О взаимоотношении между иенсеновскими бактериями типа AI и кишечной палочкой Адама

Обычное загрязнение молока не влияет на результаты определения. Плотный остаток .прибавляемой к молоку воды также не отражается заметно на результатах анализа, если только количество растворенных в воде веществ не будет чрезмерно велико. Такие фальсификации, как подмесь к молоку небольших количеств крахмала или соды, не могут заметно извращать результаты определения.

Что касается времени, которое необходимо затрачивать на определение подмеси воды к молоку по предлагаемому способу, то следует сказать, что на подготовку молока к испытанию уходит в среднем 10—15 минут, а само определение длится 2—3 минуты. При массовых испытаниях, когда можно одновременно подготовлять ряд проб, расход времени на одно определение может быть снижен до 5 минут.

Проф. И. Е. МИНКрВИЧ и О. К. КУЗНЕЦОВА

О взаимоотношении между иенсеновскими бактериями типа AI и кишечной палочкой

Адама

Из санитарно-бактериологического отдела Ленинградского научно-исследовательского санитарно-гигиенического института

Наиболее часто и постоянно, как показали исследования Христиан-сена (1917), три дизентерии телят выделяется определенная разновидность Bact. coli, подробно охарактеризованная им и описанная под названием Kälberruhrcoli AI Иенсена.

В 1927 г. Адам опубликовал свои исследования об этиологии детских диспепсий, в которых он приходит к выводу, что возбудителем этих заболеваний является особый тип кишечной палочки, названный им Dyspepsiecoli, очень близкий по своим признакам к иенсеновской палочке типа AI.

В специальном пестром ряду, предложенном Христиансеном и состоящем из сахарозы, сорбозы, рамнозы, дульцита и адонита, эти бактерии неразличимы между собой, и только введение Адамом в ряд Хри-стиансена дополнительно сорбита позволило их диференцировать. Отличие заключается в том, что адамовская палочка сорбита не разлагает, а иенсеновская его сбраживает.

Недавно нам пришлось встретиться с тем фактом, что между бакте-I риями Иенсена и Адама, несомненно, имеется во многих случаях ясно •выраженное серологическое родство. Мы могли это установить, воспользовавшись иммунной сывороткой, приготовленной еще накануне Великой отечественной войны нашим бывшим сотрудником В. И. Тецом путем иммунизации кролика одним из типичных штаммов Dyspepsiecoli, выделенных им в Ленинграде от грудных детей с явлениями диспепсии. В опытах Теца эта сыворотка до титра агглютинировала 13 других штаммов Dyspepsiecoli, имевшихся в его распоряжении. Сыворотка благополучно сохранилась в лаборатории в продолжение всего периода блокады и не утратила своего первоначального титра (1 :6 400).

Этой сывороткой было испытано 12 типичных культур Kälberruhrcoli AI, выделенных О. К. Кузнецовой от телят (частично больных) в пригородах Ленинграда.

Одна шестая часть испытанных штаммов от телят до титра агглютинируется антисывороткой Dyspepsiecoli. На фоне крайней пестроты •строения антигенного аппарата бактерий группы кишечной палочки ми-=мо этого факта нельзя пройти без внимания. С этим следует сопоставить

данные Христиансена, свидетельствующие о наличии примерно такой же степени серологического родства между штаммами Kälberruhrcoli, выявляемого при помощи иммунных сывороток своего типа (анти-Kälber-ruhrcoli).

Нельзя также не отметить, что и в отношении серологии Dyspepsiecoli имеющиеся данные разноречивы. Сам Адам сообщает об отсутствии серологического единства в этой группе бактерий. Гольдшмидт и Тец, -напротив, группу Dispeps-iecoli считают серологически однородной. Последние данные нашей бывшей непосредственной сотрудницы Р. С. Мостовой свидетельствуют скорее о том, что среди бактерий типа Dyspepsiecoli, повидимому, имеется лишь частичное серологическое родство, выраженное в такой же степени, как и между бактериями иенсеновского типа.

Большая биохимическая и серологическая близость между рассматриваемыми бактериями типа Иенсена и Адама поставила перед нами вопрос об их единстве и возможном одинаковом эпидемиологическом и патогенетическом значении. Обращаем внимание на недавнее сообщение Гориенко и Хоррокс из Ростова-<на-Дону, в котором авторы описывают вспышку тяжелых заболеваний новорожденных, вызванную иенсе-новской кишечной палочкой.

