ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ AADC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
AADC POLYNUCLEOTIDES FOR TREATING PARKINSON'S DISEASE

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001]
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на выдачу патента США № 62/075298, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 5 ноября 2014 года, предварительной заявке на патент США № 62/155692, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 1 мая 2015 года, предварительной заявке на патент США № 62/199578, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 31 июля 2015 года, и предварительной заявке на патент США № 62/243537, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 19 октября 2015 года; причем содержание каждой из них включено в данный документ во всей их полноте посредством ссылки.
ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002]
Данная заявка подана вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Файл с перечнем последовательностей с названием 1010PCTSEQLST.txt был создан 5 ноября 2015 года и его размер составляет 178144 байта. Информация из перечня последовательностей в электронном формате включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0003]
Настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут кодироваться рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или быть закодированными в них.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004]
Декарбоксилаза ароматических L-аминокислот (AADC) представляет собой гомодимерный пиридоксальфосфат-зависимый фермент, ответственный за синтез дофамина и серотонина. Кодируемый белок катализирует декарбоксилирование L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-DOPA или леводопы) в дофамин; L-5-гидрокситриптофана в серотонин; и L-триптофана в триптамин. Дефекты в этом гене являются причиной дефицита декарбоксилазы ароматических L-аминокислот (AADCD), который является врожденным нарушением метаболизма нейромедиаторов, которое приводит к совместному дефициту серотонина и катехоламинов, что в результате приводит к серьезным нарушениям двигательных и вегетативных функций.
[0005]
Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное заболевание центральной нервной системы (ЦНС), вызывающее сенсорные и двигательные симптомы. Дофаминовое замещение (т. е. леводопа) является стандартной фармакотерапией для лечения нарушения двигательных функций при БП. Однако, польза от дофаминовой терапии с течением времени становится менее заметной отчасти в связи с прогрессирующей гибелью вырабатывающих дофамин клеток и соответствующей утратой AADC-активности. Кроме того, системное введение высоких доз дофамина осложняется побочными эффектами, такими как флуктуации в двигательной активности, дискинезии и галлюцинации, возникающие в результате дофаминергической стимуляции мезолимбической системы. Одной стратегией восстановления дофаминергической функции и сведения к минимуму побочных эффектов является применение генной терапии для доставки AADC непосредственно в целевой участок ЦНС.
[0006]
Dependovirus
Аденоассоциированный вирус (AAV) проявил себя как перспективный вектор для генной терапии в связи с его длительной экспрессией генов, неспособностью к автономной репликации без вируса-помощника, способностью к трансфекции делящихся и неделящихся клеток, а также отсутствием патогенности, в отличие от инфекций дикого типа (см., например, Hadaczek et al. Mol. Ther. 18(8), 1458-1461, Aug. 2010). AAV является зависимым от помощника ДНК-парвовирусом, который принадлежит к роду .
[0007]
Настоящее изобретение относится к таким усовершенствованным конструкциям нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, для применения с помощью полученных из AAV векторов, содержащих последовательность гена дофа-декарбоксилазы («DDC»), которая кодирует полноразмерный белок AADC, для генной терапии при лечении болезни Паркинсона.
[0008]
гена DDC,
Описанные в настоящем документе конструкции нуклеиновых кислот содержат по меньшей мере 5'-ITR и 3'-ITR, каждый или оба из которых могут быть полученными из AAV, расположены около последовательности а также дополнительные компоненты, необходимые для экспрессии гена и отбора клонов.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009]
Настоящее изобретение относится к описываемым в настоящем документе композициям, способам, процессам, наборам и устройствам для разработки, получения, производства и/или составления полинуклеотидов AADC.
[00010]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут быть закодированы плазмидами, или векторами, или рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или содержаться в них.
[00011]
Подробности различных вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в описании ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут понятны из описания и формулы изобретения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Композиции согласно настоящему изобретению
[00012]
В соответствии с настоящим изобретением предлагаются полинуклеотиды AADC, которые функционируют сами по себе или в комбинации с дополнительной последовательностью(-ями) нуклеиновой кислоты, кодируя белок AADC. В контексте настоящего описания «полинуклеотид AADC» представляет собой любой полимер нуклеиновой кислоты, который кодирует белок AADC и при наличии в векторе, плазмиде или транслируемой конструкции экспрессирует такой белокAADC в клетке, ткани, органе или организме.
[00013]
Полинуклеотиды AADC включают в себя молекулы-предшественники, которые процессируются внутри клетки. Полинуклеотиды AADC или их процессированные формы могут быть закодированы в плазмиде, векторе, геноме или другом векторе экспрессии нуклеиновой кислоты для доставки в клетку.
[00014]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC разработаны в качестве компонентов вирусных геномов AAV и упакованы в вирусных частицах AAV, которые процессируются в клетке с образованием белка AADC дикого типа.
[00015]
гена DDC
ген DDC
В контексте настоящего описания белок AADC дикий тип может представлять собой любую или любой из встречающихся в природе изоформ или вариантов, полученных от . Было идентифицировано несколько получаемых путем альтернативного сплайсинга вариантов транскриптов, кодирующих различные изоформы AADC. В частности, дает семь вариантов транскриптов, которые кодируют шесть различных изоформ. Варианты 1 и 2 транскрипта DDC кодируют изоформу 1 AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC кодируют вариант 2 транскрипта DDC, таким образом кодируя нативную изоформу 1 AADC (эталонная последовательность в NCBI: NP_000781.1). Данная последовательность имеет вид: MNASEFRRRGKEMVDYVANYMEGIEGRQVYPDVEPGYLRPLIPAAAPQEPDTFEDIINDVEKIIMPGVTHWHSPYFFAYFPTASSYPAMLADMLCGAIGCIGFSWAASPACTELETVMMDWLGKMLELPKAFLNEKAGEGGGVIQGSASEATLVALLAARTKVIHRLQAASPELTQAAIMEKLVAYSSDQAHSSVERAGLIGGVKLKAIPSDGNFAMRASALQEALERDKAAGLIPFFMVATLGTTTCCSFDNLLEVGPICNKEDIWLHVDAAYAGSAFICPEFRHLLNGVEFADSFNFNPHKWLLVNFDCSAMWVKKRTDLTGAFRLDPTYLKHSHQDSGLITDYRHWQIPLGRRFRSLKMWFVFRMYGVKGLQAYIRKHVQLSHEFESLVRQDPRFEICVEVILGLVCFRLKGSNKVNEALLQRINSAKKIHLVPCHLRDKFVLRFAICSRTVESAHVQRAWEHIKELAADVLRAERE (SEQ ID NO:1)
[00016]
Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению могут быть сконструированы так, чтобы они содержали модульные элементы и/или мотивы последовательности, которые в сборке создают конструкции на основе полинуклеотида AADC.
Конструкции на основе полинуклеотида AADC
[00017]
В соответствии с настоящим изобретением представлены полинуклеотиды AADC. Такие полинуклеотиды содержат полимеры нуклеиновых кислот, которые содержат участок связанных нуклеозидов, кодирующих одну или более изоформ или вариантов белка AADC.
[00018]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит кодон-оптимизированный транскрипт, кодирующий белок AADC.
[00019]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит участок последовательности, кодирующий одну или более изоформ или вариантов белка AADC дикого типа. Такие полинуклеотиды также могут содержать участок последовательности, кодирующей любую одну или более из следующих: 5'-ITR, энхансер цитомегаловируса (CMV), промотор CMV, ie1 экзон 1, ie1 интрон 1, hbBglobin интрон 2, hBglobin экзон 3, 5'-UTR, 3'-UTR, сигнал поли(A) hGH и/или 3'-ITR. Такие участки последовательности раскрыты в настоящем описании или могут представлять собой любые, которые известны из уровня техники.
[00020]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность любой из SEQ ID NO. 2-23.
[00021]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая имеет некоторых процент идентичности с любой из SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% с любой из SEQ ID NO: 2-23. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 80% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 85% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 90% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 95% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 99% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23.
[00022]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1440 нуклеотидов. Такой полинуклеотид AADC может быть кодон-оптимизированным по всему или части полинуклеотида.
[00023]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1443 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида может присутствовать дополнительный кодон.
[00024]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1449 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида могут присутствовать дополнительные кодоны.
[00025]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит любую из SEQ ID NO: 6-9, 17-23, но без 5'- и/или 3'-ITR. Такой полинуклеотид может быть встроен в плазмиду или вектор и использован для экспрессии кодируемого белка AADC.
[00026]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены в клетках насекомых (например, клетках Sf9).
[00027]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены при помощи тройной трансфекции.
[00028]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC может содержать кодон-оптимизированную открытую рамку считывания мРНК AADC, по меньшей мере один 5'-ITR и по меньшей мере один 3'-UTR, где один или более из 5'-ITR могут быть расположены на 5'-конце промоторного участка, а один или более 3'-ITR могут быть расположены на 3'-конце сигнала поли(A). мРНК AADC может содержать промоторный участок, 5'-нетранслируемый участок (UTR), 3'-UTR и сигнал поли(A). Промоторный участок может включать в себя без ограничения энхансерный элемент, промоторный элемент, первый экзонный участок, первый интронный участок, второй интронный участок и второй экзонный участок. В качестве неограничивающего примера энхансерный элемент и промоторный элемент получены из CMV. В качестве другого неограничивающего примера первым экзонным участком является ie1 экзон 1 или его фрагменты, первым интронным участком является ie1 интрон 1 или его фрагменты, вторым интронным участком является hbBglobin интрон 2 или его фрагменты, а вторым экзонным участком является hbBglobin экзон 3 или его фрагменты. В качестве еще одного неограничивающего примера сигнал поли(A) получен из гормона роста человека.
[00029]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC кодируется в плазмиде или векторе, которые могут быть полученными из аденоассоциированного вируса (AAV). ААВ может представлять собой рекомбинантный AAV-вирус и может содержать капсид такого серотипа, как без ограничения AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV2. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAVrh10. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9(hu14). В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9.47. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ8.
Промоторы
[00030]
Nat. Med.
Специалист в данной области техники может понять, что целевая клетка может требовать специфического промотора, включающего, без ограничения, промотор, который является видоспецифическим, индуцируемым, тканеспецифическим или специфическим в отношении фазы клеточного цикла; Parr et al., 3:1145-9 (1997); содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00031]
В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, который считается эффективным для полинуклеотида AADC.
[00032]
В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, эффективный для клетки, подвергающейся целенаправленному воздействию.
[00033]
В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой слабый промотор, который обеспечивает экспрессию полезного груза в течение периода времени в целевых тканях, таких как без ограничения тканях нервной системы. Экспрессия может осуществляться в течение периода длительностью 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часа, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 1 неделя, 8 суток, 9 суток, 10 суток, 11 суток, 12 суток, 13 суток, 2 недели, 15 суток, 16 суток, 17 суток, 18 суток, 19 суток, 20 суток, 3 недели, 22 суток, 23 суток, 24 суток, 25 суток, 26 суток, 27 суток, 28 суток, 29 суток, 30 суток, 31 суток, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 19 месяцев, 20 месяцев, 21 месяц, 22 месяца, 23 месяца, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или более 10 лет. Экспрессия может может осуществляться в течение 1-5 часов, 1-12 часов, 1-2 суток, 1-5 суток, 1-2 недель, 1-3 недель, 1-4 недель, 1-2 месяцев, 1-4 месяцев, 1-6 месяцев, 2-6 месяцев, 3-6 месяцев, 3-9 месяцев, 4-8 месяцев, 6-12 месяцев, 1-2 лет, 1-5 лет, 2-5 лет, 3-6 лет, 3-8 лет, 4-8 лет или 5-10 лет. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой слабый промотор для устойчивой экспрессии полезного груза в нервных тканях. В качестве еще одного неограничивающего примера промотор является слабым промотором для непрерывной экспрессии фратаксина в ткани нервной системы, такой как без ограничения нейронная ткань и глиальная ткань.
[00034]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC применяют промотор FRDA.
[00035]
Long Range Regulation of Human FXN Gene Expression
В соответствии с одним вариантом осуществления имеет место участок, расположенный примерно на ~5 т. о. выше первого экзона полезного груза. В качестве неограничивающего примера имеет место участок из 17 т. о., расположенный примерно на 4,9 т. о. выше первого экзона гена фратаксина, для обеспечения экспрессии с промотором FRDA (см., например, Puspasari et al. , PLOS ONE, 2011; содержание которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00036]
В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой промотор, который имеет длину менее 1 т. о. Промотор может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или боле 800. Промотор может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800.
[00037]
В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой комбинацию двух или более компонентов, таких как, без ограничения, CMV и CBA. Каждый компонент может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или более 800. Каждый компонент может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой комбинацию 382-нуклеотидной энхансерной последовательности CMV и 260-нуклеотидной промоторной последовательности CBA.
[00038]
Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy
В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. , 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Неограничивающие примеры элементов для повышения специфичности трансгена в отношении мишени и усиления экспрессии включают промоторы, эндогенные miRNA, посттранскрипционные регуляторные элементы (PRE), последовательности сигнала полиаденилирования (полиA) и вышележащие энхансеры (USE), энхансеры CMV и интроны.
[00039]
Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy
В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. , 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как промоторы. Промоторы, которые стимулируют экспрессию в большинстве тканей, включают в себя без ограничения промотор 1α-субъединицы фактора элонгации (EF1α) человека, предранний промотор цитомегаловируса (CMV), промотора β-актина курицы (CBA) и его производного CAG, β-глюкуронидазы (GUSB) или убиквитина C (UBC). Для ограничения экспрессии определенными типами клеток можно применять тканеспецифические экспрессионные элементы, такие как, без ограничения, промоторы, специфические в отношении нервной системы, которые можно применять для ограничения экспрессии нейронами, астроцитами или олигодендроцитами. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для нейронов включает промоторы нейрон-специфической енолазы (NSE), фактора роста тромобоцитов (PDGF), B-цепи фактора роста тромбоцитов (PDGF-β), синапсина (Syn), метил-CpG связывающего белка 2 (MeCP2), CaMKII, mGluR2, NFL, NFH, nβ2, PPE, Enk и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для астроцитов включает промоторы глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифического экспрессионного элемента для олигодендроцитов включает промотор основного белка миелина (MBP).
[00040]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять убиквитарный промотор. Неограничивающие примеры убиквитарных промоторов включают CMV, CBA (в том числе производные CAG, CBh и т.д.), EF-1α, PGK, UBC, GUSB (hGBp) и UCOE (промотор HNRPA2B1-CBX3). Yu et al. (Molecular Pain 2011, 7:63; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали экспрессию eGFP под контролем промоторов CAG, EFIα, PGK и UBC в крысиных DRG клетках и первичных DRG клетках с использованием векторов на основе лентивируса, и обнаружили, что UBC показывал более слабую экспрессию, чем 3 другие промотора, и для всех промоторов наблюдали экспрессию только в 10-12% глии. Soderblom et al. (E. Neuro 2015; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) исследовали экспрессию eGFP в AAV8 с промоторами CMV и UBC и AAV2 с промотором CMV после инъекции в двигательную кору. Интраназальное введение плазмиды, содержащей промотор UBC или EFIα, показывало устойчивую экспрессию в дыхательных путях, большую, чем экспрессия с промотором CMV (см., например, Gene Therapy 2001, Vol. 8, 1539-1546; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Husain et al. (Gene Therapy 2009; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали конструкцию HβH с промотором hGUSB, промотором HSV-1LAT и промотором NSE и выяснили, что конструкция HβH показывала более слабую экспрессию в головном мозге мышей, чем NSE. Passini и Wolfe (J. Virol. 2001, 12382-12392, содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали долговременные эффекты вектора HβH после внутрижелудочковой инъекции у новорожденных мышей и выяснили, что присутствует устойчивая экспрессия в течение по меньшей мере 1 года. Низкая экспрессия во всех областях головного мозга была обнаружена Xu et al. (Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) в случае, когда использовали промоторы NF-L и NF-H в сравнении с CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE+wpre, NSE (0,3 т. о.), NSE (1,8 т. о.) и NSE (1,8 т. о.+wpre). Xu et al. выяснили, что активность промоторов убывала в следующем порядке: NSE (1,8 т. о.), EF, NSE (0,3 т. о.), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL и NFH. NFL представляет собой 650-нуклеотидный промотор, и NFH представляет собой 920-нуклеотидный промотор, причем оба из них отсутствуют в печени, но NFH является распространенным в проприоцептивных сенсорных нейронах, головном и спинном мозге, а NFH присутствует в сердце. Scn8a представляет собой 470-нуклеотидный промотор, который экспрессируется везде в DRG, спинном мозге и головном мозге, причем особенно высокая экспрессия наблюдается в нейронах гиппокампа и мозжечковых клетках Пуркинье, коре головного мозга, таламусе и гипоталамусе (см., например, Drews et al. 2007; и Raymond et al. 2004; причем содержание каждой из которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00041]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор UBC. Промотор UBC может иметь размер 300-350 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор UBC имеет размер 332 нуклеотида.
[00042]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор GUSB. Промотор GUSB может иметь размер 350-400 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор GUSB имеет размер 378 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00043]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFL. Промотор NFL может иметь размер 600-700 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFL имеет размер 650 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00044]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFH. Промотор NFH может иметь размер 900-950 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFH имеет размер 920 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарным, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00045]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор scn8a. Промотор scn8a может иметь размер 450-500 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор scn8a имеет размер 470 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00046]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор FXN.
[00047]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор PGK.
[00048]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CBA.
[00049]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CMV.
[00050]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор печени или скелетных мышц. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении печени, включают hAAT и TBG. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении скелетных мышц, включают десминовый промотор, MCK и C5-12.
[00051]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять энхансерный элемент, промотор и/или 5'-UTR интрон. Энхансер может представлять собой, без ограничения, энхансер CMV, промотор может представлять собой, без ограничения, промотор CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, синапсина, MeCP2 и GFAP, и 5'UTR/интрон может представлять собой, без ограничения, SV40 и CBA-MVM. В качестве неограничивающего примера, энхансер, промотор и/или интрон, применяемые в комбинации, могут представлять собой: (1) энхансер CMV, промотор CMV, интрон 5'UTR SV40; (2) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR SV 40; (3) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR CBA-MVM; (4) промотор UBC; (5) промотор GUSB; (6) промотор NSE; (7) промотор синапсина; (8) промотор MeCP2 и (9) промотор GFAP.
[00052]
В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять сконструированный промотор.
Интроны
[00053]
Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy
В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. , 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как интрон. Неограничивающие примеры интронов включают MVM (67-97 п.о.), F.IX усеченный интрон 1 (300 п.о.), SD β-глобина /акцепторный сайт сплайсинга тяжелой цепи иммуноглобулина (250 п.о.), донорный сайт сплайсинга аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга иммуноглобулина (500 п.о.), донорный сайт сплайсинга/акцепторный сайт сплайсинга поздних генов SV40 (19S/16S) (180 п.о.) и донорный сайт сплайсинга гибридного аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга IgG (230 п.о.).
[00054]
В соответствии с одним вариантом осуществления интрон может иметь длину 100-500 нуклеотидов. Интрон может иметь длину 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 или 500. Интрон может иметь длину в диапазоне 80-100, 80-120, 80-140, 80-160, 80-180, 80-200, 80-250, 80-300, 80-350, 80-400, 80-450, 80-500, 200-300, 200-400, 200-500, 300-400, 300-500 или 400-500.
Введение в клетки
[00055]
Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно встраивать в клетки-хозяева с помощью любого из множества подходов. Можно осуществить заражение вирусным вектором, содержащим полинуклеотид AADC. Примеры подходящих вирусных векторов включают векторы на основе ретровируса с дефектной репликацией, векторы на основе аденовируса, векторы на основе аденоассоциированного вируса и векторы на основе лентивируса.
[00056]
В соответствии с настоящим изобретением вирусные векторы для применения при лечении и/или диагностике представляют собой вирус, который был очищен или сокращен до минимальных компонентов, необходимых для трансдукции переносимого или полезного груза представляющей интерес нуклеиновой кислоты.
[00057]
Таким образом, вирусные векторы конструируют в качестве средств для специфической доставки при отсутствии вредных признаков репликации и/или интеграции, обнаруживаемых у вируса дикого типа.
[00058]
В контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы, такой как полинуклеотиды согласно настоящему изобретению. «Вирусный вектор» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих представляющую интерес молекулу полезного груза, например, трансген, полинуклеотид, кодирующий полипептид или несколько полипептидов. Вирусные векторы согласно настоящему изобретению могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Серотипы, которые могут быть пригодны согласно настоящему изобретению, включают любые из берущих начало от AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8.
[00059]
В соответствии с одним вариантом осуществления серотип, который может быть пригодным в настоящем изобретении, может представлять собой AAV-DJ8. Аминокислотная последовательность AAV-DJ8 может содержать две или более мутации с целью удаления гепарин-связывающего домена (HBD). В качестве неограничивающего примера последовательность AAV-DJ, описанная как SEQ ID NO: 1 в патенте США № 7588772, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки, могут содержать две мутации: (1) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (2) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr). В качестве другого неограничивающего примера может содержать три мутации: (1) K406R, где лизин (K; lys) в положении аминокислоты 406 заменен на аргинин (R; arg), (2) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (3) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr).
[00060]
AAV-векторы также могут содержать векторы на основе самокомплементарного AAV (scAAV). Векторы на основе scAAV содержат обе цепи ДНК, которые комплементарно соединены вместе с образованием двухцепочечной ДНК. За счет пропуска синтеза второй цепи scAAV обеспечивают возможность быстрой экспрессии в клетке.
Фармацевтические композиции
[00061]
например,
Несмотря на то, что описания фармацевтических композиций, например, таких полинуклеотидов (включая кодирующие плазмиды или векторы экспрессии, такие как вирусы, например, AAV), которые содержат подлежащий доставке полезный груз, например, последовательности, кодирующие AADC, преимущественно направлены на фармацевтические композиции, которые являются подходящими для введения людям, причем специалисту в данной области техники будет понятно, что такие композиции обычно являются подходящими для введения любому другому животному, например, животным, отличным от человека, млекопитающим, отличным от человека. Модификация фармацевтических композиций, подходящих для введения людям, для того, чтобы сделать композиции подходящими для введения различным животным, является хорошо понятной, и средний специалист в области ветеринарной фармакологии может разработать и/или выполнить такую модификацию с использованием только стандартного экспериментирования, если оно вообще будет необходимо. Субъекты, для которых предполагается введение фармацевтических композиций, включают, без ограничения, людей и/или других приматов; млекопитающих, в том числе коммерчески значимых млекопитающих, таких как крупный рогатый скот, свиньи, лошади, овцы, кошки, собаки, мыши и/или крысы; и/или птиц, в том числе коммерчески значимых птиц, таких как домашняя птица, куры, утки, гуси и/или индейки.
[00062]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции вводят людям, пациентам-людям или субъектам-людям. В контексте настоящего раскрытия фраза «активный ингредиент» обычно относится либо к вирусному вектору, несущему полезный груз, либо к полинуклеотидной молекуле полезного груза, доставляемой вирусным вектором, который описан в настоящем документе.
[00063]
Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию обеспечения объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами, а затем, если необходимо и/или желательно, разделение, придание формы и/или упаковку продукта в предпочтительную единицу с однократной дозой или единицу с несколькими дозами.
[00064]
Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением будут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию.
[00065]
В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическая композиция содержит вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащего капсид AAV и AAV-векторный геном. AAV-векторный геном может содержать по меньшей мере один описанный в настоящем документе полинуклеотид AADC, такой как без ограничения SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23, или варианты, обладающие по меньшей мере 95% идентичности с ним. В число векторов на основе рекомбинантного AAV в фармацевтической композиции могут входить по меньшей мере 70%, которые содержат AAV-векторный геном.
Состав
[00066]
Полинуклеотиды AADC или кодирующие их вирусные векторы можно составить с применением одного или более вспомогательных веществ для (1) повышения стабильности; (2) повышения уровня трансфекции или трансдукции клеток; (3) обеспечения возможности длительного или замедленного высвобождения или (4) изменения биораспределения (например, целенаправленного воздействия вирусного вектора на конкретные ткани или типы клеток).
[00067]
Составы согласно настоящему изобретению могут включать, без ограничения, солевой раствор, липидоиды, липосомы, липидные наночастицы, полимеры, липоплексы, наночастицы по типу ядро-оболочка, пептиды, белки, клетки, трансфицированные вирусными векторами (например, для трансплантации субъекту), средства, имитирующие наночастицы, и их комбинации. Кроме того, вирусные векторы согласно настоящему изобретению можно составить с применением самособирающихся наночастиц нуклеиновой кислоты.
[00068]
Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами.
[00069]
Фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим раскрытием можно получить, упаковать и/или реализовать нерасфасованной, в виде единичной стандартной дозы и/или в виде нескольких единичных стандартных доз. В контексте настоящего описания «стандартная доза» относится к дискретному количеству, фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента обычно равно дозе активного ингредиента, которую можно вводить субъекту, и/или подходящей части такой дозы, такой как, например, половина или треть такой дозы.
[00070]
Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием могут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию. Например, композиция может содержать от 0,1% до 99% (вес/вес) активного ингредиента. В качестве примера, композиция может содержать от 0,1% до 100%, например, от 0,5 до 50%, 1-30%, 5-80%, по меньшей мере 80% (вес/вес) активного ингредиента.
[00071]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления описанные в настоящем документе составы могут содержать по меньшей мере одну молекулу полезного груза, например, полинуклеотид AADC. В качестве неограничивающего примера составы могут содержать 1, 2, 3, 4 или 5 молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC.
[00072]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может иметь чистоту по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100%. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество одобрено для применения у людей и для применения в ветеринарии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может быть одобрено Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может иметь фармацевтическую степень чистоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может отвечать стандартам Фармакопеи США (USP), Европейской фармакопеи (EP), Британской фармакопеи и/или Международной фармакопеи.
[00073]
st
Вспомогательные вещества, которые в контексте данного описания включают, без ограничения, любые и все растворители, дисперсионные среды, разбавители или другие жидкие среды, вспомогательные средства для диспергирования или суспендирования, поверхностно-активные средства, средства для обеспечения изотоничности, загущающие или эмульгирующие средства, консерванты и т.п., которые подходят для конкретной необходимой лекарственной формы. Различные вспомогательные вещества для составления фармацевтических композиций и методики получения композиции известны из уровня техники (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включенную в данный документ в своей полноте посредством ссылки). Применение традиционной среды для лекарственного средства может предполагаться в объеме настоящего раскрытия, за исключением того случая, когда какая-либо традиционная среда для лекарственного средства может быть несовместима с веществом или его производными, как например, являясь причиной какого-либо нежелательного биологического эффекта или иным образом пагубно взаимодействуя с любым другим компонентом(компонентами) фармацевтической композиции.
[00074]
и т.д.
Иллюстративные разбавители включают, без ограничения, карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат кальция, фосфат дикальция, сульфат кальция, гидрофосфат кальция, фосфат натрия, лактозу, сахарозу, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, сорбит, инозит, хлорид натрия, сухой крахмал, кукурузный крахмал, сахарную пудру и/или их комбинации.
[00075]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC перед введением можно составить в гидрогеле. Гидрогели имеют степень пластичности, которая схожа с пластичностью естественной ткани по причине значительного содержания в них воды.
[00076]
В соответствии с другим вариантом осуществления гидрогель можно вводить субъекту до введения состава с полинуклеотидом AADC. В качестве неограничивающего примера место введения гидрогеля может находиться в пределах 3 дюймов (например, в пределах 2,9, 2,8, 2,7, 2,6, 2,5, 2,4, 2,3, 2,2, 2,1, 2,0, 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1,0, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 или менее 0,1 дюйма) от места введения состава с полинуклеотидом AADC.
[00077]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC можно вводить в физиологическом растворе. В качестве неограничивающего примера состав может представлять собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) с 0,001% плюрониловой кислоты (F-68). Кроме того, состав может быть стерилизованным.
Неактивные компоненты
[00078]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления составы с полинуклеотидом AADC могут содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое является неактивным ингредиентом. В контексте настоящего описания термин «неактивный ингредиент» относится к одному или более неактивным средствам, включенным в составы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления все, ни один или некоторые из неактивных ингредиентов, которые можно применять в составах согласно настоящему изобретению, могут быть одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).
[00079]
Составы с вирусными векторами, несущими раскрытые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, могут включать в себя катионы или анионы. В соответствии с одним вариантом осуществления составы включают катионы металлов, такие как, без ограничения, Zn2+, Ca2+, Cu2+, Mg+ и их комбинации. В качестве неограничивающего примера составы могут включать в себя полимеры и полинуклеотиды AADC в комплексе с катионом металла (см., например, патент США № 6265389 и № 6555525, каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки).
Введение
[00080]
Вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить любым путем, который приведет к терапевтически эффективному результату. Они включают без ограничения эпидуральный (в твердую мозговую оболочку), пероральный (через ротовую полость), трансдермальный, перидуральный, внутримозговой (в головной мозг), интрацеребровентрикулярный (в желудочки мозга), подкожный (под кожу), назальное введение (через нос), внутривенный (в вену), внутривенное струйное введение, внутривенное капельное введение, внутриартериальный (в артерию), интратекальный (в спинномозговой канал), эндоцервикальный, интракаудальный (в область конского хвоста спинного мозга), интрацистернальный (в мостомозжечковую цистерну), внутридисковый (в диск), интрадуральный (внутрь или под твердую мозговую оболочку), межоболочечный (в мозговые оболочки), внутриплевральный (в плевру), интраспинальный (в позвоночный столб), интратекальный (в спинномозговую жидкость на любом уровне цереброспинальной оси), внутригрудной (в грудную клетку), интрастриарный (в стриатум, хвостатое ядро и/или скорлупу), спинномозговую блокаду, блокаду нервов или спинальный. В соответствии с конкретными вариантами осуществления композиции можно вводить таким образом, который позволяет им преодолевать гематоэнцефалический барьер, сосудистый барьер или другой эпителиальный барьер. В соответствии с одним вариантом осуществления состав для некоторого пути введения может включать по меньшей мере один неактивный компонент.
[00081]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить в скорлупу правого полушария и/или скорлупу левого полушария. Введение можно осуществлять в одном или более местах скорлупы, как например, без ограничения в 2 местах, 3 местах, 4 местах или более чем в 4 местах. В качестве неограничивающего примера вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, доставляют в 2 места скорлупы левого полушария и 2 места скорлупы правого полушария.
[00082]
В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват скорлупы субъекта (например, скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-40%, 20-30%, 20-35%, 20-50%, 30-40%, 35-40%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.
[00083]
В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват задней части скорлупы субъекта (например, задней части скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охват площади поверхности задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.
[00084]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, безопасно доставляемые в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий, или, в качестве альтернативы, интрастриарно (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро(STN).
[00085]
В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить путем остроконечного двустороннего размещения катетеров в каждой скорлупе. При размещении можно применять известные из уровня техники или описанные в настоящем документе стереотаксические нейрохирургические методики с контролем по магнитно-резонансной томограмме (MRI). Кроме того, в составе можно применять контраст, такой как без ограничения гадолиниевый контраст (например, PROHANCE), для отслеживания и подтверждения распространения состава.
[00086]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, в двусторонней стереотаксической пошаговой CED-инфузии в скорлупу (например, посткомиссуральную часть скорлупы).
[00087]
В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) предусматривает скорость доставки, определяемую выражением [вг/час=мл/ч * вг/мл], где вг представляет собой количество вирусных геномов, вг/мл представляет собой концентрацию композиции, и мл/час представляет собой скорость пролонгированной инфузии.
