Трансплантация гепатоцитов человека: реалии и перспективы

УДК:612.02.015.37:616-089.843

ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ГЕПАТОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА: РЕАЛИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ

М.Д.УРАЗМЕТОВА, А.А. МАДАМИНОВ

Transplantation of human hepatocytes: realities and prospects

M.D.URAZMETOVA, A.A.MADAMINOV

Республиканский научный центр экстренной медицинской помощи

Представлен обзор 53 литературных источников, где обобщены результаты трансплантации изолированных гепатоцитов в лечении заболеваний печени и определены ее дальнейшие перспективы. К настоящему времени в литературе описано 30 случаев трансплантации клеток детям и 53 — взрослым. У детей пересадка производилась при наследственных дефектах ферментов печени, у взрослых — при острой печеночной недостаточности и хронических заболеваниях печени различного генеза. Маловероятно, что в ближайшее время станет возможным широкомасштабное клиническое применение изолированных гепатоцитов. Оптимизм вселяет открытие новых возможностей клеточной терапии с помощью эмбриональных гепатоцитов; прогенитор-ных клеток печени, получаемых из взрослой печени, эмбрионов, крови пуповины и костного мозга; иммортализации гепатоцитов.

Ключевые слова: заболевания печени, изолированный гепатоцит, трансплантация, регенерация, клеточная терапия.

In the present work the review of 53 references where results of transplantation of the isolated hepatocytes in treatment of diseases of a liver are generalized is presented and its further prospects are defined. By present time 30 cases of transplantation of cells to children and 53 - by the adult are described in the literature. In children transplantation was made at hereditary defects of enzymes of a liver, in adults - at acute liver failure and chronic diseases of liver of a various genesis. It is improbable, that in the nearest future a large-scale clinical application of the isolated hepatocytes will be possible. The discovery of new possibilities of cellular therapy by means of embryonic hepatocytes; progenitor cells of liver received from adult liver, embryoses, blood of umbilical cord and a bone marrow; immortalization hepatocytes are very important.

Keywords: diseases of a liver, isolated hepatocytes, transplantation, regeneration, cellular therapy.

В настоящее время заболевания печени занимают одно из основных мест среди причин нетрудоспособности населения. Несмотря на современные достижения интенсивной терапии смертность при развитии печеночнои недостаточности достигает 90% [13,33,49,50]. В связи с этим разработка доступных и эффективных способов лечения этого тяжелого заболевания приобретает особое значение. Перспективным представляется подход, осно-ванныи на использовании в качестве искусственных органов как отдельных клеток, так и субклеточных фракции печени. К настоящему времени клеточная терапия с использованием человеческих изолированных гепатоцитов (ИГ) начинает признаваться в качестве альтернативы ортотопи-ческои трансплантации печени (ОТП) у больных с нарушением обмена веществ печени и острои печеночнои недостаточностью (ОПН) [1,11,17,24,43].

Целью обзора является обобщение результатов трансплантации ИГ в лечении заболевании печени и определение ее дальнеиших перспектив.

После успешнои трансплантации почки печень стала вторым крупным органом, которыи привлек внимание трансплантологов. Экспериментальное изучение проблемы пересадки печени было начато в 1967 г., когда BAAfzelius, R. Schoental [8] осуществили первую пересадку ИГ на животных. Спустя 25 лет она была воспроизведена Mito и соавт. [30] на человеке. Пересадка ИГ долгое время признавалась потенциально опасным для жизни методом лечения заболевании печени. Основанием для продолжения клинических испытании послужила большая экспериментальная работа на моделях животных [11,17,26,43].

