Соединения с потенциальной антибактериальной активностью на основе 4-амино-2-фенилиндола

УДК 547

СОЕДИНЕНИЯ С ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ НА ОСНОВЕ 4-АМИНО-2-ФЕНИЛИНДОЛА

Е.А. Алямкина1, И.С. Степаненко2, С.А. Ямашкин1, М.А. Юровская*

Первичная конденсация 4-амино-2-фенилиндола с этиловыми эфирами ацетоук-сусной и 4,4,4-трифторацетоуксуной кислот приводит к соответствующим амидам, которые в кислотных условиях превращаются в пирроло[2,3-й]хинолины. Обнаружена антибактериальная активность амида, полученного на основе аминоиндола и 4,4,4-трифторацетоуксуного эфира.

Ключевые слова: 4-амино-2-фенилиндол, этиловый эфир ацетоуксусной кислоты, этиловый эфир 4,4,4-трифторацетоуксуной кислоты, амиды, пирроло[2,3-^хинолин, антибактериальная активность.

Ранее была обнаружена антимикробная активность некоторых производных аминоиндолов и пирролохинолинов [1, 2]. В настоящее время продолжается поиск новых потенциальных антибактериальных средств среди соединений этих классов.

Для разработки методов синтеза новых модельных структур среди аминоиндолов и пирро-лохинолинов мы исследовали реакции 4-амино-2-фенилиндола (1) с Р-кетоэфирами (этиловым эфиром ацетоуксусной кислоты, этиловым эфиром трифторацетоуксусной кислоты). При этом было установлено, что первичное взаимодействие ами-

ноиндола 1 с используемыми эфирами в кипящем абсолютном бензоле со следами безводной уксусной кислоты осуществляется преимущественно за счет аминогруппы индола и сложноэфирной функции кетоэфира. В результате нами выделены соответствующие амиды 2, 3 (схема).

Известно, что арил(гетарил)амины с Р-кето-эфирами могут реагировать двойственно - с участием карбонильной или сложноэфирной функции. При этом образуются либо енамины, либо амиды или их смеси. Направление протекания реакции зависит как от условий проведения (кинетический или термодинамический контроль),

С х е м а

'Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Мордовский государственный педагогический институт имени М.Е. Евсевьева»; 2Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева».

так и строения ароматического амина [3-6]. Для исследуемого нами 4-амино-2-фенилиндола (1) проведение реакции с ацетоуксусным и трифто-рацетоуксусным эфирами в кипящем абсолютном бензоле со следами концентрированной уксусной кислоты соответствует условиям термодинамического контроля.

В спектре ЯМР 1Н соединения 2 проявляются синглетные сигналы протонов О=С-СН3, -CH2-, Н-1, Н-3, 4-NH, а также сигналы 2-фенильной группы (два кажущихся триплета и дублет), два сигнала в виде дублетов Н-5, Н-7 и кажущийся триплет Н-6 с J = 8 Гц бензольных протонов (табл. 1). Полученные спектральные данные (наличие в спектре сигнала фрагмента -CH2-, а также отсутствие триплета и квадруплета протонов этоксикарбонильной группы) позволяют сделать вывод о структуре соединения 2. В масс-спектре последнего интенсивный сигнал [М-84]+ (100 %) соответствует потере молекулярным ионом амида молекулы бутендиона с образованием иона аминоиндола. Такое направление распада наблюдалось для описанных ранее подобных ациклических амидов [7].

Первичное взаимодействие аминоиндола 1 с этиловым эфиром трифторацетоуксусной кислоты в аналогичных условиях осуществляется также преимущественно за счет аминогруппы индола и карбоксильной функции кетоэфира с образованием амида 3.

