АНТИПНЕВМОКОККОВЫЙ ГИПЕРИММУННЫЙ ГЛОБУЛИН ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ ПНЕВМОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ
ANTIPNEUMOCOCCAL HYPERIMMUNE GLOBULIN FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF PNEUMOCOCCAL INFECTION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Данное изобретение относится к композициям и способам лечения инфекции, вызванной или связанной со Streptococcus pneumonia. В частности, в изобретении предлагается человеческий гипериммунный глобулин и его композиции для профилактики или лечения пневмококковой инфекции. Изобретение относится к способам получения иммунных глобулинов, содержащих высокие титры опсонических антипневмококковых антител, композициям, содержащим тоже самое, и способам применения указанных композиций при профилактике и лечении пневмококковой инфекции (например, инфекции верхних отделов дыхательных путей (например, синусит, средний отит, фарингит и т.д. (например, у иммунологически «скомпрометированного» субъекта))).
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Существует множество компонентов иммунной системы, все из которых сотрудничают для борьбы с инородными инвазивными патогенами. В то время как у большинства людей присутствует интактная иммунная система, которая служит целям защиты их от широкого спектра инфекционных организмов, обычно заражающих людей, включая вирусы, бактерии и грибы, у многих людей иммунитет нарушен или «скомпрометирован».
Первичные иммунодефициты (ПИД (PID)) представляют собой группу из более чем 200 генетически унаследованных расстройств, характеризующихся недостаточностью отдельных компонентов врожденной или адаптивной иммунной системы, с клиническим результатом в виде повышенной восприимчивости к инфекции. Например, дефект гуморальной иммунной системы, который ухудшает способность организма к выработке антител, делает человека восприимчивым ко многим инфекциям. Чтобы считаться первичным иммунодефицитом, причина иммунного дефицита не должна быть вторичной по своей природе (например, вызванной другим заболеванием, лекарственным средством или воздействием токсинов окружающей среды). Большинство первичных иммунодефицитов являются генетическими нарушениями и диагностируются у детей, хотя менее тяжелые формы могут быть не распознаны до взрослого возраста. Около 1 из 500 человек рождаются с первичным иммунодефицитом.
Показано, что внутривенное введение иммунного глобулина восстанавливает способность людей с иммунодефицитом защищаться от инфекции. Поскольку объединяется в пул иммунный глобулин от многих доноров, титры антител ко многим инфекционным организмам, от которых необходимо обеспечить защиту, значительно различаются и могут быть или не быть достаточными для удовлетворения иммунных потребностей в случае инфекции у людей с ослабленным иммунитетом.
Большинство коммерчески доступных иммуноглобулинов получают из плазмы человека, собранной, обработанной и распределенной для продажи промышленностью продуктов крови и плазмы. Первым очищенным препаратом иммуноглобулина G (IgG) человека, который применялся в клинике, был сывороточный иммунный глобулин, полученный в 1940-х годах (Cohn, Е.J., et al., J. Am Chem. Soc, 68:459-475 (1946)) и Oncely, J.L. et al., J. Am Chem Soc. 71:541-550 (1949). Гаммаглобулин, полученный таким способом, показывает молекулярное распределение с высокой молекулярной массой, по данным анализа при помощи эксклюзионной хроматографии с высоким разрешением.
Было показано, что стандартному иммунному глобулину (ВВИГ (IVIG)) присуще множество вариаций опсонической активности в отношении широко распространенного организма-комменсала, который повсеместно встречается на коже человека, S. epidermidis (L. A. Clark and С.S. F. Easmon, J. Clin. Pathol. 39:856 (1986)). Например, в исследовании Clark и Easmon одна треть тестируемых партий ВВИГ (IVIG) обладала слабой опсонической активностью с комплементом, и только два из четырнадцати были опсоническими без комплемента. Таким образом, несмотря на то, что партии ВВИГ (IVIG) были изготовлены из больших пулов плазмы доноров, надлежащее опсоническое антитело к S. epidermidis присутствовало неравномерно.
ВВИГ (IVIG), как правило, успешно предотвращает тяжелые инфекции нижних отделов дыхательных путей у иммуноскомпрометированных пациентов. Однако, несмотря на то, что у иммуноскомпрометированных пациентов, получающих ВВИГ (IVIG), по-видимому, присутствуют приемлемые уровни общего иммуноглобулина, а также достаточные уровни антител против S. pneumonia для предотвращения серьезных бактериальных инфекций, вызванных S. pneumonia, существует значительный процент пациентов, у которых возникают инвалидизирующие инфекции верхних отделов дыхательных путей и невоспалительные инфекции, которые снижают качество жизни, приводят к увеличению применения антибиотиков, которые неэффективны, а также приводят к увеличению медицинских расходов (см., например, Favre et al., Allergy 2005 60:385-390).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение относится к композициям и способам лечения инфекции, вызванной Streptococcus pneumonia. В частности, в изобретении предлагается иммунный глобулин человека и его композиции для профилактики или лечения пневмококковой инфекции. В изобретении предлагаются способы получения иммунных глобулинов, содержащих высокие титры антипневмококковых антител с опсонической активностью (например, к множеству серотипов S. pneumonia), композиции на их основе и способы применения композиций для профилактики и лечения пневмококковой инфекции. Дополнительно, в изобретении предлагаются способы профилактики или лечения пневмококковой инфекции (например, инфекции верхних отделов дыхательных путей (например, фарингит, средний отит, синусит и т.д.)) у иммуноскомпрометированных субъектов (например, путем введения композиций иммунного глобулина по изобретению (например, содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител) иммуноскомпрометированным субъектам, которые не были адекватно защищены регулярными инфузиями стандартного ВВИГ (IVIG)).
В одном варианте реализации изобретения целью изобретения является создание новой композиции иммунного глобулина, полученной от доноров плазмы в соответствии со способами по изобретению (например, доноры плазмы человека (например, здоровые доноры плазмы человека), которые были вакцинированы одной или несколькими пневмококковыми вакцинами в соответствии с описанными здесь способами), которая содержит повышенный титр специфических антипневмококковых антител, прием антитела обладают опсонической активностью по сравнению с контрольным образцом.
Изобретение не ограничивается видом применяемого контрольного образца. Например, в одном варианте реализации изобретения контрольный образец представляет собой иммунный глобулин, полученный из плазмы здорового(ых) донора(ов) плазмы человека до вакцинации (например, таким образом, что уровни титров специфических опсонических антипневмококковых антител в донорской плазме человека до иммунизации применяются в качестве исходного уровня для измерения увеличения титров специфических опсонических антипневмококковых антител после иммунизации). В другом варианте реализации изобретения контрольный образец представляет собой иммунный глобулин, полученный из смеси образцов плазмы, полученных от случайных доноров плазмы человека (например, 100, 300, 500, 1000 или большее количество случайных доноров плазмы человека), которые не были вакцинированы антипневмококковой вакциной (например, таким образом, чтобы уровни титров специфических опсонических антипневмококковых антител у невакцинированных доноров плазмы человека применялись в качестве основы для измерения увеличения титров специфических опсонических антипневмококковых антител, присутствующих у доноров плазмы человека, вакцинированных в соответствии со способами по изобретению). Специалистам в данной области техники будет понятно, что можно применять другие контрольные образцы. Изобретение не ограничивается способом или анализом, применяемым для измерения опсонического (например, опсонофагоцитарного) титра присутствующего антитела. Фактически, можно применять различные анализы, включая, но не ограничиваясь этим, описанные в данном описании (например, в Примере 1).
В одном варианте реализации изобретения целью изобретения является создание новой композиции иммунного глобулина, содержащей высокий титр опсонических антипневмококковых антител. Еще одной целью изобретения является создание новой композиции иммунного глобулина для внутривенного введения, содержащей высокий титр опсонических антипневмококковых антител (например, «антипневмококковый гипериммунный глобулин») и способов ее получения и применения (например, для профилактики и/или лечения пневмококковой инфекции (например, у иммуноскомпрометированных пациентов)). Термин «высокий титр» в этом контексте означает наличие опсонического антипневмококкового антитела в количестве, которое в 2 или большее количество раз, например, в 3, 5, 7, 10, 15, 20 или большее количество раз выше, чем в контрольном образце.
Соответственно, новая композиция иммунного глобулина (например, антипневмококковый гипериммунный глобулин), содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител по изобретению, отличается от стандартных/обычных препаратов иммунного глобулина (например, стандартного, обычного ВВИГ (IVIG)) и отличается от других препаратов ВВИГ (IVIG) (например, других гипериммунных препаратов ВВИГ (IVIG)) тем, что она содержит высокий титр человеческих опсонических антипневмококковых антител, которые являются функциональными и реагируют с широким спектром серотипов S. pneumonia, усиливают фагоцитоз и вызывают элиминацию S. pneumonia (например, in vitro и/или in vivo (например, антитела являются опсонофагоцитарными)), независимо от общего количества связывающих антипневмококковых антител (например, по данным измерения при помощи иммуноферментного анализа, ИФА (ELISA)), которые присутствуют в композиции.
Это является неожиданным, поскольку данные, полученные и раскрытые в данном описании, указывают на то, что не было систематической или предсказуемой корреляции между общим титром антипневмококкового IgG антитела и титром опсонических антипневмококковых антител, присутствующих в плазме или иммунном глобулине, полученном от вакцинированных доноров. Из-за неожиданного обнаружения большого несоответствия между общим уровнем титра связывающего антипневмококкового IgG антитела и титра опсонических антипневмококковых антител, присутствующих в плазме или полученном из нее иммунном глобулине из плазмы вакцинированных доноров, описанной в данном описании, еще одной целью изобретения является создание композиции плазмы и/или иммунного глобулина (например, антипневмококкового гипериммунного глобулина), содержащей значительно повышенные титры функциональных опсонических антипневмококковых антител (например, независимо от общего титра связывающихся антипневмококковых антител (например, путем объединения в пул плазмы и/или иммунного глобулина, полученного из плазмы вакцинированных доноров, или путем объединения плазмы вакцинированных доноров с иммунным глобулином, полученным от невакцинированных доноров, у которых высокий титр опсонических антипневмококковых антител может отсутствовать, но при объединении с донорской плазмой и/или иммунным глобулином со значительно повышенным титром опсонических антипневмококковых антител он не разбавляет общий опсонический титр до уровней, не обеспечивающих защиту)) по сравнению с контрольным образцом. Изобретение включает сыворотку/плазму, а также иммунный глобулин (например, гипериммунный глобулин), полученный из субстанций, содержащих значительно повышенные титры функциональных и опсонических антипневмококковых антител широкого спектра действия. В одном варианте реализации изобретения предлагается плазма/сыворотка и/или иммунный глобулин, полученные из субстанций, содержащих повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, 7 раз, 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) по сравнению с титрами специфических опсонических антипневмококковых антител против тех же серотипов, присутствующих в контрольном образце (иммунный глобулин, полученный из смеси образцов плазмы, полученных от случайных доноров плазмы человека (например, 100, 300, 500, 1000 или большее количество случайных доноров плазмы человека), которые не были вакцинированы антипневмококковой вакциной).
В другом варианте реализации изобретения предлагается композиция гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), содержащая титр опсонических антител широкого спектра действия, специфических в отношении 70% или большего количество серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, который в 2 или большее количество раз (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр опсонических антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из смеси образцов плазмы, полученных от случайных доноров плазмы человека (например, 100, 300, 500, 1000 или большее количество случайных доноров плазмы человека), которые не были вакцинированы антипневмококковой вакциной. В другом варианте реализации изобретения предлагается плазма/сыворотка и/или полученный из нее иммунный глобулин, содержащие титр специфических опсонических антипневмококковых антител в пределах от 1:64 до 1:8192 (например, для, по меньшей мере, 50% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большего количества) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F).
Кроме того, целью изобретения является создание новой композиции иммунного глобулина (например, антипневмококкового гипериммунного глобулина), содержащей высокий титр опсонических антипневмококковых антител, который повышает иммунитет in vivo и/или профилактически и терапевтически подавляет инфекцию (например, инфекцию верхних отделов дыхательных путей), у пациентов с нарушенной иммунной системой, у которых надлежащий ответ не достигается регулярными инфузиями обычного ВВИГ (IVIG).
Еще одной предпочтительной задачей данного изобретения является то, что, хотя стандартные пулы иммуноглобулина от нормальных доноров (например, применяемые для получения коммерчески доступного стандартного/обычного ВВИГ (IVIG)) не содержат систематических, воспроизводимых и обеспечивающих полную защиту уровней опсонического антитела к S. pneumonia, композиция гипериммунного глобулина (например, антипневмококковый гипериммунный глобулин), содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител по изобретению, при внутривенном введении немедленно обеспечивает специфические функциональные (например, не просто связывающиеся) антитела, которые способствуют фагоцитозу и вызывают элиминацию S. pneumonia под действием фагоцитов. Изобретение не ограничивается серотипом или количеством серотипов S. pneumonia, в отношении которых функциональные опсонические антитела, присутствующие в составе гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), способствуют фагоцитозу и/или вызывают элиминацию. Фактически, еще одной целью изобретения является то, что композиция (например, композиция гипериммунной плазмы и/или гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG))) по изобретению содержит опсонические антитела широкого спектра действия, по меньшей мере, против 7 из 12, 8 из 12, 9 из 12, 10 из 12, 11 из 12 или всех 12 из 12 следующих серотипов S. pneumonia: 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19A, 19F и 23F. Таким образом, в изобретении предлагаются композиции, которые содержат повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раза, 7 раза, 10 или большее количество раз выше титра специфических опсонических антипневмококковых антител, присутствующих в контрольном образце (например, для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество)) пневмококковых серотипов, выбранных из серотипов 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F), и способы их получения. В одном варианте реализации изобретения предлагается иммунный глобулин (например, гипериммунный глобулин (например, ВВИГ (IVIG))), содержащий титр опсонических антител широкого спектра действия, специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, который в 2 или большее количество раз (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр опсонических антител, специфических в отношении серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из смеси образцов плазмы, полученных от случайных доноров плазмы человека (например, 100, 300, 500, 1000 или большее количество случайных доноров плазмы человека), которые не были вакцинированы антипневмококковой вакциной, или иммунный глобулин, полученный от здорового(ых) донора(ов) плазмы человека до вакцинации (например, таким образом, чтобы уровни титров серотип-специфических опсонических антител у доноров плазмы человека до иммунизации применялись в качестве исходного уровня для измерения повышения уровня титров серотип-специфических опсонических антител после иммунизации)). В другом варианте реализации изобретения предлагается иммунный глобулин (например, гипериммунный глобулин (например, ВВИГ (IVIG)), который содержит высокий титр опсонических антител широкого спектра действия, по меньшей мере, против 50%, по меньшей мере, против 55%, по меньшей мере, против 60%, по меньшей мере, против 65%, по меньшей мере, против 70%, по меньшей мере, 75%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, 95%, 98% или большего количества из каждого серотипа, присутствующего в вакцине или множестве вакцин, применяемых для иммунизации одного или нескольких доноров плазмы, от которых получена композиция иммунного глобулина.
Еще одним преимуществом и целью изобретения является предложить композицию гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), содержащую опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, для пациента (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PIDD)), при лечении или профилактике пневмококковой инфекции у пациента (например, путем подавления роста S. pneumonia и/или клиренса S. pneumonia из крови пациента). Другим преимуществом и целью изобретения является предложить композицию гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)) по изобретению, содержащую опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, пациенту (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PIDD)) при лечении пневмококковой инфекции у пациента (например, путем улучшения или усиления клиренса S. pneumonia из крови пациента). Еще одним преимуществом и целью изобретения является предложить композицию гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)) по изобретению, содержащую опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, пациенту (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PIDD)), чтобы предотвратить инфекции верхних отделов дыхательных путей у пациента, которые невозможно предотвратить с помощью обычной терапии ВВИГ (IVIG). Изобретение не ограничивается видом инфекции верхних отделов дыхательных путей, которую предотвращают и/или лечат, и может включать, но не ограничиваясь этим, риносинусит (синусит), средний отит, фарингит, эпиглоттит, ларинготрахеит и ларинготрахеобронхит. Аналогично, композиции и способы их применения (например, введение) применяют для профилактики и/или лечения признаков или симптомов инфекции верхних отделов дыхательных путей, включая, но не ограничиваясь этим, кашель, чихание, выделения из носа, заложенность носа, насморк, лихорадку, першение или воспаление в горле и носовое дыхание.
В одном варианте реализации изобретения предлагаются композиции и способы получения композиции, содержащей объединенные в пул образцы плазмы (например, плазма от множества доноров (например, доноры, которые были вакцинированы одной или несколькими пневмококковыми вакцинами)), которые содержат высокие титры опсонических антипневмококковых антител.
Таким образом, целью изобретения является создание способов получения композиций (например, композиций крови, плазмы и/или иммунного глобулина (например, гипериммунного глобулина)), содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител. В одном варианте реализации изобретения одному или большему количеству здоровых взрослых людей (например, людей, у которых нет известных заболеваний) вводят пневмококковый иммуноген, рекомбинантный пневмококковый белок или их комбинацию. В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia является сахаром клеточной мембраны S. pneumonia (например, полисахарид). В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia представляет собой вакцину S. pneumonia, содержащую один или большее количество белков S. pneumonia (например, рекомбинантных или выделенных белков). В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia представляет собой конъюгированную вакцину (например, конъюгированную с носителем и/или адъювантом (например, белок или другая молекула-носитель)). В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia представляет собой неконъюгированную вакцину. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированная вакцина или неконъюгированная вакцина содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или большее количество различных иммуногенов (например, из равного количества различных серотипов S. pneumonia). В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество различных серотипов S. pneumonia включают, но не ограничиваясь этим, серотипы 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7А, 7В, 1С, 7D, 7Е, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18С, 19A-19F, 23A-23F и 25. В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество различных серотипов S. pneumonia выбраны из любого из более чем 90 различных известных серотипов S. pneumonia. В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество различных серотипов S. pneumonia являются впервые идентифицированными.
В следующем варианте реализации изобретения одному или большему количеству здоровых людей (например, люди, у которых нет известных заболеваний) вводят пневмококковый иммуноген, рекомбинантный пневмококковый белок или комбинацию, присутствующую в коммерческой пневмококковой вакцине. Изобретение не ограничивается видом коммерческой пневмококковой вакцины. Фактически, может применяться любая пневмококковая вакцина, известная в данной области техники, в том числе, но не ограничиваясь этим, конъюгированная пневмококковая вакцина (PCV13 или PREVNAR13, Wyeth Pharmaceuticals, Колледжвилль, штат Пенсильвания), SYNFLORIX и/или полисахаридная пневмококковая вакцина (PPSV23 или PNEUMOVAX23, Merck Sharp & Dohme Corp., Северный Уэльс, штат Пенсильвания). В одном варианте реализации изобретения один или большее количество здоровых людей получают первую или первичную вакцинацию первой антипневмококковой вакциной и последующую бустерную вакцинацию первой антипневмококковой вакциной или второй, отличной антипневмококковой вакциной. Например, в одном варианте реализации изобретения один или большее количество здоровых людей получают первую или первичную вакцинацию/иммунизацию первой антипневмококковой вакциной (например, PREVNAR), а затем получают бустерную вакцинацию/иммунизацию (например, через 2 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 или большее количество недель после первичной вакцинации/иммунизации) второй антипневмококковой вакциной (например, PNEUMOVAX23). В момент времени после последовательной вакцинации (например, через 2 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 или большее количество недель после последовательной вакцинации), производят забор сыворотки/плазмы у вакцинированных здоровых доноров плазмы человека. Плазма от вакцинированных доноров может быть объединена в пул (между собой и/или с плазмой от невакцинированных доноров), после чего следует выделение и/или очистка из нее иммунного глобулина (например, для получения антипневмококкового гипериммунного глобулина по изобретению). Способы забора плазмы, а также экстракции иммунного глобулина хорошо известны обычному специалисту в данной области техники.