В работе Гольдшмидт имеется указание на изменчивое отношение Dyspepsiecoli к сорбиту и на возможность отщепления адамовской палочкой сорбитсбраживающих вариантов, что фактически стирает биохимическую грань между Dyspepsiecoli и Kälberruhrcoli.

С целью проверки данных Гольдшмидт нами была поставлена следующая серия опытов. 5 различных штаммов Dispepsiecoli, свежевыде-ленных Р. С. Мостовой (отдел профилактики пищевых токсикоинфекций нашего института) от больных диспепсией детей и не дававших расщепления сорбита в течение месячной инкубации при 37°, длительно пассировались на синтетической среде Симонса, в которую в качестве единственного источника углерода вместо лимоннокислого натрия был введен сорбит. По существу нами был применен тот же принцип принудительной адаптации культур к новому источнику углерода, с помощью которого в свое время нам (Минкевич и Иоффе) удалось превратить типичную цитратнегативную кишечную палочку (Bact. coli commune) в цитратассимилирующую разновидность (Bact. coli citrovorum). Посевы производились на скошенную в пробирках модифицированную среду Симонса и выдерживались без перевивок по одному месяцу в термостате и параллельно при комнатной температуре. Через месяц культуры пересевались на новые серии пробирок с указанной средой и инкубировались в тех же условиях также в продолжение месяца. Всего было произведено 3 таких пассажа в период с июня по сентябрь 1946 г.

В результате этих опытов нам удалось из 5 пассированных штаммов 4 перевести в иенсеновский тип AI. В пассажных пробирках с модифицированной средой Симонса, давших положительный результат, это выражалось в появлении сначала медленно, а затем более быстро происходившего нежного роста, который в первом пассаже еще не сопровождался перекраской индикатора (бромтимолблау), а в дальнейшем давал ясно выраженную его перекраску в желтый цвет. Колонии и микробный налет (в последнем пассаже) имели ржавобурый цвет. Из развившихся культур были произведены рассевы на чашки Петри с мясо-пептонным агаром. По 10 колоний из каждого рассева были далее пересеяны в жидкую среду с сорбитом, и эти посевы помещены в термостат, где наблюдение за ними продолжалось до 2 месяцев. Результаты показали, что подавляющее большинство колоний состояло из особей, вызывавших сбраживание сорбита (с кислого- и газообразованием) уже в течение первых суток. Только единичные колонии сохранили свойства неходкого штамма: они не разложили сорбита даже через 2 месяца.

Однако в последующем рассеве на чашки из отрицательных к сорбиту пассированных культур, инкубированных на жидкой сорбитной среде 2 месяца, развивались колонии, уже дававшие расщепление сорбита, хотя и резко замедленное.

Полученные сорбитположительные варианты, разлагающие сорбит через 24 часа, как правило, давали и в последующих субкультурах колонии, состоявшие из особей, сбраживавших сорбит в первые же сутки.

Итак, в соответствии с цитировавшимися данными Гольдшмидт, показано отсутствие стабильных границ между иенсеновскими и адамов-скими бактериями, поскольку различие между ними основывается только на положительном или отрицательном отношении микробов к сорбиту. Возникновение способности разлагать сорбит у бактерий типа Dys-pepsiecoli происходит путем диссоциативного расщепления материнской сорбитнегативной культуры на сорбитпозитивные и сорбитнегативные-варианты с селекционным накоплением последних в условиях длительного культивирования бактерий на среде, содержащей сорбит.

Но даже в условиях обычного длительного хранения культур в лаборатории с регулярными пересевами их на простых средах с течением времени в субкультурах начинают отщепляться сорбитпозитивные варианты, правда, в большинстве со слабо выраженной, замедленной способностью разлагать сорбит.

При длительном хранении чашек с посевами расщепляющихся культур Dyspepsiecoli на агаре с сорбитом можно было наблюдать и морфологические проявления диссоциации в колониях в виде образования дочерних колоний инородной структуры, обычно располагающихся по краю более прозрачной периферии материнских колоний, наподобие-ожерелья. Это явление отчетливо выступало под малым увеличением микроскопа. Возвышающихся над поверхностью материнской колонии узелков, как у Bact. coli mutabile, не наблюдалось.