Стало очевидным, что при правильном выполнении вспомогательная трансплантация печени с

помощью ИГ имеет несомненное преимущество перед органной трансплантацией [35]. При этом она выгодно отличается от пересадки целого органа своеи доступностью и техническое простотои. Пересадку клеток можно регулировать по дозам и многократно повторять, используя различные пути введения и эктопические зоны репопуляции, применяться у одного больного неоднократно, сохраняя печень интактнои. Это упрощает технику выполнения операции и позволяет пересаживать необходимую клеточную массу, уменьшая вероятность развития осложнении. Не последняя роль при этом отводится стоимости клеточнои трансплантации, которая значительно ниже, чем пересадка органов. Еще одним из достоинств трансплантации клеток является возможность возмещения отсутствующих клонов специализированных клеток в поврежденном органе, увеличения пула функционирующих клеток печени реципиента, а также активизации в сохранившихся клетках поврежденного органа собственного резерва регенерации и пролиферации. Кроме того, трансплантированные клетки функционально заменяют гепа-тоциты патологически измененного органа и восстанавливают его метаболические своиства к сроку трансплантации целого органа, становясь, таким образом мостом к ОТП. В отличие от целого органа, суспензии ИГ могут быть криоконсервиро-ваны при субнулевых (-196°С) температурах и сохраняться в банке донорских клеток «до востребования», что позволяет помочь большому числу больных [5-7,46]. Создание банка клеток для клинического использования особенно актуально в случаях экстреннои госпитализации больных с ОПН, а также массовых отравлении гепатотоксиче-скими ядами. Метод позволяет полностью отка-

заться или использовать слабые иммуносупрессив-ные препараты. В последующем, при появлении после трансплантации клинических показании, вполне осуществима генотерапия печени.

Источники ИГ. Изучение терапевтических возможности метода трансплантации ИГ показало, что главным препятствием на пути внедрения клеточных технологии в широкую клиническую практику служат ограничения в получении достаточного количества биоматериала. В настоящее время взрослые человеческие гепатоциты с хорошеи жизнеспособностью получают из остатков печени во время ОТП (IV сегмент, хвостатая или правая доля). Например, количество ИГ, полученное из IV сегмента печени, с высокои, 90% жизнеспособностью может обеспечить клиническои транспланта-циеи гепатоцитов трех пациентов, эффективно увеличивая, таким образом, пул донорских клеток. Однако в некоторых случаях дефицит донорских органов диктует необходимость получения ИГ от органов, непригодных для трансплантации (печень с тяжелои формои стеатоза; продленная, но не более 9 ч холодовая ишемия трансплантата; пожилые, старше 65 лет доноры). Надо признать, что качество таких клеток неприемлемо для широкого использования в клиническои практике. В этом плане перспективным представляется получение альтернативных источников гепатоцитов: иммортализованные линии клеток [12], эмбриональные гепатоциты [3, 15] и гепатоциты, получаемые из стволовых клеток [9, 29].

Получение ИГ. Протоколы получения человеческих гепатоцитов [31,45] основаны на фермента-тивнои обработке печени in situ раствором колла-геназы путем перфузии ткани печени при 37°C. На жизнеспособность и выход клеток влияют тип и качество используемои ткани. После получения ИГ клетки должны быть использованы для клеточнои трансплантации как можно быстрее. Принимая во внимание ухудшение функции клеток даже при хранении их при 4°C, предпочтительным для клинического использования является срок до 24 ч после их получения [4]. Для более долгосрочного хранения человеческих ИГ применяется криокон-сервирование при температуре -140°C [47].

Лабораторные условия для получения ИГ. Основными условиями работы лаборатории по получению изолированных клеток печени человека является оснащение ее специальнои системои очистки с использованием бактерицидных HEPA-фильтров [14]. Немаловажно поддерживать необ-ходимыи градиент давления воздуха между комнатами, с относительно высоким давлением в асеп-тическои боксовои комнате, где выполняется работа по выделению ИГ. Все доставляемые в лабораторию донорские органы/ткани должны проверяться на наличие вируснои инфекции, включая гепатит и вирус иммунодефицита человека согласно критериям обслуживания National Solid Organ Transplant Service. Готовые к клиническому использованию клеточные продукты подвергаются скринингу на наличие микроорганизмов. Для кли-ническои трансплантации жизнеспособность ИГ должна превышать 60%, количество более 0,5 млрд с отсутствием микробного загрязнения и иметь групповую ABO совместимость с донором.

