СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЭНДОМЕТРИТА У ЖИВОТНЫХ
AGENT FOR TREATING AND PREVENTING ENDOMETRITIS IN ANIMALS

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для лечения и профилактики эндометрита у животных, и может быть использовано в акушерстве и гинекологии при создании лекарственных средств для лечения и профилактики животных при послеродовом эндометрите.
Уровень техники
Известно химиотерапевтическое средство, применяемое для лечения эндометрита у коров путем внутриматочного введения йодинала, основным действующим веществом которого является молекулярный йод (см. Григорьева Т.Е. Лечение и профилактика эндометрита у коров. - М.: Росагропромиздат, 1988, с.40-41).
Недостатком применения йодинала является одностороннее антисептическое действие препарата, при этом на фоне возможного раздражающего действия йода на ткани матки в ней не могут происходить процессы, направленные на быстрое формирование местного локального иммунитета.
Известен способ и средство лечения эндометрита у коров, включающий внутриматочное введение лечебного препарата, при этом в качестве лечебного препарата используют 0,3%-ный раствор формалина в объеме 50 мл на одно введение, при 3-4-кратности введений с интервалом 12 ч (см. пат. №2218916, МПК A61K 1/115, опубл. 20.12.2003 г.).
Недостатком данного способа и средства является то, что данный препарат не оказывает широкого спектра действия, например, он не активен в отношении аэробных Грамм+ и Грамм- бактерий.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятое авторами за прототип является средство для лечения животных при послеродовом эндометрите, включающее противомикробные и противовоспалительные препараты и полимерную основу, при этом в качестве противомикробных препаратов оно содержит этакридина лактат и цефатоксим, в качестве противовоспалительного препарата - сок алое при следующем соотношении компонентов, масс.%: этакридина лактат 0,6; сок алое 50,4; цефатоксим 2, мочевина 15,0; формалин нейтральный 10; вода дистиллированная 5; глицерин 17,0 (см. пат. RU №2367416, МПК A61K 31/047, A61K 1/115, A61K 31/17, A61K 31/473, A61K 36/886, A61P 15/00, опубл. 20.09.2009 г.).
Недостатком данного средства является то, что оно не обладает антигистаминным действием, а именно не снимает спазм гладкой мускулатуры, не уменьшает проницаемости капилляров, так как воспалительный процесс обуславливает повышенную чувствительность к продуктам тканевого распада и антигенам микробной клетки.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является разработка средства для лечения и профилактики эндометрита у животных, обладающего выраженным противомикробным и противовоспалительным широкого спектра действием с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятием спазм гладкой мускулатуры и уменьшением проницаемости капилляров.
Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к выраженному противомикробному и противовоспалительному широкого спектра действию с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятию спазм гладкой мускулатуры и уменьшению проницаемости капилляров.
Технический результат достигается с помощью средства для лечения и профилактики эндометрита у животных, включающее противомикробные и противовоспалительные препараты, полимерную основу и дистиллированную воду, при этом оно дополнительно содержит антигистаминный препарат, в качестве которого используют тавегил, и анестезирующее средство, в качестве которого используют новокаин, причем в качестве противомикробного препарата оно содержит метронидазол, а в качестве противовоспалительного препарата содержит ципрофлоксацин и доксициклин, при этом новокаин предварительно растворяют в 1 л дистиллированной воды, а затем берут по 250 мл раствора новокаина и растворяют последовательно метронидазол, ципрофлоксацин, доксициклин и тавегил с последующим их соединением при следующем соотношении компонентов, г/л: метронидазол 4,0; ципрофлоксацин 2,0, доксициклин 1,0; тавегил 2,5; новокаин 5,0; дистиллированная вода - остальное.
