Полиморфизм генов HLA класса II и ctla4 здоровых бурят и больных сахарным диабетом 1 типа в бурятской Республике

Генетика, молекулярная биология

Полиморфизм генов И1Л класса II и СТ1А4 здоровых бурят и больных сахарным диабетом 1 типа в Бурятской Республике

И.И. Дедов, Л.И. Колесникова*, О.Н. Иванова, Т.П. Бардымова*,

Н.Г. Карлова*, Т.М. Атаманова, С.А. Прокофьев

ГУ Эндокринологический научный центр (дир.- акад. РАН и РАМН И.И. Дедов) РАМН, Москва, *ГУ НЦ медицинской экологии ВСНЦ (дир.- член-корр. РАМН Л.И. Колесникова) СО РАМН, Иркутск

I

Сахарный диабет 1 типа (СД1) — многофакторное аутоиммунное заболевание с поли-генным типом наследования. Наследственная предрасположенность к СД1 определяется комбинацией аллелей ряда предрасполагающих генов, что в сочетании с внешними факторами может приводить к развитию заболевания.

Полный геномный поиск [1] позволил выявить 12 локусов предрасположенности к СД1 (IDDM 112), находящихся на разных хромосомах. В настоящее время количество генов, ассоциированных с СД1 типа, возросло до 20. Следует отметить, что эти локусы (кроме IDDM2/11p15/-ген инсулина и IDDM17/10q25) ассоциированы с развитием не только СД1, но и других аутоиммунных заболеваний [2]. Среди всех генетических локусов предрасположенности к СД1 ведущая роль отводится генам локуса HLA (human leukocyte antigen) класса II (около 40% наследуемого риска) [2, 3].

Ассоциация HLA аллелей с заболеванием СД1 была установлена около 30 лет назад [4]. Сравнительный анализ гомозиготных близнецов и HLA — гаплоидентичных сибсов выявил 40—50% конкор-дантность по HLA маркерам СД1. Известны гапло-типы HLA класса II, ассоциированные с высоким риском заболевания СД1 [5]: DRBI*0401(*0402, *0405) - DQA1*0301 - DQB1*0302 и DRB1*0301 -DQA1*0501 - DQB1*0201.

В США 90% больных СД1 имеют хотя бы один из предрасполагающих гаплотипов (в популяции в целом — 20%). Примерно 35% больных СД1 в США являются DRB1*0401(*0402, *0405) - DQA1*0301 -DQB1*0302 и DRB1*0301 - DQA1*0501 - DQB1*0201 гетерозиготами (против 2,4% в популяции в целом) [6].

С другой стороны, гаплотип DRB1*15 -DQA1*0102 - DQB1*0602 во многих популяциях является протективным по отношению к СД1.

Различные этнические группы имеют отличия по частоте встречаемости аллелей и гаплотипов HLA класса II. Генетическая гетерогенность эт-

нических популяций в комплексе с факторами окружающей среды определяет особенности распространенности и клинического течения СД1. Среди тувинцев (монголоиды) больные СД1 встречаются с частотой 0,01%, т.е. в 5 раз реже, чем среди русских, проживающих в той же географической зоне [7]. Показано, что у представителей монголоидной расы заболеваемость СД1 на порядок ниже [8].

Бурятская популяция, как и многие монголоидные популяции (китайская, японская), отличается низкой распространенностью СД1 — 0,024%. Это в 10—30 раз меньше, чем в других этнических группах.

Данные о распределении предрасполагающих и протективных аллелей генов HLA класса II по отношению к СД1 среди бурят опубликованы в работах [9,10].

В развитии заболеваний аутоиммунной природы важную роль играет нарушение механизма не только инициации, но и терминации иммунного отве-

Рис. 1. Маркерные молекулы, участвующие в активации и торможении Т-клеток.

2 ^7/200бШ

та и возможность потерн толерантности к аутоантигенам. Один из способов обеспечения периферической толерантности (физиологического торможения иммунного ответа) связан с негативной регуляцией активированных Т-клеток продуктом гена CTLA4 (IDDM12).

На рис. 1 представлена схема взаимодействия Т-клетки с антигенпрезентирующей клеткой. Ан-тигенпрезентирующие клетки (АПК) с помощью молекул HLA класса II главного комплекса гистосовместимости представляют пептиды (собственные или чужеродные) Т-клеткам.

