СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КАРЦИНОМЫ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ диагностики карциномы или остаточного заболевания, ассоциированного с ней, или прогноза карциномы, или мониторинга эффективности противоопухолевой терапии, направленной против карциномы, или мониторинга последующего состояния индивидуума, пораженного карциномой, включающий:
(1) приведение выделенных стволовых клеток взрослого в контакт с выделенным образцом гемодеривата;
(2) проверку экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера в указанных стволовых клетках.
2. Способ по п.1, где указанная карцинома выбрана из группы, состоящей из: колоректальной карциномы, карциномы желудка, карциномы молочной железы, легочной карциномы, карциномы простаты, карциномы печени, карциномы яичника, карциномы почки, карциномы щитовидной железы, карциномы мочевого пузыря и карциномы поджелудочной железы.
3. Способ по п.1, где указанный выделенный образец гемодеривата представляет собой сыворотку или плазму.
+
+
+
+
+
+
+
+
4. Способ по п.1, где указанные стволовые клетки представляют собой плюрипотентные стволовые клетки и предпочтительно выбраны из: мезенхимных стволовых клеток, CD133 клеток, CD44 клеток, CD90 клеток, CD29 клеток, CD105 клеток, CD117 клеток, CD56 клеток и CD73 клеток.
5. Способ по п.1, где указанный эпителиальный маркер представляет собой цитокератин, предпочтительно СК-18, СК-19, СК-20 или СК-21, более предпочтительно СК-19.
6. Способ по п.1, где указанная стадия (1) приведения стволовых клеток в контакт с образцом гемодеривата включает стадию посева указанных стволовых клеток на подложку и стадию разведения образца в культуральной среде для стволовых клеток.
7. Способ по п.6, где указанное разведение образца гемодеривата в клеточной культуральной среде варьирует от 1:2 до 1:20, предпочтительно от 1:4 до 1:8.
8. Способ по п.6, где указанный образец, разведенный в культуральной среде, добавляют к указанным стволовым клеткам.
9. Способ по п.8, где указанные стволовые клетки выращивают в образце, разведенном в культуральной среде, в течение периода времени в диапазоне от 48 до 180 ч, предпочтительно от 90 до 150 ч.
10. Способ по п.1, где указанную стадию проверки экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера осуществляют посредством методики, выбранной из группы, состоящей из: иммунофлуоресценции, иммуногистохимии, ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) и RT-PCR (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой); предпочтительно PCR в режиме реального времени.
11. Способ по п.10, где указанная стадия определения экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера посредством ELISA включает стадии:
(1) лизиса стволовых клеток, которые были приведены в контакт с образцом гемодеривата;
(2) приведения аликвоты белкового лизата, полученного на предыдущей стадии, в контакт с по меньшей мере антителом, направленным против эпителиального маркера, причем указанное антитело предпочтительно адсорбировано на подходящей подложке; и
(3) определения связи между по меньшей мере эпителиальным маркером и указанным антителом.
12. Способ по п.10, где указанная стадия определения экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера посредством иммунофлуоресценции включает стадии:
(1) фиксирования стволовых клеток, приведенных в контакт с указанным образцом гемодериватов, на предметном стекле;
(2) приведения указанных клеток, фиксированных как указано на предыдущей стадии, в контакт с по меньшей мере антителом, направленным против эпителиального маркера; и
(3) определения связи между по меньшей мере эпителиальным маркером, экспрессируемым дифференцированными стволовыми клетками и указанным антителом.
13. Способ по любому из пп.10-12, где указанную стадию определения экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера осуществляют после удаления из клеток указанного образца гемодеривата, разведенного в культуральной среде.
14. Способ по п.1, где мониторинг эффективности противоопухолевой терапии, направленной против карциномы, включает сравнение уровней экспрессии по меньшей мере эпителиального маркера в выделенном образце от больного индивидуума на различных стадиях терапевтического лечения, которому индивидуум подвергается.
15. Способ по п.1, где указанный способ характеризуется специфичностью, которая варьирует от 60% до 100%, предпочтительно от 70% до 90%.
16. Способ по п.1, где указанный способ характеризуется чувствительностью, которая варьирует от 60% до 100%, предпочтительно от 70% до 90%.
17. Набор для осуществления способа по п.1, содержащий:
(1) по меньшей мере антитело, направленное против эпителиального маркера, где указанное антитело предпочтительно конъюгировано с флуорохромом или с ферментом, или по меньшей мере пару олигонуклеотидов для амплификации по меньшей мере маркера эпителиального типа; и/или
(2) образец стволовых клеток; и/или
(3) среду для культивирования указанных стволовых клеток.
18. Набор по п.17, где указанное антитело направлено против цитокератина, предпочтительно цитокератина 18, цитокератина 19, цитокератина 20 или цитокератина 21, более предпочтительно цитокератина 19.
19. Набор по п.17, дополнительно содержащий вторичное антитело, направленное против указанного антитела, направленного против по меньшей мере эпителиального маркера, где указанное вторичное антитело конъюгировано с флуорохромом или ферментом.
20. Набор по п.17, дополнительно содержащий одноразовые, стерильные или стерилизуемые инструменты, предпочтительно многолуночный планшет, причем указанный планшет предпочтительно предварительно обработан по меньшей мере антителом, направленным против указанного по меньшей мере эпителиального маркера.
21. Набор по п.17, дополнительно содержащий вещества, полезные для проведения стадии определения, причем указанные вещества выбраны из группы, состоящей из: раствора для проведения амплификации по меньшей мере маркера эпителиального типа, содержащего обратную транскриптазу, фермент для амплификации ДНК, соли, смесь нуклеотидов, поверхностно-активные вещества или восстановители; или раствор для клеточного лизиса, раствор для промывки, фиксирующий раствор, блокирующий раствор, нейтрализующий раствор и раствор для определения.