ОРГАНИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ
ORGANIC COMPOUNDS

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0001]
Настоящее изобретение относится к соединениям, ингибирующим PDE2, формулы I, как описано ниже, к их применению в качестве фармацевтических средств и к фармацевтическим композициям, их содержащим. Эти соединения могут использоваться, например, для лечения PDE2-опосредованных расстройств, таких как тревога, депрессия, расстройство аутистического спектра (ASD), шизофрения и когнитивное расстройство.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002]
Eur. J. Pharmacol.
J. Pharmacol. Exp. Ther.
JPET
Intl. J. Neuropsychopharmacol.
Bioorg. Med. Chem. Lett.
Brain Res.
PDE2 представляет собой гомодимер размером 105 кДа, который экспрессируется в широком спектре тканей и клеточных типов, включая мозг (в том числе гиппокамп, полосатое тело и префронтальную кору), сердце, тромбоциты, эндотелиальные клетки, клетки надпочечников и макрофаги. Хотя цГМФ является предпочтительным субстратом и эффекторной молекулой этого фермента, PDE2 гидролизует как циклический аденозинмонофосфат (цАМФ), так и циклический гуанозинмонофосфат (цГМФ) и, как полагают, участвует в ряде физиологических процессов. В частности, было показано, что ингибирование синтазы оксида азота (NOS), которая уменьшает передачу сигналов цГМФ, ослабляет поведенческие эффекты бензодиазепина хлордиазепоксида, анксиолитического соединения. Кроме того, было показано, что коммерчески доступные ингибиторы PDE2, такие как Bay 60-7550, увеличивают уровни циклического нуклеотида в головном мозге и оказывают значительное противотревожное и антидепрессантное действие у нормальных грызунов и грызунов в условиях стресса (Xu et al.,  (2005) 518:40-46; Masood et al., (2008) 326:369-379; Masood et al.,  (2009) 331:690-699; Xu et al.,  (2013) 16:835-847). Было показано, что ингибирование PDE2 с помощью Bay 60-7550 повышает уровень цГМФ и цАМФ в стимулированных первичных культурах нейронов в дозозависимом режиме; усиливает LTP в срезах гиппокампа в ответ на электрическую стимуляцию; улучшает обучение на модели поведения животных с распознаванием объектов и выполнения задач социального поведения у крыс; улучшает фазы приобретения и закрепления в памяти новых объектов у крыс в возрасте; повышает показатели при выполнении задач по расположению объекта и распознавания при введении после обучения. Gomez et al., (2013) 23:6522-6527. Было также показано, что Bay 60-7550 улучшает когнитивную функцию и функцию памяти у крыс за счет усиления активности nNOS в головном мозге. (Domek-Lopacinska et al. (2008)  1216:68-77). Поэтому PDE2 играет важную роль в эффективном поведении и когнитивной функции.
[0003]
in vitro
В дополнение к эффективному поведению и когнитивной функции было обнаружено, что в эндотелиальных клетках мРНК PDR2A и активность сильно индуцированы в ответ на стимуляцию фактором некроза опухоли . Селективное ингибирование активности PDE2 с помощью 9-(6-фенил-2-оксогекс-3-ил)-2-(3,4-диметоксибензил)пурин-6-она (PDP) значительно изменяет барьерную функцию эндотелиальных клеток, это предполагает, что PDE2, вероятно, играет важную роль в регуляции жидкости и целостности белка в системе кровообращения в патологических условиях. Поэтому PDE2 может быть хорошей фармакологической мишенью при сепсисе или более локализованных воспалительных реакциях.
[0004]
В недавнем исследовании также было показано, что ингибирование PDE2 вызывает легочную дилатацию, предотвращает ремоделирование легочных сосудов и уменьшает гипертрофию правого желудочка, характерную для легочной гипертензии, что указывает на возможность применения в терапии ингибирования PDE2 при легочной гипертензии. Bubb et al., «Inhibition of Phosphodiesterase 2 Augments cGMP and cAMP Signaling to Ameliorate Pulmonary Hypertension», Circulation, August 5, 2014, p. 496-507, DOI:10.1161/CIRCULATIONAHA.114.009751.
[0005]
Несмотря на многообещающие доклинические данные и идентификацию PDE2 в качестве перспективной лекарственной мишени, в настоящее время ни один ингибитор PDE2 не участвует в клинических исследованиях, отчасти из-за плохих метаболической стабильности и проникновения в головной мозг существующих соединений PDE2. Таким образом, существует потребность в соединениях, которые избирательно ингибируют активность PDE2, демонстрируя превосходные биофизические свойства.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006]
В изобретении представлены новые соединения, обладающие сильными и селективными ингибирующими свойствами PDE2 с улучшенной пероральной доступностью и проницаемостью в мозг. Следовательно, в первом аспекте изобретение относится к соединению формулы I:
формула I,
где
1
1-4
(i) R представляет собой Cалкил (например, метил);
2
(ii) R выбран из группы, включающей:
H,
-OH,
галоген (например, хлор),
1-4
Cалкил (например, метил),
1-4
Cалкокси (например, метокси или этокси),
f
g
-N(R)(R),
h
i
-C(O)N(R)(R),
j
-C(O)OR,
-CN,
1-4
Cалкилтио (например, этилтио),
гетероарил (например, пиразолил, например, пиразол-1-ил),
3-7
гетероCциклоалкил (например, морфолинил (например, морфолин-1-ил) или пирролидинил (например, пирролидин-1-ил)), и
арилокси (например, фенокси), где указанный арил необязательно замещен одним или несколькими галогенами (например, фтор), например, 4-фторфенокси;
3
1-4
(iii) R представляет собой H или Cалкил (например, метил);
a
b
c
d
e
1-6
2
2
2
(iv) R, R, R, R и R независимо представляют собой H, галоген (например, хлор или фтор), -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
f
g
1-4
(v) R и R независимо представляют собой H, Cалкил (например, метил) или гетероарил (например, пиридил (например, пирид-2-ил));
h
i
1-4
(vi) R и R независимо представляют собой H или Cалкил (например, этил);
j
1-4
(vii) R представляет собой H или Cалкил (например, этил);
в свободной или солевой форме.
