ЦИКЛИЧЕСКИЕ ДИНУКЛЕОТИДЫ В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ STING
CYCLIC DINUCLEOTIDES AS STING AGONISTS

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА СМЕЖНЫЕ ЗАЯВКИ
Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/599,111, поданной 15 декабря 2017 г., которая полностью включена в настоящий документ путем ссылки.
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым соединениям, представляющим собой агонисты белка STING (стимулятор генов интерферонов) и используемым при лечении расстройств, на которые оказывает влияние модуляция белка STING. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или более таких соединений, процессам получения таких соединений и композиций и применению таких соединений или фармацевтических композиций для лечения различных заболеваний, синдромов и расстройств. Изобретение может участвовать в активации нижележащего сигнального пути, вследствие которой дополнительно происходит активация вторичных мессенджеров и факторов роста, и в продукции интерферона, участвующего во врожденном и адаптивном иммунитете. Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению таких соединений или фармацевтических композиций для лечения различных инфекций, заболеваний, синдромов и расстройств, включая, без ограничений, меланому, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркому, а также для противовирусной терапии.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
K
Cell
Cell Reports
Cell
STING (стимулятор генов интерферона), также известный как TMEM173, Mita, MPYS и ERIS, представляет собой трансмембранный рецептор, расположенный внутри клетки, и ключевой датчик цитозольных нуклеиновых кислот (Zhong B, et al. «The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation». Immunity. 2008. vol. 29; 538-550). В недавних исследованиях были выявлены биологические свойства STING и его роль в мобилизации врожденного иммунного ответа, приводящего к возникновению эффективной противоопухолевой активности в мышиных моделях. Благодаря активации пути STING происходит продукция интерферонов типа I (главным образом, ИФН-α и ИФН-β), индуцируемых через сигнальный путь IRF3 (интерферон - регулирующий фактор 3). Считается, что активация IRF3 опосредована TBK1, который рекрутирует и фосфорилирует IRF3, таким образом формируя IRF3-гомодимер, способный проникать в ядро для транскрипции интерферона типа I и других генов (Liu S, et al. «Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAYS, STING, and TRIP induces IRF3 activation» Science. 2015: 2630-2637). Кроме того, TBK1 активирует энхансер легкой цепи ядерного фактора каппа в активированных B-клетках, благодаря которому происходит продукция провоспалительных цитокинов ((IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-6, ФНО-α, и т. д.), посредством онкогенного фактора транскрипции NF-B. Кроме того, STING активирует STAT6 (сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 6) и индуцирует (клетки типа Th2), увеличивает (IL-12) или уменьшает (IL-10) выработку различных цитокинов, включая хемокины CCL2, CCL20, и CCL26 (Chen H, et al. «Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity» . 2011, vol. 14: 433-446). Кроме того, было обнаружено, что прямое фосфорилирование STING по Ser366 при активации происходит через TBK1 или ULK1 (Corrales, L. et al «Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity» , 2015, vol. 11: 1-13; Konno, H. et al. «Cyclic dinucleotides trigger ULK1 (ATG1) phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling» , 2013, vol. 155: 688-698).
Ear J Immunol
Molecular Cell
Cell
Выявлен природный лиганд, который связывается со STING и активирует его (2’,3’)циклический гуанозинмонофосфат-аденозинмонофосфат (2’,3’-cGAMP), а также фермент, ответственный за синтез (cGAS, также известный как C6orf150 или MB21D1), что обеспечивает возможность модуляции этого пути. cGAMP представляет собой высокоаффинный лиганд STING, продуцируемый клетками млекопитающих, который выступает в качестве эндогенного вторичного мессенджера для активации пути STING. Он представляет собой циклический динуклеотид с уникальной 2’, 3’- связью, которую cGAS образует в присутствии экзогенной двухцепочечной ДНК (например, высвобожденной при вторжении бактерий, вирусов или простейших) или собственной ДНК млекопитающих (Wu et al, 2013; Sun, L. et al. «Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway» Science, 2013, vol. 339: 786-791; Bhat N and Fitzgerald KA. «Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors». 2014 Mar; 44(3):634-40). Активация STING может также происходить при связывании экзогенных (3’,3) циклических динуклеотидов (c-ди-GMP, c-ди-AMP и 3’3’-cGAMP), которые высвобождаются вторгшимися бактериями (Zhang X, et al. «Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING» , 2013, vol. 51: 226-235; Danilchanka, O and Mekalanos, JJ. «Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response» . 2013. vol. 154: 962-970).
При активации пути STING инициируется иммунный ответ, вследствие чего происходит генерация специфических киллерных T-клеток, благодаря которым возможно усыхание опухолей и обеспечение длительного иммунитета без рецидивов. Поразительная противоопухолевая активность, полученная с помощью агонистов STING в доклинических моделях, вызвала значительный интерес к данной мишени и низкомолекулярным соединениям, которые могут модулировать путь STING и обладают потенциалом как для лечения рака, так и подавления аутоиммунных заболеваний.
Активация пути STING также участвует в противовирусном ответе. В отсутствие STING потеря функционального ответа либо на клеточном уровне, либо на уровне организма означает неспособность контролировать вирусную нагрузку. В случае активации пути STING инициируется иммунный ответ, вследствие чего продуцируются противовирусные и провоспалительные цитокины, которые борются с вирусом и мобилизуют врожденную и адаптивную части иммунной системы. В конечном счете вырабатывается долговременный иммунитет к патогенному вирусу. Поразительная противовирусная активность, полученная с помощью агонистов STING в доклинических моделях, вызвала значительный интерес к данной мишени и низкомолекулярным соединениям, которые могут модулировать путь STING и обладают потенциалом для лечения хронических вирусных инфекций, таких как гепатит В.
Хроническая инфекция вируса гепатита B (ВГВ) представляет собой глобальную проблему здравоохранения и поражает более 5% населения планеты (более 350 миллионов человек по всему миру и 1,25 миллиона субъектов в США). Несмотря на наличие определенных вакцин против ВГВ и видов лечения, влияние хронической инфекции ВГВ по-прежнему остается серьезной нерешенной глобальной медицинской проблемой в связи с недостаточными возможностями лечения и неизменной частотой появления новых инфекций в большинстве развивающихся стран. Текущие способы лечения ограничены только двумя классами агентов: интерфероном-альфа и аналогами нуклеозидов, играющими роль ингибиторов вирусной полимеразы. Однако ни одно из данных лекарственных средств не обеспечивает излечения заболевания, при этом их влияние ограничено из-за резистентности к лекарственному средству, низкой эффективности и проблем переносимости. Низкие частоты выздоровления от ВГВ по меньшей мере частично объясняются тем фактом, что полного подавления продукции вируса сложно достичь с помощью одного противовирусного агента. Однако вследствие устойчивого подавления ДНК ВГВ замедляется прогрессирование заболевания печени и удается предотвратить развитие гепатоцеллюлярной карциномы. Текущая терапия инфицированных ВГВ пациентов направлена на снижение сывороточной ДНК ВГВ до низких или необнаруживаемых концентраций и в конечном счете на замедление или предотвращение развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. В данной области, следовательно, существует потребность в терапевтических агентах, которые могут усиливать подавление продукции вируса и которые могут обеспечивать лечение, облегчение или предотвращение инфекции ВГВ. Посредством введения таких терапевтических агентов инфицированному ВГВ пациенту либо в качестве монотерапии, либо в комбинации с другими (или вспомогательными) способами лечения ВГВ можно существенно снижать вирусную нагрузку, улучшать прогноз, замедлять прогрессирование заболевания и повышать показатели сероконверсии.
Благодаря потенциальным терапевтическим преимуществам, связанным с усилением как врожденного, так и адаптивного иммунитета, STING представляет собой перспективную терапевтическую мишень со впечатляющей активностью как по отдельности, так и в комбинации с другими видами иммунотерапии.
ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):
в которой:
1
2
b1, b2, b3, b4, b5, b6, b7, b8, b9, b10, b11, b12, b13, b14, b15, b16, b17, b18, b19, b20, b21, b22, b23, b24, b25, b26, b27, b28, b29, b30, b31, b32
b33;
B и B независимо выбраны из группы, состоящей из  и
1a
1-3
3-6
2-6
1-3
1-3
R независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C алкенилокси; C алкинилокси; гидрокси(C)алкокси; или C алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси;
1b
1b
1a
R независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R представляет собой фтор, R представляет собой водород или фтор;
1c
R независимо выбран из водорода или метила;
2a
1-3
3-6
2-6
1-3
1-3
3
R независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C алкенилокси; C алкинилокси; гидрокси(C)алкокси; или C алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси; и R представляет собой водород;
2a
2c
2
2a
2c
или R представляет собой -O- и R представляет собой -CH-; так, что R, R и атомы, к которым они присоединены, формируют 5-членное кольцо;
2b
2b
2a
R независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R представляет собой фтор, R представляет собой водород или фтор;
2c
3
2
R независимо выбран из водорода, фтора, CH или CHF;
1
2
2
X и X независимо выбраны из группы, состоящей из O, S и CH;
1
каждый из Y и Y независимо отсутствует или выбран из группы, состоящей из O и NH;
1
Z и Z независимо выбраны из группы, состоящей из O и NH;
1
1
один из M и M представляет собой  , а другой из M и M независимо выбран из  ;
так, что когда M представляет собой  , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;
1
1
1
1
1
и так, что M представляет собой  , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;
4
5
5
2
6
2
2
2
6
2
2
2
6
R независимо выбран из группы, состоящей из гидрокси, метила, BH3 и -SR; где R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, -CHO(O)R, -CHOC(O)OR6, -CHCHSC(O)R и -CHCHS-SCHR;
6
6-10
3-12
1-20
1-6
6-10
3-12
R независимо выбран из группы, состоящей из C арила, гетероарила, гетероциклоалкила, C циклоалкила и C алкила, необязательно независимо замещенных 1-5 фтор- или гидрокси-заместителями, C алкилом, C арилом или C циклоалкилом;
или его энантиомера, диастереомера или фармацевтически приемлемой солевой формы;
1
2
2
1
1-
1
1a
b6
при условии, что, когда каждый из B и B представляет собой , и Z-M-Y представляет собой OS(O)NH, и Y-MZ представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O, R отличается от OH;
2
2
2a
3
2b
2c
2
1
1
1
1
1
1a
3
1b
1c
b6
b7
при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой OCH; R представляет собой H; R представляет собой H; Z-M-Y представляет собой OS(O)NH; Y-M-Z представляет собой OP(O)(OH)O; B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой OCH; R представляет собой H; а R представляет собой H;
2
2
2a
2b
2c
1
1
1
2
1
1
1a
1b
1c
b6
b21
при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой F; R представляет собой H; R представляет собой H; Z-M-Y представляет собой (*R)OP(O)(SH)O; Y-M-Z представляет собой NHS(O)O; B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой OH; R представляет собой H; а R представляет собой H;
2
2
2a
2b
2c
2
1
1
1
1
1
1a
3
1b
1c
b30
b7
при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой H; R представляет собой H; R представляет собой H; Z-M-Y представляет собой OS(O)NH; Y-M-Z представляет собой OP(O)(OH)O; B представляет собой ; X представляет собой O; R представляет собой OCH; R представляет собой H; а R представляет собой H.
В настоящем изобретении также обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель и соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую солевую форму, или состоящая и/или по существу состоящая из них.
Кроме того, предложены процессы получения фармацевтической композиции, содержащей смесь соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель или состоящей и/или по существу состоящей из них.
В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, у которого на вирусную инфекцию, заболевание, синдром или состояние влияет агонизм STING, с использованием соединения формулы (I).
В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, с использованием соединения формулы (I).
В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, у которого на вирусную инфекцию, заболевание, синдром или состояние, выбранные из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких, фибросаркомы и гепатита В, влияет агонизм STING, с использованием соединения формулы (I).
В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, выбранные из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких, фибросаркомы и гепатита В, с использованием соединения формулы (I).
Настоящее изобретение также относится к применению любого из соединений, описанных в настоящем документе, при получении лекарственного средства, где лекарственное средство получают для лечения у пациента вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, на которое оказывает влияние агонизм STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.
Настоящее изобретение также относится к применению любого из соединений, описанных в настоящем документе, при получении лекарственного средства, где лекарственное средство получают для лечения у пациента вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.
Настоящее изобретение также относится к получению замещенных производных циклического динуклеотида, которые действуют в качестве селективных агонистов STING.
Примерами изобретения являются способы лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, модулируемые STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.
Примерами изобретения являются способы лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в лечении вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, на которое влияет агонизм STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей соединение формулы (I), для лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Со ссылкой на заместители термин «независимо» обозначает ситуацию, в которой заместители могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга в случае возможного присутствия более одного заместителя.
1-8
1-6
2
1-6
Термин «алкил», применяемый по отдельности или в составе группы заместителей, обозначает линейную и разветвленную углеродные цепи, имеющие от 1 до 8 атомов углерода. Следовательно, указанные количества атомов углерода (например, C) независимо обозначают количество атомов углерода в алкильной функциональной группе или алкильной части более крупного алкилсодержащего заместителя. В замещающих группах со множеством алкильных групп, таких как (C алкил)амино-, C алкильные группы диалкиламино могут быть одинаковыми или разными.
Термин «алкокси» обозначает -O-алкильную группу, где термин «алкил» соответствует приведенному выше определению.
Термины «алкенил» и «алкинил» обозначают линейные и разветвленные углеродные цепи, имеющие от 2 до 8 атомов углерода, где алкенильная цепь содержит по меньшей мере одну двойную связь, а алкинильная цепь содержит по меньшей мере одну тройную связь.
Термин «циклоалкил» обозначает насыщенные или частично насыщенные моноциклические или полициклические углеводородные кольца, имеющие от 3 до 14 атомов углерода. Примеры таких колец включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и адамантил.
Термин «гетероциклил» обозначает неароматическую моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, имеющую от 3 до 10 кольцевых членов, которые включают по меньшей мере 1 атом углерода и от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. Включенный в термин гетероциклил представляет собой неароматическое циклическое кольцо из 5-7 членов, из которых 1-2 члена представляют собой N, или неароматическое циклическое кольцо из 5-7 членов, из которых 0, 1 или 2 члена представляют собой N, и до 2 членов представляют собой O или S, и по меньшей мере один член должен представлять собой N, O или S; при этом кольцо необязательно содержит от 0 до 1 ненасыщенной связи, и, если кольцо состоит из 6 или 7 членов, оно необязательно содержит до 2 ненасыщенных связей. Члены углеродного кольца, формирующие гетероциклическое кольцо, могут быть полностью насыщенными или частично насыщенными.
H
Термин «гетероциклил» также включает две 5-членные моноциклические гетероциклоалкильные группы, соединенные мостиковой связью с образованием бициклического кольца. Такие группы не считаются полностью ароматическими и не обозначаются как гетероарильные группы. Если гетероцикл является бициклическим, оба кольца гетероцикла являются неароматическими и по меньшей мере одно из колец содержит гетероатомный член кольца. Примеры гетероциклических групп включают, без ограничений, пирролинил (включая 2-пиррол, 2-пирролинил или 3-пирролинил), пирролидинил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолинил, пиразолидинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил и пиперазинил. Если не указано иное, гетероцикл присоединен к боковой группе на любом гетероатоме или атоме углерода с образованием стабильной структуры.
Термин «арил» обозначает ненасыщенное ароматическое моноциклическое или бициклическое карбоциклическое кольцо из 6-10 углеродных членов. Примеры арильных колец включают фенил и нафталенил.
Термин «гетероарил» относится к ароматической моноциклической или бициклической кольцевой системе с 5-10 кольцевыми членами, которая содержит атомы углерода и от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S. Термин «гетероарил» также обозначает ароматические 5- или 6-членные кольца, где кольцо состоит из атомов углерода и имеет по меньшей мере один гетероатом. Приемлемые гетероатомы включают атомы азота, кислорода и серы. В случае 5-членных колец гетероарильное кольцо предпочтительно содержит один член, представляющий собой атом азота, кислорода или серы, а также до 3 дополнительных атомов азота. В случае 6-членных колец гетероарильное кольцо предпочтительно содержит от 1 до 3 атомов азота. В случае когда 6-членное кольцо имеет 3 атома азота, максимум 2 атома азота смежны. Примеры гетероарильных групп включают фурил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, индолил, изоиндолил, бензофурил, бензотиенил, индазолил, бензимидазолил, бензотиазолил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензотиадиазолил, бензотриазолил, хинолинил, изохинолинил и хиназолинил. Если не указано иное, гетероарил присоединен к боковой группе на любом гетероатоме или атоме углерода с образованием в результате стабильной структуры.
Термин «атом галогена» или «галоген» обозначает атомы фтора, хлора, брома и йода.
1
6
1-6
1-2
1-3
1-4
1-5
2-6
3-6
4-6
5-6
2-5
Если термин «алкил» или «арил» либо любой из образованных от данных корней префиксов появляется в названии заместителя (например, арилалкил, алкиламино), это название следует интерпретировать как включающее ограничения, указанные выше для терминов «алкил» и «арил». Указанное количество атомов углерода (например, C-C) относится независимо к количеству атомов углерода в алкильной функциональной группе, арильной функциональной группе или в алкильной части большего заместителя, в названии которого корень «алкил» стоит в качестве префикса. Для алкильных и алкокси-заместителей указанное число атомов углерода включает все независимые члены, входящие в пределы установленного диапазона. Например, C алкил будет включать в себя отдельно метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, а также их подкомбинации (например, C, C, C, C, C, C, C, C, C и т. д.).
1
6
В целом согласно стандартным правилам номенклатуры, используемым во всем тексте данного описания, сначала описывается конечная часть указанной боковой цепи с последующим описанием смежных функциональных групп по направлению к точке прикрепления цепи. Таким образом, например, название заместителя «C-C алкилкарбонил» обозначает группу формулы:
R-
S-
R
S
R
S
Термин R в стереоцентре обозначает, что стереоцентр имеет чистую конфигурацию, определенную как указано в данной области техники; аналогично термин S обозначает, что стереоцентр имеет чистую конфигурацию. В настоящем документе термины *R или *S в стереоцентре используются для указания на наличие у стереоцентра чистой, но неизвестной конфигурации. В настоящем документе термин RS обозначает стереоцентр, существующий в форме смеси - и-конфигураций. Аналогично термины *RS или *SR обозначают стереоцентр, существующий в форме смеси - и -конфигураций и имеющий неизвестную конфигурацию относительно другого стереоцентра внутри молекулы.
В настоящем документе термин «*» обозначает стереоцентр, который может существовать в виде чистой, но неизвестной конфигурации, или смеси R- и S-конфигураций.
R
S
Соединения, содержащие один стереоцентр без обозначения стереосвязи, представляют собой смесь двух энантиомеров. Соединения, содержащие два стереоцентра без обозначения стереосвязи для обоих из них, представляют собой смесь четырех диастереомеров. Соединения с двумя стереоцентрами, каждый из которых обозначен как RS и имеет обозначения стереосвязи, представляют собой двухкомпонентную смесь, обладающую относительной стереохимической структурой, как показано в структурной формуле. Соединения с двумя стереоцентрами, каждый из которых обозначен как *RS и имеет обозначения стереосвязи, представляют собой двухкомпонентную смесь с неизвестной относительной стереохимической структурой. Необозначенные стереоцентры, указанные в структурной формуле без обозначения стереосвязей, представляют собой смесь - и -конфигураций. Для необозначенных стереоцентров, структурная формула которых приводится с обозначениями стереосвязей, абсолютная стереохимическая структура соответствует показанной формуле.
Если не указано иное, подразумевают, что определение любого заместителя или переменной в определенном положении в молекуле не зависит от соответствующих определений на других участках данной молекулы. Очевидно, что специалист в данной области может выбирать заместители и схемы замещения соединений настоящего изобретения с образованием химически стабильных соединений, которые можно легко синтезировать с помощью методик, известных в данной области, а также способами, изложенными в настоящем документе.
Термин «субъект» обозначает животное, предпочтительно млекопитающее, наиболее предпочтительно человека, являющегося объектом лечения, наблюдения или эксперимента.
Термин «терапевтически эффективное количество» обозначает количество активного соединения или фармацевтического агента, включая соединение настоящего изобретения, индуцирующее биологическую или медицинскую реакцию в тканевой системе животного или человека, необходимую исследователю, ветеринару, врачу или другому клиницисту, включая облегчение или частичное облегчение симптомов заболевания, синдрома, состояния или расстройства, требующего лечения.
Термин «композиция» обозначает продукт, включающий установленные ингредиенты в терапевтически эффективных количествах, а также любой продукт, полученный непосредственно или опосредованно из комбинаций установленных ингредиентов в установленных количествах.
Cell
Proc. Natl. Acad. Sci.
Предполагается, что термин «агонист STING»» включает в себя соединение, которое взаимодействует со STING за счет связывания с ним и индуцирует дальнейшую передачу сигнала, характеризующуюся активацией молекул, связанных с функцией STING. Сюда относится прямое фосфорилирование STING, IRF3 и/или NF-kB, а также может относиться STAT6. Вследствие активации пути STING повышается продукция интерферонов типа I (главным образом ИФН-α и ИФН-β) и экспрессия генов, стимулированных интерфероном (Chen H, et al. «Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity». . 2011, vol. 14: 433-446; и Liu S-Y, et al. “Systematic identification of type I and type II interferon- induced antiviral factors 2012:vol.1094239-4244).
Термин «модулируемое с помощью STING» используется для обозначения состояния, на которое STING влияет напрямую или посредством пути STING, включая, без ограничений, вирусные инфекции, заболевания или состояния, такие как меланома, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркома и гепатит B.
Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «расстройство, модулируемое STING» означает любую вирусную инфекцию, заболевание, расстройство или состояние, отличающееся тем, что, по меньшей мере, один из его характерных симптомов ослабевает или исчезает при лечении агонистом STING. Приемлемые примеры включают, без ограничений, меланому, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркому и гепатит B.
Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «влиять» или «подверженный влиянию» (когда речь идет о вирусной инфекции, заболевании, синдроме, состоянии или расстройстве, подверженном влиянию агонизма STING) включает снижение частоты и/или тяжести одного или более симптомов или проявлений указанной вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства; и/или включает предотвращение развития одного или более симптомов или проявлений указанной вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства или развития вирусной инфекции, заболевания, состояния, синдрома или расстройства.
Соединения настоящего изобретения используют в способах лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства, подверженных влиянию агонизма STING. Такие способы включают введение субъекту, включая животное, млекопитающее и человека, требующему такого лечения, облегчения и/или профилактики, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его энантиомера, диастереомера, сольвата или фармацевтически приемлемой соли, или состоят и/или по существу состоят из такого способа.
В частности, соединения формулы (I) или их энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму используют для лечения или облегчения заболеваний, синдромов, состояний или расстройств, таких как меланома, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркома и гепатит В.
Более конкретно, соединения формулы (I) или их энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму используют для лечения или облегчения меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита В, включая введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его энантиомера, диастереомера, сольвата или его фармацевтически приемлемой солевой формы, как определено в настоящем документе.
Hepadnaviridae
Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к способам облегчения и/или лечения вирусной инфекции, включая инфекции, вызванные , таким как вирус гепатита B или ВГВ. Способы могут включать введение субъекту, согласно определению страдающему от вирусной инфекции, эффективного количества одного или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы.
Другие варианты осуществления изобретения, описанные в данном документе, относятся к способу ослабления и/или лечения вирусной инфекции, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений, описанных в настоящем документе (например, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой формы), или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений, описанных в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль. Другие варианты осуществления изобретения, описанные в данном документе, относятся к применению одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для ослабления и/или лечения вирусной инфекции.
Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой форме, или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для облегчения и/или лечения вирусной инфекции. Некоторые варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу ингибирования репликации вируса, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений, описанных в настоящем документе или их фармацевтически приемлемую солевую форму.
Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к использованию одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для ингибирования репликации вируса. Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям, описанным в данном документе (например, соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме), или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений, описанных в данном документе, или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которая может быть использована для ингибирования репликации вируса.
В некоторых вариантах осуществления вирусная инфекция может представлять собой вирусную инфекцию гепатита B. Способы могут включать введение субъекту, согласно определению страдающему от вирусной инфекции, эффективного количества одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой солевой формы.
Другие варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу облегчения и/или лечения вирусной инфекции, которая может включать приведение клетки, инфицированной ВГВ, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I), их фармацевтически приемлемой солевой формы или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму. Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к применению одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для облегчения и/или лечения ВГВ.
Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой форме, или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для улучшения и/или лечения ВГВ. Некоторые варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу ингибирования репликации ВГВ, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую соль.
Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к использованию одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой соли при получении лекарственного средства для ингибирования репликации ВГВ. Другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для ингибирования репликации ВГВ.
2
2
2a
2b
2c
1
1-
1
1
1
1a
1b
1c
Варианты осуществления настоящего изобретения включают соединение формулы (I), описанное в настоящем документе, или его энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму, где заместители, выбранные из одного или более указанных здесь переменных (например, B, X, R, R, R, Z-M-Y, Y-MZ, B, X, R, R, R), представляют собой любые независимые отдельные заместители или любую подгруппу заместителей из приведенных в качестве примера в перечне в таблице 1 ниже.
Таблица 1
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>1</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>2A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>3</b>
b21
O
OH
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>4A</b>
b6
O
O
H
CH<sub>2</sub> с образованием кольца с R<sub>2</sub>
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>4B</b>
b6
O
O
H
CH<sub>2</sub> с образованием кольца с R<sub>2</sub>
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>5</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
OS(O)<sub>2</sub>NH
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>6</b>
b6
O
F
H
H
NHS(O)<sub>2</sub>O
OP(O)(OH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>7A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
H
OCH<sub>3</sub>
H
<b>7B</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
H
OCH<sub>3</sub>
H
<b>8</b>
b5
CH<sub>2</sub>
OH
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>9</b>
b6
O
O
H
CH<sub>2</sub> с образованием кольца с R<sub>2</sub>
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>10A</b>
b6
O
O
H
CH<sub>2</sub> с образованием кольца с R<sub>2</sub>
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>11</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OH
H
H
<b>12</b>
b6
O
H
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>13A</b>
b6
O
H
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>14A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(BH<sub>3</sub>)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>15</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b17
O
H
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>16A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b17
O
H
H
H
<b>16B</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b17
O
H
H
H
<b>17</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
OH
H
H
<b>18</b>
b6
O
H
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OH
H
H
<b>19A</b>
b6
O
H
H
H
(*<i>R</i>)OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>19B</b>
b6
O
H
H
H
(*<i>S</i>)OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>20</b>
b6
O
H
H
H
NHS(O)<sub>2</sub>O
OP(O)(OH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>21A</b>
b6
CH<sub>2</sub>
OH
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>22</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>23A</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>23B</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>24</b>
b6
O
H
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>25</b>
b6
O
O
H
CH<sub>2</sub> с образованием кольца с R<sub>2</sub>
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>26</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b7
O
H
H
H
<b>27</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b28
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>28</b>
b6
O
H
F
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>29</b>
b6
O
F
F
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
F
H
H
<b>30</b>
b6
O
OH
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
OH
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>31A</b>
b6
O
H
F
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
F
H
H
<b>31B</b>
b6
O
H
F
H
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
F
H
H
<b>32A</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
b6
O
F
H
H
<b>32B</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
b6
O
F
H
H
<b>33</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
H
H
H
<b>34</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
F
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>35</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b6
O
F
H
H
<b>36</b>
b6
O
H
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
F
H
H
<b>37</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b17
O
F
H
H
<b>38</b>
b6
O
H
F
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
F
H
H
<b>39</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b18
O
H
H
H
<b>40</b>
b6
O
H
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b18
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>41</b>
b6
O
F
OH
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(OH)O
b6
O
OH
H
H
<b>42A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
F
H
H
<b>42B</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b6
O
F
H
H
<b>43A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
CH<sub>2</sub>
OH
H
H
<b>44A</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
H
H
H
<b>44B</b>
b6
O
F
H
H
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b7
O
H
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>45</b>
b6
O
H
F
H
OP(O)(OH)O
OP(O)(OH)O
b17
O
H
H
H
<b>46A</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
H
H
H
<b>46B</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
(*<i>S</i>)OP(O)(SH)O
b7
O
H
H
H
<b>47</b>
b6
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(SH)O
b7
CH<sub>2</sub>
OH
H
H
<b>48</b>
b6
O
OH
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b2
O
OH
H
H
<b>49</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b21
O
OH
H
H
<img file="00000006.jpg" he="31" wi="51" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>№ соед.</b>
<b>B</b><sub><b>2</b></sub>
<b>X</b><sub><b>2</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>2c</b></sub>
<b>Z-M-Y</b>
<b>Y1-M1-Z1</b>
<b>B</b><sub><b>1</b></sub>
<b>X</b><sub><b>1</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1a</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1b</b></sub>
<b>R</b><sub><b>1c</b></sub>
<b>50A</b>
b6
O
H
F
H
(*<i>R</i>)OP(O)(SH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b17
O
H
H
H
<b>51</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b17
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>52</b>
b18
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
O(O)<sub>2</sub>ONH
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>53</b>
b18
O
F
H
H
OS(O)<sub>2</sub>NH
OP(O)(SH)O
b7
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>54</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b26
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
<b>55</b>
b6
O
F
H
H
OP(O)(OH)O
NHS(O)<sub>2</sub>O
b27
O
OCH<sub>3</sub>
H
H
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (Ia):
где
1a
1-3
3-6
2-6
1-3
1-3
R независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C алкенилокси; C алкинилокси; гидрокси(C)алкокси; или C алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси;
1b
1b
1a
R независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R представляет собой фтор, R представляет собой водород или фтор;
1c
R независимо выбран из водорода или метила;
2a
1-3
3-6
2-6
1-3
1-3
3
R независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C алкенилокси; C алкинилокси; гидрокси(C)алкокси; или C алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси; и R представляет собой водород;
2a
2c
2
2a
2c
или R представляет собой -O- и R представляет собой -CH-; так, что R, R и атомы, к которым они присоединены, формируют 5-членное кольцо;
2b
2b
2a
R независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R представляет собой фтор, R представляет собой водород или фтор;
2c
3
2
R независимо выбран из водорода, фтора, CH или CHF;
1
2
2
X и X независимо выбран из группы, состоящей из O, S и CH;
1
каждый из Y и Y независимо отсутствует или выбран из группы, состоящей из O и NH;
1
Z и Z независимо выбраны из группы, состоящей из O и NH;
1
1
один из M и M представляет собой  , а другой из M и M независимо выбраны из
так, что, когда M представляет собой  , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;
1
1
1
1
1
и так, что M представляет собой  , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;
4
3
5
5
2
6
2
6
2
2
6
2
2
2
6
R независимо выбран из группы, состоящей из гидрокси, метила, BH и -SR; где R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, -CHO(O)R, -CHOC(O)OR, -CHCHSCi(O)R и -CHCHS-SCHR;
6
6-10
3-12
1-20
1-6
6-10
3-12
R независимо выбран из группы, состоящей из C арила, гетероарила, гетероциклоалкила, C циклоалкила и C алкила, необязательно независимо замещенных 1-5 фтор- или гидрокси-заместителями, C алкилом, C арилом или C циклоалкилом;
или его энантиомера, диастереомера или фармацевтически приемлемой солевой формы;
1
2
2
1
1
1
1a
b6
при условии, что, когда каждый из B и B представляет собой , и Z-M-Y представляет собой OS(O)NH, и Y-M-Z представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O, R отличается от OH.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (I), выбранному из соединений 1-55:
или их фармацевтически приемлемой солевой формы.
Для применения в медицине соли соединений формулы (I) относятся к нетоксичным «фармацевтически приемлемым солям». Однако для получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солевых форм можно использовать другие соли. Приемлемые фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают кислотно-аддитивные соли, которые, например, могут быть образованы путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединения формулы (I) несут кислотную функциональную группу, их приемлемые фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, такие как соли натрия или калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция или магния; а также соли, образованные с приемлемыми органическими лигандами, такие как четвертичные аммониевые соли. Таким образом, репрезентативные фармацевтически приемлемые соли включают ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, клавуланат, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, N-метилглюкаминаммониевую соль, олеат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, сульфат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтиодид и валерат.
Типичные примеры кислот и оснований, которые моно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают кислоты, включая уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, L-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, (+)-(1S)-камфора-10-сульфиновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, додецилсульфокислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидрокси-этансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, D-глюконовую кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, α-оксо-глутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, соляную кислоту, (+)-L-молочную кислоту, (±)-DL-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-L-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-DL-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую-кислоту, 1-гидрокси-2-нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памовую кислоту, фосфорную кислоту, L-пироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-амино-салициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильные кислоты, (+)-L-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту; а также основания, в том числе аммиак, L-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, деанол, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламин)этанол, этаноламин, этилендиамин, N-метил-глюкамин, гидрабамин, 1H-имидазол, L-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.
in vivo
in vivo
Варианты осуществления настоящего изобретения включают пролекарства соединений формулы (I). В целом такие пролекарства представляют собой функциональные производные соединения, которые легко преобразовывать в требуемое соединение . Таким образом, в вариантах осуществления настоящего изобретения, описывающих способы лечения или профилактики, термин «введение» охватывает лечение или профилактику различных описанных заболеваний, состояний, синдромов и расстройств либо с использованием конкретно описанного соединения, либо с использованием соединения, которое не было конкретно описано, но которое преобразуется в установленное соединение  после введения пациенту. Стандартные методики отбора и получения приемлемых производных пролекарств описаны, например, в работе Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
Когда соединения в соответствии с вариантами осуществления данного изобретения имеют по меньшей мере один хиральный центр, они могут соответственно существовать в виде энантиомеров. Если соединения имеют два или более хиральных центров, они могут дополнительно существовать в виде диастереомеров. Следует понимать, что все такие изомеры и их смеси входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые из кристаллических форм соединений могут существовать в виде полиморфов, и в таком качестве подразумевается их включение в настоящее изобретение. Кроме того, некоторые из соединений могут образовывать сольваты с водой (т. е. гидраты) или широко распространенными органическими растворителями, при этом такие сольваты также входят в объем настоящего изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что используемый в настоящем документе термин «соединение» включает сольватированные соединения формулы (I).
В тех случаях, когда в процессах получения соединений в соответствии с определенными вариантами осуществления изобретения образуются смеси стереоизомеров, эти изомеры могут быть разделены стандартными способами, такими как препаративная хроматография. Соединения можно получать в рацемической форме или отдельные энантиомеры можно получать в результате энантиоспецифического синтеза или посредством разделения. Соединения могут, например, быть разделены на соответствующие энантиомеры стандартными методиками, такими как образование диастереомерных пар путем образования соли с оптически активной кислотой, такой как, например, (-)-ди-п-толуоил-D-винная кислота и/или (+)-ди-п-толуоил-L-винная кислота, с последующей фракционной кристаллизацией и восстановлением свободного основания. Соединения также можно разделять посредством образования диастереомерных сложных эфиров или амидов с последующим хроматографическим разделением и удалением хирального вспомогательного соединения. В альтернативном варианте осуществления соединения можно разделять с помощью хиральной ВЭЖХ-колонки.
Один вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, включая фармацевтическую композицию, содержащую (+)-энантиомер соединения формулы (I), состоящую из и/или по существу состоящую из него, где указанная композиция по существу не содержит (-)-изомера указанного соединения. В данном контексте «по существу не содержит» означает присутствие менее около 25%, предпочтительно менее около 10%, более предпочтительно менее около 5%, еще более предпочтительно менее около 2% и еще более предпочтительно менее около 1% (-)-изомера, содержание которого рассчитывают как:
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой композицию, включая фармацевтическую композицию, содержащую (-)-энантиомер соединения формулы (I), состоящую из и/или по существу состоящую из него, где указанная композиция по существу не содержит (+)-изомера указанного соединения. В контексте настоящего документа выражение «по существу не содержит» означает содержание менее около 25%, предпочтительно менее около 10%, более предпочтительно менее около 5%, еще более предпочтительно менее около 2% и еще более предпочтительно менее около 1% (+)-изомера, содержание которого рассчитывают как:
Protective Groups in Organic Chemistry,
Second Edition
Protective Groups in Organic Synthesis
Protective Groups in Organic Synthesis
Third Edition
В ходе применения любого из процессов получения соединений различных вариантов осуществления настоящего изобретения может быть необходимой и/или желательной защита чувствительных или реакционноспособных групп на любой из рассматриваемых молекул. Для этих целей можно использовать стандартные защитные группы, например описанные в публикациях , J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; T.W. Greene & P.G.M, Wilts, , John Wiley & Sons, 1991; и T.W. Greene & P.G.M. Wuts, , , John Wiley & Sons, 1999. Защитные группы можно удалять на любой удобной для этого последующей стадии, используя способы, известные в данной области.
Хотя соединения вариантов осуществления настоящего изобретения (включая их фармацевтически приемлемые соли и фармацевтически приемлемые сольваты) можно вводить отдельно, они будут по существу введены в виде добавки с фармацевтически приемлемым носителем, фармацевтически приемлемым эксципиентом и/или фармацевтически приемлемым разбавителем, выбранными с учетом предполагаемого пути введения и стандартной фармацевтической или ветеринарной практики. Таким образом, конкретные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к фармацевтическим и ветеринарным композициям, содержащим соединения формулы (I) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель.
В качестве примера в фармацевтических композициях вариантов осуществления настоящего изобретения соединения формулы (I) могут быть смешаны с любым (-и) приемлемым (-и) связующим (-и) веществом (-ами), смазывающим (-и) веществом (-ами), суспендирующим (-и) агентом (-ами), покрывающим (-и) агентом (-ами), солюбилизирующим (-и) агентом (-ами) и их комбинациями.
Твердые дозированные формы для перорального введения, такие как таблетки или капсулы, содержащие соединения настоящего изобретения, можно вводить по меньшей мере в одной дозированной форме за один раз в зависимости от ситуации. Соединения также можно вводить в составах с замедленным высвобождением.
Дополнительные пероральные формы, в которых можно вводить соединения, обладающие признаками изобретения, включают эликсиры, растворы, сиропы и суспензии; где каждое из них необязательно содержит ароматизаторы и красители.
В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) можно вводить путем ингаляции (интратрахеальной или интраназальной) или в форме суппозитория или пессария, либо их можно наносить местно в форме лосьона, раствора, крема, мази или присыпки. Например, их можно вносить в крем, который содержит водную эмульсию полиэтиленгликолей или жидкого парафина, состоит и/или по существу состоит из них. При необходимости в концентрации от около 1% масс, до около 10% масс. крема их также можно включать в состав мази, содержащей воск или полутвердый парафин в качестве основы вместе с любыми стабилизаторами и консервантами, состоящей из и/или по существу состоящей из них. Альтернативный способ введения включает трансдермальное введение с использованием накожного или трансдермального пластыря.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения (а также соединения настоящего изобретения по отдельности) можно также вводить парентерально в виде инъекций, например, путем внутрикавернозного, внутривенного, внутримышечного, подкожного, внутрикожного или интратекального введения. В этом случае композиции будут также включать по меньшей мере один приемлемый носитель, приемлемый эксципиент и приемлемый разбавитель.
Для парентерального введения фармацевтические композиции настоящего изобретения лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например соли и моносахариды, в достаточном количестве для получения раствора, изотоничного крови.
Oncotarget,
Clinical Cancer Research,
В дополнение к описанным выше способам введения для лечения рака фармацевтические композиции могут быть получены с возможностью введения посредством внутриопухолевой или околоопухолевой инъекции. Подобная активация иммунной системы для уничтожения опухолей на удаленном сайте обычно называется абскопальным эффектом, и он был продемонстрирован на животных с использованием множества способов лечения (van der Jeught, et al.,  2015, 6(3), 1359-1381). Дополнительное преимущество местного, или внутриопухолевого, или околоопухолевого введения заключается в возможности получения эквивалентной эффективности при гораздо более низких дозах и сведения таким образом к минимуму или устранения нежелательных явлений, которые могут наблюдаться при гораздо более высоких дозах (Marabeile, A., et al., 2014, 20(7), 1747-1756).
Для трансбуккального или сублингвального введения фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить в форме таблеток или пастилок, которые можно получать традиционным способом.
В качестве дополнительного примера фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно из соединений формулы (I), можно получать путем смешивания соединения (-ий) с фармацевтически приемлемым носителем, фармацевтически приемлемым разбавителем и/или фармацевтически приемлемым эксципиентом в соответствии с традиционными фармацевтическими методами смешивания. Носитель, эксципиент и разбавитель могут принимать широкое разнообразие форм в зависимости от желаемого способа введения (например, перорального, парентерального и т. п.). Таким образом, для жидких пероральных препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы, приемлемые носители, эксципиенты и разбавители включают воду, гликоли, масла, спирты, вкусоароматические агенты, консерванты, стабилизаторы, красители и т. п.; для твердых пероральных препаратов, таких как порошки, капсулы и таблетки, приемлемые носители, эксципиенты и разбавители включают крахмалы, сахара, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т. п. Твердые пероральные препараты могут также быть необязательно покрыты веществами, такими как сахар, или энтеросолюбильным покрытием так, чтобы модулировать основной участок абсорбции и дезинтеграции. Для парентерального введения носитель, эксципиент и разбавитель, как правило, включают стерильную воду, а также для улучшения растворимости и консервирования композиции можно добавлять другие ингредиенты. Суспензии или растворы для инъекций можно также получать с использованием водных носителей вместе с соответствующими добавками, такими как солюбилизаторы и консерванты.
Терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтической композиции включает диапазон дозировок от около 0,01 мг до около 3000 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне, в частности от около 0,05 мг до около 1000 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне, или более конкретно от около 0,05 мг до около 250 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне активного компонента при схеме приема от около 1 до около 4 раз в сутки для среднего человека (70 кг); хотя специалисту в данной области будет очевидно, что терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) изменяется в зависимости от заболеваний, синдромов, состояний и расстройств, лечение которых проводится.
Для перорального введения фармацевтическая композиция предпочтительно предложена в форме таблеток, содержащих около 1,0, около 10, около 50, около 100, около 150, около 200, около 250 и около 500 миллиграммов соединения формулы (I).
Преимуществом является то, что соединение формулы (I) можно вводить в однократной суточной дозе или что суточную дозу можно разделять на два, три или четыре приема в сутки.
Оптимальные дозировки вводимого соединения формулы (I) можно легко определять и варьировать в зависимости от конкретного используемого соединения, способа введения, эффективности препарата и прогрессирования вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства. Кроме того, из-за факторов, связанных с конкретным пациентом, получающим лечение, включая пол пациента, возраст, массу, рацион питания и время введения, возникает необходимость корректировки дозы для достижения необходимого терапевтического уровня и желаемого терапевтического эффекта. Следовательно, приведенные выше дозы представляют собой примеры для среднего случая. Разумеется, могут существовать отдельные случаи, в которых требуется применение большего или меньшего диапазона доз, и такие случаи входят в объем настоящего изобретения.
Соединения формулы (I) можно вводить в форме любой из описанных выше композиций и в соответствии с любой из описанных выше схем дозирования, либо с использованием любых общепринятых в данной области композиций и схем дозирования в любых случаях, когда пациент нуждается в применении соединения формулы (I).
Как агонисты белка STING, соединения формулы (I) можно использовать в способах лечения или профилактики вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства у субъекта, в том числе животного, млекопитающего и человека, у которых на вирусную инфекцию, заболевание, синдром, состояние или расстройство влияет модуляция, включая агонизм, белка STING. Такие способы включают введение (состоят и/или по существу состоят из введения) нуждающемуся в лечении или профилактике субъекту, включая животное, млекопитающее и человека, терапевтически эффективного количества соединения, соли или сольвата формулы (I).
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме для применения в лечении рака, а также раковых заболеваний и состояний или вирусной инфекции.
К примерам раковых заболеваний и состояний, при которых соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты могут оказывать потенциально положительные противоопухолевые эффекты, относятся, без ограничений, рак легкого, кости, поджелудочной железы, кожи, головы, шеи, матки, яичника, желудка, толстой кишки, молочной железы, пищевода, тонкого кишечника, кишечника, эндокринной системы, щитовидной железы, паращитовидной железы, надпочечника, уретры, предстательной железы, пениса, яичек, мочеиспускательного канала, мочевого пузыря, почки или печени; рак прямой кишки; рак анальной области; карциномы фаллопиевых труб, эндометрия, шейки матки, влагалища, вульвы, почечной лоханки, почечно-клеточный рак; саркома мягких тканей; миксома; рабдомиома; фиброма; липома; тератома; холангиокарцинома; гепатобластома; ангиосаркома; гемагрома; гепатома; фибросаркома; хондросаркома; миелома; хронический или острый лейкоз; лимфоцитозная лимфома; первичная лимфома центральной нервной системы; новообразования ЦНС; опухоли оси позвоночника; плоскоклеточные карциномы; синовиальная саркома; злокачественные плевральные мезотелиомы; глиома ствола головного мозга; аденома гипофиза; бронхиальная аденома; хондроматозная ханлартома; инезотелиома; болезнь Ходжкина или комбинация одного или более из перечисленных выше видов рака. Соответственно настоящее изобретение относится к способу лечения или уменьшения тяжести раковых заболеваний, выбранных из группы, состоящей из рака головного мозга (глиом), глиобластом, астроцитом, мультиформной глиобластомы, синдрома Банаяна - Зонана, болезни Каудена, болезни Лермитта - Дюкло, опухоли Вильма, саркомы Юинга, рабдомиосаркомы, эпендимомы, медуллобластомы, рака головы и шеи, рака почек, рака печени, меланомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, аденокарциномы, дуктальной маденокарциномы, аденосквамозной карциномы, карциномы ацинарных клеток, глюкагономы, инсулиномы, рака предстательной железы, саркомы, остеосаркомы, гигантоклеточной опухоли кости, рака щитовидной железы, лимфобластного Т-клеточного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лейкоза ворсистых клеток, острого лимфобластного лейкоза, острого миелогенного лейкоза, хронического нейтрофильного лейкоза, острого лимфобластного Т-клеточного лейкоза, плазмацитомы, иммунобластного крупноклеточного лейкоза, мантийноклеточного лейкоза, множественной миеломы, мегакариобластного лейкоза, множественной миеломы, острого мегакариоцитарного лейкоза, промиелоцитарного лейкоза, эритролейкоза, злокачественной лимфомы, ходжкиновской лимфомы, неходжкиновской лимфомы, лимфобластной Т-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта, фолликулярной лимфомы, нейробластомы, рака мочевого пузыря, рака уротелия, рака вульвы, рака шейки матки, рака эндометрия, рака почек, мезотелиомы, рака пищевода, рака слюнной железы, гепатоцеллюлярного рака, рака желудка, носоглоточного рака, рака щек, рака ротовой полости, GIST (желудочно-кишечная стромальная опухоль) и рака яичек.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме для применения при лечении расстройства, на которое оказывает влияние агонист STING, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.
Описанные соединение формулы (I) можно использовать в комбинации с одним или более дополнительными соединениями, используемыми для лечения инфекции ВГВ. Эти дополнительные соединения могут содержать другие описанные соединения и/или соединения, с помощью которых, как известно, можно лечить, предотвращать или уменьшать симптомы или эффекты инфекции ВГВ. Такие соединения включают, без ограничений, ингибиторы полимеразы ВГВ, интерфероны, ингибиторы проникновения вируса в клетку, ингибиторы созревания вируса, описанные в литературе модуляторы сборки капсида, ингибиторы обратной транскриптазы, иммуномодулирующие агенты, агонисты TLR и другие агенты с другими или неизвестными механизмами действия, которые влияют на жизненный цикл ВГВ или влияют на последствия инфекции ВГВ.
В не имеющих ограничительного характера примерах описанные соединения можно применять в комбинации с одним или более лекарственными средствами (или их солью), выбранными из группы, состоящей из:
ингибиторов обратной транскриптазы ВГВ и ингибиторов ДНК- и РНК-полимеразы, включая, без ограничений, ламивудин (3TC, Zeffix, Heptovir, Epivir и Epivir-HBV), энтекавир (Baraclude, Entavir), адефовир дипивоксил (Hepsara, Preveon, bis-POM PMEA), тенофовира дизопроксил фумарат (Viread, TDF или PMPA);
интерферонов, включая, без ограничений, интерферон-альфа (ИФН-α), интерферон-бета (ИФН-β), интерферон-лямбда (ИФН-λ) и интерферон-гамма (ИФН-γ);
ингибиторов проникновения вируса в клетку;
ингибиторов созревания вируса;
модуляторов сборки капсида, таких как, без ограничений, BAY 41-4109;
ингибиторов обратной транскриптазы;
иммуномодулирующих агентов, таких как агонисты TLR; и
агентов с другими или неизвестными механизмами, таких как, без ограничений, AT-61 ((E)-N-(1-хлор-3-оксо-1-фенил-3-(пиперидин-1-ил)проп-1-ен-2-ил)бензамид), AT-130 ((E)-N-(1-бром-1-(2-метоксифенил)-3-оксо-3-(пиперидин-1-ил)проп-1-ен-2-ил)-4-нитробензамид) и аналогов, представленные в настоящем документе.
В одном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон. Термин «интерферон» или ИФН относится к любому члену семейства высокогомологичных видоспецифичных белков, ингибирующих репликацию вируса и клеточную пролиферацию и модулирующих иммунный ответ. Например, человеческие интерфероны сгруппированы в три класса: тип I, который включает интерферон-альфа (ИФН-α), интерферон-бета (ИФН-β) и интерферон-омега (ИФН-ω); тип II, который включает интерферон-гамма (ИФН-γ); и тип III, который включает интерферон-лямбда (ИФН-λ). В настоящем документе термин «интерферон» включает рекомбинантные формы интерферонов, которые были разработаны и доступны на рынке. В настоящем документе термин «интерферон» также включает подтипы интерферонов, такие как химически модифицированные или мутировавшие интерфероны. Химически модифицированные интерфероны могут включать пегилированные интерфероны и гликозилированные интерфероны. Примеры интерферонов также включают, без ограничений, интерферон-альфа-2a, интерферон-альфа-2b, интерферон-альфа-n1, интерферон-бета-1a, интерферон-бета-1b, интерферон-лямбда-1, интерферон-лямбда-2 и интерферон-лямбда-3. Примеры пегилированных интерферонов включают пегилированный интерферон-альфа-2a и пегилированный интерферон-альфа-2b.
Соответственно, в одном варианте осуществления соединения формулы I можно вводить в комбинации с интерфероном, выбранным из группы, состоящей из интерферона-альфа (ИФН-α), интерферона-бета (ИФН-β), интерферона-лямбда (ИФН-λ) и интерферона-гамма (ИФН-γ). В одном конкретном варианте осуществления интерферон представляет собой интерферон-альфа-2a, интерферон-альфа-2b или интерферон-альфа-n1. В другом конкретном варианте осуществления интерферон-альфа-2a или интерферон-альфа-2b пегилированы. В предпочтительном варианте осуществления интерферон-альфа-2a представляет собой пегилированный интерферон-альфа-2a (PEGASYS). В другом варианте осуществления дополнительный терапевтический агент выбран из терапевтической группы иммуномодуляторов или иммуностимуляторов, которая включает биологические агенты, принадлежащие к классу интерферонов.
Кроме того, дополнительный терапевтический агент может представлять собой агент, который нарушает функцию другого (-их) основного (-ых) вирусного (-ых) белка (-ов) или белков хозяина, требуемых для репликации или персистенции ВГВ.
В другом варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой противовирусный агент, который блокирует проникновение в клетку или созревание вируса или воздействует на полимеразу ВГВ, такой как нуклеозидные или нуклеотидные или ненуклеоз(т)идные ингибиторы полимеразы. В дополнительном варианте осуществления комбинированной терапии ингибитор обратной транскриптазы или ингибитор ДНК- или РНК-полимеразы представляет собой зидовудин, диданозин, залцитабин, диданозин (ddA), ставудин, ламивудин, абакавир, эмтрицитабин, энтекавир, априцитабин, атевирапин, рибавирин, ацикловир, фамцикловир, валацикловир, ганцикловир, валганцикловир, тенофовир, адефовир, 9-(2-фосфонилметоксипропил)аденин (PMPA), цидофовир, эфавиренз, невирапин, делавирдин или этравирин.
В варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой иммуномодулирующий агент, индуцирующий естественный ограниченный иммунный ответ, способствующий индукции иммунных ответов против неродственных вирусов. Другими словами, иммуномодулирующий агент способен вызывать созревание антигенпредставляющих клеток, пролиферацию Т-клеток и высвобождение цитокинов (например, среди прочих, IL-12, IL-18, ИФН-альфа, -бета и -гамма и ФНО-альфа).
В дополнительном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой модулятор TLR или агонист TLR, такой как агонист TLR-7 или агонист TLR-9. В дополнительном варианте осуществления комбинированной терапии агонист TLR-7 выбран из группы, состоящей из SM360320 (9-бензил-8-гидрокси-2-(2-метокси-этокси)аденина) и AZD 8848 (метил-[3-({[3-(6-амино-2-бутокси-8-оксо-7,8-дигидро-9H-пурин-9-ил)пропил][3-(4-морфолинил)пропил]амино}метил)фенил]ацетата).
В любом из способов, предложенных в настоящем документе, способ может дополнительно включать введение субъекту по меньшей мере одной вакцины против ВГВ, ингибитора нуклеозида ВГВ, интерферона или любой их комбинации. В варианте осуществления вакцина против ВГВ представляет собой по меньшей мере одно из RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B или SHANVAC B.
В одном варианте осуществления способы, описанные в настоящем документе, дополнительно включают введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, выбранного из группы, состоящей из аналогов нуклеотида/нуклеозида, ингибиторов проникновения, ингибиторов слияния и любой комбинации этих или других противовирусных механизмов.
В другом аспекте в настоящем документе предложен способ лечения инфекции ВГВ у нуждающегося в этом субъекта, включающий снижение вирусной нагрузки ВГВ посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества описанного соединения в виде монотерапии или в комбинации с ингибитором обратной транскриптазы и дополнительного введения субъекту терапевтически эффективного количества вакцины против ВГВ. Ингибитор обратной транскриптазы может представлять собой по меньшей мере один из зидовудина, диданозина, залцитабина, ddA, ставудина, ламивудина, абакавира, эмтрицитабина, энтекавира, априцитабина, атевирапина, рибавирина, ацикловира, фамцикловира, валацикловира, ганцикловира, валганцикловира, тенофовира, адефовира, PMPA, цидофовира, эфавиренза, невирапина, делавирдина или этравирина.
В другом аспекте в настоящем документе предложен способ лечения инфекции ВГВ у нуждающегося в этом субъекта, включающий снижение вирусной нагрузки ВГВ посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества описанного соединения в виде монотерапии или в комбинации с антисмысловым олигонуклеотидом или РНК-интерферирующим агентом, нацеленным на нуклеиновые кислоты ВГВ; и дополнительного введения субъекту терапевтически эффективного количества вакцины против ВГВ. Антисмысловой олигонуклеотид или РНК-интерферирующий агент обладает достаточной комплементарностью к целевым нуклеиновым кислотам ВГВ, чтобы ингибировать репликацию вирусного генома, транскрипцию вирусных РНК или трансляцию вирусных белков.
макс
В другом варианте осуществления описанное соединение и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент относятся к одному составу. В еще одном варианте осуществления описанное соединение и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент вводят совместно. Для любой комбинированной терапии, описанной в настоящем документе, синергетический эффект может быть рассчитан, например, с применением приемлемых способов, таких как уравнение Sigmoid-E (Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453), уравнение аддитивности Лоэва (Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326) и уравнение медианного эффекта (Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Каждое из упомянутых выше уравнений можно применять для обработки экспериментальных данных для построения соответствующего графика, с помощью которого можно оценивать эффекты комбинации лекарственных средств. К соответствующим графикам, связанным с упомянутыми выше уравнениями, относятся кривая зависимости эффекта от концентрации, изоболограмма и кривая показателей аддитивности соответственно.
В варианте осуществления любого из способов введения комбинированных терапий, предложенных в настоящем изобретении, способ может дополнительно включать контроль или обнаружение вирусной нагрузки ВГВ у пациента, где способ осуществляют в течение периода времени, включающий период времени до момента, пока вирус ВГВ не перестанет обнаруживаться.
Описанные соединение формулы (I) можно использовать в комбинации с одним или более дополнительными соединениями, используемыми для лечения рака. Эти дополнительные соединения могут содержать другие описанные соединения или соединения, с помощью которых, как известно, можно лечить, предотвращать или уменьшать симптомы или эффекты указанного рака.
В одном варианте осуществления нацеливание на STING активационных или ингибирующих агентов может представлять собой перспективный подход для лечения заболеваний и состояний, при которых полезной является модуляция пути ИФН типа I, включая воспалительные, аллергические и аутоиммунные заболевания, инфекционные заболевания, рак, предраковые синдромы, а также возможно применение в качестве адъювантов вакцин (Dubensky et al., Therapeutic Advances in Vaccines 1(2013)131-143).
В одном варианте осуществления соединения настоящего изобретения можно использовать в качестве адъювантов в терапевтической стратегии, в которой используются противораковые вакцины. В варианте осуществления противораковая вакцина включает инактивированные или ослабленные бактерии или вирусы, содержащие интересующие антигены, очищенные антигены, живые вирусные доставочные векторы, сконструированные для экспрессии и секреции интересующего антигена. Доставочные векторы могут также включать в себя ослабленные бактериальные доставочные векторы, экспрессирующие антигены.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения включает способ лечения или уменьшения тяжести раковых заболеваний путем активации иммунной системы с помощью противораковой вакцины, включая, без ограничений, антигенные вакцины, цельноклеточные вакцины, вакцины для активации дендритных клеток, ДНК-вакцины, вакцины на основе бациллы Кальметта - Герена (БЦЖ), Sipuleucel-T (Provenge), талимоген лагерпарепвек (T-Vec; Imlygic™), вакцины на основе онколитического вируса и вакцины на основе аденовируса.
