СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ЛИЛИЙ IN VITRO
METHOD FOR LILIES REPRODUCTION IN VITRO

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений лилий in vitro.
2
Известен способ размножения лилий in vitro (Мазур A.M., Калашникова Е.А. Клональное микроразмножение ценных гибридов лилий // Сельскохозяйственная биотехнология. Избранные работы / Под ред. В. С.Шевелухи. - М.: Евразия, 2000. - 264 с.). В качестве первичного экспланта использовали чешуйки луковиц, которые стерилизовали 0,1%-ным раствором сулемы (HgCl) в течение 10 минут, высаживали на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 20-60 г/л и регуляторами роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 1,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, и культивировали в световой комнате при температуре 25±1°С, 24-часовом освещении белыми люминесцентными лампами с интенсивностью света 3000 лк. Процесс ризогенеза индуцировали добавлением в питательную среду α-нафтилуксусной кислоты в концентрации от 0,2 мг/л до 0,5 мг/л.
Недостатком данного способа является невысокий коэффициент размножения.
Технический результат заключается в повышении выхода размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся микролуковиц при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.
-11
Технический результат достигается тем, что в способе размножения лилий in vitro, включающем отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, отделение микролуковиц от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга, перед стерилизацией экспланты обрабатывают раствором препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч, экспланты высаживают на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга с содержанием регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты, затем микролуковицы отделяют от эксплантов и укореняют на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением 10 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С.
Способ осуществляют следующим образом.
Из луковицы лилии отделяют внутренние (сочные) чешуи, которые используют в качестве эксплантов, замачивают их в растворе препарата эпибрассинолид в концентрации 0,1 мг/л и времени экспозиции 1 ч. Длительность обработки и концентрация препарата эпибрассинолид подобраны на основании предварительных экспериментов (табл.1).
После этого чешуи стерилизуют и в стерильных условиях высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 7,0 г/л агара, 60 г/л сахарозы и регуляторы роста - 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты. Состав среды, использованный при культивировании чешуи луковиц, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранных в предварительных опытах концентраций сахарозы (табл.2) и регуляторов роста (табл.3). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°С (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивировании эксплантов растений).
Таблица 2
Концентрация сахарозы, г/л
Микролуковицы, штук/эксплант
10
1,6
20
1,8
30
2,4
40
2,5
50
2,6
60
2,9
70
2,7
При выращивании эксплантов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением сочетания 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты в течение 4 недель культивирования образуется максимальное число микролуковиц - 8 штук/эксплант (табл.3).
-11
В последующем микролуковицы отделяют от чешуй и пересаживают на питательную среду для укоренения. Укоренение проводят на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 10 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты в темноте при температуре 14°С. Эти условия были выбраны как наиболее способствующие укоренению пробирочных растений лилий (табл.4, 5). После укоренения размноженные растения переносят в почву и выращивают обычным способом.
Таблица 5
Длина светового дня, ч
Процент укоренения
24
53,1±2,8
16
84,4±3,1
0
100±0,0
Температура, °С
Процент укоренения
14
100±0,0
23
65,1±1,6
-11
В результате использования предложенного способа повышается выход размножаемого материала (8 штук/эксплант) за счет увеличения количества образующихся микролуковиц при положительном влиянии предобработки чешуй лилий препаратом эпибрассинолид с последующим их культивированием на питательной среде в присутствии сочетания регуляторов роста 1,5 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,5 мг/л индоуксусной кислоты. Культивирование микролуковиц на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 10 моль/л тидиазурона и 0,5 мг/л α-нафтилуксусной кислоты, в темноте при температуре 14°С приводит к 100% укоренению и высокой жизнеспособности растений - регенерантов при последующей высадке в почву.