КОМПОЗИЦИЯ КЛЕЩЕЙ, СОДЕРЖАЩАЯ ХИЩНОГО КЛЕЩА И ИММОБИЛИЗОВАННУЮ ЖЕРТВУ, КОНТАКТИРУЮЩАЯ С АГЕНТОМ, УНИЧТОЖАЮЩИМ ГРИБОК, И СПОСОБЫ И ПРИМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДАННОЙ КОМПОЗИЦИИ
MITES COMPOSITION CONTAINING PREDATORY MITE AND IMMOBILIZED PRAY IN CONTACT WITH AGENT DESTROYING FUNGUS AND RELATED METHODS AND APPLICATIONS USING SAID COMPOSITION

Данное изобретение в целом касается области биологической защиты сельскохозяйственных культур путем применения хищных клещей. Более конкретно данное изобретение касается клещевой композиции, которая содержит хищного клеща и жертву. Такая клещевая композиция пригодна для разведения хищных клещей и/или для защиты сельскохозяйственных культур с применением хищных клещей.
Применение хищных клещей для биологической защиты сельскохозяйственных культур становится все более популярным в сельском хозяйстве и садоводстве. Ныне хищные клещи семейств Phytoseiidae, Laelapidae, Macrochelidae, Parasitidae, Tydeidae, Cheyletidae, Cunaxidae, Erythraeidae, Stigmaeidae используются или предлагаются для борьбы с вредителями, такими, как растениеядные клещи, трипсы и белокрылки. Предпосылкой коммерческого использования хищных клещей как средств биологической борьбы с вредителями является их доступность по приемлемым ценам. Для этого важной является возможность их эффективного продуцирования в большом количестве.
За последние годы способы массового разведения в значительной мере усовершенствовали благодаря доступности жертв (также известных как хозяева) для разведения хищных клещей. Многие из этих жертв для разведения, которые недавно стали доступны, являются клещами Astigmatid. Например, можно обратиться к международным заявкам Koppert B.V., WO 2006/057552, WO 2006/071107 и WO 2007/075081. Кроме того, в документах WO 2008/015393, WO 2008/104807 и ЕР 2232986 описываются дополнительные комбинации видов клещей, которые принадлежат к хищникам Phytoseiid и жертвам Astigmatid. Было выявлено, что такие виды клещей-жертв Astigmatid также пригодны для массового разведения хищников других видов, таких как хищные виды клещей Mesostigmatid и хищные виды клещей Prostigmatid.
Несмотря на прогресс в обеспечении доступности жертв для разведения, сохраняются определенные ограничения в массовом разведении хищных клещей, и для массового разведения было бы полезным устранение таких ограничений.
Например, живые жертвы для разведения также могут быть источником стресса для хищных клещей вследствие их подвижности, их метаболической активности, создающей метаболические газы и метаболическое тепло. Эти эффекты, в частности, могут быть очень значительными при высокой плотности популяции. Кроме того, живые особи жертв могут продуцировать и секретировать определенные химические вещества, такие как феромоны тревоги, которые могут быть вредными для хищных клещей и даже могут действовать как защита от атакующих хищников. Эти зависимые от плотности стрессовые факторы могут приводить к замедлению развития популяции и снижению максимальной плотности популяции хищных клещей через сниженную скорость откладывания яиц, низкую выживаемость неполовозрелых и сокращенный срок жизни взрослых хищных клещей. Соответствующие решения согласно изобретению, направлены на устранение или уменьшение этих стрессовых факторов, и позволяют достичь увеличения плотности популяции при разведении и ускорить развитие популяции.
В ЕР 2380436 описывается клещевая композиция, которая содержит популяцию хищного вида Phytoseiid и популяцию вида Astigmatid, и способ разведения хищных клещей Phytoseiid с применением композиции. Композиция характеризуется тем, что популяция вида Astigmatid является безжизненной в том смысле, что вообще не содержит живых особей Astigmatid (жертва является полностью инертной).
Композиция согласно ЕР 2380436 и ее применение при разведении хищного вида Phytoseiid может уменьшать или устранять вредные стрессовые факторы, вызванные живой жертвой. Однако, обеспечивая решение определенных проблем, эта композиция также имеет большие недостатки. Авторами данного изобретения было выявлено, что мертвые клещи Astigmatid также является хорошим субстратом для грибков и содействуют росту грибков. Эта проблема не освещается в источниках существующего уровня техники. Широкий рост грибков отрицательно влияет на скорость развития популяции и максимальную плотность популяции хищных клещей.
Данное изобретение основывается на выявлении того факта, что требуется надлежащее угнетение грибков при разведении хищных клещей на популяции жертв для разведения, которая содержит значительное количество мертвых или иным образом иммобилизованных особей жертв.
Таким образом, согласно первому аспекту, изобретение касается клещевой композиции, которая включает:
- популяцию особей вида хищного клеща;
- источник питания для хищных особей, которм включает особей, по крайней мере, одного вида клещей Astigmatid, причем, по крайней мере, часть особей Astigmatid является иммобилизованной;
- необязательно источник питания, приемлемый для особей Astigmatid;
- и, необязательно, носитель для особей вида клещей;
причем иммобилизованные особи Astigmatid и необязательный источник питания для особей Astigmatid приводятся в контакт с агентом, сдерживающим развитие грибков.
Композиция включает особей популяции хищного клеща. Как известно специалистам в данной области, хищные клещи Phytoseiid имеют природную среду на растениях, где они питаются организмами-вредителями (насекомыми и клещами). Они могут быть выделены из их природной среды, как описано в публикации de Moraes et al., 2004. Хищные клещи, которые являются особенно пригодными с точки зрения данного изобретения, могут быть выбраны среди хищных видов клещей Mesostigmatid, хищных видов клещей Prostigmatid, в частности:
- видов клещей Mesostigmatid, выбранных среди:
i) Phytoseiidae, например, среди:
- подсемейства Amblyseiinae, например, из рода Amblyseius, например, Amblyseius andersoni, Amblyseius aerialis, Amblyseius swirskii, Amblyseius herbicolus или Amblyseius largoensis, из рода Euseius, например, Euseius finlandicus, Euseius hibisci, Euseius ovalis, Euseius victoriensis, Euseius stipulatus, Euseius scutalis, Euseius tularensis, Euseius addoensis, Euseius concordis, Euseius ho или Euseius citri, из рода Neoseiulus, например, Neoseiulus barkeri, Neoseiulus californicus, Neoseiulus cucumeris, Neoseiulus longispinosus, Neoseiulus womersleyi, Neoseiulus idaeus, Neoseiulus anonymus, Neoseiulus paspalivorus, Neoseiulus reductus или Neoseiulus fallacis, из рода Amblydromalus например, Amblydromalus limonicus, из рода Typhlodromalus, например, Typhlodromalus aripo, Typhlodromalus laila или Typhlodromalus peregrinus, из рода Typhlodromips, например, Typhlodromips montdorensis, из рода Phytoseiulus, например, Phytoseiulus persimilis, Phytoseiulus macropilis, Phytoseiulus longipes, Phytoseiulus fragariae;
- подсемейства Typhlodrominae, например, из рода Galendromus, например, Galendromus occidentalis, из рода Typhlodromus, например, Typhlodromus pyri, Typhlodromus doreenae или Typhlodromus athiasae;
ii) Ascidae, например, из рода Proctolaelaps, например, Proctolaelaps pygmaeus (Muller); из рода Blattisocius, например, Blattisocius tarsalis (Berlese), Blattisocius keegani (Fox); из рода Lasioseius, например, Lasioseius fimetorum Karg, Lasioseius floridensis Berlese, Lasioseius bispinosus Evans, Lasioseius dentatus Fox, Lasioseius scapulatus (Kenett), Lasioseius athiasae Nawar & Nasr; из рода Arctoseius, например, Arctoseius semiscissus (Berlese); из рода Protogamasellus, например, Protogamasellus dioscorus Manson;
iii) Laelapidae, например, из рода Stratiolaelaps например, Stratiolaelaps scimitus (Womersley) (также отнесенного к роду Hypoaspis); Geolaelaps, например, Geolaelaps aculeifer (Canestrini) (также отнесенного к роду Hypoaspis); Androlaelaps, например, Androlaelaps casalis casalis (Berlese);
iv) Macrochelidae, например, из рода Macrocheles, например, Macrocheles robustulus (Berlese), Macrocheles muscaedomesticae (Scopoli), Macrocheles matrius (Hull);
v) Parasitidae, например, из рода Pergamasus например, Pergamasusquisquiliarum Canestrini; Parasitus, например, Parasitus fimetorum (Berlese), Parasitus bituberosus Karg;
- видов клещей Prostigmatid, например:
vi) Tydeidae, например, из рода Homeopronematus, например, Homeopronematus anconai (Baker); из рода Tydeus, например, Tydeus Iambi (Baker), Tydeus caudatus (Duges), Tydeus Iambi (Baker); из рода Pronematus, например, Pronematus ubiquitous (Mcgregor);
vii) Cheyletidae, например, из рода Cheyletus например, Cheyletus eruditus (Schrank), Cheyletus malaccensis Oudemans;
viii) Cunaxidae, например, из рода Coleoscirus, например, Coleoscirus simplex (Ewing), из рода Cunaxa, например, Cunaxa setirostris (Hermann);
ix) Erythraeidae, например, из рода Balaustium например, Balaustium putmani Smiley, Balaustium medicagoense Meyer & Ryke, Balaustium murorum (Hermann);
x) Stigmaeidae, например, из рода Agistemus, например, Agistemus exsertus Gonzalez; например, из рода Zetzellia, например, Zetzelliamali (Ewing).
