Состав для ускорения заживления ожоговых ран
COMPOSITION FOR HEALING ACCELERATION OF THE BURN WOUNDS

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений пролиферативно–репаративных процессов в коже при термических ожогах.
Известно средство для заживления ожоговых ран - Линимент бальзамический (по Вишневскому) - комбинированный препарат для наружного применения (см. кн. – Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. Т.2. – 14-е изд., перераб., испр. и доп. -  /  М.: ООО «Издательство Новая волна»: Издатель С.Б. Дивов, 2002, с. 393-394), содержащий: деготь березовый – 3 г, ксероформ – 3 г;  вспомогательные вещества: аэросил, масло касторовое. Оказывает антисептическое и местно-раздражающее действие, ускоряет процессы регенерации.
Поставленная задача – получение средства для ускорения заживления ожоговых ран, путем использования препарата трекрезан в составе линимента, уменьшающего воспалительный процесс в ранах, размягчающего струп в более короткие сроки, предотвращающего повреждение свежеобразованной кожи и способствующего безболезненному отторжению некротизированных тканей и улучшению восстановительного процесса в тканях.
Технический результат - уменьшение воспалительного процесса в ранах и улучшение восстановительного процесса в тканях.
3
6
4
2
2
2
3
–
+
Технический результат достигается тем, что состав включает в себя известное средство, содержащее линимент бальзамический (по Вишневскому), а также дополнительно включает субстанцию разработанного в Иркутском институте химии им. А.Е. Фаворского СО РАН и официально выпускаемого Усолье-Сибирским химфармкомбинатом препарата трекрезан — трис-(2-гидроксиэтил)аммония 2-метилфеноксиацетат, формулы [2-CHCHOCHCOO] [NH (CHCHOH)].
при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Линимент бальзамический
(по Вишневскому)
98
Трекрезан
2
При таком соотношении компонентов лечебный результат был максимально эффективным и нетоксичным в ходе экспериментов.
Для приготовления состава линимент бальзамический (по Вишневскому)  49 граммов помещали  в чашку Петри, затем вносили 1г (2 %) субстанции препарата трекрезан, тщательно перемешивали до получения гомогенной массы, которую использовали в дальнейшем для лечения ожоговых ран.
Эксперименты проводили на беспородных кроликах - самцах в возрасте 5-5,5 месяцев, и массой – 3-3,5 кг в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации», утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ от 19.06.2003 г. №267 (Правила лабораторной практики в Российской Федерации Министерства здравоохранения РФ Приказ от 19 июня 2003 года № 267 http:// www.kodeks.ru (24 апреля 2010г.)).
Животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. По окончании эксперимента животных эвтаназировали методом цервикальной дислокации 5 позвонка спинного мозга, соблюдая правила «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, которые используются для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986).
Для лечения применяли вышеуказанный состав в виде мази, состоящей из линимента бальзамического (по Вишневскому) с добавлением субстанции трекрезана в соотношении компонентов 98:2 мас.%, соответственно. Полученный состав тщательно перемешивали и наносили общепринятым в медицине способом (ссылка Internet - http://www.medicfirst.ru/dermatologiya-i-venerologiya/primenenie-mazevich-povyazok.html) - на четырехслойную стерильную салфетку, приложив ее к месту ожоговой раны, после чего накрывали полиэтиленовой пленкой и забинтовывали. Исследования проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. №755). Эксперименты проводились в соответствии с официальными «Методическими указаниями по доклиническому изучению новых препаратов» и монографией И.О. Убашеева (см. кн. - Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. член.-корр. РАН, Р. У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО „Изд-во «Медицина»”, 2005. 832 с.;  см. кн. - Убашеев И. О., Назаров-Рыгтылон В. Э., Батарова С. М.  Раны и их лечение в тибетской медицине. Новосибирск: Наука, 1990. 192 с.).
о
Термический ожог кожи на спине у кроликов был вызван контактным высокотемпературным способом, который позволял получить стандартные по площади и глубине ожоги всей толщи кожи. Время экспозиции нагретой до 500С  контактной пластинки не превышало 30 секунд. Ожог наносился животным под легким эфирным наркозом.
Для морфологических исследований в определенные сроки (на 3, 7, 14, 21, 30 и 40 сутки, не разделяя ожоговую болезнь на стадии) брались кусочки поверхности кожи (участок непораженный и раневой). Их расправляли на фильтровальной бумаге, фиксировали в 10 % растворе формалина, затем проводили через спирты и заливали раствором – парафин: воск в соотношении  95:5. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилин-эозином по ван Гизону и серебрением по Футу согласно методу (см. кн. - Пирс Э. Гистохимия / Под ред. проф. В. В. Португалова. М.: Изд-во иностранной лит., 1962. 962 с.)
Статистическую обработку проводили с помощью программ ″Microsoft Excel″ и "Biostat" с использованием параметрического критерия (t-критерия Стьюдента) и непараметрического (U-критерия Манна-Уитни) с учетом малых выборок. Данные представлены в виде средних и стандартных значений ошибки – М и m соответственно. Для относительных величин рассчитывали 95% процентные доверительные интервалы. Достоверными считаются различия при р ≤ 0,05 (см. кн. - Петри А., Сэбин К.  Наглядная медицинская статистика / Пер. с англ. под ред. В.П.Леонова; 2-е изд.,перераб. и доп. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 168 с.).