Сущность приготовления средства для лечения и профилактики эндометрита у животных, заключается в следующем. Новокаин в количестве 5,0 г растворяют в 1 л дистиллированной воды, затем берут по 250 мл раствора новокаина и растворяют в нем ниже следующие препараты:
- метронидазол в количестве 4,0 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 250 мл раствора новокаина;
- ципрофлоксацин в количестве 2,0 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 250 мл раствора новокаина;
- доксициклин в количестве 1,0 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 250 мл раствора новокаина;
- тавегил в количестве 2,5 г, предварительно растертый в ступке, растворяют в 250 мл раствора новокаина, затем все компоненты соединяют и получают 1 литр.
Таким образом, использование в предлагаемом средстве метронидазола, который обладает противомикробным и противопротозойным действием, активен в отношении анаэробных микроорганизмов и простейших, некоторых Грамм+ микроорганизмов, ципрофлоксацина, который является антибактериальным препаратом группы фторхинолонов 2 поколения широкого спектра действия, действует преимущественно на Грамм+ и некоторые Грамм- бактерии, доксициклина, который является полусинтетическим антибиотиком группы тетрациклинов широкого спектра действия, активен в отношении аэробных Грамм+ и Грамм- бактерий, тавегила, который является антигистаминным препаратом группы H-1 блокаторы, уменьшает реакцию организма на гистамин, снимает спазм гладкой мускулатуры, оказывает противовоспалительное действие, уменьшая проницаемость капилляров, достигается технический результат, а именно выраженное противомикробное и противовоспалительное широкого спектра действие с одновременным уменьшением реакции организма на гистамин, снятием спазм гладкой мускулатуры и уменьшением проницаемости капилляров.
Краткое описание чертежей и иных материалов
В таблице 1 дано средство для лечения и профилактики эндометрита у животных, его характеристика.
В таблице 2 - то же, результаты изучения органолептических и токсилогических свойств средства в процессе хранения.
В таблице 3 - то же, определение хронической токсичности средства, опыты на белых мышах.
В таблице 4 - то же, аллергенность предлагаемого средства.
В таблице 5 - то же, определение эффективной профилактической дозы средства по предлагаемому изобретению.
Осуществление изобретения
Примеры конкретного выполнения получения средства для лечения и профилактики эндометрита у животных
Пример 1. Предлагаемое средство для лечения и профилактики эндометрита у животных готовят следующим образом. Берут новокаин, который является синтетическим местноанестезирующим средством, в количестве 5,0 г и растворяют в 1 л дистиллированной воды, затем берут по 250 мл раствора новокаина и растворяют в нем ниже следующие препараты:
- метронидазол, который является антибактериальным препаратом против анаэробных бактерий, достаточно часто являющихся возбудителями воспаления, но не обнаруживаемых в анализах, берут в количестве 4,0 г, предварительно растертый в ступке, и растворяют в 250 мл новокаина;
- ципрофлоксацин, который является антибактериальным препаратом группы фторхинолонов 2 поколения широкого спектра действия, действует преимущественно на Грамм+ и некоторые Грамм- бактерии, берут в количестве 2,0 г, предварительно растертый в ступке, и растворяют в 250 мл новокаина;
- доксициклин, который является полусинтетическим антибиотиком группы тетрациклинов широкого спектра действия, активен в отношении аэробных Грамм+ и Грамм- бактерий, берут в количестве 1,0 г, предварительно растертый в ступке, и растворяют в 250 мл новокаина;
- тавегил, который является антигистаминным препаратом группы H-1 блокаторы, уменьшает реакцию организма на гистамин, снимает спазм гладкой мускулатуры, оказывает противовоспалительное действие, уменьшая проницаемость капилляторов, берут в количестве 2,5 г, предварительно растертый в ступке, и растворяют в 250 мл новокаина, затем все компоненты соединяют и получают 1 литр. Хранить в темной посуде при температуре +4°C, при этом перед употреблением хорошо взболтать, затем отобрать 50 (100) мл в стерильную посуду и подогреть на водяной бане до 37°C, срок хранения 5-7 дней. Одноразовая доза применения 50 мл/20 доз или 100 мл/10 д. Стабильность средства в процессе хранения изучают путем выдерживая средства при комнатной температуре, в защищенном от света месте в течение 1 недели. Ежедневно определяют внешний вид, цвет, запахи безвредность средства, при этом + - соответсвует критериальному показателю - не соответсвует критериальному показателю.
