МЫШЬ С ОБЩЕЙ ЛЕГКОЙ ЦЕПЬЮ

1. Способ получения полностью человеческого биспецифического антитела, предусматривающий:
a) выделение первой вариабельной области тяжелой цепи человека из В-клетки генетически сконструированной мыши, которая:
H
H
i) характеризуется геномом зародышевой линии, который представляет собой гомозиготный или гетерозиготный для универсального гена легкой цепи каппа, включающего генного сегмента Vκ зародышевой линии человека, реаранжированного с генными сегментами Jκ зародышевой линии человека, функционально связанными с генным сегментом Сκ; а также включает в себя нереаранжированные генные сегменты V человека, функционально связанные с генным сегментом С; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V человека, причем реаранжированные генные сегменты V человека включают каждый из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V4-39, V3-43, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4-61, V3-64, V3-66, V1-69, V2-70, V3-72, V3-73;
b) экспрессию первой тяжелой цепи человека, содержащей первую вариабельную область тяжелой цепи человека;
c) образование пары экспрессированной первой тяжелой цепи человека, содержащей первую вариабельную область тяжелой цепи человека, с легкой цепью человека и со второй тяжелой цепью человека, которая также связывается с легкой цепью человека.
2. Способ по п. 1, при котором реаранжированные генные сегменты Vκ и Jκ зародышевой линии человека функционально связаны с генным сегментом Сκ мыши или генным сегментом Сκ крысы.
H
H
H
3. Способ по п. 1 или 2, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека функционально связаны с генным сегментом С мыши или генным сегментом С крысы.
4. Способ по п. 1 или 2, при котором вторая тяжелая цепь человека содержит вторую вариабельную область человека, которую также выделяют из В-клетки генетически сконструированной мыши.
5. Способ по п. 1 или 2, при котором генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39 или Vκ3-20.
6. Способ по п. 1 или 2, при котором универсальная легкая цепь каппа содержит Vκ1-39 зародышевой линии человека, реаранжированной с Jκ5 зародышевой линии человека, или Vκ3-20 человека, реаранжированной с Jκ1 человека.
7. Способ по п. 1 или 2, при котором мышь:
H
H
H
(i) характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает в себя нереаранжированные генные сегменты D человека, функционально связанные как с генными сегментами V человека, так и с генными сегментами С мыши; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
(ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов D человека, причем реаранжированные генные сегменты D человека включают каждый из D7-27, D1-26, D6-25, D5-24, D4-23, D3-22, D2-21, D1-20, D6-19, D5-18, D4-17, D3-16, D2-15, D1-14, D6-13, D5-12, D4-11, D3-10, D3-9, D2-8, D1-7, D6-6, D5-5, D4-4, D3-3, D2-2, D1-1.
H
H
H
H
8. Способ по п. 7, при котором мышь характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает в себя нереаранжированные генные сегменты J человека, функционально связанные с генными сегментами V человека и генными сегментами D человека, и тем самым с генными сегментами С мыши.
H
H
H
9. Способ по п. 8, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39, и мышь включает в В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и Dчеловека, как представлено в таблице 26.
H
H
H
10. Способ по п. 8, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ3-20 и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 25.
H
H
H
H
11. Способ по п. 1 или 2, при котором первая вариабельная область человека кодируется реаранжированным, полученным из V3-49, V4-28, V4-61 или V3-66 генным сегментом.
12. Способ по п. 1 или 2, при котором только легкая цепь каппа, экспрессированная В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
13. Способ по п. 1 или 2, при котором только легкая цепь, экспрессированная В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
H
H
14. Способ п. 1 или 2, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека замещают эндогенные генные сегменты V мыши.
15. Биспецифическое антитело, производимое в соответствии со способом по любому из пп. 1-14.
16. Способ идентификации вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, применимой в производстве биспецифических антител, при этом способ предусматривает стадию:
а) выделения вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека из В-клетки подвергнутой генной инженерии мыши, которая:
H
H
i) характеризуется геномом зародышевой линии, который представляет собой гомозиготный или гетерозиготный для универсального гена легкой цепи каппа, содержащего генный сегмент Vκ зародышевой линии человека, реаранжированный с генным сегментом Jκ зародышевой линии человека, функционально связанным с генным сегментом Сκ; а также включает в себя нереаранжированные генные сегменты V человека, функционально связанные с генным сегментом С; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V человека, причем реаранжированные генные сегменты V человека включают каждый из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V4-39, V3-43, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4-61, V3-64, V3-66, V1-69, V2-70, V3-72, V3-73.
17. Способ по п. 16, при котором реаранжированные генные сегменты Vκ и Jκ зародышевой линии человека функционально связаны с генным сегментом Сκ мыши или генным сегментом Сκ крысы.
H
H
H
18. Способ по п. 16, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека функционально связаны с генным сегментом С мыши или генным сегментом С крысы.
19. Способ по п. 16, при котором генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39 или Vκ3-20.