Антигены и адъюванты, которые можно использовать в комбинации с соединениями общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солевыми формами, включают костимуляторную молекулу B7, интерлейкин-2, интерферон-y, GM-CSF, антагонисты CTLA-4, OX-40/лиганд OX-40, CD40/лиганд CD40, сарграмостим, левамизол, вирус осповакцины, бацилла Кальметта - Герена (БЦЖ), липосомы, квасцы, полный или неполный адъювант Фрейнда, детоксифицированные эндотоксины, минеральные масла, поверхностно-активные вещества, такие как липолецитин, полиолы-плюроники, полианионы, пептиды и масляные или углеводородные эмульсии. Можно добавлять адъюванты, такие как гидроксид алюминия или фосфат алюминия, для повышения способности вакцины инициировать, усиливать или продлевать иммунный ответ. Дополнительные материалы, такие как цитокины, хемокины и бактериальные нуклеотидные последовательности, такие как CpG, агонист толл-подобного рецептора (TLR) 9, а также дополнительные агонисты TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9, включая липопротеин, LPS, монофосфориллипид A, липотейхоевая кислота, имиквимод, ресиквимод и дополнительно агонисты индуцируемого ретиноевой кислотой гена I (RIG-I), такие как poly I:C, используемые отдельно или в комбинации с нужными композициями, также представляют собой потенциальные адъюванты.
Пути CTLA-4 и PD-I представляют собой важные отрицательные регуляторы иммунного ответа. В активированных T-клетках увеличивается экспрессия CTLA-4, связывающегося с антигенпредставляющими клетками и ингибирующего стимуляцию T-клеток, экспрессию гена IL-2 и пролиферацию T-клеток; эти противоопухолевые эффекты наблюдались в мышиных моделях карциномы толстой кишки, метастатического рака предстательной железы и метастатической меланомы. Молекула PD-1 связывается с активными T-клетками и подавляет T-клеточную активацию; у антагонистов PD-1 также были отмечены противоопухолевые эффекты.
К антагонистам CTLA-4 и PD-1, которые можно применять в комбинации с соединениями формулы (I) или формулы (Ia) или их фармацевтически приемлемыми солевыми формами, описанными в настоящем документе, включают ипилимумаб, тремелимумаб, ниволумаб, пембролизумаб, CT-OII, AMP-224, и MDX-II06.
«Антагонист PD-1» или «антагонист пути PD-1» означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, которая блокирует связывание PD-L1, экспрессируемого на раковой клетке, с PD-1, экспрессируемой на иммунной клетке (T-клетке, B-клетке или NKT-клетке), и предпочтительно также блокирует связывание PD-L2, экспрессируемого на раковой клетке, с экспрессированной на иммунной клетке PD-1. Альтернативные названия или синонимы PD-1 и его лигандов включают: PDCD I, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCDILI, PDL1, B7HI, B7-4, CD274 и B7-H для PD-L1; и PDCD IL2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. В любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего описания, в которых рассматривается человеческий индивидуум, антагонист PD-1 блокирует связывание человеческого PD-L1 с человеческим PD-1, и предпочтительно блокирует связывание как человеческого PD-L1, так и PD-L2 с человеческим PD-1. Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в локусе NCBI №: NP_005009. Аминокислотные последовательности человеческого PD-L1 и PD-2 можно найти в локусе NCBI №: NP_054862 и NP_0795 I5 соответственно.
Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в локусе NCBI №: NP_305009. Аминокислотные последовательности PD-L1 и PD-L2 можно найти в локусе NCBI №: NP_054862 и NP_1795 I5 соответственно.
Антагонисты PD-1, используемые в любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантах применения настоящего описания, включают моноклональное антитело (mAb) или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связывается с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1. mAb может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело, и может включать в себя человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область выбрана из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а в предпочтительных вариантах осуществления человеческая константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab’-SH, F(ab’)2, scFv и Fv-фрагментов.
Примеры mAb, связывающиеся с человеческим PD-L1 и используемые в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, описаны в международных заявках на патент PCT № W02013/019906 и W02010/077634 A1 и в патенте США № US8383796. К специфическим mAb к человеческому PD-L1, используемым в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, относятся MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C и антитело, которое содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепей SEQ ID N0:24 и SEQ ID N0:21 соответственно, из публикации W02013/019906.
К другим антагонистам PD-1, используемым в любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантах применения настоящего описания, относятся иммуно-адгезионные молекулы, которые специфически связываются с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связываются с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1, например гибридный белок, содержащий внеклеточный или PD-1-связывающий участок PD-L1 или PD-L2, слитый с константной областью молекулы иммуноглобулина. Примеры иммуно-адгезионных молекул, которые специфически связываются с PD-1, описаны в опубликованных международных заявках на патенты PCT № W02010/027827 и W02011/066342. Специфические гибридные белки, используемые в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, включают в себя AMP-224 (также известный как B7-DCig), который представляет собой гибридный белок PD-L2-FC и связывается с человеческим PD-1.
Примеры цитотоксических агентов, которые можно использовать в комбинации с соединениями общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солями, включают, без ограничений, триоксид мышьяка (продаваемый под торговым названием TRISENox), аспарагиназу (также известную как L аспарагиназа и Erwinia L-аспарагиназа, продаваемая под торговыми марками ELSPAR и KIDROLASE).
К химиотерапевтическим препаратам, которые можно применять в комбинации с соединениями формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солями, описанными в настоящем документе, относятся: ацетат абиратерона, алтретамин, ангидровинбластин, ауристатин, бексаротен, бикалутамид, BMS 184476, сульфонамид 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил)бензола, блеомицин, N, N-диметил-L-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-1-L-пролин-трет-бутиламид, кахектин, цемадотин, хлорамбуцил, циклофосфамид, 3',4'-дидегидро-4'деокси-8'-норвин-калейкобластин, доцетаксол, доксетаксел, циклофосфамид, карбоплатин, кармустин, цисплатин, криптофицин, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин (DTIC), дактиномицин, даунорубицин децитабин, доластатин, доксорубицин (адриамицин), этопозид, 5-фторурацил, финастерид, флутамид, гидроксимочевина и гидроксимочевина и таксаны, ифосфамид, лиарозол, лонидамин, ломустин (CCNU), MDV3100, мехлоретамин (азотистый иприт), мелфалан, изетионат мивобутила, ризоксин, сертенеф, стрептозоцин, митомицин, метотрексат, таксаны, нилутамид, ниволумаб, онапристон, паклитаксел, пембролизумаб, преднимустин, прокарбазин, RPR109881, фосфат страмустина, тамоксифен, тасонермин, таксол, третиноин, винбластин, винкристин, виндезин сульфат и винфлунин.
Примеры ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) включают, без ограничений, бевацизумаб (продаваемый под торговым знаком AVASTIN), акситиниб (описанный в международной патентной публикации PCI № WO01/002369), бриваниб аланинат ((S)-((R)-1-(4-(4-фтор-2-метил-1H-индол-5-илокси)-5-метилпирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-илокси)пропан-2-ил)2-аминопропаноат, также известный как BMS-582664), мотесаниб (N-(2,3-дигидро-3,3-диметил-1H-индол-6-ил)-2-[(4-пиридинилметил)амино]-3-пиридинкарбоксамид и описанный в опубликованной заявке на международный патент PCT № WO02/068470), пасиреотид (также известный как SO 230 и описанный в опубликованной заявке на международный патент PCT № WO02/010192), и сорафениб (продаваемый под торговым наименованием NEXAVAR).
Примеры ингибиторов топоизомеразы II включают, без ограничений, этопозид (также известный как VP-16 и фосфат этопозида, продаваемый под торговыми наименованиями TOPOSAR, VEPESID и ETOPOPHOS) и тенипозид (также известный как VM 26, продаваемый под торговым наименованием VUMON).
Примеры алкилирующих агентов включают, без ограничений, 5-азацитидин (продаваемый под торговым наименованием VIDAZA), децитабин (продаваемый под торговым наименованием DACOGEN), темозоломид (продаваемый под торговыми наименованиями TEMCAD, TEMODAR и TEMODAL), дактиномицин (также известный как актиномицин-D и продаваемый под торговым наименованием COSMEGEN), мелфалан (также известный как L-PAM, L-сарколизин и фенилаланин-иприт, продаваемый под торговым наименованием ALKERAN), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM), продаваемый под торговым наименованием HEXALEN), кармустин (продаваемый под торговым наименованием BCNU), бендамустин (продаваемый под торговым наименованием TREANDA), бусульфан (продаваемый под торговыми наименованиями BUSULFEx и MYLERAN), карбоплатин (продаваемый под торговым наименованием PARAPLATIN), ломустин (также известный как CCNU, продаваемый под торговым наименованием CEENU), цисплатин (также известный как CDDP, продаваемый под торговыми наименованиями PLATINOL и PLATINOL-AQ), хлорамбуцил (продаваемый под торговым наименованием LEUKERAN), циклофосфамид (продаваемый под торговыми наименованиями CYTOXAN и NEOSAR), дакарбазин (также известный как DTIC, DIC и карбоксамид имидазола, продаваемый под торговым наименованием DTI C-DoME), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM) продаваемый под торговым наименованием HEXALEN), ифосфамид (продаваемый под торговым наименованием IFEx), прокарбазин (продаваемый под торговым наименованием MATULANE), мехлоретамин (также известный как азотистый иприт, мустин и гидрохлорид мехлорэтамина, продаваемый под торговым наименованием MUSTARGEN), стрептозоцин (продаваемый под торговым наименованием ZANOSAR), тиотепа (также известный как тиофосфамид, TESPA и TSPA и продаваемый под торговым наименованием THIORLEx.
Примеры антиопухолевых антибиотиков включают, без ограничений, доксорубицин (продаваемый под торговым названием ADRIAMYCIN и RUBEx), блеомицин (продаваемый под торговым наименованием LENOXANE), даунорубицин (также известный как гидрохлорид даунорубицина, дауномицин и гидрохлорид рубидомицина, продаваемый под торговым наименованием CERUBIDINE), даунорубицин липосомальный (липосомы цитрата даунорубицина, продаваемого под торговым наименованием DAUNOXoME), митоксантрон (также известный как DHAD, продаваемый под торговым наименованием NOVANIRONE), эпирубицин (продаваемый под торговым наименованием ELLENCE™), идарубицин (продаваемый под торговыми наименованиями EDAMYCIN, EDAMYCIN PFS) и митомицин C (продаваемый под торговым наименованием MUTAMYCIN).
К примерам антиметаболических препаратов относятся, без ограничений, кларибин (2-хлордезоксиаденозин, продаваемый под торговым наименованием LEUSTATIN), 5-фторурацил (продаваемый под торговым наименованием ADRUCIL), 6-тиогуанин (продаваемый под торговым наименованием PURINETHOL), пеметрексед (продаваемый под торговым наименованием ALIMTA), цитарабин (также известный как арабинозилцитозин (Ara-C), продаваемый под торговым наименованием CYTOSAR-U), цитарабин липосомальный (также известный как липосомальный Ara-C, продаваемый под торговым наименованием DEPOCYT™), децилабин (продаваемый под торговым наименованием DACOGEN), гидроксимочевина (продаваемая под торговыми наименованиями HYDREA, DROXIATM и MYLOCEL™), флударабин (продаваемый под торговым наименованием FLUDARA), флоксуридин (продаваемый под торговым наименованием FUDR), кладрибин (также известный как 2-хлордезоксиаденозин (2-CdA), продаваемый под торговым наименованием LEUSTATIN™), метотрексат (также известный как аметоптерин, метотрексат натрия (MTX), продаваемый под торговыми наименованиями RHEUMATREX и TREXALL™) и пентостатин (продаваемый под торговым наименованием NIPENT).
К примерам ретиноидов относятся, без ограничений, алетретиноин (продаваемый под торговым наименованием PANRETIN), третиноин (полностью транс-ретиноевая кислота, также известный как ATRA, продаваемый под торговым наименованием VESANom), изотретиноин (13-c/s-ретиноевая кислота, продаваемая под торговыми наименованиями ACCUTANE, AMNESTEEM, CLARAvis, CLARus, DECUTAN, ISOTANE, IzoTEcH, ORATANE, ISOTRET и SOTRET) и бексаротен (продаваемый под торговым наименованием TARGRETIN).
В настоящем описании, в частности в схемах и примерах, используют следующие сокращения:
ACN - ацетонитрил;
AcOH - ледяная уксусная кислота;
ADDP - азодикарбоновый дипиперидид;
водн. - водный;
Ar. - аргон;
Bn или Bzl - бензил;
Bz - бензоил;
BINAP - 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил;
Boc - трет-бутилоксикарбонил;
3
CHCN - ацетонитрил;
конц. - концентрированный;
CV - объем колонки;
dba - дибензилиденацетон;
DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен;
DCA - дихлоруксусная кислота;
N, N
DCC - '-дициклогексилкарбодиимид;
DCE - 1,2-дихлорэтан;
DCM - дихлорметан;
DDTT - 3-[(диметиламинометилен)амино]-3H-1,2,4-дитиазол-5-тион;
DEAD - диэтилазодикарбоксилат;
DIBAL - гидрид диизобутилалюминия;
DIPEA или DIEA - диизопропилэтиламин;
DMA - диметиланилин;
DMAP - 4-диметиламинопиридин;
DME - диметоксиэтан;
N, N
DMF - -диметилформамид;
DMP - периодинан Десса - Мартина;
DMSO - диметилсульфоксид;
DMTr - 4,4’-диметокситритил;
DPPA - дифенилфосфорилазид;
dppf - 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен;
EA - этилацетат;
EDCI - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид;
ИЭР - ионизация электрораспылением;
EtOAc или EA - этилацетат;
EtOH - этанол;
ГХМС - газовая хроматография с масс-спектрометрией;
ч - час или часы;
HEK - человеческий мезонефрос;
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;
LAH - алюмогидрид лития;
LDA - диизопропиламид лития;
LHMDS - бис(триметилсилил)амид лития;
Me - метил;
MEK - метилэтилкетон;
MeOH - метанол;
MeCN - ацетонитрил;
Мгц - мегагерц;
мин - минута или минуты;
MS - масс-спектрометрия или молекулярные сита;
Ms - метансульфонил;
N
NBS - -бромсукцинимид;
N
NIS - -йодосукцинимид;
N-
NMM - метилморфолин;
N
NMP - -метилпирролидон;
ЯМР - ядерный магнитный резонанс;
PADS - дисульфид фенилацетила;
PCC - хлорхромат пиридиния;
PE - петролейный простой эфир;
ОФ - обращенная фаза;
кт или КТ - комнатная температура;
1
R - время удержания;
с - секунда или секунды;
SEM-C1 - хлорид 2-(триметсилил)-этоксиметила;
TBAF - фторид тетрабутиламмония;
TBS или TBDMS - трет-бутилдиметилсилил;
TBP - фосфат трибутила;
3
TEA или EtN - триэтиламин;
TEAA - ацетат триэтиламмония;
TFA - трифторуксусная кислота;
THF - тетрагидрофуран;
TIPS - триизопропилсилил;
ТСХ - тонкослойная хроматография;
TMS - тетраметилсилан;
Ts - 4-толуолсульфонил.
Определенные соединения формулы (I) можно получать в соответствии с процессом, представленным ниже на схеме 1.
1
2
1
2
3
3
2
2
Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (II), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, силила трет-бутилдиметила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутилила или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромида углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (III). В альтернативном варианте осуществления соответственно замещенное соединение формулы (II), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п. в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (III).
Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (II), комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола, в приемлемом растворителе, таком как пиридин, DMF, или т. п.; при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30 °C, с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (III).
Соединение формулы (III) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (IV). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (III) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60 °C, с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (IV).
3
3
2
2
Соединение формулы (IV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50 °C, с получением соответствующего соединения формулы (VI).
3
4
3
2
3
2
3
3
2
2
Соединение формулы (VI) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (VII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбран из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбран из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (VIII).
1
3
Защитные группы PG и PG для спиртов в соединении формулы (VIII) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий, с получением соответствующего соединения формулы (IX).
2
2
Соединение формулы (IX) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором Rs представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, диоксан, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60 °C, с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XI).
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (XI) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS и т. п. или BH.SMe, комплекс BH.THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XII), где R представляет собой O, S или BH.
2
2
3
Из соединения формулы (XII) могут быть впоследствии удалены защитные группы с использованием щелочных условий, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-a).
В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 2.
Общая схема 2
1
4
1
4
Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XIII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., известное соединение, или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромистого углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XIV).
3
3
2
2
В альтернативном варианте осуществления соответственно замещенное соединение формулы (XIII), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно впоследствии дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XIV). Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (XIII) комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола в приемлемом растворителе, таком как пиридин, DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30 °C, с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XIV).
Соединение формулы (XIV) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XV). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XIV) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XV).
3
3
2
2
Соединение формулы (XV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XVI).
2
3
3
2
2
3
3
2
2
1
3
Соединение формулы (XVI) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XVII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, при этом PG может быть выбран из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение, или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtaN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XVIII). Защитные группы PG и PG для спирта в соединении формулы (XVIII) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XIX).
8
2
2
Соединение формулы (XIX) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R представляет собой галоген, диизопропиламино и т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XX).
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (XX) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS и т. п. или BH. SMe, комплекс BH·THF или т. п. в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXI), в котором R представляет собой O, S или BH.
2
2
3
Из соединения формулы (XXI) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-b).
В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 3.
Общая схема 3
1
4
1
4
Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XXII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с источником водорода в условиях, обеспечивающих гидрогенизацию, в присутствии соответственно выбранного катализатора или системы катализаторов, таких как Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXIII). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXII) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THE, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXIII).
3
3
2
2
Соединение формулы (XXIII) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THE, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXIV).
2
3
3
2
3
2
3
3
2
2
Соединение формулы (XXIV) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XXV), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXVI).
1
3
Защитные группы PG и PG для спирта в соединении формулы (XXVI) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии щелочных или кислотных условий, с получением соответствующего соединения формулы (XXVII).
8
2
2
Соединение формулы (XXVII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THE, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXVIII).
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (XXVIII) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH·SMe, комплекс BH·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXIX), в котором R представляет собой O, S или BH.
2
2
3
Из соединения формулы (XXIX) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-c).
В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 4.
Общая схема 4
1
2
1
2
Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XXX), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с источником водорода в условиях, обеспечивающих гидрогенизацию, в присутствии соответственно выбранного катализатора или системы катализаторов, таких как Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXI).
В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXX) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXXI).
3
3
2
2
Соединение формулы (XXXI) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXII).
3
4
3
2
3
2
3
3
2
2
Соединение формулы (XXXII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XXXIII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIV).
1
3
Защитные группы PG и PG для спирта в соединении формулы (XXXIV) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXV).
8
2
2
Соединение формулы (XXXV) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R представляет собой галоген, диизопропиламино и т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXXVI).
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (XXXVI) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH·SMe, комплекс BH·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXXVII), в котором R представляет собой O, S или BH.
2
2
3
Из соединения формулы (XXXVII) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-d).
Общая схема 5
3
1
2
3
4
1
3
2
4
1
Следовательно, защитная группа PG для спирта в соединении формулы (XVIII), в котором PG, PG, PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG и PG могут быть выбраны из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG и PG могут быть выбраны из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять в присутствии защитной группы PG для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий, с получением соответствующего соединения формулы (XXXVIII).
3
3
2
2
Соединение формулы (XXXVIII) может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромистого углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX). В альтернативном варианте осуществления, соответственно замещенное соединение формулы (XVIII), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX).
Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (XVIII) комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола в приемлемом растворителе, таком как пиридин или DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30°C с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX).
Соединение формулы (XXXIX) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc или т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXX). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXXIX) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXXX).
3
3
2
2
1
Соединение формулы (XXXX) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXI). Защитную группу PG для спирта в соединении формулы (XXXIV) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXII).
3
2
3
3
2
2
Соединение формулы (XXXXII) можно вводить в реакцию в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXIII).
2
2
3
Из соединения формулы (XXXXIII) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-e).
Общая схема 6
2
4
1
2
3
4
1
3
2
4
1
3
Следовательно, защитные группы PG и PG для спирта в соединении формулы (VIII), в котором PG, PG, PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG и PG могут быть выбраны из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG и PG могут быть выбраны из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять в присутствии защитных групп PG и PG для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXIV).
9
1-3
3
2
3
3
3
2
2
2
4
3
2
3
3
2
2
Соединение формулы (XXXXIV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (XXXXV), таким как йодметан или бромэтан, где R представляет собой необязательно замещенный C алкил или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как NaHCO, KCO, EtN, DIPEA или т. п., в выбранном соответственно растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, DMF и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVI). Защитные группы PG и PG впоследствии снова вводят в (XXXXVI), используя защитные группы, известные специалистам в данной области, выбранные из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA, DMAP, CsCO или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVII).
1
3
2
4
8
2
2
Защитные группы PG и PG для спирта в соединении формулы (XXXXVII) можно впоследствии выборочно отщеплять в присутствии защитных групп PG и PG способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVIII). Соединение формулы (XXXXVIII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60 °C, с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXXXIX).
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (XXXXIX) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH·SMe, комплекс BH·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (L), в котором R представляет собой O, S или BH.
2
2
3
Из соединения формулы (L) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH, tBuNH, гидроксид аммония, EtN·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-f).
В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) можно получать в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 7.
Схема 7
1
1
2
1
2
2
Следовательно, защитные группы PG для спирта в соединении формулы (III), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять при наличии защитных групп PG для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (L1).
1
4
1
4
8
2
2
Соединение формулы (XIII), в котором PG и PG представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии подходящего активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (LII).
2
2
3
2
3
3
2
2
4
3
Соединение формулы (LI) можно впоследствии вводить в реакцию с соединением формулы (LII) в присутствии или в отсутствие приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CHCl, THF, DMF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфита, который окисляют in situ окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH· SMe, комплексом BH· THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (LIII), где R представляет собой O, S или BH.
1
2
4
Защитную группу PG для спирта в соединении формулы (LIII) выборочно отщепляют в присутствии группы защиты спирта PG и PG способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (LIV).
Соединение формулы (LIV) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc или т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXX). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (LIV) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., а затем с водой при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (LV).
3
3
2
2
Соединение формулы (LV) может быть введено в реакцию с реагентом или известным реагентом, таким как хлорид сульфурила, 1,1’-сульфонилдиимидазол, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии или в отсутствие соответственно выбранного основания, такого как EtN, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl, CHCl, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XII).
Из соединения формулы (XII) могут быть впоследствии удалены защитные группы с использованием кислотных или щелочных условий или способами, хорошо известными специалистам в данной области, с получением соответствующего соединения формулы (I-a).
Конкретные примеры
Пример 1
1b
Стадия 1. Получение соединения
1a
1b
m/z
+
Соединение  (5,48 г, 14,7 ммоль, совместно выпаренное с безводным толуолом (2x)) растворяли в безводном DMF (87 мл). Добавляли трифенилфосфин (5,77 г, 22,0 ммоль), азид натрия (3,06 г, 47,1 ммоль), йодид тетрабутиламмония (1,08 г, 2,94 ммоль) и тетрабромистый углерод (7,30 г, 22,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи с последующим концентрированием при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде твердого порошка белого цвета (5,09 г, выход: 87%). ИЭР-МС:  399,0 [M+H].
1c
Стадия 2. Получение соединения
1b
2
4
1
+
m/z
Имидазол (0,51 г, 7,5 ммоль) и TBSCl (0,76 г, 5,0 ммоль) добавляли к раствору соединения (1,0 г, 2,5 ммоль) в DMF (15 мл), перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc, промывали объединенные органические слои солевым раствором, высушивали безводным NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 1c в виде белого твердого вещества (1,2 г, выход: 93%). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 0,18 (с, 6H), 0,95 (с, 9H), 3,52 (дд, J=13,6, 4,3 Гц, 1H), 3,78 (дд, J=13,6, 3,0 Гц, 1H), 4,25 (м, J=7,2, 3,5, 3,5 Гц, 1H), 4,85 (ддд, J=18,8, 7,5, 4,5 Гц, 1H), 5,53 (ддд, J=53,0, 4,5, 1,8 Гц, 1H), 6,24 (дд, J=18,2, 1,9 Гц, 1H), 7,50-7,58 (м, 2H), 7,59-7,67 (м, 1H), 7,99-8,08 (м, 2H), 8,23 (с, 1H), 8,80 (с, 1H), 9,04 (уш. с, 1H); ИЭР-МС:  513,1 [M+H].
1d
Стадия 3. Получение соединения
1c
1d
m/z
+
Раствор соединения  (1,15 г, 2,24 ммоль) в EtOAc (50 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 132 мг, 0,224 ммоль) в качестве катализатора. После захвата водорода катализатор удаляли фильтрацией и выпаривали фильтрат с получением соединения  (1,1 г) в виде белого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали в том виде на следующем шаге. ИЭР-МС:  509,1 [M+Na].
Стадия 4. Получение соединения 1e
1d
1e
1d
3
3
2
4
1
19
+
d)
J
J
J
J
J
J
m/z
Соединение  (710 мг, 1,16 ммоль), 4-нитрофенол (485 мг, 3,49 ммоль) и EtN (965 мкл, 6,98 ммоль) растворяли в DCM (30 мл) с последующим добавлением молекулярных сит калибра 4Å (500 мг). Полученную смесь охлаждали до -78°C с последующим добавлением хлорсульфата 4-нитрофенила (830 мг, 3,49 ммоль) в DCM (4 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч при -78 °C. Добавляли водный NaHCO, отделяли водный слой и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали над водным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (546 мг, чистота: 89%, выход: 56%, начиная от соединения ). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ- δ м. д. 0,17 (с, 3H), 0,18 (с, 3H), 0,96 (с, 9H), 3,64-3,75 (м, 2H), 4,43 (уш. с, 1H), 4,67-4,74 (м, 1H), 5,51 (дт, =51,8, 5,4 Гц, 1H), 6,14 (дд, J=13,1, 5,5 Гц, 1H), 7,41 (м, J=9,0 Гц, 2H), 7,56 (т, =7,8 Гц, 2H), 7,65 (т, =7,5 Гц, 1H), 8,05 (д, =7,3 Гц, 2H), 8,09 (с, 1H), 8,15 (м, =9,0 Гц, 2H), 8,54 (с, 1H), 8,99 (уш. с, 1H), 9,40 (уш. дд, =6,5, 2,5 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -207,51 (уш. с, 1 F); ИЭР-МС:  688,1 [M+H].
1f
Стадия 5. Получение соединения
1e
1f
3
1
19
+
d)
J
J
J
J
J
J=
J
J
J
J
J
J
Смесь соединения  (546 мг (чистота 92%), 0,73 ммоль), 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил]-D-гуанозин([103285-33-2], 753 мг (чистота 97%), 1,09 ммоль) и молекулярных сит 4Å (500 мг) в DCM (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч в азотной атмосфере. Добавляли EtN (503 мкл, 3,64 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения , которое использовали в таком виде на следующей стадии. H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ- δ м. д. 0,14 (с, 3H), 0,15 (с, 3H), 0,75 (д, =7,0 Гц, 3H), 0,89 (д, =6,8 Гц, 3H), 0,93 (с, 9H), 1,94 (спт, =6,8 Гц, 1H), 3,15 (дд, =10,9, 3,4 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,48-3,63 (м, 3H), 3,75 (с, 3H), 3,76 (с, 3H), 4,12-4,21 (м, 1H), 4,28 (т, =5,3 Гц, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 4,63-4,72 (м, 1H), 5,49 (дт, 52,0, 5,1 Гц, 1H), 5,75 (т, =4,8 Гц, 1H), 6,07 (д, =4,5 Гц, 1H), 6,12 (дд, J=13,4, 5,1 Гц, 1H), 6,79 (м, =8,4, 8,4 Гц, 4H), 7,15-7,22 (м, 1H), 7,25 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,34 (м, =8,3 Гц, 4H), 7,43-7,55 (м, 4H), 7,61 (т, =7,3 Гц, 1H), 7,72 (с, 1H), 8,08 (д, =8,3 Гц, 2H), 8,09 (с, 1H), 8,83 (с, 1H), 9,14 (м, J=8,3 Гц, 2H), 9,54 (уш. с, 1H), 12,06 (уш. с, 1H); F ЯМР (376 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -207,07 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z 1240,6 [M+Na].
1g
Стадия 6. Получение соединения
1f
1g
1f
2
3
2
4
3
6
2
1
19
+
d
m/z
К раствору неочищенного соединения  в MeCN (20 мл) добавляли 80% уксусную кислоту (20 мл, 279,5 ммоль) и триэтилсилан (2 мл, 12,5 ммоль), перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли EtOAc и водный NaCO, отделяли органический слой, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировала фильтрат при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в пиридине (10 мл), к которому добавляли триэтиламин (1,0 г, 10,0 ммоль) и EtN·3HF (807 мг, 5,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. С помощью последующего концентрирования при пониженном давлении получали неочищенный продукт, который очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Gemini C18, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 22-52% B в A в течение 11,2 мин; скорость потока: 22 мл/мин) с получением соединения  (выход: 27%, начиная от соединения ). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 1,11 (д, J=6,5 Гц, 6H), 2,75 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 3,11-3,24 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,51-3,59 (м, 1H), 3,59-3,69 (м, 1H), 3,95 (м, J=3,7 Гц, 1H), 4,09 (д, J=3,3 Гц, 1H), 4,17 (дд, J=4,9, 3,3 Гц, 1H), 4,57 (ддд, J=19,5, 7,3, 4,5 Гц, 1H), 5,22 (уш. с, 1H), 5,37 (т, J=5,5 Гц, 1H), 5,57 (ддд, J=52,5, 4,5, 2,4 Гц, 1H), 6,07 (д, J=6,5 Гц, 1H), 6,33 (дд, J=19,3, 2,2 Гц, 1H), 7,50-7,60 (м, 2H), 7,61-7,70 (м, 1H), 7,99-8,10 (м, 2H), 8,22 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,73 (с, 1H) (NH и OH при обмене с DO); F ЯМР (376 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ м. д. -205,32 (уш. с, 1F); ИЭР-МС:  802,2 [M+H]
1h
Стадия 7. Получение соединения
1g
1h
N, N,N',N'
m/z
2
2
2
3
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,12 ммоль) и 1H-тетразола (2,2 мл 0,45 M в MeCN, 0,93 ммоль) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (14 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 30 мин, после чего добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (70 мг, 0,23 ммоль) в MeCN (6 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли дополнительное количество тетразола (0,55 мл 0,45 M в MeCN, 0,25 ммоль) с последующим перемешиванием в течение еще 30 мин. Добавляли I (0,5 M в смеси 8 : 1 : 1 THF/пиридин/вода, 695 мкл, 0,357 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного NaSO и фильтровали, концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Gemini C18, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 20-50% B в A в течение 11,2 мин; скорость потока: 22 мл/мин) с получением соединения , которое использовали в таком виде на следующей стадии удаления защитных групп. ИЭР-МС:  917,4 [M+H].
соединения 1 (натриевая соль)
Стадия 8. Получение
1h
соединения 1 (натриевая соль)
1g
1
31
+
6
6
J
J
J
J
J
J
d
m/z
Раствор соединения  в смеси водного раствора аммония (25%, 9 мл) и EtOH (3 мл) перемешивали при 50°C в течение ночи. Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Syneri Polar-RP, 5 мкм, 100×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 0-25% B в A в течение 12 мин; скорость потока: 25 мл/мин) с получением соединения 1 в виде аммонийной соли. Соединение 1 превращали в натриевую соль элюированием колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с помощью водного раствора с получением 12,9 мг в виде белого твердого вещества после лиофилизации (выход: 13%, начиная от соединения ). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d, спектр записан при 80 °C) δ м. д. 3,31 (дд, =13,2. 2,2 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,60 (дд, =13,5, 3,6 Гц, 1H), 3,91-3,98 (м, 1H), 4,20 (д, =4,2 Гц, 1H), 4,23-4,28 (м, 1H), 4,28-4,31 (м, 1H), 4,31-4,37 (м, 1H), 5,22-5,34 (м, 1H), 5,43 (дд, =51,7, 4,4 Гц, 1H), 5,99 (д, =8,3 Гц, 1H), 6,19 (уш. с, 1H), 6,33 (д, =19,5 Гц, 1H), 6,58 (уш. с, 2H), 7,08 (с, 2H), 7,69 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 9,70 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 56,05 (с, 1P), 94,05 (уш. с, 1P); ИЭР-МС:  690,2 [M+H].
Пример 2
2a
Стадия 1. Получение соединения
1g
N, N,N',N'
N, N,N’,N’
m/z
3
4
+
Раствор соединения  (230 мг, 0,28 ммоль) и 1H-тетразола (1,67 мл 3-4% в MeCN) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (12 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 2 часов, после чего добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (78 мг, 0,26 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (8,6 мг, 0,03 ммоль), а затем перемешивали в течение еще 15 мин. Добавляли пиридин (15 мл) и дисульфид фенилацетила (PADS, 217 мг, 0,72 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 40 мин. После удаления молекулярных сит фильтрацией к реакционной смеси добавляли EtOAc с последующим тщательным промыванием солевым раствором и насыщенным водным NaHCO. Органическую фазу высушивали над безводным MgSO, фильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт использовали в таком виде на следующей стадии удаления защитных групп. ИЭР-МС:  933,2 [M+H].
соединения (*
R
) 2A (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
2a
соединения (*
R
) 2A
1
31
+
d
J
J
J
J
d
m/z
6
6
Неочищенное соединение перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (20 мл) при 50°C в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растворяли в воде, промывали EtOAc, лиофилизировали и очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование: 0-15% B в A в течение 29 мин, скорость потока: 30 мл/мин) с получением  в виде одного диастереомера. Превращение в натриевую соль выполняли как описано в примере 1, стадия 8 (23 мг, выход: 10%, начиная от соединения 1g). H ЯМР (400 МГц, DMSO-, спектр записан при 80 °C) δ м. д. 3,31-3,43 (м, 1H), 3,49 (с, 3H), 3,62-3,75 (м, 1H), 3,92-4,00 (м, 1H), 4,00-4,09 (м, 1H), 4,20 (уш. с, 1H), 4,31 (уш. с, 2H), 5,33-5,50 (м, 2H), 5,64 (уш. д, =52,0 Гц, 1H), 5,68 (дд, =8,7, 4,1 Гц, 1H), 6,03 (д, =8,6 Гц, 1H), 6,26 (с, 2H), 6,33 (д, =18,4 Гц, 1H), 7,07 (с, 2H), 7,88 (уш. с, 1H), 8,29 (уш. с, 2H), 8,66 (уш. с, 1H), 10,30 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 52,18 (с, 1P); ИЭР-МС: 706,0 [M+H].
Пример 3
3c
Стадия 1. Получение соединения
3b
2
К раствору соединения  (2,0 г, 4,99 ммоль, CAS № 153186-10-8) в пиридине (8 мл) медленно добавляли MsCl (1,14 г, 9,99 ммоль) при 0°C в атмосфере N; после перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (20 мл) и промывали водой (3×20 мл). Водную фазу отделяли и экстрагировали с помощью EtOAc (3×15 мл).
2
4
3c
Объединенные органические слои последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения  в виде желтого масла (3,1 г).
1
+
3
J
J
J
m/z
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 7,38-7,31 (м, 7H), 7,21-7,14 (м, 3H), 5,79 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,87 (д, =11,8 Гц, 1H), 4,74 (д, =12,0 Гц, 1H), 4,67-4,62 (м, 1H), 4,57-4,38 (м, 4H), 4,30 (д, =5,3 Гц, 1H), 3,63-3,58 (м, 1H), 3,53-3,48 (м, 1H), 3,63-3,47 (м, 1H), 3,07 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 1,71-1,67 (м, 3H), 1,35 (с, 3H); ИЭР-МС: =501,2 [M+Na].
3d
Стадия 2. Получение соединения
3c
3d
3
2
4
2
3
2
4
Раствор  (1,0 г, 2,1 ммоль) в 80% водном растворе трифторуксусной кислоты (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток растворяли в DCM (20 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO (2×20 мл). Органический слой последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла (876 мг). Масло совместно выпаривали с безводным пиридином (2×15 мл), растворяли в безводном пиридине (15 мл) и обрабатывали с помощью AcO (815,8 мг, 7,99 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 50°C реакционную смесь гасили водным насыщенным NaHCO (25 мл) и разделяли с EtOAc (2×20 мл). Органические слои объединяли, последовательно промывали солевым раствором (15 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc в петролейном эфире) с получением  в виде бесцветного сиропа (786 мг).
1
+
3
H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 7,42-7,18 (м, 12H), 6,38 (д, J=4,5 Гц, 1H), 6,15 (с, 1H), 5,36 (д, J=5,0 Гц, 1H), 5,30 (с, 1H), 5,17 (дд, J=4,8, 6,3 Гц, 1H), 2,99 (с, 3H), 2,96 (с, 1H), 2,19-2,10 (м, 4H), 2,06 (д, J=7,8 Гц, 1H), 1,90 (с, 3H). ИЭР-МС: m/z=545 [M+Na].
3f
Стадия 3. Получение соединения
3d
3f
3
3
2
4
2
2
3
1
+
К суспензии соединения  (200 мг, 0,38 ммоль) и 6-N-бензоиладенина (3e, 109,8 мг, 0,46 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (5 мл) добавляли бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 202,4 мг, 0,99 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждали до кт. Добавляли TMSOTf (170 мг, 0,76 ммоль) и нагревали раствор при 110°C в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (15 мл), впоследствии выливали в ледяной насыщенный водный NaHCO (20 мл), перемешивали в течение 0,5 ч и фильтровали. После разделения двух слоев органический слой последовательно промывали насыщенным водным NaHCO (3×15 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. С помощью очистки остатка посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (1-1,5% об./об. MeOH/CHCl) получали соединение  (208 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 8,80 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,87 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,54-7,44 (м, 1H), 7,44-7,34 (м, 2H), 7,29-7,03 (м, 10H), 6,18 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,96-5,84 (м, 1H), 4,70 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 4,56-4,29 (м, 1H), 4,55-4,22 (м, 4H), 4,21 (с, 1H), 3,63-3,53 (м, 1H), 3,46 (уш. д, J 10,0 Гц, 1H), 2,84-2,75 (м, 1H), 2,86-2,75 (м, 1H), 2,87-2,71 (м, 1H), 1,99-1,92 (м, 1H), 1,91 (уш. С, 1H); ИЭР-МС: m/z=702 [M+H].
3g
Стадия 4. Получение соединения
3f
3g
2
3
2
4
3
1
+
К раствору соединения  (5,86 г, 8,35 ммоль) в смеси THF (50 мл) и воды (35 мл) добавляли LiOH·HO (1,75 г, 41,8 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси в течение при комнатной температуре 5 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc (30 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл x 2) и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc (50 мл x 3). Объединенные органические слои последовательно промывали насыщенным водным NaHCO (3×15 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: PE=0 ~ 70%) с получением соединения  (4,25 г) в виде бледно-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 9,00 (уш. с, 2H), 8,74 (с, 2H), 8,23 (с, 2H). 8,02 (уш. д, J=7,3 Гц, 3H), 7,60 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,52 (уш. т, J=7,5 Гц, 3H), 7,38-7,16 (м, 15H), 6,09 (с, 2H), 4,79 (с, 2H), 4,66-4,49 (м, 6H), 4,24 (с, 2H), 4,18-4,05 (м, 3H), 3,99 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 3,90-3,70 (м, 3H), 2,03 (с, 2H), 1,75 (уш. с, 3H), 1,24 (уш. т, J=7,1 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z=564,1 [M+H].
3h
Стадия 5. Получение соединения
3g
3h
3
3
1
К перемешанному раствору соединения  (3,3 г, 5,85 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли метансульфоновую кислоту при 0 °C (28,9 г, 0,3 моль). После перемешивания при 0°C в течение 2,5 ч реакционную смесь объединяли с предыдущей партией и добавляли суспензию NaHCO (75 г, 0,90 моль) в DCM (180 мл) с использованием капельной воронки с выравниванием давления. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч добавляли MeOH (10 мл) и перемешивали смесь в течение еще 0,5 ч (pH ~ 7-8). Реакционную смесь фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением светло-желтого твердого вещества, очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением соединения  в виде грязно-белого твердого вещества (3,75 г). H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ м. д. 8,73 (с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,13-8,06 (м, 2H), 7,71-7,62 (м, 1H), 7,61-7,53 (м, 2H), 6,14 (с, 1H), 4,63 (с, 1H), 4,38 (с, 1H), 4,09 (д, J=7,8 Гц, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,92 (д, J=7,8 Гц, 1H).
3i
Стадия 6. Получение соединения
3h
3i
3
2
4
3
1
+
J
J
J
J
J
К смеси соединения  (4,3 г, 11,2 ммоль) в пиридине (50 мл) добавляли раствор DMTrCl (4,56 г, 13,4 ммоль) в пиридине (20 мл)) по каплям при 0 °C. После перемешивания при кт в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), впоследствии последовательно промывали насыщенным водным NaHCO (80 мл x 3) и солевым раствором (80 мл x 2). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (7,8 г). H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ м. д. 8,74 (с, 1H), 8,50 (с, 1H), 8,09 (д, =7,3 Гц, 2H), 7,70-7,62 (м, 1H), 7,60-7,53 (м, 2H), 7,48 (д, =7,5 Гц, 2H), 7,36 (дд, =3,0, 9,0 Гц, 4H), 7,33-7,27 (м, 1H), 7,26-7,18 (м, 1H), 6,87 (д, =8,8 Гц, 4H), 6,17 (с, 1H), 4,65 (с, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,10 (к, =7,3 Гц, 1H), 4,05-3,98 (м, 2H), 3,77 (с, 6H), 3,65-3,58 (м, 1H), 3,54-3,48 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=686 [M+H].
3k
Стадия 7. Получение соединения
3j
3k
3
4
3
2
4
3
3
1
+
К перемешанной суспензии соединения  (5,0 г, 13,61 ммоль, CAS № 160107-07-3), трифенилфосфина (4,28 г, 16,33 ммоль), TBAI (502 мг, 1,36 ммоль) и NaN (3,3 г, 50,76 ммоль) в DMF (60 мл) за раз добавляли CBr (5,41 г, 16,33 ммоль). После перемешивания при 20°C в течение 12 ч реакционную смесь разделяли с 80 мл насыщенного водного NaHCO и DCM (100 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире для вымывания PhPO, впоследствии переходили на 0-10% MeOH в DCM) с получением  в виде белого твердого вещества (4,26 г). H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ м. д. 8,16 (с, 1H), 5,96 (д, J=4,9 Гц, 1H), 4,82 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,27-4,21 (м, 1H), 3,97 (т, J=4,9 Гц, 1H), 3,66 (д, J=4,4 Гц, 2H), 3,52 (с, 3H), 2,78-2,69 (м, 1H), 1,24 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=393,1 [M+H].
3l
Стадия 8. Получение соединения
3k
3l
3
2
4
3
1
+
J
К раствору  (4,07 г, 10,37 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (1,63 г, 13,48 ммоль) и AgNO (2,29 г, 13,48 ммоль) в DCM (40 мл) добавляли DMTrCl (4,57 г, 13,48 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при 25 °C в течение 3 ч красную суспензию разбавляли DCM (50 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат разделяли между DCM и водой (50/30 мл) и промывали солевым раствором (30 мл). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением в виде белого твердого вещества (7,0 г). H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 7,94 (с, 1H), 7,35-7,28 (м, 1H), 7,22 (д,=8,8 Гц, 1H), 7,18-7,12 (м, 2H), 7,09 (д, J=8,811=Гц, 1H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,61 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,03 (д, J=7,7 Гц, 1H), 4,94 (уш. дд, J=5,2, 7,2 Гц, 1H), 4,87 (с, 7H), 4,16 (т, J=5,7 Гц, 1H), 4,07 (к, J=7,1 Гц, 1H), 3,71 (д, J=13,7 Гц, 4H), 3,61 (дд, J=6,6. 12,8 Гц, 1H), 3,29 (с, 3H), 3,21 (с, 2H), 2,75 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,68 (д, J=4,6 Гц, 1H), 1,99 (с, 2H), 1,28-1,17 (м, 6H); ИЭР-МС: m/z=695,3 [M+H].
3m
Стадия 9. Получение соединения
3l
3m
1
+
3
Суспензию (1,2 г, 1,72 ммоль) и 10% влажного Pd/C (1,0 г, 0,49 ммоль) в этилацетате (100 мл) гидрогенизировали при 20°C при 15 фунтов на кв. дюйм в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением  в виде белого твердого вещества (682 мг). H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 7,89 (с, 1H), 7,33 (дд, J=1,5, 7,8 Гц, 1H), 7,30-7,29 (м, 1H), 7,36-7,29 (м, 1H), 7,21 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,18-7,10 (м, 3H), 7,08 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,71 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,59 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,98 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,03 (дд, J=4,8, 7,5 Гц, 1H), 4,21 (дд, J=3,4, 9,9 Гц, 1H), 3,69 (д, J=16,3 Гц, 6H), 3,26 (с, 3H), 3,16 (дд, J=10,0, 13,1 Гц, 1H), 2,88-2,75 (м, 3H), 1,31-1,21 (м, 8H); ИЭР-МС: m/z=669,3 [M+H].
3o
Стадия 10. Получение соединения
3n
2002
3m
3o
J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1
3
2
3
2
4
3
1
+
Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила  (2,45 г, 10,31 ммоль, , , 485-495) в безводном DCM (5 мл) быстро добавляли к смеси  (2,3 г, 3,44 ммоль), 4-нитрофенола (1,43 г, 10,31 ммоль), EtN (2,09 г, 20,63 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (≈ 4 г) в безводном DCM (50 мл) в атмосфере N при -78 °C. После подогревания до комнатной температуры (12 °C) и перемешивания в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат объединяли с двумя предыдущими партиями и разделяли между DCM/насыщенный водный NaHCO (100, 3×70 мл). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% этилацетат в петролейном эфире) с получением  в виде желтого твердого вещества (4,8 г). H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 12,18 (уш. с, 1H), 9,18 (с, 1H), 8,32-8,26 (м, 3H), 7,74 (с, 1H), 7,37-7,28 (м, 4H), 7,25-7,11 (м, 6H), 7,08 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,73 (д, J=9,0 Гц, 2H), 6,63 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,89 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,99 (дд, J=5,0, 8,5 Гц, 1H), 4,29 (с, 1H), 3,80-3,74 (м, 4H), 3,72 (с, 1H), 3,50-3,44 (м, 1H), 3,38-3,29 (м, 1H), 3,20 (с, 3H), 2,77 (д, J=5,0 Гц, 1H), 2,55-2,43 (м, 1H), 1,31-1,27 (м, 4H), 1,15 (д, J=6,8 Гц, 3H). ИЭР-МС: m/z=870 [M+H].
3p
Стадия 11. Получение соединения
3o
3i
3o
3i
3p
2
3
1
+
Смесь  и  перед использованием совместно выпаривали с THF (30 мл x 3). Смесь  (4,12 г, 4,74 ммоль),  (2,5 г, 3,64 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 2 г) в безводном THF (50 мл) перемешивали в атмосфере N при кт в течение 1 ч. DMAP (2,22 г, 18,22 ммоль) добавляли в один прием и перемешивали реакционную смесь при 40°C в течение 12 ч Смесь разбавляли с помощью DCM (40 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-2% MeOH в DCM) с получением в виде светло-желтого твердого вещества (4,6 г). H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 12,31 (с, 1H), 9,25 (s, 1H), 9,11 (уш. с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,52-8,29 (м, 2H), 8,16-8,01 (м, 5H), 7,77 (с, 1H), 6,69 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,60 (д, J=9,0 Гц, 2H), 6,21 (с, 1H), 5,84 (д, J=8,8 Гц, 1H), 5,36 (с, 1H), 5,06 (с, 1H), 4,86 (дд, J=4,9, 8,7 Гц, 1H), 4,06-3,93 (м, 2H), 3,73 (д, J=2,8 Гц, 9H), 3,70 (с, 3H), 3,67-3,58 (м, 1H), 3,34 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,15 (с, 3H), 3,06 (дд, J=2,3, 12,5 Гц, 1H), 2,96-2,84 (м, 1H), 2,62-2,49 (м, 2H), 1,28-1,24 (м, 5H), 1,18 (д, J=6,8 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=1417 [M+H].
3q
Стадия 12. Получение соединения
3p
3q
3q
2
4
3
3
1
+
К перемешанному раствору  (4,6 г, 3,25 ммоль) в DCM (84 мл) добавляли 6% DCA в DCM (44 мл, 32,3 ммоль, 10,0 экв.) при кт в атмосфере N. После перемешивания при кт в течение 30 мин, реакционную смесь гасили пиридином (2,8 г, 11 экв.) и концентрировали полученный бесцветный раствор при пониженном давлении с получением бесцветного остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-7% MeOH в DCM) с получением  в виде белого твердого вещества (1,9 г). Вышеуказанное твердое вещество дополнительно очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250×50 мм x 10 мкм; подвижная фаза: вода (10 мМ NHHCO)-MeCN, начало B 15, конец B 45; скорость потока: 90 мл/мин, время градиентного элюирования: 18 мин, затем B 100 в течение 3 мин) с получением 2 фракций  в виде белого твердого вещества после лиофилизации. Фракция 1: 876 мг и фракция 2: 743 мг. H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,52 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 8,01 (д, J=7,1 Гц, 2H), 7,86 (с, 1H), 7,65 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,60-7,54 (м, 2H), 6,20 (с, 1H), 5,71 (д, J=4,9 Гц, 1H), 5,22 (д, J=14,4 Гц, 2H), 4,67-4,59 (м, 1H), 4,06 (д, J=3,7 Гц, 2H), 4,02 (уш. д, J=4,6 Гц, 3H), 4,10-3,99 (м, 1H), 3,99-3,93 (м, 1H), 3,51-3,44 (м, 4H), 3,40 (д, J=4,6 Гц, 1H), 2,73-2,65 (м, 1H), 1,21 (дд, J=5,4, 6,6 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=812,2 [M+H].
3r
Стадия 13. Получение соединения
3
2
THF непосредственно перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перегоняли над CaH непосредственно перед работой.
3q
3r
3
3
3
3
3
3
3
3
3
+
Высушенный в вакууме диол  (300 мг, 0,37 ммоль) совместно выпаривали со смесью CHCN/THF (10/6 мл x 3) и растворяли в смеси CHCN/THF (10/6 мл). Добавляли 800 мг активированных молекулярных сит 4Å и раствор 1H-тетразола в CHCN (6,56 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 945 мг тетразола в 30 мл безводного CHCN, после чего добавляли 800 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в аргоновой атмосфере перед использованием) и барботировали смесь аргоном в течение 15 мин. После перемешивания белой суспензии в течение 1 ч при 8°C в аргоновой атмосфере по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита в CHCN (5,62 мл, 0,59 ммоль, 0,105 M в CHCN, полученный путем растворения 759 мг фосфородиамидитного реагента в 24 мл CHCN, с последующим добавлением 800 мг молекулярных сит 4Å и последующим перемешиванием в течение 1 ч в аргоновой атмосфере перед использованием) в течение 60 мин. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере. Добавляли еще CHCN (6 мл) и добавляли еще тетразола (1,64 мл, 0,74 ммоль, 0,45 M в CHCN) после перемешивания при 30 °C в течение 1 ч. После перемешивания в течение еще 2 ч быстро добавляли раствор DDTT (380 мг, 1,84 ммоль) в пиридине (10 мл). После перемешивания в течение 30 мин смесь фильтровали через слой диатомитовой земли; фильтрат объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, растворенного в DCM (8 мл) и очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (12 г, 0-6% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением(275 мг) в виде светло-желтого твердого вещества, используемого на следующей стадии без дополнительной очистки. ИЭР-МС: m/z=943,5 [M+H].
соединений (*
R
) 4Å и (*
S
) 4B
Стадия 14. Получение
3r
соединения (*
R
) 4A (аммонийная соль
соединения (*
S
) 4B (аммонийная соль)
2
3
2
3
2
4
3
3
Раствор соединения  (275 мг, 0,292 ммоль) в MeNH (27-30% в EtOH, 5 мл) перемешивали при 80 °C в течение 4 ч. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка; остаток растворяли в смеси CHCN/HO (1/8 мл) и промывали DCM (8 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением желтой камеди (382 мг), впоследствии растворенной в смеси CHCN/HO (4/1). Очистка посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela Durashell C18 150×25 x 5 мкм; подвижная фаза: вода (0,04% NH3 вода+10 мМ NHHCO) - CHCN; начало B 12, конец B 25; скорость потока: 25 мл/мин, время градиентного элюирования: 12 мин, а затем B 100 в течение 3 мин); нужные фракции собирали и лиофилизировали с получением ) (39,8 мг, первый элюируемый изомер) в виде белого твердого вещества и  (65,9 мг, второй элюируемый изомер) в виде белого твердого вещества.
(*
R
) 4A (натриевая соль) и соединения (*
S
) 4B (натриевая соль)
Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной Na-ионообменной смолой Dowex 50WX8, с получением соединения в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации.
Соединение (*
R
) 4A.
1
31
+
d
6
6
H ЯМР (400 МГц, 60 °C, DMSO-) δ м. д. 3,34-3,44 (м, 1H), 3,45-3,56 (м, 1H), 3,52 (с, 3H), 3,83 (дд, J=10,7, 2,0 Гц, 1H), 3,98 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,09 (уш. с, 1H), 4,16 (уш. с, 1H), 4,23 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,67 (дд, J=11,1, 7,8 Гц, 1H), 4,98 (уш. с, 1H), 5,14 (уш. с, 1H), 5,31 (ддд, J=13,4, 9,0, 4,4 Гц, 1H), 5,78 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,07 (с, 1H), 6,13 (уш. с, 2H), 7,15 (уш. с, 2H), 7,92 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 8,17 (с, 1H). P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ 55,83 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=716,2 [M+H].
Соединение (*
S
) 4B.
1
31
+
6
6
H ЯМР (400 МГц, 80 °C, DMSO-d) δ м. д. 3,21-3,39 (м, 2H), 3,54 (с, 3H), 3,87 (дд, J=11,5, 4,3 Гц, 1H), 3,92 (д, J=8,1 Гц, 1H), 3,99 (уш. с, 1H), 4,14 (д, J=8,1 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,37 (дд, J=11,6, 5,0 Гц, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 5,06 (уш. с, 1H), 5,31 (ддд, J=12,3, 9,0, 4,2 Гц, 1H), 5,79 (д, J=9,0 Гц, 1H), 6,03 (с, 1H), 6,12 (уш. с, 2H), 6,99 (уш. с, 2H), 7,99 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,20 (с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ 52,88 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=716,2 [M+H].
Пример 4
4a
Стадия 1. Получение соединения
3j
4a
2
2
4
1
+
К раствору соединения (9,6 г, 26,13 ммоль, CAS № 160107-07-3) в DMF (80 мл) добавляли имидазол (3,56 г, 52,26 ммоль) и TBSCL (4,73 г, 31,36 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 25°C в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (200 мл) и HO (100 мл); органический слой последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (9,7 г, 76%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ=12,12 (уш. с, 1H), 9,48 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,89 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,56 (т, J=4,9 Гц, 1H), 4,21 (к, J=3,4 Гц, 1H), 3,98 (т, J=4,6 Гц, 1H), 3,93 (дд, J=3,5, 11,5 Гц, 1H), 3,79 (дд, J=2,8, 11,5 Гц, 1H), 3,47 (с, 3H), 2,75 (тд, J=6,9, 13,6 Гц, 1H), 1,27 (с, 3H), 1,25 (с, 3H), 0,91 (с, 9H), 0,10 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=482,3 [M+H].
4b
Стадия 2. Получение соединения
4a
4b
2
2
3
3
+
К раствору соединения  (10 г, 20,76 ммоль) в DCM (200 мл) добавляли периодинан Десса - Мартина (14,97 г, 35,29 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 30°C в течение 12 часов реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (300 мл); органический слой промывали водным насыщенным NaSO (100 мл) и водным насыщенным NaHCO (50 мл). Органический слой концентрировали под давлением с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (9,0 г, 80%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=498,3 [M+H7].
4c
Стадия 3. Получение соединения
4b
4c
4a
4d
4
4
1
+
J
J
J
К раствору соединения (9 г, 18,77 ммоль) в EtOH (200 мл) добавляли NaBH (1,06 г, 28,15 ммоль) при 0 °C. После перемешивания раствора при 0°C в течение 0,5 часа смесь разбавляли EtOAc (500 мл) и водным насыщенным NHCl (100 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (9,0 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (4,8 г, 53%) в виде белого твердого вещества и соединения  (1,5 г, 17%) в виде белого твердого вещества. Соединение . H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ=12,06 (с, 1H), 11,70 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 6,05 (д, =4,6 Гц, 1H), 5,85 (д, =5,5 Гц, 1H), 4,31-4,26 (м, 1H), 3,91-3,77 (м, 4H), 3,39 (с, 3H), 2,80-2,70 (м, 1H), 1,11 (д, =6,8 Гц, 6H), 0,89 (с, 9H), 0,07 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=482,3 [M+H].