На второй день исследования средство изменило цвет с желтоватого на красно-бурый, появился плотный бурый осадок, трудно разбивающийся при встряхивании, средство, введенное в желудок белым мышам в тест-дозе 0,6 мл на протяжении всего периода исследования, не вызывает значимых изменений клинического состояния животных. Тем не менее с учетом органолептических изменений средство признают не стойким при хранении. Рекомендовано использование ex tempore, хранение в холодильнике при температуре не выше 4°C не более 12 часов.
Таким образом, полученное средство для лечения и профилактики эндометрита у животных по предлагаемому изобретению не подлежит длительному хранению, активнодействующими компонентами средства является комплекс антибактериальных и антигистаминных средств метронидазола, ципрофлоксацина, доксициклина и тавегила в 0,5% растворе новокаина, полученное средство представляет собой мелкодисперсную суспензию желтоватого цвета, без запаха, при длительном хранении расслаивается с образованием осадка белого цвета, характеристика предлагаемого средства дана в таблице 1. Результаты изучения органолептических и токсикологических свойств средства в процессе хранения даны в таблице 2. В таблице 3 дано определение хронической токсичности средства, опыты на белых мышах. В таблице 4 дана аллергенность предлагаемого средства. В таблице 5 дано проведение опыта по эффективности применения оптимальной дозы разработанного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров.
Пример 2. Изучение токсичности и острой токсичности средства для лечения и профилактики эндометрита у животных по предлагаемому изобретению.
Для определения острой токсичности средства применяют методику, изложенную в «Методических указаниях по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных», утвержденных В.Т. Самохиным (1987). Опыт проводят на белых беспородных мышах. По принципу аналогов было отобрано 48 животных с массой тела 22,0±0,6 г. Было сформировано 6 групп мышей (n=8), поение и кормление которых прекращают за 4 часа до начала опыта. Наименьшую токсичную дозу средства определяют по наиболее токсичному лекарственному веществу, входящему в его состав - цефтриаксону. Мышам первой группы в желудок с помощью металлического зонда вводят 0,1 мл средства, животным второй группы - 0,2 мл, третьей - 0,3, четвертой - 0,4 мл, пятой - 0,5 мл, шестой - 0,6 мл. После введения средства корм дают через три часа. Наблюдение за мышами осуществляют в течение 72 часов, учитывают активность, аппетит, состояние шерстного покрова, регистрируют случаи гибели животных.
Мыши первой, второй третьей и четвертой групп в течение 20 минут после введения средства были незначительно угнетены, сбивались в кучу в углу клетки, далее вели себя активно. После дачи корма ели с аппетитом. На протяжении оставшегося времени наблюдения изменений в поведении и общем состоянии не наблюдается.
У мышей пятой и шестой групп в течение 5 минут после введения средства наблюдается инспираторная одышка, на протяжении 1-1,5 часов мыши были угнетены, шерсть взъерошена, сбивались в углу в кучу, аппетит отсутствовал. Состояние животных нормализовалось в течение 3 часов.
Летальных случаев и отклонений в клиническом состоянии животных на протяжении последующих десяти суток наблюдения не регистрировали.
Таким образом, проведенными экспериментальными исследованиями на лабораторных животных установлено, что предлагаемое средство при однократном пероральном применении малотоксично и не оказывает местного раздражающего и аллергизирующего действия.
