Биологические свойства цитомеди-нов, выделенных из внутренних органов животных, перенесших кровопотерю

Таким образом, при исследовании спектральных характеристик пульсовой волны выявлены информативные параметры для определения состояния регуляторных систем организма. Полученные данные в дальнейшем будут использо-

ваны при разработке алгоритма диагностических правил распознавания нарушения активности систем регуляции при определении заболевания по традиции тибетской медицины.

Литература

1. Десова А.А., Дорофеюк А.А., Гучук В.В. Исследование структуры пульсового сигнала лучевой артерии на базе информации о его спектральном составе // Биомедицинская радиофизика. 2007. - №11. С. 15-20.

2. Леднева И.П. К интерпретации основных понятий тибетской медицины // Традиционная медицина. - 2011. - №5. -С.26-28.

3. Чжуд-ши: канон тибетской медицины: пер. с тибет., предисл., примеч., указатели Д.Б. Дашиева. - М.: Восточная литература, 2001. - 766 с.

4. Азаргаев Л.Н., Бороноев В.В., Поплаухин В.Н., Сторчун Е.В. Патент № 2085111 (РФ). Устройство для измерения пульса/Опубликовано 27.07.97. Бюл.№21.

Аюшеева Лыгжима Владимировна, кандидат медицинских наук, инженер, лаборатория волновой диагностики живых систем, Институт физического материаловедения СО РАН. Тел. (3012) 434694, факс (3012) 433238. E-mail: ligzh66@mail.ru Бороноев Виталий Васильевич, доктор технических наук, профессор, зав.лаб., лаборатория волновой диагностики живых систем, Институт физического материаловедения СО РАН. Тел. (3012) 434694, факс (3012) 433238. E-mail: vboronoi ev2001 @mail.ru.

Гармаев Баир Заятуевич, научный сотрудник, лаборатория волновой диагностики живых систем, Институт физического материаловедения СО РАН. Тел. (3012) 434694, факс (3012) 433238. E-mail: bair.garmaev@gmail.com

Леднева Ирина Павловна, кандидат биологических наук, научный сотрудник, лаборатория волновой диагностики живых систем, Институт физического материаловедения СО РАН. Тел. (3012) 434694, факс (3012) 433238. E-mail: ledn@vandex.ru

Омпоков Вячеслав Дамдинович, научный сотрудник, лаборатория волновой диагностики живых систем, Институт физического материаловедения СО РАН. Тел. (3012) 434694, факс (3012) 433238. E-mail: slvd@mail.ru.

Ayusheeva Lygzhima Vladimirovna, candidate of medical sciences, engineer, laboratory of wave diagnostics of living systems, Institute of Physical Material Science, SB RAS. E-mail: ligzh66@mail.ru

Boronoev Vitaly Vasilevich, doctor of engineering, professor, head of the laboratory of wave diagnostics of living systems, Institute of Physical Material Science, SB RAS. E-mail: vboronoiev2001 @mail.ru

Garmaev Bair Zayatuevich, researcher, laboratory of wave diagnostics of living systems, Institute of Physical Material Science, SB RAS. E-mail: bair.garmaev@gmail.com

Ledneva Irina Pavlovna, candidate of biological sciences, researcher, laboratory of wave diagnostics of living systems, Institute of Physical Material Science, SB RAS. E-mail: ledn@vandex.ru

Ompokov Vyacheslav Damdinovich, researcher, laboratory of wave diagnostics of living systems, Institute of Physical Material Science, SB RAS. E-mail: slvd@mail.ru.

УДК 615.361.419.015.4:616.005.1

© И.Н. Есаулоеа, Н.Н.Цыбикое, В.А. Тарнуее, О.Ж. Гармаева

Биологические свойства цитомедииов, выделенных из внутренних органов животных,

перенесших кровопотерю

Статья посвящена углубленному изучению действия регуляторных пептидов, выделенных из тканей сердца и печени животных при кровопотере, и их влияния на иммунодефицитные состояния. Цитомедины, выделенные из внутренних органов (сердце и печень) экспериментальных животных, усиливают экспрессию СБЗ-, СБ4-, СБ8-маркеров и Ж-клеток на лимфоцитах, полученных от больных со вторичными иммунодефицитными состояниями.

