ШТАММ PROPIONIBACTERIUM, ОБЛАДАЮЩИЙ ИНГИБИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРОТИВ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ (ВАРИАНТЫ) И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
PROPIONIBACTERIUM STRAIN HAVING INHIBITORY ACTIVITY AGAINST YEASTS AND MOULD FUNGI (VERSIONS), AND ITS APPLICATION

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к новым штаммам Propionibacterium, а также препаратам и композициям, таким как ферментативные бульоны, защитные культуры, конечные пищевые или кормовые продукты только с Propionibacterium или в комбинации с бактериями рода Lactobacillus. Настоящее изобретение также относится к способам контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи и плесневые грибы, посредством применения таких новых штаммов Propionibacterium.
Предпосылки изобретения
Дрожжи и плесневые грибы играют основную роль в порче различных видов молочных продуктов, таких как йогурт, подслащенные сливки и сметана, а также разновидности свежих и зрелых сыров, и таким образом могут приводить к значительным экономическим потерям. Для сохранения молочных продуктов и обеспечения и продления срока хранения применяют химические консерванты, такие как органические кислоты и их соли (например, сорбат и пропионат). Недостатками при применении химических консервантов являются требования к маркировке (часто в виде чисел E) и потенциальные побочные эффекты на органолептические свойства пищевых продуктов.
В 1993 г. Valio, финской компанией молочных продуктов, в EP 0576780 описано применение защитной культуры для подавления роста грибов. Эта культура является смесью штамма Lactobacillus rhamnosus (депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) с номером депонирования DSM 7061) и штамма Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii (DSM 7067). Характерная особенность данной совместной культуры заключалась в том, что комбинация Lactobacillus и Propionibacterium обладала улучшенной противогрибковой активностью, нежели Lactobacillus rhamnosus сам по себе. Культуру запустили в серийное производство Wiesby под названием “Bio Profit” и переименовали в HOLDBAC™ YM-B Danisco.
EP 0576780 относится к новому штамму микроорганизма Lactobacillus casei подвид rhamnosus LC-705, DSM 7061, обладающему регулирующим действием в отношении дрожжей и плесневых грибов, к бактериальному препарату, содержащему данный штамм, отдельно или в комбинации с бактерией рода Propionibacterium или другим штаммом бактерии Lactobacillus casei и/или с традиционными средствами, применяемыми для контроля дрожжей и плесневых грибов.
В EP1308506 (Федеральный институт технологии Швейцарии (ETH) в Цюрихе, Швейцария) также описывают комбинацию молочнокислых и пропионовых бактерий. Штамм Lactobacillus paracasei подвид paracasei (DSM 14514) из ETH запустили в серийное производство в виде смеси с Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 7067 от Valio под названием HOLDBAC™ YM-C.
Патентная заявка WO 03/040349 относится к смеси бактерий, не являющейся заквасочной культурой, которая не содержит метаболитов и содержит вид Propionibacterium jensenii и вторую бактерию, выбранную из рода Lactobacillus.
Патент US 4728516 относится к способу подавления плесневых грибов и психротрофных бактерий в отстоянном зерненом твороге с применением смеси Streptococcus lactis подвид diacetylactis и с применением Propionibacterium shermanii в сливочной заправке или отстоянном зерненом твороге при температурах охлаждения.
DE 202006014937 относится к смеси молочного жира с пониженным содержанием жира, которая содержит масло и культуры биологической защиты от молочнокислых бактерий при отсутствии консервантов.
US 5096718 A относится к материалу на основе метаболитов пропионовых бактерий, а также его применению для подавления роста грамотрицательных психротрофных бактерий, дрожжей, плесневых грибов, грамположительных бактерий или листерий в пищевых продуктах.
WO 9816124 A1 относится к композиции пищевого продукта, или напитка, или корма для животных, которая включает противогрибковое эффективное количество метаболитов пропионовых бактерий.
Цель изобретения
Целью вариантов осуществления настоящего изобретения является обеспечение улучшенных штаммов Propionibacterium, а также препаратов и композиций, таких как ферментативные бульоны, защитные культуры, конечные пищевые или кормовые продукты, содержащие такие улучшенные Propionibacterium отдельно или в комбинации с бактериями рода Lactobacillus.
Целью вариантов осуществления настоящего изобретения является обеспечение способов контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы, с помощью таких новых штаммов Propionibacterium.
Краткое описание изобретения
Автором(авторами) настоящего изобретения было обнаружено, что новые штаммы Propionibacterium обладают улучшенными свойствами в отношении способности контролировать рост контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы.
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к бактериям рода Propionibacterium, выбранным из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849 или их функциональных эквивалентов.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к бактериальному препарату, характеризующемуся тем, что он содержит Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849;
или их функциональных эквивалентов, отдельно или в комбинации с бактерией рода
Lactobacillus, с каким-либо другим штаммом бактерии Propionibacterium или с обоими.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к применению бактерий рода Propionibacterium, выбранных из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849;
или их функциональных эквивалентов, при получении конечного пищевого или кормового продукта.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, такой как защитная культура или конечный пищевой или кормовой продукт, содержащей жизнеспособные бактерии рода Propionibacterium, выбранные из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к применению бактериального препарата, содержащего Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, для контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы, характеризующемуся применением бактериального препарата, содержащего Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, отдельно или в комбинации с бактерией рода Lactobacillus, с каким-либо другим штаммом бактерии Propionibacterium или с обоими.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, такой как защитная культура или конечный пищевой или кормовой продукт, содержащий жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus в комбинации с Propionibacterium, выбранной из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов.
