagatggtg atacgttact      420
ttctacgtta acttgggtag gtatatcgac tatagtggcc tataacacta ggctatgtaa      480
tatgatattg tgttgagtct ttataaacat gatttttttt aaaaaaaaga gctaaaataa      540
aaaatagaaa tcgacggtac gatgcaagtt cttctcaaga caaccaaacg cacccttgcc      600
cctttattga aattgaagta tgtgctttat caaatgttta aatactaatt ataagtatta      660
aatataattt aattataata ctaattatat agataaagac taaataacaa gacaaattta      720
ttaaatataa ttaattcatt attaacaaat acttaatgta gcacgatcga atcatggact      780
aattagtctt gatagactcg tcttaccatt taatcataat tagttttgta tactgtttat      840
aatatttcta actagctagt attaaacttt tgatgtaacc taactaaagt ttagtcacgc      900
caatacataa ggactcggat cgttcgatca cccatgacat cacgtatact aagagcatct      960
ccaaaagctc tccagaagtc tcccctaaat ctattttttt gggaaaaaca caaaaacatg     1020
tctccaacag ttcccttaaa gcgcccccaa ctttttcata gcccttaaaa ctccctcatt     1080
tgtagctaca aatgaggggt tttttgggct ccccagaaac aaactgttga tttaagggat     1140
ctgttggaga aaggattaaa atttaccctc acttattatt tagatgtccc ttaaaactga     1200
ttttgaggag tcgttttatg tagagctctt ggagatgctc taacacaccg agcacaaccg     1260
catcatcaat caaaacaacc caaagtttgt tcggtacaag tcatcagcct gtgtacacac     1320
atcagcctcg gccccgggag aagcgctagc aaacaaggtt cacctaaaaa tccatccaga     1380
ttcattgaat ccaaccagca caaacgtccc atttattaat cacctcatca caggtccccc     1440
cagcctcact ctcgcgccgg ctcaaggtac attgcgtgtc ctagccaaga cacgcagctc     1500
atctcagcct cacacgcaca gcaagagcga ggcgtgattc gccatgggcg gcctcactat     1560
ggaccaggcc ttcgtgcagg cccccgagca ccgccccaag cccatcgtca ccgaggccac     1620
cggcatccct ctcatcgacc tctcgcctct ggccgccagc ggcggcgccg tggacgcgct     1680
ggccgccgag gtgggcgcgg cgagccggga ctggggcttc ttcgtggtcg tgggccacgg     1740
cgtgcccgca gagaccgtgg cgcgcgcgac ggaggcgcag cgagcgttct tcgcgctgcc     1800
ggcagagcgg aaggccgccg tgcggaggaa cgaggcggag ccgctcgggt actacgagtc     1860
ggagcacacc aagaacgtga gggactggaa ggaggtgtac gacctcgtgc cgcgcgagcc     1920
gccgccgccg gcagccgtgg ccgacggcga gcttgtgttc gataacaagt ggccccagga     1980
tctaccgggc ttcaggtgac gaaattaact atatatccct ttcgatcata gttgcgttaa     2040
taaattaagg gaatcgtgag cgtacgtacg taagtttccg cagagaggcg ctggaggagt     2100
acgcgaaagc gatggaagag ctggcgttca agctgctgga gctgatcgcc cggagcctga     2160
agctgaggcc cgaccggctg cacggcttct tcaaggacca gacgaccttc atccggctga     2220
accactaccc tccttgcccg agccccgacc tggccctcgg cgtggggcgg cacaaggacg     2280
ccggcgccct gaccatcctg taccaggacg acgtcggggg gctcgacgtc cggcggcgct     2340
ccgacggcga gtgggtccgc gtcaggcccg tgcccgactc gttcatcatc aacgtcggcg     2400
acctcatcca ggtacgtgcc cacctgatga actgagctga acgtaggttg catgcactgc     2460
atgtgtatag gcttctcaga tcgcttcgtg tggcgtaagg tgtggagcaa cgacaggtac     2520
gagagcgcgg agcaccgggt gtcggtgaac tcggcgaggg agaggttctc catgccctac     2580
ttcttcaacc cggcgaccta caccatggtg gagccggtgg aggagctggt gagcaaggac     2640
gatccgccca ggtacgacgc ctacaactgg ggcgacttct tcagcaccag gaagaacagc     2700
aacttcaaga agctcaacgt ggagaacatt cagatcgcgc atttcaagaa gagcctcgtc     2760
ctcgcctaac tactgctact gctaggatcc atgccattgc catgtcgtct tcagattcag     2820
agcacgccat gtcgtcgcta gcttcgtggt agaacaaata atgatgtgcg tgctgtgtgt     2880
aagcatggat atggatgtga atatgtaata tgatgagcac tcctactttg gtatgtttgg     2940
gaataacaga cttgtgttgg tctggttcat tatttgtaag aaaatcaaaa agagttagta     3000
gggcaggagg ctaaccacag tcatgctgca ccacatccct ggtggaaagc tggccgggtt     3060
acgctacgct cgtgcagcca gattactgca gggccgggat atgcttccgg tggaaggaag     3120
gggacggtgg ctgaggacca tggggctgga gcctgggaga gaggtcgagc tagaagaaag     3180
ggggagagag aagacgcaca acgaagatgg gtcagccagg gatttcgacc caagggggag     3240
ctagtggatt ttgggagaaa acagaaaaga gaaaagagaa aagaagaaaa atttgttggt     3300
gtgaacacaa ggttgatttg tcttttctta tttggattga tgatgagtcg tggactaacc     3360
gacccgtgag ctattgtgtc gtataatcat gtctctcggt ttctggtgtg caggtttgaa     3420
gcacagagac ggtggtcgac gcaaaggtga acgtcatgca ggttcgtgcc gatggaccgg     3480
gagcagtgaa agacgagcgt tgggacttga acaagggacc agagtcgccg gatgactagc     3540
cgcagtggct gacgcctgga acacgcatag acgtgaggac gtggtagagc aggtgaaaat     3600
cgcctagagg gggggggggt gaatagacaa aacctaaaaa ttataaactt tgaacacaaa     3660
ctttacctga ggttaccgtt agaacgagta ttaatgaaat cggagtgcgg aaggcaagtt     3720
cttcttgcta cgagttgctt aatcaatatt gataactttg ggagtcaact caaaatgatc     3780
acaagcaaaa gaactagaga gagaggagag gaagaatcaa ctcgcaaagt aatgatcaac     3840
acaaatgaac acaatgattt atttctcgag gtttggttcc gaagaaccta ctccccgttc     3900
aggagtccac ataggacatg tctctttcaa ccctttctct ctctcaaatg gtcacataga     3960
ctggttcagt tgagagcacc tagagggggg tgaataggtg atcttgtaaa atcaaacact     4020
aatagccaca aaacttagtt taaagtgtta gtacggctaa gtagctttga agcgagttat     4080
tgtgaacaca acaat                                                      4095
<210>  39
<211>  21
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  39
ctccatcatg cggtgcaact a                                                 21
<210>  40
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  40
uaguugcacc gcaugaugga g                                                 21
<210>  41
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  41
ggtactgcga ggagatgaa                                                    19
<210>  42
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  42
uucaucuccu cgcaguaccu a                                                 21
<210>  43
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  43
caggcgccat ggtcatcaa                                                    19
<210>  44
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  44
uugaugacca uggcgccugg a                                                 21
<210>  45
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  45
tcatgcggtg caactacta                                                    19
<210>  46
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  46
uaguaguugc accgcaugau a                                                 21
<210>  47
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  47
tcgctcgcct tcttcctca                                                    19
<210>  48
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  48
ugaggaagaa ggcgagcgac a                                                 21
<210>  49
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  49
tccaacgggc ggtacaaga                                                    19
<210>  50
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  50
ucuuguaccg cccguuggac c                                                 21
<210>  51
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  51
gcatcaacag gtacaacta                                                    19
<210>  52
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  52
uaguuguacc uguugaugcg a                                                 21
<210>  53
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  53
tggacgatgg atagttcaa                                                    19
<210>  54
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  54
uugaacuauc caucguccau c                                                 21
<210>  55
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  55
tggaccatgg atacttcaa                                                    19
<210>  56
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  56
uugaaguauc caugguccau c                                                 21
<210>  57
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  57
gcaaggtcct agatttaca                                                    19
<210>  58
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  58
uguaaaucua ggaccuugca a                                                 21
<210>  59
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  59
cagagtacat ggaggtcaa                                                    19
<210>  60
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  60
uugaccucca uguacucugg a                                                 21
<210>  61
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  61
ccatgcccta cttcttcaa                                                    19
<210>  62
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  62
uugaagaagu agggcaugga a                                                 21
<210>  63
<211>  19
<212>  ДНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  63
acatggcggt caacttcta                                                    19
<210>  64
<211>  21
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  64
uagaaguuga ccgccaugug a                                                 21
<210>  65
<211>  726
<212>  ДНК
<213>  Палочковидный вирус риса тунгро
<400>  65
tcctacaaaa gggagtagta atatttaatg agcttgaagg aggatatcaa ctctctccaa       60
ggtttattgg agacctttat gctcatggtt ttattaaaca aataaacttc acaaccaagg      120
ttcctgaagg gctaccgcca atcatagcgg aaaaacttca agactataag ttccctggat      180
caaataccgt cttaatagaa cgagagattc ctcgctggaa cttcaatgaa atgaaaagag      240
aaacacagat gaggaccaac ttatatatct tcaagaatta tcgctgtttc tatggctatt      300
caccattaag gccatacgaa cctataactc ctgaagaatt tgggtttgat tactacagtt      360
gggaaaatat ggttgatgaa gacgaaggag aagttgtata catctccaag tatactaaga      420
ttatcaaagt cactaaagag catgcatggg cttggccaga acatgatgga gacacaatgt      480
cctgcaccac atcaatagaa gatgaatgga tccatcgtat ggacaatgct taaagaagct      540
ttatcaaaag caactttaag tacgaatcaa taaagaagga ccagaagata taaagcggga      600
acatcttcac atgctaccac atggctagca tctttacttt agcatctcta ttattgtaag      660
agtgtataat gaccagtgtg cccctggact ccagtatata aggagcacca gagtagtgta      720
atagat                                                                 726
<210>  66
<211>  165
<212>  ДНК
<213>  Палочковидный вирус риса тунгро
<400>  66
acgaatcaat aaagaaggac cagaagatat aaagctggaa catcttcaca tgctaccaca       60
tggctagcat ctttacttta gcatctctat tattgtaaga gtgtataatg accagtgtgc      120
ccctggactc cagtatataa ggagcaccag agtagtgtaa tagat                      165
<210>  67
<211>  2000
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  67
ctgcaatata tacaccaaaa gtattataaa ctgtcatata tatgaccaaa acctttttat       60
tttagaaaag tatattaatc atggtatatt aatcaaagtt gttgttgggg ctgcaaaaat      120
catacccttc ttccacaagc tgttccttga actgcaggta ctcaggaact ctcagctcct      180
caacagcgag ctcactgacg ttgaccctca catactccca gacaccaggc ctagggcgga      240
tggcaagtgc aacccatggg gggatgacaa tcgcctcctg taagataata gagctagaat      300
gattaaagaa ggtgcacact acaaaaggaa cagtgctgtc cagcgagatc tgaatctgat      360
gcaaacctga gctgccctca ggacatcctc aaaagcacca tccttgagct tctcgcgctc      420
agcctcaggg atcgcattgt tgtactcggc aatgatctgg tggggctgca gcataccctt      480
tccaaggttt ttcagcctgc gcaaaacgat gtgccaaata acatcagact atgccagatc      540
tataaactca tcaaacatat acaatttcaa gaaatagttt agacgtatga tcagcagtca      600
gtagcgtggg aacatatgca acatagcgaa gaggcacaac agcaaattca ttcgaaaaaa      660
tgaaaacaaa gattcctctc ttttaactga acttctcgaa acccctttca tgcctacaca      720
tccgatctag tcagatgcct atgcgttcat gctgaacaga acgtgtcaga actaagcata      780
aactggttag caagcattat cgtattcgat agacccttta gtaacaagct atacattggg      840
taagttcaga ctccaatcat tctgttcaga aacatcgtat tgaatataaa actaaagaac      900
acacatgcag gtgcagccag atctaacagc agtttacagt cggtactaaa aaaagcatgg      960
tgtatgtatg tatcatcagt atccagtact aggtttcgac aaaatcctgg atgctaatta     1020
aatactcatc ttattaggga acacaggaac attatgtcta cagcattgaa tgatggccac     1080
atcatgctag atctaacaat acataatatg atggaactgg tcttaaaaag tcgcattcgc     1140
tcaaataata cccgtagcaa aataaatgta aacttgcaga cgaagcgggg gaaatgaggg     1200
cagacctggt gaagacggcg acaagctcat tggggtgggc agagagtgag tcgccaatgc     1260
gctccctgac gctgtggagg cggctcagga cacggtcacc tgcaccttcc cccattgctg     1320
tcctcttcct ggatcctcag gcctgcacag cgaaaccgaa acggaagcgg aagcttcagt     1380
cagcagagaa aactgaaacc gaaaaacggt tcagatccgt tgacataaaa gctgcgatga     1440
catcctaaaa ctaaaacccc tccagcaaga cataaaccca actgccaaca accagtcttt     1500
taagtctcga cacacccttg acgctgcgcc acgaaactat attgcaggca agaaaccaac     1560
agaacctaac tctggaaggg gggaaagaaa cggcagacag gagcaagacc caaaaaaaaa     1620
cgactcagat cctggtacta tagtcctagt acctagacca gaaagaagaa acaaccaata     1680
caacaagagg catacaagaa ctgaatcgat gaactgaaac gcttcagagg accgaggaat     1740
ggcggagaag ggaggcgcct atttatacag atctgacgag agaaccgaac aaaaacacat     1800
cgatgggaac catggagaag aaaagggctg gccgcatggc accaatggcc tcggcctcca     1860
aaaagccgtt gaatccaaag caggcgagga cgaagcgtga cgcggcaggg tacttctcta     1920
gaaaagcacg gcatcagcaa ggtggggggg ctggggttcc ttattgcagg caatcacgag     1980
gtgattagca caaacggaag                                                 2000
<210>  68
<211>  2000
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  68
ctgaaatata catcagagat attacaatga catatatatc gataaaagaa aaataataaa       60
attaagtttt aaattttaag aatatatgtt tttagtatcc caattatgca gatttcatac      120
ccttcttcca caagctgttc cttgaactgc aagtactcgg ggactgtcag caactcaaca      180
gcgagctcgc tcacattgac cctcacatac tcccagacac cgggcctcgg gcggatggca      240
agggcaaccc atggggagat aacaatcccc tcctgcatga taaaaaacaa ttacaagtta      300
agttagagca agcggtagag taaagatgga tctctgtgat gcaatgaaat ctgaatctga      360
ttcaaacctg tgcactcctc aggacatcct caaaagcacc gtccttcagc ttctcacgat      420
cagcctcaga gattgcgttg ttgtactcag caatgatctg gtgggcctga agcattccct      480
ttccgaggtt aaccagcctg cgcaaataac agtgtcaaca aaaatatcag gccagatcta      540
tcaactcagc ctataaatat ctcaataaga taattttagc acttgagcat ttgcgcataa      600
taagaaaatt tgctattagc cacttaaaaa gaccatatat gatctgtttg cattgagatg      660
aattaaaaat ttcattgtag atatgaaatg attagttttg accatttaat tggacttaat      720
gaaatatgcg cgataatcag atctacgcgc tcgcgccaat agatctagta agatgtaggt      780
tttttatttt ttttgtgaaa ctttgctacc acaacaagca tctgtaccag tgcagaattc      840
attacttgta ttcagtttgt aaaccgtata tataatataa ataacatgca catgcagtca      900
gatctagcac taccagtcca cagtaatcca aaactacatt tgtatatttc atcattattc      960
agtagtacta ggtttgtaca aaatcttggc tgcagaaggc cgcacttaaa tattcattct     1020
aatcagaaac ttaaaaaaaa agtgactaca aaatgattgc atccaattca gtaaatatga     1080
gccattcctg gccagatcta acaatctcaa caacaaagat cctatatgaa catctccttc     1140
taaaagaaaa tacagtaaca tctgaaggca gtagactaga aaccaacaaa atctaatgct     1200
gggaaatcac taaatcagca cgaacctggt gaagacggcg acgagctcat tggggtgggc     1260
ggagagggag tcgccgatgc gctccctgac gctgtggagg cggctcagga cgcggtcgcc     1320
ggcagcttcc cccattgctc tcctcttcct cttggctcct caagcctgcg tgcacaacca     1380
accaccatca tcagatacat ccagacccag tcaacacaat cactccagga aaaaaaaaag     1440
tcaagccata aaccccaacc aaaaaccacg cctttgacaa acactggaag aaaaagaaaa     1500
tcgcagcttt ttcacaagca atctagaaga aaagaaaaag aaaagactac atagcagcta     1560
taattgactg agaagcatac aggaatcaaa caatggagaa ggggagggag gaagaacaat     1620
gatgctccag gctgaggacc gaggaactgg gtgaagcggg gtaggcgcgt atttatgcag     1680
atctgaggag agaaaccacc aaaacaatcc gatggtttca acgaaaaaga tcgtcgcttc     1740
ttgctgcacc agctcaccca tagccgttga gatcgaagct aagctagcag cagcaaagct     1800
ggaacgaaga gtgacgcatt caagctcctc tcctctcctc tcctctcctc cggagcacga     1860
ggccagcatg ggatggattg gggtttcttg ttggccatgg caaaggagga ggtcattaac     1920
gttgacacgg cgtaatttaa ttaaatctta tcttaaaata tgatttaagt ggtagtaaca     1980
aggaagatta atactatgaa                                                 2000
<210>  69
<211>  2000
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  69
gctgtttaag aaaaacagaa gtaaaattca gtcactgtta ttttgcttca gttataatct       60
gcaaatcgtc gttctggtac ttactgtcca tcaacaagct gttccttgaa tgccaagtac      120
tcagaaacac tcagctcttc cactgccaac tcacttacat tcacccgaat gtagtcccag      180
acaccaggcc ttggcctgat ggccagtgca acccagggcg gcagcacaat ggcttcctac      240
atacagtcaa ggaagtaagt tagaaagact ggtatttgac tttgagttga ctatcataac      300
catcctggct cattgccaaa tttacctgag cagcccggag aatgtcttca aagggagcat      360
atttctcttt gtcagcttcg atcaaggcat cgaactccgc aagcagctgg tgacgctgga      420
gcattccctt tccctggtta acatacctgc atagagtgat atttaagaaa tagaaccaat      480
gcttagatct cacatccttt ctgcggctga actatgttaa tggcactacc acataaacct      540
gatttttact tcttattttt aagaccacat gatctgtact taatctagct atgaacaaac      600
aatatttcaa catcatctaa gattcatgac tcaagacaaa aatgttagag ctcatcacag      660
attattatag ataccatcat taaaactaaa gagatgcata accttgtcag ctaagaattt      720
gtaacatact aacatgttat cgtttcacat ctgggttgac taagaactaa ccaactgtat      780
ggataaaatc attgaaaact caaaacaatt agtagcaggt tccaagaaga cacaagatat      840
tatattgaga tcttcaccta gagaagagtg caatcaactc attgggatga gacgagaagg      900
tggcaccgag gcgttcgcgg agactgtgga ggcgagctag cttggcagcc atgactcaat      960
ttcaggaact gcaaagaaag gttacactta gcaacacgta ccaaaaccac tcacttgcac     1020
aagaataatt agtcaacagc catcactaag cattgcaaga ctatctctga acaggaaagc     1080
catgctaaat caacactaat aacatcacac aaaagcattg gaagatcaaa acataactaa     1140
aaacagctgt ttcatctaca caactgaaag catctatggt ttacgaagca gagtgcgagt     1200
actgattcaa aataaatcaa cctgaaccaa tatactctga caatgttttc aaagggataa     1260
aagaaccagc tttatcaaat ggatttgttg ggttttagta agtatcattg agataccgat     1320
ggcatatctc aaactttgca aaattataat ggcatggttc caaattaccc tttagtatta     1380
gcaccagtta gatcctaatt cctaaatccg ataggacaga gcgaaagatc cctggagata     1440
tgaagatttg gctacagatt aagcagagcc aacatgaagt tccgaatatt atgaatccgc     1500
aagcggggag atcaaagaga agaatacgga aggtcgcgac tccatgaaag aatccaacca     1560
aaaacccaaa gatttttctc agttcaaaaa aaaaaaaccc ttcatttttg gttcgccatc     1620
caccgacagg caccaagaca ttcctcagga agcaaaaaag attaagcaga acaagtgata     1680
agcaagacac agtatcaacg gactacgagt cgagaaaatc actgaggcgc gattcttact     1740
gcaccaagta aaaaaaaatt tgggggcaaa aagaactctg caatggggcg gagcaacgtg     1800
gcagcaaaac taaaggtcga ggatttgagg ttttttgccg gttttcctcg aaaccccgaa     1860
tccgctcata gtaaacccac taaactgcag cagaaacccc cctcttggtt cagatttacc     1920
gaaagcagta aacccaagaa catgtcagca aaaactcctg caagattcag ctgacgaccc     1980
accaaagaat cgcaagaaat                                                 2000
<210>  70
<211>  2000
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  70
tggcggacgc gccacgcaca aacacaaacc tgcacacccc tgtgtcagag gaggagaggc       60
caagaaagga aatcgagtgg aggaagtgag gagcggcgga gacgtaggag gaggaggggg      120
agatggaaat ggaaagccgc gcgagagagg aggcgcgtgc tggatgggag gaggaggagg      180
aggtggtggg tttgtgtttg gagagacgag cgagagaggc gaagcattta aagggaggaa      240
gagggggaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaaa ggaggaatat      300
aataaagggt ggtgcacctg ccaactgcta tgctcaccaa cactttgtac acacccagtt      360
acacccccct gcctttatta tttccagtgc agtaataact tcaacaatta ttgaaatgaa      420
aatggaatta atggagttag tatcggatta gcgacacgct tgccgagctt ctagacggtg      480
cgattatttc agcgggaacg actttctgta ggtgaattta atagaggagt gttttaaatc      540
cactcgacgt tgtaatagct ggtttaattc gtttgtactg tcgagtagtt atccaaaatc      600
aattttggat atttaaaaga aaaaaaaaca gatccgaagt attggaccta ctggcaaata      660
ggaattttgc tatatatagg tgtgcgttca tttataatgg agtagcatgg agttttatta      720
atccagtaaa tgttttcatt gatttaatta atataacgaa tttcgcttga ggccatattt      780
gttaaacgct tttatctcta tcatcattca tcctaccagt aaagagcacc ggagatcgca      840
cttcatttaa atatatgtcc atgttggata aaccatagtt tattatagtg ttcttttata      900
tgttttgtgg ggaatttaga ttgtttaata tggcatacat atccatccat cattattata      960
ttctaacaca actggataag tgttctaaac tattgtagaa taactttgta gtatgatcga     1020
tcttgtggaa taaaaaaagt ctgacaataa cctttcataa aggaatatga atacccgtaa     1080
tcaacgcatc aaatcattca cggtgtacgc ctagcgaatt cgttggcgag tgctcgtgcg     1140
gccgtgggct cgctgtgatg catgcatggc tctctggcta cgtcgagata gcgattagta     1200
gcaaaattaa gcaagccact tattaattaa tctttggaga tatcatatga ttaaggcatt     1260
aattcgtacg tactcgtcgt cagcgttttc tgcaaagtcc actacagttt tttctttctt     1320
tgctgaaaat gctgatgtgt tggagatgga gtgacgtgca caacctgccg ccacgtggat     1380
ggttgctgga gcctacgtgt catcttaatt tgaacaaaaa aaaaagagga ataatacatc     1440
aatacatttt cgaatttcag ttctgccatt gaccagtaat acacatgtcg gcctcacatt     1500
ttaccctgat cttagtaacg ggtggtcgcc tggtcggtca ctgaaaaaag ttcaggaaat     1560
tatagtcaaa ctgaaacgaa catattcact ccttaaaaaa actaaatctt tttatatatt     1620
tgtgatattg taaaatagct acgggataat gatatagata tatatagtga taagggatag     1680
atggatcgag atatggagtt gtgctttctt taatttccac tacttgggct accatattat     1740
ggtagttggt atgaaaagat acacagcagt atagtgatgt gatcaatgac atgtatatct     1800
cacatgctcc catgttggag tcaaattttg ctagactaaa atccaattcc aagcagtccc     1860
tagccaagaa caaacaaaat tcagtgaggt cactgctgca ccaaggactg catgcatgca     1920
ggagaagggc attttctctt ttttcttttg gagactcgat tcaattcggt cggtcggtcg     1980
caatggtcag cttaattaaa                                                 2000
<210>  71
<211>  2000
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  71
tgtgaaaggt ggcggcacca gcttagccgc agcttctctc gtcgtctccc tgaaacgaga       60
gggaggaagt tggtagcgtg atatatttag gcatgtcatc tcttgtataa gaagtcttat      120
ctgtgctaat tcacacggtt ctctaatctc tctccattct gtttttgtaa attggttcag      180
tagatagcgt agggttatgc ttatatatac tccgtgaagt atatatttaa aaattagtca      240
cacgtaaagt actatacatg ttttatcgtc taataacaat aaaaacacta atcataaaat      300
ttttttaaat aatacgaatg gttaaacgtt gaatatgaac cgtgcaaaac tatatttatt      360
ttgtaacaga gaaaatattt cacattaatt agattgttgt tttatggaag gttggagagc      420
tgcgccgccg ttgcgcagac ctaggaggct gcttataagt tataatcaat caattcacgg      480
atgccggctg ggacgcggcc catcgtccgg gaagacgaca actcaacgca aaaagccgat      540
atgcctccaa attgccattg ccacctctac ggctgtttat actgctccaa atcaaaagcg      600
tccatggaag aatctagtat ttcccgcaaa gacgatgatg atatgcagga ttggatatat      660
agggggttgt tgcatgattg ctagaactcc cgtttccgaa gttgttcgtc catttttaaa      720
gctgccaaat aggaatttat tttgttttca agtgtaatag agttctgtcc agatgagtga      780
attataattt ggttcacatt ttatttgcta agtttcagtt tgaacattct caaataactt      840
ttttcttcac tttttaaccg agtaacttag ttattttttc cgtttggacc acccaacaat      900
ttgttgctaa gtgcatctca cccgtcaaat aattcctttg aatccaaatt caattatatc      960
ccaaaaataa aaaacttctg aattccacat caattcaaac cccaaccatt ttaatttctc     1020
tccatatttt ccatttctct atttttacct ttctcttttt tccatctatt tatttttttc     1080
cttttctatt tctttctttc tccttccttt ctctgtttcc ttcttcttct cctcggctag     1140
gcccgagcca gcccgtgccg cctcgcgcca accctgtgcc gccttacgcc gcgcttgcgt     1200
gcgctcgcgc ccacctcgtg cccaacccgc gcacgccaca cgcacacacg aggacgatcg     1260
acggacgaat gcaatcatat ccccttcctt actcagctag aaggctcaag aaccgcaact     1320
ttgatctctt ccaccctctc aaatccgccc caacccctgc tgactcaatc gccattaccg     1380
gaggaaaaat ccccgaaacc ctattaccgg cgccactaac agagctccaa aattcgtcgc     1440
ataattcgaa aatattctga aattgaaggt aaaaatggaa tctacatgcg aagtactccc     1500
tttcccctcc aatccgtcac tggaacgccg ccggcgccgc ctcccgctgc cactgccctg     1560
tttggccgcc gacagccgca cggcgcgccg ctgctccagg ccgccctagc ttcaaccacc     1620
gccacctttg gctccgcctc cctcctctta tgctcaccaa gcccgcctcc ctcgccggag     1680
atcgccggaa ccaccgccgc catggccgcc accgcctcct gcttctggcc gccgccgcca     1740
gcctcgccac cggcgcctat gccaccgccg accacggaaa cggagtccct acaccttggg     1800
