АНТИПРОЛИФЕРАТИВНОЕ СРЕДСТВО
ANTIPROLIFERATIVE AGENT

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственных средств природного происхождения и может быть использовано для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ).
ДГПЖ является одним из наиболее частых заболеваний мужчин пожилого возраста [Аляев Ю.Г., Винаров А.З., Локшин К.Л., Спивак Л.Г. Новое в консервативной терапии больных гиперплазией предстательной железы // Consilium medicum. - 2008. - №4. - С.45-49]. Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин старше 50 лет и 90% мужчин старше 80 лет. Клинические симптомы заболевания диагностируются у большинства мужчин старше 50 лет [Dhingra N., Bhagwat D. Benign prostatic hyperplasia: an overview of existing treatment // Ind. J. Pharmacol. - 2011. - Vol.43, N 1. - P.6-12]. По данным эпидемиологических исследований, проведенных в России, частота ДГПЖ увеличилась с 11,3% среди 40-50-летних до 81,4% у 80-летних мужчин [Рациональная фармакотерапия в урологии / Под ред. Н.А. Лопаткина, Т.С. Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].
Известно применение гомеопатического препарата рододендрона для лечения доброкачественных опухолей [Пат. РФ №2207868]. Его недостатком является необходимость индивидуального подбора дозы для каждого больного, что затрудняет применение в амбулаторной практике.
Известно применение отвара корня солодки голой для лечения хронического простатита [Пат. РФ №2058152]. Недостатками данного средства являются нестойкая при хранении и неудобная для приготовления лекарственная форма, слабый симптоматический эффект при хроническом простатите без терапевтического воздействия на патогенез заболевания, что не исключает возникновение рецидивов.
Известно применение препарата растительного происхождения для лечения простатита и аденомы предстательной железы в виде комплексной терапии, включающей средства для перорального и ректального применения [Пат. РФ №2275929]. Данное средство оказывает противовоспалительное действие, но не тормозит пролиферативные процессы в предстательной железе. Лечебный эффект при доброкачественной гиперплазии предстательной железы наступает только при сочетанном приеме средства внутрь и ректальном введении в форме клизм, что создает неудобства для амбулаторных больных.
Известно лечебно-профилактическое средство «Простанорм» для лечения простатитов, уретритов и других воспалительных заболеваний мочеполовой сферы, включающее корень солодки голой, траву зверобоя продырявленного, траву золотарника канадского, корни с корневищами эхинацеи пурпурной, взятые в равных пропорциях [Пат РФ №2098119]. Это средство также оказывает только противовоспалительный эффект и не обладает антипролиферативным действием при доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
Для лечения и профилактики ДГПЖ применяют более 10 групп лекарственных средств, хотя доказана терапевтическая эффективность только α-адреноблокаторов, ингибитора 5α-редуктазы финастерида и растительных средств - экстрактов американской вееролистной пальмы Serenoa repens (пермиксон, простамол) и камерунской сливы Pygeum africanum (трианол) [Рациональная фармакотерапия в урологии / Под ред. Н.А. Лопаткина, Т.С. Перепановой. - М.: Литтерра, 2006. - С.30-42].
В свете сказанного актуальным является поиск препаратов, обладающих комплексным влиянием на регуляторные механизмы, запускающие каскад физиологических изменений, которые приводят к возникновению такой серьезной патологии как ДГПЖ.
Наиболее близким к предлагаемому решению является средство по патенту CN101884759, взятое в качестве прототипа.
Задача изобретения - расширение арсенала средств природного происхождения на основе отечественного сырья, эффективных при лечении ДГПЖ.
Технический результат достигается тем, что в качестве антипролиферативного средства используют липиды пантов марала.
Экстракцию липидов из пантов марала осуществляют смесью растворителей этанол : этилацетат : вода при их соотношении, мас.ч., 1:1:1 и соотношении сырье : экстрагент 1:10 мас.ч. тремя последовательными мацерациями по 4 ч. каждая. Полученный экстракт концентрируют в вакуумном выпарном аппарате и досушивают в испарителе.