В случае выбора вида Phytoseiid видом клеща в предпочтительном варианте является вид Phytoseiid, выбранный среди Amblyseius swirskii, Amblysieus aerialis, Amblyseius andersoni, Neoseiulus barken, Neoseiulus californicus, Neoseiulus cucumeris, Neoseiulus fallacis, Typhlodromips montdorensis или Amblydromalus limonicus.
Названия подсемейств, родов и видов клещей Phytoseiid, которые применяют в связи с этим изобретением, являются такими, как указано в публикации de Moraes, G.J. et al., 2004, если специально не указывается иное.
Виды других семьи представлены в публикациях Gerson U., Smiley R.L. and Ochoa R., 2003, Mites (Acari) for pest control (Blackwell Publishing). Следует отметить, что для некоторых видов клещей может использоваться альтернативное или эквивалентное названия. Например, специалистам в данной области, известно, что Amblydromalus limonicus также имеет альтернативное или эквивалентное названия Amblyseius limonicus и Typhlodromalus limonicus.
Популяция хищников в предпочтительном варианте является популяцией для разведения. В этом описании термин "разведение" следует понимать как такой, что включает размножение и увеличение популяции путем полового воспроизведения. Популяция для разведения может включать половозрелых взрослых особей обеих полов и/или особей обеих полов в других стадиях жизни, например, яйца, личинки и/или куколки, которые могут созревать в половозрелые взрослые особи. В альтернативном варианте, популяция для разведения может включать одну или несколько оплодотворенных самок. По сути, популяция для разведения способна увеличивать количество ее особей путем полового воспроизведения.
Клещевая композиция также включает источник питания для хищных особей, который включает особей, по крайней мере, одного вида клещей Astigmatid. Особи на одной или нескольких стадиях жизни выбранного вида клещей Astigmatid должны быть подходящей жертвой (источником пищи) для особей выбранного хищника. Выбор подходящих клещей Astigmatid как жертв для выбранных хищников принадлежит к сфере компетенции специалистов в данной области. Клещи Astigmatid могут быть выделены из их природной среды, как описано в публикации Hughes A.M., 1977, и могут содержаться и культивироваться, как описано в публикациях Parkinson, C.L. (1992) и Solomon, М.Е. & Cunnington, A.M. (1963).
Виды клещей Astigmatid могут быть выбраны среди:
i) Carpoglyphidae, например, из рода Carpoglyphus например, Carpoglyphus lactis;
ii) Pyroglyphidae, например, из рода Dermatophagoides например, Dermatophagoides pteronysinus, Dermatophagoides farinae; из рода Euroglyphus например, Euroglyphus longior, Euroglyphus maynei; из рода Pyroglyphus например, Pyroglyphus africanus;
iii) Glycyphagidae, например, из подсемейства Ctenoglyphinae, например, из рода Diamesoglyphus например, Diamesoglyphus intermedius или из рода Ctenoglyphus, например, Ctenoglyphusplumiger, Ctenoglyphus canestrinii, Ctenoglyphus palmifer; подсемейства Glycyphaginae, например, из рода Blomia, например, Blomia freemani или из рода Glycyphagus, например, Glycyphagus ornatus, Glycyphagus bicaudatus, Glycyphagus privatus, Glycyphagus domesticus, или из рода Lepidoglyphus, например, Lepidoglyphus michaeli, Lepidoglyphus fustifer, Lepidoglyphus destructor, или из рода Austroglycyphagus, например, Austroglycyphagus geniculatus; из подсемейства Aeroglyphinae, например, из рода Aeroglyphus, например, Aeroglyphus robustus; из подсемейства Labidophorinae, например, из рода Gohieria, например, Gohieria. fusca; или из подсемейства Nycteriglyphinae, например, из рода Coproglyphus, например, Coproglyphus stammerior из подсемейства Chortoglyphidae, например, рода Chortoglyphus, например, Chortoglyphus arcuatus, в предпочтительном варианте выбранные из подсемейства Glycyphaginae, в предпочтительном варианте выбранные из рода Glycyphagus или рода Lepidoglyphus, в наиболее предпочтительном варианте выбранные среди Glycyphagus domesticus или Lepidoglyphus destructor,
iv) Acaridae, например, из рода Tyrophagus, например, Tyrophagus putrescentiae, Tyrophagus tropicus; из рода Acarus, например, Acarus siro, Acarus farris, Acarus gracilis; из рода Lardoglyphus, например, Lardoglyphus konoi, из рода Thyreophagus, например, Thyreophagus entomophagus; из рода Aleuroglyphus, например, Aleuroglyphus ovatus.
v) Suidasiidae, например, из рода Suidasia, например, Suidasia nesbiti, Suidasia pontifica или Suidasia medanensis.
Ссылка на Astigmata содержится в публикации Hughes (1977). Оптимальные клещи Astigmatid могут быть выбраны среди Lepidoglyphus destructor, Carpoglyphidae, например, из рода Carpoglyphus, например, Carpoglyphus lactis, рода Thyreophagus, например, Thyreophagus entomophagus, Acaridae, Suidasia pontifica или Suidasia medanensis или видов Blomia.
Согласно данному изобретению, по крайней мере, часть особей Astigmatid является иммобилизованной. В контексте данного изобретения термин "иммобилизованные" означает, что особи Astigmatid были подвергнуты иммобилизационной обработке. Иммобилизационная обработка означает обработку, которая снижает подвижность, которую имеет особь Astigmatid на любой из стадий жизни. Подвижность является способностью к спонтанному и независимому движению.
Как известно специалистам в данной области, стадии жизни клещей Astigmatid, которые являются подвижными, являются личинки, куколки и взрослые особи. Таким образом, обработка, которая снижает подвижность в любой из этих стадий, должна рассматриваться как иммобилизационная обработка. Кроме того, виды обработки, которые препятствуют особям развиваться от недвижимой стадии жизни, например, от стадии яйца к подвижной стадии жизни, также должны рассматриваться как иммобилизационная обработка. Согласно предпочтительному варианту воплощения, популяция иммобилизованных особей клещей Astigmatid включает яйца, личинки, куколки или взрослых особей, в предпочтительном варианте - все эти стадии жизни. Согласно другому предпочтительному варианту воплощения, особи Astigmatid окончательно иммобилизируют. Обработка, которая вызывает гибель, может считаться окончательной иммобилизирующей обработкой.
