ХИРАЛЬНЫЕ ДИАРИЛЬНЫЕ МАКРОЦИКЛЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
CHIRAL DIARYL MACROCYCLES AND USE THEREOF

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[001]
Настоящая заявка испрашивает приоритет в соответствии с 119(e) раздела 35 Свода законов США на основании предварительной заявки на патент США № 62/195081, поданной 21 июля 2015, и предварительной заявки на патент США № 62/302231, поданной 2 марта 2016, содержания которых включены в настоящий документ во всей полноте посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[002]
S
R
f
H
Настоящее изобретение относится к применению конкретных диарильных макроциклических соединений, в частности (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она, для лечения заболевания у млекопитающих. Настоящее изобретение также относится к композициям, содержащим такие соединения, и к способам применения таких композиций для лечения заболеваний у млекопитающих, особенно у людей.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[003]
2002
2004
Science
298
Nature
432
Протеинкиназы являются ключевыми регуляторами роста, пролиферации и выживания клеток. Генетические и эпигенетические изменения накапливаются в раковых клетках, что приводит к аномальной активации путей передачи сигналов, которые вызывают процессы образования злокачественных опухолей (Manning G.; Whyte D. B.; Martinez R.; Hunter T.; Sudarsanam S. The protein kinase complement of the human genome. , , 1912-1934). Фармакологическое ингибирование указанных сигнальных путей представляет собой перспективные возможности вмешательства при направленной терапии (Sawyers C. Targeted cancer therapy. , , 294-297).
[004]
2004
1994
2011
2008
2011
2014
2015
Cell Mol. Life Sci.
61
Science
263
ALK
Mol. Cancer Ther.
10
Nature
455
ALK
Mol. Cancer Ther.
10
Clin Cancer Res.
Nature
526
L1196M
Киназа анапластической лимфомы (ALK) наряду с лейкоцитарной тирозинкиназой (LTK) относится к надсемейству инсулиновых рецепторов (IR), принадлежащему к классу тирозинкиназных рецепторов. ALK в основном экспрессируется в центральной и периферических нервных системах, что указывает на ее потенциальную роль в нормальном развитии и функционировании нервной системы. (Pulford K. et al. , , 2939). ALK была впервые обнаружена, как гибридный белок NPM (нуклеофосмин)-ALK, кодируемый гибридным геном, возникающим в результате хромосомной транслокации t(2;5)(p23;q35) в клеточных линиях анапластической крупноклеточной лимфомы (ALCL) в 1994 году (Morris SW. et al. , , 1281). Во многих типах рака было открыто более двадцати различных партнеров транслокации , включая ALCL (60-90% заболеваемость), воспалительные миофибробластические опухоли (IMT, 50-60%), немелкоклеточный рак легких (NSCLC, 3-7%), колоректальный рак (CRC, 0-2,4%), рак молочной железы (0-2,4%) и другие карциномы с редкой заболеваемостью (Grande E. et al. , , 569). Онкогенные точечные мутации ALK были обнаружены как в семейных, так и в спорадических случаях нейробластомы (Mossé YP. et al. , , 930-935). И гибридные, и мутантные ALK являются высокоонкогенными и вызывают значительный интерес, что способствует разработке ингибиторов ALK для лечения гемопоэтических, солидных и мезенхимальных опухолей с аномальным геном  (Grande E. et al. , , 569-579). Кризотиниб был одобрен управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США для лечения ALK-положительного немелкоклеточного рака легких. Как и во многих направленных терапиях в отношении ингибиторов киназ, устойчивость к лекарственным средствам на основе кризотиниба развивается примерно через 10 месяцев. Механизмы устойчивости к лекарственным средствам включают амплификацию или сверхэкспрессию гена-мишени, развитие вторичных миссенс-мутаций и использование альтернативных сигнальных путей (так называемая ʺобходная устойчивостьʺ). В результате было установлено, что ингибиторы ALK второго поколения являются более эффективными в отношении дикого типа и многих мутантных форм ALK. Одной из таких мутаций является мутация привратника ALK. Церитиниб был одобрен управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США для лечения пациентов с ALK-положительным немелкоклеточным раком легких, у которых наблюдается прогрессирование заболевания или непереносимость к кризотинибу. Хотя в клинических испытаниях были исследованы многие ингибиторы ALK второго поколения, были обнаружены новые мутации ALK, устойчивые к ингибиторам ALK второго поколения. Например, в опухолях, устойчивых к кризотинибу, церитинибу и алектинибу, была обнаружена мутация G1202R (Politi K. , 20, 5576). Было обнаружено, что новые изоформы ALK, состоящие в основном из домена с внутриклеточной тирозинкиназой, экспрессируются в ~ 11% меланом и спорадически в других типах рака человека, но не в нормальных тканях (Wiesner T. et al. , , 453-457). Такие новые изоформы ALK стимулируют множество онкогенных сигнальных путей и являются чувствительными к ингибиторам ALK, что указывает на потенциальные клинические преимущества ингибирования ALK.
[005]
2012
2016,
2014
ALK
Oncotarget
EML4-ALK
in vitro
in vivo
See comment in PubMed Commons belowScience.
G1202R
Немелкоклеточный рак легких, сопровождающийся перестройкой гена , является чувствительным к лечению с применением кризотиниба в качестве ингибитора ALK. Тем не менее, возникновение устойчивости к лекарственному средству является неизбежным процессом и быстро ограничивает клиническую применимость. Механизмы устойчивости включают амплификацию гена ALK, приобретенные миссенс-мутации ALK, активацию обходного пути и эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) (Katayama R 2012) (Katayama R. et al. Sci TranslMed. , 4(120):120ra17). Обход и EMT формируют большинство популяции с приобретенной устойчивостью. Следует отметить, что 30-40% пациентов с положительным слиянием ALK имеют внутреннюю устойчивость к лечению с применением ингибитора ALK. NSCLC, сопровождающиеся перестройкой ALK, обычно представляют собой солидную перстневидноклеточную аденокарциному, которая часто связана с метастатическим фенотипом и эпителиально-мезенхимальным переходом (EMT) фенотипа (Voena C. et al. ,  April 23, 8955). Клеточная линия H2228 с гибридным геном  v3 демонстрирует мезенхимальный фенотип с непосредственным подавлением экспрессии E-кадгерина и повышающей регуляцией экспрессии виментина, а также экспрессией других генов, участвующих в EMT. Клеточная линия H2228 обеспечивает внутреннюю устойчивость к кризотинибу и другим ингибиторам ALK. Таким образом, необходимо разработать способ полифармакологии с применением ингибитора ALK, способный целенаправленно воздействовать на EMT и метастазирование. Обходная устойчивость наблюдается, когда исходный онкоген и вторичный обходной путь избыточно поддерживают нисходящие сигналы, что приводит к повышению выживания и пролиферации клеток. Например, было показано, что ингибирование ALK в моделях ALK, полученных от пациентов, приводит к повышающей регуляции активности SRC. Было показано, что комбинация ингибитора тирозинкиназы семейства Src с ингибитором ALK эффективно подавляет нисходящие сигналы, генерирует эффект синергического ингибирования и повторно сенсибилизирует ингибиторы ALK в моделях ALK, полученных от пациентов,  и  (Crystal AS. , 346, 1480). Идентификация новых ингибиторов ALK, которые способны противодействовать широкому спектру вторичных мутаций ALK, включая ALK, и ингибировать передачу сигналов Src, является важной и крайне желательной задачей для эффективного преодоления устойчивости ALK к лекарственным средствам и поддержания ответа на лечение с применением ингибиторов ALK.
[006]
2013
2003
2012
2011
2016
2015
2013
Clin Cancer Res
Genes Chromosomes Cancer
37
Nat. Med.
18
PLoS One.
Future Oncol.
N Engl J Med
N Engl J Med
G2032R
Белок ROS1 представляет собой рецепторную тирозинкиназу, тесно связанную с ALK/LTK и семейством инсулинрецепторных киназ. Хотя нормальные физиологические функции киназы ROS1 человека не были полностью изучены, в ряде случаев рака, включая глиобластому, немелкоклеточный рак легких, холангиокарциному, рак яичников, аденокарциному желудка, колоректальный рак, воспалительную миофибробластическую опухоль, ангиосаркому и эпителиоидную гемангиоэндотелиому, были зарегистрированы аномальная экспрессия и вариабельные конститутивно активирующие гибридные формы киназы ROS1 (Kurtis DD. et al. , 19 (15), 1). Гибридный белок FIG-ROS1 был первым гибридным белком ROS1, открытым в 2003 году в мультиформной глиобластоме человека (Charest A. et al. , , 58). Сообщалось о нескольких гибридных белках с киназой ROS1, включая TPM3, SDC4, SLC34A2, CD74, EZR и LRIG3, при раке легких у человека, что указывало на онкогенную роль киназы ROS1 при раке легких (Takeuchi K. et al. , , 378). Обследование передачи сигналов активированных тирозинкиназ у 23 пациентов с холангиокарциномой подтвердило наличие гибридной киназы FIG-ROS у 8,7% пациентов с холангиокарциномой (Gu TL. et al. , 6, e15640). Сообщалось о все новых и новых партнерах ROS1 по слиянию, включая KDELR2, CCDC6, MSN, LIMA1, CLTC, NFκB2, NCOR2, CEP85L, TMEM106B, HLA-A, MYO5A, PPFIBP1, ERC1, PWWP2A, CLIP1, ZCCHC8, SHTN1, TFG и YWHAE, при различных типах рака человека (Uquen A. et al. , June 3, предварительная электронная публикация). Совместно с киназой ROS1 они представляют собой перспективную молекулярную мишень для раков с аберрантной активностью киназы ROS. Ингибитор ALK/MET/ROS1 кризотиниб продемонстрировал заметную эффективность у пациентов с NSCLC с опухолями, являющимися положительными в отношении генетических аномалий ROS1 (Shaw AT. et al. , 372, 683). Как и ожидалось, у положительных в отношении перестройки ROS1 пациентов, получавших кризотиниб, в конечном итоге наблюдалось прогрессирование заболевания. Вторичная мутация ROS1 и обходная передача сигналов связаны с устойчивостью (Awad MM. et al. , 368, 2395). Является желательной разработка следующего поколения ингибиторов ROS1 для преодоления устойчивости.
[007]
2015
Cancer Discov
Тропомиозин-рецепторные тирозинкиназы (Trk) являются высокоаффинными рецепторами фактора роста нервов (NGF) семейства нейротрофинов (NT). Trk первоначально клонировали, как онкоген, слитый с геном тропомиозина во внеклеточном домене. Активирующие мутации, вызванные хромосомными перестройками, или мутации в семействе TRK были зарегистрированы во многих случаях рака (Vaishnavi A. et al. . , 5, 25). Поскольку Trk играют важную роль в болевом ощущении, а также росте клеток опухоли и поддержании передачи сигналов, ингибиторы Trk-рецепторных киназ могут принести пользу при обезболивании и лечении рака.
[008]
2005
2005
2014
1997
2005
2016
2016
2016
2012
2015
2014
2015
2016
2014
2016
2012
Nat. Rev. Drug Discov.
Cancer Cell
Cancer Res
Cell Reports
Science
Cancer Res.
Oncogene
35
Front Biosci
163
Семейство Янус-киназ (JAK) включает JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2, и они представляют собой цитопластические нерецепторные тирозинкиназы, необходимые для физиологической передачи сигналов цитокинов и факторов роста (Quintas-Cardama A. et al.  2011, 10(2), 127). Аберрантная регуляция путей JAK/STAT наблюдается во множестве патологических заболеваний человека, включая рак (JAK2) и ревматоидный артрит (JAK1, JAK3). У пациентов с MPN часто наблюдается мутация JAK2 с приобретением функции (JAK2V617F) (Levine RL. et al. , 7, 387). Мутация в домене JH2-псевдокиназы JAK2 приводит к конститутивной киназной активности. Клетки, содержащие мутацию JAK2V617F, приобретают независимую от цитокинов способность к росту и часто становятся опухолью, что является основной причиной разработки ингибиторов JAK для направленной терапии. Кроме того, гиперактивация JAK2/передатчиков сигнала и активаторов транскрипции 3 (JAK2/STAT3) ответственна за аномальную дифференциацию дендритных клеток, что приводит к аномальной дифференциации дендритных клеток и накоплению иммуносупрессивных миелоидных клеток при раке (Nefedova Y. et al. , 65, 9525). В сенесцентных опухолях с инактивированным Pten активация пути JAK2/STAT3 формирует иммуносупрессивное микроокружение опухоли, которое способствует росту и химиорезистентности опухоли (Toso A. et al. , 9, 75). У пациентов с лейкозом было обнаружено слияние гена JAK2 с генами TEL(ETV6) (TEL-JAK2) и PCM1 (Lacronique V. et al. , 278, 5341, 1309-12. Reiter A. et al. , 65, 7, 2662-7). Сообщалось, что сигнальный путь JAK/STAT3 аберрантно увеличивался в EGFR-мутантных клетках немелкоклеточного рака легких (NSCLC), устойчивых к ингибитору EGFR, и ингибирование JAK2 позволяло преодолеть приобретенную устойчивость к ингибиторам EGFR, что способствовало применению комбинированной терапии с применением ингибиторов JAK и EGFR для лечения EGFR-зависимого NSCLC (Gao SP. et al. Sci Signal. , 9 (421):ra33). Передача сигналов JAK/STAT3 способствует выявлению признаков рака в опухоли и ее окружении, включая пролиферацию, выживание, ангиогенез, метаболизм опухоли при подавлении противоопухолевого иммунитета (Buchert M. et al. , , , 939-951). Ингибирование цитокинзависимой активации пути JAK/STAT3 при помощи ингибиторов JAK также способно обеспечить возможность применения способов ортогонального лечения к другим онкогензависимым раковым клеткам, которые приобрели устойчивость к лекарственным средствам. Фокальную амплификацию гена JAK2 наблюдали при трижды негативном раке молочной железы (TNBCs) после химиотерапии в группе 9p24-амплифицированных опухолей, что указывало на ее роль в опухолегенности и химиорезистентности (Balko JM. et al. Sci Transl Med. , 8(334):ra53). Таким образом, фармакологическое ингибирование сигнального пути JAK2 может являться важной новой терапевтической стратегией для усиления противоопухолевой активности. c-Src представляет собой нерецепторную тирозинкиназу. Семейство Src (SFK) у людей состоит из восьми членов (Src, Fyn, Yes, Lyn, Lck, Hck, Blk и Fgr) с молекулярной массой в диапазоне 52-62 кДа. Src и члены его семейства дерегулируются во многих типах рака. Src является ключевым передатчиком нисходящего сигнала многих RTK, включая EGFR, HER2 и c-Met. Активация передачи сигналов Src приводила к формированию терапевтической устойчивости к направленной антиэндокринной терапии, терапии в отношении рецепторных тирозинкиназ, традиционной химиотерапии и радиационной терапии (Zhang S. et al. Trends Pharmacol Sci. , 33, 122). SRC может способствовать передаче сигналов от рецепторов фактора роста несколькими способами, включая участие в сигнальных путях, необходимых для синтеза ДНК, контроль обновления рецептора, перегруппировку актинового цитоскелета, миграцию, адгезию, инвазию, подвижность и выживание (Bromann PA. Oncogene 2004, 23, 7957-7968). Сообщалось о важной роли Src в процессах, связанных с развитием опухоли, таких как эпителиально-мезенхимальный переход (EMT), и развитии метастазирования посредством взаимодействия с сильнодействующим подавителем метастазирования, нижележащим регулируемым N-myc геном 1 (NDRG1), который регулирует миграцию раковых клеток в результате ингибирования активности Src (Liu W. et al. Oncotarget. , 6: 35522-35541). Хотя ингибиторы EGFR продемонстрировали значительные результаты у большинства пациентов с NSCLC со скрытными активирующими EGFR мутациями, подмножество пациентов с EGFR мутациями является устойчивым к EGFR-TKI. Сообщается, что устойчивость к ингибиторам EGFR включает активацию SRC и вызывает эпителиально-мезенхимальный переход (EMT). Первичная устойчивость к EGFR-TKI связана с более высоким уровнем экспрессии CRIPTO1. CRIPTO1 активирует SRC и ZEB1 для содействия EMT посредством понижающей регуляции микроРНК-205 (miR-205). Таким образом, параллельное нацеливание EGFR и SRC может преодолеть внутреннюю устойчивость к ингибитору EGFR у пациентов с CRIPTO1-положительным EGFR-мутантным NSCLC (Park, K-S. et al. J Clin Invest. , 124(7):3003-3015). Киназа фокальной адгезии (FAK) представляет собой нерецепторную тирозинкиназу с молекулярной массой 125 кДа и играет значительную роль в адгезии, выживании, подвижности, метастазировании, ангиогенезе, лимфоангиогенезе, функционировании раковых стволовых клеток, формировании микроокружения опухоли и эпителиально-мезенхимальном переходе (EMT) (Golubovskaya VM.  (Landmark Ed). 19: 687-706). Ядерная FAK контролирует транскрипцию гена, кодирующего хемокин, регуляторные T-клетки и уклонение от противоопухолевого иммунитета, а низкомолекулярный ингибитор FAK VS-4718 приводит к исчезновению регуляторных T-клеток и усиливает опосредованный CD8+ T-клетками противоопухолевый ответ (Serrels A. et al. Cells , , 160-173). Таким образом, ингибиторы FAK могут инициировать иммуноопосредованную регрессию опухоли. FAK гиперактивируется при протоковой аденокарциноме поджелудочной железы человека (PDAC) и коррелирует с иммуносупрессивным микроокружением опухоли (TME). Направленное воздействие на киназу фокальной адгезии придает раку поджелудочной железы восприимчивость к иммунотерапии, основанной на блокировке контрольных точек, путем преодоления фиброзного и иммуносупрессивного TME при PDAC в моделях мышей (Jiang H. et al. Nat Med. , Jul 4 [Предварительная электронная публикация]). Недавно сообщалось, что саракатиниб, селективный ингибитор SRC, способен повторно сенсибилизировать клеточные линии, устойчивые к ингибитору ALK, что демонстрирует терапевтическую роль ингибирования SRC в преодолении устойчивости к ингибитору ALK (Crystal AS. et al. Science 2014, 346, 1480-1486). Таким образом, ингибитор Src/FAK может играть важную роль в комбинированных схемах лечения при преодолении устойчивости к современным противораковым терапиям и при предотвращении метастатического рецидива, EMT и формирования устойчивости к противораковой терапии. Член семейства АМФ-активируемых протеинкиназ 5 (ARK5), также называемый NAUK1, является вышележащим регулятором AMPK, и он ограничивает синтез белка путем ингибирования сигнального пути рапамицина 1 (mTORC1). ARK5 поддерживает экспрессию комплексов дыхательных цепей митохондрий и дыхательную емкость для эффективного метаболизма глютамина. ARK5 экспрессируется на высоком уровне как в первичных NSCLC тканях, так и в клеточных линиях, то есть функционально связана с метастазированием NSCLC и является прогностическим фактором неблагоприятного прогноза для пациентов с NSCLC. ARK5 регулирует миграцию и инвазию клеток NSCLC и играет важную роль в пути mTOR (Shi L. et al. Br J Cancer. , 111(12):2316-27). Сообщалось, что ARK5 обеспечивает устойчивость к доксорубицину в HCC путем индуцирования EMT (Xu T. et al. Cancer Lett. , 377(2):140-8). Дерегулированная экспрессия онкобелка MYC наблюдается для многих опухолей человека. MYC способствует росту и пролиферации клеток и влияет на клеточный метаболизм. Ингибирование ARK5 приводит к значительному снижению уровней АТФ в клетках, экспрессирующих дерегулированный MYC, и продлевает выживание в моделях гепатоцеллюлярной карциномы мышей, управляемых MYC (Liu L. et al. Nature, , 483, 608-612). Таким образом, направленное воздействие на энергетический гомеостаз клеток ингибитором ARK5 представляет собой действенную терапевтическую стратегию устранения опухолевых клеток с дерегулированной экспрессией MYC.
[009]
2012
2003
2011
2014
2014
2015
Cancer Metastasis Rev.
PLoS One.
Nature Communications
J Clin Invest.
