СПОСОБ АКТИВАЦИИ АУТОФАГИИ У ЧЕЛОВЕКА
METHOD FOR ACTIVATING AUTOPHAGY IN HUMANS

Изобретение «Способ активации аутофагии у человека» предназначено для повышения активности процесса аутофагии у человека с помощью физиологических воздействий на организм без применения медикаментозных препаратов и относится к профилактической медицине и биологии. Сегодня доказано, что для сохранения системного и клеточного гомеостаза необходимо на должном уровне поддерживать процесс аутофагии в клетках (S. Kume, Т. Uzu, K. Horiike et al., 2010; Η. Liu, Α. Javaheri, R.J. Godar et al., 2017; D. Derous, S.E. Mitchell, L. Wang et al., 2017; K.W. Chung, H.Y. Chung, 2019). В этом процессе происходит уничтожение ненужных соединений и синтез новых соединений и структур, который происходит во всех эукариотических клетках, включая и клетки человека. (D.J. Klionsky, K. Abdelmohsen, A. Abe, et al., 2016) Другими словами, клетки и организм в целом в условиях активации аутофагии самоочищается и самообновляется. Многие исследователи склонны считать, что аутофагия способна увеличить продолжительность жизни человека (V.D. Longo et al., 2010-2015; S.E. Wohlgemuth, A.Y. Seo, E. Marzetti et al, 2010; K.W. Chung, D.H. Kim, M.H. Park et al., 2013; D. Derous, S.E. Mitchell, L. Wang et al., 2017; K.W. Chung, H.Y. Chung, 2019). Сам процесс аутофагии достаточно сложен и для его осуществления требуется согласованное действие более 30 генов и соответствующих белков («Genome-wide association studies)), 2021). Такая сложная система создает трудности для ее коррекции в случае необходимости.
В многочисленных экспериментальных моделях показано благоприятное воздействие аутофагии на гомеостаз клетки и всего организма. Начиная с момента открытия Y. Ohsumi (Y. Ohsumi, 2001, 2014) механизмов аутофагии было установлено, что основным триггером аутофагии является уменьшение энергообеспеченности клетки. Следует особо отметить, что автор получил эти данные на плесени, о чем и заявил в научной литературе. Однако этот тезис был экстраполирован другими заинтересованными лицами на человека с утверждением о том, что голодание вызывает активацию аутофагии. Появилось масса методик голодания, которые якобы активируют процесс аутофагии. Широко рекламируемое «периодическое голодание» и его разновидности для утверждения этого тезиса, как оказалось, не имеют научной базы и обоснования применения у человека. При этом следует отметить, что при изучении других механизмов и систем установлено положительное влияние самого голодания и ограничения калорийности питания на организм человека и животных (Ю.С. Николаев, Е.И. Нилов, 1973; V.D. Longo et al., 2010-2015) и этот факт мало кем подвергается сомнению. В отечественной научной литературе этот метод ограничения калорийности питания получил название разгрузочно-диетическая терапия - РДТ (Ю.С. Николаев, Е.И. Нилов, 1973). Однако детального изучения процесса аутофагии и методов его регуляции у человека при различных режимах ограничения питания не проводилось. В литературе имеются лишь единичные исследования этого процесса на клетках крови человека (F. Pietrocola, Y. Demont, F. Castoldi et al., 2017), в которых использовали голодание в течение 24-48 часов. Морфологические признаки показали усиление активности в нейтрофилах крови. Другие исследования касаются патологических состояний у человека (болезни Паркинсона, Альцгеймера и др.) и их молекулярно-генетических механизмов нарушений процесса аутофагии при этих заболеваниях (S.E. Wohlgemuth, Α.Y. Seo, Ε. Marzetti et al., 2010; Y.C. Ning, G.Y. Cai, L. Zhuo et al., 2013; D.J. Klionsky, K. Abdelmohsen, A. Abe, et al., 2016; L. Yang, D. Licastro, E. Cava et al., 2016; K.W. Chung, H.Y. Chung, 2019). Экспериментальные и отдельные исследования на человеке позволяют предполагать получение многообразных положительных эффектов при активации аутофагии в организме человека. Использование для этих целей, к примеру, рапамицина (А.А. Пархитко, О.О. Фаворова, Э.П. Хенске, 2013) сопровождается целой гаммой нежелательных эффектов: наиболее часто (>10%) тромбоцитопения, анемия, гипокалиемия, гипофосфатемия, инфекции мочевыводящего тракта, гиперхолестеринемия, гипергликемия, гипертриглицеридемия, боли в животе, лимфоцеле, периферические отеки, артралгия, акне, диарея и повышение уровня ЛДГ. Кроме того, у рапамицина нет утвержденных показаний для назначения его в качестве активатора аутофагии.
