ОБЪЕКТ МАИСА DP-023211-2 И СПОСОБЫ ЕГО ОБНАРУЖЕНИЯ

1. Растение кукурузы, содержащее генотип объекта кукурузы DP-023211-2, где указанный генотип содержит нуклеотидную последовательность, характеризующуюся
(а) по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 35; или
(b) по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 36; или
(с) по меньшей мере 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 37.
2. Растение кукурузы по п. 1, где указанный генотип содержит нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 35.
3. Растение кукурузы по п. 1, где указанный генотип содержит нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 36.
4. Растение кукурузы по п. 1, где указанный генотип содержит нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 37.
5. ДНК-конструкция, содержащая функционально связанные первую и вторую кассеты экспрессии, где указанная первая кассета экспрессии содержит:
a) промотор ubiZM1;
b) 5'-UTR ubiZM1;
c) интрон ubiZM1;
d) фрагмент DvSSJ1;
e) коннектор на основе интрона zm-Adh1;
f) фрагмент DvSSJ1;
g) терминатор Z27G;
h) терминатор UBQ14 и
i) терминатор In2-1 маиса;
при этом указанная вторая кассета экспрессии содержит:
1) промотор BSV(AY);
2) интрон zm-HPLV9;
3) ipd072Aa; и
4) терминатор at-T9.
6. Растение, содержащее ДНК-конструкцию по п. 5.
7. Растение по п. 6, где указанное растение представляет собой растение кукурузы.
8. Растение, содержащее последовательность, представленную под SEQ ID NO: 25.
9. Объект кукурузы DP-023211-2, где репрезентативный образец семени указанного объекта кукурузы депонирован в Американской коллекции типовых культур (ATCC) под номером доступа PTA-124722.
10. Части растения из объекта кукурузы по п. 9.
11. Семя, предусматривающее объект кукурузы DP-023211-2, где указанное семя содержит молекулу ДНК, выбранную из SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 35, где репрезентативный образец семени объекта кукурузы DP-023211-2 депонирован в Американской коллекции типовых культур (ATCC) под номером доступа PTA-124722.
12. Растение кукурузы или его часть, выращенные из семени по п. 11.
13. Трансгенное семя, полученное от растения кукурузы по п. 12.
14. Трансгенное растение кукурузы или его часть, выращенные из семени по п. 13.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 25 и 31-38 и их полноразмерных комплементарных последовательностей.
16. Ампликон, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 25-30 и их полноразмерных комплементарных последовательностей.
17. Биологический образец, полученный из растения, ткани или семени объекта кукурузы DP-023211-2, где указанный образец содержит нуклеотидную последовательность, которая представляет собой последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 35, или комплементарна ей, при этом указанная нуклеотидная последовательность может быть обнаружена в указанном образце с применением способа амплификации нуклеиновой кислоты или гибридизации нуклеиновой кислоты, при этом репрезентативный образец указанного семени объекта кукурузы DP-023211-2 депонирован в Американской коллекции типовых культур (АТСС) под номером доступа PTA-124722.
18. Биологический образец по п. 17, где указанный биологический образец предусматривает растение, ткань растения или семя трансгенного объекта кукурузы DP-023211-2.
19. Биологический образец по п. 18, где указанный биологический образец представляет собой образец ДНК, экстрагированный из трансгенного растения, представляющего собой объект кукурузы DP-023211-2, и где указанный образец ДНК содержит одну или несколько нуклеотидных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 25-38 и их комплементарных последовательностей.
20. Биологический образец по п. 17, где указанный биологический образец выбран из кукурузной муки, кукурузной крупы, кукурузного сиропа, кукурузного масла, кукурузного крахмала и злаковых продуктов, изготовленных таким образом, что они полностью или частично состоят из сопутствующих продуктов из кукурузы.
21. Экстракт, полученный из растения, ткани или семени объекта кукурузы DP-023211-2 и содержащий нуклеотидную последовательность, которая представляет собой последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 35, или комплементарна ей, где репрезентативный образец указанного семени объекта кукурузы DP-023211-2 депонирован в Американской коллекции типовых культур (АТСС) под номером доступа PTA-124722.
22. Экстракт по п. 21, где указанная нуклеотидная последовательность может быть обнаружена в указанном экстракте с применением способа амплификации нуклеиновой кислоты или гибридизации нуклеиновой кислоты.
23. Экстракт по п. 22, где указанный экстракт предусматривает растение, ткань растения или семя трансгенного растения, представляющего собой объект кукурузы DP-023211-2.
