СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ ТЕРМИНАЛЬНЫХ НУКЛЕОТИДОВ G-ЦЕПИ ТЕЛОМЕРНОЙ ДНК ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ И ДУПЛЕКС-СПЕЦИФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА, НАБОРЫ СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ ПРАЙМЕРОВ И ЗОНДОВ ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ЭТОГО СПОСОБА

1. Способ идентификации и количественной оценки терминальных нуклеотидов G-цепи теломерной ДНК человека, включающий следующие этапы:
а) экстракция геномной ДНК с последующим выделением фракции 3´-выступающих однонитевых концов теломерной ДНК (G-оверхенгов) при помощи магнитных частиц с иммобилизованными на их поверхности комплементарными зондами;
б) амплификация полученной фракции G-оверхенгов, осуществляемая в следующие подэтапы: 1) 3´-модифицирование за счёт присоединения полицитидиловой и расположенной за ней полиадениловой последовательностей с помощью фермента  терминальной трансферазы; 2) амплификация с использованием праймера SEQ ID NO: 1 с целью получения минусовых копий, содержащих адаптерную последовательность SEQ ID NO: 3; 3) 3´-модифицирование минусовых копий за счёт присоединения полиадениловой последовательности с помощью фермента терминальной трансферазы; 4) финальная ПЦР амплификация минусовых цепей с использованием пары праймеров, указанных в SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:4, при условии избытка адаптерной последовательности;
в) проведение дуплекс-специфического анализа полученной фракции минусовых цепей G-оверхенгов с использованием флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных зондов, соответствующих шести возможным вариантам нуклеотидных окончаний G-цепи теломерной ДНК человека и указанных в SEQ ID NOs: 6-11 (табл. 2);
г) регистрация результатов дуплекс-специфического анализа, включающая измерение уровней флуоресценции зондов, математическую обработку данных, заключающуюся в нормировании сигналов за счёт вычитания фона и умножения на специфические коэффициенты, и конечную оценку количественного соотношения вариантов нуклеотидных окончаний G-оверхенгов в виде построения профиля терминальных нуклеотидов G-цепи теломерной ДНК в процентах.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для выделения фракции теломерных G-оверхенгов на этапе (а) используют любой способ, сохраняющий нативность одноцепочечной ДНК из группы гибридизационных или сорбционных методов с использованием различных мембран, колонок, частиц или других поверхностей с целью иммобилизации и последующего снятия с их поверхности исследуемых молекул.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для амплификации фракции теломерных G-оверхенгов на этапе (б) после полицитидилирования проводят политимидилирование с помощью фермента терминальной трансферазы, далее последовательно осуществляют амплификацию минусовой цепи с использованием праймера SEQ ID NO:2, 3'-модифицирование полученных минусовых копий через присоединение политимидиловой последовательности с помощью фермента терминальной трансферазы и их финальную амплификацию с использованием пары праймеров, состоящей из указанных в SEQ ID NO:3 и SEQ ID NO:5 последовательностей, при условии избытка адаптерного праймера.
4. Способ по п.1 или 3, отличающийся тем, что для амплификации фракции G-оверхенгов на этапе (б) в качестве адаптерной последовательности, содержащейся в SEQ ID NOs:1-3, используется любая подходящая по структуре и температуре отжига олигонуклеотидная последовательность, не комплементарная повторам G-цепи теломерной ДНК человека.
5. Способ по п.1 или 3, отличающийся тем, что для амплификации  фракции G-оверхенгов на этапе (б) в качестве последовательностей, указанных в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, используются варианты, содержащие мононуклеотидный хвост длиной, отличающейся от указанной в 25 нуклеотидов в большую или меньшую сторону, но соответствующие по температуре плавления условиям проведения амплификации.
6. Способ по п.1 иди 3, отличающийся  тем, что  для  амплификации  фракции G-оверхенгов на этапе (б) в качестве последовательностей, указанных в SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, используются варианты, представляющие собой мононуклеотидные последовательности длиной, отличающейся от указанной в 30 нуклеотидов в большую или меньшую сторону, но соответствующие по температуре плавления условиям проведения амплификации.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что при проведении дуплекс-специфического анализа на этапе (в) вместо зондов, представленных в SEQ ID NOs: 6-11 используются варианты, гомологичные исходным последовательностям как минимум на 75%, длиной от 8 до 12 нуклеотидов, полученные путём вставок и/или делеций нуклеотидов по 3′- и/или 5′-концу.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что при проведении дуплекс-специфического анализа на этапе (в) используется любой вид или сочетание нескольких видов флуоресцентного мечения зондов с комбинацией «флуорофор-гаситель» на любом из противоположных концов зонда, состоящей из красителей FITC, FAM, R110, TET, R6G, HEX, JOE, VIC, YakimaYellow, TAMRA, Cy3, ROX, SuperROX, Cy 3.5, Cy5, Cy 5.5, Cy7, Cy 7.5 и аналогичных им и соответствующих гасителей из ряда RTQ, BHQ, Dabcyl и др.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что для регистрации результатов дуплекс-специфического анализа на этапе (г) используется любой вид аппаратно-программного обеспечения, позволяющего количественно определять уровень значимого флуоресцентного сигнала для каждого зонда, в том числе и мультиканально при сочетании нескольких видов мечения.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что для регистрации результатов дуплекс-специфического анализа в качестве аппаратно-программного комплекса используется прибор флуоресцентный детектор FDG-001 и программа LabWorks 4.6, которые позволяют преобразовывать флуоресцентные сигналы в цифровые данные с последующей их математической обработкой.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что математическая обработка уровней сигналов при регистрации результатов дуплекс-специфического анализа на этапе (г) заключается в нормировании значений умножением на коэффициенты, приведённые в таблице 3, для каждого зонда из группы FAM-RTQ1 после 1 и 2 ч проведения анализа.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что математическая обработка уровней сигналов при регистрации результатов дуплекс-специфического анализа заключается в нормировании значений умножением на коэффициенты, отличные от таблицы 3 и рассчитанные для вариантов зондов в любых концентрационных соотношениях, включая указанные, для любых групп флуоресцентного мечения по п.8 и соответствующие текущему состоянию спектральных свойств флуорофор-связанной флуоресценции ДНК на момент исследования.