Доставка и приживление ИГ в паренхиме печени. Клетки с клинической эффективностью должны удовлетворять трем основным условиям: адекватная терапевтическая масса, удовлетворительное приживление и последующая пролиферация пересаженных клеток (вторичное заселение). Важным также являются и пути доставки. В широкомасштабных лабораторных исследованиях на экспериментальных моделях у животных с человеческими болезнями печени установлены выполнимость и эффективность трансплантации гепатоци-тов в различные участки: печень, селезенка, поджелудочная железа, брюшная полость и подпочечная капсула [25]. При этом ИГ вводятся интраор-ганно или чрессосудисто. Среди чрессосудистых способов доставки в клиническои практике широко применяется введение ИГ в печень через портальную или нижнюю брыжеечную вену у взрослых и через катетеризированную пупочную вену у новорожденных. В последнем случае перед вливанием под рентгеноконтрастным контролем проверяется возможныи риск эмболизации легочнои артерии через ductus venosus. Здесь трудно представить, что гепатоцит диаметром 20-35 мкм может проникнуть через фенестры эндотелиальных клеток диаметром 0,150 мкм и синусоиды печени (6-7 мкм). Однако предельные размеры фенестров могут изменяться под влиянием сокращения эндо-телиальных клеток [36]. Вводимая через порталь-ныи кровоток гепаринизированная взвесь ИГ в количестве 30-100 млн клеток на 1 кг массы тела больного со скоростью инфузии 4-8 мл в час успешно проходит эндотелиальныи барьер синусо-идов. Затем ИГ встраиваются в паренхиму, располагаясь в печеночных синусоидах перипортальнои области печеночнои дольки [27]. После восстановления контакта с окружающими гепатоцитами реципиента донорские клетки начинают пролифери-ровать, постепенно увеличиваясь в количестве и заполняя печень реципиента. Существенным недостатком инъекции взвеси клеток в селезеночную артерию был постинъекционныи селезеночныи некроз [34], в связи с чем метод не нашел широкого клинического применения.

Среди интраорганных трансплантации ИГ следует отметить пункционное введение клеток в ткань печени и селезенки. Описано введение клеток непосредственно в ткань печени [53]. После трансплантации клетки обнаруживались не только в самои ткани, но и в центральных венах, что представляло риск эмболизации легких. Поэтому был выбран другои путь - пересадка клеток в селезенку, как наилучшее эктопическое место [10, 32]. Работы, проведенные на свиньях, показали, что непосредственное введение донорских клеток в пульпу селезенки способствует лучшему приживлению, чем введение через селезеночную артерию. В последнем случае из-за окклюзии сосудов донорскими ИГ происходит некроз пульпы, поэтому введение ИГ в пульпу селезенки менее опасно. Единственным осложнением может стать незначительное кровотечение в брюшную полость.

Экспериментальные работы с использованием меченых гепатоцитов раскрыли различные биологические этапы, которые проходят гепатоциты, прежде чем они включаются в процесс замещения

метаболической функции [22]. Оказалось, что донорские гепатоциты могут не только эффективно накапливаться в паренхиме, но и встраиваться в пластинки и активно участвовать в формировании желчных капилляров [34]. S. Gupta [22] объясняет это следующим образом: ишемия печеночнои ткани, вызванная эмболизациеи синусоидов пересаженными клетками, стимулирует выделение цито-кина VEGF (сосудистыи эндотелиальныи фактор роста), которыи влияет на сокращения эндотели-альных клеток, приводит к раскрытию пор в сину-соидальнои мембране и вторжению донорских ге-патоцитов в паренхиму печени реципиента. Кроме этого, для успешного приживления гепатоцитов используют протеолитические ферменты, которые также способствуют их взаимодеиствию с эндоте-лиальными клетками и компонентами внеклеточ-нои матрицы в подсинусоидальном пространстве. Имеются экспериментальные доказательства полного перенаселения патологическои печени пересаженными гепатоцитами [27].