Oncogenesis
3
Pharmacological Research
100
Blood
+
+
+
+
Src представляет собой нерецепторную тирозинкиназу, которая дерегулируется при многих типах рака, и является ключевым передатчиком нисходящего сигнала многих RTK, включая EGFR, HER2 и c-Met. Активация передачи сигналов Src была связана с формированием терапевтической устойчивости к направленной антиэндокринной терапии, терапии в отношении рецепторных тирозинкиназ, традиционной химиотерапии и радиационной терапии (Zhang S. et al. Trends Pharmacol Sci. , 33, 122). Ингибитор Src может играть важную роль в комбинированных схемах лечения при преодолении устойчивости к современным противораковым терапиям и при предотвращении метастатического рецидива. Цитоплазматические тирозинкиназы (также известные, как нерецепторные тирозинкиназы) семейства Src (SFK) играют важную роль в передаче сигнала, вызванного большим количеством внеклеточных стимулов, включая факторы роста и интегрины. Повышенная активность SFK наблюдается в более, чем 80% случаев колоректального рака человека (CRC), и это связано с неблагоприятным клиническим исходом (Summy JM. et al. , 22, 337-358). Член Yes семейства SFK регулирует специфические онкогенные сигнальные пути, важные для прогрессирования рака толстой кишки, которые он не делит с c-Src (Scancier F. et al. , 6(2): e17237). Гибридные гены WASF2-FGR были обнаружены при плоскоклеточной карциноме легкого, серозной цистаденокарциноме яичников и кожной меланоме (Stransky N. et al.  2014, 5, 4846). Эстроген-рецептор-положительный (ER) рак молочной железы адаптируется к гормональной депривации и становится устойчивым к антиэстрогенной терапии. Мутации в ингибирующем SH2-домене члена LYN SRC семейства киназ (SFK) относятся к ER опухолям, которые сохраняли высокую пролиферативную активность после лечения с применением летрозола, ингибитора ароматазы. LYN повышающе регулировалась во многих клеточных линиях ER рака молочной железы, устойчивых к длительной эстрогенной депривации (Schwarz LJ. et al. , 124, 5490-5502). Таким образом, целенаправленное воздействие на LYN является рациональной стратегией преодоления ускользания от антиэстрогенов в подгруппе ER раков молочной железы. Сообщалось, что LYN сверхэкспрессировалась при кастрационно-резистентном раке предстательной железы (CRPC), усиливала транскрипционную активность AR и ускоряла прогрессирование CRPC, и диссоциация комплекса AR с молекулярным шапероном Hsp90, вызываемая направленным воздействием на киназу Lyn, приводит к его убиквитинированию и протеасомальному разрушению (Zardan A. et al. , , e115). Тирозинкиназа Lyn является потенциальной терапевтической мишенью для лечения CRPC. Киназа FYN семейства Src задействована в путях передачи сигналов в нервной системе, а также в развитии и активации T-лимфоцитов в нормальных физиологических условиях. Активация Fyn наблюдается при различных типах рака, включая меланому, глиобластому, плоскоклеточную карциному, рак предстательной железы и рак молочной железы (Elias D. et al. , , 250-254). Fyn повышающе регулировалась в клеточных линиях раков молочной железы, устойчивых к тамоксифену, и играет ключевую роль в механизме устойчивости. Периферические T-клеточные лимфомы (PTCL) представляют собой гетерогенную группу агрессивных неходжкинских лимфом с неблагоприятным прогнозом. Мутации, активирующие FYN, были обнаружены при PTCL, и они усиливали рост клеток, трансформированных путем экспрессии мутантных аллелей, активированных FYN. Ингибиторы киназы SRC могут играть важную роль при лечении PTCL (Couronne L. et al.  2013, 122, 811).
[010]
2003
2011
2014
EMBO J.
BMC Cancer
14
Blood
KRAS
KRAS
TP53
KRAS
Рецепторы домена дискоидина (DDR) активируются коллагеновыми матрицами и участвует во многих клеточных функциях, таких как пролиферация, дифференциация, адгезия, миграция и инвазия. DDR играет роль в прогрессировании рака путем регулирования взаимодействий клеток опухоли с окружающей их коллагеновой матрицей. DDR1 является мишенью для прямой транскрипции p53, и активация DDR1 связана с p53-зависимым повреждением ДНК. DDR1 активировал MAP-киназный каскад зависимым от Ras образом. Ингибирование функции DDR1 приводило к увеличению апоптоза клеток, содержащих p53 дикого типа, через зависимый от каспазы путь, вовлеченный в ответ на генотоксический стресс (Ongusaha PP. et al. , 22, 1289-1301). DDR идентифицировали, как одну из нескольких основных активированных тирозинкиназ, несущих соматические мутации при раке легкого (Hammerman PS. et al. Cancer Discov. , 1, 78-89), серозном или светлоклеточном раке эндометрия (Rudd ML. et al. , , 884), а также при остром миелоцитарном лейкозе (Tomasson MH. et al.  2008, 111:4797-4808). Распространенная аденокарцинома легкого, вызванная мутантным () гомологом вирусного онкогена саркомы крыс Кирстена, является трудноизлечимой из-за недостатка эффективных способов направленной терапии. Сопутствующее подавление передачи сигналов DDR1 и Notch индуцировало регрессию  в ксенотрансплантате легкого, полученном от пациентов с мутантным  (PDX), это указывает на то, что одновременное подавление передачи сигналов DDR1 и Notch может являться эффективным способом направленной терапии для пациентов с аденокарциномой легкого, вызванной мутантным  (Ambrogia C. et al. Nature Medicine, 2016, 22, 270-277).
[011]
Желательно получать соединения, которые обладают активностью в отношении ингибиторов киназ, провоцирующих заболевания, особенно соединений, которые обладают активностью в отношении множества киназ, включая активность в отношении множества генетически измененных киназ, для применения в качестве терапевтических агентов для лечения заболеваний. Также желательны новые соединения с полифармакологическими профилями для направленного воздействия на первичные онкогены и их приобретенные механизмы устойчивости, включая вторичные мутации, обходную передачу сигналов, EMT, стволовость раковых клеток и метастазирование.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[012]
Было показано, что соединения формулы I
,
I
[013]
1
2
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
где X, X, Z, Z, Z, Z, Z, Z, Z, M, R, R, R, R, R и R определены в настоящем документе, обладают активностью в отношении дикого типа и мутантных форм ALK (киназы анапластической лимфомы), дикого типа и мутантных форм ROS1 (ROS1 протоонкогена, кодирующего рецепторную тирозинкиназу), киназ семейства TRK (тропомиозин-рецепторных тирозинкиназ, TRKA/B/C), JAK2 семейства Янус-киназ и SRC (семейства c-Src протеин-тирозинкиназ (SFK)).
[014]
S
R
f
H
Одним из таких соединений является (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-он (также называемый в настоящем документе ʺсоединением 1ʺ), представленный формулой
,
[015]
было показано, что он является сильнодействующим низкомолекулярным мультитаргетным ингибитором киназ, проявляющим активность в отношении дикого типа и мутантных форм ALK (киназы анапластической лимфомы), дикого типа и мутантных форм ROS1 (ROS1 протоонкогена, кодирующего рецепторную тирозинкиназу), киназ семейства TRK (тропомиозин-рецепторных тирозинкиназ, TRKA/B/C), JAK2 семейства Янус-киназ и SRC (семейства c-Src протеин-тирозинкиназ (SFK)). Соединение 1 обладает свойствами, включая противоопухолевые свойства, которые фармакологически опосредованы ингибированием рецепторных и нерецепторных тирозинкиназ. Соединение 1 описано в международной заявке на патент № PCT/US2015/012597, которая включена в настоящий документ во всей полноте посредством ссылки.
[016]
В одном из аспектов настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I
,
I
[017]
где
[018]
4a
M представляет собой CR или N;
[019]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[020]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OCC алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[021]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[022]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[023]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[024]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[025]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[026]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[027]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[028]
или его фармацевтически приемлемой соли.
[029]
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I
,
I
[030]
где
[031]
4a
M представляет собой CR или N;
[032]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[033]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[034]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[035]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[036]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[037]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[038]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый из R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[039]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[040]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[041]
или его фармацевтически приемлемой соли.
[042]
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения рака у пациента, включающий;
[043]
i. идентификацию у пациента генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, и
[044]
ii. введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы I
,
I
[045]
где
[046]
4a
M представляет собой CR или N;
[047]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[048]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[049]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил,
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
-NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[050]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[051]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[052]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[053]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый из R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[054]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[055]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[056]
или его фармацевтически приемлемой соли.
[057]
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ идентификации пациента для лечения при помощи соединения формулы I
,
I
[058]
где
[059]
4a
M представляет собой CR или N;
[060]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[061]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[062]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил,
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
-NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[063]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[064]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[065]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[066]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[067]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[068]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[069]
или его фармацевтически приемлемой соли,
[070]
включающий диагностирование пациента с раком, опосредованным генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой.
[071]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[072]
где
[073]
4a
M представляет собой CR или N;
[074]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[075]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[076]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[077]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[078]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[079]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[080]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[081]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[082]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[083]
или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у пациента.
[084]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[085]
где
[086]
4a
M представляет собой CR или N;
[087]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[088]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)NH(CC алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[089]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[090]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[091]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[092]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[093]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[094]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -O- C-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[095]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[096]
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента.
[097]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[098]
где
[099]
4a
M представляет собой CR или N;
[0100]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[0101]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[0102]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[0103]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[0104]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[0105]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[0106]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[0107]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -O- C-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[0108]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[0109]
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения боли у пациента.
[0110]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[0111]
где
[0112]
4a
M представляет собой CR или N;
[0113]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[0114]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[0115]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[0116]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[0117]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[0118]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[0119]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[0120]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[0121]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[0122]
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы.
[0123]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[0124]
где
[0125]
4a
M представляет собой CR или N;
[0126]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[0127]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[0128]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил,
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
-NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[0129]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[0130]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[0131]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[0132]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[0133]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[0134]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[0135]
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, где пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака.
[0136]
В другом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы I
,
I
[0137]
где
[0138]
4a
M представляет собой CR или N;
[0139]
1
2
9
2
X и X независимо представляют собой S, S(O), S(O), O или N(R);
[0140]
1
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
R представляет собой C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, CC алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил, -NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), NHC(O)OC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), N(CC алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, -C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7-членный гетероциклоалкил;
[0141]
2
3
7
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, C-C арил, C(O)OR или C(O)NRR; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле и C-C ариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), -NHC(O)C-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)C-C алкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NHC-C алкил, -N(C-C алкил)C(O)NH, -N(C-C алкил)C(O)NHC-C алкил,
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
,
2
2
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
1
6
2
1
6
2
1
6
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
1
6
2
1
6
2
1
6
2
3
6
-NHC(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)C(O)N(C-C алкил), -NHC(O)OC-C алкил, N(CC алкил)C(O)OC-C алкил, -NHS(O)(C-C алкил), -NHS(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)(C-C алкил) -NHS(O)NH, NHS(O)NH, N(C-C алкил)S(O)NH, -N(C-C алкил)S(O)NH, -NHS(O)NH(C-C алкил), NHS(O)NH(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -NHS(O)N(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)NH(C-C алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(CC алкил), -N(C-C алкил)S(O)N(C-C алкил), COH, -C(O)OC-C алкил, C(O)NH, -C(O)NH(C-C алкил), -C(O)N(C-C алкил), -SC-C алкил, -S(O)C-C алкил, S(O)C-C алкил, -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)NH(C-C алкил), -S(O)N(C-C алкил), S(O)N(C-C алкил), -P(C-C алкил), -P(O)(C-C алкил), C-C циклоалкил или 3-7членный гетероциклоалкил;
[0142]
4
4a
5
1
6
1
6
1
6
1
6
2
3
каждый из R, R и R независимо представляет собой H, фтор-, хлор-, бром-, C-C алкил, -OH, -CN, -OC-C алкил, -NHC-C алкил, -N(C-C алкил) или -CF;
[0143]
6
1
6
1
6
1
6
2
1
6
1
6
2
2
2
1
6
2
1
6
1
6
2
R представляет собой H, C-C алкил или 3-7-членный гетероциклоалкил, где каждый из атомов водорода в C-C алкиле или 3-7-членном гетероциклоалкиле независимо необязательно заменен на галоген-, -OH, -CN, -OC-C алкил, NH, -NH(C-C алкил), N(C-C алкил), COH, COCC алкил, -CONH, -CONH(C-C алкил), CON(C-C алкил), циклоалкил или моноциклический гетероциклоалкил;
[0144]
7
8
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
каждый из R и R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или гетероарил;
[0145]
9
7
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил; где каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на дейтерий, галоген-, C-C алкил, C-C галогеналкил или -OR;
[0146]
1
2
3
4
5
6
7
10
10
1
6
1
6
2
1
6
3
каждый из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z независимо представляет собой N, NH или C(R), где каждый R независимо представляет собой H, дейтерий, галоген-, C-C алкил, -OC-C алкил, -OH, -NH, NH(C-C алкил), -NH(фенил), -NH(гетероарил), -CN или -CF, и
[0147]
1
2
3
4
5
6
7
при условии, что по меньшей мере один из Z, Z, Z, Z, Z, Z и Z представляет собой N или NH;
[0148]
или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, где пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака.
[0149]
S
R
f
H
В некоторых вариантах реализации аспектов, описанных выше, соединение представляет собой (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-он или его фармацевтически приемлемую соль.
[0150]
В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано тирозин- или серинтреонинкиназой, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FAK, ARK5 и их комбинаций. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано рецепторной тирозинкиназой. В некоторых вариантах реализации рецепторная тирозинкиназа выбрана из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB и TRKC. В некоторых вариантах реализации рецепторная тирозинкиназа выбрана из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB и TRKC. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано нерецепторной киназой. В некоторых вариантах реализации нерецепторная киназа представляет собой JAK2, FYN, LYN, YES, FGR, SRC, FAK или ARK5. В некоторых вариантах реализации нерецепторная киназа представляет собой JAK2, SRC, FAK или ARK5. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано нерецепторной тирозинкиназой. В некоторых вариантах реализации нерецепторная тирозинкиназа представляет собой JAK2, SRC или FAK. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано нерецепторной серинтреонинкиназой. В некоторых вариантах реализации нерецепторная серинтреонинкиназа представляет собой ARK5. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано протеин-тирозинкиназой. В некоторых вариантах реализации протеин-тирозинкиназа представляет собой TXK. В некоторых вариантах реализации заболевание опосредовано рецептором домена дискоидина. В некоторых вариантах реализации рецептор домена дискоидина представляет собой DDR1. В некоторых вариантах реализации заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, псориаза, ревматоидного артрита, истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии, язвенного колита, миелоидной метаплазии с миелофиброзом и боли.
[0151]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный ALK. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной ALK. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из NPM, EML4, TPR, TFG, ATIC, CLTC1, TPM4, MSN ALO17 и MYH9. В некоторых вариантах реализации гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном EML4. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок EML4-ALK. В некоторых вариантах реализации гибридный белок EML4-ALK представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из L1196M, G1202R, D1203R, L1152P/R, F1174C/L/V, C1156Y, I1171N, G1123S, S1206Y, G1269S/A и вставки 1151T.
[0152]
В некоторых вариантах реализации гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном NPM. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок NPM-ALK. В некоторых вариантах реализации гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном TPR. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок TPR-ALK. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TPR-ALK представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TPR-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TPR-ALK содержит точечную мутацию L1196M.
[0153]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный ALK. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной ALK. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный ALK, содержащей одну или более точечных мутаций. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный ALK, содержащей одну или более точечных мутаций, выбранных из группы, состоящей из R1050H, F1174C/I/L/S/V, F1245C/I/L/V, R1275L/Q, T1151M, M1166R, I1170N, I1170S, I1171N, I1183T, L1196M, A1200V, L1204F, L1240V, D1270G, Y1278S, R1192P, G1128A, G1286R и T1343I. В некоторых вариантах реализации точечная мутация представляет собой мутацию в F1174. В некоторых вариантах реализации точечная мутация представляет собой мутацию ALK в F1245. В некоторых вариантах реализации точечная мутация представляет собой мутацию ALK в R1275.
[0154]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный ROS1. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной ROS1. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из FIG, TPM3, SDC4, SLC34A2, CD74, EZR и LRIG3. В некоторых вариантах реализации гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном CD74. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок CD74-ROS1. В некоторых вариантах реализации гибридный белок CD74-ROS1 представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок CD74-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок CD74-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R. В некоторых вариантах реализации гибридный белок CD74-ROS1 содержит точечную мутацию L2026M. В некоторых вариантах реализации гибридный белок CD74-ROS1 содержит точечную мутацию D2033N. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SDC4-ROS1. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SDC4-ROS1 представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SDC4-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SDC4-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R. В некоторых вариантах реализации генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SLC34A2-ROS1. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SLC34A2-ROS1 представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R.
[0155]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный TRKA. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKA. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKA, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKA, и фрагмент белка, кодируемого геном TPM3. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKA представляет собой гибридный белок TPM3-TRKA. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TPM3-TRKA представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TPM3-TRKA содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0156]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKA, и фрагмент белка, кодируемого геном LMNA. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKA представляет собой гибридный белок LMNA-TRKA. В некоторых вариантах реализации гибридный белок LMNA-TRKA представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок LMNA-TRKA содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок LMNA-TRKA представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок LMNA-TRKA содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости, включая точечную мутацию G595R.
[0157]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный TRKB. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKB. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKB, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKB, и фрагмент белка, кодируемого геном QKI или геном TEL. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKB, и фрагмент белка, кодируемого геном QKI. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKB, и фрагмент белка, кодируемого геном TEL. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKB представляет собой гибридный белок QKI-TRKB или TEL-TRKB. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKB представляет собой гибридный белок TEL-TRKB. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKB представляет собой гибридный белок QKI-TRKB. В некоторых вариантах реализации гибридный белок QKI-TRKB или TEL-TRKB представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок QKI-TRKB представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TEL-TRKB представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок QKI-TRKB или TEL-TRKB содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок QKI-TRKB содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TEL-TRKB содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок TEL-TRKB содержит точечную мутацию G639R.
[0158]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный TRKC. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKC. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKC, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKC, и фрагмент белка, кодируемого геном ETV6. В некоторых вариантах реализации генетически измененная TRKC представляет собой гибридный белок ETV6-TRKC. В некоторых вариантах реализации гибридный белок ETV6-TRKC представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок ETV6-TRKC содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости. В некоторых вариантах реализации гибридный белок ETV6-TRKC содержит точечную мутацию G623R.
[0159]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный JAK1, JAK2 или JAK3. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной JAK2. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном JAK2, и фрагмент белка, который формирует суперспиральные взаимодействия, которые облегчают димеризацию или олигомеризацию белка. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном JAK2, и фрагмент белка, кодируемого геном TEL или PCM1. В некоторых вариантах реализации генетически измененная JAK2 представляет собой гибридный белок TEL-JAK2. В некоторых вариантах реализации генетически измененная JAK2 представляет собой гибридный белок PCM1-JAK2. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный точечной(ыми) мутацией(ями) JAK2. В некоторых вариантах реализации генетически измененная JAK2 содержит мутацию JAK2V617F.
[0160]
В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой боль. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой боль, опосредованную TRKA, TRKB или TRKC. В некоторых вариантах реализации боль опосредована TRKA. В некоторых вариантах реализации боль опосредована TRKB. В некоторых вариантах реализации боль опосредована TRKC. В некоторых вариантах реализации заболевание выбрано из группы, состоящей из псориаза, ревматоидного артрита, истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии, язвенного колита и миелоидной метаплазии с миелофиброзом. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, демонстрирующий обходную устойчивость.
[0161]
В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный FGR. В некоторых вариантах реализации заболевание или рак представляет собой рак, опосредованный генетически измененной FGR. В некоторых вариантах реализации гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном FGR, и фрагмент белка, кодируемого геном WASF2. В некоторых вариантах реализации генетически измененная FGR представляет собой гибридный белок WASF2-FGR. В некоторых вариантах реализации гибридный белок WASF2-FGR представляет собой белок дикого типа. В некоторых вариантах реализации гибридный белок WASF2-FGR содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0162]
В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из ALCL, NSCLC, нейробластомы, воспалительной миофибробластической опухоли, почечно-клеточной карциномы у взрослых, почечно-клеточной карциномы у детей, рака молочной железы, аденокарциномы толстой кишки, глиобластомы, мультиформной глиобластомы и анапластического рака щитовидной железы.
[0163]
В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, рака яичников, аденокарциномы желудка, колоректального рака, воспалительной миофибробластической опухоли, ангиосаркомы и эпителиоидной гемангиоэндотелиомы.
[0164]
В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, внутрипеченочной холангиокарциномы, колоректального рака, папиллярного рака щитовидной железы, шпицоидных новообразований, саркомы, астроцитомы, глиомы мозга с высокой дифференцировкой, секреторной карциномы молочной железы, аналога карциномы молочной железы, рака молочной железы, острого миелоцитарного лейкоза, врожденной мезобластической нефромы, врожденной фибросаркомы, Ph-подобной острого лимфобластного лейкоза, аденокарциномы толстой кишки, карциномы щитовидной железы, кожной меланомы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи и глиомы у детей.
[0165]
В некоторых вариантах реализации рак выбран из группы, состоящей из NSCLC, нейробластомы, рака молочной железы, рака толстой кишки и рака предстательной железы. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой NSCLC. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой нейробластому. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой колоректальный рак.
[0166]
В некоторых вариантах реализации пациенты ранее получали лечение лекарственным средством против рака. В некоторых вариантах реализации пациенты ранее получали лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака. В некоторых вариантах реализации устойчивость представляет собой первичную внутреннюю устойчивость. В некоторых вариантах реализации устойчивость представляет собой устойчивость, приобретенную от мутации(й). В некоторых вариантах реализации устойчивость представляет собой обходную устойчивость. В некоторых вариантах реализации устойчивость представляет собой устойчивость на основе EMT.
[0167]
Дополнительные варианты реализации, отличительные признаки и преимущества изобретения будут понятны из следующего подробного описания и посредством практической реализации изобретения. Соединения согласно настоящему изобретению можно описывать, как варианты реализации в любом из следующих пронумерованных пунктов. Понятно, что любой из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, можно применять в сочетании с любыми другими вариантами реализации, описанными в настоящем документе, в той степени, в которой варианты реализации не противоречат друг другу.
[0168]
S
R
f
H
1. Способ лечения заболевания у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли.
[0169]
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что заболевание опосредовано тирозин- или серинтреонинкиназой, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FYN, LYN, YES, FGR, FAK, ARK5 и их комбинаций; или ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FAK, ARK5 и их комбинаций.
[0170]
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что заболевание опосредовано рецепторной тирозинкиназой.
[0171]
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что рецепторная тирозинкиназа выбрана из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB и TRKC.
[0172]
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что заболевание опосредовано нерецепторной киназой.
[0173]
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что нерецепторная киназа представляет собой JAK2, FYN, LYN, YES, FGR, SRC, FAK или ARK5, включая нерецепторную тирозинкиназу JAK2, FYN, LYN, YES, FGR, SRC или FAK и нерецепторную серинтреонинкиназу ARK5.
