СВЯЗУЮЩИЙ ЭЛЕМЕНТ ДЛЯ РЕЦЕПТОРА GM-CSF

1. Изолированный связывающий агент, связывающий GM-CSFRα человека, причем указанный агент ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFRα и связывает, по меньшей мере, один остаток последовательности Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln в положениях с 226 по 230 GM-CSFRα человека, последовательность которого показана в SEQ ID NO: 206, причем указанный связывающий агент связывает внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (Kd) 5нМ или меньше в анализе методом поверхностного плазменного резонанса.
2. Связывающий агент по п.1, который содержит молекулу антитела.
3. Связывающий агент по п.2, содержащий VH домен антитела, который содержит набор гипервариабельных участков CDR1, CDR2 и CDR3 и каркасный участок, причем набор гипервариабельных участков содержит CDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 173, CDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 4 и CDR3 с последовательностью аминокислот, выбранной из группы состоящей из SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195; или содержит такой набор последовательностей гипервариабельных участков с одной или двумя заменами аминокислот.
4. Связывающий агент по п.2-, содержащий VH домен антитела, который содержит гипервариабельные участки CDR1, CDR2, CDR3 и каркасный участок, при этом остаток Н97 (нумерация по Kabat) в VH CDR3 представляет собой S.
5. Связывающий агент по п.4, в котором VH CDR3 дополнительно содержит или более следующих остатков:
V, N, А или L в положении Н95 (нумерация по Kabat);
S, F, Н, Р, Т или W в положении Н99 (нумерация по Kabat);
А, Т, Р, S, V или Н в положении Н100В (нумерация по Kabat).
6. Связывающий агент по п.5, в котором остаток Н95 (нумерация по Kabat) представляет собой V.
7. Связывающий агент по п.5-, в котором остаток Н99 представляет собой S.
8. Связывающий агент по п.5-, в котором остаток Н100В (нумерация по Kabat) А или Т.
9. Связывающий агент по п.5, в котором VH CDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 185 and SEQ ID NO: 195.
10. Связывающий агент по п.4, в котором остаток Н34 в VH CDR1 представляет собой I (нумерация по Kabat).
11. Связывающий агент п.4, в котором остаток Н34 в VH CDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3.
12. Связывающий агент по п.4, в котором CDR2 VH содержит Е в положении Н54 и/или I в положении Н57 (нумерация по Kabat).
13. Связывающий агент п.4, в котором CDR2 VH имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4.
14. Связывающий агент по п.4, в котором остаток Н17 в каркасном участке VH домена представляет собой S (нумерация по Kabat).
15. Связывающий агент по п.4, содержащий VL домен антитела, который содержит гипервариабельные участки CDR1, CDR2, CDR3 и каркасный участок.
16. Связывающий агент по п.15, в котором CDR3 VL содержит один или более из следующих остатков:
S, Т или М в положении L90 (нумерация по Kabat);
D, Е, Q, S, М или Т в положении L92 (нумерация по Kabat);
S, Р, I или V в положении L96 (нумерация по Kabat).
17. Связывающий агент по п.16, в котором остаток L90 (нумерация по Kabat) представляет S.
18. Связывающий агент по п.16, в котором остаток L92 (нумерация по Kabat) представляет собой D или Е.
19. Связывающий агент по п.16, в котором остаток L95A (нумерация по Kabat) представляет собой S.
20. Связывающий агент по п.16, в котором остатком L96 (нумерация по Kabat) является S.
21. Связывающий агент по п.15, в котором VL CDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200.
22. Связывающий агент по п.15, в котором VL CDR1 содержит один или более из следующих остатков:
S в положении 27А (нумерация по Kabat);
N в положении 27В (нумерация по Kabat);
I в положении 27С (нумерация по Kabat);
D в положении 32 (нумерация по Kabat).
23. Связывающий агент по п.15, в котором VL CDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8.
24. Связывающий агент по п.15, в котором VL CDR2 содержит один или более из следующих остатков:
N в положении 51 (нумерация по Kabat);
N в положении 52 (нумерация по Kabat);
K в положении 53 (нумерация по Kabat).
25. Связывающий агент по п.15, в котором VL CDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 9.
26. Связывающий агент по п.2, содержащий VH домен антитела, в котором остаток Н94 (нумерация по Kabat) представляет собой I.