Таким образом, в организме реципиента пересаженные гепатоциты проходят четыре биологических этапа: 1) транслокация к печени; 2) приживление, которое заключается в проникновении гепатоцитов в перисинусоидальное пространство Диссе и их интеграции в паренхиму печени; 3) восстановление метаболическои функции и 4) пролиферация пересаженных гепатоцитов. После введения гепатоцитов в органы портальнои системы происходит их транслокация к печени. Некоторые авторы считают, что транслокация гепатоцитов к печени происходит посредством хемотаксиса. Это означает, что донорские гепатоциты наделены специальнои навигационнои информациеи и высокоаффинными рецепторами для целенаправлен-нои доставки и встраивания [30]. В дальнеишем происходит внедрение пересаженных гепатоцитов в печеночную паренхиму (через 20 часов после трансплантации), где они встраиваются в печеночные пластинки и участвуют в формировании желчных капилляров. Только клетки, депонированные в синусоидах печени, имеют шанс проникнуть через эндотелии синусоидов и интегрироваться в печеночную дольку. Большая часть клеток остается в мелких портальных сосудах и удаляется в течение короткого периода купферовскими клетками [22].

Таким образом, суждение авторов о способе трансплантации гепатоцитов неоднозначно, хотя подавляющее большинство предлагают использовать гепатолиенальныи бассеин. Судьба пересаженных клеток во многом зависит от участка трансплантации, в связи с этим активныи поиск рациональных способов трансплантации гепато-цитов продолжается.

Количество клеток и частота назначения. Одним из важнеиших вопросов клеточнои трансплантации является объем трансплантируемои ткани. Печень взрослого человека с массои тела 70 кг содержит в среднем 280 млрд клеток, из которых гепатоциты составляют 60-70%. Первое одномоментное внутрипортальное введение не должно превышать 1% от общеи массы печени, т.е. 2,8 млрд клеток. При расчете исходят из того, что каждая пересаженная клетка в организме реципиента

в определенных условиях после трансплантации делится от 20 [21] до 70 раз [25], прежде чем потеряют способность к митозу. Повторные вливания могут быть предприняты с промежуточным контролем портального давления. Суммарная доза 5% от массы печени в виде нескольких вливании является при ОПН недостаточно^ поэтому авторы рекомендуют увеличить ее до 10% [20]. Некоторые авторы считают, что необходимым клеточньш объем для возмещения утеряннои функции реципиента достигается после пролиферации пересаженных гепатоцитов [11, 38].

Клиническая трансплантация гепатоцитов. К настоящему времени в литературе описано 30 случаев трансплантации ИГ детям и 53 - взрослым [11, 19, 23, 24, 42, 44].

У детеи пересадка производилась при наследственных дефектах ферментов печени, у взрослых - при острои печеночнои недостаточности и хронических заболеваниях печени различного генеза. Пересадка клеток детям обеспечила кратковременную, но в большинстве случаев доказанную коррекцию метаболического дефицита. Возраст самого ребенка был 1 день, спустя 6 мес. ему была благополучно произведена ОТП [24].

S.C.Strom и соавт. [44] описана пересадка ИГ 18 взрослым пациентам с ОПН. В различных случаях был трансплантирован 1 млрд свежевыделенных гепатоцитов или криоконсервированных ИГ в селезеночную артерию или портальную вену. Всего вводилось 5% ИГ от нормальнои массы печени. В результате трансплантации достигнуто уменьшение уровня аммиака и билирубина крови, а также проявления энцефалопатии. Имеются также данные о клиническом применении трансплантации ИГ у 5 пациентов с ОПН, ожидавших ОТП [19]. Трансплантация гепатоцитов в селезенку осуществлялась через селезеночную артерию. Через 2 дня после трансплантации больные вышли из комы, а их жизнь удалось продлить на срок от 2 до 7 недель. При внутрибрюшиннои трансплантации гепатоцитов пациентам с ОПН удалось снизить летальность на 40% по сравнению с группои больных, которым не проводилась пересадка клеток.

Иммуносупрессия. Трансплантация гепатоци-тов у человека нередко ведет к иммунному конфликту между реципиентом и донором в виде реакции отторжения. Поэтому при клеточнои терапии заболевании печени важное значение имеет режим адекватнои иммуносупрессии. Ингибирова-ние активности печеночных натуральных киллеров или локальная иммуносупрессия могут улучшить приживаемость и пролиферацию трансплантированных клеток. Однако до настоящего времени споры относительно схем иммуносупрессивно-го лечения не утихают. В то же время в большинстве центров придерживаются следующего протокола трансплантации печени: комбинация такро-лимуса со стероидами с или без сиролимуса или микофенолата мофетила. Некоторые центры применяют моноклональные антитела (базиликсимаб или даклизумаб). Наилучшим вариантом является хорошо зарекомендовавшая себя иммуносупрессия по эдмонтонскому протоколу трансплантации ост-ровковых клеток [39].

