УЛУЧШЕННЫЕ НАНОТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ-АЛЬФА

1. Нанотело против TNF-альфа, включающее 4 каркасных области (FR1-FR4) и 3 гипервариабельных участка (CDR1-CDR3), в котором:
a) CDR1 содержит:
аминокислотную последовательность DYWMY; или
аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью DYWMY;
b) CDR2 содержит:
аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG; или
аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью EINTNGLITKYPDSVKG; и
c) CDR3 содержит:
аминокислотную последовательность SPSGFN; или
аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SPSGFN.
2. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY.
3. Нанотело по п.1, в котором CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG.
4. Нанотело по п.1, в котором CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.
5. Нанотело по п.1, содержащее, по меньшей мере, одну из следующих компоновок CDR:
CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY, и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN;
CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY, и CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG; и
CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG, и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.
6. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY, и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.
7. Нанотело по п.1, в котором CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY; CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG, и CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN.
8. Нанотело по любому из пп.1-7, содержащее, по меньшей мере, одну из следующих компоновок CDR:
CDR1 содержит аминокислотную последовательность DYWMY с, по меньшей мере, одной консервативной аминокислотной заменой;
CDR2 содержит аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG с, по меньшей мере, одной консервативной аминокислотной заменой; и
CDR3 содержит аминокислотную последовательность SPSGFN с, по меньшей мере, одной консервативной аминокислотной заменой.
9. Нанотело по п.1, в котором CDR1 состоит из аминокислотной последовательности DYWMY.
10. Нанотело по п.1, в котором CDR2 состоит из аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG.
11. Нанотело по п.1, в котором CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN.
12. Нанотело по п.1, содержащее, по меньшей мере, одну из следующих компоновок CDR:
CDR1 состоит из аминокислотной последовательности DYWMY, и CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN;
CDR1 состоит из аминокислотной последовательности DYWMY, и CDR2 состоит из аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG; и
CDR2 состоит из аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG, и CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN.
13. Нанотело по п.1, в котором CDR1 состоит из аминокислотной последовательности DYWMY, и CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN.
14. Нанотело по п.1, в котором CDR1 состоит из аминокислотной последовательности DYWMY, CDR2 состоит из аминокислотной последовательности EINTNGLITKYPDSVKG, и CDR3 состоит из аминокислотной последовательности SPSGFN.
15. Нанотело по п.1, которое представляет собой гуманизированное Нанотело.
16. Нанотело по п.1, которое представляет собой Нанотело класса GLEW.
17. Нанотело по п.1, которое содержит аргининовый остаток (R) в положении 103.
18. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности, по меньшей мере, с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO 52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).
19. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности, по меньшей мере, с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO 52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).
20. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 95% идентичности последовательности, по меньшей мере, с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO 52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).
21. Нанотело по п.1, которое имеет, по меньшей мере, 99% идентичности последовательности, по меньшей мере, с одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из SEQ ID NO 52 (TNF1), 76 (TNF13), 77 (TNF14), 95 (TNF29) или 96 (TNF30).
22. Нанотело по п.1, которое содержит лейциновый остаток (L) в положении 108.
off
-3
23. Нанотело по п.1, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 1·10 (1/с).
off
-3
24. Нанотело по п.1, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 2·10 (1/с).
25. Нанотело по п.1, выбранное из TNF13 (SEQ ID NO: 76), TNF14 (SEQ ID NO: 77), TNF29 (SEQ ID NO: 95) и TNF30 (SEQ ID NO: 96).
26. Нанотело по п.1, представляющее собой Нанотело TNF30 (SEQ ID NO: 96).
27. Нанотело против TNF-альфа, которое представляет собой гуманизированное Нанотело, и где Нанотело включает следующие каркасные последовательности: FR1: SEQ ID NO: 130; FR2: SEQ ID NO: 198; FR3: SEQ ID NO: 266; и FR4: SEQ ID NO: 334.
off
-3
28. Нанотело по п.27, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 2·10 (1/c).
off
-3
29. Нанотело по п.27, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 1·10 (1/c).
30. Нанотело по п.27, которое направлено против того же эпитопа TNF, что и TNF1.
31. Нанотело, которое направлено против того же эпитопа на тримере TNF-альфа, что и Нанотело TNF1 (SEQ ID NO: 52).
32. Нанотело, которое направлено против того же эпитопа на тримере TNF-альфа, что и Нанотело TNF3 (SEQ ID NO: 60).
off
-3
33. Нанотело по п.32, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 2·10 (1/с).
off
-3
34. Нанотело по п.32, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 1·10 (1/с).
35. Нанотело против TNF-альфа, которое представляет собой гуманизированный вариант Нанотела TNF1 (SEQ ID NO: 52).
off
-3
36. Нанотело по п.35, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 2·10 (1/с).
off
-3
37. Нанотело по п.35, которое имеет значение K для TNF лучше, чем 1·10 (1/с).
