ПЕРЕПРОГРАММИРОВАНИЕ ЭНДОТЕЛИЯ ЧЕЛОВЕКА В ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ ПРЕДШЕСТВЕННИКОВ МНОЖЕСТВЕННЫХ ЛИНИЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОПРЕДЕЛЕННЫХ ФАКТОРОВ

1. Способ получения гемопоэтичских клеток-предшественников множественных ростков (HMLP) человека из эндотелиальных клеток (EC) человека, включающий культивирование EC, экспрессирующих каждый из факторов транскрипции: гомолог B вирусного онкогена остеосаркомы мыши Finkel-Biskis-Jinkins (FOSB), независимый от факторов роста репрессор транскрипции 1 (GFI1), Runt-связанный фактор транскрипции 1 (RUNX1), провирусный онкоген интеграции вируса, образующего очаги в селезенке, (SPI1) или их функциональные гомологи или производные, в бессывороточной среде с эндотелиальными фидерными клетками.
2. Способ по п. 1, где указанные EC выбраны из фетальных, неонатальных, взрослых EC или EC-предшественников.
3. Способ по п. 2, где EC выбраны из эндотелиальных клеток пупочных сосудов человека (HUVEC) или взрослых эндотелиальных клеток микрососудов дермы человека (hDMEC).
4. Способ по п. 1, где эндотелиальные фидерные клетки представляют собой эндотелиальные клетки пупочных сосудов человека (HUVEC), трансформированные для экспрессии либо гена открытой рамки считывания 1 E4 аденовируса (E4ORF1), либо гена Akt.
5. Способ по п. 1, где указанные EC трансдуцированы одним или несколькими векторами, запускающими экспрессию FOSB, GFI1, RUNX1 и SPI1.
6. Способ по п. 5, где по меньшей мере один из указанных векторов дополнительно содержит селективный маркер.
7. Способ по п. 6, где указанный селективный маркер представляет собой маркер устойчивости к антибиотику, ферментный маркер, эпитопный маркер или визуальный маркер.
8. Способ по п. 6, где перед культивированием в присутствии эндотелиальных фидерных клеток проводят увеличение содержания EC с экспрессией FOSB, GFI1, RUNX1 и/или SPI1 путем селекции клеток, экспрессирующих по меньшей мере один селективный маркер.
9. Способ по п. 5, где экспрессия одного или нескольких из FOSB, GFI1, RUNX1 и SPI1 является индуцибельной.
10. Способ по п. 5, где экспрессия одного или нескольких из
FOSB, GFI1, RUNX1 и SPI1 является временной.
11. Способ по п. 1, где указанные HMLP могут продуцировать эритроидные, лимфоидные, миелоидные и мегакариоцитарные клетки.
12. Способ по п. 1, дополнительно включающий выделение HMLP на основе селекции CD45+ клеток.
+
+
13. Способ по п. 12, где HLMP представляют собой CD45CD34.
+
-
-
+
+
+
-
-
-
-
+
14. Способ по п. 1, где HMLP включают клетки, которые представляют собой CD45LinCD45RACD38CD90CD34или CD45LinCD45RACD38CD90CD34.
15. Способ по п. 1, где указанные HMLP могут дифференцироваться в гемогенные клетки после трансплантации реципиенту.
16. Способ по п. 1, где указанные EC культивируют в течение по меньшей мере пяти суток для получения HMLP.
17. Способ по п. 1, где указанные EC выращивают в присутствии эндотелиальных фидерных клеток в бессывороточной гемопоэтической среде, содержащей bFGF, EGF, SCF, FLT3, TPO и IL-6.
18. Способ по п. 17, где указанная среда дополнительно содержит IGF-1, IGF-2 и IL-3.
19. Способ по п. 17, где указанная среда представляет собой среду для гемопоэтических стволовых клеток.
20. Популяция HMLP, полученная способом по п. 1.
21. Композиция, содержащая HMLP, полученные способом по п. 1, в фармацевтически приемлемом носителе.
22. Способ лечения гемопоэтического нарушения, включающий введение HMLP, полученных способом по п. 1, индивидууму, нуждающемуся в этом.
23. Способ по п. 22, где гемопоэтическое нарушение выбрано из лейкоза или лимфомы.
24. Способ по п. 22, где указанные HMLP являются аутологичными для указанного реципиента.
25. Способ по п. 22, где указанные HMLP не вызывают злокачественной трансформации у указанного реципиента.