СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОСЬМИ СОЕДИНЕНИЙ ИЗ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ КИТАЙСКОЙ МЕДИЦИНЫ
METHOD FOR ISOLATING EIGHT COMPOUNDS FROM COMPOSITION BASED ON CHINESE MEDICINE DRUGS

Область техники
Настоящее изобретение относится к способу выделения нескольких компонентов из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины.
Предпосылки изобретения
Многокомпонентные составы являются основной формой лекарственных средств китайской медицины. За прошедшие несколько тысяч лет клинического применения лекарственные средства на основе многокомпонентных составов смогли продемонстрировать более сильный терапевтический эффект по сравнению с однокомпонентными лекарственными средствами, что уже полностью доказывает научность получения многокомпонентного состава. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим решением состоит из 13 лекарственных средств китайской медицины, таких как форсайтия свисающая, жимолость японская, сушеная эфедра китайская и др., при этом она обладает противоэпидемическим и дезинтоксикационным действием, а также удаляет жар для повышения рассеивающей функции легких и применяется в лечении эпидемического гриппа. Клинические исследования подтверждают однозначное лечебное действие и выраженный эффект фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением при лечении гриппа и острой инфекции верхних дыхательных путей. Для выяснения фармакологического механизма действия многокомпонентных составов и научного обоснования закономерности совместимости лекарственных веществ в многокомпонентных составах крайне необходимо провести систематическое исследование их материальной основы. Поэтому химический состав фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением был тщательно изучен, при этом было выделено 8 соединений, которые представляли собой 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид, кверцетин, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид (матаирезинол-4'-O-глюкозид), ликвиритин-апиозид, эпивогелозид, вогелозид и этилкофеат. На основании этого предложен новый способ выполнения контроля качества фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением.
Суть изобретения
Техническая задача
Согласно настоящему изобретению предложен способ выделения 8 соединений из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины.
Техническое решение
Композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200–300; эфедры китайской 60–100; ревеня лекарственного 40–60; гуттуинии сердцелистной 200–300; жимолости японской 200–300; вайды красильной 200–300; пачули 60–100; высушенных корневищ щитовника 200–300; родиолы розовой 60–100; ментола 5-9; горького миндаля 60–100; корня солодки 60–100 и гипса 200–300.
Указанный способ выделения согласно настоящему изобретению включает следующие этапы, на которых:
(1) общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом и 50% этанолом; соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;
(2) берут экстракт элюированной 50% этанолом части, полученный на этапе (1), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG; после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG; последовательно элюируют раствором метанол-вода при соотношениях 20:80, 40:60, 60:40, 80:20 и 100% метанолом с получением в результате Fr.A - Fr.E;
(3) берут образец Fr.A, полученный на этапе (2), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;
(4) берут образец Fr.A-2, полученный на этапе (3), и смешивают его с силикагелем, затем загружают в колонку с силикагелем и разделяют в изократическом режиме при объемном соотношении дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;
(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин и 12-13 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении, выполняют следующие разделения:
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;
(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со временем удерживания 10-11 мин, 17-19 мин и 21-24 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении; при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду; 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, и после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;
(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин соответственно, и удаляют растворитель при пониженном давлении, собранную жидкость, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждают с образованием белого осадка с помощью раствора метиленхлорида-метанола с объемным соотношением 2:1 с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, колонка для хроматографии: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.