В одном варианте реализации данное изобретение относится к способу получения гипериммунного глобулина с высоким титром опсонофагоцитарных антител против Streptococcus pneumonia (например, титр, который, по меньшей мере, в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 7 раз, 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) по сравнению с титром специфических опсонофагоцитарных антипневмококковых антител против тех же серотипов, которые присутствуют в контрольном образце; или титром специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, который в 2 или большее количество раз (например, 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце; или титр в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, по меньшей мере, 1:256 (например, по меньшей мере, в отношении 50% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество)) в отношении серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F), по данным анализа опсонофагоцитарной элиминации, описанного в данном описании), причем способ включает в себя стадии иммунизации здоровых взрослых доноров плазмы человека в возрасте от 18 до 60 лет путем первичной иммунизации поливалентной вакциной против S. pneumonia и последующей бустерной иммунизации поливалентной вакциной против S. pneumonia, которая является такой же или может отличаться от первичной вакцины; забор плазмы у доноров плазмы после бустерной иммунизации; объединение в пул плазмы вакцинированных доноров с целью получения объединенной в пул плазмы, содержащей высокий титр опсонофагоцитарных антител против S. pneumonia; и получение иммунного глобулина из объединенной в пул плазмы. В следующем варианте реализации изобретения способ включает в себя перевод полученного таким способом иммунного глобулина в подходящую для внутривенных инъекций форму. Иммунный глобулин можно предоставлять в растворе, и/или рН и ионная сила раствора могут быть отрегулированы таким образом, чтобы сделать его подходящим для внутривенных инъекций. Изобретение не ограничивается количеством людей, вакцинированных в соответствии с описанными здесь способами. Например, можно вакцинировать 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или большее количество здоровых взрослых доноров плазмы крови человека и осуществить забор плазмы у доноров. В одном варианте реализации изобретения объединенную плазму получают из пула плазмы 1000 или большего количества разных вакцинированных здоровых взрослых доноров плазмы человека. В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарных антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 7 раз, в 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) по сравнению с титрами специфических опсонофагоцитарных антипневмококковых антител против тех же серотипов, которые присутствуют в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из плазмы 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В другом варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, т.е. в 2 или большее количество раз (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из объединенной в пул плазмы 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В еще одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарных антител в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, по меньшей мере, 50% или большее количество (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19A, 19F и 23F), по данным анализа опсонофагоцитарной элиминации, описанного в данном описании или известного в данной области техники.
Кроме того, в изобретении предлагается иммунный глобулин (например, гипериммунный глобулин), полученный по описанному выше способу. Полученный таким образом иммунный глобулин (например, гипериммунный глобулин) можно применять различными способами. Например, иммунный глобулин можно применять в способе лечения инфекции S. pneumonia у субъекта (например, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества иммунного глобулина). Дополнительно, иммунный глобулин можно применять в способе проведения субъекту иммунотерапии (например, включающем в себя введение субъекту терапевтически эффективного количества иммунного глобулина).
Дополнительно, в одном варианте реализации изобретения предлагается способ получения гипериммунного глобулина, обладающего усиленной опсонофагоцитарной бактерицидной активностью против, по меньшей мере, семи серотипов Streptococcus pneumonia, для профилактики или лечения инфекции S. pneumonia, причем способ включает в себя стадии иммунизации здоровых взрослых доноров плазмы человека путем первичной иммунизации поливалентной конъюгированной вакциной против S. pneumonia и последующей бустерной иммунизации поливалентной полисахаридной вакциной против S. pneumonia, которая отличается от первичной вакцины; забор и объединение в пул плазмы от доноров иммунизированной плазмы; и получение иммунного глобулина из объединенной в пул плазмы, причем иммунный глобулин содержит титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении каждого из, по меньшей мере, семи серотипов S. pneumonia, который в два или большее количество раз выше (например, в 3-25 или большее количество раз выше), чем титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении каждого из по меньшей мере семи серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из объединенной в пул плазмы 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). Кроме того, изобретение относится к гипериммунному глобулину, полученному в соответствии с вышеописанным способом. Полученный таким образом гипериммунный глобулин можно применять различными способами. Например, гипериммунный глобулин можно применять в способе лечения инфекции S. pneumonia у субъекта, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества гипериммунного глобулина. Дополнительно, гипериммунный глобулин можно применять в способе проведения иммунотерапии субъекту, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества гипериммунного глобулина.
В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к способу получения композиций (например, композиции крови, плазмы и/или иммунного глобулина (например, гипериммунного глобулина)), содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител, включающему в себя скрининг плазмы (например, пулы плазмы или иммуноглобулина, иммуноглобулин или препараты иммуноглобулина) на предмет общих антипневмококковых связывающихся антител с применением антигенсвязывающего анализа in vitro (например, с применением ИФА (ELISA)) вместе с анализом опсонофагоцитарной элиминации (например, анализ опсонофагоцитарной элиминации, описанный в данном описании или известный в данной области техники). В некоторых вариантах реализации данное изобретение относится к способу получения композиций (например, композиции крови, плазмы и/или иммунных глобулинов), содержащих высокий титр опсонических, антипневмококковых антител, причем способ включает в себя скрининг плазмы (например, пулы плазмы или иммуноглобулина, иммуноглобулин или препараты иммуноглобулина) на предмет общего титра опсонических антипневмококковых антител с применением опсонофагоцитарного бактерицидного анализа (например, анализ, описанный в Примере 1). В другом варианте реализации изобретения предлагается способ получения композиций (например, композиции крови, плазмы и/или иммунного глобулина), содержащих высокий титр опсонических, антипневмококковых антител, включающий в себя скрининг плазмы (например, пулы плазмы или иммуноглобулина, иммуноглобулин или препараты иммуноглобулина) не предмет общих антипневмококковых связывающихся антител с применением антигенсвязывающего анализа in vitro (например, с применением ИФА (ELISA)), с последующим скринингом плазмы (например, пулы плазмы или иммуноглобулина, иммуноглобулин или препараты иммуноглобулина) на предмет общего титра опсонических антипневмококковых антител с применением опсонофагоцитарного бактерицидного анализа (например, анализ, описанный в Примере 1). В еще одном варианте реализации изобретения защитная эффективность может быть документирована in vivo путем анализа защитной активности композиций (например, композиций крови, плазмы и/или иммунного глобулина), содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител с применением модели инфекции S. pneumonia на животных (например, для определения заболеваемости, смертности и/или клиренса бактерий). Изобретение не ограничивается способом или анализом, применяемым для измерения опсонофагоцитарного титра присутствующих антител. Фактически, можно применять различные анализы, в том числе, но не ограничиваясь этим, описанные в данном описании (например, в Примере 1).
В одном варианте реализации изобретения предлагается способ получения композиции, включающий получение образцов плазмы доноров (например, 50, 100, 300, 500, 1000 или большее количество доноров (например, здоровых взрослых доноров плазмы человека)), вакцинированных одной или большим количеством антипневмококковых вакцин, и объединение в пул образцов плазмы (например, друг с другом и/или плазмой невакцинированных доноров) для получения композиции объединенной в пул плазмы. В следующем варианте реализации изобретения иммунный глобулин получают из объединенных в пул образцов плазмы (например, иммунный глобулин фракционируют, очищают и/или выделяют из плазмы любым способом, известным в данной области техники, включая описанные в данном описании). В следующем варианте реализации изобретения иммунный глобулин по изобретению переводят в пригодную для внутривенных инъекций форму (например, предоставляя иммунный глобулин в растворе, регулируя рН, корректируя ионную силу и т.д.). Как описано в данном описании, в одном варианте реализации изобретения композиция объединенной в пул плазмы по изобретению содержит титр опсонофагоцитарных антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 7 раз, в 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) по сравнению с титрами специфических опсонических антипневмококковых антител против тех же серотипов, которые присутствуют в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из объединенной в пул плазмы 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В другом варианте реализации изобретения композиция объединенной в пул плазмы содержит титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, который в 2 или большее количество раза (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр опсонических антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia, присутствующих в контрольном образце (например, иммунный глобулин, полученный из объединенной в пул плазмы 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В еще одном варианте реализации изобретения композиция объединенной в пул плазмы содержит титр опсонофагоцитарных антител в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, по меньшей мере, 50% или большее количество (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F), по данным описанного в данном описании анализа опсонофагоцитарной элиминации.
В одном варианте реализации изобретения проводят скрининг образцов плазмы (например, от вакцинированных и/или невакцинированных доноров), чтобы подтвердить отсутствие патогенов, передающихся через кровь (например, до или после объединения в пул). В некоторых вариантах реализации изобретения образцы плазмы и/или антитела получают от субъектов-доноров в виде донорского или приобретенного биологического материала (например, крови или плазмы). В некоторых вариантах реализации изобретения образцы плазмы и/или антител (например, кровь, плазма, выделенные антитела и т.д.) получают из коммерческого источника. В некоторых вариантах реализации изобретения проводят скрининг образца плазмы и/или антител, донорской крови или донорской плазмы на предмет присутствия патогенов и очищают или отбрасывают, если присутствуют определенные патогены. В некоторых вариантах реализации изобретения скрининг проводят до объединения донорского образца в пул с другими донорскими образцами. В других вариантах реализации изобретения скрининг проводят после объединения образцов в пул. Антитела, кровь и/или плазма могут быть получены от любых подходящих субъектов. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела, кровь и/или плазму получают у субъекта, который недавно (например, в пределах 1 года, в пределах 6 месяцев, в пределах 2 месяцев, в пределах 1 месяца, в пределах 2 недель, в пределах 1 недели, в пределах 3 дней, в пределах 2 дней, в пределах 1 дня) был вакцинирован или подвергался воздействию одной или большего количества пневмококковых вакцин.
В некоторых вариантах реализации изобретения образцы крови, плазмы и/или иммунного глобулина идентифицируют (например, в соответствии с описанными в данном описании способами), как содержащие высокий титр опсонических антипневмококковых антител, объединяют (например, объединяют в пул) для получения композиции по изобретению (например, гипериммунный глобулин), содержащей высокий титр опсонических антипневмококковых антител.
Любой подходящий способ получения плазмы, образцов антител, композиций объединенной в пул плазмы и/или иммуноглобулина из них находится в пределах данного изобретения. Кроме того, любой подходящий способ получения, производства, очистки, фракционирования, обогащения и т.д. образцов антител и/или пулов плазмы находится в пределах данного изобретения. Типовые методы и процедуры получения образцов антител и получения пулов плазмы приведены, например, в патенте США №4174388; патенте США №4346073; патенте США №4482483; патенте США №4587121; патенте США №4617379; патенте США №4659563; патенте США №4665159; патенте США №4717564; патенте США №4717766; патенте США №4801450; патенте США №4863730; патенте США №5505945; патенте США №5582827; патенте США №6692739; патенту США №6966200; патенте США №6984492; патенте США №7045131; патенте США №7488486; патенте США №7597891; патенте США №6372216; патентной заявке США №2003/0118591; патентной заявке США №2003/0133929; патентной заявке США №2005/0053605; патентной заявке США №2005/0287146; патентной заявке США №2006/0110407; патентной заявке США №2006/0198848; патентной заявке США №2006/0222651; патентной заявке США №2007/0037170; патентной заявке США №2007/0249550; патентной заявке США №2009/0232798; патентной заявке США №2009/0269359; патентной заявке США №2010/0040601; патентной заявке США №2011/0059085; и патентной заявке США №2012/0121578; которые включены в данную заявку в полном объеме посредством ссылки. В вариантах реализации данного изобретения можно применять любую подходящую комбинацию методов, способов или композиций из вышеупомянутых ссылок.
Выделенный иммунный глобулин по изобретению может быть из IgG фракции или изотипа, но выделенный иммунный глобулин не ограничивается какой-либо конкретной фракцией или изотипом и может представлять собой IgG, IgM, IgA, IgD, IgE или любую их комбинацию. Кроме того, предпочтительно, чтобы выделенный иммунный глобулин был чисто или антигенно иммунным глобулином человека.
В одном варианте реализации изобретения композиция, содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител по изобретению, представляет собой стерильный раствор с рН около 6,0-7,8 (например, 5,0-6,0, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 или выше). В другом варианте реализации изобретения композицию, содержащую высокий титр опсонических антипневмококковых антител по изобретению, готовят в соответствии со стандартами FDA США для препарата иммунного глобулина (см., например, 37 CFR, §640.100, 640.101, 640.102, 640.103, 640.104, 1 апреля 2013 г.). В одном варианте реализации изобретения композиция, содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител по изобретению (например, гипериммунный глобулин, описанный в данном описании, в частности, в Примерах), содержит, по меньшей мере, минимальный уровень титров антител к Corynebacterium diphtheria, вирусу кори и вирусу полиомиелита, рекомендованный FDA (например, см. 37 CFR §640.104) для лечения пациентов с иммунодефицитным заболеванием.
В одном варианте реализации изобретения композиция объединенной в пул плазмы не содержит обнаружимых уровней (например, обнаруживаемых с применением любого метода, известного в данной области техники (например, рекомендованного Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США)) вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 (ВИЧ-1), ВИЧ-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), прионов, вируса Западного Нила, парвовируса, Typanosoma cruzi, коронавируса атипичной пневмонии (SARS) и/или вируса осповакцины. В одном варианте реализации изобретения каждый отдельный образец плазмы, применяемый в способе или композиции по изобретению, отбирают только в одобренных FDA службах крови и тестируют серологическими тестами (например, серологические тесты, одобренные FDA) для вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 (ВИЧ-1), ВИЧ-2, Treponema pallidum, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax, Plasmodium knowlesi, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), прионов, вируса Западного Нила, парвовируса, Typanosoma cruzi, коронавируса SARS и/или вируса осповакцины. В другом варианте реализации изобретения индивидуальный образец плазмы и/или композицию объединенной в пул плазмы по изобретению тестируют на присутствие ВИЧ-1, ВИЧ-2, HBV, HCV или другого инфекционного агента (например, патогена) с применением тестирования нуклеиновой кислоты (ТНК (NAT)) и применяют в способе или композиции по изобретению только в том случае, если подтверждается отсутствие патогенов.
Изобретение не ограничивается видом субъекта (например, млекопитающего, не относящегося к человеку примата, человека и т.д.), которому вводят или которого лечат композицией по изобретению (например, объединенные в пул образцы плазмы и/или содержащая их иммунотерапевтическая композиция). Например, изобретение не ограничивается видом пациента, получающего композиции (например, композиции крови, плазмы и/или иммунного глобулина (например, гипериммунный глобулин)), которые содержат высокий титр опсонических, антипневмококковых антител. Целью изобретения является предоставление и/или введение композиции по изобретению пациентам с ослабленным иммунитетом, описанным в данном описании.
В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит образцы плазмы, полученные от 1000-3000 или большего количества (например, более 1000, 1250, 1500, 1750, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000 или большее количество) субъектов-людей. В одном варианте реализации изобретения композиция, содержащая объединенные в пул образцы плазмы, дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель (например, природные и/или неприродные носители). В одном варианте реализации изобретения композицию объединенной в пул плазмы применяют для получения иммунного глобулина (например, для внутривенного введения субъекту). В одном варианте реализации изобретения композиция объединенной в пул плазмы и/или иммунного глобулина обеспечивает терапевтическое преимущество для субъекта, которому вводят композицию, недостижимое путем введения смеси образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных субъектов-людей, и/или полученного из них иммуноглобулина (например, предотвращает или лечит инфекцию верхних отделов дыхательных путей у субъекта, которая не предотвращается или не лечится обычным ВВИГ (IVIG)). Изобретение не ограничивается видом терапевтического преимущества. Фактически, могут быть достигнуты различные терапевтические преимущества, в том числе описанные в данном описании.
В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или приготовленный из нее иммуноглобулин по изобретению уменьшают частоту инфекции (например, инфекции верхних отделов дыхательных путей) у субъекта, которому вводят композицию. В другом варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или приготовленный из нее иммуноглобулин по изобретению уменьшают количество дней, в течение которых субъекту, которому вводят объединенную в пул плазму и/или иммуноглобулин по изобретению, необходимо вводить антибиотики (например, для лечения инфекции (например, инфекция верхних отделов дыхательных путей)). В еще одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или приготовленный из нее иммуноглобулин по изобретению повышают минимальный уровень циркулирующих опсонических антипневмококковых антител у субъекта (например, повышают уровень титра опсонических антител, специфических в отношении S. pneumonia (например, тем самым обеспечивая защитные уровни специфических антипневмококковых антител между запланированными датами введения объединенной в пул плазмы и/или полученного из нее иммунного глобулина по изобретению (например, не поддерживаемые у субъекта, которому вводят обычный ВВИГ (IVIG))).
Дополнительные объекты, признаки и преимущества данного изобретения станут очевидными из последующего подробного описания. Однако, необходимо понимать, что подробное описание и конкретные примеры с указанием предпочтительных вариантов реализации изобретения приведены только для иллюстрации, поскольку различные изменения и модификации в пределах сущности и объема изобретения станут очевидными для специалистов в данной области техники на основе этого подробного описания.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На Фиг. 1 изображены титры связывающихся, серотип-специфических антипневмококковых IgG антител в индивидуальных образцах сыворотки вакцинированных доноров, отобранных в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR (До (Pre)), непосредственно перед вторичной вакцинацией PNEUMOVAX23 на 4 неделе (4 неделя), на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16 неделе. Средние значения титров связывающихся, серотип-специфических антипневмококковых IgG-антител приведены для времени до вакцинации и на 4, 8, 10 и 12 неделе, а также для объединенных в пул образцов до вакцинации и на 12 неделе. Кроме того, приведена кратность увеличения титров связывающихся, серотип-специфических антипневмококковых IgG антител до вакцинации и на 12 неделе.
Фиг. 2 иллюстрирует титр серотип-специфической опсонической (опсонофагоцитарной) элиминации (ОФЭ (OPK)) пневмококков в отдельных образцах сыворотки вакцинированных доноров, отобранных в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR (Pre), непосредственно перед вторичной вакцинацией PNEUMOVAX23 на 4 неделе (4 неделя), на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16 неделе, специфической в отношении различных серотипов пневмококка. Средние антипневмококковыесеротип-специфические опсонические титры приведены до вакцинации и на 4, 8, 10 и 12 неделе, а для объединенных в пул образцов до вакцинации и на 12 неделе. Кроме того, приведена кратность увеличения антипневмококковых серотип-специфических титров ОФЭ в период со времени до вакцинации по 12-ю неделю.