Пример 3. С целью определения хронической токсичности средства по предлагаемому изобретению был проведен опыт по ускоренному определению кумулятивного эффекта. Было отобрано 20 белых нелинейных мышей с массой тела 22±1,2 г. По принципу аналогов сформировано две группы (n=10). Средство вводят внутрижелудочно с помощью металлического зонда ежедневно. Мышам контрольной группы таким же способом вводят дистиллированную воду. В течение 4 суток средство дают в дозе 1000 мг/кг. Следующие четверо суток животные получают средство из расчета 2000 мг/кг. В течение 9-15 дня опыта доза средства составляет 4000 мг/кг. С 15 по 20 день мыши получают препарат из расчета 8000 мг/кг.
Наблюдение осуществляют ежедневно на протяжении всего периода опыта. При оценке состояния мышей учитывают габитус животных, их активность, аппетит.
Клиническое состояние животных в течение первого и второго периодов опыта оставалось в пределах нормы, мыши были активны, с аппетитом принимали корм, шерсть гладкая. С 9-го дня опыта было отмечено, что шерсть животных стала взъерошенной, тусклой, реакция на внешние раздражители заторможена, крысы подолгу сидят у кормушки, после чего медленно начинают есть. С 15 дня стала заметна задержка в росте мышей опытной группы по сравнению с мышами контрольной группы, шерсть стала редкой, взъерошенной, мыши подолгу сидят у кормушки, после чего медленно начинают есть, упитанность животных опытной группы была ниже средней. Состояние крыс контрольной группы на протяжении всего периода наблюдения оставалось удовлетворительным.
Суммарная средняя летальная доза при многократном введении составила 88000 мг/кг.
Для определения коэффициента кумуляции используют формулу:
50
50
x
o
K=LD /LD , где
K - коэффициент кумуляции;
50
x
LD  - летальная средняя доза при многократном введении;
50
LD° - средняя летальная доза при однократном введении.
миомат
K=88000/10000=8,8
Коэффициент кумуляции равен 8,8, что относит данное средство к четвертой группе - слабо выраженная степень кумуляции.
Пример 4. Изучение аллергизирующего действия средства по предлагаемому изобретению проводят методом накожных аппликаций. Для этого были сформированы 2 группы беспородных кроликов, по 5 особей в каждой. Кроликов первой группы ежедневно сенсибилизировали многократными аппликациями (n=24) средства в один и тот же участок кожи на боку диаметром 5 см каждые 4 часа в течение четырех дней. Вторую группу (контрольную) сенсибилизировали многократными аппликациями (n=24) лошадиной сыворотки по 0,1 мл каждые 4 часа 4 дня подряд, данные представлены в таблице 4, в которой:
+ инфильтрация и отек кожи при наличии эритемы;
± очаговая эритема;
- видимой реакции нет.
Через 72 часа (на 7-ой день) проводят капельные пробы. В опытной группе используют средство по предлагаемому изобретению, в контрольной - лошадиную сыворотку.
Учет реакции ведут каждые 24 часа, обращая внимание на признаки развития дерматита в местах капельной пробы. В результате проведенных исследований установлена низкая аллергенность разработанного комплекса средства при накожных аппликациях.
Пример 5. Проведение опыта по эффективности применения оптимальной дозы разработанного средства для профилактики и лечения острого гнойно-катарального эндометрита у коров.
Проведено исследование по установлению оптимальной профилактической дозы препарата на 60 коровах голштинской породы, подобранных по принципу пар-аналогов, разделенных на четыре группы, по 15 голов в каждой группе, одна из них служит контролем. Профилактическая доза предлагаемого средства в первой группе составила 50 мл, во второй - 80 мл, в третьей - 100 мл, в четвертой (контрольная) применяют препарат рифапол в дозе 80 мл. Препараты вводят со второго дня после отела через 48 часов трехкратно. За животными ведут наблюдения до их плодотворного осеменения.
При проведении экспериментальных исследований за опытными животными ежедневно ведут клинические наблюдения, в результате которых установлено, что предлагаемое средство в дозах 50, 80 и 100 мл обладает различной профилактической эффективностью, полученные данные сравнивают с контрольной группой животных (см. табл.5).