24. Экстракт по п. 23, где экстракт представляет собой композицию, выбранную из кукурузной муки, кукурузной крупы, кукурузного сиропа, кукурузного масла, кукурузного крахмала и злаковых продуктов, изготовленных таким образом, что они полностью или частично состоят из сопутствующих продуктов из кукурузы, при этом указанная композиция содержит поддающееся обнаружению количество указанной нуклеотидной последовательности.
25. Способ получения гибридных семян кукурузы, включающий:
a) половое скрещивание первой инбредной линии кукурузы, содержащей нуклеотид, выбранный из SEQ ID NO: 25-38, и второй инбредной линии, имеющей отличающийся генотип;
b) выращивание потомка от указанного скрещивания; и
c) сбор гибридного семени, полученного таким образом.
26. Способ по п. 25, где первая инбредная линия кукурузы представляет собой родителя женского пола.
27. Способ по п. 25, где первая инбредная линия кукурузы представляет собой родителя мужского пола.
28. Способ получения растения кукурузы, устойчивого к вредителям из отряда жесткокрылых, включающий:
a) половое скрещивание первого родительского растения кукурузы со вторым родительским растением кукурузы, где указанное первое или второе родительское растение кукурузы содержит объект DP-023211-2, с получением таким образом множества растений-потомков первого поколения;
b) самоопыление растения-потомка первого поколения с получением таким образом множества растений-потомков второго поколения; и
c) отбор растений-потомков второго поколения, которые содержат объект DP-023211-2 и являются устойчивыми к вредителю из отряда жесткокрылых.
29. Способ получения гибридных семян кукурузы, включающий:
a) половое скрещивание первой инбредной линии кукурузы, содержащей ДНК-конструкцию по п. 5, со второй инбредной линией, не содержащей ДНК-конструкцию по п. 5; и
b) сбор гибридного семени, полученного таким образом.
30. Способ по п. 29, дополнительно включающий стадию возвратного скрещивания растения-потомка второго поколения, которое содержит объект кукурузы DP-023211-2, с родительским растением, в котором отсутствует ДНК объекта кукурузы DP-023211-2, с получением таким образом растения-потомка, полученного путем возвратного скрещивания, устойчивого к вредителю из отряда жесткокрылых.
31. Способ получения растения кукурузы, устойчивого к кукурузному корневому жуку, где указанный способ включает:
a) скрещивание первого родительского растения кукурузы со вторым родительским растением кукурузы, где указанное первое или второе родительское растение кукурузы содержит объект DP-023211-2, с получением таким образом множества растений-потомков первого поколения;
b) отбор растения-потомка первого поколения, которое содержит объект DP-023211-2;
c) возвратное скрещивание растения-потомка первого поколения из стадии (b) с родительским растением, в котором отсутствует ДНК объекта кукурузы DP-023211-2, с получением таким образом множества растений-потомков, полученных путем возвратного скрещивания; и
d) отбор из растений-потомков, полученных путем возвратного скрещивания, растения, содержащего объект DP-023211-2;
где отобранное растение-потомок, полученное путем возвратного скрещивания, из стадии (d) содержит SEQ ID NO: 25, 31 или 35.
32. Способ по п. 31, где растения первой родительской линии кукурузы являются родителями женского пола или родителями мужского пола.
33. Гибридное семя, полученное посредством способа по п. 31.
34. Способ определения зиготности растения кукурузы, содержащего объект DP-023211-2, в биологическом образце, включающий:
a) приведение указанного образца в контакт с первой парой молекул ДНК и второй отличающейся парой молекул ДНК таким образом, что
1) при использовании в реакции амплификации нуклеиновой кислоты, предусматривающей ДНК объекта кукурузы DP-023211-2, образуется первый ампликон, который является диагностическим признаком объекта DP-023211-2, и
2) при использовании в реакции амплификации нуклеиновой кислоты, предусматривающей геномную ДНК кукурузы, отличную от ДНК DP-023211-2, образуется второй ампликон, который является диагностическим признаком геномной ДНК кукурузы, отличной от ДНК DP-023211-2;
b) проведение реакции амплификации нуклеиновой кислоты; и
c) обнаружение ампликонов, полученных таким образом, где обнаружение наличия обоих ампликонов указывает на то, что указанный образец является гетерозиготным в отношении ДНК объекта кукурузы DP-023211-2, при этом обнаружение только первого ампликона указывает на то, что указанный образец является гомозиготным в отношении ДНК объекта кукурузы DP-023211-2.
