Влияние производных 3-гидроксипиридина на адаптивный и врожденный иммунитет при остром ишемическом поражении печени

Таким образом, применение парапанкреатической микроирригации в комплексной профилактике острого панкреатита после радикальной дуоденопластики у больных с высокой степенью риска развития ОПП показало ее практическую осуществимость, высокую эффективность, относительную простоту, доступность и безопасность.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бобров О. Е. Острый послеоперационный панкреатит. -Киев: «Феникс», 2000. - 172 с.

2. Восканян С. Э. Прогнозирование и профилактика острого послеоперационного панкреатита в хирургии желудочных язв // В кн. «Язвенная болезнь желудка» / Под ред. В. И. Оноприева, Г. Ф. Коротько, Н. В. Корочанской, С. Н. Сериковой. - Краснодар: ООО БК «Группа Б», 2006. - С. 325-350.

3. Восканян С. Э. Профилактика острого послеоперационного панкреатита в функциональной хирургии осложненной язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // В кн. «Осложненные формы язвенной болезни двенадцатиперстной кишки» / Под ред. В. И. Оноприева, Г. Ф. Коротько, Н. В. Корочанской. - Краснодар: издательство Кубанской государственной медицинской академии, 2004. - С. 217-231.

4. Катанов Е. С. Острый послеоперационный панкреатит. -Чебоксары: «Чувашия», 2000. - 602 с.

5. Корочанская Н. В., Черненко О. Т. Эпидемиология язвенной болезни // В кн. «Осложненные формы язвенной болезни

двенадцатиперстной кишки» I Под ред. В. И. Оноприева, Г. Ф. Коротько, Н. В. Корочанской. - Краснодар: изд-во КГМА, 2004. -С. 10-16.

6. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. - М.: МедиаСфера, 2002. - 312 с.

7. Оноприев В. И., Восканян С. Э., Корсаков И. Н. Профилактика острого послеоперационного панкреатита после радикальной дуоденопластики II Кубанский научный медицинский вестник. -Краснодар, 2006. - № 7-8. - С. 107-115.

8. Оноприев В. И., Восканян С. Э., Понкина О. Н. Хирургическая гистотопография осложненной дуоденальной язвы. - Краснодар: ООО БК «Группа Б», 2006. - 297 с.

9. Полушин Ю. С., Суховецкий А. В., Сурков М. В., Пащенко О. В., Широков Д. М. Острый послеоперационный панкреатит. -Санкт-Петербург: «Фолиант», 2003. - 160 с.

10. Татауров А. В., Масляков В. В., Ермилов П. В., Тарасенко В. С., Александрова К. А. Профилактика развития тяжелого острого послеоперационного панкреатита II Анналы хирургии. -2006. - № 6. - С. 22-27.

11. Onopriev V. I., Voskanyan S. E., Ponkina O. N. Surgical anatomy of complicated duodenal ulcer and radical duodenoplasty. -Krasnodar, Russia: «Gruppa B», 2006. - P. 224: illustrations.

Поступила 28.08.2010

В. А. РАГУЛИНА1, А. И. КОНОПЛЯ1, М. В. ПОКРОВСКИЙ2, E. А. ОРЛОВА2

ВЛИЯНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ГИДРОКСИПИРИДИНА НА АДАПТИВНЫЙ И ВРОЖДЕННЫЙ ИММУНИТЕТ ПРИ ОСТРОМ ИШЕМИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ

Кафедры биологической химии, 2фармакологии Государственного образовательного учреждения

высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»,

Россия, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: ala-loc@yandex.ru

Ишемическое поражение печени, вызванное двадцатиминутным пережатием гепатодуоденальной связки, сопровождается развитием вторичного иммунодефицитного состояния, проявляющегося в снижении формирования гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, снижением фагоцитарной и кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови. Введение мексидола или этоксидола нормализует параметры, характеризующие иммунную реактивность, и корригирует функциональную активность гранулоцитов. Соединение ХС-9 нормализует все изученные параметры адаптивного и врожденного иммунитета.