На основании проведенных исследований установлено, что доза 50 мл оказалась малоэффективной, так как послеродовые осложнения диагностировались у 53,3% коров (субинволюция матки - 33,3%; послеродовой эндометрит - 20,0%). Во второй группе послеродовые осложнения наблюдались у 13,3%, а в третьей - у 6,7% животных.
У коров второй и третьей группы, которым вводят средство в дозе 80 и 100 мл регистрировалось выделение лохий, через 24-48 часов после введения предлагаемого средства. На шестой-седьмой день после отела при ректальном обследовании отмечалось уменьшение размера матки и ее регидность. В контрольной группе животных, которым вводят внутриматочно препарат рифапол в дозе 80 мл, субинволюция матки отмечалась у 13,3% коров, а послеродовой эндометрит - у 20,0% животных.
Следовательно, введение средства в дозе 80 мл является эффективным методом профилактики послеродовых осложнений, а применение средства в дозе 100 мл являлось экономически не выгодным, так как приводит к перерасходу этого средства. В сравнении с контрольной группой коров средство показало себя более эффективным профилактическим средством.
Пример 6. Проведены исследования по определению гематологических и биохимических показателей крови коров после применения комплексного лечения при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите (n=88).
При проведении гематологических и биохимических исследований сыворотки крови установлено, что после лечения коров с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом показатели общего белка увеличились. Так, в первой группе животных - с 69,3±1,32 до 72,9±2,1 (на 5,2%); во второй - с 68,9±1,31 до 70,1±2,0 (на 1,74); в третьей - с 69,7±1,41 до 71,1±2,3 (на 2,0%), уровень кальция у коров первой группы также увеличился с 1,5±0,06 до 2,2±0,1 (на 4,7%); у животных второй группы наблюдается снижения кальция с 1,3±0,06 до 1,0±0,18 (на 3,0%); также отмечается уменьшение кальция и в третьей группе коров с 1,48±0,05 до 1,1±0,03 (на 3,5%), произошло увеличение неорганического фосфора, так, в первой группе - с 1,50±0,03 до 2,09±0,23 (на 3,9%); во второй группе коров - с 1,46±0,04 до 2,0±0,13 (на 3,7%); в третьей - с 1,55±0,04 до 2,14±0,06 (на 3,8%), содержание альбуминов также увеличилось в первой группе коров с 20,4±1,8 до 26,3±2,6 (на 28,9%); во второй - с 25,7±3,2 до 31,8±2,3 (на 23,7%); в третьей - с 28,1±1,0 до 33,8±2,3 (на 20,3%).
Наличие α-глобулинов в сыворотке крови коров после лечения увеличивается в первой группе коров с 15,6±1,8 до 18,1±1,2 (на 16,4%); во второй - с 14,7±0,6 до 16,8±1,1 (на 14,3%); в третьей - с 13,1±0,4 до 14,9±2,1 (на 13,7%) - это указывает на мобилизацию иммунной системы в организме животного, что способствует благоприятному исходу течения болезни.
Содержание β-глобулиновов в первой группе коров - с 8,6±1,7 до 8,9±1,8 (на 0,35%); во второй - с 9,5±0,6 до 9,8±0,6 (на 0,32%); в третьей - с 10,1±0,7 до 10,4±0,9 (на 0,3%). Следовательно, уровень β-глобулиновов до и после лечения находится почти на одном уровне. Количество γ-глобулинов в сыворотке крови коров после лечения увеличилось в первой группе коров с 27,6±2,6 до 32,8±4,6 (на 18,8%); во второй - с 25,7±0,4 до 28,8±0,7 (на 12,1%); в третьей - с 23,2±1,32 до 25,9±0,3 (на 11,6%).
В результате проведенных биохимических исследований сыворотки крови коров с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом до и после лечения установлено, что после лечения большинство биохимических показателей имели тенденцию к повышению.
