АНТИТЕЛА ПРОТИВ СИГНАЛ-РЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА АЛЬФА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ANTIBODIES AGAINST SIGNAL-REGULATORY ALPHA PROTEIN AND THEIR APPLICATION METHODS

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001]
Эта заявка заявляет приоритет предварительной заявки на патент США № 62/397752, поданной 21 сентября 2016 г., и предварительной заявки на патент США № 62/515480, поданной 5 июня 2017, каждая из которых в полном объеме включена в данный документ посредством ссылки.
ПОДАЧА ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ В ТЕКСТОВОМ ФАЙЛЕ ASCII
[0002]
Содержание следующего поданного текстового файла ASCII в полном объеме включено в данный документ посредством ссылки: машиночитаемая форма (МЧФ) Перечня последовательностей (название файла: 757972000140SEQLIST.txt, дата записи: 20 сентября 2017 г., размер: 411 Кбайт).
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0003]
Настоящее изобретение относится к выделенным антителам, которые связывают внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба, а также к полинуклеотидам, векторам, клеткам–хозяевам и способам, имеющим к ним отношение.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0004]
(смотрите, например,
Nat. Rev. Immunol,
Сигнал–регуляторный белок альфа (SIRP–α) является частью семейства рецепторов клеточной поверхности, которые играют важную роль в регуляции иммунной системы  Barclay, A.N. and Brown, M.H. (2006)  6:457–64). SIRP–α экспрессируется на поверхности различных клеток, включая лейкоциты, такие как дендритные клетки, эозинофилы, нейтрофилы и макрофаги. SIRP–α содержит внеклеточный домен, который взаимодействует с внешними стимуляторами, такими как лиганды, и внутриклеточный домен, который опосредует ряд внутриклеточных сигналов.
[0005]
(например,
(смотрите, например,
et al.
Science
(смотрите, например,
et al.
Cell
et al.
Proc. Natl. Acad. Sci.
Одной из основных ролей SIRP–α является регуляция иммунного ответа посредством взаимодействия с CD47. CD47 экспрессируется на поверхности ряда типов клеток. Когда домен IgSF CD47 связывает внеклеточный домен (например, домен D1) SIRP–α, экспрессируемого на иммунной клетке  макрофаге), это приводит к передаче SIRP–α–опосредованного сигнала в иммунную клетку, что предотвращает фагоцитоз CD47–экспрессирующей клетки. Таким образом, CD47 служит для передачи так называемого «не ешь меня»–сигнала иммунной системе, что предотвращает фагоцитоз здоровых клеток WO2015/138600 и Weiskopf, K.  (2013)  341:88–91). Однако также было показано, что CD47 экспрессируется на высоких уровнях при ряде раков, и считается, что его взаимодействие с SIRP–α в этом контексте позволяет опухолям имитировать здоровый «не ешь меня»–сигнал, чтобы избежать иммунологического надзора и фагоцитоза макрофагами Majeti, R.  (2009)  138:286–99; Zhao, X.W.  (2011) 108:18342–7). Следовательно, существует высокая потребность в антителах, которые блокируют это взаимодействие.
[0006]
SIRPΑ
et al.
Nat. Immunol.
et al.
PNAS.
Известно, что SIRP–α является высокополиморфным белком в организме людей, обезьян и мышей. Например, была выявлена 20–аминокислотная разница между белками SIRP–α в линиях мышей NOD и C57BL/6, и эти полиморфизмы приводят к функциональным последствиям, связанным со связыванием CD47 и прививанием человеческих гемопоэтических стволовых клеток в этих линиях мышей. У людей было идентифицировано по меньшей мере 10 разных аллелей гена  (Takenaka, K.  (2007)  8:1313–23, Zhao, X. (2011),  108:18342–47; van der Heijden, J. (2014). Genetic variation in human Fc gamma receptors: Functional consequences of polymorphisms and copy number variation (Doctoral dissertation) (докторская диссертация по теме «Генетическая вариация в человеческих Fc–гамма–рецепторах: функциональные последовательности полиморфизмов и вариации числа копий»)).
[0007]
например,
Из–за важности взаимодействия SIRP–α–CD47 для нормальной иммунной функции и онкогенеза, а также полиморфной природы SIRP–α и существования других рецепторов семейства SIRP, выявление антител, имеющих разную специфичность связывания и внутри– и/или межвидовую перекрестную реактивность, представляет большой интерес для разработки клинических кандидатных средств, являющихся эффективными для людей, и изучения характеристик этих кандидатных средств в различных животных моделях. Таким образом, существует необходимость как в поисковых инструментах, так и в потенциальных клинических кандидатах, которые модулируют функцию SIRP–α,  его взаимодействие связывания с CD47. Также существует необходимость в способах выделения антител с разной специфичностью связывания SIRP–α и действием на связывание CD47–SIRP–α, для понимания и эффективного нацеливания на это взаимодействие.
[0008]
Все цитируемые в данном документе ссылки, включая патентные заявки, патентные публикации, непатентную литературу и номера доступа в UniProtKB/Swiss–Prot, в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и отдельно указана как включенная посредством ссылки.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009]
помимо прочего,
Чтобы удовлетворить эти и другие потребности, в данном документе предложены,  выделенные антитела, которые связывают внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHF
PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELS VRAKPS (SEQ ID NO:5). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFP RVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRA KPS (SEQ ID NO:6). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHF PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELS VRAKPS (SEQ ID NO:5), и связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFP
дисс.
дисс.
RVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти или десяти разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации каждый из трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти или десяти разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α содержит внеклеточный домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 6 и 76–83. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации обезьяний полипептид SIRP–α представляет собой полипептид SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) по меньшей мере двух разных обезьяньих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, внеклеточный домен полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных мышиных вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен одного или более мышиных полипептидов SIRP–α, и при этом каждый из одного или более мышиных полипептидов SIRP–α содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7–10. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело не связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело не связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–β, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13, внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–β, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–γ, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах реализации антитело модулирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации клетка представляет собой лейкоцит, выбранный из группы, состоящей из макрофага, дендритной клетки, нейтрофила, эозинофила и миелоидной супрессорной клетки (МСК). В некоторых вариантах реализации антитело ингибирует сигнализацию SIRP–α в макрофаге, экспрессирующем человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело усиливает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации антитело не связывает комплекс, содержащий вариант D1 SIRP–α, связанный с доменом IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, по меньшей мере в 10 раз большей, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. В некоторых вариантах реализации антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации антитело связывает комплекс, содержащий вариант D1 SIRP–α, связанный с доменом IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, по меньшей мере в 10 раз большей, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывает по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела S130. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α, обезьяньего полипептида SIRP–α и по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела, выбранного из группы, состоящей из S8, S13, S14 и S121. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывается или связывается со сниженной аффинностью по меньшей мере с одним из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела S137. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывает мышиный полипептид SIRP–α; и при этом антитело не связывает по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела, выбранного из группы, состоящей из S128. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, обезьяньего полипептида SIRP–α и по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело не связывает мышиный полипептид SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела, выбранного из группы, состоящей из S9, S11, S119, S120, S122 и S135. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α и внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных обезьяньих вариантных полипептидов SIRP–α, и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей CDR; последовательность вариабельного домена тяжелой цепи; и/или последовательность вариабельного домена легкой цепи из антитела, выбранного из группы, состоящей из S115, S116, S117 и S118. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
[0010]
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 115  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 115  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 116  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 116  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 117  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 117  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 118  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 118  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 119  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 119  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 120  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 120  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 121  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 121  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 122  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 122  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 123  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 123  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 126  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 126  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 128  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 128 (например, приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 130  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 130  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 135  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 135  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 137  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 137 (например, приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 138  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 138  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 1  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 1  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 2  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 2  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 8  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 8  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 9  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 9  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 11  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 11  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 12  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 12  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 13  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 13  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 14  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 14  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VH–домену антитела 21, 25, 27 или 66  приведенному в таблице 2), и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична VL–домену антитела 21, 25, 27 или 66  приведенному в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 116, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 93. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:117, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:94. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 118, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:95. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 119, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:335, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:97. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 121, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:98. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 122, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 99. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 123, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 124, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:101. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 125, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 102. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 126, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 103. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 127, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 128, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 105. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 129, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 130, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 107. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 108, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:85. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 109, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:86. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 110, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:87. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 111, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:88. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 112, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:89. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 113, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:90. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 114, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 91. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:115, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO:92. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 135, 137, 139 или 141, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, которая на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична SEQ ID NO: 136, 138, 140 или 142.
[0011]
1
2
3
1
2
3
4
5
4
5
6
6
7
8
9
7
8
9
10
11
12
10
11
12
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227 или 230, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:228 или 231, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:229; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:219 или 235, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236 или 238, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:239, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:240, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:241. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность GFSFSXXAM, где X представляет собой N или I; X представляет собой F или Y; и X представляет собой T или S (SEQ ID NO: 185); (b) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGXXDTYYADSVKG, где X представляет собой S или A, а X представляет собой G или D (SEQ ID NO: 186); (c) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVXWSGDFFDY, где X представляет собой S или G (SEQ ID NO: 187); (d) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVXXDXA, где X представляет собой K или R; X представляет собой N или S; и X представляет собой L или I (SEQ ID NO: 188); (e) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AAXXRXT, где Xпредставляет собой R или S; X представляет собой I или S; и X представляет собой E или D (SEQ ID NO: 189); и (f) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDWPPFT (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 119  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из последовательностей вариабельного домена SEQ ID NO:335 и 97  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 335 и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO:97). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 135  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из последовательностей вариабельного домена SEQ ID NO:127 и 104  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 127 и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO: 104). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из последовательностей вариабельного домена SEQ ID NO:97, 104, 120, 335 и 127  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO:335 и 127 и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO:97 и 104). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 143–148  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 143–145, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 146–148). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:148–153  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 149–151, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 152, 153 и 148). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 136  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 155–160  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO:155–157, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 158–160). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 21  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:161–166  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO:161–163, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO:164–166). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 25  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 161, 163, 168 и 170–172  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 161, 168 и 163, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 170–172). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 27  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 163, 173, 174 и 176–178  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO:163, 173 и 174, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO:176–178). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 66  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 162, 163, 179 и 182–184  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 162, 163 и 179, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 182–184). В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, 202, 204 или 205, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144, 203 или 206, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 145 или 207; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146 или 208, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147 или 209, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 или 210. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:149, 211, 213 или 214, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:150, 212 или 215, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:151 или 216; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152 или 217, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:153 или 218, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 155, 219, 221 или 222, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156 , 220, или 223, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:157 или 224; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 158 или 225, HVR–12, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159 или 226, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:161, 191 или 194, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162, 192 или 195, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163 или 193; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:161, 191 или 194, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:168, 196 или 197, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163 или 193; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:171, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:172. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 173, 198 или 200, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174, 199 или 201, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163 или 193; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178. В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:170, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:171, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 3  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:242; и/или (b) VL–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:243. В некоторых вариантах реализации антитело содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из антитела 45  приведенных в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) VH–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:244; и/или (b) VL–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:245. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164, 170, 176 или 182; HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183; и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183, HVR–L3, и содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183; и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166. 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182; HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165, 171, 177 или 183; и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации одна, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR определены по Kabat. В некоторых вариантах реализации одна, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR определены по Chothia. В некоторых вариантах реализации одна, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR определены по IMGT. В некоторых вариантах реализации антитело содержит последовательности HVR, определенные по двум или более из систем Kabat, Chothia и IMGT  антитело содержит одну или более последовательностей HVR, определенных согласно одному определению границ, и одну или более последовательностей HVR, определенных согласно другому определению границ).
[0012]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело содержит: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность NFAMT (SEQ ID NO: 175), NFAVT (SEQ ID NO:204) или NFALT (SEQ ID NO:305), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGSGDTYYADSVKG (SEQ ID NO: 144), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVSWSGDEFDY (SEQ ID NO: 145); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVKNDLA (SEQ ID NO: 146), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AAR1RET (SEQ ID NO: 147), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQY YDWPPFT (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120, 335, 246, 258 или 327; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:97 или 312. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:258, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:335, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:258, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:335, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3I2; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312.
[0013]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело содержит: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность IYAMS (SEQ ID NO:269), IYAVS (SEQ ID NO:213) или IYALS (SEQ ID NO:306), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGADDTYYADSVKG (SEQ ID NO: 150), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVGWSGDFFDY (SEQ ID NO:151); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVRSDIA (SEQ ID NO: 152), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AASSRDT (SEQ ID NO: 153), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDWPPFT (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:341, 247, 259 или 328; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 104 или 248. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:259, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:328, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:259, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:328, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248.
[0014]
1
2
3
1
2
3
1
1
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
1
2
1
2
3
4
1
2
3
4
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело содержит: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий: (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность XXDXN, где X представляет собой S или T; X представляет собой Y или S; а X представляет собой M, L или V (SEQ ID NO:307); (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность LISGSGETXYYADSVKG, где X представляет собой I или T (SEQ ID NO:308); и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность EXXXYRFFDX, где Х представляет собой N или D; X представляет собой N или D; X представляет собой R или M; а X представляет собой D или Y (SEQ ID NO:309); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL) содержащий: (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RAXQSVYXYLA, где X представляет собой S или D; а X представляет собой T или S (SEQ ID NO:310); (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность XAXXRAX, где X представляет собой G, A или D; X представляет собой S или R; X представляет собой S, N или T; а X представляет собой T или A (SEQ ID NO:311); и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDRPPLT (SEQ ID NO: 160). В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SYDMN (SEQ ID NO:270), SYDVN (SEQ ID NO:221) или SYDLN (SEQ ID NO:313), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность L1SGSGE1IYY ADSVKG (SEQ ID NO: 156), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ENNRYRFFDD (SEQ ID NO: 157); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQSVYTYLA (SEQ ID NO: 158), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность GASSRAT (SEQ ID NO: 159), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDRPPLT (SEQ ID NO: 160). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 249, 133, 260 или 329; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 134, 250 или 251. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134: VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 251.
[0015]
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
1
2
1
2
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
1
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело содержит: вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность XXAXS, где X представляет собой S или T; X представляет собой N, Y, H или D; а X представляет собой M, L или V (SEQ ID NO:297); последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISXXXXXXYYXXSXKG, где X представляет собой A или S; X представляет собой G, S или отсутствует; X представляет собой S, D или G; X представляет собой G или S; X представляет собой D, S или G; X представляет собой T или A; X представляет собой P, G, V, I, A или S; X представляет собой A, D или G; а X представляет собой V или M (SEQ ID NO:298); и последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193); и/или вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий: последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGXX XSXYYX, где X представляет собой D, G, S, I или отсутствует; X представляет собой S, W, G, Y, D или отсутствует; X представляет собой S, Y, T или D; X представляет собой Η, T, S, или Y; а X представляет собой G или A (SEQ ID NO:299); последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDXXRPX, где X представляет собой D или N; X представляет собой E, K или Q; а X представляет собой S или P (SEQ ID NO:300); и последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность XXYDXXXYXNX, где X представляет собой G или A; X представляет собой G или A; X представляет собой G, Y, Q, S или A; X представляет собой S, R или T; X представляет собой T или S; X представляет собой A, I, V, L или T; а X представляет собой T, A, D или P (SEQ ID NO:301). В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело содержит: вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий: последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SXAXS, где X представляет собой N или Y; и где X представляет собой M, L, или V (SEQ ID NO:302); последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISXGXXDTYYXXSVKG, где X представляет собой A или S; X представляет собой G или отсутствует; X представляет собой S или G; X представляет собой P, G, или V; а X представляет собой A или D (SEQ ID NO:303); и последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193); и/или вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий: последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGXYSSYYYA, где X представляет собой S или A (SEQ ID NO:304); последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336); и последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSS YTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SNAMS (SEQ ID NO: 194), SNAVS (SEQ ID NO:271) или SNALS (SEQ ID NO:318), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISAGGSDTY YPASVKG (SEQ ID NO: 195), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 135, 263, 264 или 330. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SNAMS (SEQ ID NO:194), SNAVS (SEQ ID NO:271) или SNALS (SEQ ID NO:318), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISSGSDTYYGDSVKG (SEQ ID NO: 197), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 137, 265, 266 или 331. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SYAMS (SEQ ID NO: 200), SYAVS (SEQ ID NO:272) или SYALS (SEQ ID NO:319), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISSGGDTY YVDSVKG (SEQ ID NO:201), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:139, 267, 268 или 332. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит последовательность FW1–HVR–L1–FW2–HVR– L2–FW3–HVR–L3–FW4 (от N–конца к C–концу), где FW1 содержит аминокислотную последовательность SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (SEQ ID NO:314), FW2 содержит аминокислотную последовательность WYQQKPGQAPVTLTY (SEQ ID NO:315), FW3 содержит аминокислотную последовательность NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (SEQ ID NO:316), а FW4 содержит аминокислотную последовательность FGGGTKLTVL (SEQ ID NO:317). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGSYSSYYYA (SEQ ID NO: 170), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSSYTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 252. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGAYSSYYYA (SEQ ID NO:261), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSSYTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:262. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:268, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:268, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262.
[0016]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70 и K96 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70 и K96 в соответствии с SEQ ID NO: 296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74 и R95 в соответствии с SEQ ID NO: 296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74 и R95 в соответствии с SEQ ID NO:296.
[0017]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из I7, P9, D10, K11, S12, A42, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в K11, A42, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в I7, P9, D10, K11, S12, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO: 296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из L14, T26, T28, T88, Y90, S106, S113 и A116 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в L14, T88, Y90, S106, S113 и A116 и человеческого SIRP–α v1 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в L14, T26 и T28 в соответствии с SEQ ID NO:296.
[0018]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из E47, L48, P58, R59, T82 и A84 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в E47, L48, P58, R59, T82 и A84 в соответствии с SEQ ID NO: 296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из группы, состоящей из A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57 и P83 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57 и P83 человеческого SIRP–α v1 в соответствии с SEQ ID NO: 296.
[0019]
Д
Д
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2 и домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен полипептида SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен мышиного полипептида SIRP–α.
[0020]
Д
Д
Д
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α с константой диссоциации (K) менее 100 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ и/или связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v1 и домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен полипептида SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен мышиного полипептида SIRP–α.
[0021]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 119, 120, 121, 122, 21, 25, 27, 66 и 135. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:98; (c) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107; (d) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:99; (e) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136; (f) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138; (g) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140; (h) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142; или (i) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104.
[0022]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 136 и 137. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; или (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.
[0023]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 3, 213, 173 и 209. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243; (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276; (c) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279; или (d) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281.
[0024]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 115, 116, 117, 118 и 132. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:116, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94; (c) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95; (d) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96; или (e) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283.
[0025]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела, выбранного из группы, состоящей из антител 218, 123, 149, 161, 162 и 194. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим: (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285; (b) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100; (c) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287; (d) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289; (e) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291; или (f) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293.
[0026]
В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL) антитела 45. В других аспектах в данном документе предложено выделенное антитело, которое связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α (например, домен D1), при этом антитело конкурирует за связывание внеклеточного домена человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, содержащим вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244, и вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245.
[0027]
in vivo
В некоторых вариантах реализации любого из вышеприведенных вариантов реализации антитело усиливает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело усиливает активацию дендритной клетки, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело ингибирует  рост опухоли, которая экспрессирует CD47. В некоторых вариантах реализации антитело не предотвращает взаимодействия между CD47–экспрессирующей клеткой и Т–клеткой.
[0028]
В некоторых вариантах реализации любого из вышеприведенных вариантов реализации антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой scFv–Fc, однодоменное антитело, антитело из одной тяжелой цепи или антитело из одной легкой цепи. В некоторых вариантах реализации антитело содержит константную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 325, 326 или 426. В некоторых вариантах реализации антитело содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 320–324. В некоторых вариантах реализации антитело содержит Fc–область. В некоторых вариантах реализации Fc–область представляет собой человеческую Fc–область, выбранную из группы, состоящей из Fc–области IgG1, Fc–области IgG2 и Fc–области IgG4. В некоторых вариантах реализации Fc–область содержит Fc–область человеческого IgG1, содержащую одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из L234A, L235A, L235E, G237A и N297A в соответствии с нумерацией EU. В некоторых вариантах реализации Fc–область содержит Fc–область человеческого IgG2, содержащую одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из A330S, P331S и N297A в соответствии с нумерацией EU. В некоторых вариантах реализации Fc–область содержит Fc–область человеческого IgG4, содержащую одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из S228P, E233P, F234V, L235A, L235E, delG236 и N297A в соответствии с нумерацией EU. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой фрагмент антитела, выбранный из группы, состоящей из фрагментов Fab, F(ab')2, Fab'–SH, Fv и scFv. В некоторых вариантах реализации антитело конъюгировано с цитотоксическим агентом или меткой.
[0029]
y
В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации антитело содержит первый антигенсвязывающий домен, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, и второй антигенсвязывающий домен, который связывает антиген, экспрессируемый раковой клеткой. В некоторых вариантах реализации антиген, экспрессируемый раковой клеткой, выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop–2, 5T4, EphA4, BCMA, муцина 1, муцина 16, PD–L1, PTK7, STEAP1, рецептора эндотелина B, мезотелина, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, нектина 4, NaPi2b, LIV–1A, гуанилил циклазы C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, интегрина αVβ3, интегрина α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, тенасцина, Le, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, муцина, CAIX, EPHA3, фолатного рецептора α, GD2, GD3 и ГКГС/пептидного комплекса, содержащего пептид из NY–ESO–1/LAGE, SSX–2, белка семейства MAGE, MAGE–A3, gp100/pmel17, Melan–A/MART–1, gp75/TRP1, тирозиназы, TRP2, CEA, PSA, TAG–72, незрелого рецептора ламинина, MOK/RAGE–1, WT–1, SAP–1, BING–4, EpCAM, MUC1, PRAME, сурвивина, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART–2, p53, Ras, β–катенина, TGF–βRII, HPV E6 или HPV E7. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой куриное, гуманизированное, химерное или человеческое антитело. В некоторых вариантах реализации антитело вырабатывается в организме курицы или получено из него.
[0030]
Дополнительно в данном документе предложены полинуклеотиды, содержащие антитело в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации. Дополнительно в данном документе предложены векторы, содержащие полинуклеотид в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации. Дополнительно в данном документе предложены клетки–хозяева, содержащие полинуклеотид или вектор в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации. Дополнительно в данном документе предложены способы получения антитела, включающие культивирование клетки–хозяина в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации так, чтобы она вырабатывала антитело. В некоторых вариантах реализации способы дополнительно включают выделение антитела из клетки–хозяина.
