СОСТАВНОЙ ПОЛИПЕПТИД, ИМЕЮЩИЙ МЕТАЛЛСВЯЗЫВАЮЩИЙ МОТИВ, И СОДЕРЖАЩАЯ ИХ МОЛЕКУЛЯРНАЯ КОНСТРУКЦИЯ

1
2
1
2
1. Составной полипептид, содержащий родительский полипептид и металлсвязывающий мотив, где металлсвязывающий мотив включает аминокислотную последовательность CXXHA (SEQIDNo.1) в порядке от N-конца до C-конца или в порядке от С-конца до N-конца, при этом Xпредставляет собой глицин или пролин, а Х представляет собой глицин или аланин, а металлсвязывающий мотив расположен на N- или С-конце родительского полипептида.
2. Составной полипептид по п. 1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность металлсвязывающего мотива представляет собой CGGHA (SEQIDNo. 2), CPGHA (SEQIDNo. 3), CGAHA (SEQIDNo. 4), CPAHA (SEQIDNo. 5), GCGGHA (SEQIDNo. 6), ACPGHA (SEQIDNo. 7), и GCPGHA (SEQIDNo. 8).
3. Составной полипептид по п. 1, отличающийся тем, что родительский полипептид представляет собой пептидный гормон, рецепторсвязывающий пептидомиметический лиганд, фрагмент антитела или цитокин или их эквивалент.
4. Молекулярная конструкция, содержащая составной полипептид по п. 1 и функциональный элемент, где функциональный элемент имеет сульфгидрильную (SH)-реакционноспособную группу, которая конъюгирована с тиоловой группой остатка цистеина в металлсвязывающем мотиве.
5. Молекулярная конструкция по п. 4, отличающаяся тем, что SH-реакционноспособная группа представляет собой малеимидную, иодацетильную, бромацетильную, винилсульфонную, моносульфоновую, метилсульфонилбензотиазольную или 2-пиридилдитиольную группу.
6. Молекулярная конструкция по п. 4, отличающаяся тем, что составной полипептид находится в димерной форме, каждый из которых имеет один конъюгированный с ним функциональный элемент.
7. Молекулярная конструкция по п. 4, отличающаяся тем, что функциональный элемент содержит
центральное ядро, при этом центральное ядро содержит от 2 до 10 остатков лизина (K),
необязательно, один или несколько наполнителей, в которых любые два К остатка находятся рядом друг с другом или разделены наполнителем,
необязательно, концевой спейсер, где концевые спейсеры представляют собой N-концевой спейсер, связанный с N-концом первого K остатка, или C-концевой спейсер, связанный с C-концом последнего K остатка, и каждый из наполнителей и концевой спейсер содержит, независимо, (1) от 1 до 12 аминокислотных остатков, отличных от K, или (2) ПЭГилированную аминокислоту, имеющую от 1 до 12 повторов звена этиленгликоля (EG), и
SH-реакционноспособную группу, связанную с первым или последним K остатком центрального ядра путем образования с ним амидной связи, или, когда присутствует концевой спейсер, SH-реакционноспособная группа связана с концевым аминокислотным остатком концевого спейсера образуя с ним амидную связь; а также
от 2 до 10 нацеливающих, эффекторных или фармакокинетических элементов, где,
каждый нацеливающий, эффекторный или фармакокинетический элемент связан с K остатком ядра, или
когда молекулярная конструкция дополнительно содержит от 2 до 10 связывающих ветвей, один конец каждой связывающей ветви связан с K остатком ядра посредством образования амидной связи с ε-аминогруппой остатка K, а другой конец каждой связующей ветви связан с каждым нацеливающим, эффекторным или фармакокинетическим элементом, где связывающая ветвь представляет собой пептид, содержащий 2-12 аминокислотных остатков, отличных от K; или цепь полиэтиленгликоля (ПЭГ), имеющую от 2 до 24 повторов звеньев EG.
8. Молекулярная конструкция по п. 7, отличающаяся тем, что центральное ядро несет локальный отрицательный заряд на аминокислотном остатке, связанном с SH-реакционноспособной группой, или рядом с ним.
9. Молекулярная конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что центральное ядро имеет по меньшей мере один остаток глутамата (E) или остаток аспартата (D) на аминокислотном остатке, связанном с SH-реакционноспособной группой, или рядом с ним.
10. Молекулярная конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что локальный отрицательный заряд присутствует в первых 5-15 аминокислотных остатках, начиная с аминокислотного остатка, связанного с SH-реакционноспособной группой.
11. Молекулярная конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что эффекторные элементы представляют собой отрицательно заряженные химические фрагменты.
8-28
8-28
8-28
8-28
12. Молекулярная конструкция по п. 8, отличающаяся тем, что фармакокинетический элемент представляет собой производное Cжирной кислоты или производное Cдикарбоновой жирной кислоты, где ε-аминогруппа остатка K связана с производным Cжирной кислоты или Cпроизводное дикарбоновой жирной кислоты.