[0007]
Изобретение относится также к соединению формулы I, как изложено ниже:
1
1-4
1.1 формула I, где R представляет собой Cалкил (например, метил);
1
1.2 формула 1.1, где R представляет собой метил;
2
1-4
1-4
f
g
h
i
j
1-4
3-7
1.3 формула I или любая из 1.1-1.2, где R выбран из группы, включающей H; -OH; галоген (например, хлор); Cалкил (например, метил); Cалкокси (например, метокси или этокси); -N(R)(R); -C(O)N(R)(R); -C(O)OR; -CN; Cалкилтио (например, этилтио); гетероарил (например, пиразолил, например, пиразол-1-ил); гетероCциклоалкил (например, морфолинил (например, морфолин-1-ил) или пирролидинил (например, пирролидин-1-ил)); и арилокси (например, фенокси), где указанный арил необязательно замещен одним или несколькими галогенами (например, фтор), например, 4-фторфенокси;
2
1.4 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой H;
2
1.5 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой -OH;
2
1.6 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой галоген (например, хлор);
2
1.7 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой хлор;
2
1-4
1.8 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой Cалкил (например, метил);
2
1.9 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой метил;
2
1-4
1.10 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой Cалкокси (например, метокси или этокси);
2
1.11 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой метокси;
2
1.12 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой этокси;
2
f
g
1.13 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой N(R)(R);
f
g
1-4
1.14 формула I или 1.13, где R и R независимо представляют собой H, Cалкил (например, метил) или гетероарил (например, пиридил (например, пирид-2-ил));
f
g
1-4
1.15 формула I или 1.13, где R представляет собой H и R выбран из H, Cалкила (например, метил) или гетероарила (например, пиридила (например, пирид-2-ила));
f
g
1.16 формула I или 1.13, где R представляет собой H и R представляет собой пиридил (например, пирид-2-ил);
f
g
1-4
1.17 формула I или 1.13, где R представляет собой H и R представляет собой Cалкил (например, метил);
f
g
1.18 формула I или 1.13, где R представляет собой H и R представляет собой метил;
f
g
1.19 формула I или 1.13, где R и R, оба, представляют собой H;
f
g
1-4
1.20 формула I или 1.13, где R и R, оба, представляют собой Cалкил (например, метил);
f
g
1.21 формула I или 1.13, где R и R, оба, представляют собой метил;
f
g
1.22 формула I или 1.13, где R представляет собой H и R представляет собой гетероарил (например, пиридил (например, пирид-2-ил));
2
h
i
1.23 формула I или 1.13, где R представляет собой-C(O)N(R)(R),
h
i
1-4
1.24 формула I или 1.23, где R и R независимо представляют собой H или Cалкил (например, этил);
h
i
1-4
1.25 формула I или 1.23, где R представляет собой H и R представляет собой H или Cалкил (например, этил);
h
i
1-4
1.26 формула I или 1.23, где R представляет собой H и R представляет собой Cалкил (например, этил)
h
i
1.27 формула I или 1.23, где R представляет собой H и R представляет собой этил;
h
i
1.28 формула I или 1.23, где R и R, оба, представляют собой H;
2
j
1.29 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой -C(O)OR;
j
1-4
1.30 формула I или 1.29, где R представляет собой H или Cалкил (например, этил);
j
1.31 формула I или 1.29, где R представляет собой H;
j
1-4
1.32 формула I или 1.29, где R представляет собой Cалкил (например, этил);
j
1.33 формула I или 1.29, где R представляет собой этил;
2
1.34 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой -CN;
2
1-4
1.35 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой Cалкилтио (например, этилтио);
2
1.36 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой этилтио;
2
1.37 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой гетероарил (например, пиразолил, например, пиразол-1-ил);
2
1.38 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой пиразолил, например, пиразол-1-ил;
2
3-7
1.39 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой гетероCциклоалкил (например, морфолинил (например, морфолин-1-ил) или пирролидинил (например, пирролидин-1-ил));
2
5-6
1.40 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой гетероCциклоалкил;
2
1.41 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой морфолинил (например, морфолин-1-ил);
2
1.42 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой пирролидинил (например, пирролидин-1-ил);
2
1.43 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой арилокси (например, фенокси), где указанный арил необязательно замещен одним или несколькими галогенами (например, фтор), например, 4-фторфенокси;
2
1.44 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой фенокси, где указанный фенил необязательно замещен одним или несколькими галогенами (например, фтор), например, 4-фторфенокси;
2
1.45 формула I или любая из 1.1-1.2, где R представляет собой 4-фторфенокси;
3
1-4
1.46 формула I или любая из 1.1-1.45, где R представляет собой H или Cалкил (например, метил);
3
1.47 формула I или любая из 1.1-1.45, где R представляет собой H;
3
1-4
1.48 формула I или любая из 1.1-1.45, где R представляет собой Cалкил (например, метил);
3
1.49 формула I или любая из 1.1-1.45, где R представляет собой метил;
a
b
c
d
e
1-6
2
2
2
1.50 формула I или любая из 1.1-1.49, где R, R, R, R и R независимо представляют собой H, галоген (например, хлор или фтор), -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
a
b
c
d
e
1.51 формула I или любая из 1.1-1.50, где R, R, R, R и R независимо представляют собой H;
a
b
c
d
e
1.52 формула I или любая из 1.1-1.51, где R, R, R, R и R независимо представляют собой галоген (например, хлор или фтор);
a
b
c
d
e
1.53 формула I или любая из 1.1-1.51, где R, R, R, R и R независимо представляют собой хлор или фтор;
a
b
c
d
e
1-6
2
2
2
1.54 формула I или любая из 1.1-1.53, где R, R, R, R и R независимо представляют собой -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
a
b
c
d
e
3-6
1.55 формула I или любая из 1.1-1.53, где R, R, R, R и R независимо представляют собой -O-Cалкил;
b
c
e
1.56 формула I или любая из 1.1-1.55, где R, R и R, все представляют собой H;
b
c
e
a
d
1-6
2
2
2
1.57 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; и R и R независимо выбраны из H, галогена (например, хлора или фтора), -O-Cалкила (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропила, -OCH-циклобутила или -OCH-циклопентила);
b
c
e
a
d
1-6
2
2
2
1.58 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой галоген (например, хлор или фтор); и R представляет собой H, галоген (например, хлор или фтор) или -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
b
c
e
a
d
1.59 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой галоген (например, хлор или фтор); и R представляет собой H;
b
c
e
a
d
1.60 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; и R и R, оба, представляют собой галоген (например, хлор или фтор);
b
c
e
a
d
1.61 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R и R, оба, представляют собой хлор;
b
c
e
a
d
1-6
2
2
2
1.62 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой галоген (например, хлор или фтор); и R представляет собой -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
b
c
e
a
d
3-6
2
2
2
1.63 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой галоген (например, хлор или фтор); и R представляет собой -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
b
c
e
a
d
1.64 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой хлор; и R представляет собой бутокси (например, н-бутокси, изобутокси);
b
c
e
a
d
1.65 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой хлор; и R представляет собой н-бутокси;
b
c
e
a
d
1-6
2
2
2
1.66 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R и R, все представляют собой H; R представляет собой галоген (например, хлор или фтор); и R представляет собой -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
a
b
c
e
d
1-6
1.67 формула I или любая из 1.1-1.56, где R, R, R и R, все представляют собой H и R представляет собой -O-Cалкил;
1.68 любая из предшествующих формул, где соединение представлено формулой I(i):
;
1.69 любая из предшествующих формул, где соединение представлено формулой I(ii):
;
1.70 любая из предшествующих формул, где соединение представлено формулой I(iii):
;
1.71 любая из предшествующих формул, где соединение выбрано из группы, включающей:
H
c
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-8-(4-фторфенокси)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-8-(диметиламино)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(пирролидин-1-ил)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(1H-пиразол-1-ил)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(пиридин-2-иламино)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-8-(этилтио)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
c
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-8-карбонитрил;
c
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-8-карбоновая кислота;
этил 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксилат;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-N-этил-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-3a,4-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид;
8-хлор-1-(2-хлор-5-(циклопропилметокси)фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(2,5-дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
c
H
1-(2-хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-он;
1-(2-хлорфенил)-3,5-диметил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(2,5-дихлорфенил)-3,5-диметил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
8-хлор-1-(2,5-дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-хлорфенил)-8-хлор-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
1-(5-бутокси-2-хлорфенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он; и
1-(2-хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он;
50
1.72 любая из предшествующих формул, где соединения ингибируют опосредованный фосфодиэстеразой (например, опосредованный PDE2) гидролиз cGMP, например, с IC менее чем 2 мкМ, более предпочтительно, менее чем или равной 250 нМ, более предпочтительно, менее чем или равной 10 нМ в анализе PDE, например, как описано в примере 23,
в свободной или солевой форме.
[0008]
В конкретном варианте осуществления изобретение относится к соединению формулы I(i):
Формула I(i),
где
1
1-4
(i) R представляет собой Cалкил (например, метил);
2
1-4
(ii) R представляет собой Cалкокси (например, метокси или этокси);
3
(iii) R представляет собой H;
b
c
e
a
d
1-6
2
2
2
(iv) R, R и R представляет собой H; R представляет собой галоген и R представляет собой -O-Cалкил (например, пропокси, бутокси (например, н-бутокси, изобутокси), -OCH-циклопропил, -OCH-циклобутил или -OCH-циклопентил);
в свободной или солевой форме.
[0009]
В конкретном варианте осуществления изобретение относится к соединению формулы I(i), где
1
1-4
(i) R представляет собой Cалкил (например, метил);
2
1-4
(ii) R представляет собой Cалкокси (например, метокси или этокси);
3
(iii) R представляет собой H;
b
c
e
a
d
2
(iv) R, R и R представляет собой H; R представляет собой галоген и R представляет собой -OCH-циклобутил;
в свободной или солевой форме.
[0010]
Во втором аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению, то есть, соединение формулы I, I(i), I(ii) или I(iii), или любой из формул 1.1-1.72, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли, в комбинации или ассоциации с фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителем.
[0011]
Изобретение относится также к способам применения соединений по изобретению для лечения опосредованных PDE2 расстройств, например, расстройств, указанных далее (особенно для лечения тревоги, депрессии, расстройства аутистического спектра (ASD), шизофрении, когнитивных нарушений). Этот список не является исчерпывающим и может включать в себя другие заболевания и расстройства, как изложено ниже.
