Химерные антигенные рецепторы, нацеливающиеся на CD70

1. Химерный антигенный рецептор (CAR), специфический к кластеру дифференцировки 70 (CD70), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, первый трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, где внеклеточный домен содержит одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv), связывающийся с внеклеточным доменом CD70, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает сигнальный домен 4-1BB.
2. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где внеклеточный домен содержит одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv), содержащий вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую три CDR из области VH, содержащей последовательность, представленную под SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379 или 381; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую три CDR из области VL, представленной под SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378 или 380.
3. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где область VH содержит последовательность, представленную под SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379 или 381; и вариабельная область легкой цепи (VL) содержит три CDR из области VL, представленной под SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378 или 380, или ее варианта с одной или более аминокислотными заменами по аминокислотам, которые не присутствуют в CDR.
4. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где область VH содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 97, 98 или 99; CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 100 или 101; и CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 102; и вариабельная область легкой цепи (VL) содержит следующие CDR: CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 217; CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 218; и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 219.
5. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где область VH содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:18, и область VL содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 17.
6. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где область VH содержит CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 145, 146 или 147; CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 148 или 149; и CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 150; и вариабельная область легкой цепи (VL) содержит следующие CDR: CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 241; CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 242; и CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 243.
7. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где область VH содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO:34, и область VL содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 33.
8. CAR, специфический к CD70, по п. 2 или 3, где каждая CDR определена в соответствии с определением по Кабату, определением по Чотиа, комбинацией определения по Кабату и определения по Чотиа, определением AbM или контактным определением CDR.
9. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-8, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает сигнальный домен CD3ζ.
10. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-9, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает домен 4-1BB.
11. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-10, дополнительно содержащий второй внутриклеточный сигнальный домен.
12. CAR, специфический к CD70, по п. 11, где второй внутриклеточный сигнальный домен предусматривает домен 4-1BB.
13. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-12, дополнительно содержащий домен «стебля» между внеклеточным лиганд-связывающим доменом и первым трансмембранным доменом.
14. CAR, специфический к CD70, по п. 13, где домен «стебля» выбран из группы, состоящей из шарнирного участка из CD8α человека, шарнирного участка из IgG1 и шарнирного участка из FcγRIIIα.
15. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-14, дополнительно содержащий эпитоп CD20.
16. CAR, специфический к CD70, по п. 15, где эпитоп CD20 содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 293, или SEQ ID NO: 294, или SEQ ID NO: 609.
17. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где CAR, специфический к CD70, содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 311-334.
18. CAR, специфический к CD70, по п. 1, где CAR, специфический к CD70, содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 319 или 327.
19. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-18, где первый трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен цепи CD8α.
20. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-19, дополнительно содержащий другой внеклеточный лиганд-связывающий домен, который не является специфическим к CD70.
21. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-19, где внеклеточный (внеклеточные) лиганд-связывающий (лиганд-связывающие) домен (домены), первый трансмембранный домен и внутриклеточный (внутриклеточные) сигнальный (сигнальные) домен (домены) расположены в одном полипептиде.
22. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-19, дополнительно содержащий второй трансмембранный домен, где первый трансмембранный домен и внеклеточный (внеклеточные) лиганд-связывающий (лиганд-связывающие) домен (домены) расположены в первом полипептиде, и где второй трансмембранный домен и внутриклеточный (внутриклеточные) сигнальный (сигнальные) домен (домены) расположены во втором полипептиде, где первый трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из α-цепи высокоаффинного рецептора для IgE (FcεRI), и второй трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из γ- или β-цепи FcεRI.
23. CAR, специфический к CD70, по п. 22, дополнительно содержащий третий полипептид, содержащий третий трансмембранный домен, слитый с внутриклеточным сигнальным доменом из костимулирующей молекулы, где третий трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из γ- или β-цепи FcεRI.
24. Полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-23.
25. Полинуклеотид по п. 24, где полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную под SEQ ID NO: 336 или 337.
26. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по любому из п. 24 или п. 25.
27. Сконструированная иммунная клетка, экспрессирующая на своей внешней клеточной мембране CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-23.
28. Сконструированная иммунная клетка по п. 27, дополнительно содержащая другой CAR, который не является специфическим к CD70.
29. Сконструированная иммунная клетка по п. 27 или 28, дополнительно содержащая полинуклеотид, кодирующий «суицидный» полипептид.
30. Сконструированная иммунная клетка по п. 29, где «суицидный» полипептид представляет собой RQR8.
31. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-30, где иммунная клетка получена из воспалительного Т-лимфоцита, цитотоксического Т-лимфоцита, регуляторного Т-лимфоцита или хелперного Т-лимфоцита.
32. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-31, дополнительно характеризующаяся разрушением одного или более эндогенных генов, где эндогенный ген кодирует TCRα, TCRβ, CD52, глюкокортикоидный рецептор (GR), дезоксицитидинкиназу (dCK), CD70 или белок контрольной точки иммунного ответа, такой как, например, белок запрограммированной смерти-1 (PD-1).
33. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-31, дополнительно характеризующаяся разрушением TCRα и CD52 или TCRα, CD52 и CD70.
34. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-33, где иммунная клетка получена от здорового донора.
35. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-33, где иммунная клетка получена от пациента.
36. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 27-35 для применения в качестве лекарственного препарата.
37. Сконструированная иммунная клетка по п. 36, где лекарственный препарат предназначен для применения в лечении рака.
38. Сконструированная иммунная клетка по п. 37, где рак выбран из группы, состоящей из почечно-клеточной карциномы, глиобластомы, глиомы, такой как глиома низкой степени злокачественности, неходжкинской лимфомы (NHL), болезни Ходжкина (HD), макроглобулинемии Вальденстрема, острого миелоидного лейкоза, множественной миеломы, диффузной крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы и немелкоклеточного рака легкого.
39. Популяция клеток по любому из пп. 27-38, где
a) указанная популяция клеток содержит процентную долю стволовых клеток памяти и центральных клеток памяти, составляющую более 20%, 30% или 40%, и/или
b) указанная популяция клеток обеспечивает достижение процентной доли лизиса клеток, экспрессирующих CD70, к дню 6, превышающей 10%, 20%, 30% или 40%, в случае рекурсивных клеток, экспрессирующих CD70, согласно измерению с применением анализа, описанного в примере 4.
40. Популяция клеток по п. 39, где указанная популяция клеток обеспечивает достижение процентной доли лизиса клеток, экспрессирующих CD70, к дню 6, превышающей 20%, в случае рекурсивных клеток, экспрессирующих CD70, согласно измерению с применением анализа, описанного в примере 4.
41. Способ конструирования иммунной клетки, предусматривающий:
a) обеспечение иммунной клетки и
b) обеспечение экспрессии на поверхности клетки по меньшей мере одного CAR, специфического к CD70, по любому из пп. 1-23.
42. Способ конструирования иммунной клетки по п. 41, предусматривающий:
а) обеспечение иммунной клетки;
b) введение в клетку по меньшей мере одного полинуклеотида, кодирующего указанный CAR, специфический к CD70; и
с) обеспечение экспрессии указанного полинуклеотида в клетке.
43. Способ конструирования иммунной клетки по п. 41, предусматривающий:
а) обеспечение иммунной клетки;
b) введение в клетку по меньшей мере одного полинуклеотида, кодирующего указанный CAR, специфический к CD70; и
с) введение по меньшей мере одного другого CAR, который не является специфическим к CD70.
44. Способ лечения субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий:
a) обеспечение иммунной клетки, экспрессирующей на поверхности CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 1-23 и
b) введение указанных иммунных клеток указанному пациенту.
45. Фармацевтическая композиция, содержащая сконструированную иммунную клетку по любому из пп. 27-39.
