СПОСОБЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ИНГИБИТОРА C1-ЭСТЕРАЗЫ (fC1-INH)

1. Способ определения уровня функционального ингибитора C1-эстеразы (fC1-INH) в образце, включающий:
(i) нанесения пятна образца крови индивидуума на подложку;
(ii) сушку образца крови на подложке для получения сухой капли крови;
(iii) выделение белков из сухой капли крови со стадии (ii); и
(iv) измерение уровня fC1-INH в выделенных белках со стадии (iii), если они присутствуют.
2. Способ по п.1, где измерение уровня fC1-INH включает
(a) инкубацию выделенных белков, необязательно последовательно, с компонентом комплемента 1s (C1s) и субстратом C1s для получения продукта субстрата C1s;
(b) измерение уровня продукта субстрата C1s, образующегося на стадии (a); и
(c) определение уровня fC1-INH в сухой капле крови с учетом уровня продукта субстрата C1s, измеренного на стадии (b).
3. Способ по п.2, где стадию (a) осуществляют посредством инкубации выделенных белков с C1s и субстратом C1s для получения реакционной смеси.
4. Способ по п.2 или 3, где измерение на стадии (b) осуществляют посредством жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии.
α
α
5. Способ по любому из пп.2-4, где субстрат C1s является N-карбобензилокси-Lys-тиобензиловым сложным эфиром, и продукт C1s является N-бензилоксикарбонил-L-лизином (cbz-Lys).
6. Способ по любому из пп.1-5, где выделение на стадии (iii) осуществляют посредством инкубации сухой капли крови с бычьим сывороточным альбумином (BSA)/буфером PBS в течение по меньшей мере 3 часов.
7. Способ по любому из пп.1-6, где подложка представляет собой фильтровальную бумагу.
8. Способ по любому из пп.1-7, где сушку на стадии (ii) осуществляют в течение по меньшей мере 3 часов при комнатной температуре.
9. Способ по любому из пп.1-8, дополнительно включающий получение образца крови из индивидуума.
10. Способ по любому из пп.1-9, где образец крови является образцом цельной крови.
11. Способ по любому из пп.1-10, где индивидуум является человеком.
12. Способ по п.11, где индивидуум имеет наследственный ангионевротический отек (HAE), как предполагают, имеет наследственный ангионевротический отек (HAE) или имеет риск развития наследственного ангионевротического отека (HAE).
13. Способ по п.12, где HAE является HAE типа I или HAE типа II.
14. Способ по любому из пп.1-13, дополнительно включающий определение того, имеет ли индивидуум опосредованное недостаточностью C1-INH нарушение, где сниженный уровень продукта fC1-INH по сравнению с контролем свидетельствует о том, что индивидуум имеет опосредованное недостаточностью C1-INH нарушение.
15. Способ по любому из пп.1-14, дополнительно включающий определение подходящего лечения для индивидуума с учетом уровня fC1-INH.
16. Способ по любому из пп.2-15, дополнительно включающий идентификацию индивидуума как кандидата для лечения заболевания с учетом уровня fC1-INH, определенного на стадии (c).
17. Способ по любому из пп. 1-16, дополнительно включающий введение индивидууму терапевтического средства, если индивидуум идентифицирован как имеющий риск развития или имеющий опосредованное недостаточностью C1-INH нарушение.
18. Способ по п.17, где терапевтическое средство является ингибитором калликреина плазмы (pKal), антагонистом рецептора брадикинина B2 или ингибитора C1-эстеразы.
19. Способ по п.17 или 18, где терапевтическим средством является экаллантид, ланаделумаб, икатибант или полученный из плазмы человека ингибитор C1-эстеразы.
20. Способ по любому из пп. 14-19, где опосредованное недостаточностью C1-INH нарушение является HAE.
21. Способ по п.20, где HAE является HAE типа I или HAE типа II.