4d
Стадия 4. Получение соединения
4c
4d
4c
2
1
+
К раствору соединения  (1,8 г, 3,74 ммоль) в пиридине (20 мл) добавляли DIEA (1,45 г, 11,21) и хлорид дифенилкарбамина (1,12 г, 4,86 ммоль) при 25 °C. Смесь перемешивали при 25°C в течение 3 ч. Реакционную смесь объединяли с 2 другими порциями и собирали. Смесь разделяли между этилацетатом (150 мл) и HO (100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл) и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EA/PE, об./об.) с получением соединения  (6 г, 70% из 4,8 г соединения ) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ=8,34 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,44 (уш. д, J=7,3 Гц, 4H), 7,37 (т, J=7,8 Гц, 4H), 7,25 (уш. с, 2H), 6,22 (д, J=3,0 Гц, 1H), 4,38 (уш. с, 1H), 4,16-4,12 (м, 1H), 4,00-3,93 (м, 2H), 3,83 (дд, J=2,5, 11,0 Гц, 1H), 3,51 (с, 3H), 2,94 (уш. с, 1H), 1,27 (дд, J=1,0, 6,8 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,14 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=677,4 [M+H].
4e
Стадия 5. Получение соединения
4d
4e
2
2
2
4
+
К раствору соединения  (5 г, 7,39 ммоль) в пиридине (100 мл) добавляли TfO (16,67 г, 59,1 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 0°C в течение 1,5 ч реакционную смесь разделяли между DCM (200 мл) и HO (100 мл). Органический слой отделяли, а водную фазу экстрагировали с помощью DCM (100 мл). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с другой порцией и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc/петролейный эфир, об./об.) с получением соединения  (4,0 г, в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=809,5 [M+H].
4f
Стадия 6. Получение соединения
4e
4f
3
3
2
4
1
+
J
J
J
К раствору соединения  (4,0 г, 4,94 ммоль) в DMF (40 мл) добавляли NaN (3,5 г, 54,15 ммоль) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25 °C в течение 12 часов смесь разбавляли водным насыщенным NaHCO (30 мл) для доведения до pH > 9 и экстрагировали этилацетатом (100 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно промывали солевым раствором (100 мл), высушивали безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетата в петролейном эфире) с получением соединения (1,8 г, 67%) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ=11,99 (уш. с, 1H), 8,20 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,96 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,25-4,11 (м, 3H), 3,99 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 3,82 (уш. д, =11,7 Гц, 1H), 3,53 (д, =2,4 Гц, 3H), 2,70-2,58 (м, 1H), 1,30 (уш. д, =6,8 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,13 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=507,3 [M+H].
4g
Стадия 7. Получение соединения
4f
4g
1
+
6
J
J
J
К раствору соединения  (1,8 г, 3,55 ммоль) в THF (20 мл) добавляли трифенилфосфин (1,3 г, 4,97 ммоль) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 40°C в течение 2 часов к раствору добавляли воду (10 мл) при 40°C и перемешивали смесь в течение 12 часов. Впоследствии смесь разбавляли с помощью DCM (50 мл) и промывали солевым раствором (2 × 50 мл). Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (2,0 г). Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,5 г, 81%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ=8,15 (с, 1H), 5,57 (д, =8,0 Гц, 1H), 4,07-4,00 (м, 1H), 3,91 (дд, =5,3, 8,0 Гц, 1H), 3,75-3,63 (м, 3H), 3,37 (с, 3H), 2,77-2,69 (м, 1H), 1,10 (д, =6,8 Гц, 6H), 0,86 (c, 9H), 0,04 (c, 6H); ИЭР-МС: m/z 481,3 [M+H].
4h
Стадия 8. Получение соединения
4g
3n
4h
74
3
1
+
J
J
J
J
J
К раствору соединения  (1,5 г, 2,81 ммоль) в DCM (100 мл) добавляли 4-нитрофенол (3,12 г, 22,47 ммоль), триэтиламин (1,7 г, 16,8 ммоль) и молекулярные сита 4Å (2,0 г). После перемешивания смеси при -78°C в течение 0,5 ч к раствору добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила  (2 г, 8,42 ммоль) в DCM (20 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 15 мин и перемешивания при 0°C в течение 1 часа смесь фильтровали и разбавляли с помощью DCM (100 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO (3×50 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (2,5 г). Остаток объединяли с другой порцией (объединенной с силикагелем: 6 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в DCM) с получением соединения  (1,68 г, 75% из 2,4 г соединения ) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CD3CN) δ 11,89 (уш. с, 1H), 9,27 (уш. с, 1H). 8,15 (уш. д, J=9,3 Гц, 2H), 7,94-7,90 (м, 1H), 7,23 (уш. д, =9,0 Гц, 2H), 5,80 (уш. д, =8,3 Гц, 1H), 4,81 (уш. д,=7,3 Гц, 1H), 4,24 (уш. с, 1H), 3,97 (уш. д, =4,5 Гц, 1H), 3,83 (уш. с, 2H), 3,48-3,39 (м, 3H), 2,73-2,58 (м, 1H), 1,19 (уш. дд, =3,3, 6,0 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,12 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=682,3 [M+H].
4j
Стадия 9. Получение соединения
4h
4i
4j
2
3
2
4
+
Раствор соединения  (1,68 г, 2,47 ммоль), соединения (731 мг, 1,9 ммоль) и молекулярных сит 4Å (2,0 г) в DCE (135 мл) перемешивали в атмосфере N в течение 30 мин при 25°C с последующим добавлением DMAP (1,16 г, 9,49 ммоль). После перемешивания при 55 °C (температура масла) в течение 12 часов смесь фильтровали и разделяли раствор с DCM (100 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический слой промывали насыщенным водным раствором NaHCO (3 × 100 мл); органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением неочищенного продукта (2,5 г). Неочищенный продукт (2,5 г, неочищенный) (объединенный с силикагелем: 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,2 г, 52%) в виде светло-желтого твердого вещества, ИЭР-МС: m/z 927,4 [M+H].
4k
Стадия 10. Получение соединения
4j
4k
4k
3
4
3
6
1
l9
+
J
J
J
J
J
J
m/z
К раствору соединения  (1,2 г, 1,29 ммоль) в пиридине (24 мл) добавляли TEA (1,31 г, 12,94 ммоль) и EtN-3HF (1,0, 6,47 ммоль) при 15 °C. После перемешивания раствора при 35°C в течение 12 часов добавляли THF (20 мл) и триметил(пропокси)силан (3,4 г, 25,89 ммоль) при 25 °C и перемешивали реакционную смесь в течение еще 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (2 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением неочищенного соединения  (900 мг). Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: вода (10 мМ NHHCO)-ACN B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 1, скорость потока (мл/мин): 25) с получением очищенного соединения  (0,57 г, 70%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ=8,17 (д, J=4,4 Гц, 2H), 8,08 (с, 1H), 6,21 (д, =19,6 Гц, 1H), 5,84 (д, =8,6 Гц, 1H), 5,51-5,26 (м, 1H), 5,13 (уш. с, 1H), 4,72 (дд, =5,4, 8,8 Гц, 1H), 4,53-4,38 (м, 1H), 4,22-4,16 (м, 1H), 4,14-4,10 (м, 1H), 4,09-4,00 (м, 2H), 3,86 (д, =5,4 Гц, 1H), 3,63-3,46 (м, 2H), 3,25 (с, 3H), 2,75 (тд, =6,8, 13,6 Гц, 1H), 1,11 (дд, =2,1, 6,7 Гц, 6H), F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -201,424 (с, 1F); ИЭР-МС: =699,3 [M+H].
4l
Стадия 11. Получение соединения
3
2
3
3
2
3
2
3
4l
4l
N, N,N’,N’
+
CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения. Соединение  (152 мг, 0,218 ммоль) растворяли в DMF (2 мл) и CHCN (6 мл), к нему добавляли 0,3 г молекулярных сит 4A (порошок) и раствор 1H-тетразола (3,87 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 472,5 мг тетразола в 15 мл безводного CHCN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 0,5 ч в атмосфере N до применения). Раствор фосфородиамидита 2-цианоэтил -тетраизопропила (131,15 мг, 0,43 ммоль) в CHCN (0,8 мл) добавляли по каплям посредством шприца в течение 20 мин. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 2 ч при 25°C в атмосфере N. Впоследствии к вышеуказанному раствору добавляли TBHP (0,218 мл, 1,09 ммоль, 5 M в декане) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 1 ч смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл) и CHOH (3 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали в вакууме с получением бесцветного масла; масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (4 г, 0-11,5% MeOH в DCM) с получением соединения (151 мг, 68%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=814,3 [M+H].
соединения 52 (натриевая соль)
Стадия 12. Получение
4l
соединения 52 (аммонийная соль)
2
2
3
4
3
2
2
2
1
19
31
+
Раствор соединения  (150 мг, 0,18 ммоль) в EtOH (2 мл) обрабатывали с помощью MeNH (5 мл, 30% в EtOH). После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 2 ч и при 35°C в течение 1 ч растворитель концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Остаток растворяли в HO (20 мл) и CHCN (5 мл), впоследствии промывали DCM (20 мл x 2). Затем водную фазу лиофилизировали с получением неочищенного продукта (80 мг, неочищенный) в виде светло-желтого твердого вещества. Неочищенный продукт (80 мг, неочищенный) очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NHHCO) (A)-ACN (B); начало B 0, конец B 25; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25; инъекций 12) с получением  (35 мг, 26%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ=8,29 (с, 1H), 8,19 (уш. д, J=9,5 Гц, 2H), 6,61 (уш. д, J=18,6 Гц, 1H), 6,08 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 5,90-5,72 (м, 1H), 5,39 (уш. д, J=19 6 Гц, 1H), 5,20 (уш. с, 1H), 4,76 (уш. с, 1H) 4,72 (уш. с, 1H), 4,49 (уш. д, J=10,3 Гц, 3H), 4,35 (уш. д, J=4,3 Гц, 1H), 4,17 (к, J=6,2 Гц, 1H), 3,67 (с, 3H); F ЯМР (376,5 МГц, DO) -199,859; P ЯМР (162 МГц, DO) -1,639; ИЭР-МС: m/z=691,1 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
2
4
2
2
4
2
2
4
2
2
2
2
2
2
4
3
4
3
2
2
2
соединение 52
соединения 52 (аммонийная соль
соединения 52 (натриевая соль)
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H - форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой HO (20 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде HO (20 мл), смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной HO и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной HO до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной HO (20 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в HO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной HO до нейтральной реакции. CDN (, 35 мг, 0,049 ммоль)) растворяли в деионизированной HO (8 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной HO. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением натриевой солевой формы (30 мг, чистота: 91%) в виде белого твердого вещества. Солевую форму (30 мг) очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NHHCO) (A)-ACN(B); начало B 0, конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания(мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением продукта (25 мг) в виде белого твердого вещества. Продукт (25 мг, чистота: 97,07%) очищали второй раз посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NHHCO) (A)-ACN(B); начало B 0, конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением ), которое обрабатывали ионообменной смолой DOWEX 50W x 8, 200-400 с получением  (16,1 мг, 65%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ=8,01 (с, 1H), 7,93 (с, 1H), 7,85 (с, 1H), 6,37 (уш. д, J=17,3 Гц, 1H), 5,83 (д, J=9,0 Гц, 1H), 5,59 (уш. д, J=3,5 Гц, 0,5H), 5,46 (уш. д, J=3,5 Гц, 0,5H), 5,15-5,02 (м, 1H), 4,97 (уш. д, J=4,5 Гц, 1H), 4,62-4,52 (м, 2H), 4,49 (уш. с, 1H), 4,29-4,19 (м, 3H), 4,10 (уш. д, J=4,5 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H); F ЯМР (376,5 МГц, DO) -200,863; P ЯМР (162 МГц, DO) -1,676; ИЭР-МС: m/z=691,2 [M+H].
Пример 5
5a
Стадия 1. Получение соединения
3
2
4
5a
m/z
+
Раствор 5’-O-(4,4’-диметокситритил)-N2-изобутирил-3’-O-метил-D-гуанозина [CAS 103285-33-2] (5,2 г, 7,76 ммоль) в DMF (50 мл), к которому добавляли имидазол (2,38 г, 34,94 ммоль) и TBSCl (3,51 г, 23,29 ммоль), перемешивали в течение 6 ч при 35 °C. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NaHCO и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения , которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС:  784,4 [M+H].
5b
Стадия 2. Получение соединения
3
3
2
4
5a
5b
1
+
J
J
J
J
J
J
J
m/z
TFA (2 мл, 26,12 ммоль) и EtSiH (8 мл, 50,03 ммоль) добавляли к раствору вышеуказанного соединения  в DCM (160 мл) при 0 °C. Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин, после чего перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционный раствор гасили водным NaHCO и экстрагировали с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (2,9 г). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 12,12 (уш. с, 1H), 8,36 (уш. с, 1H), 7,71 (с, 1H), 5,72 (д, =7,5 Гц, 1H), 5,41 (уш. с, 1H), 4,78 (дд, =7,5, 5,1 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 3,98 (дд, =12,6, 2,2 Гц, 1H), 3,84 (д, =5,1 Гц, 1H), 3,71 (уш. с, 1H), 3,54 (с, 3H), 2,68 (спт, =6,9 Гц, 1H), 1,28 (д, =6,8 Гц, 3H), 1,29 (д, =6,8 Гц, 3H), 0,81 (с, 9H), -0,07 (с, 3H), -0,29 (с, 3H); ИЭР-МС:  482,1 [M+H].
5d
Стадия 3. Получение соединения
5c
5d
3
2
4
+
Раствор  [CAS 2241580-02-7] (2 г, 5,02 ммоль) в DMF (10 мл), к которому добавляли имидазол (1,02 г, 15,06 ммоль) и TBSCl (1,51 г, 10,04 ммоль), перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным водным NaHCO и солевым раствором, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде желтого твердого вещества (2,57 г, выход: 100%). ИЭР-МС: m/z=513,2 [M+H].
5e
Стадия 4. Получение соединения
5d
5e
m/z
+
Раствор соединения  (1,285 г, 2,51 ммоль) в EtOAc (150 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре при атмосферном давлении в течение 2 ч, используя 10% Pd/C (2,95 г) в качестве катализатора. Реакционную смесь фильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Реакцию повторяли в том же масштабе, неочищенный продукт обеих реакций объединяли для очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,69, выход: 69%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС:  487,1 [M+H].
5f
Стадия 5. Получение соединения
5e
5f
3
3
2
4
m/z
+
Раствор соединения  (1,05 г, 2,16 ммоль) в DCM (40 мл), к которому добавляли 4-нитрофенол (900 мг, 6,47 ммоль), EtN (1,79 мл, 12,95 ммоль) и активированные молекулярные сита, перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь охлаждали до -78 °C, после чего добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила (1,54 г, 6,47 ммоль) в DCM (10 мл), перемешивание продолжали в течение 2,5 ч при -78 °C. Реакционную смесь фильтровали и промывали водным NaHCO, экстрагировали водные слои после промывки с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (1,24 г, выход: 83,5%). ИЭР-МС:  688,2 [M+H].
5g
Стадия 6. Получение соединения
5b
5f
5g
2
3
1
+
J
m/z
Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения  (105 мг, 0,218 ммоль) и сульфамата (180 мг, 0,262 ммоль) в безводном THF (2 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч в атмосфере N. Далее добавляли DMAP (133 мг, 1,09 ммоль) для инициирования реакции, перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде желтого твердого вещества (157 мг, выход: 70%). H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 12,18 (с, 1H), 9,07 (с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,39 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,66-7,59 (м, 1H), 7,58-7,49 (м, 3H), 7,19 (уш. с, 1H), 6,32 (д, J=17,8 Гц, 1H), 5,60-5,42 (м, 2H), 5,60-5,42 (м, 1H), 4,80-4,63 (м, 2H), 4,49 (дд, J=3,8, 11,0 Гц, 1H), 4,36-4,27 (м, 2H), 4,17-4,02 (м, 2H), 3,80 (дд, J=2,3, 4,8 Гц, 1H), 3,51 (с, 3H), 2,75-2,63 (м, 1H), 1,33 (д, =6,8 Гц, 3H), 1,27 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,91 (с, 9H), 0,77 (с, 9H), 0,89 (с, 3H), 0,91 (с, 3H), -0,08 (с, 3H), -0,28 (с, 3H); ИЭР-МС: 1030,5 [M+H].
5h
Стадия 7. Получение соединения
3
2
6
5g
5h
1
+
d
m/z
EtN (2,62 г, 25,92 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (6,28 г, 51,83 ммоль) добавляли к раствору соединения  (890 мг, 0,864 ммоль) в пиридине (10 мл), полученную реакционную смесь перемешивали в атмосфере N при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi Max-RP, 10 мкМ, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (397 мг, выход: 57%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,07 (с, 1H), 11,60 (с, 1H), 11,20 (с, 1H), 8,89 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 8,71 (д, J=22,8 Гц, 2H), 8,14 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,60-7,72 (м, 1H), 7,47-7,60 (м, 2H), 6,46 (д, J=19,9 Гц, 1H), 5,84 (д, J=5,7 Гц, 1H), 0,00 (д, J=6,1 Гц, 1H), 5,66 (дд, J=52,1, 4,5 Гц, 1H), 5,22 (уш. т, J=5,1 Гц, 1H), 4,50-4,69 (м, 2H), 4,22-4,42 (м, 3H), 4,05-4,16 (м, 1H), 3,93 (т, J=4,1 Гц, 1H), 3,82 (уш. дд, J=12,2, 4,4 Гц, 1H), 3,54-3,68 (м, 1H), 3,42 (с, 3H), 2,75 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС:  802,3 [M+H].
5i
Стадия 8. Получение соединения
5h
5i
2
N, N,N',N'-
N, N,N',N'-
t
m/z
+
Раствор соединения  (200 мг, 0,25 ммоль) и 1H-тетразола (1,82 мл 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF/MeCN (1 : 1, 12 мл, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в атмосфере N, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидит (75 мг, 0,25 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидита (22,5+15 мг, 0,075+0,05 ммоль) двумя порциями с интервалом 2 ч, после чего продолжали встряхивание в течение 90 мин. Добавляли раствор BuOOH (68 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,37 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение 30 мм. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (30 мг, выход: 13%). ИЭР-МС:  917,5 [M+H].
соединения 6 (натриевая соль)
Стадия 9. Получение
5i
соединения 6 (натриевая соль)
1
31
+
6
6
d
m/z
Вышеуказанное соединение  (30 мг, 0,033 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (1 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной катионной Na-ионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества (14 мг, выход: 60%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d, 61 °C) δ м. д. 10,39 (уш. с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,97 (с, 1H), 7,07 (уш. с, 2H), 6,31 (уш. с, 2H), 6,24 (дд, J=15,7, 2,7 Гц, 1H), 5,78 (д, J=9,0 Гц, 1H), 5,44 (уш. д, J=53,9 Гц, 1H), 5,11 (тд, J=9,3, 4,0 Гц, 1H), 4,42-4,57 (м, 1H), 4,13-4,25 (м, 4H), 4,11 (д, J=3,9 Гц, 1H), 3,90-4,03 (м, 1H), 3,79-3,88 (м, 1H), 3,53 (c, 3H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. -1,45 (с, 1P); ИЭР-МС:  690,3 [M+H].
Пример 6
6a
Стадия 1. Получение соединения
3h
6a
3
3
4
3
2
4
+
Соединение  (1,0 г, 2,61 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CHCN (об. : об. = 1:1, 6 мл x 2) и далее растворяли в безводном DMF (18,8 мл). Впоследствии добавляли трифенилфосфин (1,02 г, 3,91 ммоль), NaN (0,63 г, 9,73 ммоль), йодид тетрабутиламмония (192,7 мг, 0,52 ммоль) и CBr (1,3 г, 3,91 ммоль) при кт. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 12 ч реакционную смесь гасили солевым раствором (10 мл) и разделяли с EtOAc (20 мл). К смеси добавляли насыщенный водный раствор NaHCO (20 мл) с последующей экстракцией с помощью EtOAc (20 мл x 3). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: петролейный эфир=0-100%, затем MeOH : DCM=0-5%) с получением  в виде желтого порошка. ИЭР-МС: m/z=408,9 [M+H].
6b
Стадия 2. Получение соединения
6a
6b
3
2
4
3
1
+
К раствору  (1,24 г, 3,04 ммоль) в DCM (16 мл) добавляли 2,4,6-коллидин (1,4 г, 11,56 ммоль), AgNO (1,96 г, 11,56 ммоль) и DMTrCl (1,54 г, 4,56 ммоль) при 15 °C. После перемешивания при 15°C в течение 5 ч реакционную смесь гасили с использованием MeOH (20 мл) и разбавляли DCM (40 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (20 мл x 2), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: петролейный эфир=0-100%) с получением  (1,99 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 7,17-7,00 (м, 6H), 6,93 (с, 4H), 6,73-6,49 (м, 4H), 5,28 (с, 2H), 4,10 (д, J=7,3 Гц, 3H), 3,79-3,56 (м, 5H), 3,47 (уш. д, J=4,6 Гц, 1H), 3,37-3,11 (м, 2H), 2,94 (с, 1H), 2,87 (с, 1H), 2,61 (с, 6H), 2,31 (с, 3H), 2,03 (с, 1H), 1,72-1,56 (м, 5H), 1,53-1,35 (м, 2H), 1,24 (т, J=7,2 Гц, 1H), 0,99 (т, J=7,3 Гц, 3H), ИЭР-МС: м/z=711,2 [M+H].
6c
Стадия 3. Получение соединения
6b
6c
+
Суспензию  (1,99 г, 2,8 ммоль) с влажным 10% Pd/C (3,3 г, 2,8 ммоль) в качестве катализатора в EtOAc (100 мл) гидрогенизировали (15 фунтов на кв. дюйм) при кт (~ 15 °C) в течение 5 ч Катализатор удаляли фильтрованием и выпаривали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного продукта  (1,31 г) в виде белого твердого вещества, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки. ИЭР-МС: m/z=685,2 [M+H].
6d
Стадия 4. Получение соединения
6c
3n
6d
3
3
2
2
3
2
4
3
1
+
Соединение  (213 мг, 0,31 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CHCN (об. : об. = 1:1, 3×2 мл) и растворяли в безводном DCM (8 мл); впоследствии добавляли 4-нитрофенол (129,8 мг, 0,93 ммоль), EtN (188,8 мг, 1,86 ммоль) и активированные молекулярные сита 4Å (~ 3 г) в атмосфере N при кт (~ 10 °C); смесь охлаждали до -78 °C с последующим быстрым добавлением хлорсульфата 4-нитрофенила (221,74 мг, 0,93 ммоль) в атмосфере N при -78 °C. После перемешивания при -78 °C в течение 3 ч реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (30 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат разделяли между DCM/насыщенный водный NaHCO (30/45 мл) и экстрагировали водный слой с помощью DCM (15 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно промывали солевым раствором (20 мл х 2), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: Петролейный эфир=0-90%) с получением  (142 мг) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9,25-9,05 (м, 2H), 8,35-8,26 (м, 1H), 8,05-7,94 (м, 4H), 7,76-7,64 (м, 1H), 7,58 (уш. т, J=6,7 Гц, 1H), 7,50 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,38-7,27 (м, 4H), 7,24 (с, 1H), 7,20-7,10 (м, 7H), 6,65 (уш. д, J=8,8 Гц, 2H), 6,62 (уш. д, J=7,9 Гц, 2H), 5,86 (с, 1H), 4,53 (с, 1H), 4,41 (д, J=7,6 Гц, 1H), 4,09 (к, J=7,3 Гц, 2H), 4,02-3,93 (м, 2H), 3,79 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 3,71 (с, 3H), 3,70 (с, 3H), 2,88 (с, 1H), 2,01 (с, 3H), 1,22 (т, J=7,2 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=886,2 [M+H].
6f
Стадия 5. Получение соединения
6d
6d
6e
6f
3
2
2
+
Соединение  совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CHCN (1 : 1, 6 мл x 2) до применения. Смесь  (699 мг, 0,79 ммоль),  (739,81 мг, 1,1 ммоль, CAS № 103285-33-2) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 5 г) в безводном THF (20 мл) перемешивали при кт в течение 1 ч в атмосфере N. Добавляли DMAP в один прием (481,97 мг, 3,94 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 40 °C (температура масла) в течение 5 ч в атмосфере N. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (15 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH : DCM=0-10%) с получением  (969 мг) в виде бледно-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1416,2 [M+H].
6g
Стадия 6. Получение соединения
6f
6g
2
3
1
+
DCA (6% в DCM, 10,8 мл) добавляли к раствору соединения (1,1 г, 0,78 ммоль) в DCM (22 мл) в атмосфере N, полученный красный раствор перемешивали при кт в течение 30 мин, впоследствии гасили пиридином (12 мл). Прозрачную реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного остатка, который очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH : DCM=0-10%) с получением соединения  (740 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ 8,67 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 8,14-8,09 (м, 3H), 7,71-7,65 (м, 1H), 7,62-7,56 (м, 2H), 6,19 (д, J=5,3 Гц, 1H), 6,03 (с, 1H), 5,53 (т, J=5,4 Гц, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 4,48 (с, 1H), 4,43 (с, 1H), 4,32 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,14 (уш. д, J=3,8 Гц, 1H), 3,99 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,83-3,77 (м, 1H), 3,73-3,66 (м, 2H), 3,60 (с, 3H), 3,54 (д, J=13,3 Гц, 1H), 3,30-3,23 (м, 2H), 2,67 (тд, J=6,7, 13,7 Гц, 1H), 1,17 (дд, J=2,4, 6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=812,2 [M+H].
6i
Стадия 7. Получение соединения
6g
6h.
6i
3
3
3
2
2
3
N, N,N',N'
+
+
Соединение  (105 мг, 0,129 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (12 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4Å (0,3 г) и 0,45 M тетразол в CHCN (2,3 мл, 1,03 ммоль) и полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания данной смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита в CHCN (59 мг, 0,19 ммоль, 3,0 мл CHCN) в течение 30 мин при кт. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). (Соединение МС: m/z 911 [M+H]). Полученную смесь использовали непосредственно на следующей стадии. Добавляли 0,5 M раствор йода (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и гасили избыток йода насыщенным водным раствором NaSO (пока раствор не обесцветился). Слои разделяли; органический слой промывали водным насыщенным раствором NaHCO3 (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха, очищали полученный неочищенный материал посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM: 0-15%, об./об.) с получением соединения (75 мг); ИЭР-МС: m/z=927 [M+H].
9
Стадия 8. Получение соединения
6i
9
соединения 9 (натриевая соль)
2
3
2
2
1
31
-
Раствор соединения  (75 мг, 0,08 ммоль) в MeNH (33% в EtOH, 6 мл) перемешивали при 40 °C в течение 2 ч 30 мин, концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4мк, Hydro RP, 250 мм x 30 мм x 10 мкМ, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония в CHCN; градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока: 24 мл/мин) с получением соединения (18,2 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением (17,3 мг). H ЯМР (400 МГц, DO): δ 7,96 (с, 1H), 7,72 (с, 1H), 7,12 (с, 1H), 5,90-6,12 (м, 3H), 4,97 (с, 1H), 4,79 (с, 1H), 4,60 (м, 1H), 4,41 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,25 (д, J=4,0 Гц, 1H), 4,05 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,90-4,01 (м, 1H), 3,85 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,55 (д, J=12,8 Гц, 1H), 3,41 (с, 3H), 3,31 (д, J=12,8 Гц); P ЯМР (162 МГц, DO): δ -1,46 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z: 698 [M+1].
Пример 7
7b
Стадия 1. Получение соединения
1g
7a.
3
3
3
N, N,N',N'
m/z
+
Соединение  (80 мг, 0,099 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×15 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (10 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,3 г) и 0,45 M тетразола в CHCN (1,3 мл, 0,598 ммоль) и барботировали полученную гетерогенную смесь аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин, добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита в CHCN (48 мг, 0,16 ммоль, в 3,0 мл CHCN) в течение 30 мин при кт. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч смесь фильтровали и промывали THF (15 мл). (Соединение  МС:  901 [M+H]). Полученную смесь использовали непосредственно на следующей стадии.
3
7b
+
Очень медленно добавляли раствор бороводород-диметилсульфидного комплекса (2,0 M в THF, BH-DMS, 180 мкл, 0,35 ммоль) в течение 5 мин при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси в течение 20 мин при кт реакционную смесь быстро фильтровали, разбавляли EtOAc (50 мл) и гасили водой (20 мл). Слои разделяли; органический слой промывали водой (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл); водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1×20 мл). Впоследствии органические слои объединяли и выпаривали досуха. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM, об./об.) с получением  (48 мг). ИЭР-МС: m/z=915 [M+H].
соединения
(*
R
) 14A
Стадия 2. Получение
7b
соединения 14
соединения (*
R
) 14A (натриевая соль)
2
3
2
2
2
1
31
19
-
Раствор соединения  (48 мг) в MeNH (33% в EtOH, 6 мл) перемешивали при 40°C в течение 2 ч и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 4,6 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CHCN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением  (20,2 мг) в виде соли TΈAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением (18,8 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ 7,92 (с, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 6,17-6,24 (д, J=20,8 Гц, 1H), 5,95 (д, J=7,2 Гц, 1H), 5,45 (с, 1H), 5,29 (с, 0,5H), 5,16 (с, 0,5H), 4,70-4,85 (м, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,33 (д, J=8 Гц, 1H), 4,27 (с, 1H), 4,05-4,15 (м, 1H), 3,96 (д, J=10,8 Гц, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 1H), 3,44 (с, 1H), 3,30-3,44 (м, 2H), 0,3 (уш. с., 3H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ 95,57 м. д. (с, 1 P). F ЯМР (379 МГц, DO) δ широкий пик, -196,84 м. д. (с, 1F); ИЭР-МС: m/z: 686,8 [M+H].
Пример 8
8b
8c
Стадия 1. Получение соединений  и
8a
8b
8c
8b
8c
NaH (60% в минеральном масле, 4,864 г, 121,61 ммоль) добавляли к раствору аденозина  (25 г, 93,549 ммоль) в DMF (800 мл) при -5 °C. После перемешивания смеси в течение 1,5 ч при -5 °C по каплям добавляли раствор хлорида 4-метоксибензила (15,15 г, 112,26 ммоль) в DMF (50 мл) в течение 2 ч. После завершения добавления реакционную смесь подогревали до кт и перемешивали в течение 18 ч. К реакционной смеси добавляли воду (15 мл) и перемешивали смесь при 15 °C в течение 10 мин. Полученную смесь объединяли с другими реакционными смесями и выпаривали DMF в высоком вакууме. Суспензию разбавляли с помощью MeOH, фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=100 : 0 ~ 20 : 1) с получением  и ; смесь разделяли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250×50 мм x 10 мкм; условия: вода-MeCN, начало B 2%, конец B 36%; время градиентного элюирования: 18 мин; 100% B, время удержания: 14 мм; скорость потока: 100 мл/мин) с получением  (75 г) и  (15,5 г), оба в виде белого твердого вещества (общий выход 66%).
8b
1
+
6
Соединение . H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8,31 (с, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,36 (с, 2H), 7,06 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,03 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,51 (дд, J=4,4, 7,2 Гц, 1H), 5,32 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,71-4,46 (м, 2H), 4,43-4,30 (м, 2H), 4,03 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 3,74-3,61 (м, 4H), 3,61-3,49 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M+H].
8
1
+
6
Соединение c: H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8,35 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,49-7,30 (м, 4H), 6,93 (д, J=8,4 Гц, 2H), 5,92 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,57 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,51 (дд, J=4,4, 7,3 Гц, 1H), 5,64-5,40 (м, 1H), 5,56-5,37 (м, 1H), 4,89-4,73 (м, 1H), 4,72-4,62 (м, 1H), 4,62-4,49 (м, 1H), 4,60-4,48 (м, 1H), 4,15-3,98 (м, 2H), 3,75 (с, 3H), 3,70-3,60 (м, 1H), 3,53 (ддд, J=3,6, 7,6, 11,8 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M+H].
8d
Стадия 2. Получение соединения
8c
8d
2
4
6
1
+
К раствору соединения  (10 г, 25,81 ммоль) в пиридине (200 мл) по каплям добавляли хлортриметилсилан (14,74 мл, 116,162 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси в течение 2 ч ее охлаждали до 0°C и добавляли по каплям хлорид бензоила (6 мл) при 0°C в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение ночи и осторожно гасили водой (30 мл) при 0 °C, впоследствии по каплям добавляли водный раствор аммиака (60 мл) при 0 °C. После перемешивания смеси в течение 1,5 ч реакцию разбавляли с помощью DCM (800 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (200 мл × 3), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растирали с EtOAc (100 мл) с получением соединения  (9,8 г) в виде белого твердого вещества, H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 11,21 (с, 1H), 8,72 (д, J=13,2 Гц, 2H), 8,06-7,89 (м, 2H), 7,71-7,58 (м, 1H), 7,57-7,46 (м, 2H), 7,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,90 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,05 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,67 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,18 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,91-4,76 (м, 1H), 4,73-4,59 (м, 1H), 4,53 (д, J=11,6 Гц, 1H), 4,17-4,04 (м, 2H), 3,72 (с, 3H), 3,66 (тд, J=4,4, 12,0 Гц, 1H), 3,53 (ддд, J=3,6, 6,0, 12,0 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M−H].
8e
Стадия 3. Получение соединения
8d
8e
3
4
3
2
4
+
К перемешиваемой суспензии соединения  (7 г, 14,24 ммоль), трифенилфосфина (5,6 г, 21,36 ммоль), TBAI (1,05 г, 2,85 ммоль) и NaN (6,67 г, 102,54 ммоль) в DMF (90 мл) частями добавляли CBr (7,085 г, 21,363 ммоль) при 0 °C с получением желтой суспензии. После перемешивания ON при 35 °C смесь выливали в водный насыщенный раствор NaHCO (500 мл) в условиях перемешивания. Смесь экстрагировали с помощью DCM (200 мл x 3). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением  (6,4 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=517,2 [M+H].
8f
Стадия 4. Получение соединения
8e
8f
3
2
4
6
1
+
К раствору  (6,0 г, 11,61 ммоль, двукратно выпаренному совместно с пиридином до применения) в пиридине (100 мл) добавляли DMTrCl (7,87 г, 23,23 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение ночи ее разбавляли с помощью EA (800 мл) и промывали насыщенным NaHCO (200 мл х 2) и солевым раствором (200 мл х 2). Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/EtOAc) с получением в виде желтого твердого вещества (6,8 г). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ11,21 (с, 1H), 8,64 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 8,58-8,45 (м, 1Н), 8,04 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,74-7,59 (м, 1H), 7,58-7,47 (м, 2H), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,22 (дд, J=2,8, 6,8 Гц, 2H), 7,15-7,07 (м, 5H), 6,98 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,91 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,60 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,27 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,24 (дд, J=4,4, 7,6 Гц, 1H), 4,30 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=4,8, 7,8 Гц, 1H), 4,05-3,99 (м, 1H), 3,80-3,58 (м, 10H), 3,21 (дд, J=4,8, 12,8 Гц, 1H), 2,56 (д, J=4,4 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=819,4 [M+H].
8g
Стадия 5. Получение соединения
8f
8g
3
2
2
4
6
1
+
К смеси (6,8 г, 8,3 ммоль) в THF (80 мл) в один прием добавляли PPh (3,27 г, 12,46 ммоль); смесь перемешивали при 40 °C в течение 2 ч в атмосфере N с последующим добавлением воды (30 мл), впоследствии дополнительно перемешивали в течение еще 12 ч с получением бесцветного раствора. Смесь объединяли с другой для увеличения масштаба. Большую часть летучих соединений удаляли при пониженном давлении и разделяли оставшийся водный слой между DCM/водой. Слой собирали и экстрагировали с помощью DCM (200 мл х 3). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением  (6,4 г, общий выход 89%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 8,74-8,65 (м, 1H), 8,54 (с, 1H), 8,13-8,01 (м, 2H), 7,74-7,63 (м, 1H), 7,62-7,51 (м, 2H), 7,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,24 (дд, J=3,2, 6,4 Гц, 2H), 7,19-7,07 (м, 5H), 6,97 (дд, J=8,8, 18,0 Гц, 4H), 6,73 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,62 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,25 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,16 (дд, J=4,4, 7,6 Гц, 1H), 4,30 (д, J=10,8 Гц, 1H), 4,16-4,04 (м, 2H), 4,01-3,95 (м, 1H), 3,84-3,59 (м, 9H), 2,72 (д, J=4,8 Гц, 1H), 2,67-2,58 (м, 1H), 2,67-2,58 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=794,4 [M+H].
8h
Стадия 6. Получение соединения
8g
8h
3
2
2
4
6
1
+
Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (5,57 г, 23,46 ммоль) в безводном DCM (5 мл) быстро добавляли к смеси  (6,2 г, 7,82 ммоль), 4-нитрофенола (3,26 г, 23,46 ммоль), EtN (4,75 г, 46,92 ммоль) в безводном DCM (20 мл) в атмосфере N при -78 °C, впоследствии нагревали до комнатной температуры в течение 1,5 ч. Смесь переносили в разделительную воронку, промывали водным насыщенным NaHCO3 (200 мл x 4). Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением  (6,2 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 11,32 (уш. с, 1H), 9,29 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,33-8,24 (м, 2H), 8,13 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,72-7,63 (м, 1H), 7,60-7,46 (м, 4H), 7,31 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,27-7,19 (м, 2H), 7,18-7,06 (м, 5H), 6,95 (д, J=8,0 Гц, 4H), 6,73 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,60 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,30 (д, J=7,8 Гц, 1H), 5,11 (дд, J=4,8, 7,8 Гц, 1H), 4,39-4,22 (м, 2H), 4,10-3,93 (м, 2H), 3,83-3,59 (м, 10H), 2,84 (д, J=4,8 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=994,2 [M+H].
8j
Стадия 7. Получение соединения
39h
8h
8j
2
2
3
2
4
+
Суспензию  (1,3 г, 1,92 ммоль),  (2,48 г, 2,5 ммоль) и молекулярных сит (1,5 г) в безводном THF (20 мл) перемешивали в атмосфере N в течение 30 мин при комнатной температуре с последующим добавлением DMAP (0,94 г, 7,7 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 45°C в атмосфере N реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; его растворяли в DCM (300 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO (100 мл x 3). Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-70% EtOAc в PE) с получением (2,7 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=766,2 [M+H].
8k
Стадия 8. Получение соединения
8j
8k
1
19
+
6
6
К смеси (2,7 г, 1,76 ммоль) в DCM (80 мл) добавляли воду (318 мг, 17,64 ммоль) и DCA (335 мг, 4,06 ммоль) с получением желтого раствора. После перемешивания смеси при кт в течение 1,5 часа к ней добавляли MeOH (2 мл) с последующим добавлением пиридина (558,1 мг) с получением бесцветного раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и очищали остаток посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,28 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 11,26 (уш. д, J=10,8 Гц, 2H), 9,02-8,50 (м, 5H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 4H), 7,79-7,62 (м, 2H), 7,61-7,48 (м, 4H), 7,36 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,93 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,50 (дд, J=2,4, 16,8 Гц, 1H), 6,09 (д, J=5,6 Гц, 1H), 5,99-5,83 (м, 1H), 5,79 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 5,53-5,27 (м, 2H), 5,11-4,93 (м, 1H), 4,79-4,53 (м, 2H), 4,42-4,29 (м, 1H), 4,27-4,03 (м, 2H), 3,89-3,71 (м, 4H), 3,68-3,56 (м, 1H), 3,55-3,38 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) = -202,67 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=926,3 [M+H].
8l
Стадия 9. Получение соединения
3
2
3
2
2
3
3
3
8k
8l
N, N,N',N'
1
19
31
+
THF перед работой перегоняли над смесью натрий/бензофенон, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения. К раствору  (200 мг, 0,21 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (6 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (800 мг, порошок) и раствор 1H-тетразола (4,8 мл, 0,45 M, 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN с последующим добавлением молекулярных сит 4,4 (1 г, порошок), перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N перед использованием). После продувки колбы с помощью N посредством шприца по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (117 мг, 0,39 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин; после перемешивания реакционной смеси при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор TBHP (0,34 мл, 1,73 ммоль, 5 M). После перемешивания смеси в течение еще 30 мин концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении и очищали остаток посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% DCM в MeOH) с получением  в виде белого твердого вещества (153 мг, 0,14 ммоль). H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 9,85 (уш. с, 1H), 9,79-9,72 (м, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,87-8,84 (м, 1H), 8,64-8,59 (м, 1H), 8,20-8,14 (м, 1H), 8,10-8,04 (м, 4H), 8,02-7,95 (м, 3H), 7,65-7,56 (м, 3H), 7,55-7,45 (м, 6H), 6,05-5,94 (м, 1H), 4,81-4,71 (м, 2H), 4,66 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 4,52-4,47 (м, 1H), 4,36-4,21 (м, 4H), 4,01 (уш. дд, J=4,4, 8,8 Гц, 1H), 3,92-3,80 (м, 6H), 2,67 (т, J=6,0 Гц, 1H), 2,43-2,28 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, CDCl) δ -196,54 - -197,10 (м, 1F); P ЯМР (162 МГц, CDCl) δ -2,49 (с, 1P), -4,38 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=780,2 [M/2+H].
8m
Стадия 10. Получение соединения
8l
8m
2
Раствор  (153 мг, 0,14 ммоль) в MeNH/EtOH (5 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, растворенного в воде (20 мл); водный слой промывали с помощью DCM (10 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением 114 мг  в виде белого твердого вещества.
соединения 41 (аммонийная соль)
Стадия 11. Получение
8m
соединения 41 (аммонийная соль)
2
4
3
6
6
6
‘1
19
31
+
Раствор анизола (158 мг, 1,46 ммоль) в TFA (1,57 мл, 20,47 ммоль) охлаждали до 0°C и добавляли к  (114 мг). После перемешивания реакционной смеси при 0°C в течение 2,5 ч TFA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили с помощью MeNH (33% раствор в EtOH, 1,6 мл) при 0 °C и выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток разделяли между DCM/водой (15 мл x 3/15 мл). Водный слой лиофилизировали с получением белого остатка, дополнительно очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25.) с получением в виде белого твердого вещества (45 мг). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 10,63 (уш. с, 1H), 8,44-8,37 (м, 1H), 8,25 (уш. с, 1H), 8,04 (уш. с, 2H), 7,38-6,89 (м, 2H), 6,41 (уш. д, J=19,6 Гц, 1H), 6,13(д, J=8,4 Гц, 1H), 6,01-5,83 (м, 1H), 5,60 (уш. с, 1H), 5,31 (уш. с, 1H), 4,45 (уш. д, J=5,2 Гц, 1H), 4,28 (уш. с, 2H), 4,12-4,04 (м, 1H), 3,99 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ -198,36 - -200,33 (м, 1F); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. -3,40 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=659,9 [M+H].
соединения 41 (натриевая соль)
Стадия 12. Получение
соединения 41 (аммонийная соль)
соединение 41 (аммонийная соль)
соединения 41 (натриевая соль)
2
4
2
4
2
4
2
2
2
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (9 мл, H-форма) добавляли в стакан (на 45 мг ) и промывали деионизированной водой (50 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (50 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 CV [объема колонки]) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде (20 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции, (45 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды, добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Нужные фракции объединяли и лиофилизировали с получением (31,4 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DO, 400 МГц) δ 8,06 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,62-7,87 (м, 1H), 7,28 (уш. с, 1H), 6,24 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 6,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 5,49-5,74 (м, 1H), 5,22-5,31 (м, 1H), 5,11 (уш. д, J=16,4 Гц, 1H), 4,53 (уш. с, 1H), 4,44 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,39 (уш. с, 1H), 4,34 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,98 (уш. δ, J=8,8 Гц, 1H), 3,71-3,79 (м, 1H), 3,60-3,70 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -201,23 (уш. с, 1F), P ЯМР (162 МГц, DO) δ -2,76 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H].
Пример 9
9b
Стадия 1. Получение соединения
9a
9b
2
4
6
1
+
Раствор соединения  (8,3 г, 27,27 ммоль, CAS № 2086765-82-2) в безводном пиридине (160 мл) при 0 °C, к которому по каплям добавляли хлортриметилсилан (14,8 г, 136,36 ммоль), перемешивали при 0°C в течение 1,5 ч. Добавляли по каплям хлорид бензоила (19,2 г, 136,36 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционный раствор, охлажденный на ледяной бане, гасили добавлением воды (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли водный раствор аммиака (70 мл 25% раствора) и продолжали перемешивание в течение еще одного часа. Реакционный раствор экстрагировали с помощью EtOAc, объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде желтого твердого вещества (9,1 г, выход: 80%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,11 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,66-7,61 (м, 1H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,13 (тд, J=6,3, 12,0 Гц, 1H), 4,92 (т, J=6,8 Гц, 1H), 4,80 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,55 (дд, J=4,4, 7,2 Гц, 1H), 3,59-3,46 (м, 2H), 2,32-2,20 (м, 2H), 2,16-2,03 (м, 1H), 1,49 (с, 3H), 1,23 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=409,1 [M+H].
9c
Стадия 2. Получение соединения
9b
9c
3
2
4
2
3
2
4
6
1
+
d
m/z
DMAP (448 мг, 3,76 ммоль) и хлорид тозила (2,80 г, 14,69 ммоль) добавляли к раствору соединения  (3,0 г, 7,35 ммоль) и EtN (2,33 г, 22,04 ммоль) в DCM (60 мл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь гасили водой и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении с получением тозилированного соединения. Неочищенный продукт растворяли в DMF (30 мл), добавляли азид натрия (2,34 г, 36,00 ммоль) и перемешивали полученную реакционную смесь при 30°C в течение ночи. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, разбавляли насыщенным водным NaCO и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-40% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде желтого твердого вещества (2,1 г, выход: 62%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,13 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,10-8,03 (м, 2H), 7,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,67-7,61 (м, 1H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 5,16 (тд, J=6,3, 12,0 Гц, 1H), 4,99-4,89 (м, 1H), 4,55 (дд, J=5,1, 7,2 Гц, 1H), 3,63-3,46 (м, 2H), 2,41-2,27 (м, 2H), 2,20-2,07 (м, 1H), 1,50 (с, 3H), 1,24 (с, 3H); ИЭР-МС:  434,1 [M+H].
9d
Стадия 3. Получение соединения
9c
9d
2
3
2
4
6
1
+
J
J
J
J
J
m/z
TFA (40 мл) добавляли к раствору соединения  (5,4 г, 12,46 ммоль) в DCM (100 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении повторно растворяли в MeOH (20 мл) с последующим добавлением насыщенного водного KCO (40 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 20 мин, после чего экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении с получением соединения, которое использовали в таком виде на следующей стадии. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,08 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,07 (уш. д, =7,5 Гц, 2H), 7,67-7,61 (м, 2H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,66 (д, =3,5 Гц, 1H), 5,10-5,01 (м, 1H), 4,97 (д, =6,5 Гц, 1H), 4,89 (д, =4,8 Гц, 1H), 4,27 (тд, =6,1, 8,1 Гц, 1H), 3,84-3,80 (м, 1H), 3,60-3,48 (м, 2H), 2,34-2,25 (м, 1H), 2,23-2,12 (м, 1H), 1,67-1,55 (м, 1H); ИЭР-МС:  394,0 [M+H].
9e
Стадия 4. Получение соединения
9d
9e
9e
9c
2
4
6
1
+
d
m/z
Вышеуказанное соединение растворяли в DCM (90 мл) с последующим добавлением имидазола (2,42 г, 35,52 ммоль) и TBSCl (2,68 г, 17,76 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее выливали в воду и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением и его 3’-региоизомера. Разделение проводили препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi, 10 мкм Max-RP, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения  (2,3 г, выход: 50% из ) в виде первого элюируемого изомера. H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,05 (уш. с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,8 Гц, 2H), 7,60-7,68 (м, 2H), 7,47-7,59 (м, 2H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,10-5,23 (м, 1H), 4,63 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,37 (дд, J=8,0, 5,8 Гц, 1H), 3,74-3,84 (м, 1H), 3,48-3,62 (м, 2H), 2,10-2,30 (м, 2H), 1,66-1,85 (м, 1H), 0,64 (с, 9H), -0,16 (с, 3H), -0,37 (с, 3H); ИЭР-МС:  508,1 [M+H].
9f
Стадия 5. Получение соединения
9e
9f
1
+
6
DMTrCl (3,87 г, 11,43 ммоль), AgNO3 (4,85 г, 28,56 ммоль) и 2,4,6-коллидин (3,46 г, 28,56 ммоль) добавляли к раствору соединения  (2,9 г, 5,71 ммоль) в DCM (50 мл), полученную смесь перемешивали при 35°C в течение ночи. Реакционный раствор фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-20% EtOAc в петролейном эфире) с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi Max-RP, 10 мкм, 250×50 мм, подвижная фаза: 0,1% водный TEA (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения(3,6 г, выход 78%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,04 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,08 (д, J=7,4 Гц, 2H), 7,66 (д, J=3,5 Гц, 1H), 7,61-7,65 (м, 1H), 7,55 (к, J=7,3 Гц, 4H), 7,40 (т, J=8,6 Гц, 4H), 7,27-7,35 (м, 2H), 7,18-7,26 (м, 1H), 6,85-6,96 (м, 4H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,50 (к, J=9,1 Гц, 1H), 4,42 (дд, J=9,1, 4,1 Гц, 1H), 3,74 (с, 3H), 3,73 (с, 3H), 3,64 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 3,27-3,37 (м, 1H), 3,20 (дд, J=12,3, 5,5 Гц, 1H), 2,26-2,37 (м, 1H), 1,71-1,84 (м, 1H), 1,59-1,71 (м, 1H), 0,60-0,78 (м, 9H), -0,27 - -0,18 (м, 3H), -0,59 - -0,51 (м, 3H); ИЭР-МС: m/z=810,1 [M+H].
9g
Стадия 6. Получение соединения
9f
9g
2
3
2
3
2
4
m/z
+
Раствор соединения  (2,3 г, 2,84 ммоль) в EtOAc (80 мл) перемешивали в атмосфере H (50 фунтов на кв. дюйм) при 35°C в течение ночи в присутствии Pd/C (10% на угле, 2,0 г). Катализатор удаляли фильтрованием через диатомитовую землю и остаток на фильтре промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина, которое использовали сразу в таком виде на следующей стадии. Неочищенный продукт растворяли в DCM (90 мл), с последующим добавлением 4-нитрофенола (2,81 г, 20,21 ммоль), EtN (1,23 г, 12,12 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78°C в атмосфере N , после чего по каплям добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила (2,88 г, 12,12 ммоль) в DCM (10 мл), реакционному раствору позволяли прогреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, высушивали над NaSO и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-20% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения (1,4 г, выход: 80% (чистота по данным ЖХ-УФ: 76%)). ИЭР-МС:  986,6 [M+H].
9h
Стадия 7. Получение соединения
9g
9g
9h
3
4
m/z
+
В реакционную колбу помещали DMAP (0,55 г, 4,47 ммоль), безводный THF (6 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь встряхивали при комнатной температуре в инертной атмосфере в течение 2 ч. Одновременно раствор 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина [103285-33-2], (0,33 г, 0,46 ммоль) и раствор соединения  (1,16 г, 0,89 ммоль), каждый в безводном THF (2×6 мл), высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора 5'-O-(4,4'-диметокситритил) -N2-изобутирил-2'-O-метилгуанозина и соединения  соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,17 г, выход: 86%). ИЭР-МС:  1515,9 [M+H].
9i
Стадия 8. Получение соединения
9h
9i
1
+
d)
J
J
J
J
J
J
J
m/z
Раствор соединения  (1,13 г, 0,75 ммоль) в DCM (20 мл) обрабатывали с помощью DCA (250 мкл, 2,98 ммоль) в присутствии воды (67 мкл, 3,73 ммоль) в течение 2,5 ч. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (360 мкл, 4,47 ммоль). Полученный раствор наносили в таком виде на силикагелевую колонку для очистки (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (595 мг, выход: 87%). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ- δ м. д. 12,01 (уш. с, 1H), 9,70 (уш. с, 1H), 8,71 (уш. с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,57-7,63 (м, 1H), 7,49-7,57 (м, 2H), 7,13 (д, =3,7 Гц, 1H), 7,00 (д, =3,6 Гц, 1H), 6,12 (д, =4,0 Гц, 1H), 5,49 (т, =4,5 Гц, 1H), 4,74-4,83 (м, 2H), 4,39 (уш. т, =5,3 Гц, 1H), 4,12-4,27 (м, 1H), 4,04-4,10 (м, 1H), 3,97-4,04 (м, 1H), 3,74-3,82 (м, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,37-3,46 (м, 1H), 3,17-3,26 (м, 1H), 2,65 (спт, =7,0 Гц, 1H), 2,45-2,54 (м, 1H), 2,39-2,49 (м, 1H), 1,96-2,03 (м, 1H), 1,17 (д, =6,6 Гц, 3H), 1,18 (д, J=6,6 Гц, 3H), 0,75 (с, 9H), -0,23 (с, 3H), -0,44 (с, 3H); ИЭР-МС:  911,6 [M+H].
9j
Стадия 9. Получение соединения
9i
9j
H
N, N,N',N'
t
d
J
d)
m/z
2
2
3
3
1
31
+
Раствор соединения  (530 мг, 0,58 ммоль) в безводном THF/MeCN (1 : 1, 108 мл, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в инертной атмосфере (прибл. 2 ч встряхивание), добавляли 1-тетразол (5,0 мл 3-4% в MeCN, 1,73 ммоль, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å до применения) и встряхивали смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее за раз добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (180 мкл, 0,58 ммоль) и продолжали встряхивание в течение 18 ч. В заключение добавляли две равные порции BuOOH (2×120 мкл 5,5 M раствора в декане, 2×0,63 ммоль) с интервалом 30 мин, после чего реакционную смесь встряхивали в течение еще 2 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали смесью насыщенного водного NaSO и насыщенного водного NaHCO и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (130 мг, выход: 21%). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-) δ м. д. -0,04 (уш. с, 3H), 0,11 (с, 3H), 0,85 (с, 9H), 0,93 (уш. д, J=6,9 Гц, 3H), 1,10 (д, J=6,9 Гц, 3H), 2,42-2,52 (м, 1H), 2,52-2,69 (м, 2H), 2,89 (тд, J=5,9, 2,8 Гц, 2H), 2,93 (уш. д, J=5,7 Гц, 1H), 3,37-3,50 (м, 1H), 3,56-3,67 (м, 4H), 4,35 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,37-4,48 (м, 4H), 4,53 (дт, J=5,3, 3,7 Гц, 1H), 4,80 (уш. с, 1H), 4,99 (ддд, =11,0, 5,3, 3,7 Гц, 1H), 5,27-5,32 (м, 1H), 5,95-6,02 (м, 2H), 7,03 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,12 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,52-7,58 (м, 2H), 7,58-7,65 (м, 1H), 7,59-7,67 (м, 1H), 8,04 (с, 1H), 8,12 (д, J=7,3 Гц, 2H), 8,93 (уш. с, 1H), 9,10 (уш. с, 1H), 10,66 (уш. с, 1H), 12,10 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, ХЛОРОФОРМ- δ м. д. -3,52 (с, 1P); ИЭР-МС:  1026,6 [M+H].
соединения 8 (натриевая соль)
Стадия 10. Получение
9j
8
соединения 8 (натриевая соль)
3
6
6
1
31
+
d
d
Соединение  (118 мг, 0,11 ммоль) перемешивали в растворе 33% метиламина в этаноле (5,9 мл) при 40°C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (6 мл) с последующим добавлением EtN (460 мкл, 3,31 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (280 мкл, 1,66 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°C в течение 18 ч. Добавляли изопропокситриметилсилан (1,17 мл, 6,62 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 2 дней. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в безводном ацетонитриле, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% водный бикарбонат аммония (A) -MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением в виде рыхлого белого твердого вещества (32 мг, выход: 41%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 10,31 (уш. с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,76 (уш. с, 1H), 7,21 (д, J=3,3 Гц, 1H), 6,74 (д, J=3,1 Гц, 1H), 6,48-6,60 (м, 5H), 6,02 (д, J=8,4 Гц, 1H), 5,92 (дд, J=8,4, 4,3 Гц, 1H), 4,80-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,34-4,43 (м, 1H), 4,30 (д, J=3,8 Гц, 2H), 4,18 (дд, J=12,2, 3,6 Гц, 1H), 4,08 (дд, J=12,5, 2,8 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,16 (уш. д, J=6,1 Гц, 2H), 2,25-2,37 (м, 2H), 1,45-1,57 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 1,42 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=685,3 [M+H].
Пример 10
10b
Стадия 1. Получение соединения
10a
10b
3
2
4
6
d
+
К раствору соединения  (0,8 г, 2,15 ммоль) в DMF (6 мл) добавляли имидазол (439,98 мг, 6,46 ммоль) и TBSCl (616,94 мг, 4,09 ммоль). После перемешивания при кт в течение 1,5 ч смесь объединяли с другой порцией и разбавляли с помощью EA (800 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (200 мл х 2), солевым раствором (200 мл х 2), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-70% EA в PE) с получением соединения(5,5 г) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ 11,44 (уш. с, 1H), 8,66 (уш. с, 1H), 8,17-7,92 (м, 2H), 7,85 (уш. с, 1H), 7,69-7,59 (м, 1H), 7,57-7,33 (м, 2H), 5,44-5,09 (м, 2H), 5,02 (уш. д, J=5,4 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,01 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 3,87 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 3,80-3,61 (м, 2H), 0,84 (с, 9H). 0,01 (д, J=4,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=486,2 [M+H].
10c1
10c2
Стадия 2. Получение соединения  и
10b
10b
10c1
10c2
3
2
4
+
Соединение  перед использованием дважды совместно выпаривали с пиридином (10 мл). К раствору соединения  (1,7 г, 0,88 ммоль) в пиридине (15 мл) добавляли DMTrCl (41,78 г, 5,25 ммоль). После перемешивания при кт в течение 2 ч смесь объединяли с другой порцией и разбавляли с помощью EtOAc (500 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (150 мл х 2), солевым раствором (150 мл х 2), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-70% EtOAc в PE) с получением смеси  и  (3,9 г). ИЭР-МС: m/z=788,4 [M+H].
