КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ МОДУЛИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЧЕРЕЗ CD14 И КАСКАД ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА TOLL-ПОДОБНЫМ РЕЦЕПТОРОМ 4

1. Способ лечения рабдовирусной инфекции у млекопитающего, предположительно имеющего инфекцию, включающий введение индивидууму модулятора активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14 в количестве, эффективном для снижения или устранения рабдовирусной инфекции или для предотвращения ее возникновения или рецидива.
2. Способ по п.1, где модулятор представляет собой антагонист активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14.
3. Способ по п.1, где модулятор представляет собой ингибитор активности CD14 или активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4.
4. Способ по п.3, где ингибитор представляет собой интерферирующую РНК, короткую шпилечную РНК, рибозим или антисмысловой олигонуклеотид к CD14 или TLR-4.
5. Способ по п.3, где ингибитор представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, пептид, пептидомиметик или низкомолекулярный химический ингибитор CD14 или TLR-4.
6. Способ по п.5, где ингибитор представляет собой антитело к CD14.
7. Способ по п.5, где ингибитор представляет собой антитело к TLR-4.
8. Способ по п.5, где рабдовирус представляет собой вирус бешенства или вирус везикулярного стоматита.
9. Способ лечения аутоиммунного заболевания у млекопитающего, включающий введение млекопитающему модулятора активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14 в количестве, эффективном для снижения или устранения аутоиммунного заболевания или для предотвращения его возникновения или рецидива.
10. Способ по п.9, где модулятор представляет собой антагонист активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14.
11. Способ по п.10, где модулятор представляет собой ингибитор активности CD14 или активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4.
12. Способ по п.11, где ингибитор представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, пептид, пептидомиметик или низкомолекулярный химический ингибитор CD14 или TLR-4.
13. Способ по п.11, где ингибитор представляет собой антитело к CD14.
14. Способ по п.11, где ингибитор представляет собой антитело к TLR-4.
15. Способ лечения воспаления у млекопитающего, включающий введение млекопитающему модулятора активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14 в количестве, эффективном для снижения или устранения воспаления или для предотвращения его возникновения или рецидива.
16. Способ по п.15, где модулятор представляет собой антагонист активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 через CD14.
17. Способ по п.16, где модулятор представляет собой ингибитор активности CD14 или активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4.
18. Способ по п.17, где ингибитор представляет собой моноклональное антитело, поликлональное антитело, пептид, пептидомиметик или низкомолекулярный химический ингибитор CD14 или TLR-4.
19. Способ по п.17, где ингибитор представляет собой антитело к CD14.
20. Способ по п.17, где ингибитор представляет собой антитело к TLR-4.
21. Способ идентификации модулятора передачи сигнала в клетках через каскад Toll-подобного рецептора 4, включающий:
контактирование тестируемого соединения с клеточной системой для анализа, содержащей клетку, экспрессирующую Toll-подобный рецептор 4, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
предоставление CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4; и
детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала Toll-подобным рецептором 4 в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании.
22. Способ по п.21, далее включающий коэкспрессию CD14 и Toll-подобного рецептора 4 в клетке.
23. Способ по п.21, далее включающий предоставление Toll-подобного рецептора 4 системе для анализа и детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала CD14/Toll-подобным рецептором 4 в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании.
24. Способ по п.21, где лиганд представляет собой эндогенный лиганд или экзогенный лиганд.
2
4
25. Способ по п.24, где экзогенный лиганд представляет собой липополисахарид, липид A, диацилированный липопептид, триацилированный липопептид, S-MALP-2, R-MALP-2, бактериальный липопептид, PamCSK, липотейхоевую кислоту или зимозан A.
Salmonella minnesota
26. Способ по п.24, где экзогенный лиганд представляет собой шероховатый липополисахарид, гладкий липополисахарид или липид A из .
Salmonella minnesota
27. Способ по п.26, где стадия детекции далее включает измерение эффекта на продукцию фактора некроза опухоли в клетке, где продукция TNF изменяется в ответ на шероховатый липополисахарид, но не в ответ на гладкий липополисахарид или липид A из .
28. Способ по п.21, где эндогенный лиганд представляет собой липид.
29. Способ по п.21, где стадия детекции дополнительно включает эффективное снижение связывания лиганда с CD14 с помощью соединения.
30. Способ по п.21, где стадия детекции дополнительно включает эффективное снижение связывания CD14 с Toll-подобным рецептором 4 с помощью соединения.
31. Способ по п.21, где стадия детекции дополнительно включает эффективное усиление связывания лиганда с CD14 с помощью соединения.
32. Способ по п.21, где стадия детекции дополнительно включает эффективное усиление связывания CD14 с Toll-подобным рецептором 4 с помощью соединения.
