Некоторые вопросы ферментативной активности печени и патоморфологических изменений при фасциолёзе крупного рогатого скота

активность по сравнению с исходным АБЗ и препаратом празиквантел. Кроме того, было проведено гистоморфологическое исследование печени животных, которое показало, что комплексы албендазола не вызывают токсического поражения печени, в отличие от АБЗ.

Литература: 1 .Душкин А.В., Метелева Е.С., Чистяченко Ю.С., Халиков С.С.//Фундаментальные исследования.- 2013.- №1, ч.3.- С.741-749.2.Душкин А.В., Метелева Е.С., Ляхов Н.З., Чистяченко Ю.С., Халиков С.С., Толстикова Т.Г., Хвостов М.В., Баев Д.С., Жукова Н.А., Мордвинов В.А., Катохин А.В., Пахарукова М.Ю.Композиция на основе албендазола с противоописторхозной фармакологической активностью. - Заявка на патент РФ №2013144528, приоритет от 03.10.2013. З.Чистяченко Ю.С., Хвостов М.В., Халиков С.С., Белоусов А.И., Жукова Н.А., Пахарукова М.Ю., Катохин А.В., Толстикова Т.Г., Душкин А.В., Мордвинов В.А., Ляхов Н.З. //Доклады академии наук. 2014. впечати.

Perspective agent based on albendazole against O. felineus. Chistyachenko Yu.S., Dushkin A.V., Hvostov M.V., Zhukova N.A., Tolstikova T.G., Belousov A.I., Paharukova M.Yu., Katochin A.V., Mordvinov V.A., Halikov S.S. Institute of Solid State Chemistry and Mechanochemistry; NovosibirskInstitute of Organic Chemistry;Institute of Cytologyand Genetics; A.N.Nesmeyanov Institute of Organoelement Compounds.

Summary. It was shown that complexes of albendazole with arabinogalactane had the higher pharmacological activity against O. felineus compared with original albendazole and praziquantel. Histomorphological investigation of liver of animals showed that albendazole complexes didn’t cause toxic damage of liver compared with albendazole alone.

НЕКОТОРЫЕ ВОПРОСЫ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ПЕЧЕНИ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРИ ФАСЦИОЛЁЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Шелякин И.Д., Семёнов С.Н., Сапожкова О.А.

ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. императора Петра I»

Введение. В познании специфики клеточного метаболизма одно из главных мест принадлежит проблемам ферментативного катализа, и прежде всего, изучению особенностей функционирования, регуляции активности, механизма действия ферментов. Исследования саморегулирования обменных процессов на уровне отдельных ферментных систем позволят приблизиться к глубокому детальному анализу организации метаболизма в живой клетке. Исследованию ферментативных процессов посвящено немало научных работ.

342

В этом плане функциональное состояние ферментной системы крови и печени у крупного рогатого скота при фасциолёзе изучено недостаточно, но имеет исключительное значение для определения биохимического статуса животных при проведении противогельминтозных мероприятий.

Определённый практический и теоретический интерес представляют данные по изучению организации и регуляции отдельных звеньев метаболизма в крови и печени здоровых и инвазированных животных с целью повышения их устойчивости к заболеваниям.

При фасциолёзе нарушается структура и функция печени. Повреждается цитоплазматическая мембрана клеток, начинается выход растворимых энзимов цитоплазмы: аланинаминотрансферазы, альдолазы, фосфорилазы, лактодегидрогеназы и др. Ферменты быстро диффундируют в межклеточное пространство.

При необратимом разрушении гепатоцитов во внеклеточную среду выходят митохондриальные ферменты, в том числе аспартатаминотрансферазы, появляющиеся в циркуляции [2].

Одной из основных характеристик морфологической целостности гепатоцитов является определение в крови аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) и имеет исключительное значение для понимания специфики биохимических превращений в крови и печени коров при фасциолёзе.

Целью наших исследований было изучение функционирования ферментной системы процессов переаминирования и мочевинообразования в крови и печени крупного рогатого скота, поражённого фасциолёзом, для выяснения паразито-хозяинных отношений и проведения патогенетической терапии.