Предпочтительный способ выделения согласно настоящему изобретению включает следующие этапы, на которых:
(1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола;
(2) берут 200 г экстракта элюированной 50% этанолом части, полученного на этапе (1), добавляют к 200 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG S-50 мкм, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG, S-50 мкм с соотношением высоты слоя 1:4, при пониженном давлении последовательно элюируют с помощью 6 л раствора метанол-вода с соотношением 20:80, с помощью 7 л раствора с соотношением 40:60, с помощью 7 л раствора с соотношением 60:40, с помощью 5 л раствора с соотношением 80:20 и с помощью 3 л 100% метанола с получением в результате Fr.A – Fr.E;
(3) берут 50,0 г образца Fr.A, полученного на этапе (2), добавляют к 50 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;
(4) берут 3,2 г образца Fr.A-2, полученного на этапе (3), и смешивают его с 6,4 г силикагеля, 200–300 меш, помещают в колонку с силикагелем, соотношение высоты слоя 1:50, разделяют в изократическом режиме с объемным соотношением дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении с получением Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;
(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин, 12-13 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении, и выполняют следующие разделения:
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;
(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду; время удерживания 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;
(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, и раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.
Предпочтительная композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях:
форсайтии свисающей 200, жимолости японской 300, вайды красильной 200, ревеня лекарственного 40, пачули 60, высушенных корневищ щитовника 300, родиолы розовой 100, ментола 9, эфедры китайской 60, горького миндаля 100, гуттуинии сердцелистной 200, корня солодки 100 и гипса 200.
Предпочтительная композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях:
форсайтии свисающей 300, жимолости японской 200, вайды красильной 300, ревеня лекарственного 60, пачули 100, высушенных корневищ щитовника 200, родиолы розовой 60, ментола 5, эфедры китайской 100, горького миндаля 60, гуттуинии сердцелистной 300, корня солодки 60 и гипса 300.
Предпочтительная композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях:
форсайтии свисающей 278, жимолости японской 294, вайды красильной 285, ревеня лекарственного 55, пачули 95, высушенных корневищ щитовника 290, родиолы розовой 87, ментола 8,5, эфедры китайской 88, горького миндаля 80, гуттуинии сердцелистной 284, корня солодки 95 и гипса 277.
Общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, описанной в настоящем решении, получают с помощью следующих этапов:
(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;
(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;
(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;
(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью от 1,10 до 1,15, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;
(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до получения экстракта с относительной плотностью от 1,15 до 1,20, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.
Полезный эффект
Способ выделения согласно настоящему решению обеспечивает выделение 8 соединений, которые представляют собой 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид, кверцетин, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид, ликвиритин апиозид, эпивогелозид, вогелозид и этилкофеат.
Варианты осуществления данного изобретения
Пример 1
Взвешивают в пропорциях: 20 кг форсайтии свисающей, 30 кг жимолости японской, 20 кг вайды красильной, 4 кг ревеня лекарственного, 6 кг пачули, 30 кг высушенных корневищ щитовника, 10 кг родиолы розовой, 0,9 кг ментола, 6 кг эфедры китайской, 10 кг горького миндаля, 20 кг гуттуинии сердцелистной, 10 кг корня солодки, 20 кг гипса, и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:
(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;
(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;
(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;
(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;
(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,20, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.
Стадии способа выделения являлись следующими.
1. Инструменты и материалы
254
Инфракрасный спектрометр Bruker Alpha (компания Bruker в Швейцарии); спектрометр ядерного магнитного резонанса Bruker AVIIIHD 600 (компания Bruker в Швейцарии); масс-спектрометр Synapt G2-S (компания Waters, США); препаративный жидкостный хроматограф среднего и низкого давления Combi Flash Rf (компания Teledvne ISCO, США); препаративный жидкостный хроматограф NP7000 (Jiangsu Hanbon Science & Technology, Co.); очиститель чистой воды Milli-Q (компания Millipore, США); аналитические электронные весы AL204 (компания Mettler Toledo, США); обращенно-фазовый силикагель YMC ODS-A-HG, 50 мкм (компания YMC, Япония), силикагель для колоночной хроматографии (100-200 меш и 200-300 меш, Qingdao Ocean Chemical Industry, LC), тонкослойная тоска с силикагелем хроматографии GF (Qingdao Ocean Chemical Industry, LC); YMC-Pack R&D ODS-A (250 × 20 мм, S-10 мкм, компания YMC, Япония), общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению (Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: B1509001); хроматографически чистые ацетонитрил и метанол (Shanghai Adamas Reagent Company); аналитические реагенты (Beijing Chemical Factory).