Фиг. 3 иллюстрирует титр связывающихся, серотип-специфических антипневмококковых IgG антител в объединенной в пул донорской сыворотке 40 субъектов, которая была получена в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR (До (Pre)), на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе, на 16 неделе и на 5 месяце.
Фиг. 4 иллюстрирует увеличение кратности концентраций связывающихся, серотип-специфических антипневмококковых IgG-антител в объединенной в пул донорской сыворотке, полученной в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR (До (Pre)), на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16 неделе, и на 5 месяце (* = исходный уровень).
Фиг. 5 иллюстрирует титры серотип-специфической опсонической элиминации (ОФЭ (OPK)) пневмококков в объединенной в пул донорской сыворотке 40 субъектов, которая была получена в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR (До (Pre)), на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16-й неделе и на 5 месяце.
Фиг. 6 иллюстрирует титры серотип-специфических антипневмококковых связывающихся IgG антител в очищенном иммунном глобулине (ИГ (IG)) из объединенной в пул донорской сыворотки 40 индивидуумов, которая была получена в указанных временных точках.
Фиг. 7 иллюстрирует титры серотип-специфической ОФЭ (OPK) пневмококков в очищенном IgG из объединенной в пул донорской сыворотки 40 индивидуумов, которая была получена в указанных временных точках.
Фиг. 8 иллюстрирует сравнение титра серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенной в пул человеческой сыворотке вакцинированных доноров по сравнению с титром серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в нескольких разных традиционных коммерчески доступных ВВИГ (IVIG). Каждая колонка представляет собой единственный уникальный серотип S. pneumonia. Каждая строка представляет собой уникальный образец. Образцы A-I представляют собой различные партии обычного, коммерчески доступного ВВИГ (IVIG). «ВВИГ (IVIG) средний» представляет собой средний титр серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенном в пул образце, содержащем равные количества каждого обычного, коммерчески доступного ВВИГ (IVIG). «Донорская сыворотка до вакцинации» представляет титр серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенной в пул донорской сыворотке человека до вакцинации, описанной в Примере 1. «Сыворотка вакцинированных доноров» представляет титр серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенной в пул донорской сыворотке человека в течение двенадцати недель после вакцинации, описанной в Примере 1. «Кратность увеличения титра по сравнению с коммерческим ВВИГ (IVIG)» представляет собой кратность увеличения титра серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенной в пул донорской сыворотке человека через двенадцать недель после вакцинации, описанной в Примере 1, по сравнению со средним титром серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенном в пул образце, содержащем равные количества каждого из обычных коммерчески доступных ВВИГ (IVIG).
Фиг. 9A-9L иллюстрируют титр серотип-специфических опсонических антител против S. pneumonia, присутствующих в девяти различных коммерческих партиях ВВИГ (IVIG) (образцы A-I) по сравнению с титром серотип-специфических опсонических антител S. pneumonia, присутствующим в гипериммунном глобулине по изобретению, содержащем высокий титр опсонических антипневмококковых антител к каждому серотипу.
Фиг. 10 иллюстрирует процент субъектов с первичным иммунодефицитом, у которых остаточный уровень связывающих антител против S. pneumonia снижается ниже защитных уровней (1,2 мг/мл) после инфузии обычного ВВИГ (IVIG).
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Как используется в данном описании, термин «субъект» относится к любому человеку или животному (например, примат, не относящийся к человеку, грызун, кошачьи, собачьи, крупные жвачные животные, свиноподобные, лошадиные и т.д.).
Как используется в данном описании, термин «образец» используется в самом широком смысле и включает материалы, полученные из любого источника, и может использоваться, например, для обозначения материалов, полученных из биологического источника, например, полученных от животных (включая человека), и дополнительно включает в себя любые жидкости, твердые тела и ткани. В конкретных вариантах реализации данного изобретения биологические образцы включают в себя кровь и продукты крови, такие как плазма, сыворотка и т.п. Однако эти примеры не следует истолковывать как ограничивающие виды образцов, которые находят применение в данном изобретении.
H
L
H
L
H
L
H
L
Как используется в данном описании, термин «антитело» относится к молекуле иммуноглобулина, которая обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, причем каждая пара содержит одну «легкую» (L) цепь и одну «тяжелую» (Н) цепь. Легкие цепи человека классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как мю, дельта, гамма, альфа или ипсилон и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легкой и тяжелой цепях вариабельные и константные участки соединяются участком «J», содержащим около 12 или большее количество аминокислот, причем тяжелая цепь дополнительно содержит участок «D», содержащий около 3 или большее количество аминокислот. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного участка тяжелой цепи (сокращенно обозначен в данном описании как HCVR или V) и константного участка тяжелой цепи. Константный участок тяжелой цепи состоит из трех доменов: CH1, СН2 и СН3. Каждая легкая цепь состоит из вариабельного участка легкой цепи (сокращенно обозначен как LCVR или V) и константного участка легкой цепи. Константный участок легкой цепи состоит из одного домена CL. Константные участки антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая в себя различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (C1q) классической системы комплемента. Участки V и V можно далее подразделить на участки гипервариабельности, которые называются участками, определяющими комплементарность (CDR), которые чередуются с более консервативными участками, которые называются каркасными участками (FR). Каждый V и V состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных в следующем порядке от амино-конца к карбокси-концу: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные участки каждой пары тяжелой/легкой цепи (V и V), соответственно, образуют сайт связывания с антителом. Термин «антитело» включает в себя антитело, которое является частью полимера антитела (полимерной формы антител), такого как димеры, тримеры или полимеры более высокого порядка из мономерных антител. Кроме того, он включает в себя антитело, которое связано или присоединено или иным образом физически или функционально соединено с фрагментом, который не является антителом. Кроме того, термин «антитело» не ограничен каким-либо конкретным способом получения антитела. Например, он включает в себя, в частности, рекомбинантные антитела, синтетические антитела, моноклональные антитела, поликлональные антитела, биспецифические антитела и полиспецифические антитела.
Как используется в данном описании, термин «производное антитела» или «производное» антитела относится к молекуле, способной связываться с тем же антигеном, с которым связывается антитело, от которого она происходит, и содержит аминокислотную последовательность, которая является такой же или сходной с антителом, связанным с дополнительным молекулярным объектом. Аминокислотная последовательность антитела, которая содержится в производном антитела, может быть полноразмерным антителом или может быть любой частью или частями полноразмерного антитела. Дополнительный молекулярный объект может быть химической или биологической молекулой. Примеры дополнительных молекулярных объектов включают в себя химические группы, аминокислоты, пептиды, белки (такие как ферменты, антитела) и химические соединения. Дополнительный молекулярный объект может быть полезным с любой точки зрения, например, для применения в качестве агента обнаружения, метки, маркера, фармацевтического или терапевтического агента. Аминокислотная последовательность антитела может быть присоединена или связана с дополнительным объектом посредством химической связи, генетического синтеза, нековалентной ассоциации или иным образом. Кроме того, термин «производное антитела» включает в себя химерные антитела, гуманизированные антитела и молекулы, которые получены из модификаций аминокислотных последовательностей антитела, таких как консервативные замены, добавления и инсерции аминокислот.
Используемые в данном описании термины «антиген» и «иммуноген» используются взаимозаменяемо для обозначения любого вещества, которое способно индуцировать адаптивный иммунный ответ. Антиген может представлять собой цельную клетку (например, бактериальную клетку), вирус, гриб или ее антигенную часть или компонент. Примеры антигенов включают, но не ограничиваясь этим, микробные патогены, бактерии, вирусы, белки, гликопротеины, липопротеины, пептиды, гликопептиды, липопептиды, токсоиды, углеводы, опухолеспецифические антигены и их антигенные части или компоненты.
Как используется в данном описании, термин «антигенсвязывающий фрагмент» антитела относится к одной или нескольким частям полноразмерного антитела, которые сохраняют способность связываться с тем же антигеном, с которым связывается антитело.
Используемые в данном описании термины «иммуноглобулин», «иммунный глобулин», «молекула иммуноглобулина» и «Ю» включают в себя (1) антитела, (2) антигенсвязывающие фрагменты антитела и (3) производные антитела, каждый как определено в данном описании. Как описано в данном описании, иммунный глобулин может быть получен из (например, фракционирован из, выделен из, очищен из, концентрирован из и т.д.) композиций объединенной в пул плазмы (например, для введения субъекту). Как используется в данном описании, термин «внутривенный иммунный глобулин (ВВИГ (IVIG))» относится к обычному иммуноглобулину, полученному из плазмы человека от больших количеств (например, 250, 500, 1000 или большее количество) случайных доноров (например, HIZENTRA, иммунный глобулин подкожный, CSL Behring), тогда как термины «антипневмококковый иммунный глобулин» или «антипневмококковый ВВИГ (IVIG)» или «антипневмококковый гипериммунный глобулин» (например, как описано в данном описании и в Примерах) относятся к иммунному глобулину, полученному от доноров плазмы (например, доноры плазмы человека) в соответствии со способами по изобретению (например, большие количества (например, 250, 500, 1000 или большее количество) доноров плазмы человека (например, здоровых доноров плазмы человека), которые были вакцинированы одной или несколькими анти-пневмококковыми вакцинами в соответствии со способами, описанными в данном описании), который содержит повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител по сравнению с контрольным образцом.
Термины «опсонофагоцитарное антитело» и «опсоническое антитело» используются в данном описании взаимозаменяемо для обозначения антител, которые функционируют таким образом, чтобы активно вызывать восприимчивость бактерий или других инородных тел (например, клетки или клеточные продукты) к действию фагоцитов (например, опсонические антитела покрывают бактерии, в результате чего бактериальные клетки становятся восприимчивыми к фагоцитозу в результате взаимодействия между опсоническими антителами, покрывающими бактериальные клетки, и рецепторами на поверхности фагоцитов). Например, опсоническое антипневмококковое антитело представляет собой антитело, которое связывается с поверхностью S. pneumonia и покрывает ее, вызывая восприимчивость бактерии к фагоцитозу/элиминации под действием фагоцитов.
Термины «титр опсонофагоцитарного антитела» и «титр опсонического антитела» в данном описании используются взаимозаменяемо для обозначения титра функционально активных опсонофагоцитарных антител (например, которые коррелируют с защитой от инфекции и/или заболевания). Например, титр опсонических антипневмококковых антител (например, по данным анализа ОФЭ (OPK), описанного в данном описании) представляет собой титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении S. pneumonia, в образце (например, который является независимым и отличается от общего количества антител, способных связываться с S. pneumonia, присутствующих в образце (например, по данным анализа ИФА (ELISA)).
Как используется в данном описании, термин «гипериммунный глобулин» относится к иммуноглобулину, полученному из плазмы доноров с высоким титром антител (например, опсоническое антитело) против конкретного организма (например, S. pneumonia). Например, как используется в данном описании, «антипневмококковый гипериммунный глобулин» представляет собой иммуноглобулин, содержащий повышенный титр опсонических антипневмококковых антител независимо от (например, независимо и в отличие от) общего титра или количества антител, способных связываться с S. pneumonia.
Как описано в данном описании, повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 7 раз, в 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) по сравнению титрами специфических опсонических антипневмококковых антител, специфических в отношении тех же серотипов, которые присутствуют в контрольном образце; или специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, причем он в 2 или большее количество раз выше (например, в 3-25 или большее количество раз), чем титр опсонических антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia, которые присутствуют в контрольном образце; или такой, который находится в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, по меньшей мере, 50% или большее количество (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F), по данным описанного в данном описании анализа опсонофагоцитарной элиминации; или такой, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 или большее количество раз выше, чем титр специфических опсонических антипневмококковых антител, которые присутствуют в контрольном образце, например, по меньшей мере, для 55% или большего количества пневмококковых серотипов, выбранных из серотипов 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F (т.е., по меньшей мере, в 2, 3, 4, 5 или большее количество раз более выраженное увеличение титров опсонических антипневмококковых антител, специфических в отношении 7/12, 8/12, 9/12,10/12, 11/12 или 12/12 пневмококковых серотипов, по сравнению с контрольным образцом). Изобретение не ограничивается видом применяемого контрольного образца. Например, в одном варианте реализации изобретения контрольный образец представляет собой иммунный глобулин, полученный из плазмы здорового(ых) донора(ов) плазмы человека до вакцинации (например, таким образом, что уровни титров специфических опсонических антипневмококковых антител в донорской плазме человека до иммунизации применяются в качестве исходного уровня для измерения увеличения титров специфических опсонических антипневмококковых антител после иммунизации). В другом варианте реализации изобретения контрольный образец представляет собой иммунный глобулин, полученный из смеси образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных доноров плазмы человека, которые не были вакцинированы антипневмококковой вакциной (например, таким образом, чтобы уровни титров специфических опсонических антипневмококковых антител у невакцинированных доноров плазмы человека применялись в качестве основы для измерения увеличения титров специфических опсонических антипневмококковых антител, присутствующих у доноров плазмы человека, вакцинированных в соответствии со способами по изобретению). Специалистам в данной области техники будет понятно, что можно применять другие контрольные образцы. Кроме того, повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител может быть титром, который применяется для измерения элиминации бактерий и/или который применяется в качестве точного суррогата для прогнозирования эффективности препарата иммуноглобулина для защиты от инфекций S. pneumonia.
Как используется в данном описании, выражение «фармацевтически приемлемый» относится к молекулярным объектам и композициям, которые являются физиологически переносимыми и обычно не вызывают неприемлемой аллергической или подобной неблагоприятной реакции при введении человеку.
PNEUMOVAX (Merck Sharp & Dohme Corp., Северный Уэльс, РА) относится к пневмококковой полисахаридной вакцине, состоящей из очищенных препаратов пневмококкового капсулярного полисахарида. PPSV23 содержит полисахаридный антиген из следующих 23 серотипов пневмококковых бактерий: 1, 2, 3, 4, 5, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, ПА, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19F, 19А, 20, 22F, 23F и 33F. Он содержит 25 мкг каждого антигена на дозу и содержит 0,25% фенола в качестве консерванта.
PREVNAR-13 (Wyeth Pharmaceuticals, Колледжвилль, штат Пенсильвания) относится к пневмококковой конъюгированной вакцине, которая содержит очищенный капсульный полисахарид из 13 серотипов Streptococcus pneumoniae (1, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 9V, 14, 19А, 19F, 18С и 23F), конъюгированный с нетоксичным вариантом дифтерийного токсина, известным как CRM 197. Доза PCV13 0,5 миллилитра (мл) содержит приблизительно 2,2 микрограмма (мкг) полисахарида каждого из 12 серотипов и приблизительно 4,4 мкг полисахарида серотипа 6В; общая концентрация CRM 197 составляет приблизительно 34 мкг; он содержит 0,02% полисорбата 80 (Р80), 0,125 миллиграмма (мг) алюминия в виде адъюванта фосфата алюминия (AlPO4) и 5 мл сукцинатного буфера. Вакцина не содержит тимеросала в качестве консерванта.
Как используется в данном описании, термин «образец антител» относится к композиции, содержащей антитела (например, жидкость (например, плазма, кровь, очищенные антитела, фракции крови или плазмы, компоненты крови или плазмы и т.д.)), полученной от или предоставленной донором (например, природный источник) или полученной из синтетического, рекомбинантного, другого источника in vitro или из коммерческого источника. Образец антител может содержать повышенный титр конкретного антитела или набора антител на основе патогенных/антигенных воздействий (например, естественного воздействия или путем вакцинации) на донора, или антител, сконструированных для получения в синтетическом, рекомбинантном или in vitro контексте. В данном случае образец антител с повышенным титром антитела X упоминается как «образец с повышенным уровнем антитела X». Например, образец антител с повышенным титром антител против S. pneumonia носит название «образец антител с повышенным титром против S. pneumonia».
Как используется в данном описании, термин «выделенное антитело» или «выделенная связывающаяся молекула» относится к антителу или связывающейся молекуле, которые идентифицированы и отделены от, по меньшей мере, одного загрязнителя, с которым они обычно ассоциируются в источнике. Примеры выделенных антител включают: антитело, которое: (1) не связано с одним или большим количеством ассоциирующихся с ним в природе компонентов, которые сопровождают его в естественном состоянии; (2) по существу не содержит других белков из источника происхождения; или (3) экспрессируется рекомбинантно, in vitro или без клеток, или синтезируется, и удаляется среда, в которой оно было получено.
Используемые в данном описании термины «объединенная в пул плазма», «объединенные в пул образцы плазмы» и «композиция объединенной в пул плазмы» относятся к смеси двух или большего количества образцов плазмы и/или полученной из нее композиции (например, иммунный глобулин). Повышенный титр конкретного антитела или набора антител в объединенной в пул плазме отражает повышенные титры образцов антител, которые составляют объединенную в пул плазму. Например, образцы плазмы могут быть получены от субъектов, которые были вакцинированы (например, с помощью пневмококковой вакцины) и, следовательно, имеют высокий титр антител (например, высокий общий титр связывающихся антител и/или высокий титр опсонических антител) к патогену (S. pneumonia) по сравнению с уровнем(ями) антител, найденным(и) в популяции в целом. При объединении образцов плазмы в пул получают композицию объединенной в пул плазмы (например, содержащей повышенный титр антител, специфических в отношении конкретного патогена). В этом случае объединенная в пул плазма с повышенным титром антитела X (например, где «X» представляет собой микробный патоген) упоминается как «пул антител с повышенным X». Например, объединенная в пул плазма с повышенным титром связывающих антител против S. pneumonia носит название «пул с повышенным уровнем антител против S. pneumoniae. Композиции объединенной в пул плазмы можно применять для получения иммунного глобулина (например, который затем вводят субъекту) способами, известными в данной области техники (например, фракционирование, очистка, выделение и т.д.). Изобретение предусматривает, что как композиции объединенной в пул плазмы, так и полученный из них иммунный глобулин могут вводиться субъекту с целью обеспечения профилактических и/или терапевтических преимуществ для субъекта. Соответственно, термин композиция объединенной в пул плазмы может относиться к иммунному глобулину, полученному из объединенной в пул плазмы/объединенных в пул образцов плазмы.
Как используется в данном описании, термин «пул, нагруженный антителами» относится к объединенной в пул плазме, нагруженной или объединенной с антителами или другим иммуноглобулином, полученным синтетически, рекомбинантно или другими средствами in vitro.
Как используется в данном описании, термин «очищенный» или «очищать» означает результат любого процесса, который удаляет часть загрязняющего вещества из представляющего интерес компонента, такого как белок (например, антитело) или нуклеиновая кислота. Таким образом, процент очищенного компонента в образце увеличивается.
