Применение адъювантов в технологии получения сывороток к энтеротоксину холерного вибриона

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

НОВЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЧУМЫ

И ХОЛЕРЫ

А.К. Никифоров, М.В. Антонычева, И.М. Жулидов, О.А. Лобовикова, И.В. Шульгина, С.А. Еремин, Т.В. Аленкина, Н.И. Вахрушина, С.В. Астафьева, А.Д. Белоусов, Л.В. Зайцева, О.С. Пуденкова, Е.Г. Абрамова

ФКУЗ «РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора, г. Саратов

По усовершенствованной технологии получены в сухой форме экспериментально-производственные основы микробиологических сред: автолизат пекарских дрожжей (5 серий) и ферментативный гидроли-зат фибрина (3 серии). Физико-химический состав основ соответствует требованиям МУК 4.2.2316, 2008. Экспериментальные основы были использованы в составе питательных сред для культивирования чумного микроба и холерного вибриона. Разработаны среды, в которых эти основы являются моно-источниками питательных компонентов и предложены комбинированные среды, в которых автолизат пекарских дрожжей использован как стимулятор роста. Испытания плотных и жидких питательных сред для культивирования возбудителей чумы и холеры проведены в соответствии с требованиями МУ 3.3.2.2124, 2006. В качестве контрольных были питательные среды на основе гидролизата по Хоттингеру.

На основе автолизата пекарских дрожжей для культивирования чумного микроба и холерного вибриона сконструированы плотная и жидкая среды, по биологическим показателям соответствующие требованиям МУ и позволяющие накапливать антиген аналогично результату на контрольной среде. Запатентован «Способ получения питательной основы и среда для культивирования микроорганизмов рода Yersinia и Vibrio» № 2360962 РФ, МПК C12N1/20.

Из сухой основы ферментативного гидролизата фибрина предложены жидкая и плотная среды, обеспечивающие типичный рост тест-штаммов чумного микроба, однако несколько уступающие контрольной среде по показателям чувствительность и эффективность. Среды, приготовленные из ферментативного гидролизата фибрина с использованием в виде добавки автолизата пекарских дрожжей, обеспечивают типичный рост тест-штаммов и не уступают по эффективности контрольной среде по Хоттингеру. Для культивирования холерного вибриона являются оптимальными жидкая и плотная среды, приготовленные из моноосновы — ферментативного гидролизата фибрина. Они обеспечивают типичный рост тест-штаммов, не уступая по всем показателям контрольной среде. Экспериментальные жидкие среды на основе ферментативного гидролизата фибрина испытаны при масштабированном культивировании производственных штаммов холерного вибриона: Vibrio cholerae Ol M-41, используемого для изготовления холерной бивалентной химической вакцины, и V. cholerae не O1 105, применяемого в качестве адсорбента при производстве холерной диагностической агглютинирующей сыворотки О1. По результатам проведенных исследований получен патент «Питательная среда для глубинного культивирования холерного вибриона», № 2425866 РФ, МПК C12N1/20, C12R1/63.

ВЫЯВЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕГИОНЕЛЛ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ВОДНЫХ СИСТЕМАХ ОХЛАЖДЕНИЯ ПРОМЫШЛЕННЫХ ПРЕДПРИЯТИЙ

И.В. Новокшонова1, И.С. Тартаковский2

ФБУЗ Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва; 2НИИэпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва

Эпидемические вспышки легионеллеза часто связаны с контаминацией возбудителем градирен (водных систем охлаждения) промышленных предприятий. Данные объекты являются предметом регулярного профилактического мониторинга. Нами проведено скрининговое исследование образцов воды и биопленок из 20 градирен промышленных предприятий в Москве и Московской области с целью выявления Legionella pneumophila.

