СПОСОБ ОЦЕНКИ ИЗМЕНЕНИЯ РАЗМЕРОВ АГРЕГАТОВ ЭРИТРОЦИТОВ
METHOD FOR ASSESSING CHANGE IN SIZE OF RED CELL AGGREGATES

Способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.
Известны способы оценки агрегационной способности эритроцитов при использовании в качестве индукторов агрегации хлористого лантана (Шереметьев Ю.А., Суслов Ф.Ю. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. Пат. 2082968 РФ, 1997), пикриновой кислоты (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В., Успенский А.Н. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. 2238556 РФ, 2004), катионного красителя акридинового оранжевого (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2390778 РФ, 2010), хлористого цинка (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат.2452958 РФ, 2012) и трихлорида железа (Шереметьев Ю.А., Поповичева А.Н., Успенский А.Н., Левин Г.Я. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2667009 РФ, 2018).
Для изучения агрегации эритроцитов в кювету агрегометра с суспензией клеток добавляют индуктор агрегации и при постоянном перемешивании регистрируют максимальную степень агрегации эритроцитов (максимальная амплитуда агрегатограммы).
В то же время важным показателем агрегации является оценка размеров агрегатов эритроцитов. При этом определение размеров агрегатов проводят путем подсчета количества эритроцитов, вовлеченных в их агрегаты. Это относится к агрегации эритроцитов в виде «монетных столбиков» в аутологичной плазме крови.
Однако в агрегатах эритроцитов, полученных после добавления индукторов агрегации, очень трудно подсчитать количество клеток, так как агрегаты представляют собой глыбчатые структуры.
Поэтому задача создания способов одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов является актуальной.
За прототип взят "Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов" (патент RU 2082968, 1997), включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегации, с использованием хлористого лантана в качестве индуктора агрегации эритроцитов. Перемешивание суспензии осуществляют с помощью электромеханической мешалки. Процесс агрегации регистрируется фотоколориметрически с записью на самописец в виде агрегатограммы. Об изменении состояния мембран эритроцитов судят по степени их агрегации в сравнении с контролем.
Однако этот способ не позволяет провести одновременную оценку агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.
Задачей предлагаемого изобретения является одновременное определение агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов. При этом агрегация эритроцитов стимулируется различными индукторами.
Поставленная задача достигается тем, что предлагаемый способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов включает выделение эритроцитов из крови, регистрацию максимальной степени их агрегации, стимулированной индукторами, прекращение перемешивания агрегатов эритроцитов после достижения максимальной амплитуды их агрегации, проведение записи оседания агрегатов эритроцитов и оценка скорости их оседания. По максимальной амплитуде агрегации и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности и размерах их агрегатов.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещают в кювету для изучения агрегации и добавляют 0.1 мл индуктора агрегации. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводят запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращают перемешивание суспензии эритроцитов и записывают оседание агрегатов. По максимальной амплитуде агрегатограммы и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности клеток и размерах их агрегатов.
Пример 1. Отмытые эритроциты здорового донора ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы эритроцитов составила 50%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) здорового донора составила 20 секунд.
Пример 2. Отмытые эритроциты больного неспецифическим язвенным колитом ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы составила 35%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) больного неспецифическим язвенным колитом составило 90 секунд.
Таким образом, степень агрегационной способности эритроцитов и размеры их агрегатов эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом значительно меньше, чем у здорового донора.
Регистрацию агрегации эритроцитов и скорости оседания агрегатов эритроцитов осуществляли фотометрическим методом на лазерном агрегометре ЛА 230-2 НПФ «Биола».
На фигуре представлена агрегатограмма записи агрегации эритроцитов и оседания их агрегатов после добавления хлористого лантана.