[0031]
y
Д
Д
Дополнительно в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования рака у индивида, включающие введение индивиду эффективного количества антитела в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации способы дополнительно включают введение индивиду эффективного количества второго антитела, в некоторых вариантах реализации второе антитело связывает антиген, экспрессируемый раковой клеткой. В некоторых вариантах реализации антиген, экспрессируемый раковой клеткой, выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop–2, 5T4, EphA4, BCMA, муцина 1, муцина 16, PTK7, STEAP1, рецептора эндотелина B, мезотелина, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, нектина 4, NaPi2b, LIV–1A, гуанилил циклазы C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, интегрина αVβ3, интегрина α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, тенасцина, Le, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, муцина, CAIX, EPHA3, фолатного рецептора α, GD2, GD3 и ГКГС/пептидного комплекса, содержащего пептид из NY–ESO–1/LAGE, SSX–2, белка семейства MAGE, MAGE–A3, gp100/pmel17, Melan–A/MART–1, gp75/TRP1, тирозиназы, TRP2, CEA, PSA, TAG–72, незрелого рецептора ламинина, MOK/RAGE–1, WT–1, SAP–1, BING–4, EpCAM, MUC1, PRAME, сурвивина, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART–2, p53, Ras, β–катенина, TGF–βRII, HPV E6 или HPV E7. В некоторых вариантах реализации способы дополнительно включают введение индивиду эффективного количества иммунотерапевтического агента. В некоторых вариантах реализации иммунотерапевтический агент содержит второе антитело. В некоторых вариантах реализации второе антитело связывается с антигеном, выбранным из группы, состоящей из PD–1, PD–L1, OX40, CTLA–4, GD137/4–1BB, TNFR2, B7–H3, FZD7, CD27, CCR4, CSF1R, CSF, TIM–3, LAG–3, VISTA, ICOS, CCR2, IDO, A2R, CD39, CD73, TIGIT, CD80, CD47, аргиназы, TDO и PVRIG. В некоторых вариантах реализации первое антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v2 или внеклеточные домены как человеческого полипептида SIRP–α v1, так и человеческого полипептида SIRP–α v2 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ, при этом первое антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, а второе антитело связывается с PD–1. В некоторых вариантах реализации первое антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α, при этом первое антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, а второе антитело связывается с PD–1. В некоторых вариантах реализации первое антитело связывает внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ, при этом первое антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, а второе антитело связывается PD–L1. В некоторых вариантах реализации первое антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α, при этом первое антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, а второе антитело связывается с PD–L1.
В некоторых вариантах реализации индивид является человеком.
[0032]
Дополнительно в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования аутоиммунного заболевания или воспалительного заболевания у индивида, включающие введение индивиду эффективного количества антитела в соответствии с любым из вышеприведенных вариантов реализации. В некоторых вариантах реализации аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из множественного склероза, ревматоидного артрита, спондилоартропатии, системной красной волчанки, антителоопосредованного воспалительного или аутоиммунного заболевания, болезни «трансплантат против хозяина», сепсиса, диабета, псориаза, псориатического артрита, атеросклероза, синдрома Шегрена, прогрессирующего системного склероза, склеродермы, острого коронарного синдрома, ишемической реперфузии, болезни Крона, язвенного колита, эндометриоза, гломерулонефрита, нефропатии IgA–типа, поликистозной болезни почек, миастении гравис, идиопатического легочного фиброза, астмы, атопического дерматита, острого респираторного дистресс–синдрома (ОРДС), васкулита и воспалительного аутоиммунного миозита. В некоторых вариантах реализации индивид является человеком.
[0033]
Дополнительно в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α, включающие (a) обеспечение антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α; (b) получение комплекса, содержащего вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; (с) приведение в контакт антигенсвязывающего домена с полученным комплексом; и (d) выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем связывание антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. Дополнительно в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α, включающие приведение в контакт антитела или антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; и выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем связывание антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. Дополнительно в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α, включающие (a) обеспечение антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α; (b) получение комплекса, содержащего вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; (с) приведение в контакт антигенсвязывающего домена с полученным комплексом; и (d) выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем отсутствие связывания антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. Дополнительно в данном документе предложены способы идентификации антитела или антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α, включающие приведение в контакт антитела или антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; и (d) выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем отсутствие связывания антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В некоторых вариантах реализации вариант D1 SIRP–α содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17–52. В некоторых вариантах реализации домен IgSF CD47 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий домен IgSF CD47, содержит внеклеточный домен человеческого CD47. В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий домен IgSF CD47, дополнительно содержит Fc–область антитела.
[0034]
Дополнительно в данном документе предложены способы получения анти–SIRP–α антитела, которое связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, включающие: (a) иммунизацию курицы пептидом, содержащим по меньшей мере часть внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого SIRP–α; (b) получение антитела из вырабатывающей антитело клетки от иммунизированной курицы; и (c) выявление связывания между антителом, полученным из клетки, и внеклеточными доменами (например, доменами D1) человеческого полипептида SIRP–α, при этом связывание между антителом и внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α указывает на то, что антитело является анти–SIRP–α антителом, которое связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого вариантного полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой куриное, гуманизированное, химерное или человеческое антитело. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHF PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFP RVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHF
дисс.
дисс.
PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5), и связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLTPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFP RVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRA KPS (SEQ ID NO:6). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти или десяти разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации каждый из трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти или десяти разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α содержит внеклеточный домен (например, домен D1), содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5, 6 и 76–83. В некоторых вариантах реализации способы дополнительно включают выявление связывания между антителом, полученным из клетки, и внеклеточным доменом (например, доменом D1) одного или более полипептидов SIRP–α, выбранных из группы, состоящей из обезьяньего полипептида SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α, человеческого полипептида SIRP–β и человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации обезьяний полипептид SIRP–α представляет собой полипептид SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) по меньшей мере двух разных обезьяньих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:12, или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных мышиных вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) одного или более мышиных полипептидов SIRP–α, и при этом каждый из одного или более мышиных полипептидов SIRP–α содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7–10. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ, в некоторых вариантах реализации антитело не связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело не связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, или их оба. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах реализации способы дополнительно включают выявление связывания или отсутствия связывания между антителом, полученным из клетки, и комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α, связанный с доменом IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает комплекс, содержащий вариант D1 SIRP–α, связанный с доменом IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. В некоторых вариантах реализации антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации антитело не связывает комплекс, содержащий вариант D1 SIRP–α, связанный с доменом IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. В некоторых вариантах реализации антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки. В некоторых вариантах реализации антитело модулирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации клетка представляет собой лейкоцит, выбранный из группы, состоящей из макрофага, дендритной клетки, нейтрофила, эозинофила и миелоидной супрессорной клетки (МСК). В некоторых вариантах реализации антитело ингибирует сигнализацию SIRP–α в макрофаге, экспрессирующем человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело усиливает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α.
[0035]
Следует понимать, что одно, некоторые или все свойства различных вариантов реализации, описанных в данном документе, можно комбинировать, чтобы получить другие варианты реализации настоящего изобретения. Эти и другие аспекты изобретения станут понятны специалисту в данной области техники. Эти и другие варианты реализации изобретения дополнительно описаны в нижеприведенном подробном описании.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0036] Фиг. 1A
иллюстрирует выравнивание доменов D1 10 разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. Приведенные последовательности соответствуют SEQ ID NO: 5, 6 и 76–83 (сверху вниз). Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0037] Фиг. 1B
иллюстрирует выравнивание между доменами D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, яванского макака и мышей 129. Приведенные последовательности соответствуют SEQ ID NO: 5, 6, 11 и 7 (сверху вниз). Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0038] Фиг. 1C
иллюстрирует выравнивание между различными человеческими и мышиными доменами D1 SIRP–α с указанием петель R1, R2 и R3. Показано выравнивание между доменами D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей 129, мышей NOD, мышей C57BL/6 и мышей BALB/c. Приведенные последовательности соответствуют SEQ ID NO: 5–10 (сверху вниз). Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0039] Фиг. 2
иллюстрирует выравнивание между доменами D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, яванского макака, мышей 129 и кур. Приведенные последовательности соответствуют SEQ ID NO: 5, 6, 11, 7 и 84 (сверху вниз). Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0040] Фиг. 3A и 3B
Фиг. 4A–9B
Фиг.
3B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S130 в отношении различных пептидов SIRP. Фиг. 3A иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса из высокоаффинных вариантов SIRP–α, связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO: 16). Преформированный комплекс создавали, смешивая два высокоаффинных человеческих полипептида SIRP–α v1 и v2 (SEQ ID NO: 17 и 19) в соотношении 1:1 и комбинируя смесь с CD47 для создания комплекса SIRP–α: CD47. Преформированный комплекс SIRP–α: CD47 на  готовили аналогично. обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0041] Фиг. 4A и 4B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S121 в отношении различных пептидов SIRP. Фиг. 4A иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса из высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO:17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO:16). Фиг. 4B обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0042] Фиг. 5A и 5B
Фиг. 5A
5B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела SI37 в отношении различных пептидов SIRP.  иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO:15) и преформированного комплекса из высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO: 17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO: 16). Фиг.  обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0043] Фиг. 6A и 6B
Фиг. 6A
Фиг. 6B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S128 в отношении различных пептидов SIRP.  иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса из высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO:17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO:16).  обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0044] Фиг. 7A и 7B
Фиг. 7A
7B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S135 в отношении различных пептидов SIRP.  иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса из высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO:17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO:16). Фиг.  обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0045] Фиг. 8A и 8B
Фиг. 8A
Фиг. 8B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S126 в отношении различных пептидов SIRP.  иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO: 17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO: 16).  обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0046] Фиг. 9A и 9B
Фиг. 9A
Фиг. 9B
иллюстрируют специфичность связывания клона антитела S138 в отношении различных пептидов SIRP.  иллюстрирует кривые связывания ELISA для антитела против доменов D1 SIRP–α v1 человека, v2 человека, мышей и яванского макака, а также человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15) и преформированного комплекса высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO: 17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO:16).  обобщает данные по специфичности связывания для клона против каждой из этих мишеней («+» указывает на связывание; «–» указывает на отсутствие связывания).
[0047] Фиг. 10A
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов scFv–Fc, полученных от кур дикого типа. Приведены SEQ ID NO:53–60 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности CDR и линкеров указаны линиями. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0048] Фиг. 10B
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов scFv–Fc, полученных от кур, вырабатывающих человеческие антитела. Приведены SEQ ID NO:61–74 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности CDR и линкеров указаны линиями. Аминокислотные различия указаны звездочками.
0049] Фиг. 11A
[ иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов семейства 2. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372 и 378 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361 и 373 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0050] Фиг. 11B
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов семейства 3. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394 и 400 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 134, 105, 387, 389, 395, 397, 399, 403, 391, 393,и 401 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
0051] Фиг. 11С
[ иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов семейства 4. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0052] Фиг. 11D
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL семейства 5, клонов группы 4. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 278 и 412 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 279 и 413 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
0053] Фиг. 11E
[ иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL дополнительных клонов группы 4 семейства 5. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 275 и 414 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 276 и 415 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR и линкеров указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat.
Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0054] Фиг. 11F
иллюстрирует последовательности доменов VH и VL (SEQ ID NO: 280 и 281, соответственно, семейство 5, клон S209 группы 4. Последовательности HVR подчеркнуты.
[0055] Фиг. 11G
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL семейства 5, клонов группы 5. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 123 и 292 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 100 и 293 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0056] Фиг. 11H
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL дополнительных клонов группы 5 семейства 5. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0057] Фиг. 11I
иллюстрирует последовательности доменов VH и VL клона 149 (SEQ ID NO: 286 и 287, соответственно) и клона 218 (SEQ ID NO: 284 и 285, соответственно). Последовательности HVR подчеркнуты.
[0058] Фиг. 11J
иллюстрирует выравнивание доменов VH и VL клонов семейства 1. Аминокислотные последовательности доменов VH представлены SEQ ID NO: 120, 121, 130 и 122 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Аминокислотные последовательности доменов VL представлены SEQ ID NO: 97, 98, 107 и 99 (в порядке сверху вниз на выравнивании). Последовательности HVR указаны линиями. HVR приведены в соответствии с Kabat. Аминокислотные различия указаны звездочками.
[0059] Фиг.
12A–12C
Фиг. 12A
12B
Фиг. 12C
(например,
(например,
(например,
иллюстрируют профили связывания, полученные методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР), репрезентативных клонов антител, связывающих преформированный комплекс из высокоаффинного варианта SIRP–α (SEQ ID NO: 18), смешанного с возрастающими концентрациями домена IgSF CD47 (SEQ ID NO:16).  иллюстрирует кривую связывания клона антитела (S123), которое не блокирует связывание CD47 с SIRP–α  неблокирующего антитела). Фиг.  иллюстрирует кривую связывания клона антитела (S119), которое блокирует связывание CD47 с SIRP–α  блокирующего антитела). иллюстрирует кривую связывания клона антитела (S118), которое связывает SIRP–α и снижает его аффинность в отношении связывания CD47  «отталкивающего» антитела).
[0060] Фиг.
13A–13G
Фиг. 13A–13D
и 13G
Фиг. 13E и 13F
Фиг. 13A и
13B),
Фиг.
13C и 13D
Фиг. 13E
Фиг. 13F
Фиг. 13G
in vitro
иллюстрируют результаты  анализа фагоцитоза опухолевых клеток с применением макрофагов, обработанных анти–SIRP–α антителом (в указанном ряде концентраций), цетуксимабом или трастузумабом, анти–SIRP–α антителом плюс цетуксимабом или трастузумабом или контрольным антителом (IgG1, κ), как указано. Макрофаги, осуществлявшие фагоцитоз опухолевых клеток, были определены как клетки, положительные в отношении CD33, CD206 и CFSE, методом проточной цитометрии. В этом анализе опухолевые клетки представляли собой клетки DLD–1 () или OE19 (). Исследуемые анти–SIRP–α антитела представляли собой AB3a (AB45a (), AB119a (), AB135a () и AB136c ().
[0061] Фиг. 14
in vivo
иллюстрирует результаты  анализа активации дендритных клеток для дендритных клеток, выделенных из селезенки мышей Balb/c, обработанных анти–SIRP–α антителом AB136b, контрольным крысиным антимышиным анти–SIRP–α антагонистическим антителом (клон p84), крысиным контрольным IgG или мышиным контрольным IgG, как указано. Мышей внутривенно инъецировали указанным антителом при 10 мг/кг, а селезенки вырезали через пять часов после инъекции. Измерения маркера активации CD86 на дендритных клетках проводили методом проточной цитометрии.
[0062] Фиг. 15
in vivo
3
3
иллюстрирует результаты  сингенной модели карциномы толстой кишки мышей для оценки активности отдельного агента. Клетки MC38 подкожно имплантировали мышам C57BL/6 и рандомизировали животных по группам (8 мышей/группа). Мышей обрабатывали базовым раствором (ФСБ), CD47–блокирующим анти–SIRP–α антителом AB25b, CD47–блокирующим анти–SIRP–α антителом AB25c, CD47–блокирующим анти–SIRP–α антителом AB27b, не блокирующим CD47 анти–SIRP–α антителом AB3b или не блокирующим CD47 анти–SIRP–α антителом 136b. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 60 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали дозой 10 мг/кг анти–SIRP–α антител дважды в неделю в течение трех недель. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
[0063] Фиг. 16
in vivo
3
3
иллюстрирует результаты  сингенной модели карциномы толстой кишки мышей для оценки активности отдельного агента. Клетки CT26 подкожно имплантировали мышам BALB/c (использовали 8–9 мышей на группу), которых обрабатывали AB136b или базовым раствором (ФСБ), как указано. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 80 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали дозой 3 мг/кг или 10 мг/кг анти–SIRP–α антител дважды в неделю в течение трех недель. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
[0064] Фиг.
17A
иллюстрирует сравнение связывания CD47 и Fab клона анти–SIRP–α антитела 119 с SIRP–α, определенного методом рентгеновской кристаллографии.
[0065] Фиг. 17B
иллюстрирует участок взаимодействия между Fab клона анти–SIRP–α антитела 119 и SIRP–α, определенный методом анализа площади погруженной поверхности. Остатки SIRP–α, входящие в состав эпитопа связывания Fab антитела 119, затенены в соответствии с изменениями площади погруженной поверхности. Указаны ключевые остатки антитела в паратопе SIRP–α: (H) = остаток тяжелой цепи; (L) = остаток легкой цепи.
[0066] Фиг. 18A
иллюстрирует сравнение связывания CD47 и Fab клона анти–SIRP–α антитела 136 с SIRP–α, определенного методом рентгеновской кристаллографии.
[0067] Фиг. 18B
иллюстрирует участок взаимодействия между Fab клона анти–SIRP–α антитела 136 и SIRP–α, определенный методом анализа площади погруженной поверхности. Остатки SIRP–α, входящие в состав эпитопа связывания Fab антитела 136, затенены в соответствии с изменениями площади погруженной поверхности. Указаны ключевые остатки антитела в паратопе SIRP–α: (H) = остаток тяжелой цепи; (L) = остаток легкой цепи.
[0068] Фиг. 19A
иллюстрирует сравнение связывания CD47 и Fab клона анти–SIRP–α антитела 3 с SIRP–α, определенного методом рентгеновской кристаллографии.
[0069] Фиг. 19B
иллюстрирует участок взаимодействия между Fab клона анти–SIRP–α антитела 3 и SIRP–α, определенный методом анализа площади погруженной поверхности. Остатки SIRP–α, входящие в состав эпитопа связывания Fab антитела 3, затенены в соответствии с изменениями площади погруженной поверхности. Указаны ключевые остатки антитела в паратопе SIRP–α: (H) = остаток тяжелой цепи; (L) = остаток легкой цепи.
[0070] Фиг. 19C
иллюстрирует сравнение связывания CD47 и Fab клона анти–SIRP–α антитела 115 с SIRP–α, определенного методом рентгеновской кристаллографии.
[0071] Фиг.
19D
иллюстрирует участок взаимодействия между Fab клона анти–SIRP–α антитела 115 и SIRP–α, определенный методом анализа замаскированной поверхности. Остатки SIRP–α, входящие в состав эпитопа связывания Fab антитела 115, затенены в соответствии с изменениями площади погруженной поверхности. Указаны ключевые остатки антитела в паратопе SIRP–α: (H) = остаток тяжелой цепи; (L) = остаток легкой цепи.
[0072] Фиг. 20A
иллюстрирует сравнение связывания CD47, клона анти–SIRP–α антитела 119 Fab, клона анти–SIRP–α антитела 136 Fab, клона анти–SIRP–α антитела 3 Fab, клона анти–SIRP–α антитела 115 Fab с SIRP–α, определяемого методом рентгеновской кристаллографии.
[0073] Фиг. 20B
2
иллюстрирует эпитопы связывания CD47, Fab клона анти–SIRP–α антитела 119, Fab клона анти–SIRP–α антитела 136, Fab клона анти–SIRP–α антитела 3 и Fab клона анти–SIRP–α антитела 115 с SIRP–α, определенные методом рентгеновской кристаллографии. Значения указывают разницу между доступной площадью поверхности каждого атома остатка в Fab/CD47 при анализе в отдельности и в комплексе с SIRP–α, выраженную в виде площади погруженной поверхности (Å). Нумерация остатков приведена в соответствии с SEQ ID NO: 296.
[0074] Фиг. 21A
иллюстрирует блок–схему эпитоп–специфической сортировки анти–SIRP–α антител.
[0075] Фиг. 21B
иллюстрирует результаты типового анализа для эпитоп–специфической сортировки анти–SIRP–α антител A, B, C, D, E и F.
[0076] Фиг. 22A и 22B
иллюстрируют результаты эпитоп–специфической сортировки указанных анти–SIRP–α антител. Номер клона для лиганда (анти–SIRPα), связанного с чипом, указан в строке, а номер клона для аналитов (анти–SIRPα), проводимых через чип, указан в колонке. Белые клетки соответствуют антителам, которые образуют сандвич–структуры (и считается, что они связывают разные эпитопы). Серые клетки соответствуют антителам, которые не образуют сандвич–структуры (и считается, что они связывают один эпитоп). «Х» указаны случаи, когда данные для одной ориентации не согласуются с данными для другой.
[0077] Фиг. 23
представляет модель связывания анти–SIRP–α антитела и CD47 с доменом D1 SIRP–α на основании эпитоп–специфической сортировки. Представлены (и помечены номером) репрезентативные клоны антител для каждой группы.
[0078] Фиг. 24A
иллюстрирует выравнивание между тяжелой цепью родительского 119 («119_VH_Wt»), тяжелой цепью варианта 119 с 4 мутациями (3 обратные мутации до последовательности зародышевой линии в каркасной области и одна мутация в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления; «VH_MutALL»), тяжелой цепью варианта 119 с 3 мутациями (3 обратные мутации до последовательности зародышевой линии только в каркасной области; «VH_MutAll_V34M») и тяжелой цепью варианта 119 с 3 мутациями и мутацией M34L (3 обратные мутации до последовательности зародышевой линии в каркасной области; «VH_MulAll_V34L»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO:335 для 119_VH_Wt, SEQ ID NO:246 для VH_MutALL, SEQ ID NO:258 для VH_MutAll_V34M и SEQ ID NO:327 для VH_MutAlL_V34L. Последовательности CDR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0079] Фиг. 24B
иллюстрирует выравнивание между легкой цепью родительского 119 («119_VL_Wt») и легкой цепью варианта 119 с 4 мутациями (4 обратные мутации до последовательности зародышевой линии в каркасной области; «VL_mutAll»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO: 97 для 119_VL_Wt и SEQ ID NO:312 для VL_mutAll, последовательности CDR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0080] Фиг. 25A
иллюстрирует выравнивание между легкой цепью родительского 135 («VL_wt») и легкой цепью варианта 135 с 2 мутациями (2 обратные мутации до последовательности зародышевой линии в каркасной области; «VL_mutAll»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO: 104 для 135 VL_wt и SEQ ID NO:248 для 135 VL_MutALL. Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0081] Фиг.
