БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ КОМПОЗИЦИЯ
BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOSITION

Предлагаемое изобретение относится к пищевой и химико-фармацевтической промышленности и касается биологически активной добавки к пище, которая может быть использована для профилактики ряда распространенных заболеваний, а также для повышения защитных сил организма, улучшения адаптации, то есть в качестве общеукрепляющего средства и для повышения работоспособности. Это средство прерывает различные патогенетические механизмы и ускоряет саногенез. Предотвращает процессы старения в организме. Оно обладает мощным антиоксидантным действием, блокирует свободнорадикальное окисление, оказывает капилляропротективный эффект. Улучшает мозговое и периферическое кровообращение, восстанавливает трофику тканей. Обладает иммуностимулирующим эффектом. Оказывает противовирусное действие. Положительно влияет на липидный и углеводный обмены - снижает уровень холестерина и глюкозы в крови при их повышении.
Известна смесь биофлаваноидов, полученная из измельченной древесины лиственницы, которая может быть использована как биологически активная добавка к пище (а.с. СССР №351847 "Способ выделения дигидрокверцетина"). Основу известной добавки составляет биофлаваноидное соединение природного происхождения дигидрокверцетин (3,3,4,5,7-пентагидроксифлавонон), а содержащиеся примеси имеют неизвестный состав.
Наличие в добавке примесей неизвестного состава ограничивает применение известной добавки, т.к. может привести к побочным явлениям.
Наиболее близким по совокупности существенных признаков к предлагаемой добавке является продукт из биофлаваноидных компонентов, получаемый из измельченной древесины лиственницы (п. РФ №2154967, опубл. 27.08.2000). Согласно изобретению в качестве биофлаваноидных компонентов он содержит дигидрокверцетин и дигидрокемпферол при следующем соотношении компонентов, мас.%:
дигидрокверцетин - 88-92,
дигидрокемпферол - 8-12.
Недостатком данной добавки является наличие в ней примесей неизвестного состава, употребление которых может привести к негативным побочным явлениям.
Технический результат данного изобретения заключается в восстановлении функционального состояния иммунной системы в условиях повышенных нагрузок, повышении резистентности организма в результате комплексного оздоравливающего воздействия на гуморальное и клеточное звенья иммунитета, а также на воспалительные реакции.
Неблагоприятная экологическая обстановка, высокий уровень загрязнения окружающей среды, частые и длительные стрессы (психоэмоциональные перегрузки), а также условия жизни в современном обществе, а именно: гиподинамия, продолжительная работа с компьютером, несбалансированное питание неблагоприятно влияют на функциональное состояние иммунной системы, провоцируя развитие вторичных иммунодефицитных состояний, что способствует активации латентных вирусов, в частности вируса простого герпеса.
Вирус простого герпеса выявляется в организме большинства взрослых (до 90%). При нормальном функциональном состоянии иммунной системы он ничем себя не проявляет. Нарушение адаптации и расстройство сбалансированной работы иммунной системы проявляются прежде всего рецидивами т.н. «простуды на губах», генитальным герпесом. Наряду с этими проявлениями расстройства функционального состояния иммунной системы и нарушения взаимодействия ее с нервной и эндокринной системами являются понижение CD 4/CD 8-Тлимфоцитов (Тх/Тс), лейкопения; повышение СОЭ; повышение СРБ; нарушение со стороны гуморального и клеточного звеньев иммунитета, рост воспалительных реакций. При этом возникает также выраженная усталость и мышечная слабость, которая не проходит после ночного сна, поверхностный сон с кошмарными сновидениями, трудности с засыпанием. Характерны изменчивость настроения в течение дня под влиянием самых незначительных психогенных факторов и периодически возникающее состояние депрессии.
Предложенный биокорректор обладает положительным влиянием на функциональное состояние иммунной системы, является источником витамина С, который не вырабатывается в организме человека, и источником биофлавоноидов.
Технический результат был достигнут тем, что предлагаемая биологически активная композиция к пище на основе дигидрокверцетина согласно изобретению содержит хитозан различной молекулярной массы, аскорбиновую кислоту и экстракт зеленого чая, при следующем соотношении компонентов в мг:
дигидрокверцетин - 2.5-3.0;
хитозан - 190-200;
аскорбиновая кислота - 3.0-4.0;
экстракт зеленого чая - 3.5-4.0.
