СПОСОБ РАСТВОРЕНИЯ НИФЕДИПИНА В ВОДНОЙ СРЕДЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НАНОТЕХНОЛОГИИ. ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ РАСТВОР НИФЕДИПИНА В ВОДНОЙ СРЕДЕ. СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИФЕДИПИНА В РАСТВОРЕ
METHOD OF DISSOLVING NIFEDIPINE IN AQUEOUS MEDIUM USING NANOTECHNOLOGY; PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING NIFEDIPINE SOLUTION IN AQUEOUS MEDIUM; METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF NIFEDIPINE IN SOLUTION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к фармацевтике, а именно к способам растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии, а также к фармацевтическим композициям, содержащим плохо растворимые в водной среде вещества, в том числе такие, как нифедипин и к способам количественного определения нифедипина в растворе.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
17
18
2
6
Известно, что нифедипин представляет собой гипотензивный препарат, производное дигидропиридина, антагонист ионов кальция, химическая формула: 1,4-Дигидро-2,6-диметил-4-(2-нитрофенил)-3,5-пиридиндикарбоновой кислоты диметиловый эфир: CHNO
Нифедипин - желтый кристаллический порошок, который практически нерастворим в воде, труднорастворим в спирте. Молекулярная масса нифедипина - 346,3.
Нифедипин оказывает антиангинальное и гипотензивное действие, блокирует кальциевые каналы, тормозит трансмембранное поступление ионов кальция в клетки гладкой мускулатуры артериальных сосудов и кардиомиоцитов, расширяет периферические, в основном артериальные, сосуды, в том числе коронарные, понижает артериальное давление.
Нифедипин рекомендуют применять при таких заболеваниях, как, например, артериальная гипертензия, при гипертоническом кризе, для профилактики приступов стенокардии, при синдроме Рейно, при легочной гипертензии, при бронхообструктивном синдроме.
Тем не менее, принимая во внимание механизм действия нифедипина, его можно успешно использовать при различных иных заболеваниях, требующих сосудорасширяющего действия.
Например, известно, что, учитывая липофильность вещества, изготавливают лекарственные средства, содержащие нифедипин в форме мазей или эмульсий для наружного применения с использованием жировой основы [1-3].
Однако использование лекарственных форм на жировой основе вредит приверженности пациентов установленному регламенту лечения, так как такие средства плохо всасываются, пачкают одежду, вызывают неприятные ощущения на коже.
Для устранения вышеуказанных недостатков используют средства для наружного применения, изготовленные на водной основе, например гели.
Известны также композиции и способы их получения [4, 5], в которых нифедипин наносят на водорастворимый носитель в смеси с поливинилпирролидоном или сополимером N-винилпирролидона и винилацетата и фармацевтически приемлемым акриловым полимером. Отношение поливинилпирролидона или сополимера N-винилпирролидона и винилацетата к содержанию нифедипина составляет от 1:1 до 1:10, а соотношение акрилового полимера к содержанию нифедипина составляет от 1:4 до 1:20. Представленные в [4, 5] композиции являются подходящими для введения нифедипина один раз в день. Изобретения [4, 5] относятся к фармацевтическим композициям, содержащим нифедипин, и к способу их получения. В частности, к фармацевтической композиции с медленно высвобождаемым активным компонентом, содержащей нифедипин, которая предусматривает при приеме регулярное и пролонгированное действие, в наиболее предпочтительной форме композицию можно принимать один раз в день, и к способу получения описанной фармацевтической композиции.
Тем не менее, вследствие плохой растворимости нифедипина в воде до настоящего времени разработка и производство подобных лекарственных форм не представляется возможным. По этой же причине невозможными являются разработка и производство комбинаций нифедипина с другими действующими веществами, легко растворимыми в воде, в лекарственных средствах для наружного применения.
Возникает необходимость в создании способа растворения нифедипина в водной среде с использованием фармацевтически допустимых высокомолекулярных соединений, которые общеизвестно относятся к области нанотехнологий, а также в создании фармацевтической композиции, которая основана на использовании такого способа растворения нифедипина в водной среде в количестве, многократно превышающем пределы растворимости данного вещества в воде, в создании способа количественного определения нифедипина в растворе.