Согласно изобретению, особи Astigmatid могут быть иммобилизованы путем иммобилизационной обработки, выбранной среди термической обработки, такой как замораживание, нагревание, холодовой шок или тепловой шок; химической обработки, такой как газовая или дымовая обработка, например, удушение газом или обработка спиртовыми или эфирными испарениями, в предпочтительном варианте - обработка испарениями этанола; путем лучевой обработки, такой как ультрафиолетовая, микроволновая или рентгеновская обработка; путем механической обработки, такой как интенсивное встряхивание или перемешивание, подвергание действию сдвижных усилий, столкновению; обработки давлением газа, такой как ультразвуковая обработка, изменение давления, в предпочтительном варианте понижение давления; электрической обработки, такой как смертельный электрошок; иммобилизации адгезивом; или иммобилизации вследствие голодания, такого как лишение воды и пищи; иммобилизации путем удушения, такого как временное удаление кислорода из атмосферы или замена кислорода другим газом. Специалистам в данной области очевидна возможность и способы такой обработки, результатом которой может быть иммобилизация особей Astigmatid, и то, что иммобилизационная обработка должна быть такой, чтобы особи Astigmatid оставались подходящими жертвами (источником питания) для особей хищных клещей.
Термическую обработку осуществляют путем подвергания особей Astigmatid на протяжении достаточно продолжительного времени действию температуры вне границ диапазона температуры окружающей среды, таким образом, чтобы могла быть вызвана иммобилизация. Температура вне границ диапазона температуры окружающей среды может быть выбрана, например, среди таких показателей: ≤3°C, ≤2°C, ≤1°C, ≤0°C, ≤-1°C, ≤-2°C, ≤-3°C, ≤-4°C, ≤-5°C, ≤-6°C, ≤-7°C, ≤-8°C, ≤-9°C, ≤-10°C, ≤-18°C, ≤-20°C. Не существует нижней границы для температуры вне границ диапазона температуры окружающей среды, отличной от практических ограничений, и температура вне границ диапазона температуры окружающей среды может представлять лишь -78°C, -79°C, -80°C, -194°C, -195°C, -196°C, -197°C. В альтернативном варианте температура вне границ диапазона температуры окружающей среды может быть выбрана среди ≥40°C, ≥41°C, ≥42°C, ≥43°C, ≥44°C, ≥45°C, ≥46°C, ≥47°C, ≥48°C, ≥49°C, ≥50°C. Температура вне границ диапазона температуры окружающей среды может достигать 55°C, 60°C или 65°C, 70°C, 75°C, 80°C.
2
2
2
Химическую обработку осуществляют путем подвергания особей Astigmatid на протяжении достаточно продолжительного времени действию иммобилизирующего химического вещества, таким образом, чтобы могла быть вызвана иммобилизация. Иммобилизирующее химическое вещество может быть в форме газа или дыма, например, газа, который вызывает удушение через вытеснение кислорода и/или токсичность, такого как CO, N, СО, NO, NO. В альтернативном варианте иммобилизирующее химическое вещество может быть другим химическим веществом, которое может быть вредным для физиологии животного, например, спиртом, таким как этанол или метанол, или комбинацией, или эфиром, таким как диэтиловый эфир. В предпочтительном варианте иммобилизирующее химическое вещество не должно оставлять токсичных следов, поскольку иммобилизованные особи Astigmatid служат источником питания для хищных клещей.
Лучевую обработку осуществляют путем подвергания особей Astigmatid на протяжении достаточно продолжительного времени иммобилизирующему облучению, таким образом, чтобы могла быть вызвана иммобилизация. Иммобилизирующее облучение может быть выбрано среди ультрафиолетового, рентгеновского или микроволнового облучения.
Иммобилизацию механическими средствами осуществляют любыми механическими средствами, которые позволяют рассеивать достаточное количество энергии для вызывания иммобилизирующего эффекта. Это может достигаться путем интенсивного встряхивания или перемешивания, в частности, в присутствии частичек, которые могут соударяться с клещами, которые подлежат иммобилизации. Соударения также может осуществляться путем ускорения клещей с помощью газового потока и ударения об определенное количество объектов, которые, по крайней мере, частично блокируют газовый поток, или путем помещения клещей в турбулентный газовый поток, в предпочтительном варианте - вместе с дополнительными частичками, которые переносятся турбулентным газовым потоком (таким как турбулентный поток воздуха) и обеспечения возможности соударения клещей с этими частичками. В альтернативном варианте также может применяться ультразвуковая обработка.
Согласно другому варианту воплощения, клещи Astigmatid могут быть иммобилизованы адгезивом. Например, путем приклеивания их к поверхности, в альтернативном варианте путем приклеивания их конечностей, таким образом, препятствуя их подвижности.
Голодание может быть еще одним средством достижения иммобилизации. Голодание может осуществляться через лишение воды или пищи. Лишение воды и пищи должны рассматриваться как обстоятельство, при котором количество доступной воды или пищи является меньшим, чем количество, необходимое для нормального обмена веществ при существующих условиях в среде нахождения клеща.
Иммобилизационная обработка должна быть достаточно эффективной для иммобилизации, по крайней мере, части особей клещей Astigmatid. По крайней мере, часть следует понимать как часть или практически всех. Часть иммобилизованных особей Astigmatid может составлять ≥10%, ≥20%, ≥30%, ≥40%, ≥50%, ≥60%, ≥70%, ≥80%, ≥90%, ≥95% или ≥97%. В предпочтительном варианте часть иммобилизованных особей Astigmatid составляет 50-90%, в предпочтительном варианте 70-90%. Часть иммобилизованных особей Astigmatid включает клещей Astigmatid на одной или нескольких стадиях жизни, выбранных среди яиц, личинок, куколок или взрослых особей.
Таким образом, согласно изобретению, нет необходимости в том, чтобы популяция особей Astigmatid была полностью мертвой или инертной (поскольку может существовать неиммобилизованная подвижная часть) для получения положительного эффекта относительно снижения стресса, который создается для хищников особями Astigmatid. Кроме того, присутствие малой популяции подвижных особей Astigmatid может обеспечивать дополнительные преимущества благодаря их микофагальному поведению, продуцированию противогрибковых эксудатов и/или обеспечению свежего (живого) источника питания, как обсуждается ниже. Также нет необходимости в метаболической неактивности иммобилизованных особей Astigmatid. Некоторые типы иммобилизационной обработки допускают сохранение метаболической активности, вместе с тем препятствуя подвижности. Метаболично активные иммобилизованные особи Astigmatid также могут рассматриваться как источник свежей пищи для хищников.
Согласно изобретению, иммобилизованные особи Astigmatid и любые неиммобилизованные особи, в случае присутствия, могут принадлежать к одному виду. Однако, согласно некоторым вариантам воплощения, иммобилизованные особи Astigmatid и любые неиммобилизованные особи, в случае присутствия, в альтернативном варианте могут принадлежать к разным видам. Это позволяет сделать разнообразным выбор видов Astigmatid, присутствующих в композиции. Особям определенного вида может быть отдано преимущество как иммобилизованному источнику пищи, тогда, как особям другого вида может быть отдано преимущество учитывая функции, которые выполняются живыми особями, такие как угнетение грибков.
В композиции согласно изобретению соотношения хищных особей с особями Astigmatid может составлять приблизительно от 100:1 до 1:100, например, приблизительно от 1:1 до 1:50, например, приблизительно 1:4, 1:10, 1:20 или 1:30. Таким образом, композиция согласно изобретению может иметь меньшее соотношение хищных особей с особями Astigmatid. Таким образом, для хищников доступно большее количество жертв. Это обеспечивает преимущество при разведении хищных клещей.
Как обсуждалось выше для композиции согласно данному изобретению, большая плотность хищников может поддерживаться в среде, которой включает носитель. Таким образом, согласно предпочтительному варианту воплощения, композиция включает носитель и содержит ≥10, ≥50, ≥100, ≥150, ≥200, 250, ≥300, ≥350, ≥400, до 450 хищных особей, в предпочтительном варианте особей Phytoseiid, на мл носителя.
