СРЕДСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ ИММУНИТЕТ, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО НОВООБРАЗОВАНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ АНТАГОНИСТА АЛЛЕРГИНА-1
IMMUNE ENHANCING AGENT FOR TREATING A MALIGNANT NEOPLASM WITH USING AN ALLERGIN-1 ANTAGONIST

[Область техники]
[0001] Настоящее изобретение относится к средству, повышающему иммунитет, для лечения злокачественного новообразования, содержащему антагонист аллергина-1 в качестве активного ингредиента. Более конкретно, настоящее изобретение относится к средству для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, отличающемуся введением антагониста аллергина-1 в отдельности или комбинации с противоопухолевым средством.
[Уровень техники]
[0002] В отличие от общепринятых способов лечения посредством хирургического вмешательства, лучевой терапии или медикаментозной терапии с использованием противоопухолевых средств или средств для молекулярного таргетинга, противоопухолевая иммунотерапия предназначена для супрессии прогрессирования злокачественного новообразования или лечения злокачественного новообразования посредством действия на иммунологический надзор пациентов со злокачественными новообразованиями, таким образом, повышающего иммунитет против злокачественного новообразования. В результате недавних исследований противоопухолевого иммунитета обнаружено, что иммуносупрессорное окружение участка злокачественного новообразования вовлечено в его прогрессирование, и злокачественное новообразование само по себе использует систему для избегания иммунологического надзора. В качестве молекул, используемых для системы избегания, известны так называемые молекулы иммунных контрольных точек, такие как CTLA-4 и PD-1 или PD-L1, являющийся его лигандом, (PTL1 и 2), и значительные клинические результаты показаны для их ингибиторов.
[0003] Однако, следует отметить, что все равно есть пациенты со злокачественными новообразованиями, в случае которых не наблюдают достаточные терапевтические эффекты даже при использовании ингибиторов иммунных контрольных точек. Таким образом, существует насущная потребность в новых способах терапии для пациентов со злокачественными новообразованиями и функциональном понимании молекул-мишеней, являющихся ключевыми для разработки таких способов терапии.
[0004] При этом, аллергин-1, представленный в настоящем описании, является мембрано-ассоциированным рецептором, имеющим домен ITIM во внутриклеточной области и внеклеточную иммуноглобулино-подобную структуру, и в большом количестве экспрессируется на тучных клетках. Из анализов молекулы с использованием нокаутных мышей известно, что молекула супрессирует аллергические реакции, например, супрессируя дегрануляцию посредством передачи сигнала через рецептор IgE, таким образом, супрессируя анафилаксию или супрессируя астматическую реакцию, вызываемую клещевыми аллергенами (NPL1, 2 и 3).
[0005] Однако, в достаточной степени не известно, супрессирует ли молекула иммунитет против злокачественных новообразований.
[Ссылки]
[Патентная литература]
[0006]
[PTL1] WO 2006/121168
[PTL2] Публикация патентной заявки Японии № 2006-340714
[Непатентная литература]
[0007]
[NPL1] Nature Immunology, 2010, Vol. 11, No. 7, p. 601-608
[NPL2] PLOS ONE, 2013, Vol. 8, No. 10, e76160
[NPL3] Allergology & Immunology, 2011, Vol. 18, No. 4, p. 506-514
[Сущность изобретения]
[Техническая задача]
[0008] Целью настоящего изобретения является средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее новый активный ингредиент, способный повышать иммунитет против злокачественных новообразований.
[Решение задачи]
[0009] Авторы настоящего изобретения осуществляли обширные исследования и в результате обнаружили, что с помощью антагониста аллергина-1 можно решать указанную выше задачу, таким образом, осуществляя настоящее изобретение.
[0010] Таким образом, настоящее изобретение представляет собой следующее:
[1] Средство, повышающее иммунитет, для лечения злокачественного новообразования, содержащее антагонист аллергина-1 в качестве активного ингредиента.
[2] Средство по предшествующему п.[1], для применения в супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечении злокачественного новообразования.
[3] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее антагонист аллергина-1 в качестве активного ингредиента.
[4] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[3], где антагонист аллергина-1 супрессирует передачу иммуносупрессорного внутриклеточного сигнала аллергина-1.
[5] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[4], где антагонист аллергина-1 является антителом против аллергина-1, аллергин-1-связывающим белком или слитым белком аллергина-1.
[6] Средство по предшествующему п.[5], где антитело против аллергина-1 является антителом против аллергина-1 человека.
[7] Средство по предшествующему п.[5] или [6], где антитело против аллергина-1 является моноклональным антителом.
1
4
[8] Средство по предшествующему п.[7], где моноклональное антитело против аллергина-1 имеет изотип IgGили IgG.
2
[9] Средство по предшествующему п.[7] или [8], где моноклональное антитело против аллергина-1 является фрагментом антитела, выбранным из группы, состоящей из Fab-, Fab'-, Fv-, scFv- и (Fab')-фрагментов.
[10] Средство по любому из предшествующих пп.[7]-[9], где моноклональное антитело против аллергина-1 является гуманизированным или человеческим антителом.
1
4
[11] Средство по предшествующему п.[7], где моноклональное антитело против аллергина-1 является гуманизированным или человеческим моноклональным антителом IgGили IgGпротив аллергина-1 человека.
-8
[12] Средство по любому из предшествующих пп.[7]-[11], где моноклональное антитело против аллергина-1 связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 5×10M или менее.
-8
[13] Средство по любому из предшествующих пп.[7]-[11], где моноклональное антитело против аллергина-1 связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 1×10M или менее.
-9
[14] Средство по любому из предшествующих пп.[7]-[11], где моноклональное антитело против аллергина-1 связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 5×10M или менее.
-9
[15] Средство по любому из предшествующих пп.[7]-[11], где моноклональное антитело против аллергина-1 связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 1×10M или менее.
[16] Средство по предшествующему п.[5] или [6], где антитело против аллергина-1 является полиспецифическим антителом против аллергина-1, распознающим два или более разных эпитопа на одной молекуле аллергина-1.
[17] Средство по любому из предшествующих пп.[2]-[16], где злокачественное новообразование является солидным злокачественным новообразованием или гемобластозом.
[18] Средство по предшествующему п.[17], где солидное злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рак фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома.
[19] Средство по предшествующему п.[17], где гемобластоз является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из множественной миеломы, неходжкинской лимфомы, лимфомы Ходжкина, острого миелоидного лейкоза и хронического миелоидного лейкоза.
[20] Средство по любому из предшествующих пп.[2]-[19], вводимое пациенту со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью противоопухолевого лекарственного средства.
[21] Средство по предшествующему п.[20], где противоопухолевое лекарственное средство является противоопухолевым иммунотерапевтическим средством.
[22] Средство по предшествующему п.[21], где противоопухолевое иммунотерапевтическое средство является одним или несколькими лекарственными средствами, выбранными из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против PD-L2, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, антитела против CTLA-4, антитела против LAG-3, антитела против Tim3, антитела против KIR, антитела против BTLA, антитела против TIGIT, антитела против VISTA, антитела против CD137, антитела против OX40, антитела против HVEM, антитела против CD27, антитела против GITR, антитела против CD28, антитела против CCR4 и антитела против CD4.
[23] Средство по предшествующему п.[22], где антитело против PD-1 является ниволумабом, REGN-2810, пембролизумабом, PDR-001, BGB-A317, STI-A1110 или AMP-514.
[24] Средство по предшествующему п.[22], где антитело против PD-L1 является атезолимумабом, авелумабом, дурвалумабом или BMS-936559.