46. Способ лечения состояния, ассоциированного со злокачественными клетками, экспрессирующими CD70, у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 45.
47. Способ по п. 46, где состояние представляет собой рак.
48. Способ по п. 47, где рак выбран из группы, состоящей из почечно-клеточной карциномы, глиобластомы, глиомы, такой как глиома низкой степени злокачественности, неходжкинской лимфомы (NHL), болезни Ходжкина (HD), макроглобулинемии Вальденстрема, острого миелоидного лейкоза, множественной миеломы, диффузной крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы и немелкоклеточного рака легкого.
49. Способ подавления роста или прогрессирования опухоли у субъекта, у которого имеются злокачественные клетки, экспрессирующие CD70, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 45.
50. Способ подавления метастазирования злокачественных клеток, экспрессирующих CD70, у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 45.
51. Способ индуцирования регрессии опухоли у субъекта, у которого имеются злокачественные клетки, экспрессирующие CD70, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 45.
52. Химерный антигенный рецептор, специфический к кластеру дифференцировки 70 (CAR, специфический к CD70), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, где внеклеточный домен содержит одноцепочечный Fv-фрагмент (scFv), связывающийся с внеклеточным доменом CD70, содержащим вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL); где:
a) область VH содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 18, и область VL содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 17; или
b) область VH содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 34, и область VL содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 33.
53. CAR, специфический к CD70, по п. 52, где внеклеточный домен содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 319.
54. CAR, специфический к CD70, по п. 52, где внеклеточный домен содержит аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 327.
55. Полинуклеотид, кодирующий CAR, специфический к CD70, где полинуклеотид содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая:
a) на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 297 и на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 298 или
b) на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 307 и на по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 308.
56. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий антигенсвязывающую молекулу, которая специфически связывается с CD70, где антигенсвязывающая молекула содержит по меньшей мере одно из следующего:
a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49-51, 55-57, 61-63, 67-69, 73-75, 79-81, 85-87, 91-93, 97-99, 103-105, 109-111, 115-117, 121-123, 127-129, 133-135, 139-141, 145-147, 151-153, 157-159, 163-165, 169-171, 175-177, 181-183, 187-189, 382-384, 388-390, 394-396, 400-402, 406-408, 412-414, 418-420, 424-426, 430-432, 436-438, 442-444, 448-450, 454-456, 460-462, 466-468, 472-474, 478-480, 484-486, 490-492, 496-498, 502-504 и 508-510,
b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 52, 53, 58, 59, 64, 65, 70, 71, 76, 77, 82, 83, 88, 89, 94, 95, 100, 101, 106, 107, 112, 113, 118, 119, 124, 125, 130, 131, 136, 137, 142, 143, 148, 149, 154, 155, 160, 161, 166, 167, 172, 173, 178, 179, 184, 185, 190, 191, 385, 386, 391, 392, 397, 398, 403, 404, 409, 410, 415, 416, 421, 422, 427, 428, 433, 434, 439, 440, 445, 446, 451, 452, 457, 458, 463, 464, 469, 470, 475, 476, 481, 482, 487, 488, 493, 494, 499, 500, 505, 506, 511 и 512,
c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 387, 393, 399, 405, 411, 417, 423, 429, 435, 441, 447, 453, 459, 465, 471, 477, 483, 489, 495, 501, 507 и 513,
d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ NO: 193, 196, 199, 202, 205, 208, 211, 214, 217, 220, 223, 226, 229, 232, 235, 238, 241, 244, 247, 250, 253, 256, 259, 262, 514, 517, 520, 523, 526, 529, 532, 535, 538, 541, 544, 547, 550, 553, 556, 559, 562, 565, 568, 571, 574 и 577,
e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 194, 197, 200, 203, 206, 209, 212, 215, 218, 221, 224, 227, 230, 233, 236, 239, 242, 245, 248, 251, 254, 257, 260, 263, 515, 518, 521, 524, 527, 530, 533, 536, 539, 542, 545, 548, 551, 554, 557, 560, 563, 566, 569, 572, 575 и 578, и
f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 195, 198, 201, 204, 207, 210, 213, 216, 219, 222, 225, 228, 231, 234, 237, 240, 243, 246, 249, 252, 255, 258, 261, 264, 516, 519, 522, 525, 528, 531, 534, 537, 540, 543, 546, 549, 552, 555, 558, 561, 564, 567, 570, 573, 576 и 579.
