СПОСОБ ОЦЕНКИ КРИОУСТОЙЧИВОСТИ СПЕРМЫ ЖЕРЕБЦОВ ПО КОНЦЕНТРАЦИИ ФИБРИНОГЕНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
METHOD FOR EVALUATION OF STALLION SPERM CRYO-RESISTANCE BY BLOOD SERUM FIBRINOGEN CONCENTRATION

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к области животноводства, в частности к коневодству, и может быть использовано для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Известно исследование (Атрощенко, М.М. Изучение влияния возраста на биохимические показатели сыворотки крови жеребцов / М.М. Атрощенко, A.M. Кудлаева, М.Г. Енгалычева // Коневодство и конный спорт. - 2020. - № 5. - С.10-14), в котором установлена положительная корреляция между возрастом жеребцов и концентрацией фибриногена в сыворотке крови (r равна 0,47; р равна 0,002).
Основным отличием данного исследования от заявляемого способа является то, что в нем не были изучены взаимосвязи качества и криоустойчивости спермы с концентрацией фибриногена в сыворотке крови.
Ближайшим аналогом (прототипом) заявляемого способа является способ оценки качества спермы жеребцов и ее криоустойчивости в зависимости от показателей крови (Атрощенко, М.М. Взаимосвязь качества спермы жеребцов и ее криоустойчивости с показателями крови / М.М. Атрощенко, Е.Ю. Бородкина // Коневодство и конный спорт. - 2010. - № 2. - С.34-36.), в котором проводится сравнение репродуктивных качеств жеребцов в зависимости от уровня концентраций показателей крови, в том числе фибриногена.
Недостатком этого способа является то, что невозможно связать повышение концентрации фибриногена с показателями спермы, т.к. ее повышение наблюдалось только у одного, реже у двух жеребцов в каждой группе и эту взаимосвязь нельзя считать достоверной.
Мы поставили задачу количественно оценить значение предельно допустимой концентрации (ПДК) фибриногена в сыворотке крови жеребцов, а затем изучить влияние концентрации фибриногена в сыворотке крови на криоустойчивость спермы в сравнении с ПДК.
Предлагаемый нами способ отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации фибриногена в сыворотке крови позволяет оценить это качество, не прибегая к отбору самой спермы. Другими словами, не имея продукта (в данном случае спермы), мы сможем оценить некоторые его качества.
Следовательно, заявленный нами способ соответствует условию патентоспособности изобретения «новизна». Изобретение является применимым, так как оно может быть использовано в коневодстве для отбора жеребцов с высокой криоустойчивостью спермы по концентрации фибриногена в сыворотке крови.
РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Образцы спермы, предназначенной для исследования (n равно 87), были отобраны с использованием ранее разработанной методики (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.) (далее - Рекомендации). После получения спермы, каждый эякулят оценивали по следующим показателям: объем эякулята и концентрация сперматозоидов в нативной сперме, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С, после оттаивания. Для разбавления спермы использовали лактозо-хелато-цитратно-желточную (ЛХЦЖ) среду в объемном соотношении 1:3 (Инструкция по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов лошадей. - Дивово, 2012. - 72 с.).
Замораживание спермы проводили в парах жидкого азота по технологии (Рекомендации), разработанной ФГБНУ «ВНИИ коневодства». Хранили замороженную сперму в жидком азоте при температуре -196°С. Оттаивание криоконсервированной спермы проводили в водяной бане при температуре 40°С в течение 60 секунд. После оттаивания криоконсервированной спермы определяли выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С.
Одновременно с получением спермы производился забор крови от каждого жеребца из яремной вены однократно до кормления животных.
Концентрация фибриногена в сыворотке крови рассчитывалась с использованием весового унифицированного метода определения фибриногена в плазме крови по Р.А. Рутбергу. На основании полученных нами результатов, согласно уже имеющимся данным (Бородкина Е.Ю. Показатели крови племенных и спортивных лошадей в связи с функциональным состоянием: автореф. дисс. … канд. биол. наук: 03.00.13 / Е.Ю. Бородкина; ВНИИконеводства. - Рязань: ВНИИ Коневодства, 2008. - 18 с.; 170 л.), была рассчитана ПДК фибриногена в сыворотке крови жеребцов, установленная в границах 50 процентиля репрезентативной выборки, и оказалась равной 3,90 г/л.
Затем мы распределили животных по группам. В первой группе находились жеребцы со значением ПДК фибриногена меньше 3,90 г/л, во второй группе, соответственно, больше 3,90 г/л.
Как видно из полученных данных, жеребцы со значением концентрации фибриногена в сыворотке крови меньше 3,90 г/л превосходили по выживаемости сперматозоидов в криоконсервированной сперме при Т 2-4°С на 207,32% аналогов из группы с превышением данного показателя (Р не больше 0,01).
Сам собой напрашивается вывод: на основании результатов эксперимента можно сделать следующее заключение - при значениях концентрации фибриногена в сыворотке крови меньше 3,90 г/л, отмечается высокий уровень выживаемости сперматозоидов в криоконсервированной сперме после оттаивания. В связи с этим предложенный способ является достоверным.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Применимость предлагаемого способа была проведена в условиях Терского племенного конного завода № 169 Ставропольского края на жеребцах арабской чистокровной породы (n равно 12).
Забор крови от каждого жеребца производят из яремной вены однократно до кормления животных, эти образцы оценивают по концентрации фибриногена в сыворотке крови весовым унифицированным методом определения фибриногена в плазме крови по Р.А. Рутбергу.
Одновременно получают образцы спермы жеребцов, которые оценивают по следующим показателям: объем эякулята, концентрация сперматозоидов в нативной сперме, выживаемость сперматозоидов при температуре (Т) 2-4°С, после оттаивания криоконсервированной спермы.
При этом мы учли данные (Науменкова, В.А. Рекомендации по взятию, разбавлению и замораживании спермы жеребцов / В.А. Науменкова. - Издание ВНИИ коневодства, 2006. - 23 с.), где указаны требования к качеству спермы жеребцов после оттаивания, в которых выживаемость должна быть не менее 96 часов. Следовательно, сперму, в которой показатель выживаемости после оттаивания при Т 2-4°С равен этому значению или выше его, можно смело относить к группе с высокой криоустойчивостью.
Вывод: при концентрации фибриногена в сыворотке крови ниже 3,90 г/л жеребца следует относить к группе с высокой криоустойчивостью спермы, а при концентрации фибриногена в сыворотке крови выше 3,90 г/л, соответственно, к группе с низкой.
Таким образом, при практическом использовании предлагаемого способа, для установления уровня криоустойчивости спермы жеребцов, не нужно знать выживаемость сперматозоидов при Т 2-4°С после оттаивания криоконсервированной спермы.