ДИМЕРЫ SCFV-FC, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С ТРАНСФОРМИРУЮЩИМ ФАКТОРОМ РОСТА β1 С ВЫСОКОЙ АФФИННОСТЬЮ, АВИДНОСТЬЮ И СПЕЦИФИЧНОСТЬЮ

1. Выделенный связывающий белок, который связывается с TGFβ1, где указанный связывающий белок содержит полипептидную цепь, имеющую следующую формулу в направлении от N-конца к C-концу:
n
m
p
(VH-домен)-(линкер 1)-(VL-домен)-(линкер 2)-(шарнирная область)-(Fc-область),
где каждое из p, n и m независимо равняется 0 или 1.
2. Выделенный связывающий белок по п. 1, где
VH-домен содержит область 1, определяющую комплементарность, тяжелой цепи (HCDR1), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22; HCDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и HCDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, 25, 26 или 30; и
VL-домен содержит CDR 1 легкой цепи (LCDR1), LCDR2 и LCDR3, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 27, 28 и 29 соответственно.
3. Выделенный связывающий белок по п. 1 или 2, где выделенный связывающий белок представляет собой димер, содержащий две полипептидные цепи.
4. Выделенный связывающий белок по п. 3, где две полипептидные цепи являются идентичными.
5. Выделенный связывающий белок по п. 1 или 2, где выделенный связывающий белок представляет собой димер, содержащий две полипептидные цепи.
6. Выделенный связывающий белок по п. 5, где две полипептидные цепи являются идентичными.
7. Выделенный связывающий белок по п. 6, где
VH-домен содержит последовательность человеческого VH-домена, указанную под SEQ ID NO: 1 или 2, или ее вариант, имеющий до четырех аминокислотных модификаций включительно; и
VL-домен содержит последовательность человеческого Vκ-домена, указанную под SEQ ID NO: 5 или 6, или ее вариант, имеющий до четырех аминокислотных модификаций включительно.
8. Выделенный связывающий белок по п. 7, где VH- и VL-домены содержат аминокислотные последовательности, указанные под SEQ ID NO: 1 и 5 соответственно.
9. Выделенный связывающий белок по п. 8, где полипептидная цепь содержит аминокислотную последовательность, указанную под SEQ ID NO: 9.
10. Выделенный связывающий белок по любому из пп. 1-6, где выделенный связывающий белок обладает по меньшей мере одной из следующих характеристик:
a) избирательно связывается с TGFβ1;
50
b) имеет IC в отношении человеческого TGFβ1, составляющую менее 1 нМ, в биологическом анализе с использованием клеток A549;
c) характеризуется Kd для человеческого TGFβ1, по меньшей мере на приблизительно 50% более низкой, чем Kd для человеческого TGFβ2, согласно измерениям по методу поверхностного плазмонного резонанса; и
d) характеризуется Kd для человеческого TGFβ1, по меньшей мере на приблизительно 50% более низкой, чем Kd для человеческого TGFβ3, согласно измерениям по методу поверхностного плазмонного резонанса.
11. Выделенный связывающий белок по любому из предыдущих пунктов, где n равняется 1, и линкер 1
имеет длину 15 аминокислот или
содержит аминокислотную последовательность SGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 3), аминокислотную последовательность GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 4) или их вариант, имеющий до четырех аминокислотных модификаций включительно.
12. Выделенный связывающий белок по любому из предыдущих пунктов, где p равняется 1, и шарнирная область содержит
1
4
a) аминокислотную последовательность шарнирной области человеческого IgG или IgG;
b) аминокислотную последовательность PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP (SEQ ID NO: 7) или ее вариант, имеющий до четырех аминокислотных модификаций включительно; или
c) аминокислотную последовательность CPPCP (SEQ ID NO: 21).
13. Выделенный связывающий белок по любому из предыдущих пунктов, где m равняется 1, и линкер 2 содержит аминокислотную последовательность GGSG (SEQ ID NO: 20) или ее вариант, имеющий до 2 аминокислотных модификаций включительно.
1
4
1
4
14. Выделенный связывающий белок по любому из предыдущих пунктов, где Fc-область получена из человеческого IgG, человеческого IgG или варианта человеческого IgG или IgG, в котором могут быть модифицированными до десяти аминокислот включительно.
15. Выделенный связывающий белок, который связывается с TGFβ1, где указанный связывающий белок содержит первую полипептидную цепь и вторую полипептидную цепь, при этом каждая из первой и второй полипептидных цепей имеет следующую формулу:
1
n
2
m
p
(VD)-(линкер 1)-(VD)-(линкер 2)-(шарнирная область)-(Fc-область),
1
2
где каждый из VDи VDв каждой полипептидной цепи независимо представляет собой VL- или VH-домен, выделенный из антитела, способного связываться с TGFβ1; и
где каждое из n, m и p независимо равняется 0 или 1.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенный связывающий белок по любому из предыдущих пунктов и фармацевтически приемлемый наполнитель.
17. Выделенный полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую выделенный связывающий белок по любому из пп. 1-15.
18. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 17.
19. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п. 17.
20. Способ получения выделенного связывающего белка, включающий:
культивирование клетки-хозяина по п. 19 в условиях, подходящих для выработки связывающего белка, и
выделение связывающего белка.
21. Применение выделенного связывающего белка по любому из пп. 1-15 для производства лекарственного препарата для лечения заболевания у человека, нуждающегося в ингибировании активности TGFβ1.
22. Применение по п. 21, где заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброзного заболевания, рака и иммуноопосредованного заболевания.
23. Применение по п. 21, где заболевание представляет собой диффузный кожный системный склероз, заболевание, характеризующееся нарушением ремоделирования костной ткани, или заболевание почек.