[0012]
Таким образом, в третьем аспекте изобретение относится к способу лечения опосредованного PDE2 расстройства, включающего введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, описанного в настоящем документе, то есть, соединения формулы I, I(i), I(ii) или I(iii) или любой из формул 1.1-1.72, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
[0013]
В следующем варианте осуществления третьего аспекта изобретение относится к способу лечения у субъекта, предпочтительно, млекопитающего, предпочтительно, человека, следующих нарушений:
неврологические расстройства (такие как мигрень, эпилепсия, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, травма головного мозга; инсульт; цереброваскулярные заболевания (включая церебральный атеросклероз, церебральную амилоидную ангиопатию, наследственное внутимозговое кровоизлияние, гипоксию и ишемию мозга); спинальная мышечная атрофия; боковой амиотрофический склероз; рассеянный склероз;
когнитивные расстройства (включая амнезию, сенильную деменцию, деменцию, связанную с ВИЧ, деменцию, связанную с болезнью Альцгеймера, деменцию, связанную с болезнью Хантингтона, деменцию с тельцами Леви, сосудистую деменцию, деменцию, связанную с отравлением лекарственными средствами, делирий и умеренное когнитивное расстройство); и когнитивная дисфункция, связанная с болезнью Паркинсона и депрессией;
психический дефицит (включая синдром Дауна и синдром ломкой Х-хромосомы);
расстройства сна (включая гиперсомнию, расстройство циркадного ритма сна, бессонницу, парасомнию и депривацию сна);
психические расстройства (такие как тревожность (включая острое стрессовое расстройство, генерализированное тревожное расстройство, социальное тревожное расстройство, паническое расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство (PTSD), обсессивно-компульсивное расстройство, специфическая фобия, социофобия, хроническое тревожное расстройство и обсессивно-компульсивное расстройство личности);
имитируемое расстройство (включая острую галлюцинаторную манию);
расстройства контроля над побуждениями (включая патологическое влечение к азартным играм, патологическое влечение к поджогам, патологическое влечение к воровству и интермиттирующее эксплозивное расстройство);
расстройства настроения (включая биполярное расстройство I типа, биполярное расстройство II типа, маниакальное состояние, смешанное аффективное состояние, большая депрессия, хроническая депрессия, сезонная депрессия, психотическая депрессия и послеродовая депрессия);
психомоторные расстройства (экстрапирамидные и двигательные расстройства, например, паркинсонизм, болезнь телец Леви, тремор, тремор, вызванный лекарственными средствами, поздняя дискинезия, вызванная лекарственными препаратами, дискинезия, вызванная L-допа, и синдром беспокойных ног);
психотические расстройства (включая шизофрению (например, непрерывное или эпизодическое, параноидальное, гебефреническое, кататоническое, недифференцированное и остаточное шизофренические расстройства), шизоаффективное расстройство, шизофреноформное и бредовое расстройство);
лекарственная зависимость (включая наркотическую зависимость, алкоголизм, зависимость от амфетамина, зависимость от кокаина, зависимость от никотина и абстинентный наркотический синдром);
расстройства пищевого поведения (включая анорексию, булимию, расстройство пищевого поведения, гиперфагию и пагофагию);
психические расстройства у детей (включая синдром дефицита внимания, синдром дефицита внимания/гиперактивности, кондуктивное расстройство (например, тикозные расстройства, такие как временные, хронические, двигательные или голосовые тикозные расстройства), аутизм и расстройство аутического спектра (ASD));
психические и поведенческие расстройства вследствие употребления психоактивных веществ;
сердечно-сосудистое расстройство (например, легочная гипертензия и легочная артериальная гипертензия); и
боль (например, боль в костях и суставах (остеоартрит), повторяющаяся боль при движении, зубная боль, боль, связанная с раковым заболеванием, миофасциальная боль (мышечная травма, фибромиалгия), периоперационная боль (общая хирургия, гинекология), хроническая боль и невропатическая боль),
который включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по изобретению, описанного в настоящем документе, то есть, соединения формулы I, I(i), I(ii) или I(iii) или любой из формул 1.1-1.72, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе.
[0014]
В одном варианте осуществления заболевание или расстройство выбрано из группы, включающей тревожность, депрессию, расстройство аутического спектра и шизофрению, например, тревожность и/или депрессию у аутичных и/или больных шизофренией. В другом варианте осуществления заболевание или расстройство представляет собой когнитивные нарушения, связанные с шизофренией или деменцией.
[0015]
В четвертом аспекте изобретение относится к соединению по изобретению, описанному в настоящем документе, то есть, соединениям формулы I, I (i), I (ii) или I (iii), или любой из формул 1.1-1.72, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли (для использования при изготовлении лекарственного средства) для лечения расстройства, опосредованного PDE2, как описано в настоящем документе.
[0016]
В пятом аспекте изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение по изобретению, описанное в настоящем документе, то есть, соединение формулы I, I(i), I(ii) или I(iii) или любых формул 1.1-1.72, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли в комбинации или ассоциации с фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителем для применения при лечении расстройства, опосредованного PDE2, как описано в настоящем документе.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0017]
Если не указано иное или ясно из контекста, следующие термины здесь имеют следующие значения:
(a)
«Алкил», как используется в настоящем документе, представляет собой насыщенную или ненасыщенную углеводородную группу, предпочтительно, насыщенную, предпочтительно, содержащую от одного до шести атомов углерода, предпочтительно, содержащую от одного до четырех атомов углерода, которая может быть прямой или разветвленной, и которая необязательно может быть моно-, ди- или три-замещенной, например, галогеном (например, хлором или фтором), гидрокси или карбокси.
(b)
«Арил», как используется в настоящем документе, представляет собой моно или бициклический ароматический углеводород, предпочтительно, фенил, необязательно замещенный, например, алкилом (например, метилом), галогеном (например, хлором или фтором), галогеналкилом (например, трифторметилом) или гидрокси.
(c)
«Гетероарил», как используется в настоящем документе, представляет собой ароматическую группу где один или несколько атомов, образующих ароматическое кольцо, представляет собой серу или азот вместо углерода, например, пиридил или тиадиазолил, которое необязательно может быть замещено, например, алкилом, галогеном, галогеналкилом или гидрокси.
[0018]
1-4
1-4
1-4
1-4
Соединения по изобретению, например, соединения формулы I, I(i), I(ii) или I(iii), например, любой из формул 1.1-1.72, могут существовать в свободном виде или в виде солей, например, в виде солей добавления кислот. В данном описании, если не указано иное, такую фразу как «соединения по изобретению» следует понимать как охватывающую соединения в любом виде, например, в свободном виде или в виде соли добавления кислоты, или, если соединения содержат кислотные заместители, в виде соли добавления основания. Соединения по изобретению предназначены для использования в качестве фармацевтических препаратов, поэтому предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли. Соли, которые непригодны для фармацевтического применения, могут быть использованы, например, для выделения или очистки соединений по изобретению в свободном виде или в виде их фармацевтически приемлемых солей, поэтому они также включены. Соединения по изобретению в некоторых случаях могут существовать в форме пролекарства. Формой пролекарства является соединение, которое в организме преобразуется в соединение по изобретению. Например, когда соединения по изобретению содержат гидрокси или карбокси заместители, эти заместители могут образовывать физиологически гидролизуемые и приемлемые сложные эфиры. Как используется в настоящем документе, «физиологически гидролизуемый и приемлемый сложный эфир» означает сложные эфиры соединений по изобретению, которые гидролизуются в физиологических условиях с образованием кислот (в случае соединений по изобретению, которые имеют гидрокси заместители) или спиртов (в случае соединений по изобретению, которые имеют карбокси заместители), которые сами по себе являются физиологически переносимыми в дозах, подлежащих введению. Таким образом, когда соединение по изобретению содержит гидрокси группу, например, соединение-OH, то ацильное сложноэфирное пролекарство такого соединения, то есть, соединение-O-C(O)-Cалкил, может гидролизоваться в организме с образованием физиологически гидролизуемого спирта (соединение-OH) с одной стороны и кислоты с другой (например, HOC(O)-Cалкил). Альтернативно, когда соединение по изобретению содержит группу карбоновой кислоты, например, соединение-C(O)OH, то сложноэфирное пролекарство такого соединения, соединение-C(O)O-Cалкил может гидролизоваться с образованием соединения-C(O)OH и HO-Cалкила. Как будет понятно, термин, таким образом, охватывает обычные фармацевтические пролекарственные формы.
[0019]
Соединения по изобретению в данном документе включают их энантиомеры, диастереоизомеры и рацематы, а также их полиморфы, гидраты, сольваты и комплексы. Некоторые отдельные соединения в рамках настоящего изобретения могут иметь двойные связи. Предполагается, что характерные примеры двойных связей по данному изобретению подразумевают как E, так и Z-изомеры двойной связи. Кроме того, некоторые соединения в рамках настоящего изобретения могут содержать один или несколько асимметрических центров. Данное изобретение включает использование любого из оптически чистых стереоизомеров, а также любую комбинацию стереоизомеров.
