СПОСОБЫ И ВЕКТОРЫ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ АСИАЛИЛИРОВАННЫХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

1. Способ обеспечения сиалидазной ферментативной активности в культуре, включающий создание клетки млекопитающего для экспрессии Fc-содержащей молекулы, включающий трансфекцию созданной клетки млекопитающего вектором, кодирующим полипептид, способный к сиалидазной ферментативной активности, где полипептид секретируется в культуру вместе с Fc-содержащей молекулой, посредством чего на гликаны Fc-содержащей молекулы может воздействовать сиалидазная ферментативная активность полипептида.
2. Способ по п.1, где вектор кодирует каталитический домен фермента сиалидазы А Arthrobacter ureafaciencs.
3. Способ по п.1, где Fc-содержащая молекула представляет собой антитело, и линию клеток млекопитающего выбирают из группы, состоящей из COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, YB2/0 или Y3, клеток миеломы или лимфомы или их любого производного, иммортализованных или трансформированных клеток.
4. Способ по п.3, где антитело представляет собой антитело против TNFα, и клеточная линия представляет собой С168М.
5. Экспрессирующий вектор, включающий нуклеотидную последовательность, кодирующую фермент сиалидазу, способный к экспрессии полипептида, имеющего сиалидазную ферментативную активность, в культуре клеток млекопитающего, экспрессирующей Fc-содержащую молекулу.
6. Вектор по п.5, где фермент сиалидаза представляет собой фермент сиалидазу А из Arthrobacter ureafaciencs, и линию клеток млекопитающего выбирают из группы, состоящей из COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, YB2/0 или Y3, клеток миеломы или лимфомы или их любого производного, иммортализованных или трансформированных клеток.
7. Вектор по п.5, включающий сигнальную последовательность, промоторную последовательность и устойчивость к антибиотику.
8. Вектор по п.7, где сигнальная последовательность представляет собой сигнальную последовательность гормона роста человека, промоторная последовательность представляет собой промоторную последовательность CMV, и устойчивость к антибиотику является устойчивостью к неомицину.
9. Способ регулирования свойств Fc-содержащей молекулы, экспрессированной в клеточной линии, включающий снижение сиалилирования олигосахаридов Fc-области посредством трансфекции клеточной линии вектором, кодирующим фермент сиалидазу, где экспрессированная Fc-содержащая молекула включает пониженное количество остатков сиаловой кислоты.
10. Способ по п.9, где регулируемыми свойствами Fc-содержащей молекулы являются авидность молекулы в отношении множества локализованных белков-мишеней; аффинность в отношении одного или нескольких Fc-гамма-рецепторов FcγRI, FcγRIIA и FcγRIIIA; активность ADCC; активация макрофагов или моноцитов и время полужизни в сыворотке.
11. Способ по п.9, где вектор кодирует каталитический домен фермента сиалидазы А из Arthrobacter ureafaciencs.
12. Способ по п.9, где Fc-содержащая молекула представляет собой антитело, и линию клеток млекопитающего выбирают из группы, состоящей из COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, YB2/0 или Y3, клеток миеломы или лимфомы или их любого производного, иммортализованных или трансформированных клеток.
13. Способ по п.12, где антитело представляет собой антитело против TNFα, и клеточная линия представляет собой С168М.
14. Способ по п.9, где Fc-содержащая молекула имеет связывающий домен, специфичный для мишени, причем указанная мишень представляет собой иммобилизованную мишень.
15. Способ по п.9, где Fc-содержащая молекула имеет связывающий домен, специфичный для мишени, причем указанная мишень экспрессируется на поверхности клетки.
16. Fc-содержащий белок, полученный или измененный способом по любому из пп. 9-15.
17. Белок по п.16, показанный для лечения расстройств, родственных онкологии, хронических заболеваний или инфекционных заболеваний.
18. Белок по п.17, где инфекционные заболевания включают опосредуемый FcR клиренс антителоопсинизированных клеток или частиц, включающих вирусы и бактерии - один фактор или оба, и хронические заболевания, требующие длительного лечения.
19. Белок по п.17, включающий рекомбинантно экспрессированные моноклональные антитела, причем антитела имеют определенные гликоформы, обогащенные с использованием аффинной хроматографии на лектине.
20. Белок по п.17, включающий рекомбинантно экспрессированные моноклональные антитела, очищенные с использованием одного или нескольких видов хроматографии: аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии, гидрофобной хроматографии и гель-хроматографии.
21. Белок по п.20, где аффинная хроматография представляет собой аффинную хроматографию на лектине.
22. Белок по п.17, где белок представляет собой моноклональные антитела, экспрессированные в клетке-хозяине, созданной генной инженерией, имеющий повышенные уровни асиалилированных моноклональных антител.
23. Фармацевтическая композиция, включающая белок по любому из пп. 16-22 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.
24. Способ применения композиции по п.23 для лечения или диагностики заболевания или состояния.
25. Способ по п.24, где указанный белок используют для лечения опухолевого заболевания, выбранного из группы, состоящей из карциномы, лимфомы, саркомы и миеломы.
26. Способ по п.24, где указанный белок используют для лечения воспалительного расстройства, выбранного из группы, состоящей из псориаза, ревматоидного артрита, неспецифического язвенного колита, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона и системной красной волчанки.
27. Способ по п.24, где белок используют для лечения расстройств, включающих образование новых сосудов в роговице или сетчатке.
28. Любое изобретение, описанное в данном документе.