КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКИЙ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ИНТЕРФЕРОН АЛЬФА-2b, И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ ВЕТЕРИНАРИИ НА ЕЕ ОСНОВЕ, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
COMPOSITION CONTAINING HUMAN RECOMBINANT INTERFERON ALPHA-2b, AND MEDICINAL AGENT OF PROLONGED ACTION FOR VETERINARY SCIENCE ON ITS BASIS, HAVING ANTIVIRUS, IMMUNOMODULATORY AND ANTIBACTERIAL ACTION

Область техники
Изобретение относится к ветеринарии и представляется собой композицию, обладающую противовирусным, иммуномодулирующим и антибактериальным действием.
Предшествующий уровень техники
Использование в медицине человеческого рекомбинантного интерферона в качестве противовирусного и иммуномодулирующего средства в последние годы получило широкое распространение. Часто для проведения подобной терапии используют свечи или растворы местного применения (например, препарат Гриппферон).
Известен препарат в форме раствора для применения в качестве глазных капель, интраназально, интравагинально, интрауретально, для введения в гайморовы пазухи и для орошения слизистой оболочки респираторного тракта. Препарат обладает пролонгированным действием и содержит в мг на 1 мл: интерферон человеческий рекомбинантный (1-50)·103 ME, лимонную кислоту 1-3, борную кислоту 8-11, натрия тетраборат 5-10, унитол 1-5, альбумин сывороточный человеческий 1-5, натрия хлорид 1-3, натрия карбоксиметилцеллюлозу или гидроксиэтилцеллюлозу 5-50, и воду очищенную до 1 мл (патент РФ №2270692). В качестве антимикробных веществ используются борная кислота и тетраборат натрия. Данный препарат предназначен для местного применения и не рассматривается в качестве инъекционного препарата вследствие значительно меньших количеств интерферона, чем необходимо для проведения инъекционной терапии. Кроме того, указанные антимикробные вещества являются бактериостатиками жидкого препарата и не являются лекарственным антибактериальным средством.
4
6
Известен препарат, содержащий в 1 г следующие компоненты: интерферон человеческий рекомбинантный (10-3·10) ME, полиэтиленгликоль 4000-6000 - 0,0001-0,5, полиглюкин 0,001-0,1, структурообразователь (мальтоза, манит, глюкоза, фруктоза) 0,01-0,8, набухающее и диспергирующее вещество (целлюлоза, метилцеллюлоза, ацетилфталилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и т.д.) 0,001-0,1 и целевая добавка - остальное. При этом препарат представляет собой смесь для формирования таблетки или содержимого капсулы. В качестве интерферона используют сухую субстанцию, сублимированную из раствора, содержащего полиглюкин, структурообразователь и рекомбинантный человеческий интерферон, адсорбированный полиэтиленгликолем (патент РФ №2292907). Однако данный препарат не является инъекционным, а указанная композиция должна была увеличить биодоступность рекомбинантного человеческого интерферона в таблетированном виде. Заявленный антимикробный эффект не подтвержден примерами и встречается только в названии патента.
Известно лекарственное средство, обладающее противовирусным, противобактериальным и противовоспалительным действием (патент РФ №2187332). Лечебное средство представлено в виде мази, геля, суппозитория, пасты, крема, линимента, таблеток на основе интерферона и, дополнительно, иммуномодуляторов, витаминов, антибиотиков широкого спектра, антисептиков, противопаразитарных и противовоспалительных средств. В качестве антибиотиков широкого спектра приводят амоксициллин, ампициллин, оксациллин, метициллин, цефалексин, т.е. антибиотики бета-лактамной группы. В примерах антибиотики широкого спектра действия не приводятся, их декларируемое содержание в композиции - 0,025-0,05 г/г. Подобная композиция не является инъекционным раствором, хотя и может обладать пролонгированным эффектом и местным антибактериальным (обеззараживающим) эффектом.
Известно противовирусное и антибактериальное средство «Интерлизин» (патент РФ №2188665), представляющее собой водный раствор интерферона и лизоцима, при следующем соотношении компонентов: интерферон 2500-5000 МЕ/мл и лизоцим 2,5-5,0 мг/мл. Препарат является местным средством, содержит интерферон в концентрациях на три-четыре порядка ниже, чем необходимо для проведения инъекционной терапии животных, и не обладает пролонгированным действием.
