СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ СРЕДСТВО
STRESS PROTECTOR

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для профилактики и лечения осложнений острых стрессорных воздействий со стороны желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).
2
2
Основными направлениями профилактики и лечения стресс-повреждений желудка являются антацидная, антисекреторная и гастропротекторная терапия, направленные на поддержание pH выше 3,5 (до 6,0), нормализация моторики желудка, повышение устойчивости слизистого барьера. Исходя из физиологического соотношения между моторно-эвакуаторной функцией желудка и секрецией соляной кислоты, для профилактики и лечения стресс-язв используют: ингибиторы протонной помпы (омепразол); антагонисты H-рецепторов (H-блокаторы) (ранитидин); антацидные средства и гастропротекторы (сукральфат). Термин стресс-повреждение желудка, или синдром острого повреждения желудка (СОПЖ) - это повреждения, возникающие при нарушении механизмов его защиты у больных, находящихся в критическом состоянии ("Профилактика стресс-повреждений верхнего желудочно-кишечного тракта у больных в критическом состоянии" Методические рекомендации Российская ассоциация специалистов по хирургическим инфекциям (РАСХИ), Москва 2004 г.). Эрозивно-язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки выявляют у 75% (40-100%) больных в первые часы пребывания в отделении интенсивной терапии (ОИТ) (Fennerty MB. Crit Care Med 2002; 30 (6): 351-5). Основными причинами повреждения целостности слизистой оболочки желудка являются: локальная ишемия/реперфузия, сопровождающаяся избыточным/аномальным синтезом оксида азота, свободных радикалов, цитокинов, снижением синтеза защитных простагландинов, гибелью эпителиальных клеток и угнетением процесса их регенерации.
Однако проблема профилактики и лечения стресс-повреждения желудка при различных критических состояниях остается острой, поэтому, учитывая патогенез данных состояний, поиск стресспротекторов в ряду веществ с антиоксидантной и антигипоксантной активностью является актуальной задачей.
Цель изобретения: расширение арсенала антистрессорных средств. Цель достигается применением диосмина (7-рутинозид диосметин) в качестве стресспротектора.
В настоящий момент диосмин применяется в клинической практике в качестве венотонизирующего средства. При экспериментальных исследованиях иммобилизационно-болевого стресса было впервые выявлено его стресспротекторное действие.
28
32
15
пл
В эксперименте использовали субстанцию диосмина, выделенную из травы вики изменчивой профессором, заведующим кафедрой органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии Оганесяном Э.Т. Субстанция представляет собой серый порошок, плохо растворимый в воде, который обладает следующими свойствами: взаимодействовать со свободными радикалами; связываться с различными ферментами, изменяя их активность; участвовать в транспорте электронов; образовывать хелатные комплексы с различными ионами металлов. Диосмин (CHO, Т 290-293°C) является основным флавоноидом надземной части вики изменчивой, представляет собой 7-рутинозид диосметина. Характерной особенностью данного биозида является высокая прочность гликозидной связи (Шаренко О.М. Химико-технологическое обоснование использования вики изменчивой, вики Гроссгейм и вики обрубленной как источников получения гепатозащитных и венотонизирующих средств: Дисс…канд. фармац. наук. - Пятигорск, 2005). Диосмин - основной компонент многих венотонизирующих препаратов.
Пример. Крысе массой 210 г внутрижелудочно через зонд вводили водный раствор предварительно суспендированной с лецитином субстанции диосмина объемом 1,5-2 мл в дозе 100 мг/кг однократно в течение 7 суток. Затем животное подвергали 24-часовому иммобилизационно-болевому стрессу. На 8-е сутки от начала опыта животное было декапитировано с учетом требований этического комитета. После вскрытия взвешивали тимус, надпочечники и исследовали стрессорное повреждение слизистой оболочки желудка (СОЖ) для оценки «триады» стрессорного повреждения. Кроме того, был произведен забор крови для получения сыворотки, в которой определяли активность перекисного окисления липидов (ПОЛ), а также ткань желудка для гистологического исследования и для получения гомогената, в котором также определяли активность ПОЛ.
При визуальном обследовании слизистая оболочка была слабо гиперемирована, складки не утолщены, единичные точечные кровоизлияния, площадь и количество язвенных дефектов были достоверно меньше, чем в контрольной группе животных (см. табл.1). Масса надпочечников у данной крысы составила 30 и 29 мг, что приближается к среднему значению у интактных животных и значительно ниже среднего показателя у животных контрольной группы. Масса тимуса у данной крысы - 81 мг, что приближается к среднему значению у интактных животных и выше среднего показателя у животных контрольной группы (см. табл.2). В результате исследования активности ПОЛ светосумма в гомогенате желудка данной крысы 58143, что значительно ниже средней величины у контрольных животных и ближе к среднему значению у интактной группы. Значение величины светосуммы в сыворотке крови у опытного животного определено на уровне 73281, что приближается к среднему значению у интактных животных и значительно ниже среднего показателя у животных контрольной группы (см. табл.3).
