ЭКЗОСОМЫ, СОДЕРЖАЩИЕ РНК-ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА

1. Внеклеточная везикула, содержащая по меньшей мере один слитый полипептид, содержащий по меньшей мере один домен, связывающий нуклеиновую кислоту (НК), и по меньшей мере один экзосомальный полипептид, при этом по меньшей мере один НК-связывающий домен является одним или более из PUF, Cas6, Cas13 и/или НК-аптамер-связывающим доменом.
2. Внеклеточная везикула по п. 1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере одну молекулу НК-груз.
3. Внеклеточная везикула по  п. 2, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна молекула НК-груз транспортируется во внеклеточную везикулу с помощью слитого полипептида.
4. Внеклеточная везикула по любому из пп. 2 или 3, отличающаяся тем, что молекула НК-груза выбрана из группы, содержащей shРНК, miРНК, mРНК, gРНК, pri-miРНК, pre-miРНК, кольцевую РНК, piРНК, tРНК, rРНК, snРНК, IncРНК, рибозимы, мини-кольцевую ДНК и/или плазмидную ДНК.
5. Внеклеточная везикула по любому из пп. 2-4, отличающаяся тем, что каждая молекула НК-груз содержит (i) по меньшей мере один сайт связывания для НК-связывающего домена и (ii) терапевтический полинуклеотидный домен.
6. Внеклеточная везикула по п. 5, отличающаяся тем, что молекула НК-груз содержит сайт расщепления между по меньшей мере одним сайтом связывания и терапевтическим полинуклеотидным доменом.
7. Внеклеточная везикула по любому из пп. 2-6, отличающаяся тем, что молекула НК-груза кодирует терапевтический полипептид.
8. Внеклеточная везикула по п. 7, отличающаяся тем, что терапевтический полипептид выбран из группы, содержащей: антитела, интраантитела, одноцепочечные вариабельные фрагменты, аффибоды, ферменты, транспортеры, опухолевые супрессоры, вирусные или бактериальные ингибиторы, белки клеточного компонента, ДНК и/или РНК-связывающие белки, ингибиторы репарации ДНК, нуклеазы, протеиназы, интегразы, факторы транскрипции, факторы роста, ингибиторы и индукторы апоптоза, токсины, структурные белки, нейротрофические факторы, мембранные транспортеры, нуклеотидсвязывающие белки, белки теплового шока, CRISPR-ассоциированные белки и любые их комбинации.
9. Внеклеточная везикула по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что слитый полипептид содержит по меньшей мере один экзосомальный полипептид, фланкированный N- и/или C-терминально НК-связывающими доменами и/или отличающаяся тем, что по меньшей мере один НК-связывающий домен инсертирован в экзосомальную полипептидную последовательность.
10. Внеклеточная везикула по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что экзосомальный полипептид выбран из группы, содержащей CD9, CD53, CD63, CD81, CD54, CD50, FLOT1, FLOT2, CD49d, CD71, CD133, CD138, CD235a, ALIX, AARDC1, Синтенин-1, Синтенин-2, Lamp2b, TSPAN8, синдекан-1, синдекан-2, синдекан-3, синдекан-4, TSPAN14, CD37, CD82, CD151, CD231, CD102, NOTCH1, NOTCH2, NOTCH3, NOTCH4, DLL1, DLL4, JAG1, JAG2, CD49d/ITGA4, ITGB5, ITGB6, ITGB7, CD11a, CD11b, CD11c, CD18/ITGB2, CD41, CD49b, CD49c, CD49e, CD51, CD61, CD104, Fc-рецепторы, рецепторы интерлейкинов, иммуноглобулины, компоненты MHC-I или MHC-II, CD2, CD3-эпсилон, CD3-зета, CD13, CD18, CD19, CD30, CD34, CD36, CD40, CD4OL, CD44, CD45, CD45RA, CD47, CD86, CD110, CD111, CD115, CD117, CD125, CD135, CD184, CD200, CD279, CD273, CD274, CD362, COL6A1, AGRN, EGFR, GAPDH, GLUR2, GLUR3, HLA-DM, HSPG2, L1CAM, LAMB1, LAMC1, LFA-1, LGALS3BP, Mac-1 альфа, Mac-1 бета, MFGE8, SLIT2, STX3, TCRA, TCRB, TCRD, TCRG, VTI1A, VTI1B, другие экзосомальные полипептиды и любые их комбинации.
11. Внеклеточная везикула по любому из предыдущих пунктов, отличающаяся тем, что ВВ дополнительно содержит по меньшей мере один нацеливающий фрагмент.
12. Внеклеточная везикула по любому из пп. 2-11, отличающаяся тем, что молекула НК-груз является линейной, кольцевой и/или имеет любую вторичную, и/или третичную, и/или другую структуру.
13. Внеклеточная везикула по любому из пп. 2-12, отличающаяся тем, что молекула НК-груз содержит одно или несколько из нижеследующего:
(i) сайт для связывания miРНК, который, необязательно, является для ткане- и/или тип клеток-специфическим;
(ii) по меньшей мере один стабилизирующий домен, такой как поли(A)-хвост или стебель-петля; или,
(iii) по меньшей мере одну гибридную НТО на 5'- и/или 3'-конце.