В некоторых вариантах осуществления способ также включает в качестве стадии очистку и/или концентрирование указанных бактерий рода Lactobacillus.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы, в композиции, при этом способ характеризуется наличием в данной композиции бактериального препарата в соответствии с настоящим изобретением.
В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу хранения пищевого или кормового продукта, причем указанный пищевой или кормовой продукт содержит жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus, при этом способ включает стадию контроля роста контаминанта, такого как бактерия, дрожжи или плесневые грибы, в данном пищевом или кормовом продукте посредством добавления к указанному пищевому или кормовому продукту бактерии в соответствии с настоящим изобретением или бактериального препарата в соответствии с настоящим изобретением.
Краткое описание фигур
Фигуры 1-8 представляют собой результаты анализа верхнего слоя. Прозрачные зоны вокруг колоний пропионовых бактерий являются видимыми при продуцировании противогрибковых метаболитов пропионовыми бактериями.
Фиг. 1: Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 25846 и ее ингибирующее действие в отношении Penicillium sp. DCS 436.
Фиг. 2: Propionibacterium freudenreichii DSM 25847 и ее ингибирующее действие в отношении Penicillium sp. DCS 436.
Фиг. 3: Propionibacterium freudenreichii DSM 25847 и ее ингибирующее действие в отношении Debaryomyces hansenii DCS 605.
Фиг. 4: Propionibacterium freudenreichii DSM 25847 и ее ингибирующее действие в отношении Penicillium sp. DCS 1540.
Фиг. 5: Propionibacterium acidipropionici DSM 25845 и ее ингибирующее действие в отношении Candida sake DCS 1055.
Фиг. 6: Propionibacterium thoenii DSM 25848 и ее ингибирующее действие в отношении Candida sake DCS 1055.
Фиг. 7: Propionibacterium thoenii DSM 25848 и ее ингибирующее действие в отношении Candida sake DCS 1057.
Фиг. 8: Propionibacterium thoenii DSM 25848 и ее ингибирующее действие в отношении Fusarium sp. DCS 1105.
Фиг. 9: Уровни дрожжей (Rhodotorula mucilaginosa DCS 1087 и Debaryomyces hansenii DCS 605) в 3 различных партиях йогурта с противогрибковыми культурами и без противогрибковых культур, сохранившиеся при температуре 6°C. Без защитной культуры (♦), смесь Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061, полученная сублимационной сушкой (), смесь Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 25846 и Lactobacillus paracasei подвид paracasei DSM 14514, полученная сублимационной сушкой ().
Фиг. 10: Уровни дрожжей (Rhodotorula mucilaginosa DCS 1087 и Debaryomyces hansenii DCS 605) в 3 различных партиях йогурта с противогрибковыми культурами и без противогрибковых культур, сохранившиеся при температуре 6°C. Без защитной культуры (♦), смесь Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 (), полученная сублимационной сушкой, замороженная смесь Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 (), смесь Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514 (), полученная сублимационной сушкой, замороженная смесь Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514 (∆).
Подробное описание изобретения
Противогрибковые действия коммерчески доступных противогрибковых культур HOLDBAC™ YM-B и HOLDBAC™ YM-C (DuPont, Дания) были продемонстрированы в различных исследованиях с нагрузкой в различных видах ферментированных кисломолочных продуктов, таких как йогурт, свежий сыр, сметана и белый соленый сыр. Также применение HOLDBAC™ YM-B и HOLDBAC™ YM-C оценивали во внутрипроизводственных испытаниях в сыре типа гауда. Результаты показали замедленный рост плесневых грибов, вызывающих порчу, на сырах, приготовленных с HOLDBAC™ YM-B или HOLDBAC™ YM-C по сравнению с образцом без добавления защитной культуры. Предполагается, что присутствие только штамма Propionibacterium потенциально может вызвать образование противогрибковых метаболитов штаммом Lactobacillus. Авторы настоящего изобретения показали, что основная часть противогрибковой активности исходит от Lactobacillus и комбинаций живых молочнокислых бактерий с пропионовыми бактериями, которые также проявляют противогрибковую активность.
Настоящее изобретение относится к улучшенным пропионовым бактериям, обладающим ингибирующей активностью против дрожжей или плесневых грибов. Эти бактерии являются подходящими для обеспечения сохранности продуктов (например, пищи или корма).
Описанные в примерах штаммы изучали методом посева на агар.
Эти штаммы могут применяться для разработки противогрибковых культур, в частности, для применения в молочном производстве. С помощью противогрибковых молочнокислых бактерий было бы возможным применение противогрибковых культур на основе принципа совместной культуры HOLDBAC™ YM, например, для применения в йогурте (включая питьевой йогурт), сметане, полутвердом и твердом сыре, зерненом твороге, свежем сыре, кислом сыре, сливочном сыре и белом соленом сыре. Потенциальным применением могут являться другие области пищевого применения, такие как, например, закваска, а также защита кормовых продуктов, таких как, например, силос.