Подробное описание изобретения
В области ветеринарной сельскохозяйственной медицины использование свечей, растворов местного применения или таблеток является трудоемким и неудобным процессом. При этом для подобных препаратов необходимо использовать более высокие концентрации интерферона, что связано с большей массой животных, по сравнению с людьми. В этой области наиболее удобной формой препарата являются инъекционные растворы. Но и использование инъекционных форм, в случае, если терапию препаратом необходимо проводить несколько раз в неделю, является затратным процессом, т.к. в случае проведения сезонной терапии необходимо обработать все поголовье. В этом случае экономически выгодным является использование препарата интерферона, обладающего пролонгированным действием, который бы позволил весь курс лечения проводить за одну-две инъекции. Часто на фоне заболеваний вирусной этиологии происходит развитие бактериальных инфекций, что требует проведения не только терапии интерфероном, но и дополнительное лечение антибактериальными препаратами. И, как следствие, возрастает количество инъекций на одно животное, что приводит к удорожанию животноводческой продукции.
Проблема лечения смешанных вирусных и бактериальных инфекций может быть решена за счет создания лекарственных препаратов, содержащих интерферон пролонгированного действия и антибиотик.
Целью настоящего изобретения является создание лекарственного средства для ветеринарии на основе человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2b, обладающего противовирусным, иммуномодулирующим, а также антибактериальным действием, в виде стабильного инъекционного раствора или лиофилизата для приготовления инъекционного раствора. При этом указанное средство должно обладать пролонгированным действием.
Поставленная цель была достигнута путем создания лекарственного средства, в котором в качестве активного вещества используют гидрофобный комплекс интерферона и двух биологических полимеров - декстрана и метилцеллюлозы, за счет которых высвобождение интерферона в организме животного происходит постепенно и достигается пролонгация его действия. А в качестве антибактериального средства используют антибиотики тетрациклинового ряда, аминогликозиды, бета-лактамные антибиотики, полимиксины, фторхинолоны, сульфаниламиды. В качестве декстрана используется декстран с молярной массой 30000 или 60000, или смесь их. Также композиция содержит фосфатный буфер для стабилизации pH. Наиболее оптимальное соотношение компонентов следующее: человеческий рекомбинантный интерферон альфа-2b - 10-200 млн ME, декстран - 5-10 мг, метилцеллюлоза - 1-20 мг, антибиотик -1-200 мг, натрий фосфатный буфер - 50 ммоль, натрий хлористый - 8,7 мг, калий хлористый - 0,3 мг, кислота соляная или натрия гидроксид - до pH - 5,0-7,5, вода для инъекций - до 1 мл. Лекарственное средство представляет собой стабильный стерильный раствор для инъекций или стерильный лиофилизат для приготовления раствора для инъекций.
К антибиотикам тетрациклинового ряда относятся, например, тетрациклин, окситетрациклин, доксициклин.
К аминогликозидным антибиотикам относятся, например, гентамицин, канамицин, неомицин.
К бета-лактамным антибиотикам относятся антибиотики пенициллинового ряда - ампициллин, амоксициллин, пенициллин, бензилпенициллин; и антибиотики цефалоспоринового ряда - цефалексин, цефиксим, цефатоксим.
К антибиотикам полимиксинового ряда относятся полимиксин, колистин.
К фторхинолонам относятся, например, энрофлоксацин, ципрофлоксацин.
К сульфаниламидам относятся, например, триметоприм, сульфадиметоксин, сульфадимедин, сульфадимезин.
Лекарственное средство предназначено для инъекционного введения - внутримышечно, подкожно, внутривенно.
Ранее авторы настоящего изобретения показали, что при использовании гидрофобного комплекса интерферона и двух биологических полимеров - декстрана и метилцеллюлозы высвобождение интерферона в организме животного происходит постепенно и этим достигается пролонгация его действия.
Так, например, на свиньях было определено, что максимальная концентрация интерферона в крови после введения препарата, содержащего комплекс интерферона и с декстраном и метилцеллюлозой, достигалась на (23±6) часов, в то время как при введении контроля (раствора интерферона) - (6±1) часов. В то же время период полувыведения интерферона после инъекции контроля составил (4±1) часов, а после введения препарата - (26±8) часов. Аналогичные данные были получены на телятах: максимальная концентрация интерферона в крови после введения препарата - (27±8) часов, при введении контроля - (7±1) часов; период полувыведения интерферона после инъекции контроля составил (4±1) часов, а после введения препарата - (23±8) часов.
Данное изобретение является продолжением исследования авторов, описывающее пролонгированные инъекционные стерильные растворы или лиофилизаты для приготовления растворов на основе комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы, и направлено на расширение арсенала противовирусных лекарственных средств, одновременно обладающих антибактериальным действием, для лечения бактериальных заболеваний на фоне вирусной этиологии.
Сущность изобретения поясняется в следующих примерах.
Пример 1. Получение лекарственной формы в виде раствора для инъекций, который содержит аминогликозидный антибиотик.
