МЕЧЕНЫЕ АЛЬДЕГИДОМ ПОЛИПЕПТИДЫ ИММУНОГЛОБУЛИНА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенный меченый альдегидом полипептид иммуноглобулина (Ig), содержащий последовательность аминокислот константной области Ig, включающую последовательность аминокислот мотива сульфатазы,
при том, что мотив сульфатазы расположен в пределах или вблизи доступного для растворителя участка петли константной области полипептида Ig, и указанный мотив сульфатазы не расположен на C-конце полипептидной цепи Ig.
2. Выделенный меченый альдегидом полипептид Ig по п.1, отличающийся тем, что мотив сульфатазы содержит последовательность аминокислот формулы X1Z1X2Z2X3Z3, причем
Z1 представляет собой цистеин или серин;
Z2 представляет собой остаток пролина или аланина;
Z3 является алифатической аминокислотой или основной аминокислотой;
X1 присутствует или отсутствует и, если присутствует, может представлять собой любую аминокислоту, с условием, что когда гетерологичный мотив сульфатазы расположен на N-конце полипептида, X1 присутствует;
каждый из Х2 и Х3 независимо представляет собой любую аминокислоту.
3. Выделенный полипептид Ig по п.2, отличающийся тем, что Z3 представляет собой аргинин (R).
4. Выделенный полипептид Ig по п.2, отличающийся тем, что каждый из X1, если он присутствует, Х2 и Х3 независимо представляет собой алифатическую аминокислоту, серосодержащую аминокислоту или полярную, незаряженную аминокислоту.
5. Выделенный полипептид Ig по п.2, отличающийся тем, что X1, если он присутствует, представляет собой L, М, V, S или Т.
6. Выделенный полипептид Ig по п.2, отличающийся тем, что каждый из X2 и Х3 независимо представляет собой S, Т, А, V, G или С.
7. Выделенный полипептид Ig по п.2, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит константную область тяжелой цепи Ig.
8. Выделенный полипептид Ig по п.7, отличающийся тем, что константная область тяжелой цепи Ig представляет собой константную область тяжелой цепи IgG1.
9. Выделенный полипептид Ig по п.1, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит константную область легкой цепи Ig.
10. Выделенный полипептид Ig по п.9, отличающийся тем, что константная область легкой цепи Ig представляет собой константную область легкой цепи каппа.
11. Выделенный полипептид Ig по п.1, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит два или более мотивов сульфатазы.
12. Выделенный полипептид иммуноглобулина (Ig), модифицированный таким образом, чтобы содержать группу 2-формилглицин (FGly), причем указанный FGly-модифицированный мотив сульфатазы расположен в пределах или вблизи доступного для растворителя участка петли Ig полипептида, и, при этом, в FGly-модифицированном Ig группа FGly расположена на доступной для растворителя поверхности, когда он находится в свернутом состоянии, при том, что мотив сульфатазы не расположен на C-конце полипептидной цепи Ig.
13. Выделенный полипептид Ig по п.12, отличающийся тем, что FGly-модифицированный мотив сульфатазы включает формулу:
X1(FGly)X2Z2X3Z3
при условии, что:
X1 присутствует или отсутствует, и, если присутствует, то представляет собой любую аминокислоту, при условии, что, если мотив сульфатазы расположен на N-конце полипептида, то X1 присутствует;
каждый из Х2 и Х3 независимо представляет собой любую аминокислоту; и
Z3 представляет собой основную аминокислоту.
14. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.12, отличающийся тем, что FGly-модифицированный полипептид Ig содержит два или более FGly-модифицированных мотива сульфатазы.
15. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.12, отличающийся тем, что FGly-модифицированный полилептид Ig содержит константную область тяжелой цепи Ig.
16. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.15, отличающийся тем, что константная область тяжелой цепи Ig представляет собой константную область тяжелой цепи IgG1.
17. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.12, отличающийся тем, что FGly-модифицированный полипептид Ig содержит константную область легкой цепи Ig.
18. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.17, отличающийся тем, что константная область легкой цепи Ig представляет собой константную область легкой цепи каппа Ig.
19. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.13, отличающийся тем, что Z3 представляет собой аргинин (R).
20. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.13, отличающийся тем, что каждый из X1, если он присутствует, Х2 и Х3 независимо представляет собой алифатическую аминокислоту, серосодержащую аминокислоту или полярную, незаряженную аминокислоту.
21. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.13, отличающийся тем, что X1, если он присутствует, представляет собой L, М, V, S или Т.
22. FGly-модифицированный полипептид Ig по п.13, отличающийся тем, что каждый из Х2 и Х3 независимо представляет собой S, Т, А, V, G или С.
