АНАЛИЗ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛОСТРИДИАЛЬНОГО НЕЙРОТОКСИНА

1. Способ измерения эффекта, вызванного в клеточной культуре клостридиальным нейротоксином, включающий:
(а) контактирование клеточной культуры с образцом, включающим указанный клостридиальный нейротоксин;
(с) измерение указанного эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным клостридиальным нейротоксином;
где этап (с) выполняют в отсутствии указанного образца; и
до указанного измерения в этапе (с) и после контакта в этапе (а) указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч с водной средой, которая не содержит клостридиального токсина.
2. Способ по п.1 определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце, включающий:
(а) контактирование клеточной культуры с указанным вторым образцом;
(c) измерение второго эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным нейротоксином;
(d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина;
(e) регистрацию указанного измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, второго набора данных;
(f) контактирование клеточной культуры с указанным первым образцом;
(h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре;
(k) определение концентрации, при которой указанный первый и указанный второй эффекты идентичны;
(l) приравнивание указанной концентрации в (k) к указанной неизвестной концентрации;
где этап (с) и/или этап (h) выполняют в отсутствии указанного второго и/или первого образца; и
до указанного измерения в этапе (с) или этапе (h), или этапе (с) и этапе (h), и после контакта в этапе (а) или этапе (f), или этапе (а) и этапе (f), указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч с водной средой, которая не содержит клостридиального токсина.
3. Способ по п.1 определения относительной активности клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к активности клостридиального нейротоксина во втором образце, включающий:
(а) контактирование клеточной культуры с указанным вторым образцом;
(с) измерение второго эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным нейротоксином;
(d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина;
(e) регистрацию указанного измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, второго набора данных;
(f) контактирование клеточной культуры с указанным первым образцом;
(h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре;
(i) повторение этапов (f)-(h) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина;
(j) регистрацию указанного измеренного первого эффекта этапа (i) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, первого набора данных;
где этап (с) и/или этап (h) выполняют в отсутствии указанного второго и/или первого образца; и
до указанного измерения в этапе (с) или этапе (h), или этапе (с) и этапе (h), и после контакта в этапе (а) или этапе (f), или этапе (а) и этапе (f), указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч с водной средой, которая не содержит клостридиального токсина.
4. Способ измерения эффекта, вызванного в мышечной ткани клостридиальным нейротоксином, включающий:
(а) контактирование мышечной ткани с образцом, включающим указанный клостридиальный нейротоксин;
(с) измерение указанного эффекта, вызванного в указанной мышечной ткани указанным клостридиальным нейротоксином;
где этап (с) выполняют в отсутствии указанного образца.
5. Способ по п.4 определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце, включающий:
(а) контактирование мышечной ткани с указанным вторым образцом;
(с) измерение второго эффекта, вызванного в указанной мышечной ткани указанным нейротоксином;
(d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина;
(e) регистрацию указанного измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, второго набора данных;
(f) контактирование мышечной ткани с указанным первым образцом;
(h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной мышечной ткани;
(k) определение концентрации, при которой указанный первый и указанный второй эффекты идентичны;
(l) приравнивание указанной концентрации в (k) к указанной неизвестной концентрации;
где этап (с) и/или этап (h) выполняют в отсутствии указанного второго и/или первого образца.
6. Способ по п.4 определения относительной активности клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к активности клостридиального нейротоксина во втором образце, включающий:
(а) контактирование мышечной ткани с указанным вторым образцом;
(c) измерение второго эффекта, вызванного в указанной мышечной ткани указанным нейротоксином;
(d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального неиротоксина;
(e) регистрацию указанного измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, второго набора данных;
(f) контактирование мышечной ткани с указанным первым образцом;
(h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной мышечной ткани;
(i) повторение этапов (f)-(h) при различных концентрациях указанного клостридиального неиротоксина;
(j) регистрацию указанного измеренного первого эффекта этапа (i) в зависимости от концентрации, с регистрацией, таким образом, первого набора данных;
где этап (с) и/или этап (h) выполняют в отсутствии указанного второго и/или первого образца.
