ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ СИНТЕЗ 4’-ЭТИНИЛНУКЛЕОЗИДНЫХ АНАЛОГОВ

1. Способ синтеза 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозида или его аналога, включающий объединение соединения 6,5:
,
с пуриннуклеозид-фосфорилазой и нуклеооснованием или его аналогом в буферном растворе, содержащем соль марганца (II),
и где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
2. Способ по п. 1, где 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозид представляет собой
.
3. Способ по п. 2, дополнительно включающий выделение
.
4. Способ по п. 1 для синтеза 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозида или его аналога, дополнительно включающий объединение соединения 6
и фосфопентомутазы с пуриннуклеозид-фосфорилазой и нуклеооснованием или его аналогом в буферном растворе, содержащем соль марганца (II).
5. Способ по п. 4, дополнительно включающий удаление неорганического фосфатного побочного продукта из реакционной смеси.
6. Способ по п. 5, включающий удаление неорганического фосфатного побочного продукта из реакционного раствора путем (a) добавления сахарозо-фосфорилазы и сахарозы к реакционной смеси или (b) добавления кальция, магния или марганца к реакционной смеси.
7. Способ по любому из пп. 4-6, дополнительно включающий выделение 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозида или его аналога.
8. Способ по любому из пп. 4-6, где 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозид представляет собой
.
9. Способ по п. 8, дополнительно включающий выделение
.
10. Способ по п. 4, дополнительно включающий стадию синтеза соединения 6, где синтез включает объединение соединения 5
с ацетальдегидом и дезоксирибозо-фосфат-альдолазой в водном растворе с получением соединения 6;
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
11. Способ по п. 10, где реакцию осуществляют в герметично закрытом сосуде.
12. Способ по п. 10 или 11, дополнительно включающий стадию синтеза соединения 5, где синтез включает объединение соединения 4
с пантотенаткиназой в буферном растворе,
в присутствии соли двухвалетного металла,
с АТФ в качестве источника фосфата, где АТФ восстанавливают in situ,
с получением соединения 5.
13. Способ по п. 12, где АТФ восстанавливают in situ с использованием (a) ацетилфосфата и ацетаткиназы, или (b) пируватоксидазы, каталазы и ацетаткиназы в присутствии пирувата, фосфата и кислорода, или (c) комбинации вышеуказанных.
14. Способ по п. 13, где (a) пантотенаткиназа является иммобилизованной или (b) пантотенаткиназа и ацетаткиназа являются иммобилизованными.
15. Способ по п. 12, дополнительно включающий стадию синтеза соединения 4, где синтез включает объединение соединения 3
с галактозооксидазой, медью, каталазой и пероксидазой или окислителем;
в присутствии кислорода, в буферном растворе с получением соединения 4.
16. Способ по п. 15, где галактозооксидаза является иммобилизованной.
17. Способ синтеза 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозида или его аналога, включающий объединение соединения 5
, ацетальдегида и нуклеооснования или его аналога
с дезоксирибозо-фосфат-альдолазой, фосфопентомутазой и пуриннуклеозид-фосфорилазой
в буферном растворе, содержащем соль марганца (II),
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
18. Способ по п. 17, дополнительно включающий удаление неорганического фосфатного побочного продукта из реакционной смеси.
19. Способ по п. 18, включающий удаление неорганического фосфатного побочного продукта из реакционной смеси путем (a) добавления сахарозо-фосфорилазы и сахарозы к реакционной смеси или (b) добавления кальция, магния или марганца к реакционной смеси.
20. Способ по любому из пп. 17-19, дополнительно включающий выделение 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозида или его аналога.
21. Способ по любому из пп. 17-19, где 4’-этинил 2’-дезоксинуклеозид представляет собой
.
22. Способ по п. 21, дополнительно включающий выделение
.
23. Способ синтеза соединения 6,5
,
включающий объединение соединения 6
с фосфопентомутазой,
в буферном растворе, содержащем соль марганца (II),
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
24. Способ синтеза соединения 6
,
включающий объединение соединения 5
с ацетальдегидом и дезоксирибозо-фосфат-альдолазой в водном растворе с получением соединения 6;
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
25. Способ синтеза соединения 5
,
включающий объединение соединения 4
с пантотенаткиназой в буферном растворе,
в присутствии соли двухвалетного металла,
с АТФ в качестве источника фосфата, где АТФ восстанавливают in situ, и
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
26. Способ по п. 25, где АТФ восстанавливают in situ с использованием (a) ацетилфосфата и ацетаткиназы, или (b) пируватоксидазы, каталазы и ацетаткиназы в присутствии пирувата, фосфата и кислорода, или (c) комбинации вышеуказанных.
27. Способ по п. 26, где (a) пантотенаткиназа является иммобилизованной или (b) пантотенаткиназа и ацетаткиназа являются иммобилизованными.
28. Способ синтеза соединения 4
,
включающий объединение соединения 3
с (а) галактозооксидазой, медью, каталазой и (b) пероксидазой или окислителем;
в присутствии кислорода, в буферном растворе с получением соединения 4.
29. Способ по п. 28, где галактозооксидаза является иммобилизованной.
30. Способ выделения соединения 4
,
включающий
N, N
N, O
(1) взаимодействие соединения 4 с амином, диамином или аминоспиртом, который образует стабильный -ацеталь или -ацеталь, в органическом растворителе, который не смешивается с водой,
в отсутствие кислорода с образованием аминаля; и
(2) взаимодействие аминаля с органической или неорганической кислотойв присутствии не смешиваемого с водой органического растворителя для восстановления соединения 4.
31. Способ синтеза соединения 5
,
включающий объединение соединения 9
с галактозооксидазой в буферном растворе,
в присутствии кислорода, каталазы и либо пероксидазы, либо химического окислителя,
с получением соединения 5,
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый указанный катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
32. Способ синтеза соединения 9
,
включающий объединение соединения 3
с пантотенаткиназой в буферном растворе,
в присутствии соли двухвалетного металла,
с АТФ в качестве источника фосфата, где АТФ восстанавливают in situ,
с получением соединения (9),
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый указанный катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
33. Соединение
.
34. Соединение
,
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый указанный катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
35. Соединение
,
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый указанный катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.
36. Соединение
,
где 2X+ представляет собой (a) два протона, (b) один протон и один одновалентный катион, (c) два одновалентных катиона, где каждый указанный катион является одинаковым или они отличны друг от друга, или (d) один двухвалентный катион.