ЖИДКОСТЬ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ООЦИСТ КОКЦИДИЙ, ЦИСТ БАЛАНТИДИЙ И ЖИАРДИЙ, ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ РАЗНЫХ КЛАССОВ, КЛЕЩЕЙ, НАСЕКОМЫХ, ИХ ОТДЕЛЬНЫХ СТАДИЙ РАЗВИТИЯ
LIQUID OF DIAGNOSTICS OF COCCIDIA OOCYSTS, CYSTS OF BALANTIDIUM COLI AND GIARDIA, HELMINTH EGGS OF DIFFERENT CLASSES, MITES, INSECTS, SEPARATE STAGES OF THEIR DEVELOPMENT

Изобретение относится к ветеринарии, медицине и предназначено для выявления ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации.
4
3
Известны растворы для выявления ооцист простейших и яиц гельминтов: насыщенный раствор поваренной соли NaCl; раствор аммиачной селитры - нитрата аммония NHNO; жидкость Дарлинга (прототип), представляющая собой смесь глицерина и насыщенного раствора соли NaCl в соотношении 1:1. (1. Практическая паразитология, под ред. проф. Д.В.Виноградова-Волжинского Л. 1977; 2. Справочник ветеринарного лаборанта под ред. В.Я.Антонова, М., Колос, 1981; 3. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник, М., 1984; 4. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственных животных. Под ред. М.Ш.Акбаева. М., Колос, 1994; 5. Ларионов С.В., Давыдов Ю.М., Бычкова Л.В. Практикум по паразитологии. Саратов, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», 2003).
Однако рассмотренные растворы не являются достаточно эффективными для требуемых исследований, так как яйца некоторых трематод - фасциол и парамфистом не всплывают, растворы не позволяют выделять клещей, насекомых, их отдельные стадии развития из соскобов с животных и птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и из фекальных масс. Кроме того, кристаллизация соли в пленке жидкости на предметном стекле затрудняет обнаружение яиц гельминтов, и делает невозможным обнаружение ооцист простейших.
Исследование фекалий с помощью жидкости Дарлинга осуществляется следующим образом: осадок фекальных масс перемешивают с жидкостью и центрифугируют 2 мин со скоростью вращения 1500 об/мин, что приводит к флотации. Яйца гельминтов всплывают на поверхностную пленку в пробирке, с которой их снимают копрологической петлей для обнаружения ооцист простейших, яиц гельминтов из фекальных масс.
Жидкость Дарлинга позволяет проводить копрологические исследования, но относительная плотность жидкости Дарлинга (1,20-1,22 г/мл) не позволяет применять ее при диагностике трематодозов.
Задача изобретения - создание жидкости с многофункциональными возможностями для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации.
Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития входят следующие компоненты: первый - вода - 48% и натрия хлорид - 25%, второй: также в виде жидкости, содержащей: лаурилсульфат натрия - 16,3%, (насыщенный раствор соли), полиэтиленгликоль - 10%, бензоат натрия - 0,7%, при этом первый и второй компоненты смешивали между собой в соотношении 1:1. Жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, их отдельных стадий развития гомогенная, опалесцирующая, полупрозрачная, сиропообразной консистенции.
Готовую жидкость переливали в колбу, этикетировали и использовали следующим образом. Сначала центрифугированием субстратов, объектов внешней среды, фекальных масс получали осадок, содержащий ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яйца гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, который перемешивали с готовой жидкостью. Полученную смесь вновь центрифугировали 4-5 мин со скоростью вращения центрифуги 1500 об/мин, что приводило к флотации объектов исследования, которые находились в верхнем слое жидкости пробирки. Для микроскопирования объекты исследования снимали копрологической петлей с поверхностной пленки жидкости.
За счет разницы относительной плотности жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития  (1,33-1,36 г/л) и объектов исследования они всплывали и находились в ее верхнем слое. Выделение ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс, путем их осаждения и флотации проводили по общепринятой методике с использованием созданной жидкости. Эффективность исследований достигала 100%.
Практическая апробация осуществлялась в звероводческих и животноводческих хозяйствах Ленинградской области. В клинике Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины проводилось обследование животных: собак, кошек, пушных зверей, крупного рогатого скота.