Взаимодействие комплекса белков HLA класса II АПК и Т-клеточного рецептора (ТКР) необходимо, но недостаточно для активации Т-клеток. Требуется дополнительный сигнал — взаимодействие костимуляторных рецепторов со своими лигандами. CD28 — основной костимулирующий рецептор [11], конститутивно экспрессирующийся на Т-клетках, связываясь с CD80/CD86 (В7-1/В7-2) АПК, активирует Т-клетки, тогда как рецептор CD152, кодируемый геном CTLA4, экспрессирующийся на поверхности активированных Т-клеток, связываясь с теми же лигандами (CD80/CD86), ограничивает пролиферацию активированных Т-кле-ток, обеспечивает их негативную регуляцию, вызывая анергию или апоптоз [12]. Нарушение баланса взаимодействия между CD80/CD86 с CD28 и CD152 может привести к потере аутотолерантности и развитию аутоиммунных заболеваний [13]. Нарушение этого баланса [14] может быть связано с полиморфизмами гена CTLA4, но не CD28. Действительно, продукт гена CTLA4 играет важную роль в инициации, поддержании либо терминации аутоиммунного ответа в экспериментальных моделях на животных [15—17]. Независимыми исследованиями многократно показана ассоциация ряда полиморфных маркеров гена CTLA4 с возникновением ОД1 типа [18—20], болезни Грейвса [19, 21—23], аутоиммунного тиреоидита [21], множественного склероза и ряда других аутоиммунных процессов [24]. Причем носительство аллеля G49, ассоциированного с уменьшением торможения пролиферации Т-клеток [11], увеличивает риск возникновения аутоиммунных заболеваний.

Обнаружена этническая гетерогенность ассо-циациии CTLA4 (IDDM12) с риском возникновения СД 1 типа. Огатистически достоверная ассоциация выявлена в 4 европейских популяциях (итальянцы, испанцы, французы, русские), мексикано-американской популяции и корейской; слабая ассоциация в европеоидной /North American/ и не обнаружена ассоциация в британской, сардинской и японской популяциях [25, 39]; данные исследований по китайской популяции не однозначны [20, 26].

В связи с существенным отличием монголоидной группы по частоте распространенности CД1 типа и клиническими особенностями течения заболевания изучение ассоциации высоко полиморфных генов HLA класса II (DRB1, DQA1 и DQB1) и полиморфных маркеров гена CTLA4 при CД1 типа у бурят представляет значительный интерес.

Проведенный анализ включал:

• идентификацию аллелей 3 генов локуса HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1) в двух группах бурят (больных ОД1 и здоровых) с последующим определением диабетогенных гаплотипов;

• исследование диморфизмов гена CTLA4 — C(-318)T, A49G, C159G, C1IT), определение частот аллелей и генотипов указанных однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs — single nucleotide polymorphisms) в двух группах бурят (больных ОД1 и здоровых) и поиск возможных ассоциаций этих SNP с развитием ОД 1 в данной популяции.

Объект и методы исследования

Все больные ОД1 и лица контрольной группы относятся к бурятской популяции (монголоидная раса). В Республике Бурятия проживает около 300 тыс. бурят. Cреди них к началу 2005 г. зарегистрировано 66 неродственных больных ОД! В представленной работе обследовано 64 из них и 10 больных ОД1 бурятской национальности, проживающих в Усть-Ордынском Бурятском автономном округе. Все больные постоянно получают инсулин. Диагноз поставлен или подтвержден в клиниках Улан-Удэ и Иркутска. Возраст больных колеблется от 1 года до 40 лет. Возраст манифестации диабета от 3 мес. до 32 лет. Контрольная группа состояла из практически здоровых лиц (61 человек) без аутоиммунных заболеваний и отягощенной наследственности по ним.

Выделение ДНК из лейкоцитов периферической крови проводили по модифицированной методике Gemmell и Akiyama [27,28].

Аллеи локуса HLA идентифицировали методом мультипраймерной полимеразной цепной реак-

Таблица 1

Использованные праймеры и рестриктазы

SNP Последовательность праймеров 5'-3' Рестриктаза

C(-318)T F GCCCAAGGGCTCAGAAAGTTAGCAG R GGAAGCCGTGGGTTTAGCTGTTACG Tru9I

A49G F GCTCTACTTCCTGAAGACCT R AGT CT CACT CACCTTT GCAG Fsp4HI

CUT F TGGATCATGGGGGACTCATTGAATG R CTGACACCACCGCTGCCTCTCG Bstc81

C159G F CCTGCCACAACCATCTTGAAGAATC RGTAGTATGGCGGTGGGTACACATGAGC Bsc4I

ции, используя наборы ЗАО «НПФ ДНК-Техно-логия». Типирование проводилось согласно регламенту производителя.

