Применение способа введения натриевой соли 2-метилтио-6-нитро-1,2-4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7-она, дигидрата, обладающей противовирусной активностью, для профилактики коронавирусной инфекции COVID-19
APPLICATION OF METHOD FOR ADMINISTRATION OF SODIUM SALT OF 2-METHYLTHIO-6-NITRO-1,2-4-TRIAZOL[5,1-C] -1,2,4-TRIAZIN-7-ONE, DIHYDRATE WITH ANTIVIRAL ACTIVITY, FOR PREVENTION OF CORONAVIRUS INFECTION COVID-19

Заявляемое изобретение относится к области биологически активных соединений,  предназначенных для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых патогенными для человека и животных вирусами, в том числе новой коронавирусной инфекции COVID-19.
Актуальной проблемой в настоящее время является расширение арсенала средств лекарственной профилактики новой коронавирусной инфекции COVID-19, особенно в условиях пандемии.
Согласно временным методическим рекомендациям Министерства здравоохранения Российской Федерации «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)» [Временные методические рекомендации Министерства здравоохранения России «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)», версия 10, 08.02.2021.] определены три основные группы мероприятий для профилактики новой коронавирусной инфекции (COVID-19):
- специфическая профилактика у взрослых (вакцинация);
- неспецифическая профилактика (комплекс мероприятий, направленных на предотвращение распространения инфекции: диагностика и активное выявление инфицированных, соблюдение режима самоизоляции, соблюдение дистанции, использование мер социального разобщения, переход на удаленный режим работы, перевод на дистанционное обучение образовательных организаций, соблюдение правил личной гигиены и другие);
- медикаментозная профилактика.
В качестве медикаментозной профилактики COVID-19 возможно назначение интраназальных форм интерферона альфа (Interferonum alpha - ИФН-б), обладающего противовирусным, иммуномодулирующим, противоопухолевым и антипролиферативным фармакологическим действием. Важно отметить, что для беременных имеются ограничения и для них возможно только интраназальное введение рекомбинантного ИФН-б2b и/или умифеновира.
Кроме того, данное средство имеет ряд противопоказаний, в частности для лиц с гиперчувствительностью, тяжелыми заболеваниями сердца (в т.ч. в анамнезе), острым инфарктом миокарда, выраженными нарушения функции печени, почек или системы кроветворения, эпилепсия и/или других нарушений функций ЦНС.
При применении интерферона альфа могут возникать побочные явления, такие как вялость, лихорадка, озноб, потеря аппетита, мышечные боли, головная боль, боли в суставах, нарушение функции печени, гепатит, головокружение, расстройства зрения, ишемическая ретинопатия, депрессия, сонливость, нарушение сознания, нервозность, нарушение сна, кожные аллергические реакции (сыпь, зуд).
Учитывая сложности, связанные как с обеспечением специфической профилактики, включающей необходимость широкого охвата населения вакцинацией, а также существующих у конкретного человека противопоказаний, длительности формирования иммунного ответа, так и неспецифической профилактики, обусловленной трудностями повсеместной организации и обеспечении контроля, представляется целесообразным расширение арсенала средств лекарственной профилактики новой коронавирусной инфекции.
Из предшествующего уровня техники известно применение миристамидопропилдиметилбензиламмоний хлорида («мирамистин») в качестве средства инактивации коронавирусов (патент № 2234313 на изобретение «Средство инактивации коронавирусов», дата подачи 04.06.2003г., опубликовано 20.08.2004 г.).
При этом средство представляет собой мирамистин (он же миристамидопропилдиметилбензиламмоний хлорида), ранее известный как антисептик с противогрибковым, антимикробным действием и эффективный также против вирусов ВИЧ, гриппа и герпеса. Известное изобретение расширяет арсенал средств указанного назначения и позволяет лечить и предупреждать вызванные коронавирусами заболевания дыхательных путей, к которым также относится SARS и гастроэнтериты.
Однако изобретение по патенту № 2234313 имеет ряд существенных недостатков, в том числе, обусловленных  активным веществом, которое является производным четвертичного аммониевого основания, обладающего действием, аналогичным действию ядов кураре, и парализующего нервно-мышечные центры. При этом подавляется действие холинэстеразы и внутриклеточных окислительных ферментов (https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A5%D0%BE%D0%BB%D0%B8%D0%BD%D1%8D%D1%81%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B0%D0%B7%D0%B0).
