КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УХОДА ЗА ПОЛОСТЬЮ РТА ДЛЯ ОСЛАБЛЕНИЯ ГИПЕРЕСТЕЗИИ ДЕНТИНА
ORAL CARE COMPOSITION FOR SUPPRESSING DENTIN HYPERESTHESIA

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к композиции для ухода за полостью рта, и, более конкретно, настоящее изобретение относится к композиции для ухода за полостью рта для предотвращения или ослабления гиперестезии дентина путем индукции физиологической реминерализации дефектов дентина в составе зуба.
2. Уровень техники
Гиперестезию дентина обычно называют «повышенной чувствительностью дентина», и она является обычным симптомом, с которым сталкивалось от 8% до 57% взрослого населения. В частности, в случае заболевания пародонта, что является наиболее распространенным заболеванием в Корее, от 72,5% до 98% пациентов страдают «повышенной чувствительностью дентина» (Источник: National Health Information Portal Medical Information; http://health.cdc.go.kr/health/Main.do).
Гиперестезию дентина можно определить как боль, которая вызвана открытием дентинных канальцев, передающих все внешние раздражители к нервам пульпы. Это приводит к тому, что нерв пульпы становится более чувствительным к одному и тому же раздражителю. Несмотря на то, что в самом дентине нет никаких нервов, мы можем воспринимать температурные изменения, поскольку воздействие холода передается через дентинные канальцы к нервам внутри пульпы.
В дентине, занимающем большую часть зуба, имеются дентинные канальцы, которые проходят от пульпы к эмали. Эти канальцы заполнены жидкостью. Их диаметр увеличивается по направлению к пульпе, и они имеет закрытую структуру. Благодаря такой структуре канальцев внешние раздражители могут быстро передаваться к нерву пульпы. Если поверхность дентина повреждена, и количество открытых дентинных канальцев увеличено, то это может при вести к более чувствительной реакции на раздражитель, чем обычная реакция на него.
В настоящее время для борьбы с гиперестезией дентина известны два способа с разными принципами воздействия. Один способ основан на том, чтобы помешать передаче сигнала нерва, который передает боль, а другой - в блокировании (закупориванию) открытых дентинных канальцев для ослабления болевых симптомов, вызванных гиперестезией.
2
4
Дикалийфосфат (KНРО) широко используется в способе, связанном с воздействием на передачу сигнала нервов, которые передают боль. Тем не менее, дикалийфосфат имеет низкий эффект в отношении блокирования боли, и поэтому он должен использоваться повторно и постоянно, что не может рассматриваться как эффективный способ лечения, поскольку он ограничивает чувствительность при жевании.
4
3
Для закупоривания дентинных канальцев используют гидрофосфат кальция (СаНРО), фтор, оксалат, аргинин (аминокислота) и карбонат кальция (СаСО). Однако, поскольку для закупоривания дентинного канальца также используется инородный материал, отличный от дентина, то в области периферической границы между дентином и инородным материалом может образоваться зазор. После отделения инородного материала от дентина нерв снова обнажится, что ведет к рецидиву повышенной чувствительности дентина.
В настоящее время существует множество фторсодержащих продуктов, используемых для чистки полости рта, которые ослабляют гиперестезию дентина (гиперчувствительность дентина или чувствительность зубов). Поскольку фторид покрывает зубы, и он обладает способностью прочно связываться с кальциевыми компонентами, присутствующими в слюне, то он способен закупоривать открытые дентинные канальцы, ослабляя болезненные симптомы. Однако известно, что фторид имеет побочные эффекты, которые при длительном применении фторида могут привести к повреждению иммунной системы человека или вызвать артрит, боли в спине и остеопороз.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Варианты выполнения настоящего изобретения основаны на предоставлении композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина, содержащий пептид, включающий аминокислотную последовательность следующей формулы 1:
KY-R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-R8 (Формула 1)
где R1 представляет собой аргинин(R), лизин(K) или глутамин(Q);
R2 представляет собой аргинин(R) или глутамин(Q);
R3, R4 и R5 представляют собой аргинин(R) или лизин(K), соответственно;
R6 представляет собой аспарагин(N) или серин(S); и
R7 и R8 представляют собой лизин(K) или тирозин(Y), соответственно.
Варианты выполнения настоящего изобретения также основаны на предоставлении композиции для ухода за полостью рта, содержащей пептид, включающий любую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1-96.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что в состав композиции могут быть включены 0,00005-0,00015 массовых частей пептида из расчета на 100 массовых частей композиции.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что в состав композиции могут быть включены 0,0545-0,0555 массовых частей цетилпиридиний хлорида из расчета на 100 массовых частей композиции.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что в состав композиции для ухода за полостью рта могут входить 85-87 массовых частей очищенной воды, 1,7-2,9 массовых частей поверхностно-активного вещества и 0,0045-0,0055 массовых частей гидрата лимонной кислоты из расчета на 100 массовых частей композиции.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что поверхностно-активное вещество может представлять собой полоксамер и/или полисорбат 20.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что поверхностно-активное вещество может включать 12-14 мас.% полоксамера 407 и 86-88 мас.% полисорбата 20.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что композиция для ухода за полостью рта может включать 9-11 массовых частей увлажнителя из расчета на 100 массовых частей композиции.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что увлажнитель может представлять собой раствор D-сорбита и/или концентрированный глицерин.
Варианты выполнения настоящего изобретения предусматривают, что увлажнитель может включать 45-55 мас.% раствора D-сорбита и 45-55 мас.% концентрированного глицерина.
Эффекты изобретения
Варианты выполнения настоящего изобретения предоставляют композицию для ухода за полостью рта, которая предотвращает или ослабляет гиперестезию дентина путем устранения дефектов дентинных канальцев и закупоривания открытых дентинных канальцев за счет физиологической реминерализации дентина.