14. Популяция внеклеточных везикул любому из предыдущих пунктов.
15. Популяция внеклеточных везикул по п. 14, отличающаяся тем, что среднее количество молекул НК-грузов на внеклеточную везикулу в популяции внеклеточных везикул выше одной на внеклеточную везикулу.
16. Популяция внеклеточных везикул по любому из пп. 14 или 15, отличающаяся тем, что популяция содержит по меньшей мере две субпопуляции, при этом первая субпопуляция внеклеточных везикул содержит в среднем более одного слитого полипептида на внеклеточную везикулу, а вторая субпопуляция внеклеточных везикул содержит рассматриваемую молекулу НК-груз в комбинации в среднем с более чем одним слитым полипептидом на внеклеточную везикулу.
17. Популяция внеклеточных везикул по любому из пп. 14-16, отличающаяся тем, что по меньшей мере 5%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85% по меньшей мере 90% и/или по меньшей мере 95% всех внеклеточных везикул содержат по меньшей мере одну молекулу НК-груз.
18. Полипептидная конструкция, содержащая слитый полипептид, содержащий по меньшей мере один НК-связывающий домен и по меньшей мере один экзосомальный полипептид, при этом по меньшей мере один НК-связывающий домен является одним или несколькими из PUF, Cas6, Cas13 и/или НК-аптамер-связывающим доменом.
19. Полипептидная конструкция по п. 18, отличающаяся тем, что, при необходимости, дополнительно содержит одно или несколько из:
(i) по меньшей мере один домен мультимеризации;
(ii) по меньшей мере один линкер;
(iii) по меньшей мере один высвобождающий домен, такой как интеин;
(iv) по меньшей мере один РНК-расщепляющий домен;
(v) по меньшей мере один эндосомальный выходящий фрагмент; и/или
(vi) по меньшей мере один нацеливающий фрагмент.
20. Полинуклеотидная конструкция, кодирующая полипептидную конструкцию по любому из пп. 9 или 18.
21. Полинуклеотидная конструкция по п. 20, отличающаяся тем, что полинуклеотид является по существу линейным, кольцевым, и/или имеет любую вторичную, и/или третичную структуру, и/или структуру более высокого порядка, и/или содержится в векторе, таком как плазмида, кольцевой полинуклеотид ДНК, вирус, аденоассоциированный вирус, mРНК, модифицированная mРНК и/или мини-кольцевая.
22. Способ получения внеклеточных везикул по любому из предыдущих пунктов, содержащий:
(i) введение в клетку продуцируемой внеклеточной везикулы по меньшей мере одной полинуклеотидной конструкции по любому из пп. 20 или 21;
(ii) экспрессию в клетке продуцируемой внеклеточной везикулы по меньшей мере одной полипептидной конструкции, кодируемой по меньшей мере одной полинуклеотидной конструкцией, с образованием, таким образом, вышеуказанных ВВ.
23. Клетка, содержащая (i) по меньшей мере одну полинуклеотидную конструкцию по любому из пп. 20 или 21 и/или (ii) по меньшей мере одну полипептидную конструкцию по любому из пп.18, 19 и/или (iii) по меньшей мере одну внеклеточную везикулу по любому из пп. 1-13.
24. Клетка по п. 23, отличающаяся тем, что клетка является моноклональной клеткой и/или моноклональной клеточной линией.
25. Клетка по любому из пп. 23 или 24, отличающаяся тем, что клетка стабильно модифицирована и содержит по меньшей мере одну моноцистронную, бицистронную или мультицистронную полинуклеотидную конструкцию, кодирующую полипептидную конструкцию по любому из пп. 18 или 19, и по меньшей мере одну молекулу НК-груз.
26. Способ in vitro для внутриклеточной доставки по меньшей мере одной молекулы РНК-груза, включающий контактирование клетки-мишени с по меньшей мере одной внеклеточной везикулой по любому из пп. 1-13 и/или по меньшей мере с одной популяцией внеклеточных везикул по любому из пп. 14-17 и/или по меньшей мере одной полинуклеотидной конструкцией по любому из пп. 20 или 21.
27. Фармацевтическая композиция, содержащая (i) по меньшей мере одну полинуклеотидную конструкцию по любому из пп. 20, 21, (ii) по меньшей мере одну полипептидную конструкцию любому из пп. 18, 19, (iii) по меньшей мере одну внеклеточную везикулу по любому из пп. 1-13, (iv) по меньшей мере одну клетку по любому из пп. 23-25 и/или (v) по меньшей мере одну популяцию внеклеточных везикул по любому из пп. 14-17 и фармацевтически приемлемый наполнитель или носитель.
28. (i) По меньшей мере одна полинуклеотидная конструкция по любому из пп. 20 или 21, (ii) по меньшей мере одна полипептидная конструкция по любому из пп. 18 или 19, (iii) по меньшей мере одна внеклеточная везикула любому из пп. 1-13, (iv) по меньшей мере одна клетка по любому из пп. 23-25, (v) по меньшей мере одна популяция внеклеточных везикул по любому из пп. 14-17 и/или (vi) фармацевтическая композиция по п. 27 для применения в медицине.