СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУСНОГО АНТИГЕНА И ВАКЦИН

1. Способ получения вирусного антигена из оболочечного вируса, включающий следующие стадии в указанном порядке:
a) обеспечение жидкости, содержащей оболочечный вирус,
b) осветление жидкости, содержащей указанный оболочечный вирус, приводящее к получению жидкого продукта, содержащего указанный оболочечный вирус,
c) уменьшение объема жидкого продукта, полученного после стадии b), для получения концентрированного жидкого продукта,
d) солюбилизация оболочечного вируса, присутствующего в жидком продукте, путем добавления детергента или смеси детергентов, содержащей катионный детергент, к концентрированному жидкому продукту, полученному на стадии c),
e) отделение вирусных ядер от композиции, полученной после стадии d), и
f) необязательно, удаление катионного детергента из композиции, полученной после стадии e),
и
g) очистка вирусного антигена,
при этом за стадией c) непосредственно следует стадия d).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадию очистки, направленную на специфическую очистку оболочечного вируса, не проводят до стадии d).
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что единственную стадию хроматографии, которую проводят, проводят на стадии g).
4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что ультрацентрифугирование в градиенте плотности и/или хроматографию не проводят до стадии d).
5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что проводят стадию инактивации и/или стадию удаления вируса.
6. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что коэффициент уменьшения объема на стадии c) составляет по меньшей мере 4, предпочтительно по меньшей мере 5.
7. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что конечная концентрация катионного детергента составляет по меньшей мере 2000 мкг/мл.
8. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что катионный детергент имеет в основе катионы четверичного аммония.
9. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что за стадией b) непосредственно следует стадия c), за которой непосредственно следует стадия d).
10. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что не происходит замены детергента.
11. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что нуклеазу или другой расщепляющий ДНК фермент не добавляют до стадии d), предпочтительно, нуклеазу не добавляют на всех стадиях способа.
12. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что оболочечный вирус выбран из группы, состоящей из оболочечных РНК вирусов, оболочечных ДНК вирусов или оболочечных ретровирусов, при этом оболочечные РНК вирусы включают флавивирусы, тогавирусы, коронавирусы, вирусы гепатита D, филовирусы, рабдовирусы, буньявирусы, ортомиксовирусы, парамиксовирусы и аренавирусы, и оболочечные ДНК вирусы включают гепаднавирусы, вирусы герпеса и поксвирусы, предпочтительно, оболочечный вирус выбран из оболочечных РНК вирусов, более предпочтительно, оболочечный вирус представляет собой ортомиксовирус, наиболее предпочтительно вирус гриппа, такой как вирус гриппа A, B или C.
13. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что жидкость на стадии a) получена из культуры для размножения оболочечного вируса на основе клеток или культуры для размножения оболочечного вируса на основе яиц.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что культура для размножения оболочечного вируса на основе клеток содержит клетки клеточной линии млекопитающего, предпочтительно клеточной линии животного.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что клетки культивируют как адгезивные клетки.
16. Способ по п.13, отличающийся тем, что культура для размножения оболочечного вируса на основе яиц включает куриные яйца.
17. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что жидкость на стадии a) получают с использованием одноразового биореактора.
18. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что стадию b) проводят с применением метода, выбранного из группы, состоящей из центрифугирования, проточной фильтрации вдоль потока и глубинной фильтрации.
19. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что стадию c) проводят, применяя метод, выбранный из группы, состоящей из проточной фильтрации вдоль потока, ультрацентрифугирования и осаждения.
20. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что стадию e) проводят, применяя метод, выбранный из группы, состоящей из ультрацентрифугирования и проточной фильтрации вдоль потока.
21. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что стадию g) проводят, применяя хроматографию, предпочтительно хроматографию, выбранную из группы, состоящей из ионообменной хроматографии, хроматографии гидрофобного взаимодействия, аффинной хроматографии и эксклюзионной хроматографии.
22. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, отличающийся тем, что вирусный антиген представляет собой часть оболочечного вируса, предпочтительно вирусный антиген представляет собой вирусный белок.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что вирусный белок представляет собой HA и/или NA из вируса гриппа.
24. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16 или 23, включающий дополнительную стадию формулирования полученного вирусного антигена в фармацевтическую композицию.
25. Способ по п.24, отличающийся тем, что фармацевтическая композиция представляет собой вакцинный препарат или его промежуточную форму, предпочтительно, фармацевтическая композиция представляет собой вакцину против гриппа.
26. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, 23 или 25, отличающийся тем, что стадия g) включает использование композиции, имеющей проводимость в диапазоне от ровно или более чем 3,0 до менее чем 5,0 мсек/см, предпочтительно от ровно или более чем 3,5 до ровно или менее чем 4,7 мсек/см, даже более предпочтительно в диапазоне от ровно или более чем 3,6 до ровно или менее чем 4,65 мсек/см, в условиях температуры 25°C.
27. Способ по любому из пп.1, 2, 14-16, 23 или 25, отличающийся тем, что стадия g) включает использование композиции, имеющей молярную концентрацию в диапазоне от ровно или более чем 1,0 M до ровно или менее чем 3,5 M, предпочтительно в диапазоне от ровно или более чем 1,0 M до ровно или менее чем 3,0 M, более предпочтительно в диапазоне от ровно или более чем 1,5 M до ровно или менее чем 3,0 M, и даже более предпочтительно в диапазоне от ровно или более чем 1,5 M до ровно или менее чем 2,6 M, в условиях температуры 25°C.
28. Применение способа производства вакцинного препарата, содержащего вирусный антиген, полученный из культуры для размножения оболочечного вируса на основе клеток, включающего следующие стадии в указанном порядке:
i) уменьшение объема жидкого продукта, содержащего оболочечный вирус, полученной из культуры для размножения оболочечного вируса на основе клеток, тем самым получение концентрированного жидкого продукта, и
ii) солюбилизация оболочечного вируса, присутствующего в жидком продукте, путем добавления детергента или смеси детергентов, содержащей катионный детергент, к концентрированному жидкому продукту, полученному на стадии i),
при этом за стадией i) непосредственно следует стадия ii), и
при этом уменьшение ДНК клеток-хозяев, присутствующей в вакцинном препарате, составляет по меньшей мере 2,5 log.