ХИНОКСАЛИНИЛМАКРОЦИКЛИЧЕСКИЕ ИНГИБИТОРЫ СЕРИНПРОТЕАЗЫ ВИРУСА ГЕПАТИТА С
QUINOXALINYL MACROCYCLIC HEPATITIS C VIRUS SERINE PROTEASE INHIBITORS

Родственная заявка
Данная заявка заявляет приоритет предварительной заявки на патент США № 60/872442, поданной 26 июня 2006. Взятые в целом идеи указанной выше заявки включены в описание в качестве ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым макроциклам, обладающим активностью против вируса гепатита С (НСV) и применимым при лечении инфекций HCV. Более конкретно, изобретение относится макроциклическим соединениям, композициям, содержащим такие соединения, и способам применения их, а также способам получения таких соединений.
Уровень техники
HCV является основной причиной гепатита ни «А», ни «В» и причиной возрастающей серьезной проблемы здоровья населения как в развитых, так и развивающихся странах. Установлено, что вирус инфицирует свыше 200 миллионов человек во всем мире, что превышает число индивидуумов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), почти в пять раз. Пациенты, инфицированные HCV, вследствие высокого процента индивидуумов, инфицированных хроническими инфекциями, имеют повышенный риск развития цирроза печени, последующего гепатоклеточного рака и заболевания печени в терминальной стадии. HCV является наиболее преобладающей причиной гепатоклеточного рака и причиной того, что в Западном мире пациентам требуются трансплантации печени.
Существуют значительные барьеры для разработки терапий против HCV, которые включают, но не ограничиваются перечисленным, устойчивость вируса, генетическое многообразие вируса во время репликации в организме хозяина, высокая частота инцидентов развития резистентных к лекарственному средству мутантов и отсутствие систем репродуцируемых инфекционных культур и моделей небольших животных для репликации и патогенеза HCV. В большинстве случаев при условии слабого течения процесса инфекции и сложной биологии печени особое внимание должно быть уделено противовирусным лекарственным средствам, которые, вероятно, имеют значительные побочные действия.
В настоящее время применимыми являются только две одобренные терапии для инфекции HCV. Первоначальная схема лечения обычно включает 3-12-месячный курс внутривенного введения интерферона-α (INF-α), тогда как новое принятое лечение второго поколения включает совместное лечение INF-α и обычными противовирусными нуклеозидными миметиками, подобными рибавирину. Оба из этих лечений страдают связанными с интерфероном побочными действиями, а также низкой эффективностью против инфекций HCV. Вследствие низкой переносимости и эффективности существующих терапий существует потребность в разработке эффективных противовирусных агентов для лечения инфекции HCV.
Для популяции пациентов, в которой основная часть индивидуумов является хронически инфицированной и бессимптомной и прогнозы для которой неизвестны, эффективное лекарственное средство предпочтительно проявляет значительно более слабые побочные действия, чем доступные в настоящее время лечения. Неструктурный белок-3 (NS3) гепатита С является протеолитическим ферментом, требуемым для процессинга вирусного полипротеина и, следовательно, вирусной репликации. Несмотря на огромное число вирусных вариантов, связанных с инфекцией HCV, активный сайт NS3-протеазы остается в высокой степени консервативным, что таким образом делает его ингибирование перспективным способом воздействия. Современный успех в лечении ВИЧ ингибиторами протеазы подтверждает концепцию, что ингибирование NS3 является ключевой целью в борьбе против HCV.
HCV является РНК-вирусом типа флавивируса. Геном HCV покрыт оболочкой и содержит молекулу одноцепочечной РНК, состоящую приблизительно из 9600 пар оснований. Он кодирует полипептид, состоящий приблизительно из 3010 аминокислот.
Полипротеин HCV процессируется пептидазой вируса и хозяина в 10 отдельных пептидов, которые выполняют различные функции. Имеется три структурных белка, С, Е1 и Е2. Белок Р7 имеет неизвестную функцию и состоит из высоковариабельной последовательности. Имеется шесть неструктурных белков. NS2 является цинкзависимой металлопротеиназой, которая функционирует в сочетании с частью белка NS3. NS3 выполняет две каталитические функции (отдельно от связи с NS2): функцию серинпротеазы у N-конца, которая требует NS4A в качестве кофактора, и функцию АТФ-азазависимой геликазы у карбоксильного конца. NS4A тесно ассоциирован, но не нековалентным связыванием, с кофактором серинпротеазы.
NS3.4A-протеаза является ответственной за расщепление четырех сайтов на вирусном полипротеине. Расщепление NS3-NS4A является аутокаталитическим, имеющим место в цис-положении. Остальные три гидролиза, NS4А-NS4В, NS4В-NS5A и NS5А-NS5В, все имеют место в транс-положении. NS3 является серинпротеазой, которую структурно классифицируют как подобную химотрипсину протеазу. Хотя сама серинпротеаза NS обладает протеолитической активностью, протеазный фермент HCV не является эффективным ферментом в смысле катализа расщепления полипротеина. Обнаружено, что для такого усиления требуется центральная гидрофобная область белка NS4A. По-видимому, для процессинга событий, повышающих протеолитическую эффективность у всех таких сайтов, необходимо образование комплекса белка NS3 с NS4A.
Общей стратегией для разработки противовирусных агентов должна быть инактивация вирусно кодированных ферментов, в том числе NS3, которые являются важными для репликации вируса. Современные исследовательские усилия, направленные на открытие ингибиторов протеазы NS3, указаны в обзоре S. Tan, A. Pause, Y. Shi, N. Sonenberg, Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov., 1, 867-881 (2002). Другими патентными открытиями, описывающими синтез ингибиторов протеазы HCV, являются WO 00/59929 (2000); WO 99/07733 (1999); WO 00/09543 (2000); WO 99/50230 (1999); US5861297 (1999); US6410531; US7176208; US7125845; публикации US 20050153877 и 20050261200.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, являющимся новыми ингибиторами протеазы HCV, и их фармацевтически приемлемым солям, сложным эфирам или пролекарствам, которые ингибируют активность серинпротеазы, особенно активности протеазы NS3-NS4A вируса гепатита С (HCV). Следовательно, соединения настоящего изобретения препятствуют жизненному циклу вируса гепатита С и также являются применимыми в качестве противовирусных агентов. Настоящее изобретение относится далее к фармацевтическим композициям, включающим указанные выше соединения, соли, сложные эфиры или пролекарства, для введения пациенту, страдающему инфекцией HCV. Настоящее изобретение далее относится к фармацевтическим композициям, включающим соединение настоящего изобретения (или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство) и другой агент против HCV, такой как интерферон (например, альфа-интерферон, бета-интерферон, интерферон с консенсусной последовательностью, ПЭГилированный интерферон или альбумин или другой конъюгированный интерферон), рибавирин, амантадин, другой ингибитор протеазы HCV или ингибитор полимеразы, геликазы или внутреннего сайта вхождения рибосомы HCV. Изобретение относится также к способам лечения инфекции HCV у пациента введением фармацевтической композиции настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения в описании раскрыты соединения, представленные формулой I, или их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или пролекарства.
а также его фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства,
1
2
2
2
1
2
2
где А выбран из Н, -(C=O)-O-R, -(C=O)-R, -C(=O)-NH-R или -S(O)-R, -S(O)NHR;
1
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из
(i) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iii) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из
(i) водорода;
(ii) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(iii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iv) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
3
2
4
5
3
G выбран из -NHS(O)-R или -NH(SO)NRR, где каждый R независимо выбран из
(i) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила; и
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iii) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
3
2
2
2
с условием, что R не является -CHPh или -СНСНPh;
4
5
каждый R и R независимо выбран из
(i) водорода;
(ii) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(iii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила; и
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iv) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
2
L выбран из -СН-, -О-, -S- или -S(O)-;
X и Y, взятые вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют циклическую часть, выбранную из арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
W отсутствует или выбран из -О-, -S-, -NH-, -N(Me)-, -C(O)NH- или -С(О)N(Me)-;
2
4
2
4
в альтернативном случае W может быть -С-Салкиленом-, замещенным -С-Салкиленом-;
Z выбран из групп, состоящих из
(i) водорода;
(ii) -CN;
3
(iii) -N;
(iv) галогена;
2
2
(v) -NH-N=CH(R), где R имеет значения, указанные ранее;
(vi) арила, замещенного арила;
(vii) гетероарила, замещенного гетероарила;
3
12
3
12
(viii) -С-Сциклоалкила, замещенного -С-Сциклоалкила, гетероциклоалкила, замещенного гетероциклоалкила;
1
6
(ix) -С-Салкила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
2
6
(x) -С-Салкенила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
2
6
(xi) -С-Салкинила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
j равно 0, 1, 2, 3 или 4;
k равно 1, 2 или 3;
m равно 0, 1 или 2 и
означает углерод-углеродную одинарную или двойную связь.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим соединение изобретения или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство. Еще в одном другом варианте осуществления настоящего изобретения описаны фармацевтические композиции, включающие терапевтически эффективное количество соединения изобретения или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом. В следующем другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения инфекции гепатита С у пациента, нуждающегося в таком лечении, указанными фармацевтическими композициями.
Подробное описание изобретения
Первый вариант осуществления изобретения относится к соединению, представленному формулой I, описываемой выше, или его фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру или пролекарству, применяемому отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.
В других вариантах осуществления изобретение относится к соединениям, представленным формулами II-V, согласно описанию, или их фармацевтически приемлемым солям, сложным эфирам или пролекарствам, применяемым отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.
Соединение формулы II
1
2,
3
4
6
6
где каждый из Х, Х Х и Х независимо выбран из -CR и N, где R независимо выбран из
2
(i) водорода; галогена; -NO; -CN;
4
4
(ii) -M-R, M представляет собой О, S, NH, где R имеет значения, указанные ранее;
4
5
4
5
(iii) NRR, где R и R имеют значения, указанные ранее;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iv) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
(v) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(vi) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
где A, G, W, Z имеют значения, указываемые для формулы I.
2
4
2
4
2
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
2
3
3
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
В одном примере W отсутствует или представляет собой -С-Салкилен- или замещенный -С-Салкилен-, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А выбран из группы, состоящей из -C(O)-R, -C(O)-O-R, -S(O)NHR и -C(O)-NH-R, где R выбран из арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила, замещенного -С-Салкинила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила; замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила, G может быть -NH-SO-NH-R или -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
2
4
2
4
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
3
1
8
3
12
3
12
3
12
3
12
В другом примере W отсутствует или представляет собой -С-Салкилен- или замещенный -С-Салкилен-, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А представляет собой -C(O)-O-R, -S(O)NHR или -C(O)-NH-R, где R выбран из-С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила, замещенного -С-Салкинила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила; замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, -арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
В другом примере W отсутствует, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А представляет собой -С(О)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
В предпочтительном примере W отсутствует, Z представляет собой гетероарил или замещенный гетероарил, А представляет собой -С(О)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
В другом предпочтительном примере W отсутствует, Z представляет собой 2-тиофенил, А представляет собой -С(О)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
Еще в одном предпочтительном примере соединение формулы II имеет формулу, выбранную из формул II' и II”
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
100
3
где А представляет собой -С(О)-О-R и R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероциклоалкил или замещенный гетероциклоалкил, G представляет собой -NHSO-R и R выбран из -С-Сциклоалкила (например, циклопропила) или замещенного -С-Сциклоалкила. R представляет собой водород или -О-СН.
Соединение формулы III
1
2
3
6
6
6
где каждый из Y, Y и Y независимо выбран из CR, N, NR, S и О; где A, G, W, Z имеют значения, указанные для формулы I, и R имеет значения, указанные для формулы II.
2
4
2
4
2
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
2
3
3
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
В одном примере W отсутствует или представляет собой -С-С-алкилен или замещенный -С-Салкилен-, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А выбран из группы, состоящей из -C(O)-R, -C(O)-O-R, -S(O)NHR и -C(O)-NH-R, где R выбран из арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила, замещенного -С-Салкинила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила. G может быть -NH-SO-NH-R или -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
2
4
2
4
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
3
1
8
3
12
3
12
3
12
3
12
Еще в одном примере W отсутствует или представляет собой -С-С-алкилен- или замещенный -С-Салкилен-, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А представляет собой -C(O)-О-R, -S(O)NHR или - C(O)-NH-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Салкенил, -С-Салкинил, замещенный -С-Салкил, замещенный -С-Салкенил, замещенный -С-Салкинил, -С-Сциклоалкил, -С-Сциклоалкенил, замещенный -С-Сциклоалкил или замещенный -С-Сциклоалкенил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
Еще в одном примере W отсутствует, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А представляет собой -C(O)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила и замещенного -С-Сциклоалкила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
Еще в одном примере W отсутствует, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, А представляет собой -C(O)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
В другом примере W отсутствует, Z представляет собой 2-тиофенил, А представляет собой -C(O)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
Еще в одном примере W отсутствует, Z может быть, без ограничения, 2-тиофенилом, А представляет собой -C(O)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероциклил или замещенный гетероциклил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
Репрезентативные соединения изобретения включают, но не ограничиваются указанным, нижеследующие соединения (таблицы 1-4) согласно формуле IV.
Таблица 1
Таблица 2
Таблица 3
Таблица 4
Дополнительными соединениями изобретения являются соединения формулы IV
где A, Q и G имеют значения, указанные в описании в таблицах А-матрица, Q-матрица и G-матрица (таблицы 5-7). Ниже в таблицах А-матрица, Q-матрица и G-матрица указаны заместители, присутствующие на циклической структуре, показанной формулой (IV), которая, когда один заместитель А выбран из А-матрицы, один заместитель Q выбран из Q-матрицы и один заместитель G выбран из G-матрицы, описывает дополнительное соединение изобретения. Соединения образуют посредством выбора любого элемента из А-матрицы с любым элементом из Q-матрицы и с любым элементом из G-матрицы, достигая при этом образования A,Q,G-замещенного макроцикла формулы IV. Например, соединение формулы IV, где А представляет собой элемент А01 из А-матрицы, Q представляет собой элемент Q01 из Q-матрицы и G представляет собой элемент G02 из G-матрицы, обозначают номером А01Q01G02.