Идентификацию аллелей 4 полиморфных маркеров гена CTLA4 проводили с помощью метода PCR-RFLP (restriction fragment lengh polymorphism). Праймеры для анализа C1IT и C159G разработаны с помощью программы Primer Primer 5.0. Типирование полиморфизмов C(-318)T и A49G проводили по [19, 29]. В табл. 1 представлены структура использованных праймеров и рестриктазы. Амплификацию проводили на многоканальном термоциклере «МС2» в составе смеси: 1хПЦР-буфер, 0,2у геномной ДНК, 1U Taq-полимеразы, 20 пмоль каждого праймера, 8 ммоль dNTPs.

Идентификацию продуктов амплификации проводили после электрофореза в 2% агарозном геле и окрашивания продуктов амплификации бромистым этидием. Полученные ампликоны инкубировали с 5U соответствующей рестриктазы в течение 4—8 ч, продукты рестрикции разделяли электрофорезом в 2—3% агарозном геле.

Проведено сравнение частот аллелей и генотипов между двумя группами. Частоту аллелей определяли методом простого счета (n/2N, где n — число раз встречаемости аллеля (у гомозигот он учитывался дважды) в выборке N генотипов). Расчет трехлокусных гаплотипов выполняли при помощи компьютерной программы «Arlequin ver 2.000» (S.Schneider, D.Roessli, L.Excoffier). Предварительная проверка соблюдения закона Харди-Вайнберга проводилась для каждой группы (СД1, К) методом %2.

Степень предрасположенности тех или иных аллелей к заболеванию определяли по величине показателя соотношения шансов (odds ratio — OR) га формуле [30]:

OR= —-------- -------—,

где a — число лиц с наличием и b — с отсутствием данного аллеля среди больных пациентов, с и d — число лиц, соответственно, с наличием и отсутствием данного аллеля среди здоровых лиц; поправка «0,5» в этой формуле использовалась в случае малых выборок. OR>1 рассматривали как положительную ассоциацию, OR<1 — как отрицательную ассоциацию аллеля с заболеванием.

Статистическую достоверность отличия OR от 1 (р) определяли по методу х2, в случае малых объемов групп — по точному двустороннему критерию Фишера для четырехпольных таблиц [31], вводили поправку Бонферрони при множественных сравнениях [31]. Расчеты выполняли при помощи компьютерных программ «Биостатистика», Microsoft Excel-97.

Таблица 2

Частота аллельных вариантов гена DRB1 среди больных и в контрольной группе и риск развития СД1

DRB1* Больные СД1 Контроль OR

аллели n II к n=61

01 0,060811 0,016393 3,88

03(17) 0,108108 0,073777 1,52

03(18) 0 0

04 0,27027 0,172131 1,78

07 0,121622 0,098361 1,19

08 0,114865 0,04918 2,51

09 0,054054 0,040983 1,34

10 0,013514 0,02459 0,54

11 0,074324 0,131115 0,33*

12 0,040541 0,040983 0,82

13 0,114865 0,139344 0,86

14 0,0135135 0,065573 0,2

15 0,040541 0,139344 0,26**

16 0 0,008197

*p=0,025; **p=0,007

Таблица 3

Частота аллельных вариантов гена и риск развития СД1 DQA1

DQA1* аллели Больные СД1 n=74 Контроль n=61 OR

0101 0,081081 0,090164 0,89

0102 0,074324 0,196721 0,36*

0103 0,047297 0,065574 0,71

0201 0,121621 0,098361 1,19

0301 0,385135 0,221311 2 2**

0401 0,040541 0,040984 0,99

0501 0,243243 0,286885 0,8

0601 0,006756 0 0,4

*p=0,009; **p=0,006

Таблица 4

Частота аллельных вариантов гена и риск развития СД1 СО Q D

DQB1* аллели Больные СД1 n=74 Контроль n=61 OR

0201 0,243243 0,147541 1,86

0301 0,222973 0,311475 0,69

0302 0,148648 0,032787 5,15*

0303 0,081081 0,065574 0,99

0401/0402 0,101351 0,090164 1,14

501 0,074324 0,04918 1,55

0502/4 0 0,040984 0,16

503 0,006757 0,016393 0,4

0601 0,02027 0,032787 0,61

0602-8 0,101351 0,213115 0,42**

*p=0,003; **p=0,017

Примечание.

