СПОСОБ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПРЕЭКЛАМПСИИ
METHOD OF MORPHOLOGICAL DIAGNOSTICS OF PRE-ECLAMPSIA

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, связано с разработкой способа диагностики преэклампсии путем морфологического исследования плаценты, в том числе у пациенток с отсутствующими клинико-лабораторными данными. Преэклампсия относится к важнейшим и нерешенным проблемам акушерства и гинекологии, являясь одной из основных причин материнской и перинатальной заболеваемости и смертности. Развитие преэклампсии отмечается примерно у 5-10% первородящих беременных [Sibai В., Dekker G., Kupferminc M. Pre-eclampsia // Lancet. 2005. Vol.365. P.785-799]. Несмотря на многочисленные исследования данного заболевания, до настоящего времени не установлены точные причины возникновения и звенья патогенеза, а соответственно отсутствуют достоверные методы диагностики и патогенетически обоснованные методы лечения.
Известен способ морфологической диагностики преэклампсии путем иммуногистохимического выявления повышенного уровня активности ингибитора активатора плазминогена (plasminogen activator inhibitor -1, PAI-1) в структурах плаценты [Estelles A., Gilabert J., Keeton M., Eguchi Y., Aznar J., Grancha S., Espna F., Loskutoff D.J., Schleef R.R. Altered expression of plasminogen activator inhibitor type 1 in placentas from pregnant women with preeclampsia and/or intrauterine fetal growth retardation // Blood. 1994. Vol.84. P.143-150]. Другим способом морфологической диагностики преэклампсии является иммуногистохимическое выявление и определение соотношений фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и его трех рецепторов (VEGF-R1, VEGF-R2, VEGF-R3) [Tripathi R., Rath G., Jain A., Salhan S. Soluble and membranous vascular endothelial growth factor receptor-1 in pregnancies complicated by preeclampsia // Ann. Anat. 2008. Vol. 190. P.477-489; Tripathi R., Rath G., Ralhan R., Saxena S., Salhan S. Soluble and membranous vascular endothelial growth factor receptor-2 in pregnancies complicated by preeclampsia // Yonsei Med. J. 2009. Vol.50. P.656-666].
Однако эти способы достаточно продолжительные по времени и требуют использования большого количества дорогостоящих иммуногистохимических реактивов. Выявление продукта реакции зависит от четкого соблюдения методики, а оценка уровня реакции носит субъективный характер.
Целью изобретения является повышение объективности, а также упрощение и ускорение диагностики.
Цель достигается тем, что парафиновые гистологические препараты окрашивают гематоксилином и эозином, проводят морфометрию терминальных ворсин, определяют общую площадь их капилляров и площадь синцитиотрофобласта, рассчитывают отношение полученных значений площадей капилляров и синцитиотрофобласта терминальных ворсин и при значениях менее 2,5 диагностируют преэклампсию, а при значениях более 3 - ее отсутствие.
Способ осуществляют следующим образом. Полученные парафиновые гистологические препараты из парацентральной части плаценты подвергают депарафинизации общепринятым методом путем последовательной обработки срезов, включающей 3 смены ксилола (по 10 минут), 3 смены 96° этилового спирта (по 10 минут), 80° этиловый спирт (5 минут), 50° этиловый спирт (5 минут), 2 смены дистиллированной воды (по 3 минуты). После депарафинизации препараты подвергают окрашиванию гематоксилином и эозином.
1. Споласкивают срезы дистиллированной водой.
2. Окрашивают раствором гематоксилина в течение 10 минут при комнатной температуре.
3. Споласкивают срезы дистиллированной водой.
4. Помещают срезы в аммиачную воду на 30 секунд.
5. Споласкивают срезы в проточной водопроводной воде.
6. Окрашивают раствором эозина в течение 2 минут при комнатной температуре.
7. Проводят обезвоживание срезов: 50° этиловый спирт (3 минуты), 80° этиловый спирт (3 минуты), 2 смены 96° этилового спирта (3 минуты), 3 смены ксилола (по 3 минут).
8. На препарат капают синтетическую смолу и накрывают покровным стеклом.
На полученных окрашенных препаратах при помощи микроскопа проводят морфометрию 10-20 поперечно срезанных терминальных ворсин и определяют общую площадь их капилляров и площадь синцитиотрофобласта. Рассчитывают отношение полученного значения общей площади капилляров и площади синцитиотрофобласта. Если полученное значение менее 2,5, то диагностируют преэклампсию. Если значение более 3, то диагностируют нормальное развитие плаценты.
2
2
Пример 1. Пациентка Т., 35 лет, была родоразрешена на 39 неделе гестации. Из присланной плаценты вырезают кусочек размером 2×2×0,5 см, из которого по стандартной методике готовят парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после общепринятой методики депарафинизации окрашивают гематоксилином и эозином. На готовых препаратах проводят морфометрию терминальных ворсин и определяют общую площадь капилляров равную 843 мкм и синцитиотрофобласта 357 мкм. Отношение площади капилляров к площади синцитиотрофобласта составляет 2,36, что свидетельствует о преэклампсии. При последующем получении и анализе истории родов установлено наличие признаков повышения артериального давления и повышенного содержания белка в моче, на основании чего сделано клиническое заключение о развитии у беременной преэклампсии.
2
2
Пример 2. Пациентка К., 34 лет, в связи с появлением эпизодов повышенного артериального давления и подозрением на развитие преэклампсии поступила для наблюдения и последующего родоразрешения. После операции кесарева сечения из присланной плаценты вырезают кусочек размером 2×2×05 см, из которого по стандартной методике готовят парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после общепринятой методики депарафинизации окрашивают гематоксилином и эозином. На готовых препаратах проводят морфометрию терминальных ворсин и определяют общую площадь капилляров равную 1439 мкм и синцитиотрофобласта 444 мкм. Отношение площади капилляров к площади синцитиотрофобласта составляет 3,24, что свидетельствует об отсутствии преэклампсии. При анализе результатов клинического течения и лабораторных показателей мочи в истории родов сделано заключение о развитии у беременной артериальной гипертензии, но отсутствии преэклампсии.
Предлагаемый способ диагностики преэклампсии, отличаясь простотой и кратковременностью проведения (1-1,5 ч), а также высокой информативностью, позволяет улучшить результаты постановки диагноза, а, следовательно, и лечения данного контингента больных.
Диагностические возможности предлагаемого способа были проверены при сопоставлении результатов морфологического исследования материала плаценты и данных клинико-лабораторных обследований 33 беременных, находившихся на лечении в Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова. У 19 из них была диагностирована преэклампсия, у 14 - нормальное течение беременности и развитие плаценты.