[00088]
В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию до 1 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025, 0,030, 0,040, 0,050, 0,060, 0,070, 0,080, 0,090, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 мл.
[00089]
В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию, составляющую от приблизительно 1 мл до приблизительно 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,1, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 10 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 10 мл.
[00090]
В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл.
[00091]
В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в участок обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 1800 мкл.
[00092]
В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в скорлупу обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 450 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 100 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 300 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 450 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 1800 мкл.
[00093]
В соответствии с одним вариантом осуществления общий объем, доставляемый субъекту, можно разделить между одним или более местами введения, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более 5 местами. В качестве неограничивающего примера общий объем разделяют между введением в скорлупу левого и правого полушария. В качестве еще одного неограничивающего примера общий объем разделяют между двумя местами введения в скорлупу каждого из левого и правого полушария.
[00094]
В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическую композицию с вирусным вектором вводят с помощью иглы с несколькими отверстиями. Неограничивающие примеры игл с несколькими отверстиями описаны в патентах США №№ 8333734, 7135010, 7575572, 7699852, 4411657, 6890319, 6613026, 6726659, 6565572, 6520949, 6382212, 5848996, 5759179, 5 674267, 5588960, 5484401, 5199441, 5012818, 4474569, 3766907, 3552394, причем содержание каждого из них включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
[00095]
В соответствии с одним вариантом осуществления композиция содержит описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, и полинуклеотиды AADC являются компонентами AAV-вирусного генома, упакованного в вирусную частицу AAV. Процентное (%) соотношение вирусных частиц AAV, содержащих полинуклеотид AADC (также называемых в настоящем документе AADC-частицами) к вирусным частицам AAV без полинуклеотида AADC (также называемым в настоящем документе пустыми капсидами) в композиции может составлять 0:100, 1:99, 0:90, 15:85, 25:75, 30:70, 50:50, 70:30, 85:15, 90:10, 99:1 или 100:0. В качестве неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 50:50. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 70:30. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 85:15. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 100:0.
[00096]
В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит по меньшей мере 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более 99% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 50% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 52% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 58% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 70% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 83% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 85% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит 100% AADC-частиц.
[00097]
В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50 -100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80 -85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-100% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-60% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-90% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-95% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-85% AADC-частиц.
[00098]
В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит менее 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 50% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 45% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 40% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 35% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 30% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 25% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 20% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 15% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 10% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 5% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 1% пустых частиц.
[00099]
Описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-40% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-50% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-60% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-70% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-80% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-90% пустых частиц.
[000100]
В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить субъекту, который также проходит терапию леводопой. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть положительная реакция на терапию леводопой, и уменьшается по меньшей мере один симптом PD. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD остаются стабильными. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть отрицательная реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD усиливаются.
[000101]
В соответствии с одним вариантом осуществления доза леводопы, вводимая субъекту до введения полинуклеотидов AADC, составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более 25 мг/кг. В качестве неограничивающего примера доза составляет 3 мг/кг. В качестве другого неограничивающего примера доза составляет 10 мг/кг. В качестве еще одного неограничивающего примера доза составляет 20 мг/кг. Реакцию субъекта (например, поведенческую реакцию) на леводопу можно оценить до введения полинуклеотидов AADC. Кроме того, субъекту можно снова вводить леводопу после введения полинуклеотидов AADC (например, через 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год или более 1 года после введения полинуклеотидов AADC). Для определения влияний полинуклеотидов AADC, можно повторно оценить поведенческую реакцию и сравнить ее с первоначальной реакцией. Субъект может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% улучшение поведенческой реакции.
[000102]
В соответствии с одним вариантом осуществления леводопу можно вводить многократно после введения полинуклеотидов AADC. Леводопу можно вводить по повторяющейся схеме (например, каждые 5 дней, еженедельно, каждые 10 дней, каждые 15 дней, каждые 30 дней, ежемесячно, раз в два месяца, каждые 3 месяца, каждые 4 месяца, каждые 5 месяцев, каждые 6 месяцев, каждые 7 месяцев, каждые 8 месяцев, каждые 9 месяцев, каждые 10 месяцев, каждые 11 месяцев или раз в год) или по мере возникновения симптомов. В качестве неограничивающего примера через 3 года после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 6 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 9 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC.
[000103]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, имеет задокументированную реакцию на терапию леводопой, но имеет рефракторные с медицинской точки зрения флуктуации и считается потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство. Решение, является ли субъект потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство, может принимать врач, осуществляющий лечение субъекта от PD, или врач, назначающий введение полинуклеотидов AADC, который принимает во внимание соотношения общий риск к пользе для пациента в отношении хирургического вмешательства, необходимого для доставки полинуклеотидов AADC.
[000104]
В соответствии с одним вариантом осуществления соотношение объема распределения в паренхиме поля у субъекта к инфузионному объему поля у субъекта может составлять 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0 или более 6,0. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 1,6 в хвостатом ядре. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 3,1 в скорлупе. В качестве неограничивающего примера распределение полинуклеотидов AADC в скорлупе может в 2-3 раза превышать вводимый инфузией объем.
Дозировка
[000105]
например
Настоящее изобретение относится к способам, предусматривающим введение вирусных векторов и их полезного груза в виде полинуклеотидов AADC или комплексов в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в том субъекту. Фармацевтические, визуализирующие, диагностические или профилактические композиции с вирусными векторами могут быть введены субъекту в любом количестве и любым путем введения, эффективным для предупреждения, лечения, диагностики или визуализации заболевания, нарушения и/или состояния (, заболевания, нарушения и/или состояния, связанного с нарушением кратковременной памяти). Точное необходимое количество будет варьировать от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния субъекта, тяжести заболевания, конкретной композиции, способа ее введения, механизма ее действия и т.п. Композиции согласно настоящему изобретению, как правило, составляют в единичной лекарственной форме для облегчения введения и равномерности дозировки. Тем не менее, будет понятно, что общее суточное потребление композиций согласно настоящему изобретению может определяться лечащим врачом по результатам тщательной клинической оценки. Конкретный терапевтически эффективный, профилактически эффективный или соответствующий для визуализации уровень дозы для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе от нарушения, подлежащего лечению, и тяжести нарушения; активности конкретного используемого соединения; конкретной используемой композиции; возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и рациона пациента; времени введения, пути введения, а также скорости выведения из организма используемого полезного груза в виде конкретных полинуклеотидов; длительности лечения; лекарственных средств, применяемых в комбинации или совместно с конкретным используемым соединением; и подобных факторов, хорошо известных в области медицины.
[000106]
например
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтические композиции c вирусными векторами согласно настоящему изобретению можно вводить с уровнями дозировки полинуклеотида AADC, достаточными для доставки от приблизительно 0,0001 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,005 до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,005 мг/кг, от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 0,5 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 0,1 до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта в день, один или более раз в день, для получения желаемого терапевтического, диагностического, профилактического или визуального эффекта. Необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставлять три раза в день, два раза в день, один раз в день или в за период 24 часа дозировку можно доставлять один, два, три или более трех раз. В соответствии с определенными вариантами осуществления необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставить с помощью нескольких введений (, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати или большего числа введений). Если используют несколько введений, можно применять режимы дозирования с разделением дозы, такие как описанные в данном документе. В контексте настоящего описания «раздельная доза» относится к разделению единичной стандартной дозы или общей дозы на две или более доз, например, два или более введений единичной стандартной дозы. В контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства на основе полинуклеотида, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы. В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, вводят субъекту раздельными дозами. Их можно составить только в буфере или в составе, описанном в данном документе.
[000107]
6
16
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
9
9
9
9
9
9
9
9
9
10
10
10
10
10
10
10
10
10
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
13
13
13
13
13
13
13
13
13
14
14
14
14
14
14
14
14
14
15
15
15
15
15
15
15
15
15
16
13
12
12
12
11
12
12
12
12
В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию от приблизительно 1×10 вг/мл до приблизительно 1×10 вг/мл. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 1.8×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 5.5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 0.8×10, 0.83×10, 1×10, 1,1×10, 1,2×10, 1,3×10, 1,4×10, 1,5×10, 1,6×10, 1,7×10, 1,8×10, 1,9×10, 2×10, 2,1×10, 2,2×10, 2,3×10, 2,4×10, 2,5×10, 2,6×10, 2,7×10, 2,8×10, 2,9×10, 3×10, 3,1×10, 3,2×10, 3,3×10, 3,4×10, 3,5×10, 3,6×10, 3,7×10, 3,8×10, 3,9×10, 4×10, 4,1×10, 4,2×10, 4,3×10, 4,4×10, 4,5×10, 4,6×10, 4,7×10, 4,8×10, 4,9×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10 или 1×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,1×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3,7×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,6×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,9×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,8×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,83×10 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет максимальную итоговую дозу, которая может содержаться в ампуле.
[000108]
6
16
6
6
6
6
6
6
6
6
6
7
7
7
7
7
7
7
7
7
8
8
8
8
8
8
8
8
8
9
9
9
9
9
9
9
9
9
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
13
13
13
13
13
13
13
13
13
14
14
14
14
14
14
14
14
14
15
15
15
15
15
15
15
15
15
16
13
12
11
11
11
11
11
12
12
12
12
В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию на субъекта от приблизительно 1×10 VG до приблизительно 1×10 вг. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 1.5×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 1,3×10, 2×10, 2,1×10, 2,2×10, 2,3×10, 2,4×10, 2,5×10, 2,6×10, 2,7×10, 2,8×10, 2,9×10, 3×10, 4×10, 5×10, 5,4×10, 6×10, 7×10, 7,1×10, 7,2×10, 7,3×10, 7,4×10, 7,5×10, 7,6×10, 7,7×10, 7,8×10, 7,9×10, 8×10, 9×10, 9,4×10, 1×10, 1,1 x10, 1,2×10, 1,3×10, 1,4×10, 1,5×10, 1,6×10, 1,7×10, 1,8×10, 1,9×10, 2×10, 2,3×10, 2,4×10, 3×10, 4×10, 4,1×10, 4,2×10, 4,3×10, 4,4×10, 4,5×10,4,6×10, 4,7×10, 4,8×10, 4,9×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 8,1×10, 8,2×10, 8,3×10, 8,4×10, 8,5×10, 8,6×10, 8,7×10, 8,8 x10, 8,9×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10, 1×10, 2×10, 3×10, 4×10, 5×10, 6×10, 7×10, 8×10, 9×10 или 1×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×10 вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 3×10 вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 9×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,2×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,5×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,4×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,8×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8,8×10 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×10 вг/субъект.
[000109]
В соответствии с одним вариантом осуществления эффективность дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью различных способов, описываемых в настоящем документе, таких как без ограничения PET-визуализация, тест с нагрузкой L-DOPA (например, см. Forsayeth et al. 2006, Mol. Ther. 14(4): 571-577), оценки по шкале UPDRS и журналы пациентов. В качестве неограничивающего примера у субъекта после введения композиции с полинуклеотидом AADC может быть сниженная дискинезия или периоды сниженной дискинезии. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть снижение симптомов, связанных с болезнью Паркинсона, в том числе ограниченной подвижности и дискинезии. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может наблюдаться улучшению показателей периода «выключения» и двигательных флуктуаций. Улучшение может составлять по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более 90%. Улучшение может продолжаться в течение нескольких минут (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или более 55), часов (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или более 24), дней (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более 7), недель (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более 7), месяцев (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или более 11) или лет (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более 9).
[000110]
В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью визуализации периваскулярных пространств (PVS), которые также известны как пространства Вирхова-Робина. PVS окружают артериолы и венулы, по мере их проникновения в паренхиму мозга, и они заполнены спинномозговой жидкостью (CSF)/интерстициальной жидкостью. PVS распространены в среднем мозге, BG и полуовальном центре. Без привязки к теории, PVS могут играть некоторую роль в нормальном выведении метаболитов, и была установлена их ассоциация с ухудшением когнитивных функций и некоторыми болезненными состояниями, в том числе с болезнью Паркинсона. Обычно PVS имеют нормальный размер, но они могут увеличиваться в размере при ряде болезненных состояний. Potter et al. (Cerebrovasc Dis. 2015 Jan; 39(4): 224-231; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) разработали способ ранжирования, при этом они исследовали весь спектр PVS и ранжировали PVS базальных ганглиев, полуовального центра и среднего мозга. Они использовали частоту и диапазон PVS, которые были использованы в работе Mac и Lullich et al. (J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2004 Nov;75(11):1519-23; содержание которой включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) и Potter et al. разделили PVS базальных ганглиев и полуовального центра на 5 рангов: 0 (отсутствуют), 1 (1-10), 2 (11-20), 3 (21-40) и 4 (>40); и PVS среднего мозга на 2 ранга: 0 (не видимы) или 1 (видимы). Руководство пользователя для системы ранжирования по Potter et al. можно найти по следующей ссылке: www.sbirc.ed.ac.uk/documents/epvs-rating-scale-user-guide.pdf.
[000111]
18
18
В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с путем измерения с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PET) нейровизуализационных биомаркеров, таких как без ограничения [F]FDOPA. Нейровизуализационные биомаркеры, такие как [F]FDOPA, можно применять для идентификации пораженных индивидуумов и/или можно применять для выявления нигростриального поражения до начала клинических проявлений. Кроме того, PET-критерии можно применять для категоризации субъектов по функциональности их нигростриальных нейронов (например, аномальной, нормальной или неопределенной функциональности нигростриальных нейронов) (Rachette et al. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2006 Apr 5; 141B(3): 245-249; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки).
[000112]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, может иметь прогрессирующую PD и все еще отвечать на терапию леводопой, но субъект также испытывает рефрактерные с медицинской точки зрения двигательные осложнения (например, серьезные двигательные флуктуации и/или дискинезии, возникающие во время терапии леводопой и другой дофаминергической терапии, несмотря на корректировки и оптимизацию лечения лекарственными препаратами). Субъект может быть достаточно здоров для прохождения нейрохирургической процедуры, которая может быть определена способами, известными из уровня техники. В качестве неограничивающего примера субъект может соответствовать критериям отбора для глубокой стимуляции головного мозга (DBS). Субъект может иметь идиопатическую PD, быть в возрасте моложе 69 лет, иметь выраженные реакции на леводопу, иметь рефракторные к лечению лекарственными препаратами симптомы (например, двигательную флуктуацию и/или дискинезию) и/или иметь незначительную когнитивную дисфункцию или вообще ее не иметь.
[000113]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, также может страдать от деменции или когнитивного нарушения.
[000114]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог быть ранее подвергнут лечению с помощью такого же или схожего терапевтического средства. В соответствии с другим вариантом осуществления субъект мог быть подвергнут лечению с помощью терапевтического средства, для которого было показано уменьшение симптомов болезни Паркинсона.
[000115]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог не получить надлежащий полезный эффект от стандартной лекарственной терапии. В качестве неограничивающего примера субъект мог не отвечать на лечение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть остаточное нарушение функций, несмотря на лечение.
[000116]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, можно подвергать тестированию для оценки уровней нейромедиаторных аналитов для определения эффективности дозы. В качестве неограничивающего примера можно проанализировать нейромедиаторы CSF, активность AADC в плазме и/или VLA в моче.
[000117]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемого в настоящем документе полинуклеотида AADC, можно записывать на видео или аудио для отслеживания прогресса у субъекта в ходе курса лечения.
Комбинации
[000118]
Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC, можно применять в комбинации с одним или более другими терапевтическими, профилактическими, диагностическими или визуализирующими средствами. Под выражением «в сочетании с» не подразумевается, что средства нужно вводить одновременно и/или составлять для совместной доставки, хотя эти способы доставки находятся в пределах объема настоящего раскрытия. Композиции можно вводить одновременно с одним или более другими необходимыми терапевтическими средствами или медицинскими процедурами, до или после них. В целом, каждое средство будут вводить в дозе и/или по временному графику, определенным для каждого средства. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие охватывает доставку фармацевтических, профилактических, диагностических или визуализирующих композиций в комбинации со средствами, которые могут повысить их биодоступность, снизить и/или модифицировать их метаболизм, подавить их выведение из организма и/или модифицировать их распределение в организме.
Доставка
[000119]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP1857552, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000120]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки белков с использованием векторов на основе AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP2678433, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000121]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки молекул ДНК с использованием векторов на основе AAV, описанных в патенте США № US 5858351, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000122]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки ДНК в кровоток, описанных в патенте США № US 6211163, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000123]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в патенте США № US 6325998, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000124]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в центральную нервную систему, описанных в патенте США № US 7588757, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000125]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза, описанных в патенте США № US 8283151, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000126]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза с использованием вектора для доставки глутаматдекарбоксилазы (GAD), описанных в Международной патентной публикации № WO2001089583, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000127]
В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в нервные клетки, описанных в международной патентной публикации № WO2012057363, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000128]
Фармацевтические композиции с описанными в данном документе вирусными векторами могут быть охарактеризованы с помощью одного или более из биодоступности, терапевтического окна и/или объема распределения.
Биодоступность
[000129]
max
Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении в композиции со средствами для доставки/составления или средами, которые описаны в настоящем документе, могут иметь повышенную биодоступность по сравнению с композициями без средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «биодоступность» относится к системной доступности заданного количества определенного средства, вводимого субъекту. Биодоступность может быть оценена путем измерения площади под кривой (AUC) или максимальной концентрации в сыворотке или плазме (C) неизмененной формы соединения после введения соединения млекопитающему. AUC представляет собой определение площади под кривой, графически представляющей концентрацию соединения в сыворотке или плазме по оси ординат (оси Y) в зависимости от времени по оси абсцисс (оси X). Как правило, AUC для определенного соединения может быть рассчитана при помощи способов, известных специалистам в данной области техники и описанных в G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996, содержание которой включено в данный документ при помощи ссылке во всей своей полноте.
[000130]
max
max
max
min
Значения C представляют собой максимальные концентрации соединений, достигаемые в сыворотке или плазме субъекта после введения соединений субъекту. Значения C определенных соединений могут быть измерены при помощи способов, известных специалистам в данной области техники. В контексте настоящего описания выражения «повышение биодоступности» или «улучшение фармакокинетики» относятся к действиям, которые могут повышать системную доступность вирусного вектора согласно настоящему изобретению (по результатам измерения по AUC, C или C) у субъекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие действия могут предусматривать совместное введение с одним или более средствами для доставки, которые описаны в данном документе. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биодоступность вирусных векторов может повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.
Терапевтическое окно
[000131]
Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться увеличением терапевтического окна введения соединения и/или композиции по сравнению с терапевтическим окном вирусных векторов, вводимых без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «терапевтическое окно» относится к диапазону концентраций в плазме или диапазону уровней терапевтически активного вещества в месте действия с высокой вероятностью получения терапевтического эффекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтические окна вирусных векторов при введении в составе могут повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.
Объем распределения
[000132]
распр.
распр.
распр.
распр.
Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться улучшенным объемом распределения (V), например, сниженным или направленным, относительно составов без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. V относится к количеству средства в организме по отношению к концентрации того же самого средства в крови или плазме. В контексте настоящего описания термин «объем распределения» относится к объему жидкости, которое потребовалось бы для содержания всего количества средства в организме в такой же концентрации, что и в крови и в плазме: V равняется количеству средства в организме/концентрации средства в крови или плазме. Например, для дозы 10 мг заданного средства и концентрации в плазме 10 мг/л объем распределения составил бы 1 литр. Объем распределения отражает степень, в которой средство присутствует во внесосудистой ткани. Большие объемы распределения отражают тенденцию средств связываться с тканевыми компонентами, а не с белками плазмы. В клинических условиях V может быть использован для определения нагрузочных доз для достижения концентраций в равновесном состоянии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления объемы распределения композиций с вирусными векторами по настоящему изобретению при совместном введении с одним или более средствами доставки, которые описаны в данном документе, могут снижатьсяпо меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%.
Наборы и устройства
[000133]
Настоящее изобретение предлагает ряд наборов для удобного и/или эффективного осуществления способов по настоящему изобретению. Как правило, наборы будут содержать достаточные количества и/или числа компонентов, с тем чтобы позволить пользователю осуществить несколько процедур обработки субъекта(субъектов) и/или провести несколько экспериментов.
[000134]
В состав набора можно включить любой из векторов AADC, конструкций AADC, полинуклеотидов AADC или полипептидов AADC согласно настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут дополнительно включать реагенты и/или инструкции для получения и/или синтеза соединений и/или композиций по настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут включать один или более буферов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы по настоящему изобретению могут включать компоненты для получения массивов или библиотек белков или нуклеиновых кислот и, таким образом, могут включать, например, твердые подложки.
[000135]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть упакованы либо в водных средах, либо в лиофилизированной форме. Емкость в наборе обычно будет включать по меньшей мере одну ампулу, пробирку, колбу, бутылку, шприц или другую емкость, в которую можно поместить компонент и предпочтительно в виде соответствующей аликвоты. В случае, если в наборе присутствует более одного компонента (метящий реагент и метка могут быть упакованы вместе), наборы, как правило, также могут содержать вторые, третьи или другие дополнительные емкости, в которые могут быть отдельно помещены дополнительные компоненты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут содержать вторую емкость для хранения стерильных фармацевтически приемлемых буферов и/или других разбавителей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления в одной или более ампулах могут содержаться различные комбинации компонентов. Наборы по настоящему изобретению также обычно могут включать средства хранения соединений и/или композиций по настоящему изобретению, например, емкости для белков, нуклеиновых кислот и любых других реагентов исключительно для коммерческой продажи. Такие емкости могут включать емкости для инъекций или пластиковые емкости, полученные методом выдувания, в которых хранятся необходимые ампулы.
[000136]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов представлены в одном и/или более жидких растворах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления жидкими растворами являются водные растворы, при этом стерильные водные растворы являются особенно предпочтительными. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть представлены в виде сухого(сухих) порошка(порошков). Если реагенты и/или компоненты представлены в виде сухих порошков, то такие сухие порошки могут быть разведены при добавлении подходящих объемов растворителя. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что растворители также могут быть представлены в другой емкости. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления метящие красители представлены в виде сухих порошков. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 микрограмм или по меньшей мере или по большей мере эти количества сухого красителя представлены в наборах по настоящему изобретению. В соответствии с такими вариантами осуществления краситель может также быть ресуспендирован в любом подходящем растворителе, таком как DMSO.
[000137]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут включать инструкции для использования компонентов наборов, а также применения любого другого реагента, не включенного в набор. Инструкции могут включать вариации, которые могут быть осуществляться.
Устройства
[000138]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения AADC и/или композиции AADC согласно настоящему изобретению можно объединять в комбинации с устройством, нанести на него или поместить в него. Устройства могут включать без ограничения стенты, помпы и/или другое имплантируемое терапевтическое устройство. Кроме того, соединения AADC и/или композиции AADC можно доставлять субъекту при использовании субъектом компрессионного устройства, такое как без ограничения компрессионное устройство для уменьшения вероятности тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта.
[000139]
Настоящее изобретение относится к устройствам, которые могут содержать вирусные векторы, которые кодируют одну или более молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC. Эти изделия содержат в стабильном составе вирусные векторы, которые могут быть незамедлительно доставлены нуждающемуся в том субъекту, такому как пациент-человек.
[000140]
Устройства для введения можно использовать для доставки вирусных векторов, содержащих полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, согласно режиму однократного, множественного или разделенного дозирования, который раскрыт в настоящем документе.
[000141]
Предусмотрены способы и устройства, известные в данной области техники для многократного введения в клетки, органы и ткани для применения в сочетании со способами и композициями, раскрытыми в данном документе в виде вариантов осуществления настоящего изобретения. В их число входят, например, такие способы и устройства, в которых предусмотрено использование нескольких игл, гибридные устройства с использованием, например, полостей или катетеров, а также устройства с использованием механизмов, работающих от источников тепла, электрического тока или излучения.
[000142]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение АADC и/или композицию AADC согласно настоящему изобретению можно доставить с помощью устройства, такого как без ограничения стент, пробирка, катетер, трубка, трубочка, игла и/или капилляр. Способы применения таких устройств описаны в настоящем документе и известны из уровня техники.
[000143]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью систем доставки, которые объединяют терапию и визуализацию с контролем по изображениям, такие как без ограничения лазерные, MRgFUS, эндоскопические устройства и устройства для роботизированной хирургии.
[000144]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы для нейровмешательства CLEARPOINT от MRI Interventions, Inc. Систему для нейровмешательства CLEARPOINT можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов или устройств для введения. Система для нейровмешательства CLEARPOINT помогает обеспечивать стереотаксический контроль при размещении приборов или устройств и манипуляции с ними в ходе планирования и осуществления неврологических процедур.
[000145]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной системы NEUROMATE для стереотаксиса от Renishaw PLC. Систему NEUROMATE можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера систему NEUROMATE можно применять с держателями головы, локализаторами изображения CT, каркасными креплениями, устройствами дистанционного управления и программным обеспечением.
[000146]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью устройства Elekta MICRODRIVE™ от Elekta AB. Устройство MICRODRIVE™ можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера устройство MICRODRIVE™ можно применять для размещения электродов (например, при имплантации электродов для микроэлектродной записи (MER), макростимуляции и глубокой стимуляции мозга (DBS)), имплантации катетеров, трубок или электродов для DBS с использованием крестообразных и A-P фиксаторов для проверки положения, биопсий, инъекций и аспираций, воздействия на очаги поражения головного мозга, контроля эндоскопа и радиохирургии GAMMA KNIFE.
[000147]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью амагнитной рамки для стереотаксиса AXIIIS от MONTERIS Medical, Inc. Амагнитную рамку для стереотаксиса AXIIIS можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Амагнитная рамка для стереотаксиса AXIIIS является устройством для выравнивая траектории, которое можно применять для лазерной коагуляции, биопсий, размещения катетера, имплантации электрода, эндоскопии и удаления тромбов. Амагнитная рамка обеспечивает 360-градусную область взаимодействия и с помощью простой регулировки обеспечивает доступ к множеству внутричерепным целевым точкам. Кроме того, амагнитная рамка совместима с MRI.
[000148]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы INTEGRA™ CRW от Integra LifeSciences Corporation. Систему INTEGRA™ CRW можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Систему CRW можно использовать для различных целей, таких как без ограничения стереотаксическая хирургия, микрохирургия, катетеризация и биопсия. Система CRW выполнена так, чтобы для использующих такую систему обеспечивалась точность (например, крыльчатые затворные винты, наличие шкалы верньера, двойная фиксация болта и жесткая рамка).
[000149]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы-решения EPOCH от Stereotaxis, Inc., которая может включать магнитную навигационную систему NIOBE ES, роботизированную навигационную систему VDRIVE и/или информационное решение ODYSSEY (все от Stereotaxis, Inc.). Систему-решение EPOCH можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера магнитную навигационную систему NIOBE ES можно применять для проведения взаимодействия с субъектом с высокой степенью точности. В качестве другого неограничивающего примера магнитную систему NIOBE ES можно применять с роботизированной системой навигации VDRIVE для обеспечения точного движения и стабильности.
[000150]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью рабочей станции NeuroStation, в работе которой применяются бескаркасные стереотаксические способы, обеспечивающие визуальный контроль для таких целей, как без ограничения планирование хирургической операции, биопсии, краниотомии, эндоскопия, ультразвуковая и лучевая терапия во время хирургической операции.
[000151]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной стереотаксической системы, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5078140, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. Для точного ориентирования хирургических инструментов или другого оборудования, используемого для осуществления процедуры, можно применять манипулятор устройства.
[000152]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью автоматической системы доставки, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5865744, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. На основе изображений, собранных с помощью системы доставки, компьютер корректирует введение иглы на соответствующую глубину для конкретного субъекта.
[000153]
В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту, который одновременно применяет в ходе введения и/или применяет в течение периода времени до и/или после введения компрессионное устройство, такое как без ограничения компрессионное устройство, которое уменьшает вероятность тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере за 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов или более 8 часов до введения субъекту полинуклеотидов AADC. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере через 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели или через месяц после введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера компрессионное устройство применяют одновременно с процедурой доставки полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют до введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют после введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют в ходе или до введения полинуклеотидов AADC.
[000154]
В число неограничивающих примеров компрессионных устройств входят компрессионное устройство периодического действия ActiveCare+SFT, пневматическое компрессионное устройство ActiveCare+SFT, DVTlite's Venowave, KCl системный компрессор, система Aircast VenaFlow, пневматическое оборудование для компрессионной терапии от SCD Compression System Express или Bio Compression Systems, Inc. (например, помпу можно выбрать из модели модели SC-2004, модели SC-2004-FC, модели SC-3004, модели SC-3004-FC, модели SC-2008, модели SC-2008-DL, модели SC-3008-T, системы BioCryo, модели IC-ВАР-DL или multi-flo DVT combo IC_1545-DL, а используемое с помпой надеваемое на тело изделие может быть 4-камерным, 8-камерным, надеваемым на тело изделием BioCryo, Multi-Flo или BioArterial).
Заболевания ЦНС
[000155]
Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности. В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона.
[000156]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности, при этом полезный груз, т. е. AADC, замещается альтернативным полезным грузом.
[000157]
Настоящее раскрытие относится к способу лечения заболевания, нарушения и/или состояния у субъекта-млекопитающего, в том числе человека-субъекта, предусматривающему введение субъекту любой из вирусных частиц, например, описываемых в настоящем документе AAV, полинуклеотидов AAV или геномов AAV (т. е. вирусных геномов или «вг»), или введение субъекту частицы, содержащей указанный полинуклеотид AAV или геном AAV, или введение субъекту любой из описанных композиций, в том числе фармацевтических композиций.
[000158]
В соответствии с одним вариантом осуществления заболевание, нарушение и/или состояние представляет собой неврологическое заболевание, нарушение и/или состояние. Заболевания ЦНС могут быть заболеваниями, которые затрагивают любой компонент головного мозга (в том числе полушария головного мозга, таламус, ствол головного мозга и мозжечок) или спинного мозга.
[000159]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению, посредством доставки функционального полезного груза, который является терапевтическим продуктом, который может модулировать уровень или функцию генного продукта в ЦНС, можно применять для лечения нейродегенеративных заболеваний и/или заболеваний или нарушений, которые характеризуются нейродегенерацией, нервно-мышечных заболеваний, лизосомных заболеваний, травмы, травм костного мозга, боли (включая невропатическую боль), злокачественных опухолей нервной системы, демиелинизирующих заболеваний, аутоиммунных заболеваний нервной системы, нейротоксических синдромов, нарушений сна, генетических нарушений головного мозга и нарушений развития ЦНС. Функциональный полезный груз может облегчить или уменьшить симптомы, которые являются результатом аномального уровня и/или функции генного продукта (например, отсутствие или дефект белка) у нуждающегося в том субъекта или, в противном случае, обеспечивает полезный эффект в отношении нарушения ЦНС у нуждающегося в том субъекта.
