Способ оценки лечебного эффекта фотодинамической терапии при железистых раках желудочно-кишечного тракта
METHOD OF THERAPEUTIC EFFECT ESTIMATION OF PHOTODYNAMIC THERAPY IN IRON-CANCER OF THE GASTROINTESTINAL TRACT

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике в онкологии, и может применяться для оценки эффективности фотодинамической терапии (ФДТ) железистого рака желудочно-кишечного тракта.
Известен способ оценки цитотоксической эффективности ФДТ в клетках остеосаркомы [Meier, D., Campanile, С., Botter, S.М., Born, W., Fuchs, В. Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro. J. Vis. Exp. (85), e51213, doi:10.3791/51213 (2014)].
Устанавливают оптимальные настройки процедуры ФДТ in vitro для эффективного лечения широко используемых клеточных линий остеосаркомы, которые используются для воспроизведения заболевания человека в моделях остеосаркомы большеберцовой кости мыши. Поглощение фотосенсибилизатора mTHPC оценивают с помощью спектрофотометра, и фототоксичность провоцируют лазерным светом возбуждения mTHPC на 652 нм, вызывая гибель клеток, которая оценивается WST-1 анализом и подсчетом выживших клеток по показателю их метаболической активности.
Недостатками этого способа являются: 1) он не является экспресс-методикой и оценивает только косвенные признаки эффективности ФДТ; 2) сложность программы и дороговизна получения клеточных линий; 3) большие затраты на проведение анализа WST-1 и его высокая специфичность; 4) требование дорогого лабораторного оборудования для проведения высокоточных анализов.
Ближайшим к заявляемому является способ оценки лечебного эффекта фотодинамической терапии при лечении раннего рака желудка, при котором оценка эффективности проводится через месяц после сеанса ФДТ или комбинированного лечения с использованием ФДТ и эндоскопических методик удаления опухоли. Результаты ФДТ оценивают по общепринятым критериям ВОЗ, учитывающим клиническую (эндоскопическую) динамику со стороны опухоли и результаты гистологического исследования биопсийного материала [Романов В.Ф., Странадко Е.Ф., Решетников А.В., Смирнов Е.А. Результаты лечения раннего рака желудка методом фотодинамической терапии. Материалы III Всероссийской конференции «Фотодинамическая терапия и Фотодиагностика». - 2014. - Т. 1. - стр 36].
Недостатки способа, выбранного в качестве прототипа, следующие.
1. Он не позволяют оценивать таргетные эффекты под лучом и не является экспресс-методом.
2. Данную методику можно использовать только при оценке эффекта лечения ранних опухолей.
Задачей данного изобретения является повышение информативности оценки при обеспечении экспресс-диагностики.
Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в способе оценки лечебного эффекта фотодинамической терапии (ФДТ) при железистых раках желудочно-кишечного тракта, включающем проведение ФДТ и последующее исследование состояния облученных тканей, до проведения ФДТ разделяют пополам один метастатический лимфоузел абдоминальной зоны лимфодиссекции и одну половину удаляют, а облучению подвергают вторую половину лимфоузла, после чего облученную половину также удаляют, затем сравнивают процентное содержание «голых ядер» атипичных клеток в облученной и необлученной половинах лимфоузла и при превышении процентного содержания «голых ядер» в облученной половине лимфоузла по сравнению с необлученной не менее чем вдвое оценивают эффект ФДТ как положительный.
Сравнение содержания «голых ядер» в облученных и необлученных половинах лимфоузлов позволяет оценить эффект ФДТ в популяции опухолевых клеток, т.к. процент «голых ядер» в клетках прямо указывает на цитотоксические таргетные эффекты ФДТ, а самое главное, всегда есть возможность оценить исходное значение интактного контрольного уровня - частоты «голых ядер», установленной параллельно в цитологических препаратах, полученных из интактных, не подвергнутых ФДТ, лимфоузлов.
Поскольку цитологические мазки-отпечатки получают прямо в операционной во время сеанса ФДТ, полученные мазки передаются в лабораторию, где они окрашиваются фиксатором-красителем и в них определяют значения частот «голых ядер». Время на получение цитологических препаратов, их окрашивание и микроскопирование не превышает 2-3 часов.