Эксперименты проводили на 120 аутбредных белых крысах самцах позднего репродуктивного возраста (8-10 мес) массой 500-550 г, выращенных в конвенциональных условиях в клинике лабораторных животных НИИ фармакологии СО РАМН. Антипролиферативное влияние липидов пантов марала оценивали на модели ДГПЖ, вызванной ежедневным внутрибрюшинным введением сульпирида (эглонил, раствор в ампулах, Sanofi-Winthrop Industrie, Франция) в дозе 40 мг/кг в течение 60 сут. На протяжении эксперимента крысам вводили в желудок липиды пантов марала в виде суспензии на 1% крахмальной слизи в дозах 10, 30, 60 мг/кг. В качестве референтного препарата применяли экстракт Serenoa repens пермиксон (Pierre Fabre Medicament Production, Франция) в дозе 50 мг/кг (по экстракту Serenoa repens). Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. Через 60 сут крыс декапитировали под эфирным наркозом. Взвешивали переднюю, боковую и заднюю доли предстательной железы. Для гистологического исследования боковую и заднюю доли фиксировали 10% нейтральным формалином, депарафинированные срезы окрашивали гематоксилином-эозином. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы определяли содержание белка, диеновых конъюгатов, скорость образования малонового диальдегида, количество восстановленного глутатиона, активность селензависимой глутатионпероксиазы и супероксиддисмутазы. В плазме крови анализировали содержание пролактина, тестостерона и 5α-дигидротестостерона иммунофлуоресцентным методом (наборы DRG International, США).
Статистическую обработку результатов проводили методом парных сравнений с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни при вероятности ошибочного вывода, не превышающей 5% (р≤0,05).
2
Сульпирид, блокируя рецепторы D дофамина в тубероинфундибулярной системе, значительно увеличивает секрецию стимулятора пролиферации предстательной железы пролактина с развитием экспериментальной ДГПЖ. При введении сульпирида в течение 60 сут масса передней доли предстательной железы не изменялась, масса боковой и задней долей и весовые коэффициенты (отношение массы железы к массе тела животных) становились в 1,8-2,1 раза больше, чем у интактных животных (табл.1). При гистологическом исследовании предстательной железы определялись увеличенное число ацинусов с папиллярным разрастанием эпителия в форме сосочков. Строма между ацинусами содержала большое количество гипертрофированных гладких мышц, грубых коллагеновых волокон, была инфильтрирована нейтрофилами, лимфоцитами, макрофагами, тучными клетками. Расширенный просвет ацинусов заполнялся ацидофильной массой и нейтрофилами. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы в 1,6 раза увеличивалось содержание белка и активировалось перекисное окисление липидов на фоне ингибирования антиперекисной защиты. Содержание диеновых конъюгатов повышалось в 2,1 раза по сравнению с их количеством в норме, продукция малонового диальдегида в присутствии аскорбата ускорялась в 2,2 раза, после добавления NADP·H - в 2,7 раза. Содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы уменьшались в 1,7-2,2 раза. В сыворотке крови крыс с экспериментальной ДГПЖ содержание пролактина возрастало в 5,8 раза, 5α-дигидротестостерона - в 1,5 раза, количество тестостерона снижалось в 3,2 раза (табл.2).
Липиды пантов марала в дозах 10, 30 и 60 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг эффективно препятствовали прогрессированию экспериментальной ДГПЖ, вызванной инъекциями сульпирида у крыс самцов позднего репродуктивного возраста. В дозе 10 мг/кг липиды пантов марала и экстракт Serenoa repens снижали массу боковой и задней долей предстательной железы в 1,4-1,5 раза, хотя она оставалась в 1,3-1,4 раза больше, чем в норме. В дозах 30 и 60 мг/кг липиды пантов марала уменьшали массу боковой и задней долей в 1,8-2,1 раза, при этом масса становилась такой же, как у интактных животных. Весовые коэффициенты снижались в 1,8-2,1 раза. Антипролиферативное действие липидов пантов марала в дозах 30 и 60 мг/кг превосходило эффект экстракта Serenoa repens (табл.1).
Для углубленного исследования антипролиферативного действия при модели ДГПЖ липиды пантов марала вводили в дозе 30 мг/кг. Под влиянием экспериментальной терапии липидами пантов марала в ткани боковой и задней долей предстательной железы сокращалась площадь эпителиальных структур на фоне расширения просвета ацинусов. Ткань предстательной железы состояла из отдельных железок, разделенных узкими пучками соединительной ткани с гладкомышечными клетками, коллагеновыми и эластическими волокнами нормального строения. Клеточная инфильтрация интерстиция отсутствовала, в ацинусах не определялись лейкоциты. При введении экстракта Serenoa repens сохранялась умеренная лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы экспериментальная терапия липидами пантов марала сопровождалась снижением содержания белка в 1,5 раза, при действии экстракта Serenoa repens - в значительно меньшей степени, в 1,3 раза (табл.2).