[000160]
В качестве неограничивающих примеров терапевтические продукты, доставляемые с помощью вирусных частиц согласно настоящему изобретению, могут включать без ограничения факторы роста и трофические факторы, цитокины, гормоны, нейромедиаторы, ферменты, антиапоптические факторы, ангиогенные факторы, а также любой белок, мутантная форма которого известна при патологических нарушениях, такой как белок «выживания двигательных нейронов» (SMN); антисмысловую РНК или средства для RNAi информационных РНК, кодирующих белки, представляющие терапевтический интерес при любом из рассматриваемых в настоящем документе заболеваний ЦНС; или микроРНК, которые функционируют при сайленсинге генов и посттранскрипционной регуляции экспрессии генов в ЦНС (например, специфическая для головного мозга Mir-128a, см., Adlakha and Saini, Molecular cancer, 2014, 13:33). Например, средство для RNAi, целью которого является фермент супероксиддисмутаза, может быть упаковано в вирусные частицы согласно настоящему изобретению для лечения ALS.
[000161]
Факторы роста и трофические факторы могут включать без ограничения мозговой фактор роста (BDNF), эпидермальный фактора роста (EGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), кортикотропин-рилизинг-фактор (CRF), глиальный фактор роста (GDNF), инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), фактор роста нервов (NGF), нейротрофин-3 (NT-3), нейротрофин-4 (NT-4) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Цитокины могут включать интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-6, интерлейкин-8, хемокин CXCL12 (SDF-1), TGF-бета и фактор роста и дифференцировки (GDF-1/10).
[000162]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть нейродегенеративными нарушениями, включая без ограничения болезни Альцгеймера (AD); боковой амиотрофический склероз (ALS); болезнь Крейтцфельда-Якоба (CJD); болезнь Хантингтона (HD); атаксия Фридрейха (FA); болезнь Паркинсона (PD); множественную системную атрофию (MSA); спинальную мышечную атрофию (SMA), рассеянный склероз (MS); первичную прогрессирующую афазию; прогрессирующий надъядерный паралич (PSP); деменцию; злокачественную опухоль головного мозга, нейродегенеративные заболевания, энцефалит, эпилепсию, генетические нарушения головного мозга, которые вызывают нейродегенерацию, пигментный ретинит (RP), мальформации головы и головного мозга, гидроцефалию, инсульт, прионную болезнь, детский нейрональный цероид-липофусциноз (INCL) (нейродегенеративное заболевание детей, вызванное дефицитом лизосомального фермента пальмитоил-протеинтиоэстеразы-1 (PPT1)) и другие.
[000163]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения заболеваний, которые ассоциированы с нарушениями роста и развития ЦНС, т. е. нарушений неврологического развития. В соответствии с некоторыми аспектами такие нарушения неврологического развития могут быть вызванными генетическими мутациями, включая без ограничения синдром ломкой Х-хромосомы (вызываемый мутациями в гене FMR1), синдром Дауна (вызываемый трисомией 21-й хромосомы), синдром Ретта, синдром Уильямса, синдром Эйнджелмена, синдром Смита-Магениса, синдром ATR-Х, синдром Барта, иммунную дисфункцию и/или инфекционные заболевания в раннем детстве, такие как хорея Сиденгама, шизофрения, спровоцированная врожденным токсоплазмозом, синдром врожденной краснухи, нарушения обмена веществ, такие как сахарный диабет и фенилкетонурия; нарушения питания и/или травма головного мозга, аутизм и его разнообразные формы.
[000164]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения опухоли в ЦНС, включая без ограничения невриному слухового нерва, астроцитому (I, II, III и IV класса), хордому, лимфому ЦНС, краниофарингиому, глиомы (например, глиому ствола головного мозга, эпендимому, глиому зрительного нерва, субэпендимому), медуллобластому, менингиому, метастатические опухоли головного мозга, олигодендроглиому, опухоли гипофиза, примитивную нейроэктодермальную опухоль (PNET) и шванному.
[000165]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть функциональными неврологическими нарушениями с двигательными и/или сенсорными симптомами, которые имеют неврологическое происхождение в ЦНС. В качестве неограничивающих примеров функциональные неврологические нарушения могут представлять собой хроническую боль, судороги, нарушения речи, непроизвольные движения и нарушения сна.
[000166]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой нарушения белого вещества (группа заболеваний, которая затрагивает нервные волокна в ЦНС), включая без ограничения болезнь Пелицеуса-Мерцбахер, гипомиелинизацию с атрофией базальных ганглиев и мозжечка, синдром Айкарди-Гутьереса, мегалэнцефалическую лейкоэнцефалопатию с подкорковыми кистами, врожденную мышечную дистрофию, миотоническую дистрофию, болезнь Вильсона, синдром Лоу, синдром Шегрена-Ларссона, PIBD или синдром Тэй, болезнь Коккейна, церебротендинальный ксантоматоз, синдром Зельвегера, неонатальную адренолейкодистрофию, детскую болезнь Рефсума, синдром, подобный синдрому Зеллвегера, псевдо-синдром Зельвегера, псевдо-неонатальную адренолейкодистрофию, бифункциональный дефицит белка, адренолейкодистрофию, сцепленную с Х-хромосомой, и адреномиелоневропатию и болезнь Рефсума.
[000167]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой лизосомальные болезни накопления (LSD), вызванные неспособностью клеток в ЦНС разрушать конечные продукты метаболизма, включая без ограничения болезнь Ниманна-Пика (LSD, развивающуюся в результате наследственного дефицита кислой сфингомиелиназы (АНМ); метахроматическую лейкодистрофию (MLD) (LSD, которая характеризуется накоплением сульфатидов в глиальных клетках и нейронах, в результате наследственного дефицита арилсульфатазы А (ARSA)); глобоидную-клеточную лейкодистрофию (GLD) (LSD, вызываемую мутациями в галактозилцерамидазы); болезнь Фабри (LSD, вызываемую мутациями в гене альфа-галактозидазы А (GLA)); болезнь Гоше (вызываемую мутациями в гене бета-глюкоцереброзидазы (GBA)); ганглиозидоз GM1/GM2; мукополисахаридоз; болезнь Помпе и неврональный цероид-липофусциноз.
[000168]
В соответствии с одним вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Паркинсона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Паркинсона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на AADC или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Паркинсона. В качестве неограничивающего примера состоянием является ранняя стадия болезни Паркинсона. В качестве другого неограничивающего примера состоянием является поздняя стадия болезни Паркинсона.
[000169]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъектом является пациент-человек, который имеет минимальный показатель двигательной активности от приблизительно 30 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 10 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 20 до максимального показателя приблизительно 100 в унифицированной оценочной шкале болезни Паркинсона.
[000170]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона в пределах последних 5 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона в пределах недели, 2 недель, 3 недель, 4 недель, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 4 лет или менее 5 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000171]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за 5-10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000172]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за более чем 10 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24 или более чем 24 года до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000173]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение двигательных симптомов, таких как формы тремора и движений. Неограничивающие примеры форм тремора включают односторонние или двусторонние легкие формы тремора, двусторонние или средне-умеренные формы тремора или тяжелые формы тремора. Неограничивающие примеры движений включают мягкую брадикинезию, умеренную брадикинезию, тяжелую брадикинезию и утреннюю акинезию.
[000174]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть изменения равновесия, такие как без ограничения нарушение равновесия, нарушение установочных рефлексов, существенное нарушение или отсутствие равновесия.
[000175]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта может быть ухудшенное качество жизни. В качестве неограничивающего примера у субъекта может умеренно затрагиваться качество его жизни, например, он может испытывать некоторые ограничения в повседневной деятельности. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть качество жизни, которое ухудшилось по причине болезни.
[000176]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до ведения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение недвигательных симптомов. В качестве неограничивающего примера у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции может быть легкое-умеренное когнитивное нарушение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть значительное когнитивное нарушение, такое как деменция, которая также может включать поведенческие нарушения психического равновесия, такие как галлюцинации.
[000177]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций может быть удовлетворительная реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.
[000178]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть двигательные флуктуации, обуславливающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.
[000179]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть рефракторные с медицинской точки двигательные флуктуации, состоящие из «истощения» и/или индуцированных леводопой дискинезий, обуславливающих значительное ограничение жизнедеятельности.
[000180]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения отсутствие диагностированного за последние 5 лет когнитивного нарушения, приемлемая реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, односторонние или двусторонние легкие формы тремора, незначительное или полное отсутствие влияния на качество жизни и/или отсутствие нарушения равновесия.
[000181]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения легкое-умеренное когнитивное нарушение, первые признаки нарушения равновесия и установочных рефлексов, двигательные флуктуации, вызывающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, диагностированные за последние 5-10 лет двусторонние или средне-умеренные формы тремора, умеренная брадикинезия, и/или субъект испытывает некоторые ограничения в повседневной деятельности.
[000182]
В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть дополнительные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения, если болезнь Паркинсона была диагностирована более чем 10 лет до того, средние рефракторные двигательные флуктуации, истощение и/или индуцированная леводопой дискинезия, вызывающая значительное ограничение жизнедеятельности, тяжелые формы тремора, значительное нарушение равновесия и/или отсутствие равновесия, значительное нарушение когнитивных функций (например, деменция с нарушениями поведения или без них), тяжелая брадикинезия, качество жизни, которое заметно ухудшилось с болезнью и/или утренней акинезией.
[000183]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект был направлен к специалисту по двигательным расстройствам (MDS), но не подвергался глубокой стимуляции головного мозга.
[000184]
В соответствии с одним вариантом осуществления субъект применяет DUOPA™ в комбинации с описанными в настоящем документе композициями. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть успешным лечение с помощью только DUOPA™. В качестве неограничивающего примера у субъекта может не быть успешным или может быть лишь частично успешным лечение с помощью только DUOPA™.
[000185]
В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является атаксия Фридрейха. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения атаксии Фридрейха полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на фратаксин или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения атаксии Фридрейха.
[000186]
В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является боковой амиотрофический склероз (ALS). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения ALS полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для SOD1 или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения ALS.
[000187]
В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Хантингтона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Хантингтона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для Htt или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Хантингтона.
[000188]
В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением или состоянием является спинальная мышечная атрофия (SMA). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения SMA полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на SMN или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения SMA.
Циркадный ритм и циклы сон-бодрствование
[000189]
Циркадный ритм представляет собой физические, психические и поведенческие изменения, которые имеют склонность соответствовать 24-часовому циклу. Циркадные ритмы могут влиять на циклы сон-бодрствование, секрецию гормонов, температуру тела и другие функции организма. Изменения циркадного ритма могут вызывать состояния и/или нарушения, такие как без ограничения нарушения сна (например, инсомнию), депрессию, биполярное расстройство, сезонное аффективное расстройство, ожирение и диабет.
[000190]
В соответствии с одним вариантом осуществления описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно применять для лечения инсомнии.
[000191]
Цикл сон-бодрствование включает периоды сна и периоды бодрствования. Как правило, в 24-часовом периоде общее количество часов сна меньше, чем общее количество часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 7-9 часов сна и 15-17 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8 часов сна и 16 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8-10 часов сна и 14-16 часов бодрствования.
[000192]
В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта улучшают путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC.
[000193]
В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта регулируют путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера регуляция может представлять собой коррекцию большего количества периодов сна, имеющих место за ночь, и меньшего количества имеющих место периодов сна.
[000194]
В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, улучшается по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера субъект имеет увеличенный период сна и уменьшенный период бодрствования. В качестве неограничивающего примера субъект имеет уменьшенный период сна и увеличенный период бодрствования.
[000195]
В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, регулируется по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования может быть приблизительно одинаковой (например, +/- 1 час) на протяжении по меньшей мере 2 дней. В качестве еще одного неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования, в случае 24 часового периода, может варьировать в пределах 10 минут, 15 минут, 20 минут, 25 минут, 30 минут, 35 минут, 40 минут, 45 минут, 50 минут, 55 минут, 1 часа, 1,5 часа или 2 часов от предыдущего 24-часового периода.
[000196]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал сна с быстрым движением глаз (REM), который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. REM-сон, как правило, рассматривают как активный период сна, характеризуемый интенсивной активностью головного мозга, при котором мозговые волны являются динамичными и десинхронизированными. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 20-25% своего общего суточного периода сна в REM-сне. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000197]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал не-REM (NREM) сна, который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. NREM-сон, как правило, характеризуется снижением физиологической активности, поскольку мозговые волны, измеренные с помощью EEG, становятся медленнее и имеют большую амплитуду. NREM содержит четыре стадии: стадия 1 представляет собой время сомнолентности или перехода от бодрствования к засыпанию, при котором мозговые волны и мышечная активность начинают замедляться; стадия 2 представляет собой период легкого сна, в течение которого останавливается движение глаз, а мозговые волны замедляются со случайными вспышками быстрых волн (иногда называемых сонными веретенами); стадия 3 и стадия 4 (совместно называемые медленноволновым сном) характеризуются наличием медленных мозговых волн (дельта-волн), чередующихся с меньшими, более быстрыми волнами, при этом движения глаз отсутствуют. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 75-80% своего общего суточного периода сна в NREM-сне и приблизительно половину своего общего суточного времени сна в стадии 2 NREM-сна.
[000198]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000199]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 1 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000200]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 2 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000201]
В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 3 и 4 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000202]
В соответствии с одним вариантом осуществления периоды циклов NREM и REM более согласованы у субъекта после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. Обычно циклы NREM и REM чередуются каждые 90-110 минут четыре-шесть раз за ночь.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[000203]
В различных местах настоящего описания заменители соединений по настоящему раскрытию раскрыты в группах или в диапазонах. В частности предполагается, что настоящее раскрытие включает в себя все без исключения отдельные подкомбинации членов таких групп и диапазонов.
[000204]
Приблизительно:
в контексте настоящего описания термин «приблизительно» означает +/- 10% от указанного значения.
[000205]
Активность
: в контексте настоящего описания термин «активность» относится к состоянию, при котором нечто происходит и осуществляется. Описываемые в настоящем документе композиции могут обладать активностью, и эта активность может участвовать в одном или более биологических событий.
[000206]
Аденоассоциированный вирус
: термин «аденоассоциированный вирус» или «AAV» в контексте настоящего описания относится к представителям рода Dependovirus, в том числе к любой частице, последовательности, гену, белку или их производному компоненту. В контексте настоящего описания термин «частица AAV» содержит капсид и полинуклеотид. Частица AAV может быть получена из любого описываемого в настоящем документе или известного из уровня техники серотипа, в том числе из комбинаций серотипов (т. е. «псевдотипированный» AAV), или из различных геномов (например, одноцепочечный или самокомплементарный). Кроме того, частица AAV может быть дефектной по репликации и/или подвергшейся целенаправленному воздействию.
[000207]
Вводимый в комбинации:
например
в контексте настоящего описания термин «вводимый в комбинации» или «комбинированное введение» означает, что два или более средства (например, AAV) вводят субъекту в одно и то же время или в пределах такого интервала, чтобы могло иметь место перекрытие эффекта от каждого средства на пациента, и/или чтобы субъект в некоторый момент времени одновременно подвергался воздействию обоих средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления их вводят в пределах приблизительно 60, 30, 15, 10, 5 или 1 минуты друг от друга или в пределах приблизительно 24 часов, 12 часов, 6 часов, 3 часов от по меньшей мере одной дозы одного или более других средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение происходит согласно перекрывающимся режимам дозирования. В контексте настоящего описания термин «режим дозирования» относится к множеству разделенных по времени доз. Такие дозы могут вводиться через равные промежутки времени или могут включать один или более перерывов при введении. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления интервал между введением средств очень незначителен, поэтому достигается комбинаторный (, синергический) эффект.
[000208]
Ослабление
: в контексте настоящего описания термины «ослабление» или «ослабляющий» относятся к снижению тяжести по меньшей мере одного показателя состояния или заболевания. Например, в контексте нейрогенеративного заболевания, ослабление включает уменьшение потери нейронов.
[000209]
Животное:
например
в контексте настоящего описания термин «животное» относится к любому представителю царства Животные. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к людям на любой стадии развития. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к отличным от человека животным на любой стадии развития. В соответствии с определенными вариантами осуществления отличным от человека животным человека является млекопитающее (, грызун, мышь, крыса, кролик, обезьяна, собака, кошка, овца, крупный рогатый скот, примат или свинья). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животные включают без ограничения млекопитающих, птиц, рептилий, амфибий, рыб и червей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животным является трансгенное животное, животное, полученное методами генной инженерии, или клон.
[000210]
Антисмысловая цепь
: в контексте настоящего описания термины «антисмысловая цепь», или «первая цепь», или «направляющая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая практически комплементарна участку из приблизительно 10-50 нуклеотидов, например, из приблизительно 15-30, 16-25, 18-23 или 19-22 нуклеотидов, в мРНК гена, подвергающемуся целенаправленному воздействию с целью сайленсинга. Антисмысловая цепь или первая цепь имеет последовательность, в достаточной степени комплементарную последовательности необходимой целевой мРНК для непосредственного мишень-специфического сайленсинга, например, комплементарную в достаточной степени для запуска разрушения необходимой целевой мРНК с помощью аппарата или процесса RNAi.
[000211]
Примерно:
в контексте настоящего описания термин «примерно» или «приблизительно», применительно к одному или более представляющим интерес значениям, относится к значению, которое является схожим с приведенным эталонным значением. В соответствии с определенными вариантами осуществления термин «примерно» или «приблизительно» относится к диапазону значений, которые находятся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или менее в любом направлении (больше или меньше) от указанного референтного значения, если только не указано иное или не очевидно иное из контекста (кроме случаев, когда такое число превышало бы 100% от возможного значения).
[000212]
Ассоциированный с:
например
в контексте настоящего описания термины «ассоциированный с», «конъюгированный», «соединенный», «прикрепленный» и «связанный», при использовании в отношении двух или более фрагментов, означают, что фрагменты физически ассоциированы или соединены друг с другом, либо непосредственно, либо посредством одного или более дополнительных фрагментов, которые служат связывающим средством, с образованием структуры, которая является достаточно стабильной, чтобы фрагменты оставались физически ассоциированными в условиях использования структуры, , физиологических условиях. «Ассоциация» не обязательно должна осуществляться при помощи прямой ковалентной химической связи. Она может также предполагать ионную или водородную связь или гибридизацию на основе связности, достаточно стабильной для того, чтобы «ассоциированные» молекулярные частицы оставались физически ассоциированными.
[000213]
Бифункциональный:
в контексте настоящего описания термин «бифункциональный» относится к любому веществу, молекуле или фрагменту, который способен к поддержанию или поддерживает по меньшей мере две функции. Функции могут затрагивать один и тот же результат или различный результат. Структура, которая выполняет такую функцию, может быть одной и той же или различной.
[000214]
Биологически активный
: в контексте настоящего описания фраза «биологически активный» относится к характеристике любой материи (например, AAV), которая обладает активностью в биологической системе и/или организме. Например, вещество, которое при введении в организм обладает биологическим эффектом на этот организм, считают биологически активным. В соответствии с конкретными вариантами осуществления полинуклеотид согласно настоящему изобретению можно считать биологически активным, если хотя бы часть полинуклеотидов является биологически активными или имитируют активность, которая считается биологически релевантной.
[000215]
Биологическая система
: в контексте настоящего описания термин «биологическая система» относится к группе органов, тканей, клеток, внутриклеточных компонентов, белков, нуклеиновых кислот, молекул (включая без ограничения биомолекулы), которые совместно функционируют, выполняя определенную биологическую задачу в клеточных мембранах, клеточных компартментах, клетках, тканях, органах, системах органов, многоклеточных организмах или любых биологических организмах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы представляют собой клеточные сигнальные пути, содержащие межклеточные и/или внеклеточные сигнальные биомолекулы клетки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы включают сигнальные события фактора роста во внеклеточном/клеточном матриксе и/или клеточных нишах.
[000216]
Биомолекула
: в контексте настоящего описания термин «биомолекула» представляет собой любую природную молекулу, в основе которой лежат аминокислоты, нуклеиновые кислоты, углеводы или липиды и т. п.
[000217]
Комплементарный и практически комплементарный
: в контексте настоящего описания термин «комплементарный» относится к способности полинуклеотидов к образованию пар оснований друг с другом. Пары оснований, как правило, образуются с помощью водородных связей между нуклеотидными звеньями в антипараллельных полинуклеотидных цепях. Комплементарные полинуклеотидные цепи могут образовывать пары оснований посредством образования уотсон-криковских пар (например, A с T, A с U, C с G) или любым другим способом, который обеспечивает возможность образования дуплексов. Поскольку специалисты в данной области техники осведомлены, что при использовании РНК в отличие от ДНК урацил, а не тимин является основанием, которое считается комплементарным аденозину. Тем не менее, если U обозначен в контексте настоящего изобретения, предполагается возможность замены T, если не указано иное. Полная комплементарность или 100% комплементарность относится к ситуации, в которой каждое нуклеотидное звено в одной полинуклеотидной цепи может образовать водородную связь с нуклеотидным звеном во второй полинуклеотидной цепи. Менее чем полная комплементарность относится ситуации, в которой некоторые, но не все нуклеотидные звенья в двух цепях могут образовывать водородные связи друг с другом. Например, в случае двух последовательностей из 20 мономерных звеньев, если только две пары оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 10% комплементарность. В том же примере, если 18 пар оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 90% комплементарность. В контексте настоящего описания термин «практически комплементарный» означает, что siRNA имеет последовательность (например, в антисмысловой цепи), которая является достаточной для связывания необходимой целевой мРНК и для запуска РНК-сайленсинга целевой мРНК.
[000218]
Соединение
: в контексте настоящего описания термин «соединение» относится к индивидуальной химической структурной единице. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления конкретное соединение может существовать в одной или более изомерных или изотопных формах (включая без ограничения стереоизомеры, геометрические изомеры и изотопы). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется только в одной такой форме. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется в виде смеси из двух или более таких форм (включая без ограничения рацемическую смесь стереоизомеров). Специалисты в данной области техники знают, что некоторые соединения существуют в различных таких формах и характеризуются различными свойствами и/или активностями (включая без ограничения биологические активности). В таких случаях рядовой специалист в данной области техники без труда подберет или исключит определенные формы соединения для применения в соответствии с настоящим изобретением. Например, соединения, которые содержат асимметрично замещенные атомы углерода, можно выделить в оптически активной или рацемической форме. Из уровня техники известны способы получения оптически активных форм из оптически активных исходных материалов, такие как разделение рацемических смесей или стереоселективный синтез. Многие геометрические изомеры олефинов, C=N двойных связей и подобного также могут присутствовать в описанных в данном документе соединениях, и в настоящем раскрытии предусматриваются все такие стабильные изомеры. Цис- и транс-геометрические изомеры соединений по настоящему раскрытию описаны и могут быть выделены в виде смеси изомеров или в виде разделенных изомерных форм.
[000219]
Соединения по настоящему раскрытию также включают таутомерные формы. Таутомерные формы образуются в результате обмена одинарной связи на соседнюю двойную связь и сопутствующей миграции протона. Таутомерные формы включают прототропные таутомеры, которые представляют собой изомерные протонированные состояния с той же эмпирической формулой и суммарным зарядом.
[000220]
Соединения по настоящему раскрытию также включают все изотопы атомов, встречающихся в промежуточных или конечных соединениях. Выражение «изотопы» относится к атомам с одним атомным числом, но другими массовыми числами, образующимся из различного числа нейтронов в ядрах. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий.
[000221]
Соединения и соли по настоящему раскрытию могут быть получены при помощи стандартных способов в комбинации с молекулами растворителей или воды с образованием сольватов и гидратов.
[000222]
Консервативный
: в контексте настоящего описания термин «консервативный» относится к нуклеотидам или аминокислотным остаткам соответственно полинуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности, которые встречаются неизмененными в одном и том же положении у двух или более сравниваемых последовательностей. Нуклеотиды или аминокислоты, которые являются сравнительно консервативными, представляют собой такие, которые консервативны в более родственных последовательностях по сравнению с нуклеотидами или аминокислотами, встречающимися в других местах в последовательностях.
[000223]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «полностью консервативными», если они на 100% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они приблизительно на 70% идентичны, приблизительно на 80% идентичны, приблизительно на 90% идентичны, приблизительно на 95% идентичны, приблизительно на 98% идентичны или приблизительно на 99% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательности являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны, по меньшей мере на 98% идентичны или по меньшей мере на 99% идентичны друг другу. Консервативность последовательности может быть применима ко всей длине олигонуклеотида, полинуклеотида или полипептида или может быть применима к его части, участку или элементу.
[000224]
В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.
[000225]
В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.
[000226]
Доставка
: в контексте настоящего описания термин «доставка» относится к процессу или способу доставки соединения, такого как парвовирус, например, AAV и/или соединение, вещество, молекулярная частица, фрагмент, груз или полезный груз на основе AAV, к цели. Такой целью может быть клетка, ткань, орган, организм или система (как биологическая, так и произведенная).
[000227]
Средство доставки
in vivo
in vitro
: в контексте настоящего описания «средство доставки» относится к любому средству или веществу, которое облегчает, по меньшей мере частично, и/или доставку полинуклеотида и/или одного или более веществ (включая без ограничения соединения и/или композиции согласно настоящему изобретению, например, вирусные частицы или векторы экспрессии) к целевым клеткам.
[000228]
Дестабилизированный
: в контексте настоящего описания термин «дестабилизированный», «дестабилизировать» или «дестабилизирующий участок» означает участок или молекулу, которая является менее стабильной, чем исходная, эталонная, дикого типа или нативная форма того же участка или молекулы.
[000229]
Детектируемая метка:
в контексте настоящего описания термин «детектируемая метка» относится к одному или более маркерам, сигналам или фрагментам, которые присоединены, включены или ассоциированы с другой молекулярной частицей, которая легко детектируется известными в настоящей области техники способами, включая радиографию, флуоресценцию, хемилюминесценцию, ферментативную активность, абсорбционную иммунологическую детекцию и т. п. Детектируемые метки могут включать радиоизотопы, флуорофоры, хромофоры, ферменты, красители, ионы металла, лиганды, такие как биотин, авидин, стрептавидин и гаптены, квантовые точки и т. п. Детектируемые метки могут быть иметь любое расположение в молекулярной частице, к которой они присоединены, в которую включены или с которой ассоциированы. Например, при присоединении, включении в или ассоциировании с пептидом или белком, они могут находиться среди аминокислот, пептидов или белков или быть расположенными на N- или С-конце.
[000230]
Режим дозирования
: в контексте настоящего описания «режим дозирования» представляет собой график введения или определенный врачом режим лечения, профилактики или паллиативной терапии.
[000231]
Эффективное количество:
в контексте настоящего описания термин «эффективное количество» средства, представляет собой такое количество, которое достаточно для обеспечения полезных или желаемых результатов, например, при введении однократной дозы или множества доз в подвергаемую воздействию клетку, при излечении, снижении, облегчении или уменьшении одного или более симптомов нарушения, клинических результатов, и само по себе «эффективное количество» зависит от контекста, в котором это выражение употребляется. Например, в контексте введения средства, которое обеспечивает лечение болезни Паркинсона, эффективное количество средства представляет собой, например, количество, достаточное для осуществления лечения болезни Паркинсона, которое определено в данном документе, по сравнению с ответом, полученным без введения средства.
[000232]
Инкапсулировать:
в контексте настоящего описания термин «инкапсулировать» означает включать, окружать или заключать.
[000233]
Сконструированный
: в контексте настоящего описания варианты осуществления характеризуют как «сконструированные», если они разработаны такими, чтобы имели признак и свойство, либо структурное, либо химическое, которое отличается от такового у первоначальной, дикого типа или нативной молекулы. Таким образом, сконструированные средства или молекулярные частицы являются такими, чья разработка и/или получение включают действие при участии человека.
[000234]
Эпитоп
: в контексте настоящего описания «эпитоп» относится к поверхности или участку на молекуле, которые могут взаимодействовать с биомолекулой. Например, белок может содержать одну или более аминокислот, например, эпитоп, который взаимодействует с антителом, например, с биомолекулой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, эпитоп может представлять собой линейный отрезок аминокислот или трехмерную структуру, образованную уложенными аминокислотными цепями.
[000235]
Экспрессия
например
например
: в контексте настоящего описания «экспрессия» последовательности нуклеиновой кислоты относится к одному или более из следующих событий: (1) производству матрицы РНК с последовательности ДНК (, путем транскрипции); (2) процессингу РНК-транскрипта (, путем сплайсинга, редактирования, образование 5′-кэпа и/или процессинга 3′-конца); (3) трансляции РНК в полипептид или белок; (4) укладке полипептида или белка; и (5) посттрансляционной модификации полипептида или белка.
[000236]
Признак:
в контексте настоящего описания «признак» относится к характеристике, свойству или отличительному элементу.
[000237]
Состав
: в контексте настоящего описания термин «состав» включает по меньшей мере один полинуклеотид, и/или соединение, и/или композицию согласно настоящему раскрытию (например, вектор, частицу AAV и т. д.) и средство доставки.
[000238]
Фрагмент:
«фрагмент», в контексте настоящего описания, относится к непрерывной части целого. Например, фрагменты белков могут представлять собой полипептиды, полученные при расщеплении полноразмерного белка, выделенного из культивируемых клеток. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагмент белка включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250 или более аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагменты антитела включают части антитела, подвергаемые ферментативному расщеплению или синтезированные таким образом.
[000239]
Функциональный
: в контексте настоящего описания «функциональная» биологическая молекула представляет собой биологическую молекулу и/или молекулярную частицу со структурой и в форме, в которой она проявляет свойство и/или активность, которыми она характеризуется.
[000240]
Экспрессия гена
: термин «экспрессия гена» относится к процессу, при котором последовательность нуклеиновой кислоты подвергается успешной транскрипции и, в большинстве случаев, трансляции с образованием белка или пептида. Для ясности, в случае, когда упоминается измерение «экспрессии гена», это следует понимать как означающее, что измерения могут относиться к продукту транскрипции нуклеиновой кислоты, например, РНК или мРНК, или к состоящему из аминокислот продукту трансляции, например, полипептидам или пептидам. Способы измерения количества или уровней РНК, мРНК, полипептидов и пептидов хорошо известны в уровне техники.
[000241]
Гомология
например,
например,
: в контексте настоящего описания термин «гомология» относится к общему родству между полимерными молекулами, между молекулами нуклеиновых кислот (молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полимерные молекулы считаются «гомологичными» друг другу, если их последовательности являются по меньшей мере на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% идентичными или схожими. Выражение «гомологичный» обязательно относится к сравнению между по меньшей мере двумя последовательностями (полинуклеотидными или полипептидными последовательностями). В соответствии с настоящим изобретением две полинуклеотидные последовательности считаются гомологичными, если полипептиды, которые они кодируют, по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или даже 99% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления гомологичные полинуклеотидные последовательности характеризуются способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. Для полинуклеотидных последовательностей длиной менее 60 нуклеотидов гомология обычно определяется способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. В соответствии с настоящим изобретением две белковые последовательности считаются гомологичными, если белки по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичный белок может характеризоваться большой общей степенью гомологии и высокой степенью гомологии на протяжении по меньшей мере одного короткого отрезка по меньшей мере из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или более аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичные белки имеют один или более характерных элементов последовательности. В контексте настоящего описания термин «характерный элемент последовательности» относится к мотиву, присутствующему в родственных белках. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления присутствие таких мотивов коррелирует с конкретной активностью (такой как биологическая активность).
