ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ ПАЦИЕНТОВ С АНЕМИЕЙ ФАНКОНИ

1. Кассета экспрессии, содержащая полинуклеотидную последовательность, содержащую следующее в 5’-3’-направлении:
(a) промоторную последовательность гена фосфоглицераткиназы (PGK) человека или ее функциональный гомолог или вариант;
(b) последовательность, кодирующую полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант;
(c) сигнальную последовательность экспорта РНК регуляторного элемента вируса гепатита сурков (WPRE) или ее функциональный вариант или фрагмент,
где последовательность, кодирующая полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант, функционально связана с промоторной последовательностью гена PGK.
2. Кассета экспрессии по п. 1, где полипептид FANCA или его функциональный фрагмент или вариант содержат последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 25.
3. Кассета экспрессии по п. 1, где последовательность, кодирующая полипептид FANCA или его функциональный фрагмент или вариант, содержит последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 8.
4. Кассета экспрессии по п. 1, где промотор гена PGK содержит нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 7. 5. Кассета экспрессии по п. 1, где элемент WPRE содержит нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 23.
6. Кассета экспрессии по п. 1, где кассета содержит нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 24.
7. Кассета экспрессии по любому из пп. 1-6, дополнительно содержащая одну или более энхансерных последовательностей.
8. Кассета экспрессии по п. 1, дополнительно содержащая (d) полипуриновый тракт (PPT) или сигнальную последовательность полиаденилирования (polyA).
9. Кассета экспрессии по п. 1, дополнительно содержащая одну или более из следующих последовательностей:
(f) усеченную последовательность Gag;
(g) Rev-чувствительный элемент (RRE);
(h) центральный полипуриновый тракт (cPPT);
(i) центральную терминальную последовательность (CTS) и (j) элемент последовательности, расположенный против хода транскрипции (USE), необязательно из вируса обезьян 40 (SV40-USE).
10. Рекомбинантный вектор доставки гена, содержащий кассету экспрессии по любому из пп. 1-9.
11. Рекомбинантный вектор доставки гена по п. 10, где рекомбинантный вектор доставки гена представляет собой вирус или вирусный вектор.
12. Рекомбинантный вектор доставки гена по п. 11, где вирус или вирусный вектор представляет собой лентивирус (LV).
13. Клетка, содержащая кассету экспрессии по п. 1 или рекомбинантный вектор доставки гена по п. 11 или 12.
14. Клетка по п. 13, где клетка представляет собой гемопоэтическую стволовую клетку.
+
15. Клетка по п. 13, где клетка представляет собой CD34 клетку.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель и рекомбинантный вектор доставки гена по любому из пп. 10-12.
17. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый наполнитель и клетку по любому из пп. 13-15.
18.Способ лечения анемии Фанкони у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий обеспечение субъекта фармацевтической композицией по п. 16 или 17.
+
19. Способ лечения анемии Фанкони у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий обеспечение субъекта CD34 клетками, содержащими кассету экспрессии, где кассета экспрессии содержит полинуклеотидную последовательность, содержащую следующее в 5’-3’-направлении:
(a) промоторную последовательность гена фосфоглицераткиназы (PGK) человека или ее функциональный гомолог или вариант;
(b) последовательность, кодирующую полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант;
(c) сигнальную последовательность экспорта РНК регуляторного элемента вируса гепатита сурков (WPRE) или ее функциональный вариант или фрагмент,
где последовательность, кодирующая полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант, функционально связана с промоторной последовательностью гена PGK.
+
20. Способ по п. 19, где CD34 клетки были получены от субъекта.
21. Способ по п. 20, где CD34+ клетки были получены от субъекта после обработки субъекта комбинацией из: (i) G-CSF или филграстима и (ii) плериксафора.
+
22. Способ по п. 20, где CD34 клетки были трансдуцированы рекомбинантным вектором доставки гена, содержащим кассету экспрессии.
+
+
23.Способ по п. 21, где CD34 клетки были трансдуцированы за счет приведения CD34 клеток в контакт с рекомбинантным вектором доставки гена на протяжении приблизительно 24 часов.
24. Способ лечения анемии Фанкони у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий:
(a) обеспечение субъекта комбинацией из: (i) G-CSF или филграстима и (ii) плериксафора для мобилизации CD34+ клеток у субъекта;
+
(b) получение биологического образца, содержащего CD34 клетки, от субъекта, где биологический образец необязательно представляет собой периферическую кровь или костный мозг;
(c) получение клеточной популяции, обогащенной CD34+ клетками, из биологического образца;
(d) трансдуцирование клеточной популяции, обогащенной CD34+ клетками, рекомбинантным вектором доставки гена, содержащим кассету экспрессии, содержащую полинуклеотидную последовательность, содержащую следующее в 5’-3’-направлении:
(i) промоторную последовательность или ее функциональный гомолог или вариант и
(ii) последовательность, кодирующую полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант,
где последовательность, кодирующая полипептид FANCA человека или его функциональный фрагмент или вариант, функционально связана с промоторной последовательностью гена PGK,
+
где трансдуцирование предусматривает приведение клеточной популяции, обогащенной CD34 клетками, в контакт с лентивирусным вектором на протяжении приблизительно 24 часов; и
(e) обеспечение субъекта клеточной популяцией, трансдуцированной лентивирусным вектором, полученной на стадии (d).
25. Способ по п. 24, где получение клеточной популяции предусматривает проведение истощения по эритроцитам.
+
26. Способ по п. 24, где получение клеточной популяции предусматривает проведение обогащения CD34 клетками путем положительного отбора, отрицательного отбора или их комбинации.
27. Способ по п. 24, где способ подавляет развитие, препятствует прогрессированию и/или обращает прогрессирование гематологического проявления анемии Фанкони у субъекта.
28. Способ по п. 27, где гематологическое проявление анемии Фанкони выбрано из одного или более из BMF, тромбоцитопении, лейкопении, панцитопении, нейтропении и анемии.