НОВЫЙ ЭКСТРАКТ ЭВКАЛИПТА, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
NEW EUCALYPTUS EXTRACT, METHOD FOR PRODUCING AND USING IT FOR THERAPEUTIC PURPOSES

Настоящее изобретение относится к применению экстракта эвкалипта для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний или патологий, являющихся следствием нарушения обратного захвата следующих нейромедиаторов: дофамина, серотонина и/или норадреналина. Предпочтительно, указанный экстракт обогащен по меньшей мере одним из соединений формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм:
в которой R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу C=CH2, группу,  или и R2 означает изобутильную, α-изобутильную или β-изобутильную группу.
Настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного из соединений формулы (I), выше, для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний или патологий, вызванных нарушением обратного захвата указанных нейромедиаторов.
Eucalyptus globulus
Существует множество видов эвкалипта (более 600), большинство родом из Австралии и Тасмании, небольшое число из Новой Гвинеи и с востока Малайзии. Эвкалипт относится к семейству миртовых, и его название происходит от характерной формы его цветков. Действительно, слово Eucalyptus означает "хорошо укрытый", намекая на крышечку (образованную смыкающимися лепестками), накрывающую тычинки цветков. Обычно это большие красивые деревья, которые могут достигать в высоту 80-100 м в стране происхождения (Австралия) и от 3 до 20 м в более умеренном климате. Их гладкая кора отделяется длинными полосами бледно-сероватого цвета. Они обычно отличаются диморфизмом листьев. В случае Labill молодые листья являются продолговато-овальными, синевато-зелеными, с синим ободком, примыкающими и бесчерешковыми, тогда как зрелые листья являются серповидными, серовато-зелеными, свисающими, с корявыми черешками и ориентированы вертикально (эквивалентность обеих сторон). Цветочные бутоны имеют форму чаши в виде четырехгранной пирамиды, прикрывающей крышечку, которая приподнимается во время цветения, позволяя появиться многочисленным тычинкам с длинными белыми нитями и желтыми пыльниками. Плоды представляют собой капсулы диаметром от 2 до 2,5 см, заключающие в себе черные или коричневатые зерна.
Eucalyptus globulus
E.polybractea
Eucalyptus smithii
В европейской фармакопее в фитотерапии в основном используются три вида: Labill,  R.T. Baker и  R.T. Baker. Используются листья с наиболее зрелых ветвей (серповидные и с черешками), эфирное масло и эвкалиптол, который получают из этого последнего.
Листья эвкалипта традиционно применяются перорально и местно для лечения заболеваний респираторной системы (бронхит, воспаление горла, заложенность носа, насморк и т.п.) или наложением для лечения ран, кожных язв и т.д.
Эфирное масло эвкалипта и эвкалиптол (или 1,8-цинеол) входят во множество препаратов, предназначенных для лечения заболеваний дыхательных путей благодаря их антисептической, муколитической активности и отхаркивающему действию. Эфирное масло применяется как репеллент и в ветеринарии.
Plantes thérapeutiques
et al.
et al.
et al.
et al.
Известными в настоящее время фармакологическими свойствами эфирного масла эвкалипта являются: противомикробные, отхаркивающие и противокашлевые (WICHTL M., ANTON R., 1999 -  - 177-179), противовоспалительные и противоастматические (JUERGENS , 2003 - Anti-inflammatory activity of 1,8-cineol (eucalyptol) in bronchial asthma: a double-bind placebo controlled trial - Respir. Med., 97(3), 250-256), противодиабетические (SWANSTON , 1990 - Traditional plant treatments for diabetes. Studies in normal and streptozotocin diabetics rats - Diabetologia, 33(8), 462-464), антигистаминные (IKAWATI Z. , 2001 - Screening of several Indonesian medecinal plants for their inhibitory effect on histamine release from RBL-2H3cells - J. EthnopharmacoL, 75(2-3), 248-256), противораковые (TAKASAKI , 2000 - Cancer chemopreventive activity of euglobal-G1 from leaves of Eucalyptus grandis - Cancer Lett, 155(1), 61-65), противовирусные (TAKASAKI et al., 1990 - Structures of euglobal-G1, -G2 and -G3 from Eucalyptus grandis, three new inhibitors of Epstein virus activation - Chem. Pharm. Bull. 38(5), 1444-1446) и анти-ВИЧ (WICHTL M., ANTON R., 1999 - Plantes thérapeutiques - 177-179) свойства.
Неожиданно заявитель выявил применимость экстракта эвкалипта для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики заболеваний или патологий, вызванных нарушением обратного захвата нейромедиаторов.
Таким образом, областью настоящего изобретения является экстракт эвкалипта, у которого были обнаружены интересные фармакологические свойства, и, таким образом, предполагается новое применение в терапии. Настоящее изобретение не относится к эфирному маслу эвкалипта как таковому, для которого была собрана обширная библиография.
Предпочтительно, лекарственное средство или пищевая добавка предназначены для лечения и/или профилактики патологий, проистекающих вследствие нарушения обратного захвата нейромедиаторов, выбранных из группы:
- неврологические заболевания, нарушения или расстройства,
- психиатрические заболевания, нарушения или расстройства,
- расстройства памяти, внимания и бессонница, связанные с неврологическими и психиатрическими заболеваниями, нарушениями или расстройствами,
- функциональные соматические расстройства,
- зависимость от веществ, вызывающих привыкание.
Предпочтительно, лечение и/или профилактика указанных заболеваний или патологий состоит в ингибировании обратного захвата нейромедиаторов.
