СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ХРОНИЧЕСКОГО КАЛЬКУЛЕЗНОГО ХОЛЕЦИСТИТА У МУЖЧИН
METHOD FOR PREDICTION OF RISK OF DEVELOPMENT OF CHRONIC CALCULOUS CHOLECYSTITIS IN MALES

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита (далее ХКХ) у мужчин.
Хронический калькулезный холецистит - обменно-воспалительное заболевание билиарной системы, характеризующееся образованием конкрементов в просвете желчного пузыря [Ильченко А.А. Болезни желчного пузыря и желчных путей: руководство для врачей / А.А. Ильченко. - 2-е изд. - Москва: Мед. информ. агентство, 2011. - 877 с.]. Среди болезней органов пищеварения ХКХ встречается достаточно часто и составляет почти 90% всех случаев желчнокаменной болезни (далее ЖКБ), заболеваемость которой в мире достигает 10%. По данным статистических исследований последних лет, ЖКБ страдают почти каждая пятая женщина и каждый десятый мужчина [Коханенко Н. Желчнокаменная болезнь / Н. Коханенко, А. Глебова // Медицинская газета. - 2011. - 2 марта. - С. 8-9].
За всю историю изучения ЖКБ существовало несколько теорий патогенеза заболевания. Основными механизмами образования желчных камней считают обменный и воспалительный [Полунина Т.Е. Желчнокаменная болезнь / Т. Е. Полунина // Лечащий врач. - 2005. - №2. - С. 34-38]. Среди генов-кандидатов, регулирующих преимущественно процессы воспаления, важное значение имеют интерлейкины. Интерлейкины, взаимодействуя со специфическими рецепторами, являются одними из главных звеньев в воспалительном каскаде при ЖКБ, изменяя интенсивность и длительность воспалительных, склеротических и литогенных процессов в желчном пузыре [Царегородцева Т.М. Цитокины при заболеваниях органов пищеварения [Электронный ресурс] / Т.М. Царегородцева // Регистр лекарственных средств России: энцикл. лекарств и товаров аптечного ассортимента: офиц. сайт /группа компаний РЛС. - Москва, 2009. - 28 апр. - Режим доступа: http://www.rlsnet.ru/articles_426.htm.].
IL-1А - белок, кодируемый геном IL-1А, который располагается на второй хромосоме (2q14). IL-1А - провоспалительный цитокин, обладающий широким спектром метаболической, физиологической, кроветворной деятельности, а также играет одну из центральных ролей в регуляции иммунного ответа. После попадания инфекции в организм, IL-1А активизирует множество процессов системы иммунного ответа. В частности: стимулирует распространение фибробластов, индуцирует синтез протеаз и белков острой фазы, влияет на увеличение числа нейтрофилов крови, активизирует распространение лимфоцитов и вызывает лихорадку [Dinarello С.А. Induction of interleukin-1 and interleukin-1 receptor antagonist / С.А. Dinarello // Semin. Оnсоl. - 1997. - №24, №3, suppl. 9. - P. S981-S993].
Ген IL-1А содержит 7 экзонов и 6 интронов, на 3 и 5 концах он имеет нетранслируемые области. Кроме того, он обладает высокой степенью гомологии интронных последовательностей, что, возможно, регулирует экспрессию этого гена. [Громова А.Ю. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека / А.Ю. Громова, А.С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2005. - Т. 4, №2. - С. 3-12].
IL-1B - белок, кодируемый геном IL-1B, который располагается на второй хромосоме (2q13-q21). IL-1 В является многофункциональным цитокином с широким спектром действия. При действии патогенных факторов он играет важную роль в формировании и поддержании защитной реакции организма. Продуцируется IL-1 В, в основном, макрофагами и моноцитами [Schönbeck U. Generation of biologically active IL-1 beta by matrix metalloproteinases: а novel caspase-1-independent pathway of IL-1 beta processing / U. Schönbeck, F. Mach, P. Libby // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161, №7. - P. 3340-3346].
