УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ ДЛЯ ОДИНОЧНЫХ ВАРИАБЕЛЬНЫХ ДОМЕНОВ ИММУНОГЛОБУЛИНА

1. Способ определения количества и/или концентрации в образце, по меньшей мере, одного ISVD, или белка или полипептида, которые включают, по меньшей мере, один ISVD, который включает следующие стадии:
a) контактирование образца с захватывающим агентом, таким образом, что ISVD, белок или полипептид захватывается указанным захватывающим агентом;
b) контактирование ISVD, белка или полипептида, захваченного захватывающим агентом с детектирующим агентом, таким образом, что указанный детектирующий агент связывается с ISVD, белком или полипептидом, захваченным захватывающим агентом;
c) генерирование сигнала, соответствующего количеству детектирующего агента, связанного с ISVD, белком или полипептидом, захваченным захватывающим агентом,
который осуществляют в присутствии гасителя флуоресценции, указанный гаситель флуоресценции, представляющий собой белок или полипептид, с которым ранее существовавшие антитела могут связываться, но с которым не может связываться ни захватывающий агент, ни детектирующий агент.
2. Способ по п. 1, в котором белок или полипептид, применяемые в качестве гасителя флуоресценции, представляют собой белок или полипептид, который связывается моноклональным антителом 21-4 с аффинностью лучше, чем 1 микромоль (мкМ), такой как от 1000 до 1 нМ.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором белок или полипептид, применяемые в качестве гасителя флуоресценции, представляют собой белок или полипептид, связанный с предполагаемым захватывающим агентом и предполагаемым детектирующим агентом с аффинностью меньше/хуже, чем 3 мкМ, предпочтительно, меньше, чем 10 мкМ, более предпочтительно, меньше, чем 50 мкМ, такой как хуже, чем 100 мкМ.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором гаситель флуоресценции представляет собой моновалентный одиночный вариабельный домен иммуноглобулина или слитого белка или конструкции, включающей не более пяти, например, четыре, три, два или один одиночный вариабельный домен иммуноглобулина.
5. Способ по п. 4, в котором, по меньшей мере, один из одиночных вариабельных доменов иммуноглобулина, присутствующий в гасителе флуоресценции, имеет экспонированный C-конец.
6. Способ по п. 5, в котором, по меньшей мере, один из одиночных вариабельных доменом иммуноглобулина, который имеет экспонированный С-конец, имеет последовательность VTVSS (SEQ ID NO:1) на своем C-конце.
7. Способ по п. 4 или 5, в котором, по меньшей мере, гаситель флуоресценции имеет одиночный вариабельный домен иммуноглобулина на своем C-конце.
8. Способ по п. 7, в котором одиночный вариабельный домен иммуноглобулина на С-конце гасителя флуоресценции, в более широком смысле, полный гаситель флуоресценции, имеет последовательность VTVSS (SEQ ID NO:1) на своем C-конце.