Изоэлектрическая точка белков в водных растворах азолов

А. С. Чухно, И. Б. Дмитриева, Д. В. Мартынов

ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ ТОЧКА БЕЛКОВ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ АЗОЛОВ*

Введение. Изучение свойств коллоидных систем, содержащих сложные органические соединения, представляет интерес как с теоретической, так и практической точек зрения. Отличительной особенностью таких систем является специфический характер сорбции органических соединений, сложная структура межфазной границы раздела, длительность процесса адсорбции и их высокая лабильность, что вызвано сложным составом и строением молекул органических соединений. В состав органических молекул могут входить различные функциональные группы, влияющие на процесс их сорбции, который может происходить за счёт одновременной реализации различных типов взаимодействий (кулоновское, донорно-акцепторное, за счёт ван-дер-ваальсовых сил и др.). Нередко процесс сорбции таких молекул сопровождается изменением их конформации, реакциями химической конденсации и поверхностного комплексообразования с активными центрами сорбентов. Специфический характер сорбции органических соединений влияет на изоэлектрическую точку, электрокинетический потенциал сорбентов, устойчивость и другие свойства указанных дисперсных систем. Механизм специфического взаимодействия сложных органических молекул с активными центрами поверхности определяет пространственное и энергетическое состояния адсорбированных молекул в поверхностном слое, а в последующем — их биологическую активность. Активные исследования влияния сорбции сложных органических молекул на электроповерхност-ные свойства дисперсных систем, осуществляемые в настоящее время в нашей стране и за рубежом, пока не привели к созданию непротиворечивых теоретических представлений, позволяющих описать и предсказать поведение таких систем, как это сделано для простых неорганических электролитов.

С практической точки зрения интерес к данным исследованиям обусловлен значительной ролью аминокислот, белков и гетероциклических соединений в разнообразных биологических процессах, а также широкими перспективами их использования в фармакологии, медицине, биотехнологиях.

Авторами изучены закономерности адсорбции азолов (тетразола, имидазола и триа-зола) на оксидах переходных металлов [1-7]. Представляемая работа является началом цикла по исследованию коллоидных свойств дисперсных систем, содержащих белок в виде дисперсной фазы и входящий в состав дисперсионной среды.

Результаты и обсуждения. Целью работы являлось изучение влияния азотосодержащих гетероциклических соединений на положение изоэлектрической точки (ИЭТ) белков.

Исследование процесса взаимодействия белков с азолами и их производными при различных значениях pH включает в себя следующие задачи: выбор объектов исследования; определение изоэлектрической точки (ИЭТ) чистых белков; определение ИЭТ белков при добавлении к ним растворов азолов.

* Работа поддержана грантом Президента Российской Федерации «Ведущие научные школы» № НШ-6291.2010.3 «Термодинамические, механические, реологические и электрические свойства поверхностных слоёв, дисперсных систем и материалов».

© А.С.Чухно, И.Б.Дмитриева, Д.В.Мартынов, 2011

В качестве объектов исследования выбраны азолы (1,3-диазол, 1,2,4-триазол, н-тет-разол, далее — имидазол, триазол, тетразол) и их производные (5-пиразолон, далее пи-разолон, 2-метилимидазол, далее — метилимидазол, 3,5-бутиламино-1,2,4-триазол, далее — бутиламинотриазол, 2-аминотиазол, далее — аминотиазол) и 3,4-диметилпиррол, далее — просто диметилпиррол — пятичленный гетероцикл с одним гетероатомом азота. Следует отметить, что диметилпиррол входит в состав гемоглобина крови. Азолы и их производные были синтезированы и очищены в Санкт-Петербургском государственном технологическом институте (техническом университете) и в Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии. В качестве белков выбраны: яичный альбумин, желатина, казеин производства немецкой фирмы “Мегск”.