В контексте настоящего изобретения под "нейромедиаторами" понимаются: дофамин, и/или серотонин, и/или норадреналин.
Eudesmia
Symphomyrtus
Corymbia
Eucalyptus globulus
Eucalyptus pulverulenta
Eucalyptus kartzoffiana
Eucalyptus macrocarpa
Eucalyptus cinerea
Eucalyptus dorrigoensis
Eucalyptus leptopoda
Eucalyptus occidentalis
Eucalyptus viridis
Eucalyptus polybractea
Eucalyptus smithii
Под "эвкалиптом" в контексте настоящего изобретения понимаются виды, относящиеся предпочтительно к подродам ,  и , в частности следующие виды:  L.,  Sims, L.A.S. Johnson 1 Blaxell,  Hook.,  F. Muell.ex Benth.,  (Blakely) L.A.S. Johnson 1 K.D. Hill,  Benth.,  Endl.,  R.T. Baker,  R.T. Baker и  R.T. Baker.
Эти примеры иллюстрируют настоящее изобретение, однако не ограничивают его объем.
Предпочтительно, экстракт эвкалипта получают из листьев, цветков, плодов, стеблей или ствола эвкалипта, предпочтительно из листьев эвкалипта.
Предпочтительно, экстракт эвкалипта, используемый по настоящему изобретению, отличается тем, что он содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I) или какую-либо из его диастереоизомерных форм.
macrocarpal
Указанная формула (I) охватывает, помимо прочего, четыре соединения семейства :
macrocarpal
A
- : (5-((1R)-1-((11S,7R)-7-гидрокси-3,3,7,11-тетраметилтрицикло(6.3.0.0(2,4))ундек-11-ил)-3-метилбутил)-2,4,6-тригидроксибензол-1,3-дикарбальдегид), в котором R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу  и R2 означает β-изобутил
28
40
6
Брутто-формула: CHO
Молекулярная масса: 472 г/моль
macrocarpal
Предпочтительно, массовая доля  A в экстракте эвкалипта по настоящему изобретению больше или равна 0,1% и строго ниже 3%.
macrocarpal
B
- : (5-((1S))-1-((11S,7R)-7-гидрокси-3,3,7,11-тетраметилтрицикло(6.3.0.0(2,4))ундек-11-ил)-3-метилбутил)-2,4,6-тригидроксибензол-1,3-дикарбальдегид), в котором R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу  и R2 означает α-изобутил.
28
40
6
Брутто-формула: CHO
Молекулярная масса: 472 г/моль
macrocarpal
Предпочтительно, массовая доля  B в экстракте эвкалипта по настоящему изобретению больше или равна 0,1% и строго ниже 3%.
macrocarpal
C:
-  (5-((1R)-1-((11S)-3,3,11-триметил-7-метилентрицикло(6.3.0.0(2,4))ундек-11-ил)-3-метилбутил)-2,4,6-тригидроксибензол-1,3-дикарбальдегид), в котором R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу C=CH2 и R2 означает β-изобутил.
28
38
5
Брутто-формула: CHO
Молекулярная масса: 454 г/моль
macrocarpal
Предпочтительно, массовая доля  C в экстракте эвкалипта по настоящему изобретению больше или равна 0,1% и строго ниже 3%.
macrocarpal
G
- : (5-(1-(3,3,11-триметил-7-метилентрицикло(6.3.0.0(2,4))ундек-11-ил)-3-метилбутил)-2,4,6-тригидроксибензол-1,3-дикарбальдегид), в котором R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу C=CH2 и R2 означает изобутил.
28
38
5
Брутто-формула: CHO
Молекулярная масса: 454 г/моль
macrocarpal
Предпочтительно, массовая доля  G в экстракте эвкалипта по настоящему изобретению больше или равна 0,1% и строго ниже 5%.
Указанный экстракт эвкалипта получают способом экстракции, осуществляемым обычными стадиями, известными специалисту.
Eucalyptus sp.
Листья, цветки, плоды, стебли или ствол эвкалипта () или смесь этих частей измельчают, затем экстрагируют органическим растворителем, который может быть алканом (пентан, гексан, гептан, октан, циклогексан), простым эфиром (тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир), сложным эфиром (этилацетат, изопропилацетат), спиртом (метанол, этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, октанол), кетоном (метилэтилкетон, метилизобутилкетон), галогенуглеводородом (хлороформ, дихлорметан) или смесью воды и органического растворителя или растворителей, смешиваемых с водой (например, водно-спиртовая смесь).
Экстракцию проводят при отношении растение/растворитель, составляющем от примерно 1/1 до примерно 1/20, и ее можно повторять 2-3 раза. Температура экстракционного растворителя может быть равной температуре окружающей среды или выше и может доходить до температуры кипения используемого растворителя. Время контакта растения с растворителем составляет от примерно 30 мин до примерно 72 часов.
Затем проводят разделение твердое/жидкость, причем растение отделяют от растворителя фильтрацией или центрифугированием.
Полученный фильтрат можно:
либо высушить напрямую путем полного испарения экстракционного растворителя, он представляет собой конечный экстракт;
либо более или менее сконцентрировать. В случае смешанного экстракционного растворителя (например, водно-спиртовая смесь) концентрирование продолжается до испарения присутствующего органического растворителя. В случае органического растворителя к полученному концентрату добавляют некоторое количество воды. Стадия очистки жидкость-жидкость проводится добавлением к водной фазе несмешивающегося растворителя, который может быть алканом (например, гексан), простым эфиром (например, диэтиловый эфир), сложным эфиром (например, этилацетат), спиртом (например, бутанол), кетоном (например, метилэтилкетон) или галогенизированным углеводородом (например, хлороформ). Проводится одна, две или три экстракции жидкость-жидкость. Соединенные органические фазы можно высушить над сульфатом натрия перед сушкой.