2
4
2
2
4
2
В емкость на 600 л заливают воду для инъекций с температурой (23±2)°С - 300 л, засыпают 4350 г хлористого натрия, 150 г хлористого кальция, NaHPO·12HO - 6784 г и NaHPO·2HO - 165,2 г и растворяют при постоянном перемешивании. Засыпают 40,0 кг субстанции гентамицина сульфата, с активностью не ниже 590 единиц на 1 г, и перемешивают до полного растворения. В емкость заливают раствор комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы, полученный, как описано в предыдущем исследовании. Доводят pH гидроксидом натрия или соляной кислотой до 6,5 и доводят объем до 500 л водой для инъекций. Раствор подвергают асептической фильтрации в стерильную емкость, переводят в помещение класса «А», где осуществляют асептический розлив в 10, 20 или 100 мл флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Полученный препарат содержит (18-22) млн ME интерферона в мл, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой и 8% гентамицина сульфата.
Пример 1а. Получение лекарственной формы в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций, который содержит аминогликозидный антибиотик.
2
4
2
2
4
2
10
8
2
В емкость на 150 л последовательно заливают воду для инъекций по ФС 42-2620-97 - 70 л, засыпают NaHPO·12HO - 1696 г и NaHPO·2HO - 41,3 г и растворяют. При постоянном перемешивании в емкость засыпают 5000 г декстрана-70000 и 1500 г метилцеллюлозы. Растворяют при постоянном перемешивании. Доводят pH раствора гидроксидом натрия или соляной кислотой до 8,0 и доводят объем до 100 л водой для инъекций. Охлаждают раствор до (4±2)°С. При постоянном перемешивании добавляют концентрированный раствор человеческого рекомбинантного интерферона в количестве 22,8 мл или 10 ME (исходная концентрация интерферона - 2 мг/мл или 4,4·10 МЕ/мл). Полученный раствор инкубируют в течение 16 часов при температуре (4±2)°С и постоянном медленном перемешивании - около 10-20 rpm. Далее при постоянном объеме и при температуре (4±2)°С проводят тангенсальную диафильтрацию с использованием 50 кДа ультрафильтрационных фильтрационных элементов с площадью поверхности не менее 3 м, не менее 4 объемов, против 50 мМ натрий фосфатного буфера, содержащего 8,7 г/л хлорида натрия и 0,3 г/л хлорида калия, pH=5,5. Диафильтрацию прекращают по достижению pH значения 5,8-6,1. Далее раствор концентрируют до 70 л, быстро нагревают до (30±2)°С, в течение примерно 30 минут и добавляют 20 кг субстанции гентамицина сульфата, с активностью не ниже 590 единиц на 1 г, перемешивают до полного растворения, доводят объем до 100 л 50 мМ натрий фосфатным буфером, содержащим 8,7 г/л хлорида натрия и 0,3 г/л хлорида калия, pH=6,0. Раствор подвергают асептической фильтрации в стерильную емкость. Стерильный раствор переводят в помещение класса «А», где осуществляют асептический розлив в 10 мл флаконы по 2 мл при комнатной температуре. Флаконы замораживают на -40°С на 24 часа, после чего переносят в лиофильную сушилку и проводят сублимирование. По окончании процесса флаконы в асептических условиях укупоривают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Полученный лиофилизат содержит 90-110 млн ME интерферона на флакон в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой и 400 мг гентамицина сульфата.
Пример 2. Получение лиофильной субстанции комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы.
Раствор комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы, полученный в примере 1а, до описания нагревания и добавления гентамицина сульфата, концентрируют до 30 л, и лиофильно высушивают. В полученной лиофильно высушенной субстанции определяют активность интерферона в млн ME (1,0-1,2·106 МЕ/г субстанции). Субстанция хранится при температуре (6±4)°С в течение как минимум одного года, без потери активности.
Пример 3. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций, который содержит антибиотик тетрациклинового ряда.
Приготовление 10% и 20% раствора препарата антибиотика тетрациклинового ряда - окситетрациклина гидрохлорида осуществляли согласно US патенту №4,018,889, с небольшими изменениями. Доведение pH осуществляли этаноламином до значения 7,2±0,2 единицы, после чего в раствор засыпали при постоянном перемешивании субстанцию комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы и растворяли при температуре около 30°С, быстро охлаждали, после чего барботировали азотом в течение 2 часов. Полученный раствор подвергали асептической фильтрации высокого давления и стерильно разливали во флаконы по 10 мл. Полученный препарат содержит 10% или 20% окситетрациклина гидрохлорида в пересчете на основание и от 20 млн ME интерферона в 1 мл.
Пример 4. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций, который содержит фторхинолоновый антибиотик.
