Низкий уровень пролиферации - неблагоприятный прогностический признак при аденокарциноме толстой кишки

студентов; данная проблема требует дальнейшего изучения.

Мы планируем анкетирование студентов немедицинских высших учебных заведений, что позволит получить более достоверные данные о распространении данной проблемы среди молодого населения г. Иркутска, выявить структуру данной патологии и спланировать подходы к её возможному решению.

ЛИТЕРАТУРА

1. Балашова Т.Н., Волкова Е.Н., Инсурина Г.Л. и др. Фетальный алкогольный синдром. — СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2012. — С. 3-51.

2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М.: Практика, 1999. — 459 с.

3. Голенков А.В. Пограничные психические расстройства у студентов Чувашии. — Чебоксары: Чуваш. ун-т, 1996. — 116 с.

4. Голенков А.В., Андреева А.П., Булыгина И.Е. Частотно-количественные показатели и мотивы потребления алкогольных напитков студентами медиками // Наркология. — 2009. — №10. — С. 25-29.

5. Завьялов В.Ю. Психологические аспекты форми-

УДК 611.018.825: 616.345-006.66-036: 616-091-076-079

рования алкогольной зависимости. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд., 1988. — 198 с.

6. Иванов Н.Я., Личко А.Е. Патохарактерологичес-кий диагностический опросник для подростков: Краткое руководство. — М., СПб.: Фолиум, 1994. — 64 с.

7. Личко А.Е., Битенский В.С. Подростковая наркология: Руководство. — Л.: Медицина, 1991. — 304 с.

8. Михалевич И.М., Алфёрова М.А., Рожков Н.Ю. Основы прикладной статистики. — Иркутск: РИО ИГИУВа, 2008. — 101 с.

9. Немчин Т.А., Цыцарев С.В. Личность и алкоголизм. — Л.: Изд-во ЛГУ, 1989. — 192 с.

10. Программа первоочередных мер государственной антиалкогольной политики, Москва. — Август, 2006. — http://www.sbnt.ru/files/project_AntiAlkoProgram. doc (дата обращения: 01.03.14).

11. Серия технических докладов, 944. Каталог публикаций ВОЗ. Комитет экспертов ВОЗ по проблемам, связанным с потреблением алкоголя. — Женева, 10-13 октября. — 2006. — 66 с.

12. Ganaraja B., Kotian M, Bhat R. et al. Alcohol expectancy responses from first year medical students: are they prone to alcoholism? // Indian J. Med. Sci. — 2007. — Vol. 61, N 9. — P. 511-516.

13. Young R., Connor J., Ricciardelli L. et al. The role of alcohol expectancy and drinking refusal self-efficacy beliefs in university student drinking // Alcohol & Alcoholism. — 2006. — Vol. 41, N 1. — P. 70-75.

Т15

НИЗКИЙ УРОВЕНЬ ПРОЛИФЕРАЦИИ - НЕБЛАГОПРИЯТНЫЙ ПРОГНОСТИЧЕСКИЙ ПРИЗНАК ПРИ АДЕНОКАРЦИНОМЕ ТОЛСТОЙ

КИШКИ

Григорий Александрович Раскин1*, Семён Венедиктович Петров2

'Российский научный центр радиологии и хирургических технологий, Санкт-Петербург, 2Казанский государственный медицинский университет

Реферат

Цель. Сопоставить пролиферативную активность клеток аденокарциномы толстой кишки со стадией опухолевого процесса и выживаемостью пациентов.

Методы. Иммуногистохимически исследовали экспрессию белка Ki-67 в первичных опухолях от 217 больных аденокарциномой толстой кишки. Гистологические срезы после демаскировки антигенов и ингибирования эндогенной пероксидазы 3% раствором водорода пероксида (перекиси водорода) окрашивали с использованием антител к белку Ki-67 (клон SP6, разведение 1:300) и полимерной системой детекции, в качестве хромогена использовали диаминобензидин. Контр-окрашивание ядер осуществляли при помощи гематоксилина Майера.