Ключевые слова: производные 3-гидроксипиридина, ишемическое поражение печени, мексидол, этоксидол.

V. A. RAGULINA1, A. I. KONOPLYA1, M. V. POKROVSKY2, E. A. ORLOVA2

INFLUENCE OF DERIVATIVES 3-GIDROKSIPIRIDINA ON ADAPTIVE AND CONGENITAL IMMUNITY

AT SHARP ISCHEMIC DEFEAT OF THE LIVER

Chairs of biological chemistry, 2pharmacology State educational institution of the higher professional formations «Kursk state medical university Federal agency on public health services and social to development»,

Russia, 305041, Kursk, street K. Marks, 3. E-mail: ala-loc@yandex.ru

The ischemic defeat of a liver is accompanied by development secondary immunodeficiency a condition shown in decrease of formation gumoral and cellular forms of the immune answer, decrease phagocytes and oxygen activity neutrophyles peripheral blood. Introduction meksidol, ethoksidol normalises the parametres characterising immune reactance, and correcting functional activity granulocytes. Connection ХС-9 normalises all studied parametres of adaptive and congenital immunity.

Key words: derivatives 3-gidroksipiridina, ischemic defeat of a liver, meksidol, ethoksidol.

Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010 УДК 615.272.4:616.36-005.4

Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010

Введение

При нарушениях функции гепатоцитов токсического, инфекционного, ишемического генеза в кровотоке накапливаются метаболиты (свободный и связанный билирубин, конъюгированные и неконъю-гированные желчные кислоты, «белки острой фазы», липопротеиды низкой и очень низкой плотности, продукты перекисного окисления липидов, лизосомальные протеазы), вызывающие развитие окислительного стресса и оказывающие выраженное супрессирующее влияние на функцию иммунной системы [7, 9].

В этой связи особый интерес представляют препараты, сочетающие сразу несколько фармакологических эффектов: иммуномодулирующий, антиок-сидантный и антигипоксантный. Перспективными в этом отношении являются производные 3-гидрокси-пиридина (3-ГП), что обусловлено известным участием некоторых из них в энергетическом и иммунном гомеостазе [1]. В связи с этим мексидол и мексикор нашли широкое применение для лечения ишемических повреждений головного мозга и миокарда, профилактики и лечения острого панкреатита, профилактики последствий массовых кровопотерь, повышения адаптации к физическим нагрузкам, лечения токсических и стрессорных поражений печени [3, 10, 11].

Целью работы стало изучение иммуномодулирующих эффектов некоторых производных 3-гидроксипи-ридина в условиях экспериментальной острой ишемии печени.

Материалы и методы исследования

Эксперименты проводили на 120 здоровых половозрелых крысах линии Вистар массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч., с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ от 19.06.2003 г. № 267).

Производные 3-ГП вводили пятикратно, через 24 часа, внутрибрюшинно, в экспериментально подобранных дозах: ХС-9 - 35 мг/кг, этоксидол -50 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали производное оксипиридина - мексидол, который вводили внутрибрюшинно, в дозе 50 мг/кг, по той же схеме, что и исследуемые соединения. Первая инъекция производных 3-ГП проводилась одновременно с введением антигена - эритроцитов барана (ЭБ). Выведение животных из опыта осуществляли через 24 часа после последнего введения производного 3-ГП.

Острое ишемическое поражение печени вызывали оперативным методом под внутрибрюшинным гексена-ловым наркозом (30 мг/кг веса). Операция выполнялась из верхнесрединного лапаротомного доступа. Ишемию печени вызывали пережатием гепатодуоденальной связки (ГДС) с помощью турникета в течение 20 минут. Перед пережатием производилась инфильтрация ГДС 0,5 мл 0,5%-ного раствора новокаина. После истечения срока окклюзии лигатуру с ГДС снимали. Рану брюшной полости ушивали послойно, наглухо. Послеоперационную рану обрабатывали 2%-ным йодом. Накладывали асептическую повязку. Верификация наступления структурных изменений в ткани печени производилась гистологическими методами.

