БУФЕРЫ ДЛЯ СТАБИЛИЗАЦИИ ЛЕНТИВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ

1. Водная композиция, содержащая лентивирусные векторы, буфер 1,4-пиперазиндиэтансульфоновой кислоты (PIPES) и соль.
2. Водная композиция по п.1, где указанный буфер PIPES присутствует в концентрации от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.
3. Водная композиция по п.2, где указанный буфер PIPES присутствует в концентрации приблизительно 20 мМ.
4. Водная композиция по любому из пп. 1-3, где pH указанной водной композиции составляет от приблизительно 6,0 до приблизительно 7,0.
5. Водная композиция по п.4, где pH указанной водной композиции составляет приблизительно 6,5.
6. Водная композиция по любому из пп. 1-5, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида магния и хлорида кальция.
7. Водная композиция по п.6, где указанная соль является хлоридом натрия.
8. Водная композиция по любому из пп. 1-7, где концентрация указанной соли в указанной водной композиции составляет от приблизительно 25 мМ до приблизительно 150 мМ.
9. Водная композиция по п.8, где концентрация указанной соли в указанной водной композиции составляет приблизительно 50 мМ.
10. Водная композиция по п.8, где концентрация указанной соли в указанной водной композиции составляет приблизительно 75 мМ.
11. Водная композиция по любому из пп. 1-10, где указанная водная композиция содержит 20 мМ PIPES и 75 мМ хлорида натрия, и где указанная водная композиция имеет pH приблизительно 6,5.
12. Водная композиция по любому из пп. 1-11, где указанная водная композиция дополнительно содержит углевод.
13. Водная композиция по п.12, где указанный углевод является невосстанавливающим углеводом.
14. Водная композиция по п.13, где указанный невосстанавливающий углевод выбран из группы, состоящей из сахарозы и трегалозы.
15. Водная композиция по любому из пп. 12-14, где указанный углевод присутствует в концентрации от приблизительно 1% до приблизительно 10% по массе на объем указанной водной композиции.
16. Водная композиция по п.15, где указанный углевод присутствует в концентрации от приблизительно 2% до приблизительно 5% по массе на объем указанной водной композиции.
17. Водная композиция по п.16, где указанный углевод присутствует в концентрации приблизительно 2,5% по массе на объем указанной водной композиции.
18. Водная композиция по любому из пп. 12-17, где указанная водная композиция содержит 20 мМ PIPES, 75 мМ хлорида натрия и 2,5% сахарозы по массе на объем указанной водной композиции, и где указанная водная композиция имеет pH приблизительно 6,5.
19. Водная композиция по любому из пп. 1-18, где осмоляльность указанной водной композиции составляет от приблизительно 270 мосмоль/кг до приблизительно 330 мосмоль/кг.
20. Водная композиция по п.19, где осмоляльность указанной водной композиции составляет от приблизительно 275 мосмоль/кг до приблизительно 300 мосмоль/кг.
21. Водная композиция по п.20, где осмоляльность указанной водной композиции составляет приблизительно 285 мосмоль/кг.
8
9
22. Водная композиция по любому из пп. 1-21, где указанные лентивирусные векторы присутствуют в концентрации от приблизительно 2×10 единиц трансдукции на миллилитр (TU/мл) до приблизительно 1×10 TU/мл.
8
8
23. Водная композиция по п.22, где указанные лентивирусные векторы присутствуют в концентрации от приблизительно 3×10 TU/мл до приблизительно 5×10 TU/мл.
24. Водная композиция по любому из пп. 1-23, где указанные лентивирусные векторы представляют собой рекомбинантный вирус иммунодефицита человека.
25. Водная композиция по любому из пп. 1-24, где указанный лентивирусные векторы содержат G-белок вируса везикулярного стоматита (VSV-G).
26. Водная композиция по п.25, где указанный G-белок VSV присутствует на поверхности указанных лентивирусных векторов.
27. Водная композиция по любому из пп. 1-26, где указанные лентивирусные векторы содержат трансген.
28. Водная композиция по п.27, где указанный трансген кодирует белок.
29. Водная композиция по п.28, где указанный белок содержит химерный антигенный рецептор (CAR).
30. Водная композиция по п.29, где указанный CAR содержит, в направлении с N-конца к C-концу, антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и один или несколько сигнальных доменов.
31. Водная композиция по п.30, где указанный сигнальный домен содержит один или несколько первичных сигнальных доменов.