Результаты. При оценке пролиферативной активности в аденокарциноме толстой кишки выявлено существенное отличие доли случаев с экстремально высоким уровнем пролиферации (>70%) и относительно-низким (<30%) в группах с метастатическим и неметастатическим раком. При анализе пролиферативной активности опухолей у пациентов с прослеженным безрецидивным периодом оказалось, что в 21 (95%) случае из 22 пролиферация была выше 70%, лишь в одном наблюдении пролиферация по Ki-67 была 60%. Ни одного случая из последней группы с уровнем пролиферации менее 50% выявлено не было. При статистическом анализе оказалось, что у пациентов с метастатической аденокарциномой толстой кишки пролиферативный уровень достоверно ниже в сравнении с аденокарциномами без метастазов (р=0,0019). В наших исследованиях было клиническое наблюдение с агрессивной формой аденокарциномы толстой кишки с метастазами в сальник, брюшину и пупочную область у 28-летнего пациента. Пролиферативная активность, измеренная по Ki-67, составила в данном случае 20%.

Вывод. Низкая пролиферативная активность в аденокарциноме толстой кишки — плохой прогностический признак с точки зрения развития метастазов и рецидивов.

Ключевые слова: Ki-67, пролиферация, аденокарцинома толстой кишки, прогноз.

LOW PROLIFERATIVE LEVEL IS A POOR PROGNOSTIC FACTOR FOR COLON ADENOCARCINOMA

G.A. Raskin1, S.V. Petrov2. 'Russian Research Centre for Radiology and Surgical Technologies, Saint-Petersburg, Russia,2Kazan State Medical University, Kazan, Russia. Aim. To match up the proliferative activity of colon adenocarcinoma cells with tumor stage and survival rate. Methods. Ki-67 protein expression was evaluated by immunohistochemical methods in 217 patients with primary colon adenocarcinoma. After epitope retrieval and endogenous peroxidase inhibiting by 3% solution of

Адрес для переписки: rasking@list.ru

378

hydrogen peroxide, histologic samples were stained by antibodies to Ki-67 protein (clone SP6, dilution 1:300) and polymer systemic detection with diaminobenzidine as a chromogenic substrate. Nuclear counterstain was performed using Mayer's hematoxylin solution. Results. Assessment of colon adenocarcinoma proliferative activity showed a significant difference between the number of cases with high (>70%) and relatively low (<30%) proliferative levels in groups with metastatic cancers and non-metastatic tumors. In patients with no relapses, colon adenocarcinoma proliferative activity assessment showed proliferation level exceeding 70% in 21 (95%) out of 22 cases, in a single case proliferation level of 60% was found according to Ki-67, no cases of proliferation level lower than 50% was found. Statistical analysis showed that proliferative activity was significantly lower in patients with metastatic colon adenocarcinoma compared to cases of adenocarcinoma without metastases (p= 0.0019). We observe one clinical case of aggressive colon adenocarcinoma with omental, peritoneal, paraumbilical metastases in 28-year old patient, in whom proliferative activity by Ki-67 was measured as 20%. Conclusion. Low proliferative level in colon adenocarcinoma is a poor prognostic factor for possible metastasing and cancer recurrence.

Keywords: Ki-67, proliferation, colon adenocarcinoma, prognosis.

Колоректальный рак — одна из наиболее распространённых злокачественных опухолей, которая также занимает лидирующие позиции по летальности от рака в мире [3]. Несмотря на то, что основным методом лечения служит оперативное вмешательство, с 1990 г. у пациентов с метастазами в лимфатические узлы стандартной считают адъ-ювантную химиотерапию [2, 8]. Поиск молекулярных маркёров с прогностическим или предиктивным эффектом важен для подбора соответствующего лечения пациентам для исключения ненужных препаратов с токсичными побочными эффектами.

Пролиферация опухолевых клеток — неотъемлемая черта злокачественной опухоли, часто связанная с её агрессивностью. Белок Ю-67 экспрессируется с G1- по М-фазу клеточного цикла, с его помощью можно оценивать пролиферирующий пул клеток. Ядерный белок Ю-67 кодируется геном МК167, локализованным на хромосоме 10 (Юq25-qter). Он относится к семейству перихромонуклеино-вых протеинов, окружающих хромосомы в течение митоза. Ю-67 впервые описан Geгdes и соавт. в 1983 г. на клеточной линии, полученной из лимфомы Ходжкина [5]. Так как Ю-67 выявлялся только в делящихся клетках, его стали широко применять как маркёр пролиферации [6].