[0174]
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из рака, псориаза, ревматоидного артрита, истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии, язвенного колита, миелоидной метаплазии с миелофиброзом и боли.
[0175]
8. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак.
[0176]
9. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный ALK.
[0177]
10. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной ALK.
[0178]
11. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из NPM, EML4, TPR, TFG, ATIC, CLTC1, TPM4, MSN ALO17 и MYH9.
[0179]
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном EML4.
[0180]
13. Способ по п. 10, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок EML4-ALK.
[0181]
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK представляет собой белок дикого типа.
[0182]
15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0183]
16. Способ по п. 13, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из L1196M, G1202R, D1203R, L1152P/R, F1174C/L/V, C1156Y, I1171N, G1123S, S1206Y, G1269S/A, и вставки 1151T.
[0184]
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой L1196M.
[0185]
18. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой G1202R.
[0186]
19. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой L1152P.
[0187]
20. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой F1174C.
[0188]
21. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой C1156Y.
[0189]
22. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой I1171N.
[0190]
23. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой G1269S.
[0191]
24. Способ по п. 16, отличающийся тем, что мутация представляет собой вставку 1151T.
[0192]
25. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном NPM.
[0193]
26. Способ по п. 10, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок NPM-ALK.
[0194]
27. Способ по п. 11, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном TPR.
[0195]
28. Способ по п. 10, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок TPR-ALK.
[0196]
29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK представляет собой белок дикого типа.
[0197]
30. Способ по п. 28, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0198]
31. Способ по п. 28, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK содержит точечную мутацию L1196M.
[0199]
32. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный ALK, содержащей одну или более точечных мутаций.
[0200]
33. Способ по любому из пп. 1-4 или 32, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный ALK, содержащей одну или более точечных мутаций, выбранных из группы, состоящей из R1050H, F1174C/I/L/S/V, F1245C/I/L/V, R1275L/Q, T1151M, M1166R, I1170N, I1170S, I1171N, I1183T, L1196M, A1200V, L1204F, L1240V, D1270G, Y1278S, R1192P, G1128A, G1286R и T1343I.
[0201]
34. Способ по любому из пп. 1-4, 32 или 33, отличающийся тем, что точечная мутация представляет собой мутацию ALK в F1174.
[0202]
35. Способ по любому из пп. 1-4, 32 или 33, отличающийся тем, что точечная мутация представляет собой мутацию ALK в F1245.
[0203]
36. Способ по любому из пп. 1-4, 32 или 33, отличающийся тем, что точечная мутация представляет собой мутацию ALK в R1275.
[0204]
37. Способ по любому из пп. 9-36, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из ALCL, NSCLC, нейробластомы, воспалительной миофибробластической опухоли, почечно-клеточной карциномы у взрослых, почечно-клеточной карциномы у детей, рака молочной железы, аденокарциномы толстой кишки, глиобластомы, мультиформной глиобластомы и анапластического рака щитовидной железы.
[0205]
38. Способ по любому из пп. 9-37, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0206]
39. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный ROS1.
[0207]
40. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной ROS1.
[0208]
41. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из FIG, TPM3, SDC4, SLC34A2, CD74, EZR и LRIG3.
[0209]
42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном CD74.
[0210]
43. Способ по п. 40, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок CD74-ROS1.
[0211]
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0212]
45. Способ по п. 43, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0213]
46. Способ по п. 43, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R, L2026M или D2033N.
[0214]
47. Способ по п. 40, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SDC4-ROS1.
[0215]
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0216]
49. Способ по п. 47, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0217]
50. Способ по п. 47, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R.
[0218]
51. Способ по п. 40, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SLC34A2-ROS1.
[0219]
52. Способ по п. 51, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0220]
53. Способ по п. 51, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0221]
54. Способ по п. 51, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R.
[0222]
55. Способ по любому из пп. 1-4, 7, 8 или 39-54, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, рака яичников, аденокарциномы желудка, колоректального рака, воспалительной миофибробластической опухоли, ангиосаркомы и эпителиоидной гемангиоэндотелиомы.
[0223]
56. Способ по любому из пп. 1-4, 7, 8 или 39-55, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0224]
57. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный TRKA.
[0225]
58. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKA.
[0226]
59. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном TRKA, и фрагмент белка, кодируемого геном TPM3 или геном LMNA.
[0227]
60. Способ по п. 58, отличающийся тем, что генетически измененная TRKA представляет собой гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA.
[0228]
61. Способ по п. 60, отличающийся тем, что гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA представляет собой белок дикого типа.
[0229]
62. Способ по п. 60, отличающийся тем, что гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости, включая гибридный белок LMNA-TRKA, содержащий точечную мутацию G595R.
[0230]
63. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный TRKB.
[0231]
64. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKB, включая QKI-TRKB или TEL-TRKB, включая TEL-TRKB, содержащий точечную мутацию G639R.
[0232]
65. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный TRKC.
[0233]
66. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной TRKC, включая гибридный белок ETV6-TRKC, включая генетически измененный гибридный белок ETV6-TRKC, включая гибридный белок ETV6-TRKC, содержащий точечную мутацию G326R.
[0234]
67. Способ по любому из пп. 1-4, 7, 8 или 57-66, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, внутрипеченочной холангиокарциномы, колоректального рака, папиллярного рака щитовидной железы, шпицоидных новообразований, саркомы, астроцитомы, глиомы мозга с высокой дифференцировкой, секреторной карциномы молочной железы, аналога карциномы молочной железы, рака молочной железы, острого миелоцитарного лейкоза, врожденной мезобластической нефромы, врожденной фибросаркомы, Ph-подобного острого лимфобластного лейкоза, аденокарциномы толстой кишки, карциномы щитовидной железы, кожной меланомы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи и глиомы у детей.
[0235]
68. Способ по любому из пп. 1-4, 7, 8 или 57-67, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0236]
69. Способ по любому из пп. 1-4, 7, 8 или 57-67, отличающийся тем, что рак представляет собой колоректальный рак.
[0237]
70. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный JAK1, JAK2 или JAK3.
[0238]
71. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный генетически измененной JAK2.
[0239]
72. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный гибридным белком, содержащим фрагмент белка, кодируемого геном JAK2, и фрагмент белка, кодируемого геном TEL или PCM1.
[0240]
73. Способ по п. 71, отличающийся тем, что генетически измененная JAK2 представляет собой гибридный белок TEL-JAK2.
[0241]
74. Способ по п. 71, отличающийся тем, что генетически измененная JAK2 представляет собой гибридный белок PCM1-JAK2.
[0242]
75. Способ по п. 71, отличающийся тем, что генетически измененная JAK2 содержит точечную мутацию V617F.
[0243]
76. Способ по любому из пп. 1-4, 7 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, опосредованный SRC.
[0244]
77. Способ по п. 76, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, внутрипеченочной холангиокарциномы, колоректального рака, папиллярного рака щитовидной железы, шпицоидных новообразований, саркомы, астроцитомы, глиомы мозга с высокой дифференцировкой, секреторной карциномы молочной железы, аналога карциномы молочной железы, рака молочной железы, острого миелоцитарного лейкоза, врожденной мезобластической нефромы, врожденной фибросаркомы, Ph-подобного острого лимфобластного лейкоза, аденокарциномы толстой кишки, карциномы щитовидной железы, кожной меланомы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи и глиомы у детей.
[0245]
78. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что заболевание представляет собой боль.
[0246]
79. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что заболевание представляет собой боль, опосредованную TRKA, TRKB или TRKC.
[0247]
80. Способ по п. 79, отличающийся тем, что боль опосредована TRKA.
[0248]
81. Способ по п. 79, отличающийся тем, что боль опосредована TRKB.
[0249]
82. Способ по п. 79, отличающийся тем, что боль опосредована TRKC.
[0250]
83. Способ по любому из пп. 1-3, 5 или 6 отличающийся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из псориаза, ревматоидного артрита, истинной полицитемии, эссенциальной тромбоцитемии, язвенного колита и миелоидной метаплазии с миелофиброзом.
[0251]
84. Способ по любому из пп. 1, 5, 6 или 8, отличающийся тем, что заболевание представляет собой рак, демонстрирующий обходную устойчивость.
[0252]
S
R
f
H
85. Способ лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли.
[0253]
86. Способ по п. 85, отличающийся тем, что генетически измененная тирозинкиназа выбрана из группы, состоящей из генетически измененной ALK, генетически измененной ROS1, генетически измененной TRK и генетически измененной JAK.
[0254]
87. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок, содержащий фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из NPM, EML4, TPR, TFG, ATIC, CLTC1, TPM4, MSN ALO17 и MYH9.
[0255]
88. Способ по п. 87, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном EML4.
[0256]
89. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок EML4-ALK.
[0257]
90. Способ по п. 89, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK представляет собой белок дикого типа.
[0258]
91. Способ по п. 89, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0259]
92. Способ по п. 89, отличающийся тем, что гибридный белок EML4-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из L1196M, G1202R, D1203R, L1152P/R, F1174C/L/V, C1156Y, I1171N, G1123S, S1206Y, G1269S/A и вставки 1151T.
[0260]
93. Способ по п. 87, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном NPM.
[0261]
94. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок NPM-ALK.
[0262]
95. Способ по п. 87, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ALK, и фрагмент белка, кодируемого геном TPR.
[0263]
96. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная ALK представляет собой гибридный белок TPR-ALK.
[0264]
97. Способ по п. 96, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK представляет собой белок дикого типа.
[0265]
98. Способ по п. 96, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0266]
99. Способ по п. 98, отличающийся тем, что гибридный белок TPR-ALK содержит точечную мутацию L1196M.
[0267]
100. Способ по любому из пп. 85-99, отличающийся тем, что рак демонстрирует механизм обходной устойчивости.
[0268]
101. Способ по п. 100, отличающийся тем, что механизм обходной устойчивости обусловлен SRC.
[0269]
102. Способ по любому из пп. 85-101, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из ALCL, NSCLC, нейробластомы, воспалительной миофибробластической опухоли, почечно-клеточной карциномы у взрослых, почечно-клеточной карциномы у детей, рака молочной железы, аденокарциномы толстой кишки, глиобластомы, мультиформной глиобластомы и анапластического рака щитовидной железы.
[0270]
103. Способ по любому из пп. 85-102, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0271]
104. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок, содержащий фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном, выбранным из группы, состоящей из FIG, TPM3, SDC4, SLC34A2, CD74, EZR и LRIG3.
[0272]
105. Способ по п. 104, отличающийся тем, что гибридный белок содержит фрагмент белка, кодируемого геном ROS1, и фрагмент белка, кодируемого геном CD74.
[0273]
106. Способ по п. 104, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок CD74-ROS1.
[0274]
107. Способ по п. 106, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0275]
108. Способ по п. 106, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0276]
109. Способ по п. 106, отличающийся тем, что гибридный белок CD74-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R, L2026M или D2033N.
[0277]
110. Способ по п. 105, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SDC4-ROS1.
[0278]
111. Способ по п. 110, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0279]
112. Способ по п. 110, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0280]
113. Способ по п. 110, отличающийся тем, что гибридный белок SDC4-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R.
[0281]
114. Способ по п. 105, отличающийся тем, что генетически измененная ROS1 представляет собой гибридный белок SLC34A2-ROS1.
[0282]
115. Способ по п. 114, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 представляет собой белок дикого типа.
[0283]
116. Способ по п. 114, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0284]
117. Способ по п. 114, отличающийся тем, что гибридный белок SLC34A2-ROS1 содержит точечную мутацию G2032R.
[0285]
118. Способ по любому из пп. 85, 86 или 104-117, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, рака яичников, аденокарциномы желудка, колоректального рака, воспалительной миофибробластической опухоли, ангиосаркомы и эпителиоидной гемангиоэндотелиомы.
[0286]
119. Способ по любому из пп. 85, 86 или 104-118, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0287]
120. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная TRK представляет собой гибридный белок, содержащий фрагмент белка, кодируемого геном TRKA, и фрагмент белка, кодируемого геном TPM3 или геном LMNA.
[0288]
121. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная TRK представляет собой гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA.
[0289]
122. Способ по п. 121, отличающийся тем, что гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA представляет собой белок дикого типа.
[0290]
123. Способ по п. 121, отличающийся тем, что гибридный белок TPM3-TRKA или LMNA-TRKA содержит по меньшей мере одну мутацию устойчивости.
[0291]
124. Способ по любому из пп. 86, 87 или 120-123, отличающийся тем, что рак выбран из группы, состоящей из глиобластомы, мультиформной глиобластомы, NSCLC, холангиокарциномы, внутрипеченочной холангиокарциномы, колоректального рака, папиллярного рака щитовидной железы, шпицоидных новообразований, саркомы, астроцитомы, глиомы мозга с высокой дифференцировкой, секреторной карциномы молочной железы, аналога карциномы молочной железы, рака молочной железы, острого миелоцитарного лейкоза, врожденной мезобластической нефромы, врожденной фибросаркомы, Ph-подобного острого лимфобластного лейкоза, аденокарциномы толстой кишки, карциномы щитовидной железы, кожной меланомы, плоскоклеточной карциномы головы и шеи и глиомы у детей.
[0292]
125. Способ по любому из пп. 85, 86 или 120-123, отличающийся тем, что рак представляет собой NSCLC.
[0293]
126. Способ по любому из пп. 79, 80 или 120-123, отличающийся тем, что рак представляет собой колоректальный рак.
[0294]
127. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная JAK представляет собой гибридный белок, содержащий фрагмент белка, кодируемого геном JAK2, и фрагмент белка, кодируемого геном TEL или PCM1.
[0295]
128. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная JAK представляет собой гибридный белок TEL-JAK2.
[0296]
129. Способ по п. 86, отличающийся тем, что генетически измененная JAK представляет собой гибридный белок PCM1-JAK2.
[0297]
130. Способ лечения рака у пациента, включающий;
[0298]
i. идентификацию у пациента генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, и
[0299]
S
R
f
H
ii. введение пациенту терапевтически эффективного количества (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли.
[0300]
131. Способ по п. 130, отличающийся тем, что стадия идентификации включает проведение с образцом, полученным у пациента, испытания, выбранного из группы, состоящей из FISH, ИГХ, ПЦР и секвенирования генов.
[0301]
S
R
f
H
132. Способ идентификации пациента для лечения при помощи (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли, включающий диагностирование пациента с раком, опосредованным генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой.
[0302]
133. Способ по п. 132, отличающийся тем, что диагностирование включает проведение с образцом, полученным у пациента, биологического испытания или биологического исследования, выбранного из группы, состоящей из FISH, ИГХ, ПЦР и секвенирования генов.
[0303]
134. Способ по любому из пп. 1-133, отличающийся тем, что пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака.
[0304]
135. Способ по любому из пп. 1-134, отличающийся тем, что пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака.
[0305]
136. Способ по п. 129, отличающийся тем, что устойчивость представляет собой приобретенную устойчивость.
[0306]
137. Способ по п. 129, отличающийся тем, что устойчивость представляет собой обходную устойчивость.
[0307]
S
R
f
H
138. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у пациента.
[0308]
S
R
f
H
139. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента.
[0309]
S
R
f
H
140. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения боли у пациента.
[0310]
S
R
f
H
141. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы.
[0311]
S
R
f
H
142. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, где пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака.
[0312]
S
R
f
H
143. Применение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она или его фармацевтически приемлемой соли для лечения рака у пациента, у которого ранее наблюдали экспрессию генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, где пациент ранее получал лечение лекарственным средством против рака, и рак развил устойчивость к лекарственному средству против рака.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0313]
На ФИГ. 1 представлено влияние соединения 1 на апоптоз клеток Karpas-299. На ФИГ. 1A представлен апоптоз клеток Karpas-299 после инкубации в различных концентрациях соединения 1 в течение 48 часов; на ФИГ. 1B представлены клетки Karpas-299, которые собирали, лизировали и анализировали путем ДСН-ПААГ-электрофореза и иммуноблоттинга с применением антител к ПАРП и актину.
[0314]
На ФИГ. 2 представлено влияние соединения 1 на заживление ран в клетках HCC78 и HT-1080.
[0315]
На ФИГ. 3 представлены гели, демонстрирующие, что соединение 1 понижающе регулирует экспрессию EGFR. На ФИГ. 3A представлены результаты после 4 часов воздействия соединения 1 при 0 нМ, 30 нМ, 100 нМ, 300 нМ и 1000 нМ; на ФИГ. 3A представлены результаты после 24 часов воздействия соединения 1 при 0 нМ, 30 нМ, 100 нМ, 300 нМ и 1000 нМ.
[0316]
На ФИГ. 4 представлены гели, демонстрирующие, что соединение 1 понижающе регулирует экспрессию CD44 по сравнению с таким же экспериментом с применением кризотиниба, который не демонстрирует понижающую регуляцию экспрессии CD44. На ФИГ. 4A представлены результаты после воздействия соединения 1 при 0 нМ, 30 нМ, 100 нМ, 300 нМ и 1000 нМ; на ФИГ. 4A представлены результаты после воздействия кризотиниба при 0 нМ, 30 нМ, 100 нМ, 300 нМ и 1000 нМ.
[0317]
in vivo
На ФИГ. 5 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели Karpas-299  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (▪) 50 мг/кг.
[0318]
in vivo
На ФИГ. 6 представлена стабильность массы тела животного в модели Karpas-299  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 50 мг/кг.
[0319]
in vivo
На ФИГ. 7 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели NIH3T3 EML4-ALK ДТ  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (▪) 50 мг/кг.
[0320]
in vivo
На ФИГ. 8 представлена стабильность массы тела животного в модели NIH3T3 EML4-ALK ДТ после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 50 мг/кг.
[0321]
in vivo
На ФИГ. 9 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели NIH3T3 SDC4-ROS1 ДТ  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 50 мг/кг.
[0322]
in vivo
На ФИГ. 10 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели KM12  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0323]
in vivo
На ФИГ. 11 представлена стабильность массы тела животного в модели KM12  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0324]
in vivo
На ФИГ. 12 представлено ингибирование фосфорилирования NPM-ALK соединением 1 в модели Karpas-299 .
[0325]
in vivo
На ФИГ. 13 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели KM12  при различных дозах, (○) контроль, () 1 мг/кг, (●) 3 мг/кг, () 15 мг/кг.
[0326]
in vivo
На ФИГ. 14 представлена стабильность массы тела животного в модели KM12  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 1 мг/кг, (●) 3 мг/кг, () 15 мг/кг.
[0327]
in vivo
На ФИГ. 15 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели Ba/F3 EML4-ALK ДТ  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0328]
in vivo
На ФИГ. 16 представлена стабильность массы тела животного в модели Ba/F3 EML4-ALK ДТ  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0329]
in vivo
На ФИГ. 17 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели Ba/F3 EML4-ALK G1202R  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0330]
in vivo
На ФИГ. 18 представлена стабильность массы тела животного в модели Ba/F3 EML4-ALK G1202R  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0331]
in vivo
На ФИГ. 19 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели Ba/F3 CD74-ROS1 ДТ  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0332]
in vivo
На ФИГ. 20 представлена стабильность массы тела животного в модели Ba/F3 CD74-ROS1 ДТ  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0333]
in vivo
На ФИГ. 21 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R  при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0334]
in vivo
На ФИГ. 22 представлена стабильность массы тела животного в модели Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 15 мг/кг, (●) 75 мг/кг.
[0335]
in vivo
На ФИГ. 23 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели NIH3T3 LMNA-TRKA ДТ  при различных дозах, (○) контроль, () 3 мг/кг, (●) 15 мг/кг.
[0336]
in vivo
На ФИГ. 24 представлена стабильность массы тела животного в модели NIH3T3 LMNA-TRKA ДТ  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 3 мг/кг, (●) 15 мг/кг.
[0337]
in vivo
На ФИГ. 25 представлено влияние соединения 1 на рост опухоли в модели NIH3T3 LMNA-TRKA G595R  при различных дозах, (○) контроль, () 3 мг/кг, (●) 15 мг/кг, () 60 мг/кг.
[0338]
in vivo
На ФИГ. 26 представлена стабильность массы тела животного в модели NIH3T3 LMNA-TRKA G595R  после введения соединения 1 при различных дозах, (○) контроль, () 3 мг/кг, (●) 15 мг/кг, () 60 мг/кг.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0339]
Перед дальнейшим описанием настоящего изобретения следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными вариантами реализации, поскольку они, разумеется, могут изменяться. Также следует понимать, что терминология, применяемая в настоящем документе, предназначается только для описания конкретных вариантов реализации и не является ограничивающей, поскольку объем настоящего изобретения ограничивается только пунктами прилагаемой формулы изобретения.
[0340]
Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в настоящем документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области, к которой относится настоящее изобретение. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, упоминаемые в настоящем документе, включены во всей полноте посредством ссылки. Если определение, представленное в данном разделе, противоречит или иным образом не соответствует определению, представленному в патенте, заявке или другой публикации, которая включена в настоящий документ посредством ссылки, определение, представленное в данном разделе, превалирует над определением, включенным в настоящий документ посредством ссылки.
[0341]
В настоящем документе и в пунктах прилагаемой формулы изобретения форма единственного числа включает форму множественного числа, если из контекста явно не следует иное. Также следует отметить, что пункты формулы изобретения можно варьировать для исключения любых дополнительных элементов. Таким образом, данное утверждение предназначено для использования в качестве предшествующей основы для применения таких исключающих терминов, как ʺисключительноʺ, ʺтолькоʺ и т.п., в связи с перечислением элементов пунктов формулы изобретения, или применения ʺотрицательногоʺ ограничения.
