Способы доказательства метаболитов золпидема в моче

СПОСОБЫ ДОКАЗАТЕЛЬСТВА МЕТАБОЛИТОВ ЗОЛПИДЕМА В МОЧЕ Крылова Е.А.

Пермская государственная фармацевтическая академия, кафедра фармацевтической химии ФДПО и ФЗО, г. Пермь_

Описаны способы химико-токсикологического определения метаболитов золпидема в моче. Для извлечения золпидема применялась твердофазная экстракция. Для идентификации метаболитов применялся метод газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ/МС) с использованием свойств их функциональных групп и характера масс-фрагментации полученных производных. Полученные данные полезны для установления факта приема данного препарата.

Целью исследования явилось изучение основных направлений метаболических превращений золпидема, препарата, относящегося к так называемым «Z-лекарствам» - снотворным средствам с новой химической структурой. Подробной схемы метаболизма вещества в организме человека в отечественной и зарубежной литературе не представлено, авторы ограничиваются лишь описанием отдельных направлений [1, 2]. Обнаружение и идентификацию метаболитов золпидема проводили путем поиска оптимальных условий извлечения их из мочи (у лиц, добровольно получавших препарат в однократной терапевтической дозе) с последующим подбором наиболее удачных способов дериватизации. Было установлено, что метаболиты золпидема образуются в организме человека в результате последовательных процессов окисления в двух основных направлениях: гидроксилирование метильных радикалов имидазопиридинового ядра и бензольного кольца. Последующее окисление гидроксильных групп ведет к появлению соответствующих карбокси- метаболитов золпидема.

Метаболиты золпидема являются фармакологически неактивными соединениями, выводящимися почками. Только около 1% исходного вещества экскретируется с мочой в неизменном виде [1]. Поэтому очевидно, что химико-токсикологический анализ мочи для установления факта приема золпидема будет наиболее информативен при выявлении его метаболитов, т.к. концентрация нативного золпидема в данном биообъекте может быть настолько мала (особенно при приеме однократной терапевтической дозы), что будет ниже предела его обнаружения, даже при применении такого высокочувствительного метода как ГХ/МС.

Пробоподготовка образцов мочи включала этап энзимного гидролиза ß-глюкуронидазой с целью разрушения конъюгатов метаболитов золпидема. Извлечение их из мочи проводили твердофазной экстракцией с применением сорбента со смешанной фазой (патроны AccuBond II EVIDEX 200 мг/3т1 (Agilent)), т.е. сорбция аналитов проходила за счет ионных и гидрофобных взаимодействий [3].

Идентификацию метаболитов золпидема, полученных из образцов мочи, проводили методом ГХ/МС с использованием свойств их функциональных групп и характера масс-фрагментации полученных производных. Реакции ацилирования применяли для гидроксипроизводных золпидема. Реакции алкилирования и этерификации использовали для карбоксипроизводных золпидема. Для обоих типов метаболитов (гидрокси- и карбоксипроизводные) получали триметилсилильные эфиры.

В результате проведенных исследований было установлено, что для производных основных метаболитов золпидема в масс-спектрах является характерным наличие выраженных пиков молекулярных ион-радикалов и фрагментных ионов [M-72]+. Было установлено, что для идентификации описанных метаболитов методом ГХ/МС наиболее предпочтительным в качестве дериватизирующего агента можно назвать BSTFA, так как он позволяет получить ТМС эфиры одновременно и гидрокси- и карбокси-метаболитов, данные производные также обладают удовлетворительными газохроматографическими свойствами. Отметим, что процедуры дериватизации метаболитов золпидема для ГХ/МС исследования абсолютно необходимы, т.к. без них ни один из метаболитов обнаружен не был. Полученные дериваты метаболитов золпидема термостабильны, проявляется их специфическая масс-фрагментация и повышается чувствительность анализа в целом.

Полученные данные позволяют проводить надежное доказательство метаболитов золпидема, устанавливать факт применения данного препарата, не только при постоянном использовании золпидема, но и даже при приеме однократной терапевтической дозы.

Литература

1. Hempel G, Blaschke G Direct determination of Zolpidem and its main metabolites in urine using capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection // Journal of Chromatography B. - 1996. - Vol. 675. -P. 131-137.

2. Pichard L, Gillet G, Bonfils C et al. Oxidative metabolism of Zolpidem by human liver cytochrome P450S // Drug Metabolism and Disposition. - 1995. - Vol. 23.№11. - P. 1253-1262.

3. Хомов Ю.А., Егорова Е.И., Шилова Е.А. Химико-токсикологический анализ золпидема // Вестник РУДН. Серия Медицина. - 2009. - №4. - C. 469-473.

Материалы XII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2011

4. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

5. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

6. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

7. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

8. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

9. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

10. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

11. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

12. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

13. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

14. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и

образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2010г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2009г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2008г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2007г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2006г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2005г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2004г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2003г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2002г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2001г. образование в XXI веке» РУДН, Москва, 1999г.

Материалы XII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2011