Однако в физиологических условиях процесс аутофагии и способы его активации у человека в научной литературе представлены лишь в единичных сообщениях, а сами исследования выполнены на отдельных клетках и тканях человека.
Известен способ повышения активности аутофагии у крыс (М. Alirezaei, С.С.Kemball, С.Т. Flynn et al., 2017) посредством ограничения калорийности питания, включая голодание. Авторы обнаружили усиление активности аутофагии в нейронах мозга крыс. Однако эффективность этого метода не подтверждена на людях.
+
Известен способ активации аутофагии в лейкоцитах у человека (F. Pietrocola, Y. Demont, F. Castoldi et al., 2017), в котором ограничивали прием пищи в течение 1-4 суток. Для установления признаков активации использовали степень ацетилирования белка путем иммунофлуоресцентного окрашивания пермеабилизированных и фиксированных лейкоцитов антителом, специфичным для белка, содержащего ацетилированные остатки лизина. Было установлено наличие признаков активации; только нейтрофилы от здоровых добровольцев демонстрировали повышенное количество LC3B puncta, показывающими активацию аутофагии в этой популяции клеток крови.
В исследовании участвовали девять здоровых добровольцев-людей (возраст 24-54 года, 5 мужчин, 4 женщины, все без какой-либо известной патологии в прошлом или настоящем и с нормальным индексом массы тела 20-25). Обследованные согласились соблюдать диету с нулевой калорийностью (с водой, чаем и кофе ad libitum) в течение 4 дней подряд.
+
Кровь с гепарином брали каждое утро с 9 до 9:30 утра в период голодания, а также 3 дня подряд (без предварительного завтрака) за 1 неделю до и 1 неделю после периода голодания. Оказалось, что только нейтрофилы от здоровых добровольцев демонстрировали повышенное количество LC3B puncta, показывающими активацию аутофагии в этой популяции клеток крови. Нарастание этих признаков фиксировалось уже через 24 часа после начала голодания и до конца исследования.
Однако этот способ имеет ряд недостатков:
1. Наблюдения проведены на малочисленных группах, что ставит под сомнение объективность полученных выводов;
2. В исследовании использовались маркеры, характеризующие активность аутофагии лишь в отдельных клетках крови;
3. Способ оценки аутофагии, использованный авторами, сложен, требует специфического дорогостоящего оснащения;
4. Авторы не использовали интегральный метод оценки аутофагии во всем организме.
Задача изобретения - разработать физиологически адекватный, экономически малозатратный, доступный способ активации аутофагии у человека.
Способ активации аутофагии у человека осуществляется посредством разгрузочно-диетической терапии (РДТ) и комплексом оздоровительных процедур, обладающих универсальностью, обусловленной простотой воспроизведения, что позволяет его использовать в обычных клиниках, имеющий существенное отличие:
- для проведения данного способа не требуется дорогостоящего оборудования;
- для проведения данного способа не требуется фармакологических средств;
- данный способ не предусматривает вмешательств in vivo;
- у пациентов при проведении процедур не возникает отрицательных эффектов;
- способ экономически малозатратен;
- универсальность способа позволяет его использовать на широкой аудитории людей.