10d1
10d2
Стадия 3. Получение соединения  и
10c1
10c2
10d1
10d2
3
2
4
+
К раствору  и  (2,5 г, 3,17 ммоль) в DMF (25 мл) добавляли NaH (60% в минеральном масле, 482,3 мг, 12,05 ммоль) при 0 °C. Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и по каплям добавляли раствор хлорид 4-метоксибензила (745,31 мг, 4,76 ммоль) в DMF (5 мл) в течение 10 мин. После перемешивания при кт в течение 2 ч смесь гасили добавляемой по каплям водой (5 мл) и разбавляли с помощью EA (500 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (150 мл х 2), солевым раствором (150 мл х 2), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-40% EA в PE) с получением смеси  и  (1,9 г). ИЭР-МС: m/z=908,4 [M+H].
10e1 и 10e2
Стадия 3. Получение соединений
10e1
10e2
10e1 и 10e2
+
Раствор  и  (1,9 г, 2,09 ммоль) в DCM (30 мл) обрабатывали водой (0,38 мл, 20,92 ммоль) и DCA (0,69 мл, 8,37 ммоль). Полученный желтый раствор перемешивали при кт в течение 2 ч. Впоследствии добавляли к MeOH (0,15 мл) с последующим добавлением пиридина (662 мг) с получением бесцветного раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с получением смеси соединений (1,05 г) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=606,1 [M+H].
10f1
10f2
Стадия 4. Получение соединений  и
10e1
10e2
10f1
10f2
10f1
10f2
10f2
10f2
10f1
3
2
4
4
3
Смесь соединений  и  (1,2 г, 1,98 ммоль) в THF (12 мл) обрабатывали в один прием с помощью TBAF (3 мл, 1 M). Смесь перемешивали при кт в течение 3 ч и гасили водным насыщенным NaHCO (150 мл). Органический слой высушивали (безводным NaSO), фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (5% MeOH в DCM) с получением смеси соединений  и . Смесь  и  объединяли с другой порцией и растирали с MeOH; в MeOH образовался осадок; после фильтрования и промывки небольшим количеством MeOH его идентифицировали как главный чистый изомер соединения  (659 мг); остаточную жидкость концентрировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 10 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 25%, конец B: 45%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением дополнительного количества соединения  (97 мг) и побочного изомера соединения  (200 мг), каждый - в виде белого твердого вещества.
10f1
1
+
d
6
Соединение . H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ 8,51 (с, 1H). 8,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 7,81 (с, 1H), 7,67-7,63 (м, 1H), 7,57-7,53 (м, 2H), 7,17 (д, J=8,0 Гц, 2H), 6,80 (д, J=8,0 Гц, 2H), 5,28 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,09 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 4,83 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,64 (д, J=12 Гц, 1H), 4,47 (д, J=12 Гц, 1H), 4,28 (т, J=4,0 Гц, 1H), 4,20 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,91 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,70 (с, 3H), 3,61-3,58 (м, 1H), 3,51-3,47 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=492,2 [M+H].
10f2
1
+
d
6
Соединение . H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ 8,61 (уш. с, 1H), 8,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 7,92 (уш. с, H), 7,69-7,65 (м, 1H), 7,58-7,54 (м, 2H), 7,33 (д, J=8,0 Гц, 2H), 6,92 (д, J=8,0 Гц, 2H), 5,33 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,21 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 4,87 (т, J=8,0 Гц, 1H), 4,66 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,57-4,49 (м, 2H), 4,01 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,95 (т, J=4,0 Гц, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,60-3,55 (м, 1H), 3,50-3,45 (м, 1H); ИЭР-МС: м/z=492,3 [M+H].
10g
Стадия 5. Получение соединения
10f2
10g
10f2
3
2
4
6
1
+
d
К раствору N-(7-((2S,3S,4S,5R)-3-гидрокси-5-(гидроксиметил)-4-((4-метоксибензил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[2,1-f] [1,2,4]триазин-4-ил)бензамид, соединение  (400 мг, 0,81 ммоль), в пиридине (6 мл) добавляли DMTrCl (496 мг, 1,46 ммоль) при кт. После перемешивания при кт в течение ночи смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала и разбавляли с помощью DCM (50 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (50 мл x 3), высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире и 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (450 мг) в виде белого твердого вещества. Непрореагировавшее соединение  (160 мг) извлекали в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-) 11,50 (уш. с, 1H), 8,67 (уш. с, 1H), 7,99 (уш. д, J=6,0 Гц, 1H), 7,86 (уш. с, 1H), 7,65 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 7,54 (уш. т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29-7,35 (м, 2H), 7,23-7,29 (м, 2H), 7,17-7,23 (м, 7H), 6,83 (тд, J=6,0, 3,2 Гц, 6H), 5,45 (уш. д, J=4,8 Гц, 1H), 5,30 (уш. с, 1H), 4,63 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 4,43 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,12 (уш. с, 1H), 4,07 (уш. с, 1H), 3,72 (с, 9H), 3,20 (уш. д, J=7,6 Гц, 1H), 3,01 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=794,2 [M+H].
10h
Стадия 5. Получение соединения
10g
17a
10h
2
3
2
4
+
Перемешанную суспензию соединения  (450 мг, 0,56 ммоль), сульфамата  (744,735 мг, 0,850 ммоль) и молекулярных сит 4Å (1 г) в безводном THF (6 мл) обрабатывали с помощью DMAP (277 мг, 2,27 ммоль) при 25 °C. После перемешивания желтой суспензии при 45°C в течение 18 ч в атмосфере N реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; остаток растворяли в DCM (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO (100 мл x 4). Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в PE) с получением соединения  (604 мг) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=766,8 [M+H].
10i
Стадия 6. Получение соединения
10h
10i
1
19
+
6
6
d
Раствор соединения (704 мг, 0,46 ммоль) в воде (0,08 мл) и DCM (15 мл) обрабатывали с помощью DCA (118,6 мг, 0,92 ммоль) при комнатной температуре в течение 4 ч, впоследствии гасили пиридином (0,5 мл). После перемешивания при кт в течение 10 мин смесь концентрировали in vacuo с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в PE) с получением соединения (370 мг) в виде твердого вещества, H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 11,46 (уш. с, 1H), 11,24 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,45 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 8,03 (уш. т, J=8,0 Гц, 6H), 7,67-7,63 (м, 2H), 7,57-7,53 (м, 4H), 7,30 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 6,91 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 6,38-6,33 (м, 1H), 5,89 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 5,65 (уш. с, 1H), 5,51 (уш. с, 1H), 5,38 (уш. с, 1H), 4,95 (уш. с, 1H), 4,63-4,50 (м, 4H), 4,32 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,04-3,99 (м, 3H), 3,74 (с, 3H), 3,59 (уш. д, J=12,0 Гц, 2H), 3,29-3,22 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-;) δ -202,69 (тд, J=18,8, 52,6 Гц, 1F); ИЭР-МС: m/z=926,5 [M+H].
10j
Стадия 7. Получение соединения
3
2
3
2
2
f
10i
10j
N, N,N',N'
+
ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения. К раствору соединения  (220 мг, 0,24 ммоль, высушен лиофилизацией) растворенного в THF (4 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг) и раствор 1H-тетразола (5,28 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 945 мг тетразола (высушенного лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N до применения). Колбу несколько раз продували с помощью N. Раствор 2-цианоэтил--тетраизопропилфосфородиамидита (129 мг, 0,43 ммоль) в THF (2 мл) добавляли по каплям посредством шприца в течение 20 мин. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор TBHP (0,38 мл, 1,9 ммоль, 5 M) и смесь перемешивали в течение еще 30 мин и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% DCM в MeOH, R=0,6) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (308 мг). ИЭР-МС: m/z=1041,4 [M+H].
10k
Стадия 8. Получение соединения
10j
10k
2
4
3
+
Соединение  (308 мг) обрабатывали с помощью MeNH/EtOH (2 мл) и перемешивали при кт в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали остаток посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения(32 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=780,3 [M+H].
соединения 48 (натриевая соль)
Стадия 9. Получение
10k
соединения 48
аммонийная соль
2
4
3
2
2
2
1
19
31
+
Раствор анизола (43,43 мг, 0,4 ммоль) в TEA (0,31 мл, 4,02 ммоль) охлаждали до 0 °C. Раствор добавляли к соединению  (32 мг, 0,04 ммоль). После перемешивания смеси при 0° C в течение 2,5 ч большую часть TEA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили MeNH, 33% раствор в EtOH (0,31 мл) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении и разделяли остаток между DCM/водой (30 мл x 3/15 мл) и промывали водный слой с помощью DCM (30 мл x 2). Водный слой лиофилизировали с получением остатка. Остаток очищали обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: ACN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением() (19,2 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,32 (с, 1H), 8,00 (д, J=3,2 Гц, 2H), 7,49 (с, 1H), 6,57-6,50 (м, 1H), 5,81-5,75 (м, 1H), 5,73-5,65 (м, 2H), 5,54 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,39-5,27 (м, 1H), 4,80 (д, J=4,2 Гц, 1H), 4,46 (уш. с, 1H), 4,42-4,34 (м, 1H), 4,24-4,17 (м, 1H), 3,82 (уш. дд, J=3,2, 13,4 Гц, 1H), 3,61 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -197,15-197,29 (м, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ-1,83 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
2
2
2
Соединение 48 (аммонийная соль)
соединения 48 (натриевая соль)
1
31
19
+
Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (5 мл, H-форма) добавляли в стакан и промывали деионизированной водой (25 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (25 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. (19,2 мг) растворяли в деионизированной воде (2 мл), и добавляли в верхнюю часть колонки, и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (16 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,04 (уш. с, 1H), 7,73 (с, 1H), 7,56 (с, 1H), 6,83 (уш. с, 1H), 6,33-6,25 (м, 1H), 5,68-5,60 (м, 1H), 5,46 (уш. д, J=9,6 Гц, 1H), 5,32 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 5,20 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,06-4,90 (м, 1H), 4,38 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,17 (уш. дд, J=6,0, 10,4 Гц, 1H), 4,02 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 3,67 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 3,41 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ -2,02 (с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -196,74 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H].
Пример 11
11a
Стадия 1. Получение соединения
2
6
SM 11
11a
N-
d
m/z
1
+
TIPDSCl (6,70 г, 21,23 ммоль) добавляли к раствору , изобутирилгуанозин (5,0 г, 14,15 ммоль) в пиридине (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, после чего концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения в виде белой пены (5,5 г, выход: 65%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,12 (с, 1H), 11,76 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,79 (с, 1H), 5,71 (д, J=4,9 Гц, 1H), 4,28-4,39 (м, 2H), 4,13 (уш. дд, J=12,9, 2,6 Гц, 1H), 4,00-4,07 (м, 1H), 3,94 (уш. дд, J=12,9, 2,7 Гц, 1H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,6 Гц, 6H), 0,93-1,08 (м, 28H); ИЭР-МС:  596,2 [M+H].
11b
Стадия 2. Получение соединения
11a
1e
11b
2
3
2
6
1
+
d
m/z
Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения  (1,28 г, 1,92 ммоль) и соединения  (1,0 г, 1,28 ммоль) в безводном THF (60 мл); Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N. Далее добавляли DMAP (783 мг, 6,41 ммоль) для инициирования реакции. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и прополаскивали с помощью DCM, фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM, а комбинированный органический слой высушивали с помощью NaSCN, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение  (520 мг, выход: 36%) получали в виде желтого твердого вещества после очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-2% MeOH в DCM). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,08 (уш. с, 1H), 11,56 (уш. с, 1H), 11,28 (уш. с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,54 (уш. с, 1H), 8,09 (с, 1H), 8,04 (с, 2H), 7,61-7,73 (м, 1H), 7,49-7,59 (м, 2H), 6,31-6,44 (м, 1H), 6,06 (д, J=1,5 Гц, 1H), 5,73 (уш. д, J=53,5 Гц, 1H), 5,31 (уш. д, J=5,8 Гц, 1H), 4,79-4,95 (м, 1H), 4,64 (т, J=6,9 Гц, 1H), 3,84-4,10 (м, 4H), 3,41 (м, J=13,3 Гц, 1H), 3,11-3,25 (м, 1H), 2,75 (спт, J=6,5 Гц, 1H), 0,85-1,15 (м, 43H), 0,15 (с, 3H), 0,14 (с, 3H); ИЭР-МС:  1144,4 [M+H].
11c
Стадия 3. Получение соединения
11b
11c
2
3
4
6
1
+
Раствор соединения (1,3 г, 0,98 ммоль) в безводном MeOH (55 мл, высушен на молекулярных ситах) обрабатывали с помощью HCl (0,19 мл 2M раствора в EtO, 13,7 ммоль) в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного NaHCO с последующей экстракцией с помощью DCM. Органическую фазу высушивали безводным MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (670 мг, выход: 65%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 1,01-1,08 (м, 28H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,67-1,75 (м, 1H), 2,20-2,32 (м, 1H), 2,43-2,54 (м, 1H), 2,62 (уш. д, J=14,3 Гц, 1H), 2,79 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 2,85-2,96 (м, 1H), 3,51 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 2H), 3,75-3,83 (м, 1H), 4,39-4,48 (м, 1H), 4,50 (д, J=4,2 Гц, 1H), 5,02 (к, J=9,6 Гц, 1H), 5,09 (т, J=4,5 Гц, 1H), 5,25 (дд, J=9,8, 4,1 Гц, 1H), 5,52 (ддд, J=52,4, 4,4, 2,6 Гц, 1H), 5,68 (уш. д, J=5,9 Гц, 1H), 6,30 (дд, J=18,5, 2,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,7 Гц, 2H), 7,61-7,69 (м, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 8,11 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,33 (уш. с, 1H), 12,09 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z=1060,7 [M+H].
11d
Стадия 4. Получение соединения
11c
H
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
m/z
2
+
Раствор соединения  (340 мг, 0,32 ммоль) и 1-тетразола (4,48 мл, 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводной смеси THF/MeCN (1 : 1, 11 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированным 3Å молекулярными ситами в течение 2 ч в атмосфере N, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (96 мг, 0,32 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (19 мг, 0,064 ммоль) и встряхивание продолжали в течение 2 ч. Добавляли раствор BuOOH (93 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,51 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение 30 мин. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 11d (100 мг, выход: 26,5%). ИЭР-МС:  1177,6 [M+H].
соединения 11 (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
11d
соединения 11
соединения 11 (натриевая соль)
3
6
6
1
31
+
m/z
Вышеуказанное соединение  (100 мг, 0,085 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и растирали в MeCN. Осадок растворяли в смеси пиридина (684 мкл мл) и EtN (590 мкл). Добавляли тригидрофторид триэтиламина (57 мг, 0,34 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (Примечание. Наблюдали выпадение нужного продукта в осадок). Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм, подвижная фаза: 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной катионной Na-ионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества (24,5 мг, выход: 41%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-d) δ м. д. 10,03 (уш. с, 1H), 9,49 (уш. с, 1H), 8,27 (уш. с, 1H), 7,85 (с, 1H), 7,60 (уш. с, 1H), 7,25 (уш. с, 2H), 6,41-6,79 (м, 2H), 6,36 (уш. д, J=200 Гц, 1H), 6,08-6,22 (м, 1H), 6,04 (уш. д, J=7,9 Гц, 1H), 5,72 (уш. с, 1H), 5,43 (уш. дд, J=51,7, 4,3 Гц, 1H), 5,25-5,34 (м, 1H), 4,54 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,33-4,43 (м, 1H), 4,29-4,33 (м, 1H), 4,11 (уш. т, J=3,9 Гц, 1H), 3,85-3,94 (м, 1H), 3,56 (уш. дд, J=13,0, 2,6 Гц, 1H), 3,34 (уш. д, J=12,6 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. -2,34 (с, 1P); ИЭР-МС:  675,1 [M+H].
Пример 12
12b
Стадия 1. Получение соединения
12a
12b
N, N,N',N'
2
2
3
3
4
2
+
Соединение  (300 мг, 0,38 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (33 мл) и безводного THF (33 мл), добавляли 1H-тетразол (3,3 мл, 1,13 ммоль) и 3Å молекулярные сита. Смесь встряхивали при кт в течение 2 ч и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил- -тетраизопропилфосфородиамидит (0,16 мл, 0,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,078 мл, 0,25 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,075 мл, 0,41 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут и впоследствии фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением  (47 мг, выход 12%), ИЭР-МС: m/z 905,4 [M+H].
соединения 29 (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
12b
соединения 29 (натриевая соль)
4
3
6
1
+
d
Соединение  (47 мг, 0,045 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (2,5 мл, 20,2 ммоль) перемешивали при 40 °C в течение 3 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Остаток очищали обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза; RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза; 0,25% раствор NHHCO в воде, MeOH). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и очищали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной ионообменной смолой. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением в виде белого твердого вещества (27 мг, выход 87%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 3,18-3,28 (м, 1H), 3,29-3,40 (м, 1H), 4,02-4,10 (м, 2H), 4,17-4,25 (м, 1H), 4,29-4,48 (м, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 5,09 (уш. дд, J=13,6, 7,1 Гц, 1H), 5,23-5,49 (м, 2H), 5,86-6,00 (м, 2H), 6,34-6,42 (м, 1H), 6,61 (уш. с, 2H), 6,96 (уш. с, 2H), 7,92 (с, 1H), 8,11 (д, J=2,4 Гц, 1H), 8,15 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 678,2 [M+H].
Пример 13
13b
Стадия 1. Получение соединения
13a
13b
2
2
3
3
4
2
+
Соединение  (355 мг, 0,46 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (40 мл) и безводного THF (40 мл), добавляли 1H-тетразол (4,1 мл, 1,4 ммоль) и 3Å молекулярные сита. Смесь встряхивали при кт в течение 2 часов и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,19 мл, 0,61 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,18 мл, 0,57 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,093 мл, 0,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и водного насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, сушили с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением  (34 мг, выход 5%). ИЭР-МС: m/z=888,4 [M+H].
15 (натриевая соль)
Стадия 2. Получение соединения
13b
соединения 15 (натриевая соль)
4
3
6
1
+
d
Соединение (34 мг, 0,023 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (2 мл, 16 ммоль) перемешивали при 40 °C в течение 3 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок фильтровали и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку выполняли посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NHHCO в воде, MeOH). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением (23 мг, выход 100%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 2,00-2,13 (м, 1H), 2,49 (м, J=3,9, 1,7, 1,7 Гц, 1H), 3,29-3,37 (м, 1H), 3,57 (дд, J=13,6, 2,6 Гц, 1H), 3,85-3,97 (м, 1H), 4,03-4,17 (м, 1H), 4,27 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 4,45-4,55 (м, 1H), 4,73-4,88 (м, 1H), 5,10 (уш. д, J=22,4 Гц, 1H), 5,42 (дд, J=51,1, 4,1 Гц, 1H), 6,11 (уш. д, J=4,1 Гц, 1H), 6,32 (д, J=18,7 Гц, 1H), 6,86-7,03 (м, 2H), 7,07 (уш. с, 2H), 7,85 (уш. с, 1H), 8,15 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,40-8,87 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=661,3 [M+H].
Пример 14
14b
Стадия 1. Получение соединения
14a
14b
2
2
3
3
4
2
+
Соединение  (275 мг, 0,26 ммоль) растворяли в безводном ACN (40 мл), добавляли 1H-тетразол (2,3 мл, 1,8 ммоль) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,084 мл, 0,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,084 мл, 0,26 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,062 мл, 0,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 18 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и водного насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, сушили с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением  (30 мг, выход 5%). ИЭР-МС: m/z=1159,6 [M+H].
14c (метиламмонийная соль)
Стадия 2. Получение соединения
14b
соединения 14c (метиламмонийная соль)
+
Соединение  (30 мг, 0,014 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (3 мл, 24,3 ммоль) перемешивали при 45 °C в течение 1 часа. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок фильтровали и промывали безводным ACN с получением в виде белого твердого вещества (11 мг, выход 71%). ИЭР-МС: m/z=898,5 [M+H].
30 (натриевая соль)
Стадия 3. Получение соединения
соединению 14c
4
3
3
31
+
Раствор анизола (0,011 мл, 0,1 ммоль) в TFA (0,076 мл, 1 ммоль) охлаждали до 0 °C. Холодный раствор добавляли к  (11 мг, 0,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0 °C в течение 75 минут. Большую часть TFA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили добавлением метиламина, 33% раствора в этаноле (0,12 мл, 1 ммоль) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали досуха. Остаток очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×250 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NHHCO в воде, CHCN). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Фракции, содержащие продукт, объединяли. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением соединения 30 (натриевая соль) в виде белого твердого вещества (3 мг, выход 45%). P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -1,27 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 658,3 [M+H].
Пример 15
15b
Получение соединения
15a
15b
N, N,N',N'
2
2
3
3
+
Диол  (210 мг, 0,272 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (20 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,8 г) и 0,45 M тетразола в MeCN (4,8 мл, 2. 17 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (131 мг, 0,43 ммоль) в MeCN (3 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания в течение 90 мин реакционную смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Добавляли 0,5 M йода (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), излишек йода гасили водным насыщенным NaSO (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане) с получением  (120 мг). ИЭР-МС: m/z=873 [M+H].
соединения 38 (натриевая соль)
Получение
15b
соединения 38
3
-
Соединение  (120 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (15 мл) при кт. После перемешивания реакционной смеси при 40°C в течение 2 ч смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок собирали фильтрованием и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония [TEAA] в CHCN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением  (7,1 мг) в виде соли TEAA. ИЭР-МС: m/z: 658 [M-1].
2
4
2
4
2
4
3
2
2
2
Соединение 38 (соль TEAA)
соединения 38 (натриевая соль)
1
31
19
-
Превращение соли. Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. (24,2 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CHCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (6,3 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 7,98 (с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 6,37 (дд, J=5,2 Гц, 11,6 Гц, 1H), 5,75-5,90 (м, 2H), 5,49 (т, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,37 (т, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,01-5,15 (м, 1H), 4,51 (с, 1H), 4,26 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,00-4,10 (м, 2H), 3,35-3,50 (м, 2H), 2,45-2,70 (м, 2H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ -1,416 м. д. (с, 1P); F ЯМР (379 МГц, DO) δ -196 м. д. (широкий пик, 1F); ИЭР-МС: m/z: 658,4 [M-1].
Пример 16
16b
Получение соединения
16a
N, N,N',N'
3
Соединение  (140 мг, 0,174 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3 × 30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (15 мл). Добавляли порошок молекулярных сит 4Å (0,5 г) и 0,45 M тетразола в ацетонитриле (2,32 мл, 1,04 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали с помощью Ar в течение 4 мин. После перемешивания смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (84 мг, 0,28 ммоль, 1,6 экв) в CHCN (3,0 мл) при кт в течение 30 мин.
m/z
об./об./об.
об./об.
m/z
+
+
2
2
3
3
16b
После перемешивания реакционной смеси в течение 90 мин смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученное фосфитное соединение (MS:  901 [M+H]) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, ) до получения устойчивого цвета. После перемешивания смеси при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл); избыток йода гасили водным насыщенным NaSO (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане, ) с получением соединения  (80 мг). ИЭР-МС:  917 [M+H].
соединения 28 (натриевая соль)
Получение
16b
соединения 28 (натриевая соль)
3
2
2
2
1
19
31
-
m/z
Соединение  (80 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (6 мл) при кт. После перемешивания смеси при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок собирали фильтрованием и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм × 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CHCN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 28 (22,4 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получениемв виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (21,9 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 7,87 (с, 1H), 7,80 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,32 (т, J=5,6 Гц, 1H), 5,97 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,50 (с, 0,5H), 5,37 (с, 0,5H), 4,98-5,10 (м, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,10-4,30 (м, 4H), 3,52 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,44 (с, 3H), 3,34 (д, J=12,4 Гц); F ЯМР (379 МГц, DO) δ широкий пик -196,61 м. д.; P ЯМР (162 МГц, DO) δ -1,38 м. д.; ИЭР-МС: : 688,8 [M-1].
Пример 17
17-1
Стадия 1. Получение соединения
1b
1b
17-1
1b
3
2
4
+
ПРИМЕЧАНИЕ. Соединение  до применения дважды совместно выпаривали с пиридином (60 мл). К раствору соединения  (6 г, 15,06 ммоль) в пиридине (60 мл) добавляли DMTrCl (10,2 г, 30,12 ммоль) и DMAP (920 мг, 7,53 ммоль) при 5 °C. Реакционную смесь перемешивали при 80 °C в течение 18 ч, вследствие чего получали желтый раствор. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и собирали. Летучие соединения удаляли в вакууме и остаток растворяли в DCM (150 мл), впоследствии медленно выливали в водный насыщенный NaHCO (100 мл) при интенсивном перемешивании. Водный слой экстрагировали с помощью DCM (100 мл × 2). Органические слои объединяли, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (12,6 г, 88% из 7,9 г соединения ) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=701,1 [M+H].
17-2
Стадия 2. Получение соединения
3
2
2
2
2
4
3
3
17-1
17-2
1
19
+
PPh (6,6 г, 25,1 ммоль) в один прием добавляли к раствору соединения  (12,6 г, 17,98 ммоль) в THF (100 мл); смесь перемешивали при 40°C в течение 2 ч в атмосфере N с последующим добавлением HO (50 мл); смесь перемешивали в течение 12 ч с получением бесцветного раствора. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и разделяли оставшийся водный слой между DCM/HO (80/30 мл). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (40 мл × 2). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (11,6 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,93 (уш. с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,31 (с, 1H), 8,01 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,33-7,19 (м, 4H), 6,82 (дд, J=6,9, 8,9 Гц, 4H), 6,17 (дд, J=1,5, 17,6 Гц, 1H), 4,64 (ддд, J=4,4, 7,6, 19,4 Гц, 1H), 4,57-4,36 (м, 1H), 4,18-4,08 (м, 1H), 3,77 (д, J=5,3 Гц, 6H), 2,94 (дд, J=2,4, 14,2 Гц, 1H), 2,64 (дд, J=4,3, 14,3 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, CDCl) δ -197,03 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=675,1 [M+H].
17a
Стадия 3. Получение соединения
2
2
3
2
2
2
3
2
4
3
3
17-2
17a
1
19
+
J
J
J
J
J
J
Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (768 мг, 3,23 ммоль) в безводном CHCl (5 мл) быстро добавляли к смеси соединения (727 мг, 1,07 ммоль), 4-нитрофенола (449 мг, 3,23 ммоль), EtN (654 мг, 6,46 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 1 г)в безводном CHCl (15 мл) в атмосфере N при -78 °C. Смесь постепенно нагревали до кт в течение 1,5 ч. Реакционную смесь объединяли с другими партиями и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат переносили в разделительную воронку, промывали водным насыщенным NaHCO (200 мл х 4). Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (16 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 8,93-8,81 (м, 2H), 8,41 (с, 1H), 8,11-7,92 (м, 5H), 7,67-7,58 (м, 1H), 6,86 (уш. т, =7,7 Гц, 4H), 6,20 (уш. дд, =5,1, 13,7 Гц, 1H), 5,34-5,23 (м, 2H), 5,16 (уш. т, =5,1 Гц, 1H), 4,73 (уш. с, 1H), 3,90 (уш. с, 1H), 3,79 (д, =6,4 Гц, 6H), 3,23 (уш. д,=13,2 Гц, 1H), 2,89 (уш. дд, =8,7, 12,6 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, CDCl) δ -199,28 - -205,90 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=876,1 [M+H].
17c
Стадия 4. Получение соединения
17a
17b
17c
2
3
2
4
6
6
1
19
+
J
J
J
J
J
Раствор соединения (2053 мг, 2,34 ммоль), соединения (1000 мг, 1,56 ммоль) и молекулярных сит (6 г) в THF (30 мл) перемешивали в атмосфере N при кт в течение 30 мин; добавляли DMAP (954,8 мг, 7,81 ммоль) и перемешивали смесь при 45 °C (температура масла) в течение 12 ч. Реакционную смесь фильтровали и добавляли к ней DCM (50 мл) и солевой раствор (20 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO (3×50 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с силикагелем (6 г), очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=0-5%) с получением  (1,8 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 12,10 (с, 1H), 11,46 (с, 1H), 11,23 (с, 1H), 11,05 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,47 (с, 1Н), 8,13-8,10 (м, 1Н), 8,02 (д, =73 Гц, 2H), 7,68-7,63 (м, 1H), 7,58-7,46 (м, 4H), 7,41-7,31 (м, 6H), 7,29-7,23 (м, 3H), 7,20-7,11 (м, 7H), 6,91 (дд, =6,4, 8,3 Гц, 4H), 6,75 (дд, =8,9, 12,3 Гц, 4H), 6,39-6,30 (м, 1H), 6,16 (с, 1H), 5,34 (уш. д, =5,9 Гц, 1H), 4,91 (уш. с, 1H), 4,86-4,73 (м, 2H), 4,45 (уш. д, =5,4 Гц, 1H), 3,69 (с, 12H), 3,21-3,08 (м, 2H), 2,96-2,88 (м, 1H), 2,73 (м, 2H), 2,07 (м, 1H), 1,02 (м, 6H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ -197,64 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=689,1 [M/2+H].
17d
Стадия 5. Получение соединения
17c
17d
1
19
+
6
6
К раствору  (1,8 г, 1,31 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли воду (235,5 мг, 13,08 ммоль) и DCA (337,233 мг, 2,615 ммоль) с получением красного раствора. Раствор перемешивали при 25°C в течение 12 часов при кт. Впоследствии добавляли MeOH (5 мл) до получения прозрачного раствора, а затем пиридин (1034,4 мг, 13,08 ммоль). После перемешивания смеси при 25°C в течение 2 часов раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (3,0 г). Остаток объединяли с силикагелем (6,0 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% DCM в MeOH) с получением  (0,9 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 12,12 (с, 1H), 11,57 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,47 (т, J=5,9 Гц, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,07-8,02 (м, 2H), 7,69-7,63 (м, 1H), 7,60-7,52 (м, 2H), 6,33 (дд, J=2,0, 19,3 Гц, 1H), 6,08 (д, J=1,7 Гц, 1H), 5,92 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,70-5,50 (м, 1H), 5,30 (уш. д, J=6,1 Гц, 1H), 5,02 (т, J=5,4 Гц, 1H), 4,67-4,53 (м, 1H), 4,27 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,11 (к, J=5,1 Гц, 1H), 4,05-3,99 (м, 1H), 3,66-3,55 (м, 1H), 3,46 (тд, J=4,9, 12,2 Гц, 1H), 2,78 (тд, 1H), 2,24 (тд, 1H), 1,12 (д, 6H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ -202,156 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=772,1 [M+H].
17e
Стадия 5. Получение соединения
3
2
THE перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
17e
17e
N, N,N',N'
m/z
+
К раствору (100 мг, 0,130 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 1 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 2,3 мл) при 25°C с последующим добавлением раствора 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (78,1 мг, 0,26 ммоль, разведенного в 1 мл THE) при 25 °C. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли гидропероксид трет-бутила (0,12 мл, 0,65 ммоль) при 25°C и перемешивали раствор в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток объединяли с силикагелем (2 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением  (80 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: =887,5 [M+H].
соединения 33 (натриевая соль)
Стадия 4. Получение
17e
соединения 33 (аммонийная соль)
соединения 33
(натриевая соль)
2
4
3
3
2
2
2
1
19
31
+
Соединение  (80 мг, 0,090 ммоль) обрабатывали с помощью MeNH (50% в EtOH, 5,0 мл). После перемешивания при 25°C в течение 4 часов раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela Durashell 5 мкм C18 150×25, условия: вода (10 мМ NHHCO)-CHCN; начало B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 9, 100% B; время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением  (15 мг) в виде белого твердого вещества. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением натриевой соли  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (25,5 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,16 (уш. с, 1H), 7,88 (с, 1H), 7,15 (уш. с, 1H), 6,45 (уш. д, J=19,8 Гц, 1H), 6,19 (уш. д, J=7,3 Гц, 1H), 6,00 (уш. д, J=7,1 Гц, 1H), 5,43-5,29 (м, 1H), 5,28-5,18 (м, 1H), 4,63-4,51 (м, 2H), 4,31-4,22 (м, 1H), 4,16-4,04 (м, 1H), 3,78 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,45 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 2,80-2,60 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -196,95 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -1,422 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,2 [M+H].
Пример 18
18b
Стадия 1. Получение соединения
3
2
THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
18a
18b
3
2
2
2
N, N,N’,N’
1
31
+
К раствору  (100 мг, 0,127 ммоль) в THF (2 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 0,5 г) и раствор 1H-тетразола (2,25 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 945 мг тетразола в 30 мл безводного CHCN, с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N перед применением); впоследствии несколько раз продували с помощью N. По каплям добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (61 мг, 0,203 ммоль) в THF (0,6 мл) в течение 5 мин. После перемешивания в при кт в течение 4 ч добавляли раствор TBHP (124 мкл, 0,62 ммоль, 5 M в декане) в атмосфере N. После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь объединяли с предыдущей партией, фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (12 г, 35 мл/мин, сначала элюировали с помощью 50-80% TBF в петролейном эфире, впоследствии переходили на 0-2% MeOH в DCM) с получением  в виде белого твердого вещества (89 мг). H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ 8,82 (с, 2H), 8,60 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 7,95 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,81 (уш. с, 2H), 7,60-7,50 (м, 1H), 7,47-7,37 (м, 3H), 7,37-7,28 (м, 2H), 6,95 (с, 1H), 6,36 (уш. д, J=17,6 Гц, 2H), 6,23-5,80 (м, 2H), 5,67-5,39 (м, 1H), 4,87-4,56 (м, 3H), 4,53-4,37 (м, 3H), 3,84-3,67 (м, 2H), 3,48-3,32 (м, 1H), 2,87 (уш. т, J=5,9 Гц, 4H); P ЯМР (162 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ -5,30 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=923,4 [M+H].
соединения 34 (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
Соединение 18b
соединения 34
3
+
(98 мг, 0,096 ммоль) обрабатывали раствором метиламина в EtOH (30% в EtOH, 5 мл). После перемешивания при 40 °C в течение 1 ч летучие растворители выпаривали при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество растворяли в смеси вода/CHCN (15/4 мл), впоследствии промывали DCM (10 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением  (61 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=662,2 [M+H].
4
3
3
соединения 34
(аммонийная соль)
+
1
19
31
Твердое вещество очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 10 мкм 150×30 мм, условия: вода (10 мМ NHHCO)-CHCN; начало B: 8, конец B 38, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением  в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=662,3 [M+H]; H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,50-8,11 (м, 1H), 8,08-7,86 (м, 1H), 7,81-7,56 (м, 1H), 6,95-6,58 (м, 1H), 6,41-6,01 (м, 2H), 5,76-5,05 (м, 4H), 5,01-4,76 (м, 1H), 4,45-3,93 (м, 3H), 3,81-3,23 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ -196,50-197,49, -197,63, -198,85; P ЯМР (162 МГц, D2O) δ -2,25 (1 с, 1P).
34 (натриевая соль)
Получение соединения
2
4
2
4
2
4
3
Соединение 34 (соль TEAA)
соединения 34 (натриевая соль)
1
31
19
+
Превращение соли. Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (6 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. (44 мг) растворяли в смеси деионизированная вода : CHCN (4 : 1), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением  (43,5 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,29 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 7,68 (с, 1H), 6,75 (уш. с, 1H), 6,31-6,17 (м, 2H), 5,73-5,58 (м, 1H), 5,57-5,39 (м, 1H), 5,31-5,12 (м, 1H), 4,96-4,82 (м, 1H), 4,68 (уш. д, J=2,4 Гц, 1H), 4,33 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 4,25-4,06 (м, 2H), 3,62 (дд, J=2,4, 13,4 Гц, 1H), 3,43 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,15 (с, 1P); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -196,86 (с, 1F), -198,50 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=662,2 [M+H].
Пример 19
19b
Стадия 1. Получение соединения
O
m/z
19a
19b
2
4
+
Имидазол (31 г, 456,1 ммоль) и TBSCl (45,8 г, 304,0 ммоль) последовательно добавляли в раствор N6-бензоил-5'--(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозина (, [64325-78-6], 50,0 г, 76,0 ммоль) в безводном DMF (750 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор разбавляли EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток повторно осаждали с DCM и гексаном с получением соединения  в виде белой пены (68 г, неочищенный). ИЭР-МС:  771,0 [M+H].
19c
Стадия 2. Получение соединения
19b
19c
3
3
2
4
6
1
+
J
J
J
J
J
J
J
m/z
Соединение  (68,0 г, 88,3 ммоль) растворяли в CHCl (1564 мл) и охлаждали до 0° C. Добавляли раствор pTSA моногидрата (20,1 г, 105,9 ммоль) в метаноле. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего добавляли насыщенный водный NaHCO для гашения. Водный слой экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (27 г). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 11,20 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,05 (д, =7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, =7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, =7,6 Гц, 2H), 6,47 (т, =6,9 Гц, 1H), 5,06, (т,=5,5 Гц, 1H), 4,65 (м, 1H), 3,90 (к, =4,1 Гц, 1H), 3,63 (м, 1H), 3,53 (м, 1H), 2,92 (м, 1H), 2,36 (кд, =6,4, 2,8 Гц, 1H), 0,92 (с, 9H), 0,13 (с, 6H); ИЭР-МС:  470,0 [M+H].
19d
Стадия 3. Получение соединения
19c
19d
3
2
4
3
2
4
6
1
+
J
J
J
J
J
J
Хлорид мезила (5,1 мл, 66,7 ммоль) добавляли по каплям к раствору соединения  (27,0 г, 57,5 ммоль) в безводном пиридине (135 мл) при 0° C. Реакционную смесь перемешивали при 0° C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего гасили метанолом и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением мезилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в безводном DMF (256 мл) с последующим добавлением азида натрия (30,5 г, 468,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60° C в течение 5 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO и водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены (24 г, выход: 84%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 11,19 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,05 (д, =6,9 Гц, 2H), 7,65 (т, =7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, =7,6 Гц, 2H), 6,51 (т, J=6,9 Гц, 1H), 4,71 (м, 1H), 4,01 (м, 1H), 3,65 (к, =6,4 Гц, 1H), 3,57 (дд, =13,1, 4,8 Гц, 1H), 3,06 (м, 1H), 2,41 (кд, =6,7, 4,0 Гц, 1H), 0,92 (с, 9H), 0,14 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=495,0 [M+H].
19e
Стадия 4. Получение соединения
19d
19e
3
2
3
2
4
6
1
+
J
J
J
J
J
J
J
J
m/z
Раствор соединения (10,0 г, 20,2 ммоль) в MeOH (100 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 1 г). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, промывали диатомитовую землю с помощью MeOH. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина в виде белой пены (9,4 г, неочищенный продукт). Неочищенный продукт (9,4 г) растворяли в DCM (395 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (8,38 г, 60,2 ммоль), EtN (16,9 мл, 120,4 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78 °C в атмосфере N, после чего добавляли по каплям раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (14,28 г, 60,2 ммоль) в DCM (45 мл) и продолжали перемешивание до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и промывали насыщенным водным NaHCO и водой. Органическую фазу сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в гексане) с получением соединения  в виде пены (6,4 г, выход: 47%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 11,20 (с, 1H), 9,09 (т, =5,9 Гц, 1H), 8,70 (д, =2,1 Гц, 2H), 8,29 (тд, =6,2, 3,9 Гц, 2H), 8,05 (д, =7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, =7,2 Гц, 1H), 7,54 (м, 4H), 6,50 (т, =6,9 Гц, 1H), 4,66 (м, 1H), 4,01 (м, 1H), 3,51 (дт, =14,2, 5,7 Гц, 1H), 3,39 (м, 1H), 3,05 (м, 1H), 2,38 (кд, =6,7, 2,8 Гц, 1H), 0,91 (c, 9H), 0,13 (c, 6H); ИЭР-МС:  670,0 [M+H].
19f
Стадия 5. Получение соединения
19e
22c
19f
3
4
2
4
6
1
+
Каждое из 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина ([103285-33-2], 2,5 г, 3,73 ммоль), соединения  (2,9 г, 4,48 ммоль) и DMAP (2,27 г, 18,6 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×10,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Далее растворы 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина и соединения  последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Реакционную смесь перемешивали в течение 22 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl. Объединенные органические фазы высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  (2,04 г, выход: 45,5%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 12,10 (c, 1H), 11,54 (c, 1H), 11,20 (c, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,24 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,18 (т, J=9,6 Гц, 5H), 6,81 (дд, J=8,3, 6,2 Гц, 4H), 6,46 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,16 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,55 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,63 (м, 1H), 4,38 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,12 (q, J=4,6 Гц, 1H), 3,86 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,23 (м, 5H), 2,97 (м, 1H), 2,74 (м, 1H), 1,09 (м, 6H), 0,88 (с, 9H), 0,11 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=1201,0 [M+H].
19g
Стадия 6. Получение соединения
3
3
6
19f
19g
1
+
m/z
EtN (11,61 мл, 83,3 ммоль) и EtN·3HF (1,35 мл, 8,33 ммоль) добавляли к раствору соединения (2,5 г, 2,08 ммоль) в пиридине (16,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (5,9 мл, 33,28 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Посредством концентрирования при пониженном давлении получали неочищенное соединение с удаленными 5’-защитными группами, которое повторно растворяли в DCM (59,0 мл). Добавляли воду (0,17 мл, 9,65 ммоль) и дихлоруксусную кислоту (6,3 мл 10% в DCM, 7,72 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (полное превращение), после чего ее гасили добавлением пиридина (0,77 мл, 9,65 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-9% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,4 г, выход: 86%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 12,08 (c, 1H), 11,62 (c, 1H), 11,19 (c, 1H), 8,70 (c, 1H), 8,60 (c, 1H), 8,25 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,42 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,08 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,45 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,38 (дд, J=6,5, 5,2 Гц, 1H), 5,26 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,36 (д, J=2,1 Гц, 1H), 4,18 (к, J=2,5 Гц, 1H), 4,10 (м, 1H), 3,79 (тд, J=5,9, 3,2 Гц, 1H), 3,61 (дтд, J=37,3, 8,3, 3,8 Гц, 2H), 3,41 (с, 3H), 3,09 (д, J=15,1 Гц, 3H), 2,83 (м, 1H), 2,74 (тд, J=13,4, 6,7 Гц, 1H), 2,33 (кд, J=6,7, 3,6 Гц, 1H), 1H (к, J=3,4 Гц, 6H); ИЭР-МС:  784,0 [M+H].
19h
Стадия 7. Получение соединения
19g
19h
N, N,N’N’
t-
+
Раствор соединения  (500 мг, 0,638 ммоль) и 1H-тетразола (5,59 мл 3-4% в MeCN) в безводном THF (26 мл) обрабатывали молекулярными ситами 3 Å в течение 2 ч в инертной атмосфере. 2-цианоэтил-,-тетра(изопропил)фосфородиамидит (250 мг, 0,829 ммоль) добавляли в один прием и реакционную смесь встряхивали в течение ночи. Добавляли BuOOH (174 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,96 ммоль) и продолжали встряхивание в течение 1 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и обильно промывали с помощью DCM. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения , которое использовали напрямую на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z=899,5 [M+H].
соединения 12 (натриевая соль)
Стадия 8. Получение
19h
соединения 12 (аммонийная соль)
соединения 12 (натриевая соль)
1
31
-
d
d
m/z
6
6
Неочищенное соединение  перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением. Превращение в натриевую соль осуществляли элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (43 мг, выход: 10%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-, 60 °C) δ м. д. 10,36 (уш. с, 1H), 8,54 (уш. с, 1H), 8,33 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 7,11 (с, 2H), 6,76 (уш. с, 2H), 6,35 (т, J=6,9 Гц, 1H), 5,98 (уш. с, 2H), 5,14 (уш. с, 1H), 4,28 (уш. с, 2H), 4,19 (с, 1H), 4,09 (с, 1H), 3,86-3,95 (м, 1H), 3,48 (с, 3H), 3,34-3,46 (м, 1H), 3,09-3,26 (м, 1H), 2,87-2,99 (м, 1H), 2,56-2,65 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. -1,88 (с, 1P); ИЭР-МС:  670,2 [M-H].
Пример 20
20b
Стадия 1. Получение соединения
20a
20b
2
4
6
1
+
m/z
Раствор N-бензоил-3’-дезокси-3'-фтор-аденозина  [CAS 129054-67-7] (7,4 г, 18,5 ммоль) в безводном пиридине (138 мл), к которому добавляли DMAP (1,13 г, 9,2 ммоль) и DMTrCl (10 г, 29,7 ммоль) (частями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белой пены (9,8 г, выход: 78%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 3,31 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,36 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 4,41 (дт, J=26,4, 4,6 Гц, 1H), 5,19 (м, 1H), 5,28 (дд, J=11,7, 7,6 Гц, 1H), 6,09 (дд, J=6,9, 4,8 Гц, 2H), 6,87 (м, 4H), 7,24 (м, 7H), 7,39 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (м, 1H), 8,06 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,62 (д, J=3,4 Гц, 2H), 11,27 (с, 1H); ИЭР-МС:  676,1 [M+H].
20c
Стадия 2. Получение соединения
20b
19e
20b
19c
20c
3
4
2
4
6
1
+
d
В реакционную колбу помещали DMAP (2,62 г, 21,4 ммоль), безводный DCM (50 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения(2,9 г, 4,29 ммоль) и раствор соединения  (3,4 г, 5,15 ммоль) (каждый в безводном DCM (2×50 мл)), сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения  и соединения соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  (4,2 г, выход: 81%). H ЯМР (500 МГц DMSO -) δ м. д.: 11,23 (д, J=36,5 Гц, 2H), 8,70 (с, 1H), 8,63 (д, J=20,0 Гц, 2H), 8,53 (с, 1H), 8,04 (к, J=3,4 Гц, 4H), 7,65 (м, 2H), 7,55 (тд, J=7,6, 4,8 Гц, 4H), 7,35 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,22 (м, 7H), 6,83 (м, 4H), 6,43 (к, J=7,1 Гц, 2H), 6,05 (тд, J=11,0, 6,2 Гц, 1H), 5,64 (д, J=54,4 Гц, 1H), 4,53 (м, 2H), 3,88 (т, J=3,1 Гц, 1H), 3,70 (с, 6H), 3,37 (м, 2H), 3,20 (м, 2H), 2,97 (м, 1H), 0,88 (с, 9H), 0,09 (д, J=2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=1206 [M+H].
20d
Стадия 3. Получение соединения
3
3
6
20d
20d
1
+
m/z
EtN (19,4 мл, 139,4 ммоль) и EtN·3HF (2,2 мл, 13,9 ммоль) добавляли к раствору соединения  (4,2 г, 3,4 ммоль) в пиридине (70 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (9,9 мл, 55,7 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. В заключение реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-4% MeOH в DCM) с получением соединения в виде пены (3,0 г, выход: 78%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 11,21 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (д, J=9,6 Гц, 2H), 8,53 (с, 1H), 8,04 (м, 4H), 7,65 (м, 2H), 7,55 (тд, J=7,7, 3,7 Гц, 4H), 7,36 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,21 (м, 7H), 6,83 (м, 4H), 6,43 (дд, J=16,2, 6,5 Гц, 2H), 6,04 (тд, J=11,0, 6,2 Гц, 1H), 5,66 (дт, J=53,5, 3,4 Гц, 1H), 5,46 (с, 1H), 4,49 (дд, J=24,1, 2,8 Гц, 1H), 4,39 (с, 1H), 3,88 (м, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,40 (к, J=5,3 Гц, 2H), 3,20 (м, 2H), 2,85 (к, J=6,9 Гц, 1H); ИЭР-МС:  1090 [M+H].
20e
Стадия 4. Получение соединения
20d
20e
1
+
6
m/z
Соединение  (3,0 г, 2,7 ммоль) растворяли в DCM (84 мл), воде (250 мкл, 13,7 ммоль) и добавляли дихлоруксусную кислоту (9,1 мл 10% в DCM, 10,9 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (до полного превращения), после чего ее гасили добавлением пиридина (1,1 мл, 13,7 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,9 г, выход: 87%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 11,28 (с, 1H), 11,21 (с, 1H), 8,72 (д, J=4,1 Гц, 3H), 8,62 (с, 1H), 8,04 (д, J=8,3 Гц, 4H), 7,64 (м, 2H), 7,55 (к, J=6,9 Гц, 4H), 6,40 (м, 2H), 5,53 (т, J=5,9 Гц, 1H), 5,42 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,45 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 4,35 (с, 1H), 3,79 (т, J=7,2 Гц, 1H), 3,68 (д, J=20,0 Гц, 2H), 3,10 (м, 3H), 2,84 (м, 1H), 2,32 (к, J=3,4 Гц, 1H); ИЭР-МС:  790 [M+H].
20f
Стадия 5. Получение соединения
20e
20f
H
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
3
4
+
Раствор соединения  (500 мг, 0,63 ммоль) и 1 -тетразола (5,54 мл 3-4% в MeCN) в безводном THF (31 мл) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-,-тетра(изопропил)фосфородиамидит (210 мг, 0,70 ммоль). Реакционную смесь затем встряхивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-,-тетра(изопропил)фосфородиамидита (95 мг, 0,32 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Добавляли BuOOH (196 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,08 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали солевым раствором и насыщенным водным NaHCO, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (56 мг, выход: 10%). ИЭР-МС: m/z=905,5 [M+H].
соединения 36 (натриевая соль)
Стадия 6. Получение
20f
соединения 36 (аммонийная соль)
соединения 36 (натриевая соль)
1
31
+
d
d
m/z
6
6
Соединение  (56 мг, 0,062 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением. Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной Na-катионообменной смолой с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (17,5 мг, выход: 42%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-, 81 °C) δ м. д. 8,71 (уш. с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,07 (с, 1H), 6,94 (уш. с, 2H), 6,90 (уш. с, 2H), 6,32 (т, J=7, 1 Гц, 1H), 6,22 (уш. с, 1H), 5,68 (уш. д, J=26,8 Гц, 1H), 5,42 (уш. д, J=51,9 Гц, 1H), 5,10 (уш. с, 1H), 4,46 (уш. д, J=25,5 Гц, 1H), 4,10-4,19 (м, 1H), 4,04 (уш. с, 1H), 3,79 (уш. с, 1H), 3,18 (м, J=11,4 Гц, 1H), 2,92 (с, 1H), 2,53 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. -1,74 (с, 1P); ИЭР-МС:  644,4 [M+H].
Пример 21
21b
Стадия 1. Получение соединения
21a
21b
2
4
6
1
+
m/z
Раствор 3'-дезокси-3'-фторинозина  [CAS 117517-20-1] (2,2 г, 8,14 ммоль) в безводном пиридине (33 мл), к которому добавляли DMAP (0,49 г, 4,0 ммоль) и DMTrCl (4,4 г, 13 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (3,3 г, выход: 71%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 8,22 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,93 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,36 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,28 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,23 (м, 5H), 6,86 (дд, J=8,3, 6,2 Гц, 4H), 5,92 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,14 (дд, J=54,1, 4,5 Гц, 1H), 5,02 (дк, J=23,2, 3,9 Гц, 1H), 4,35 (дт, J=25,9, 4,3 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,29 (дк, J=37,5, 5,2 Гц, 2H); ИЭР-МС:  572,0 [M+H].
21c
Стадия 2. Получение соединения
21b
17a
21b
17a
21c
3
4
2
4
6
1
+
d
m/z
Каждое из соединения  (0,66 г, 1,15 ммоль), сульфамата  (1,21 г, 1,38 ммоль) и DMAP (0,704 г, 5,76 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Далее растворы соединения  и сульфамата  последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат последовательно промывали насыщенным водным NaHCO и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (0,475 г, выход: 31%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,47 (c, 1H), 11,23 (c, 1H), 8,66 (c, 1H), 8,56 (c, 1H), 8,48 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,03 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,84 (с, 1H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,36 (к, J=4,8 Гц, 4H), 7,32 (м, 4H), 7,23 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,19 (т, J=7,9 Гц, 5H), 6,90 (дд, J=9,0, 6,9 Гц, 4H), 6,81 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 4H), 6,34 (м, 1H), 6,23 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,78 (м, 2H), 5,50 (д, J=53,7 Гц, 1H), 4,72 (м, 2H), 4,43 (д, J=24,1 Гц, 1H), 4,01 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,74 (с, 1H), 3,70 (т, J=2,4 Гц, 12H), 3,25 (дд, J=10,7, 3,8 Гц, 1H), 2,99 (д, J=13,1 Гц, 1H), 2,70 (дд, J=14,5, 9,0 Гц, 1H); ИЭР-МС:  1310,0 [M+H].
21d
Стадия 3. Получение соединения
21c
21d
1
+
d
m/z
6
Раствор соединения  (0,453 г, 0,34 ммоль) в DCM (12,6 мл), к которому добавляли DCA (1,14 мл, 10% в DCM, 1,38 ммоль) и воду (31 мкл, 1,72 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,14 мл, 1,72 ммоль) и нескольких капель метанола. Полученную суспензию перемешивали в течение 20 мин, фильтровали и высушивали с получением соединения  (0,21 г, выход: 86%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,5 (д, J=3,4 Гц, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,4 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,32 (дд, J=20,0, 2,1 Гц, 1H), 6,21 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,85 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,60 (м, 1H), 5,49 (м, 3H), 5,34 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,40 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,0 Гц, 1H), 3,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 3,17 (т, J=6,2 Гц, 2H); ИЭР-МС:  706,0 [M+H].
21e
Стадия 4. Получение соединения
21d
21e
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
m/z
4
+
Раствор соединения  (260 мг, 0,37 ммоль) и 1H-тетразола (2,15 мл 3-4% в MeCN, высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) в DMF/THF (1 : 2, 30 мл, высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил) фосфородиамидит (129 мкл, 0,41 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (23 мкл, 0,074 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли BuOOH (134 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,74 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат тщательно промывали водой, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (20 мг, выход: 7%). ИЭР-МС:  820,4 [M+H].
соединения 29 (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
21e
соединения 29 (аммонийная соль)
соединения 29 (натриевая соль)
31
+
d
m/z
6
Соединение  (20 мг, 0,024 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (~ 1 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13,5 мг, выход: 80%). P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. -2,06 (с, 1P); ИЭР-МС:  663,3 [M+H].
Пример 22
22b
Стадия 1. Получение соединения
22a
22b
2
3
m/z
+
Раствор рибозида 6-хлорпурина  (10,0 г, 34,88 ммоль, CAS № 5399-87-1) в THF (200 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (10% на угле, 8 г) в присутствии KCO (9,64 г, 69,77 ммоль). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, диатомитовую землю последовательно промывали с помощью THF и 5 : 1 THF/MeOH. Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения  (6,3 г), которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС:  253,1 [M+H].
22c
Стадия 2. Получение соединения
22b
22c
2
4
6
1
+
d
m/z
Раствор неочищенного соединения  (6,1 г) и DMTrCl (11,93 г, 35,20 ммоль) в безводном пиридине (300 мл) перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и промывали солевым раствором. Водный слой повторно экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (11,7 г). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 9,21 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,33 (д, J=6,8 Гц, 2H), 7,15-7,26 (м, 7H), 6,80 (т, J=9,3 Гц, 4H), 6,07 (д, J=4,5 Гц, 1H), 5,62 (д, J=5,6 Гц, 1H), 5,29 (д, J=5,8 Гц, 1H), 4,78 (к, J=5,1 Гц, 1H), 4,34 (к, J=5,3 Гц, 1H), 4,11 (к, J=4,8 Гц, 1H), 3,72 (с, 3H), 3,71 (с, 3H), 3,21-3,25 (м, 2H); ИЭР-МС:  555,1 [M+H].
22d
22e
Стадия 3. Получение соединений  и
22c
22d
22e
22d
22e
2
4
6
6
1
+
1
+
d
m/z
d
m/z
Раствор соединения  (6,7 г, 12,1 ммоль) в DMF (70 мл), к которому добавляли имидазол (2,47 г, 14,5 ммоль) и TBSCl (2,19 г, 2,39 ммоль), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали солевым раствором. Органическую фазу сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 10-33% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (3,3 г, выход: 40%) в виде первого элюируемого изомера и соединения  (3,5 г, выход: 43%) в виде второго элюируемого изомера. Соединение . H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 9,22 (с, 1H), 8,87 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,38 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,16-7,29 (м, 7H), 6,83 (дд, J=8,5, 4,9 Гц, 4H), 6,09 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,23 (д, J=6,0 Гц, 1H), 4,89 (т, J=4,9 Гц, 1H), 4,27 (к, J=5,2 Гц, 1H), 4,14 (к, J=4,5 Гц, 1H), 3,72 (с, 6H), 3,29 (уш. д, J=4,6 Гц, 2H), 0,72 (с, 10H), -0,05 (с, 3H), -0,17 (с, 3H); ИЭР-МС:  669,2, 1 [M+H]. Соединение. H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 9,20 (с, 1H), 8,87 (с, 1H), 8,80 (с, 1H), 7,29-7,40 (м, 2H), 7,12-7,27 (м, 7H), 6,82 (м, J=8,8, 6,8 Гц, 4H), 6,04 (д, J=5,0 Гц, 1H), 5,48 (д, J=6,0 Гц, 1H), 4,92 (к, J=5,2 Гц, 1H), 4,52 (т, J=4,6 Гц, 1H), 4,05-4,13 (м, 1H), 3,72 (с, 6H), 3,36 (дд, J=10,5, 4,5 Гц, 1H), 3,15 (дд, J=10,5, 5,0 Гц, 1H), 0,84 (с, 9H), 0,09 (с, 3H), 0,05 (с, 3H); ИЭР-МС: 669,2 [M+H].