При обследовании животных, которым были поставлены предварительные диагнозы: саркоптоз, отодектоз, хориоптоз, демодекоз, псороптоз, хейлетиеллез, бовиколез, в каждом отдельном случае делали традиционный соскоб, но помещали его в пробирку с жидкостью для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития.
Далее смесь центрифугировали 4-5 мин при вращении 1500 об/мин, затем копрологической петлей снимали верхнюю пленку, помещали ее на предметное стекло и микроскопировали, при этом в 100% случаев лабораторным исследованием подтверждали предварительный диагноз, устанавливая окончательный. Субстраты, собранные в животноводческих помещениях и звероводческих хозяйствах (пыль, скопление грязи, жиропот, смесь помета и шерсти и т.д.) исследовали по уже отработанной методике с использованием созданной жидкости и в 100% случаев обнаруживали всех вышеперечисленных паразитов. В табл.1 и 2 приведены результаты апробации.
Таблица 1
Результаты диагностики арахноэнтомозов при использовании жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития.
Группа живот. (n)
Болезни
Саркоптоз, % пораж.
Отодектоз, % пораж.
Хориоптоз, % пораж.
Демодекоз, % пораж.
Псороптоз, % пораж.
Хейлетиоз, % пораж.
Бовиколез, % пораж.
Собаки (n=150)
12
24
0
42
0
10
0
Кошки (n=210)
18,6
80
0
0
0
1,4
0
Песцы (n=320)
45
55
0
0
0
0
0
КРС* (n=180)
1,1
0
38,9
30,6
39
0
20
Примечание:
* - у крупного рогатого скота было выявлено сочетанное проявление хориоптоза, демодекоза и бовиколеза.
Таблица 2
Результаты выявления гельминтозов и протозоозов при использовании жидкости для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития.
Группа животных (n)
Болезни
Аскаридатозы, % пораж.
Трихоцефалезы, % пораж.
Трематодозы, % пораж.
Стронгилятозы, % пораж.
Протозоозы, % пораж.
Собаки (n=150)
68,6
2,85
0
5,7
38,6
Кошки (n=210)
30
0
4
0
50
Песцы (n=320)
72
0
5
2
40
КРС (n=180)
1,2
10
50
24
20
Примечание:
Во всех исследованных группах у отдельных животных была выявлена сочетанная инвазия.
В отличие от известных жидкостей, созданная жидкость для диагностики ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий, яиц гельминтов разных классов, клещей, насекомых, и их отдельных стадий развития позволяет обследовать субстраты (например, пыль), находящиеся в звероводческих и животноводческих помещениях. Для этой цели брали навески образцов субстратов по 1 г, смешивали с созданной жидкостью и центрифугировали 4-5 мин при 1500 об/мин, затем копрологической петлей снимали верхний слой, помещали на предметное стекло и проводили микроскопию.
Таким образом, результаты вышеизложенных опытов позволили сделать заключение: использование созданной жидкости в диагностических исследованиях позволили 100% подтвердить диагнозы во всех случаях, путем выявления ооцист кокцидий, цист балантидий и жиардий (лямблий), яиц гельминтов разных классов (нематоды, трематоды и цестоды), клещей, насекомых, их отдельных стадий развития из соскобов с животных, птиц, из субстратов, из объектов внешней среды и фекальных масс. Кроме того, по сравнению с вышеуказанными и другими известными жидкостями (жидкость Дарлинга), созданная жидкость является оригинальной композицией и обладает рядом преимуществ:
1. Экспресс-диагностикум для лабораторных исследований;
2. Позволяет использовать ее при подтверждении диагнозов не только на гельминтозы и кишечные протозоозы, но и на саркоптоидозы, демодекозы и некоторые энтомозы, т.е. увеличивает спектр определяемых болезней;
3. Действие компонентов позволяет очищать соскобы и пробы фекальных масс от сопутствующих артефактов, затрудняющих просмотр препаратов при микроскопии;
4. Компоненты, входящие в состав жидкости, не кристаллизуются;
5. Жидкость позволяет усилить эффект четкости объекта в микроскопе;
6. В состав жидкости входит бензонат натрия, что препятствует развитию бактериальной микрофлоры, поэтому приготовленную жидкость можно хранить более 30 дней;
7. Жидкость в предлагаемой композиции не токсична для людей;
8. Жидкость не требует особых условий хранения и транспортировки, при дневном свете не теряет своих свойств, сохраняет гомогенность;
9. Жидкость можно использовать extempore после ее приготовления.