СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА ГИНКГО БИЛОБА, ЭКСТРАКТ, ПОЛУЧЕННЫЙ ЭТИМ СПОСОБОМ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
METHOD OF PRODUCING GINKGO BILOBA EXTRACT, EXTRACT PRODUCED THEREBY, AND ITS APPLICATION

Данное изобретение относится к способу получения экстракта гинкго билоба, имеющего пониженное содержание 4'-O-метилпиридоксина и/или бифлавонов по сравнению с первоначальным экстрактом, характеризующемуся следующими стадиями:
(а) получение раствора экстракта гинкго в подходящем растворителе,
(б) нанесение раствора на адсорбирующую смолу и элюирование очищенного экстракта из адсорбирующей смолы с помощью подходящего растворителя, причем бифлавоны, которые должны быть удалены, остаются на адсорбирующей смоле и/или
(в) нанесение раствора на кислый ионообменник и элюирование очищенного экстракта из ионообменника с применением подходящего растворителя, при этом 4'-О-метилпиридоксин, который должен быть удален, остается на ионообменнике и, возможно,
(г) концентрирование и сушка раствора экстракта с целью получения сухого экстракта, при этом стадии (б) и (в) могут также проводиться в обратном порядке.
Данное изобретение относится также к экстрактам гинкго билоба, имеющим пониженное содержание 4'-O-метилпиридоксина и/или бифлавонов по сравнению с первоначальным экстрактом, при этом экстракты, полученные из гинкго билоба, приготовлены способом по данному изобретению, а также к их применению.
Уже в течение десятилетий экстракты из листьев гинкго билоба применяются в качестве лекарственного препарата. В настоящее время они используются для лечения различных видов деменции и ее симптомов, а также нарушений церебрального и периферического кровообращения. Ингредиентами, с которыми связана эффективность, являются лактоны терпенов (гинкголиды А, В, С и билобалид), а также гликозиды флавонов (кверцетин, кемпферол и изорамнетин). Листья гинкго билоба содержат также компоненты, которые не влияют на желательную эффективность, но которые могут отвечать за риски и побочное действие. Кроме неполярных ингредиентов растений, таких как гинкголевые кислоты, этими компонентами являются 4'-O-метилпиридоксин и бифлавоны. В экстракте гинкго, который является эффективным и в то же самое время безопасным, как это только возможно, приводящим к наименьшим побочным эффектам, эти соединения не должны, таким образом, содержаться в экстракте.
4'-O-метилпиридоксин может вызвать появление симптомов отравления, таких как конвульсивные судороги и потеря сознания. Это соединение называется также гинкготоксином. Бифлавоны, содержащиеся в гинкго, могут быть иммунотоксичными и могут вызывать контактную аллергию. Эти бифлавоны, содержащиеся в гинкго, преимущественно представляют собой аментофлавон, билобетин, гинкгетин, изогинкгетин и скьядопитизин (sciadopytysin).
4'-O-метилпиридоксин
Бифлавоны
1
2
3
Аментофлавон: R=R=R=Н
1
3
2
3
Билобетин: R=R=Н, R=ОСН
3
1
2
3
Гинкгетин: R=Н, R=R=ОСН
1
2
3
3
Изогинкгетин: R=Н, R=R=ОСН
1
2
3
3
Скьядопитизин: R=R=R=ОСН
Способы уменьшения содержания 4'-O-метилпиридоксина и одновременно бифлавонов, а также получаемые экстракты уже описаны в ЕР 1037646 В1. Согласно этому источнику 4'-O-метилпиридоксин удерживается с помощью кислого катионообменника, а бифлавоны адсорбируются на активированном угле. Предпочтительно эти стадии осуществляются после обработки раствора соединением свинца или нерастворимым полиамидом (стр.3).
В ЕР 1037646 В1 уменьшение содержания бифлавонов и 4'-O-метилпиридоксина осуществляется на стадии (стадия f), когда соли свинца и соли аммония содержатся в таком довольно большом количестве, что нужно применять повышенное количество ионообменника.
Однако этот способ ограничен сложностью последовательных нескольких стадий.
