Способ моделирования хеликобактериоза
HELICO-BACTERIOSIS SIMULATION METHOD

Изобретение относится к экспериментальной медицине, медицинской микробиологии и инфектологии и может быть использовано для изучения приживаемости, колонизирующей способности и персистенции в организме млекопитающих бактерий Helicobacter pylori и вызываемых ими патологических изменений в желудке, а также для оценки эффективности новых средств лечения и профилактики хеликобактериоза.
Хеликобактериоз - инфекционное заболевание с фекально-оральным механизмом передачи, вызываемое бактериями Helicobacter pylori, имеющими выраженную тропность к эпителию слизистой оболочки желудка. Уровень инфицирования хеликобактером детей составляет около 10%, в то время как взрослое население инфицировано практически на 100%. В настоящее время Helicobacter pylori рассматривается как один из факторов, вызывающих хроническое воспаление желудка - хеликобактериоз и способствующих развитию гастрита, язвенной болезни и новообразований желудка (Goodwin C.S., Armstrong J.A., Marshall B.J. Campylobacter pyloris, gastritis, and peptic ulcer // J. Clin. Pathol. - 1986. - Vol. 39. - P. 353-365). Хеликобактер приспособился к длительному пребыванию в желудке, в антральной части которого он скапливается в большом количестве. Именно здесь относительно мало клеток, секретирующих соляную кислоту, что способствует выживанию хеликобаетера на поверхности эпителия желудка.
К роду Helicobacter в настоящее время относится до 10 видов бактерий: Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii, Helicobacter mustalae, Helicobacter felis и др. Основным возбудителем заболевания у людей является Helicobacter pylori. Это грамотрицательные, короткие извитые, S- образные бактерии средних размеров, подвижные, имеющие 4-5 жгутиков, лофотрохи. Не растут на питательных средах, содержащих глицерин, желчные соли и хлорид натрия. Оксидазо- и каталазоположительные, проявляют выраженную уреазную активность, обладают фосфатазой, образуют сероводород, не свертывают молоко. Уреаза Helicobacter pylori (мочевинная амидогидролаза) определяет основные звенья патогенеза хеликобактариоза, начиная от адгезии и колонизации слизистой оболочки желудка вплоть до формирования преканцероза желудка (Mobley Н. The role of Helicobacter pylori urease in the pathogenesis of gastritis and peptic ulceration // Alim. Pharmacol. Ther. -1996. -Vol. 10 (Suppl. 1). - P. 57-64). Фермент обладает абсолютной специфичностью в отношении единственного субстрата - мочевины, которую он расщепляет гидролитическим путем до аммиака и угольной кислоты. Уреаза совместно с другими ферментами Helicobacter pylori (фосфолипазами, протеазами, муциназами) разрушают защитный слизистый барьер желудка и воздействуют на мембраны эпителиоцитов. Данные электронной микроскопии свидетельствуют о том, что при этом клеточные мембраны переходят из гидрофобного состояния в гидрофильное. Такая структурная перестройка снижает резистентность клеток желудочного эпителия к соляной кислоте. Важно при этом отметить, что аммиак, образующийся под влиянием Helicobacter pylori, соединяется с соляной кислотой желудка с образованием цитотоксических продуктов, в том числе гидроксиламина и монохлорамина. Последние усугубляют повреждения клеток желудочного эпителия (Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. - М.: Триада - X. -1998.- 496 с; Шкитин В.А., Шкирина А.И., Старовойтов Г.Н. Роль Helicobacter pylori в патологии человека // Клин. микробиол. и антимикроб, химиотерапия. - 2002. - Т. 4, №2. - С. 128-145.). Высокая степень корреляции уреазной активности Helicobacter pylori с гистологическими признаками хронического гастрита продемонстрированы F. Morris (Morris F., Maher К., Thomsen L. et al. Distribution of Campylobacter pylori in the human stomach obtained at postmortem // Scand. J. Gastroenterol. -1988. - Vol. 23. - P. 257-264). Наконец, уреаза, обладающая прямым воздействием на эпителиальные тканевые структуры желудка, рассматривается в качестве потенциального промотора предраковых изменений слизистой оболочки кишечника (Tsujii М, Kawano S., Tsujii S. et al. Ammonia: a possible promotor in Helicobacter pylori - related gastric carcinogenesis // Cancer Lett. - 1992. -Vol. 65.-P. 15-18). Можно констатировать, что свойства уреазы Helicobacter pylori уникальны, позволяющие бактериям колонизировать желудок и выживать в организме хозяина. Длительная персистенция Helicobacter pylori в слизисто -бикарбонатном барьере патологической биопленки создает известные трудности в диагностике и лечении хликобактериоза (Нижевич А.А., Хасанов Р.Ш. Helicobacter pylori: введение в патогенез и патобиохимию гастрита // Материалы VIII тематической сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori, 18 мая 1999 г, Уфа./ www.Helicobacter.ru/index.php?i=59; Helicobacter pylori - инфекция: современные аспекты диагностики и терапии (пособие для врачей) / НИИ физико-химической медицины МЗ РФ, Научно-производственная фирма «Литех», Научный Центр Здоровья Детей, Центральная Клиническая Больница МЦ УД Президента РФ. - М.: - 2004. - 41 с.). Очевидно, что именно этим обстоятельством можно объяснить данные статистики, согласно которым полное выздоровление наблюдается лишь у 15% больных хеликобактериозом, и, как ни странно, далеко не все пациенты, инфицированные Helicobacter pylori, заболевают раком желудка.