Техническим результатом, на достижение которого направлено настоящее изобретение, является создание способа растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде, кроме того, техническим результатом является также создание фармацевтической композиции, включающей раствор нифедипина в водной среде в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде, а также техническим результатом является создание способа количественного определения нифедипина в растворе.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Технический результат достигается тем, что предложен способ растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии, при котором для обеспечения растворения нифедипина до концентрации порядка 0,8-4,0 мг/г готовят водный раствор при температуре 20-37°С, включающий нифедипин, полоксамер 407, макрогол 400, полоксамер 188 при следующем соотношении ингредиентов на 100 г водного раствора, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
0-30
Полоксамер 188
0-10
Вода очищенная
остальное
Способ растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии осуществляется следующим образом: готовят водный раствор, включающий полоксамер 407 в количестве порядка 1,0-19,0 г или включающий полоксамер 407 в количестве порядка 1,0-19,0 г и полоксамер 188 в количестве порядка 0-10,0 г, который помещают в мерный стакан, защищенный от света, добавляют 39 мл воды очищенной, перемешивают и оставляют для последующего растворения вплоть до образования бесцветной прозрачной жидкости, параллельно готовят суспензию нифедипина, для чего берут не менее 0,08 г нифедипина, помещают в мерный стакан, защищенный от света, добавляют порядка 0-30,0 г макрогола 400, добавляют воды очищенной, доводя общую массу суспензии до 30 г и перемешивают, затем к полученному вышеупомянутому раствору добавляют полученную суспензию, доводят рН полученного раствора до 2.5-9.5, в том числе одномолярным раствором гидроксида натрия или одномолярным раствором хлористоводородной кислоты, добавляют очищенную воду до 100 г и перемешивают в течение 1-9 часов, в том числе на магнитной мешалке при комнатной температуре порядка 20-37°С, постоянно контролируя рН, в том числе с помощью рН-метра, далее полученный раствор отстаивают не менее 15 минут, фильтруют, в том числе через фильтровальную бумагу, например, в мерный стакан, защищенный от действия света, и замеряют рН, который, в случае необходимости, доводят до значений 2,5-9.5, готовый раствор разливают по предназначенным емкостям.
Примеры осуществления способа растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии: для обеспечения растворения нифедипина до достижения концентрации порядка 0,8-4,0 мг/г готовят водный раствор при комнатной температуре порядка 20-37°С, включающий нифедипин, полоксамер 407, макрогол 400, полоксамер 188 при следующем соотношении ингредиентов на 100 г водного раствора, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
0-30
Полоксамер 188
0-10
Вода очищенная
остальное
Готовят водный раствор следующим образом: насыпают в мерный стакан, защищенный от света, полоксамер 407 в любом количестве из интервала значений порядка 1,0-19,0 г или насыпают в мерный стакан, защищенный от света, полоксамер 407 в любом количестве из интервала значений порядка 1,0-19,0 и добавляют полоксамер 188 в количестве из интервала значений порядка 0-10,0 г, затем добавляют 39 мл воды очищенной, перемешивают и оставляют для последующего растворения вплоть до образования бесцветной прозрачной жидкости, параллельно готовят суспензию нифедипина, для чего берут не менее 0,08 г нифедипина, помещают в мерный стакан, защищенный от света, добавляют в любом количестве из интервала значений порядка 0-30,0 г макрогола 400, добавляют воды очищенной, доводя общую массу суспензии до 30 г и перемешивают, затем к полученному вышеупомянутому раствору добавляют полученную суспензию, доводят рН полученного раствора до 2.5-9.5, например, одномолярным раствором гидроксида натрия или одномолярным раствором хлористоводородной кислоты, добавляют очищенную воду до 100 г и перемешивают в течение 1-9 часов, в том числе на магнитной мешалке при комнатной температуре порядка 20-37°С, постоянно контролируя рН с помощью рН-метра, далее полученный раствор отстаивают не менее 15 минут в течение любого интервала значений и фильтруют, в том числе через фильтровальную бумагу, например, в мерный стакан, защищенный от действия света, и замеряют рН, который, в случае необходимости, доводят до значений 2,5-9.5, готовый раствор разливают по предназначенным емкостям.
Раствор промышленным образом разливают, например, во флаконы темного стекла, в том числе по 10 мл, 30 мл или 50 мл.
Вышеперечисленные представленные примеры иллюстрируют, но не исчерпывают все возможные варианты осуществления способа растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии.
Таким образом, предлагаемым изобретением достигнут технический результат, а именно предложен способ растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде.
Технический результат достигается также тем, что предложена фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде, обеспечивающая концентрацию нифедипина до значений порядка 0,8-4,0 мг/г, включающая нифедипин, полоксамер 407, макрогол 400, полоксамер 188, воду очищенную, при значениях рН водной среды порядка 2,5-9,5 на 100 г водного раствора, при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
0-30
Полоксамер 188
0-10
Вода очищенная
остальное
При этом фармацевтические композиции могут быть однокомпонентные, двухкомпонентные или трехкомпонентные по вспомогательным веществам:
- однокомпонентная фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде для обеспечения концентрации нифедипина порядка 0,8-4,0 мг/г, включает на 100 г водного раствора: полоксамер 407, воду очищенную, при значениях рН водной среды, которую известными способами, в том числе и вышеописанными, доводят до значений рН порядка 2,5-9,5 при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Вода очищенная
остальное
- двухкомпонентная фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде для обеспечения концентрации нифедипина порядка 0,8-4,0 мг/г, включает на 100 г водного раствора: нифедипин, полоксамер 407, макрогол 400, воду, при значениях рН водной среды, которую известными способами, в том числе и вышеописанными, доводят до значений порядка 2,5-9,5 в следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
1-30
Вода очищенная
остальное
- трехкомпонентная фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде для обеспечения концентрации нифедипина до значений порядка 0,8-4,0 мг/г, включает на 100 г водного раствора: нифедипин, полоксамер 407, макрогол 400, полоксамер 188, воду очищенную, при значениях рН водной среды, которую известными способами, в том числе и вышеописанными, доводят до значений порядка 2,5-9,5 при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
не менее 0,08
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
1-30
Полоксамер 188
1-10
Вода очищенная
остальное
Представленные фармацевтические композиции являются, в основном, однородными растворами, а при высоких концентрациях полоксамера 407 - гелями с допустимым процентом воздушных пузырей.
Представленные ниже примеры фармацевтической композиции обеспечивают содержание нифедипина в водной среде с целевой концентрацией для использования в вышеописанных растворах и гелях, причем с добавлением каждого из компонентов растворение нифедипина улучшается.
Пример 1. Однокомпонентная по вспомогательным веществам фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде, включающая для обеспечения растворения нифедипина до концентрации порядка 0,8-4,0 мг/г на 100 г водного раствора: нифедипин, полоксамер 407, воду очищенную, при значениях рН водной среды, которую известными, в том числе и вышеуказанными, способами доводят до значений порядка 2,5-9,5 при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
0,08-0,1
Полоксамер 407
1-19
Вода очищенная
остальное
Получена концентрация нифедипина порядка 0,8-1,0 мг/г.
Пример 2. Двухкомпонентная по вспомогательным веществам фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде, включающая для обеспечения растворения нифедипина до концентрации порядка 0,8-4,0 мг/г на 100 г водного раствора: нифедипин, полоксамер 407, воду очищенную, при значениях рН водной среды, которую известными, в том числе и вышеуказанными, способами доводят до значений порядка 2,5-9,5 при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
0,12-0,2
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
1-30
Вода очищенная
остальное
Получена концентрация нифедипина порядка 0,8-2,0 мг/г.
Пример 3. Трехкомпонентная по вспомогательным веществам фармацевтическая композиция, содержащая раствор нифедипина в водной среде, включающая для обеспечения растворения нифедипина до концентрации порядка 0,8-4,0 мг/г на 100 г водного раствора: нифедипин, полоксамер 407, воду очищенную, при значениях рН водной среды, которую известными, в том числе и вышеуказанными, способами доводят до значений порядка 2,5-9,5 при следующих соотношениях ингредиентов, г:
Нифедипин
0,2-0,4
Полоксамер 407
1-19
Макрогол 400
1-30
Полоксамер 188
1-10
Вода очищенная
остальное
Получена концентрация нифедипина порядка 0,8-4,0 мг/г.
Таким образом, в представленных примерах видно, что концентрация нифедипина достигает 0,8-4,0 мг/г
Вышеперечисленные примеры показывают, что введение полоксамера 188 позволяет снизить динамическую вязкость раствора, обусловленную полоксамером 407.
Раствор можно профильтровать и получить изначальную концентрацию нифедипина в фильтрате.
Так как раствор жидкий, то он является однородным.
Размер мицелл полоксамеров сопоставим с размером наночастиц.
Примеры подтверждают, что при увеличении концентрации макрогола 400, полоксамера 407, полоксамера 188 растворимость нифедипина увеличивается.
Оценку растворов и гелей нифедипина осуществляют по внешнему виду следующим образом: оценку внешнего вида полученных растворов и гелей нифедипина проводят визуально на предметном стекле. При оценке по внешнему виду в гелях и растворах нифедипина допускают наличие пузырей воздуха. Так как было установлено, что пузыри воздуха образуются при растворении следующих компонентов в воде при приготовлении гелей и растворов: полоксамера 407 и макрогола 400, при этом не должно быть заметно наличие частиц нифедипина.