[25] Средство по предшествующему п.[22], где антитело против CTLA-4 является ипилимумабом или тремелимумабом.
[26] Средство по предшествующему п.[22], где слитый белок PD-L2 является AMP-224.
[27] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[26], где дополнительно вводят одно или несколько противоопухолевых лекарственных средств.
[28] Средство по предшествующему п.[27], где антагонист аллергина-1 и противоопухолевое лекарственное средство вводят в разных препаратах.
[29] Средство по предшествующему п.[28], где противоопухолевое лекарственное средство вводят перед введением антагониста аллергина-1.
[30] Средство по предшествующему п.[28], где антагонист аллергина-1 вводят перед введением противоопухолевого лекарственного средства.
[31] Средство по любому из предшествующих пп.[27]-[30], где есть период, когда антагонист аллергина-1 и противоопухолевое лекарственное средство вводят одновременно.
[32] Средство по предшествующему п.[27] или [28], где антагонист аллергина-1 и противоопухолевое лекарственное средство вводят одновременно.
[33] Средство по предшествующим пп.[27] или [32], где антагонист аллергина-1 и противоопухолевое лекарственное средство вводят в одном препарате.
[34] Средство по любому из предшествующих пп.[27]-[33], где противоопухолевое лекарственное средство является противоопухолевым иммунотерапевтическим средством.
[35] Средство по предшествующему п.[34], где противоопухолевое иммунотерапевтическое средство является одним или несколькими лекарственными средствами, выбранными из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против PD-L2, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, антитела против CTLA-4, антитела против LAG-3, антитела против Tim3, антитела против KIR, антитела против BTLA, антитела против TIGIT, антитела против VISTA, антитела против CD137, антитела против OX40, антитела против HVEM, антитела против CD27, антитела против GITR, антитела против CD28, антитела против CCR4 и антитела против CD4.
[36] Средство по предшествующему п.[35], где антитело против PD-1 является ниволумабом, REGN-2810, пембролизумабом, PDR-001, BGB-A317, STI-A1110 или AMP-514.
[37] Средство по предшествующему п.[35], где антитело против PD-L1 является атезолимумабом, авелумабом, дурвалумабом или BMS-936559.
[38] Средство по предшествующему п.[35], где антитело против CTLA-4 является ипилимумабом или тремелимумабом.
[39] Средство по предшествующему п.[35], где слитый белок PD-L2 является AMP-224.
[40] Средство по предшествующему п.[35], где антитело против CD4 является IT1208.
[41] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[40], где антагонист аллергина-1 повышает продукцию интерферона типа I (такого как интерферон-α и/или интерферон-β).
[42] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[41], где антагонист аллергина-1 стимулирует пролиферацию CD8-положительных T-клеток.
[43] Средство по любому из предшествующих пп.[1]-[42], где антагонист аллергина-1 активирует CD8-положительные T-клетки.
1
4
[44] Средство, повышающее иммунитет, для лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома.
1
4
[45] Средство, повышающее иммунитет, для лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное против антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз).
1
4
[46] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома.
1
4
[47] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз).
1
4
[48] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят пациенту со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью противоопухолевого иммунотерапевтического средства, и где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома.
1
4
[49] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят пациенту со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью противоопухолевого иммунотерапевтического средства, и где злокачественное новообразование является одним или несколькими злокачественными новообразованиями, выбранными из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз).
1
4
[50] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими противоопухолевыми иммунотерапевтическими средствами, выбранными из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против PD-L2, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, антитела против CTLA-4, антитела против LAG-3, антитела против Tim3, антитела против KIR, антитела против BTLA, антитела против TIGIT, антитела против VISTA, антитела против CD137, антитела против OX40, антитела против HVEM, антитела против CD27, антитела против GITR, антитела против CD28, антитела против CCR4 и антитела против CD4.
1
4
[51] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз), содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими противоопухолевыми иммунотерапевтическими средствами, выбранными из антитела против PD-1, антитела против PD-L1, антитела против PD-L2, слитого белка PD-L1, слитого белка PD-L2, антитела против CTLA-4, антитела против LAG-3, антитела против Tim3, антитела против KIR, антитела против BTLA, антитела против TIGIT, антитела против VISTA, антитела против CD137, антитела против OX40, антитела против HVEM, антитела против CD27, антитела против GITR, антитела против CD28, антитела против CCR4 и антитела против CD4.
1
4
[52] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими средствами, выбранными из антитела против PD-1 ниволумаба, REGN-2810, пембролизумаба, PDR-001, BGB-A317, AMP-514, ANB011 и STI-A1110.
1
4
[53] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз), содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими средствами, выбранными из антитела против PD-1 ниволумаба, REGN-2810, пембролизумаба, PDR-001, BGB-A317, AMP-514, ANB011 и STI-A1110.
1
4
[54] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из злокачественной меланомы, немелкоклеточного рака легких, мелкоклеточного рака легких, рака головы и шеи, почечноклеточного рака, светлоклеточного почечноклеточного рака, рака молочной железы, рака яичников, светлоклеточной аденокарциномы яичника, саркомы костной и мягких тканей, глиобластомы, глиосаркомы, рака носоглотки, рака матки, рака анального канала, колоректального рака, печеночноклеточного рака, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака желудка, уротелиального рака, рака предстательной железы, рака фаллопиевых труб, первичного рака забрюшинного пространства, плевральной мезотелиомы и миелопролиферативного синдрома, содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgGпротив аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими средствами, выбранными из антитела против PD-L1 атезолимумаба, авелумаба, дурвалумаба и BMS-936559.
1
4
[55] Средство для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения одного или нескольких злокачественных новообразований, выбранных из множественной миеломы, злокачественной лимфомы (такой как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоза (такого как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз), содержащее человеческое или гуманизированное моноклональное антитело IgG или IgG против аллергина-1 человека в качестве активного ингредиента, где средство вводят с одним или несколькими средствами, выбранными из антитела против PD-L1 атезолимумаба, авелумаба, дурвалумаба и BMS-936559.
[56] Антагонист аллергина-1 для повышения иммунитета против злокачественного новообразования.
[57] Применение антагониста аллергина-1 в получении средства, повышающего иммунитет, для лечения злокачественного новообразования.
[58] Способ повышения иммунитета против злокачественного новообразования, включающий введение эффективной дозы антагониста аллергина-1 пациенту, нуждающемуся в противоопухолевой терапии.
[59] Антагонист аллергина-1 для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования.
[60] Применение антагониста аллергина-1 в получении средства для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования.
[61] Способ супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования, включающий введение эффективной дозы антагониста аллергина-1 пациенту, нуждающемуся в противоопухолевой терапии.
[Полезные эффекты изобретения]
[0011] Антагонист аллергина-1 по настоящему изобретению способен повышать иммунитет против злокачественного новообразования, и его можно применять для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования.
[Краткое описание чертежей]
[0012]
[Фиг. 1]
На фиг. 1 представлена структура направленного вектора аллергина-1 и результаты саузерн-блоттинга с использованием полученных нокаутных по аллергину-1 (далее в настоящем описании также обозначаемых как аллергин-1KO или Alg1-KO) гетерозиготных и гомозиготных мышей.
[Фиг. 2]
На фиг. 2 представлено изменение (медиана и среднее значение) объема опухоли MC38 у мышей C57BL/6 (мышей WT) и мышей аллергин-1KO, несущих линию клеток колоректального рака мыши MC38.
[Фиг. 3]
На фиг. 3 представлено изменение (медиана и среднее значение) объема опухоли B16F10 у мышей C57BL/6 (мышей WT)и мышей аллергин-1KO, несущих линию клеток меланомы мыши B16F10.