Ввыделены аллеи, наличие которых в генотипе статистически достоверно предрасполагает к развитиюю СД1 (протективные аллеи - курсивом); п - количество обследованных; p - статистическая значимость отдичия OR от 1.

Таблица 5

Частота распределения гаплотипов локусс HLA в 2 группах бурят

Гаплотип Больные СД1 Контроль

DRB1* DQA1* DQB1* n=148 n=122 OR Р

01 0101 0501 0,061 0,016

04 0301 0201 0,034 0,008

04 0301 0301 0,081 0,098

04 0301 0302 0,089 0,016 5,78 0,02

04 0301 04010/402 0,068 0,049

07 0201 0201 0,095 0,074

07 0201 0303 0,027 0,024

08 0301 0302 0,061 0,008 7,83 0,05

08 0401 0401/0402 0,034 0,041

09 0301 0303 0,054 0,041

10 0101 0501 0,014 0,025

11 0501 0301 0,047 0,123 0,35 0,04

12 0501 0301 0,041 0,041

13 0102 0602-8 0,047 0,082

13 0103 0602-8 0,027 0,032

13 0501 0301 0,034 0,025

14 0101 0503 0,007 0,016

14 0101 0502/4 0 0,025

14 0501 0301 0,007 0,016

15 0102 0602-8 0,027 0,098 0,25 0,01

15 0103 0601 0,014 0,033

17 0501 0201 0,108 0,074 1,52 0,1

другие 0,028 0,032

Прмечание.

Приведены лишь те гаплотипы, частота которых >1% хотя бы в одной из групп. Выделены гаплотипы, предрасполагающие (протективные- курсивом) к развитию СД1 у бурят; п - количество гаплотипов; р - статистическая значимость.

Прогностическая значимость результатов выражается показателем PcPPV (Prevalence-corrected Positive Predictive Value), при вычислении которого учитывается распространенность СД1 в популяции (у бурят составляет 0,024%). Он означает вероятность для случайного представителя популяции, имеющего конкретный гаплотип, заболеть СД1 [32].

Результаты и их обсуждение

Распределение аллелей генов HLA (DRB1, DQA 1, DQB1) в группах бурят, больных СД1, и здоровых индивидов представлено в табл. 2—4. Анализ распределения аллелей показал статистически значимые отличия в частотах аллелей DRB1*15, DRB1*11, DQA1*0102, DQA1*0301,DQB1*0302, DQB1*0602-8.

Частоты других аллелей генов HLA незначительно отличались у больных и здоровых индивидуумов или эти отличия не были достоверными.

В группе больных СД1 обнаружена повышенная частота аллеля DQA1*0301 и пониженная частота аллеля DQA 1*0102 по сравнению с контрольной группой (OR=2,2 и OR=0,36 соответственно, р<0,01).

В гене DQB1 выявлено достоверное (р<0,01) увеличение частоты аллеля DQB1*0302 и уменьшение частоты аллеля DQBI*0602-8 в группе больных СД1 (OR=5,2 и OR=0,42 соответственно).

В гене DRB1 выявлено достоверное (р<0,01) уменьшение частоты аллелей DRB1*15 и DRB1*11 в группе больных СД1 (0R=0,26 и (0R=0,33 соответственно).

Среди вычисленных показателей OR максимальное значение отмечено для аллеля DQB1*0302 (OR=5,2; рс=0,03). Такое значение OR однозначно свидетельствует о положительной ассоциации этого аллеля с СД1. При этом указанный аллель может рассматриваться как маркер предрасположенности к СД1. Минимальные значения OR показаны для аллелей DRB1*15 и DRB1*11 (0R=0,26 и

0,33 соответственно). Данные аллели являются протективными во многих популяциях.