Для угнетения грибков иммобилизованные особи Astigmatid приводятся в контакт с агентом, сдерживающим развитие грибков. При контактировании иммобилизованных особей Astigmatid с агентом, сдерживающим развитие грибков, агент, сдерживающий развитие грибков, получает доступ к иммобилизованным особям Astigmatid, в предпочтительном варианте практически всем иммобилизованным особям Astigmatid, таким образом, чтобы он мог вызывать противогрибковое действие. Таким образом, контактирование с агентом, сдерживающим развитие грибков, обеспечивает сдерживающий развитие грибков эффект. Как понятно специалистам в данной области, этот сдерживающий развитие грибков эффект должен быть достаточным для обеспечения возможности разведения хищников в композиции. Благодаря контакту с иммобилизованными особями Astigmatid с агентом, сдерживающим развитие грибков, любой материал, связанный с иммобилизованными особями Astigmatid, такой как источник питания для этих особей Astigmatid, также может контактировать с агентом, сдерживающим развитие грибков, и, таким образом, также может эффективно подвергаться обработке, сдерживающей развитие грибков.
Агентом, сдерживающим развитие грибков, может быть любой агент, который сдерживает рост грибков, например, путем замедления или препятствования росту грибков, например, путем препятствования метаболизму грибков или сдерживанию роста грибков путем разрушения грибковой биомассы. Агент, сдерживающий развитие грибков, может включать химические агенты, сдерживающие развитие грибков, такие как природный или синтетический фунгицид, например, природный фунгицид, выбранный среди цитраля, нераля, 2,3-эпоксинераля, гераниаля, фарнезаля, α-акарадиаля, β-акарадиаля или натамицина (пимарицина).
В альтернативном варианте агент, сдерживающий развитие грибков, может включать биологический агент, сдерживающий развитие грибков, такой как популяция особей клещей, которые питаются грибками. Клещи, которые питаются грибками (или микофагальные клещи), являются клещами, которые питаются грибковой биомассой и, таким образом, могут снижать и сдерживать рост грибков. В предпочтительном варианте особи клещей, которые питаются грибками, выбирают среди видов Astigmatid, таких как виды, выбранные среди Acaridae, например, Tyrophagus putrescentiae, Thyreophagus entomophagus, Acarus farris, Acarus siro, Aleuroglyphus ovatus; Glycyphagidae, например, Lepidoglyphus destructor, Glycyphagus domesticus; Carpoglyphidae, например, Carpoglyphus lactis; Suiidasidae, например, Suiidasia pontifica, Suidasia medanensis, Suiidasia nesbiti; Pyroglyphidae, например, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus. Специалистам в данной области должно быть понятно, что для выполнения их микофагальной функции особи клещей, которые питаются грибками, должны быть живыми, в предпочтительном варианте - должны быть подвижными. Подвижные особи, которые питаются грибками, могут составлять, по крайней мере, часть неиммобилизованной части особей Astigmatid.
Биологический агент, сдерживающий развитие грибков, также может быть выбран как популяция видов клещей, которые продуцируют противогрибковые эксудаты, такие как цитраль, нераль, гераниаль, фарнезаль, α-акарадиаль или β-акарадиаль. Такие виды клещей, которые продуцируют противогрибковые эксудаты, могут быть выбраны из ряда Astigmata, в предпочтительном варианте - среди Lepidoglyphus destructor, Acarus siro, Lardoglyphus konoi, Caloglyphus polyphyllae; Tyrophagus putresecntiae, Tyrophagus neiswanderi, Tyrophagus pernisciosus; Rhizoglyphus robini; из рода Carpoglyphidae, например, Carpoglyphus lactis; среди Suiidasidae, например, Suiidasia Pontifica, Suidasia medanensis, Suiidasia nesbiti. Для особей клещей, которые продуцируют противогрибковые эксудаты, подвижность не обязательна. Определенные типы иммобилизационной обработки, такие как иммобилизация путем применения адгезива или некоторых способов механической иммобилизации, могут допускать сохранение метаболической активности продуцирующих противогрибковые эксудаты особей клещей, таким образом, также допуская продуцирование противогрибковых эксудатов. Однако преимущество отдают варианту, в котором при применении продуцирующие противогрибковые эксудаты особи клещей являются подвижными. Таким образом, противогрибковые эксудаты могут эффективнее распределяться в композиции. Подвижные продуцирующие противогрибковые эксудаты особи клещей могут составлять, по крайней мере, часть неиммобилизованной части особей Astigmatid.
Выбор видов клещей, которые питаются грибками, и видов клещей продуцирующих противогрибковые эксудаты из Astigmata считается оптимальным с учетом того факта, что этот ряд охватывает много видов, которые имеют нужную микофагальное поведение или активность в продуцировании противогрибковых эксудатов. Кроме того, виды этого ряда также могут служить жертвами для особей хищных клещей. Подвижные (неиммобилизованные) особи Astigmatid могут обеспечивать дополнительный источник питания для хищных особей. Оно представляет собой источник свежей пищи для хищников. Это может быть важным для обеспечения хищников неустойчивыми питательными веществами, такими как витамины, которые не могут быть в достаточной мере сохранены в клещах, которые являются иммобилизованными жертвами. Это может улучшать состояние здоровья хищных клещей. Это состояние здоровья может быть фактором, который содействует адаптивности и/или подвижности хищников в связи с их хищническим поведением.
Согласно варианту воплощения изобретения, композиция включает питательное вещество, пригодное для особей Astigmatid. Выбор пригодных питательных веществ принадлежит к сфере компетенции специалистов в данной области и описывается, например, в документах WO 2006/057552, WO 2006/071107, WO 2007/075081, WO 2008/015393, WO 2008/104807 и ЕР 2232986. Присутствие пригодного питательного вещества является благоприятным в случае, если композиция включает живых особей Astigmatid. Но и в случае, если композиция включает лишь мертвых особей Astigmatid, питательное вещество может присутствовать в композиции вследствие перенесения источника питания из среды разведения клещей Astigmatid.
В этом состоит основное отличие от композиции согласно ЕР 2380436, которая обсуждалась выше. Любые остатки источника питания для клещей Astigmatid являются потенциальным субстратом для грибков и содействуют росту грибков. Таким образом, в ЕР 2380436 требуется удаление источника питания. В документе ЕР 2380436 предлагается удалять источник питания путем голодания. Однако это непрактично и означает, что разведение клещей Astigmatid должно регулироваться на основе состояния источника питания вместо развития популяции клещей Astigmatid. Для практического разведения это нежелательно. Кроме того, беспрерывный процесс становится невозможным и разведение должно осуществляться периодически. Удаление источника питания любыми другими средствами трудоемко и может приводить к потере биомассы Astigmatid, создавая источник неэффективности. В композиции согласно данному изобретению удаление источника питания не является необходимым, если учесть, что согласно некоторым вариантам воплощения, для угнетения грибков источник питания может контактировать с агентом, сдерживающим развитие грибков. Контактирование с агентом, сдерживающим развитие грибков, обеспечивает сдерживающий развитие грибков эффект. Как должно быть понятно специалистам в данной области, этот сдерживающий развитие грибков эффект должен быть достаточным для обеспечения возможности разведения хищников в композиции.
В предпочтительном варианте воплощения композиция включает носитель для особей клещей. Носитель может быть любым твердым материалом, который пригоден для обеспечения поверхности носителя для особей. В предпочтительном варианте носитель обеспечивает пористую среду, которой дает возможность обмена метаболических газов и метаболического тепла, производимого популяциями клещей, метаболической активностью носителя, источником питания клещей-жертв Astigmatid и микроорганизмами, которые растут на среде. Примерами пригодных носителей являются растительные материалы, такие как отруби (пшеничные), древесная пыль, перемолотые кукурузные початки, вермикулит и т.д. Если композиция включает питательное вещество, пригодное для особей Astigmatid, сам носитель может включать пригодное питательное вещество. Применение носителя, который включает тонко измельченные элементы носителя, является распространенным, учитывая возможность поддержания культуры клещей как трехмерной культуры.
Согласно предпочтительному варианту воплощения, носитель для особей вида клещей включает элементы носителя, в предпочтительном варианте - элементы носителя, которые имеют наиболее длинную ось приблизительно 1,0-15,0 мм, например, 3,0-9,0 мм, и складывание элементов носителя включает средства защиты для особей хищных клещей. В общих чертах средство защиты может определяться как место проживания, которое обеспечивает хранилище от влияния окружающей среды. Хранилища носителя согласно изобретению предусмотрено для особей клещей. На основе открытия согласно данному изобретению в комбинации с общеизвестной информацией специалист в данной области сможет понять конструкционные требования к хранилищу для клещей. Таким образом, специалист в данной области сможет разработать и/или выбрать пригодные носители, которые включают хранилища для клещей, в частности хранилища, пригодные для коммерческих клещей, выбранных среди хищных клещей или жертв для разведения.
