Особенности экспрессии металлотионеина в органах крысы при интоксикации цинком и свинцом

Литература

1. Гейниц А.В., Москвина С.В. Лазерная терапия в косметологии и дерматологии. - М.: Триада, 2010. -С. 63-130.

2. Землякова С.С., Иванов О.Л., Львов А.Н., Феденко Е.С. Аллергический контактный дерматит и ассоциированные аллергодерматозы: современные представления об этиологии, патогенезе и диагностике // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 2010. - № 4. -С. 47-51.

3. Москвина С.В., Ачилов А.А. Основы лазерной терапии. - М.: Тверь: Триада, 2008. - 256 с.

4. Ruel-Gariepy E., Chenite A., Chaput С. Characterization of thermosensitive chitosan gels for the sustained delivery of drugs // Int. J. Pharm. - 2000. - Vol. 203, № 1-2. -P. 89-98.

References

1. Geynits A.V., Moskvin S.V. Laser therapy in cosmetology and dermatology. - M.: Triada, 2010. - P. 63-130.

2. Zemlyakova S.S., Ivanov O.L., Lvov A.N., Fedenko E.S. Aller- gic contact dermatitis and associated allergodermatoses: Current views on the etiology, pathogenesis and diagnosis // Russian Journal of Skin and Venereal Diseases. - 2010. -Vol. 4. - P. 47-51.

3. Moskvina S.V., Achilov A.A. The Basics of laser therapy. - М.: Tver: Triada, 2008. - P. 256

4. Ruel-Gariepy E., Chenite A., Chaput С. Characterization of thermosensitive chitosan gels for the sustained delivery of drugs // Int. J. Pharm. - 2000. - Vol. 203, № 1-2. -P. 89-98.

Сведения об авторах

Казанбаев Ринат Тагирович - аспирант кафедры дерматовенерологии с курсом косметологии и ПО ГБОУ ВПОКрасноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка д. 1; тел. 8(391) 2114101, e-mail: Tagirson86@mail.ru.

Прохоренков Виктор Иванович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой дерматовенерологии с курсом косметологии и ПО ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка д. 1; тел. 8(391) 2114101, e-mail: Kras_derma@mail.ru.

Яковлева Татьяна Александровна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры дерматовенерологии с курсом косметологии и ПО ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка д. 1; тел. 8(391) 2114101, e-mail: Kras_derma@mail.ru.

Максименко Вячеслав Геннадьевич - кандидат медицинских наук, ассистент кафедры дерматовенерологии с курсом косметологии и ПО ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка д. 1; тел. 8(391) 2114101, e-mail: Kras_derma@mail.ru.

© КУТЯКОВ В. А., ШЕСТАКОВА Л. А., САЛМИНА А. Б., ЧИКУН В. И.

УДК [546.47 + 546.815]:616-009-074:547.96

ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ МЕТАЛЛОТИОНЕИНА В ОРГАНАХ КРЫСЫ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ЦИНКОМ И СВИНЦОМ

В. А. Кутяков, Л. А. Шестакова, А. Б. Салмина, В. И. Чикун ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф.

В. Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения РФ, ректор - д. м. н., проф. И. П. Артюхов; кафедра биологической химии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии, зав. - д. м. н., проф. А. Б. Салмина; НИИ молекулярной медицины и патобиохимии, руководитель - д. м. н., проф. А. Б. Салмина; кафедра патологической анатомии имени проф. П. Г. Подзолкова, и. о. зав. - д. м. н., доцент А. К. Кириченко; кафедра судебной медицины ИПО, зав. - д. м. н., проф. В. И. Чикун.

Цель исследования. Изучение иммуногистохимических особенностей экспрессии металлотионеина в органах крысы при острой интоксикации цинком и свинцом.

Матери алы и методы. Иммуногистохимическим методом в различных органах и тканях крыс исследовалась экспрессия металлотионеина после введения соединений свинца и цинка. Применялись антитела LifeSpan BioSciences, Inc., реагенты для визуализации - на основе полимера Novolink и пероксидазы (RE7290-K).

Результаты. Экспрессия металлотионеина носила избирательный характер разной интенсивности. Введение свинца вызвало более выраженные морфологические изменения в органах по сравнению с таковыми при введении цинка.

