СПОСОБ КРУПНОМАСШТАБНОГО ПОЛУЧЕНИЯ, ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА

1. Способ крупномасштабного получения, выделения и очистки рчГ-КСФ, включающий в себя разрушение бактериальных клеток штамма-продуцента при выделении тел включения, предварительное удаление примесных белков, растворение тел включения, восстановление, ренатурацию, анионообменную и катионообменную хроматографические очистки рчГ-КСФ, отличающийся применением концентрирования культуральной жидкости, двукратной обработкой высоким давлением при разрушении клеток штамма-продуцента, получением обобщенного пула отмытых тел включения, солюбилизацией тел включения, а также применимыми к крупномасштабному получению подходами к ренатурации путем разбавления раствора белка и очистки рчГ-КСФ посредством хроматографии.
2. Способ по п.1, в котором в качестве штамма-продуцента используется штамм E.coli SGK25/pA3GF.
3. Способ по п.1, в котором конечный продукт содержит более 98% основного вещества по результатам гель-электрофореза в ПААГе.
4. Способ по п.1, в котором конечный продукт имеет гомогенность по ВЭЖХ более 97%.
5. Способ по п.1, в котором солюбилизации подвергаются тела включения массой от 20 до 340 г.
6. Способ по п.4, в котором стадия ренатурации проводится путем разбавления раствора белка до 400 л с длительностью 60-90 ч.
7. Способ по п.1, в котором анионообменная хроматографическая очистка осуществляется в колонках диаметром 17-30 см, с высотой слоя сорбента 7-20 см, с линейной скоростью нанесения 30-240 см/ч и линейной скоростью элюции 15-30 см/ч.
8. Способ по п.1, в котором очистка рчГ-КСФ включает анионообменную и катионообменную хроматографию.
9. Способ по п.1, в котором катионообменная хроматографическая очистка рчГ-КСФ включает концентрирование раствора белка в колонках диаметром 170 мм и проведение катионообменного хроматографического разделения в колонках диаметром 7-15 см, с высотой слоя сорбента от 30 до 50 см, с линейной скоростью нанесения 25-50 см/ч и линейной скоростью элюции 17-30 см/ч.
10. Способ по п.1, отличающийся получением целевого белка на стадии концентрирования раствора рчГ-КСФ путем элюирования в изократическом режиме в присутствии 0,9 М-0,13 M хлористого натрия.
3
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве катионообменного сорбента при хроматографической очистке белка в режиме рецикла фракций используют Фрактогель SO.
12. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве катионообменного сорбента при хроматографической очистке белка в режиме рецикла фракций используют СМ сефарозу.
13. Способ по п.1, отличающийся стабилизацией белка с помощью диафильтрации.