Кроме того, уменьшение содержания бифлавонов и 4'-O-метилпиридоксина описано и заявляется только как уменьшение комбинации этих веществ. Однако в зависимости от пределов, которые возможно будут установлены в будущем, и с учетом требования наименьшей модификации состава экстракта возможно будет желательным удаление только бифлавонов или только 4'-O-метилпиридоксина.
Более того, уменьшение содержания описано для одного единственного ионообменника (Merck I) в случае 4'-O-метилпиридоксина и для одного единственного адсорбента (активного углерода) в случае бифлавонов. Для этой цели активный углерод имеет недостаток, заключающийся в том, что он обычно не связывает соединения очень селективно и не может быть регенерирован.
Таким образом, цель данного изобретения состоит в создании способа получения экстрактов гинкго, при котором содержание 4'-O-метилпиридоксина и/или бифлавонов может быть снижено в очень большой степени по сравнению с первоначальным экстрактом, и способ может проводиться простым и экономным методом. Еще одна цель данного изобретения состоит в создании экстрактов гинкго, которые получают этим способом.
Эта цель может быть достигнута путем выделения бифлавонов при помощи адсорбирующих смол и/или выделения 4'-O-метилпиридоксина при помощи кислых ионообменников.
В способе согласно данному изобретению осуществляют следующие стадии:
(а) получение раствора экстракта гинкго в подходящем растворителе,
(б) нанесение раствора на адсорбирующую смолу и элюирование очищенного экстракта из адсорбирующей смолы с помощью подходящего растворителя, причем бифлавоны, которые должны быть удалены, остаются на адсорбирующей смоле и/или
(в) нанесение раствора на кислый ионообменник и элюирование очищенного экстракта из ионообменника с применением подходящего растворителя, при этом 4'-О-метилпиридоксин, который должен быть удален, остается на ионообменнике и может быть вымыт из ионообменника при помощи кислоты, такой как водная соляная кислота, чтобы ионообменник мог быть снова применен и, возможно,
(г) концентрирование и сушка раствора экстракта с целью получения сухого экстракта, при этом стадии (б) и (в) могут также проводиться в обратном порядке.
Особенно подходящими растворителями на стадиях (а), (б) и (в) независимо являются водные кетоны, содержащие 3-6 атомов углерода (такие как ацетон, 2-бутанон) и алканолы, содержащие 1-3 атома углерода (метанол, этанол, н-пропанол и изопропанол), предпочтительно водный ацетон и этанол, при этом предпочтительной является концентрация, равная 30-60%. Предпочтительными адсорбирующими смолами на стадии (б) являются смолы на основе необязательно замещенных стиролов и дивинилбензолов, такие как Diaion HP-20, HP-21 или Sepabeads SP-207 и SP-850. Особенно предпочтительные адсорбирующие смолы представляют собой сополимеры на основе стирола и дивинилбензола и сополимеры на основе бромированного стирола и дивинилбензола. Предпочтительные ионообменники на стадии (в) представляют собой сильно кислые ионообменники, такие как Merck I или Amberlite IR-120.
Первоначальный экстракт, используемый для определения первоначальных величин, получают из первоначального раствора (раствор экстракта гинкго со стадии (а)) путем сушки с целью получения сухого экстракта.
На стадии (б) способа по данному изобретению количество используемой смолы, а также полярность или состав используемого растворителя должны регулироваться таким образом, чтобы из смолы вначале как можно больше вымывались желательные компоненты экстракта, а бифлавоны оставались на смоле. При этом большее количество воды в растворителе приводит к большему удалению бифлавонов, а именно бифлавоны остаются на смоле. В зависимости от растворимости экстракта содержание воды в растворителе находится в указанных выше пределах от 30 до 70% по весу. Оно может быть таким же, как на стадии (а), так и отличным от него.
В качестве первоначальных экстрактов (в виде растворов экстракта гинкго на стадии (а) или полученных на этой стадии), которые должны быть очищены от 4'-O-метилпиридоксина и/или бифлавонов при помощи адсорбирующей смолы, могут быть следующие:
- одноразовые экстракты, полученные способами, известными per se, например согласно European Pharmacopoeia, путем экстракции высушенных листьев гинкго билоба с применением органических растворителей или их смесей с водой, например смесей этанол/вода или смесей ацетон/вода и
- экстракты, состав которых отличается от одноразовых экстрактов в большей или меньшей степени вследствие наличия одной или нескольких дополнительных стадий способа (так называемые особые экстракты).