[000242]
Идентичность
например
например,
например
,
,
et al., Nucleic Acids Research
et al., J. Molec. Biol.,
: в контексте настоящего описания термин «идентичность» относится к общему родству между полимерными молекулами, , между олигонуклеотидными и/или полинуклеотидными молекулами (молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента идентичности двух полинуклеотидных последовательностей, например, можно осуществить путем выравнивания двух последовательностей в контексте оптимального сравнения (, можно внести гэпы в одну или обе из первой и второй последовательности нуклеиновых кислот для оптимального выравнивания, а неидентичные последовательности в контексте сравнения можно не учитывать). В соответствии с определенными вариантами осуществления длина выравниваемой последовательности для сравнения составляет по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% от длины эталонной последовательности. Затем сравнивают нуклеотиды в соответствующих нуклеотидных положениях. Если положение в первой последовательности занято тем же самым нуклеотидом, что и соответствующее положение во второй последовательности, то молекулы являются идентичными по этому положению. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой зависимость числа идентичных положений, общих для последовательностей, с учетом числа гэпов и длины каждого гэпа, который необходим для введения с целью оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя последовательностями может быть выполнено при помощи математического алгоритма. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить с помощью способов, таких как описанные в работах Computational Molecular BiologyLesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biologyvon Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; каждая из которых включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить, например, с помощью алгоритма Майера и Миллера (CABIOS, 1989, 4: 11-17), который был включен в программу ALIGN (версия 2.0) с использованием матрицы вероятности мутаций PAM120, штрафа за удлинение гэпа 12 и штрафа за открытие гэпа 4. Процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями альтернативно можно определить с помощью программы GAP в пакете компьютерной программы GCG с использованием матрицы NWSgapdna.CMP. Способы, обычно используемые для определения процента идентичности между последовательностями, включают без ограничения способы, раскрытые в работе Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48: 1073 (1988); включенной в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Методики определения идентичности закодированы в общедоступных компьютерных программах. Иллюстративные компьютерные программы для определения гомологии между двумя последовательностями включают без ограничения программный пакет GCG, Devereux, J., , 12(1), 387 (1984)), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul, S. F. 215, 403 (1990)).
[000243]
Ингибировать экспрессию гена
: в контексте настоящего описания фраза «ингибировать экспрессию гена» означает, что это приводит к снижению количества продукта экспрессии гена. Продукт экспрессии может представлять собой РНК, транскрибируемую с гена (например, мРНК), или полипептид, транслируемый с мРНК, которая транскрибируется с гена. Как правило, снижение уровня мРНК приводит в результате к снижению уровня полипептида, транслируемого с нее. Уровень экспрессии можно определить с применением стандартных методик для измерения уровня мРНК или белка.
[000244]
In vitro
in vitro
например
и т. д.,
например
: в контексте настоящего описания «» относится к событиям, которые происходят в искусственной среде, , в пробирке или реакционном сосуде, в клеточной культуре, в чашке Петри а не внутри организма (, животного, растения или микроба).
[000245]
In vivo
in vivo
например
: в контексте настоящего описания термин «» относится к событиям, которые происходят внутри организма (, животного, растения или микроба или в их клетке или ткани).
[000246]
Выделенный
: в контексте настоящего описания термин «выделенный» является синонимом «отделенный», но охватывает вместе с тем базирующееся на умозаключении отделение, осуществляемое при участии человека. В соответствии с одним вариантом осуществления выделенное вещество или молекулярная частица представляет собой вещество или молекулярную частицу, которые были отделены по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми они ранее были ассоциированы (либо в природе, либо в экспериментальных условиях). Выделенные вещества могут иметь различные уровни чистоты по отношению к веществам, с которыми они были ассоциированы. Выделенные вещества и/или молекулярные частицы могут быть отделены по меньшей мере приблизительно от 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или более других компонентов, с которыми они были изначально ассоциированы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделенные средства имеют степень чистоты более чем приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более приблизительно 99%. В контексте настоящего описания вещество является «чистым», если оно практически не содержит других компонентов.
[000247]
Практически выделенный
: «практически выделенный» означает, что соединение практически отделено от среды, в которой оно было образовано или обнаружено. Частичное отделение может включать, например, композицию с высоким содержанием соединения по настоящему раскрытию. Практическое отделение может включать композиции, содержащие по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по массе соединения по настоящему раскрытию или его соли. Способы выделения соединений и их солей общеизвестны в данной области техники. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение вещества или молекулярной частицы включает разрушение химических ассоциаций и/или связей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение включает только отделение от компонентов, с которыми выделенное вещество или молекулярная частица ранее были объединены, и не предусматривает такое разрушение.
[000248]
Модифицированный:
в контексте настоящего описания термин «модифицированный» относится к измененному состоянию или структуре молекулы или молекулярной частицы согласно настоящему изобретению по сравнению с исходной или эталонной молекулой или частицей. Молекулы можно модифицировать разнообразными путями, в том числе химически, структурно и функционально. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения и/или композиции согласно настоящему раскрытию модифицированы путем внесения не встречающихся в природе аминокислот или не встречающихся в природе нуклеотидов.
[000249]
Мутация
: в контексте настоящего описания термин «мутация» относится к модификации и/или изменению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации могут представлять собой модификации и/или изменения в белках (включая пептиды и полипептиды) и/или нуклеиновых кислотах (включая полинуклеиновые кислоты). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации включают модификации и/или изменения в последовательности белка и/или нуклеиновой кислоты. Такие модификации и/или изменения могут включать добавление, замену и/или делецию одной или более аминокислот (в случае белков и/или пептидов) и/или нуклеотидов (в случае нуклеиновых кислот и/или полинуклеиновых кислот). В соответствии с вариантами осуществления, где мутации включают добавление и/или замену аминокислот и/или нуклеотидов, такие добавления и/или замены могут включать 1 или более аминокислотных и/или нуклеотидных остатков и могут включать модифицированные аминокислоты и/или нуклеотиды.
[000250]
Встречающийся в природе:
в контексте настоящего описания термин «встречающийся в природе» означает существующие в природе без искусственной помощи или участия человека
[000251]
Отличное от человека позвоночное:
Homo sapiens
в контексте настоящего описания термин «отличное от человека позвоночное» включает всех позвоночных, за исключением , включая дикие и одомашненные виды животных. Примеры отличных от человека позвоночных включают без ограничения таких млекопитающих, как альпака, бантенг, бизон, верблюд, кошка, крупный рогатый скот, олень, собака, осел, гаял, коза, морская свинка, лошадь, лама, мул, свинья, кролик, северный олень, овца, буйвол и як.
[000252]
Нуклеиновая кислота
: в контексте настоящего описания термины «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид» относятся к любым полимерам нуклеиновой кислоты, состоящим или из полидезоксирибонуклеотидов (содержащих 2-дезокси-D-рибозу), или из полирибонуклеотидов (содержащих D-рибозу), или из полинуклеотида любого другого типа, который представляет собой N-гликозид пуринового или пиримидинового основания или модифицированных пуриновых или пиримидиновых оснований. Не предполагаются различия по длине между терминами «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид», и эти термины используются взаимозаменяемо. Эти термины относятся только к первичной структуре молекулы. Таким образом, эти термины включают двух- и одноцепочечную ДНК, а также двух- и одноцепочечную РНК.
[000253]
Нецелевой
: в контексте настоящего описания «нецелевой» относится к любому непредусмотренному эффекту в отношении любой одной или более мишени, гена и/или клеточного транскрипта.
[000254]
Открытая рамка считывания:
в контексте настоящего описания «открытая рамка считывания» или «ORF» относится к последовательности, которая не содержит стоп-кодона в указанной рамке считывания.
[000255]
Функционально связанный:
в контексте настоящего описания термин «функционально связанный» относится к функциональному соединению между двумя или более молекулами, конструкциями, транскриптами, молекулярными частицами, фрагментами и т. п.
[000256]
Частица
: в контексте настоящего описания термин «частица» представляет собой вирус, содержащий в своем составе по меньшей мере два компонента: белковый капсид и полинуклеотидную последовательность, заключенную внутри капсида.
[000257]
Пациент:
в контексте настоящего описания «пациент» относится к субъекту, который может обратиться за помощью или нуждаться в лечении, требовать лечения, проходить лечение, будет проходить лечение, или к субъекту, который находится под наблюдением обученного специалиста по конкретному заболеванию или состоянию, такому как, например, болезнь Паркинсона.
[000258]
Полезный груз
: в контексте настоящего описания «полезный груз» относится к одному или более полинуклеотидам или полинуклеотидным участкам, закодированным посредством вирусного генома или в вирусном геноме, или продукту экспрессии такого полинуклеотида или полинуклеотидного участка, например, трансгена, полинуклеотида, кодирующего полипептид или несколько полипептидов, или модулирующей нуклеиновой кислоты или регуляторной нуклеиновой кислоты.
[000259]
Конструкция полезного груза
: в контексте настоящего описания «конструкция полезного груза» представляет собой один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих полезный груз, который фланкирован на одной или обеих сторонах последовательностью инвертированных концевых повторов (ITR). Конструкция полезного груза представляет собой матрицу, которая реплицируется в клетке для вирусного производства с образованием вирусного генома.
[000260]
Вектор с конструкцией полезного груза
: в контексте настоящего описания «вектор с конструкцией полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и регуляторные участки для репликации и экспрессии в бактериальных клетках.
[000261]
Вектор экспрессии конструкции полезного груза
: в контексте настоящего описания, «вектор экспрессии конструкции полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и дополнительно содержащий один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.
[000262]
Пептид:
в контексте настоящего описания «пептид» имеет длину менее 50 аминокислот или равную 50 аминокислотам, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислотам.
[000263]
Фармацевтически приемлемый
: фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, по результатам тщательной клинической оценки, являются подходящими для применения в контакте с тканями человеческих организмов и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соизмеримых с разумным соотношением выгоды и риска.
[000264]
Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества:
фраза «фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества» в контексте настоящего описания относится к любому ингредиенту, отличному от соединений и/или активных средств (например, которые описаны в настоящем документе), присутствующих в фармацевтических композициях и обладающих свойствами, практически не вызывающими токсичность и воспаление у субъекта, такого как пациент. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества представляют собой среды, способные суспендировать и/или растворять активные средства. Вспомогательные вещества могут включать, например, антиадгезивы, антиоксиданты, связующие вещества, покрытия, средства для спрессовывания, разрыхлители, красители (пигменты), смягчающие вещества, эмульгаторы, наполнители (разбавители), пленкообразователи или покрытия, ароматизаторы, отдушки, скользящие вещества (усилители текучести), смазывающие вещества, консерванты, краски для печати, сорбенты, суспензионные или диспергирующие средства, подсластители и гидратационную воду. Иллюстративные вспомогательные вещества включают без ограничения: бутилированный гидрокситолуол (BHT), карбонат кальция, фосфат кальция (двухосновный), стеарат кальция, кроскармеллозу, перекрестно сшитый поливинилпирролидон, лимонную кислоту, кросповидон, цистеин, этиленцеллюлозу, желатин, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, лактозу, стеарат магния, мальтит, маннит, метионин, метилцеллюлозу, метилпарабен, микрокристаллическую целлюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, повидон, прежелатинизированный крахмал, пропилпарабен, ретинилпальмиат, шеллак, диоксид кремния, карбоксиметилцеллюлозу натрия, цитрат натрия, натрия крахмала гликолят, сорбит, крахмал (кукурузный), стеариновую кислоту, сахарозу, тальк, диоксид титана, витамин A, витамин E, витамин C и ксилит.
[000265]
Фармацевтически приемлемые соли
: фармацевтически приемлемые соли соединений, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к производным или формах раскрытых соединений, где исходное соединение модифицировано посредством превращения существующего кислотного или основного фрагмента в его солевую форму (например, которые получены путем осуществления реакции группы свободного основания с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничения, соли основных остатков, таких как амины, с минеральными или органическими кислотами; соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, с щелочами или органическими основаниями и т.п. Типичные соли присоединения кислоты включают ацетат, соли уксусной кислоты, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, соли бензолсульфоновой кислоты, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и т.п. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают катионы натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, в том числе, без ограничения, катионы аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п. Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему раскрытию включают традиционные нетоксичные соли, образованные исходным соединением, например, с нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему раскрытию может быть синтезированной солью, полученной из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, посредством традиционных химических способов. Обычно такие соли можно получить посредством проведения реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или же в их смеси; обычно предпочтительными являются неводные среды, подобные эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу. Перечень подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, и Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
[000266]
Фармацевтически приемлемый сольват
: термин «фармацевтически приемлемый сольват» в контексте настоящего описания относится к кристаллической форме соединения согласно настоящему изобретению, где молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым во вводимой дозе. Например, сольваты можно получить посредством кристаллизации, перекристаллизации или осаждения из раствора, который включает органические растворители, воду или их смесь. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода (например, моно-, ди- и тригидраты), N-метилпирролидинон (NMP), диметилсульфоксид (DMSO), N,N'-диметилформамид (DMF), N,N'-диметилацетамид (DMAC), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMEU), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1H)-пиримидинон (DMPU), ацетонитрил (ACN), пропиленгликоль, этилацетат, бензиловый спирт, 2-пирролидон, бензилбензоат и т. п. Если растворителем является вода, сольват называется «гидратом». В соответствии с некоторыми вариантами осуществления включенный в сольват растворитель относится к типу или находится на уровне, который является физиологически переносимым для организма, в который вводят такой сольват (например, в единичной лекарственной форме из фармацевтической композиции).
[000267]
Фармакокинетический:
в контексте настоящего описания «фармакокинетический» относится к любому одному или более свойствам молекулы или соединения, когда оно относится к определению поведения веществ, вводимых в живой организм. Фармакокинетика разделена на несколько областей, в том числе степень и скорость всасывания, распределение, метаболизм и выведение из организма. В целом это обозначается как ADME, где: (A) всасывание представляет собой процесс проникновения вещества в кровоток; (D) распределение представляет собой распространение или рассредоточение веществ в жидкостях и тканях организма; (M) метаболизм (или биотрансформация) представляет собой необратимое превращение исходных соединений в дочерние метаболиты; и (E) выведение из организма (или элиминация) относится к удалению веществ из организма. В редких случаях некоторые лекарственные препараты необратимо накапливаются в ткани организма.
[000268]
Физико-химический:
в контексте настоящего описания «физико-химический» означает физическое и/или химическое свойство или относится к физическому и/или химическому свойству.
[000269]
Предупреждение
: в контексте настоящего описания термин «предупреждение» относится к частичной или полной задержке проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или клинических проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке прогрессирования инфекции, конкретного заболевания, нарушения и/или состояния; и/или снижению риска развития патологии, ассоциированной с инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.
[000270]
Пролекарство
Bioreversible Carriers in Drug Design
: настоящее раскрытие также включает пролекарства соединений, которые описаны в данном документе. В контексте настоящего описания «пролекарства» относятся к любому веществу, молекуле или молекулярной частице, которые находятся в форме, предшествующей для такого вещества, молекулы или молекулярной частицы, начиная действовать в качестве лекарства при химическом или физическом изменении. Пролекарства могут быть ковалентно связаны или секвестированы некоторым образом и высвобождают или превращаются в активный лекарственный фрагмент до введения, при введении или после введения субъекту-млекопитающему. Получение и применение пролекарств рассмотрено в работе T. Higuchi and V. Stella, ʺPro-drugs as Novel Delivery Systems,ʺ Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, и в работе , ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, обе из которых включены в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки.
[000271]
Пролиферировать
: в контексте настоящего описания термин «пролиферировать» означает расти, размножаться, реплицироваться или увеличиваться в количестве или вызывать рост, размножение, репликацию или увеличение в количестве. «Пролиферативный» означает наличие способности к пролиферации. «Антипролиферативный» означает наличие свойств, которые противоположны или противодействуют пролиферативным свойствам.
[000272]
Профилактический
: в контексте настоящего описания «профилактический» относится к лекарству или способу воздействия, используемому для предупреждения распространения заболевания.
[000273]
Профилактика:
в контексте настоящего описания «профилактика» относится к мере, предпринимаемой для поддержания здоровья и предупреждения распространения заболевания.
[000274]
Представляющий интерес белок:
в контексте настоящего описания термины «представляющие интерес белки» или «необходимые белки» включают предлагаемые в данном документе белки, а также их фрагменты, мутанты, варианты и измененнные формы.
[000275]
Очищенный:
в контексте настоящего описания «очищать», «очищенный», «очистка» означает делать практически чистым или очищенным от нежелательных компонентов, загрязнителя, примеси или дефекта. «Очищенный» относится к состоянию чистоты. «Очистка» относится к способу получения чистого продукта.
[000276]
Участок
: в контексте настоящего описания термин «участок» относится к зоне или общей площади. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, участок может содержать линейную последовательность аминокислот вдоль белка или белкового модуля или может содержать трехмерную область, эпитоп и/или кластер из эпитопов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о белках, концевые участки могут включать в себя N- и/или C-концы. N-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной аминогруппой. С-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной карбоксильной группой. Таким образом, N- и/или С-концевые участки могут включать в себя N- и/или С-концы, а также окружающие аминокислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N- и/или С-концевые участки содержат от приблизительно 3 аминокислот до приблизительно 30 аминокислот, от приблизительно 5 аминокислот до приблизительно 40 аминокислот, от приблизительно 10 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, от приблизительно 20 аминокислот до приблизительно 100 аминокислот и/или по меньшей мере 100 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя N-конец, но не включает С-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления С-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя С-конец, но не включает N-конец.
[000277]
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о полинуклеотиде, участок может содержать линейную последовательность из нуклеотидов вдоль полинуклеотида или может характеризоваться трехмерной областью, вторичной структурой или третичной структурой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о полинуклеотидах, концевые участки могут включать в себя 5' и 3'-концы. 5'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной фосфатной группой. 3'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной гидроксильной группой. Таким образом, 5'- и 3'-участки могут включать в себя 5'- и 3'-концы, а также окружающие нуклеотиды. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'- и 3'-концевые участки содержат от приблизительно 9 нуклеотидов до приблизительно 90 нуклеотидов, от приблизительно 15 нуклеотидов до приблизительно 120 нуклеотидов, от приблизительно 30 нуклеотидов до приблизительно 150 нуклеотидов, от приблизительно 60 нуклеотидов до приблизительно 300 нуклеотидов и/или по меньшей мере 300 нуклеотидов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 5'-конец, но не включает 3'-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 3'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 3'-конец, но не включает 5'-конец.
[000278]
РНК или молекула РНК
: в контексте настоящего описания термин «РНК», или «молекула РНК», или «молекула рибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из рибонуклеотидов; термин «ДНК», или «молекула ДНК», или «молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из дезоксирибонуклеотидов. ДНК и РНК могут синтезироваться в естественных условиях, например, при репликации ДНК и транскрипции ДНК, соответственно; или их можно химически синтезировать. ДНК и РНК могут быть одноцепочечными (т.е. ssRNA или ssDNA, соответственно) или многоцепочечными (например, двухцепочечными, т.е. dsRNA и dsDNA, соответственно). Термины «мРНК» или «информационная РНК», которые используются в данном документе, относятся к одноцепочечной РНК, которая кодирует аминокислотную последовательность одной или более полипептидных цепей.
[000279]
РНК-интерференция
: в контексте настоящего описания термин «РНК-интерференция» или «RNAi» относится к специфичному в отношении последовательности регуляторному механизму, опосредованному молекулами РНК, который приводит в результате к ингибированию, или препятствованию, или «сайленсингу» экспрессии соответствующего гена, кодирующего белок.
[000280]
Образец:
в контексте настоящего описания термин «образец» относится к аликвоте, подмножеству или части, взятой из источника и/или предоставленной для анализа или обработки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец получен из биологического источника, например, ткань, клетка или составная часть (например, жидкость организма, в том числе без ограничения кровь, слизь, лимфатическая жидкость, синовиальная жидкость, спинномозговая жидкость, слюна, амниотическая жидкость, амниотическая пуповинная кровь, моча, влагалищные выделения и сперма). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец может представлять собой или содержать гомогенат, лизат или экстракт, полученный из целого организма или подмножества его тканей, клеток или составных частей, или их фракции или доли, в том числе без ограничения, например, плазмы, сыворотки, цереброспинальной жидкости, лимфы, внешних участков кожи, дыхательных, кишечных и мочеполового трактов, слез, слюны, молока, клеток крови, опухолей или органов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец представляет собой или содержит среду, такую как питательный бульон или гель, которая может содержать клеточные компоненты, такие как белки или молекулы нуклеиновой кислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «первичный» образец представляет собой аликвоту источника. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первичный образец подвергают одной или более стадиям обработки (например, разделению, очистке и т.д.) для подготовки образца для анализа или другого применения.
[000281]
Самокомплементарная вирусная частица
: в контексте настоящего описания «самокомплементарная вирусная частица» представляет собой частицу, состоящую по меньшей мере из двух компонентов: белкового капсида и полинуклеотидной последовательности, кодирующей самокомплементарный геном, заключенный внутри капсида.
[000282]
Смысловая цепь
: в контексте настоящего описания термин «смысловая цепь», или «вторая цепь», или «сопровождающая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая комплементарна антисмысловой цепи или первой цепи. Антисмысловая и смысловая цепи молекулы siRNA гибридизируются с образованием дуплексной структуры. В контексте настоящего описания «дуплекс siRNA» включает в себя цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью с участком приблизительно из 10-50 нуклеотидов в мРНК гена, подвергающегося целенаправленному воздействию с целью сайленсинга, и цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью для образования дуплекса с цепью siRNA.
[000283]
Сигнальные последовательности
: в контексте настоящего описания фраза «сигнальные последовательности» относится к последовательности, которая может управлять транспортом или локализацией.
[000284]
Единичная стандартная доза
: в контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления единичная стандартная доза представлена в виде дискретной лекарственной формы (например, таблетки, капсулы, пластыря, заряженного шприца, ампулы и т. д.).
[000285]
Схожесть
например,
например,
: в контексте настоящего описания термин «схожесть» относится к общему родству между полимерными молекулами, между полинуклеотидными молекулами (молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента схожести полимерных молекул друг с другом может быть выполнен таким же образом, как и расчет процента идентичности, за исключением того, что при расчете процента схожести учитываются консервативные замены, как понимается в данной области техники.
[000286]
Малая/короткая интерферирующая РНК
: в контексте настоящего описания термин «малая/короткая интерферирующая РНК» или «siRNA» относится к молекуле РНК (или аналога РНК), содержащей приблизительно 5-60 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), которая способна управлять или опосредовать RNAi. Предпочтительно молекула siRNA содержит приблизительно 15-30 нуклеотидов или нуклеотидных аналогов, более предпочтительно приблизительно 16-25 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), еще более предпочтительно приблизительно 18-23 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) и еще более предпочтительно приблизительно 19-22 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) (например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида или нуклеотидного аналога). Термин «короткая» siRNA относится к siRNA, содержащей 5-23 нуклеотида, предпочтительно 21 нуклеотид (или нуклеотидный аналог), например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида. Термин «длинная» siRNA относится к siRNA, содержащей 24-60 нуклеотидов, предпочтительно приблизительно 24-25 нуклеотидов, например, 23, 24, 25 или 26 нуклеотидов. Короткие siRNA в некоторых случаях могут включать в себя менее 19 нуклеотидов, например, 16, 17 или 18 нуклеотидов, или всего лишь 5 нуклеотидов при условии, что более короткая siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi. Аналогичным образом, длинные siRNA в некоторых случаях могут включать в себя более 26 нуклеотидов, например, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или даже 60 нуклеотидов, при условии, что более длинная siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi или трансляционную репрессию при отсутствии дополнительного процессинга, например, ферментативного процессинга, в короткие siRNA. siRNA могут представлять собой молекулы одноцепочечной РНК (ss-siRNA) или молекулы двухцепочечной РНК (ds-siRNA), содержащие смысловую цепь и антисмысловую цепь, которые гибридизируются с образованием дуплексной структуры, называемой дуплексом siRNA.
[000287]
Раздельная доза
: в контексте настоящего описания «раздельная доза» представляет собой разделение единичной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или более доз.
[000288]
Стабильный:
в контексте настоящего описания термин «стабильный» относится к соединению или молекулярной частице, которые достаточно устойчивы, чтобы выдержать выделение до пригодной степени чистоты из реакционной смеси, и предпочтительно могут быть составлены в эффективное терапевтическое средство.
[000289]
Стабилизированный:
в контексте настоящего описания термин «стабилизировать», «стабилизированный», «стабилизированный участок» означает делать или становиться стабильным. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к абсолютному значению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к эталонному соединению или молекулярной частице.
[000290]
Субъект:
например
например
в контексте настоящего описания термин «субъект» или «пациент» относятся к любому организму, которому можно вводить композицию в соответствии с настоящим изобретением, , для экспериментальных, диагностических, профилактических и/или терапевтических целей. Типичные субъекты включают в себя животных (, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, отличные от человека приматы и люди), и/или растения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъектом может быть младенец, новорожденный или ребенок в возрасте до 12 лет. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект может находиться в утробе матери.
[000291]
Практически
: в контексте настоящего описания термин «практически» относится к качественному состоянию проявления полной или почти полной степени или порядка представляющей интерес характеристики или свойства. Специалисту в биологии в данной области техники будет понятно, что биологические и химические явления редко, если вообще, доходят до завершения и/или продолжаются до завершенности или приводят к достижению или избежанию абсолютного результата. Таким образом, выражение «практически» используют в данном документе для отражения потенциального отсутствия завершенности, свойственного многим биологическим и химическим явлениям.
[000292]
Практически равный
: в контексте настоящего описания это относится к временным различиям между дозами, при этом выражение означает плюс/минус 2%.
[000293]
Практически одновременно
: в контексте настоящего описания, и поскольку он относится к нескольким дозам, этот термин обычно означает в течение приблизительно 2 секунд.
[000294]
Страдающий от
: у индивидуума, который «страдает от» заболевания, нарушения и/или состояния, было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние, такое как, например, болезнь Паркинсона, или проявляется один или более его симптомов.
[000295]
Подвержен развитию
: у индивидуума, который «подвержен развитию» заболевания, нарушения и/или состояния, не было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние или не могут проявляться его симптомы, но он имеет предрасположенность к развитию заболевания или его симптомов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления индивид, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния (например, злокачественной опухоли), может быть охарактеризован одним или более из следующего: (1) генетической мутацией, ассоциированной с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (2) генетическим полиморфизом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (3) повышенной и/или сниженной экспрессией и/или активностью белка и/или нуклеиновой кислоты, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием; (4) привычками и/или образом жизни, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (5) семейным анамнезом заболевания, нарушения и/или состояния; и (6) воздействием микроорганизма и/или заражением микроорганизмом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, разовьется заболевание, нарушение и/или состояние. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, не разовьется заболевание, нарушение и/или состояние.
[000296]
Замедленное высвобождение:
в контексте настоящего описания термин «замедленное высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует скорости высвобождения в течение определенного периода времени.
[000297]
Синтетический
: термин «синтетический» означает полученный, приготовленный и/или произведенный руками человека. Синтез полинуклеотидов, или полипептидов, или других молекул согласно настоящему изобретению может быть химическим или ферментативным.
[000298]
Нацеливание
: в контексте настоящего описания термин «нацеливание» означает процесс разработки и подбора последовательности нуклеиновой кислоты, которая будет гибридизироваться с целевой нуклеиновой кислотой и индуцировать желаемый эффект.
[000299]
Целевые клетки:
in vitro
in vivo
in situ
в контексте настоящего описания термин «целевые клетки» относится к любой одной или более представляющим интерес клеткам. Клетки могут находиться , , или в ткани или органе организма. Организмом может быть животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человек и наиболее предпочтительно пациент.
[000300]
Терапевтическое средство:
термин «терапевтическое средство» относится к любому средству, которое при введении субъекту оказывает терапевтический, диагностический и/или профилактический эффект и/или вызывает необходимый биологический и/или фармакологический эффект.
[000301]
Терапевтически эффективное количество:
например
и т. д.),
в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективное количество» означает количество средства, подлежащего доставке (, нуклеиновой кислоты, лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства которое является достаточным, при введении субъекту, страдающему от или подверженному развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, уменьшения симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, такого как, например, болезнь Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество представлено в виде единичной дозы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество вводят согласно режиму дозирования, предусматривающему введение множества доз. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления, единичную лекарственную форму можно рассматривать как содержащую терапевтически эффективное количество конкретного средства или молекулярной частицы, если она содержит количество, которое является эффективным при введении в качестве части такого режима дозирования.
[000302]
Терапевтически эффективный результат
: в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективный результат» означает результат, который является достаточным у субъекта, который страдает инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием или подвержен развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, нормализации симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.
[000303]
Общая суточная доза:
в контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы.
[000304]
Трансфекция
: в контексте настоящего описания термин «трансфекция» относится к способам введения в клетку экзогенных нуклеиновых кислот. Способы трансфекции включают, без ограничения, химические способы, физическую обработку и обработку катионными липидами или смесями.
[000305]
Лечение
: в контексте настоящего описания термин «лечение» относится к частичному или полному снижению, ослаблению, уменьшению, облегчению, задержке проявления, ингибированию прогрессирования, уменьшению тяжести и/или снижению частоты возникновения одного или более симптомов или признаков конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния. Например, «лечение злокачественной опухоли» может относиться к ингибированию выживаемости, роста и/или распространения опухоли. Лечение можно назначать субъекту, у которого не наблюдаются признаки заболевания, нарушения и/или состояния, и/или субъекту, у которого наблюдаются только ранние признаки заболевания, нарушения и/или состояния, с целью снижения риска развития патологии, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.
[000306]
Немодифицированный
: в контексте настоящего описания термин «немодифицированный» относится к любому веществу, соединению или молекуле до ее изменения каким-либо образом. Немодифицированный может, но не всегда, относиться к форме дикого типа или нативной форме биомолекулы или молекулярной частицы. Молекулы или молекулярные частицы могут быть подвергнуты ряду модификаций, в силу чего каждое модифицированное вещество, соединение, молекула или молекулярная частица может служить в качестве «немодифицированной» исходной молекулы для последующей модификации.
[000307]
Вектор
: в контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы. Векторы по настоящему раскрытию могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе и/или могут содержать исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Такие исходные или эталонные последовательности AAV могут служить в качестве изначальной, второй, третьей или последующей последовательности для конструирования векторов. В неограничивающих примерах такие исходные или эталонные последовательности AAV могут включать в себя любую одну или более из следующих последовательностей: полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид или несколько полипептидов, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа и последовательность которой может кодировать полноразмерную или частичную последовательность белка, белкового домена или одной или более субъединиц белка; причем полинуклеотид содержит модулирующую или регуляторную нуклеиновую кислоту, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа; и трансген, который может быть или не быть последовательностью, модифицированной от дикого типа. Эти последовательности AAV могут служить либо «донорной» последовательностью одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида), либо «акцепторными» последовательностями одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида).
[000308]
Вектор на основе вирусной конструкции
: в контексте настоящего описания «вектор на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих белок Rep и или Cap.
[000309]
Вектор экспрессии на основе вирусной конструкции
: в контексте настоящего описания «вектор экспрессии на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих Rep и или Cap, который дополнительно содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.
[000310]
Вирусный геном
: в контексте настоящего описания «вирусный геном» представляет собой полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR), по меньшей мере одну регуляторную последовательность и по меньшей мере один полезный груз. Вирусный геном получен путем репликации конструкции полезного груза из вектора экспрессии конструкции полезного груза. Вирусный геном кодирует по меньшей мере одну копию конструкции полезного груза.
ЭКВИВАЛЕНТЫ И ОБЪЕМ
[000311]
Специалисты в данной области техники поймут или будут способны установить с использованием не более чем стандартного экспериментирования многие эквиваленты конкретным вариантам осуществления в соответствии с настоящим изобретением, описанным в данном документе. Не предполагается, чтобы объем настоящего изобретения ограничивался вышеизложенным описанием, вместо этого он изложен в прилагаемой формуле изобретения.