[Фиг. 4]
На фиг. 4 представлено изменение (правая панель) объема опухоли MC38 после введения антитела против PD-1 мыши 4H2 (10 мг/кг) мышам аллергин-1KO, несущим MC38. На фигуре "mIgG" означает контрольное антитело.
[Фиг. 5]
На фиг. 5 представлены результаты анализа инфильтрирующих опухоль лимфоцитов у мышей C57BL/6 (мышей WT) и мышей аллергин-1KO, несущих MC38.
[Фиг. 6]
На фиг. 6 представлены результаты измерение ИФНα в крови после введения агониста TLR9 (CpG) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO.
[Фиг. 7]
На фиг. 7 представлено изменение объема опухоли MC38 после введения антитела против PD-1 мыши 4H2 (3 мг/кг) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO, несущим MC38. На фигуре "mIgG" означает контрольное антитело.
[Фиг. 8]
На фиг. 8 представлено изменение объема опухоли MC38 после введения антитела против PD-1 мыши 4H2 (1 мг/кг) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO, несущим MC38.
[Фиг. 9]
2b
На фиг. 9 представлено изменение объема опухоли MC38 после введения антитела против CD4 мыши GK1.5 (5 мг/кг) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO, несущим MC38. На фигуре "IgGкрысы" означает контрольное антитело.
[Фиг. 10]
На фиг. 10 представлено изменение объема опухоли B16F10 после введения антитела против CD4 мыши GK1.5 (5 мг/кг) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO, несущим B16F10.
[Фиг. 11]
На фиг. 11 представлены результаты измерений ИФНα (A на фигуре) и ИФНβ (B на фигуре) в крови после введения агониста TLR7 (полиуридина) мышам C57BL/6 (WT) и мышам аллергин-1KO(KO).
[Фиг. 12]
На фиг. 12 представлены результаты измерения ИФНβ в супернатантах культур, получаемых после добавления агониста STING (cGAMP) к интраперитонеальным макрофагам, полученным из мышей C57BL/6 (WT) и мышей аллергин-1KO.
[Фиг. 13]
На фиг. 13 представлено изменение объема опухоли B16F10 после введения антитела против PD-1 мыши 4H2 (10 мг/кг) мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO, несущим B16F10.
[Фиг. 14]
На фиг. 14 представлено изменение среднего объема опухоли MC38 (A) и B16F10 (B), соответственно, у мышей C57BL/6 (мышей WT)и мышей аллергин-1KO, несущих MC38 и B16F10.
[Описание вариантов осуществления]
[0013] Аллергин-1 также обозначают как MILR1, и он включает три варианта сплайсинга у людей, которыми являются "аллергин-1L", "аллергин-1S1" и "аллергин-1S2", являющиеся мембрано-ассоциированными белками, имеющими аминокислотные последовательности, представленные в GenBank под регистрационными №№ NP_001078892.1, AB542951.1 и AB542952.1, соответственно. Его гомолога у мыши обозначают как MCA32, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в GenBank под регистрационным № AB542953.1.
[0014] В настоящем описании термин "аллергин-1", если не указано иначе, используют для включения аллергина-1 человека и его вариантов сплайсинга, а также его гомологов у млекопитающих, идентифицированных к настоящему времени.
[0015] В рамках изобретения термин "антагонист аллергина-1" означает вещество, супрессирующее, снижающее или полностью ингибирующее характерные физиологические функции аллергина-1. Примеры "антагониста аллергина-1" включают вещество, супрессирующее, снижающее или полностью ингибирующее передачу иммуносупрессорного внутриклеточного сигнала аллергина-1, антагонистически действуя на природный лиганд аллергина-1. Конкретно, их примеры включают антитело против аллергина-1, слитый белок аллергина-1, аллергин-1-связывающий белок, пептид, низкомолекулярное соединение и т.п. Термин "слитый белок аллергина-1" означает молекулу, содержащую целый внеклеточный домен аллергина-1 или его часть, супрессирующую, снижающую или полностью ингибирующую передачу иммуносупрессорного внутриклеточного сигнала аллергина-1, антагонистически действуя на связывание, например, природного лиганда аллергина-1 с аллергином-1, и его примеры включают целый внеклеточный домен аллергина-1 или его часть, связанную с Fc-областью антитела. Термин "аллергин-1-связывающий белок" означает белок, связывающийся с аллергином-1, антагонистически действующий на связывание, например, природного лиганда аллергина-1 с аллергином-1 и, таким образом, супрессирующий, снижающий или полностью ингибирующий передачу иммуносупрессорного внутриклеточного сигнала аллергина-1. Его примеры включают природный лиганд аллергина-1, его целый внеклеточный домен или его часть, слитый белок на их основе, каркасный белок и т.п. Примеры каркасного белка для аллергина-1 включают аднектин (WO 2001/64942), аффитело(WO 95/19374, WO 2000/63243), антикалин (WO 99/16873), авимер (Nature Biotechnology (2005), Vol. 23, pp. 1556-1561), дарпин (Nature Biotechnology (2004), Vol. 22, pp. 575-582), LRRP (Nature (2004), Vol. 430, No. 6996, pp. 174-180), аффилин (WO 2001/04144 и WO 2004/106368), аффитин (Journal of molecular biology (2008), Vol. 383, No. 5, pp. 1058-1068), финомер (WO 2011/023685) и т.п. без ограничения. Аналогично антагонисту аллергина-1, антисмысловая РНК или миРНК (малая интерферирующая РНК) аллергина-1, ингибирующая экспрессию генов или синтез белка аллергина-1, также применима для супрессии, снижения или полного ингибирования характерных физиологических функций аллергина-1.
[0016] То, действует ли антитело против аллергина-1 или аллергин-1-связывающий белок из числа антагонистов аллергина-1 по настоящему изобретению антагонистически на природный лиганд аллергина-1, можно исследовать, например, следующим способом.
[0017] Сначала получают слитый белок аллергина-1 и ищут линию клеток, связывающуюся со слитым белком. Используя линию клеток, для которой подтверждено специфическое связывание со слитым белком аллергина-1, можно определять, является ли вещество антагонистом аллергина-1 или нет, с использованием в качестве показателя наличие или отсутствие антагонизма антагониста аллергина-1 в отношении связывания слитого белка аллергина-1 с клетками. Например, слитый белок аллергина-1 связывается с линией клеток THP-1, полученной из человека с острым моноцитарным лейкозом, и антагонист аллергина-1 можно получать посредством мониторинга ингибиторной активности в отношении связывания слитого белка аллергина-1 с THP-1.
2
[0018] В рамках изобретения термин "антитело" включают полноразмерное антитело, а именно полноразмерное антитело, состоящее из двух тяжелых цепей и двух легких цепей, соединенных дисульфидными связями, а также его фрагмент (такой как одноцепочечное антитело (такое как Fab, Fab', Fv и scFv) и (Fab')) и полиспецифическое антитело (такое как биспецифическое антитело и диатело).
[0019] В рамках изобретения термин "моноклональное антитело" означает антитело, состоящее из, по существу, однородной популяции, имеющей одну специфичность связывания в отношении конкретного антигена. Моноклональное антитело, используемое для настоящего изобретения, можно получать гибридомным способом (например, см. Kohlerand Milsteinet al., Nature (1975), 256:495-97, Hongoet al., Hybridoma (1995), 14(3): 253-260, Harlowet al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, second edition; 1988) и Hammerlinget al., Monoclonal antibodies and T-cell Hybridomas, 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), способом рекомбинантной ДНК (например, см. патент США № 4816567), способом фагового дисплея (например, см. патенты США №№ 5223409, 5403484 и 5571698 Ladner et al., патенты США №№ 5427908and 5580717 Dower et al., патенты США №№ 5969108 и 6172197 McCafferty et al., и патенты США №№ 5885793, 6521404, 6544731, 6555313, 6582915 и 6593081 Griffiths et al.).