32. Водная композиция по п.30 или 31, где указанные сигнальные домены содержат один или несколько костимуляторных сигнальных доменов.
33. Водная композиция по п.31, где один из указанных одного или нескольких первичных сигнальных доменов содержит стимуляторный домен CD3-дзета.
34. Водная композиция по п.32 или 33, где один или несколько из указанных костимуляторных сигнальных доменов содержат внутриклеточный домен, выбранный из костимуляторного белка, выбранного из группы, состоящей из CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, GITR, CD30, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, ICAM-1, лимфоцитарного функционального антигена-1 (LFA-1), CD2, CDS, CD7, CD287, LIGHT, NKG2C, NKG2D, SLAMF7, NKp80, NKp30, NKp44, NKp46, CD160, B7-H3 и лиганда, специфически связывающегося с CD83.
35. Водная композиция по п.34, где указанный один или несколько из указанных костимуляторных сигнальных доменов содержат костимуляторный домен 4-1BB (CD137).
36. Водная композиция по п.34 или 35, где указанный один или несколько из указанных костимуляторных доменов содержат костимуляторный домен CD28.
37. Водная композиция по любому из пп. 30-36, где указанный антигенсвязывающий домен является scFv.
38. Водная композиция по любому из пп. 30-37, где указанный антигенсвязывающий домен связывается с антигеном выбранным из группы, состоящей из CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1; лектин-подобной молекулы-1 C-типа, CD33; варианта III рецептора эпидермального фактора роста (EGFRvIII); ганглиозида G2 (GD2); ганглиозида GD3; члена семейства рецепторов ФНО B-клеточного антигена созревания (BCMA); антигена Tn ((Tn Ag) или (GalNAcα-Ser/Thr)); простат-специфического мембранного антигена (PSMA); тирозинкиназа-подобного орфанного рецептора 1 (ROR1); Fms-подобной тирозинкиназы 3 (FLT3); опухоле-ассоциированного гликопротеина 72 (TAG72); CD38; CD44v6; карциноэмбрионального антигена (CEA); эпителиальной молекулы адгезии (EPCAM); B7H3 (CD276); KIT (CD117); субъединицы альфа-2 рецептора интерлейкина-13; мезотелина; альфа-рецептора интерлейкина-11 (IL-11Ra); антигена стволовых клеток простаты (PSCA); сериновой протеазы 21; рецептора 2 фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR2); антигена Льюиса (Y); CD24; бета-рецептора тромбоцитарного фактора роста (PDGFR-бета); стадиеспецифичного эмбрионального антигена-4 (SSEA-4); CD20; рецептора фолата альфа; рецепторной тирозиновой протеинкиназы ERBB2 (Her2/neu); муцина 1, ассоциированного с поверхностью клетки (MUC1); рецептора эпидермального фактора роста (EGFR); молекулы адгезии нервных клеток (NCAM); простазы; простатической кислой фосфатазы (PAP); мутантного фактора элонгации 2 (ELF2M); эфрина B2; белка активации фибробластов альфа (FAP); рецептора инсулиноподобного фактора роста 1 (рецептора IGF-I), карбоангидразы IX (CAIX); субъединицы протеасомы (просомы, макропаина), тип бета, 9 (LMP2); гликопротеина 100 (gp100); онкогенного слитого белка, состоящего из кластерного региона точечных разрывов (BCR) и гомолога 1 онкогена вируса мышиного лейкоза Абельсона (Abl) (bcr-abl); тирозиназы; рецептора эфрина 2 типа A (EphA2); фукозил-GM1; сиалилового антигена Льюиса (sLe); ганглиозида GM3; трансглутаминазы 5 (TGS5); высокомолекулярного меланома-ассоциированного антигена (HMWMAA); o-ацетил-GD2-ганглиозида (OAcGD2); рецептора фолата бета; опухолевого эндотелиального маркера 1 (TEM1/CD248); белка, родственного опухолевому эндотелиальному маркеру 7 (TEM7R); клаудина 6 (CLDN6); рецептора тиреотропного гормона (TSHR); сопряженного с G-белком рецептора класса C группы 5, член D (GPRC5D); открытой рамки считывания 61 хромосомы X (CXORF61); CD97; CD179a; киназы анапластической лимфомы (ALK); полисиаловой кислоты; плацента-специфического белка 1 (PLAC1); гексасахаридной части гликоцерамида globoH (GloboH); антигена дифференцировки молочной железы (NY-BR-1); уроплакина 2 (UPK2); клеточного рецептора 1 вируса гепатита A (HAVCR1); адренорецептора бета 3 (ADRB3); паннексина 3 (PANX3); сопряженного с G-белком рецептора 20 (GPR20); комплекса лимфоцитарного антигена 6, локус K 9 (LY6K); обонятельного рецептора 51E2 (OR51E2); белка альтернативной рамки считывания TCR-гамма (TARP); белка опухоли Вильмса (WT1); раково-тестикулярного антигена 1 (NY-ESO-1); раково-тестикулярного антигена 2 (LAGE-1a); меланома-ассоциированного антигена 1 (MAGE-A1); варианта транслокации гена ETS 6, локализованного на хромосоме 12p (ETV6-AML); белка спермы 17 (SPA17); члена 1A семейства X-антигенов (XAGE1); ангиопоэтин-связывающего рецептора поверхности клеток 2 (Tie 2); раково-тестикулярного антигена меланомы-1 (MAD-CT-1); раково-тестикулярного антигена меланомы-2 (MAD-CT-2); Fos-родственного антигена 1; опухолевого белка p53 (p53); мутанта p53; простеина; сурвивина; теломеразы; антигена карциномы предстательной железы-1, антигена меланомы, распознаваемого T-клетками 1; мутантного белка саркомы Rat (Ras); теломеразной обратной транскриптазы человека (hTERT); транслокационного варианта антигена саркомы с точечными разрывами; меланомного ингибитора апоптоза (ML-IAP); ERG (слитого гена трансмембранной протеазы, сериновой 2 (TMPRSS2) ETS); N-ацетил-глюкозамил-трансферазы V (NA17); белка семейства спаренных боксов Pax-3 (PAX3); андрогенового рецептора; циклина B1; нейробластомного гомолога онкогена v-myc вируса миелоцитоматоза птиц (MYCN); члена C семейства гомологов Ras (RhoC); тирозиназа-родственного белка 2 (TRP-2); цитохрома P450 1B1 (CYP1B1); подобного CCCTC-связывающему фактору (белку с цинковыми пальцами) антигена 3 плоскоклеточной карциномы, распознаваемого T-клетками (SART3); белка семейства спаренных боксов Pax-5 (PAX5); проакросин-связывающего белка sp32 (OY-TES1); лимфоцит-специфической тирозиновой протеинкиназы (LCK); якорного белка A-киназы 4 (AKAP-4); белка синовиальной саркомы, X с точечными разрывами 2 (SSX2); рецептора конечных продуктов гликирования (RAGE-1); почечного убиквитинового антигена 1 (RU1); почечного убиквитинового антигена 2 (RU2); легумаина; белка вируса папилломы человека E6 (HPV E6); белка вируса папилломы человека E7 (HPV E7); кишечной карбоксилэстеразы; мутантного белка теплового шока 70-2 (mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; лейкоцит-ассоциированного иммуноглобулин-подобного рецептора 1 (LAIR1); рецептора Fc-фрагмента IgA (FCAR или CD89); члена 2 подсемейства A лейкоцитарных иммуноглобулин-подобнобных рецепторов (LILRA2); члена f семейства CD300-подобных молекул (CD300LF); члена A семейства 12 белков с лектиновыми доменами C-типа (CLEC12A); антигена стромальных клеток костного мозга 2 (BST2); EGF-подобного, содержащего модули, муцин-подобного, подобного рецептору гормонов белка 2 (EMR2); лимфоцитарного антигена 75 (LY75); глипикана-3 (GPC3); Fc-рецептор-подобного белка 5 (FCRL5) и подобного иммуноглобулину лямбда полипептида 1 (IGLL1).
39. Водная композиция по п.38, где указанный антигенсвязывающий домен связывается с CD19, мезотелином или CD123.
40. Водная композиция по любому из пп. 29-39, где указанный CAR содержит антитело против CD19 или его фрагмент, трансмембранный домен 4-1BB (CD137) и сигнальный домен CD3-дзета.
41. Водная композиция по любому из пп. 1-40, где указанная водная композиция не содержит один или несколько белков, выбранных из группы, состоящей из сывороточного альбумина человека (HSA), рекомбинантного сывороточного альбумина человека (rHSA), бычьего сывороточного альбумина (BSA) и липопротеина.
42. Водная композиция по п.41, где указанная водная композиция не содержит HSA, rHSA, BSA и липопротеины.