gaccacaaaa ccggcggcat ccctcccaaa accggcctcc tccaccgccg gcgttcgtgg     1860
gattccggcc agttctgtgc agagcgagag aagaagagga aaaatagatt ttcctattga     1920
aagataaatc agaaaattcc tttttctttt cctatcaagt tgaccatccg tttgacctca     1980
aaatcaaaat ctgagaccta                                                 2000
<210>  72
<211>  786
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  72
gacatggagg tggaaggcct gacgtagata gagaagatgc tcttagcttt cattgtcttt       60
cttttgtagt catctgattt acctctctcg tttatacaac tggtttttta aacactcctt      120
aacttttcaa attgtctctt tctttaccct agactagata attttaatgg tgattttgct      180
aatgtggcgc catgttagat agaggtaaaa tgaactagtt aaaagctcag agtgataaat      240
caggctctca aaaattcata aactgttttt taaatatcca aatattttta catggaaaat      300
aataaaattt agtttagtat taaaaaattc agttgaatat agttttgtct tcaaaaatta      360
tgaaactgat cttaattatt tttccttaaa accgtgctct atctttgatg tctagtttga      420
gacgattata taattttttt tgtgcttaac tacgacgagc tgaagtacgt agaaatacta      480
gtggagtcgt gccgcgtgtg cctgtagcca ctcgtacgct acagcccaag cgctagagcc      540
caagaggccg gaggtggaag gcgtcgcggc actatagcca ctcgccgcaa gagcccaaga      600
gaccggagct ggaaggatga gggtctgggt gttcacgaat tgcctggagg caggaggctc      660
gtcgtccgga gccacaggcg tggagacgtc cgggataagg tgagcagccg ctgcgatagg      720
ggcgcgtgtg aaccccgtcg cgccccacgg atggtataag aataaaggca ttccgcgtgc      780
aggatt                                                                 786
<210>  73
<211>  1160
<212>  ДНК
<213>  Zea mays
<400>  73
atgtgctggt gccccataag gtaggcacct aggtctgtgt ttgaagcatc gacagatttg       60
taaacatgtt cctatgaacc tatttctgat tgataatttg tcaaaactca tcatttgtct      120
tcatccttgc ctgcttgcgt tcacgtgaca aagtacgtgt atgtcttcgg cctttgctgt      180
gtatgtttcg cattgcttag atgtggtgaa agaacatcag aagatgcatt gatggcgtgc      240
ttaaaccagt gatgtgctcc aggtgttcct gcagtctgca gagatattta ctcttgtagt      300
cttgttgaca gcacagttgt atgtgatttc ttggatgtaa tgtaaaccaa atgaaagata      360
ggaacagttc gtcctcttcc gtatacgaag gtcactgtat catttgtcgt ggcacaagat      420
gatctgcagg caggactgca acatggtttc ttggactgtc ctgaatgccc gttcttgttc      480
tttagttgag ccagagcagc agcctggtgt cggtgcctga gacctgacga agcacacggc      540
aaacaaacaa gtcgcagcag ctagcagggg cgttgccatc gccacaagcc cccaagagac      600
ccgccgagga aaagaaaaaa aaactacggc cgccgttgcc aagccgagcg tgcgaaccga      660
tccacggatg ggagatcaga gatcacccac cgcaggcggg cggcagtggc tggcgaggtg      720
cgtccacaga acctgctgca ggtccctgtc cgtcccggcg accccttttc taggcgagca      780
actccccatg gcagagctgc acgcagcagg gcccgtcgtt ggttgcagct ttaacccttt      840
ttgttttaac catacaatgc agagtcgcag aggtgaaaca ggacggaaat tacagaaaag      900
atggtggtgt gccagcagcc ccagcatgaa gaagatcagg acaaaagaaa agcttgtgat      960
tggtgacagc aacaggattg gattggagcc aagctaggca gtgagaggca ggcagcaaga     1020
cgcgtcagcc actgaaatcc agagggcaac ctcggcctca caactcatat ccccttgtgc     1080
tgttgcgcgc cgtggttagc caggtgtgct gcaggcctcc tccttgttta tatatgggag     1140
atgctctcac cctctaaggt                                                 1160
<210>  74
<211>  1532
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  74
tagtcctcta atatatgaaa ttttgatata ggtaaagaag ggtattgcaa ggataagaat       60
gtaaaaagaa ataagagtaa tccttaccga taatagtatt ccttctctac cgttaaaagt      120
taaacctgtg cgtgtagcat tttaatccag gatctatcga atccgtccct cgttggcgtg      180
ggcgacgaac acgtgcagaa gaagctttcc ccagaaagca cctcaccgcc tcgccgtctg      240
gcagactggc acgcggggcc ctaccctcgc tgcgcctggg cccgtccgcc ttctgcacac      300
tgtcacgccc ccacccgctc gccgcctcgc gcctctctct ccgcctccgc cgcggccgcc      360
cgacgtgata gcgacacgta ggactcgcca aacacaaaaa atccatcgcg atttttggaa      420
ttttgttaca aaccaaatcc cgcattagag atttaatttg atttaattta attacgtagg      480
agtaccagat aaggagatcg agttaaaaaa gctaacggcg cggcgtggtt atctccgaat      540
cggctgtggc tccccgcgtc ggcgtcggcg cggcggcggc gcgccggccg aaccctggcc      600
gtcggatcgg gcgtcgtcct gggccccacg cgccacgggc ggctgtcgtt tgctcctcgg      660
agcggggtgg gcccaccatg gccaccacca caggtcgcgg tcgcggctga cctggcggtg      720
gtcccgtgct cgcggtgttt tttttttttc actctctttc tctcggtgga cagtagcggg      780
ggccgcggcc cgcgggggca gagattgcaa aaacagcgga aacggaagat tgcaaaattg      840
caactgcttt cctgttttta attcgggatc aaaaagattc tttcgtcggg gtccccgtgc      900
cattgttgta ttgcgcgtag gtccttgctt gtaaaagata atctccttaa ttttttcttt      960
gtactactag tgtatatgca gtaagaatat accatgagta aaatgaacca caaaactaat     1020
tacgatatac cattctcatg tagacgttct cttttctttt gctagtcata cgtgcatata     1080
taaccaaaca aaaaaatgtt tgaagtactc ctatccaatt tattactcca gtagacaaca     1140
aaagaaaatg tttgaagtaa taactgatcc atggtacagt agggttgtcg tcaatcttgt     1200
gtttctttca ttccattgta cttacaatcg tactccagct agcacagcac aatgggctta     1260
agctttggac cccaaattct gatcttgtcg gggacccgta cgaaaatact cccgtagaga     1320
tgcagatacc gtcacaacct acaaccaacg aatgttaaga aaacaaaggg aaaaaaaaag     1380
aggcgaattc ggaggagaaa aaacggtggc taaaatatag tgcgggtgtg gggacgcgac     1440
gcgagcgacg aaagaggaga gaggatgggt tggcctgccc ccccctcccc tgtctataaa     1500
tgcagaggcg ccgagtgccc tagtcgccgc tc                                   1532
<210>  75
<211>  841
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  75
tcgaggtcat tcatatgctt gagaagagag tcgggatagt ccaaaataaa acaaaggtaa       60
gattacctgg tcaaaagtga aaacatcagt taaaaggtgg tataaagtaa aatatcggta      120
ataaaaggtg gcccaaagtg aaatttactc ttttctacta ttataaaaat tgaggatgtt      180
tttgtcggta ctttgatacg tcatttttgt atgaattggt ttttaagttt attcgctttt      240
ggaaatgcat atctgtattt gagtcgggtt ttaagttcgt ttgcttttgt aaatacagag      300
ggatttgtat aagaaatatc tttagaaaaa cccatatgct aatttgacat aatttttgag      360
aaaaatatat attcaggcga attctcacaa tgaacaataa taagattaaa atagctttcc      420
cccgttgcag cgcatgggta ttttttctag taaaaataaa agataaactt agactcaaaa      480
catttacaaa aacaacccct aaagttccta aagcccaaag tgctatccac gatccatagc      540
aagcccagcc caacccaacc caacccaacc caccccagtc cagccaactg gacaatagtc      600
tccacacccc cccactatca ccgtgagttg tccgcacgca ccgcacgtct cgcagccaaa      660
aaaaaaaaga aagaaaaaaa agaaaaagaa aaaacagcag gtgggtccgg gtcgtggggg      720
ccggaaacgc gaggaggatc gcgagccagc gacgaggccg gccctccctc cgcttccaaa      780
gaaacgcccc ccatcgccac tatatacata cccccccctc tcctcccatc cccccaaccc      840
t                                                                      841
<210>  76
<211>  1392
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  76
ctcgaggtca ttcatatgct tgagaagaga gtcgggatag tccaaaataa aacaaaggta       60
agattacctg gtcaaaagtg aaaacatcag ttaaaaggtg gtataagtaa aatatcggta      120
ataaaaggtg gcccaaagtg aaatttactc ttttctacta ttataaaaat tgaggatgtt      180
ttgtcggtac tttgatacgt catttttgta tgaattggtt tttaagttta ttcgcgattt      240
tggaaatgca tatctgtatt tgagtcgggt tttaagttcg tttgcttttg taaatacaga      300
gggatttgta taagaaatat ctttaaaaaa acccatatgc taatttgaca taatttttga      360
gaaaaatata tattcaggcg aattctcaca atgaacaata ataagattaa aatagcttgc      420
ccccgttgca gcgatgggta ttttttctag taaaataaaa gataaactta gactcaaaac      480
atttacaaaa acaaccccta aagtcctaaa gcccaaagtg ctatgcacga tccatagcaa      540
gcccagccca acccaaccca acccaaccca ccccagtgca gccaactggc aaatagtctc      600
cacaccccgg cactatcacc gtgagttgtc cgcaccaccg cacgtctcgc agccaaaaaa      660
aaaaaaagaa agaaaaaaaa gaaaaagaaa aaacagcagg tgggtccggg tcgtgggggc      720
cggaaaagcg aggaggatcg cgagcagcga cgaggccggc cctccctccg cttccaaaga      780
aacgcccccc atcgccacta tatacatacc cccccctctc ctcccatccc cccaacccta      840
ccaccaccac caccaccacc tcctcccccc tcgctgccgg acgacgagct cctcccccct      900
ccccctccgc cgccgccggt aaccaccccg cgtccctctc ctctttcttt ctccgttttt      960
tttttccgtc tcgtctcgat ctttggcctt ggtagtttgg gggcgagagg cggcttcgtc     1020
gcccagatcg gtgcgcggga ggggcgggat ctcgcggctg ggtctcggcg tgcggccgga     1080
tcctcgcggg gaatggggct ctcggatgta gatctgatcc gccgttgttg ggggagatga     1140
tggggcgttt aaaatttcgc catgctaaac aagatcagga agaggggaaa agggcactat     1200
ggtttatatt tttatatatt tctgctgctg ctcgtcaggc ttagatgtgc tagatctttc     1260
tttcttcttt ttgtgggtag aatttgaatc cctcagcatt gttcatcggt agtttttctt     1320
ttcatgattt gtgacaaatg cagcctcgtg cggagctttt ttgtaggtag aagatggctg     1380
acgccgagga ta                                                         1392
<210>  77
<211>  743
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  77
gaattcccgg acctccatgc ctacatcaac taatttgatt ccttgagttt acgtttagtg       60
atatgtctat ttttagagct tgttggggct tcggcctcag ctctagccag ccaaacatgt      120
tctaccaagt accctatgtt ggcatgatat agtgatgcat tataacaata aatgagcgag      180
ggattgctgg ctgaaaaagc tatactagct gcatttggtt atagttaacc gaactattaa      240
ttgcgtgtac aacaaaataa aaaaaatgca tgttgcacat tctttcatta acattatgtt      300
ttggtagtgt gaattagaaa tttgattgac agtagatcga caaacatagt ttcaatatgc      360
ttaagttagt tatgacttta acatatcagt ctccttgata ttttcgtttt agattcgtct      420
ctctactagt gtgtatgtcc accttccata gcagtgaagg gttccattcc atccctggta      480
aaaaaaaatc aaccactact atttatttcc taaaaagcaa aatgataaaa tatcattttt      540
ttaataaaaa taaaaaaatt ttggggtaca taattgatgt tgccccttgg gattaacctt      600
aaaaaagggc gaattttcta gggtttggcc aagttttgca atgcaccaaa ttattcccct      660
tgggccggcc gccaccccaa aaaaaacccc aacccccaac tttccattga aggccgggcc      720
cccttaaatc ctcatccccc caa                                              743
<210>  78
<211>  144
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  78
taaaaaaggg cgaattttct agggtttggc caagttttgc aatgcaccaa attattcccc       60
ttgggccggc cgccacccca aaaaaaaccc caacccccaa ctttccattg aaggccgggc      120
ccccttaaat cctcatcccc ccaa                                             144
<210>  79
<211>  612
<212>  ДНК
<213>  Вирус мозаики цветной капусты
<400>  79
ggtccgattg agacttttca acaaagggta atatccggaa acctcctcgg attccattgc       60
ccagctatct gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc      120
catcattgcg ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa      180
gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca      240
aagcaagtgg attgatgtga tggtccgatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga      300
aacctcctcg gattccattg cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag      360
gaaggtggct cctacaaatg ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc      420
tctgccgaca gtggtcccaa agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa      480
gacgttccaa ccacgtcttc aaagcaagtg gattgatgtg atatctccac tgacgtaagg      540
gatgacgcac aatcccacta tccttcgcaa gacccttcct ctatataagg aagttcattt      600
catttggaga gg                                                          612
<210>  80
<211>  837
<212>  ДНК
<213>  Coix lacryma-jobi
<400>  80
agcagactcg cattatcgat ggagctctac caaactggcc ctaggcatta acctaccatg       60
gatcacatcg taaaaaaaaa accctaccat ggatcctatc tgttttcttt ttgccctgaa      120
agagtgaagt catcatcata tttaccatgg cgcgcgtagg agcgcttcgt cgaagaccca      180
taggggggcg gtactcgcac cgtggttgtt tcctgttatg taatatcgga tgggggagca      240
gtcggctagg ttggtcccat cggtactggt cgtcccctag tgcgctagat gcgcgatgtt      300
tgtcctcaaa aactcttttc ttcttaataa caatcatacg caaatttttt gcgtattcga      360
gaaaaaaaga agattctatc tgtttttttt ttgaaatggc tccaatttat aggaggagcc      420
cgtttaacgg cgtcgacaaa tctaacggac accaaccagc gaatgagcga acccaccagc      480
gccaagctag ccaagcgaag cagacggccg agacgctgac acccttgcct tggcgcggca      540
tctccgtcgc tggctcgctg gctctggccc cttcgcgaga gttccggtcc acctccacct      600
gtgtcggttt ccaactccgt tccgccttcg cgtgggactt gttccgttca tccgttggcg      660
gcatccggaa attgcgtggc gtagagcacg gggccctcct ctcacacggc acggaaccgt      720
cacgagctca cggcaccggc agcacggcgg ggattccttc cccaccaccg ctccttccct      780
ttcccttcct cgcccgccat cataaatagc cacccctccc agcttccttc gccacat         837
<210>  81
<211>  947
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  81
aatccgaaaa gtttctgcac cgttttcacg tcctaactaa caatataggg aacgtgtgct       60
aaatataaaa tgagacctta tatatgtagc gctgataact agaactatgt aagaaaaact      120
catccaccta ctttagtggc aatcgggcta aataaaaaag agtcgctaca ctagtttcgt      180
tttccttagt aattaagtgg gaaaatgaaa tcattattgc ttagaatata cgttcacatc      240
tctgtcatga agttaaatta ttcgaggtag ccataattgt catcaaactc ttcttgaata      300
aaaaaatctt tctagctgaa ctcaatgggt aaagagagat attttttttt aaaaaaaaat      360
agaatgaaga tattctgaac gtatcggcaa agatttaaac atataattat ataattttat      420
agtttgtgca ttcgttatat cgcacgtcat taaggacatg tcttactcca tctcaatttt      480
tatttagtaa ttaaagacaa ttgacttatt tttattattt atcttttttc gattagatgc      540
aaggtactta cgcacacact ttgtgctcat gtgcatgtgt gagtgcacct cctcaataca      600
cgttcaacta gcgacacatc tccaatatca ctcgcctatt taatacattt aggtagcaat      660
atctgaattc aagcactcca ccatcaccag accactttta ataatatcta aaatacaaaa      720
aataatttta cagaatagca tgaaaagtat gaaacgaact atttaggttt ttcacataca      780
aaaaaaaaaa gaattttgct cgtgcgcgag cgccaatctc ccatattggg cacacaggca      840
acaacagagt ggctgcccac agaacaaccc acaaaaaacg atgatctaac ggaggacagc      900
aagtccgcaa caacctttta acagcaggct ttgcggccag gagagag                    947
<210>  82
<211>  721
<212>  ДНК
<213>  Каулимовирус мозаики Mirabilis
<400>  82
tggagattca gaaaaatctc catcaacaaa taatccaagt aaggattaat ggattgatca       60
acatccttac cgctatgggt aagattgatg aaaagtcaaa aacaaaaatc aattatgcac      120
accagcatgt gttgatcacc agctattgtg ggacaccaat ttcgtccaca gacatcaaca      180
tcttatcgtc ctttgaagat aagataataa tgttgaagat aagagtggga gccaccacta      240
aaacattgct ttgtcaaaag ctaaaaaaga tgatgcccga cagccacttg tgtgaagcat      300
gtgaagccgg tccctccact aagaaaatta gtgaagcatc ttccagtggt ccctccactc      360
acagctcaat cagtgagcaa caggacgaag gaaatgacgt aagccatgac gtctaatccc      420
acaagaattt ccttatataa ggaacacaaa tcagaaggaa gagatcaatc gaaatcaaaa      480
tcggaatcga aatcaaaatc ggaatcgaaa tctctcatct ctctctacct tctctctaaa      540
aaacacttag atgtgtgagt aatcacccac ttggggttgt aatatgtagt agtaaataag      600
ggaaccttag ggtataccat tgttgtaata ttattttcag tatcaataaa ataatctttc      660
agtttatctt atattcattt gtgtgacacc gtattcccat aaaaccgatc ctaatctctc      720
c                                                                      721
<210>  83
<211>  352
<212>  ДНК
<213>  Peanut chlorotic streak caulimovirus
<400>  83
acagagggat ttctctgaag atcatgtttg ccagctatgc gaacaatcat cgggagatct       60
tgagccaatc aaagaggagt gatgtagacc taaagcaata atggagccat gacgtaaggg      120
cttacgccat tacgaaataa ttaaaggctg atgtgacctg tcggtctctc agaaccttta      180
ctttttatat ttggcgtgta tttttaaatt tccacggcaa tgacgatgtg acctgtgcat      240
ccgctttgcc tataaataag ttttagtttg tattgatcga cacgatcgag aagacacggc      300
catttggacg atcatttgag agtctaaaag aacgagtctt gtaatatgtt tt              352
<210>  84
<211>  1648
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  84
cactcgcaca tctcatggtg tcccaagaac ggcaagagcc agcactgcct ctgcctagca       60
acagcagcag cgccaagcga gcagccgcgt ccatggacgc cagcagcccg gccccgccgc      120
tcctcctccg cgcccccact cccagtccca gcattgacct ccccgctgcc gctggcaagg      180
ccgcggccgt gttcgacctg cggcgggagc ccaagatccc ggcgccattc ctgtggccgc      240
acgaggaggc gcgcccgacc tcggccgcgg agctggaggt tccggtggtg gacgtgggcg      300
tgctgcgcaa tggcgaccgc gcggggctgc ggcgcgccgc ggcgcaggtg gcctcggcgt      360
gcgcgacgca cgggttcttc caggtgtgcg ggcacggcgt ggacgcggcc ctggggcgcg      420
ccgcgctgga cggcgccagc gacttcttcc ggctgccgct ggccgacaag cagcgcgccc      480
ggcgcgtccc cggcaccgtg tccgggtaca cgagcgcgca cgccgaccgg ttcgcgtcca      540
agctcccctg gaaggagacc ctgtccttcg gcttccacga cggcgccgcg tcgcccgtcg      600
tcgtggacta cttcaccggc accctcggcc aagatttcga gccaatgggg cgggtgtacc      660
agaggtactg cgagaagatg aaggagctgt cgctgacgat catggagctg ctggagctga      720
gcctgggcgt ggagcgcggc tactaccggg agttcttcga ggacagccgc tccatcatgc      780
ggtgcaacta ctacccgccg tgcccggagc cggagcgcac gctgggcacg ggcccgcact      840
gcgaccctac ggcgctgacc atcctcctgc aggacgacgt cggcgggctg gaggtgctgg      900
tggacggcga gtggcgcccc gtccggcccg tcccaggcgc catggtcatc aacatcggcg      960
acaccttcat ggcgctgtcg aacgggcggt acaagagctg cctgcaccgc gcggtggtga     1020
accagcggca ggagcggcgg tcgctggcct tcttcctgtg cccgcgcgag gaccgggtgg     1080
tgcggccgcc ggccagcagc gccacgccgc ggcagtaccc ggacttcacc tgggccgacc     1140
tcatgcgctt cacgcagcgc cactaccgcg ccgacacccg cacgctggac gccttcaccc     1200
gctggctctc ccacggccca gtcccagccc aggaggcggc ggctccctgc acctagcgag     1260
cgagcgagcc gggccaaaca aacaaggggc aaaggccatc tctttcgccg gggcccgcgc     1320
gcggggttcg cccacgtgcg cgcccaggtg ggcgctggcc gcgggcaggt ggcggacatg     1380
tggcctgcgg gccccgcgcc gccttcccat ttttggacgc tgccgcgcat gccgcatgcg     1440
tgcgtcgacg gccctactac ttctactact gctactgcga ctactagtgt acatacgcaa     1500
aaatacatat atacgtattt tctatatata tatatataag caaggcggcc ccccggtgac     1560
cttttctttg tttttgtcga caactgtgtt ttgatcccat tctagctgtt ctatggacca     1620
tggatggttc gttcaatgtt tgtacgta                                        1648
<210>  85
<211>  1242
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  85
atggtgtccc aagaacggca agagccagca ctgcctctgc ctagcaacag cagcagcgcc       60
aagcgagcag ccgcgtccat ggacgccagc agcccggccc cgccgctcct cctccgcgcc      120
cccactccca gtcccagcat tgacctcccc gctgccgctg gcaaggccgc ggccgtgttc      180
gacctgcggc gggagcccaa gatcccggcg ccattcctgt ggccgcacga ggaggcgcgc      240
ccgacctcgg ccgcggagct ggaggttccg gtggtggacg tgggcgtgct gcgcaatggc      300
gaccgcgcgg ggctgcggcg cgccgcggcg caggtggcct cggcgtgcgc gacgcacggg      360
ttcttccagg tgtgcgggca cggcgtggac gcggccctgg ggcgcgccgc gctggacggc      420
gccagcgact tcttccggct gccgctggcc gacaagcagc gcgcccggcg cgtccccggc      480
accgtgtccg ggtacacgag cgcgcacgcc gaccggttcg cgtccaagct cccctggaag      540
gagaccctgt ccttcggctt ccacgacggc gccgcgtcgc ccgtcgtcgt ggactacttc      600
accggcaccc tcggccaaga tttcgagcca atggggcggg tgtaccagag gtactgcgag      660
aagatgaagg agctgtcgct gacgatcatg gagctgctgg agctgagcct gggcgtggag      720
cgcggctact accgggagtt cttcgaggac agccgctcca tcatgcggtg caactactac      780
ccgccgtgcc cggagccgga gcgcacgctg ggcacgggcc cgcactgcga ccctacggcg      840
ctgaccatcc tcctgcagga cgacgtcggc gggctggagg tgctggtgga cggcgagtgg      900
cgccccgtcc ggcccgtccc aggcgccatg gtcatcaaca tcggcgacac cttcatggcg      960
ctgtcgaacg ggcggtacaa gagctgcctg caccgcgcgg tggtgaacca gcggcaggag     1020
cggcggtcgc tggccttctt cctgtgcccg cgcgaggacc gggtggtgcg gccgccggcc     1080
agcagcgcca cgccgcggca gtacccggac ttcacctggg ccgacctcat gcgcttcacg     1140
cagcgccact accgcgccga cacccgcacg ctggacgcct tcacccgctg gctctcccac     1200
ggcccagtcc cagcccagga ggcggcggct ccctgcacct ag                        1242
<210>  86
<211>  413
<212>  ПРТ
<213>  Sorghum bicolor
<400>  86
Met Val Ser Gln Glu Arg Gln Glu Pro Ala Leu Pro Leu Pro Ser Asn
1. 5                   10                  15
Ser Ser Ser Ala Lys Arg Ala Ala Ala Ser Met Asp Ala Ser Ser Pro
20                  25                  30
Ala Pro Pro Leu Leu Leu Arg Ala Pro Thr Pro Ser Pro Ser Ile Asp
35                  40                  45
Leu Pro Ala Ala Ala Gly Lys Ala Ala Ala Val Phe Asp Leu Arg Arg
50                  55                  60
Glu Pro Lys Ile Pro Ala Pro Phe Leu Trp Pro His Glu Glu Ala Arg
65                  70                  75                  80
Pro Thr Ser Ala Ala Glu Leu Glu Val Pro Val Val Asp Val Gly Val
85                  90                  95
Leu Arg Asn Gly Asp Arg Ala Gly Leu Arg Arg Ala Ala Ala Gln Val
100                 105                 110
Ala Ser Ala Cys Ala Thr His Gly Phe Phe Gln Val Cys Gly His Gly
115                 120                 125
Val Asp Ala Ala Leu Gly Arg Ala Ala Leu Asp Gly Ala Ser Asp Phe
130                 135                 140
Phe Arg Leu Pro Leu Ala Asp Lys Gln Arg Ala Arg Arg Val Pro Gly
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Gly Tyr Thr Ser Ala His Ala Asp Arg Phe Ala Ser Lys
165                 170                 175
Leu Pro Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Gly Phe His Asp Gly Ala Ala
180                 185                 190
Ser Pro Val Val Val Asp Tyr Phe Thr Gly Thr Leu Gly Gln Asp Phe
195                 200                 205
Glu Pro Met Gly Arg Val Tyr Gln Arg Tyr Cys Glu Lys Met Lys Glu
210                 215                 220
Leu Ser Leu Thr Ile Met Glu Leu Leu Glu Leu Ser Leu Gly Val Glu
225                 230                 235                 240
Arg Gly Tyr Tyr Arg Glu Phe Phe Glu Asp Ser Arg Ser Ile Met Arg
245                 250                 255
Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Pro Glu Pro Glu Arg Thr Leu Gly Thr
260                 265                 270
Gly Pro His Cys Asp Pro Thr Ala Leu Thr Ile Leu Leu Gln Asp Asp
275                 280                 285
Val Gly Gly Leu Glu Val Leu Val Asp Gly Glu Trp Arg Pro Val Arg
290                 295                 300
Pro Val Pro Gly Ala Met Val Ile Asn Ile Gly Asp Thr Phe Met Ala
305                 310                 315                 320
Leu Ser Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Cys Leu His Arg Ala Val Val Asn
325                 330                 335
Gln Arg Gln Glu Arg Arg Ser Leu Ala Phe Phe Leu Cys Pro Arg Glu
340                 345                 350
Asp Arg Val Val Arg Pro Pro Ala Ser Ser Ala Thr Pro Arg Gln Tyr
355                 360                 365
Pro Asp Phe Thr Trp Ala Asp Leu Met Arg Phe Thr Gln Arg His Tyr
370                 375                 380
Arg Ala Asp Thr Arg Thr Leu Asp Ala Phe Thr Arg Trp Leu Ser His
385                 390                 395                 400
Gly Pro Val Pro Ala Gln Glu Ala Ala Ala Pro Cys Thr
405                 410
<210>  87
<211>  12906
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  87
cactcgcaca tctcatggtg tcccaagaac ggcaagagcc agcactgcct ctgcctagca       60
acagcagcag cgccaagcga gcagccgcgt ccatggacgc cagcagcccg gccccgccgc      120
tcctcctccg cgcccccact cccagtccca gcattgacct ccccgctgcc gctggcaagg      180
ccgcggccgt gttcgacctg cggcgggagc ccaagatccc ggcgccattc ctgtggccgc      240
acgaggaggc gcgcccgacc tcggccgcgg agctggaggt tccggtggtg gacgtgggcg      300
tgctgcgcaa tggcgaccgc gcggggctgc ggcgcgccgc ggcgcaggtg gcctcggcgt      360
gcgcgacgca cgggttcttc caggtgtgcg ggcacggcgt ggacgcggcc ctggggcgcg      420
ccgcgctgga cggcgccagc gacttcttcc ggctgccgct ggccgacaag cagcgcgccc      480
ggcgcgtccc cggcaccgtg tccgggtaca cgagcgcgca cgccgaccgg ttcgcgtcca      540
agctcccctg gaaggagacc ctgtccttcg gcttccacga cggcgccgcg tcgcccgtcg      600
tcgtggacta cttcaccggc accctcggcc aagatttcga gccaatgggg taagcgaagc      660
accgatttac atttaccgcg cgtcggcccc tgaggcctgg gtcttagtct tagcactgca      720
tatacggtcg gtagctctgg atatgatacg tatatatgaa accccgttcc aatcccatgc      780
acggtgtaca caggcgggtg taccagaggt actgcgagaa gatgaaggag ctgtcgctga      840
cgatcatgga gctgctggag ctgagcctgg gcgtggagcg cggctactac cgggagttct      900
tcgaggacag ccgctccatc atgcggtgca actactaccc gccgtgcccg gagccggagc      960
gcacgctggg cacgggcccg cactgcgacc ctacggcgct gaccatcctc ctgcaggacg     1020
acgtcggcgg gctggaggtg ctggtggacg gcgagtggcg ccccgtccgg cccgtcccag     1080
