РАЗРАБОТКА СТАБИЛЬНОГО ГЕТЕРОДИМЕРНОГО АНТИТЕЛА С МУТАЦИЯМИ В ДОМЕНЕ Fc

1. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный гетеродимерный домен СН3, где указанный модифицированный домен СН3 содержит: первый модифицированный полипептид домена СН3, включающий по меньшей мере три модификации аминокислот по сравнению с полипептидом домена СН3 дикого типа, и второй модифицированный полипептид домена СН3, включающий по меньшей мере три модификации аминокислот по сравнению с полипептидом домена СН3 дикого типа;
причем по меньшей мере один из указанных первого и второго полипептидов домена СН3 включает модификацию аминокислоты K392J, где J выбран из L, I или аминокислоты с объемом боковой цепи, значительно не превышающим объем боковой цепи K;
при этом указанные первый и второй модифицированные полипептиды домена СН3 предпочтительно образуют гетеродимерный домен СН3 с температурой плавления (Tm), составляющей по меньшей мере приблизительно 74°С, и чистотой по меньшей мере 95%; и
при этом по меньшей мере одна модификация аминокислоты не затрагивает аминокислоту, которая находится на границе между указанным первым и указанным вторым полипептидами домена СН3.
2. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая по меньшей мере одну модификацию Т350Х, где X представляет собой природную или неприродную аминокислоту, выбранную из валина, изолейцина, лейцина, метионина и производных или вариантов указанных аминокислот.
3. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая по меньшей мере одну модификацию T350V.
4. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую по меньшей мере приблизительно 75°С или более.
5. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 4, отличающаяся тем, что модифицированный домен СН3 имеет Tm, составляющую приблизительно 77°С или более.
6. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 5, отличающаяся тем, что модифицированный домен СН3 имеет Tm, составляющую приблизительно 80°С или более.
7. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию по меньшей мере одной из аминокислот L351, F405 и Y407.
8. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты Т366.
9. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что первый полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот в положениях L351, F405 и Y407, и второй полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот в положениях Т366, K392 и Т394.
10. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 9, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот T366L, K392M и T394W.
11. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 9, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот T366L, K392L и T394W.
12. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 9, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот T366I, K392M и T394W.
13. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 9, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот
L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот T366I, K392L и T394W.
14. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго полипептидов домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты в положении S400.
15. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 12, включающая модификацию S400Z, где Ζ выбран из положительно заряженной аминокислоты и отрицательно заряженной аминокислоты.
16. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты, выбранную из S400E и S400R.
17. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго полипептидов домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты в положении N390.
18. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 15, включающая модификацию N390Z, в которой Ζ выбран из положительно заряженной аминокислоты и отрицательно заряженной аминокислоты.
19. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 17, отличающаяся тем, что указанный второй домен СН3 включает модификацию аминокислоты N390R.
20. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что указанный первый полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты S400E, и указанный второй полипептид домена СНЗ представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты N390R.
21. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что каждый из указанных первого и второго полипептидов домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, при этом один указанный модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты
Q347R, а другой модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты K360E.
22. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию по меньшей мере одной из аминокислот K409 и Т411.
23. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 22, включающая по меньшей мере одну из K409F, Т411Е и T411D.
24. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что по меньшей мере один полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификацию аминокислоты D399.
25. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 24, включающая по меньшей мере одну из D399R и D399K.
26. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по любому из пп. 22-25, отличающаяся тем, что первый полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий по меньшей мере одну модификацию аминокислоты, выбранную из K409F, Т411Е и T411D, и второй полипептид домена СН3 представляет собой модифицированный полипептид домена СН3, включающий по меньшей мере одну модификацию аминокислоты, выбранную из Y407A, Y407I, Y407V, D399R и D399K.
27. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 22, содержащая первый модифицированный домен СН3, включающий одну из модификаций аминокислот T366V, T366I, Т366А, Т366М и T366L; и второй модифицированный домен СН3, включающий модификацию аминокислоты L351Y.
28. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, содержащая первый модифицированный домен СН3, включающий одну из модификаций аминокислот K392L или K392E; и второй модифицированный домен СН3, включающий одну из модификаций аминокислот S400R или S400V.
29. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3 и второй модифицированный полипептид домена СН3, где каждый модифицированный полипептид домена СН3 включает по меньшей мере четыре мутации аминокислот, причем по меньшей мере один из указанного первого и указанного второго модифицированных полипептидов домена СН3 включает мутацию, выбранную из N390Z и S400Z, где Ζ выбран из положительно заряженной аминокислоты и отрицательно заряженной аминокислоты, и
при этом указанные первый и второй модифицированные полипептиды домена СН3 предпочтительно образуют гетеродимерный домен СН3 с температурой плавления (Tm), составляющей по меньшей мере приблизительно 70°С, и чистотой по меньшей мере 90%.
30. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3 и второй модифицированный полипептид домена СН3, где каждый модифицированный полипептид домена СН3 включает мутации по меньшей мере трех аминокислот, причем один из указанного первого и указанного второго модифицированных полипептидов домена СН3 включает мутацию, выбранную из Т411Е и T411D, и
при этом указанные первый и второй модифицированные полипептиды домена СН3 предпочтительно образуют гетеродимерный домен СН3 с температурой плавления (Tm), составляющей по меньшей мере приблизительно 70°С, и чистотой по меньшей мере 90%.
31. Изолированный гетеромультимер по любому из пп. 29-30, отличающийся тем, что указанный первый модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот в положениях F405 и Y407 и указанный второй модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты в положении Т394.
32. Изолированный гетеромультимер по п. 31, отличающийся тем, что первый модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты в положении L351.