В ряду диазол ^ триазол ^ тетразол в зависимости от числа атомов азота происходит изменение полярности, увеличение ароматичности гетероциклов, увеличение кислотных и уменьшение основных свойств и изменение донорно-акцепторных свойств, что определяет их комплексообразующие и адсорбционные свойства. В водных растворах азолов одновременно могут находиться катионы, анионы и недиссоциированные молекулы. Преобладание той или иной формы определяется прежде всего видом азола и значением рН раствора. Для катионных форм азолов характерна локализация заряда на первом и третьем атомах азота в цикле, а для анионных — образование единой п-системы. Вследствие различного распределения заряда в катионах и анионах процесс ассоциации для них различен. Катионы в растворе ассоциируются с образованием протяжённых цепочек, а анионы практически не ассоциируются [2-4, 7-11].

Схожее строение имеет тиазол. Тиазол — гетероцикл, содержащий один атом азота и атом серы в цикле. Тиазол в энергетическом отношении устойчивее имидазола. Свойства азолов зависят не только от количества атомов азота в их молекулах, но и от их взаимного расположения. Например, у пиразола (1,2-диазол) несколько слабее проявляются донорно-акцепторные свойства и ниже реакционная способность по сравнению с имидазолом (1,3-диазолом) [12, 13]. Пиразолон (5-оксо-1,2-диазол) — производный пиразола.

имидиазол

N

Н

пиразол

О

N

Н

1,2,4-триазол N

N

N

N

Н

1,2,3,4-тетразол N _

II

N

I

Н

тиазол

N

\\

2-метилимидазол 4-нитроимидазол

N

5-амино-1,2,4-

триазол

/----N

N

8

N

Н

№

Введение в молекулы азолов различных заместителей, СНз — 6, N02 — 7 и других приводит к ослаблению или усилению кислотно-основных и донорно-акцепторных свойств [8, 9, 12]. При сопоставлении характера влияния замещённых азолов на процесс

S

адсорбции, точку нулевого заряда, электрокинетический потенциал и амфотерных, донорно-акцепторных и других характеристик азолов можно понять, какой вид взаимодействий между молекулами адсорбата и активными центрами сорбента преобладает.

Альбумины — водорастворимые глобулярные белки, входящие в состав молока, сыворотки крови, цитоплазмы клеток животных и растений. Яичный белок по своим свойствам близок к сывороточному альбумину. Среди транспортных систем крови сывороточному альбумину принадлежит важная роль, его доля составляет около 60 % от суммарного количества белков крови. В молекуле альбумина содержится большое количество реакционно-способных участков (тиоловые, имидазольные, карбоксильные группы, аминогруппы лизина), благодаря чему он легко вступает во взаимодействие с различными ионами. Альбумин обладает способностью связывать значительное число лигандов различной химической структуры. Вследствие этой своей способности альбумин является уникальным среди белков плазмы. Высокая тропность альбумина к разного рода лигандам в сочетании с низкой избирательностью лиганд-протеинового связывания позволяет рассматривать взаимодействие экзогенных соединений с альбумином как один из этапов реализации обобщающих закономерностей контакта организма и химических объектов окружающей среды. Известно, что распределение любых физиологически активных веществ в организме в значительной степени зависит от их связывания с транспортными белками крови и, в первую очередь, с альбумином [14].

Изучение связывания азолов с белками плазмы крови является одной из наиболее важных задач. Это объясняется тем, что лекарственные средства связываются с плазматическими белками в большей степени, чем с другими компонентами крови.

В наше время интерес к исследованию альбумина не ослабевает, а накопленные данные позволяют перевести изыскания на качественно новый уровень и вплотную подойти к научно обоснованному моделированию и прогнозированию лиганд-альбуминовых взаимодействий. В последние годы этот подход активно развивается, предлагаются различные модели, в основе которых лежат критерии растворимости, липофильности, кислотно-основные свойства молекул лиганда, элементы структуры и другие параметры [14].