[000312]
В пунктах формулы изобретения формы единственного числа, такие как «некоторый», «некий» и «данный», могут означать один или более чем один, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Пункты формулы изобретения или описания, которые включают «или» между одним или более членами группы, считаются удовлетворительными, если один, более чем один или все из членов группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых именно один член группы присутствует в, используется в или иным образом относится к заданному продукту или процессу. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного или все члены группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу.
[000313]
Также отмечается, что термин «содержащий» предполагается открытым и позволяет, но не требует включения дополнительных элементов или стадий. Если термин «содержащий» используется в данном документе, термин «состоящий из», следовательно, также охватывается и раскрывается.
[000314]
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понятно среднему специалисту в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Способы и материалы описаны в данном документе для применения в настоящем раскрытии; также могут быть использованы другие подходящие способы и материалы, известные в данной области техники.
[000315]
В случае, если приведены диапазоны, конечные значения включены. Более того, следует понимать, что если не указано иное, или это в иных условиях не является очевидным из контекста и понимания специалиста в данной области техники, величины, которые выражены в виде диапазонов, могут предполагать любое конкретное значение или поддиапазон в приведенных диапазонах в разных вариантах осуществления настоящего изобретения, до десятой части единицы измерения на нижней границе диапазона, если контекст явно не предписывает иное.
[000316]
например
и т. д.)
Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, который попадает в уровень техники, может быть явно исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления считаются известными специалисту в данной области техники, их можно исключить, даже если исключение явно не изложено в данном документе. Любой определенный вариант осуществления композиций по настоящему изобретению (, любая нуклеиновая кислота или кодируемый ею белок; любой способ получения; любой способ применения; может быть исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения по любой причине, связанной или не связанной с его присутствием в уровне техники.
[000317]
Все упоминаемые источники, например, ссылки, публикации, базы данных, записи в базах данных и источники из уровня техники, цитируемые в данном документе, включены в настоящую заявку при помощи ссылки, даже если явным образом не указываются при цитировании. В случае противоречивых утверждений из цитируемого источника и настоящей заявки, утверждение в настоящей заявке должно иметь преимущественную силу.
[000318]
Названия разделов и таблиц не подразумеваются как ограничивающие.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Разработка полинуклеотидов AADC
[000319]
Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.
[000320]
После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.
[000321]
Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.
[000322]
Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.
[000323]
В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 1. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).
Таблица 1. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.
<b>Конструкция</b>
<b>SEQ ID NO</b>
pFB CMV hAADC-1
2
pFB CMV hAADC-2
3
pFB CMV hAADC-3
4
pFB CMV hAADC-4
5
Пример 2. Полинуклеотиды AADC: ITR к ITR
[000324]
Полинуклеотиды AADC, пригодные для применения в вирусном векторе на основе AAV, включают приведенные в таблице 2.
[000325]
В таблице 2 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 1.
Таблица 2. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR
<b>Конструкция</b>
<b>SEQ ID NO</b>
pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR)
6
pFB CMV hAADC-2 (ITR к ITR)
7
pFB CMV hAADC-3 (ITR к ITR)
8
pFB CMV hAADC-4 (ITR к ITR)
9
Пример 3. По отношению к исходной последовательности ITR к ITR,
[000326]
полинуклеотиды AADC разработаны согласно таблице 3 и таблице 4. Положения старт- и стоп-кодонов даны по отношению полинуклеотидам AADC ITR к ITR, описанным в таблице 2.
Таблица 3. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR)
pFB CMV hAADC-2(ITR к ITR)
pFB CMV hAADC-3(ITR к ITR)
pFB CMV hAADC-4(ITR к ITR)
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
5'-ITR
1
130
1
130
1
130
1
130
Энхансер CMV
263
566
263
566
263
566
296
599
Промотор CMV
567
769
567
769
567
769
600
802
ie1 экзон 1
784
917
784
917
784
917
817
950
ie1 интрон 1
918
949
918
949
918
949
951
982
hbBglobin, интрон 2
950
1296
950
1296
950
1296
983
1329
hBglobin, экзон 3
1297
1349
1297
1349
1297
1349
1330
1382
5'-UTR
--
--
--
--
--
--
1398
1468
hAADC
1374
2822
--
--
1374
2822
1473
2921
кодоп hAADC
--
--
1374
2816
--
--
--
--
3'-UTR
--
--
--
--
2823
3221
2922
3361
сигнал поли(A) hGH
2841
3317
2835
3311
3240
3716
3380
3856
3'-ITR
3417
3535
3416
3534
3822
3940
3961
4079
Таблица 4. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
hAADC_1k
hAADC_2k
hAADC_3k
hAADC_4
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
5'-ITR
1
141
1
141
1
141
1
141
Энхансер CMV
245
548
245
548
245
548
245
548
Промотор CMV
549
751
549
751
549
751
549
751
ie1 экзон 1
766
899
766
899
766
899
766
899
ie1 интрон 1
900
931
900
931
900
931
900
931
hbBglobin, интрон 2
932
1278
932
1278
932
1278
932
1278
hBglobin, экзон 3
1279
1331
1279
1331
1279
1331
1279
1331
5'-UTR
--
--
--
--
--
--
1347
3310
hAADC
1356
2804
1356
2804
--
--
1422
2864
кодоп hAADC
--
--
--
--
1356
2798
--
--
3'-UTR
--
--
--
--
--
--
2865
3310
сигнал поли(A) hGH
2823
3299
2823
3299
2817
3293
3329
3805
3'-ITR
3357
3497
3357
3497
3351
3491
3863
4003
Таблица 5. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
hAADC_5k
hAADC_6k
hAADC_9k
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
Старт
Стоп-кодон
5'-ITR
1
145
1
141
1
130
Энхансер CMV
249
552
245
548
234
537
Промотор CMV
553
755
549
751
538
740
ie1 экзон 1
770
903
766
899
755
888
ie1 интрон 1
904
935
900
931
889
920
hbBglobin, интрон 2
936
1282
932
1278
921
1267
hBglobin, экзон 3
1283
1335
1279
1331
1268
1320
5'-UTR
--
--
--
--
--
--
hAADC
1356
2798
1345
2793
кодоп hAADC
1360
2802
--
--
--
--
3'-UTR
--
--
2799
3203
--
--
сигнал поли(A) hGH
2821
3297
3222
3698
2812
3288
3'-ITR
3355
3499
3756
3896
3346
3475
Пример 4. Разработка полинуклеотидов AADC
[000327]
Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.
[000328]
После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.
[000329]
Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.
[000330]
Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.
[000331]
В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 6. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).
Таблица 6. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.
<b>Конструкция</b>
<b>SEQ ID NO</b>
phAADC_1k
10
phAADC_2k
11
phAADC_3k
12
phAADC_4
13
phAADC_5k
14
phAADC_6k
15
phAADC_9k
16
[000332]
В таблице 7 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 6.
Таблица 7. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR
<b>Конструкция</b>
<b>SEQ ID NO</b>
phAADC_1k (ITR к ITR)
17
phAADC_2k (ITR к ITR)
18
phAADC_3k (ITR к ITR)
19
phAADC_4 (ITR к ITR)
20
phAADC_5k (ITR к ITR)
21
phAADC_6k (ITR к ITR)
22
phAADC_9k (ITR к ITR)
23
Пример 5. Введение композиций с полинуклеотидами AADC пациентам для генной терапии
[000333]
Композиции с векторами на основе рекомбинантных AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводили инфузией в черную субстанцию и, в частности, Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) пациентов, у которых есть болезнь Паркинсона и которые идентифицированы как подходящие для лечения в соответствии с известными в настоящей области техники способами.
[000334]
et al
et al
Neurosurgery
et al
Neurosurgery
Одним способом введения, рассматриваемым для применения в описываемых в настоящем документе способах, является конвективная доставка в режиме реального времени (RCD) композиций с векторами на основе AAV, содержащими полинуклеотид AADC, путем совместной инфузии гадотеридола (контраста, используемого для магнитного резонанса (MR)) и магнитно-резонансной томографии T1 или Т2 (MRT), с помощью которой можно прогнозировать области последующей экспрессии гена AADC. Как описано в Richardson, ., 2011, точность размещения канюли и начального распределение инфузата можно безопасно определять путем инфузии солевого раствора без существенного изменения последующего распределения радиоактивного индикатора (Richardson, ., 2011, , 69(1):154-163). RCD Т2 позволяет производить детекцию интрапаренхиматозной конвективной доставки в неповрежденном головном мозге, и с помощью нее можно прогнозировать последующее распределение трансгена после инфузии вирусного вектора. Субъектам вводили инфузию солевого раствора/получали T2-изображения, сразу же с последующей инфузией гадотериола/получением T1-изображений в скорлупе и стволе головного мозга. Анализировали объемы распределения и пространственные паттерны. Гадотеридол и AVV-кодируемые AADC совместно вводили инфузией при переменном получении T2/T1-изображений в таламусе, а гиперинтенсивные области сравнивали с областями последующей экспрессии трансгена. Ожидалось, что соотношения объема распределения к объему инфузии должны были быть схожими для RCD солевого раствора и гадотеридола. Пространственное перекрытие должно было хорошо коррелировать между T2- и T1-изображениями. Второй инфузат должен был повторять пространственно-временной паттерн, аналогичный первому, заполняя целевую область до появления дополнительного целераспределения. Области экспрессии AADC должны были хорошо коррелировать с областями гиперинтенсивности как на Т1-, так и на Т2-изображениях, наблюдаемой в ходе RCD (Richardson, ., 2011, , 69(1):154-163).
[000335]
т. е.
et al
Stereotact. Funct. Neurosurg.
Конвективная доставка (CED) макромолекул непосредственно в паренхиму головного мозга известна на протяжении более двух десятилетий. CED - это термин, который обозначает использование градиента давления для создания объемного потока внутри паренхимы головного мозга, конвекции макромолекул внутри интерстициальной жидкости, управляемой путем инфузии раствора через канюлю, размещенную непосредственно в целевой структуре. Этот способ делает возможным равномерное распределение терапевтических средств по большим объемам ткани головного мозга, минуя гематоэнцефалический барьер и превосходя простую диффузию (Richardson,., 2011, 89:141-151).
[000336]
al
et al
Frontiers in Neuroanatomy
et al
Stereotact. Funct. Neurosurg.
et al
Frontiers in Neuroanatomy
Salegioet . недавно продемонстрировали распределение наночастиц различных размеров, в том числе мицелл (~15 нм по размеру), ААV (~20-25 нм) и липосом (~65 нм), в ЦНС грызунов и NHP (Salegio ., 2014, , vol. 8, article 9: pp. 1-8). Простые инъекции не могут задействовать периваскулярную систему, и необходимы специализированные инфузионные канюли, позволяющие поддерживать постоянное давление на кончике канюли, благодаря чему превышается интерстициальное гидростатическое давление, а инфузат может вытекать в ткань. Простые иглы создают значительный противоток; поэтому для противодействия такой тенденции были разработаны устойчивые к противотоку канюли. Появление платформ для конвективных инфузий с контролем по MRI дополнительно усовершенствовало понимание механики периваскулярного потока, и было продемонстрировано, что периваскулярное распределение липосом было линейным относительно времени, наклон кривой возрастал в миелинизированных участках, а прекращение инфузии предотвращало дальнейшее увеличение объема распределения. (Richardson,., 2011, 89:141-151;Salegio ., 2014, , vol. 8, article 9: pp. 1-8).
[000337]
et al
Известно, что интрапаренхимальные инъекции rAAV приводят к устойчивой, но относительно локальной трансдукции. Такие способы локальной доставки являются преимущественными при проведении генной терапии неврологических нарушений, которые обусловлены невропатологией, которая локализована в конкретном анатомическом участке или анатомической цепи, например, как в случае болезни Паркинсона. Тем не менее, в способах лечения, предусматривающих трансдукцию более широких областей ЦНС, интрапаренхимальные инъекции являются практически нецелесообразными. Лечение неврологических нарушений, относящихся к врожденным аномалиям обмена веществ и/или моногенным нарушениям, или таким, которые затрагивают двигательные нейроны спинного мозга, может предусматривать трансдукцию больших частей соответственно головного мозга или спинного мозга. Разработка малоинвазивных способов доставки через гематоэнцефалический барьер для векторов является чрезвычайно важной задачей. Сообщалось о многочисленных попытках с различными результатами применять молекулы, о которых известно, что они взаимодействуют с различными механизмами активного транспорта (вероятно, рецептор-опосредованного) для переноса белков через гематоэнцефалический барьер. Учитывая большое количество доступных серотипов AAV, один или более серотипов могут связываться с рецептором входа в клетку, способным транспортировать капсид AAV через гематоэнцефалический барьер (Manfredsson, ., 2009, ʺAAV9: a potential blood brain barrier buster.ʺ Molecular Therapy 17(3):403-405).
Вектор и стереотаксическая инфузия
[000338]
et al
Sci. Transl. Med.
Стереотаксической подход можно применять для хирургической доставки полинуклеотидов AADC. Хотя у индивидуумов с дефицитом AADC присутствует недостаток адреналина и норадреналина, у этих пациенты должны сохраняться стабильное кровяное давление и частота сердечных сокращений во время хирургической операции. Не должно быть никаких заметных внутримозговых кровоизлияний на послеоперационных сканах компьютерной томографии (СТ) или MRI. Следы от укола иглы, которые видны на MRI, должны свидетельствовать о точной инъекции в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA). Пациенты должны быть выписаны из больницы приблизительно через одну неделю после хирургической операции (Hwu, W.L., ., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Vol. 4, 134ra61).
[000339]
см.,
et al
Mol. Ther. Methods Clin. Dev.
см.,
CNS Drugs
Назначенные на лечение субъекты получают вектор в композиции с AAV-вектором, безопасно доставляемый в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий или, в качестве альтернативы, в полосатое тело (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро(STN), например, необязательно с использованием FDA-утвержденных нейровентрикулярных канюль SMARTFLOW (SurgiVision, Inc), специально разработанных для клинического применения, с или без помощи системы CLEARPOINT, для того, чтобы помочь лечащему нейрохирургу(-ам) направлять и отслеживать доставку терапевтического средства в головной мозг (например, San Sebastian, ., 2014, 3: 14049; например, Feng and Maguire-Zeiss, 2010, 24(3):177-192).
[000340]
12
11
Так, например, во время хирургической операции определяют две целевые точки в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (ВТА), которые достаточно отделены друг от друга в дорсолатеральных направлениях и идентифицировали на магнитно-резонансной томограмме. Пробуривают одно трепанационное отверстие на каждой стороне кости черепа, через которое вектор вводят инъекцией в две целевые точки по двойному пути введения. Содержащий AAV-вектор раствор готовят в концентрации 1,5 × 10 векторного генома/мл, и 50 мкл на каждую точку раствора вводят инъекцией в количестве 1 мкл/мин.; каждый пациент получает 3 × 10 векторного генома AAV-векторной конструкции.
[000341]
3
Титры нейтрализующих антител к AAV2 определяют путем измерения β-галактозидазных активностей в клетках НЕК293, трансдуцированных 5 × 10 векторного генома/клетка векторов AAV2, экспрессирующих β-галактозидазу, в различных разведениях сыворотки.
PET
[000342]
Уровень экспрессии AADC в черной субстанции оценивают на PET с визуализацией FMT за шесть дней до хирургической операции и через один и шесть месяцев после переноса гена. Все пациенты прекращают принимать дофаминергические лекарственные препараты за 18 часов до PET и принимали 2,5 мг/кг карбидопы перорально за один час до FMT-инъекции. Затем 0,12 мКи/кг средства для FMT в солевом растворе вводят инфузией в локтевую вену и получают 90-минутную динамическую последовательность изображений. Данные PET и магнитно-резонансной томографии совместно регистрируют с помощью программы обработки наложения (Syntegra; Philips, Амстердам, Нидерланды) для получения наложенных изображений. Значения радиоактивности в пределах представляющих интерес объемов, задействованных в нигростриарном пути, рассчитывают между 80 и 90 минутами после инъекции индикатора. Изменение поглощения в FMT нигростриатного пути от исходной точки до 24 недель оценивают с использованием соотношения значений радиоактивности черной субстанции к полосатому телу.
Статистический анализ
[000343]
См.,
et al
Mol. Ther.
Значения в исходной точке и через 6 месяцев после переноса гена сравнивают с помощью t-критерия Стьюдента (спаренные анализы). Двустороннее Р-значение <0,05 берут для обозначения значимых различий. Двусторонний дисперсионный анализ с поправкой по методу Бонферрони P-значений используют для оценки кратковременного ответа к леводопе. (например, Muramatsu, ., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ 18:1731-1735).
[000344]
Безопасность и переносимость двустороннего введения композиций с вектором на основе AAV с использованием инфузии в режиме реального времени с контролем по изображениям в головной мозг субъектов с болезнью Паркинсона можно отслеживать сроком до 9 месяцев после операции или дольше. Широкий охват целевых областей (Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (VTA)) и широкое распределение белка AADC в стриатуме должны достигаться без каких-либо побочных эффектов.
[000345]
Изменения роста и двигательных навыков:
пациенты должны набирать массу и характеризоваться улучшением их двигательных показателей после переноса гена в течение года после лечения. Массу измеряют через 3-6 месяцев после переноса гена. Все пациенты изначально должны иметь предварительные показатели, равные нулю, по Шкале развития моторики младенцев Альберта (AIMS) и очень низкие предварительные показатели по Шкале развития моторики Пибоди, второй редакции (PDMS-II). После переноса гена у всех пациентов должны наблюдаться непрерывные увеличения их предварительных показателей по этим двум шкалам, что свидетельствует о том, что их двигательные функции улучшились. Анкета сравнительной оценки развития для младенцев и детей (CDIIT) охватывает развитие как когнитивных так и двигательных функций. У всех пациентов должны наблюдаться низкие предварительные показатели CDIIT перед переносом гена, а последующее увеличение показателей свидетельствует об улучшении как двигательных, так и когнитивных функций.
Субъективные улучшения после переноса гена
[000346]
et al
Sci. Transl. Med.
Для документирования симптомов, которые труднее поддаются количественной оценке, супругов, опекунов или попечителей пациентов в конце исследования просят заполнить анкету. Симптомы окулогирных кризов должны уменьшаться, а некоторыми умеренными симптомами при окулогирных кризах, которые могли оставаться после генной терапии являются, например, девиации глаза и нарушения сна. Субъекты могут испытывать повышенную эмоциональную стабильность, и/или некоторые улучшения в потоотделения и гипертермии (общее проявление нестабильности температуры тела в жаркую погоду). Не должно быть никаких детектируемых аномалий в колебательности сердечного ритма, оцениваемых по 24-часовому холтеровскому мониторированию ЭКГ, либо до, либо после переноса гена. У пациентов, которые до генной терапии были прикованы к постели и у которых наблюдали небольшое спонтанное движение, может наблюдаться менее серьезный птоз (опущение верхнего века) через одну-две недели после переноса гена. В соответствии с предыдущими исследованиями, через один месяц после переноса гена может появляться дискинезия, но в случае, если наблюдалось уменьшение дискинезии, должно начинаться развитие двигательных функций (Hwu, W.L., ., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Vol. 4, 134ra61). У субъектов можно наблюдать, например, улучшенное удержание головы спустя три месяца, способность сидеть с поддержкой спустя шесть - девять месяцев, способность садиться из лежачего положения спустя тринадцать месяцев и способность удерживать игрушки и стоять с поддержкой спустя шестнадцать месяцев после переноса гена. Антитело к AAV2 должно быть отрицательным у пациентов до генной терапии, и титры могут слегка возрастать после переноса гена.
PET-сканирование и CSF-анализ
[000347]
et al
Sci. Transl. Med.
Для подвергаемых лечению пациентов проводят PET-сканирование и CSF-анализ. Через шесть месяцев после переноса гена на PET-сканах должно быть видно, что поглощение 6-[18F]-фтордопы (FDOPA) увеличивается от исходного уровня в объединенных (справа и слева) участках обработки. CSF-анализ должен выявить увеличение уровней гомованилиновой кислоты (HVA, метаболита дофамина) и 5-оксииндолуксусной кислоты (HIAA, метаболита серотонина). Однако уровни L-DOPA и 3-О-метилдопы могут оставаться повышенными (Hwu, W.L., ., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Vol. 4, 134ra61).
Пример 6. Введение полинуклеотидов AADC
[000348]
Композицию с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводят инфузией в скорлупу пациентов с болезнью Паркинсона с помощью способов введения, описанных в Примере 5. Доза, число пациентов и объем приведены в таблице 8.
Таблица 8. Схема исследования
<b>Исследование №</b>
<b>Количество пациентов</b>
<b>Доза</b>
<b>Объем</b>
1
6
3×10<sup>11</sup> вг
100 мкл на скорлупу
2
6
9×10<sup>11</sup> вг
300 мкл на скорлупу
3
10
2,3×10<sup>11</sup> вг
100 мкл на скорлупу
4
10
7,5×10<sup>11</sup> вг
100 мкл на скорлупу
5
5
7,5×10<sup>11</sup> вг
450 мкл на скорлупу
6
До 20
1,4×10<sup>12</sup> вг
До 900 мкл на скорлупу
7
До 20
4,8×10<sup>12</sup> вг
До 900 мкл на скорлупу
8
До 20
8,8×10<sup>12</sup> вг
До 900 мкл на скорлупу
[000349]
см.
et al
Movement Disorders
см.,
et al
Mol. Ther.
В ходе исследования оценивали безопасность и переносимость инфузии композиций с векторами на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащим полинуклеотид AADC, у пациентов-людей с диагностированной болезнью Паркинсона. Пациентов оценивали до операции и ежемесячно в послеоперационном периоде в течение шести месяцев с использованием нескольких показателей, в том числе шкалы общей оценки дистонии (GDS) (Comella, ., 2003, , 18(3):303-312), теста с нагрузкой L-DOPA, оценок по шкале UPDRS, журналов статуса двигательных функций и результатов лабораторных тестов. С помощью журналов, в которых день разделен на получасовые сегменты, опекуны пациентов регистрировали их подвижность в течение четырех дней до поступления и в течение еще четырех дней через шесть месяцев после поступления в исследовательский центр. Опекунов пациента обучали оценивать состояние субъекта как спящего, неподвижного, подвижного без вызывающей беспокойство дискинезии или подвижного с вызывающей беспокойство дискинезией. Подсчитывали общее количество часов, проведенных в каждой из этих категорий, и различие между исходной оценкой и шестимесячными оценками сравнивали между группами. Кратковременный ответ на леводопу оценивали на исходном уровне и через 6 месяцев после переноса гена; субъекты принимали 100 мг леводопы перорально с 25 мг бенсеразида спустя 20 часов без дофаминергического лекарственного препарата. Двигательные симптомы, на основе GDS и концентрации леводопы в плазме, оценивали на исходном уровне и через 30 мин, 1, 2, 3 и 4 часа после приема леводопы (например, Muramatsu, ., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ 18:1731-1735).
Пример 7.
In vivo
введение полинуклеотидов AADC
[000350]
12
Две композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмиду, SEQ ID NO: 10 и 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 17 и 19), контроль и стандарт вводили крысам (n=5) с помощью двустороннего интрастриарного введения (10 мкл/сторона) с уровнем дозы 2×10вг/мл. Экспрессию AADC в стриатуме крыс определяли с помощью ELISA через 4 и 8 недель. Наблюдали разброс среди животных и полушарий из-за отличающейся доставки среди участков инфузий. Обе конструкции экспрессировали AADC, но для конструкции phAADC_3k (плазмида SEQ ID NO: 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 19) наблюдали до 200% увеличения экспрессии по сравнению со стандартной конструкцией.
Пример 8. Дозозависимое исследование полинуклеотидов AADC
[000351]
11
13
ex vivo
Крысам с поражениями, вызванными 6-OHDA, вводили композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17) с пятью различными уровнями доз в диапазоне от 1×10вг/мл до 1×10вг/мл и контроль. Поведенческий ответ на введение низкой дозы леводопы количественно оценивали до и после (на 3-ю и 4-ю неделю) доставки композиции. Спустя 5 недель после введения дозы проводили аутопсию и измеряли ферментативную активность AADC в анализе ткани стриатума и с помощью иммуногистохимического (IHC) окрашивания определяли распределение AADC в головном мозге.
Пример 9. Влияние пустых частиц на интрастриарную трансдукцию
[000352]
Взрослым крысам (п=6) вводили различные соотношения заполненных:пустых векторных частиц, 0% заполненных, 50% заполненных, 85% заполненных или 99% заполненных. В постоянной дозе и объеме (5 мкл и 1×10 вг) интрастриарно вводили вектор на основе рекомбинантного AAV, содержащий полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17). Крыс оценивали через 4 недели после введения. Низкая доза вектора доза приводила к ограниченной экспрессии вектора AADC. Объем распределения для частиц показан в таблице 9 (ELISA), а стриарные уровни экспрессии AADC показаны в таблице 10 (гистология).
Таблица 9. Объем распределения
<b>% отношения заполненной AAV2-AADC-частицы к пустым капсидам</b>
<b>Примерный объем распределения (мм</b><sup><b>3</b></sup><b>)</b>
50:50
2
70:30
2.4
85:15
2.5
100:0
3
Таблица 10. Стриарные уровни
<b>% заполненных AAV2-AADC-частиц</b>
<b>пг AADC/мкг белка</b>
0
0.4
52
1.1
58
1.7
83
2
>99
2.1
[000353]
Распределение было сравнимым для всех групп. Относительно низкая доза вектора приводила к ограниченной экспрессии AADC. Также имела место тенденция к снижению уровней экспрессии AADC при >30% пустых частиц.
[000354]
Хотя настоящее изобретение было описано в некотором объеме и с некоторыми подробностями в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не предполагается, что оно должно ограничиваться любыми такими подробностями или вариантами осуществления или любым конкретным вариантом осуществления, а его следует толковать с учетом прилагаемой формулы изобретения для того, чтобы обеспечить наиболее широкую возможную интерпретацию таких пунктов формулы изобретения в связи с уровнем техники и, следовательно, чтобы эффективно охватить предусмотренный объем настоящего изобретения.
Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упомянутые в данном документе, включены во всей своей полноте посредством ссылки. В случае конфликта настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущество. Кроме того, заголовки разделов, материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC.