В табл. 5 приведены частоты гаплотипов локу-са HLA, составленных с помощью программы «Arlequin ver 2.000» и проверенных с помощью семейного анализа на 25 бурятских семьях (данные не приводятся). Сравнение частот гаплотипов ло-куса HLA в 2 группах бурят выявило статистически значимые различия в их распределении: гаплотипы

Таблица 6

PcPPV для четырех гаплотипов лоуса HLA класса II в бурятской популяции

Гаплотип Больные СД1 Контроль

DRB1* DQA1* DQB1* n=148 n=122 PcPPV

предрасполагающие

04 0301 0302 0,089 0,016 0,0013

08 0301 0302 0,061 0,008 0,0018

x 0301 0302 0,149 0,024 0,0015

протективные

11 0501 0301 0,047 0,123 0,00009

15 0102 0602-8 0,027 0,098 0,00006

x 0102 0602-8 0,081 0,18 0,0001

15 0102 x 0,027 0,107 0,00006

DRB1*04 - DQA1*0301 - DQB1*0302 и DRB1*08 -DQA1*0301 - DQB1*0302 позитивно ассоциированы с СД1; гаплотип DRB1*17 - DQA1*0501 -DQB1*0201 имеет слабовыраженную ассоциацию (в данной выборке недостоверную — ^=1,52 и р=0,1); гаплотипы DRB1*11 - DQA1*0501 -DQB1*0301 и DRB1*15 - DQA1*0102 - DQB1*0602-8 негативно ассоциированы с СД1 (как и во многих других популяциях). Обращает на себя внимание существенно более высокая предрасположенность к развитию СД1 у носителей гаплотипа DRB1*08 - DQA1*0301 - DQBI*0302, чем DRB1*04

- DQA1*0301 - DQB1*0302 ^=7,83 и OR=5,78 соответственно). Гаплотип DRB1*04 - DQA1*0301

- DQB1*0302 в разной степени, но во многих популяциях позитивно ассоциирован с СД1. В бурятской популяции риск, сообщаемый этим гаплоти-пом, более 5. Однако частота его значительно ниже, чем в европеоидных популяциях (1,6% против ~10%), что представляет интерес в свете более низкой распространенности СД1 среди бурят. Кроме того, с DQA1*0301 - DQB1*0302 могут быть сцеплены разные специфичности DRB1*04, сообщающие различную степень риска. В частности, аллель DRB1*0403 вкупе с DQA1*0301 - DQB1*0302 является слабо протективным, а аллели DRB1*0401, DRB1*0402 и DRB1*0405 — предрасполагающими.

Показано, что в японской популяции, где распространенность СД1 тоже очень низкая (0,6/100 000/год) [38], аллель DRB1*0405 почти отсутствует. Субтипирование локуса DRB1*04 с помощью методов высокого разрешения даст более точную картину распределения «классических» предрасполагающих гаплотипов в бурятской популяции.

Обнаруженная позитивная ассоциация гаплотипа DRB1*08 - DQA1*0301 — DQB1*0302 с возникновением СД1 у бурят согласуется с данными о монголоидных популяциях, опубликованными сравнительно недавно [36,37]. Известно, что аллель DRB1*0802 является предрасполагающим в японской популяции [36]. В статье [37] описаны исследования японской популяции, указывающие на гаплотип DRB1*08 — DQB1*0302 как предрасполагающий к возникновению СД1 в детском возрасте (OR=4,88, р=0,0017).

Выявленные протективные гаплотипы DRB1*11 — DQA1*0501 — DQB1*0301 u DRB1*15 — DQA1*0102 — DQB1*0602-8 являются таковыми во многих популяциях.

В табл. 6 представлено значение PcPPV (Prevalence-corrected Positive Predictive Value) — вероятность для случайного представителя определенной популяции (с известной распространенностью СД1), имеющего конкретный гапло-

Таблица 7

Распределение аллелей A49G гена CTLA4 в бурятской и других популяциях [по 19,23,33-35]

Аллель Европеоиды [34] n=363 [19] n=325 Русские [33] n=153 Японцы [23] n=200 Китайцы [35] n=158 Буряты n=61

GG 7,8 12,6 Частоты генотипов 32,3 39 48,1 42,62

AG 47,1 45,8 44 37,3 42,62

AA 45,1 41,5 26,9 17 14,6 14,75

G 31,4 35,5 Частоты аллелей 52,7 61 66,8 63,93

A 68,6 64,5 47,3 39 33,2 36,06

тип, заболеть СД1. PcPPV рассчитали лишь для тех гаплотипов, различия распространенности которых в 2 группах бурят статистически значимы. Видно, что для случайного представителя бурятской популяции вероятность заболеть наименьшая в том случае, если он имеет гаплотип DRB1*15 - DQA1*0102 - DQB1*0602-8 (в 6 случаях из 100 000), наибольшая — если он имеет гаплотип DRB1*08 - DQA1*0301 - DQB1*0302 (~2 из 1000). При этом у первого риск заболеть в 30 раз ниже, чем у второго.

