СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ И МОЧЕПОЛОВОГО ТРАКТА В СТАДИИ РЕМИССИИ
DIAGNOSTIC TECHNIQUE FOR REMITTED GENITAL AND UROGENITAL HERPETIC INFECTION

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике особенностей иммунологического реагирования при герпетической инфекции половых органов и мочеполового тракта в стадии ремиссии.
Основная особенность герпесвирусных инфекций - их склонность к хроническому течению с периодами обострения и ремиссии, иммуноопосредованный патогенез заболевания.
Известен способ диагностики генитального герпеса и иммунологических нарушений, включающий в том числе следующие лабораторные обследования: клинический анализ мочи, микроскопическое исследование неокрашенных препаратов, исследование мазков, окрашенных по Грамму, выделение и идентификация вирусов в крови и слюне, определение антител против антигенов ВИЧ, лимфотоксическая проба с В-лимфоцитами, определение антител к нормальным разновидностям ткани, другие иммунофлюоресцентные методы, анализ крови клинический, определение Т-супрессоров/киллеров с помощью моноклональных антител в лимфоцитотоксическом тесте, определение соотношения субпопуляций Т-лимфоцитов, определение соотношений больших и малых лимфоцитов (1).
Недостатком способа является высокая экономическая затратность обследования, обусловленная в том числе необходимостью 2-, 3-кратного проведения трудоемких методик, не полностью раскрывающих основные иммунопатогенетические механизмы реагирования организма пациента. Нет указаний на дифференцированное лечение.
Известен способ диагностики при герпесе, включающий микробиологическое исследование материала, обнаружение и выделение вируса простого герпеса, прямую иммунофлюорисценцию мазков на вирус простого герпеса, определение антител к вирусу простого герпеса в реакции непрямой иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ сыворотки крови на определение антител к вирусу простого герпеса, определение интерферонов альфа-1, бета-1 сыворотки крови, анализ крови клинический, определение количества Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, субпопуляций Т-лимфоцитов (2).
Недостатком способа также является дороговизна обследования обусловленная, в том числе необходимостью 2-кратного проведения высокотехнологичных методик. При этом также не учитывается, что у людей с установленным диагнозом необходимости в проведении полного объема рекомендуемых лабораторных методик нет.
Известен способ диагностики при герпетической инфекции, включающий клинический анализ мочи, определение антител против антигенов ВИЧ, исследование соскоба из везикул на вирус простого герпеса методом прямой и непрямой иммунофлюоресценции, исследование слюны на вирус простого герпеса методом прямой и непрямой иммунофлюоресценции, определение антител в реакции пассивной гемагглютинации, определение сывороточных иммуноглобулинов основных классов (IgA,M,G), определение уровня иммуноглобулина М методом иммуноферментного анализа, анализ крови клинический (3).
Недостатком способа также является высокая стоимость обследования, не раскрывающего основные патогенетические механизмы иммунологического реагирования организма пациента в период ремиссии заболевания.
Данный способ взят за прототип.
Целью изобретения является снижение экономических затрат и раскрытие иммунопатогенетических механизмов герпетической инфекции половых органов и мочеполового тракта в стадии ремиссии для дальнейшего выбора патогенетически оптимизированной, индивидуальной иммунокорригирующей терапии.
Поставленная цель достигается тем, что в период ремиссии герпетической инфекции половых органов и мочеполового тракта кровь пациента забирают утром, натощак из локтевой вены в процедурном кабинете в пробирку с гепарином.
Определяют уровни Т-лимфоцитов с фенотипом кластера дифференцировки CD4+, CD8+, CD16+ методом лазерной проточной цитофлюориметрии. Количественное определение интерлейкина-2 проводят твердофазным иммуноферментным методом тест-системами ООО «Протеиновый контур» (С.-Петербург), альфа-интерферона, альфа-фактора некроза опухоли иммуноферментным методом реактивами ЗАО «Вектор-Бест» (г.Новосибирск).
Так же проводят определение спонтанного и индуцированного гамма-интерферона, альфа-интерферона венозной крови. Кровь пациента забирают утром, натощак из локтевой вены в процедурном кабинете в пробирку с гепарином. Для определения уровней цитокинов (спонтанной и стимулированной продукции) 1 мл гепаринизированной крови добавляют в флакон со средой (поддерживающая среда с добавлением гепарина, L-глютамина, гентамицина) в соотношении 1:4. Перемешивают. Отливают 1 мл смеси в флакон с ФГА (митоген, 10 мкг/мл). Отливают 1 мл смеси в флакон с ФГА (митоген, 10 мкг/мл). Отливают 1 мл смеси в флакон с ФГА (митоген, 10 мкг/мл). Отливают 1 мл смеси в флакон с ФГА (митоген, 10 мкг/мл). Оба флакона инкубируют сутки при 37°С. После инкубации содержимое обоих флаконов центрифугируют при 3000 G 10 мин. Надосадочную жидкость отбирают и определяют в ней концентрацию требуемых цитокинов. Флакон с средой - показатель спонтанной продукции ЦК. Флакон с ФГА - показатель стимулированной продукции ЦК.
