СПОСОБ КОНЪЮГАЦИИ

1. Способ конъюгации антигена, включающий стадии
a) активации антигена для получения активированного антигена;
b) реакции активированного антигена и белка-носителя для получения иминовой группы, связывающей активированный антиген с белком-носителем; и
c) восстановления иминовой группы с использованием восстанавливающего средства, включающего триацетоксиборогидридный компонент, для получения конъюгированного антигена;
или
а) активации антигена для получения активированного антигена;
b′) реакции активированного антигена и линкера для получения иминовой группы, связывающей активированный антиген с линкером;
с′) восстановления иминовой группы с использованием восстанавливающего средства, включающего триацетоксиборогидридный компонент, для получения антигена-линкера; и
d) реакции антигена-линкера с белком-носителем для получения конъюгированного антигена; где антиген происходит от Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Salmonella Vi или Staphylococcus epidermidis, где антиген является бактериальным капсулярным сахаридом и где стадия а) включает реакцию антигена с перийодатом.
2. Способ по п.1, где восстанавливающее средство не содержит цианоборогидридный компонент.
3. Способ по любому из пп.1 и 2, где антигеном является бактериальный сахарид, происходящий от S.pneumoniae, Н.influenzae, N.meningitidis, S.aureus, E.faecalis, E.faecium, Salmonella Vi или S.epidermidis.
4. Способ по п.3, где антигеном является бактериальный капсулярный сахарид от S.pneumoniae серотипа, выбираемого из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и 33F.
5. Способ по п.4, где бактериальным капсулярным сахаридом является капсулярный сахарид S.pneumoniae 23F.
6. Способ по п.4, где бактериальным капсулярным сахаридом является капсулярный сахарид S.pneumoniae 6В.
7. Способ по п.4, где бактериальным полисахаридом является полисахарид или олигосахарид Haemophilus influenzae b (Hib).
8. Способ по любому из пп.1, 2, 4-7, где белком-носителем является белок, выбираемый из группы, состоящей из анатоксина столбняка (ТТ), фрагмента С ТТ, анатоксина дифтерии, CRM197, пневмолизина, белка D, PhtD, PhtDE и N19.
9. Способ по любому из пп.1, 2, 4-7, где антиген и белок-носитель лиофилизируют после стадии а).
10. Способ по п.9, где антиген и белок-носитель лиофилизируют в присутствии невосстанавливающего сахара.
11. Способ по любому из пп.1, 2, 4-7, 10, где стадия а) включает реакцию антигена с 0,0001-0,7 молярными эквивалентами перийодата.
12. Способ по любому из пп.1, 2, 4-7, 10, включающий дополнительную стадию е) очистки конъюгированного антигена и/или включающий дополнительную стадию f), где конъюгированный антиген стерильно фильтруют, и/или дополнительную стадию смешивания конъюгированного антигена с дополнительными антигенами.
13. Способ по п.12, где дополнительные антигены включают по меньшей мере 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 сахаридов S.pneumoniae, выбираемых из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и 33F.
14. Способ по любому из пп.1, 2, 4-7, 10, 13, где конъюгированный антиген смешивают с добавкой, где необязательно добавкой является соль алюминия.
15. Способ конъюгации антигена, включающий стадии
a) активации антигена для получения активированного антигена;
а′) лиофилизации активированного антигена и белка-носителя с последующим восстановлением в DMSO или DMF;
b) реакции активированного антигена и белка-носителя для получения иминовой группы, связывающей антиген с белком-носителем; и
c) восстановления иминовой группы с использованием восстанавливающего средства, включающего триацетоксиборогидридный компонент, для получения конъюгированного антигена;
или
а) активации антигена для получения активированного антигена;
а′) лиофилизации активированного антигена и линкера с последующим восстановлением в DMSO или DMF;
b′) реакции активированного антигена и линкера для получения иминовой группы, связывающей активированный антиген с белком-носителем; и
с′) восстановления иминовой группы с использованием восстанавливающего средства, включающего триацетоксиборогидридный компонент, для получения антигена-линкера;
d) реакции антигена-линкера с белком-носителем для получения конъюгированного антигена, где антиген является бактериальным капсулярным сахаридом и где стадия а) включает реакцию антигена с перийодатом.
16. Способ по пункту 15, где восстанавливающее средство не содержит цианоборогидридный компонент.
17. Способ по любому из пп.15 и 16, где антигеном является бактериальный сахарид, происходящий от S.pneumoniae, Н.influenzae, N.meningitidis, S.aureus, E.faecalis, E.faecium, Salmonella Vi или S.epidermidis.
18. Способ по п.17, где антигеном является бактериальный капсулярный сахарид от S.pneumoniae серотипа, выбираемого из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и 33F.
19. Способ по п.18, где бактериальным капсулярным сахаридом является капсулярный сахарид S.pneumoniae 23F.
20. Способ по п.18, где бактериальным капсулярным сахаридом является капсулярный сахарид S.pneumoniae 6B.
21. Способ по п.18, где бактериальным полисахаридом является полисахарид или олигосахарид Haemophilus influenzae b (Hib).
22. Способ по любому из пп.15, 16, 18-21, где белком-носителем является белок, выбираемый из группы, состоящей из анатоксина столбняка (ТТ), фрагмента С ТТ, анатоксина дифтерии, CRM197, пневмолизина, белка D, PhtD, PhtDE и N19.
23. Способ по любому из пп.15, 16, 18-21, где антиген и белок-носитель лиофилизируют после стадии а).
24. Способ по п.23, где антиген и белок-носитель лиофилизируют в присутствии невосстанавливающего сахара.
25. Способ по любому из пп.15, 16, 18-21, 24, где стадия а) включает реакцию антигена с 0,0001-0,7 молярными эквивалентами перийодата.
26. Способ по любому из пп.15, 16, 18-21, 24, включающий дополнительную стадию е) очистки конъюгированного антигена и/или включающий дополнительную стадию f), где конъюгированный антиген стерильно фильтруют, и/или дополнительную стадию смешивания конъюгированного антигена с дополнительными антигенами.
27. Способ по п.26, где дополнительные антигены включают по меньшей мере 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 сахаридов S.pneumoniae, выбираемых из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и 33F.
28. Способ по любому из пп.15, 16, 18-21, 24, 26, где конъюгированный антиген смешивают с добавкой, где необязательно добавкой является соль алюминия.