Казеин — основной белок молока. Он относится к запасным белкам и представляет собой смесь нескольких фосфопротеидов (ае-, Ь-казеинов). В фракцию казеина входит также ^-казеин (2,5 % от всего казеина) — продукт частичного протеолиза Ь-казеина, катализируемого протеиназой молока. Основные компоненты казеина имеют генетические варианты, различающиеся несколькими аминокислотными остатками. Эти белки имеют молекулярную массу около 20 тыс., изоэлектрическую точку около 4,7, содержат повышенные количества пролина (полипептидная цепь имеет Ь-структуру), устойчивы к действию денатурантов. Казеин включает все необходимые организму аминокислоты (в т. ч. незаменимые), является главной составной частью творога и сыра; служит плен-кообразователем в производстве клеев и клеевых красок, а также сырьём для пластмасс и волокон [15].

Используемая нами желатина представляет собой продукт гидролиза белка коллагена. Коллаген — фибриллярный белок, составляющий основу соединительной ткани животных и обеспечивающий её прочность. Коллаген, или тропоколлаген, наиболее распространённый белок животного мира. У взрослых млекопитающих на долю коллагена приходится почти 30 % от всей массы белков. Одной из отличительных особенностей данного белка является то, что 1/3 всех его аминокислотных остатков составляет глицин, 1/3 — пролин и 4-гидроксипролин, около 1 % — гидроксилизин; некоторые

молекулярные формы коллагена содержат также 3-гидроксипролин, хотя и в весьма ограниченном количестве [16]. Коллаген характеризуется низким содержанием серосодержащих аминокислот и отсутствием триптофана [17]. Согласно последним структурным исследованиям, молекулы тропоколлагена, расположенные ближе к периферии фибриллы, связаны большим количеством ковалентных связей, нежели центральные тропоколлагеновые молекулы [18], в связи с чем фибрилла в целом обладает жёстким поверхностным слоем и более мягкой сердцевиной. Желатина используется в пищевой промышленности, при изготовлении фотографических материалов, а также как среда для культивирования микроорганизмов в микробиологии [17].

Белки представляют собой полипептидные цепи, построенные из аминокислот, в водной среде они содержат основные группы HONH3- и кислотные группы -СООН.

В кислой среде в результате избытка водородных ионов подавлена ионизация карбоксильных групп. Молекула белка ведёт себя как основание, приобретает положительный заряд (за счёт преобладания групп NH+) и под действием внешнего электрического поля передвигается к катоду. В щелочной среде из-за большого количества ОН-ионов ионизация HON^-групп подавлена, и молекула белка ведёт себя как кислота, приобретает отрицательный заряд (за счёт групп -COO-) и передвигается к аноду.

Между указанными состояниями белка существует состояние, при котором отрицательный заряд всех анионных групп скомпенсирован положительным зарядом катионных групп, при этом наблюдается равенство числа ионизированных кислотных и основных групп, то есть суммарный заряд макромолекулы равен нулю. Это равнозарядное состояние называют изоэлектрическим, а значение рН среды, отвечающее этому состоянию, — рН изоэлектрической точкой (рНиэт).

В изоэлектрическом состоянии свойства растворов полиамфолитов меняются, при этом данные растворы имеют наименьшую вязкость, плохую растворимость, наименьшую степень набухания, большую летучесть, что связано с изменением формы макромолекул [19].

В работе выбраны следующие методы исследования. Изоэлектрические точки белков определены по изменению их степени набухания, электрокинетического потенциала и относительной вязкости в зависимости от значений рН, вида азола и их концентрации. Важно отметить, используемыми методами определяется только ИЭТ белков, а точнее рНиэт. Положение рНиэт смещается в щелочную область в случае специфической сорбции катионов и в кислую — анионов. Значение рН в точке нулевого заряда, или рНтнз, определяется по адсорбционным данным — по пересечению кривых потенциометрического титрования (в присутствии адсорбента и без него). В этом случае рНтнз смещается в кислую область при специфической сорбции катионов и в щелочную для анионов.