25B
иллюстрирует выравнивание между тяжелой цепью родительского 135 («VH_wt»), тяжелой цепью варианта 135 с 6 мутациями (5 обратных мутаций до последовательности зародышевой линии в каркасной области и одна мутация в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления; «VH_MutAII»), тяжелой цепью варианта 135 с 5 обратными мутациями до последовательности зародышевой линии в каркасной области («VH_MutAll_V34M») и тяжелой цепью варианта 135 с 5 обратными мутациями до последовательности зародышевой линии в каркасной области и мутацией M34L («VH_MutALL_V34L»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO:341 для VH_wt, SEQ ID NO:247 для VH_MutAll и SEQ ID NO:259 для VH_MutAll_V34M и SEQ ID NO: 328 для VH_MutAll_V34L. Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0082]
Фиг. 26A
иллюстрирует выравнивание между легкой цепью родительского 136 («VL_wt»), легкой цепью варианта 136 с 4 мутациями (4 обратные мутации до последовательности зародышевой линии в каркасной области; «VL_mutaLL»), легкой цепью варианта 136 с одной обратной мутацией I2T до последовательности дикого типа в полностью мутированном («all mut») окружении («VL_Mutall_I2T»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO: 134 для VL_wt, SEQ ID NO:250 для VL_mutall и SEQ ID NO:251для VL_Mutall_I2T. Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0083] Фиг. 26B
иллюстрирует выравнивание между тяжелой цепью родительского 136 («VH_wt»), тяжелой цепью варианта 136 с 6 мутациями (5 обратных мутаций до последовательности зародышевой линии в каркасной области и одна мутация в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления; «VH_mutall»), тяжелой цепью варианта 136 с 5 обратными мутациями до последовательности зародышевой линии в каркасной области («VH_Mutall_V34M») и тяжелой цепью варианта 136 с 5 обратными мутациями до последовательности зародышевой линии в каркасной области и мутацией M34L («VH_Mutall_V34L»). Приведенные последовательности представляют собой: SEQ ID NO: 133 для VH_wt, SEQ ID NO:249 для VH_mutall, SEQ ID NO:260 для VH_Mutall_V34M, и SEQ ID NO:329 для VH_Mutall_V34L. Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0084] Фиг. 27A
Д
Д
Д
иллюстрирует аффинность связывания вариантов антитела 136 с шестью белками SIRP–α: человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11), SIRP–α мышей NOD (SEQ ID NO:8), SIRP–α мышей BL/6 (SEQ ID NO:9) и SIRP–α мышей BALB/c (SEQ ID NO: 10). Варианты антител имели мутантные («мут» или «mut») или родительские («дт» или «wt») легкие цепи и мутантные или родительские тяжелые цепи, как указано в порядке легкая цепь/тяжелая цепь. На графике по оси y указано соотношение K mut/K wt. Соотношение 1 указывает на то, что антитело имеет эквивалентную K с антителом wt/wt (дт/дт) (указано пунктирной линией); соотношение >1 указывает на меньшую аффинность, чем у wt/wt; а соотношение <1 указывает на большую аффинность, чем у wt/wt.
[0085] Фиг. 27B
Д
Д
Д
иллюстрирует аффинность связывания вариантов антитела 136 с семью белками SIRP–α: SIRP–α мышей BL/6 (SEQ ID NO:9), SIRP–α мышей NOD (SEQ ID NO:8), SIRP–α мышей BALB/c (SEQ ID NO: 10), человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11) и человеческим SIRP–γ v1 (SEQ ID NO: 15). Кроме исследования wt 136 (дикого типа) и all mutant 136 (вариант, содержащий все мутации) конструировали варианты с удалением каждой отдельной мутации в содержащем все мутации окружении легкой цепи. На графике по оси y указано соотношение K mut/K wt. Соотношение 1 означает, что антитело имеет эквивалентную K с антителом wt/wt (указано пунктирной линией); соотношение >1 указывает на меньшую аффинность, чем у wt/wt; а соотношение <1 указывает на большую аффинность, чем у wt/wt.
[0086] Фиг. 28
иллюстрирует сравнение результатов экспрессии и аффинности связывания антител, имеющих указанные человеческие тяжелые цепи и гуманизированные легкие цепи, в клетках 293–FS FreeStyle™ (Thermo Fisher).
[0087] Фиг. 29
иллюстрирует выравнивание между VL–доменами Hum1, Hum 8 и Hum9. Hum 8 был создан на основе Hum1, но с 5 аминокислотными заменами вблизи или в HVR–L1 и –L2, которые повышают человекоподобность. Hum 9 был создан на основе Hum1, но с 4 аминокислотными заменами вблизи или в HVR–L1 и –L2, которые повышают человекоподобность. Представлены SEQ ID NO: 252 (Huml), 416 (Hum 8) и 262 (Hum9). Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0088] Фиг. 30
иллюстрирует выравнивание между вариантом антитела 21 с обратными мутациями до зародышевой линии («HC_MutAll»), вариантом антитела 21 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления M34V («HC_MutAll_M34V»), вариантом антитела 21 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией M34L («HC_MutAll_M34L»), вариантом антитела 25 с обратными мутациями до зародышевой линии («HC_MutAll»), вариантом антитела 25 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления M34V («HC_MutAll_M34V»), вариантом антитела 25 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией M34L («HC_MutAll_M34L»), вариантом антитела 27 с обратными мутациями до зародышевой линии («HC_MutAll»), вариантом антитела 27 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией в CDR–H1 с удалением потенциальной горячей точки окисления M34V («HC_MutAll_M34V») и вариантом антитела 27 с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией M34L («HC_MutAll_M34L»). Приведенные последовательности представляют собой SEQ ID NO: 263, 264, 330, 267, 268, 332, 265, 266 и 331 (сверху вниз). Последовательности HVR указаны линиями; аминокислотные различия указаны звездочками.
[0089] Фиг. 31
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток HER2(+) OE19 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. «Отталкивающие» анти–SIRP–α антитела исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–HER2 антителом трастузумабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0090] Фиг. 32
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Неблокирующие анти–SIRP–α антитела исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0091] Фиг. 33A–33C
in vitro
иллюстрируют результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Анти–SIRP–α антитела исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0092] Фиг. 34
in vitro
2
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Каждое из неблокирующих анти–SIRP–α антител 27 и 136 исследовали в виде полноразмерного антитела (с Fc–областью) или фрагмента F(ab) в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0093] Фиг. 35
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Блокирующие варианты анти–SIRP–α антитела 119 исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0094] Фиг. 36
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Блокирующие варианты анти–SIRP–α антитела 135 исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0095] Фиг. 37
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Неблокирующие анти–SIRP–α антитела исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0096] Фиг.
38A–38B
in vivo
иллюстрируют результаты  анализа активации дендритных клеток указанными анти–SIRP–α антителами. Мышей внутривенно инъецировали указанным антителом при 10 мг/кг, а селезенки вырезали через пять часов после инъекции. Измерения маркеров активации CD86, ГКГСII и CCR7 на дендритных клетках CD4+ проводили методом проточной цитометрии.
[0097] Фиг. 39A
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Варианты анти–SIRP–α антител 218a и 218 исследовали в указанных концентрациях в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0098] Фиг. 39B
in vitro
иллюстрирует результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Типовые блокирующие анти–SIRP–α антитела 119a, 120a и 122a исследовали в указанных концентрациях. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0099] Фиг.
39C
in vitro
иллюстрируют результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Типовые неблокирующие анти–SIRP–α антитела 136a и 137a исследовали в указанных концентрациях. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0100] Фиг. 39D
in vitro
иллюстрируют результаты  анализа фагоцитоза с применением клеток EGFR(+) DLD–1 в качестве мишени и макрофагов M2 в качестве клеток, осуществляющих фагоцитоз. Типовые отталкивающие анти–SIRP–α антитела 115a, 116a, 117a, 118a и 132a исследовали в указанных концентрациях. Фагоцитоз определяли по процентному содержанию клеток CFSE+.
[0101] Фиг. 40
in vivo
3
3
иллюстрируют результаты  сингенной модели карциномы толстой кишки мышей для оценки активности комбинирования обработки анти–SIRP–α с ингибированием пути PD–L1/PD–1. Клетки CT26 подкожно имплантировали мышам C57BL/6 и рандомизировали животных по группам (8 мышей/группа). Мышей обрабатывали базовым раствором (ФСБ), анти–PD–L1 антителом, CD47–блокирующим анти–SIRP–α антителом AB25b или AB25b и PD–L1. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 60 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей дозировали внутрибрюшинно (В/Б) дозой 10 мг/кг дважды в неделю в течение трех недель и умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
[0102] Фиг. 41
in vivo
3
3
иллюстрируют результаты  сингенной модели карциномы толстой кишки мышей для оценки активности комбинирования обработки анти–SIRP–α с ингибированием пути PD–L1/PD–1. Клетки MC38 подкожно имплантировали мышам C57BL/6 и рандомизировали животных по группам (8 мышей/группа). Мышей обрабатывали базовым раствором (ФСБ), анти–PD–1 антителом, CD47–блокирующим анти–SIRP–α антителом AB25b, AB25b и анти–PD–1, CD47–неблокирующим анти–SIRP–α антителом AB136b или AB136b и анти–PD–1. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 60 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей дозировали внутрибрюшинно (В/Б) дозой 10 мг/кг дважды в неделю в течение трех недель и умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0103]
in vitro
in vivo
in vivo
В настоящем изобретении описаны антитела, которые связывают внеклеточные домены (например, домены D1) одного или более человеческих полипептидов SIRP–α и имеют различные представляющие потенциальный интерес профили связывания SIRP–α. Эти уникальные профили связывания SIRP–α включают одну или более из следующих связывающих способностей, которые можно комбинировать многофакториальным образом для получения ряда вариантов с уникальной специфичностью. Например, антитело может связывать внеклеточные домены (например, домены D1) человеческого SIRP–α v1, человеческого SIRP–α v2 или их оба; антитело может связывать внеклеточные домены (например, домены D1) одного или более обезьяньих полипептидов SIRP–α или оно может не связываться с ними; антитело может связывать внеклеточные домены (например, домены D1) одного или более мышиных полипептидов SIRP–α или оно может не связываться с ними; антитело может связывать внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β или оно может не связываться с ним; и/или антитело может связывать внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ или оно может не связываться с ним. Кроме того, в настоящем изобретении описаны антитела, которые блокируют связывание CD47 с SIRP–α, антитела, которые не блокируют связывание CD47 с SIRP–α, и антитела, которые не блокируют связывание CD47 с SIRP–α, но снижают аффинность SIRP–α в отношении CD47, что приводит к более быстрой диссоциации комплекса CD47/SIRP–α. Кроме того, в настоящем изобретении описаны анти–SIRP–α антитела с одним или более  и/или биологическими свойствами, представляющими интерес, такими как способность усиливать фагоцитоз макрофагами, усиливать активацию дендритных клеток, ингибировать  рост опухоли, которая экспрессирует CD47, и/или способность осуществлять один или более из этих видов активности, не предотвращая взаимодействия между CD47–экспрессирующей клеткой и Т–клеткой.
[0104]
(например,
Описанные в данном документе способы можно применять для идентификации антител с уникальными комбинациями вышеуказанных вариантов специфичности связывания. Не ограничиваясь теорией считается, что возможность идентифицировать уникальные анти–SIRP–α антитела с разными профилями связывания, описанными выше, позволяет идентифицировать антитела  описанные в данном документе) с необходимыми клиническими свойствами и преимуществами для доклинических исследований.
[0105]
В одном аспекте в данном документе предложены выделенные антитела, которые связывают внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба. Дополнительно в данном документе предложены полинуклеотиды и векторы, кодирующие антитела согласно настоящему изобретению, а также связанные с ними способы получения антител.
[0106]
В другом аспекте в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования рака у индивида, включающие введение индивиду эффективного количества антитела согласно настоящему изобретению.
[0107]
В другом аспекте в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования аутоиммунного или воспалительного заболевания у индивида, включающие введение индивиду эффективного количества антитела согласно настоящему изобретению.
[0108]
В другом аспекте в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В некоторых вариантах реализации способы включают (a) обеспечение антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α; (b) получение комплекса, содержащего вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; (с) приведение в контакт антигенсвязывающего домена с полученным комплексом; и (d) выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем связывание антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В другом аспекте в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В некоторых вариантах реализации способы включают приведение в контакт антигенсвязывающего домена или антитела, которое связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, причем вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; и выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем связывание антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α.
[0109]
В другом аспекте в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В некоторых вариантах реализации способ включает (a) обеспечение антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α; (b) получение комплекса, содержащего вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; (с) приведение в контакт антигенсвязывающего домена с полученным комплексом; и (d) выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем отсутствие связывания антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В другом аспекте в данном документе предложены способы идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. В некоторых вариантах реализации способ включает приведение в контакт антигенсвязывающего домена или антитела, которое связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α, с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47, при этом вариант D1 SIRP–α представляет собой высокоаффинный домен D1 SIRP–α искусственного происхождения и при этом вариант D1 SIRP–α связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47; и выявление связывания антигенсвязывающего домена с комплексом, причем отсутствие связывания антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α.
[0110]
В другом аспекте в данном документе предложены способы получения анти–SIRP–α антитела, которое связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации способы включают (а) иммунизацию курицы пептидом, содержащим по меньшей мере часть внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого SIRP–α; (b) получение антитела из вырабатывающей антитело клетки от иммунизированной курицы; и (c) выявление связывания между антителом, полученным из клетки, и внеклеточными доменами (например, доменами D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, при этом связывание между антителом и внеклеточными доменами (например, доменами D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α указывает на то, что антитело является анти–SIRP–α антителом, которое связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α.
Определения
[0111]
Перед подробным описанием представленных вариантов реализации следует понимать, что настоящее изобретение не ограничено конкретными композициями или биологическими системами, которые, конечно, могут варьироваться. Также следует понимать, что используемая в данном документе терминология предназначена исключительно для описания конкретных вариантов реализации и не подразумевает ограничения.
[0112]
В контексте этого описания и прилагаемой формулы изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если иное четко не следует из контекста. Таким образом, например, ссылка на «молекулу», необязательно, включает комбинацию из двух или более таких молекул, и т. д.
[0113]
В контексте данного документа термин «около» относится к обычному диапазону погрешности для соответствующей величины, как известно специалисту в данной области техники. В данном документе употребление «около» в отношении величины или параметра включает (и описывает) варианты реализации, которые непосредственно относятся к этой величине или параметру.
[0114]
Следует понимать, что аспекты и варианты реализации настоящего изобретения включают «содержащие», «состоящие» и «преимущественно состоящие» из этих аспектов и вариантов реализации.
[0115]
(например,
например,
(например,
например,
SIRPΑ
например,
В контексте данного документа «полипептид SIRP–α» может относиться к любому эндогенному или природному полипептиду SIRP–α, кодируемому геномом любого позвоночного животного, включая млекопитающих, таких как люди, обезьяны, грызуны  мыши или крысы), и птиц, таких как куры. Этот термин также включает варианты природного происхождения,  варианты с альтернативным сплайсингом, аллельные варианты или полиморфизмы  описанные в данном документе). Этот термин может дополнительно относиться к полноразмерным, не подвергнутым процессингу полипептидам SIRP–α, а также к полипептидам SIRP–α, полученным в результате клеточного процессинга,  удаления сигнальной последовательности и т. д. Типовые последовательности полипептидов SIRP–α описаны в данном документе. В некоторых вариантах реализации человеческий полипептид SIRP–α кодируется человеческим геном ,  описанным NCBI Gene ID № 140885. Как описано в данном документе, полипептиды SIRP–α отличаются высокой степенью полиморфизма в пределах и среди видов. Например, было идентифицировано по меньшей мере 10 человеческих вариантов с аминокислотным полиморфизмом во внеклеточном домене.
[0116]
например,
(смотрите, например,
et al.
Mol. Cell
et al.
J. Biol. Chem.
et al.
J. Biol. Chem.
et al.
J. Biol Chem.
например
(смотрите, например,
et al.
J. Immunol.
Полипептиды SIRP–α содержат внеклеточный домен, который связывается с лигандами/партнерами,  CD47. Полипептиды SIRP–α содержат 3 высокогомологичных внеклеточных (Ig)–подобные домена иммуноглобулина – D1, D2 и D3. Домен D1 SIRP–α («домен D1») относится к удаленному от мембраны внеклеточному домену SIRP–α и опосредует связывание SIRP–α с CD47  Hatherley, D.  (2008)  31:266–77; Hatherley. D,  (2007)  282:14567–75; Hatherley, D.  (2009)  284:26613–9; и Lee, W. Y.  (2010)  285:37953–63). Внеклеточный домен в общем случае относится ко всей внеклеточной части SIRP–α, , экспрессируемой на поверхности клетки, и может включать разные домены SIRP–α, такие как домен D1. Домен D1 содержит остатки, являющиеся критическими для опосредования связывания CD47  Lee, W.Y.  (2007) 179:7741–50). В некоторых вариантах реализации антитело, которое связывает внеклеточный домен полипептида SIRP–α, связывает один или более остатков домена D1. Типовые последовательности домена D1 человеческого SIRP–α описаны в тексте настоящего изобретения и включают, без ограничений, SEQ ID NO:5, 6 и 76–83. Последовательности доменов D2 и D3 человеческого SIRP–α также известны и включают, без ограничений,
APWSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVS YSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIR (SEQ ID NO: 131) для домена D2 и VPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKD
GTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVS (SEQ ID NO: 132) для домена D3.
[0117]
например,
(смотрите, например,
(смотрите, например,
Nat. Rev. Immunol.
et al,
J. Biol. Chem.
В контексте данного документа «CD47» (также известный как ассоциированный с интегрином белок (TAP), MER6 и OA3) относится к полипептиду, который, помимо прочего, выступает в качестве партнера по связыванию для полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации CD47 относится к человеческому полипептиду CD47,  полипептиду, кодируемому человеческим геном CD47, таким как описан NCBI Ref Seq ID No. 961. Известны типовые аминокислотные последовательности человеческого CD47  эталонную последовательность с номером доступа NCBI NP_001768). В частности, домен IgSF CD47 относится к N–концевому внеклеточному домену CD47, который, как известно, является критическим для связывания SIRP–α  Barclay, A.N. and Brown, M.H. (2006)  6:457–64 и Hatherley, D.  (2009)  284:26613–9). В некоторых вариантах реализации домен IgSF CD47 содержит аминокислотную последовательность
QLLFNKTKSVEFTFSNDTWIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDTYTFDGALNKS
например,
например,
TVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVS (SEQ ID NO: 16). Термин «CD47» также может включать модифицированные полипептиды CD47, которые не способны связывать SIRP–α,  полипептид, содержащий домен IgSF CD47, конъюгированный с другим полипептидом или соединением,  Fc–областью Ig.
[0118]
(смотрите Antibodies, A Laboratory Manual,
(смотрите
Biol. Chem.
В контексте данного документа «эпитоп SIRP–α» может относиться к аминокислотам полипептида SIRP–α, которые образуют участок связывания для анти–SIRP–α антитела согласно настоящему изобретению и/или партнера по связыванию SIRP–α, включая, без ограничений, CD47. Можно получать характеристики связывания антитела или других полипептидов с эпитопом и/или проводить их картирование, используя различные методы анализа, известные в данной области техники, включая, без ограничений, анализ перекрестного блокирования  Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)), картирование эпитопов  Champe et al., J.  270:1388–1394 (1995)), рентгеновскую совместную кристаллографию, эпитоп–специфическую сортировку, сайт–направленный мутагенез, олигопептидное сканирование, высокопроизводительное картирование с мутагенезом, водородно–дейтериевый обмен, ограниченный протеолиз и т. д.
[0119]
(например,
(например,
В контексте данного документа «модуляция сигнализации SIRP–α» может относиться к осуществлению антагонизма, агонизма или какого–либо иного вмешательства в отношении одного или более аспектов сигнализации SIRP–α в клетке, экспрессирующей полипептид SIRP–α. Сигнализация SIRP–α может относиться к одному или более внутриклеточным событиям сигнализации, опосредованным активацией полипептида SIRP–α, включая, без ограничений, фосфорилирование тирозина внутриклеточной области SIRP–α, связывание фосфатазы  SHP1), связывание адаптерного белка  SCAP2, FYB и/или GRB2), выработку цитокинов (например, IL–10, IL–1β, IFN или TNF) и выработку оксида азота; и/или к одному или более межклеточным фенотипам, включая, без ограничений, фагоцитоз макрофагами и другие активирующие или супрессивные фенотипы макрофагов, эозинофилов, нейтрофилов, дендритных клеток и миелоидных супрессорных клеток (МСК).
[0120]
В контексте данного документа термин «антитело» может относиться к интактным антителам; фрагментам антител (включая, без ограничений Fab, F(ab’)2, Fab’–SH, Fv, диатела, scFv, scFv–Fc, однодоменные антитела, антитела из одной тяжелой цепи и антитела из одной легкой цепи) при условии, что они демонстрируют необходимую биологическую активность (например, связывание эпитопа); моноклональным антителам; поликлональным антителам; моноспецифическим антителам; мультиспецифическим антителам (например, биспецифическим антителам); и антитело–подобным белкам.
[0121]
(например,
В контексте данного документа термин «биспецифический», употребляемый в отношении антитела или фрагмента антитела, включает антитело или фрагмент антитела, которые характеризуются двумя разными специфичностями связывания. Например, каждая специфичность связывания может приводить к распознаванию отличного антигена или же каждая специфичность связывания может приводить к распознаванию одного антигена с разной аффинностью и/или конкретного эпитопа. В некоторых вариантах реализации каждая отдельная специфичность связывания соответствует одному или более разным антигенсвязывающим доменам антитела  вариабельным доменам) так, что биспецифическое антитело или фрагмент антитела содержит по меньшей мере первый антигенсвязывающий домен с первой специфичностью связывания и второй антигенсвязывающий домен со второй специфичностью связывания. Различные типовые форматы биспецифических антител описаны в данном документе и известны в данной области техники.
[0122]
например,
(например,
«Выделенное» антитело может относиться к антителу, которое было отделено и/или отъединено от компонента своего природного окружения,  клетки–хозяина или организма. В некоторых вариантах реализации антитело очищено до необходимой степени чистоты по массе  по меньшей мере 95%); и/или гомогенности методом ДСН–ПААГ с применением, например, окрашивания серебром, кумасси и т. д. В некоторых вариантах реализации выделенное антитело получают, проводя один или более этапов очистки.
[0123]
Как известно в данной области техники, «нативные» антитела относятся к, как правило, гетеродимерным комплексам, содержащим две идентичные легкие (L) цепи и две идентичные тяжелые (H) цепи. Две тяжелые цепи соединяет различное число дисульфидных связей, и одна соединяет каждую легкую цепь с тяжелой цепью в дополнение к внутрицепочечным дисульфидным мостикам. Тяжелые цепи содержат вариабельный домен (VH), за которым следуют (от N–конца к С–концу) три или четыре константных домена. Легкие цепи содержат вариабельный домен (VL), за которым следует константный домен (CL). Как правило, легкие цепи млекопитающих относятся к одной или двум категориям на основании аминокислотной последовательности: каппа и лямбда.
