Рекомбинантный вакцинный препарат пролонгированного действия для профилактики чумы у млекопитающих и человека и способ его получения

1. Рекомбинантный вакцинный препарат пролонгированного действия для профилактики чумы у млекопитающих и человека, содержащий биодет радируемый полимер и рекомбинантные очищенные антигены чумного микроба F1 и V, отличающийся тем, что он представляет собой смесь высокодисперсного сорбента и микрокапсул V и F1 антигенов, микрокапсулированных и высушенных раздельно, состоящих из пористого ядра, образованного высушенным гелем из поливинилового спирта, поливинилпирролидона или другого подходящего водорастворимого полимера, с распределенным в нем сухим белковым антигеном, твердой непроницаемой для жидкостей и малопроницаемой для газов полимерной оболочки из гидрофобного полимера, например поли(D,L-лактида) либо поли(D,L-лактида-когликолида), и поверхностно-активного вещества, например Tween 20, Tween 80 или Pluronic 68 (не более 10 мкг на 1 мг препарата).
2. Способ получения микрокапсулированной вакцины путем выпаривания растворителя из двойной эмульсии типа «вода в масле/в воде», где первичная водная фаза представляет собой водный раствор белкового антигена и биосовместимого полимера, масляная фаза состоит из раствора гидрофобного полимера и стабилизирующей добавки в легколетучем органическом растворителе, а вторичная водная фаза представляет собой водный раствор биосовместимого полимера и ПАВ-эмульгатора, и последующей сублимационной сушки замороженной суспензии, отличающийся тем, что первичную водную фазу получают путем растворения белковых V антигена и F1 антигена в водных растворах полимера-гелеобразователя, причем оболочка микрокапсул образуется нерастворимыми в виде полимерами при удалении органического растворителя, и поверхностно-активным веществом, после окончания микрокапсулирования растворенные в водной фазе не включившиеся в микрокапсулы антигены сорбируются тонкодисперсным биосовместимым сорбентом, вводимым в состав препарата, а окончательная структура препарата формируется при сублимационном высушивании замороженной суспензии микрокапсул в водных растворах.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве белковых антигенов одновременно используют иммуногенный полипептид LcrV(G113), экспрессируемый рекомбинантным штаммом Е. coli BL21(DE3)/pETV-I-3455, и иммуногенный белок F1, формирующий капсулу Y. pestis.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что водный раствор полимера в первичной эмульсии представляет собой раствор поливинилового спирта, либо декстрана, либо раствор полиакриловой кислоты.
5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что «масляную» дисперсионную среду в эмульсии образует один из органических растворителей; дихлорметан, трихлорметан (хлороформ) или этанол, а растворенным гидрофобным полимером является поли(D,L-лактид) или сополимер молочной и гликолевой кислот поли-(D,L-лактид-когликолид) молекулярной массой от 5000 до 150000 Да в концентрации от 5 до 30 вес. %; или блок-сополимер одного из указанных полимеров и гидрофильного водорастворимого полимера, например полиоксиэтилена молекулярной массой от 5000 до 20000 Да.
6. Способ по п. 2, отличающийся тем, что вторичную водную фазу образует 0,5-1,5% водно-солевой буферный раствор на базе 0,05 М фосфатного буфера и соли NaCl с добавлением 0,1-2,0% одного из полимеров: поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, декстран, крахмал, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и стабилизатора эмульсии Tween 20 до конечной концентрации 0,05-0,1%.
7. Способ по п. 2, отличающийся тем, что во вторичную водную фазу после формирования микрокапсул вводят тонкодисперсный биосовместимый сорбент белковых антигенов, например оксид алюминия, или гидроксид алюминия, или соли алюминия (гель фосфата алюминия и др.), или любой другой высокодисперсный и биосовместимый твердый сорбент с достаточной сорбционной емкостью по белковым антигенам F1 и V, например фосфат магния.