Низкотемпературное хранение актиномицетов - представителей рода Streptomyces

DOI: 10.24411/0235-2990-2019-10011

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Низкотемпературное хранение актиномицетов — представителей рода Streptomyces

*О. Н. СИНЁВА, Т. Д. ИВАНКОВА, Л. П. ТЕРЕХОВА

НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф.Гаузе, Москва

Low Temperature Storage of Actinomycetes — Members of the Genus Streptomyces

*O. N. SINYOVA, T. D. IVANKOVA, L. P.TEREKHOVA Gause Institute of New Antibiotics, Moscow

Проведены исследования в области долгосрочного хранения актиномицетов — представителей рода Streptomyces в условиях низких температур (-70°С). Установлено сохранение высокого уровня жизнеспособности исследуемых культур актиномицетов в течение 3 лет, отмечена стабильность морфологических характеристик данных культур и сохранение антибиотической активности в отношении тест-микроорганизмов в течение всего периода хранения. Споры стрептоми-цетов сохраняют высокий уровень жизнеспособности как с использованием 10% раствора глицерина в качестве крио-протектора, так и без него. Показана эффективность консервирования спор актиномицетов рода Streptomyces методом низкотемпературного замораживания.

Ключевые слова: долгосрочное хранение, жизнеспособность, актиномииеты, Streptomyces, антибиотическая активность.

Studies have been carried out in the field of long-term storage of actinomycetes, representatives of the genus Streptomyces, at low temperatures (-70°C). It has been established that a high level of viability of the studied cultures of actinomycetes is maintained for 3 years, the stability of the morphological characteristics of these cultures and the preservation of antibiotic activity against test microorganisms during the entire storage period are noted. Spores of streptomycetes retain a high level of viability, both with and without 10% glycerol solution as a cryoprotector. The effectiveness of spore preservation of genus Streptomyces actinomycetes by the method of low-temperature freezing is shown.

Keywords: long-term storage, viability, actinomycetes, Streptomyces, antibiotic activity.

Введение

Актиномицеты — продуценты разнообразных по химическому строению биологически активных соединений, обладающих антибактериальным, противогрибковым и противоопухолевым действием. Большинство антибиотиков выделено из актиномицетов широко распространённого рода БиерОтусез. Стрептомицеты — грамполо-жительные бактерии, характеризующиеся наличием субстратного и воздушного мицелия и способностью формировать цепочки спор [1—4].

Несмотря на достижения в области открытия новых антибиотиков, а также развитие методов их производства, инфекционные заболевания по-прежнему остаются второй ведущей причиной смерти во всем мире, а бактериальные инфекции ежегодно приводят примерно к 17 млн случаев смерти, затрагивая главным образом детей и пожилых людей. Самолечение и чрезмерное использование антибиотиков является ещё одним

© Коллектив авторов, 2019

Адрес для корреспонденции: 119021, Москва, ул. Большая Пироговская, д. 11, стр. 1. НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе

важным фактором, который способствует развитию устойчивости, сокращая срок службы антибиотика, тем самым вызывая постоянную потребность в исследованиях и разработке новых антибиотиков [5—8].

Поиск новых антибиотиков включает в себя такие этапы, как поиск продуцентов, изучение химического строения вторичных метаболитов и их антибиотической активности в отношении тест-микроорганизмов. На всех этапах изучения очень важно сохранить жизнеспособность культур и их способность к синтезу антибиотиков. Известно, что в процессе хранения может наблюдаться дифференциация колоний, что в свою очередь может привести к сохранению колоний, не обладающих нужными свойствами.