33. Изолированный гетеромультимер по п. 31, отличающийся тем, что указанный второй модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию по меньшей мере в одном из положений Т366 и K392.
34. Изолированный гетеромультимер по любому из пп. 29-30, отличающийся тем, что модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую по
меньшей мере приблизительно 75°С, и получен с чистотой по меньшей мере приблизительно 95%.
35. Изолированный гетеромультимер по одному из пп. 29-30, отличающийся тем, что по меньшей мере один модифицированный полипептид домена СН3 включает по меньшей мере одну из модификаций аминокислот N390R, S400E и S400R.
36. Изолированный гетеромультимер по одному из пп. 29-30, отличающийся тем, что один из указанных первого и второго модифицированных полипептидов домена СН3 включает модификацию аминокислоты в положении 347, а другой модифицированный полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты в положении 360.
37. Изолированный гетеромультимер по одному из пп. 29-30, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго модифицированных полипептидов домена СН3 включает модификацию аминокислоты T350V.
38. Изолированный гетеромультимер по одному из пп. 29-30, отличающийся тем, что указанный первый модифицированный полипептид домена СН3 включает по меньшей мере одну модификацию аминокислоты, выбранную из L351Y, F405A и Y407V; и указанный второй модифицированный полипептид домена СН3 включает по меньшей мере одну модификацию аминокислоты, выбранную из T366L, T366I, K392L, K392M и T394W.
39. Изолированный гетеромультимер по любому из пп. 29-30, отличающийся тем, что первый модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот в положениях D399 и Y407, и второй модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот в положениях K409 и Т411.
40. Изолированный гетеромультимер по п. 39, отличающийся тем, что первый полипептид домена СН3 включает модификацию аминокислоты в положении L351, и второй модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот в положениях Т366 и K392.
41. Изолированный гетеромультимер по п. 40, отличающийся тем, что по меньшей мере один из указанных первого и второго полипептидов домена СН3 включает модификацию аминокислоты T350V.
42. Изолированный гетеромультимер по любому из пп. 40-41, отличающийся тем, что модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую по меньшей мере приблизительно 75°С или более, и получен с чистотой по меньшей мере приблизительно 95%.
43. Изолированный гетеромультимер по п. 39, отличающийся тем, что указанный первый модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот, выбранные из L351Y, D399R, D399K, S400D, S400E, S400R, S400K, Y407A и Y407V; и указанный второй модифицированный полипептид домена СН3 включает модификации аминокислот, выбранные из T366V, T366I, T366L, Т366М, N390D, N390E, K392L, K392I, K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и Т411Е.
44. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V; и второй модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот T366I, K392M и T394W.
45. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V; и второй модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот T366I, K392L и T394W.
46. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V; и второй модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот T366L, K392M и T394W.
47. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, содержащий первый модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот L351Y, F405A и Y407V; и второй модифицированный полипептид домена СН3, включающий модификации аминокислот T366L, K392L и T394W.
48. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая модифицированную Fc-область на основе иммуноглобулина типа G (IgG).
49. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 48, отличающаяся тем, что указанный IgG представляет собой один из IgG2 и IgG3.
50. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая модифицированную Fc-область на основе иммуноглобулина M (IgM).
51. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая модифицированную Fc-область на основе иммуноглобулина A (IgA).
52. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая модифицированную Fc-область на основе иммуноглобулина D (IgD).
53. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, включающая модифицированную Fc-область на основе иммуноглобулина Ε (IgE).
54. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что указанный гетеромультимер представляет собой биспецифическое антитело.
55. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 1, отличающаяся тем, что указанный гетеромультимер представляет собой мультиспецифическое антитело.
56. Композиция, содержащая изолированную гетеромультимерную конструкцию Fc по любому из пп. 1-55 и фармацевтически приемлемый носитель.
57. Клетка хозяина-млекопитающего, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую изолированную гетеромультимерную конструкцию Fc по любому из пп. 1-55.
58. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по любому из пп. 1, 48, 54-55, включающая по меньшей мере одно терапевтическое антитело.
59. Изолированная гетеромультимерная конструкция Fc по п. 58, отличающаяся тем, что гетеромультимер включает по меньшей мере одно терапевтическое антитело, выбранное из группы, состоящей из абаговомаба, адалимумаба, алемтузумаба, аурограба, бапинейзумаба, базиликсимаба, белимумаба, бевацизумаба, бриакинумаба, канакинумаба, катумаксомаба, цертолизумаба пегола, цетуксимаба, даклизумаба, деносумаба, эфализумаба, галиксимаба, гемтузумаба озогамицина,
голимумаба, ибритумомаба тиуксетана, инфликсимаба, ипилимумаба, лумиликсимаба, меполизумаба, мотавизумаба, муромонаба, микограба, натализумаба, нимотузумаба, окрелизумаба, офатумумаба, омализумаба, паливизумаба, панитумумаба, пертузумаба, ранибизумаба, реслизумаба, ритуксимаба, теплизумаба, тоцилизумаба/атлизумаба, тозитумомаба, трастузумаба, Проксиниума™, Ренкарекса™, устекинумаба и залутумумаба.
60. Способ лечения рака у пациента, страдающего раком, характеризующимся наличием ракового антигена, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества изолированной гетеромультимерной конструкции Fc по любому из пп. 1-55, 58-59.
61. Способ лечения иммунологических расстройств у пациента, страдающего иммунологическим расстройством, характеризующимся наличием иммунного антигена, включающий введение указанному пациенту терапевтически эффективного количества изолированной гетеромультимерной конструкции Fc по любому из пп. 1-55, 58-59.