Таким образом, изобретение включает соединения формулы IV и их фармацевтически приемлемые соли, где А представляет собой любой элемент в А-матрице, Q представляет собой любой элемент Q-матрицы и G представляет собой любой элемент G-матрицы.
Определенные соединения включают, но не ограничиваются нижеуказанными соединениями: А01Q01G02; A01Q02G02; A01Q03G02; A01Q38G02; A01Q48G02; A01Q49G02; A01Q61G02; A05Q01G03; A01Q02G03; A05Q03G05; A09Q38G02; A30Q48G02; A01Q49G03; A05Q01G20; A05Q01G24; A05Q01G05; A05Q61G11; A05Q01G11; A30Q01G11; A05Q38G24; A05Q38G02; A05Q49G05; A30Q02G03; A09Q01G02; A09Q02G02; A09Q03G02; A095Q38G02; A09Q48G02; A09Q61G03; A30Q03G02; A30Q03G03; A30Q05G09; A30Q61G02; A05Q03G09; A05Q03G09; A01Q38G02; A01Q49G24; A05Q61G20; A09Q38G20; A30Q48G24; A30Q48G20; A30Q49G24; A05Q38G09; A05Q17G09; A05Q09G09; A05Q04G09; A05Q08G11; A05Q01G06; А05Q16G02; A05Q17G02; A05Q25G02; A03Q01G02; A06Q01G02; A16Q01G02.
В дополнительное аспекте изобретение относится к соединениям формулы V.
Соединение формулы V
1
2
2
2
1
2
2
где А выбран из Н, -(C=O)-O-R, -(C=O)-R, -C(=O)-NH-R или -S(O)-R, -S(O)NHR;
1
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из
(i) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iii) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
каждый R независимо выбран из группы, состоящей из
(i) водорода;
(ii) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(iii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iv) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
3
2
4
5
G выбран из -ОН, -NHS(O)-R, -NH(SO)NRR,
3
каждый R независимо выбран из
(i) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(ii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iii) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
4
5
каждый R и R независимо выбран из
(i) водорода;
(ii) арила; замещенного арила; гетероарила; замещенного гетероарила;
(iii) гетероциклоалкила или замещенного гетероциклоалкила;
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
(iv) -С-Салкила, -С-Салкенила или -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила или замещенного -С-Салкинила, причем каждый содержит 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N; -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила; -С-Сциклоалкенила или замещенного -С-Сциклоалкенила;
2
2
L выбран из -СН-, -О-, -S- или -S(O)-;
X и Y, взятые вместе с атомами углерода, к которым они присоединены, образуют циклическую часть, выбранную из арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
W отсутствует или выбран из -О-, -S-, -NH-, -N(Me)-, -C(O)NH- или -С(О)N(Me)-;
Z выбран из группы, состоящей из
(i) водорода;
(ii) -CN;
3
(iii) -N;
(iv) галогена;
2
2
(v) -NH-N=CH(R), где R имеет значения, указанные выше;
(vi) арила, замещенного арила;
(vii) гетероарила, замещенного гетероарила;
3
12
3
12
(viii) -С-Сциклоалкила, замещенного -С-Сциклоалкила, гетероциклоалкила, замещенного гетероциклоалкила;
1
6
(ix) -С-Салкила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
2
6
(x) -С-Салкенила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
2
6
(xi) -С-Салкинила, содержащего 0, 1, 2 или 3 гетероатома, выбранные из О, S или N, и необязательно замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из атома галогена, арила, замещенного арила, гетероарила или замещенного гетероарила;
j равно 0, 1, 2, 3 или 4;
k равно 1, 2 или 3;
m равно 0, 1 или 2 и
означает углерод-углеродную одинарную или двойную связь.
2
2
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
2
3
3
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
В одном примере L представляет собой -СН-, j равно 2 и k равно 1, А выбран из группы, состоящей из -C(O)-R, C(O)-O-R, -S(O)NHR и -C(O)-NH-R, где R выбран из арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, замещенного -С-Салкила, замещенного -С-Салкенила, замещенного -С-Салкинила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила; замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила. G может быть -NH-SO-NH-R или -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, -С-Салкенила, -С-Салкинила, арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
2
2
2
2
2
2
1
8
2
8
2
8
1
8
2
8
2
8
3
12
3
12
3
12
3
12
2
3
3
1
8
3
12
3
12
3
12
3
12
В другом примере L представляет собой -СН-, j равно 2 и k равно 1, А представляет собой -C(O)-O-R, -S(O)NHR или -C(O)-NH-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Салкенил, -С-Салкинил, замещенный -С-Салкил, замещенный -С-Салкенил, замещенный -С-Салкинил, -С-Сциклоалкил, -С-Сциклоалкенил, замещенный -С-Сциклоалкил или замещенный -С-Сциклоалкенил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Салкила, -арила, замещенного арила, гетероарила, замещенного гетероарила, гетероциклила, замещенного гетероциклила, -С-Сциклоалкила, -С-Сциклоалкенила, замещенного -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкенила.
2
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
Еще в одном примере L представляет собой -СН-, j равно 2 и k равно 1, W отсутствует, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, арил или замещенный арил, А представляет собой -С(О)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
2
1
1
1
8
3
12
3
12
2
3
3
3
12
3
12
В еще одном примере L представляет собой -СН-, j равно 2 и k равно 1, W отсутствует, Z представляет собой гетероарил, замещенный гетероарил, А представляет собой -С(О)-О-R, где R представляет собой -С-Салкил, -С-Сциклоалкил, замещенный -С-Сциклоалкил, гетероарил или замещенный гетероарил, G представляет собой -NHSO-R, где R выбран из -С-Сциклоалкила или замещенного -С-Сциклоалкила.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим соединение изобретения (например, соединение формулы I, II, III, IV или V, раскрытое в описании выше) или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
Согласно альтернативному варианту осуществления, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут дополнительно содержать другие агенты против HCV или их можно вводить (одновременно или последовательно) с другими агентами против HCV, например, как часть комбинированной терапии. Примеры агентов против HCV включают, но не ограничиваются перечисленным, α-интерферон, β-интерферон, рибавирин и амантадин. Для дополнительных подробностей см. S. Tan, A. Pause, Y. Shi, N. Sonenberg, Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev. Drug Discov., 1, 867-881 (2002); WO 00/59929 (2000); WO 99/07733 (1999); WO 00/09543 (2000); WO 99/50230 (1999); US5861297 (1999) и US2002/0037998 (2002), которые включены в описание в качестве ссылки во всей их полноте.
Согласно дополнительному варианту осуществления, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут дополнительно содержать другие ингибиторы протеазы HCV.
Согласно еще одному варианту осуществления, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут дополнительно включать ингибитор(ы) других мишеней в жизненном цикле HCV, включающих, но не ограничивающихся перечисленным, геликазу, полимеразу, металлопротеазу и внутренний сайт вхождения рибосомы (IRES).
Согласно следующему варианту осуществления, настоящее изобретение включает способы лечения инфекций гепатита С у пациента, нуждающегося в таком лечении, введением указанному пациенту вирусно эффективного против HCV количества или ингибирующего количества фармацевтических композиций настоящего изобретения.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения включает способы обработки биологических образцов контактированием биологических образцов с соединениями настоящего изобретения, например, для снижения потенциала инфекции HCV, который может присутствовать в образце.
Еще одним следующим аспектом настоящего изобретения является способ получения любого из соединений, указанных в описании, применением любого из раскрытых в описании синтетических способов.
Определения
Ниже перечислены определения различных терминов, применяемых для описания данного изобретения. Такие определения относятся к терминам, когда их применяют на всем протяжении данного описания и формулы изобретения, если в противном случае они не ограничиваются определенными отдельными случаями, либо отдельно, либо как часть большой группы.
1
6
1
8
1
6
1
8
Термин “С-Салкил” или “С-Салкил”, применяемый в описании, относится к насыщенным углеводородным радикалам с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащим от одного до шести или от одного или восьми атомов углерода соответственно. Примеры С-Салкильных радикалов включают, но не ограничиваются перечисленным, метильный, этильный, пропильный, изопропильный, н-бутильный, трет-бутильный, неопентильный, н-гексильный радикалы и примеры С-Салкильных радикалов включают, но не ограничиваются перечисленным, метильный, этильный, пропильный, изопропильный, н-бутильный, трет-бутильный, неопентильный, н-гексильный, гептильный, октильный радикалы.
2
6
2
8
Термин “С-Салкенил” или “С-Салкенил”, применяемый в описании, означает одновалентную группу, образованную из углеводорода удалением одного атома водорода, где углеводород содержит от двух до шести или от двух до восьми атомов углерода соответственно и имеет по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Алкенильные группы включают, но не ограничиваются перечисленным, этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, гептенил, октенил и тому подобное.
2
6
2
8
Термин “С-Салкинил” или “С-Салкинил”, применяемый в описании, означает одновалентную группу, образованную из углеводорода удалением одного атома водорода, где углеводород содержит от двух до шести или от двух до восьми атомов углерода соответственно и имеет по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь. Репрезентативные алкинильные группы включают, но не ограничиваются перечисленным, этинил, 1-пропинил, 1-бутинил, гептинил, октинил и тому подобное.
3
8
3
12
3
8
3
12
Термин “С-Сциклоалкил” или “С-Сциклоалкил”, применяемый в описании, означает одновалентную группу, образованную из моноциклического или полициклического насыщенного карбоциклического соединения удалением одного атома водорода, где карбоциклическое кольцо содержит от 3 до 8 атомов углерода или от 3 до 12 атомов углерода соответственно. Примеры С-Сциклоалкила включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопентил и циклооктил и примеры С-Сциклоалкила включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, бицикло[2.2.1]гептил и бицикло[2.2.2]октил.
3
8
3
12
3
8
3
12
Термин “С-Сциклоалкенил” или “С-Сциклоалкенил”, применяемый в описании, означает одновалентную группу, образованную из моноциклического или полициклического карбоциклического соединения удалением одного атома водорода, где карбоциклическое кольцо имеет по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь и содержит от 3 до 8 атомов углерода или от 3 до 12 атомов углерода соответственно. Примеры С-Сциклоалкенила включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил, циклооктенил и тому подобное и примеры С-Сциклоалкенила включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил, циклооктенил и тому подобное.
Термин “арил”, применяемый в описании, относится к моно- или бициклической карбоциклической системе колец, имеющей одно или два ароматических кольца, включающей, но не ограничивающейся перечисленным, фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, инденил и тому подобное.
1
3
1
6
Термин “арилалкил”, применяемый в описании, относится к С-Салкильному или С-Салкильному остатку, присоединенному к арильному кольцу. Примеры его включают, но не ограничиваются перечисленным, бензил, фенетил и тому подобное.
Термин “гетероарил”, применяемый в описании, относится к моно-, би- или трициклическому ароматическому радикалу или кольцу, имеющему от пяти до десяти атомов кольца, из которых один атом кольца выбран из S, O и N; ноль, один или два атома кольца являются дополнительными гетероатомами, независимо выбранными из S, O и N, и остальными атомами кольца являются атомы углерода. Гетероарил включает, но не ограничивается перечисленным, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, оксазолил, изоксазолил, тиадизолил, оксадиазолил, тиофенил, фуранил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, хиноксалинил и тому подобное.
1
3
1
6
Термин “гетероарилалкил”, применяемый в описании, относится к С-Салкильному или С-Салкильному остатку, присоединенному к гетероарильному кольцу. Примеры его включают, но не ограничиваются перечисленным, пиридинилметил, пиримидинилэтил и тому подобное.
Термин “гетероциклоалкил”, применяемый в описании, относится к неароматическому 3-, 4-, 5-, 6- или 7-членному кольцу или би- или трициклической конденсированной системе, где (i) каждое кольцо содержит от одного до трех гетероатомов, независимо выбранных из атомов кислорода, серы и азота, (ii) каждое 5-членное кольцо имеет 0-1 двойную связь и каждое 6-членное кольцо имеет 0-2 двойные связи, (iii) гетероатомы азота и серы могут быть необязательно окислены, (iv) гетероатом азота может быть необязательно кватернизован и (v) любое из указанных выше колец может быть конденсировано с кольцом бензола. Репрезентативные гетероциклоалкильные группы включают, но не ограничиваются перечисленным, [1,3]диоксолан, пирролидинил, пиразолинил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, пиперидинил, пиперазинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, морфолинил, тиазолидинил, изотиазолидинил и тетрагидрофурил.