43. Водная композиция по любому из пп. 1-42, где указанные лентивирусные векторы продуцируются в клетках, культивируемых в отсутствие сыворотки.
44. Водная композиция по любому из пп. 1-43, где указанные лентивирусные векторы отличаются гидродинамическим радиусом 100±25 нм, измеряемым посредством динамического рассеяния света (DLS).
45. Водная композиция по п.44, где указанные лентивирусные векторы сохраняют указанный гидродинамический радиус 100±25 нм в диапазоне температур от 25°C до 55°C.
46. Водная композиция по любому из пп. 1-45, где указанные лентивирусные векторы отличаются полидисперсностью от 10% до 25%.
47. Водная композиция по п.46, где указанные лентивирусные векторы сохраняют указанную полидисперсность от 10% до 25% в диапазоне температур от 25°C до 55°C.
48. Водная композиция по любому из пп. 1-47, где указанные лентивирусные векторы сохраняют концентрацию после 3 циклов замораживания-размораживания от приблизительно 70% до приблизительно 100% относительно концентрации указанных лентивирусных векторов в указанной водной композиции до указанных циклов замораживания-размораживания, где каждый из указанных циклов замораживания-размораживания включает замораживание указанной водной композиции и последующее размораживание указанной водной композиции при комнатной температуре.
49. Водная композиция по п.48, где указанные лентивирусные векторы сохраняют указанную концентрацию от приблизительно 70% до приблизительно 100% после 6 из указанных циклов замораживания-размораживания.
50. Водная композиция по п.49, где указанные лентивирусные векторы сохраняют указанную концентрацию от приблизительно 70% до приблизительно 100% после 9 из указанных циклов замораживания-размораживания.
51. Водная композиция, содержащая лентивирусные векторы, буфер, выбранный из группы, состоящей из фосфатного буфера, буфера цитрата натрия, буфера 2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты (MES), буфера 3-морфолинопропан-1-сульфоновой кислоты (MOPS), и соль.
52. Водная композиция по п.51, где указанная соль выбрана из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида магния и хлорида кальция.
53. Водная композиция по п.51 или 52, где указанная водная композиция дополнительно содержит невосстанавливающий углевод, выбранный из группы, состоящей из сахарозы и трегалозы.
54. Способ очистки лентивирусных векторов, включающий пропускание водной композиции по любому из пп. 1-53 через фильтр, и таким образом, получение водной композиции, по существу не содержащей микроорганизмы.
55. Способ по п.54, где указанный фильтр содержит множество пор, и где указанные поры имеют диаметр приблизительно 0,2 мкм.
56. Способ по п.55, где указанная водная композиция, по существу, не содержащая микроорганизмы, содержит указанные лентивирусные векторы в концентрации приблизительно 80% относительно концентрации указанных лентивирусных векторов в указанной водной композиции до указанного приведения в контакт.
57. Способ очистки лентивирусных векторов, включающий:
a. приведение водной композиции по любому из пп. 1-53 в контакт с материалом, содержащим множество частицы; и
b. отделение веществ, проходящих через указанный материал, от веществ, остающихся в указанном материале, и, таким образом, получение водной композиции, обогащенной указанными лентивирусными векторами.
58. Способ очистки лентивирусных векторов, включающий приведение водной композиции по любому из пп. 1-53 в контакт с нуклеазой, и таким образом, получение водной композиции, по существу не содержащей контаминирующие полинуклеотиды.
59. Способ экспрессии трансгена в клетке, включающий приведение указанной клетки в контакт с водной композиции по любому из пп. 1-53.
60. Способ по п.59, где указанная клетка представляет собой клетку млекопитающего.
61. Способ по п.60, где указанная клетка млекопитающего является T-клеткой.
62. Способ по п.61, где указанная T-клетка является T-клеткой человека.
63. Способ по п.62, где указанная T-клетка человека является клеткой 293T, T-клеткой Jurkat или первичной T-клеткой человека.
64. Набор, содержащий водную композицию по любому из пп. 1-53 и вкладыш в упаковку.
65. Набор по п.64, где указанный вкладыш в упаковку включает инструкции для пользователя указанного набора по экспрессии трансгена в клетке способом по любому из пп. 59-63.
66. Набор по п.65, где указанный набор дополнительно содержит реагент, который можно использовать для культивирования клетки по п.65.
67. Применение водной композиции по любому из пп. 1-53 в способе доставки вирусного вектора, необязательно содержащего трансген, в клетку индивидуума, включающем введение композиции индивидууму.