Результаты оценки по внешнему виду можно охарактеризовать по наличию пузырей воздуха. По результатам визуальной оценки определяют, что:
- использование комбинации, включающей полоксамер 407, макрогол 400 увеличивает количество пузырей в структуре гелей до допустимого уровня,
- в растворах нифедипина встречаются единичные пузыри воздуха или мало пузырей воздуха по сравнению с гелями.
Таким образом, достигнут технический результат созданием фармацевтической композиции, содержащей раствор нифедипина в водной среде в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде.
Технический результат достигается также тем, что предложен способ количественного определения нифедипина в растворе, включающий приготовление испытуемого раствора, для чего берут порядка 2,5 г полученной фармацевтической композиции, содержащей раствор нифедипина в водной среде, помещают в мерную колбу вместимостью до 25 мл, добавляют порядка 10 мл подвижной фазы, в составе которой ацетонитрил-метанол-вода 15:35:50, затем перемешивают, после оседания образовавшейся пены объем раствора доводят подвижной фазой до метки и перемешивают, готовят стандартный раствор 1, для чего используют до 10 мг точной навески стандартного образца нифедипина, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают, до получения концентрации нифедипина в растворе порядка 0,4 мг/мл, затем готовят базовый стандартный раствор примеси, для чего используют порядка 3,125 мг точной навески стандартного образца нитропиридина - примесь А нифедипина и порядка 3,125 мг точной навески стандартного образца нитрозопиридина - примесь В нифедипина, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают до концентрации примеси А нифедипина в растворе порядка 0,125 мг/мл, до концентрации примеси В нифедипина в растворе порядка 0,125 мг/мл, далее готовят стандартный раствор 2, для чего берут 1,0 мл базового стандартного раствора примеси помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляют 5 мл стандартного раствора 1, доводят объем смеси подвижной фазой до метки и перемешивают до получения концентрации нифедипина порядка 0,2 мг/мл, концентрации примеси А нифедипина в растворе порядка 0,0125 мг/мл, до концентрации примеси нифедипина B в растворе порядка 0,0125 мг/мл, при таких условиях проведения анализа, при которых колонка: 250 мм × 4,6 мм, октадецилсилиловый силикагель, размер гранул 5 мкм (Luna С18) или альтернативная колонка, удовлетворяющая требованиям пригодности хроматографической системы, подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-вода 15:35:50, скорость потока: 1,0 мл/мин, температура колонки: 40°С, УФ-детектор с длиной волны 230 нм, объем пробы порядка 20 мкл, порядок элюирования - примесь А, примесь В, нифедипин, время удерживания нифедипина составляет от 6 до 20 мин, проверка пригодности хроматографической системы включает хроматографирование равных объемов приготовленных растворов, фиксирование хроматограмм, при этом хроматографическая система считается пригодной в случае, если относительное стандартное отклонение площади по пику нифедипина из 6 введений испытуемого раствора составляет не более 1,5%, а фактор разрешения между пиками нифедипина и примеси В не менее 1,5, при этом эффективность колонки, рассчитанная по пику нифедипина, не менее 1500 теоретических тарелок, а времена удерживания пиков нифедипина, примеси А и примеси В на хроматограмме испытуемого раствора могут отличаться от времен удерживания аналогичных пиков на хроматограмме рабочего стандартного раствора 2 не более чем на ±5%, при этом содержание нифедипина в мг/г (X) в растворах рассчитывают по формуле:
Содержание нифедипина в мг/г (X) в растворах рассчитывают по формуле:
u
где: A - площадь пика нифедипина на хроматограмме испытуемого раствора;
s
A - площадь пика нифедипина на хроматограмме стандартного раствора 2;
s
W - навеска стандартного образца, мг;
Ρ - содержание нифедипина в стандартном образце, %.
Пример реализации способа количественного определения нифедипина в водном растворе с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии - ВЭЖХ:
Осуществляют приготовление растворов следующим образом.
Готовят испытуемый раствор, для чего 2,5 помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл подвижной фазы и перемешивают. После оседания образовавшейся пены объем раствора доводят подвижной фазой до метки и перемешивают.
Стандартный раствор 1, для чего 10 мг (точная навеска) стандартного образца нифедипина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают.
Концентрация нифедипина в растворе - 0,4 мг/мл.
Базовый стандартный раствор примеси: около 3,125 мг (точная навеска) стандартного образца нитропиридина (примесь А нифедипина) и около 3,125 мг (точная навеска) стандартного образца нитрозопиридина (примесь В нифидипина) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают.
Концентрация примеси А нифедипина в растворе - 0,125 мг/мл.
Концентрация примеси В нифедипина в растворе - 0,125 мг/мл.
