КОНСТРУКЦИЯ РЕКОМБИНАНТНОЙ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

1. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая, в направлении 5’→ 3':
5’-UTR,
кодирующую область, кодирующую эффекторную молекулу,
3’-UTR,
где 5’-UTR выбрана из группы, включающей 5’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего Ang-2 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего H3.3. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего галектин-9 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего GADD34 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего EDN1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего HSP70m5 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего E-селектин или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего ICAM-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего IL-6 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;, 5'-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;,
где 3’-UTR выбрана из группы, включающей 3’-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего H3.3. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего GADD34 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего EDN1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего IL-6 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
где эффекторная молекула является эффективной для восстановления клеточной функции или эффективной для достижения терапевтического эффекта в клетке или на клетке, и
где конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты отличается от мРНК дикого типа, кодирующей эффекторную молекулу.
2. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, где
а) 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и где 3’-UTR выбрана из группы, включающей 3’-UTR гена, кодирующий vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
b) 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и где 3’-UTR выбрана из группы, включающей 3’-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3'-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
c) 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и где 3’-UTR выбрана из группы, включающей 3'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3'-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
d) 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего ANG-2 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и где 3’-UTR выбрана из группы, включающей 3'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 3’-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3'-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%.
3. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 1, где
а) 3'UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR выбрана из группы, включающей 5'-UTR гена, кодирующего МСР-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR гена, кодирующего ANG-2 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
b) 3’-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR выбрана из группы, включающей 5'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего ANG-2, или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR гена, кодирующего МСР-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
c) 3’-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR выбрана из группы, включающей 5'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5’-UTR гена, кодирующего RPLl2s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего ANG-2, или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR гена, кодирующего МСР-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; или
d) 3’-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR выбрана из группы, включающей 5'-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; 5'-UTR гена, кодирующего ANG-2, или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 5'-UTR гена, кодирующего МСР-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%.
4. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3, где 5’-UTR и 3’-UTR рекомбинантной конструкции имеют различное происхождение, а предпочтительно, они происходят от различных эндогенных генов или видов.
5. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, где 5’-UTR и 3’-UTR рекомбинантной конструкции имеют одинаковое происхождение, а предпочтительно, они происходят от одинаковых эндогенных генов или видов.
6. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-5, где конструкция выбрана из группы, включающей
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; а 3’-UTR представляет собой 3' UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; а 3'-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3'-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего МСР-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего ANG-2 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; а 3’-UTR представляет собой 3’-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3’-UTR представляет собой 3’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего HSP70 или или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3’-UTR представляет собой 3’-UTR гена, кодирующего HSP70 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего H3.3. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3’-UTR представляет собой 3’-UTR гена, кодирующего H3.3. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего галектин 9 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и 3’-UTR представляет собой 3’-UTR гена, кодирующего галектин 9 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%,
а предпочтительно, конструкция представляет собой:
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; а 3’-UTR представляет собой 3' UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
конструкцию, где 5’-UTR представляет собой 5’-UTR гена, кодирующего RPL12s.c. или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; а 3'-UTR представляет собой 3'-UTR гена, кодирующего vWF или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%;
7. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-6, где конструкция содержит поли-А-хвост, предпочтительно на 3’-конце конструкции рекомбинантной нуклеиновой кислоты.
8. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, где конструкция содержит структуру САР, предпочтительно на 5’-конце конструкции рекомбинантной нуклеиновой кислоты.
9. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-8, где конструкция содержит последовательность IRES (внутреннего сайта связывания с рибосомой), предпочтительно на 5’-конце конструкции рекомбинантной нуклеиновой кислоты.
10. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-9, где конструкция содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую сигнальный пептид, а предпочтительно, этот сигнальный пептид находится в одной рамке считывания с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей сигнальный пептид, и расположен между 5'-UTR и кодирующей областью, кодирующей эффекторную молекулу.
11. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по п. 10, где сигнальный пептид обеспечивает секрецию эффекторной молекулы.
12. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты для использования по любому из пп. 10-11, где нуклеотидная последовательность, кодирующая сигнальный пептид, выбрана из группы, включающей нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид MCP-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид IL-6 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид Ang-2 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%; и нуклеотидную последовательность, кодирующую сигнальный пептид Ang-1 или его производное с идентичностью нуклеотидов по меньшей мере 85%.
13. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-12, где клетка, функция которой восстанавливается, и/или клетка, в которой или на которой достигается терапевтический эффект, представляет собой эндотелиальную клетку, предпочтительно эндотелиальную клетку сосудов, а более предпочтительно, эндотелиальная клетка сосудов представляет собой эндотелиальную клетку микрососудов.
14. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-13, где клеточная функция представляет собой функцию, которая может быть восстановлена эффекторной молекулой, обладающей функцией, препятствующей проницаемости эндотелиальных клеток; функцией, препятствующей выходу жидкости из сосудов, антиапоптотическим эффектом эндотелиальных клеток или противовоспалительным эффектом эндотелиальных клеток или эффектом, блокирующим реакцию на стресс, а предпочтительно эффектом, связанным или ассоциированным с путем передачи сигнала Tie-2, путем передачи сигнала рецептора VEGF, путем передачи сигнала NOTCH, путем передачи сигнала киназы PI3, путем передачи сигнала eNOS, сиртуин-зависимым путем метаболизма и путем гомеостаза энергии, путем окислительного стресса, путем ответа на сдвиговой стресс, путем передачи сигнала ЕТ-1, путем NO-опосредованной передачи сигнала и путем химико-механической трансдукции.
15. Вектор, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14.
16. Клетка, содержащая конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14 и/или вектор по п. 15.
17. Носитель для доставки, содержащий конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14, где носитель для доставки представляет собой частицу для доставки катионных липидов, которая предпочтительно представляет собой наночастицу, а более предпочтительно, наночастицу со средним размером приблизительно от 30 нм до приблизительно 200 нм, предпочтительно, приблизительно от 30 нм до приблизительно 140 нм, а более предпочтительно, приблизительно от 30 нм до приблизительно 60 нм.
18. Фармацевтическая композиция, содержащая конструкцию нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14, вектор по п. 15, клетку по п. 16 и/или носитель для доставки по п. 17 и фармацевтически приемлемый разбавитель.
19. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14 для ее применения в способе лечения и/или профилактики заболевания.
20. Конструкция рекомбинантной нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-14 для ее применения в способе восстановления функции клетки.