Казеинолитическая активность содержимого толстой кишки при дисбиозе на фоне хронического панкреатита

ВОПРОСЫ ПРЕПОДАВАНИЯ МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ

сохранение здоровья человека, поддержание генофонда человечества, именно поэтому им необходимо уделять большое внимание. Возникающие проблемы, связанные с их преподаванием, необходимо решать в кратчайшие сроки, а проблемы, как мы видим, имеются:

1. Малое количество учебников и учебных пособий, издаваемых на государственном языке, по данным дисциплинам.

2. В учебниках сведения по экологическим проблемам в основном устаревшие (за время выхода в свет учебника увеличивается, к примеру, процент дегради-

ровавших почв или процент загрязнения водоемов, количество вспышек инфекционных заболеваний и т.д.)

3. Очень малое количество часов отводится в школах на преподавание экологии, а зачастую эти часы отсутствуют вообще. Из-за этого нет основной опорной базы знаний и понятий у пришедших в вуз детей. Исключением являются выпускники специализированных школ, где углубленно изучается биология. В особенности слабо подготовлены специалисты по техническим дисциплинам, а ведь промышленность как раз является основным источником загрязнения окружающей среды.

КАЗЕИНОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОДЕРЖИМОГО ТОЛСТОЙ КИШКИ ПРИ ДИСБИОЗЕ НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО ПАНКРЕАТИТА

А.Ю. Миронов, Е.Ф. Мельникова, Е.В. Русанова, Н.В. Загальская

ГОУ ВПО «IМГМУ им. И.М. Сеченова», МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского

В содержимом толстой кишки присутствует большое количество протеаз, вырабатываемых желудком, поджелудочной железой, а также продуцируемых микробами. При развитии дисбиоза суммарная протеоли-тическая активность возрастает с увеличением количества УПМ. Суммарное количество протеаз в пробе фекалий увеличивается у детей с дисфункциями ЖКТ и у взрослых с ОКИ. Повышенное содержание протеаз может служить показателем наличия и степени выраженности дисбиоза. На фоне обострения хронического панкреатита развивается нарушение нормоценоза содержимого толстой кишки, при котором происходит увеличение количества УПМ. Учитывая трудоемкость, сроки выполнения и стоимость микробиологического исследования проб содержимого толстой кишки, обращено внимание на экспресс-метод определения дис-биоза у больных хроническим панкреатитом.

Цель работы - изучение величины протеолитиче-ской активности проб фекалий у больных хроническим панкреатитом параллельно с бактериологическим исследованием проб фекалий.

Материалы и методы. Исследованы пробы фекалий, полученные от 60 пациентов с хроническим панкреатитом в стадии обострения при их поступлении в стационар. Протеолитическую активность супер-натантов фекалий изучали по методике Е. М. Горской, определяя зоны гидролиза казеина. Тестирование проводили в стерильных чашках Петри, отобранных по одинаковому внутреннему диаметру. Чашки размещали на строго горизонтальной поверхности, вносили казеиновый агар, для приготовления которого использовали 2 %-ный раствор казеина по Гамерстайну Олай-ненского завода с равным объемом 2 % Ьай-агара на 0,05М фосфатном буфере КН2Р04/№2НР04, рН 7,2. В чашках с 20 мл казеинового агара пробивали лунки диаметром 4 мм, вносили по 20 мкл супернатантов фе-

калий. После 18 ч. инкубирования при температуре 37° С зоны протеолиза проявляли добавлением 5 %-ной соляной кислоты. Активность учитывали по диаметру зон протеолиза, считая минимальной при диаметре 5-6 мм, средней - 7-9 мм, высокой - 10 мм и выше.

Пробы нативных фекалий исследовали на наличие анаэробных (Bifidobacterium sp., Lactobacillus sp.) и факультативно-анаэробных УПМ и общепризнанных индигенных бактерий и грибов. Первичный посев проб фекалий проводили на жидкие и капельным методом на плотные питательные среды. Идентификацию изо-лятов осуществляли общепринятыми методами. Степень обсемененности образца выражали 10n КОЕ/г, где n — степень колониеобразующих единиц в одном грамме фекалий. Оценку нарушений микроэкологии проводили по показателям нормофлоры.

Результаты. По зонам казеинолитической активности обследованные пациенты разделены на группы и сравнивались между собой по выявленным нарушениям в микробиоценозе толстой кишки. Низкая про-теолитическая активность не обнаружена, средняя отмечена в 18 (30 %) пробах (I группа) и высокая -в 42 (70 %) пробах (II группа).

В I группе из 117 штаммов доля изолятов облигат-ных представителей микробиоценоза (Bifidobacterium sp., Lactobacillus sp., E. coli, Enterococcus sp.) составила 12,8-15,4 %; доля УПМ - 6,8-11,1 %. Во II группе из 311 штаммов выше доля УПМ (8,4-12,5 %), а штаммы облигатных микроорганизмов составили 11,9-13,2 %. Такие различия удельного веса выделенных штаммов могут свидетельствовать о том, что во II группе нарушения микроэкологии содержимого толстой кишки более выражены.