[0342]
Термины ʺвключающийʺ, ʺсодержащийʺ и ʺсоставляющийʺ, применяемые в настоящем описании, применяются в их открытом неограничивающем значении.
[0343]
Для обеспечения более краткого описания некоторые из количественных выражений, приведенных в настоящем документе, не сопровождаются термином ʺпримерноʺ. Следует понимать, что независимо от того, используется ли термин ʺпримерноʺ явно или нет, каждая количественная величина, приведенная в настоящем документе, предназначена для обозначения фактической заданной величины и также охватывает значения, приближенные к такой заданной величине, которые разумно подразумеваются специалистом в данной области, включая эквиваленты и приближения, обусловленные условиями проведения экспериментов и/или измерений такой заданной величины. Всякий раз, когда выход указывается в процентах, такой выход относится к массе продукта, для которого указывается выход, по отношению к максимальному количеству продукта, которое можно получить в конкретных стехиометрических условиях. Концентрации, указанные в процентах, относятся к массовым отношениям, если не указано иное.
[0344]
Если не указано иное, способы и техники согласно настоящим вариантам реализации обычно выполняют в соответствии с общепринятыми способами, хорошо известными в данной области и описанными в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании. Смотри, например, Loudon, Organic Chemistry, Fourth Edition, New York: Oxford University Press, 2002, pp. 360-361, 1084-1085; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001.
[0345]
Определения
[0346]
1
12
1
10
1
9
1
8
1
7
1
6
1
4
1
8
1
7
1
6
1
4
н
н
втор
трет
Термин ʺалкилʺ, применяемый в настоящем описании, включает цепь атомов углерода, которая необязательно разветвлена и содержит от 1 до 20 атомов углерода. Также следует понимать, что в некоторых вариантах реализации алкил может иметь преимущественно ограниченную длину, включая C-C, C-C, C-C, C-C, C-C, C-C и C-C, В качестве примера такие алкильные группы с ограниченной длиной, включая C-C, C-C, C-C и C-C и т.п., могут упоминаться, как ʺнизшие алкилыʺ. Иллюстративные алкильные группы включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, -пропил, изопропил, -бутил, изобутил, -бутил, -бутил, пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, гексил, гептил, октил и т.п. Алкил может являться замещенным или незамещенным. Типичные заместители включают циклоалкил, арил, гетероарил, гетероалициклические группы, гидрокси, алкокси, арилокси, меркапто, алкилтио, арилтио, циано, галоген-, карбонил, оксо, (=O), тиокарбонил, O-карбамил, N-карбамил, O-тиокарбамил, N-тиокарбамил, C-амидо, N-амидо, C-карбокси, O-карбокси, нитри и амино или являются такими, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Следует понимать, что ʺалкилʺ можно объединять с другими группами, такими как группы, описанные выше, с получением функционализированного алкила. Например, комбинация ʺалкильнойʺ группы, описанной в настоящем документе, с ʺкарбоксильнойʺ группой может упоминаться, как ʺкарбоксиалкильнаяʺ группа. Другие неограничивающие примеры включают гидроксиалкил, аминоалкил и т.п.
[0347]
2
12
2
9
2
8
2
7
2
6
2
4
2
8
2
7
2
6
2
4
Термин ʺалкенилʺ, применяемый в настоящем описании, включает цепь атомов углерода, которая необязательно разветвлена, содержит от 2 до 20 атомов углерода и также содержит по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод (то есть C=C). Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации алкенил может иметь преимущественно ограниченную длину, включая C-C, C-C, C-C, C-C, C-C и C-C. В качестве примера такие алкенильные группы с ограниченной длиной, включая C-C, C-C, C-C и C-C, могут упоминаться, как низшие алкенилы. Алкенил может являться незамещенным или замещенным, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Иллюстративные алкенильные группы включают, но не ограничиваются ими, этенил, 1-пропенил, 2- пропенил, 1-, 2- или 3-бутенил и т.п.
[0348]
2
12
2
9
2
8
2
7
2
6
2
4
2
8
2
7
2
6
2
4
Термин ʺалкинилʺ, применяемый в настоящем описании, включает цепь атомов углерода, которая необязательно разветвлена, содержит от 2 до 20 атомов углерода и также содержит по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод (то есть C≡C). Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации алкинил может иметь преимущественно ограниченную длину, включая C-C, C-C, C-C, C-C, C-C и C-C. В качестве примера такие алкинильные группы с ограниченной длиной, включая C-C, C-C, C-C и C-C, могут упоминаться, как низшие алкинилы. Алкинил может являться незамещенным или замещенным, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Иллюстративные алкинильные группы включают, но не ограничиваются ими, этинил, 1-пропинил, 2-пропинил, 1-, 2- или 3-бутинил и т.п.
[0349]
p
6
10
Термин ʺарилʺ, применяемый в настоящем описании, относится к моноциклическим или конденсированным полициклическим группам, содержащим от 6 до 12 атомов углерода и не содержащим гетероатомов, которые имеют полностью сопряженную -электронную систему. Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации арил может иметь преимущественно ограниченный размер, такой как C-C арил. Иллюстративные арильные группы включают, но не ограничиваются ими, фенил, нафталенил и антраценил. Арильная группа может являться незамещенной или замещенной, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе.
[0350]
p
H
3
13
3
9
3
6
4
6
Термин ʺциклоалкилʺ, применяемый в настоящем описании, относится к 3-15-членной моноциклической кольцевой группе, не содержащей гетероатомов, включая 5-членную/6-членную или 6-членную/6-членную конценсированную бициклическую кольцевую систему, не содержащую гетероатомов, или конденсированную полициклическую кольцевую систему (термин ʺконденсированнаяʺ кольцевая система означает, что каждое из колец в системе имеет общую пару атомов углерода с другим кольцом в системе), где одно или более колец могут содержать одну или более двойных связей, но циклоалкил не содержит полностью сопряженной -электронной системы. Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации циклоалкил может иметь преимущественно ограниченный размер, такой как C-C, C-C, C-C или C-C. Циклоалкил может являться незамещенным или замещенным, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Иллюстративные циклоалкильные группы включают, но не ограничиваются ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклопентадиенил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, адамантил, норборнил, норборненил, 9-флуорен-9-ил и т.п. Иллюстративные примеры циклоалкильных групп, представленные на графических изображениях, включают следующие группы в форме надлежащим образом связанных фрагментов:
[0351]
Термин “гетероциклоалкил”, применяемый в настоящем описании, относится к моноциклической или конденсированной кольцевой группе, содержащей в кольце(ах) от 3 до 12 кольцевых атомов, в которой по меньшей мере один кольцевой атом является гетероатомом, таким как азот, кислород или сера, а остальные кольцевые атомы являются атомами углерода. Гетероциклоалкил необязательно содержит 1, 2, 3 или 4 гетероатома. Гетероциклоалкил также может содержать одну или более двойных связей, включая двойные связи с азотом (например, C=N или N=N), но не содержит полностью сопряженной p-электронной системы. Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации гетероциклоалкил может иметь преимущественно ограниченный размер, например, 3-7-членный гетероциклоалкил, 5-7-членный гетероциклоалкил и т.п. Гетероциклоалкил может являться незамещенным или замещенным, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Иллюстративные гетероциклоалкильные группы включают, но не ограничиваются ими, оксиранил, тианарил, азетидинил, оксетанил, тетрагидрофуранил, пирролидинил, тетрагидропиранил, пиперидинил, 1,4-диоксанил, морфолинил, 1,4-дитианил, пиперазинил, оксепанил, 3,4-дигидро-2H-пиранил, 5,6-дигидро-2H-пиранил, 2H-пиранил, 1,2,3,4-тетрагидропиридинил и т.п. Иллюстративные примеры гетероциклоалкильных групп, представленные на графических изображениях, включают следующие группы в форме надлежащим образом связанных фрагментов:
[0352]
p
Термин ʺгетероарилʺ, применяемый в настоящем описании, относится к моноциклической или конденсированной кольцевой группе из 5-12 кольцевых атомов, которая содержит один, два, три или четыре кольцевых гетероатома, выбранных из азота, кислорода и серы, и в которой остальные кольцевые атомы являются атомами углерода, и которая также содержит полностью сопряженную -электронную систему. Следует понимать, что в некоторых вариантах реализации гетероарил может иметь преимущественно ограниченный размер, например, 3-7-членный гетероарил, 5-7-членный гетероарил и т.п. Гетероарил может являться незамещенным или замещенным, как описано для алкила, или, как описано в различных вариантах реализации, представленных в настоящем документе. Иллюстративные гетероарильные группы включают, но не ограничиваются ими, пирролил, фуранил, тиофенил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, пиразолил, пиридинил, пиримидинил, хинолинил, изохинолинил, пуринил, тетразолил, триазинил, пиразинил, тетразинил, хиназолинил, хиноксалинил, тиенил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, триазолил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензтиазолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, карбазолоил и т.п. Иллюстративные примеры гетероарильных групп, представленные на графических изображениях, включают следующие группы в форме надлежащим образом связанных фрагментов:
[0353]
Термин ʺгидроксиʺ или ʺгидроксилʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -OH.
[0354]
Термин ʺалкоксиʺ, применяемый в настоящем описании, относится как к группе -O-(алкил), так и к группе -O-(незамещенный циклоалкил). Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, метокси, этокси, пропокси, бутокси, циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси, циклогексилокси и т.п.
[0355]
Термин ʺарилоксиʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -O-арил или группе -O-гетероарил. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, фенокси, пиридинилокси, фуранилокси, тиенилокси, пиримидинилокси, пиразинилокси и т.п.
[0356]
Термин ʺмеркаптоʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -SH.
[0357]
Термин ʺалкилтиоʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -S-(алкил) или группе -S-(незамещенный циклоалкил). Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, метилтио, этилтио, пропилтио, бутилтио, циклопропилтио, циклобутилтио, циклопентилтио, циклогексилтио и т.п.
[0358]
Термин ʺарилтиоʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -S-арил или группе -S-гетероарил. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, фенилтио, пиридинилтио, фуранилтио, тиенилтио, пиримидинилтио и т.п.
[0359]
Термин ʺгало-ʺ или ʺгалоген-ʺ, применяемый в настоящем описании, относится к атому фтора, хлора, брома или иода.
[0360]
Термин ʺцианоʺ, применяемый в настоящем описании, относится к группе -CN.
[0361]
Термин ʺоксоʺ представляет собой карбонильный кислород. Например, циклопентил, замещенный оксо, представляет собой циклопентанон.
[0362]
Термин ʺзамещенныйʺ означает, что указанная группа или фрагмент содержит один или несколько заместителей. Термин ʺнезамещенныйʺ означает, что указанная группа не содержит заместителей. При применении термина ʺзамещенныйʺ для описания структурной системы подразумевается замещение в любом положении в системе, разрешенном по валентности. В некоторых вариантах реализации ʺзамещенныйʺ означает, что указанная группа или фрагмент содержит один, два или три заместителя. В других вариантах реализации ʺзамещенныйʺ означает, что указанная группа или фрагмент содержит один или два заместителя. В других вариантах реализации ʺзамещенныйʺ означает, что указанная группа или фрагмент содержит один заместитель.
[0363]
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
1
6
2
6
2
6
3
6
6
10
Термин ʺнеобязательныйʺ или ʺнеобязательноʺ, применяемый в настоящем описании, означает, что описанное далее событие или случай может произойти или не произойти, и, что описание включает ситуации, когда событие или случай произошел, и ситуации, когда событие или случай не произошел. Например, ʺгде каждый из атомов водорода в C-C алкиле, C-C алкениле, C-C алкиниле, C-C циклоалкиле, 3-7-членном гетероциклоалкиле, C-C ариле или моно- или бициклическом гетероариле независимо необязательно заменен на C-C алкилʺ означает, что алкил может, но не обязательно, присутствовать в любом из C-C алкила, C-C алкенила, C-C алкинила, C-C циклоалкила, 3-7-членного гетероциклоалкила, C-C арила или моно- или бициклического гетероарила путем замены атома водорода на алкильную группу, и описание включает ситуации, когда C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил замещены алкильной группой, и ситуации, когда C-C алкил, C-C алкенил, C-C алкинил, C-C циклоалкил, 3-7-членный гетероциклоалкил, C-C арил или моно- или бициклический гетероарил не замещены алкильной группой.
[0364]
Термин ʺнезависимоʺ, применяемый в настоящем описании, означает, что описанное далее событие или случай следует рассматривать отдельно относительно других аналогичных событий или случаев. Например, в случае, когда несколько эквивалентных водородных групп необязательно заменены на другую группу, описанную в случае, применение термина ʺнезависимо необязательноʺ означает, что каждый из атомов водорода в группе может заменяться на другую группу, где группы, заменяющие каждый из атомов водорода, могут являться одинаковыми или могут различаться. Или, например, при наличии множества групп, каждую из которых можно выбирать из набора возможных вариантов, применение термина ʺнезависимоʺ означает, что каждую из групп можно выбирать из набора возможных вариантов отдельно от любой другой группы, и группы, выбираемые в данном случае, могут являться одинаковыми или могут различаться.
[0365]
Термин ʺфармацевтически приемлемая сольʺ, применяемый в настоящем описании, относится к тем солям, которые содержат противоионы, которые можно применять в лекарственных средства. Смотри, например, S.M. Berge. et al. ʺPharmaceutical Salts,ʺ J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые являются фармакологически эффективными и подходят для контактирования с тканями субъектов, не сопровождающегося чрезмерной токсичностью, раздражением или аллергической реакцией. Соединение, описанное в настоящем документе, может содержать достаточно кислотную группу, достаточно основную группу, оба типа функциональных групп или более, чем одну из групп каждого типа, и соответственно может взаимодействовать с рядом неорганических или органических оснований и неорганических или органических кислот с образованием фармацевтически приемлемой соли. Такие соли включают:
[0366]
п
(1) соли присоединения кислоты, которые можно получать путем взаимодействия свободного основания исходного соединения с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, перхлорная кислота и т.п., или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, (D)- или (L)-яблочная кислота, малеиновая кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, -толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, малоновая кислота и т.п.; или
[0367]
(2) соли, образованные, когда кислотный протон, присутствующий в исходном соединении, заменяется на ион металла, например, ион щелочного металла, ион щелочноземельного металла или ион алюминия; или координируется с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, триметамин, N-метилглюкамин и т.п.
[0368]
Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны специалистам в данной области, и любую такую фармацевтически приемлемую соль можно рассматривать в связи с вариантами реализации, описанными в настоящем документе. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, моногидрофосфаты, дигидрофосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, хлориды, бромиды, иодиды, ацетаты, пропионаты, деканоаты, каприлаты, акрилаты, формиаты, изобутираты, капроаты, гептаноаты, пропиолаты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, субераты, себакаты, фумараты, малеаты, бутин-1,4-диоаты, гексин-1,6-диоаты, бензоаты, хлорбензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты, гидроксибензоаты, метоксибензоаты, фталаты, сульфонаты, метилсульфонаты, пропилсульфонаты, безилаты, ксиленсульфонаты, нафталин-1-сульфонаты, нафталин-2-сульфонаты, фенилацетаты, фенилпропионаты, фенилбутираты, цитраты, лактаты, γ-гидроксибутираты, гликоляты, тартраты и манделаты. Списки другие подходящих фармацевтически приемлемых солей приведены в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985.
[0369]
п
Для соединения формулы I, которое содержит основный атом азоты, фармацевтически приемлемую соль можно получать при помощи любого подходящего способа, доступного в данной области, например, обработки свободного основания неорганической кислотой, такой как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, азотная кислота, борная кислота, фосфорная кислота и т.п., или органической кислотой, такой как уксусная кислота, фенилуксусная кислота, пропионовая кислота, стеариновая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, изэтионовая кислота, янтарная кислота, валериановая кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, олеиновая кислота, пальмитиновая кислота, лауриновая кислота, пиранозидиловая кислота, такая как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфа-гидроксикислота, такая как миндальная кислота, лимонная кислота или винная кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная кислота, 2-ацетоксибензойная кислота, нафтойная кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как лаурилсульфоновая кислота, -толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, или любой совместимой смесью кислот, таких как кислоты, приведенные в настоящем документе в качестве примера, и любыми другими кислотами и их смесями, которые полагаются эквивалентными или приемлемыми заменителями в соответствии со знаниями обычного специалиста в данной области.
[0370]
in vivo
Настоящее изобретение также относится к фармацевтически приемлемым пролекарствам соединений формулы I и способам лечения с применением таких фармацевтически приемлемых пролекарств. Термин ʺпролекарствоʺ обозначает соединение-предшественник назначенного соединения, которое после введения субъекту приводит к образованию соединения  посредством химического или физиологического процесса, такого как сольволиз или ферментативное расщепление, или под воздействием физиологических условий (например, пролекарство под воздействием физиологического pH превращается в соединение формулы I). ʺФармацевтически приемлемое пролекарствоʺ представляет собой пролекарство, которое является нетоксичным, биологически переносимым или биологически подходящим для введения субъекту. Иллюстративные способы отбора и получения подходящих производных пролекраств описаны, например, в ʺDesign of Prodrugsʺ, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.
[0371]
J. Med. Chem
40
J. Pharm. Sci
86 (7)
Drug Dev. Res
34
Adv. Drug Res
13
Настоящее изобретение также относится к фармацевтически активным метаболитам соединений формулы I и применению таких метаболитов в способах согласно настоящему изобретению. Термин ʺфармацевтически активный метаболитʺ обозначает фармацевтически активный продукт метаболизма соединения формулы I или его соли в организме. Пролекарства и активные метаболиты соединения можно определять при помощи обычных способов, известных или доступных в данной области. Смотри, например, Bertolini et al., . 1997, , 2011-2016; Shan et al., . 1997, , 765-767; Bagshawe, . 1995, , 220-230; Bodor, . 1984, , 255-331; Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); и Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991).
[0372]
Любые формулы, представленные в настоящем документе, предназначены для представления структурной формулы соединения, а также некоторых вариаций или форм. Например, формула, представленная в настоящем документе, включает рацемическую форму, один или два энантиомера, диастереомера или геометрических изомера или их смесь. Кроме того, любая формула, представленная в настоящем документе, также относится к гидрату, сольвату или полиморфу указанного соединения и к их смеси.
[0373]
2007
2010
2002
Nature
Cancer Cell
Leukemia Research
Термин ʺгенетически измененныйʺ, применяемый в настоящем описании, относится к перманентному изменению в последовательности ДНК, образующей ген, которое может приводить к изменению в последовательности белка, кодируемого геном. Ген, который согласно настоящему описанию является ʺгенетически измененнымʺ, может иметь изменения участков разного размера в последовательности ДНК и/или в последовательности белка, кодируемого последовательностью ДНК; например, изменение в одном нуклеотиде (также известное, как одиночный нуклеотидный полиморфизм, SNP или точечная мутация), множественный нуклеотидный полиморфизм (MNP), изменение в большом сегменте хромосомы, который содержит множество генов, таком как гибридный ген, и т.п. Примеры гибридных генов включают, но не ограничиваются ими, гены, которые являются результатом инверсии сегмента хромосомы, при которой часть хромосомной ДНК, кодирующая один или более генов, перестраивается, что приводит к слиянию двух генов, которые обычно не взаимодействуют в последовательности ДНК, например, EML4-ALK (смотри, например, Soda M. et al. , , 448, 561-567), гены, которые являются результатом делеции в последовательности ДНК (ʺинтерстициальной делецииʺ), при которой часть последовательности ДНК хромосомы удаляется, что приводит к слиянию двух генов, которые обычно не взаимодействуют в последовательности ДНК, например, TMPRSS2-ERG (смотри, например, Yu J. et al. , , 17, 5, 443-54), или гены, которые являются результатом транслокации, при которой часть хромосомной ДНК сплайсируется и вставляется в ту же или другую хромосому, что приводит к слиянию двух генов, которые обычно не взаимодействуют в последовательности ДНК, например, BCR-ABL (смотри, например, Advani A.S. et al. , , 26, 8, 713-720). Специалисту в данной области понятно, что слияние генов можно наблюдать во множестве вариантов в зависимости от индивидуума, у которого происходит слияние генов, и каждый из таких вариантов подразумевается способами, описанными в настоящем документе.
[0374]
ʺГенетически измененныйʺ ген или белок, кодируемый таким геном, может являться наследственной мутацией, которая наследуется от родителя и иногда называется гаметной мутацией, или ʺгенетически измененныйʺ ген или белок, кодируемый таким геном, может являться приобретенной (или соматической) мутацией, которая возникает в какой-то момент в течение жизни человека. В некоторых случаях ʺгенетически измененныйʺ ген можно описать, как впервые обнаруженную (новую) мутацию, и она может являться наследственной или соматической. Также понятно, что термин ʺгенетически измененныйʺ может относиться к ситуации, при которой у пациента одновременно наблюдается более, чем одно, изменение в последовательности ДНК, описанное в настоящем документе, например, SNP (или точечная мутация) и транслокация. Такие ситуации могут возникать в результате, но не являются следствием исключительно ее, так называемой ʺприобретенной устойчивостиʺ, при которой у пациента, который получал лечение при помощи ингибитора киназы, может развиваться мутация в последовательности ДНК, которая снижает эффективность лечения. Неограничивающие примеры таких мутаций приобретенной устойчивости включают точечные мутации L1196M, G1202R, L1152P, F1174C, C1156Y, I1171N, G1269S и вставку 1151T, которые наблюдаются в гибридном гене EML4-ALK.
[0375]
2007
2002
Cancer Drug Resistance
Annu. Rev. Med.