Другие аспекты, преимущества и характерные особенности вариантов выполнения изобретения будут очевидны для специалистов в данной области техники из приведенного ниже подробного описания, которое вместе с прилагаемыми фигурами раскрывает иллюстративные варианты выполнения изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На Фигуре 1A представлен график, показывающий результаты сравнения эффекта действия соответствующих групп пептидов, входящих в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по изобретению, на экспрессию DSPP, который представляет собой маркерный ген дифференциации одонтобластов.
На Фигуре 1В представлен график, показывающий результаты сравнения уровней экспрессии гена DSPP, маркера дифференциации одонтобластов в клетках MDPC-23, обработанных пептидами, входящими в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по изобретению.
На Фигуре 1С представлен график, показывающий результаты сравнения уровней экспрессии генов DSPP, Dmp1 и Nestin, маркеров дифференциации одонтобластов в клетках MDPC-23, обработанных пептидами группы 11 и группы 12, входящих в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по изобретению.
На Фигуре 1D представлен график, показывающий результаты оценки цитотоксичности пептидов, входящих в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по изобретению.
На Фигуре 2 показана проницаемость композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по изобретению. Реагент для флуоресцентного окрашивания (родамин В) смешивали с композицией для ухода за полостью рта и обрабатывали зуб с открытыми дентинными канальцами в течение 1 минуты, а затем наблюдали с помощью флуоресцентного микроскопа.
На Фигуре 3 показаны результаты сравнения композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с вариантом выполнения изобретения (Пример 2), со Сравнительным примером 2-1 и Сравнительным примером 2-2 в отношении способности закупоривания дентинных канальцев.
На Фигуре 3 A-C показаны дентинные канальцы, которые обрабатывали только очищенной водой (Сравнительный пример 2-1), На Фигуре 3 D-F показаны дентинные канальцы, обработанные композицией без пептида (Сравнительный пример 2-2). На Фигуре 4 G-I показаны дентинные канальцы, обработанные композицией для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с изобретением (масштабные шкалы: A, D, G - 100 мкм, В, E, H - 20 мкм; C, F, I - 10 мкм). В каждом случае срезы дентина с открытыми дентинными канальцами обрабатывали один раз в день в течение 1 минуты, а затем погружали в искусственную слюну. После повторения этого процесса в течение 2 недель оценивали эффективность закупоривания дентинных канальцев с помощью сканирующего электронного микроскопа.
На Фигуре 4 представлено увеличенное изображение, на котором показаны дентинные канальцы, закупоренные за счет обработки композицией для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения. Видна реминерализация в закупоренных дентинных канальцах и на поверхности дентина.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее будет представлено подробное описание вариантов выполнения изобретения, примеры которых проиллюстрированы на прилагаемых фигурах, где одинаковые обозначения позиций относятся к одинаковым элементам. Следует отметить, что представленные варианты выполнения изобретения могут иметь разные формы выполнения, и они не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение, изложенное в данном документе. Если не указано иное, все термины, включая технические и научные термины, используемые здесь, имеют свои обычные значения, как их понимает обычный специалист в данной области техники, к которой относится изобретение. Кроме того, следует понимать, что термины, определения которых представлено в обычно используемых словарях, должны интерпретироваться как имеющие значение, которое согласуется с их значением в контексте соответствующей области техники, и они не могут интерпретироваться в идеализированном или чрезмерно формальном смысле, если это прямо не определено здесь. Кроме того, смысловые значения терминов, которые будут использоваться ниже, определены с учетом их вкладов в настоящее изобретение, и их смысловое значение может варьироваться в зависимости от намерений пользователя изобретения или практики использования изобретения.
Настоящее изобретение будет более подробно раскрыто со ссылкой на прилагаемые фигуры, на которых показаны иллюстративные варианты выполнения изобретения. Однако это раскрытие может быть реализовано в различных формах, и его не следует истолковывать как ограничивающее настоящее изобретение конкретными вариантами выполнения, описанными в данном документе, поскольку эти иллюстративные варианты выполнения изобретения представлены для того, чтобы описание давало специалистам в данной области техники полную и исчерпывающую информацию о настоящем изобретении. Поскольку в настоящем описании представлены иллюстративные раскрытия в виде примеров, следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается этими примерами, и оно определяется только объемом формулы изобретения, которая представлена здесь.
Следует понимать, что при использовании в данном описании терминов «содержит» и/или «содержащий», которые определяют присутствие перечисляемых компонентов, они подразумевают, что описываемый объект может содержать больше количество компонентов, не исключая другие компоненты, если только не указано особо.
Варианты выполнения настоящего изобретения далее будут описаны более подробно.
Одонтобласт представляет собой клетку, которая синтезирует и секретирует белки и полисахариды, составляющие матрицу дентина. Это столбчатые клетки, которые контактируют с предентином (некальцинированным дентином), и они образуют слой клеток на периферии пульпы зуба. Он представляет собой дифференцированную клетку, происходящую из мезенхимальной эктодермы, которая участвует в кальцификации дентина. Одонтобласт на стадии своего развития контактирует с эмалью зуба, наряду с другими клетками зубного сосочка.
in vivo,
Пептид, входящий в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения (далее - «пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов»), не проявляет цитотоксичности, но может повышать уровень экспрессии генов-маркеров дифференциации одонтобластов DSPP, Dmp1 и Nestin. При трансплантации клеток ткани пульпы в условиях клетки ткани пульпы могут образовывать дентиновую/дентиноподобную ткань.
Пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов, включает мутантные пептиды, имеющие иную аминокислотную последовательность, в которой представлен по меньшей мере один другой аминокислотный остаток, при условии, что эти пептиды могут способствовать регенерации дентина или лечению гиперестезии дентина.
Аминокислотные замены в белках и полипептидах, которые обычно не изменяют активность молекулы, известны в данной области. Наиболее часто встречающиеся замены представляют собой следующие аминокислотные замены остатков Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala./Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly, в обоих направлениях. Пептид может включать пептиды, которые в результате изменения или модификации аминокислотной последовательности обладают улучшенной структурной стабильностью к нагреву, воздействию pH и т.п., или которые обладают улучшенной способностью промотировать регенерацию дентина или пульпы зуба.