Полученные растворы концентрируют в вакууме при температуре, составляющей от температуры окружающей среды до температуры кипения.
Конечная сушка экстракта проводится лиофилизацией или обычными средствами сушки, известными специалисту (распыление, сушильная печь и т.д.). Предпочтительно, температуры сушки не превышают примерно 60°C.
Экстракт может быть стабилизирован добавлением антиоксиданта, такого, например, как аскорбиновая кислота, лимонная кислота, в количествах, составляющих от примерно 0,05 до примерно 1 г на 100 г сухого экстракта.
Совершенно замечательный признак настоящего изобретения состоит в том, что фармакологические свойства экстракта эвкалипта как ингибитора обратного захвата нейромедиаторов тем существеннее, чем больше указанный экстракт обогащен по меньшей мере одним из соединений формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм.
Так, указанный экстракт эвкалипта предпочтительно обогащен по меньшей мере одним соединением формулы (I).
macrocarpal
macrocarpal
Под "экстрактом эвкалипта, обогащенным  A", в контексте настоящего изобретения понимают экстракт эвкалипта, в котором массовая доля  A больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%.
macrocarpal
macrocarpal
Под "экстрактом эвкалипта, обогащенным  B", в контексте настоящего изобретения понимают экстракт эвкалипта, массовая доля в котором  B больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%.
macrocarpal
macrocarpal
Под "экстрактом эвкалипта, обогащенным  C", в контексте настоящего изобретения понимают экстракт эвкалипта, массовая доля в котором  C больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%.
macrocarpal
macrocarpal
Под "экстрактом эвкалипта, обогащенным  G", в контексте настоящего изобретения понимают экстракт эвкалипта, массовая доля в котором  G больше или равна 5% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 5% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 5% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 5% и ниже 20%.
Заявитель показал влияние экстракта эвкалипта на обратный захват дофамина, и/или норадреналина, и/или серотонина.
Благодаря своим фармакологическим свойствам как ингибитора обратного захвата этих нейромедиаторов указанный экстракт особенно подходит для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики многочисленных заболеваний или патологий, происходящих из-за нехватки дофамина, и/или серотонина, и/или норадреналина.
Из заболеваний или патологий, которые можно лечить и/или предупреждать с помощью экстракта эвкалипта по настоящему изобретению, можно назвать в качестве иллюстративных неограничивающих примеров:
- неврологические заболевания, нарушения или расстройства:
такие, как нейродегенеративные заболевания (болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, болезнь Паркинсона, церебрально-сосудистые повреждения, черепные травмы), боковой амиотрофический склероз, сенильная деменция, фронто-темпоральная деменция, сосудистая деменция, мигрень, невропатические боли центрального механизма;
- психиатрические заболевания, нарушения или расстройства: такие, как депрессия (эндогенная, стойкая, реактивная или ятрогенная), депрессивное состояние, шизофрения, биполярное нарушение, генерализованная тревожность, заболевания, связанные со стрессом, панические атаки, обсессивно-компульсивные расстройства, синдромы посттравматического стресса, расстройства внимания и гиперактивность, нарушения пищевого поведения (в частности, булимия, анорексия), фобия (в частности, агорафобия), аутизм;
- расстройства памяти, внимания и бессонница, связанные с неврологическими или психиатрическими заболеваниями, нарушениями или расстройствами;
- функциональные соматические расстройства:
такие, как синдром хронической усталости, фибромиалгия, синдром раздраженного кишечника, пищеводно-желудочный рефлюкс, потеря либидо, нарушения эрекции, недержание мочи;
- зависимость от веществ, вызывающих привыкание:
в частности, никотина, алкоголя, опиатов, каннабиоидов, психостимуляторов.
Действительно, лекарственное средство или пищевая добавка согласно изобретению предназначены предпочтительно для того, чтобы вызвать отказ от никотина, алкоголя, опиатов, каннабиоидов, психостимуляторов и чтобы предупредить возврат к ним у лиц в состоянии абстиненции.
Лекарственное средство или пищевая добавка по изобретению предпочтительно используются как заместительная терапия для замещения веществ, вызывающих привыкание, и для профилактики и/или лечения депрессивного синдрома, связанного с отменой.
Специалист сможет обнаружить другие патологии, лечение которых требует такого ингибирования.
Заявитель указывает здесь, без ограничений, несколько библиографических ссылок, в которых приводится связь между патологиями и их лечением с помощью тройного ингибитора обратного захвата дофамина, и/или серотонина, и/или норадреналина. Отмечен один пример для каждой "группы".
Дофамин, серотонин и норадреналин способствуют развитию и сохранению нейронов (Lauder J.M., Trends Neurosci, 1993, 16; 233). Определенные неврологические патологии, такие как болезнь Паркинсона (Hornykiewicz O., Adv Cytopharmacol. 1971, 1; 369) возникают из-за дефицита дофамина; ингибиторы моноаминоксидаз, которые повышают долю дофамина, серотонина и норадреналина, применяются для лечения болезни Паркинсона и других неврологических заболеваний (Ebadi M., Curr Drug Targets. 2006, 7; 1513). Таким образом, экстракт эвкалипта по настоящему изобретению может предпочтительно применяться для лечения этих неврологических болезней.