IL-1 В участвует в инициации и регуляции воспалительных, иммунных процессов, активации нейтрофилов, Т- и В-лимфоцитов, стимуляции синтеза белков острой фазы. За счет IL-1 В происходит повышение хемотаксиса, фагоцитоза, гемопоэза, проницаемости сосудистой стенки, цитотоксической и бактерицидной активности. Отмечается повышение уровня данного цитокина в крови у пациентов с язвенной болезнью желудка, панкреатитом и желчнокаменной болезнью до 1100-3200 пг/мл, по сравнению с контрольной группой (до 40 пг/мл) [Царегородцева Т.М. Цитокины при заболеваниях органов пищеварения / Т.М. Царегородцева // Регистр лекарственных средств России: энцикл. лекарств и товаров аптечного ассортимента: офиц. сайт /группа компаний РЛС. - Москва, 2009. - 28 апр. - Режим доступа: http://www.rlsnet.ru/articles_426.htm].
IL-4 - лимфокин, массой 15-20 kDa. Ген IL-4 располагается на пятой хромосоме. Основными продуцентами IL-4 являются Т-клетки (Th2). Данный цитокин принимает участие в дифференцировке Т- и В-лимфоцитов. Наиболее мощный эффект интерлейкина-4 связывают с регуляцией синтеза других цитокинов. Он принимает участие в многочисленных биологических процессах, таких как воспалительные реакции и иммунный ответ [Характер распределения аллелей генов ARIL-1 и IL-4 у больных ревматоидным артритом русской национальности, проживающих в Челябинской области / Д.С. Сташкевич, А.Л. Бурмистрова, Т.А. Суслова [и др.] // Успехи современного естествознания. - 2006. - №3. - С. 52-53].
http://www.rlsnet.ru/articles_426.htm
Повышение уровня IL-4 отмечается и при регенераторно-восстановительных процессах хронических рецидивирующих заболеваний органов пищеварения, таких как: язвенная болезнь желудка, панкреатит, желчнокаменная болезнь. [Царегородцева Т.М. Цитокины при заболеваниях органов пищеварения / Т.М. Царегородцева // Регистр лекарственных средств России: энцикл. лекарств и товаров аптечного ассортимента: офиц. сайт /группа компаний РЛС. - Москва, 2009. - 28 апр. - Режим доступа: ].
IL-5 - димерный белок, массой 50-60 kDa. Ген IL-5 располагается на пятой хромосоме 5q23 -q31. Продуцируется IL-5 Т-клетками (Th 2). В пептидной части одной цепи IL-5 содержатся 115 аминокислотных остатков. Сходной функциональной активностью обладают его мономерная и димерная формы. IL-5 инициирует продукцию иммуноглобулинов и стимулирует синтез IgA. [Murphy J.M. IL-3, IL-5, and GM-CSF signaling: crystal structure of the human beta-common receptor / J.M. Murphy, I.G. Уоung // Vitam. Horm. - 2006. - Vol. 74. - P. 1-30].
Помимо клеток иммунной системы, данный цитокин оказывает влияние и на миелоидные клетки. IL-5 оказывает избирательное действие на костномозговых предшественников эозинофилов, регулируя их пролиферацию и дифференцировку. Наряду с этим, IL-5 увеличивает продукцию супероксидантов и усиливает хемотаксис данных типов клеток [База знаний по биологии человека / Разраб. А.А. Александров. - Москва, 1990-2011. - Режим доступа: http://humbio.ru].
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2014 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита у мужчин на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов интерлейкинов.
Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.
Известен способ прогнозирования характера течения хронического калькулезного холецистита по патенту РФ №2406089 (заявка №2009124685, 29.06.2009), где предложен способ прогнозирования характера течения хронического калькулезного холецистита путем выделения ДНК из периферической венозной крови больных и выявления полиморфизма гена TNF. При выявлении генотипов -308GA и -308АА прогнозируют тяжелое течение хронического калькулезного холецистита с частыми обострениями, перемежающегося характера. При выявлении генотипа -308GG прогнозируют среднетяжелое и легкое течение хронического калькулезного холецистита, носящего рецидивирующий или монотонный характер. Его недостатком является то, что его невозможно использовать для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита у мужчин.