Стандартный раствор 2:1,0 мл базового стандартного раствора примеси помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляют 5 мл стандартного раствора 1, доводят объем смеси подвижной фазой до метки и перемешивают.
Концентрация Нифедипина - 0,2 мг/мл.
Концентрация примеси А нифедипина в растворе - 0,0125 мг/мл.
Концентрация примеси нифедипина B в растворе - 0,0125 мг/мл.
Условия проведения анализа:
Колонка: 250 мм × 4,6 мм, октадецилсилиловый силикагель, размер гранул 5 мкм (LunaC18) или альтернативная колонка, удовлетворяющая требованиям пригодности хроматографической системы.
Подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-вода 15:35:50
Скорость потока: 1,0 мл/мин
Температура колонки: 40°С
УФ-детектор с длиной волны 230 нм
Объем пробы: 20 мкл
Порядок элюирования: примесь А, примесь В, нифедипин
Время удерживания нифедипина составляет от 6 до 20 мин.
Проверка пригодности хроматографической системы:
Хроматографируют равные объемы приготовленных растворов, записывают хроматограммы. Хроматографическая система считается пригодной если:
- относительное стандартное отклонение площади по пику нифедипина из 6 введений испытуемого раствора составляет не более 1,5%,
- фактор разрешения между пиками нифедипина и примеси В не менее 1,5, - эффективность колонки, рассчитанная попику нифедипина, не менее 1500 теоретических тарелок,
- времена удерживания пиков нифедипина, примеси А и примеси В на хроматограмме испытуемого раствора могут отличаться от времен удерживания аналогичных пиков на хроматограмме рабочего стандартного раствора 2 не более чем на ±5%.
Расчеты:
Содержание нифедипина в мг/г (X) в растворах рассчитывают по формуле:
u
где: A - площадь пика нифедипина на хроматограмме испытуемого раствора;
s
A - площадь пика нифедипина на хроматограмме стандартного раствора 2;
s
W - навеска стандартного образца, мг;
Ρ - содержание нифедипина в стандартном образце, %.
Предложенный способ позволяет определять количественный состав нифедипина в водном растворе.
Таким образом, технический результат достигнут созданием способа количественного определения нифедипина в водном растворе.
Вышеуказанные примеры, приведенные по тексту описания по всем представленным изобретениям, иллюстрируют, но не исчерпывают все возможные варианты реализации предлагаемых изобретений.
Таким образом, технический результат достигнут предложением способа растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде, кроме того, технический результат достигнут созданием фармацевтической композиции, содержащей раствор нифедипина в водной среде в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде, а также технический результат достигнут созданием способа количественного определения нифедипина в водном растворе.
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
Предложены способ растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии, а также фармацевтическая композиция, содержащая плохо растворимые в водной среде вещества, в том числе такие, как нифедипин и предложен способ количественного определения нифедипина в растворе.
Представленные: способ растворения нифедипина в водной среде с использованием нанотехнологии в количестве, превышающем более чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде, а также фармацевтическая композиция, включающей раствор нифедипина в водной среде в количестве, превышающем более, чем в сто раз пределы растворимости данного вещества в воде и способ количественного определения нифедипина в растворе представляют собой новую нанотехнологию растворения нифедипина в водной среде.
Все представленные изобретения промышленно применимы, прошли лабораторные испытания, реализуемы практически и найдут широкое применение в фармацевтической промышленности.
Источники информации
1. Perrotti Ρ, Dominici Ρ, Grossi Ε, Cerutti R, Antropoli C. Topical nifedipine with lidocaine ointment versus active control for pain after hemorrhoidectomy: results of a multicentre, prospective, randomized, double-blind study. Can J Surg. 2010 Feb; 53(1): 17-24.
2. Katsinelos P, Kountouras J, Paroutoglou G, Beltsis A, Chatzimavroudis G, Zavos C, Katsinelos T, Papaziogas B. Aggressive treatment of acute anal fissure with 0.5% nifedipine ointment prevents its evolution to chronicity. World J Gastroenterol. 2006 Oct 14; 12(38): 6203-6.
3. Hugo Almeida, Maria Helena Amaral, Paulo Lobão, José Manuel Sousa Lobo. Pluronic F-127 and Pluronic Lecithin Organogel (PLO): Main Features and their Applications in Topical and Transdermal Administration of Drugs. J Pharm Pharmaceut Sci. 15(4) 592-605, 2012.
4. PCT/GB 93/00055 (12.01.92).
5. Заявка RU №94035739/14, A61K 31/44, A61K 9/16, опубликовано: 20.09.1996.