СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ГИГАНТСКОЙ УСТРИЦЫ CRASSOSTREA GIGAS В ЧЕРНОМ МОРЕ
METHOD FOR GROWING GIANT OYSTER CRASSOSTREA GIGAS IN BLACK SEA

Предполагаемое изобретение относится к марикультуре и предназначено для промышленного выращивания устриц в Черном море в контролируемых условиях.
Гигантская устрица Crassostrea gigas является основным объектом культивирования во многих станах Европы, Азии, Африки, Америки и Австралии. Этот вид устриц отличается высоким темпом роста, устойчивостью ко многим болезням, высокими вкусовыми и лечебно-профилактическими качествами. В 70-е годы 20 ст. в Черном море запасы черноморской устрицы Ostrea edilus были почти полностью уничтожены раковинной болезнью. В этот период была осуществлена государственная программа интродукции гигантской устрицы Crassostrea gigas из Дальнего Востока. Однако до настоящего времени гигантская устрица не стала промысловым видом и не образовала природных поселений на Черном море из-за невозможности достижения необходимой численности производителей без массового подращивания молоди в питомниках.
Известен способ выращивания устрицы Crassostrea gigas (см Силкин Ю.А., Силкина Е.Н., Давидович Н.А., Давидович О.И., Орленко А.Н. Интродукция устрицы Crassostrea gigas в районе Карадага // Карадаг. История, биология, археология. -Симферополь: «СОНАТ», 2001. - С. 273-280). В июне партию половозрелых моллюсков (213 экз.) переносили в лабораторию. Т.к. большинство четырехлетних особей уже отнерестились в естественных условиях, то их стимулировали через сутки после доставки в аквариальную. Двухлетних устриц отсаживали на кондиционирование продолжительностью 20 суток, а затем подвергали стимуляции. Нерест стимулировали либо раствором серотонина концентрации 0,02% в мышцу или в мантийную полость (с одновременным повышением температуры воды до 28°С или без повышения); либо повышением температуры воды; либо внесением в воду раствора суспензии гонад самцов. После получения половых клеток проводили осеменение в 20-литровых аквариумах из оргстекла. Для очищения воду с гаметами пропускали через шелковое или капроновое газ-сито с диаметром ячеи 96 мкм.
3
Дробящиеся яйцеклетки переносили в пластиковый лоток объемом 100 л, а затем на стадии трохофоры в пластиковые бассейны объемом 5, 6 и 25 м. Личинок и спат устриц выращивали в бассейнах с небольшим протоком воды на естественном корме, без дополнительного внесения микроводорослей. В качестве субстрата для осаждения личинок использовали створки мидий. Когда личинки переходили на стадию педивелигера, коллекторы выставляли в бассейны и, в течение недели, происходило оседание личинок. Через месяц спат размером 3,5÷5,0 мм выставляли в море. Доращивание до товарных размеров проводили в море на устричном носителе, глубина постановки которого составляет 14-20 м.
Известный способ обладает рядом недостатков:
- концентрация серотонина является питательной средой для микроорганизмов. Т.к. от момента введения раствора до вымета половых продуктов происходит 1-4 часа, а скорость размножения микроорганизмов увеличивается с повышением температуры воды, то происходит интенсивное осеменение микроорганизмами среды и яйцеклеток;
- оплодотворенные яйцеклетки не промываются стерильной морской водой, что является причиной низкой выживаемости личинок на ранних стадиях развития;
- введение шприцом раствора серотонина в мышцу моллюсков травмирует мягкие ткани и приводит к гибели производителей;
- т.к. диаметр яйцеклетки составляет 50-70 мкм, то при очистке суспензии оплодотворенных яйцеклеток через газ-сито с диаметром ячеи 96 мкм проходят яйцеклетки с лишними сперматозоидами, что приводит к полиспермии и нарушениям эмбрионального развития;
- развитие оплодотворенных яйцеклеток происходит в воде, где проводили стимуляцию нереста производителей. Содержание биогенов в такой воде значительно превышает предельно-допустимые концентрации;
- концентрация микроводорослей в морской воде значительно ниже необходимой для полноценного питания личинок и спата устриц. Забор воды непосредственно из моря и без осуществления предварительной очистки приводит к тому, что вместе с микроорганизмами поступают личинки зоо- и меропланктона, что создает пищевую конкуренцию личинкам устриц и влияет на их выживаемость;
- было получено 20 тыс. спата моллюсков, что составляет 0,4% от начального значения, и это свидетельствует об очень низкой выживаемости;
- применяемые в схеме устричного носителя рамки с устрицами препятствуют линейному росту моллюсков, их дыханию и фильтрации.