[0020]
13
15
18
123
131
125
11
18
11
Предполагается также, что соединения по изобретению охватывают их стабильные и нестабильные изотопы. Стабильными изотопами являются нерадиоактивные изотопы, которые содержат один дополнительный нейтрон по сравнению с распространенными нуклидами одного того же вида (то есть, элемента). Ожидается, что активность соединений, содержащих такие изотопы, будет сохранена, и такое соединение также будет полезно для измерения фармакокинетики неизотопных аналогов. Например, атом водорода в определенном положении соединения по изобретению может быть заменен на дейтерий (стабильный изотоп, который не радиоактивен). Примеры известных стабильных изотопов включают, но ими не ограничиваются, дейтерий, C, N, O. Альтернативно, нестабильные изотопы, представляющие собой радиоактивные изотопы, которые содержат дополнительные нейтроны по сравнению с распространенными нуклидами того же вида (то есть, элемента), например, I, I, I, C, F, могут заменить соответствующие распространенные виды I, C и F. Другим примером полезного изотопа соединения по изобретению является изотоп С. Эти радиоизотопы могут быть использованы для радиоизображений и/или фармакокинетических исследований соединений по изобретению. Изотопно-меченные соединения формулы I обычно могут быть получены путем замены изотопно-немеченого реагента на изотопно-меченный реагент.
[0010]
Фраза «соединения по изобретению» или «ингибиторы PDE 2 по изобретению» охватывает любое и все соединения, описанные в настоящем документе, например, соединение формул I, I(i), I(ii), I(iii) или любой из 1.1-1.72, как описано в настоящем документе, в свободной или солевой форме.
[0011]
Слова «лечение» и «обработка» следует понимать, соответственно, как подразумевающие лечение или улучшение симптомов заболевания, а также и лечение причины заболевания. В одном варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания или расстройства, описанного в настоящем документе. В другом варианте осуществления изобретение относится к способу профилактики заболевания или расстройства, как описано в настоящем документе.
[0012]
В случае способов лечения слово «эффективное количество» предназначено для обозначения терапевтически эффективного количества для лечения конкретного заболевания или расстройства.
[0013]
Термин «легочная гипертензия» обозначает легочную артериальную гипертензию.
[0014]
Термин «субъект» включает человека или не человека (то есть, животное). В конкретном варианте осуществления изобретение охватывает как человека, так и не человека. В другом варианте осуществления изобретение относится к не человеку. В другом варианте осуществления термин относится к человеку.
[0015]
Термин «содержащий», используемый в этом описании, предполагается как неограниченный и не исключает дополнительных, не перечисленных элементов или стадий способа.
[0016]
Термин «когнитивные расстройства» относится к любому расстройству, включающему симптом когнитивного дефицита (то есть, субнормальное или субоптимальное функционирование в одном или более когнитивных аспектах, таких как память, интеллект, обучение, логика, внимание или способность к целенаправленной деятельности (рабочая память) у человека по сравнению с другими индивидуумами в группе одного и того же возраста). Таким образом, когнитивные расстройства включают, но этим не ограничиваются, амнезию, сенильную деменцию, деменцию, связанную с ВИЧ, деменцию, связанную с болезнью Альцгеймера, деменцию, связанную с болезнью Хантингтона, деменцию с тельцами Леви, сосудистую деменцию, деменцию, связанную с отравлением лекарственными средствами, делирий и умеренное когнитивное расстройство. Когнитивные расстройства также могут быть расстройствами, в первую очередь, но не исключительно, связанными с психозом (шизофрения), расстройствами настроения, биполярными расстройствами, инсультом, лобно-височной деменцией, прогрессирующим супрануклеарным параличом, травмой мозга и злоупотреблением наркотиками, синдромом Аспергера и возрастным нарушением памяти.
[0017]
Соединения по изобретению, например, соединения формул I, I(i), I(ii) или I(iii), например, любой из формул 1.1-1.72, как описано в настоящем документе, в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли могут использоваться в качестве единственного терапевтического агента, но могут также использоваться в комбинации или для совместного введения с другими активными агентами.
[0018]
Дозы, используемые в практике настоящего изобретения, будут, разумеется, различаться в зависимости, например, от конкретного заболевания или состояния, подлежащего лечению, конкретного соединения по изобретению, способа введения и желаемой терапии. Соединения по изобретению могут вводиться любым подходящим путем, включая пероральный, парентеральный, трансдермальный или путем ингаляции, но, предпочтительно, вводятся перорально. Как правило, удовлетворительные результаты, например, для лечения заболеваний, как указано выше, представлены для перорального введения в дозах примерно от 0,01 до 2,0 мг/кг. Для более крупных млекопитающих, например, для человека, указанная суточная доза для перорального введения будет, соответственно, находиться в диапазоне от примерно 0,75 до 150 мг, удобно вводить один раз или в разделенных дозах 2-4 раза, ежедневно или в форме пролонгированного высвобождения. Единичные дозированные формы для перорального введения, таким образом, например, могут содержать от примерно 0,2 до 75 или 150 мг, например, от примерно 0,2 или 2,0 до 50, 75 или 100 мг соединения по изобретению вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
[0019]
Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретению, могут быть получены с использованием обычных разбавителей или вспомогательных веществ и методов, известных в области получения лекарственных средств. Фармацевтически приемлемый носитель может содержать любой обычный фармацевтический носитель или вспомогательное вещество. Подходящие фармацевтические носители включают инертные разбавители или наполнители, воду и различные органические растворители (такие как гидраты и сольваты). Фармацевтическая композиция может, при желании, содержать дополнительные ингредиенты, такие как ароматизаторы, связующие вещества, вспомогательные вещества и тому подобное. Таким образом, для перорального введения могут использоваться таблетки, содержащие различные вспомогательные вещества, такие как лимонная кислота, вместе с различными разрыхлителями, такими как крахмал, альгиновая кислота и некоторые сложные силикаты, и связующие вещества, такие как сахароза, желатин и аравийская камедь. Кроме того, для получения таблеток часто могут быть использованы смазывающие агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. В мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах также могут быть использованы твердые композиции аналогичного типа. Неограничивающие примеры материалов, таким образом, включают лактозу или молочный сахар и полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой. Когда желательны водные суспензии или эликсиры для перорального введения, активное соединение в нем может быть объединено с различными подслащивающими или ароматизирующими агентами, красителями или красками и, при желании, эмульгаторами или суспендирующими агентами вместе с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин или их комбинации. Фармацевтическая композиция может, например, быть в виде, пригодном для перорального введения, в виде таблетки, капсулы, пилюли, порошка, препарата замедленного высвобождения, раствора или суспензии для парентеральной инъекции в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии для местного введения в виде мази или крема, или для ректального введения в виде суппозитория.
[0020]
Соединения по изобретению, описанные в настоящем документе, и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены с использованием способов, как описано в настоящем документе, и приведенных в настоящем документе в качестве примера, и подобных им способов, и способов, известных в области химии. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, описанные ниже. Если они не являются коммерчески доступными, исходные вещества для этих способов могут быть получены с помощью способов, которые выбирают из известных в области химии, с использованием способов, которые подобны или аналогичны синтезу известных соединений. Все ссылки, приведенные в настоящем документе, включены посредством ссылки во всей их полноте.
Пример 1
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-8-(4-фторфенокси)-3-метил-1
H
-пиразолo[4,3-
c
][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
(a) 5-Бутокси-2-фторбензоламин
[0021]
m/z
+
Смесь 4-фтор-3-нитрофенола (1) (2,81 г, 17,9 ммоль), 1-бромбутана (3,43 г, 25,0 ммоль) и карбоната цезия (11,6 г, 35,7 ммоль) в безводном ДМФ (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток обрабатывали водой (400 мл) и экстрагировали метиленом (3×50 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха с получением 4-бутокси-1-фтор-2-нитробензола в виде масла оранжевого цвета. К раствору сырого 4-бутокси-1-фтор-2-нитробензола в EtOH (10 мл) медленно добавляли концентрированную HCl (10 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем добавляли хлорид олова(I) (8,40 г, 44,3 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 16 ч реакционную смесь обрабатывали водой (500 мл) и экстрагировали метиленом (4×50 мл). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (40 мл) и затем упаривали досуха при пониженном давлении. Полученный сырой продукт далее очищали на колонке с нейтральным оксидом алюминия, используя градиент 0-100% этилацетата в гексане в качестве элюента с получением 5-бутокси-2-фторбензоламина в виде масла (2,42 г, 74%-ный выход). МС (ESI)  184,1 [M+H].
(b) (5-Бутокси-2-фторфенил)гидразин
[0022]
m/z
+
К суспензии 5-бутокси-2-фторбензоламина (2,30 г, 12,6 ммоль) в концентрированной соляной кислоте (12 мл) при температуре 0°C добавляли по каплям раствор нитрита натрия (1,04 г, 15,1 ммоль) в воде (5 мл). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 мин, и затем добавляли раствор дигидрата хлорида олова(II) (6,86 г, 30,4 ммоль) в концентрированной соляной кислоте (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем фильтровали. Слой на фильтре последовательно промывали 6н HCl (3×4 мл) и гексаном (3×5 мл) и затем сушили в вакууме с получением 3,18 г сырого продукта, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI)  199,1 [M+H].