Ключевые слова: кровопотеря, СБ-маркеры, цитомедины, иммунодефицитные состояния.

I.N. Esaulova, N.N. Tsybikov, V.A. Tarnuev, O.Zh. Garmaeva

The biological properties of cytomedines allocated from the internal organs of animals

undergone loss of blood

The article is devoted to the study of the action of regulatory peptides, allocated from heart and liver tissues of animals at loss of blood and their influence on immunodeficiency states. Cytomedines, allocated from internal organs (heart and liver) of experimental animals, increase expression of CD3-, CD4-, CD8-markers and NK-cells on lymphocytes received from sick patients with secondary immunodeficiency.

Keywords: loss of blood, CD-markers, cytomedines, immunodeficiency states.

Острая кровопотеря представляет собой едва ли не самое распространенное повреждение организма на пути эволюции человека и является одной из актуальных проблем современной медицины [6]. В ответ на кровотечение возникает комплекс компенсаторных и патологических реакций [3].

Известно, что кровопотеря сопровождается активацией системы иммунитета, это проявляется в возникновении «активированных лимфоцитов», увеличении уровня антител, активацией реакции неспецифического иммунитета [1, 2, 5]. Основное место в регуляции системы иммунитета отводится медиаторам, в том числе щелочным полипептидам - цитомединам, которые являются пептидами межклеточной регуляции и обеспечивают гомеостаз организма. Последние образуются в клетках различных органов в результате катапсинового протеолиза, проникают в жидкие среды организма и способны специфическим образом через рецепторы воздействовать на лимфоциты [4, 5, 6, 7, 8].

Одним из перспективных направлений исследования адаптационных реакций организма в ответ на острую кровопотерю является изучение свойств эндогенных пептидов (цитомединов), продуцируемых органами, тканями и клетками, способных вмешиваться в реализацию самых различных функций организма [3, 4, 6, 9].

Целью настоящего исследования явилось изучение биологических свойств пептидов, выделенных из печени и сердца животных, перенесших острую кровопотерю.

Материалы и методы

Эксперименты проведены на 20 животных (бараны). Все животные были разделены на 2 группы: опытные (10 баранов), которым пунктировали яремные вены и извлекали кровь в объеме, равном 30% ОЦК за 5 дней до забоя, и контрольные - без предварительного кровопускания (10 баранов). Забой проводился в соответствии с «Правилами проведения работ с исполь-

зованием экспериментальных животных» (Приложение 4 к Приказу М3 СССР №755 от 12. 08. 1977). Для получения цитомединов были взяты внутренние органы баранов - ткани печени и сердца. Выделение цитомединов проводилось методом уксусно-кислой экстракции с последующим осаждением комплекса полипептидов ацетоном (Морозов, Хавинсон, 1999).

Нами проводилось исследование биологической активности цитомединов на 24 образцах крови доноров (16 мужчин и 8 женщин) в возрасте от 31 до 55 лет (средний возраст 39,6±1,7), не имеющих соматических, психических заболеваний, и 30 образцах крови пациентов со вторичными иммунопатологическими состояниями (20 мужчин и 10 женщин) в возрасте от 19 до 59 лет (средний возраст 40,4±2,4). Группа больных представлена пациентами АУ РБ Республиканского клинического госпиталя для ветеранов войн, ГУ Республиканской клинической больницы г. Улан-Удэ. У всех больных диагноз ХОБЛ подтвержден данными анамнеза, клиники, функциональных и рентгенологических методов исследований в соответствии с Федеральной программой по ХОБЛ (Москва, 2004), рекомендациями Европейского респираторного общества по ХОБЛ (Consensus Statement of the European Respiratory Society, 2003) GOLD (Global Initiative for Obstructive Lung Disease, 2008). Наличие вторичного иммунодефицитного состояния выявлялось по результатам иммунологического исследования.