Определения
Применяемый в данном документе термин “жизнеспособный” относится к бактериальным клеткам, способным к активному метаболизму, выживанию, росту или размножению.
Применяемый в данном документе термин “защитная культура Lactobacillus” относится к композиции, содержащей живые Lactobacillus (чистые культуры или концентраты культур), которая не является конечным пищевым продуктом, подходящим для потребления, но которую добавляют к продуктам питания с целью снижения рисков, опосредованных патогенными или токсикогенными микроорганизмами. Включенными в это определение являются композиции, такие как среды для ферментации или их концентрированные препараты, в которых Lactobacillus выращивают в подходящей среде.
Применяемый в данном документе термин “защитная культура Propionibacterium” относится к композиции, содержащей живые Propionibacteria (чистые культуры или концентраты культур), которая не является конечным пищевым продуктом, подходящим для потребления, но которую добавляют к продуктам питания с целью снижения рисков, опосредованных патогенными или токсикогенными микроорганизмами. Включенными в это определение являются композиции, такие как среды для ферментации или их концентрированные препараты, в которых Propionibacterium выращивают в подходящей среде.
Европейская ассоциация пищевых продуктов и культур (EFFCA) охарактеризовала защитные культуры следующим образом: термин “защитные культуры” применим к микробным культурам, применяемым при производстве пищевых продуктов (MFC), проявляющим метаболическую активность, способствующую подавлению или контролю роста нежелательных микроорганизмов в пищевых продуктах. Такими нежелательными микроорганизмами могут быть патогенные или токсикогенные бактерии и грибы, но также могут быть включены виды, вызывающие порчу пищевых продуктов.
Защитные культуры рассматривают как составную часть заквасочных культур, которые являются традиционными средствами технологии пищевых продуктов, применяемой для производства кисломолочных пищевых продуктов, таких как сыр, йогурт, некоторые колбасы, вино и т.д. Общим свойством кисломолочных продуктов является то, что они обладают более долгим сроком хранения, чем не сброженное исходное сырье (например, сыр имеет гораздо более долгий срок хранения, чем молоко). Это свойство является результатом активного метаболизма культуры для ферментации, воздействующей посредством сложной системы конкуренции за питательные вещества и сайты связывания, а также посредством продуцирования ингибирующих метаболитов, таких как органические кислоты, перекись водорода, диацетил, реутерин и бактериоцины.
В зависимости от конкретных применяемых культур, культуры обычно придают многочисленные свойства пищевому продукту, которые также представляют собой органолептические свойства и пищевую ценность. В этом отношении аналогичные виды заквасочных культур, применяемых в способах ферментации, также применяли по отношению к пищевому продукту с целью применения потенциала “биологической защиты” с воздействием или без воздействия на органолептические свойства. Для таких заквасочных культур применяли термин защитная культура.
Их применение не ограничено “классическими” кисломолочными пищевыми продуктами, но также играет важную роль, когда их метаболическая активность имеет место в пищевом продукте с нейтральным значением pH и высокой активностью воды, которые подвергаются повышенному риску роста патогенов пищевых продуктов. Применение “защитных культур” является дополнительным мероприятием для улучшения гигиены пищевых продуктов и не стоит пренебрегать каким-либо мероприятием надлежащей производственной практики, обеспечивающим высокий стандарт пищевой безопасности.
Защитные культуры скорее являются составной частью заквасочных культур, нежели добавками. Очевидно, что эти культуры развивают собственный защитный и полезный потенциал подобно всем заквасочным культурам в результате своей метаболической активности внутри или на поверхности пищевого продукта. (EFFCA, декабрь 2011 г.).
Защитную культуру добавляют вместе с заквасочной культурой к основе пищевого продукта или корма перед ферментацией пищевого продукта или корма. Таким образом, защитная культура подвергается стадии ферментации и способна расти и/или обладать метаболической активностью. Заквасочная культура необходима для получения кисломолочных пищевых продуктов, таких так йогурт, сыр или сметана, и способствует желаемым изменениям при формировании вкуса, структуры и запаха продукта. В дополнение к этому, защитные культуры добавляют к пищевому продукту для ограничения роста патогенных бактерий или бактерий, вызывающих порчу пищевого продукта, и, таким образом, снижают риск пищевых отравлений и обеспечивают срок хранения.
Применяемый в данном документе термин “конечный пищевой или кормовой продукт” относится к композиции, подходящей для потребления, такой как для потребления человеческом или животным в форме пищевого или кормового продукта.
Термин “контаминант”, применяемый в данном документе, относится к любому нежелательному или случайному росту любого микроорганизма, такого как бактерии, грибы, такие как дрожжевые или плесневые грибы. В некоторых случаях контаминант может вызывать заболевание. Однако, часто контаминант только ухудшает и портит продукт, в котором он находится, и/или придает неприятный или нежелательный вкус или вкусовое ощущение.