57. CAR, специфический к CD70, по п. 56, где антигенсвязывающая молекула содержит:
a) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO:
i) 49-51, 52-53, 54;
ii) 55-57, 58-59, 60;
іii) 61-63, 64-65, 66;
іv) 67-69, 70-71, 72;
v) 73-75, 76-77, 78;
vi) 79-81, 82-83, 84;
vii) 85-87, 88-89, 90;
viii) 91-93, 94-95, 96;
ix) 97-99, 100-101, 102;
x) 103-105, 106-107, 108;
xi) 109-111, 112-113, 114;
xii) 115-117, 118-119, 120;
xiii) 121-123, 124-125, 126;
xiv) 127-129, 130-131, 132;
xv) 133-135, 136-137, 138;
xvi) 139-141, 142-143, 144;
xvii) 145-147, 148-149, 150;
xviii) 151-153, 154-155, 156;
xix) 157-159, 160-161, 162;
xx) 163-165, 166-167, 168;
xxi) 169-171, 172-173, 174;
xxii) 175-177, 178-179, 180;
xxiii) 181-183, 184-185, 186;
xxiv) 187-189, 190-191, 192;
xxv) 382-384, 385-386, 387;
xxvi) 388-390, 391-392, 393;
xxvii) 394-396, 397-398, 399;
xxviii) 400-402, 403-404, 405;
xxix) 406-408, 409-410, 411;
xxx) 412-414, 415-416, 417;
xxxi) 418-420, 421-422, 423;
xxxii) 424-426, 427-428, 429;
xxxiii) 430-432, 433-434, 435;
xxxiv) 436-438, 439-440, 441;
xxxv) 442-444, 445-446, 447;
xxxvi) 448-450, 451-452, 453;
xxxvii) 454-456, 457-458, 459;
xxxviii)460-462, 463-464, 465;
xxxix) 466-468, 469-470, 471;
xl) 472-474, 475-476, 477;
xli) 478-480, 481-482, 483;
xlii) 484-486, 487-488, 489;
xliii) 490-492, 493-494, 495;
xliv) 496-498, 499-500, 501;
xlv) 502-504, 505-506, 507 или
xlvi) 508-510, 511-512, 513; и
b) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO:
i) 193, 194, 195;
ii) 196, 197, 198;
iii) 199, 200, 201;
iv) 202, 203, 204;
v) 205, 206, 207;
vi) 208, 209, 210;
vii) 211, 212, 213;
viii) 214, 215, 216;
ix) 217, 218, 219;
x) 220, 221, 222;
xi) 223, 224, 225;
xii) 226, 227, 228;
xiii) 229, 230, 231;
xiv) 232, 233, 234;
xv) 235, 236, 237;
xvi) 238, 239, 240;
xvii) 241, 242, 243;
xviii) 244, 245, 246;
xix) 247, 248, 249;
xx) 250, 251, 252;
xxi) 253, 254, 255;
xxii) 256, 257, 258;
xxiii) 259, 260, 261;
xxiv) 262, 263, 264;
xxv) 514, 515, 516;
xxvi) 517, 518, 519;
xxvii) 520, 521, 522;
xxviii) 523, 524, 525;
xxix) 526, 527, 528;
xxx) 529, 530, 531;
xxxi) 532, 533, 534;
xxxii) 535, 536, 537;
xxxiii) 538, 539, 540;
xxxiv) 541, 542, 543;
xxxv) 544, 545, 546;
xxxvi) 547, 548, 549;
xxxvii) 550, 551, 552;
xxxviii)553, 554, 555;
xxxix) 556, 557, 558;
xl) 559, 560, 561;
xli) 562, 563, 564;
xlii) 565, 566, 567;
xliii) 568, 569, 570;
xliv) 571, 572, 573;
xlv) 574, 575, 576 и
xlvi) 577, 578, 579.