[0124]
например,
«Константный домен» может относиться к более консервативной части антитела или фрагмента,  за пределами вариабельных доменов. Этот термин может включать домен CL, а также константные домены тяжелой цепи CH1, CH2, CH3 и, необязательно, CH4.
[0125]
Константные домены тяжелой цепи можно отнести к 5 основным типам:
Cellular and Mol. immunology,
IgA, IgD, IgE, IgG и IgM. В рамках некоторых из этих основных типов существует несколько подтипов. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации разных классов иммуноглобулинов хорошо известны и в целом описаны, например, в Abbas et al.  4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000).
[0126]
В контексте данного документа термин «вариабельный домен антитела» относится к частям легких и тяжелых цепей антитела, которые содержат определяющие комплементарность области (CDR, например, CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 и CDR H3) и каркасные области (FR).
[0127]
(смотрите
Sequences of Proteins of Immunological interest
Термин «вариабельный» относится к тому факту, что подпоследовательности вариабельных доменов существенно отличаются по последовательности между антителами и являются определяющими для специфичности связывания конкретного антитела с его антигеном. Вариабельность сконцентрирована в трех гипервариабельных областях (HVR) в доменах VH и VL. Более консервативные части вариабельных доменов называются каркасными областями (FR), которые перемежаются HVR. Каждый из вариабельных доменов нативных тяжелых и легких цепей содержит четыре FR–области, соединенные тремя HVR, которые образуют петли  Kabat et al., , Fifth Edition, National institute of Health, Bethesda, Md. (1991)).
[0128]
Смотрите
Methods in Molecular Biology
Термин «гипервариабельная область (HVR)» может относиться к подобласти доменов VH и VL, характеризуемой повышенной вариабельностью последовательности и/или образованием определенных петель. Они включают три HVR в домене VH (H1, H2 и H3) и три HVR в домене VL (L1, L2 и L3). Считается, что H3 является критической в определении точной специфичности связывания, при этом L3 и H3 демонстрируют наибольший уровень разнообразия.  Johnson and Wu, в  248:1–25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003).
[0129]
et at, Sequences of Proteins of Immunological Interest,
J. Mol Biol
Известно некоторое количество вариантов определения границ HVR. Определяющие комплементарность области по Kabat (CDR) основаны на вариабельности последовательности и являются наиболее применяемыми (Kabat  5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia, напротив, относится расположению структурных петель (Chothia and Lesk  196:901–917 (1987)). HVR по AbM представляют компромиссный вариант между HVR по Kabat и структурными петлями по Chothia, и используются в программном обеспечении для моделирования антител Oxford Molecular's AbM. «Контактные» HVR определяют в анализе доступных кристаллических структур комплексов. Остатки из каждой из этих HVR приведены ниже. Остатки «каркасной области» или «FR» представляют собой остатки вариабельного домена, отличные от остатков HVR.
Петля
Kabat
AbM
Chothia
Контакт
L1
L24–L34
L24–L34
L26–L32
L30–L36
L2
L50–L56
L50–L56
L50–L52
L46–L55
L3
L89–L97
L89–L97
L91–L96
L89–L96
H1
H26–H35B
H31–H35B
H26–H32
H30–H35B (нумерация Kabat)
H1
H31–H35
H26–H35
H26–H32
H30–H35 (нумерация Chothia)
H2
H50–H65
H50–H58
H53–H55
H47–H58
H3
H95–H102
H95–H102
H96–H101
H93–H101
[0130]
Также известны «удлиненные» HVR: 24–36 или 24–34 (L1), 46–56 или 50–56 (L2) и 89–97 или 89–96 (L3) в VL и 26–35 (H1), 50–65 или 49–65 (H2) и 93–102, 94–102, или 95–102 (H3) в VH (нумерация Kabat).
[0131]
выше.
(например,
«Нумерация в соответствии с Kabat» может относиться к системе нумерации, применяемой в отношении вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи при составлении антител в Kabat et al.,  Фактическая линейная аминокислотная последовательность может содержать меньшее или дополнительное количество аминокислот, что соответствует укорочению FR или HVR вариабельного домена или вставке в них. Нумерация остатков по Kabat для данного антитела может быть определена путем выравнивания областей гомологии последовательности антитела со «стандартной» пронумерованной по Kabat последовательностью. Как правило, нумерацию Kabat используют в отношении остатков в вариабельных доменах (приблизительно остатки 1–107 легкой цепи и остатки 1–113 тяжелой цепи), тогда как систему нумерации или индекс EU  индекс EU по Kabat, нумерация в соответствии с EU IgG1) в общем случае используют в отношении остатков в константной области тяжелой цепи.
[0132]
например,
«Полноразмерные» или «интактные» антитела, как правило, содержат тяжелые цепи с Fc–областью,  в отличие от фрагмента антитела. Антигенсвязывающие фрагменты «Fab» с одним антигенсвязывающим участком можно отделять от остаточного Fc–фрагмента путем расщепления папаином. Фрагменты F(ab’)2 содержат два антигенсвязывающих участка, получаемых при обработке антитела пепсином. При этом фрагменты антител содержат одну или более вариабельных областей антитела.
[0133]
например,
Смотрите
The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,
(например,
Смотрите
Nature
Nature Struct. Biol.
(например,
Фрагмент «Fv» содержит полный антигенсвязывающий участок. Одноцепочечный Fv (scFv) может содержать домены VH и VL, связанные пептидным линкером с ассоциацией доменов VH и VL,  как в случае антитела или фрагмента Fab, таким образом, чтобы HVR образовывали антигенсвязывающий участок.  Pluckthiin, в  vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer–Verlag, New York, 1994), pp. 269–315. В некоторых вариантах реализации scFv слит с Fc–доменом антитела  scFv–Fc). Несмотря на то, что антигенсвязывающий участок составляют шесть HVR, один вариабельный домен с тремя HVR все равно способен связывать антиген, хоть и с меньшей аффинностью.  Hamers–Casterman et al., 363:446–448 (1993); Sheriff et al.,  3:733–736 (1996). Однодоменныеантитела  антитела верблюжьих), как правило, содержат один мономерный вариабельный домен для связывания антигена. Также известны антитела из одной тяжелой цепи (VHH) и одной легкой цепи. Фрагмент Fab’, как правило, содержит несколько дополнительных остатков в С–конце по сравнению с фрагментом Fab. Fab’–SH содержит остатки цистеина со свободным тиолом. В данной области техники известны различные варианты химического сопряжения фрагментов антител.
[0134]
Смотрите
Nat. Med.
«Диатело» содержит фрагменты антитела с двумя антигенсвязывающими участками. Они включают домены VH и VL, соединенные линкером, который, как правило, является слишком коротким для облегчения спаривания доменов из одной цепи. Диатела могут быть бивалентными или биспецифическими. Известны также триатела и тетратела или антитела с другим числом доменов VH/VL.  Hudson et ah, 9:129–134 (2003).
[0135]
например,
например,
(например,
например,
смотрите, например,
Nature
et al, Hybridoma,
et al. Antibodies: A Laboratory Manual,
et al.,
Monoclonal Antibodies and T–Cell Hybridomas
et al, Nature,
et al, J.
Mol. Biol.
et al, J. Mol. Biol.
et al, J. Mol. Biol.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
et al, J. Immunol. Methods
et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
et al., Nature
et al. Year in Immunol
et al, Bio/Technology
Nature
Nature
et al, Nature Biotechnol
Nature Biotechnol.
Intern. Rev. Immunol.
В контексте данного документа «моноклональное» антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител,  по существу идентичных, но допускающих незначительные уровни фоновых мутаций и/или модификаций. Выражение «моноклональное» указывает на по существу гомогенный характер антител и не требует получения антитела каким–либо конкретным способом. В некоторых вариантах реализации моноклональное антитело выбирают по его последовательностям HVR, VH и/или VL и/или свойствам связывания,  выбирают из пула клонов  полученных рекомбинантным способом, из гибридомы или с помощью фага). Моноклональное антитело может быть сконструировано так, чтобы оно содержало одну или более мутаций,  для изменения аффинности связывания или других свойств антитела, создания гуманизированного или химерного антитела, улучшения выработки и/или гомогенности антител, конструирования мультиспецифического антитела, при этом получаемые в результате антитела считаются моноклональными по своей природе. Популяцию моноклональных антител можно отличить от поликлональных антител, так как отдельные моноклональные антитела в популяции распознают один и тот же антигенный участок. Известны различные методики получения моноклональных антител;  гибридомный способ (например, Kohler and Milstein, , 256:495–97 (1975); Hongo  14 (3): 253–260 (1995), Harlow  (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling  в: 563–681 (Elsevier, N.Y., 1981)), методы рекомбинантных ДНК (смотрите, например, патент США № 4816567), технологии фагового дисплея (смотрите, например, Clackson  352: 624–628 (1991); Marks  222: 581–597 (1992); Sidhu  338(2): 299–310 (2004); Lee  340(5): 1073–1093 (2004); Fellouse,  101(34): 12467–12472 (2004); и Lee  284(1–2): 119–132 (2004), а также технологии получения человеческих и подобных человеческим антител у животных, которые содержат часть локусов или все локусы человеческого иммуноглобулина или гены, кодирующие последовательности человеческого иммуноглобулина (смотрите, например, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits  90: 2551 (1993); Jakobovits  362: 255–258 (1993); Bruggemann  7:33 (1993); патенты США № 5545807; 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; и 5661016; Marks  10: 779–783 (1992); Lonberg et al.,  368: 856–859 (1994); Morrison,  368: 812–813 (1994); Fishwild  14: 845–851 (1996); Neuberger,  14: 826 (1996); и Lonberg and Huszar,  13: 65–93 (1995).
[0136]
«Химерные» антитела могут относиться к антителу с одной частью тяжелой и/или легкой цепи от конкретного изотипа, класса или организма и другой частью от другого изотипа, класса или организма. В некоторых вариантах реализации вариабельная область получена из одного источника или организма, а константная область – из другого.
[0137]
(например,
(например,
например,
Смотрите
et al
Nature
et al., Nature
Curr. Op. Struct. Biol.
«Гуманизированные» антитела могут относиться к антителам с преимущественно человеческой последовательностью и минимальным количеством отличной от человеческой  мышиной или куриной) последовательности. В некоторых вариантах реализации гуманизированное антитело содержит одну или более последовательностей HVR (обеспечивающих представляющую интерес специфичность связывания) из антитела, полученного из отличного от человеческого  мышиного или куриного) организма, привитых в каркасную область (FR) реципиентного человеческого антитела. В некоторых вариантах реализации нечеловеческие остатки дополнительно привиты в человеческую каркасную область (не присутствующую ни в одном из исходных или реципиентных антител),  для улучшения свойств антитела. В общем случае гуманизированное антитело будет содержать практически все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или практически все гипервариабельные петли представлены областями нечеловеческого иммуноглобулина, а все или практически все FR представлены последовательностью человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело также необязательно будет содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, человеческого иммуноглобулина.  Jones .,  321:522–525 (1986); Riechmann 332:323–329 (1988); и Presta,  2:593–596 (1992).
[0138]
J. Mol. Biol,
et al, J. Mol. Biol.,
et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,
et al, J. Immunol,
например,
например,
(смотрите, например,
«Человеческое» антитело может относиться к антителу, имеющему аминокислотную последовательность, которая соответствует последовательности антитела, вырабатываемого человеком и/или была получена любым из способов получения человеческих антител, описанных в данном документе. Человеческие антитела можно получать различными способами, известными в данной обрасти техники, включая библиотеки фагового дисплея; Hoogenboom and Winter,  227:381 (1991); Marks  222:581 (1991); получение моноклональных человеческих антител, как описано в Cole  Alan R, Liss, p. 77 (1985); Boerner 147(1):86–95 (1991); и путем введения антигена трансгенному животному, которое было модифицировано так, чтобы вырабатывать такие антитела в ответ на антигенную стимуляцию, но чьи эндогенные локусы были инактивированы,  иммунизированным ксеномышам (смотрите,  патенты США № 6075181 и 6150584 в отношении технологии XENOMOUSE™) или курам с последовательностью (–ями) человеческого иммуноглобулина  WO2012162422, WO2011019844 и WO2013059159).
[0139]
В контексте данного документа «линкер» относится к связи между двумя элементами, например, белковыми доменами. В некоторых вариантах реализации линкер может представлять собой ковалентную связь или спейсер. Термин «спейсер» относится к соединению (например, полимеру полиэтиленгликоля (ПЭГ)) или аминокислотной последовательности (например, последовательности из 1–200 аминокислот), находящимся между двумя полипептидами или полипептидными доменами и обеспечивающему пространство или гибкость (или как пространство, так и гибкость) между двумя полипептидами или полипептидными доменами. В некоторых вариантах реализации аминокислотный спейсер является частью первичной последовательности полипептида (например, соединен с разнесенными полипептидами или полипептидными доменами посредством полипептидного остова).
[0140]
В контексте данного документа термин «цитотоксический агент» может относиться к любому агенту, который ингибирует клеточную пролиферацию или индуцирует гибель клеток. Цитотоксические агенты включают, но не ограничиваются этим, химиотерапевтические агенты; радиоактивные изотопы; агенты, ингибирующие рост; и токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины, включая их фрагменты и/или варианты. Типовые цитотоксические агенты включают, без ограничений, ингибиторы метаболизма, агенты против микротрубочек, содержащие платину соединения, алкилирующие агенты, ингибиторы протеасом, ингибиторы топоизомеразы II, антиметаболиты, ингибиторы топоизомеразы I, ингибиторы путей сигнальной трансдукции, ингибиторы ангиогенеза нерецепторной тирозинкиназы, гормоны и аналоги гормонов, проапоптотические агенты, ингибиторы LDH–A, ингибиторы клеточного цикла, ингибиторы HDAC и антибиотики.
[0141]
например,
(например,
В контексте данного документа «метка» может включать любое соединение, которое служит агентом для выявления,  связывания между меченым антителом согласно настоящему изобретению и макромолекулой или клеткой. Типовые метки включают, без ограничений, флуоресцентные  соединения или белки), радиоактивные или ферментные соединения, а также метки для аффинной очистки.
[0142]
in vitro
in vivo
Д
В контексте данного документа можно говорить, что антитело «связывает» антиген с аффинностью, достаточной для того, чтобы антитело было применимо для  и/или  манипуляций с антигеном. В некоторых вариантах реализации антитело, которое «связывает» антиген, характеризуется константой диссоциации (K) в отношении антигена, меньшей или равной 1 мкМ при 25°C.
[0143]
Д
А
Д
Д
Д
Д
дисс.
асс.
В контексте данного документа термин «аффинность» или «аффинность связывания» относится к силе связывающего взаимодействия между двумя молекулами. В общем случае аффинность связывания относится к силе общих нековалентных взаимодействий между молекулой и ее партнером по связыванию, например, высокоаффинным вариантом D1 SIRP–α и CD47. Если не указано иное, аффинность связывания относится к характерной аффинности связывания, которая отображает 1:1 взаимодействие между представителями связывающейся пары. Аффинность связывания между двумя молекулами обычно описывается константой диссоциации (K) или константой ассоциации (K). Две молекулы, имеющие низкую аффинность связывания в отношении друг друга в общем случае связываются медленно с тенденцией к быстрой диссоциации и демонстрируют большое значение K. Две молекулы, имеющие высокую аффинность связывания в отношении друг друга в общем случае связываются легко с тенденцией к тому, чтобы дольше оставаться связанными, и демонстрируют небольшое значение K. В некоторых вариантах реализации K двух взаимодействующих молекул определяют, используя известные способы и технологии, например, метод поверхностного плазмонного резонанса (ППР). K можно рассчитать как соотношение k/k.
[0144]
Д
Д
Д
Д
Д
Д
В контексте данного документа термин «K меньше чем» относится к численно меньшему значению K и повышению аффинности связывания по отношению к указанному значению K. В контексте данного документа термин «K больше чем» относится к численно большему значению K и снижению аффинности связывания по отношению к указанному значению K.
[0145]
В контексте данного документа термин «лечение» может относиться к терапевтическому введению молекулы, соединения, состава, композиции и т. д. с целью изменения одного или более патологических симптомов у подлежащего лечению индивида или в клетке. Желаемое действие лечения может включать, без ограничений, замедление прогрессирования заболевания, уменьшение или облегчение патологического симптома или состояния заболевания, улучшение прогноза и/или достижение ремиссии заболевания. Например, «лечение» рака у индивида считается успешным при уменьшении или устранении одного или более симптомов, связанных с раком, таких как, без ограничений, снижение пролиферации раковых клеток, элиминация раковых клеток или опухолевой нагрузки, уменьшение симптомов, связанных с раком, повышение качества жизни индивида, снижение дозы других лекарственных средств и/или продление жизни индивида. В качестве другого примера «лечение» аутоиммунного или воспалительного заболевания может считаться успешным при уменьшении или устранении одного или более симптомов, связанных с аутоиммунным или воспалительным заболеванием, таких как, без ограничений, снижение числа аутореактивных иммунных клеток и/или воспалительных иммунных клеток или цитокинов, снижение иммунной активации и/или воспаления, замедление или уменьшение повреждения органов в результате заболевания, снижение симптомов, связанных с заболеванием, повышение качества жизни индивида, снижение дозы других лекарственных средств и/или продление жизни индивида.
[0146]
например,
например,
например,
В контексте данного документа «замедление прогрессирования» заболевания может относиться к замедлению, задержке, отсрочке, отложению развития, стабилизации или какому–либо иному торможению патологического течения заболевания. В некоторых вариантах реализации этот термин может относиться к замедлению, достаточному для эффективного предотвращения,  предотвращения развития заболевания у индивида. В некоторых вариантах реализации,  замедление прогрессирования распространенного рака может включать замедление появления метастазов. Специалисту в данной области техники понятно, что точная величина замедления может зависеть,  от конкретного заболевания, состояния индивида и т. д.
[0147]
(например,
Термины «рак» и «раковый» могут описывать нарушение регуляции или отсутствие регуляции роста/пролиферации клеток со стороны клетки или клеток млекопитающего. Может быть включен любой известный в данной области техники тип рака, такой как, без ограничений, карцинома, саркома, лимфома, лейкоз, лимфома и бластома. Более конкретные примеры таких видов рака включают, но не ограничиваются этим, рак легкого, плоскоклеточный рак, опухоли головного мозга, глиобластому, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, колоректальный рак  рак толстой или прямой кишки), рак печени, рак мочевого пузыря, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, рак яичника, рак мочевыводящих путей, рак молочной железы, перитонеальный рак, рак матки, рак слюнных желез, рак почки, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному анального канала, карциному полового члена, меланому, множественную миелому и B–кеточную лимфому (включая неходжкинскую лимфому (НХЛ)); острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ); хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); острый миелоидный лейкоз (ОМЛ); карциному из клеток Меркеля; волосатоклеточный лейкоз; хронический миелобластный лейкоз (ХМЛ); и связанные с ними метастазы.
[0148]
например,
В контексте данного документа термин «эффективное количество» может относиться к количеству антитела согласно настоящему изобретению или фармацевтической композиции, содержащей антитело согласно настоящему изобретению, являющемуся достаточным и эффективным для обеспечения необходимого терапевтического действия при лечении или замедлении прогрессирования пациента, имеющего заболевание, такое как рак, например, солидную опухоль или рак крови. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество позволяет избежать нежелательных побочных явлений, и/или благоприятное действие превосходит такие побочные явления. Эффективное количество может зависеть от подлежащего лечению индивида,  возраста, массы, пола, состояния заболевания, а также от способности агента вызывать необходимый ответ. Эффективное количество можно вводить за одно или более введений. В клиническом контексте эффективное количество лекарства, соединения или фармацевтической композиции может быть или не быть обеспечено в сочетании с другим лекарством, соединением или фармацевтической композицией, например, другим терапевтическим агентом. Таким образом, «эффективное количество» также можно рассматривать в контексте введения одного или более других терапевтических агентов, при этом считается, что отдельный агент применяется в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более другими агентами может быть обеспечен или обеспечивается необходимый результат.
[0149]
В контексте данного документа термин «фармацевтическая композиция» может относиться к медицинскому или фармацевтическому составу, который содержит активный ингредиент, а также вспомогательные вещества или разбавители (или как вспомогательные вещества, так и разбавители), и обеспечивает возможность введения активного ингредиента удобными способами введения. В некоторых вариантах реализации описанные в данном документе фармацевтические композиции содержат фармацевтически приемлемые компоненты, которые совместимы с одним или более антителами согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция находится в форме таблетки или капсулы для перорального приема или в водной форме для внутривенного или подкожного введения, например, посредством инъекции.
[0150]
В контексте данного документа термины «субъект», «индивид» и «пациент» используются взаимозаменяемо и относятся к позвоночному, например, млекопитающему. Млекопитающие включают, но не ограничиваются этим, мышей, обезьян, людей, сельскохозяйственных животных, спортивных животных и домашних животных.
[0151]
(например,
В контексте данного документа выражения «в сочетании с» или «в комбинации с» могут относиться к введению одного терапевтического средства в дополнение к  до, во время и/или после) другому терапевтическому средству.
Антитела
[0152]
Фиг. 1A
SIRPΑ
смотрите
et al.
Nat. Immunol.
Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к антителам, которые связывают внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба. Как продемонстрировано в данном документе, были получены характеристики антител, которые специфически связываются с v1 или v2, а также антител, которые связываются с обоими белками. У людей было идентифицировано по меньшей мере 10 разных аллелей гена  (смотрите ; также  Takenaka, K.  (2007)  8:1313–23). Описанные в данном документе антитела, которые связывают один или более человеческих полипептидов SIRP–α и обладают одной или более другими специфичностями связывания, являются полезным открытием настоящего изобретения. Кроме того, в настоящем изобретении продемонстрированы способы получения и идентификации антител, представляющих удивительное разнообразие новых профилей специфичности связывания SIRP–α.
[0153]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFP
RVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGN1TPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPTQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, содержащий аминокислотную последовательность
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFP
RVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5), и внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELiYNQKEGHFPR
VTTVSESTKRENMDESISISNiTP AD AGTY YC VKFRKGSPDTEFKSG AGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6).
[0154]
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. В контексте данного документа выражение «человеческий вариантный полипептид SIRP–α» может относиться к человеческому вариантному полипептиду SIRP–α природного происхождения или полиморфизму, экспрессируемому у людей,  в отличие от варианта, несущего одну или более сконструированных мутаций. Например, в некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) одного или более человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, содержащих последовательность, приведенную в таблице 1. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1 и/или внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 и связывается с внеклеточным доменом (например, доменом D1) одного или более человеческих полипептидов SIRP–α, выбранных из v3, v4, v5, v6, v7, v8, v9 и v10.