В спектре ЯМР 1Н соединения 3 (табл. 1) имеются сигналы протонов Н-1, H-7, H-9, 4-ОН, два дублета Н-5, H-6 системы АВ, а также 8-фе-нильной группы (два кажущихся триплета и дублет), протоны метиленовой группы в виде двух дублетов (2,85 и 3,03 м.д.) с константой спин-спинового взаимодействия 15 Гц, что свидетельствует о циклическом строении получившегося амида 3 (4-гидрокси-8-фенил-4-(трифторметил)-1,3,4,7-тетрагидро-2#-пирроло[2,3-й]хинолин-2-она). Полученные данные хорошо согласуется с характеристиками ЯМР 1Н подобных структур [5] и соответствуют расчетному спектру. Самым интенсивным пиком в масс-спектральном распаде соединения 3 является сигнал фрагмент-ного иона (m/z = 277), который соответствует потере молекулярным ионом радикала CF3, приводящей к стабильной протонированной пирроло[2,3-й]хинолиндионовой системе, что также подтверждает цикличность структуры 3. Такое направление масс-спектрального распада характерно для подобного рода соединений [5]. Данные УФ-спектров амидных структур 2,

3, в которых наблюдаются полосы поглощения с максимумами при 209, 243, 318 нм (для 2) и 230, 270, 318 нм (для 3), согласуются с полученными нами ранее результатами для амидов, синтезированных из 4-амино-2,3-диметил-, 4-амино-1,2,3-триметилиндолов [5].

Таким образом, мы установили, что первичная реакция 4-амино-2-фенилиндола (1) с этиловым эфиром ацетоуксуной кислоты и ее трифторуксусным производным в рассматриваемых условиях приводит к образованию амида 2 и циклического амида 3. Конденсация амина с трифторацетоуксусным эфиром первоначально протекает (как и в случае с ацетоуксусным эфиром) с образованием ациклического амида, который за счет высокой электрофильности трифторацетильной группы в условиях проведения реакции легко циклизуется по С5 индола, но не ароматизуется. Циклизация амида 2, а также дальнейшее превращение амидов 2, 3 в пирролохинолины требует более жестких условий. Для этого полученные амиды 2, 3 были исследованы в условиях использования кипящей СF3COOH, выступающей одновременно и как катализатор, и как дегидратирующий агент. Поведение соединений 2, 3 в данных условиях различно - амид 2 в течение 2 ч превращается в соответствующий пирролохинолин 4 (схема). Данные спектра ЯМР 1Н в ДМСО-^6 свидетельствуют, что соединение 4 существует в виде двух таутомерных форм: хинолоновой (4а) и ги-дроксихинолиновой (4б), при их соотношении 1,4:1,0.

В спектре ЯМР 1Н соединения 4 (табл. 1) наблюдаются сигналы протонов метильной группы с разной интегральной интенсивностью и с разными химическими сдвигами для 4а и 4б. Сигналы протонов Н-3, Н-7, Н-9 также имеют разную интегральную интенсивность и разные химические сдвиги, мультиплет протонов Н-5, Н-6, 8-Ph, 2-OH (для 4б), синглет водорода Н-1 (для 4а).

Отнесение сингалов протонов проводили согласно расчетным спектрам и литературным данным для хинолоновых и гидроксихинолино-вых таутомерных форм [8]. В масс-спектре пир-ролохинолина 4 преобладает пик молекулярного иона с m/z = 274 (100%), свидетельствующий об устойчивости молекулы к электронному удару.

Кипячение соединения 3 в CF3COOH приводит к образованию смеси соединений, в которой масс-спектрометрически идентифицирован молекулярный пик продукта ароматизации амида с

-й-

К>

Таблица 1

Спектральные параметры соединений 2—I

Соединение Спектр ЯМР 1 H.d. м.ц., J (Гц) Масс-спектр, m/z (/^, %) Уф-спектр

Кшс HM Ige

2 2,20 (ЗН, с, 0=С-СН3), 3,66 (2Н, с, СН2), 6,99 (1Н, дц, J56= 8, J61= 8, Н-6), 7,07 (1Н, с, Н-3), 7,12 (1Н, д, J16= 8, Н-7), 7,28 (1Н, • и. -А.,. 8, J4,5 = 8, /7-Ph), 7,43 (211. ДД,^,2,(5,6,,= 8,^3,4,5.4. = 8, Jw-Ph), 7,58 (1Н, д, JS6= 8, Н-5), 7,77 (2Н, д, J2,3,[6, „,= 8, o-Ph), 9,77 (1Н, с, 4-NH), 11,58 (1Н, с, H-l). 292 (50, M+), 235 (13), 234 (95), 209 (15), 208 (100), 207 (42), 206 (16),205 (13), 180 (30), 152 (11), 43 (40) 209 243 318 4,23 4,17 4,20

