СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПАТОЛОГИИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

1. Способ выявления патологии молочной железы путем высокоэффективной жидкостной хроматографии пробы мочи, включающий
подготовку пробы мочи к анализу,
идентификацию нуклеозидов,
количественное определение содержания нуклеозидов,
расчет прогнозирующей функции,
и оценку вероятности наличия патологии.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что подготовку пробы мочи к анализу осуществляют путем проведения высокоселективной твердо-фазной экстракции.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что высокоселективную твердо-фазную экстракцию осуществляют с использованием сорбента с привитыми фенил-боронатными группами.
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что высокоселективную твердо-фазную экстракцию осуществляют с помощью системы стабилизированной подачи растворов реагентов с постоянным объемным расходом.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что система стабилизированной подачи растворов реагентов с постоянным объемным расходом снабжена полуавтоматическим устройством на основе шприцевого насоса.
6. Способ по п.2, отличающийся тем, что перед проведением высокоселективной твердо-фазной экстракции в пробу мочи вводят 200 мкл 1-метилгуанозина (д3), концентрации 30 мкг/мл.
7. Способ по п.2, отличающийся тем, что после проведения высокоселективной твердо-фазной экстракции в конечный экстракт вводят 20 мкл 1-метилинозина (д3) концентрации 600 мкг/мл.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что осуществляют качественное и количественное определение содержания нуклеозидов в пробе мочи методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на гидрофильной колонке с градиентным элюированием с масс-спектрометрическим детектированием.
1
2
3
4
5
6
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что осуществляют качественное и количественное определение следующих нуклеозидов: 1-метиладенозина (z), уридина (z), ксантозина (z), 5-дезокси-5-метилтиоаденозина (МТА) (z), цитидина (z), и NN-диметилгуанозина (z).
10. Способ по п.8, отличающийся тем, что качественное и количественное определение каждого из выбранных нуклеозидов осуществляют с помощью колонки для жидкостной хроматографии, сорбентом в которой является силикагель с привитыми углеводородными цепями, дополнительно содержащими гидрофильные функциональные группы.
11. Способ по п.8, отличающийся тем, что идентификацию каждого из выбранных нуклеозидов осуществляют в режиме селективного детектирования по времени хроматографического удерживания и масс-спектрометрическим характеристикам: интенсивностям сигналов по двум выделенным ионам для каждого соединения и отношения интенсивностей площадей сигналов в точке максимума хроматографического пика для нуклеозидов, регистрируемых по двум ионам.
12. Способ по п.8, отличающийся тем, что количественный анализ каждого из выбранных нуклеозидов осуществляют с использованием системы двух внутренних стандартов.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что в качестве внутренних стандартов используют 1-метилгуанозин (д3) и 1-метилинозин (д3).
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что 1-метилгуанозин (д3) вводят в пробу мочи перед проведением высокоселективной твердо-фазной экстракции.
15. Способ по п.12, отличающийся тем, что 1-метилинозин (д3) вводят в конечный экстракт пробы мочи непосредственно перед хроматографическим анализом.
16. Способ по п.8, отличающийся тем, что анализ содержания нуклеозидов в готовых экстрактах проб осуществляют с помощью калибровочных графиков, представляющих собой отношение площади пиков с m/z, соответствующих гидратированному молекулярному иону и фрагментному иону каждого из выбранных нуклеозидов к площади пика, соответствующего гидратированному иону 1-метилгуанозина (д3) m/z 286.2.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что калибровочные зависимости рассчитаны в диапазоне концентраций от 0 до 20 мкг/мл каждого из выбранных нуклеозидов.
18. Способ по п.1, отличающийся тем, что расчет диагностического параметра осуществляют путем многопараметрического анализа исследуемых проб.
19. Способ по п.18, отличающийся тем, что многопараметрический анализ исследуемых проб включает определение времени удерживания на хроматографической колонке каждого из выбранных нуклеозидов, и определение концентрации нескольких нуклеозидов одновременно.
20. Способ по п.18, отличающийся тем, что многопараметрический анализ исследуемых проб включает определение многомерной нелинейной зависимости прогнозирующей функции от концентрации выбранных нуклеозидов.
21. Способ по п.1, отличающийся тем, что оценку вероятности наличия патологии молочной железы рассчитывают путем определения значения прогнозирующей функции F по формуле:
где Z - концентрация соответствующего нуклеозида в пробе мочи (мг/мл),
n
φ - идентификационная функция,
F - прогнозирующая функция,
и последующего сопоставления с диаграммой возраста пациентки.
1
1
22. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида 1-метиладенозина (Z) имеет следующее значение:
1
1
φ=0 при 0<Z≤24,7045,
1
1
1
φ=-(Z-24,7045)·0,9749 при 24,7045<Z≤34,7347,
1
1
1
φ=-9,7781-(Z-34,7347·0,1245) при 34,7347<Z≤240,3545,
1
1
φ=-35,3801 при 240,3545<Z.
2
2
23. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида уридина (Z) имеет следующее значение:
2
2
φ=0 при 0<Z≤1,7842,
2
2
2
φ=(Z-1,7842)6,6095 при 1,7842<Z≤3,0340,
2
2
φ=8,2605 при 3,0340<Z.
3
3
24. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида ксантозина (Z) имеет следующее значение:
3
3
φ=0при 0<Z<0,0142,
3
3
3
φ=(Z-0,0142 8,7356 при 0,0142<Z≤1,5389,
3
3
φ=13,3191 при 1,5389<Z.
4
4
25. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида 5-дезокси-5-метилтиоаденозина (МТА) (Z) имеет следующее значение:
4
4
4
φ=Z 1,677 при 0<Z≤36,6236;
4
4
φ=61,43 при 36,6236<Z.
5
5
26. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида цитидина (Z) имеет следующее значение:
5
5
φ=0 при 0<Z≤0,1249,
5
5
5
φ=(Z-0,1249)·24,889 при 0,1249<Z≤0,8202,
5
5
φ=17,3053 при 0,8202<Z.
6
6
27. Способ по п.21, отличающийся тем, что идентификационная функция φ для нуклеозида NN-диметилгуанозина (Z) имеет следующее значение:
6
6
φ=0 при 0<Z≤79,0336,
6
6
6
φ=-(Z-79,0336)·0,68 при 79,0336<Z≤103,3472,
6
6
6
φ=-16,53-(Z-103,3472)·0,081 при 103,3472<Z≤879,95,
6
φ=-79,5 при 879,95.