20. Способ по п. 16, при котором универсальная легкая цепь каппа содержит Vκ1-39 зародышевой линии человека, реаранжированный с Jκ5 зародышевой линии человека, или Vκ3-20 человека, реаранжированного с Jκ1 человека.
21. Способ по п. 16, при котором мышь:
H
H
H
(I) характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает в себя нереаранжированные генные сегменты D человека, функционально связанные как с генными сегментами V человека, так и с генными сегментами С мыши; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
(II) включает в себя В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов D человека, причем реаранжированные генные сегменты D человека включают в себя каждый из D7-27, D1-26, D6-25, D5-24, D4-23, D3-22, D2-21, D1-20, D6-19, D5-18, D4-17, D3-16, D2-15, D1-14, D6-13, D5-12, D4-11, D3-10, D3-9, D2-8, D1-7, D6-6, D5-5, D4-4, D3-3, D2-2, D1-1.
H
H
H
H
22. Способ по п. 21, при котором мышь характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает в себя переаранжированные генные сегменты J человека, функционально связанные с генными сегментами V человека и генными сегментами D человека, и тем самым с генными сегментами С мыши.
H
H
H
23. Способ по п. 22, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 26.
H
H
H
24. Способ по п. 22, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ3-20, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 25.
H
H
H
H
25. Способ по любому из пп. 16-24, при котором вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина человека кодируется реаранжированным, полученным из V3-49, V4-28, V4-61 или V3-66 генным сегментом.
26. Способ по любому из пп. 16-24, при котором только легкая цепь каппа, экспрессированная В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
27. Способ по любому из пп. 16-24, при котором только легкая цепь, экспрессированная В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
H
H
28. Способ по любому из пп. 16-24, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека замещают эндогенные генные сегменты V мыши.
29. Способ изготовления продукта, который представляет собой антигенсвязывающий белок, предусматривающий:
(a) выделение вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека из В-клетки подвергнутой генной инженерии мыши, которая:
H
i) характеризуется геномом зародышевой линии, который представляет собой гомозиготный или гетерозиготный для универсального гена легкой цепи каппа, включающего реаранжированные генные сегменты Vκ и Jκ зародышевой линии человека, генные сегменты Vκ выбраны из генных сегментов Vκ1-39 или Vκ3-20; а также включает нереаранжированные генные сегменты V человека, и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V человека, причем реаранжированные генные сегменты V человека включают в себя каждый из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V4-39, V3-43, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4,
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
где идентифицированная вариабельная область тяжелой цепи происходит от одного из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V4-39, V3-43, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4;
(b) экспрессию тяжелой цепи, содержащей выделенную из В-клетки мыши вариабельную область тяжелой цепи человека и константную область тяжелой цепи человека, и
(c) образование пары экспрессированной тяжелой цепи, содержащей выделенную из В-клетки мыши вариабельной области тяжелой цепи человека, с легкой цепью, содержащей вариабельную область легкой цепи, полученную из Vκ1-39/Jκ и Vκ3-20/Jκ и константной области легкой цепи человека.
30. Способ по п. 29, при котором реаранжированные генные сегменты Vκ и Jκ зародышевой линии человека функционально связаны с генным сегментом Сκ мыши или генным сегментом Сκ крысы.
H
H
H
31. Способ по п. 29 или 30, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека функционально связаны с генным сегментом С мыши или генным сегментом С крысы.
32. Способ по п. 29, при котором универсальная легкая цепь каппа состоит из Vκ1-39 зародышевой линии человека, реаранжированного с Jκ5 зародышевой линии человека, или Vκ3-20 человека, реаранжированного с Jκ1 человека.
33. Способ по п. 29, при котором мышь:
H
H
H
(i) характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает нереаранжированные генные сегменты D человека, функционально связанные как с генными сегментами V человека, так и с генными сегментами С мыши; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
(ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов D человека, причем реаранжированные генные сегменты D человека включают каждый из D7-27, D1-26, D6-25, D5-24, D4-23, D3-22, D2-21, D1-20, D6-19, D5-18, D4-17, D3-16, D2-15, D1-14, D6-13, D5-12, D4-11, D3-10, D3-9, D2-8, D1-7, D6-6, D5-5, D4-4, D3-3, D2-2, D1-1.
H
H
H
H
34. Способ по п. 33, при котором мышь характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает нереаранжированные генные сегменты J человека, функционально связанные с генными сегментами V человека и генными сегментами D человека, и тем самым с генными сегментами С мыши.
H
H
H
35. Способ по п. 34, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 26.
H
H
H
36. Способ по п. 34, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ3-20, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 25.
H
H
H
H
37. Способ по п. 29, при котором вариабельная область тяжелой цепи человека кодируется реаранжированным, полученным из V3-49, V4-28, V4-61 или V3-66 генным сегментом.