Проявления хеликобактериоза весьма индивидуальны, но они затрудняют жизнь больного и заставляют обращаться к врачу. Начиная лечение, врач исходит из стандартной тройной схемы эрадикационной терапии, рекомендованной Российской Гастроэнтерологической Ассоциацией, а именно с первой линии лечения: ингибиторы протонной помпы, антибиотики кларитромицин и амоксициллин или метронидазол (Рекомендация Российской Гастроэнтерологической Ассоциации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых / В.Т. Ивашкин, И.В. Маев, Т.Л. Лапина, А.А. Шептуллин - Комитет по подготовке проекта рекомендации. Методические рекомендации: РЖГГК - №1. - С. 87-89). Для более адекватного терапевтического воздействия на возбудителя хеликобактериоза целесообразно в эксперименте на лабораторных животных выявить факторы и условия, способствующие длительной персистенции бактерий в желудке и поддержанию хронического воспаления. Экспериментальный хиликобактериоз для изучения характера патологических изменений стенки желудка лабораторных животных, а также для обоснования лечебных режимов, нуждается в определенном обосновании и установлении последовательности действий, направленных на уничтожение (эрадикацию) Helicobacter pylori в слизистой оболочке желудка с целью создания благоприятных условий для заживления язвы и предупреждения ее перерождения в раковую опухоль. То, что эрадикация Helicobacter pylori возможна, свидетельствует успешный опыт одного из авторов открытия бактерий Helicobacter pylori B.J. Marshall по самозаражению возбудителем и излечению приобретенного хеликтобактериозного гастрита в результате двухнедельного курсового приема метронидозола и солей висмута. В последующем именно этот метод лег в основу современной эрадикации Helicobacter pylori. Это тем более важно, что полученные в ходе экспериментов на лабораторных животных результаты можно в последующем экстраполировать на организм человека как в плане профилактики, так и лечения хеликобактериоза.
До настоящего времени вопрос о моделировании хеликобактериоза не решен. В доступной литературе нет описания специальных исследований, выполненных в данном направлении. Имеются лишь сведения о прогрессирующей атрофии слизистой оболочки желудка, у взятых в эксперименты крыс, вследствие продолжительного введения в желудок аммиака. Последующая малигнизация тканей желудка развилась на фоне усиленной клеточной пролиферации с постепенным формированием низкодифференцированных аденокарцином (Tsujii М., Kawano S., Tsujii S. et al. Cell kinetics of mucosal atrophy in rat stomach induced by long-term administration of ammonia // Gastroenterology.- 1933. - Vol. - 104. - P. 769-801.; Tsujii M., Kawano S., Tsujii S. et al. Mechanism for ammonia-induced promotor of gastric carcinogenesis in rats // Carcinogenesis. - 1995. - Vol. 16. - P. 563-566). Возможным объяснением трудностей, возникающих в связи с попытками моделирования хеликобактериоза, является тот факт, о котором 20.06.2015 г.сообщил информационно-аналитический портал «Русская Планета», что животные практически никак не реагируют на хеликобактера и не страдают связанными с ним болезнями. И эта констатация фактически переводит хеликобактериоз в разряд антропонозов, что с очевидностью усложняет проблему моделирования данной инфекции, но при этом делает ее более интересной.
Целью изобретения является разработка способа, позволяющего моделировать хеликобактериоз у лабораторных животных.
Технический результат, который может быть достигнут при использовании данного способа, заключается в том, что у лабораторных животных можно проследить этапность развития инфекции, вызванной бактериями Helicobacter pylori, начиная от адгезии и колонизации бактериями слизистой оболочки кишечника и до хронического воспаления желудка, изъязвления или до новообразования. Другим аспектом решения указанной проблемы является возможность изучения длительности пребывания возбудителя Helicobacter pylori в тканях желудка и выделения из организма с кишечным содержимым, а также оценки терапевтической эффективности эрадикации Helicobacter pylori при использовании существующих и создаваемых средств и методов лечения и профилактики хеликобактериоза.