22f
Стадия 4. Получение соединения
22e
17a
22f.
3
2
4
Активированные молекулярные сита 3Å добавляли в реакционную колбу с помещенным в нее соединением  (1,31 г, 1,96 ммоль) и сульфаматом  (1,88 г, 2,14 ммоль) в безводном THF (85 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор DMAP (1,2 г, 9,82 ммоль) в безводном THF (15 мл) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å, после чего его переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали водой и насыщенным водным NaHCO, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения
22g
Стадия 5. Получение соединения
22f
22g
2
4
6
1
+
d
m/z
Раствор соединения  (2,4 г, 1,71 ммоль) в DCM (80 мл), к которому добавляли DCA (0,563 мл, 6,83 ммоль) и воду (154 мкл, 8,54 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (688 мкл, 8,54 ммоль) в метаноле (1 мл) и промывали водой. Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения . H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,26 (с, 1H), 9,17 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,83 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,44 (т, J=5,8 Гц, 1H), 8,00-8,08 (м, 2H), 7,61-7,75 (м, 1H), 7,49-7,59 (м, 2H), 6,34 (д, J=6,0 Гц, 1H), 6,28 (дд, J=19,2, 2,1 Гц, 1H), 5,79 (д, J=6,1 Гц, 1H), 5,39-5,61 (м, 2H), 5,21-5,32 (м, 1H), 4,69 (дд, J=4,8, 2,8 Гц, 1H), 4,39-4,55 (м, 1H), 4,02 (к, J=3,5 Гц, 1H), 3,78-3,87 (м, 1H), 3,66-3,76 (м, 1H), 3,54-3,62 (м, 1H), 2,95-3,14 (м, 2H), 0,91 (с, 9H), 0,13 (с, 3H), 0,13 (с, 3H); ИЭР-МС:  801,3 [M+H].
22h
Стадия 6. Получение соединения
22g
22h
H
N, N,N',N'-
t
m/z
2
2
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,129 ммоль) и 1-тетразола (2,22 мл 0,45 M раствор в MeCN, 0,99 ммоль) в безводном THF (3 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 5 мин в атмосфере N, после чего по каплям посредством шприца добавляли 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидит (75 мг, 0,25 ммоль) в безводном THF (1 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном и MeCN перед работой перегоняли над CaH до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор BuOOH (114 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,624 ммоль) добавляли посредством шприца и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения  (66 мг, выход 57%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: =916,3 [M+H].
22i
Стадия 7. Получение соединения
22h
22i
1
19
31
+
2
2
2
m/z
Соединение  (66 мг, 0,072 ммоль) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (5 мл) при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Agela Durashell C18, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения  (11,6 мг, выход: 14,5%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д, 9,57 (д, J=1,5 Гц, 1H), 9,35 (дд, J=1,5, 9,5 Гц, 2H), 8,71 (д, J=1,3 Гц, 1H), 8,09 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,04 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,86 (уш. д, J=19,6 Гц, 1H), 6,18-5,91 (м, 2H), 5,84-5,65 (м, 1H), 5,24 (уш. с, 1H), 4,88-4,80 (м, 3H), 4,74-4,59 (м, 1H), 4,05 (уш. дд, J=5,4, 14,4 Гц, 1H), 3,96-3,81 (м, 1H), 1,44 (д, J=1,3 Гц, 9H), 0,73-0,60 (м, 6H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -198,496 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -198,496 (с, 1F); ИЭР-МС: =759,2 [M+H].
49 (натриевая соль)
Стадия 8. Получение соединения
22i
соединения 49 (аммонийная соль)
соединения 49 (натриевая соль)
3
2
2
2
1
19
31
+
m/z
Раствор соединения  (40 мг, 0,053 ммоль) в пиридине (3 мл), к которому добавляли EtN (320 мг, 3,16 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (254 мг, 1,58 ммоль), перемешивали при 50°C в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью THF (2 мл). Добавляли изопропокситриэтилсилан (697 мг, 5,27 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением в виде белого твердого вещества после лиофилизации (22,5 мг, выход: 58%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,95 (с, 1H), 8,76 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 6,73-6,58 (м, 1H), 6,53 (д, J=8,0 Гц, 1H), 6,42-6,33 (м, 1H), 5,93 (уш. дд, J=4,3, 7,8 Гц, 1H), 5,50-5,30 (м, 1H), 5,19-5,04 (м, 1H), 4,88-4,81 (м, 1H), 4,55-4,44 (м, 2H), 4,39-4,32 (м, 1H), 4,25 (ддд, J=2,3, 4,9, 12,2 Гц, 1H), 3,71 (уш. д, J=13,1 Гц, 1H), 3,46 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H). F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -197, 119 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -1,984 (с, 1P); ИЭР-МС: =645,2 [M+H].
Пример 23
23a
Стадия 1. Получение соединения
13a
23a
N, N,N',N'-
N, N,N',N'
2
2
3
3
4
+
Соединение (900 мг, 1,16 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (103 мл) и безводного THF (103 мл), добавляли 1H-тетразол (10,2 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 2 часов и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил- тетраизопропилфосфородиамидит (0,48 мл, 1,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетраизопропилфосфородиамидита (0,48 мл, 1,51 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (0,7 г, 2,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% MeOH в DCM) с получением соединения (152 мг, выход: 11%). ИЭР-МС: m/z=904,3 [M+H].
(
*R
) 16A и соединения (
*S
) 16B
Стадия 2. Получение соединения
23a
соединения (
*R
) 16A (натриевая соль)
соединения (
*S
) 16B (натриевая соль)
4
3
Соединение  (152 мг, 0,12 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (7 мл, 56 ммоль), перемешивали при 40 °C в течение 3 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку/разделение двух эпимеров выполняли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NHHCO в воде, MeOH). Растворители из двух чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остатки растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением (37 мг, выход 29%) и (5 мг, выход 6%), оба в виде белых твердых веществ.
Соединение (
*R
) 16A (натриевая соль)
1
+
6
H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 2,58-2,69 (м, 1H), 2,95-3,07 (м, 1H), 3,41 (дд, J=13,2, 2,6 Гц, 1H), 3,58-3,68 (м, 1H), 4,01 (тд, J=11,8, 6,5 Гц, 1H), 4,18 (ддд, J=13,5, 11,3, 4,1 Гц, 1H), 4,36 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 4,47-4,56 (м, 1H), 5,18-5,29 (м, 1H), 5,75-5,94 (м, 1H), 5,79 (м, J=9,0, 4,1 Гц, 1H), 6,13 (д, J=3,7 Гц, 1H), 6,37 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,78 (уш. с, 2H), 7,15 (уш. с, 2H), 7,99 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 9,65 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z=677,0 [M+H].
Соединение (
*S
) 16B (натриевая соль)
31
+
P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,80 (с, 1 P); ИЭР-МС: m/z=677,3 [M+H].
Пример 24
24a
Стадия 1. Получение соединения
19g
24a
H
N, N,N',N’
2
2
3
3
4
6
6
1
31
+
Соединение  (0,6 г, 0,77 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (55 мл) и безводного THF (55 мл), добавляли 1-тетразол (8,94 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил--тетраизопропил-фосфородиамидит (0,24 мл, 0,77 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 2,5 ч и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,46 г, 1,53 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% MeOH в DCM) с получением соединения  (184 мг, выход: 26%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 1,13 (дд, J=6,7, 1,4 Гц, 6H), 2,69-2,87 (м, 2H), 3,07 (т, J=5,9 Гц, 2H), 3,25-3,30 (м, 1H), 3,35-3,47 (м, 2H), 3,53 (с, 3H), 3,55-3,65 (м, 1H), 4,31-4,48 (м, 4H), 4,51-4,61 (м, 2H), 5,14 (дд, J=8,5, 4,1 Гц, 1H), 5,38-5,52 (м, 1H), 6,20 (д, J=8,5 Гц, 1H), 6,60 (дд, J=8,5, 6,1 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,0 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,5 Гц, 2H), 8,35 (с, 1H), 8,44 (уш. с, 1H), 8,73 (с, 1H), 8,76 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,73 (с, 1H), 12,11 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 65,02 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=915,5 [M+H].
соединения (
*R
) 13A (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
24a
соединения (*
R
) 13Å (натриевая соль)
4
3
6
6
+
1
31
+
d
J
d
m/z
Соединение  (184 мг, 0,2 ммоль) в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл, 81 ммоль) перемешивали при 45 °C в течение 1 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 3 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку выполняли посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NHHCO в воде, MeOH). Растворители чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной ионообменной смолой IR120 в форме Na. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением (93 мг, выход 66%) в виде рыхлого белого твердого вещества.H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 10,59 (уш. с, 1H), 8,42 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 7,23-7,33 (м, 2H), 7,28 (уш. с, 2H), 6,52 (уш. с, 2H), 6,35 (дд, =8,4, 6,0 Гц, 1H), 6,02 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,48 (уш. дд, J=8,6, 4,0 Гц, 1H), 5,17 (уш. с, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,95-4,04 (м, 1H), 3,88-3,95 (м, 1H), 3,48-3,59 (м, 1H), 3,47 (с, 3H), 3,18 (дд, J=14,0, 4,3 Гц, 1H), 3,06 (ддд, J=13,9, 8,2, 5,9 Гц, 1H), 2,53-2,68 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 52,21 (с, 1 P); ИЭР-МС:  688,3 [M+H].
Пример 25
25a
Стадия 1. Получение соединения
12a
25a
N, N,N',N'-
N, N,N',N'
2
2
3
3
4
+
Соединение  (300 мг, 0,38 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (33 мл) и безводного THF (33 мл), добавляли 1H-тетразол (4,4 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-тетраизопропилфосфородиамидит (0,12 мл, 0,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4,5 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетраизопропилфосфородиамидита (0,06 мл, 0,19 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 18 часов и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (0,23 г, 0,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением  (103 мг, выход 27%). ИЭР-МС: m/z=921,4 [M+H].
(*R) 31A (натриевая соль) и соединения (*S) 31B (натриевая соль)
Стадия 2. Получение соединения
25a
31A
31B
4
3
Соединение (103 мг, 0,1 ммоль) помещали в метиламин, 33% раствор в этаноле (6 мл, 58,4 ммоль), перемешивали при 45 °C в течение 1 часа. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку/разделение двух эпимеров выполняли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NHHCO в воде, MeOH). Растворители из двух чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остатки растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Растворители оставшихся растворов удаляли лиофилизацией с получением соединений  и , каждое в виде белого твердого вещества.
Соединение (*R) 31A (натриевая соль)
1
31
+
d
6
6
(42 мг, выход 57%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 3,36-3,51 (м, 2H), 3,88 (м, J=9,8 Гц, 1H), 4,12-4,23 (м, 2H), 4,55 (д, J=1,0 Гц, 1H), 5,19 (уш. т, J=13,0 Гц, 1H), 5,26-5,61 (м, 3H), 6,04 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 6,37-6,48 (м, 1H), 6,53 (уш. с, 2H), 7,35 (уш. с, 2H), 8,16 (с, 1H), 8,22 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,34 (с, 1H), P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 52,43 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 694,3 [M+H].
Соединение (*S) 31B (натриевая соль)
31
+
(3 мг, выход 4%). P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,20 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=694,3 [M+H].
Пример 26
26b
Стадия 1. Получение соединения
26a
26b
1
+
d
6
Хлортриметилсилан (5,53 мл, 43,7 ммоль) по каплям добавляли к раствору [CAS 847648-20-8] (2,6 г, 8,74 ммоль) в безводном пиридине (26 мл) при 0 °C. Реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего снова охлаждали до 0 °C. Добавляли по каплям хлорид изобутирила (4,58 мл, 43,7 ммоль) в течение 15 мин и продолжали перемешивание при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь охлаждали до 0 °C, добавляли воду с последующим добавлением водного раствора аммиака (26%, 18 мл) через 20 мин, продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционный раствор нейтрализовали уксусной кислотой и концентрировали при пониженном давлении. Очистку выполняли колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде грязно-белого твердого вещества (1,3 г, выход: 40%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,10 (с, 1H), 11,71 (с, 1H), 7,96 (с, 1H), 5,93 (д, J=4,1 Гц, 1H), 4,80 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,50 (т, J=2,1 Гц, 1H), 4,23 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,78 (к, J=2,1 Гц, 1H), 3,71 (м, 1H), 3,63 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 2,78 (м, 1H), 1,23 (д, J=4,8 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=367,9 [M+H].
26c
Стадия 2. Получение соединения
26b
26c
2
4
6
1
+
m/z
Раствор соединения  (1,75 г, 4,76 ммоль) в безводном пиридине (35 мл), к которому добавляли DMAP (0,29 г, 2,38 ммоль) и DMTrCl (2,41 г, 7,14 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 1,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку выполняли колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2,5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде бледно-коричневой пены (3,1 г, выход: 96%), H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 11,89 (д, J=177,0 Гц, 2H), 7,75 (с, 1H), 7,39 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,25 (м. 7H), 6,86 (м, 4H), 5,98 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,83 (д, J=2,1 Гц, 1H), 4,49 (м, 2H), 3,82 (к, J=2,1 Гц, 1H), 3,73 (д, J=2,8 Гц, 6H), 3,27 (с, 3H), 3,22 (м, 1H), 2,78 (м, 1H), 1,12 (дд, J=6,9, 2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС:  669 [M+H].
26d
Стадия 3. Получение соединения
26c
17a
26c
17a
26d
3
4
2
4
6
1
+
m/z
В реакционную колбу помещали DMAP (0,35 г, 2,9 ммоль), безводный DCM (10 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения (0,38 г, 0,57 ммоль) и раствор сульфамата  (0,6 г, 0,69 ммоль) (каждый в безводном DCM (2×10 мл)) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения  и сульфамата  соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены (0,44 г, выход: 55%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д.: 12,12 (с, 1H), 11,69 (с, 1H), 11,22 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,02 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,64 (к, J=7,3 Гц, 2H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,49 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,36 (м, 8H), 7,23 (м, 8H), 6,92 (т, J=9,6 Гц, 4H), 6,84 (дд, J=13,8, 9,0 Гц, 4H), 6,28 (д, J=19,3 Гц, 1H), 6,05 (д, J=1,0 Гц, 1H), 5,15 (с, 1H), 4,97 (м, 1H), 4,85 (д, J=22,0 Гц, 1H), 4,40 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,98 (м, 2H), 3,70 (т, J=3,1 Гц, 12H), 3,23 (д, J=6,9 Гц, 2H), 3,13 (с, 3H), 2,79 (м, 2H), 2,65 (м, 2H), 1,10 (д, J=5,5 Гц, 6H); ИЭР-МС:  1406 [M+H].
26e
Стадия 4. Получение соединения
26d
26e
1
+
d
m/z
6
Раствор соединения  (430 мг, 0,3 ммоль) в DCM (12 мл), к которому добавляли DCA (1,0 мл 10% в DCM, 1,2 ммоль) и воду (27 мкл, 1,5 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (120 мкл, 1,5 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-8% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого порошка (225 мг, выход: 92%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д.: 12,11 (с, 1H), 11,67 (с, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,73 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,04 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,29 (дд, J=19,6, 1,7 Гц, 1H), 6,04 (с, 1H), 5,92 (с, 1H), 5,58 (м, 1H), 5,22 (с, 1H), 4,92 (д, J=10,3 Гц, 1H), 4,62 (м, 1H), 4,17 (к, J=5,0 Гц, 1H), 4,10 (т, J=2,1 Гц, 1H), 4,02 (тд, J=7,2, 2,5 Гц, 1H), 3,70 (м, 1H), 3,61 (м, 1H), 3,45 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 3,06 (к, J=7,3 Гц, 1H), 2,77 (м, 1H), 1,12 (дд, J=6,9, 2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС:  801,0 [M+H].
26f
Стадия 5. Получение соединения
26e
26f
H
N, N,N',N'
m/z
2
2
3
3
4
+
Раствор соединения (220 мг, 0,27 ммоль) и 1-тетразола (3,2 мл, 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в смеси MeCN/THF (1 : 1, 48 мл, предварительно высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 1 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (87 мкл, 0,27 ммоль). Полученную реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 22 часов. Добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,45 г, 1,5 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты последовательно промывали смесью 1 : 1 насыщенного водного NaSO и насыщенного водного NaHCO и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (55 мг, выход: 21%). ИЭР-МС:  933,5 [M+H].
(*R) 7A (натриевая соль) и соединения (*S) 7B (натриевая соль)
Стадия 6. Получение соединения
26e
соединения (*R) 7 A (аммонийная соль)
соединения (*
S
) 7B (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 7 A (натриевая соль)
соединения (*
S
) 7B (натриевая соль)
Соединение  (55 мг, 0,059 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (4 мл) при 45 °C до полного превращения (прибл. 1 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование), вследствие чего были разделены оба P-эпимера: в виде первого элюируемого изомера и в виде второго элюируемого изомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  (выход: 7 мг, 16%) в виде белого твердого вещества и  (выход: 4 мг, 9%) в виде белого твердого вещества.
Соединение (*
R
) 7A (натриевая соль)
1
31
+
2
2
m/z
. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 3,31 (уш. д, J=12,2 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 1H), 4,28-4,50 (м, 4H), 4,74 (с, 1H), 4,97-5,08 (м, 1H), 5,29 (с, 1H), 5,72 (дд, J=50,5, 3,7 Гц, 1H), 6,15 (с, 1H), 6,30 (д, J=18,7 Гц, 1H), 7,76 (с, 1H), 8,10 (с, 1H), 8,21 (с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 55,05 (с, 1P); ИЭР-МС:  706,0 [M+H].
Соединение (*S) 7B (натриевая соль).
1
31
+
2
2
m/z
H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,43 (уш. с, 1H). 8,18 (с, 1H). 7,84 (с, 1H), 6,37 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,14 (с, 1H), 5,52 (дд, J=50,7, 4,3 Гц, 1H), 5,26 (уш. с, 1H), 4,87-4,99 (м, 2H), 4,64-4,70 (м, 1H), 4,49 (ддд, J=10,5, 4,9, 2,7 Гц, 1H), 4,39 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,23 (дт, J=23,8, 10,7 Гц, 1H), 3,57 (уш. дд, J=14,1, 3,5 Гц, 1H), 3,47 (с, 3H), 3,33 (уш. д, J=13,9 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 56,94 (с, 1P); ИЭР-МС:  706,1 [M+H].
Пример 27
27a
Стадия 1. Получение соединения
3
2
Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
17d
27a
N, N,N',N'-
E
+
К раствору  (400 мг, 0,518 ммоль) в тетрагидрофуране (14 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 2 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 9,2 мл) при 25°C с последующим добавлением раствора 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидита (0,31 г, 1,037 ммоль, разведенный в 2 мл THF) при 25 °C. После перемешивания в течение 1,5 ч при кт добавляли ()-N, N-диметил-N'-(3-тиоксо-3H-1,2,4-дитиазол-5-ил)формимидамид (DDTT, 0,453 г, 2,205 ммоль, разведенный в 10 мл Py) при 25°C и перемешивали раствор в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением  (80 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=902,9 [M+H].
(*
R
) 44A (натриевая соль)
(*S) 44B (натриевая соль)
Стадия 2. Получение соединенияисоединения
27a
соединение (*R) 44A (аммонийную соль)
соединение (*S) 44B (аммонийная соль)
Соединение (*
R
) 44A (натриевая соль)
4
3
3
2
2
2
1
19
31
m/z
Раствор соединения  (80 мг, 0,09 ммоль) в метиламине (50% в EtOH, 5,0 мл) перемешивали при 25°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. За счет разделения посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: вода (10 мМ NHHCO)-VCHCN; начало B: 5, конец B 20, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) получали (19 мг) и (1,5 мг), обе в виде белого твердого вещества. Заключительное превращение обоих соединений в натриевые соли проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой. (27 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,29 (уш. с, 1H), 6,57-6,50 (м, 1H), 6,05-5,98 (м, 2H), 5,94-5,78 (м, 1H), 5,31-5,13 (м, 1H), 4,70 (уш. д, J=7,5 Гц, 1H), 4,60 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,26 (уш. дд, J=4,3, 11,5 Гц, 1H), 4,19-4,11 (м, 1H), 3,85 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,56 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 2,81-2,63 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -195,872 (с, 1F) м. д.; P ЯМР (162 МГц, DO) δ 52,528 (с, 1P) м. д.; ИЭР-МС: =676,0 [M+H].
Соединение (*
S
), 44B (натриевая соль)
1
19
31
+
2
2
2
(1,8 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,20 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 6,59-6,46 (м, 1H), 6,22-6,14 (м, 1H), 5,97 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,53-5,34 (м, 2H), 4,66-4,54 (м, 2H), 4,34 (уш. т, J=11,5 Гц, 1H), 4,11 (уш. дд, J=4,6, 11,9 Гц, 1H), 3,77 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,45 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,02 (к, J=7,3 Гц, 1H), 2,76-2,66 (м, 1H), 2,78-2,65 (м, 1H), 2,58 (уш. дд, J=7,8, 12,5 Гц, 1H), 1,26-1,18 (м, 1H), 1,27-1,17 (м, 1H), 1,22 (уш. т. J=7,3 Гц, 1H), 1,32-1,10 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -195,902 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 56,151 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=677,0 [M+H].
Пример 28
28a
Стадия 1. Получение соединения
3
2
Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
18a
28a
3
2
2
m/z
+
К раствору  (430 мг, 0,532 ммоль, высушен лиофилизацией) в тетрагидрофуране (9 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 2 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 9,46 мл, получен путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN с последующим добавлением 1,5 г молекулярных сит 4Å и перемешиванием впоследствии в течение 1 ч в атмосфере N до применения) при 25 °C, продували несколько раз с использованием N с последующим добавлением раствора 3-((бис(диизопропиламино)фосфино)окси)пропаненитрил (0,288 мг, 0,958 ммоль, разведен в 2 мл THF) по каплям в течение 30 мин при 25°C с получением белой суспензии. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор DDTT (655 мг, 3,19 ммоль) в пиридине (10 мл) при 25°C и перемешивали раствор в течение 30 мин. Реакционную смесь объединяли с другой порцией, фильтровали через слой диатомитовой земли, концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-2% MeOH в DCM) с получением  (260 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: =939,1 [M+H].
(*
R
) 42A (аммонийная соль)
соединения (*
S
) 42B (аммонийная соль)
Стадия 2. Получение соединения и
28a
соединения (*
R
) 42A (аммонийная соль)
соединения (*
S
) 42B (аммонийная соль)
4
3
3
Раствор соединения  (130 мг, 0,138 ммоль) в метиламине (от 27 до 32% в EtOH, 5,0 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и выпаривали смесь при пониженном давлении с получением белого твердого вещества; твердое вещество растворяли в воде (30 мл), впоследствии промывали DCM (20 мл x 4). Водный слой лиофилизировали с получением белого твердого вещества (190 мг). Белое твердое вещество очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 5 мкм, условия: вода (10 мМ NHHCO)-CHCN, начало B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением (70 мг) в виде белого твердого вещества и  (12 мг) в виде белого твердого вещества.
Соединение (*
R
) 42A (аммонийная соль)
1
19
31
+
. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,96 (с, 1H), 8,23 (д, J=7,1 Гц, 2H), 7,25 (с, 1H), 6,58-6,41 (м, 2H), 5,90-5,58 (м, 3H), 5,33-5,12 (м, 1H), 4,93-4,77 (м, 1H), 4,41-4,24 (м, 2H), 3,86 (уш. дд, J=2,8, 13,1 Гц, 1H), 3,66 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ7 м. д. -196,52 (с, 1F), -198,72 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, D20) δ м. д. 54,24 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,2 [M+H].
Соединение (*
S
) 42B (аммонийная соль).
1
19
31
+
m/z
H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,54 (уш. с, 1H), 8,15 (уш. с, 1H), 7,97 (уш. с, 1H), 7,14 (уш. с, 1H), 6,40 (уш. с, 2H), 5,95-5,71 (м, 1H), 5,94-5,69 (м, 1H), 5,68-5,33 (м, 1H), 5,70-5,32 (м, 1H), 5,19 (уш. с, 1H), 4,13 (уш. с, 2H), 3,72 (уш. с, 1H), 3,57 (уш. д, J=12,7 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,66 (с, 1F), -198,44 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,09 (с, 1P); ИЭР-МС: =678,1 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
3
Соединение (*
R
) 42A (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 42A (натриевая соль)
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (12 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH.  (92 мг в 20 мл/9 мл) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CHCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (72,4 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,96 (уш. с, 1H), 8,24 (уш. д, J=13,2 Гц, 2H), 7,13 (с, 1H), 6,62-6,41 (м, 2H), 5,95-5,64 (м, 3H), 5,27-5,06 (м, 1H), 5,02-4,89 (м, 1H), 4,63 (уш. д, J=8,3 Гц, 1H), 4,39 (уш. с, 2H), 3,92 (уш. д, J=11,5 Гц, 1H), 3,72 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -196,32 (с, 1F), -198,94 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 54,05 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,1 [M+H].
соединения (*
S
) 42B (натриевой соли)
1
19
31
+
С использованием приведенной выше процедуры превращения в натриевую соль получали  (6,9 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,63 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 6,56-6,39 (м, 2H), 5,95-5,77 (м, 1H), 5,73-5,58 (м, 1H), 5,58-5,45 (м, 1H), 5,58-5,44 (м, 1H), 5,36-5,22 (м, 1H), 4,91-4,78 (м, 1H), 4,53 (уш. дд, J=6,1, 11,0 Гц, 1H), 4,19 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 4,25-4,13 (м, 1H), 3,79 (дд, J=4,0, 13,6 Гц, 1H), 3,71-3,70 (м, 1H), 3,66-3,66 (м, 1H), 3,68-3,59 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,10-196,43 (м, 1F), -198,17 (тд, J=25,9, 52,5 Гц, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ 55,26 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,1 [M+H].
Пример 29
29b
Стадия 1. Получение соединения
29a
29b
4
3
1
К раствору соединения  (13 г, 49,94 ммоль) в пиридине (10,06 мл, 124,86 ммоль) и дихлорметане (300 мл) по каплям добавляли трифлатный ангидрид (10,92 мл, 64,93 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси при 0°C в течение около 1 ч смесь разбавляли с помощью DCM (100 мл), промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушивали безводным MgSO, фильтровали и выпаривали досуха с получением  (20,4 г) в виде желтого масла, использованного на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 6,07 (д, J=3,6 Гц, 1H), 5,35 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,85 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,32-4,19 (м, 3H), 4,06 (дд, J=3,90, 8,8 Гц, 1H), 1,61 (с, 3H), 1,51 (с, 3H), 1,42 (д, J=2,6 Гц, 6H).
29c
Стадия 2. Получение соединения
29b
29c
4
4
4
3
1
К раствору соединения  (20,4 г, 51,99 ммоль) в толуоле (500 мл) по каплям добавляли n-BUNBH (40,13 г, 155,98 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 80°C в течение 6 ч реакционную смесь промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушивали безводным MgSO, фильтровали и выпаривали досуха с получением желтого масла. Полученное масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-20% EA в PE) с получением соединения  (6,4 г) в виде бесцветного масла. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 5,83 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,1 Гц, 1H), 4,23-4,08 (м, 3H), 3,89-3,76 (м, 1H), 2,19 (дд, J=3,9, 13,4 Гц, 1H), 1,82-1,73 (м, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,43 (с, 3H), 1,35 (д, J=15,3 Гц, 6H).
29d
Стадия 3. Получение соединения
29c
29d
Раствор соединения  (13,4 г, 54,85 ммоль) в смеси AcOH/вода (об./об., 1 : 1, 200 мл) перемешивали в течение 12 ч при 25 °C. Реакционный раствор концентрировали и совместно выпаривали с толуолом (2×40 мл) с получением соединения  (11,4 г) в виде бесцветного масла, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки.
29e
Стадия 4. Получение соединения
29d
29e
2
2
3
2
4
К раствору соединения (11,4 г, 8,81 ммоль) в MeOH (200 мл) и воде (100 мл) добавляли перйодат натрия (17,91 г, 83,73 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при 25°C фильтровали реакционную смесь и разбавляли фильтрат водным насыщенным NaSO (50 мл); впоследствии концентрировали смесь для удаления MeOH. Остаток разделяли с 2-Me-THF (200 мл), экстрагировали водный слой с помощью 2-Me-THF (5×100 мл). Органические слои впоследствии объединяли, промывали солевым раствором, высушивали (безводный NaSO), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения (11 г) в виде желтого масла, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки.
29f
Стадия 5. Получение соединения
29e
29f
29f
4
3
1
К раствору соединения  (11 г, 9,29 ммоль) в MeOH (200 мл) добавляли боргидрид натрия (2,9 г, 76,66 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при 0°C реакционную смесь гасили водным насыщенным NHCl (60 мл) и концентрировали смесь для удаления MeOH. Остаток лиофилизировали с получением неочищенного продукта . Неочищенный продукт смешивали с MeOH/DCM (об./об., 10 : 1, 200 мл), впоследствии фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-60% PE в EA) с получением соединения  (5,3 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ 5,83 (д, J=3,7 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,2 Гц, 1H), 4,41-4,30 (м, 1H), 3,90 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 3,57 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 2,01 (дд, J=4,5, 13,3 Гц, 1H), 1,89-1,81 (м, 2H), 1,33 (с, 3H).
29g
Стадия 6. Получение соединения
29f
29g
1
3
Уксусный ангидрид (6,51 мл, 68,9 ммоль) и концентрированную серную кислоту (36,91 мкл, 0,69 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения  (1,2 г, 6,89 ммоль) в уксусной кислоте (39,4 мл, 688,89 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при кт в течение 1 ч реакционную смесь гасили холодной водой (100 мл), перемешивали в течение при кт 30 мин и экстрагировали этилацетатом (3×60 мл). Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3×90 мл), солевым раствором (2×90 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-40% EA в PE, об./об.) с получением соединения (870 мг) в виде бесцветного масла. H ЯМР (400 МГц, CDCN) δ 6,03 (с, 1H), 5,11 (д, J=4,6 Гц, 1H), 4,49 (дтд, J=3,3, 6,5, 9,6 Гц, 1H), 4,19 (дд, J=3,3, 11,9 Гц, 1H), 4,00 (дд, J=6,6, 12,0 Гц, 1H), 2,03-1,99 (м, 11H). Ту же реакцию повторяли несколько раз и объединяли все партии.
29i
Стадия 7. Получение соединения
29h
29g
29i
3
4
3
3
4
1
+
Раствор соединения  (0,672 г, 4,42 ммоль) и BSA (3,13 г, 15,37 ммоль) в безводном CHCN (12 мл) перемешивали при 85°C в течение 1 ч и впоследствии охлаждали до 0 °C. Затем его по каплям добавляли к соединению  (1 г, 3,84 ммоль) и SnCl (3,003 г, 11,53 ммоль) при 0°C с перемешиванием; после перемешивания смеси при 26°C в течение 24 ч неочищенную смесь объединяли с другой порцией, охлаждали и разбавляли с помощью EA (300 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (4×200 мл), солевым раствором (2×150 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле: 20 г) (0%-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (3,52 г) в виде белой пены. H ЯМР (400 МГц, CDOD-d) δ 6,22 (с, 1H), 5,75 (уш. д, J=5,5 Гц, 1H), 4,65 (уш. дд, J=3,6, 9,7 Гц, 1H), 4,31 (дд, J=3,3, 12,0 Гц, 1H), 4,12 (дд, J=5,6, 11,9 Гц, 1H), 3,35 (с, 3H), 2,80 (ддд, J=5,8, 10,0, 14,1 Гц, 1H), 2,33 (уш. дд, J=6,0, 13,8 Гц, 1H), 2,12 (с, 3H), 1,97-1,93 (м, 3H); ИЭР-МС: m/z=352,9 [M+H].
29j
Стадия 8. Получение соединения
29i
29j
3
2
4
К раствору соединения  (2 г, 5,677 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли по каплям EtN (1,72 г, 17,03 ммоль) и хлорид изобутирила (1,21 г, 11,35 ммоль) при кт. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч реакционную смесь гасили водой (50 мл), промывали солевым раствором (2×50 мл), высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения  (2,39 г), используемого на следующей стадии без дополнительной очистки.
29k
Стадия 9. Получение соединения
29j
29k
3
6
1
+
К раствору соединения  (2,39 г, 5,67 ммоль) в THF (25 мл) добавляли по каплям метанолат натрия (1,23 г, 22,71 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч добавляли по каплям дополнительное количество метанолата натрия (1,23 г, 22,71 ммоль). После перемешивания при 25°C в течение 0,5 ч смесь разбавляли насыщенной смесью вода/CHCOOH (1 : 1, 4 мл) с доведением до pH 7, впоследствии концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (770 мг) в виде белой пены. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 12,09 (уш. с, 2H), 5,99 (с, 1H), 5,75 (уш. д, J=2,9 Гц, 1H), 4,80-4,70 (м, 2H), 4,49-4,36 (м, 1H), 3,51-3,40 (м, 2H), 2,79 (тд, J=6,8, 13,6 Гц, 1H), 2,43-2,30 (м, 1H), 2,07 (дд, J=6,7, 12,6 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,6 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=339,1 [M+H].
29l
Стадия 10. Получение соединения
29k
29l
2
4
1
+
DMTrC1 (1,20 г, 3,54 ммоль) добавляли к раствору соединения  (1 г, 2,95 ммоль) в Py (10 мл). После перемешивания при 25°C в течение 12 ч смесь разделяли между EA (150 мл) и водой (100 мл). Смесь фильтровали и последовательно промывали органический слой солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали досуха с получением неочищенного остатка (масла). Остаток (объединенный с силикагелем, 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (1,52 г) в виде желтой пены. H ЯМР (400 МГц, CD3CN) δ7,32 (дд, J=1,6, 7,9 Гц, 2H), 7,22-7,10 (м, 7H), 6,73 (дд, J=8,8, 13,9 Гц, 4H), 6,13 (с, 1H), 4,93 (уш. с, 1H), 4,77-4,57 (м, 1H), 3,77 (уш. с, 1H), 3,73 (д, J=3,9 Гц, 6H), 3,23-3,04 (м, 2H), 2,70 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 2,57 (ддд, J=5,3, 9,8, 13,3 Гц, 1H), 2,08 (дд, J=6,4, 13,4 Гц, 1H), 1,19 (д, J=6,8 Гц, 6H). ИЭР-МС: m/z=663,3 [M+Na].
29n
Стадия 11. Получение соединения
3
2
3
2
4
6
6
29m
29n
1
19
+
Йодид тетрабутиламмония (0,89 г, 2,41 ммоль), трифенилфосфин (4,74 г, 18,08 ммоль), тетрабромистый углерод (5,996 г, 18,080 ммоль), NaN (3,330 г, 51,223 ммоль) добавляли к раствору соединения  (4,5 г, 12,05 ммоль, CAS № 144924-99-2cb) в DMF (70 мл) при 30 °C. После перемешивания при 30°C в течение 24 ч к раствору добавляли дополнительное количество йодида тетрабутиламмония (0,89 г, 2,41 ммоль), трифенилфосфина (4,74 г, 18,00 ммоль) и тетрабромистого углерода (5,99 г, 18,08 ммоль). После перемешивания в течение еще 24 ч смесь разбавляли водным насыщенным NaCO (150 мл) для доведения смеси до pH 9 и экстрагировали смесь этилацетатом (200 мл x 3). Органические слои впоследствии объединяли и последовательно промывали солевым раствором (100 мл), сушили безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Реакцию повторяли несколько раз и объединяли все партии. Остаток (объединенный с силикагелем: 30 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 120 г) (градиентное элюирование: 0-100% этилацетата в петролейном эфире, затем 0-20% метанола в этилацетате) с получением соединения  (9,5 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,28 (уш. с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,54 (д, J=2,4 Гц, 1H), 8,08-8,02 (м, 2H), 7,68-7,62 (м, 1H), 7,58-7,52 (м, 2H), 6,66-6,58 (м, 1H), 6,18 (уш. с, 1H), 5,46-5,24 (м, 1H), 4,56 (тд, J=4,4, 19,1 Гц, 1H), 4,08-4,04 (м, 1H), 3,72-3,68 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ м. д. -197,05 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z=398,9 [M+H].
29o
Стадия 12. Получение соединения
29n
29o
29o
2
4
3
3
1
19
+
К раствору соединения (8,5 г, 21,33 ммоль) и DMAP (1,3 г, 10,67 ммоль) в пиридине (90 мл) добавляли DMTrCl (14,46 г, 42,67 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 80°C в течение 14 ч смесь разделяли между DCM (200 мл) и водой (50 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением неочищенного продукта . Его объединяли с другой порцией и очищали; остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/(EA/DCM=1/1) от 10% до 100%) с получением соединения  (9,5 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ9,00 (уш. с, 1H), 8,84 (уш. с, 1H), 8,20 (уш. с, 1H), 8,02 (уш. д, J=7,6 Гц, 2H), 7,64-7,58 (м, 1H), 7,54 (уш. т, J=7,5 Гц, 2H), 7,46 (уш. д, J=7,1 Гц, 2H), 7,40-7,34 (м, 5H), 7,30 (уш. д, J=7,3 Гц, 1H), 6,94-6,84 (м, 4H), 6,58-6,48 (м, 1H), 4,48-4,34 (м, 2H), 4,18-4,06 (м, 1H), 3,38 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H), 3,18 (уш. дд, J=5,9, 13,9 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, CDCl) δ -196,176 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z 701,2 [M+H].
29p
Стадия 13. Получение соединения
29o
29p
1
19
+
6
6
К раствору соединения (10,0 г, 14,27 ммоль) в THF (100 мл) добавляли трифенилфосфин (5,24 г, 1,99 ммоль) при 25 °C. После перемешивания раствора при 40°C в течение 2 ч к раствору добавляли воду (50 мл) при 40°C и перемешивали смесь в течение 12 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (200 мл) и солевым раствором (2×50 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (10,0 г). Желтое твердое вещество (объединенное с силикагелем: 20 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM/MeOH=0-20%) с получением соединения  (6,6 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 8,74 (с, 1H), 8,46 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,06-7,98 (м, 2H), 7,64 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,58-7,50 (м, 2H), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,38-7,32 (м, 6H), 7,30-7,26 (м, 1H), 6,94 (дд, J=3,4, 8,8 Гц, 4H), 6,50-6,40 (м, 1H), 4,38-4,32 (м, 1H), 4,24-4,08 (м, 2H), 3,74 (д, J=2,9 Гц, 6H), 2,68-2,54 (м, 2H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ м. д. -195,79 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=675,3 [M+H].
29q
Стадия 14. Получение соединения
29p
29q
1
19
+
3
3
m/z
4-Нитрофенол (0,92 г, 6,67 ммоль) и триэтиламин (1,35, 13,34 ммоль) добавляли к раствору соединения  (1,5 г, 2,22 ммоль) в DCM (40 мл). Полученный раствор перемешивали при -78°C и добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенил (1,58 г, 6,67 ммоль) в DCM (5 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения  (1,4 г) в виде светло-желтого твердого вещества, хранимого при -20 °C. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 8,94 (уш. с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,48 (уш. с, 1H), 8,18-8,08 (м, 2H), 8,00 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 7,96 (с, 1H), 7,66-7,60 (м, 1H), 7,58-7,52 (м, 2H), 7,44 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 7,38-7,28 (м, 7H), 6,92-6,84 (м, 4H), 6,40-6,26 (м, 1H), 4,48-4,42 (м, 2H), 4,28 (уш. с, 1H), 3,86-3,76 (м, 6H), 3,56 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,32 (уш. д, J=13,7 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, CDCl) δ м. д. -193,08 (с, 1F); ИЭР-МС:  876,6 [M+H].
29r
Стадия 15. Получение соединения
29l
29q
29r
2
2
2
3
2
4
+
Раствор соединения  (800 мг, 1,25 ммоль), соединения  (1,64 г, 1,87 ммоль) и активированные молекулярные сита 4Å (3 г) в THF (24 мл) перемешивали в атмосфере N при комнатной температуре в течение 0,5 ч Впоследствии в один прием добавляли DMAP (762,73 мг, 6,24 ммоль). После перемешивания при кт в течение 2 ч в атмосфере N и впоследствии при 45°C в течение 12 ч в атмосфере N реакционную смесь разбавляли с помощью EA (100 мл), затем фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат промывали водным насыщенным NaHCO (6×50 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения (1,4 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1377,1 [M+H].
29s
Стадия 16. Получение соединения
29r
29s
2
6
1
19
+
К раствору соединения (1,4 г, 1,01 ммоль) в DCM (24 мл) добавляли дихлоруксусную кислоту (262 мг, 2,03 ммоль) и воду (0,183 мл) при кт. После перемешивания в атмосфере N при кт в течение 3 ч к раствору добавляли пиридин (0,8 г, 10,16 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 6 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH/DCM=0-10%) с получением соединения  (570 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,15-11,97 (м, 2H), 11,22 (с, 1H), 8,78 (т, J=5,9 Гц, 1H), 8,67 (с, 1H), 8,41 (д, J=1,5 Гц, 1H), 8,09-8,00 (м, 2H), 7,69-7,61 (м, 1H), 7,60-7,51 (м, 2H), 6,51 (дд, J=3,8, 17,6 Гц, 1H), 6,34 (с, 1H), 6,23 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 5,33-5,13 (м, 1H), 4,76 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,51-4,33 (м, 2H), 4,18-4,02 (м, 2H), 3,54-3,36 (м, 3H), 2,90-2,73 (м, 1H), 2,69-2,56 (м, 1H), 2,40 (уш. дд, J=6,0, 14,3 Гц, 1H), 1,13 (дд, J=6,9, 10,2 Гц, 6H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) δ м. д. -197,57 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=773,3 [M+H].
29t
Стадия 17. Получение соединения
3
2
THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
29s
29t
3
3
2
2
2
+
Высушенное в вакууме соединение  (100 мг, 0,13 ммоль) выпаривали со смесью CHCN и THF (2/2 мл x 3), впоследствии растворяли в смеси THF (5 мл). Впоследствии добавляли молекулярные сита 4Å (500 мг) и раствор 1H-тетразола (2,301 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 315 мг тетразола в 10 мл безводного CHCN, с последующим добавлением 500 мг молекулярных сит 4Å и перемешиванием в течение 1 ч в атмосфере N до применения). Полученную белую суспензию перемешивали в течение 5 мин при кт в атмосфере N. Впоследствии по каплям добавляли раствор 2-цианоэтилтетраизопропилфосфородиамидита (78,01 мг, 0,26 ммоль) в THF (1 мл) в течение 5 мм посредством шприца. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 1 ч при 35°C в атмосфере N. Раствор TBHP (0,118 мл, 0,65 ммоль, 5 ~ 6M в декане) добавляли посредством шприца и перемешивали в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), впоследствии фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали с получением неочищенного продукта в виде бесцветного масла. Неочищенный продукт (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-6% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (72 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=887,9 [M+H].
соединения 45 (натриевая соль)
Стадия 18. Получение
29t
соединения 45 (аммонийная соль)
4
3
2
2
2
1
19
31
+
m/z
Соединение  (72 мг, 0,082 ммоль) объединяли с метиламином (5,0 мл); после перемешивания при кт в течение 4 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 10 мкм=150×30 мм, условия: вода (10 мМ NHHCO)-ACN B: 0, конец B 25, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением  (6,9 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,12 (с, 1H), 7,67 (уш. с, 1H), 6,52 (уш. дд, J=4,9, 11,7 Гц, 1H), 6,31 (уш. д, J=7,0 Гц, 1H), 6,18-6,04 (м, 1H), 5,64-5,43 (м, 1H), 5,32-5,20 (м, 1H), 4,37 (уш. д, J=3,5 Гц, 1H), 4,15-4,03 (м, 2H), 3,57-3,46 (м, 2H), 2,83-2,71 (м, 1H), 2,67-2,56 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -195,88 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -1,513 (с, 1P); ИЭР-МС: =661,1101 [M+H].
Превращение в натриевую соль.
оединение 45 (аммонийная соль)
соединения 45 (натриевая соль)
2
4
2
4
2
4
3
2
2
2
1
19
31
+
m/z
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (8 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. С(6,9 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CHCN (1 : 1, об./об., 5 мл), помещали в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (2 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,20 (с, 1H), 7,74 (уш. с, 1H), 6,58 (дд, J=5,1, 11,7 Гц, 1H), 6,37 (д, J=7,1 Гц, 1H), 6,24-6,13 (м, 1H), 5,69-5,51 (м, 1H), 5,42-5,29 (м, 1H), 4,85-4,83 (м, 1H), 4,70 (уш. дд, J=2,3, 6,2 Гц, 1H), 4,43 (уш. д, J=3,4 Гц, 1 H), 4,23-4,10 (м, 2H), 3,64-3,50 (м, 2H), 2,91-2,78 (м, 1H), 2,73-2,64 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -195,902 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -1,54 (с, 1P); ИЭР-МС: =661,2 [M+H].
Пример 30
30a
Стадия 1. Получение соединения
3
2
Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH перед применением.
29s
30a
3
N, N,N',N'
+
Соединение  (200 мг, 0,26 ммоль) растворяли в THF (6 мл) и CHCN (10 мл), к которому добавляли 0,3 г молекулярных сит 4Å (порошок) и раствор 1H-тетразола (4,6 мл, 0,45 M, высушен на активированных молекулярных ситах до применения). Добавляли по каплям посредством шприца раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (156 мг, 0,52 ммоль) в THF (0,9 мл) в течение 10 мм. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 2 ч при 35°C в аргоновой атмосфере. Впоследствии к вышеуказанному раствору добавляли раствор DDTT (264,9 мг, 1,29 ммоль) в пиридине (10 мл) при 35 °C. После перемешивания реакционной смеси при 35°C в течение 1 ч смесь разбавляли с помощью EtOAc (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли, слой промывали EtOAc и выпаривали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM=0-7%) с получением соединения  (80 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=904,2 [M+H].
соединения (*
R
) 50A (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
30a
соединения (*
R
) 50A (аммонийная соль)
2
2
3
4
3
1
19
31
+
Соединение  (80 мг) обрабатывали MeNH (5 мл, в EtOH, 30%) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 3 ч растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворяли в смеси HO/CHCN (30 мл) и промывали DCM (3×15 мл). Водную фазу лиофилизировали с получением неочищенного продукта (71 мг) в виде желтого твердого вещества. Остаток очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NHHCO)(A)-ACN(B), начало B 0, конец B 23; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания (мин) 0; скорость потока (мл/мин) 25) с получением  (8 мг, 9%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,63 (уш. с, 1H), 8,51 (д, J=1,7 Гц, 1H), 6,94 (уш. д, J=18,8 Гц, 1H), 6,65 (уш. д, J=3,4 Гц, 1H), 6,39 (уш. д, J=2,9 Гц, 1H), 6,20-6,00 (м, 1H), 5,71 (уш. т, J=11,4 Гц, 1H), 5,06 (уш. с, 1H), 4,70-4,60 (м, 1H), 4,56-4,47 (м, 1H), 4,04-3,96 (м, 1H), 3,94-3,85 (м, 1H), 3,27-3,17 (м, 1H), 3,16-3,03 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,682; P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 54,318; ИЭР-МС: m/z 677,2 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
3
оединение (*
R
) 50A (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 5QA (натриевая соль)
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (2 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (10 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. С (4 мг) растворяли в минимальном количестве смеси деионизированная вода : CHCN (3 : 1, об./об., 8 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением  (2,4 мг, 58%) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,25 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 6,59 (дд, J=4,3, 15,5 Гц, 1H), 6,33 (д, J=6,8 Гц, 1H), 6,15-6,01 (м, 1H), 5,86-5,66 (м, 1H), 5,54-5,41 (м, 1H), 4,47 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,29-4,12 (м, 2H), 3,65-3,54 (м, 2H), 2,88-2,79 (м, 1H), 2,76-2,69 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -194,41; P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 53,83; ИЭР-МС: m/z=677,1 [M+H].
Пример 31
31b
Стадия 1. Получение соединения
31a
31b
3
3
2
4
6
1
+
m/z
Бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 93,95 г, 461,9 ммоль) добавляли по каплям к суспензии 8-азагуанина (11,71 г, 77,0 ммоль) в безводном MeCN (340 мл) при 25 °C. Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 ч и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли раствор 1,2-ди-O-ацетил-5-бензоил-3-O-метил-D-рибофуранозы [CAS 10300-21-7] (13,56 г, 38,5 ммоль) в безводном MeCN (65 мл) с последующим добавлением SnCl4 (80,21 г, 307,9 ммоль) по каплям. Гомогенный раствор перемешивали при 80 °C в течение 30 мин, впоследствии охлаждали до комнатной температуры и выливали в ледяной 5% водный раствор NaHCO (800 мл). Добавляли EtOAc (800 мл) и продолжали перемешивание в течение 10 мин. Реакционную смесь фильтровали и переносили фильтрат в разделительную воронку. Два слоя разделяли и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc (200 мл × 2). Объединенные органические слои промывали 5% водным NaHCO (600 мл x 2), высушивали над NaSO и выпаривали досуха in vacuo с получением неочищенного соединения  (11,50 г). Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей реакции без дополнительной очистки. H ЯМР (600 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,09 (уш. с, 1H), 7,88 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,44-7,52 (м, 2H), 7,04 (уш. с, 2H), 6,17 (д, J=1,7 Гц, 1H), 5,90 (дд, J=5,0, 2,1 Гц, 1H), 4,66 (дд, J=7, 1, 4,9 Гц, 1H), 4,53-4,58 (м, 1H), 4,35-4,42 (м, 2H), 3,41 (с, 3H), 2,14 (с, 3H); ИЭР-МС: 445,5 [M+H].
31c
Стадия 2. Получение соединения
31b
31c
4
2
4
К раствору вышеуказанного неочищенного соединения  (11,50 г) в безводном диметилацетамиде (57,5 мл) добавляли по каплям изомасляный ангидрид (6,14 г, 38,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 140°C в течение 2 ч впоследствии охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью EtOAc (300 мл). Полученный раствор промывали 10% водным NHCl (300 мл x 3) и солевым раствором (300 мл). Органический слой высушивали над NaSO и концентрировали досуха in vacuo с получением неочищенного соединения  (13,30 г). Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей реакции без дополнительной очистки.
31d
Стадия 3. Получение соединения
31c
31d
31b
2
2
6
1
+
К раствору неочищенного соединения  (11,98 г, со стадии 2) в THF (42 мл), MeOH (35 мл) и HO (11 мл), добавляли 5 N NaOH (11 мл, 55 ммоль) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. pH реакционной смесь доводили до 6,5 муравьиной кислотой. Полученный раствор концентрировали in vacuo досуха и несколько раз растирали остаток с MeCN и HO с получением соединения  (1,55 г, выход: 14% из ). H ЯМР (600 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,07 (уш. с, 2H), 5,97 (д, J=4,4 Гц, 1H), 5,68 (уш. с, 1H), 4,92 (уш. с, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 4,01-4,08 (м, 2H), 3,52-3,59 (м, 1H), 3,44-3,50 (м, 1H), 3,43 (с, 3H), 2,79 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=369,5 [M+H].
31e
Стадия 4. Получение соединения
31d
31e
3
2
4
6
1
+
m/z
К раствору соединения  (1,10 г, 3,0 ммоль) в безводном пиридине (20,0 мл) добавляли раствор DMTrCl (1,32 г, 3,9 ммоль) в пиридине (3,0 мл) при 0 °C. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, после чего разбавляли EtOAc и промывали насыщенным NaHCO, водой и солевым раствором. Органический слой высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали досуха при 40 °C. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 20-50% EtOAc в гептане) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (1,52 г, выход: 76%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,87 (уш. с, 1H), 7,24-7,28 (м, 2H), 7,10-7,24 (м, 7H), 6,76-6,82 (м, 4H), 6,06 (д, J=2,7 Гц, 1H), 5,79 (уш. д, J=4,6 Гц, 1H), 5,01 (уш. с, 1H), 4,18-4,24 (м, 2H), 3,71 (с, 6H), 3,36 (с, 3H), 3,15-3,20 (м, 1H), 3,05 (уш. дд, J=10,0, 3,9 Гц, 1H), 2,80 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС:  671,4 [M+H].
31f
Стадия 5. Получение соединения
31e
17a
17a
31e
31f
2
2
3
m/z
+
Соединение  (1,30 г, 1,94 ммоль), DMAP (546 мг, 4,47 ммоль) и сульфамат (1,18 г, 1,33 ммоль) растворяли по отдельности в безводном DCE (3×3 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N в течение ночи. К раствору сульфамата  в DCE были соответственно добавлены раствор DMAP в DCE и раствор соединения  в DCE (посредством шприца). Реакционную смесь перемешивали при 60°C в атмосфере N в течение 4 ч. Эту смесь разбавляли DCM и фильтровали, фильтрат промывали последовательно 2% водным раствором уксусной кислоты, 5% водным NaHCO и солевым раствором и впоследствии выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM и очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0,6-1% EtOH в DCM) с получением соединения  в виде желтого твердого вещества (0,53 г, выход: 28%). ИЭР-МС:  1407,6 [M+H].
31g
Стадия 5. Получение соединения
31f
31g
3
2
4
6
1
+
d
m/z
Раствор соединения (480 мг, 0,34 ммоль) в DCM (5 мл), к которому добавляли воду (30,8 мг, 1,71 ммоль) и DCA (220 мг, 1,71 ммоль), перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее реакционную смесь промывали 5% водным NaHCO и солевым раствором. Органическую фазу высушивали над NaSO и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% EtOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (150 мг, выход: 55%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,90 (уш. с, 1H), 11,27 (уш. с, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,61-7,70 (м, 1H), 7,51-7,59 (м, 2H), 6,38 (д, J=19,5 Гц, 1H), 6,29 (д, J=2,3 Гц, 1H), 5,51-5,69 (м, 2H), 4,90 (уш. с, 1H), 4,63 (ддд, J=20,4, 7,6, 4,6 Гц, 1H), 4,47 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 4,00-4,12 (м, 2H), 3,55-3,61 (м, 1H), 3,42-3,47 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,21-3,29 (м, 1H), 2,77 (спт, J=6,7 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС:  803,7 [M+H].
31h
Стадия 6. Получение соединения
31g
31h
2
2
N, N,N',N'
t
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,125 ммоль) и 1H-тетразола (2,22 мл, 0,45 M раствор в MeCN, 0,998 ммоль) в безводном THF (2 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 1 ч, после чего по каплям добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)-фосфородиамидит (67,5 мг, 0,22 ммоль) в безводном MeCN (0,6 мл) в течение 15 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Добавляли раствор BuOOH (199 мкл, 0,99 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (595 мг, выход: 30%). ИЭР-МС: m/z=918,4 [M+H].
соединения 51 (натриевая соль)
Стадия 7. Получение
31h
соединения 51 (натриевая соль)
1
31
19
+
2
2
2
m/z
Соединение  (32 мг, 0,035 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (12 мл) при 40°C в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (14 мг, выход: 55%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,15 (уш. с, 1H), 7,10 (уш. с, 1H), 6,51-6,45 (м, 1H), 6,41 (уш. с, 1H), 6,16 (уш. с, 1H), 5,36-5,12 (м, 2H), 4,61 (уш. д, J=2,4 Гц, 1H), 4,52 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,38 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,23 (дд, J =2,4, 4,8 Гц, 2H), 3,77 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,42 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -1,81 (с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -196,87-197,38 (м, 1F); ИЭР-МС:  691,0 [M+H].
Пример 32
соединения 32a
Получение
3
2
THF непосредственно перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перегоняли над CaH непосредственно перед работой.
3q
32a
3
3
3
3
3
3
3
3
N, N,N',N'
m/z
+
Высушенный в вакууме диол  (250 мг, 0,307 ммоль) совместно выпаривали со смесью CHCN/THF (8/5 мл x 3) и растворяли в смеси CHCN/THF (7,5/5 мл). Добавляли 600 мг активированных молекулярных сит 4Å и раствор 1H-тетразола в CHCN (5,47 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 630 мг тетразола в 20 мл безводного CHCN с последующим добавлением 600 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в аргоновой атмосфере). После перемешивания белой суспензии в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил--тетраизопропилфосфородиамидита CHCN (4,69 мл, 0,49 ммоль, 0,105 M в CHCN, получен до применения путем растворения 506 мг амидита в 16 мл CHCN с последующим добавлением 600 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешиванием в течение 1 ч в аргоновой атмосфере) в течение 60 мин. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере. Добавляли дополнительное количество CHCN (5 мл) и после перемешивания при 30 °C в течение 1 ч добавляли дополнительное количество тетразола (1,36 мл, 0,61 ммоль). После перемешивания в течение еще 2 ч быстро добавляли TBHP (0,5 мл, 2,5 ммоль, 5 M в декане). После перемешивания в течение 30 мин смесь фильтровали через слой диатомитовой земли; фильтрат объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, растворенного в DCM (8 мл) и очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-6% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением  (136 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: =927 [M+H].