Кроме того, четвертичные аммониевые соединения могут быть менее эффективны при продолжительном воздействии, например, в течение 10 минут. Применение данного средства человеком возможно лишь при местном способе использования и в очень низкой концентрации, которая будет безопасной для него. При этом четвертичные соединения эффективны в случае попадания вируса на внешнюю поверхность, но не внутрь организма [Н.Ф. Измеров, И.В Саноцкий, К.К. Сидоров. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии. М., 1977, 197 с.].  Для сохранения длительной защиты уже обработанные поверхности рук и/или лица, необходимо заново дезинфицировать, что негативно влияет на состояние кожных покровов и приводит к повреждению их целостности.
Указанные особенности средства инактивации коронавирусов не допустимы для системного применения и не могут помочь в борьбе с вирусом, который уже попал внутрь организма.
Известно биологически активное соединение - натриевая соль 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7-она, дигидрат, предназначенная для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых патогенными для человека и животных вирусами. Однако действие данного вещества распространяется на определенный список инфекций, вызываемых, в частности, вирусами лихорадки долины Рифт, вирусами ЗЭЛ, парагриппа, респираторно-синцитиального вируса, вируса болезни Ауески, инфекционного ляринготрахеита птиц, вируса гриппа птиц, всего более 10 РНК и ДНК содержащих вирусов Рифт.
Данное изобретение лишено указанных выше недостатков, и ранее показало хорошую переносимость и безопасность приема [Э.Г. Деев, О.И. Киселев, Т.И. Мельникова, А.А. Шалджан, П.А. Некрасов, А.С. Киселев, К.А. Загородникова, В.Н. Чарушин, В.Л. Русинов, Е.Н. Уламский, О.Н. Чупахин Новый противовирусный препарат «Триазавирин». Результаты I фазы клинического исследования. Эпидемиология и инфекционные болезни, №5, 2013; Киселев О.И., Деева Э.Г., Мельникова Т.И., Козелецкая К.Н., Киселев А.С., Русинов В.Л., Чарушин В.Н., Чупахин О.Н Новый противовирусный препарат Триазавирин. Результаты II фазы клинического исследования. Вопросы вирусологии. – 2012. – № 6. – С. 9-12; Т.В. Сологуб, И.И. Токин, А.С. Мидикари, В.В. Цветков. Сравнительная эффективность и безопасность применения противовирусных препаратов в терапии больных гриппом / Инфекционные болезни, 2017, т.15, N3, с.40-47].
Техническим результатом, на достижение которого направлено предлагаемое к защите изобретение, является расширение области применения натриевой соли 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она, дигидрат, обладающей противовирусной активностью, для профилактики заболеваний, вызываемых патогенными для человека и животных вирусами, в частности, новой коронавирусной инфекцией COVID-19.
Указанный технический результат достигается за счет применения натриевой соли 2-метилтио-6-нитро-1,2-4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7-она, дигидрата, обладающей противовирусной активностью, для профилактики новой коронавирусной инфекции COVID-19 путем приема по одной капсуле препарата риамиловир, содержащей 250 мг натриевой соли 2-метилтио-6-нитро-1,2-4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7-она, дигидрата, в сутки в течение 20 дней.
Предлагаемое к защите изобретение осуществляется следующим образом.
Натриевая соль 2-метилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7(4Н)-она, дигидрат является основным компонентом (активным веществом) лекарственного средства - препарата риамиловир (торговое наименование «Триазавирин»), которое промышленно выпускается с содержанием по 250 мг в капсуле.
Исследования профилактической клинической эффективности и безопасности применения противовирусного препарата риамиловир были проведены у группы участников в количестве 113 человек в возрасте от 18 лет и старше, имевших контакты 1 уровня (семейные, производственные) с больными новой коронавирусной инфекцией (COVID-19), ранее не болевшие и с отрицательными результатами ПЦР на SARS-CoV2.
Взятие мазков из носо-и ротоглотки для определения ПЦР на SARS-CoV2 проводилось на 7, 14 и 21 сутки включения пациента в исследование.
Общий и биохимический анализы крови, общий анализ мочи, рутинное ЭКГ-обследование  проводились до начала профилактики (на старте) и на двадцатый (20-й) день применения препарата риамиловир.
Для включения участников для прохождения исследования были установлены следующие критерии:
- возраст от 18 лет до 64 лет вне зависимости от пола;
- отсутствие беременности у женщин;
- подписание информированного согласия.