Как используется в данном описании, термин «иммунотерапевтические агенты» относится к химическому или биологическому веществу, которое может усиливать иммунный ответ (например, специфический или общий) млекопитающего. Как используется в данном описании, термин «донор» относится к субъекту, который обеспечивает биологический образец (например, кровь, плазма и т.д.). Донор/донорский образец может быть подвергнут скринингу на предмет наличия или отсутствия конкретных патогенов (например, с применением директив по оценке стандартов безопасности для продуктов крови Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) США для оценки стандартов безопасности для продуктов крови (например, изданных Консультативным комитетом по продуктам крови FDA). Например, донор/донорский образец может быть подвергнут скринингу в соответствии с директивами FDA для проверки отсутствия одного или нескольких патогенов, передающихся через кровь (например, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 (ВИЧ-1), ВИЧ-2, Treponema pallidum (сифилис), Plasmodium falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax или P. knowlesi (малярия), вирус гепатита В (HBV), вирус гепатита С HCV), прионы (болезнь Крейтцфельда-Якоба), вирус Западного Нила, парвовирус, Typanosoma cruzi, коронавирус атипичной пневмонии (SARS), вирус осповакцины или другой патоген, на который обычно проводится скрининг или рекомендуется проводить скрининг регулирующим органом, таким как FDA).
Как используется в данном описании, термин «иммуностимулирующее количество» относится к такому количеству вакцины (например, антипневмококковой вакцины), которое способно стимулировать иммунный ответ. Иммунный ответ включает набор биологических эффектов, которые приводят к выработке организмом иммуноглобулинов или антител в ответ на инородный объект. Соответственно, иммунный ответ относится к активации В-клеток, in vivo или в культуре, путем стимуляции молекул рецептора Ig на клеточной поверхности В-клетки. Измерение иммунного ответа находится в пределах обычной компетенции специалистов в данной области техники и включает определение уровней антител с применением способов, описанных в серии Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays (Burdon & van Knippenberg eds., 3rd ed.,1985) Elsevier, New York; и Antibodies: A Laboratory Manual (Harlow & Lane eds., 1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press; а также таких методов, как противоточный иммуноэлектрофорез (ПТЭФ (GIEP)), радиоиммунологический анализ, радиоиммунопреципитация, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА (ELISA)), дот-блот анализы и сэндвичевые анализы, см. патенты США №№4376110 и 4486530, все из которых включены посредством ссылки. Кроме того, измерение иммунного ответа включает обнаружение или определение событий активации В-клеток, которые могут предшествовать выработке антител, или сигнализировать об увеличении выработки антител. Такие измерения включают в себя анализы пролиферации В-клеток, анализы фосфорилирования, анализы концентрации внутрицитоплазматического свободного кальция и другие способы определения активации В-клеток, известные в данной области техники. Типовые анализы представлены в Mongini et al., J. Immunol. 159:3782-91 (1997); Frade, et al., BBRC 188:833-842 (1992); Tsokos et al., J. Immunol. 144:1640-1645 (1990); Delcayre etal., BBRC 159:1213-1220 (1989); и Nemerow et al., J. Immunol. 135:3068-73 (1985), каждый из которых включен посредством ссылки. В предпочтительных вариантах реализации изобретения практика изобретения включает в себя содействие, усиление или стимуляцию иммунного ответа. Эти действия относятся к формированию иммунного ответа, который ранее не существовал; к оптимизации или повышению желаемого иммунного ответа; к формированию или повышению вторичного ответа, характеризующегося усилением переключения изотипов, ответами памяти или обоими; к обеспечению статистически повышенного иммунозащитного действия против патогена; к получению эквивалентного или более выраженного гуморального иммунного ответа или другой меры активации В-клеток на основе сниженной или пороговой дозы антигена; к генерированию повышенного гуморального иммунного ответа или другому показателю активации В-клеток в ответ на эквивалентную дозу антигена; или к снижению порога аффинности для активации В-клеток in vivo или in vitro. Предпочтительно иммуностимулирующее количество относится к такому количеству вакцины, которое способно стимулировать иммунный ответ у субъекта (например, донора), у которого производят забор плазмы, сыворотки или другой компонент крови, для применения в композициях и способах по изобретению (например, при терапевтическом и/или профилактическом лечении пневмококковой инфекции у субъекта, получающего лечение композициями и способами, описанными в данном описании)).
Термины «буфер» или «буферные агенты» относятся к материалам, которые при добавлении к раствору заставляют раствор противостоять изменениям рН.
Термины «восстанавливающий агент» и «донор электронов» относятся к материалу, который передает электроны второму материалу, чтобы уменьшить состояние окисления одного или нескольких атомов второго материала.
Термин «одновалентная соль» относится к любой соли, в которой металл {например, Na, K или Li) имеет чистый заряд 1+ в растворе (т.е., на один протон больше, чем электронов).
Термин «двухвалентная соль» относится к любой соли, в которой металл (например, Mg, Са или Sr) имеет чистый 2+ заряд в растворе.
Термины «хелатор» или «хелатирующий агент» относятся к любым материалам, содержащим более одного атома с одиночной парой электронов, которые доступны для связи с ионом металла.
Термин «раствор» относится к водной или неводной смеси.
Как используется в данном описании, термин «адъювант» относится к любому веществу, которое может стимулировать иммунный ответ. Некоторые адъюванты могут вызывать активацию клетки иммунной системы (например, адъювант может вызвать создание выработку и секрецию цитокина иммунной клеткой). Примеры адъювантов, которые могут вызывать активацию клетки иммунной системы, включают, но не ограничиваясь этим, сапонины, очищенные из коры дерева Q. saponaria, такие как QS21 (гликолипид, который при фракционировании ВЭЖХ элюируется в 21-м пике; Aquila Biopharmaceuticals, Inc., Вустер, штат Массачусетс); поли(ди(карбоксилатофенокси)фосфазен (ПКФФ (РСРР)-полимер, Исследовательский институт вирусов, США), производные липополисахаридов, таких как монофосфориллипид A (MPL, Ribi ImmunoChem Research, Inc., Гамильтон, штат Монтана), мурамилдипептид (MDP, Ribi) и треонил-мурамилдипептид (t-MDP, Ribi), ОМ-174 (дисахарид глюкозамина, родственный липиду А, ОМ Pharma SA, Мерен, Швейцария), токсин холеры (ТХ (СТ)) и фактор элонгации Leishmania (очищенный белок Leishmania, Corixa Corporation, Сиэтл, штат Вашингтон). Традиционные адъюванты хорошо известны в данной области техники и включают, например, фосфатные или гидроксидные соли алюминия («квасцы»). В некоторых вариантах реализации изобретения композиции по данному изобретению вводят с одним или большим количеством адъювантов (например, чтобы вызвать отклонение иммунного ответа в сторону ответа типа Th1 и/или Th2). В некоторых вариантах реализации изобретения применяют адъюванты, описанные в US 2005158329, US 2009010964, US 2004047882 или US 6262029 (каждый из которых включен в данную заявку в полном объеме посредством ссылки).
Как используется в данном описании, термин «количество, эффективное для индуцирования иммунного ответа» (например, пневмококковой вакцины) относится к требуемому уровню дозы (например, при введении субъекту), чтобы стимулировать, генерировать и/или вызвать иммунный ответ у субъекта. Эффективное количество можно вводить за один или большее количество приемов (например, одним и тем же или другим способом), нанесений или доз, что не ограничивается конкретным препаратом или способом введения.
Как используется в данном описании, термин «в условиях, при которых указанный субъект генерирует иммунный ответ "относится к любой качественной или количественной индукции, генерации и/или стимуляции иммунного ответа (например, врожденного или приобретенного).
Как используется в данном описании, термин «иммунный ответ» относится к реакции иммунной системы субъекта. Например, иммунные ответы включают, но не ограничиваясь этим, обнаружимое изменение (например, повышение) активации Toll-подобного рецептора (TLR), экспрессии и/или секреции лимфокина (например, цитокина (например, Th1 или Th2 типа) или хемокина), активации макрофагов, активации дендритных клеток, активации Т-клеток (например, CD4+ или CD8+ Т-клетки), активации природных клеток киллеров, ПК (>1К)-клеток, и/или активации В-клеток (например, генерация и/или секреция антител). Дополнительные примеры иммунных ответов включают связывание иммуногена (например, антиген (например, иммуногенный полипептид)) с молекулой основного комплекса гистосовместимости, ОКГ (МНС) и индукцию ответа в форме цитотоксического Т-лимфоцита («CTL»), индуцирующего ответ В-клеток (например, выработка антител) и/или ответ в форме Т-хелперного лимфоцита и/или ответ в форме гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ (DTH)) против антигена, из которого получен иммуногенный полипептид, экспансию (например, рост популяции клеток) клеток иммунной системы (например, Т-клеток, В-клеток (например, любой стадии развития (например, плазматических клеток) и повышенный процессинг и презентацию антигена с помощью антигенпрезентующих клеток. Иммунный ответ может быть направлен на иммуногены, которые иммунная система субъекта считает чужеродными (например, неаутоантигены из микроорганизмов (например, патогены) или аутоантигены, признанные чужеродными). Таким образом, необходимо понимать, что, как используется в данном описании, «иммунный ответ» относится к любому виду иммунного ответа, включая, но не ограничиваясь этим, врожденный иммунный ответ (например, активация каскада передачи сигналов рецептора Toll), опосредованные клетками иммунные ответы (например, ответы, опосредуемые Т-клетками (например, антигенспецифические Т-клетки) и неспецифическими клетками иммунной системы) и гуморальные иммунные ответы (например, например, реакции, опосредуемые В-клетками (например, посредством генерации и секреции антител в плазму, лимфу и/или тканевые жидкости). Термин «иммунный ответ» включает все аспекты способности иммунной системы субъекта реагировать на антигены и/или иммуногены (например, как первичный ответ на иммуноген (например, патоген), так и приобретенный (например, память), которые являются результатом адаптивного иммунного ответа).
Как используется в данном описании, термин «фармацевтически приемлемый носитель» обозначает любой из стандартных фармацевтических носителей, в том числе, но не ограничиваясь этим, фосфатно-солевой буфер, воду и различные виды увлажняющих агентов (например, лаурилсульфат натрия), любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, лаурилсульфат натрия, изотонические и абсорбирующие агенты, разрыхлители (например, картофельный крахмал или натрий крахмал гликолят), полиэтиленгликоль, другие природные и неприродные носители и т.п. Кроме того, композиции могут содержать стабилизаторы и консерванты. Примеры носителей, стабилизаторов и адъювантов описаны и известны в данной области техники (см., например, Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975), включенной в данный документ посредством ссылки).
4
1-4
+
Как используется в данном описании, термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к любой соли (например, полученной введением в реакцию с кислотой или основанием) композиции по данному изобретению, которая физиологически переносится целевым субъектом. «Соли» композиций по данному изобретению могут быть получены с неорганическими или органическими кислотами и основаниями. Примеры кислот включают, но не ограничиваясь этим, хлористоводородную, бромистоводородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, этансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, сульфоновую, нафталин-2-сульфоновую, бензолсульфоновую кислоту и т.п. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, которые сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, можно применять при получении солей, пригодных в качестве промежуточных продуктов, для получения композиций по изобретению и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей. Примеры оснований включают, но не ограничиваясь этим, гидроксиды щелочных металлов (например, натрий), гидроксиды щелочноземельных металлов (например, магний), аммиак и соединения формулы NW, где W представляет собой С алкил, и т.п.
+
+
+
4
4
1-4
Примеры солей включают, но не ограничиваясь этим: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфарат, камфарсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, флукогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, хлорид, бромид, йодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и т.п. Другие примеры солей включают в себя анионы соединений по данному изобретению в соединении с подходящим катионом, таким как Na, NH4 и NW(где W представляет собой C алкильную группу) и т.п. Для терапевтического применения включены фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения.
Для терапевтического применения включены фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Streptococcus pneumonia является ведущей причиной смертности и заболеваемости во всем мире. Его основным фактором вирулентности является капсулярный полисахарид. Пожилой возраст и иммунодефицит антител (например, в результате первичного иммунодефицита, описанного в данном описании) являются основными факторами риска пневмококковой инфекции. По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), ежегодно от пневмококковых заболеваний умирает 1,6 миллиона человек. Хотя большинство из более чем 90 известных капсульных серотипов могут вызывать серьезное заболевание, только ограниченное их количество вызывает большинство случаев инвазивного пневмококкового заболевания (ИПЗ (IPD)). Иммунитет к S. pneumonia опосредуется фагоцитозом бактерий в присутствии комплемента и серотип-специфического опсонического антитела. Оценка серологических ответов на различные пневмококковые вакцины в крупных клинических испытаниях обеспечила параметры корреляции с защитой, необходимые для выпуска новых вакцин. Для прогнозирования защиты от заболевания ИПЗ (IPD) ВОЗ рекомендует контрольный порог от 0,2 до 0,35 мкг/мл для пневмококковых конъюгированных вакцин (все серотипы), а для полисахаридных вакцин текущая директива указывает 1,3 мкг/мл. Более точный суррогатный маркер, который является показателем защиты и который был принят FDA, как коррелирующий с клинической эффективностью, представляет собой титр опсонических антител, и было установлено, что он является достаточно точным, чтобы заменить потребность в испытаниях вакцин. Например, опсонические титры у вакцинированного индивидуума 1:8 обычно считаются коррелирующими с защитой от различных серотипов S. pneumonia. Если вакцина индуцирует опсонический титр 1:8 против конкретного серотипа, то вакцина может рассматриваться как клинически эффективная даже в отсутствие клинического испытания, демонстрирующего снижение количества инфекций у вакцинированных людей по сравнению с невакцинированными людьми.
Первичные иммунодефициты (ПИД (PID)) представляют собой группу из более чем 200 генетически унаследованных расстройств, характеризующихся дефицитом отдельных компонентов врожденной или адаптивной иммунной системы, с клиническим результатом в виде повышенной восприимчивости к инфекции. Наиболее распространенным иммунодефицитом является дефицит антител. Основными клиническими особенностями пациентов с дефицитом антител (также называемый гипогаммаглобулинемией) являются рецидивирующие инфекции дыхательных путей, причем наиболее часто выделяемой бактерией является Streptococcus pneumonia (см., например, Fried and Bonilla, Clin Microbiol Rev., 2009; 22: 396-414; Busse et al., J Allergy Clin Immunol, 2002; 109: 1001-1004).
В течение последних нескольких десятилетий долгосрочное применение поливалентного внутривенного иммуноглобулина человека (ВВИГ (IVIG), также называется в данном описании «обычный ВВИГ (IVIG)») было основным терапевтическим средством для снижения тяжести и частоты инфекций у иммунодефицитных людей (например, с дефицитом антителах) (см., например, Salehzadeh et al., J Microbiol Immunol Infect 2010, 43 (1): 11-17; Favre et al., Allergy 2005 60: 385-390). Инфузия ВВИГ (IVIG) приводит к быстрому появлению пика концентрации иммуноглобулина G (IgG), с последующим снижением IgG. Уровень IgG непосредственно перед следующей инфузией (т.е., остаточный уровень) контролируют для оценки адекватности конкретной схемы инфузий. В целом, пациентам с ПИД (PID), которых лечат ВВИГ (IVIG), проводят инфузию каждые три или четыре недели. Хотя инфузия ВВИГ (IVIG) каждые три или четыре недели в основном была успешной для предотвращения серьезных инфекций нижних отделов дыхательных путей у пациентов с ПИД (PID), существует значительный процент пациентов с ПИД (PID), у которых продолжают возникать инфекции верхних отделов дыхательных путей, с соответствующей заболеваемостью и заболеванием, во время лечения. Это несмотря на тот факт, что у большинства иммуноскомпрометированных пациентов, получающих ВВИГ (IVIG), по-видимому, присутствуют приемлемые уровни общего иммуноглобулина, а также приемлемые остаточные уровни IgG против S. pneumonia (см., например, Favre et al., Allergy 2005 60: 385-390). Кроме того, применяли антибиотики, но они часто неэффективны.
Таким образом, введение экзогенного объединенного в пул человеческого ВВИГ (IVIG) было значимым терапевтическим средством в клинической медицине для пациентов с иммунодефицитом (например, с дефицитом антител) и, по-видимому, предотвращало возникновение серьезных инфекций нижних отделов дыхательных путей. Тем не менее, и в полную противоположность этому, традиционная терапия ВВИГ (IVIG) не смогла предотвратить или излечить значительную частоту менее опасных для жизни инфекций верхних отделов дыхательных путей (например, вызванных S. pneumonia), которые возникают у пациентов с ПИД (PID) (см., например, Favre et al., Allergy 2005 60: 385-390, Simao-Gurge et al., Allergo Irnmunopathol 2017, 45: 55-62). Иначе говоря, в то время как общие концентрации IgG, достигаемые регулярными инфузиями обычного ВВИГ (IVIG), предотвращают серьезные инфекции нижних дыхательных путей у пациентов с ПИД (PID), сохраняется значительная и значимая заболеваемость менее серьезными с клинической точки зрения инфекциями верхних отделов дыхательных путей у пациентов с ПИД (PID), вызванными S. pneumonia, что в свою очередь приводит к значительным медицинским осложнениям, снижению качества жизни и неразборчивому применению у пациентов антибиотиков широкого спектра действия в попытке контролировать инфекции.
В данном документе раскрыты композиции и способы лечения инфекции, вызванной Streptococcus pneumonia. В частности, в изобретении предлагается человеческий гипериммунный глобулин и его композиции для профилактики или лечения пневмококковой инфекции. Изобретение относится к способам получения гипериммунных глобулинов, содержащих высокие титры опсонических антипневмококковых антител, композициям на их основе и способам применения композиций для профилактики и лечения пневмококковой инфекции. Кроме того, в изобретении предлагаются способы профилактики или лечения пневмококковой инфекции (например, инфекции верхних отделов дыхательных путей (например, бронхит, отит, синусит и т.д.)) у иммуноскомпрометированных субъектов путем введения композиций гипериммунного глобулина по изобретению (например, содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител) иммуноскомпрометированный субъектам.
Как подробно описано в данном описании (например, в Примерах), в изобретении предлагается новая композиция гипериммунного глобулина, содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител, которая неожиданно и значительно отличается от обычных препаратов иммунного глобулина, а также других препаратов ВВИГ (IVIG) (например, другие гипериммунные препараты ВВИГ (IVIG)). В частности, как описано в Примерах 2-4, неожиданно было обнаружено, что гипериммунный глобулин, полученный в соответствии со способами по изобретению, содержит повышенный титр опсонических антипневмококковых антител, которые являются функциональными, имеют широкий спектр действия в отношении множества серотипов S. pneumonia, усиливают фагоцитоз и вызывают элиминацию S. pneumonia in vitro (например, антитела являются опсонофагоцитарными), независимо от общего количества связывающих антипневмококковых антител (например, измеренного при помощи ИФА (ELISA)), которые присутствуют в композиции. Иными словами, эксперименты, проведенные во время разработки вариантов реализации изобретения, неожиданно выявили, что общее связывающееся IgG антитело против капсулярного полисахарида S. pneumonia не коррелирует с и не является прогностическим для количества функционального опсонического антитела, присутствующего в иммунном глобулине, полученном из сыворотки вакцинированного хозяина (см., например, Примеры 2-4). Таким образом, низкие уровни связывающего антитела могут быть связаны с высоким уровнем защитных опсонических антител и наоборот. Таким образом, измерение уровней общих антител только в препаратах иммуноглобулина не предсказывает и не коррелирует с защитной эффективностью этого препарата. Таким образом, в одном варианте реализации изобретения предлагается идентификация и характеристика композиций плазмы и/или иммунного глобулина, содержащих скорее желаемый функциональный титр опсонического антитела, чем тот, в котором известно только общее количество IgG (например, из-за выявления отсутствие корреляции между общим титром антипневмококковых IgG и титром опсонических антипневмококковых антител, присутствующих в плазме или полученном из нее иммунном глобулине от вакцинированных доноров).