Степень набухания определяли по стандартной методике [20]. Массу высокомолекулярного вещества (ВМВ) до и после набухания находили с помощью торсионных весов, значения рН растворов измерялись на рН-метре рН-673. Степень набухания рассчитывали по формуле

m2 - mi

а =----------,

mi

где а — степень набухания; m2 — масса (мг) набухшего ВМВ; mi — масса (мг) ВМВ до набухания.

Вязкость определяли методом вискозиметрии с помощью вискозиметра Оствальда [20]. Для расчёта относительной вязкости растворов белков (п) измеряли время истечения раствора белка (£2) и дистиллированной воды (ti) через узкий капилляр

12-| а 108642

10

12

Рис. 1. Зависимость степени набухания желатины от рН раствора:

1 — фоновый (не содержит азотсодержащих гетероциклов);

2 — раствор диметилпиррола, 0,001 моль/л; 3 — раствор имида-зола, 0,001 моль/л

вискозиметра при одинаковых давлениях. Относительную вязкость растворов белков рассчитывали по формуле

Ч„„. = 32 = ^2, ,2)

П1 ^1р1

где П2 — вязкость водного раствора белка; П1 — вязкость растворителя — дистиллированной воды; р2 и р1 — плотности водного раствора белка и дистиллированной воды, соответственно.

Электрокинетический потенциал (^-потенциал) определяли методом макроэлектрофореза — методом подвижной границы [20, 21]. Границу раздела между водной дисперсией белка и раствором, имеющим такой же состав, как и дисперсионная среда, определяли с помощью лазера. Для макроэлектрофореза использовали 1 %-ю водную дисперсию белка. Электрокинетический потенциал белков рассчитывали по уравнению Гельмгольца—Смолуховского

К лт^Мэ.ф. & /„ч

£= ---------> «э.ф =Ш,

где п — вязкость дисперсионной среды; мэ.ф. — электрофоретическая подвижность; & — расстояние, на которое сместилась подвижная граница за время £ при градиенте потенциала Н; е — диэлектрическая проницаемость дисперсионной среды; К — фактор, учитывающий форму частиц.

Во всех трёх методиках измерения проводили через 1 ч после приготовления водных дисперсий белков.

Погрешность всех измерений не превышала 10 %.

Исследования проводили в водных растворах. Необходимые значения рН дисперсионной среды создавали с помощью растворов соляной кислоты и гидроксида калия либо использовали стандартные буферные растворы с известными значениями рН.

По полученным данным построены графики зависимостей степени набухания, относительной вязкости и электрокинетического потенциала (^-потенциал) от значений рН растворов белка.

На рис. 1 представлены зависимости степени набухания (а) желатины от рН растворов. Минимум на кривых а—рН соответствует значению рНиэт желатины. В растворах имидазола (кривая 3) наблюдается наибольшее смещение ИЭТ желатины по сравнению с ИЭТ желатины в растворах неорганических электролитов (НС1, КОН) — кривая 1.

Рис. 2. Зависимость степени набухания желатины от рН раствора:

1 — фоновый (не содержит азотсодержащих гетероциклов); 2 — раствор пи-разолона, 0,001 моль/л; 3 — раствор 2-аминотиазола, 0,001 моль/л