Способ осуществляют следующим образом:
1. После поступления пациента в стационар врач проводит беседу и выясняет личные установки пациента на предлагаемый оздоровительный комплекс, а также определяет индекс массы тела;
2. Пациент в первый день принимает солевое слабительное (35-40 г «английской соли»);
3. Весь курс лечения больной в течение 12 дней ограничивают калорийность пищи до 800-1200 ккал/сутки и потребляет 1,5-2,0 л воды;
4. Выполняет дезинтоксикационные процедуры, которые включают в себя на период частичной пищевой депривации ежедневные клизмы, либо гидроколонотерапию 2-3 раза в неделю;
5. Обеспечивает физические нагрузки, которые включают в себя ежедневную ходьбу в спокойном ритме общей дистанцией в 3-6 км (при отсутствии противопоказаний);
2
6. Выполняет сеансы лазеротерапии помощью аппарата «Милта», 10 процедур на проекцию селезенки площадью 4,2 см инфракрасным лазером с длиной волны 0,85-0,89 мкм контактным способом, лучом мощностью на светодиоде 100 мВт, мощностью излучения основного терминала лазерного источника 21 Вт, частотой повторения импульсов 600 Гц, длительность 4 минуты;
7. Получает биорезонансную терапию два-три раза в неделю курсом 6-8 раз в режиме, задаваемом с помощью интерстициального сканера EIS СЕ 0535 (системы ESTECK System Complex);
8. Пациент получает через день массаж всего тела - 10 процедур;
9. Принимает теплый душ 2-3 раза в сутки;
10. Посещает инфракрасную сауну 1 раз в неделю;
11. Соблюдение режима сна и отдыха;
12. Исключает курения, приема алкоголя;
13. Сеансы лечения выполняют на фоне мелодичной классической музыки;
14. Ежедневно пребывает на свежем воздухе в течение 2,0-2,5 часа;
15. При поступлении пациенты в клинику и перед выпиской проводится иммуноферментный анализ для определения концентрации Beklin-1.
Техническим результатом изобретения является повышение активности процесса аутофагии у человека.
Эффективность способа подтверждается с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) определения концентрации маркера аутофагии Beclin-1 до начала курса и после его завершения, при котором оценивают степень активации аутофагии во всем организме.
Доказательная база строилась на исследовании 43 пациентов в возрасте от 28 до 69 лет, проходившим курс оздоровления на базе ООО «Центр Здоровье», г. Майкопа.
Материал и методы исследования
2
2
Исследование проведено на 11 мужчинах в возрасте 30-69 лет и 32 женщинах в возрасте от 28 до 68 лет. Все участники исследования проходили обследование до получения профилактического оздоровительного курса на базе клиники ООО «Центр здоровье» в г. Майкопе. Клинический и биохимический анализ крови включал в себя общий анализ крови, общий холестерин (ОХ), липопротеиды высокой плотности (ЛПВП), липопротеиды низкой плотности (ЛПНП), триглицериды (ТГ). Индекс массы тела (ИМТ) рассчитывался по коэффициенту Кетле: отношение массы тела (кг) к росту (м). Ожирение диагностировали при ИМТ ≥30 кг/м. Активность процессов аутофагии определяли при помощи белка Beclin-1 (беклин-1). Концентрацию беклина-1 определяли методом ИФА на аппарате «CLARIOstarplus» BMG LABTECH (Germany) при помощи тест-наборов «Cloud-Clone Согр» (USA). Забор крови осуществляли утром натощак при поступлении в оздоровительный центр и на 12 сутки пребывания в центре. Концентрация маркера выражалась в пг/мл.
Анализ цифровых данных проводился с использованием программного обеспечения IBM SPSSStatistics (26.0). Для характеристики статистического ряда использовалась описательная статистика (процентили 5%-95%) с вычислением медианы, среднего значения, ошибки средней, минимального и максимального значения. Для сравнения средних значений использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни, параметрический t-критерий Стьюдента. Различия считались достоверными при p<0,05.
Способ осуществляется следующим образом.
