ВАКЦИНАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ РЕКОМБИНАНТНЫХ ДРОЖЖЕЙ С ФОРМИРОВАНИЕМ ЗАЩИТНОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА ПРОТИВ ОПРЕДЕЛЕННЫХ АНТИГЕНОВ

1. Рекомбинантные дрожжи вида Kluyveromyces lactis, несущие чужеродный ген и обеспечивающие экспрессию чужеродных белков, отличающиеся тем, что рекомбинантные дрожжи вида Kluyveromyces lactis применяют для формирования защитного гуморального иммунного ответа.
2. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что рекомбинантные дрожжи применяют в качестве субъединичной маркерной вакцины.
3. Рекомбинантные дрожжи по п. 2, отличающиеся тем, что субъединичную маркерную вакцину применяют для того, чтобы отличать вакцинированных индивидуумов от естественно инфицированных.
4. Рекомбинантные дрожжи по п. 2 или 3, отличающиеся тем, что субъединичная маркерная вакцина дополнительно обладает сильными адъювантными свойствами.
5. Рекомбинантные дрожжи по п. 2, отличающиеся тем, что субъединичная маркерная вакцина является сильно иммуногенной.
6. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что интеграцию чужеродного гена осуществляют без дополнительных векторных последовательностей или маркеров отбора.
7. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что экспрессия чужеродного гена осуществляется конститутивно.
8. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что экспрессия чужеродного гена является индуцируемой.
9. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что экспрессию чужеродного гена можно количественно определить непрямым способом через экспрессию эндогенного репортерного гена.
10. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что чужеродный ген обеспечивает экспрессию чужеродных белков с антигенными свойствами.
11. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что рекомбинантные дрожжи индуцируемо или конститутивно экспрессируют значимые количества чужеродного белка, или доменов этого чужеродного белка, или доменов этого чужеродного белка, слитых с доменами белков других видов.
12. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что Kluyveromyces lactis является штаммом Kluyveromyces lactis VAK367-D4 (DSM 23097) или его вариантом.
13. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от возбудителя болезни или опухоли.
14. Рекомбинантные дрожжи по п. 13, отличающиеся тем, что чужеродный белок является опухолеассоциированным антигеном, выбранным из СЕА, 5Т4, MUC1, MART1 и HER-2.
15. Рекомбинантные дрожжи по п. 13, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от вируса, бактерии или паразита.
16. Рекомбинантные дрожжи по п. 15, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от паразита.
17. Рекомбинантные дрожжи по п. 16, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Leishmania sp., Plasmodium sp.или Schistosoma sp.
18. Рекомбинантные дрожжи по п. 16 или п. 17, отличающиеся тем, что чужеродный белок выбран из группы, включающей:
Necator americanus или Ancylostoma duodenale: белок ASP и гемоглобинразрушающие протеазы;
Leishmania sp.: gp63, 46 кДа антиген промастиготы, LACK;
Plasmodium sp.: белок CSP, CSA-1, CSA-3, EXP1, SSP2, STARP, SALSA, MSP1, MSP2, MSP3, AMA-1, GLURP, Pfs 25, Pfs 28, Pvs 25, Pvs 28, Pfs 48/45, Pfs 230;
Schistosoma sp.: TP1, Sm23, ShGST 26 и 28, парамиозин, паразитарный миозин, Sm 14.
19. Рекомбинантные дрожжи по п. 15, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от бактерии.
20. Рекомбинантные дрожжи по п. 19, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от Mycobacterium tuberculosis, Helicobacter pylori, Streptococcus sp.группы A, Streptococcus pneumoniae, Salmonella typhimurium, Shigella sp., Vibrio cholerae, Escherichia coli или Yersinia pestis.