7. Способ по п.3 или 6, дополнительно включающий этапы (m) и (n):
(m) выбор указанных различных концентраций из диапазона концентраций, который лучше всего соответствует первому и второму набору данных;
(n) определение указанного наилучшего соответствия с помощью статистического критерия, включающего следующие подэтапы (α)-(δ):
(α) представление диапазона значений второго набора данных, полученного в этапе (е), в виде эмпирической кривой;
(β) представление диапазона значений первого набора данных, полученного в этапе (j), в виде эмпирической кривой;
(γ) линеаризация эмпирических кривых, соответственно;
(δ) параллелизация линеаризованных эмпирических кривых.
8. Способ по п.7, дополнительно включающий этап (ε):
(ε) вычисление на основе смещения линеаризованных и параллелизованных эмпирических кривых относительно друг друга относительной активности первого образца по отношению ко второму образцу.
9. Способ по любому из пп.1-3, где указанный эффект является расщеплением белка из комплекса SNARE.
10. Способ по любому из пп.1-3, где до указанного измерения на этапе (с) или этапе (h), или этапе (с) и этапе (h) указанную клеточную культуру подвергают контакту с указанным клостридиальным токсином в течение от 5 до 45 ч или от 15 до 40 ч, или от 25 до 35 ч; или
где до указанного измерения в этапе (с) или этапе (h), или этапе (с) и этапе (h) указанную клеточную культуру подвергают контакту с указанным клостридиальным токсином в течение от 5 до 45 ч или от 15 до 40 ч, или от 25 до 35 ч; и где до указанного измерения в этапе (с) или этапе (h), или этапе (с) и этапе (h), и после контакта в этапе (а) или этапе (f), или этапе (а) и этапе (f), указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч или от 1 до 95 ч, или от 6 до 90 ч, или от 7 до 80 ч, или от 8 до 70 ч, или от 9 до 60 ч, или от 10 до 50 ч, или от 11 до 50 ч, или от 12 до 40 ч, или от 15 до 40 ч, с водной средой, которая не содержит клостридиального токсина.
11. Способ по любому из пп.4-6, где указанную мышечную ткань подвергают электрической стимуляции; или где указанную мышечную ткань подвергают электрической стимуляции, включающий этап (b) после этапа (а) или включающий этап (b) после этапа (а) и этап (g) после этапа (f):
(b) электрическая стимуляция указанной мышечной ткани, полученной в этапе (а);
(g) электрическая стимуляция указанной мышечной ткани, полученной в этапе (f).
12. Способ по любому из пп.4-6, где этапы (b) или (g) выполняют в отсутствии второго или первого образца, или где этапы (b) и (g) выполняют в отсутствии второго и первого образца.
13. Способ по любому из пп.2, 3, 5 или 6, где указанную регистрацию указанного измеренного второго эффекта проводят путем построения графика зависимости указанного второго эффекта от концентрации, и указанную регистрацию указанного второго набора данных проводят посредством регистрации калибровочной кривой.
14. Способ по любому из пп.4-6, где указанный первый и второй эффекты выбраны из группы, состоящей из времени до наступления паралича указанной мышечной ткани, изменения частоты сокращений указанной мышечной ткани, изменения расстояния сокращения указанной мышечной ткани, изменения силы сокращения указанной мышечной ткани, изменения потенциала концевой пластинки или миниатюрного потенциала концевой пластинки указанной мышечной ткани.
15. Способ по любому из пп.4-6, где указанная мышечная ткань выбрана из межреберной мышцы, мышцы задней конечности и длинной разгибающей мышцы пальца задней конечности, подошвенных мышц задней лапы, диафрагмального нерва-гемидиафрагмы, длинной поднимающей мышцы уха, нейромышечного соединения лягушки, двубрюшной мышцы шеи цыпленка, реберных мышц, ткани мозга или электрического органа морского ската.
16. Компьютерный программный продукт, включающий компьютерную программу, включающую программные средства для осуществления способа по п.3 или 6.
17. Применение способа по п.1 или 4 для определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце; или для определения относительной активности клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к активности клостридиального нейротоксина во втором образце.