33. Способ по п.30, где соединение представляет собой антагонист передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4.
34. Способ по п.32, где соединение представляет собой агонист передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4.
35. Способ по п.33, где стадия детекции далее включает определение снижения фактора некроза опухоли в клеточном анализе.
36. Способ по п.34, где стадия детекции далее включает определение повышения фактора некроза опухоли в клеточном анализе.
37. Способ по п.32, где клеточный анализ далее включает макрофагальную клетку.
38. Способ по п.21, где стадия детекции далее включает определение связывания меченого CD14 с лигандом или связывания меченого CD14 с Toll-подобным рецептором 4.
39. Способ по п.38, где метка представляет собой радиоактивную метку или флуоресцентную метку.
40. Способ по п.21, где клетка экспрессирует TRAM-Trif, способный отвечать на лиганд передачей сигнала;
с предоставлением системе для анализа CD14 и лиганда в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала TRAM-Trif; и
детекцией эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала TRAM-Trif в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании.
41. Способ по п.40, далее включающий коэкспрессию CD14, Toll-подобного рецептора 4 и TRAM-Trif в клетке.
42. Способ по п.40, далее включающий предоставление Toll-подобного рецептора 4 системе для анализа и детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала CD14/Toll-подобным рецептором 4/TRAM-Trif в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании.
43. Способ по п.40, где стадия детекции дополнительно включает эффективное снижение связывания лиганда с Toll-подобным рецептором 4 с помощью соединения.
44. Способ по п.40, где стадия детекции дополнительно включает эффективное снижение связывания Toll-подобного рецептора 4 с TRAM-Trif с помощью соединения.
45. Способ по п.40, где стадия детекции дополнительно включает эффективное усиление связывания лиганда с CD14 с помощью соединения.
46. Способ по п.40, где стадия детекции дополнительно включает эффективное усиление связывания Toll-подобного рецептора 4 с TRAM-Trif с помощью соединения.
47. Способ по п.40, где соединение представляет собой агонист каскада передачи сигнала TRAM-Trif.
48. Способ по п.40, где соединение представляет собой антагонист каскада передачи сигнала TRAM-Trif.
49. Способ по п.40, где лиганд представляет собой эндогенный лиганд или экзогенный лиганд.
50. Способ по п.49, где экзогенный лиганд представляет собой липополисахарид.
51. Способ по п.49, где эндогенный лиганд представляет собой липид.
52. Способ по п.47, где стадия детекции дополнительно включает определение повышения фосфорилирования IRF-3 в клеточном анализе.
53. Способ по п.48, где стадия детекции дополнительно включает определение снижения фосфорилирования IRF-3 в клеточном анализе.
54. Способ по п.47, где стадия детекции дополнительно включает определение повышения интерферона-β в клеточном анализе.
55. Способ по п.48, где стадия детекции дополнительно включает определение снижения интерферона-β в клеточном анализе.
56. Способ по п.47, где стадия детекции дополнительно включает определение снижения восприимчивости к инфекционной способности вируса в клеточном анализе.
57. Способ по п.48, где стадия детекции дополнительно включает определение повышения восприимчивости к инфекционной способности вируса в клеточном анализе.
58. Способ по п.40, где клеточный анализ дополнительно включает макрофагальную клетку.
59. Способ по п.40, где стадия детекции дополнительно включает определение связывания меченого CD14 с лигандом или связывания меченого CD14 с TLR4 или TRAM-Trif.
60. Способ по п.59, где метка представляет собой радиоактивную метку или флуоресцентную метку.
61. Способ скрининга соединения для лечения инфекционного заболевания, включающий:
контактирование тестируемого соединения с клеточной системой для анализа, содержащей клетку, экспрессирующую Toll-подобный рецептор 4, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
предоставление CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4; и
детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала Toll-подобным рецептором 4 в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании инфекционного заболевания.
62. Способ по п.61 где клетка экспрессирует TRAM-Trif, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
с предоставлением CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала TRAM-Trif; и
детекцией эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала TRAM-Trif в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании инфекционного заболевания.
63. Способ по п.61, где соединение представляет собой антагонист передачи сигнала от лиганда Toll-подобному рецептору 4.
64. Способ по п.62, где соединение представляет собой антагонист передачи сигнала от лиганда Toll-подобному рецептору 4.
65. Способ по п.61, где инфекционное заболевание представляет собой бактериальное или вирусное заболевание.
Staphylococcus aureus
66. Способ по п.65, где инфекционное заболевание представляет собой рабдовирусную инфекцию, инфекцию вирусом бешенства, инфекцию вирусом везикулярного стоматита, ВИЧ-инфекцию, СПИД, инфекцию цитомегаловирусом или инфекцию .
67. Способ по п.66, где соединение представляет собой ингибитор взаимодействия гликопротеина G рабдовируса с CD14.