Заключение. Описанный протокол исследования может быть эффективно использован при судебно-медицинском исследовании органов в случаях острого отравления соединениями тяжелых металлов. Отмечена целесообразность дальнейших исследований в разработке эффективного протокола по выявлению и использованию металлотионеина как биомаркера отравлений тяжелыми металлами.

Ключевые слов а: иммуногистохимическое исследование, металлотионеин, свинец, цинк, судебно-медицинская экспертиза.

THE FEATURES OF METALLOTHIONEIN EXPRESSION IN RAT ORGANS AT INTOXICATION BY ZINC AND LEAD

V. A. Kutyakov, L. A. Shestakova, A. B. Salmina, V. I. Tchikun Krasnoyarsk State Medical University named after prof. V. F. Voino-Yasenetsky

The purpose of the study. To study immunohistochemical features of metallothionein expression in rat organs in acute intoxication by zinc and lead.

Materials and methods. By immunohistochemical method in various organs and tissues of rats was studied metallothionein expression after inject of the lead and zinc. Were used antibodies LifeSpan BioSciences, Inc., Reagents for visualizing - on the base of polymer Novolink and peroxidase (RE7290-K).

Conclusion. Described study protocol can be effectively used in forensic medical examination in cases of acute poisoning with heavy metals. It was noted the expediency of further research in the development of an effective protocol for the identification and use of metallothionein as a biomarker of heavy metal poisoning.

Key words: immunohistochemistry, metallothionein, lead, zinc, forensic medical examination.

Введение

Современная судебно-медицинская экспертиза развивается в направлении повышения роли лабораторных методов, основанных на принципах доказательной медицины. Вместе с тем метод исследования макромолекул с учетом их расположения в клетках и тканях - часто остаётся недоступным для судебно-медицинского эксперта. Метод иммуногистохимиче-ского (ИГХ) исследования отличается высокой специфичностью, возможностью распределения исследуемого вещества в тканевых и клеточных структурах и его количественного определения в них. В основе метода ИГХ лежит иммунная реакция исследуемого вещества и высокоспецифичного антитела к нему. Длительность и дозы проникающих в клетки антигенов имеют важное значение в формировании направленности иммунной реакции [2]. Ценность метода заключается не только в возможности количественной оценки результатов, но и в установлении качественно новых признаков, которые принципиально невозможно наблюдать при обычных гистологических окрасках [1].

Возможности метода ИГХ в отношении судебно-медицинской диагностики отравлений пока мало изучены. Например, предложены методы ИГХ исследования при интоксикациях цианидами [6], опиатами [1]. В то же время судебно-медицинская диагностика отравлений тяжелыми металлами базируется лишь на определении валовой концентрации их в различных объектах.

Оценка уровня экспрессии тканевых рецепторов к различным токсикантам могла бы стать основой посмертной диагностики интоксикаций. Металлотионеин -низкомолекулярный белок - не случайно привлек внимание исследователей в связи с оценкой металлогомеостаза.

Многочисленными исследованиями авторских коллективов установлены физиологические функции металлоти-онеина. Так, С.Б. ЫоМЬегд е! а1. предположили, что при попадании соединений металлов в организм они неселективно

связываются с высокомолекулярными белками, попадают в печень, где происходит образование их комплексов с металлотионеином [4, 10]. Таким образом, металлотионеин можно рассматривать в качестве биомаркера интоксикации тяжелыми металлами. Степень его индукции также зависит от времени после введения, так как для транспорта металла к месту синтеза, экспрессии генов мРНК металлотионеина и собственно синтеза белка требуется определенное время [13]. Изучение локализации металлотионеина в органах при введении соединений различных металлов показало значительные различия в его индукции и межорганном распределении [3].

Большинство исследований посвящено локализации металлотионеина в почках (рис. 1), печени, головном мозге, поскольку экспрессия металлотионеина в этих органах наиболее характерна [7, 12] и важна в деятельности ЦНС [9]. Другими авторами отмечается статистически значимое возрастание количества металлотионеина в тимусе и селезенке при длительном (2 недели) приеме цинка [8].