Аналогичные результаты были получены для желатины в растворах с метилимидазо-лом и некоторыми другими производными имидазола. Смещение рНиэт в щелочную область свидетельствует о специфической сорбции катионов, что согласуется с преобладанием катионных форм у имидазола и его производных. Сравнение ИЭТ желатины в растворах дибазола [22] и имидазола, показывает, что дибазол смещает ИЭТ желатины аналогично имидазолу, но значительно меньше. Во всех случаях смещение ИЭТ у производных имидазола меньше, чем в системе с имидазолом, но значительнее, чем у дибазола. Можно предположить, что чем сложнее строение молекул у производных имидазола, тем слабее они влияют на ИЭТ белка. Важную роль здесь может играть стерический фактор. Влияние заместителя зависит и от типа группы, например, ме-тильная группа обладает положительным индуктивным эффектом, поэтому введение её в молекулу имидазола увеличивает отрицательный заряд я-системы и делает реакционную способность анионов метилимидазола выше, чем анионов имидазола. Вследствие этого сорбция метилимидазолат-анионов становится больше, чем сорбция имидазолат-анионов, что приводит к уменьшению роли специфической сорбции катионов, следовательно, и уменьшению смещения рНиэт.

В случае пиразолона (рис. 2, кривая 2) наблюдается сдвиг ИЭТ желатины в основную область, но он существенно меньше, чем у диметилпиррола (рис. 1, кривая 2). Аналогично ведут себя и все исследованные нами производные пиразолона, не приведённые на рис. 2. Следует отметить, что ИЭТ близки для всех производных пиразолона. Очевидно, что пиразолон и его производные взаимодействуют с белками значительно слабее, чем имидазола и его производные. Как отмечено выше, в молекуле пиразолона атомы азота находятся рядом (положения 1, 2) в отличие от молекулы имидазола (положения атомов азота 1,3), что приводит к ослаблению не только донорной способности азота в молекуле пиразолона, но и реакционной способности пиразолона в целом.

Тиазол и его производные, как и имидазол, значительно смещают ИЭТ белка в щелочную область. Особенность тиазола и его производных состоит в том, что природа заместителя практически не влияет на смещение ИЭТ. Пример зависимости а—рН для желатины в растворе производного тиазола — аминотиазоле показан на рис. 2, кривая 3. Замена одного атома азота атомом серы в гетероцикле молекулы азола приводит к нивелированию роли других заместителей, находящихся в боковых ответвлениях гетероцикла.

Триазол (рис. 3, кривая 2) также смещает ИЭТ белка в основную область, но это смещение меньше, чем у имидазола и производных тиазола. Производные триазола

10-

8-

6-

4-

2

0

10

_рН

"Ъ

10

12

Рис. 3. Зависимость степени набухания желатины от рН раствора:

1 — фоновый (не содержит азотсодержащих гетероциклов); 2 — раствор 1,2,4-триазола, 0,001 моль/л;

3 — раствор 3,5-бутиламино 1,2,4-триазола, 0,001 моль/л

6

4

2

Рис. 4. Зависимость степени набухания желатины от рН раствора:

1 — фоновый (не содержит азотсодержащих гетероциклов); 2 — раствор 1,2,3,4-тетразола, 0,001 моль/л

ИЭТ белка практически не смещают. Это обусловлено тем, что в растворах триазола и его производных содержание катионных форм значительно меньше, чем в растворах имидазола и тиазола.

В случае тетразола (рис. 4, кривая 2) наблюдается смещение ИЭТ в кислую область, что говорит о специфической сорбции аниона тетразола на белке. Аналогично ведут себя и исследованные нами производные тетразола, не приведённые здесь, но сдвиг ИЭТ для них менее выражен, чем у тетразола.

В работе были исследованы дисперсии желатины в водных растворах азолов и их производных, для которых заданные значения рН создавали с помощью стандартных буферных растворов, так как в литературе часто рекомендуется использовать стандартные буферные растворы для определения ИЭТ белков [20]. В этих случаях азолы и их производные в значительно меньшей степени влияли на значения ИЭТ желатины. Это объясняется влиянием многозарядных анионов на ИЭТ белка, конкретно в нашем случае — фосфат-аниона. Отсюда следует, что при определении ИЭТ заданные значения рН и ионной силы дисперсий более корректно создавать с помощью однозарядных электролитов (НС1, ^ОН, КОН, ^С1), менее склонных к специфической сорбции.