Например, хотя глутамин, который представляет собой кислую аминокислоту в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 по изобретению, заменен основной аминокислотой, лизином или аргинином, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового; хотя аргинин, который представляет собой основную аминокислоту в положении 4 или 5 пептида SEQ ID NO: 1, заменен кислой аминокислотой глутамином или основной аминокислотой лизином, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового; хотя лизин, который представляет собой основную аминокислоту в положении 6, 7 или 9 пептида SEQ ID NO: 1, заменен основной аминокислотой аргинином или ароматической аминокислотой тирозином, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового; хотя аспарагин, который представляет собой кислую аминокислоту в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1, заменен нейтральной аминокислотой серином, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового; и хотя тирозин, который представляет собой ароматическую аминокислоту в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1, заменен основной аминокислотой лизином, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового.
Таким образом, хотя кислые аминокислоты, основные аминокислоты или ароматические аминокислоты, образующие пептид по изобретению, могут быть заменены аминокислотами, имеющими такие же свойства, или заменены другими кислыми аминокислотами, основными аминокислотами, нейтральными аминокислотами или ароматическими аминокислотами, соответственно, можно получить эффекты пептида по изобретению как такового. Поэтому очевидно, что вариант пептида, имеющий последовательность, включающую один или несколько аминокислотных остатков, отличающихся от остатков аминокислотной последовательности, образующей пептид по изобретению, также охватывается определением «пептид по изобретению».
Кроме того, произвольные аминокислоты могут быть добавлены на N-конце или C-конце пептида по изобретению, и при этом могут быть получены такие же эффекты, как у пептида по изобретению. Следовательно, пептид, полученный добавлением произвольной аминокислоты на N-конце или C-конце пептида по изобретению, также охватывается определением «пептид по изобретению». Например, в качестве примера может быть приведен пептид, полученный путем добавления от 1 до 300 аминокислот на N-конце или С-конце пептида по изобретению; в качестве другого примера можно указать пептид, полученный путем добавления от 1 до 100 аминокислот на N-конце или С-конце пептида по изобретению, и в качестве еще одного примера можно указать пептид, полученный добавлением от 1 до 24 аминокислот на N-конце или С-конце пептида по изобретению.
Уровень мРНК гена DSPP в клетках MDPC-23, обработанных пептидом, промотирующим дифференциацию одонтобластов, по сравнению с уровнем мРНК гена DSPP в клетках MDPC-23, не обработанных пептидом, промотирующим дифференциацию одонтобластов (контроль), для всех случаев был выше в 1,3 раза или более (Таблицы 13-24).
Как уже сообщалось, известно, что по мере повышения уровня мРНК гена DSPP, промотируется дифференциация одонтобластов и регенерация дентина, и, следовательно, можно ожидать, что 128 видов пептидов, повышающих уровни мРНК гена Dspp, могут проявлять эффект промотирования дифференциации одонтобластов и регенерации дентина (Taduru Sreenath et al., THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, Vol. 278, No. 27, Issue of July 4, pp. 24874-24880, 2003; William T. Butler et al, Connective Tissue Research, 44(Suppl. 1): 171-178, 2003).
Пептид, входящий в состав композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина, можно использовать в форме монопептида или в форме полипептида с 2 или более повторами пептида, и пептид также можно использовать в комплексной форме с лекарственным средством, обладающим терапевтическим эффектом действия в отношении заболевания дентина или пульпы зуба, где лекарственное средство связано с N-концом или C-концом пептида.
Пример 1:
Синтез пептидов для стимуляции дифференциации одонтобластов
Авторы настоящего изобретения синтезировали пептид (SEQ ID NO: 1), обладающий способностью промотировать регенерацию дентина или тканей зубной пульпы, известным способом с использованием 9-флуоренилметилоксикарбонила (Fmoc), и они синтезировали пептиды соответствующих групп (Таблицы 1-12) путем замены аминокислот синтезированного пептида.
N-KYQRRKKNKY-C (SEQ ID NO: 1)
Сначала синтезировали пептиды Группы 1 с использованием пептида SEQ ID NO: 1 или путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином (Таблица 1).
Таблица 1
Пептиды Группы 1
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
12345678
KYQRRKKNKYKYQRRKRNKYKYQRRRKNKYKYQRRRRNKYKYQRKKKNKYKYQRKRKNKYKYQRKKRNKYKYQRKRRNKY
Затем синтезировали пептиды Группы 2 путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином или путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином (Таблица 2).
Таблица 2
Пептиды Группы 2
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
910111213141516
KYQRRKKSKYKYQRRKRSKYKYQRRRKSKYKYQRRRRSKYKYQRKKKSKYKYQRKRKSKYKYQRKKRSKYKYQRKRRSKY
Затем синтезировали пептиды Группы 3 путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином или путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином (Таблица 3).
Таблица 3
Пептиды Группы 3
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
1718192021222324
KYQRRKKNYKKYQRRKRNYKKYQRRRKNYKKYQRRRRNYKKYQRKKKNYKKYQRKRKNYKKYQRKKRNYKKYQRKRRNYK
Затем синтезировали пептиды Группы 4 путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином, путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином, путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином или путем замены аминокислоты в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1 лизином (Таблица 4).
Таблица 4
Пептиды Группы 4
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
2526272829303132
KYQRRKKSYKKYQRRKRSYKKYQRRRKSYKKYQRRRRSYKKYQRKKKSYKKYQRKRKSYKKYQRKKRSYKKYQRKRRSYK
Затем синтезировали пептиды Группы 5 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 аргинином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином или путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином (Таблица 5).
Таблица 5
Пептиды Группы 5
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
3334353637383940
KYRQRKKNKYKYRQRKRNKYKYRQRRKNKYKYRQRRRNKYKYRQKKKNKYKYRQKRKNKYKYRQKKRNKYKYRQKRRNKY
Затем синтезировали пептиды Группы 6 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 аргинином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином или путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином (Таблица 6).