<120> ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ AADC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
<130> 2057.1010PCT
<140> PCT/US2015/XXXXXX
<141> 2015-11-05
<150> 62/243,537
<151> 2015-10-19
<150> 62/199,578
<151> 2015-07-31
<150> 62/155,692
<151> 2015-05-01
<150> 62/075,298
<151> 2014-11-05
<160> 23
<170> PatentIn, версия 3.5
<210> 1
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Asn Ala Ser Glu Phe Arg Arg Arg Gly Lys Glu Met Val Asp Tyr
1               5                   10                  15
Val Ala Asn Tyr Met Glu Gly Ile Glu Gly Arg Gln Val Tyr Pro Asp
20                  25                  30
Val Glu Pro Gly Tyr Leu Arg Pro Leu Ile Pro Ala Ala Ala Pro Gln
35                  40                  45
Glu Pro Asp Thr Phe Glu Asp Ile Ile Asn Asp Val Glu Lys Ile Ile
50                  55                  60
Met Pro Gly Val Thr His Trp His Ser Pro Tyr Phe Phe Ala Tyr Phe
65                  70                  75                  80
Pro Thr Ala Ser Ser Tyr Pro Ala Met Leu Ala Asp Met Leu Cys Gly
85                  90                  95
Ala Ile Gly Cys Ile Gly Phe Ser Trp Ala Ala Ser Pro Ala Cys Thr
100                 105                 110
Glu Leu Glu Thr Val Met Met Asp Trp Leu Gly Lys Met Leu Glu Leu
115                 120                 125
Pro Lys Ala Phe Leu Asn Glu Lys Ala Gly Glu Gly Gly Gly Val Ile
130                 135                 140
Gln Gly Ser Ala Ser Glu Ala Thr Leu Val Ala Leu Leu Ala Ala Arg
145                 150                 155                 160
Thr Lys Val Ile His Arg Leu Gln Ala Ala Ser Pro Glu Leu Thr Gln
165                 170                 175
Ala Ala Ile Met Glu Lys Leu Val Ala Tyr Ser Ser Asp Gln Ala His
180                 185                 190
Ser Ser Val Glu Arg Ala Gly Leu Ile Gly Gly Val Lys Leu Lys Ala
195                 200                 205
Ile Pro Ser Asp Gly Asn Phe Ala Met Arg Ala Ser Ala Leu Gln Glu
210                 215                 220
Ala Leu Glu Arg Asp Lys Ala Ala Gly Leu Ile Pro Phe Phe Met Val
225                 230                 235                 240
Ala Thr Leu Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ser Phe Asp Asn Leu Leu Glu
245                 250                 255
Val Gly Pro Ile Cys Asn Lys Glu Asp Ile Trp Leu His Val Asp Ala
260                 265                 270
Ala Tyr Ala Gly Ser Ala Phe Ile Cys Pro Glu Phe Arg His Leu Leu
275                 280                 285
Asn Gly Val Glu Phe Ala Asp Ser Phe Asn Phe Asn Pro His Lys Trp
290                 295                 300
Leu Leu Val Asn Phe Asp Cys Ser Ala Met Trp Val Lys Lys Arg Thr
305                 310                 315                 320
Asp Leu Thr Gly Ala Phe Arg Leu Asp Pro Thr Tyr Leu Lys His Ser
325                 330                 335
His Gln Asp Ser Gly Leu Ile Thr Asp Tyr Arg His Trp Gln Ile Pro
340                 345                 350
Leu Gly Arg Arg Phe Arg Ser Leu Lys Met Trp Phe Val Phe Arg Met
355                 360                 365
Tyr Gly Val Lys Gly Leu Gln Ala Tyr Ile Arg Lys His Val Gln Leu
370                 375                 380
Ser His Glu Phe Glu Ser Leu Val Arg Gln Asp Pro Arg Phe Glu Ile
385                 390                 395                 400
Cys Val Glu Val Ile Leu Gly Leu Val Cys Phe Arg Leu Lys Gly Ser
405                 410                 415
Asn Lys Val Asn Glu Ala Leu Leu Gln Arg Ile Asn Ser Ala Lys Lys
420                 425                 430
Ile His Leu Val Pro Cys His Leu Arg Asp Lys Phe Val Leu Arg Phe
435                 440                 445
Ala Ile Cys Ser Arg Thr Val Glu Ser Ala His Val Gln Arg Ala Trp
450                 455                 460
Glu His Ile Lys Glu Leu Ala Ala Asp Val Leu Arg Ala Glu Arg Glu
465                 470                 475                 480
<210> 2
<211> 8150
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 2
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac       60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt      120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg      180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta      240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa      300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg      360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca      420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt      480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt      540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt      600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca      660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg      720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc      780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca      840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat      900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac      960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa     1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt     1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc     1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat     1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc     1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc     1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa     1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt     1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg     1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc     1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata     1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat     1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct     1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt     1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa     1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt     1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca     1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga     2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg     2100
tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg     2160
agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg     2220
aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc     2280
cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc     2340
tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc     2400
tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga     2460
atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg     2520
tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc     2580
tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct     2640
cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca     2700
acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc     2760
tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc     2820
tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct     2880
acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg     2940
cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca     3000
tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga     3060
agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg     3120
gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac     3180
tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc     3240
aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa     3300
agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc     3360
acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca     3420
cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg     3480
tgctgcgagc agagagggag taggagtgag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct     3540
gtgacccctc cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc     3600
ttgtcctaat aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta     3660
tggggtggag gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct     3720
gcggggtcta ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct     3780
ccgcctcctg ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg     3840
catgcatgac caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat     3900
tggccaggct ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat     3960
tgctgggatt acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa     4020
ccccggacca cgtgcggacc gagcggccgc tctagagcat ggctacgtag ataagtagca     4080
tggcgggtta atcattaact acaaggaacc cctagtgatg gagttggcca ctccctctct     4140
gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgggcg accaaaggtc gcccgacgcc cgggcggcct     4200
cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc aggtctgaga caataaccct gataaatgct     4260
tcaataatgt agccaaccac tagaactata gctagagtcc tgggcgaaca aacgatgctc     4320
gccttccaga aaaccgagga tgcgaaccac ttcatccggg gtcagcacca ccggcaagcg     4380
ccgcgacggc cgaggtcttc cgatctcctg aagccagggc agatccgtgc acagcacctt     4440
gccgtagaag aacagcaagg ccgccaatgc ctgacgatgc gtggagaccg aaaccttgcg     4500
ctcgttcgcc agccaggaca gaaatgcctc gacttcgctg ctgcccaagg ttgccgggtg     4560
acgcacaccg tggaaacgga tgaaggcacg aacccagttg acataagcct gttcggttcg     4620
taaactgtaa tgcaagtagc gtatgcgctc acgcaactgg tccagaacct tgaccgaacg     4680
cagcggtggt aacggcgcag tggcggtttt catggcttgt tatgactgtt tttttgtaca     4740
gtctatgcct cgggcatcca agcagcaagc gcgttacgcc gtgggtcgat gtttgatgtt     4800
atggagcagc aacgatgtta cgcagcagca acgatgttac gcagcagggc agtcgcccta     4860
aaacaaagtt aggtggctca agtatgggca tcattcgcac atgtaggctc ggccctgacc     4920
aagtcaaatc catgcgggct gctcttgatc ttttcggtcg tgagttcgga gacgtagcca     4980
cctactccca acatcagccg gactccgatt acctcgggaa cttgctccgt agtaagacat     5040
tcatcgcgct tgctgccttc gaccaagaag cggttgttgg cgctctcgcg gcttacgttc     5100
tgcccaagtt tgagcagccg cgtagtgaga tctatatcta tgatctcgca gtctccggcg     5160
agcaccggag gcagggcatt gccaccgcgc tcatcaatct cctcaagcat gaggccaacg     5220
cgcttggtgc ttatgtgatc tacgtgcaag cagattacgg tgacgatccc gcagtggctc     5280
tctatacaaa gttgggcata cgggaagaag tgatgcactt tgatatcgac ccaagtaccg     5340
ccacctaaca attcgttcaa gccgagatcg gcttcccggc cgcggagttg ttcggtaaat     5400
tgtcacaacg ccgcgaatat agtctttacc atgcccttgg ccacgcccct ctttaatacg     5460
acgggcaatt tgcacttcag aaaatgaaga gtttgcttta gccataacaa aagtccagta     5520
tgctttttca cagcataact ggactgattt cagtttacaa ctattctgtc tagtttaaga     5580
ctttattgtc atagtttaga tctattttgt tcagtttaag actttattgt ccgcccacac     5640
ccgcttacgc agggcatcca tttattactc aaccgtaacc gattttgcca ggttacgcgg     5700
ctggtctatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg     5760
ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt     5820
atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa     5880
gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc     5940
gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag     6000
gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt     6060
gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg     6120
aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg     6180
ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg     6240
taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac     6300
tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg     6360
gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt     6420
taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg     6480
tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc     6540
tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt     6600
ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt     6660
taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag     6720
tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt     6780
cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc     6840
gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc     6900
cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg     6960
ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac     7020
aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg     7080
atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc     7140
tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact     7200
gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc     7260
aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat     7320
acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc     7380
ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac     7440
tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa     7500
aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact     7560
catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg     7620
atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg     7680
aaaagtgcca cctaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt     7740
taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa     7800
gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag     7860
aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt     7920
gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac     7980
cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag     8040
gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg     8100
cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc                8150
<210> 3
<211> 8149
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 3
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac       60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt      120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg      180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta      240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa      300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg      360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca      420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt      480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt      540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt      600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca      660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg      720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc      780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca      840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat      900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac      960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa     1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt     1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc     1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat     1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc     1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc     1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa     1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt     1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg     1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc     1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata     1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat     1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct     1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt     1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa     1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt     1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca     1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga     2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcca gcgagttcag gaggaggggc aaggagatgg     2100
tggactacgt ggccaactac atggagggca tcgagggcag gcaggtgtac cccgacgtgg     2160
agcccggcta cctgaggccc ctgatccccg ccgccgcccc ccaggagccc gacaccttcg     2220
aggacatcat caacgacgtg gagaagatca tcatgcccgg cgtgacccac tggcacagcc     2280
cctacttctt cgcctacttc cccaccgcca gcagctaccc cgccatgctg gccgacatgc     2340
tgtgcggcgc catcggctgc atcggcttca gctgggccgc cagccccgcc tgcaccgagc     2400
tggagaccgt gatgatggac tggctgggca agatgctgga gctgcccaag gccttcctga     2460
acgagaaggc cggcgagggc ggcggcgtga tccagggcag cgccagcgag gccaccctgg     2520
tggccctgct ggccgccagg accaaggtga tccacaggct gcaggccgcc agccccgagc     2580
tgacccaggc cgccatcatg gagaagctgg tggcctacag cagcgaccag gcccacagca     2640
gcgtggagag ggccggcctg atcggcggcg tgaagctgaa ggccatcccc agcgacggca     2700
acttcgccat gagggccagc gccctgcagg aggccctgga gagggacaag gccgccggcc     2760
tgatcccctt cttcatggtg gccaccctgg gcaccaccac ctgctgcagc ttcgacaacc     2820
tgctggaggt gggccccatc tgcaacaagg aggacatctg gctgcacgtg gacgccgcct     2880
acgccggcag cgccttcatc tgccccgagt tcaggcacct gctgaacggc gtggagttcg     2940
ccgacagctt caacttcaac ccccacaagt ggctgctggt gaacttcgac tgcagcgcca     3000
tgtgggtgaa gaagaggacc gacctgaccg gcgccttcag gctggacccc acctacctga     3060
agcacagcca ccaggacagc ggcctgatca ccgactacag gcactggcag atccccctgg     3120
gcaggaggtt caggagcctg aagatgtggt tcgtgttcag gatgtacggc gtgaagggcc     3180
tgcaggccta catcaggaag cacgtgcagc tgagccacga gttcgagagc ctggtgaggc     3240
aggaccccag gttcgagatc tgcgtggagg tgatcctggg cctggtgtgc ttcaggctga     3300
agggcagcaa caaggtgaac gaggccctgc tgcagaggat caacagcgcc aagaagatcc     3360
acctggtgcc ctgccacctg agggacaagt tcgtgctgag gttcgccatc tgcagcagga     3420
ccgtggagag cgcccacgtg cagagggcct gggagcacat caaggagctg gccgccgacg     3480
tgctgagggc cgagagggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc     3540
cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc     3600
taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt     3660
ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg     3720
tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct     3780
cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca     3840
tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca     3900
ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg     3960
gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaacgtaac     4020
cccggaccac gtgcggaccg agcggccgct ctagagcatg gctacgtaga taagtagcat     4080
ggcgggttaa tcattaacta caaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg     4140
cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggcggcctc     4200
agtgagcgag cgagcgcgca gctgcctgca ggtctgagac aataaccctg ataaatgctt     4260
caataatgta gccaaccact agaactatag ctagagtcct gggcgaacaa acgatgctcg     4320
ccttccagaa aaccgaggat gcgaaccact tcatccgggg tcagcaccac cggcaagcgc     4380
cgcgacggcc gaggtcttcc gatctcctga agccagggca gatccgtgca cagcaccttg     4440
ccgtagaaga acagcaaggc cgccaatgcc tgacgatgcg tggagaccga aaccttgcgc     4500
tcgttcgcca gccaggacag aaatgcctcg acttcgctgc tgcccaaggt tgccgggtga     4560
cgcacaccgt ggaaacggat gaaggcacga acccagttga cataagcctg ttcggttcgt     4620
aaactgtaat gcaagtagcg tatgcgctca cgcaactggt ccagaacctt gaccgaacgc     4680
agcggtggta acggcgcagt ggcggttttc atggcttgtt atgactgttt ttttgtacag     4740
tctatgcctc gggcatccaa gcagcaagcg cgttacgccg tgggtcgatg tttgatgtta     4800
tggagcagca acgatgttac gcagcagcaa cgatgttacg cagcagggca gtcgccctaa     4860
aacaaagtta ggtggctcaa gtatgggcat cattcgcaca tgtaggctcg gccctgacca     4920
agtcaaatcc atgcgggctg ctcttgatct tttcggtcgt gagttcggag acgtagccac     4980
ctactcccaa catcagccgg actccgatta cctcgggaac ttgctccgta gtaagacatt     5040
catcgcgctt gctgccttcg accaagaagc ggttgttggc gctctcgcgg cttacgttct     5100
gcccaagttt gagcagccgc gtagtgagat ctatatctat gatctcgcag tctccggcga     5160
gcaccggagg cagggcattg ccaccgcgct catcaatctc ctcaagcatg aggccaacgc     5220
gcttggtgct tatgtgatct acgtgcaagc agattacggt gacgatcccg cagtggctct     5280
ctatacaaag ttgggcatac gggaagaagt gatgcacttt gatatcgacc caagtaccgc     5340
cacctaacaa ttcgttcaag ccgagatcgg cttcccggcc gcggagttgt tcggtaaatt     5400
gtcacaacgc cgcgaatata gtctttacca tgcccttggc cacgcccctc tttaatacga     5460
cgggcaattt gcacttcaga aaatgaagag tttgctttag ccataacaaa agtccagtat     5520
gctttttcac agcataactg gactgatttc agtttacaac tattctgtct agtttaagac     5580
tttattgtca tagtttagat ctattttgtt cagtttaaga ctttattgtc cgcccacacc     5640
cgcttacgca gggcatccat ttattactca accgtaaccg attttgccag gttacgcggc     5700
tggtctatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc     5760
tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta     5820
tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag     5880
aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg     5940
tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg     6000
tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg     6060
cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga     6120
agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc     6180
tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt     6240
aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact     6300
ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg     6360
cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt     6420
accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt     6480
ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct     6540
ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg     6600
gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt     6660
aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt     6720
gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc     6780
gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg     6840
cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc     6900
gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg     6960
gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca     7020
ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga     7080
tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct     7140
ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg     7200
cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca     7260
accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata     7320
cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct     7380
tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact     7440
cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa     7500
acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc     7560
atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga     7620
tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga     7680
aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt     7740
aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag     7800
aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga     7860
acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg     7920
aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc     7980
ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg     8040
aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc     8100
gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtc                 8149
<210> 4
<211> 8555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 4
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac       60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt      120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg      180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta      240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa      300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg      360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca      420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt      480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt      540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt      600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca      660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg      720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc      780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca      840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat      900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac      960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa     1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt     1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc     1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat     1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc     1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc     1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa     1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt     1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg     1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc     1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata     1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat     1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct     1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt     1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa     1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt     1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca     1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga     2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg     2100
tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg     2160
agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg     2220
aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc     2280
cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc     2340
tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc     2400
tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga     2460
atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg     2520
tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc     2580
tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct     2640
cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca     2700
acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc     2760
tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc     2820
tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct     2880
acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg     2940
cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca     3000
tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga     3060
agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg     3120
gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac     3180
tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc     3240
aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa     3300
agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc     3360
acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca     3420
cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg     3480
tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga     3540
gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa ataaatatca tcctgccttc atggaactca     3600
gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca aagttatcca gagggttgtg attttgtctg     3660
cttagtatct catcaacaaa gaaatattat ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc     3720
atagctttta ttcattagct gtgatttttg ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc     3780
ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct cactgatata ttttccaggg caatcaatgt     3840
tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg     3900
cctaataagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc     3960
tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt     4020
gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat     4080
ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa     4140
gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga     4200
ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc atgcatgacc aggctcagct     4260
aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact     4320
cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa     4380
ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac cgtaaccccg gaccacgtgc     4440
ggaccgagcg gccgctctag agcatggcta cgtagataag tagcatggcg ggttaatcat     4500
taactacaag gaacccctag tgatggagtt ggccactccc tctctgcgcg ctcgctcgct     4560
cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag     4620
cgcgcagctg cctgcaggtc tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatgtagcca     4680
accactagaa ctatagctag agtcctgggc gaacaaacga tgctcgcctt ccagaaaacc     4740
gaggatgcga accacttcat ccggggtcag caccaccggc aagcgccgcg acggccgagg     4800
tcttccgatc tcctgaagcc agggcagatc cgtgcacagc accttgccgt agaagaacag     4860
caaggccgcc aatgcctgac gatgcgtgga gaccgaaacc ttgcgctcgt tcgccagcca     4920
ggacagaaat gcctcgactt cgctgctgcc caaggttgcc gggtgacgca caccgtggaa     4980
acggatgaag gcacgaaccc agttgacata agcctgttcg gttcgtaaac tgtaatgcaa     5040
gtagcgtatg cgctcacgca actggtccag aaccttgacc gaacgcagcg gtggtaacgg     5100
cgcagtggcg gttttcatgg cttgttatga ctgttttttt gtacagtcta tgcctcgggc     5160
atccaagcag caagcgcgtt acgccgtggg tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga     5220
tgttacgcag cagcaacgat gttacgcagc agggcagtcg ccctaaaaca aagttaggtg     5280
gctcaagtat gggcatcatt cgcacatgta ggctcggccc tgaccaagtc aaatccatgc     5340
gggctgctct tgatcttttc ggtcgtgagt tcggagacgt agccacctac tcccaacatc     5400
agccggactc cgattacctc gggaacttgc tccgtagtaa gacattcatc gcgcttgctg     5460
ccttcgacca agaagcggtt gttggcgctc tcgcggctta cgttctgccc aagtttgagc     5520
agccgcgtag tgagatctat atctatgatc tcgcagtctc cggcgagcac cggaggcagg     5580
gcattgccac cgcgctcatc aatctcctca agcatgaggc caacgcgctt ggtgcttatg     5640
tgatctacgt gcaagcagat tacggtgacg atcccgcagt ggctctctat acaaagttgg     5700
gcatacggga agaagtgatg cactttgata tcgacccaag taccgccacc taacaattcg     5760
ttcaagccga gatcggcttc ccggccgcgg agttgttcgg taaattgtca caacgccgcg     5820
aatatagtct ttaccatgcc cttggccacg cccctcttta atacgacggg caatttgcac     5880
ttcagaaaat gaagagtttg ctttagccat aacaaaagtc cagtatgctt tttcacagca     5940
taactggact gatttcagtt tacaactatt ctgtctagtt taagacttta ttgtcatagt     6000
ttagatctat tttgttcagt ttaagacttt attgtccgcc cacacccgct tacgcagggc     6060
atccatttat tactcaaccg taaccgattt tgccaggtta cgcggctggt ctatgcggtg     6120
tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc     6180
gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa     6240
ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa     6300
aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct     6360
ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac     6420
aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc     6480
gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc     6540
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg     6600
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga     6660
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag     6720
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta     6780
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag     6840
agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg     6900
caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac     6960
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc     7020
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag     7080
tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc     7140
agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac     7200
gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc     7260
accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg     7320
tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag     7380
tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc     7440
acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac     7500
atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag     7560
aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac     7620
tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg     7680
agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc     7740
gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact     7800
ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg     7860
atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa     7920
tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt     7980
tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg     8040
tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctaa     8100
attgtaagcg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt     8160
tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata     8220
gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac     8280
gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa     8340
tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc     8400
cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg     8460
aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca     8520
cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtc                                8555
<210> 5
<211> 8694
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 5
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac       60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt      120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg      180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta      240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa      300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg      360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca      420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt      480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt      540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt      600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca      660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg      720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc      780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca      840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcaa cgcgtaaact tcgtcgacga      900
tctgcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc      960
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac     1020
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa     1080
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag     1140
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc     1200
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct     1260
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg     1320
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt     1380
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac     1440
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa     1500
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga     1560
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc     1620
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt     1680
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct     1740
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt     1800
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa     1860
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct     1920
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg     1980
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt     2040
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcgaattcg ggcacgaggg     2100
aggacagaga gcaagtcact cccggctgcc tttttcacct ctgacagagc ccagacacca     2160
tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca     2220
tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc     2280
tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg     2340
agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc     2400
ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca     2460
tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact     2520
ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg     2580
gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga     2640
ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg     2700
agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa     2760
ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg     2820
ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg     2880
ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct     2940
gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct     3000
gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc     3060
cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag     3120
acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag     3180
ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga     3240
aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc     3300
atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct     3360
gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg     3420
aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca     3480
gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc     3540
agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt     3600
aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat     3660
aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt     3720
ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag     3780
aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg     3840
tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta     3900
ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat     3960
ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataaaca attcaagtga     4020
aatactaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg     4080
tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct     4140
tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat     4200
ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg     4260
cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc     4320
cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc     4380
atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt     4440
ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt     4500
gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac     4560
gtaaccccgg accacgtgcg gaccgagcgg ccgctctaga gcatggctac gtagataagt     4620
agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg aacccctagt gatggagttg gccactccct     4680
ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggcg     4740
gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagctgc ctgcaggtct gagacaataa ccctgataaa     4800
tgcttcaata atgtagccaa ccactagaac tatagctaga gtcctgggcg aacaaacgat     4860
gctcgccttc cagaaaaccg aggatgcgaa ccacttcatc cggggtcagc accaccggca     4920
agcgccgcga cggccgaggt cttccgatct cctgaagcca gggcagatcc gtgcacagca     4980
ccttgccgta gaagaacagc aaggccgcca atgcctgacg atgcgtggag accgaaacct     5040
tgcgctcgtt cgccagccag gacagaaatg cctcgacttc gctgctgccc aaggttgccg     5100
ggtgacgcac accgtggaaa cggatgaagg cacgaaccca gttgacataa gcctgttcgg     5160
ttcgtaaact gtaatgcaag tagcgtatgc gctcacgcaa ctggtccaga accttgaccg     5220
aacgcagcgg tggtaacggc gcagtggcgg ttttcatggc ttgttatgac tgtttttttg     5280
tacagtctat gcctcgggca tccaagcagc aagcgcgtta cgccgtgggt cgatgtttga     5340
tgttatggag cagcaacgat gttacgcagc agcaacgatg ttacgcagca gggcagtcgc     5400
cctaaaacaa agttaggtgg ctcaagtatg ggcatcattc gcacatgtag gctcggccct     5460
gaccaagtca aatccatgcg ggctgctctt gatcttttcg gtcgtgagtt cggagacgta     5520
gccacctact cccaacatca gccggactcc gattacctcg ggaacttgct ccgtagtaag     5580
acattcatcg cgcttgctgc cttcgaccaa gaagcggttg ttggcgctct cgcggcttac     5640
gttctgccca agtttgagca gccgcgtagt gagatctata tctatgatct cgcagtctcc     5700
ggcgagcacc ggaggcaggg cattgccacc gcgctcatca atctcctcaa gcatgaggcc     5760
aacgcgcttg gtgcttatgt gatctacgtg caagcagatt acggtgacga tcccgcagtg     5820
gctctctata caaagttggg catacgggaa gaagtgatgc actttgatat cgacccaagt     5880
accgccacct aacaattcgt tcaagccgag atcggcttcc cggccgcgga gttgttcggt     5940
aaattgtcac aacgccgcga atatagtctt taccatgccc ttggccacgc ccctctttaa     6000
tacgacgggc aatttgcact tcagaaaatg aagagtttgc tttagccata acaaaagtcc     6060
agtatgcttt ttcacagcat aactggactg atttcagttt acaactattc tgtctagttt     6120
aagactttat tgtcatagtt tagatctatt ttgttcagtt taagacttta ttgtccgccc     6180
acacccgctt acgcagggca tccatttatt actcaaccgt aaccgatttt gccaggttac     6240
gcggctggtc tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca     6300
ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag     6360
cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag     6420
gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc     6480
tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc     6540
agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc     6600
tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt     6660
cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg     6720
ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat     6780
ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag     6840
ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt     6900
ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc     6960
cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta     7020
gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag     7080
atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga     7140
ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa     7200
gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa     7260
tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc     7320
ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga     7380
taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa     7440
gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt     7500
gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg     7560
ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc     7620
aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg     7680
gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag     7740
cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt     7800
actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt     7860
caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac     7920
gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac     7980
ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag     8040
caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa     8100
tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga     8160
gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc     8220
cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt     8280
ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc     8340
aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt     8400
aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact     8460
acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg     8520
gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag     8580
aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac     8640
gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtc           8694
<210> 6
<211> 3535
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 6
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt       60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact      120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct      180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc      240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac      300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa      360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag      420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc      480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct      540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg      600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt      660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac      720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa      780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga      840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc      900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt      960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct     1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt     1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa     1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct     1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg     1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt     1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg     1380
caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag     1440
gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc     1500
ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga     1560
taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg     1620
ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct     1680
tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg     1740
ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag     1800
tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag     1860
tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc     1920
tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg     1980
gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc     2040
aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc     2100
tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca     2160
aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg     2220
agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca     2280
aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa     2340
cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta     2400
tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt     2460
ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc     2520
agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg     2580
aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc     2640
ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca     2700
agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg     2760
cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt     2820
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg     2880
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca     2940
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca     3000
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga     3060
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc     3120
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt     3180
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat     3240
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg     3300
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccccgga ccacgtgcgg accgagcggc     3360
cgctctagag catggctacg tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga     3420
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg     3480
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcag          3535
<210> 7
<211> 3534
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 7
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt       60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact      120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct      180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc      240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac      300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa      360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag      420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc      480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct      540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg      600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt      660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac      720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa      780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga      840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc      900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt      960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct     1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt     1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa     1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct     1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg     1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt     1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg     1380
ccagcgagtt caggaggagg ggcaaggaga tggtggacta cgtggccaac tacatggagg     1440
gcatcgaggg caggcaggtg taccccgacg tggagcccgg ctacctgagg cccctgatcc     1500
ccgccgccgc cccccaggag cccgacacct tcgaggacat catcaacgac gtggagaaga     1560
tcatcatgcc cggcgtgacc cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccaccg     1620
ccagcagcta ccccgccatg ctggccgaca tgctgtgcgg cgccatcggc tgcatcggct     1680
tcagctgggc cgccagcccc gcctgcaccg agctggagac cgtgatgatg gactggctgg     1740
gcaagatgct ggagctgccc aaggccttcc tgaacgagaa ggccggcgag ggcggcggcg     1800
tgatccaggg cagcgccagc gaggccaccc tggtggccct gctggccgcc aggaccaagg     1860
tgatccacag gctgcaggcc gccagccccg agctgaccca ggccgccatc atggagaagc     1920
tggtggccta cagcagcgac caggcccaca gcagcgtgga gagggccggc ctgatcggcg     1980
gcgtgaagct gaaggccatc cccagcgacg gcaacttcgc catgagggcc agcgccctgc     2040
aggaggccct ggagagggac aaggccgccg gcctgatccc cttcttcatg gtggccaccc     2100
tgggcaccac cacctgctgc agcttcgaca acctgctgga ggtgggcccc atctgcaaca     2160
aggaggacat ctggctgcac gtggacgccg cctacgccgg cagcgccttc atctgccccg     2220
agttcaggca cctgctgaac ggcgtggagt tcgccgacag cttcaacttc aacccccaca     2280
agtggctgct ggtgaacttc gactgcagcg ccatgtgggt gaagaagagg accgacctga     2340
ccggcgcctt caggctggac cccacctacc tgaagcacag ccaccaggac agcggcctga     2400
tcaccgacta caggcactgg cagatccccc tgggcaggag gttcaggagc ctgaagatgt     2460
ggttcgtgtt caggatgtac ggcgtgaagg gcctgcaggc ctacatcagg aagcacgtgc     2520
agctgagcca cgagttcgag agcctggtga ggcaggaccc caggttcgag atctgcgtgg     2580
aggtgatcct gggcctggtg tgcttcaggc tgaagggcag caacaaggtg aacgaggccc     2640
tgctgcagag gatcaacagc gccaagaaga tccacctggt gccctgccac ctgagggaca     2700
agttcgtgct gaggttcgcc atctgcagca ggaccgtgga gagcgcccac gtgcagaggg     2760
cctgggagca catcaaggag ctggccgccg acgtgctgag ggccgagagg gagtgagctg     2820
ctcgagagat ctacgggtgg catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg     2880
aagttgccac tccagtgccc accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt     2940
ctgactaggt gtccttctat aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc     3000
aagttgggaa gacaacctgt agggcctgcg gggtctattg ggaaccaagc tggagtgcag     3060
tggcacaatc ttggctcact gcaatctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc     3120
agcctcccga gttgttggga ttccaggcat gcatgaccag gctcagctaa tttttgtttt     3180
tttggtagag acggggtttc accatattgg ccaggctggt ctccaactcc taatctcagg     3240
tgatctaccc accttggcct cccaaattgc tgggattaca ggcgtgaacc actgctccct     3300
tccctgtcct tctgattttg taggtaacgt aaccccggac cacgtgcgga ccgagcggcc     3360
gctctagagc atggctacgt agataagtag catggcgggt taatcattaa ctacaaggaa     3420
cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg     3480
cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcag           3534
<210> 8
<211> 3940
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 8
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt       60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact      120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct      180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc      240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac      300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa      360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag      420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc      480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct      540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg      600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt      660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac      720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa      780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga      840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc      900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt      960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct     1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt     1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa     1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct     1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg     1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt     1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg     1380
caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag     1440
gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc     1500
ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga     1560
taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg     1620
ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct     1680
tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg     1740
ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag     1800
tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag     1860
tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc     1920
tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg     1980
gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc     2040
aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc     2100
tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca     2160
aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg     2220
agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca     2280
aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa     2340
cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta     2400
tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt     2460
ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc     2520
agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg     2580
aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc     2640
ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca     2700
agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg     2760
cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt     2820
gaagccagct gcaggaatca aaaattgaag agagatatat ctgaaaactg gaataagaag     2880
caaataaata tcatcctgcc ttcatggaac tcagctgtct gtggcttccc atgtctttct     2940
ccaaagttat ccagagggtt gtgattttgt ctgcttagta tctcatcaac aaagaaatat     3000
tatttgctaa ttaaaaagtt aatcttcatg gccatagctt ttattcatta gctgtgattt     3060
ttgttgatta aaacattata gattttcatg ttcttgcagt catcagaagt ggtaggaaag     3120
cctcactgat atattttcca gggcaatcaa tgttcacgca acttgaaatt atatctgtgg     3180
tcttcaaatt gtcttttgtc atgtggctaa atgcctaata agctgctcga gagatctacg     3240
ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc cctggaagtt gccactccag     3300
tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat tttgtctgac taggtgtcct     3360
tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa ggggcaagtt gggaagacaa     3420
cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag tgcagtggca caatcttggc     3480
tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct gcctcagcct cccgagttgt     3540
tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt gtttttttgg tagagacggg     3600
gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc tcaggtgatc tacccacctt     3660
ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc tcccttccct gtccttctga     3720
ttttgtaggt aaccgtaacc ccggaccacg tgcggaccga gcggccgctc tagagcatgg     3780
ctacgtagat aagtagcatg gcgggttaat cattaactac aaggaacccc tagtgatgga     3840
gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgggcgac caaaggtcgc     3900
ccgacgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag                           3940
<210> 9
<211> 4079
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 9
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt       60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact      120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct      180
agagcggccg caacgcgtaa acttcgtcga cgatctgcgg ccgcacgcgt ggagctagtt      240
attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta      300
cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt      360
caataatgac gtatgttccc atagtaacgt caatagggac tttccattga cgtcaatggg      420
tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat atgccaagta      480
cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga      540
ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg      600
tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca cggggatttc      660
caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg caccaaaatc aacgggactt      720
tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg      780
ggaggtctat ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc      840
acgctgtttt gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc agcctccgcg gattcgaatc      900
ccggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac gtaagtaccg      960
cctatagagt ctataggccc acaaaaaatg ctttcttctt ttaatatact tttttgttta     1020
tcttatttct aatactttcc ctaatctctt tctttcaggg caataatgat acaatgtatc     1080
atgcctcttt gcaccattct aaagaataac agtgataatt tctgggttaa ggcaatagca     1140
atatttctgc atataaatat ttctgcatat aaattgtaac tgatgtaaga ggtttcatat     1200
tgctaatagc agctacaatc cagctaccat tctgctttta ttttatggtt gggataaggc     1260
tggattattc tgagtccaag ctaggccctt ttgctaatca tgttcatacc tcttatcttc     1320
ctcccacagc tcctgggcaa cgtgctggtc tgtgtgctgg cccatcactt tggcaaagaa     1380
ttgggattcg aacatcgaat tcgggcacga gggaggacag agagcaagtc actcccggct     1440
gcctttttca cctctgacag agcccagaca ccatgaacgc aagtgaattc cgaaggagag     1500
ggaaggagat ggtggattac gtggccaact acatggaagg cattgaggga cgccaggtct     1560
accctgacgt ggagcccggg tacctgcggc cgctgatccc tgccgctgcc cctcaggagc     1620
cagacacgtt tgaggacatc atcaacgacg ttgagaagat aatcatgcct ggggtgacgc     1680
actggcacag cccctacttc ttcgcctact tccccactgc cagctcgtac ccggccatgc     1740
ttgcggacat gctgtgcggg gccattggct gcatcggctt ctcctgggcg gcaagcccag     1800
catgcacaga gctggagact gtgatgatgg actggctcgg gaagatgctg gaactaccaa     1860
aggcattttt gaatgagaaa gctggagaag ggggaggagt gatccaggga agtgccagtg     1920
aagccaccct ggtggccctg ctggccgctc ggaccaaagt gatccatcgg ctgcaggcag     1980
cgtccccaga gctcacacag gccgctatca tggagaagct ggtggcttac tcatccgatc     2040
aggcacactc ctcagtggaa agagctgggt taattggtgg agtgaaatta aaagccatcc     2100
cctcagatgg caacttcgcc atgcgtgcgt ctgccctgca ggaagccctg gagagagaca     2160
aagcggctgg cctgattcct ttctttatgg ttgccaccct ggggaccaca acatgctgct     2220
cctttgacaa tctcttagaa gtcggtccta tctgcaacaa ggaagacata tggctgcacg     2280
ttgatgcagc ctacgcaggc agtgcattca tctgccctga gttccggcac cttctgaatg     2340
gagtggagtt tgcagattca ttcaacttta atccccacaa atggctattg gtgaattttg     2400
actgttctgc catgtgggtg aaaaagagaa cagacttaac gggagccttt agactggacc     2460
ccacttacct gaagcacagc catcaggatt cagggcttat cactgactac cggcattggc     2520
agataccact gggcagaaga tttcgctctt tgaaaatgtg gtttgtattt aggatgtatg     2580
gagtcaaagg actgcaggct tatatccgca agcatgtcca gctgtcccat gagtttgagt     2640
cactggtgcg ccaggatccc cgctttgaaa tctgtgtgga agtcattctg gggcttgtct     2700
gctttcggct aaagggttcc aacaaagtga atgaagctct tctgcaaaga ataaacagtg     2760
ccaaaaaaat ccacttggtt ccatgtcacc tcagggacaa gtttgtcctg cgctttgcca     2820
tctgttctcg cacggtggaa tctgcccatg tgcagcgggc ctgggaacac atcaaagagc     2880
tggcggccga cgtgctgcga gcagagaggg agtaggagtg aagccagctg caggaatcaa     2940
aaattgaaga gagatatatc tgaaaactgg aataagaagc aaataaatat catcctgcct     3000
tcatggaact cagctgtctg tggcttccca tgtctttctc caaagttatc cagagggttg     3060
tgattttgtc tgcttagtat ctcatcaaca aagaaatatt atttgctaat taaaaagtta     3120
atcttcatgg ccatagcttt tattcattag ctgtgatttt tgttgattaa aacattatag     3180
attttcatgt tcttgcagtc atcagaagtg gtaggaaagc ctcactgata tattttccag     3240
ggcaatcaat gttcacgcaa cttgaaatta tatctgtggt cttcaaattg tcttttgtca     3300
tgtggctaaa tgcctaataa acaattcaag tgaaatacta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa     3360
agctgctcga gagatctacg ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc     3420
cctggaagtt gccactccag tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat     3480
tttgtctgac taggtgtcct tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa     3540
ggggcaagtt gggaagacaa cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag     3600
tgcagtggca caatcttggc tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct     3660
gcctcagcct cccgagttgt tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt     3720
gtttttttgg tagagacggg gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc     3780
tcaggtgatc tacccacctt ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc     3840
tcccttccct gtccttctga ttttgtaggt aacgtaaccc cggaccacgt gcggaccgag     3900
cggccgctct agagcatggc tacgtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca     3960
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg     4020
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcag      4079
<210> 10
<211> 9266
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 10
gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc       60
ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac      120
agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa      180
ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg      240
cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc      300
aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct      360
agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc      420
tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt      480
ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg      540
cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct      600
atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag      660
ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag      720
tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg      780
gcggagccta tggaaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa      840
cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat      900
ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aagcccaatc tgaataatgt tacaaccaat      960
taaccaattc tgaaaacgcg cgatgcagct ctggcccgtg tctcaaaatc tctgatgtta     1020
cattgcacaa gataaaaata tatcatcatg aacaataaaa ctgtctgctt acataaacag     1080
taatacaagg ggtgttatga gccatattca acgggaaacg tcgaggccgc gattaaattc     1140
caacatggat gctgatttat atgggtataa atgggctcgc gataatgtcg ggcaatcagg     1200
tgcgacaatc tatcgcttgt atgggaagcc cgatgcgcca gagttgtttc tgaaacatgg     1260
caaaggtagc gttgccaatg atgttacaga tgagatggtc agactaaact ggctgacgga     1320
atttatgcct cttccgacca tcaagcattt tatccgtact cctgatgatg catggttact     1380
caccactgcg atccccggaa aaacagcatt ccaggtatta gaagaatatc ctgattcagg     1440
tgaaaatatt gttgatgcgc tggcagtgtt cctgcgccgg ttgcattcga ttcctgtttg     1500
taattgtcct tttaacagcg atcgcgtatt tcgtctcgct caggcgcaat cacgaatgaa     1560
taacggtttg gttgatgcga gtgattttga tgacgagcgt aatggctggc ctgttgaaca     1620
agtctggaaa gaaatgcata aacttttgcc attctcaccg gattcagtcg tcactcatgg     1680
tgatttctca cttgataacc ttatttttga cgaggggaaa ttaataggtt gtattgatgt     1740
tggacgagtc ggaatcgcag accgatacca ggatcttgcc atcctatgga actgcctcgg     1800
tgagttttct ccttcattac agaaacggct ttttcaaaaa tatggtattg ataatcctga     1860
tatgaataaa ttgcagtttc atttgatgct cgatgagttt ttctaatcag aattggttaa     1920
ttggttgtaa cattattcag attgggcttg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga     1980
tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt     2040
tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcaacaccc cttgtattac     2100
tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgatgatat atttttatct tgtgcaatgt     2160
aacatcagag attttgagac acgggccaga gctgcatcgc gcgtttcggt gatgacggtg     2220
aaaacctctg acacatgcag ctcccgtatc tggaggctat aaatgattac gatacttcga     2280
aaacatcctt atcctggaaa actccccgtt catttcccac tctcctgcca ttcgacactc     2340
gtgcgtccat tcaagtctgt gctaatttct acgcatttcc ctctgccatt gactttgctt     2400
gcgtgggata ataactatta agccaacttg attcaactca ggcattcaaa aggcattttg     2460
attagtcgaa aagtggcacg gctgacgagt ggagctgcca tttcacgttt atttcgaact     2520
tttgattaca tggtatattt agtaatacac atatttttta gccagcaggt taatacttca     2580
aagttgtttc gattttcaac gaataaaagg aatttggcat ggtgtttttt ctggtctttg     2640
gtattgacaa atcagggata tacaatatgt attaacaaaa ttggattgct acatatattt     2700
aatgattttc attattagaa tgggtggaat aaagttttaa attacattat taatttcatt     2760
agggttggct gattgattac tatttcctca ttgaattgca ttcgatatta gcagtattta     2820
tctggcccat tttggaagtt acttaaattt cgaaccttaa gtcattatta gagctaatat     2880
acaacagagt tgtcaacttg gtttgatcag cattgaaatt aaactgattt cttgttcgtt     2940
cttatttcgt ttggttttgt atctcgtatt ttatatgcag gagggcatat attggcacaa     3000
gacaaataat cacagcaccc attctcaact ttgtcctgtt tctcagttta gtgtaaatag     3060
aatgttgcaa aaaattgaat ataagcatta tcatagtgtc aaattcgaga ggatgagttt     3120
gctgtgggtc ttcgaggttc tttccctgtg tttgccacgg ttcgttgcac gttgccactg     3180
attggacaca tgtccgcagt gaaaaatcta cggtcaggta ccacccaact aaaccggaag     3240
gcggcacgtg tgtgggcgtt gagcggtgtg ggcgtggcag ccatataatg agacatttat     3300
ttaaaaagaa cattcgaaca tttttgatgg gccatatctt ggcttgtcaa gctccagggc     3360
agacattttc ctcgactcca ccgccttttt catttgaatg gaggaggtgt agggcacaaa     3420
aaacgtttcc tgccttttta agcagcacaa aggatatgag ccattaaatt agttaatttc     3480
gagtgcattt cattttaaat aagtgttgga aagggaataa aaaagcgact gatagaaaag     3540
ttgcagacac caagagaatg ttaaatattt taataatagc tacatttttc tatctctgtg     3600
acaaggcctg tgtactttaa tgttatatta cttctttgtg tttgatttct gttaaaagtt     3660
tatgattttg gcatgtacaa atcttacaac ccttttttgt catcatgaca aaatcaaaat     3720
cgtgcaatat ttccattctc atcttttagc cgattcataa cattcgtaga aattaatatg     3780
aaatcaatca tgtataattt tcatgcacgt tatgccgatt tggtatcgtc gatttgccgg     3840
ctcatcgtcg ccattgtgtt aatggaaaag ttatgctttt cgcaggaaaa aagagttgaa     3900
aattccaatt tttgtcatgc tcatcaaaat gttatacatt cggtaatttg agctggccaa     3960
acgttaaccc cttatcgccc cgcgcaagca ttcattaact gcccccagag cgtaattaat     4020
ctctttctcg cagaatttcc ttcacagcca cgtcttgggt aaaagtcacc cctcaaagtg     4080
gcagttgcat gttgtaaatt agattttcgt ccgtcatgac aaccctcgtg cgagggttgc     4140
tgcagcattt gaatgcaaaa ctgcttttgg tcattaacct gtctgaggca ctttgctgca     4200
aaacttctat tagaattcgg tttggactcg aattcggatt tcttccccca aaatgcgatg     4260
gctacagcaa aatgctttca gcttccgaag ttttgcaacc ccaaagtcca gagtttccac     4320
gctgtcacga ttccaaagcg gcgccatttt tggctcacgc aaaacttatt aatgaacttt     4380
aagcagacta cgaggaaagg gctataatgg ccacacaaaa gggttaagca agtgttaagg     4440
gctggtggga gggaaaaatc atcaatcata ttttctgcat agctgaatca tttgcgccga     4500
tcagttgggg ttacttaatg ggtttatttc aagaagaaaa ctgtgggaaa ctaactgact     4560
ctaaacttaa tcagattaaa tgtaacctgg agatgatttt caaaatatta aaagagtttt     4620
atggaggtaa ttttaaagaa aactgaaaaa ctttgaagaa gtctataata gatccagtct     4680
taatcgtagc actgattatt tgtttttaaa ttggaaaaaa ttaaatgata catcatgctt     4740
aaatgcgatg tccaacaaat cccaagacgg taatttccgt gcgttccaaa ctcatctgaa     4800
gaatcttaca aatacatttc gtgtatcccc aggctcagcg tgcaaataaa tcttttggat     4860
ctttgcaaat gcgaaatgct tatttttatg cgttttcaat gccaattcga tggcaaaacc     4920
aacaaaatca catggaaata atggaaaagc aatttccatt tctacaaggg aggcagtgag     4980
acacaagagc agcgtataca attccccagc agcgatttga ccattaaaat tatacccaca     5040
ggacgagcag gcataaaaag cagaggatgc gaggtgttca ggggactgtc tatatctcca     5100
acttgaatat atgaaatcgt ttggaaatag ccaagcgacc aaattggcat ttggaaaatt     5160
gcacaacgac agaagaagat gtttgaaaag agaaattgaa ataataaacc aagatatatg     5220
taaacggttg gtcacatttg ggttctgaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg     5280
ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta     5340
actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc     5400
acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact     5460
gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat     5520
gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa     5580
cgacggccag tgaattcgag ctcggtacca tttaaatcgt cttggccact ccctctctgc     5640
gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg gcgtcgggcg acctttggtc     5700
gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt ggccaactcc atcactaggg     5760
gttccttcgc gagcttaatt aactgcggcc gctcggtccg cacgtggtta cctacaaaat     5820
cagaaggaca gggaagggag cagtggttca cgcctgtaat cccagcaatt tgggaggcca     5880
aggtgggtag atcacctgag attaggagtt ggagaccagc ctggccaata tggtgaaacc     5940
ccgtctctac caaaaaaaca aaaattagct gagcctggtc atgcatgcct ggaatcccaa     6000
caactcggga ggctgaggca ggagaatcgc ttgaacccag gaggcggaga ttgcagtgag     6060
ccaagattgt gccactgcac tccagcttgg ttcccaatag accccgcagg ccctacaggt     6120
tgtcttccca acttgcccct tgctccatac cacccccctc caccccataa tattatagaa     6180
ggacacctag tcagacaaaa tgatgcaact taattttatt aggacaaggc tggtgggcac     6240
tggagtggca acttccaggg ccaggagagg cactggggag gggtcacagg gatgccaccc     6300
gtagatctct cgagcagctc actcctactc cctctctgct cgcagcacgt cggccgccag     6360
ctctttgatg tgttcccagg cccgctgcac atgggcagat tccaccgtgc gagaacagat     6420
ggcaaagcgc aggacaaact tgtccctgag gtgacatgga accaagtgga tttttttggc     6480
actgtttatt ctttgcagaa gagcttcatt cactttgttg gaacccttta gccgaaagca     6540
gacaagcccc agaatgactt ccacacagat ttcaaagcgg ggatcctggc gcaccagtga     6600
ctcaaactca tgggacagct ggacatgctt gcggatataa gcctgcagtc ctttgactcc     6660
atacatccta aatacaaacc acattttcaa agagcgaaat cttctgccca gtggtatctg     6720
ccaatgccgg tagtcagtga taagccctga atcctgatgg ctgtgcttca ggtaagtggg     6780
gtccagtcta aaggctcccg ttaagtctgt tctctttttc acccacatgg cagaacagtc     6840
aaaattcacc aatagccatt tgtggggatt aaagttgaat gaatctgcaa actccactcc     6900
attcagaagg tgccggaact cagggcagat gaatgcactg cctgcgtagg ctgcatcaac     6960
gtgcagccat atgtcttcct tgttgcagat aggaccgact tctaagagat tgtcaaagga     7020
gcagcatgtt gtggtcccca gggtggcaac cataaagaaa ggaatcaggc cagccgcttt     7080
gtctctctcc agggcttcct gcagggcaga cgcacgcatg gcgaagttgc catctgaggg     7140
gatggctttt aatttcactc caccaattaa cccagctctt tccactgagg agtgtgcctg     7200
atcggatgag taagccacca gcttctccat gatagcggcc tgtgtgagct ctggggacgc     7260
tgcctgcagc cgatggatca ctttggtccg agcggccagc agggccacca gggtggcttc     7320
actggcactt ccctggatca ctcctccccc ttctccagct ttctcattca aaaatgcctt     7380
tggtagttcc agcatcttcc cgagccagtc catcatcaca gtctccagct ctgtgcatgc     7440
tgggcttgcc gcccaggaga agccgatgca gccaatggcc ccgcacagca tgtccgcaag     7500
catggccggg tacgagctgg cagtggggaa gtaggcgaag aagtaggggc tgtgccagtg     7560
cgtcacccca ggcatgatta tcttctcaac gtcgttgatg atgtcctcaa acgtgtctgg     7620
ctcctgaggg gcagcggcag ggatcagcgg ccgcaggtac ccgggctcca cgtcagggta     7680
gacctggcgt ccctcaatgc cttccatgta gttggccacg taatccacca tctccttccc     7740
tctccttcgg aattcacttg cgttcatggt ggcggccgat gttcgaatcc caattctttg     7800
ccaaagtgat gggccagcac acagaccagc acgttgccca ggagctgtgg gaggaagata     7860
agaggtatga acatgattag caaaagggcc tagcttggac tcagaataat ccagccttat     7920
cccaaccata aaataaaagc agaatggtag ctggattgta gctgctatta gcaatatgaa     7980
acctcttaca tcagttacaa tttatatgca gaaatattta tatgcagaaa tattgctatt     8040
gccttaaccc agaaattatc actgttattc tttagaatgg tgcaaagagg catgatacat     8100
tgtatcatta ttgccctgaa agaaagagat tagggaaagt attagaaata agataaacaa     8160
aaaagtatat taaaagaaga aagcattttt tgtgggccta tagactctat aggcggtact     8220
tacgtcactc ttggcacggg gaatccgcgt tccaatgcac cgttcccggc cgggattcga     8280
atccgcggag gctggatcgg tcccggtgtc ttctatggag gtcaaaacag cgtggatggc     8340
gtctccaggc gatctgacgg ttcactaaac gagctctgct tatatagacc tcccaccgta     8400
cacgcctacc gcccatttgc gtcaatgggg cggagttgtt acgacatttt ggaaagtccc     8460
gttgattttg gtgcaaaaca aactcccatt gacgtcaatg gggtggagac ttggaaatcc     8520
ccgtgagtca aaccgctatc cacgcccatt gatgtactgc caaaaccgca tcaccatggt     8580
aatagcgatg actaatacgt agatgtactg ccaagtagga aagtcccata aggtcatgta     8640
ctgggcataa tgccaggcgg gccatttacc gtcattgacg tcaatagggg gcgtacttgg     8700
catatgatac acttgatgta ctgccaagtg ggcagtttac cgtaaatact ccacccattg     8760
acgtcaatgg aaagtcccta ttgacgttac tatgggaaca tacgtcatta ttgacgtcaa     8820
tgggcggggg tcgttgggcg gtcagccagg cgggccattt accgtaagtt atgtaacgcg     8880
gaactccata tatgggctat gaactaatga ccccgtaatt gattactatt aataactagc     8940
tccacgcgtg cggccgcaga tcgtcgacga agtttaaact caggaacccc tagtgatgga     9000
gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg     9060
gcgtcgggcg acctttggtc gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt     9120
ggccaacgtc atttaaatgc atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt     9180
gtgaaaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg     9240
cattaatgaa tcggccaacg cgcggg                                          9266
<210> 11
<211> 9236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 11
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa      180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag      240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc      300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat      360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg      420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt      480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag      540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc      600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag      660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt      720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca      780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg      840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat      900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag      960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca     1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt     1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca     1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc     1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg     1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt     1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg     1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc     1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat     1500
tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg     1560
gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg     1620
cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc     1680
ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt     1740
acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg     1800
cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc     1860
tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg     1920
gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc     1980
ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt     2040
actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat     2100
taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc     2160
tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca     2220
caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca     2280
tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc     2340
accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat     2400
tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct     2460
ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact     2520
accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat     2580
ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc     2640
atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc     2700
tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa     2760
gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc     2820
tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac     2880
acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc     2940
gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag     3000
ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg     3060
actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag     3120
ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg     3180
cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc     3240
ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt     3300
ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga     3360
tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc     3420
ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct     3480
cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga     3540
ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga     3600
gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt     3660
acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc     3720
ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt     3780
gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg     3840
tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag     3900
ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc     3960
atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc agaacccaaa tgtgaccaac cgtttacata     4020
tatcttggtt tattatttca atttctcttt tcaaacatct tcttctgtcg ttgtgcaatt     4080
ttccaaatgc caatttggtc gcttggctat ttccaaacga tttcatatat tcaagttgga     4140
gatatagaca gtcccctgaa cacctcgcat cctctgcttt ttatgcctgc tcgtcctgtg     4200
ggtataattt taatggtcaa atcgctgctg gggaattgta tacgctgctc ttgtgtctca     4260
ctgcctccct tgtagaaatg gaaattgctt ttccattatt tccatgtgat tttgttggtt     4320
ttgccatcga attggcattg aaaacgcata aaaataagca tttcgcattt gcaaagatcc     4380
aaaagattta tttgcacgct gagcctgggg atacacgaaa tgtatttgta agattcttca     4440
gatgagtttg gaacgcacgg aaattaccgt cttgggattt gttggacatc gcatttaagc     4500
atgatgtatc atttaatttt ttccaattta aaaacaaata atcagtgcta cgattaagac     4560
tggatctatt atagacttct tcaaagtttt tcagttttct ttaaaattac ctccataaaa     4620
ctcttttaat attttgaaaa tcatctccag gttacattta atctgattaa gtttagagtc     4680
agttagtttc ccacagtttt cttcttgaaa taaacccatt aagtaacccc aactgatcgg     4740
cgcaaatgat tcagctatgc agaaaatatg attgatgatt tttccctccc accagccctt     4800
aacacttgct taaccctttt gtgtggccat tatagccctt tcctcgtagt ctgcttaaag     4860
ttcattaata agttttgcgt gagccaaaaa tggcgccgct ttggaatcgt gacagcgtgg     4920
aaactctgga ctttggggtt gcaaaacttc ggaagctgaa agcattttgc tgtagccatc     4980
gcattttggg ggaagaaatc cgaattcgag tccaaaccga attctaatag aagttttgca     5040
gcaaagtgcc tcagacaggt taatgaccaa aagcagtttt gcattcaaat gctgcagcaa     5100
ccctcgcacg agggttgtca tgacggacga aaatctaatt tacaacatgc aactgccact     5160
ttgaggggtg acttttaccc aagacgtggc tgtgaaggaa attctgcgag aaagagatta     5220
attacgctct gggggcagtt aatgaatgct tgcgcggggc gataaggggt taacgtttgg     5280
ccagctcaaa ttaccgaatg tataacattt tgatgagcat gacaaaaatt ggaattttca     5340
actctttttt cctgcgaaaa gcataacttt tccattaaca caatggcgac gatgagccgg     5400
caaatcgacg ataccaaatc ggcataacgt gcatgaaaat tatacatgat tgatttcata     5460
ttaatttcta cgaatgttat gaatcggcta aaagatgaga atggaaatat tgcacgattt     5520
tgattttgtc atgatgacaa aaaagggttg taagatttgt acatgccaaa atcataaact     5580
tttaacagaa atcaaacaca aagaagtaat ataacattaa agtacacagg ccttgtcaca     5640
gagatagaaa aatgtagcta ttattaaaat atttaacatt ctcttggtgt ctgcaacttt     5700
tctatcagtc gcttttttat tccctttcca acacttattt aaaatgaaat gcactcgaaa     5760
ttaactaatt taatggctca tatcctttgt gctgcttaaa aaggcaggaa acgttttttg     5820
tgccctacac ctcctccatt caaatgaaaa aggcggtgga gtcgaggaaa atgtctgccc     5880
tggagcttga caagccaaga tatggcccat caaaaatgtt cgaatgttct ttttaaataa     5940
atgtctcatt atatggctgc cacgcccaca ccgctcaacg cccacacacg tgccgccttc     6000
cggtttagtt gggtggtacc tgaccgtaga tttttcactg cggacatgtg tccaatcagt     6060
ggcaacgtgc aacgaaccgt ggcaaacaca gggaaagaac ctcgaagacc cacagcaaac     6120
tcatcctctc gaatttgaca ctatgataat gcttatattc aattttttgc aacattctat     6180
ttacactaaa ctgagaaaca ggacaaagtt gagaatgggt gctgtgatta tttgtcttgt     6240
gccaatatat gccctcctgc atataaaata cgagatacaa aaccaaacga aataagaacg     6300
aacaagaaat cagtttaatt tcaatgctga tcaaaccaag ttgacaactc tgttgtatat     6360
tagctctaat aatgacttaa ggttcgaaat ttaagtaact tccaaaatgg gccagataaa     6420
tactgctaat atcgaatgca attcaatgag gaaatagtaa tcaatcagcc aaccctaatg     6480
aaattaataa tgtaatttaa aactttattc cacccattct aataatgaaa atcattaaat     6540
atatgtagca atccaatttt gttaatacat attgtatatc cctgatttgt caataccaaa     6600
gaccagaaaa aacaccatgc caaattcctt ttattcgttg aaaatcgaaa caactttgaa     6660
gtattaacct gctggctaaa aaatatgtgt attactaaat ataccatgta atcaaaagtt     6720
cgaaataaac gtgaaatggc agctccactc gtcagccgtg ccacttttcg actaatcaaa     6780
atgccttttg aatgcctgag ttgaatcaag ttggcttaat agttattatc ccacgcaagc     6840
aaagtcaatg gcagagggaa atgcgtagaa attagcacag acttgaatgg acgcacgagt     6900
gtcgaatggc aggagagtgg gaaatgaacg gggagttttc caggataagg atgttttcga     6960
agtatcgtaa tcatttatag cctccagata cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc     7020
gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat     7080
tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa     7140
tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga     7200
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct     7260
tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa     7320
ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag     7380
gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga     7440
ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat     7500
caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat     7560
gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt     7620
caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca     7680
ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa     7740
caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg     7800
aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta     7860
accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg     7920
tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat     7980
gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg     8040
attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat     8100
ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt     8160
ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac     8220
atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg     8280
gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct     8340
aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc     8400
actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc     8460
ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat     8520
aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc     8580
cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct     8640
cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg     8700
aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc     8760
cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga     8820
ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa     8880
gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta     8940
gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc     9000
agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc     9060
tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg     9120
ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc     9180
gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc         9236
<210> 12
<211> 6260
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 12
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg      180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc      240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt      300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat      360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg      420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa      480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact      540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta      600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt      660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg      720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg      780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc      840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt      900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca      960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc     1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa     1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct     1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat     1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca     1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac     1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc     1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg     1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca     1500
tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca     1560
tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc     1620
tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg     1680
agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc     1740
ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca     1800
tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact     1860
ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg     1920
gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga     1980
ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg     2040
agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga     2100
tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg     2160
ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg     2220
ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct     2280
gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct     2340
gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc     2400
cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg     2460
acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg     2520
gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga     2580
agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc     2640
acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct     2700
gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg     2760
aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga     2820
gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc     2880
agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt     2940
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg     3000
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca     3060
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca     3120
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga     3180
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc     3240
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt     3300
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat     3360
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg     3420
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt     3480
aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg     3540
ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc     3600
ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag     3660
ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca     3720
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg     3780
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta     3840
ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat     3900
ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc     3960
ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctccgggag     4020
ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt     4080
gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa     4140
actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac     4200
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc     4260
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat     4320
ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat     4380
gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct     4440
gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt     4500
ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa     4560
ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt     4620
tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac     4680
tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat     4740
cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca     4800
gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt     4860
ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga     4920
tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat     4980
cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat     5040
acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat     5100
ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc     5160
tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata     5220
tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg     5280
cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac     5340
ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa     5400
tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat     5460
cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga     5520
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg     5580
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg     5640
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc     5700
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg     5760
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca     5820
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt     5880
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag     5940
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg     6000
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca     6060
gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc     6120
ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg     6180
ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc     6240
caatacgcaa accgcctctc                                                 6260
<210> 13
<211> 6442
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 13
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa      180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag      240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc      300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat      360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg      420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt      480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag      540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc      600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag      660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt      720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca      780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg      840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat      900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag      960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca     1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt     1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca     1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc     1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg     1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt     1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg     1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc     1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcgaattc gggcacgagg gaggacagag     1500
agcaagtcac tcccggctgc ctttttcacc tctgacagag cccagacacc atgaacgcaa     1560
gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg tggattacgt ggccaactac atggaaggca     1620
ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg     1680
ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg aggacatcat caacgacgtt gagaagataa     1740
tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc cctacttctt cgcctacttc cccactgcca     1800
gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct     1860
cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc tggagactgt gatgatggac tggctcggga     1920
agatgctgga actaccaaag gcatttttga atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga     1980
tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga     2040
tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg     2100
tggcttactc atccgatcag gcacactcct cagtggaaag agctgggtta attggtggag     2160
tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg     2220
aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg     2280
ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg     2340
aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt     2400
tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg cagattcatt caactttaat ccccacaaat     2460
ggctattggt gaattttgac tgttctgcca tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg     2520
gagcctttag actggacccc acttacctga agcacagcca tcaggattca gggcttatca     2580
ctgactaccg gcattggcag ataccactgg gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt     2640
ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc     2700
tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag     2760
tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc     2820
tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc acttggttcc atgtcacctc agggacaagt     2880
ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct     2940
gggaacacat caaagagctg gcggccgacg tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa     3000
gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa     3060
ataaatatca tcctgccttc atggaactca gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca     3120
aagttatcca gagggttgtg attttgtctg cttagtatct catcaacaaa gaaatattat     3180
ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc atagctttta ttcattagct gtgatttttg     3240
ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct     3300
cactgatata ttttccaggg caatcaatgt tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct     3360
tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg cctaataaac aattcaagtg aaatactaaa     3420
aaaaaaaaaa aaaaaaaaag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct gtgacccctc     3480
cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc ttgtcctaat     3540
aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta tggggtggag     3600
gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct gcggggtcta     3660
ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct ccgcctcctg     3720
ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg catgcatgac     3780
caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat tggccaggct     3840
ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat tgctgggatt     3900
acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa ccacgtgcgg     3960
accgagcggc cgcagttaat taagctcgcg aaacccctag tgatggagtt ggccactccc     4020
tctctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc     4080
tttgcccggg cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagct ggacgattta aatggtaccg     4140
agctcgaatt cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc     4200
caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc     4260
cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatggcg cctgatgcgg     4320
tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatggtgcac tctcagtaca     4380
atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg     4440
ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg     4500
agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgatgca gctctggccc     4560
gtgtctcaaa atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata     4620
aaactgtctg cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa     4680
acgtcgaggc cgcgattaaa ttccaacatg gatgctgatt tatatgggta taaatgggct     4740
cgcgataatg tcgggcaatc aggtgcgaca atctatcgct tgtatgggaa gcccgatgcg     4800
ccagagttgt ttctgaaaca tggcaaaggt agcgttgcca atgatgttac agatgagatg     4860
gtcagactaa actggctgac ggaatttatg cctcttccga ccatcaagca ttttatccgt     4920
actcctgatg atgcatggtt actcaccact gcgatccccg gaaaaacagc attccaggta     4980
ttagaagaat atcctgattc aggtgaaaat attgttgatg cgctggcagt gttcctgcgc     5040
cggttgcatt cgattcctgt ttgtaattgt ccttttaaca gcgatcgcgt atttcgtctc     5100
gctcaggcgc aatcacgaat gaataacggt ttggttgatg cgagtgattt tgatgacgag     5160
cgtaatggct ggcctgttga acaagtctgg aaagaaatgc ataaactttt gccattctca     5220
ccggattcag tcgtcactca tggtgatttc tcacttgata accttatttt tgacgagggg     5280
aaattaatag gttgtattga tgttggacga gtcggaatcg cagaccgata ccaggatctt     5340
gccatcctat ggaactgcct cggtgagttt tctccttcat tacagaaacg gctttttcaa     5400
aaatatggta ttgataatcc tgatatgaat aaattgcagt ttcatttgat gctcgatgag     5460
tttttctaat cagaattggt taattggttg taacattatt cagattgggc ttgatttaaa     5520
acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa     5580
aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg     5640
atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc     5700
gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac     5760
tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca     5820
ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt     5880
ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc     5940
ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg     6000
aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc     6060
cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac     6120
gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct     6180
ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc     6240
cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt     6300
tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac     6360
cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg     6420
cccaatacgc aaaccgcctc tc                                              6442
<210> 14
<211> 9260
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 14
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg      180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc      240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt      300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat      360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg      420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa      480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact      540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta      600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt      660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg      720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg      780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc      840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt      900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca      960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc     1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa     1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct     1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat     1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca     1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac     1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc     1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg     1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca     1500
tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca     1560
tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc     1620
tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg     1680
agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc     1740
ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca     1800
tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact     1860
ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg     1920
gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga     1980
ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg     2040
agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga     2100
tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg     2160
ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg     2220
ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct     2280
gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct     2340
gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc     2400
cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg     2460
acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg     2520
gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga     2580
agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc     2640
acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct     2700
gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg     2760
aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga     2820
gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc     2880
agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt     2940
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg     3000
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca     3060
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca     3120
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga     3180
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc     3240
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt     3300
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat     3360
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg     3420
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt     3480
aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg     3540
ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc     3600
ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag     3660
ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca     3720
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg     3780
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta     3840
ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat     3900
ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc     3960
ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctcagaacc     4020
caaatgtgac caaccgttta catatatctt ggtttattat ttcaatttct cttttcaaac     4080
atcttcttct gtcgttgtgc aattttccaa atgccaattt ggtcgcttgg ctatttccaa     4140
acgatttcat atattcaagt tggagatata gacagtcccc tgaacacctc gcatcctctg     4200
ctttttatgc ctgctcgtcc tgtgggtata attttaatgg tcaaatcgct gctggggaat     4260
tgtatacgct gctcttgtgt ctcactgcct cccttgtaga aatggaaatt gcttttccat     4320
tatttccatg tgattttgtt ggttttgcca tcgaattggc attgaaaacg cataaaaata     4380
agcatttcgc atttgcaaag atccaaaaga tttatttgca cgctgagcct ggggatacac     4440
gaaatgtatt tgtaagattc ttcagatgag tttggaacgc acggaaatta ccgtcttggg     4500
atttgttgga catcgcattt aagcatgatg tatcatttaa ttttttccaa tttaaaaaca     4560
aataatcagt gctacgatta agactggatc tattatagac ttcttcaaag tttttcagtt     4620
ttctttaaaa ttacctccat aaaactcttt taatattttg aaaatcatct ccaggttaca     4680
tttaatctga ttaagtttag agtcagttag tttcccacag ttttcttctt gaaataaacc     4740
cattaagtaa ccccaactga tcggcgcaaa tgattcagct atgcagaaaa tatgattgat     4800
gatttttccc tcccaccagc ccttaacact tgcttaaccc ttttgtgtgg ccattatagc     4860
cctttcctcg tagtctgctt aaagttcatt aataagtttt gcgtgagcca aaaatggcgc     4920
cgctttggaa tcgtgacagc gtggaaactc tggactttgg ggttgcaaaa cttcggaagc     4980
tgaaagcatt ttgctgtagc catcgcattt tgggggaaga aatccgaatt cgagtccaaa     5040
ccgaattcta atagaagttt tgcagcaaag tgcctcagac aggttaatga ccaaaagcag     5100
ttttgcattc aaatgctgca gcaaccctcg cacgagggtt gtcatgacgg acgaaaatct     5160
aatttacaac atgcaactgc cactttgagg ggtgactttt acccaagacg tggctgtgaa     5220
ggaaattctg cgagaaagag attaattacg ctctgggggc agttaatgaa tgcttgcgcg     5280
gggcgataag gggttaacgt ttggccagct caaattaccg aatgtataac attttgatga     5340
gcatgacaaa aattggaatt ttcaactctt ttttcctgcg aaaagcataa cttttccatt     5400
aacacaatgg cgacgatgag ccggcaaatc gacgatacca aatcggcata acgtgcatga     5460
aaattataca tgattgattt catattaatt tctacgaatg ttatgaatcg gctaaaagat     5520
gagaatggaa atattgcacg attttgattt tgtcatgatg acaaaaaagg gttgtaagat     5580
ttgtacatgc caaaatcata aacttttaac agaaatcaaa cacaaagaag taatataaca     5640
ttaaagtaca caggccttgt cacagagata gaaaaatgta gctattatta aaatatttaa     5700
cattctcttg gtgtctgcaa cttttctatc agtcgctttt ttattccctt tccaacactt     5760
atttaaaatg aaatgcactc gaaattaact aatttaatgg ctcatatcct ttgtgctgct     5820
taaaaaggca ggaaacgttt tttgtgccct acacctcctc cattcaaatg aaaaaggcgg     5880
tggagtcgag gaaaatgtct gccctggagc ttgacaagcc aagatatggc ccatcaaaaa     5940
tgttcgaatg ttctttttaa ataaatgtct cattatatgg ctgccacgcc cacaccgctc     6000
aacgcccaca cacgtgccgc cttccggttt agttgggtgg tacctgaccg tagatttttc     6060
actgcggaca tgtgtccaat cagtggcaac gtgcaacgaa ccgtggcaaa cacagggaaa     6120
gaacctcgaa gacccacagc aaactcatcc tctcgaattt gacactatga taatgcttat     6180