38. Полипептид, который содержит, по меньшей мере, одно Нанотело по любому из пп.1-37.
39. Полипептид по п.38, который содержит только одно Нанотело по любому из пп.1-37.
40. Полипептид по п.38, который содержит два Нанотела по любому из пп.1-37.
41. Полипептид по п.40, который, после связывания с тримером TNF, способен ингибировать или снижать перекрестное сшивание рецептора TNF, которое опосредуется указанным тримером TNF, и/или сигнальную трансдукцию, которая опосредуется таким перекрестным сшиванием рецептора.
42. Полипептид по п.40, который способен к внутримолекулярному связыванию, по меньшей мере, с двумя сайтами связывания рецепторов TNF на тримере TNF.
43. Полипептид по п.40, в котором два Нанотела непосредственно связаны друг с другом.
44. Полипептид по п.40, в котором два Нанотела связаны друг с другом посредством линкера.
45. Полипептид по п.44, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность.
46. Полипептид по п.45, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 14 аминокислот.
47. Полипептид по п.45, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 17 аминокислот.
48. Полипептид по п.45, в котором линкер представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит, по меньшей мере, 20-40 аминокислот.
49. Полипептид по п.45, в котором линкер содержит глициновые и сериновые остатки.
50. Полипептид по п.40, который содержит два гуманизированных варианта полипептида TNF1, связанных глициновым и сериновым линкером, как показано в полипептиде TNF7 (SEQ ID NO: 73).
51. Полипептид по п.40, который содержит полипептид TNF55 (SEQ ID NO: 419) или TNF56 (SEQ ID NO: 420).
52. Полипептид по п.38, который является пегилированным.
53. Полипептид по п.38, который дополнительно содержит, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека.
54. Полипептид по п.53, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, имеет CDR последовательности, имеющиеся в ALB 8 (SEQ ID NO: 102).
55. Полипептид по п.40, который дополнительно содержит, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека.
56. Полипептид по п.55, в котором два Нанотела против TNF связаны непосредственно с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека.
57. Полипептид по п.55, в котором два Нанотела против TNF связаны с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, посредством линкера.
58. Полипептид по п.57, в котором линкер, который связывает два Нанотела против TNF с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, представляет собой аминокислотную последовательность.
59. Полипептид по п.58, в котором линкер, который связывает два Нанотела против TNF с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит 3-40 аминокислот.
60. Полипептид по п.58, в котором линкер, который связывает два Нанотела против TNF с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, представляет собой аминокислотную последовательность, которая содержит 5-15 аминокислот.
61. Полипептид по п.58, в котором линкер, который связывает два Нанотела против TNF с Нанотелом, направленным против сывороточного альбумина человека, содержит глициновые и сериновые остатки.
62. Полипептид по п.55, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, имеет последовательности CDR, присутствующие в ALB 8 (SEQ ID NO: 102).
63. Полипептид по любому из пп.55-62, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, представляет собой гуманизированное Нанотело.
64. Полипептид по п.63, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, представляет собой гуманизированный вариант нанотела ALB 1 (SEQ ID NO: 63).
65. Полипептид по п.63, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, выбрано из ALB 3 (SEQ ID NO: 87), ALB 4 (SEQ ID NO: 88), ALB 5 (SEQ ID NO: 89), ALB 6 (SEQ ID NO: 100), ALB 7 (SEQ ID NO: 101), ALB 8 (SEQ ID NO: 102), ALB 9 (SEQ ID NO: 103) и ALB 10 (SEQ ID NO: 104).
66. Полипептид по п.65, в котором, по меньшей мере, одно Нанотело, направленное против сывороточного альбумина человека, представляет собой ALB 8 (SEQ ID NO: 102).
67. Полипептид по п.55, который содержит два Нанотела, которые являются гуманизированными вариантами Нанотела по любому из пп.1-37 и одного гуманизированного варианта нанотела ALB 1 (SEQ ID NO: 63).
68. Полипептид по п.55, который содержит гуманизированный вариант полипептида TNF 24 (SEQ ID NO: 90) Нанотела, который содержит гуманизированные варианты Нанотела TNF 1 и гуманизированный вариант Нанотела ALB 1.
69. Полипептид по п.55, который содержит два Нанотела TNF 30 и одно Нанотело ALB 8.
70. Полипептид по п.69, который содержит полипептид TNF 60 (SEQ ID NO: 417).
71. Полипептид по п.69, который состоит из полипептида TNF 60 (SEQ ID NO: 417).
72. Полипептид против TNF-альфа, который имеет, по меньшей мере, 80% идентичности последовательности с полипептидом TNF60 (SEQ ID NO: 417).
