Иммунологические аспекты доклинического применения современных пробиотических трансдермальных терапевтических систем как альтернатива антибиотической иммунодепресии

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ СОВРЕМЕННЫХ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ТРАНСДЕРМАЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СИСТЕМ КАК АЛЬТЕРНАТИВА АНТИБИОТИЧЕСКОЙ ИММУНОДЕПРЕСИИ

Н.А. Забокрицкий

Кафедра фармакологии ГОУ ВПО УГМА Росздрава ул. Репина, 3, Екатеринбург, Россия, 620219

Статья посвящена одной из важнейших проблем современной медицинской науки и здравоохранения — вторичным иммуносупрессивным состояниям, возникающими в результате широкого нерационального использования антибиотиков. Автором предлагаются альтернативные аспекты решения этого вопроса возможностью замещения антибиотиков пробиотиками, причем применение последних предлагается нетрадиционным способом — их включением в современные трансдер-мальные терапевтические системы. Описанные в статье результаты экспериментальных исследований показывают выраженное иммуномодулирующее действие гелевых пробиотических препаратов на некоторые факторы гуморального иммунитета.

Ключевые слова: пробиотик, трансдермальные терапевтические системы, иммуностимуляция.

Трансдермальные терапевтические системы (TTS) представляют собой альтернативный способ назначения тех лекарств, которые не могут быть введены иначе, или их традиционный пероральный путь назначения является менее эффективным [4]. Кожа обладает превосходным барьерным свойством, что ограничивает типы молекул, которые могут быть через нее введены. Тем не менее для лекарств, обладающих этими свойствами, способ трансдермальной доставки препарата обеспечивает непрерывное дозирование на протяжении продолжительного периода времени [17]. В TTS лекарственная молекула диффундирует из лекарственной формы в поверхность кожи, затем препарат проходит сквозь роговой слой и достигает эпидермиса, а потом и дермы, где васкулярная сеть переносит его молекулы к органам [1, 7—9, 12, 15].

Трансдермальная доставка лекарств имеет несколько преимуществ. В сравнении с пероральным назначением возможность обеспечить более быстрое действие лекарств, возможность избежать проблем, связанных с пероральным приемом: инактивация или снижение активности лекарства в результате первого пассажа и желудочного метаболизма, а также связанные с этим неблагоприятные реакции, возможность немедленного прекращения лечения при развитии неблагоприятных реакций, обеспечение постоянной концентрации препарата в крови, без колебаний концентрации и связанных с этим неблагоприятных реакций. Снижение частоты назначения за счет доставки необходимой дозы препарата в более продолжительный период времени. Уменьшение необходимой дозы препарата, так как снижаются потери препарата, связанные с метаболизмом. В нашей стране в каче-

стве трансдермальных терапевтических систем (TTS) применяются такие чрез-кожные проводники, как диметилсульфоксид и диметилформамид. Поиск новых эффективных препаратов-проводников привел российских исследователей к обоснованию возможности применения кремний- и титансодержащих (кремнийорга-нический глицерогидрогель — КГГ, тизоль, эфтидерм) органических веществ [7—8]. Для лечения большинства инфекционных заболеваний кожной локализации традиционно используются химиотерапевтические антимикробные средства — антибиотики. Положительным моментом действия антибиотиков по сравнению с современными пробиотиками является то, что наиболее эффективные из антибиотиков оказывают свое действие гораздо быстрее последних. Это следует учитывать при лечении терминальных состояний. Существенные отрицательные последствия от применения антибиотиков известны: возникновение как местных, так и системных дисбактериозов, снижение иммунологической реактивности вследствие иммуносупрессирующего действия антибиотиков, снижение эффективности из-за эффекта резистентности патогенной микрофлоры и т.д. [2—3, 16—20]. Кроме того, эти препараты дороги и вводятся, как правило, парэнтерально, что создает определенные организационные проблемы. В отличие от антибиотиков пробио-тики оказывают свое действие физиологически, не провоцируя иммуносупрессии, дисбактериозов и прочих негативных явлений [18]. Более того, препараты можно применять после антибиотиков для коррекции этих осложнений. В то же время одним из важнейших свойств пробиотических препаратов является их хорошо выраженное иммуномодулирующее действие [14, 19]. Так, в частности, пробиоти-ческие спорообразующие аэробные бациллы и молочнокислые бактерии способны стимулировать факторы клеточного и гуморального иммунитета [11]: фагоцитарную активность нейтрофилов крови, легочных и перитонеальных макрофагов, повышать численность некоторых субпопуляций лимфоцитов (В-клеток, Т-хелперов и соотношение Т-хелперы/Т-супрессоры), а также увеличивать в периферической крови содержание таких факторов, как ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-6 и ИЛ-10, индуцировать синтез эндогенного интерферона [5, 6, 10, 13]. В связи с вышеизложенным перспективность включения пробиотиков в состав TTS очевидна.