Анализ культур сорбитпозитивного и сорбитнегативного варианта,, полученных в результате описанного диссоциационного опыта, на наличие в них буавеновского глюцидоглипоидного комплекса (resp. эндотоксина)-показал, что положительные по сорбиту подштаммы типа палочки Иен-сена обычно бывают более богаты эндотоксином, чем сорбитотрица-тельные подштаммы, соответствующие палочке Адама. Это было установлено нами, с одной стороны, при помощи трипафлавинной агглютинации по Пригге и Кикшу, а с другой — при помощи прямого получения из бактерий глюцидо-липоидного комплекса по методу Буавена и испытания его действия в биологической пробе (опыты О. К. Кузнецовой на себе с введением эндотоксина в кожу).

Как известно, метод Пригге и Кикша заключается в том, что испытуемая культура (или колония) при помощи петли взвешивается в капле физиологического раствора на предметном стекле, и к этой взвеси затем добавляется капля раствора трипафлавина (2 : 1 ООО) в дестиллирован-ной воде. При последующем перемешивании петлей обеих капель культура, лишенная глюцидо-липоидного комплекса, немедленно агглютинируется под петлей. Напротив, культура, обладающая глюцидо-липоид-ным комплексом, никаких признаков агглютинации под влиянием трипафлавина не обнаруживает. Эти отношения, повидимому, определяются тем, что слой молекул глюцидо-липоидного комплекса, покрывающий поверхность тел микробных клеток, выступает в роли защитного коллоида, обеспечивающего лиофильные свойства микробной суспензии.

В качестве примера приводим один из наших опытов.

По 50 колоний, развившихся на чашках с мясо-пептонным агаром в рассевах из сорбитположительной колонии, проведенной через жидкую с oip битную среду, и из сорбитотрицательной колонии, также проведенной через жидкую среду с сорбитом, подверглись трипафлавинной.' агглютинации. Получены следующие результаты:

1. Сорбитположительный вариант дал 16 (32%) трипафлавиннега-тивных, т. е. содержащих эндотоксин, колоний и 34 (68°/») трипафла-¡вишгозитивных — не содержащих эндотоксина.

2. Сорбитотрицательный вариант дал 5 (10%) эндотоксинсодержа-щих (трипафлавинотрицательных) и 45 (95%) не содержащих эндотоксина (трипафлавинположительных) колоний. •

Подобные же результаты мы получили и при испытании других расщепившихся штаммов. Была отмечена выраженная корреляция между результатами трипафлавинной агглютинации и S — R-фазовой выриа-бильностью микробов: трипафлавиннегатив'ные колонии преобладали в культурах, находившихся в фазе S.

Препараты глюцидо-липоидного комплекса, извлеченного из трипа-флавиннегативных штаммов трихлоруксусной кислотой, по Буавену, дали бурную реакцию при внутрикожном введении, тогда как аналогичные препараты, полученные из трипафлавинпозитивных культур, не проявили почти никакого действия.

Эти данные говорят скорее о необходимости уделения большего внимания кишечной палочке иенсеновского типа (сорбитположительной) как микробу более токсичному и к тому же безусловно зарекомендовавшему себя в качестве серьезного патогенного фактора в кишечно-септи-ческих заболеваниях (колибациллез, белый понос) молодняка животных.

По аналогии с данными из зоопатологии мы допускаем, что эти бактерии могут играть подобную роль и в кишечно-токсических заболеваниях грудных детей, особенно часто страдающих, как известно, при переводе их на искусственное питание с применением коровьего молока.

В этом аспбкте большого внимания заслуживает работа Р. С. Мостовой, показавшей недавно на достаточно обширном материале, что у •страдающих диспепсиями детей адамовская Dyspepsiecoli выделяется довольно редко, зато неизмеримо чаще, почти с закономерным постоянством, выделяются бактерии типов иенсеновских палочек AI и AIV; последние отличаются от первых только своим отрицательным отношением к сорбозе. Если к этому добавить, что 50% образцов молока, идущего для питания детей в Ленинграде, по исследованиям нашей сотрудницы А. Г. Капковой, содержат иенсеновскую Kälberruhrcoli (AI), то, естественно, напрашивается мысль о возможном существовании эпидемиологических связей между поражением колибациллезом телят, с одной стороны, и грудных детей так называемыми диспепсиями — с другой.

В свете изложенного необходимо признать, что ведущим патогенным типом кишечной палочки является, повидимому, иенсеновская Kälberruhrcoli; адамовская же разновидность Dyspepsiecoli представляет гораздо менее распространенный минус-вариант ее. При этом данный вариант практически всегда находится в состоянии более или менее выраженной потенции возврата к своему исходному, сорбитлозитив-ному (иенсеновскому) типу.