В некоторых вариантах осуществления контаминантом являются грибы, выбранные из списка, состоящего из видов Penicillium, Penicillium brevicompactum, Penicillium solitum, Penicillium glabrum, Penicillium corylophilum, Penicillium roqueforti, Aspergillus sp., Aspergillus ochraceus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus versicolor, Aspergillus niger, Eurotium spp., Fusarium spp., Candida spp., Candida colliculosa, Candida famata, Candida guilliermondii, Candida kefyr, Candida lambica, Candida lipolytica, Candida lusitaniae, Candida sake, Candida sphaerica, Candida parapsilosis, Candida pelliculosa, Candida rugosa, Candida zeylanoides, Debaryomyces spp., Debaryomyces hansenii, Kluyveromyces spp., Kluyveromyces marxianus, Rhodotorula spp., Rhodotorula mucilaginosa, Saccharomyces spp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces servazzii и Geotrichum spp., Geotrichum candidum.
В некоторых вариантах осуществления контаминант представляет собой бактерии, отличные от конкретного штамма Lactobacillus, применяемого в способах в соответствии с настоящим изобретением, выбранные из списка, состоящего из Listeria monocytogenes, видов Pseudomonas, Staphylococcus aureus, Bacillus sp., Lactobacillus sp., Leuconostoc sp., Clostridium sp., Enterobacteriaceae, таких как Citrobacter sp., Enterobacter sp., Escherichia sp., Klebsiella sp., Salmonella sp.
Lactobacillus
Применяемый в данном документе термин “бактерии рода Lactobacillus” относится к любому штамму рода Lactobacillus, такому как штаммы Lactobacillus, которые могут применяться для производства йогурта, сыра, квашеной капусты, солений, пива, вина, сидра, кимчхи, какао и других кисломолочных пищевых продуктов, а также животных кормов, таких как силос. Термин Lactobacillus предназначен для включения организмов, описанных в (http://www.bacterio.cict.fr/l/Lactobacillus.html), и, в частности, включающих L. acetotolerans, L. acidifarinae, L. acidipiscis, L. acidophilus, L. agilis, L. algidus, L. alimentarius, L. amylolyticus, L. amylophilus, L. amylotrophicus, L. amylovorus, L. animalis, L. antri, L. apodemi, L. aviarius, L. bifermentans, L. brevis, L. buchneri, L. camelliae, L. casei, L. catenaformis, L. ceti, L. coleohominis, L. collinoides, L. composti, L. concavus, L. coryniformis, L. crispatus, L. crustorum, L. curvatus, L. delbrueckii подвид delbrueckii, L. delbrueckii подвид bulgaricus, L. delbrueckii подвид lactis, L. dextrinicus, L. diolivorans, L. equi, L. equigenerosi, L. farraginis, L. farciminis, L. fermentum, L. fornicalis, L. fructivorans, L. frumenti, L. fuchuensis, L. gallinarum, L. gasseri, L. gastricus, L. ghanensis, L. graminis, L. hammesii, L. hamsteri, L. harbinensis, L. hayakitensis, L. helveticus, L. hilgardii, L. homohiochii, L. iners, L. ingluviei, L. intestinalis, L. jensenii, L. johnsonii, L. kalixensis, L. kefiranofaciens, L. kefiri, L. kimchii, L. kitasatonis, L. kunkeei, L. leichmannii, L. lindneri, L. malefermentans, L. mali, L. manihotivorans, L. mindensis, L. mucosae, L. murinus, L. nagelii, L. namurensis, L. nantensis, L. oligofermentans, L. oris, L. panis, L. pantheris, L. parabrevis, L. parabuchneri, L. paracollinoides, L. parafarraginis, L. parakefiri, L. paralimentarius, L. paraplantarum, L. pentosus, L. perolens, L. plantarum, L. pontis, L. psittaci, L. rennini, L. reuteri, L. rhamnosus, L. rimae, L. rogosae, L. rossiae, L. ruminis, L. saerimneri, L. sakei, L. salivarius, L. sanfranciscensis, L. satsumensis, L. secaliphilus, L. sharpeae, L. siliginis, L. spicheri, L. suebicus, L. thailandensis, L. ultunensis, L. vaccinostercus, L. vaginalis, L. versmoldensis, L. vini, L. vitulinus, L. zeae и L. zymae, а также их разновидности.
Термин Lactobacillus предназначен для включения любого конкретного штамма Lactobacillus, описанного в EP 0576780, EP 1308506 EP 1796698, EP 2245943, EP 1530642, EP 1740726, WO 03/040349 WO/2006/032542, WO/2007/132359, WO/2004/013343 и WO/2010/081138.
В некоторых вариантах осуществления штамм Lactobacillus выбран из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514 и Lactobacillus plantarum DSM 25833.
Propionibacterium
Применяемый в данном документе термин “любой другой штамм бактерии Propionibacterium” относится к любому другому штамму рода Propionibacterium, включая виды Propionibacterium acidifaciens, Propionibacterium acidipropionici, Propionibacterium acnes, Propionibacterium australiense, Propionibacterium avidum, Propionibacterium cyclohexanicum, Propionibacterium freudenreichii подвид freudenreichii, Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii, Propionibacterium granulosum, Propionibacterium jensenii, Propionibacterium microaerophilum, Propionibacterium propionicum и Propionibacterium thoenii, а также их варианты. Этот термин предполагает включение конкретных штаммов, описанных в настоящем раскрытии, и в любом из EP 0576780, EP 1308506, WO 03/040349 и US 4728516, включая Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 7067.