При поступлении в центр пациентам назначался комплекс оздоровительных процедур:
1. После поступления пациента в стационар врач проводит беседу и выясняет личные установки пациента на предлагаемый оздоровительный комплекс, а также определяет индекс массы тела;
2. Пациент в первый день принимает солевое слабительное (35-40 г «английской соли»);
3. Весь курс лечения пациент в течение 12 дней ограничивает калорийность пищи до 800-1200 ккал/сутки и потребляет 1,5-2,0 л воды;
4. Выполняет дезинтоксикационные процедуры, которые включают в себя на период частичной пищевой депривации ежедневные клизмы, либо гидроколонотерапию 2-3 раза в неделю;
5. Обеспечивает физические нагрузки, которые включают в себя ежедневную ходьбу в спокойном ритме общей дистанцией в 3-6 км (при отсутствии противопоказаний);
2
6. Выполняет сеансы лазеротерапии помощью аппарата «Милта», 10 процедур на проекцию селезенки площадью 4,2 см инфракрасным лазером с длиной волны 0,85-0,89 мкм контактным способом, лучом мощностью на светодиоде 100 мВт, мощностью излучения основного терминала лазерного источника 21 Вт, частотой повторения импульсов 600 Гц, длительность 4 минуты;
7. Получает биорезонансную терапию два-три раза в неделю курсом 6-8 раз в режиме, задаваемом с помощью интерстициального сканера EIS СЕ 0535 (системы ESTECK System Complex);
8. Пациент получает через день массаж всего тела - 10 процедур;
9. Принимает теплый душ 2-3 раза в сутки;
10. Посещает инфракрасную сауну 1 раз в неделю;
11. Соблюдает режим сна и отдыха;
12. Исключает курения, приема алкоголя;
13. Сеансы лечения выполняют на фоне мелодичной классической музыки;
14. Ежедневно пребывает на свежем воздухе в течение 2,0-2,5 часа;
15. При поступлении пациенты в клинику и перед выпиской проводится иммуноферментный анализ для определения концентрации Beklin-1.
Техническим результатом изобретения является повышение активности аутофагии. Эффективность способа подтверждается с помощью иммуноферментного анализа определения концентрации маркера аутофагии Beklin-1, проводимого до начала оздоровительного курса и на 12 сутки оздоровительного курса.
Доказательства эффективности способа
Для доказательства активации аутофагии под действием комплекса оздоровительных процедур была исследована концентрация маркера аутофагии белка беклин-1 у 43 пациентов до начала курса и у 37 пациентов после окончания оздоровительного курса (табл. 1).
Как видно из представленной таблицы концентрация маркера активности аутофагии - беклина-1 в результате проведения комплекса оздоровительных мероприятий, включая ограничение калорийности питания, достоверно повысилась. Повышение концентрации беклина-1 свидетельствует о суммарной активации процесса аутофагии у обследованных пациентов, как у мужчин, так и у женщин, однако у женщин степень активации была менее выраженной.
Клинические примеры, подтверждающие состоятельность способа.
2
12
9
Пример №1. Пациентка П., 38 лет. При поступлении в оздоровительный центр клинический диагноз: Ожирение I степени. Больная повышенного питания. Вес - 96 кг, рост - 166 см, индекс массы тела 34,84 кг/м. Артериальное давление систолическое 130 мм рт. ст., диастолическое -90 мм рт.ст., уровень белка Beclin-1 - 51,68 пг/мл, глюкозы в крови - 7,1 ммоль/л, общего холестерина - 6,24 ммоль/л, липопротеидов низкой плотности - 4,55 ммоль/л, липопротеидов высокой плотности - 1,45 ммоль/л, триглицеридов - 1,65 ммоль/л, гемоглобин - 140 г/л, эритроциты - 5,22×10, СОЭ - 22 мм/час, лейкоциты - 5,75×10.