Таблица 6
Пептиды Группы 6
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
4142434445464748
KYRQRKKSKYKYRQRKRSKYKYRQRRKSKYKYRQRRRSKYKYRQKKKSKYKYRQKRKSKYKYRQKKRSKYKYRQKRRSKY
Затем синтезировали пептиды Группы 7 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 аргинином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином, путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином или путем замены аминокислоты в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1 лизином (Таблица 7).
Таблица 7
Пептиды Группы 7
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
4950515253545556
KYRQRKKNYKKYRQRKRNYKKYRQRRKNYKKYRQRRRNYKKYRQKKKNYKKYRQKRKNYKKYRQKKRNYKKYRQKRRNYK
Затем синтезировали пептиды Группы 8 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 аргинином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином, путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином, путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином или путем замены аминокислоты в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1 лизином (Таблица 8).
Таблица 8
Пептиды Группы 8
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
5758596061626364
KYRQRKKSYKKYRQRKRSYKKYRQRRKSYKKYRQRRRSYKKYRQKKKSYKKYRQKRKSYKKYRQKKRSYKKYRQKRRSYK
Затем синтезировали пептиды Группы 9 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 лизином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином или путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином (Таблица 9).
Таблица 9
Пептиды Группы 9
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
6566676869707172
KYKQRKKNKYKYKQRKRNKYKYKQRRKNKYKYKQRRRNKYKYKQKKKNKYKYKQKRKNKYKYKQKKRNKYKYKQKRRNKY
Затем синтезировали пептиды Группы 10 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 лизином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином или путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином (Таблица 10).
Таблица 10
Пептиды Группы 10
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
7374757677787980
KYKQRKKSKYKYKQRKRSKYKYKQRRKSKYKYKQRRRSKYKYKQKKKSKYKYKQKRKSKYKYKQKKRSKYKYKQKRRSKY
Затем синтезировали пептиды Группы 11 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 лизином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином, путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином или путем замены аминокислоты в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1 лизином (Таблица 11).
Таблица 11
Пептиды Группы 11
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
8182838485868788
KYKQRKKNYKKYKQRKRNYKKYKQRRKNYKKYKQRRRNYKKYKQKKKNYKKYKQKRKNYKKYKQKKRNYKKYKQKRRNYK
Наконец, синтезировали пептиды Группы 12 путем замены аминокислоты в положении 3 пептида SEQ ID NO: 1 лизином, путем замены аминокислоты в положении 4 пептида SEQ ID NO: 1 глутамином, путем замены любой аминокислоты в положениях 5-7 пептида SEQ ID NO: 1 лизином или аргинином, путем замены аминокислоты в положении 8 пептида SEQ ID NO: 1 серином, путем замены аминокислоты в положении 9 пептида SEQ ID NO: 1 тирозином или путем замены аминокислоты в положении 10 пептида SEQ ID NO: 1 лизином (Таблица 12).
Таблица 12
Пептиды Группы 12
SEQ ID NO:
Аминокислотная последовательность(N-C)
8990919293949596
KYKQRKKSYKKYKQRKRSYKKYKQRRKSYKKYKQRRRSYKKYKQKKKSYKKYKQKRKSYKKYKQKKRSYKKYKQKRRSYK
Пример 2: Подтверждение эффекта промотирования регенерации дентина с использованием одонтобластов
Пример 2-1: Подтверждение эффекта действия пептидов на активность промотора DSPP (дентин сиалофосфопротеин)
2
Сначала культивировали клетки MDPC-23, которые представляют собой одонтобласты мыши, в среде DMED, дополненной 10% FBS, в условиях 5% CO и 37°C.
4
Затем культивированные клетки MDPC-23 высевали в 24-луночный планшет при плотности 5 × 10 клеток на лунку и культивировали в течение 24 часов. Затем культивированные клетки трансфицировали рекомбинантным вектором, сконструированным путем введения промотора DSPP и гена люциферазы в pGL3 вектор с использованием реагента Lipofectamine Plus™. Трансфицированные клетки MDPC-23 обрабатывали пептидами Групп 1-12, синтезированными в Примере 1, соответственно, и культивировали в течение 48 часов. Измеряли люциферазную активность в каждой из трансфицированных клеток MDPC-23, и рассчитанные средние уровни активности для соответствующих групп сравнивали друг с другом (Фиг. 1A). При этом трансфицированные клетки MDPC-23, которые не обрабатывали пептидом по изобретению, использовали в качестве контроля.
На Фиг. 1А представлен график, показывающий результаты сравнения эффектов действия каждого из пептидов соответствующих групп по изобретению на экспрессию гена-маркера дифференциации одонтобластов DSPP. Как показано на Фиг. 1A, общие уровни люциферазной активности соответствующих пептидов по настоящему изобретению были приблизительно выше в 1,3 раз и более, чем в контрольной группе, при этом показаны различия, имевшие место в каждой группе. Показано, что пептиды Группы 12 обладают наибольшим уровнем люциферазной активности. Пептиды Группы 11 показали следующий за ними высокий уровень люциферазной активности.
Таким образом подтверждено, что пептиды по изобретению эффективно активируют промотор DSPP.
Пример 2-2: Подтверждение эффекта действия пептидов на уровень экспрессии гена-маркера дифференциации одонтобластов DSPP
Клетки MDPC-23, культивированные в Примере 2-1, обрабатывали пептидами соответствующих групп, которые были синтезированы в Примере 1, и дополнительно культивировали в течение 48 часов. Затем измеряли уровни мРНК гена-маркера дифференциации одонтобластов DSPP, экспрессируемого в клетках MDPC-23, и рассчитывали отношение измеренных уровней мРНК DSPP относительно измеренных уровней мРНК DSPP в контрольной группе, соответственно (Таблицы 13-24). Кроме того, средние значения уровней мРНК Dspp, измеренных в пептидах соответствующих групп, сравнивали между группами (Фиг. 1B). При этом клетки MDPC-23, которые не обрабатывали пептидом по изобретению, использовали в качестве контроля.
