МУЛЬТИПОТЕНТНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ, ПОЛУЧЕННЫЕ ИЗ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ЧЕЛОВЕКА, И СОДЕРЖАЩИЕ ИХ КЛЕТОЧНЫЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ АГЕНТЫ

1. Способ получения взрослых стволовых клеток, включающий культивирование осадка, полученного из жировой ткани человека в среде, содержащей N-ацетил-L-цистеин (NAC), и последующий сбор культивированных взрослых стволовых клеток, которые характеризуются следующим:
(a) демонстрируют положительные иммунологические ответы на CD73, CD90, CD29, CD44 и CD105 и отрицательные иммунологические ответы на CD33, CD34, CD45, CD4, CD31, CD62p, CD14 и HLA-DR;
(b) растут с прикреплением к пластиковому материалу, демонстрируя веретенообразную морфологию и формируя сферы в среде, содержащей CORM-2, что делает возможным их поддержание в недифференцированном состоянии в течение длительного периода времени; и
(c) обладают способностью дифференцироваться в клетки мезодермального происхождения.
2. Способ по п.1, в котором NAC-содержащая среда дополнительно содержит аскорбиновую кислоту, кальций, rEGF, BPE, инсулин и гидрокортизон.
3. Способ поддержания взрослых стволовых клеток в недифференцированном состоянии, включающий культивирование взрослых стволовых клеток, полученных способом по п.1 или 2 в среде, содержащей CORM-2, для формирования сфер.
4. Способ поддержания взрослых стволовых клеток в недифференцированном состоянии, в котором содержащая CORM-2 среда представляет собой бессывороточную среду, которая дополнительно содержит раствор противогрибковых антибиотиков, гидрокортизон, инсулин, rEGF, FGF, B27 и β-меркаптоэтанол.
5. Взрослые стволовые клетки, полученные способом по п.1 или 2, которые характеризуются следующим:
(a) демонстрируют положительные иммунологические ответы на все из CD73, CD90, CD29, CD44 и CD105 и отрицательные иммунологические ответы на все из CD33, CD34, CD45, CD4, CD31, CD62p, CD14 и HLA-DR;
(b) растут с прикреплением к пластиковому материалу, демонстрируя веретенообразные морфологические особенности и формируя сферы в среде, содержащей CORM-2, что делает возможным их поддержание в недифференцированном состоянии в течение длительного периода времени; и
(c) обладают способностью дифференцироваться в клетки мезодермального происхождения.
6. Взрослые стволовые клетки по п.5, которые культивируются в недифференцированном состоянии, по меньшей мере, в течение 16 пассажей.
7. Взрослые стволовые клетки по п.5, где клетки мезодермального происхождения выбираются из группы, состоящей из: клеток хряща, остеогенных клеток, нервных клеток, астроцитов, жировых клеток и высвобождающих инсулин бета-клеток поджелудочной железы.
8. Способ дифференцировки взрослых стволовых клеток в нервные клетки, включающий следующие стадии:
(а) преинкубацию взрослых стволовых клеток по любому из пп.5-7 в среде DMEM, содержащей ВМЕ и FBS; и
(а) обработку проинкубированной жидкой питательной среды диметилсульфоксидом и ВНА для индукции дифференцировки в нервные клетки.
9. Клеточный терапевтический агент для лечения нервного заболевания, содержащий в качестве активных ингредиентов нервные клетки, дифференцированные способом по п.8.
10. Способ дифференцировки взрослых стволовых клеток в клетки хряща, включающий культивирование взрослых стволовых клеток по любому из пп.5-7 в среде α-МЕМ, содержащей TFG-β1, L-аскорбат-2-фосфат и инсулин.
11. Клеточный терапевтический агент для лечения остеоартрита, содержащий в качестве активных ингредиентов клетки хряща, дифференцированные способом по п.10.
12. Способ дифференцировки взрослых стволовых клеток в остеогенные клетки, включающий смешивание взрослых стволовых клеток по любому из пп.5-7 с трикалцийфосфатом (TCP) и изотрансплантацию данной смеси.
13. Клеточный терапевтический агент для лечения дефицита кости, содержащий в качестве активных ингредиентов остеогенные клетки, дифференцированные способом по п.12.
14. Способ дифференцировки взрослых стволовых клеток в жировые клетки, включающий культивирование взрослых стволовых клеток по любому из пп.5-7 в среде α-МЕМ, содержащей дексаметазон, индометацин, инсулин и IBMX.
15. Клеточный терапевтический агент для формирования ткани молочной железы, содержащий в качестве активных ингредиентов жировые клетки, дифференцированные способом по п.14.
16. Способ дифференцировки взрослых стволовых клеток в высвобождающие инсулин бета-клетки поджелудочной железы, включающий следующие стадии:
(а) культивирование взрослых стволовых клеток по любому из пп.5-7 среде DMEM с низким содержанием глюкозы, содержащей никотинамид, β-меркаптоэтанол и FBS в течение 12-72 ч; и
(b) последующее культивирование этих клеток в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы, содержащей никотинамид, β-меркаптоэтанол и FBS в течение 4-7 дней.
17. Клеточный терапевтический агент для лечения диабета, содержащий в качестве активных ингредиентов высвобождающие инсулин бета-клетки поджелудочной железы, дифференцированные способом по п.16.
18. Клеточный терапевтический агент для лечения нервного заболевания, содержащий в качестве активных ингредиентов взрослые стволовые клетки по любому из пп.5-7, которые обладают способностью дифференцировки в нервные клетки.
19. Клеточный терапевтический агент для лечения диабета, содержащий в качестве активных ингредиентов взрослые стволовые клетки по любому из пп.5-7, которые обладают способностью дифференцировки в высвобождающие инсулин бета-клетки поджелудочной железы.
20. Клеточный терапевтический агент для лечения остеоартрита, содержащий в качестве активных ингредиентов взрослые стволовые клетки по любому из пп.5-7, которые обладают способностью дифференцировки в клетки хряща.
21. Клеточный терапевтический агент для лечения дефицита кости, содержащий в качестве активных ингредиентов взрослые стволовые клетки по любому из пп.5-7, которые обладают способностью дифференцировки в остеогенные клетки.
22 Клеточный терапевтический агент для формирования ткани молочной железы, содержащий в качестве активных ингредиентов взрослые стволовые клетки по любому из пп.5-7, которые обладают способностью дифференцировки в жировые клетки.