В настоящее время в большинстве коллекций микроорганизмов используют методы длительного хранения, такие как лиофилизация, крио-консервация и низкотемпературное замораживание. Выбор способа хранения конкретного объекта основывается на сохранении микроорганизмами жизнеспособности, морфологических признаков, физиологических характеристик, биохимической и генетической стабильности. Нужно

Ц-э,

67 !-

93

54

0 005

97151гер1отусе5_МЬап(_1МА_01191 ' 51гер1отуо&5_Н Ьап1_зиЬ5р ._гиШ5_з1га1п_Шб_2ШВ7 Э гер1оппусеа_гндге$с-еп$_1 уре_йг£1(П_М К в |._В-12176Т 5(гер1о(П ус«_п1дге$сеп$_1МА_01194 31гер(отусе5 Ьудгозсфсиз 1МА 01199 51гер(отусе$_|1уд гозсор! п_М ВЯС_13472 51гер1оп(1усе$_ьудго5сор1сц$_$иь5р-_ьудго5сор1си$

1001-5йер1отусе$^1ус<ж>гэп$_1МА_01196

100

С

100

51гер1отусе5^1ус(М5гап5_1уре_йга1 п_У1М_М_10366 £1гер1отусе5_сЬгейотусе11сш_1МА_01192 51гер1отусе&_сЬгезЛолпусе1<си5_51га1п_АОР4 51гер1огп усе5_сЬге5{ап усейси5_5Ь-э1 п_ОЭМ_4&&45

юз | &гер1отусез_э1Ьодпзео1и5_1МА_01198

100

1 ЙгерИп усе8_а1Ь&дп5ео1и$_йга1п_Ы Я Р 306Т  Йгер! оту№5_э 1Ьодп$ео1и$_1ур е_з! гэ1п_05М_40003

100

51ге#отус«_са1Ш$_1М_01195

75

100

93

Ййе^от усе$_аигапАаси5_1730Ж_Е1Р670724

39

51гер1отусев_аи гапйао^Н В11М173139_Р ^2443 агер(отусе$_эигапКаси$_1К1А_СИ193

-Э1гер(отусе8_«1егепэ15_1уре_йга1п_053Р688

— 31гер(отусе5_е(1егепя5_1МА_01197 Эгер*о(пусе5_е(1е{ег1515_51га1п_ВССО_10_4Ба

100

Рис. 1. Филогенетическое дерево актиномицетов рода Б^ерОтусеБ, основанное на сиквенс-анализе нуклео-тидных последовательностей 16S рРНК. Дендрограмма построена с помощью алгоритма «ближайшего соседа» (neighbor-joining). Масштаб соответствует 5 нуклеотидным заменам на каждые 1000 нуклеотидов.

также учитывать максимально возможное время хранения культуры и надёжность данного метода. Состав среды, температура, условия аэрации и другие факторы оказывают существенное влияние на устойчивость микроорганизмов к стрессам, возникающим при длительном хранении. Для повышения устойчивости микроорганизмов к воздействию низких температур применяются защитные вещества — криопротекторы [9—17].

Жизнеспособность микроорганизмов во время замораживания и хранения также зависит от вида и штамма микроорганизма, размера клеток и их формы, состава клеточной стенки. Известно, что микроорганизмы, способные к формированию спор, хорошо переносят замораживание без применения криопротекторов, но в большинстве случаев добавление криопротекторов существенно увеличивает выживаемость микроорганизмов [13, 18, 19].

Низкотемпературная консервация по сравнению с другими методами хранения (лиофилиза-

ция и криоконсервация) микроорганизмов более универсальна в связи с наличием и доступностью низкотемпературных холодильников, способных надежно поддерживать низкие температуры в течение длительного времени. Кроме того, данный метод менее трудоёмкий и безопасный по сравнению с криоконсервацией в жидком азоте [10].

Материал и методы

Объектами исследования явились 9 культур актиномицетов рода 31гвр1отусв8, выделенные из почвы. Антибиотическую активность изучаемых актинобактерий в отношении ряда тест-организмов определяли методом штриха [20].