Уровни экспрессии гена DSPP измеряли методом ОТ-ПЦР и методом ПЦР в режиме реального времени. Более подробно, общую РНК выделяли из клеток MDPC-23 при помощи реагента TRIzol. Для синтеза кДНК использовали 2 мкг общей РНК, 1 мкл обратной транскриптазы и 0,5 мкг праймера oligo (oligo(dT)). Синтезированную кДНК использовали в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени осуществляли на системе детекции последовательностей ABI PRISM 7500 (Applied Biosystems) и SYBR GREEN PCR Master Mix (Takara, Japan) с использованием праймеров, указанных ниже. Полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени осуществляли в условиях: 94°C, 1 мин; 95°C, 15 сек; 60°C, 34 сек для 40 циклов. Результаты анализировали сравнительным методом расчета значений порогового цикла (CT). При этом ген Gapdh использовали в качестве внутреннего контроля. Эксперименты осуществляли в трех повторах, и в качестве измеренных значений использовали средние значения и их стандартные отклонения.
Dspp_F: 5'-ATTCCGGTTCCCCAGTTAGTA-3'(SEQ ID NO: 97)
Dspp_R: 5'-CTGTTGCTAGTGGTGCTGTT-3'(SEQ ID NO: 98)
Gapdh_F: 5'-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3'(SEQ ID NO: 99)
Gapdh_R: 5'-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-3'(SEQ ID NO: 100)
Таблица 13
Эффекты действия пептидов Группы 1 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
12345678
1,7541,6461,4641,8551,6391,7461,8641,639
0,1320,0920,2210,1020,0570,0910,1320,032
Таблица 14
Эффекты действия пептидов Группы 2 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
910111213141516
1,8541,7461,6391,5481,6851,8461,9641,739
0,0320,0520,2010,0270,0770,1410,2790,092
Таблица 15
Эффекты действия пептидов Группы 3 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
1718192021222324
2,1172,3191,9312,5531,8932,4122,1712,212
0,2090,0920,1020,0990,1320,0720,2810,111
Таблица 16
Эффекты действия пептидов Группы 4 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
2526272829303132
2,3712,1931,9932,4531,8832,5122,3712,219
0,0890,0520,2020,1920,1010,2090,1390,302
Таблица 17
Эффекты действия пептидов Группы 5 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
3334353637383940
1,7121,9311,9832,3191,5972,1161,7122,219
0,0910,1720,1020,2920,3010,2110,1910,212
Таблица 18
Эффекты действия пептидов Группы 6 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
4142434445464748
1,5461,5861,6691,7931,5321,8871,6971,558
0,0910,1030,0950,2030,3100,0770,0090,201
Таблица 19
Эффекты действия пептидов Группы 7 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
4950515253545556
1,9231,8871,6012,0191,5921,4371,6631,701
0,1920,0070,0820,1350,2220,3410,0940,109
Таблица 20
Эффекты действия пептидов Группы 8 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
5758596061626364
2,0391,9981,7922,1072,3011,6721,7691,967
0,0820,1720,0070,2010,0190,3080,0850,039
Таблица 21
Эффекты действия пептидов Группы 9 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
6566676869707172
1,7231,6271,7771,4322,0111,9271,8792,011
0,0720,2910,0270,4100,0810,1050,0600,009
Таблица 22
Эффекты действия пептидов Группы 10 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
7374757677787980
2,0352,0111,9972,3511,7292,6352,2311,837
0,0210,0630,0590,1090,1110,0910,0770,201
Таблица 23
Эффекты действия пептидов Группы 11 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
8182838485868788
3,0923,3613,5723,7023,6703,7053,8884,021
0,1520,0980,2090,3010,0880,1370,0720,301
Таблица 24
Эффекты действия пептидов Группы 12 на уровень мРНК гена Dspp
SEQ ID NO:
Уровень мРНК гена Dspp
Среднее значение
Стандартное отклонение
8990919293949596
4,2114,8114,3624,2114,5253,8364,6205,211
0,4130,3020,1820,2870,2500,0990,4010,371
Как показано в Таблицах 13-24, подтверждено, что уровни мРНК гена DSPP в экспериментальных группах, обработанных пептидом по изобретению, были выше в 1,3 раза или более по сравнению с уровнем мРНК гена DSPP в контрольной группе. В частности, подтверждено, что все пептиды Группы 11 показали повышение уровня мРНК гена DSPP в 3 раза или более, и все пептиды Группы 12 показали повышение уровня мРНК гена DSPP в 3,8 раза или более по сравнению с контролем.
Кроме того, на Фиг. 1B представлен график, демонстрирующий результаты сравнения уровней экспрессии гена-маркера дифференциации одонтобластов Dspp в клетках MDPC-23, обработанных пептидами по изобретению. Как показано на Фиг. 1B, при обработке пептидами по изобретению, уровни мРНК гена-маркера дифференциации одонтобластов Dspp были повышены, и аналогично тому, как показано на Фиг. 1A, уровни мРНК были приблизительно выше в 1,3 раза или более, чем уровни мРНК Dspp, измеренные в контрольной группе.
Пример 2-3: Подтверждение эффекта действия пептида на уровень экспрессии генов-маркеров дифференциации одонтобластов DSPP, Dmp1 и Nestin.
Результаты Примера 2-2 подтвержают, что пептиды по изобретению, промотирующие дифференциацию одонтобластов, могут повышать уровни мРНК гена Dspp и, в частности, пептиды Группы 11 и Группы 12 могут повышать уровни мРНК гена Dspp по меньшей мере в три раза или более.
Соответственно, необходимо установить, могут ли пептиды Группы 11 и Группы 12 также повышать уровни мРНК гена Dmp1 и гена Nestin, которые являются другими генами-маркерами дифференциации одонтобластов.
Указанные ниже праймеры использовали в соответствии со способом Примера 2-2. Для оценки влияния на уровни экспрессии генов Dmp1 и Nestin использовали пептиды Группы 11 и Группы 12. Измеряли эффекты действия пептида в отношении промотирования дифференциации, и сравнивали средние уровни (Фиг. 1C). При этом в качестве контрольной группы использовали клетки MDPC-23 без обработки пептидом, промотирующим дифференциацию одонтобластов.