Помимо атипичных большую часть клеток на мазке-отпечатке составляют незлокачественные, что позволяет оценить возможные цитотоксические эффекты и на них. Это необходимо, чтобы выяснить, какие клетки подвергаются воздействию ФДТ с образованием «голых ядер».
Все эти обстоятельства позволяют повысить информативность оценки эффективности ФДТ при железистых раках желудочно-кишечного тракта при ускорении диагностики.
Способ осуществляется следующим образом. Перед операциями по поводу железистого рака желудочно-кишечного тракта пациентам вводят внутривенно радахлорин или фотодитазин (за 2-2,5 часа до операции в дозировке 1,3-1,5 мг/кг). Во время операции один из лимфоузлов зоны абдоминальной лимфодиссекции предварительно до облучения разделяют пополам. Отделенная часть узла отпечатывается на предметное стекло для цитологических исследований. Оставшаяся in vivo часть лимфоузла попадает в зону облучения установкой Фара-2 с экспозицией 20 мин во время проведения запланированного сеанса ФДТ. Затем облученную половину узла через 30-180 минут удаляют и от нее также получают мазок-отпечаток на предметном стекле. Все препараты окрашиваются азур-эозином по Романовскому, после чего изучаются с помощью световой микроскопии под увеличением 400х, определяют процентное содержание «голых ядер» атипичных клеток. Рассчитанный процент «голых ядер» в препарате, полученном от облученной половины лимфоузла, сравнивают с этим показателем в препарате от необлученной половины. При превышении процента «голых ядер» в облученной половине не менее чем вдвое по сравнению с необлученной половиной оценивают эффект ФДТ как положительный.
Пример 1. Больная Б. поступила 20.01.2016 г. в Мариинскую Больницу Санкт-Петербурга с диагнозом аденокарцинома пищевода. За 2 часа до резекции пищевода пациентке был внутривенно введен препарат радахлорин. В соответствии с заявляемым способом во время операции половина лимфоузла была удалена перед сеансом ФДТ, оставшаяся же часть в течение 20 минут находилась в зоне облучения Фары-2, после чего также удалялась. По результатам исследования в мазках-отпечатках, полученных от необлученной половины лимфоузла (исходный контрольный уровень), «голые ядра» обнаружены не были, т.е. частота «голых ядер» составила 0%, а в мазках-отпечатках половины того же лимфоузла после ФДТ этот показатель составил 10%. Следовательно, сделано заключение о значимом (более чем вдвое) эффекте ФДТ.
Пример 2. Больной А. поступил 15.07.2016 г. в Мариинскую Больницу Санкт-Петербурга с диагнозом аденокарцинома желудка. За 3 часа до резекции желудка пациентке был внутривенно введен препарат фотодитазин. В соответствии с заявляемым способом во время операции половина лимфоузла 8а (классификация японской ассоциации изучения рака желудка) была удалена перед сеансом ФДТ, оставшаяся же часть в течение 40 минут находилась в зоне облучения Фары-2, после чего также удалялась. По результатам исследования в мазках-отпечатках, полученных от необлученной половины лимфоузла (исходный контрольный уровень) частота «голых ядер» составила 17%, а в мазках-отпечатках половины того же лимфоузла после ФДТ этот показатель составил 54%. Следовательно, сделано заключение о значимом (более чем вдвое) эффекте ФДТ.
Заявляемый способ позволяет в первые часы оценивать таргетные эффекты сеанса ФДТ, которые возникают под лучом, для чего собственно и предназначена ФДТ. Он может применяться повсеместно в клиниках, где проводится хирургическое лечение рака с сеансами ФДТ. Для его осуществления достаточно рутинных методов, стандартно выполняемых в клинико-диагностической лаборатории, и сертифицированного врача-лаборанта. Для проведения диагностики не требуется повторное присутствие пациента после операции; способ осуществляется за короткое время за счет простоты и удобства, не требует дорогостоящих реактивов.
Способ позволяет упростить и сделать более удобным проведение оценки эффективности ФДТ. Он не требует специального оборудования и дополнительных клинических или инструментальных исследований.