Конкретные варианты осуществления настоящего изобретения
В некоторых вариантах осуществления бактериальным препаратом в соответствии с настоящим изобретением является клеточная суспензия в ферментативном бульоне отдельно или в комбинации с бактерией рода Lactobacillus или другим штаммом Propionibacterium.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением также содержит штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат содержит штамм Propionibacterium, выбранный из Propionibacterium acidipropionici DSM 25845; Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846; Propionibacterium freudenreichii DSM 25847; Propionibacterium thoenii DSM 25848; Propionibacterium thoenii DSM 25849 и Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 7067 или любой их комбинации.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium acidipropionici DSM 25845 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 25846 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium freudenreichii DSM 25847 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium thoenii DSM 25848 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium thoenii DSM 25849 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением содержит Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 7067 и штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением концентрируют.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением высушивают с помощью сублимационной сушки или замораживают.
В некоторых вариантах осуществления бактериальный препарат в соответствии с настоящим изобретением характеризуется тем, что он дополнительно содержит традиционные средства, применяемые для контроля дрожжей и плесневых грибов, такие как пропионат или фенилаланин.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Lactobacillus, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Propionibacterium, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Propionibacterium присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является конечным пищевым или кормовым продуктом, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является конечным пищевым или кормовым продуктом, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Propionibacterium присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
В некоторых вариантах осуществления композиция или препарат в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Lactobacillus.
В некоторых вариантах осуществления композиция или препарат в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Propionibacterium.
В некоторых вариантах осуществления композиция или препарат в соответствии с настоящим изобретением является конечным пищевым или кормовым продуктом.
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением находится с или без клеточных остатков указанных бактерий рода Propionibacterium.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Lactobacillus, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5x10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Propionibacterium, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Propionibacterium присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является конечным продуктом, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Lactobacillus, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является защитной культурой Propionibacterium, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Propionibacterium присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
В некоторых вариантах осуществления композиция в соответствии с настоящим изобретением является конечным продуктом, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
В некоторых вариантах осуществления композиция или препарат в соответствии с настоящим изобретением применяется для получения пищевого продукта или кормового продукта, такого как молочный йогурт. В некоторых вариантах осуществления продукт питания выбран из группы, состоящей из молочных продуктов, йогурта, питьевого йогурта, сыра, такого как свежий сыр, сливочный сыр, зерненый творог, полумягкий и мягкий сыр, полутвердый и твердый сыр, белый соленый сыр, кисломолочных продуктов и сметаны, квашеной капусты, солений, пива, вина, сидра, кимчхи, какао, закваски и других кисломолочных пищевых продуктов, а также животных кормов, таких как силос.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения бактерии рода Lactobacillus выбраны из списка, состоящего из:
Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514;
Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832;
Lactobacillus plantarum DSM 25833;
Lactobacillus plantarum DSM 25834;
Lactobacillus plantarum DSM 25835;
Lactobacillus plantarum DSM 25836;
Lactobacillus plantarum DSM 25837 и
Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
Пронумерованные варианты осуществления в соответствии с настоящим изобретением
1. Бактерии рода Propionibacterium, выбранные из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849 или их функциональных эквивалентов.
2. Бактериальный препарат, характеризующийся тем, что он содержит Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, отдельно или в комбинации с бактерией рода
Lactobacillus, с каким-либо другим штаммом рода Propionibacterium или с обоими.
3. Бактериальный препарат в соответствии с вариантом осуществления 2, которым является клеточная суспензия в ферментативном бульоне, отдельно или в комбинации с бактерией рода Lactobacillus, с другим штаммом Propionibacterium или с обоими.
4. Бактериальный препарат в соответствии с любым из вариантов осуществления 2-3, характеризующийся тем, что он содержит штамм Lactobacillus, выбранный из Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514; Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832; Lactobacillus plantarum DSM 25833; Lactobacillus plantarum DSM 25834; Lactobacillus plantarum DSM 25835; Lactobacillus plantarum DSM 25836; Lactobacillus plantarum DSM 25837 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061.
5. Бактериальный препарат в соответствии с любым из вариантов осуществления 2-4, причем препарат является концентрированным.
6. Бактериальный препарат в соответствии с любым из вариантов осуществления 2-4, причем препарат является высушенным с помощью сублимационной сушки.
7. Бактериальный препарат в соответствии с любым из вариантов осуществления 2-6, характеризующийся тем, что он дополнительно содержит традиционные средства, применяемые для контроля дрожжей и плесневых грибов, такие как пропионат или фенилаланин.
8. Применение бактерий рода Propionibacterium, выбранных из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, при получении конечного пищевого или кормового продукта.
9. Применение бактериального препарата, содержащего Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, для контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы.
10. Способ контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы, характеризующийся применением бактериального препарата, содержащего Propionibacterium, выбранную из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов, отдельно или в комбинации с бактерией рода Lactobacillus, с другим штаммом бактерии рода Propionibacterium или с обоими.
11. Композиция, такая как защитная культура или конечный пищевой или кормовой продукт, содержащая жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus в комбинации с Propionibacterium, выбранной из списка, состоящего из:
a. Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
b. Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846;
c. Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
d. Propionibacterium thoenii DSM 25848 и
e. Propionibacterium thoenii DSM 25849
или их функциональных эквивалентов.