Dmp1_F: 5'-CATTCTCCTTGTGTTCCTTTGGG-3'(SEQ ID NO 101)
Dmp1_R: 5'-TGTGGTCACTATTTGCCTGTG-3'(SEQ ID NO 102)
Nestin_F: 5'-CCCTGAAGTCGAGGAGCTG-3'(SEQ ID NO 103)
Nestin_R: 5'-CTGCTGCACCTCTAAGCGA-3'(SEQ ID NO 104)
На Фиг. 1C представлен график, демонстрирующий результаты сравнения уровней экспрессии генов-маркеров дифференциации одонтобластов Dspp, Dmp1 и Nestin в клетках MDPC-23, обработанных пептидами Группы 11 и Группы 12. Как показано на Фиг. 1C, при обработке клеток пептидами по изобретению, все уровни мРНК генов-маркеров дифференциации одонтобластов Dspp, Dmp1 и Nestin повышались, но уровни увеличения для каждого гена были разными. Показано, что пептиды Группы 12 более эффективны.
Поскольку известно, что каждый ген-маркер дифференциации участвует в дифференциации одонтобластов и кальцификации дентина, то необходимо проанализировать пептиды по изобретению в отношении промотирования регенерации дентина.
Пример 2-4: Оценка цитотоксичности пептидов в отношении клеток ткани пульпы
Сначала выделяли стволовые клетки из зубов мудрости 10 взрослых субъектов (возраст 18-22 года) в Школе стоматологии Сеульского Национального Университета. В частности, все эксперименты проводились после их одобрения Экспертным советом учреждения и получения информированного согласия от пациентов. Чтобы обнажить пульпу, зубы мудрости разрушали по методу Jung HS et al. (J Mol Histol. (2011)), и ткани пульпы отделяли щипцами. Каждую из отделенных тканей пульпы зуба измельчали на мелкие кусочки лезвием бритвы, помещали в чашку диаметром 60 мм, накрывали покровным стеклом и затем культивировали в среде Игла, модифицированной по Дульбекко.
3
Затем полученные клетки ткани пульпы зуба высевали в 96-луночный планшет при плотности 3×10 клеток на лунку и культивировали в течение 24 часов. Затем клетки обрабатывали пептидами Группы 11 или Группы 12 при концентрации 10 мкг/мл или 50 мкг/мл, и затем культивировали в течение 1 дня, 3 дней или 5 дней. Клетки после культивирования промывали раствором PBS, добавляли к ним 20 мкл раствора MTT и затем оставляли для протекания реакции при 37°C в течение 4 часов. После завершения реакции раствор MTT удаляли, добавляли 100 мкл DMSO и измеряли поглощение при 540 нм (Фиг. 1D). При этом в качестве контроля использовали клетки ткани пульпы, культивированные без пептида.
На Фиг. 1D представлен график, демонстрирующий результаты оценки цитотоксичности пептидов, промотирующих дифференциацию одонтобластов в клетки ткани пульпы зуба. Как показано на Фиг. 1D, выживаемость клеток ткани пульпы была на том же уровне, что и в контрольной группе, даже когда добавляли пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов.
Пример 3: Приготовление композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина
Стадия 1
К очищенной воде добавляли полоксамер 407, а затем перемешивали в смесителе в течение приблизительно 30 минут (условия: смешивание лопаточной мешалкой: 15-20 об/мин; получение дисперсии: 400-500 об/мин).
Стадия 2
Добавляли сорбат калия, цетилпиридиний хлорид, ксилит, краситель, ацесульфам калия (голубой № 1), раствор D-сорбита и концентрированный глицерин, и затем перемешивали в смесителе в течение приблизительно 30 минут (условия: смешивание лопаточной мешалкой: 15-20 об/мин; получение дисперсии: 400-500 об/мин).
Стадия 3
Scutellaria Baicalensis,
Добавляли полисорбат 20 (Твин 20), экстракт корня экстракт зеленого чая, экстракт ромашки, экстракт розмарина и ароматизатор мята (HF-3585) при нагревании, и затем перемешивали в течение приблизительно 30 минут (условия: смешивание лопаточной мешалкой: 15-20 об/мин; получение дисперсии: 400-500 об/мин).
Стадия 4
После перемешивания добавляли приблизительно 0,0001% пептида, промотирующего дифференциацию одонтобластов (SEQ ID NO: 96), и гидрат лимонной кислоты для доведения pH от 5,5 до 6,0.
Таблица 25
Состав композиция для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по Примеру 3
Составная часть
Ингредиент
Содержание (% масс.)
1
Растворитель
Дистиллированная вода
86,25
Поверхностно-активное вещество
Полоксамер 407
0,3
Пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов
Пептид (SEQ ID NO: 96)
0,0001
2
Консервант
Сорбат калия
0,1
Основной компонент
Цетилпиридиний хлорид
0,055
Подсластитель
Ксилит
1
Ацесульфам калия
0,05
Регулятор pH
Гидрат лимонной кислоты
0,005
Краситель
Голубой 1 (CI 42090)
0,00025
Увлажнитель
Раствор D-сорбита
5
Глицерин (концентрированный)
5
3
Поверхностно-активное вещество
Полисорбат (Твин 20)
2
Флаворант
Экстракт корня Scutellaria Baicalensis
0,01
Экстракт зеленого чая
0,01
Экстракт ромашки
0,01
Экстракт розмарина
0,01
Ароматизатор мята (HF-3585)
0,2
Всего
100
Приготовление композиций сравнительного примера
Сравнительный пример 3-1:
Подготовленная очищенная вода такого же объема, как и в Примере 3.
Сравнительный пример 3-2:
Использовали все ингредиенты Примера 3, кроме пептида, промотирующего дифференциацию одонтобластов (SEQ ID NO: 96), и композицию готовили аналогичным образом.