68. Способ скрининга соединения для лечения аутоиммунного заболевания, включающий:
контактирование тестируемого соединения с клеточной системой для анализа, содержащей клетку, экспрессирующую Toll-подобный рецептор 4, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
предоставление CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4; и
детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала Toll-подобным рецептором 4 в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании аутоиммунного заболевания.
69. Способ по п.68 где клетка экспрессирует TRAM-Trif, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
с предоставлением CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала TRAM-Trif; и
детекцией эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала TRAM-Trif в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании аутоиммунного заболевания.
70. Способ по п.68, где соединение представляет собой антагонист передачи сигала от лиганда Toll-подобному рецептору 4.
s
71. Способ по п.68, где аутоиммунное заболевание представляет собой инсулинзависимый сахарный диабет, рассеянный склероз, экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, ревматоидный артрит, экспериментальный аутоиммунный артрит, миастению, тиреоидит, экспериментальную форму увеоретинита, тиреоидит Хашимото, первичную миксоэдему, тиреотоксикоз, пернициозную анемию, аутоиммунный атрофический гастрит, болезнь Аддисона, преждевременную менопаузу, мужское бесплодие, ювенильный диабет, синдром Гудпасчера, пемфигус обыкновенный, пемфигоид, симпатическую офтальмию, факогенный увеит, аутоиммунную гемолитическую анемию, идиопатическую лейкопению, первичный биллиарный цирроз, активный хронический гепатит Hb-ve, криптогенный цирроз, язвенный колит, синдром Шегрена, склеродермию, гранулематоз Вегенера, полидерматомиозит, дискоидную LE или системную красную волчанку.
72. Способ скрининга соединения для лечения воспаления, включающий:
контактирование тестируемого соединения с клеточной системой для анализа, содержащей клетку, экспрессирующую Toll-подобный рецептор 4, способный к ответу на лиганд в виде передачи сигнала;
предоставление CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4; и
детекцию эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала Toll-подобным рецептором 4 в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании аутоиммунного заболевания.
73. Способ по п.72, где клетка экспрессирует TRAM-Trif, способный отвечать на лиганд передачей сигнала;
с предоставлением CD14 и лиганда системе для анализа в количестве, выбранном для эффективной активации передачи сигнала TRAM-Trif; и
детекцией эффекта тестируемого соединения на передачу сигнала TRAM-Trif в системе для анализа, где эффективность тестируемого соединения в анализе свидетельствует о модулировании аутоиммунного заболевания.
74. Способ по п.72, где соединение представляет собой антагонист передачи сигнала от лиганда Toll-подобному рецептору 4.
75. Трансгенное не относящееся к человеку животное, содержащее гетерологичную нуклеиновую кислоту, где нуклеиновая кислота содержит аллель гена CD14 с потерей функции, и животное имеет фенотип, относительно фенотипа дикого типа обладающий свойством ингибирования активации макрофагов, восприимчивости к вирусной или бактериальной инфекции, снижения продукции TNF-α или сочетания любых двух или более из них.
76. Трансгенное не относящееся к человеку животное по п.75, где фенотип мутантного по CD14 животного обладает свойством сниженного фосфорилирования и димеризации IRF-3 при индукции липополисахаридом, отсутствия ответа в виде продукции IFN-β при индукции липополисахаридом, или гиперчувствительности макрофагов на цитолиз, индуцированной вирусом везикулярного стоматита или вирусом бешенства.
77. Трансгенное не относящееся к человеку животное по п.75, где аллель гена CD14 с потерей функции представляет собой преждевременный стоп-кодон в Q284X.
78. Трансгенное не относящееся к человеку животное по п.75, где животное представляет собой мышь или крысу.
79. Клетка или клеточная линия, полученная из трансгенного не относящегося к человеку животного по п.75.
in vitro
80. Способ скрининга модулятора активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif , где способ включает: контактирование клетки или клеточной линии по п.79 с тестируемым соединением и детекцию повышения или снижения уровня продукции TNF-α, восприимчивости к вирусной или бактериальной инфекции, или индуцируемой Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif активности в отношении активации макрофагов, с идентификацией посредством этого тестируемого соединения в качестве модулятора индуцируемой Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif активности в отношении активации макрофагов.
in vivo
81. Способ скрининга модулятора активности передачи сигнала Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif , где способ включает: контактирование клетки или клеточной линии по п.79 с тестируемым соединением и детекцию повышения или снижения уровня продукции TNF-α, восприимчивости к вирусной или бактериальной инфекции, или индуцируемой Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif активности в отношении активации макрофагов, с идентификацией посредством этого тестируемого соединения в качестве модулятора индуцированной Toll-подобным рецептором 4 или TRAM-Trif активности в отношении активации макрофагов.