2
2
2
2
2
2
[0020] В рамках изобретения термин "полиспецифическое антитело" означает молекулу антитела, имеющую специфичность связывания в отношении двух или более разных молекул антигена или эпитопов, и, как правило, включает биспецифическое антитело. В этом контексте эпитопы могут являться эпитопами на двух или более разных молекулах антигенов или двумя или более разных эпитопами на одной молекуле антигена. Примеры вариантов осуществления биспецифического антитела включают диатело, биспецифический sc(Fv), биспецифическое минитело, биспецифический F(ab'), биспецифическое гибридное антитело, ковалентное диатело (биспецифическое DART) (WO 2006/113665 или WO 2008/157379), биспецифический (FvCys)(J.Immunol., 1992, Vol. 149, No. 1,p. 120-126), биспецифический F(ab'-молния)(J.Immunol., 1992, Vol. 148, No. 5,p. 1547-1553), биспецифический (Fv-молния)(Biochemistry, 1992, Vol. 31,No. 6, p. 1579-1584), биспецифическое трехцепочечное антитело (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, Vol. 90, No. 14, p. 6444-6448) и биспецифическое mAb(www.f-star.com/technology_mab.html)и т.п.
2
[0021] В рамках изобретения термин "фрагмент антитела" означает часть полноразмерного антитела, содержащую, по меньшей мере, антигенсвязывающую часть, и ее примеры включают Fab, Fab', Fv, scFv, F(ab') и т.п. Термин "антигенсвязывающая часть" означает наименьшую единицу антитела, которая может связываться с антигеном и содержит три определяющие комплементарность области (CDR), соответственно, в вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи и каркасные области, упорядочивающие CDR таким образом, что комбинация CDR может распознавать желаемый антиген.
[0022] В рамках изобретения термин "химерное антитело" означает антитело, содержащее последовательность вариабельной области и последовательность константной области, соответственно, полученные из разных млекопитающих. Примером является антитело, содержащее последовательность вариабельной области, полученную из антитела мыши, и последовательность константной области, полученную из антитела человека. Химерное антитело можно получать, соединяя ген, кодирующий вариабельную область антитела, выделенную хорошо известным способом из антитело-продуцирующей гибридомы, выделенной гибридомным способом, способом рекомбинантной ДНК или способом фагового дисплея, описанными выше, с геном, кодирующим константную область антитела, полученным из людей хорошо известным способом (например, см. патент США № 4816567 Cabillyet al.).
[0023] В рамках изобретения термин "гуманизированное антитело" означает антитело, содержащее последовательности CDR, полученные из зародышевой линии млекопитающего, иного, чем люди, такого как мыши, пересаженные на каркасные последовательности человека. Гуманизированное антитело также можно получать, соединяя гены, кодирующие области CDR антитела, выделенные хорошо известным способом из антитело-продуцирующей гибридомы, полученной указанным выше способом, с генами, кодирующими каркасные области антитела, полученные из людей хорошо известным способом (например, см. патенты США №№ 5225539 и 5530101 Winter и патенты США №№ 5585089 и 6180370 Queen).
[0024] В рамках изобретения термин "антитело человека" означает антитело, содержащее вариабельную область, образованную каркасными областями, областями CDR и константной областью, полученными из последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека. Антитело человека, используемое в настоящем изобретении, можно получать способом, в котором используют мышей, трансформированных для получения антител человека, таких как мыши Humab-Mouse (например, см. патенты США №№ 5545806, 5569825, 5625126, 5633425, 5789650, 5877397, 5661016, 5814318, 5874299 и 5770429 Lonberg and Kay et al.), мыши KM (например, см. WO 2002/43478 Ishida et al.), мыши Xenomouse (например, см. патенты США №№ 5939598, 6075181, 6114598, 6150584 и 6162963) и мыши Tc (например, см. Tomizuka et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000): 722-727). Антитело человека также можно получать с использованием мышей SCID (например, см. патенты США №№ 5476996 и 5698767 Wilsonet al.), в которых иммунные клетки человека реконструируют так, чтобы запускать гуморальную реакцию человека посредством иммунизации. Антитело человека, используемое в настоящем изобретении, также можно получать способом фагового дисплея, описанным выше.
1
4
1
4
[0025] В рамках изобретения термин "изотип" используют для обозначения класса антитела (такого как IgM или IgG), кодируемого геном константной области тяжелой цепи. Антитело против аллергина-1 по настоящему изобретению, предпочтительно, является IgG или IgG. IgG, предпочтительно, модифицируют таким образом, что произвольную аминокислоту в константной области тяжелой цепи подвергают замене, делеции или инсерции таким образом, что антитело не имеет связывания или имеет сниженное связывание с Fc-рецептором. IgG, предпочтительно, модифицируют таким образом, что произвольную аминокислоту в константной области тяжелой цепи подвергают замене, делеции или инсерции таким образом, что супрессируют перестановку.
[0026] В рамках изобретения термин "слитый белок" означает полипептид, содержащий два белковых остатка, имеющие различные свойства, являющиеся ковалентно связанными. Например, если для слитого белка используют мембрано-ассоциированный белок, часть, в основном, содержащую внеклеточную часть мембрано-ассоциированного белка, можно связывать с Fc-областью антитела для получения слитого белка, чтобы поспособствовать солюбилизации белка.
-8
-8
-9
-9
[0027] Антитело против аллергина-1, которое можно выбирать в качестве антагониста аллергина-1 по настоящему изобретению, является антителом, связывающимся с аллергином-1 человека с константой диссоциации (значением Kd) 5×10M или менее, более предпочтительно - связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 1×10M или менее, еще более предпочтительно - связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 5×10M или менее, и особенно предпочтительно - связывается с аллергином-1 человека со значением Kd 1×10M или менее.
[0028] В другом варианте осуществления антитело против аллергина-1, предпочтительно, является полиспецифическим антителом против аллергина-1 человека, распознающим два или более разных эпитопа на одной молекуле антигена.
1
4
[0029] В другом варианте осуществления антитело против аллергина-1, предпочтительно, является моноклональным антителом против аллергина-1 человека и, еще более предпочтительно, моноклональным антителом IgG или IgGпротив аллергина-1 человека.
[0030] В рамках изобретения термин "противоопухолевая терапия" или подобные термины включают, например, терапию, посредством которой (i) снижают пролиферацию злокачественных клеток, (ii) снижают симптом, являющийся результатом злокачественного новообразования, (iii) улучшают качество жизни пациента со злокачественным новообразованием, (iv) снижают дозу другого противоопухолевого лекарственного средства или вспомогательного вещества для противоопухолевой терапии, которое уже вводят, и/или (v) повышают выживаемость пациента со злокачественным новообразованием. Термин "супрессия прогрессирования злокачественного новообразования" означает задержку прогрессирования злокачественного новообразования, стабилизацию симптома, ассоциированного со злокачественным новообразованием, и реверсирование прогрессирования симптома. Термин "супрессия рецидивирования" означает профилактику рецидивирования злокачественного новообразования у пациента, злокачественное повреждение у которого полностью или в значительной степени устраняют или удаляют посредством противоопухолевой терапии или резекции злокачественного новообразования.