В основу изобретения «Способ выращивания гигантской устрицы Crassostrea gigas в Черном море» поставлена задача путем разработки оптимальных условий нереста, выращивания личинок и получения жизнестойкой молоди в искусственных условиях, обеспечить возрождение устриеводства на Черном море.
Поставленная задача реализуется следующим образом.
В способе выращивания гигантской устрицы Crassostrea gigas в Черном море, кондиционирование производителей осуществляют в течение 24 ч путем содержания без корма с постоянной аэрацией воды. Серотонин, растворенный в стерильной морской воде, вводят в межстворчатую жидкость по 1 мл/особь в концентрации 0,003%. Через 15 минут после оплодотворения проводят селекцию яйцеклеток по размерам. При культивировании яйцеклеток поддерживают плотность 50 тыс.яйц./л, на ранних и поздних стадиях развития личинок - соответственно 20 тыс.лич./л и 10 тыс.лич/л, на стадии оседания - до 1 тыс.лич./л. На всех стадиях развития устриц обеспечивают кормом, причем на ранних стадиях развития корм состоит из Isochrysis galbana и Chaetoceros calcitrans в концентрации до 100 тыс. кл./мл при соотношении клеток 2:1, на поздних включает микроводоросли Isochrysis galbana, Chaetoceros calcitrans, Phaeodactilum tricomutum, Tetraselmis suecica в концентрации корма до 200 тыс.кл./млв при соотношении клеток 2:1:1:1 соответственно, а на стадии педивелигера в состав корма дополнительно вводят микроводоросль Skeletonema costatum (2 части) при общей концентрации 200-250 тыс.кл/мл. При кондиционировании производителей обмен фильтрованной морской воды производят дважды в сутки. Для селекции по размерам яйцеклетки собирают на мельничное сито с диаметром ячеи 32 мкм и промывают фильтрованной и стерилизованной морской водой. Эмбриональное развитие яйцеклеток проводят в стерилизованной морской воде с аэрацией.
Преимущества применяемой стимуляции нереста состоят в том, что производители остаются живыми после стимуляции, происходит нерест только зрелых сперматозоидов и яйцеклеток, что обеспечивает высокую выживаемость личинок. Раствор серотонина концентрации 0,003% является оптимальным для стимуляции нереста гигантской устрицы, т.к. концентрация на порядок ниже не вызывает стимуляцию, а на порядок выше - создает питательную среду для микроорганизмов, находящихся в мантийной полости устриц. Проведение селекции обеспечивает прохождение раннего эмбриогенеза без нарушений, а также сортировку яйцеклеток по размерам. Многофакторные эксперименты, проведенные авторами, позволили определить оптимальные величины плотности посадки, состава корма и концентрации микроводорослей, которые обеспечивают высокую выживаемость, темп роста и влияют на продолжительность выращивания.
Предполагаемое изобретение поясняется фотографиями. Фиг. 1 - Пластина из пищевой пластмассы - субстрат для оседания личинок гигантской устрицы. Фиг. 2 -Коллектор из пластмассовых чашечек для оседания личинок гигантской устрицы. Фиг. 3 - садок для подращивания устриц в море до товарного размера.
Способ реализуется следующим образом.
Кондиционирование производителей. Созревание производителей происходит в природных условиях в садках на глубине 2-3 метров при оптимальной плотности посадки. Сбалансированное питание и естественный ход температуры дают возможность получить половые продукты высокого качества, что впоследствии обеспечивает высокую выживаемость личинок.
14
19
5
2
2
4
Маточное стадо составляют из производителей разного возраста для обеспечения баланса полов, поскольку среди младших возрастных групп преобладают самцы, а среди старших - самки. Для избежания инбридинга количество производителей должно быть не менее 100 экз. Во второй декаде июня, когда температура воды на глубине месторасположения устриц составляет 18°С, а луна входит в фазу полнолуния (нерест устриц в природе происходит во время прилива), производителей переносят в питомник для кондиционирования. Очищенных производителей распределяют по сетке, размещенной в прямоугольной емкости на высоте 10 см от дна. Емкость предварительно заполняется фильтрованной морской водой с температурой 20°С. Производителей содержат без корма с постоянной аэрацией воды. Обмен воды производят дважды в сутки. В течение этого периода у производителей очищается кишечник и жабры, что обеспечивает получение чистых половых продуктов. Стимуляция нереста и получение половых продуктов. Нерест устриц начинается на вторые сутки. Первыми начинают нереститься самцы; их переносят в отдельную емкость от самок. При необходимости срочного получения половых продуктов, или при невозможности получения их первым способом (когда, например, луна находится в других фазах), применяют стимуляцию нереста производителей. Растворенный в фильтрованной морской воде серотонин (CHNO·HSO), в концентрации 0,003%, вводят при помощи шприца в межстворчатую жидкость по 1 мл/особь. Ткани устрицы-производителя при этом не травмируются.
