ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATMENT OF VIRAL DISEASES

Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным препаратам на основе пептидов, и, в частности, к препаратам, используемым при лечении вирусных заболеваний, таких как грипп и острое респираторное вирусное заболевание (ОРВИ). Эти заболевания, достаточно тяжелые сами по себе (особенно грипп), часто вызывают постинфекционные осложнения, такие как пневмония, бронхиты различной этиологии, воспаление гайморовых или лобных пазух и т.д.
Известно средство для лечения гриппа и ОРВИ, которое сокращает продолжительность заболевания и снижает число постинфекционных осложнений, а именно - рекомбинантный (экзогенный) интерферон-альфа, который применяют в виде инъекций не менее 40000 единиц по 2 раза в день в течение 10 дней [Н.Г.Перминов и др. Реаферон. Кольцово, 1993, с.69-71].
Недостатком препарата является риск возникновения побочных эффектов, среди которых наиболее частыми являются озноб, лихорадка, головная боль, снижение массы тела, аллергические реакции, лейко- и тромбоцитопения. Кроме того, при назначении экзогенного интерферона существует риск формирования специфических противоинтерфероновых антител, которые могут полностью нейтрализовать введенный экзогенный препарат [Лечение интерфероном. Доклад научной группы ВОЗ. Серия технических докладов 676. Женева. 1984; Hoshino. А., et al. // Antiviral Res. 1983, vol.3. P.59-65].
Также известны химические соединения, способные индуцировать синтез эндогенного интерферона у пациента. Эти соединения - дипептиды, такие как альфа-глутамил-триптофан (α-glu-trp) и альфа-лизил-глутамин (α-lys-glu). Эндогенный интерферон более эффективен при лечении вирусных инфекций, чем экзогенный, так как введение индуктора интерферона не вызывает избыточного образования интерферона, вследствие чего отсутствуют побочные явления, связанные с возможной передозировкой, а также у пациента не образуются противоинтерфероновые антитела к постороннему интерферону. Пептидные индукторы безопасны при терапевтическом применении [Морозов В.Г. и др. Пептидные тимомиметики. СПб, «Наука», 2000, с.19, 33].
A-glu-trp способен восстанавливать показатели иммунитета, сниженные при миксовирусных (вызывающих грипп) инфекциях [Смирнов B.C., Селиванов А.А. Регуляторы в профилактике и лечении гриппа. СПб, «Наука», 196 с.]. Он обладает профилактическим эффектом, который имеет продолжительность не более 2 месяцев, после чего восприимчивость к вирусу не только восстанавливается, но может увеличиться. На фоне уже развившейся инфекции применение α-glu-trp не оказывает существенного влияния на течение и исход патологического процесса.
Дипептид γ-glu-trp по своим биологическим свойствам является близким аналогом α-glu-trp и проявляет равную с ним эффективность [Li Kam Wa T.G. et al. / Brit. J. Clin. Pharmacol., 1996, 42, p.365-370].
Дипептид α-lys-glu, содержащийся в молекуле тимозина-альфа [Caldarella J. et al. Proc. Nati. Acad. Sei. USA, 1983, 80, p.7424-7427] также обладает иммуномодулирующими свойствами.
Известна фармацевтическая композиция для парентерального введения, включающая 0,001-0,01% масс γ-glu-trp в форме ацетата и фармакологически приемлемую добавку, например 5% водный раствор глицина, 6% раствор полиглюкина в физиологическом растворе, и т.п. [RU патент №2120298, М. кл. A61K 38/05, 1998]. Указанная композиция использовалась для коррекции иммунодефицита у онкологических больных; однако при лечении вирусных заболеваний, таких как грипп и ОРВИ, она малоэффективна.