[0031] Злокачественное новообразование, которое можно подвергать супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечению антагонистом аллергина-1, включает любое солидное злокачественное новообразование и гемобластоз. Примеры солидного злокачественного новообразования, в случае которого антагонист аллергина-1 может быть особенно эффективным, включают злокачественную меланому (такую как злокачественная меланома кожи, эпителия ротовой полости и внутриглазничную меланому), немелкоклеточный рак легких (такой как плоскоклеточный немелкоклеточный рак легких и неплоскоклеточный немелкоклеточный рак легких), мелкоклеточный рак легких, рак головы и шеи, почечноклеточный рак, светлоклеточный почечноклеточный рак, рак молочной железы, рак яичников, светлоклеточную аденокарциному яичника, саркому костной и мягких тканей (такую как саркома Юинга, рабдомиосаркома детей и лейомиосаркома матки), глиобластому, глиосаркому, рак носоглотки, рак матки (такой как рак шейки матки и рак эндометрия), рак анального канала, колоректальный рак, печеночноклеточный рак, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак желудка, уротелиальный рак (такой как рак мочевого пузыря, рак верхних мочевыводящих путей, рак мочеточника, рак почечной лоханки и рак уретры), рак предстательной железы, рак фаллопиевых труб, первичный рак забрюшинного пространства, плевральную мезотелиому и миелопролиферативный синдром. Примеры гемобластоза, в случае которого антагонист аллергина-1 может быть особенно эффективным, включают множественную миелому, злокачественную лимфому (такую как неходжкинская лимфома (такая как фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома) и лимфома Ходжкина) и лейкоз (такой как острый миелоидный лейкоз и хронический миелоидный лейкоз).
[0032] Помимо указанного выше, эффект можно ожидать при раке желчного пузыря, раке желчных протоков, билиарном раке, раке кожи (таком как рак из клеток Меркеля), раке прямой кишки, раке толстого кишечника, раке яичка (герминоме), раке влагалища, раке вульвы, раке полового члена, раке тонкого кишечника, раке эндокринных желез, раке щитовидной железы, раке паращитовидной железы, раке надпочечника, опухоли головного мозга, опухоли спинного мозга, саркоме Капоши, плоскоклеточном раке, хроническом или остром лимфоцитарном лейкозе, T-клеточном лейкозе взрослых, первичной злокачественной лимфоме центральной нервной системы, миелодиспластическом синдроме, злокачественных новообразованиях детского возраста и злокачественных новообразованиях с неизвестной первичной опухолью.
[0033] Польза антагониста аллергина-1 по настоящему изобретению может быть особенно очевидной, когда его прописывают пациенту со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью существующего противоопухолевого лекарственного средства (антинеопластического лекарственного средства). Помимо прочего, польза антагониста аллергина-1 может быть особенно очевидной, когда его прописывают пациенту со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью противоопухолевого иммунотерапевтического средства. Примеры "пациента со злокачественным новообразованием с недостаточной терапевтической эффективностью противоопухолевого лекарственного средства" включают пациентов, определенных в качестве "прогрессирующих (PD)" при оценке уменьшения размера опухоли RECIST даже после терапии с использованием существующего противоопухолевого лекарственного средства. Примеры существующего противоопухолевого лекарственного средства включают алкилирующее средство, препарат платины, антиметаболит (такой как антифолат, антиметаболит пиридина, антиметаболит пурина, ингибитор рибонуклеотидредуктазы и аналог нуклеотида), ингибитор топоизомеразы, ингибитор полимеризации микротрубочек, ингибитор деполимеризации микротрубочек, антибиотик-антинеопластическое средство, препарат цитокина, антигормон, лекарственное средство для молекулярного таргетинга, противоопухолевое иммунотерапевтическое средство и т.п.

[0034] Примеры алкилирующего средства включают дакарбазин, нимустин, темозоломид, фотемустин, циклофосфамид, ифосамид и т.п. Примеры препарата платины включают цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин и т.п. Примеры антифолата включают пеметрексед, лейковорин, метотрексат и т.п. Примеры антиметаболита пиридина включают TS-1, 5-фторурацил, UFT, кармофур, доксифлуридин, капецитабин и т.п. Примеры аналога нуклеотида включают гемцитабин и т.п. Примеры ингибитора топоизомеразы включают иринотекан, этопозид и т.п. Примеры ингибитора полимеризации микротрубочек включают винкристин, винбластин, винорелбин и т.п. Примеры ингибитора деполимеризации микротрубочек включают доцетаксел, паклитаксел и т.п. Примеры антибиотика-антинеоплатического средства включают блеомицин, митомицин C, эпирубицин и т.п. Примеры препарата цитокина включают ИФН-α2a, ИФН-α2b, PEG-ИФН-α2b, природный ИФН-β, интерлейкин-2 и т.п. Примеры антигормона включают тамоксифен, фулвестрант, гозерелин, лейпрорелин, анастрозол, летрозол, экземестан и т.п. Примеры лекарственного средства для молекулярного таргетинга включают иматиниб, сорафениб, сунитиниб, бевацизумаб, гефитиниб, эрлотиниб, кризотиниб, темсиролимус, эверолимус, акситиниб, пазопаниб, регорафениб, цетуксимаб, ритуксимаб, ибрутиниб, офатумумаб, панитумумаб и т.п.
[0035] В рамках изобретения термин "противоопухолевая иммунотерапия" или т.п. относится к терапии для усиления иммунной реакции на злокачественное новообразование, а именно для усиления иммунитета к злокачественному новообразованию, таким образом, супрессирующего пролиферацию злокачественного новообразования или уменьшающего или устраняющего злокачественное новообразование. Термин "противоопухолевое иммунотерапевтическое средство" означает средство, способное усиливать иммунную реакцию. Примеры терапевтического средства включают антитело против PD-1 (такое как моноклональное (нейтрализующее) антитело человека против PD-1 человека (такое как ниволумаб и REGN-2810) и гуманизированное моноклональное (нейтрализующее) антитело против PD-1 человека (такое как пембролизумаб, PDR-001, BGB-A317 и AMP-514 (также известное как MEDI0680)), ANB011 (также известное как TSR-042) и STI-A1110), антитело против PD-L1 (такое как атезолимумаб (также известный как RG7446 или MPDL3280A), авелумаб (также известный как PF-06834635 или MSB0010718C), дурвалумаб (также известный как MEDI4736), BMS-936559, STI-1010, STI-1011 и STI-1014), антагонист PD-1 (такой как AUNP-12), антитело против PD-L2, слитый белок PD-L1, слитый белок PD-L2 (такой как AMP-224), антитело против CTLA-4 (такое как ипилимумаб и тремелимумаб), антитело против LAG-3 (такое как BMS-986016 и LAG525), антитело против Tim3 (такое как MBG453), антитело против KIR (такое как лирилумаб), антитело против BTLA, антитело против TIGIT, антитело против VISTA, антитело против CD137 (такое как урелумаб), антитело против OX40 (такое как MEDI6469), антитело против HVEM, антитело против CD27 (такое как варлилумаб), антитело против GITR (такое как MK-4166 и TRX-518), антитело против CD28, антитело против CCR4 (такое как могамулизумаб), антитело против CD4 (такое как MTRX-1011A, TRX-1, ибализумаб, huB-F5, занолимумаб, 4162W94, кленоликсимаб, келиксимаб, AD-519, PRO-542, цеделизумаб, TNX-355, дацетузумаб, трегализумаб, приликсимаб, MDX-CD4, КЭМПАС-9 и IT1208), агонист TLR, агонист STING (такой как MIW815) и т.п. В рамках изобретения противоопухолевое иммунотерапевтическое средство не включает антагониста аллергина-1 по настоящему изобретению.