Критерии невключения пациента в исследование определялись следующим образом:
- беременность;
-наличие аллергических реакций на препарат риамиловир в анамнезе;
- участие в других клинических исследованиях в течение последних 3 месяцев.
- применение иных противовирусных препаратов (кроме препарата риамиловир), иммуномодуляторов/иммуностимуляторов, иммуноглобулинов, иммунодепрессантов, препаратов, при назначении которых ранее отмечались аллергические реакции.
Эффективность профилактики оценивалась по следующим критериям:
- доля лиц с положительным результатом теста методом полимеразной цепной реакции (далее – ПЦР-тест) на седьмой (7-й), четырнадцатый (14-й) и двадцатый (20-й) день;
- доля лиц с возникновением клиники COVID-19;
- доля лиц с нежелательными реакциями на препарат Риамиловир.
Уровень безопасности применения риамиловира в профилактических целях  оценивался по  характеру и длительности нежелательных реакций. Для этого в течение 20 дней все контактные лица вели дневники самооценки. Кроме того, оценивались возможные отклонения в лабораторных показателях и ЭКГ.
Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием программного обеспечения  SAS 9.4.
Полученные результаты исследования.
Препарат риамиловир в виде капсул с содержанием активного вещества 250 мг был использован в 75 семейных и 6 производственных очагах новой коронавирусной инфекции COVID-19.
Количество контактных лиц, исключая детей, в семейных очагах  составило 79 человек, в производственных - 34 человека.
Общее  количество контактных лиц, принимавших препарат риамиловир для профилактики COVID-19  составило 113 участника, из них различную коморбидную патологию имели 24 человека.
На фоне профилактического приема препарата риамиловир в течение первых 7 дней COVID–19 заболело 3 участника.  Болезнь протекала в легкой форме в виде ОРВИ с положительными результатами ПЦР на SARS-CoV2.
В последующие дни наблюдения лиц, у которых проявились клинические симптомы COVID–19 или имеющих  положительный результат ПЦР на SARS-CoV2, выявлено не было.
Таким образом, эффективность профилактического приема препарата риамиловир  у контактных лиц  в очагах инфекции COVID–19 составила  97,35±0,93 %.
Основные жалобы, предъявляемые контактными лицами во время наблюдения, приведены в Таблице 1.
Таблица 1
Жалобы среди контактных лиц, отмеченные в период исследования
Характер жалоб
Кол-во обследуемых, абс.
Удельный вес (%) заболевших к общему числу обследуемых
Местного характера
Заложенность носа
10
8,85±2,85%
Боль в горле
5
4,42±2,06%%
Сухой кашель
2
1,77±1,31%
Общего характера
Сонливость
13
11,50±3,21%
Головная боль
8
7,07±2,57%
Повышенная утомляемость
7
6,19±2,42%
Боли в животе
6
5,31±2,25%
Раздражительность
3
2,65±1,61%
Ощущения онемения, чувство покалывания, ползания мурашек
2
1,77±1,31%
Повышенное потоотделение
2
1,77±1,31%
Отсутствие аппетита
1
0,89±0,63%
Повышение температуры
1
0,89±0,63%
Диарея
1
0,89±0,63%
Суставная боль
1
0,89±0,63%
Тошнота
1
0,89±0,63%
Выявленные жалобы носили слабовыраженный характер и не влияли на повседневную деятельность пациентов.
Основное количество жалоб было выявлено на второй день наблюдения. К пятому дню наблюдений жалобы практически полностью прекратились.
В  показателях общего анализа крови обследуемых пациентов статистически значимых различий между параметрами, полученными до начала исследований и на 20-й день применения препарата риамиловир, не выявлено.
Отдельные данные по показателям анализа крови приведены в Таблице 2.