gcgccatggt catcaacatc ggcgacacct tcatggtaac ccctgctctg ttttttcttg     1140
tcctcctctt gtcctgtgtg tgtgtatatt cacttctctc tgtttttttg ccccgaatcc     1200
tagtggacct aactggacgg attacagcac gcacacgtag gcatgtcatg tagcagcagt     1260
ctgcagcact gtagtactta gcgatgcaat agagacatgc gttccagtcg gttccatctc     1320
ggtgggctac agctacagtc ctacacggac gcggctcgta gtcgtaggga cgggcgcgtt     1380
ctctgtatcc acacacggct gcgcccaggc cgaggcttcc gccgcgggaa agttgcgaca     1440
acagaacggg gtttgtgccg ttggagcgtt gcggagaggc agaggcttgg ggggacgggg     1500
gcgcgatacg ctgcgatggg tgggtgaccg aggcgacgct ttcggcgggg gcccgggcct     1560
gcccaggtgc gcgcggcctc gtcgccttcc cctgtttttt tgatgccgcc gctcggtcct     1620
cggtgttctg gctccgcccg cccgctcgct gggtgcccat cccatctgat ccgatccgct     1680
ccgctccgcg gtggcggtcc tatgcgatgc cgccgcacga gcgcgggggg ccgcccgtgg     1740
aggagtagaa agtggtacaa ggttggttgg aacttggaat tgtggggggt tactgctgct     1800
ggtggctgct gctttgcaac ttgccaggct gctgcctgtt gccccccgcg ttttctagcc     1860
gtttccgctc gcgatccggc acgcggcgcc cacaccgggg ctccagctcg gccccttggc     1920
cgtgtaggta gcaggcactt gcatctgtcc gttcgacacg atgattcttg tgcactgtgt     1980
acgtatgtac taaccctttc tggtatgatg tacgcatggc atgcaggcgc tgtcgaacgg     2040
gcggtacaag agctgcctgc accgcgcggt ggtgaaccag cggcaggagc ggcggtcgct     2100
ggccttcttc ctgtgcccgc gcgaggaccg ggtggtgcgg ccgccggcca gcagcgccac     2160
gccgcggcag tacccggact tcacctgggc cgacctcatg cgcttcacgc agcgccacta     2220
ccgcgccgac acccgcacgc tggacgcctt cacccgctgg ctctcccacg gcccagtccc     2280
agcccaggag gcggcggctc cctgcaccta gcgagcgagc gagccgggcc aaacaaacaa     2340
ggggcaaagg ccatctcttt cgccggggcc cgcgcgcggg gttcgcccac gtgcgcgccc     2400
aggtgggcgc tggccgcggg caggtggcgg acatgtggcc tgcgggcccc gcgccgcctt     2460
cccatttttg gacgctgccg cgcatgccgc atgcgtgcgt cgacggccct actacttcta     2520
ctactgctac tgcgactact agtgtacata cgcaaaaata catatatacg tattttctat     2580
atatatatat ataagcaagg cggccccccg gtgacctttt ctttgttttt gtcgacaact     2640
gtgttttgat cccattctag ctgttctatg gaccatggat ggttcgttca atgtttgtac     2700
gtactccacg taaccaaact actctagtgg actagtagat cgggctcatg tgatgaaact     2760
ggaccgacgc ggacgtcacg tgcgtcaccc gcgtctggta gcggtagcgc acgagcgccg     2820
aatgtttcct gggcccgcaa gagaatcgct tctcatctcc tctcaccatg aatggggaaa     2880
aatgctgcgt cgaaagttcc agacgtttcc aaattccaaa cggttttgtg gcgtccgatc     2940
catggggcgc cccaaacttc caagacgttt tcaggttcca aatcttcgtg ctccacatca     3000
ccttcttccc agattcattt gcctcgtcgc ttgctctcct gtgttattca cgggtcccac     3060
tgttgccccg tctgcgagaa agaaatttat tagagttgaa gcattcgaca tttcgactga     3120
ctgattgtta gtatcactaa attttgtgca catgtttctt tggtcattca tctctggata     3180
ttttttttag ataatggata taaatatcgg gcctctacat ctgaggaagt acacagccaa     3240
ttattttcat ctctggacat gggacgatgg aagaggcaga tagatttagg agacccttca     3300
attcagaatt tcaggtgcac aaggcctgcc tggcttgccc ggattcttgt ttcggacatg     3360
accaactagg ccgcactact tgcactgata gctggagaaa aaacaaaact ttgcaaacag     3420
caggattatc tacaagggaa actccatcca cgtgaaccag catttcaggg agagatgcga     3480
caaaaaaaaa gaggcggcaa caaaaaaatc ttactgcaat tttatctctg cattgaacct     3540
cttccaacca tgccgcatcc tgtactgttt tgtatctttc ccggtggtcc gttgcgttct     3600
cacgcagttg ataacatgca gtcacgcacc accgaatcca gtgtactagg ggtagtgact     3660
tgtcacgcgg aacaacaggt cggtagcacc aagcaagtcg ctgtagactt gggcgtttaa     3720
caacgacttg cacaacagtt caaatatagc atatgcaatt atgcacaaga ttgttcgact     3780
gctatccgac aaactgaaga agctgcccaa ttgaacagaa tgtaccagtg atttccagca     3840
cactatctta cagcagcgtt gagaatgaaa caacaaatgg gggaaaacag atgtgtatta     3900
ttctacagtt acaccaaaga gtttgtcctt tcagcatcaa caagaatcat atgcatatct     3960
agtgacaaaa attcctctaa ttttacccta cttggtaaca gttctcttca acacatatat     4020
ttcacgtgct tgcatcgagt tccttgggcc gccacatcga cttctcgacg caaagcaagc     4080
cctcgttgcc cttggtgtag gtcattcgca cctcccactg cagggacttg gccatgcttt     4140
ccagttcgtt tattgtgtcc gcagtgtccc tcacaatcag tttgccttgg ggcctcagta     4200
cacgatcaac ctcggcaaaa actgccatca atttgcatct gtaaacaagc aacacagatt     4260
tagcatctgt aaacaccaca ggtttcattg caagaagcat aaagcatgca aacatgctac     4320
ttgtacatgt caaagaaaca tgtcaaactc aaacacatga aaatcattat tattgttttc     4380
ttgctgaact gatcacatta gttggtttca atttctgagt tccactagta atctatacca     4440
gaaggataga ataatgtcaa gaacaagaga tacaaacctc tttgtgagct ttgagaatag     4500
atggtccgcg tgcagaaggt cataagttct tgggtaagtg ctcaaagact cgcaccagtc     4560
atggtacata ccaaacaaac cacgctcgta aatgatgggc agtgtgtctg gtgaatcaat     4620
cggcacaata ttcatgaccc agaccttttg gtccctcaga gctgcagcaa aactgccatg     4680
caacgatgta aagcattagt aaaaatattg ggttttttaa accaaaacca agaaagataa     4740
ttcctccagc ttaactgaaa gaaagaaaga aaaaaactgc ttaatgactt atggtggaca     4800
agttgcctgt tatgttttat gatagctatg tgccagcttg gctaactggt agttatgtag     4860
tgtgatctga attaccaaaa aagagaagaa aaaaaaatca tgcccaagaa actgagaaag     4920
acacccattt acttaccctc catacacagc tctcatgtcc attacatttc tcactttgga     4980
ccagtcaatt cccatgccat tcacatacga tttacttaca acccttttcc agtgagcatt     5040
atctgcctcg aaatcttcat ttgcaggctt tccatagacc ccaaccttgg aaccatcaat     5100
ccagaaagga gtcttctcaa gcctttgtgg ccaaaactct ggccattttg accctcgaac     5160
tttcgagcca acaggcagtt tgtgcatgca tgcttccaaa ggtacattcc tgcaaatcaa     5220
aagattgtgt aagcaaagca gaggaagcac ttcgccgcat tgaaaatacg ttcttctcaa     5280
agaaacaaaa ccataccaag ctgcatctgc atcatcagat tccttgcaca atggtgggtt     5340
gttttcggat cttttctcat agcaaatgtt gtccattggt ttctgaaata tgaccatacc     5400
aacttgattt aacttatcct tagtcttgtt gaccatcttc cagcacatgg actttgtcaa     5460
agtggacatc gctgaaaaga ttaaggggtc atatgttatg atagaaataa aattcaattt     5520
tgcactgttg gtacatagca tctgttttga acaaatgcaa tccttcctta tccatgaaag     5580
aagttaaccc ctgatactta ggattattca gtactttcac tcatgaactg ctgaatttgt     5640
tctgccagta gttgctatac tagaaatgtt cagtgtacca aacataaatt tggtacgggt     5700
tccttattaa agatgggagg ctgtatggta tttcgacgta acaaatcaag ttagcagcta     5760
ccctacttat ggatatacac ttctcaaaat gaatatacat agttttgata ggtgacatta     5820
attaatataa gaacttcatg cagttagggt gaaactaaac taagcagtta cggaaatacc     5880
attccaaatc tcaacatcct ctgggagctt ttggtaaaca ggagtggcag accagacaaa     5940
gtaaccacca gggcgtaaca agcggttcaa ttccagcaaa agcatgccac ctaaaaggag     6000
tcagtaataa gattcagttc tatagcaaat caataaatga aaggaagaca tgtcaccaac     6060
aagacaaacc ttcaatgtgc caagggaccc tgcagcgagc gcaatgaatg acatcaaaga     6120
ctctgctggg gtatggaagt ctcttggtgc ccatcacagc tgatattgct ggaattcccc     6180
tttctaatgc aaattgtact tgagcttcat gctcatcttt cggagcaaaa gacatggtaa     6240
gcacatctct atcaaacatg tagcctccaa agctggcaac tccacaaccg acatctagaa     6300
tgacgcggct tcgtttgccc catgcaatat caggcagtgc ctgtgaatga cagtttaatc     6360
agcatatgat gaaagcaagt gtgataatat caagttcaaa gatgcaacat gaaactttca     6420
taatcatgga cagtactaag cttgcttgat agattaatgt atggatgaga ctaaaaaaaa     6480
ggaaagttgt atccatcaga acgagaggct gaaaacacat ggctggctgt gaaagcctga     6540
tgtcgtttag tctagcataa acaaactgtc ctcagcatgt agatttccat agggtggcat     6600
ttgacaaatt atgattgtgg actagcgaat caatcactga ttctcaaaag tgtgagacag     6660
atgagttcaa gtctaagggg tgactaatat gggatgctgg gatgatgatg atgatatata     6720
cctgctgaat agtatcaata tagtggaggg caccattctt gaactgagtc ccacccccag     6780
ggaacaggag gtagtcacct gatactttaa cccaattttg atgtcccttg tactctgcga     6840
gcctagtgtg aggaacattg ctgtaccata cctgcaaaaa gcagcacaag atggtaataa     6900
gtaaacagag atcttggtca gctaaagatg attcagtgtc gtacaattta gaatagacag     6960
aatcaccttg tccctgctcc ttggccactc aattgggcgt ttatatcctt ctgggagtgg     7020
aacaaggcag gtaggaggct cctcagggca atgcctctca cgatgttcat aatgtttagt     7080
agttcgaagc ttcttgatag ccttctcgtt gtcaaggcaa ggtatgtaat ctgtcgaggc     7140
actgctatta catagtttcc aggaatagct agtcgcatca cctgaagact ttgatgacgc     7200
ttggacttcc ttttcattct tggactctgc agcctgtgtg gggaatgaac cattctgggt     7260
atttgactcc ttcagaagct ctgattgggc cccatcagga aatacctcgt tggagtttga     7320
gctctgatcc ttctctccat tttcttccac cttctcttct atctgaggtt gctcctcctg     7380
agtggcatca ccttcaggct tctcttcttg atcatccttg ctctctccat caggtttttc     7440
atcaccactc tcatttgtga tttcatcatc tttcttctcc ccactcttct ccccgtcacc     7500
atcgttcttc atgtcatctg accgcccttc tgattttcca tttgcatcat caaacatatc     7560
cttggtctca gctttctctg tcggcacttc cggctccttc tcttcaggct tctcctctgg     7620
cttctcagtg aacttctctt ccatcgtggc atccttgtta ttcggctcct ccggcatcgt     7680
ggcatcattg ttgtcggtgt cctcaaattt ctcagaacct tcaccagcat tgtcctgtga     7740
ggccccaaaa ttgacaggcg caggctgctg cttcaccacc ggcttcttat tcgaggagat     7800
ctccagcggg aagacagtgg acgaggtcat catccacgcg ccgaccaggc agagcgccac     7860
aaagacgacg accgtggtgg tcgtgcagaa cgacgacgac gtcgaggacg gccggcggcc     7920
gtccatcttc ccacctcggc caaatgccat tagtgcctgg cgaacatgta ccagagcacc     7980
gaccttcacg cgatttatct ccaccaacta ctgctggacc aagaaccccc aaaaaaatcg     8040
cacctttgtc tgctttgtgc tgctacagcc gcgcggcacc tgaagcaaac cacaaaaaaa     8100
acttaaatcg ccgcggacat aaatcaaggt gctggatcta aagaacaaac gctggatcta     8160
ctcaagcaac aacggaagga agatccgcta ttggtgctag tattagcttc ttgtttccta     8220
gtactacagc ggctctttcc cagtataaga acacgggaaa acgcggagaa atcccccttc     8280
gtggccaaac atggaaagaa aattagtaaa gcgtgtgctt taaaaccccc tcgttctgtt     8340
ccttccgcgg agagctaccg catcttccaa ttgagctggt tctcagctgg gcgcaaaacg     8400
cgcactaatc aatgtccgat tccatccaca aagaaaaaaa agacgggaac agctaatcca     8460
gcagctcgct cgctagctag ctagctcatc ggcggaagga cggaaccagc tttgctggat     8520
ccaggacagc aagagtgtgc aaggagaaag aacggagcag caatgcggat tgcggaggcg     8580
gtggattggt acctcgccgg aaccgaccgg agtggtcgcg gtggccctcc gcgcggatct     8640
cgaagaggag cgaggaaggg gaaggcggat gcgcgtcctt gggttctctg ccaccgcact     8700
gggcctcgcc gcgttataaa ggcgggcggg cgggcgggca gcgcagtgtg agtggagtgc     8760
aatctgttgt gtagtgtgtg aagaggcgga agcggaagcg gaggagatgg gttcgcatta     8820
gacgaccgta cgtaattata cgctatacta gtacttgggt tagattactc gggagatctt     8880
ggccaaaatg tccggtctga gtgtttggta gttttatgga tttgcccttt taagatgttg     8940
gtatttctcc gggagcttag aaagaagaaa tggcgatgct ttaggccttg tttagatgcg     9000
aaaaaaattt ggatttcgct actgtggcat ttttatttgt ttgtagcaaa tattgtccaa     9060
acacggacta actaagattc atctcgcgat ttacagttaa actgtacaat tagtttttat     9120
tttcatttat atttaatgtt tcatggatgt gtcgaaagat acgatatgat agaaaatttt     9180
gaaaactttt tagttattga ggttaactaa acaatgcctt aattgagaat ttactcgagc     9240
aaaaagagtt aggtcagtct cagtggagag tttcatggtg ttgtttccaa gactgccata     9300
tcatgtgaaa tgaaatgaaa cttggttgaa acactcactc tcaatggaga gtttcatttt     9360
atagtttcat gggcatttaa tttcaatact catagagagt tgatatcgtg ccaactcatt     9420
tcttctctct cttcttaaat acacagtcat atcatcaaaa aaaatcctat gtagcaacat     9480
atttaatgca aataaaactc atatggtgga ctgtaggagt agcattaggc caagggcaca     9540
cacacggtca cggtgtgagt gcgacggtgc gagtgggccc gcggcggtag taagtgcgtg     9600
cgcgcccggc gcccccctcc gcggcgacga cgcagcggca gcgcgtcgtc cagtgcaccg     9660
tctgctgttc ggcgctgcgg gtcctccgcg ccacggcgca gtgaaccggg cgcgtgcatc     9720
ccgggagcgg cggcttggca ctcccctgct tgtcggtggc ggccgtcggc atcgctcggc     9780
cccggagcgt cacgaggctg ctgattggga gcgagagcga gtagtggggc tggttgggga     9840
caatcccatt cccacccggc ccaccaggct gggactggcc cactagtcac tagtgggtgg     9900
ctcatgggtg tgggtgggct ggctaatgcc gcctgcccaa caaccaaccc aacccctgtg     9960
gacgctggta ccggtagttg ccgcgccatg gtggactgct gccgcctgat gcctttgcct    10020
gccacgctcc acgagttgag gcgcaccaaa ctgtgctgtg ctcctgattt gtgctaatcg    10080
gccgacgcgt accattcttt ctttctttcg tctacgcgca gagaggccgg ttgactgttt    10140
cttcgttgga gggccatgtt gactcgtact aataataaaa ataataatac taggttgact    10200
ttttcaattc caacgcagca gtgcaaagct gcccacctat gagcacaggt ccttttttaa    10260
ctccgttttt gtacgtacac acgtactgtc cagcctgtgt ctaataatct taccaaaaac    10320
ctgtcatctc actatcaacc aatcaggctc tccgcctgtt cgtcgaggaa cagcagttgt    10380
tttccctact ccaacataga gtacactatg gacgcacatt accatgccag cttgagctta    10440
gcattgccca ccgttggata actgccatgc cattctcagg ccctgtttag ttcccatcta    10500
aaaatttttc atccattcca tcgaatcttt ggacacatgc atggaacatt aaatgtagat    10560
aaaaaaataa actaattaca cagtttagtt gagaatcgcg agacgaatct tttaagtcta    10620
gttactccat aattagcctt aagtgctaca gtaatccaca tatactaatg acagattaat    10680
tatgcttaat aaatttgtct tacagtttcc tgacgagcta tgtaatttgt ttttttatta    10740
gtttctaaaa acccctcccg acatccttcc gacatatccg atgtgacaac caaaaaattt    10800
tcatcttcaa tctaaacagg ccctcactct catcatctca tgccggggca gcaggtccgt    10860
cgtcaggtct gtcgtcccgt cccgtgccgt ctgaagcaac aggcgagaga aacgccgttc    10920
catcggtttg ccgagcgtgc agaggataga gctatactcg atccggagag gattgtgaaa    10980
cgaagcacgg ttaagcagtg ccgcgcacgt gctgctctgc tcctggatcc gatccagatc    11040
gactcggggc gtctcggcct cagcggcgat ggcaatcatc gcgcgcgctg ctggagctgg    11100
acgttttcgt cttgcattgc aggaggcgga acagaacgga gaaagccacg gcgcgctttg    11160
ccgacgccac gcgctgacac gagggacccg ttcagcggcc agcacgcagc ctaatcatgc    11220
ctgtcggggg gagctcatcc gttcctgaat ttgggtcatg ctccagtatc aggtattcag    11280
gtactagtac tcctgagcca tgtgctgcga caaaaaagcg aggctcctgt agtagagcct    11340
tgtttactta caaaattttt tacattctca gttatattaa atcttgtgac acatgcataa    11400
agcattaaat atacataaaa gaaataatta tttacacagt tacttataat ttgcgaaacg    11460
aatcttttaa gactggttag tttatgatta gataatattt attaaataca aatgaaagta    11520
atattattta tattttgcaa aaagtaaata agacctaggt agctaggcca acgtgagcat    11580
gtcggacccg gaccggttcg ttctacggcg cgtcccgcaa acctgcagcc aggtagtagt    11640
agtacaccgt gcacgggaga ggtgcgccat gcatgctcgg gcaaaagatc atagagaaag    11700
gtgcagcgtt tcagttgcac acctgaccga gtgacgcctc gccttgtttg gctttgttcc    11760
caaaattttt taaaattcct catcacatta aatctttgaa cgaatatatg gagcattaaa    11820
tataaataaa agaaataatt aatcatacaa tttgtctgta atttgcgaga cgaatctttt    11880
gagcctagtt agtttataat taaataatat ttgttaaata caaacgaaaa tgctacgtta    11940
gccaaaacta aaatttttct ccaaacgtga cccagcacct tccgatcaat catcactcag    12000
cgggtcacgt cagaagatca gatggacctt gccgtccggg cctgtctctc ggcctcctcc    12060
ccatctggaa cgaacagagg tccagtcctg tttcgagtcg agctgagtcg atcagatggg    12120
cctaaatagg ccgaagacgt aggcaaaggg cccgctgatt tatctgattc ttctaggacc    12180
gtgcatgcgc ggatgggcct aggtggaaac ccaacagatg tgaggcttca aagaggaaga    12240
agtccgttac acatggagag ttagtctata atgggataat atttaccaca aacaaataaa    12300
aatactacag tagcgaaatc caaaattttt cacatctaaa caaggcccta gatgttttgt    12360
cagtgccaga ccagagaaaa tctcgtcttc tgctgtcaat agctttgatg attcctggcg    12420
gcagaggtaa agcttgcctg ggccttgttt agttccgaaa agtgaaaagt tttcggtact    12480
gtagcacttt tgtttgttcg tgacaaatat catccaatta tggactaact agaattaaaa    12540
gattcgtctc gtgatctaca gctaaactgt gtaattagtt tttgttttcg tctatattta    12600
atgtttcatg catgtgccac aagattcgat gtgacggaga attttgaaaa ttttttggtt    12660
ttcagagtga actaaacaag gcccagatgt aattgaccat gccatcgagc gcgagttgac    12720
tagagtgagt cggccctgat ggttaagtag tgcagactgc caagtggaca accgtctatc    12780
aactttgcag agtggggcga atgcactgag gatgttggag aggggcaagc caaggtaaac    12840
ttgaggaaag atgcttgttg acactgtagt atgtgaacaa tcctgtttaa ttttgtgtcc    12900
tcgacg                                                               12906
<210>  88
<211>  1790
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  88
tctcatggtg tcccaagcac agcaagagcc agctctgcct cacagcagca gcaccgccaa       60
gcgcgcagcc gcgtcactca tggacgcccg cccggcccag cctctcctcc tccgcgcccc      120
gactcccagc attgacctcc ccgcgtccaa gccggacagg gccgccgcgg cggccggcaa      180
ggccgccgcc gcctccgtgt tcgacctgcg gcgggagccc aagatcccgg cgccattcgt      240
gtggccgcac gacgacgcgc ggccggcgtc ggcggcggag ctggacgtgc cgttggtgga      300
cgtgggcgtg ctgcgcaatg gcgaccgcgc ggggctgcgg cgcgctgcgg cgcaggtggc      360
cgcggcgtgc gcgacgcacg ggttcttcca ggtgtgcggg cacggcgtgg gcgcggacct      420
ggcgcgcgcg gcgctggacg gcgccagtga cttcttccgg ctgccgctgg cggagaagca      480
gcgcgcccgg cgcgtcccgg ggaccgtgtc cgggtacacg agcgcgcacg ccgaccggtt      540
cgcgtccaag ctcccctgga aggagaccct ctccttcggg ttccacgacg gcgccgcgtc      600
gcccgtcgtc gtcgactact tcgccggcac cctcgggcag gacttcgagg cagtggggcg      660
ggtgtaccag aggtactgcg aggagatgaa ggctctgtcg ctgacgatca tggagctcct      720
ggagctgagc ctgggcgtgg agcgcggcta ctaccgcgac ttcttcgagg acagccgctc      780
catcatgcgg tgcaactact acccgccgtg cccggagccg gagcgcacgc tgggcacggg      840
cccgcactgc gaccccaccg cgctgaccat cctcctccag gacgacgtcg gcgggctcga      900
ggtcctcgtc gacggcgact ggcgccccgt ccgccccgtc cccggcgcca tggtcatcaa      960
catcggcgac accttcatgg ctctgtccaa cgggcggtac aagagctgcc tgcaccgggc     1020
ggtggtgaac cagcggcagg agcggcggtc gctggccttc ttcctgtgcc cgcgcgagga     1080
ccgggtggtg cgcccgccgg ccagcggcgc cgtcggcgag gcgccccgcc gctacccgga     1140
cttcacctgg gccgacctca tgcgcttcac gcagcgccac taccgcgccg acacccgcac     1200
gctggacgcc ttcacacgct ggctctccca cggcccggcc caggacgcgc cagtggcggc     1260
ggcggcttcc acctagctag cggcgcggat ccgaccgagc ccattgacga cgccgtccct     1320
ttccgccgcc gccggggccc gcgcgggggt tcaccccacg tgcgcgccca ggtgggcgag     1380
gtggcggcct cgtggcccgc gggccccgcg ccgccttccc atttttgggc gctgccgccc     1440
cgcgcgcatg ccggatgcgt gcgtccacgg cctactgctg ctactagtgt acatatacaa     1500
acatacatat atacgtagta taaatatata agcaagcggc ccggtgcccc ttttcgtttt     1560
cttgttttgt cgatcacaat ctctggattc gatggatgga taaatgtttg tacgcatgca     1620
tgtagatggg ctcatgaaat ttcagaatct ggaacggacg aggagctcac gtgcctcttc     1680
cgtgtctggt agcggtagct gcgtgccaaa tgtctggtgg gcccaaagaa attctagtgc     1740
cacccgtccg gatccggcat ccgaaagttc ccgacggttc gacacccgaa                1790
<210>  89
<211>  1272
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  89
atggtgtccc aagcacagca agagccagct ctgcctcaca gcagcagcac cgccaagcgc       60
gcagccgcgt cactcatgga cgcccgcccg gcccagcctc tcctcctccg cgccccgact      120
cccagcattg acctccccgc gtccaagccg gacagggccg ccgcggcggc cggcaaggcc      180
gccgccgcct ccgtgttcga cctgcggcgg gagcccaaga tcccggcgcc attcgtgtgg      240
ccgcacgacg acgcgcggcc ggcgtcggcg gcggagctgg acgtgccgtt ggtggacgtg      300
ggcgtgctgc gcaatggcga ccgcgcgggg ctgcggcgcg ctgcggcgca ggtggccgcg      360
gcgtgcgcga cgcacgggtt cttccaggtg tgcgggcacg gcgtgggcgc ggacctggcg      420
cgcgcggcgc tggacggcgc cagtgacttc ttccggctgc cgctggcgga gaagcagcgc      480
gcccggcgcg tcccggggac cgtgtccggg tacacgagcg cgcacgccga ccggttcgcg      540
tccaagctcc cctggaagga gaccctctcc ttcgggttcc acgacggcgc cgcgtcgccc      600
gtcgtcgtcg actacttcgc cggcaccctc gggcaggact tcgaggcagt ggggcgggtg      660
taccagaggt actgcgagga gatgaaggct ctgtcgctga cgatcatgga gctcctggag      720
ctgagcctgg gcgtggagcg cggctactac cgcgacttct tcgaggacag ccgctccatc      780
atgcggtgca actactaccc gccgtgcccg gagccggagc gcacgctggg cacgggcccg      840
cactgcgacc ccaccgcgct gaccatcctc ctccaggacg acgtcggcgg gctcgaggtc      900
ctcgtcgacg gcgactggcg ccccgtccgc cccgtccccg gcgccatggt catcaacatc      960
ggcgacacct tcatggctct gtccaacggg cggtacaaga gctgcctgca ccgggcggtg     1020
gtgaaccagc ggcaggagcg gcggtcgctg gccttcttcc tgtgcccgcg cgaggaccgg     1080
gtggtgcgcc cgccggccag cggcgccgtc ggcgaggcgc cccgccgcta cccggacttc     1140
acctgggccg acctcatgcg cttcacgcag cgccactacc gcgccgacac ccgcacgctg     1200
gacgccttca cacgctggct ctcccacggc ccggcccagg acgcgccagt ggcggcggcg     1260
gcttccacct ag                                                         1272
<210>  90
<211>  423
<212>  ПРТ
<213>  Setaria italica
<400>  90
Met Val Ser Gln Ala Gln Gln Glu Pro Ala Leu Pro His Ser Ser Ser
1. 5                   10                  15
Thr Ala Lys Arg Ala Ala Ala Ser Leu Met Asp Ala Arg Pro Ala Gln
20                  25                  30
Pro Leu Leu Leu Arg Ala Pro Thr Pro Ser Ile Asp Leu Pro Ala Ser
35                  40                  45
Lys Pro Asp Arg Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Ala Ala Ala Ala Ser
50                  55                  60
Val Phe Asp Leu Arg Arg Glu Pro Lys Ile Pro Ala Pro Phe Val Trp
65                  70                  75                  80
Pro His Asp Asp Ala Arg Pro Ala Ser Ala Ala Glu Leu Asp Val Pro
85                  90                  95
Leu Val Asp Val Gly Val Leu Arg Asn Gly Asp Arg Ala Gly Leu Arg
100                 105                 110
Arg Ala Ala Ala Gln Val Ala Ala Ala Cys Ala Thr His Gly Phe Phe
115                 120                 125
Gln Val Cys Gly His Gly Val Gly Ala Asp Leu Ala Arg Ala Ala Leu
130                 135                 140
Asp Gly Ala Ser Asp Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala Glu Lys Gln Arg
145                 150                 155                 160
Ala Arg Arg Val Pro Gly Thr Val Ser Gly Tyr Thr Ser Ala His Ala
165                 170                 175
Asp Arg Phe Ala Ser Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Gly
180                 185                 190
Phe His Asp Gly Ala Ala Ser Pro Val Val Val Asp Tyr Phe Ala Gly
195                 200                 205
Thr Leu Gly Gln Asp Phe Glu Ala Val Gly Arg Val Tyr Gln Arg Tyr
210                 215                 220
Cys Glu Glu Met Lys Ala Leu Ser Leu Thr Ile Met Glu Leu Leu Glu
225                 230                 235                 240
Leu Ser Leu Gly Val Glu Arg Gly Tyr Tyr Arg Asp Phe Phe Glu Asp
245                 250                 255
Ser Arg Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Pro Glu Pro
260                 265                 270
Glu Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro Thr Ala Leu Thr
275                 280                 285
Ile Leu Leu Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Glu Val Leu Val Asp Gly
290                 295                 300
Asp Trp Arg Pro Val Arg Pro Val Pro Gly Ala Met Val Ile Asn Ile
305                 310                 315                 320
Gly Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Cys Leu
325                 330                 335
His Arg Ala Val Val Asn Gln Arg Gln Glu Arg Arg Ser Leu Ala Phe
340                 345                 350
Phe Leu Cys Pro Arg Glu Asp Arg Val Val Arg Pro Pro Ala Ser Gly
355                 360                 365
Ala Val Gly Glu Ala Pro Arg Arg Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Ala Asp
370                 375                 380
Leu Met Arg Phe Thr Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Thr Arg Thr Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ala Phe Thr Arg Trp Leu Ser His Gly Pro Ala Gln Asp Ala Pro
405                 410                 415
Val Ala Ala Ala Ala Ser Thr
420
<210>  91
<211>  2888
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  91
tctcatggtg tcccaagcac agcaagagcc agctctgcct cacagcagca gcaccgccaa       60
gcgcgcagcc gcgtcactca tggacgcccg cccggcccag cctctcctcc tccgcgcccc      120
gactcccagc attgacctcc ccgcgtccaa gccggacagg gccgccgcgg cggccggcaa      180
ggccgccgcc gcctccgtgt tcgacctgcg gcgggagccc aagatcccgg cgccattcgt      240
gtggccgcac gacgacgcgc ggccggcgtc ggcggcggag ctggacgtgc cgttggtgga      300
cgtgggcgtg ctgcgcaatg gcgaccgcgc ggggctgcgg cgcgctgcgg cgcaggtggc      360
cgcggcgtgc gcgacgcacg ggttcttcca ggtgtgcggg cacggcgtgg gcgcggacct      420
ggcgcgcgcg gcgctggacg gcgccagtga cttcttccgg ctgccgctgg cggagaagca      480