Проведенное исследование позволяет выявить действие субстанции трекрезана в составе линимента бальзамического (по Вишневскому) для лечения термического ожога. Эксперименты, представленные ниже, предполагали проследить влияние субстанции трекрезана во времени, от момента нанесения раны до её полного заживления.
1 сутки
Планиметрически выясняется, что к концу первых суток после нанесения повреждения, на раневой поверхности, образуется струп из некротизированных тканей. Этот феномен характерен и для животных групп контроля (леченных только линиментом Вишневского), и для животных подопытной группы (леченных составом: линимент Вишневского в композиции с трекрезаном).
При гистологическом исследовании в коже животных в первые сутки выявляется коагуляционный некроз эпидермиса, сосочкового и сетчатого слоев дермы. Волокнистое межклеточное вещество дермы местами спаивается в общую бесструктурную массу. Наблюдается частичная фрагментация эластичных волокон. Между пучками основного вещества дермы видны лейкоциты. О проницаемости стенок кровеносных сосудов судят по появлению выраженного отека и исчезновению складок эпидермиса.
3 сутки:
2
Происходит увеличение ожоговой поверхности. Площадь раны в группе контроля достигает 29249 ± 320 мм.
2
Площадь раны, обработанной составом: линимент бальзамический (по Вишневскому) с трекрезаном заметно меньше относительно контроля - 22511 ± 210 мм.
7 сутки
:
2
2
Дальнейшее увеличение площади раневой поверхности происходило следующим образом. Площадь раны, леченной линиментом бальзамическим по Вишневскому (контроль,) достигает 33450 мм. Площадь раны, леченной составом: линимент бальзамический (по Вишневскому) с трекрезаном (опытная группа), остаётся меньше контроля (27121 мм).
Увеличение поврежденной ожогом поверхности, как неизменный фактор в процессе раневой болезни, отмечено Адамской Н.А.: [Адамская Н.А., Косова И.А., Кармазановский Г.Г., Князь В.А. «Компьютерное 3D-моделирование поверхности тела для точного планирования реконструктивных операций» // Материалы 7 Всероссийского научного форума "Радиология 2005". 31 мая-3 июня, Москва. 2005. С. 4–5].
Увеличиваются складки кожи во всех группах при утолщении струпа.
14 сутки:
2
Наступает стадия заживления. Струп уменьшается в размерах, и начинается его отделение от раневой поверхности. Лечение ожоговой раны линиментом бальзамическим (по Вишневскому) в группе контроля характеризуется размером ожоговой поверхности 28435 мм.
2
Лечение ожоговой раны составом: линимент бальзамический (по Вишневскому) в композиции с трекрезаном в опытной группе характеризуется размером ожоговой поверхности 24775 мм.
21 сутки
2
Продолжается отторжение струпа. В группе контрольных животных, леченных линиментом бальзамическим (по Вишневскому), площадь раны достигает (21023 ± 223 мм). Струп имеет жесткую поверхность, которая трудно удаляется хирургическими инструментами и мешает животным при движениях, цепляясь за стенки клетки и доставляя при этом дискомфорт.
2
В опытной группе у животных, леченных составом: линимент бальзамический по Вишневскому с трекрезаном, площадь раны уменьшается уже значительно, достигая 15408 ± 232 мм.
Проникновение в ткани активных действующих веществ создаёт условия для эпителизации поверхности раны, что приводит к размягчению и легкому удалению струпа.
У всех групп  животных, при отделении большей части струпа, в некоторых местах раны открываются участки, непокрытые эпителием.
30 сутки
2
2
Резкое уменьшение площади раневой поверхности и отторжение струпа во всех группах. Однако в группе леченных составом: линимент бальзамический (по Вишневскому) с трекрезаном, струп мягкий и не беспокоит животных, легко удаляется с помощью инструментов. Движение животных свободное, и их поведение оценивается  как положительное.  За период с 21 к 30-м суткам площадь раны (по Л.Н. Поповой) при лечении линиментом бальзамическим (по  Вишневскому) в контрольной группе уменьшается до 174,19 ± 11,5 мм. В опытной группе, получающих линимент Вишневского с трекрезаном, площадь раны уменьшается значительно, до 16,7 ± 2,2 мм, что свидетельствует об эффективности местного лечения раны составом: линимент бальзамическим (по Вишневскому), 98 мас.% с трекрезаном, 2 мас.%; причем рана полностью затягивается в среднем уже через двое суток.
40 сутки
К сороковым суткам лечения в контроле раны затягиваются. При использовании состава: линимент бальзамический (по  Вишневскому) с трекрезаном это происходит к тридцать вторым суткам и без образования рубца.
В обеих группах наблюдается интенсивное зарастание шерстью здоровой кожи.