3 2,85 (1Н, д, -J= 15, Н-3), 3,01 (1Н, д, 2J= 15, Н-3), 7,11 (1Н, д, J56= 8, Н-5), 7,28 (1Н, с, Н-9), 7,30 (1Н, с, 4-ОН), 7,31 (1Н, д, J65 = 8, Н-6), 7,46 (2Н, дц, J3,2,{5,6,, = 8, J3,M5,A) = 8, .u-Ph). 7,67 (1Н, дц, J4,з ,= 8, J4,5,=8, w-Ph), 7,75 (2H, д, J2,3,{6, 5,= 8, o-Ph), 10,40 (1H, c, l-NHaMiw), 11,68 (1H, с, H-7) 346 (36, M+), 328 (15), 278 (19), 277 (100), 235 (11), 231 (10), 208 (10), 207 (34), 206 (12), 205 (10), 164 (10), 117 (23), 115 (16), 103 (24), 102 (10), 78 (24), 77 (16),43 (29), 42 (12) 230 270 318 4,44 4,24 4,39

4 (а) 1,54 (ЗН, c, CH3), 5,19 (1H, с, H-3), 6,85 (2H, ДЦ,-/3,2,(„&|= 8, 8,JW-Ph), 7,10 (1H, с, H-9), 7,29 (1H, ц, J6S= 8, H-6), 7,30 (1H, дц, J4,3,= 8, J4,s,= 8, w-Ph), 7,39 (1H, Ц,^6= 8, H-5), 7,76 (2H, ц, J2,3,(6,5,= 8, o-Ph), 9,50 (1H, c, H-l), 11,41 (1H, c, H-7). (б) 2,43 (ЗН, c, CH3), 6,24 (1H, c, H-3), 6,36 (1H, Ц,Л6= 8, H-5), 6,66 (1H, ц, J6 5 = 8, H-6), 6,85 (2H, дц, J3 ,2,{5, 6,= 8, /3,4,5,4= 8, Л/-Р11), 6,98 (1H, c, H-9), 7,30 (1H, дц, J4,3, = 8, J4,, ,= 8, w-Ph), 7,62 (1H, с, 2-OH), 7,76 (2H, д, J2,3,(6, „,= 8, o-Ph), 11,88 (1H, c, H-7) 274 (100, M+), 273 (10), 245 (17) 211 233 302 4,48 4,45 4,35

СО

и о н

X

о

о я

£

о и

к» о

On

н

(л

-J

£ On

молекулярной массой 328. В масс-спектре присутствует также пик меньшей интенсивности (m/z = 424), который, вероятно, является молекулярным ионом пирролохинолина, трифтор-ацилированного по ß-положению пиррольного фрагмента. Из-за трудности разделения эти соединения в индивидуальном виде не выделялись и не идентифицировались.

Проведено исследование антибактериальной активности 3-оксо-^-(2-фенил-1Л-индол-4-ил)бутан-амида (2), 4-гидрокси-8-фенил-4- (трифторметил)-1,3,4,7-тетрагидро-2#-пир-роло[2,3-й]хинолин-2-она (3) и 4-метил-8-фенил-1,7-дигидро-2Л-пир-роло[2,3-й]хинолин-2-она (4) по отношению к эталонным штаммам S. aureus 29213, E. coli 25922 и P. aeruginosa 27853. Результаты исследований методом серийных разведений в бульоне показали незначительную антибактериальную активность соединения 2, 4, в отличие от соединения 3. Поэтому для дальнейших исследований был использован циклический амид 3.

Результаты исследований антибактериальной активности амида 3 по отношению к эталонным штаммам S. aureus 29213, E. coli 25922 и P. aeruginosa 27853 приведены в табл. 2.

Для препарата сравнения диоксидина минимальная подавляющая концентрация (МПК) относительно штаммов S. spp., Escherichia coli и P. spp. составляет соответственно 125,0-1000,0; 8,0-250,0 и 125,0-1000,0 мкг/мл.

Из данных табл. 2 видно, что амид 3 оказывает бактериостатическое действие на S. aureus 29213 при концентрации 7,8 мкг/мл, а при концентрации 15,7 мкг/мл полностью ингибирует рост культуры. Бактериостатическое действие на E. coli 25922 проявляется при концентрации 125,0 мкг/мл, а при концентрации 250 мкг/мл он полностью ингибирует рост культуры. Бактерио-статическое действие в исследуемых концентрациях исследуемого тестируемого вещества на P. aeruginosa 27853 отсутствует.