27. Изолированный агент, связывающий GM-CSFRα человека, причем указанный агент ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFRα и связывает внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (KD) 5нМ или менее в анализе методом поверхностного плазменного резонанса, и где связывающий агент:
(i) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 60 пМ или меньше в тесте на пролиферацию клеток с 7 пМ GM-CSF человека;
(ii) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 50 пМ или меньше в тесте на изменение формы гранулоцитов с 7 пМ GM-CSF человека; и/или
(iii) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 100 пМ или меньше в тесте на высвобождение TNFα моноцитами с 1 нМ GM-CSF.
28. Изолированный агент, связывающий GM-CSFRα человека, содержащий набор гипервариабельных участков HCDR1, HCDR2 и HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3, в котором:
HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 173;
HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4;
HCDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195;
LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8;
LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 9; и
LCDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200.
29. Связывающий агент по п.28, отличающийся тем, что:
HCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3;
HCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4;
HCDR3 имеет последовательность аминокислот ID NO: 55;
LCDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8;
LCDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 9; and
LCDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 60.
30. Связывающий агент по п.27, 28 или 29, который содержит молекулу антитела.
31. Изолированный агент, связывающий GM-CSFRα человека, при этом указанный связывающий агент связывает внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (Kd) 5нМ или меньше в анализе методом поверхностного плазменного резонанса, ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFRα, и содержит молекулу антитела человека или гуманизированного антитела, которая конкурирует за связывание внеклеточного домена GM-CSFRα человека с молекулой антитела, имеющей последовательность аминокислот VH-домена SEQ ID NO: 52 и последовательность аминокислот VL-домена SEQ ID NO: 57.
32. Изолированный агент, связывающий GM-CSFRα человека, ингибирующий связывание GM-CSF с GM-CSFRα, причем указанный связывающий агент содержит молекулу антитела, содержащую VH-домен антитела, содержащий набор гипервариабельных участков HCDR1, HCDR2 и HCDR3 и каркасный участок, и VL-домен антитела, содержащий набор гипервариабельных участков LCDR1, LCDR2 и LCDR3 и каркасный участок, причем указанный набор гипервариабельных участков содержит HCDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 173, HCDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 4, HCDR3 с последовательностью аминокислот, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195, an LCDR1 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 8; LCDR2 с последовательностью аминокислот SEQ ID NO: 9; LCDR3 с последовательностью аминокислот, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200.
33. Связывающий агент по любому из пп.2-26 или любому из пп.31 и 32, в котором молекула антитела представляет собой молекулу гуманизированного антитела или антитела человека.
34. Связывающий агент по п.33, в котором каркасный участок VH-домена представляет собой каркасный участок VH1 DP5 или VH3 DP47 зародышевой линии человека.
35. Связывающий агент по п.33, содержащий VL-домен, в котором каркасный участок VL-домена представляет собой каркасный участок VLambda 1 DPL8, VLambda 1 DPL3 или VLambda 6_6a зародышевой линии человека.
36. Изолированная молекула антитела к GM-CSFRα человека, которая ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFRα, причем указанный связывающий агент связывает внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (Kd) 5нМ или меньше в анализе методом поверхностного плазменного резонанса, и при этом связывающий агент включает VH-домен с последовательностью аминокислот VH-домена, представляющей собой SEQ ID NO: 52 или ее вариант с одним или двумя изменениями аминокислот, и VL-домен с последовательностью аминокислот VL-домена, представляющей собой SEQ ID NO: 57 или ее вариант с одним или двумя изменениями аминокислот; причем указанные изменения аминокислот выбраны из группы, состоящей из замен, вставок и делений.
37. Связывающий агент по любому из пп.2-26, 31, 32, 34, 35, или молекула антитела по п.36, в которых молекула антитела представляет собой IgG4.
38. Связывающий агент или молекула антитела по любому из пп. по любому из пп.2-26, 31, 32, 34, 36, которые связывают внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (KD) 1нМ или менее в анализе методом поверхностного плазменного резонанса.
39. Связывающий агент или молекула антитела по п.38, которые связывают внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (KD) 0.5нМ или менее в анализе методом поверхностного плазменного резонанса.
40. Связывающий агент или молекула антитела по любому из пп.1-29, 31-32, 34-36, 39, которые имеют нейтрализующую активность IC50 60 пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7 пМ GM-CSF человека.