(c) 8-Бром/Хлор-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0023]
H
H
c
H
m/z
H
c
H
m/z
2
2
+
+
К суспензии (4-бутокси-2-фторфенил)гидразина (860 мг, 4,34 ммоль) и 3-ацетил-6-бром-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1)-она (500 мг, 1,77 ммоль) в диоксане (4 мл) добавляли концентрированную HCl (0,1 мл). Реакционную смесь в герметичном сосуде перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем нагревали в микроволновом реакторе при температуре 160°C в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь обрабатывали водой (200 мл) и затем экстрагировали смесью CHCl/MeOH (10/1) (4×50 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха. Объединенный остаток очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, используя градиент 0-100% этилацетата в гексане в качестве элюента с получением 580 мг продукта, который содержит 22% 8-хлор-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-она (МС (ESI)  401,1 [M+H]) и 68% 8-бром-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-она (МС (ESI)  445,1 [M+H]). Два соединения совместно элюировали на колонке и использовали напрямую на следующей стадии без дополнительной очистки.
(d) 1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-8-(4-фторфенокси)-3-метил-1
H
-пиразолo[4,3-
c
][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0024]
H
c
H
H
c
d
J
J
J
J
J
m/z
2
2
1
+
Суспензию 8-бром/хлор-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-она (41,0 мг), 4-фторфенола (112 мг, 1,00 ммоль) и карбоната цезия (97 мг, 0,30 ммоль) в диоксане (0,6 мл) в герметичном сосуде для микроволнового облучения нагревали в микроволновом реакторе при температуре 160°C в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь обрабатывали водой (100 мл) и экстрагировали CHCl(4×25 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха. Объединенный остаток очищали с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ, используя градиент 0-70% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, в течение 16 мин с получением 17 мг 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-8-(4-фторфенокси)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5H)-она в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 11,24 (с, 1H), 7,81 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,13 (д, =8,8 Гц, 1H), 6,88 (дд, =6,0, 3,1 Гц, 1H), 6,85-6,78 (м, 4H), 6,76-6,70 (м, 1H), 6,62 (дд, =9,2, 9,2 Гц, 1H), 4,03-3,78 (м, 2H), 2,79 (с, 3H), 1,81-1,74 (м, 2H), 1,58-1,45 (м, 2H), 1,00 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  477,2 [M+H].
Пример 2
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-8-(диметиламино)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0025]
1
+
d
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 1, где на стадии (d) вместо 4-фторфенола добавляли 40%-ный раствор диметиламина. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,82 (с, 1H), 7,56 (д, =9,1 Гц, 1H), 7,15-7,08 (м, 2H), 6,99-6,92 (м, 1H), 6,80 (д, =9,0 Гц, 1H), 3,97 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,81 (с, 3H), 2,77 (с, 6H), 1,81-1,71 (м, 2H), 1,53-1,42 (м, 2H), 0,96 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  410,2 [M+H].
Пример 3
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(пирролидин-1-ил)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0026]
1
+
d
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 1, где на стадии (d) вместо 4-фторфенола добавляли пирролидин. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,28 (с, 1H), 7,47 (д, =9,0 Гц, 1H), 7,15-7,08 (м, 2H), 7,00-6,92 (м, 1H), 6,55 (д, =9,0 Гц, 1H), 3,97 (т, =6,5 Гц, 2H), 3,16-3,01 (м, 4H), 2,80 (с, 3H), 1,95-1,84 (м, 4H), 1,80-1,71 (м, 2H), 1,53-1,43 (м, 2H), 0,96 (т, =7,4, 7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  436,2 [M+H].
Пример 4
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(1H-пиразол-1-ил)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0027]
1
+
d
J
J
J
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру, 1 где на стадии (d) вместо 4-фторфенола добавляли 1H-пиразол. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,83 (с, 1H), 8,15 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,83 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,67 (дд, =1,7, 0,8 Гц, 1H), 7,59 (дд, =2,6, 0,8 Гц, 1H), 7,25-7,16 (м, 2H), 7,14-7,08 (м, 1H), 6,33 (дд, =2,6, 1,6 Гц, 1H), 4,00 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,84 (с, 3H), 1,82-1,72 (м, 2H), 1,53-1,43 (м, 2H), 0,96 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  433,2 [M+H].
Пример 5
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(пиридин-2-иламино)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0028]
H
c
H
d
J
J
J
m/z
2
3
6
1
+
Суспензию сырого 8-бром/хлор-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-она, синтезированного на стадии c примера 1 (41,0 мг), пиридин-2-амина (160 мг, 1,7 ммоль), Pd(dba) (8 мг), Xantphos (10 мг) и карбоната цезия (130 мг, 0,40 ммоль) в диоксане (0,6 мл) нагревали при температуре 100°C в течение 60 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь обрабатывали ДМФ (5 мл) и затем фильтровали. Фильтрат отделяли с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ, используя градиент 0-30% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, в течение 16 мин с получением 11 мг 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-8-(пиридин-2-иламино)-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, ДМСО-) δ 11,43 (с, 1H), 9,67 (с, 1H), 8,16-8,09 (м, 1H), 7,68 (д, =9,0 Гц, 1H), 7,38-7,32 (м, 1H), 7,32-7,27 (м, 2H), 7,19-7,10 (м, 2H), 6,98-6,91 (м, 1H), 6,83-6,76 (м, 1H), 3,99 (т, =6,4 Гц, 2H), 2,60 (с, 3H), 1,71-1,60 (м, 2H), 1,45-1,31 (м, 2H), 0,87 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  459,2 [M+H].
Пример 6
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-8-(этилтио)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0029]
1
+
d
J
J
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру, 1 где на стадии (d) вместо 4-фторфенола добавляли этантиол. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 11,00 (с, 1H), 7,56 (д, =8,7 Гц, 1H), 7,24 (д, =8,7 Гц, 1H), 7,18-7,09 (м, 2H), 7,03-6,98 (м, 1H), 3,97 (т, =6,4 Гц, 2H), 2,81 (с, 3H), 2,51 (кв, =7,4 Гц, 2H), 1,81-1,73 (м, 2H), 1,53-1,44 (м, 2H), 1,01 (т, =7,4 Гц, 3H), 0,97 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  427,2 [M+H].
Пример 7
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-
c
][1,5]нафтиридин-8-карбонитрил
[0030]
H
c
H
c
d
J
J
J
J
m/z
1
+
Суспензию сырого 8-бром/хлор-1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-4(5)-она, полученного на стадии c примера 1 (140 мг), и цианида меди(I) (50 мг, 0,56 ммоль) в пиридине (1,5 мл) в герметичном сосуде для микроволнового облучения нагревали в микроволновом реакторе при температуре 180°C в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток обрабатывали этилацетатом (15 мл) и затем фильтровали. Фильтрат промывали водой три раза (3×5 мл) и затем упаривали досуха. Полученный сырой продукт очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем с получением 71 мг 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-8-карбонитрила в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 11,23 (с, 1H), 7,80 (д, =8,5 Гц, 1H), 7,73 (д, =8,2 Гц, 1H), 7,23-7,15 (м, 1H), 7,13-7,08 (м, 1H), 7,08-7,01 (м, 1H), 4,00 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,82 (с, 3H), 1,84-1,74 (м, 2H), 1,53-1,47 (м, 2H), 0,98 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  392,1 [M+H].
Пример 8
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-
c
][1,5]нафтиридин-8-карбоновая кислота
[0031]
c
d
J
J
J
m/z
1
+
К суспензии 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбонитрила (56 мг, 0,14 ммоль) в диоксане (1,0 мл) добавляли концентрированную соляную кислоту (0,15 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре 100°C в течение 24 ч. После удаления растворителей при пониженном давлении остаток далее сушили в вакууме с получением 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-][1,5]нафтиридин-8-карбоновой кислоты (45 мг, 77%-ный выход) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,87 (с, 1H), 9,49 (с, 1H), 8,30 (д, =8,1 Гц, 1H), 7,90 (д, =8,4 Гц, 1H), 7,30-7,23 (м, 1H), 7,19-7,15 (м, 1H), 7,14-7,08 (м, 1H), 4,12-3,92 (м, 2H), 2,84 (с, 3H), 1,86-1,74 (м, 2H), 1,53-1,45 (м, 2H), 0,98 (т, =7,4, 7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  411,1 [M+H].