Таблица 1.
Последовательности человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, соответствующие домену D1.
Вариант
SEQ ID NO
Последовательность
v1
5
<img file="00000001.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v2
6
<img file="00000002.jpg" he="5" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000003.jpg" he="8" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v3
76
<img file="00000004.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v4
77
<img file="00000005.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v5
78
<img file="00000006.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v6
79
<img file="00000007.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v7
80
<img file="00000008.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v8
81
<img file="00000009.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v9
82
<img file="00000010.jpg" he="12" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
v10
83
<img file="00000011.jpg" he="13" wi="100" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0155]
(например,
(например,
Macaca fascicularis).
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α  домен D1 обезьяньего полипептида SIRP–α). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака  встречающийся в организме  В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) по меньшей мере двух разных обезьяньих вариантных полипептидов SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) по меньшей мере двух разных вариантных полипептидов SIRP–α яванского макака. Например, в некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPEKSVSVAAGESATLNCTATSLIPVGPIQWFRGVGPGRELIYHQKEGHFP RVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO: 11, внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака, содержащий аминокислотную последовательность EEELQVIQPEKSVSVAAGDSATLNCTVSSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNLKEGHFPRVTAVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO: 12), или их оба.
[0156]
(например,
Mus musculus
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен мышиного полипептида SIRP–α  встречающийся в организме ;  домен D1 мышиного полипептида SIRP–α). В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных мышиных вариантных полипептидов SIRP–α. Известно множество мышиных вариантных полипептидов SIRP–α от разных линий мышей. В некоторых вариантах реализации мышиный вариантный полипептид SIRP–α сдержит аминокислотную последовательность, выбранную из
KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIKWYRGVGQSRLLIYSFTGEHFPRVTNVSDATKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQKGPSEPDTEIQSGGGTEVYVLAKPS (SEQ ID NO: 7; из линии мышей 129),
TEVKVIQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGQSRQLIYSFTTEHFPRVTNVSDATKRSNLDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQRGSPDTEIQSGGGTEVYVLAK (SEQ ID NO:8; из линии мышей NOD),
KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGPSRLLIYSFAGEYVPRIRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPADAGIYYCVKFQKGSSEPDTEIQSGGGTEVYVLA K (SEQ ID NO:9; из линии мышей C57BL/6) и
TEVKVTQPEKSVSVAAGDSTILNCTVTSLLPVGPIRWYRGVGQSRLLIYSFTGEHFPRIRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQRGSSEPDTEIQSGGGTEVYVLAK (SEQ ID NO: 10; из линии мышей BALB/c).
[0157]
SIRPB1
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) белка человеческого семейства SIRP. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации человеческий полипептид SIRP–β относится к полипептиду, кодируемому человеческим геном ,  описываемым NCBI Ref Seq ID No. 10326. В некоторых вариантах реализации внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β содержит аминокислотную последовательность EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO: 13) или EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYN QKEGHEPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDHVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO: 14).
[0158]
SIRPG
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации человеческий полипептид SIRP–γ относится к полипептиду, кодируемому человеческим геном ,  описываемым NCBI Ref Seq ID No. 55423. В некоторых вариантах реализации внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ содержит аминокислотную последовательность EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSPENVEFKSGPGTEMALGAKPS (SEQ ID NO: 15).
[0159]
Кроме антител, которые связывают один или более из описанных выше полипептидов, в настоящем изобретении предусмотрены антитела, которые не связывают один или более из описанных выше полипептидов. Иными словами, профиль связывания антитела согласно настоящему изобретению может быть охарактеризован путем положительного или отрицательного перечисления любых вариантов специфичности связывания и/или свойств, описанных в данном документе.
[0160]
(например,
(например,
et al.
Nature
et al.
Biochem. Biophys. Res. Commun.
et al.
Inflammation Research
et al.
Immunity
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению модулирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению антагонизирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению препятствует сигнализации SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению агонизирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α. В некоторых вариантах реализации сигнализация SIRP–α включает одно или более внутриклеточных сигнальных событий, опосредованных активацией полипептида SIRP–α, включая, без ограничений, фосфорилирование тирозина внутриклеточной области SIRP–α, связывание фосфатазы  SHP1), связывание адаптерного белка  SCAP2, FYB и/или GRB2) и выработку оксида азота. Различные методы анализа для определения сигнализации SIRP–α в клетке включают, без ограничений, фосфорилирование SIRP–α, совместную иммунопреципитацию SHP1 и SHP2, сигнализацию PI3–киназы, выработку цитокинов (как воспалительных IL–12, IL–23, TNFα, IFN, так и супрессивных цитокинов IL–10, IL–4, IL–13, уровней маркеров клеточной поверхности для маркеров макрофагов M1 и M2) или активацию и функцию дендритных клеток; Kharitonenkov, A.  (1997)  386: 181–6; Ochi, F.  (1997)  239:483–7; Kim, E.J.  (2013)  62:377–86; Yi. T.  (2015)  43:764–75.
[0161]
например,
например,
В некоторых вариантах реализации клетка, экспрессирующая человеческий полипептид SIRP–α, представляет собой лейкоцит. В некоторых вариантах реализации клетка представляет собой макрофаг, дендритную клетку, нейтрофил, эозинофил или миелоидную супрессорную клетку (МСК). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению снижает или антагонизирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90%,  при применении одного или более методов анализа сигнализации SIRP–α, описанных в данном документе или известных в данной области техники. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению повышает или агонизирует сигнализацию SIRP–α в клетке, экспрессирующей человеческий полипептид SIRP–α, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90%,  при применении одного или более методов анализа сигнализации SIRP–α, описанных в данном документе или известных в данной области техники.
[0162]
например,
et al
Science
et al.
Proc. Natl. Acad. Sci.
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению модулирует межклеточный фенотип, опосредованный SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению усиливает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α. Например, фагоцитарную активность макрофага, обработанного или приведенного в контакт с антителом согласно настоящему изобретению, можно сравнивать с фагоцитарной активностью макрофага, не обработанного или не приведенного в контакт с антителом, или же фагоцитарную активность макрофага, который экспрессирует человеческий полипептид SIRP–α и обрабатывается или приводится в контакт с антителом согласно настоящему изобретению, можно сравнивать с фагоцитарной активностью макрофага, который не экспрессирует человеческий полипептид SIRP–α и обрабатывается или приводится в контакт с антителом. Типовые методы анализа фагоцитоза можно найти,  в Wieskopf, K.  (2013)  341: 88 и Willingham, S.B.  (2012)  109:6662–7. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению повышает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90%,  при применении одного или более методов анализа фагоцитоза, описанных в данном документе или известных в данной области техники.
[0163]
(например,
(например,
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению усиливает активацию дендритной (–ых) клетки (–ок), экспрессирующей (–их) человеческий полипептид SIRP–α  повышает уровень активации отдельных дендритных клеток или повышает долю активированных дендритных клеток в популяции образца). Например, активацию дендритных клеток, обработанных или приведенных в контакт с антителом согласно настоящему изобретению, можно сравнивать с активацией дендритных клеток, не обработанных или не приведенных в контакт с антителом, или же активацию дендритных клеток, которые экспрессируют человеческий полипептид SIRP–α и обрабатываются или приводятся в контакт с антителом согласно настоящему изобретению, можно сравнивать с активацией дендритных клеток, которые не экспрессируют человеческий полипептид SIRP–α и обрабатываются или приводятся в контакт с антителом. Типовые методы анализа активации дендритных клеток описаны в данном документе. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению повышает активацию дендритных клеток  экспрессирующих человеческий полипептид SIRP–α), по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90%,  при применении одного или более методов анализа активации дендритных клеток, описанных в данном документе или известных в данной области техники.
[0164]
in vivo
in vivo
in vivo
in vivo
in vivo
например,
in vivo
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению ингибирует рост опухоли, которая экспрессирует CD47. Например,  рост опухоли, которая экспрессирует CD47 и обрабатывается антителом согласно настоящему изобретению, можно сравнивать с  ростом опухоли, которая экспрессирует CD47 и не обрабатывается антителом согласно настоящему изобретению. Типовые методы анализа  роста опухоли описаны в данном документе. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению ингибирует  рост опухоли, которая экспрессирует CD47, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90%,  при применении одного или более методов анализа  роста опухоли, описанных в данном документе или известных в данной области техники.
[0165]
(например,
смотрите
et al.
J. Biol. Chem.
et al.
J.
Mol. Biol.
in vitro
например,
in vitro
in vitro
(например,
например,
(например,
(например,
т. е.
(например,
например,
in vivo
in vivo
например,
(например,
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47  «блокирующее антитело»). Например, антитело и полипептид CD47 могут «конкурировать» за один и тот же эпитоп SIRP–α и/или связывание антитела с SIRP–α может быть взаимно исключающим со связыванием CD47 с SIRP–α. Область связывания между SIRP–α и CD47, а также остатки обоих белков, которые участвуют в связывании, являются известными:  Hatherley, D.  (2007)  282:14567–75 и Nakaishi, A.  (2008)  375:650–60. Типовые методы анализа для определения того, блокирует ли антитело связывание CD47 с SIRP–α, описаны в данном документе. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 в  анализе,  с применением очищенных полипептидов SIRP–α и/или CD47. Например, в данном документе описаны методы  анализа ELISA и ППР, хотя это не подразумевает ограничения, так как можно использовать также другие методы  анализа связывания. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α  связывание высокоаффинного домена D1 SIRP–α искусственного происхождения с CD47 с более высокой аффинностью, чем в случае одного или более вариантов природного происхождения, как описано в данном документе), связанным с доменом IgSF CD47, используют для скрининга в отношении блокирующих, неблокирующих и/или отталкивающих антител. В некоторых вариантах реализации «блокирующие» и/или «неблокирующие» антитела можно исследовать методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР;  как описано в примере 1). Например, может происходить образование комплекса между доменом IgSF CD47 и вариантом D1 SIRP–α  связывание высокоаффинного домена D1 SIRP–α искусственного происхождения с CD47 с более высокой аффинностью, чем в случае одного или более вариантов природного происхождения, как описано в данном документе), а затем можно определять связывание исследуемого антитела с комплексом. В случае антитела, которое блокирует связывание SIRP–α с CD47, при повышении концентрации CD47 можно было бы ожидать, что меньше молекул SIRP–α будет доступно для связывания с антителом, так как антитело конкурирует за один и тот же участок связывания, что и CD47, а большинство/весь SIRP–α находится в комплексе CD47. Следовательно, можно ожидать снижение резонанса (РЕ) при повышении концентрации CD47 в смеси. В некоторых вариантах реализации «блокирующее» анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению связывается с внеклеточным доменом полипептида SIRP–α  доменом D1) в одном или более остатках области связывания между CD47 и SIRP–α,  блокирующее антитело и CD47 используют частично или полностью перекрывающиеся эпитопы. В некоторых вариантах реализации «блокирующее» анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению связывается с внеклеточным доменом полипептида SIRP–α  доменом D1) в одной или более позициях, которые также связываются CD47 в комплексе CD47: SIRP–α. Области связывания между SIRP–α и типовыми анти–SIRP–α антителами или CD47 описаны в примере 4. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки,  при применении  анализа связывания между полипептидами, экспрессируемыми на поверхности клеток. В некоторых вариантах реализации  анализ может позволить оценить связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки, посредством анализа одного или более аспектов сигнализации SIRP–α,  одного или более внутриклеточных событий сигнализации, опосредованных активацией полипептида SIRP–α, включая, без ограничений, фосфорилирование тирозина внутриклеточной области SIRP–α, связывание фосфатазы  SHP1), связывание адаптерного белка  SCAP2, FYB и/или GRB2), выработку цитокинов (например IL–10, IL–1β, IFN или TNF) и выработку оксида азота; и/или одного или более межклеточных фенотипов, включая, без ограничений, фагоцитоз макрофагами и другие активирующие или супрессивные фенотипы макрофагов, эозинофилов, нейтрофилов, дендритных клеток и миелоидных супрессорных клеток (МСК).
[0166]
(например,
in vitro
например,
in vitro
in vitro
например,
например,
(например,
(например,
т. е.
например,
in vivo
in vivo
например,
(например,
in vivo
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47  «неблокирующее антитело»). Например, антитело и полипептид CD47 могут связывать различные и/или не перекрывающиеся эпитопы SIRP–α. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 в  анализе,  с применением очищенных полипептидов SIRP–α и/или CD47. Например, в данном документе описаны методы  анализа ELISA и ППР, хотя это не подразумевает ограничения, так как можно использовать также другие методы  анализа связывания. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α ( связывание высокоаффинного домена D1 SIRP–α искусственного происхождения с CD47 с более высокой аффинностью, чем в случае одного или более вариантов природного происхождения, как описано в данном документе), связанный с доменом IgSF CD47, используют для скрининга в отношении блокирующих, неблокирующих и/или отталкивающих антител. В некоторых вариантах реализации «блокирующие» и/или «неблокирующие» антитела можно исследовать методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР;  как описано в примере 1). Например, может происходить образование комплекса между доменом IgSF CD47 и вариантом D1 SIRP–α  связывание высокоаффинного домена D1 SIRP–α искусственного происхождения с CD47 с более высокой аффинностью, чем в случае одного или более вариантов природного происхождения, как описано в данном документе), а затем можно определять связывание исследуемого антитела с комплексом. В случае антитела, которое не блокирует связывание SIRP–α с CD47, можно ожидать, что антитело будет связывать комплекс SIRP–α /CD47 и образовывать сандвич–структуру. Следовательно, при повышении концентрации CD47 будет возрастать резонанс вследствие повышения образования сандвич–структур. В некоторых вариантах реализации «неблокирующее» анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению связывается с внеклеточным доменом полипептида SIRP–α  доменом D1) в одном или более остатках, отличных от области связывания между CD47 и SIRP–α,  неблокирующее антитело и CD47 используют полностью не перекрывающиеся эпитопы. Области связывания между SIRP–α и типовыми анти–SIRP–α антителами или CD47 описаны в примере 4. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки,  при применении  анализа связывания между полипептидами, экспрессируемыми на поверхности клеток. В некоторых вариантах реализации  анализ может позволить оценить связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки, посредством анализа одного или более аспектов сигнализации SIRP–α,  одного или более внутриклеточных событий сигнализации, опосредованных активацией полипептида SIRP–α, включая, без ограничений, фосфорилирование тирозина внутриклеточной области SIRP–α, связывание фосфатазы (например, SHP1), связывание адаптерного белка  SCAP2, FYB и/или GRB2), выработку цитокинов (например IL–10, IL–1β, IFN или TNF) и выработку оксида азота; и/или одного или более межклеточных фенотипов, включая, без ограничений, фагоцитоз макрофагами и другие активирующие или супрессивные фенотипы макрофагов, эозинофилов, нейтрофилов, дендритных клеток и миелоидных супрессорных клеток (МСК). Удивительным открытием настоящего изобретения стало то, что антитела, которые не блокируют взаимодействие SIRP–α с CD47, способны повышать фагоцитоз и блокировать  рост опухоли. Не ограничиваясь теорией считается, что неблокирующие анти–SIRP–α антитела могут модулировать одну или более функций SIRP–α независимо от связывания CD47.
[0167]
(например,
(например
(например
in vitro
например,
in vitro
например,
in vitro
in vitro
например,
например,
in vivo
т. е.
например,
in vivo
in vivo
например,
(например,
(например,
дисс.
дисс.
дисс.
дисс.
–3
В некоторых вариантах реализации связывание антитела согласно настоящему изобретению с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47  «отталкивающее» антитело). В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого высокоаффинного полипептида SIRP–α , описанного в данном документе) повышает k человеческого высокоаффинного полипептида SIRP–α , описанного в данном документе) в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47 до более чем около 1×10 1/с. Например, антитело и полипептид CD47 могут использовать смежные или частично перекрывающиеся эпитопы SIRP–α так, чтобы антитело было способно связывать SIRP–α, когда оно связано с CD47, но антитело: SIRP–α стимулирует диссоциацию SIRP–α: CD47. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению снижает аффинность внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47 в  анализе,  с применением очищенных полипептидов SIRP–α и/или CD47. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47 в  анализе,  с применением очищенных полипептидов SIRP–α и/или CD47. Например, в данном документе описаны методы  анализа ELISA и ППР, хотя это не подразумевает ограничения, так как можно использовать также другие методы  анализа связывания. В некоторых вариантах реализации связывание антитела с комплексом, содержащим вариант D1 SIRP–α ( связывание высокоаффинного домена D1 SIRP–α искусственного происхождения с CD47 с более высокой аффинностью, чем в случае одного или более вариантов природного происхождения, как описано в данном документе), связанный с доменом IgSF CD47, используют для скрининга в отношении блокирующих, неблокирующих и/или отталкивающих антител. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению снижает аффинность внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки,  при применении  анализа связывания между полипептидами, экспрессируемыми на поверхности клеток. В некоторых вариантах реализации «отталкивающее» анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению связывается с внеклеточным доменом (например, доменом D1) полипептида SIRP–α в одном или более остатках области связывания между CD47 и SIRP–α,  отталкивающее антитело и CD47 используют частично перекрывающиеся эпитопы. В некоторых вариантах реализации «отталкивающее» анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению связывается с внеклеточным доменом (например, доменом D1) полипептида SIRP–α в 1 или более остатках, которые также связываются CD47 в комплексе CD47:SIRP–α. Например, «отталкивающее» анти–SIRP–α антитело может связываться с внеклеточным доменом (например, доменом D1) полипептида SIRP–α в 2 или более остатках, которые также связываются CD47 в комплексе CD47:SIRP–α и находятся на периферии эпитопа связывания CD47 на SIRP–α. Области связывания между SIRP–α и типовыми анти–SIRP–α антителами или CD47 описаны в примере 4. В некоторых вариантах реализации связывание антитела согласно настоящему изобретению с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, повышает k человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки,  при применении  анализа связывания между полипептидами, экспрессируемыми на поверхности клеток. В некоторых вариантах реализации  анализ может позволить оценить связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α, экспрессируемого на поверхности первой клетки, и доменом IgSF человеческого полипептида CD47, экспрессируемого на поверхности второй клетки, посредством анализа одного или более аспектов сигнализации SIRP–α,  одного или более внутриклеточных событий сигнализации, опосредованных активацией полипептида SIRP–α, включая, без ограничений, фосфорилирование тирозина внутриклеточной области SIRP–α, связывание фосфатазы  SHP1), связывание адаптерного белка  SCAP2, FYB и/или GRB2), выработку цитокинов (например, IL–10, IL–1β, IFN или TNF) и выработку оксида азота; и/или одного или более межклеточных фенотипов, включая, без ограничений, фагоцитоз макрофагами и другие активирующие или супрессивные фенотипы макрофагов, эозинофилов, нейтрофилов, дендритных клеток и миелоидных супрессорных клеток (МСК).
[0168]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению модулирует одну или более иммунных функций посредством связывания с двумя или более (или всеми тремя) из SIRP–α, SIRP–β и SIRPγ.
[0169]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0170]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0171]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47.
[0172]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0173]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0174]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47.
[0175]
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего  яванского макака) полипептида SIRP–α; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0176]
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего  яванского макака) полипептида SIRP–α; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47.
[0177]
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1, внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v2 или их оба; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) обезьяньего  яванского макака) полипептида SIRP–α; связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α; и при этом связывание антитела с внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α снижает аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении связывания домена IgSF человеческого полипептида CD47.
[0178]
Фиг. 3A и
3B
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывает по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 (смотрите, ).
[0179]
Фиг. 4A и
4B
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α, обезьяньего полипептида SIRP–α и по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 (смотрите, ).
[0180]
Фиг. 5A и
5B
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, мышиного полипептида SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывает по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 (смотрите, ).
[0181]
Фиг. 6A и 6B
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α и обезьяньего полипептида SIRP–α; при этом антитело не связывает мышиный полипептид SIRP–α; при этом антитело не связывает по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 (смотрите, ).
[0182]
Фиг. 7A и 7B
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α, обезьяньего полипептида SIRP–α и по меньшей мере один из внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–β и внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–γ; при этом антитело не связывает мышиный полипептид SIRP–α; и при этом антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 (смотрите, ).
[0183]
Фиг. 10A–10B и 11A–11J).
Фиг. 10A–10B и
11A–11J).
Фиг. 10A–10B и 11A–11J
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит три CDR из VH–домена, содержащего последовательность, приведенную в таблице 2, и/или три CDR из VL–домена, содержащего последовательность, приведенную в таблице 2 (последовательности VH и VL с выделенными CDR приведены на Например, в некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит три CDR из VH–домена, содержащего последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372, 378, 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394, 400, 116, 117, 118, 119, 282, 404, 406, 278, 412, 275, 414, 280, 123, 292, 288, 290, 408, 410, 286, 284, 120, 121, 130 и 122, и/или три CDR из VL–домена, содержащего последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361, 373, 134, 105,387,389,395,397,399, 403, 391, 393, 401, 93, 94, 95, 96, 283, 405, 407, 279, 413, 276, 415, 281, 100, 293, 289, 291, 409, 411, 287, 285, 97, 98, 107 и 99. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий последовательность, приведенную в таблице 2, и/или VL–домен, содержащий последовательность, приведенную в таблице 2 (смотрите Например, в некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372, 378, 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394, 400, 116, 117, 118, 119, 282, 404, 406, 278, 412, 275, 414, 2,80, 123, 292, 288, 290, 408, 410, 286, 284, 120, 121, 130 и 122, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361, 373, 134, 105, 387, 389, 395, 397, 399, 403, 391, 393, 401, 93, 94, 95, 96, 283, 405, 407, 279, 413, 276, 415, 281, 100, 293, 289, 291, 409, 411, 287, 285, 97, 98, 107 и 99. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит шесть последовательностей CDR из антитела, приведенного в таблице 2 (смотрите ). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий последовательность VL–доменов Hum1–Hum9, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой человеческое антитело. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен и/или VL–домен из антитела, приведенного в таблице 2. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий остаток D или E, за которым следует (например, в направлении от N–конца к C–концу) последовательность VH–домена, выбранная из SEQ ID NO: 116–130.
Таблица 2. Аминокислотные последовательности клонов антител, описанных в данном документе.