gcgcgcccgg cgcgtcccgg ggaccgtgtc cgggtacacg agcgcgcacg ccgaccggtt      540
cgcgtccaag ctcccctgga aggagaccct ctccttcggg ttccacgacg gcgccgcgtc      600
gcccgtcgtc gtcgactact tcgccggcac cctcgggcag gacttcgagg cagtggggta      660
agtatgtagg aatgaacttg gcacgcattg catccacatg gcgtgctgat cgaacgagct      720
gagccaaccg gcatgcacac atggcgtggc aggcgggtgt accagaggta ctgcgaggag      780
atgaaggctc tgtcgctgac gatcatggag ctcctggagc tgagcctggg cgtggagcgc      840
ggctactacc gcgacttctt cgaggacagc cgctccatca tgcggtgcaa ctactacccg      900
ccgtgcccgg agccggagcg cacgctgggc acgggcccgc actgcgaccc caccgcgctg      960
accatcctcc tccaggacga cgtcggcggg ctcgaggtcc tcgtcgacgg cgactggcgc     1020
cccgtccgcc ccgtccccgg cgccatggtc atcaacatcg gcgacacctt catggtacgg     1080
ccgccgctaa tccatccttt tgttgctctt atctcctctg gcgagtgcga gtaacgaaag     1140
cgctagctcc cctgctcctt gtcctgctct gtttcccaag tcctaatgga gctaaccggg     1200
cagactgcaa cacgcacgcg taggcatgtc acgtagccac cacttgcact gtgctgcgca     1260
gcgacgacgc aacgcggacg tgcgttcgag tcggttccat ctcggcgccg ctacacgcgg     1320
ccgcggctcc tagcctccta gggctccctg atccctatcc ccgagccctt ccgcgggaaa     1380
agttcgttgg cgacggcaga ggagagccga cgggtccgtg ccgttggagc gtggcggcag     1440
gagaggccgg gagggtgttt tgttgcgttg cgcggcggcg cggaggatgc gatggcgcgg     1500
gcgggcggcg ctttcggcgg tggcccccgc gacccacgtg cgcgcgcggt ctcgtcgcct     1560
tccctgtttt ggtgccacct ctctgtgtcc gggaatgggt tggcttagcg gcgaccgaga     1620
ccgggcggtg gtctggcctg ctcccggcgc ccatcccgcc tggtctctca tcctgctcct     1680
cctatgcgcg agggggcctg tagcggctgg agtacaagca gattggttgg gttgggttgc     1740
tgctgcttgg ctgttgcccg cccgctttct agccgtttcc gctcgccatc cggcacgcgg     1800
cgcccacgcc ggggctccag ctcggcccct ttggccgtgt gggtggcagg cacccctgca     1860
tcgtctcgtg cgtccggttt ccgcgcctgg ccccccgcct tgaggtttcc ctgtgctttt     1920
gacaagactt tcgtagatat atgtgtgtgt atgtgtgtgt gtgcgtgcgc gcgtgtgtgt     1980
atatatatat ataaataaat aacatctgtg aatgatggat tacacgtgta gctgaccggc     2040
tgattgtgtt cgcgtgtgtg tcttcgatgc attgcaggct ctgtccaacg ggcggtacaa     2100
gagctgcctg caccgggcgg tggtgaacca gcggcaggag cggcggtcgc tggccttctt     2160
cctgtgcccg cgcgaggacc gggtggtgcg cccgccggcc agcggcgccg tcggcgaggc     2220
gccccgccgc tacccggact tcacctgggc cgacctcatg cgcttcacgc agcgccacta     2280
ccgcgccgac acccgcacgc tggacgcctt cacacgctgg ctctcccacg gcccggccca     2340
ggacgcgcca gtggcggcgg cggcttccac ctagctagcg gcgcggatcc gaccgagccc     2400
attgacgacg ccgtcccttt ccgccgccgc cggggcccgc gcgggggttc accccacgtg     2460
cgcgcccagg tgggcgaggt ggcggcctcg tggcccgcgg gccccgcgcc gccttcccat     2520
ttttgggcgc tgccgccccg cgcgcatgcc ggatgcgtgc gtccacggcc tactgctgct     2580
actagtgtac atatacaaac atacatatat acgtagtata aatatataag caagcggccc     2640
ggtgcccctt ttcgttttct tgttttgtcg atcacaatct ctggattcga tggatggata     2700
aatgtttgta cgcatgcatg tagatgggct catgaaattt cagaatctgg aacggacgag     2760
gagctcacgt gcctcttccg tgtctggtag cggtagctgc gtgccaaatg tctggtgggc     2820
ccaaagaaat tctagtgcca cccgtccgga tccggcatcc gaaagttccc gacggttcga     2880
cacccgaa                                                              2888
<210>  92
<211>  1567
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  92
tgcccagaca gctcgccctg cacacacaca cacactcaca ctcacacacg ctctcaactc       60
actcccgctc aacacagcgc tcacttctca tctccaatct catggtggcc gagcacccca      120
cgccaccaca gccgcaccaa ccaccgccca tggactccac cgccggctct ggcattgccg      180
ccccggcggc ggcggcggtg tgcgacctga ggatggagcc caagatcccg gagccattcg      240
tgtggccgaa cggcgacgcg aggccggcgt cggcggcgga gctggacatg cccgtggtcg      300
acgtgggcgt gctccgcgac ggcgacgccg aggggctgcg ccgcgccgcg gcgcaggtgg      360
ccgccgcgtg cgccacgcac gggttcttcc aggtgtccga gcacggcgtc gacgccgctc      420
tggcgcgcgc cgcgctcgac ggcgccagcg acttcttccg cctcccgctc gccgagaagc      480
gccgcgcgcg ccgcgtcccg ggcaccgtgt ccggctacac cagcgcccac gccgaccgct      540
tcgcctccaa gctcccatgg aaggagaccc tctccttcgg cttccacgac cgcgccgccg      600
cccccgtcgt cgccgactac ttctccagca ccctcggccc cgacttcgcg ccaatgggga      660
gggtgtacca gaagtactgc gaggagatga aggagctgtc gctgacgatc atggaactcc      720
tggagctgag cctgggcgtg gagcgaggct actacaggga gttcttcgcg gacagcagct      780
caatcatgcg gtgcaactac tacccgccat gcccggagcc ggagcggacg ctcggcacgg      840
gcccgcactg cgaccccacc gccctcacca tcctcctcca ggacgacgtc ggcggcctcg      900
aggtcctcgt cgacggcgaa tggcgccccg tcagccccgt ccccggcgcc atggtcatca      960
acatcggcga caccttcatg gcgctgtcga acgggaggta taagagctgc ctgcacaggg     1020
cggtggtgaa ccagcggcgg gagcggcggt cgctggcgtt cttcctgtgc ccgcgggagg     1080
acagggtggt gcggccgccg ccgagcgccg ccacgccgca gcactacccg gacttcacct     1140
gggccgacct catgcgcttc acgcagcgcc actaccgcgc cgacacccgc acgctcgacg     1200
ccttcacgcg ctggctcgcg ccgccggccg ccgacgccgc cgcgacggcg caggtcgagg     1260
cggccagctg atcgccgaac ggaacgaaac ggaacgaaca gaagccgatt tttggcgggg     1320
cccacgccca cgtgaggccc cacgtggaca gtgggcccgg gcggaggtgg cacccacgtg     1380
gaccgcgggc cccgcgccgc cttccaattt tggaccctac cgctgtacat attcatatat     1440
tgcaagaaga agcaaaacgt acgtgtgggt tgggttgggc ttctctctat tactaaaaaa     1500
aatataatgg aacgacggat gaatggatgc ttatttattt atctaaattg aattcgaatt     1560
cggctca                                                               1567
<210>  93
<211>  1170
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  93
atggtggccg agcaccccac gccaccacag ccgcaccaac caccgcccat ggactccacc       60
gccggctctg gcattgccgc cccggcggcg gcggcggtgt gcgacctgag gatggagccc      120
aagatcccgg agccattcgt gtggccgaac ggcgacgcga ggccggcgtc ggcggcggag      180
ctggacatgc ccgtggtcga cgtgggcgtg ctccgcgacg gcgacgccga ggggctgcgc      240
cgcgccgcgg cgcaggtggc cgccgcgtgc gccacgcacg ggttcttcca ggtgtccgag      300
cacggcgtcg acgccgctct ggcgcgcgcc gcgctcgacg gcgccagcga cttcttccgc      360
ctcccgctcg ccgagaagcg ccgcgcgcgc cgcgtcccgg gcaccgtgtc cggctacacc      420
agcgcccacg ccgaccgctt cgcctccaag ctcccatgga aggagaccct ctccttcggc      480
ttccacgacc gcgccgccgc ccccgtcgtc gccgactact tctccagcac cctcggcccc      540
gacttcgcgc caatggggag ggtgtaccag aagtactgcg aggagatgaa ggagctgtcg      600
ctgacgatca tggaactcct ggagctgagc ctgggcgtgg agcgaggcta ctacagggag      660
ttcttcgcgg acagcagctc aatcatgcgg tgcaactact acccgccatg cccggagccg      720
gagcggacgc tcggcacggg cccgcactgc gaccccaccg ccctcaccat cctcctccag      780
gacgacgtcg gcggcctcga ggtcctcgtc gacggcgaat ggcgccccgt cagccccgtc      840
cccggcgcca tggtcatcaa catcggcgac accttcatgg cgctgtcgaa cgggaggtat      900
aagagctgcc tgcacagggc ggtggtgaac cagcggcggg agcggcggtc gctggcgttc      960
ttcctgtgcc cgcgggagga cagggtggtg cggccgccgc cgagcgccgc cacgccgcag     1020
cactacccgg acttcacctg ggccgacctc atgcgcttca cgcagcgcca ctaccgcgcc     1080
gacacccgca cgctcgacgc cttcacgcgc tggctcgcgc cgccggccgc cgacgccgcc     1140
gcgacggcgc aggtcgaggc ggccagctga                                      1170
<210>  94
<211>  389
<212>  ПРТ
<213>  Oryza sativa
<400>  94
Met Val Ala Glu His Pro Thr Pro Pro Gln Pro His Gln Pro Pro Pro
1. 5                   10                  15
Met Asp Ser Thr Ala Gly Ser Gly Ile Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala
20                  25                  30
Val Cys Asp Leu Arg Met Glu Pro Lys Ile Pro Glu Pro Phe Val Trp
35                  40                  45
Pro Asn Gly Asp Ala Arg Pro Ala Ser Ala Ala Glu Leu Asp Met Pro
50                  55                  60
Val Val Asp Val Gly Val Leu Arg Asp Gly Asp Ala Glu Gly Leu Arg
65                  70                  75                  80
Arg Ala Ala Ala Gln Val Ala Ala Ala Cys Ala Thr His Gly Phe Phe
85                  90                  95
Gln Val Ser Glu His Gly Val Asp Ala Ala Leu Ala Arg Ala Ala Leu
100                 105                 110
Asp Gly Ala Ser Asp Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala Glu Lys Arg Arg
115                 120                 125
Ala Arg Arg Val Pro Gly Thr Val Ser Gly Tyr Thr Ser Ala His Ala
130                 135                 140
Asp Arg Phe Ala Ser Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Gly
145                 150                 155                 160
Phe His Asp Arg Ala Ala Ala Pro Val Val Ala Asp Tyr Phe Ser Ser
165                 170                 175
Thr Leu Gly Pro Asp Phe Ala Pro Met Gly Arg Val Tyr Gln Lys Tyr
180                 185                 190
Cys Glu Glu Met Lys Glu Leu Ser Leu Thr Ile Met Glu Leu Leu Glu
195                 200                 205
Leu Ser Leu Gly Val Glu Arg Gly Tyr Tyr Arg Glu Phe Phe Ala Asp
210                 215                 220
Ser Ser Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Pro Glu Pro
225                 230                 235                 240
Glu Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro Thr Ala Leu Thr
245                 250                 255
Ile Leu Leu Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Glu Val Leu Val Asp Gly
260                 265                 270
Glu Trp Arg Pro Val Ser Pro Val Pro Gly Ala Met Val Ile Asn Ile
275                 280                 285
Gly Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Cys Leu
290                 295                 300
His Arg Ala Val Val Asn Gln Arg Arg Glu Arg Arg Ser Leu Ala Phe
305                 310                 315                 320
Phe Leu Cys Pro Arg Glu Asp Arg Val Val Arg Pro Pro Pro Ser Ala
325                 330                 335
Ala Thr Pro Gln His Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Ala Asp Leu Met Arg
340                 345                 350
Phe Thr Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Thr Arg Thr Leu Asp Ala Phe
355                 360                 365
Thr Arg Trp Leu Ala Pro Pro Ala Ala Asp Ala Ala Ala Thr Ala Gln
370                 375                 380
Val Glu Ala Ala Ser
385
<210>  95
<211>  3140
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  95
tgcccagaca gctcgccctg cacacacaca cacactcaca ctcacacacg ctctcaactc       60
actcccgctc aacacagcgc tcacttctca tctccaatct catggtggcc gagcacccca      120
cgccaccaca gccgcaccaa ccaccgccca tggactccac cgccggctct ggcattgccg      180
ccccggcggc ggcggcggtg tgcgacctga ggatggagcc caagatcccg gagccattcg      240
tgtggccgaa cggcgacgcg aggccggcgt cggcggcgga gctggacatg cccgtggtcg      300
acgtgggcgt gctccgcgac ggcgacgccg aggggctgcg ccgcgccgcg gcgcaggtgg      360
ccgccgcgtg cgccacgcac gggttcttcc aggtgtccga gcacggcgtc gacgccgctc      420
tggcgcgcgc cgcgctcgac ggcgccagcg acttcttccg cctcccgctc gccgagaagc      480
gccgcgcgcg ccgcgtcccg ggcaccgtgt ccggctacac cagcgcccac gccgaccgct      540
tcgcctccaa gctcccatgg aaggagaccc tctccttcgg cttccacgac cgcgccgccg      600
cccccgtcgt cgccgactac ttctccagca ccctcggccc cgacttcgcg ccaatggggt      660
aattaaaacg atggtggacg acattgcatt tcaaattcaa aacaaattca aaacacaccg      720
accgagatta tgctgaattc aaacgcgttt gtgcgcgcag gagggtgtac cagaagtact      780
gcgaggagat gaaggagctg tcgctgacga tcatggaact cctggagctg agcctgggcg      840
tggagcgagg ctactacagg gagttcttcg cggacagcag ctcaatcatg cggtgcaact      900
actacccgcc atgcccggag ccggagcgga cgctcggcac gggcccgcac tgcgacccca      960
ccgccctcac catcctcctc caggacgacg tcggcggcct cgaggtcctc gtcgacggcg     1020
aatggcgccc cgtcagcccc gtccccggcg ccatggtcat caacatcggc gacaccttca     1080
tggtaaacca tctcctattc tcctctcctc tgttctcctc tgcttcgaag caacagaaca     1140
agtaattcaa gctttttttt ctctctcgcg cgaaattgac gagaaaaata agatcgtggt     1200
aggggcgggg ctttcagctg aaagcgggaa gaaaccgacc tgacgtgatt tctctgttcc     1260
aatcacaaac aatggaatgc cccactcctc catgtgttat gatttatctc acatcttata     1320
gttaatagga gtaagtaaca agctactttt ttcatattat agttcgtttg attttttttt     1380
tttaaagttt ttttagtttt atccaaattt attgaaaaac ttagcaacgt ttataatacc     1440
aaattagtct catttagttt aatattgtat atattttgat aatatattta tgttatatta     1500
aaaatattac tatatttttc tataaacatt attaaaagcc atttataata taaaatggaa     1560
ggagtaatta atatggatct cccccgacat gagaatattt tccgatggtg tgacgacgcc     1620
atgtaagctt cggtgggcct ggacggccag aggtgccaac agccacgtcc aacaacccct     1680
gggtcccccc ctaacactcc aaacagtagt gagtagtgtc tcgtcgcgtt ttagtatttg     1740
atgacaaaca aagtgtgagt tgagttagcc accaccaact tgcacacgag cacatacatt     1800
tgtgtccatt ctcgccagtc acttccatct ctagtcctaa ctcctatcta gcgatgtaag     1860
cggataattt catcatccgt atataaacct gtttgttata gttaatttcc tatataatac     1920
tataacagta tacattttaa aagaaaacaa aattaggata aacaggccct gctcctatcc     1980
atccatggca cttggaagga ccagactcgg tcatgccatg ccaagccaag atatgggtta     2040
tggaagagta gagaagagga gagatgagag ataagcatgc gttctcctcc tcgttggatg     2100
tgtattttgg agggatttgt gtagtagtag cagcggcgcc gcggggacgg atgcggatgg     2160
tggcgctttc ggtggcgttt tcccgggggg gttttggttt ggcgcttggg ggggatggca     2220
tggcgcggcg tgcggctgca cgccacacac acgcgcgcgc acgcacgtac gtcgtcgtcg     2280
ccgcgggcgg acggtagctt agggtggtgt gttccgcgcg cgggcgcgga ttgttccatg     2340
ccgatcgatt tggcgccacc ctcgccgcgg ctcttgtcgc gtcgtgcgcc tctctcgcgc     2400
ggtttgtcct tgtcgcgttg ctcagccggc gacgggggca cggacattgg cgatgtagcc     2460
ctgcacgtgt cggcctctcc gttgatgaat gatgatgtat gtatgtattt ttttttgtct     2520
gaaggaattt gtggggaatt gttgtgtgtg caggcgctgt cgaacgggag gtataagagc     2580
tgcctgcaca gggcggtggt gaaccagcgg cgggagcggc ggtcgctggc gttcttcctg     2640
tgcccgcggg aggacagggt ggtgcggccg ccgccgagcg ccgccacgcc gcagcactac     2700
ccggacttca cctgggccga cctcatgcgc ttcacgcagc gccactaccg cgccgacacc     2760
cgcacgctcg acgccttcac gcgctggctc gcgccgccgg ccgccgacgc cgccgcgacg     2820
gcgcaggtcg aggcggccag ctgatcgccg aacggaacga aacggaacga acagaagccg     2880
atttttggcg gggcccacgc ccacgtgagg ccccacgtgg acagtgggcc cgggcggagg     2940
tggcacccac gtggaccgcg ggccccgcgc cgccttccaa ttttggaccc taccgctgta     3000
catattcata tattgcaaga agaagcaaaa cgtacgtgtg ggttgggttg ggcttctctc     3060
tattactaaa aaaaatataa tggaacgacg gatgaatgga tgcttattta tttatctaaa     3120
ttgaattcga attcggctca                                                 3140
<210>  96
<211>  1170
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  96
atggacacca gccctgcaac tcccctgctc ctccagcctc ctgctcccag cattgacccg       60
ttcgccgcca aggcggccgt caacaagggc ggcggcgcgg caaccgcggt gtacgacctc      120
cggagggagc cgaagatccc cgccccgttc gtgtggccgc acgccgaggt gcgccccacc      180
acggcccagg agctggccgt gccggtggtg gacgtgggcg tgctgcgcaa tggcgacgcc      240
gcggggctcc gccgcgccgt ggcgcaggtg gccgcggcgt gcgccacgca cgggttcttc      300
caggtgtccg ggcacggcgt ggacgaggcc ctggcgcgcg cggcgctgga cggcgcgagc      360
ggcttcttcc ggctgccgct ggccgagaag cagcgcgcgc ggcgcgtccc ggggaccgtg      420
tccgggtaca cgagcgcgca cgccgaccgg ttcgcctcca agctcccctg gaaggagacc      480
ctctccttcg gcttccacga ccgcgccggc gccgcgcccg tcgtggtgga ctacttcacc      540
agcaccctcg ggccggacta cgagccaatg gggagggtgt accaggagta ctgcgggaag      600
atgaaggagc tgtcgctgag gatcatggag ctgctggagc tgagccaggg cgtggagaag      660
cgcgggtact accgggagtt cttcgcggac agcagctcca tcatgcggtg caactactac      720
ccgccgtgcc cggagccgga gcgcacgctg ggcacgggcc cgcactgcga ccccacggcg      780
ctcaccatcc tactgcagga cgacgtgggc gggctggagg tcctcgtcga cggcgactgg      840
cgccccgtcc gccccgtccc cggcgccatg gtcatcaaca tcggcgacac cttcatggcg      900
ctgtcgaacg ggcggtacaa gagctgcctg caccgcgcgg tggtgaaccg gcggcaggag      960
cggcggtcgc tggccttctt cctgtgcccg cgcgaggacc gcgtggtgcg gccgccgccg     1020
ggcctgagga gcccgcggcg gtacccggac ttcacctggg ctgacctcat gcgcttcacg     1080
cagcgccact accgcgccga cacgcgcacc ctcgacgcct tcacccagtg gttctcctcc     1140
tcctcctcct cggcccagga ggcggcctga                                      1170
<210>  97
<211>  389
<212>  ПРТ
<213>  Triticum aestivum
<400>  97
Met Asp Thr Ser Pro Ala Thr Pro Leu Leu Leu Gln Pro Pro Ala Pro
1. 5                   10                  15
Ser Ile Asp Pro Phe Ala Ala Lys Ala Ala Val Asn Lys Gly Gly Gly
20                  25                  30
Ala Ala Thr Ala Val Tyr Asp Leu Arg Arg Glu Pro Lys Ile Pro Ala
35                  40                  45
Pro Phe Val Trp Pro His Ala Glu Val Arg Pro Thr Thr Ala Gln Glu
50                  55                  60
Leu Ala Val Pro Val Val Asp Val Gly Val Leu Arg Asn Gly Asp Ala
65                  70                  75                  80
Ala Gly Leu Arg Arg Ala Val Ala Gln Val Ala Ala Ala Cys Ala Thr
85                  90                  95
His Gly Phe Phe Gln Val Ser Gly His Gly Val Asp Glu Ala Leu Ala
100                 105                 110
Arg Ala Ala Leu Asp Gly Ala Ser Gly Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala
115                 120                 125
Glu Lys Gln Arg Ala Arg Arg Val Pro Gly Thr Val Ser Gly Tyr Thr
130                 135                 140
Ser Ala His Ala Asp Arg Phe Ala Ser Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr
145                 150                 155                 160
Leu Ser Phe Gly Phe His Asp Arg Ala Gly Ala Ala Pro Val Val Val
165                 170                 175
Asp Tyr Phe Thr Ser Thr Leu Gly Pro Asp Tyr Glu Pro Met Gly Arg
180                 185                 190
Val Tyr Gln Glu Tyr Cys Gly Lys Met Lys Glu Leu Ser Leu Arg Ile
195                 200                 205
Met Glu Leu Leu Glu Leu Ser Gln Gly Val Glu Lys Arg Gly Tyr Tyr
210                 215                 220
Arg Glu Phe Phe Ala Asp Ser Ser Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr
225                 230                 235                 240
Pro Pro Cys Pro Glu Pro Glu Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys
245                 250                 255
Asp Pro Thr Ala Leu Thr Ile Leu Leu Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu
260                 265                 270
Glu Val Leu Val Asp Gly Asp Trp Arg Pro Val Arg Pro Val Pro Gly
275                 280                 285
Ala Met Val Ile Asn Ile Gly Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly
290                 295                 300
Arg Tyr Lys Ser Cys Leu His Arg Ala Val Val Asn Arg Arg Gln Glu
305                 310                 315                 320
Arg Arg Ser Leu Ala Phe Phe Leu Cys Pro Arg Glu Asp Arg Val Val
325                 330                 335
Arg Pro Pro Pro Gly Leu Arg Ser Pro Arg Arg Tyr Pro Asp Phe Thr
340                 345                 350
Trp Ala Asp Leu Met Arg Phe Thr Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Thr
355                 360                 365
Arg Thr Leu Asp Ala Phe Thr Gln Trp Phe Ser Ser Ser Ser Ser Ser
370                 375                 380
Ala Gln Glu Ala Ala
385
<210>  98
<211>  3050
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  98
ctcatggtgc tccagaccgc tcagcaagaa ccatccctga cgcgtccgcc tcactgcagc       60
gtcgccagcg cgcgctcgcc ggcggccatg gacaccagcc ctgcaactcc cctgctcctc      120
cagcctcctg ctcccagcat tgacccgttc gccgccaagg cggccgtcaa caagggcggc      180
ggcgcggcaa ccgcggtgta cgacctccgg agggagccga agatccccgc cccgttcgtg      240
tggccgcacg ccgaggtgcg ccccaccacg gcccaggagc tggccgtgcc ggtggtggac      300
gtgggcgtgc tgcgcaatgg cgacgccgcg gggctccgcc gcgccgtggc gcaggtggcc      360
gcggcgtgcg ccacgcacgg gttcttccag gtgtccgggc acggcgtgga cgaggccctg      420
gcgcgcgcgg cgctggacgg cgcgagcggc ttcttccggc tgccgctggc cgagaagcag      480
cgcgcgcggc gcgtcccggg gaccgtgtcc gggtacacga gcgcgcacgc cgaccggttc      540
gcctccaagc tcccctggaa ggagaccctc tccttcggct tccacgaccg cgccggcgcc      600
gcgcccgtcg tggtggacta cttcaccagc accctcgggc cggactacga gccaatgggg      660
taatatatcc acccgcccac acccctatcc ggccagcacg aatccatccc cgccactgca      720
tttttttcct tttgtttccg cgcgaccgta cgttcgatcg gcgcccacgt acgtacgtgc      780
gtacgcagta gcagtacttg aagccgccgt actacgtgct gagtagtgac aactgaacac      840
gtgcaggagg gtgtaccagg agtactgcgg gaagatgaag gagctgtcgc tgaggatcat      900
ggagctgctg gagctgagcc agggcgtgga gaagcgcggg tactaccggg agttcttcgc      960
ggacagcagc tccatcatgc ggtgcaacta ctacccgccg tgcccggagc cggagcgcac     1020
gctgggcacg ggcccgcact gcgaccccac ggcgctcacc atcctactgc aggacgacgt     1080
gggcgggctg gaggtcctcg tcgacggcga ctggcgcccc gtccgccccg tccccggcgc     1140
catggtcatc aacatcggcg acaccttcat ggtaattact cctctctcag cgttgctttc     1200
gctgattaat tgcagaaaca gtagtcaact acccatgctc tgttccgctg tgctctgctt     1260
cccaacgagc gaaccggccc ataaaaactg ccttgctgtc ttggaaccaa gaggaaaggg     1320
accgtgggag cctaccgaca cgacgtgatt gcactctgct tcctaacaag cgagccgccg     1380
gtagggctat caccgtaagg gctcctttga ttcaaaggaa tttcttagga tttctgaagg     1440
attgaaatcc ttaggatttt ttcctatgtt ggtacttcga ttcataggat tgaatcccat     1500
aggatttttt tcctatgaaa tcttctgtac tacatttcat aggaaatcta acatccactc     1560
caaccttttt ttatatttcc tttgtttttc atgtgccatc aaacactcct tgttaatcct     1620
ataggattca agtgggcatg ccactccaat cctatacttt tcccattcct acgttttcaa     1680
aatcctacga atcaaagagg ccctaaagct gctgacatga cgtgattttt tttttctttt     1740
ctttctttct ttctcagctc caatcaacgc tggttattag atcattagag tggacaggtt     1800
gaattaacat gcagtagtta gtagttagca gccacaaacg ggtcccgttc tctgaagtct     1860
gaactgacat aagtcctgat catcgaccat tctttgcttc ctaggacgat gcctgttgga     1920
acttgcgtcc aatgcccgtt agggagtggt aattgtcatc acttttagac tcgtcgattc     1980
cactgatgaa gacgtagcac atggatgagc caacgtatcc gtttctagtg gtctcgaaaa     2040
gtagggtttc attcattcta tctatctatc cgtccgtcca aaagggctgc gatgcgagca     2100
cttgagtcgg agccaatcag agcgcgagaa aagatagggg gggtagcaag ccatgtcgga     2160
ggggcgtttg cttccggcag gtttggattc ttgtggtagg cgggcggctc tgtacagtag     2220
cggcggtgac ggtgaggtgg cggcgctttc ggtggcgggc caacccaggt gcatgcacgc     2280
gcgctcgtcg ttttcccgcc tgaatctgcc gctgcgccca tggcaagggg gtgggtgctg     2340
ccgccgggcg atggagtaga tcacggtcgc cgtcgggctc ggccagttga tcacggttcg     2400
ttcgtgcggt actaggttcc cccacggcac tgtgactgca tcgttccggc cctcgccatt     2460
ggcgatcggg caatctcctg ttcatccgtc gctgttgatt cctcggccac gatagaccat     2520
gcgcgtgccg gtcgtcgccc cgtcgcgctc gcttcacgtg ctcgtcgcgt ggctcccgtc     2580
ccacacgagg ccgccgcttt ctgacccagt ggagcgcgtg atttacagtt tatatatgtc     2640
gctgcatttt tctttttgtg tgctgctcat tttgcttgga cggagaccgg gaacgattag     2700
ccacggatct aacgcgttgt tgcttgtttt caatgcatgc atgcaggcgc tgtcgaacgg     2760
gcggtacaag agctgcctgc accgcgcggt ggtgaaccgg cggcaggagc ggcggtcgct     2820
ggccttcttc ctgtgcccgc gcgaggaccg cgtggtgcgg ccgccgccgg gcctgaggag     2880
cccgcggcgg tacccggact tcacctgggc tgacctcatg cgcttcacgc agcgccacta     2940
ccgcgccgac acgcgcaccc tcgacgcctt cacccagtgg ttctcctcct cctcctcctc     3000
ggcccaggag gcggcctgat tctgctctgc cacgaaacga tcggtccaca                3050
<210>  99
<211>  1486
<212>  ДНК
<213>  Hordeum vulgare
<400>  99
gaccagtagc atatagtttt tcttgtgttt gccatggtgg acgtgtcgaa ctttgtagaa       60
gccaatggca atgcagcagt atcgattcct gccatggaag ttgctgggag tcctcacgtc      120
ccgttcgttc ctcgggacgc gaacgcgaca gacagcaaga atgccaagga cgtcctcgac      180
ctctggcggc agcagaaaca aatcccggct cccttcatct ggccccacgc cgacgcgcgg      240
ccgtcgtcga tcttggagct ggacgtgccc gtggtcgaca tcggcgcggc cctgcacagc      300
gccgccggga tggcccgcgc cgcggcgcag gtggccgagg catgcgcgag ccacggcttc      360