Проведение оплодотворения. Через 15 минут после оплодотворения яйцеклетки собирают на мельничное сито с диаметром ячеи 32 мкм и промывают фильтрованной морской водой, прошедшей стерилизацию. Дальнейшее эмбриональное развитие проходит в стерильной морской воде с аэрацией при плотности 50 тыс.яйц./л.
Выращивание личинок гигантской устрицы. Температура воды в течение периода выращивания поддерживают на уровне 21-24°С, что соответствует температуре, при которой происходит размножение и развитие личинок в природных условиях. Оптимальной для роста личинок на стадии велигера является плотность посадки до 20 тыс.лич./л. Корм состоит из Isochrysis galbana и Chaetoceros calcitrans в концентрации до 100 тыс.кл./мл при соотношении клеток 2:1.
На поздних стадиях развития оптимальной является плотность посадки до 10 тыс.лич/л, концентрация корма - до 200 тыс.кл./мл и состав микроводорослей Isochrysis galbana, Chaetoceros calcitrans, Phaeodactilum tricomutum, Tetraselmis suecica в соотношении клеток 2:1:1:1. На стадии педивелигера в состав корма вводят еще одну микроводоросль- Skeletonema costatum (2 части).
Выращивание личинок проводят в цилиндрических емкостях из пластика, объемом 100 литров при постоянной аэрации и ежедневной подаче корма. В первую неделю культивирования личинок замена воды производят ежедневно, в последующие недели - через двое суток.
Оседание личинок. Для оседания устриц используют коллекторы в виде пластин или чашечек из пищевой пластмассы (фиг. 1, 2). Перед оседанием субстраты выдерживают в море в течение 1 месяца, затем проводят их очистку и дезинфекцию. Через 2 недели после оседания, спат размером 2-3 мм выставляют в море для доращивания. Применяемый тип субстрата позволяет разделять спат без потерь, независимо от плотности оседания. Темпы роста спата, прикрепленного к пластинам, в 1,6 раза выше, чем на осколках раковин мидий.
Проведение оседания. Педивелигеров размерами 325 мкм переносят в емкость с подготовленными коллекторами. Плотность личинок составляет 1 тыс. лич./л; концентрация корма - 200-250 тыс.кл./мл. Состав микроводорослей аналогичен предыдущему. Интенсивность аэрации воды снижена. Полную замену воды проводят через двое суток. По истечении 3 суток оседание заканчивается. Коллекторы с осевшим спатом переносят в емкость для подращивания.
Подращивание спата устриц в море до товарного размера. В конце октября -начале ноября, при достижении размеров 35-40 мм, спат гигантской устрицы снимают с субстрата, разделяют и переносят в садки на доращивание. В качестве садков используют обшитые делью пластмассовые ящики с отверстиями. Размеры садков -37×28×10 см (I тип) и 47×28×11 см (И тип). Садки промываются морской водой со всех сторон, устрицы свободно открывают створки для дыхания и питания; свободное расположение устриц не мешает их росту.
При оптимальных условиях выращивания устрицы достигают товарного размера 85- 120 мм за 1,5-2 года.
Пример реализации способа.
В апреле 2003 года из всей выборки устриц Crassostrea gigas, выращиваемых на мидийно-устричной ферме в бухте Карантинная, проводили отбор производителей разного возраста (1-3 года) в количестве 140 экз. Устриц распределяли по садкам (по 35-40 экз.) и подвешивали в море на глубине 2-3 м. В июне, при повышении температуры воды до 18°С, половину производителей перенесли в лабораторию, провели механическую очистку раковин от обрастания и поместили в емкость объемом 250 л. Устриц содержали без корма в течение 24 часов в стерильной морской воде с аэрацией при температуре 20,4°С. За это время дважды проводили смену морской воды.