Наиболее близкой к заявляемой композиции по совокупности существенных признаков является фармацевтическая композиция «Цитовир-3», включающая 0,001-0,01% масс дипептида, а также гидрохлорид-2-бензилбензимидазол и аскорбиновую кислоту [RU патент №2165254, М. кл. A61K, 1991]. В качестве дипептида композиция содержит мононатриевую соль α-glu-trp, который вызывает индукцию эндогенного интерферона-альфа, наиболее эффективного в начале инфекционного вирусного заболевания. Гидрохлорид-2-бензилбензимидазол, являющийся коиндуктором интерферона, поддерживает иммуностимулирующую функцию α-glu-trp. Аскорбиновая кислота, взятая в количестве 0,02-0,050 г на дозу, является субстратом терминального звена митохондриального дыхательного комплекса и оптимизирует действие первых двух компонентов.
«Цитовир-3» показал свою высокую эффективность при проведении профилактических мероприятий в период эпидемий ОРВИ и гриппа [Шипицын К.С. и др. Эпидемиологические инфекционные болезни. 2010, №1, с.57-61]. Однако, если «Цитовир-3» применяют после начала клинической манифестации заболевания, его эффективность значительно ниже. Кроме того, повышенная доза аскорбиновой кислоты может провоцировать обострение гастрита и, в исключительных случаях, почечную колику у больных мочекаменной болезнью.
Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в формировании продолжительной противовирусной резистентности, необходимой и достаточной для быстрой и эффективной элиминации вируса-возбудителя и устранения симптомов заболевания.
Указанный технический результат достигается тем, что фармацевтическая композиция, включающая индуктор эндогенного интерферона дипептид на основе глутаминовой кислоты и коиндуктор эндогенного интерферона, в качестве последнего содержит глицирризиновую кислоту в форме натриевой или аммонийной соли, а в качестве дипептида - дипептид, выбранный из группы, включающей α-glu-trp, γ-glu-trp и α-lys-glu, при следующем соотношении компонентов в композиции (в мг на одну дозу):
дипептид на основе
глутаминовой кислоты
- 0,01-0,03
глицирризиновая кислота
- 10-500.
Фармацевтическая композиция может дополнительно включать 50-500 мг/дозу фумарата или сукцината натрия, как вещества, оптимизирующего действие первых двух компонентов.
42
62
16
Глицирризиновая кислота CHO представляет собой тритерпеновое соединение общей формулы
4
где X=Н, Na, NH,
выделенное из глицирризина - гликозида, полученного из корней солодки.
Глицирризиновая кислота обладает противовирусной активностью в отношении вируса герпеса и папилломы [Толстиков Г.А. и др. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. Новосибирск, «Гео», 2007, с.305-207]. Описан также содержащий глицирризиновую кислоту лекарственный препарат «Фосфоглив», применяющийся в комплексной терапии вирусного гепатита C [Ипатова О.М. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике. М., 2005, 318 с.].
Известно [Utsunomiya Т. et al. Antimicrob. Agents Chemother., 1997, v.4, N3, p.551-556], что глицирризиновая кислота способна снизить заболеваемость и смертность животных, инфицированных смертельной дозой вируса гриппа; однако по нашим данным лечебная эффективность глицирризиновой кислоты, вводимой животным на фоне уже развившейся инфекции, оказалась достаточно низкой.
Соединение в одной фармацевтической композиции глицирризиновой кислоты и дипептида на основе глутаминовой кислоты, в частности альфа-глутамилтриптофана (тимогена), представлялось проблематичным по следующей причине.
Глицирризиновая кислота близка по структуре к кортикостероидам, то есть гормонам надпочечников. Тимоген является функциональным аналогом гормона тимуса. Известно, что гормоны тимуса и надпочечников находятся между собой в антагонистических отношениях. Так, на фоне введения тималина (экстракта тимуса) наблюдалось достоверное снижение концентрации кортизола [Г.М.Яковлев и др. Механизмы биорегуляции. СПб, «Наука», 1992, с.20]. Поэтому отсутствие антагонизма между указанными веществами и выраженная суммация лечебных свойств композиции, включающей эти вещества, оказались неожиданными и не вытекающими из известных свойств компонентов.
Глицирризиновая кислота плохо растворяется в воде и в желудочном соке. В силу этого ее взяли в форме тринатриевой или триаммониевой соли (их свойства идентичны), хорошо растворимых и в воде, и в желудочном соке.