ttccaggtga ccgggcacgg cgtcgacccc gcgctggccc aagcagcgct cgacggcgca      420
gcggacttct tccgcctgcc gctcgccacc aagcagcgcg cccgccgatc cccggggacc      480
gtcaaagggt acgcctccgc ccacgccgac cgcttcgccg ccaagcttcc ctggaaggag      540
actctctcct tcatccacaa ccacgtccac gaggacgtcg gcgcccgcgc aagcagtcac      600
gtcgtcgact acttcacctc cgcccttggc gacgacttca tgcacctagg ggaggtgtac      660
caggagtact gtgaggcgat ggaggacgcg tcgctggcga taatggaggt gctgggggtg      720
agcctggggc tggggagagg gtactacagg gacttcttcg ccgacggcag ctccatcatg      780
aggtgcaact actacccgcg gtgcccggag ccggaccgga cgctggggac ggggccgcac      840
tgcgacccgt cggcgctgac catcctgctg caggacggcg aggtggacgg gctccaggtg      900
ctcgtcgacg gcgcatggcg ctccgtgcgg cccaagcccg gcgagctcgt cgtaaacatc      960
ggcgacacct tcatggcgct gtcgaacggc cggtacaaga gctgcctcca ccgcgcggtg     1020
gtgcaccggg agaaggagcg ccggtcgctg gcctacttcc tcgccccgcg ggaggaccgg     1080
gtggttcgcc cgccgccttc gccggcgccg gcgccgcggc tctacccgga cttcacctgg     1140
gcggagctca tgcgattcac gcagcgccac taccgcgccg acgcccgcac gctcgacgcc     1200
ttcgcgtgct ggctcgacct gcccagctgc cccaccacgc cccaggccca agggactgtc     1260
tagtgtctgt gatgtatcat ctgtctcagc tgttgtatac gaccacttgt gtctgctagc     1320
tctgcgcttg tgtttcttat gtgagctaac taactaaata gtgtgtatat ttcttgccgc     1380
gccttatgca agccctagtc tagaacatgt aataattaac ttaagcatat acgttgatct     1440
ttggtgtatt tttcatattt ccttcataat gaataatcta ttatgc                    1486
<210>  100
<211>  1230
<212>  ДНК
<213>  Hordeum vulgare
<400>  100
atggtggacg tgtcgaactt tgtagaagcc aatggcaatg cagcagtatc gattcctgcc       60
atggaagttg ctgggagtcc tcacgtcccg ttcgttcctc gggacgcgaa cgcgacagac      120
agcaagaatg ccaaggacgt cctcgacctc tggcggcagc agaaacaaat cccggctccc      180
ttcatctggc cccacgccga cgcgcggccg tcgtcgatct tggagctgga cgtgcccgtg      240
gtcgacatcg gcgcggccct gcacagcgcc gccgggatgg cccgcgccgc ggcgcaggtg      300
gccgaggcat gcgcgagcca cggcttcttc caggtgaccg ggcacggcgt cgaccccgcg      360
ctggcccaag cagcgctcga cggcgcagcg gacttcttcc gcctgccgct cgccaccaag      420
cagcgcgccc gccgatcccc ggggaccgtc aaagggtacg cctccgccca cgccgaccgc      480
ttcgccgcca agcttccctg gaaggagact ctctccttca tccacaacca cgtccacgag      540
gacgtcggcg cccgcgcaag cagtcacgtc gtcgactact tcacctccgc ccttggcgac      600
gacttcatgc acctagggga ggtgtaccag gagtactgtg aggcgatgga ggacgcgtcg      660
ctggcgataa tggaggtgct gggggtgagc ctggggctgg ggagagggta ctacagggac      720
ttcttcgccg acggcagctc catcatgagg tgcaactact acccgcggtg cccggagccg      780
gaccggacgc tggggacggg gccgcactgc gacccgtcgg cgctgaccat cctgctgcag      840
gacggcgagg tggacgggct ccaggtgctc gtcgacggcg catggcgctc cgtgcggccc      900
aagcccggcg agctcgtcgt aaacatcggc gacaccttca tggcgctgtc gaacggccgg      960
tacaagagct gcctccaccg cgcggtggtg caccgggaga aggagcgccg gtcgctggcc     1020
tacttcctcg ccccgcggga ggaccgggtg gttcgcccgc cgccttcgcc ggcgccggcg     1080
ccgcggctct acccggactt cacctgggcg gagctcatgc gattcacgca gcgccactac     1140
cgcgccgacg cccgcacgct cgacgccttc gcgtgctggc tcgacctgcc cagctgcccc     1200
accacgcccc aggcccaagg gactgtctag                                      1230
<210>  101
<211>  409
<212>  ПРТ
<213>  Hordeum vulgare
<400>  101
Met Val Asp Val Ser Asn Phe Val Glu Ala Asn Gly Asn Ala Ala Val
1. 5                   10                  15
Ser Ile Pro Ala Met Glu Val Ala Gly Ser Pro His Val Pro Phe Val
20                  25                  30
Pro Arg Asp Ala Asn Ala Thr Asp Ser Lys Asn Ala Lys Asp Val Leu
35                  40                  45
Asp Leu Trp Arg Gln Gln Lys Gln Ile Pro Ala Pro Phe Ile Trp Pro
50                  55                  60
His Ala Asp Ala Arg Pro Ser Ser Ile Leu Glu Leu Asp Val Pro Val
65                  70                  75                  80
Val Asp Ile Gly Ala Ala Leu His Ser Ala Ala Gly Met Ala Arg Ala
85                  90                  95
Ala Ala Gln Val Ala Glu Ala Cys Ala Ser His Gly Phe Phe Gln Val
100                 105                 110
Thr Gly His Gly Val Asp Pro Ala Leu Ala Gln Ala Ala Leu Asp Gly
115                 120                 125
Ala Ala Asp Phe Phe Arg Leu Pro Leu Ala Thr Lys Gln Arg Ala Arg
130                 135                 140
Arg Ser Pro Gly Thr Val Lys Gly Tyr Ala Ser Ala His Ala Asp Arg
145                 150                 155                 160
Phe Ala Ala Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr Leu Ser Phe Ile His Asn
165                 170                 175
His Val His Glu Asp Val Gly Ala Arg Ala Ser Ser His Val Val Asp
180                 185                 190
Tyr Phe Thr Ser Ala Leu Gly Asp Asp Phe Met His Leu Gly Glu Val
195                 200                 205
Tyr Gln Glu Tyr Cys Glu Ala Met Glu Asp Ala Ser Leu Ala Ile Met
210                 215                 220
Glu Val Leu Gly Val Ser Leu Gly Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Arg Asp
225                 230                 235                 240
Phe Phe Ala Asp Gly Ser Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Arg
245                 250                 255
Cys Pro Glu Pro Asp Arg Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Cys Asp Pro
260                 265                 270
Ser Ala Leu Thr Ile Leu Leu Gln Asp Gly Glu Val Asp Gly Leu Gln
275                 280                 285
Val Leu Val Asp Gly Ala Trp Arg Ser Val Arg Pro Lys Pro Gly Glu
290                 295                 300
Leu Val Val Asn Ile Gly Asp Thr Phe Met Ala Leu Ser Asn Gly Arg
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Ser Cys Leu His Arg Ala Val Val His Arg Glu Lys Glu Arg
325                 330                 335
Arg Ser Leu Ala Tyr Phe Leu Ala Pro Arg Glu Asp Arg Val Val Arg
340                 345                 350
Pro Pro Pro Ser Pro Ala Pro Ala Pro Arg Leu Tyr Pro Asp Phe Thr
355                 360                 365
Trp Ala Glu Leu Met Arg Phe Thr Gln Arg His Tyr Arg Ala Asp Ala
370                 375                 380
Arg Thr Leu Asp Ala Phe Ala Cys Trp Leu Asp Leu Pro Ser Cys Pro
385                 390                 395                 400
Thr Thr Pro Gln Ala Gln Gly Thr Val
405
<210>  102
<211>  1423
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  102
cctctcatca caggccccag cctcactctt ctcacagcaa gacatcgcag cctcacaacc       60
acacagcaac gtgatcgcca tgggcgggct caccatggag caggccttcg tgcaggcccc      120
cgagcaccgc cccaagccca ccgtcaccga ggccaccggc atcctggtca tcgacctctc      180
gcctctcacc gccagcgaca ccgacgcggc cgcggtggac gcgctggccg ccgaggtggg      240
cgcggcgagc cgggactggg gcttcttcgt ggtggttggc cacggcgtgc ccgcggagac      300
cgtggcgcgc gcgacggcgg cgcagcgcgc gttcttcgcg ctgccggcgg agcggaaggc      360
cgccgtgcgg aggagcgagg cggagccgct cgggtactac gagtcggagc acaccaagaa      420
cgtcagggac tggaaggagg tgttcgacct cgtcccgcgc gatccgccgc cgccagcagc      480
cgtggccgac ggcgagctcg tcttcaagaa caagtggccc caggatctgc cgggcttcag      540
agaggcgctg gaggagtacg cggcagcgat ggaggagctg tcgttcaagc tgctggagct      600
gatcgcccgg agcttgaagc tgaggcccga ccggctgcac ggcttcttca aggaccagac      660
gacgttcatc cggctgaacc actaccctcc atgcccgagc ccggacctgg cgctgggagt      720
ggggcggcac aaggacgcgg gggcgctgac catcctgtac caggacgaag tgggcgggct      780
ggacgtccgg cggcgctcct ccgacggcgg cggcggcgag tgggtgcggg tgaggcccgt      840
gccggagtcg ttcgtcatca acgtcggcga cctcgtccag gtgtggagca acgacaggta      900
cgagagcgcg gagcaccggg tgtcggtgaa ctcggcgagg gagaggttct ccatgcccta      960
cttcttcaac ccggcgagct acaccatggt ggagccggtg gaggagctgg tgagcgacga     1020
cgacccgccc aggtacgacg cctacagctg gggcgagttc ttcagcacca ggaagaacag     1080
caacttcaag aagctcagcg tggagaacat tcagatcgcg catttcaaga agaccctcgt     1140
cctcgcctag ataagcagca ggatactaca ggtctacagg actaggacaa gccgatcgag     1200
gtgaccggcc gtcgtcttca gattcagtat atgcgtgtcg ccgttcgtgt tagaacaaat     1260
taataatgtg cgcgctgtgt gctgtgtgtg tggagtaaaa aaaaactaaa catggatgtg     1320
catgttcaaa aaaaaaaaca tggatgcgag tatgtttggg aataataaca ggcttgtgac     1380
ggtctggttt atttgcaaat tcaaaccgaa ttggttgatc ttc                       1423
<210>  103
<211>  1071
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  103
atgggcgggc tcaccatgga gcaggccttc gtgcaggccc ccgagcaccg ccccaagccc       60
accgtcaccg aggccaccgg catcctggtc atcgacctct cgcctctcac cgccagcgac      120
accgacgcgg ccgcggtgga cgcgctggcc gccgaggtgg gcgcggcgag ccgggactgg      180
ggcttcttcg tggtggttgg ccacggcgtg cccgcggaga ccgtggcgcg cgcgacggcg      240
gcgcagcgcg cgttcttcgc gctgccggcg gagcggaagg ccgccgtgcg gaggagcgag      300
gcggagccgc tcgggtacta cgagtcggag cacaccaaga acgtcaggga ctggaaggag      360
gtgttcgacc tcgtcccgcg cgatccgccg ccgccagcag ccgtggccga cggcgagctc      420
gtcttcaaga acaagtggcc ccaggatctg ccgggcttca gagaggcgct ggaggagtac      480
gcggcagcga tggaggagct gtcgttcaag ctgctggagc tgatcgcccg gagcttgaag      540
ctgaggcccg accggctgca cggcttcttc aaggaccaga cgacgttcat ccggctgaac      600
cactaccctc catgcccgag cccggacctg gcgctgggag tggggcggca caaggacgcg      660
ggggcgctga ccatcctgta ccaggacgaa gtgggcgggc tggacgtccg gcggcgctcc      720
tccgacggcg gcggcggcga gtgggtgcgg gtgaggcccg tgccggagtc gttcgtcatc      780
aacgtcggcg acctcgtcca ggtgtggagc aacgacaggt acgagagcgc ggagcaccgg      840
gtgtcggtga actcggcgag ggagaggttc tccatgccct acttcttcaa cccggcgagc      900
tacaccatgg tggagccggt ggaggagctg gtgagcgacg acgacccgcc caggtacgac      960
gcctacagct ggggcgagtt cttcagcacc aggaagaaca gcaacttcaa gaagctcagc     1020
gtggagaaca ttcagatcgc gcatttcaag aagaccctcg tcctcgccta g              1071
<210>  104
<211>  356
<212>  ПРТ
<213>  Sorghum bicolor
<400>  104
Met Gly Gly Leu Thr Met Glu Gln Ala Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Pro Lys Pro Thr Val Thr Glu Ala Thr Gly Ile Leu Val Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Thr Ala Ser Asp Thr Asp Ala Ala Ala Val Asp Ala
35                  40                  45
Leu Ala Ala Glu Val Gly Ala Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe Val
50                  55                  60
Val Val Gly His Gly Val Pro Ala Glu Thr Val Ala Arg Ala Thr Ala
65                  70                  75                  80
Ala Gln Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Ala Glu Arg Lys Ala Ala Val
85                  90                  95
Arg Arg Ser Glu Ala Glu Pro Leu Gly Tyr Tyr Glu Ser Glu His Thr
100                 105                 110
Lys Asn Val Arg Asp Trp Lys Glu Val Phe Asp Leu Val Pro Arg Asp
115                 120                 125
Pro Pro Pro Pro Ala Ala Val Ala Asp Gly Glu Leu Val Phe Lys Asn
130                 135                 140
Lys Trp Pro Gln Asp Leu Pro Gly Phe Arg Glu Ala Leu Glu Glu Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Ala Ala Met Glu Glu Leu Ser Phe Lys Leu Leu Glu Leu Ile Ala
165                 170                 175
Arg Ser Leu Lys Leu Arg Pro Asp Arg Leu His Gly Phe Phe Lys Asp
180                 185                 190
Gln Thr Thr Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro Cys Pro Ser Pro
195                 200                 205
Asp Leu Ala Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala Gly Ala Leu Thr
210                 215                 220
Ile Leu Tyr Gln Asp Glu Val Gly Gly Leu Asp Val Arg Arg Arg Ser
225                 230                 235                 240
Ser Asp Gly Gly Gly Gly Glu Trp Val Arg Val Arg Pro Val Pro Glu
245                 250                 255
Ser Phe Val Ile Asn Val Gly Asp Leu Val Gln Val Trp Ser Asn Asp
260                 265                 270
Arg Tyr Glu Ser Ala Glu His Arg Val Ser Val Asn Ser Ala Arg Glu
275                 280                 285
Arg Phe Ser Met Pro Tyr Phe Phe Asn Pro Ala Ser Tyr Thr Met Val
290                 295                 300
Glu Pro Val Glu Glu Leu Val Ser Asp Asp Asp Pro Pro Arg Tyr Asp
305                 310                 315                 320
Ala Tyr Ser Trp Gly Glu Phe Phe Ser Thr Arg Lys Asn Ser Asn Phe
325                 330                 335
Lys Lys Leu Ser Val Glu Asn Ile Gln Ile Ala His Phe Lys Lys Thr
340                 345                 350
Leu Val Leu Ala
355
<210>  105
<211>  1499
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  105
cctctcatca caggccccag cctcactctt ctcacagcaa gacatcgcag cctcacaacc       60
acacagcaac gtgatcgcca tgggcgggct caccatggag caggccttcg tgcaggcccc      120
cgagcaccgc cccaagccca ccgtcaccga ggccaccggc atcctggtca tcgacctctc      180
gcctctcacc gccagcgaca ccgacgcggc cgcggtggac gcgctggccg ccgaggtggg      240
cgcggcgagc cgggactggg gcttcttcgt ggtggttggc cacggcgtgc ccgcggagac      300
cgtggcgcgc gcgacggcgg cgcagcgcgc gttcttcgcg ctgccggcgg agcggaaggc      360
cgccgtgcgg aggagcgagg cggagccgct cgggtactac gagtcggagc acaccaagaa      420
cgtcagggac tggaaggagg tgttcgacct cgtcccgcgc gatccgccgc cgccagcagc      480
cgtggccgac ggcgagctcg tcttcaagaa caagtggccc caggatctgc cgggcttcag      540
gtgacgaaat caacttatct tttcgatcat attttaccat ttaatagttt aacaataatt      600
gaactttttt ttgcagagag gcgctggagg agtacgcggc agcgatggag gagctgtcgt      660
tcaagctgct ggagctgatc gcccggagct tgaagctgag gcccgaccgg ctgcacggct      720
tcttcaagga ccagacgacg ttcatccggc tgaaccacta ccctccatgc ccgagcccgg      780
acctggcgct gggagtgggg cggcacaagg acgcgggggc gctgaccatc ctgtaccagg      840
acgaagtggg cgggctggac gtccggcggc gctcctccga cggcggcggc ggcgagtggg      900
tgcgggtgag gcccgtgccg gagtcgttcg tcatcaacgt cggcgacctc gtccaggtgt      960
ggagcaacga caggtacgag agcgcggagc accgggtgtc ggtgaactcg gcgagggaga     1020
ggttctccat gccctacttc ttcaacccgg cgagctacac catggtggag ccggtggagg     1080
agctggtgag cgacgacgac ccgcccaggt acgacgccta cagctggggc gagttcttca     1140
gcaccaggaa gaacagcaac ttcaagaagc tcagcgtgga gaacattcag atcgcgcatt     1200
tcaagaagac cctcgtcctc gcctagataa gcagcaggat actacaggtc tacaggacta     1260
ggacaagccg atcgaggtga ccggccgtcg tcttcagatt cagtatatgc gtgtcgccgt     1320
tcgtgttaga acaaattaat aatgtgcgcg ctgtgtgctg tgtgtgtgga gtaaaaaaaa     1380
actaaacatg gatgtgcatg ttcaaaaaaa aaaacatgga tgcgagtatg tttgggaata     1440
ataacaggct tgtgacggtc tggtttattt gcaaattcaa accgaattgg ttgatcttc      1499
<210>  106
<211>  1490
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  106
accccacaca cacacccgca ctgcatgcgg cgtcctagct aatcagtcgc tgctggcagc       60
ctcacaagtc acacaactcc gacgcaggaa agctcgatcc atcgccatgg gcggcttctc      120
catggatcag tccttcgtgc aggcccccga gcaccgcccc aagcccaccg tcaccgaggc      180
cacgggcatc ccgctcatcg acctctcgcc actcaccggc ggtggcggcg gcgacgcggc      240
cgccgtggac gcgctggccg ccgaggtggg cgcggcgagc cgggactggg gcttcttcgt      300
ggtggtgggg cacggtgtgc cggcggagac cgtggcgcgc gccacggagg cgcagcgcgc      360
gttcttcgcc ctgccggcgg agcggaaagc cgccgtgcgg aggagcgagg cggagccgct      420
cgggtactac gagtcggagc acaccaagaa cgtcagggac tggaaggagg tgtacgacct      480
cgtcccgggc gggcttcagc cgccgatagc cgtggccgac ggcgaggtcg tgttcgaaaa      540
caagtggccc gaagacctgc cgggattcag agaggcgttg gaggagtaca tgcaagcgat      600
ggaagagctg gcattcaaga tactggagct gatcgcccgg agcctgaacc tgaggcctga      660
cagactgcac ggcttcttca aggaccagac caccttcatc cggctcaacc actaccctcc      720
ctgcccgagc cccgacctcg ccctcggcgt cggccggcac aaggacgccg gagcactgac      780
catcctctac caggacgacg tcggcgggct cgacgtccgg cgccgttccg acggcgattg      840
ggtccgcgtc aagcctgtcc ccgactcctt catcatcaac gtcggcgacc tcatccaggt      900
ttggagcaac gacaggtacg agagcgcgga gcaccgggtt acggtgaact cggccaagga      960
gaggttctcc aggccctact tcttcaaccc ggcgggctac accatggtgg agccggtgga     1020
ggagctggtg agcgaggagg acccgccccg gtacgacgcc tacaactggg gcaacttctt     1080
cagcaccagg aagaacagca acttcaagaa gctgagcgtg gagaacatcc agatcgcgca     1140
tttcaagagg agcgtcgccg cctaggatac gcacagaaag atcccatatg ctgacttgct     1200
gatgaggcga caggcggccg tgtcgtcttc agattcagag actgggagta aacatttgtg     1260
cggtgttctg taatcgtgat gtgacgagaa ctttagatat atgtttggaa ataacagcct     1320
tgtgttggtc tggcttatcc gcaaagtcaa gattttcttc tacattttgg gattattgtt     1380
ggtaagcatt aagcaacgtc cagttcttac ttcttagctc gatcagtgga cgtaggaccg     1440
gcctctgatg acaagggtga tttatgagaa atgtcatgta tatatgttcc                1490
<210>  107
<211>  1059
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  107
atgggcggct tctccatgga tcagtccttc gtgcaggccc ccgagcaccg ccccaagccc       60
accgtcaccg aggccacggg catcccgctc atcgacctct cgccactcac cggcggtggc      120
ggcggcgacg cggccgccgt ggacgcgctg gccgccgagg tgggcgcggc gagccgggac      180
tggggcttct tcgtggtggt ggggcacggt gtgccggcgg agaccgtggc gcgcgccacg      240
gaggcgcagc gcgcgttctt cgccctgccg gcggagcgga aagccgccgt gcggaggagc      300
gaggcggagc cgctcgggta ctacgagtcg gagcacacca agaacgtcag ggactggaag      360
gaggtgtacg acctcgtccc gggcgggctt cagccgccga tagccgtggc cgacggcgag      420
gtcgtgttcg aaaacaagtg gcccgaagac ctgccgggat tcagagaggc gttggaggag      480
tacatgcaag cgatggaaga gctggcattc aagatactgg agctgatcgc ccggagcctg      540
aacctgaggc ctgacagact gcacggcttc ttcaaggacc agaccacctt catccggctc      600
aaccactacc ctccctgccc gagccccgac ctcgccctcg gcgtcggccg gcacaaggac      660
gccggagcac tgaccatcct ctaccaggac gacgtcggcg ggctcgacgt ccggcgccgt      720
tccgacggcg attgggtccg cgtcaagcct gtccccgact ccttcatcat caacgtcggc      780
gacctcatcc aggtttggag caacgacagg tacgagagcg cggagcaccg ggttacggtg      840
aactcggcca aggagaggtt ctccaggccc tacttcttca acccggcggg ctacaccatg      900
gtggagccgg tggaggagct ggtgagcgag gaggacccgc cccggtacga cgcctacaac      960
tggggcaact tcttcagcac caggaagaac agcaacttca agaagctgag cgtggagaac     1020
atccagatcg cgcatttcaa gaggagcgtc gccgcctag                            1059
<210>  108
<211>  352
<212>  ПРТ
<213>  Setaria italica
<400>  108
Met Gly Gly Phe Ser Met Asp Gln Ser Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Pro Lys Pro Thr Val Thr Glu Ala Thr Gly Ile Pro Leu Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Thr Gly Gly Gly Gly Gly Asp Ala Ala Ala Val Asp
35                  40                  45
Ala Leu Ala Ala Glu Val Gly Ala Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe
50                  55                  60
Val Val Val Gly His Gly Val Pro Ala Glu Thr Val Ala Arg Ala Thr
65                  70                  75                  80
Glu Ala Gln Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Ala Glu Arg Lys Ala Ala
85                  90                  95
Val Arg Arg Ser Glu Ala Glu Pro Leu Gly Tyr Tyr Glu Ser Glu His
100                 105                 110
Thr Lys Asn Val Arg Asp Trp Lys Glu Val Tyr Asp Leu Val Pro Gly
115                 120                 125
Gly Leu Gln Pro Pro Ile Ala Val Ala Asp Gly Glu Val Val Phe Glu
130                 135                 140
Asn Lys Trp Pro Glu Asp Leu Pro Gly Phe Arg Glu Ala Leu Glu Glu
145                 150                 155                 160
Tyr Met Gln Ala Met Glu Glu Leu Ala Phe Lys Ile Leu Glu Leu Ile
165                 170                 175
Ala Arg Ser Leu Asn Leu Arg Pro Asp Arg Leu His Gly Phe Phe Lys
180                 185                 190
Asp Gln Thr Thr Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro Cys Pro Ser
195                 200                 205
Pro Asp Leu Ala Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala Gly Ala Leu
210                 215                 220
Thr Ile Leu Tyr Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Asp Val Arg Arg Arg
225                 230                 235                 240
Ser Asp Gly Asp Trp Val Arg Val Lys Pro Val Pro Asp Ser Phe Ile
245                 250                 255
Ile Asn Val Gly Asp Leu Ile Gln Val Trp Ser Asn Asp Arg Tyr Glu
260                 265                 270
Ser Ala Glu His Arg Val Thr Val Asn Ser Ala Lys Glu Arg Phe Ser
275                 280                 285
Arg Pro Tyr Phe Phe Asn Pro Ala Gly Tyr Thr Met Val Glu Pro Val
290                 295                 300
Glu Glu Leu Val Ser Glu Glu Asp Pro Pro Arg Tyr Asp Ala Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Trp Gly Asn Phe Phe Ser Thr Arg Lys Asn Ser Asn Phe Lys Lys Leu
325                 330                 335
Ser Val Glu Asn Ile Gln Ile Ala His Phe Lys Arg Ser Val Ala Ala
340                 345                 350
<210>  109
<211>  1886
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  109
accccacaca cacacccgca ctgcatgcgg cgtcctagct aatcagtcgc tgctggcagc       60
ctcacaagtc acacaactcc gacgcaggaa agctcgatcc atcgccatgg gcggcttctc      120
catggatcag tccttcgtgc aggcccccga gcaccgcccc aagcccaccg tcaccgaggc      180
cacgggcatc ccgctcatcg acctctcgcc actcaccggc ggtggcggcg gcgacgcggc      240
cgccgtggac gcgctggccg ccgaggtggg cgcggcgagc cgggactggg gcttcttcgt      300
ggtggtgggg cacggtgtgc cggcggagac cgtggcgcgc gccacggagg cgcagcgcgc      360
gttcttcgcc ctgccggcgg agcggaaagc cgccgtgcgg aggagcgagg cggagccgct      420
cgggtactac gagtcggagc acaccaagaa cgtcagggac tggaaggagg tgtacgacct      480
cgtcccgggc gggcttcagc cgccgatagc cgtggccgac ggcgaggtcg tgttcgaaaa      540
caagtggccc gaagacctgc cgggattcag gtgaatcaac ttgcgcatat tgttgtttct      600
ggcattgcat atgatcgtcg tgccagtatg ttttgacaat atttttgttt tcatattttt      660
ggtgaagatg ggaaaatctt tgttgaaata atcagggaat tttcacatct ttttttaatc      720
aaagatagaa taggttcggt tactgaattt tgatgatgga cagaaaaagc tgtgttttca      780
ctttccatct cagcgatgtt tttttgtgga tgaattctcc taaatttttg tcttttcatg      840
ttaaaacttg aacgggaatt ctcgcagaga ggcgttggag gagtacatgc aagcgatgga      900
agagctggca ttcaagatac tggagctgat cgcccggagc ctgaacctga ggcctgacag      960
actgcacggc ttcttcaagg accagaccac cttcatccgg ctcaaccact accctccctg     1020
cccgagcccc gacctcgccc tcggcgtcgg ccggcacaag gacgccggag cactgaccat     1080
cctctaccag gacgacgtcg gcgggctcga cgtccggcgc cgttccgacg gcgattgggt     1140
ccgcgtcaag cctgtccccg actccttcat catcaacgtc ggcgacctca tccaggtaca     1200
acaaacaaaa acacacgtca ttctcaaatc ttttcgtgct gttaatgctc attcacgaat     1260
tgatatctta catgaacgac tgagactttt tcaggtttgg agcaacgaca ggtacgagag     1320
cgcggagcac cgggttacgg tgaactcggc caaggagagg ttctccaggc cctacttctt     1380
caacccggcg ggctacacca tggtggagcc ggtggaggag ctggtgagcg aggaggaccc     1440
gccccggtac gacgcctaca actggggcaa cttcttcagc accaggaaga acagcaactt     1500
caagaagctg agcgtggaga acatccagat cgcgcatttc aagaggagcg tcgccgccta     1560
ggatacgcac agaaagatcc catatgctga cttgctgatg aggcgacagg cggccgtgtc     1620
gtcttcagat tcagagactg ggagtaaaca tttgtgcggt gttctgtaat cgtgatgtga     1680
cgagaacttt agatatatgt ttggaaataa cagccttgtg ttggtctggc ttatccgcaa     1740
agtcaagatt ttcttctaca ttttgggatt attgttggta agcattaagc aacgtccagt     1800
tcttacttct tagctcgatc agtggacgta ggaccggcct ctgatgacaa gggtgattta     1860
tgagaaatgt catgtatata tgttcc                                          1886
<210>  110
<211>  1379
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  110
aagccacacg cacacacaca cacacgctga cacacgagac gaacacttgt gctacagctt       60
ctcgccacca gctactgatc gaccatgggc ggcctctcca tggaccaggc gttcgtgcag      120
gcccccgagc accgccccaa ggcgtccgtc gccgaggccg acggcatccc ggtcatcgac      180