Для развития гуморального иммунного ответа (ГИО) ЭБ вводили внутрибрюшинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела. Его выраженность оценивали на шестые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа иммунных антителообразующих клеток (АОК) [4]. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) индуцировали внутрибрю-шинным введением 1х108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл физраствора (разрешающая доза). Спустя 24 ч. выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатеральный подколенный лимфоузлы. О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов [12].

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась через 24 часа после послед-

Влияние производных 3-гидроксипиридина на иммунную реактивность в условиях ишемии печени

01 С = С Показатели 1 2 3 4 5

Здоровые животные Ишемия печени Ишемия печени и мексидол Ишемия печени и этоксидол Ишемия печени и ХС-9

1 АОК 26,7±1,9 11,1±0,8*1 25,5±1,3*2 24,1±2,1*2 26,1±1,1*2

2 РМЛ 5,6±0,3 2,5±0,1*1 5,8±0,6*2 5,5±0,35*2 5,7±0,2*2

3 НСТ-сп. 10,1±0,8 5,2±0,6*1 7,6±0,9*12 8,9±0,8*12 11,1±0,3*2-4

4 НСТ-ст. 36,2±1,5 11,6±1,5*1 25,8±2,4*12 22,5±2,2*12 34,2±2,1*2-4

5 ФРН 26,1±1,8 6,4±1,0*1 18,2±1,7*12 13,6±1,7*12 23,1±2,2*2-4

6 ФИ 41,4±3,8 22,5±2,2*1 34,5±2,6*12 31,6±1,5*12 42,1±2,3*2-4

7 ФЧ 1,6±0,2 0,8±0,1*1 1,1±0,2*1,2 1,2±0,15*12 1,7±0,3*2-4

8 ИАФ 0,66±0,07 0,18±0,02*1 0,37±0,06*12 0,38±0,06*12 0,72±0,07*2-4

Примечание: * - достоверность различий средних арифметических величин, р<0,05; цифры рядом со звездочкой обозначают, по отношению к показателю какой группы эти различия достоверны.

него введения производных 3-ГП по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ) [8]. Кислородзависимую активность оценивали по НСТ-тестам - спонтанному (НСТ-сп.) и стимулированному (НСТ-ст.) зимозаном, а также рассчитывали фагоцитарный резерв нейтрофи-лов (ФРН) - разницу между диформазан-позитивными клетками в стимулированной реакции и диформазан-позитивными клетками в спонтанной реакции НСТ-тес-та [13].

Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрический коэффициент Стьюдента и непараметрические критерии Вил-коксона-Манна и Уитни [2]. Статистически значимыми считали различия с р<0,05.

Результаты исследования и обсуждение

Установлено, что изолированная лапаротомия не вызывала летальных исходов, не влияла на функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови и иммунную реактивность, индуцированную ЭБ.

Ишемическое повреждение печени, вызываемое пережатием ГДС в течение 20 минут, сопровождалось развитием вторичного иммунодефицита. Об этом свидетельствовало снижение иммунных АОК в селезенке и РМЛ соответственно в 2,5 и 1,7 раза по сравнению с контрольной группой. В эти же сроки также снижалась функциональная активность нейтрофилов периферической крови: показатели ФИ, ФЧ, НСТ-сп. и НСТ-инд. оказались ниже соответственно в 1,6; 1,9; 1,7 и 1,7 раза по сравнению с контрольной группой животных (таблица). При этом выжило 75% животных.

Введение мексидола, этоксидола и соединения ХС-9 после моделирования ишемии печени нормализовало формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа. В отношении функционально-метаболической активности гранулоцитов периферической крови мексидол и этоксидол оказывали корригирующие эффекты, а соединение ХС-9 нормализовало фагоцитарную и кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов крыс с ишемическим поражением печени (таблица). Выживаемость животных при 20-минутной ишемии печени на фоне введения мексидола, этоксидола и соединения ХС-9 составила 83%, 85% и 91% соответственно.