[0036] Ниволумаб можно получать способом, описанным в WO2006/121168, пембролизумаб можно получать способом, описанным в WO2008/156712, BMS-936559 можно получать способом, описанным в WO2007/005874, и ипилимумаб можно получать способом, описанным в WO2001/014424.
[0037] Антагонист аллергина-1 по настоящему изобретению, как правило, вводят системно или местно в парентеральной форме. Дозу можно варьировать в зависимости от возраста, массы тела, симптомов, терапевтической эффективности, способа введения, периода лечения и т.п. Однако, антагонист аллергина-1, как правило, можно вводить в диапазоне от 0,1 мкг/кг до 300 мг/кг, и особенно предпочтительно - в диапазоне от 0,1 мг/кг до 10 мг/кг на дозу на взрослого от одного до нескольких раз в сутки посредством парентерального введения или внутривенного непрерывного введения в течение периода от 1 часа до 24 часов в сутки. Как описано выше, дозу можно варьировать в зависимости от различных условий. Таким образом, достаточная доза может быть меньше дозы, указанной выше, или может потребоваться более высокая доза, чем указанный выше диапазон.
[0038] Антагонист аллергина-1 по настоящему изобретению можно комбинировать с одним или несколькими другими средствами (в основном, противоопухолевым лекарственным средством), используемым для лечения злокачественного новообразования, описанного выше, для (1) супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или повышения терапевтической эффективности в отношении злокачественного новообразования, (2) снижения дозы других средств, используемых в комбинации, и/или (3) снижения побочного эффекта других средств, используемых в комбинации. Если антагонист аллергина-1 и другие средства вводят раздельно, антагонист аллергина-1 можно вводить перед введением других средств, другие средства можно вводить перед введением антагониста аллергина-1, или может быть конкретный период, в течение которого оба средства вводят одновременно. Средства можно вводить одинаковым или разными способами введения. В зависимости от характеристик средств, препарат, содержащий антагонист аллергина-1, и препарат, содержащий другие средства, можно предоставлять в виде набора. Дозу других средств можно соответствующим образом выбирать на основе клинически используемой дозы. Другие средства можно вводить посредством комбинирования любых двух или более средств в подходящих пропорциях. Другие средства включают существующие средства, а также средства, которые будут открыты в будущем.
[0039] Примеры противоопухолевого лекарственного средства, которые, в основном, можно приводить в качестве примера других средств, включают противоопухолевое лекарственное средство, описанное выше.
[0040] Антагонист аллергина-1 по настоящему изобретению составляют в виде препарата для инъекции или инфузии и используют. Препарат для инъекции или инфузии может находиться в любой форме из водного раствора, суспензии или эмульсии, или его можно составлять в виде твердого средства для использования посредством добавления растворителя перед использованием для его растворения, суспендирования или эмульгирования. Примеры растворителя, используемого для препарата для инъекции или инфузии, включают дистиллированную воду для инъекции, физиологический раствор, раствор декстрозы и изотонический раствор (такой как раствор хлорида натрия, хлорида калия, глицерина, маннита, сорбита, борной кислоты, буры или пропиленгликоля) и т.п.

[0041] Примеры фармацевтически приемлемого носителя, используемого для препарата для инъекции, инфузии или твердого средства для использования посредством добавления растворителя перед использованием для его растворения, суспендирования или эмульгирования, включают стабилизатор, солюбилизатор, суспендирующее средство, эмульгатор, успокаивающее средство, буферное средство, консервант, антисептик, средство для контроля pH, антиоксидант и т.п. Примеры стабилизатора, который можно использовать, включают различные аминокислоты, альбумин, глобулин, желатин, маннит, глюкозу, декстран, этиленгликоль, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, аскорбиновую кислоту, кислый сульфит натрия, тиосульфат натрия, эдетат натрия, цитрат натрия, дибутилгидрокситолуол и т.п. Примеры солюбилизатора, который можно использовать, включают спирт (такой как этанол), полиспирт (такой как пропиленгликоль и полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество (такое как Polysorbate80 и HCO-50) и т.п. Примеры суспендирующего средства, которое можно использовать, включают глицерилмоностеарат, моностеарат алюминия, метилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиметилцеллюлозу, лаурилсульфат натрия и т.п. Примеры эмульгатора, который можно использовать, включают гуммиарабик, аргинат натрия, трагакантовую камедь и т.п. Примеры успокаивающего средства, которое можно использовать, включают бензиловый спирт, хлорбутанол, сорбит и т.п. Примеры буферного средства, которое можно использовать, включают фосфатный буфер, ацетатный буфер, боратный буфер, карбонатный буфер, цитратный буфер, буфер Трис, глутаматный буфер, эпсилон-аминокапронатный буфер и т.п. Примеры консерванта, который можно использовать, включают метил-пара-оксибензоат, этил-пара-оксибензоат, пропил-пара-оксибензоат, бутил-пара-оксибензоат, хлорбутанол, бензиловый спирт, хлорид бензалкония, дегидроацетат натрия, эдетат натрия, борную кислоту, буру и т.п. Примеры антисептика, который можно использовать, включают хлорид бензалкония, пара-оксибензойную кислоту, хлорбутанол и т.п. Примеры средства для контроля pH, которое можно использовать, включают соляную кислоту, гидроксид натрия, фосфорную кислоту, уксусную кислоту и т.п. Примеры антиоксиданта, который можно использовать, включают (1) водорастворимый антиоксидант, такой как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, пиросульфит натрия и сульфит натрия, (2) растворимый в масле антиоксидант, такой как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, лецитин, пропилгаллат и α-токоферол, и (3) металл-хелатирующее средство, такое как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота, сорбит, винная кислота и фосфорная кислота.
[0042] Препарат для инъекции или инфузии можно получать посредством стерилизации при конечной обработке или асептическим способом, таким как стерилизация посредством фильтрации через фильтр и упаковка в стерилизованный контейнер. Препарат для инъекции или инфузии можно использовать посредством растворения асептического порошка (который может содержать порошок фармацевтически приемлемого носителя), полученного посредством вакуумной сушки или лиофилизации в подходящем растворителе перед использованием.
[0043] Настоящее изобретение более конкретно описано в виде в представленных ниже примеров, не ограничивающих объем изобретения. Следует отметить, что специалист в этой области может осуществлять различные изменения и модификации на основе описания настоящего изобретения, и такие изменения и модификации также включены в настоящее изобретение.
[Примеры]
Пример 1: Получение мышей аллергин-1KO
[0044]
Конструировали направленный вектор аллергина-1. Конкретно, первый экзон, включающий инициирующий кодон аллергина-1, заменяли кассетой гена резистентности к неомицину (фиг. 1A). Клетки ES, полученные из мышей C57BL/6N, трансфицировали с использованием линеаризованного направленного вектора аллергина-1 посредством электропорации. Клетки подвергали селекции посредством скрининга на резистентность к лекарственному средству и выбирали гомологичные рекомбинировавшие клоны посредством саузерн-блоттинга. Используя положительные клоны, химерных мышей получали посредством агрегации. Эмбрионы ICR на стадии восьми клеток использовали в качестве эмбрионов-реципиентов. Встречаемость химер из полученных химерных мышей анализировали с учетом окраски всего тела. Полученную отдельную химерную мышь скрещивали с мышью C57BL/6N и потомков F1 генетически анализировали посредством саузерн-блоттинга для получения гетерозиготных индивидуумов F1. Самцов и самок гетерозиготных индивидуумов F1 скрещивали и подтверждали получение мышей Alg1-KO посредством генетического анализа с использованием Саузерн-блоттинга (фиг. 1B).
[0045] Т.к. у мышей аллергин-1KO не наблюдали особенно очевидный фенотип, ожидают, что побочный эффект антагониста аллергина-1 может быть незначительным.
