Оценка антигенных свойств препаратов из дрожжей Candida и Malassezia методом дот-блот анализа

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

свойства, относились к серотипу Oranienburg. У всех штаммов отмечен одинаковый плазмидный спектр и положительный амплификационный ответ на ген inv А. Рестрикционные профили 12 изолятов были абсолютно идентичны; один штамм имел минимальные отличия (коэффициент подобия = 0,98), что позволило отнести все штаммы к одной клональной группе. Комплексный подход с использованием современных технологий идентификации и типи-рования дал возможность установить клональный характер заболеваний и подтвердить эпидемиологическую связь штаммов, выделенных от больных и фактора передачи.

ИЗУЧЕНИЕАНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ, ИЗОЛИРОВАННЫХ ОТ ПТИЦ

Е.В. Афанасьевская, С.В. Поспелова, А.В. Перова

ГБОУ ВПО ПГМА им. акад. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития РФ, г. Пермь

Современное птицеводство не может быть успешным без проведения превентивных профилактических мероприятий с использованием различного рода антибактериальных средств. Одно из основных негативных последствий их применения — развитие устойчивости возбудителей, в результате чего снижается их эффективность и возникает необходимость повторных курсов.

Целью работы явилось изучение видового состава и динамическая оценка антибиотикочувствительно-сти культур, выделенных в условиях птицефабрики в период с 2009 по 2012 годы. Исследовано 825 проб патологического материала, взятого при вынужденном забое птицы. Бактериологическое исследование проводили по стандартной методике. Чувствительность изолированных штаммов к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом в отношении ципрофлоксацина, энрофлоксацина, ванкомицина, оксациллина, ампициллина, фураз-ролидона, триметоприма, гентамицина.

Всего было выделено и идентифицировано 1672 культуры различных видов микроорганизмов, среди которых преобладали бактерии семейства Enterobacteriaceae (58,1%), которые чаще всего (46,3%) изолировали из ассоциаций со стафило- и энтерококками. Особый интерес представляло изучение чувствительности микроорганизмов к фторхино-лонам, которые входят в состав многих кормовых антибиотиков и широко применяются в птицеводстве. Изучение антибиотикограмм позволило выявить формирование и распространение устойчивых к фторхинолонам клонов эшерихий и золотистых стафилококков. Динамическое наблюдение показало, что с 2009 по 2011 гг. количество резистентных штаммов E. coli возросло с 5,3 до 29,1%. S. aureus в 2009 г. встречался в единичных случаях и был чувствителен ко всему выбранному спектру антибиотиков. К 2011 г. доля культур S. aureus, рост которых фторхинолоны не подавляли, составила 33,5%. Важно подчеркнуть, что ванкомицин проявлял активность в отношении всех грамположительных кокков. MRSA среди «птичьих» штаммов обнаружены не были.

Таким образом, сформировавшаяся и распространившаяся среди бактерий, циркулирующих на птицефабрике, устойчивость к ципрофлоксацину является одним из факторов риска развития генерализованных инфекций у птиц. Для предотвращения

формирования резистентности необходима правильная и своевременная ротация препаратов с разным механизмом действия.

ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA И MALASSEZIA МЕТОДОМ ДОТ-БЛОТ АНАЛИЗА

О.А. Баева, В.Г. Арзуманян, О.А. Сердюк

ФГБУ НИИ вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова РАМН, Москва

Многие виды дрожжевых грибов являются возбудителями фунгемийиаллергомикозов. Качественная диагностика этих заболеваний предполагает наличие панели высокоспецифичных и стандартизованных дрожжевых антигенов. Антигенные препараты из дрожжей производятся за рубежом, причем первой стадией их выделения является дезинтеграция дрожжевых клеток. В то же время известно, что наиболее важными в антигенном отношении являются поверхностные компоненты клеток дрожжей, поскольку именно поверхность микробной клетки является той материей, которая непосредственно взаимодействует с клетками и антителами иммунной системы хозяина (Mochon A.B. et al, 2010). Нами разрабатывается и постоянно совершенствуется способ выделения антигенных компонентов поверхностных слоев дрожжей. Целью настоящего исследования явилось сравнение иммунологических свойств двух препаратов — из дрожжей родов Candida и Malassezia.

