МУТАНТЫ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА

1. Нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа H1, причем белок НА содержит аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну замену по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа, причем указанная по меньшей мере одна замена представляет собой замену одной или более аминокислот, соответствующих аминокислоте в положении 390, 429, 97 или 374 H1 A/Michigan/45/15 НА.
2. Нуклеиновая кислота по п. 1, причем
(i) по меньшей мере одна замена аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 97 H1 A/Michigan/45/15 НА, представляет собой замену на не аспарагин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты;
(ii) по меньшей мере одна замена аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 374 H1 A/Michigan/45/15 НА, представляет собой замену на не лизин, например, на глутаминовую кислоту или консервативную замену глутаминовой кислоты;
(iii) по меньшей мере одна замена аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 390 H1 A/Michigan/45/15 НА, представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты; и/или
(iv) по меньшей мере одна замена аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина
3. Нуклеиновая кислота по п. 2, причем по меньшей мере одна замена аминокислоты, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина, причем нуклеиновая кислота дополнительно содержит вторую замену, указанная вторая замена относится к аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 380 H1 A/Michigan/45/15 НА, указанная вторая замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аланин или консервативную замену аланина.
4. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 390 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты, и
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина.
5. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 97 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты, и
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 374 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лизин, например, на глутаминовую кислоту или консервативную замену глутаминовой кислоты.
6. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 97 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты;
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 390 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты, и
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина.
7. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 374 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лизин, например, на глутаминовую кислоту или консервативную замену глутаминовой кислоты;
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 390 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты, и третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина.
8. Нуклеиновая кислота по п. 1, содержащая
первую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 97 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не аспарагин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты;
вторую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 374 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лизин, например, на глутаминовую кислоту или консервативную замену глутаминовой кислоты;
третью замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 390 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не фенилаланин, например, на аспарагиновую кислоту или консервативную замену аспарагиновой кислоты, и
четвертую замену по аминокислоте, соответствующей аминокислоте в положении 429 H1 A/Michigan/45/15 НА, причем указанная замена представляет собой замену на не лейцин, например, на метионин или консервативную замену метионина.
9. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 2-8, причем:
консервативная замена аспарагиновой кислоты представляет собой глутаминовую кислоту, глутамин или серин;
консервативная замена глутаминовой кислоты представляет собой аспарагиновую кислоту, глутамин, аргинин, аспарагин, гистидин или серин;
консервативная замена метионина представляет собой изолейцин, глутамин, валин или фенилаланин и/или
консервативная замена аланина представляет собой серин, глицин, треонин, цистеин или валин.
10. Модифицированный белок гемагглютинин (НА) гриппа H1, кодируемый нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-9.
11. Вирусоподобная частица (VLP), содержащая модифицированный белок гемагглютинин (НА) гриппа H1, кодируемый нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-9.
12. Способ получения вирусоподобной частицы (VLP) в растении, части растения или растительной клетке, предусматривающий:
i) введение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-9 в растение, часть растения или растительную клетку или
ii) предоставление растения, части растения или растительной клетки, содержащих нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-9;
b) инкубацию растения, части растения или растительной клетки в условиях, которые допускают экспрессию белка НА, кодируемого нуклеиновой кислотой, тем самым производя VLP, и
c) необязательно, сбор растения, части растения или растительной клетки и очистку VLP.
13. VLP, полученная способом по п. 12, необязательно содержащая один или более липидов, полученных из растения, части растения или растительной клетки, специфические для растений N-гликаны, модифицированные N-гликаны или их комбинацию.
14. Растение, часть растения или растительная клетка, содержащие нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-9, белок НА по п. 10 или VLP по п. 11 или 13.
15. Композиция для индукции иммунного ответа, содержащая эффективную дозу VLP по п. 11 или 13 и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант, наполнитель или вспомогательное вещество.
16. VLP по п. 11 или 13 для применения в индукции иммунитета к инфекции гриппа у субъекта, необязательно причем VLP вводят субъекту перорально, интраназально, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или подкожно.
17. Способ увеличения выхода продукции вирусоподобных частиц (VLP) в растении, части растения или растительной клетке, предусматривающий:
a) i) введение нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-9 в растение, часть растения или растительную клетку или
ii) предоставление растения, части растения или растительной клетки, содержащих нуклеиновую кислоту, по любому из пп. 1-9; а также
b) инкубацию растения, части растения или растительной клетки в условиях, которые допускают экспрессию белка НА, кодируемого нуклеиновой кислотой, тем самым производя VLP с более высоким выходом по сравнению с растением, частью растения или растительной клеткой, экспрессирующей немодифицированный белок НА, и
c) необязательно, сбор растения, части растения или растительной клетки и очистку VLP.
18. Модифицированный белок гемагглютинин (НА) вируса гриппа H1, причем белок НА содержит аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну замену по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа, причем указанная по меньшей мере одна замена представляет собой одну или более аминокислот, соответствующих аминокислоте в положении 390, 429, 97 или 374 H1 A/Michigan/45/15 НА.