СПОСОБЫ СКРИНИНГА АГОНИСТОВ УБИКВИТИНЛИГАЗЫ

1. Способ идентификации агониста убиквитинлигазы, включающий:
(а) контактирование убиквитинлигазы с агонистом-кандидатом и новым субстратом; и
(b) определение того, является ли агонист-кандидат эффективным для связывания убиквитинлигазы с новым субстратом, при этом связывание субстрата убиквитина с новым субстратом идентифицирует кандидата-агониста как агониста убиквитинлигазы.
2. Способ по п. 1, в котором связывание убиквитинлигазы с новым субстратом предоставляет комплекс, содержащий убиквитинлигазу, агонист и новый субстрат.
3. Способ по п. 1, в котором определение того, является ли агонист-кандидат эффективным для связывания убиквитинлигазы с новым субстратом, включает в себя наблюдение сигнала, генерируемого в результате связывания.
4. Способ по п. 1, в котором убиквитинлигаза дополнительно содержит первый репортерный агент, а субстрат дополнительно содержит второй репортерный агент, при этом после связывания убиквитинлигазы с новым субстратом первый репортерный агент действует со вторым репортерным агентом, с тем чтобы генерировать сигнал.
5. Способ по п. 4, в котором убиквитинлигаза, содержащая первый репортерный агент, представляет собой шарик-донор, сконфигурированный для генерации активных форм кислорода в возбужденном состоянии, а новый субстрат, содержащий второй репортерный агент, представляет собой шарик-акцептор, сконфигурированный для генерации света в присутствии активных форм кислорода при связывании убиквитинлигазы с новым субстратом.
6. Способ по п. 5, в котором шарик-донор содержит сенсибилизатор, сконфигурированный для генерации активных форм кислорода, когда сенсибилизатор находится в возбужденном состоянии.
7. Способ по п. 6, в котором сенсибилизатор представляет собой фотосенсибилизатор, сконфигурированный для генерации активных форм кислорода, когда сенсибилизатор освещается стимулирующим электромагнитным излучением.
8. Способ по п. 6, в котором фотосенсибилизатор представляет собой фталоцианин.
9. Способ по п. 5, в котором шарик-акцептор содержит люминесцентное соединение, сконфигурированное для генерации люминесцентного света, когда люминесцентное соединение находится вблизи активных форм кислорода.
10. Способ по п. 9, в котором люминесцентное соединение выбирают группы, состоящей из тиоксена, антрацена, рубренеина и комбинаций указанного.
11. Способ по п. 5, в котором активные формы кислорода представляют собой атомарный кислород.
12. Способ по п. 1, в котором определение того, является ли агонист-кандидат эффективным для связывания убиквитинлигазы с новым субстратом, включает в себя наблюдение усиления сигнала в результате связывания.
13. Способ по п. 1, в котором убиквитинлигаза дополнительно содержит первый репортерный агент, а новый субстрат дополнительно содержит второй репортерный агент, при этом после связывания убиквитинлигазы с новым субстратом первый репортерный агент действует со вторым репортерным агентом, что приводит к усилению сигнала.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором убиквитинлигаза является членом суперсемейства куллин-RING мультисубъединичных убиквитинлигаз E3, членом семейства лигаз E3 RING-типа с субстрат-связывающим доменом или членом семейства лигаз E3 HECT-типа с субстрат-связывающим доменом.
15. Способ по любому из пп. 1-13, в котором убиквитинлигаза представляет собой KEAP1.
16. Способ по любому из пп. 1-13, в котором новый субстрат представляет собой KRAS или мутант KRAS.