Пациенту назначена оздоровительная программа в следующем объеме:
1. В первый день определен индекс массы тела и назначено солевое слабительное - глауберовая соль 35 г, per os;
2. РДТ курсом в 12 дней с ограничением калорийности питания до 800 ккал/сутки, с потреблением воды в объеме 1,5-2,0 литра;
3. Гидроколонотерапия 2 раза в неделю-всего 6 процедур;
4. Физические нагрузки, включающие в себя ежедневную ходьбу в спокойном ритме начиная с 3 км, прибавляя каждый день по 0,5 км до достижения дистанции в 5-6 км;
5. Лазеротерапию с помощью аппарата «Милта», всего 10 процедур, через день на проекцию селезенки;
6. Биорезонансная терапия 10 процедур с помощью интерстициального сканера EISCE 0535 системы ESTECK System Complex;
7. Массаж тела через день;
8. Теплый душ 2-3 раза в сутки;
9. Соблюдение режима сна и отдыха;
10. Кедровая бочка (мини-сауна) 2 раза в неделю;
11. Мелодичная классическая музыка во время сеансов;
12. Пребывание на свежем воздухе в общей сложности 2,5 часа.
12
9
В течение первых 12 дней артериальное давление нормализовалось на цифрах 120 сист. и 80 диаст. мм рт.ст. Потеря веса составила 7,5 кг, уровень белка Beclin-1 - 94,93 пг/мл, глюкозы крови - 5,85 ммоль/л, общего холестерина - 5,0 ммоль/л, липопротеидов низкой плотности - 3,79 ммоль/л, липопротеидов высокой плотности - 0,69 ммоль/л, триглицеридов - 1,15 ммоль/л; гемоглобин - 123 г/л, эритроциты - 3,9×10, СОЭ - 4 мм/час, лейкоциты - 4,9×10.
2
12
9
Пример №2. Пациент И., 64 года. Клинический диагноз: Ожирение II степени. Больной повышенного питания, вес - 110 кг, рост - 170 см, индекс массы тела 38,06 кг/м. Артериальное давление систолическое 130 мм рт.ст., диастолическое - 100 мм рт.ст., уровень белка Beclin-1 - 13,20 пг/мл, общего холестерина - 5,94 ммоль/л, липопротеидов низкой плотности - 4,18 ммоль/л, липопротеидов высокой плотности - 0,9 ммоль/л, триглицеридов - 2,71 ммоль/л, гемоглобин - 150 г/л, эритроциты - 5,12×10, СОЭ - 13 мм/час, лейкоциты - 7,57×10.
Пациенту назначена оздоровительная программа в следующем объеме:
1. В первый день определяется индекс массы тела и назначается солевое слабительное - 40 г глауберовой соли, per os;
2. РДТ курсом в 12 дней с ограничением калорийности питания до 1200 ккал/сутки и с потреблением воды в объеме 1,5-2,0 литра;
3. Гидроколонотерапия 2 раза в неделю - всего 6 процедур;
4. Физические нагрузки, включающие в себя ежедневную ходьбу в спокойном ритме начиная с 3 км, прибавляя каждый день по 0,5 км до достижения дистанции в 5-6 км;
5. Лазеротерапию с помощью аппарата «Милта», всего 10 процедур, через день на проекцию селезенки;
6. Биорезонансная терапия 10 процедур с помощью интерстициального сканера EISCE 0535 системы ESTECK System Complex;
7. Массаж тела через день;
8. Теплый душ 2-3 раза в сутки;
9. Соблюдение режима сна и отдыха;
10. Кедровая бочка (мини-сауна) 2 раза в неделю;
11. Мелодичная классическая музыка во время сеансов;
12. Пребывание на свежем воздухе в общей сложности 2,5 часа.
2
12
9
Потеря веса за период пребывания в оздоровительном центре составила 14 кг. При отъезде из клиники вес - 96 кг, индекс массы тела - 33,22 кг/м, систолическое АД - 110 мм рт.ст., диастолическое 70 мм рт. ст., уровень общего холестерина - 3,48 ммоль/л, липопротеидов низкой плотности - 0,42 ммоль/л, липопротеидов высокой плотности - 2,41 ммоль/л, триглицеридов - 1,43 ммоль/л, гемоглобин - 152 г/л, эритроциты - 5×10, СОЭ - 13 мм/час, лейкоциты - 4×10. Концентрация маркера Beklin-1 повысилась до 45 пг/мл. Пациент намерен строго соблюдать рекомендации по здоровому образу жизни.