1
6
2
6
2
6
1
6
2
6
2
6
3
12
2
2
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
2
1
12
2
12
2
12
3
12
2
1
12
2
2
12
2
2
12
2
3
12
2
2
2
2
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
2
1
12
2
2
12
2
2
12
2
3
12
2
2
2
2
1
12
2
12
2
12
3
12
2
1
12
2
12
2
12
3
12
2
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
2
2
2
1
12
2
2
12
2
2
12
2
3
12
2
2
2
2
1
12
2
2
12
2
2
12
2
3
12
2
2
2
2
2
2
2
3
3
12
1
12
2
12
2
12
3
12
3
3
2
2
Термин “замещенный”, применяемый в описании, относится к независимой замене одного, двух, трех или более атомов водорода заместителями, включающими, но не ограничивающимися перечисленным, С-Салкил, С-Салкенил, С-Салкинил, -COOH, - C(O)O-С-Салкил, -C(O)O-C-Cалкенил, -C(O)O-C-Cалкинил, С(О)O-арил, -C(O)O-замещенный арил, -C(O)O-гетероариларил, -C(O)O-замещенный гетероарил, - C(O)O-C-Cциклоалкил, - C(O)O-гетероциклоалкил, -C(O)H, -F, -Cl, -Br, -I, -OH, защищенный гидрокси, -NO, -CN, -NH, защищенный амино, оксо, тиоксо, -NH-C-C-алкил, -NH-C-Cалкенил, -NH-C-C-алкинил, -NH-C-C-циклоалкил, -NH-арил, -NH-гетероарил, -NH-гетероциклоалкил, -диалкиламино, -диариламино, -дигетероариламино, -O-C-C-алкил,-O-C-C-алкенил, -O-C-C-алкинил, -О-C-C-циклоалкил, -O-арил, -O-гетероарил, -O-гетероциклоалкил, -C(O)-C-C-алкил, -С(O)-C-C-алкенил, -C(O)-C-C-алкинил, -C(O)-C-C-циклоалкил, -C(O)-арил, -C(O)-гетероарил, -C(O)-гетероциклоалкил, -CONH, -CONH-C-C-алкил, -CONH-C-C-алкенил, -CONH-C-C-алкинил, -CONH-C-C-циклоалкил, -CONH-арил, -CONH-гетероарил, -CONH-гетероциклоалкил, -OCO-C-C-алкил, -OCO-C-C-алкенил, -OCO-C-C-алкинил, -OCO-C-C-циклоалкил, -OCO-арил, -OCO-гетероарил, -OCO-гетероциклоалкил, -OCONH, -OCONH-C-C-алкил, -OCONH-C-C-алкенил, -OCONH-C-C-алкинил, -OCONH-C-C-циклоалкил, -OCONH-арил, -OCONH-гетероарил, -OCONH-гетероциклоалкил, -NHC(O)H, -NHC(O)-C-C-алкил, -NHC(O)-C-C-алкенил, -NHC(O)-C-C-алкинил, -NHC(O)-C-C-циклоалкил, -NHC(О)-арил, -NHC(O)-гетероарил, -NHC(O)-гетероциклоалкил, -NHCO-C-C-алкил, -NHCO-C-C-алкенил, -NHCO-C-C-алкинил, -NHCO-C-C-циклоалкил, -NHCO-арил, -NHCO-гетероарил, -NHCO-гетероциклоалкил, -NHC(O)NH, -NHC(O)NH-C-C-алкил, -NHC(O)NH-C-C-алкенил, -NHC(O)NH-C-C-алкинил, -NHC(O)NH-C-C-циклоалкил, -NHC(O)NH-арил, -NHC(O)NH-гетероарил, -NHC(O)NH-гетероциклоалкил, NHC(S)NH, -NHC(S)NH-C-C-алкил, -NHC(S)NH-C-C-алкенил, -NHC(S)NH-C-C-алкинил, -NHC(S)NH-C-C-циклоалкил, -NHC(S)NH-арил, -NHC(S)NH-гетероарил, -NHC(S)NH-гетероциклоалкил, -NHC(NH)NH, -NHC(NH)NH-C-C-алкил, -NHC(NH)NH-C-C-алкенил, -NHC(NH)NH-C-C-алкинил, -NHC(NH)NH-C-C-циклоалкил, -NHC(NH)NH-арил, -NHC(NH)NH-гетероарил, -NHC(NH)NH-гетероциклоалкил, -NHC(NH)-C-C-алкил, -NHC(NH)-C-C-алкенил, -NHC(NH)-C-C-алкинил, -NHC(NH)-C-C-циклоалкил, -NHC(NH)-арил, -NHC(NH)-гетероарил, -NHC(NH)-гетероциклоалкил, -C(NH)NH-C-C-алкил, -C(NH)NH-C-C-алкенил, -C(NH)NH-C-C-алкинил, -C(NH)NH-C-C-циклоалкил, -C(NH)NH-арил, -C(NH)NH-гетероарил, -C(NH)NH-гетероциклоалкил, -S(O)-C-C-алкил, - S(O)-C-C-алкенил, -S(O)-C-C-алкинил, -S(O)-C-C-циклоалкил, -S(O)-арил, -S(O)-гетероарил, -S(O)-гетероциклоалкил, -SONH, -SONH-C-C-алкил, -SONH-C-C-алкенил, -SONH-C-C-алкинил, -SONH-C-C-циклоалкил, -SONH-арил, -SONH-гетероарил, -SONH-гетероциклоалкил, -NHSO-C-C-алкил, -NHSO-C-C-алкенил, -NHSO-C-C-алкинил, -NHSO-C-C-циклоалкил, -NHSО-арил, -NHSO-гетероарил, -NHSO-гетероциклоалкил, -CHNH, -CHSOCH, -арил, -арилалкил, -гетероарил, -гетероарилалкил, -гетероциклоалкил, -C-C-циклоалкил, полиалкоксиалкил, полиалкокси, -метоксиметокси, -метоксиэтокси, -SH, -S-C-C-алкил, -S-C-C-алкенил, -S-C-C-алкинил, -S-C-C-циклоалкил, -S-арил, -S-гетероарил, -S-гетероциклоалкил, метилтиометил, -Si(алкил) или -Si(арил). Понятно, что арилы, гетероарилы, алкилы и тому подобное могут быть дополнительно замещены. В некоторых случаях каждый заместитель в замещенной части дополнительно необязательно замещен одной или несколькими группами, причем каждая группа независимо выбрана из -F, -Cl, -Br, -I, -OH, -NO, -CN или -NH.
Согласно изобретению, любым из раскрытых в описании арилов, замещенных арилов, гетероарилов и замещенных гетероарилов может быть любая ароматическая группа. Ароматические группы могут быть замещенными или незамещенными.
Понятно, что любая раскрытая в описании алкильная, алкенильная, алкинильная, циклоалкильная и циклоалкенильная часть может быть также замещена алифатической группой, алициклической группой или гетероциклической группой. “Алифатической группой” является неароматическая часть, которая может содержать любую комбинацию атомов углерода, атомов водорода, атомов галогена, атомов кислорода, азота или других атомов и необязательно содержит одно или несколько ненасыщенных звеньев, например, двойные и/или тройные связи. Алифатическая группа может иметь неразветвленную, разветвленную или циклическую цепь и предпочтительно содержит от приблизительно 1 до приблизительно 24 атомов углерода, более типично, от приблизительно 1 до приблизительно 12 атомов углерода. Помимо алифатических углеводородных групп алифатические группы включают, например, полиалкоксиалкилы, такие как, например, полиалкиленгликоли, полиамины и полиимины. Такие алифатические группы могут быть дополнительно замещены. Понятно, что алифатические группы можно применять вместо раскрытых в описании алкильных, алкенильных, алкинильных, алкиленовых, алкениленовых и алкиниленовых групп.
Термин “алициклическая”, применяемый в описании, означает одновалентную группу, образованную из моноциклического или полициклического насыщенного карбоциклического соединения удалением одного атома водорода. Примеры его включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, бицикло[2.2.1]гептил и бицикло[2.2.2]октил. Такие алициклические группы могут быть дополнительно замещены.
Термин “галоген”, применяемый в описании, относится к атому, выбранному из атомов фтора, хлора, брома и йода.
Раскрытые в описании соединения содержат один или несколько асимметричных центров, и это обусловливает присутствие их в виде энантиомеров, диастереомеров и других стереоизомерных форм, которые можно обозначить в терминах абсолютной стереохимии как (R)- или (S)-, или как (D)- или (L)-изомеры для аминокислот. Имеется в виду, что настоящее изобретение включает все такие возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы. Оптические изомеры можно получить из их соответствующих оптически активных предшественников методиками, описанными выше, или разделением рацемических смесей. Разделение можно проводить в присутствии разделяющего агента хроматографией, или многократной кристаллизацией, или некоторой комбинацией таких методик, которые известны специалисту в данной области. Дополнительные подробности, относящиеся к разделению, можно найти в публикации Jacques, et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions (John Wiley & Sons, 1981). Когда раскрытые в описании соединения содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асимметрии и, если не оговорено особо, предполагается, что соединения включают как Е-, так и Z-геометрические изомеры. Таким же образом предполагается, что соединения включают также все таутомерные формы. Конфигурация любой углерод-углеродной двойной связи, изображаемая в описании, выбрана только для удобства, и не предполагается, что она обозначает конкретную конфигурацию, если она таким образом не указана в тексте; поэтому углерод-углеродная двойная связь, изображенная в описании произвольно как транс, может быть цис, транс или смесью двух конфигураций в любой пропорции.
Термин “пациент”, применяемый в описании, относится к млекопитающему. Следовательно, пациент относится, например, к собакам, кошкам, лошадям, коровам, свиньям, морским свинкам и тому подобное. Пациентом предпочтительно является человек.
Применяемый в описании термин “фармацевтически приемлемая соль” относится к тем солям соединений, полученным способом настоящего изобретения, которые с медицинской точки зрения являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и низших животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и тому подобное и имеют приемлемое отношение польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли являются хорошо известными в данной области. Например, S. M. Berge, et al. подробно описали фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977). Соли можно получить in situ во время последнего выделения и очистки соединение изобретения или отдельно реакцией свободной функциональной основной группы с подходящей органической кислотой. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются перечисленным, нетоксичные кислотно-аддитивные соли, которые являются солями аминогруппы, образованными с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и перхлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или применением других методов, применяемых в данной области, таких как ионообмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются перечисленным, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорасульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, глюконат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, п-толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и тому подобное. Репрезентативные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и тому подобное. Следующие фармацевтически приемлемые соли включают, при необходимости, нетоксичные аммониевые, четвертичные аммониевые и аминовые катионы, образованные с применением противоионов, таких как галогенид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, алкил, имеющий от 1 до 6 атомов углерода, сульфонат и арилсульфонат.
Применяемый в описании термин “фармацевтически приемлемый сложный эфир” относится к сложным эфирам соединений, полученным способом настоящего изобретения, которые гидролизуются in vivo и включают соединения, которые легко разлагаются в теле человека с выделением «родительского» соединения или его соли. Подходящие сложноэфирные группы включают, например, группы, образованные из фармацевтически приемлемых алифатических карбоновых кислот, особенно алкановых, алкеновых, циклоалкановых и алкандиовых кислот, в которых каждая алкильная или алкенильная часть преимущественно имеет не более чем 6 атомов углерода. Примеры конкретных сложных эфиров включают, но не ограничиваются перечисленным, формиаты, ацетаты, пропионаты, бутираты, акрилаты и этилсукцинаты.
Термин “фармацевтически приемлемые пролекарства”, применяемый в описании, относится к тем пролекарствам соединений, полученных способом настоящего изобретения, которые с медицинской точки зрения являются подходящими для применения в контакте с тканями людей и низших животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и тому подобное, имеют приемлемое отношение польза/риск и являются эффективными для их предполагаемого применения, а также цвиттерионным формам, когда это возможно, соединений настоящего изобретения. Термин “пролекарство”, применяемый в описании, означает соединение, которое является превращаемым in vivo метаболическим путем (например, гидролизом) с образованием любого соединения, изображенного формулами настоящего изобретения. В данной области известны различные формы пролекарств, например, обсуждаемые в Bundgaard, (ed.), Design of Prodrugs, Elsevier (1985); Widder, et al. (ed.), Methods in Enzymology, vol. 4, Academic Press (1985); Krogsgaard-Larsen, et al., (ed). “Design and Application of Prodrugs, Textbook of Drug Design and Development, Chapter 5, 113-191 (1991); Bundgaard, et al., Journal of Drug Deliver Reviews, 8:1-38(1992); Bundgaard, J. of Pharmaceutical Sciences, 77:285 et seq. (1988); Higuchi and Stella (eds.) Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems, American Chemical Society (1975); and Bernard Testa & Joachim Mayer, “Hydrolysis In Drug And Prodrug Metabolism: Chemistry, Biochemistry And Enzymology,” John Wiley and Sons, Ltd. (2002).
Комбинациями заместителей и символов, рассматриваемыми данным изобретением, являются только комбинации, которые приводят к образованию стабильных соединений. Термин “стабильный”, применяемый в описании, относится к соединениям, которые обладают стабильностью, которая является достаточной для их получения и которая сохраняет целостность соединения в течение достаточного периода времени, чтобы оно было пригодным для целей, подробно указанных в описании (например, терапевтического или профилактического введения пациенту).
Синтезированные соединения можно выделить из реакционной смеси и далее очистить таким методом, как колоночная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография или перекристаллизация. Как должно быть понятно специалисту в данной области, дополнительные способы синтеза соединений указанных в описании формул будут очевидны среднему специалисту в данной области ввиду настоящего изобретения. Кроме того, для получения требуемых соединений различные синтетические стадии можно проводить в альтернативной последовательности или порядке. Кроме того, растворители, температуры, продолжительности реакции и т.д. указываются в описании только для целей иллюстрации, и среднему специалисту в данной области должно быть понятно, что изменение условий реакции может привести к образованию требуемых мостиковых макроциклических продуктов настоящего изобретения. Методологии превращений синтетической химии и защитных групп (защита и удаление защиты), применимые при синтезе раскрытых в описании соединений, известны в данной области и включают, например, такие методологии, как описаны в публикациях R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995).
Соединения данного изобретения можно модифицировать присоединением различных функциональных групп посредством любого указанного в описании синтетического способа для усиления селективных биологических свойств. Такие модификации известны в данной области и включают модификации, которые повышают биологическое проникновение в данную биологическую систему (например, кровь, лимфатическую систему, центральную нервную систему), повышают пероральную доступность, повышают растворимость, что позволяет проводить введение инъекцией, изменяют метаболизм и изменяют скорость экскреции.
Фармацевтические композиции
Фармацевтические композиции настоящего изобретения включают терапевтически эффективное количество соединения настоящего изобретения вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Применяемый в описании термин “фармацевтически приемлемый носитель” означает нетоксичный, инертный твердый, полутвердый или жидкий наполнитель, разбавитель, капсулирующее вещество или вспомогательное средство любого типа для изготовления композиции. Некоторыми примерами веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, являются сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлоза и ее производные, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошкообразный трагакант; мальт; желатин; тальк; эксципиенты, такие как какао-масло и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; вода без пирогенов; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы, а также другие нетоксичные совместимые смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния; в композиции могут присутствовать также красящие агенты, высвобождающие агенты, агенты для образования покрытий, подслащивающие, придающие вкус и аромат агенты, консерванты и антиоксиданты согласно оценке изготовителя композиции. Фармацевтические композиции данного изобретения можно вводить людям и другим животным перорально, ректально, парентерально, внутриполостно, интравагинально, внутрибрюшинно, местно (в виде порошков, мазей или капель), буккально или в виде спрея для введения через рот или нос.
Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Помимо активных соединений жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно применяемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и эфиры жирных кислот сорбитана и их смеси. Помимо инертных разбавителей пероральные композиции могут также включать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, подслащивающие, придающие вкус и запах агенты.
Инъецируемые препараты, например стерильные инъецируемые водные или маслянистые суспензии, можно изготовить согласно известному в данной области способу с применением подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов. Стерильным инъецируемым препаратом может быть также стерильный инъецируемый раствор, суспензия или эмульсия в нетоксичном, парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых наполнителей и растворителей, которые можно применять, имеются вода, раствор Рингера, раствор U.S.P. (фармакопеи США) и изотонический раствор хлорида натрия. Помимо этого, стерильные, жирные масла обычно применяют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для такой цели можно применять любое, жирное масло мягкого действия, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Помимо этого, при получении инъецируемых препаратов применяют жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.
Инъецируемые препараты можно стерилизовать, например, фильтрованием через удерживающий бактерии фильтр или включением стерилизующих агентов в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъецируемой среде перед применением.
Для пролонгирования действия лекарственного средства часто желательно замедлить абсорбцию лекарственного средства при подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно выполнить применением жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества с низкой растворимостью в воде. Скорость абсорбции лекарственного средства далее зависит от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов и кристаллической формы. В альтернативном случае, замедленную абсорбцию парентерально введенной лекарственной формы достигают растворением или суспендированием лекарственного средства в маслянистом наполнителе. Инъецируемые формы-депо изготовляют образованием матриц микрокапсул лекарственного средства в биодеградируемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от отношения лекарственного средства к полимеру и природы конкретного применяемого полимера можно регулировать скорость высвобождения лекарственного средства. Примеры других биодеградируемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъецируемые препараты-депо получают также улавливанием лекарственного средства в липосомах или микроэмульсиях, которые совместимы с тканями тела.
Композициями для ректального или вагинального введения предпочтительно являются суппозитории, которые можно получить смешиванием соединений данного изобретения с подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, такими как какао-масло, полиэтиленгликоль или воск для суппозитория, который является твердым при температуре окружающей среды, но становится жидким при температуре тела и, следовательно, плавится в прямой кишке или вагинальной полости и высвобождает активное соединение.
Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешивают по меньшей мере с одним инертным, фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем, таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или а) наполнителями или разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, b) связывающими веществами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и аравийская камедь, с) увлажнителями, такими как глицерин, d) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия, е) замедляющими растворение агентами, такими как парафин, f) ускорителями абсорбции, такими как соединения четвертичного аммония, g) смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт и моностеарат глицерина, h) абсорбентами, такими как каолиновая и бентонитовая глина, и i) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смесями. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма может включать также буферные агенты.
Твердые композиции подобного типа можно также применять в качестве наполнителей в мягкие или твердые наполненные желатиновые капсулы с применением таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой и тому подобное.
Активные соединения могут быть также в микрокапсулированной форме с одним или несколькими эксципиентами, как указано выше. Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получить с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия, покрытия, регулирующие высвобождение, и другие покрытия, хорошо известные в области изготовления фармацевтических препаратов. В таких твердых лекарственных формах активное соединение можно смешать по меньшей мере с одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы могут включать также, что является обычной практикой, дополнительные вещества, другие, чем инертные разбавители, например, таблетирующие смазывающие вещества и другие таблетирующие вспомогательные средства, такие как стеарат магния и макрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут включать также буферные агенты. Они могут необязательно содержать агенты, придающие лекарственной форме непрозрачность, и могут быть также композицией, которая высвобождает активный ингредиент(ы) только или преимущественно в некоторой части кишечного тракта, необязательно, замедленным способом. Примеры заливочных композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски.
Лекарственные формы для местного или трансдермального введения соединения данного изобретения включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, ингаляционные препараты или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми требуемыми консервантами или буферами, если они могут требоваться. Офтальмический препарат, глазные капли, глазные мази, порошки и растворы также рассматриваются как находящиеся в объеме данного изобретения.
Мази, пасты, кремы и гели могут содержать помимо активного соединения данного изобретения эксципиенты, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевую кислоту, тальк и оксид цинка или их смеси.
Порошки и спреи могут содержать помимо соединений данного изобретения эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидный порошок или смеси таких соединений. Спреи могут дополнительно содержать обычные пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды.
Чрескожные пластыри имеют дополнительное преимущество, заключающееся в обеспечении регулируемой доставки соединения в организм. Такие лекарственные формы можно изготовить растворением или распределением соединения в подходящей среде. Для усиления прохождения потока соединения через кожу можно также применять усилители абсорбции. Скорость можно регулировать либо обеспечением мебраны, регулирующей скорость, либо диспергированием соединения в полимерной матрице или геле.
Однако должно быть понятно, что применение общей суточной дозы соединений и композиций настоящего изобретения будет решать штатный врач больницы с медицинской точки зрения. Уровень определенной терапевтической эффективной дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, включающих подвергаемое лечению нарушение и тяжесть нарушения; активность применяемого определенного соединения; определенную применяемую композицию; возраст; массу тела, общее состояние здоровья, пол и диету пациента; время введения, путь введения и скорости экскреции определенного применяемого соединения; продолжительности лечения; лекарственные средства, применяемые в комбинации или одновременно с определенным применяемым соединением, и подобные факторы, хорошо известные в областях медицины.
Общая суточная доза соединений данного изобретения, вводимая человеку или другому животному в виде целой или разделенных доз, может быть в количествах, например, от 0,01 до 50 мг/кг массы тела или более обычно от 0,1 до 25 мг/кг массы тела. Композиции в виде разовых доз могут содержать такие количества или их дольные количества, чтобы обеспечивать суточную дозу. В общем, схемы лечения согласно настоящему изобретению включают введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, приблизительно от 10 мг до приблизительно 1000 мг соединения(ий) данного изобретения в день в виде целой дозы или дольных доз.
Могут требоваться более низкие или более высокие дозы, чем дозы, указанные выше. Определенная доза и схемы лечения для любого конкретного пациента будут зависеть от различных факторов, включающих активность применяемого определенного соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, скорость экскреции, комбинацию лекарственных средств, тяжесть и течение заболевания, состояние или симптомы, предрасположенность пациента к заболеванию, состояние или симптомы и оценку лечащего врача.
Антивирусная активность
Ингибирующее количество или доза соединений настоящего изобретения может составлять приблизительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 500 мг/кг, альтернативно от приблизительно 1 до приблизительно 50 мг/кг. Ингибирующие количества или дозы могут также варьироваться в зависимости от пути введения, а также возможности совместного применения с другими агентами.
Согласно способам лечения настоящего изобретения, вирусные инфекции лечат или предотвращают у пациента, такого как человек или низшее млекопитающее, введением пациенту вирусно эффективного против гепатита С количества или ингибирующего количества соединения настоящего изобретения в таких пределах и в течение такого времени, которые необходимы для достижения требуемого результата. Дополнительным способом настоящего изобретения является обработка биологических образцов ингибирующим количеством соединения композиции настоящего изобретения в таких пределах и в течение такого времени, которые необходимы для достижения требуемого результата.
Термин “вирусно эффективное против гепатита С количество” соединения изобретения, применяемый в описании, означает достаточное количество соединения для снижения вирусной нагрузки в биологическом образце или в организме пациента. Как хорошо известно в областях медицины, вирусно эффективное против гепатита С количество соединения данного изобретения должно быть при приемлемом отношении польза/риск, пригодном для любого консервативного лечения.
Термин “ингибирующее количество” соединения настоящего изобретения означает достаточное количество для снижения вирусной нагрузки при гепатите С в биологическом образце или в организме пациента. Понятно, что, когда указанное ингибирующее количество соединения настоящего изобретения вводят пациенту, оно должно быть при приемлемом отношении польза/риск, пригодном для любого консервативного лечения, определяемого лечащим врачом. Термин “биологический образец(ы)”, применяемый в описании, означает вещество биологического происхождения, предназначенное для введения пациенту. Примеры биологических образцов включают, но не ограничиваются перечисленным, кровь и ее компоненты, такие как плазма, тромбоциты, субпопуляции клеток крови и тому подобное; органы, такие как почки, печень, сердце, легкие и тому подобное, сперма и яйцеклетка; костный мозг и его компоненты или стволовые клетки. Таким образом, другим вариантом осуществления настоящего изобретения является способ обработки биологического образца контактированием указанного биологического образца с ингибирующим количеством соединения или фармацевтической композицией настоящего изобретения.
При улучшении состояния пациента, если необходимо, можно вводить поддерживающую дозу соединения, композиции или комбинации данного изобретения. Затем дозу, или частоту введения, или оба можно уменьшить как функцию симптомов до уровня, при котором улучшенное состояние сохраняется, когда симптомы ослаблены до желаемого уровня, лечение следует прекратить. Однако пациенту может требоваться интермиттирующее лечение на длительной основе при любом рецидиве симптомов заболевания.
Дополнительным способом настоящего изобретения является обработка биологических образцов ингибирующим количеством соединения настоящего изобретения в таких пределах и в течение такого времени, которые являются необходимыми для ингибирования вирусной репликации и/или снижения вирусной нагрузки. Термин “ингибирующее количество” означает количество, достаточное для ингибирования вирусной репликации и/или уменьшения нагрузки вируса гепатита С в биологическом образце. Термин “биологический образец(ы)”, применяемый в описании, означает вещество биологического происхождения, предназначенное для введения пациенту. Примеры биологических образцов включают, но не ограничиваются перечисленным, кровь и ее компоненты, такие как плазма, тромбоциты, субпопуляции клеток крови и тому подобное; органы, такие как почки, печень, сердце, легкие и тому подобное, сперма и яйцеклетка; костный мозг и его компоненты или стволовые клетки. Таким образом, другим вариантом осуществления настоящего изобретения является способ обработки биологического образца контактированием указанного биологического образца с ингибирующим количеством соединения или фармацевтической композиции настоящего изобретения.
Если не оговорено особо, все технические и научные термины, применяемые в описании, соответствуют значению, обычно известному среднему специалисту в данной области. Все публикации, патенты, опубликованные заявки на патенты и другие ссылки, указанные в описании, таким образом включены в качестве ссылки во всей их полноте.
Аббревиатуры
Аббревиатуры, которые применяют в описаниях схем и примерах, имеют следующие значения:
ACN означает ацетонитрил;
ВМЕ означает 2-меркаптоэтанол;
ВОР означает гексафторфосфат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония;
COD означает циклооктадиен;
DAST означает трифторид диэтиламиносеры;
DABCYL означает 6-(N-4'-карбокси-4-(диметиламино)азобензол)аминогексил-1-О-(2-цианоэтил)-(N,N-диизопропил)фосфорамидит;
DCM означает дихлорметан;
DIAD означает диизопропилазодикарбоксилат;
DIBAL-H означает диизобутилалюминийгидрид;
DIEA означает диизопропилэтиламин;
DMAP означает N,N-диметиламинопиридин;
DME означает диметиловый эфир этиленгликоля;
DMEM означает модифицированную по способу Дульбекко среду Игла;
ДМФА означает N,N-диметилформамид;
ДМСО означает диметилсульфоксид;
DUPHOS означает
EDANS означает 5-(2-аминоэтиламино)нафталин-1-сульфоновую кислоту;
EDCI или EDC означает гидрохлорид 1-(3-диэтиламинопропил)-3-этилкарбодиимида;
EtOAc означает этилацетат;
HATU означает гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония;
KHMDS означает бис(триметилсилил)амид калия;
Ms означает мезил;
NMM означает N-4-метилморфолин;
PyBrOP означает гексафторфосфат бромтрипирролидинофосфония;
Ph означает фенил;
RCM означает метатезис с замыканием кольца;
RT означает обратную транскрипцию;
RT-PCR означает обратную транскрипцию-полимеразную цепную реакцию;
TEA означает триэтиламин;
TFA означает трифторуксусную кислоту;
ТГФ означает тетрагидрофуран;
ТСХ означает тонкослойную хроматографию;
3
ТРР или PPh означает трифенилфосфин;
tBOC или Вос означает трет-бутилоксикарбонил и
ксантфос означает 4,5-бис-дифенилфосфанил-9,9-диметил-9Н-ксантен.
Синтетические способы
Соединения и способы настоящего изобретения будут лучше понятны в связи со следующими синтетическими схемами, которые иллюстрируют способы, которыми могут быть получены соединения изобретения.
Схема 1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Все из аналогов хиноксалина получают из общего промежуточного продукта -6. Синтез соединения -6 показан на схеме 1. Снятие защиты у коммерчески доступного Вос-гидроксипролина -1 при помощи HCl в диоксане с последующим сочетанием с кислотой -2 с применением HATU дает промежуточный продукт -3. Вместо -2 для получения различных макроциклических структур можно применять другие производные аминокислот, содержащие концевой алкен (дополнительные подробности см. в WO/0059929). Гидролиз -3 LiOH с последующим пептидным сочетанием с циклопропилсодержащим амином -4 дает трипептид -5. Наконец, метатезис с замыканием кольца с применением катализатора на основе рутения, такого как дихлор-(о-изопропоксифенилметилен)(трициклогексилфосфин)рутений(II), дает требуемый ключевой промежуточный продукт -6 (дополнительные подробности по метатезису с замыканием кольца см. в последних обзорах: Grubbs et al., Acс. Chem. Res., 1995, 28, 446; Shrock et al., Tetrahedron 1999, 55, 8141; Furstner, A. Angew. Chem. Int. Ed. 2000, 39, 3012; Trnka et al., Acс. Chem. Res. 2001, 34, 18; and Hoveyda et al., Chem. Eur. J. 2001, 7, 945).
