СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВИРУС-АССОЦИИРОВАННОГО ГАСТРОДУОДЕНИТА У ДЕТЕЙ
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR VIRUS-ASSOCIATED GASTRODUODENITIS IN CHILDREN

Изобретение относится к медицине, а именно к детской гастроэнтерологии, и может быть использовано для выявления вирусов в желудке и двенадцатиперстной кишке, ассоциированных с хроническим гастродуоденитом, у детей и обеспечения дифференцированного подхода к терапии.
Хронический гастродуоденит является одним из самых распространенных заболеваний у детей и занимает в структуре патологии верхних отделов пищеварительного тракта первое место, характеризуясь частым рецидивированием, риском развития диспластических изменений, и представляет серьезную проблему в гастроэнтерологии.
Современными исследователями показано, что в этиологии хронических воспалительных заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта, наряду с Helicobacter pylori, играют роль вирусы группы герпеса - 1, 2, 6, 7, 8 типов, Эпштейна-Барр, цитомегаловируса, в том числе вируса папилломы человека при вышеуказанной патологии и предопухолевых процессах в желудке (Высоцкий В.И. и соавт. Ассоциация опухолевых и предопухолевых заболеваний желудка с онкогенными вирусами // Сибирский онкологический журнал. - 2007. - №2. - С.35-36).
Существуют данные, что персистенция некоторых герпес-вирусов утяжеляет течение воспалительной патологии гастродуоденальной области, а наличие в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки вирусов папилломы человека определенных типов связано с высоким канцерогенным риском.
Следовательно, установление этиологических факторов патологии позволяет не только повысить эффективность проводимых лечебных мероприятий, но и улучшить прогноз заболевания.
Поскольку вирусная теория является новой, но перспективной в отношении этиологической диагностики гастродуоденальных заболеваний, продолжение исследований в данной области является актуальной проблемой современной гастроэнтерологии, особенно в педиатрии.
Известен способ определения Н. pylori и Herpesviridae методом иммуногистохимического исследования участков генома микроорганизмов в биопсийном материале слизистой оболочки и одновременно в мононуклеарных клетках крови, осуществляемый в целях прогноза развития хронических воспалительных заболеваний гастродуоденальной области.
Наличие вирусов определяют при обнаружении микроорганизмов по меньшей мере двух и более видов в биоптатах и в клетках периферической крови (Нелюбин В.Н. Иммунопатогенетические особенности развития хронического воспаления у больных с гастродуоденальной патологией, обусловленной Helicobacter pylori и вирусами герпеса: Автореф. дис. докт. мед. наук: 14.03.09. / Нелюбин Владимир Николаевич. - Москва, 2011. - 45 с.).
Известен способ выявления вирусов простого герпеса, цитомегаловируса, а также вирусов папилломы человека методом полимеразной цепной реакции в биоптатах слизистой оболочки желудка (Волынец Г.В., Клембовский А.И., Новикова А.В. Морфологические изменения слизистой оболочки желудка у детей с хроническим гастритом в зависимости от этиологических факторов заболевания // Российский педиатрический журнал. - 2006. - №4. - С.32-44; Высоцкий, В.И. и соавт. Ассоциация опухолевых и предопухолевых заболеваний желудка с онкогенными вирусами // Сибирский онкологический журнал. - 2007. - №2. - С.35-36).
Известен способ иммуногистохимического исследования, который используют для выявления герпес-вирусов в биоптатах гастродуоденальной слизистой оболочки (Новикова В.П., Крулевский В.А., Петровский А.Н. Эпштейн-Барр вирусная инфекция при нехеликобактерном хроническом гастрите у лиц разного возраста // Инфекции и иммунитет. Достижения фармакотерапии. - 2008. - 3 (28) - С.87-90).
Все вышеперечисленные способы являются трудоемким и дорогостоящим, так как включают суммарно несколько методик определения для каждого диагностируемого микроорганизма.
За прототип предлагаемого изобретения взят «Способ диагностики ВЭБ-ассоциированного гастродуоденита у детей», патент РФ №2436090), включающий эндоскопическое обследование ребенка и морфологическое исследование слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.
Сущность данного способа заключается в выявлении числа тучных клеток, превышающих определенное значение клеток инфильтрата в биоптатах слизистой оболочки тела желудка и двенадцатиперстной кишки с последующим иммуногистохимическим исследованием или ПЦР-диагностикой вирусов Эпштейна-Барр, при котором диагностируют ВЭБ-ассоциированный гастродуоденит.
Данный способ требует забора нескольких биоптатов слизистой оболочки и трудоемкой методики подсчета количества тучных клеток.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка простого и менее травматичного способа скрининга хронического гастродуоденита, ассоциированного с вирусами в желудке и двенадцатиперстной кишке у детей.
Данная задача решается тем, что в способе диагностики вирус-ассоциированного гастродуоденита у детей, включающем эндоскопическое обследование ребенка и морфологическое исследование слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, в собственной пластинке гастродуоденальной слизистой оболочки выявляют лимфоидные фолликулы без мантии и инфильтрацию покровного эпителия межэпителиальными лимфоцитами с зонами лизиса и при наличии таковых диагностируют вирус-ассоциированный гастродуоденит.
Новизна способа обусловлена тем, что в доступной научно-практической литературе предлагаемое решение не использовалось - ни в гастроэнтерологии, ни в педиатрии - для решения поставленной задачи.