41. Связывающий агент или молекула антитела по п.39, которые имеют нейтрализующую активность IC50 10пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7пМ GM-CSF человека.
42. Связывающий агент или молекула антитела по любому из предыдущих пунктов, которые имеют нейтрализующую активность IC50 50пМ или менее в тесте на изменение формы гранулоцитов человека с 7пМ GM-CSF человека.
43. Связывающий агент или молекула антитела по п.42, которые имеют нейтрализующую активность IC50 25пМ или менее в тесте на пролиферацию клеток TF-1 с 7пМ GM-CSF человека.
44. Связывающий агент или молекула антитела по любому из пп.1-29, 31-32, 34-36, 39, 41-43, которые имеют нейтрализующую активность IC50 100пМ или менее в тесте на высвобождение TNFα моноцитами с 1нМ GM-CSF человека.
45. Композиция, содержащая связывающий агент или молекулу антитела по любому из предыдущих пунктов и фармацевтически приемлемый наполнитель.
46. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, кодирующую связывающий агент или молекулу антитела по любому из пп.1-44.
47. Клетка-хозяин, содержащая in vitro молекулу нуклеиновой кислоты по п.44.
48. Способ получения связывающего агента или молекулы антитела по любому из пп.1-44, включающий культивирование хозяйских клеток по п.47.
49. Способ по п.48, включающий дополнительно очищение связывающего агента.
50. Способ получения молекулы антитела к GM-CSFRα человека, включающий получение путем вставки, деления или замены одной или нескольких аминокислот в последовательности аминокислот родительского VH домена, включающего HCDR1, HCDR2 и HCDR3, VH домена, который является вариантом последовательности аминокислот родительского VH домена; в котором
родительский VH CDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 3;
родительский VH CDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 4; and
родительский VH CDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 185; и SEQ ID NO: 195; или в котором
родительский VH CDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 173,
родительский VH CDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 174,
родительский VH CDR3 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 175;
и, возможно, соединение VH домена, полученного таким образом, с одним или несколькими VL доменами, с получением одной или более комбинаций VH/VL; и тестирование VH домена или комбинации VH/VL для идентификации молекулы антитела к GM-CSFRα человека, включающее тестирование способности молекулы антитела связывать и нейтрализовать GM-CSFRα, причем молекула антитела ингибирует связывание GM-CSF с GM-CSFRα, связывает внеклеточный домен GM-CSFRα человека с аффинностью (KD) 5нМ или меньше в анализе методом поверхностного плазменного резонанса, и:
(i) связывает, по меньшей мере, один остаток из Tyr-Leu-Asp-Phe-Gln в положениях с 226 по 230 GM-CSFRα человека, последовательность которого показана в SEQ ID NO: 206;
(ii) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 60 пМ или меньше в тесте на пролиферацию клеток с 7 пМ GM-CSF человека;
(iii) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 50 пМ или меньше в тесте на изменение формы гранулоцитов с 7 пМ GM-CSF человека; и/или
(iv) обладает IC50 эффективностью нейтрализации 100 пМ или меньше в тесте на высвобождение TNFα моноцитами с 1 нМ GM-CSF.
51. Способ по п.50, в котором указанный один или более VL-доменов получают путем вставки, деления и/или замены одной или более аминокислот в последовательности аминокислот родительского VL-домена, содержащего LCDR1, LCDR2 и LCDR3; причем
родительский VL CDR1 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 8;
родительский VL CDR2 имеет последовательность аминокислот SEQ ID NO: 9; и
родительский VL CDR3 имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 190 и SEQ ID NO: 200.
52. Способ по п.50, включающий тестирование способности молекулы антитела ингибировать связывание GM-CSF человека с GM-CSFRα человека.
53. Способ получения композиции молекулы антитела, включающий получение антитела способом по любому из пп.50-52, изготовление композиции молекулы антитела, содержащей, по меньшей мере, один дополнительный компонент.
54. Применение связывающего агента или молекулы антитела по любому из пп.1-44 в производстве медикамента для лечения воспалительного, респираторного или аутоиммунного состояния или заболевания или для лечения лейкемии.
55. Применение по п.54, в котором состояние или заболевание представляет собой ревматоидный артрит, астму, хроническую обструктивную болезнь легких, аллергическую реакцию, рассеянный склероз, миелоидную лейкемию или атеросклероз.