СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АКТИВНОГО ФРАГМЕНТА АЛЬФА-ФЕТОПРОТЕИНА ЧЕЛОВЕКА

1. Способ получения активного фрагмента альфа-фетопротеина человека, включающий выделение телец включения, содержащих целевой белок, из биомассы штамма-продуцента и их солюбилизацию с последующими ренатурацией и очисткой активного фрагмента альфафетопротеина человека.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что выделение телец включения, содержащих целевой белок, из биомассы штамма-продуцента осуществляют путем ресуспендирования в фосфатно-солевой буфере (PBS), pH 7,4, NaCl 0,1 М, AEBSF (4-(2-Aminoethyl) benzenesulfonyl fluoride hydrochloride) 1 mM, полученную суспензию подвергают двукратной обработке ультразвуком в течение 2 мин импульсом 0,3 с при 0° с последующим добавлением к суспензии Triton Х-100 до концентрации 1% и проводят обработку ультразвуком в том же режиме, после чего суспензию центрифугируют при 10000 g в течение 10 мин и полученный осадок суспендируют в фосфатно-солевом буфере (PBS), pH 7,4, NaCl 0,1 М, Na-дезоксихолат 0,1%, после чего суспензию подвергают обработке ультразвуком в том же режиме, вновь центрифугируют при 10000 g в течение 10 мин, ресуспендируют осадок в фосфатно-солевом буфере, pH 7,4 и окончательно центрифугирируют при 10000 g в течение 10 мин.
3
3
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что солюбилизацию телец включения, содержащих целевой белок, осуществляют путем суспендирования в денатурирующем буфере 0,05 М NaBO (pH 8,6), 8 М мочевина, 0,1 М NaCl, 50 мМ β-меркаптоэтанол, инкубируют полученный раствор в течение 2-х ч при комнатной температуре при постоянном перемешивании до полного растворения осадка, после чего его центрифугирируют в течение 15 мин при 13400 g и 7°C.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что ренатурацию и очистку фрагмента альфа-фетопротеина человека проводят путем быстрого разведения солюбилизированного белка в буфер для ренатурации, содержащий фосфатно-солевой буфер (PBS), pH 8,0, 5 мМ, глутатион восстановленный (Fluka), 1 мМ глутатион окисленный (Fluka).