СПОСОБЫ КОНЪЮГАЦИИ

1. Способ приготовления очищенного конъюгата в растворе, при этом конъюгат включает эффекторную или репортерную молекулу, соединенную со связывающимся с клетками агентом, включающий этапы: (а) связывания эффекторной или репортерной молекулы с бифункциональным линкерным реагентом для ковалентного присоединения линкера к эффекторной или репортерной молекуле и приготовления таким образом неочищенной первой смеси, содержащей эффекторные или репортерные молекулы, связанные с линкером, (б) конъюгацию связывающегося с клетками агента с эффекторной или репортерной молекулой, связанной с линкером, путем реакции неочищенной первой смеси со связывающимся с клетками агентом для приготовления второй смеси и (в) воздействие на вторую смесь путем тангенциальной поточной фильтрации, диализа, гелевой фильтрации, адсорбционной хроматографии, селективного осаждения или их комбинации для получения очищенного конъюгата.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что этап (б) выполняют в растворе с рН от около 4 до около 9.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что вторая смесь на этапе (б) по большей части свободна от нежелаемых поперечно-сшитых гидролизованных частиц, образовавшихся в результате внутримолекулярных или межмолекулярных реакций.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что эффекторная молекула является цитотоксичным агентом.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что цитотоксичный агент является майтансиноидом, таксаном, СС1065 или их аналогом.
6. Способ по п.4, отличающийся тем, что цитотоксичный агент является майтансиноидом.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что майтансиноид включает в себя тиоловую группу.
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что майтансиноид является DM1.
9. Способ по п.6, отличающийся тем, что майтансиноид является DM4.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что связывающийся с клетками агент является интерферонами, интерлейкином 2, (IL-2), интерлейкином 3 (IL-3), интерлейкином 4 (IL-4), интерлейкином 6 (IL-6), инсулином, EGF, TGF-a, FGF, G-CSF, VEGF, MCSF, GM-CSF, трансферрином или антителами.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что связывающийся с клетками агент является антителом.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что антитело является моноклональным антителом.
13. Способ по п.11, отличающийся тем, что антитело является человеческим или гуманизированным моноклональным антителом.
v
3
v
5
v
6
14. Способ по п.10, отличающийся тем, что антитело является MY9, анти-В4, ЕрСАМ, CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD11, CD19, CD20, CD22, CD26, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD56, CD79, CD105, CD138, EphA рецепторами, EphB рецепторами, EGFR, EGFRvIII, HER2, HER3, мезотелином, крипто, альфабета, альфабета; альфабета интегрином или С242.
15. Способ по п.13, отличающийся тем, что человеческое или гуманизированное антитело является Му9-6, В4, С242, N901, DS6, EphA2 рецепторами, CD38, IGF-IR, CNTO 95, В-В4, трастузумабом, пертузумабом, биватузумабом, зибротузумабом или ритуксимабом.
16. Способ по п.1, отличающийся тем, что линкер является расщепляемым или нерасщепляемым линкером.
17. Способ по п.1, отличающийся тем, что репортерная молекула является радиоизотопом.