ctctcccctc tcctcgccgc cggcgatggc gacgccgacg gggtggacgc gctcgcggcg      240
gaggtcggga gggcgagccg ggactggggc ttcttcgtgg tggtgcgcca cggtgtgccc      300
gcggaggcgg tggcgcgcgc ggcggaggcg cagaggacgt tcttcgcgct gccgccggag      360
cggagggcgg ccgtggcgcg gagcgaggcg gcgccgatgg ggtactacgc gtccgagcac      420
accaagaacg tcagggactg gaaggaggtg ttcgacctcg tcccgcgcca gacgccgccg      480
ccgccgacga ccgccgtggc cgacggcgac ctggtgttcg acaacaagtg gcccgacgac      540
ctgccgggat tcagggaggc aatggaggag tacggcgaag cggtggagga gctggcgttc      600
aagctgctgg agctgatcgc caggagcctc ggcctgagac ccgaccgcct ccatggcttc      660
ttcaaggacg accagaccac cttcatccgg ctcaaccact accctccctg cccgagcccc      720
gacctcgccc tcggcgtcgg ccgccacaag gacgccggcg cgctcaccgt gctctaccag      780
gacgatgtcg gcggcctcga cgtccgccgc cgatccgacg gcgagtgggt gcgcgtcagg      840
cccgtccctc actccttcat catcaacgtc ggcgacatca tccaggtgtg gagcaatgac      900
aggtacgaga gcgcggagca ccgggtggcg gtgaacgtgg agaaggagag gttctccatc      960
cctttcttct tcaacccggc gggccacacc atggtggagc cactggagga ggtcgtgagc     1020
gacgagagcc cggccaggta caacccctac aactggggcg aattcttcag caccaggaag     1080
aacagcaact tcaagaagct ggacgtggag aacgtccaga tcacgcattt caggaagaat     1140
taacgcgccg gctagatcat gttcagtaaa ttttcagatg atgatgcgtg gacaaccata     1200
tagcctttgc gtcataagtt aataatgtct gtgacagtat atcatgtaaa caatcgtatg     1260
atgtggcttc tctatctgcc ggtgatggta atgtgacatt gtagaagagg gtttgtgaga     1320
tacttccttc acttaacttt tacgaatgaa tatagacaac cacaacatcc ttgtcgtga      1379
<210>  111
<211>  1059
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  111
atgggcggcc tctccatgga ccaggcgttc gtgcaggccc ccgagcaccg ccccaaggcg       60
tccgtcgccg aggccgacgg catcccggtc atcgacctct cccctctcct cgccgccggc      120
gatggcgacg ccgacggggt ggacgcgctc gcggcggagg tcgggagggc gagccgggac      180
tggggcttct tcgtggtggt gcgccacggt gtgcccgcgg aggcggtggc gcgcgcggcg      240
gaggcgcaga ggacgttctt cgcgctgccg ccggagcgga gggcggccgt ggcgcggagc      300
gaggcggcgc cgatggggta ctacgcgtcc gagcacacca agaacgtcag ggactggaag      360
gaggtgttcg acctcgtccc gcgccagacg ccgccgccgc cgacgaccgc cgtggccgac      420
ggcgacctgg tgttcgacaa caagtggccc gacgacctgc cgggattcag ggaggcaatg      480
gaggagtacg gcgaagcggt ggaggagctg gcgttcaagc tgctggagct gatcgccagg      540
agcctcggcc tgagacccga ccgcctccat ggcttcttca aggacgacca gaccaccttc      600
atccggctca accactaccc tccctgcccg agccccgacc tcgccctcgg cgtcggccgc      660
cacaaggacg ccggcgcgct caccgtgctc taccaggacg atgtcggcgg cctcgacgtc      720
cgccgccgat ccgacggcga gtgggtgcgc gtcaggcccg tccctcactc cttcatcatc      780
aacgtcggcg acatcatcca ggtgtggagc aatgacaggt acgagagcgc ggagcaccgg      840
gtggcggtga acgtggagaa ggagaggttc tccatccctt tcttcttcaa cccggcgggc      900
cacaccatgg tggagccact ggaggaggtc gtgagcgacg agagcccggc caggtacaac      960
ccctacaact ggggcgaatt cttcagcacc aggaagaaca gcaacttcaa gaagctggac     1020
gtggagaacg tccagatcac gcatttcagg aagaattaa                            1059
<210>  112
<211>  352
<212>  ПРТ
<213>  Oryza sativa
<400>  112
Met Gly Gly Leu Ser Met Asp Gln Ala Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Pro Lys Ala Ser Val Ala Glu Ala Asp Gly Ile Pro Val Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Leu Ala Ala Gly Asp Gly Asp Ala Asp Gly Val Asp
35                  40                  45
Ala Leu Ala Ala Glu Val Gly Arg Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe
50                  55                  60
Val Val Val Arg His Gly Val Pro Ala Glu Ala Val Ala Arg Ala Ala
65                  70                  75                  80
Glu Ala Gln Arg Thr Phe Phe Ala Leu Pro Pro Glu Arg Arg Ala Ala
85                  90                  95
Val Ala Arg Ser Glu Ala Ala Pro Met Gly Tyr Tyr Ala Ser Glu His
100                 105                 110
Thr Lys Asn Val Arg Asp Trp Lys Glu Val Phe Asp Leu Val Pro Arg
115                 120                 125
Gln Thr Pro Pro Pro Pro Thr Thr Ala Val Ala Asp Gly Asp Leu Val
130                 135                 140
Phe Asp Asn Lys Trp Pro Asp Asp Leu Pro Gly Phe Arg Glu Ala Met
145                 150                 155                 160
Glu Glu Tyr Gly Glu Ala Val Glu Glu Leu Ala Phe Lys Leu Leu Glu
165                 170                 175
Leu Ile Ala Arg Ser Leu Gly Leu Arg Pro Asp Arg Leu His Gly Phe
180                 185                 190
Phe Lys Asp Asp Gln Thr Thr Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro
195                 200                 205
Cys Pro Ser Pro Asp Leu Ala Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala
210                 215                 220
Gly Ala Leu Thr Val Leu Tyr Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Asp Val
225                 230                 235                 240
Arg Arg Arg Ser Asp Gly Glu Trp Val Arg Val Arg Pro Val Pro His
245                 250                 255
Ser Phe Ile Ile Asn Val Gly Asp Ile Ile Gln Val Trp Ser Asn Asp
260                 265                 270
Arg Tyr Glu Ser Ala Glu His Arg Val Ala Val Asn Val Glu Lys Glu
275                 280                 285
Arg Phe Ser Ile Pro Phe Phe Phe Asn Pro Ala Gly His Thr Met Val
290                 295                 300
Glu Pro Leu Glu Glu Val Val Ser Asp Glu Ser Pro Ala Arg Tyr Asn
305                 310                 315                 320
Pro Tyr Asn Trp Gly Glu Phe Phe Ser Thr Arg Lys Asn Ser Asn Phe
325                 330                 335
Lys Lys Leu Asp Val Glu Asn Val Gln Ile Thr His Phe Arg Lys Asn
340                 345                 350
<210>  113
<211>  2027
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  113
aagccacacg cacacacaca cacacgctga cacacgagac gaacacttgt gctacagctt       60
ctcgccacca gctactgatc gaccatgggc ggcctctcca tggaccaggc gttcgtgcag      120
gcccccgagc accgccccaa ggcgtccgtc gccgaggccg acggcatccc ggtcatcgac      180
ctctcccctc tcctcgccgc cggcgatggc gacgccgacg gggtggacgc gctcgcggcg      240
gaggtcggga gggcgagccg ggactggggc ttcttcgtgg tggtgcgcca cggtgtgccc      300
gcggaggcgg tggcgcgcgc ggcggaggcg cagaggacgt tcttcgcgct gccgccggag      360
cggagggcgg ccgtggcgcg gagcgaggcg gcgccgatgg ggtactacgc gtccgagcac      420
accaagaacg tcagggactg gaaggaggtg ttcgacctcg tcccgcgcca gacgccgccg      480
ccgccgacga ccgccgtggc cgacggcgac ctggtgttcg acaacaagtg gcccgacgac      540
ctgccgggat tcaggtcagg tcaccacatc gatcgatcgt cttcttcatc ctcgcatcaa      600
ttcagttcaa cctcatcgaa ttcttgagca gggaggcaat ggaggagtac ggcgaagcgg      660
tggaggagct ggcgttcaag ctgctggagc tgatcgccag gagcctcggc ctgagacccg      720
accgcctcca tggcttcttc aaggacgacc agaccacctt catccggctc aaccactacc      780
ctccctgccc gagccccgac ctcgccctcg gcgtcggccg ccacaaggac gccggcgcgc      840
tcaccgtgct ctaccaggac gatgtcggcg gcctcgacgt ccgccgccga tccgacggcg      900
agtgggtgcg cgtcaggccc gtccctcact ccttcatcat caacgtcggc gacatcatcc      960
aggtactttt ttttttgagc agctacatat ttatcaacaa attttcttct aacaatttat     1020
cggacataaa tatattacaa tgaaagaata attgtatcat aacttgtgtg tccttatatg     1080
taagttttag aaatcctata gtaacatggt attttcgcga aagcggagat tgtgagaccg     1140
tatcttttca cccatgcgcg tcatatgatt tttttttctt gccaacttaa ataaatttca     1200
aagtaaatct aatagattaa aattatgtga aacttacata taagttttct acggtaacac     1260
gctattttca cgaaacggag gtcgttccaa gttgaatgaa tcttgaagta aatctaacga     1320
tttaaaatta tgtgcataca cgttatatta cagttatata caagttataa tataattaca     1380
ctacaattat aacggtattc atagttgaca aacttttaaa agagaattag ttaataaata     1440
tataacaaca ttgtagttta attgttacta tttgacatca tttttatttg cattttgaat     1500
ttgactgaaa aaattgagag tgcgcttgtc caggtgtgga gcaatgacag gtacgagagc     1560
gcggagcacc gggtggcggt gaacgtggag aaggagaggt tctccatccc tttcttcttc     1620
aacccggcgg gccacaccat ggtggagcca ctggaggagg tcgtgagcga cgagagcccg     1680
gccaggtaca acccctacaa ctggggcgaa ttcttcagca ccaggaagaa cagcaacttc     1740
aagaagctgg acgtggagaa cgtccagatc acgcatttca ggaagaatta acgcgccggc     1800
tagatcatgt tcagtaaatt ttcagatgat gatgcgtgga caaccatata gcctttgcgt     1860
cataagttaa taatgtctgt gacagtatat catgtaaaca atcgtatgat gtggcttctc     1920
tatctgccgg tgatggtaat gtgacattgt agaagagggt ttgtgagata cttccttcac     1980
ttaactttta cgaatgaata tagacaacca caacatcctt gtcgtga                   2027
<210>  114
<211>  1747
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  114
tcactcaagg ccacaacaca ctcgccagtc catcgccacc atacgtgaca acttgagtta       60
cttgatctgt tgctcatcga tctcgacatc gccatgggcg gcctctccat ggaccaggcc      120
ttcgtgcagg cccccgagca tcgcaccaag gcgaacctcg ccgacgcggc cggcatcccg      180
gtcatcgacc tctcccctct cgccgccggc gacaaggccg gcctggacgc cctcgcggcc      240
gaggtgggca gggcgagccg tgactggggg ttcttcgtgg tggtgcgcca cggcgtgccg      300
gcggagacgg tggcgcgggc gctggaggcg cagagggcct tcttcgcgct gcccgcggac      360
cggaaggcgg ccgtgcggag ggacgaggcg gcgccgctgg ggtactacga gtcggagcac      420
accaagaacg tcagggactg gaaggaggtg ttcgacctcg tcccccgcga gccgccgccg      480
cctgccgcgg ttgccgacgg cgagctcatg ttcgagaaca agtggcccga ggacctgccg      540
gggttcagag aggctctcga agagtacgag aaagcgatgg aggagctggc gttcaagctg      600
ctggagctga tcgcccggag cctgggactg agaccggacc ggctgcacgg cttcttcaag      660
gaccagacca ccttcatccg gctgaaccac tacccgccct gccccagccc cgacctcgcc      720
ctcggcgtcg gtcgccacaa ggacgccggc gcgctcacca tcctctacca ggacgacgtc      780
ggcgggctcg acgtccggcg ccgctccgac ggcgagtggg tgcgcgtcag gcctgtcccg      840
gactcctacg tcatcaacgt cggcgacatc atccaggtgt ggagcaacga caggtacgag      900
agcgcggagc acagggtgtc ggtgaactcg cacaaggaga ggttctccat gccctacttc      960
ttcgaccccg ggagcgacgc catgatcgag ccgttggagg agatggtgag cgacgaaagg     1020
ccggccaggt acgacgccta caactggggc aacttcttca gcaccaggaa gaacagcaac     1080
ttcaggaagc tcgccgtcga aaacgtccag atcgcacact tcagaaagga ccgaccttaa     1140
atgaaggatc cctcatgaat tcatgatcct tccgctctcc tcagtgatcc tagtgctaca     1200
actacaagca tctccccgtt tgtagtaatc atatataaat aagtattccc tccgtaaact     1260
aatataagag catttaaaac actactctag tgatctaaat gctcttatat tagtttacag     1320
agagagtatt gtgtattaat aatgactttc tctgtttcaa aataagtgat gacgtggttt     1380
tagttcaatt ttttttagag aggaggcatc tgacgggcct taaactgagg accttagagt     1440
acaaacaagg ttcgacgaaa gtaagtttaa gggatacaag gccgtagcca acaaaacgcg     1500
acgcagcgcg caatctaaaa tcagcgtgct gtcaaggtag ctggagacgt ccatgccgtt     1560
aatctctctc aagaagctcg ccgaagctca gtgcaccttg cgtgcactct tgtgaagagc     1620
accttcacgt gtcctttgtc ctgagatttt gtcaacagtt tccatgactg caagaaaaac     1680
actagtttgt ataatagctc agcgggatgt cgaatgaatt gcccctcaat caaagcttta     1740
tttctag                                                               1747
<210>  115
<211>  1047
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  115
atgggcggcc tctccatgga ccaggccttc gtgcaggccc ccgagcatcg caccaaggcg       60
aacctcgccg acgcggccgg catcccggtc atcgacctct cccctctcgc cgccggcgac      120
aaggccggcc tggacgccct cgcggccgag gtgggcaggg cgagccgtga ctgggggttc      180
ttcgtggtgg tgcgccacgg cgtgccggcg gagacggtgg cgcgggcgct ggaggcgcag      240
agggccttct tcgcgctgcc cgcggaccgg aaggcggccg tgcggaggga cgaggcggcg      300
ccgctggggt actacgagtc ggagcacacc aagaacgtca gggactggaa ggaggtgttc      360
gacctcgtcc cccgcgagcc gccgccgcct gccgcggttg ccgacggcga gctcatgttc      420
gagaacaagt ggcccgagga cctgccgggg ttcagagagg ctctcgaaga gtacgagaaa      480
gcgatggagg agctggcgtt caagctgctg gagctgatcg cccggagcct gggactgaga      540
ccggaccggc tgcacggctt cttcaaggac cagaccacct tcatccggct gaaccactac      600
ccgccctgcc ccagccccga cctcgccctc ggcgtcggtc gccacaagga cgccggcgcg      660
ctcaccatcc tctaccagga cgacgtcggc gggctcgacg tccggcgccg ctccgacggc      720
gagtgggtgc gcgtcaggcc tgtcccggac tcctacgtca tcaacgtcgg cgacatcatc      780
caggtgtgga gcaacgacag gtacgagagc gcggagcaca gggtgtcggt gaactcgcac      840
aaggagaggt tctccatgcc ctacttcttc gaccccggga gcgacgccat gatcgagccg      900
ttggaggaga tggtgagcga cgaaaggccg gccaggtacg acgcctacaa ctggggcaac      960
ttcttcagca ccaggaagaa cagcaacttc aggaagctcg ccgtcgaaaa cgtccagatc     1020
gcacacttca gaaaggaccg accttaa                                         1047
<210>  116
<211>  348
<212>  ПРТ
<213>  Triticum aestivum
<400>  116
Met Gly Gly Leu Ser Met Asp Gln Ala Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Thr Lys Ala Asn Leu Ala Asp Ala Ala Gly Ile Pro Val Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Ala Ala Gly Asp Lys Ala Gly Leu Asp Ala Leu Ala
35                  40                  45
Ala Glu Val Gly Arg Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe Val Val Val
50                  55                  60
Arg His Gly Val Pro Ala Glu Thr Val Ala Arg Ala Leu Glu Ala Gln
65                  70                  75                  80
Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Ala Asp Arg Lys Ala Ala Val Arg Arg
85                  90                  95
Asp Glu Ala Ala Pro Leu Gly Tyr Tyr Glu Ser Glu His Thr Lys Asn
100                 105                 110
Val Arg Asp Trp Lys Glu Val Phe Asp Leu Val Pro Arg Glu Pro Pro
115                 120                 125
Pro Pro Ala Ala Val Ala Asp Gly Glu Leu Met Phe Glu Asn Lys Trp
130                 135                 140
Pro Glu Asp Leu Pro Gly Phe Arg Glu Ala Leu Glu Glu Tyr Glu Lys
145                 150                 155                 160
Ala Met Glu Glu Leu Ala Phe Lys Leu Leu Glu Leu Ile Ala Arg Ser
165                 170                 175
Leu Gly Leu Arg Pro Asp Arg Leu His Gly Phe Phe Lys Asp Gln Thr
180                 185                 190
Thr Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro Cys Pro Ser Pro Asp Leu
195                 200                 205
Ala Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala Gly Ala Leu Thr Ile Leu
210                 215                 220
Tyr Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Asp Val Arg Arg Arg Ser Asp Gly
225                 230                 235                 240
Glu Trp Val Arg Val Arg Pro Val Pro Asp Ser Tyr Val Ile Asn Val
245                 250                 255
Gly Asp Ile Ile Gln Val Trp Ser Asn Asp Arg Tyr Glu Ser Ala Glu
260                 265                 270
His Arg Val Ser Val Asn Ser His Lys Glu Arg Phe Ser Met Pro Tyr
275                 280                 285
Phe Phe Asp Pro Gly Ser Asp Ala Met Ile Glu Pro Leu Glu Glu Met
290                 295                 300
Val Ser Asp Glu Arg Pro Ala Arg Tyr Asp Ala Tyr Asn Trp Gly Asn
305                 310                 315                 320
Phe Phe Ser Thr Arg Lys Asn Ser Asn Phe Arg Lys Leu Ala Val Glu
325                 330                 335
Asn Val Gln Ile Ala His Phe Arg Lys Asp Arg Pro
340                 345
<210>  117
<211>  1863
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  117
tcactcaagg ccacaacaca ctcgccagtc catcgccacc atacgtgaca acttgagtta       60
cttgatctgt tgctcatcga tctcgacatc gccatgggcg gcctctccat ggaccaggcc      120
ttcgtgcagg cccccgagca tcgcaccaag gcgaacctcg ccgacgcggc cggcatcccg      180
gtcatcgacc tctcccctct cgccgccggc gacaaggccg gcctggacgc cctcgcggcc      240
gaggtgggca gggcgagccg tgactggggg ttcttcgtgg tggtgcgcca cggcgtgccg      300
gcggagacgg tggcgcgggc gctggaggcg cagagggcct tcttcgcgct gcccgcggac      360
cggaaggcgg ccgtgcggag ggacgaggcg gcgccgctgg ggtactacga gtcggagcac      420
accaagaacg tcagggactg gaaggaggtg ttcgacctcg tcccccgcga gccgccgccg      480
cctgccgcgg ttgccgacgg cgagctcatg ttcgagaaca agtggcccga ggacctgccg      540
gggttcaggt acggtcatca actcaatcaa ttctgcgacc ccgagagaaa tggttcacta      600
ttattcgtgg ttcatacgta tgattcagac gttaatctcg atgcaaattg atttgtgcat      660
gcagagaggc tctcgaagag tacgagaaag cgatggagga gctggcgttc aagctgctgg      720
agctgatcgc ccggagcctg ggactgagac cggaccggct gcacggcttc ttcaaggacc      780
agaccacctt catccggctg aaccactacc cgccctgccc cagccccgac ctcgccctcg      840
gcgtcggtcg ccacaaggac gccggcgcgc tcaccatcct ctaccaggac gacgtcggcg      900
ggctcgacgt ccggcgccgc tccgacggcg agtgggtgcg cgtcaggcct gtcccggact      960
cctacgtcat caacgtcggc gacatcatcc aggtgtggag caacgacagg tacgagagcg     1020
cggagcacag ggtgtcggtg aactcgcaca aggagaggtt ctccatgccc tacttcttcg     1080
accccgggag cgacgccatg atcgagccgt tggaggagat ggtgagcgac gaaaggccgg     1140
ccaggtacga cgcctacaac tggggcaact tcttcagcac caggaagaac agcaacttca     1200
ggaagctcgc cgtcgaaaac gtccagatcg cacacttcag aaaggaccga ccttaaatga     1260
aggatccctc atgaattcat gatccttccg ctctcctcag tgatcctagt gctacaacta     1320
caagcatctc cccgtttgta gtaatcatat ataaataagt attccctccg taaactaata     1380
taagagcatt taaaacacta ctctagtgat ctaaatgctc ttatattagt ttacagagag     1440
agtattgtgt attaataatg actttctctg tttcaaaata agtgatgacg tggttttagt     1500
tcaatttttt ttagagagga ggcatctgac gggccttaaa ctgaggacct tagagtacaa     1560
acaaggttcg acgaaagtaa gtttaaggga tacaaggccg tagccaacaa aacgcgacgc     1620
agcgcgcaat ctaaaatcag cgtgctgtca aggtagctgg agacgtccat gccgttaatc     1680
tctctcaaga agctcgccga agctcagtgc accttgcgtg cactcttgtg aagagcacct     1740
tcacgtgtcc tttgtcctga gattttgtca acagtttcca tgactgcaag aaaaacacta     1800
gtttgtataa tagctcagcg ggatgtcgaa tgaattgccc ctcaatcaaa gctttatttc     1860
tag                                                                   1863
<210>  118
<211>  349
<212>  ПРТ
<213>  Hordeum vulgare
<400>  118
Met Gly Gly Leu Ser Met Gly Gln Ala Phe Val Gln Ala Pro Glu His
1. 5                   10                  15
Arg Thr Lys Pro Thr Leu Ala Asp Ala Asp Gly Ile Pro Val Ile Asp
20                  25                  30
Leu Ser Pro Leu Ala Ala Gly Asp Glu Ala Gly Val Asp Ala Leu Ala
35                  40                  45
Ala Glu Val Gly Arg Ala Ser Arg Asp Trp Gly Phe Phe Val Val Val
50                  55                  60
Arg His Gly Val Pro Ala Glu Thr Val Ala Arg Ala Leu Glu Ala Gln
65                  70                  75                  80
Arg Ala Phe Phe Ala Leu Pro Ala Glu Arg Lys Ala Ala Val Arg Arg
85                  90                  95
Asp Glu Ala Ala Pro Leu Gly Tyr Tyr Glu Ser Glu His Thr Lys Asn
100                 105                 110
Val Arg Asp Trp Lys Glu Val Phe Asp Phe Val Pro Arg Glu Pro Pro
115                 120                 125
Pro Pro Ala Ala Val Ala Asp Gly Glu Leu Val Phe Glu Asn Lys Trp
130                 135                 140
Pro Glu Asp Leu Pro Gly Phe Arg Val Ala Phe Glu Glu Tyr Ala Lys
145                 150                 155                 160
Ala Met Glu Glu Leu Ala Phe Lys Leu Leu Glu Leu Ile Ala Arg Ser
165                 170                 175
Leu Gly Leu Thr Pro Asp Arg Leu Asn Gly Phe Phe Lys Asp His Gln
180                 185                 190
Thr Thr Phe Ile Arg Leu Asn His Tyr Pro Pro Cys Pro Ser Pro Asp
195                 200                 205
Leu Ala Leu Gly Val Gly Arg His Lys Asp Ala Gly Ala Leu Thr Val
210                 215                 220
Leu Tyr Gln Asp Asp Val Gly Gly Leu Asp Val Arg His Arg Ser Asp
225                 230                 235                 240
Gly Glu Trp Val Arg Val Arg Pro Val Pro Asp Ser Tyr Val Ile Asn
245                 250                 255
Val Gly Asp Ile Ile Gln Val Trp Ser Asn Asp Arg Tyr Glu Ser Ala
260                 265                 270
Glu His Arg Val Ser Val Asn Ser Asp Lys Glu Arg Phe Ser Met Pro
275                 280                 285
Tyr Phe Phe Asn Pro Gly Ser Asp Ala Met Val Glu Pro Leu Glu Glu
290                 295                 300
Met Val Ser Asp Glu Arg Pro Ala Arg Tyr Asp Ala Tyr Asn Trp Gly
305                 310                 315                 320
His Phe Phe Ser Thr Arg Lys Asn Ser Asn Phe Lys Lys Leu Asp Val
325                 330                 335
Glu Asn Val Gln Ile Ala His Phe Arg Lys Leu His Leu
340                 345
<210>  119
<211>  1963
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  119
tataaatacc acgccatgta cttctctgct tctacacttc tccagcttct ctcatgccat       60
accactagtg caaggtccta gatttacact tggtgctaca gcttcttcct ccctccctcc      120
cctctctagg cagctagcac gcagcgcagc acacgaaaca tctattgacc ggccgcctcc      180
gccggggatc cataattact atactaccaa tcggccagcg tcatgccgac gccgtcgcac      240
ctcgcgaacc cgcgctactt cgacttccgt gcggcgcggc gggtgccgga gacgcacgcc      300
tggccggggc tgcacgacca ccccgtcgtg gacggcggcg cgccggggcc agacgccgtc      360
cccgtggtgg acctcgcggg ggcggcggac gagccgagag ccgcggtggt ggcccaagtg      420
gcgcgcgccg ccgagcaatg gggcgcgttc ctgctcacgg ggcacggcgt ccccgcggag      480
ctgctggcgc gcgtcgagga ccggatcgcc accatgttcg cgctgccagc ggacgacaag      540
atgcgcgccg tgcgcgggcc tggcgacgcc tgcggctacg gctccccgcc catctcctcc      600
ttcttctcca agtgcatgtg gtcggaggga tacaccttct cgccggccaa cctccgcgcc      660
gacctccgca agctctggcc taaggccggc gacgactaca ccagcttctg tgatgtgatg      720
gaggagttcc acaagcacat gcgtgccctc gcggacaagc tgctggagct gttcctcatg      780
gcgctggggc tcaccgacga gcaggtcggc ggcgtggagg cggagcggag gatcgccgag      840
acgatgaccg ccaccatgca cctcaactgg taccctcggt gcccggaccc gcgccgcgcg      900
ctggggctga tcgcgcacac cgactcgggc ttcttcacct tcgtgctgca gagcctcgtc      960
ccggggctgc agctcttccg ccacgccccg gaccggtggg tggcggtgcc ggcggtaccg     1020
ggcgccttcg tcgtcaacgt gggcgacctc ttccacatcc tcaccaacgg ccggttccac     1080
agcgtgtacc accgcgccgt cgtgaaccgg gacctcgaca ggatatctct cggctacttc     1140
ctcggcccgc cgccgcacgc caaggtggcg ccgctaaggg aggccgtgcc gcccggccgc     1200
acccccgcgt accgcgccgt cacgtggccc gagtacatgg gcgtccgcaa gaaggccttc     1260
accaccggcg catccgcgct caagatggtc gccctcgccg ccgccgccgc cgccgccgac     1320
ctcgacgatg acgccggtgc tggcgccgcc gccgaacctg tcgtccatca gcagctactc     1380
gtctcgtcgt agccgatcga tcgccggatc ggtcgagact gatgatgatg atgcatatat     1440
actcgtcgat ggagtagaca gactaatcaa gcaaccctga aactatgaat gcatgcgtgc     1500
gcttcgtgct tgcttgcgca tgcagctagc aggcttcatt ccgttccgca gctgctctgc     1560
tccaacctgc tctgctggat tgatgtatat ggtagaagaa ttaagagatc gatggatgac     1620
ggaggaagaa gaagacgaag acgacgatga ggaaaaggac acgctgtacg tagctggttc     1680
ttctagtcta gtttacagca ggccgggcgg ccggctgctg cttccaatcg agtttgtcgt     1740
tactgacgat tgttagtgga tcgattaact aatctggaat tctggattat taatataatg     1800
catgtggttt ggcatctggc gtaaagcagg taatggtacc tagccagtag ccagtagcca     1860
ggctggtcaa tgataggtct ataccctgat cctgtactgt tgtttctttc ggtctttctg     1920
agagagaaaa aaaacgaata tatggcgtac tcaattcatc aaa                       1963
<210>  120
<211>  1170
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  120
atgccgacgc cgtcgcacct cgcgaacccg cgctacttcg acttccgtgc ggcgcggcgg       60
gtgccggaga cgcacgcctg gccggggctg cacgaccacc ccgtcgtgga cggcggcgcg      120
ccggggccag acgccgtccc cgtggtggac ctcgcggggg cggcggacga gccgagagcc      180
gcggtggtgg cccaagtggc gcgcgccgcc gagcaatggg gcgcgttcct gctcacgggg      240
cacggcgtcc ccgcggagct gctggcgcgc gtcgaggacc ggatcgccac catgttcgcg      300
ctgccagcgg acgacaagat gcgcgccgtg cgcgggcctg gcgacgcctg cggctacggc      360
tccccgccca tctcctcctt cttctccaag tgcatgtggt cggagggata caccttctcg      420
ccggccaacc tccgcgccga cctccgcaag ctctggccta aggccggcga cgactacacc      480