23. Конъюгат иммуноглобулина (Ig), который содержит:
полипептид Ig и ковалентно конъюгированный фрагмент, причем указанный полипептид Ig содержит модифицированный мотив сульфатазы, содержащий FGly',
a FGly' представлен формулой:
, ,
или
при том, что J1 представляет собой ковалентно связанную группу;
каждый L1 представляет собой двухвалентную группу, независимо выбранную из алкилена, замещенного алкилена, алкенилена, замещенного алкенилена, алкинилена, алкинилена, арилена, замещенного арилена, циклоалкилена, замещенного циклоалкилена, гетероарилена, замещенного гетероарилена, гетероциклена, замещенного гетероциклена, ацила, амидо, ацилокси, уретанилена, тиоэфира, сульфонила, сульфонамида, сульфонильного эфира, -O-, -S-, -NH- и замещенного амина; и
n представляет собой число от 0 до 40;
при этом указанный мотив сульфатазы расположен в пределах или вблизи доступного для растворителя участка петли полипептида Ig, причем мотив сульфатазы не расположен на C-конце полипептида Ig, а ковалентно связанный фрагмент расположен на доступной для растворителя поверхности в указанном конъюгате Ig, когда он находится в свернутом состоянии.
24. Конъюгат Ig по п.23, отличающийся тем, что указанный мотив сульфатазы включает формулу:
X1(FGly')X2Z2X3Z3
причем:
Z2 представляет собой остаток пролина или аланина;
X1 присутствует или отсутствует, и, если присутствует, то представляет собой любую аминокислоту, при условии, что, если мотив сульфатазы расположен на N-конце полипептида, то X1 присутствует;
каждый из X2 и Х3 независимо представляет собой любую аминокислоту; и
Z3 является алифатической аминокислотой или основной аминокислотой.
25. Конъюгат Ig по п.23, отличающийся тем, что J1 выбран из лекарственного средства, обнаруживаемой метки, растворимого в воде полимера и синтетического пептида.
26. Конъюгат Ig по п.23, отличающийся тем, что указанный конъюгат Ig содержит два или более модифицированных мотивов сульфатазы.
27. Конъюгат Ig по п.25, отличающийся тем, что J1 представляет собой низкомолекулярное лекарственное средство.
28. Конъюгат Ig по п.27, отличающийся тем, что указанное низкомолекулярное лекарственное средство представляет собой противораковое химиотерапевтическое средство.
29. Конъюгат Ig по п.28, отличающийся тем, что указанное противораковое химиотерапевтическое средство представляет собой алкилирующее средство, производное нитрозомочевины, антиметаболит, противоопухолевый антибиотик, алкалоид барвинка или стероидный гормон.
30. Конъюгат Ig по п.25, отличающийся тем, что J1 представляет собой растворимый в воде полимер.
31. Конъюгат Ig по п.30, отличающийся тем, что растворимый в воде полимер представляет собой поли(этиленгликоль).
32. Конъюгат Ig по п.25, отличающийся тем, что J1 представляет собой обнаруживаемую метку.
33. Конъюгат Ig по п.32, отличающийся тем, что обнаруживаемая метка представляет собой средство для визуализации.
34. Конъюгат Ig по п.23, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит константную область тяжелой цепи Ig.
35. Конъюгат Ig по п.34, отличающийся тем, что константная область тяжелой цепи Ig представляет собой константную область тяжелой цепи IgG1.
36. Конъюгат Ig по п.23, отличающийся тем, что FGly-модифицированный полипептид Ig содержит константную область легкой цепи Ig.
37. Конъюгат Ig по п.36, отличающийся тем, что константная область легкой цепи Ig представляет собой константную область легкой цепи каппа Ig.
38. Конъюгат Ig по п.24, отличающийся тем, что Z3 представляет собой аргинин (R).
39. Конъюгат Ig по п.24, отличающийся тем, что каждый из X1, если он присутствует, Х2 и Х3 независимо представляет собой алифатическую аминокислоту, серосодержащую аминокислоту или полярную, незаряженную аминокислоту.
40. Конъюгат Ig по п.24, отличающийся тем, что X1, если он присутствует, представляет собой L, М, V, S или Т.
41. Конъюгат Ig по п.24, отличающийся тем, что каждый из Х2 и Х3 независимо представляет собой S, Т, А, V, G или С.
42. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, которая содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую меченый альдегидом полипептид иммуноглобулина (Ig) по п.1.
43. Нуклеиновая кислота по п.42, отличающаяся тем, что полипептид Ig содержит константную область тяжелой цепи Ig.
44. Нуклеиновая кислота по п.43, отличающаяся тем, что полипептид Ig дополнительно содержит вариабельную область Ig.
45. Нуклеиновая кислота по п.42, отличающаяся тем, что полипептид Ig содержит константную область легкой цепи Ig.
46. Нуклеиновая кислота по п.45, отличающаяся тем, что полипептид Ig дополнительно содержит вариабельную область Ig.
47. Рекомбинантный вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту по п.42, при том, что нуклеотидная последовательность, кодирующая меченый альдегидом полипептид Ig, функционально связана с промотором.
48. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.47, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит константную область тяжелой цепи Ig.
49. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.48, отличающийся тем, что вектор содержит сайт встраивания для вариабельной области Ig в 5' направлении относительно кодирующей меченый альдегидом полипептид Ig нуклеотидной последовательности.
50. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.47, отличающийся тем, что полипептид Ig содержит константную область легкой цепи Ig.
51. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.50, отличающийся тем, что указанный вектор содержит сайт встраивания для вариабельной области Ig в 5' направлении относительно кодирующей меченый альдегидом полипептид Ig нуклеотидной последовательности.
52. Библиотека рекомбинантных векторов экспрессии, которая содержит:
популяцию рекомбинантных векторов экспрессии по п.47, при том, что каждый член популяции содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид иммуноглобулина, который помечен альдегидом отличным от других образом.
53. Библиотека меченых альдегидом полипептидов иммуноглобулина (Ig), которая содержит:
популяцию меченых альдегидом полипептидов Ig по п.1 или FGly-модифицированных полипептидов иммуноглобулина по п.12, при том, что указанная популяция включает члены, содержащие полипептиды Ig, которые по-разному помечены альдегидом.
54. Композиция, которая содержит:
а) конъюгат Ig по п.23; и
б) фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
55. Способ получения конъюгата иммуноглобулина с лекарственным средством, который включает этапы:
объединение в реакционной смеси FGly-модифицированного, меченого альдегидом полипептида иммуноглобулина (Ig) по п.12, в котором Z1 представляет собой остаток 2-формил-глицина (FGly); и
лекарственного средства для конъюгации с FGly-модифицированным полипептидом Ig, причем лекарственное средство содержит аминоокси или гидразидную реакционноспособную группу,
при этом указанное лекарственное средство обеспечивают в реакционной смеси в количестве, достаточном, чтобы обеспечить желательное соотношение лекарственного средства и полипептида Ig, причем указанное объединение проводят в условиях, подходящих для протекания реакции между альдегидом полипептида Ig и реакционноспособной группой лекарственного средства, с образованием конъюгата полипептида Ig с лекарственным средством; и
выделение конъюгата полипептида Ig с лекарственным средством из реакционной смеси.
56. Способ введения лекарственного средства индивидууму, нуждающемуся в этом, отличающийся тем, что способ включает введение указанному индивидууму эффективного количества конъюгата Ig по п.23.
57. Способ лечения рака у субъекта, который включает этап введения страдающему раком субъекту эффективного количества конъюгата иммуноглобулина с лекарственным средством по п.23, причем указанное введение является эффективным для лечения рака у субъекта.
58. Меченое альдегидом антитело, которое содержит меченый альдегидом полипептид иммуноглобулина (Ig) по п.1.
59. Меченое альдегидом антитело по п.58, отличающееся тем, что антитело содержит меченую альдегидом константную область тяжелой цепи Ig.
60. Меченое альдегидом антитело по п.58, отличающееся тем, что указанное антитело содержит меченую альдегидом константную область легкой цепи Ig.
61. Меченое альдегидом антитело по п.58, отличающееся тем, что указанное антитело содержит меченую альдегидом константную область тяжелой цепи Ig и меченую альдегидом константную область легкой цепи Ig.
62. Антитело, содержащее группу формилглицин (FGly), причем указанное антитело содержит FGly-модифицированный полипептид Ig по п.12.
63. FGly-модифицированное антитело по п.62, отличающееся тем, что указанное антитело содержит FGly-модифицированную константную область тяжелой цепи.
64. FGly-модифицированное антитело по п.62, отличающееся тем, что указанное антитело содержит FGly-модифицированную константную область легкой цепи.
65. FGly-модифицированное антитело по п.62, отличающееся тем, что антитело содержит FGly-модифицированную константную область тяжелой цепи и FGly-модифицированную константную область легкой цепи.
66. Конъюгат антитела, который содержит конъюгат иммуноглобулина (Ig) по п.21.
67. Конъюгат антитела по п.66, отличающийся тем, что конъюгат антитела содержит группу J1, ковалентно связанную с константной областью тяжелой цепи Ig.
68. Конъюгат антитела по п.66, отличающийся тем, что конъюгат антитела содержит группу J1, ковалентно связанную с константной областью легкой цепи Ig.
69. Конъюгат антитела по п.66, отличающийся тем, что указанный конъюгат антитела содержит группу J1, ковалентно связанную с константной областью тяжелой цепи Ig, и группу J1, ковалентно связанную с константной областью легкой цепи Ig.
70. Конъюгат антитела по п.66, отличающийся тем, что указанное антитело специфично связывается с опухолевым антигеном на раковой клетке.
71. Конъюгат антитела по п.70, отличающийся тем, что группа J1 представляет собой цитотоксическое средство.
72. Конъюгат антитела по п.66, отличающийся тем, что указанное антитело специфично связывается с антигеном на клетке, зараженной вирусом.
73. Конъюгат антитела по п.72, отличающийся тем, что антиген кодируется вирусом.
74. Конъюгат антитела по п.72, отличающийся тем, что группа J1 представляет собой ингибитор слияния вируса.