СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ КОРД-ФАКТОРА ПАТОГЕННОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА
METHOD OF SUPPRESSING CORD-FACTOR OF TUBERCULOSIS MYCOBACTERIA PATHOGENICITY

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к борьбе с туберкулезом человека и животных.
Аналоги изобретения. Известен способ определения антагонистической активности пробиотиков из споровых бактерий (Сахабактисубтил) по отношению к микобактериям (патент РФ на изобретение №2328530, опубл. 10.07.2008 г., бюл. №19). Однако способ предусматривает определение антагонистической активности пробиотиков путем установления индекса блокирования роста микобактерий в течение длительного времени (45 дней). Механизм действия антагониста не раскрывается. Способ отличается большой трудоемкостью с использованием твердых питательных веществ.
Выделены штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП и известен пробиотик «Сахабактисубтил» из этих штаммов, используемые для обеззараживания птичьего помета и навоза, профилактики диарейных болезней новорожденных телят и поросят, для профилактики эндометритов коров (патенты РФ на изобретение №2105810, опубл. 27.02.1998 г., бюл. №6; №2218924, опубл. 20.12.2003 г., бюл. №35; №2352344, бюл. №2, опубл. 20.09.2008 г.). Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП не предложены для борьбы с туберкулезом животных и человека, в частности для подавления корд-фактора микобактерий.
Технический результат изобретения - способ подавления образования корд-фактора патогенных микобактерий. В жидкую питательную среду с культурой штамма патогенных микобактерий добавляют культуру штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП. В результате подавляется развитие фактора патогенности микобактерий - корд-фактора.
Суспензированную культуру изготавливают из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП, депонированных в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (Справки о депонировании от 6 февраля 2002 г., №180/15, №181/15).
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии и ВГНКИ ветеринарных препаратов.
Технический результат достигается следующим образом.
8
Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°С, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5·10 КОЕ в 1 мл.
8
В пробирки с жидкой питательной средой Школьникова проводят посев 1 мл суспензии культуры штамма бактерий М.Tuberculosis №492, содержащей 5·10 KOE в 1 мл. Затем добавляют суспензию штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях в дозе 1 мл.
Контроль: в пробирки со средой и культурой штамма бактерий М.Tuberculosis добавляют 1 мл стерильного физиологического раствора.
Учет результатов проводят через 3-5 дней в течение 21 дней инкубирования при 37°С. Готовят мазки и окрашивают по Циль-Нильсону. При микроскопировании мазков с пробирок, содержащих пробиотик, отмечают отсутствие корд-фактора, то есть культура штамма бактерий М.Tuberculosis не формирует характерные для патогенных штаммов «тяжи».
В пробирках без суспензии культуры штаммов бактерий Bacillus subtilis отмечают образование корд-фактора, обуславливающих рост микобактерий в виде «тяжей», на 14 день инкубации.
Таким образом, суспензия культуры штаммов бактерий Bacillus subtilis в питательной среде подавляет образование корд-фактора у патогенного штамма бактерий М.Tuberculosis.
Способ подавления образования корд-фактора - фактора патогенности микобактерий может быть использован в ветеринарной и медицинской практике для выбора пробиотических препаратов в качестве лечебно-профилактических средств при туберкулезе.