СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ МИКРООРГАНИЗМА И НАБОР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ МИКРООРГАНИЗМА

1. Способ детекции живых клеток микроорганизма в тестируемом образце, который включает следующие стадии:
a) стадию обработки тестируемого образца ядом топоизомеразы и/или ядом ДНК-гиразы,
b) стадию экстракции ДНК из тестируемого образца и амплификацию мишеневого участка экстрагированной ДНК методом ПЦР и
c) стадию анализа продукта амплификации.
2. Способ по п.1, где продукт амплификации анализируют с помощью стандартной кривой, отражающей зависимость количества продукта амплификации от количества микроорганизма, которую получают с использованием стандартных образцов микроорганизма.
3. Способ по п.2, где ПЦР проводят в режиме реального времени одновременно с анализом продукта амплификации.
4. Способ по любому из пп.1-3, где тестируемый образец представляет собой молоко, молочный продукт, пищевой продукт, полученный с использованием молока или молочного продукта в качестве сырья, образец крови, образец мочи, образец спинномозговой жидкости, образец синовиальной жидкости и образец плевральной жидкости.
5. Способ по любому из пп.1-3, где микроорганизм представляет собой бактерию.
6. Способ по п.5, где мишеневый участок представляет собой ген рРНК 23S.
7. Способ по п.6, где ПЦР проводят с использованием набора праймеров, содержащего праймеры SEQ ID NO: 1 и 2, или набора праймеров, содержащего праймеры SEQ ID NO: 3 и 4.
8. Способ по любому из пп.1-3, где микроорганизм представляет собой патогенную бактерию.
9. Способ по п.8, где мишеневый участок предпочтительно представляет собой патогенный ген.
10. Способ по п.9, где ПЦР предпочтительно проводят с использованием набора праймеров, содержащего праймеры SEQ ID NO: 7 и 8.
11. Способ по любому из пп.1-3, 6, 7, 9 и 10, где яд топоизомеразы выбран из амсакрина, камптотецина, доксорубицина, эллиптицина, этопозида, митоксантрона, саинтопина, топотекана и CP-115953.
12. Способ по любому из пп.1-3, 6, 7, 9 и 10, где яд ДНК-гиразы выбран из ципрофлоксацина, офлоксацина, эноксацина, пефлоксацина, флероксацина, норфлоксацина, налидиксовой кислоты, оксолиновой кислоты и пиромидиновой кислоты.
13. Способ по любому из пп.1-3, 6, 7, 9 и 10, где яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы представляет собой моноазид этидия, а способ включает стадию облучения тестируемого образца, к которому добавлен моноазид этидия, видимым светом.
14. Способ по п.13, где тестируемый образец обрабатывают моноазидом этидия и ядом топоизомеразы и/или ядом ДНК-гиразы, отличным от моноазида этидия.
15. Способ по любому из пп.1-3, 6, 7, 9, 10 и 14, где перед стадией a) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
16. Набор для детекции живых клеток микроорганизма в тестируемом образце методом ПЦР, который содержит следующие компоненты:
яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы и праймеры для амплификации мишеневого участка ДНК микроорганизма, детектируемого методом ПЦР.
17. Набор по п.16, который дополнительно содержит топоизомеразу и/или ДНК-гиразу.
18. Набор по п.16 или 17, где яд топоизомеразы выбран из амсакрина, камптотецина, доксорубицина, эллиптицина, этопозида, митоксантрона, саинтопина, топотекана и СР-115953.
19. Набор по п.16 или 17, где яд ДНК-гиразы выбран из ципрофлоксацина, офлоксацина, эноксацина, пефлоксацина, флероксацина, норфлоксацина, налидиксовой кислоты, оксолиновой кислоты и пиромидиновой кислоты.
20. Набор по п.16 или 17, который содержит моноазид этидия и яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы, отличный от моноазида этидия.
21. Набор по п.16 или 17, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 1 и 2 или праймеры SEQ ID NO: 3 и 4.
22. Набор по п.16 или 17, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 7 и 8.
23. Способ по п.4, где микроорганизм представляет собой бактерию.
24. Способ по п.4, где микроорганизм представляет собой патогенную бактерию.
25. Способ по п.4, где яд топоизомеразы выбран из амсакрина, камптотецина, доксорубицина, эллиптицина, этопозида, митоксантрона, саинтопина, топотекана и СР-115953.
26. Способ по п.5, где яд топоизомеразы выбран из амсакрина, камптотецина, доксорубицина, эллиптицина, этопозида, митоксантрона, саинтопина, топотекана и СР-115953.
27. Способ по п.8, где яд топоизомеразы выбран из амсакрина, камптотецина, доксорубицина, эллиптицина, этопозида, митоксантрона, саинтопина, топотекана и СР-115953.
28. Способ по п.4, где яд ДНК-гиразы выбран из ципрофлоксацина, офлоксацина, эноксацина, пефлоксацина, флероксацина, норфлоксацина, налидиксовой кислоты, оксолиновой кислоты и пиромидиновой кислоты.
29. Способ по п.5, где яд ДНК-гиразы выбран из ципрофлоксацина, офлоксацина, эноксацина, пефлоксацина, флероксацина, норфлоксацина, налидиксовой кислоты, оксолиновой кислоты и пиромидиновой кислоты.
30. Способ по п.8, где яд ДНК-гиразы выбран из ципрофлоксацина, офлоксацина, эноксацина, пефлоксацина, флероксацина, норфлоксацина, налидиксовой кислоты, оксолиновой кислоты и пиромидиновой кислоты.
31. Способ по п.4, где яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы представляет собой моноазид этидия, а способ включает стадию облучения тестируемого образца, к которому добавлен моноазид этидия, видимым светом.
32. Способ по п.5, где яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы представляет собой моноазид этидия, а способ включает стадию облучения тестируемого образца, к которому добавлен моноазид этидия, видимым светом.
33. Способ по п.8, где яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы представляет собой моноазид этидия, а способ включает стадию облучения тестируемого образца, к которому добавлен моноазид этидия, видимым светом.
34. Способ по п.4, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
35. Способ по п.5, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
36. Способ по п.8, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
37. Способ по п.11, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
38. Способ по п.12, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
39. Способ по п.13, где перед стадией а) проводят:
d) стадию обработки тестируемого образца топоизомеразой и/или ДНК-гиразой.
40. Набор по п.18, который содержит моноазид этидия и яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы, отличный от моноазида этидия.
41. Набор по п.19, который содержит моноазид этидия и яд топоизомеразы и/или яд ДНК-гиразы, отличный от моноазида этидия.
42. Набор по п.18, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 1 и 2 или праймеры SEQ ID NO: 3 и 4.
43. Набор по п.19, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 1 и 2 или праймеры SEQ ID NO: 3 и 4.
44. Набор по п.20, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 1 и 2 или праймеры SEQ ID NO: 3 и 4.
45. Набор по п.18, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 7 и 8.
46. Набор по п.19, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 7 и 8.
47. Набор по п.20, где набор праймеров содержит праймеры SEQ ID NO: 7 и 8.