В интерфазе Ю-67 входит в состав гете-рохроматина в области ядрышек [9], начиная с поздней стадии 01, участвует в формировании малых гранул в ядре, а в дальнейшем в фазах G2 и S — больших фокусов гетерохроматина с ядрышками. В М-фазе локализация Ю-67 полностью изменяется, переходя на поверхность конденсированных хромосом [12].

Было высказано много предположений относительно функций Ю-67 в митозе. Одни авторы утверждали, что такая локализация Ю-67 на поверхности хромосом является лишь распределением ядерных белков в дочерние клетки. Другие считали, что Ю-67 играет важную роль в конденсации и

деконденсации хромосом. Эксперименты, проведённые Starborg [12] и Schluter [11], показали, что Ю-67 жизненно необходим в митозе клетки и что при его нейтрализации митоз останавливается.

В литературе существуют противоречивые данные о влияние уровня пролиферации на прогноз при аденокарциноме толстой кишки. Целью исследованию было сопоставить пролиферативную активность со стадией опухолевого процесса и выживаемостью пациентов.

Был исследован материал первичных опухолей от 217 больных, получавших лечение в Городском клиническом онкологическом диспансере Санкт-Петербурга и 122-й клинической больнице (табл. 1).

Таблица 1

Характеристика пациентов

Количество Распреде- Средний Распреде-

случаев ление по возраст, ление по

стадиям годы полу

217 I-II - 55 59 М: 104

(25%), (48%),

IV - 162 Ж: 157

Иммуногистохимическое исследование. Материал поступал в виде как парафиновых блоков, так и кусочков опухолей, залитых в 10% буферный формалин. В последнем случае выполняли вырезку материала и доведение фиксации в формалине до 24 ч. Затем проводили материал в 10 порциях изопропилового спирта и 3 парафинах. Приготавливали блоки, с них осуществляли срезы толщиной 4 мкм, которые помещали на стёкла с поли-Ъ-лизиновым покрытием. Срезы подсушивали, депарафинировали и подвергали демаскировке антигенов при помощи цитратного буфера в условиях водяной бани, 1=95 °С, 30 мин. После этого они остывали при комнатной температуре и промывались трис-буфером с твином. Каждый срез обводили парафиновым каранда-

Таблица 2

Уровень пролиферации в аденокарциномах толстой кишки в зависимости от метастатического статуса

Пролиферация по Ю-67

Ю-67 <30%

30% <Ki-67 <50%

50°% <Ki-67 <70%

Ki-67 >70%

Всего случаев

Метастатическая форма

30

40

49

43

162

Неметастатическая форма

2

5

19

29 (52,

55

шом, после чего осуществляли ингибирова-ние эндогенной пероксидазы 3% раствором водорода пероксида (перекиси водорода) в течение 20 мин. Затем на каждый срез наносили первое антитело (Ю-67, клон SP6, разведение 1:300), экспозиция длилась 30 мин на термостолике в условиях «водяной бани» при температуре 30 °С

Для визуализации реакции антиген-антитело применяли полимерную систему детекции «EnVisюn» компании «DAKO», в качестве хромогена использовали диа-минобензидин. Контр-окрашивание ядер осуществляли при помощи гематоксилина Майера. После каждого из этапов до окрашивания диаминобензидином стёкла со срезами промывали в трис-буфере с твином

(рН=7,1) фирмы «ВюОр^са». Стёкла заключали в среду «BioMaunt» фирмы «BioOptica».

Мы проанализировали уровень пролиферации, определённый по Ю-67, в случаях аденокарциномы толстой кишки с метастазами и без них. Все случаи по про-лиферативному уровню были разделены на группы: меньше 30%; больше 30%, но меньше 50%; больше 50%, но меньше 70%; больше 70% (табл. 2).

Как видно из табл. 2, в группе аденокар-цином без метастазов было два наблюдения, в которых пролиферация была ниже 30%. Однако необходимо учитывать, что оценка метастатического статуса в данной группе осуществлялась до операции при помощи компьютерной томографии и на удалённом материале гистологически (в группу вошли только те пациенты, у которых было забрано для исследования не менее 16 лимфатических узлов). Таким образом, выявленные два случая с относительно низким уровнем пролиферации могут быть сомнительны в плане метастатического потенциала, так как не был прослежен безрецидивный период. Если сравнить распределение случаев по уровню пролиферации в зависимости от метастатического потенциала, то мы увидим следующие кривые (рис. 1).