Материалы и методы. Исследования проведены на 40 коровах симментальской породы: 20 - инвазированных гельминтами и 20 -

клинически здоровых. Кровь брали из яремной вены утром до кормления, для стабилизации крови применяли гепарин фирмы «Биохеми». Гомогенат ткани печени готовили на фосфатном буфере (pH=7,5) в отношении 100 мг ткани на 1 мл буфера. Активность аминотрансфераз определяли колориметрическим методом Райтмана-Френкеля и выражали в нмоль сек/л. Определение оптической плотности проводили с помощью фотоколориметра КФК - 2 при длине волны 540 нм. Вычислялся коэффициент де Ритиса (отношение АсАт к АлАт).

Для гистологического исследования вырезали кусочки печени толщиной до 0,5 см, включающие желчные протоки и прилегающую к ним паренхиму органа. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Гистологические срезы готовили на замораживающем микротоме, окраска срезов проводилась гематоксилин-эозином.

Результаты исследования обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента [1].

Результаты. Реакции орнитинового цикла синтеза мочевины в печени являются центральными реакциями обезвреживания аммиака и углекислоты.

343

Ключевая роль в этом принадлежит ферменту аргиназе, катализирующему реакцию гидролиза 1-аргинина, отщепляя гуанидиновую группу до мочевины и орнитина.

Как показали наши исследования, в печени здоровых и инвазированных животных происходит переаминирование аспарагиновой кислоты, аспарагина, фенилаланина, гистидина, лейцина, тирозина, триптофана, метионина, валина и аланина с а-кетоглутаровой кислотой с образованием глутаминовой кислоты. Наиболее интенсивное образование глутаминовой кислоты происходит при переаминировании аспарагиновой кислоты и аспарагина с а-кетоглутаратом у инвазированных животных. Активными аминодонорами в этой реакции являются также фенилаланин, гистидин, лейцин. Слабее всего реакция переаминирования протекает между аланином и а-кетоглутаратом. Отмеченный интенсивный синтез глутаминовой кислоты у коров, больных фасциолезом, свидетельствует о функциональном изменении клеток печени с усилением процессов переаминирования и самообновления белков в них, как ответная реакция на заболевание. Такие аминокислоты, как аргинин, лизин, серин, треонин и пролин в условиях наших опытов не вступают в реакцию переаминирования с а-кетоглутаратом.

Наивысшая активность аргиназы в печени была у инвазированных животных и составляла 4343±718 - 5391±265 мкМ мочевины на 1 г сырой ткани при концентрации мочевины в крови 26,5±2,7 - 34,4±3,4 мг%. Достоверная разница в содержании мочевины в крови и выделении азота с мочой отмечена у больных и здоровых животных. Так, концентрация мочевины в крови здоровых животных была ниже в 1,7 раза по сравнению с инвазированными животными, выделение азота с мочой - в 1,4 раза.

При фасциолезе нарушаются структура и функция печени. Повреждается цитоплазматическая мембрана клеток, начинается выход растворимых энзимов цитоплазмы: аланинаминотрансферазы, альдолазы, фосфорилазы, лактодегидрогеназы и др. Ферменты быстро диффундируют в межклеточное пространство [3].

Одной из основных характеристик морфологической целостности является определение активности аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) и имеет исключительное значение для понимания специфики биохимических превращений в печени коров при фасциолезе.

Как показали наши исследования, активность АсАТ и АлАТ в печени инвазированных животных выше, чем в контрольной группе, и составляет соответственно АсАТ - 121±9,8 - 139±11,2 нмоль сек/л; АлАТ - 105±10,6 -120±8,9 нмоль сек/л.

Функциональные изменения при фасциолезной инвазии связаны с нарушением метаболизма в организме животного, приводящего к накоплению в печени метаболитов перекисного окисления липидов, к нарушению активности ферментов антиоксидантной защиты: каталазы, пероксидазы, супероксиддисмутазы (СОД), церулоплазмина.

344

СОД - основной фермент первого звена антиоксидантной защиты, катализирует дисмутацию и обезвреживание двух молекул супероксидного радикала О2 с образованием менее активной перекиси водорода, которая разлагается каталазой и группой пероксидаз до воды и кислорода.

Важная роль каталазы и пероксидазы при поражении печени фасциолами связана с активным их участием в поддержании антиоксидантного равновесия путем обезвреживания перекиси водорода. При исследовании печени инвазированных коров выявлено снижение уровня активности супероксиддисмутазы, повышение активности каталазы (на 10% по отношению к клинически здоровым животным). Активность пероксидазы при этом снижалась и составила 33,7±2,21 - 35,2±1,48 ед. опт.пл./л.с.