Штаммы актинобактерий выращивали в пробирках при температуре 28°С до стадии спороношения на овсяной ага-ризованной среде: овсяная мука — 20,0 г, вода — 1000 мл, агар — 20,0 г; рН 7,2—7,4 [21]. Для отделения спор от мицелия производили их смыв стерильной дистиллированной водой со скошенной агаризованной среды. Полученные суспензии отфильтровывали через стерильный бумажный фильтр «зелёная лента» ГОСТ 12026-76 ООО «МЕЛИОР» (Россия). Споровые суспензии были использованы в следу-

Таблица 1. Антибиотическая активность актиномицетов Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces auranti-cus INA 01193, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces nigrescens INA 01194 в отношении тест-организмов

Тест-организм Антибиотическая активность

S.libani S.aurantiacus S.chrestomyceticus S.nigrescens

INA 01191 INA 01193 INA 01192 INA 01194

Staphylococcus aureus ИНА 00985 (209Р) 5 — — —

Staphylococcus aureus ИНА 00761 (MRSA) — — — —

Staphylococcus aureus ИНА 00762 (209Р/УФ-2) — — — —

Micrococcus luteus ATCC 9341 8 18 35 10

Bacillus subtilis ATCC 6533 — — — —

Esherichia coli ATCC 25922 — — — —

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 — — — —

Saccharomyces cerevisiae ИНА 01042 — 20 — —

Примечание. Здесь и в табл. 2: «—» отсутствие зоны подавления тест-организма.

Таблица 2. Антибиотическая активность актиномицетов Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovo-rans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albogriseolus INA 01198, Streptomyces hygro-scopicus INA 01199 в отношении тест-организмов

Тест-организм Антибиотическая активность

S.canus S.glycovorans S.ederensis S.albogriseolus S.hygroscopicus

INA 01195 INA 01196 INA 01197 INA 01198 INA 01199

Staphylococcus aureus HHA 00985 (209P) 5 20 5 3 20

Staphylococcus aureus HHA 00761 (MRSA) — 10 11 3 20

Staphylococcus aureus HHA 00762 (209P/Y0-2) — 3 12 14 20

Micrococcus luteus ATCC 9341 12 15 8 — >25

Bacillus subtilis ATCC 6533 — 5 8 15 5

Esherichia coli ATCC 25922 — — 8 — 5

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 — — 3 — —

Saccharomyces cerevisiae HHA 01042 — — — 10 10

ющих концентрациях — 10—108 КОЕ/мл. В качестве крио-протектора применяли глицерин («Реахим», РФ) в концентрации 10%. Для заморозки споровых суспензий использовали криопробирки («Greiner bio-one», Германия). Замораживание и хранение образцов проводилось в низкотемпературном морозильнике Revco («Thermo Scientific», США) при —70°С. Процесс восстановления замороженный: клеток осуществляли путём оттаивания при комнатной температуре. Высев культур производили на агаризованную среду 2 Гаузе (модификация): триптон — 3,0 г, пептон — 5,0 г, глюкоза — 10,0 г, NaCl — 5,0 г, агар — 20,0 г, вода 1000 мл; рН 7,2—7,4 [21]. Процент выживших КОЕ актинобактерий рассчитывали относительно числа КОЕ до криоконсервации. Высев проб проводили каждый месяц в течение 1,5 лет, далее каждые 6 мес. до 3 лет хранения.

Антибиотическую активность определяли методом штриха до заморозки и в течение всего периода хранения. В качестве тест-организмов для определения антибиотической активности использовали следующие культуры: Staphylococcus aureus ИНА 00985 (FDA 209P), Staphylococcus aureus ИНА 00761 (MRSA), Staphylococcus aureus ИНА 00762 (209Р/УФ-2), Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Saccharomyces cerevisiae ИНА 01042.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel 2010.