Статистический анализ распределения генотипов HLA класса II в 2 группах бурят не выявил значимых различий. Можно лишь сказать, что «классический» высоко предрасполагающий генотип DRB1*04- DQA1*0301 - DQB1*0302 / DRB1*17 -DQA1*0501 - DQB1*0201 в группе здоровых не наблюдается, а в группе больных частота его составляет 0,068 (~7% ), тогда как в европеоидной группе больных СД1 частота его достигает 35%.

В табл. 7 представлено сравнение распределения аллелей полиморфного маркера A49G гена CTLA4 в бурятской и других популяциях (контрольные группы). Аллели SNP A49G гена CTLA4 в бурятской этнической группе распределены примерно так же, как и в японской и в китайской. В отличие от европейских популяций доминирующим аллелем в азиатских популяциях является аллель 49G.

В табл. 8 представлено количество (и частоты в скобках) аллелей и генотипов SNP A49G в 2 группах бурят (здоровых — К и больных СД1). В группе пациентов обнаружено характерное для аутоиммунных заболеваний увеличение частоты аллеля G и генотипа GG. В группе больных СД1 частота генотипа GG (51,4%) выше, чем в контрольной группе (42,6%), однако данные статистически не достоверны (р>0,05).

Стратификация исследованных групп по HLA гаплотипам не выявила значимых различий в распределении частот аллелей и генотипов CTLA4 в бурятской популяции (данные не приводятся).

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов SNP C1IT и SNP A49G показал, что они находятся в полном неравновесии по сцеплению.

У всех 135 исследованных бурят генотипу 49 АА соответствовал генотип 1ICC, 49 aG - 1IСТ, 49 GG - 11 ТТ.

Полиморфизм 159 C/G в изученных группах не обнаружен. Либо этот нуклеотид мономорфен у бурят (в то время как в китайской популяции гетерозиготность его составляет 7,4 в контрольной группе и 10,3 в группе больных СД1 [26]), либо гетерозиготность его <0,7. В этом случае сайт мало информативен для изучения ассоциаций. В распределении частот аллелей и геноти-

Таблица 8

Количество (и частоты, %) аллелей и генотипов полиморфного маркера A49G в двух группах бурят

Показатель СД1 (n=74) n II 1 p

Частота аллеля

Л 41(27,7) 44(36,06) 0,18

G 107(72,3) 78(63,93) 0,18

Частота генотипа

ЛЛ 5(6,76) 9(14,75) 0,272

ЛG 31(41,9) 26(42,62) 0,272

GG 38(51,4) 26(42,62) 0,272

Частота фенотипа

AA+ЛG 36(48,65) 35(57,37) 0,402

GG+ЛG 69(93,24) 52(85,24) 0,217

Таблица 9

Количество (и частоты в скобках) аллелей полиморфного маркера С(-318)Т в двух группах бурят

Аллель СД1 (n=74) n II 1 p

C T 138(0,93) 10(0,067) 116(0,94) 6(0,057) 0,93

пов SNP С(-318)Т значимых различий не выявлено (р>0,05, табл. 9).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в бурятской популяции не наблюдается ассоциация сахарного диабета 1 типа с исследованными полиморфными маркерами гена С^А 4.

Выводы

1. Гаплотип DRB1*08 — DQA1*0301 — DQB1*0302 является гаплотипом, наиболее предрасполагающим к развитию СД1 типа в бурятской популяции (OR=7,83); гаплотип DRB1*04 — DQA1*0301-DQB1*0302 является гаплотипом, менее предрасполагающим к развитию СД1 типа в бурятской популяции (OR=5,78), тогда как в европеоидных популяциях данный гаплотип сообщает наибольший риск развития заболевания.

2. «Классический» высоко предрасполагающий генотип в европеоидных популяциях DRB1*04 — DQA1*0301 — DQB1*0302 / DRB1*17 — DQA1*0501

— DQB1*0201 в группе здоровых бурят не наблюдается, а в группе больных частота его составляет 0,068 (~7% ), тогда как в европеоидной группе больных СД1 частота его достигает 35%.

3. Аллели полиморфного маркера A49G гена CTLA 4 в бурятской этнической группе распределены примерно так же, как и в японской и китайской популяциях. В отличие от европейских популяций доминирующим аллелем в азиатских популяциях является аллель 49G (>60% против 30—50%).

4. Ассоциаций какого-либо из изученных полиморфных маркеров гена CTLA 4 с предрасположенностью к СД1 в бурятской популяции не выявлено.