Влияние имидазола на ИЭТ казеина исследовали методом макроэлектрофореза. Зависимости ^—рН для водных дисперсий казеина приведены на рис. 5. ИЭТ на зависимости ^—рН соответствует значению рН, при котором ^-потенциал равен нулю. На

Рис. 5. Зависимость электрокинетического потенциала казеина от pH раствора:

1 — дисперсия казеина в отсутствие азолов; 2 — дисперсия казеина с ими-дазолом

Рис. 6. Зависимость относительной вязкости водных дисперсий альбумина от pH:

1 — в отсутствие азолов; 2 — с метилими-дазолом; 3 — с имидазолом

рисунке видно, что имидазол смещает ИЭТ казеина в щелочную область по сравнению с ИЭТ белка в растворе простых неорганических электролитов (НС1, КОН). Направление и величина смещения ИЭТ казеина в растворе имидазола согласуются с данными для желатины.

На рис. 6 приведены зависимости относительной вязкости дисперсий альбумина от рН водной фазы. Как отмечено выше, в ИЭТ дисперсии белков имеют наименьшую вязкость. На рисунке видно, что имидазол влияет на ИЭТ альбумина так же, как и казеина. Метилимидазол влияет на ИЭТ альбумина слабее, чем имидазол, как и на ИЭТ желатины.

Заключение.

1. В работе установлено, что все азолы в ряду пиррол ^ 1,2-диазол ^ 1,3-диазол ^ 1,2,4-триазол ^ 1,2,3,4.-тетразол смещают ИЭТ желатины, казеина и альбумина, что свидетельствует о специфическом (отличном от простого электростатического) взаимодействии азолов с белками.

2. Пиррол, 1,2-диазол, 1,3-диазол и 1,2,4-триазол смещают ИЭТ белков по сравнению с неорганическими электролитами (НС1, КОН) в щелочную область, что свидетельствует о специфической сорбции катионных форм азолов. Смещение ИЭТ 1,3-диазолом больше, чем 1,2,4-триазолом в соответствии с уменьшением количества катионных форм в их растворах. Важно отметить, что 1,2-диазол (пиразол) очень слабо смещает ИЭТ белков по сравнению с 1,3-диазолом (имидазолом) вследствие ослабления донорно-акцепторных свойств и реакционной способности у 1,2-диазолов, несмотря на то, что содержание катионных форм в их растворах очень близко. Последний факт говорит о возможном характере специфического взаимодействия между азолами и белками.

3. Тетразол смещает ИЭТ белков в кислую область, что свидетельствует о специфической сорбции анионов. В растворах всех исследованных азолов, кроме пиррола и его производных, одновременно присутствуют катионные и анионные формы, которые могут сорбироваться специфически. Преобладание той или иной ионной формы приводит к смещению ИЭТ белков либо в щелочную (для катионов, преобладающих в растворах диазола и триазола), либо в кислую (для анионов, преобладающих в растворах тетразола). Наличие в молекулах азолов различных заместителей, изменяющих соотношение анионных и катионных форм, приводит к уменьшению или увеличению сдвига ИЭТ.

Литература

1. Тихомолова К. П., Дмитриева И. Б., Иванова М. В. Влияние поверхностного комплек-сообразования 1,3-диазола на электроповерхностные свойства оксидов металлов // Журн. прикл. химии. 1998. Т. 71. Вып. 4. С. 536-543.

2. Дмитриева И. Б., Тихомолова К. П., ЧухноА. С. Особенности адсорбции 1,3-диазола на поверхности оксидов NiO и Fe2O3 // Журн. прикл. химии. 2005. T. 78. Вып. 5. С. 741-746.

3. Dmitrieva I. B, Tikhomolova K. P. ChukhnoA.S. et al. Investigation of the electrosurface properties of NiO and Fe2O3 in azole solutions // Colloid and Surfaces. (A). 2007. Vol. 241. Iss. 1-3. P. 45-59.