Гистологическое исследование
Развитие ожоговой раны во всех случаях происходит по одной и той же схеме. Отличаются только сроки заживления ожоговых поражений. Поэтому представляется целесообразным во избежание многословия дать гистологическое описание развития ожога лишь на примере контрольной группы животных, получавших лечение только линиментом Вишневского.
В коже животных в первые сутки выявляется коагуляционный некроз эпидермиса, сосочкового и сетчатого слоев дермы. Волокнистое межклеточное вещество дермы местами спаивается в общую бесструктурную массу. Наблюдается частичная фрагментация эластичных волокон. Между пучками основного вещества дермы видны лейкоциты. О проницаемости стенок кровеносных сосудов судят по появлению выраженного отека и исчезновению складок эпидермиса.
К седьмым суткам у всех кроликов наблюдается отграничение омертвевших участков кожи от жизнеспособных тканей и пролиферация эпидермиса под струпом.
К четырнадцатым суткам у всех животных раневая поверхность уменьшается благодаря эпителизации её краевых частей. Видно формирование сосочков, волосяных фолликул и сальных желез. Жизнеспособные клетки пласта, окружающего дефект, продвигаются со всех сторон под струп, эпителизируя поверхность одновременно образующейся грануляционной ткани.
К двадцать первым суткам и у контрольных животных и у кроликов опытной группы под растущим эпидермальным регенератом постепенно появляется тонкий слой грануляционной ткани. К этому же времени происходит очистка в соединительной ткани от омертвевших компонентов дермы и придатков кожи. В поверхностных частях раны клетки грануляционной ткани располагаются без видимой ориентировки. В более глубоких слоях заметно уменьшается  количество сосудистых петель и клеток. При этом межклеточное вещество приобретает выраженное волокнистое строение; кое-где волокна оформляются в более или менее толстые пучки, что отчетливо наблюдается в контрольной группе.
Вместе с тем, у животных опытной группы начинается интенсивное заживление с образованием грануляционной ткани, основная масса которой состоит из развившихся кровеносных сосудов. Грануляционная ткань формируется из эндотелиальных отпрысков кровеносных сосудов, сопровождаемых адвентициальными клетками и пролиферирующими соединительными элементами.
К тридцатым суткам происходит заживление с образованием грануляционной ткани, основная масса которой состоит из развившихся кровеносных сосудов. Грануляционная ткань формируется из эндотелиальных отпрысков кровеносных сосудов, сопровождаемых адвентициальными клетками и пролиферирующими соединительными элементами. Эндотелиальные тяжи превращаются в полые трубки и далее образовывают сложно анастомозирующие широкие капилляры. В межсосочковых промежутках пальцевидные отростки сети направлены к эпидермису, а на вершине сосочка от сети отходят длинные аргирофильные волокна.
К тридцать третьим суткам у кроликов, леченных составом: линимент бальзамический (по Вишневскому) с трекрезаном, регенерат на большей части своего протяжения имеет многослойное строение.
К сороковым суткам у животных, леченных только линиментом Вишневского (контроль), регенерат на большей части своего протяжения имел многослойное строение.
Проведенные эксперименты показывают, что новое средство - состав на основе линимента бальзамического (по Вишневскому) с трекрезаном  эффективно при лечении термических ожогов. Заживление ожогового поражения в этом случае происходит на неделю раньше, чем у животных, леченных только линиментом Вишневского. Действие состава направлено на уменьшение воспалительного процесса, размягчение струпа, предотвращающее повреждение свежеобразованной кожи и способствующее безболезненному отторжению некротизированных тканей.
Предлагаемый состав для наружного применения прост в изготовлении, для его получения не требуется дорогостоящего оборудования, входящие в него компоненты доступны и дёшевы.
Литературные источники информации, принятые во внимание
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в. 2 т. Т.2. – 14-е изд., перераб., испр. и доп. - / М.: ООО «Издательство Новая волна»: Издатель С.Б. Дивов, 2002, с. 393-394.
2. Гусейнов Ш.Л., Стороженко П.А., Малашин А.С. Технология производства нанодисперсных порошков // Все материалы. Энциклопедический справочник. 2010. 11. с. 4-10.
3. http://www.medicfirst.ru/dermatologiya-i-venerologiya/primenenie-mazevich-povyazok.html
4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. член.-корр. РАН, Р. У. Хабриева. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО „Изд-во «Медицина»”, 2005. 832 с.
5.  Убашеев И. О., Назаров-Рыгтылон В. Э., Батарова С. М.  Раны и их лечение в тибетской медицине. Новосибирск: Наука, 1990. 192 с.
6.  Пирс Э. Гистохимия / Под ред. проф. В. В. Португалова. М.: Изд-во иностранной лит., 1962. 962 с.
7. Петри А., Сэбин К.  Наглядная медицинская статистика / Пер. с англ. под ред. В.П.Леонова; 2-е изд.,перераб. и доп. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 168 с.
8. Адамская Н.А., Косова И.А., Кармазановский Г.Г., Князь В.А. Компьютерное 3D-моделирование поверхности тела для точного планирования реконструктивных операций // Материалы 7 Всероссийского научного форума "Радиология 2005". 31 мая-3 июня, Москва. 2005. С. 4–5.