Во всех пробирках с «отрицательным контролем» отмечалась задержка роста тест-культур. Проведено 5 последовательностей опыта. Таким образом, МПК для амида 3 составила 7,8; 125,0 и более 250 мкг/мл относительно S. aureus 29213, E. coli 25922 и P. aeruginosa 27853 соответственно. Следовательно, исследуемое соединение обладает способностью подавлять рост эталонных штаммов S. aureus 29213 и E. coli 259213.

Проведено исследование антибактериальной активности соединения 3 в отношении других тест-штаммов микроорганизмов диско-диффу-

зионным методом, результаты которого представлены в табл. 3. В контрольном эксперименте диски пропитывались дистиллированной водой и во всех случаях наблюдался сплошной рост исследуемых микроорганизмов.

Препарат сравнения диоксидин проявил высокую активность относительно тест-штаммов C. freundii 101/57, K. pneumoniae 9172, P. vulgaris 222 и B. cereus 96 (Р < 0,05). Чувствительными к препарату сравнения оказались также S. aureus 906, S. pyogenes 1238, S. enteritidis 5765 ATCC, S. sonnei S-форма 20 и P. aeruginosa 453 (Р < 0,05). На фоне применения диоксидина значимой задержки роста E. coli М17, E. faecalis 2919 АТСС не наблюдалось.

Амид 3 оказался активен относительно S. aureus 906 и S. pyogenes 1238 (Р < 0,05). Высокую чувствительность к данному соединению показал B. cereus 96 (Р < 0,05). В отношении E. faecalis 2919 АТСС, E. coli М17 штамм, S. enteritidis 5765 АТСС, S. sonnei S-форма 20, K. pneumoniae 9172 амид 3 оказался малоактивен.

Полученные данные свидетельствуют о способности подавлять рост микроорганизмов и о наличии антибактериальной активности 4-гидрокси-8-фенил-4-(трифторметил)-1,3,4,7-тетрагидро-2Л-пирроло[2,3^ ] хинолин-2-она (3) в отношении тест-штаммов грамотрицатель-ных и грамположительных микроорганизмов.

Таким образом, в ходе проведенного исследования впервые изучено поведение 4-амино-2-фенилиндола в реакциях с ß-кетоэфирами (этиловыми эфирами 4,4,4-трифторацетоуксусной и ацетоуксусной кислот). На основании спектральных характеристик полученные соединения идентифицированы как амиды, т.е. реакции конденсации преимущественно реализуются за счет аминогруппы аминоиндола и сложноэфир-ной функции кетоэфиров. При этом амиду 3, полученному из трифторацетоуксусного эфира, приписана циклическая структура.

Изучение реакций продукта конденсации 4-амино-2-фенилиндола и этилового эфира ацетоуксусной кислоты в условиях кислотной циклизации позволило разработать метод получения ранее неизвестной трицикли-ческой структуры, которая в соответствии с ЯМРХН- и УФ-спектроскопией, а также масс-спектрометрией отнесена к ряду ранее неизвестных пирроло[2,3-^хинолинов.

Изучение антибактериальной активности трифторметилзамещенного амида показало способность подавлять рост и размножение

Таблица 2

Определение минимальных подавляющих концентраций (МПК) соединения 3 методом серийных разведений в жидкой питательной

среде

Тест-культура Staphylococcus aureus 29213 Escherichia coli 25922 Pseudomonas aeruginosa 27853

исследуемое вещество 3 3 3

250,0 0 0 +++

125,0 0 +/-/МПК +++

62,5 0 ++ +++

31,25 0 ++ +++

Концентрация веществ в питательной среде, мкг/мл 15,7 0 ++ +++

7,8 +/-'/мпк +++ +++

3,9 ++ +++ +++

1,9 +++ +++ +++

0,9 +++ +++ +++

«Отрицательный» контроль +/- +/- +/-

Обозначения: «-1» - титр активности; «+++» - обильный рост; «++» - глубинный или поверхностный рост штаммов менее обилен; «+» - рост слабый, неактивный менее 50-30%; «+/-, 0» - более 70% задержки или отсутствие роста культуры по сравнению с контролем.