Схема 2
2
2
1
2
Аналоги хиноксалина настоящего изобретения получают посредством нескольких различных синтетических путей. Самым простым способом, показанным на схеме 2, была конденсация коммерчески доступных аналогов 1Н-хиноксалин-2-она, включающих, но не ограничивающихся указанным, соединения -2 - -5, с ключевым промежуточным продуктом -6 с применением условий реакции Мицунобу с последующим гидролизом LiOH. Существующая литература предсказывает образование продукта Мицунобу у атома азота в 1-положении, однако наблюдали присоединение у кислорода карбонила с образованием соединения -1. Подробное обсуждение идентификации и характеризации неожиданного продукта оксоприсоединения реакции Мицунобу имеется в описании в примерах. Дополнительные подробности по реакции Мицунобу см. в публикациях O. Mitsunobu, Synthesis 1981, 1-28; D. L. Hughes, Org. React. 29, 1-162 (1983); D. L. Hughes, Organic Preparations and Procedures Int. 28, 127-164 (1996); and J. A. Dodge, S. A. Jones, Recent Res. Dev. Org. Chem. 1, 273-283 (1997).
Схема 3
3
3
3
3
6
7
Различные производные хиноксалина формулы -3 можно получить посредством конденсации фенилдиаминов формулы -1, где R имеет значения, указанные ранее, с кетокислотами или сложными эфирами формулы -2, где R представляет собой W-Z, как указано ранее, в безводном метаноле при комнатной температуре (для дополнительных подробностей данной реакции см. Bekerman et al., J. Heterocycl. Chem. 1992, 29, 129-133). Примеры фенилдиаминов, подходящих для получения производных хиноксалина формулы -3, включают, но не ограничиваются перечисленным, 1,2-диамино-4-нитробензол, о-фенилендиамин, 3,4-диаминотолуол, 4-хлор-1,2-фенилендиамин, метил-3,4-диаминобензоат, бензо[1,3]диоксол-5,6-диамин, 1,2-диамино-4,5-метилендиоксибензол, 4-хлор-5-(трифторметил)-1,2-бензолдиамин и тому подобное. Примеры кетокислот, подходящих для реакции, описанной на схеме 3, включают, но не ограничиваются перечисленным, бензоилмуравьиную кислоту, фенилпировиноградную кислоту, индол-3-глиоксиловую кислоту, индол-3-пировиноградную кислоту, нитрофенилпировиноградную кислоту, (2-фурил)глиоксиловую кислоту и тому подобное. Примеры сложных кетоэфиров, подходящих для реакции, описанной на схеме 3, включают, но не ограничиваются перечисленным, этилтиофен-2-глиоксилат, этил-2-оксо-4-фенилбутират, этил-2-(формиламино)-4-тиазолилглиоксилат, этил-2-амино-4-тиазолилглиоксилат, этил-2-оксо-4-фенилбутират, этил-(5-бромтиен-2-ил)глиоксилат, этил-3-индолилглиоксилат, этил-2-метилбензоилформиат, этил-3-этилбензоилформиат, этил-3-этилбензоилформиат, этил-4-циано-2-оксобутират, метил-(1-метилиндолил)-3-глиоксилат и тому подобное.
Схема 4
4
4
4
4
4
4
4
7
3,6-Замещенные хиноксалин-2-оны формулы -4, где R представляет собой W-Z, как указано ранее, можно получить региоселективным способом, способствующим замещению в 6-положении, начиная с амидного сочетания 4-метокси-2-нитроанилина -1 и замещенной глиоксиловой кислоты -2 с получением соединения -3. 3,6-Замещенный хиноксалин-2-он -4 получают посредством каталитического восстановления нитрогруппы соединения -3 с последующей конденсацией. Другие заместители можно ввести в -4 посредством применения других 2-нитроанилинов. Примеры кетокислот, подходящих для реакции, описанной на схеме 4, включают, но не ограничиваются перечисленным, бензоилмуравьиную кислоту, фенилпировиноградную кислоту, индол-3-глиоксиловую кислоту, индол-3-пировиноградную кислоту, нитрофенилпировиноградную кислоту, (2-фурил)глиоксиловую кислоту и тому подобное. Примеры 2-нитроанилинов, подходящих для реакции, описанной на схеме 4, включают, но не ограничиваются перечисленным, 4-этокси-2-нитроанилин, 4-амино-3-нитробензотрифторид, 4,5-диметил-2-нитроанилин, 4-фтор-2-нитроанилин, 4-хлор-2-нитроанилин, 4-амино-3-нитрометилбензоат, 4-бензоил-2-нитроанилин, 3-бром-4-метокси-2-нитроанилин, 3'-амино-4'-метил-2-нитроацетофенон, 5-этокси-4-фтор-2-нитроанилин, 4-бром-2-нитроанилин, 4-(трифторметокси)-2-нитроанилин, этил-4-амино-3-нитробензоат, 4-бром-2-метил-6-нитроанилин, 4-пропокси-2-нитроанилин, 5-(пропилтио)-2-нитроанилин и тому подобное.
Схема 5
А
5
3
5
5
5
2
. Ключевой промежуточный продукт, 3-хлор-1Н-хиноксалин-2-он, -3, можно синтезировать двумя стадиями, начиная с конденсации фениламинов формулы -1, указанных ранее, и диэтилового эфира щавелевой кислоты -1 в условиях, аналогичных условиям, указываемым на схеме 3 (см. Bekerman et al., J. Heterocycl. Chem. 1992, 29, 129-133). Образовавшийся 1,4-дигидрохиноксалин-2,3-дион -2 затем обрабатывают SOCl (1,37 экв.) в смеси 1:40 ДМФА:толуол (для дополнительных подробностей см. Loev et al., J. Med. Chem. (1985), 28, 363-366), получая при этом требуемый промежуточный продукт соединение -3.
В
5
1
5
. Ключевой 3-хлорхиноксалин-2-он -3 присоединяют к макроциклическому предшественнику -6 в условиях реакции Мицунобу через атом кислорода карбонила, а не ожидаемый атом азота в 1-положении с получением макроциклического промежуточного продукта формулы -4. Этот промежуточный продукт облегчает введение различных заместителей в 3-положение хиноксалина.
Реакция сочетания Сузуки
5
5
6
3
4
3
Соединения формулы-5, где R имеет значения, указанные ранее, и R представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил или замещенный гетероарил, как указано ранее, можно синтезировать посредством реакции сочетания Сузуки с арил-, замещенный арил-, гетероарил- или замещенный гетероарилбороновой кислотой в DME в присутствии Pd(PPh) и CsCO. Для дополнительных подробностей, относящихся к реакции сочетания Сузуки, см. A. Suzuki, Pure Appl. Chem. 1991, 63, 419-422 and A. R. Martin, Y. Yang, Acta Chem. Scand. 1993, 47, 221-230. Примеры бороновых кислот, подходящих для сочетания по реакции Сузуки для получения макроциклического ключевого промежуточного продукта-5, включают, но не ограничиваются перечисленным, 2-бромтиофен, фенилбороновую кислоту, 4-бромтиофен-3-бороновую кислоту, 4-цианофенилбороновую кислоту, 4-трифторметоксифенилбороновую кислоту и тому подобное.
Реакция Соногашира
5
5
1
6
2
3
2
Соединения формулы -6, где R имеет значения, указанные ранее, и R имеет значения, указанные ранее, можно синтезировать посредством реакции Соногашира макроциклического ключевого промежуточного продукта и алкина с концевой тройной связью в ацетонитриле в присутствии триэтиламина, PdCl(PPh) и CuI при 90°С в течение 12 час. Для дополнительных подробностей реакции Соногашира см. Sonogashira, Comprehensive Organic Synthesis, Volume 3, Chapters 2,4 and Sonogashira, Synthesis 1977, 777. Алкины с концевой тройной связью, подходящие для реакции Соногашира с макроциклическим ключевым промежуточным продуктом -5, включают, но не ограничиваются перечисленным, этинилбензол, 4-цианоэтинилбензол, пропаргилбензол и тому подобное.
Реакция сочетания Стилла
5
5
5
6
3
4
Соединения формулы -7, где R имеет значения, указанные ранее, и R представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил или замещенный гетероарил, как указано ранее, можно синтезировать посредством реакции сочетания Стилла ключевого макроциклического промежуточного продукта -4 и арилстаннанов в диоксане в присутствии Pd(PPh). Для дополнительных подробностей реакции сочетания Стилла см. J. K. Stille, Angew. Chem. Int. Ed. 1986, 25, 508-524, M. Pereyre et al., Tin in Organic Synthesis (Butterworths, Boston, 1987) pp 185-207 passim, и обзор синтетических применений в публикации T. N. Mitchell, Synthesis 1992, 803-815. Органостаннаны, подходящие для реакции сочетания Стилла с ключевым макроциклическим промежуточным соединением -4, включают, но не ограничиваются перечисленным, цианид трибутилолова, аллилтри-н-бутилолово, 2-трибутилоловопиридин, 2-три-н-бутилоловофуран, 2-три-н-бутилоловотиофен, 2,3-дигидро-5-(три-н-бутилолово)бензофуран и тому подобное.
Схема 6
5
При помощи ключевого макроциклического промежуточного 3-хлорхиноксалинилпродукта -4 можно ввести три дополнительных класса заместителей в 3-положение кольца хиноксалина. Среди различных групп, которые можно ввести, имеются монозамещенная амино, дизамещенная амино, простые эфиры и простые тиоэфиры.
6
5
4
5
6
8
2
3
4
5
Аминозамещенный хиноксалин -1, где R, R, R имеют значения, указанные ранее, и R представляет собой Z, который имеет значения, указанные ранее (см., например, формулу I), можно получить посредством добавления КСО (2,0 экв.) и HNRR (1,2 экв.) к 0,1 М раствору макроциклического промежуточного хиноксалинилпродукта -4 в 10 мл ДМФА и перемешивания образовавшейся реакционной смеси при комнатной температуре в течение 5-12 часов. Амины, подходящие для таких условий, включают, но не ограничиваются перечисленным, этиламин, 2-фенилэтиламин, циклогексиламин, этилметиламин, диизопропиламин, бензилэтиламин, 4-пентениламин, пропаргиламин и тому подобное.
6
5
6
4
5
4
5
4
5
Для получения соответствующего соединения -1 с применением аминов формулы HNRR, где R представляет собой Н и R представляет собой арил, замещенный арил, гетероарил или замещенный гетероарил, следует применять другой набор условий реакции. Добавление NaH (2,0 экв.) и HNRR (1,2 экв.) к 0,1 М раствору макроциклического промежуточного хиноксалинилпродукта -4 в ТГФ и перемешивание образовавшейся реакционной смеси в течение 5-12 часов дает анилинзамещенное соединение -1. Аминами, подходящими для таких условий, являются анилин, 4-метоксианилин, 2-аминопиридин и тому подобное.
5
5
2
3
8
8
8
Введение простых эфиров в 3-положение кольца хиноксалина можно достичь посредством обработки 0,1 М раствора макроциклического промежуточного хиноксалинилпродукта -4 в ДМФА КСО (2,0 экв.) и HOR (1,2 экв.), где R представляет собой Z, как указано ранее. Образовавшуюся реакционную смесь можно затем перемешивать в течение 5-12 часов при комнатной температуре для введения остатка требуемого простого эфира в 3-положение. Спирты, подходящие для таких условий, включают, но не ограничиваются перечисленным, этанол, пропанол, изобутанол, трифторметанол, фенол, 4-метоксифенол, пиридин-3-ол и тому подобное. Простые тиоэфиры можно получить при помощи такой же методики, например, реакцией макроциклического промежуточного хиноксалилпродукта -4 с реагентом формулы HS-R.
Схема 7
7
7
7
3
7
7
7
7
7
Превращение бензочасти кольца хиноксалина в производное можно достичь посредством применения галогензамещенного хиноксалина формулы -2. Хиноксалин формулы -2 можно получить посредством конденсации бромзамещенного фенилдиамина -1 с дикетосоединением формулы -2, где R представляет собой W-Z, как указано ранее, в безводном метаноле, как подробно описано ранее. Промежуточный продукт -3 получают в условиях реакции Мицунобу из макроциклического предшественника -6 и бромзамещенного хиноксалина -2. Промежуточный продукт -3 можно затем подвергнуть реакции сочетания Сузуки, реакции Соногашира или реакции сочетания Стилла в положении, занимаемом атомом брома. Для дополнительных подробностей см. предыдущее обсуждение реакции сочетания Сузуки, реакции Соногашира или реакции сочетания Стилла. Реакция Бухвальда позволяет заменить атом брома арила на амины, как первичные, так и вторичные, а также азотистые 1Н-гетероциклы. Для дополнительных подробностей реакции Бухвальда см. J. F. Hartwig, Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 2046-2067.
Схема 8
8
8
8
8
8
7
Промежуточную 3-замещенную 2-оксо-1,2-дигидрохиноксалин-6-карбоновую кислоту -4 можно получить посредством конденсации этил-3,4-диаминобензоата (-1) с оксоуксусной кислотой формулы -2, где R представляет собой W-Z, как указано ранее, с применением способа, указанного ранее на схеме 3 (для дополнительных подробностей см. Bekerman et al., J. Heterocycl. Chem. 1992, 29, 129-133). Образовавшийся сложный этиловый эфир -3 затем гидролизуют LiOH в МеОН при комнатной температуре, получая при этом промежуточную карбоновую кислоту -4.
8
8
8
1
th
Карбоновую кислоту -4 можно затем превратить в замещенный кетон -6 (где R имеет значения, указанные ранее) посредством образования амида Вейнреба -5 и последующей обработкой различными реактивами Гриньяра (для подробностей получения и применения амида Вейнреба см. Weinreb et al. Tetrahedron Lett. 1977, 33, 4171; Weinreb et al., Synth. Commun. 1982, 12, 989 и см. B.S. Furniss, A.J. Hannaford, P.W.G. Smith, A.R. Tatchell, Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, 5 ed., Longman, 1989). Добавление проводят в инертном растворителе, обычно при низких температурах. Подходящие растворители включают, но не ограничиваются перечисленным, тетрагидрофуран, диэтиловый простой эфир, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан и гексаны. Растворителем предпочтительно является тетрагидрофуран или диэтиловый простой эфир. Реакцию предпочтительно проводят при температуре от -78°С до 0°С.