Контаминация Legionella pneumophila выявлена на 5 из 8 промышленных предприятий, в 14 из 20 обследованных градирен (70%). Концентрация возбудителя в контаминированных системах колебалась в диапазоне от 1,2 х 102 до 9,6 х 104 КОЕ (геномных копий) на литр воды. Среди выделенных изолятов 52% принадлежали к 1-й серогруппе L. pneumophila, 48% к другим серогруппам возбудителя. В 14% положительных образцов были выделены изоляты нескольких серогрупп L. pneumophila, в том числе первой. По уровню контаминации все обследованные объекты можно разделить на 3 группы: 1) на объекте отсутствуют легионеллы, при визуальном осмотре не обнаружены биопленки; 2) на объекте выявлены легионеллы в низкой концентрации (менее 103 КОЕ на литр), биопленки не обнаружены; 3) на объекте выявлены легионеллы в концентрации превышающий уровень 103 КОЕ на литр; обнаружены биопленки, содержащие Legionella pneumophila, на орошаемой поверхности чаши градирен.

В странах ЕЭС, США, Японии, а с 2010 г. и в Российской Федерации, введены допустимые концентрации Legionella pneumophila для различного типа водных систем или объектов. Так для градирен допускается эксплуатация при концентрации возбудителя не превышающей 104К0Е/л. В данном исследовании превышение допустимого уровня контаминации Legionella pneumophila выявлено на 1 из 8 промышленных предприятий (12,5%).

Проведенные исследования позволили впервые охарактеризовать частоту и уровень контаминации Legionella pneumophila потенциально опасных водных систем в Российской Федерации. Частота контаминации водных систем охлаждения промышленных предприятий (70%) соответствовала частоте контаминации аналогичных объектов за рубежом — 50-75%.

ПРИМЕНЕНИЕ АДЪЮВАНТОВ В ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТОК К ЭНТЕРОТОКСИНУ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА

М.В. Овчинникова, Т.В. Аленкина, М.Н. Киреев, Н.И. Белякова, А.К. Никифоров

ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Роспотребнадзора, г. Саратов

Одним из основных компонентов, входящих в состав препарата «Вакцина холерная химическая бивалентная таблетированная» (ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб»), является холероген-анатоксин. В технологии производства для определения содержания

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

и активности данного антигена, применяют холерные эритроцитарные диагностикумы, производимые за пределами России, что определяет актуальность разработок новых систем контроля. Основу таких систем составляют иммунные сыворотки.

Цель исследования: оценка эффективности применения адъювантов при получении иммунных сывороток к энтеротоксину холерного вибриона пригодных для конструирования системы контроля состава холерной вакцины.

Материалы и методы. Антиген — токсин холерный очищенный, содержащий 360 мкг белка в 1 мл и 3400 опытных доз/мл. Продуценты — кролики массой 2,5—3 кг разделили на 3 группы: животных I и II группы иммунизировали полным адъювантом Фрейнда и аминополисахаридом 2-амино-2-дезокси-Р^-глюкан М.м 38,2 кДа соответственно. Животные III группы иммунизировались холерным токсином.

Уровень специфических антител сывороток оценивали в реакции диффузной преципитации с холерным токсином. Антитоксическая активность сывороток животных I и II групп составляла 1:32—1:64, контрольной — 1:8. Однако при применении полного адъюванта Фрейнда у всех животных I группы (100%) на месте введения развивались глубокие дефекты кожного покрова и мышечной ткани, а ухудшение общего состояния явилось причиной приостановления иммунизационного процесса и, как следствие, увеличения срока иммунизации на одну неделю. При введении аминополисахарида отрицательных реакциях со стороны организма животных-продуцентов отмечено не было, поэтому иммунизация проводилась согласно графику.

Выводы. Полученные данные свидетельствуют об эффективности применения адъювантов для получения активных сывороток к холерному токсину. Предпочтение следует отдать аминополисахариду, который характеризуется высокой иммуностимулирующей активностью наряду с низкой реактогенно-стью для животных.