73. Полипептид против TNF-альфа по п.72, который имеет, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полипептидом TNF 60 (SEQ ID NO: 417).
74. Полипептид против TNF-альфа по п.72, который имеет, по меньшей мере, 95% идентичности последовательности с полипептидом TNF 60 (SEQ ID NO: 417).
75. Полипептид против TNF-альфа по п.72, который имеет, по меньшей мере, 99% идентичности последовательности с полипептидом TNF 60 (SEQ ID NO: 417).
76. Полипептид, который содержит два или более вариабельных домена иммуноглобулина или их фрагмента, каждый из которых направлен против эпитопов на TNF-альфа, которые находятся в и/или составляют часть сайта(ов) связывания рецептора тримера TNF, такие, что указанный полипептид, после связывания с тримером TNF, способен ингибировать или снижать перекрестное сшивание рецептора TNF, которое опосредуется указанным тримером TNF, и/или сигнальную трансдукцию, которая опосредуется таким перекрестным сшиванием рецептора.
77. Полипептид, который содержит два или более вариабельных домена иммуноглобулина или их фрагмента, каждый из которых направлен против эпитопов на TNF-альфа, которые находятся в и/или составляют часть сайта(ов) связывания рецепторов тримера TNF, такие, что указанный полипептид, способен к внутримолекулярному связыванию, по меньшей мере, с двумя сайтами связывания рецептора TNF на тримере TNF.
78. Полипептид по п.76 или 77, в котором два или более вариабельных доменов иммуноглобулина направлены против того же эпитопа, что и Нанотело TNF 1 (SEQ ID NO: 52).
79. Полипептид по п.76 или 77, в котором два или более вариабельных доменов иммуноглобулина являются Нанотелами.
80. Нуклеиновая кислота, включающая нуклеиновую кислоту, кодирующую Нанотело по любому из пп.1-37.
81. Нуклеиновая кислота, включающая нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид по любому из пп.38-79.
82. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.80, способная к экспрессии Нанотела по любому из пп.1-37.
83. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п.81, способная к экспрессии полипептида по любому из пп.38-79.
84. Способ получения Нанотела, который включает культивирование или поддержание клетки-хозяина по п.82 при таких условиях, что указанная клетка-хозяин продуцирует Нанотело по любому из пп.1-37.
85. Способ по п.84, который дополнительно включает выделение Нанотела по любому из пп.1-37.
86. Способ получения полипептида, который включает культивирование или поддержание клетки-хозяина по п.83 при таких условиях, что указанная клетка-хозяин продуцирует полипептид по любому из пп.38-79.
87. Способ по п.86, который дополнительно включает выделение полипептида по любому из пп.38-79.
88. Фармацевтическая композиция, содержащая, по меньшей мере, одно Нанотело по любому из пп.1-37 или, по меньшей мере, один полипептид по любому из пп.38-79, и при необходимости, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель.
89. Фармацевтическая композиция по п.88 для лечения, по меньшей мере, одного состояния, выбранного из воспаления, ревматоидного артрита, ХОБЛ, астмы, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, воспалительных заболеваний кишечника, множественного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета I типа, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, тиреоидита Хашимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, множественного склероза, злокачественной миастении, пузырчатки, псориаза, ревматического полиартрита, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, спондилоартропатии, тиреоидита и васкулита.
90. Применение нанотела по любому из пп.1-37 для получения лекарственного средства для лечения, по меньшей мере, одного состояния, выбранного из воспаления, ревматоидного артрита, ХОБЛ, астмы, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, воспалительных заболеваний кишечника, множественного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета I типа, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, тиреоидита Хашимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, множественного склероза, злокачественной миастении, пузырчатки, псориаза, ревматического полиартрита, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, спондилоартропатии, тиреоидита и васкулита.
91. Применение полипептида по любому из пп.38-79 для получения лекарственного средства для лечения, по меньшей мере, одного состояния, выбранного из воспаления, ревматоидного артрита, ХОБЛ, астмы, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, воспалительных заболеваний кишечника, множественного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета I типа, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, тиреоидита Хашимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, множественного склероза, злокачественной миастении, пузырчатки, псориаза, ревматического полиартрита, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, спондилоартропатии, тиреоидита и васкулита.
92. Способ лечения, по меньшей мере, одного состояния, выбранного из воспаления, ревматоидного артрита, ХОБЛ, астмы, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, воспалительных заболеваний кишечника, множественного склероза, болезни Аддисона, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного паротита, диабета I типа, эпидидимита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, тиреоидита Хашимото, гемолитической анемии, системной красной волчанки, мужского бесплодия, множественного склероза, злокачественной миастении, пузырчатки, псориаза, ревматического полиартрита, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, спондилоартропатии, тиреоидита и васкулита, включающий введение Нанотела по любому из пп.1-37 или полипептида по любому из пп.38-79 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.