Будущие перспективы. К настоящему времени

в способах доставки трансплантированных гепато-цитов к печени в экспериментальных моделях на животных достигнуты значительные успехи, которые, однако, не могут быть перенесены на людеи. Несмотря на обнадеживающие результаты многих клинических исследовании, полного выздоровления от нарушении обмена веществ у больных с помощью однои только трансплантации ИГ достичь не удалось.

Надо признать, что пока не будут наидены альтернативные источники клеток, дефицит донорского органа останется актуальнои проблемой Маловероятно, что в ближаишее время станет возможным широкомасштабное клиническое применение ИГ. Оптимизм вселяет надежду на открытие новых возможностеи клеточнои терапии с помощью эмбриональных гепатоцитов [18]; прогени-торных клеток печени, получаемых из взрослои печени, эмбрионов, крови пуповины и костного мозга [40]; иммортализации гепатоцитов [52].

Потенциально неограниченным источником новых гепатоцитов могут стать ксенотранспланта-ты. Однако при этом сохраняется потенциальная опасность передачи инфекционных болезнеи животных - еще одна проблема, требующая своего решения.

Другим ограничивающим фактором является хранение изолированных клеток. Жизнеспособность и функция замороженных гепатоцитов после размораживания могут быть улучшены с помощью новых криопротекторных средств, а также благодаря использованию различных криобиологических технологии [48].

Одним из других важных вопросов, требующих своего решения, остается доказательство приживления и репопуляции печени реципиента донорскими человеческими гепатоцитами. Контроль уровня биохимических параметров после пересадки ИГ больным с метаболическими нарушениями печени не дает надежнои информации о количестве выживших после трансплантации привитых клеток, их функционировании и распределении в печени реципиента. Для определения приживления донорских клеток необходимы другие современные методы, такие как биопсия печени с анализом коротких тандемных повторов [28], количественная оценка экспрессии генов гепатоспецифи-ческих транскриптов (переносов генетическои информации с ДНК на РНК) и флуоресцентная гибридизация in situ, позволяющая выявлять хромосомные аномалии [41], ПЦР-анализ в режиме реального времени Y-хромосом [51]. По этим причинам после трансплантации нужны надежные малоин-вазивные методы контроля выживаемости и репо-пуляции клеток. В связи с этим растет интерес к использованию магнитно-резонанснои томографии, отслеживающии клетки после их мечения in vitro контрастными веществами [37].

Становится понятным, что многие введенные клетки не приживляются в печени реципиента и/ или выводятся ретикулоэндотелиальнои системои либо теряют жизнеспособность в раннем посттрансплантационном периоде. Трансплантация гепатоцитов будет иметь преимущества перед органными пересадками при условии развития методов, увеличивающих приживляемость в печени

реципиента донорских человеческих гепатоцитов. Отторжение аллогенных гепатоцитов и/или возможное старение трансплантированных клеток, вероятно, не позволит длительно функционировать им в клинических трансплантатах. Поэтому необходимо больше исследовании в этои области для минимизации или преодоления потребности в иммуносупрессии при трансплантации клеток печени. При достижении указанных условии трансплантация ИГ будет иметь исключительные преимущества перед ОТП.

Суммируя вышесказанное, необходимо отметить, что к настоящему времени накоплено достаточно данных об использовании ИГ в эксперименте. Маловероятно, что в ближаишее время станет возможным широкомасштабное клиническое применение ИГ. Оптимизм вселяет открытие новых возможностеи клеточнои терапии с помощью эмбриональных гепатоцитов; прогениторных клеток печени, получаемых из взрослои печени, эмбрионов, крови пуповины и костного мозга; имморта-лизации гепатоцитов. Вследствие этого белые пятна в современном знании об ассимиляции и пролиферации клеток печени стремительно уменьшаются. В связи с этим актуальность широкого клинического использования живых ИГ возрастает, что позволяет рекомендовать метод для широкого клинического применения.

