СИСТЕМА ЭКСПРЕССИИ КОМПОНЕНТОВ ОРТОГОНАЛЬНОЙ ТРАНСЛЯЦИИ В ЭУБАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКЕ-ХОЗЯИНЕ

1. Композиция, включающая конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую:
(a) последовательности промотора и терминатора, полученные из гена пролин-тРНК Escherichia coli, и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, причем обе указанные последовательности промотора и терминатора функционально соединены с указанной экспрессируемой последовательностью, а указанная экспрессируемая последовательность является гетерологичной по отношению к указанным последовательностям промотора и терминатора;
(b) нуклеотидную последовательность промотора, соответствующую модифицированному промотору glnS E. coli, которая имеет нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO:13, и экспрессируемую нуклеотидную последовательность, причем указанная модифицированная нуклеотидная последовательность промотора glnS E. coli функционально соединена с указанной экспрессируемой последовательностью;
(c) нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК), и нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), где указанная O-РС предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты; или
(d) полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей генов тРНК, где по меньшей мере один ген тРНК отделен от по меньшей мере одного смежного с ним гена тРНК гетерологичным полинуклеотидным линкером, полученным из природного полинуклеотидного линкера от природного тРНК оперона.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
указанная конструкция содержит одновременно (а) и (b), где указанные в (а) и (b) экспрессируемые нуклеотидные последовательности различаются; или
указанная конструкция содержит одновременно (а), (b) и (с), где указанная в (а) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует указанную O-тРНК и где указанная в (b) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует указанную O-РС; или
указанный ген пролин-тРНК E. coli: выбран из генов тРНК E. coli proK, proL и promM, или
указанные последовательности промотора и терминатора пролин-тРНК Е. coli получены из последовательностей промотора и терминатора proK E. coli, представленных в SEQ ID NOS: 32 (промотор) и 33 (терминатор), соответственно; или
указанная в (а) экспрессируемая нуклеотидная последовательность представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество из одной или более нуклеотидных последовательностей; или
указанная в (а) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует тРНК.
3. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что:
указанная тРНК получена из одной или более тРНК Архей; или
указанная тРНК закодирована в нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1 (MjtRHA-Tyr(CUA)); или
указанная экспрессируемая нуклеотидная последовательность представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1 (MjtRHA-Tyr(CUA)).
4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что указанная экспрессируемая нуклеотидная последовательность содержит множество указанных полицистронных оперонов.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
указанная в (b) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует полипептид; или
указанная в (b) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует аминоацил-тРНК синтетазу; или
указанная в (b) экспрессируемая нуклеотидная последовательность кодирует ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), где указанная O-РС предпочтительно амин-ацилирует соответствующую O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты.
6. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что:
указанная O-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii, или
указанная O-РС получена из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii, или
в указанной O-РС имеется замена аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO: 2 (Mj-tRHA-Tyr PC дикого типа).
7. Клетка-хозяин, которая содержит композицию по п.1.
8. Клетка-хозяин по п.7, отличающаяся тем, что:
указанная клетка-хозяин представляет собой эубактериальную клетку-хозяин; или
указанная клетка-хозяин представляет собой клетку E. coli.
9. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что:
указанный в (d) полицистронный оперон содержит множество идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров; или
указанный в (d) полицистронный оперон содержит множество гетерологичных полинуклеотидных линкеров, где по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются; или
указанный в (d) полицистронный оперон содержит нуклеотид тимидин на 5'-конце, нуклеотид аденозин на 3'-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5'-конце и нуклеотид аденозин на 3'-конце; или
указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV, valV и valW, glyT и thrT, metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX, alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ; или
указанный в (d) гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 14 (valU/valX линкер) или 15 (ileT/alaT линкер).
10. Система трансляции для экспрессии представляющего интерес полипептида, который содержит по меньшей мере одну не встречающуюся в природе аминокислоту в заданном положении, включающая:
(a) не встречающуюся в природе аминокислоту;
(b) конструкцию нуклеиновой кислоты, которая содержит: нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК), и нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), где указанная O-РС предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты; и
(c) полинуклеотид, кодирующий указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной O-тРНК, причем положение указанного селекторного кодона в указанном полинуклеотиде определяет заданное положение не встречающейся в природе аминокислоты в полипептиде, представляющем интерес, при экспрессии полинуклеотида с образованием полипептида.
