СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БОГАТОЙ ТРОМБОЦИТАМИ ПЛАЗМЫ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ В СОСТАВЕ МАЗИ
METHOD FOR PREPARING PLATELET-RICH PLASMA TO BE USED AS INGREDIENT OF OINTMENT

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при лечении больных различных профилей, которым показано применение богатой тромбоцитами плазмы в целях стимуляции регенераторных процессов.
Известно получение и применение богатой тромбоцитами плазмы (БТП) в ортопедии в виде геля при смешивании с хлоридом кальция и тромбином (Гайдуков В.Е. Хирургическое лечение несросшихся переломов и ложных суставов длинных трубчатых костей с использованием богатой тромбоцитами аутоплазмы: Автореф. дис. на соискание …кандидата медицинских наук 14.00.27 - хирургия, 14.00.22 - травматология и ортопедия. - Воронеж, 2009. - 22 с. Доступ URL: ). БТП получают известным способом (Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. / Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.А. и др./ Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 368 с.), согласно которому кровь при заборе стабилизируют 3,8% раствором цитрата натрия, центрифугируют при 1000-1500 об/мин (около 300 g) в течение 5-7 мин. Полученную БТП непосредственно перед применением переносят в стерильную емкость, в которую заранее добавляют 10% раствор хлористого кальция из расчета 2 мл на 20 мл аутоБТП в смеси с тромбином, взятым из расчета 50-60 единиц на 20 мл сгустка БТП, перемешивают, а затем вводят в зону псевдоартроза.
Однако этот способ получения и применения БТП осуществим только в процессе оперативного вмешательства при непосредственном доступе в зону стимуляции регенерации, травматичен, требует участия квалифицированного специалиста и соблюдения правил стерильности. Кроме того, этот способ не предусматривает возможности дополнительного концентрирования тромбоцитов после получения БТП, в то время как известно, что эффект стимуляции костной регенерации тем более выражен, чем больше концентрация тромбоцитов (Haynesworth SE, Kadiyala S, Liang LN, et al: Mitogenic stimulation of human mesenchymal stem cells by platelet release suggest a mechanism for enhancement of bone repair by platelet concentrates. Presented at the 48th Meeting of the Orthopedic Research Society, Boston, MA, 2002. - цит. по Marx R.E. Platelet-Rich Plasma: Evidence to Support Its Use. // J. Oral Maxillofac Surg. - 2004. - V.62. - P.489-496, доступ URL: http://www.drkoprp.com/pdfs/prp/PRPbyDr.Marx.pdf).
Задачей изобретения является разработка способа получения и применения БТП, обеспечивающего снижение травматичности его выполнения, расширение показаний к применению, а также возможность дополнительного концентрирования тромбоцитов.
9
Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения богатой тромбоцитами плазмы и ее применения в составе мази, включает забор крови, ее стабилизацию 3,8% раствором цитрата натрия, центрифугировании при 1000-1500 об/мин (около 300 g) в течение 5-7 мин, и после измерения содержания тромбоцитов плазму лиофилизируют, лиофилизат вводят в состав мази в соотношении, предусматривающем итоговую концентрацию тромбоцитов в ней не менее 800×10/л, а затем полученную мазь накладывают на поверхность тела в проекции зоны регенерации.
Настоящее изобретение поясняют морфологическими исследованиями, подробным описанием, примером практического использования и иллюстрациями, на которых изображено:
Фиг.1 - рентгенограммы бедра и голени пациента до лечения;
Фиг.2 - рентгенограммы перед началом применения способа;
Фиг.3 - рентгенограммы после окончания применения способа.
Морфологические исследования
Донорами БОТП были интактные мыши. Выделение БОТП проводили по общепринятой методике [Лабораторные методы исследования в клинике: справочник. / Меньшиков В.В. и др./ Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - 386 с.]. Измерение тромбоцитов проводили на анализаторе агрегации тромбоцитов «Биола».