4
3
3
36a
1
Вышеуказанное твердое вещество объединяли с другой порцией и дополнительно очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xtimate 5 мкм C18 150×25; подвижная фаза: вода (10 мМ NHHCO)-ACN, начало B 23, конец B 53; скорость потока: 25 мл/мин, время градиентного элюирования: 9 мин, затем B 100 в течение 3 мин); нужные фракции собирали и лиофилизировали с получением  в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCN) δ 9,36 (тд, J=3,7, 7,2 Гц, 2H), 8,72-8,60 (м, 1H), 8,73-8,56 (м, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,12-7,96 (м, 3H) 7,86 (с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,71-7,62 (м, 1H), 7,62-7,51 (м, 2H), 6,21 (с, 1H), 6,06-5,94 (м, 1H), 5,46-5,37 (м, 1H), 5,37-5,29 (м, 1H), 5,28-5,21 (м, 1H), 4,82 (дд, J=6,2, 11,1 Гц, 1H), 4,63 (дд, J=3,9, 11,2 Гц, 1H), 4,48 (дд, J=2,8, 11,4 Гц, 1H), 4,45-4,38 (м, 1H), 4,35-4,19 (м, 2H), 4,17-4,07 (м, 2H), 4,03-3,93 (м, 1H), 3,89-3,79 (м, 1H), 3,68-3,58 (м, 2H), 3,59-3,50 (м, 1H), 2,80 (т, J=5,9 Гц, 1H), 2,54 (тд, J=5,2, 17,2 Гц, 1H), 2,42-2,27 (м, 1H), 1,10-1,02 (м, 3H), 0,88 (д, J=6,8 Гц, 1H), 0,83 (д, J=6,8 Гц, 1H);
31
+
3
P ЯМР (162 МГц, CDCN) = 3,07 (с, 1P), 3,15 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=927,3 [M+H].
соединения 25 (натриевая соль)
Получение
32a
соединения 25 (натриевая соль)
2
2
2
1
31
+
Раствор соединения  (30,5 мг, 0,033 ммоль) в MeNH (27-30% в EtOH, 5 мл) перемешивали при 5 °C в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка; остаток разделяли между DCM/водой (10/15 мл). Водный слой промывали с помощью DCM (8 мл x 3) и лиофилизировали. Неочищенное соединение суспендировали в 6 мл этилацетата, подвергали ультразвуковой обработке (3 мин) и центрифугировали (5 мин). Вышеуказанный супернатант собирали и повторяли указанную выше процедуру дважды. Осадок разделяли между DCM/водой (10/15 мл). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (10 мл x 2) и лиофилизировали с получением твердого вещества. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (60,1 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,15-7,90 (м, 1H), 7,83 (уш. с, 2H), 7,69 (уш. с, 1H), 6,90-6,72 (м, 1H), 6,08-5,82 (м, 1H), 4,45-4,15 (м, 3H), 4,16-3,88 (м, 1H), 3,28 (т, J=6,8 Гц, 1H), 2,87 (т, J=6,7 Гц, 1H), 2,68-2,59 (м, 1H), 2,46 (с, 4H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ-2,4 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=700 [M+H].
Пример 33
33b
33c
Стадия 1. Получение соединений  и
33a
33b
33c
33b
33c
2
2
2
3
3
N, N,N',N'
N, N,N',N'
m/z
m/z
+
+
Раствор соединения  (600 мг, 0,75 ммоль) и 1H-тетразола (8,97 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (110 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N в течение 1 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (240 мкл, 0,75 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 3,5 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетраизопропилфосфородиамидита (0,12 мл, 0,37 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Далее добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,45 г, 1,5 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение еще 18 часов. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты последовательно промывали смесью насыщенного водного NaSO и насыщенного водного NaHCO (1 : 1) и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (122 мг, выход: 17%) в виде первого элюируемого изомера и соединения  (39 мг, выход: 5%) в виде второго элюируемого изомера. Соединение . ИЭР-МС:  933,5 [M+H]. Соединение . ИЭР-МС:  933,6 [M+H].
соединения (R*) 23A (натриевая соль) и соединения (S*) 23B (натриевая соль)
Стадия 2. Получение
33b
соединения (
R
*) 23A
соединения (
R
*) 23A (натриевая соль)
1
31
+
2
2
m/z
Соединение  (122 мг, 0,13 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (7 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13 мг, выход: 14%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,23 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,82 (уш. с, 1H), 6,44 (д, J=15,5 Гц, 1H), 5,92 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,65 (дд, J=50,6, 3,4 Гц, 1H), 5,42 (уш. с, 1H), 5,17 (ддд, J=21,8, 9,2, 3,4 Гц, 1H), 4,66-4,71 (м, 1H), 4,46-4,58 (м, 2H), 4,15 (уш. с, 1H), 4,00 (уш. дд, J=12,2, 4,1 Гц, 1H), 3,69-3,90 (м, 2H), 3,60 (с, 3H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 52,18 (с, 1P); ИЭР-МС:  706,4 [M+H].
33c
соединения (
S
*) 23B
соединения (
S
*) 23B (натриевая соль)
1
31
+
2
2
m/z
Соединение  (39 мг, 0,035 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (18 мг, выход: 70%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,43 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,88 (уш. с, 1H), 6,52 (д, J=15,9 Гц, 1H), 5,97 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,81 (дд, J=50,5, 3,7 Гц, 1H), 5,45-5,60 (м, 1H), 5,33-5,44 (м, 1H), 4,67-4,73 (м, 1H), 4,49-4,53 (м, 1H), 4,43 (дт, J=11,7, 3,7 Гц, 1H), 4,17 (уш. с, 1H), 4,05-4,11 (м, 1H), 3,78 (м, J=9,8 Гц, 2H), 3,62 (с, 3H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 56,24 (с, 1P); ИЭР-МС:  706,4 [M+H].
Пример 34
34b
34c
Стадия 1. Получение соединения  и соединения
34a
34b
34c
2
2
3
3
4
Соединение  (0,8 г, 0,99 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (85 мл) и безводного THF (85 мл), добавляли 1H-тетразол (11,5 мл, 3,96 ммоль) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,31 мл, 0,99 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4,5 часа. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,16 мл, 0,5 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 2 дней и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,6 г, 1,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 18 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора NaSO и насыщенного раствора NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (224 мг, выход: 16%) в виде первого элюируемого изомера и соединения  (265 мг, выход: 11%) в виде второго элюируемого изомера.
34a.
+
Соединение  ИЭР-МС: m/z 939,5 [M+H];
34b.
+
соединение  ИЭР-МС: m/z 939,5 [M+H].
(*
R
), 33A (натриевая соль)
соединения 33b (натриевая соль).
34a
соединения (*
R
), 32A (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 32A (натриевая соль)
1
31
+
d
m/z
6
6
Стадия 2. Получение соединения и Соединение  (224 мг, 0,16 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (6,5 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (31 мг, выход: 27%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 8,77 (уш. с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,34 (уш. с, 2H), 7,18 (уш. с, 2H), 6,22 (дд, J=15,3, 2,4 Гц, 1H), 6,01 (д, J=8,6 Гц, 1H), 5,70-5,84 (м, 1H), 5,59 (уш. д, J=51,7 Гц, 1H), 5,30 (дд, J=54,9, 3,3 Гц, 1H), 5,03 (уш. д, J=17,1 Гц, 1H), 4,15-4,29 (м, 3H), 3,70-3,79 (м, 1H), 3,20 (д, J=15,4 Гц, 1H), 3,00-3,11 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 52,83 (с, 1P); ИЭР-МС:  678,4 [M+H].
34b
соединения (*
S
) 32b (аммонийная соль)
соединение (*
S
) 32b (натриевая соль)
1
31
+
2
2
m/z
Соединение  (265 мг, 0,11 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при 45 C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (20 мг, выход: 25%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,22 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,83 (с, 1H), 6,45 (уш. д, J=15,7 Гц, 1H), 6,27 (уш. д, J=8,2 Гц, 1H), 5,91 (уш. д, J=51,3 Гц, 1H), 5,52-5,74 (м, 1H), 5,23-5,51 (м, 2H), 4,50-4,80 (перекрытие с пиком растворителя, 4H), 4,00-4,43 (м, 1H), 3,59-3,98 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 56,05 (с, 1P); ИЭР-МС:  678,1 [M+H].
Пример 35
35b
Стадия 1. Получение соединения
35a
35a
2
2
Соединение  дважды выпаривали с пиридином (30 мл) до применения. К перемешиваемой суспензии соединения  (3 г, 11,22 ммоль) в пиридине (50 мл) по каплям при 0°C добавляли TMSCl (7,2 мл, 56,73 ммоль) посредством капельной воронки с выравниванием давления в течение 30 мин с получением белой суспензии, впоследствии дополнительно перемешанной при кт в течение 1 ч. Впоследствии к реакционной смеси посредством шприца добавляли хлорид изобутирила (2,4 г, 22,52 ммоль) при 0°C в атмосфере N в течение 15 мин. Полученную суспензию перемешивали при кт в атмосфере N в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду (15 мл) при 0 °C, впоследствии добавляли гидроксид аммония (17,3 мл, 25%) посредством капельной воронки с выравниванием давления при 0°C в течение 10 мин.
35b
1
+
6
Полученный прозрачный раствор дополнительно перемешивали при кт в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением в виде желтого твердого вещества, H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ м. д. 12,12 (с, 1H), 11,71 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 5,79 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,46-4,50 (м, 1H), 4,30-4,38 (м, 1H), 3,68 (уш. дд, J=12,0, 3,2 Гц, 3H), 3,52 (уш. дд, J=12,0, 3,6 Гц, 1H), 2,73-2,84 (м, 1H), 2,18-2,28 (м, 1H), 1,90 (ддд, J=13,2, 6,0, 2,0 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=338,1 [M+H].
35c
Стадия 2. Получение соединения
35b
35c
2
2
3
2
4
6
1
+
К перемешанному раствору соединения  (3,4 г, неочищенный продукт) добавляли трифенилфосфин (7,93 г, 30,23 ммоль) и имидазол (2,75 г, 40,4 ммоль) в THF (35 мл) при 0°C и раствор I (7,68 г, 30,26 ммоль) в THF (20 мл). После перемешивания реакционной смеси при 35°C в течение ночи смесь фильтровали и концентрировали фильтрат, впоследствии разбавляли с помощью DCM (150 мл) и промывали водным насыщенным NaSO (100 мл x 2). Органический слой сушили с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10: 1) с получением соединения  (1,55 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ м. д. 12,11 (с, 1H), 11,66 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 5,82 (д, J=2,4 Гц, 1H), 5,74-5,76 (м, 1H), 4,65-4,70 (м, 1H), 4,30-4,39 (м, 1H), 3,43-3,55 (м, 2H), 2,78 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,12-2,25 (м, 2H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=447,9 [M+H].
35d
Стадия 3. Получение соединения
3
2
2
4
35c
35d
+
NaN (800 мг, 12,3 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения  (1,73 г, 3,87 ммоль) в DMF (25 мл) в атмосфере N. После перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение 3 ч смесь разбавляли с помощью DCM (100 мл) и промывали солевым раствором (50 мл x 2). Органический слой высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения (1,27 г) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=363,1 [M+H].
35e
Стадия 4. Получение соединения
35d
35d
35e
2
2
3
2
4
6
1
+
Соединение  дважды совместно выпаривали с пиридином (20 мл) до применения. К раствору соединения  (1,27 г) в пиридине (15 мл) добавляли DMAP (215 мг, 1,76 ммоль) и DMTrCl (1,781 г, 5,257 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение ночи смесь разбавляли CHCl (80 мл), впоследствии промывали последовательно водным насыщенным NaHCO (50 мл x 3). Органический слой собирали, сушили с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-85% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (1,61 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,05 (с, 1H), 11,59 (с, 1H), 7,96 (с, 1H), 7,36 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,22-7,29 (м, 2H), 7,12-7,22 (м, 5H), 6,76 (д, J =8,8 Гц, 2H), 6,69 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,55 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,72 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 4,42-4,51 (м, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 6H), 3,47-3,54 (м, 1H), 3,37 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 2,79 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,03-2,14 (м, 1H), 1,85-1,94 (м, 1H), 1,13 (т, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=665,2 [M+H].
35f
Стадия 5. Получение соединения
35e
35f
3
2
2
2
2
2
2
4
6
1
+
К раствору соединения  (1,61 г, 2,42 ммоль) в THF (16 мл) в один прием добавляли PhP (889 мг, 3,39 ммоль), впоследствии смесь перемешивали при 40 °C в атмосфере N в течение 2 ч. К смеси добавляли воду (8 мл), впоследствии дополнительно перемешивали при 40 °C в течение ночи. Смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала и разбавляли CHCl (100 мл), водой (80 мл) и экстрагировали CHCl (100 мл x 2). Органические слои объединяли, высушивали с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,5 г, 2,34 ммоль) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ7,92 (с, 1H), 7,36 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,13-7,28 (м, 7H), 6,76 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,70 (д, J=9,2 Гц, 2H), 5,59 (д, J =1,6 Гц, 1H), 4,56-4,87 (м, 5H), 4,26 (дк, J=10,0, 5,2 Гц, 1H), 3,65 (д, J=11,6 Гц, 6H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,58-2,72 (м, 2H), 1,99-2,11 (м, 1H), 1,73 (уш. дд, J=13,2, 5,6 Гц, 1H), 1,13 (т, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=639,2 [M+H].
35g
Стадия 6. Получение соединения
3n
35f
35g
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
4
6
1
+
m/z
Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (1,67 г, 7,04 ммоль) в безводном CHCl (3 мл) быстро добавляли к смеси соединения  (1,5 г, 2,35 ммоль), 4-нитрофенола (980,1 мг, 7,04 ммоль), EtN (1,96 мл, 14,14 ммоль) в безводном CHCl (27 мл) в атмосфере N при -78 °C, впоследствии естественным путем нагревали до кт в течение 2 ч. Смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала, разбавляли с помощью CHC1 (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO (100 мл х 5). Органический слой собирали, сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (1,6 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ12,05 (с, 1H), 11,55 (с, 1H), 8,91 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,20-8,27 (м, 2H), 7,93 (с, 1H), 7,43-7,51 (м, 2H), 7,34 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,21-7,28 (м, 2H), 7,11-7,21 (м, 5H), 7,11-7,21 (м, 1H), 6,75 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,68 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,55 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,67 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 4,34-4,44 (м, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 6H), 3,30-3,37 (м, 1H), 3,18-3,27 (м, 1H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,99-2,10 (м, 1H), 1,89 (уш. дд, J=12,4, 5,6 Гц, 1H), 1,10-1,15 (м, 6H); ИЭР-МС: 840,3 [M+H].
35i
Стадия 7. Получение соединения
35h
35g
35i
2
2
3
2
4
+
Суспензию соединения  (910 мг, 1,347 ммоль), соединения  (1,6 г, 1,905 ммоль) и молекулярных сит (3 г) в THF (40 мл) перемешивали при кт в атмосфере N в течение 30 мин, после чего добавляли DMAP (659 мг, 5,39 ммоль) с последующим добавлением при 45°C в атмосфере N в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка, который растворяли в DCM (60 мл), впоследствии промывали водным насыщенным NaHCO (40 мл х 3). Органический слой собирали, сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : EtOAc=1 : 0 ~ 1 : 4) с получением соединения  (1,13 г) в виде белого твердого вещества, что было подтверждено данными ЖХМС, ИЭР-МС: m/z 1377,3 [M+H].
35j
Стадия 8. Получение соединения
35i
35j
1
19
+
6
6
К перемешанному раствору соединения  (1,13 г, 0,77 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли воду (140 мг, 7,77 ммоль) и DCA (220 мг, 1,7 ммоль). Желтую смесь перемешивали при кт в течение ночи. Впоследствии добавляли MeOH (5 мл) с последующим добавлением пиридина (244,5 мг, 4 экв) с получением желтого раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин; раствор собирали вместе с другой партией неочищенного вещества и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением соединения  (630 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,11 (с, 1H), 11,64 (с, 1H), 11,28 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (уш. т, J=6,0 Гц, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,62-7,69 (м, 1H), 7,52-7,59 (м, 2H), 6,48 (дд, J=16,8, 2,8 Гц, 1H), 5,76-5,96 (м, 2H), 5,72 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,30-5,43 (м, 2H), 4,60 (уш. с, 1H), 4,36-4,45 (м, 1H), 4,28-4,34 (м, 1H), 3,74-3,84 (м, 1H), 3,58-3,68 (м, 1H), 3,23-3,35 (м, 2H), 2,71-2,83 (м, 1H), 2,17-2,28 (м, 1H), 2,00-2,09 (м, 1H), 1,11 (дд, J=6,8, 1,6 Гц, 6H); F ЯМР (DMSO-d, 376 МГц) δ-202,81 (дт, J=52,1, 16,5 Гц, 1F); ИЭР-МС: m/z=772,3 [M+H].
35k
Стадия 9. Получение соединения
3
2
3
2
2
35j
39k
+
THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH перед применением. К раствору соединения  (120 мг, 0,15 ммоль) в THF (3 мл), добавляли 800 мг молекулярных сит 4A (порошок) и раствор 1H-тетразола (3,45 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN, с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и перемешиванием в атмосфере N в течение 1 ч); смесь продували с помощью N. Добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (84,36 мг, 0,28 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин посредством шприца, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли раствор TBHP (0,25 мл, 1,24 ммоль, 5 M) и перемешивали в течение еще 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением  в виде белого твердого вещества (68 мг). ИЭР-МС: m/z=887,4 [M+H].
соединения 26 (аммонийная соль)
Стадия 10. Получение
35k
соединения 26 (аммонийная соль)
2
4
3
6
6
6
1
19
31
+
Раствор соединения  (68 мг, 0,077 ммоль) в MeNH/EtOH (5 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. После перемешивания реакционной смеси при 40 °C в течение 1 ч летучие соединения выпаривали и полученное белое твердое вещество растворяли водой (20 мл), впоследствии экстрагировали с помощью DCM (10 мл x 4). Водный слой лиофилизировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 0%, конец B: 30%; скорость потока 25 мл/мин) с получением в виде белого твердого вещества (18,8 мг). H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ м. д. 10,78 (уш. с, 1H), 8,84 (уш. д, J=6,8 Гц, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,86 (с, 1H), 6,67 (уш. с, 1H), 6,44 (уш. д, J=18,0 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,62 (уш. с, 1H), 5,49 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,30-5,16 (м, 2H), 4,72 (уш. с, 1H), 4,44 (уш. д, J=9,4 Гц, 1H), 4,48-4,40 (м, 1H), 4,29 (уш. д, J=12,4 Гц, 1H), 4,21 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H), 3,89 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 3,45-3,33 (м, 1H), 2,92 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 1,94 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ м. д. -198,95 (уш. с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. -4,86 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,3 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
3
2
2
2
оединение 26 (аммонийная соль)
соединения 26 (натриевая соль)
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. С(10 мг) растворяли в минимальном количестве смеси деионизированной воды и CHCN (1 : 1, об./об., 3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (6,1 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 8,11 (уш. с, 1H), 7,75 (с, 1H), 6,40 (уш. д, J=16,8 Гц, 1H), 5,88 (уш. с, 1H), 5,73 (уш. с, 1H), 5,60 (уш. с, 1H), 5,24-5,04 (м, 1H), 4,59 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,49 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,13 (уш. д, J=11,8 Гц, 1H), 3,69 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,41 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 2,76 (уш. с, 1H), 2,26-2,19 (м, 1H), 2,22 (уш. д, J=6,8 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -200,45 (уш. с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -2,84 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,0 [M+H].
Пример 36
36b
Стадия 1. Получение соединения
36a
36b
2
4
3
1
К раствору соединения  (4,2 г, 24,11 ммоль) в DCM (40 мл) по каплям добавляли TEA (4,88 г, 48,22 ммоль) и MsCl (4,97 г, 43,4 ммоль) в течение 10 мин. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч смесь разделяли между DCM (100 мл) и водой (50 мл). Органический слой промывали солевым раствором (3×50 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=от 0% до 5%) с получением соединения  (5,6 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 5,84 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,78 (т, J=3,4 Гц, 1H), 4,51-4,40 (м, 2H), 4,29-4,22 (м, 1H), 3,09-3,05 (м, 3H), 2,18-2,09 (м, 1H), 1,84-1,73 (м, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,33 (с, 3H).
36c
Стадия 2. Получение соединения
36b
36c
3
3
2
4
3
1
К раствору соединения  (5,6 г, 22,19 ммоль) в DMF (55 мл) добавляли NaN (4,25 г, 65,37 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 100°C в течение 3 ч смесь разбавляли водным насыщенным NaHCO (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Твердое вещество (объединенное с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 20 г) (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в петролейном эфире, впоследствии 0-20% метанол в этилацетате) с получением соединения  (3,8 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 5,85 (д, J=3,4 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,2 Гц, 1H), 4,45-4,35 (м, 1H), 3,59 (дд, J=3,7, 13,2 Гц, 1H), 3,28 (дд, J=4,6, 13,2 Гц, 1H), 2,09 (дд, J=4,4, 13,4 Гц, 1H), 1,79 (ддд, J=4,8, 10,7, 13,4 Гц, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,33 (с, 3H).
36d
Стадия 3. Получение соединения
36c
36d
2
4
3
Уксусный ангидрид (18,03 мл, 190,75 ммоль) и концентрированную серную кислоту (0,104 мл, 1,91 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения  (3,8 г, 19,08 ммоль) в уксусной кислоте (109,1 мл, 1907,56 ммоль) при 0 °C. После перемешивания в течение 2 ч при 25°C реакционную смесь гасили холодной водой (100 мл) и перемешивали в течение 30 мин при 25 °C. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Органические слои объединяли и последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3×300 мл), солевым раствором (2×200 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения  (3,2 г) в виде желтого масла. ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 6,21-6,14 (м, 1H), 5,22 (д, J=5,0 Гц, 1H), 4,58-4,50 (м, 1H), 3,57 (дд, J=4,0, 13,1 Гц, 1H), 3,25 (дд, J=4,6, 13,2 Гц, 1H), 2,29-2,19 (м, 1H), 2,12-2,10 (м, 1H), 2,09 (с, 6H).
36e
Стадия 4. Получение соединения
3
3
4
3
2
4
6
36d
36e
1
+
Раствор 5-амино-3H-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(6H)-она (2,37 г, 15,6 ммоль) и BSA (11,041 г, 54,273 ммоль) в безводном CHCN (200 мл) перемешивали при 80°C в течение 1 ч и впоследствии охлаждали до 0 °C. Далее добавляли раствор соединения  (3,3 г, 13,57 ммоль) в безводном CHCN (80 мл), а затем SnCl (10,6 г, 40,7 ммоль). После перемешивания при 26°C в течение 48 часов смесь охлаждали и разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), впоследствии по каплям добавляли в водный насыщенный NaHCO (500 мл) при 0 °C. Органический слой промывали солевым раствором (2×100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (2-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения  (6,4 г) в виде желтой пены. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,08 (уш. с, 1H), 7,28 (уш. с, 1H), 6,68 (уш. с, 1H), 6,10 (с, 1H), 5,68 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,61-4,50 (м, 1H), 3,58 (дд, J=3,1, 13,4 Гц, 1H), 3,34-3,29 (м, 1H), 2,71-2,59 (м, 1H), 2,33-2,24 (м, 1H), 2,09 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=336,1 [M+H].
36f
Стадия 5. Получение соединения
36e
36f
2
4
К раствору соединения (4,8 г, 14,32 ммоль) в DCM (48 мл) добавляли триэтиламин (4,34 г, 42,95 ммоль) и DMAP (504,37 мг, 4,13 ммоль) при 25 °C. После перемешивания в течение 5 мин смесь охлаждали при 0°C и добавляли к раствору хлорид изобутирила (3,05 г, 28,63 ммоль) в течение 10 мин. После перемешивания при 25°C в течение 2 часов смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), промывали солевым раствором (3×100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения  (4,8 г) в виде желтого твердого вещества, которое непосредственно использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.
36g
Стадия 6. Получение соединения
36f
36g
1
+
3
m/z
К раствору соединения (6,5 г) в смеси THF/MeOH/вода (240/150/45 мл) добавляли NaOH (0,5 M в воде, 64,14 мл) при 0 °C. Впоследствии раствор перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Раствор подкисляли уксусной кислотой (~ 2 мл) до pH 7. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (6 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 40 г) (DCM/MeOH=1/0-5/1) с получением соединения  (4,5 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ м. д. 6,20 (с, 1H), 4,94 (д, J=5,0 Гц, 1Н;·. 4,73-4,65 (м, 1H), 3,52-3,46 (м, 1H), 3,38-3,33 (м, 1H), 2,78-2,61 (м, 2Н), 2,20 (ддд, J=1,3, 6,0, 13,3 Гц, 1H), 1,23 (д, J=7,0 Гц, 6H); ИЭР-МС: =364,2 [M+H].
36h
Стадия 7. Получение соединения
36g
36h
2
4
3
1
+
Раствор соединения  (5 г, 13,76 ммоль) в Py (50 мл) обрабатывали с помощью DMAP (841 мг, 6,88 ммоль) при 0°C в течение 10 мин. Через 10 мин добавляли DMTrCl (9,3 г, 27,52 ммоль) и впоследствии перемешивали раствор при 80°C в течение 12 часов. Реакционную смесь разбавляли EA (50 мл) и промывали солевым раствором (3 × 80 мл). Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (10 г). Желтое твердое вещество (объединенное с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения  (8,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCl) δ м. д. 12,01 (уш. с, 1H), 8,35 (уш. с, 1H), 7,45-7,42 (м, 2H), 7,28-7,24 (м, 7H), 6,73-6,66 (м, 4H), 5,10 (д, J=5,8 Гц, 1H), 4,84-4,74 (м, 1H), 3,83-3,77 (м, 1H), 3,71 (д, J=6,3 Гц, 6H), 3,43-3,35 (м, 1H), 3,29-3,23 (м, 1H), 2,68-2,56 (м, 2H), 2,40 (дд, J=5,9, 13,2 Гц, 1H), 1,31 (дд, J=6,9, 11,7 Гц, 6H). ИЭР-МС: m/z 688,1 [M+Na].
36i
Стадия 8. Получение соединения
36h
36i
2
+
Раствор соединения  (8,0 г, 12,02 ммоль) в EA/EtOH (1/1, 350 мл) обрабатывали Pd/C (4,5 г); после перемешивания смеси в атмосфере H (15 фунтов на кв. дюйм) в течение 2 ч раствор фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 40 г) (DCM-MeOH от 1/0 до 5/1) с получением соединения  (6,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=640,4 [M+H].
36j
Стадия 9. Получение соединения
36i
36j
3
3
1
+
Раствор соединения (6,0 г, 8,44 ммоль) в DCM (130 мл) обрабатывали 4-нитрофенолом (3,52 г, 25,32 ммоль) и триэтиламином (5,12 г, 50,65 ммоль). После охлаждения до -78 °C, добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (6,02 г, 25,32 ммоль) в DCM (20 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 1 ч смесь фильтровали и разбавляли фильтрат с помощью DCM (300 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO (3×150 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (10 г). Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения (5,9 г) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCN) δ м. д. 12,07 (уш. с, 1H), 9,39 (уш. с, 1H), 8,22-8,17 (м, 2H), 7,40-7,36 (м, 4H), 7,24-7,14 (м, 7H), 6,76-6,66 (м, 4H), 5,76 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,97-4,90 (м, 1H), 4,68-4,60 (м, 1H), 3,68 (д, J=8,3 Гц, 6H), 3,46-3,39 (м, 1H), 3,32-3,25 (м, 1H), 2,65 (тд, J=7,0, 13,7 Гц, 1H), 2,40-2,32 (м, 1H), 2,22-2,19 (м, 1H), 1,22 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,21-1,18 (м, 3H). ИЭР-МС: m/z 863,2 [M+Na].
36k
Стадия 10. Получение соединения
36j
35h
36k
2
3
2
4
3
3
1
19
+
m/z
Раствор соединения  (1,18 г, 1,40 ммоль), соединения  (0,73 г, 1,08 ммоль) и 4A MS (1 г) в DCE (21 мл) перемешивали при кт в атмосфере N в течение 30 мин с последующим добавлением DMAP (660,41 мг, 5,41 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при 45 °C (температура масла) в течение 12 ч смесь фильтровали и разделяли фильтрат между DCM (100 мл) и солевым раствором (100 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (3×100 мл), высушивали над безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка (4 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 6 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=0-5%) с получением соединения  (1,2 г) в виде светло-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDCN) δ 11,88 (уш. с, 1H), 9,42 (уш. с, 1H), 9,09 (уш. с, 1H), 8,38 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 7,98-7,85 (м, 1H), 7,76 (уш. д, J=7,6 Гц, 1H), 7,47-7,39 (м, 1H), 7,35-7,27 (м, 2H), 7,12 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,07 (уш. д, J=6,4 Гц, 2H), 7,02-6,86 (м, 11H), 6,72 (уш. д, J=8,6 Гц, 1H), 6,59-6,40 (м, 8H), 6,13-6,03 (м, 1H), 5,83 (уш. с, 0,5H), 5,73-5,62 (м, 1H), 5,46 (уш. с, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,33 (уш. с, 1H), 3,99 (уш. с, 1H), 3,67-3,38 (м, 11H), 3,25 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 3,10 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 3,00 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 2,89 (уш. д, J=6,1 Гц, 1H), 2,51-2,41 (м, 1H), 2,14-2,05 (м, 1H), 1,75-1,72 (м, 6H); F ЯМР (376 МГц, CDCN) δ м. д. -200,072 (с, 1F); ИЭР-МС:  1377,8 [M+H].
36l
Стадия 11. Получение соединения
36k
36l
1
19
+
6
Раствор соединения  (1,2 г, 0,78 ммоль) в DCM (30 мл) обрабатывали водой (141,25 мг, 7,84 ммоль) и DCA (202,19 мг, 1,57 ммоль) с получением красного раствора. После перемешивания при 25°C в течение 12 ч к смеси добавляли MeOH (5 мл), пока она не стала прозрачной, с последующим добавлением пиридина (620,19 мг, 7,84 ммоль). Смесь перемешивали при кт в течение 2 ч, впоследствии концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% DCM в MeOH) с получением соединения  (0,54 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 12,26 (с, 1H), 11,92 (с, 1H), 11,27 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,53 (уш. т, J=5,8 Гц, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,69-7,63 (м, 1H), 7,60-7,53 (м, 2H), 6,46 (дд, J=2,6, 16,7 Гц, 1H), 6,04 (с, 1H), 5,92 (уш. с, 0,5H), 5,86 (уш. д, J=3,8 Гц, 1H), 5,79 (уш. д, J=3,3 Гц, 0,5H), 5,37-5,26 (м, 2H), 4,75 (уш. с, 1H), 4,60-4,49 (м, 1H), 4,27 (уш. с, 1H), 4,10 (уш. с, 1H), 3,77 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 3,60 (уш. дд, J=4,8, 8,0 Гц, 1H), 2,79 (тд, J=6,7, 13,7 Гц, 1H), 2,19 (уш. дд, J=6,3, 12,5 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,8 Гц, 6H); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) δ м. д. -202,787 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=773,3 [M+H].
36m
Стадия 12. Получение соединения
3
2
Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения.
36l
36m
3
2
2
N, N,N’,N’
+
Раствор соединения (100 мг, 0, 13 ммоль) в THF (2 мл) обрабатывали с помощью молекулярных сит 4A (порошок) (1 г); после перемешивания в течение 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M) в CHCN (2,3 мл) при 25 °C. Добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (0,078 г, 0,26 ммоль, разведен в 2 мл THF) при 25°C и перемешивали смесь в течение 1,5 ч с последующим добавлением гидропероксида трет-бутила (0,12 мл, 0,65 ммоль) при 25 °C. После перемешивания в течение 1,5 ч смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали с получением неочищенного продукта в виде желтого твердого вещества (1,0 г). Неочищенный продукт (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH in CHCl) с получением соединения  (50 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=888,3 [M+H].
соединения 37 (натриевая соль)
Стадия 13. Получение
36m
соединения 37 (аммонийная соль)
4
3
2
2
2
1
19
31
+
Раствор соединения  (50 мг, 0,056 ммоль) в EtOH (2,5 мл) обрабатывали метиламином (2,5 мл, 33% в EtOH). После перемешивания при 25°C в течение 3 ч раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм 150×30, условия: вода (10 мМ NHHCO)-ACN B: 0, конец B 30, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 1, скорость потока (мл/мин): 25) с получением (12,2 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,58 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 6,66 (д, J=18,1 Гц, 1H), 6,46 (с, 1H), 5,94-5,75 (м, 1H), 5,51-5,41 (м, 1H), 5,37 (уш. с, 1H), 4,63 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 4,35 (уш. д, J=13,4 Гц, 1H), 3,92 (уш. дд, J=3,7, 14,4 Гц, 1H), 3,50-3,36 (м, 1H), 3,16 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 2,65-2,55 (м, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -199,359 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -3,307 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,3 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
2
2
2
оединение 37 (аммонийная соль)
соединения 37 (натриевая соль)
1
19
31
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (10 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции.С(28 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (20 мл/5 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (24,5 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) = 8,63 (уш. с, 1H), 8,48 (уш. с, 1H), 6,71 (уш. д, J=17,6 Гц, 1H), 6,51 (уш. с, 1H), 5,97-5,79 (м, 1H), 5,54-5,40 (м, 2H), 4,69 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 4,41 (уш. д, J=13,1 Гц, 1H), 3,97 (уш. д, J=13,8 Гц, 1H), 3,54-3,41 (м, 1H), 3,22 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 2,66 (уш. с, 1H); F ЯМР (376 МГц, DO) м. д. -199,443 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) м. д. -3,283 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,2 [M+H].
Пример 37
37b
Стадия 1. Получение соединения
37a
37b
2
3
2
4
6
1
+
К перемешанному раствору соединения  (10 г, 28,3 ммоль), трифенилфосфина (22,27 г, 84,91 ммоль), имидазола (7,71 г, 113,25 ммоль) в THF (100 мл) добавляли раствор йода (21,55 г, 84,91 ммоль) в THF (100 мл) при 0 °C. После перемешивания при 35 °C в течение ночи реакционную смесь фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и разбавляли с помощью DCM (400 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaSO (200 мл x 2), высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения  (6 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,10 (с, 1H), 11,65 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,83 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,66 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 5,45 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,68 (к, J=5,6 Гц, 1H), 4,11 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 3,92-4,02 (м, 1H), 3,58 (уш. дд, J=10,4, 6,0 Гц, 1H), 3,43 (уш. дд, J=10,4, 6,8 Гц, 1H), 2,76 (дт, J=13,6, 6,8 Гц, 1H), 1,12 (уш. д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=463,9 [M+H].
37c
Стадия 2. Получение соединения
37b
37c
3
2
2
4
6
1
+
Раствор соединения  (6 г, 12,95 ммоль) в DMF (100 мл) обрабатывали с помощью NaN (2,47 г, 37,99 ммоль) в атмосфере N. После перемешивания при 80°C в течение 3 ч смесь разбавляли с помощью DCM (400 мл) и промывали солевым раствором (300 мл x 2). Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения (4 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,10 (с, 1H), 11,64 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,84 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,65 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,38 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,60 (к, J=5,6 Гц, 1H), 4,09-4,11 (м, 1H), 4,02 (дт, J=7,2, 3,6 Гц, 1H), 3,62-3,72 (м, 1H), 3,52-3,60 (м, 1H), 2,77 (септ, J=6,8 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=379,0 [M+H].
37d
Стадия 3. Получение соединения
37c
37c
37d
2
2
3
2
4
6
1
+
Соединение  дважды совместно выпаривали с пиридином (80 мл) до применения. К раствору соединения  (4 г, 10,57 ммоль) в пиридине (40 мл) добавляли DMAP (646 мг, 5,29 ммоль) и DMTrCl (5,38 г, 15,88 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при кт в течение ночи реакционную смесь разбавляли с помощью CHCl (200 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO (150 мл x 3), высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением неочищенного продукта в виде желтого. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Phenomenex Synergi Max-RP 10 мкм 250×50 мм; подвижная фаза: вода - ACN от 30% до 70%; скорость потока: 100 мл/мин) с получением соединения (4,15 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,02 (с, 1H), 11,43 (уш. с, 1H), 7,97 (с, 1H), 7,42 (д, J=6,8 Гц, 2H), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,11-7,22 (м, 5H), 6,71 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,63 (д, J=9,2 Гц, 2H), 5,66 (д, J=5,2 Гц, 1H), 5,48 (д, J=5,6 Гц, 1H), 4,80 (уш. т, J=4,8 Гц, 1H), 4,05 (дт, J=7,2, 4,0 Гц, 1H), 3,65 (д, J=11,6 Гц, 6H), 3,56 (уш. дд, J=13,2, 7,2 Гц, 1H), 3,44-3,51 (м, 1H), 3,39 (дд, J=13,2, 4,0 Гц, 1H), 2,79 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 1,14 (дд, J=6,8, 2,3 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=681,4 [M+H].
37e
Стадия 4. Получение соединения
37d
37e
37d
2
4
4
3
6
1
+
m/z
NaH (60% в минеральном масле, 189,5 мг, 4,74 ммоль) добавляли к суспензии соединения  (2,15 г, 3,16 ммоль) в DMF (20 мл) при 0 °C. После перемешивания при 0°C в течение 0,5 ч по каплям добавляли раствор хлорида 4-метоксибензила (0,512 мл, 3,8 ммоль) в DMF (10 мл). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, гасили водой (80 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл x 2). Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с другой порцией и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (YMC Triart C18, 7 мкм 250×50 мм; подвижная фаза: вода (10 мМ NHHCO)-ACN от 55% до 90%; скорость потока: 90 мл/мин) с получением соединения  (1,5 г, 1,83 ммоль) в виде белого твердого вещества и соединения  (2,16 г, 3,09 ммоль) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 12,04 (с, 1H), 11,42 (уш. с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,32 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,22-7,28 (м, 2H), 7,14-7,20 (м, 5H), 7,05 (д, J =9,2 Гц, 2H), 6,96 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,74 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,66 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,02 (д, J=7,6 Гц, 1H) 4,87 (уш. с, 1H), 4,34 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=7,2, 5,2 Гц, 1H), 4,00 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,78 (с, 3H), 3,69 (д, J=9,6 Гц, 7H), 3,27 (дд, J=12,8, 4,8 Гц, 1H), 2,76 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,61 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 1,09-1,17 (м, 6H); ИЭР-МС:  801,4 [M+H].
37f
Стадия 5. Получение соединения
3
2
4
6
37e
1
+
PhP (673 мг, 2,566 ммоль) в один прием добавляли к раствору соединения  (1,5 г, 1,83 ммоль) в THF (15 мл). Смесь перемешивали при 40 °C в течение 2 ч в атмосфере N2 с последующим добавлением воды (7,5 мл). После перемешивания при 40 °C смесь разбавляли DCM (50 мл), водой (40 мл) и экстрагировали с помощью DCM (50 мл x 2). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% MeOH в DCM) с получением соединения 37f (1,27 г) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) δ 8,06 (с, 1H), 7,31 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,22-7,27 (м, 2H), 7,13-7,22 (м, 5H), 7,04 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,96 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,74 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,66 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,99 (д, J=7,6 Гц, 1H), 4,78 (уш. с, 1H), 4,30 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,04 (т, J=5,6 Гц, 1H), 3,96 (д, J=10,4 Гц, 1H), 3,75-3,80 (м, 3H), 3,69 (д, J=8,4 Гц, 6H), 2,73-2,85 (м, 1H), 2,66 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 2,62 (уш. д, J=6,0 Гц, 2H), 1,12 (т, J=6,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=775,3 [M+H].
37g
Стадия 6. Получение соединения
37f
37g
2
3
2
4
6
1
+
m/z
Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (1,17 г, 4,92 ммоль) в безводном DCM (3 мл) добавляли к смеси соединения  (1,27 г, 1,64 ммоль), 4-нитрофенола (685 мг, 4,92 ммоль), Et3N (1,37 мл, 9,88 ммоль) в безводном DCM (27 мл) в атмосфере N при -78 °C, впоследствии естественным путем нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакционную смесь объединяли с другой партией, разбавляли с помощью DCM (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO (100 мл x 5). Органический слой собирали, сушили безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в PE) с получением соединения  (1,55 г, 1,59 ммоль) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (DMSO-d, 400 МГц) 12,05 (с, 1H), 11,49 (уш. с, 1H), 8,88 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,26-8,31 (м, 2H), 8,13 (с, 1H), 7,47-7,53 (м, 2H), 7,29 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,20-7,25 (м, 2H), 7,14-7,20 (м, 5H), 7,03 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,95 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,74 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,67 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,95 (д, J=7,2 Гц, 1H), 4,72 (уш. с, 1H), 4,25 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,18 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 3,96 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,77 (с, 3H), 3,69 (д, J=6,8 Гц, 6H), 3,24-3,44 (м, 2H), 2,91 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 2,69-2,79 (м, 1H), 1,12 (т, J=6,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: =976,3 [M+H].
37h
Стадия 7. Получение соединения
35h
37h
2
2
3
2
4
m/z
+
Суспензию соединения 37g (766 мг, 1,13 ммоль), соединения  (1,55 г, 1,59 ммоль) и молекулярных сит (3 г) в THF (40 мл) перемешивали при кт в атмосфере N в течение 30 мин, после чего добавляли DMAP (554 мг, 4,53 ммоль), впоследствии перемешивали при 45°C ON в атмосфере N. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; остаток растворяли в 60 мл DCM и промывали водным насыщенным NaHCO (40 мл x 3). Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE : EtOAc=1 : 0 ~ 0 : 1) с получением соединения  (360 мг) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: =757,4 [M/2+H].
37i
Стадия 8. Получение соединения
37h
37i
m/z
+
Раствор соединения  (360 мг, 0,24 ммоль) в DCM (10 мл) обрабатывали водой (43 мг, 2,39 ммоль) и DCA (67,5 мг, 0,52 ммоль) с получением желтого раствора. После перемешивания при кт в течение 6 ч к смеси добавляли MeOH (2 мл) с последующим добавлением пиридина (75,5 мг, 4 экв); полученный раствор перемешивали в течение 15 мин и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением соединения  (130 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: =908,4 [M+H].
37j
Стадия 9. Получение соединения
3
2
3
2
2
f
37i
37j
N, N.N',N'
+
ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения. К раствору соединения  (130 мг, 0,14 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (3 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг), а затем раствор 1H-тетразола (3,18 мл, 0,45 M, получен перед использованием путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN с последующим добавлением 1 г молекулярные сита 4Å и впоследствии перемешиванием в течение 1 ч в атмосфере N); после продувки резервуара несколько раз с помощью N посредством шприца добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (77,69 мг, 0,26 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч с последующим добавлением гидропероксида трет-бутила (0,23 мл, 1,13 ммоль, 5 M). После перемешивания в течение еще 30 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1, R=0,4) с получением соединения  (46 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1023,5 и 1023,4 [M+H].
37k
Стадия 10. Получение соединения
37j
37k
2
4
3
+
Раствор соединения (46 мг, 0,045 ммоль) обрабатывали смесью MeNH/EtOH (5 мл) при 40 °C в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм 150×30, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 25%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения  (12 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=796,3 [M+H].
48 (натриевая соль)
Стадия 11. Получение соединения
37k
соединения 47 (аммонийная соль)
4
3
2
2
2
1
31
19
+
Раствор анизола (15,9 мг, 0,14 ммоль) в TFA (0,113 мл, 57,3 ммоль) охлаждали до 0°C и добавляли к соединению  (12 мг, 0,015 ммоль). После перемешивания при 0°C в течение 2,5 ч TEA удаляли продувкой газообразным азотом при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили 33% раствором метиламина в EtOH (0,113 мл) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали досуха и разделяли между DCM и водой (20 мл x 3/10 мл). Водный слой лиофилизировали с получением белого остатка, очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением (7,1 мг, 0,010 ммоль) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,59 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 6,76 (д, J=16,8 Гц, 1H), 6,28 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,07 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 5,94 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,63 (уш. дд, J=3,2, 8,8 Гц, 1H), 5,58 (уш. дд, J=4,4, 8,8 Гц, 1H), 5,49 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 4,93 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,39 (уш. д, J=15,6 Гц, 1H), 4,13-4,07 (м, 1H), 3,96 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -2,21 (с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ 200,3-200,4 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
4
2
4
2
4
2
2
2
Соединение 47 (аммонийная соль)
соединения 47 (натриевая соль)
1
31
19
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (3 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции.  (7,1 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (3 мл/3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением(3,4 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,57 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 6,73 (д, J=16,6 Гц, 1H), 6,25 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,04 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 5,91 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 5,60 (уш. дд, J=3,6, 9,2 Гц, 1H), 5,55 (уш. дд, J=4,0, 9,2 Гц, 1H), 5,49-5,42 (м, 1H), 4,90 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 4,39-4,33 (м, 1H), 4,08 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 3,93 (уш. д, J=14,8 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -2,26 (с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -200,34-200,47 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,1 [M+H].
Пример 38
38a
Стадия 1. Получение соединения
3
2
3
2
2
35j
38a
N, N,N',N'
+
ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CHCN перед работой перегоняли над CaH до применения. К раствору соединения  (300 мг, 0,39 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (6 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг) и раствор 1H-тетразола (8,64 мл, 0,45 M, получен до применения путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CHCN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и перемешивания в атмосфере N в течение 1 ч); после продувания реакционной колбы несколько раз с помощью N добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (210,9 мг, 0,7 ммоль) в THF (2 мл) в течение 20 мин посредством шприца, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем добавляли DDTT (638,53 мг, 3,11 ммоль) и перемешивали смесь в течение еще 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (372 мг). ИЭР-МС: m/z 903,2 и 903,4 [M+H].
соединения (*
R
) 46A (натриевая соль)
соединения 46B (*
S
) (натриевая соль)
Стадия 2. Получение  и
38a
соединения (*
R
) 46A (аммонийная соль)
соединения (*
S
) (аммонийная соль) 46B
2
4
3
Соединение  (372 мг) обрабатывали с помощью MeNH/EtOH (15 мл) при 40°C в течение 2,5 ч. После перемешивания при 40 °C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества, объединенного с другой партией. Твердое вещество растворяли в воде (40 мл) и промывали DCM (20 мл x 4). Водный слой лиофилизировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Xtimate C18 5 мкм 150×25 мм, условия: A: вода (10 мМ NHHCO)-ACN: MeCN, начало B: 12%, конец B 42%; скорость потока (мл/мин) 25.) с получением белого твердого в виде белого твердого вещества (18,5 мг) и в виде белого твердого вещества (35,2 мг).
Соединение (*
R
) 46A (аммонийная соль).
1
31
19
6
6
6
H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 8,69 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 7,89 (с, 1H), 6,46 (д, J=16,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 5,48 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 5,35 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 5,10 (уш. дд, J=3,2, 9,4 Гц, 1H), 5,04 (уш. дд, J=3,2, 9,2 Гц, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,47 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,36 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 4,19 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H), 3,85 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,62 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 3,02 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 1,89 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 50,5 (уш. с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ м. д. -199,86 (тд, J=19,6, 49,6 Гц, IF).
Соединение (*S) 46B (аммонийная соль)
1
31
19
6
6
6
. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 8,48 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 6,45 (д, J=17,2 Гц, 1H), 5,90 (с, 1H), 5,58 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,45 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,17 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 5,12 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,75 (уш. с, 1H), 4,54-4,45 (м, 2H), 4,25-4,16 (м, 1H), 3,78 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,38 (уш. дд, J=11,2, 13,6 Гц, 1H), 3,01 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 1,93 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 52,02 (уш. с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DMSO-d) δ м. д. -199,30-199,90 (м, 1F).
Превращение в соединение (натриевая соль) (*R) 46A
2
4
2
4
2
4
2
2
2
Соединение (*
R
) 46A (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 46A
(натриевая соль)
1
31
19
+
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (4 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции.  (18,5 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (8 мл/2 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением(13,7 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,27 (уш. с, 1H), 7,97 (уш. с, 1H), 7,72 (уш. с, 1H), 6,35 (уш. д, J=16,4 Гц, 1H), 5,77 (уш. с, 1H), 5,70-5,49 (м, 1H), 5,26 (уш. с, 2H), 4,59-4,44 (м, 2H), 4,36 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 4,05 (уш. с, 1H), 3,60-3,38 (м, 2H), 2,71 (уш. с, 1H), 2,28 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ 54,42 (уш. с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -200,41 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H].
Превращение в соединение (*
S
) 46B (натриевая соль)
2
4
2
4
2
4
оединение (*
S
) 46B (аммонийная соль)
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (10 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (25 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. С(35,2 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (10 мл/8 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой.
соединения(*S) 46B (натриевая соль)
1
31
19
+
2
2
2
Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением(33,1 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,72 (уш. с, 1H), 8,73-8,68 (м, 1H), 8,58 (уш. с, 1H), 8,14 (уш. с, 1H), 6,81 (уш. д, J=17,6 Гц, 1H), 6,26 (уш. с, 1H), 6,07-5,89 (м, 1H), 5,67-5,53 (м, 2H), 4,94 (уш. д, J=6,8 Гц, 2H), 4,82 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. д, J=12,4 Гц, 1H), 4,09 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 4,14-4,04 (м, 1H) 3,82-3,69 (м, 1H), 3,23 (уш. с, 1H), 2,58 (уш. с, 1H), 2,37 (уш. с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. 53,58 (уш. с, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -199,69 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H].
Пример 39
39b
Стадия 1. Получение соединения
20b
39b
2
4
6
1
+
m/z
Имидазол (2,36 г, 34,6 ммоль) и TBSCl (3,48 г, 23,1 ммоль) последовательно добавляли к раствору соединения  [CAS 170871-87-1] (7,8 г, 11,5 ммоль) в безводном DCM (101 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор разбавляли DCM и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения  в виде белой пены (9,2 г, неочищенный). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 0,20 (с, 3H), 0,24 (с, 3H), 0,96 (с, 9H), 3,60 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,97 (д, J=2,1 Гц, 6H), 4,69 (м, 1H), 5,4 (дд, J=54,4, 4,1 Гц, 1H), 5,63 (дк, J=21,3, 3,9 Гц, 1H), 6,35 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,10 (м, 4H), 7,47 (к, J=7,3 Гц, 1H), 7,52 (м, 6H), 7,66 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,80 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,89 (т, J=7,6 Гц, 1H), 8,29 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,83 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 11,49 (с, 1H); ИЭР-МС:  790,4 [M+H].
39c
Стадия 2. Получение соединения
39b
39c
1
+
d
6
Раствор неочищенного соединения  (9,2 г) в DCM (250 мл), к которому добавляли воду (1 мл, 57,6 ммоль) и DCA (38 мл 10% раствор в DCM, 46,1 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили пиридином (4,6 мл, 57,6 ммоль) и метанолом (5 мл) и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения в виде белой пены (4,4 г). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: -0,26 (с, 3H), -0,06 (с, 3H), 0,72 (с, 9H), 3,72 (м, 2H), 4,36 (дт, J=26,6, 4,0 Гц, 1H), 5,10 (м, 2H), 5,22 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,39 (с, 1H), 6,13 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,77 (д, J=9,6 Гц, 2H), 11,24 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 488,2 [M+H].
39d
Стадия 3. Получение соединения
39c
39d
3
2
4
3
2
4
6
1
+
m/z
Хлорид мезила (1,04 мл, 13,55 ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения  (4,4 г, 9,03 ммоль) в безводном пиридине (44 мл) при 0° C. Реакционную смесь перемешивали при 0° C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего гасили метанолом и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением мезилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в безводном DMF (50 мл) с последующим добавлением азида натрия (4,51 г, 69,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60° C в течение 5 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO и водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белой пены (4 г, выход: 86,5%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: -0,25 (с, 3H), -0,02 (с, 3H), 0,72 (с, 9H), 3,65 (дд, J=13,1, 4,1 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,9 Гц, 1H), 4,50 (дк, J=25,3, 3,7 Гц, 1H), 5,20 (дд, J=53,7, 4,8 Гц, 1H), 5,35 (дк, J=22,0, 3,9 Гц, 1H), 6,15 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,80 (д, J=2,4 Гц, 2H), 11,24 (с, 1H); ИЭР-МС:  513,2 [M+H].
39e
Стадия 4. Получение соединения
39d
39e
3
2
3
2
4
6
1
+
m/z
Раствор соединения  (4 г, 7,8 ммоль) в MeOH (40 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 0,4 г). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, промывали диатомитовую землю с помощью MeOH. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением соединения-амина в виде белой пены. Неочищенный продукт (высушенный выпариванием с безводным толуолом) растворяли в DCM (59 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (3,2 г, 24 ммоль), EtN (6,5 мл, 46,8 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78 °C в атмосфере N, после чего по каплям добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (5,5 г, 23,4 ммоль) в DCM (20 мл), продолжали перемешивание до полного превращения (прибл. 3 ч). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и промывали насыщенным водным NaHCO и водой. Органическую фазу сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в гексане) с получением соединения  в виде желтой пены (3,5 г, выход: 65%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: -0,28 (д, J=15,8 Гц, 3H), -0,05 (д, J=6,2 Гц, 3H), 0,71 (с, 9H), 3,66 (т, J=5,9 Гц, 2H), 4,42 (д, J=26,2 Гц, 1H), 5,29 (м, 2H), 6,14 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (м, 4H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 8,30 (м, 2H), 8,69 (с, 1H), 8,76 (д, J=7,6 Гц, 1H), 9,22 (т, J=5,9 Гц, 1H), 11,27 (с, 1H); ИЭР-МС:  688,29 [M+H].
39g
Стадия 5. Получение соединения
39f
39e
39f и
39e
39g
3
4
2
4
6
1
+
m/z
В реакционную колбу помещали DMAP (2,59 г, 21,2 ммоль), безводный DCM (60 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения (2,05 г, 4,2 ммоль) и раствор сульфамата  (3,5 г, 5,1 ммоль) (каждый в безводном DCM) (2×60 мл), сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения сульфамата соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO и насыщенным водным NHCl. Объединенные органические фазы высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (2,9 г, выход: 66%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: -0,26 (с, 3H), -0,05 (т, J=11,0 Гц, 9H), 0,71 (с, 9H), 0,77 (с, 9H), 3,56 (м, 2H), 3,85 (дд, J=12,4, 3,4 Гц, 1H), 3,98 (д, J=9,6 Гц, 1H), 4,33 (т, J=3,4 Гц, 1H), 4,46 (дт, J=25,2, 6,0 Гц, 1H), 5,18 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,31 (м, 2H), 5,55 (дк, J=17,9, 4,1 Гц, 1H), 5,98 (дд, J=51,0, 2,8 Гц, 1H), 6,15 (д, J=7,6 Гц, 1H), 6,51 (дд, J=18,9, 1,7 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 2H), 8,04 (дд, J=7,9, 1,7 Гц, 4H), 8,59 (с, 1H), 8,75 (д, J=8,3 Гц, 3H), 8,86 (т, J=6,2 Гц, 1H), 11,26 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС:  1036,5 [M+H].
34a
Стадия 6. Получение соединения
39g
34a
3
3
6
1
+
Раствор соединения  (2,9 г, 2,8 ммоль) в пиридине (55 мл), к которому добавляли EtN (19,5 мл, 140 ммоль) и EtN·3HF (4,5 мл, 28 ммоль), перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли изопропоксиметилсилан (19,8 мл, 112 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, суспендировали в DCM, добавляли несколько капель метанола. Суспензию перемешивали в течение 20 мин, после чего осадок собирали фильтрованием и высушивали под высоким вакуумом с получением соединения  в виде порошка грязно-белого цвета (1,8 г, выход: 79%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д.: 3,51 (дд, J=46,1, 13,8 Гц, 2H), 3,65 (тд, J=9,0, 3,4 Гц, 1H), 3,81 (к, J=4,1 Гц, 1H), 4,34 (т, J=3,12 Гц, 1H), 4,41 (дт, J=25,9, 6,0 Гц, 1H), 5,21 (м, 2H), 5,40 (м, 2H), 5,92 (дт, J=51,2, 3,8 Гц, 1H), 6,11 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,15 (д, J=6,2 Гц, 1H), 6,50 (дд, J=17,2, 2,8 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 2H), 8,04 (дд, J=7,6, 2,1 Гц, 4H), 8,70 (с, 1H), 8,76 (д, J=7,6 Гц, 3H), 8,85 (с, 1H), 11,27 (с, 2H); ИЭР-МС: m/z=808,3 [M+H].
39h
Стадия 7. Получение соединения
34a
39h
H
N, N,N',N'-
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
2
3
4
+
Раствор соединения  (890 мг, 1,10 ммоль) и 1-тетразола (12,86 мл 3-4% раствора в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (50 мл) предварительно обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N в течение 2 ч. Добавляли в один прием 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидит (365 мг, 1,21 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 1 ч, после чего добавляли дополнительную порцию 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (166 мг, 0,55 ммоль). Встряхивание продолжали в течение ночи. После введения дополнительного количества 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (33 мг, 0,11 ммоль) выполняли встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавили BuOOH (341 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,87 ммоль) и встряхивание продолжали в течение 1 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали солевым раствором, насыщенным NaHCO и солевым раствором соответственно, высушивали с помощью MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (168 мг, выход: 16,5%). ИЭР-МС: m/z=923,4 [M+H].
соединения 35 (натриевая соль)
Стадия 8. Получение
39h
соединения 35 (аммонийная соль)
соединения 35 (натриевая соль)
1
31
+
6
6
m/z
Соединение  (168 мг, 0,182 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B): градиентное элюирование) с получением. Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (25 мг, выход: 20%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-d, 67 °C) δ м. д. 10,60 (уш. с, 1H), 8,32 (уш. с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,32 (уш. с, 2H), 7,14 (уш. с, 2H), 6,29 (дд, J=15,4, 4,4 Гц, 1H), 6,05 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,00-6,14 (м, 1H), 5,48-5,59 (м, 2H), 5,27 (дд, J=53,0, 3,6 Гц, 1H), 4,46-4,53 (м, 1H), 4,42-4,46 (м, 1H), 4,08 (дт, J=11,7, 7,5 Гц, 1H), 3,73 (ддд, J=11,7, 6,0, 3,3 Гц, 1H), 3,69 (уш. д, J=14,7 Гц, 1H), 3,49 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. -1,33 (с, 1P); ИЭР-МС:  660,3 [M+H].