Литература

1. Бруслик В.Г., Логинов А.С., Сперанскии М.Д., Васина Н.В. Способы применения изолированных гепатоцитов для лечения острои печеночнои недостаточности. Вестн РАМН 1994; 5: 8-14.

2. Иванов Д.В., Рязанов А.И., Хадарцев А.А. Трансплантация гепатоцитов в лечении заболевании печени - настоящее и будущее. Вестн новых мед технологии 2006; XIII (3): 39-44.

3. Лебедева Ю.Н., Суббота Н.П., Кебкало А.Б. Применение изолированных клеток печени для лечения больных с печеночнои недостаточностью. Укр мед журн 2001; 3 (23): 104-111.

4. Суббота Н.П., Грищенко В.И. Криоконсервиро-ванные клетки и ткани плодов человека как источник трансплантационного материала. Криобиология 1991; 1: 3-8.

5. Суббота Н.П., Пашинскии П.П., Кебкало А.Б. Криоконсервированные препараты, выделенные из печени плода человека, восстанавливают биохимические процессы при острои печеночнои недостаточности. Укр мед журн 1999; 71 (2): 55-60.

6. Суббота Н.П., Шиманко И.И., Зимина Л.Н. Крио-консервирование аллогенных гепатоцитов и их детоксикационная активность. Клин токсикол 1989; 1: 17-18.

7. Шумаков В.И., Арзуманов В.С., Онищенко Н.А. Лечение тяжелои печеночнои недостаточности перфузиеи крови больного через взвесь крио-консервированных гепатоцитов. Хирургия 1990; 2: 113-116.

8. Afzelius B.A., Schoental R. The ultrastructure of the enlarged hepatocytes induced in rats with a single oral dose of retrorsine, a pyrrolizidine (Senecio) alkaloid. J Ultrastruct Res 1967; 20 (5): 328-345.

9. Avital I., Feraresso C., Aoki T. et al. Bone marrow-derived liver stem cell and mature hepatocyte

engraftment in livers undergoing rejection. Surgery 2002; 132: 384-390.

10.Baumgartner D., LaPlante-O'Neill P.M., Sutherland D.E. et al. Effects of intrasplenic injection of hepatocytes, hepatocyte fragments and hepatocyte culture supernatants on D-galactosamine-induced liver failure in rats. Europ Surg Res 1983; 15: 129135.

11.Bilir B.M., Guinette D., Karrer F. et al. Hepatocyte transplantation in acute liver failure. Liver Transpl 2000; 6: 32-40.

12.Cai J., Ito M., Nagata H., et al. Treatment of liver failure in rats with endstage cirrhosis by transplantation of immortalized hepatocytes. Hepatology 2002; 36: 386-394.

13.Chongsrisawat V., Hutagalung Y., Poovorawan Y. Liver function test results and outcomes in children with acute liver failure due to dengue infection. South. Asian J Trop Med Public Health 2009; 40 (1): 47-53.

14.Crimi P., Valgiusti M., Macrina G., Grieco A. et al.. Evaluation of microbial contamination of air in two haematology departments equipped with ventilation systems with different filtration devices. J Prev Med Hyg 2009; 50 (1): 33-36.

15.Dan Y.Y., Riehle K.J., Lazaro C. et al. Isolation of multipotent progenitor cells from human fetal liver capable of differentiating into liver and mesenchymal lineages. Proc Natl Acad Sci USA 2006; 103: .9912-9917.

16.Demetriou A.A., Reisner A., Sanchez J. et al. Transplantation of microcarrier-attached hepatocytes into 90% partially hepatectomized rats. Hepatology 1988; 8: 1006-1009.

17.Dhawan A., Mitry R.R., Hughes R.D. et al. Hepatocyte transplantation for inherited factor VII deficiency. Transplantation 2004; 78: 1812-1814.

18.Fiegel H.C., Kneser U., Kluth D. et al. Development of hepatic tissue engineering. Pediatr Surg Int 2009; 25 (8): 667-673.