9
У животных - реципиентов мази моделировали перелом ребра. В качестве основы мази был выбран препарат Тизоль, разрешенный к медицинскому применению. Средство начинали наносить через сутки после операции на кожную область проекции остеотомии и продолжали в течение 6 суток. В контрольной группе животных (n=5) наносили Тизоль без БОТП, в экспериментальной группе (n=7) - суспензию лиофилизата БОТП на Тизоле. Доза тромбоцитов составила 22,8×10/кг массы реципиента. Через 10 суток после операции проводили забой животных и выделяли материал для морфологических исследований области перелома. Гистоморфометрические исследования включали подсчет количества клеток остеобластической и хондробластической линий дифференцировки на единицу площади периостальной костно-хрящевой мозоли.
Данные представлены в виде медиан и квартилей. Для проверки гипотез использовали критерий Вилкоксона для независимых выборок. Полученные результаты приведены в таблице.
Влияние аппликаций БОТП на морфометрические показатели области остеотомии
Показатель
ОБ*
ХБ
Контрольная группа (Тизоль в соответствующем разведении)
Медиана
0,733
7,317
Квартиль 1
0,533
6,583
Квартиль 3
0,983
7,383
Экспериментальная группа (суспензия лиофилизата БОТП на Тизоле)
Медиана
3,233
3,325
Квартиль 1
1,979
2,979
Квартиль 3
3,383
3,738
р-значение по критерию Вилкоксона для независимых выборок
0,005766
0,005766
*ОБ, ХБ соответственно количество клеток остеобластической и хондробластической линий дифференцировки на единицу площади периостальной костно-хрящевой мозоли (0,0025 мм<sup>2</sup>).
Таким образом, полученные данные показали достоверно более высокое количество клеток остеобластической линии дифференцировки (440% от контрольных значений) и меньшее количество клеток хондробластической линии дифференцировки (45% от контрольных значений) в регенерате животных экспериментальной группы через 10 суток после операции по остеотомии ребра.
Способ осуществляют следующим образом.
У пациентов забирают кровь в количестве 50-100 мл, стабилизируют 3,8% раствором цитрата натрия, центрифугируют при 1000-1500 об/мин (около 300 g) в течение 5-7 мин.
9
После измерения содержания тромбоцитов полученную аутоплазму лиофильно высушивают с помощью устройства для лиофильного высушивания. Лиофилизат вводят в имеющий консистенцию мази состав, обладающий способностью проникновения через кожные покровы (например, на основе геля «Тизоль») в таком соотношении, чтобы концентрация тромбоцитов в конечном объеме мази была не менее 800×10/л. Полученный состав апплицируют на поверхность тела пациента в проекции зоны формирования костного регенерата (кожи, кости, сухожилий, мышц, нервов и т.п.).
Практическое использование способа иллюстрируется следующим клиническим наблюдением.
Пациент Л., 32 г., истории болезни № 6937. Диагноз: врожденная аномалия развития верхних и нижних конечностей, вальгусная деформация левой нижней конечности. Произведен монолокальный остеосинтез костей левого бедра и левой голени аппаратом Илизарова.
9
9
К 70-му дню после операции у больной отмечалась замедленная регенерация костей бедра и голени. Для стимуляции репаративного процесса больной были назначены аппликации с богатой тромбоцитами аутоплазмой, согласно предложенному способу. Объем плазмы составил 80,0 мл, количество тромбоцитов - 519×10/л. Полученную аутоплазму лиофильно высушили, растворили в 12,5 мл воды для инъекций и соединили с 37,5 г геля «Тизоль». Итоговая концентрация тромбоцитов в мази составила 830×10/л тромбоцитов. Полученную мазь, начиная с 89-го дня после операции, в течение 35 дней наносили на поверхность кожи в проекциях зон регенерации костей бедра и голени. К концу указанного срока рентгенологически отмечали ускорение консолидации костей бедра и голени, что выразилось в формировании хорошо выраженных регенератов однородной плотности. Общий срок фиксации составил 120 дней.
Применение способа в ФГБУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г.А. Илизарова показало, что он сокращает сроки лечения пациентов ортопедо-травматологического профиля (интрамедуллярный остеосинтез, чрескостный остеосинтез и т.д.), прост в выполнении, малоинвазивен и значительно расширяет возможность применения БТП.