Сравнение предлагаемого способа с другими известными в данной области медицины способами показывает соответствие критериям изобретения.
Заявляемым способом обследовано 1654 больных.
Пример 1
Больной С., 30 лет.
Обратился с жалобами на рецидивы генитального герпеса с локализацией высыпаний в области крайней плоти. Площадь поражения кожи 2-3 см, частота рецидивов 10-14 раз в год, продолжительность обострения 7-10 дней. Рецидив сопровождался выраженными парестезиями в виде «покалывания», «жжения», увеличением паховых лимфатических узлов. Больным считает себя в течение 5 лет, проходил лечение только при обострении заболевания. Использовал таблетки ацикловира и местную форму (крем «Зовиракс»). Пришел в ремиссию заболевания, которая, по словам больного, продолжалась 3 недели. Ранее методами полимеразно-цепной реакции и иммуноферментным методом была доказана этиологическая роль вируса простого герпеса в развитии заболевания.
Данные осмотра - общее состояние удовлетворительное. На коже крайней плоти высыпаний герпеса нет. Увеличение паховых лимфатических узлов до 1,5 см, мягко-эластической консистенции, безболезненных при пальпации. Кожа над лимфоузлами не изменена. Зев - без признаков воспаления, язык чистый. Дыхание везикулярное, сердечные тоны ясные, ритмичные. Печень у края реберной дуги, пальпация кишечника безболезненная. Симптом Пастернацкого отрицательный. Температура тела 36,5. Физиологические отправления в норме.
3
Накануне обращения, в период ремиссии заболевания, прошел иммунологическое обследование. Общеклинический анализ из венозной крови: лейкоциты - 3,2×10 л, палочкоядерные нейтрофилы - 1%, сегментоядерные нейтрофилы - 64%, эозинофилы - 4%, моноциты - 11%, лимфоциты - 20%. Клеточное звено иммунитета (кластеры дифференцировки): CD4+ 32%, CD8+ 20%, CD16+ 10%. Цитокины: интерлейкин-2 0, альфа-интерферон 0, альфа-интерферон спонтанный 0, альфа-интерферон индуцированный 0, гамма-интерферон 0, гамма-интерферон спонтанный 0, гамма-интерферон индуцированный 1000, альфа-фактор некроза опухоли 0.
Поставлен диагноз: Вторичное иммунодефицитное состояние комбинированного типа (клеточного с цитокиновой недостаточностью). Инфекционный синдром. Хроническая рецидивирующая герпетической инфекции половых органов и мочеполового тракта, стадия ремиссии.
Назначено лечение противовирусным препаратом с иммуномодулирующим действием «Ферровир», курс 10 инъекций. После проведенного лечения наблюдалась стойкая ремиссия в течение 3-х месяцев.
3
В контрольных анализах крови, проведенных через 3 месяца после окончания лечения, - положительная динамика. Общеклинический анализ крови: лейкоциты - 4,5×10 л, палочкоядерные нейтрофилы - 0%, сегментоядерные нейтрофилы - 51%, эозинофилы - 5%, моноциты - 7%, лимфоциты - 37%. Клеточное звено иммунитета (кластеры дифференцировки): CD4+38%, CD8+24%, CD16+12%. Цитокины: интерлейкин-2 10, альфа-интерферон 5, альфа-интерферон спонтанный 6, альфа-интерферон индуцированный 10, гамма-интерферон 12,4, гамма-интерферон спонтанный 2, гамма-интерферон индуцированный 5, альфа-фактор некроза опухоли 0.
Пример 2
Больная П., 20 лет.
Обратилась с жалобами на высыпания герпеса на большой половой губе 5-7 раз в год как на фоне провоцирующих факторов (переохлаждение, стресс), так и без видимой причины. Высыпания «мигрирующие» в паховой области, площадь около 1 см, периодически - высыпания этапное, несколько локализаций. Всегда на участке гиперемии появлялись везикулы, лопавшиеся, ссыхающиеся в «корку» с трещинами и эрозиями. Продолжительность рецидива 5-10 дней. Высыпания сопровождались увеличением и болезненностью паховых лимфатических узлов, повышением температуры тела до субфебрильных значений. Больна 2 года. Использовала в период обострения «Ацикловир», местно - на область высыпаний «3овиракс». Обследована у дерматолога в обострение: положительная полимеразно-цепная реакция и специфические иммуноглобулины классов M,G (иммуноферментным методом) к вирусу простого герпеса.