Термин ʺвнутренняя устойчивостьʺ, применяемый в настоящем описании, относится к ранее существовавшей устойчивости клеток заболевания, в частности, раковых клеток, к лечению лекарственными средствами, в частности, к химиотерапии. Понятно, внутренняя устойчивость может приводить к устойчивости клеток к одному лекарственному средству, небольшой группе структурно похожих лекарственных средств или нескольким лекарственным средствам с различной химической структурой (так называемой ʺмножественной лекарственной устойчивостиʺ или ʺМЛРʺ) (Monti E. . Molecular Determinants of Intrinsic Multidrug Resistance in Cancer Cells and Tumors In B. Teicher (Ed.),  (pp. 241-260). Totowa, New Jersey: Humana Press Inc.). Понятно, внутренняя устойчивость может являться результатом одного или более факторов, связанных с хозяином и/или набором генов клеток. Такие факторы включают, но не ограничиваются ими, иммуномодуляцию; фармакогенетические факторы, такие как невозможность достичь оптимальных уровней лекарственных средств в сыворотке из-за измененного ADME или низкой толерантности к побочным эффектам, вызываемым лекарственными средствами; ограниченный доступ лекарственного средства к месту опухоли; и сигналы микроокружения. Указанные факторы, связанные с набором генов клеток, включают, но не ограничиваются ими, измененную экспрессию транспортера лекарственного средства; качественные изменения мишени(ей) лекарственного средства; количественные изменения мишени(ей) лекарственного средства; изменения в внутриклеточной переработке/метаболизме лекарственного средства; изменения в репарации ДНК и изменения в апоптотических путях (Gottesman M.M., , , 53, 516-527).
[0376]
Термин ʺтерапевтически эффективное количествоʺ, применяемый в настоящем описании, относится к такому количеству активного соединения или фармацевтического агента, которое вызывает биологический или лекарственный ответ у пациента, который включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, подвергаемого лечению. В одном из аспектов терапевтически эффективное количество представляет собой количество, которое может лечить или облегчать заболевание или симптомы. Конкретная терапевтически эффективная доза для конкретного пациента зависит от ряда факторов, включая расстройство, подвергаемое лечению, и тяжесть заболевания; активность конкретного применяемого соединения; конкретную применяемую композицию; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион пациента: время введения, способ введения и скорость выведения конкретного применяемого соединения; продолжительность лечения; лекарственные средства, применяемые в комбинации или параллельно с конкретным применяемым соединением; и другие факторы. Примерная доза находится в диапазоне от примерно 0,1 мг до 1 г в день, или примерно от 1 мг до 50 мг в день, или примерно от 50 до 250 мг в день, или примерно от 250 мг до 1 г в день. Суммарную дозу можно представлять в форме единичной стандартной дозы или нескольких стандартных доз (например, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день).
[0377]
Термин ʺзаболеваниеʺ, применяемый в настоящем описании, включает, но не ограничивается ими, рак, боль, псориаз, ревматоидный артрит, истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию, язвенный колит и миелоидную метаплазию с миелофиброзом.
[0378]
+
Термин ʺракʺ, применяемый в настоящем описании, включает, но не ограничивается ими, ALCL, NSCLC, нейробластому, воспалительную миофибробластическую опухоль, почечно-клеточную карциному у взрослых, почечно-клеточную карциному у детей, рак молочной железы, ER рак молочной железы, аденокарциному толстой кишки, глиобластому, мультиформную глиобластому, анапластический рак щитовидной железы, холангиокарциному, рак яичников, аденокарциному желудка, колоректальный рак, воспалительную миофибробластическую опухоль, ангиосаркому, эпителиоидную гемангиоэндотелиому, внутрипеченочную холангиокарциному, папиллярный рак щитовидной железы, шпицоидные новообразования, саркому, астроцитому, глиому мозга с высокой дифференцировкой, секреторную карциному молочной железы, аналог карциномы молочной железы, острый миелоцитарный лейкоз, врожденную мезобластическую нефрому, врожденную фибросаркому, Ph-подобный острый лимфобластный лейкоз, карциному щитовидной железы, кожную меланому, плоскоклеточную карциному головы и шеи, глиому ХМЛ у детей, рак предстательной железы, плоскоклеточную карциному легкого, серозную цистаденокарциному яичников, кожную меланому, кастрационно-резистентный рак предстательной железы, ходжкинскую лимфому и серозный или светлоклеточный рак эндометрия.
[0379]
Варианты реализации
[0380]
В некоторых вариантах реализации способы, описанные в настоящем документе, относятся к лечению заболевания, включающему введение пациенту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения, обладающего активностью в отношении по меньшей мере одной тирозинкиназы, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRK, JAK и SRC. В некоторых вариантах реализации соединение обладает активностью в отношении по меньшей мере одной тирозин- или серинтреонинкиназы, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FAK и ARK5. В некоторых вариантах реализации соединение обладает активностью в отношении по меньшей мере двух тирозин- или серинтреонинкиназ, выбранных из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FAK и ARK5. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере одна или по меньшей мере две тирозин- или серинтреонинкиназы являются генетически измененными. В некоторых вариантах реализации соединение представляет собой соединение формулы I
,
I
[0381]
1
2
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
где X, X, Z, Z, Z, Z, Z, Z, Z, M, R, R, R, R, R и R являются такими, как описано в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль.
[0382]
Понятно, что заболевание может являться любым из ряда заболеваний, связанных с тирозинкиназами, описанными в настоящем документе, в отношении которых проявляют активность соединения формулы I. Например, способы, описанные в настоящем документе, можно применять для лечения заболеваний, таких как рак, боль, псориаз, ревматоидный артрит, истинная полицитемия, эссенциальная тромбоцитемия, язвенный колит, миелоидная метаплазия с миелофиброзом и т.п. Понятно, что заболевание может являться любым заболеванием, связанным с активностью тирозинкиназы, описанной в настоящем документе. Также понятно, что заболевание может являться любым заболеванием, связанным с генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC, FAK и ARK5. Также понятно, что заболевание может являться любым заболеванием, связанным с повышающей регуляцией JAK2, SRC, FAK или ARK5. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с тирозинкиназой. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с серинтреонинкиназой. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с генетически измененной тирозинкиназой. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с генетически измененной серинтреонинкиназой. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с повышающей регуляцией JAK2, SRC, FAK или ARK5. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с генетически измененной тирозинкиназой, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC, JAK2, SRC и FAK. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак, опосредованный или связанный с генетически измененной серинтреонинкиназой, такой как ARK5.
[0383]
Понятно, что рак может представлять собой рак, опосредованный или связанный с генетически измененной тирозинкиназой, выбранной из группы, состоящей из ALK, ROS1, TRKA, TRKB, TRKC и JAK2, или с повышающей регуляцией JAK2, SRC, FAK или ARK5, включая, но не ограничиваясь ими, ALCL, NSCLC, нейробластому, воспалительную миофибробластическую опухоль, почечно-клеточную карциному у взрослых, почечно-клеточную карциному у детей, рак молочной железы, аденокарциному толстой кишки, глиобластому, мультиформную глиобластому, анапластический рак щитовидной железы, холангиокарциному, рак яичников, аденокарциному желудка, колоректальный рак, воспалительную миофибробластическую опухоль, ангиосаркому, эпителиоидную гемангиоэндотелиому, внутрипеченочную холангиокарциному, папиллярный рак щитовидной железы, шпицоидные новообразования, саркому, астроцитому, глиому мозга с высокой дифференцировкой, секреторную карциному молочной железы, аналог карциномы молочной железы, острый миелоцитарный лейкоз, врожденную мезобластическую нефрому, врожденную фибросаркому, Ph-подобный острый лимфобластный лейкоз, карциному щитовидной железы, кожную меланому, плоскоклеточную карциному головы и шеи, глиому ХМЛ у детей и рак предстательной железы. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой NSCLC. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой колоректальный рак. В некоторых вариантах реализации рак представляет собой нейробластому.
[0384]
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы лечения заболевания у пациента, который получал предварительное лечение одним или более терапевтическими агентами. В некоторых вариантах реализации пациент ранее получал лечение одним или более химиотерапевтическими агентами. В других вариантах реализации пациент ранее получал лечение одним или более химиотерапевтическими агентами, и у него развилась приобретенная устойчивость к лечению. В других вариантах реализации пациент ранее получал лечение одним или более химиотерапевтическими агентами, и у него развилась обходная устойчивость к лечению. В других вариантах реализации пациент ранее получал лечение одним или более химиотерапевтическими агентами, и у него развилась обходная устойчивость к лечению, регулируемая SRC или JAK2.
[0385]
Другие химиотерапевтические агенты, при помощи которых пациент мог получать лечение перед лечением одним или более соединениями, описанными в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, ингибиторы киназ, адренокортикоиды и кортикостероиды, алкилирующие агенты, пептидные и пептидомиметические ингибиторы передачи сигналов, антиандрогены, антиэстрогены, андрогены, акламицин и производные акламицина, эстрогены, антиметаболиты, соединения платины, аманитины, растительные алкалоиды, митомицины, дискодермолиды, ингибиторы микротрубочек, эпотилоны, воспалительные и провоспалительные агенты, аналоги пурина, аналоги пиримидина, камптотецины и доластатины. В некоторых вариантах реализации химиотерапевтический агент, получаемый пациентом перед лечением одним или более соединениями, описанными в настоящем документе, может являться одним или более из афатиниба, акситиниба, алектиниба, бозутиниба, бригатиниба, кабозантиниба, церитиниба, кризотиниба, дабрефениба, дазатиниба, эрлотиниба, эверолима, гефитиниба, ибрутиниба, иматиниба, лапатиниба, ленватиниба, нилотиниба, нинтеданиба, палбоциклиба, пазопаниба, понатиниба, регорафениба, руксолитиниба, сиролимуса, сорафениба, сунитиниба, тофацитиниба, темсиролимуса, траметиниба, вандетаниба, вемурафениба, метотрексата, бусульфана, карбоплатина, хлорамбуцила, цисплатина, тамоксифена, таксола, паклитаксела, доцетаксела, цитозина арабинозида, циклофосфамида, дауномицина, ризоксина, преднизона, гидроксимочевины, тенипозида, винкристина, винбластина, эрибулина, камптотецина, иринотекана, гелданамицина, эстрамустина и нокодазола. В некоторых вариантах реализации в способах, описанных в настоящем документе, представлено лечение пациента, который ранее получал лечение ингибитором киназы, выбранным из группы, состоящей из афатиниба, алектиниба, акситиниба, бозутиниба, бригатиниба, кабозантиниба, церитиниба, кризотиниба, дабрефениба, дазатиниба, эрлотиниба, эверолима, гефитиниба, ибрутиниба, иматиниба, лапатиниба, ленватиниба, нилотиниба, нинтеданиба, палбоциклиба, пазопаниба, понатиниба, регорафениба, руксолитиниба, сиролимуса, сорафениба, сунитиниба, тофацитиниба, темсиролимуса, траметиниба, вандетаниба и вемурафениба. В некоторых вариантах реализации пациент ранее получал лечение кризотинибом.
[0386] Фармацевтические композиции
[0387]
В целях лечения фармацевтические композиции, содержащие соединения, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество представляет собой вещество, которое является нетоксичным и биологически подходящим для введения субъекту. Такие вспомогательные вещества облегчают введение соединений, описанных в настоящем документе, и являются совместимыми с активным ингредиентом. Примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают стабилизаторы, смазывающие вещества, поверхностно-активные вещества, разбавители, антиоксиданты, связывающие вещества, красители, наполнители, эмульгаторы и модификаторы вкуса. В предпочтительных вариантах реализации фармацевтические композиции согласно изобретению представляют собой стерильные композиции. Фармацевтические композиции можно получать с применением способов получения, известных или доступных специалистам в данной области.
[0388]
Изобретение также охватывает стерильные композиции, включая композиции, которые соответствуют национальным или местным нормам, которые регулируют такие композиции.
[0389]
Фармацевтические композиции и соединения, описанные в настоящем документе, можно получать в форме растворов, эмульсий, суспензий или дисперсий в подходящих фармацевтических растворителях или веществах-носителях, в форме пилюль, таблеток, пастилок, суппозиториев, порошков в пакетиках саше, драже, гранул, порошков, порошков для разведения или капсул, содержащих также твердые вещества-носители, в соответствии с общепринятыми способами, известными в области получения различных лекарственных форм. Фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить подходящим путем доставки, таким как пероральный, парентеральный, ректальный, назальный, местный или глазной путь или путем ингаляции. Предпочтительно композиции получают для внутривенного или перорального введения.
[0390]
Для перорального введения соединения согласно изобретению можно представлять в твердой форме, такой как таблетка или капсула, или в форме раствора, эмульсии или суспензии. Для получения пероральной композиции соединения согласно изобретению можно готовить таким образом, чтобы они формировали дозу, например, от примерно 0,1 мг до 1 г в день, или от примерно 1 мг до 50 мг в день, или от примерно 50 до 250 мг в день, или от примерно 250 мг до 1 г в день. Пероральные таблетки могут содержать активный(е) ингредиент(ы), смешанные с совместимыми фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, такими как разбавители, дезинтеграторы, связывающие вещества, смазывающие вещества, подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты. Подходящие инертные наполнители включают карбонаты натрия и кальция, фосфаты натрия и кальция, лактозу, крахмал, сахар, глюкозу, метилцеллюлозу, стеарат магния, маннит, сорбит и т.п. Примеры жидких пероральных вспомогательных веществ включают этанол, глицерин, воду и т.п. Крахмал, поливинилпирролидон (ПВП), крахмалгликолят натрия, микрокристаллическая целлюлоза и альгиновая кислота являются типичными дезинтеграторами. Связывающие вещества могут включать крахмал и желатин. Смазывающее вещество, если присутствует, может представлять собой стеарат магния, стеариновую кислоту или тальк. При желании таблетки можно покрывать материалом, таким как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, для задержки всасывания в желудочно-кишечном тракте или можно покрывать кишечнорастворимым покрытием.
[0391]
Капсулы для перорального введения включают твердые и мягкие желатиновые капсулы. Для получения твердых желатиновых капсул активный(е) ингредиент(ы) можно смешивать с твердым, полутвердым или жидким разбавителем. Мягкие желатиновые капсулы можно получать путем смешивания активного ингредиента с водой, маслом, таким как арахисовое масло или оливковое масло, жидким парафином, смесью моно- и диглицеридов короткоцепочечных жирных кислот, полиэтиленгликолем 400 или пропиленгликолем.
[0392]
п
Жидкости для перорального введения могут находиться в форме суспензий, растворов, эмульсий или сиропов или их можно лиофилизировать или представлять в форме сухого продукта для разведения водой или другим подходящим носителем перед применением. Такие жидкие композиции необязательно могут содержать: фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как суспендирующие агенты (например, сорбит, метилцеллюлозу, альгинат натрия, желатин, гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гель стеарата алюминия и т.п.); неводные носители, например, масло (например, миндальное масло или фракционированное кокосовое масло), пропиленгликоль, этиловый спирт или воду; консерванты (например, метил- или пропил--гидроксибензоатили сорбиновую кислоту); увлажнители, такие как лецитин; и, при желании, ароматизаторы или красители.
[0393]
Для парентерального применения, включая внутривенные, внутримышечные, внутрибрюшинные, интраназальные или подкожные пути, агенты согласно изобретению можно представлять в форме стерильных водных растворов или суспензий, буферизированных до подходящего pH и изотоничности, или в парентерально приемлемом масле. Подходящие водные носители включают раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Такие формы можно представлять в виде единичной стандартной дозы, такой как ампулы или одноразовые устройства для инъекций, в виде мультидозовых лекарственных форм, таких как флаконы, из которых можно отбирать соответствующую дозу, или в твердой форме или в виде предконцентрата, которые можно применять для получения состава для инъекции. Иллюстративные дозы для инфузии составляют от примерно 1 до 1000 мкг/кг/минута агента, смешанного с фармацевтическим веществом-носителем, вводимые в течение периода времени от нескольких минут до нескольких дней.
[0394]
Для назального, ингаляционного или перорального введения фармацевтические композиции согласно изобретению можно вводить с применением, например, состава в форме спрея, также содержащего подходящее вещество-носитель. Композиции согласно изобретению можно готовить для ректального введения в форме суппозитория.
[0395]
Для местного применения соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно получают в форме кремов, мазей или аналогичного носителя, подходящего для местного введения. Для местного введения соединения согласно изобретению можно смешивать с фармацевтическим веществом-носителем в концентрации от примерно 0,1% до примерно 10% лекарственного средства в расчете на массу носителя. В другом способе введения агентов согласно изобретению можно применять состав в форме пластыря для осуществления чрескожной доставки.
[0396]
2
3
11
13
14
15
18
17
31
32
35
18
36
125
14
2
3
2
in vivo
Любые формулы, приведенные в настоящем документе, включают немеченые формы соединений, а также формы с радиоизотопными метками. Соединения с радиоизотопными метками имеют структуры, представленные формулами, приведенными в настоящем документе, за исключением того, что один или более атомы заменены на атомы, имеющие выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые можно вводить в соединения согласно изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора, хлора и иода, такие как H, H, C, C, C, N, O, O, P, P, S, F, Cl и I, соответственно. Такие соединения с радиоизотопными метками подходят для применения в исследованиях метаболизма (предпочтительно с применением C), исследованиях кинетики реакций (например, с применением H или H), способах детектирования или визуализации [таких как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОЭКТ)], включая исследования распределения лекарственного средства или субстрата в тканях, или для радиоизотопного лечения пациентов. Кроме того, замена на более тяжелые изотопы, такие как дейтерий (то есть H), может обеспечивать определенные терапевтические преимущества, являющиеся результатом большей метаболической стабильности, например, увеличенный период полувыведения  или сниженную требуемую дозировку. Соединения с радиоизотопными метками согласно настоящему изобретению и их пролекарства можно получать путем проведения способов, представленных в схемах или в примерах и способах получения, описанных ниже, путем замены реагента без радиоизотопной метки на легкодоступный реагент с радиоизотопной меткой.
[0397] Комбинации лекарственных средств
[0398]
Соединения, описанные в настоящем документе, можно применять в фармацевтических композициях или способах в комбинации с одним или более дополнительными активными ингредиентами для лечения заболеваний или расстройств, описанных в настоящем документе. Дополнительные активные ингредиенты включают другие терапевтические средства или агенты, которые смягчают неблагоприятное влияние терапии на предполагаемые мишени заболеваний. Такие комбинации могут служить для увеличения эффективности, облегчения других симптомов заболевания, уменьшения одного или более побочных эффектов или снижения требуемой дозы соединения согласно изобретению. Дополнительные активные ингредиенты можно вводить в виде фармацевтической композиции, отдельной от соединения согласно настоящему изобретению, или можно объединять с соединением согласно настоящему изобретению в одной фармацевтической композиции. Дополнительные активные ингредиенты можно вводить одновременно с соединением согласно настоящему изобретению, а также до него или после.
[0399]
Агенты композиции, включая дополнительные активные ингредиенты, представляют собой агенты, которые известны или признаны эффективными при лечении заболеваний и расстройств, описанных в настоящем документе, включая агенты, активные в отношении других мишеней, связанных с заболеванием. Например, композиции и составы согласно изобретению, а также способы лечения могут дополнительно содержать другие лекарственные средства или фармацевтические средства, например, другие активные агенты, подходящие для лечения или облегчения заболеваний или связанных с ними симптомов или состояний.
[0400]
Другие химиотерапевтические агенты, подходящие для применения в комбинации в способах, описанных в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, ингибиторы киназ, адренокортикоиды и кортикостероиды, алкилирующие агенты, пептидные и пептидомиметические ингибиторы передачи сигналов, антиандрогены, антиэстрогены, андрогены, акламицин и производные акламицина, эстрогены, антиметаболиты, соединения платины, аманитины, растительные алкалоиды, митомицины, дискодермолиды, ингибиторы микротрубочек, эпотилоны, воспалительные и провоспалительные агенты, аналоги пурина, аналоги пиримидина, камптотецины и доластатины. В некоторых вариантах реализации химиотерапевтические агенты, подходящие для комбинированного лечения в способах, описанных в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, один или более из афатиниба, алектиниба, акситиниба, бозутиниба, бригатиниба, кабозантиниба, церитиниба, кризотиниба, дабрефениба, дазатиниба, эрлотиниба, эверолима, гефитиниба, ибрутиниба, иматиниба, лапатиниба, ленватиниба, нилотиниба, нинтеданиба, палбоциклиба, пазопаниба, понатиниба, регорафениба, руксолитиниба, сиролимуса, сорафениба, сунитиниба, тофацитиниба, темсиролимуса, траметиниба, вандетаниба, вемурафениба, метотрексата, бусульфана, карбоплатина, хлорамбуцила, цисплатина, тамоксифена, таксола, паклитаксела, доцетаксела, цитозина арабинозида, циклофосфамида, дауномицина, ризоксина, преднизона, гидроксимочевины, тенипозида, винкристина, винбластина, эрибулина, камптотецина, иринотекана, гелданамицина, эстрамустина и нокодазола. Химиотерапевтические агенты, подходящие для комбинированного лечения в способах, описанных в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, один или более ингибиторы киназ, выбранные из группы, состоящей из афатиниба, алектиниба, акситиниба, бозутиниба, бригатиниба, кабозантиниба, церитиниба, кризотиниба, дабрефениба, дазатиниба, эрлотиниба, эверолима, гефитиниба, ибрутиниба, иматиниба, лапатиниба, ленватиниба, нилотиниба, нинтеданиба, палбоциклиба, пазопаниба, понатиниба, регорафениба, руксолитиниба, сиролимуса, сорафениба, сунитиниба, тофацитиниба, темсиролимуса, траметиниба, вандетаниба и вемурафениба. В некоторых вариантах реализации пациент ранее получал лечение кризотинибом. Агенты, применяемые в комбинации, подходящие для болезненных состояний, включают противовоспалительные средства, такие как НПВС. Фармацевтические композиции согласно изобретению могут дополнительно содержать один или более таких активных агентов, и способы лечения могут дополнительно включать введение эффективного количества одного или более таких активных агентов.