2. Извлечение и выделение
(1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола и, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;
(2) берут 200 г экстракта элюированной 50% этанолом части, полученного на этапе (1), добавляют к 200 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG S-50 мкм, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG, S-50 мкм с соотношением высоты слоя 1:4, при пониженном давлении последовательно элюируют с помощью 6 л раствора метанол-вода с соотношением 20:80, с помощью 7 л раствора с соотношением 40:60, с помощью 7 л раствора с соотношением 60:40, с помощью 5 л раствора с соотношением 80:20 и с помощью 3 л 100% метанола с получением в результате Fr.A – Fr.E;
(3) берут 50,0 г образца Fr.A, полученного на этапе (2), добавляют к 50 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;
(4) берут 3,2 г образца Fr.A-2, полученного на этапе (3), и смешивают его с 6,4 г силикагеля, 200–300 меш, помещают в колонку с силикагелем, соотношение высоты слоя 1:50, разделяют в изократическом режиме с объемным соотношением дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении с получением Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;
(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин, 12-13 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении, и выполняют следующие разделения:
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина;
фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;
(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракцию, соответствующую хроматографическим пикам со значением времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду, 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;
(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, удаляют растворитель при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждали в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-О-(п-гидроксициннамоил)адоксозидовой кислоты.
3. Идентификация структуры
3.1 Идентификация структуры новых соединений
max
25
30
12
-1
-1
-1
-
Соединение 1: светло-желтый порошок, УФ λ (MeOH): 228, 312 нм. Инфракрасная спектроскопия показала, что присутствуют гидроксильная группа (3330 см), α,β-ненасыщенная карбонильная группа (1680, 1630 см) и бензольное кольцо (1603, 1514 см). HR-ESI-MS масса/заряд: 521,1699[M-H] (рассчитанное значение: 521,1659) в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. Ненасыщенность составляет 11.
1
6
На спектре H-ЯМР (DMSO-d, 600 МГц) (таблица 1) показано, что соединение содержит пару двойных транс-связей: δ 7,56 (1H, d, J = 16,2 Гц), 6,39 (1H, d, J = 16,2 Гц) и соответствующие ароматической системе AB атомы водорода: δ 7,55 (2H, d, J = 8,4 Гц), 6,79 (2H, d, J = 8,4 Гц), химический сдвиг водорода на спектре составляет 4,52 (1H, d, J = 7,8 Гц), предположительно водорода является концевым атомом сахара.
13
6
C
C
На спектре C-ЯМР (DMSO-d, 150 МГц) (таблица 1) показано, что соединение содержит два сопряженных карбонильных углерода (δ: 168,4, 167,2) и два различных фрагмента, δ: 116,2 (2C), 130,8 (2C), 160,2 представляет собой п-гидроксифенильный фрагмент, δC: 99,3, 77,6, 77,1, 73,6, 70,4, 61,6 представляет собой фрагмент на основе глюкозы.
H
C
H
2
H
C
Согласно HMBC двойные связи с δ 7,56 и 6,39 связаны с фенильным углеродом с δ 125,5, двойные связи с δ 6,39 и -CH-δ 4,12 связаны с карбонилом с δ 167,2. Указанный выше фрагмент не имеет корреляций с другими химическими сдвигами C и H. Предполагается, что этот фрагмент представляет собой независимый фрагмент п-гидроксициннамоила, а оставшийся фрагмент, не включающий сахар, считается ядром. После расчета ненасыщенность ядра равна 4 (содержит карбонильную группу и двойную связь), и предполагается, что ядро имеет структуру двойного кольца. Посредством присваивания и объединения HSQC и HMBC предполагается, что это соединение является иридоидным соединением, а также путем поиска в литературе определили, что ядром данного соединения является аксоксозидовая кислота.