Поиски оптимальных условий иммуновизуализации приводят к появлению новых протоколов проведения исследований, поскольку условия не могут быть точно предсказаны для любого антитела и ткани или клеток, а различные протоколы визуализации антигена должны быть апробированы с каждым новым антителом и тканью,

Рис. 1. ИГХ-окрашивание препаратов почек: (а) контрольный орган - отсутствие экспрессии MT; (b) металлотионеин локализован в проксимальных извитых канальцах (белый блок-стрелка), со слабым или отсутствующим окрашиванием в дистальных канальцах (черный блок-стрелка); (с) - сильное иммуноокрашивание металлотионеина в проксимальных извитых канальцах (белый блок-стрелка) (Jennifer A. Jamieson et al., 2010).

прежде чем применять их при рутинных иммуногистохи-мических исследованиях [5]. Методы различаются множеством факторов: в том числе антитела, реагенты, время экспозиции, нагревание и другие, каждый из которых влияет на эффективность визуализации [14]. Отмечается, что антитела могут обладать различным сродством к металло-тионеину, связанным с различными тяжелыми металлами, что объясняется изменением конформации антитела [15]. В перспективе О'Лири и др. предложили сосредоточить внимание на двух моментах исследований: (1) извлечение неизмененных белков в нативной конформации из фиксированной ткани и (2) разработка новых методов для оценки количества и функционального состояния тканевых белков, выделенных из фиксированной ткани [11].

Цель настоящего исследования - изучить иммуноги-стохимические особенности экспрессии металлотионеи-на в органах крысы при острой интоксикации цинком и свинцом.

Материалы и методы

В представленной работе все исследования выполнены на разнополых белых крысах линии Вистар (3 группы: контрольная - интактные животные, с введением цинка, с введением свинца; по 3 животных в каждой группе), массой от 150 до 200 г, которые содержались в виварии на стандартном пищевом и водном режиме и в условиях, соответствующих требованиям приказа Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной диагностики» и ГОСТа Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики». При работе с животными соблюдались основные принципы и правила гуманного обращения с лабораторными животными, изложенными в «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 1986 г.) и Декларации Всемирной медицинской ассоциации (Хельсинки, 1964 г.). Для исследования отбирались головной мозг, печень, почка, селезенка. Растворы для внутрибрю-шинного введения готовили на деионизованной воде из цинка уксуснокислого по ГОСТ 5823-78 и свинца уксуснокислого по ГОСТ 2017-67. Вводимая доза цинка и свинца составляла 100 мг/кг соответственно. Контрольный раствор - раствор натрия хлорида 0,9%, приготовленный на деионизованной воде. Время момента введения растворов металлов до момента отбора проб составляло 72 часа.

Изъятые органы помещались в забуференный 10% формалин (4,0 г натрия дигидрофосфата и 6,5 г натрия гидрофосфата в 1 литре формалина), с дальнейшим обезвоживанием в батарее спиртов и изготовлением парафиновых блоков. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимическое выявление антигена в парафиновых срезах иммунопероксидазным методом проводили по методике компании - производителя антител.

Применяли первичные антитела к металлотионеину -моноклональные (Metallothionein Mouse anti-Rabbit Monoclonal (UC1MT) Antibody - LS-B3698 - LSBio). Вторичные

антитела - поликлональные (Mouse IgG Horse anti-Mouse Polyclonal (Biotin) Antibody - LS-D2 - LSBio). Производитель - LifeSpan BioSciences, Inc. (США). Для визуализации

- на основе полимера Novolink и пероксидазы (RE7290-K) (Германия). Для фонового докрашивания использовали гематоксилин.

Для оценки степени экспрессии металлотионеина использовали полуколичественный метод, разделяя по интенсивности окрашивания и площади экспрессии: 0 - нет окрашивания (отсутствие экспрессии); + (1 балл) - слабое окрашивание, < 5% клеток; + + (2 балла) - окрашивание < 5-25% клеток; + + + (3 балла) - окрашивание < 26-50% клеток; + + + + (4 балла) - окрашивание > 50% клеток (гиперэкспрессия).

Ставили позитивные и негативные контрольные реакции. Позитивным контролем для иммуногистохимического исследования послужили реакции на неизмененных тканях с известной положительной реакцией, негативный контроль - без первичных антител.

Результаты и обсуждение

В группе сравнения в образцах печени, почек, головного мозга и селезенки без патологических изменений не выявлена экспрессия металлотионеина.