19.Fisher R.A., Strom S.C. Human hepatocyte transplantation: worldwide results. Transplantation 2006; 82: 441-449.

20.Fitzpatrick E., Mitry R.R., Dhawan A. Human hepatocyte transplantation: state of the art. J Intern Med 2009; 266 (4): 339-357.

21.Fox I.J., Chowdhury J.R., Kaufman S.S. et al. Treatment of the Crigler-Najjar syndrome type I with hepatocyte transplantation. New Engl J Med 1998; 338 (20): 1422-1426.

22.Gupta S., Rajvanshi P., Sokhi R. et al. Entry and integration of transplanted hepatocytes in rat liver plates occur by disruption of hepatic sinusoidal endothelium. Hepatology 1999; 29: 509-519.

23.Habibullah C.M., Syed I.H., Qamar A., Taher-Uz Z. Human fetal hepatocyte transplantation in patients with fulminant hepatic failure. Transplant 1994; 58: 951-952.

24.Horslen S.P., McCowan T.C., Goertzen T.C. et al. Isolated hepatocyte transplantation in an infant with a severe urea cycle disorder. Pediatr 2003; 111: 1262-1267.

25.Horslen S.P., Fox I.J. Hepatocyte transplantation. Transplant 2004; 77: 1481-1486.

26. Ito M., Nagata H., Yamamoto T. et al. Intrasplenic hepatocyte transplantation prolonged the survival

in Nagase analbuminemic rats with liver failure induced by common bile duct ligation. Cell Transplant 2007; 16 (5): 547-553.

27.Koenig S., Stoesser C., Krause P. et al. Liver Repopulation After Hepatocellular Transplantation: Integration and Interaction of Transplanted Hepatocytes in the Host. Cell Transplant 2005; 14 (1): 31-40.

28.Mas V.R., Maluf D.G., Thompson M. et al. Engraftment measurement in human liver tissue after liver cell transplantation by short tandem repeats analysis. Cell Transplant 2004; 13: 231-236.

29.Miki T., Lehmann T., Cai H. et al. Stem cell characteristics of amniotic epithelial cells. Stem Cells 2005; 23: 1549-1559.

30.Mito M., Kusano M., Kawaura Y. Hepatocyte transplantation in man. Transplant Proc 1992; 24 (6): 3052-3053.

31.Mitry R.R., Hughes R.D., Aw M.M. et al. Human hepatocyte isolation and relationship of cell viability to early graft function. Cell Transplant 2003; 12: 69-74.

32.Nagata H., Ito M., Shirota C. et al. Route of hepatocyte delivery affects hepatocyte engraftment in the spleen. Transplant 2003; 76 (4): 732-734.

33.Nguyen N.T., Vierling J.M. Acute liver failure. Curr Opin Organ Transplant 2011; 16 (3): 289-96.

34.Nussler A., Konig S., Ott M. et al. Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases. J Hepatol 2006; 45: 144-159.

35.Pereira S.P., McCarthy M., Ellis A. et al. Auxiliary partial orthotopic liver transplantation for acute liver failure. J Hepatol 1997; 26: 1010-1017.

36.Rajvanishi P., Kerr A., Bharagavab K.K. et al. Efficacy and safety of repeated hepatocyte transplantation for significant liver repopulation in rodents. Gastroenterology 1996; 111: 1092-1102.

37.Rogers W.J., Meyer C.H., Kramer C.M. Technology insight: in vivo cell tracking by use of MRI. Nat Clin Pract Cardiovasc Med 2006; 3: 554-562.

38.Selden C., Hodgson H. Cellular therapies for liver replacement. Transplant Immunol 2004; 12: 273288.

39.Shapiro A.M.J., Lakey J.R.T., Ryan E.A. et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. New Engl J Med 2000; 343: 230-238.

40.Shikanai M., Asahina K., Iseki S. et al. A novel method of mouse ex utero transplantation of hepatic progenitor cells into the fetal liver. Biochem Biophys Res Commun 2009; 381 (2): 276-282.

41.Stephenne X., Najimi M., Sibille C. et al. Sustained engraftment and tissue enzyme activity after liver cell transplantation for argininosuccinate lyase deficiency. Gastroenterology 2006; 130: 1317-1323.