Перед проведением исследования опытные порошки (цитомедины) растворяли в соотношении 100 мкг в 1,0 мл физиологического раствора. Для инкубации с лимфоцитами бралось 0,1 мл раствора. Длительность инкубации составляла 60 мин. Полученные результаты выражали в кл/мкл. Лимфоциты выделялись на градиенте Фиколл-урографин с плотностью 1,077 г/см3, дважды отмывались средой 199 или раствором Хенкса. Выявление поверхностных маркеров

лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD22+ и CD 16+) проводили с помощью моноклональных антител реакцией иммунофлюоресценции (РИФ). Использовали моноклональные антитела (ТОО «МедБиоСпектр», Москва). Оценку реакции осуществляли по проценту светящихся клеток. Анализировалась динамика изменений CD-маркеров лимфоцитов, инкубированных с «контрольными» и «опытными» пептидами в среде роста RPMI-1640. В качестве контроля проводили аналогичные тесты с введением физиологического раствора.

Полученные данные были обработаны статистически общепринятыми методами с применением пакета прикладной программы «BIOSTAT» и программы статистического анализа Microsoft Excel, версия ХР. Исследуемые параметры приведены в виде средних величин со стандартным отклонением М± SD, где М -среднее значение, SD - среднее квадратичное отклонение. Для анализа нормальности распределения данных применялся параметрический t-критерий Стьюдента; если гипотеза нормальности отвергалась, показатель достоверности

вычислялся с помощью рангового непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при р<0,05.

Результаты и их обсуждение Прежде всего мы решили выяснить, как влияют пептиды, полученные до и после крово-потери из внутренних органов животных, на экспрессию СО-маркеров лимфоцитов.

Известно, что введение цитомединов в организм существенным образом меняет иммунологический потенциал. Цитомедины модулируют течение реакций как врожденного, так и адаптивного иммунитета [4]. Последнее представляет максимальный интерес, т.к. специфический иммунитет наиболее эффективен в повышении антибактериальной резистентности организма. Поэтому в первую очередь мы решили оценить биологические свойства цитомединов, выделенных из печени и сердца как интактных, так и перенесших кровопотерю баранов. Причем лимфоциты-индикаторы выделяли из крови как доноров, так и больных с явлениями иммунодефицита.

Таблица 1

Влияние пептидов из печени животных, полученных до и после кровопотери, на экспрессию СО-маркеров лимфоцитов доноров и больных

Изучаемые показатели (хЮ3кл/мкл) Лимфоциты доноров Лимфоциты больных

Физиологический раствор (контроль)п=24 Контрольные пептиды (опыт I) п=24 Опытные пептиды (опыт II) п=24 Физиоло- гический раствор (контроль) п=30 Контрольные пептиды (опыт I) п=30 Опытные пептиды (опыт II) п=30

Т-лимфо-циты CD3+ Pi Р2 Рз 0,61+0,09 0,58+0,1 0,53+0,12 0,63+0,21 1,01+0,18 <0,05 1,06+0,12 <0,05

Т-хелперы CD4+ Pi Р2 Рз 0,48+0,04 0,47+0,11 0,5+0,1 0,41+0,12 0,72+0,2 <0,05 0,76+0,21 <0,05

Т-лимфо-циты CD8+ Pi Р2 Рз 0,33+0,07 0,35+0,06 0,31+0,05 0,24+0,06 0,38+0,03 <0,05 0,37+0,08 <0,05

В-лимфоци-ты CD22+ 0,31+0,04 0,37+0,13 0,38+0,11 0,26+0,03 0,41+0,21 0,35+0,09

NK CD 16+ Pi Р2 Рз 0,41+0,07 0,27+0,1 <0,05 0,29+0,12 <0,05 0,23+0,05 0,51+0,08 <0,05 0,45+0,06 <0,05

Примечание:

Р! - достоверность различий между контролем и опытом I; р2- достоверность различий между опытом I и опытом II; Рз _ достоверность различий между контролем и опытом II

В таблице 1 представлены данные по динамике экспрессии СБ-маркеров лимфоцитов доноров под влиянием пептидов, полученных из печени баранов до и после кровопотери. Как видно, пептиды, выделенные из печени практически не оказывают эффекта на экспрессию СЮ-маркеров лимфоцитов.