В органах экспериментальных животных наблюдалась различная гистологическая картина как внутри групп, так и между ними. С введением свинца выявлены более выраженные морфологические изменения в органах по сравнению с таковыми при введении цинка. В головном мозге отмечаются капиллярно-венозное полнокровие, отёк от умеренного до выраженного, перицеллюлярный и периваскулярный, диффузно-очаговая демиелинизация, очаговая дистрофия нейронов разной степени выраженности, часть нейронов - в состоянии острого набухания, с явлениями хроматолиза, вплоть до тотального, реактивный астроцитоз. В почках выявлено капиллярно-венозное полнокровие коркового и мозгового вещества, некроз эпителия извитых проксимальных и дистальных канальцев, выраженный интерстициальный отёк и очаговая монону-клеарная инфильтрация стромы, очаговый некроз капилляров почечных клубочков, умеренная пролиферация клеток в области юкстагломерулярного аппарата (ЮГА), гиалиново-капельная и гидропическая дистрофия в эпителии собирательных трубочек. В печени наблюдалась жировая дистрофия гепатоцитов (мелкокапельная), очаговый некроз гепатоцитов, умеренная мононуклеарная инфильтрация портальных трактов, капиллярно-венозное полнокровие. В селезенке наблюдаются очаги некроза, атрофия паренхимы, диффузный гемосидероз.

При проведении иммуногистохимического исследования установлено, что экспрессия металлотионеина носила избирательный характер разной интенсивности. В почках - выраженная (+ + + +) равномерная экспрессия металлотионеина в эпителии собирательных трубочек и неравномерная, умеренная - в почечном тельце (+ + +), более интенсивная - в области ЮГА (рис. 2).

Рис. 2. Иммуногистохимическое исследование почек при введении свинца: а - выраженная экспрессия металлотионеина в отдельных эндотелиоцитах гломерулярных капилляров (черная стрелка); отсутствие экспрессии металлотионеина в некротизированных эпителиоцитах извитых канальцев (красная стрелка); б - выраженная экспрессия металлотионеина в эпителиоцитах собирательных трубочек. х400.

Рис. 4. Иммуногистохимическое исследование головного мозга при введении цинка. а, б - слабая экспрессия металлотионеина в эндотелиоцитах, цитоплазме клеток глии и нейронов. x400.

В печепи была установлена выраженная (+ + + +) и неравномерная экспрессия металлотионеина в гепатоцитах 3 зоны аципуса (рис. 3).

Рис. 3. Иммуногистохимическое исследование печени при введении свинца: а - выраженная экспрессия металлотионеина в пе-ривенулярныхгепатоцитах. б - умеренная экспрессия металлотионеина в гепатоцитах третьей зоны ацинуса. х400.

В селезепке и головном мозге пе выявлено экспрессии металлотионеина (0), что, вероятнее всего, связапо с высокой токсичностью свинца, сопровождающейся тяжелым повреждепием селезепки и головного мозга.

Введение цинка сопровождалось менее выраженными патологическими изменениями в органах и характеризовалось преимущественно нарушением кровообращения и слабо выраженной дистрофией в паренхиме. В головном мозге отмечались капиллярно-венозное полнокровие, слабо выраженный отёк периваскулярный и перицеллюлярный, очаговая дистрофия пейропов, умеренно выраженная, очаги глиоза, продуктивный васкулит. В почках, печепи, селезепке наблюдались капиллярно

- вепозпое полнокровие, паренхиматозная белковая и жировая дистрофия, слабо и умеренно выраженная.

В результате иммупопероксидазпого метода отмечена слабая ( + ) экспрессия металлотионеина в части пейропов головного мозга, элементах глии и эндотелиоцитах (рис. 4).

В селезепке, печепи и почках отсутствовала экспрессия металлотионеина (0), что может быть связапо с однократным воздействием токсиканта и недостаточным временем для синтеза белка, а также низким сродством антител к комплексу металлотионеина с ципком.