Рис. 1. Распределение случаев аденокарциномы толстой кишки в зависимости от пролиферативного уровня в категориях с метастатическим паком и паком пШМ0.

Как видно из рис. 1, пересечение кривых произошло в области [50%; 70%], но если для кривой метастатического рака это точка экстремума, то для неметастатического — точка с максимальным ростом. Точка экстремума для случаев рШМ0 лежит в области >70%, то есть с максимальным проли-феративным уровнем.

Если сопоставить уровень пролиферации в группах с метастатическими аденокарци-номами толстой кишки и неметастатическими опухолями с составлением таблицы сопряжения 2x2, то мы увидим следующую картину (табл. 3).

Таблица 3

Таблица сопряжённости 2x2 для метастатической и неметастатической аденокарцином с уровнем пролиферации до 30% и превышающим 70%

Как видно из табл. 3, существует значительное отличие доли случаев с экстремально высоким уровнем пролиферации (>70%) и относительно низким (<30%) в группах с метастатическим и неметастатическим раком. Это подтверждает наше предположение о том, что низкий уровень пролиферации в аденокарциномах толстой кишки — плохой прогностический признак. Высокий же уровень пролиферации не имеет самостоятельного прогностического значения.

Для подтверждения данных выводов мы провели исследование на группе адено-карцином с прослеженным 5-летним клиническим периодом. Отличием данных случаев является тот факт, что у пациентов был прослежен 5-летний период, и в группу вошли только те пациенты, у которых не было метастазирования и рецидивов в течение этого времени.

В 21 (95%) из 22 случаев пролиферация по Ю-67 была выше 70%, лишь в 1 наблюдении она составила 60%. Ни 1 случая с прослеженным 5-летним безрецидивным периодом и без развития метастазов с уровнем пролиферации менее 50% выявлено не было. Таким образом, это подтверждает наше

предположение о том, что низкий уровень пролиферации в аденокарциномах толстой кишки — плохой прогностический признак. Более того, в 2 случаях с низким уровнем пролиферации из предыдущей группы следует ожидать в будущем развития метастазов или рецидива.

Эта позиция позволяет понять данные предыдущего нашего исследования, где крайне высокая пролиферативная активность в аденокарциномах толстой кишки не сопровождалась высокой эффективностью химиотерапии, более того, все 9% случаев с низкой пролиферативной активностью имели регионарные или отдалённые метастазы [1].

К схожим результатам пришли E.C. Fluge и соавт. [4], показав, что высокий пролиферативный уровень (>40%) является хорошим прогностическим маркёром для безрецидивного течения заболевания у пациентов с аденокарциномами ободочной кишки. Высокий уровень пролиферации наблюдается в ранних неметастатических формах аденокарцином толстой кишки [7].

E.B. Salminen и соавт. [10] показали, что высокий пролиферативный уровень, определённый по Ki-67, — хороший прогностический фактор для выживаемости пациентов в сравнении с низкой пролиферативной активностью.

В наших исследованиях было клиническое наблюдение с агрессивной формой аденокарциномы толстой кишки с метастазами в сальник, брюшину и пупочную область у 28-летнего пациента. Пролифера-тивная активность, определённая по Ki-67, составила в данном случае 20%.

ВЫВОД

Низкая пролиферативная активность в аденокарциномах толстой кишки — плохой прогностический признак с точки зрения развития метастазов и рецидивов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Раскин Г.А., Орлова Р.В., Петров С.В., Протасова А.Э. Иммуногистохимическое исследование аденокарциномы толстой кишки для оценки прогностических факторов // Вестн. Санкт-Петербург. унта. — 2012. — Серия 11. — №1. — С. 172-182.

2. Belac-Lovasic I, Petkovic M., Ferrari A.M. Evaluation of adjuvant chemotherapy in patients with colorectal cancer in Primorsko-Goranska and Istarska County — a twenty years retrospective study // Coll. Antropol. — 2011. — Vol. 35. — P. 111-114.

