Способы получения антител с заданным профилем гликозилирования

1. Способ, включающий экспрессию антитела из мутантной по способу гликозилирования клеточной линии СНО, кодирующей указанное антитело, где указанная клеточная линия СНО подвергнута мутации так, что N-гликаны в антителах, продуцируемых клеткой, характеризуются концевым сахаром, который представляет собой N-ацетилглюкозамин.
2. Способ по п. 1, где мутация предусматривает по меньшей мере отрицательную регуляцию переносчика UDP-Gal в аппарат Гольджи.
3. Способ по п. 2, где мутация дополнительно предусматривает отрицательную регуляцию по меньшей мере переносчика СМР-сиаловой кислоты в аппарат Гольджи, отрицательную регуляцию или обеспечение неправильной локализации GlcNAc-TV, положительную регуляцию GlcNAc-TIII и их комбинации.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где концевые остатки сахара в N-гликанах представляют собой N-ацетилглюкозамин.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где клеточная линия представляет собой производственную клеточную линию.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где клеточная линия выбрана из группы, включающей Lec3.2.8, Lec4.8, Lec4A.8, Lec8 и Lec10.8.
7. Способ по любому из пп. 1-4, который дополнительно включает стадию обеспечения реакции субстрата, представляющего собой N-ацетилглюкозамин, в N-гликане в антителе, экспрессированном из мутантной клеточной линии СНО, с реакционноспособным сахаром в присутствии катализатора-фермента с добавлением указанного остатка реакционноспособного сахара к гликану.
8. Способ по п. 7, где фермент представляет собой трансферазу.
9. Способ по п. 8, где трансфераза представляет собой фермент GalT, в том числе его мутантный вариант, где одна или две аминокислоты заменены, удалены или добавлены.
10. Способ по п. 9, где фермент GalT представляет собой мутантную форму, выбранную из группы, включающей Y289L, Y289N, Y289I и R228K.
11. Способ по п. 10, где фермент GALT характеризуется мутацией Y289L.
12. Способ по п. 7, где реакционноспособный сахар содержит химическую функциональную группу, выбранную из кетона, алкинила, азида.
13. Способ по п. 12, где реакционноспособный сахар представляет собой производное галактозамина.
14. Способ по п. 13, где реакционноспособный сахар содержит остаток GalAz или Keto-Gal.
15. Способ по любому из пп. 7-14, где реакционноспособный сахар представляет собой ферментный субстрат UDP-GalX в форме для переноса, где UDP представляет собой уридин-дифосфат, Gal представляет собой остаток галактозы, и X представляет собой функциональную группу в виде альдегида, алкинила или азида.
16. Способ по любому из пп. 7-15, который включает дополнительную стадию конъюгирования полезной нагрузки с альдегидной, алкинильной или азидной функциональными группами в остатке галактозы, добавленном к гликану путем переноса, опосредованного ферментом.
17. Способ по п. 16, где полезная нагрузка выбрана из выбрана из группы, включающей токсин, молекулу лекарственного средства (такого как цитотоксическое средство), полимер, антитело или его связывающий фрагмент.
18. Способ по п. 17, где молекула лекарственного средства выбрана из таковой, предусматривающей майтанзиноид, например N2'-деацетил-N2'-(3-меркапто-1-оксопропил)-майтанзин (DM1), N2'-деацетил-N2'-(4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM3) и N2'-деацетил-N2'-(4-метил-4-меркапто-1-оксопентил)-майтанзин (DM4).
19. Способ по п. 17, где полезная нагрузка представляет собой токсин.
20. Способ по п. 17, где полимер представляет собой природный полимер, например крахмал или альбумин, или синтетический полимер, такой как PEG.
21. Способ по любому из пп. 16-20, где используемые химические реакции конъюгирования представляют собой реакции клик-химии.
22. Способ по п. 21, где реакции клик-химии представляют собой химические реакции без использования меди.
23. Молекула, полученная или получаемая в соответствии с любым из пп. 1-22.