ИСКУССТВЕННАЯ МОДИФИКАЦИЯ ГЕНОМА ДЛЯ РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА

1. Композиция, которая нацелена на последовательность-мишень в области TATA-бокса или энхансерной области гена PLP1, содержащая:
Streptococcus pyogenes
Campylobacter jejuni
белок Cas9, происходящий из  или , или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9; и
руководящую РНК, включающую руководящий cr-РНК и tracr-РНК, или нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК;
где cr-РНК содержит руководящий домен, способный нацеливаться на последовательность-мишень, и первый комплементарный домен,
где руководящий домен и первый комплементарный домен последовательно связаны в направлении от 5’ до 3’,
где первый комплементарный домен и tracr-РНК способны взаимодействовать с белком Cas9 с формированием комплекса руководящая РНК-Cas.
Streptococcus pyogenes
jejuni
2. Композиция по п. 1, где, когда белок Cas9 происходит из , последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 56-93, где, когда белок Cas9 происходит из Campylobacter, последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 94-115.
Streptococcus pyogenes
3. Комопозиция по п.1, где, когда белок Cas9 происходит из , первый комплементарный домен cr-РНК имеет последовательность 5’-GUUUUAGAGCUA-3’(SEQ ID NO: 296), и tracr-РНК имеет последовательность из последовательно связанных в направлении от 5’ до 3’ последовательностей 5’-UAGCAAGUUAAAAU-3’(SEQ ID NO: 299), 5’-AAGGCUAGUCCG-3’(SEQ ID NO: 302) и 5’-UUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC-3’(SEQ ID NO: 304),
Campylobacter jejuni
где, когда белок Cas9 происходит из , первый комплементарный домен cr-РНК имеет последовательность 5’-GUUUUAGUCCCUUUUUAAAUUUCUU-3’ (SEQ ID NO: 297), и tracr-РНК имеет последовательность из последовательно связанных в направлении от 5’ до 3’ последовательностей 5’-AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU-3’ (SEQ ID NO: 300), 5’-AAAGAGUUUGC-3’ (SEQ ID NO: 303) и 5’-GGGACUCUGCGGGGUUACAAUCCCCUAAAACCGCUUUU-3’ (SEQ ID NO: 305).
4. Композиция по п. 1, где руководящая РНК композиции представляет собой одноцепочечную руководящую РНК, в которой cr-РНК, линкер и tracr-РНК последовательно связаны в направлении от 5’ до 3’.
5. Композиция по п. 4, где линкер имеет последовательность 5’-GAAA-3’.
6. Композиция по п. 1, где композиция содержит белок Cas9 и руководящую РНК в Форме рибонуклеопротеин (RNP).
7. Композиция по п. 1, композиция представлена в форме вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9, и нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК.
8. Способ лечения болезни Пелициуса-Мерцбахера (PMD), включающий:
введение субъекту композиции для редактирования гена PLP1,
где композиция содержит
Streptococcus pyogenes
Campylobacter jejuni
белок Cas9, происходящий из  или , или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9; и
Streptococcus pyogenes
где, когда белок Cas9 происходит из , последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 56-93,
Campylobacter jejuni
где, когда белок Cas9 происходит из , последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 94-115;
руководящую РНК, содержащую cr-РНК и tracr-РНК, или нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК,
где cr-РНК содержит содержит руководящий домен, способный нацеливаться на последовательность-мишень, и первый комплементарный домен,
где руководящий домен и первый комплементарный домен последовательно связаны в направлении от 5’ до 3’,
где первый комплементарный домен и tracr-РНК способны взаимодействовать с белком Cas9 с формированием комплекса руководящая РНК-Cas.
9. Способ лечение PMD по п. 8, где композиция содержит белок Cas9 и руководящую РНК в Форме рибонуклеопротеин (RNP).
10. Способ лечения PMD по п. 8, композиция представлена в форме вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9, и нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК.
11. Способ редактирования области TATA-бокса или энхансерной области гена PLP1 в клетке, включающий:
введение субъекту композиции для редактирования гена PLP1,
где композиция содержит
белок Cas9, происходящий из Streptococcus pyogenes или Campylobacter jejuni, или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9; и
руководящую РНК, содержащую cr-РНК и tracr-РНК, или нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК,
где cr-РНК содержит содержит руководящий домен, способный нацеливаться на последовательность-мишень, и первый комплементарный домен,
где руководящий домен и первый комплементарный домен последовательно связаны в направлении от 5’ до 3’,
где первый комплементарный домен и tracr-РНК способны взаимодействовать с белком Cas9 с формированием комплекса руководящая РНК-Cas.
Streptococcus pyogenes
12. Способ по п. 11, где, когда белок Cas9 происходит из , последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 56-93,
Campylobacter jejuni
где, когда белок Cas9 происходит из , the последовательность-мишень выбирают из SEQ ID NO: 94-115.
Streptococcus pyogenes
13. Способ по п. 11, где, когда белок Cas9 происходит из , первый комплементарный домен cr-РНК имеет последовательность 5’-GUUUUAGAGCUA-3’(SEQ ID NO: 296), и tracr-РНК имеет последовательность из последовательно связанных в направлении от 5’ до 3’ последовательностей 5’-UAGCAAGUUAAAAU-3’(SEQ ID NO: 299), 5’-AAGGCUAGUCCG-3’(SEQ ID NO: 302) и 5’-UUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGC-3’(SEQ ID NO: 304),
Campylobacter jejuni
где, wherein, когда белок Cas9 происходит из , первый комплементарный домент cr-РНК имеет последовательность 5’-GUUUUAGUCCCUUUUUAAAUUUCUU-3’ (SEQ ID NO: 297), и tracr-РНК имеет последовательность из последовательно связанных в направлении от 5’ до 3’ последовательностей 5’-AAGAAAUUUAAAAAGGGACUAAAAU-3’ (SEQ ID NO: 300), 5’-AAAGAGUUUGC-3’ (SEQ ID NO: 303) и 5’-GGGACUCUGCGGGGUUACAAUCCCCUAAAACCGCUUUU-3’ (SEQ ID NO: 305).
14. Способ по п. 11, где руководящая РНК композиции представляет собой одноцепочечную руководящую РНК, в которой cr-РНК, линкер и tracr-РНК последовательно связаны в направлении от 5’ до 3’.
15. Способ по п. 14, где линкер одноцепочечной руководящей РНК имеет последовательность 5’-GAAA-3’.
16. Способ по п. 14, где композиция содержит белок Cas9 и руководящую РНК в Форме рибонуклеопротеин (RNP).
17. Способ по п. 11, где композиция представлена в форме вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Cas9, и нуклеиновую кислоту, кодирующую руководящую РНК.