Таблица 2
Показатели общего анализа крови до начала и на 20 день применения Риамиловира (М±m)
Показатель
Срок анализа
Среднее значение
Гемоглобин (г/л)
до начала применения
141,84±1,55
на 20 день применения
141,54±1,49
Эритроциты (10<sup>12</sup>)
до начала применения
4,79±0,04
на 20 день применения
4,74±0,04
Лейкоциты (10<sup>9</sup>)
до начала применения
6,75±0,17
на 20 день применения
6,66±0,15
Тромбоциты (10<sup>9</sup>)
до начала применения
277,79±6,14
на 20 день применения
278,59±5,95
Эозинофилы (%)
до начала применения
3,17±0,19
на 20 день применения
3,31±0,19
Базофилы (%)
до начала применения
0,84±0,15
на 20 день применения
0,77±0,03
Лимфоциты (%)
до начала применения
34,04±0,78
на 20 день применения
32,04±0,74
Нейтрофилы (%)
до начала применения
52,404±0,87
на 20 день применения
53,648±1,02
Моноциты (%)
до начала применения
9,12±0,30
на 20 день применения
8,37±0,36
СОЭ (мм)
до начала применения
9,92±0,69
на 20 день применения
10,52±0,71
Показатели биохимического анализа крови, взятой до начала исследования и на 20-й день применения риамиловира, приведены в Таблице 3.
Таблица 3
Показатели биохимического анализа крови до начала обследования и на 20-й день применения Риамиловира (М±m)
Показатель
Срок анализа
Среднее значение
Общий белок (г/л)
до начала применения
75,10±0,39
на 20 день применения
74,06±0,36
Глюкоза (моль/л)
до начала применения
5,51±0,18
на 20 день применения
5,49±0,19
Общий билирубин (мкмоль/л)
до начала применения
10,76±0,96
на 20 день применения
12,08±1,73
АЛТ (ед.)
до начала применения
24,01±3,56
на 20 день применения
20,83±0,94
АСТ (ед.)
до начала применения
25,31±2,34
на 20 день применения
21,66±0,72
Мочевина (ммоль/л)
до начала применения
4,38±0,11
на 20 день применения
4,46±0,11
Креатинин (мкмоль/л)
до начала применения
70,63±1,11
на 20 день применения
84,31±9,27
Из представленных в Таблице 3 данных видно, что уровень  глюкозы, билирубина, АЛТ, АСТ, мочевины, креатинины в крови человека статистически не различаются.
По результатам оценки общего анализа мочи статистически значимых различий в показателях также не наблюдается.
Отдельные показатели приведены в Таблице 4.
Таблица 4
Показатели общего анализа мочи до начала и на 20-й день применения Риамиловира
Показатель
Срок анализа
Среднее значение
pH
до начала применения
5,80±0,05
на 20 день
5,75±0,04
Удельный вес
до начала применения
1016,87±0,59
на 20 день
1017,40±0,58
В параметрах электрокардиограмм, снятых у пациентов до начала и на 20-й день применения препарата риамиловир, статистически значимых отличий также не было выявлено.
Таким образом, на протяжении всего периода наблюдения за участниками, имевшими контакт с больными новой коронавирусной инфекцией (COVID-19) и принимавшими препарат риамиловир с профилактической целью,  не было выявлено лиц с нежелательными реакциями на применение препарата, или имевшими клинические проявления болезни, или лабораторные отклонения от нормы. Переносимость применения препарата риамиловир в течение 20 дней отмечена как хорошая.
В результате проведенного исследования эффективности и безопасности профилактического применения препарата риамиловир в рамках Постановления Правительства России № 441 «Об особенностях обращения лекарственных препаратов для медицинского применения, которые предназначены для применения в условиях угрозы возникновения, возникновения и ликвидации чрезвычайной ситуации и для организации оказания медицинской помощи лицам, пострадавшим в результате чрезвычайных ситуаций, предупреждения чрезвычайных ситуаций, профилактики и лечения заболеваний, представляющих опасность для окружающих, заболеваний и поражений, полученных в результате воздействия неблагоприятных химических, биологических, радиационных факторов» было установлено:
- высокая эффективность (на уровне 97,35 %) профилактического приема препарата риамиловир контактными лицами в очагах инфекции по схеме: 1 капсула (250 мг) в сутки;
- безопасность применения и хорошая переносимость препарата риамиловир при его использовании в течении 20 дней.
В процессе наблюдения не было выявлено значимых нежелательных явлений и побочных реакций на фоне применение препарата риамиловир в течение 20 дней, в том числе у лиц с коморбидной патологией.
В результате исследования были получены клинические и лабораторные данные о профилактической эффективности применения противовирусного препарата риамиловир в отношении новой коронавирусной инфекции (COVID-19).
Подтверждено эффективное применение натриевой соли 2-метилтио-6-нитро-1,2-4-триазоло[5,1-с]-1,2,4-триазин-7-она, дигидрата, обладающей противовирусной активностью, для профилактики новой коронавирусной инфекции COVID-19.