Последние могут быть получены, например, путем распределения жидкость/жидкость согласно патенту ЕР 360556 В1 или на нескольких стадиях согласно патенту ЕР 431535 В1 или путем проведения способа (всего) по ЕР 4315535 В1 или по патенту США 6117431.
Растворы экстракта гинкго согласно стадии (а) могут быть получены или непосредственно путем приготовления экстракта, или путем растворения сухого экстракта или другого экстракта.
Дальнейшим объектом данного изобретения являются экстракты, в частности сухие экстракты, которые получаются способом по данному изобретению и которые характеризуются пониженным содержанием 4'-O-метилпиридоксина и/или бифлавонов по сравнению с используемыми первоначальными экстрактами. Содержание 4'-O-метилпиридоксина составляет максимум 20 м.д. в случае экстрактов по изобретению, предпочтительно 10 м.д. максимум и особенно 5 м.д. максимум. Количество бифлавонов составляет максимум 25% от первоначальной величины в первоначальном экстракте, предпочтительно максимум 11% и особенно максимум 6%.
Согласно Европейской Фармакопее сухие экстракты обычно содержат сухой остаток, равный по меньшей мере 95% по весу.
Экстракты согласно данному изобретению могут вводиться в виде порошков, гранул, таблеток, драже (таблеток с покрытием) или капсул, предпочтительно перорально.
Для того, чтобы приготовить таблетки, экстракт смешивают с подходящими фармацевтически приемлемыми адъювантами, такими как лактоза, целлюлоза, двуокись кремния, кроскармелоза и стеарат магния, и прессуют в таблетки, которые могут быть снабжены подходящим покрытием, например, на основе гидроксиметилцеллюлозы, полиэтиленгликоля, пигментов (таких как двуокись титана, окись железа) и талька. Экстракт по данному изобретению помещают в капсулы, возможно с добавлением адъювантов, таких как стабилизаторы, наполнители и т.п. Доза экстракта, принимаемая в день, составляет 10-2000 мг, предпочтительно 50-1000 мг и в особенности предпочтительно 100-500 мг.
Еще одним предметом данного изобретения являются лекарственные препараты, пищевые продукты и другие препараты, содержащие эти экстракты, возможно в сочетании с другими веществами, такими как активные ингредиенты и/или фармацевтически приемлемые адъюванты.
Термин "пищевой продукт", используемый в данном описании, относится к диетическим пищевым продуктам, диетическим добавкам, а также к медицинским пищевым продуктам и диетическим добавкам.
Примеры
Первоначальный раствор для сравнительного примера 1 и примеров 1-3 согласно данному изобретению
200 г высушенных и измельченных листьев гинкго билоба подвергали экстракции дважды, используя каждый раз 7-кратное по отношению к их весу (вес/вес) количество смеси этанол/вода 60/40 (вес/вес) при температуре около 50°С, полученный экстракт отфильтровывали.
Сравнительный пример 1 (получение одноразового экстракта в качестве первоначального экстракта)
25% первоначального раствора, полученного выше, концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 14,0 г (28,0% в расчете на высушенные листья).
Пример 1 по изобретению (удаление бифлавонов)
25% первоначального раствора, полученного выше, загружали в колонку со 100 мл адсорбирующей смолы Sepabeads SP-850 и элюировали 300 мл 40 вес.% этанола. Элюат концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 11,5 г (23,0% в расчете на высушенные листья).
Пример 2 по изобретению (удаление 4'-O-метилпиридоксина)
25% первоначального раствора, полученного выше, помещали в колонку с 20 мл сильно кислого ионообменника Amberlite IR-120 и элюировали 60 мл 60 вес.% этанола. Элюат концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 13,0 г (26,0% в расчете на высушенные листья).