Депрессия является частой патологией настроения, отличающейся чувствами сильной грусти, пессимистическими мыслями, сниженной самооценкой, часто сопровождающейся потерей увлечений, воодушевления и либидо. Неспособность испытывать удовольствие от обычно приятной деятельности, известная также под названием ангедония, также рассматривается как частый симптом в депрессии. Депрессия в настоящее время лечится селективными ингибиторами обратного захвата серотонина, такими как флюоксетин, циталопрам или пароксетин, селективными ингибиторами обратного захвата норадреналина, такими как ребоксетин, или же смешанными ингибиторами обратного захвата серотонина и норадреналина, такими как милнаципран или венлафаксин. Однако важная роль приписывалась дофаминэргическим нейронам, проецирующимся на область мозга, называемую прилежащим ядром, вызывая удовольствие и мотивацию (Koob G.F. Sem. Neurosci. 1992, 4, 139; Salamone J.D. Behav. Brain Res. 1994, 61, 117). Таким образом, симптомы депрессии могут предпочтительно лечиться ингибитором обратного захвата дофамина, серотонина и норадреналина, таким как экстракт эвкалипта по настоящему изобретению.
Абсорбция веществ, вызывающих привыкание, в том числе никотина, повышает внеклеточное содержание дофамина в вентральном стриатуме у животных (Di Chiara G., Imperato A., Proc Natl Acad Sci USA. 1988, 85; 5274) и человека (Brody et al., Am J Psychiatry, 2004, 161; 1211). Отмена табака может сопровождаться депрессивным синдромом (Wilhelm K et al., Drug Alcohol Rev, 2006, 25; 97). Таким образом, экстракт эвкалипта по настоящему изобретению может предпочтительно использоваться в заместительной терапии для замещения веществ, вызывающих привыкание, таких как никотин, и для профилактики или лечения депрессивного синдрома, связанного с отменой.
Функциональные расстройства, называемые также соматотропными, являются расстройствами, которые относятся к основным физиологическим функциям и которые вызваны не органическими поражениями, но способом функционирования органа (печени, селезенки и т.д.). Функциональные соматические расстройства могут лежать в основе заболевания, которое проявится позднее. Из этих расстройств фибромиалгия является расстройством, связанным с диффузными или локализованными болями, хронической усталостью, депрессивными синдромами, нарушениями памяти и концентрации (Rooks DS., Curr Opin Rheumatol. 2007, 19; 111). Фибромиалгические симптомы лечатся смешанными ингибиторами обратного захвата норадреналина/серотонина (Vitton O., Hum Psychopharmacol. 2004, 19 Suppl 1:S27). Добавление компонента, способствующего дофаминэргическому тонусу, например, в экстракт эвкалипта по настоящему изобретению, предпочтительно для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики функциональных соматических расстройств.
Предпочтительно, указанное лекарственное средство находится в форме для перорального введения или в форме для инъекций.
Предпочтительно, форма для перорального введения выбрана из группы, состоящей из таблеток, желатиновых капсул, облаток, жидких препаратов, таких как сиропы, питьевые растворы, или порошков для питьевых суспензий.
Предпочтительно, указанную пищевую добавку (или нутрицевтик, или диетическую добавку) готовят в лекарственной форме, а именно в таких готовых формах, как желатиновые капсулы, пастилки, таблетки, пилюли и другие аналогичные формы, а также в пакетиках с порошком, ампулах с жидкостью, флаконах, снабженных пипеткой, и в других аналогичных формах приготовления жидкостей или порошков, предназначенных для приема в единицах, измеряемых малым количеством.
Результаты, полученные исходя из экстракта эвкалипта, обогащенного по меньшей мере одним соединением формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм по настоящему изобретению, показывают, что выгода от настоящего изобретения может быть распространена на все композиции на основе по меньшей мере одного соединения формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм, какие получены либо химическим и биохимическим путем, либо из растительного экстракта.
Таким образом, настоящее изобретение относится также к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики неврологических, психиатрических патологий или заболеваний или связанных с этим расстройств, функциональных соматических синдромов и зависимости от веществ, вызывающих привыкание, проистекающих из-за нарушения обратного захвата нейромедиаторов. Предпочтительно, лечение и/или профилактика указанных заболеваний или патологий состоит в ингибировании обратного захвата нейромедиаторов.
Благодаря своим фармакологическим свойствам как ингибитора обратного захвата этих нейромедиаторов соединения формулы (I) и их диастереоизомерные формы особенно подходят для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики многочисленных заболеваний или патологий, являющихся результатом нехватки дофамина, и/или серотонина, и/или норадреналина.
Из заболеваний или патологий, которые можно лечить и/или предупредить с помощью указанных соединений по настоящему изобретению, можно назвать в качестве иллюстративных, неограничивающих примеров следующие:
- неврологические заболевания, нарушения или расстройства:
такие, как нейродегенеративные заболевания (болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, болезнь Паркинсона, церебрально-сосудистые повреждения, черепные травмы), боковой амиотрофический склероз, сенильная деменция, фронто-темпоральная деменция, сосудистая деменция, мигрень, невропатические боли центрального механизма;
- психиатрические заболевания, нарушения или расстройства:
такие, как депрессия (эндогенная, стойкая, реактивная или ятрогенная), депрессивное состояние, шизофрения, биполярное нарушение, генерализованная тревожность, заболевания, связанные со стрессом, панические атаки, обсессивно-компульсивные расстройства, синдромы посттравматического стресса, расстройства внимания и гиперактивность, нарушения пищевого поведения (в частности, булимия, анорексия), фобия (в частности, агорафобия), аутизм;
- расстройство памяти, внимания и бессонница, связанные с неврологическими и психиатрическими заболеваниями, нарушениями или расстройствами;
- функциональные соматические расстройства:
такие, как синдром хронической усталости, фибромиалгия, синдром раздраженного кишечника, пищеводно-желудочный рефлюкс, потеря либидо, нарушения эрекции, недержание мочи;
- зависимость от веществ, вызывающих привыкание:
в частности, никотина, алкоголя, опиатов, каннабиоидов, психостимуляторов.