11. Система трансляции по п.10, отличающаяся тем, что указанная конструкция нуклеиновой кислоты содержит по меньшей мере одно из следующего:
(i) нуклеотидные последовательности промотора и терминатора, полученные из гена пролин-тРНК Escherichia coli, причем обе указанные последовательности промотора и терминатора функционально соединены с указанной нуклеотидной последовательностью, содержащей или кодирующей указанную O-тРНК, а указанная O-тРНК является гетерологичной по отношению у указанным нуклеотидным последовательностям промотора и терминатора;
(ii) нуклеотидная последовательность, соответствующая модифицированному промотору glnS E. coli, имеющему нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 13, причем указанная нуклеотидная последовательность модифицированного glnS E. coli функционально соединена с указанной нуклеотидной последовательностью, кодирующее указанную O-РС; и
(iii) полицистронный оперон, который содержит множество указанных нуклеотидных последовательностей генов O-тРНК, причем по меньшей мере один ген O-тРНК отделен от по меньшей мере одного смежного с ним гена O-тРНК гетерологичным полинуклеотидным линкером, полученным из природного полинуклеотидного линкера из природного тРНК оперона.
12. Система трансляции по п.11, отличающаяся тем, что:
указанный ген пролин-тРНК Е. coli выбран из генов тРНК: proK, proL и proM;
или
указанные последовательности промотора и терминатора пролин-тРНК Е. coli получены из последовательностей промотора и терминатора proК Е. coli, представленных в SEQ ID NOS: 32 (промотор) и 33 (терминатор), соответственно; или
указанный полицистронный оперон содержит множество идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров; или
указанный полицистронный оперон содержит множество гетерологичных полинуклеотидных линкеров, причем по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкеров различаются; или
указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер содержит нуклеотид тимидин на 5'-конце или нуклеотид аденозин на 3'-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5'-конце и нуклеотид аденозин на 3'-конце; или
указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV, valV и valW, glyT и thrT, metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX, alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ; или
указанный гетерологичный полинуклеотидный линкер получен из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 14 (valU/valX линкер) или 15 (ileT/alaT линкер).
13. Система трансляции по п.11, отличающаяся тем, что:
указанная O-тРНК получена из одной или более тРНК Архей; или
указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая O-тРНК, представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих O-тРНК; или
указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая O-тРНК, содержит нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая O-тРНК, представляет собой полицистронный оперон, содержащий множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанная O-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; или
указанная O-РС получена из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; или
в указанной O-РС имеется замена аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO: 2 (Mj-tRNA-Tyr PC дикого типа).
14. Система трансляции по п.11, включающая клетку-хозяина, содержащую (а), (b) и (с).
15. Система трансляции по п.14, отличающаяся тем, что:
указанная клетка-хозяин представляет собой эубактериальную клетку-хозяина; или
указанная клетка-хозяин представляет собой клетку Е. coli.
16. Способ получения в клетке-хозяине представляющего интерес полипептида, содержащего в заданном положении не встречающуюся в природе аминокислоту, включающий:
(а) обеспечение:
(i) не встречающейся в природе аминокислоты;
(ii) конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК), и нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), причем указанная O-РС предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты; и
(iii) полинуклеотида, кодирующего указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной O-тРНК, причем положение селекторного кодона соответствует заданному положению не встречающейся в природе аминокислоты в представляющем интерес полипептиде;
(iv) клетки-хозяина, которая содержит (i), (ii) и (iii); и
(b) культивирование указанной клетки-хозяина; и
(c) включение указанной не встречающейся в природе аминокислоты в заданное положение указанного полипептида в ходе трансляции указанного полипептида в указанной клетке-хозяина и, таким образом, получение указанного представляющего интерес полипептида, содержащего не встречающуюся в природе аминокислоту в заданном положении.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что:
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-тРНК, полученную из одной или более тРНК Архей; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение полицистронного оперона, который содержит множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих одну или более разновидностей тРНК; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-тРНК, содержащей нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение полицистронного оперона, содержащего множество нуклеотидных последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, полученную из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, полученную из тирозил-тРНК синтетазы; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, которая содержит замену аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO: 2 (Mj-tRNA-Tyr PC дикого типа); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение по меньшей мере одного из следующего:
(I) последовательности промотора и терминатора, полученных из гена пролин-тРНК Escherichia coli, причем обе указанные последовательности промотора и терминатора соединены с указной нуклеотидной последовательностью, кодирующей указанную O-тРНК, а указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая указанную O-тРНК является гетерологичной по отношению к указанным последовательностям промотора и терминатора;
(II) нуклеотидной последовательности промотора, соответствующей модифицированному промотору glnS E. coli, который имеет последовательность нуклеотидов, соответствующую SEQ ID NO: 13, где указанная модифицированная нуклеотидная последовательность glnS E. coli функционально соединена с указанной нуклеотидной последовательностью, кодирующей указанную O-РС; и
(III) полицистронного оперона, содержащего множество нуклеотидных последовательностей генов O-тРНК, причем по меньшей один ген O-тРНК отделен от по меньшей мере одного смежного с ним гена O-тРНК гетерологичным полинуклеотидным линкером, полученным из природного полинуклеотидного линкера из природного тРНК оперона.