Пример 40
Соединение 53
40b
Стадия 1. Получение соединения
O
m/z
40a
40b
3
2
4
+
В реакционную колбу помещали DMAP (1,43 г, 11,7 ммоль), безводный DCM (9 мл) и активированные молекулярные сита 4Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор 5'--DMTr-2'-F-дезоксиинозина [CAS 51424-83-1] (1,47 г, 2,57 ммоль) и раствор сульфамата  (2,0 г, 2,34 ммоль) (каждый в безводном DCM) (2×9 мл) высушивали на активированных молекулярных ситах 4Å (прибл. 3 ч). Оба раствора последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 40°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, впоследствии экстрагировали водную фазу с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-3% MeOH в DCM) с получением очищенного соединения  (2,01 г, 65,9%). ИЭР-МС:  1303,8 [M+H].
40c
Стадия 2. Получение соединения
40b
40c
1
+
6
Соединение  (2,0 г, 1,53 моль) растворяли в DCM (77 мл), к которому добавляли воду (140 мкл, 7,65 ммоль) и DCA (490 мкл, 5,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего добавляли пиридин (620 мкл, 7,65 ммоль) и небольшое количество MeOH. Полученную смесь частично концентрировали при пониженном давлении и переносили на силикагелевую колонку для очистки (градиентное элюирование: 0-18% MeOH в DCM) с получением соединения  (0,92 г, 86%). H ЯМР (300 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,48 (уш. с, 1H), 12,08 (уш. с, 1H), 11,60 (уш. с, 1H), 8,63 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,2 Гц, 1H), 6,31 (дд, J=16,4, 2,9 Гц, 1H), 5,58-5,88 (м, 3H), 5,37 (уш. т, J=5,0 Гц, 1H), 5,18-5,30 (м, 1H), 4,65 (к, J=5,9 Гц, 1H), 4,23-4,33 (м, 1H), 4,05 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,84 (т, J=4,1 Гц, 1H), 3,70-3,81 (м, 1H), 3,54-3,68 (м, 1H), 3,42 (с, 3H), 3,20-3,40 (м, 2H), 2,75 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 1,12 (уш. д, J=7,0 Гц, 3H), 1,11 (уш. д, J=7,0 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=699,4 [M+H].
40d
Стадия 3. Получение соединения
40c
40d
H
N, N,N',N'
t
m/z
2
2
+
Раствор соединения  (200 мг, 0,286 ммоль) и 1-тетразола (5,09 мл, мл 0,45 M раствор в MeCN, 2,29 ммоль) в безводном MeCN (8 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 1 ч, после чего добавляли по каплям 2-цианоэтил--тетра(изопропил)-фосфородиамидит (173 мг, 0,57 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном и MeCN перед работой перегоняли над CaH до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли раствор BuOOH (300 мкл, 1,5 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (206 мг, 71%). ИЭР-МС:  814,4 [M+H].
соединения 53 (натриевая соль)
Стадия 4. Получение
40d
соединения 53 (натриевая соль)
1
31
19
+
2
2
2
Соединение  (206 мг, 0,253 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при 40°C в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8 с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13 мг, 8%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,39 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,06 (с, 1H), 6,63 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,12 (д, J=8,5 Гц, 1H), 6,01-5,84 (м, 1H), 5,66 (ддд, J=4,1, 8,7, 19,1 Гц, 1H), 5,54-5,44 (м, 1H), 4,75-4,69 (м, 1H), 4,66 (с, 1H), 4,51 (уш. д, J=11,5 Гц, 1H), 4,26 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,24-4,17 (м, 1H), 4,03-3,94 (м, 1H), 3,91-3,81 (м, 1H), 3,77 (с, 3H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -2,020 (с, 1P); F ЯМР (376,5 МГц, DO) δ м. д. -198,634 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=691,2 [M+H].
Пример 41
41b
Стадия 1. Получение соединения
41a
41b
1
-
6
m/z
Реагент Selectfluor (34,6 г, 97,7 ммоль) и AcOH (100 мл) добавляли к раствору 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина [CAS 3680-69-1] (, 10,0 г, 65,1 ммоль) в безводном MeCN (500 мл), смесь перемешивали при 70°C до полного превращения (прибл. 16 ч). После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и выпаривали с безводным толуолом. Полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей DCM/EtOAc (1 : 1), полученный раствор фильтровали через слой диатомитовой земли, который тщательно промывали. Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде грязно-белого твердого вещества (5,2 г, выход: 47%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,49 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 7,73 (т, J=2,8 Гц, 1H); ИЭР-МС:  169,8 [M-H].
41c
Стадия 2. Получение соединения
41b
41c
O
O
O
d
m/z
3
2
4
6
1
+
Бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 3,15 мл, 12,8 ммоль) добавляли к суспензии соединения  (2,0 г, 11,6 ммоль) в безводном MeCN (80 мл). После перемешивания в течение 10 мин последовательно добавляли 1,2-ди--ацетил-3--метил-5--бензоил-D-рибофуранозу ([10300-21-7], 4,53 г, 12,8 ммоль) и трифторметансульфонат триметилсилила (TMSOTf, 2,34 мл, 12,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре и впоследствии переносили на подогретую масляную баню 80 °C, перемешивание продолжали в течение 90 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и последовательно промывали насыщенным водным NaHCO и солевым раствором. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% EtOAc в гексане) с получением соединения  в виде порошка грязно-белого цвета (1,6 г, выход: 30%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 8,66 (с, 1H), 7,99 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,95 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65-7,71 (м, 1H), 7,47-7,56 (м, 2H), 6,42 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,78 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,65 (дд, J=12,2, 3,5 Гц, 1H), 4,51 (дд, J=12,2, 5,1 Гц, 1H), 4,41-4,45 (м, 1H), 4,35-4,40 (м, 1H), 3,41 (с, 3H), 2,09 (с, 3H); ИЭР-МС:  464,0 [M+H].
41d
Стадия 3. Получение соединения
41c
41d
1
+
d
m/z
6
2M водный NaOH (16 мл) добавляли к раствору соединения  (1,6 г, 3,4 ммоль) в диоксане (16 мл). Реакционную смесь перемешивали при 110°C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего охлаждали до комнатной температуры и нейтрализовали 1M водным раствором HCl. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения в виде порошка грязно-белого цвета (0,32 г, выход: 45%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,11 (уш. с, 1H), 7,92 (с, 1H), 7,34 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,04 (дд, J=6,2, 1,4 Гц, 1H), 5,42 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,08 (уш. т, J=5,2 Гц, 1H), 4,33-4,43 (м, 1H), 3,96 (к, J=3,8 Гц, 1H), 3,77 (дд, J=5,0, 3,4 Гц, 1H), 3,56-3,65 (м, 1H), 3,49-3,55 (м, 1H), 3,39 (с, 3H); ИЭР-МС:  299,9 [M+H].
41e
Стадия 4. Получение соединения
41d
41e
2
4
6
1
+
m/z
Раствор соединения  (0,51 г, 1,7 ммоль) в безводном пиридине (8 мл), к которому добавляли DMAP (0,1 г, 0,8 ммоль) и DMTrCl (0,92 г, 2,7 ммоль) (порциями) добавляли, перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили метанолом (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (0,75 г, выход: 74%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,13 (уш. с, 1H), 7,93 (с, 1H), 7,35-7,41 (м, 2H), 7,26-7,32 (м, 2H), 7,22-7,26 (м, 5H), 7,18 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,83-6,90 (м, 4H), 6,06 (дд, J=4,8, 1,4 Гц, 1H), 5,54 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,47 (к, J=5,4 Гц, 1H), 4,05 (к, J=4,4 Гц, 1H), 3,87 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,33 (с, 3H), 3,20 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС:  602,3 [M+H].
41f
Стадия 5. Получение соединения
41e
17a
41e
17a
41f
2
3
4
2
4
+
Каждое из соединения  (1,2 г, 2,03 ммоль), сульфамата  (2,1 г, 2,43 ммоль) и DMAP (1,2 г, 10,14 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×30,0 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N в течение по меньшей мере 2 ч К раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения  в DCM и раствор сульфамата в DCM. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl. Объединенные органические фазы высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  (1,3 г, выход: 49%). ИЭР-МС: m/z=1338,77 [M+H].
41g
Стадия 6. Получение соединения
41f
41g
1
+
d
m/z
6
Раствор соединения  (1,3 г, 0,9 ммоль) в DCM (36,5 мл), к которому добавляли DCA (3,2 мл 10% в DCM, 3,8 ммоль) и воду (90 мкл, 4,8 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,4 мл, 4,8 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, суспендировали в дихлорметане, фильтровали и высушивали с получением соединения в виде порошка грязно-белого цвета (0,56 г, выход: 78%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,18 (уш. с, 1H), 11,26 (уш. с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,49 (уш. т, J=5,9 Гц, 1H), 8,06 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,93 (уш. д, J=2,1 Гц, 1H), 7,63-7,70 (м, 1H), 7,53-7,60 (м, 2H), 7,34 (с, 1H), 6,37 (уш. д, J=19,3 Гц, 1H), 6,31 (уш. д, J=5,5 Гц, 1H), 5,86 (уш. с, 1H), 5,59 (уш. д, J=53,7 Гц, 1H), 5,25 (уш. с, 1H), 5,20 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 4,59 (уш. д, J=18,6 Гц, 1H), 4,03-4,15 (м, 2H), 3,98 (м, J=2,1 Гц, 1H), 3,60-3,67 (м, 1H), 3,53-3,59 (м, 1H), 3,38 (с, 3H), 3,11-3,27 (м, 2H); ИЭР-МС:  734,2 [M+H].
41h
Стадия 7. Получение соединения
41g
41h
2
2
H
N, N,N',N'
t
m/z
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,136 ммоль) в безводном MeCN/DMF (4 мл, 1 : 3) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 20 мин в атмосфере N, после чего добавляли раствор 1-тетразола (2,42 мл 0,45 M в MeCN, 1,09 ммоль) и 2-цианоэтил--тетра(изопропил)-фосфородиамидит (82 мг, 0,27 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) (Примечание. MeCN перед работой перегоняли над CaH перед применением). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли раствор BuOOH (126 мкл, 0,69 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM, впоследствии фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (50 мг, чистота 77%). ИЭР-МС:  849,3 [M+H].
соединения 54 (натриевая соль)
Стадия 8. Получение
41h
соединения 54 (натриевая соль)
41g
1
19
31
+
Вышеуказанное соединение  перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (5 мл) при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8 с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (24 мг, выход: 25% из ). H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 7,30 (уш. с, 1H), 6,46-6,34 (м, 2H), 5,39 (уш. дд, J=4,6, 8,1 Гц, 2H), 5,23 (уш. с, 1H), 5,08-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,48 (уш. д, J=8,6 Гц, 1H), 4,41 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,32-4,25 (м, 1H), 4,25-4,18 (м, 1H), 3,77 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 3,59 (с, 3H), 3,54 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -164,506 (с, 1F), -197,262 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -1,850 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=692,1 [M+H].
Пример 42
42b
Стадия 1. Получение соединения
4h
42a
42b
2
2
3
1
+
m/z=
Смесь соединения  (520 мг, 0,76 ммоль), соединения (372 мг, 0,76 ммоль) и молекулярных сит 4Å (1 г) в THF (20 мл) перемешивали в атмосфере N при 20°C в течение 1 ч. Впоследствии добавляли DMAP (466 мг, 3,81 ммоль). Полученную желтую суспензию перемешивали при 20 °C в течение 17 ч в атмосфере N. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении (< 40 °C) с получением остатка, очищенного посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентный элюент: петролейный эфир/этилацетат от 100/0 до 0/100, впоследствии дихлорметан/метанол от 100/0 до 100/10) с получением соединения (460 мг) в виде бледно-желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, CDOD) δ м. д. 8,69 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 8,08-8,13 (м, 3H), 7,64-7,71 (м, 1H), 7,54-7,62 (м, 2H), 6,28 (дд, J=19,07, 1,47 Гц, 1H), 5,94 (д, J=8,07 Гц, 1H), 5,57 (д, J=4,40 Гц, 1H), 5,44 (д, J=2,93 Гц, 1H), 4,92-5,00 (м, 1H), 4,61 (дд, J=8,07, 5,38 Гц, 1H), 4,22 (уш. дд, J=8,19, 2,81 Гц, 2H), 4,13-4,17 (м, 1H), 4,06 (уш. дд, J=7,09, 3,18 Гц, 1H), 3,84-3,91 (м, 2H), 3,77-3,82 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 2,69 (дт, J=13,69, 6,85 Гц, 1H), 1,20 (т, J=6,60 Гц, 6H), 0,87-0,96 (м, 17H), 0,17-0,21 (м, 6H), 0,08 (д, J=11,00 Гц, 6H); ИЭР-МС: 1031,2 [M+H].
42c
Стадия 2. Получение соединения
42b
42c
4
3
1
+
Раствор соединения  (660 мг, 0,64 ммоль), триэтиламина (648,2 мг, 6,4 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (516,3 мг, 3,20 ммоль) в пиридине (20 мл) перемешивали при 10 °C в течение 17 часов. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении при 30 °C с получением неочищенного масла, очищаемого посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela DuraShell 5 мкм, 150 мм x 25 мм; подвижная фаза: A: вода (10 мМ NHHCO) - B: MeCN; градиентное элюирование: A (93%): B (7%) до A (63%) и B (37%) в течение 9 мин; скорость потока 25 мл/мин). Чистые фракции собирали и лиофилизировали досуха с получением соединения  (230 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ м. д. 12,08 (с, 1H), 11,63 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 8,69-8,81 (м, 2H), 8,56 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,28 Гц, 2H), 7,62-7,71 (м, 1H), 7,50-7,61 (м, 2H), 6,38 (д, J=19,83 Гц, 1H), 5,99 (д, J=6,53 Гц, 1H), 5,84 (д, J=8,78 Гц, 1H), 5,46-5,68 (м, 1H), 5,15 (т, J=5,27 Гц, 1H), 4,59-4,79 (м, 2H), 4,21-4,32 (м, 1H), 4,13-4,19 (м, 1H), 4,03-4,11 (м, 2H), 3,85 (д, J=5,52 Гц, 1H), 3,55-3,63 (м, 1H), 3,45-3,53 (м, 1H), 3,19 (с, 3H), 2,75 (кв., J=6,71 Гц, 1H), 1,11 (дд, J=6,78, 2,76 Гц, 5H), 1,08-1,14 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=801,9 [M+H].
42d
Стадия 3. Получение соединения
42c
42d
3
3
3
3
3
H
N, N,N',N’
+
К раствору соединения  (310 мг, 0,38 ммоль) в CHCN/THF (1 : 1, об./об., 18 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (1 г) и 1-тетразол в CHCN (7 мл, 3,15 ммоль, 0,45 M в CH3CN). После перемешивания смеси при 25°C в течение 0,5 ч к смеси добавляли 2-цианоэтил -тетраизопропилфосфородиамидит (190 мг, 0,63 ммоль) в CHCN. После перемешивания смеси при 30 °C в течение 2 ч к смеси добавляли 1H-тетразол в CHCN (1,8 мл, 0,81 ммоль, 0,45 M в CHCN). После перемешивания смеси при 30 °C в течение 0,5 ч к реакционной смеси добавляли TBHP (0,4 мл, 2 ммоль, 5 M в декане). После перемешивания смеси при 30 °C в течение 2 ч реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения  (850 мг); ИЭР-МС: m/z=917,1 [M+H].
соединения 5 (аммонийная соль)
Стадия 3. Получение
Соединение 42d
соединения 5 (аммонийная соль)
3
2
4
3
2
2
2
1
31
i9
+
m/z=
(1000 мг, неочищенный) обрабатывали метанамином в EtOH (33%) (10 мл) при кт. После перемешивания реакционной смеси при 20 °C в течение 2 ч смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл x 2). Водную фазу лиофилизировали досуха с получением остатка, очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela DuraShell 5 мкм, 150 мм x 25 мм; подвижная фаза: A: вода (0,04% NH - HO+10 мМ NHHCO) - B : MeCN; градиентное элюирование: A (100%): B (0%) до A (90%) и B (10%) в течение 10 мин; скорость потока 25 мл/мин). Чистые фракции собирали и лиофилизировали досуха с получением  (111 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 7,98 (с, 1H), 7,56-7,70 (м, 2H), 6,20 (уш. д, J=14,92 Гц, 1H), 5,71 (уш. д, J=9,05 Гц, 1H), 5,18-5,40 (м, 2H), 4,98 (уш. с, 1H), 4,85 (уш. д, J=4,89 Гц, 1H), 4,55 (уш. д, J=10,27 Гц, 1H), 4,44-4,52 (м, 1H), 4,39 (уш. с, 1H), 4,19 (уш. д, J=11,25 Гц, 1H), 4,05-4,16 (м, 2H), 4,01 (уш. д, 1=4,40 Гц, 1H), 3,34-3,43 (м, 1H), 3,35 (с, 3H); P ЯМР (162 МГц, DO)) δ м. д. -2,37 - -0,06 (м, 1P); F ЯМР (376 МГц, DO) δ м. д. -202,54 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: 689,9 [M+H].
Пример 43
Соединение 20
43c
Стадия 1. Получение соединения
43a
43b
43c
2
2
4
O
N
O
N, N
m/z
+
5-[3,5-Бис(трифторметил)фенил]тетразол (9,65 мл 0,25 M раствор в MeCN, 2,41 ммоль, высушен на молекулярных ситах до применения) добавляли к раствору L-бензоил-2',3'-дидезокси-3'-[(трифенилметил)амино]-аденозина  [CAS 195375-63-4] (720 мг, 1,21 ммоль) в MeCN (8 мл). Добавляли активированные молекулярные сита и перемешивали полученную смесь в течение 1 ч в атмосфере N. Далее в вышеуказанную смесь переносили раствор 5'--(4,4-диметокситритил)-2-изобутирил-3'--метилгуанозин-2'-(2-цианоэтил--диизопропил-фосфорамидита)  [CAS 179479-04-0] (2201 мг, 2,53 ммоль) в MeCN (25 мл), высушенный на активированных молекулярных ситах. Полученный реакционный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего добавляли tBuQOH (1,10 мл 5,5 M раствор в декане, 6,03 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще одного часа. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Добавляли воду и этилацетат, водную фазу отделяли и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы сушили безводным NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением соединения  (2,3 г). ИЭР-МС:  1381,4 [M+H].
43d
Стадия 2. Получение соединения
43e
43d
m/z
+
+
Раствор вышеуказанного соединения  (1,3 г, неочищенный) в MeCN (15 мл), к которому добавляли AcOH (80% в воде, 15 мл) и триэтилсилан (4,8 мл, 30,22 ммоль), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xtimate C18, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением смеси продуктов (260 мг): соединения  и его аналога с удаленными цианоэтиловыми защитными группами. ИЭР-МС:  838,2 [M+H] и 784,2 [M+H] (соединение с удаленными цианоэтиловыми защитными группами).
43e
Стадия 3. Получение соединения
43d
43e,
3
2
4
m/z
+
Смесь соединения  и его аналог с удаленными цианоэтиловыми защитными группами (400 мг, ~ 0,49 ммоль) растворяли в пиридине/DCM (1 : 1, мл) с последующим добавлением EtN (403 мг, 3,98 ммоль), 4-нитрофенола (346 мг, 2,49 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å. Полученный раствор охлаждали до -78 ºC и перемешивали в инертной атмосфере в течение 1 ч. К этому раствору добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (592 мг, 2,49 ммоль) в DCM (5 мл), высушенный на активированных молекулярных ситах 4Å (1 ч) до применения. Реакционную смесь перемешивали при -78 °C в течение 2 ч после чего ее нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 1,5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Добавляли воду и этилацетат, водную фазу отделяли и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили безводным NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением неочищенного соединения которое использовали в таком виде без какой-либо дополнительной очистки. ИЭР-МС:  899,3 [M+H].
43f
Стадия 4. Получение соединения
Трет
43e
43f
+
-бутиламин (200 мкл, 1,88 ммоль) добавляли к раствору соединения  (100 мг, неочищенное) в этаноле (1 мл). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали неочищенный продукт посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Agela Durashell C18, 5 мкм, 150×25 мм, подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением очищенного соединения (7 мг). ИЭР-МС: m/z=846,2 [M+H].
соединения 20
Стадия 5. Получение
43f
соединения 20
1
31
+
d
m/z
6
6
Соединение (6 мг, 7,09 мкмоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (1 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растирали остаток в MeCN с получением  (2 мг, выход: 33%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-) δ м. д. 8,37 (с, 1H), 8,17 (с, 1 B), 7,89 (с, 1H), 7,29 (уш. с, 2H), 6,53 (уш. с, 2H), 6,36 (дд, J=9,7, 5,4 Гц, 1H), 5,76 (д, J=9,1 Гц, 1H), 5,08 (тд, J=9,7, 4,3 Гц, 1H), 4,73 (уш. д, J=5,1 Гц, 1H), 4,37 (д, J=11,2 Гц, 1H), 4,29 (с, 1H), 4,16-4,22 (м, 2H), 4,15 (уш. дд, J=11,8, 2 Гц, 1H), 3,94 (д, J=4,1 Гц, 1H), 3,52-3,57 (м, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,12-3,19 (м, 1H), 2,44-2,49 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 0,97 (с, 1P); ИЭР-МС:  672,3 [M+H].
Пример 44
Соединение (*
R
) 10A
44a
Стадия 1. Получение соединения
6g
44a
3
3
3
m/z
+
Соединение  (95 мг, 0,117 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (10 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,3 г) и 0,45 M тетразол в CHCN (2,0 мл, 0,936 ммоль) и барботировали полученную гетерогенную смесь аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил N, N-диизопропил-хлорфосфорамидит в CHCN (57 мг, 0,18 ммоль, в 3,0 мл CHCN) при кт в течение 30 мин. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали THF (15 мл). Фильтрат использовали непосредственно на следующей стадии. Добавляли раствор DDTT (119 мг, 0,585 ммоль растворяли в 5 мл пиридина). После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO3 (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 40 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха, очищали полученный неочищенный материал посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM: 0-15%, об./об.) с получением соединения  (58 мг); ИЭР-МС:  943 [M+H].
(*
R
) 10A (натриевая соль)
Стадия 2. Получение соединения
44a
соединения (*
R
) 10A
2
3
Раствор соединения (58 мг, 0,06 ммоль) в MeNH (33% в EtOH, 10 мл) перемешивали при 40 °C в течение 2 ч 30 мин, концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 4,6 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CHCN; градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока: 24 мл/мин) с получением (15,9 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением
соединения (*
R
) 10A (натриевая соль)
Стадия 3. Получение
2
4
2
4
2
4
2
2
16
соединения (*
R
) 10A (натриевая соль)
1
31
-
m/z
Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл), к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде; смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 CV [объема колонки]) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH (pH бумаги). Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Соединение  (15,9 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды, добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли (UV) и лиофилизировали с получением(15,1 мг). H ЯМР (400 МГц, DO): δ 8,33 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,71 (с, 1H), 6,30-6,42 (м, 2H), 6,22 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,43 (с, 1H), 5,27 (с, 1H), 4,84-4,98 (м, 1H), 4,60-4,70 (м, 1H), 4,56 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,32 (д, J=8,4 Гц, 1H), 4,12 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,01-4,11 (м, 1H), 3,81 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,69 (с, 3H), 3,55 (д, J=11,6 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO): δ 54,07 (с, 1P); ИЭР-МС: : 714,7 [M-1].
Пример 45
45b
Получение соединения
45a
45b
N, N,N',N'
+
+
2
2
3
3
Соединение  (200 мг, 0,216 ммоль) выпаривали со смесью безводный толуол : MeCN (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (20 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,8 г) и 0,45 M тетразол в MeCN (3,8 мл, 1,72 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания данной смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра-(изопропил)фосфородиамидита (105 мг, 0,345 ммоль) в MeCN (3 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания реакционной смеси в течение 90 мин ее фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученную смесь (MS: m/z 1007 [M+H]) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания при кт в течение 30 мин реакционную смесь впоследствии разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), избыток йода гасили водным насыщенным NaSO (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM, об./об.) с получением (135 мг). ИЭР-МС: m/z=1023 [M+H].
45c
Получение соединения
45b
45c
+
Соединение  (135 мг) обрабатывали 33% раствором метиламина в этаноле (10 мл) при кт. После перемешивания при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали с получением  (98 мг) в виде твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=796 [M+H].
соединения 17 (натриевая соль)
Получение
45c
соединения 17
3
m/z
-
Соединение  (98 мг) обрабатывали 80% водным раствором TEA (4 мл) при 0 C. После перемешивания при 0 C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде бесцветного масла. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм × 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетат триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония в CHCN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением  (24,2 мг) в виде соли TEAA. ИЭР-МС: : 674 [M-1].
Получение натриевой соли
2
4
2
4
2
4
2
2
2
соединения 17
соединения 17 (натриевая соль)
1
31
19
-
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. TEAA-соль  (1 : 1, об./об.) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и MeCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (22,9 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,31 (с, 1H), 7,95 (с, 1H), 7,76 (с, 1H), 6,74 (с, 1H), 6,15-6,25 (м, 2H), 5,45-5,55 (м, 1H), 5,25 (д, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,13 (д, J=4,8 Гц, 0,5H), 4,75-4,90 (м, 1H), 4,65 (с, 1H), 4,35-4,45 (м, 1H), 4,33 (д, J=9,6 Гц, 1H), 4,10-4,25 (м, 2H), 3,55-3,70 (дд, J=3,2, 13,2 Гц, 1H), 3,38 (д, J=12 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ -1,895 м. д. (с, 1P); F ЯМР (379 МГц, DO) δ -196,91 м. д. (широкий пик, 1F); ИЭР-МС: m/z: 658,5 [M-1].
Пример 46
46b
Получение соединения
46a
46b
N, N,N',N'
+
+
2
3
2
2
3
Соединение  (110 мг, 0,123 ммоль) выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (14 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,5 г) и 0,45 M тетразол в MeCN (2,1 мл, 0,989 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали с помощью Ar в течение 4 мин. После перемешивания смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (60 мг, 0,197 ммоль) в MeCN (3,0 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания при кт в течение 90 мин реакционную смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученную смесь (MS: m/z 989 [M+H]) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), избыток йода гасили водным насыщенным NaSiO (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaSO (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO3 (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане, об./об.) с получением соединения  (77 мг). ИЭР-МС: m/z=1005,8 [M+H].
46c
Получение соединения
46b
46c
+
Соединение  (77 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (6 мл) при кт. После перемешивания при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали с получением соединения  (43 мг). ИЭР-МС: m/z=778 [M+H].
соединения 18 (натриевая соль)
Получение
46c
соединения 18
3
Соединение  (43 мг) обрабатывали 80% водным TEA (2 мл). После перемешивания при кт в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением остатка в виде бесцветного масла. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CHCN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением  (6,4 мг) в виде соли TEAA.
2
4
2
4
2
4
2
2
соединение 18
соединения 18 (натриевая соль)
1
31
-
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной воде и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли 15% раствор NaOH в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции,  (TEAA-соль) (6,4 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и MeCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением (5,9 мг). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 7,93 (с, 1H), 7,84 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 6,32 (дд, J=2,8; 4,8 Гц, 1H), 6,05 (д, J=8,4 Гц, 1H), 5,92-6,01 (м, 1H), 5,15-5,25 (м, 1H), 4,61 (д, J=12 Гц, 1H), 4,30-4,36 (м, 1H), 3,90-4,20 (м, 3H), 3,50-3,58 (дд, J=3,2, 13,2 Гц, 1H), 3,20-3,33 (дд, J=2, 13,2 Гц, 1H), 2,60-2,75 (м, 2H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ м. д. -0,838 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z: 656,8 [M-1].
Пример 47
47b
Стадия 1. Получение соединения
47a
47b
2
4
6
1
+
m/z
Хлортриметилсилан (2,08 мл, 16,38 ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения  [CAS 174171-97-2] (1 г, 3,28 ммоль) в безводном пиридине (60 мл) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч, после чего добавляли по каплям хлорид бензоила (1,89 мл, 16,38 ммоль). Перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционный раствор охлаждали до 0 °C, добавляли воду (30 мл) с последующим добавлением водного раствора аммиака (30 мл 25% раствора), перемешивание продолжали в течение 90 мин при 0 °C. Реакционный раствор экстрагировали с помощью EtOAc, объединенные органические слои высушивали с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 50-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (1,1 г, выход: 82%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,17 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,46-7,59 (м, 2H), 5,02-5,09 (м, 1H), 4,90-5,01 (м, 1H), 4,83 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,59 (дд, J=7,2, 3,9 Гц, 1H), 3,53 (уш. т, J=5,0 Гц, 2H), 2,17-2,41 (м, 3H), 1,50 (с, 3H), 1,25 (с, 3H); ИЭР-МС:  410,2 [M+H].
47c
Стадия 2. Получение соединения
47b
47c
3
2
4
2
3
2
4
6
1
+
m/z
DMAP (448 мг, 3,66 ммоль) и хлорид тозила (2,79 г, 14,65 ммоль) добавляли к раствору соединения  (3 г, 7,32 ммоль) и EtN (3,07 мл, 21,98 ммоль) в DCM (6 мл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь гасили водой и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении с получением тозилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в DMF (15 мл) с последующим добавлением азида натрия (1,88 г, 28,91 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при 35°C в течение 16 ч. Далее реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли насыщенным водным NaCO и экстрагировали EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали безводным NaSO и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-25% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения в виде желтого твердого вещества (2, 1 г, выход: 61%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 1,25 (с, 3H), 1,51 (с, 3H), 2,24-2,48 (м, 3H), 3,53 (дд, J=12,3, 6,3 Гц, 1H), 3,60 (дд, J=12,3, 5,3 Гц, 1H), 4,02 (к, J=7,2 Гц, 1H), 4,58 (дд, J=7,2, 4,6 Гц, 1H), 4,93-5,03 (м, 1H), 5,03-5,11 (м, 1H), 7,51-7,59 (м, 2H), 7,60-7,71 (м, 1H), 8,04 (д, J=7,5 Гц, 2H), 8,64 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 11,19 (уш. с, 1H); ИЭР-МС:  435,1 [M+H].
47d
Стадия 3. Получение соединения
47c
47d
2
3
2
4
m/z
+
TFA (100 мл, 75% в воде) добавляли к раствору соединения  (3,47 г, 7,99 ммоль) в DCM (20 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным KCO, водный слой отделяли и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали безводным NaSO и выпаривали в вакууме с получением соединения  в виде белого твердого вещества (3,25 г, неочищенный продукт), которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС:  395,0 [M+H].
47e
Стадия 4. Получение соединения
47d
47e
47ea
2
4
6
1
+
Соединение  (3,25 г) растворяли в DMF (22 мл) с последующим добавлением имидазола (1,57 г, 23,0 ммоль) и TBSCl (1,39 г, 9,20 ммоль). Параллельно в тех количествах проводили вторую реакцию. Обе реакционные смеси перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего добавляли EtOAc и солевой раствор. Органическую фазу отделяли и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc. Объединенные органические слои высушивали безводным NaSO, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенной смеси региоизомеров. Разделение проводили препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi, 10 мкм Max-RP, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения  (2,0 мг, выход: 24%) в виде первого элюируемого изомера и 3’-TBS-защищенного региоизомера (, структура не показана, 2,5 г, выход: 31%) в виде второго элюируемого изомера. H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 11,13 (с, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,04 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,51-7,58 (м, 2H), 4,91-5,01 (м, 1H), 4,78 (д, J=5,3 Гц, 1H), 4,52 (дд, J=8,5, 5,5 Гц, 1H), 3,79-3,86 (м, 1H), 3,54-3,64 (м, 2H), 2,34 (дт, J=12,6, 8,5 Гц, 1H), 2,16-2,28 (м, 1H), 1,94-2,04 (м, 1H), 0,64 (с, 9H), -0,16 (с, 3H), -0,38 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=509,2 [M+H].
47f
Стадия 5. Получение соединения
3
2
4
6
47e
47f
1
+
d
m/z
DMTrCl (394 мг, 1,16 ммоль), AgNO (492 мг, 2,90 ммоль) и 2,4,6-коллидин (351 мг, 2,90 ммоль) добавляли к раствору соединения  (300 мг, 0,59 ммоль) в DCM (6 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили солевым раствором, водный слой отделяли и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали безводным NaSO, фильтровали и выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (430 мг, выход: 90%) в виде желтого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. -0,68 (с, 3H), -0,22 (с, 3H), 0,67-0,75 (м, 9H), 0,80-0,89 (м, 1H), 1,54-1,66 (м, 1H), 2,00-2,08 (м, 1H), 2,29-2,39 (м, 1H), 3,21 (дд, J=12,0, 5,9 Гц, 1H), 0,00 (уш. дд, J=3,9, 1,0 Гц, 1H), 3,74 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 4,58 (дд, J=9,3, 3,9 Гц, 1H), 5,37 (к, J=9,3 Гц, 1H), 6,83-6,96 (м, 4H), 7,20-7,27 (м, 1H), 7,28-7,35 (м, 2H), 7,36-7,44 (м, 4H), 7,50-7,60 (м, 4H), 7,61-7,67 (м, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,6 Гц, 2H), 8,62-8,69 (м, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,12 (уш. с, 1H); ИЭР-МС:  811,3 [M+H].
47g
Стадия 6. Получение соединения
47f
47g
2
2
3
2
4
6
1
+
m/z
Суспензию соединения  (3,23 г, 3,98 ммоль) в EtOAc (150 мл) перемешивали в атмосфере H (15 фунтов на кв. дюйм) при 30°C в течение ночи в присутствии Pd/C (10% на угле, 3,0 г). Катализатор удаляли фильтрованием через диатомитовую землю, фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина, которое использовали сразу в таком виде на следующей стадии. Неочищенный продукт растворяли в DCM (110 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (3,53 г, 25,38 ммоль), Et3N (2,12 мл, 15,23 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78°C в атмосфере N, после чего добавляли по каплям хлорсульфат 4-нитрофенила (3,62 г, 15,23 ммоль) в DCM (20 мл), реакционному раствору позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли DCM и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, высушивали над NaSO и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения  (2,6 г, выход: 67%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. -0,62 (с, 3H), -0,30 (с, 3H), 0,65 (с, 9H), 1,92-2,11=1 (м, 2H), 2,44 (уш. дд, J=9,9, 3,5 Гц, 1H), 2,85-3,01 (м, 1H), 3,04-3,15 (м, 1H), 3,45 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 3,72 (с, 3H), 3,72 (с, 3H), 4,68 (уш. дд, J=9,5, 3,9 Гц, 1H), 5,47 (к, J=9,5 Гц, 1H), 6,87 (с, 3H), 7,19-7,25 (м, 1H), 7,26-7,34 (м, 2H), 7,35-7,48 (м, 5H), 7,51-7,60 (м, 3H), 7,62-7,70 (м, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 8,33 (д, J=9,0 Гц, 2H), 8,67 (д, J=7,1 Гц, 1H), 8,80 (уш. т, J=5,7 Гц, 1H), 11,15 (с, 1H); ИЭР-МС:  986,6 [M+H].
47h
Стадия 7. Получение соединения
47g
47h
3
2
4
m/z
+
Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения (1 г, 1,07 ммоль) и 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина [CAS 103285-33-2] (717 мг, 1,01 ммоль) в безводном THF (25 мл) и перемешивали полученную смесь в азотной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее для инициирования реакции добавляли раствор DMAP (619 мг, 5,07 ммоль) в THF (10 мл), полученный путем перемешивания в течение 2 ч в присутствии активированных молекулярных сит. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали фильтрат насыщенным водным NaHCO. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения (875 мг, выход: 54%). ИЭР-МС:  759,2 [M+2H]/2.
47i
Стадия 8. Получение соединения
47h
47i
2
4
6
1
+
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
Раствор соединения  (875 мг, 0,56 ммоль) в DCM (40 мл) обрабатывали DCA (0,19 мл, 2,25 ммоль) в присутствии воды (0,05 мл, 2,81 ммоль) в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,23 мл, 2,81 ммоль) в метаноле (2 мл) с последующим концентрированием при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в DCM, полученный раствор промывали водой и солевым раствором, высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (465 мг, выход: 91%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,11 (уш. с, 1H), 11,58 (уш. с, 1H), 11,09 (уш. с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,44 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 8,05 (д, 7,3 Гц, 2H), 7,59-7,70 (м, 1H), 7,47-7,58 (м, 2H), 6,10 (д, J=6,5 Гц, 1H), 5,41 (дд, 6,5, 5,3 Гц, 1H), 5,29 (т, 5,3 Гц, 1H), 4,91 (к, 9,3 Гц, 1H), 4,54 (уш. д, 3,7 Гц, 1H), 4,48 (дд, 8,7, 5,5 Гц, 1H), 4,22 (дд, 4,9, 2,4 Гц, 1H), 4,15 (к, 3,3 Гц, 1H), 3,76 (уш. с, 1H), 3,54-3,73 (м, 2H), 3,49 (с, 3H), 2,97 (дд, 13,4, 7,7 Гц, 1H), 2,81-2,90 (м, 1H), 2,75 (спт, 6,8 Гц, 1H), 2,18-2,29 (м, 1H), 2,02-2,15 (м, 1H), 1,74-1,87 (м, 1H), 1,11 (д, 6,5 Гц, 3H), 1,08 (д, 6,9 Гц, 3H), 0,63 (с, 9H), -0,17 (с, 3H), -0,41 (с, 3H); ИЭР-МС:  912,7 [M+H].
47j
Стадия 9. Получение соединения
47i
47j
H
N, N,N',N'-
d
m/z
2
3
6
31
+
Раствор соединения  (280 мг, 0,31 ммоль) и 1-тетразола (3,58 мл 3-4% в MeCN, предварительно высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) в MeCN/THF (1 : 1, 44 мл, предварительно высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в атмосфере N, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-тетра(изопропил)фосфородиамидит (97 мкл, 0,31 ммоль). Полученную реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли PADS (0,19 г, 0,61 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты промывали насыщенным водным NaHCO и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (91 мг, выход: 26%) в виде одного диастереомера. P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 66,65 (с, 1P); ИЭР-МС:  1043,7 [M+H].
(*
R
) 21 A (натриевая соль)
Стадия 10. Получение соединения
47j
соединения (*
R
) 21A
соединения (*
R
) 21 A (натриевая соль)
3
2
2
1
31
+
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
Соединение  (86 мг, 0,077 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (4 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (4 мл) с последующим добавлением EtN (320 мкл, 2,32 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (200 мкл, 1,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°C в течение 18 ч. Добавляли изопропокситриметилсилан (0,82 мл, 4,65 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 18 ч. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в безводном ацетонитриле, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% водный бикарбонат аммония (A) - MeOH (B); градиентное элюирование) с получением  в виде одного диастереомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением в виде рыхлого белого твердого вещества (27 мг, выход: 46%). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,36 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 6,10 (д, 8,1 Гц, 1H), 5,68 (дд, 8,3, 4,3 Гц, 1H), 4,83-4,95 (м, 2H), 4,67-4,72 (м, 1H), 4,61 (м, 2,0 Гц, 1H), 4,39 (д, 4,5 Гц, 1H), 4,27 (ддд, 11,8, 6,5, 2,4 Гц, 1H), 4,18 (ддд, 12,2, 4,5, 1,6 Гц, 1H), 3,55 (с, 3H), 3,36 (уш. д, 4,8 Гц, 2H), 2,55-2,65 (м, 2H), 1,92-2,03 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DO) δ ч/млн 54,55 (с, 1P); ИЭР-МС:  702,4 [M+H].
Пример 48
48b
Стадия 1. Получение соединения
48a
48b
3
2
4
6
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
TEPDSCb (765 мкл, 2,39 ммоль) добавляли к раствору соединения  [CAS 1834500-50-3] (0,6 г, 1,71 ммоль) в пиридине (25 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего выливали в насыщенный водный NaHCO и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои сушили безводным NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (550 мг, выход: 54%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,06 (уш. с, 1H), 11,56 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 4,85 (д, 7,3 Гц, 1H), 4,51-4,64 (м, 1H), 4,29 (к, 7,2 Гц, 1H), 4,14-4,23 (м, 1H), 3,90 (дд, 11,5, 3,0 Гц, 1H), 3,76 (дд, 11,6, 8,1 Гц, 1H), 2,78 (спт, 6,7 Гц, 1H), 2,10-2,29 (м, 2H), 1,42-1,58 (м, 1H), 1,13 (д, 7,0 Гц, 6H), 0,99-1,10 (м, 28H); ИЭР-МС:  594,4 [M+H].
48c
Стадия 2. Получение соединения
48b
17a
48c
3
2
4
Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения  (350 мг, 0,59 ммоль) и сульфамата (745 мг, 0,85 ммоль) в безводном THF (20 мл), полученную смесь перемешивали в азотной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее для инициирования реакции добавляли раствор DMAP (347 мг, 2,84 ммоль) в THF (5 мл), предварительно высушенный путем перемешивания в присутствии активированных молекулярных сит. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали фильтрат насыщенным водным NaHCO. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение  (401 мг, выход: 51%) получали в виде желтого твердого вещества после двух раундов очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (цикл 1: градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM, цикл 2: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-10% MeOH в EtOAc).
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
6
H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,00 (с, 1H), 11,44 (с, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,20 (уш. т, 5,4 Гц, 1H), 8,03 (д, 7,3 Гц, 2H), 8,00 (с, 1H), 7,62-7,70 (м, 1H), 7,55 (т, 7,5 Гц, 2H), 7,46 (д, 7,5 Гц, 2H), 7,28-7,39 (м, 6H), 7,18-7,26 (м, 1H), 6,84-6,92 (м, 4H), 6,30 (дд, 17,9, 3,0 Гц, 1H), 4,98-5,04 (м, 1H), 4,84-4,95 (м, 1H), 4,56-4,72 (м, 1H), 4,55 (уш. с, 1H), 4,39 (т, 5,5 Гц, 1H), 3,73-3,93 (м, 3H), 3,71 (с, 3H), 3,70 (с, 3H), 2,88-3,00 (м, 1H), 2,73 (спт, 6,8 Гц, 1H), 2,57-2,68 (м, 1H), 2,20-2,34 (м, 2H), 1,54-1,66 (м, 1H), 1,09 (д, 6,8 Гц, 6H), 0,86-1,07 (м, 28H); ИЭР-МС: m/z 1329,8 [M+2H]/2.
48d
Стадия 3. Получение соединения
48c
48d
2
3
4
Раствор соединения  (1,3 г, 0,98 ммоль) в безводном MeOH (55 мл, высушен на молекулярных ситах) обрабатывали HCl (0,19 мл 2M раствора в EtO, 13,7 ммоль) в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного NaHCO с последующим экстрагированием с помощью DCM. Органическую фазу высушивали безводным MgSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (670 мг, выход: 65%).
1
+
6
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 1,01-1,08 (м, 28H), 1,12 (д, 6,8 Гц, 3H), 1,67-1,75 (м, 1H), 2,20-2,32 (м, 1H), 2,43-2,54 (м, 1H), 2,62 (уш. д, 14,3 Гц, 1H), 2,79 (спт, 6,9 Гц, 1H), 2,85-2,96 (м, 1H), 3,51 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 2H), 3,75-3,83 (м, 1H), 4,39-4,48 (м, 1H), 4,50 (д, 4,2 Гц, 1H), 5,02 (к, 9,6 Гц, 1H), 5,09 (т, 4,5 Гц, 1H), 5,25 (дд, 9,8, 4,1 Гц, 1H), 5,52 (ддд, 52,4, 4,4, 2,6 Гц, 1H), 5,68 (уш. д, 5,9 Гц, 1H), 6,30 (дд, 18,5, 2,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,7 Гц, 2H), 7,61-7,69 (м, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 8,11 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,33 (уш. с, 1H), 12,09 (уш. с, 1H); ИЭР-МС:  1060,7 [M+H].
48e
Стадия 4. Получение соединения
48d
48e
H
N, N,N',N'
N, N,N',N'
m/z
2
+
Раствор соединения  (640 мг, 0,60 ммоль) и 1-тетразола (7,05 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (47,5 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N в течение 2 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (200 мг, 0,66 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 3 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (73 мг, 0,24 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Добавляли пиридин (19,5 мл) и PADS (456 мг, 1,53 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения  (250 мг, выход: 35%). ИЭР-МС:  1138,7 [M+H].
соединения (*R) 43 A (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
48e
соединения (*
R
)
43A (аммонийная соль)
соединения (*
R
) 43A (натриевая соль)
1
3l
+
6
6
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
d
m/z
Соединение  (250 мг, 0,21 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 4 ч), после чего реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и растирали в MeCN. Осадок растворяли в смеси пиридина (1,7 мл) и Et3N (1,5 мл). Добавляли тригидрофторид триэтиламина (141 мкл, 0,84 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (Примечание. Наблюдали выпадение нужного продукта в осадок). Добавляли изопропокситриметилсилан (596 мкл, 3,36 ммоль) и перемешивали в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением в виде одного P-эпимера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получениемв виде рыхлого белого твердого вещества (56 мг, выход: 37,5%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-d, 61 °C) δ м. д. 10,24 (уш. с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 8,07 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,26 (с, 3H), 6,34 (дд, 18,6, 2,2 Гц, 1H), 6,23 (уш. с, 2H), 5,69 (д, 51,8 Гц, 1H), 5,44-5,54 (м, 1H), 5,39 (дддд, 17,3, 9,8, 7,2, 4,7 Гц, 1H), 5,18 (уш. с, 1H), 5,06 (к, 9,8 Гц, 1H), 4,30-4,38 (м, 1H), 4,29 (уш. с, 1H), 3,99-4,10 (м, 1H), 3,86 (дт, 11,0, 4,0 Гц, 1H), 3,63 (дд, 13,2, 4,5 Гц, 1H), 3,36 (дд, 13,6, 3,7 Гц, 1H), 2,45 (дт, 13,5, 10,2 Гц, 1H), 2,20 (м, 9,1, 4,5 Гц, 1H), 1,80-1,91 (м, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. 51,63 (с, 1P); ИЭР-МС:  690,1 [M+H].
Пример 49
Соединение 24
49a
Стадия 1. Получение соединения
N
d
J=
J
J
J=
J=
J
J=
m/z
3j
49a
3
6
1
+
К раствору 2-изобутирил-3'-O-метил-гуанозина  (50 г, 136 ммоль) в безводном пиридине (500 мл) добавляли имидазол (18,52 г, 272 ммоль), трифенилфосфин (53,51 г, 204 ммоль) и йод (51,78 г, 204 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере N2 при 0 ~ 5 °C в течение 3 ч. Раствор впоследствии выпаривали досуха и растворяли остаток в DCM (500 мл). Добавляли насыщенный водный NaHCO и перемешивали смесь в течение 30 мин. Осадок фильтровали и сушили в вакууме с получением соединения  в виде белого порошка (56 г, выход: 86%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,94 (уш. с, 2H), 8,24 (с, 1H), 5,82 (д, 6,5 Гц, 1H), 5,69 (уш. с, 1H), 4,84 (дд, =5,0, 6,5 Гц, 1H), 4,10 (м, 1H), 3,83 (дд, =3,0, 4,5 Гц, 1H), 3,58 (дд, 7,0, 10,5 Гц, 1H), 3,47 (дд, 7,0, 10,5 Гц, 1H), 3,46 (с, 3H), 2,74 (спт, =6,5 Гц, 1H), 1,12 (д, 6,5 Гц, 6H); ИЭР-МС:  477,8 [M+H].
3k
Стадия 2. Получение соединения
49a
3k
2
6
1
+
J=
J=
J
J=
J=
J
J
m/z
Азид натрия (22,48 г, 345,8 ммоль) добавляли к раствору соединения  (55 г, 115,2 ммоль) в безводном DMF (100 мл) и перемешивали в атмосфере N при 85°C в течение 4 ч. Реакционный раствор впоследствии охлаждали до 25 °C, выливали в воду (2 л) и перемешивали в течение 30 мин. Осадок собирали фильтрованием и высушивали с получением соединения (41 г, выход: 91%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ м. д. 12,09 (уш. с, 1H), 11,63 (уш. с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,84 (д, 6,0 Гц, 1H), 5,68 (д, 5,0 Гц, 1H), 4,76 (м, 1H), 4,14 (м, 1H), 3,84 (т, =4,5 Гц, 1H), 3,69 (дд, 8,0, 13,0 Гц, 1H), 3,57 (дд, 4,0, 13,0 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H), 2,77 (спт, =7,0 Гц, 1H), 1,13 (д, =7,0 Гц, 6H); ИЭР-МС: 393,0 [M+H].
49b
Стадия 3. Получение соединения
3k
49b
2
2
4
1
+
d6
J=
J=
J=
J=
m/z
Смесь соединения  (40,00 г, 101,94 ммоль), имидазола (10,41 г, 152,9 ммоль) и TBSCl (18,44 г, 122,4 ммоль) в безводном DMF (100 мл) перемешивали в атмосфере N при 25 °C в течение 17 ч. Реакционный раствор выпаривали досуха при 55°C при пониженном давлении. Осадок растворяли в EtOAc и промывали водой. Органическую фазу высушивали с помощью NaSO, фильтровали и выпаривали фильтрат. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 20-40% EtOAc в гептане) с получением соединения  (45 г, выход: 87%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,08 (уш. с, 1H), 11,59 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 5,87 (д, 7,5 Гц, 1H), 4,86 (дд, 4,5, 7,5 Гц, 1H), 4,17 (м, 1H), 3,84-3,79 (м, 2H), 3,56 (дд, 4,5, 13,0 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 2,77 (спт, 7,0 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,5 Гц, 6H), 0,74 (с, 9H), -0,02 (с, 3H), -0,23 (с, 3H); ИЭР-МС:  507,6 [M+H].
49c
Стадия 4. Получение соединения
49b
49c
2
4
1
+
d6
J=
J
J
J
J
J
J=
m/z
Трифенилфосфин (31,06 г, 118,4 ммоль) добавляли к раствору соединения (40 г, 78,95 ммоль) в THF (400 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 10 мин, после чего добавляли по каплям воду (5,68 г, 315,2 ммоль) в течение 30 мин. Добавляли TsOH (27,19 г, 157,9 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 10 мин. Реакционный раствор выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM (400 мл) и промывали водой (3×400 мл). Органическую фазу высушивали с помощью NaSO, фильтровали и выпаривали. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% MeOH в DCM) с получением соединения в виде тозилированной соли (35 г, выход: 68%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 9,38 (уш. с, 5H), 8,33 (с, 1H), 7,49 (д, 8,5 Гц, 2H), 7,12 (д, =8,5 Гц, 2H), 5,88 (д, =7,0 Гц, 1H), 4,85 (дд, =5,0 и 7,0 Гц, 1H), 4,20 (м, 1H), 3,92 (дд, =2,0 и 4,5 Гц, 1H), 3,46 (с, 3H), 3,31-3,17 (м, 2H), 2,77 (спт, =7,0 Гц, 1H), 2,29 (с, 3H), 1,12 (д, 7,0 Гц, 6H), 0,74 (с, 9H), -0,01 (с, 3H), -0,25 (с, 3H); ИЭР-МС:  481,6 [M+H].
49d
Стадия 5. Получение соединения
49c
49d
3
2
4
2
4
1
+
J=
J=
J
J=
J
J=
J=
Соединение  (соль TsOH, 34 г, 52,1 ммоль), 4-нитрофенол (72,48 г, 521 ммоль) и EtN (63,21 г, 625 ммоль) растворяли в DCM (800 мл) и охлаждали до -78 °C. Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (24,76 г, 104,2 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли по каплям в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревали до 0 °C, разбавляли с помощью DCM (800 мл) и промывали 1 M водным NaHPO (3×800 мл). Органическую фазу высушивали с помощью NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% DCM в MTBE) с получением соединения  (19 г, выход: 53,5%). H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ м. д. 9,49 (уш. с, 1H), 8,32 (д, 9,0 Гц, 2H), 7,63 (с, 1H), 7,47 (д,9,0 Гц, 2H), 5,64 (д, =8,0 Гц, 1H), 4,95 (дд, 5,5, 8,0 Гц, 1H), 4,38 (с, 1H), 3,84 (д, =5,5 Гц, 1H), 3,64 (с, 2H), 3,55 (с, 3H), 2,51 (спт, 7,0 Гц, 1H), 1,18 (д, 7,0 Гц, 3H), 1,12 (д, J=7,0 Гц, 1H), 0,77 (с, 9H), -0,10 (с, 3H), -0,31 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 682,7 [M+H].
49e
Стадия 6. Получение соединения
49d
49d1
49d
49e
6
3
2
3
O
O
Соединение  (18 г, 26,4 ммоль), N-бензоил-5'--(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозин (34,56 г, 52,55 ммоль) и EtN (13,32 г, 131,6 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×72 мл). Каждый раствор высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å путем перемешивания в атмосфере N в течение 4 ч. Далее раствор EtN добавляли к раствору N6-бензоил-5'--(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозина () с последующим добавлением раствора сульфамата  (переносили посредством шприца). Полученную реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 ч Молекулярные сита удаляли фильтрованием, фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт использовали в таком виде на следующей стадии.
49f
Стадия 7. Получение соединения
49e
49f
3
1
+
J=
J=
J
J=
J=
J=
J=
J
m/z
Вышеуказанный неочищенный продукт  растворяли в THF (190 мл) и обрабатывали TBAF (14,57 г, 55,73 ммоль) при 25°C в течение 16 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM, промывали 2% водным раствором уксусной кислоты (3×190 мл) и выпаривали. Неочищенный продукт растворяли в DCM (190 мл) и обрабатывали с использованием DCA (17,97 г, 139,4 ммоль) и водой (2,5 мл, 138,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°C до полного удаления защитных групп и впоследствии промывали 5% водным NaHCO. Остаток, полученный после выпаривания при пониженном давлении, очищали посредством обращенно-фазной хроматографии, используя MeOH и воду в качестве элюента, с получением соединения  (4 г) в виде твердого вещества грязно-белого цвета. H-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ (м. д.) 12,07 (с, 1H), 11,59 (с, 1H), 11,19 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,68 (с, 1H), 8,47 (т, 5,5 Гц, 1H), 8,26 (с, 1H), 8,05 (д, 7,5 Гц, 2H), 7,65 (т, =7,0 Гц, 1H), 7,55 (т, 7,5 Гц, 2H), 6,51 (т, 6,5 Гц, 1H), 5,83 (д, 6,0 Гц, 1H), 5,64 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,27-5,23 (м, 2H), 4,67 (к, 5,5 Гц, 1H), 4,24 (м, 1H), 4,08 (м, 1H), 3,87 (м, 1H), 3,60 (м, 2H), 3,44 (с, 3H), 3,44-3,28 (м, 2H), 3,10 (м, 1H), 2,76 (м, 2H), 1,12 (д, =3,0 Гц, 6H); ИЭР-МС:  784,1 [M+H].
49g
Стадия 8. Получение соединения
49f
49g
H
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
+
Раствор соединения (387 мг, 0,49 ммоль) в безводном MeCN/THF (1 : 1, 24 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч, после чего его переносили в реакционную колбу, добавляли 1-тетразол (4,32 мл, 3-4% раствор в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) с последующим добавлением 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (172 мкл, 0,54 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (78 мкл, 0,25 ммоль), продолжали перемешивание в течение ночи. Добавляли BuOOH (161 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,89 ммоль), перемешивали реакционный раствор в течение еще 90 мин, после чего фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7,5% MeOH в DCM) с получением соединения  (158 мг, выход: 31%). ИЭР-МС: m/z=899,5 [M+H].
соединения 24 (натриевая соль)
Стадия 9. Получение
49g
соединения 24 (натриевая соль)
1
31
+
d
J=
J=
J=
J=
m/z
6
6
Соединение  (158 мг, 0,155 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации. H ЯМР (400 МГц, DMSO-, 81 °C) δ м. д. 10,19 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,19 (уш. с, 1H), 6,92 (с, 1H), 6,33 (дд, 94, 5,6 Гц, 1H), 6,19 (уш. с, 2H), 5,74 (д, 8,8 Гц, 1H), 5,36-5,60 (м, 2H), 4,05-4,24 (м, 3H), 3,82 (д, 4,4 Гц, 1H), 3,53-3,63 (м, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,26 (уш. с, 2H), 3,01-3,11 (м, 1H, сигнал под пиком воды), 2,87 (дд, 14,1, 5,5 Гц, 1H); P ЯМР (126 МГц, DMSO-d) δ м. д. 0,84 (с, 1P); ИЭР-МС:  672,3 [M+H].
Пример 50
50a
Стадия 1. Получение соединения
49f
50a
H
N, N,N',N'
m/z
3
2
4
+
Раствор (1 г, 1,3 ммоль) и 1-тетразола (0,2 г, 3,1 ммоль) в безводном DCM (40 мл) предварительно обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 3 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (0,4 г, 1,3 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 35°C в течение 1 ч. Добавляли ксантан-гидрид (0,22 г, 1,43 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 30 мин. Реакционный раствор разбавляли с помощью DCM и промывали солевым раствором, 5% водным NaHCO и водой. Органическую фазу сушили с помощью NaSO и фильтровали. Фильтрат выпаривали досуха при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 5-10% MeOH в DCM) с получением 600 мг смеси соединения и продукта удаления цианоэтильных защитных групп ИЭР-МС:  916,0 [M+H].
(*
R
) 19A (натриевая соль) и соединения (*
S
) 19B (натриевая соль)
Стадия 2. Получение соединения
50a
50a
соединения (*
R
) 19A (аммонийная соль)
соединения (*
S
) 19B (аммонийная соль)
Вышеуказанный продукт  перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (13 мл) при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали обращенно-фазной колонкой C18 с использованием MeOH и воды в качестве подвижной фазы с получением смеси P-эпимеров (60 мг, выход: 7% из соединения ). Изомеры разделяли посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением в виде первого элюируемого изомера и в виде второго элюируемого изомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой.