Действительно, лекарственное средство или пищевая добавка согласно изобретению предпочтительно предназначены для того, чтобы вызвать прекращение приема никотина, алкоголя, опиатов, каннабиоидов, психостимуляторов и предотвратить возврат к ним у лиц в состоянии абстиненции.
Лекарственное средство или пищевую добавку согласно изобретению предпочтительно используют в заместительной терапии для замещения веществ, вызывающих привыкание, и для профилактики и/или лечения депрессивного синдрома, связанного с отменой.
Специалист может обнаружить другие патологии, лечение которых требует такого ингибирования.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Предпочтительно, настоящее изобретение относится к применению  A,  B,  C и/или  G для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или профилактики неврологических, психиатрических патологий или заболеваний и связанных с этим расстройств, функциональных соматических синдромов и зависимости от веществ, вызывающих привыкание, проистекающих из-за нарушения обратного захвата дофамина, и/или серотонина, и/или норадреналина.
Испытания, проведенные с соединением формулы (I) и его диастереоизомерными формами, показали, что эти соединения действуют на ингибирование обратного захвата дофамина, и/или серотонина, и/или норадреналина.
Предпочтительно указанное лекарственное средство находится в форме для перорального введения или в форме для инъекций.
Macrocarpal
3
Соединения формулы (I) и их диастереоизомерные формы по настоящему изобретению могут быть получены очисткой растительного экстракта или химическим или биохимическим синтезом, который описан в Total Synthesis of (-)- C. Stereoselective Coupling Reaction with a Novel Hexasubstituted Benzene Cr(CO) Complex as a Biomimetic Chiral Benzyl Cation Equivalent /Tanaka, Tetsuaki; Mikamiyama, Hidenori; Maeda, Kimiya; Iwata, Chuzo; In, Yasuko; Ishida, Toshimasa / Journal of Organic Chemistry (1998), 63(26), 9782-9793.
macrocarpal

Указанные соединения могут быть выделены из "экстракта эвкалипта" или "экстракта, обогащенного по меньшей мере одним  формулы (I)". Методами, позволяющими осуществить его очистку, являются обычные для специалиста хроматографические методы. Экстракты фракционируют на препаративной колонке, имеющей в качестве стационарной фазы обращенную фазу, предпочтительно Symetry Shield, 5 мкМ (Waters), и в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрил/вода/трифторуксусная кислота в пропорциях 95/5/0,1%.
Чистота соединения формулы (I) в такой фракции больше или равна 90%.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Предпочтительно, чистота по  A,  B,  C и/или  G такой фракции больше или равна 90%.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Согласно настоящему изобретению можно разумно предложить применение  A, и/или  B, и/или  C, и/или  G для получения лекарственного средства или пищевой добавки, предназначенных для лечения и/или предупреждения избытка массы тела или ожирения.
Настоящее изобретение относится также к обогащенному экстракту эвкалипта, отличающемуся тем, что он содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I) или какую-либо из его диастереоизомерных форм:
в которой R1 вместе с атомом углерода, с которым он связан, образует группу C=CH2, группу ,  или и R2 означает изобутильную, α-изобутильную или β-изобутильную группу, и тем, что
macrocarpal
массовая доля  A больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и меньше 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%;
macrocarpal
массовая доля  B больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%;
macrocarpal
массовая доля  C больше или равна 3% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 3% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 3% и ниже 20%; и
macrocarpal
массовая доля  G больше или равна 5% и строго меньше 90%, предпочтительно больше или равна 5% и ниже 50%, более предпочтительно больше или равна 5% и ниже 40% и еще более предпочтительно больше или равна 5% и ниже 20%.
Предпочтительно, настоящее изобретение относится к применению указанного обогащенного экстракта эвкалипта в качестве лекарственного средства или пищевой добавки.
Наконец, настоящее изобретение относится к способу получения такого обогащенного экстракта эвкалипта.
Способ получения указанного экстракта состоит в следующих стадиях:
- измельчение листьев, и/или цветков, и/или плодов, и/или стеблей, и/или ствола эвкалипта;
- по меньшей мере одна экстракция органическим растворителем или смесью воды и органического растворителя или растворителей, смешиваемых с водой.
Экстракцию проводят при отношении растение/растворитель, составляющем от примерно 1/1 до примерно 1/20, и ее можно повторить 2-3 раза. Температура экстракционного растворителя может быть равной температуре окружающей среды или выше и может достигать температуры кипения используемого растворителя. Время контакта растения с растворителем составляет от примерно 30 мин до примерно 72 часов. Предпочтительно, растворитель выбирают из группы, состоящей из алкана (пентан, гексан, гептан, октан, циклогексан), простого эфира (тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир), сложного эфира (этилацетат, изопропилацетат), спирта (метанол, этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, октанол), кетона (метилэтилкетон, метилизобутилкетон), галогенизированного углеводорода (хлороформ, дихлорметан) или смеси воды и органических растворителей, смешиваемых с водой (например, водно-спиртовая смесь).