agcttctgtg atgtgatgga ggagttccac aagcacatgc gtgccctcgc ggacaagctg      540
ctggagctgt tcctcatggc gctggggctc accgacgagc aggtcggcgg cgtggaggcg      600
gagcggagga tcgccgagac gatgaccgcc accatgcacc tcaactggta ccctcggtgc      660
ccggacccgc gccgcgcgct ggggctgatc gcgcacaccg actcgggctt cttcaccttc      720
gtgctgcaga gcctcgtccc ggggctgcag ctcttccgcc acgccccgga ccggtgggtg      780
gcggtgccgg cggtaccggg cgccttcgtc gtcaacgtgg gcgacctctt ccacatcctc      840
accaacggcc ggttccacag cgtgtaccac cgcgccgtcg tgaaccggga cctcgacagg      900
atatctctcg gctacttcct cggcccgccg ccgcacgcca aggtggcgcc gctaagggag      960
gccgtgccgc ccggccgcac ccccgcgtac cgcgccgtca cgtggcccga gtacatgggc     1020
gtccgcaaga aggccttcac caccggcgca tccgcgctca agatggtcgc cctcgccgcc     1080
gccgccgccg ccgccgacct cgacgatgac gccggtgctg gcgccgccgc cgaacctgtc     1140
gtccatcagc agctactcgt ctcgtcgtag                                      1170
<210>  121
<211>  389
<212>  ПРТ
<213>  Sorghum bicolor
<400>  121
Met Pro Thr Pro Ser His Leu Ala Asn Pro Arg Tyr Phe Asp Phe Arg
1. 5                   10                  15
Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Thr His Ala Trp Pro Gly Leu His Asp
20                  25                  30
His Pro Val Val Asp Gly Gly Ala Pro Gly Pro Asp Ala Val Pro Val
35                  40                  45
Val Asp Leu Ala Gly Ala Ala Asp Glu Pro Arg Ala Ala Val Val Ala
50                  55                  60
Gln Val Ala Arg Ala Ala Glu Gln Trp Gly Ala Phe Leu Leu Thr Gly
65                  70                  75                  80
His Gly Val Pro Ala Glu Leu Leu Ala Arg Val Glu Asp Arg Ile Ala
85                  90                  95
Thr Met Phe Ala Leu Pro Ala Asp Asp Lys Met Arg Ala Val Arg Gly
100                 105                 110
Pro Gly Asp Ala Cys Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe
115                 120                 125
Ser Lys Cys Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ala Asn Leu
130                 135                 140
Arg Ala Asp Leu Arg Lys Leu Trp Pro Lys Ala Gly Asp Asp Tyr Thr
145                 150                 155                 160
Ser Phe Cys Asp Val Met Glu Glu Phe His Lys His Met Arg Ala Leu
165                 170                 175
Ala Asp Lys Leu Leu Glu Leu Phe Leu Met Ala Leu Gly Leu Thr Asp
180                 185                 190
Glu Gln Val Gly Gly Val Glu Ala Glu Arg Arg Ile Ala Glu Thr Met
195                 200                 205
Thr Ala Thr Met His Leu Asn Trp Tyr Pro Arg Cys Pro Asp Pro Arg
210                 215                 220
Arg Ala Leu Gly Leu Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe
225                 230                 235                 240
Val Leu Gln Ser Leu Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg His Ala Pro
245                 250                 255
Asp Arg Trp Val Ala Val Pro Ala Val Pro Gly Ala Phe Val Val Asn
260                 265                 270
Val Gly Asp Leu Phe His Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val
275                 280                 285
Tyr His Arg Ala Val Val Asn Arg Asp Leu Asp Arg Ile Ser Leu Gly
290                 295                 300
Tyr Phe Leu Gly Pro Pro Pro His Ala Lys Val Ala Pro Leu Arg Glu
305                 310                 315                 320
Ala Val Pro Pro Gly Arg Thr Pro Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro
325                 330                 335
Glu Tyr Met Gly Val Arg Lys Lys Ala Phe Thr Thr Gly Ala Ser Ala
340                 345                 350
Leu Lys Met Val Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Asp Leu Asp
355                 360                 365
Asp Asp Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Glu Pro Val Val His Gln Gln
370                 375                 380
Leu Leu Val Ser Ser
385
<210>  122
<211>  2321
<212>  ДНК
<213>  Sorghum bicolor
<400>  122
tataaatacc acgccatgta cttctctgct tctacacttc tccagcttct ctcatgccat       60
accactagtg caaggtccta gatttacact tggtgctaca gcttcttcct ccctccctcc      120
cctctctagg cagctagcac gcagcgcagc acacgaaaca tctattgacc ggccgcctcc      180
gccggggatc cataattact atactaccaa tcggccagcg tcatgccgac gccgtcgcac      240
ctcgcgaacc cgcgctactt cgacttccgt gcggcgcggc gggtgccgga gacgcacgcc      300
tggccggggc tgcacgacca ccccgtcgtg gacggcggcg cgccggggcc agacgccgtc      360
cccgtggtgg acctcgcggg ggcggcggac gagccgagag ccgcggtggt ggcccaagtg      420
gcgcgcgccg ccgagcaatg gggcgcgttc ctgctcacgg ggcacggcgt ccccgcggag      480
ctgctggcgc gcgtcgagga ccggatcgcc accatgttcg cgctgccagc ggacgacaag      540
atgcgcgccg tgcgcgggcc tggcgacgcc tgcggctacg gctccccgcc catctcctcc      600
ttcttctcca agtgcatgtg gtcggaggga tacaccttct cgccggccaa cctccgcgcc      660
gacctccgca agctctggcc taaggccggc gacgactaca ccagcttctg gtacgtgcac      720
ccgccggccg cgcgccgcca cacaccgtac ccacacacgt gcgcgctcgc gcctagctac      780
tagtagctgc tttgctttgc ttacctttga ttctcgcctt tgccatgcat atgcatgatg      840
cacgtacagg tactgcaggt acaacatgtc acacgcacgc acgcacgcac aacccatagt      900
ccgatacgat acatcatcga tcgacgtgtc gtcaccgtct aaggccatgc atgcatgcaa      960
gcacacgcct agaccttttt agcatgctgg ctgacgagga gtatactagc taataagcta     1020
cttgtcactg cgcgtcttgc ttaattacac tagtgcatat ttctacagtg atgtgatgga     1080
ggagttccac aagcacatgc gtgccctcgc ggacaagctg ctggagctgt tcctcatggc     1140
gctggggctc accgacgagc aggtcggcgg cgtggaggcg gagcggagga tcgccgagac     1200
gatgaccgcc accatgcacc tcaactggta ccctcggtgc ccggacccgc gccgcgcgct     1260
ggggctgatc gcgcacaccg actcgggctt cttcaccttc gtgctgcaga gcctcgtccc     1320
ggggctgcag ctcttccgcc acgccccgga ccggtgggtg gcggtgccgg cggtaccggg     1380
cgccttcgtc gtcaacgtgg gcgacctctt ccacatcctc accaacggcc ggttccacag     1440
cgtgtaccac cgcgccgtcg tgaaccggga cctcgacagg atatctctcg gctacttcct     1500
cggcccgccg ccgcacgcca aggtggcgcc gctaagggag gccgtgccgc ccggccgcac     1560
ccccgcgtac cgcgccgtca cgtggcccga gtacatgggc gtccgcaaga aggccttcac     1620
caccggcgca tccgcgctca agatggtcgc cctcgccgcc gccgccgccg ccgccgacct     1680
cgacgatgac gccggtgctg gcgccgccgc cgaacctgtc gtccatcagc agctactcgt     1740
ctcgtcgtag ccgatcgatc gccggatcgg tcgagactga tgatgatgat gcatatatac     1800
tcgtcgatgg agtagacaga ctaatcaagc aaccctgaaa ctatgaatgc atgcgtgcgc     1860
ttcgtgcttg cttgcgcatg cagctagcag gcttcattcc gttccgcagc tgctctgctc     1920
caacctgctc tgctggattg atgtatatgg tagaagaatt aagagatcga tggatgacgg     1980
aggaagaaga agacgaagac gacgatgagg aaaaggacac gctgtacgta gctggttctt     2040
ctagtctagt ttacagcagg ccgggcggcc ggctgctgct tccaatcgag tttgtcgtta     2100
ctgacgattg ttagtggatc gattaactaa tctggaattc tggattatta atataatgca     2160
tgtggtttgg catctggcgt aaagcaggta atggtaccta gccagtagcc agtagccagg     2220
ctggtcaatg ataggtctat accctgatcc tgtactgttg tttctttcgg tctttctgag     2280
agagaaaaaa aacgaatata tggcgtactc aattcatcaa a                         2321
<210>  123
<211>  1796
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  123
actagtgcaa ggtcctagat ttacacttgg tgcttgcttg tttcttccta gttgctactg       60
gtagcacgca gtggctggct ggccgtaatc tattgtctgg gctcgatcgg tgattaggaa      120
gtagccaaag caagctaagg ccgccgccgc cgccgccatg ccgacgccgt cgcacctcaa      180
gaacccgctc tacttcgact tccgcgccgc gcggcgggtg ccggagtccc acgcctggcc      240
ggggctcgac gaccaccccg tggtggacgg cggcggcgcg ccggggtccc cggacgccgt      300
gccggtggtg gacctgcgcg agccgggcgc cgcggcggtg gcccgcgtgg cgcgcgccgc      360
cgagcagtgg ggcgcgttcc tgctcaccgg ccacggcgtc cccgcggagc tcctggcgcg      420
cgtcgaggac cgcgtcgcgt gcatgttcgc gctgccggcc gccgacaaga tgcgcgccgt      480
gcgcgggccg ggggacgcct gcggctacgg ctcgccgccc atctcctcct tcttctccaa      540
gtgcatgtgg tccgagggct acaccttctc gccggcctcc ctccgccgcg acctccgcaa      600
gctctggccc aaggccggcg acgactacga cagcttctgt gacgtgatgg aggagttcca      660
caaggagatg cgcgccctcg ccgacaggct cctggagctg ttcctcaggg cgctcgggct      720
caccggcgag caggtcggcg ccgtcgaggc ggagcggagg atcggcgaga cgatgaccgc      780
caccatgcac ctcaactggt atccgaggtg cccggacccg cggcgcgcgc tggggctgat      840
cgcgcacacg gactcgggct tcttcacctt cgtgctgcag agcctcgtgc cggggctgca      900
gctgttccgg cacggcccca accggtgggt ggcggtgccg gccgtgccgg gcgccttcgt      960
cgtcaacgtc ggcgacctct tccacatcct cacgaacggc cgcttccaca gcgtgtacca     1020
ccgcgccgtc gtcaaccggg acctcgaccg gatatcgctc ggctacttcc tcggcccgcc     1080
gccccacgcc aaggtggcgc cgctccggga ggtcgtgccg ccgggccggg cccccgccta     1140
ccgcgccgtc acgtggcccg agtacatggg cgtccgcaag aaggccttca ccaccggcgc     1200
ctccgcgctc aagatggtcg ccgccgccgc cgccgccacc gaatccgacg acaccgacgc     1260
agccgccgcc gccgttcacc agccgccggt cgtcgtctca tcgtagccga tcgatcgccg     1320
gaaacacaga cgatgcatac cgtaccccga gcaatctaat caaaacaagg catccattct     1380
cgcgcgcatg cagcggccag ccgggcttcc gcagctgctc ggcctcctct gctggctgtg     1440
gaaatggaaa attttaatct gagatgaaga cgaagacgaa gacgaaacgg agaggaaaag     1500
gacatgctgt agctgtttct tctagttgcg caggccgctc ccagtcgagt ttgtcgttac     1560
tgacgattat tactctgatg aaaactaatc tgaattaatg catgtagttt ggcaatttgg     1620
tactaaaggt aggcacctag ccaggctggt caatgatagg tctataacct gatcctgttc     1680
tctgttgttt tcctttgtct gagaaaaaat ggaaataatt gatccggccg gacgggtgta     1740
ctgataggtg atgctgaatt gctgatgcaa gaggttgcga gctgcagtga gcagca         1796
<210>  124
<211>  1149
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  124
atgccgacgc cgtcgcacct caagaacccg ctctacttcg acttccgcgc cgcgcggcgg       60
gtgccggagt cccacgcctg gccggggctc gacgaccacc ccgtggtgga cggcggcggc      120
gcgccggggt ccccggacgc cgtgccggtg gtggacctgc gcgagccggg cgccgcggcg      180
gtggcccgcg tggcgcgcgc cgccgagcag tggggcgcgt tcctgctcac cggccacggc      240
gtccccgcgg agctcctggc gcgcgtcgag gaccgcgtcg cgtgcatgtt cgcgctgccg      300
gccgccgaca agatgcgcgc cgtgcgcggg ccgggggacg cctgcggcta cggctcgccg      360
cccatctcct ccttcttctc caagtgcatg tggtccgagg gctacacctt ctcgccggcc      420
tccctccgcc gcgacctccg caagctctgg cccaaggccg gcgacgacta cgacagcttc      480
tgtgacgtga tggaggagtt ccacaaggag atgcgcgccc tcgccgacag gctcctggag      540
ctgttcctca gggcgctcgg gctcaccggc gagcaggtcg gcgccgtcga ggcggagcgg      600
aggatcggcg agacgatgac cgccaccatg cacctcaact ggtatccgag gtgcccggac      660
ccgcggcgcg cgctggggct gatcgcgcac acggactcgg gcttcttcac cttcgtgctg      720
cagagcctcg tgccggggct gcagctgttc cggcacggcc ccaaccggtg ggtggcggtg      780
ccggccgtgc cgggcgcctt cgtcgtcaac gtcggcgacc tcttccacat cctcacgaac      840
ggccgcttcc acagcgtgta ccaccgcgcc gtcgtcaacc gggacctcga ccggatatcg      900
ctcggctact tcctcggccc gccgccccac gccaaggtgg cgccgctccg ggaggtcgtg      960
ccgccgggcc gggcccccgc ctaccgcgcc gtcacgtggc ccgagtacat gggcgtccgc     1020
aagaaggcct tcaccaccgg cgcctccgcg ctcaagatgg tcgccgccgc cgccgccgcc     1080
accgaatccg acgacaccga cgcagccgcc gccgccgttc accagccgcc ggtcgtcgtc     1140
tcatcgtag                                                             1149
<210>  125
<211>  382
<212>  ПРТ
<213>  Setaria italica
<400>  125
Met Pro Thr Pro Ser His Leu Lys Asn Pro Leu Tyr Phe Asp Phe Arg
1. 5                   10                  15
Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Ser His Ala Trp Pro Gly Leu Asp Asp
20                  25                  30
His Pro Val Val Asp Gly Gly Gly Ala Pro Gly Ser Pro Asp Ala Val
35                  40                  45
Pro Val Val Asp Leu Arg Glu Pro Gly Ala Ala Ala Val Ala Arg Val
50                  55                  60
Ala Arg Ala Ala Glu Gln Trp Gly Ala Phe Leu Leu Thr Gly His Gly
65                  70                  75                  80
Val Pro Ala Glu Leu Leu Ala Arg Val Glu Asp Arg Val Ala Cys Met
85                  90                  95
Phe Ala Leu Pro Ala Ala Asp Lys Met Arg Ala Val Arg Gly Pro Gly
100                 105                 110
Asp Ala Cys Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe Ser Lys
115                 120                 125
Cys Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ala Ser Leu Arg Arg
130                 135                 140
Asp Leu Arg Lys Leu Trp Pro Lys Ala Gly Asp Asp Tyr Asp Ser Phe
145                 150                 155                 160
Cys Asp Val Met Glu Glu Phe His Lys Glu Met Arg Ala Leu Ala Asp
165                 170                 175
Arg Leu Leu Glu Leu Phe Leu Arg Ala Leu Gly Leu Thr Gly Glu Gln
180                 185                 190
Val Gly Ala Val Glu Ala Glu Arg Arg Ile Gly Glu Thr Met Thr Ala
195                 200                 205
Thr Met His Leu Asn Trp Tyr Pro Arg Cys Pro Asp Pro Arg Arg Ala
210                 215                 220
Leu Gly Leu Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe Val Leu
225                 230                 235                 240
Gln Ser Leu Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg His Gly Pro Asn Arg
245                 250                 255
Trp Val Ala Val Pro Ala Val Pro Gly Ala Phe Val Val Asn Val Gly
260                 265                 270
Asp Leu Phe His Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val Tyr His
275                 280                 285
Arg Ala Val Val Asn Arg Asp Leu Asp Arg Ile Ser Leu Gly Tyr Phe
290                 295                 300
Leu Gly Pro Pro Pro His Ala Lys Val Ala Pro Leu Arg Glu Val Val
305                 310                 315                 320
Pro Pro Gly Arg Ala Pro Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu Tyr
325                 330                 335
Met Gly Val Arg Lys Lys Ala Phe Thr Thr Gly Ala Ser Ala Leu Lys
340                 345                 350
Met Val Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Glu Ser Asp Asp Thr Asp Ala
355                 360                 365
Ala Ala Ala Ala Val His Gln Pro Pro Val Val Val Ser Ser
370                 375                 380
<210>  126
<211>  2146
<212>  ДНК
<213>  Setaria italica
<400>  126
actagtgcaa ggtcctagat ttacacttgg tgcttgcttg tttcttccta gttgctactg       60
gtagcacgca gtggctggct ggccgtaatc tattgtctgg gctcgatcgg tgattaggaa      120
gtagccaaag caagctaagg ccgccgccgc cgccgccatg ccgacgccgt cgcacctcaa      180
gaacccgctc tacttcgact tccgcgccgc gcggcgggtg ccggagtccc acgcctggcc      240
ggggctcgac gaccaccccg tggtggacgg cggcggcgcg ccggggtccc cggacgccgt      300
gccggtggtg gacctgcgcg agccgggcgc cgcggcggtg gcccgcgtgg cgcgcgccgc      360
cgagcagtgg ggcgcgttcc tgctcaccgg ccacggcgtc cccgcggagc tcctggcgcg      420
cgtcgaggac cgcgtcgcgt gcatgttcgc gctgccggcc gccgacaaga tgcgcgccgt      480
gcgcgggccg ggggacgcct gcggctacgg ctcgccgccc atctcctcct tcttctccaa      540
gtgcatgtgg tccgagggct acaccttctc gccggcctcc ctccgccgcg acctccgcaa      600
gctctggccc aaggccggcg acgactacga cagcttctgg tacgtcgtcg tctatagcta      660
gtagctagcc gccggcacac gtgcgcctga cctgctccgc catgcatggt gcacgtatgc      720
agatcgatca cacgcaccga tcgatcgacg tgtcccggtc aaggccatgc atgcatgcaa      780
gcaaccaaca gcacgcctcc tgatactgct tgttgcttac accgttggta tgtgcctgtt      840
gcctacagtg acgtgatgga ggagttccac aaggagatgc gcgccctcgc cgacaggctc      900
ctggagctgt tcctcagggc gctcgggctc accggcgagc aggtcggcgc cgtcgaggcg      960
gagcggagga tcggcgagac gatgaccgcc accatgcacc tcaactggta tgtgccatgc     1020
catgaccacc tgcgtctatg aactaacgga agcttccatc gcgtgtccat gacgatttag     1080
aagctgtagt ccagagcttg agacaaacga aacgaagctt acatggtggc gtgacgtgtc     1140
gcgtgcaggt atccgaggtg cccggacccg cggcgcgcgc tggggctgat cgcgcacacg     1200
gactcgggct tcttcacctt cgtgctgcag agcctcgtgc cggggctgca gctgttccgg     1260
cacggcccca accggtgggt ggcggtgccg gccgtgccgg gcgccttcgt cgtcaacgtc     1320
ggcgacctct tccacatcct cacgaacggc cgcttccaca gcgtgtacca ccgcgccgtc     1380
gtcaaccggg acctcgaccg gatatcgctc ggctacttcc tcggcccgcc gccccacgcc     1440
aaggtggcgc cgctccggga ggtcgtgccg ccgggccggg cccccgccta ccgcgccgtc     1500
acgtggcccg agtacatggg cgtccgcaag aaggccttca ccaccggcgc ctccgcgctc     1560
aagatggtcg ccgccgccgc cgccgccacc gaatccgacg acaccgacgc agccgccgcc     1620
gccgttcacc agccgccggt cgtcgtctca tcgtagccga tcgatcgccg gaaacacaga     1680
cgatgcatac cgtaccccga gcaatctaat caaaacaagg catccattct cgcgcgcatg     1740
cagcggccag ccgggcttcc gcagctgctc ggcctcctct gctggctgtg gaaatggaaa     1800
attttaatct gagatgaaga cgaagacgaa gacgaaacgg agaggaaaag gacatgctgt     1860
agctgtttct tctagttgcg caggccgctc ccagtcgagt ttgtcgttac tgacgattat     1920
tactctgatg aaaactaatc tgaattaatg catgtagttt ggcaatttgg tactaaaggt     1980
aggcacctag ccaggctggt caatgatagg tctataacct gatcctgttc tctgttgttt     2040
tcctttgtct gagaaaaaat ggaaataatt gatccggccg gacgggtgta ctgataggtg     2100
atgctgaatt gctgatgcaa gaggttgcga gctgcagtga gcagca                    2146
<210>  127
<211>  1933
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  127
actactcatt ccactattgt aaagtcatag aaaaaattta tatagagaga aaaaattagt       60
gttgttattg ttactggctt tctgccagac gagacgagcg agcgcgcgag tgtgttgctc      120
tctggtcatc gtcgtcgtcg tcgcgatgcc gacgccgtcg cacttgaaga acccgctctg      180
cttcgacttc cgggcggcga ggcgggtgcc ggagacgcac gcgtggccgg ggctggacga      240
ccacccggtg gtggacggcg gcggcggcgg cggcgaggac gcggtgccgg tggtggacgt      300
cggggcgggc gacgcggcgg cgcgggtggc gcgggcggcg gagcagtggg gcgcgttcct      360
tctggtcggg cacggcgtgc cggcggcgct gctgtcgcgc gtcgaggagc gcgtcgcccg      420
cgtgttctcc ctgccggcgt cggagaagat gcgcgccgtc cgcggccccg gcgagccctg      480
cggctacggc tcgccgccca tctcctcctt cttctccaag ctcatgtggt ccgagggcta      540
caccttctcc ccttcctccc tccgctccga gctccgccgc ctctggccca agtccggcga      600
cgactacctc ctcttctgtg acgtgatgga ggagtttcac aaggagatgc ggcggctagc      660
cgacgagttg ctgaggttgt tcttgagggc gctggggctc accggcgagg aggtcgccgg      720
agtcgaggcg gagaggagga tcggcgagag gatgacggcg acggtgcacc tcaactggta      780
cccgaggtgc ccggagccgc ggcgagcgct ggggctcatc gcgcacacgg actcgggctt      840
cttcaccttc gtgctccaga gcctcgtccc ggggctgcag ctgttccgtc gagggcccga      900
ccggtgggtg gcggtgccgg cggtggcggg ggccttcgtc gtcaacgtcg gcgacctctt      960
ccacatcctc accaacggcc gcttccacag cgtctaccac cgcgccgtcg tgaaccgcga     1020
ccgcgaccgg gtctcgctcg gctacttcct cggcccgccg ccggacgccg aggtggcgcc     1080
gctgccggag gccgtgccgg ccggccggag ccccgcctac cgcgctgtca cgtggccgga     1140
gtacatggcc gtccgcaaga aggccttcgc caccggcggc tccgccctca agatggtctc     1200
caccgacgcc gccgccgccg ccgacgaaca cgacgacgtc gccgccgccg ccgacgtcca     1260
cgcataagct atagctacta gctacctcga tctcacgcaa aaaaaaaaag aaacaattaa     1320
tagagcaaaa aaaaaaagaa gagaaaatgg tggtacttgt gtttaaggtt tcctccatgc     1380
aaaatggttt gcatgcatgc atgcaaagct agcatctgca gctgcaagaa ttacaagagc     1440
agagaagcag acagctagat ggagataatt aattaattaa ttaatctaat taagcatgca     1500
ataattaaga ttattattct gatttcagaa ctgaaaaaaa aagtgtggtt aattaattat     1560
tggttaggct taattttatc tagatgtaga aaaagaatca agatcttcaa gcaagagaga     1620
agaggatcga agaagaagga aaagaaaacg aaaaggacat gctgtgttgt ctcttctagt     1680
tgtaccctgg ctgctgatta agtgctttgt tttgttgctg caagcttgtc gttactgatt     1740
attagttagt tatgcatcta attgattaaa ctaatctgtt tggcattttg gctcgagcta     1800
agctatagcc aggctggtca atgataggaa cttgtacaat ttaagcaatt gaacctgatc     1860
ctgtactggc atgtatgtat atatgcaagt gatgagaacc actagctagt atagctagac     1920
atgtatttgt ata                                                        1933
<210>  128
<211>  1122
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  128
atgccgacgc cgtcgcactt gaagaacccg ctctgcttcg acttccgggc ggcgaggcgg       60
gtgccggaga cgcacgcgtg gccggggctg gacgaccacc cggtggtgga cggcggcggc      120
ggcggcggcg aggacgcggt gccggtggtg gacgtcgggg cgggcgacgc ggcggcgcgg      180
gtggcgcggg cggcggagca gtggggcgcg ttccttctgg tcgggcacgg cgtgccggcg      240
gcgctgctgt cgcgcgtcga ggagcgcgtc gcccgcgtgt tctccctgcc ggcgtcggag      300
aagatgcgcg ccgtccgcgg ccccggcgag ccctgcggct acggctcgcc gcccatctcc      360
tccttcttct ccaagctcat gtggtccgag ggctacacct tctccccttc ctccctccgc      420
tccgagctcc gccgcctctg gcccaagtcc ggcgacgact acctcctctt ctgtgacgtg      480
atggaggagt ttcacaagga gatgcggcgg ctagccgacg agttgctgag gttgttcttg      540
agggcgctgg ggctcaccgg cgaggaggtc gccggagtcg aggcggagag gaggatcggc      600
gagaggatga cggcgacggt gcacctcaac tggtacccga ggtgcccgga gccgcggcga      660
gcgctggggc tcatcgcgca cacggactcg ggcttcttca ccttcgtgct ccagagcctc      720
gtcccggggc tgcagctgtt ccgtcgaggg cccgaccggt gggtggcggt gccggcggtg      780
gcgggggcct tcgtcgtcaa cgtcggcgac ctcttccaca tcctcaccaa cggccgcttc      840
cacagcgtct accaccgcgc cgtcgtgaac cgcgaccgcg accgggtctc gctcggctac      900
ttcctcggcc cgccgccgga cgccgaggtg gcgccgctgc cggaggccgt gccggccggc      960
cggagccccg cctaccgcgc tgtcacgtgg ccggagtaca tggccgtccg caagaaggcc     1020
ttcgccaccg gcggctccgc cctcaagatg gtctccaccg acgccgccgc cgccgccgac     1080
gaacacgacg acgtcgccgc cgccgccgac gtccacgcat aa                        1122
<210>  129
<211>  373
<212>  ПРТ
<213>  Oryza sativa
<400>  129
Met Pro Thr Pro Ser His Leu Lys Asn Pro Leu Cys Phe Asp Phe Arg
1. 5                   10                  15
Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Thr His Ala Trp Pro Gly Leu Asp Asp
20                  25                  30
His Pro Val Val Asp Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Asp Ala Val Pro
35                  40                  45
Val Val Asp Val Gly Ala Gly Asp Ala Ala Ala Arg Val Ala Arg Ala
50                  55                  60
Ala Glu Gln Trp Gly Ala Phe Leu Leu Val Gly His Gly Val Pro Ala
65                  70                  75                  80
Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Glu Arg Val Ala Arg Val Phe Ser Leu
85                  90                  95
Pro Ala Ser Glu Lys Met Arg Ala Val Arg Gly Pro Gly Glu Pro Cys
100                 105                 110
Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe Ser Lys Leu Met Trp
115                 120                 125
Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ser Ser Leu Arg Ser Glu Leu Arg
130                 135                 140
Arg Leu Trp Pro Lys Ser Gly Asp Asp Tyr Leu Leu Phe Cys Asp Val
145                 150                 155                 160
Met Glu Glu Phe His Lys Glu Met Arg Arg Leu Ala Asp Glu Leu Leu
165                 170                 175
Arg Leu Phe Leu Arg Ala Leu Gly Leu Thr Gly Glu Glu Val Ala Gly
180                 185                 190
Val Glu Ala Glu Arg Arg Ile Gly Glu Arg Met Thr Ala Thr Val His
195                 200                 205
Leu Asn Trp Tyr Pro Arg Cys Pro Glu Pro Arg Arg Ala Leu Gly Leu
210                 215                 220
Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe Val Leu Gln Ser Leu
225                 230                 235                 240
Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg Arg Gly Pro Asp Arg Trp Val Ala
245                 250                 255
Val Pro Ala Val Ala Gly Ala Phe Val Val Asn Val Gly Asp Leu Phe
260                 265                 270
His Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val Tyr His Arg Ala Val
275                 280                 285
Val Asn Arg Asp Arg Asp Arg Val Ser Leu Gly Tyr Phe Leu Gly Pro