Пример 9
Этил 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксилат
[0032]
1
+
d
δ
J
J
J
J
J
m/z
Смесь 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоновой кислоты (20 мг, 0,049 ммоль) и концентрированной серной кислоты (10 мкл) в этаноле (0,60 мл) в герметичном сосуде для микроволнового облучения нагревали в микроволновом реакторе при температуре 120°C в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Объединенный остаток очищали с помощью полу-препаративной ВЭЖХ с получением этил 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксилата (17 мг, 77%-ный выход) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-)  11,07 (с, 1H), 8,23 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,79 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,19-7,13 (м, 2H), 7,07-7,00 (м, 1H), 4,35-4,24 (м, 2H), 3,99 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,83 (с, 3H), 1,82-1,72 (м, 2H), 1,56-1,42 (м, 2H), 1,30 (т, =7,2 Гц, 3H), 0,97 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  439,2 [M+H].
Пример 10
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-N-этил-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид
(a) 1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-4-хлор-N-этил-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид
[0033]
2
2
2
2
m/z
+
К раствору 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоновой кислоты (25 мг, 0,061 ммоль) в CHCl (0,75 мл) добавляли тионилхлорид (45 мкл, 0,62 ммоль), затем две капли ДМФ. После перемешивания при температуре 46°C в течение ночи реакционную смесь упаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в CHCl (0,80 мл), и затем в раствор при комнатной температуре в течение 30 мин барботировали этанамин. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток промывали водой два раза (2×1 мл) и затем сушили в вакууме с получением 26 мг сырого 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-4-хлор-N-этил-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамида, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. МС (ESI)  456,2 [M+H].
(b) 1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-N-этил-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид
[0034]
1
+
d
J
J
J
J
Суспензию 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-4-хлор-N-этил-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамида (26 мг, 0,057 ммоль) и концентрированной соляной кислотой (10 мкл) в диоксане (0,50 мл) в герметичном сосуде нагревали в микроволновом реакторе при температуре 130°C в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь упаривали досуха при пониженном давлении. Полученный сырой продукт очищали с помощью полу-препаративной ВЭЖХ с получением 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-N-этил-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамида (11 мг, 44%-ный выход) в виде твердого вещества бледно-желтого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,77 (с, 1H), 8,30 (д, =8,5 Гц, 1H), 7,81 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,26-7,16 (м, 2H), 7,13-7,06 (м, 1H), 6,84-6,76 (м, 1H), 4,10-3,90 (м, 2H), 3,42-3,24 (м, 2H), 2,83 (с, 3H), 1,87-1,72 (м, 2H), 1,55-1,42 (м, 2H), 1,11 (т, =7,3 Гц, 3H), 0,97 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI) m/z 438,2 [M+H].
Пример 11
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-3a,4-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамид
[0035]
1
+
d
J
J
J
J
m/z
К суспензии 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-4,5-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбонитрила (10 мг, 0,026 ммоль) в диоксане (0,2 мл) добавляли 6н водный раствор NaOH (40 мкл). Реакционную смесь нагревали при температуре 100°C в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь упаривали досуха при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ с получением 1-(5-бутокси-2-фторфенил)-3-метил-4-оксо-3a,4-дигидро-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-8-карбоксамида (3,2 мг, 30%-ный выход) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,13 (с, 1H), 8,29 (д, =8,4 Гц, 1H), 7,76 (д, =8,3 Гц, 1H), 7,25-7,14 (м, 2H), 7,10-7,02 (м, 1H), 6,59 (с, 1H), 5,32 (с, 1H), 3,99 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,81 (с, 3H), 1,82-1,74 (м, 2H), 1,52-1,46 (м, 2H), 0,97 (т, =7,4, 7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  410,2 [M+H].
Пример 12
8-Хлор-1-(2-хлор-5-(циклопропилметокси)фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
(a) 5-(Бензилокси)-2-хлорбензоламин
[0036]
N,N
m/z
3
+
Смесь 4-хлор-5-нитрофенола (2,25 г, 13,0 ммоль), (бромметил)бензола (2,33 г, 13,6 ммоль) и карбоната цезия (8,50 г, 25,9 ммоль) в безводном -диметилацетамиде (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток обрабатывали водой (300 мл) и затем экстрагировали метиленом три раза (3×30 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха с получением 4-(бензилокси)-1-хлор-2-нитробензола в виде масла. К раствору сырого 4-(бензилокси)-1-хлор-2-нитробензола в EtOH (10 мл) медленно добавляли концентрированную HCl (8 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем добавляли хлорид олова(I) (8,0 г, 42,0 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 0,5 ч реакционную смесь обрабатывали водой (400 мл) и затем экстрагировали метиленом (4×30 мл). Объединенную органическую фазу последовательно промывали насыщенным NaHCO (30 мл) и насыщенным солевым раствором (30 мл), и затем упаривали досуха с получением 3,0 г 5-(бензилокси)-2-хлорбензоламина в виде твердого вещества светло-оранжевого цвета. МС (ESI)  234,1 [M+H].
(b) (5-(Бензилокси)-2-хлорфенил)гидразин
[0037]
2
2
m/z
+
К суспензии 5-(бензилокси)-2-хлорбензоламина (640 мг, 2,74 ммоль) в концентрированной соляной кислоте (5 мл) при температуре 0°C добавляли по каплям раствор нитрита натрия (226 мг, 3,28 ммоль) в воде (3 мл). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 30 мин. Добавляли раствор хлорида олова(II) (2,08 г, 11,0 ммоль) в концентрированной соляной кислоте (3 мл). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем фильтровали. Слой на фильтре собирали. Фильтрат подщелачивали до pH 10 с помощью 10н NaOH и затем экстрагировали CHCl (3×40 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха. Объединенный остаток и собранный на фильтре слой объединяли и очищали на колонке с нейтральным оксидом алюминия, используя градиент 0-20% метанола в этилацетате с получением (5-(бензилокси)-2-хлорфенил)гидразина (300 мг, 44%-ный выход). МС (ESI) 249,1 [M+H].
(c) 8-Хлор-1-(2-хлор-5-гидроксифенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0038]
H
d
J
J
m/z
2
2
6
1
+
К суспензии (5-(бензилокси)-2-фторфенил)гидразина (650 мг, 2,6 ммоль) и 3-ацетил-6-бром-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1)-она (200 мг, 0,71 ммоль) в диоксане (2 мл) добавляли концентрированную HCl (0,1 мл). Реакционную смесь в герметичном сосуде перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин и затем нагревали при температуре 110°C в течение 2 дней. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь обрабатывали водой (200 мл) и затем экстрагировали смесью CHCl/MeOH (10/1) (4×50 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха с получением 409 мг сырого 8-хлор-1-(2-хлор-5-гидроксифенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она, который использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной очистки. Небольшое количество сырого продукта очищали с помощью полу-препаративной ВЭЖХ для уточнения структуры. H ЯМР (500 МГц, ДМСО-) δ 11,70 (с, 1H), 10,13 (с, 1H), 7,77 (д, =8,7 Гц, 1H), 7,54 (д, =8,7 Гц, 1H), 7,47-7,41 (м, 1H), 7,02-6,95 (м, 2H), 2,60 (с, 3H). МС (ESI)  361,0 [M+H].
(d) 8-Хлор-1-(2-хлор-5-(циклопропилметокси)фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0039]
1
+
d
J
J
J
J
m/z
Суспензию 8-хлор-1-(2-хлор-5-гидроксифенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она (60 мг, 0,17 ммоль), (бромметил)циклопропана (30 мкл, 0,27 ммоль) и карбоната натрия (36 мг, 0,23 ммоль) в ДМФ (1,2 мл) в герметичном реакционном сосуде нагревали при температуре 100°C в течение 2 дней. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь фильтровали. Фильтрат разделяли с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ, используя градиент 0-63% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, в течение 16 мин с получением 8-хлор-1-(2-хлор-5-(циклопропилметокси)фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она в виде твердого вещества не совсем белого цвета (7 мг, 10%-ный выход). H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 11,08 (с, 1H), 7,71 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,46 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,38 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,14-7,06 (м, 2H), 3,86 (дд, =7,0, 2,8 Гц, 2H), 2,83 (с, 3H), 1,37-1,24 (м, 1H), 0,73-0,62 (м, 2H), 0,44-0,29 (м, 2H). МС (ESI)  415,1 [M+H].