<b>Клон/Антитело</b>
<b>Каркасная область</b>
<b>Домен</b>
<b>SEQ ID NO</b>
<b>Последовательность</b>
S1
Куриная
VL
85
<img file="00000012.jpg" he="36" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S2
Куриная
VL
86
<img file="00000013.jpg" he="36" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S8
Куриная
VL
87
<img file="00000014.jpg" he="36" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S9
Куриная
VL
88
<img file="00000015.jpg" he="17" wi="68" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S11
Куриная
VL
89
<img file="00000016.jpg" he="36" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S12
Куриная
VL
90
<img file="00000017.jpg" he="27" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000018.jpg" he="5" wi="44" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S13
Куриная
VL
91
<img file="00000019.jpg" he="36" wi="152" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S14
Куриная
VL
92
<img file="00000020.jpg" he="17" wi="72" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S115
Человеческая
VL
93
<img file="00000021.jpg" he="36" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S116
Человеческая
VL
94
<img file="00000022.jpg" he="36" wi="152" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S117
Человеческая
VL
95
<img file="00000023.jpg" he="36" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S118
Человеческая
VL
96
<img file="00000024.jpg" he="35" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S119
Человеческая
VL
97
<img file="00000025.jpg" he="36" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S120
Человеческая
VL
98
<img file="00000026.jpg" he="36" wi="152" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S122
Человеческая
VL
99
<img file="00000027.jpg" he="37" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S123
Человеческая
VL
100
<img file="00000028.jpg" he="36" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S126
Человеческая
VL
101
<img file="00000029.jpg" he="36" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S128
Человеческая
VL
102
<img file="00000030.jpg" he="17" wi="65" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S130
Человеческая
VL
103
<img file="00000031.jpg" he="37" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S135
Человеческая
VL
104
<img file="00000032.jpg" he="8" wi="151" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000033.jpg" he="27" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S137
Человеческая
VL
105
<img file="00000034.jpg" he="36" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S138
Человеческая
VL
106
<img file="00000035.jpg" he="36" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S121
Человеческая
VL
107
<img file="00000036.jpg" he="36" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S1
Куриная
VH
108
<img file="00000037.jpg" he="21" wi="71" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S2
Куриная
VH
109
<img file="00000038.jpg" he="45" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S8
Куриная
VH
110
<img file="00000039.jpg" he="45" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S9
Куриная
VH
111
<img file="00000040.jpg" he="21" wi="69" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S11
Куриная
VH
112
<img file="00000041.jpg" he="45" wi="155" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S12
Куриная
VH
113
<img file="00000042.jpg" he="21" wi="68" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S13
Куриная
VH
114
<img file="00000043.jpg" he="45" wi="154" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S14
Куриная
VH
115
<img file="00000044.jpg" he="36" wi="153" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000045.jpg" he="4" wi="52" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S115
Человеческая
VH
116
<img file="00000046.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S116
Человеческая
VH
117
<img file="00000047.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S117
Человеческая
VH
118
<img file="00000048.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S118
Человеческая
VH
119
<img file="00000049.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S119
Человеческая
VH
120
<img file="00000050.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S120
Человеческая
VH
121
<img file="00000051.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S122
Человеческая
VH
122
<img file="00000052.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S123
Человеческая
VH
123
<img file="00000053.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S126
Человеческая
VH
124
<img file="00000054.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S128
Человеческая
VH
125
<img file="00000055.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S130
Человеческая
VH
126
<img file="00000056.jpg" he="13" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000057.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S135
Человеческая
VH
127
<img file="00000058.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S137
Человеческая
VH
12,8
<img file="00000059.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S138
Человеческая
VH
129
<img file="00000060.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S121
Человеческая
VH
130
<img file="00000061.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB136
Человеческая
VH
133
<img file="00000062.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB136
Человеческая
VL
134
<img file="00000063.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB21
Человеческая
VH
135
<img file="00000064.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB21
Куриная
VL
136
<img file="00000065.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB25
Человеческая
VH
137
<img file="00000066.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB25
Куриная
VL
138
<img file="00000067.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB27
Человеческая
VH
139
<img file="00000068.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB27
Куриная
VL
140
ALTQPASVSADLGETVKITCSGGDSSSHYYGWYQQKSPGSAPVTVIYSDDERPSDIPSRFSGSASGSTATLTITGVRVEDEAIYYCGAYDGSTYANTFGAGTTLTVL
AB66
Человеческая
VH
141
DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFT FSSYAMSWVRQAPGKGLEWLAGISAGG SDTYYIDSVKGRFTTSRDNPKNSLYLQMS SLTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLG TLVTVSS
AB66
Куриная
VL
142
ALTQPASVSANPGETVKITCSGGDYYSTY YAWYQQKSPGSAPVTVIHSDDKRPSDI PSRESGSASGSAATLHTGVRVEDEAVYY CGGYDGRTYINTFGAGTTLTVL
AB119
Человеческая
HVR–H1
143
GFSFSNFAMT
AB119
Человеческая
HVR–H2
144
TIGSGDTYYADSVKG
AB119
Человеческая
HVR–H3
145
DSTVSWSGDFFDY
AB119
Человеческая
HVR–L1
146
RASQNVKNDLA
AB119
Человеческая
HVR–L2
147
AARIRET
AB119
Человеческая
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB135
Человеческая
HVR–H1
149
GFSFSIYAMS
AB135
Человеческая
HVR–H2
150
TIGADDTYYADSVKG
AB135
Человеческая
HVR–H3
151
DSTVGWSGDFFDY
AB135
Человеческая
HVR–L1
152
RASQNVRSDIA
AB135
Человеческая
HVR–L2
153
AASSRDT
AB135
Человеческая
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB136
Человеческая
HVR–H1
155
GFTFSSYDMN
AB136
Человеческая
HVR–H2
156
LISGSGEHYYADSVKG
AB136
Человеческая
HVR–H3
157
ENNRYRFFDD
AB136
Человеческая
HVR–L1
158
RASQSVYTYLA
AB136
Человеческая
HVR–L2
159
GASSRAT
AB136
Человеческая
HVR–L3
160
QQYYDRPPLT
AB21
Человеческая
HVR–H1
161
GFTFSSNA
AB21
Человеческая
HVR–H2
162
ISAGGSDT
AB21
Человеческая
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB21
Куриная
HVR–L1
164
SGGDYYSYYYG
AB21
Куриная
HVR–L2
165
TVIYSDDKRPSD
AB21
Куриная
HVR–L3
166
GGYDYSTYANA
AB25
Человеческая
HVR–H1
161
GFTFSSNA
AB25
Человеческая
HVR–H2
168
ISSGSDT
AB25
Человеческая
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB25
Куриная
HVR–L1
170
SGGSYSSYYYA
AB25
Куриная
HVR–L2
171
TLIYSDDKRPSN
AB25
Куриная
HVR–L3
172
GGYDQSSYTNP
AB27
Человеческая
HVR–H1
173
GFRFSSYA
AB27
Человеческая
HVR–H2
174
ISSGGDT
AB27
Человеческая
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB27
Куриная
HVR–L1
176
SGGDSSSHYYG
AB27
Куриная
HVR–L2
177
TVLYSDDERPSD
AB27
Куриная
HVR–L3
178
GAYDGSTYANT
AB66
Человеческая
HVR–H1
179
GFTFSSYA
AB66
Человеческая
HVR–H2
162
ISAGGSDT
AB66
Человеческая
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB66
Куриная
HVR–L1
182
SGGDYYSTYYA
AB66
Куриная
HVR–L2
183
<img file="00000069.jpg" he="4" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB66
Куриная
HVR–L3
184
<img file="00000070.jpg" he="4" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB3
Куриная
VH
242
<img file="00000071.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB3
Куриная
VL
243
<img file="00000072.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB45
Куриная
VH
244
<img file="00000073.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB45
Куриная
VL
245
<img file="00000074.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB119 mut
Человеческая с мутациями D1E, E43K, L112Q и M34V
VH
246
<img file="00000075.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB135 mut
Человеческая с мутациями D1E, R13Q, E16G, E43K, L112Q и M34V
VH
247
<img file="00000076.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB136 mut all
Человеческая с мутациями D1E, R13Q, E16R, E43K, L111Q и M34V
VH
249
<img file="00000077.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB136 mut all
Человеческая с мутациями T2I, T12S, T22S и E38Q
VL
250
<img file="00000078.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB136 mut all_I2T
Человеческая с мутациями T12S, T22S и E38Q
VL
251
<img file="00000079.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum1
Гуманизированная
VL
252
<img file="00000080.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum2
Гуманизированная
VL
253
<img file="00000081.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum3
Гуманизированная
VL
254
<img file="00000082.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum4
Гуманизированная
VL
255
<img file="00000083.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum5
Гуманизированная
VL
256
<img file="00000084.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum6
Гуманизированная
VL
257
<img file="00000085.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119 VH MutAll_V34M
Человеческая с мутациями D1E, E43K и L112Q
VH
258
<img file="00000086.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135 VH MutAll_V34M
Человеческая с мутациями D1E, R13Q, E16G, E43K и L112Q
VH
259
<img file="00000087.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136 VH MutAll_V34M
Человеческая с мутациями D1E, R13Q, E16R, E43K и L111Q
VH
260
<img file="00000088.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum 8
Гуманизированная
VL
416
<img file="00000089.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum9
Гуманизированная
HVR–L1
261
<img file="00000090.jpg" he="4" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum 9
Гуманизированная
VL
262
<img file="00000091.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB21 Mut All
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии
VH
263
<img file="00000092.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB21 Mut All M34V
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
264
<img file="00000093.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB25 Mut All
Человеческая с обратными
VH
265
<img file="00000094.jpg" he="13" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
мутациями до зародышевой линии
<img file="00000095.jpg" he="12" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB25 Mut All M34V
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
266
<img file="00000096.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB27 Mut All
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии
VH
267
<img file="00000097.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB27 Mut All M34V
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
268
<img file="00000098.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135 V34M
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
269
<img file="00000099.jpg" he="12" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136 V34M
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
270
<img file="00000100.jpg" he="12" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
21/25 M34V
Человеческая
HVR–H1
271
<img file="00000101.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
27 M34V
Человеческая
HVR–H1
272
<img file="00000102.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
115
Человеческая
VH
273
<img file="00000103.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
115
Человеческая
VL
274
<img file="00000104.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
213
Человеческая
VH
275
<img file="00000105.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
213
Куриная
VL
276
<img file="00000106.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
173
Человеческая
VH
278
<img file="00000107.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
173
Человеческая
VL
279
<img file="00000108.jpg" he="5" wi="71" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000109.jpg" he="12" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
209
Человеческая
VH
280
<img file="00000110.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
209
Куриная
VL
281
<img file="00000111.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
132
Человеческая
VH
282
<img file="00000112.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
132
Человеческая
VL
283
<img file="00000113.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
218
Человеческая
VH
284
<img file="00000114.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
218
Куриная
VL
285
<img file="00000115.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
149
Человеческая
VH
286
<img file="00000116.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
149
Человеческая
VL
287
<img file="00000117.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
161
Человеческая
VH
288
<img file="00000118.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
161
Человеческая
VL
289
<img file="00000119.jpg" he="16" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
162
Человеческая
VH
290
<img file="00000120.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
162
Человеческая
VL
291
<img file="00000121.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000122.jpg" he="9" wi="80" img-content="undefined" img-format="jpg" />
194
Человеческая
VH
292
<img file="00000123.jpg" he="23" wi="80" img-content="undefined" img-format="jpg" />
194
Человеческая
VL
293
<img file="00000124.jpg" he="18" wi="80" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119M34L
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
305
<img file="00000125.jpg" he="4" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135M34L
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
306
<img file="00000126.jpg" he="5" wi="14" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119 mut all
Человеческая с мутациями F21L, R39K, E60A и T76S
VL
312
<img file="00000127.jpg" he="19" wi="79" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136M34L
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
313
<img file="00000128.jpg" he="4" wi="12" img-content="undefined" img-format="jpg" />
21/25M34L
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
318
<img file="00000129.jpg" he="5" wi="13" img-content="undefined" img-format="jpg" />
27M34L
Человеческая с мутацией подверженности
HVR–H1
319
<img file="00000130.jpg" he="4" wi="11" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119_VH _MutAll _V34L
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
327
<img file="00000131.jpg" he="20" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135_VH_MutAll_V34L
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
328
<img file="00000132.jpg" he="18" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_VH_Mutall_V34L
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
329
<img file="00000133.jpg" he="18" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB21_HC_MutAl_M34L
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
330
<img file="00000134.jpg" he="18" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB25_HC_Mut
Человеческая с обратными
VH
331
<img file="00000135.jpg" he="7" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Αll_Μ34L
мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
<img file="00000136.jpg" he="11" wi="63" img-content="undefined" img-format="jpg" />
AB27_ HC_Mut All_M34L
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии и мутацией подверженности
VH
332
<img file="00000137.jpg" he="18" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
218_Hum13 (218 VL с IGLV2 человека)
Гуманизированная
VL
333
<img file="00000138.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
218_Hum14 (218 VL с IGLV3 человека)
Гуманизированная
VL
334
<img file="00000139.jpg" he="25" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119
Человеческая
VH
335
<img file="00000140.jpg" he="20" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135
Человеческая
VH
341
<img file="00000141.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
16
Человеческая
VH
294
<img file="00000142.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
16
Куриная
VL
295
<img file="00000143.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
17
Человеческая
VH
342
<img file="00000144.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
17
Куриная
VL
343
<img file="00000145.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
22
Человеческая
VH
344
<img file="00000146.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
22
Куриная
VL
345
<img file="00000147.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
23
Человеческая
VH
346
<img file="00000148.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000149.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
23
Куриная
VL
347
<img file="00000150.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
24
Человеческая
VH
348
<img file="00000151.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
24
Куриная
VL
349
<img file="00000152.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
26
Человеческая
VH
350
<img file="00000153.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
26
Куриная
VL
351
<img file="00000154.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
28
Человеческая
VH
352
<img file="00000155.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
28
Куриная
VL
353
<img file="00000156.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
29
Человеческая
VH
354
<img file="00000157.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
29
Куриная
VL
355
<img file="00000158.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
30
Человеческая
VH
356
<img file="00000159.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
30
Куриная
VL
357
<img file="00000160.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
55
Человеческая
VH
358
<img file="00000161.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
55
Куриная
VL
359
<img file="00000162.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
56
Человеческая
VH
360
<img file="00000163.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
56
Куриная
VL
361
<img file="00000164.jpg" he="4" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000165.jpg" he="9" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
59
Человеческая
VH
362
<img file="00000166.jpg" he="12" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
59
Куриная
VL
363
<img file="00000167.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
60
Человеческая
VH
364
<img file="00000168.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
60
Куриная
VL
365
<img file="00000169.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
65
Человеческая
VH
366
<img file="00000170.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
65
Куриная
VL
367
<img file="00000171.jpg" he="13" wi="65" img-content="undefined" img-format="jpg" />
69
Человеческая
VH
368
<img file="00000172.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
69
Куриная
VL
369
<img file="00000173.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
70
Человеческая
VH
370
<img file="00000174.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
70
Куриная
VL
371
<img file="00000175.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
71
Человеческая
VH
372
<img file="00000176.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
71
Куриная
VL
373
<img file="00000177.jpg" he="12" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
73
Человеческая
VH
374
<img file="00000178.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
73
Куриная
VL
375
<img file="00000179.jpg" he="9" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000180.jpg" he="3" wi="19" img-content="undefined" img-format="jpg" />
74
Человеческая
VH
376
<img file="00000181.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
74
Куриная
VL
377
<img file="00000182.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
76
Человеческая
VH
378
<img file="00000183.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
76
Куриная
VL
379
<img file="00000184.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
201
Человеческая
VH
380
<img file="00000185.jpg" he="13" wi="63" img-content="undefined" img-format="jpg" />
201
Куриная
VL
381
<img file="00000186.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
202
Человеческая
VH
382
<img file="00000187.jpg" he="12" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
202
Куриная
VL
383
<img file="00000188.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
206
Человеческая
VH
384
<img file="00000189.jpg" he="14" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
206
Куриная
VL
385
<img file="00000190.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
175
Человеческая
VH
386
<img file="00000191.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
175
Человеческая
VL
387
<img file="00000192.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
177
Человеческая
VH
388
<img file="00000193.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
177
Человеческая
VL
389
<img file="00000194.jpg" he="13" wi="64" img-content="undefined" img-format="jpg" />
178
Человеческая
VH
390
<img file="00000195.jpg" he="3" wi="63" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000196.jpg" he="11" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
178
Человеческая
VL
391
<img file="00000197.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
180
Человеческая
VH
392
<img file="00000198.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
180
Человеческая
VL
393
<img file="00000199.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
184
Человеческая
VH
394
<img file="00000200.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
184
Человеческая
VL
395
<img file="00000201.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
185
Человеческая
VH
396
<img file="00000202.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
185
Человеческая
VL
397
<img file="00000203.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
189
Человеческая
VH
398
<img file="00000204.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
189
Человеческая
VL
399
<img file="00000205.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
190
Человеческая
VH
400
<img file="00000206.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
190
Человеческая
VL
401
<img file="00000207.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
193
Человеческая
VH
402
<img file="00000208.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
193
Человеческая
VL
403
<img file="00000209.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
191
Человеческая
VH
404
<img file="00000210.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
191
Человеческая
VL
405
<img file="00000211.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
198
Человеческая
VH
406
<img file="00000212.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
198
Человеческая
VL
407
<img file="00000213.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
163
Человеческая
VH
408
<img file="00000214.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
163
Человеческая
VL
409
<img file="00000215.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
164
Человеческая
VH
410
<img file="00000216.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
164
Человеческая
VL
411
<img file="00000217.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
174
Человеческая
VH
412
<img file="00000218.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
174
Человеческая
VL
413
<img file="00000219.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
214
Человеческая
VH
414
<img file="00000220.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
214
Куриная
VL
415
<img file="00000221.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum8
Гуманизированная
VL
416
<img file="00000222.jpg" he="15" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_MutAll(легкая цепь)_S12T
Человеческая с мутациями D1E, R13Q, E16R, E43K и L111Q
VL
417
<img file="00000223.jpg" he="21" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_MutAll(легкая цепь)_S22T
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии
VL
418
<img file="00000224.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_Mut AH(легкая цепь)_Q38E
Человеческая с обратными мутациями до зародышевой линии
VL
419
<img file="00000225.jpg" he="17" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119_wt_M34L
Человеческая с мутацией подверженности
VII
420
<img file="00000226.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
U9_wt_M34V
Человеческая с мутацией подверженности
VH
421
<img file="00000227.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135_w7_M34L
Человеческая с мутацией подверженности
VH
422
<img file="00000228.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
135_wt_M34V
Человеческая с мутацией подверженности
VH
423
<img file="00000229.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_wt_M34L
Человеческая с мутацией подверженности
VH
424
<img file="00000230.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
136_wt_M34V
Человеческая с мутацией подверженности
VH
425
<img file="00000231.jpg" he="19" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
119HVR–H1
Человеческая
HVR–H1
175
<img file="00000232.jpg" he="8" wi="73" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0184]
(т. е.
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с человеческим полипептидом SIRP–α в одном или более остатках. Следует понимать, что остатки полипептида SIRP–α, которые связывает антитело согласно настоящему изобретению, могут быть описаны по отношению к эталонному полипептиду SIRP–α, но такое описание не ограничено единственным полипептидом SIRP–α  эталонным полипептидом SIRP–α). Скорее конкретные аминокислотные остатки эталонного полипептида SIRP–α описаны, чтобы идентифицировать соответствующие аминокислотные позиции, которые можно идентифицировать в различных полипептидах SIRP–α. Например, конкретные остатки, которые соответствуют одной или более аминокислотным позициям SEQ ID NO: 296, можно идентифицировать для различных человеческих полипептидов SIRP–α, таких как v1 и/или v2. Так как аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 296 и SEQ ID NO:5 отличаются только в позиции N80 (за исключением небольшого числа C–концевых остатков SEQ ID NO:296, полезных для выработки и очистки белка), специалисту в данной области техники будет понятно, что ссылки на аминокислотные позиции в отношении аминокислотной последовательности SEQ ID NO:296 будут соответствовать таким же позициям в аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5. Способы определения остатков полипептида SIRP–α, связываемых антителом, известны в данной области техники; типовые и неограничивающие описания приведены в примере 4.
[0185]
SEQ ID NО: 296
[0186]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70 и K96 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74 и R95 в соответствии с SEQ ID NO: 296.
[0187]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из I7, P9, D10, K11, S12, A42, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в K11, A42, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в I7, P9, D10, K11, S12, A108 и E111 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из L14, T26, T28, T88, Y90, S106, S113 и A116 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в L14, T88, Y90, S106, S113 и Al16 человеческого SIRP–α v1 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в L14, T26 и T28 в соответствии с SEQ ID NO:296.
[0188]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из E47, L48, P58, R59, T82 и A84 в соответствии с SEQ ID NO:296. В некоторых вариантах реализации антитело дополнительно связывается с человеческим полипептидом SIRP–α v1 в одной или более аминокислотных позициях, выбранных из A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57 и P83 в соответствии с SEQ ID NO: 296.
[0189]
Д
Д
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ, менее 50 нМ или менее 30 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47 и при этом антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1 с a константой диссоциации (K) менее 100 нМ, менее 50 нМ или менее 30 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v1 и домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–γ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α.
[0190]
Д
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α и не блокирует связывание между внеклеточным доменом (например, доменом D1) человеческого полипептида SIRP–α и доменом IgSF человеческого полипептида CD47. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α v1 с константой диссоциации (K) менее 100 нМ, менее 50 нМ или менее 30 нМ. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v1. В некоторых вариантах реализации антитело связывает домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v1 и домен D1 человеческого полипептида SIRP–α v2. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) полипептида SIRP–α яванского макака. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–β. В некоторых вариантах реализации антитело связывает внеклеточный домен (например, домен D1) мышиного полипептида SIRP–α.
[0191]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом. Способы определения того, конкурирует ли антитело за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом, известны в данной области техники; типовые и неограничивающие описания приведены в примере 5.
[0192]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более эталонными анти–SIRP–α антителами, выбранными из 119, 120, 121, 122, 21, 25, 27, 66 и 135. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более из следующих эталонных анти–SIRP–α антител: (a) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; (b) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:98; (c) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107, (d) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:99; (e) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136, (f) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138, (g) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140, (h) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142, и (i) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104.
[0193]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более эталонными анти–SIRP–α антителами, выбранными из 136 и 137. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более из следующих эталонных анти–SIRP–α антител: (a) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134, и (b) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.
[0194]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более эталонными анти–SIRP–α антителами, выбранными из 3, 213, 173 и 209. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более из следующих эталонных анти–SIRP–α антител: (a) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243, (b) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276, (c) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279, и (d) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281.
[0195]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более эталонными анти–SIRP–α антителами, выбранными из 115, 116, 117, 118 и 132. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более из следующих эталонных анти–SIRP–α антител: (a) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:93; (b) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:94; (c) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:95, (d) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:96, и (e) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 283.