7
7
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
12. Композиция в соответствии с вариантом осуществления 11, в котором указанная композиция является защитной культурой Lactobacillus, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
13. Композиция в соответствии с вариантом осуществления 11, в котором указанная композиция является конечным пищевым или кормовым продуктом, при этом указанные жизнеспособные бактерии рода Lactobacillus присутствуют в количестве по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5x10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5x10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 10 КОЕ/г или мл, таком как по меньшей мере 5×10 КОЕ/г или мл композиции.
14. Композиция в соответствии с любым из вариантов осуществления 11-13 или препарат в соответствии с вариантами осуществления 2-7, которая представляет собой или которую применяют для получения пищевого продукта или кормового продукта, такого как молочный продукт.
15. Композиция в соответствии с вариантом осуществления 14, в котором продукт питания выбран из группы, состоящей из молочных продуктов, йогурта, питьевого йогурта, сыра, такого как свежий сыр, сливочный сыр, зерненый творог, полумягкий и мягкий сыр, полутвердый и твердый сыр, белый соленый сыр, кисломолочных продуктов и сметаны, квашеной капусты, солений, пива, вина, сидра, кимчхи, какао, закваски и других кисломолочных пищевых продуктов, а также животных кормов, таких как силос.
16. Композиция в соответствии с любым из вариантов осуществления 11-13 или препарат в соответствии с вариантами осуществления 2-7, в которых указанные бактерии рода Lactobacillus выбраны из списка, состоящего из
Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514;
Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 25832;
Lactobacillus plantarum DSM 25833;
Lactobacillus plantarum DSM 25834;
Lactobacillus plantarum DSM 25835;
Lactobacillus plantarum DSM 25836;
Lactobacillus plantarum DSM 25837 и
Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 или комбинации любого из них.
17. Применение композиции в соответствии с любым из вариантов осуществления 11-16 для контроля роста контаминанта, такого как бактерии, дрожжи или плесневые грибы.
Пример 1
Тест-штаммы пропионовых бактерий
Применяли следующие штаммы пропионовых бактерий:
• Propionibacterium acidipropionici DSM 25845;
• Propionibacterium freudenreichii подвид shermanii DSM 25846;
• Propionibacterium freudenreichii DSM 25847;
• Propionibacterium thoenii DSM 25848;
• Propionibacterium thoenii DSM 25849;
Культивирование пропионовых бактерий
Пропионовые бактерии размножали в бульоне с лактатом натрия, который состоял из 2% пептона из казеина (Merck KGaA, Дармштадт, Германия), 1% дрожжевого экстракта (Merck) и 1,6% раствора лактата натрия 50% (Merck) при температуре 30°C в анаэростатах. Пассаж выполняли добавлением 0,1 мл из прекультур к 10 мл бульона с лактатом натрия, культивирование проводили, как описано ранее. Перед применением культуры выдерживали при температуре 4–6°C.
Индикаторные штаммы дрожжей и плесневых грибов
В таблице 1 и 2 ниже приведены штаммы дрожжей и плесневых грибов.
Таблица 1Список штаммов дрожжей, применяемых в скрининге в отношении противогрибковой активности
Номер штамма
Название штамма
Происхождение
DCS 298
Candida parapsilosis
Miescher<sup>1</sup>
DCS 605
Debaryomyces hansenii
DSM 70238<sup>2</sup>
DCS 1037
Debaryomyces hansenii
DuPont A/S<sup>3</sup>
DSC 1048
Candida lusitaniae
DuPont A/S
DSC 1055
Candida sake
DuPont A/S
DSC 1057
Candida sake
DuPont A/S
1) Miescher, S. 1999. Antimicrobial and autolytic systems of dairy propionibacteria. PhD thesis No. 13486. ETH Цюрих, Швейцария.2) Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Брауншвейг, Германия.3) Danisco Nutrition Biosciences ApS, Брабранд, Дания
Перед применением дрожжи культивировали в бульоне, состоящем из 2% глюкозы (vwr, Херлев, Дания), 0,5% дрожжевого экстракта (Oxoid Limited, Бейзингсток, Великобритания) и 0,01% пептона из казеина (Oxoid), растворенного в растворе однозамещенного фосфорнокислого калия (312 мкмоль/л, pH 7,20±0,10). Стерильный глицерин добавляли в концентрации 33% об./об.к среде с выращенными дрожжами перед хранением в криопробирках при температуре -80°C. После замораживания дрожжевые культуры подсчитывали на солодово-пептонном агаре (Oxoid).
Таблица 2Список штаммов плесневых грибов, применяемых в скрининге в отношении противогрибковой активности
Номер штамма
Название штамма
Происхождение
DCS 434
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 435
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 436
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 437
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 708
Aspergillus ochraceus
CBS 116.39<sup>4</sup>
DCS 709
Aspergillus parasiticus
CBS 100926
DCS 1065
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 1069
Aspergillus versicolor
DSM 63292
DCS 1093
Penicillium roqueforti
DTU 531<sup>5</sup>
DCS 1099
Eurotium sp.
DTU 123
DCS 1105
Fusarium sp.