3. Ferlay J, Shin H.R, Bray F. et al. GLOBOCAN 2008 v2.0, cancer incidence and mortality worldwide: IARC

381

Метастатическая форма Неметастатическая форма

Пролиферация по Ki-67 <30% 30 (41%) 2 (6%) Х2=10,6883, р=0,0019

Пролиферация по Ki-67 >70% 43

CancerBase No. 10 [Internet]. — Lyon, France: International Agency for Research on Cancer; 2010. — Available from: http://globocan.iarc.fr/Pages/fact_sheets_cancer.aspx.

4. Fluge Ш, Gravdal K, Carlsen E. et al. Expression of EZH2 and Ki-67 in colorectal cancer and associations with treatment response and prognosis // Br. J. Cancer. — 2009. — Vol. 101, N 8. — P. 1282-1289.

5. Gerdes J., Schwab U, Lemke H, Stein H. Producing of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation // Int. J. Cancer. — 1983. — Vol. 31. — P. 13-20.

6. Gerdes J. Ki-67 and other proliferation markers useful for immnohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies // Semin. Cancer Biol. — 1990. — Vol. 1. — P. 99-106.

7. Hoos A, Nissan A., Stojadinovic A. et al. Tissue micro-array molecular profiling of early, node-negative adenocar-cinoma of the rectum. A comprehensive analysis // Clin. Cancer Res. — 2002. — Vol. 8 — P. 38-41.

8. Moertel C.G., Flemming T.R., Macdonald J.C. et al. 5-FU plus levamisole as effective adjuvant therapy after resection of stage III colon carcinoma: a final report // Ann.

Intern. Med. - 1995. - Vol. 122. - P. 321-326.

9. Saiwaki T, Kotera I., Sasaki M. et al. In vivo dynamics and kinetics of pKi-67: transition from a mobile to an immobile form at the onset of anaphase // Exp. Cell Res. — 2005. — Vol. 308, N 1. — P. 123-134.

10. Salminen E, Palmu S, Vahlberg T. et al. Increased proliferation activity measured by immunoreactive Ki-67 is associated with survival improvement in rectal/recto sigmoid cancer // World J. Gastroenterol. — 2005. — Vol. 11, N 21. — P. 3245-3249.

11. Schlüter C, Duchrow M, Wohlenberg C. et al. The cell proliferation-associated antigen of antibody Ki-67: a very large, ubiquitous nuclear protein with numerous repeated elements, representing a new kind of cell cycle-maintaining proteins // J. Cell. Biol. — 1993. — Vol. 123, N 3. — P. 513-522.

12. StarborgM, Gell K., Brundell E, Hoog C. The murine Ki-67 cell proliferation antigen accumulates in the nucleo-lar and heterochromatic regions of interphase cells and at the periphery of the mitotic chromosomes in a process essential for cell cycle progression // J. Cell. Sci. — 1996. — Vol. 109. — Pt. 1. — P. 143-153.

Уважаемые читатели!

Продолжается подписка на II полугодие 2014 года на «Казанский медицинский журнал»

Тематика «Казанского медицинского журнала» охватывает широкий круг самых актуальных проблем по терапии, хирургии, акушерству и гинекологии, онкологии, фтизиатрии, неврологии и психиатрии, ортопедии и травматологии, социальной гигиене и др. В статьях даётся описание современных методов лечения и диагностики с помощью новейшего медицинского оборудования. Журнал информирует о съездах и конференциях, проводимых как в нашей стране, так и за рубежом.

Решением Высшей аттестационной комиссии Министерства образования и науки России «Казанский медицинский журнал» включён в перечень периодических научных изданий, выпускаемых в Российской Федерации, в которых рекомендуется публикация основных результатов диссертаций на соискание учёной степени кандидата и доктора наук. Тираж журнала удостоверяется Национальной тиражной службой РФ.

Редакционная цена на II полугодие 2014 г. на «Казанский медицинский журнал» — 450 руб. без почтовых расходов на пересылку. Подписка осуществляется во всех отделениях связи.

Статьи от авторов принимаются только при наличии ксерокопий квитанций о подписке на 2014 год.

Индекс журнала — 73205