Липиды пантов марала оказывали выраженное антиоксидантное действие. В гомогенатах боковой и задней долей предстательной железы содержание продуктов перекисного окисления липидов и показатели антиперекисной защиты - количество восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы нормализовались. Содержание диеновых конъюгатов уменьшалось в 2,2 раза, продукция аскорбат- и NADP·H-зависимого малонового диальдегида замедлялась в 1,8-2,1 раза, содержание глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышались в 1,5-2 раза по сравнению с показателями при модели ДГПЖ. При введении экстракта Serenoa repens интенсивность липопероксидации снижалась в 1,4-1,8 раза, активность антиперекисной защиты возрастала в 1,3-1,5 раза (различия с эффектами липидов пантов марала достоверны только для содержания диеновых конъюгатов). Скорость продукции малонового диальдегида превышала скорость в норме в 1,4-1,5 раза, содержание восстановленного глутатиона, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы оставались сниженными в 1,4 раза (табл.2).
В крови крыс, получавших липиды пантов марала, содержание пролактина снижалось втрое по сравнению с уровнем гормона у крыс, которым вводили только сульпирид, но оно в 1,9 раза превышало норму. При введении экстракта Serenoa repens содержание в крови пролактина уменьшалось в меньшей степени - в 1,5 раза, оставаясь в 3,8 раза выше нормы и вдвое больше, чем при введении липидов пантов марала. Содержание мужских половых гормонов в крови крыс, защищенных липидами пантов марала и экстрактом Serenoa repens, изменялось в одинаковой степени и становилось близким к количеству гормонов у интактных животных - содержание тестостерона повышалось в 2,2-2,6 раза, 5α-дигидротестостерона - снижалось в 1,5-1,7 раза по сравнению с количеством этих гормонов, измеренном при введении одного сульпирида (табл.2).
Таким образом, при модели ДГПЖ, вызванной введением стимулятора секреции пролактина сульпиридом крысам самцам позднего репродуктивного возраста, липиды пантов марала в эффективной дозе 30 мг/кг и экстракт Serenoa repens в дозе 50 мг/кг, препятствовали развитию гиперплазии боковой и задней долей предстательной железы, разрастанию ее эпителия и воспалительной инфильтрации. Оба препарата оказывали выраженное антиоксидантное действие и изменяли в сторону нормы гормональный баланс. При экспериментальной ДГПЖ липиды пантов в большей степени, чем экстракт Serenoa repens, сдерживали увеличение массы боковой и задней долей предстательной железы, продукцию первичных продуктов липопероксидации - диеновых конъюгатов и развитие гиперпролактинемии.
Судя по росту уровня тестостерона и снижению количества 5α-дигидротестостерона, в крови крыс, получавших на фоне инъекций сульпирида липиды пантов марала, этот препарат ингибирует 5α-редуктазу и тормозит восстановление тестостерона в 5α-дигидротестостерон - стимулятор пролиферации ткани предстательной железы. В механизме антипролиферативного эффекта липидов пантов марала большое значение имеет антиоксидантное действие. Продукты липопероксидации стимулируют пролиферацию эпителия и соединительной ткани в предстательной железе.