attcaatttt ttgcaacatt ctatttacac taaactgaga aacaggacaa agttgagaat     6240
gggtgctgtg attatttgtc ttgtgccaat atatgccctc ctgcatataa aatacgagat     6300
acaaaaccaa acgaaataag aacgaacaag aaatcagttt aatttcaatg ctgatcaaac     6360
caagttgaca actctgttgt atattagctc taataatgac ttaaggttcg aaatttaagt     6420
aacttccaaa atgggccaga taaatactgc taatatcgaa tgcaattcaa tgaggaaata     6480
gtaatcaatc agccaaccct aatgaaatta ataatgtaat ttaaaacttt attccaccca     6540
ttctaataat gaaaatcatt aaatatatgt agcaatccaa ttttgttaat acatattgta     6600
tatccctgat ttgtcaatac caaagaccag aaaaaacacc atgccaaatt ccttttattc     6660
gttgaaaatc gaaacaactt tgaagtatta acctgctggc taaaaaatat gtgtattact     6720
aaatatacca tgtaatcaaa agttcgaaat aaacgtgaaa tggcagctcc actcgtcagc     6780
cgtgccactt ttcgactaat caaaatgcct tttgaatgcc tgagttgaat caagttggct     6840
taatagttat tatcccacgc aagcaaagtc aatggcagag ggaaatgcgt agaaattagc     6900
acagacttga atggacgcac gagtgtcgaa tggcaggaga gtgggaaatg aacggggagt     6960
tttccaggat aaggatgttt tcgaagtatc gtaatcattt atagcctcca gatacgggag     7020
ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt     7080
gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa     7140
actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac     7200
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc     7260
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat     7320
ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat     7380
gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct     7440
gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt     7500
ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa     7560
ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt     7620
tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac     7680
tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat     7740
cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca     7800
gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt     7860
ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga     7920
tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat     7980
cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat     8040
acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat     8100
ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc     8160
tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata     8220
tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg     8280
cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac     8340
ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa     8400
tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat     8460
cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga     8520
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg     8580
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg     8640
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc     8700
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg     8760
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca     8820
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt     8880
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag     8940
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg     9000
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca     9060
gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc     9120
ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg     9180
ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc     9240
caatacgcaa accgcctctc                                                 9260
<210> 15
<211> 9665
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 15
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg      180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc      240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt      300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat      360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg      420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa      480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact      540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta      600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt      660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg      720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg      780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc      840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt      900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca      960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc     1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa     1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct     1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat     1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca     1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac     1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc     1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg     1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca     1500
tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca     1560
tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc     1620
tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg     1680
agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc     1740
ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca     1800
tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact     1860
ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg     1920
gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga     1980
ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg     2040
agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa     2100
ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg     2160
ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg     2220
ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct     2280
gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct     2340
gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc     2400
cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag     2460
acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag     2520
ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga     2580
aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc     2640
atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct     2700
gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg     2760
aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca     2820
gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc     2880
agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt     2940
aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat     3000
aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt     3060
ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag     3120
aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg     3180
tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta     3240
ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat     3300
ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataagct gctcgagaga     3360
tctacgggtg gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca     3420
ctccagtgcc caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg     3480
tgtccttcta taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg caagttggga     3540
agacaacctg tagggcctgc ggggtctatt gggaaccaag ctggagtgca gtggcacaat     3600
cttggctcac tgcaatctcc gcctcctggg ttcaagcgat tctcctgcct cagcctcccg     3660
agttgttggg attccaggca tgcatgacca ggctcagcta atttttgttt ttttggtaga     3720
gacggggttt caccatattg gccaggctgg tctccaactc ctaatctcag gtgatctacc     3780
caccttggcc tcccaaattg ctgggattac aggcgtgaac cactgctccc ttccctgtcc     3840
ttctgatttt gtaggtaacc acgtgcggac cgagcggccg cagttaatta agctcgcgaa     3900
ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc     3960
cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg     4020
agcgcgcaga gagggagtgg ccaagacgat ttaaatggta ccgagctcga attcactggc     4080
cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc     4140
agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc     4200
ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca     4260
tctgtgcggt atttcacacc gcatatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc     4320
atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct     4380
gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctca gaacccaaat gtgaccaacc     4440
gtttacatat atcttggttt attatttcaa tttctctttt caaacatctt cttctgtcgt     4500
tgtgcaattt tccaaatgcc aatttggtcg cttggctatt tccaaacgat ttcatatatt     4560
caagttggag atatagacag tcccctgaac acctcgcatc ctctgctttt tatgcctgct     4620
cgtcctgtgg gtataatttt aatggtcaaa tcgctgctgg ggaattgtat acgctgctct     4680
tgtgtctcac tgcctccctt gtagaaatgg aaattgcttt tccattattt ccatgtgatt     4740
ttgttggttt tgccatcgaa ttggcattga aaacgcataa aaataagcat ttcgcatttg     4800
caaagatcca aaagatttat ttgcacgctg agcctgggga tacacgaaat gtatttgtaa     4860
gattcttcag atgagtttgg aacgcacgga aattaccgtc ttgggatttg ttggacatcg     4920
catttaagca tgatgtatca tttaattttt tccaatttaa aaacaaataa tcagtgctac     4980
gattaagact ggatctatta tagacttctt caaagttttt cagttttctt taaaattacc     5040
tccataaaac tcttttaata ttttgaaaat catctccagg ttacatttaa tctgattaag     5100
tttagagtca gttagtttcc cacagttttc ttcttgaaat aaacccatta agtaacccca     5160
actgatcggc gcaaatgatt cagctatgca gaaaatatga ttgatgattt ttccctccca     5220
ccagccctta acacttgctt aacccttttg tgtggccatt atagcccttt cctcgtagtc     5280
tgcttaaagt tcattaataa gttttgcgtg agccaaaaat ggcgccgctt tggaatcgtg     5340
acagcgtgga aactctggac tttggggttg caaaacttcg gaagctgaaa gcattttgct     5400
gtagccatcg cattttgggg gaagaaatcc gaattcgagt ccaaaccgaa ttctaataga     5460
agttttgcag caaagtgcct cagacaggtt aatgaccaaa agcagttttg cattcaaatg     5520
ctgcagcaac cctcgcacga gggttgtcat gacggacgaa aatctaattt acaacatgca     5580
actgccactt tgaggggtga cttttaccca agacgtggct gtgaaggaaa ttctgcgaga     5640
aagagattaa ttacgctctg ggggcagtta atgaatgctt gcgcggggcg ataaggggtt     5700
aacgtttggc cagctcaaat taccgaatgt ataacatttt gatgagcatg acaaaaattg     5760
gaattttcaa ctcttttttc ctgcgaaaag cataactttt ccattaacac aatggcgacg     5820
atgagccggc aaatcgacga taccaaatcg gcataacgtg catgaaaatt atacatgatt     5880
gatttcatat taatttctac gaatgttatg aatcggctaa aagatgagaa tggaaatatt     5940
gcacgatttt gattttgtca tgatgacaaa aaagggttgt aagatttgta catgccaaaa     6000
tcataaactt ttaacagaaa tcaaacacaa agaagtaata taacattaaa gtacacaggc     6060
cttgtcacag agatagaaaa atgtagctat tattaaaata tttaacattc tcttggtgtc     6120
tgcaactttt ctatcagtcg cttttttatt ccctttccaa cacttattta aaatgaaatg     6180
cactcgaaat taactaattt aatggctcat atcctttgtg ctgcttaaaa aggcaggaaa     6240
cgttttttgt gccctacacc tcctccattc aaatgaaaaa ggcggtggag tcgaggaaaa     6300
tgtctgccct ggagcttgac aagccaagat atggcccatc aaaaatgttc gaatgttctt     6360
tttaaataaa tgtctcatta tatggctgcc acgcccacac cgctcaacgc ccacacacgt     6420
gccgccttcc ggtttagttg ggtggtacct gaccgtagat ttttcactgc ggacatgtgt     6480
ccaatcagtg gcaacgtgca acgaaccgtg gcaaacacag ggaaagaacc tcgaagaccc     6540
acagcaaact catcctctcg aatttgacac tatgataatg cttatattca attttttgca     6600
acattctatt tacactaaac tgagaaacag gacaaagttg agaatgggtg ctgtgattat     6660
ttgtcttgtg ccaatatatg ccctcctgca tataaaatac gagatacaaa accaaacgaa     6720
ataagaacga acaagaaatc agtttaattt caatgctgat caaaccaagt tgacaactct     6780
gttgtatatt agctctaata atgacttaag gttcgaaatt taagtaactt ccaaaatggg     6840
ccagataaat actgctaata tcgaatgcaa ttcaatgagg aaatagtaat caatcagcca     6900
accctaatga aattaataat gtaatttaaa actttattcc acccattcta ataatgaaaa     6960
tcattaaata tatgtagcaa tccaattttg ttaatacata ttgtatatcc ctgatttgtc     7020
aataccaaag accagaaaaa acaccatgcc aaattccttt tattcgttga aaatcgaaac     7080
aactttgaag tattaacctg ctggctaaaa aatatgtgta ttactaaata taccatgtaa     7140
tcaaaagttc gaaataaacg tgaaatggca gctccactcg tcagccgtgc cacttttcga     7200
ctaatcaaaa tgccttttga atgcctgagt tgaatcaagt tggcttaata gttattatcc     7260
cacgcaagca aagtcaatgg cagagggaaa tgcgtagaaa ttagcacaga cttgaatgga     7320
cgcacgagtg tcgaatggca ggagagtggg aaatgaacgg ggagttttcc aggataagga     7380
tgttttcgaa gtatcgtaat catttatagc ctccagatac gggagctgca tgtgtcagag     7440
gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgat gcagctctgg cccgtgtctc aaaatctctg     7500
atgttacatt gcacaagata aaaatatatc atcatgaaca ataaaactgt ctgcttacat     7560
aaacagtaat acaaggggtg ttgaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca     7620
gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac     7680
ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaagc ccaatctgaa taatgttaca     7740
accaattaac caattctgat tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat     7800
tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa     7860
actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc     7920
gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga     7980
aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc     8040
agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac     8100
cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac     8160
aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat     8220
tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgtttttccg gggatcgcag     8280
tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca     8340
taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac     8400
ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaag cgatagattg     8460
tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca     8520
tgttggaatt taatcgcggc ctcgacgttt cccgttgaat atggctcata acaccccttg     8580
tattactgtt tatgtaagca gacagtttta ttgttcatga tgatatattt ttatcttgtg     8640
caatgtaaca tcagagattt tgagacacgg gccagagctg catcgcgcgt tttcagaatt     8700
ggttaattgg ttgtaacatt attcagattg ggcttgattt aaaacttcat ttttaattta     8760
aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt     8820
tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct ttccataggc     8880
tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga     8940
caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc     9000
cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt     9060
ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct     9120
gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg     9180
agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta     9240
gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct     9300
acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa     9360
gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt     9420
gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaaa cgccagcaac gcggcctttt     9480
tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg     9540
attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa     9600
cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc     9660
ctctc                                                                 9665
<210> 16
<211> 6236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 16
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg       60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc      120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa      180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag      240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc      300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat      360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg      420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt      480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag      540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc      600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag      660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt      720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca      780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg      840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat      900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag      960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca     1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt     1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca     1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc     1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg     1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt     1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg     1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc     1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat     1500
tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg     1560
gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg     1620
cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc     1680
ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt     1740
acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg     1800
cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc     1860
tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg     1920
gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc     1980
ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt     2040
actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat     2100
taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc     2160
tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca     2220
caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca     2280
tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc     2340
accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat     2400
tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct     2460
ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact     2520
accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat     2580
ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc     2640
atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc     2700
tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa     2760
gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc     2820
tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac     2880
acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc     2940
gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag     3000
ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg     3060
actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag     3120
ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg     3180
cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc     3240
ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt     3300
ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga     3360
tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc     3420
ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct     3480
cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga     3540
ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga     3600
gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt     3660
acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc     3720
ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt     3780
gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg     3840
tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag     3900
ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc     3960
atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc     4020
gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat     4080
tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa     4140
tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga     4200
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct     4260
tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa     4320
ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag     4380
gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga     4440
ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat     4500
caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat     4560
gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt     4620
caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca     4680
ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa     4740
caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg     4800
aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta     4860
accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg     4920
tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat     4980
gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg     5040
attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat     5100
ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt     5160
ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac     5220
atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg     5280
gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct     5340
aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc     5400
actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc     5460
ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat     5520
aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc     5580
cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct     5640
cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg     5700
aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc     5760
cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga     5820
ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa     5880
gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta     5940
gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc     6000
agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc     6060
tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg     6120
ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc     6180
gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc         6236
<210> 17
<211> 3497
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 17
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc       60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca      120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg      180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt      240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc      300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac      360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata      420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc      480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta      540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac      600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca      660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg      720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag      780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg      840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg      900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt      960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata     1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag     1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag     1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg     1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct     1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt     1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga     1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg     1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg     1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga     1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca     1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc     1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac     1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca     1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg     1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg     1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca     1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag     2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct     2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc     2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga     2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt     2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg     2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt     2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt     2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg     2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg     2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca     2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg     2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag     2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct     2820
acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc     2880
cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt     2940
ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga     3000
caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt     3060
ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt     3120
tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac     3180
ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac     3240
cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc     3300
tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga     3360
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg     3420
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc     3480
gcgcagctgc ctgcagg                                                    3497
<210> 18
<211> 3497
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 18
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc       60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca      120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg      180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt      240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc      300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac      360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata      420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc      480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta      540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac      600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca      660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg      720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag      780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg      840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg      900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt      960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata     1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag     1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag     1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg     1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct     1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt     1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga     1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg     1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg     1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga     1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca     1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc     1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac     1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca     1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg     1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg     1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca     1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag     2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct     2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc     2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga     2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt     2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg     2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt     2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt     2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg     2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg     2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca     2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg     2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag     2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct     2820
acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc     2880
cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt     2940
ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga     3000
caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt     3060
ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt     3120
tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac     3180
ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac     3240
cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc     3300
tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga     3360
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg     3420
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc     3480
gcgcagctgc ctgcagg                                                    3497
<210> 19
<211> 3491
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 19
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc       60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca      120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg      180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt      240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc      300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac      360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata      420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc      480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta      540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac      600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca      660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg      720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag      780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg      840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg      900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt      960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata     1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag     1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag     1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg     1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct     1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt     1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgccagcgag ttcaggagga     1380
ggggcaagga gatggtggac tacgtggcca actacatgga gggcatcgag ggcaggcagg     1440
tgtaccccga cgtggagccc ggctacctga ggcccctgat ccccgccgcc gccccccagg     1500
agcccgacac cttcgaggac atcatcaacg acgtggagaa gatcatcatg cccggcgtga     1560
cccactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac cgccagcagc taccccgcca     1620
tgctggccga catgctgtgc ggcgccatcg gctgcatcgg cttcagctgg gccgccagcc     1680
ccgcctgcac cgagctggag accgtgatga tggactggct gggcaagatg ctggagctgc     1740
ccaaggcctt cctgaacgag aaggccggcg agggcggcgg cgtgatccag ggcagcgcca     1800
gcgaggccac cctggtggcc ctgctggccg ccaggaccaa ggtgatccac aggctgcagg     1860
ccgccagccc cgagctgacc caggccgcca tcatggagaa gctggtggcc tacagcagcg     1920
accaggccca cagcagcgtg gagagggccg gcctgatcgg cggcgtgaag ctgaaggcca     1980
tccccagcga cggcaacttc gccatgaggg ccagcgccct gcaggaggcc ctggagaggg     2040
acaaggccgc cggcctgatc cccttcttca tggtggccac cctgggcacc accacctgct     2100
gcagcttcga caacctgctg gaggtgggcc ccatctgcaa caaggaggac atctggctgc     2160
acgtggacgc cgcctacgcc ggcagcgcct tcatctgccc cgagttcagg cacctgctga     2220
acggcgtgga gttcgccgac agcttcaact tcaaccccca caagtggctg ctggtgaact     2280
tcgactgcag cgccatgtgg gtgaagaaga ggaccgacct gaccggcgcc ttcaggctgg     2340
accccaccta cctgaagcac agccaccagg acagcggcct gatcaccgac tacaggcact     2400
ggcagatccc cctgggcagg aggttcagga gcctgaagat gtggttcgtg ttcaggatgt     2460
acggcgtgaa gggcctgcag gcctacatca ggaagcacgt gcagctgagc cacgagttcg     2520
agagcctggt gaggcaggac cccaggttcg agatctgcgt ggaggtgatc ctgggcctgg     2580
tgtgcttcag gctgaagggc agcaacaagg tgaacgaggc cctgctgcag aggatcaaca     2640
gcgccaagaa gatccacctg gtgccctgcc acctgaggga caagttcgtg ctgaggttcg     2700
ccatctgcag caggaccgtg gagagcgccc acgtgcagag ggcctgggag cacatcaagg     2760
agctggccgc cgacgtgctg agggccgaga gggagtgagc tgctcgagag atctacgggt     2820
ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc     2880
ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct     2940
ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct     3000
gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca     3060
ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg     3120
gattccaggc atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt     3180
tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc     3240
ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt     3300
tgtaggtaac cacgtgcgga ccgagcggcc gcagttaatt aagctcgcga aggaacccct     3360
agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc     3420
aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag     3480
ctgcctgcag g                                                          3491
<210> 20
<211> 4003
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 20
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc       60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca      120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg      180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt      240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc      300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac      360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata      420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc      480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta      540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac      600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca      660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg      720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag      780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg      840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg      900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt      960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata     1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag     1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag     1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg     1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct     1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt     1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcgaatt cgggcacgag ggaggacaga gagcaagtca     1380
ctcccggctg cctttttcac ctctgacaga gcccagacac catgaacgca agtgaattcc     1440
gaaggagagg gaaggagatg gtggattacg tggccaacta catggaaggc attgagggac     1500
gccaggtcta ccctgacgtg gagcccgggt acctgcggcc gctgatccct gccgctgccc     1560
ctcaggagcc agacacgttt gaggacatca tcaacgacgt tgagaagata atcatgcctg     1620
gggtgacgca ctggcacagc ccctacttct tcgcctactt ccccactgcc agctcgtacc     1680
cggccatgct tgcggacatg ctgtgcgggg ccattggctg catcggcttc tcctgggcgg     1740
caagcccagc atgcacagag ctggagactg tgatgatgga ctggctcggg aagatgctgg     1800
aactaccaaa ggcatttttg aatgagaaag ctggagaagg gggaggagtg atccagggaa     1860
gtgccagtga agccaccctg gtggccctgc tggccgctcg gaccaaagtg atccatcggc     1920
tgcaggcagc gtccccagag ctcacacagg ccgctatcat ggagaagctg gtggcttact     1980
catccgatca ggcacactcc tcagtggaaa gagctgggtt aattggtgga gtgaaattaa     2040
aagccatccc ctcagatggc aacttcgcca tgcgtgcgtc tgccctgcag gaagccctgg     2100
agagagacaa agcggctggc ctgattcctt tctttatggt tgccaccctg gggaccacaa     2160
catgctgctc ctttgacaat ctcttagaag tcggtcctat ctgcaacaag gaagacatat     2220
ggctgcacgt tgatgcagcc tacgcaggca gtgcattcat ctgccctgag ttccggcacc     2280
ttctgaatgg agtggagttt gcagattcat tcaactttaa tccccacaaa tggctattgg     2340
tgaattttga ctgttctgcc atgtgggtga aaaagagaac agacttaacg ggagccttta     2400
gactggaccc cacttacctg aagcacagcc atcaggattc agggcttatc actgactacc     2460
ggcattggca gataccactg ggcagaagat ttcgctcttt gaaaatgtgg tttgtattta     2520
ggatgtatgg agtcaaagga ctgcaggctt atatccgcaa gcatgtccag ctgtcccatg     2580
agtttgagtc actggtgcgc caggatcccc gctttgaaat ctgtgtggaa gtcattctgg     2640
ggcttgtctg ctttcggcta aagggttcca acaaagtgaa tgaagctctt ctgcaaagaa     2700
taaacagtgc caaaaaaatc cacttggttc catgtcacct cagggacaag tttgtcctgc     2760
gctttgccat ctgttctcgc acggtggaat ctgcccatgt gcagcgggcc tgggaacaca     2820
tcaaagagct ggcggccgac gtgctgcgag cagagaggga gtaggagtga agccagctgc     2880
aggaatcaaa aattgaagag agatatatct gaaaactgga ataagaagca aataaatatc     2940
atcctgcctt catggaactc agctgtctgt ggcttcccat gtctttctcc aaagttatcc     3000
agagggttgt gattttgtct gcttagtatc tcatcaacaa agaaatatta tttgctaatt     3060
aaaaagttaa tcttcatggc catagctttt attcattagc tgtgattttt gttgattaaa     3120
acattataga ttttcatgtt cttgcagtca tcagaagtgg taggaaagcc tcactgatat     3180
attttccagg gcaatcaatg ttcacgcaac ttgaaattat atctgtggtc ttcaaattgt     3240
cttttgtcat gtggctaaat gcctaataaa caattcaagt gaaatactaa aaaaaaaaaa     3300
aaaaaaaaaa gctgctcgag agatctacgg gtggcatccc tgtgacccct ccccagtgcc     3360
tctcctggcc ctggaagttg ccactccagt gcccaccagc cttgtcctaa taaaattaag     3420
ttgcatcatt ttgtctgact aggtgtcctt ctataatatt atggggtgga ggggggtggt     3480
atggagcaag gggcaagttg ggaagacaac ctgtagggcc tgcggggtct attgggaacc     3540
aagctggagt gcagtggcac aatcttggct cactgcaatc tccgcctcct gggttcaagc     3600
gattctcctg cctcagcctc ccgagttgtt gggattccag gcatgcatga ccaggctcag     3660
ctaatttttg tttttttggt agagacgggg tttcaccata ttggccaggc tggtctccaa     3720
ctcctaatct caggtgatct acccaccttg gcctcccaaa ttgctgggat tacaggcgtg     3780
aaccactgct cccttccctg tccttctgat tttgtaggta accacgtgcg gaccgagcgg     3840
ccgcagttaa ttaagctcgc gaaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg     3900
cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc     3960
cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc agg                       4003
<210> 21
<211> 3499
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 21
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc       60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg      120
gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt cgacgatctg cggccgcacg      180
cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag cccatatatg      240
gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc      300
cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgtcaatagg gactttccat      360
tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat      420
catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat      480
gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc      540
gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac      600
tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttgcaccaaa      660
atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta      720
ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct      780
ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga tccagcctcc      840
gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc ggattccccg tgccaagagt      900
gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa atgctttctt cttttaatat      960
acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct ctttctttca gggcaataat     1020
gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat aacagtgata atttctgggt     1080
taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca tataaattgt aactgatgta     1140
agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac cattctgctt ttattttatg     1200
gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc cttttgctaa tcatgttcat     1260
acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg gtctgtgtgc tggcccatca     1320
ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca tgaacgccag cgagttcagg     1380
aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca tggagggcat cgagggcagg     1440
caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc tgatccccgc cgccgccccc     1500
caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg agaagatcat catgcccggc     1560
gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc ccaccgccag cagctacccc     1620
gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca tcggcttcag ctgggccgcc     1680
agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact ggctgggcaa gatgctggag     1740
ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg gcggcgtgat ccagggcagc     1800
gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga ccaaggtgat ccacaggctg     1860
caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg agaagctggt ggcctacagc     1920
agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga tcggcggcgt gaagctgaag     1980
gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg ccctgcagga ggccctggag     2040
agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg ccaccctggg caccaccacc     2100
tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct gcaacaagga ggacatctgg     2160
ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct gccccgagtt caggcacctg     2220
ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc cccacaagtg gctgctggtg     2280
aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg acctgaccgg cgccttcagg     2340
ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg gcctgatcac cgactacagg     2400
cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga agatgtggtt cgtgttcagg     2460
atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc acgtgcagct gagccacgag     2520
ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct gcgtggaggt gatcctgggc     2580
ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg aggccctgct gcagaggatc     2640
aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga gggacaagtt cgtgctgagg     2700
ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc agagggcctg ggagcacatc     2760
aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt gagctgctcg agagatctac     2820
gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca     2880
gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc     2940
ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca     3000
acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg     3060
ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg     3120
ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg     3180
ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct     3240
tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtccttctg     3300
attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt aattaagctc gcgaaggaac     3360
ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc     3420
gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc     3480
gcagagaggg agtggccaa                                                  3499
<210> 22
<211> 3896
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 22
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc       60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca      120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg      180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt      240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc      300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac      360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata      420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc      480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta      540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac      600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca      660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg      720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag      780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg      840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg      900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt      960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata     1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag     1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag     1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg     1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct     1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt     1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga     1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg     1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg     1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga     1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca     1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc     1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac     1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca     1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg     1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg     1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca     1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag     2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct     2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc     2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga     2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt     2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg     2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt     2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt     2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg     2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg     2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca     2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg     2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag     2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgaagccag ctgcaggaat     2820
caaaaattga agagagatat atctgaaaac tggaataaga agcaaataaa tatcatcctg     2880
ccttcatgga actcagctgt ctgtggcttc ccatgtcttt ctccaaagtt atccagaggg     2940
ttgtgatttt gtctgcttag tatctcatca acaaagaaat attatttgct aattaaaaag     3000
ttaatcttca tggccatagc ttttattcat tagctgtgat ttttgttgat taaaacatta     3060
tagattttca tgttcttgca gtcatcagaa gtggtaggaa agcctcactg atatattttc     3120
cagggcaatc aatgttcacg caacttgaaa ttatatctgt ggtcttcaaa ttgtcttttg     3180
tcatgtggct aaatgcctaa taagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc     3240
cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc     3300
taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt     3360
ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg     3420
tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct     3480
cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca     3540
tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca     3600
ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg     3660
gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt     3720
gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaggaa cccctagtga tggagttggc     3780
cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg     3840
cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg         3896
<210> 23
<211> 3475
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 23
cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa agcccgggcg tcgggcgacc       60
tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag agggagtggc caactccatc      120
actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc gcacgcgtgg agctagttat      180
taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca      240
taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca      300
ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg      360
gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg      420
ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc      480
ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg      540
atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca      600
agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca ccaaaatcaa cgggactttc      660
caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg      720
aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga cgccatccac      780
gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag cctccgcgga ttcgaatccc      840
ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca agagtgacgt aagtaccgcc      900
tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt aatatacttt tttgtttatc      960
ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca ataatgatac aatgtatcat     1020
gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc tgggttaagg caatagcaat     1080
atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg atgtaagagg tttcatattg     1140
ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt ttatggttgg gataaggctg     1200
gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg ttcatacctc ttatcttcct     1260
cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc catcactttg gcaaagaatt     1320
gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat tccgaaggag agggaaggag     1380
atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg gacgccaggt ctaccctgac     1440
gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg cccctcagga gccagacacg     1500
tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc ctggggtgac gcactggcac     1560
agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt acccggccat gcttgcggac     1620
atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg cggcaagccc agcatgcaca     1680
gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc tggaactacc aaaggcattt     1740
ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg gaagtgccag tgaagccacc     1800
ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc ggctgcaggc agcgtcccca     1860
gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt actcatccga tcaggcacac     1920
tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat taaaagccat cccctcagat     1980
ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc tggagagaga caaagcggct     2040
ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca caacatgctg ctcctttgac     2100
aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca tatggctgca cgttgatgca     2160
gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc accttctgaa tggagtggag     2220
tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat tggtgaattt tgactgttct     2280
gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct ttagactgga ccccacttac     2340
ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact accggcattg gcagatacca     2400
ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat ttaggatgta tggagtcaaa     2460
ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc atgagtttga gtcactggtg     2520
cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc tggggcttgt ctgctttcgg     2580
ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa gaataaacag tgccaaaaaa     2640
atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc tgcgctttgc catctgttct     2700
cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac acatcaaaga gctggcggcc     2760
gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat     2820
ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc     2880
agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat     2940
attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg     3000
gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca     3060
atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc     3120
caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc     3180
atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc     3240
aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag     3300
gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaaccc ctagtgatgg     3360
agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg     3420
cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctg          3475
<---