Т а б л и ц а 3

Исследование антибактериальной активности исследуемого соединения 3 относительно тест-штаммов микроорганизмов диско-диффузионным

методом

Тест-штамм Степень активности

контроль соединение 3 диоксидин

Staphylococcus aureus 906 0 ++* ++*

Streptococcus pyogenes 1238 0 ++* ++*

Enterococcus faecalis 2919 АТСС 0 + +

Escherichia coli М17 штамм 0 + +

Salmonella enteritidis 5765 АТСС 0 + ++*

Shigella sonnei S-форма 20 0 + ++*

Citrobacter freundii 101/57 0 +/- +++*

Klebsiella pneumoniae 9172 0 + +++*

Proteus vulgaris 222 0 +/- +++*

Pseudomonas aeruginosa 453 0 +/- ++*

Bacillus cereus 96 0 +++* +++*

О б о з н а ч е н и я. Степень активности вещества (диаметр зоны подавления роста, мм): «+++» - высокая активность (более 25) , «++» - активное (16-25), «+» - малоактивное (10-15), «+/-, 0)» - неактивное (менее 10 и полное отсутствие); * - отличие от контроля статистически достоверно при Р < 0,05.

тест-штаммов как грамотрицательных, так и грамположительных микроорганизмов. Кроме того, вызывают интерес довольно низкие значения МПК исследуемого соединения относительно S. aureus 29213.

Экспериментальная часть

Спектры ЯМР 1Н записаны на мультиядерном спектрометре ядерного магнитного резонанса «Joel JNM-ECX400» (400 МГц) в ДМСО-d^ Расчетные спектры соединений выполнены с использованием программы ACD/LABS HNMR Spectrum Generator: Chemsketch Windows. Электронные спектры получены на приборе «LEKI SS2109UV» в этаноле. Масс-спектры зарегистрированы на масс-спектрометре «Finnigan MAT INC0S-50» с прямым вводом образца в ионный источник при энергии ионизации 70 эВ. Контроль за ходом реакции и чистотой полученных соединений, а также определение Rf осуществляли с помощью ТСХ на пластинках Silufol UV-254 в системах бензол :этилацетат = 3:1 (а) и бензол:этилацетат = 5:1 (б). Спектральные и физико-химические характеристики полученных соединений приведены в табл. 1, 4.

Аминоиндол 1 получен по методике, приведенной в работе [9].

3-Оксо- ^-(2-фенил-1#-индол-4-ил)бута-намид (2). Смесь 0,30 г (1,40 ммоль) 4-амино-2-фенилиндола (1) и 0,19 г (1,5 ммоль) этилового эфира ацетоуксусной кислоты в 200 мл абсолютного бензола в присутствии следов ледяной уксусной кислоты нагревают 74 ч с насадкой Дина-Старка. По окончании реакции (контроль хроматографи-ческий) бензол отгоняют. Выход 0,15 г.

4-Гидрокси-8-фенил-4-(трифторметил)-1,3,4,7-тетрагидро-2# - пирроло [2,3-// ]-хинолин-2-он (3). Получают аналогично из 0,40 г (2,00 ммоль) 4-амино-2-фенилиндола (1) и 0,37 г (2,00 ммоль) этилового эфира трифторацетоук-сусной кислоты, но нагревают 84 ч. Выход 0,24 г.

4-Метил-8-фенил-1,7-дигидро-2# -пирроло [2,3-/] хинолин-2-он (4). Смесь из 0,02 г (0,07 ммоль) соединения 2 и пятикратного избытка трифторуксусной кислоты нагревают в течение 1 ч. По окончании реакции (хроматографический контроль) реакционную смесь выливают в 12%-й водный аммиак со льдом. Выпавший осадок отфильтровывают, многократно промывают водой. Сушат на воздухе. Выход 0,012 г.

Т а б л и ц а 4

Физико-химические характеристики соединений 2-4

Соединение Брутто-формула Найдено Вычислено Rf (система) Т пл. °С Выход, %

С (%) H (%) M

2 C18H16N2Ü2 74,00 73,95 5,45 5,52 292 292 0,24 (а) 102- 103 35

3 C18H13F3N2Ü2 62,49 62,43 3,55 3,78 346 346 0,23 (б) 275- 276 34

4 cANÜ 79,05 78,81 4,99 5,14 274 274 0,37 (а) 215- 220 63

Исследование антибактериальной активности соединения 3 проводили на базе бактериологической лаборатории кафедры иммунологии, микробиологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева».