21. Рекомбинантные дрожжи по п. 19 или п. 20, отличающиеся тем, что чужеродный белок выбран из группы, включающей:
Mycobacterium tuberculosis: Ag85A, Hsp65, R8307, 19 кДа, 45 кДа, 10.4;
Helicobacter pylori: VacA, LagA, NAP, hsp, уреаза, каталаза;
Streptococcus sp.группы A: M, пептидаза SCPA, эндотоксины SPEA и SPEC, фибронектинсвующий белок;
Streptococcus pneumoniae: PspA, Psa A, BHV 3, BHV 4;
Salmonella typhimurium: Vi антиген;
Shigella sp.: LPS;
Vibrio cholerae: CTB;
Escherichia coli: ETEC: LT, LT-ST, CTB; и
Yersinia pestis: F1 и V.
22. Рекомбинантные дрожжи по п. 15, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от вируса.
23. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный ген обеспечивает экспрессию вирусных белков с антигенными свойствами.
24. Рекомбинантные дрожжи по п. 22 или 23, отличающиеся тем, что чужеродный ген обеспечивает экспрессию вирусных структурных белков.
25. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от Birnaviridae, Caliciviridae, Reoviridae, Retroviridae, Flaviviridae, Hepadnaviridae, Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Herpesviridae, Coronaviridae, Orthomyxoviridae или Papillomaviridae.
26. Рекомбинантные дрожжи по п. 25, отличающиеся тем, что чужеродный белок выбран из группы, включающей:
Birnaviridae: VP2
Caliciviridae (норовирусы, HEV): NV 60 кДа; HEV ORF2;
Reoviridae (ротавирусы): VP7, VP4;
Retroviridae (ВИЧ): Gag, Pol, Nef, Env, gp160, gp120, gp140, gp41;
Flaviviridae (род Flavivirus: WNV, Dengue, YF, TBE, JEV): preM-Env, NS3, NS4, NS5;
RNA
Flaviviridae (род Pestivirus BVDV, CSFV, BDV. Род Hepacivirus HCV (вирус гепатита С)): E1, E2, E(Pesti), С, NS3, NS4, NS5;
Hepadnaviridae (HBV (вирус гепатита В)): HBS-антиген;
Paramyxoviridae {Paramyxovirinae: PIV-1, PIV-2, Mumps, Sendai, PIV-2, PIV-4, Morbilli): M, HN, N, F;
Paramyxoviridae (Pneumovirinae: RSV): F, G, SH, M;
Rhabdoviridae (бешенство): G;
Herpesviridae (EBV, HSV2): gp350/220 (EBV), gB2, gD2 (HSV);
Coronaviridae (SARS): CoV, N, M, S;
Orthomyxoviridae (грипп А, В): HA, NA, M1, M2, NP и
Papillomaviridae: L2, E6, E7.
27. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный белок происходит от представителя семейства Birnaviridae.
28. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный белок является VP2-антигеном вируса инфекционного бурсита (IBDV).
29. Рекомбинантные дрожжи по п. 28, отличающиеся тем, что VP2-антиген происходит от штамма D78 вируса инфекционного бурсита (IBDV).
30. Рекомбинантные дрожжи по п. 28, отличающиеся тем, что VP2-антиген вируса инфекционного бурсита (IBDV) кодируется нуклеотидной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 5.
31. Рекомбинантные дрожжи по п. 28, отличающиеся тем, что VP2-антиген вируса инфекционного бурсита (IBDV) содержит аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 6.
32. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что штамм Kluyveromyces lactis выбран из:
Kluyveromyces lactis VAK367-D4 890 DSM 25405,
Kluyveromyces lactis VAK367-D4 910 DSM 25406, и
Kluyveromyces lactis VAK367-D4 911 DSM 25407.
33. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный белок является мутированным VP2-антигеном вируса инфекционного бурсита (IBDV).
34. Рекомбинантные дрожжи по п. 22, отличающиеся тем, что чужеродный белок является кодон-оптимизированным VP2-антигеном вируса инфекционного бурсита (IBDV).