58. CAR, специфический к CD70, по п. 57, где антигенсвязывающая молекула содержит аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3 соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO:
a) 49-51, 52-53, 54, 193, 194, 195;
b) 55-57, 58-59, 60, 196, 197, 198;
с) 61-63, 64-65, 66, 199, 200, 201;
d) 67-69, 70-71, 72, 202, 203, 204;
e) 73-75, 76-77, 78, 205, 206, 207;
f) 79-81, 82-83, 84, 208, 209, 210;
g) 85-87, 88-89, 90, 211, 212, 213;
h) 91-93, 94-95, 96, 214, 215, 216;
i) 97-99, 100-101, 102, 217, 218, 219;
j) 103-105, 106-107, 108, 220, 221, 222;
k) 109-111, 112-113, 114, 223, 224, 225;
l) 115-117, 118-119, 120, 226, 227, 228;
m) 121-123, 124-125, 126, 229, 230, 231;
n) 127-129, 130-131, 132, 232, 233, 234;
o) 133-135, 136-137, 138, 235, 236, 237;
p) 139-141, 142-143, 144, 238, 239, 240;
q) 145-147, 148-149, 150, 241, 242, 243;
r) 151-153, 154-155, 156, 244, 245, 246;
s) 157-159, 160-161, 162, 247, 248, 249;
t) 163-165, 166-167, 168, 250, 251, 252;
u) 169-171, 172-173, 174, 253, 254, 255;
v) 175-177, 178-179, 180, 256, 257, 258;
w) 181-183, 184-185, 186, 259, 260, 261;
x) 187-189, 190-191, 192, 262, 263, 264;
y) 382-384, 385-386, 387, 514, 515, 516;
z) 388-390, 391-392, 393, 517, 518, 519;
aa) 394-396, 397-398, 399, 520, 521, 522;
bb) 400-402, 403-404, 405, 523, 524, 525;
cc) 406-408, 409-410, 411, 526, 527, 528;
dd) 412-414, 415-416, 417, 529, 530, 531;
ee) 418-420, 421-422, 423, 532, 533, 534;
ff) 424-426, 427-428, 429, 535, 536, 537;
gg) 430-432, 433-434, 435, 538, 539, 540;
hh) 436-438, 439-440, 441, 541, 542, 543;
ii) 442-444, 445-446, 447, 544, 545, 546;
jj) 448-450, 451-452, 453, 547, 548, 549;
kk) 454-456, 457-458, 459, 550, 551, 552;
ll) 460-462, 463-464, 465, 553, 554, 555;
mm) 466-468, 469-470, 471, 556, 557, 558;
nn) 472-474, 475-476, 477, 559, 560, 561;
oo) 478-480, 481-482, 483, 562, 563, 564;
pp) 484-486, 487-488, 489, 565, 566, 567;
qq) 490-492, 493-494, 495, 568, 569, 570;
rr) 496-498, 499-500, 501, 571, 572, 573;
ss) 502-504, 505-506, 507, 574, 575, 576 и
tt) 508-510, 511-512, 513, 577, 578, 579.
59. CAR, специфический к CD70, по п. 56, где антигенсвязывающая молекула содержит:
a) вариабельный домен легкой цепи, содержащий аминокислотные последовательности CDRH1, CDRH2 и CDRH3 соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378 и 380; и
b) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий аминокислотные последовательности CDRL1, CDRL2 и CDRL3 соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379 и 381.