DTU 40496
DCS 1106
Fusarium sp.
DTU 40872
DCS 1113
Penicillium corylophilum
DSM 62831
DCS 1115
Aspergillus niger
DSM 737
DCS 1558
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 1540
Penicillium sp.
DuPont A/S
DCS 1541
Penicillium sp.
DuPont A/S
3) Danisco Nutrition Biosciences ApS, Брабранд, Дания.4) Centraalbureau voor Schimmelcultures, Утрехт, Нидерланды.5) Danmarks Tekniske Universitet, Лингби, Дания.
Штаммы плесневых грибов культивировали на солодово-пептонном скошенном агаре (Oxoid) до тех пор, пока не становилась видимой споруляция. Споры собирали добавлением дважды 5 мл стерильной водопроводной воды с добавкой 0,01% Tween 80 (Merck). Стерильный глицерин добавляли в концентрации 33% об./об. к растворам со спорами перед хранением в криопробирках при температуре -80°C. Подсчет спор проводили после замораживания на солодово-пептонном агаре (Oxoid).
Анализ верхнего слоя
Тест-штаммы пропионовых бактерий высеивали каплями (три капли на чашку Петри) на агар с лактатом натрия, который состоял из 2% триптона (Oxoid), 1% дрожжевого экстракта (Oxoid), 1,6% раствора лактата натрия 50% (Merck) и 1,5% агар-агара (Merck). Чашки Петри инкубировали при температуре 30°C в анаэростатах.
4
4
Чашки Петри с выращенными колониями пропионовых бактерий покрывали мягким агаром с солодовым экстрактом, состоящим из 2% бульона с солодовым экстрактом (Oxoid) и 0,8% агар-агара (Merck), доведенным до температуры 47°C, содержащим 10 клеток дрожжей/мл или 10 спор плесневых грибов/мл. Покрытые чашки Петри инкубировали в течение 3–5 дней при температуре 25°C и проверяли на наличие зон ингибирования вокруг тестируемых колоний. В качестве контроля роста для каждого индикаторного организма готовили чашки Петри с агаром без капельных тест-штаммов. Площадь зон классифицировали следующим образом:
отсутствие ингибирования, чашка Петри полностью заросла - ;
отсутствие роста грибов на капле (+);
отсутствие роста грибов на расстоянии 5 мм вокруг капли +.
Результаты
Пять штаммов пропионовых бактерий испытывали на наличие противогрибковой активности. В связи с этим штаммы капельно высеивали в чашки Петри с агаром с лактатом натрия, на который помещали грибы, указанные в таблице 1 и 2, включенные в мягкий агар с солодовым экстрактом. Чашки Петри хранили при температуре 25°C и проверяли на наличие зон ингибирования вокруг колоний молочнокислых бактерий.
Все пять штаммов тестируемых пропионовых бактерий продемонстрировали противогрибковую активность при анализе в верхнем слое, как приведено в таблице 3.
Пропионовые бактерии продемонстрировали лишь незначительно отличные спектры ингибирования. Большинство штаммов плесневых грибов были более чувствительными и подавлялись в большей степени, нежели тестовые штаммы дрожжей.
Таблица 3Противогрибковая активность выбранных штаммов Propionibacterium при анализе в верхнем слое
P. acidipropionici DSM 25845
P. freudenreichii подвид shermanii DSM 25846
P. freudenreichii DSM 25847
P. thoenii DSM 25848
P. thoenii DSM 25849
Candida parapsilosis DCS 298
(+)
(+)
(+)
(+)
-
Debaryomyces hansenii DCS 605
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Debaryomyces hansenii DCS 1037
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Candida lusitaniae DCS 1048
-
(+)
-
(+)
(+)
Candida sake DCS 1055
(+)
(+)
(+)
+
(+)
Candida sake DCS 1057
-
-
-
(+)
(+)
Penicillium sp.DCS 434
(+)
+
+
(+)
+
Penicillium sp. DCS 435
+
+
+
+
+
Penicillium sp. DCS 436
+
+
+
+
+
Penicillium sp. DCS 437
+
+
(+)
+
+
Aspergillus ochraceus DCS 708
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Aspergillus parasiticus DCS 709
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Penicillium sp. DCS 1065
+
+
+
+
+
Aspergillus versicolor DCS 1069
+
+
+
+
+
Penicillium roqueforti DCS 1093
-
-
(+)
-
-
Eurotium sp. DCS 1099
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Fusarium sp. DCS 1105
(+)
+
+
+
+
Fusarium sp. DCS 1106
(+)
+
+
+
+
Penicillium corylophilum DCS 1113
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Aspergillus niger DCS 1115
(+)
(+)
(+)
(+)
(+)
Penicillium sp. DCS 1540
+
+
+
+
+
Penicillium sp. DCS 1541
+
+
+
+
+
Penicillium sp. DCS 1558
+
(+)
+
+
+
ПРИМЕР 2
Противогрибковая активность в йогурте
Противогрибковую активность Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 оценивали в экспериментальных смесях с Lactobacillus paracasei подвидом paracasei DSM 14514 или Lactobacillus rhamnosus DSM 7061. Контрольный образец без добавленных защитных культур включали для сравнения. Проводили два отдельных испытания. В первом испытании экспериментальные смеси защитных культур готовили из высушенных посредством сублимационной сушки штаммов. Во втором испытании экспериментальные смеси защитных культур готовили из высушенных посредством сублимационной сушки и замороженных штаммов.