Предпочтительно, экстракционный растворитель является дихлорметаном или изопропилацетатом;
- в случае экстракционного растворителя, смешиваемого с водой, фильтрат сушат, а потом растворяют в растворителе, не смешиваемом с водой.
В случае растворителя, не смешиваемого с водой, фильтрат концентрируют;
- разделение твердое/жидкость методами, известными специалисту.
2
3
В одном предпочтительном варианте осуществления изобретения одну или несколько экстракций жидкость-жидкость проводят путем добавления основания, предпочтительно карбоната натрия (NaCO). Объединенные основные водные фазы подкисляют добавлением кислоты, предпочтительно соляной кислоты (HCl), затем экстрагируют путем одной или нескольких экстракций жидкость-жидкость, проводимых с растворителем, не смешиваемым с водой.
Подкисление ведут предпочтительно до получения pH, примерно равного 1.
Объединенные органические фазы можно сушить над сульфатом натрия, затем концентрировать в вакууме при температуре, варьирующейся от температуры окружающей среды до температуры кипения.
macrocarpal
Концентрат сушат обычными средствами сушки (распыление, сушильная печь и т.д.), предпочтительно при температурах, не превышающих 60°C, и он представляет собой экстракт, обогащенный  G. Этот экстракт может быть стабилизирован добавлением антиоксиданта, такого, например, как аскорбиновая кислота или лимонная кислота, в количествах, составляющих от 0,05 до 1 г на 100 г сухого экстракта.
В частном варианте осуществления изобретения экстракт эвкалипта или экстракт эвкалипта, называемый "обогащенным по меньшей мере одним соединением формулы (I) или какой-либо из его диастереоизомерных форм", также получают способом экстракции, использующим в качестве экстракционного растворителя сверхкритическую жидкость.
Eucalyptus sp
Листья, цветки, плоды, стебли или ствол эвкалипта (.) или смесь этих частей, измельченные или нет, экстрагируют затем сверхкритической жидкостью, которой может быть диоксид углерода.
2
Первую экстракцию сверхкритическим CO проводят предпочтительно в следующих условиях:
- температура жидкости составляет от примерно 40°C до примерно 80°C, предпочтительно от примерно 40°c до примерно 60°C;
- ее давление составляет от примерно 80 бар до примерно 250 бар, предпочтительно от примерно 100 бар до примерно 200 бар;
- продолжительность экстракции составляет от примерно 1 часа до примерно 6 часов;
2
- расход жидкости должен подбираться специалистом в зависимости от количества экстрагируемого материала и размера применяемого автоклава. Предпочтительно, расход CO, используемого в способе по настоящему изобретению, составляет от 2 до 15 кг/час, благоприятно 8-12 кг/час, причем
• количество растения составляет от 200 до 1000 граммов, предпочтительно около 500 граммов,
• емкость автоклава составляет от 2 до 10 литров, предпочтительно примерно 5 литров.
На этой первой стадии экстракции можно добавить органический сорастворитель, из семейства спиртов (в том числе этанол), простых эфиров, сложных эфиров или смесь двух или более из этих растворителей.
2
Растение, прошедшее такую экстракцию, можно затем подвергнуть второй факультативной экстракции. Экстракционная среда предпочтительно является сверхкритическим CO с или без сорастворителя. Рабочие условия следующие:
- температура жидкости составляет от примерно 40°C до примерно 80°C, предпочтительно от примерно 40°C до примерно 60°C;
- ее давление составляет от примерно 80 бар до примерно 250 бар, предпочтительно от примерно 100 бар до примерно 200 бар;
- расход жидкости составляет от 2 до 15 кг/час, предпочтительно 8-12 кг/час; причем
• количество растений составляет от 200 до 1000 граммов, предпочтительно примерно 500 граммов, и
• вместимость автоклава составляет от 2 до 10 литров, предпочтительно примерно 5 литров.
Предпочтительно, экстракцию проводят при массовом отношении растение/сорастворитель от примерно 1/0,1 до 1/5.
Эта вторая стадия экстракции при необходимости может быть повторена. Продолжительность экстракции составляет от примерно 1 часа до примерно 3 часов на дополнительной стадии экстракции.
Затем проводят упаривание полученного экстракта.
Специалист сможет подобрать рабочие условия этого способа с помощью суперкритической жидкости, чтобы получить более или менее обогащенный экстракт эвкалипта.
Окончательную сушку экстракта проводят лиофилизацией или обычными средствами сушки, известными специалисту (распыление, сушильная печь и т.д.). Предпочтительно, температура сушки не превышает примерно 60°C.
Экстракт можно стабилизировать добавлением антиоксиданта, такого как, например, аскорбиновая кислота, лимонная кислота, в количествах, составляющих от примерно 0,05 до примерно 1 г на 100 г сухого экстракта.
Изобретение можно будет лучше понять с помощью следующих примеров, которые, однако, не ограничивают его объем.
Пример 1:
Eucalyptus globulus
Приготовление экстракта
Eucalyptus globulus
Листья  измельчали, затем экстрагировали 5 объемами этанола при температуре окружающей среды. Время контакта растения с растворителем составляло 48 часов.
Растение отделяли от растворителя фильтрацией.
Полученный фильтрат сушили в вакууме при температуре 60°C.
in vitro,
Полученный таким образом экстракт был использован для испытаний  представленных в примере 5.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Полученный экстракт содержал около 0,65 г  A, около 0,7 г  B, около 0,4 г  C и около 1 г  G на 100 г сухого экстракта.