Пришла в ремиссию. Данные осмотра: общее состояние удовлетворительное, кожные покровы обычного цвета. На слизистых оболочках половых органов высыпаний герпеса нет. Полость рта санирована. Лимфатические узлы: паховые увеличены до 1-2 см, мягко-эластической консистенции, безболезненные, не спаянные с окружающими тканями. Дыхание везикулярное. Хрипов нет. Сердечные тоны ясные, ритмичные. Температура тела 36,8.
3
Данные обследования: общеклинический анализ крови: лейкоциты - 3,8×10 л, палочкоядерные нейтрофилы - 1%, сегментоядерные нейтрофилы - 70%, эозинофилы - 5%, моноциты - 6%, лимфоциты - 18%. Клеточное звено иммунитета (кластеры дифференцировки): CD4+ 22%, CD8+ 20%, CD16+ 19%. Цитокины: интерлейкин-2 14,2, альфа-интерферон 0, альфа-интерферон спонтанный 1, альфа-интерферон индуцированный 0, гамма-интерферон 0, гамма-интерферон спонтанный 0, гамма-интерферон индуцированный 1000, альфа-фактор некроза опухоли 0.
Поставлен диагноз: Вторичное иммунодефицитное состояние комбинированного типа (клеточного с цитокиновой недостаточностью). Инфекционный синдром. Хроническая рецидивирующая герпетическая инфекция половых органов и мочеполового тракта, стадия ремиссии.
П. рекомендовано провести иммунокорригирующую и противовирусную терапию с момента появления «предвестников» рецидива: «Фамвир» 500 мг, местно на область высыпаний «Виферон-гель», через 2 недели от начала клинических проявлений рецидива, в мышцу, «Ферровир», курсом 10 инъекций.
При следующем посещении П. рассказала, что проведенное лечение было эффективным: в первый день обострения проявления «парестезии» были купированы, инфильтрата, везикул не было, лимфатические узлы не увеличивались, их болезненности не было. Температура тела не поднималась. Ремиссия после курса лечения составила 4 месяца.
3
В контрольных анализах, проведенных через 3 месяца, выявлена положительная динамика. Общеклинический анализ крови: лейкоциты - 4,7×10 л, палочкоядерные нейтрофилы - 2%, сегментоядерные нейтрофилы - 62%, эозинофилы - 3%, моноциты - 8%, лимфоциты - 25%. Клеточное звено иммунитета (кластеры дифференцировки): CD4+ 40%, CD8+ 25%, CD16+ 10%. Цитокины: интерлейкин-2 10, альфа-интерферон 0, альфа-интерферон спонтанный 0, альфа-интерферон индуцированный 0, гамма-интерферон 14,3, гамма-интерферон спонтанный 10, гамма-интерферон индуцированный 1000, альфа-фактор некроза опухоли 5, гамма-интерферон 0.
Клинические испытания показали, что применение способа диагностики нарушений иммунологического реагирования при герпетической инфекции половых органов и мочеполового тракта в период ремиссии путем комбинации методик лабораторного исследования уровней Т-лимфоцитов с фенотипом кластера дифференцировки СД4+, СД8+, СД16+ методом лазерной проточной цитофлюориметрии, уровней цитокинов интерлейкина-2, альфа-интерферона, гамма-интерферона, альфа-фактора некроза опухоли приводит к уточнению патогенетических особенностей иммунологического реагирования для выбора наиболее оптимальной и эффективной иммуномодулирующей терапии.
Способ может быть рекомендован в практической деятельности аллергологов-иммунологов, инфекционистов, дерматовенерологов, гинекологов, урологов, терапевтов амбулаторно-поликлинического звена и стационаров.
Источники информации
1. Приказ Минздравмедпрома РФ от 08.04.1996 N134 "О временных отраслевых стандартах объема медицинской помощи" (вместе с "Методическими рекомендациями по пользованию временных отраслевых стандартов объема медицинской помощи»). Приложение 1. Шифр МКБ-10: А 60.0.
2. Приказ Минздравмедпрома РФ от 08.04.1996 N134 "О временных отраслевых стандартах объема медицинской помощи" (вместе с "Методическими рекомендациями по пользованию временных отраслевых стандартов объема медицинской помощи»). Приложение 1. Шифр МКБ-10: B00.
3. Приказ Минздравмедпрома РФ от 08.04.1996 N134 "О временных отраслевых стандартах объема медицинской помощи" (вместе с "Методическими рекомендациями по пользованию временных отраслевых стандартов объема медицинской помощи»). Приложение 1. Шифр МКБ-10: В00.9.