[0401] Диагностические испытания
[0402]
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы лечения заболевания у пациента, ранее идентифицированного, как пациент, имеющий генетически измененную тирозин- или серинтреонинкиназу, например, гибридный ген. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы лечения рака у пациента, ранее идентифицированного, как пациент, имеющий генетически измененную тирозин- или серинтреонинкиназу, например, гибридный ген. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложены способы лечения заболевания у пациента, включающие (i) идентификацию у пациента генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы, и (ii) введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения, подходящего для лечения такого заболевания.
[0403]
in situ
Понятно, что диагностирование или идентификацию пациента, имеющего генетически измененную тирозин- или серинтреонинкиназу, можно проводить при помощи любого количества диагностических испытаний, известных специалисту в данной области. Например, такие диагностические испытания включают, но не ограничиваются ими, флуоресцентную гибридизацию  (FISH), полимеразную цепную реакцию (ПЦР), иммуногистохимию (ИГХ), полногеномное секвенирование, секвенирование нового поколения и т.п. Также понятно, что любые способы, известные в данной области и применимые для диагностирования пациента или идентификации пациента в связи с настоящим изобретением, включают преобразование биологического образца из одного состояния вещества в другое путем прямой модификации, синтеза или путем прямого нековалентного соединения с получением модифицированного образца, который можно применять для определения наличия или отсутствия у субъекта генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназы. В некоторых вариантах реализации термины ʺдиагностированиеʺ или ʺидентификацияʺ в отношении болезненного состояния пациента означают применение диагностического испытания, такого как FISH, ПЦР или ИГХ, на биологическом образце, полученном от пациента.
[0404]
Понятно, что FISH представляет собой испытание, которое ʺотображаетʺ генетический материал в клетках пациента. Указанное испытание можно применять для визуализации конкретных генов или фрагментов генов. FISH является цитогенетическим способом, в котором применяют флуоресцентные зонды, которые связываются только с теми частями хромосомы, с которыми имеют высокую степень комплементарности последовательности. Такие испытания FISH можно применять для идентификации пациента с генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой при помощи любого из способов, известных в данной области, и такое испытание можно применять в комбинации со способами, описанными в настоящем документе, в качестве средства предварительной идентификации пациента для лечения или сопутствующей идентификации пациента для лечения.
[0405]
Следует понимать, что ИГХ относится к способу обнаружения антигенов (например, белков) в клетках фрагмента ткани, основанному на использовании антител, специфически связывающихся с антигенами в биологических тканях. Иммуногистохимическое окрашивание широко применяют в диагностике аномальных клеток, таких как клетки в раковых опухолях. Специфические молекулярные маркеры являются характерными для конкретных клеточных событий, таких как пролиферация или гибель клеток (апоптоз). Визуализацию взаимодействия антитела с антигеном можно проводить несколькими способами. В наиболее распространенном случае антитело конъюгируют с ферментом, такой как пероксидаза, который может катализировать реакцию, вызывающую окрашивание. Альтернативно, антитело также можно помечать флуорофором, таким как флуоресцеин или родамин. Такие испытания ИГХ можно применять для идентификации пациента с генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой при помощи любого из способов, известных в данной области, и такое испытание можно применять в комбинации со способами, описанными в настоящем документе, в качестве средства предварительной идентификации пациента для лечения или сопутствующей идентификации пациента для лечения.
[0406]
Понятно, что ПЦР относится к технологии в молекулярной биологии, применяемой для амплификации одной копии или нескольких копий фрагмента ДНК на несколько порядков с получением от тысяч до миллионов копий конкретной последовательности ДНК. Такие испытания ПЦР можно применять для идентификации пациента с генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой при помощи любого из способов, известных в данной области, и такое испытание можно применять в комбинации со способами, описанными в настоящем документе, в качестве средства предварительной идентификации пациента для лечения или сопутствующей идентификации пациента для лечения.
[0407]
Понятно, что полногеномное секвенирование или секвенирование нового поколения относится к способу, который определяет полную последовательность ДНК генома организма за одну процедуру. Оно включает секвенирование всей хромосомной ДНК организма, а также ДНГ, содержащейся в митохондриях. Такие испытания полногеномного секвенирования можно применять для идентификации пациента с генетически измененной тирозин- или серинтреонинкиназой при помощи любого из способов, известных в данной области, и такое испытание можно применять в комбинации со способами, описанными в настоящем документе, в качестве средства предварительной идентификации пациента для лечения или сопутствующей идентификации пациента для лечения.
ПРИМЕРЫ
[0408]
Примеры и примеры получения, приведенные ниже, дополнительно иллюстрируют конкретные аспекты вариантов реализации согласно изобретению. Следует понимать, что объем настоящего изобретения не ограничивается в какой-либо степени объемом следующих примеров.
[0409] Аббревиатуры
[0410]
В примерах, описанных в настоящем документе, применяют материалы, включая, но не ограничиваясь ими, материалы, описанные следующими аббревиатурами, известными специалистам в данной области:
г
граммы
экв.
эквиваленты
ммоль
миллимоли
моль
моли
мл
миллилитры
л
литры
EtOAc или ЭА
этилацетат
MeCN
ацетонитрил
ДХМ
дихлорметан
ДЭАД
диэтилазодикарбоксилат
МГц
мегагерц
δ
химический сдвиг
ТГФ
тетрагидрофуран
ПЭ
петролейный эфир
R<sub>f</sub>
коэффициент удерживания
ДМСО-<i>d</i><sub><i>6</i></sub>
дейтерированный диметилсульфоксид
CDCl<sub>3</sub>
дейтерированный хлороформ
<i>н</i>-BuOH
<i>н</i>-бутанол
ДИЭА
N,N-диизопропилэтиламин
ТМС-Cl
триметилсилилхлорид
мин
минуты
ч
часы
ТСХ
тонкослойная хроматография
М
молярный
МС
масс-спектр
<i>m/z</i>
отношение массы к заряду
FDPP
пентафторфенилдифенилфосфинат
ДМАП
4-(диметиламино)пиридин
ДМФ
N,N-диметилформамид
[0411] Получение соединения 1
[0412]
Соединение 1 получали в соответствии со следующей схемой синтеза:
[0413]
Пример 1: Получение 5-хлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (1a).
[0414]
H
Стадия 1: Получение этил-5-оксо-4-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (1-2)
[0415]
1-2
H
E
d
J
J
J
J
2
3
2
2
6
1
К смеси этил-5-амино-1-пиразол-4-карбоксилата (Sigma-Aldrich, 150,00 г, 1,08 ммоль) и этил-()-3-этоксипроп-2-еноата (Sigma-Aldrich, 292,16 г, 2,03 моль) в ДМФА (3,2 л) одной порцией добавляли CsCO (656,77 г, 2,02 моль) при 20°C в атмосфере N. Смесь перемешивали при 110°C в течение 6 ч. Результаты ТСХ (ПЭ:EtOAc=1:1) свидетельствовали о завершении реакции. Смесь охлаждали до 20°C и фильтровали через слой целита. Слой фильтрата промывали этилацетатом (30 мл x3). Фильтрат добавляли к HO (2 л) и подкисляли HOAc до pH=4. Полученный осадок отфильтровывали с получением  (173,00 г, 834,98 ммоль, 86,36% выход) в виде белого твердого вещества: H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-) δ 8,54 (d, =7,91 Гц, 1H), 8,12 (s, 1H), 6,13 (d, =7,91 Гц, 1H), 4,27 (q, =7,11 Гц, 2H), 1,28 (t, =7,09 Гц, 3H).
[0416]
Стадия 2: Получение 5-хлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (1)
[0417]
1-2
1a
3
2
6
1
d
J
J
J
J
К смеси  (158,00 г, 762,59 ммоль) в MeCN (1,6 л) добавляли POCl (584,64 г, 3,81 моль) при 20°C в атмосфере N. Смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. Результаты ТСХ (ПЭ:ЭА=1:1) свидетельствовали о завершении реакции. Смесь охлаждали до 20°C, порциями погружали в воду со льдом (5000 мл) при 0°C и перемешивали в течение 20 мин. Осадок отфильтровывали и сушили с получением  (110,00 г, 487,52 ммоль, 63,93% выход) в виде белого твердого вещества: H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-) δ 9,33 (d, =7,28 Гц, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,41 (d, =7,15 Гц, 1H), 4,31 (q, =7,15 Гц, 2H), 1,32 (t, =7,09 Гц, 3H).
[0418]
Пример 2: Получение (
)-2-(1-аминоэтил)-4-фторфенола (2).
R
[0419]
R
N
Стадия 1: Получение ()--(5-фтор-2-гидроксибензилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида (2-2)
[0420]
2-1
2-2
R
экв.
экв.
экв.
2
3
2
2
4
3
1
К раствору ()-2-метилпропан-2-сульфинамида (Sigma-Aldrich, 150,00 г, 1,24 моль, 1,00 ) и 5-фтор-2-гидроксибензальдегида () (Sigma-Aldrich, 173,74 г, 1,24 моль, 1,00 ) в ДХМ (2,00 л) добавляли CsCO (646,43 г, 1,98 моль, 1,60 ). Смесь перемешивали при 16°C в течение 16 часов. Результаты ТСХ (ПЭ:EtOAc=5:1) свидетельствовали о завершении реакции. Реакцию гасили добавлением HO (1000 мл) при 0°C, а затем смесь экстрагировали EtOAc (500 мл x4). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (1000 мл), сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением (230,00 г, 945,33 ммоль, 76,24% выход). H-ЯМР(CDCl, 400 МГц) δ 8,64 (s, 1H), 7,22-7,11 (m, 2H), 7,03-6,95 (m, 1H), 1,28 (s, 9H).
[0421]
R
N
R
Стадия 2: Получение ()--(()-1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)-2-метилпропан-2-сульфинамида (2-3R)
[0422]
2-2
2-3R
R
N
экв.
экв
R
J
J
J
J
J
J
2
2
2
4
2
3
1
К раствору ()--(5-фтор-2-гидроксибензилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида () (200,00 г, 822,03 ммоль, 1,00 ) в ТГФ (2,5 л) по каплям добавляли MeMgBr (490,09 г, 4,11 моль, 5,00 .) при -65°C в атмосфере N в течение 30 мин. Затем смесь нагревали до температуры окружающей среды и перемешивали в течение 18 часов. Результаты ТСХ (ПЭ:EtOAc=1:1) свидетельствовали о завершении реакции с образованием двух диастереомеров. Реакцию гасили добавлением HO (2 л) при 0°C, смесь экстрагировали EtOAc (500 мл x3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (500 мл), сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали путем колоночной хроматографии (SiO, петролейный эфир/этилацетат=от 50:1 до 1:1) с получением ()-N-((R)-1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)-2-метилпропан-2-сульфинамида () (125 г, верхнее, менее полярное пятно с Rf: 0,5, ПЭ:ЭА=1:1). H-ЯМР(CDCl, 400 МГц) δ: 9,17 (s, 1H), 6,68 (dd, =3,0, 8,8 Гц, 1H), 6,47 (dt, =3,0, 8,4 Гц, 1H), 6,31 (dd, =4,8, 8,8 Гц, 1H), 5,11 (d, =8,0 Гц, 1H), 4,28 (quin, =7,2 Гц, 1H), 1,43 (d, =6,8 Гц, 3H), 1,20 (s, 9H).
[0423]
R
Стадия 3: Получение ()-2-(1-аминоэтил)-4-фторфенола (2)
[0424]
2-3R
2
R
N
R
экв
R
d
J
J
1
Раствор ()--(()-1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)-2-метилпропан-2-сульфинамида () (125 г, 481,99 ммоль, 1,00 .) в смеси HCl/диоксан (1,5 л, 4 н. раствор) перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 часов. Результаты ТСХ (ПЭ:EtOAc=2:1) свидетельствовали о завершении реакции. Смесь фильтровали с получением HCl соли ()-2-(1-аминоэтил)-4-фторфенола () (85 г, 443,56 ммоль, 90,03% выход) в виде белого твердого вещества. H-ЯМР (-ДМСО, 400 МГц) δ 10,24 (s, 1H), 8,48 (шир. s, 3H), 7,31 (dd, =2,9, 9,7 Гц, 1H), 7,05-6,99 (m, 1H), 6,98-6,93 (m, 1H), 4,59-4,45 (m, 1H), 1,46 (d, =6,8 Гц, 3H).
[0425]
Пример 3: Получение (7
,13
)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-
][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5
)-она (Соединение 1).
S
R
f
H
[0426]
R
Стадия 1: Получение этил-()-5-((1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (3)
[0427]
2
1a
(3)
R
экв
экв
н
экв
R
J
J
J
J
2
2
4
2
3
1
К раствору ()-2-(1-аминоэтил)-4-фторфенола () (85 г, 443,56 ммоль, 1,00 .) и этил-5-хлорпиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата ()(100,08 г, 443,56 ммоль, 1,00 .) в -BuOH (2 л) добавляли ДИЭА (343,96 г, 2,66 моль, 6,00 .). Смесь перемешивали при 120°C в течение 2 ч. Результаты ТСХ (ПЭ:EtOAc=1:1) свидетельствовали о завершении реакции. Реакционную смесь разбавляли HO (500 мл) при 16°C и экстрагировали EtOAc (500 мл x3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (500 мл), сушили над NaSO, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали путем колоночной хроматографии (SiO, смесями петролейный эфир/этилацетат от 10:1 до 1:3) с получением этил-()-5-((1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата  (122 г, 349,34 ммоль, 78,76% выход, э.и. >99% чистота) в виде белого твердого вещества. H-ЯМР (CDCl, 400 МГц) δ 9,28 (шир. s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,14 (d, =7,5 Гц, 1H), 6,95-6,89 (m, 2H), 6,87-6,80 (m, 1H), 6,18 (d, =7,5 Гц, 1H), 5,98 (d, =8,3 Гц, 1H), 5,71-5,54 (m, 1H), 4,50-4,35 (m, 2H), 1,60 (d, =6,8 Гц, 3H), 1,42 (t, J=7,2 Гц, 3H).
[0428]
трет
Стадия 2: Получение этил-5-(((R)-1-(2-(((S)-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (4)
[0429]
(3)
(4)
R
трет
R
R
S
трет
m/z
d
J
J
J
J
J
J
J
3
2
4
+
1
Смесь этил-()-5-((1-(5-фтор-2-гидроксифенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата  (10,00 г, 29,04 ммоль) и -бутил-()-(2-гидроксипропил)карбамата (Combi-Blocks, 7,63 г, 43,56 ммоль) сушили путем перегонки азеотропа со смесью ДХМ/толуол, а затем повторно растворяли в ДХМ (11,62 мл). К раствору добавляли PPh (11,43 г, 43,56 ммоль) и смесь перемешивали до полного растворения исходных веществ. К раствору в течение 5 минут при перемешивании добавляли ДЭАД (8,81 г, 43,56 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (125 мл), а затем добавляли водный раствор NaOH (2 М, 100 мл). Смесь интенсивно перемешивали в течение 12 часов и слои разделяли. Водный слой дополнительно экстрагировали ДХМ (3×50 мл). Объединенные экстракты промывали солевым раствором (50 мл), сушили над NaSO и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем флэш-хроматографии (система Teledyne ISCO, силикагель (330 г), 0-40% смесями этилацетат/гексан) с получением этил-5-((()-1-(2-((()-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)-пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата  (8,88 г, 60,9% выход). ЖХ-МС  502,2 (M+H). H-ЯМР (400 МГц, хлороформ-) δ 8,24 (s, 1H), 8,21 (d, =7,6 Гц, 1H), 7,04 (d, =8,4 Гц, 1H), 6,87 (d, =6,0 Гц, 2H), 6,13 (d, =7,2 Гц, 1H), 5,91 (шир. s, 1H), 4,58 (d, =3,6 Гц, 1H), 4,43-4,28 (m, 2H), 3,52-3,34 (m, 2H), 1,54 (d, =6,8 Гц, 3H), 1,47-1,36 (m, 12H), 1,30 (d, =6,4 Гц, 3H).
[0430]
трет
Стадия 3: Получение 5-(((R)-1-(2-(((S)-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты (5)
[0431]
(4)
(5)
трет
экв
трет
m/z
2
2
2
4
+
К раствору этил-5-(((R)-1-(2-(((S)-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата  (6,98 г, 13,92 ммоль, 1 .) в метаноле (65 мл) и ТГФ (20 мл) добавляли LiOH (2 М, 47,9 мл, 95,8 ммоль). Смесь грели при 70°C в течение 3 ч и охлаждали до температуры окружающей среды, а затем реакцию гасили вод. раствором HCl (2 М, 95,8 мл) до pH <5. Реакционную смесь экстрагировали CHCl (3x 50 мл) и сушили над NaSO. После фильтрования, выпаривания и сушки под высоким вакуумом получали 5-(((R)-1-(2-(((S)-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновую кислоту  в виде белого твердого вещества, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС  474,2 (M+H).
[0432]
Стадия 4: Получение 5-(((R)-1-(2-(((S)-1-аминопропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты (6)
[0433]
(5)
6
R
трет
m/z
2
2
+
К раствору 5-((()-1-(2-(((S)-1-((-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновой кислоты  (6,59 г, 13,92 ммоль) в CHCl (130 мл) добавляли раствор HCl в диоксане (4 М, 30,4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов до завершения реакции, определяемого путем ЖХ-МС. Реакционную смесь концентрировали и сушили под высоким вакуумом с получением соединения  в виде белого твердого вещества, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС  374,2 (M+H).
[0434]
S
R
f
H
Стадия 5: Получение (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она (соединение 1).
[0435]
6
соединение 1
R
S
S
R
f
H
m/z
d
J
J
J
J
J
J
J
J
2
3
2
4
6
+
1
5-((()-1-(2-((()-1-аминопропан-2-ил)окси)-5-фторфенил)этил)амино)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоновую кислоту () (5,20 г, 13,93 ммоль) растворяли в ДМФА (75 мл) с получением раствора A. К раствору основания Хунига (ДИПЭА) (14,40 г, 111,4 ммоль) в ДМФА (150 мл) и ДХМ (350 мл) последовательно добавляли раствор A (25 мл) и одну треть от общего количества FDPP (5,62 г, 14,63 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа и по результатам ЖХ-МС определяли завершение реакции сочетания. Аналогичную процедуру повторили еще 2 раза. Конечный раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение 63 часов (или до завершения реакции, определяемого путем ЖХ-МС). Реакцию гасили добавлением водного раствора NaCO (2 М, 150 мл), смесь перемешивали в течение 15 мин и экстрагировали ДХМ (3×150 мл). Объединенные экстракты сушили над NaSO, концентрировали при пониженном давлении и очищали путем флэш-хроматографии (система Teledyne ISCO, силикагель (220 г), 0-7,5% смесями метанол/дихлорметан) с получением (7,13)-11-фтор-7,13-диметил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5)-она () (4,38 г, 12,33 ммоль, 88,5% выход) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС:  [M+H] 356,2. H-ЯМР (500 МГц, ДМСО-) δ ppm 9,82 (dd, =8,02, 2,29 Гц, 1H), 8,81 (d, =6,87 Гц, 1H), 8,58 (d, =7,45 Гц, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,12 (dd, =9,45, 3,15 Гц, 1H), 6,99-7,05 (m, 1H), 6,94-6,99 (m, 1H), 6,36 (d, =7,45 Гц, 1H), 5,53 (m, 1H), 4,45-4,52 (m, 1H), 3,90 (ddd, =13,46, 8,31, 4,01 Гц, 1H), 3,10-3,17 (m, 1H), 1,46 (d, =6,30 Гц, 3H), 1,44 (d, =7,45 Гц, 3H).
[0436] Исследования
in vitro
[0437] Материалы и способы
[0438] Способ исследования связывания киназы
[0439]
scan
K
E. coli
E. coli
d
Исследования связывания киназы проводили в DiscoveRx с применением общего протокола KINOME (Fabian, M. A. et al., ʺA small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitorsʺ, Nat. Biotechnol. 2005, 23(3):329-36). Для большинства исследований штаммы фага T7, меченные киназой, готовили в хозяине , полученном из штамма BL21.  выращивали до фазы логарифмического роста, инфицировали фагом T7 и инкубировали при встряхивании при 32°C до прохождения лизиса. Лизаты центрифугировали и фильтровали для удаления клеточного дебриса. Оставшиеся киназы получали в клетках HEK-293, а затем метили ДНК для определения количественной ПЦР. Магнитные гранулы, покрытые стрептавидином, обрабатывали биотинилированными низкомолекулярными лигандами в течение 30 минут при комнатной температуре для получения аффинных смол для киназных исследований. Содержащие лиганд гранулы блокировали избытком биотина и промывали блокирующим буфером (SeaBlock (Pierce), 1% БСА, 0,05% Tween 20, 1 мМ ДТТ) для удаления несвязанного лиганда и уменьшения неспецифического связывания. Реакции связывания проводили путем объединения киназ, содержащих лиганд аффинных гранул и исследуемых соединений в 1x буфере для связывания (20% SeaBlock, 0,17x ФСБ, 0,05% Tween 20, 6 мМ ДТТ). Все реакции проводили в 96-луночных планшетах из полистирола в конечном объеме 0,135 мл. Планшеты для исследований инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре при встряхивании и аффинные гранулы промывали промывочным буфером (1x ФСБ, 0,05% Tween 20). Затем гранулы повторно суспендировали в буфере для элюирования (1x ФСБ, 0,05% Tween 20, 0,5 мкМ небиотинилированный аффинный лиганд) и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 30 минут. Концентрацию киназы в элюатах измеряли путем количественной ПЦР.