Испытание 1
6
6
Образцы йогурта готовили из цельного молока с содержанием 3,5% жира. Молоко подвергали термической обработке в течение 360 секунд при температуре 95°C и затем охлаждали до температуры ферментации 43°C. Молоко инокулировали коммерчески доступной термофильной заквасочной культурой йогурта. Заквасочная культура йогурта состояла из штаммов Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrückii подвида bulgaricus (DuPont, Дания). Тестовые образцы дополнительно инокулировали экспериментальными смесями защитных культур до содержания 5,0⋅10 КОЕ/мл для смеси Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 или 5,35⋅10 КОЕ/мл для смеси Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514. Ферментацию проводил в течение около 6–7 часов при температуре 43°C до тех пор, пока pH не достиг 4,60. Йогурт распределяли в стерильных стаканах и инокулировали пулом дрожжей. Пул дрожжей содержал штаммы Rhodotorula mucilaginosa DCS 1087 (CFSQE 63 (Magnusson, J. et al 2003. FEMS Microbiology Letters 219: 129-135) и Debaryomyces hansenii DCS 605 (DSM 70238, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Брауншвейг, Германия)) и его добавляли при конечном уровне 2,0E00 КОЕ/г йогурта. Образцы йогурта хранили в течение 36 дней при температуре 5°C и дрожжи подсчитывали на агаре YGC.
Испытание 2
6
7
6
Образцы йогурта готовили из цельного молока с содержанием 3,5% жира. Молоко подвергали термической обработке в течение 360 секунд при температуре 95°C и затем охлаждали до температуры ферментации 43°C. Молоко инокулировали коммерчески доступной термофильной заквасочной культурой йогурта. Заквасочная культура йогурта состояла из штаммов Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrückii подвида bulgaricus (DuPont, Дания). Испытуемые образцы дополнительно инокулировали экспериментальными смесями защитных культур до следующего содержания клеток: 5,0⋅10 КОЕ/мл для высушенной посредством сублимационной сушки смеси Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061, 1,0⋅10 КОЕ/мл для замороженной смеси Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus rhamnosus DSM 7061, и 5,35⋅10 КОЕ/мл для высушенной посредством сублимационной сушки и замороженной смеси Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 и Lactobacillus paracasei подвида paracasei DSM 14514. Ферментацию проводил в течение около 6–7 часов при температуре 43°C до тех пор, пока pH не достиг 4,60. Йогурт распределяли в стерильных стаканах и инокулировали пулом дрожжей. Пул дрожжей содержал штаммы Rhodotorula mucilaginosa DCS 1087 и Debaryomyces hansenii DCS 605 и его добавляли при конечном уровне 8,0E00 КОЕ на 10 г йогурта. Образцы йогурта хранили в течение 33 дней при температуре 5°C и дрожжи подсчитывали на агаре YGC.
Результаты
Испытание 1
Высушенные посредством сублимационной сушки экспериментальные смеси культур Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 с Lactobacillus paracasei подвидом paracasei DSM 14514 или Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 оценивали в отношении ингибирующей активности против дрожжей в йогурте. Контрольный образец без противогрибковых культур включали для сравнения. Порции цельного молока с содержанием 3,5% жира ферментировали с коммерческой культурой йогурта. Тестовые образцы дополнительно инокулировали защитными штаммами. После ферментации образцы йогурта распределяли в стерильные стаканы и инокулировали пулом дрожжей. Образцы хранили при температуре 6°C и следили за ростом добавленных штаммов дрожжей. На фиг. 1 показано развитие пула дрожжей в образцах йогурта с противогрибковыми культурами и без противогрибковых культур. Повышение числа дрожжевых клеток наблюдали во всех образцах, но в контрольном образце без противогрибковых культур было продемонстрировано более высокое число дрожжевых клеток, нежели в образцах, полученных с экспериментальными противогрибковыми культурами, после приблизительно семи дней хранения.
Испытание 2
Высушенные посредством сублимационной сушки и замороженные экспериментальные смеси культур Propionibacterium freudenreichii подвида shermanii DSM 25846 с Lactobacillus paracasei подвидом paracasei DSM 14514 или Lactobacillus rhamnosus DSM 7061 оценивали в отношении ингибирующей активности против дрожжей в йогурте. Контрольный образец без противогрибковых культур включали для сравнения. Порции цельного молока с содержанием 3,5% жира ферментировали с коммерческой культурой йогурта. Тестовые образцы дополнительно инокулировали защитными штаммами. После ферментации образцы йогурта распределяли в стерильные стаканы и инокулировали пулом дрожжей. Образцы хранили при температуре 6°C и следили за ростом добавленных штаммов дрожжей. На фиг. 2 показано развитие пула дрожжей в образцах йогурта с противогрибковыми культурами и без противогрибковых культур. Повышение числа дрожжевых клеток наблюдали во всех образцах, но в контрольном образце без противогрибковых культур было продемонстрировано более высокое число дрожжевых клеток, нежели в образцах, полученных с экспериментальными противогрибковыми культурами, после приблизительно семи дней хранения.