Научно-технический уровень изобретения обусловлен новой научной информацией, полученной в результате проведенных исследований, связанных с изучением роли изменений микрофлоры верхних отделов желудочно-кишечного тракта при хроническом гастродуодените у детей и установлением факта наличия взаимосвязи присутствия лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и инфильтрации покровного эпителия межэпителиальными лимфоцитами (МЭЛ) с зонами лизиса с выявлением вирусов простого герпеса 1, 2 типов, или цитомегаловируса, или вирусов папилломы человека высокого канцерогенного риска 16, 18 типов ПЦР-исследованием в желудке и двенадцатиперстной кишке у детей с хроническим гастродуоденитом.
Таким образом, факт обязательного присутствия лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и инфильтрации покровного эпителия МЭЛ с зонами лизиса при наличии вирусов простого герпеса, цитомегаловируса или вирусов папилломы человека у детей с хроническим гастродуоденитом, позволяющий применять данные морфологические критерии в качестве скрининга вирус-ассоциированного гастродуоденита, установлен авторами изобретения.
Промышленная применимость способа и его работоспособность подтверждены на материале обследования и лечения 94 детей с хроническим гастродуоденитом.
Морфологическое исследование биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки проводилось одновременно с ПЦР-исследованием ДНК вирусов герпеса 1, 2 типов, цитомегаловируса, вирусов папилломы человека 16, 18 типов в биоптатах слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки и желудочном соке. Установлено, что при наличии лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и инфильтрации покровного эпителия МЭЛ с зонами лизиса в гастродуоденальной области выявлялись вирусы в 100% случаев, и наоборот, при выявлении вирусов в 92% случаев наблюдались лимфоидные фолликулы без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и в 100% случаев - инфильтрация эпителия МЭЛ с зонами лизиса.
Техническим результатом изобретения является выявление вирусов на материале одного биоптата с использованием одной методики.
Способ осуществляют следующим образом.
Больному проводят ФГДС исследование по общепринятой методике с применением гибких эндоскопов с забором биоптата слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки для последующего морфологического исследования.
Биоптат подвергают стандартной гистологической обработке с получением парафиновых срезов толщиной 5 мкм, окрашенных гематоксилином и эозином. Выявляют лимфоидные фолликулы без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и МЭЛ с зонами лизиса среди клеток инфильтрата в поверхностном или ямочном эпителии.
Присутствие лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки и инфильтрации покровного эпителия МЭЛ с зонами лизиса расценивают как диагностический критерий наличия вирусов герпеса 1, 2 типа, или цитомегаловируса, или вирусов папилломы человека 16, 18 типов в гастродуоденальной области. Для определения конкретного вируса у исследуемых пациентов применяют ПЦР-диагностику.
Примеры конкретного исполнения способа приведены в виде выписок из историй болезни.
1. Юлия И., 7 лет. История болезни №558/164 от 25.02.2011 г., диагноз: хронический гастродуоденит (диффузный пангастрит средней степени активности, пандуоденит сильной степени активности), период обострения. Из анамнеза заболевания известно, что страдает гастродуоденитом с 2008 г. (4 года), рецидивы 2-3 раза в год. При поступлении в стационар предъявляет жалобы на сильные боли в области пупка ноющего характера. По данным ФГДС отмечается эритематозно-экссудативный пангастрит, выраженный, пандуоденит, выраженный. Морфологическое исследование биоптатов желудка и двенадцатиперстной кишки: диффузный пангастрит средней степени активности, пандуоденит сильной степени активности, отмечается присутствие лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и инфильтрация покровного эпителия МЭЛ с зонами лизиса. ПЦР-исследование биоптата двенадцатиперстной кишки на наличие ДНК папиллома-вирусов 16 типа - положительное.
2. Арсений Л., 10 лет. История болезни №916/262 от 29.03.2011 г., диагноз: хронический гастродуоденит (поверхностный фундальный гастрит средней степени активности, диффузный антральный гастрит сильной степени активности, диффузный пандуоденит средней степени активности), период обострения. Наблюдался по поводу данного заболевания в течение 3 лет, рецидивы отмечались 5 раз. При поступлении предъявляет жалобы на интенсивные боли в области пупка, правом подреберье. По данным ФГДС отмечается эритематозно-экссудативный пангастрит умеренно выраженный, бульбит выраженный, постбульбарный дуоденит умеренно выраженный. Морфологическое исследование биоптатов желудка и двенадцатиперстной кишки: поверхностный фундальный гастрит средней степени активности, диффузный антральный гастрит сильной степени активности, диффузный пандуоденит средней степени активности, отмечается присутствие лимфоидных фолликулов без мантии в собственной пластинке слизистой оболочки антрального отдела желудка и двенадцатиперстной кишке и инфильтрация покровного эпителия МЭЛ с зонами лизиса. ПЦР-исследование биоптата антрального отдела желудка на наличие ДНК вирусов герпеса 1, 2 типа - положительное.
Предлагаемый способ диагностики вирус-ассоциированного гастродуоденита у детей, по сравнению с известными, является более простым, но менее травматичным, трудоемким и дорогостоящим.
Это позволяет использовать его у детей с хроническим гастродуоденитом на базе лечебных и диагностических учреждений, оптимизировать тактику обследования больных с данной патологией и обеспечить более дифференцированный подход к терапии.