Технический результат достигается:
- формированием хеликобактериоза путем перорального введения лабораторным животным суспензии бактерий Helicobacter pylori на фоне медикаментозного подавления финальной стадии секреции соляной кислоты под действием ингибиторов протонного насоса в желудке;
- формированием хеликобактериоза путем перорального введения лабораторным животным суспензии бактерий Helicobacter pylori на фоне иммуносупрессивного эффекта от внутримышечного введения Дексаметазона.
+
Согласно инструкции (Инструкция по медицинскому применению препарата Париет. Производитель «ЭсаиКо», ЛТД, Япония. Регистрационный номер П NO 118890/01), препарат Париет подавляет секрецию желудочного сока путем специфического ингибирования H7R-АТФазы на секреторной поверхности париетальных клеток желудка. В наших экспериментах (Чичерин И.Ю., Лундовских И.А., Погорельский И.П., Гаврилов К.Е., Янов С.Н., Дармов И.В. Влияние подавления секреции желудочного сока препаратом Париет на приживаемость бифидобактерий и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных // Журн. международной медицины. - 2012. - №1 (1). - С. 98-104) эти данные получили полное подтверждение. Таким же ингибитором протонного насоса в желудке, блокирующим финальную стадию продукции соляной кислоты, является препарат Омепразол (производитель АО «АКРИХИН», Россия). Оба препарата создают условия в организме лабораторных животных, фактически устраняющие кислотный барьер в желудке, конкуренцию кишечной микробиоты, и способствующие приживлению бактерий Helicobacter pylori прежде всего в антральном отделе желудка.
Дексаметазон (производитель KRKA, Словения), согласно инструкции по применению, является мощным синтетическим глюкокортикоидным препаратом, содержащим гормоны коры надпочечников и их синтетические аналоги, который предназначен для регуляции белкового, углеводного и минерального обмена. Иммуносупрессивный эффект дексаметазона обусловлен вызываемой им инволюцией лимфоидной ткани, угнетением пролиферации лимфоцитов (особенно Т-лимфоцитов), подавлением миграции В-клеток и взаимодействия Т- и В-лимфоцитов, торможением миграции цитокинов (интерлейкина 1, интерлейкина 2, интерферона гамма) из лимфоцитов и макрофагов, снижением образования антител.
Суточные дозы вводимых белым мышам препаратов с учетом переводного коэффициента составили: для препарата Париет 52 мкг, а для Дексаметазона - 40 мкг на одно животное.
Важным элементом исследований является установление количества бактерий Helicobacter pylori, адгезированных на эпителиоцитах слизистой оболочки желудка. Исследуют мазки-отпечатки слизистой оболочки желудка, полученные у пациентов при эндоскопии из участков, где обнаружены визуальные отклонения от нормы (отек, гиперемия). Одну часть полученных мазков высушивают, окрашивают и просматривают под микроскопом при увеличении ×360; другую часть мазков используют для окраски «кампи-теста» или для посева на плотную питательную среду, на которой подсчитывают количество выросших при оптимальной температуре колоний Helicobacter pylori. Во всех случаях - либо при микроскопии окрашенных препаратов, либо по времени изменения окраски «кампи-теста», либо при подсчете выросших на плотной питательной среде колоний Helicobacter pylori, определяют обсемененность бактериями слизистой оболочки желудка. Условно выделяют 3 степени обсемененности хеликобактером слизистой оболочки желудка: слабая обсемененность - (+), что соответствует 20 микробам в поле зрения или 10 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста», в течение 24 часов; средняя обсемененность - (++), что соответствует 20-40 микробам в поле зрения или 10-20 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста» в течение 2-3 часов; высокая обсемененность - (+++),что соответствует 40 и более микробам в поле зрения или свыше 50 выросшим на плотной питательной среде колониям, либо изменению окраски «кампи-теста» в течение 1 часа.