Кроме того, была обнаружена выраженная вариабельность серотип-специфических опсонических титров в различных коммерческих партиях обычного ВВИГ (IVIG) (см., например, Фиг. 9A-9L, каждый из образцов A-I представляет коммерческий ВВИГ (IVIG)), а также то, что повышенный титр до одного серотипа не предсказывал или коррелировал с повышенным титром в отношении любого другого серотипа. Это указывало на то, что индивидуальный повышенный ответ в любом индивидуальном обычном ВВИГ (IVIG) не отражает общего усиленного иммунного ответа против S. pneumonia, а скорее спорадический(е) усиленный(е) ответ(ы) на очень специфические серотипы (см., например, Malgorzata et al. Clin Diagn Lab Immunol 2004, 11 (6): 1158-1164). В противоположность этому, титры опсонических антител, наблюдаемые для иммунного глобулина, полученного от иммунизированных доноров согласно изобретению, были отмечены как усиленные для всех серотипов без исключения (см., например, Пример 5, Фиг. 8 и см. Фиг. 9A-9L, образец HIG - «гипериммунный глобулин» по изобретению). В зависимости от серотипа, наблюдалось увеличение титра опсонических антипневмококковых антител в иммунном глобулине от иммунизированных доноров в 3-256 раз по сравнению с различными коммерческими партиями иммунного глобулина (см., например, Пример 5 и Фиг. 8, коммерческие/обычные образцы ВВИГ (IVIG) A-I по сравнению с гипериммунными донорскими сыворотками). Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения композиции и способы получения композиций по изобретению (например, композиции крови, плазмы и/или иммунного глобулина), содержащие повышенный титр опсонических антипневмококковых антител, обеспечивают гетерогенную композицию, содержащую титры опсонических антипневмококковых антител, специфических в отношении множества пневмококковых серотипов (например, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или большее количество серотипов) и/или значительно увеличенные (например, в 3-256 раз выше) титры опсонических антител по сравнению с обычным коммерческим иммунным глобулином.
Таким образом, из-за идентификации несогласованности между общим титром связывающихся антипневмококкового IgG антител и титром опсонических антипневмококковых антител, присутствующих в плазме или полученном из нее иммунном глобулине из плазмы вакцинированных доноров, описанной в данном описании, в качестве еще одного объекта изобретения предлагается композиция плазмы и/или иммунного глобулина (например, антипневмококковый гипериммунный глобулин), содержащие желаемый повышенный титр функциональных, опсонических антипневмококковых антител (например, по меньшей мере, от 1:64 до около 1:8192 (например, независимо от общего титра связывающихся антипневмококковых антител (например, путем объединения плазмы и/или иммунного глобулина, собранного из плазмы вакцинированных доноров, и/или иммунного глобулина, идентифицированного как содержащий высокий титр опсонических антипневмококковых антител, друг с другом и/или с вакцинированной донорской плазмой и/или иммунным глобулином, которые могут не содержать высокого титра опсонических антипневмококковых антител, но при объединении с содержащей высокий титр опсонических антипневмококковых антител донорской плазмой и/или иммунным глобулином не разбавляют общий опсонический титр до нежелательного уровня по сравнению с контрольным образцом))).
В данном описании дополнительно описано открытие того факта, что пулы стандартного/обычного иммуноглобулина от нормальных доноров (например, применяемые для получения коммерчески доступного стандартного/обычного ВВИГ (IVIG)) не содержат надежных и стабильно высоких уровней опсонических антител для множественных серотипов S. pneumonia, тогда как композиция иммунного глобулина (например, антипневмококковый гипериммунный глобулин), содержащая высокий титр опсонических антипневмококковых антител широкого спектра действия по изобретению против множества серотипов при внутривенном введении немедленно обеспечивает функциональные, специфические антитела, которые способствуют фагоцитозу и вызывают элиминацию множества серотипов S. pneumonia фагоцитами. Изобретение не ограничивается серотипом или количеством серотипов S. pneumonia, в отношении которых функциональные, опсонические антитела, присутствующие в составе гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)) по изобретению, способствуют опсонофагоцитозу и/или элиминации. Фактически, в изобретении предлагается композиция (например, композиция гипериммунной плазмы и/или гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG))) по изобретению, которая содержит опсонические антитела широкого спектра действия, по меньшей мере, против 9 из 12, 10 из 12, 11 из 12 или все 12 из 12 следующих серотипов S. pneumonia: 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F (см., например, Примеры 2-5). Таким образом, в изобретении предлагаются композиции и способы их получения, которые содержат повышенный титр специфических опсонических антипневмококковых антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 7 раз, в 10 или большее количество раз выше, чем титр специфических опсонических антипневмококковых антител, присутствующий в контрольном образце (например, по меньшей мере, 75% пневмококковых серотипов, выбранных из серотипов 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F). В другом варианте реализации изобретения предлагается композиция гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), которая содержит высокий титр опсонических антител широкого спектра действия, по меньшей мере, против 70%, по меньшей мере, 75%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере, 90%, 95%, 98% или большего количества для каждого из серотипов, присутствующего в вакцине или множестве вакцин, применяемых для иммунизации одного или нескольких доноров плазмы, от которых получен иммунный глобулин.
Еще одним преимуществом и целью изобретения является предложить композицию гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), содержащую опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, пациенту (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PIDD)), для лечения (например, терапевтического и/или профилактического) пневмококковой инфекции у пациента (например, путем подавления роста S. pneumonia и/или клиренса S. pneumonia из крови пациента). Кроме того, в изобретении предлагается композиция гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), содержащая опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, для пациента (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PID)D)) с целью лечения пневмококковой инфекции у пациента (например, путем улучшения или усиления клиренса S. pneumonia из крови пациента). Дополнительно, изобретение относится к композиции гипериммунного глобулина (например, ВВИГ (IVIG)), содержащей опсонические антитела широкого спектра действия, специфические в отношении S. pneumonia, для пациента (например, иммуноскомпрометированный пациент (например, пациент с ПИД (PID)D)), для предотвращения инфекции верхних отделов дыхательных путей у пациента, которые невозможно предотвратить при помощи терапии обычным ВВИГ (IVIG). Изобретение не ограничивается видом инфекции верхних отделов дыхательных путей, которую предотвращают и/или лечат, и может включать, но не ограничиваясь этим, риносинусит (синусит), средний отит, фарингит, эпиглоттит, ларинготрахеит и ларинготрахеобронхит. Аналогично, композиции и способы их применения (например, введение) применяют для профилактики и/или лечения признаков или симптомов инфекции верхних отделов дыхательных путей, включая, но не ограничиваясь этим, кашель, чихание, выделения из носа, заложенность носа, насморк, лихорадка, першение или боль в горле и носовое дыхание.
Изобретение не ограничивается видом стрептококковой инфекции, которую лечат (например, профилактически и/или терапевтически). Фактически, можно лечить любую стрептококковую инфекцию, вызванную стрептококковой группой бактерий. Существует более 90 различных штаммов бактерий Streptococcus pneumonia (S. pneumonia) (известных как серотипы), некоторые из которых вызывают более серьезную инфекцию, чем другие. Симптомы пневмококковой инфекции могут варьироваться в зависимости от вида инфекции. К общим симптомам относятся: высокая температура (лихорадка) 38С (100, 4F), ноющие и острые боли и/или головная боль. Пневмококковые инфекции обычно относятся к одной из двух категорий: неинвазивные пневмококковые инфекции - они возникают за пределами основных органов или крови и имеют тенденцию быть менее серьезными; и инвазивные пневмококковые инфекции они возникают внутри основного органа или крови и, как правило, более серьезны. Композиции по изобретению и способы их применения находят применение при лечении (например, терапевтическом и/или профилактическом) как неинвазивных, так и инвазивных пневмококковых инфекций.
В одном варианте реализации изобретения предлагаются композиции и способы получения композиции, содержащей объединенные в пул образцы плазмы (например, плазма от множества доноров (например, доноров, которые вакцинированы одной или большим количеством пневмококковых вакцин)), которые содержат высокие титры опсонических антипневмококковых антител. Таким образом, целью изобретения является создание способов получения композиций (например, композиций крови, плазмы и/или иммунного глобулина), содержащих высокий титр опсонических антипневмококковых антител. В одном варианте реализации изобретения одному или большему количеству здоровых взрослых людей (например, людей, не имеющих известных заболеваний) вводят пневмококковый иммуноген, рекомбинантный пневмококковый белок или их комбинацию. В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia является сахаром клеточной мембраны S. pneumonia (например, полисахарид). В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia представляет собой конъюгированную вакцину (например, конъюгированную с носителем и/или адъювантом (например, белок или другая молекула-носитель). В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноген S. pneumonia представляет собой неконъюгированную вакцину. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированная вакцина или неконъюгированная вакцина содержат 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или большее количество разных иммуногенов (например, из такого же количества разных серотипов S. pneumonia). В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество различных серотипов S. pneumonia включают, но не ограничиваясь этим, серотипы 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7А, 7В, 7С, 7D, 7Е, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18С, 19A-19F, 23A-23F и 25. В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество различных серотипов S. pneumonia выбраны из любого из более чем 90 идентифицированных серотипов S. pneumonia. В некоторых вариантах реализации изобретения один или большее количество разных серотипов S. pneumonia недавно идентифицированы.
Одному или большему количеству здоровых людей (например, люди без каких-либо известных заболеваний) можно вводить пневмококковый иммуноген, рекомбинантный пневмококковый белок или их комбинацию, присутствующую в коммерческой пневмококковой вакцине. Изобретение не ограничивается видом коммерческой пневмококковой вакцины. Фактически, можно применять любую пневмококковую вакцину, известную в данной области техники, в том числе, но не ограничиваясь этим, пневмококковая конъюгированная вакцина (PCV13 или PREVNAR13, Wyeth Pharmaceuticals, Колледжвилль, штат Пенсильвания), SYNFLORIX и/или пневмококковая полисахаридная вакцина (PPSV23 или PNEUMOVAX23, Merck Sharp & Dohme Corp., Северный Уэльс, штат Пенсильвания). В одном варианте реализации изобретения одному или большему количеству здоровых людей проводят первую или первичную вакцинацию первой антипневмококковой вакциной и последующую бустерную вакцинацию первой антипневмококковой вакциной или другой антипневмококковой вакциной. Например, в одном варианте реализации изобретения один или большее количество здоровых людей получают первую или первичную вакцинацию/иммунизацию при помощи первой антипневмококковой вакцины (например, PREVNAR), а затем получают бустерную вакцинацию/иммунизацию (например, через 2 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 или большее количество недель после первичной вакцинации/иммунизации) второй антипневмококковой вакциной (например, PNEUMOVAX23). В момент времени после последовательной вакцинации (например, через 2 недели, 4 недели, 6 недель, 8 недель, 10 недель, 12 или большее количество недель после последовательной вакцинации) осуществляют забор сыворотки/плазмы у вакцинированных здоровых доноров плазмы человека. Плазму вакцинированных доноров можно объединить (друг с другом и/или с плазмой невакцинированных доноров), после чего следует сбор иммунного глобулина. Способы забора плазмы, а также сбора иммунного глобулина хорошо известны специалистам в данной области техники.
В одном варианте реализации данного изобретения предлагается способ получения гипериммунного глобулина с высоким титром опсонофагоцитарного антитела к Streptococcus pneumonia (например, титр, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, 7 в 10 или большее количество раз для, по меньшей мере, около 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F) выше, чем титры присутствующих в контрольном образце специфических опсонических антипневмококковых антител против тех же серотипов; или титр специфических в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, в 2 или большее количество раз (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр присутствующих в контрольном образце опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia; или титр в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, для, по меньшей мере, 50% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19A, 19F и 23F), по данным описанного в данном описании анализа опсофагоцитарной элиминации), причем способ включает в себя стадии иммунизации здоровых взрослых доноров плазмы человека в возрасте 18-60 первичной поливалентной вакциной против S. pneumonia, с последующей иммунизацией бустерной поливалентной вакциной против S. pneumonia, которая отличается от первичной вакцины; забор плазмы у доноров плазмы после бустерной иммунизации; объединение плазмы вакцинированных доноров в пул с целью получения объединенной в пул плазмы, содержащей высокий титр опсонофагоцитарных антител против S. pneumonia; и получение иммунного глобулина из объединенной в пул плазмы. В следующем варианте реализации изобретения способ включает в себя перевод полученного иммунного глобулина в пригодную для внутривенных инъекций форму. Иммунный глобулин можно предоставлять в растворе, и/или рН и ионную силу раствора можно отрегулировать таким образом, чтобы сделать его пригодным для внутривенных инъекций. Изобретение не ограничивается количеством людей, вакцинированных в соответствии с описанными в данном описании способами. Например, можно вакцинировать 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или большее количество здоровых взрослых доноров плазмы человека и осуществлять забор плазмы у доноров. В одном варианте реализации изобретения объединенную в пул плазму получают из пула плазмы 1000 или большего количества разных здоровых вакцинированных взрослых доноров плазмы человека. В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарных антител, который, по меньшей мере, в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 5 раз, в 7 раз, в 10 или большее количество раз выше для, по меньшей мере, 55% или большего количества (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% и большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F, и 23F) по сравнению с титрами присутствующих в контрольном образце специфических опсонических антипневмококковых антител против тех же серотипов (например, плазма или полученный из плазмы иммунный глобулин, объединенные в пул для 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В другом варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарного антитела, специфический в отношении 70% или большего количества серотипов S. pneumonia, выбранных из серотипов 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23, который в 2 или большее количество раз (например, в 3-25 или большее количество раз) выше, чем титр присутствующих в контрольном образце опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении тех же серотипов S. pneumonia (например, плазма или полученный из плазмы иммунный глобулин, объединенные в пул для 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). В еще одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма содержит титр опсонофагоцитарных антител в диапазоне от 1:64 до 1:8192 (например, по меньшей мере, 50% или большее количество (например, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или большее количество) серотипов S. pneumonia 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19А, 19F и 23F), по данным описанного в данном описании анализа опсонофагоцитарной элиминации. Кроме того, в изобретении предлагается гипериммунный глобулин, полученный в соответствии с вышеописанным способом. Полученный таким образом гипериммунный глобулин можно применять различными способами. Например, гипериммунный глобулин можно применять в способе лечения инфекции S. pneumonia у субъекта (например, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества гипериммунного глобулина). Дополнительно, гипериммунный глобулин можно применять в способе проведения иммунотерапии субъекту (например, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества гипериммунного глобулина).
В одном варианте реализации изобретения дополнительно предлагается способ получения иммунного глобулина, обладающего усиленной опсонофагоцитарной бактерицидной активностью, по меньшей мере, в отношении семи серотипов Streptococcus pneumonia (например, серотипы 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F и 23F), для профилактики или лечения инфекции S. pneumonia, включающий в себя стадии иммунизации здоровых взрослых доноров плазмы человека с первичной иммунизацией поливалентной конъюгированной вакциной S. pneumonia, за которой следует иммунизация с применением поливалентной полисахаридной вакцины против S. pneumonia, отличной от первичной вакцины; забор и объединение в пул плазмы от доноров иммунизированной плазмы; и получение иммунного глобулина из объединенной в пул плазмы, причем иммунный глобулин содержит титр опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении каждого из, по меньшей мере, семи серотипов S. pneumonia, который в два или большее количество раз выше, чем титр присутствующих в контрольном образце опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении каждого из, по меньшей мере, семь серотипов S. pneumonia (например, иммунный глобулин, полученный из плазмы, объединенной в пул для 1000 или большего количества случайных невакцинированных доноров плазмы человека). Кроме того, в изобретении предлагается иммунный глобулин, полученный по описанному выше способу. Иммунный глобулин, полученный таким образом, можно применять различными способами. Например, иммунный глобулин можно применять в способе лечения инфекции S. pneumonia у субъекта, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества иммунного глобулина. Дополнительно, иммунный глобулин можно применять в способе проведения иммунотерапии субъекту, включающем введение субъекту терапевтически эффективного количества иммунного глобулина.
Эксперименты, проведенные во время разработки вариантов реализации изобретения, выявили, что у значительного количества пациентов, получавших ВВИГ (IVIG), остаточные концентрации антител против S. pneumonia снижались ниже уровня, что считается защитным. Например, как изображено на Фиг. 10, было установлено, что у значительного процента пациентов с первичным иммунодефицитным заболеванием, получающих лечение с применением обычного ВВИГ (IVIG), присутствуют остаточные уровни общих связывающихся серотип-специфических антител против S. pneumonia, сниженные ниже защитного уровня (ниже 1,2 мкг/мл).
Все иммунные глобулины, фракционированные и/или выделенные из сыворотки и применяемые для внутривенной инфузии, содержат мало, если вообще содержат измеримые уровни IgA, что может объяснять неспособность иммунного глобулина осуществлять защиту на поверхностях слизистой оболочки (например, тем самым приводя к увеличению частоты инфекции верхних отделов дыхательных путей у иммунодефицитных пациентов, получающих обычный ВВИГ (IVIG)). Таким образом, хотя понимание механизма не требуется для практического применения данного изобретения, и хотя данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом действия, в некоторых вариантах реализации изобретения предложена композиция гипериммунного глобулина по изобретению, содержащая высокую концентрацию опсонических антител против S. pneumonia широкого спектра действия (например, поставляемые в композиции гипериммунного глобулина по изобретению), допускает градиентную диффузию более высоких концентраций функционального, опсонического антипневмококкового IgG широкого спектра действия сквозь слизистые оболочки, тем самым обеспечивая защиту слизистой оболочки и уменьшая частоту инфекции верхних отделов дыхательных путей (например, по сравнению с обычным ВВИГ (IVIG), который не содержит высокой концентрации опсонических антител широкого спектра действия против S. pneumonia и, следовательно, градиентная диффузия значительно меньше или отсутствует, что приводит к высокой заболеваемости инфекциями верхних отделов дыхательных путей у иммуноскомпрометированных пациентов, получающих лечение обычным ВВИГ (IVIG))).
