СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАННИХ ПЛОДОВЫХ ПОТЕРЬ ПРИ ИНДУЦИРОВАННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ В ПРОГРАММАХ ЭКО
METHOD FOR PREDICTION OF RISK OF EARLY FETAL LOSS IN IVF INDUCED PREGNANCIES

Изобретение относится к области медицины, в частности к новым репродуктивным технологиям в акушерстве.
Важнейшей составляющей общего здоровья человека и качества его жизни является репродуктивное здоровье, а одним из основных его компонентов - способность к зачатию, вынашиванию и рождению детей. Утрата этой способности - трагедия семьи и общества, и с этих позиций бесплодие в браке - это современная медико-социальная проблема, требующая дальнейшего изучения, тем более что в России каждая 4-5-я супружеская пара бесплодна. Возрастающий интерес к развитию вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) во всем мире обусловлен приоритетностью проблемы бесплодия. Внедрение и модернизация методов новых репродуктивных технологий способствовали углубленному изучению процесса репродукции и существенно расширили возможности восстановления репродуктивной функции при наиболее тяжелых формах женского и мужского бесплодия. Вместе с тем результативность проведенных программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) не совсем удовлетворяет специалистов по репродуктивной медицине: частота наступления беременности после ЭКО все еще остается низкой - около 28% для женщин до 35 лет. Частота преждевременных родов составляет 33,6%, а у каждой 5 женщины беременность прерывается до 20 недель гестации.
В последнее время все большее внимание уделяется изучению роли цитокинов и специфических иммунокомплексов в составе различных биожидкостей, которые принимают участие в механизмах вынашивания плода и развития патологии беременности. Так, концентрация некоторых цитокинов в составе фолликулярной жидкости, по мнению ряда авторов, отражает степень зрелости и качества ооцитов. Определение специфических иммунокомплексов в крови беременных женщин позволяет своевременно диагностировать крайне тяжелое осложнение беременности - эклампсию (Концентрация комплексов макроглобулин - IgG, как возможный критерий для прогнозирования гестоза и оценки степени его тяжести. /В.Н.Зорина, P.M.Зорина, В.Г.Левченко и др. // Клиническая и лабораторная диагностика. - 2001. - №8. - С.48-49).
Известен способ иммуноферментного определения в сыворотке крови цитокина - ИЛ-1β на ранних этапах гестации (11-15 день) при физиологической беременности. Повышенные показатели данного цитокина коррелируют с выкидышем в ранние сроки беременности (Fortunato S.J. IL-1β is a better inducer of apoptosis in human fetal membranes than IL-6. / S.J.Fortunato, R.Menon // Placenta. - 2003. - Vol.24( 10). - P.922-928).
Недостатки способа:
1) высокая индивидуальная вариабельность показателей для уровней данного цитокина в сыворотке крови;
2) исследования проводились при беременности, наступившей в естественных циклах без стимуляции овуляции, в I триместре (6-12 нед.) беременности.
Известен способ иммуноферментного определения в сыворотке крови концентрации другого цитокина - ИФН-γ в крови женщин, принявших участие в программах ЭКО на 15 день после переноса эмбрионов в полость матки (Maternal serum levels of interferon-gamma and interleukin-2 soluble receptor-alpha predict the outcome of early IVF pregnancies. / S.J.Fasouliotis, S.D.Spandorfer, S.S.Witkin et al. // Hum Reprod.- 2004. - Jun; 19(6). - P.1357-63).
Высокая концентрация ИФН-γ в сыворотке крови часто сопровождается ранними репродуктивными потерями.
Недостатки способа:
1) высокая индивидуальная вариабельность показателей;
2) определение цитокина (ИФН-γ) проводится в сыворотке крови женщин уже при наличии установленной беременности.
Задача данного изобретения заключается в создании достаточно точного и информативного способа прогнозирования ранних плодовых потерь у участниц программ ЭКО уже в день забора ооцитов путем анализа состава фолликулярной жидкости иммуноферментным способом.
Поставленная задача достигается способом прогнозирования риска ранних плодовых потерь при индуцированной беременности в программах ЭКО путем исследования биологической жидкости иммуноферментным методом. У женщин в случае наступления индуцированной беременности в фолликулярной жидкости определяют содержание специфических иммунных комплексов альфа 2-макроглобулин - иммуноглобулин G (МГ-IgG) и лактоферрин - иммуноглобулин G (ЛФ-IgG) и при значении МГ-IgG менее 0,6 мкг/мл, а ЛФ-IgG менее 0,8 мкг/мл прогнозируют высокую вероятность раннего выкидыша.
Новизна изобретения.
У женщин в случае наступления индуцированной беременности в фолликулярной жидкости определяют содержание специфических иммунных комплексов МГ-IgG и ЛФ-IgG.
При значении МГ-IgG менее 0,6 мкг/мл, а ЛФ-IgG менее 0,8 мкг/мл прогнозируют высокую вероятность раннего выкидыша.
Совокупность существенных признаков изобретения позволяет создать способ прогнозирования выкидыша в раннем сроке беременности, что позволяет своевременно, сразу после забора ооцитов, не дожидаясь окончания программы ЭКО, назначить интенсивную поддержку лютеиновой фазы.