Качественный состав добавки и количественное соотношение компонентов продиктован необходимостью комплексного эффекта, а именно: аскорбиновая кислота сама по себе хотя и является иммунокорректором, сама по себе не восстанавливает нормальное соотношение CD 4/CD 8-Тлимфоцитов (Тх/Тс). Дигидрокверцетин в отсутствии хитозана не способствует восстановлению формулы крови и уменьшению лейкопении. Хитозан не обладает выраженным капилляропротекторным и противовоспалительным эффектом, как аскорбиновая кислота и дигидрокверцетин. В то же время есть клинические данные о том, что хитозан усиливает усвоение аскорбиновой кислоты в 6 раз, повышая тем самым ее биодоступность.
Т.к. заявленная композиция относится к профилактическим и общеукрепляющим средствам при подборе дозировки исходили из рекомендаций института питания РАМН о предельно разрешенных дозах. Нижняя граница определялась положительным функциональным эффектом при применении композиции.
1
Дигидрокверцетин, как вещество с Р-витаминной активностью, усиливает положительные эффекты витамина С. Кроме того, обладает собственными мощными антиоксидантными и вазопротективными, радиопротекторными свойствами, противовирусной активностью. Хитозан обеспечивает транспорт дигидрокверцетина и витамина С через желудочно-кишечный тракт и пролонгирование их действия. Кроме того, под действием ферментов желудочно-кишечного тракта происходит частичный гидролиз высокомолекулярного хитозана с образованием олигосахаридов. Хитозан и олигосахариды хитозана способны снижать уровень холестерина в крови за счет секвестрации желчных кислот. Кроме того, олигосахариды хитозана, всасывающиеся в кишечнике, могут снижать уровень холестерина за счет активации метаболизма. Хитозан и его олигомеры (олигомеры - это и есть хитозан, но с более низкой молекулярной массой, еще его называют олигосахарид, ранее он упоминается как продукт частичного гидролиза хитозана в ЖКТ) могут контролировать уровень глюкозы в крови - высокомолекулярный хитозан, как пищевое волокно, уменьшает постпрандиальную гликемию, а олигомеры улучшают транспорт глюкозы через клеточную мембрану при метаболическом синдроме и сахарном диабете 2 типа. Хитозан восстанавливает поврежденные клеточные мембраны, действуя на клеточном уровне в различных тканях и органах, а также стимулирует иммунитет - повышает активность макрофагов, восстанавливает соотношение CD 4/CD 8-Тлимфоцитов, стимулирует выработку интерферонов, блокирует молекулы клеточной адгезии ICAM-1. Хитозан влияет на функцию эндотелия за счет стимуляции выработки оксида азота, мощного вазодилататора, положительно влияет на рост и размножение нормальной микрофлоры кишечника, подавляет развитие патогенных микроорганизмов, восстанавливает иммунитет на уровне кишечника (пейеровы бляшки), препятствует всасыванию токсинов и аллергенов. Зеленый чай обладает противовоспалительными свойствами. Кроме того, из всех известных растений в зеленом чае наибольшее содержание котехина, который снижает проницаемость стенок сосудов и обладает ярко выраженными противомутагенными свойствами. Алантаин, содержащийся в зеленом чае, снижает риск повреждения клеток головного мозга. Витамины B, P и K, а также микроэлементы зеленого чая усиливают антиоксидантную активность компонентов биологически активной композиции.
Являясь источником витамина С, веществ с Р-витаминной активностью и хитозана, предлагаемая композиция (добавка) может быть использована как БАД к пище для повышения резистентности организма к действию повреждающих факторов и «выгоранию» специалистов в условиях сложной экологической обстановки и постоянных стрессов (вызванных обостренностью социальных проблем в обществе). Она представляет собой эффективное средство профилактики сердечно-сосудистых, легочных заболеваний, иммунодефицитных состояний, синдрома хронической усталости, синдрома раздраженного кишечника, так как обладает выраженной антиоксидантной, вазопротективной, капилляропротективной активностью в сочетании с противоаллергическим, иммуностимулирующим, гастропротективным действием. Такой широкий спектр действия (плейотропные эффекты) обусловлен как известными свойствами дигидрокверцетина и аскорбиновой кислоты, так и наличием в ней хитозана, а также их количественным соотношением, что позволяет говорить о синергитической активности компонентов.
Синергетический эффект композиции в отношении повышения адаптивных свойств организма был показан в экспериментах на экспериментальных животных - беспородных крысах-самцах массой 250-300 г, выращенных в условиях вивария при свободном доступе к пище и воде и естественном чередовании суточной освещенности.