Таким образом, в изобретении предлагается гипериммунный глобулин, полученный по любому из описанных в данном описании способов, который содержит повышенный титр опсонических антител, специфических в отношении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или большего количества различных серотипов S. pneumonia, включая, но не ограничиваясь этим, серотипы 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7А, 7В, 1С, 7D, 7Е, 7F, 8, 9A-9V, 12, 14, 18С, 19A-19F, 23A-23F и 25. Хотя понимание механизма не требуется для практического применения данного изобретения, и хотя данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом действия, объединение в пул вакцинированных донорских сывороток обеспечивает желаемые уровни (например, защитных с терапевтической и/или профилактической точки зрения уровней) опсонических IgG широкого спектра действия против всех серотипов, присутствующих в одной или нескольких вакцинах, которые применяются для вакцинации здоровых взрослых доноров плазмы человека (например, несмотря на любые вариации от серотипа к серотипу и/или степень разведения при объединении в пул). Соответственно, в некоторых вариантах реализации изобретения любое индивидуальное отличие в концентрации опсонического серотип-специфического IgG может быть нормализовано без ущерба для защитных уровней таких антител путем объединения сывороток в пул. Очистка иммунного глобулина из сыворотки не приводила к дефициту ни какого-либо серотип-специфического опсонического антипневмококкового IgG, ни его функциональной активности.
Получение очищенного иммуноглобулина. В одном варианте реализации изобретения получают очищенный иммуноглобулин, который содержит высокий титр специфических опсонических антипневмококковых антител. Термин «высокий титр» в этом контексте означает присутствие антитела в количестве, которое в 2 или большее количество раз (например, до 10-20 или большего количества раз выше, чем показатель, найденный в нормальной популяции 1000 случайных образцов).
Продукт крови может быть получен путем (i) забора и очистки иммуноглобулина от донора, который был вакцинирован (например, согласно способу по изобретению), причем иммуноглобулин содержит высокие титры специфических опсонических антипневмококковых антител или (ii) объединением донорского иммуноглобулина от множества индивидуумов (например, 100, 200, 200-500, 500-1000 или 1000 или большее количество субъектов), которые были вакцинированы в соответствии со способом по изобретению.
Плазмаферез может использоваться для забора сыворотки/плазмы у вакцинированного донора. Термин плазмаферез описывает метод, в котором кровь извлекают из организма животного, разделяют на клеточные и плазменные компоненты, затем клетки возвращают в организм животного, а плазму сохраняют. Плазмаферез большого объема требует, чтобы извлеченная плазма была заменена подходящей жидкостью, и, если это делают, то данный метод часто называют обменом плазмы. Любые компоненты, обнаруженные в плазме, могут быть удалены обменом плазмы. Плазма, извлеченная таким образом для коммерческой продажи, доступна для применения в предпочтительном варианте реализации данного изобретения.
В некоторых вариантах реализации изобретения предпочтительно идентифицировать и поддерживать постоянную донорскую группу путем повторного забора небольших количеств крови, например, забора крови у людей один раз в месяц. Частота забора может влиять на количество, которое можно безопасно извлекать. В общем, желательно осуществлять забор максимального количества крови с течением времени, не причиняя вреда здоровью донора. Это может диктовать забор небольших количеств с большой частотой или максимально возможного количества с уменьшенной частотой. Объем крови донора можно оценить по стандартным формулам, доступным в Центре контроля заболеваний. Способы забора крови и плазмы обычно являются стандартными и хорошо известны специалистам в данной области техники. Любой способ можно применять для достижения желаемых результатов.
После выделения плазмы иммунный глобулин (антитела) может быть очищен от других клеточных продуктов. Это может быть достигнуто с помощью различных методик выделения белка, известных специалистам в области очистки иммуноглобулина, таких как фракционирование по Кону, ионный обмен, аффинная очистка и т.д. Средства для получения и характеристики антител хорошо известны в данной области техники. Например, образцы сыворотки могут быть пропущены сквозь колонки белка А или белка G сефарозы для связывания IgG (в зависимости от изотипа). Далее связанные антитела можно элюировать, например, цитратным буфером с рН 5,0. Элюирующиеся фракции, которые содержат Ab, диализируют против изотонического буфера. В качестве альтернативы, элюат дополнительно пропускают сквозь колонку против иммуноглобулина-сефарозы. Затем Ab можно элюировать 3,5 М раствором хлорида магния. Ab, очищенные таким образом, затем можно протестировать на предмет активности связывания, например, с помощью изотип-специфического анализа ИФА (ELISA) и иммунофлуоресцентного окрашивания клеток-мишеней, или на предмет опсонической (опсофагоцитарной) активности (например, с применением одного или большего количества описанных анализов опсонической элиминации, описанных в данном описании).
В одном варианте реализации изобретения, если образцы плазмы собирают и смешивают (например, от множества субъектов (например, 100, 200, 200-500, 500-1000, 1000 или большее количество субъектов), иммунизированных в соответствии с описанными в данном описании способами), то смешанная плазма или полученный из нее иммунный глобулин (например, выделенный и/или фракционированный) содержит серопротективные титры антител против кори, дифтерии и/или полиомиелита (например, содержит титры антител против кори, дифтерии и/или полиомиелита, обеспечивающие субъект, которому осуществляют введение, смешанной композицией плазмы или полученного из нее иммуноглобулина сывороточных уровней антител, специфических в отношении кори, дифтерии и полиомиелита, чтобы предотвратить или защитить от инфекции этими возбудителями). В другом варианте реализации изобретения, если смешивают образцы плазмы от множества вакцинированных субъектов, то смешанная плазма или полученный из нее иммунный глобулин (например, фракционированный) содержит серопротективные титры антител против кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка (например, содержат титры антител против кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка, обеспечивающие субъект, которому осуществляют введение, смешанной композицией плазмы или полученного из нее иммунного глобулина сывороточными уровнями антител, специфических в отношении кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка, для предотвращения или защиты от инфекции этими возбудителями (например, соответствует уровням титра антител, рекомендованным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (например, для лечения иммунодефицитного заболевания и/или лечения или профилактики инфекции у иммунодефицитного субъекта)). В одном варианте реализации изобретения смешанная/объединенная в пул плазма содержит образцы плазмы, полученные от 1000-3000 или большего количества (например, чем более 1000, 1250, 1500, 1750, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000 или большее количество субъектов-людей). В одном варианте реализации изобретения объединенную в пул плазму применяют для получения иммуноглобулина (например, для внутривенного введения субъекту). В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или иммуноглобулин обеспечивает терапевтическое преимущество для субъекта, которому вводят объединенную в пул плазму и/или иммуноглобулин, недостижимое путем введения смеси образцов плазмы (или полученного из нее иммунного глобулина), полученных от 1000 или большего количества случайных людей. Изобретение не ограничивается видом терапевтического преимущества. Действительно, могут быть достигнуты различные терапевтические преимущества, в том числе описанные в данном описании (например, лечение пневмококковой инфекции (например, инфекции верхних отделов дыхательных путей)). В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или иммунный глобулин обладает улучшенными опсонофагоцитарными антипневмококковыми свойствами по сравнению со смесью образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных людей или полученного из нее иммунного глобулина. Например, в одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма обладает усиленными опсонофагоцитарными антипневмококковыми свойствами против десяти или большего количества разных пневмококковых серотипов (например, 10, 10-20, 20-30 или большее количество серотипов). В еще одном варианте реализации изобретения усиленные антипневмококковые опсонофагоцитарные свойства уменьшают и/или предотвращают инфекцию у субъекта, которому вводили композицию, на период времени, который дольше и не достигается у субъекта, которому вводили смесь образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных (например, невакцинированных) субъектов-людей. В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или полученный из нее иммунный глобулин уменьшают частоту инфицирования у субъекта, которому вводили композицию. В другом варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или полученный из нее иммунный глобулин уменьшают необходимое количество дней введения антибиотиков субъекту, которому вводили объединенную в пул плазму и/или иммуноглобулин (например, для лечения инфекции). В еще одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или полученный из нее иммунный глобулин повышают остаточный уровень циркулирующих антипневмококковых опсонофагоцитарных антител у субъекта (например, повышает уровень титра опсонофагоцитарных антител, специфических в отношении десяти или большего количества пневмококковых серотипов (например, тем самым обеспечивая защитные уровни антипневмококковых опсонофагоцитарных антител между запланированными датами введения объединенной в пул плазмы и/или полученного из нее иммунного глобулина, не поддерживающиеся у субъекта, которому вводили смесь образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных людей, или полученного из нее иммунного глобулина)). В одном варианте реализации изобретения композиция, содержащая объединенные в пул образцы плазмы, дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель (например, любой(ые) природный(ые) или неприродный(ые) носитель(и), известный(ые) в данной области техники). В одном варианте реализации изобретения средняя кратность увеличения титра антипневмококкового опсонофагоцитарного антитела составляет у субъекта, которому вводили иммуноглобулин, полученный из объединенной в пул плазмы в соответствии с изобретением, составляет, по меньшей мере, 2 раза, 3 раза, 4 раза, по меньшей мере, 5 раз, по меньшей мере, 6 раз, по меньшей мере, 7 раз, по меньшей мере, 8 раз, по меньшей мере, 9 или большее количество раз в момент времени, по меньшей мере, от 1 до 14 дней после введения (например, 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19 или большее количество дней) иммунного глобулина. Изобретение не ограничивается количеством иммунного глобулина, вводимого субъекту. В одном варианте реализации изобретения субъекту вводят 100-5000 мг/кг иммуноглобулина однократно или ежедневно в течение двух или большего количества дней (например, 2, 3, 4 или большее количество дней подряд). В другом варианте реализации изобретения такие дозы вводят с перерывами, например, каждую неделю, каждые две недели, каждые три недели, каждые четыре недели и т.д. В одном варианте реализации изобретения субъекту вводят 750-1500 мг/кг иммунного глобулина в первый день и 750-1500 мг/кг иммунного глобулина во 2 день. В одном варианте реализации изобретения субъекту вводят 1500 мг/кг иммунного глобулина в первый день и 750 мг/кг иммунного глобулина во 2 день. В другом варианте реализации изобретения субъекту вводят 750 мг/кг иммунного глобулина в первый день и 750 мг/кг иммунного глобулина во 2 день. В одном из вариантов реализации изобретения субъекту вводят иммунный глобулин в первый день, при необходимости вводили иммунный глобулин во 2 день, а затем повторно вводят иммунный глобулин каждые 21 день. В одном из вариантов реализации изобретения субъекту вводят иммунный глобулин в первый день, необязательно вводят иммунный глобулин во 2 день, а затем повторно вводят иммунный глобулин каждые 28 дней. В одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или полученный из нее иммунный глобулин, уменьшают частоту пневмококковой инфекции у субъекта, которому вводили композицию. В еще одном варианте реализации изобретения объединенная в пул плазма и/или полученный из нее иммунный глобулин повышает остаточный уровень циркулирующих антипневмококковых опсонофагоцитарных антител и повышает остаточный уровень циркулирующих специфических антител против кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка (например, таким образом повышая уровень титров опсонофагоцитарных антипневмококковых антител, специфических в отношении пневмококковых серотипов и кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка (например, таким образом обеспечивая защитные уровни антипневмококковых опсонофагоцитарных антител и специфических антител против кори, дифтерии, полиомиелита и/или столбняка между запланированными датами введения объединенной в пул плазмы и/или полученного из нее иммунного глобулина, не поддерживаемые у субъекта, которому вводили смесь образцов плазмы, полученных от 1000 или большего количества случайных людей (например, невакцинированных субъектов) или полученный из нее иммунный глобулин)).
В некоторых вариантах реализации изобретения образцы плазмы и/или антитела содержат донорские и/или приобретенные образцы жидкостей организма, например отдельные образцы крови или компонентов крови (например, плазма). Такие образцы могут быть очищены и/или подвергнуты скринингу на предмет присутствия патогенов или других примесей (например, до или после объединения в пул). Множественные образцы донорских антител (например, образцы донорской плазмы или другие образцы, содержащие антитела) можно объединять в пул для получения объединенных в пул образцов плазмы. В некоторых вариантах реализации изобретения объединенные в пул образцы антител очищают, подвергают скринингу и/или концентрируют. В одном варианте реализации изобретения объединение образцов в пул (например, 1000 или большее количество образцов) осуществляют способом, в котором используется наименьшее возможное количество образцов (например, генерируемых композициями и способами, описанными в данном описании), но который все еще сохраняет желаемый стандартизованный и повышенный уровень антипневмококковых опсонофагоцитарных антител.
Как описано в данном описании, в некоторых вариантах реализации изобретения используют плазму субъектов, которым были введены иммуногенные вещества (например, вакцины), с целью получения повышенных уровней антипневмококковых опсонофагоцитарных антител у субъекта. Изобретение не ограничивается видом вакцины и/или антигена (например, антигена S. pneumonia), применяемым для введения субъекту (например, донору), чтобы индуцировать экспрессию специфических антител. В некоторых вариантах реализации изобретения антиген представляет собой антиген S. pneumonia или его фрагмент или его компонент. В некоторых вариантах реализации изобретения антиген представляет собой один или большее количество полисахаридов (например, неконъюгированный или конъюгированный с носителем или белком). В некоторых вариантах реализации изобретения антиген (например, антиген S. pneumonia) представляет собой вакцину, содержащую компоненты, способные индуцировать специфические антитела (например, антитела, специфические в отношении нескольких разных серотипов S. pneumonia). В некоторых вариантах реализации изобретения вакцина представляет собой коммерчески доступную вакцину. Изобретение не ограничивается вакциной. Фактически, можно применять различные вакцины (например, вакцины против S. pneumonia), включая, но не ограничиваясь этим, PREVNAR, SYNFLORIX, PNEUMOVAX, а также другие, известные в данной области техники. Аналогично, изобретение не ограничивается видом или способом введения/иммунизации. Действительно, можно применять любой способ/вид иммунизации, включая, но не ограничиваясь этим, способы, описанные в публикациях США № US 2008026002, US 2007009542; US 2002094338; US 2005070876; US 2002010428; US 2009047353; US 2008066739; и US 2002038111), каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме. Подобным же образом изобретение не ограничивается композицией вакцины (например, вакцина S. pneumonia). Фактически, можно применять любой препарат, включая, но не ограничиваясь этим, те, описанные в US 2002107265, которая настоящим включена посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах реализации изобретения вакцина представляет собой поливалентную вакцину, в которую добавляют дополнительные антигены (см., например, US 2007161088, US 2006121059, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме). В некоторых вариантах реализации изобретения антигены очищают перед применением в вакцине (например, конъюгированной вакцине) (см., например, US 2008286838, которая включена в данное описание посредством ссылки). Способы культивирования микроорганизмов, пригодные в процессе изготовления пневмококковых конъюгированных вакцин, описаны в US 2010290996, которая включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме. В качестве альтернативы, в некоторых вариантах реализации изобретения применяют антигены (например, антигены S. pneumonia), которые не конъюгированы с белком-носителем (см., например, US 2009136547, которая настоящим включена посредством ссылки в полном объеме). В некоторых вариантах реализации изобретения применяют иммуномодуляторы (см., например, US 2004156857, US 5985264 и WO 11041691, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме). В некоторых вариантах реализации изобретения терапевтические антитела вырабатываются в организме донора, которому вводят антиген (например, антиген S. pneumonia) и/или вакцину в соответствии со способами, описанными в WO 05070458; US 2009191217; и WO 10094720, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах реализации изобретения антигены (например, вакцины (например, конъюгированные или неконъюгированные вакцины)) применяют для генерации антител (например, присутствующих в сыворотке и/или плазме), которые полезны против инфекционных болезнетворных организмов (например, как описано, например, в US 2003099672, WO 0062802, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме).
В некоторых вариантах реализации изобретения применяют полисахаридную вакцину (например, содержащая множественные серотипы S. pneumonia (например, содержащая очищенные полисахариды из 1, 2, 3, 4 или большего количества или всех 23 из следующих серотипов S. pneumonia: 1, 2, 3, 4, 5, 6b, 7F, 8,9N, 9V, 10A, ПА, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F и 33F). Хотя нет необходимости в понимании механизма для практики данного изобретения, и данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом действия, в некоторых вариантах реализации изобретения антиген (например, антиген S. pneumonia) или вакцина, которая стимулирует В-клетки (например, плазматические клетки) для генерации и секреции специфического (например, специфического в отношении S. pneumonia) иммуноглобулина без помощи Т-клеток, находит применение в изобретении.
В некоторых вариантах реализации изобретения применяется конъюгированная вакцина, которая содержит капсульные полисахариды (например, из множества серотипов S. pneumonia), ковалентно связанные с носителем и/или адъювантом (например, дифтерийным анатоксином CRM 197). Хотя нет необходимости в понимании механизма для практики данного изобретения, и данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом действия, в некоторых вариантах реализации изобретения любой антиген (например, антиген S. pneumonia) или вакцина, которая стимулирует В-клетки (например, плазматические клетки) для генерации и секреции специфического (например, специфического в отношении S. pneumonia IgM и/или IgG) иммуноглобулина путем взаимодействия со специфическими хелперными Т-клетками типа 2) и/или выработка В-клеток памяти (например, В-клеток памяти, специфических в отношении S. pneumonia) находит применение в изобретении.
Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагаются способы стимуляции высоких уровней опсонофагоцитарных антипневмококковых антител у донора, которые включают введение животному, например, человеку, фармацевтически приемлемой композиции, содержащей иммунологически эффективное количество антигенной композиции (например, композиция антигена S. pneumonia). Композиция может содержать частично или в значительной мере очищенные антигены (например, антигены S. pneumonia (например, полисахаридные, белковые и/или пептидные эпитопы, полученные из природных или рекомбинантных источников, которые могут быть получены естественным путем или химически синтезированы или, в качестве альтернативы, получены in vitro из рекомбинантных клеток-хозяев, экспрессирующих сегменты ДНК, которые кодируют такие эпитопы)).
Способы определения эффективности иммунизации (например, определение уровня титров антител, специфических в отношении S. pneumonia) известны в данной области техники, причем любой известный способ можно применять для оценки эффективности иммунизации (например, эффективность индуцирования опсонофагоцитарных антипневмококковых антител (например, описанный в данном описании или известный в данной области техники анализ опсонофагоцитарной элиминации)). В некоторых вариантах реализации изобретения способы обнаружения применяют для оценки эффективности вакцины (например, пневмококковой конъюгированной вакцины), как описано, например, в US 2005260694; US 4308026; US 4185084; или US 2005208608, каждая из которых включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются наборы и способы, которые идентифицируют образцы и/или пулы с титрами конкретных антител (например, повышенные титры антител опсонофагоцитарных антипневмококковых антител). В одном варианте реализации изобретения подходящее количество реагента обнаружения (например, антитело, специфическое в отношении антител, антигена или другого реагента, известного в данной области техники) иммобилизируют на твердой подложке и метят обнаружимым агентом. Антитела могут быть иммобилизированы на различных твердых субстратах известными способами. Подходящие материалы твердой подложки включают материалы, содержащие мембрану или покрытие, нанесенные или прикрепленные к палочкам, шарикам, чашкам, плоским пакетам или другой твердой подложке. Другие твердые материалы включают планшеты для культивирования клеток, планшеты ИФА (ELISA), пробирки и полимерные мембраны. В антитела можно ввести метку в виде обнаружимого агента, такого как флуорохром, радиоактивная метка, биотин или другой фермент, такой как пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза и 2-галактозидаза. Если обнаружимый реагент является ферментом, в набор можно включить средства для обнаружения обнаружимого реагента. В подходящем средстве для обнаружения обнаружимого агента в качестве обнаружимого агента применяется фермент и субстрат фермента, который меняет цвет при контакте с ферментом. Кроме того, набор может включать средство для оценки продукта анализа, например, диаграмму цвета или числовую справочную диаграмму. Некоторые подходящие методы для характеристики образцов и пулов приведены в ссылках, включенных в данное описание посредством ссылки. Данное изобретение не ограничивается способом, применяемым для характеристики образцов и пулов, как содержащих повышенный титр. Дополнительно можно применять анализы для определения уровня антипневмококковых опсонофагоцитарных антител в плазме, иммунном глобулине и/или их пулах (например, как описано в Примерах).