В качестве препарата сравнения использован диоксидин («Биосинтез», раствор для местного применения, эндотрахеального и внутривенного введения, 10 мг/мл), антибактериальный препарат, производное хиноксалина.

В качестве тест-микроорганизмов использовали музейные штаммы: Salmonella enteritidis 5765 АТСС, Shigella sonnei S-форма 20, Pseudomonas aeruginosa 27853 АТСС, Pseudomonas aeruginosa

453, Escherichia coli М17 штамм, Escherichia coli 25922 АТСС, Staphylococcus aureus 29213 АТСС, Staphylococcus aureus 906, Enterococcus faecalis 2919 АТСС, Citrobacter freundii 101/57, Proteus vulgaris 222, Klebsiella pneumoniaе 9172, Bacillus cereus 96, Streptococcus pyogenes 1238 АТСС. Штаммы, используемые в работе, получены из коллекции музея живых культур ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича.

Определение чувствительности микроорганизмов к исследуемым соединениям методом серийных разведений и диско-диффузионным методом (ДДМ) проводили в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.1890-04 [10].

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Степаненко И.С., Котькин А.И., Ямашкин С.А. // Фундаментальные исследования. 2013. № 8. Ч. 6. С. 1406.

2. Степаненко И.С., Котькин А.И., Ямашкин С.А. // Проблемы медицинской микологии. 2015. Т. 17. № 2. С. 135.

3. Эльдерфильд Р. Гетероциклические соединения. Т. 4. М., 1955. С. 24.

4. Ямашкин С.А., Кучеренко Н.Я., ЮровскаяМ.А. // ХГС. 1997. № 5. С. 579.

5. Ямашкин С.А., Орешкина Е.А., Жукова Н.В. // ХГС. 2007. № 8. С. 1234.

6. Ямашкин С.А., Алямкина Е.А., Позднякова О.В. //

Фундаментальные исследования. 2013. № 10. Ч. 11. С. 2456.

7. Ямашкин С.А., Орешкина Е.А., Юровская М.А. // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 2. Химия. 2007. Т. 48. № 2. С. 125.

8. Ямашкин С.А, Алямкина Е.А. // ХГС. 2009. № 9. С. 1400.

9. Ямашкин С.А., Юровская М.А. // ХГС. 1999. № 12. С. 1630.

10. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1890-04) // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2004. Т. 6. № 4. С. 306.

Поступила в редакцию 12.03.16

A NOTE ON THE POSSIBLE PRODUCTION OF COMPOUNDS WITH POTENTIAL ANTIBACTERIAL ACTIVITY BASED ON 4-AMINO-2-PHENYLINDOLE

E.A. Alyamkina, I.S. Stepanenko, S.A. Yamashkin, M.A. Yurovskaya*

Primary condensation of 4-amino-2-phenylindole with ethyl esters of acetylacetic and 4,4,4-trifluoroacetylacetic acids results in corresponding amides which under acidic conditions reacts to form pyrrolo[2,3-A]quinolones. Antibacterial activity of amide based on aminoindole and 4,4,4- trifluoroacetylacetic acids was detected.

Key words: 4-amino-2-phenylindole, ethyl acetoacetoate, ethyl 4,4,4-trifluoroacetoacetoate, amide, pyrrolo[2,3-h]quinoline, аntibacterial activity.

Сведения об авторах: Алямкина Елена Андреевна - доцент кафедры химии, технологии и методик обучения естественно-технологического факультета Мордовского государственного педагогического института им. М.Е. Евсевьева, канд. хим. наук (saranskchem@mail.ru); Степаненко Ирина Семеновна - зам. директора по научной работе, доцент кафедры иммунологии, микробиологии и вирусологии Медицинского института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева, канд. мед. наук (ymahkina@mail.ru); Ямашкин Семен Александрович - профессор кафедры химии, технологии и методик обучения естественно-технологического факультета Мордовского государственного педагогического института им. М.Е. Евсевьева, докт. хим. наук (Yamashk@yandex.ru); Юровская Марина Абрамовна - вед. науч. сотр. кафедры органической химии химического факультета МГУ, докт. хим. наук, профессор (ymar@org.chem.msu.ru).