Известен способ прогнозирования хронического холецистита по патенту РФ №2014614, опубл. 15.06.1994, согласно которому в пробе крови определяют группу крови ABO, тип Hp и HIA-антигены. При наличии в фенотипе маркеров, из числа характерных для хронического холецистита (B (III), Hp 1 - 1, HIA A3, A28, A30, B5, B13, b35, B40), суммируют их общие прогностические коэффициенты и при значении суммы 13 и более прогнозируют риск развития хронического холецистита. Для уточнения клинической формы холецистита выявляют в фенотипе наличие дифференциальных генетических маркеров форм заболевания (O(1), Hp 1 - 1, HIA B5, B7, B18, B35), суммируют их дифференциальные прогностические коэффициенты и при сумме, равной 6 и более, прогнозируют риск развития бескаменного холецистита, а при сумме, равной -6 и менее, - риск развития каменного холецистита.
Его недостатком является то, что не используются данные о генетических полиморфизмах интерлейкинов и их сочетаний для прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита у мужчин.
Таким образом, в изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита у мужчин на основе данных о генетических полиморфизмах интерлейкинов и их сочетаний IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т.
Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала способов прогнозирования риска развития хронического калькулезного холецистита у пациентов мужского пола русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, с учетом полиморфизмов генов интерлейкинов.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития ХКХ у индивидуумов мужского пола русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, в зависимости от наличия генетических вариантов полиморфных маркеров IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и их сочетаний.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития ХКХ у мужчин по наличию генетических вариантов полиморфных маркеров IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и их сочетаний, включающий:
- выделение ДНК из периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной эстракции;
- генотипирование образцов ДНК с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров;
- прогнозирование повышенного риска развития ХКХ среди индивидуумов мужского пола русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, в случае выявления генетических вариантов -511Т IL-1 В, -511ТТ IL-1 В, либо комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -511Т IL-1 В и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1 В и -584Т IL-4, либо комбинации аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B;
- прогнозирование пониженного риска развития ХКХ среди индивидуумов мужского пола русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, в случае выявления генотипа 511СС IL-1 В.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогнозирования риска развития ХКХ у мужчин по наличию генетических вариантов полиморфных маркеров IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и их сочетаний.
Изобретение охарактеризовано на фигурах 1-6:
на фиг. 1 представлена дискриминация аллелей по локусу IL-1А -889 Т>С (rs 1800587), где 2, 3, 4 - -889ТТ IL-1А; 5, 6, 10 - -889СС IL-1А; 1, 7-9, 11-14 - -889СТ IL-1А;
на фиг. 2 представлена дискриминация аллелей по локусу IL-1 В -511С>Т (rs419598), где 1, 9 - гомозиготы -511ТТ; 2, 3, 5, 7, 8, 12 - гетерозиготы -511СТ; 4, 6, 10-11 - гомозиготы -511СС;
на фиг. 3 представлена дискриминация аллелей по локусу IL-4 -584С>Т (rs 2243250), где - -584СС IL-4, - -584ТТ IL-4, - -584СТ IL-4, - отрицательный контроль;
на фиг. 4 представлена дискриминация аллелей по локусу IL-5 -703С>Т (rs12704795), где 1, 3-8, 12, 15 - гомозиготы -703СС; 10, 11, 13, 14 - гетерозиготы -703СТ; 2, 9 - гомозиготы -703ТТ;
на фиг. 5 в таблице представлены частоты комбинаций генетических вариантов интерлейкинов у больных хроническим калькулезным холециститом и в контрольной группе мужского пола;
на фиг. 6 показана роль генов интерлейкинов в развитии хронического калькулезного холецистита у мужчин.
На фигуре 3 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю Т, зонд с красителем FAM -аллелю С.
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (СТ).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю Т (УОФ аллеля Т отложены по оси y).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю С (УОФ аллеля С отложены по оси x).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.
Способ осуществляют следующим образом.
Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH 7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН 8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96%-ного этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -200ºС. Выделенную ДНК используют для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.
Анализ всех генетических полиморфизмов интерлейкинов проводят методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. Для ПЦР используют: ДНК-полимеразу Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М», олигонуклеотидные праймеры и зонды, синтезированные фирмой «Синтол». Полимеразную цепную реакцию выполняют на амплификаторах «Терцик-МС4» (ДНК-технология) и IQ5 (Bio-Rad).
