УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ СПОСОБЫ ВЫДЕЛЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ

2
1. Способ получения рекомбинантного белка, включающий (а) культивирование прокариотической клетки-хозяина, где прокариотическая клетка-хозяин трансформирована нуклеиновой кислотой, кодирующей рекомбинантный белок, и (б) выделение рекомбинантного белка в условиях, где уровень растворенного кислорода (dO) превышает 0%, и (в) очистку рекомбинантного белка до отфильтрованного препарата для хранения (FBS), где отфильтрованный препарат не содержит детектируемых количеств аддукта рекомбинантного белка и 1,4-дигидрокси-2-нафтоата (DHNA) по данным ионообменной хроматографии (IEC) при 310 нм.
2. Способ по п. 1, в котором аналитическим анализом является HPLC, RP HPLC, HIC HPLC, ЯМР, масс-спектрометрия или УФ-спектроскопия.
2
3. Способ по п. 1, в котором уровень dO непрерывно поддерживают на уровне более 0% на стадии (б) выделения.
4. Способ по п. 3, в котором выделение включает стадию гомогенизации.
2
5. Способ по п. 4, в котором уровень dO поддерживают на уровне от примерно 30% до примерно 75% до гомогенизации.
2
6. Способ по п. 4, в котором уровень dO поддерживают на уровне более 75% до гомогенизации.
2
7. Способ по п. 4 или 5, в котором уровень dO поддерживают на уровне примерно 50% после гомогенизации.
2
8. Способ по п. 4 или 5, в котором уровень dO поддерживают на уровне более 50% после гомогенизации.
2
9. Способ по п. 5, в котором уровень dO поддерживают в течение периода, равного или превышающего 1,5 часа.
2
10. Способ по п. 6, в котором уровень dO поддерживают в течение периода, равного или превышающего 2 часа.
2
11. Способ по п. 1, в котором уровень dO поддерживают с использованием нагнетаемого в пространство над средой воздуха или барботажного воздуха, увеличением противодавления или с помощью перемешивания.
12. Способ по п. 11, в котором количество нагнетаемого в пространство над средой воздуха составляет от примерно 0,4 vvm до примерно 0,8 vvm.
13. Способ по п. 12, в котором количество нагнетаемого в пространство над средой воздуха составляет 0,6 vvm.
14. Способ по п. 11, в котором увеличение противодавления составляет от примерно 1,0 до примерно 30 фунтов на квадратный дюйм.
15. Способ по п. 14, в котором увеличение противодавления составляет 19 фунтов на квадратный дюйм.
16. Способ по п. 11, в котором скорость перемешивания составляет от примерно 6 Вт/л до примерно 8 Вт/л.
17. Способ по п. 16, в котором скорость перемешивания составляет, по меньшей мере, 6 Вт/л.
18. Способ получения рекомбинантного белка, включающий (а) культивирование прокариотической клетки-хозяина с делецией гена menE, где прокариотическая клетка-хозяин трансформирована нуклеиновой кислотой, кодирующей рекомбинантный белок, (б) выделение рекомбинантного белка и (в) очистку рекомбинантного белка до FBS, где отфильтрованный препарат не содержит детектируемых количеств аддукта рекомбинантного белка и DHNA по данным ионообменной хроматографии (IEC) при 310 нм.
19. Способ по п. 18, в котором выход рекомбинантного белка увеличен примерно на 20% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более по сравнению с выходом при использовании контрольной прокариотической клетки-хозяина.
20. Способ по пп. 1-19, где культивирование не зависит от объема культивирования.
21. Способ по п. 1 или 18, в котором рекомбинантный белок представляет собой рекомбинантный полипептид или выделенное антитело.
22. Способ по п. 1 или 18, в котором прокариотической клеткой-хозяином является Escherichia coli (Е. coli), Enterobacter, Azotobacter, Erwinia, Bacillus, Pseudomonas, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Serratia, Shigella, Rhizobia, Vitreoscilla и Paracoccus.