Согласно варианту воплощения изобретения, хранилище может быть предусмотрено в зоне, где материал элемента носителя защищает особь клеща, если он находится в этой зоне, от окружающей среды в, по крайней мере, 3-х направлениях, которые являются ортогональными или обратными относительно друг друга. Под защитой от окружающей среды следует понимать, что она, по крайней мере, уменьшает, в предпочтительном варианте ограничивает, и в наиболее предпочтительном варианте, по сути, устраняет неблагоприятное взаимодействие с окружающей средой. Такое неблагоприятное взаимодействие с окружающей средой, в частности, создается или вызывается другими клещами в композиции, например, передвижением и связанным с ним телесным контактом с другими клещами. Но также может существовать канибалистическое поедание особями одного вида, в случае, если клещ является хищным клещом. Следует понимать, что все хищные клещи в определенной мере демонстрируют канибалистическое поведение. Такое неблагоприятное взаимодействие отрицательно влияет на скорость развития популяции, поскольку отрицательно влияет на один или несколько факторов, к которым принадлежат скорость откладывания яиц, выживаемость и время жизни особей клещей. Интенсивность такого неблагоприятного взаимодействия между конспецифическими особями хищных клещей по обыкновению увеличивается при увеличении плотности популяции. Однако коммерческие производители клещей стараются достичь по возможности большей плотности популяции и по возможности большей скорости развития популяции для максимального снижения производственных затрат. Согласно варианту воплощения изобретения, хранилище может обеспечиваться путем защиты особей клещей от неблагоприятного взаимодействия. Эта защита может обеспечиваться путем уменьшение доступа к особям клещей.
Как должно быть понятно, направления, которые являются ортогональными или обратными относительно друг друга, отвечают направлениям вдоль 6 осей (положительной X, отрицательной X, положительной Y, отрицательной Y, положительной Z, отрицательной Z) воображаемой ортогональной (или декартовой) трехмерной системы координат в направлении от точки отсчета (0,0,0), причем особь клеща является точкой отсчета. Три направления являются перпендикулярными (ортогональными) или обратными. В трехмерном пространстве максимальное количество этих направлений составляет 6, как показано на Фигуре 1.
Согласно варианту воплощения изобретения, особь клеща, находясь в зоне хранилища, защищена от окружающей среды в, по крайней мере, 3 таких направлениях, в предпочтительном варианте в, по крайней мере, 4 таких направлениях, в наиболее предпочтительном варианте в, по крайней мере, 5 таких направлениях, например, в 5 таких направлениях. Защита в 3 таких направлениях может обеспечиваться конструкцией, подобной углу, образованному 3 плоскостями, как показано на Фигуре 2, или конструкцией, представленной на Фигуре 3. Защита в, по крайней мере, 4 таких направлениях может обеспечиваться такой конструкцией, как "коробка", открытой с 2-х сторон, как показано на Фигуре 4. Защита в 5 направлениях должна обеспечиваться в ситуации, представленной на Фигуре 3, где 5 горизонтальная плоскость находится на боковой стенке 4-плоскостной "коробки", таким образом, что образуется открытый куб.
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
Для защиты особей клещей от внешнего влияния, вызванного другими клещами в композиции, оптимальный размер хранилищ рассчитывают таким образом, чтобы объем хранилища составлял 1-140 мм, например, 2-120 мм, 2-100 мм, 2-80 мм, 2-70 мм, 2-60 мм, 2-50 мм, 2-40 мм, 2-30 мм, 2-25 мм, 2-20 мм, 2-18 мм, 2-16 мм, 2-14 мм, 2-12 мм, 2-10 мм, 2-8 мм, 2-6 мм или 2-4 мм. Это уменьшает вероятность присутствия в хранилище чрезмерного количества особей клещей, что может создавать неблагоприятный эффект.
2
2
2
2
2
Очевидно, что хранилища должны быть доступны для особей клещей. В этом отношении следует отметить, что зоны, которые являются недоступными для клещей, не могут рассматриваться как хранилища. Согласно некоторым вариантам воплощения изобретения, для того, чтобы иметь надлежащий доступ для особей клещей, зона может иметь доступ с диаметром доступа по крайней мере 0,3-1,2 мм, например, 0,5-1,0 мм или 0,5-0,8 мм, и площадь доступа, по крайней мере, 0,25-1,44 мм, 0,30-1,20 мм, 0,30-1,00 мм, 0,30-0,80 мм, 0,30-0,90 мм.
Хранилища для клещей могут обеспечиваться полостями, такими как полости, образованные углублениями, вырезами, порами, камерами, кавернами, нишами, раковинами, карманами, трубками, куполами, кюветами и подобными образованиями. Такие полости, которые в предпочтительном варианте отвечают представленным выше размерам касательно объема и/или доступа, являются приемлемыми как хранилища для клещей.
Хранилища для особей клещей могут присутствовать на или в отдельных элементах носителя присутствующих в кладке. То есть, отдельные элементы носителя в кладке включают конструкции, приемлемые как хранилища для клещей. В альтернативном варианте хранилища для клещей могут быть образованы между элементами носителя в кладке. То есть, среди элементов носителя в кладке много элементов носителя вместе образуют конструкции, приемлемые как хранилища для клещей. "Складывание элементов носителя" следует понимать как трехмерное упорядочивание многих элементов носителя. Термин "упорядочивание" включает случайное упорядочивание.
Согласно данному изобретению, могут применяться элементы носителя, произведенные из половы. Специалистам в данной области известно, что термин "полова" означает сухую чешуяподобную защитную оболочку (шелуху) семян травянистых видов (в частности, злаков) или другой подобный мелкий, сухой, чешуяподобный растительный материал, такой как чешуяподобные части цветков или мелко нарезанная солома. Согласно предпочтительному варианту воплощения полова является производной травянистых видов (Роасеае или, в альтернативном варианте, Gramineae), в наиболее предпочтительном варианте из злаковых культур, таких как пшеница, рис, рожь, овес или просо. Особое преимущество отдают шелухе. В частности, шелуха из проса имеет оптимальные внешние и внутренние размеры, которые делают ее наиболее пригодной в качестве субстрата, который обеспечивает соответствующие хранилища.
К видам, которые охватываются термином "просо" согласно данному изобретению, принадлежат: просо африканское или посевное (Pennisetum glaucum); просо итальянское (Setaria italica); просо обычное, сорго метельчатое, просо истинное или просо белое (Panicum miliaceum); просо пальчатое (Eleusine согасапа) (в Индии также известно как Ragi, Nachani или Mandwa), индийское куриное просо или Sawa (Echinochloa frumentacea); японское петушиное просо (Echinochloa esculenta); паспалум шершавый (Paspalum scrobiculatum); просо южное (Panicum sumatrense); просо гвинейское (Brachiaria deflexa = Urochloa deflexa); просо ветвистое (Urochloa ramosa = Brachiaria ramosa = Panicum ramosum). Теф (Eragrostis tef) и фонио (Digitaria exilis) также часто называют просом, реже - сорго (Sorghum spp.) или слезы Иова (Coix lacrima-jobi). Согласно данному изобретению, эти виды также определяются как просо.
Кроме размеров элементов носителя и их структурной конфигурации, которые являются приемлемыми для обеспечения хранилищ для клещей, преимущество отдают элементам носителя, которые являются инертными с точки зрения биологического распада. Это означает, что материал носителя является плохим субстратом для развития микроорганизмов, таких как грибки и/или бактерии. Это позволяет держать под контролем рост микробов, например, рост грибков, что может быть потенциальной проблемой при определенных условиях разведения. Полова, в частности, обсуждаемые выше разновидности половы, которым отдают предпочтение, являются плохим субстратом для развития микроорганизмов, в частности, для грибков.
Согласно еще одному аспекту, данное изобретение касается способа разведения хищных клещей, который включает:
(i) получение композиции согласно изобретению
(ii) предоставление хищным особям возможности питаться особями популяции Astigmatid.