Пример 2:
Eucalyptus globulus
Приготовление экстракта
Eucalyptus globulus
Листья  измельчали, затем экстрагировали 3 раза с обратным холодильником 5 объемами 50%-ного (об./об.) этанола. Время контакта растения с растворителем составляет примерно 1 час.
Растение отделяли от растворителя фильтрацией.
Полученный фильтрат концентрировали до 0,5 объема. Очистку жидкость-жидкость проводили добавлением дихлорметана. Было проведено три экстракции жидкость-жидкость. Органические фазы объединяли и сушили над сульфатом натрия. Окончательную сушку экстракта проводили при 60°C в вакууме.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Полученный экстракт содержал около 1,3 г  A, около 1,4 г  B, около 0,8 г  C и около 2 г  G на 100 г сухого экстракта.
Пример 3:
Eucalyptus globulus
Приготовление экстракта
Eucalyptus globulus
Листья  измельчали, затем 2 раза экстрагировали с обратным холодильником 5 объемами смеси этанол-вода (50% об./об.) примерно в течение 1 часа.
Растение отделяли от растворителя фильтрацией.
Полученный фильтрат концентрировали, затем стабилизировали добавлением 0,1 г лимонной кислоты на 100 г сухого экстракта.
Концентрат замораживали, затем сушили лиофилизацией.
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
Полученный экстракт содержал около 0,3 г  A, около 0,35 г  B, около 0,2 г  C и около 0,5 г  G на 100 г сухого экстракта.
Пример 4:
2
537 г листьев эвкалипта измельчали, затем помещали в автоклав. Экстрагировали в течение 4 часов сверхкритическим CO при 40°C, 150 бар, с расходом 10 кг/ч.
2
2
Прошедшие такую экстракцию листья подвергали второй экстракции смесью сверхкритический CO/этанол при 150 бар, 50°C. Вводили 1 объем этанола на единицу веса растения. Экстрагировали таким образом в течение 2 ч 15 мин, затем листья сушили, пропуская только CO в тех же самых рабочих условиях в течение 30 минут.
Macrocarpal
Собрано 273,7 г экстракта, который сушили выпариванием растворителя. Таким образом получено 27,9 г экстракта, содержащего 6,85 г  G на 100 г сухого экстракта.
Пример 5:
Eucalyptus globulus
Оценка экстракта листьев  на обратный захват серотонина, дофамина и норадреналина
Испытания на обратный захват проводили in vitro на синапсах крыс.
1) Оценка обратного захвата серотонина (или 5-HT)
Порядок действий, используемый для этой оценки, такой же, какой описан в Perovic S. and Muller W.E.G., 1995. - Pharmacological profile of hypericum extract: effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arzneim-Forsch. Drug Res., 45: 1145-1148.
Его принцип следующий.
3
Eucalyptus globulus
4
2
4
3
Синапсы, взятые из мозга крысы, инкубировали в течение 15 мин при 37°C с 0,1 мкКи [H]-серотонина в присутствии или в отсутствие (контроль) экстракта , полученного по примеру 1, или имипрамина (эталон) в буфере, содержащем 118 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2,5 мМ MgSO, 1,2 мМ NaHPO, 25 мМ NaHCO, 11 мМ глюкозы, 10 мкМ ЭГТА и 50 мкМ аскорбиновой кислоты (pH 7,4).
Базальную активность определяли инкубированием этой же смеси в течение 15 мин при 37°C в присутствии 10 мкМ имипрамина для блокирования обратного захвата.
3
После инкубирования образцы быстро фильтровали в вакууме через стекловолоконные фильтры (GB/B, Packard) и два раза промывали ледяным инкубационным буфером для удаления свободного [H]-серотонина. Фильтры сушили и удержанную радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетчиком Topcount (Packard), используя сцинтилляционный коктейль Microscint O (Packard).
3
Результаты выражены в процентах ингибирования обратного захвата контрольного [H]-серотонина (ср. таблицу 1).
2) Оценка обратного захвата дофамина (или DA)
3
Порядок действий, использованный для этой оценки, такой же, какой описан в Janowsky A., Berger P., Vocci F., Labarca R., Skolnick P., Paul S.M., 1996. - Characterization of sodium-dependent [H]GBR-12935 binding in brain: a radioligand for selective labelling of the dopamine transport complex, J. Neurochem., 46, 1272-1276.
Его принцип следующий.
3
Eucalyptus globulus
Синаптическую среду (синапсы стриатума крысы) инкубировали в течение 15 мин при 37°C с 0,1 мкКи [H]-DA в присутствии или в отсутствие (контроль) экстракта , полученного согласно примеру 1, или GBR 12909 (эталон) в буферном растворе (ср. обратный захват серотонина).
Базальную активность определяли, инкубируя эту же смесь в течение 15 мин при 37°C в присутствии 10 мкМ GBR 12909, чтобы блокировать захват.
3
После инкубирования образцы быстро фильтровали в вакууме через стекловолоконные фильтры (GB/B, Packard) и два раза промывали ледяным инкубационным буфером для удаления свободного [H]-дофамина. Фильтры сушили и удержанную радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетчиком Topcount (Packard), используя сцинтилляционный коктейль Microscint O (Packard).
3
Результаты выражены в процентах ингибирования обратного захвата контрольного [H]-дофамина (ср. таблицу 1).
3) Оценка обратного захвата норадреналина (или NE)
Порядок действий, использованный для этой оценки, такой же, какой описан в Perovic S., Muller W.E.G., 1995. - Pharmacological profile of hypericum extract: effect on serotonin uptake by postsynaptic receptors, Arzneim-Forsch. Drug Res., 45: 1145-1148.
Его принцип следующий.