Можно увидеть, что оставшийся фрагмент представляет собой п-гидроксициннаминовую кислоту, которая образует сложный эфир относительно положения 10 ядра на основе адоксозидовой кислоты. Посредством поиска в базе данных SciFinder и Reaxys было определено, что это соединение является новым соединением (конфигурация данного соединения не была подтверждена в этом эксперименте и будет подтверждена в последующих исследованиях), а именно представляет собой 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту.
Таблица 1. Данные ЯМР для соединения 1
a
Возможно, химические сдвиги обусловлены обменом
3.2 Идентификация структуры известных соединений
-
1
13
21
20
10
6
H
2
6
H
2
Соединение 2: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 431[M-H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (DMSO-d, 600 МГц) δ: 12,88 (1H, s, OH), 7,89 (1H, dd, J = 1,2, 8,4 Гц, H-5), 7,86 (1H, t, J = 7,8 Гц, H-6), 7,72 (1H, dd, J = 1,2, 8,4 Гц, H-7), 7,66 (1H, brs, H-4), 7,28 (1H, brs, H-2), 5,17 (1H, d, J = 7,8 Гц, аномерный H), 4,62 (2H, s, CHOH), 3,72~3,23 (Glc-H). C-ЯМР (DMSO-d, 150 МГц) δ: 188,8 (C-9), 182,6 (C-10), 162,2 (C-1), 158,7 (C-8), 152,7 (C-3), 136,4 (C-6), 135,3 (C-10a), 132,7 (C-4a), 122,9 (C-7), 121,2 (C-2), 121,0 (C-5), 116,4 (C-8a, C-9a), 100,9 (C-1'), 77,7 (C-5'), 77,0 (C-3'), 73,7 (C-2'), 70,0 (C-4'), 62,5 (CHOH), 61,0 (C-6'). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид.
-
1
13
21
20
11
6
H
6
C
Соединение 3: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 447[M-H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (DMSO-d, 600 МГц) δ: 12,66 (1H, s, 5-OH), 7,31 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-2'), 7,26 (1H, d, J = 2,4, 8,4 Гц, H-6'), 6,87 (1H, d, J = 8,4 Гц, H-5'), 6,39 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-8), 6,21 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-6), 5,26 (1H, d, J = 1,8 Гц, аномерный H), 0,82 (3H, d, J = 6,0 Гц, CH 3). C-ЯМР (DMSO-d, 150 МГц) δ: 178,2 (C-4), 164,6 (C-7), 161,7 (C-5), 157,7 (C-2), 156,9 (C-9), 148,9 (C-4'), 145,6 (C-3'), 134,7 (C-3), 121,5 (C-6'), 121,2 (C-1'), 116,1 (C-5'), 115,9 (C-2'), 104,5 (C-10), 102,3 (C-1''), 99,1 (C-6), 94,1 (C-8), 71,6 (C-4''), 71,0 (C-3''), 70,8 (C-2''), 70,5 (C-5''), 17,9 (C-6''). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями и соединение идентифицировано как кверцетин.
-
1
13
26
32
11
6
H
3
6
C
3
3
Соединение 4: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 519[M-H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. H-ЯМР(DMSO-d, 600 МГц) δ: 6,99 (1H, d, J = 8,4 Гц, H-5), 6,78 (1H, d, J = 1,8 Гц, H-2'), 6,67 (2H, m, H-5, H-6'), 6,63 (1H, s, H-2), 6,50 (1H, dd, J = 1,8, 8,4 Гц, H-6), 4,84 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1''), 4,09 (1H, t, J = 7,8 Гц, H-9a), 3,86 (1H, t, J = 8,4 Гц, H-9b), 3,72 (6H, d, J = 2,4 Гц, 2×OCH). C-ЯМР (DMSO-d, 150 МГц) δ: 178,9 (C-9'), 149,1 (C-3'), 147,9 (C-3), 145,7 (C-4'), 145,4 (C-4), 132,2 (C-1'), 130,0 (C-1), 121,8 (C-6'), 121,2 (C-6), 115,9 (C-5'), 115,6 (C-5), 114,3 (C-2'), 113,1 (C-2), 100,6 (C-1''), 77,4 (C-5''), 77,3 (C-3''), 73,7 (C-2''), 71,1 (C-9), 70,1 (C-4''), 61,1 (C-6''), 56,1 (OCH), 56,0 (OCH), 46,0 (C-8'), 41,3 (C-8), 37,3 (C-7), 33,9 (C-7'). Приведенные выше данные об углеродном спектре в основном согласуются с литературными сведениями, и это соединение идентифицировано как матаирезинол-4'-O-глюкозид.