R
-1
Важным показателем, характеризующим размножение хеликобактера в желудке и его дальнейшее проникновение в кишечник, является выделение бактерий Helicobacter pylori из фекалий животных. Данное исследование на людях не проводится ввиду невозможности отличить хеликобактер от представителей кишечной микробиоты. В этой связи необходимо отметить важную особенность заявляемого способа, которая заключается в том, что в работе для перорального введения животным используют маркированный по признаку устойчивости к антибиотику рифампицину штамм Helicobacter pylori КМ-11 (Rif). Маркерный признак обеспечивает возможность идентификации хеликобактера Helicobacter pylori в фекалиях животных при их высеве на селективную плотную питательную среду с рифампицином в концентрации 150 мкг×мл, на которой бактерии кишечной микрофлоры и другие бактерии не растут (Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундовских И.А., Янов С.Н. Способ оценки выживаемости бифидо- и лактобактерий в желудочно-кишечном тракте экспериментальных животных. Патент №2528867. Российская Федерация, опубл. 20.09.2014. Бюл. №26. Номер охранного документа МПК C12Q 1/04, МПК C12Q 1/06).
R
R
-1
Для выращивания бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif), полученных из мазков-отпечатков слизистой оболочки желудков павших животных, а также установления факта возможного выделения с фекалиями животных бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) и их количественной оценки, суспензию фекалий белых мышей высевают на селективную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл) и выращивают в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С. Пропись селективной питательной среды включает следующие компоненты при их количественном соотношении, г/л:
- пептон
20,0
- дрожжевой экстракт
5,0
- натрий хлористый
10,0
- глюкоза
5,0
- тиамина хлорид
0,008
- кальция пантотенат
0,008
- натрия сульфит
0,5
- гемин
0,01
- агар-агар
12,0
- твин-80
1,0
- рифампицин
150 мкг⋅мл<sup>-1</sup>
- дистиллированная вода
остальное
рН среды 7,3±0,2 ед. рН
R
R
Плотная питательная среда приведенной прописи обеспечивает рост бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif), маркированных по признаку устойчивости к рифампицину - Rif, уже через 24 ч инкубации в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в отличие от традиционно используемого колумбийского агара с кровью, на котором хеликобактер растет 5 суток (Колумбийский агар (основа). Кат. № TN 1247 (для культивирования требовательных микроорганизмов и выявления гемолиза) Производитель: SIFIN Institute fur Immunpraparate und Nahrmedien Gmb H, Берлин, Германия).
Гистологическое исследование желудка у павших лабораторных животных проводят после фиксации ткани в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживают в изопропаноле и заливают в парафин. Приготовленные на микротоме препараты желудка окрашивают гематоксилином Эрлиха и эозином, просматривают на микроскопе «Микмед-2» (ООО «ЛОМО», Россия) при увеличении ×200, ×1000, после чего выносят суждение о выраженности патологического процесса. Пример 1
R
5
Выращивают культуру бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в течение 24 ч, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия исходя из расчета 1×10 микробных клеток в объеме 0,2 мл.
-1
-1
Берут необходимое количество прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18 - 20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Ежедневно отбирают от каждого животного фекалии, взвешивают их, после чего суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на селективную плотную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл) в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях. С учетом массы фекалий, полученных от каждого животного, делают перерасчет числа бактерий на 1 г фекалий (КОЕ×г).
Готовят суспензию препарата Париет на дистиллированной воде из расчета 52 мкг в 0,2 мл воды (оптимальный объем для перорального введения белым мышам).
R
R
Ежедневно белым мышам вводят перорально препарат Париет на дистиллированной воде. Через 1-1,5 ч, в течение которых развивается антисекреторный эффект препарата Париет, животным вводят перорально один раз в сутки 0,2 мл суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) на изотоническом растворе хлорида натрия. Введение суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) продолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых их организма животных.
R
R
R
Обрабатывают полученные результаты высева фекалий на селективную питательную среду с рифампицином, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о приживаемости бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) в стенке желудка, о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (Rif).
R
R
R
-1
-1
-1
Заявленный способ позволяет установить приживаемость хеликобактера в желудке, долю выживших маркированных (Rif) бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif), введенных перорально белым мышам и прошедших через желудочно-кишечный тракт. Полученные результаты свидетельствуют, что в фекалиях животных хеликобактер появляется уже на 3 день после начала перорального введения белым мышам; на 4 день количество бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) достигает 25000 КОЕ.ги в последующем снижается к 10 дню эксперимента до 180 КОЕ.г, а после прекращения перорального введения - стабилизируется на уровне 190-195 КОЕ.г на 16 день эксперимента. Приведенные данные созвучны опубликованным результатам, согласно которым только около 10% клеток Helicobacter pylori, обитающих в желудке, находятся в адгезированном состоянии, остальные эвакуируются из желудка в кишечник. Но даже этого количества адгезированных на слизистой оболочке желудка бактерий достаточно для развития болезни (Пиманов С.И. Эзофагит, гастрит и язвенная болезнь. - М: Мед. книга - 2000. - 378 с.).