[0440]
K
d
угловой коэффициент Хилла
угловой коэффициент Хилла
Константы связывания () рассчитывали по стандартной кривой зависимости доза-эффект с применением уравнения Хилла: Ответ=Фон+(Сигнал-Фон)/(1+(Kd/Доза)). Угловой коэффициент Хилла принимали равным -1. Кривые строили с применением нелинейной аппроксимации методом наименьших квадратов при помощи алгоритма Левенберга-Марквардта.
[0441] Способ биохимического исследования киназы
[0442]
2011
Nat Biotechnol
2
3
4
50
33
Биохимическое исследование киназы проводили в Reaction Biology Corporation (www.reactionbiology.com, Malvern, PA) в соответствии с процедурами, описанными в ссылке (Anastassiadis T. et al. . , 29, 1039). Конкретные пары киназа/субстрат вместе с необходимыми кофакторами готовили в реакционном буфере; 20 мМ буфер HEPES pH 7,5, 10 мМ MgCl, 1 мМ ЭГТА, 0,02% Brij35, 0,02 мг/мл БСА, 0,1 мМ NaVO, 2 мМ ДТТ, 1% ДМСО (подробное описание отдельных компонентов киназных реакций смотри в дополнительной таблице 2). Соединения добавляли в реакционную смесь и через ~ 20 минут добавляли смесь АТФ (Sigma, St. Louis MO) и P АТФ (Perkin Elmer, Waltham MA) до конечной концентрации 10 мкМ. Реакции проводили при комнатной температуре в течение 120 мин, а затем реакционную смесь наносили на ионообменную фильтровальную бумагу P81 (Whatman Inc., Piscataway, NJ). Несвязанный фосфат удаляли промыванием фильтров в избытке 0,75% раствора фосфорной кислоты. После вычитания фона, полученного в контрольных реакциях, включающих неактивный фермент, данные активности киназы выражали в виде оставшейся активности киназы в процентах в испытываемых образцах по сравнению с реакциями с носителем (диметилсульфоксид). Значения IC и кривые получали с применением Prism (GraphPad Software).
[0443]
[0444] Клеточные линии и клеточная культура:
[0445]
Клеточную линию рака легких человека NCI-H2228 получали в ATCC. Клеточные линии 293T, NIH3T3, Ba/F3 и HCC78 приобретали в DSMZ. Клеточную линию Karpas-299 приобретали в Sigma. Клеточную линию KM12 получали в NCI.
[0446]
NIH3T3 выдерживали в среде DMEM, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и 100 ед/мл смеси пенициллин/стрептомицин. HCC78, Karpas-299 и H2228 выдерживали в RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и 100 ед/мл смеси пенициллин/стрептомицин. Клетки Ba/F3 выдерживали в RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, 10% (об./об.) кондиционированной средой из WIHI-3B миеломоноцитарных клеток, секретирующих ИЛ-3, и 100 ед/мл смеси пенициллин/стрептомицин. Стабильные клеточные линии BaF3 выдерживали в RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, 100 ед/мл пенициллина и 0,5 мкг/мл раствора пуромицина.
[0447]
[0448] Клонирование и получение стабильной клеточной линии Ba/F3 или NIH3T3
[0449]
6
Ген EML4-ALK (вариант 1) синтезировали в GenScript и клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc). Точечные мутации G1202R, L1196M, L1152P, F1174C, C1156Y, I1171N, G1269S и вставку 1151T в EML4-ALK получали в GenScript путем ПЦР и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3-EML4-ALK дикого типа и мутанты получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим EML4-ALK дикого типа или мутанты. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0450]
6
SDC4-ROS1 дикого типа, CD74-ROS1 дикого типа и их G2032R мутантные гены синтезировали в GenScript, клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc) и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3 SDC4-ROS1, CD74-ROS1 и соответствующие G2032R мутанты получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим гибридные гены. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0451]
Клеточные линии Ba/F3 TPR-ALK и Ba/F3 TPR-ALK L1196M готовили в Advanced Cellular Dynamics, Inc. и там же проводили исследования пролиферации клеток. Панель ACD состояла из 92 уникальных киназ, которые индивидуально экспрессировали в традиционно используемой лимфоидной клеточной линии (клетки Ba/F3 мышей). Выживание каждой из клеточных линий зависело от активности рекомбинантной киназы.
[0452]
6
Мутантные гены L2026M и D2033N в SDC4-ROS1 синтезировали в GenScript, клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc) и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3 L2026M и D2033N мутанты CD74-ROS1 получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим гибридные гены. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0453]
6
LMNA-TRKA дикого типа и его G595R мутантные гены синтезировали в GenScript, клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc) и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3 LMNA-TRKA и соответствующий G595R мутант получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим гибридные гены. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0454]
6
TEL-TRKB (также называемый ETV6-TRKB) дикого типа и его G639R мутантные гены синтезировали в GenScript, клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc) и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3 TEL-TRKB и соответствующий G639R мутант получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим гибридные гены. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0455]
6
TEL-TRKC (также называемый ETV6-TRKC) дикого типа и его G623R мутантные гены синтезировали в GenScript, клонировали в плазмиду pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro (System Biosciences, Inc) и подтверждали путем секвенирования. Ba/F3 TEL-TRKC и соответствующий G623R мутант получали путем трансдукции клеток Ba/F3 с лентивирусом, содержащим гибридные гены. Стабильные клеточные линии отбирали путем обработки пуромицином с последующим удалением ИЛ-3. Вкратце, 5X10 клетки Ba/F3 трансдуцировали надосадочной жидкостью с лентивирусом в присутствии 8 мкг/мл протаминсульфата. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина в присутствии среды RPMI1640, содержащей ИЛ-3, с добавлением 10% ФСБ. Через 10-12 дней после отбора выжившие клетки дополнительно отбирали для роста, независимого от ИЛ-3.
[0456]
Стабильные клеточные линии NIH3T3 ALK или ROS1 получали путем трансдукции клеток с лентивирусом, содержащим EML4-ALK дикого типа и его G1202R мутантные гены, SDC4-ROS1 дикого типа, CD74-ROS1 дикого типа и их G2032R мутантные гены. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина.
[0457]
Стабильные клеточные линии NIH3T3 ROS1, TRKA, TRKB или TRKC получали путем трансдукции клеток с лентивирусом, содержащим L2026M и D2033N мутантные гены CD74-ROS1, LMNA-TRKA дикого типа и его G595R мутантные гены, TEL-TRKB дикого типа и его G639R мутантные гены, TEL-TRKB дикого типа и его G623R мутантные гены, соответственно. Затем трансдуцированные клетки отбирали с применением 1 мкг/мл пуромицина.
[0458] Исследования пролиферации клеток:
[0459]
2
50
Две тысячи клеток на лунку высеивали в белый 384-луночный планшет, выдерживали в течение 24 ч, а затем обрабатывали соединениями в течение 72 часов (37°C, 5% CO). Пролиферацию клеток измеряли в исследовании на обнаружение АТФ на основе люциферазы CellTiter-Glo (Promega) в соответствии с протоколом производителя. Определение IC проводили с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA).
[0460]
2
Исследование пролиферации клеток клеточных линий Ba/F3 TPR-ALK и Ba/F3 TPR-ALK L1196M проводили в Advanced Cellular Dynamics, Inc. Ингибирование активности киназы приводило к гибели клеток, которую отслеживали по концентрации АТФ с применением CellTiter-Glo (Promega). Клеточные линии выдерживали в питательной среде RPMI-1640, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки и антибиотики. Собирали клетки в фазе логарифмического роста и вносили 5000 клеток в каждую из лунок 384-луночного планшета с 50 мкл питательной среды. Родительские клетки (только) высеивали в присутствии 10 нг/мл ИЛ-3 для поддержания роста и выживания клеток. В соответствующие лунки в двух повторностях добавляли пятьдесят нанолитров разбавленного соединения и клетки выращивали в течение 48 часов при 37°C в увлажненной 5% атмосфере CO. Жизнеспособность определяли путем добавления 15 мкл CellTiter-Glo и измерения люминесценции, которую представляли в относительных световых единицах (RLU) в секунду.
[0461] Иммуноблоттинг для клеточных исследований фосфорилирования киназ
[0462]
50
Клеточную линию NSCLC H2228 (содержащую эндогенный гибридный ген EML4-ALK), клетки HCC78 (содержащие эндогенный гибридный ген SLC34A2-ROS1), клетки Karpas-299 (содержащие эндогенный гибридный ген NPM-ALK) или клетки SET-2 (содержащие эндогенную активирующую мутацию JAK2V617F) выращивали в среде RPMI и клеточную линию KM12 (содержащую эндогенный гибридный ген TPM3-TRKA) выращивали в среде DMEM, в обоих случаях с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки и 100 ед/мл смеси пенициллин/стрептомицин. Клетки Ba/F3 и NIH3T3, устойчиво экспрессирующие ALK или ROS1 (дикого типа или мутант), выращивали, как описано выше. Полмиллиона клеток на лунку высеивали в 24-луночный планшет, выдерживали в течение 24 ч, а затем обрабатывали соединениями в течение 4 часов. После обработки собирали клетки и проводили лизис в RIPA-буфере (50 мМ Tris, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата, 0,1% ДСН), дополненном 10 мМ ЭДТА, 1X Halt ингибиторами протеаз и фосфатаз (Thermo Scientific). Лизаты белков (примерно 20 мкг) разделяли на 4-12% готовых гелях Bolt Bis-Tris с подвижным MES-буфером (Life Technologies), переносили на нитроцеллюлозные мембраны с применением системы транспортировки Trans-Blot Turbo (Bio-Rad) и детектировали при помощи антителами, направленно действующими на фосфорилированную ALK Y1604 (Cell Signaling Technology), общую ALK (Cell Signaling Technology), фосфорилированную ROS1 и общую ROS1 (Cell Signaling Technology), фосфорилированную TRK A/B (Cell Signaling Technology), общее антитело TRKA (Santa Cruz Biotechnogy), фосфорилированные STAT3 и STAT5, общие STAT3 и STAT5 (Cell Signaling Technology), фосфорилированную AKT (Cell Signaling Technology), общую AKT (Cell Signaling Technology), фосфорилированную ERK (Cell Signaling Technology), общую ERK (Cell Signaling Technology) и тубулин (Sigma). Как правило, антитела инкубировали при аккуратном перемешивании в течение ночи при 4°C, а затем промывали и выдерживали с соответствующими HRP-конъюгированными вторичными антителами. Мембраны инкубировали с хемилюминесцентным субстратом в течение 5 мин при комнатной температуре (SuperSignal West Femto, Thermo Scientific). Хемилюминесцентные изображения получали при помощи системы визуализации C-DiGit (LI-COR Biosciences). Относительную плотность хемилюминесцентных полос количественно измеряли при помощи Image Studio Digits производства LICOR. Значение концентрации полумаксимального ингибирования (IC) рассчитывали при помощи анализа нелинейной регрессии с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA).
[0463]
50
Клеточную линию NSCLC H2228 (содержащую эндогенный гибридный ген EML4-ALK) выращивали в среде RPMI, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и 100 ед/мл смеси пенициллин/стрептомицин. Клетки Ba/F3 и NIH3T3, устойчиво экспрессирующие ROS1, TRKA, TRKB или TRKC (дикого типа или мутант), выращивали, как описано выше. Полмиллиона клеток на лунку высеивали в 24-луночный планшет, выдерживали в течение 24 ч, а затем обрабатывали соединениями в течение 4 часов. После обработки собирали клетки и проводили лизис в RIPA-буфере (50 мМ Tris, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата, 0,1% ДСН), с дополненном 10 мМ ЭДТА, 1X Halt ингибиторами протеаз и фосфатаз (Thermo Scientific). Лизаты белков (примерно 20 мкг) разделяли на 4-12% готовых гелях Bolt Bis-Tris с подвижным MES-буфером (Life Technologies), переносили на нитроцеллюлозные мембраны с применением системы транспортировки Trans-Blot Turbo (Bio-Rad) и детектировали антителами, направленно действующими на фосфорилированную ROS1 и общую ROS1 (Cell Signaling Technology), фосфорилированную TRK A/B (Cell Signaling Technology), общее антитело TRKA (Santa Cruz Biotechnogy), фосфорилированную SRC Y416 (Cell Signaling Technology), общую SRC (Cell Signaling Technology), фосфорилированную FAK Y576/577 (Cell Signaling Technology), общую FAK (Cell Signaling Technology), фосфорилированный паксиллин Y118 (Cell Signaling Technology), общий паксиллин (Cell Signaling Technology), фосфорилированную EGFR и общую EGFR, CD44 и тубулин (Sigma). Как правило, антитела инкубировали при аккуратном перемешивании в течение ночи при 4°C, а затем промывали и выдерживали с соответствующими HRP-конъюгированными вторичными антителами. Мембраны инкубировали с хемилюминесцентным субстратом в течение 5 мин при комнатной температуре (SuperSignal West Femto, Thermo Scientific). Хемилюминесцентные изображения получали при помощи системы визуализации C-DiGit (LI-COR Biosciences). Относительную плотность хемилюминесцентных полос количественно измеряли при помощи Image Studio Digits производства LICOR. Значение концентрации полумаксимального ингибирования (IC) рассчитывали при помощи анализа нелинейной регрессии с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA).
[0464] Исследования активности апоптоза/каспазы.
[0465]
Клетки Karpas-299 выдерживали в среде RPMI, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и антибиотиками. Пять тысяч на лунку высеивали в 12-луночный планшет, вводили соединения в различных концентрациях и выдерживали в течение 48 ч. Затем собирали клетки и проводили лизис в буфере для лизиса (20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 5 мМ EDTA, 1% NP40), дополненном Halt ингибиторами протеаз и фосфатаз (Thermo Scientific). Для исследований каспазы примерно 20 мкг клеточного лизата выдерживали с 20 мкл реагента каспаза-GLO 3 (Promega) и активность фермента измеряли сигналу люминесценции после инкубации в течение 20 мин при 37°C. Для вестерн-блоттинга клеточный лизат кипятили и исследовали путем ДСН-ПААГ-электрофореза и иммуноблоттинга с применением антител к каспазе-3 (Cell Signaling Technology), ПАРП (Cell Signaling Technology) или актину (Cell Signaling Technology). Как правило, антитела инкубировали при аккуратном перемешивании в течение ночи при 4°C, а затем промывали и выдерживали с соответствующими HRP-конъюгированными вторичными антителами. Мембраны инкубировали с хемилюминесцентным субстратом в течение 5 мин при комнатной температуре (SuperSignal West Femto, Thermo Scientific) и хемилюминесцентные изображения получали при помощи системы визуализации C-DiGit (LI-COR Biosciences).
[0466] Исследование заживления царапин
[0467]
Клетки HT1080 или HCC78 в среде RPMI, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и антибиотиками, высеивали в 24-луночный планшет. Через 12-24 часов конфлюэнтные клеточные монослои осторожно царапали стерильным наконечником пипетки для образования царапины. Планшеты промывали свежей средой и клетки выдерживали в только среде или в среде, содержащей соединения в различных концентрациях. Через 12-24 часов планшеты исследовали и записывали при помощи EVOS FL микроскопии (Life Technology) для отслеживания заживления клеточного монослоя.
[0468] Способы
in vivo
[0469] Клеточные линии
[0470]
2
Клеточные линии выращивали с применением стандартных способов в среде DMEM или RPMI-1640 (Corning, Inc) с 10% фетальной бычьей сывороткой (Thermo Fisher Scientific, Inc) при 37°C в увлажненной 5% атмосфере CO. Для имплантации клетки отбирали и гранулировали центрифугированием при 250g в течение 2 минут. Клетки один раз промывали и повторно суспендировали в бессывороточной среде с 50% матригеля (об./об.), по мере необходимости.
[0471] Модели подкожного ксенотрансплантата у мышей с ослабленным иммунитетом
[0472]
2
3
Самок голых бестимусных мышей и мышей ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров (возрастом 5-8 недель) получали из лаборатории Charles River и размещали в одноразовых клетках Innovive IVC на вентилируемых стеллажах с фильтром HEPA со свободным доступом к корму для грызунов и воде. Пять миллионов клеток в 100 мкл бессывороточной среды имплантировали мышам подкожно в правый бок. Клетки Karpas299 имплантировали мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров. Клетки KM12, мутантные клетки NIH3T3 EML4-ALK дикого типа и мутантные клетки NIH3T3 SCD4-ROS1 дикого типа имплантировали голым бестимусным мышам, соответственно. Во всех моделях, кроме KM12, имплантацию проводили с применением среды с 50% матригеля (Corning, Inc). Размер опухоли и массу тела измеряли в назначенные дни. Размер опухоли измеряли при помощи электронного циркуля, а объем опухоли рассчитывали по формуле длина * ширина * 0,5. Мышей случайным образом распределяли по размеру опухоли в группы лечения, когда объем опухоли достигал примерно 100-200 мм, и определенные дозы соединения 1 вводили перорально (два раза в день).
[0473]
2
3
Самок голых бестимусных мышей и мышей ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров (возрастом 5-8 недель) получали из лаборатории Charles River и размещали в одноразовых клетках Innovive IVC на вентилируемых стеллажах с фильтром HEPA со свободным доступом к корму для грызунов и воде. Пять миллионов клеток в 100 мкл бессывороточной среды имплантировали мышам подкожно в правый бок. Клетки Ba/F3 EML4-ALK дикого типа и мутантные клетки G1202R, клетки Ba/F3 CD74-ROS1 дикого типа и мутантные клетки G2032R имплантировали мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров. Мутантные клетки NIH3T3 CD74-ROS1 G2032, клетки NIH3T3 LMNA-TRKA дикого типа и мутантные клетки G595R имплантировали голым бестимусным мышам, соответственно. Во всех моделях имплантирование проводили с применением среды с 50% матригеля (Corning, Inc). Размер опухоли и массу тела измеряли в назначенные дни. Размер опухоли измеряли при помощи электронного циркуля, а объем опухоли рассчитывали по формуле длина * ширина * 0,5. Мышей случайным образом распределяли по размеру опухоли в группы лечения, когда объем опухоли достигал примерно 100-200 мм, и определенные дозы соединения 1 вводили перорально (два раза в день).
[0474] Обработка опухолей и иммуноблоттинг для фармакодинамических исследований
in vivo
[0475]
Мышей с ксенотрансплантатными опухолями подвергали гуманной эвтаназии и опухоли вырезали, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C. Замороженные образцы опухоли обрабатывали при 4°C в 1x буфере для лизиса клеток (Cell Signaling Technologies) для экстракции белков. Образцы с ДСН готовили путем добавления одного объема 4X ДСЛ-буфера для образцов (Life Technologies, Inc) к трем объемам белкового лизата. Образцы белка опухоли в ДСН обрабатывали путем ДСН-ПААГ и подвергали иммуноблоттингу с применением кроличьих антител к фосфорилированной ALK и мышиных антител к актину (Cell Signaling Technologies). Сигналы иммуноблота детектировали при помощи блот-сканера C-DiGit производства LI-COR, а интенсивность сигнала оценивали количественно с применением программного обеспечения Image Studio Digit (LI-COR).
[0476] Данные и результаты:
[0477] Пример 4a: Аффинность связывания киназ и ферментативная киназная активность соединения 1.
[0478]
K
d
50
Проводили скрининг аффинности связывания киназ для соединения 1 в DiscoveRx на панели из 460 киназ с последующим определением  для киназ, в отношении которых соединение имело аффинность. Была продемонстрирована высокая аффинность связывания соединения 1 с ALK, ROS1, TRKA/B/C, JAK2, SRC, FAK и ARK5 (таблица 1). Кроме того, активность ингибирования ферментативной киназы соединением 1 при 10 мкМ концентрации АТФ определяли в Reaction Biology, и результаты IC сведены в таблицу 1.
Таблица 1
Мишень
ALK
ROS1
TRKA
TRKB
TRKC
JAK2
SRC
FAK
ARK5
<i>K</i><sub>d</sub> (нМ)
5,7
0,19
0,019
0,054
0,088
0,082
12,0
27
3,7
IC<sub>50</sub> (нМ)
1,04
0,0706
0,826
0,0517
0,0956
1,04
5,29
6,96
4,46
[0479] Пример 4b: Ферментативная киназная активность соединения 1.
[0480]
50
Проводили скрининг аффинности связывания киназ для соединения 1 в DiscoveRx на панели из 460 киназ. Киназы, в отношении которых соединение 1 имело аффинность, дополнительно подтверждали в рекомбинированном исследовании ферментативного киназного ингибирования с применением 10 мкМ концентрации АТФ в Reaction Biology, и данные IC сведены в таблицу 1b.
Таблица 1b.
Мишень
IC<sub>50</sub> (нМ) при 10 мкМ АТФ
Мишень
IC<sub>50</sub> (нМ) при 10 мкМ АТФ
Мишень
IC<sub>50</sub> (нМ) при 10 мкМ АТФ
TRKB
0,05
SNARK
13,0
JAK3
50
ROS1
0,07
HCK
16,4
EPHA8
50,2
TRKC
0,1
IRR
18,1
IGFR
111
TRKA
0,83
LCK
18,6
PLK4
126
ALK
1,04
JAK1
19
AXL
149
JAK2
1,04
TYK2
21,6
MARK3
512
FYN
1,05
LTK
21,8
LYN
1,66
DDR2
23
YES
2,15
BTK
23,7
FGR
3,05
TNK2
24,1
TXK
3,17
EPHA1
25,0
ARK5
4,46
BLK
32,3
SRC
5,3
GRK7
35,2
DDR1
5,7
PYK2
39,9
FAK
6,96
RET
47,1
[0481] Пример 5: Оценка активности соединения 1 в отношении панели мутаций ALK.