В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются композиции (например, образцы антител, образцы объединенной в пул плазмы, иммунные глобулины и т.д.), в которых антитела были очищены и/или выделены из одного или нескольких загрязнителей. Человеческие иммуноглобулины были впервые выделены в больших масштабах в 1940-х годах F.J. Cohn. В некоторых вариантах реализации изобретения методы, предложенные Cohn (Cohn et al., J. Am. Chem., 1946; 68: 459-475, включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме), или модифицированные методы по Кону, применяются для получения иммунных глобулинов. В некоторых вариантах реализации изобретения различные способы очистки и выделения применяются для получения по существу немодифицированных, не измененных, неденатурированных и/или нативных молекул иммунного глобулина с высокой степенью чистоты. Типовые методики приведены, например, в патенте США №4482483, включенном в данное описании посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах реализации изобретения композиции (например, пулы антител) содержат >50% иммуноглобулина (например, >60%, >70%, >80%, >90%, >95%, >99%). Для получения таких композиций можно применять различные способы, включая, например, стандартные способы очистки и выделения белка, а также фракционирование биологических жидкостей (например, плазмы). Описание фракционирования антител для применения в иммунотерапии, содержится, например, в патенте США №4346073 и других ссылках, представленных в данном описании, каждая из которых включена посредством ссылки в полном объеме. В некоторых вариантах реализации изобретения иммуноглобулины очищают методом фракционного осаждения, ионообменной хроматографией, эксклюзионной хроматографией, ультрафильтрацией, аффинной хроматографией или любыми подходящими их сочетаниями (см., например, патент США №7597891, патент США №4256631, патент США №4305870, Lullau et al., J. Biol., 1996, 271: 16300-16309, Corthesy, Biochem, Soc, 1997, 25: 471-475 и Crottet et al., Biochem. J 1999, 341: 299-306, которые включены в данное описание посредством ссылки в полном объеме).
Композицию по изобретению (например, объединенную в пул плазму и/или полученный из нее иммунный глобулин) можно вводить любыми подходящими способами, включая парентеральное, подкожное, внутрибрюшинное, внутрилегочное и, при желании применить для местного лечения, внутриочаговое введение. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Кроме того, композиции по изобретению можно вводить путем пульсовой инфузии, особенно с понижением доз. Введение доз можно осуществлять любым подходящим способом, например, путем инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, в зависимости от того, является ли введение острым или хроническим.
Композиция по изобретению может быть составлена, отмерена и/или введена в соответствии с надлежащей медицинской практикой. Факторы для рассмотрения в этом контексте включают конкретное расстройство, подлежащее лечению, клиническое состояние отдельного пациента, причину расстройства, место доставки агента, способ введения, расписание введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Композиции по изобретению не обязательно должны быть, но необязательно могут быть составлены с одним или несколькими агентами, которые в данное время применяются для предотвращения или лечения рассматриваемого расстройства. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества антитела, присутствующего в препарате, вида расстройства или лечения и других факторов, рассмотренных выше. Они обычно применяются в тех же дозах и теми же способами введения, как описано в данном описании, или примерно от 1 до 99% доз, описанных в данном описании, или в любой дозе и любым способом, который эмпирически/клинически определен как подходящий.
Для профилактики или лечения заболевания соответствующие дозы композиции по изобретению (при применении в качестве монотерапии или в сочетании с одним или большим количеством других дополнительных терапевтических агентов) может зависеть от ряда факторов, включая вид заболевания, подлежащего лечению, вид антитела, размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, конкретное вводимое соединение, пол, время и способ введения, общее состояние здоровья, взаимодействие с одновременно назначаемыми другими лекарственными средствами, тяжесть и течение заболевания, независимо от того, антитело вводят для профилактических или терапевтических целей, предшествующей терапии и клинической истории пациента.
Точные дозы могут определяться отдельным врачом с учетом пациента, подлежащего лечению. Дозы и введение регулируют таким образом, чтобы обеспечить достаточный уровень активного фрагмента (например, пул плазмы) или поддерживать желаемый эффект. Дополнительные факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают тяжесть патологического состояния; возраст, массу тела и пол пациента; рацион, время и частоту введения, комбинацию(и) лекарственного средства, чувствительность реакции и переносимость/ответ на терапию. Фармацевтические композиции длительного действия можно вводить каждые 3-4 дня, каждую неделю или один раз в две недели, четыре недели, шесть недель, восемь или большее количество недель, в зависимости от периода полувыведения и скорости клиренса конкретного препарата.
Композицию по изобретению можно вводить пациенту однократно или в несколько приемов. В зависимости от вида и тяжести заболевания от около 1 мкг/кг до 5000 мг/кг (например, от 0,5 мг/кг до 1500 мг/кг) композиции по изобретению может быть потенциальной исходной дозой для введения пациенту, будь то, например, однократно или в несколько приемов или в виде непрерывной инфузии. Как описано в данном описании, дополнительные лекарственные средства или агенты (например, противомикробные средства (например, антибиотики, противовирусные средства, противогрибковые средства и т.д.), другие композиции иммуноглобулина (например, обычный ВВИГ (IVIG)), противовоспалительные и/или способствующие заживлению соединения и т.д.) можно вводить одновременно с композицией объединенной в пул плазмы по изобретению. Типовая суточная доза такого агента может составлять от примерно 1 до 100 мг/кг или большее количество. При повторном введении в течение нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение обычно можно поддерживать до тех пор, пока не произойдет желаемое подавление симптомов заболевания. Одна типовая доза композиции по изобретению будет находиться в диапазоне от около 0,05 мг/кг до около 10 мг/кг. Таким образом, пациенту можно вводить одну или большее количество доз, составляющих около 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг или 10 мг/кг (или любую их комбинацию). Такие дозы можно вводить с перерывами, например, каждую неделю или каждые две-три недели. Врач-терапевт с легкостью может контролировать терапевтическое введение композиции по изобретению и может, в свою очередь, определять, следует ли вводить более высокие или более низкие дозы композиции.
Композиции по изобретению можно вводить пациенту (например, внутривенно, перорально, внутримышечно, подкожно и т.д.) в фармацевтически приемлемом носителе, таком как физиологический раствор. Такие способы хорошо известны специалистам в данной области техники.
Соответственно, в некоторых вариантах реализации данного изобретения композицию по изобретению пациенту можно вводить отдельно или в комбинации с другими лекарственными средствами или в фармацевтических композициях, где она смешана со вспомогательным(и) веществом(ами) или другими фармацевтически приемлемыми носителями. В одном варианте реализации данного изобретения фармацевтически приемлемый носитель является фармацевтически инертным. В зависимости от состояния, подлежащего лечению, фармацевтические композиции могут быть составлены и введены системно или местно. Методы составления и введения можно найти в последнем издании «Remington's Pharmaceutical Sciences» (Mack Publishing Co, Easton Pa.). Подходящие способы могут, например, включать пероральное или трансмукозальное введение; а также парентеральное введение, включая внутримышечное, подкожное, интрамедуллярное, интратекальное, внутрижелудочковое, внутривенное, внутрибрюшинное или интраназальное введение.
Для инъекций композиция по изобретению может быть приготовлена в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферах, таких как раствор Хэнкса, раствор Рингера или фосфатно-солевой буфер. Для введения в ткани или клетки в препарате применяют пенетранты, соответствующие конкретному барьеру, сквозь который надо обеспечить проникновение. Такие пенетранты обычно известны в данной области техники.
В других вариантах реализации изобретения композиции по данному изобретению (например, фармацевтические композиции) могут быть составлены с применением фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в данной области техники, в дозах, подходящих для перорального введения. Такие носители позволяют составлять фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюль, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, суспензий, суспензий и т.п. для перорального или назального приема пациентом, подлежащим лечению.
Фармацевтические композиции, подходящие для применения в данном изобретении, включают композиции, в которых активные ингредиенты содержатся в количестве, эффективном для достижения намеченной цели. Например, эффективным количеством композиции по изобретению может быть такое количество, которое приводит к подавлению роста и/или уничтожению бактерий в организме субъекта. Определение эффективных количеств находится в пределах компетенции специалистов в данной области техники, особенно в свете приведенного в данном описании раскрытия.
В дополнение к активным ингредиентам фармацевтические композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые носители, содержащие вспомогательные вещества и дополнительные вещества, которые облегчают составлением композиций по изобретению в препараты, которые могут применяться в фармацевтической области.
Фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть произведены способом, который сам по себе известен (например, посредством обычных способов смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, левигации, эмульгирования, инкапсуляции, захвата или лиофилизации).
Фармацевтические препараты для парентерального введения включают водные растворы композиций в водорастворимой форме. Кроме того, суспензии композиций могут быть приготовлены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натрий карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Необязательно, суспензия может дополнительно содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость композиций, чтобы обеспечить получение высококонцентрированных растворов.
Композиции по изобретению, составленные в фармацевтически приемлемом носителе, могут быть приготовлены, помещены в соответствующую емкость и маркированы для лечения указанного состояния. Состояния, указанные на этикетке, могут включать лечение или профилактику вирусной или бактериальной инфекции.
Фармацевтическая композиция может быть представлена в виде соли и может быть образована со многими кислотами, включая, но не ограничиваясь этим, соляную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли имеют тенденцию к большей растворимости в водных или других протонных растворителях по сравнению с соответствующими формами свободного основания. В других случаях предпочтительным препаратом может быть лиофилизированный порошок в 1-50 мМ гистидина, 0,1-2% сахарозы, 2% маннита, с рН в диапазоне от 4,5 до 5,5, который перед использованием объединяют с буферным раствором.
Композиции по данному изобретению (например, антипневмококковый гипериммунный глобулин) могут быть объединены с дополнительными агентами (например, антителами, фрагментами антител, антителоподобными молекулами, моноклональными антителами, противомикробными препаратами, другими композициями иммунного глобулина (например, обычный ВВИГ (IVIG) или другие белки или молекулы небольшого размера) для усиления иммунотерапевтического и/или противовоспалительного действия. Такие дополнительные агенты могут быть получены рекомбинантным, синтетическим путем, in vitro и т.д. Данное изобретение не ограничивается видами дополнительных агентов, с которыми антипневмококковый гипериммунному глобулину вводят совместно и/или сочетают. В некоторых вариантах реализации изобретения совместно вводят и/или добавляют рекомбинантные или синтетические антитела (например, гуманизированные моноклональные антитела) или фрагменты антител (например, направленные на специфический патоген или антиген). Кроме того, антитела (например, моноклональные, поликлональные и т.д.) против определенных бактерий и вирусов можно вводить совместно и/или добавлять в композиции. В некоторых вариантах реализации изобретения различные терапевтические средства (например, противовоспалительные агенты, химиотерапевтические средства), стабилизаторы, буферные растворы и т.д. вводят совместно и/или добавляют в антипневмококковый гипериммунный глобулин, например, для дальнейшего повышения эффективности, стабильности, пригодности для введения, продолжительности действия, диапазона областей применения и т.д. В одном варианте реализации изобретения антипневмококковый гипериммунный глобулин вводят совместно с обычным ВВИГ (IVIG) (например, пациенту с первичным иммунодефицитным заболеванием (например, для лечения (например, профилактического и/или терапевтического) инфекции (например, вызванной S. pneumonia, Corynebacterium diphtheria, вирусом кори и/или вирусом полиомиелита)).
Композиции могут необязательно содержать носители, такие как консерванты, смачивающие, эмульгирующие и диспергирующие агенты. Предупреждение воздействия микроорганизмов может обеспечиваться с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота и т.п. Кроме того, может быть желательным введение изотонических агентов, например, Сахаров, хлорида натрия и т.п. Пролонгированная абсорбция иммуноглобулинов может быть обеспечена применением агентов, замедляющих абсорбцию, например моностеарата алюминия и желатина.
В некоторых вариантах реализации изобретения антипневмококковый гипериммунный глобулин по изобретению вводят субъекту для обеспечения терапевтических, профилактических, профилактических и/или других преимуществ.
Заболевания и состояния, при которых антипневмококковый гипериммунный глобулин по изобретению следует вводить с терапевтической или профилактической целью, включают, но не ограничиваясь этим: общий вариабельный иммунодефицит, дефицит IgA, инфекция вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), бактериальные и вирусные инфекции таких как инфекция дыхательных путей гриппом, инфекция дыхательных путей респираторно-синцитиальным вирусом, инфекция дыхательных путей риновирусом, инфекция дыхательных путей аденовирусом: простейшие инфекции, такие как гиардиоз, дрожжевые инфекции; хронический лимфоцитарный лейкоз; множественная миелома; макроглобулинемии; хронический бронхит; бронхиэктаз; астма; угнетение иммунитета, связанное с трансплантацией костного мозга; угнетение иммунитета, связанное с введением циклофосфамида; угнетение иммунитета, связанное с введением азатиоприна; угнетение иммунитета, связанное с введением метотрексата; угнетение иммунитета, связанное с введением хлорамбуцила; угнетение иммунитета, связанное с введением средств на основе ипритного азота; угнетение иммунитета, связанное с введением 6-меркаптопурина; угнетение иммунитета, связанное с введением тиогуанина; тяжелый комбинированный иммунодефицит; дефицит аденозиндезаминазы; дефицит основного комплекса гистосовместимости класса I (синдром пустого лейкоцита) и класса II; дефицит пуриннуклеозидфосфорилазы; синдром ДиДжорджи; транзиторная гипогаммаглобулинемия младенчества; Х-связанная агаммаглобулинемия; Х-связанная агаммаглобулинемия с дефицитом гормона роста; дефицит транскобаламина II; иммунодефицит с тимомой; иммунодефицит с наследственным дефектным ответом на вирус Эпштейна-Барр; дефицит иммуноглобулина с повышенным IgM; дефицит цепи Р; атаксия телеангиэктазия; иммунодефицит с частичным альбинизмом; последствия избирательного дефицита IgA, такие как ревматоидный артрит; ювенильный ревматоидный артрит; системная красная волчанка; тиреоидит; пернициозная анемия; дерматомиозит; Кумбс-положительная гемолитическая анемия; идиопатическая болезнь Аддисона; церебральный васкулит и идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура.
В некоторых вариантах реализации изобретения композиции и способы по данному изобретению обеспечивают противовоспалительные преимущества при введении субъекту. Было показано, что объединенные в пул иммуноглобулины оказывают противовоспалительное действие при пассивном введении (см., например, Nimmerjahn and Ravetch, Annu Rev. Immunol. 2008. 26: 513-33, Ramakrishna et al. Plos Pathogens. 2011. 7: 6: e 1002071, включенные в данное описание посредством ссылки в полном объеме). В некоторых вариантах реализации изобретения антипневмококковый гипериммунный глобулин по изобретению оказывает усиленное противовоспалительное действие (например, улучшение на 10%, усиление на 20%, усиление на 50%, усиление в 2 раза, усиление в 3 раза, усиление в 5 раз, усиление в 10 или большее количество раз) по сравнению с противовоспалительным эффектом смеси образцов плазмы, полученных от случайных людей (например, 1000 или большее количество случайных людей). Хотя понимание механизма не является необходимым для практики данного изобретения, и хотя данное изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом, в одном варианте реализации изобретения антипневмококковый гипериммунный глобулин по изобретению демонстрирует значительно улучшенный противовоспалительный эффект по сравнению с обычным ВВИГ (IVIG), поскольку композиция объединенной в пул плазмы по изобретению содержит плазму, по меньшей мере, 1000 доноров (например, по сравнению с обычным гипериммунным глобулином, полученным от ограниченного количества доноров (например, в одном варианте реализации изобретения, чем больше количество различных образцов плазмы, тем более выражен наблюдаемый противовоспалительный эффект (например, тем более выражен гистопатологический эффект (например, снижение гибели эпителиальных клеток)))).
В некоторых вариантах реализации данного изобретения композиции по изобретению вводят отдельно, в то время как в других вариантах реализации изобретения композиции предпочтительно присутствуют в фармацевтической композиции, содержащей, по меньшей мере, один активный ингредиент/агент, как определено выше, вместе с твердой подложкой или, в качестве альтернативы, вместе с одним или большим количеством фармацевтически приемлемых носителей и необязательно другими терапевтическими агентами. Каждый носитель должен быть «приемлемым» в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами препарата и безвреден для субъекта.
В одном варианте реализации изобретения антипневмококковый гипериммунный глобулин, представленный в данном описании, дополнительно содержит один или большее количество биологически активных агентов. Изобретение не ограничивается видом биологически активного агента/материала. Фактически, можно применять различные биологически активные агенты/материалы, включая, но не ограничиваясь этим, антитела, антитоксиновый материал, противовоспалительный агент, противораковый агент, противомикробный агент, терапевтический агент, антигистамин, цитокин, хемокин, витамин, минерал и т.п. В одном варианте реализации изобретения биологически активный агент представляет собой антитоксиновый агент. В одном варианте реализации изобретения антитоксиновый агент представляет собой моноспецифическое, биспецифическое или полиспецифическое антитело со специфичностью в отношении вирусного, бактериального или грибкового токсина. В следующем варианте реализации изобретения бактериальный или грибковый токсин выбирают из ботулинического нейротоксина, токсина столбняка, токсина Е. coli, токсина Clostridium difficile, токсина Vibrio RTX, стафилококковых токсинов, токсина цианобактерий и микотоксинов. В другом варианте реализации изобретения иммунотерапевтическая композиция дополнительно содержит аликвоту одного или большего количества моноклональных антител с одним или большим количеством видов специфичности (например, иммуногенная композиция может быть покрыта одним или несколькими антителами или биологически активным веществом (например, моноклональное антитело любой специфичности, антитоксиновый агент и т.д.)). Изобретение не ограничивается видом одного или большего количества добавляемых антител (например, нагрузкой) к иммуногенной композиции. Фактически, можно применять любые одно или большее количество антител (например, специфические в отношении патогена или продукта патогена), в том числе, но не ограничиваясь этим, стандартные антитела, биспецифические антитела, полиспецифические антитела и т.п., известные в данной области техники (например, специфические в отношении одного или большего количества антигенов).