8
8
4
В альтернативном случае карбоновую кислоту -4 можно применять для получения различных амидов формулы -7, где R имеет значения, указанные ранее, способом, в общем указанным на схеме 8. Все из различных производных хиноксалин-2-она, указанных на схеме 8, далее сочетают с макроциклическим предшественником посредством реакции Мицунобу, условия которой описаны выше.
Схема 9
Дополнительные 6-замещенные производные хиноксалин-2-она можно получить посредством общих методик, указанных на схеме 9.
А. Восстановление 6-нитрогруппы и получение амида
9
9
9
9
7
2
2
2
1
6-Нитро-1Н-хиноксалин-2-он (-3) можно получить способом, ранее описанным, из 3,4-диаминонитробензола и оксоуксусной кислоты формулы -2, где R представляет собой W-Z, как указано ранее. Восстановление нитрогруппы в 6-положении можно достичь с помощью Pd/C с HNNH•НО в кипящем с обратным холодильником МеОН. 6-Положение амина -4 затем можно обработать различными хлорангидридами кислот для получения различных амидов формулы -5, где R имеет значения, указанные ранее.
В. Окисление бензилового спирта и восстановительное аминирование
9
9
9
9
9
7
3
4
5
th
Хиноксалин-2-он формулы -7 можно получить посредством конденсации 3,4-диаминобензилового спирта и различных оксоуксусных кислот формулы -2, где R представляет собой W-Z, как указано ранее. Образовавшийся бензиловый спирт -7 можно затем окислить в условиях реакции Сверна или в любых других условиях окисления для получения альдегида формулы -8. Для дополнительных подробностей, относящихся к реакции Сверна, см. A. J. Mancuso, D. Swern, Synthesis 1981, 165-185 passim; T. T. Tidwell, Org. React. 1990, 39, 297-572 passim. Другие условия окисления см. публикацию B.S. Furniss, A.J. Hannaford, Р.W.G. Smith, A.R. Tatchell, Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, 5 ed., Longman, 1989. Последующие реакции восстановительного аминирования первичными или вторичными аминами в присутствии NaCNBH и уксусной кислоты могут дать соединения формулы -9, где R и R имеют значения, указанные ранее.
Схема 10
7
2
2
6
7
Гидролиз предшествующих макроциклических хиноксалинилсоединений проводят стандартным способом. Раствор этилового сложного эфира -4 в смеси ТГФ/МеОН/НО обрабатывают LiOH·НО, непосредственно получая при этом соответствующую свободную кислоту, где R имеет значения, указанные ранее, и R представляет собой W-Z, как указано ранее.
Схема 11
11
10
3
2
2
3
6
7
Сульфонамиды -1 получают из соответствующих кислот -1 обработкой кислоты реагентом сочетания (например, CDI, HATU, DCC, EDC и тому подобное) при комнатной температуре (к.т.) или при повышенной температуре с последующим добавлением соответствующего сульфонамида R-S(O)-NH в присутствии основания, где R, R и R имеют значения, указанные ранее, и R представляет собой W-Z, как указано ранее.
Все ссылки, цитированные в описании, независимо от того, находятся ли они в напечатанной, электронной, считываемой, запоминаемой компьютером форме или другой форме, специально включены в качестве ссылки во всей их полноте и включают, но не ограничиваются перечисленным, рефераты, статьи, журналы, публикации, учебники, монографии, веб-сайты Интернета, базы данных, патенты и публикации патентов.
ПРИМЕРЫ
Соединения и способы настоящего изобретения будут лучше понятны из нижеследующих примеров, которые предлагаются только в качестве иллюстрации и не ограничивают объем изобретения. Различные изменения и модификации к описанным вариантам осуществления будут очевидны специалистам в данной области, и такие изменения и модификации, включающие, без ограничения, изменения и модификации, относящиеся к химическим структурам, заместителям, производным, препаратам и/или способам изобретения, могут быть сделаны, не выходя за пределы сущности изобретения и объема прилагаемой формулы изобретения.
Синтез циклического пептидного предшественника
Пример 1.
eq = экв.
1А
1а
1b
1с
3
2
4
+
. К раствору Вос-L-2-амино-8-ноненовой кислоты (1,36 г, 5 моль) и коммерчески доступного сложного метилового эфира цис-L-гидроксипролина  (1,09 г, 6 ммоль) в 15 мл ДМФА добавляют DIEA (4 мл, 4 экв.) и HATU (4 г, 2 экв.). Сочетание проводят при 0°С в течение 1 час. Реакционную смесь разбавляют 100 мл EtOAc и сразу промывают 5% лимонной кислотой (2×20 мл), водой (2×20 мл), 1 М NaHCO (4×20 мл) и насыщенным раствором соли (2×10 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO, фильтруют и затем концентрируют в вакууме, получая при этом дипептид  (1,91 г, 95,8%), который идентифицируют ВЭЖХ (время удерживания = 8,9 мин, 30-70%, 90% В) и МС (найдено 421,37, М+Na).
1В.
1с
1d
3
2
4
Дипептид  (1,91 г) растворяют в 15 мл диоксана и 15 мл 1 н. водного раствора LiOH и образовавшуюся смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь подкисляют 5% лимонной кислотой и экстрагируют 100 мл EtOAc. Органическую часть затем промывают водой (2×20 мл), 1 М NaHCO (2х20 мл) и насыщенным раствором соли (2×20 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO, фильтруют и затем концентрируют в вакууме, получая при этом свободную карбоновую кислоту  (1,79 г, 97%), которую применяют непосредственно без необходимости дополнительной очистки.
1С
1е
1f
3
2
4
+
. К раствору свободной кислоты, полученной выше (1,77, 4,64 ммоль), в 5 мл ДМФА добавляют этиловый эфир D-β-винилциклопропанаминокислоты  (0,95 г, 5 ммоль), DIEA (4 мл, 4 экв.) и HATU (4 г, 2 экв.). Сочетание проводят при 0°С в течение 5 часов. Реакционную смесь разбавляют 80 мл EtOAc и промывают 5% лимонной кислотой (2×20 мл), водой (2×20 мл), 1 М NaHCO (4×20 мл) и насыщенным раствором соли (2×10 мл). Органическую фазу сушат над безводным NaSO, фильтруют и затем концентрируют в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с применением градиентного элюирования смесью гексаны:EtOAc (5:1→3:1→1:1→1:2→1:5). Линейный трипептид  выделяют в виде масла (1,59 г, 65,4%) и идентифицируют ВЭЖХ (время удерживания = 11,43 мин) и МС (найдено 544,84, М+Na).
1D
Метатезис с замыканием кольца (RCM)
1f
1
1
2
2
+
. . Раствор линейного трипептида  (1,51 г, 2,89 ммоль) в 200 мл сухого DCM освобождают от кислорода барботированием N. Затем в виде твердого вещества добавляют катализатор для метатезиса с замыканием кольца (RCM) (например, катализатор Груббса, катализатор Нолана или катализатор Ховейда и т.д.) (например, 5 мол.% экв.). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в атмосфере N в течение 12 часов. Растворитель выпаривают и остаток очищают флэш-хроматографией на силикагеле с применением градиентного элюирования смесью гексаны:EtOAc (9:1→5:1→3:1→1:1→1:2→1:5). Циклический пептидный предшественник  выделяют в виде белого порошка (1,24 г, 87%) и идентифицируют ВЭЖХ (время удерживания = 7,84 мин, 30-70%, 90%В) и МС (найдено 516,28, М+Na). Для дополнительных подробностей синтетических способов, применяемых для получения циклического пептидного предшественника , см. WO 00/0599929 (2000).
Пример 2. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
2А
Стадия
1
2а
2b
К охлажденной смеси макроциклического предшественника , 3-(тиофен-2-ил)-1Н-хиноксалин-2-она  (1,1 экв.) и трифенилфосфина (2 экв.) в ТГФ по каплям при 0°С добавляют DIAD (2 экв.). Образовавшуюся смесь выдерживают при 0°С в течение 15 мин перед нагреванием до комнатной температуры. Спустя 18 часов смесь концентрируют в вакууме и остаток очищают хроматографией с элюированием 60% EtOAc в гексанах, получая при этом  в виде прозрачного масла (35 мг, 99%).
МС (найдено): 704,4 (M+H).
1
3
H-ЯМР [CDCl, δ (м.д.)]: 8,6 (д, 1H), 8,0 (д, 1H), 7,8 (д, 1H), 7,6 (м, 2H), 7,5 (д, 2H), 7,2 (т, 1H), 7,0 (ушир.с, 1H), 6,0 (ушир.т, 1H), 5,5 (м, 1H), 5,3 (ушир.д, 1H), 5,2 (т, 1H), 5,0 (м, 1H), 4,6 (ушир.т, 1H), 4,1-4,3 (м, 3H), 3,1 (м, 1H), 5,3 (м, 1H), 2,1-2,3 (м, 2H), 1,3 (ушир.с, 9H), 1,2 (т, 3H).
2В
Стадия
2b
2
4
Раствор соединения  и гидроксида лития (10 экв.) в смеси ТГФ/МеОН/НО (2:1:0,5) перемешивают при комнатной температуре в течение 20 часов. Избыточные растворители выпаривают в вакууме и образовавшийся остаток разбавляют водой и подкисляют до рН ~5. Смесь экстрагируют EtOAc (2×). Объединенные органические экстракты промывают один раз насыщенным раствором соли, сушат (MgSO), фильтруют и концентрируют в вакууме, получая при этом маслянистый остаток, который очищают колоночной хроматографией с элюированием смесью 2-10% метанол-хлороформ (87%).
МС (найдено): 676,3.
1
3
H-ЯМР [CDOD, δ (м.д.)]: 8,14 (1Н), 7,96 (1Н), 7,86 (1Н), 7,65 (1Н), 7,62 (1Н), 7,59 (1Н), 7,19 (1Н), 6,07 (1Н), 5,53 (1Н), 5,52 (1Н), 4,81 (1Н), 4,75 (1Н), 4,23 (1Н), 4,12 (1Н), 2,65-2,75 (2H), 2,52 (1Н), 2,21 (1Н), 1,97 (1Н), 1,80 (1Н), 1,62 (2H), 1,54 (1Н), 1,47 (2H), 1,44 (2H), 1,41 (2H), 1,09 (9H).
13
3
C-ЯМР [CDOD, δ (м.д.)]: 176,2, 174,1, 173,4, 156,0, 152,9, 141,0, 139,6, 138,9, 138,6, 131,5, 130,6, 130,0, 129,3, 128,1, 127,8, 127,1, 126,6, 78,6, 76,1, 59,8, 53,3, 52,3, 41,4, 34,5, 32,3, 30,0, 27,5, 27,4, 27,2 (3C), 26,1, 22,6, 22,4.
Пример 3. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
Стадия 3А
- снятие защиты у амина
Указанное в заголовке соединение стадии 2А (82 мг, 0,116 ммоль) обрабатывают HCl (4 М в диоксане, 3 мл, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 час до тех пор, пока ЖХ-МС не покажет полный расход исходного соединения. Растворитель удаляют в вакууме.
Стадия 3В
- хлорформиатный реагент
Хлорформиатный реагент 3b получают растворением 0,22 ммоль циклопентанола в ТГФ (5 мл) и добавлением 0,45 ммоль фосгена в толуоле (20%). Образовавшуюся реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и растворитель удаляют в вакууме. К остатку добавляют DCM и затем концентрируют досуха дважды в вакууме, получая при этом хлорформиатный реагент 3b.
Стадия 3с
- получение карбамата
2
3
+
Образовавшийся остаток со стадии 3а растворяют в DCM (3 мл), затем обрабатывают циклопентилхлорформиатом, полученным со стадии 3b (0,22 ммоль), и iPrNЕt (0,35 мл, 2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2,5 час. К раствору добавляют этилацетат (15 мл). Смесь промывают с насыщенным водным раствором NaHCO, затем водой и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия. Органическую фазу затем фильтруют, концентрируют в вакууме и затем очищают флэш-хроматографией (этилацетат/гексаны, 1:2), получая при этом 60,0 мг сложного эфира. МС (ESI) m/z 716,31 (М+Н).
Стадия 3D
- гидролиз сложного эфира
Сложный эфир со стадии 3с гидролизуют методикой, указанной в примере 2, получая при этом указанное в заголовке соединение (42,0 мг, 55% после 3 стадий).
+
МС (ESI) m/z 688,37 (M+H).
13
3
C-ЯМР (125 MГц, CDOD): δ 174,6, 173,5, 173,0, 156,7, 152,9, 141,1, 140,0, 139,2, 138,8, 133,4, 130,8, 130,1, 129,3, 128,0, 127,2, 126,7, 126,3, 77,5, 76,2, 59,7, 53,3, 52,6, 40,3, 34,8, 34,4, 32,4, 32,2, 32,1, 30,8, 27,5, 27,4, 26,4, 23,6, 23,3, 23,0, 22,3.
Пример 4. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
4
Указанное в заголовке соединение получают смешиванием соединения со стадии 2А с 4 мл 4 М раствора HCl в диоксане и перемешиванием реакционной смеси в течение 1 часа. Реакционный остаток концентрируют в вакууме. К этому остатку добавляют 4 мл ТГФ и 0,045 ммоль TEA, смесь охлаждают до 0°С, к смеси добавляют 0,045 ммоль хлорангидрида циклопентилкарбоновой кислоты. Образовавшуюся реакционную смесь перемешивают в течение 2 часов при 0°С. Реакционную смесь затем экстрагируют EtOAc, промывают 1 М бикарбонатом натрия, водой и насыщенным раствором соли, сушат над MgSO и концентрируют досуха в вакууме. Сырое соединение очищают на колонке с диоксидом кремния и этиловый сложный эфир затем гидролизуют методикой, указанной в примере 2.
Пример 5. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
4
Указанное в заголовке соединение получают смешиванием соединения 2b с 4 мл 4 М раствора HCl в диоксане и перемешиванием реакционной смеси в течение 1 часа. Образовавшуюся реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток растворяют в 4 мл ТГФ и охлаждают до 0°С. К раствору при 0°С добавляют 0,045 ммоль циклопентилизоцианата и образовавшуюся реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Раствор затем экстрагируют EtOAc, промывают 1% HCl, водой и насыщенным раствором соли, сушат над MgSO и концентрируют в вакууме досуха. Сырое соединение очищают на колонке с диоксидом кремния и этиловый сложный эфир затем гидролизуют методикой, указанной в примере 2.
