МУТАНТНЫЙ ФОТОПРОТЕИН (ВАРИАНТЫ) ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО КАЛЬЦИЯ ОДНОВРЕМЕННО В РАЗНЫХ ОРГАНЕЛЛАХ КЛЕТКИ

1. Мутантный фотопротеин для определения внутриклеточного кальция одновременно в разных органеллах клетки, обладающий светоизлучающей функцией и характеризующийся аминокислотной последовательностью кальций-регулируемого фотопротеина дикого типа, в которой, по крайней мере, природный остаток фенилаланина, относящийся к консервативной области названной последовательности и соответствующий остатку 119 фотопротеина обелина Obelia longissima (или остатку 120 фотопротеина акворина Aequorea victoria, или остатку 122 фотопротеина клитина Clytia gregaria), заменен другим аминокислотным остатком, отличным от фенилаланина, таким образом, что чувствительность кальций-регулируемого фотопротеина к ионам кальция уменьшается по сравнению с фотопротеином дикого типа.
2. Мутантный фотопротеин по п.1, отличающийся тем, что аминокислотный остаток, соответствующий остатку 119 в обелине Obelia longissima, является триптофаном.
3. Мутантный фотопротеин по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что он дополнительно мутирован таким образом, что аминокислотный остаток, соответствующий остатку 88 обелина Obelia longissima заменен другим остатком, отличным от фенилаланина, введение которого обеспечивает изменение длины волны испускаемого света по сравнению с фотопротеином дикого типа.
4. Мутантный фотопротеин по п.3, отличающийся тем, что гидрофобная аминокислота заменена на гидрофильную аминокислоту.
5. Мутантный фотопротеин по п.4., где гидрофильная аминокислота, обеспечивающая изменение длины волны испускаемого света, представляет собой тирозин.
6. Мутантный фотопротеин по пп.1, 2, 3, 4, 5, характеризующийся аминокислотной последовательностью, описанной в Seq. №2, где аминокислотный остаток обелина фенилаланин 119 заменен на триптофан и изолейцин, в положении 88 заменен на гистидин.
7. Мутантный фотопротеин для определения внутриклеточного кальция одновременно в разных органеллах клетки, обладающий светоизлучающей функцией и характеризующийся аминокислотной последовательностью кальций-регулируемого фотопротеина дикого типа, в которой природный остаток изолейцина, являющийся консервативной аминокислотой и соответствующий остатку 144 фотопротеина обелина Obelia longissima (или остатку 145 фотопротеина акворина Aequorea victoria, или остатку 147 фотопротеина клитина Clytia gregaria), заменен другим аминокислотным остатком, отличным от изолейцина, таким образом, что увеличивается чувствительность кальций-регулируемого фотопротеина к ионам кальция и изменяется длина волны излучения по сравнению с фотопротеином дикого типа.
8. Мутантный фотопротеин по п.7, отличающийся тем, что гидрофобный аминокислотный остаток в положении 144 фотопротеина обелина Obelia longissima заменен на гидрофильный аминокислотный остаток.
9. Мутантный фотопротеин по п.8, где гидрофильная аминокислота, обеспечивающая увеличение чувствительности кальций-регулируемого фотопротеина к ионам кальция и изменение длины волны испускаемого света, представляет собой гистидин.
10. ДНК, кодирующая мутантный фотопротеин по п.6, характеризующаяся тем, что ее полинуклеотидная последовательность представляет собой последовательность фотопротеина обелина дикого типа, в которой кодоны, соответствующие аминокислотным остаткам в положениях 119 и 88, заменены кодонами, определяющими аминокислоты, отличные от фенилаланина, таким образом, что чувствительность кальций-регулируемого фотопротеина к ионам кальция уменьшается и изменяется длина волны испускаемого света по сравнению с фотопротеином дикого типа.
11. ДНК по п.10, отличающаяся тем, что имеет нуклеотидную последовательность, описанную в Seq. №1, где нуклеотиды в положениях 262-264 образуют кодон, кодирующий аминокислоту, отличную от фенилаланина и обеспечивающую смещение максимума излучения в более коротковолновую область спектра, и нуклеотиды в положениях 355-357 образуют кодон, кодирующий аминокислоту, отличную от фенилаланина и обеспечивающую уменьшение чувствительности фотопротеина к ионам кальция.
12. ДНК по п.11, где нуклеотиды в положениях 262-264 кодируют тирозин, и нуклеотиды в положениях 355-357 кодируют триптофан.
13. ДНК, кодирующая мутантный фотопротеин по п.9, характеризующаяся тем, что ее полинуклеотидная последовательность представляет собой последовательность фотопротеина обелина дикого типа, в которой кодон, соответствующий аминокислотному остатку в положении 144, заменен кодоном, определяющим аминокислоту, отличную от изолейцина, таким образом, что чувствительность кальций-регулируемого фотопротеина к ионам кальция увеличивается и изменяется длина волны испускаемого света по сравнению с фотопротеином дикого типа.
14. ДНК по п.13, отличающаяся тем, что имеет нуклеотидную последовательность, описанную в Seq. №3, где нуклеотиды в положениях 430-432 образуют кодон, кодирующий аминокислоту, отличную от изолейцина и обеспечивающую смещение максимума излучения в более длинноволновую область спектра и увеличение чувствительности фотопротеина к ионам кальция.
15. ДНК по п.14, где нуклеотиды в положениях 430-432 кодируют гистидин.
16. Вектор для экспрессии белка, охарактеризованный в любом из пп.1-6, в клетках млекопитающих, представляющий собой плазмиду pCMV/myc/mito, в которую лигирована ДНК, охарактеризованная в любом из пп.10-12.
17. Вектор для экспрессии белка, охарактеризованный в любом из пп.7-9, в клетках млекопитающих, представляющий собой плазмиду pcDNA3, в которую лигирована ДНК, охарактеризованная в любом из пп.13-15.