Стимуляция нереста. Одновременно применили температурную и химическую стимуляцию нереста (т.к. луна находилась в фазе роста). Температуру воды повысили до 23°С. Десяти устрицам в межстворчатую жидкость был введен раствор серотонина концентрации 0,003% в количестве 1 мл/особь. Через 1,5 часа первыми начали нереститься стимулированные серотонином самцы, затем остальные устрицы. Самок и самцов рассаживали по отдельным емкостям. Через час после начала нереста яйцеклетки собрали на газ-сито с размером ячеи 32 мкм и перенесли в 10 л емкость со стерильной морской водой с аэрацией. Туда добавили суспензию сперматозоидов (200 мл) молочного цвета. Через 15 мин. оплодотворенные яйцеклетки снова собрали на газ-сито, промыли стерильной морской водой и перенесли в другую емкость. Раннее эмбриональное развитие устриц проходило при плотности посадки 50 тыс. эмбрионов/л в объеме 20 литров при температуре 22°С. Оценивали зрелость яйцеклеток, а также процесс оплодотворения и раннего эмбрионального развития при помощи микроскопа МБИ-6.
Выращивание личинок. Через сутки при помощи газ-сита (56 мкм) велигеров перенесли в стерильную морскую воду с аэрацией. Плотность посадки личинок составила 10 тыс.лич./л; кормили золотистой микроводорослью Isochrysis galbana концентрации 50 тыс.кл./мл в течение 3 дней, затем постепенно увеличивали концентрацию до 100 тыс.кл./мл, добавляя одну часть Chaetoceros calcitrans. В течение первой недели обмен воды проводили ежедневно при помощи газ-сита (84-140 мкм в зависимости от размеров личинок), затем через день. Стадия велигера продолжалась 8-10 дней; прирост составил до 10 мкм/сут при выживаемости личинок 82%. На стадии великонхи личинок содержали при плотности посадки 5 тыс.лич./л и температуре воды до 24°С. В состав корма постепенно вводили другие виды микроводорослей (Phaeodactilum tricomutum, Tetraselmis suecica) концентрации от 150 до 200 тыс.кл./мл. Продолжительность этой стадии - 14-17 суток. Среднесуточный прирост личинок составил 15-19 мкм/сут. при выживаемости 60,2%. Стадия педивелигера продолжалась 3-5 суток. В состав корма была введена еще одна микроводоросль Sceletonema costatum (2 части), а концентрация корма увеличена до 250 тыс.кл./мл. Выживаемость педивелигеров до 25%.
Оседание личинок. Педивелигеров собирали на газ-сито с размером ячеи 210 мкм и перенесли в подготовленную емкость с субстратами для оседания (створки раковин мидии и чашки из пищевой пластмассы). Плотность посадки педивелигеров - 1 тыс/л; состав и концентрация корма аналогичны предыдущему. Оседание продолжалось 3 суток. При полной замене воды на вторые сутки, было выявлено, что оседание завершилось.
Подращивание спата._Спат подращивали в течение 2 недель. Подачу корма осуществляли два раза в сутки, суммарная концентрация увеличена в два раза. Состав микроводорослей аналогичный предыдущему. Смену воды проводили ежедневно. Температура воды - до 25°С. Среднесуточный прирост спата составил 110-190 мкм. При размерах спата 2-5 мм, коллекторы были выставлены в море на доращивание. Чтобы сохранить спат от опадания и выедания рыбами, на коллекторы одевали рукава, сшитые из дели (размер ячеи 1 см).
Разделение спата. В конце октября - начале ноября спат снимали с субстрата, разделяли по одному экземпляру и распределяли по садкам. Некоторые условия выращивания и линейно-весовые характеристики представлены в Таблице. Количество спата определяли «объемным методом», который заключается в определении среднего количества особей в 6 выборках, отобранных цилиндрическим стаканом объема 1,5 л. Суммарное количество спата составило около 65 тыс. или 6,5% от изначального количества яйцеклеток.
Таблица
Оптимальные условия содержания гигантской устрицы при доращивании в море
Преимущества предлагаемого способа выращивания гигантской устрицы Crassostrea gigas в Черном море заключаются в том, что разработаны оптимальные условия для получения личинок и выращивания гигантской устрицы в питомнике. При выращивании проводится селекция, как производителей, так и личинок и контролируется весь цикл культивирования. Благодаря оптимизации всех этапов культивирования гигантской устрицы С. gigas появляется возможность создания полноцикличного устричного хозяйства для производства товарной устрицы в Черном море.