Генотипирование ДНК-маркеров производят следующими методами:
1. Метод полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (локусы IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-5 -703С>T). Генотипирование производят с помощью соответствующих эндонуклеаз. Реакция протекает в присутствии буферов и при температурных условиях, рекомендованных производителями эндонуклеаз - ООО «Сибэнзим» (Новосибирск). Продукты рестрикции фракционируют с помощью электрофореза в агарозных гелях различной концентрации и окрашивают в этидиум бромиде (фиг. 1, 2, 4).
2. Метод дискриминации аллелей согласно значениям величин уровня относительной флуоресценции (УОФ) каждого зонда. Проводят на амплификаторе «СFХ96» (локус IL-4 -584С>T) (фиг. 3).
Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития ХКХ у мужчин подтверждает анализ результатов наблюдений 249 больных хроническим калькулезным холециститом и 294 человек популяционного контроля. Общий объем исследуемой выборки составил 543 человека. Среди больных ХКХ 16,80% составили мужчины (41 человек), 83,20% - женщины (208 человек). В контрольной выборке (n=294) процентное соотношение было аналогичным: мужчины - 17,00% (50 человек), женщины - 83,00% (244 человек) (p>0,05).
В выборки больных и контроля включались индивидуумы русской национальности Центрального Черноземья России, не связанные между собой родственными связями. Пациентов относили к соответствующей группе больных ХКХ после подтверждения установленного диагноза с помощью клинических и лабораторно-инструментальных методов обследования в соответствии с обязательными диагностическими стандартами. Контрольная группа была сформирована при экспедиционном обследовании населения областей Центрально-Черноземного региона России: Красненского и Прохоровского районов Белгородской области, Репьевского района Воронежской области и Черемисиновского района Курской области.
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществляли в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.
Формирование базы данных и статистические расчеты осуществляли с использованием программы «STATISTICA 6.0».
2
Выявление ассоциаций генетических вариантов анализируемых локусов с развитием ХКХ у мужчин проводили с помощью таблиц сопряженности 2х2, на основе вычисления критерия χ (хи-квадрат) с поправкой Йетса на непрерывность.
cor
bonf
Характер ассоциаций различных аллелей и генотипов с ХКХ у лиц мужского пола оценивали при помощи показателя отношения шансов (OR) [Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.]. При проведении множественных сравнений использовали поправку Бонферрони - производили перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: р=р×n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали р≤ 0,05.
f
perm
perm
f
perm
Изучение роли комбинаций генетических вариантов IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т в развитии ХКХ у мужчин проводили с помощью программного обеспечения APSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику. Для валидации найденных ассоциаций использовали точный критерий Фишера (P) и пермутационный анализ (P). Значение P для аллеля или аллельного сочетания определяется как вероятность того, что после сбалансированного перемешивания меток «больной ХКХ» - «контроль» (100 пермутаций) и нового поиска с помощью APSampler оценка значимости ассоцииации с ХКХ произвольно найденного аллеля или аллельного сочетания будет не хуже, чем эта оценка для исходного. [Царева E.Ю. Фармакогеномные исследования эффективности лечения рассеянного склероза иммуномодулирующими препаратами: диссертация... кандидата биологических наук: 03.01.03 / Царева Екатерина Юрьевна // Москва, 2012. - 140 с.]. Значимыми считали различия сравниваемых частот, если P<0,05 и P≤ 0,005, при условии, что значения 95% CI для OR не пересекают 1.
2
2
2
bonf
bonf
Установлена более высокая частота генетических вариантов -511Т IL-1 В (51,47%), -511ТТ IL-1 В (29,41%), и низкая распространенность генотипа -511СС IL-1 В (26,47%) среди мужчин, больных ХКХ, в сравнении с контрольной группой мужчин, где данные показатели составили 23,08% (χ=11,47, р=0,002), 5,13% (χ=6,13, р=0,01, Р=0,03) и 58,97% (χ=6,5, р=0,01, Р=0,03) соответственно. Таким образом, генетические варианты -511Т IL-1 В и -511ТТ IL-1 В обусловливают повышенный риск развития данного заболевания (OR=3,54; 95% CI=1,64-7,67 и OR=7,71; 95% CI=1,39-56,14 соответственно), тогда как генотип -511СС IL-1 В является протективным фактором развития хронического калькулезного холецистита у мужчин (OR=0,25; 95% CI=0,08-0,75).