Пример тестирования 1:
Визуально оценивали проницаемость композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по Примеру 3 в дентинные канальцы.
A. Разрезание зуба для открытия дентинных канальцев
Алмазной пилой делали горизонтальный срез верхней части удаленного зуба человека, чтобы открыть дентинные канальцы, а затем зуб дважды промывали фосфатным буферным раствором в течение приблизительно 5 минут.
B. Очистка зуба со срезом
Ранее полученный зуб со срезом подвергали воздействию 0,5 М раствора этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA, pH 7,4) в течение приблизительно 5 минут, а затем дважды промывали фосфатным буферным раствором в течение приблизительно 5 минут.
С. Добавление красящего флуоресцентного реагента к композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по Примеру 3
Добавляли 0,1% красящего флуоресцентного реагента к композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина, содержащей пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов (SEQ ID NO: 96), хорошо перемешивали и затем воздействовали на зуб со стороны среза, открывшего дентинные канальцы, в течение приблизительно 1 минуты.
D. Наблюдение за прониканием композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина.
Зуб, обработанный со стороны среза, открывшего дентинные канальцы, дважды промывали фосфатным буферным раствором в течение приблизительно 5 минут, а затем разрезали алмазной пилой по его длине, получая срезы толщиной приблизительно 0,5 мм, так чтобы дентинные канальцы разрезанного зуба располагались по длине среза, и глубину проникания композиции наблюдали с помощью флуоресцентного микроскопа (Фиг. 2).
Пример тестирования 2:
Наблюдение за способностью композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по Примеру 3 закупоривать дентиные канальцы
А. Приготовление искусственной слюны
Состав искусственной слюны показан в Таблице 26, приведенной ниже.
2
4
Добавляли очищенную воду до конечной концентрации каждого компонента, указанной в Таблице 26, и затем перемешивали. В последнюю очередь добавляли фосфат калия (KHPO).
pH искусственной слюны составляет около 7,2, как и у человеческой слюны.
Таблица 26
Ингредиент
Концентрация (мМ)
CaCl<sub>2</sub>
0,7
MgCl<sub>2</sub>
0,2
K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>
4
KCl
30
NaN<sub>3</sub>
0,3
HEPES
20
B. Получение образцов дентина с дентинными канальцами
Удаленный человеческий зуб разрезали по горизонтали с помощью алмазной пилы, чтобы получить образец ткани дентина толщиной 1 мм с открытыми дентинными канальцами.
Образец ткани дентина подвергли воздействию 32% раствора фосфорной кислоты в течение приблизительно 5 минут до полного открытия дентинных канальцев, а затем его трижды промывали очищенной водой в течение приблизительно 5 минут. Затем образец ткани дентина промывали 6 раз в ультразвуковом очистителе в течение приблизительно 5 минут, чтобы полностью открыть дентинные канальцы.
После этого образцы трижды промывали фосфатным буферным раствором и хранили до использования.
С. Наблюдение за способностью композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина закупоривать дентинные канальцы
Используя композицию для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина по Примеру 3, полученный образец с открытыми дентинными канальцами обрабатывали в ней в течение приблизительно 1 минуты, а затем подвергали воздействию искусственной слюны в течение приблизительно 24 часов.
После повторения этого процесса в течение 2 недель, образцы трижды промывали дистиллированной водой, сушили, и затем наблюдали уровень закупоривания дентинных канальцев с помощью сканирующего электронного микроскопа (S-4700, Hitachi, Токио, Япония) (Фиг. 3, G-I).
Сравнительный пример тестирования 2-1:
Используя очищенную воду, полученную в Сравнительном примере 3-1, образец с открытыми дентинными канальцами обрабатывали в ней в течение приблизительно 1 минуты, а затем подвергали воздействию искусственной слюны в течение приблизительно 24 часов.
После повторения этого процесса в течение 2 недель, образцы трижды промывали дистиллированной водой, сушили, и затем наблюдали уровень закупоривания дентинных канальцев с помощью сканирующего электронного микроскопа (Фиг. 3, A-C).
Сравнительный пример тестирования 2-2:
Используя композицию для ухода за полостью рта, полученную в Сравнительном примере 3-2, образец с открытыми дентинными канальцами обрабатывали в ней в течение приблизительно 1 минуты, а затем подвергали воздействию искусственной слюны в течение приблизительно 24 часов.
После повторения этого процесса в течение 2 недель, образцы трижды промывали дистиллированной водой, сушили, и затем наблюдали уровень закупоривания дентинных канальцев с помощью сканирующего электронного микроскопа (Фиг. 3, D-F).
В соответствии с Примером тестирования 1, в результате наблюдения с помощью флуоресцентного микроскопа за проницаемостью композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с примером 3 в дентинные канальцы, как показано на Фиг. 2, в случае зуба, обработанного композицией, наблюдалась сильная флуоресценция на поверхности дентина. Кроме того, наблюдалось проникновение окрашивающего флуоресцентного реагента вдоль нижней стороны открытых дентинных канальцев.
Кроме того, на Фиг. 3 представлены результаты испытаний по Примеру тестирования 2 и Сравнительных примеров тестирования 2-1 и 2-2. На Фиг. 3 представлена серия фотографий ткани дентина, позволяющих сравнить действие композиции для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезию дентина по Примеру 3 и композиций Сравнительных примеров 3-1 и 3-2 в отношении способности закупоривания дентинных канальцев. В частности, на Фиг. 3 A-C показаны дентинные канальцы в образцах ткани дентина, обработанные только очищенной водой (Сравнительный пример 3-1). На Фиг. 3 D-F показаны дентинные канальцы в образцах ткани дентина, обработанные композицией для ухода за полостью рта без пептида, промотирующего дифференциацию одонтобластов, (Сравнительный пример 3-2). На Фиг. 3 G-I показаны дентинные канальцы в образцах ткани дентина, обработанные композицией для ухода за полостью рта, содержащей в своем составе пептид, промотирующий дифференциацию одонтобластов, которая предотвращает или ослабляет гиперестезию дентина в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения. На фотоснимках представлены масштабные шкалы: на A, D, G - 100 мкм; на B, E, H - 20 мкм; на C, F, I - 10 мкм.
