СПОСОБ IN-VITRO ДЛЯ БЫСТРОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ ПАЦИЕНТА, КОТОРОЕ СВЯЗАНО С ИНФЕКЦИЕЙ Mycobacterium tuberculosis

1. Способ in-vitro для быстрого определения статуса инфекции Mycobacterium tuberculosis по цельной крови с точки зрения активного или латентного туберкулеза, включающий стадии:
- стимуляции антиген-специфической Т-клетки, которая присутствует в первом образце цельной крови, очищенным белковым производным (PPD) в присутствии антител против CD28, или CD28 и CD49d;
2
- обработки PPD антиген-представляющими клетками (АРС) путем инкубации в течение от 1,5 ч до 2,5 ч, особенно, в течение 2 ч, при температуре от 35°С до 39°С, особенно, при 37°С, необязательно с добавлением СО;
- затем добавления ингибитора секреции;
- осуществления интенсивного смешивания; и
- другой инкубации в течение периода по меньшей мере 2,5 ч при температуре от 35°С до 39°С, и
- определения цитокинового профиля и по продукции внутриклеточного INF-γ, и продукции внутриклеточного IL-2 антиген-специфической Т-клетки; причем
- на присутствие активного туберкулеза указывает сдвиг цитокинового профиля в сторону Т-клеток, секретирующих только IFN-γ, сопровождающийся уменьшением содержания Т-клеток, секретирующих и IFN-γ, и IL-2.
2. Способ по п.1, где другую стимуляцию SEB, ESAT-6 и CFP-10 и/или антигеном вакцинации осуществляют в дополнение к указанной стимуляции PPD.
3. Способ по п.1 или 2, где отрицательный контроль выполняется добавлением физиологического буфера, такого как PBS 0,9% NaCl или 5% глюкоза, к антиген-специфической Т-клетке, которая присутствует в цельной крови второго образца, который является аутентичным с указанным первым образцом.
4. Способ по п.1 или 2, где положительный контроль выполняется добавлением SEB к антиген-специфической Т-клетке, которая присутствует в цельной крови третьего образца, который является аутентичным с указанным первым образцом.
5. Способ по п.1 или 2, где контроль вакцинацией осуществляется добавлением антигена вакцинации к антиген-специфической Т-клетке, которая присутствует в цельной крови четвертого образца, который является аутентичным с указанным первым образцом.
6. Способ по п.1 или 2, где контроль вакцинацией БЦЖ осуществляется добавлением ESAT-6 (рано секретируемой антигенной мишени) и CFP-10 (белка фильтрата культуры) к антиген-специфической Т-клетке, которая присутствует в цельной крови четвертого образца, который является аутентичным с указанным первым образцом.
7. Способ по п.1 или 2, где контроль того, имел ли место контакт с нетуберкулезными микобактериями у донора цельной крови, осуществляется добавлением ESAT-6 (рано секретируемой антигенной мишени) и CFP-10 (белка фильтрата культуры) к антиген-специфической Т-клетке, которая присутствует в цельной крови пятого образца, который является аутентичным с указанным первым образцом.
8. Способ по п.1 или 2, где ингибитор секреции выбран из группы, состоящей из брефелдина А, моненсина или тому подобных.
9. Способ по п.1 или 2, где определение цитокинового профиля осуществляется посредством проточной цитометрии.
10. Способ по п.1 или 2, где цельная кровь образцов получена у людей или животных.
11. Способ по п.1 или 2, применяемый для прослеживания контакта, причем цельную кровь получают у индивида, находящегося в близком контакте с пациентом с активным ТВ, или с подозрением на наличие в прошлом контакта с пациентом с активным ТВ.
12. Способ по п.11, где решение по лечению принимается следующим образом:
а. профилактика, такая как INH, или активное лечение, такое как терапия четырьмя препаратами, показано в случаях, когда был выявлен сдвиг цитокинового профиля в сторону Т-клеток, секретирующих только IFN-γ, сопровождающийся уменьшением содержания Т-клеток, секретирующих и IFN-γ, и IL-2;
b1. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и нет информации о предыдущем тестировании, то срочная терапия не требуется, и пациента следует повторно тестировать в пределах 2-4 недель;
b2. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и если при предыдущем тестировании на латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis пока не выявлен контакт с Mycobacterium tuberculosis, то показана профилактика, такая как терапия INH;
c1. срочная терапия не показана, если у пациента не проявляется реакция;
c2. в случае, если у пациента выявляются какие-либо клинические симптомы, показано повторное тестирование.
13. Способ по п.1 или 2, где цельная кровь была получена у индивида перед получением иммуносуппрессивных лекарственных средств или при состоянии нарушенного иммунитета, подобном ВИЧ-инфекции.
14. Способ по п.13, где решение по лечению принимается следующим образом:
а. профилактика, такая как INH, или активное лечение, такое как терапия четырьмя препаратами, и, необязательно, задержка иммуносуппрессивной терапии, показана в случаях, когда был выявлен сдвиг цитокинового профиля в сторону Т-клеток, секретирующих только IFN-γ, сопровождающийся уменьшением содержания Т-клеток, секретирующих и IFN-γ, и IL-2;
b1. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и нет информации о предыдущем тестировании, то возможна иммуносуппрессивная терапия, и пациента следует повторно тестировать в пределах 2-4 недель;
b2. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и если при предыдущем тестировании на латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis пока не выявлен контакт с Mycobacterium tuberculosis, то показана профилактика, такая как терапия INH, а также повторное тестирование пациента в пределах 2-4 недель;
с1. иммуносуппрессивную терапию следует начинать, если у пациента не проявляется реакция;
с2. в случае, если у пациента выявляются какие-либо клинические симптомы, показано повторное тестирование.
15. Способ по п.1 или 2, где цельная кровь была получена у индивида с подозрением на активную ТВ инфекцию.
16. Способ по п.15, где решение по лечению принимается следующим образом:
а. активное лечение, такое как терапия четырьмя препаратами, показано в случаях, когда был выявлен сдвиг цитокинового профиля в сторону Т-клеток, секретирующих только IFN, сопровождающийся уменьшением содержания Т-клеток, секретирующих и IFN-γ, и IL-2;
b1. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и нет информации о предыдущем тестировании, то вероятность острой инфекции отсутствует, то следует рассматривать альтернативный диагноз, и пациента следует повторно тестировать в пределах 2-4 недель;
b2. если диагностические исследования выявили латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis Т-клетками, секретирующими и IFN-γ, и IL-2, и если при предыдущем тестировании на латентную инфекцию Mycobacterium tuberculosis пока не выявлен контакт с Mycobacterium tuberculosis, то показана профилактика, такая как терапия INH, или активное лечение, такое как терапия четырьмя препаратами, и пациента следует повторно тестировать в пределах 2-4 недель;
c1. срочная терапия показана, если у пациента не проявляется реакция;
с2. в случае, если у пациента выявляются какие-либо клинические симптомы, показано повторное тестирование.