Пример 13
1-(2,5-Дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0040]
1
+
d
J
J
m/z
К суспензии 2,5-дихлорфенилгидразина (80 мг, 0,45 ммоль) и 3-ацетил-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-она (62 мг, 0,30 ммоль) в этаноле (2 мл) добавляли концентрированную HCl (0,1 мл). Реакционную смесь в герметичном сосуде нагревали в микроволновом реакторе при температуре 160яяC в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли ДМФ (10 мл) и затем фильтровали. Фильтрат выделяли с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ с получением 1-(2,5-дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она (20 мг, 50%-ный выход:). H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 9,95 (с, 1H), 8,27 (дд, =4,5, 1,4 Гц, 1H), 7,66-7,56 (м, 2H), 7,52-7,43 (м, 2H), 7,37 (дд, =8,3, 4,5 Гц, 1H), 2,81 (с, 3H). МС (ESI) 345,0 [M+H].
Пример 14
1-(2-Хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-
c
][1,5]нафтиридин-4(5
H
)-он
[0041]
1
+
d
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 2,5-дихлорфенилгидразина добавляли (2-хлорфенил)гидразин. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,22 (с, 1H), 8,24 (дд, =4,5, 1,4 Гц, 1H), 7,64 (дд, =8,3, 1,4 Гц, 1H), 7,61-7,53 (м, 2H), 7,52-7,42 (м, 2H), 7,34 (дд, =8,3, 4,5 Гц, 1H), 2,82 (с, 3H). МС (ESI)  311,1 [M+H].
Пример 15
1-(2-Хлорфенил)-3,5-диметил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0042]
1
+
d
J
J
J
m/z
К перемешиваемой суспензии гидрида натрия (24 мг, 0,10 ммоль) в ДМФ (0,60 мл) добавляли 1-(2-хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он (12 мг, 0,039 ммоль). После перемешивания суспензии при комнатной температуре в течение 0,5 ч добавляли метилйодид (274 мг, 1,93 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем охлаждали до температуры -70°C. Для гашения реакции добавляли воду (1 мл), затем добавляли ДМФ (5 мл). Полученную смесь фильтровали, и фильтрат выделяли с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ с получением 1-(2-хлорфенил)-3,5-диметил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она (12 мг, 72%-ный выход). H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 8,22 (дд, =4,6, 1,2 Гц, 1H), 7,67 (дд, =8,6, 1,0 Гц, 1H), 7,59-7,53 (м, 2H), 7,51-7,41 (м, 2H), 7,38 (дд, =8,6, 4,2 Гц, 1H), 3,73 (с, 3H), 2,80 (с, 3H). МС (ESI)  325,1 [M+H].
Пример 16
1-(2,5-Дихлорфенил)-3,5-диметил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0043]
1
+
d
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 15, где вместо 1-(2-хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она добавляли 1-(2,5-дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 8,27 (дд, =4,5, 1,4 Гц, 1H), 7,71 (дд, =8,7, 1,2 Гц, 1H), 7,60 (д, =2,2 Гц, 1H), 7,53-7,46 (м, 2H), 7,44 (дд, =8,6, 4,4 Гц, 1H), 3,76 (с, 3H), 2,81 (с, 3H). МС (ESI)  359,0 [M+H].
Пример 17
1-(5-Бутокси-2-хлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0044]
m/z
+
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 2,5-дихлорфенилгидразина добавляли (5-бутокси-2-хлорфенил)гидразин. МС (ESI)  383,2 [M+H].
Пример 18
1-(5-Бутокси-2-фторфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0045]
1
+
d
J
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 2,5-дихлорфенилгидразина добавляли (5-бутокси-2-фторфенил)гидразин. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,69 (с, 1H), 8,32 (дд, =4,6, 1,4 Гц, 1H), 7,69 (дд, =8,4, 1,5 Гц, 1H), 7,37 (дд, =8,3, 4,5 Гц, 1H), 7,21-7,07 (м, 2H), 7,04-6,96 (м, 1H), 3,98 (т, =6,5 Гц, 2H), 2,82 (с, 3H), 1,84-1,68 (м, 2H), 1,56-1,42 (м, 2H), 0,97 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  367,2 [M+H].
Пример 19
8-Хлор-1-(2,5-дихлорфенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0046]
1
+
d
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 3-ацетил-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-она добавляли 3-ацетил-6-бром-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-он. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,94 (с, 1H), 7,67 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,58 (д, =2,3 Гц, 1H), 7,55-7,46 (м, 2H), 7,38 (д, =8,5 Гц, 1H), 2,81 (с, 3H). МС (ESI)  379,0 [M+H].
Пример 20
1-(5-Бутокси-2-хлорфенил)-8-хлор-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0047]
1
+
d
J
J
J
J
J
J
J
m/z
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 2,5-дихлорфенилгидразина и 3-ацетил-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-она добавляли (5-бутокси-2-хлорфенил)гидразин и 3-ацетил-6-бром-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-он. H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,83 (с, 1H), 7,66 (д, =8,6 Гц, 1H), 7,43 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,36 (д, =8,5 Гц, 1H), 7,09 (д, =2,9 Гц, 1H), 7,04 (дд, =8,9, 2,9 Гц, 1H), 3,99 (дт, =14,3, 7,0 Гц, 2H), 2,81 (с, 3H), 1,91-1,71 (м, 2H), 1,56-1,40 (м, 2H), 0,97 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  417,1 [M+H].
Пример 21
1-(5-Бутокси-2-хлорфенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0048]
2
2
1
+
d
J
J
J
J
J
J
m/z
К раствору 1-(5-бутокси-2-хлорфенил)-8-хлор-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она (50 мг, 0,12 ммоль) в диоксане (2,0 мл) добавляли раствор метоксида натрия (0,5н, 1 мл в MeOH), затем порциями в атмосфере аргона добавляли NaH (60 мг, 2,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и затем нагревали в герметичном сосуде в микроволновом реакторе при температуре 160°C в течение 6 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли еще раствор метоксида натрия (0,5н, 0,8 мл в MeOH) и NaH (80 мг, 3,3 ммоль). Реакционный сосуд герметично закрывали и нагревали в микроволновом реакторе при температуре 160°C в течение еще 6 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (100 мл) и затем экстрагировали CHCl (4×25 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха при пониженном давлении. Объединенный остаток очищали с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ, используя градиент 0-70% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, в течение 16 мин с получением 1-(5-бутокси-2-хлорфенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она в виде твердого вещества не совсем белого цвета (36 мг, 72%-ный выход). H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,82 (с, 1H), 7,65 (д, =8,8 Гц, 1H), 7,41 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,12 (д, =2,8 Гц, 1H), 6,98 (дд, =8,9, 2,8 Гц, 1H), 6,87 (д, =8,8 Гц, 1H), 4,08-3,88 (м, 2H), 3,36 (с, 3H), 2,82 (с, 3H), 1,83-1,69 (м, 2H), 1,55-1,39 (м, 2H), 0,96 (т, =7,4 Гц, 3H). МС (ESI)  413,1 [M+H].
Пример 22
1-(2-Хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
(a) 8-Хлор-1-(2-хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0049]
Указанное в заголовке соединение получали способом, аналогичным способу, описанному для синтеза по примеру 13, где вместо 2,5-дихлорфенилгидразина и 3-ацетил-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-она добавляли (2-хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)гидразин и 3-ацетил-6-бром-4-гидрокси-1,5-нафтиридин-2(1H)-он.
(b) 1-(2-Хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-он
[0050]
1
+
d
J
J
J
J
J
m/z
К раствору сырого 8-хлор-1-(2-хлор-5-(циклобутилметокси)-фенил)-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она (50 мг, 0,11 ммоль) в метаноле (1,5 мл) добавляли раствор метоксида натрия (5M, 1 мл в MeOH), затем добавляли CuI (22 мг, 0,12 ммоль) в атмосфере аргона. Смесь нагревали в герметичном сосуде в микроволновом реакторе при температуре 130°C в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (20 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (20 мл). Объединенную органическую фазу упаривали досуха при пониженном давлении. Объединенный остаток очищали с помощью системы полу-препаративной ВЭЖХ, используя градиент 0-43% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% муравьиной кислоты, в течение 16 мин с получением 1-(2-хлор-5-(циклобутилметокси)фенил)-8-метокси-3-метил-1H-пиразолo[4,3-c][1,5]нафтиридин-4(5H)-она в виде твердого вещества белого цвета (14 мг, 30%-ный выход). H ЯМР (500 МГц, хлороформ-) δ 10,67 (с, 1H), 7,62 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,41 (д, =8,9 Гц, 1H), 7,13 (д, =2,9 Гц, 1H), 6,98 (дд, =8,9, 2,9 Гц, 1H), 6,86 (д, =8,9 Гц, 1H), 3,97-3,90 (м, 2H), 3,36 (с, 3H), 2,82 (с, 3H), 2,79-2,72 (м, 1H), 2,16-2,09 (м, 2H), 1,99-1,90 (м, 2H), 1,88-1,81 (м, 2H). МС (ESI)  425,1 [M+H].