290                 295                 300
Pro Pro Asp Ala Glu Val Ala Pro Leu Pro Glu Ala Val Pro Ala Gly
305                 310                 315                 320
Arg Ser Pro Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu Tyr Met Ala Val
325                 330                 335
Arg Lys Lys Ala Phe Ala Thr Gly Gly Ser Ala Leu Lys Met Val Ser
340                 345                 350
Thr Asp Ala Ala Ala Ala Ala Asp Glu His Asp Asp Val Ala Ala Ala
355                 360                 365
Ala Asp Val His Ala
370
<210>  130
<211>  2040
<212>  ДНК
<213>  Oryza sativa
<400>  130
actactcatt ccactattgt aaagtcatag aaaaaattta tatagagaga aaaaattagt       60
gttgttattg ttactggctt tctgccagac gagacgagcg agcgcgcgag tgtgttgctc      120
tctggtcatc gtcgtcgtcg tcgcgatgcc gacgccgtcg cacttgaaga acccgctctg      180
cttcgacttc cgggcggcga ggcgggtgcc ggagacgcac gcgtggccgg ggctggacga      240
ccacccggtg gtggacggcg gcggcggcgg cggcgaggac gcggtgccgg tggtggacgt      300
cggggcgggc gacgcggcgg cgcgggtggc gcgggcggcg gagcagtggg gcgcgttcct      360
tctggtcggg cacggcgtgc cggcggcgct gctgtcgcgc gtcgaggagc gcgtcgcccg      420
cgtgttctcc ctgccggcgt cggagaagat gcgcgccgtc cgcggccccg gcgagccctg      480
cggctacggc tcgccgccca tctcctcctt cttctccaag ctcatgtggt ccgagggcta      540
caccttctcc ccttcctccc tccgctccga gctccgccgc ctctggccca agtccggcga      600
cgactacctc ctcttctggt atatatacat atatactctc ccatgcattc catgcacata      660
cactctacgt atatatctac ctctacgtat atatctacgt attgatctac gtataatata      720
cgcagtgacg tgatggagga gtttcacaag gagatgcggc ggctagccga cgagttgctg      780
aggttgttct tgagggcgct ggggctcacc ggcgaggagg tcgccggagt cgaggcggag      840
aggaggatcg gcgagaggat gacggcgacg gtgcacctca actggtaccc gaggtgcccg      900
gagccgcggc gagcgctggg gctcatcgcg cacacggact cgggcttctt caccttcgtg      960
ctccagagcc tcgtcccggg gctgcagctg ttccgtcgag ggcccgaccg gtgggtggcg     1020
gtgccggcgg tggcgggggc cttcgtcgtc aacgtcggcg acctcttcca catcctcacc     1080
aacggccgct tccacagcgt ctaccaccgc gccgtcgtga accgcgaccg cgaccgggtc     1140
tcgctcggct acttcctcgg cccgccgccg gacgccgagg tggcgccgct gccggaggcc     1200
gtgccggccg gccggagccc cgcctaccgc gctgtcacgt ggccggagta catggccgtc     1260
cgcaagaagg ccttcgccac cggcggctcc gccctcaaga tggtctccac cgacgccgcc     1320
gccgccgccg acgaacacga cgacgtcgcc gccgccgccg acgtccacgc ataagctata     1380
gctactagct acctcgatct cacgcaaaaa aaaaaagaaa caattaatag agcaaaaaaa     1440
aaaagaagag aaaatggtgg tacttgtgtt taaggtttcc tccatgcaaa atggtttgca     1500
tgcatgcatg caaagctagc atctgcagct gcaagaatta caagagcaga gaagcagaca     1560
gctagatgga gataattaat taattaatta atctaattaa gcatgcaata attaagatta     1620
ttattctgat ttcagaactg aaaaaaaaag tgtggttaat taattattgg ttaggcttaa     1680
ttttatctag atgtagaaaa agaatcaaga tcttcaagca agagagaaga ggatcgaaga     1740
agaaggaaaa gaaaacgaaa aggacatgct gtgttgtctc ttctagttgt accctggctg     1800
ctgattaagt gctttgtttt gttgctgcaa gcttgtcgtt actgattatt agttagttat     1860
gcatctaatt gattaaacta atctgtttgg cattttggct cgagctaagc tatagccagg     1920
ctggtcaatg ataggaactt gtacaattta agcaattgaa cctgatcctg tactggcatg     1980
tatgtatata tgcaagtgat gagaaccact agctagtata gctagacatg tatttgtata     2040
<210>  131
<211>  1332
<212>  ДНК
<213>  Hordeum vulgare
<400>  131
acactcactc ctcaatccat ccgtctccac cattgctcgc tagctcgagc tctactagct       60
agcactgcaa agtcagccgg gccggagttg atttggtcct tgttagcttg accgatcgta      120
tacgtatcgc caggatgccg acgccgtcgc acctgagcaa ggacccgcac tacttcgact      180
tccgggcggc gcggcgggtg ccggagacac acgcgtggcc ggggctgcac gaccacccgg      240
tggtggacgg cggcggcgcg ggcggagggc cggacgcggt gccggtggtg gacatgcgcg      300
acccgtgcgc cgcggaggcg gtggcgctgg ccgcgcagga ctggggcgcc ttcctcttgc      360
agggccacgg cgtcccgttg gagctgctgg cccgcgtgga ggccgcgata gcgggcatgt      420
tcgcgctgcc ggcgtcggag aagatgcgcg ccgtgcggcg gcccggcgac tcgtgcggct      480
acgggtcgcc gcccatctcc tccttcttct ccaagtgcat gtggtccgag ggctacacct      540
tctccccggc caacctccgc tccgacctcc gcaagctctg gcccaaggcc ggccacgact      600
accgccactt ctgtgccgtg atggaggagt tccacaggga gatgcgcgtt ctggccgaca      660
agctgctgga gctgttcctg gtggccctcg ggctcaccgg cgagcaggtc gccgccgtcg      720
agtcggagca caagatcgcc gagaccatga ccgccacaat gcacctcaac tggtacccca      780
agtgcccgga cccgaagcga gcgctgggcc tgatcgcgca cacggactcg ggcttcttca      840
ccttcgtgct ccagagcctg gtgcccgggc tgcagctgtt ccggcacggc cccgaccgtt      900
gggtgacggt gcccgccgtg ccgggcgcca tggtcgtcaa cgtcggcgac ctcttccaca      960
tcctcaccaa tggccgcttc cacagcgtct accaccgcgc cgtcgtcaac cgcgacagcg     1020
accggatatc gctggggtac ttcctcggcc cgcccgccca cgttaaggtg gcgccgctca     1080
gggaggccct cgccggcacg cccgctgcct accgcgccgt cacgtggccc gagtacatgg     1140
gcgtgcgcaa gaaggccttc accaccggcg cctccgcgct caagatggtc gccatctcca     1200
ccgacgacgc cgccgacgtc ctccccgacg tcctctcgtc gtagatcggc gccggccatc     1260
acccggccgg ccaagagacc gatctataca aacaattagt gaacaaaaaa aaaaaaaaaa     1320
aaaaaaaaaa aa                                                         1332
<210>  132
<211>  1110
<212>  ДНК
<213>  Hordeum vulgare
<400>  132
atgccgacgc cgtcgcacct gagcaaggac ccgcactact tcgacttccg ggcggcgcgg       60
cgggtgccgg agacacacgc gtggccgggg ctgcacgacc acccggtggt ggacggcggc      120
ggcgcgggcg gagggccgga cgcggtgccg gtggtggaca tgcgcgaccc gtgcgccgcg      180
gaggcggtgg cgctggccgc gcaggactgg ggcgccttcc tcttgcaggg ccacggcgtc      240
ccgttggagc tgctggcccg cgtggaggcc gcgatagcgg gcatgttcgc gctgccggcg      300
tcggagaaga tgcgcgccgt gcggcggccc ggcgactcgt gcggctacgg gtcgccgccc      360
atctcctcct tcttctccaa gtgcatgtgg tccgagggct acaccttctc cccggccaac      420
ctccgctccg acctccgcaa gctctggccc aaggccggcc acgactaccg ccacttctgt      480
gccgtgatgg aggagttcca cagggagatg cgcgttctgg ccgacaagct gctggagctg      540
ttcctggtgg ccctcgggct caccggcgag caggtcgccg ccgtcgagtc ggagcacaag      600
atcgccgaga ccatgaccgc cacaatgcac ctcaactggt accccaagtg cccggacccg      660
aagcgagcgc tgggcctgat cgcgcacacg gactcgggct tcttcacctt cgtgctccag      720
agcctggtgc ccgggctgca gctgttccgg cacggccccg accgttgggt gacggtgccc      780
gccgtgccgg gcgccatggt cgtcaacgtc ggcgacctct tccacatcct caccaatggc      840
cgcttccaca gcgtctacca ccgcgccgtc gtcaaccgcg acagcgaccg gatatcgctg      900
gggtacttcc tcggcccgcc cgcccacgtt aaggtggcgc cgctcaggga ggccctcgcc      960
ggcacgcccg ctgcctaccg cgccgtcacg tggcccgagt acatgggcgt gcgcaagaag     1020
gccttcacca ccggcgcctc cgcgctcaag atggtcgcca tctccaccga cgacgccgcc     1080
gacgtcctcc ccgacgtcct ctcgtcgtag                                      1110
<210>  133
<211>  369
<212>  ПРТ
<213>  Hordeum vulgare
<400>  133
Met Pro Thr Pro Ser His Leu Ser Lys Asp Pro His Tyr Phe Asp Phe
1. 5                   10                  15
Arg Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Thr His Ala Trp Pro Gly Leu His
20                  25                  30
Asp His Pro Val Val Asp Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Pro Asp Ala
35                  40                  45
Val Pro Val Val Asp Met Arg Asp Pro Cys Ala Ala Glu Ala Val Ala
50                  55                  60
Leu Ala Ala Gln Asp Trp Gly Ala Phe Leu Leu Gln Gly His Gly Val
65                  70                  75                  80
Pro Leu Glu Leu Leu Ala Arg Val Glu Ala Ala Ile Ala Gly Met Phe
85                  90                  95
Ala Leu Pro Ala Ser Glu Lys Met Arg Ala Val Arg Arg Pro Gly Asp
100                 105                 110
Ser Cys Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe Ser Lys Cys
115                 120                 125
Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ala Asn Leu Arg Ser Asp
130                 135                 140
Leu Arg Lys Leu Trp Pro Lys Ala Gly His Asp Tyr Arg His Phe Cys
145                 150                 155                 160
Ala Val Met Glu Glu Phe His Arg Glu Met Arg Val Leu Ala Asp Lys
165                 170                 175
Leu Leu Glu Leu Phe Leu Val Ala Leu Gly Leu Thr Gly Glu Gln Val
180                 185                 190
Ala Ala Val Glu Ser Glu His Lys Ile Ala Glu Thr Met Thr Ala Thr
195                 200                 205
Met His Leu Asn Trp Tyr Pro Lys Cys Pro Asp Pro Lys Arg Ala Leu
210                 215                 220
Gly Leu Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe Val Leu Gln
225                 230                 235                 240
Ser Leu Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg His Gly Pro Asp Arg Trp
245                 250                 255
Val Thr Val Pro Ala Val Pro Gly Ala Met Val Val Asn Val Gly Asp
260                 265                 270
Leu Phe His Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val Tyr His Arg
275                 280                 285
Ala Val Val Asn Arg Asp Ser Asp Arg Ile Ser Leu Gly Tyr Phe Leu
290                 295                 300
Gly Pro Pro Ala His Val Lys Val Ala Pro Leu Arg Glu Ala Leu Ala
305                 310                 315                 320
Gly Thr Pro Ala Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu Tyr Met Gly
325                 330                 335
Val Arg Lys Lys Ala Phe Thr Thr Gly Ala Ser Ala Leu Lys Met Val
340                 345                 350
Ala Ile Ser Thr Asp Asp Ala Ala Asp Val Leu Pro Asp Val Leu Ser
355                 360                 365
Ser
<210>  134
<211>  1653
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<220>
<221>  прочий_признак
<222>  (1594)..(1600)
<223>  n представляет собой a, c, g или t
<220>
<221>  прочий_признак
<222>  (1641)..(1641)
<223>  n представляет собой a, c, g или t
<400>  134
cacgagatcc atccgtctcc accattgctc gctagctcga gctcctagct agtactgcaa       60
agtcagccgg ggagttgatt tggtccttct tggcttgacc gatcgtacgt gccgccagga      120
tgccgacgcc ggcgcacctg agcaaggacc cgcgctactt cgacttccgg gcggcgcggc      180
gggtgccgga gacgcacgcg tggcccgggc tgcacgacca ccccgtggtg gacggcagcg      240
gcgcgggcgg agggccggac gcggtgccgg tggtggacat gcgcgacccg tgcgcggcgg      300
aggcggtggc gctggcggcg caggactggg gcgccttcct cctggagggc cacggcgtcc      360
cgttggagct gctggcgcgc gtggaggccg cgatcgcggg catgttcgcg ctgccggcgt      420
cggagaagat gcgcgccgtg cggcggcccg gcgactcgtg cggctacggg tcgccgccca      480
tctcctcctt cttctccaag tgcatgtggt ccgagggcta caccttctcc ccggccaacc      540
tccgctccga cctccgcaag ctctggccca aggccggcca cgactaccgc cacttctgcg      600
ccgtgatgga ggagttccac agggagatgc gcgcgctggc cgacaagctg ctggagctgt      660
tcctggtggc cctcgggctc accggcgagc aggtcgccgc cgtcgagtcc gagcagaaga      720
tcgccgagac catgaccgcc acaatgcacc tcaactggta ccccaagtgc ccggacccga      780
agcgggcgct gggcctgatc gcgcacacgg actcgggctt cttcaccttc gtgctgcaga      840
gccttgtgcc cgggctgcag ctgttccggc acggccccga ccggtgggtg acggtgcccg      900
ccgtgccggg ggccatggtc gtcaacgtcg gcgacctctt ccagatcctc accaacggcc      960
gcttccacag cgtctaccac cgcgccgtcg tcaaccgcga cagcgaccgg atatcgctcg     1020
gctacttcct cggcccgccc gcccacgtca aggtggcgcc gctcagggag gccctggccg     1080
gcacgcccgc cgcctaccgc gccgtcacgt ggcccgagta catgggcgtg cgcaagaagg     1140
ccttcaccac cggcgcctcc gcgctcaaga tggtcgccat ctccactgac aacgacgccg     1200
ccaaccacac ggacgacctg atctcgtcgt agatcggcgc cggccatcac cggccggcca     1260
agggatcgat ctacacacac aattagtgaa caaaaaaatg ccagagatgg tgcatggtgg     1320
gctggtagct tagctgaggt agctaggagg aagagcgcgc gtgcggctgt cgttcgtgcg     1380
gctgttcccg caaaaaaaaa aaaggtttcc tccatatatg tctccatgca gaactgcaga     1440
tgctggtggt ggatgcgtcc atgcagcagg gaacgaacta attgtaagaa aatcaagcaa     1500
acttagttct acatctgtaa ttaagtatgc atgccacttg gtttaattca attcaagtgc     1560
agaaaaaatt atgatgggaa aaaaaaagac atgnnnnnnn aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa     1620
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa naaaaaaaaa aaa                                  1653
<210>  135
<211>  1113
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  135
atgccgacgc cggcgcacct gagcaaggac ccgcgctact tcgacttccg ggcggcgcgg       60
cgggtgccgg agacgcacgc gtggcccggg ctgcacgacc accccgtggt ggacggcagc      120
ggcgcgggcg gagggccgga cgcggtgccg gtggtggaca tgcgcgaccc gtgcgcggcg      180
gaggcggtgg cgctggcggc gcaggactgg ggcgccttcc tcctggaggg ccacggcgtc      240
ccgttggagc tgctggcgcg cgtggaggcc gcgatcgcgg gcatgttcgc gctgccggcg      300
tcggagaaga tgcgcgccgt gcggcggccc ggcgactcgt gcggctacgg gtcgccgccc      360
atctcctcct tcttctccaa gtgcatgtgg tccgagggct acaccttctc cccggccaac      420
ctccgctccg acctccgcaa gctctggccc aaggccggcc acgactaccg ccacttctgc      480
gccgtgatgg aggagttcca cagggagatg cgcgcgctgg ccgacaagct gctggagctg      540
ttcctggtgg ccctcgggct caccggcgag caggtcgccg ccgtcgagtc cgagcagaag      600
atcgccgaga ccatgaccgc cacaatgcac ctcaactggt accccaagtg cccggacccg      660
aagcgggcgc tgggcctgat cgcgcacacg gactcgggct tcttcacctt cgtgctgcag      720
agccttgtgc ccgggctgca gctgttccgg cacggccccg accggtgggt gacggtgccc      780
gccgtgccgg gggccatggt cgtcaacgtc ggcgacctct tccagatcct caccaacggc      840
cgcttccaca gcgtctacca ccgcgccgtc gtcaaccgcg acagcgaccg gatatcgctc      900
ggctacttcc tcggcccgcc cgcccacgtc aaggtggcgc cgctcaggga ggccctggcc      960
ggcacgcccg ccgcctaccg cgccgtcacg tggcccgagt acatgggcgt gcgcaagaag     1020
gccttcacca ccggcgcctc cgcgctcaag atggtcgcca tctccactga caacgacgcc     1080
gccaaccaca cggacgacct gatctcgtcg tag                                  1113
<210>  136
<211>  370
<212>  ПРТ
<213>  Triticum aestivum
<400>  136
Met Pro Thr Pro Ala His Leu Ser Lys Asp Pro Arg Tyr Phe Asp Phe
1. 5                   10                  15
Arg Ala Ala Arg Arg Val Pro Glu Thr His Ala Trp Pro Gly Leu His
20                  25                  30
Asp His Pro Val Val Asp Gly Ser Gly Ala Gly Gly Gly Pro Asp Ala
35                  40                  45
Val Pro Val Val Asp Met Arg Asp Pro Cys Ala Ala Glu Ala Val Ala
50                  55                  60
Leu Ala Ala Gln Asp Trp Gly Ala Phe Leu Leu Glu Gly His Gly Val
65                  70                  75                  80
Pro Leu Glu Leu Leu Ala Arg Val Glu Ala Ala Ile Ala Gly Met Phe
85                  90                  95
Ala Leu Pro Ala Ser Glu Lys Met Arg Ala Val Arg Arg Pro Gly Asp
100                 105                 110
Ser Cys Gly Tyr Gly Ser Pro Pro Ile Ser Ser Phe Phe Ser Lys Cys
115                 120                 125
Met Trp Ser Glu Gly Tyr Thr Phe Ser Pro Ala Asn Leu Arg Ser Asp
130                 135                 140
Leu Arg Lys Leu Trp Pro Lys Ala Gly His Asp Tyr Arg His Phe Cys
145                 150                 155                 160
Ala Val Met Glu Glu Phe His Arg Glu Met Arg Ala Leu Ala Asp Lys
165                 170                 175
Leu Leu Glu Leu Phe Leu Val Ala Leu Gly Leu Thr Gly Glu Gln Val
180                 185                 190
Ala Ala Val Glu Ser Glu Gln Lys Ile Ala Glu Thr Met Thr Ala Thr
195                 200                 205
Met His Leu Asn Trp Tyr Pro Lys Cys Pro Asp Pro Lys Arg Ala Leu
210                 215                 220
Gly Leu Ile Ala His Thr Asp Ser Gly Phe Phe Thr Phe Val Leu Gln
225                 230                 235                 240
Ser Leu Val Pro Gly Leu Gln Leu Phe Arg His Gly Pro Asp Arg Trp
245                 250                 255
Val Thr Val Pro Ala Val Pro Gly Ala Met Val Val Asn Val Gly Asp
260                 265                 270
Leu Phe Gln Ile Leu Thr Asn Gly Arg Phe His Ser Val Tyr His Arg
275                 280                 285
Ala Val Val Asn Arg Asp Ser Asp Arg Ile Ser Leu Gly Tyr Phe Leu
290                 295                 300
Gly Pro Pro Ala His Val Lys Val Ala Pro Leu Arg Glu Ala Leu Ala
305                 310                 315                 320
Gly Thr Pro Ala Ala Tyr Arg Ala Val Thr Trp Pro Glu Tyr Met Gly
325                 330                 335
Val Arg Lys Lys Ala Phe Thr Thr Gly Ala Ser Ala Leu Lys Met Val
340                 345                 350
Ala Ile Ser Thr Asp Asn Asp Ala Ala Asn His Thr Asp Asp Leu Ile
355                 360                 365
Ser Ser
370
<210>  137
<211>  1884
<212>  ДНК
<213>  Triticum aestivum
<400>  137
tatatataca gctccttgta cttctctcgt tcttacactc actcctcaat ccatccgtct       60
ccaccattgc tcgctagctc gagctcctag ctagtactgc aaagtcagcc ggggagttga      120
tttggtcctt cttggcttga ccgatcgtac gtgccgccag gatgccgacg ccggcgcacc      180
tgagcaagga cccgcgctac ttcgacttcc gggcggcgcg gcgggtgccg gagacgcacg      240
cgtggcccgg gctgcacgac caccccgtgg tggacggcag cggcgcgggc ggagggccgg      300
acgcggtgcc ggtggtggac atgcgcgacc cgtgcgcggc ggaggcggtg gcgctggcgg      360
cgcaggactg gggcgccttc ctcctggagg gccacggcgt cccgttggag ctgctggcgc      420
gcgtggaggc cgcgatcgcg ggcatgttcg cgctgccggc gtcggagaag atgcgcgccg      480
tgcggcggcc cggcgactcg tgcggctacg ggtcgccgcc catctcctcc ttcttctcca      540
agtgcatgtg gtccgagggc tacaccttct ccccggccaa cctccgctcc gacctccgca      600
agctctggcc caaggccggc cacgactacc gccacttctg gtacgtacgc cggccgccga      660
tgcgcatata cacgtcatag tacggcacct acctaactgg ctctggccaa ccgtccgtac      720
acacgtgaag gggcgacgtg tccgactccg accatgcatg catgcacgcg cgcgaaactt      780
gttactcctg ttctgctatg gcagcagcta gccgcgtgtg tccgttcgta ggagtagtta      840
cttacacagt tacacttacg ccgtccgtcg tgttcctcga cgtgcagcgc cgtgatggag      900
gagttccaca gggagatgcg cgcgctggcc gacaagctgc tggagctgtt cctggtggcc      960
ctcgggctca ccggcgagca ggtcgccgcc gtcgagtccg agcagaagat cgccgagacc     1020
atgaccgcca caatgcacct caactggtac gttccactac tactccagta gtacaagtac     1080
aatatataga atacaaatgg cagcagccac gacgacacgt actccaccat gcagcaaagc     1140
atatattgtc ggtgcggcgg ttgacacgga gttgtgtcgt gtcgttgatt cacaggtacc     1200
ccaagtgccc ggacccgaag cgggcgctgg gcctgatcgc gcacacggac tcgggcttct     1260
tcaccttcgt gctgcagagc cttgtgcccg ggctgcagct gttccggcac ggccccgacc     1320
ggtgggtgac ggtgcccgcc gtgccggggg ccatggtcgt caacgtcggc gacctcttcc     1380
agatcctcac caacggccgc ttccacagcg tctaccaccg cgccgtcgtc aaccgcgaca     1440
gcgaccggat atcgctcggc tacttcctcg gcccgcccgc ccacgtcaag gtggcgccgc     1500
tcagggaggc cctggccggc acgcccgccg cctaccgcgc cgtcacgtgg cccgagtaca     1560
tgggcgtgcg caagaaggcc ttcaccaccg gcgcctccgc gctcaagatg gtcgccatct     1620
ccactgacaa cgacgccgcc aaccacacgg acgacctgat ctcgtcgtag atcggcgccg     1680
gccatcaccg gccggccaag ggatcgatct acacacacaa ttagtgaaca aaaaaatgcc     1740
agagatggtg catggtgggc tggtagctta gctgaggtag ctaggaggaa gagcgcgcgt     1800
gcggctgtcg ttcgtgcggc tgttcccgca aaaaaaaaaa ggtttcctcc atatakgtcc     1860
ccakscaaaa tsgmaawgct gggg                                            1884
<210>  138
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  138
acggguucuu ccaggugugc                                                   20
<210>  139
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  139
cacggguucu uccaggugug                                                   20
<210>  140
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  140
cauugaccuc cccgcuggca                                                   20
<210>  141
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  141
ccagcgggga ggucaaugcu                                                   20
<210>  142
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  142
cccagcauug accuccccgc                                                   20
<210>  143
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  143
cgcgcucgug uacccggaca                                                   20
<210>  144
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  144
cucccggcgc aggucgaaca                                                   20
<210>  145
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  145
guguacccgg acacggugcc                                                   20
<210>  146
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  146
ugcagggaag cuguccgggc                                                   20
<210>  147
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  147
uucuuccagg ugugcgggca                                                   20
<210>  148
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  148
agauccccgc gccauuccug                                                   20
<210>  149
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  149
augcagggaa gcuguccggg                                                   20
<210>  150
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  150
auuccugugg ccgcaggaag                                                   20
<210>  151
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  151
cagcggggag gucaaugcug                                                   20
<210>  152
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  152
caggaauggc gcggggaucu                                                   20
<210>  153
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  153
gacuacuucg ucggcacccu                                                   20
<210>  154
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  154
gccaggauuu cgagccaaug                                                   20
<210>  155
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  155
ggaacauuug gagggaggcg                                                   20
<210>  156
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  156
gggaggucaa ugcuggggcu                                                   20
<210>  157
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  157
uuggcucgaa auccuggccg                                                   20
<210>  158
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  158
acggguucuu ccaggugugc                                                   20
<210>  159
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  159
cacggguucu uccaggugug                                                   20
<210>  160
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  160
cauugaccuc cccgcuggca                                                   20
<210>  161
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  161
ccagcgggga ggucaaugcu                                                   20
<210>  162
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  162
cccagcauug accuccccgc                                                   20
<210>  163
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  163
cgcgcucgug uacccggaca                                                   20
<210>  164
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  164
cucccggcgc aggucgaaca                                                   20
<210>  165
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  165
guguacccgg acacggugcc                                                   20
<210>  166
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  166
ugcagggaag cuguccgggc                                                   20
<210>  167
<211>  20
<212>  РНК
<213>  Искусственная Последовательность
<220>
<223>  олигонуклеотид супрессии
<400>  167
uucuuccagg ugugcgggca                                                   20
<---