[0196]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более эталонными анти–SIRP–α антителами, выбранными из 218, 123, 149, 161, 162 и 194. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с одним или более из следующих эталонных анти–SIRP–α антител: (a) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285, (b) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, (c) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287, (d) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289, (e) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291, и (f) антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293.
[0197]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с эталонным анти–SIRP–α антителом 45. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению конкурирует за связывание внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого полипептида SIRP–α с антителом, содержащим VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244, и VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245.
[0198]
(например,
(например,
(например,
in vitro
(например,
(смотрите, например,
В настоящем изобретении предложено некоторое количество семейств анти–SIRP–α антител, при этом каждое семейство содержит некоторое количество антител. Как продемонстрировано в данном документе, антитела в рамках заданного семейства могут обладать некоторыми общими структурными свойствами  сходными или идентичными последовательностями HVR или CDR), а также одним или более функциональными свойствами, включая, но не ограничиваясь этим, аффинность связывания с человеческим, обезьяньим и/или мышиным полипептидом (–ами) SIRP–α, аффинность связывания с полипептидами SIRP–β, аффинность связывания с полипептидами SIRP–γ, характер связывания с SIRP–α блокирование CD47, отсутствие блокирования CD47 или «отталкивающее» связывание), индукцию фагоцитоза в  анализе), активацию дендритных клеток, противоопухолевую эффективность, остатки или «группу» связывания эпитопа SIRP–α  определенные в анализе сортировки) и т. д.  таблицы P–T). По причине этих общих свойств подразумевается, что последовательности HVR и/или VH или VL, принадлежащие одному семейству, можно менять или перемешивать между собой, вследствие чего анти–SIRP–α антитело может содержать HVR и/или VH или VL, полученные из более чем одного конкретного анти–SIRP–α антитела, описанного в данном документе. Как более подробно обсуждается в данном документе, в данной области техники известны различные методики определения последовательностей HVR или CDR вариабельных доменов антител, которые можно взаимозаменяемо использовать в контексте данного документа, включая, без ограничений, определения Kabat, Chothia и IMGT, а также их комбинации.
[0199]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:97, 98, 107, 99, 104 и 312; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328.В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99,104 и 312; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335 и 328; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312: HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 97, 98, 107, 99, 104 и 312.
[0200]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373,375, 377, 379, 381, 383 и 385; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384: HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382 и 384; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383 и 385.
[0201]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 32,9, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400 и 402; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401 и 403.
[0202]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; и HVR– H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 282, 404 и 406; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407: HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 93, 94, 95, 96, 283, 405 и 407.
[0203]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 242; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 243.
[0204]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 278 и 412; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 279 и 413.
[0205]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 275 и 414; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 276 и 415.
[0206]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 280; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 281.
[0207]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 123 и 292; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 100 и 293.
[0208]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–H2 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 291, 408 и 410; HVR–H3 из последовательности VH–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 288, 290, 408 и 410; HVR–L1 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; HVR–L2 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, выбранной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 289, 291, 409 и 411.
[0209]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 286; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 287.
[0210]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 284; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 285.
[0211]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO:244; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 244; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 244; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 245; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 245; и/или HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 245. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 244; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 244; и HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO: 244. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO:245; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO:245; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO:245. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR–H1 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO:244; HVR–H2 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO:244; HVR–H3 из последовательности VH–домена, приведенной в SEQ ID NO:244; HVR–L1 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO:245; HVR–L2 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 245; и HVR–L3 из последовательности VL–домена, приведенной в SEQ ID NO: 245.
[0212]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:242, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:243. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:244, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:245. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:282, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:283. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293.
[0213]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:278, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:279. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:280, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:281. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:275, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:276. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:414, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:415. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:414, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:415. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:292, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:293. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:288, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:289. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:290, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:291. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:286, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:287. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из VH–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из VL–домена, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO:285, 333 или 334. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:284, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 285, 333 или 334.
[0214]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность NFAMT (SEQ ID NO: 175), NFAVT (SEQ ID NO:204) или NFALT (SEQ ID NO:305), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGSGDTYYADSVKG (SEQ ID NO: 144), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVSWSGDFFDY (SEQ ID NO: 145); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVKNDLA (SEQ ID NO: 146), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AARIRET (SEQ ID NO: 147), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDWPPFT (SEQ ID NO:148). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120, 246, 258 или 327; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:97 или 312. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:258, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NО:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:246, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:258, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:327, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:312.
[0215]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность IYAMS (SEQ ID NO:269), IYAVS (SEQ ID NO:313) или IYALS (SEQ ID NO:306), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGADDTYYADSVKG (SEQ ID NO: 150), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVGWSGDFFDY (SEQ ID NO:151); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVRSDIA (SEQ ID NO: 152), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AASSRDT (SEQ ID NO: 153), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDWPPFT (SEQ ID NO: 148). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:341, 127, 247, 259 или 328; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 104 или 248. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:341, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:259, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:328, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:104; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:341 а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:247, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:259, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID 140:328, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:248.
[0216]
1
2
3
1
2
3
1
1
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
1
2
1
2
3
4
1
2
3
4
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий: (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность XXDXN, где X представляет собой S или T; X представляет собой Y или S; и X представляет собой M, L или V (SEQ ID NO:307); (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность LISGSGEIXYYADSVKG, где X представляет собой I или T (SEQ ID NO:308); и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность EXXXYRFFDX, где X представляет собой N или D; X представляет собой N или D; X представляет собой R или M; и X представляет собой D или Y (SEQ ID NO:309); и/или (b)вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий: (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RAXQSVYXYLA, где X представляет собой S или D; и X представляет собой T или S (SEQ ID NO: 10); (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность XAXXRAX, где X представляет собой G, A или D; X представляет собой S или R; X представляет собой S, N или T; и X представляет собой T или A (SEQ ID NO:311); и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDRPPLT (SEQ ID NO: 160). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SYDMN (SEQ ID NO:270), SYDVN (SEQ ID NO: 221) или SYDLN (SEQ ID NO:313), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность LISGSGEIIYYADSVKG (SEQ ID NO: 156), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ENNRYRFFDD (SEQ ID NO: 157); и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQSVYTYLA (SEQ ID NO: 158), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность GASSRAT (SEQ ID NO: 159), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDRPPLT (SEQ ID NO: 160). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 133, 260, 329 или 249; и/или VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:134, 250, 251, 417, 418 или 419. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:417; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:417; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:417; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:417; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:418; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:418; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:418; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:418; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:419; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:419; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:419; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:419; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:260, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:329, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:250; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:249, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:251.
[0217]
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
1
2
1
2
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
1
1
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий: (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность XXAXS, где X представляет собой S или T; X представляет собой N, Y, H или D; и X представляет собой M, L или V (SEQ ID NO:297); (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISXXXXXXYYXXSXKG. где X представляет собой A или S; X представляет собой G, S или отсутствует; X представляет собой S, D или G; X представляет собой G или S; X представляет собой D, S или G; X представляет собой T или A; X представляет собой P, G, V, I, A или S; X представляет собой A, D или G; и X представляет собой V или M (SEQ ID NO:298); и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193): и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий: (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGXXXSXYYX, где X представляет собой D, G, S, I или отсутствует; X представляет собой S, W, G, Y, D или отсутствует; X представляет собой S, Y, T или D; X представляет собой Η, T, S или Y; и X представляет собой G или A (SEQ ID NO:299); (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDXXRPX, где X представляет собой D или N; X представляет собой E, K, или Q; и X представляет собой S или P (SEQ ID NO:300); и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность XXYDXXXΥΧΝΧ, где X представляет собой G или A; X представляет собой G или A; X представляет собой G, Y, Q, S или A; X представляет собой S, R или T; X представляет собой T или S; X, представляет собой A, I, V, L или T; и X представляет собой T, A, D или P (SEQ ID NO:301). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (а) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий: (1) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SXAXS, где X представляет собой N или Y; и где X представляет собой M, L или V (SEQ ID NG:302); (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISXGXXDTYYXXSVKG, где X представляет собой A или S; X представляет собой G или отсутствует; X представляет собой S или G; X представляет собой P, G или V; и X представляет собой A или D (SEQ ID NO:303); и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193): и/или (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий: (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGXYSSYYYA, где X представляет собой S или A (SEQ ID NO:304); (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336); и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSSYTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SNAMS (SEQ ID NO: 194), SNAVS (SEQ ID NO:271) или SNALS (SEQ ID NO:318), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISAGGSDTYYPASVKG (SEQ ID NO: 195), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 135, 263, 264 или 330. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SNAMS (SEQ ID NO: 194), SNAVS (SEQ ID NO:271) или SNALS (SEQ ID NO:318), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISSGSDTYYGDSVKG (SEQ ID NO: 197), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 137, 265, 266 или 331. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит (i) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SYAMS (SEQ ID NO:200), SYAVS (SEQ ID NO:272) или SYALS (SEQ ID NO:319), (ii) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность GISSGGDTYYVDSVKG (SEQ ID NO:201), и (iii) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность ETWNHLFDY (SEQ ID NO: 193). В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 139, 267, 268 или 332. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит одну или более человеческих каркасных последовательностей IGLV3. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит четыре человеческие каркасные последовательности IGLV3. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит последовательность FW1–HVR–L1–FW2–HVR–L2–FW3–HVR–L3–FW4 (от N–конца к C–концу), при этом FW1 содержит аминокислотную последовательность SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (SEQ ID NO:314), FW2 содержит аминокислотную последовательность WYQQKPGQAPVTLTY (SEQ ID NO:315), FW3 содержит аминокислотную последовательность NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 316) и FW4 содержит аминокислотную последовательность FGGGTKLTVL (SEQ ID NO:317). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGSYSSYYYA (SEQ ID NO: 170), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSSYTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:252. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:254. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:416. В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит (i) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SGGAYSSYYYA (SEQ ID NO:261), (ii) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SDDKRPS (SEQ ID NO:336), и (iii) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность GGYDQSSYTNP (SEQ ID NO: 172). В некоторых вариантах реализации VL–домен содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO:262. В некоторых вариантах реализации VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:268, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:252; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:268, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:268, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:263, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:264, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:330, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:265, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:266, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:331, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:267, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:368, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:332, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 416, VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:416; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:254; VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:416; или VH–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:139, а VL–домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:262.
[0218]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:97. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 134. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:135, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 142.
[0219]
1
2
3
1
2
3
4
5
4
5
6
6
7
8
9
7
8
9
10
11
12
10
11
12
В некоторых вариантах реализации антитело содержит (a) последовательность HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность GFSFSXXAMX, где X представляет собой N или I; X представляет собой F или Y; и X представляет собой T или S (SEQ ID NO: 185); (b) последовательность HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность TIGXXDTYYADSVKG, где X представляет собой S или A и X представляет собой G или D (SEQ ID NO: 186); (c) последовательность HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность DSTVXWSGDFFDY, где X представляет собой S или G (SEQ ID NO: 187); (d) последовательность HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность RASQNVXXDXA, где X представляет собой K или R; X представляет собой N или S; и X представляет собой L или I (SEQ ID NO: 188); (e) последовательность HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность AAXXRXT, где X представляет собой R или S; X представляет собой I или S; и X представляет собой E или D (SEQ ID NO: 189); и (f) последовательность HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность QQYYDWPPFT (SEQ ID NO: 148).
[0220]
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 143–148  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO:143–145, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO:146–148). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 148–153  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 149–151, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 152, 153 и 148). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:155–160  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 155–157, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 158–160). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:161–166  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 161–163, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 164–166). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 161–166  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO:161–163, и/или одну, две или три последовательности HVR вариабельного домена легкой цепи, приведенного в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 161, 163, 168 и 170–172  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 161, 168 и 163, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 170–172). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 161, 163, 168 и 170–172  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 161, 168 и 163, и/или одну, две или три последовательности HVR вариабельного домена легкой цепи, приведенного в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 163, 173, 174 и 176–178  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 163, 173 и 174, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 176–178). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 162, 163, 179 и 182–184  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 162, 163 и 179, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 182–184). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 162, 163, 179 и 182–184  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 162, 163 и 179, и/или одну, две или три последовательности HVR вариабельного домена легкой цепи, приведенного в таблице 2). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 120 и 97  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 120 и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO:97). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из последовательностей вариабельного домена SEQ ID NO: 127 и 104  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 127 и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO: 104). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей HVR из последовательностей вариабельного домена SEQ ID NO:97, 104, 120 и 127  одну, две или три последовательности HVR тяжелой цепи из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO: 120 и 127, и/или одну, две или три последовательности HVR легкой цепи из последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO:97 и 104).
[0221]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 145; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:149, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:150, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 153, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 143 или 149, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144 или 150, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 145 или 151, и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146 или 152, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147 или 153, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 155, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 157; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 158, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163, и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:168, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:171, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 173, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184.
[0222]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 171, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 172. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:139, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 184.
[0223]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165, 171, 177 или 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168, HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (а) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 173, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:165, 171, 177 или 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183; и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183, HVR–L3, и содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183; и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:166, 172, 178 или 184. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 141, и/или VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, 170, 176 или 182, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, 171, 177 или 183, HVR–L3, и содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, 172, 178 или 184.
[0224]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:242; и/или (b) VL–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:243. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:244; и/или (b) VL–домен, содержащий одну, две или три последовательности HVR из SEQ ID NO:245.
[0225]
выше
(например,
Как описано , в данной области техники известны различные способы определения границ гипервариабельных областей (HVR) или определяющих комплементарность областей (CDR), которые можно применять в отношении описанных в данном документе последовательностей вариабельных доменов. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит HVR по определению Chothia, Kabat, IMGT или их комбинации  одну или более HVR по определению согласно одному варианту определения границ и одну или более HVR по определению согласно другому варианту определения границ). Последовательности HVR антител согласно настоящему изобретению, определенные согласно трем известным вариантам определения границ (Chothia, Kabat и IMGT), приведены в таблице 5. В контексте данного документа, если не указано иное, нумерация остатков HVR определена по нумерации Kabat.
Таблица 5.
Варианты определения границ HVR.
Hum 1 (Chothia)
HVR–L1
170
SGGSYSSYYYA
HVR–L2
336
SDDKRPS
HVR–L3
172
GGYDQSSYTNP
Hum 1 (Kabat)
HVR–L1
170
SGGSYSSYYYA
HVR–L2
336
SDDKRPS
HVR–L3
172
GGYDQSSYTNP
Hum 1 (IMGT)
HVR–L1
337
GSYSS
HVR–L2
338
IYS
HVR–L3
339
GGYDQSSYT
Hum 7 (Chothia)
HVR–L1
164
SGGDYYSYYYG
HVR–L2
336
SDDKRPS
HVR–L3
166
GGYDYSTYANA
Hum 7 (Kabat)
HVR–L1
164
SGGDYYSYYYG
HVR–L2
336
SDDKRPS
HVR–L3
166
GGYDYSTYANA
Hum 7 (IMGT)
HVR–L1
340
GDYYS
HVR–L2
338
IYS
HVR–L3
190
GGYDYSTYA
AB21(Chothia)
HVR–H1
191
GFTFSSN
HVR–H2
192
SAGGSD
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB21(Kabat)
HVR–H1
194
SNAMS
HVR–H2
195
GISAGGSDTYYPASVKG
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB21(IMGT)
HVR–H1
161
GFTFSSNA
HVR–H2
162
ISAGGSDT
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB25(Chothia)
HVR–H1
191
GFTFSSN
HVR–H2
196
SSGSD
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB25(Kabat)
HVR–H1
194
SNAMS
HVR–H2
197
GISSGSDTYYGDSVKG
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB25(IMGT)
HVR–H1
161
GFTFSSNA
HVR–H2
168
ISSGSDT
HVR– H3
163
ARETWNHLFDY
AB27(Chothia)
HVR–H1
198
GFRFSSY
HVR–H2
199
SSGGD
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB27(Kabat)
HVR–H1
200
SYAMS
HVR–H2
201
GISSGGDTYYVDSVKG
HVR–H3
193
ETWNHLFDY
AB27(IMGT)
HVR–H1
173
GFRFSSYA
HVR–H2
174
ISSGGDT
HVR–H3
163
ARETWNHLFDY
AB119(Chothia)
HVR–H1
202
GFSFSNF
HVR–H2
203
GSGD
HVR–H3
145
DST V S W SGDFFD Y
AB119(Kabat)
HVR–H1
204
NFAVT
HVR–H2
144
TIGSGDTYYADSVKG
HVR–H3
145
DST V S WSGDFFD Y
AB119(IMGT)
HVR–H1
205
GFSFSNFA
HVR–H2
206
IGSGDT
HVR–H3
207
AKDSTVSWSGDFFDY
AB119(Chothia)
HVR–L1
146
RASQNVKNDLA
HVR–L2
147
AARIRET
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB119(Kabat)
HVR–L1
146
RASQNVKNDLA
HVR–L2
147
AARIRET
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB119(IMGT)
HVR–L1
208
QNVKND
HVR–L2
209
AAR
HVR–L3
210
QQYYDWP
AB135(Chothia)
HVR–H1
211
GFSFSIY
HVR–H2
212
GADD
HVR–H3
151
DSTVG WSGDFFD Y
AB135(Kabat)
HVR–H1
213
IYAVS
HVR–H2
150
TIGADDTYYADSVKG
HVR–H3
151
DSTVGWSGDFFDY
AB135(IMGT)
HVR–H1
214
GFSFSIYA
HVR–H2
215
IGADDT
HVR–H3
216
AKDSTV G WSGDFFD Y
AB135(Chothia)
HVR–L1
152
RASQNVRSDIA
HVR–L2
153
AASSRDT
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB135(Kabat)
HVR–L1
152
RASQNVRSDIA
HVR–L2
153
AASSRDT
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB135(IMGT)
HVR–L1
217
QNVRSD
HVR–L2
218
AAS
HVR–L3
148
QQYYDWPPFT
AB136(Chothia)
HVR–H1
219
GFTFSSY
HVR–H2
220
SGSGEI
HVR–H3
157
ENNRYRFFDD
AB136(Kabat)
HVR–H1
221
SYDVN
HVR–H2
156
LISGSGEIIYY ADS V KG
HVR–H3
157
ENNRYRFFDD
AB136(IMGT)
HVR–H1
222
GFTFSSYD
HVR–H2
223
ISGSGEII
HVR–H3
224
AKENNRYR FFDD
AB136(Chothia)
HVR–L1
158
RASQSVYTYLA
HVR 4.2
159
GASSRAT
HVR–L3
160
QQYYDRPPLT
AB136(Kabat)
HVR–L1
158
RASQSVYTYLA
HVR–L2
159
GASSRAT
HVR–L3
160
QQYYDRPPLT
AB136(IMGT)
HVR–L1
225
QSVYTY
HVR–L2
226
GAS
HVR–L3
160
QQYYDRPPLT
AB3(Kabat)
HVR–H1
227
DYGMN
HVR–H2
228
QITSGSRT YY GAAVKG
HVR–H3
229
DFGSGVGSIDA
AB3(Chothia)
HVR–H1
230
GFIFSDY
HVR–H2
231
TSGSR
HVR–H3
229
DFGSGVGSIDA
AB3(Chothia)
HVR–L1
232
SGSRGRYG
HVR–L2
233
RDNQRPS
HVR–L3
234
GSYDGSIDI
AB3(Kabat)
HVR–L1
232
SGSRGRYG
HVR–L2
233
RDNQRPS
HVR–L3
234
GSYDGSIDI
AB45(Kabat)
HVR–H1
235
SYAMG
HVR–H2
236
GIDDDGST ANYGPAVKG
HVR–H3
237
ASVTGWSAHISGRLDT
AB45(Chothia)
HVR–H1
219
GFTFSSY
HVR–H2
238
DDGST
HVR–H3
237
ASVTGWSAHISGRLDT
AB45(Chothia)
HVR–L1
239
SGGGIYYYG
HVR–L2
240
ENDKRPS
HVR–L3
241
GGYDSNTTSGI
AB45(Kabat)
HVR–L1
239
SGGGIYYYG
HVR–L2
240
ENDKRPS
HVR–L3
241
GGYDSNTTSGI
[0226]
(например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит 1, 2, 3, 4, 5 или 6 HVR, перечисленных в таблице 5  VL–домен, содержащий 1, 2 или 3 HVR легкой цепи, перечисленных в таблице 5, и/или VH–домен, содержащий 1, 2 или 3 HVR тяжелой цепи, перечисленных в таблице 5).
[0227]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 191, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 191, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 198, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 199, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 191 или 198, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192, 196 или 199, HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:230, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:231, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232.В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:239, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:240, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:241, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:219, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:238, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237.
[0228]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 194, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 195, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 194, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 197, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 200, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 201, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 164, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 165, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 194, 198 или 200, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 195, 197 или 201, HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 193. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:232, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:233, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:234, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:227, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:228, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:230. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:239, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:240, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:241, и/или VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:235, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:236, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:237.
[0229]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 162, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 161, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:168, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:163. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 173, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 174, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 163.
[0230]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 202, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 203, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 145; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 211, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 212, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 153, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 219, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 220, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 157; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:158, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160.
[0231]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 145; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 213, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 150, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 151; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 152, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 153, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 221, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 157; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:158, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 159, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160.
[0232]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 205, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 207; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 208, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 209, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 210. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 214, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 215, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 217, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 218, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит (a) VH–домен, содержащий HVR–H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 222, HVR–H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 223, и HVR–H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 224; и/или (b) VL–домен, содержащий HVR–L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 225, HVR–L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 226, и HVR–L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160.
[0233]
in vivo
например,
В некоторых вариантах реализации любого из вышеприведенных вариантов реализации антитело усиливает фагоцитоз макрофагом, экспрессирующим человеческий полипептид SIRP–α, усиливает активацию дендритных клеток, экспрессирующих человеческий полипептид SIRP–α, ингибирует  рост опухоли или опухолевых клеток, экспрессирующих CD47, и/или не предотвращает взаимодействие между CD47–экспрессирующей клеткой и Т–клеткой. Типовые методы анализа для определения фагоцитоза, активации дендритных клеток, ингибирования роста опухоли и взаимодействия между CD47–экспрессирующими клетками и Т–клетками ( анализа адгезии) описаны в данном документе и известны в данной области техники.
Получение антител и другие свойства антител
[0234]
Антитело согласно настоящему изобретению можно получать любыми способами, известными в данной области техники. Типовые методики получения антител описаны ниже; однако эти типовые методики приведены исключительно в иллюстративных целях и не подразумевают ограничения. Кроме того, дополнительно описаны свойства типовых антител, подразумеваемые в случае применения описанных в данном документе антител.