13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что математическая обработка уровней сигналов при регистрации результатов дуплекс-специфического анализа заключается в нормировании значений умножением на коэффициенты для каждого зонда из группы FAM-RTQ1 или любой другой группы мечения, рассчитанные для иных, чем 1 и 2 ч промежутков времени.
14. Способ по п.1, отличающийся тем, что для проведения дуплекс-специфического анализа и регистрации его результатов на этапе (г) используются оптически-прозрачные микропробирки различного объёма, в том числе стрипы, а также планшеты, капилляры, луночные стёкла, гибридизационные камеры и другие замкнутые микрообъёмы, позволяющие сканировать каждый зонд по отдельности или все варианты сразу.
15. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов, представленных в SEQ ID NOs: 1-5, приведенных в таблице 1, используемых в качестве праймеров для амплификации  минусовых цепей теломерных G-оверхенгов в ходе ПЦР в способе идентификации и количественной оценки терминальных нуклеотидов G-цепи теломерной ДНК человека, охарактеризованном в п.1 и его варианте в п.3.
16. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов по п.15, используемых в качестве праймеров для амплификации минусовых цепей теломерных G-оверхенгов в ходе ПЦР, отличающийся тем, что в качестве адаптерной последовательности, содержащейся в SEQ ID NOs:1-3, используется любая подходящая по структуре и температуре отжига дезоксирибоолигонуклеотидная последовательность, не комплементарная повторам G-цепи теломерной ДНК человека.
17. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов по п.15, используемых в качестве праймеров для амплификации минусовых цепей теломерных G-оверхенгов в ходе ПЦР, отличающийся тем, что в качестве последовательностей указанных в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, используются варианты, содержащие мононуклеотидный хвост длиной, отличающейся от указанной в 25 нуклеотидов в большую или меньшую сторону, но соответствующие по температуре плавления условиям проведения амплификации в способе по п.1 и его варианте, охарактеризованном в п.3.
18. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов по п.15, используемых в качестве праймеров для амплификации минусовых цепей теломерных G-оверхенгов в ходе ПЦР, отличающийся тем, что в качестве последовательностей указанных в SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, используются варианты, представленные мононуклеотидной последовательностью длиной, отличающейся от указанной в 30 нуклеотидов в большую или меньшую сторону, но соответствующие по температуре плавления условиям проведения амплификации в способе по п.1 и его варианте, охарактеризованном в п.3.
19. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов, представленных в SEQ ID NOs: 6-11, приведенных в таблице 2, используемых в качестве флуоресцентно-меченных зондов при проведении дуплекс-специфического анализа в способе идентификации и количественной оценки терминальных нуклеотидов G-цепи теломерной ДНК человека, охарактеризованном в п.1 и его варианте в п.3.
20. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов по п.19, используемых вместо последовательностей, представленных в SEQ ID NOs: 6-11, в качестве флуоресцентно-меченных зондов при проведении дуплекс-специфического анализа и полученных путём преобразования исходных последовательностей зондов за счёт вставок и/или делеций нуклеотидов по 3′- и/или 5′-концу, гомологичных исходным последовательностям как минимум на 75%, длиной от 8 до 12 нуклеотидов.
21. Набор специфических дезоксирибоолигонуклеотидов по п.19, используемых в качестве флуоресцентно-меченных зондов при проведении дуплекс-специфического анализа, в котором применяется любой вид или сочетание нескольких видов флуоресцентного мечения с комбинацией «флуорофор-гаситель» на любом из противоположных концов зонда, состоящей из красителей FITC, FAM, R110, TET, R6G, HEX, JOE, VIC, YakimaYellow, TAMRA, Cy3, ROX, SuperROX, Cy 3.5, Cy5, Cy 5.5, Cy7, Cy 7.5 и аналогичных им и соответствующих гасителей из ряда RTQ, BHQ, Dabcyl и др.