18. Способ по п.17, отличающийся тем, что:
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (I) включает обеспечение нуклеотидной последовательности, соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин-тРНК Escherichia coli, выбранной из тРНК E. coli: proK, proL and proM tRNA; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (I) включает обеспечение нуклеотидной последовательности, соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин-тРНК Escherichia coli, которые содержат последовательности промотора и терминатора proК Е. coli, соответствующие SEQ ID NO: 32 (промотор) и SEQ ID NO: 33 (терминатор), соответственно; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение множества идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение множества гетерологичных полинуклеотидных линкеров, причем по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, содержащего нуклеотид тимидин на 5'-конце, нуклеотид аденозин на 3'-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5'-конце и нуклеотид аденозин на 3'-конце; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV, valV и valW, glyT и thrT, metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX, alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 14 (valU/valX линкер) или SEQ ID NO: 15 (ileT/alaT линкер).
19. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение эубактериальной клетки-хозяина; или
указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение клетки-хозяина Escherichia coli.
20. Способ получения в клетке-хозяине представляющего интерес полипептида, который содержит в заданном положении не встречающуюся в природе аминокислоту, включающий:
(а) обеспечение:
(i) не встречающейся в природе аминокислоты;
(ii) конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК);
(iii) конструкции нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), причем указанная O-РС предпочтительно предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты;
(iv) полинуклеотида, кодирующего указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной O-тРНК причем положение селекторного положение соответствует указанному заданному положению не встречающейся в природе аминокислоты в представляющем интерес полипептиде;
(v) клетки-хозяина, содержащей (i), (ii), (iii) и (iv);
причем указанные в (ii) и (iii) конструкции нуклеиновых кислот совместно содержат по меньшей мере одно из следующего:
(I) нуклеотидные последовательности промотора и терминатора, полученные из гена пролин-тРНК Escherichia coli, причем обе указанные последовательности промотора и терминатора функционально соединены с указанной нуклеотидной последовательностью, кодирующей указанную O-тРНК, а указанная нуклеотидная последовательность, кодирующая указанную O-тРНК, является гетерологичной по отношению к указанным последовательностям промотора и терминатора;
(II) нуклеотидная последовательность промотора, соответствующая модифицированному промотору glnS E. coli, которая имеет последовательность нуклеотидов, соответствующую SEQ ID NO: 13, причем указанная модифицированная нуклеотидная последовательность glnS E. coli функционально соединена с указанной нуклеотидной последовательностью, кодирующей указанную O-РС;
(III) полицистронный оперон, который содержит множество нуклеотидных последовательностей генов O-тРНК, причем по меньшей мере один ген O-тРНК отделен от по меньшей мере одного смежного с ним гена O-тРНК гетерологичным полинуклеотидным линкером, полученным из природного полинуклеотидного линкера из природного тРНК оперона;
(b) выращивание клетки-хозяина; и
(c) включение указанной не встречающейся в природе аминокислоты в указанное заданное положение указанного полипептида в ходе трансляции указанного полипептида в указанной клетке-хозяина и, таким образом, получение указанного представляющего интерес полипептида, который содержит не встречающуюся в природе аминокислоту в указанном заданном положении.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-тРНК, полученную из одной или более тРНК Архей; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение полицистронного оперона, содержащего множество нуклеотидных последовательностей, кодирующих одну или более разновидностей O-тРНК; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-тРНК, содержащей нуклеотидную последовательность, соответствующую SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение полицистронного оперона, содержащего множество нуклеотидных последовательностей, соответсвующих SEQ ID NO: 1 (MjtRNA-Tyr(CUA)); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, полученную из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, полученную из тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты включает обеспечение нуклеотидной последовательности, кодирующей O-РС, которая содержит замену аспарагиновой