В экспериментах использованы штаммы дрожжей из институтской коллекции — Candida albicans № 927, Malassezia furfur № 1451. Выращивание культур дрожжей Сandida проводили в чашках Петри на плотной синтетической питательной среде, содержащей соли, витамины и глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии (Yarrow, 1998). Дрожжи Malassezia культивировали в чашках Петри на синтетической среде, содержащей соли, Tween 40 и желчные соли (Арзуманян В.Г., 2000). Инкубацию чашек проводили в термостате при температуре 32°С.

Выделение антигенного комплекса поверхностных компонентов клеток проводили путем экстракции раствором додецилсульфата натрия. Концентрация детергента подбиралась таким образом, чтобы клетки оставались целыми. Бесклеточный экстракт использовали в качестве антигенного препарата.

Два кролика породы шиншилла были иммунизированы по следующей схеме: препараты из дрожжей вводили внутривенно в краевую вену уха в дозе 0,25 мл, причем по 6 иммунизаций без адьюванта с интервалом 3 суток, после чего еще по 5 иммуни-заций в нарастающей дозе от 0,25 мл до 1 мл с адью-вантом Фрейнда с интервалом 2 недели. Сыворотки кроликов были использованы в опытах по изучению перекрестной реактивности препаратов из упомянутых дрожжей. Кролик А — иммунизирован препаратом из C. albicans, кролик Б — из M. furfur.

Дот-блот анализ полученных препаратов с кроличьими сыворотками проводили методом, описанным ранее (Towbin H. et al., 1979). На мембрану наносили по 1 мкл дрожжевых препаратов, концентрация белка примерно 2,3 мг/мл; в качестве отрицательного контроля использовали раствор бычьего сывороточного альбумина 2 мг/мл в фосфатном бу-

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

фере; положительным контролем явилась сыворотка кролика, разведенная в 10 раз фосфатным буфером. Одну серию мембран проявляли сывороткой кролика А; другую — кролика Б.

Дот-блот анализ кроличьих сывороток с антигенами указанных дрожжей показал следующее. Препарат из C. albicans вызывал образование IgG-антител у кролика А, при этом антитела у кролика Б к данному препарату отсутствовали, то есть этот препарат не содержал перекрестных эпитопов с препаратом из M. furfur.

Сыв оротка кролика Б с одержала антитела к др ож-жам M. furfur, однако, сыворотка кролика А тоже содержала антитела к M. furfur. Этот факт можно объяснить следующим образом — кролик А являлся носителем дрожжей Malassezia, что вполне вероятно, так как зрелые особи млекопитающих в основном являются носителями этих дрожжей на коже.

Считаем, что полученные препараты обладают высокой специфичностью. Перспективным является расширение числа антигенных препаратов за счет увеличения списка видов и родов клинически значимых дрожжей.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ЗА СОСТОЯНИЕМ КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА К ДИФТЕРИИ ОТДЕЛЬНЫХ ГРУПП НАСЕЛЕНИЯ РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ

Н.Ю. Баранова, Л.А. Аббасова, И.В. Воронцова

ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Рязанской области», г. Рязань

В 2009—2011 гг. в Рязанской области проводились исследования состояния антитоксического иммунитета к дифтерии. Целью проводимых серологических исследований было изучение степени защищенности против дифтерии детей, подростков и взрослых на отдельных территориях Рязанской области.

Результаты исследований в 2009 г. показали высокую степень защиты у детей в возрастной группе 3—4 лет; число сывороток с защитными титрами составили 100%, в том числе с титрами 1:320 и выше 88%. Среди подростков число сывороток с защитными титрами составило также 90%, с титрами 1:320 и выше — 86%. Среди взрослого населения исследования проводились в нескольких возрастных группах. Так в возрастных группах 23—25 и 40—49 лет 100% лиц имели защитные титры антител, в том числе 87% и 84,4% соответственно с уровнем выше 1:320. В целом в 2009 г. процент лиц с защитными титрами антител к дифтерии составил 97,6%, в том числе с титрами выше 1:320 — 86,3%.