38. Способ по п. 29, при котором только легкая цепь каппа, экспрессированная В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
39. Способ по п. 29, при котором только легкая цепь, экспрессируемая В-клетками, кодируется универсальным геном легкой цепи каппа или его соматически мутированным вариантом.
H
H
40. Способ по п. 29, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека замещают эндогенные генные сегменты V мыши.
41. Способ получения биспецифического антигенсвязывающего белка, предусматривающий:
(a) воздействие на первую генетически модифицированную мышь первым представляющим интерес антигеном, который содержит первый эпитоп;
(b) воздействие на вторую генетически модифицированную мышь, которая представляет собой такую же или отличную мышь, вторым представляющим интерес антигеном, который содержит второй эпитоп;
первая и вторая мыши, экспрессирующие вариабельные домены тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина человека, где:
(i) мыши экспрессируют репертуар вариабельных областей легкой цепи к иммуноглобулина, состоящий из единственной вариабельной области легкой цепи человека, которая экспрессируется из реаранжированного гена Vκ1-39/J человека или гена Vκ3-20/J человека; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
(ii) мыши включают В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V человека, причем реаранжированные генные сегменты V человека включают каждый из V6-1, V1-2, V1-3, V2-5, V3-7, V1-8, V3-9, V3-11, V3-13, V3-15, V1-18, V3-20, V3-21, V3-23, V1-24, V2-26, V4-28, V3-30, V4-31, V3-33, V4-34, V4-39, V3-43, V1-46, V3-48, V3-49, V5-51, V3-53, V1-58, V4-59, V4-61, V3-64, V3-66, V1-69, V2-70, V3-72, V3-73.
(с) обеспечение возможности первой и второй мыши каждой поддерживать иммунные ответы к представляющим интерес антигенам, идентификацию в первой мыши первой вариабельной области тяжелой цепи человека, которая связывается с первым эпитопом первого представляющего интерес антигена, идентификацию во второй мыши второй вариабельной области тяжелой цепи человека, которая связывается со вторым эпитопом второго представляющего интерес антигена, производство первого гена полностью человеческой тяжелой цепи, который содержит первую вариабельную область тяжелой цепи человека и кодирует первую тяжелую цепь, которая связывается с первым эпитопом первого представляющего интерес антигена, производство второго гена полностью человеческой тяжелой цепи, который содержит вторую вариабельную область тяжелой цепи человека и кодирует вторую тяжелую цепь, которая связывается со вторым эпитопом второго представляющего интерес антигена, экспрессию первой тяжелой цепи и второй тяжелой цепи в клетке, которая экспрессирует единственную полностью человеческую легкую цепь, происходящую от того же гена Vκ/J, который присутствует у мыши, для образования биспецифического антигенсвязывающего белка, и выделение биспецифического антигенсвязывающего белка.
42. Способ по п. 41, при котором реаранжированный ген Vκ1-39/J человека или ген Vκ3-20/J человека функционально связаны с генным сегментом Сκ мыши или генным сегментом Сκ крысы.
43. Способ по п. 41, при котором реаранжированный ген Vκ1-39/J человека представляет собой Vκ1-39/Jκ5 человека или реаранжированный ген Vκ3-20/J человека представляет собой Vκ3-20/Jκ1 человека.
44. Способ по п. 41, при котором мышь:
H
H
H
(i) характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает в себя нереаранжированные генные сегменты D человека, функционально связанные как с генными сегментами V человека, так и с генными сегментами С мыши; и
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
H
(ii) включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов D человека, причем реаранжированные генные сегменты D человека включают каждый из D7-27, D1-26, D6-25, D5-24, D4-23, D3-22, D2-21, D1-20, D6-19, D5-18, D4-17, D3-16, D2-15, D1-14, D6-13, D5-12, D4-11, D3-10, D3-9, D2-8, D1-7, D6-6, D5-5, D4-4, D3-3, D2-2, D1-1.
H
H
H
H
45. Способ по п. 44, при котором мышь характеризуется наличием зародышевой линии, которая включает нереаранжированные генные сегменты J человека, функционально связанные с генными сегментами V человека и генными сегментами D человека, и тем самым с генными сегментами С мыши.
H
H
H
46. Способ по п. 45, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ1-39/J, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 26.
H
H
H
47. Способ по п. 45, при котором реаранжированный генный сегмент Vκ зародышевой линии человека представляет собой генный сегмент Vκ3-20/J, и мышь включает В-клетки, предварительно иммунизированные, которые экспрессируют гены тяжелой цепи, возникающие вследствие реаранжировки генных сегментов V, J и D человека, как представлено в таблице 25.
H
H
H
H
48. Способ по п. 41, при котором первая и/или вторая вариабельная область человека кодируется реаранжированным происходящим от V3-49, V4-28, V4-61 или V3-66 генным сегментом.
H
H
49. Способ по п. 41, при котором нереаранжированные генные сегменты V человека замещают эндогенные генные сегменты V мыши.
50. Биспецифическое антитело, производимое в соответствии со способом по любому из пп. 41-49.