2
4
2
2
4
2
В емкость на 600 л заливают воду для инъекций с температурой (23±2)°С - 300 л, засыпают 4350 г хлористого натрия, 150 г хлористого кальция, NaHPO·12HO - 6784 г и NaHPO·2HO - 165,2 г и растворяют при постоянном перемешивании. Засыпают 25,0 или 50,0 кг субстанции энрофлоксацина лактата, и перемешивают до полного растворения с нагреванием до 45°С. Раствор охлаждают, доводят pH соляной кислотой до 6,0. В емкость заливают раствор комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы, полученный как описано в предыдущем исследовании. Доводят объем до 500 л водой для инъекций. Раствор подвергают асептической фильтрации в стерильную емкость, переводят в помещение класса «А», где осуществляют асептический розлив в 10, 20 или 100 мл флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Полученный препарат содержит (18-22) млн ME интерферона в мл, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой и 5% или 10% энрофлоксацина лактата в 1 мл.
Пример 5. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций, который содержит полимиксиновый антибиотик.
2
4
2
2
4
2
В емкость на 600 л заливают воду для инъекций с температурой (23±2)°С - 300 л, засыпают 4350 г хлористого натрия, 150 г хлористого кальция, NaHPO·12HO - 6784 г и NaHPO·2HO - 165,2 г и растворяют при постоянном перемешивании. Засыпают около 12,5 или 25,0 кг субстанции колистина сульфата, в пересчете на активное вещество (субстанция с активностью 20000 ME колистина сульфата на мг) и перемешивают до полного растворения с нагреванием до 45°С. Раствор охлаждают, доводят pH соляной кислотой до 4,5. В емкость заливают раствор комплекса интерферона, декстрана и метилцеллюлозы, полученный, как описано в предыдущем исследовании. Доводят объем до 500 л водой для инъекций. Раствор подвергают асептической фильтрации в стерильную емкость, переводят в помещение класса «А», где осуществляют асептический розлив в 10, 20 или 100 мл флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Полученный препарат содержит (18-22) млн ME интерферона в мл, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой и 500000 или 1000000 ME колистина сульфата в 1 мл.
Пример 6. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций, который содержит бета-лактамный антибиотик.
В качестве бета-лактамных антибиотиков используют антибиотики пенициллинового ряда - ампициллин и амоксициллин, и антибиотики цефалоспоринового ряда - цефалексин и цефиксим. Антибиотики растворяют в смеси высокомолекулярного поливинилпирролидона (Коллидон 90, BASF), полиэтиленгликоля 400 и гидрогенизированного касторового масла, получая масляную часть препарата. Далее лиофильно высушенный комплекс интерферона, декстрана и метилцеллюлозы растворяют в воде, получая водную фазу. К водной фазе при постоянном перемешивании добавляют масляную фазу, после чего суспензию пропускают через коллоидную мельницу до состояния «видимой» прозрачности.
Раствор подвергают асептической фильтрации в стерильную емкость, переводят в помещение класса «А», где осуществляют асептический розлив в 10 мл флаконы. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Полученные препараты содержат в 1 мл:
(18-22) млн ME интерферона в мл, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой.
Ампициллина - 100 или 150 мг или аммоксициллина - 150 или 200 мг, цефалексина - 50, 100, 150 или 200 мг, цефиксима - 50 или 100 мг.
Высокомолекулярного поливинилпирролидона - от 75 до 150 мг.
Полиэтиленгликоля 400 - от 50 до 100 мг.
Гидрогенизированного касторового масла - от 100 до 400 мг.
Воды - остальное.
Пример 7. Получение лекарственных форм в виде раствора для инъекций, который содержит два и более антибиотика.
Аналогично примерам 1, 4 и 5 получают препараты интерферона, которые содержат в 1 мл раствора:
(18-22) млн ME интерферона, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой, колистина сульфата - 1000000 ME, энрофлоксацина лактата - 100 мг, вспомогательные вещества, pH=4,5 ед., вода для инъекций - до 1 мл.
(18-22) млн ME интерферона, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой, колистина сульфата - 500000 ME, энрофлоксацина лактата - 50 мг, вспомогательные вещества, pH=4,5 ед., вода для инъекций - до 1 мл.
(18-22) млн ME интерферона, в виде комплекса с декстраном и метилцеллюлозой, колистина сульфата - 600000 ME, триметоприма - 100 мг, вспомогательные вещества, pH=4,5 ед., вода для инъекций - до 1 мл.
Хотя указанное изобретение описано в деталях со ссылкой на Примеры, для специалиста в указанной области техники очевидно, что могут быть совершены различные изменения и произведены эквивалентные замены, и такие изменения и замены не выходят за рамки настоящего изобретения.