Способы разведения хищных клещей, при которых популяцию хищников объединяют с популяцией клещей Astigmatid, и особям хищников предоставляют возможность питаться особями популяции Astigmatid, известны специалистам в данной области. Способ согласно данному изобретению отличается от способов существующего уровня техники тем, что в композиции согласно изобретению, по крайней мере, часть особей Astigmatid является иммобилизованной, и иммобилизованные особи Astigmatid вводятся в контакт с агентом, сдерживающим развитие грибков.
Технические аспекты композиции согласно изобретению уже обсуждались выше.
Еще один аспект изобретения касается применения композиции, которая включает популяцию особей, по крайней мере, одного вида Astigmatid, причем, по крайней мере, часть особей Astigmatid является иммобилизованной, и иммобилизованные особи Astigmatid приводятся в контакт с агентом, сдерживающим развитие грибков, для разведения хищного клеща. Как станет очевидно после ознакомления с представленным выше описанием и представленными ниже экспериментами, применение популяции видов клещей Astigmatid, в которой часть особей Astigmatid является иммобилизованной, имеет определенные преимущества для разведения хищных клещей.
Еще один аспект изобретения касается системы для разведения хищных клещей, причем система включает контейнер, в котором содержится композиция согласно изобретению. Согласно предпочтительному варианту воплощения, контейнер в предпочтительном варианте включает выход для, по крайней мере, одной подвижной стадии жизни хищного клеща, в предпочтительном варианте выход, пригодный для обеспечения длительного высвобождения, по крайней мере, одной вышеупомянутой стадии жизни.
Согласно еще одному аспекту, изобретение касается применения композиции согласно изобретению или системы разведения согласно изобретению для контроля вредителей сельскохозяйственных культур.
Вредители могут быть выбраны среди белокрылок, таких как Trialeurodes vaporariorum или Bemisia tabaci; трипсов, например, видов Thrips tabaci или Frankliniella, например, Frankliniella occidentalis, клещей паутинных, таких как Tetranychus urticae, или других растениеядных клещей, таких как Polyphagotarsonemus.
Сельскохозяйственные культуры могут быть выбраны из, но не ограничиваются, (тепличных) овощных культур, таких как томаты (Lycopersicon esculentum), перец (Capsicum аппиит), баклажаны (Solanum melogena), тыквенные (Cucurbitaceae), такие как огурцы (cucumis sativa), дыни (cucumis melo) арбузы (Citrullus lanatus); бобы (Phaseolus vulgaris); ягоды (такие как клубника (Fragaria x annanassa), малина (Rubus ideaus)); декоративные (тепличные) культуры (такие как розы, герберы, хризантемы) или древесные культуры, такие как цитрусовые.
Еще один аспект изобретения касается способа биологической борьбы с вредителями в сельскохозяйственных культурах. Способ включает применение композиции согласно изобретению в указанной культуре. Вредитель и культура могут быть выбраны как описано выше.
При осуществлении способа согласно изобретению композицию применяют путем нанесения определенного количества композиции вблизи растений, например, на растения или на грунт. Композиция может наноситься на культурное растение путем простого распространения на растениях или на грунте, на котором выращивают растения, согласно устойчивой практике применения композиций хищных клещей для дополнительной биологической борьбы с вредителями. Количество композиции, которая может быть применена для каждого отдельного культурного растения путем простого распространения, может составлять 20 на 1-20 мл, например, 1-10 мл, в предпочтительном варианте 2-5 мл. В альтернативном варианте композиция может наносится на ряд культурных растений в системе разведения согласно изобретению, которая пригодна для высвобождения хищных клещей в культурах. Система разведения может применяться вблизи ряда культурных растений, например, на растениях или на грунте. При осуществлении способа биологической борьбы с вредителями согласно изобретению применение композиции относительно всех культурных растений не является обязательным. Коммерческие сорта по обыкновению имеют плотность культивирования 30. Хищные клещи могут распространятся от одного растения к другому. Количество культурных растений, которые должны подвергаться действию композиции согласно изобретению с целью достаточной защиты урожая, может зависеть от конкретных обстоятельств и может быть легко определена специалистом в данной области на основе общеизвестных знаний в данной области. Обычно более решающим является количество высвобожденных хищных клещей на гектар. Это количество может составлять 1000-3 млн. на гектар, по обыкновению 250000-1 млн. или 250000-500000.
Дальше изобретение объясняется подробнее со ссылкой на сопроводительные фигуры и примеры. Следует отметить, что эти фигуры и примеры являются лишь иллюстрацией и никоим образом не ограничивают объем изобретения, определенный формулой изобретения.
Фигура 1 представляет трехмерную ортогональную (декартову) систему координат. Вдоль осей Χ, Υ, Ζ может быть определено шесть направлений от точки отсчета (0,0,0) (вдоль положительной оси X, вдоль отрицательной оси X, вдоль положительной оси Υ, вдоль отрицательной оси Υ, вдоль положительной оси Ζ, вдоль отрицательной оси Ζ). Три направления являются перпендикулярными (ортогональными) или обратными.
Фигура 2 представляет общую схему хранилища, в котором особь клеща (1) защищена от взаимодействия с его окружением в трех направлениях, указанных стрелками (2), (3), (4). Защита обеспечивается в плоскости пола (5), первой боковой плоскости (6) и второй боковой плоскости (7). Взаимодействующие типы влияния могут поступать от окружения с направлений, обозначенных стрелками (8), (9), (10).
Фигура 3 представляет общую схему альтернативного хранилища, в котором особь клеща (1) защищена от взаимодействия с его окружением в трех направлениях, указанных стрелками (2), (3), (4). Защита обеспечивается в плоскости пола (5), первой боковой плоскости (6) и второй боковой плоскости (7). Взаимодействующие типы влияния могут поступать от окружения с направлений, обозначенных стрелками (8), (9), (10).
Фигура 4 представляет общую схему хранилища, в котором особь клеща (1) защищена от взаимодействия с его окружением в четырех направлениях, обозначенных стрелками (2), (3), (4), (8). Защита обеспечивается в плоскости пола (5), первой боковой плоскости (6), второй боковой плоскости (7) и третей боковой плоскости (11). Взаимодействующие типы влияния могут поступать от окружения с направлений, обозначенных стрелками (9), (10). Понятно, что особь клеща может быть дополнительно защищена от взаимодействия с окружением, если покрывающая плоскость находится на боковых плоскостях (6), (7), (11). Кроме того, защита от окружения может дополнительно усиливаться, если дополнительная боковая плоскость располагаться перпендикулярно боковой плоскости (7). Таким образом, особь клеща (1) также должна быть защищена от окружения в направлении, обозначенном стрелкой (10).
Следует понимать, что хотя все схематические изображения на Фигурах 1-4, представлены в прямоугольной системе координат, подобный защитный эффект может обеспечиваться и непрямоугольными образованиями, например, углублениями, вырезами, порами, камерами, кавернами, нишами, раковинами, карманами, трубками, куполами, кюветами и подобными образованиями.
ПРИМЕР 1
Установки
Тест на плесневение проводили на 6 образцах тестирования (А), (В), (С), (А+), (В+), (С+). Эти смеси приготавливали из нижеприведенных ингредиентов. (1) популяция чистого Carpoglyphus lactis, состоящая из всех подвижных стадий жизни. Этот образец не был связанным с частичками пищи и имел содержание влаги 70% (±1%). (2) Клещей из (1) замораживали при -20°C в закрытом контейнер на протяжении 24 часов и вблизи от ряда культурных растений размораживали перед использованием. (3) состоит из Carpoglyphus lactis в среде его разведения (содержит отруби и частички пищи), замороженного на 4 дня при -20°C в закрытом контейнере. (4) влажный вермикулит (размер частичек <2 мм, содержание влаги 15,8%). Применяя эти ингредиенты, готовили несколько смесей в двух экземплярах в небольших чашках. В такой же набор чашек, ко всем смесям прибавляли 0,1 г (±0,01 г) живых клещей Carpoglyphus lactis (чистых). Степень плесневения (рост мицелия и спорообразование) наблюдали на 2, 4 и 6-й день при двух показателях влажности (93% и 85%) и 25°C.
Результаты
Результаты представлены ниже в Таблице 1.1.