Как видно из приведенных примеров, активация аутофагии сопровождается целым рядом положительных эффектов, характеризующихся снижением веса, нормализацией или тенденцией к нормализации уровня глюкозы, холестерина и его фракций.
Таким образом, в результате проведенного исследования получены доказательства состоятельности изобретения об активации аутофагии у человека, подтвержденного современными методами диагностики с регистрацией адекватного маркера аутофагии-Beklin-1. Доказано, что процесс аутофагии активируется при ограничении калорийности в пределах 800-1200 ккал/сут в течение 12 дней. Это открывает широкие возможности физиологической активации и коррекции аутофагии у здорового и больного человека.
Список использованной литературы
1. Николаев Ю.С. Голодание ради здоровья / Ю.С.Николаев, Е.И. Нилов - М.: Изд-во «Советская Россия», 1973. - 192 с.
2. Пархитко А.А., Фаворова О.О., Хенске Э.П. Аутофагия. Механизмы, регуляция и роль в развитии опухолей / А.А. Пархитко, О.О. Фаворова, Э.П. Хенске // Биохимия. - 2013. - №78(4). - С. 466-480.
3. Alirezaei Μ., Kemball С.С, Flynn СТ. Short-term fasting induces profound neuronal autophagy / M. Alirezaei, C.C. Kemball, C.T. Flynn, M.R. Wood, J.L. Whitton, W.B. Kiosses // Autophagy. - 2010. - №6(6). - P. 702-710. DOI: 10.4161/auto.6.6.12376. Epub 2010 Aug 14. PMID: 20534972; PMCID: PMC3106288.
4. Chung K.W., Kim D.H., Park M.H. Recent advances in calorie restriction research on aging / K.W. Chung, D.H. Kim, M.H. Park, Y.J. Choi, N.D. Kim [et al.] // J. Exp.Gerontol. - 2013. - №48(10). - P. 1049-1053. DOI: 10.1016/j.exger.2012.11.007. Epub 2012 Nov 29. PMID: 23201549
5. Chung K.W., Chung H.Y. The Effects of Calorie Restriction on Autophagy: Role on Aging Intervention / K.W. Chung, H.Y. Chung // Nutrients. - 2019. - №11(12). - P. 2923. DOI: 10.3390/nu11122923. PMID: 31810345; PMCID: PMC6950580.
6. Derous D., Mitchell S.E., Wang L. The effects of graded levels of calorie restriction: XI. Evaluation of the main hypotheses underpinning the life extension effects of CR using the hepatic transcriptome / D. Derous, S.E. Mitchell, L. Wang, C.L. Green, Y. Wang, L. Chen [et al] // Aging (Albany NY). - 2017. - №9(7). - P. 1770-1824. DOI: 10.18632/aging. 101269. PMID: 28768896; PMCID: PMC5559174.
7. Genome-wide association studies [электронный ресурс] - Режим доступа. - URL: https://www.ebi.ac.uk/gwas/.
8. Klionsky D.J., Abdelmohsen K., Abe A. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition) / D J. Klionsky, K. Abdelmohsen, A. Abe, M.J. Abedin, H. Abeliovich, A. Acevedo [et al.] // Autophagy. - 2016. - 12(1). - P. 1-222. DOI: 10.1080/15548627.2015.1100356. Erratum in: Autophagy. 2016; 12(2):443. PMID: 26799652; PMCID: PMC4835977.
9. Kume S., Uzu Т., Horiike K. Calorie restriction enhances cell adaptation to hypoxia through Sirt1-dependent mitochondrial autophagy in mouse aged kidney/ S. Kume, T. Uzu, K. Horiike, M. Chin-Kanasaki, K. Isshiki, S. Araki [et al] // J. Clin. Invest. - 2010.- №120(4). - P. 1043-155. DOI: 10.1172/JCI41376. Epub 2010 Mar 24. PMID: 20335657; PMCID: PMC2846062.