Изобретение не ограничивается видом субъекта, которого лечат композициями и способами по изобретению. Фактически, таким образом можно лечить различных субъектов, в том числе, но не ограничиваясь этим, субъекта, подверженного риску развития инфекции (например, верхних отделов дыхательных путей или другой вид инфекции (например, тем самым снижая риск развития инфекции у субъекта с повышенным риском инфекции)). В одном варианте реализации изобретения у субъекта, которого лечат композицией по изобретению, присутствует или диагностировано первичное иммунодефицитное заболевание (ПИД (PIDD)). В другом варианте реализации изобретения субъектом является пациент с терминальной стадией почечной недостаточности (ТСПД (ESRD)); пациент с раком, получающий иммуносупрессивную терапию, пациент со СПИДом, диабетический пациент, новорожденный, перенесший трансплантацию пациент, получающий иммунодепрессивную терапию пациент, пациент с ПИД (PIDD) и другими иммунодефицитами, пациент с нарушением функции иммунной системы, пациент с аутоиммунным заболеванием, человек пожилого возраста в лечебном учреждении санаторного типа для больных, нуждающихся в постоянном уходе, получающий иммуносупрессивную терапию пациент с аутоиммунным заболеванием, пациент отделения трансплантологии, пациент с инвазивным хирургическим вмешательством, ожоговый пациент или другой пациент в отделении неотложной помощи.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Следующие примеры приведены с целью демонстрации и дополнительной иллюстрации некоторых предпочтительных вариантов реализации изобретения и аспектов данного изобретения и не должны истолковываться как ограничивающие его объем.
Пример 1
Генерация доноров гипериммунной плазмы, гипериммунной сыворотки и полученного из них иммунного глобулина
Эксперименты были проведены во время разработки вариантов реализации изобретения с целью генерации доноров гипериммунной плазмы, у которых присутствует гипериммунная плазма/сыворотка с широким спектром действия в отношении пневмококковых серотипов. Ниже приведен неограничивающий пример таких экспериментов.
Для иммунизации были выбраны здоровые люди (мужчины и женщины) в возрасте от 18 до 45 лет. В частности, для участия в исследовании и функционирования в качестве вакцинированного донора плазмы крови человека от каждого субъекта требовалось отсутствие каких-либо известных патологических состояний.
Каждому участнику исследования была назначена следующая схема вакцинации: первичная вакцинация/доза PREVNAR (PCV13) (внутримышечная инъекция 0,5 мл в соответствии с инструкцией производителя) в 0 день, с последующей вторичной вакцинацией PNEUMOVAX23 (внутримышечная инъекция 0,5 мл в соответствии с инструкцией производителя) на 4 неделе. Осуществляли забор крови у каждого участника (10 мл) в следующих временных точках: непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR, непосредственно перед вторичной вакцинацией PNEUMOVAX23 на 4 неделе, на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16 неделе. Образцы сыворотки готовили из каждого образца крови, делили на аликвоты и хранили при -70°С ± 10°С. С образцами сыворотки проводили различные исследования (например, описанные ниже).
Количественная оценка серотип-специфических антипневмококковых антител против полисахарида (ПС (PS)) (тестирование IgG). Пневмококковый серотип (СТ (ST))-специфический IgG количественно определяют с применением ранее описанных способов (см., например, Lai et al., 2005 J bnmunolo Meth 296: 135-147). Вкратце, спектрально отличные гранулы люминекса конъюгируют с пневмококковым (Pnc) СТ (ST)-специфическим капсульным полисахаридом (ПС (PS)), полученным из Американской Коллекции Типовых Культур, АКТК (АТСС). Тестовые образцы сыворотки смешивают с ПС (Р8)-конъюгированными гранулами, а СТ (ST)-специфический IgG количественно определяют с помощью контрольной сыворотки человека 89SF. Серотип-специфическую концентрацию в образцах сыворотки выражали как мкг/мл.
Анализ опсонофагоцитарной элиминации (ОФЭ (OPK)). Концентрации функциональных антител (титр) в образцах сыворотки тестируют с применением ранее описанных способов (см., например, Romero-Steiner et al., 1997 Clin Diagn Lab Immunol. Jul, 4 (4): 415 - 22.). Вкратце, клетки HL-60 (промиелоцитарные лейкоциты человека), дифференцированные в полиморфноядерную (ПМЯ (PMN)) линию, применяют в качестве эффекторных клеток. В качестве мишени применяют живые серотип-специфические штаммы S. pneumonia, а в качестве источника комплемента для опсонофагоцитарной элиминации применяют комплемент детеныша кролика (PELFREEZE, Inc, Роджерс, Арканзас). Реагенты, хранящиеся при 4±2°С, доводят до комнатной температуры до проведения анализа. В каждую лунку 96-луночного планшета добавляют 10 мкл сбалансированного солевого раствора Хэнкса, ССРХ (HBSS) (+) с желатином, который далее называется буфером для анализа, за исключением ряда А. В лунки А1-А3 добавляют 20 мкл неразведенной сыворотки контроля качества. В лунки А4-А12 добавляют 20 мкл разбавленного образца. Сыворотку КК (QC) и неизвестные образцы последовательно разбавляют 1:2. Контрольные лунки комплемента и контрольные лунки клеток в этот момент содержат 10 мкл буфера для анализа.
Рабочую бактериальную суспензию S. pneumonia разбавляют до концентрации 8,0 х 105 колоний на 20 мкл. По 20 мкл бактериальной суспензии добавляют в каждую лунку планшета, включая контрольные лунки. Планшет инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин. В каждую лунку добавляют 10 мкл замороженного кроличьего комплемента, за исключением контроля клеток. В контроль клеток добавляют 10 мкл буфера для анализа. Планшет инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин. В каждую лунку планшета добавляют 40 мкл дифференцированных ПМЯ (PMN) HL60. Концентрацию клеток определяют таким образом, чтобы добавлять 100000 клеток на лунку. Планшет инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин.
С помощью многоканальной пипетки 5 мкл из каждой лунки в ряду одновременно переносят в чашку Петри размером 150 × 15 мм, содержащую шоколадный агар. Чашку наклоняют, чтобы объем пробы мог стекать по агаровой пластине параллельными рядами. Чашки инкубируют в течение ночи при 37°С и 5% CO2. На следующий день пластинки фотографируют и подсчитывают колониеобразующие единицы (КОЕ (CFU)). Элиминацию бактерий вычисляют как процент уничтожения в лунке (КОЕ на лунку/среднее значение КОЕ контроля комплемента * 100). Величину, обратную разведению, при котором имеет место уничтожение > 50% целевой бактерии по сравнению с контролем комплемента, регистрируют как титр ОФЭ (OPK). Поскольку первое разведение составляет 1:8, образцы сыворотки без титров регистрируют как 1:4 для целей вычисления.
Пример 2
Идентификация и характеристика специфического и общего ответа на пневмококковый серотип в форме функциональных антител у иммунизированных индивидуумов
Индивидуальный образец сыворотки отбирают у участников исследования в разные моменты времени (непосредственно перед первичной вакцинацией PREVNAR, непосредственно перед вторичной вакцинацией PNEUMOVAX23 на 4 неделе, на 8 неделе, на 10 неделе, на 12 неделе и на 16 неделе). Сыворотку анализируют на предмет концентрации IgG, специфического в отношении пневмококкового (Pnc) серотип (СТ (ST)) (см. тест IgG в Примере 1 выше). В дополнение к индивидуальным образцам сыворотки получают объединенную в пул сыворотку путем объединения равного количества сыворотки от каждого участника до и после 12 недели, а также образцы объединенной в пул сыворотки характеризуют для оценки влияния объединения в пул на результат тестирования IgG. Кроме того, как индивидуальные, так и объединенные в пул образцы сыворотки тестируют на предмет ответа в форме функциональных антител, применяя анализ опсофагоцитарной элиминации (ОФЭ (OPK)), описанный в Примере 1.
Концентрации/титр серотип-специфического антипневмококкового IgG. Образцы сыворотки от каждого индивидуума (n=10) иммунизированного прайм-буст PREVNAR-PNEUMOVAX23, анализируют на предмет СТ (ST)-специфического IgG Pnc. Титры СТ (ST)-специфического IgG Pnc изображены на Фиг. 1. Были зарегистрированы вариации ответа в форме IgG в образцах сыворотки между донорами и между СТ (ST). В то время как у 9/10 доноров наблюдался надежный ответ на Pnc СТ (ST) в форме IgG, существуют различия в СТ (ST)-специфических ответах. Среди доноров, у 7/10 присутствовали пиковые концентрации IgG в течение 4 недель после вакцинации PNEUMOVAX23 (бустерный ответ на PNEUMOVAX23 через восемь недель после первичной вакцинации), а затем постепенное снижение уровня, который оставался в несколько раз выше исходного уровня даже на 12 неделе. Несмотря на эти вариации, все доноры продемонстрировали концентрации СТ (ST)-специфического IgG Pnc выше защитного уровня (>0,2 мкг/мл) иммунитета (см., например, Balmer et al., Clin Exp Immunol, 2003 Sep, 133 (3): 364-9). Концентрация IgG в объединенной в пул сыворотке продемонстрировала повышение концентрации IgG в 2,2-30 раз в конце периода исследования (12 неделя) по сравнению с исходным уровнем (до). Среди них, максимальное увеличение ответа в форме IgG зарегистрировано для серотипа ST 1, за которым следовали серотипы ST23F и ST4. Серотип ST19A проявляет наименьшую кратность увеличения концентрации IgG (в 2,2 раза), далее следует ST 3 (в 2,6 раза) и ST14 (в 3,2 раза).
Титр функциональных/опсонических антител (OPK). На Фиг. 2 изображены данные, относящиеся к титру ОФЭ (OPK) в образцах донорской сыворотки, специфической в отношении различных СТ (ST) Pnc. Базовый уровень титров ОФЭ (OPK) указан вместе с концентрацией IgG. Кратность увеличения титра функционального антитела возросла в 4-256 раз (см. Фиг. 2). Неожиданно было обнаружено, что общее количество IgG (например, изображенное на Фиг. 1) не коррелирует с количеством общих функциональных опсонических антител. Например, для серотипа ST14 зарегистрировано только умеренное увеличение общего титра IgG (в 3,2 раза, см. Фиг. 1). Тем не менее, у него зарегистрировано наибольшее увеличение функционального ответа (титр опсонических антител) в 256 раз по сравнению с исходным уровнем.
Пример 3
Количественное определение общих и функциональных серотип-специфических антипневмококковых антител в объединенной в пул сыворотке человека
Образцы сыворотки вакцинированных доноров плазмы человека (n=34) были получены с интервалом в один месяц, начиная с 1 месяца до вакцинации и заканчивая 5 месяцами после вакцинации. В этих 6 временных точках образцы сыворотки объединяли в пул и анализировали на предмет концентрации СТ (ST)-специфического IgG Pnc (тестирование IgG) и функциональных антител с применением ОФЭ (OPK), описанной в Примере 1 выше. Определяли концентрации антител (серотип-специфический IgG и ОФЭ (OPK)) и кратность увеличения по сравнению с исходным уровнем до вакцинации.
Образцы сыворотки вакцинированных индивидуумов (иммунизированные прайм-буст PREVNAR-PNEUMOVAX23), объединяют в пул каждый 1 месяц в промежутке от 1 месяца до вакцинации и до 5 месяцев после вакцинации, и объединенную в пул сыворотку для каждой временной точки анализируют на предмет СТ (ST)-специфического IgG Pnc. Титр СТ (ST)-специфического IgG Pnc в объединенной в пул сыворотке доноров, полученной в каждой временной точке, изображен на Фиг. 3. Средняя концентрация IgG в образцах сыворотки после иммунизации варьировала от 4,4 до 37,59 мкг/мл. Снижение общих концентраций IgG по сравнению с конечной точкой на 12 неделе, возможно, связано с постепенным снижением уровней IgG после всплеска, наблюдаемого на 4 неделе после бустерной вакцинации, что привело к снижению концентрации IgG с течением времени. Тем не менее, кратность увеличения концентрации IgG по сравнению с исходным уровнем (см. Фиг. 4) продемонстрировала картину, аналогичную изображенной на Фиг. 1, с более высоким ответом на ST1, ST23F и ST4.
ОФЭ (OPK). Титры ОФЭ (OPK) в объединенной в пул донорской сыворотке, специфической в отношении различных СТ (ST) Pnc, изображены на Фиг. 5. Среднее значение титра ОФЭ (OPK) после иммунизации для ST1 было исключительно высоким (36044), тогда как все остальные СТ (ST) демонстрировали титр, по меньшей мере, на логарифм ниже. Несмотря на то, что высокие титры ОФЭ (OPK) были зарегистрированы в индивидуальных образцах сыворотки, протестированных на 12 неделе (см. Фиг. 2), титры не были на логарифм выше, чем для других серотипов.
Пример 4
Идентификация и характеристика общих и функциональных серотип-специфических антипневмококковых антител в очищенном IgG человека
Образцы сыворотки, полученные от участников исследования в разные моменты времени (n=34), объединяли в пул в каждой из индивидуальных временных точек (до, 4, 8, 10, 12, 16 неделя и 5 месяц), и IgG очищали из объединенных в пул образцов с применением стандартных колонок иммуносорбента с белком А. Очищенный IgG анализировали на предмет концентрации СТ (ST)-специфического IgG Pnc (тестирование IgG) и функциональных антител с применением ОФЭ (OPK), как описано в Примере 1. Были охарактеризованы концентрации антител (серотип-специфический IgG) и титр функциональных антител (ОФЭ (OPK)). Кроме того, характеристика результатов была проведена для понимания взаимосвязи между методами in vitro и ex vivo на основе регрессионного анализа индивидуальных результатов.
Концентрации серотип-специфического пневмококкового IgG. Образцы сыворотки индивидуумов, вакцинированных с применением схемы прайм-буст иммунизации PREVNAR-PNEUMOVAX23, объединяли в пул с промежутком один месяц, начиная с 1 месяца до вакцинации и до 5 месяцев после, сыворотку для каждой временной точки объединяли в пул и очищали IgG. Объединенные в пул образцы сыворотки анализировали на предмет СТ (ST)-специфического IgG Pnc. СТ (ST)-специфический IgG Pnc объединенной в пул сыворотки показан на Фиг. 6. Среднее значение концентрации IgG в объединенной в пул сыворотке после иммунизации варьировало от 3,2 до 23,3 мкг/мл, что приводило к снижению концентрации IgG с течением времени. Тем не менее, увеличение концентрации IgG по сравнению с исходным уровнем (см. Фиг. 4) показало картину, аналогичную изображенной Фиг. 1, с более высоким ответом для ST1, ST23F и ST4.
ОФЭ (OPK): Титр ОФЭ (OPK) в объединенной донорской сыворотке, СТ (ST)-специфической в отношении различных Pnc, изображен на Фиг. 7. Средний титр после иммунизации ОФЭ (OPK) варьировался от 213 до 5826,7 с самым высоким титром для ST7F (5826,7), за которым следовали ST23F (4778,7) и ST5 (4096).
Пример 5
Сравнение титра серотипа ОФЭ (OPK), присутствующего в объединенной человеческой сыворотке от вакцинированных доноров, по сравнению с титром серотипа ОФЭ (OPK), присутствующим в обычном, коммерчески доступном анализе ВВИГ (IVIG)
Анализ ОФЭ (OPK). Применяли анализ ОФЭ (OPK), описанный в Примере 1 выше. Вкратце, реагенты, хранящиеся при 4±2°С, доводят до комнатной температуры перед проведением анализа. В каждую лунку 96-луночного планшета добавляют 10 мкл ССРХ (HBSS) (+) с желатином, который далее называется буфером для анализа, за исключением ряда А. В лунки А1-А3 добавляют 20 мкл неразведенной сыворотки для контроля качества. В лунки А4-А12 добавляют по 20 мкл разбавленного образца. Сыворотку КК (QC) и неизвестные образцы последовательно разбавляют 1:2. Контрольные лунки комплемента и контрольные лунки клеток в этот момент содержат 10 мкл буфера для анализа.
Рабочую бактериальную суспензию S. pneumonia разбавляют до концентрации 8,0 х 105 колоний на 20 мкл. По 20 мкл бактериальной суспензии добавляют в каждую лунку планшета, включая контрольные лунки. Планшет инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин. В каждую лунку добавляют 10 мкл замороженного кроличьего комплемента, за исключением контроля клеток. В контроль клеток добавляют 10 мкл буфера для анализа. Планшет инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин. В каждую лунку планшета добавляют 40 мкл дифференцированных ПМЯ (PMN) HL60. Концентрацию клеток определяют таким образом, чтобы добавлять 100000 клеток на лунку. Планшет инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре на шейкере для планшетов, установленном на 200 об/мин.
С помощью многоканальной пипетки 5 мкл из каждой лунки в ряду одновременно переносят в чашку Петри размером 150 × 15 мм, содержащую шоколадный агар. Чашку наклоняют, чтобы объем пробы мог стекать по агаровой пластине параллельными рядами. Чашки инкубируют в течение ночи при 37°С и 5% CO2. На следующий день пластинки фотографируют и подсчитывают колониеобразующие единицы (КОЕ (CFU)). Элиминацию бактерий вычисляют как процент уничтожения в лунке (КОЕ на лунку/среднее значение КОЕ контроля комплемента * 100).
На Фиг. 8 изображено сравнение титра серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в объединенной в пул сыворотке человека от вакцинированных доноров, по сравнению с титром серотип-специфической ОФЭ (OPK) функциональных/опсонических антител, присутствующих в девяти случайных и разных обычных, коммерчески доступных ВВИГ (IVIG). Каждая колонка представляет единственный, уникальный серотип S. pneumonia. Каждая строка представляет уникальный образец. Образцы A-I представляют собой обычный коммерчески доступный ВВИГ (IVIG).
Как изображено на Фиг. 8, в коммерческих партиях ВВИГ (IVIG) была обнаружена выраженная вариабельность серотип-специфических опсонических титров. Кроме того, обнаружено, что повышенный титр для одного серотипа не предсказывал и не коррелировал с повышенным титром для любого из других серотипов, предполагая, что индивидуальный повышенный ответ не отображает общего усиленного иммунного ответа на S. pneumonia, но скорее спорадический(е) усиленный(е) ответ(ы) на очень специфические серотипы. В заметную противоположность этому, титры опсонических антител, наблюдаемые для иммунного глобулина от иммунизированных доноров, были отмечены как усиленные для всех без исключения серотипов. Кроме того, в иммунном глобулине от иммунизированных доноров наблюдалось увеличение в 3-256 раз титра опсонического антипневмококкового антитела в иммунного глобулинах по сравнению с коммерческими сериями иммунного глобулина. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения композиции и способы по изобретению для получения композиций (например, композиций крови, плазмы и/или иммунного глобулина), содержащих повышенный титр опсонических антипневмококковых антител, обеспечивают гомогенную композицию, содержащую титры опсонических антител к пневмококкам, специфических в отношении всех множественных пневмококковых серотипов (например, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или большее количество серотипов) и/или значительно повышенные титры опсонических антител по сравнению с обычным коммерческим иммунным глобулином (например, это повышенный в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или большее количество раз титр опсонических антител).