Заключение

Соединения цинка и свинца, вызывая при внутрибрю-шинном введении различные морфологические изменения в органах крыс, являются индукторами металлотионеина, что подтверждается различиями в его экспрессии после введения растворов металлов. Свинец вызывает необратимые морфологические изменения в селезенке, головном мозге, препятствуя экспрессии металлотионеина в этих органах. Выраженная экспрессия металлотионеина при однократном остром воздействии свинца является тканеспецифичной, наибольшей - в печени, почке. При воздействии соединений цинка наблюдалась слабая, диффузная экспрессия металлотионеина в нейронах, глиальных клетках и эндотелиоцитах головного мозга. Данный факт может свидетельствовать об активации механизмов защитных реакций, с участием металлотионеина, при слабом токсическом воздействии цинка, способствуя поддержанию морфологической целостности головного мозга. Результаты проведенного исследования позволяют считать, что описанный протокол иммунопероксидазной реакции может быть эффективно использован при судебно-медицинском исследовании органов в случаях острого отравления соединениями тяжелых металлов. Обнаруженная разница в визуализации металлотионеина при воздействии свинца и цинка неопределенна, и может быть обусловлена низким сродством антител к комплексу металлотионеина с цинком. Большее число наблюдений, позволяющее провести сопоставление гистологических и иммуногистохимических признаков, позволит объяснить особенности экспрессии металлотионеина в органах при однократном введении цинка и свинца.

Литература

1. Богомолов, Д. В., Богомолова, И. Н., Караваева, И. Е. Перспективы использования методов иммуногистохимии в судебно-медицинской танатологии // Судебно-медицинская экспертиза. - 2009. - № 6. - С. 32-37.

2. Казанбаев, Р. Т., Прохоренков, В. И., Яковлева, Т. А., Васильева, Е. Ю. Иммунологические механизмы развития аллергических дерматозов // Сибирское медицинское обозрение. - 2013. - № 4. - С. 9-13.

3. Пыхтеева, Е. Г. Сравнение распределения и токсического действия CdCl2 и экзогенного комплекса кадмия с металлотионеином при интраперитонеальном введении II Актуальные проблемы транспортной медицины. -2013. - № 2 (32). - С. 20-24.

4. Arizon O.K., Ito T., Yamaguchi M. and Ariyoshi T. Induction of zincmetallothionein in the liver of rats by lead II Eisei kagaku. - 19В2. - № 2б. - P. 94-9В.

б. Brzica H., Breljak D., Vrhovac I., Sabolic I. Microwave Heating. Dr. Usha Chandra (Ed.). - InTech. - 2011. - P. 41-б2.

6. Bywood PT., Johnson S.M. Dendrite loss is a characteristic early indicator of toxin-induced neurodegeneration in rat midbrain slices II Exp. Neurol. - 2000. - Vol. 1б1, № 1. - P. 30б-31б.

7. Jamieson J.A., Stringer D.M., Zahradka P., Taylor C.G. Dietary zinc attenuates renal lead deposition but metallothionein is not directly involved II Biometals. - 200B. - № 21. - P. 29-40.

B. Huerta P., Galan P., Teijon J. M., Ribas B. Increase of metallothionein and other proteins in thymus and spleen during chronic zinc administration II Toxicological & Environmental Chemistry. - 19B9. - Vol. 2б, № 1. - P. б3-бВ.

9. Nakajima K., Suzuki K. Immunochemical detection of metallothionein in brain II Neurochem. Int. - 199б. -Vol. 27, № 1. - P. 73-B7.

10. Nordberg G.F., Goyer R., Nordberg M. Comparative toxicity of cadmium metallothionein and cadmium chloride on mouse kidney II Arch. Pathol. - 197б. - № 99. - P. 192-197.

11. O'Leary T.J., Fowler C.B., Evers D.L., Cunningham R.E., Mason J.T. Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics. Shi S.-R., Taylor C.R. (Editors). -Hoboken (NJ), John Wiley, 2010. - P. 323-331.

12. Sabolic I., Breljak D., Skarica M., Herak-Krambeger C.M. Role of metallothionein in cadmium traffic and toxicity in kidneys and other mammalian organs II Biometals. -2010. - Vol. 23, № б. - P. В97-92б.

13. Sasagawa S. Stress related induction of hepatic metallothionein synthesis and increase in peripheral polymorphonuclear leukocytes in mice II Immunopharmacol. Immunotoxicol. -1993. - Vol. 15, № (2-3). - P. 217-22б.

14. Shi Sh.-R., Shi Yan, Taylor C.R. Antigen Retrieval Immu-nohistochemistry: Review and Future Prospects in Research and Diagnosis over Two Decades II J. of Histochem. & Cytochem. -2011. - Vol. б9, № 1. - P. 13-32.