Примеры 6-14. Соединения формулы IV, где А представляет собой t-BOC, получают реакцией указанного в заголовке соединения примера 1 с подходящим 1Н-хиноксалин-2-оном () в условиях реакции Мицунобу, описанных в примере 2, с последующим гидролизом сложного этилового эфира посредством обработки LiOH, как описано в примере 2. 1Н-Хиноксалин-2-оны (), применяемые в примерах, являются либо коммерчески доступными, либо их можно получить из легкодоступных исходных соединений посредством синтетических способов, описанных на схемах 3-9, или синтетическими способами, хорошо известными среднему специалисту в данной области.
Пример 6. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 736,18 (М+Н).
Пример 7. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 710,22 (М+Н).
Пример 8. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 697,4 (М+Н).
Пример 9. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 696,4 (М+Н).
Пример 10. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 726,2 (М+Н).
Пример 11. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 716,2 (М+Н).
Пример 12. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 703,1 (М+Н).
Пример 13. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 702,0 (М+Н).
Пример 14. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 705,50 (М+Н).
Примеры 15-25. Соединения формулы IV, где А представляет собой , получают реакцией указанного в заголовке соединения примера 1 с соответствующим 1Н-хиноксалин-2-оном () в условиях реакции Мицунобу, описанных в стадии 2А, с последующим превращением по методикам, описанным в примере 3.
Пример 15. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 748,30 (М+Н).
Пример 16. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 756,10 (М+Н).
Пример 17. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 718,11 (М+Н).
Пример 18. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 718,11 (М+Н).
Пример 19. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 748,20 (М+Н).
Пример 20. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 714,26 (М+Н).
Пример 21. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 766,15 (М+Н).
Пример 22. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 722,2 (М+Н).
Пример 23. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 717,24 (М+Н).
Пример 24. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 734,17 (М+Н).
Пример 25. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 716,30 (М+Н).
Соединения примеров 26-28 получают по методикам, описанным в примере 3, с применением подходящих хлорформиатных реагентов.
Пример 26. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 666,29 (М+Н).
Пример 27. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 674,19 (М+Н).
Пример 28. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 702,27 (М+Н).
Соединения примеров 29-39 получают по методикам, описанным в примере 4, с применением соответствующих активированных производных кислот.
Пример 29. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 686,28 (М+Н).
Пример 30. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 680,35 (М+Н).
Пример 31. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 669,35 (М+Н).
Пример 32. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 683,37 (М+Н).
Пример 33. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 670,33 (М+Н).
Пример 34. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 697,37 (М+Н).
Пример 35. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 712,39 (М+Н).
Пример 36. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 670,34 (М+Н).
Пример 37. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 670,31 (М+Н).
Пример 38. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 670,09 (М+Н).
Пример 39. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
+
МС (ESI) m/z 712,38 (М+Н).
Пример 40. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 5.
+
МС (ESI) m/z 665,25 (М+Н).
Пример 41. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой ОН.
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 2.
+
МС (ESI) m/z 682,08 (М+Н).
Пример 42. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой -ОН.
+
МС (ESI) m/z 670,33 (М+Н).
Пример 43. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой -ОН.
+
МС (ESI) m/z 698,41 (М+Н).
Пример 44. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой -ОН.
+
МС (ESI) m/z 685,43 (М+Н).
Пример 45. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой -ОН.
+
МС (ESI) m/z 722,14 (М+Н).
Пример 46. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
1
3
Стадия 46а: циклопропилсульфонилхлорид (1,4 г, 10 ммоль) растворяют в 0,5 М аммиаке в диоксане (50 мл, 25 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 3 дней. Большое количество осадка отделяют фильтрованием и выгружают. Прозрачный фильтрат выпаривают в вакууме и белый остаток сушат в вакууме в течение 24 часов, получая при этом циклопропилсульфонамид (0,88 г, 74%). H-ЯМР (500 MГц, CDCl): δ 4,62 (2H, с), 2,59 (1Н, м), 1,20 (2H, м), 1,02 (2H, м).
3
Стадия 46b: указанное в заголовке соединение примера 2 (21,0 мг, 0,031 ммоль) и карбонилдиимидазол (6,0 мг, 0,037 ммоль) растворяют в 0,7 мл безводного ДМФА и образовавшийся раствор нагревают до 40°С в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляют циклопропилсульфонамид (8,0 мг, 0,06 ммоль) с последующим добавлением DBU (7,0 мг, 0,046 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 40°С в течение 10 час. Анализ ЖХ-МС показал образование требуемого продукта. Реакционную смесь охлаждают и к раствору добавляют 10 мл этилацетата. Смесь промывают насыщенным водным раствором NaHCO, водой и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия. Органическую фазу затем фильтруют, концентрируют в вакууме и затем очищают флэш-хроматографией (этилацетат/гексаны, 1:1), получая при этом 17,0 мг (71%) указанного в заголовке соединения.
+
МС (ESI) m/z 779,2 (M+H).
1
3
H-ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 10,24 (1Н, с), 8,10 (1Н, с), 8,00 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,82 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,60 (2H, м), 7,49 (1Н, д, J=5,0 Гц), 7,16 (1Н, с), 6,91 (1Н, с), 6,09 (1Н, с), 5,67 (1Н, м), 5,12 (1Н, м), 4,98 (1Н, т, J=8,0 Гц), 4,70 (1Н, т, J=8,0 Гц), 4,62 (2H, с), 4,33 (1Н, м), 4,10 (1Н, м), 2,92 (1Н, м), 2,75 (2H, м), 2,58 (2H, м), 2,28 (1Н, м), 1,91 (2H, м), 1,60-0,80 (20H, м).
13
3
C-ЯМР (125 MГц, CDCl, диапазон 200-40 м.д.): δ 177,1, 173,5, 168,1, 155,2, 152,5, 140,7, 139,8, 139,1, 136,5, 130,5, 130,4, 129,7, 128,7, 128,3, 127,6, 127,1, 124,8, 80,1, 75,8, 59,7, 53,5, 52,3, 44,8.
Пример 47. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 14.
+
МС (ESI): m/z 808,22 (М+Н).
Пример 48. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3.
+
МС (ESI) m/z 791,2 (М+Н).
1
3
H-ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 10,3 (1Н, с), 8,10 (1Н, д, J=3,5 Гц), 8,00 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,83 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,66-7,59 (2H, м), 7,48 (1Н, д, J=5,0 Гц), 7,31 (1Н, с), 7,14 (1Н, т, J=4,2 Гц), 6,10 (1Н, с), 5,60 (1Н, м), 5,42 (1Н, д, J=8,0 Гц), 4,92 (1Н, т, J=8,0 Гц), 4,89 (3H, м), 4,71 (1Н, т, J=8,0 Гц), 4,64 (1Н, д, J=11,5 Гц), 4,39 (1Н, м), 4,10 (1Н, м), 2,88 (1Н, м), 2,69 (2H, м), 2,58 (2H, м), 2,24 (1Н, м), 1,95-0,80 (20H, м).
13
3
C-ЯМР (125 МГц, CDCl): δ 177,4, 173,3, 168,4, 156,0, 152,5, 140,7, 140,0, 139,1, 136,5, 130,7, 130,3, 129,8, 128,7, 128,4, 127,6, 127,1, 124,7, 78,1, 75,9, 59,7, 53,5, 52,5, 44,7, 33,1, 32,7, 32,6, 31,3, 30,0, 27,5, 27,3, 26,3, 23,8, 22,4, 21,0, 6,9, 6,4, 6,3.
Пример 49. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединение примера 23 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI): m/z 820,22 (М+Н).
Пример 50. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из карбоновой кислоты из примера 22 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 825,17 (М+Н).
Пример 51. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из карбоновой кислоты из примера 19 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 851,33 (М+Н).
Пример 52. Соединение формулы IV, где А представляет собой -Н, Q представляет собой , G представляет собой .
2
2
Указанное в заголовке соединение примера 46 (164 мг, 0,21 ммоль) обрабатывают HCl (4 М в диоксане, 3 мл, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 0,5 час до тех пор, пока анализ ЖХ-МС не показал полный расход исходного соединения. Растворитель удаляют в вакууме. Добавляют CHCl (15 мл), затем удаляют в вакууме (повторяют 3 раза), получая при этом указанный в заголовке амин.
+
МС (ESI) m/z 679,36 (М+Н).
Пример 53. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают из соединения примера 52 по методикам, описанным в стадии 3b и стадии 3с, с применением циклопент-3-енола.
+
МС (ESI) m/z 789,29 (М+Н).
Пример 54. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают из соединения примера 52 по методикам, описанным в стадии 3b и стадии 3с, с применением тетрагидропиран-4-ола.
+
МС (ESI) m/z 807,40 (М+Н).
Пример 55. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают из соединения примера 52 по методикам, описанным в стадии 3b и стадии 3с, с применением циклобутанола.
+
МС (ESI) m/z 777,29 (М+Н).
13
3
C-ЯМР (125 МГц, CDCl): δ 177,3, 173,4, 168,4, 155,4, 152,5, 140,7, 139,7, 139,1, 136,5, 130,7, 130,3, 129,8, 128,7, 128,3, 127,7, 127,1, 124,7, 110,0, 75,7, 69,4, 59,8, 53,6, 52,5, 44,7, 34,9, 33,0, 31,3, 30,8, 30,2, 29,9, 27,4, 27,3, 26,3, 22,4, 14,4, 13,3, 6,9, 6,4.
Пример 56. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают из соединения примера 52 по методикам, описанным в стадии 3b и стадии 3с, с применением метил-1-гидроксициклопропанкарбоксилата.
+
МС (ESI) m/z 821,13 (М+Н).
Пример 57. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают из соединения примера 52 по методикам, описанным в примере 4.
+
МС (ESI) m/z 789,15 (М+Н).
Пример 58. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 17 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 821,43 (М+Н).
.
Пример 59. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 18 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 821,44 (М+Н).
Пример 60. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 20 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 817,44 (М+Н).
Пример 61. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 45 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 825,32 (М+Н).
Пример 62. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 24 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 837,40 (М+Н).
Пример 63. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 42 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 773,54 (М+Н).
Пример 64. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 3, исходя из указанного в заголовке соединения примера 63.
+
МС (ESI) m/z 785,40 (М+Н).
Пример 65. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 43 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 801,46 (М+Н).
Пример 66. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 3, исходя из указанного в заголовке соединения примера 65.
+
МС (ESI) m/z 813,52 (М+Н).
Пример 67. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 25 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 819,45 (М+Н).
Пример 68. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 44 и циклопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 788,48 (М+Н).
Пример 69. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
3
Указанное в заголовке соединение получают обработкой соединения примера 52 3,3-диметилмасляным альдегидом и NaBHCN в ацетонитриле.
+
МС (ESI) m/z 763,41 (М+Н).
Пример 70. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
2
3
Указанное в заголовке соединение получают обработкой соединения примере 46 иодметаном, КСО и ДМФА.
+
МС (ESI) m/z 793,40 (М+Н).
Пример 71. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и изопропилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 793,5 (М+Н).
Пример 72. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и амида 2,2,2-трифторэтансульфоновой кислоты.
+
МС (ESI) m/z 833,1 (М+Н).
Пример 73. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и трифторметансульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 819,2 (М+Н).
Соединения от примера 74 до примера 109 (формулы IV) можно получить по методикам, описанным в примерах 2, 3, 4, 5, 46 и 52.
Пример 110. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и фенилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 827,3 (М+Н).
Пример 111. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-ацетамидобензолсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 884,5 (М+Н).
Пример 112. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-метилфенилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 841,3 (М+Н).
1
3
H-ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 10,49 (1Н, с), 8,09 (1Н, д, J=3,5 Гц), 8,01 (1Н, д, J=8,5 Гц), 7,87 (2H, д, J=8,5 Гц), 7,85 (1Н, д, J=8,5 Гц), 7,66-7,58 (2H, м), 7,48 (1Н, м), 7,27 (2H, д, J=8,5 Гц), 7,12 (1Н, м), 6,66 (1Н, с), 6,16 (1Н, с), 5,43 (1Н, м), 5,30 (1Н, м), 5,13 (1Н, м), 4,93 (1Н, м), 4,78 (1Н, м), 4,53-4,49 (1Н, м), 4,38-4,35 (1Н, м), 4,13-4,11 (1Н, м), 3,66-3,40 (2H, м), 2,81-2,72 (2H, м), 2,42 (3H, с), 2,00-0,80 (19H, м).
Пример 113. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-карбоксифенилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 871,2 (М+Н).
Пример 114. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-метоксифенилсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 857,2 (М+Н).
1
3
H-ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 10,48 (1Н, с), 8,09 (1Н, д, J=3,5 Гц), 8,01 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,92 (2H, д, J=8,5 Гц), 7,85 (1Н, дд, J=8,0, 1,0 Гц), 7,66-7,58 (2H, м), 7,48 (1Н, д, J=4,5 Гц), 7,11 (1Н, т, J=4,5 Гц), 6,93 (2H, д, J=8,5 Гц), 6,75 (1Н, с), 6,14 (1Н, с), 5,30 (1Н, дд, J=18,0, 9,0 Гц), 5,16 (1Н, д, J=8,0 Гц), 4,77 (1Н, м), 4,65 (2H, дд, J=16,5, 8,0 Гц), 4,49 (1Н, т, J=9,0 Гц), 4,36 (1Н, ддд, J=11,0, 11,0, 3,5 Гц), 4,13-4,10 (1Н, м), 3,86 (3H, с), 2,81-2,72 (2H, м), 2,44-2,37 (1Н, м), 2,17 (1Н, дд, J=17,5, 8,5 Гц), 1,82-0,8 (19H, м).
Пример 115. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 2-аминобензолсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 842,24 (М+Н).
Пример 116. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и амида хинолин-8-сульфоновой кислоты.
+
МС (ESI) m/z 878,3 (М+Н).