Содержание бифидобактерий снижено у 55,6 % пациентов в I группе и у 61,9 % пациентов во II группе; содержание лактобактерий снижено у 83,3 и у 85,7 %

НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК

больных соответственно. Содержание E. coli повышено у 77,8 и у 88,1 % больных соответственно. Снижено содержание Enterococcus faecalis у 66,7 % больных I группы и у 64,3 % II группы, Е. faecium - у 61,1 и у 57,1 % больных соответственно. В исследованных группах концентрации облигатных анаэробных и факультативно-анаэробных представителей нормофлоры были практически равны.

В обеих группах наблюдалось повышение концентраций УПМ. Во II группе удельный вес пациентов с повышенным содержанием условно-патогенных энтеро-бактерий (92,9 % больных), стафилококков (61,9 % больных), грибов (76,2% больных) выше, чем в I группе, -соответственно 44,4, 44,4 и 72,2 % больных, что также может свидетельствовать о более выраженных дис-биотических нарушениях у пациентов II группы.

Микрофлора представлена монокультурами, двух-и трехкомпонентными ассоциациями. В I группе преобладали монокультуры и двухкомпонентные ассоциации (88,2 %), во II группе - двух- и трехкомпонентные (80,5 %). Наличие многокомпонентных ассоциаций УПМ во II группе свидетельствует о более выраженных дисбиотических нарушениях у этих пациентов.

E. coli с измененными ферментативными свойствами (лактозоотрицательные и гемолитические), условно-патогенные энтеробактерии, стафилококки чаще встречались во II, чем в I группе: 22,2, 35,7 и 44,4 % и 92,9, 44,4 и 61,9 % пациентов соответственно. Такие показатели обсемененности могут свидетельствовать

0 роли перечисленных микробов в повышении протео-литической активности проб содержимого толстой кишки. Для уточнения их роли проведен развернутый анализ видового и количественного содержания УПМ в пробах по группам. Изолированы представители родов Enterobacter, Klebsiella, Proteus, Citrobacter, Morganella. Во II группе присутствовали все изолированные виды, но преобладали бактерии рода Klebsiella (46,2 %), в I группе в процентном отношении преобладали бактерии рода Enterobacter (62,5 %), а Klebsiella sp. и Proteus sp. не обнаружены. Микробиоценоз пациентов II группы отличается от микробиоценоза пациентов

1 группы наличием гемолитических форм микроорга-

низмов у 47,5 % больных (в I группе отсутствуют), грибов рода Candida у 45,2 % больных (в I группе - у 17 %), лактозоотрицательных и гемолитических E. coli у 37,5 % больных (в I группе - только лактозоотрицательные E. coli у 22,2 %), золотистых стафилококков у 11,9 % больных (в I группе отсутствуют).

В I группе 62,5 % штаммов условно-патогенных эн-теробактерий изолировали в концентрации 102 КОЕ/г, а во II группе 71,8 % штаммов - в концентрации 104109 КОЕ/г. Различия концентраций статистически достоверны (Р>0,005). Статистически достоверны различия концентраций грибов рода Candida и E. coli с измененными ферментативными свойствами.

Заключение. Анализ результатов бактериологического исследования проб фекалий параллельно с определением протеолитической активности суперна-тантов фекалий позволяет судить об увеличении зон активности параллельно с усугублением дисбиотических нарушений. В группе пациентов с зонами протео-лиза 7-9 мм дисбиоз проявлялся наличием лактозоотрицательных E. coli у 22,2 % больных в концентрации до 103 КОЕ/г, условно-патогенных энтеробактерий у 44,4 % больных в концентрации до 104 КОЕ/г, стафилококков у 44,4 % больных в концентрации до 103 КОЕ/г, грибов рода Candida у 16,7 % больных в концентрации до 103 КОЕ/г. В группе пациентов с зонами протеолиза более 10 мм дисбактериоз проявлялся наличием тех же УПМ, но у большего количества пациентов и в больших концентрациях: E. coli с измененными ферментативными свойствами у 37,5 % больных в концентрации до 1010 КОЕ/г; условно-патогенные энтеробактерии у 92,9 % больных в концентрации до 109 КОЕ/г; стафилококки у 61,9 % больных в концентрации до 107 КОЕ/г; грибы рода Candida у 45,2 % больных в концентрации до 107 КОЕ/г. Увеличение диаметров зон, вероятнее всего, может быть обусловлено наличием в пробах таких микроорганизмов, как гемолитические E. coli, Klebsiella sp., грибы рода Candida. Существует корреляция между повышением концентраций УПМ, не свойственных данному биотопу, и увеличением диаметра зон казеино-литической активности.