[0482]
Проводили оценку соединения 1 в отношении ALK-резистентных мутаций в ферментативных киназных исследованиях с применением 10 мкМ концентрации АТФ в Reaction Biology, Inc. Результаты сведены в таблицу 2. Высокоактивное ингибирование соединением 1 наблюдали в случае ALK и ROS1 дикого типа и их мутантных форм.
Таблица 2
NPM-ALK
ALK дикого типа
ALK T1151M
ALK 1151Tins
ALK L1152R
ALK C1156Y
ALK F1174L
IC<sub>50</sub> (нМ)
1,23
1,04
0,49
2,16
1,23
0,93
1,46
ALK F1174S
ALK L1196M
ALK G1202R
ALK S1206R
ALK G1269A
ALK G1269S
ALK R1275Q
IC<sub>50</sub> (нМ)
1,02
1,08
1,21
0,53
5,5
14,1
2,79
ROS1 ДТ
ROS1 G2032R
ROS1-TPM3
IC<sub>50</sub> (нМ)
0,0706
0,456
0,113
[0483] Пример 6: Соединение 1 с высокой активностью подавляло пролиферацию клеток в первичных клеточных линиях с онкогенными гибридными или мутантными генами ALK, ROS1, TRKA или JAK2.
[0484]
Образование гибридных ALK является основным фактором формирования злокачественных новообразований во многих типах рака и раковых клеточных линиях, включая клеточную линию Karpas-299 лимфомы, содержащую гибридный ген NPM-ALK, клеточную линию H2228 немелкоклеточного рака легких, содержащую гибридный ген EML4-ALK, клеточную линию HCC78 немелкоклеточного рака легких, содержащую гибридный ген SLC34A2-ROS1, клеточную линию KM12 колоректального рака, содержащую гибридный ген TPM3-TRKA, и клеточную линию SET-2 лейкоза, содержащую мутацию JAK2 V617F. Проводили оценку антипролиферативной активности соединения 1 в отношении указанных клеточных линий, и результаты сведены в таблицу 3.
[0485] Пример 7: Оценка активности соединения 1 в отношении панели мутаций генов ALK в сконструированных клеточных линиях Ba/F3.
[0486]
Кроме того, использовали клетки Ba/F3, сконструированные для экспрессии гибридного гена EML4-ALK дикого типа и мутантов EML4-ALK. Рост клеток Ba/F3 зависит от интерлейкина-3 (ИЛ-3). При эктопической экспрессии гена EML4-ALK рост клеток Ba/F3 становится независимым от ИЛ-3 и зависит от киназной активности онкогенной гибридной ALK. Соединение 1 с высокой активностью подавляло пролиферацию клеток различных сконструированных клеточных линий Ba/F3, экспрессирующих EML4-ALK дикого типа и его мутанты, и результаты сведены в таблицу 3.
[0487]
Подавление пролиферации клеток клеточных линий Ba/F3 TPR-ALK и Ba/F3 TPR-ALK L1196M проводили в Advanced Cellular Dynamics. Соединение 1 демонстрировало высокую активность подавления в обеих клеточных линиях (таблица 3).
[0488] Пример 8: Оценка активности соединения 1 в отношении ROS1 в сконструированных клеточных линиях Ba/F3.
[0489]
G2032R
G2032R
Клетки Ba/F3 конструировали для экспрессии онкогенных гибридных генов SDC4-ROS1, SDC4-ROS1, CD74-ROS1 и CD74-ROS1, соответственно. Сконструированные клетки Ba/F3 с гибридными ROS1 генами использовали для исследования ингибирующей активности соединения 1 в отношении гибридных ROS1 генов дикого типа и мутантных форм. Результаты ингибирования роста клеток сведены в таблицу 3.
[0490]
L2026M
D2033N
Клетки Ba/F3 конструировали для экспрессии онкогенных гибридных генов CD74-ROS1 и CD74-ROS1, соответственно. Сконструированные клетки Ba/F3 с гибридными ROS1 генами использовали для исследования ингибирующей активности соединения 1. Результаты ингибирования роста клеток сведены в таблицу 3.
[0491]
G595R
Клетки Ba/F3 конструировали для экспрессии онкогенных гибридных генов LMNA-TRKA м LMNA-TRKA, соответственно. Сконструированные клетки Ba/F3 с гибридными TRKA генами использовали для исследования ингибирующей активности соединения 1. Результаты ингибирования роста клеток сведены в таблицу 3.
[0492]
G639R
Клетки Ba/F3 конструировали для экспрессии онкогенных гибридных генов TEL-TRKB (также называемого ETV6-TRKB) и TEL-TRKB, соответственно. Сконструированные клетки Ba/F3 с гибридными TRKB генами использовали для исследования ингибирующей активности соединения 1. Результаты ингибирования роста клеток сведены в таблицу 3.
[0493]
G623R
Клетки Ba/F3 конструировали для экспрессии онкогенных гибридных генов TEL-TRKC (также называемого ETV6-TRKC) и TEL-TRKC, соответственно. Сконструированные клетки Ba/F3 с гибридными TRKC генами использовали для исследования ингибирующей активности соединения 1. Результаты ингибирования роста клеток сведены в таблицу 3.
Таблица 3
Исследования
IC<sub>50</sub> (нМ)
Пролиферация клеток клеточной линии Karpas-299
23,7
Пролиферация клеток клеточной линии NCI-H2228
73
Пролиферация клеток клеточной линии HCC78
0,3
Пролиферация клеток клеточной линии KM12
0,3
Пролиферация клеток клеточной линии SET-2
169
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK дикого типа
17,8
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK G1202R
20,5
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK L1152P
85
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK L1196M
50
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK F1174C
54
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK C1156Y
98
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TPR-ALK дикого типа
12
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TPR-ALK L1196M
13,4
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 дикого типа
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R
8,4
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 SDC4-ROS1 дикого типа
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 SDC4-ROS1 G2032R
5
Пролиферация клеток родительской клеточной линии Ba/F3 +IL3
1236
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 L2026M
5
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 D2033N
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 LMNA-TRKA
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 LMNA-TRKA G595R
0,4
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TEL-TRKB (ETV6-TRKB)
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TEL-TRKB (ETV6-TRKB) G639R
0,6
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TEL-TRKC (ETV6-TRKC)
0,2
Пролиферация клеток клеточной линии Ba/F3 TEL-TRKC (ETV6-TRKC) G623R
3
[0494] Пример 9: Механизм действия соединения 1 в клетках.
[0495]
50
50
50
50
50
50
Оценивали фармакодинамическую ингибирующую активность соединения 1 в отношении ALK, ROS1, TRKA и SRC и передачу соответствующих нисходящих сигналов в клетках, и результаты сведены в таблицу 4. Соединение 1 вызывало подавление аутофосфорилирования ALK, а также последующее фосфорилирование STAT3 и AKT при IC примерно 1-3 нМ в клеточной линии Karpas-299, которая содержит гибридный ген NPM-ALK. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование ROS1, а также последующее фосфорилирование STAT3 и AKT при IC примерно 1-3 нМ в клеточной линии HCC78, которая содержит гибридный ген SLC34A2-ROS1. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование TRKA, а также последующее фосфорилирование AKT и ERK при IC примерно 0,3 в клеточной линии KM12, которая содержит гибридный ген TPM3-TRKA. Соединение 1 ингибировало фосфорилирование STAT5 при IC примерно 158 в клеточной линии SET-2, которая содержит мутацию JAK2 V617F. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование ALK при IC 20-30 нМ в сконструированных стабильных клеточных линиях Ba/F3, кодирующих гибридный ген EML4-ALK v1 дикого типа или мутантной формы G1202R. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование ROS1 в сконструированных стабильных клеточных линиях Ba/F3, кодирующих гибридные гены CD74-ROS1 или SDC4-ROS1 дикого типа или мутантной формы G2032R. Оценивали фармакодинамическую ингибирующую активность соединения 1 в отношении передачи сигналов TRKA, TRKB, TRKC и FAK в клетках, и результаты сведены в таблицу 4a. Соединение 1 ингибировало фосфорилирование FAK, а также SRC-фосфорилирование паксиллина при IC примерно 103 нМ в клеточной линии NCI-H2228, которая содержит гибридный ген EML4-ALK с повышающей регуляцией SRC и FAK. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование ROS1 в сконструированных стабильных клеточных линиях Ba/F3, кодирующих мутантные формы L2026M или D2033N гибридного гена CD74-ROS1. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование TRKA в сконструированных стабильных клеточных линиях NIH3T3, кодирующих гибридный ген LMNA-TRKA дикого типа или мутантной формы G595R. Соединение 1 ингибировало аутофосфорилирование TRKB в сконструированных стабильных клеточных линиях NIH3T3, кодирующих гибридный ген TEL-TRKB, также называемый ETV6-TRKB, дикого типа или мутантной формы G639R.
Таблица 4
Исследования
IC<sub>50</sub> (нМ)
Фосфорилирование ALK клеточной линии Karpas-299
0,9
Фосфорилирование ALK клеточной линии NCI-H2228
5,8
Фосфорилирование ALK клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK ДТ
29,9
Фосфорилирование ALK клеточной линии Ba/F3 EML4-ALK G1202R
18,4
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии HCC78
2
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 ДТ
0,3
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R
3
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 SDC4-ROS1 ДТ
0,5
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 SDC4-ROS1 G2032R
2
Фосфорилирование TRKA клеточной линии KM12
0,35
Фосфорилирование STAT5 клеточной линии SET-2
158
Фосфорилирование SRC клеточной линии H2228
102
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 L2026M
10
Фосфорилирование ROS1 клеточной линии Ba/F3 CD74-ROS1 D2033N
<1
Фосфорилирование TRKA клеточной линии NIH3T3 LMNA-TRKA
0,01
Фосфорилирование TRKA клеточной линии NIH3T3 LMNA-TRKA G595R
0,1
Фосфорилирование TRKB клеточной линии NIH3T3 TEL-TRKB
<0,1
Фосфорилирование TRKB клеточной линии NIH3T3 TEL-TRKB G639R
1
Фосфорилирование FAK клеточной линии NCI-H2228
100
[0496]
Соединение 1 увеличивало количество апоптотических клеток Karpas-299. После обработки соединением 1 в течение 48 часов проводили лизис клеток Karpas-299 и оценивали путем исследования расщепления каспазы-GLO 3 с применением реагента каспаза-3/7 или с применением ПАРП в вестерн-блоттинге. Результаты приведены на ФИГ. 1.
[0497]
Соединение 1 подавляло миграцию клеток HCC78 или HT1080 после 12-часовой обработки в исследованиях заживления царапин. Результаты приведены на ФИГ. 2.
[0498] Соединение 1 обеспечивало понижающую регуляцию экспрессии EGFR в клетках H2228.
[0499]
Активация активности киназы SRC обеспечивает повышение регуляции уровня экспрессии RTK, что приводит к формированию обходной устойчивости сигнальных путей. Ингибирование SRC приводит к понижению регуляции RTK. Соединение 1 обеспечивает понижение регуляции экспрессии EGFR зависимым от дозы и времени образом, как показано на ФИГ. 3.
[0500] Соединение 1 обеспечивало понижающую регуляцию экспрессии EGFR в клетках H2228.
[0501]
CD44 является биомаркером стволовости раковых клеток. Был обнаружен высокий уровень экспрессии CD44 в клетках H2228. Соединение 1 подавляло уровень экспрессии CD44 в клетках H2228 зависимым от концентрации образом после 48-часовой обработки, как показано на ФИГ. 4, это указывает на то, что соединение 1 обладает потенциалом для подавления стволовости раковых клеток.
[0502] Исследования
in vivo
[0503] Противоопухолевая эффективность соединения 1 в моделях ксенотрансплантатов опухолей
[0504]
Противоопухолевую эффективность соединения 1 оценивали в нескольких моделях ксенотрансплантатов опухолей, представляющих популяции рака, в которых проявляется дисрегуляция ALK, ROS1 или TRKA.
[0505] Пример 10: Модель ALCL Karpas 299
[0506]
3
Группа лечения в последний день лечения
Группа лечения в первый день лечения
Контрольная группа в последний день лечения
Контрольная группа в первый день лечения
Группа лечения в последний день лечения
Группа лечения в первый день лечения
Группа лечения в последний день лечения
Группа лечения в первый день лечения
Группа лечения в последний день лечения
Группа лечения в первый день лечения
Подтверждали влияние гибридного гена NPM-ALK в клетках Karpas 299 на рост опухоли. Мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров с опухолевыми клетками Karpas 299 (при среднем размере опухоли 160 мм) в течение семи дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 5). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли (TMV) измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля, и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 5. ʺ*ʺ означает, что средние TMV значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. Подавление роста опухоли (TGI) рассчитывали, как 100%*{1-[(TMV-TMV)/(TMV-TMV)]}, если TMV≥TMV. Если TMV<TMV, регрессию опухоли (REG) рассчитывали, как 100%*(1-TMV/TMV). В указанном исследовании соединение 1 демонстрировало способность подавлять рост опухоли на 59% и 94% при дозах 15 мг/кг и 50 мг/кг, вводимых два раза в день, соответственно. Кроме того, у 4 из 8 мышей в группе лечения, получавшей 50 мг/кг, наблюдали регрессию опухоли. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 6).
[0507] Пример 11: Модель NIH3T3 EML4-ALK дикого типа (ДТ)
[0508]
3
Голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками NIH3T3 EML4-ALK ДТ (при среднем размере опухоли 120 мм) в течение 12 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 7). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 7. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при режиме дозирования 50 мг/кг/два раза в день приводило к 41% регрессии опухоли, и у 8 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при режиме дозирования 15 мг/кг/два раза в день демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 90%, и при этом у 2 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 8).
[0509] Пример 12: Модель NIH3T3 SDC4-ROS1 ДТ
[0510]
3
Гибридный ген SDC4-ROS1 считали фактором прогрессирования опухоли при NSCLC. Голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками NIH3T3 SDC4-ROS1 ДТ (при среднем размере опухоли 100 мм) в течение 26 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 9). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 9. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при дозе 50 мг/кг приводило к 69% регрессии опухоли, и у 7 из 7 мышей наблюдали регрессию опухоли. У мышей, получавших соединение 1 в дозе 15 мг/кг, наблюдали 39% регрессию опухоли и у 7 из 8 мышей в данной группе наблюдали регрессию опухоли.
[0511] Пример 13: Модель колоректального рака KM12
[0512]
3
Абберантную активность TPM3-TRKA считали движущим фактором роста опухоли в модели KM12. Голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками KM12 (при среднем размере опухоли 100 мм) в течение семи дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 10). Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 10. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании соединение 1 в дозах 15 мг/кг и 75 мг/кг приводило к 13% и 11% регрессии опухоли, соответственно. В группе, получавшей 15 мг/кг, у 8 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. В группе, получавшей 75 мг/кг, у 5 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Не наблюдали снижения массы тела мышей, получавших соединение 1, по сравнению с мышами из контрольной группы, получавшими носитель (ФИГ. 11).
[0513] Пример 14: Связь между ингибированием ALK и противоопухолевой активностью при пероральном введении соединения 1
[0514]
Для оценки влияния соединения 1 на ингибирование фосфорилирования ALK опухолевые клетки Karpas 299 собирали через 3 часа или через 12 часов после введения последней дозы соединения 1 в исследовании повторного введения (15 мг/кг или 50 мг/кг, два раза в день в течение 7 дней). Уровень фосфорилирования ALK определяли путем иммуноблоттинга в комбинации с количественной оценкой сигнала при помощи программного обеспечения Image Studio Digit. Способность соединения 1 ингибировать фосфорилирование ALK проиллюстрирована на ФИГ. 12. При дозе 50 мг/кг фосфорилирование ALK снижалось до <5% контроля через 3 часа после перорального введения соединения 1 и сохранялось на уровне примерно 10% контроля через 12 часов после дозирования. Указанный уровень ингибирования фосфорилирования соответствует 94% TGI. При дозе 15 мг/кг фосфорилирование ALK снижалось до <10% контроля через 3 часа после перорального введения и сохранялось на уровне примерно 21% контроля через 12 часов после дозирования. Указанный уровень ингибирования фосфорилирования соответствует 59% TGI. Указанные результаты подтверждают связь между ингибированием ALK, мишени соединения 1, и степенью противоопухолевой эффективности в модели опухоли, зависимой от NPM-ALK.
[0515] Пример 15: Зависимые от дозы исследования в модели колоректального рака KM12
[0516]
3
Для исследования зависимого от дозы влияния соединения 1 на ингибирование опухоли в модели колоректального рака KM12 голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками KM12 (при среднем размере опухоли 125 мм) в течение семи дней два раза в день перорально вводили соединение 1 в дозах не более, чем 15 мг/кг (ФИГ. 13). Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 13. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании соединение 1 подавляло рост опухоли зависимым от дозы образом. Лечение соединением 1 при дозе 15 мг/кг приводило к 1% регрессии опухоли, и у 5 из 10 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 3 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 91%, и при этом у 2 из 10 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 1 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 77%. Не наблюдали снижения массы тела мышей, получавших соединение 1, по сравнению с мышами из контрольной группы, получавшими носитель (ФИГ. 14).
[0517] Пример 16: Модель Ba/F3 EML4-ALK ДТ
[0518]
3
Мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров с опухолевыми клетками Ba/F3 EML4-ALK ДТ (при среднем размере опухоли 190 мм) в течение 14 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 15). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 15. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании соединение 1 при дозе 75 мг/кг приводило к 54% регрессии опухоли, при этом у 6 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при режиме дозирования 15 мг/кг/два раза в день демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 74%. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 16).
[0519] Пример 17: Модель Ba/F3 EML4-ALK G1202R
[0520]
3
Для исследования влияния соединения 1 на подавление роста опухолей, имеющих устойчивые к лекарственным средствам мутации фронта растворителя, мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров с опухолевыми клетками Ba/F3 EML4-ALK G1202R (при среднем размере опухоли 210 мм) в течение 17 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 17). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 17. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании соединение 1 при дозе 75 мг/кг приводило к подавлению роста опухоли с TGI, составляющим 99%. В указанной группе у 4 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 15 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 56%. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 18).
[0521] Пример 18: Модель Ba/F3 CD74-ROS1 ДТ
[0522]
3
Гибридный ген CD74-ROS1 считали одним из факторов прогрессирования опухоли при NSCLC. Мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров с опухолевыми клетками Ba/F3 CD74-ROS1 ДТ (при среднем размере опухоли 200 мм) в течение 12 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 19). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 19. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при дозе 75 мг/кг приводило к 100% регрессии опухоли, при этому у 8 из 8 мышей наблюдали полную регрессию опухоли. Также в группе мышей, получавших соединение 1 в дозе 15 мг/кг, наблюдали 97% регрессию опухоли и у 8 из 8 мышей в указанной группе наблюдали регрессию опухоли. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 20).
[0523] Пример 19: Модель Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R
[0524]
3
Для исследования влияния соединения 1 на подавление роста опухолей, имеющих устойчивые к лекарственным средствам мутации фронта растворителя, мышам ТКИД/с дефицитом натуральных клеток-киллеров с опухолевыми клетками Ba/F3 CD74-ROS1 G2032R (при среднем размере опухоли 210 мм) в течение 11 дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 21). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 21. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при дозе 75 мг/кг приводило к 100% регрессии опухоли, при этом у 8 из 8 мышей наблюдали полную регрессию опухоли. Соединение 1 при режиме дозирования 15 мг/кг/два раза в день демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 99%, при этом у 2 из 8 мышей в указанной группе наблюдали регрессию опухоли. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 22).
[0525] Пример 20: Модель NIH3T3 LMNA-TRKA ДТ
[0526]
3
Гибридный ген LMNA-TRKA считали одним из факторов прогрессирования опухоли при колоректальном раке. Голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками NIH3T3 LMNA-TRKA ДТ (при среднем размере опухоли 240 мм) в течение пяти дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 23). Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 23. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при дозе 15 мг/кг приводило к 28% регрессии опухоли, при этом у 7 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 3 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 100%, при этом у 3 из 8 мышей наблюдали регрессию опухоли. Не наблюдали снижения массы тела мышей, получавших соединение 1, по сравнению с мышами из контрольной группы, получавшими носитель (ФИГ. 24).
[0527] Пример 21: Модель NIH3T3 LMNA-TRKA G595R
[0528]
3
Для исследования влияния соединения 1 на подавление роста опухолей, имеющих устойчивые к лекарственным средствам мутации фронта растворителя, голым бестимусным мышам с опухолевыми клетками NIH3T3 LMNA-TRKA G595R (при среднем размере опухоли 230 мм) в течение пяти дней два раза в день перорально вводили соединение 1 (ФИГ. 25). Контрольная группа мышей получала только носитель. Объем опухоли измеряли в назначенные дни при помощи электронного циркуля и результаты показаны в виде среднего значения ± СОС на ФИГ. 25. ʺ*ʺ означает, что средние объемы опухолей значительно ниже в группе лечения по сравнению с контрольной группой (p<0,05), что определено путем двухфакторного ANOVA с повторными измерениями и последующего анализа post hoc. В указанном исследовании лечение соединением 1 при дозе 60 мг/кг приводило к 23% регрессии опухоли, при этом у 10 из 10 мышей наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 15 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 97%, при этом у 3 из 8 мышей в указанной группе наблюдали регрессию опухоли. Соединение 1 при дозе 3 мг/кг демонстрировало способность подавлять рост опухоли с TGI, составляющим 56%. Массу тела мышей измеряли в назначенные дни и в группах лечения, получавших соединение 1, не наблюдали снижения массы тела (ФИГ. 26).