35. Способ по п. 34, где первая пара молекул ДНК предусматривает пару праймеров под SEQ ID NO: 7 и 8.
36. Способ по п. 34, где первая и вторая пары молекул ДНК содержат поддающуюся обнаружению метку.
37. Способ по п. 36, где поддающаяся обнаружению метка представляет собой флуоресцентную метку.
38. Способ по п. 36, где поддающаяся обнаружению метка ковалентно связана с одной или несколькими молекулами праймера.
39. Способ обнаружения наличия молекулы нуклеиновой кислоты, которая является уникальной для объекта DP-023211-2, в образце, содержащем нуклеиновые кислоты кукурузы, при этом способ включает:
a) приведение образца в контакт с парой праймеров, которые при использовании в реакции амплификации нуклеиновой кислоты с геномной ДНК из объекта DP-023211-2 обеспечивают образование ампликона, который является диагностическим признаком объекта DP-023211-2;
b) проведение реакции амплификации нуклеиновой кислоты с получением таким образом ампликона, который является диагностическим признаком объекта DP-023211-2; и
c) обнаружение ампликона, который является диагностическим признаком объекта DP-023211-2.
40. Способ по п. 39, где молекула нуклеиновой кислоты, которая является диагностическим признаком объекта DP-023211-2, представляет собой ампликон, образуемый при цепной реакции амплификации нуклеиновой кислоты.
41. Способ по п. 39, где зонд содержит поддающуюся обнаружению метку.
42. Способ по п. 41, где поддающаяся обнаружению метка представляет собой флуоресцентную метку.
43. Способ по п. 41, где поддающаяся обнаружению метка ковалентно связана с зондом.
44. Множество полинуклеотидных праймеров, содержащих один или несколько полинуклеотидов, которые нацелены на ДНК-матрицу объекта DP-023211-2 в образце, для получения ампликона, являющегося диагностическим признаком объекта DP-023211-2, в результате применения способа на основе полимеразной цепной реакции.
45. Множество полинуклеотидных праймеров по п. 44, где
a) первый полинуклеотидный праймер содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов из нуклеотидной последовательности, выбранной из нуклеотидов 1-503 в SEQ ID NO: 3, нуклеотидов 16687-17568 в SEQ ID NO: 3 и их комплементарных последовательностей; и
b) второй полинуклеотидный праймер содержит по меньшей мере 10 смежных нуклеотидов из нуклеотидов 1-503 в SEQ ID NO: 3, нуклеотидов 16687-17568 в SEQ ID NO: 3 и их комплементарных последовательностей.
46. Множество полинуклеотидных праймеров по п. 44, где
a) первый полинуклеотидный праймер предусматривает нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 7, и ее комплементарные последовательности; и
b) второй полинуклеотидный праймер предусматривает нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 8, и ее комплементарные последовательности.
47. Множество полинуклеотидных праймеров по п. 44, где указанный первый праймер и указанный второй праймер содержат по меньшей мере 18 нуклеотидов.
48. Способ обнаружения наличия ДНК, соответствующей объекту DP-023211-2, в образце, при этом способ включает:
a) приведение образца, содержащего ДНК маиса, в контакт с полинуклеотидным зондом, который гибридизируется в жестких условиях гибридизации с ДНК из объекта маиса DP-023211-2 и не гибридизируется в указанных жестких условиях гибридизации с ДНК растения маиса, отличной от DP-023211-2;
b) подвергание образца и зонда жестким условиям гибридизации; и
c) обнаружение гибридизации зонда с ДНК;
где обнаружение гибридизации указывает на наличие объекта DP-023211-2.
49. Набор для обнаружения нуклеиновых кислот, которые являются уникальными для объекта DP-023211-2, содержащий по меньшей мере одну молекулу нуклеиновой кислоты достаточной длины из смежных полинуклеотидов для функционирования в качестве праймера или зонда в способе обнаружения нуклеиновой кислоты, и которая после амплификации целевой последовательности нуклеиновой кислоты в образце или после гибридизации с ней с последующим обнаружением ампликона или гибридизации с целевой последовательностью является диагностическим признаком наличия последовательностей нуклеиновой кислоты, уникальных для объекта DP-023211-2, в образце.
50. Набор по п. 49, где молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO: 7-38.
51. Набор по п. 49, где молекула нуклеиновой кислоты является праймером, выбранным из SEQ ID NO: 7-38 и их комплементарных последовательностей.