В 2010 г. в 99,5% проб крови отмечались защитные уровни антител, число сывороток с титрами выше 1:320 составило 87,8%. Дети 3—4 лет и подростки защищены на 100%, из них 84,2 и 96,7% соответственно имели титры антител выше 1:320. Среди 23—25-летних 100% имели защитные уровни антител, в том числе 88% лиц имели титры выше 1:320. Среди 40-летних защитные уровни антител имели 98% обследованных, в том числе у 80,1% лиц титры выше 1:320.

В 2011 г. исследования проводились среди взрослого населения, защитные титры антител к дифтерии имели 95,8% обследованных, причем высокие титры 1:320 и выше выявлены у 74% лиц. Среди 23—25-лет-

них 97,8% имели защитные уровни антител, в том числе 79,6% из них имели титры выше 1:320. Среди 30-летних защитные уровни антител имели 100% обследованных, в том числе 83,2,% лиц имели титры выше 1:320. Среди 40-летних защитные тиры имели 99% обследованных, в том числе у 73% титры выше 1:320. Среди 50-летних 87% имели защитные титры, в том числе у 61,1% титры выше 1:320.

Таким образом, на основании полученных результатов серологических исследований можно сделать вывод, что население области в достаточной степени защищено против дифтерии, подтверждением тому является спокойная эпидемическая обстановка; в 2009—2011 гг. заболеваемость дифтерией в Рязанской области не регистрировалась.

БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВО STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE СРЕДИ ДЕТЕЙ г. КРАСНОЯРСКА

Н.В. Бахарева2, И.Н. Протасова1, О.В. Перьянова1, И.П. Кукушкина4, С.В. Мемнонова3, М.В. Коваль5, И.О. Коваленко1, О.А. Тюшевская1, Т.А. Елистратова1

1ГБОУВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздравсоцразвития России; 2Главное управление здравоохранения администрации г. Красноярска; 3МБУЗ «Городская детская поликлиника № 1» г. Красноярска; 4МБУЗ «Городская детская клиническая больница № 5» г. Красноярска; 5КГБУЗ «Красноярский краевой специализированный дом ребенка № 3» г. Красноярска

Streptococcus pneumoniae является основным возбудителем внебольничной пневмонии, менингита, среднего отита и синусита у детей до 5 лет. По расчетной оценке ВОЗ на один случай пневмококкового менингита приходится 24 случая пневмококковой бактериемии, 132 — пневмококковой пневмонии и 3750 случаев острого среднего отита. Развитию вышеперечисленных заболеваний, как правило, предшествует носительство пневмококка. Максимальная частота бактерионосительства отмечается у здоровых детей в возрасте 1—3 лет (43—70%).

Целью данного исследования явилось изучение бактерионосительства S. pneumoniae в детских организованных коллективах, в коллективах с круглосуточным пребыванием детей и среди неорганизованных детей г. Красноярска.

Были обследованы 183 ребенка в возрасте до 5 лет. 125 детей находились в детских организованных коллективах, из них 77 детей находились в доме ребенка и 48 детей посещали детские дошкольные учреждения (3 детских сада). В группу неорганизованных вошли 58 детей того же возраста. Исследование проводилось культуральным методом с использованием Columbia agar c добавлением 5% крови и Chocolate agar (HiMedia). Идентификация выделенных культур осуществлялась по морфо-тинкториальным, культуральным, антигенным (Slidex PneumoKit, bioMerieux) свойствам.

Распространенность бактерионосительства среди организованных детей составила 49,6%. При этом уровень носительства пневмококка в доме ребенка и в детских дошкольных учреждениях достоверно не различался (49% и 50% соответственно, р > 0,05). Неорганизованные дети являлись носителями пневмококка в 53,4% случаев, при этом 56,9% из них были