СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ АКТИВИРОВАННЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1. Способ продуцирования активированных стволовых клеток для получения активированной стволовой клетки одного типа путем активации покоящейся стволовой клетки одного типа в состоянии покоя после хранения в течение предварительно определенного периода времени стволовой клетки одного типа, полученной путем культивирования жидкости костного мозга, взятой у донора, , где способ включает стадии: фиксации покоящейся стволовой клетки для подачи покоящейся стволовой клетки одного типа, предварительно определенной культуральной жидкости и жидкого культурального продукта, полученных в способе культивирования стволовой клетки одного типа до хранения покоящейся стволовой клетки, в первый сосуд для культивирования, имеющий предварительно заданную емкость и нижнюю поверхность с предварительно заданной площадью, и фиксации покоящейся стволовой клетки на дне первого сосуда для культивирования; и культивирования покоящейся стволовой клетки для культивирования покоящейся стволовой клетки, фиксированной на дне первого сосуда для культивирования в стадии фиксации покоящейся стволовой клетки, пролиферации и активации покоящейся стволовой клетки до тех пор, пока общая площадь покоящейся стволовой клетки к площади нижней поверхности первого сосуда для культивирования не будет достигать первого целевого отношения, и превращения покоящейся стволовой клетки в активированную стволовую клетку одного типа.
2. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 1, где в стадии культивирования покоящейся стволовой клетки, смешанную культуральную жидкость, состоящую из культуральной жидкости и жидкого культурального продукта, выгружают из первого сосуда для культивирования после фиксации покоящейся стволовой клетки на дне первого сосуда для культивирования в стадии фиксации покоящейся стволовой клетки, новую культуральную жидкость и новый жидкий культуральный продукт подают в первый сосуд для культивирования и культивируют покоящуюся стволовую клетку, фиксированную на дне первого сосуда для культивирования, с использованием новой смешанной культуральной жидкости из новой культуральной жидкости и нового жидкого культурального продукта.
3. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 1 или 2, где в стадии фиксации покоящейся стволовой клетки, первый сосуд для культивирования оставляют в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, и под заданным углом наклона на 12-24 ч, наблюдают за деформацией покоящейся стволовой клетки по сравнению с первоначальной плоской формой в первом сосуде для культивирования с интервалом приблизительно от 1 до 2 ч в течение 12-24 ч, и в случае деформации покоящейся стволовой клетки, имеющей первоначальную плоскую форму, в предварительно заданную плоскую форму, подтверждают, что покоящаяся стволовая клетка является фиксированной на нижней поверхности первого сосуда для культивирования.
4. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 3, где исходной плоской формой покоящейся стволовой клетки является приблизительно круглая форма, а плоской формой деформированной покоящейся стволовой клетки является, главным образом, приблизительно круглая форма и плоская форма, если покоящаяся стволовая клетка является удлиненной и имеет аморфную форму в одном направлении, а если в стадии фиксации покоящейся стволовой клетки, эта покоящаяся стволовая клетка деформируется до аморфной плоской формы, то это означает, что покоящаяся стволовая клетка фиксирована на нижней поверхности первого сосуда для культивирования.
5. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 1-4, где первое целевое отношение общей площади покоящейся стволовой клетки составляет 70-80% от площади нижней поверхности первого сосуда для культивирования, и в стадии культивирования покоящейся стволовой клетки, первый сосуд для культивирования оставляют в статическом состоянии на 36-48 ч при температуре, приблизительно равной температуре тела, и под предварительно заданным углом наклона, после чего общую площадь покоящейся стволовой клетки, фиксированной на нижней поверхности первого сосуда для культивирования, по отношению к площади нижней поверхности первого сосуда для культивирования, наблюдают с интервалом приблизительно 1-2 ч в течение 36-48 ч.
6. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 1-5, где способ включает стадии:
фиксации активированной стволовой клетки для экстракции из первого сосуда для культивирования активированной стволовой клетки, если общая площадь покоящейся стволовой клетки достигает первого целевого отношения площади нижней поверхности первого сосуда для культивирования, подачи экстрагированной активированной стволовой клетки, новой культуральной жидкости и нового жидкого культурального продукта во второй сосуд для культивирования, обладающий предварительно заданной емкостью и имеющий нижнюю поверхность с предварительно заданной площадью, где емкость превышает емкость первого сосуда для культивирования, и фиксации активированной стволовой клетки на дне второго сосуда для культивирования; и
культивирования активированной стволовой клетки для культивирования активированной стволовой клетки, фиксированной на дне второго сосуда для культивирования в стадии фиксации активированной стволовой клетки, и пролиферации активированной стволовой клетки до тех пор, пока общая площадь активированной стволовой клетки не достигнет второго целевого отношения площади нижней поверхности второго сосуда для культивирования.
7. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 6, где в стадии культивирования активированной стволовой клетки, смешанную культуральную жидкость, состоящую из культуральной жидкости и жидкого культурального продукта, выгружают из второго сосуда для культивирования после фиксации активированной стволовой клетки на дне второго сосуда для культивирования в стадии фиксации активированной стволовой клетки, новую культуральную жидкость и новый жидкий культуральный продукт подают во второй сосуд для культивирования и культивируют активированную стволовую клетку, фиксированную на дне второго сосуда для культивирования, с использованием новой смешанной культуральной жидкости из новой культуральной жидкости и нового жидкого культурального продукта.
8. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 6 или 7, где в стадии фиксации активированной стволовой клетки, второй сосуд для культивирования оставляют в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, и под заданным углом наклона на 36-48 ч, наблюдают за деформацией активированной стволовой клетки по сравнению с первоначальной плоской формой во втором сосуде для культивирования с интервалом приблизительно от 1 до 2 ч в течение 36-48 ч, и в случае деформации активированной стволовой клетки, имеющей первоначальную плоскую форму, в предварительно заданную плоскую форму, подтверждают, что активированная стволовая клетка является фиксированной на нижней поверхности второго сосуда для культивирования.
9. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 8, где исходной плоской формой активированной стволовой клетки является приблизительно круглая форма, а плоской формой деформированной активированной стволовой клетки является, главным образом, приблизительно круглая форма и плоская форма, если активированная стволовая клетка является удлиненной и имеет аморфную плоскую форму в одном направлении, и в стадии фиксации активированной стволовой клетки, если активированная стволовая клетка деформируется до аморфной плоской формы, то это означает, что активированная стволовая клетка фиксирована на нижней поверхности второго сосуда для культивирования.
10. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 6-9, где второе целевое отношение общей площади активированной стволовой клетки составляет 88-92% от площади нижней поверхности второго сосуда для культивирования, и в стадии культивирования активированной стволовой клетки, второй сосуд для культивирования оставляют в статическом состоянии при температуре, приблизительно равной температуре тела, и под предварительно заданным углом наклона на 36-48 ч, и общую площадь активированной стволовой клетки, фиксированной на нижней поверхности второго сосуда для культивирования по отношению к площади нижней поверхности второго сосуда для культивирования, наблюдают с интервалом приблизительно 1-2 ч в течение 36-48 ч.
11. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 1-10, где жидкий культуральный продукт в процессе культивирования стволовой клетки одного типа содержит предварительно определенный метаболит, секретированный стволовой клеткой одного типа.
12. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 1-11, где стволовую клетку одного типа получают в стадиях:
первой фиксации стволовой клетки для разделения слоев жидкости костного мозга, взятой у донора, экстракции промежуточного слоя жидкости костного мозга, находящейся в промежуточном слое жидкости костного мозга с разделенными слоями, подачи промежуточного слоя жидкости костного мозга и предварительно определенной культуральной жидкости в третий сосуд для культивирования, имеющий предварительно заданную емкость и нижнюю поверхность с предварительно заданной площадью, и фиксации первой стволовой клетки, содержащейся в промежуточном слое жидкости костного мозга, на нижней поверхности третьего сосуда для культивирования;
первого культивирования стволовой клетки для загрузки культуральной жидкости в третий сосуд для культивирования после фиксации первой стволовой клетки на нижней поверхности третьего сосуда для культивирования в стадии первой фиксации стволовой клетки, подачи новой культуральной жидкости в третий сосуд для культивирования, культивирования первой стволовой клетки и пролиферации первой стволовой клетки до тех пор, пока общая площадь первой стволовой клетки не достигнет третьего целевого отношения площади нижней поверхности третьего сосуда для культивирования;
второй фиксации стволовой клетки для центрифужного разделения слоев первой стволовой клетки, культивированной в стадии первого культивирования стволовой клетки, экстракции второй стволовой клетки, находящейся в самом нижнем слое первой стволовой клетки с разделенными слоями, подачи второй стволовой клетки и новой культуральной жидкости в четвертый сосуд для культивирования, имеющий предварительно заданную емкость и нижнюю поверхность с предварительно заданной площадью, где емкость превышает емкость третьего сосуда для культивирования, и фиксации второй стволовой клетки на дне четвертого сосуда для культивирования; и
второго культивирования стволовой клетки для загрузки культуральной жидкости в четвертый сосуд для культивирования после фиксации второй стволовой клетки на дне четвертого сосуда для культивирования в стадии второй фиксации стволовой клетки, подачи новой культуральной жидкости в четвертый сосуд для культивирования, культивирования второй стволовой клетки и пролиферации второй стволовой клетки до тех пор, пока общая площадь второй стволовой клетки не достигнет четвертого целевого отношения площади нижней поверхности четвертого сосуда для культивирования.
13. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по п. 12, где жидкий культуральный продукт представляет собой остаточную культуральную жидкость, полученную путем экстракции второй стволовой клетки одного типа из четвертого сосуда для культивирования.
14. Способ продуцирования активированных стволовых клеток по любому из пп. 1-13, где такими стволовыми клетками являются мезенхимные стволовые клетки.