60. CAR, специфический к CD70, по п. 59, где антигенсвязывающая молекула содержит аминокислотные последовательности вариабельного домена легкой цепи и вариабельного домена тяжелой цепи соответственно, выбранные из одной из SEQ ID NO:
a) 1 и 2;
b) 3 и 4;
c) 5 и 6;
d) 7 и 8;
e) 9 и 10;
f) 11 и 12;
g) 13 и 14;
h) 15 и 16;
i) 17 и 18;
j) 19 и 20;
k) 21 и 22;
l) 23 и 24;
m) 25 и 26;
n) 27 и 28;
o) 29 и 30;
р) 31 и 32;
q) 33 и 34;
r) 35 и 36;
s) 37 и 38;
t) 39 и 40;
u) 41 и 42;
v) 43 и 44;
w) 45 и 46;
x) 47 и 48;
y) 338 и 339;
z) 340 и 341;
aa) 342 и 343;
bb) 344 и 345;
cc) 346 и 347;
dd) 348 и 349;
ee) 350 и 351;
ff) 352 и 353;
gg) 354 и 355;
hh) 356 и 357;
ii) 358 и 359;
jj) 360 и 361;
kk) 362 и 363;
ll) 364 и 365;
mm) 366 и 367;
nn) 368 и 369;
oo) 370 и 371;
pp) 372 и 373;
qq) 374 и 375;
rr) 376 и 377;
ss) 378 и 379 и
tt) 380 и 381.
61. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-60, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает сигнальный домен CD3ζ.
62. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-61, где внутриклеточный сигнальный домен предусматривает домен 4-1BB.
63. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-62, дополнительно содержащий второй внутриклеточный сигнальный домен.
64. CAR, специфический к CD70, по п. 63, где второй внутриклеточный сигнальный домен предусматривает домен 4-1BB.
65. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-64, дополнительно содержащий домен «стебля» между внеклеточным лиганд-связывающим доменом и первым трансмембранным доменом.
66. CAR, специфический к CD70, по п. 65, где домен «стебля» выбран из группы, состоящей из шарнирного участка из CD8α человека, шарнирного участка из IgG1 и шарнирного участка из FcγRIIIα.
67. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-66, дополнительно содержащий эпитоп CD20.
68. CAR, специфический к CD70, по п. 67, где эпитоп CD20 содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 293, или SEQ ID NO: 294, или SEQ ID NO: 609.
69. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-68, где первый трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен цепи CD8α.
70. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-69, дополнительно содержащий другой внеклеточный лиганд-связывающий домен, который не является специфическим к CD70.
71. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-70, где внеклеточный (внеклеточные) лиганд-связывающий (лиганд-связывающие) домен (домены), первый трансмембранный домен и внутриклеточный (внутриклеточные) сигнальный (сигнальные) домен (домены) расположены в одном полипептиде.
72. CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-70, дополнительно содержащий второй трансмембранный домен, где первый трансмембранный домен и внеклеточный (внеклеточные) лиганд-связывающий (лиганд-связывающие) домен (домены) расположены в первом полипептиде, и где второй трансмембранный домен и внутриклеточный (внутриклеточные) сигнальный (сигнальные) домен (домены) расположены во втором полипептиде, где первый трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из α-цепи высокоаффинного рецептора для IgE (FcεRI), и второй трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из γ- или β-цепи FcεRI.
73. CAR, специфический к CD70, по п. 72, дополнительно содержащий третий полипептид, содержащий третий трансмембранный домен, слитый с внутриклеточным сигнальным доменом из костимулирующей молекулы, где третий трансмембранный домен предусматривает трансмембранный домен из γ- или β-цепи FcεRI.
74. Полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-73.
75. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 74.
76. Сконструированная иммунная клетка, экспрессирующая на своей внешней клеточной мембране CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-73.
77. Сконструированная иммунная клетка по п. 76, дополнительно содержащая другой CAR, который не является специфическим к CD70.
78. Сконструированная иммунная клетка по п. 76 или 77, дополнительно содержащая полинуклеотид, кодирующий «суицидный» полипептид.
79. Сконструированная иммунная клетка по п. 78, где «суицидный» полипептид представляет собой RQR8.
80. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-79, где иммунная клетка получена из воспалительного Т-лимфоцита, цитотоксического Т-лимфоцита, регуляторного Т-лимфоцита или хелперного Т-лимфоцита.
81. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-80, дополнительно характеризующаяся разрушением одного или более эндогенных генов, где эндогенный ген кодирует TCRα, TCRβ, CD52, глюкокортикоидный рецептор (GR), дезоксицитидинкиназу (dCK), CD70 или белок контрольной точки иммунного ответа, такой как, например, белок запрограммированной смерти-1 (PD-1).
82. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-81, дополнительно характеризующаяся разрушением TCRα и CD52 или TCRα, CD52 и CD70.
83. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-82, где иммунная клетка получена от здорового донора.
84. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-82, где иммунная клетка получена от пациента.
85. Сконструированная иммунная клетка по любому из пп. 76-84 для применения в качестве лекарственного препарата.
86. Сконструированная иммунная клетка по п. 85, где лекарственный препарат предназначен для применения в лечении рака.
87. Сконструированная иммунная клетка по п. 86, где рак выбран из группы, состоящей из почечно-клеточной карциномы, глиобластомы, глиомы, такой как глиома низкой степени злокачественности, неходжкинской лимфомы (NHL), болезни Ходжкина (HD), макроглобулинемии Вальденстрема, острого миелоидного лейкоза, множественной миеломы, диффузной крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы и немелкоклеточного рака легкого.
88. Популяция клеток по любому из пп. 76-87, где
a) указанная популяция клеток содержит процентную долю стволовых клеток памяти и центральных клеток памяти, составляющую более 20%, 30% или 40%, и/или
b) указанная популяция клеток обеспечивает достижение процентной доли лизиса клеток, экспрессирующих CD70, к дню 6, превышающей 10%, 20%, 30% или 40%, в случае рекурсивных клеток, экспрессирующих CD70, согласно измерению с применением анализа, описанного в примере 4.
89. Популяция клеток по п. 88, где указанная популяция клеток обеспечивает достижение процентной доли лизиса клеток, экспрессирующих CD70, к дню 6, превышающей 20%, в случае рекурсивных клеток, экспрессирующих CD70, согласно измерению с применением анализа, описанного в примере 4.
90. Способ конструирования иммунной клетки, предусматривающий:
a) обеспечение иммунной клетки и
b) введение в клетку по меньшей мере одного полинуклеотида, кодирующего указанный CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-73.
91. Способ конструирования иммунной клетки по п. 90, дополнительно предусматривающий введение по меньшей мере одного другого CAR, не являющегося специфическим к CD70.
92. Способ лечения нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий:
a) обеспечение иммунной клетки, экспрессирующей на поверхности CAR, специфический к CD70, по любому из пп. 56-73 и
b) введение указанных иммунных клеток указанному пациенту.
93. Фармацевтическая композиция, содержащая сконструированную иммунную клетку по любому из пп. 76-87.
94. Способ лечения состояния, ассоциированного со злокачественными клетками, экспрессирующими CD70, у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 93.
95. Способ по п. 94, где состояние представляет собой рак.
96. Способ по п. 95, где рак выбран из группы, состоящей из почечно-клеточной карциномы, глиобластомы, глиомы, такой как глиома низкой степени злокачественности, неходжкинской лимфомы (NHL), болезни Ходжкина (HD), макроглобулинемии Вальденстрема, острого миелоидного лейкоза, множественной миеломы, диффузной крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы и немелкоклеточного рака легкого.
97. Способ подавления роста или прогрессирования опухоли у субъекта, у которого имеются злокачественные клетки, экспрессирующие CD70, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 93.
98. Способ подавления метастазирования злокачественных клеток, экспрессирующих CD70, у субъекта, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 93.
99. Способ индуцирования регрессии опухоли у субъекта, у которого имеются злокачественные клетки, экспрессирующие CD70, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по п. 93 субъекту.