кислоты на аргинин в положении 286 или в положении, аналогичном положению 286, по сравнению с аминокислотной последовательностью тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа, соответствующей SEQ ID NO: 2 (wild type Mj-tRNA-Tyr PC); или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (I) включает обеспечение нуклеотидной последовательности соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин-тРНК Eschenchia coli, выбранной из тРНК Е. coli: proK, proL and proM tRNA; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (I) включает обеспечение последовательности нуклеотидов, соответствующей последовательностям промотора и терминатора пролин-тРНК Escherichia coli, которые содержат последовательности промотора и терминатора proK E. coli, соответствующие SEQ ID NO: 32 (промотор) и SEQ ID NO: 33 (терминатор), соответственно; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (III) включает обеспечение множества идентичных гетерологичных полинуклеотидных линкеров; или
указанное обеспечение конструкции нуклеиновой кислоты (III) включает обеспечение множества гетерологичных полинуклеотидных линкеров, причем по меньшей мере два гетерологичных полинуклеотидных линкера различаются; или
указанное обеспечение полицистроного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, содержащего нуклеотид тимидин на 5'-конце, нуклеотид аденозин на 3'-конце или одновременно нуклеотид тимидин на 5'-конце и нуклеотид аденозин на 3'-конце; или
указанное обеспечение полицистроного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из природного полинуклеотидного линкера, расположенного между эндогенными генами тРНК Escherichia coli, выбранными из: valU и valX; ileT и alaT; serV и argV, valV и valW, glyT и thrT, metT и leuW; glnW и metU; hisR и leuT; glnU и glnW; leuP и leuV; glnV и glnX, alaW и alaX; ileU и alaU; ileV и alaV; metU и glnV; glyW и cysT; argX и hisR; и argY и argZ; или
указанное обеспечение полицистронного оперона (III) включает обеспечение гетерологичного полинуклеотидного линкера, полученного из нуклеотидной последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 14 (valU/valX линкер) или SEQ ID NO: 15 (ileT/alaT линкер); или
указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение эубактериальной клетки-хозяина; или
указанное обеспечение клетки-хозяина включает обеспечение клетки-хозяина Escherichia coli; или
22. Способ получения системы трансляции для экспрессии представляющего интерес полипептида, который в заданном положении содержит по меньшей мере одну не встречающуюся в природе аминокислоту, включающий обеспечение:
(a) не встречающейся в природе аминокислоты;
(b) конструкции нуклеиновой кислоты, включающей: нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК), и нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), причем указанная O-РС предпочтительно предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК путем присоединения к ней не встречающейся в природе аминокислоты; и
(с) полинуклеотида, кодирующего представляющий интерес указанный полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной O-тРНК, причем положение указанного селекторного кодона в полинуклеотиде определяет указанное заданное положение не встречающейся в природе аминокислоты в указанном представляющем интерес полипептиде при экспрессии полинуклеотида с образованием полипептида.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что клетка-хозяин содержит (а), (b) и (с).
24. Способ получения представляющего интерес полипептида, который в заданном положении содержит не встречающуюся в природе аминокислоту, включающий:
(a) обеспечение системы трансляции, включающей:
(i) не встречающуюся в природе аминокислоту;
(ii) конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную тРНК (O-тРНК) и нуклеотидную последовательность, кодирующую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (O-РС), причем указанная O-РС предпочтительно предпочтительно амин-ацилирует указанную O-тРНК, присоединяя к ней не встречающуюся в природе аминокислоту; и
(iii) полинуклеотид, кодирующий указанный представляющий интерес полипептид, который содержит по меньшей мере один селекторный кодон, который распознается указанной O-тРНК, причем положение указанного селекторного кодона соответствует указанному заданному положению не встречающейся в природе аминокислоты в представляющем интерес полипептиде;
(iv) клетку-хозяина, содержащую (i), (ii) и (iii); и
(b) культивирование указанной клетки-хозяина; и
(c) (с) включение указанной не встречающейся в природе аминокислоты в заданное положение указанного полипептида в ходе трансляции указанного полипептида в указанной клетке-хозяина и, таким образом, получение указанного представляющего интерес полипептида, содержащего не встречающуюся в природе аминокислоту в указанном заданном положении.