35. Рекомбинантные дрожжи по п. 1, отличающиеся тем, что штамм Kluyveromyces lactis выбран из Kluyveromyces lactis VAK890, VAK910 и VAK911.
36. Применение рекомбинантных дрожжей по любому из пп. 1-35 в способе подкожной вакцинации.
37. Способ подкожной вакцинации рекомбинантными дрожжами, характеризующийся тем, что он включает следующие стадии:
a) культивирование и размножение рекомбинантных дрожжей,
b) сбор и инактивация дрожжей,
c) введение рекомбинантных дрожжей согласно установленной схеме иммунизации,
d) определение титра образовавшихся антител и/или
e) подтверждение иммунизации.
38. Способ подкожной вакцинации рекомбинантными дрожжами, отличающийся тем, что в способе используют рекомбинантные дрожжи по любому из пп. 1-35.
39. Способ по п. 37 или 38, отличающийся тем, что посредством подкожного введения целых дрожжевых клеток рекомбинантных дрожжей по любому из пп. 1-35 обеспечивается специфическая иммунизация против экспрессированного чужеродного белка.
40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что специфическая иммунизация обеспечивается против чужеродного белка возбудителя болезни или опухоли.
41. Способ по п. 40, отличающийся тем, что чужеродный белок происходит от паразита, бактерии или вируса как указано в любом из пп. 13-31.
42. Способ по п. 39, отличающийся тем, что специфическая иммунизация обеспечивается против цитотоксического антигена.
43. Способ по любому из пп. 37 и 38, отличающийся тем, что посредством подкожного введения целых дрожжевых клеток рекомбинантных дрожжей по любому из пп. 1-35 обеспечивается гуморальная иммунизация против экспрессированного чужеродного белка.
44. Способ по любому из пп. 37 и 38, отличающийся тем, что посредством подкожного введения целых дрожжевых клеток рекомбинантных дрожжей по любому из пп. 1-35 обеспечивается защитная гуморальная иммунизация против экспрессированного чужеродного белка.
45. Специфический способ ELISA (твердофазный иммуносорбентный анализ) для обнаружения и количественной оценки иммунного ответа против чужеродных белков согласно любому из пп. 1-44.
46. Способ ELISA по п. 45 для обнаружения и количественной оценки иммунного ответа против белка VP2 IBDV и/или мутированного белка VP2-T2S IBDV.
47. Способ выявления нейтрализующих антител в сыворотках индивидуумов, иммунизированных согласно любому из пп. 37-44.
48. Способ выявления нейтрализующих антител против белка VP2 IBDV, и/или мутированного белка VP2-T2S IBDV, и/или кодон-оптимизированного белка OVP2-T2S в сыворотках индивидуумов, иммунизированных согласно любому из пп. 37-44.
49. Способ подтверждения иммунизации согласно любому из пп. 37-44 посредством нагрузки антигеном.
50. Способ подтверждения иммунизации согласно любому из пп. 37-44 посредством нагрузки вирусным антигеном или нагрузки вирусом.
51. Способ подтверждения иммунизации согласно любому из пп. 37-44 посредством нагрузки белком VP2 IBDV, и/или мутированным белком VP2-T2S IBDV, и/или кодон-оптимизированным белком oVP2-T2S.
52. Олигонуклеотид, имеющий последовательность нуклеотидов согласно SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9.
53. Вектор экспрессии, несущий чужеродный ген, отличающийся тем, что чужеродный ген имеет последовательность нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 5.
54. Вектор экспрессии по п. 53, отличающийся тем, что чужеродный ген содержит природную или кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность, которая кодирует белок VP2 IBDV или белок VP2-T2S IBDV.
55. Вектор экспрессии по п. 53 или 54, отличающийся тем, что чужеродный ген кодирует белок VP2 IBDV с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 2 или белок VP2-T2S IBDV с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 4.
56. Вектор экспрессии по п. 53, отличающийся тем, что вектор экспрессии является вектором Klp3 или Klp3-MCS (SEQ ID NO: 10).