Несколько иная картина обнаруживается при анализе результатов исследования лимфоцитов больных. Оказалось, что интактные цитомедины усиливают экспрессию маркеров С 03+ (Р1<0,05), СБ4+ (Р!<0,01), СБ8+ (Р1<0,02), СБ16+ (р1<0,05). Вместе с тем подобный эффект выявлен и у «опытных» цитомединов. Так, пептиды, выделенные из печени баранов, перенес-

ших кровопотерю, усиливают по сравнению с исходными данными экспрессию маркеров СБЗ+ (р3<0,05), СБ4+ (р3<0,05), СБ8+ (р3<0,05), СБ16+ (р3<0,05).

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что пептиды печени ин-тактных и опытных баранов способны менять экспрессию СБ-маркеров в большей степени на лимфоцитах, выделенных из крови пациентов.

В таблице 2 представлены результаты экспериментов по изучению экспрессии С О-маркеров лимфоцитов, выделенных из крови доноров, при стимуляции цитомединами, полученными из сердца интактных, а также перенесших кровопотерю баранов.

Таблица 2

Влияние пептидов из сердца животных, полученных до и после кровопотери, на экспрессию СБ-маркеров лимфоцитов доноров и больных

Изучаемые показатели (хЮ3кл/мкл) Лимфоциты доноров Лимфоциты больных

Физиологический раствор (контроль) п=24 Контрольные пептиды (опыт I) п=24 Опытные пептиды (опыт II) п=24 Физиоло- гический раствор (контроль) п=30 Контрольные пептиды (опыт I) п=30 Опытные пептиды (опыт II) п=30

Т-лимфо-циты СБЗ+ Рі Р2 Рз 0,61+0,09 0,6+0,05 0,63+0,07 0,63+0,21 0,86+0,39 <0,05 0,92+0,15 <0,05 <0,05

Т-хелперы СБ4+ Рі Р2 Рз 0,48+0,04 0,51+0,06 0,53+0,05 0,41+0,12 0,54+0,21 <0,05 0,68+0,09 <0,05 <0,05

Т-лимфо-циты СБ8+ Рі Р2 Рз 0,33+0,07 0,35+0,04 0,42+0,08 <0,05 0,24+0,06 0,39+0,08 <0,05 0,49+0,1 <0,05 <0,05

В-лимфо-циты СБ22+ Рі Р2 Рз 0,31+0,04 0,35+0,04 0,37+0,07 0,26+0,03 0,29+0,06 0,34+0,11 <0,05

Ж СБ16+ Рі Р2 Рз 0,41+0,07 0,23+0,04 <0,001 0,52+0,03 <0,05 <0,05 0,23+0,05 0,35+0,12 <0,05 0,49+0,06 <0,05 <0,05

Примечание: условные обозначения те же, что и в таблице 1

Наши наблюдения показали, что выраженного сдвига общего количества Т- и В-лимфоцитов, а также их различных популяций не произошло. Однако зарегистрированы изме-

нения при инкубации пептидов из сердца баранов до кровопотери с взвесью лимфоцитов здоровых людей. Так, число клеток, несущих маркеры СБ16+, уменьшается (р, <().()() 1) и увеличи-

вается при инкубации с пептидами из сердца баранов после кровопотери СО 16+ (р2<0,05; р3<0,05) и СБ8+ (р3<0,05).

Далее нами было показано, что инкубация цитомединов из сердца баранов с лимфоцитами больных приводит к выраженным сдвигам в экспрессии СЮ- маркеров лимфоцитов (табл. 2). Это в полной мере относится к цитомединам, полученным из сердца интактных баранов, которые после инкубации увеличивали маркеры СБЗ+, СБ4+, СБ8+, СБ16+ (ра<0,05). Цитоме-дины, полученные из сердца «опытных» животных еще в большей степени увеличивали содержание маркеров СБЗ+, СБ4+, СБ8+ и СО 16+ (р2<0,05; рз<0,05), а также СБ22+ (р3<0,05).