3
Eucalyptus globulus
Синаптическую среду (синапсы гипоталамуса крысы) инкубировали в течение 20 мин при 37°C с 0,1 мкКи [H]-NE в присутствии или в отсутствие (контроль) экстракта , полученного согласно примеру 1, или протриптиллина (эталон) в буферном растворе (ср. обратный захват серотонина).
Базальную активность определяли, инкубируя эту же смесь в течение 20 мин при 37°C в присутствии 10 мкМ протриптиллина, чтобы блокировать захват.
3
После инкубирования образцы быстро фильтровали в вакууме через стекловолоконные фильтры (GB/B, Packard) и два раза промывали ледяным инкубационным буфером для удаления свободного [H]-NE. Фильтры сушили и удержанную радиоактивность измеряли сцинтилляционным счетчиком Topcount (Packard), используя сцинтилляционный коктейль Microscint O (Packard).
3
Результаты выражены в процентах ингибирования обратного захвата контрольного [H]-норадреналина (ср. таблицу 1).
4) Результаты
Результаты выражены в процентах ингибирования обратного захвата оцениваемого нейромедиатора (ср. таблицу 1).
<b>Таблица 1</b>Оценка экстракта листьев <i>Eucaliptus globulus</i> на обратный захват серотонина, дофамина и норадреналина
Испытание
Концентрации(мкг сухого экстракта/мл раствора)
% ингибирования
Обратный захват серотонина
1
3
10
43
100
103
Обратный захват дофамина
1
4
10
91
100
102
Обратный захват норадреналина
1
-14
10
11
100
101
Можно видеть существенное ингибирование обратного захвата серотонина и дофамина при 10 мкг/мл и трех нейромедиаторов при 100 мкг/мл.
Пример 6
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
: Оценка экстракта эвкалипта, обогащенного  G, в сравнении с экстрактом эвкалипта без  G и с чистым  G
Eucaliptus globulus
Листья  измельчали, затем экстрагировали 5 объемами дихлорметана. Экстракцию проводили два раза с обратным холодильником в течение 1 часа.
Затем проводили фильтрацию в вакууме. Собранные фильтраты концентрировали до 2 объемов.
2
3
Три экстракции жидкость-жидкость проводили добавлением одного объема карбоната натрия (NaCO) концентрации 0,1 М.
macrocarpal
macrocarpal
Обедненную фазу дихлорметана сохраняли. После сушки над сульфатом натрия, концентрирования и сушки в вакууме при 60°C полученный остаток представлял собой "экстракт, обедненный " (при этом массовая доля  G была ниже 0,1%).
macrocarpal
macrocarpal
Объединенные основные водные фазы подкисляли добавлением соляной кислоты (HCl) концентрации 1 M до получения pH, равного примерно 1, затем экстрагировали дихлорметаном посредством 3 экстракций жидкость-жидкость. Органические фазы сушили над сульфатом натрия, затем концентрировали и сушили в вакууме при температуре максимум 60°C. Полученный сухой остаток представлял собой "экстракт, обогащенный  G". Этот последний имеет массовую долю  G 7%.

Обогащенный экстракт фракционировали на препаративной колонке, имеющей в качестве стационарной фазы обращенную фазу Symetry Shield, 5 мкм (Waters) и в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрил/вода/трифторуксусная кислота в соотношении 95/5/0,1%.
macrocarpal
Чистота  G полученной фракции составляла примерно 97%.
Используемый далее порядок действий в том, что касается оценки обратного захвата серотонина, идентичен порядку в примере 5. Полученные результаты представлены ниже в таблице 2.
<b>Таблица 2</b>Сравнение активности "экстракта, обогащенного <i>macrocarpal</i> G", "экстракта без <i>macrocarpal</i> G" и фракции, обогащенной <i>macrocarpal</i> G, в захвате серотонина
Испытание
Концентрации(мкг экстракта/мл раствора)
% ингибирования
Экстракт, обогащенный <i>macrocarpal</i> G
15
101
Экстракт, обедненный <i>macrocarpal</i> G
15
37
<i>Macrocarpal</i> G
0,3
103,8
macrocarpal
Видно, что процентная доля ингибирования обратного захвата серотонина тем значительнее, чем выше содержание  G.
Пример 7:
Определение концентрации (CI
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
macrocarpal
)  A,  B,  C и  G, ингибирующей на 50% обратный захват нейромедиаторов, в сравнении с гиперфорином
50
macrocarpal
Следующий порядок действий такой же, как в примере 5. Он был повторен для разных концентраций  A, B, C и G и гиперфорина.
50
Полученные кривые ингибирования позволили получить нижеследующие значения CI.
<b>Таблица 3</b>Определение концентраций (CI<sub>50</sub>) <i>macrocarpal</i> A, <i>macrocarpal</i> B, <i>macrocarpal</i> C и <i>macrocarpal</i> G и гиперфорина, ингибирующих на 50% обратный захват серотонина, норадреналина и дофамина
CI<sub>50</sub> (мкг экстракта/мл раствора)
Испытание
Macrocarpal A
Macrocarpal B
Macrocarpal C
Macrocarpal G
Гиперфорин
Обратный захват серотонина
1,3
2,5
1,3
1,4
0,89
Обратный захват норадреналина
1,8
>31
0,54
3,1
0,79
Обратный захват дофамина
0,71
1,5
0,68
0,35
0,23
Эти результаты позволили выявить, что эти 4 соединения являются носителями активности ингибирования обратного захвата нейромедиаторов. Кроме того, следует отметить, что уровень активности этих 4 соединений является эквивалентным.