В качестве стрессорного фактора применялась гипобарическая гипоксия. Маркерами стресс-реакции служили активность лактатдегидрогеназы - одного из ключевых ферментов энергетического обмена, параметры системы крови - лейкоцитарная формула и лейкоцитарный коэффициент (отношение процента лимфоцитов к относительному содержанию сегментоядерных нейтрофилов), значение которого снижается при стрессе и увеличивается при устойчивой активации. В плазме крови также определяли показатели активности свободнорадикальных процессов по содержанию оснований Шиффа.
Животным (в каждой группе содержалось по 6 крыс) в течение 20 дней с периодичностью 1 раз в сутки перорально (через рот с помощью зонда) вводили заявляемую композицию. На 14-21 сутки после окончания курса введения производили забор крови из подъязычной вены и определяли вышеуказанные показатели.
Результаты исследований статистически обрабатывали с помощью программы BIOSTAT. Независимые выборки сравнивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа, непараметрических критериев Крускала-Уоллиса и Ньюмена-Кейлса.
Выявлены адаптогенные свойства заявляемой композиции. Гипоксия вызывала возникновение у контрольных животных стресс-реакции: нейтрофильный лейкоцитоз, лимфопению, снижение значений лейкоцитарного коэффициента, резкое увеличение активности лактат-дегидрогеназы. У животных опытной группы через 14 дней указанные показатели соответствовали значениям нормы (Таблица 1).
На чертеже показана активность ЛДГ (ммоль пирувата/мин × мкг белка) в плазме крыс через 14 дней после курсового перорального введения препаратов в условиях гипобарической гипоксии.
Полученные результаты показывают, что БАД оказывает синергетический энергосберегающий и адаптогенный эффект в условиях гипоксии.
Заявляемый БАД к пище обладает способностью повышать иммунитет, работоспособность, бороться с синдромом хронической усталости и прочими вирусными инфекциями. Введение в БАДы антиоксидантов, например аскорбиновой кислоты, дигидрокверцетина, способствует появлению дополнительного биологического эффекта - улучшению мозгового, коронарного и периферического кровообращения, что ускоряет реабилитацию после инфаркта и инсульта. Заявленный БАД к пище благодаря наличию хитозана улучшает состояние и самочувствие больных хроническими заболеваниями печени (воспалительные, жировой и алкогольный гепатоз) за счет восстановления функции гепатоцитов, нормализует повышенный уровень холестерина и глюкозы в крови, нормализует функцию желудочно-кишечного тракта, способствует заживлению эрозий и язв, начиная с уровня пищевода и желудка, устраняет гастриты и синдром раздраженного кишечника, нормализует микрофлору желудочно-кишечного тракта, а также опосредованно восполняет дефицит витаминов группы «В». БАД к пище, содержащий дигидрокверцетин, повышает активность головного мозга, положительно влияет на высшие мозговые функции, активизирует умственную работоспособность и творческий потенциал лиц, находящихся в процессе обучения или решения сложных проблем, замедляет процессы старения, предотвращает патологическое старение, оказывает благотворное влияние на продление активной жизни человека.
Заявляемая добавка представляет собой мелкодисперсный порошок от белого до светло-желтого цвета, не имеющий ни запаха, ни вкуса, и может выпускаться в капсулированной форме.
В результате проведенных клинических исследований было доказано, что после 20-дневного курса происходило улучшение состояния, повышение адаптации, уменьшение астении, улучшение переносимости умственных нагрузок, повышение работоспособности, исчезновение герпетических элементов.
Ниже приведены конкретные примеры заявленной композиции.
Больная А., 38 лет. Диагноз: Рецидивирующая герпетическая инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (тип 1). Синдром хронической усталости. Принимала БАД в течение 20-ти дней один раз в сутки по 12 капсул. Состав компонентов в одной капсуле: хитозан - 190 мг, дигидрокверцетин - 2,5 мг, аскорбиновая кислота - 4 мг, экстракт зеленого чая - 3,5 мг.