Следовательно, использование предлагаемого средства при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите вызвало положительный сдвиг как в белковом обмене, так и в морфологических показателях крови.
В результате проведенных исследований по определению активности индикаторных ферментов щелочной фосфотазы, AST и ALT установлено, что в опытных и контрольной группах животных наблюдается повышение их активности, но в опытных группах коров их повышение происходит более интенсивно. Активность индикаторных ферментов сыворотки крови животных определяет механизм адаптивности организма при различных изменениях физиологического состояния коров.
При проведении комплексного лечения в опытных и контрольной группах животных наблюдается повышение щелочной фасфотазы (ЩФ), которое связано с выходом глюкозы из тканей после дефосфорилирования, в то же время в первой опытной группе на 10,8%, во второй - на 8,7%, в третьей - на 5,7%, а в контрольной группе на 3,3%. Повышение активности AST наблюдается при значительной интенсивности, а также взаимосвязи белкового, углеводного и липидного обменов. Увеличение содержания ALT сопровождается усилением аланинглюкозного пути с выделением из клеток глюкозы за счет ее дефосфорилирования повышенной активностью щелочной фасфотазы. По результатам экспериментальных исследований полученные данные активности индикаторных ферментов крови отражают активность процессов, формирующих гомеостаз организма.
Следовательно, лечение острого послеродового гнойно-катарального эндометрита должно быть комплексным с применением не только этиотропного препарата, но и препаратов заместительной и патогенетической терапии.
Следовательно, использование нового предлагаемого средства для лечения коров с послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом способствует получению высокого лечебного эффекта и повышению показателей естественной резистентности организма коров.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- выраженное противомикробное и противовоспалительное широкого спектра действие;
- уменьшение реакции организма на гистамин;
- снятие спазм гладкой мускулатуры;
- уменьшение проницаемости капилляров;
- высокий лечебный эффект;
- повышение показателей естественной резистентности организма коров.
Таблица 1
№/№
Наименование показателя
Норма по НТД
1
Описание препарата
Мелкодисперсная суспензия
2
Прозрачность и цветность
Суспензия желтоватого цвета, при отстаивании образуется осадок
3
Безвредность
LD<sub>50</sub>>10000 мг/кг. 4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76
Таблица 2
Показатель
Характеристика(норма)
Дни хранения
1
2
3
4
5
6
7
Внешний вид ицвет
Мелкодисперснаясуспензия, желтоватого цвета, при отстаивании образуется осадок
+
-
-
-
-
-
-
Запах
Слабый, неспецифический
+
+
-
-
-
-
-
Безвредность в тест-дозе 0,6 мл на одну мышь
Безвреден
+
+
+
+
+
+
+
Таблица 3
Номер периода
I
II
III
IV
Сутки от начала опыта
1-4
5-8
9-15
15-20
Доли от LD<sub>50</sub>
0,1
0,2
0,4
0,8
Доза от LD<sub>50</sub>
1000
2000
4000
8000
Гибель (%)
0
0
0
0
Суммарная доза за период (на 1 кг массы тела)
4000
8000
28000
48000
Суммарная доза(на 1 кг массы тела)
4000
12000
40000
88000
Таблица 4
Препарат
№ животного
Реакция кожи после капельной пробы
12 часов
48 часов
72 часа
Средство по предлагаемому изобретению
1
-
-
-
2
±
-
-
3
±
-
-
Контроль (сыворотка)
1
+
±
±
2
+
±
±
3
±
-
-
Таблица 5
Однократная доза препарата
Кол-во коров вгруппе
Послеродовые осложнения
Субинволюция матки
Послеродовойэндометрит
Всего
n
%
n
%
n
%
1. 50 мл
15
5
33,3
3
20,0
8
53,3
2. 80 мл
15
1
6,7
1
6,7
2
13,3
3. 100 мл
15
1
6,7
-
-
-
6,7
4. контрольная
15
2
13,3
3
20,0
5
33,3