ИНГИБИРОВАНИЕ AXL СИГНАЛИЗАЦИИ В АНТИМЕТАСТАТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ

1. Растворимый вариант полипептида AXL, где полипептид не имеет трансмембранного домена AXL и включает в себя, по меньшей мере, одну модификацию аминокислоты по сравнению с последовательностью AXL дикого типа, и в котором заявленное изменение повышает сродство связывания полипептида AXL с GAS6.
2. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL содержит, по меньшей мере, одну модификацию аминокислоты в участке, выбранном из группы, состоящей из 1) между 15-50, 2) между 60-120 и 3) между 125-135 последовательности AXL дикого типа (SEQ ID NO: 1).
3. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL содержит, по меньшей мере, одну модификацию аминокислоты в положении 19, 23, 26, 27, 32, 33, 38, 44, 61, 65, 72, 74, 78, 79, 86, 87, 88, 90, 92, 97, 98, 105, 109, 112, 113, 116, 118 или 127 последовательности AXL дикого типа (SEQ ID NO: 1), или их сочетание.
4. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL содержит, по меньшей мере, одну модификацию аминокислоты, которая выбрана из группы, состоящей из 1) А19Т, 2) Т23М, 3) E26G, 4) E27G или E27K, 5) G32S, 6) N33S, 7) T38I, 8) T44A, 9) H61Y, 10) D65N, 11) A72V, 12) S74N, 13) Q78E, 14) V79M, 15) Q86R, 16) D87G, 17) D88N, 18) I90M или I90V, 19) V92A, V92G или V92D, 20) I97R, 21) T98A или Т98Р, 22) T105M, 23) Q109R, 24) V112A, 25) F113L, 26) H116R, 27) T118A, 28) G127R или G127E и 29) G129E, и их комбинации.
5. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что вариант AXL включает в себя замену аминокислоты по сравнению с последовательностью AXL дикого типа (SEQ ID NO: 1) по следующим позициям: (а) глицин 32; (b) аспарагиновая кислота 87; (с) валин 92; и (d) глицин 127.
6. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что остаток глицина 32 заменен остатком серина, остаток аспарагиновой кислоты 87 заменен остатком глицина, остаток валина 92 заменен остатком аланина или остаток глицина 127 заменен остатком аргинина, или их комбинации.
7. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что вариант AXL включает в себя замену аминокислоты по сравнению с последовательностью AXL дикого типа (SEQ ID NO: 1) по следующим позициям: (а) глутаминовая кислота 26; (b) валин 79; (с) валин 92; и (d) глицин 127.
8. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что остаток глутаминовой кислоты 26 заменен остатком глицина, остаток валина 79 заменен остатком метионина, остаток валина 92 заменен остатком аланина или остаток глицина 127 заменен остатком аргинина, или их комбинации.
9. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что полипептид содержит, по меньшей мере, аминокислотный участок, которая выбирается из группы, состоящей из аминокислотных участков 19-437, 130-437, 19-132, 21-121, 26-132, 26-121 и 1-437 полипептида AXL дикого типа (SEQ ID NO: 1), и в которой одна или более аминокислотных модификаций встречается в указанной аминокислотной области.
10. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что полипептид гибридного белка содержит Fc домен.
-8
-9
11. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL имеет сродство, по меньшей мере, 1×10 М или 1×10 M к GAS6.
12. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL демонстрирует сродство к GAS6, что, по меньшей мере, в 10 раз сильнее, или, по меньшей мере, около 20 раз сильнее, чем сродство полипептида AXL дикого типа.
13. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL ингибирует связывание между диким типом полипептида AXL и GAS6 белком в условиях in vivo или in vitro.
14. Растворимый вариант полипептида AXL по п.1, отличающийся тем, что растворимый вариант полипептида AXL ингибирует связывание между белком GAS6 и полипептидом по п.6 или 8 в условиях in vivo или in vitro.
15. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество одного или нескольких вариантов растворимого полипептида AXL по п.1, или его фармацевтически приемлемой соли.
16. Фармацевтическая композиция по п.15, отличающаяся тем, что дополнительно включает, по меньшей мере, один цитотоксический агент или фармацевтически приемлемый наполнитель, или их комбинацию.
17. Выделенное антитело или его фрагмент, которое специфически связывается с белком GAS6.
18. Выделенное антитело или его фрагмент по п.17, отличающееся тем, что антитело является моноклональным антителом, гуманизированным антителом или химерным антителом, или одноцепочечным антителом (ScFv), или их комбинацией.
