СПОСОБЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИЧ-НЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ

1. Способ in vitro для определения ВИЧ-нейтрализующих антител в образце, включающий: (i) взаимодействие клетки, содержащей участок связывания с CD4 gp120 на своей поверхности, с указанным образцом и со слитым белком, содержащим (i) белок, способный связываться с участком связывания с CD4 gp120, и (ii) Fc-область первичного антитела, и (ii) измерение эффективности связывания указанного слитого белка с участком связывания с CD4 gp120,
где ВИЧ-нейтрализующие антитела определяют в указанном образце, если указанное связывание ингибируется в присутствии образца.
2. Способ по п. 1, где белок, способный связываться с участком связывания с CD4 gp120, представляет собой CD4 или его функционально эквивалентный вариант.
3. Способ по п. 2, где функционально эквивалентный вариант CD4 представляет собой фрагмент CD4, содержащий, по меньшей мере, N-концевые домены D1-D2 CD4.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где указанное измерение включает использование репортера, связывающегося с указанным слитым белком.
5. Способ по любому из пп. 1-3, где указанное измерение включает анализ указанной клетки посредством проточной цитометрии.
6. Способ по п. 4, где указанный репортер представляет собой Fc-специфичное вторичное антитело, связанное с детектируемой группой.
7. Способ по любому из пп. 1-3, где указанная клетка представляет собой ВИЧ-инфицированную клетку и где указанная ВИЧ-инфицированная клетка предпочтительно хронически инфицирована.
8. Способ по любому из пп. 1-3, где этапу (ii) предшествует, по меньшей мере, один этап промывания для удаления несвязавшегося слитого белка.
9. Способ по любому из пп. 1-3, где указанное определение представляет собой количественное определение.
10. Способ по любому из пп. 1-3, где образец представляет собой образец плазмы.
11. Слитый белок, содержащий (i) белок, способный связываться с участком связывания с CD4 gp120, и (ii) Fc-область первичного антитела.
12. Слитый белок по п. 11, где белок, способный связываться с участком связывания с CD4 gp120, представляет собой CD4 или его функционально эквивалентный вариант.
13. Слитый белок по п. 12, где функционально эквивалентный вариант CD4 представляет собой его фрагмент, содержащий, по меньшей мере, N-концевые домены D1-D2 CD4.
14. Слитый белок по п. 11, где первичное антитело представляет собой IgG мыши или его функционально эквивалентный вариант.
15. Нуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок по любому из пп. 11-14, или экспрессирующая кассета, вектор или трансгенная клетка, содержащая указанную нуклеиновую кислоту.
16. Набор, содержащий (i) слитый белок по любому из пп. 11-14, нуклеиновую кислоту, вектор или трансгенную клетку по п. 15 и (ii) репортер, способный связываться с указанным слитым белком.
17. Способ in vitro для идентификации антителопродуцирующей клетки, экспрессирующей ВИЧ-нейтрализующие антитела, включающий:
(i) взаимодействие клетки, содержащей участок связывания с CD4 gp120 на своей поверхности, с супернатантом культуры указанной антителопродуцирующей клетки и со слитым белком, содержащим (i) белок, способный связываться с участком связывания с CD4 gp120, и (ii) Fc-область первичного антитела, и
(ii) измерение эффективности связывания указанного слитого белка с участком связывания с CD4 gp120,
где антителопродуцирующие клетки определяют как экспрессирующие ВИЧ-нейтрализующие антитела, если указанное связывание ингибируется в присутствии указанного супернатанта.
18. Способ по п. 17, где антителопродуцирующие клетки представляют собой В-клетки или гибридомные клетки.
19. Способ по п. 17 или 18, далее включающий клонирование клетки, которая экспрессирует нейтрализующие антитела.
20. Способ получения ВИЧ-нейтрализующих антител, включающий:
(i) культивирование антителопродуцирующих клеток, выделенных по любому из пп. 17-19, и
(ii) выделение антител, экспрессированных указанными антителопродуцирующими клетками.
21. Применение ВИЧ-нейтрализующих антител, полученных способом по п. 20, для лечения или предотвращения заболеваний, ассоциированных с инфекцией ВИЧ.
22. Применение ВИЧ-нейтрализующих антител, продуцированных клетками, идентифицированными способом по любому из пп. 17-19, для лечения или предотвращения заболеваний, ассоциированных с инфекцией ВИЧ.