- означает отсутствие плесневения, + легкая, ++ средняя и +++ максимальная степень плесневения (пища полностью покрыта грибками и недоступна).
Результаты показывают, что плесневение органического материала четко наблюдалось во всех чашках, которые не содержали живых клещей С. lactis, начиная с 4-го дня. Четко наблюдалось, что замороженные клещи-жертвы в чистой форме были восприимчивыми к плесневению. В случае включения среды разведения клещей-жертв восприимчивость к плесневению возрастала. Живые клещи исчезали, когда питательный материал был недоступен (А+ и С+), а следовательно, появлялась возможность плесневения.
Типы плесневения были разными по морфологии. Когда органический материал находился в тесном контакте (без носителя или маленькие частички), мицелий образовывал полную сеть и вызывал слипание смеси. Когда частички пищи отделялись носителем, спорообразование было более выразительным.
Плесневение всех типов пищи наблюдалось во всех смесях и при всех значениях влажности, приемлемых для разведения хищных клещей. Уменьшение части органического материала (клещей-жертв или пищи для клещей-жертв) снижало степень или скорость плесневения. Прибавление подвижных клещей Carpoglyphus lactis (10% от общего количества пищи) снижало рост мицелия, а следовательно, позволяло поддерживать доступность мертвых клещей-жертв для хищников.
ПРИМЕР 2
Установки
Для иммобилизации клещей-жертв 7,5 г Carpoglypus lactis комбинировали с 0,75 г чистого этанола в 100 мл стаканах. Стаканы закрывали и встряхивали для перемешивания содержимого. Через 2, 3 или 4 часа при окружающей температуре стаканы снова открывали. Для того, чтобы материал мог дышать, а этанол мог испариться, стаканы закрывали крышками с ситом. Стаканы хранили при 21°C и относительной влажности 65-75% на протяжении всего эксперимента. Для наблюдения за активностью клещей, в разное время после начала обработки этанолом отирали относительно подвижные образцы приблизительно по 0,5 г. Из этих образцов брали подвижных клещей, применяя модифицированную воронку Берлезе, и подсчитывали.
Результаты
Результаты представлены ниже в Таблице 2.1.
В таблице показано количество клещей, которые продемонстрировали видимую активность (на грамм среды в разные моменты после применения этанола). Необработанный материал в результате дает приблизительно 15000 активных особей на грамм (взрослых, куколок и личинок вместе). Через два часа после применения этанола большинство клещей продолжали демонстрировать активность, но большей частью это были неконтролируемые движения конечностями. После трех часов действия этанола большинство клещей были неактивными. После 4 часов лишь несколько особей демонстрировали слабые движения конечностями. Через 1 день почти все движения прекратились и можно было наблюдать лишь случайных подвижных особей. В первые несколько дней едва ли можно было наблюдать каких-либо активных клещей. Клещи, которые были активными в этот период, представляли все стадии жизни. Через несколько дней активность клещей начинала медленно восстанавливаться.
ПРИМЕР 3
Установки
Приемлемость обработанных этанолом клещей-жертв для хищных клещей подвергли испытанию в эксперименте с выбором. Партию предназначенных для разведения Carpoglyphus lactis разделяли на три группы. Одна группа (группа Е) подвергалась обработке этанолом на протяжении трех часов, как описано выше. В то время когда проводили обработку этанолом, другу и третью группы помещали в морозильную камеру при -18°C. Через 18 часов обе группы вынимали из морозильной камеры. Одну группу (группу FE) подвергали дополнительной обработке этанолом, как описано выше, а другую группа (группа F) не подвергали обработке. Через 27 часов после начала обработки клещей-жертв полученный материал использовали в тесте тристороннего выбора A. limonicus. Небольшие порции приготовленной пищи помещали в три соединенные круглые чашки и в центр помещали определенное количество А. limonicus. На следующий день подсчитывали количество A. limonicus на каждом типе пищи. Эксперимент повторяли 10 раз.
Результаты
Результаты представлены на Фигуре 5 как среднюю часть клещей, взятых из пищи, которых подвергали разной обработке. "Усы" показывают стандартное отклонение. А. limonicus не отдает преимущества конкретным образцам по-разному обработанной пищи (ANOVA, Р=0,06), демонстрируя, что обработанный этанолом Carpoglyphus lactis, как типичный представитель клещей Astigmatid, является одинаково приемлемым как источник питания, по сравнению с замороженным Carpoglyphus lactis.
ПРИМЕР 4
Установки
В этом эксперименте использовали точно такой же материал, как и в эксперименте 3 (группы Е, F и FE). Через 27 часа после начала обработки клещей-жертв, материал использовали для начала эксперимента с хранением в условиях, подобных тем, что применяли для разведения хищных клещей. Небольшие чашки заполняли 0,6 г среды, по пять экземпляров для каждой обработки. Их хранили при 25°C и относительной влажности 93%. Качество среды оценивали каждый день.
Результаты
Группа Ε
Через 2 дня после помещения чашек в условия 25°C и 93% относительной влажности несколько клещей-жертв (приблизительно 1%) были активными. Первый рост грибков наблюдали на 7-и день с 0-5 небольшими участками мицелия на каждую чашку. В это время много клещей-жертв были активными, приблизительно 20% от начального количества клещей перед обработкой этанолом.
Группа F
Первый рост грибков наблюдали на 3-й день с 3-6 небольшими участками мицелия на каждую чашку. Через 5 дней 100% поверхности было покрыто белым мицелием. На 7-и день зеленые и желтые споридии покрывали 70-100% и 5-20% площади поверхности, соответственно.
Группа FE
Первый рост грибков наблюдали на 3-й день в нескольких образцах с 0-1 небольшими участками мицелия на каждую чашку. Через 5 дней 20% поверхности было покрыто белым мицелием. На 7-и день поверхность была полностью покрыта белым мицелием, а зеленые и желтые споридии покрывали 20-75% и 1% площади поверхности, соответственно.
Как в эксперименте с иммобилизацией (эксперимент 2), активность клещей в группе Ε через несколько дней восстанавливается. Эта обработка, безусловно, связана с наиболее низким развитием грибков. Полагают, что это вызвано восстановлением активности клещей, которые подавляют грибки. Кроме того, сам этанол может снижать рост грибков. Это отражается в том, что группа FE имеет меньшее развитие, по сравнению с группой F, тогда как в обеих группах F и FE не наблюдалось активных клещей.
ПРИМЕР 5
Установки
Данные плесневения из испытания разведения с использованием ряда клещей-жертв Astigmatid рассчитывали с целью определения сдерживающее развитие грибков эффекта подвижных особей Astigmatid. Собирали и анализировали данные разведения с использованием Carpoglyphus lactis (CI), Lepidoglyphus destructor (Ld), Suidasia pontifica (Sp), Thyreophagus entomophagus (Те) и Tyrophagus putrescentiae (Tp).
Во включенных испытаниях, разведения проводили, как описано в Примере 2. Плесневение среды оценивали на основе слипания мицелия. Применяли такую таблицу оценки: слабое (оценка 1), среднее (оценка 2) или сильное (оценка 3).
Результаты
Точечные графики, представленные на Фигуре 6, показывают оценку плесневения на отрубях и просяной полове (лишь для CI) как носителе в связи с плотностью клещей-жертв для 5 видов.
Сдерживающий развитие грибков эффект клещей Astigmatid является очевидным. Некоторые виды клещей являются более эффективными в угнетении плесневения, по сравнению с другими. Например, С. lactis и Т. entomophagous являются эффективными в исследованных условиях при плотности >500 клещей/грамм, тогда как L. destructor и S. pontifica требуют плотности >1000 клещей/грамм. Результаты также показывают, что полова как носитель является менее предрасположенной к образованию плесени.
ПРИМЕР 6
Установки
Испытание разведения было предназначено для A. swirskii и A. limonicus как типичных хищных клещей семейства Phytoseiidae. С. lactis и Т. entomophagus выбирали как представителей клещей-жертв ряда Astigmata.