Цель работы — оценить выраженность иммуномодулирующего действия нового гелевого образца пробиотика Субплант на основе бактерий Bacillus sub-tilis двух видов штаммов, Lactobacterium plantarum и трех видов современных TTS — тизоля, эфтидерма и КГГ на некоторые показатели гуморального и клеточного иммунитета у лабораторных животных.

Материалы и методы исследования. Изучаемые препараты и гелевые образцы смешивали с таким расчетом, чтобы получить в конечном итоге лекарственную форму, содержащую в своем составе 1, 2, 10, 100 доз Субпланта (разовая терапевтическая доза Субпланта составляет 3,6 ± 0,2 и 8,2 ± 0,7 • 106 кл/см-3 В. Subtilis 9906, В. Subtilis 9907 и L. Plantarum 8Р-А3 соответственно). Препарат сравнения — антибиотический ранозаживляющий гель — левосин.

Для оценки изменений показателей иммунитета в эксперименте были использованы белые крысы линии подтипа Vistar в количестве 150 животных (по 30 в каждой группе), которым на предварительно выстриженный участок шерсти 4 х 4 см в течение 7 суток наносили испытуемые экспериментальные препараты.

Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием метода вариационной статистики с использование программы МБ Ехе1. Оценку разности достоверности различий определяли с помощью критерия Стьюдента. Различия считали достоверными при величине р < 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение. Гуморальный статус при оценке терапевтической эффективности испытуемых препаратов у животных оценивали путем определения следующих количественных показателей сыворотки крови: титра иммуноглобулинов А, Е, G, М, а-интерферона, рецепторного антагониста интерлейкина (РА ИЛ-1).

Полученные экспериментальные данные влияния лечения испытуемыми препаратами на количественное изменение показателей гуморального иммунитета при моделировании локализованной гнойной инфекции кожи у экспериментальных животных представлены в рис. 1—5. Как видно из данных рис. 1—5, в группе подопытных животных, по сравнению с контрольной (интактной) группой животных, на 1-е сутки отмечается повышение уровня всех изучаемых показателей гуморального иммунитета. В большей степени возросла концентрация иммуноглобулина М (более чем в 2 раза), циркулирующих иммунных комплексов (более чем в 2 раза) и иммуноглобулина Е (в 4 раза), а также концентрация исследуемых цитокинов. Титр иммуноглобулина Е увеличился в 4 раза (до величины 0,93 ± 0,04 мг-см-3).

Рис. 1. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета (М ± т) при р < 0,05

Рис. 2. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета (М ± т) при р < 0,05

" Количественные изменения 1д й

(мг/см3) в периферической крови лабораторных животных

28 24

Субплант + Субплант + Субплант + Левосин Контроль

КГГ Эфтидерм Тизоль

на 1-е сутки Щ на 7-е сутки

Рис. 3. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета (М± т) при р < 0,05

а-ИФН Количественные изменения а-ИФН

(пг/см3) в периферической крови лабораторных животных

у

1 1 1 1 \ -г

\ 1 ; * 1 1 1 * 11

Субплант + Субплант + Субплант + Левосин Контроль

КГГ Эфтидерм Тизоль

Н на 1-е сутки Щ на 7-е сутки

Рис. 4. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета (М ± т) при р < 0,05

ИЛ-1 Количественные изменения рецепторного антагониста

(пг/см3) ИЛ-1 (пг/см3) в периферической крови лабораторных животных

40 -л-т=-

Субплант + Субплант + Субплант + Левосин Контроль

КГГ Эфтидерм Тизоль

Ы на 1-е сутки  на 7-е сутки

Рис. 5. Количественные изменения показателей гуморального иммунитета (М ± т) при р < 0,05

Исследование количественного содержания цитокинов в сыворотке крови подопытных животных показало высокие значение титра а-интерферона и рецепторного антагониста интерлейкина-1 во всех без исключения группах экспериментальных животных.

Таким образом, исследования по оценке иммунного статуса подопытных животных, получавших испытуемые гелевые препараты для наружного применения на основе Субпланта, позволяет сделать заключение о наличии у них определенных иммуномодулирующих свойств.

Более выраженные эффекты отмечены для препарата на основе Субпланта и КГГ, что выявлено также при их сравнении с препаратом левосином.