Показатели:
До применения
После применения
CD4+ кл./мкл до 450 (500-1100 - норма)
CD4+ кл./мкл до 606 (500-1100 - норма)
CD8+ кл./мкл до 600 (300-700 - норма)
CD8+ кл./мкл до 318 (300-700 - норма)
CD4/CD8=0,75 (N 1,2-2,0)
CD4/CD8=1,9 (N 1,2-2,0)
ЦИК=135 у.е. (норма до 130)
ЦИК=95 у.е. (норма до 130)
Формула крови
До применения
После применения
Лейкоциты 5,7·10<sup>9</sup> кл./л
Лейкоциты 6,4·10<sup>9</sup> кл./л
П1, С58, Л30, М11
Э1, П3, С60, Л32, М4
СОЭ 18 мм/ч
СОЭ 9 мм/ч
СРБ до ++
СРБ нет
Больная М., 28 лет. Диагноз: Рецидивирующая герпетическая инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (тип 1). Синдром хронической усталости. Принимала БАД в течение 20-ти дней один раз в сутки по 12 капсул. Состав компонентов в одной капсуле: хитозан - 200 мг, дигидрокверцетин - 3 мг, аскорбиновая кислота - 3 мг, экстракт зеленого чая - 4 мг.
Показатели:
До применения
После применения
CD4+ кл./мкл до 420 (500-1100 - норма)
CD4+ кл./мкл до 650 (500-1100 - норма)
CD8+ кл./мкл до 550 (300-700 - норма)
CD8+ кл./мкл до 400 (300-700 - норма)
CD4/CD8=0,76 (N 1,2-2,0)
CD4/CD8=1,6 (N 1,2-2,0)
ЦИК=140 у.е. (норма до 130)
ЦИК=90 у.е. (норма до 130)
9
9
Лейкоциты до приема - 4,7·10 кл./л, через две недели - 5,3·10 кл./л.
Больная С., 65 лет. Диагноз: Рецидивирующая герпетическая инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (тип 1). Принимала БАД в течение 20-ти дней один раз в сутки по 12 капсул. Состав компонентов в одной капсуле: хитозан - 200 мг, дигидрокверцетин - 3 мг, аскорбиновая кислота - 3 мг, экстракт зеленого чая - 4 мг.
Показатели:
До применения
После применения
CD4+ кл./мкл до 410 (500-1100 - норма)
CD4+ кл./мкл до 600 (500-1100 - норма)
CD8+ кл./мкл до 500 (300-700 - норма)
CD8+ кл./мкл до 370 (300-700 - норма)
CD4/CD8=0,82 (N 1,2-2,0)
CD4/CD8=1,6 (N 1,2-2,0)
ЦИК=145 у.е. (норма до 130)
ЦИК=100 у.е. (норма до 130)
9
9
Лейкоциты до приема - 4,9·10 кл./л, через две недели - 5,2·10 кл./л.
Через две недели от начала применения полностью прекратилось появление новых герпетических высыпаний.
Приведенные данные указывают на тенденцию к стабилизации показателей клеточного иммунитета, уменьшение выраженности воспалительных реакций.
Таблица 1
Содержание лейкоцитов и лейкоцитарная формула в крови крыс при моделировании гипобарической гипоксии через 14 дней после окончания перорального введения БАД. Компоненты вводили из расчета на 1 кг массы животного: хитозан - 38 мг, дигидрокверцетин - 0,5 мг, аскорбиновая кислота - 0,8 мг, экстракт зеленого чая - 0,7 мг.
Показатель
Интактные
Контроль (гипоксия)
Хитозан + аскорбиновая кислота
Экстракт зел. чая + дигидрокверцетин
Полная композиция
Лейкоциты, ×10<sup>9</sup> кл./л
17,1±1,15
26,9±2,32*
28,3±2,9*
28,0±3,1*
28,5±1,9*
Сегментоядерные нейтрофилы, %
12,8±0,88
22,9±2,2*
16,1±1,5
19,1±1,8*
12,4±1,29
Лимфоциты, %
73,4±1,9
58,1±2,9*
64,6±2,5*
61,2±2,2*
69,5±2,7#+<sup>0</sup>
Лейкоцитарный коэффициент
5,74±0,71
2,54±0,28*
4,01±0,22*+
3,2±0,24*
5,6±0,29#+<sup>0</sup>
Основания Шиффа, ед. опт. пл.
0,025±0,002
0,035±0,0006
0,032±0,0003
0,03±0,0002
0,025±0,002
Примечание: статистически значимые отличия:
* - p<0.05 по отношению к интактным животным;
# - p<0,05 по отношению к контролю (гипоксия).
+ - p<0,05 по отношению к группе «Экстракт зел. чая + дигидрокверцетин»
<sup>0 </sup>- p<0,05 по отношению к группе «Хитозан + аскорбиновая кислота»