Морфологические изменения изучались в печени, взятой от 3 коров, убитых для внутрихозяйственных целей. Макроскопически печень выглядела слегка уплотнённой, капсула органа была немного утолщена. С каудальной поверхности были заметны утолщённые древовидно ветвящиеся желчные протоки, а в их просвете обнаружена желтоватая слизистая масса и единичные экземпляры половозрелых фасциол. На разрезе органа были заметны расширенные прослойки междольковой соединительной ткани, более развитой вблизи желчных протоков.

При исследовании гистосрезов установлено, что утолщение стенки желчных протоков происходит в основном за счёт разрастания волокнистой соединительной ткани. В слизистой оболочке, наряду с этим, наблюдалась клеточная инфильтрация преимущественно гистиоцитами и лимфоидными клетками. Реже встречаются эозинофилы, нейтрофилы, плазматические клетки. Наблюдались десквамация и некроз покровного эпителия.

В участках печени, прилегающих к утолщённым желчным протокам, обнаруживаются широкие прослойки разросшейся междольковой соединительной ткани с большим количеством образуемых желчных протоков и атрофия печёночных долек. По мере удаления от утолщённых желчных протоков этот процесс менее выражен, то есть идёт на убыль.

Заключение. Состояние антиоксидантной защиты печени коров при фасциолезной инвазии характеризуется повышением активности каталазы и снижением активности пероксидазы и супероксиддисмутазы, что способствует ослаблению окислительных реакций перекисного типа, уменьшает тем самым накопление свободных радикалов в клетках, сохраняя целостность клеточных мембран гепатоцитов.

Функциональное состояние ферментной системы переаминирования, мочевинообразования, антиоксидантной защиты имеет диагностическое значение для контроля над состоянием метаболического статуса животных и эффективностью терапии при фасциолезной инвазии.

При фасциолезе в печени наблюдается хронический катаральный холангит и нередко выраженный атрофический цирроз, главным образом в участках, прилегающих к изменённым крупным желчным протокам.

345

Литература: 1. Лакин Г.Ф. Биометрия. Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1980. - 293 с. 2. Титов В.Н., Бочкова Н.А. //Лабораторное дело. - 1990. - № 8. - С. 4-11. 3. Шелякин И.Д., Кузьмичёва В.Н.//С6. мат. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», посвящ. 130-летию со дня рождения академика К.И. Скрябина. - М., 2008. - вып. 9.- С. 525- 528.

Some questions of enzyme activity of liver and pathomorphological alterations at Fasciola infection of cattle. Shelyakin I.D., Semenov S.N., Sapozhkova O.A.Voronezh Emperor Peter the I State Agrarian University.

Summary. Antioxidant peotection system of liver in cattle at Fasciola infection is characterized by increased activity of catalase and decreased activity of peroxidase and superoxidasedismutase what promotes reduction of oxidative reactions of peroxide type whereby reducing the accumulation of free radicals in cells remaining the integrity of hepatocyte cell membranes. Functional state of enzymatic system of transamidation, formation of urea and antioxidant protection has the diagnostic value for control of metabolicstatus of animals and efficacy of drugs at Fasciola infection. One notes the chronic catarrhal cholangitis and sometime manifested cirrhosis in foci attached to large bile ducts are noted at Fasciola infection.

ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭНДОВИТА И ГЕКСИХОЛА-С ПРИ ФАСЦИОЛЁЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Шелякин И.Д., Шапошникова Ю.В., Степанов В.А.

ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. императора Петра I»

Введение. Трематоды имеют широкое распространение в мире и поражают все виды домашних и диких копытных животных [1,3,4,6,7,8]. Особенно часто они локализуются в печени животных и человека и вызывают тяжелые заболевания. Значительный экономический ущерб народному хозяйству причиняет фасциолёз (Fasciola hepatica, Trematoda, Plathelminthes). Фактически мы не знаем ни одной области в Центральном Черноземье, на территории которой не встречалось бы данное заболевание [6].

Вследствие этого заболевания недополучаем 30 - 40% продуктивности крупного и мелкого рогатого скота. Такой ценнейший диетический продукт, каким является печень, при убое домашних животных выбраковывается или значительно зачищается в результате поражения ее гельминтами.

Целью наших исследований было изучение эффективности проведения патогенетической терапии с использованием препаратов эндовит и гексихол-С.

Материалы и методы. Эффективность применения эндовита при гепатозе вторичного происхождения изучалась на 300 дойных коровах,

346