Результаты и обсуждения

В течение трёх лет проводилось изучение выживаемости культур стрептомицетов, свежевыде-ленных из образцов дерново-подзолистой почвы г. Москвы и чернозёма Оренбургской области. Выделенные культуры были отнесены на основании морфологических, фенотипических и гено-

систематических признаков к следующим видам: Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces aurantiacus INA 01193, Streptomyces nigrescens INA 01194, Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovo-rans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albogriseolus INA 01198, Streptomyces hygroscopicus INA 01199 (рис 1).

Все культуры обладали антибиотической активностью в отношении тест-микроорганизмов (табл. 1, 2). В течение 3 лет проводилась оценка выживаемости культур стрептомицетов и сохранения ими антибиотической активности при хранении в условиях низких температур (-70°С).

Одной из задач наших исследований было оценить действие криопротектора — 10% раствора глицерина на выживаемость стрептомицетов и сохранение ими антибиотической активности.

Как известно, применение криопротекторов снижает воздействие повреждающих факторов, что существенно увеличивает выживаемость бактерий при замораживании, хранении и оттаивании. Общими свойствами криопротекторов является наличие в их структуре полярных молекул, способных взаимодействовать как с молекулами Н2О, металлами и солями, так и с компонентами мембран и биополимерами. Важным свойством криопротекторов является также их способность влиять на процессы кристаллизации, способствуя формированию мелкокрис-

S.Iibani S.chrestomyceticus S.aurantiacus S.nigrescens S.canus S.glycovorans S.ederensis S.albogriseolus S.hygroscopicus INA01191 1NA01192 INA0Í193 INA01194 INA01195 INA01196 1NA01197 INA01198 ¡NA01199

Рис. 2. Выживаемость споровых суспензий культур стрептомицетов после 3 лет хранения при температуре -70°С без использования криопротектора.

таллического льда, который не обладает сильными полями напряжения. Изменение структуры льда под влиянием криопротекторов снижает степень механического воздействия на цито-плазматическне структуры и мембраны [9, 18, 22]. В тоже время, изучение механизмов устойчивости к низким температурам у психрофиль-ных и мезофильных микроорганизмов, часть жизненного цикла которых может проходить в условиях низких температур, показало, что защитные функции у этих микроорганизмов выполняют белки, полисахариды, меланинопо-добные вещества и др. [23—27].

В результате проведённых исследований установлено, что споры стрептомицетов, суспендированные в дистиллированной воде в концентрации 107—108 КОЕ/мл, хорошо переносят процесс низкотемпературного замораживания с последующим оттаиванием при комнатной температуре. Выживаемость культур стрептомицетов составила 93—97% (рис. 2). Выживаемость культур стрептомицетов в вариантах без использования крио-протектора, так и с применением 10% раствора глицерина, на протяжении всего периода хранения оставалась на одном уровне. Таким образом, данные культуры можно хранить и без применения криопротектора.

Ранее нами было показано [28], что коллекционный штамм стрептомицета Streptomyces hygroscopicus RIA 1433T полностью сохраняет жизнеспособность и антибиотическую активность в течение 1,5 лет хранения при температуре -70°С как в присутствии криопротектора, так и без него. Кроме того, снижение концентрации споровых суспензий до 102 КОЕ/мл не вызывало снижения количества выживших колоний при

замораживании в дистиллированной воде, хотя культуры актиномицетов других родов погибали при данных концентрациях. Исследования фа-зово-структурной организации фосфолипидных фракций Streptomyces hygroscopicus RIA 1433T [29] показали стабильность ламеллярной конфигурации доминирующих фосфолипидов данной культуры, что могло способствовать сохранению бислойной упаковки клеточных мембран, в результате штамм полностью сохранял жизнеспособность даже при низких концентрациях споровых суспензий.

Таким образом, можно предположить, что мембраны исследуемых стрептомицетов обладают повышенной устойчивостью к действию повреждающих факторов консервации.