Пример 2: Пролиферация опухоли (MC38) у мышей аллергин-1KO
[0046]
5
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали MC38 в количестве 2,0×10/мышь. Количество мышей в одной группе составляло 15. Объем опухоли MC38 измеряли в день 7, 10, 14, 17, 21 и 24 после трансформации. На фиг. 2 представлены изменения объема опухоли в виде медианы (фиг. 2, левая панель) и среднего ± стандартная ошибка (фиг. 2, правая панель) для каждой группы. У мышей мыши аллергин-1KO пролиферация опухоли была значительно супрессирована по сравнению с мышами дикого типа.
Пример 3: Пролиферация опухоли (B16F10) у мышей аллергин-1KO
[0047]
5
3
3
3
3
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали B16F10 в количестве 2,0×10/мышь. Количество мышей в одной группе составляло 10. Объем опухоли B16F10 в каждой группе измеряли в день 7, 11, 14, 18 и 21, при условии, что день трансплантации являлся днем 0. В группе, которой вводили антитело против PD-1 мыши 4H2 (антитело, полученное способом, описываемым в примере 12 в WO2006/121168), 4H2 интраперитонеально вводили мышам WT в день трансплантации и день 6, 12 и 18. На фиг. 3 представлены изменения объема опухоли в виде медианы (фиг. 3, левая панель) и среднего ± стандартная ошибка (фиг. 3, правая панель) для каждой группы. Как показано на фиг. 3, пролиферация опухоли B16F10 также была значительно супрессирована у мышей аллергин-1KO по сравнению с мышами дикого типа. При этом, в группе мышей WT, которым вводили антитело против PD-1 мыши 4H2, медиана объема опухоли в день 21 после трансплантации составляла 1985,6 мм(среднее: 2105,0±418,4 мм). Медиана объема опухоли в день 21 в группе мышей, несущих опухоль, которым не осуществляли введение, составляла 2661,0 мм(среднее: 2622,6±377,1 мм).
[0048] Результаты, представленные в примерах 2 и 3, свидетельствуют о том, что пролиферацию опухоли можно супрессировать посредством ингибирования аллергина-1.
Пример 4: Эффект антитела против PD-1 у мышей аллергин-1KO
[0049]
5
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали MC38 в количестве 2,0×10клеток/мышь. mIgG и антитело против PD-1 мыши 4H2 интраперитонеально вводили в день трансплантации и день 6 и 12, при условии, что день трансплантации являлся днем 0. Доза 4H2 составляла 10 мг/кг (20 мг/кг только в день трансплантации 0). Количество мышей в одной группе составляло 15 для группы мышей, которые лишь несли опухоль (фиг. 4, левая панель), и 10 для групп мышей, которым вводили антитела (фиг. 4, правая панель). Объем опухоли MC38 измеряли в день 7, 11, 14, 18, 21, 24 и 27 после трансплантации. На фиг. 4 представлено изменение объема опухоли в виде среднего ± стандартная ошибка для каждой группы. В группе мышей аллергин-1KO, которым вводили антитело 4H2, пролиферация опухоли была дополнительно супрессирована по сравнению с группой мышей аллергин-1KO, которым вводили контрольное антитело, а именно не наблюдали пролиферацию опухоли в течение периода измерения.
[0050] Результаты, представленные в примерах 3 и 4, свидетельствовали о том, что наблюдали синергическое действие при ингибировании аллергина-1 и ингибировании PD-1.
Пример 5: Повышение иммунитета к злокачественному новообразованию у мышей аллергин-1KO
[0051]
5
+
+
+
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали MC38 в количестве 2,0×10клеток/мышь. Количество мышей в одной группе составляло 11 или 12. В день 15 после трансплантации опухоль удаляли из мышей и обрабатывали коллагеназой для получения опухолевых клеток. Полученные клетки подвергали окрашиванию с использованием антител и измеряли количество инфильтрирующих опухоль CD8-положительных T-клеток и количество специфичных в отношении опухолевого антигена(p15E) CD8-положительных T-клеток с помощью FACS. На фиг. 5 представлено количество инфильтрирующих лимфоцитов на 1 мг опухоли в виде среднего ± стандартная ошибка. У мышей аллергин-1KO инфильтрирующие опухоль CD8 клетки ("CD8T-клетка" на фиг. 5) и опухолеспецифичных CD8 клеток ("CD8тетрамер" на фиг. 5) было значимо повышено по сравнению с мышами дикого типа.
Пример 6: Повышение продукции ИФНα у мышей аллергин-1KO
[0052]
Различные олигонуклеотиды CpG (CpG-ODN) смешивали с реагентом для липофекции DOTAP и вводили мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO через хвостовую вену в количестве 52 нмоль/кг. Через 2, 6 и 24 часа после введения, кровь собирали из хвостовой вены и ИФНα в крови измеряли посредством ELISA. На фиг. 6 показан ИФНα в крови (пг/мл) в виде среднего ± стандартная ошибка в каждой точке оценки для каждой группы. У мышей аллергин-1KO продукция ИФНα была значимо повышена по сравнению с мышами дикого типа.
[0053] Результаты примеров 5 и 6 показали, что ингибирование аллергина-1 повышало иммунитет против опухоли.
Пример 7: Эффект антитела против PD-1 у мышей аллергин-1KO
[0054]
5
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали MC38 в количестве 2,0×10клеток/мышь. Контрольное антитело mIgG и антитело против PD-1 мыши 4H2 интраперитонеально вводили в день трансплантации и день 6 и 12, при условии, что день трансплантации являлся днем 0. Доза 4H2 составляла 1 или 3 мг/кг. Количество мышей в одной группе составляло 10. объем опухоли MC38 измеряли в день 7, 11, 13, 18, 21 и 24 после трансплантации. На фиг. 7 и 8 представлены профили объема опухоли в виде среднего ± стандартная ошибка для каждой группы.
[0055] В группах мышей Alg1-KO, которым вводили 1 и 3 мг/кг антитела 4H2, противоопухолевый эффект наблюдали на уровне, схожем с таковым в примере 4. Количество животных в каждой группе, у которых наблюдали регрессирование опухоли в день 32, представлено ниже.
[Таблица 1]
Мышь
Антитело (1 мг/кг)
Количество животных с регрессированием опухоли
Мышь
Антитело (3 мг/кг)
Количество животных с регрессированием опухоли
WT
4H2
0/10
WT
4H2
0/10
Alg1-KO
mIgG
0/10
Alg1-KO
mIgG
0/10
Alg1-KO
4H2
5/10
Alg1-KO
4H2
9/10
Пример 8: Эффект антитела против CD4 у мышей аллергин-1KO
[0056]
5
2b
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO подкожно трансплантировали MC38 или B16F10 в количестве 2,0×10клеток/мышь. Контрольное антитело IgG крысыи антитело против CD4 мыши GK1.5 (BioXcell) интраперитонеально вводили в день 5, при условии, что день трансплантации являлся днем 0. Доза антител составляла 5 мг/кг. Количество мышей в одной группе составляло 10. Объем опухоли MC38 и B16F10 измеряли в день 7, 11, 14, 18, 21, 25 и 28 после трансплантации. Когда половина или больше животных в группе умирали или были умерщвлены, измерение непосредственно после наблюдения представляло собой последний день измерения опухоли. На фиг. 9 и 10 представлено изменение объема опухоли в виде среднего ± стандартная ошибка для каждой группы. В группе мышей Alg1-KO, которым вводили GK1.5, пролиферация опухоли была дополнительно супрессирована по сравнению с группой мышей Alg1-KO, которым вводили контрольное антитело.