15. Suzuki K.T., Sato M. Preparation of biologic sample for quantification of metallothionein with care against oxidation II Biomed. Res. Trace Elements. - 199б. - № б. - P. б1-бб.

References

1. Bogomolov D.V., Bogomolova I.N., Karavayeva I.E. Prospects of using the methods of immunohistochemistry in forensic thanatology II Sud.-Med. Ekspertiza. - 2009. -Vol. б. - P. 32-37.

2. Kazanbaev R.T., Prokhorenkov V.I., Yakovleva T.A., Vasilieva E.Yu. Immunological mechanisms of allergic dermatoses II Siberian medical review. - 2013. - Vol. 4. - P. 9-13.

3. Pykhteeva E.G. Comparison of distribution and toxic effects CdCl2 and exogenous cadmium complex with metallothionein in the intraperitoneal injection II Actual problems of transport medicine. - 2013. - Vol. 2 (32). - P. 20-24.

4. Arizon O.K., Ito T., Yamaguchi M. and Ariyoshi T. Induction of zincmetallothionein in the liver of rats by lead II Eisei kagaku. - 19B2. - Vol. 2б. - P. 94-9B.

5. Brzica H., Breljak D., Vrhovac I., Sabolic I. Microwave Heating. Dr. Usha Chandra (Ed.). - InTech, 2011. - P. 41-62.

6. Bywood P.T., Johnson S.M. Dendrite loss is a characteristic early indicator of toxin-induced neurodegeneration in rat midbrain slices // Exp. Neurol. - 2000. - Vol. 161, № 1. -P. 306-316.

7. Jamieson J.A., Stringer D.M., Zahradka P., Taylor C.G. Dietary zinc attenuates renal lead deposition but metallothionein is not directly involved // Biometals. - 2008. - Vol. 21. -P. 29-40.

8. Huerta P., Galan P., Teijon J. M., Ribas B. Increase of metallothionein and other proteins in thymus and spleen during chronic zinc administration // Toxicological & Environmental Chemistry. - 1989. - Vol. 25, № 1. - P. 63-68.

9. Nakajima K., Suzuki K. Immunochemical detection of metallothionein in brain // Neurochem. Int. - 1995. -Vol. 27, № 1. - P. 73-87.

10. Nordberg G.F., Goyer R., Nordberg M. Comparative toxicity of cadmium metallothionein and cadmium chloride on mouse kidney // Arch Pathol. - 1975. - Vol. 99. - P. 192-197.

11. O'Leary T.J., Fowler C.B., Evers D.L., Cunningham R.E., Mason J.T. Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics. Shi S.-R., Taylor C.R. (Editors). -Hoboken (NJ), John Wiley, 2010. - P. 323-331.

12. Sabolic I., Breljak D., Skarica M., Herak-Krambeger C.M. Role of metallothionein in cadmium traffic and toxicity in kidneys and other mammalian organs // Biometals. - 2010. - Vol. 23, № 5. - P. 897-926.

13. Sasagawa S. Stress related induction of hepatic metallo-thionein synthesis and increase in peripheral polymorphonuclear leukocytes in mice // Immunopharmacol. Immunotoxicol. -1993. - Vol. 15, № (2-3). - Р. 217-226.

14. Shi Sh.-R., Shi Yan, Taylor C.R. Antigen Retrieval Immunohistochemistry: Review and Future Prospects in Research and Diagnosis over Two Decades // J. of Histochem. & Cytochem. - 2011. - Vol. 59, № 1. - P. 13-32.

15. Suzuki K.T., Sato M. Preparation of biologic sample for quantification of metallothionein with care against oxidation // Biomed. Res. Trace Elements. - 1995. - Vol. 6. - P. 51-56.

Сведения об авторах

Кутяков Виктор Андреевич - старший преподаватель кафедры биологической химии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8(391) 2280769; e-mail: victor-koutjakov@yandex.ru.

Шестакова Людмила Анатольевна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической анатомии имени проф. П.Г. Подзолкова ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8(391) 2201425; e-mail: patholog-LAn@yandex.ru.

Салмина Алла Борисовна - доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой биологической химии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии, руководитель НИИ молекулярной медицины и патобиохимии ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8(391) 2280769; e-mail: allasalmina@mail.ru.

Чикун Владимир Иванович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой судебной медицины ИПО ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8(391) 2201391; e-mail: krsk.edu@sudmed.info.