МЕДИЦИНСКОЕ И СОЦИАЛЬНОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ НЕУСТАНОВЛЕННОЙ ЭТИОЛОГИИ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ

И.В. Овсянникова

ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург

В 2011 г. в России было зарегистрировано 496 967 случаев острых кишечных инфекций неустановленной этиологии (ОКИНЭ), причем каждый 15-й из них — в Санкт-Петербурге. Актуальность ОКИНЭ связана с частотой распространения, неуправляемостью, тяжестью течения, возможностью неблагоприятных исходов и значительным экономическим ущербом. Показатель заболеваемости этой нозологической формой в России в 2011 г. составил 350,2 на 100,000. В Санкт-Петербурге этот уровень в 1,5 раза выше среднего по стране (548,6 на 100,000 — в 2011 г.). Показатели заболеваемости ОКИНЭ у детей до 17 лет превышают таковые у взрослых в 3 раза. В 2011 в России у детей до 17 лет показатель заболеваемости ОКИНЭ составил 1127,0 на 100,000, в Санкт-Петербурге — 1837,9 на 100,000. Доля ОКИНЭ в общей структуре инфекций в Санкт-Петербурге в 2010—2011 гг. составила 69—71%.

В последние годы продолжали регистрироваться летальные исходы по причине ОКИНЭ. В 2010 г. в России показатель смертности от ОКИНЭ составил 0,005 на 100,000, в Санкт-Петербурге — 0,22 на 100,000. Проведено изучение 53 случаев смерти от острых гастроэнтероколитов неустановенной этиологии в инфекционном стационаре Санкт-Петербурга в 2009—2011 гг. Умершие от ОКИНЭ были в возрасте от 29 до 93 лет, причем женщин среди них было больше, чем мужчин (60,4% — женщин; 39,6% — мужчин). Доля лиц трудоспособного возраста составила 47% от числа умерших по причине ОКИНЭ, из них менее суток и сутки провели в стационаре 70%. На поздних сроках заболевания поступили в стационар 30 пациентов. Сопутствующие хронические заболевания имели 80% умерших от ОКИНЭ, зависимость от алкоголя отмечалась у 20%. Из сопутствующих заболеваний отмечались сердечно-сосудистая патология, злокачественные новообразования, сахарный диабет, болезни печени и почек. Патолого-анатомическая экспертиза, проведенная в 30 случаях смерти от ОКИНЭ, выявила различной степени выраженности морфологические изменения в тонком и толстом кишечнике, желудке. У 23 умерших от ОКИНЭ по причине отказа родственников от вскрытия диагноз поставлен клинически. Пожилой возраст больных ОКИНЭ, наличие серьезных сопутствующих заболеваний, злоупотребление алкоголем являются факторами риска, способствующими наступлению летального исхода.

Широкая распространенность ОКИНЭ, непредсказуемость эпидемической ситуации, в ряде случаев тяжесть течения заболевания и возможность летальных исходов определяют их медицинское и социальное значение. Своевременное обращение за медицинской помощью при кишечных дисфункциях будет способствовать уменьшению их неблагоприятных последствий.

ПОЛУЧЕНИЕ ТЕСТ-СЫВОРОТОК ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ХОЛЕРНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ БАКТЕРИОФАГОВ

М.В. Овчинникова, Т.В. Аленкина, Г.И. Коровкина, М.Н. Киреев, А.К. Никифоров

ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Роспотребнадзора, г. Саратов

Основным условием получения высокоактивных и стабильных антифаговых сывороток является высокая иммуногенность антигена-бактериофага, которая напрямую зависит от концентрации фаговых частиц. Для образования антител к бактериофагам в организме лабораторного животного необходима концентрация бактериофага не менее пх1010—пх10п БОЕ/мл.

Цель работы: определение эффективности применения адъювантов при получении антифаговых тест-сывороток, используемых для проверки чистоты линий маточных культур в производстве диагностических бактериофагов.

Материалы и методы. Антиген — монофаг холерный эльтор Лх- 348/1102, в концентрации пх107— пх108 БОЕ/мл, входящий в состав бактериофага диагностического холерного эльтор йх-. Для усиления иммунного ответа использовали полный адъювант Фрейнда и низкомолекулярный ацетилирован-ный биополимер. Животные-продуценты кролики