7

1. Todd J.A. Genetic analysis of type 1 diabetes using whole genome approaches.//Proc Nat Acad Sci USA.- 1995^о1.92.-№19.-Р.8560-8565.

2. Redondo M., Eisenbarth G. Genetic control of autoimmuniti in Typel diabetes 22.

and assotiated disorders.//Diabetologia.- 2002- Vol. 45.-P.605-622.

3. S.Anjos, C.Polychronakos. Mechanisms of genetic susceptibility to type I

diabetes: beyond HLA. //Molecular Genetics and Metabolism.-2004.-Vol.81.-P. 187-195. 23.

4. Nerup J., Plats P., Anderson 0.0 . et al. HL-A antigens and diabetes mellitus.// Lancet.-1974.-Vol.l2.-P.864-866.

5. Park Y.S., Wang C.Y., Ко K.W. et al. Combinations of HLA DR and DQ 24.

molecules determine the susceptibility to insulin-dependent diabetes

mellitus in Koreans. //Hum. Immunol- 1998.- Vol.59.-P.794-801. 25.

6. Redondo M.J., Fain P.R., Eisenbarth G.S. Genetics of Type 1A Diabetes //

Recent Prog Horm Res.-2001.-Vol.56.-P.69-89.

7. Осокина И.В., Болдырева М.Н., Ширшина Р.К., Гуськова И.А., Богато- 26.

ва О.В., Грудакова Е.Г., Кабдулова Д. О., Алексеев Л.П.. // Сахарный диабет.-2001-№ 4.-С.8-9.

8. Karvonen М, Tuomilentho J, Libman I, et al. . A review of the recent epi- 27.

demio logical data on incidence of type 1 diabetes mellitus world wide. //Diabetologia - 1993- Vol.36.-P. 883-892. 28.

9. Boldyreva М., Trofimov D., Guskova I., Demidova I., Zilov A., Dedov I.,

Alexeev L. HLA genetic markers of IDDM in buriat population. //Human Immunology. - 1996.^о1.47.-№1-2.-Р.156. 29.

10. Алексеев Л.П., Дедов И.И., Зилов А.В., Болдырева М.Н., Демидов И.Ю., Трофимов Д.Ю., Хаитов P.M. //Сахарный диабет.-1999-№1.-С -19-21.

11. Biancone L., Deambrosis I., Camussi G. Lymphocyte costimulatory receptors in renal disease and transplantation. //J. Nephrol.- 2002-Vol.l5.-P.7-1 6.

12. J.G.Gribben, G.J.Freeman, V.A.Boussiotis et al. CTLA4 mediates antigen-specific apoptosis of human Т cells.//Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1995-Vol.92.-P. 811-815.

13. Amundsen S., Naluai A, Ascher H. et al. Genetic analysis of the CD28/CTLA4/ICOS (CELIAC3) region in coeliac disease.//Tissue Antigens.- 2004-Vol.64.-P.593-599.

14. Ahmed S., lhara K., Nakashima H.et al. Association of CTLA-4 but not CD28 gene polymorphisms with systemic lupus erythematosus in the Japanese population. //Rheumatology. - 2001-Vol. 40.-P. 662-7.

15. Luhder F., Chambers C., Allison J.P. et al. Pinpointing when Т cell costimulatory receptor CTLA-4 must be engaged to dampen diabetogenic Т cells .// PNAS USA- 2000-P. 12204-12209.

16. Luhder F., Hoglund P., Allison J.P. et al. Cytotoxic Т lymphocyte-associated antigen 4 (CTLA-4) regulates the unfolding ofautoimmune diabetes .// J.Exp.Med. -1998-Vol.187.-P. 427-432.

17. Karandikar N.J., Eagar T.N., Vanderlugt C.L. et al. CTLA-4 downregu-lates epitope spreading and mediates remission in relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis//J. Neuroimmunol .-2000- Vol.l09.-P.173-180 .

18. Nistico L., Buzzetti R., Pritchard L. et al. The CTLA4 gene region of chromosome 2q33 is linked to, and associated with, typel diabetes.//Hum.

Mol. Genet.- 1996-Vol. 5.-P. 1975-80.

19. Donner H., Rau H., Walfish P. et al. CTLA4 alanin-17 confers genetic susceptibility to Graves' disease and to typel diabetes mellitus. // J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1997-Vol. 82.-P. 143-146.