Данные показатели избраны в связи с тем, что вышеперечисленные специфические комплексы обладают иммунорегуляторной активностью, так как в их состав входит иммуноглобулин G, а вторым компонентом - регуляторные белки: альфа 2-макроглобулин (МГ) или лактоферрин (ЛФ). По всей вероятности данные белки синтезируются в фолликулярной жидкости и принимают участие в механизмах вынашивания плода («Роль макроглобулинов в репродуктивной функции» (обзор литературы) / Н.А.Зорин, В.Г.Левченко, P.M.Зорина и др. // Акушерство и гинекология. - 2005. - №4. -С.7-9; Birkenmeier G. «Targetting the proteinase inhibitor and immune modulatory function of human alpha 2-macroglobulin» / G. Birkenmeier // Mod. Asp. Immunobiol. - 2001. - Vol.2. - P.32-36; Urdl W. «Criteria of the maturity of follicle and oocyte within the scope of in vitro fertilization». An overview / W. Urdl // Wien Med Wochenschr. - 1991. - Vol.141(1-2). - P.2-9; High concentrations of lactoferrin in the follicular fluid correlate with embryo quality during in vitro fertilization cycles / A. Yanaihara, K. Mitsukawa, S. Iwasaki et al. // Fertil Steril. - 2006. - Vol.6. - P.311-320).
Однако в литературе отсутствуют сведения, касающиеся использования специфических иммунных комплексов в качестве прогностических критериев исхода индуцированной беременности.
Заявленный способ применен у 61 участницы программы ЭКО с анализом результативности проведенных программ и исходом полученной при этом беременности. У 30 пациенток беременность в программах ЭКО не наступила, у 45 пациенток програма закончилась наступлением беременности, из них у 6 пациенток беременность прервалась в 7-9 недель гестации. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1
Содержание иммунокомплексов МГ-IgG и ЛФ-IgG (мкг/мл) в фолликулярной жидкости участниц ЭКО.
Показатели
Группы обследованных
Неэффективные программы «ЭКО-»
Программы с наступившей беременностью «ЭКО+»
1 плод
2 плода
выкидыш
n
30
34
5
6
МГ-IgG(М±m)
0,87±0,103
0,95±0,19
1,18±0,18
0,47±0,05*
ЛФ-IgG(М±m)
0,81±0,05
0,98±0,08
1,28±0,16
0,65±0,05*
Примечения: * - разница показателей статистически достоверна по сравнению с уровнем при нормально протекающей беременности, независимо от количества плодов.
При использовании многофакторного анализа достоверность различий для комплексов МГ-IgG составила по Kruskal-Wallis Test - 0,019, Van der Waerden - 0,027. Для ЛФ-IgG комплексов - 0,013 и 0,01 соответственно.
Способ осуществляется следующим образом. У женщин участниц программ ЭКО при проведении трансвагинальной пункции, одновременно с забором ооцитов, забирают фолликулярную жидкость и определяют в ней концентрацию специфических иммунных комплексов МГ-IgG и ЛФ-IgG иммуноферментным методом. Полученные результаты оценивают следующим образом: при уровне МГ-IgG менее 0,6 мкг/мл и ЛФ-IgG менее 0,8 мкг/мл - прогнозируется высокий риск раннего выкидыша в случае наступления индуцированной беременности.
Пример 1. Беременная М., 30 лет, № протокола ведения программы ЭКО Э/596. Настоящая беременность третья: первая закончилась срочными родами (3400,0-51,0), вторая - медицинским абортом, осложненным эндометритом. Длительность бесплодия до вступления в программу ЭКО - 7 лет. По поводу трубно-перитонеального бесплодия воспалительного генеза взята в программу ЭКО, по длинному стандартному протоколу с применением а-Гн-РГ, стимуляция суперовуляции проводилась гонадотропинами. На пике индукции суперовуляции было забрано 13 ооцитов, получено 10 эмбрионов хорошего качества. На этапе забора ооцитов в фолликулярной жидкости были определены концентрации МГ-IgG=0,4 мкг/мл и ЛФ-IgG=0,5 мкг/мл. В полость матки перенесено 2 эмбриона на этапе 6-ти клеточного деления. Терапия, направленная на поддержку лютеиновой фазы, была назначена профилактическая. При подтверждении факта беременности терапия была усилена, и до срока 6-7 недель беременность прогрессировала. Однако в последующем беременная была госпитализирована в гинекологическое отделение с признаками угрожающего выкидыша и в последующем произошел самопроизвольный выкидыш в сроке 7-8 недель.
Пример 2. Пациентка П.А., 26 лет, № протокола ведения программы ЭКО Э/503. Настоящая беременность вторая, первая - медицинский аборт, в сроке 12 недель в связи с перенесенной краснухой. Длительность бесплодия до вступления в программу ЭКО - 6 лет, диагноз верифицирован лапароскопически. По поводу трубно-перитонеального бесплодия воспалительного генеза взята в программу ЭКО, по длинному стандартному протоколу с применением а-Гн-РГ, стимуляция суперовуляции проводилась гонадотропинами. На пике индукции суперовуляции было забрано 20 ооцитов, получено 16 эмбрионов хорошего качества. На этапе забора ооцитов в фолликулярной жидкости были определены концентрации МГ-IgG-1,2 мкг/мл и ЛФ-IgG - 1,45 мкг/мл. В полость матки перенесено 3 эмбриона на этапе 4-клеточного деления. Терапия, направленная на поддержку лютеиновой фазы, была назначена профилактическая. При подтверждении факта беременности терапия была усилена. Дальнейшее течение беременности протекало без осложнений и закончилось рождением двойни в сроке 38 недель.
Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования раннего выкидыша при индуцированной беременности путем исследования иммунных комплексов в составе фолликулярной жидкости у женщин, участвующих в программах ЭКО, позволяет своевременно оценивать риск и прогнозировать с большой степенью вероятности ранний выкидыш при наступившей беременности в программах ЭКО. Своевременный прогноз и оценка риска ранних плодовых потерь позволит принять меры на этапах ранней гестации: назначить интенсивную терапию в период поддержки лютеиновой фазы или использовать криоперенос полученных эмбрионов в другом цикле, когда будут созданы более благоприятные условия для имплантации и развития беременности.