ПРИМЕР 23
Измерение ингибирования PDE2 in vitro
[0051]
r-hPDE2A
2
(номер доступа NM_002599, фосфодиэстераза 2A Homo sapiens, цГМФ-стимулированная, вариант транскрипции 1) Вектор экспрессии млекопитающих с копией рекомбинантной кДНК гена был приобретен у компании Origene. Белок экспрессировался посредством временной трансфекции клеток HEK293. Клетки собирали через 48 часов после трансфекции, промывали один раз буфером TBS (50 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl), затем лизировали ультразвуком в холодном буфере для гомогенизации (50 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 5 мМ MgCl, 1× смесь ингибиторов протеаз). Гомогенат центрифугировали в течение 30 мин при 15000 g при температуре 4°C с получением растворимой цитозольной фракции. Концентрацию белка в цитозоле определяли, используя набор BCA Protein Assay Kit (Pierce) вместе с бычьим сывороточным альбумином в качестве стандарта.
[0052]
Анализ:
PDE2A анализировали с помощью FL-цАМФ в качестве субстрата. Сначала проводили ферментативное титрование для определения рабочей концентрации PDE. Концентрация фермента, обуславливающая активность 100 ΔмП в отсутствие ингибитора, считается подходящей рабочей концентрацией для PDE.
[0053]
2
3
Фермент PDE разбавляли в стандартном реакционном буфере (10 мМ Трис-HCl, pH 7,2, 10 мМ MgCl, 0,1% БСА, 0,05% NaN) в соответствии с кривой титрования. Для анализа PDE2 реакционный буфер дополняли 1 мкМ цГМФ для полной активации фермента. В каждую лунку добавляли 99 мкл разбавленного раствора фермента в 96-луночном полистирольном планшете с плоским дном и затем добавляли ~1 мкл испытуемого соединения, растворенного в 100% ДМСО. Соединения смешивали и предварительно инкубировали вместе с ферментом в течение 10 мин при комнатной температуре.
[0054]
Реакцию конверсии FL-cNMP инициировали, добавляя субстрат (конечная 45 нМ). Смесь ферментов и ингибиторов (16 мкл) и раствор субстрата (4 мкл 0,225 мкМ) объединяли в 384-луночном планшете для микротитрования. Реакционную смесь инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин. Реакцию останавливали, добавляя в каждую лунку 384-луночного планшета 60 мкл связывающего реагента (гранулы IMAP с разведением 1:400 в связующем буфере с добавлением противовспенивателя с разбавлением 1:1800). Планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа, чтобы обеспечить полное связывание IMAP, а затем помещали в многорежимный планшет-ридер Envision (PerkinElmer, Shelton, CT) для измерения поляризации флуоресценции (Δmp).
[0055]
50
50
Снижение концентрации цАМФ, измеренное как уменьшение Δmp, указывало на ингибирование активности PDE. Значения IC определяли путем измерения активности фермента в присутствии 8-16 концентраций соединения в диапазоне от 0,00037 нМ до 80 000 нМ, а затем расcчитывая концентрации лекарственного средства по сравнению с ΔmP. Значения тестовых лунок нормализовали с контрольными реакциями, проводимыми на том же планшете (значения, пересчитанные в % от контроля). Значения IC оценивали, используя программное обеспечение нелинейной регрессии, подгоняя четырех-параметровую односайтовую модель доза-реакция (XLFit; IDBS, Cambridge, MA). Нижняя часть кривой фиксировали при 0% контроля.
[0056]
Контроль качества:
50
Для того, чтобы определить IC ингибитора, выбирали концентрацию фермента, которая дает оптимальный диапазон сигналов 100-200 миллиполяризационных единиц. Суммарную интенсивность флуоресценции каждой лунки образца измеряли для расчета среднего и стандартного отклонения. Если общая интенсивность флуоресценции любой лунки образца не находилось в пределах среднего значения ±3SD, то значение mp этой конкретной лунки не учитывалось.
[0057]
50
50
50
Используя описанную выше или подобную процедуру IMAP, авторы проверили проприетарную библиотеку соединений, сфокусированную на PDE, для идентификации новых соединений с наномолярной ингибиторной активностью PDE2. Представленные в описании в качестве примера соединения (например, соединения по примерам 1-22) тестировали, и они показывали, как правило, значение IC, равное меньше 2 мкМ, большинство соединений имели значение IC, равное меньше или 250 нМ, максимальное число соединений, равное меньше 100 нМ, некоторые меньше 10 нМ. В частности, значения IC Bay 60-7550 и соединений по примерам 17, 19, 20, 21 и 22 показаны ниже.
Пример
PDE2 IC<sub>50</sub> (мкМ)
Bay 60-7550
0,001
19
0,073
20
0,012
17
0,028
21
0,0094
22
0,0059
ПРИМЕР 24
Фармакокинетическое исследование на мышах
[0058]
819
19
J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci.
Rapid Commun. Mass Spec.
Мышам давали одну пероральную дозу соединения по примеру 22 (10 мг/кг, ПО) и измеряли доступность в плазме и головном мозге (0,25-4 ч), используя ВЭЖХ и ЖХ-МС, с применением способов, аналогичных способам, описанным в работах Zhao et al., (2005) (1):73-80, и Appels, N.M., et al., 2005. (15): p. 2187-92. Эксперимент показал, что соединение по примеру 22 имеет хорошую доступность в головной мозг, как показано в таблице ниже, по сравнению с опубликованным стандартным Bay 60-7550, который имеет Cmax 3 нг/мл; Tmax 0,25 ч и отношение объема в крови к объему плазмы 0,04 при 10 мг/кг ПО.
Параметры PK
Описание
Прим. 22 10 мг/кг ПО мозга
Кровь/плазма Соотношение
E полужизни
час
2,4
Cmax (набл.)
нг/мл
17
1,4
Tmax (набл.)
час
2,0
AUC (0-4 час) (набл. площадь)
нг-час/мл
50
1,4
AUC (площадь)
нг-час/мл
83
0,9
ПРИМЕР 25
Измерения цГМФ в мозге мыши
in vivo
:
[0059]
0
0
0
0
Мышам давали одну внутрибрюшинную (в.б.) дозу соединения по примеру 22 (3 мг/кг) или BAY 60-7550 (3 мг/кг), а затем убивали сфокусированным микроволновым облучением через 15, 30 или 60 минут, как показано на фигуре 1. Полосатое тело выделяли из мозга мыши и анализировали на уровни цГМФ. К образцам ткани добавляли трихлоруксусную кислоту (TCA) до конечной концентрации 5% TCA, и ткань немедленно обрабатывали ультразвуком в растворе и хранили на льду. Образец, обработанный ультразвуком, центрифугировали при 15000×g течение 20 мин при 4°С для удаления осажденного белка. Для извлечения TCA образец трижды промывали насыщенным водным эфиром. Образцы затем сушили в вакууме (Speedvac, Savant SPD111V) при комнатной температуре и повторно суспендировали в 100 мкл буфера EIA. Оба образца и серийные разбавленные стандартов цГМФ ацетилировали, используя 0,64М КОН и 4% уксусный ангидрид для увеличения сродства цГМФ-антитела. Каждый образец тестировали в двух повторах в предварительно обработанных планшетах для анализа вместе с 8-точечными стандартными разведениями цГМФ. Кроме того, предусматривали пустое, максимальное связывание (B) и неспецифическое связывание. Во все лунки, содержащие образец и стандарт, объемом 50 мкл, добавляли равные объемы AChE-связанных цГМФ и цГМФ-антител. Планшет инкубировали при 4°С в течение 18 часов. Затем лунки промывали 5 раз промывочным буфером. Добавляли реагент для обнаружения, содержащий ацетилтиохолин и 2-нитробензойную кислоту, и планшет инкубировали при комнатной температуре до тех пор, пока OD B лунок не составил по меньшей мере 0,5, как записано программным обеспечением SoftMax 4.8 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Каждую точку данных преобразовывали в % B/B (100×[(образец или стандартное OD-среднее неспецифическое связывание)/(среднее значение B-среднее неспецифическое связывание)]). Стандарты наносили на график и подгоняли к 4-параметрическому логистическому уравнению (фигура 1). Концентрации образцов интерполировали со стандартной кривой, используя Microsoft Excel и GraphPad Prizm.
[0060]
Используя методику, описанную или подобную описанной выше, эксперимент показывал, что соединение по примеру 22 увеличивает уровни цГМФ в полосатом теле мышей после системного дозирования по сравнению с Bay 60-7550 (см. фигуру 1), что показывает улучшение доступности в мозг соединения примера 22 по сравнению с Bay60-7550.