20. Marron M., Raffel L., Garchon H. et al. Insulin-depended diabetes mellitus (IDDM) is associated with CTLA4 polymorphisms in multiple ethnic groups.// Hum. Mol. Genet-1997-Vol. 6.-P. 1275-1282.

Kotsa К., Watson P. A CTLA4 gene polymorphism is associated with both Graves' disease and autoimmune hypothyroidism.// Clin. Endocrinol.-1997-Vol. 46.-P.551-554.

Kouki Т., Sawai Y., Gardine C. et al. CTLA-4 gene polymorphism at position 49 in exon 1 reduces the ingibitory function of CTLA-4 and contributes to the pathogenesis of Graves' disease.//J. ImmunoL- 2000-Vol. 165. -P.6606-611.

Yanagawa Т., Taniyama M., Enomoto S. et al. CTLA4 gene polymorphism confers susceptibility to Graves' disease in Japanese. // Thyroid .-1997-Vol. 7.-P. 843-846.

Harbo H., Celius E., Vartdal F. et al. CTLA4 promoter and exon 1 dimorphisms in multiple sclerosis. //Tissue Antigens.- 1999-Vol.1.-P. 106-110.

Yanagawa Т., Kristianses 0., Mato E. et al. Lack of association between CTLA4gene polymorphism and IDDM in Japanese subjects. // Autoimmunity.- 1999.-Vol.29.-P.53-57.

Osei-Hhyaman D., HouL., Zhiyin R .et al. Association of a novel point mutation (C159G) of the CTLA4 gene with Type 1 Diabetes in West Africans but not in Chinese.// Diabetes.- 2001.-Vol.50.-P. 2169-2171. Анализ генома. Методы.// Пер. с англ./Под редакцией К.Дейвиса. -

M.: Мир, 1990. -246с.

Ezquieta В., Jariego С., Varela J.M. et al. Microsatellite markers in the indirect analysis of the steroid 21-hydroxylase gene. // Prenat. Diagn. -

1997. - Vol. 17(5). -P.429-434.

Liu M.-F., Wang C.-R., Chen P.-C. et al. Increased expression of soluble cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 molecule in patients with systemic lupus erythematosus. // Scandinavian J of lmmunol.- 2003.-Vol. 57(6).-P. 568-72.

30. Woolf B.On estimating the relation between blood group and disease//Am. Hum. Genet.-1955.-Vol9.-P.251.

31. Стентон Гланц. Медико-биологическая статистика.//Практика. Москва1999.

32. M.Zamani, J-J.Cassiman. Reevaluation of the Importance of Polymorphic HLA Class II Alleles and Amino Acids in the Susceptibility of Individuals of Different Populations to Type I Diabetes.// Am. J. of Medical Genetics,-

1998.- Vol76.-P.183-194.

33. Савостьянов К.В., Чистяков Д.А., Петунина И.А. и др. Генетическая предрасположенность к развитию диффузного токсического зоба в популяции Москвы.// Проблемы эндокринологии.-2004.-Т.50 №6, стр. 10-13.

34. Heward J., Allahabadia A., Armitage M., et al. The development of Draves' disease and the CTLA4 gene on chromosome 2q33.// J of Clin Endocrinol and metabol.- 1999.-Vol.84.-P.2398-2401.

35. E. Yung, P. S. Cheng, T. F. Fok at al. CTLA-4 gene A-G polymorphism and childhood. Graves' disease.// Clinical Endocrinology.-2002.-Vol.56.-P.649-653.

36. T.Awata, Y.Kanazawz. Genetic marker for insulin-dependet diabetes mellitus in Japanese.//Diabetes Res and Clin Pract.-1994.-Vol. 24.-

P.83-87.

37. S.Murao, H.Makino, Y.Kaino et al. Differences in the Contribution of HLA-DR and -DQ Haplotypes to Susceptibility to Adult- and Childhood-Onset Type 1 Diabetes in Japanese Patients.//Diabetes.- 2004.-Vol.53.-P. 2684-2690.

38. DERI Group (Diabetes Epidemiology Research International Group). Geographical patterns of childhood insulin-dependent diabetes mellitus.// Diabetes.- 1988.-Vol.37.- P.1113-1119.

39. Chistiakov D.A., Savostanov K.V., Nosikov V.V. CTLA4 gene polymorphisms are associated with, and linked to, insulin-dependet diabetes mellitus in a Russian population.//BMC Genetics.-2001 .-Vol.2( 1). -P. 6-10.

Литература

21.

8 ^7/200бЩ