Разведение проводили в чашках Петри (∅=25 мм, h=30 мм) с вентилируемой нейлоновой крышкой с отверстиями сита 90 мкм. Эти чашки помещали в большой контейнер (длина × ширина × высота =33×20×15 см) с насыщенным солевым раствором на дне для создания нужной влажности. Все испытания проводили при относительной влажности 85%, за исключением A. limonicus (при относительной влажности 93%). Температура составляла 25,0°C (±0,3°C) при световом режиме 16/8 (день: ночь). Количество копий для каждого режима составляла 3.
Как материал носителя для клещей применяли пшеничные отруби с 10% влажностью во всех случаях за исключением A. limonicus (в этом случае применяли просяную полову с 13% влажностью). Разведение хищных клещей начинали, используя одинаковый инокулят при относительно низкой плотности.
Клещей Astigmatid разводили на рационе, который содержал отруби и дрожжи, который давали как пищу. Клещей-жертв Astigmatid скармливали хищникам в живой или живой + замороженной форме, в зависимости от теста. Количество замороженных клещей-жертв вдвое превышала количество живых + замороженных клещей-жертв (за исключением S. pontifica, для которых количество замороженных клещей-жертв в 4 раза превышала количество живых + замороженных клещей-жертв) с целью обеспечения достаточного количества пищи, и поддержания соотношения живых клещей-жертв: хищных клещей на приемлемом уровне (соотношение <10, в предпочтительном варианте - 0-5). Носитель и жертву вводили дважды в неделю в количестве 50% (масса/масса) инокулята. Источником питания были иммобилизованные (3-7 дней при -18°C, размороженные за 1 час до применения) особи Astigmatid выбранных видов или смесь иммобилизованных и живых особей Astigmatid выбранных видов. Это позволяло регулировать соотношение живых: иммобилизованных (лишь для режима с живыми + замороженными). Клещей Astigmatid разводили на рационе, который содержал отруби и дрожжи.
Испытания длились 18-50 дней (см. графики) и дважды в неделю отбирали 1 образец из каждой чашки. Живых хищных клещей и клещей-жертв извлекали из этого образца и подсчитывали. Таким образом подсчитывали плотность (на грамм) и соотношение (живые клещи-жертвы: живые хищные клещи).
Результаты
Результаты представлены на Фигуре 7 и они демонстрируют, что комбинация живых + иммобилизованных жертв в значительной мере увеличивала плотность хищных клещей Phytoseiid. Для A. swirskii, которых разводили на С. lactis (график А), среднее увеличение составляло 150%, для A. swirskii, которых разводили на Т. entomophagus (график В), увеличение составляло 135%, и для A. swirskii, которых разводили на S. pontifica (график С), увеличение составляло 155%. Для A. limonicus, которых разводили на С. lactis (график D), это увеличение было наивысшим и составляло 270%. Графики показывают плотность хищных клещей (на грамм) (среднее значение ± стандартная погрешность) в процессе испытания. Под графиком представлено среднее значение для каждого режима и р-значение статистического теста (Т-критерий двух образцов со сравнением средних значений).
Можно сделать вывод, что иммобилизованная жертва Astigmatid позволяет специалистам по массовому разведению кормить большее количество клещей-жертв Astigmatid без риска повышения уровня стресса у хищника. В результате это может обеспечивать значительно большую плотность хищных клещей и, таким образом, увеличивать эффективность массового разведения.
ПРИМЕР 7
Установки
3
Два вида хищных клещей, A. swirskii и A. limonicus, подвергли испытанию для определения преимущества, которое они отдают разным типам носителя. Зрелых самок собирали приблизительно через 10 дней после начала разведения со стадии яиц. Среди 3 предложенных носителей были просяная полова, носитель согласно изобретению, пшеничные отруби, стандартный носитель и вермикулит (мелкое зерно, все частички <2 мм), а также стандартный носитель. Все носители одновременно предлагались во влажной форме (прибавляли 15 мл воды/100 г). Из каждого носителя 2 части располагали друг напротив друга на фиксированном расстоянии от точки высвобождения (4 см). Все испробованные субстраты предлагались в одном объеме 0,5 см (разделенном на 2 части для каждой круглой чашки). В начале испытания 10 самок и 2 самцов каждого вида помещали в середину каждой пластиковой круглой чашки для выбора (∅=12 см). Чашку помещали на влажную вату для обеспечения воды для хищных клещей и предотвращения бегства. Как источник питания в точке высвобождения помещали пыльцу рогозы. Количество копий составляло 3 и каждую следующую чашку ориентировали с другим субстратом в верхней позиции (12 часов на циферблате).
Испытание проводили в климатической камере с условиями 25°C, относительная влажность 75% и световым режимом 16:8 (день: ночь) и относительной влажностью на чашке приблизительно 85%. Через 2 дня подсчитывали количество яиц хищников на каждом субстрате и количество взрослых особей (особи самцов исключали из статистики). Для этого все частички носителя отдельно внимательно исследовали, а также проверяли через 2 дня после добавления дополнительной пищи. Результаты для каждого субстрата для каждого вида подвергали статистическому анализу с применением критерия согласования хи-квадрат Fit Test (одна переменная).
Результаты
Общее количество самок, выявленных в каждом субстрате (после 3 повторов) представлено на Фигуре 8 (график А). Из всех начальных самок (30) большую часть особей было взято из субстратов, то есть 87% (26 особей) среди всех A. limonicus и 60% (18 особей) среди всех A. swirskii. Таким образом, даже несмотря на то, что материал был четко отделен от источника питания, большинство самок находили в этом носители. Оба испытания продемонстрировали значительное отличие между материалами носителя (р=0,000).
Общее количество яиц (и только что вылупившихся личинок), которые находятся в каждом носители (после 3 повторов), показано на графике В на Фигуре 1. Понятно, что наличие самок клещей коррелируется с количеством яиц, отложенных на носителях. Оба испытания продемонстрировали значительное отличие между материалами носителя (р=0,000).
Результаты указывают, что материалы носителей, которые обеспечивают хранилища для клещей, как показано в этом эксперименте с помощью просяной половы, являются наиболее предпочтительными для клещей, таких как Phytoseiid.
ПРИМЕР 8
Установки
Получали толстые пласты среды для стимуляции единицы массового разведения. Как материал носителя применяли отруби или просяную полову (и то, и другое увлажненное). Отруби являются стандартным носителем, который применяют при коммерческом разведении клещей. Полова является показательным носителем согласно изобретению для использования в хранилищах для клещей. Применяли два типа пищи (А и В), оба из которых включали С. lactis в замороженной форме. Для начального разведения хищного клеща, A. limonicus, разводили на протяжении >2 поколений на пластах испробованной среды. Следующее разведение проводили в пластах толщиной 6-7 см в вентилируемых коробках (длина × ширина × высота =15×15×8 см) на протяжении 2 недель. Изымание образцов, подкорм и смешивание осуществляли дважды на неделю. Испытание проводили в двух экземплярах при 21°C и относительной влажности 93%. Каждую неделю подсчитывали количество живых клещей-хищников и клещей-жертв в образце.
Результаты
Результаты представлены на Фигуре 9. Показатели плотности хищников при разведении на полове возрастают на первой и второй недели при обеих типах питания. В смесях отрубей разведение поддерживается на первой неделе, но резко снижается на второй неделе. После уменьшения количества хищников происходит рост количества клещей-жертв и это вызывает проблемы с поддержанием непрерывности этих смесей для разведения. Испытание демонстрирует конечный результат, который является положительным для носителя из половы, по сравнению со стандартным носителем - отрубями.
Библиография
Solomon, М.Е. and Cunnington, A.M., 1963, Rearing acaroid mites, Agricultural Research Council, Pest Infestation Laboratory, Slough, England, pp 399-403.
Parkinson, C.L., 1992, "Culturing free - living astigmatid mites." Arachnida: Proceedings of a one day symposium on spiders and their allies held on Saturday 21st November 1987 at the Zoological Society of London, eds. Cooper, J.E., Pearce - Kelly, P, Williams, D.L., p. 62-70.
Hughes, A.M., 1977, The mites of stored food and houses. Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, Technical Bulletin No. 9: 400 pp.
De Moraes, G.J., Mcmurtrv, J.A., Denmark, H.A. & Campos. C.B., 2004. A revised catalog of the mite family Phytoseiidae. Magnolia Press Auckland New Zealand 494 pp.