4. ЧухноА. С., Дмитриева И. Б., Тихомолова К. П., Воронкова Н. В. Электроповерхностные свойства оксидов никеля(П) и железа(Ш) в водных растворах 1,2,4 триазола // Журн. прикл. химии. 2010. T. 83. Вып. 7. С. 1119-1123.

5. Тихомолова К. П., Дмитриева И. Б. Иванова М. В., Колдобский Г. И. Кинетика изменений электроповерхностных свойств NiO в водных растворах тетразола с позиции поверхностного лигандного обмена // Журн. прикл. химии. 2000. Т. 73. Вып. 3. С. 391-396.

6. Дмитриева И. Б., ЧухноА. С., Степина Е. Ю. Влияние тетразола и метилтетразола на электроповерхностные свойства водных суспензий оксида никеля(П) // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 4: Физика, химия. 2003. Вып. 4. С. 57-61.

7. Дмитриева И. Б., Тихомолова К. П., ЧухноА. С. Адсорбция тетразола на оксидах Ni(II) и Fe(III) // Журн. прикл. химии. 2006. Т. 79. Вып. 1. С. 51-56.

8. Паккет Л. Основы современной химии гетероциклических соединений. М., 1971. 352 с.

9. ИванскийВ. И. Химия гетероциклических соединений. М., 1978. 559 с.

10. Ostrovskii V. A., Koldobskii G. I., Trifonov R. E. Tetrazoles // Comprehensive heterocyclic chemistry III / ed. by A. R. Katrizky, C. A. Ramsden, E. F. V. Scriven, R. J. K. Taylor. Oxford, 2008. Vol. 6. Р. 257-262.

11. Трифонов Р. Е., Островский В. А. Протолитические равновесия тетразолов // Журн. органич. химии. 2006. T. 42. Вып. 11. С. 1599-1616.

12. Эльдерфильд Р. Гетероциклические соединения / под ред. Р. Эльдерфилда / пер. с англ. под ред. Н. К. Кочеткова. T. 5. М., 1961. 584 с.

13. Петров Б. И., Ыосквитинова T. Б. Использование реакции межфазного анионного обмена для повышения избирательности экстракции // Журн. аналит. химии. 1982. T. 37. Вып. 7. С. 1185-1192.

14. WoodM. Anesthesia and analgesia // Vanderbilt Univercity. Nashville, Tennessee, USA, 1986. Vol. 65. Р. 786-804.

15. Черников М. П. Протeолиз и биологическая ценность белков (Казеины как собственно пищевые белки). М., 1975. 232 с.

16. Уайт А., Хендлер Ф., СмитЭ. и др. Основы биохимии. М., 1981. 1878 с.

17. Мазуров В. И. Биохимия коллагеновых белков. М., 1974. 248 с.

18. Gutsmann T., Fantner G. E., Venturoni M. et al. Evidence that Collagen Fibrils in Tendons Are Inhomogeneously Structured in a Tubelike // Biophysical J. 2003. Vol. 84. P. 2593-2598.

19. Беляев А. П. Физическая и коллоидная химия / под. ред. А. П. Беляева. М., 2008. 704 с.

20. БугрееваЕ. В., ЕвстратоваК. И., КупинаН. А. и др. Практикум по физической и коллоидной химии / под ред. К. И. Евстратовой. М., 1990. 255 с.

21. Григоров О. Н., КарповаИ. Б, Козьмина З. П. и др. Руководство к практическим работам по коллоидной химии. Л., 1964. 336 с.

22. ЧухноА. С., ДмитриеваИ. Б., Мартынов Д. В. Взаимодействие белков с азолами и лекарственными средствами на их основе при различных значениях рН // Вестн. КазНУ. Сер. химич. 2010. T. 3. № 59. С. 30-33.

Статья поступила в редакцию 26 ноября 2010 г.