19. Выделенное антитело или его фрагмент по п.17, отличающееся тем, что антитело связывается с эпитопом, состоящим из одной или нескольких аминокислотных участков GAS6, выбранных из группы, состоящей из R299-T317, V364-P372, R389-N396, D398-A406, Е413-Н429 и W450-M468.
20. Выделенное антитело или его фрагмент по п.17, отличающееся тем, что антитело связывается с эпитопом, состоящим из аминокислотного участка, выбранного из группы, состоящей из RMFSGTPVIRLRFKRLQPT (SEQ ID NO: 3), VGRVTSSGP (SEQ ID NO: 4), RNLVIKVN (SEQ ID NO: 5), DAVMKIAVA (SEQ ID NO: 6), ERGLYHLNLTVGGIPFH (SEQ ID NO: 7) и WLNGEDTTIQETVKVNTRM (SEQ ID NO: 8).
21. Выделенное антитело или его фрагмент по п.17, отличающееся тем, что антитело ингибирует связывание между полипептидом AXL и GAS6.
22. Выделенное антитело, включающее CDR1, CDR2 или CDR3, или их комбинацию антитела по п.20.
23. Выделенная клетка, которая производит антитело или его фрагмент по п.17 или 22.
24. Гибридома, которая производит антитело или его фрагмент по п.17 или 22.
25. Фармацевтическая композиция, включающая терапевтически эффективное количество выделенного антитела или его фрагментов по п.17 или 22, или его фармацевтически приемлемой соли.
26. Фармацевтическая композиция по п.25, дополнительно включающая, по меньшей мере, один цитотоксический агент или фармацевтически приемлемый наполнитель, или их комбинацию.
27. Способ лечения, снижения, или предотвращение метастазирования или инвазии опухоли у пациента, относящегося к млекопитающим, включающий: введение указанному пациенту эффективной дозы растворимого варианта полипептида AXL по п.1 или выделенного антитела, или его фрагмента по п.17 или 22.
28. Способ по п.27, где опухоль является опухолью, выбранной из группы, состоящей из опухоли яичника, опухоли молочной железы, опухоли легких, опухоли печени, опухоли толстой кишки, опухоли желчного пузыря, опухоли поджелудочной железы, опухоли предстательной железы, а также глиобластомы.
29. Способ лечения, снижения или предотвращение метастазирования или инвазии опухоли у пациента, относящегося к млекопитающим, включающий: введение одного или более ингибиторов, выбранных из группы, состоящей из (а) ингибитора активности AXL; (b) ингибитора активности GAS6; и (с) ингибитора взаимодействия AXL-GAS6.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что ингибитор представляет собой полипептид, полинуклеотид, небольшую молекулу, антитело, фрагмент антитела, или конъюгат антитело-лекарство.
31. Способ определения способности опухоли к инвазии или метастазированию у субъекта, указанный способ включает:
- определение уровня активности AXL в биологическом образце от субъекта с опухолью; и
- сравнивание уровня активности AXL в биологическом образце с предопределенным уровнем,
где увеличение по сравнению с предопределенным уровнем свидетельствует о предрасположенности опухоли к инвазии или метастазированию.
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что уровень AXL активности измеряется по уровню экспрессии мРНК AXL или уровню экспрессии белка AXL.
33. Способ определения способности опухоли к инвазии или метастазированию у субъекта, указанный способ включает:
- определение уровня GAS6 активности в биологическом образце от субъекта с опухолью; и
- сравнение уровня GAS6 активности в биологическом образце с предопределенным уровнем,
где увеличение по сравнению с предопределенным уровнем свидетельствует о предрасположенности опухоли к инвазии или метастазированию.
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что уровень активности GAS6 измеряют по уровню экспрессии мРНК GAS6 или уровню экспрессии белка GAS6.
35. Способ по п.31 или 33, отличающийся тем, что опухоль выбрана из опухоли, входящей в группу, состоящую из опухоли яичников, опухоли молочной железы, опухоли легких, опухоли печени, опухоли толстой кишки, опухоли желчного пузыря, опухоли поджелудочной железы, опухоли предстательной железы, а также глиобластомы.
36. Способ по п.31 или 33, отличающийся тем, что биологический образец выбран из группы, состоящей из образца ткани, опухолевого образца ткани, образца крови, образца сыворотки, образца спинномозговой жидкости (CSF), образца асцитной жидкости, а также образца клеточной культуры.