-
1
13
26
30
13
3
H
3
C
Соединение 5: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 549[M-H], в сочетании с данными ЯМР молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (CDOD, 600 МГц) δ: 7,70 (1H, d, J = 9,0 Гц, H-5), 7,40 (2H, d, J = 8.4 Гц, H-2', 6'), 7,09 (2H, d, J = 9,0 Гц, H-3', 5'), 6,48 (1H, dd, J = 2,4, 9,0 Гц, H-6), 6,34 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-8), 5,46 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-1'''), 5,39 (1H, dd, J = 2,4, 13,2 Гц, H-2), 4,98 (1H, d, J = 7,2 Гц, H-1''), 4,04 (1H, d, J = 9,6 Гц, H-5'''a), 3,89 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-2'''), 3,88 (1H, dd, J = 1,2, 12,0 Гц, H-6''a), 3,79 (1H, d, J = 9,6 Гц, H-5'''b), 2,99 (1H, m, H-3a), 2,74 (1H, dd, J = 2,4, 16,8 Гц, H-3b). C-ЯМР (CDOD, 150 МГц) δ: 193,2 (C-4), 166,7 (C-7), 165,3 (C-8a), 159,0 (C-4'), 134,3 (C-1'), 129,9 (C-5), 128,8 (C-2', 6'), 117,6 (C-3', 5'), 114,9 (C-4a), 111,8 (C-6), 110,7 (C-1'''), 103,8 (C-8), 100,7 (C-1''), 80,7 (C-2), 80,6 (C-3'''), 78,8 (C-5''), 78,6 (C-2'''), 78,0 (C-2''), 77,9 (C-3''), 75,4 (C-4'''), 71,4 (C-4''), 66,0 (C-5'''), 62,4 (C-6''), 44,9 (C-3). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как ликвиритин-апиозид.
-
1
13
17
24
10
3
H
3
3
C
3
Соединение 6: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 387[M-H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (CDOD, 600 МГц) δ: 7,60 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-3), 5,55 (1H, d, J = 1,8 Гц, H-1), 5,48 (1H, m, H-8), 5,31 (1H, s, H-7), 5,29 (1H, m, H-10a), 5,25 (1H, m, H-10b), 4,67 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1'), 3,50 (1H, s, 7-OCH), 3,18 (1H, m, H-5), 2,63 (1H, m, H-9), 1,85 (1H, dd, J = 6,0, 13,2 Гц, H-6a), 1,69 (1H, td, J = 3,0, 13,8 Гц, H-6b). C-ЯМР(CDOD, 150 МГц) δ: 167,4 (C-11), 154,4 (C-4), 133,3 (C-8), 121,0 (C-10), 105,3 (C-4), 103,3 (C-7), 100,3 (C-1'), 98,5 (C-1), 78,3 (C-5'), 78,0 (C-3'), 74,6 (C-2'), 71,4 (C-4'), 62,6 (C-6'), 57,0 (7-OCH), 43,5 (C-9), 30,2 (C-6), 22,8 (C-5). Вышеуказанные характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как эпивогелозид.