На Фиг. 3 видно, что в образцах ткани дентина, обработанных композицией для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина, содержащей пептид в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения, дентинные канальцы закупорены за счет реминерализации.
Фиг.4 представляет собой увеличенное изображение дентинных канальцев, закупоренных за счет действия содержащей пептид композиции по уходу за полостью рта, которая предотвращает или ослабляет гиперестезию дентина в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения, и на ней показаны результаты реминерализации в закупоренных дентинных канальцев и на поверхности ткани дентина.
Ссылаясь ни Фиг.4, где хорошо видны дентинные канальцы после обработки композицией по Примеру 3, можно заметить, что реминерализация произошла как в дентинных канальцах, так и на поверхности дентина. Композиция для ухода за полостью рта, включающая пептид по изобретению, который предотвращает или ослабляет гиперестезию дентина, формирует тонкую пленку на дентине, и при этом прочно связывается с ионами фосфата кальция, присутствующими в дентинных канальцах и слюне, и реминерализует открытые дентинные канальцы и поверхность дентина. Другими словами, композиция для ухода за полостью рта для ослабления гиперестезии дентина в соответствии с вариантом выполнения настоящего изобретения вызывает реминерализацию не только на поверхности открытых дентинных канальцев, но также и внутри дентинных канальцев, проявляя тем самым эффект своего действия по ослаблению и/или предотвращению симптомов боли.
Хотя здесь выше описаны со ссылкой на иллюстративные материалы один или несколько вариантов выполнения настоящего изобретения, однако специалистам в данной области техники понятно, что в описанные варианты могут быть внесены различные изменения по форме выполнения и в деталях выполнения без отступления от сущности и объема настоящего изобретения, определенного в прилагаемой формуле изобретения.
«Это исследование было поддержано в рамках Проекта развития технологий Министерства малого и среднего бизнеса и стартапов в 2017 году [S2462696]»
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Перечень последовательностей
<110>    HysensBio
<120>    КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ УХОДА ЗА ПОЛОСТЬЮ РТА ДЛЯ ОСЛАБЛЕНИЯ ГИПЕРЕСТЕЗИИ ДЕНТИНА
<130>    LP18122PCT
<150>    KR 20180053012
<151>    2018-05-09
<160>    104
<170>    KopatentIn 2.0
<210>    1
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    1
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    2
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    2
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    3
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    3
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    4
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    4
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    5
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    5
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    6
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    6
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    7
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    7
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    8
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    8
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    9
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    9
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    10
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    10
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    11
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    11
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    12
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    12
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    13
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    13
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    14
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    14
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    15
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    15
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    16
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    16
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    17
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    17
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    18
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    18
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    19
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    19
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    20
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    20
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    21
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    21
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    22
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    22
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    23
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    23
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    24
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    24
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    25
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    25
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    26
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    26
Lys Tyr Gln Arg Arg Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    27
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    27
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    28
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    28
Lys Tyr Gln Arg Arg Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    29
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    29
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    30
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    30
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    31
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    31
Lys Tyr Gln Arg Lys Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    32
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    32
Lys Tyr Gln Arg Lys Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    33
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    33
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    34
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    34
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    35
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    35
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    36
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    36
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    37
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    37
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    38
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    38
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    39
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    39
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    40
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    40
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    41
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    41
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    42
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    42
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    43
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    43
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    44
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    44
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    45
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    45
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    46
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    46
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    47
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    47
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    48
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    48
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    49
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    49
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    50
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    50
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    51
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    51
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    52
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    52
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    53
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    53
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    54
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    54
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    55
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    55
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    56
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    56
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    57
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    57
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    58
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    58
Lys Tyr Arg Gln Arg Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    59
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    59
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    60
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    60
Lys Tyr Arg Gln Arg Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    61
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    61
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    62
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    62
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    63
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    63
Lys Tyr Arg Gln Lys Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    64
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    64
Lys Tyr Arg Gln Lys Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    65
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    65
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    66
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    66
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    67
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    67
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    68
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    68
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    69
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    69
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    70
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    70
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Lys Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    71
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    71
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    72
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    72
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Arg Asn Lys Tyr
1               5                  10
<210>    73
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    73
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    74
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    74
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    75
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    75
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    76
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    76
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    77
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    77
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    78
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    78
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Lys Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    79
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    79
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    80
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    80
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Arg Ser Lys Tyr
1               5                  10
<210>    81
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    81
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    82
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    82
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    83
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    83
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    84
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    84
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    85
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    85
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    86
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    86
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Lys Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    87
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    87
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    88
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    88
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Arg Asn Tyr Lys
1               5                  10
<210>    89
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    89
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    90
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    90
Lys Tyr Lys Gln Arg Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    91
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    91
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    92
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    92
Lys Tyr Lys Gln Arg Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    93
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    93
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    94
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    94
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Lys Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    95
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    95
Lys Tyr Lys Gln Lys Lys Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    96
<211>    10
<212>    Пептид
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Новый пептид
<400>    96
Lys Tyr Lys Gln Lys Arg Arg Ser Tyr Lys
1               5                  10
<210>    97
<211>    21
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    97
attccggttc cccagttagt a                                                   21
<210>    98
<211>    20
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    98
ctgttgctag tggtgctgtt                                                     20
<210>    99
<211>    21
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    99
aggtcggtgt gaacggattt g                                                   21
<210>    100
<211>    23
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    100
tgtagaccat gtagttgagg tca                                                 23
<210>    101
<211>    23
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    101
cattctcctt gtgttccttt ggg                                                 23
<210>    102
<211>    21
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    102
tgtggtcact atttgcctgt g                                                   21
<210>    103
<211>    19
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    103
ccctgaagtc gaggagctg                                                      19
<210>    104
<211>    19
<212>    ДНК
<213>    Искусственная последовательность
<220>
<223>    Праймер
<400>    104
ctgctgcacc tctaagcga                                                      19
<---