Заключение. Согласно полученным результатам, в доклинической оценке экспериментальных пробиотических препаратов на основе современных транску-танных проводников в ТТБ наблюдается выраженный иммуномодулирующий эффект при местном применении исследуемых препаратов, что сопровождается влиянием на различные факторы клеточного и гуморального иммунитета и выражалось в стимуляции клеточного фагоцитоза, увеличении титра иммуноглобулинов А, Е, в, М и а-интерферона, активности Т- и В-клеточного звена иммунитета.

Таким образом, есть все основания рекомендовать предлагаемые экспериментальные пробиотические ТТБ для дальнейших расширенных клинических исследований как современную альтернативу решения проблемы антибиотической иммуносупресии.

ЛИТЕРАТУРА

[1] Амирова И.А. Проницаемость кожи после контакта с нефтью и мазутом // Вестник дерматологии и венерологии. — 1996. — № 1. — С. 46 —47.

[2] Сорокулова И.Б. // Антибиотики и химиотерапия. — 1996. — Т. 41. — № 10. — С. 13—15.

[3] Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию // Антибиотики и химиотерапия. — 1998. — 43. — № 9. — С. 44—48.

[4] Белоусов Ю.Б. Трансдермальные терапевтические системы // Качествен. клин. практика. — М.: Медицина, 2001. — Т. 1. — С. 7—10.

[5] Бляхер М.С. Характер влияния биоспорина на некоторые показатели иммунитета // Проблемы инфекционных болезней. Сб. статей, посвящ. 100-летию со дня рождения Г.Н. Габ-рического. — М., 2000. — С. 23—27.

[6] Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков // Микробиол. журн. — 1998. — № 4. — С. 107—112.

[7] Васильев А.Е. Трансдермальные терапевтические системы доставки лекарственных веществ (обзор) // Хим.-фарм. ж. — 2001. — Т. 35. — № 11. — С. 29—42.

[8] Глазкова Л.К. Урогенитальная хламидийная инфекция. — Екатеринбург, 1997. — С. 74.

[9] Дмитрук С.И. Некоторые вопросы косметологии. — Томск, 2000. — С. 178.

[10] Карсонова М.И. Иммуностимулирующая активность мурамилдипептида // Журн. мик-робиол. — 1999. — № 3. — С. 105.

[11] Кетлинский С.А., Калинина Н.М. // Иммунология для врача. — СПб.: Гиппократ, 1998. — С. 156.

[12] Козин В.М. Дерматология. — Минск, 1999. — С. 58—59.

[13] Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. Иммуномодулирующее действие препа-ратов-эубиотиков // Вестник РАМН. — М., 1997. — № 3. — С. 30—34.

[14] Николаева И.В., Бондаренко В.М., Анокин В.А. и др. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактериоза [текст] / И.В. Николаева // Журн. микробиол. — 2000. — № 1. — С. 19.

[15] Степанова Э.Ф., Андреева И.Н., Кузякова Л.М. и др. Гели для чрескожного всасывания биологически активных веществ растительного происхождения // V Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». Тез. докл. — М., 1998. — С. 529.

[16] Таточенко В.К., Озерецковский Н.А. // Иммунопрофилактика. 6-е изд. — М.: Медицина, 2003. — С. 132—138.

[17] Утц С.Р., Одоевская О.А. Морфофункциональные особенности женской кожи // Вестник дерматологии и венерологии. — 1999. — № 3. — С. 8—11.

[18] Харечко А.Т., Ларионов Л.П. и др. Эубиотики для профилактики, лечения и реабилитации больных при инфекционных заболеваниях и дисбактериозах // Методические рекомендации. — Екатеринбург, 1998.

[19] Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание // Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. — М., 1998.

[20] Шендеров Б.А., Маквелова М.А. и др. Пробиотики и функциональное питание [текст] / Б.А. // Антибиотики и химиотерапия. — 1997. — № 7.— С. 30—34.

IMMUNOLOGICAL ASPECTS PRE-CLINICAL OF APPLICATION MODERN PROBIOTICAL THROUGH-LEATHER THERAPEUTIC SYSTEMS AS ALTERNATIVE ANTIBIOTICAL IMMUNOSUPPRESSION

N.A. Zabokritskiy

Department of pharmacology Ural State Medical Academy Repina str., 3, Ekaterinburg, Russia, 620219

Clause is devoted to one of the major problems of a modern medical science and public health services — secondary immunosuppression to the conditions, resulting wide irrational use of antibiotics. The author offers alternative aspects of the decision of this question by an opportunity of replacement of antibiotics probiotics, and application of the last is offered in the nonconventional way — their inclusion in modern through-leather therapeutic systems. The results of experimental researches described in clause show expressed immunomodulatory action gels probiotical preparations on some factors humoral immunity.

Keywords: the probiotic, through-leather therapeutic systems, immunostimulation.