Таким образом, полученные данные свиде-

тельствуют о том, что цитомедины, полученные из печени интактных животных, увеличивают содержание маркеров СБ4+ лимфоцитов доноров и повышают количество клеток, несущих маркеры СБЗ+, СБ4+, СБ8+ и СО 16+, полученных от больных со вторичными иммунодефицитами. Пептиды, выделенные из сердца животных, перенесших кровопотерю, увеличивают число маркеров С 08+ и СО 16+ - лимфоцитов больных ХОБЛ. Проведенное исследование показало, что биологическая активность цитомединов, полученных из печени и сердца животных, перенесших острую кровопотерю, отлична от свойств регуляторных пептидов, полученных от интактных животных.

Литература

1. Абакумов М.М., Булава Г.В., Боровкова Н.В. Клиническая оценка параметров иммунитета у хирургических больных с синдромом системного воспалительного ответа // Хирургия. - 2007. - № 8. - С. 24-28.

2. Гординская Н.А. Особенности иммунологических показателей у больных с тяжелой термической травмой // Иммунология. - 2007. - Т. 28, № 3. - С. 155-157.

3. Клигуненко Е.Н., Кравец О.В. Интенсивная терапия кровопотери. - М.: МЕДпресс-инфом, 2005. - 112 с.

4. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии. - Чита: Экс-

пресс-издательство, 2010. - 832 с.

5. Лиханов И.Д., Витковский Ю.А., Кузник Б.И. Влияние биорегулирующей терапии на состояние иммунитета и гемостаза при заболеваниях, сопровождающихся вторичными иммунодефицитами // XX съезд физиологического о-ва им. И.П. Павлова. - М., 2007. - С. 179-180.

6. Острая массивная кровопотеря / А.И. Воробьев, В.М. Городецкий, Е.М. Шулутко и др. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. -176 с.

7. Сепиашвили Р.И., Балмасова И.П. Физиология естественных киллеров. - М.: Медицина-здоровье, - 2005. - 456 с.

8. Хаитов P.M., Манько В.М. Физиологические особенности активации и торможения функции клеток иммунной системы // Российский физиологический журн. им. И.М. Сеченова. - 2006. - №6. - С. 662-676.

9. Tomas-Niera J.T. Shock and hemorrhage: an overview of animal models / J.T. Tomas-Niera, M. Perl, C.S. Chung // Shock.

2005.-Vol. 24, № l.-P. 33-39.

Есаулова Ирина Николаевна, ассистент кафедры медицинской реабилитации ГБОУ ДПО ИГМАПО. Республиканский клинический госпиталь для ветеранов войн, кафедра медицинской реабилитации ГБОУ ДПО ИГМАПО. Тел/факс: 8(3012) 41-66-70; 8-9021-66-18-18; E-mail: esaulova i@mail.ru

Цыбиков Намжил Нанзатович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патфизиологии ГБОУ ВПО ЧГМА. Тел.: 8(3022) 354324.

Тарнуев Владимир Абогоевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры медицинской реабилитации ГБОУ ДПО ИГМАПО. Республиканский клинический госпиталь для ветеранов войн. Тел/факс: 8(3012) 437382.

Гармаева Оюна Жоржевна, врач-рефлексотерапевт, АУ РБ Республиканский клинический госпиталь для ветеранов войн. Тел.: 89503870413.

Esaulova Irina Nikolaevna, assistant, department of medical rehabilitation, Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education. Republican clinical hospital for veterans of wars. Ph./fax: 8(3012) 41-66-70; 8-9021-66-18-18. E-mail: esaulova_i@mail.ru

Tsybikov Namzhil Nanzatovich, doctor of medical sciences, professor, head of the department of pathophisiology, Chita State Medical Academy. Ph.: 8 (3022) 354324.

Tarnuev Vladimir Abogoevich, candidate of medical sciences, associate professor, department of medical rehabilitation, Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education. Republican clinical hospital for veterans of wars. Ph./fax: 8(3012) 437382.

Garmayeva Oyuna Zhorzhevna, doctor-reflexotherapist, Republican clinical hospital for veterans of war. Republican clinical hospital for veterans of war. Ph.: 89503870413.