R
В случае летального исхода заболевания у одного или нескольких подопытных животных проводят патологоанатомическое и гистологическое исследование желудка и начальных отделов кишечника, а также бактериологическое исследование биоптатов разных участков слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Макропрепарат слизистой оболочки желудка при развившемся хеликобактериозе на фоне перорального введения препарата Париет, где 1 - норма, а 2 - патология, представлен на фигуре 1. Гистологическое исследование срезов желудков белых мышей, павших от инфицирования бактериями хеликобактера на фоне перорального введения препарата Париет показало, что основными мишенями воздействия Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) в слизистой оболочке желудка являются эпителиоциты, подвегающиеся трансформации с последующими изменениями в виде дистрофии, атрофии, кишечной метаплазии и распространения воспалительного процесса из антрального (пилорического) отдела на тело желудка с преобладанием атрофических процессов в слизистой оболочке и формированием диффузного атрофического пангастрита.
Пример 2
R
5
Выращивают культуру бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С в течение 24 ч, после чего готовят бактериальную суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия, исходя из расчета 1×10 микробных клеток в объеме 0,2 мл.
Готовят раствор Дексаметазона из расчета 40 мкг в 0,1 мл дистиллированной воды на одно животное.
-1
-1
Берут необходимое количество прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18 - 20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. Ежедневно отбирают от каждого животного фекалии, взвешивают их, после чего суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают на селективную плотную питательную среду с рифампицином (150 мкг×мл) в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 24-48 ч в микроаэрофильных условиях. С учетом массы фекалий от каждого животного делают перерасчет числа бактерий на 1 г фекалий (КОЕ×г).
Вводят 0,1 мл раствора Дексаметазона белым мышам внутримышечно в течение 10 дней.
R
R
Через 2 ч после внутримышечного введения раствора Дексаметазона животным вводят перорально один раз в сутки 0,2 мл суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) на изотоническом растворе хлорида натрия. Введение суспензии бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) продолжают в течение 10 суток, ежедневно отбирая фекалии для определения количества хеликобактерий, выводимых их организма животных.
R
R
R
Обрабатывают полученные результаты высева фекалий на селективную питательную среду с рифампицином, основываясь на количестве выросших колоний, и выносят суждение о приживаемости бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) в стенке желудка, о начале бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) с фекалиями животных, интенсивности, длительности и продолжительности бактериовыделения Helicobacter pylori КМ-11 (Rif).
R
R
R
-1
-1
-1
Заявленный способ позволяет установить приживаемость хеликобактера в желудке, долю выживших маркированных (Rif) бактрий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif), введенных перорально белым мышам и прошедших через желудочно-кишечный тракт.Полученные результаты свидетельствуют, что в фекалиях животных единичные бактерии хеликобактера появляются на 3 день после начала перорального введения белым мышам; на 4 день количество бактерий Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) достигает 28000 КОЕ×г и в последующем снижается к 10 дню эксперимента до 190 КОЕ×г, а после прекращения перорального введения -стабилизируется на уровне 210-215 КОЕ×г на 16 день эксперимента. Таким образом, после адгезии хеликобактер интенсивно размножается, колонизирует слизистую оболочку антрального отдела желудка, вызывая ее повреждение, воспаление и утяжеление течения болезни (Окороков А.Н. Диагностика болезней внутренних органов. - М.: Мед. лит.- Т. 1. - 1999. - 560 с.).
R
R
В случае летального исхода заболевания у одного или нескольких подопытных животных проводят патологоанатомическое и гистологическое исследование желудка и начальных отделов кишечника, а также бактериологическое исследование биоптатов разных участков слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. При инициации хеликобактериоза внутримышечным введением белым мышам Дексаметазона развивается выраженное прогрессирующее повреждение слизистой оболочки желудка с участками изъязвления. Макропрепарат слизистой оболочки желудка при развившемся хеликобактериозе на фоне внутримышечного введения раствора препарата Дексаметазона, где 1 - норма, а 2 - патология представлен на фигуре 2. В дне и по краям изъязвленных участков отмечается рубцовая ткань, нарушающая трофику новообразованной слизистой оболочки и, по-видимому, способствующая рецидивированию язвы. Одновременно наблюдается желудочная метаплазия эпителия кишки, которая способствует проникновению бактерий хеликобактера в кишечник, где выявляются эпителиоциты с соответствующими рецепторами для Helicobacter pylori КМ-11 (Rif). При этом отмечается чередование процессов изъязвления и регенерации с формированием хронической дуоденальной язвы, для которой характерна высокая степень обсемененности Helicobacter pylori КМ-11 (Rif) начала двенадцатиперстной кишки.