СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИБРИНОГЕНА

1. Способ очистки фибриногена из содержащего фибриноген сырья с применением хроматографии на анионообменных смолах, где анионообменные смолы выбраны из группы, состоящей из носителя, содержащего гидроксилированный полимер с привитыми третичными или четвертичными аминогруппами.
2. Способ по п.1, где носитель состоит из целлюлозы, агарозы, диоксида кремния, полимерного или керамического материала.
3. Способ по любому из пп.1 и 2, где анионообменная смола представляет собой триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к гидроксилированному метакриловому полимеру, такую как GigaCap Q-650.
4. Способ по п. 1, где содержащее фибриноген сырье представляет собой криопреципитат, предпочтительно растворенный при нейтральном значении рН.
3
5. Способ по п.4, где полученный раствор обрабатывают Al(OH) и полученный гель удаляют.
6. Способ по п.4 или 5, где инактивацию вирусов проводят с помощью обработки растворителем-детергентом (S/D).
7. Способ по п.6, где проводят экстракцию реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и осмоляльностью 570-610 мосмоль/л.
8. Способ по п.7, где фибриноген осаждают с помощью глицина, в частности, приблизительно 1 М глицина, и выделяют образованную пасту фибриногена.
9. Способ по п.8, где пасту фибриногена ресуспендируют предпочтительно в приблизительно 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0.
10. Способ по п.9, где полученную после фильтрации фракцию наносят на сильную ионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и слабо связавшиеся вещества отмывают предпочтительно промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см.
11. Способ по п.10, где фибриноген элюируют элюирующим буфером, содержащим цитрат натрия, хлорид натрия и глицин, предпочтительно около 1,5 г/л цитрата натрия, 7,0 г/л хлорида натрия и 10,0 г/л глицина, в частности со значением рН, доведенным до 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см.
12. Способ по п.11, где полученную фракцию концентрируют, составляют, стерилизуют фильтрованием и/или заполняют.
13. Способ по п.12, где полученную фракцию лиофилизируют.
14. Способ по п.1, включающий следующие стадии:
a. растворение криопреципитата, разведенного при нейтральном значении рН,
3
b. подвергание раствора адсорбции с Al(OH) и удаление полученного геля,
c. инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D), экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт контакта водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и с осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,
d. осаждение фибриногена, обнаруживаемого в смыве или супернатанте стадии с) с помощью приблизительно 1 М глицина и выделение пасты фибриногена,
e. ресуспендирование пасты фибриногена в 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0, фильтрация и
f. нанесение отфильтрованного раствора стадии е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабо связавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,
g. элюирование фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности со значением рН, доведенным до значения приблизительно 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см,
h. концентрирование, составление, стерилизация фильтрованием и заполнение.
15. Содержащий фибриноген продукт, полученный по любому из пп.1-14.
16. Содержащий фибриноген продукт по п.15 с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена, полученный способом, включающим следующие стадии:
a. растворение криопреципитата, разведенного при нейтральном значении рН,
3
b. подвергание полученного раствора адсорбции с Al(OH) и удаление полученного геля,
c. инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D) c Triton и TnBP, экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,
d. осаждение фибриногена, обнаруживаемого в смыве или супернатанте стадии с) с помощью приблизительно 1 М глицина и выделение пасты фибриногена,
e. ресуспендирование пасты фибриногена в 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0, фильтрация и
f. нанесение отфильтрованного раствора этапа е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабо связавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,
g. элюирование фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности со значением рН, доведенным до значения приблизительно 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см,
h. концентрирование, составление, стерилизация фильтрованием и заполнение.
17. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16 с содержанием фибринопептида А 0,01-9,0 нг/мг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕ/мг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1 МЕ/мг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕ/мг фибриногена.
18. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16, обладающий следующими свойствами:
Фибриноген по методу Клауса (турбидометрический метод) [мг/мл]
20-26,0
мг антигена фибриногена/мг фибриногена (по методу Клауса)
0,8-1,2
МЕ фактора свертываемости крови FXIII/мг фибриногена (по методу Клауса)
0,09-0,14
мкг фибронектина/мг фибриногена (по методу Клауса)
0,1-1,0
нг фибринопептида А/мг фибриногена (по методу Клауса)
0,3-5,0
19. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16, отличающийся тем, что он находится в лиофилизированном виде.
20. Применение анионообменной смолы, выбранной из группы, состоящей из носителя, содержащего основную цепь гидроксилированного полимера с привитыми к нему третичными или четвертичными аминогруппами, для очистки или производства содержащего фибриноген продукта по любому из пп.15-19 способом по любому из пп.1-14.