В результате гистологического исследования срезов ткани желудка интактной крысы патологических изменений не выявлено (см. фото 1). При микроскопическом исследовании препаратов стенки желудка опытной крысы было выявлено значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка по сравнению с животными контрольной группы (см. фото 2, 3).
Лабораторные исследования были выполнены на 30 крысах-самцах линии Вистар массой 200-220 г в осенне-зимний период. Все животные были разделены на контрольную (интактные крысы) и 2 опытные группы (иммобилизационно-болевой стресс; иммобилизационно-болевой стресс+лекарственное вещество).
Количество животных в каждой серии составляло 10 особей. Все экспериментальные животные содержались в обычных условиях вивария в соответствии с нормами кормления и содержания лабораторных животных.
Опытным крысам ежедневно внутрижелудочно вводили водный раствор субстанции диосмина в дозе 100 мг/кг однократно в течение 7 суток. Затем животных подвергали 24-часовому иммобилизационно-болевому стрессу. На 8-е сутки от начала опыта животных декапитировали с учетом требований этического комитета.
После вскрытия желудка оценивали картину слизистой оболочки (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения). Индекс Паулса, или индекс изъязвления, (ИП) определяли по формуле:
ИП=А×В/100,
где А - среднее количество язв на 1 животное; В - количество животных с язвами в группе (в %). Противоязвенную активность препаратов определяли как отношение ИП контрольной группы к опытной (см. табл.1). Препарат считали активным, если противоязвенная активность в терапевтической дозе равна 2 и более (Пупыкина, К.А. Лечебное действие противоязвенного сбора /К.А.Пупыкина, Н.Ж.Басченко, Н.С.Макара // Фармация. - 2006. - №3. - С.37-38).
Тимус и надпочечники взвешивали с помощью аналитических весов. Иммобилизационно-болевой стресс у крыс приводил к выраженному увеличению массы надпочечников и уменьшению массы тимуса. При введении диосмина масса надпочечников и тимуса приближалась к таковой у интактных животных (см. табл.2).
Оценку показателей свободнорадикального окисления (СРО) проводили методом хемилюминесценции в супернатанте гомогената ткани желудка и сыворотке крови. Исследованию подвергалась сыворотка, отделяемая путем центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин цельной крови, собираемой в момент декапитации животных. В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе СРО антиоксидантных систем.
Иммобилизационно-болевой стресс у крыс приводил к выраженному повышению активности процессов перекисного окисления липидов как в желудке, так и в сыворотке крови экспериментальных животных (см. табл.3). Применение соединения приводит к снижению активности ПОЛ в желудке и сыворотке крови животных, получавших диосмин относительно контрольной группы животных (см. табл.3).
В результате гистологического исследования срезов ткани желудка животных было выявлено значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка животных, получавших диосмин по сравнению с животными контрольной группы (см. фото 2, 3).
В ходе экспериментального исследования было установлено, что соединение оказывает стресспротекторное действие, достоверно уменьшая площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, достоверно уменьшая массу надпочечников и увеличивая массу тимуса, эффективно снижая активность процессов перекисного окисления липидов, а также выраженность повреждений слизистой оболочки желудка.
Таким образом, выявлено, что диосмин:
1) уменьшает площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка;
2) уменьшает массу надпочечников и увеличивает массу тимуса;
3) значительно снижает активность перекисного окисления липидов в желудке и сыворотке крови;
4) уменьшает выраженность повреждения слизистой оболочки желудка.
Таблица 1
Стресспротекторное средство
Группа наблюденияn=10
Площадь язвенных дефектов, мм<sup>2</sup>
Количество животных с язвенными дефектами, %
Среднее количество язвенных дефектов на 1 крысу
ИП
ПА
Контроль
7,38±1,74#
100
8,00±1,79
8,0
-
(стресс)
Диосмин 100 мг/кг+стресс
0,83±0,20*
100
1,83±0,75*
1,8
4,4
Примечание. # - р<0,001 относительно интактной группы животных;
* - р<0,001 относительно контрольной группы животных.
Таблица 2
Стрессопротекторное средство
Органы исследования
Интактные животные, мг/кг массы
Контрольные животные, мг/кг массы
Диосмин 100 мг/кг, мг/кг массы
Надпочечники
20,93±1,35
63,42±4,88#
33,17±3,18*
Тимус
102,62±6,43
52,18±5,1#
88,82±4,15*
Примечание. # - р<0,001 относительно интактной группы животных;
* - p<0,001 относительно контрольной группы животных.
Таблица 3
Стресспротекторное средcтво
Среды исследования
Интактные животные
Контрольные животные
Диосмин 100 мг/кг
Сыворотка крови
45228±1765,33
343384±37019,56#
74188±2913,7*
Гомогенат желудка
42332,5±3609,24
212217,8±9350,4#
63045±9054,5*
Примечание. # - p<0,001 относительно интактной группы животных;
* - p<0,001 относительно контрольной группы животных.