10. Liu H., Javaheri Α., Godar R.J. Intermittent fasting preserves beta-cell mass in obesity-induced diabetes via the autophagy-lysosome pathway / H. Liu, A. Javaheri, R.J. Godar, J. Murphy, X. Ma, N. Rohatgi [et al.] // Autophagy. - 2017. №13(11). - P.1952-1968. DOI: 10.1080/15548627.2017.1368596. Epub 2017 Nov 25. PMID: 28853981; PMCID: PMC5788488.
11. Longo, V.D., Fontana, L. Calorie restriction and cancer prevention: metabolic and molecular mechanisms / V.D. Longo, L.Fontana // Trends Pharmacol Sci. -2010. - №31(2). - P. 89-98. DOI: 10.1016/j.tips.2009.11.004.
12. Longo, V.D., Fontana, L., Adelaiye, R.M. Dietary protein restriction inhibits tumor growth in human xenograft models / V.D. Longo, L. Fontana, R.M. Adelaiye, A.L. Rastelli, K.M. Miles [et al.] // Oncotarget. - 2013. - №4(12). - P. 2451-2461. DOI: 10.18632/oncotarget.l586.
13. Longo, V.D., Fontana, L., Kennedy, B.K. Medical research: treat ageing / V.D. Longo, L. Fontana, B.K. Kennedy, D. Seals, S. Melov // Nature.- 2014. - №511(7510). - P. 405-417. DOI: 10.1038/511405a.
14. Longo, V.D., Antebi, Α., Bartke, A. Interventions to Slow Aging in Humans: Are We Ready? / V.D. Longo, A. Antebi, A. Bartke, N. Barzilai, H.M. Brown-Borg, C. Caruso // Aging Cell. - 2015. - №14(4). - P. 497-510. DOI: 10.1111/acel.12338.
15. Ning Y.C., Cai G.Y., Zhuo L. Short-term calorie restriction protects against renal senescence of aged rats by increasing autophagic activity and reducing oxidative damage / Y.C. Ning, G.Y. Cai, L. Zhuo, J.J. Gao, D. Dong, S. Cui [et al.] // Mech. Ageing Dev. - 2013. - №134(11-12). - P. 570-579. DOI: 10.1016/j.mad.2013.11.006. Epub 2013 Nov 27. PMID: 24291536.
16. Ohsumi Y. Historical landmarks of autophagy research / Y. Ohsumi // Cell Res. - 2014. - №24. - P. 9-23. DOI: https://doi.org/10.1038/cr.2013.169
17. Ohsumi Y. Molecular dissection of autophagy: two ubiquitin-like systems / Y. Ohsumi // Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. - 2001. - №2(3). - P. 211-6. DOI: 10.1038/35056522. PMID: 11265251.
18. Pietrocola F., Demont Y., Castoldi F. Metabolic effects of fasting on human and mouse blood in vivo / F. Pietrocola, Y. Demont, F. Castoldi, D. Enot, S. Durand, M. Semeraro [et al.] // Autophagy. - 2017. - №13(3). - P. 567-578. DOI: 10.1080/15548627.2016.1271513. Epub 2017 Jan 6. PMID: 28059587; PMCID: PMC5361613.
19. Wohlgemuth S.E., Seo A.Y., Marzetti E. Skeletal muscle autophagy and apoptosis during aging: effects of calorie restriction and life-long exercise / S.E. Wohlgemuth, A.Y. Seo, E. Marzetti, H.A. Lees, C. Leeuwenburgh // Exp.Gerontol. - 2010. - №;45(2). - P.:138-148. DOI: 10.1016/j.exger.2009.11.002. Epub 2009 Nov 10. PMID: 19903516; PMCID: PMC2829942.
20. Yang L., Licastro D., Cava E. Long-Term Calorie Restriction Enhances Cellular Quality-Control Processes in Human Skeletal Muscle / L. Yang, D. Licastro, E. Cava, N. Veronese, F. Spelta, W. Rizza [et al] // Cell Rep.- 2016. -№14(3). - P. 422-428. DOI: 10.1016/j.celrep.2015.12.042. Epub 2016 Jan 7. PMID: 26774472.