СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАТЕХОЛАМИНОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТВЕРДОФАЗНОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО БИОСЕНСОРА

1. Способ определения катехоламинов и их метаболитов с использованием твердофазного флуоресцентного биосенсора, включающий ферментативную дериватизацию исходных соединений с образующими конденсированные структуры аминами, отличающийся тем, что аналитический сигнал регистрируется не в растворе, а непосредственно в чувствительном слое сенсора, закрепленном на поверхности подложки, что позволяет проводить анализ в непрозрачных и мутных средах без их дополнительной пробоподготовки.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве фермента используют пероксидазу из корней хрена, в качестве окислителя используют пероксид водорода, в качестве амина используют о-фенилендиамин; процесс проводят при концентрации пероксидазы хрена - 10-25 нМ; концентрации пероксида водорода - 250-500 мкМ, концентрации дериватизирующего агента - 50-100 мкМ; концентрации катехоламинов и метаболитов - 5-2000 нМ; в качестве буферного раствора берут 5 мМ фосфатный буферный раствор рН 9,5-10,0.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что чувствительный слой сенсора содержит иммобилизованные фермент и дериватизирующий агент и представляет собой двухслойную пленку {хитозан - о-фенилендиамин/хитозан - пероксидаза}; формирование чувствительного слоя осуществляют последовательным нанесением 100 мкл смеси {хитозан - о-фенилендиамин} и 150 мкл смеси {хитозан - пероксидаза} на поверхность стеклянной пластинки (14×40 мм); объемная доля хитозана в пленке - 95%; после нанесения каждого слоя поверхность биосенсора высушивается на воздухе при комнатной температуре.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что для проведения индикаторной реакции биосенсор выдерживается 30 сек в реакционной системе и высушивается на воздухе при комнатной температуре; для измерения аналитического сигнала биосенсор устанавливается в кюветном отделении флуориметра перед отражающей поверхностью (зеркальная пластинка, 14×40 мм) под углом 75º относительно источника возбуждения (ксеноновая лампа), интенсивность флуоресценции чувствительного слоя регистрируется в режиме отражения.