Заявляемая фармацевтическая композиция предназначена для перорального употребления и может выпускаться в форме таблеток, капсул или сиропа.
Компоненты композиции не вступают в химическое взаимодействие друг с другом; композиция может быть получена смешением на обычном фармацевтическом оборудовании и таблетирована или капсулирована с последующей расфасовкой. Композиция может содержать обычные фармацевтически приемлемые добавки.
Эффективность заявляемой композиции была изучена на модели выживаемости животных, зараженных смертельной дозой вируса гриппа A/H3N2/ на фоне 5-дневного перорального введения заявляемой композиции.
В качестве животных использовались беспородные мыши-самцы массой 16-18 г, полученные из питомника «Рапполово» РАМН. Перед опытом животных выдерживали в виварии на карантине в течение одной недели. Все животные содержались на сбалансированных кормах в стандартизированном температурно-влажностном режиме.
Каждая группа животных в эксперименте составляла 30 особей.
3
4
50
50
50
Для моделирования экспериментальной гриппозной инфекции использовали адаптированный для мышей штамм вируса типа A/H3N2/Пуэрто-Рико-8/34, пассировавшийся на развивающихся куриных эмбрионах. Исходный титр вируса составлял 10-10 ЛД/мл. Животных заражали интраназально. Доза вируса составляла для одних групп 5 ЛД, для других 10 ЛД. В группах сравнения при заражении указанными дозами выживаемость мышей на 10-е сутки после заражения равна нулю, то есть исследуемые дозы являются смертельными.
Лечение зараженных мышей заявляемой композицией начинали через 24 часа после заражения. Композиции. Вводили внутрижелудочно с помощью специального атравматического металлического зонда в форме раствора в изотоническом растворе хлорида натрия. Доза лекарственного препарата рассчитывалась на 1 кг веса животного. Количество раствора составляло 0,2 мл. Лечение продолжали в течение пяти суток. Эффективность действия композиции оценивали по выживаемости животных на 21 сутки после заражения.
Результаты испытаний представлены в таблице. Для сравнения в таблице приведены данные об эффективности действия отдельных компонентов композиции: глицирризиновой кислоты (графа 8), α-glu-trp (графа 9) и α-lys-glu (графа 10).
В эксперименте отмечено, что в том случае, когда композиция включает дополнительно фумарат или сукцинат натрия, уровень миелопероксидазы в сыворотке крови был достоверно выше, чем у животных, получавших двухкомпонентную композицию, что свидетельствует об уменьшении выработки синглетного кислорода и вызванного им последующего повреждения клеток.
Из таблицы видно, что отдельные компоненты композиции, как глицирризиновая кислота, так и дипептиды, недостаточно или почти неэффективны при лечении животных, зараженных смертельной дозой вируса.
50
50
Лечение гриппа заявляемой композицией обеспечивает выживаемость животных даже в случае заражения дозой вируса (ЛД=10), вдвое превышающей смертельную дозу ЛД=5.
Таблица
Выживаемость животных на фоне 5-дневного перорального введения заявляемой композиции
Состав фармацевтической композиции, мг/доза
Доза вируса, ЛД<sub>50</sub>
Выживаемость на 21 сутки
Графа
α-glu-trp
γ-glu-trp
α-lys-glu
Na соль глицирриз. кислоты
NH4 соль глицирриз. кислоты
1
-
-
0,01
-
100
5
100
10
83,3
2
-
-
0,03
100
-
5
100
10
80
3
0,01
-
-
10
-
5
100
10
83,3
4
-
0,01
-
-
10
5
100
10
80
5
-
-
0,01
-
500
5
100
10
83,3
6
0,01*
10
5
100
10
93,3
7
0,01**
10
5
100
10
90
8
-
-
-
100
-
5
30
10
30
9
0,01
-
-
-
-
5
10
10
10
10
-
-
0,01
-
-
5
20
10
10
* Композиция включала также 500 мг фумарата натрия
** Композиция включала дополнительно 50 мг сукцината натрия