13. Линкерное звено, содержащее,
центральное ядро, при этом центральное ядро содержит,
от 2 до 10 остатков лизина (K),
необязательно, один или несколько наполнителей, в которых любые два остатка К находятся рядом друг с другом или разделены наполнителем,
необязательно, концевой спейсер, где концевые спейсеры представляют собой N-концевой спейсер, связанный с N-концом первого K остатка, или C-концевой спейсер, связанный с C-концом последнего K остатка, и каждый из наполнителей и концевой спейсер содержит, независимо, (1) от 1 до 12 аминокислотных остатков, отличных от K, или (2) ПЭГилированную аминокислоту, имеющую от 1 до 12 повторов звена этиленгликоля (EG),
SH-реакционноспособную группу, связанную с первым или последним K остатком центрального ядра путем образования с ним амидной связи, или, когда присутствует концевой спейсер, SH-реакционноспособная группа связана с концевым аминокислотным остатком концевого спейсера путем образования с ним амидной связи, при этом центральное ядро несет локальный отрицательный заряд на аминокислотном остатке, связанном с SH- реакционноспособной группой, или рядом с ним; а также
от 2 до 10 нацеливающих, эффекторных или фармакокинетических элементов, где,
каждый нацеливающий, эффекторный или фармакокинетический элемент связан с остатком K ядра, или
когда молекулярная конструкция дополнительно включает от 2 до 10 связывающих ветвей, один конец каждой связывающей ветви связан с K остатком ядра посредством образования амидной связи с ε-аминогруппой K остатка, а другой конец каждой связывающей ветви связан с каждым нацеливающим, эффекторным или фармакокинетическим элементом, где связывающая ветвь представляет собой пептид, содержащий 2-12 аминокислотных остатков, не являющихся K, или цепь полиэтиленгликоля (PEG), имеющую 2-24 повтора EG-звеньев.
14. Линкерное звено по п. 13, отличающееся тем, что центральное ядро имеет по меньшей мере один остаток глутамата (E) или остаток аспартата (D) на аминокислотном остатке, связанным с SH-реакционноспособной группой, для передачи отрицательного заряда, или рядом с ним.
15. Линкерное звено по п. 13, отличающееся тем, что локальный отрицательный заряд присутствует в первых 5-15 аминокислотных остатках, начиная с аминокислотного остатка, связанного с SH-реакционноспособной группой.
16. Линкерное звено по п. 13, отличающееся тем, что эффекторные элементы представляют собой отрицательно заряженные химические фрагменты.
17. Линкерное звено, содержащее центральное ядро, при этом центральное ядро содержит от 2 до 10 остатков лизина (K),
необязательно, один или несколько наполнителей, в которых любые два К остатка находятся рядом друг с другом или разделены наполнителем,
необязательно, концевой спейсер, где концевые спейсеры представляют собой N-концевой спейсер, связанный с N-концом первого K остатка, или C-концевой спейсер, связанный с C-концом последнего K остатка, и каждый из наполнителей и концевой спейсер содержит, независимо, (1) от 1 до 12 аминокислотных остатков, отличных от K, или (2) ПЭГилированную аминокислоту, имеющую от 1 до 12 повторов звена этиленгликоля (EG),
группу конъюгирования, связанную с первым или последним K остатком центрального ядра путем образования с ним амидной связи, или, когда присутствует концевой спейсер, конъюгированная группа связана с концевым аминокислотным остатком концевого спейсера путем образования амидной связи с ней, при этом конъюгированная группа выбрана из группы, состоящей из азидных, алкиновых, тетразиновых, циклооктеновых и циклооктиновых групп; а также от 2 до 10 связывающих ветвей, в которых один конец каждого связывающей ветви связан с одним из K остатков центрального ядра посредством образования амидной связи с ε-аминогруппой остатка K, другой конец имеет SH-реакционноспособную группу, связывающая ветвь представляет собой пептид, содержащий 2-12 аминокислотных остатков, отличных от K, или цепь полиэтиленгликоля (PEG), имеющую 2-24 повтора EG-звеньев, и несет локальный отрицательный заряд на конце или рядом с концом, имеющим SH-реакционноспособные группы.
18. Линкерное звено по п. 17, отличающееся тем, что дополнительно содержит от 2 до 10 составных полипептидов, где каждый составной полипептид содержит родительский полипептид и металлсвязывающий мотив, причем
родительский полипептид представляет собой пептидный гормон, рецептор-связывающий пептидомиметический лиганд, фрагмент антитела или цитокин, или их эквивалент;
1
2
1
2
металлсвязывающий мотив включает аминокислотную последовательность CXXHA (SEQIDNo.1) в порядке от N-конца до C-конца или в порядке от C-конца до N-конца, при этом X представляет собой глицин или пролин, а X представляет собой глицин или аланин; а также
металлсвязывающий мотив расположен на N- или C-конце родительского полипептида;
где SH-реакционноспособная группа каждой связывающей ветви конъюгирована с тиольной группой остатка цистеина в металлсвязывающем мотиве каждого составного полипептида.
19. Линкерное звено по п. 17, отличающееся тем, что связывающая ветвь имеет по меньшей мере один остаток глутамата (E) или остаток аспартата (D) на конце или рядом с концом, имеющим SH-реакционноспособную группу, для передачи отрицательного заряда.
20. Линкерное звено по п. 17, отличающийся тем, что локальный отрицательный заряд присутствует в первых 5-15 аминокислотных остатках, начиная с конца, имеющего SH-реакционноспособную группу.