СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ЦИФРОВОЙ ПЦР

1. Способ детектирования нуклеиновой кислоты-мишени, включающий:
фракционирование образца на множество объемов образца, где более чем 50% фракций содержат не более чем 1 молекулу нуклеиновой кислоты - мишени на объем образца;
воздействие на множество объемов образца с помощью условий для амплификации;
детектирование изменения ионной концентрации в объеме образца, где присутствует нуклеиновая кислота-мишень;
подсчет количества фракций с амплифицированной нуклеиновой кислотой-мишенью; и
определение количества нуклеиновой кислоты-мишени в образце.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий объединение образца с праймерами и зондами для амплификации.
3. Способ по п. 1, где изменение ионной концентрации представляет собой повышение ионной концентрации.
4. Способ по п. 1, дополнительно включающий объединение образца с гранулой.
5. Способ по п. 1, дополнительно включающий загрузку образца на субстрат, где субстрат включает, по меньшей мере, одну лунку.
6. Способ по п. 5, дополнительно включающий покрытие, по меньшей мере, одной лунки с помощью несмешивающегося слоя жидкости.
7. Способ по п. 5, где, по меньшей мере, одна лунка включает покрытие.
8. Способ по п. 7, где покрытие представляет собой гидрофильное покрытие.
9. Способ по п. 1, дополнительно включающий расположение каждого из множества образцов во множестве изолированных положений, где каждое из множества изолированных положений находится в химической коммуникации с сенсором.
10. Способ по п. 1, где изменение ионной концентрации представляет собой повышение количества ионов водорода.
11. Способ по п. 1, где изменение ионной концентрации представляет собой изменение pH.
12. Способ по п. 1, дополнительно включающий количественную оценку количества нуклеиновой кислоты-мишени.
13. Способ осуществления оценки абсолютного количества нуклеиновой кислоты, включающий:
разведение образца, содержащего исходное количество нуклеиновой кислоты-мишени, во множестве объемов образца, где процент реакционных областей, содержащих одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты - мишени, составляет более чем 50% и менее чем 100%;
воздействие на множество объемов образца с помощью, по меньшей мере, одного цикла амплификации;
детектирование изменения ионной концентрации, по меньшей мере, в одном из множества объемов образца в результате, по меньшей мере, одного цикла амплификации;
количественную оценку исходного количества нуклеиновой кислоты-мишени.
14. Способ по п. 13, где изменение ионной концентрации представляет собой ее повышение.
15. Способ по п. 13, где ион представляет собой положительный ион.
16. Способ по п. 15, где положительный ион представляет собой ион водорода.
17. Способ по п. 13, где ион представляет собой отрицательный ион.
18. Устройство для осуществления ПЦР, включающее
держатель для образцов, сконфигурированный для фракционирования образца на множество объемов образца, где более чем 50% фракций содержит не более чем 1 молекулу нуклеиновой кислоты-мишени на объем образца, и дополнительно сконфигурированный для поддержания образца;
сенсорный слой в химической коммуникации с устройством для поддержания образца; и
по меньшей мере, один сенсор в электрической коммуникации с сенсорным слоем.
19. Устройство по п. 18, где устройство для поддержания образца представляет собой матрицу.
20. Устройство по п. 19, где матрица представляет собой внеклеточную матрицу.
21. Устройство по п. 18, где устройство для поддержания образца представляет собой гель.
22. Устройство по п. 21, где гель представляет собой гидрогель.
23. Устройство по п. 18, где устройство для поддержания образца локализовано вокруг, по меньшей мере, части периферии сенсора.