Выжившие после криоконсервации колонии каждой культуры были проверены на антибиотическую активность в отношении тест-микроорганизмов методом штриха. Сравнительный анализ антибиотической активности до замораживания и в течение всего периода хранения (как в присутствии криопротектора, так и без него) показал, что споры стрептомицетов обладают не только высокой устойчивостью к замораживанию, но и сохраняют высокий уровень антибиотической активности (95—97%) по отношению к каждому тест-микроорганизму, к которым была установлена антибиотическая активность до замораживания. Следует отметить, что при регулярных пересевах в обычных условиях также наблюдалась небольшая дифференциация колоний на более и менее активные, таким образом, появление менее активных колоний не является следствием замораживания и/или хранения.

Заключение

Проведённое исследование показало, что споровые суспензии стрептомицетов: Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces auranticus INA 01193, Streptomyces nigrescens INA 01194, Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovorans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albo-griseolus INA 01198, Streptomyces hygroscopicus INA

ЛИТЕРАТУРА

1. Waive M.G., Tickoo R, Jog M.M., BholeB.D. How many antibiotics are produced by the genus Streptomyces? Arch Microbial 2001; 176: 386—390.

2. Berdy J. Bioactive Microbial Metabolites. J Antibiot 2005; 58: 1: 1—26.

3. Khanna M, Solanki R, Lal R. Selective isolation of rare actinomycetes producing novel antimicrobial compounds. Intern J Advan Biotechnol Res 2011; 2: 357—375.

4. Tivari K, Gupta R.K. Rare actinomycetes: a potential storehouse for novel antibiotics. Crit Rev Biotechnol 2012; 32: 2: 108—132.

5. de Lima Procopio R.E., da Silva I.R., Martins M.K., de Azevedo J.L., de Araujo J.M. Antibiotics produced by Streptomyces. Brazil J Infect Dis 2012; 16: 5: 466—471.

6. Davies J., Davies D. Origins and evolution of antibiotic resistance. Microbiol Mol Biol Rev 2010; 74: 417—433.

7. Okeke I.N.Antibiotic use and resistance in developing countries, in: S. Knobler, S. Lemon, M. Najafi, T. Burroughs (Eds.),The Resistance Phenomenon in Microbes and Infectious Disease Vectors: Implications for Human Health and Strategiesfor Containment-workshop Summary, Institute of Medicine,National Academy of Science, Washington DC. 2003; 132—139.

8. Spellberg B, Guidos R, Gilbert D, Bradley J., Boucher H.W., Scheld W.M. et al. The epidemic of antibiotic — resistance infection: a call to action for the medical community from the infection diseases society of America. Clin Infect Dis 2008; 46: 155—164.

9. Похиленко В.Д., Баранов A.M., Детушев K.B. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. — 2009. Т. 4. — № 12. — С. 99—121. / Pokhilenko V.D., Baranov A.M., Detushev K.V. Metody dlitelnogo khra-neniya kollektsionnykh kultur mikroorganizmov i tendentsii razvitiya. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzhskiy region. Meditsinskie nauki 2009; 4: 12: 99—121. [in Russian]

10. Малахаева A.H., Ляшова О.Ю., Плотников О.П., Осин A.B. Хранение штаммов Francisella tularensis 15 НИИЭГ и Brucella abortus 19BA в жизнеспособном состоянии путём их глубокого замораживания. Проблемы особо опасных инфекций. — 2015. — № 1. — С. 63—66. / MalakhaevaA.N., Lyashova O.Yu, Plotnikov O.P., OsinA.V. Khranenie shtammov Francisella tularensis 15 NIIEG i Brucella abortus 19BA v zhiznesposobnom sostoyanii putem ikh glubokogo zamorazhivaniya. Problemy osobo opasnykh infektsiy 2015; 1: 63—66. [in Russian]

11. Грачева И.В, Осин A.B. Низкотемпературная консервация коллекционных штаммов холерных вибрионов. Проблемы особо опасных инфекций. — 2014. — 4. — С. 39—42. / Gracheva I.V., Osin A.V. Nizkotemperaturnaya konservatsiya kollektsionnykh shtammov kholernykh vibrionov. Problemy osobo opasnykh infektsiy 2014; 4: 39—42. [in Russian]

12. Ryan M.J., Smith D. Cryopreservation and freeze-drying of fungi employing centrifugal and shelf freeze-drying. Metod Molecul Biol 2007; 368: 127—140.

