СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ИШЕМИИ КОНЕЧНОСТИ, В ТОМ ЧИСЛЕ ПРИ L-NAME ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА
METHOD OF PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF EXTREMITY ISCHEMIA INCLUDING IN L-NAME INDUCED NITROGEN OXIDE DEFICIENCY

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности с помощью ежедневного однократного введения L-аргинина в дозе от 30 до 200 мг/кг, предложенный М.В.Покровским и соавт. Патент на изобретение RU 2302239 C1.
Однако в данном решении не проводится оценка влияния рекомбинантного эритропоэтина на ишемию конечности, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота.
Задачей изобретения является разработка способа коррекции ишемии конечности, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, включающего применение рекомбинантного эритропоэтина.
Поставленная задача достигается тем, что коррекция ишемии конечности, в том числе при моделировании дефицита оксида азота (NO) внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно, проводится путем подкожного введения рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах-самках линии Wistar массой 200-220 г. Моделирование дефицита оксида азота осуществляется внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.
Моделирование ишемии конечности проводится на вторые сутки эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени.
Оценка микроциркуляции в мышцах голени животного проводится при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекают участок кожи в переднебоковом участке области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).
Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах с моделированием ишемии конечности, с моделированием ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота и в группах животных, которым проводилась коррекция ишемии конечности и ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота рекомбинантным эритропоэтином.
Рекомбинантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г.Санкт-Петербург, РОССИЯ) вводится подкожно в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента в утренние часы.
При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Уровень микроциркуляции в правой и левой мышцах голени интактных животных не отличался друг от друга и составлял 533,2±9,7 п.е. (перфузионных единиц). Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:
1. моделирование ишемии конечности (n=20);
2. моделирование ишемии конечности + рекомбинантный эритропоэтин (n=20);
3. моделирование ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота (n=20);
4. моделирование ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота + рекомбинантный эритропоэтин (n=20).
Всем животным осуществляли моделирование ишемии конечности на вторые сутки эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени. Моделирование дефицита оксида азота (NO) осуществляли животным 3-й и 4-й групп внутрибрюшинным введением в течение первых 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно. Коррекцию ишемии конечности производили у животных 2-й и 4-й групп подкожным введением рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
Оценку микроциркуляции в мышцах голени животного проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США) на 21 и 28 сутки. Для этого под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекали участок кожи в переднебоковой области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.
Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных с моделированием ишемии задней конечности, с моделированием ишемии задней конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота и групп, получавших лечение, представлены в таблице (табл.1).
Таблица 1
Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени (М±m)
21 сутки(n=10)
28 сутки(n=10)
Ишемия конечности
322,43±13,9
361,454±11,955
Ишемия конечности+эритропоэтин
435,33±27,3*
768,83±14,575*
Ишемия конечности+L-NAME
350,757±35,111
427,253±12,902
Ишемия конечности+L-NAME+эритропоэтин
359,93±18,078
682,2393±42,794**
* - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности;
** - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности, получавших L-NAME.
Из таблицы видно, что уровень микроциркуляции после операции моделирования ишемии задней конечности на 21 сутки 322,43±13,9 п.е., на 28 сутки 361,454±11,955 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (p<0,001).
На фоне лечения рекомбинантным эритропоэтином на 21 сутки уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 435,33±27,3 п.е. (p<0,05), а на 28 до 768,83±14,575 п.е. (p<0,0000000087).
При моделировании ишемии конечности на фоне L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота уровень микроциркуляции на 21 сутки в пролеченной группе достоверно не отличается от группы животных, не получавших лечение (359,93±18,078 п.е. против 350,757±35,111 п.е.). Статистически значимая разница отмечена в данных группах на 28 сутки 682,2393±42,794 п.е. против 427,253±12,902 (p<0,0002).
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать фармакологическую коррекцию ишемии конечности, в том числе ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота рекомбинантным эритропоэтином.