Пример 117. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 3-фторбензолсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 845,2 (М+Н).
Соединения от примера 118 до примера 122 (формулы IV) можно получить по методикам, описанным в примерах 2, 3, 4, 5, 46 или 52.
Пример 123. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и бензо[b]тиофен-2-сульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 883,3 (М+Н).
Пример 124. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 2-тиофенсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 833,4 (М+Н).
Пример 125. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 5-метил-2-пиридинсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 842,2 (М+Н).
Пример 126. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-хлор-3-пиридинсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 862,2 (М+Н).
Пример 127. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 1-метил-1Н-имидазол-4-сульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 831,2 (М+Н).
Соединения от примера 128 до примера 142 (формулы IV) получают по методикам, описанным в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и соответствующих сульфонамидов.
Пример 128. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 862,4 (М+Н).
Пример 129. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 803,3 (М+Н).
Пример 130. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 805,3 (М+Н).
Пример 131. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 817,3 (М+Н).
Пример 132. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 831,3 (М+Н).
Пример 133. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 795,2 (М+Н).
Пример 134. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 792,2 (М+Н).
Пример 135. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 818,3 (М+Н).
Пример 136. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 821,2 (М+Н).
Пример 137. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 835,1 (М+Н).
Пример 138. Соединение формулы IV, где А представляет собой  Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 835,1 (М+Н).
Пример 139. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 819,4 (М+Н).
Пример 140. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 805,2 (М+Н).
Пример 141. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 825,4 (М+Н).
Пример 142. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
+
МС (ESI) m/z 867,4 (М+Н).
Соединения примеров 143 и 144 (формулы IV) получают по методикам, описанным в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 2 и соответствующих сульфонамидов.
Пример 143. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Пример 144. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Пример 145. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-морфолинсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 836,3 (М+Н).
1
3
H-ЯМР (500 МГц, CDCl): δ 10,05 (1Н, с), 8,09 (1Н, д, J=3,5 Гц), 8,01 (1Н, д, J=8,0 Гц), 7,83 (1Н, дд, J=8,0, 1,5 Гц), 7,66-7,58 (2H, м), 7,50 (1Н, д, J=5,0 Гц), 7,14 (1Н, т, J=4,0 Гц), 6,74 (1Н, с), 6,13 (1Н, с), 5,79 (1Н, дд, J=18,0, 9,0 Гц), 5,12 (1Н, м), 5,05 (1Н, т, J=9,5 Гц), 4,76 (1Н, м), 4,68-4,65 (2H, м), 4,38-4,33 (2H, м), 4,09 (1Н, дд, J=11,5, 3,5 Гц), 3,79 (2H, т, J=3,6 Гц), 3,76-3,67 (2H, м), 3,38-3,28 (2H, м), 3,17 (2H, т, J=3,6 Гц), 2,76-2,70 (2H, м), 2,59 (1Н, м), 2,28 (1Н, дд, J=6,4, 3,6 Гц) 1,93-1,78 (2H, м), 1,57-0,80 (16H, м).
Пример 146. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и 4-метил-1-пиперазинсульфонамида.
+
МС (ESI) m/z 849,3 (М+Н).
Пример 147. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и амида диметиламиносульфоновой кислоты.
+
МС (ESI) m/z 794,3 (М+Н).
Пример 148. Соединение формулы IV, где А представляет собой , Q представляет собой , G представляет собой .
Указанное в заголовке соединение получают по методике, описанной в примере 46, исходя из указанного в заголовке соединения примера 3 и сульфонилдиамидов.
+
МС (ESI) m/z 766,4 (М+Н).
Соединения от примера 149 до примера 156 (формулы IV) можно получить по методикам, описанным в примерах 2, 3, 4, 5, 42 или 59.
Соединения настоящего изобретения обладают сильными ингибирующими свойствами против протеазы NS3 HCV. В нижеследующих примерах описаны анализы, в которых соединения настоящего изобретения можно испытывать на действия против HCV.
Пример 157. Анализ фермента протеаза NS3/NS4a
2
Активность и ингибирование протеазы HCV анализировали с применением по сути флуорогенного субстрата, содержащего гасящую группу. Группы DABCYL и EDANS присоединены к противоположным концам короткого пептида. Гашение флуоресценции EDANS группой DABCYL ослабляется при протеолитическом расщеплении. Флуоресценцию измеряют Molecular Devices Fluoromax (или его эквивалентом) с применением длины волны возбуждения 355 нм и длины волны испускания 485 нм. Анализ проводят в 96-луночных планшетах Corning с наполовину прозрачной площадью (VWR 29444-312 [Corning 3693] с полноразмерной протеазой 1b NS3 HCV, связанной с кофактором NS4A (конечная концентрация фермента 1-15 нМ)). Буфер для анализа дополняют 10 мкМ кофактором Pep 4A NS4A (Anaspec 25336 или в лаборатории, мол. масса 1424,8). RET S1 (Ac-Asp-Glu-Asp(EDANS)-Glu-Glu-Abu-[COO]Ala-Ser-Lys-(DABCYL)-NH, AnaSpec 22991, мол. масса 1548,6) применяют в качестве флуорогенного пептидного субстрата. Буфер для анализа содержит 50 мМ Hepes при рН 7,5, 30 мМ NaCl и 10 мМ ВМЕ. Ферментативную реакцию проводят на протяжении времени 30 минут при комнатной температуре в отсутствие и в присутствии ингибиторов.
В качестве эталонных соединений применяют пептидные ингибиторы HCV Inh 1 (Anaspec 25345, мол. масса 796,8) Ac-Asp-Glu-Мet-Glu-Glu-Cys-OH, [-20°С] и HCV Inh 2 (Anaspec 25346, мол. масса 913,1) Ac-Asp-Glu-Dif-Cha-Cys-OH.
50
Λ
Величины IC вычисляют с применением XLFit в Activity Base (IDBS) с применением уравнения 205: y = A+((B-A)/(1+((C/x)D))).
Пример 158. Анализ репликона на клеточной основе
3
2
Количественное определение РНК репликона HCV (анализ HCV на клеточной основе) выполняют с применением клеточной линии Huh 11-7 ((Lohmann, et al. Science 285:110-113, 1999). Клетки засевают при плотности 4×10 клеток/лунку в 96-луночных планшетах и добавляют питательные среды, содержащие DMEM (высокое содержание глюкозы), 10% фетальную телячью сыворотку, пенициллин-стрептомицин и заменимые аминокислоты. Клетки инкубируют в инкубаторе с 7,5% СО при 37°С. В конце периода инкубации общую РНК экстрагируют и очищают из клеток с применением набора Ambion RNAqueous 96 (Catalog № AM1812). Для амплификации РНК HCV, так чтобы достаточный материал можно было детектировать HCV-специфичным зондом (ниже), праймеры, специфичные для HCV (ниже), опосредуют как обратную транскрипцию РНК HCV, так и амплификацию кДНК полимеразной цепной реакцией (ПЦР) с применением набора TaqМan One-Step RT-PCR Мaster Мix Kit (Applied Biosystems catalog no. 4309169). Нуклеотидные последовательности праймеров ОT-ПЦП, которые расположены в области NS5B генома HCV, являются следующими:
прямой праймер HCV “RBNS5bfor”
5'GCTGCGGCCTGTCGAGCT (SEQ ID NO: 1):
обратный праймер HCV “RBNS5Brev”
5'CAAGGTCGTCTCCGCATAC (SEQ ID NO 2).
Детекцию продукта ОT-ПЦР выполняют с применением системы детекции последовательности (SDS) Applied Biosystems (ABI) Prism 7500, которая детектирует флуоресценцию, которая излучается, когда зонд, который мечен флуоресцентным репортерным красителем и красителем-гасителем, разрушается во время реакции ПЦР. Повышение степени флуоресценции измеряют во время каждого цикла ПЦР, оно отражает возрастающее количество продукта ОТ-ПЦР. В частности, количественная оценка основана на пороговом цикле, когда диаграмма амплификации пересекает определенный порог флуоресценции. Сравнение пороговых циклов образца с известным стандартом обеспечивает проведение очень чувствительного измерения относительной матричной концентрации в различных образцах (ABI User Bulletin #2 December 11, 1997). Данные анализируют применением версии 1.7 программы ABI SDS. Относительную матричную концентрацию можно превратить в числа копий РНК применением стандартной кривой стандартов РНК HCV с известным числом копий ((ABI User Bulletin #2 December 11, 1997).
Продукт ОТ-ПЦР детектируют с применением следующего меченого зонда:
5'FAМ-CGAAGCTCCAGGACTGCACGATGCT-TAМRA (SEQ ID NO: 3)
FAМ = флуоресцентный репортерный краситель.
TAMRA = краситель-гаситель.
Реакцию ОТ проводят при 48°С в течение 30 минут с последующим проведением ПЦР. Параметрами термического цикла, применяемыми для реакции ПЦР на системе детекции последовательности ABI Prism 7500, являются: один цикл при 95°С, 10 минут, с последующими 40 циклами, каждый из которых включает одну инкубацию при 95°С в течение 15 секунд и вторую инкубацию при 60°С в течение 1 минуты.
Для нормализации данных относительно внутренней контрольной молекулы в клеточной РНК ОТ-ПЦР проводят на глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназе (GAPDH) клеточной информационной РНК. Число копий GAPDH
является очень стабильным в применяемых клеточных линиях. ОТ-ПЦР GAPDH проводят на том же образце РНК, у которого определяют число копий HCV. Праймеры GAPDH и зонд содержатся в наборе для анализа ABI Pre-Developed TaqМan (catalog no. 4310884E). Отношение HCV/GAPDH РНК применяют для вычисления активности соединений, оцениваемых по ингибированию репликации РНК HCV.
Активность соединений в качестве ингибиторов репликации HCV (анализ на клеточной основе) в содержащих репликон клеточных линиях Huh-7
3
Влияние определенного противовирусного соединения на уровни РНК репликона HCV в клетках Huh-11-7 определяют сравнением количества РНК HCV, нормализованной относительно GAPDH (например, отношение HCV/GAPGH), в клетках, подвергнутых воздействию соединения, и в клетках, подвергнутых воздействию наполнителя ДМСО (отрицательный контроль). В частности, клетки засевают при плотности 4×10 клеток/лунка в 96-луночном планшете и инкубируют либо со 1) средой, содержащей 1% ДМСО (контроль с 0% ингибированием), или 2) смесью среда/содержащее 1% ДМСО соединение с фиксированной концентрацией. 96-луночные планшеты, описываемые выше, затем инкубируют при 37°С в течение 4 дней (определение EC50). Процентное ингибирование вычисляют следующим образом:
% ингибирование = 100-100·S/C1,
где S = отношению число копий РНК HCV/число копий РНК GAPDH в образце;
С1 = отношению число копий РНК HCV/число копий РНК GAPDH в контроле с 0% ингибированием (среда/1% ДМСО).
Кривую доза-реакция ингибитора генерируют добавлением соединения при серийных трехразовых разведениях в интервалах трех логарифмов к лункам, начиная с самой высокой концентрации определенного соединения 1,5 мкМ и кончая самой низкой концентрацией 0,23 нМ. Дальнейшие ряды разведения (например, от 500 нМ до 0,08 нМ) проводят, если величина EC50 не располагается должным образом на кривой. ЕС50 определяют программой IDBS Activity Base program “XL Fit” с применением четырехпараметрической нелинейной регрессивной подгонки (model # 205 in version 4.2.1, build 16).
В описанных выше анализах было установлено, что репрезентативные соединения настоящего изобретения обладают активностью, ингибирующей репликацию HCV, и активностью, ингибирующей протеазу NS3 HCV. Например, репрезентативные соединения формулы II, указываемой выше, обнаруживали значительную ингибирующую репликацию HCV активность. Эти соединения были также эффективными при ингибировании протеаз NS3 HCV различных генотипов HCV, включая генотипы 1, 2, 3 и 4. В качестве неограничивающего примера репрезентативные соединения в предпочтительных примерах формулы II обнаруживали ЕС50 в диапазоне от менее чем 0,2 нМ до приблизительно 2 нМ с применением анализов репликона на клеточной основе. Репрезентативные соединения этих предпочтительных примеров ингибировали также протеазы NS3 HCV различных генотипов HCV, таких как генотипы 1а, 1b, 2a, 2b и 4а, и имели IC50 в диапазоне от менее чем 0,2 нМ до приблизительно 50 нМ.
Установлено, что репрезентативные соединения формулы II обладают, по меньшей мере, 10-кратными увеличениями в активности по сравнению с их соответствующими производными кислот в анализе ингибирующей активности протеазы NS3 HCV.
Фармакокинетический анализ репрезентативных соединений показал высокие уровни лекарственных средств в печени. Установлено, что отношение концентрация в печени/концентрация в плазме для этих соединений составляет приблизительно 50-500.
Фармакокинетический анализ репрезентативных соединений показал высокие уровни лекарственных средств в печени и низкие уровни лекарственных средств в плазме и сердце. В случае одной пероральной дозы 20 мг на кг массы крысы соединения формул II' и II” обнаруживали отношение концентрация лекарственного средства в печени/концентрация лекарственного средства в плазме от ~100 до ~300 через 3 часа после введения дозы. Кроме того, концентрация соединения формулы II' в печени через 24 часа после введения дозы была в 600 раз больше, чем величина ЕС50 ее репликона. При введении 20 мг на кг массы крысы соединения формулы II' также обнаруживали меньшую концентрацию лекарственного средства в сердце, чем в плазме, с Сmax-отношением концентрация лекарственного средства в сердце/концентрация лекарственного средства в плазме 0,15.
Соединения изобретения не обнаруживают значительные ингибирования ферментов цитохром Р450.
Фармакокинетический анализ репрезентативных соединений показал высокие уровни лекарственных средств в печени. Установлено, что для этих соединений отношения концентрация в печени/концентрация в плазме составляет приблизительно 50-500.
Хотя изобретение описано по отношению к различным предпочтительным вариантам осуществления, не предполагается, что оно ограничивается ими, а специалистам в данной области должно быть понятно, что возможны варианты и модификации, которые находятся в пределах сущности изобретения и объема прилагаемой формулы изобретения.