Известно, что при патологии печени вне зависимости от этиологии, в том числе и при ишемическом поражении, существенную роль в повреждении гепатоцитов играет активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). При этом в крови резко повышается концентрация метаболитов, обладающих иммуносупрессорным эффектом: продуктов ПОЛ (ацилгидроперекисей, диеновых конъюгатов жирных кислот, малонового диальдегида), аномальных метаболитов липидного обмена (окислительно-модифицированных холестерина, липопротеидов низкой и очень низкой плотности), гликозаминогликанов (высокомолекулярных фрагментов гиалуроновой и хондроитинсерной кислот), оказывающих прямое действие на мембрану имму-нокомпетентных клеток, с изменением их функциональной активности [7]. Не исключено и экспериментально доказано, что все или некоторые из этих нормальных, но в значительно повышенных количествах или аномальных метаболитов индуцируют

у легких эритроцитов появление иммуносупресси-рующих свойств [5, 6].

Использованные в работе препараты обладают выраженными антиоксидантными эффектами обусловленными легко подвижным атомом водорода фенольной группы в составе молекулы 3-ГП, вступающими во взаимодействие с образующимися в ходе ПОЛ перокси(КОО.) и алкоксирадикалами (КО ). В этой связи иммуномодулирующие эффекты изученных препаратов, скорее всего опосредованные, являются следствием нормализации процессов ПОЛ, стабилизации мембран гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени, что приводит к снижению уровня иммуносупрессирующих сывороточных метаболитов.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой иммунометаболической эффективности производных 3-ГП в условиях острого ишемического поражения печени, что дает основания для применения мексидола и этоксидола при развитии ре-перфузионных осложнений и открывает возможность для клинического исследования соединения ХС-9.

ЛИТЕРАТУРА

1. Авдеева Е. В., Конопля А. И., Сернов Л. Н. Влияние производных оксиникотиновой кислоты и 3-оксипиридина на функциональную активность полинуклеаров крыс // Вестн. Уральской мед. академ. науки. - 2006. - № 3-1 (14). - С. 102-104.

2. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. -Л.: Медицина, 1973. - 141 с.

3. Девяткина Т. А, Важничая Е. М., Луценко Р. В. Влияние мексидола на процессы гликолиза при остром стрессе // Экспе-рим. и клинич. фармакол. - 2004. - Т. 67. № 4. - С. 47-49.

4. Зауэр Х. Метод иммунных розеток // Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. Г. Фримеля. - М.: Мир, 1987. -С. 273-282.

5. Конопля А. И. Взаимосвязь структуры и функции эритроцитов с иммунным гомеостазом. - Курск: КГМУ, 2008. - 40 с.

6. Лазарев А. И., Бровкина И. Л., Гаврилюк В. П. и др. Эритро-цитзависимые эффекты лекарственных и физиотерапевтических средств. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - 336 с.

7. Лазарева Г. А., Бровкина И. Л., Лазарев А. И. и др. Имму-нометаболические эффекты регуляторов энергетического обмена при нарушении гомеостаза / Под ред. Л. Г. Прокопенко. - Курск, 2006 - 329 с.

8. Медведев А. Н, Чаленко В. В. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза // Лаб. дело. - 1991. - № 2. -С.19-20.

9. Подымова С. Д. Болезни печени. - М.: Медицина, 2005. - 768 с.

10. Сипров А. В., Инчина В. И., Смирнов Л. Д. Влияние мек-сидола на адаптацию к физическим нагрузкам при доксорубици-новой кардиомиопатии // Тезисы X Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 2003. - С. 753.

11. Тюриков П. Ю. Влияние милдроната на показатели липидного профиля и функции эндотелия у больных стабильной стенокардией напряжения // Фундамент. исследования. - 2004. -№ 4. - С. 42-43.

12. Федосеева Т. В., Порядин Л. В., Ковальчук Л. В. и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993. - 319 с.

13. Щербаков В. И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам // Лаб. дело. - 1989. -№ 1.- С. 30-33.

Поступила 26.07.2010

Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010