Соединение (*
R
) 19A (натриевая соль)
1
+
d
J=
J=
J=
J=
m/z
6
H ЯМР (600 МГц, DMSO-, 81 °C) δ м. д. 9,17 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,96 (уш. с, 1H), 6,97 (с, 2H), 6,38 (дд, 9,1, 5,4 Гц, 1H), 6,20 (уш. с, 2H), 5,77 (д, 8,9 Гц, 2H), 5,51 (уш. с, 1H), 4,44-4,51 (м, 1H), 4,26 (уш. с, 1H), 4,18 (уш. с, 1H), 3,78 (д, 4,6 Гц, 1H), 3,56-3,62 (м, 1H), 3,53 (с, 3H), 3,20-3,50 (м, 3H), 2,90 (дд, 14,5, 5,4 Гц, 1H); ИЭР-МС:  687,1 [M+H].
Соединение (*
S
) 19B (натриевая соль)
1
31
+
6
6
H ЯМР (600 МГц, DMSO-d, 81 °C) δ м. д. 10,03 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,00 (уш. с, 1H), 6,97 (уш. с, 2H), 6,38 (дд, J=9,4, 5,4 Гц, 1H), 6,26 (уш. с, 2H), 5,78 (д, J=8,9 Гц, 1H), 5,50 (уш. с, 1H), 5,48 (уш. с, 1H), 4,22-4,34 (м, 1H), 4,15 (уш. с, 1H), 4,09 (к, J=11,2 Гц, 1H), 3,85 (д, J=4,5 Гц, 1H), 3,60-3,71 (м, 1H), 3,55 (с, 3H), 3,41-3,48 (м, 1H), 3,34-3,40 (м, 1H), 3,23-3,34 (м, 1H), 2,87 (дд, J=14,5, 5,4 Гц, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. 55,50 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 678,1,1 [M+H].
Пример 51
51a
Стадия 1. Получение соединения
N
d
m/z
1a
51a
4
2
4
6
1
+
Имидазол (3,94 г, 57 ммоль) и TBSCl (7,18 г, 470 ммоль) добавляли к раствору 6-бензоил-2'-дезокси-2'-фтораденозина  [CAS 136834-20-3] (12,7 г, 34,0 ммоль) в DMF (105 мл) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (2 ч). Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали насыщенным водным NHCl и водой. Органическую фазу сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (12 г, выход: 71%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д. -0,04 (с, 3H), -0,02 (с, 3H), 0,82 (с, 9H), 3,81 (дд, J=11,7, 4,1 Гц, 1H), 3,99 (м, 2H), 4,62 (ддд, J=21,7, 11,7, 6,9 Гц, 1H), 5,54 (дк, J=52,8, 2,0 Гц, 1H), 5,77 (м, 1H), 6,38 (дд, J=18,6, 1,4 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,04 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,57 (с, 1H), 8,75 (с, 1H); ИЭР-МС:  488,0 [M+H].
51c
Стадия 2. Получение соединения
51a
51b
51a
51b
51c
3
4
2
4
6
1
+
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
В реакционную колбу помещали DMAP (2,03 г, 16,6 ммоль), безводный DCM (40 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения (1,6 г, 3,3 ммоль) и раствор сульфамата  (2,5 г, 3,66 ммоль) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч), при этом каждый был в безводном DCM (2×40 мл). Оба раствора (соединение  и сульфамат  соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (1,8 г, выход: 53%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д. -0,25 (с, 3H), -0,050 (с, 3H), -0,015 (д, 2,8 Гц, 6H), 0,73 (с, 9H), 0,79 (с, 9H), 1,11 (дд, 6,9, 1,4 Гц, 6H), 2,75 (м, 1H), 3,40 (к, 6,9 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,48 (к, 6,9 Гц, 1H), 3,85 (дд, 11,7, 3,4 Гц, 2H), 3,98 (дд, J=12,4, 2,1 Гц, 1H), 4,13 (м, 1H), 4,33 (т, 3,4 Гц, 1H), 4,71 (дд, 6,9, 4,8 Гц, 1H), 5,49 (дк, =17,6, 3,9 Гц, 1H), 5,86 (д, 6,9 Гц, 1H), 6,51 (дд, 18,6, 2,1 Гц, 1H), 7,56 (т, 7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, 7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 8,30 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,71 (т, 6,2 Гц, 1H), 8,75 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 11,65 (с, 1H), 12,08 (с, 1H); ИЭР-МС:  1030,4 [M+H].
33a
Стадия 3. Получение соединения
3
3
6
51c
33a
1
+
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
EtN (12,1 мл, 87,37 ммоль) и EtN·3HF (2,84 мл, 17,4 ммоль) добавляли к раствору соединения (1,8 г, 1,74 ммоль) в пиридине (34 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (12,4 мл, 69,9 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (1,2 г, выход: 86%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д. 1,11 (к, 3,2 Гц, 6H), 2,75 (м, 1H), 3,40 (с, 1H), 3,43 (с, 3H), 3,64 (д, 12,4 Гц, 1H), 3,80 (д, 12,4 Гц, 1H), 3,86 (т, 4,5 Гц, 1H), 4,07 (м, 1H), 4,32 (т, 3,1 Гц, 1H), 4,67 (к, 5,7 Гц, 1H), 5,36 (тд, 10,7, 4,6 Гц, 2H), 5,66 (д, 6,2 Гц, 1H), 5,88 (м, 2H), 6,49 (дд, J=16,5, 2,8 Гц, 1H), 7,56 (т, 7,9 Гц, 2H), 7,66 (т, 7,6 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 8,25 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,74 (д, 32,4 Гц, 2H), 11,27 (с, 1H), 11,62 (с, 1H), 12,08 (с, 1H); ИЭР-МС:  802,1 [M+H].
51d
Стадия 4. Получение соединения
33a
51d
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
m/z
+
Раствор соединения  (500 мг, 0,624 ммоль) и 1H-тетразола (5,46 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (25 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (206 мг, 0,686 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (94 мг+38 мг, 0,312 ммоль+0,125 ммоль) двумя порциями с интервалом 5 ч, продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли BuOOH (227 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,25 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат концентрировали и очищали полученный остаток посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7,5% MeOH в DCM) с получением соединения  (110 мг, выход: 19%). ИЭР-МС:  917,5 [M+H].
соединения 22 (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
51d
соединения 22 (аммонийная соль)
соединения 22 (натриевая соль)
1
31
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
d
m/z
6
6
Соединение  (110 мг, 0,12 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением. Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (52 мг, выход: 60%). H ЯМР (600 МГц, DMSO-, 60 °C) δ м. д. 10,67 (уш. с, 1H), 9,13 (уш. с, 1H), 8,37 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,99 (уш. с, 1H), 7,24 (уш. с, 2H), 6,33 (дд, 15,9, 3,3 Гц, 1H), 6,29 (уш. с, 2H), 5,95 (уш. д, 50,9 Гц, 1H), 5,76 (д, 8,9 Гц, 1H), 5,59 (уш. с, 1H), 5,18-5,25 (м, 1H), 4,47 (уш. с, 1H), 4,20 (дт, 11,9, 6,1 Гц, 1H), 4,14 (уш. с, 1H), 3,94 (уш. д, 4,4 Гц, 1H), 3,75-3,81 (м, 1H), 3,52 (c, 3H), 3,47-3,55 (м, 1H), 3,42 (с, 1H); P ЯМР (162 МГц, DMSO-) δ м. д. -1,28 (с, 1P); ИЭР-МС:  690,3 [M+H].
Пример 52
52a
Стадия 1. Получение соединения
41d
52a
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
6
Карбонат калия (0,32 г, 2,3 ммоль) добавляли к раствору соединения (0,55 г, 1,8 ммоль) в безводном DMF (6 мл). Полученную суспензию охлаждали до 0 °C, после чего добавляли метан йода (0,15 мл, 2,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-4% MeOH в DCM) с получением соединения в виде белого порошка (0,45 г, выход: 79%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 8,25 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 6,02 (д, 5,5 Гц, 1H), 5,43 (д, 6,9 Гц, 1H), 5,09 (т, 5,5 Гц, 1H), 4,39 (к, 6,0 Гц, 1H), 3,97 (к, 3,4 Гц, 1H), 3,73-3,80 (м, 1H), 3,57-3,64 (м, 1H), 3,50-3,55 (м, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,40 (с, 3H); ИЭР-МС:  314 [M+H].
52b
Стадия 2. Получение соединения
52a
52b
2
4
6
1
+
d
J=
J
J
J
J=
J=
J
J=
J
J=
Раствор соединения  (0,85 г, 2,7 ммоль) в безводном пиридине (12,7 мл), к которому добавляли DMAP (0,16 г, 1,3 ммоль) и DMTrCl (1,46 г, 4,3 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили метанолом (9 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-0,2% MeOH в DCM) с получением соединения в виде пены грязно-белого цвета (1,4 г, выход: 85%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д.: 8,24 (с, 1H), 7,37 (д,7,6 Гц, 2H), 7,29 (т, =7,6 Гц, 2H), 7,22 (м, 6H), 6,87 (дд, =9,0, 2,1 Гц, 4H), 6,04 (д, =4,8 Гц, 1H), 5,53 (д, 6,2 Гц, 1H), 4,47 (к, 5,5 Гц, 1H), 4,05 (к, =4,4 Гц, 1H), 3,85 (т, 4,8 Гц, 1H), 3,72 (д, =9,6 Гц, 6H), 3,45 (с, 3H), 3,35 (с, 3H), 3,20 (д, 4,8 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 638,2 [M+Na].
52c
Стадия 3. Получение соединения
52b
17a
52b
17a
52c
2
3
4
2
4
Каждое из соединения  (0,9 г, 1,46 ммоль), сульфамата  (1,53 г, 1,75 ммоль) и DMAP (0,9 г, 7,31 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×25,0 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N в течение по меньшей мере 2 ч. К этому раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения в DCM и раствор сульфамата  в DCM. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl. Объединенные органические фазы высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-0,4% MeOH в DCM) с получением соединения (0,38 г, выход: 19%) и более полярной фракции (0,8 г), содержащий продукт с удаленной одной или двумя защитными группами DMTr.
52d
Стадия 4. Получение соединения
52c
52d
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
6
Раствор соединения  (0,38 г, 0,28 ммоль) в DCM (10,6 мл), к которому добавляли DCA (0,9 мл 10% в DCM, 1,1 ммоль) и воду (30 мкл, 1,4 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,1 мл, 1,4 ммоль) и нескольких капель метанола и концентрировали при пониженном давлении. Сходный протокол реакции применяли для вышеуказанных 0,8 г полярной фракции. Остаток обеих реакций объединяли для очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде белого порошка (0,4 г, выход: 62%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 11,27 (уш. с, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,54 (уш. т, 5,9 Гц, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,06 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,64-7,70 (м, 1H), 7,52-7,59 (м, 2H), 7,36 (уш. с, 1H), 6,36 (дд, 19,3, 2,1 Гц, 1H), 6,28 (д, 6,2 Гц, 1H), 5,90 (уш. с, 1H), 5,58 (уш. д, 52,7 Гц, 1H), 5,22 (т, 5,5 Гц, 1H), 4,52-4,64 (м, 1H), 4,07-4,14 (м, 2H), 3,95-4,01 (м, 1H), 3,64 (дд, 12,4, 3,4 Гц, 1H), 3,56 (дд, 11,7, 2,8 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H), 3,38 (с, 3H), 3,12-3,24 (м, 2H); ИЭР-МС:  748,5 [M+H].
52e
Стадия 5. Получение соединения
52d
52e
H
N, N,N',N'
t
m/z
2
2
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,134 ммоль) и 1-тетразола (2,38 мл 0,45 M раствора в MeCN, 1,14 ммоль) в смеси безводного MeCN/DMF (5 мл, 4 : 1) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 10 мин, после чего добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (80 мг, 0,27 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) (Примечание. MeCN перед работой перегоняли над CaH перед применением). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Далее добавляли раствор BuOOH (126 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,67 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM, фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения . ИЭР-МС:  863,1 [M+H].
соединения 55 (натриевая соль)
Стадия 6. Получение
52e
соединения 55 (аммонийная соль)
52d
1
19
31
+
2
2
2
m/z
Вышеуказанное соединение перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси вода/MeCN (4 : 1), промывали DCM и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением(25 мг, выход: 26% из ). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором на колонке, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8. H ЯМР (400 МГц, DO) δ 8,13 (уш. с, 1H). 8,00 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 7,42 (уш. с, 1H), 7,06 (уш. с, 1H), 6,42-6,33 (м, 2H), 5,41 (уш. с, 1H), 5,35-5,16 (м, 1H), 5,05-4,88 (м, 1H), 4,65 (уш. с, 1H), 4,53-4,40 (м, 2H), 4,33-4,20 (м, 2H), 3,88-3,76 (м, 1H), 3,60 (с, 4H), 3,48 (с, 3H); F ЯМР (376 МГц, DO) δ -165,090 (с, 1F), -196,605 (с, 1F); P ЯМР (162 МГц, DO) δ -1,899 (с, 1P); ИЭР-МС:  706,0 [M+H].
Пример 53
53b
Стадия 1. Получение соединения
53a
53b
O
O
O
d
J=
J=
m/z
2
4
6
1
+
Реакционную колбу, в которую помещали метил 5-(диэтоксиметил)-1H-имидазол-4-карбоксилат  [CAS 85109-99-5] (3,24 г, 14,1 ммоль) и безводный MeCN (120 мл) охлаждали на ледяной бане. Добавили гидрид натрия (1,23 г 55% дисперсии в минеральном масле, 28,5 ммоль), полученную смесь перемешивали при кт в течение 45 мин. В отдельной колбе йодтриметилсилан (3,23 мл, 22,6 ммоль) добавляли к раствору 1,2-ди--ацетил-3--метил-5--бензоил-D-рибофуранозы ([10300-21-7], 5 г, 14,1 ммоль) в безводном толуоле (50 мл). Полученный раствор перемешивали при кт в течение 20 мин, после чего медленно переносили в вышеуказанную реакционную колбу, охлажденную на ледяной бане. Полученную реакционную смесь перемешивали при 50°C до полного превращения (прибл. 3,5 ч). После охлаждения до кт добавляли EtOAc. Органическую фазу промывали водой и солевым раствором, высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-40% EtOAc в гексане) с получением соединения  в виде бесцветной камеди (4,3 г, выход: 58%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д. 8,0 (м, 3H), 7,70 (т, 7,6 Гц, 1H,), 7,56 (м, 2H), 6,36 (м, 1H), 6,23 (с, 1H), 5,49 (дд, 4,1, 2,8 Гц, 1H), 4,63 (м, 2H), 4,26 (м, 2H), 3,78 (с, 3H), 3,68 (м, 1H), 3,47 (м, 1H), 2,11 (с, 2H), 1,11 (м, 6H); ИЭР-МС:  521,2 [M+H].
53c
Стадия 2. Получение соединения
53b
58c
2
4
6
1
d
Раствор соединения (4,3 г, 8,25 ммоль) в 80% водном растворе AcOH (50 мл) перемешивали при кт в течение 16 ч. Далее реакционный раствор выливали в ледяную воду и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали водой, высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-30% EtOAc в гексане) с получением соединения  в виде белого твердого вещества (1,7 г, выход: 52%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-), δ м. д. -10,27 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,00 (м, 2H), 7,70 (м, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,40 (д, J=2,1 Гц, 1H), 5,54 (к, J=2,3 Гц, 1H), 4,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 4,34 (м, 1H), 4,19 (дд, J =7,9, 5,2 Гц, 1H), 3,87 (с, 1H).
53d
Стадия 3. Получение соединения
53d
1
+
6
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
Гидразин (1 M в THF, 362 мл, 362 ммоль) добавляли к раствору соединения 53c (8,1 г, 18,12 ммоль) в безводном EtOH (200 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником, при этом позволяли THF полностью испариться (реакция идет очень медленно в присутствии THF). После завершения реакции (прибл. 72 ч) растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM). Полученный продукт растворяли в воде и доводили pH до 5 добавлением водородной формы смолы Amberlite IR120. Смолу удаляли фильтрацией и промывали водой, фильтрат выпаривали и высушивали в высоком вакууме с получением соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (3,5 г, 68%). H ЯМР (500 МГц DMSO-d) δ м. д. 12,75 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,54 (с, 1H), 5,92 (д, 6,9 Гц, 1H), 5,75 (с, 1H), 4,39 (т, 5,9 Гц, 1H), 4,11 (к, 3,0 Гц, 1H), 3,83 (к, 2,8 Гц, 2H), 3,69 (дд,12,1, 3,1 Гц, 2H), 3,64 (дд, J=12,1, 3,1 Гц, 2H), 3,42 (с, 3H), 3,16 (с, 1H); ИЭР-МС:  283,1 [M+H].
53e
Стадия 4. Получение соединения
53d
53e
1
+
6
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
DMAP (0,75 г, 6, 18 ммоль) и DMTrCl (6,6 г, 19,7 ммоль) (порциями) добавляли к раствору соединения  (3,5 г, 12,3 ммоль, высушен выпариванием с безводным толуолом и безводным пиридином) в безводном пиридине (52 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч, после чего ее гасили добавлением метанола (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде бледно-розовой пены (4,8 г, выход: 67%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-d,) δ м. д.: 12,76 (с, 1H), 8,50 (д, 16,5 Гц, 2H), 7,28 (м, 4H), 7,20 (м, 5H), 6,84 (д, 9,0 Гц, 4H), 5,99 (д, 4,8 Гц, 1H), 5,82 (д, 5,5 Гц, 1H), 4,67 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,19 (к, 4,1 Гц, 1H), 3,94 (т, 14,8 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,23 (к, 3,4 Гц, 2H); ИЭР-МС:  585,3 [M+H].
53f
Стадия 5. Получение соединения
53e
17a
53e
17a
53f
2
3
4
2
4
m/z
+
Соединение  (0,53 г, 0,9 ммоль), сульфамат  (0,876 г, 1,08 ммоль) и DMAP (0,55 г, 4,5 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20 мл). Каждый раствор высушивали с помощью 3Å активированных молекулярных сит путем перемешивания в атмосфере N в течение по меньшей мере 2 ч. К раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения  и раствор сульфамата . Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде бледно-желтой пены (0,45 г, выход: 38%). ИЭР-МС:  1321,5 [M+H].
53g
Стадия 5. Получение соединения
53f
53g
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
6
Раствор соединения (0,75 г, 0,52 ммоль) в DCM (20 мл), к которому добавляли DCA (1,75 мл 10% раствора в DCM, 2,1 ммоль) и воду (47 мл, 2,6 ммоль) перемешивали при кт до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,2 мл, 2,6 ммоль) и нескольких капель метанола и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде порошка грязно-белого цвета (0,33 г, выход: 82%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,77 (с, 1H), 11,24 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,60-8,64 (м, 3H), 8,60 (с, 1H), 8,04 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,63-7,67 (м, 1H), 7,53-7,58 (м, 2H), 6,34 (д, 4,8 Гц, 1H), 6,37 (дд, 20,0, 2,1 Гц, 1H), 5,89 (д, 6,2 Гц, 1H), 5,59 (ддд, 52,3, 4,8, 2,1 Гц, 1H), 5,46 (т, 4,8 Гц, 1H), 5,18 (т, 4,8 Гц, 1H), 4,56-4,65 (м, 1H), 4,13-4,18 (м, 2H), 4,00 (тд, 7,4, 3,1 Гц, 1H), 3,76 (с, 1H), 3,60-3,69 (м, 1H), 3,36 (с, 3H), 3,26-3,31 (м, 1H), 3,15-3,23 (м, 1H); ИЭР-МС:  717,3 [M+H].
53h
Стадия 6. Получение соединения
2
Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH перед применением.
53g
53h
H
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
m/z=
2
2
+
Раствор соединения  (100 мг, 0,14 ммоль) и 1-тетразола (2,48 мл 0,45 M раствор в MeCN, 1,12 ммоль) в безводном DMF (7 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 30 мин. Впоследствии по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (75 мг, 0,25 ммоль) в безводном THF (1,0 мл). После перемешивания смеси при кт в течение 3 ч добавляли дополнительное количество раствора 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (21 мг, 0,07 ммоль) в безводном THF (0,5 мл). Полученную суспензию дополнительно перемешивали в течение 16 ч. Добавляли BuOOH (140 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,70 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение еще 30 мин. Смесь частично концентрировали при пониженном давлении. Фильтровали остаток и выливали фильтрат при перемешивании в HO (20 мл) с получением суспензии. Твердое вещество собирали, растворяли в DCM/MeOH (3 мл/1 мл) и очищали посредством препаративной тонкослойной хроматографии (DCM : MeOH=8 : 1). Нужные фракции собирали и растирали в MeCN/DMSO (10 мл/2 мл) в течение 2 ч с получением суспензии. После фильтрования фильтрат выпаривали досуха с получением неочищенного соединения  в виде раствора в DMSO (2 мл), который напрямую использовали в следующей стадии. ИЭР-МС: 832,1 [M+H].
соединения 27 (натриевая соль)
Стадия 7. Получение
53h
соединения 27 (аммонийная соль)
2
4
3
1
19
31
+
J=
m/z
Предыдущий раствор соединения  в DMSO (2 мл) обрабатывали с помощью MeNH (30% в EtOH, 3 мл) и перемешивали при кт в течение 2 ч. Смесь выпаривали досуха, объединяли с другой партией и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NHHCO) (A)-ACN (B); начало B 0, Конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7, 100% B; время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением после лиофилизации  (5 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,63 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,24-6,33 (м, 2H), 5,11-5,34 (м, 3H), 4,55 (уш. с, 1H), 4,28-4,42 (м, 2H), 4,23 (уш. с, 1H), 4,08-4,20 (м, 1H), 3,61 (уш. д, 12,96 Гц, 1H), 3,44 (с, 3H), 3,33 (уш. д, J=13,69 Гц, 1H); F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -198,29 - -197,44 (м, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,34 (с, 1P); ИЭР-МС: =6153 [M+H].
Превращение в натриевую соль
2
2
4
2
2
4
2
2
4
2
2
2
2
2
2
соединение 27 (аммонийная соль)
соединения 27 (натриевая соль)
1
19
31
+
J=
J=
J
m/z
Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (10 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой HO (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% HSO в деионизированной воде HO (30 мл), смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% HSO в деионизированной HO и промывали 15% HSO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной HO до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной HO (30 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в HO (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной HO до нейтральной реакции, (5 мг) растворяли в деионизированной HO (3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной HO. Нужные фракции объединяли и лиофилизировали с получением (2,1 мг) в виде белого твердого вещества. H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,75 (с, 1H), 8,52 (уш. с, 1H), 7,84-8,36 (м, 1H), 6,65-7,24 (м, 1H), 6,38 (уш. д, 19,07 Гц, 2H), 5,28-5,46 (м, 1H), 5,26 (уш. дд, 8,53, 4,77 Гц, 1H), 4,81-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. дд, =10,54, 7,78 Гц, 2H), 4,19-4,34 (м, 2H), 3,58-3,75 (м, 1H), 3,54 (с, 3H), 3,30-3,48 (м, 1H); F ЯМР (377 МГц, D2O) δ м. д. -197,75 (уш. с, 1F); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,15 (уш. с, 1 P); ИЭР-МС: =675,2 [M+H].
Пример 54
54b
Стадия 1. Получение соединения
54a
3o
54b
54a.
2
2
3
2
4
m/z
+
Соединение (1 г, 1,5 ммоль) и сульфамат  (1,3 г, 1,5 ммоль) растворяли в DCE (10 мл), добавляли молекулярные сита 4Å (порошок) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере N при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь DMAP (913 мг, 7,5 ммоль) и порошка молекулярных сит 4Å (0,5 г) в DCE (2 мл) перемешивали в атмосфере N при комнатной температуре в течение 6 ч и впоследствии добавляли к вышеуказанной смеси. (Примечание. DCE высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å до применения). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали с помощью NaSO, фильтровали и выпаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-2% MeOH в DCM) с получением 1,8 г (выход: 83%) смеси соединения  и его 2’-связанного региоизомера (структура не показана), где последний получен в результате частичного 2'→3’ TBS-перехода соединения ИЭР-МС:  1097,5 [M-DMTr+H].
54c
Стадия 2. Получение соединения
2
4
6
54c
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J
J
J
J=
Вышеуказанную смесь продуктов (2,6 г, 1,84 ммоль) растворяли в DCM (30 мл), к которому добавляли DCA (610 мкл, 7,40 ммоль) и воду (330 мкл, 1,84 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч), после чего ее гасили добавлением пиридина (1,5 мл, 18,4 ммоль) в метаноле (4 мл) и затем промывали водой. Органический слой сушили безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: LEG (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением очищенного соединения  в виде белого твердого вещества (600 мг, выход: 40%). H ЯМР (400 МГц, DMSO-) δ м. д. 12,09 (уш. с, 1H), 11,62 (уш. с, 1H), 9,26 (с, 1H), 8,99 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,45 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 6,10 (д, 6,0 Гц, 1H), 5,82 (д, 6,0 Гц, 1H), 5,71 (д, 6,3 Гц, 1H), 5,48 (уш. с, 1H), 4,91-5,00 (м, 2H), 4,72 (к,5,8 Гц, 1H), 4,29-4,40 (м, 1H), 4,03-4,12 (м, 1H), 3,87 (уш. т,4,3 Гц, 1H), 3,60-3,74 (м, 2H), 3,44 (с, 3H), 3,35-3,42 (м, 1H), 3,29 (дд,  =14,1, 7,8 Гц, 1H), 2,75 (спт,  =6,8 Гц, 1H), 1,11 (д,  =6,8 Гц, 3H), 1,09 (д, 6,9 Гц, 3H), 0,63 (с, 9H), -0,08 (с, 3H), -0,34 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=795,4 [M+H].
54d
Стадия 3. Получение соединения
54c
54d
2
2
2
4
N, N,N',N'
t
m/z
+
Раствор соединения  (400 мг, 0,5 ммоль) и 1H-тетразола (8,9 мл 0,45 M раствора в MeCN, 4,03 ммоль) в смеси безводного THF (48 мл) и безводного DMF (4 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 30 мин, после чего по каплям добавляли 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (273 мг, 0,91 ммоль) в безводном THF (4 мл) в течение 10 мин. (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Далее добавляли раствор BuOOH (500 мкл 5 ~ 6 M раствор в декане, 2,5 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и концентрировали. Осадок растворяли в DCM и промывали водой. Объединенный органический слой сушили на NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-10% MeOH в DCM) с получением соединения  (130 мг, выход 23%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС:  910,5 [M+H].
соединения 3 (аммонийная соль)
Стадия 3. Получение
54d
соединения 3 (аммонийная соль)
3
1
31
+
J=
J=
m/z
Соединение  (58 мг) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (2 мл), после чего добавляли EtN (30 мг, 0,27 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (21,7 мг, 0,13 ммоль), полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 1 дня. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли изопропокситриэтилсилан (0,1 мл, 0,54 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением (4 мг). H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 9,26 (с, 1H), 9,02 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 6,40 (д, 1,5 Гц, 1H), 6,01 (д, 8,5 Гц, 1H), 5,39 (тд, J=9,1, 5,3 Гц, 1H), 5,25 (дд, J=7,9, 4,5 Гц, 1H), 5,06-5,11 (м, 1H), 4,55 (с, 1H), 4,48 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,09-4,18 (м, 2H), 3,86 (уш. д, J=14,6 Гц, 1H), 3,72 (уш. д, J=14,3 Гц, 1H), 3,65 (с, 3H); P ЯМР (162 МГц, D2O) δ ч/млн -2,22 (с, 1P); ИЭР-МС:  673,2 [M+H].
Пример 55
55b
Стадия 1. Получение соединения
55a
55b
2
4
6
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J
J
J
J
Раствор 3'-дезокси-3’-фторинозина  [CAS 117517-20-1] (2,2 г, 8,14 ммоль) в безводном пиридине (33 мл), к которому добавляли DMAP (0,49 г, 4,0 ммоль) и DMTrCl (4,4 г, 13 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (3,3 г, выход: 71%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 8,22 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,93 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,36 (д, 8,3 Гц, 2H), 7,28 (т, 7,6 Гц, 2H), 7,23 (м, 5H), 6,86 (дд, 8,3, 6,2 Гц, 4H), 5,92 (д, 7,6 Гц, 1H), 5,14 (дд,  =54,1, 4,5 Гц, 1H), 5,02 (дк,  =23,2, 3,9 Гц, 1H), 4,35 (дт,  =25,9, 4,3 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,29 (дк,  =37,5, 5,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 572,0 [M+H].
55c
Стадия 2. Получение соединения
55b
17a
55b
17a
55c
3
4
2
4
6
1
+
d
J=
J=
J=
J=
J=
J=
m/z
Каждое из соединения  (0,66 г, 1,15 ммоль), сульфамата  (1,21 г, 1,38 ммоль) и DMAP (0,704 г, 5,76 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в инертной атмосфере в течение по меньшей мере 2 ч. Далее растворы соединения  и сульфамата последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат последовательно промывали насыщенным водным NaHCO и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде пены грязно-белого цвета (0,475 г, выход: 31%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,47 (c, 1H), 11,23 (c, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,48 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,03 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,84 (с, 1H), 7,65 (т, 7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, 7,6 Гц, 2H), 7,48 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,36 (к, 4,8 Гц, 4H), 7,32 (м, 4H), 7,23 (т, 7,6 Гц, 4H), 7,19 (т, J=7,9 Гц, 5H), 6,90 (дд, J=9,0, 6,9 Гц, 4H), 6,81 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 4H), 6,34 (м, 1H), 6,23 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,78 (м, 2H), 5,50 (д, J=53,7 Гц, 1H), 4,72 (м, 2H), 4,43 (д, J =24,1 Гц, 1H), 4,01 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,74 (с, 1H), 3,70 (т, J=2,4 Гц, 12H), 3,25 (дд, J=10,7, 3,8 Гц, 1H), 2,99 (д, J=13,1 Гц, 1H), 2,70 (дд, J=14,5, 9,0 Гц, 1H). ИЭР-МС:  1310,0 [M+H].
55d
Стадия 3. Получение соединения
55c
55d
1
+
d
6
Раствор соединения  (0,453 г, 0,34 ммоль) в DCM (12,6 мл), к которому добавляли DCA (1,14 мл 10% раствора в DCM, 1,38 ммоль) и воду (31 мкл, 1,72 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,14 мл, 1,72 ммоль) и нескольких капель метанола. Полученную суспензию перемешивали в течение 20 мин, фильтровали и сушили с получением соединения  (0,21 г, выход: 86%). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,5 (д, J=3,4 Гц, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,4 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,32 (дд, J=20,0, 2,1 Гц, 1H), 6,21 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,85 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,60 (м, 1H), 5,49 (м, 3H), 5,34 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,40 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,0 Гц, 1H), 3,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 3,17 (т, J=6,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z=706,0 [M+H].
55e
Стадия 4. Получение соединения
55d
55e
N, N,N',N'
N, N,N',N'
t
+
Раствор соединения  (260 мг, 0,37 ммоль) и 1H-тетразола (2,15 мл 3-4% в MeCN, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) в DMF/THF (1 : 2, 30 мл, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли фосфородиамидит 2-цианоэтил--тетра(изопропила) (129 мкл, 0,41 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидита (23 мкл, 0,074 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли BuQOH (134 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,74 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат тщательно промывали водой, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения  (20 мг, выход: 7%). ИЭР-МС: m/z=820,4 [M+H].
соединения 39 (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
55e
соединения 39 (аммонийная соль)
соединения 39
(натриевая соль)
31
+
6
Соединение (20 мг, 0,024 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (~ 1 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением . Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением  в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13,5 мг, выход: 80%). P ЯМР (162 МГц, DMSO-d) δ м. д. -2,06 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=663,3 [M+H].
Пример 56
56b
Стадия 1. Получение соединения
O
d
m/z
56a
56b
2
4
6
1
+
Раствор 3’-(-метил)инозина (, 1,5 г, 5,31 ммоль, CAS №75479-64-0) в безводном пиридине (30 мл), к которому добавляли DMAP (0,32 г, 2,65 ммоль) и DMTrCl (2,69 г, 7,97 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой промывали водой, высушивали безводным NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2,5% MeOH в DCM) с получением соединения  в виде бледно-коричневой пены (2,19 г, выход: 71%). H ЯМР (500 МГц, DMSO-) δ м. д.: 12,35 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,34 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,27 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,21 (м, 5H), 6,84 (м, 4H), 5,89 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,62 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,78 (к, J=5,3 Гц, 1H), 4,13 (к, J=4,6 Гц, 1H), 3,99 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,22 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС:  585 [M+H].
56d
Стадия 2. Получение соединения
56b
56c
56b
56c
56d
3
4
2
4
6
1
+
d
m/z
В реакционную колбу помещали DMAP (0,76 г, 6,2 ммоль), безводный DCM (25 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения (0,73 г, 1,24 ммоль) и раствор соединения  (1,0 г, 1,49 ммоль) высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч), при этом каждый был в безводном DCM (2×25 мл). Оба раствора (соединения  и соединения  соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO, солевым раствором и насыщенным водным NHCl, высушивали над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения (0,54 мг, выход: 39%). H ЯМР (500 МГц DMSO -) δ м. д.: 8,72 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,09 (м, 1H), 8,05 (м, 2H), 7,99 (с, 1H), 7,65 (м, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,24 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,18 (м, 5H), 6,87 (д, J=9,0 Гц, 1H), 6,81 (дд, J=9,0, 4,1 Гц, 4H), 6,46 (м, 1H), 6,24 (д, J=3,4 Гц, 1H), 5,66 (м, 1H), 4,63 (т, J=2,8 Гц, 1H), 4,54 (м, 1H), 4,11 (м, 1H), 3,93 (м, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,32 (д, J=8,3 Гц, 13H), 3,26 (м, 3H), 3,19 (м, 3H), 2,99 (м, 1H), 2,58 (м, 4H), 2,35 (м, 1H), 0,89 (с, 9H), 0,11 (с, 6H); ИЭР-МС:  1116 [M+H].
56e
Стадия 3. Получение соединения
3
3
6
56d
56e
1
+
d
m/z
EtN (2,65 мл, 19,0 ммоль) и EtN·3HF (0,31 мл, 1,9 ммоль) добавляли к раствору соединения  (0,53 г, 0,47 ммоль) в пиридине (9,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (1,34 мл, 7,6 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Посредством концентрирования при пониженном давлении получали неочищенное соединение со снятой 5’-защитой, которое повторно растворяли в DCM (13,3 мл). Добавляли воду (40 мкл, 2,37 ммоль) и дихлоруксусную кислоту (1,57 мл 10% раствора в DCM, 1,9 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (полное превращение), после чего ее гасили добавлением пиридина (200 мкл, 2,37 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-9% MeOH в DCM) с получением соединения (220 мг, выход: 66,6% за две стадии). H ЯМР (500 МГц DMSO-) δ м. д.: 12,43 (уш. с, 1H), 11,20 (уш. с, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 8,57 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,04 (м, 3H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,43 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,17 (д, J=5,5 Гц, 1H), 5,45 (м, 2H), 5,26 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,38 (м, 1H), 4,23 (т, J=4,1 Гц, 1H), 4,12 (к, J=3,7 Гц, 1H), 3,84 (м, 1H), 3,68 (м, 1H), 3,57 (м, 1H), 3,40 (с, 3H), 3,12 (м, 2H), 2,84 (м, 1H), 2,33 (м, 1H); ИЭР-МС:  699 [M+H].
56f
Стадия 4. Получение соединения
56e
56f
H
N, N,N',N'
t
m/z
2
2
+
Раствор соединения  (200 мг, 0,286 ммоль) и 1-тетразола (5,09 мл 0,45 M раствор в MeCN, 0,99 ммоль, высушен молекулярных ситах 4Å до применения) в безводном MeCN/THF (1:2,9 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N в течение 30 мин, после чего добавляли по каплям 2-цианоэтил--тетра(изопропил)фосфородиамидит (155 мг, 0,52 ммоль) в безводном MeCN (2 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли раствор BuOOH (286 мкл 5-6 M раствора в декане, 1,43 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-8% MeOH в DCM) с получением соединения(130 мг, выход: 44% (чистота: ~ 80% ЖХ-УФ)) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: =814,3 [M+H].
соединения 40 (натриевая соль)
Стадия 5. Получение
22f
соединения 40 (натриевая соль)
22f
1
31
+
2
2
m/z
Вышеуказанное соединение (130 мг, 0,072 ммоль) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (15 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором на колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получениемв виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (5,8 мг, выход: 3% из ). H ЯМР (400 МГц, DO) δ м. д. 8,39 (с, 1H), 7,91 (уш. д, J=13,2 Гц, 2H), 7,24 (уш. с, 1H), 6,26 (уш. с, 1H), 6,18 (уш. д, J=8,3 Гц, 1H), 5,49 (уш. с, 1H), 4,87-5,06 (м, 1H), 4,51 (уш. с, 1H), 4,30 (уш. д, J=3,7 Гц, 1H), 4,10 (уш. с, 3H), 3,42 (с, 3H), 3,38 (уш. с, 2H), 2,53-2,75 (м, 2H); P ЯМР (162 МГц, DO)) м. д. -1,23 (с, 1P); ИЭР-МС: =657,0 [M+H].
Биологические примеры
Анализы
in vitro
Пример 1
Анализ связывания STING методом SPA
В анализе связывания человеческого STING методом сцинтилляционного анализа сближения (SPA) измеряют вытеснение меченного тритием 2’,3’cGAMP (циклического (гуанозин-(2' - > 5')-монофосфата-аденозин-(3' - > 5')-монофосфата) от биотинилированного белка STING. В E.coli экспрессировали растворимый вариант рекомбинантного STING, у которого отсутствовали четыре трансмембранных домена и имелись остатки 139-379 белка Q86WV6 с R в положении 232 (H232R). На основании 58% частоты аллеля в популяции H232R считается диким типом (Yi, et. al., «Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides» PLOS ONE. 2013, 8(10), e77846). Конструкт STING имеет N-концевую гистидиновую метку и следующий за ней сайт расщепления протеазой TEV и метка AVI, благодаря которой возможно прямое биотинилирование биотинлигазой BirA (Beckett et al, A minimal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation. (1999) Protein Science 8, 921-929). Гистидиновую метку отщепляли после очистки и до биотинилирования.
3
3
D
Анализ проводили на 1536-луночных планшетах с общим объемом 8 мкл в лунке путем добавления 8 нМ [H]-2’3’-cGAMP и 40 нМ белка биотин-STING в буфере для анализа [25 мМ HEPES (Corning 25-060-C1) pH 7,5, 150 мМ NaCl (Sigma S5150), 0,5 мг/мл BSA (Gibco 15260-037), 0,001% Tween-20 (Sigma P7949), сверхчистая вода (Corning 46-000-CM)]. Исследуемые соединения (80 нл) добавляли через акустический диспенсер (EDC Biosystems) в 100% DMSO с конечной концентрацией 1% DMSO при анализе. Планшеты центрифугировали в течение 1 мин и инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. В заключение добавляли (2 мкл) полистироловых гранул для SPA со стрептавидином (PerkinElmer RPNQ0306) и герметизировали и центрифугировали планшеты в течение 1 мин при комнатной температуре. Планшеты адаптировали к темноте в течение 2 ч и считывали на сканере ViewLux (Perkin Elmer) в течение 12 мин на планшет. Кривая насыщения связывания [H]-2’3’-cGAMP показала K 3,6 ± 0,3 нМ для связывания со STING, что сопоставимо с отмеченными значениями для природного лиганда (Zhang et al, Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinity ligand for STING).
50
С другими природными лигандами в данном анализе, включая циклический ди-GMP, также получали значения в пределах ожидаемого диапазона. Эталонным значением является cGAMP, и результаты приводятся в виде процентного ингибирования и значений IC. При связывании с мышиным STING использовали конструкт, сходный с вышеописанным и содержащий остатки 138-378 белка Q3TBT3.
Анализ связывания с полноразмерным человеческим STING
3
Человеческий белок STING, состоящий из остатков 1-379 белка Q86WV6 с R в позиции 232 (H232R) с N-концевой меткой 6HIS, после которой идет метка FLAG, с сайтом расщепления протеазой TEV и меткой AVI для биотинилирования рекомбинантно экспрессировали в клетках HEK293-EXPI. Из этих клеток получали очищенные мембраны и подтверждали экспрессию STING, а также количественно оценивали иммуноблоттингом. STING-содержащие мембраны объединяли с исследуемым соединением на 384-луночном планшете Greiner и инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа в том же буфере для анализа, используемом для анализа связывания STING методом SPA. Далее добавляли [H]-2’3’-cGAMP и инкубировали планшеты при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционные смеси переносили на предварительно промытый фильтрующий планшеты Pall 5073 и 3 раза промывали каждую лунку 50 мкл буфера для анализа. Фильтрующие планшеты высушивали при 50°C в течение 1 ч. В каждую лунку добавляли по 10 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint, планшеты герметизировали и считывали на приборе TopCount (Perkin Elmer) в течение 1 мин на лунку.
Анализ связывания STING методом SPR
Соединения анализировали с использованием прибора для измерения поверхностного плазмонного резонанса (SPR) S200 biacore SPR (GE Healthcare). E.coli, продуцирующие урезанный белок STING, иммобилизовали на стрептавидиновом чипе серии S посредством захвата биотина (GE Healthcare #BR100531). Соединения подвергали скринингу с разведениями 1 : 2 от 100 мкМ до 0,195 мкМ в рабочем буфере (10 мМ HEPES, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,005% P20, 1 мМ TECEP). Оценку стационарной аффинности и кинетики проводили с использованием модели связывания 1 : 1 (STING рассматривали как димер). Применяли следующие параметры прогона: 60 сек асс, 300 сек дисс для соединений IFM, циклический-ди-GMP (60 сек асс/60 сек дисс), тиоловый изомер 1 (60 сек асс/300 сек дисс) и cGAMP (60 сек асс/1200 сек дисс) при скорости потока 50 мкл/мин и сборе данных с частотой 40 Гц при 25 °C.
Анализ STING по гену-репортеру на человеческих клетках
Агонизм в отношении человеческого пути STING оценивали в клетках THP1-ISG (Invivogen, кат № thp-isg), полученных из человеческой моноцитарной клеточной линии THP1 путем стабильного встраивания SEAT-репортерного конструкта, индуцируемого регуляторным фактором интерферонов (IRF). Клетки THP1-Blue ISG экспрессируют репортерный ген секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP) под контролем минимального промотора ISG54 в сочетании с пятью элементами отклика, стимулируемыми интерфероном (ИФН). В результате благодаря клеткам THP1-Blue ISG можно отслеживать активацию IRF путем определения активности SEAP. Уровни IRF-индуцированной SEAP в супернатанте клеточной культуры можно легко определять с помощью детекторной среды для щелочной фосфатазы, детекторного реагента SEAP. Эти клетки устойчивы к зеоцину. В качестве положительного контроля в данном анализе используют 2’3’cGAMP. Для проведения анализа 60 000 клеток наносили в 384-луночный планшет в объеме 30 мкл на лунку для культивирования тканей с белым непрозрачным дном.
2
Исследуемые соединения добавляли в объеме 10 мкл (конечная концентрация DMSO 1%). Соединения первоначального получали в 100% DMSO, наносили на планшет для разведения и впоследствии разводили средой перед нанесением. Анализируемую смесь инкубировали в течение 24 ч при 37 °C, 5% CO, впоследствии планшеты центрифугировали при 1200 об/мин (120 x g) в течение 5 мин. После заключительной инкубации в каждую лунку нового 384-луночного планшета с прозрачным дном добавляли по 90 мкл среды-субстрата для обнаружения активности щелочной фосфатазы и переносили по 10 мкл клеточного супернатанта из планшета с анализируемой смесью на этот новый планшет для обнаружения активности щелочной фосфатазы с помощью дозатора Biomek FX и перемешивали 4 раза. Планшеты инкубировали при кт в течение 20 мин, впоследствии определяли поглощение на длине волны 655 нм с помощью сканера Tecan Safire2.
Анализ STING на мышиных репортерных клетках
Агонизм в отношении мышиного пути STING оценивали в клетках RAW Lucia (Invivogen, кат. № rawl-isg)), полученных из мышиной макрофагальной клеточной линии RAW-264.7 путем стабильного встраивания индуцируемого интерфероном репортерного конструкта с люциферазой Lucia. Клетки RAW Lucia экспрессируют репортерный ген секретируемой люциферазы под контролем минимального промотора ISG54 в сочетании с пятью элементами отклика, стимулируемыми интерфероном (ИФН). В результате благодаря клеткам RAW Lucia можно отслеживать активацию IRF путем определения активности люциферазы. Уровни IRF-индуцированной люциферазы в супернатанте клеточной культуры можно легко определять с помощью QUANTI-Luc™ - детекторной среды для люциферазы. Эти клетки устойчивы к зеоцину. В качестве положительного контроля в данном анализе используют 2’3’cGAMP. Для проведения анализа 100 000 клеток наносили в 96-луночный плоскодонный планшет в объеме 90 мкл на лунку для культивирования тканей. Исследуемые соединения добавляли в объеме 10 мкл. Анализируемую смесь инкубировали при 37 °C, 5% CO2 в течение 24 и 48 часов. После инкубации 20 мкл клеточного супернатанта из планшета с анализируемой смесью переносили в новый 96-луночный планшет и добавляли 50 мкл субстрата QUANTI-Luc. Планшет инкубировали при встряхивании при кт в течение 5 минут, впоследствии люминесценцию определяли на сканере EnVision 2104 со временем интегрирования 0,1 с.
Анализ индукции человеческого интерферона-β
Клетки THP1-Blue ISG использовали для измерения секреции ИФН-β в супернатант культуры после активации пути STING. Для проведения анализа иммобилизирующие антитела к ИФН-β наносили на 96-луночные планшеты MultiArray (Mesoscale Discovery). После инкубации в течение часа планшеты промывали и на эти планшеты с покрытием наносили по 50 мкл супернатанта из планшетов для анализа STING с человеческими репортерными клетками или стандартов ИФН-β в смеси с 20 мкл конъюгированного с Sulfotag детекторного антитела. Планшеты инкубировали встряхиванием в течение 2 ч промывали и наносили буфер для считывания. Электрохемилюминесценцию измеряли прибором SectorImager.
Анализ сигнального пути клетки STING.
2
Агонизм в отношении пути STING измеряли в клетках THP1 BLUE ISG за счет определения фосфорилированного STING(S366), фосфорилированного TBK1(S172) и фосфорилированного IRF3(S396) методом вестерн-блоттинга. Вкратце 5 миллионов клеток в 90 мкл нуклеофекторного буфера смешивали с 10 мкл исследуемого соединения. Эти смеси подвергали электропорации с помощью программы V-001 на приборе Amaxa Nucleofector (Lonza). Клетки переносили в 12-луночные планшеты со свежей средой и позволяли восстановиться при 37 °C, 5% CO в течение одного часа. Впоследствии клетки промывали в холодном BBSS и лизировали буфером RIPA. Образцы нормализовали по общему содержанию белка и разводили либо в буфере для образцов ProteinSimple, либо в нагрузочном буфере LDS. Образцы денатурировали нагреванием при 95 °C в течение 5 мин, впоследствии использовали систему PeggySue (ProteinSimple) для измерения содержания фосфорилированных и общих STING и IRF3, а для измерения TBK1 использовали систему NuPAGE (Invitrogen). Использовали программное обеспечение Compass или Licor Odyssey соответственно для анализа данных.
Активность STING in vivo
3
0,1 мл
Во всех исследованиях использовали самок мышей Balb/c, приобретенных в Charles River Labs (Уилмингтон, штат Массачусетс, США), в возрасте 6-8 недель и с массой около 20 г. Всем животным давали акклиматизироваться и восстановиться после стресса, связанного с транспортировкой, в течение по меньшей мере 5 дней до применения в экспериментах. В свободном доступе предоставляли хлорированную воду, очищенную обратным осмосом, и обработанный облучением корм (Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010, Lab Diet), и животных содержали в 12 ч цикле свет/темнота. Клетки и подстилку автоклавировали перед использованием и меняли еженедельно. Все эксперименты были выполнены в соответствии с руководством по уходу и применению лабораторных животных и утверждены Институциональным комитетом по уходу и применению животных компании Janssen R & D, г. Спринг-Хаус, штат Пенсильвания, США. В каждую экспериментальную группу входило 8 мышей. Для оценки эффективности in vivo на мышиной модели опухоли CT26 мышам Balb/c подкожно имплантировали 500 000 опухолевых клеток карциномы толстой кишки CT26 и позволяли опухоли развиться до объема 100-300 мм. Соединения вводили внутрь опухоли в фосфатно-солевом буфере в объеме на инъекцию. Мышам вводили 0,05 мг каждые три дня (всего три дозы). Эффективность измеряли в виде процентного ингибирования роста опухоли (TGI), вычисленного как уменьшение объема опухоли после лечения (T) по сравнению с объемом опухоли в контроле (C) по следующей формуле: ((C - T) / (C)) * 100, когда все контрольные животные еще участвовали в исследовании. Количество излеченных определяли как количество животных без определимой опухоли в течение 10 сроков удвоения объема опухоли (TVDT) после введения последней дозы.
Полученные данные представлены в таблице 2.
Таблица 2
№ соед.
hSTING SPA IC50 (мкМ)*
Человеческие репор терные клетки EC50 (мкМ)*
SPR человеческий STING KD (мкМ)
Человеческий ИФН-β (ранговая величина)
Активность in vivo (% TGI)
Активность in vivo (излечения)**
<b>c-GAMP</b>
0,024
0,53
0,0055
-
-
-
<b>3’,3’c-GAMP</b>
8,62
8,7
3,97
-
-
-
<b>3’,3’c-GAMP</b>
73,06
17,83
5,99
539
-
-
<b>1</b>
0,0046
0,077
0,0012
7930
108,9
6
<b>6</b>
0,011
0,99
0,0012
6762
-
-
<b>8</b>
11,68
2,38
-
5539
-
-
<b>9</b>
2,79
0,11
0,28
8104
-
-
<b>11</b>
0,015
0,03
0,0065
14896
-
-
<b>12</b>
0,22
0,14
-
-
-
-
<b>15</b>
0,36
0,043
-
15611
-
<b>17</b>
21,58
0,25
5,14
17298
-
-
<b>18</b>
1,14
0,11
-
15249
-
-
<b>20</b>
0,047
~ 0,22
0,0082
6045
-
-
<b>22</b>
0,092
0,026
-
-
-
-
<b>24</b>
5
0,011
-
11534
-
-
<b>25</b>
29,2
0,1
3,48
6595
88,9
-
<b>26</b>
28,41
1,02
-
-
-
-
<b>28</b>
0,19
0,099
-
12969
-
-
<b>29</b>
0,29
0,053
16254
-
-
<b>30</b>
> 100
13,05
-
-
-
-
<b>33</b>
0,39
0,17
-
-
-
-
<b>34</b>
4,26
0,025
-
-
-
-
<b>35</b>
> 100
7,08
-
-
-
-
<b>36</b>
> 100
2,46
-
-
-
-
<b>37</b>
12,36
1,35
-
-
-
-
<b>39</b>
0,021
0,065
-
-
-
-
<b>40</b>
0,066
0,038
-
-
-
-
<b>41</b>
> 100
22,53
-
-
-
-
<b>45</b>
76,17
1,84
-
-
-
-
<b>47</b>
1,3
~ 0,039
-
-
-
-
<b>48</b>
> 100
6,66
-
-
-
-
<b>49</b>
37,09
0,26
-
-
-
-
<b>51</b>
0,011
-
-
-
-
-
<b>52</b>
0,32
-
-
18191
-
-
<b>53</b>
4,01
-
-
11036
-
-
<b>54</b>
0,75
-
-
18578
-
-
<b>55</b>
0,22
-
-
25628
-
-
Ранговую величину для человеческого ИФН-β определяли по общей совокупной индукции ИФН-β в пг/мл в диапазоне исследованных доз (0,78-50 мкМ) на клетках THP-1 после 24 часов воздействия
50
50
* IC и EC являются средними для по меньшей мере трех значений
** 8 мышей в группе
(-) не проводилось
Биологический пример 2
Анализ STING на основании индукции выработки цитокинов первичными человеческими клетками PBMC
Агонизм в отношении человеческого пути STING оценивали в первичных человеческих мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC), полученных из цельной человеческой крови, для чего 1 пинту (около 420 мл) свежей донорской крови (AliCells Inc, г. Аламида, штат Калифорния, США) разделяли на слои в среде Lymphocyte Separation Medium (1,077-1,080 г/мл, Corning, г. Манассас, штат Виргиния, США), впоследствии центрифугировали с 500 g при кт в течение 20 мин и при этом не применяли тормоз. Собирали PBMC, скопившиеся на границе между сывороткой и средой Lymphocyte Separation Medium, промывали, впоследствии подсчитывали. PBMC состоят из субпопуляций лимфоцитов и моноцитов, таких как B-клетки, T-клетки, и т. п., и эти субпопуляции по литературным данным экспрессируют разные уровни белка STING. В ответ на применение агонистов STING, таких как 2’3’-cGAMP, эти клетки активируются, и в них индуцируется экспрессия различных провоспалительных и противовирусных цитокинов. Кроме того, при стимуляции агонистами STING в этих клетках возрастает экспрессия маркеров активации. Уровни индукции цитокинов можно измерять различными способами, включая ELISA, Luminex и MSD. Повышение экспрессии маркеров активации можно измерять проточной цитометрией.
2
Для проведения анализа 1 000 000 клеток можно наносить в объеме 225 мкл на лунку на 96-луночные плоскодонные планшеты, обработанные для культивирования тканей. Исследуемые соединения можно добавлять в объеме 25 мкл в концентрации 10x. Некоторые соединения можно солюбилизировать в 100% DMSO, и итоговая концентрация DMSO в культурах, получающих эти соединения, может составлять 1%. Анализируемую смесь можно инкубировать в течение 48 ч при 37 °C, 5% CO. Можно собирать 200 мкл супернатанта, не затрагивая клетки на дне планшета, а затем замораживать при -20°C до измерения методом Luminex, где анализы Luminex можно проводить с использованием G-CSF, ИФНα2, ИФНγ, IL-1b, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), ФНО-α, которые входят в иммунологический мультиплексный набор MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel и аналита IFNβ1 из набора MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel IV (EMD Millipore, г. Биллерика, штат Массачусетс, США) в соответствии с протоколом производителя. Индукцию цитокинов можно измерять с использованием прибора Luminex FlexMAP 3D (Luminex Corporation, г. Раднор, штат Пенсильвания, США). Анализ полученных методом Luminex данных можно выполнять с помощью программного обеспечения MILLIPLEX Analyst (EMD Millipore).
Подавление вируса HBV в клетках PHH с использованием кондиционированной среды от активированных STING первичных человеческих PBMC
5
2
Первичные человеческие гепатоциты могут быть инфицированы вирусом гепатита В и при развившейся инфекции будут продуцировать вирусные белки, такие как HBsAg и HBeAg, которые могут быть выявлены методом ELISA. Терапевтическая обработка соединениями, такими как энтекавир, может подавлять размножение HBV, которое можно измерять по снижению продукции вирусных белков. Первичные человеческие гепатоциты (кол-во клеток) 4×10 клеток/лунка (BioReclamation, г. Вестбери, штат Нью-Йорк, США) можно наносить в объеме 500 мкл/лунка на плоскодонные 24-луночные планшеты, обработанные для культивирования тканей. Через 24 ч клетки можно инфицировать с помощью множественности заражения (moi) 30-75 вируса HBV. На следующий день PHH можно 3 раза промывать и можно добавлять к ним свежую среду для поддержания. Параллельно можно выделять PBMC, как описано выше. Для стимуляции PBMC можно наносить 10 000 000 клеток на плоскодонные 24-луночные планшеты, обработанные для культивирования тканей, в объеме 400 мкл на лунку. Исследуемые соединения можно добавлять в объеме 100 мкл, впоследствии можно инкубировать культуры при 37 °C, 5% CO, в течение 48 ч. Можно собирать супернатанты. В клетках можно измерять повышение экспрессии маркера активации методом проточной цитометрии. Вкратце клетки можно окрашивать флуоресцентно-меченными антителами к CD56, CD19, CD3, CD8a, CD14, CD69, CD54, CD161, CD4 и CD80. Образцы можно анализировать на проточном цитометре Attune NxT (Thermo Fisher, г. Карлсбад, штат Калифорния, США).
Из стимулированных культур PBMC можно отбирать часть супернатанта для определения цитокинов методом Luminex, как описано выше. Остальной супернатант можно разделять на две части и хранить одну аликвоту при 4 °C для применения на 8 день анализа. Другую аликвоту супернатанта можно разводить 1 : 1 средой 2X для PHH, впоследствии можно добавлять к инфицированным клеткам PHH на 4 день. Через 96 ч можно заменять израсходованную среду и можно добавлять супернатант в разведении средой 2X для PHH 1 : 1. В этот момент можно выполнять промежуточное измерение HBsAg с использованием набора для ИФА HBsAg (Wantai Bio-pharm, г. Пекин, Китай). Через 96 ч можно собирать среду и измерять HBsAg.
Хотя приведенное выше описание содержит сведения о принципах настоящего изобретения с примерами, приведенными для иллюстрации, следует понимать, что практическое применение изобретения охватывает обычные вариации, адаптации и/или модификации, входящие в объем приведенной ниже формулы изобретения и ее эквивалентов.