13. Hubalek Z. Protectants used in the cryopreservation of microorganisms. Criobiology 2003; 6: 205—229.

14. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии. М.: Медгиз. 1961. — 263 с. / Blankov BI, Klebanov D.L. Primenenie liofilizatsii v mikrobiologii. M.: Medgiz, 1961; 263. [in Russian]

15. Шендеров Б. A., Гахова Э. H, Манвелова М. A, Пиорунский Д. A, Карнаухов В. Н. Способ длительного хранения естественных сим-биотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных. РФ Пат. 2123044, 10.12.1998. / Shenderov B. A., Gakhova E. N, Manvelova M. A, Piorunskiy D. A, Karnaukhov V. N. Sposob dlitelnogo khraneniya estestvennykh simbioticheskikh assotsiatsiy mikroorganiz-mov cheloveka i zhivotnykh. RF Pat. 2123044, 10.12.1998. [in Russian]

16. Каменских Т.Н., Калашникова E.A., Ившина И.Б. Особенности крио-консервации алканотрофных актинобактерий рода Rhodococcus. Вестник Пермского университета. — 2010. — № 1. — С. 15—20. / Kamenskikh T.N., Kalashnikova E.A., Ivshina I.B. Osobennosti kriokon-servatsii alkanotrofnykh aktinobakteriy roda Rhodococcus. Vestnik Permskogo universiteta 2010; 1: 15—20. [in Russian]

01199, замороженные при температуре -70°С, хорошо переносят длительное хранение в течение 3 лет, не теряя при этом способности к синтезу антибиотиков. Применение в качестве защитной среды 10% раствора глицерина не оказало влияния на хранение спор исследуемых стрептомице-тов. Простота и доступность данного метода позволяют рекомендовать данный метод для хранения культур стрептомицетов.

17. ЧукпароваА.У. Оценка сохранения жизнеспособности штаммов микроорганизмов при низкотемпературной консервации. Материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов — прошлое, настоящее, будущее. К 90-летию заслуженного профессора Московского университета Н.С. Егорова. М.: 2011. — 131 с. / Chukparova A.KOtsenka sokhraneniya zhiznesposobnosti shtammov mikroorganizmov pri nizkotemperaturnoy konservatsii. Materialy Vserossiyskogo simpoziuma s mezhdunarodnym uchastiem «Biologicheski aktivnye veshchestva mikroorganizmov — proshloe, nastoyashchee, budushchee. K 90-letiyu zasluzhennogo professora Moskovskogo universiteta N. S. Egorova. M.: 2011; 131. [in Russian]

18. Бекер M.E, Рапопорт А.И., Калакуцкий Л.В., Звягинцев Д.Г., Абызов С.С., Аксенов С.И. и др. Торможение жизнедеятельности клеток. Под ред. Бекера М.Е. Рига: Зинатне, 1987. — 240 с. / Beker M.E., Rapoport A.I., Kalakutskiy L.V., Zvyagintsev D.G., Abyzov S.S., Aksenov S.I. i dr. Tormozhenie zhiznedeyatelnosti kletok. Pod red. Bekera M.E. Riga: Zinatne, 1987; 240. [in Russian]

19. Filippova S.N., Surgucheva N.A., Kuznetsov V.D., El'-Registan G.I., Gal'chenko V.F. Optimization of protective media for actinomycetes storage in liquid nitrogen. Microbiology 2007; 76: 4: 506—509.

20. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Наука, 2004. — 528 с. / Egorov N.S. Osnovy ucheniya ob antibiotikakh. M.: Nauka, 2004; 528. [in Russian]

21. Гаузе Г.Ф., Преображенская Т.П., Свешникова М.А., Терехова Л.П., Максимова Т.С. Определитель актиномицетов. М.: Наука, 1983. — 245 с. / Gauze G.F., Preobrazhenskaya T.P., Sveshnikova M.A., Terekhova L.P., Maksimova T.S. Opredelitel aktinomitsetov. M.: Naukaб 1983; 245. [in Russian]

22. Грачева И.В., Осин А.В. Механизмы повреждений бактерий при лиофилизации и протективное действие защитных сред. Проблемы особо опасных инфекций. — 2016. — № 3. — С. 5—12. / Gracheva I.V., Osin A.V. Mekhanizmy povrezhdeniy bakteriy pri liofilizatsii i pro-tektivnoe deystvie zashchitnykh sred. Problemy osobo opasnykh infekt-siy 2016; 3: 5—12. [in Russian]

23. Chattopadhyay M.K. Bacterial cryoprotectants. Resonance 2002; 7: 11: 59—63.

24. Kim S.J., Yim J.H. Cryoprotective properties of exopolysaccharide (P-21653) produced by antarctic bacterium Pseudoalteromonas arctica KOPRI 21653. J Microbiology 2007; 45: 6: 510-514.

25. Marx J.G., Carpenter S.D., Deming J.W. Production of crioprotectant extracellular polycaccharide substances (EPS) by the marine psy-chrophilic bacterium Colwellia psychrerythraea strain 34H under extreme conditions. Canad J Microbiol 2009; 55: 1: 63—72.

26. Ewert M., Deming J.W. Selective retention in saline ice of extracellular polysaccharidesproduced by the cold-adapted marine bacterium Colwellia psychrerythraea strain 34H. Annal Glaciol 2011; 52: 111—117.

27. Абызов С. С. Микроорганизмы в леднике центральной Антарктиды. Успехи микробиологии. — 1992. — № 25. — С. 27—49. / Abyzov S. S. Mikroorganizmy v lednike tsentralnoy Antarktidy. Uspekhi mikrobiologii. 1992; 25: 27—49. [in Russian]

28. Синева О.Н., Куликова Н.Г., Филиппова С.Н., Терехова Ё.П.Хране-ние культур актинобактерий — представителей родов Streptomyces и Nonomuraea методом низкотемпературной консервации. Антибиотики и химиотер. — 2014. — Т. 59. — № 11—12. — С. 11—15. / Sineva O.N., Kulikova N.G., Filippova S.N., Terekhova L.P. Khranenie kultur aktinobakteriy — predstaviteley rodov Streptomyces i Nonomuraea metodom nizkotemperaturnoy konservatsii. Antibiotiki i khimioter 2014; 59: 11—12 : 11—15. [in Russian]

29. Филиппова С.Н., Сургучева Н.А., Ермакова Е.В., Киселев М.А., Терехова Л.П., Синева О.Н. и др. Изучение фазово-структурного состояния фосфолипидных фракций актинобактерий в связи с условиями их хранения. Микробиология. — 2013. — Т. 82. — № 3. — С. 335—343. / Filippova S.N., Surgucheva N.A., Ermakova E.V., Kiselev M.A., Terekhova L.P., Sineva O.N. i dr. Izuchenie fazovo-strukturnogo sostoyaniya fosfolipidnykh fraktsiy aktinobakteriy v svyazi s usloviyami ikh khraneniya. Mikrobiologiya 2013; 82: 3: 335—343. [in Russian]

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Синева Ольга Николаевна — н. е., лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва Иванкова Татьяна Дмитриевна — н. с., лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное науч-

ное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва Терехова Лариса Петровна — д. б. н., профессор, Заслуженный деятель науки РФ руководитель отдела микробиологии, лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва