ВАРИАНТНЫЙ СЛИТЫЙ БЕЛОК PD1-4-1BBL И СПОСОБЫ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ

1. Слитый белок PD1-4-1BBL, содержащий аминокислотную последовательность PD1 и аминокислотную последовательность 4-1BBL, причем указанная аминокислотная последовательность PD1:
(a) составляет 123-148 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-21, 85, 89, 93 и 115, и не содержит ни одного из аминокислотных сегментов P1 - L5 и F146 - V150, соответствующих SEQ ID NO: 2, или составляет 138-145 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18, 117 и 119, и не содержит аминокислотный сегмент F146 - V150, соответствующий SEQ ID NO: 2; и/или
(b) содержит модификацию аминокислоты с С на S в положении, соответствующем аминокислоте 93 согласно SEQ ID NO: 2; и/или
причем указанная аминокислотная последовательность 4-1BBL:
(аа) составляет 185-202 аминокислоты в длину, характеризуясь по меньшей мере 95% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22-25, составляет 170-197 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 127 и 129, и не содержит аминокислотный сегмент G198-E205, соответствующий SEQ ID NO: 3, составляет 170-182 аминокислоты в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к SEQ ID NO: 125, и не содержит аминокислотный сегмент А1-Е23, соответствующий SEQ ID NO: 3, или составляет 184 аминокислоты в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к SEQ ID NO: 123; и/или
(bb) содержит три повтора аминокислотной последовательности 4-1BBL;
и при этом указанный слитый белок способен по меньшей мере к одному из следующего:
(i) связывание PDL1 и 4-1ВВ;
(ii) активация указанного сигнального пути 4-1ВВ в клетке, экспрессирующей указанный 4-1ВВ; и/или
(iii) костимуляция иммунных клеток, экспрессирующих указанный 4-1ВВ.
2. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность PD1, причем указанная аминокислотная последовательность PD1 составляет 123-148 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-21, 85, 89, 93 и 115, и не содержит ни одного из аминокислотных сегментов P1 - L5 и F146 - V150, соответствующих SEQ ID NO: 2, или составляет 138-145 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18, 117 и 119, и не содержит аминокислотный сегмент F146 - V150, соответствующий SEQ ID NO: 2; и необязательно содержит модификацию аминокислоты с С на S в положении, соответствующем аминокислоте 93 согласно SEQ ID NO: 2; и причем указанный полипептид способен связывать PDL1.
3. Выделенный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность 4-1BBL, причем указанная аминокислотная последовательность 4-1BBL составляет 185-202 аминокислоты в длину, характеризуясь по меньшей мере 95% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 22-25, составляет 170-197 аминокислот в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 127 и 129, и не содержит аминокислотный сегмент G198-E205, соответствующий SEQ ID NO: 3, или составляет 170-182 аминокислоты в длину, характеризуясь по меньшей мере 80% идентичности по отношению к SEQ ID NO: 125, и не содержит аминокислотный сегмент А1-Е23, соответствующий SEQ ID NO: 3; и необязательно содержит три повтора указанной аминокислотной последовательности 4-1BBL; и причем указанный полипептид способен по меньшей мере к одному из следующего:
(i) связывание 4-1ВВ,
(ii) активация указанного сигнального пути 4-1ВВ в клетке, экспрессирующей указанный 4-1ВВ; и/или
(iii) костимуляция иммунных клеток, экспрессирующих указанный 4-1 ВВ.
4. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 составляет не больше чем 140 аминокислот в длину.
5. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 составляет по меньшей мере 126 аминокислот в длину.
6. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 содержит указанную SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 85, 89, 93 или 115.
7. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 содержит SEQ ID NO: 75, 83, 87, 91 или 95.
8. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 состоит из указанной SEQ ID NO: 18, 19, 20, 21, 85, 89, 93 или 115.
9. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность PD1 состоит из SEQ ID NO: 75, 79, 81, 83, 87, 91 или 95.
10. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность 4-1BBL не содержит ни одного из аминокислотных остатков A1 - V6 или A1 - G14, соответствующих SEQ ID NO: 3.
11. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность 4 - 1BBL содержит указанную SEQ ID NO: 22, 23, 24 или 25.
12. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность 4- 1BBL состоит из указанной SEQ ID NO: 22, 23, 24 или 25.
2
13. Слитый белок PD1-4-1BBL по п.п. 1, причем выход продукции указанного слитого белка по меньшей мере в 1,5 раз выше, чем выход продукции SEQ ID NO: 5 при одинаковых условиях получения, причем указанные условия получения включают в себя экспрессию в клетке млекопитающего и культивирование при 32-37°С, 5-10% СО в течение 5-13 дней.
2
14. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, причем количество агрегатов указанного слитого белка по меньшей мере на 20% ниже, чем количество агрегатов SEQ ID NO: 5 при одинаковых условиях получения, причем молекулярная масса указанных агрегатов составляет по меньшей мере 300 кДа, и указанные условия получения включают в себя экспрессию в клетке млекопитающего и культивирование при 32-37°С, 5-10% CO в течение 5-13 дней.
15. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность слитого белка PD1-4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80% идентичности по отношению к аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 14, 16, 44-56, 97, 101, 103, 105, 107, 111, 113, 133, 135, 137, 139, 141, 143 и 147.
16. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность слитого белка PD1-4-1BBL содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 14, 16, 44-56, 97, 101, 103, 105, 107, 111, 113, 133, 135, 137, 139, 141, 143 и 147.
17. Слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1, в котором указанная аминокислотная последовательность слитого белка PD1-4-1BBL состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 14, 16, 44-56, 97, 101, 103, 105, 107, 111, 113, 133, 135, 137, 139, 141, 143 и 147.
18. Полинуклеотид, кодирующий слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1.
19. Нуклеиновокислотный конструкт, содержащий полинуклеотид по п. 18 и регуляторный элемент для управления экспрессией указанного полинуклеотида в клетке-хозяине.
20. Клетка-хозяин, содержащая слитый белок PD1-4-1BBL по п. 1.
21. Способ получения слитого белка PD1-4-1BBL, причем способ предусматривает экспрессию в клетке-хозяине полинуклеотида или нуклеиновокислотного конструкта по любому из пп. 18, 19.
22. Способ по п. 21, предусматривающий выделение слитого белка или полипептида.
23. Способ лечения заболевания, при котором активация иммунных клеток может привести к благоприятному результату, предусматривающий введение нуждающемуся в этом субъекту слитого белка PD1-4-1BBL по любому из пп. 1-17.
24. Изделие, содержащее упаковочный материал, упаковывающий терапевтическое средство для лечения заболевания, при котором активация иммунных клеток может привести к благоприятному результату; и слитый белок PD1-4-1BBL или выделенный полипептид по любому из пп. 1-17.
25. Способ активации иммунных клеток, причем способ предусматривает активацию in vitro иммунных клеток в присутствии слитого белка PD1-4-1BBL по любому из пп. 1-17.