Пример 3 согласно данному изобретению (удаление бифлавонов и 4'-O-метилпиридоксина)
25% первоначального раствора, полученного выше, загружали в колонку со 100 мл адсорбирующей смолы Sepabeads SP-850 и элюировали 300 мл 40 вес.% этанола. Элюат помещали во вторую колонку с 20 мл сильно кислого ионообменника Amberlite IR-120 и элюировали 100 мл 40%-ного (вес) этанола. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 10,1 г (20,2% в расчете на высушенные листья).
Первоначальный раствор для сравнительного примера 2 и примеров 4-6 согласно данному изобретению
200 г высушенных и измельченных листьев гинкго билоба подвергали экстракции дважды, используя каждый раз 7-кратное по отношению к их весу (вес/вес) количество смеси этанол/вода 60/40 (вес/вес) при температуре около 50°С, полученный экстракт отфильтровывали. Раствор экстракта сильно концентрировали (45 г), разбавляли водой до примерно 400 г и хранили в течение примерно 19 ч при температуре 10°С. Образовавшийся осадок удаляли при фильтровании.
Сравнительный пример 2 (получение особого экстракта в качестве первоначального экстракта)
25% первоначального раствора, полученного выше, концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 9,4 г (18,8% в расчете на высушенные листья).
Пример 4 по изобретению (удаление бифлавонов)
25% первоначального раствора, полученного выше, помещали в колонку с 50 мл Sepabeads SO-207 (адсорбирующей смолы) и элюировали 150 мл 40%-ного (по весу) этанола. Элюат концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 9,4 г (18,8% в расчете на высушенные листья).
Пример 5 согласно изобретению (удаление 4'-O-метилпиридоксина)
25% первоначального раствора, полученного выше, помещали в колонку с 20 мл сильно кислого ионообменника Amberlite IR-120 и элюировали 100 мл 40%-ного (по весу) этанола. Элюат концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 8,7 г (17,4% в расчете на высушенные листья).
Пример 6 по изобретению (удаление бифлавонов и 4'-O-метилпиридоксина)
25% первоначального раствора, полученного выше, помещали в первую колонку с 50 мл Sepabeads SP-207 (адсорбирующей смолы) и элюировали 150 мл 40%-ного (по весу) этанола. Элюат помещали во вторую колонку с 20 мл сильно кислого ионообменника Amberlite IR-120 и элюировали 100 мл 40%-ного (по весу) этанола. Полученный раствор концентрировали при пониженном давлении и сушили при замораживании: 8,3 г (16,6% в расчете на высушенные листья).
Содержание бифлавонов и 4'-O-метилпиридоксина в полученных экстрактах показано в следующей таблице. Можно видеть, что количество бифлавонов по примерам 1, 3, 4 и 6 по изобретению значительно ниже, чем по соответствующим сравнительным примерам 1 и 2 соответственно. Аналогично, содержание 4'-O-метилпиридоксина по примерам 2, 3, 5 и 6 согласно изобретению значительно ниже по сравнению со сравнительными примерами 1 и 2 соответственно.
ТаблицаСостав экстрактов согласно приведенным выше примерам
Экстракт по:
Сравнительному примеру
1
Примеру по изобретению
1
2
3
4'-O-метилпиридоксин (м.д.)
23
40
2
6
Аментофлавон (м.д.)
72
112
92
107
Билобетин (м.д.)
780
530
1031
593
Гинкгетин (м.д.)
2303
91
2792
143
Изогинкгетин (м.д.)
2877
139
3418
208
Скьядопитизин (м.д.)
4524
2
5400
6
Общее количество бифлавонов (м.д.)
10556
874
12733
1057
Таблица (продолжение)
Экстракт по:
Сравнительному примеру
2
Примеру по изобретению
4
5
6
4'-O-метилпиридоксин (м.д.)
29
29
<1
<1
Аментофлавон (м.д.)
7
<0,1
6
Примерно 2
Билобетин (м.д.)
20
Примерно 0,1
16
Примерно 1
Гинкгетин (м.д.)
17
Примерно 0,2
14
Примерно 0,7
Изогинкгетин (м.д.)
23
Примерно 0,3
16
Примерно 0,6
Скьядопитизин (м.д.)
22
Примерно 0,4
16
Примерно 0,6
Общее количество бифлавонов (м.д.)
89
Примерно 1
68
Примерно 5