42.Sterling R.K., Fisher R.A. Liver transplantation. Living donor, hepatocyte, and xenotransplantation. Clin Liver Dis 2001; 5: 431-460.

43.Strom S.C., Fisher R.A., Thompson M.T. et al. Hepatocyte transplantation as a bridge to orthotopic liver transplantation in terminal liver failure. Transplant 1997; 63: 559-569.

44.Strom, S.C., Chowdhury, J. R., Fox, I. J. Hepatocyte transplantation for the treatment of human disease. Semin Liver Dis 1999; 19: 39-48.

45.Strom S.C., Dorko K., Thompson M.T. et al. Large scale isolation and culture of human hepatocytes. D.Franco et al. ed. I'lots de Langerhans et he'patocytes: vers une utilisation therapeutique. 1998; 195-205.

46.Terry C., Mitry R.R., Lehec S.C et al. The effects of cryopreservation on human hepatocytes obtained from different sources of liver tissue. Cell Transplant 2005; 14: 585-594.

47.Terry C., Dhawan A., Mitry R.R. et al. Cryopreservation of isolated human hepatocytes for transplantation: State of the art. Cryobiology 2006; 53: 149-159.

48.Terry C., Dhawan A., Mitry R.R. et al. Preincubation of rat and human hepatocytes with cytoprotectants prior to cryopreservation can improve viability and function upon thawing. Liver Transplant 2005; 11: 1533-1540.

49.Umemura T., Tanaka E., Kiyosawa K., Kumada H. Mortality secondary to fulminant hepatic failure in patients with prior resolution of hepatitis B virus infection in Japan. Clin Infect Dis 2008; 47 (5): 5256.

50.Viana C.F., Rocha T.D., Cavalcante F.P. et al. Liver transplantation for acute liver failure: a 5 years experience. Arq Gastroenterol 2008; 45 (3): 192194.

51.Wang L.J., Chen Y.M., George D. et al. Engraftment assessment in human and mouse liver tissue after sex-mismatched liver cell transplantation by realtime quantitative PCR for Y chromosome sequences. Liver Transplant 2002; 8: 822-828.

52.Weber A. Immortalization of hepatic progenitor cells. Pathol Biol (Paris) 2004; 52 (2): 93-96.

53.Wu C.X., Zou Q., Zhu Z.Y. et al. Intrahepatic transplantation of hepatic oval cells for fulminant hepatic failure in rats. Wld J Gastroenterol 2009; 28: 15(12); 1506-1511.

ОДАМ ГЕПАТОЦИТЛАРИНИНГ ТРАНСПЛАНТА-ЦИЯСИ: РЕАЛ *ОЛАТ ВА ИСТИКБОЛЛАРИ

М.Д.Уразметова, А.А. Мадаминов Республика шошилинч тиббий ёрдам илмий маркази

Мацолада жигар касалликларини даволашда якка-ланган гепатоцитлар трансплантациясининг натижала-ри умумлаштирилган ва унинг келажакдаги истицбол-лари аницлаб берилган. Айни дамда адабиётларда 30 та болаларга ва 53та катталарга хужайраларни кучи-риб утказиш холатлари ёритиб берилган. Болаларда трансплантация жигарнинг ирсий фермент нуцсони булган холатларда цулланилган булса, катталарда -уткир жигар етишмовчилиги ва келиб чициши турлича булган жигарнинг сурункали касалликларида амалга оширилган. Яцин келажакда яккаланган гепатоцитлар-нинг клиникада кенг цулланилиши эхтимолдан узоцроц. Шундай булсада, эмбрионал гепатоцитлар, ёрдамида амалга ошириладиган хужайралар терапияси янги имкониятларининг, катталар жигаридан, эмбри-онлардан, киндик цонидан ва цизил миядан олинади-ган прогенитор хужайраларнинг, гепатоцитлар иммор-тализациясининг очилиши келажакка умид баги-шлайди.

Контакт: Мадаминов Аибек Азадович. 100107, Ташкент, ул. Фархадская, 2. РНЦЭМП. Тел.+998-71-1504384. E-mail: aybekm@mail.ru