Таблица 1
Влияние липидов пантов марала в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) на массу предстательной железы при модели ее доброкачественной гиперплазии (<maths num="1"><math display="block"><mrow><mover accent="true"><mtext>X</mtext><mo stretchy="true">¯</mo></mover><mo>±</mo><mtext>S</mtext><mover accent="true"><mtext>x</mtext><mo stretchy="true">¯</mo></mover></mrow></math><img file="00000001.tif" he="5" wi="14" img-content="undefined" img-format="tif" /></maths>
; n=10)
Показатель
Интактные животные
Сульпирид
Липиды пантов марала
Экстракт Serenoa repens
10 мг/кг
30 мг/кг
60 мг/кг
+ сульпирид
Масса крыс, г
510,6±7,5
523,4±8,7
525,7±8,4
512,8±17,6
529,4±19,6
529,6±11,5
Передняя доля предстательной железы
масса, мг
191,8±12,7
194,7±10,5
187,1±11,3
184,8±12,2
192,0±18,2
190,9±12,0
весовой коэффициент, мг/г
0,38±0,05
0,37±0,04
0,36±0,03
0,36±0,05
0,35±0,04
0,36±0,02
Боковая доля предстательной железы
масса, мг
43,6±2,9
87,9±7,1*
59,2±3,0*<sup>+</sup>
42,4±4,5<sup>+</sup>
43,9±4,3<sup>+</sup>
64,5±3,5*<sup>+#</sup>
весовой коэффициент, мг/кг
0,08±0,01
0,17±0,02*
0,11±0,02
0,08±0,01<sup>+</sup>
0,08±0,02<sup>+</sup>
0,12±0,02
Задняя доля предстательной железы
масса, мг
49,6±3,8
96,7±4,8*
62,6±3,7*<sup>+</sup>
48,3±5,2<sup>+</sup>
52,6±3,4<sup>+</sup>
70,2±4,0*<sup>+#</sup>
весовой коэффициент, мг/кг
0,10±0,02
0,18±0,02*
0,12±0,03
0,09±0,02<sup>+</sup>
0,10±0,02<sup>+</sup>
0,13±0,02
Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем * - интактных животных, <sup>+</sup> - при введении сульпирида, <sup>#</sup> - при введении липидов пантов марала в дозах 30 и 60 мг/кг.
Таблица 2
Влияние липидов пантов марала на липопероксидацию и содержание гормонов в сравнении с действием экстракта Serenoa repens (пермиксон) при модели доброкачественной гиперплазии предстательной железы (<maths num="2"><math display="block"><mrow><mover accent="true"><mtext>X</mtext><mo stretchy="true">¯</mo></mover><mo>±</mo><mtext>S</mtext><mover accent="true"><mtext>x</mtext><mo stretchy="true">¯</mo></mover></mrow></math><img file="00000001.tif" he="5" wi="14" img-content="undefined" img-format="tif" /></maths>
; n=10)
Показатель
Интактные животные
Сульпирид
Липиды пантов марала
Экстракт Serenoa repens
+ сульпирид
Гомогенат предстательной железы
Белок, мг/г ткани
120,7±7,9
197,4±10,3*
129,0±5,9<sup>+</sup>
156,8±7,3*<sup>+#</sup>
Диеновые конъюгаты, мкмоль/г ткани
18,6±1,5
38,7±2,7*
17,9±l,6<sup>+</sup>
26,8±3,4<sup>+#</sup>
Малоновый диальдегид, нмоль/мг белка·мин:
аскорбатзависимый
0,44±0,03
0,98±0,07*
0,55±0,06<sup>+</sup>
0,63±0,07*<sup>+</sup>
NADP·H-зависимый
0,57±0,06
1,54±0,06*
0,75±0,08<sup>+</sup>
0,88±0,09*<sup>+</sup>
Восстановленный глутатион, нмоль/мг белка
5,2±0,4
2,4±0,3*
4,8±0,7<sup>+</sup>
3,5±0,5*<sup>+</sup>
Глутатионпероксидаза, нмоль NADP·H/ г ткани·мин
2528±123
1478±96*
2198±119<sup>+</sup>
1865±114*<sup>+</sup>
Супероксиддисмутаза, Е/мг белка
0,87±0,07
0,41±0,05*
0,69±0,08<sup>+</sup>
0,61±0,06*<sup>+</sup>
Сыворотка крови
Пролактин, нг/мл
10,9±1,8
62,7±3,3*
21,l±2,5*<sup>+</sup>
41,7±5,3*<sup>+#</sup>
Тестостерон, пг/мл
2187±312
673±57*
1765±164<sup>+</sup>
1460±97<sup>+</sup>
5α-Дигидротестостерон, пг/мл
179,7±10,9
265,9±23,4*
171,6±13,5<sup>+</sup>
158,7±17,9<sup>+</sup>
Примечание. Р<0,05: по сравнению с показателем * - интактных животных, <sup>+</sup> - при введении сульпирида, <sup># </sup>- при введении липидов пантов марала.