Выявлена более высокая частота комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5 у больных ХКХ по сравнению с группой контроля. В группе больных данное сочетание встречается в 71,43% случаев, а в контрольной группе лишь в 33,33%. Эта комбинация является фактором риска развития хронического калькулезного холецистита (pf=0,003; pperm=0,01; OR=5,0; 95% CI 1,67-14,93).
f
рerm
f
рerm
Сочетание генетических маркеров -511Т IL-1 В и -703С IL-5 встречается у 66,67% мужчин, больных ХКХ, что в 1,8 раз чаще, чем в контрольной группе (36,36%). Данная комбинация генетических вариантов интерлейкинов определяет повышенный риск формирования хронического калькулезного холецистита (р=0,003; р=0,01; OR=4,8; 95% CI 1,64-14,12). Сочетание генетических маркеров -889Т IL-1А, -511Т IL-1 В и -584Т IL-4, которое отмечается у 35,48% мужчин, больных ХКХ, и у 8,33% контроля, также является фактором риска развития данного заболевания (р=0,004; р=0,02; OR=6,6; 95% CI 1,65-26,46).
f
рerm
Зарегистрированы различия между мужчинами, больными ХКХ, и контрольной группой по концентрации сочетания аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B. Среди больных данная комбинация встречается у 71,88%, а в контрольной группе лишь у 38,46%. Наличие данного сочетания является фактором риска развития хронического калькулезного холецистита у мужчин (р=0,005; р=0,02; OR=4,1; 95% CI 1,5-11,17).
Таким образом, резюмируя полученные данные, можно сделать вывод о значимом вкладе полиморфных вариантов генов интерлейкинов IL-1А -889Т>С, IL-1 В -511С>Т, IL-4 -584С>Т, IL-5 -703С>Т и их сочетаний в развитие ХКХ у мужчин. Причем наличие у мужчин аллеля -511Т IL-1 В и генотипа -511ТТ IL-1 В-511Т IL-1 В, -511ТТ IL-1 В, либо комбинации аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -511Т IL-1 В и -703С IL-5, либо комбинации аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1 В и -584Т IL-4, либо комбинации аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B обуславливает повышенный риск развития ХКХ. Тогда как генотип -511СС IL-1 В является протективным фактором развития хронического калькулезного холецистита у мужчин.
Примеры, подтверждающие осуществимость предложенного изобретения
1. Генетический вариант -511Т IL-1 В был выявлен у пациента К. При дальнейшем обследовании данному пациенту был поставлен диагноз хронический калькулезный холецистит.
2. Генотип -511ТТ IL-1 В был выявлен у пациента А. При дальнейшем обследовании данному пациенту был поставлен диагноз хронический калькулезный холецистит.
3. Генотип -511СС IL-1 В был выявлен у пациента Г. При дальнейшем обследовании у данного пациента хронический калькулезный холецистит не обнаружен.
4. Сочетание аллелей -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5 было обнаружено у пациента Х. При дальнейшем детальном обследовании у этого пациента был обнаружен хронический калькулезный холецистит.
5. Сочетание аллелей -511Т IL-1 В и -703С IL-5 было выявлено у пациента Р. При дальнейшем обследовании данному пациенту был поставлен диагноз хронический калькулезный холецистит.
6. Сочетание аллелей -889Т IL-1А, -511Т IL-1 В и -584Т IL-4 было обнаружено у пациента В. При дальнейшем детальном обследовании у этого пациента был обнаружен хронический калькулезный холецистит.
7. Сочетание аллелей -889T IL-1А и -511T IL-1B было выявлено у пациента П. При дальнейшем обследовании данному пациенту был поставлен диагноз хронический калькулезный холецистит.
Использование данного способа позволяет прогнозировать риск развития ХКХ у индивидуумов мужского пола русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России, что будет способствовать более эффективной реализации лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению формирования данного заболевания.