Пример 9: Продукция ИФН типа I у мышей аллергин-1KO после введения полиуридина
[0057]
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg1-KO внутривенно вводили полиуридин вместе с реагентом для липосомной трансфекции DOTAP. Доза составляла 50 мкг/мышь. ИФНα и ИФНβ в сыворотке измеряли посредством ELISA через 2 и 6 часа после введения. На фиг. 11 представлены ИФНα и ИФНβ в сыворотке для каждой группы. В группе мышей Alg1-KO, которым вводили полиуридин, продукция ИФНα и ИФНβ была повышена по сравнению с WT.
Пример 10: Продукция ИФН типа I после стимуляции cGAMP в интраперитонеальных макрофагах, полученных из мыши аллергин-1KO
[0058]
+
+
Мышам C57BL/6N и мышам Alg1-KO интраперитонеально вводили 3% тиогликолятную среду в количестве 1 мл/организм. Через 3 дня 5 мл 5 мМ ЭДТА/PBS инъецировали для интраперитонеального лаважа и собирали дренажную жидкость. После гемолитической обработки вычисляли долю CD11bF4/80 клеток среди интраперитонеальных инвазирующих клеток с помощью проточного цитометра.
+
+
5
[0059] Клетки высевали на 96-луночный планшет таким образом, что количество CD11bF4/80 клеток составляло 2×10клеток/лунку, супернатант культуры выбрасывали через 1 час, клетки однократно промывали средой и добавляли среду, содержащую 3, 10 или 30 мкМ циклического GMP-AMP (cGAMP), соответственно. Супернатант культуры собирали через 24 и 48 часов и измеряли количество ИФНβ в супернатантах культур. На фиг. 12 представлено количество ИФНβ для каждой группы. В группе макрофагов, полученных из мышей Alg1-KO, которых стимулировали cGAMP, продукция ИФНβ была повышена по сравнению с WT.
Пример 11: Эффект антитела против PD-1 у мышей аллергин-1KO
[0060]
5
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам Alg-1KO подкожно трансплантировали B16F10 в количестве 2,0×10 клеток/мышь. mIgG и антитело против PD-1 мыши 4H2 интраперитонеально вводили в день трансплантации и день 6, 12 и 18, при условии, что день трансплантации являлся днем 0. Доза 4H2 составляла 10 мг/кг (20 мг/кг только в день трансплантации 0). Количество мышей в одной группе составляло 10. объем опухоли B16F10 измеряли в день 7, 11, 14, 18 и 21 после трансплантации. На фиг. 13 представлено изменение объема опухоли в виде медианы для каждой группы. В группе мышей аллергин-1KO, которым вводили 4H2 антитело, пролиферация опухоли была значимо супрессирована по сравнению с другими группами.
Пример 12: Эффект комбинированного использования недостаточности аллергина-1 и антитела против PD-1 в тесте с использованием повторной пробы
[0061]
5
Мышам C57BL/6 (мышам WT) и мышам аллергин-1KO (Alg1-KO) подкожно трансплантировали MC38 в количестве 2,0×10клеток/мышь. Антитело против PD-1 мыши 4H2 вводили интраперитонеально в день трансплантации и день 6, 12 и 18. Доза 4H2 составляла 10 мг/кг (20 мг/кг только в день трансплантации 0) для мышей WT и 1 мг/кг или 3 мг/кг (2 мг/кг или 6 мг/кг только в день трансплантации 0) для мышей Alg1-KO. Количество мышей в одной группе трансплантации составляло 20 в случае мышей WT и 10 на каждую дозу в случае мышей Alg1-KO. В день 32 после трансплантации у 8 из 20 мышей WT и 14 из 20 мышей Alg1-KO наблюдали полную ремиссию (CR) опухоли.
5
[0062] Мышам WT и мышам Alg1-KO, у которых наблюдали CR, подкожно трансплантировали MC38 и B16F10 в правый и левый бок, соответственно, в количестве 2,0×10/мышь в день 42 после первой трансплантации. Объем опухоли MC38 и B16F10 измеряли в день 7, 11, 14, 18, 21, 25, 28, 32, 35, 39 и 42 после трансплантации. На фиг. 14 представлено изменение объема опухоли в виде среднего ± стандартная ошибка для каждой группы. В случае MC38 у 7 из 8 мышей WT и всех 14 мышей Alg1-KO наблюдали ремиссию опухоли. В случае B16F10 у 1 из 8 мышей WT и 11 из 14 мышей Alg1-KO наблюдали ремиссию опухоли, а именно в группе мышей Alg1-KO, у которых наблюдали CR после введения 4H2, наблюдали больше индивидуумов с CR, чем в группе мышей WT, у которых наблюдали CR после введения 4H2.
[0063] Это свидетельствует о том, что у мышей, из которых злокачественные клетки MC38 полностью удаляли только посредством ингибирования PD-1, уже развивалась иммунологическая память против злокачественных клеток MC38, с которыми иммунная система мышей взаимодействовала, в то время как CD8T-клетки памяти не функционировали в достаточной степени против злокачественных клеток B16F10, с которыми иммунная система никогда не взаимодействовала. При этом, если ингибирование PD-1 сопутствовало ингибированию аллергина-1, возникшие CD8T-клетки памяти против злокачественных клеток MC38, с которыми иммунная система мышей уже взаимодействовала, в достаточной степени функционировали в отношении злокачественных клеток B16F10, с которыми иммунная система никогда не взаимодействовала, таким образом, полностью их удаляя. В этом контексте B16F10 можно рассматривать в качестве рекуррентных злокачественных клеток. А именно, результаты свидетельствуют о том, что иммунная система в окружении, в котором ингибирование PD-1 сопутствует ингибированию аллергина-1, может запоминать больше различных антигенов злокачественных опухолей, чем антигенов злокачественных опухолей, которые могут быть запомнены иммунной системой в окружении, в котором есть только ингибирование PD-1. Спектр антигенов злокачественных новообразований, запоминаемых иммунной системой в окружении, в котором ингибирование PD-1 сопутствует ингибированию аллергина-1, охватывает антигены злокачественных новообразований со слабой антигенностью. Таким образом, полагают, что антигены со слабой антигенностью не распознаются иммунной системой как антигены злокачественных новообразований в нормальном окружении и с трудом распознаются как антигены злокачественных новообразований даже в окружении только с ингибированием PD-1. Кроме того, полагают, что, если сохраняется окружение с ингибированием аллергина-1, злокачественные клетки, которые никогда не могли бы распознаваться иммунной системой в нормальном окружении и могут с трудом распознаваться в окружении только с ингибированием PD-1, могут распознаваться как антигены, и можно наблюдать противоопухолевый эффект против новых злокачественных клеток или, другими словами, рекуррентных злокачественных клеток.
[0064] Результаты примеров 6, 9 и 10 свидетельствовали о том, что ингибирование аллергина-1 повышает реактивность в отношении агониста STING и лигандов TLR. Полагают, что в окружении с ингибированием аллергина-1 иммунная система распознает антигены злокачественных новообразований на злокачественных клетках, имеющие низкую антигенность, для активации CD8T-клеток и атаки злокачественных клеток, а затем агонисты STING и лиганды TLR из убитых злокачественных клеток дополнительно усиливают иммунную реакцию против злокачественного новообразования в окружении с ингибированием аллергина-1, таким образом, приводя к синергическому действию и предотвращению рецидивирования.
[Промышленная применимость]
[0065] Антагонист аллергина-1 по настоящему изобретению способен повышать иммунитет к злокачественному новообразованию, и его можно использовать для супрессии прогрессирования, супрессии рецидивирования и/или лечения злокачественного новообразования.