-
1
13
17
24
10
3
H
3
3
C
3
Соединение 7: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 387[M-H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (CDOD, 600 МГц) δ: 7,58 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-3), 5,55 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-1), 5,47 (1H, m, H-8), 5,31 (1H, s, H-7), 5,29 (1H, m, H-10a), 5,26 (1H, m, H-10b), 4,66 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1'), 3,54 (1H, s, 7-OCH), 3,16 (1H, m, H-5), 2,67 (1H, m, H-9), 1,97 (1H, m, H-6a), 1,44(1H, m, H-6b). C-ЯМР(CDOD, 150 МГц) δ: 167,6 (C-11), 154,1 (C-4), 133,0 (C-8), 121,1 (C-10), 105,4 (C-4), 105,1 (C-7), 99,7 (C-1'), 97,9 (C-1), 78,4 (C-5'), 77,8 (C-3'), 74,7 (C-2'), 71,5 (C-4'), 62,6 (C-6'), 57,1 (7-OCH), 43,7 (C-9), 31,7 (C-6), 25,3 (C-5). Вышеуказанные характеристики водородного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и сигналам на углеродном спектре присвоены значения, и соединение идентифицировано как вогелозид.
+
1
13
11
12
4
6
H
6
C
Соединение 8: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 209[M + H], в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой CHO. H-ЯМР (DMSO-d, 600 МГц) δ: 7,46 (1H, d, J = 15,9 Гц, H-7), 7,04 (1H, brs, H-2), 6,99 (1H, d, J = 8,1 Гц, H-6), 6,75 (1H, d, J = 8,1 Гц, H-5), 6,24 (1H, d, J = 15,9 Гц, H-8), 4,15 (2H, q, J = 7,1 Гц, H-10), 1,24 (3H, t, J = 7,1 Гц, H-11). C-ЯМР (DMSO-d, 150 МГц) δ: 166,5 (C-9), 148,6 (C-4), 145,0 (C-7), 145,6 (C-3), 121,3 (C-6), 125,3 (C-1), 115,7 (C-5), 114,7 (C-2), 113,9 (C-8), 59,6 (C-10), 14,3 (C-11). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как этилкофеат.
Пример 2
Взвешивают в пропорциях: 30 кг форсайтии свисающей, 20 кг жимолости японской, 30 кг вайды красильной, 6 кг ревеня лекарственного, 10 кг пачули, 20 кг высушенных корневищ щитовника, 6 кг родиолы розовой, 0,5 кг ментола, 10 кг эфедры китайской, 6 кг горького миндаля, 30 кг гуттуинии сердцелистной, 6 кг корня солодки, 30 кг гипса, и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:
(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;
(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;
(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;
(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;
(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,15, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.
1. Инструменты и материалы такие же, как в Примере 1.
2. Извлечение и выделение
Берут 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению, адсорбируют на макропористую смолу d-101; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом, 50% этанолом, после концентрирования получают экстракты каждой части; другие стадии выполняют как в примере 1.
3. Результаты оценивали так же, как в примере 1, восемь выделенных соединений представляют собой точно такие же, как полученные в примере 1.
Пример 3
Получают состав лекарственного средства из: 27,8 кг форсайтии свисающей, 29,4 кг жимолости японской, 28,5 кг вайды красильной, 5,5 кг ревеня лекарственного, 9,5 кг пачули, 29 кг высушенных корневищ щитовника, 8,7 кг родиолы розовой, 0,85 кг ментола, 8,8 кг эфедры китайской, 8 кг горького миндаля, 28,4 кг гуттуинии сердцелистной, 9,5 кг корня солодки, 27,7 кг гипса и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:
(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;
(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;
(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;
(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,13, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;
(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,18, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.
1. Инструменты и материалы такие же, как в Примере 1.
2. Извлечение и выделение
Берут 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению, адсорбируют на макропористую смолу HPD-100; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом, 50% этанолом и, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части; другие стадии выполняют как в примере 1.
3. Оценка результатов
Оценка результатов такая же, как в примере 1, восемь выделенных соединений представляют собой точно такие же, как полученные в примере 1.
Выше приведены только предпочтительные варианты осуществления согласно настоящему решению, и они не предназначены для ограничения настоящего решения. Любая модификация, эквивалентная замена или улучшение, осуществленные в соответствии с идеями и принципами настоящего решения, включены в объем защиты настоящего решения.