[0235]
Д
Д
(например,
(например,
например,
например,
В некоторых вариантах реализации антитело, которое «связывает» антиген, имеет константу диссоциации (K)в отношении антигена, меньшую или равную 1 мкМ при 25°C. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению имеет константу диссоциации (K) в отношении человеческих полипептидов SIRP–α v1 и/или v2, меньшую или равную 1 мкМ при 25°C, меньшую или равную 500 нМ при 25°C, меньшую или равную 400 нМ при 25°C, меньшую или равную 300 нМ при 25°C, меньшую или равную 250 нМ при 25°C, меньшую или равную 200 нМ при 25°C, меньшую или равную 200 нМ при 25°C, меньшую или равную 100 нМ при 25°C или меньшую или равную 50 нМ при 25°C. В некоторых вариантах реализации антитело, которое связывает человеческий полипептид SIRP–α и один или более нечеловеческих полипептидов SIRP–α, связывает человеческий полипептид SIRP–α с большей аффинностью  в 10 или в 100 раз большей), чем нечеловеческий полипептид SIRP–α, хотя все еще считается, что оно «связывает» оба полипептида. В некоторых вариантах реализации антитело, которое связывает нечеловеческий полипептид SIRP–α и один или более человеческих полипептидов SIRP–α, связывает нечеловеческий полипептид SIRP–α с большей аффинностью  в 10 или в 100 раз большей), чем человеческий полипептид SIRP–α, хотя все еще считается, что оно «связывает» оба полипептида. Аналитические методы для определения аффинности связывания известны в данной области техники и включают, без ограничений, метод поверхностного плазмонного резонанса (ППР),  описанный в данном документе; анализ связывания радиоактивно меченого антигена (РИА),  с применением Fab–версии антитела и его антигена; и т. д. Другие типовые методы анализа связывания описаны в данном документе.
[0236]
например,
Чтобы получить антиген, его можно очистить или каким–либо другим способом получить из природного источника, или же его можно экспрессировать, используя рекомбинантные технологии. В некоторых вариантах реализации антиген можно использовать в виде растворимого белка. В некоторых вариантах реализации антиген может быть конъюгирован с другим полипептидом или другим соединением,  для повышения его иммуногенности. Например, описанный в данном документе антиген может быть сопряжен с Fc–областью. В некоторых вариантах реализации клетку, экспрессирующую антиген на своей поверхности, можно использовать в качестве антигена.
[0237]
Поликлональные антитела можно получать в организме животного посредством нескольких подкожных (П/К) или внутрибрюшинных (В/Б) инъекций антигена и адъюванта. Например, в данном документе приведены описания иммунизации кур. В некоторых вариантах реализации антиген конъюгирован с иммуногенным белком, например, гемоцианином фиссуреллы, сывороточным альбумином, бычьим тироглобулином или ингибитором соевого трипсина, с помощью бифункционального дериватизирующего агента. В данном документе приведены типовые способы иммунизации кур. Релевантные способы, подходящие для ряда других организмов, хорошо известны в данной области техники.
[0238]
выше,
et al., Nature,
et al, Hybridoma,
et al., Antibodies: A Laboratory Manned,
et al,
Monoclonal Antibodies and T–Cell Hybridomas
Histology and Histopathology,
Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology
например,
in vitro
например,
in vivo
Как описано  моноклональные антитела можно получать рядом способов. В некоторых вариантах реализации моноклональное антитело согласно настоящему изобретению получают, используя гибридомный способ, впервые описанный в Kohler  256:495 (1975), и дополнительно описанный в Hongo  14(3): 253–260 (1995); Harlow  (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); и Hammerling  в:  563–681 (Elsevier, N.Y., 1981). Технология человеческой гибридомы (технология триомы) описана в Vollmers and Brandlein,  20(3):927–937 (2005) и Vollmers and Brandlein, , 27(3): 185–91 (2005). Культуральную среду, в которой растут клетки гибридомы, можно исследовать в отношении наличия представляющего интерес антитела,  методом  анализа связывания, иммунопреципитации, ELISA, РИА и т. д.; а аффинность связывания можно определить,  в анализе Скэтчарда. Гибридому, которая вырабатывает антитела с необходимыми связывающими свойствами можно субклонировать и выращивать, используя известные способы культивирования, выращивать  в виде асцитных опухолей в организме животного и т. д.
[0239]
Смотрите, например,
Methods in Molecular Biology
например,
Ann. Rev. Immunol,
(например,
EMBO J,
in vitro,
J. Mol. Biol,
В некоторых вариантах реализации моноклональное антитело получают, используя такой метод, как применение библиотеки фагового дисплея.  Hoogenboom et al. in  178:1–37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.T. 2001). В некоторых вариантах реализации гены VH и VL клонируют посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем исследуют в отношении антигенсвязывающего фага,  как описано в Winter et al.,  12: 433–455 (1994). Фаг, как правило, представляет фрагменты антител, как в виде одноцепочечных фрагментов Fv (scFv), так и в виде фрагментов Fab. В альтернативном варианте можно клонировать наивный репертуар  от человека), чтобы получить единый источник антител к широкому диапазону несобственных и также собственных антигенов без какой–либо иммунизации, как описано в Griffiths et al.,  12: 725–734 (1993). И наконец, наивные библиотеки также можно получать синтетически, клонируя неперестроенные V–генные сегменты из стволовых клеток и используя ПЦР–праймеры, содержащие случайную последовательность, для кодирования высоковариабельных областей CDR3 и для осуществления перестройки  как описано в Hoogenboom and Winter,  227: 381–388 (1992).
[0240]
смотрите, например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой куриное антитело. Куриные антитела можно получать различными способами, известными в данной обрасти техники;  патенты США № 6143559; 8592644; и 9380769.
[0241]
Смотрите, например,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой химерное антитело.  патент США № 4816567 и Morrison et al.,  81:6851–6855 (1984). В некоторых вариантах реализации химерное антитело содержит нечеловеческую вариабельную область ( вариабельную область, полученную от курицы, мыши, крысы, хомяка, кролика или отличного от человека примата, такого как обезьяна) и человеческую константную область. В некоторых вариантах реализации химерное антитело представляет собой антитело «с переключенным классом», в котором был изменен класс или подкласс по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
[0242]
например,
(например,
например,
например,
например,
Front. Biosci.
например,
В некоторых вариантах реализации химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Нечеловеческое антитело можно гуманизировать, чтобы снизить его иммуногенность для человека, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского нечеловеческого антитела. В общем случае гуманизированное антитело содержит один или более вариабельных доменов, в которых HVR,  CDR (или их части) получены из нечеловеческого антитела  куриного антитела), а FR (или их части) получены из последовательностей человеческого антитела. Гуманизированное антитело также необязательно будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых вариантах реализации некоторые остатки FR в гуманизированном антителе замещены соответствующими остатками из нечеловеческого антитела ( антитела, из которого получены остатки HVR),  для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела. Обзор гуманизированных антител и способов их получения приведен  в Almagro and Fransson, 13:1619–1633 (2008). Также были описаны способы гуманизации куриных антител,  в WO2005014653.
[0243]
Смотрите, например,
J. Immunol.
Proc. Natl Acad. Sci. USA,
J. Immunol,
Front. Biosci.
Biol Chem.
Человеческие каркасные области, подходящие для гуманизации, включают, но не ограничиваются этим: каркасные области, выбранные методом «наилучшего соответствия»; каркасные области, полученные из консенсусной последовательности человеческих антител конкретной подгруппы вариабельных областей тяжелой или легкой цепи; человеческие соматически мутированные каркасные области или каркасные области человеческой зародышевой линии; и каркасные области, полученные при скрининге библиотек FR. Sims et al.  151:2296 (1993); Carter et al.  89:4285 (1992); Presta et al.  151:2623 (1993); Almagro and Fransson, 13:1619–1633 (2008); и Baca et al., J.  272:10678–10684 (1997).
[0244]
(смотрите, например,
Cun. Opin. Immunol.
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой человеческое антитело. Человеческие антитела можно получать различными способами, известными в данной обрасти техники. В некоторых вариантах реализации человеческое антитело вырабатывается отличным от человека животным, таким как генетически измененные куры  патенты США № 8592644; и 9380769) и/или мыши, описанные в данном документе. Вцелом, человеческие антитела описаны в Lonberg,  20:450–459 (2008).
[0245]
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вырабатывается в организме курицы или получено из него,  с помощью описанных в данном документе способов.
[0246]
например,
например,
Journal of Biochemical and Biophysical Methods
Science,
E. coli.
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой фрагмент антитела, включая, без ограничений, фрагмент Fab, F(ab’)2, Fab’–SH, Fv или scFv, или однодоменное, состоящее из одной тяжелой цепи или состоящее из одной легкой цепи антитело. Фрагменты антител можно получать,  путем ферментативного расщепления или рекомбинантными способами. В некоторых вариантах реализации для создания фрагмента антитела используют протеолитическое расщепление интактного антитела,  как описано в Morimoto et al.,  24:107–117 (1992) и Brennan et al.,  229:81 (1985). В некоторых вариантах реализации фрагмент антитела получают с помощью рекомбинантной клетки–хозяина. Например, фрагменты антител Fab, Fv и ScFv экспрессируются и секретируются  В альтернативном варианте фрагменты антител можно выделять из фаговой библиотеки антител.
[0247]
E. coli
Смотрите
Bio/Technology
in vivo
2
2
2
Фрагменты Fab'–SH можно непосредственно выделять из  и проводить их химическое сопряжение с образованием фрагментов F(ab').  Carter et al.,  10:163–167 (1992). Фрагменты F(ab') также можно непосредственно выделять из культуры рекомбинантных клеток–хозяев. Фрагменты Fab и F(ab') с повышенным  временем полужизни, содержащие остатки связывания эпитопа рецептора реутилизации, описаны в патенте США № 5869046.
[0248]
Смотрите
В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой одноцепочечный фрагмент Fv (scFv). WO 93/16185 и патенты США № 5571894 и 5587458. Можно конструировать слитые белки scFv с получением слияния эффекторного белка в амино– или карбокси–конце scFv. Фрагмент антитела также может представлять собой «линейное антитело», например, описанное в патенте США № 5641870. Такие линейные антитела могут быть моноспецифическими или биспецифическими.
[0249]
например,
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой мультиспецифическое антитело. Мультиспецифические антитела обладают специфичностью связывания в отношении более чем одного антигена ( обладают двумя, тремя или более специфичностями связывания). В некоторых вариантах реализации антитело представляет собой биспецифическое антитело. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело имеет две разные специфичности связывания в отношении одного антигена ( характеризующихся разной аффинностью связывания и/или разными конкретными эпитопами одного антигена). В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело характеризуется специфичностью связывания в отношении двух разных антигенов. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело представляет собой полноразмерное или интактное антитело. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело представляет собой фрагмент антитела согласно настоящему изобретению.
[0250]
например,
например,
y
В данном документе предусмотрены биспецифические или мультиспецифические антитела с рядом комбинаций вариантов специфичности связывания. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело имеет первую специфичность связывания в отношении одного или более полипептидов SIRP–α, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело имеет вторую специфичность связывания в отношении антигена, экспрессируемого раковой клеткой,  на клеточной поверхности. Примеры таких антигенов включают, без ограничений, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop–2, 5T4, EphA4, BCMA, муцин 1, муцин 16, PTK7, PD–L1, STEAP1, рецептор эндотелина B, мезотелин, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, нектин 4, NaPi2b, LIV–1A, гуанилил циклазу C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, интегрин αVβ3, интегрин α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, тенасцин, Le, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, муцин, CAIX, EPHA3, фолатный рецептор α, GD2, GD3 и ГКГС/пептидного комплекса, содержащего пептид из NY–ESO–1/LAGE, SSX–2, белок семейства MAGE, MAGE–A3, gp100/pmel17, Melan–A/MART–1, gp75/TRP1, тирозиназу, TRP2, CEA, PSA, TAG–72, незрелый рецептор ламинина, MOK/RAGE–1, WT–1, SAP–1, BING–4, EpCAM, MUC1, PRAME, сурвивин, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART–2, p53, Ras, β–катенин, TGF–βRII, HPV E6 или HPV E7. Не ограничиваясь теорией, считается, что комбинация такой специфичности связывания со специфичностью связывания против SIRP–α обеспечивает исключительное преимущество, для направления FcR–экспрессирующих лейкоцитов для нацеливания на опухолевую клетку со второй специфичность связывания, в то же время ингибируя восприимчивость SIRP–α, экспрессируемого лейкоцитом, к любому CD47, экспрессируемому опухолевой клеткой с первой специфичностью связывания.
[0251]
например,
В данной области техники известны различные способы создания и очистки биспецифических антител. Было описано множество подходов. Одним из подходов является подход «выступ–во–впадину» или «выпуклость–в–углубление» (смотрите,  патент США № 5731168). В некоторых вариантах реализации гетеродимеризацию мономеров Fc–домена стимулируют, внося разные, но совместимые замены в два мономера Fc–домена, такие как пары остатков «выступ–во–впадину» и заряженные пары остатков. Взаимодействие типа выступ–во–впадину способствует образованию гетеродимера, тогда как взаимодействие «выступ–выступ» и «впадина–впадина» препятствует образованию гетеродимера вследствие стерического несоответствия и устранения благоприятных взаимодействий. Впадиной называется пространство, создаваемое при замещении оригинальной аминокислоты в белке другой аминокислотой, имеющей меньший объем боковой цепи. Выступом называется выпуклость, создаваемая при замещении оригинальной аминокислоты в белке другой аминокислотой, имеющей больший объем боковой цепи. Например, в некоторых вариантах реализации замещаемая аминокислота находится в CH3 константного домена антитела мономера Fc–домена и вовлечена в димеризацию двух мономеров Fc–домена. В некоторых вариантах реализации в CH3 константного домена антитела создается впадина, соответствующая выступу в другом CH3 константного домена антитела, так, что аминокислоты выступа и впадины стимулируют или способствуют гетеродимеризации двух мономеров Fc–домена. В некоторых вариантах реализации впадина в CH3 константного домена антитела создается, чтобы лучше соответствовать оригинальной аминокислоте в другом CH3 константного домена антитела. В некоторых вариантах реализации выступ в CH3 константного домена антитела создается для образования дополнительных взаимодействий с оригинальными аминокислотами в другом CH3 константного домена антитела.
[0252]
В некоторых вариантах реализации впадину создают путем замещения аминокислот, имеющих большие боковые цепи, таких как тирозин или триптофан, аминокислотами, имеющими меньшие боковые цепи, такими как аланин, валин или треонин, например, как в случае мутации Y407V в CH3 константного домена антитела. Аналогично, в некоторых вариантах реализации выступ создают путем замещения аминокислот, имеющих меньшие боковые цепи, аминокислотами, имеющими большие боковые цепи, например, как в случае мутации T366W в CH3 константного домена антитела. В некоторых вариантах реализации один мономер Fc–домена содержит мутацию типа «выступа» T366W, а другой мономер Fc–домена содержит мутации типа «впадины» T366S, L358A и Y407V. В некоторых вариантах реализации полипептид согласно изобретению, включая высокоаффинный вариант D1 SIRP–α, слит с мономером Fc–домена, содержащим мутацию типа «выступ» T366W, для ограничения нежелательного образования гомодимера «выступ–выступ». Примеры аминокислотных пар типа «выступ–во–впадину» включены, без ограничений, в таблицу 3.
Таблица 3.
Аминокислотные пары типа «выступ–во–впадину».
МономерFc–Домена 1
Y407T
Y407A
F405A
T394S
T366SL358AY407V
T394WY407T
T394SY407A
T366WT394S
Мономер Fc–домена 2
T366Y
T366W
T394W
F405W
T366W
T366YF405A
T366WF405W
F405WY407A
[0253]
например,
Смотрите
(смотрите, например,
(смотрите, например,
Science,
J. Immunol.,
например,
et al.
Mol. Immunol.
2
В другом подходе используются вариабельные домены антитела с необходимой специфичностью связывания (участки связывания антитело–антиген), слитые с последовательностями константного домена иммуноглобулина,  с константным доменом тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащим по меньшей мере часть шарнирной области, а также областей CH2 и CH3. В некоторых вариантах реализации биспецифическое антитело имеет гибридную тяжелую цепь иммуноглобулина с первой специфичностью связывания в одном плече и гибридную пару тяжелая цепь – легкая цепь иммуноглобулина (обеспечивающую вторую специфичность связывания) в другом плече.  WO 94/04690. В другом подходе используется перекрестное сшивание  патент США № 4676980) для получения гетероконъюгированного антитела. В некоторых вариантах реализации биспецифические антитела можно получать, используя химическую связь  Brennan et al.,  229: 81 (1985)) для протеолитического расщепления интактного антитела на фрагменты F(ab'), которые восстанавливаются в присутствии дитиолового комплексирующего агента и превращаются в производные тионитробензоата (ТНБ), одно из которых повторно преобразуется в Fab’–посредством восстановления и смешивается с другим Fab'–ТНБ производным с образованием биспецифического антитела. В некоторых вариантах реализации фрагменты Fab'–SH химически сопряжены. В некоторых вариантах реализации фрагменты биспецифических антител получают в клеточной культуре, используя лейциновые молнии, как описано в Kostelny et al.,  148(5): 1547– 1553 (1992). Информацию о других форматах биспецифических антител смотрите,  в Spiess, C.  (2015)  67:95–106.
[0254]
Смотрите, например,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
Смотрите
J. Immunol,
H
L
L
H
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой диатело.  Hollinger et al.,  90:6444–6448 (1993). В диателе домены V и V одного фрагмента спарены с комплементарными доменами V и V другого фрагмента, образуя, таким образом, два антигенсвязывающих участка. Сообщалось о другой стратегии получения фрагментов биспецифических антител путем использования димеров из одноцепочечных Fv (sFv). Gruber et al,  152:5368 (1994).
[0255]
(смотрите, например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению представляет собой однодоменное антитело. Однодоменным антителом называется одиночная полипептидная цепь, содержащая весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В определенных вариантах реализации однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело  патент США № 6248516 B1). В одном варианте реализации однодоменное антитело содержит весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи антитела. Также известны антитела верблюжьих.
[0256]
например,
Антитела можно получать рекомбинантными способами. Для рекомбинантного получения антитела против антигена выделяют нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, и вставляют в способный к репликации вектор для дополнительного клонирования (амплификации ДНК) или для экспрессии. ДНК, кодирующую антитело, легко можно выделять и секвенировать, используя традиционные процедуры ( путем применения олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелую и легкую цепи антитела). Доступно большое количество векторов. Компоненты вектора в общем случае включают, но не ограничиваются этим, один или более из следующих компонентов: сигнальная последовательность, точка начала репликации, один или более маркерных генов, энхансерный элемент, промотор и последовательность терминации транскрипции.
[0257]
например,
например,
например,
Saccharomyces
Kluyveromyces
C. albicans
Антитело согласно настоящему изобретению можно получать рекомбинантным способом в виде полипептида, слитого с гетерологичным полипептидом,  сигнальной последовательностью или другим полипептидом, имеющим специфический участок расщепления в N–конце зрелого белка или полипептида. Выбранной гетерологичной сигнальной последовательностью может быть последовательность, которая распознается и процессируется ( расщепляется сигнальной пептидазой) клеткой–хозяином. В случае прокариотических клеток–хозяев, которые не распознают и не процессируют сигнальную последовательность, сигнальную последовательность замещают прокариотической сигнальной последовательностью, выбранной, например, из лидерных последовательностей щелочной фосфатазы, пенициллиназы, lpp или термостабильного энтеротоксина II. В случае дрожжевой секреции нативную сигнальную последовательность можно замещать,  лидерной последовательностью дрожжевой инвертазы, лидерной последовательностью фактора (включая лидерные последовательности α–фактора и  ) или лидерной последовательностью кислой фосфатазы, лидерной последовательностью глюкоамилазы и т. д. В случае экспрессии в клетках млекопитающих доступны сигнальные последовательности млекопитающих, а также вирусные секреторные лидерные последовательности, например, gD–сигнал вируса простого герпеса.
[0258]
например,
Как экспрессионные, так и клонирующие векторы содержат последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает возможность репликации вектора в одной или более выбранных клетках–хозяевах,  возможность репликации вектора независимо от хромосомной ДНК хозяина. Эта последовательность может содержать точки начала репликации или последовательности автономной репликации. Такие последовательности хорошо известны для многих бактерий, дрожжей и вирусов. В общем случае компонент точки начала репликации не является необходимым для экспрессионных векторов млекопитающих (можно использовать точку SV40, так как она содержит ранний промотор).
[0259]
например,
Экспрессионные и клонирующие векторы могут содержать селективный ген или селективный маркер. Типичные селективные гены кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам,  к ампициллину, неомицину, метотрексату или тетрациклину, (b) восполняют ауксотрофный дефицит клетки или (c) обеспечивают важные питательные вещества, не доступные в комплексных средах. Примеры доминантной селекции включают применение таких препаратов как неомицин, микофеноловая кислота и гигромицин. Другими примерами подходящих селективных маркеров для клеток млекопитающих являются маркеры, обеспечивающие возможность идентификации клеток, способных поглощать кодирующую антитело нуклеиновую кислоту, такие как DHFR, глутаминсинтетаза (GS), тимидинкинада, металлотионеин–I и –II, предпочтительно гены металлотионеина приматов, аденозиндезаминаза, орнитиндекарбоксилаза и т. д. Например, линию клеток яичника китайского хомяка (CHO) с дефицитом активности эндогенного DHFR, трансформированную геном DHFR, идентифицируют, культивируя трансформантов в культуральной среде, содержащей метотрексат (Mtx), конкурентный антагонист DHFR.
[0260]
например,
В альтернативном варианте отбор клеток–хозяев (в частности, хозяев дикого типа, которые содержат эндогенный DHFR), трансформированных или совместно трансформированных последовательностями ДНК, кодирующими представляющее интерес антитело, ген DHFR дикого типа и другой селективный маркер, такой как аминогликозид–3'–фосфотрансфераза (APH), можно проводить по росту клеток в среде, содержащей селективный агент для селективного маркера, такой как аминогликозидный антибиотик,  канамицин, неомицин или G418.
[0261]
phoA
Экспрессионные и клонирующие векторы в общем случае содержат промотор, который распознается организмом–хозяином и который функционально связан с нуклеиновой кислотой, кодирующей антитело. Промоторы, подходящие для использования с прокариотическими хозяевами, включают промотор , промоторные системы β–лактамазы и лактозы, промотор щелочной фосфатазы, промоторную систему триптофана (trp) и гибридные промоторы, такие как промотор tac. При этом подходят и другие известные бактериальные промоторы. Промоторные последовательности известны также для эукариот. Дрожжевые промоторы хорошо известны в данной области техники и могут включать индуцибельные промоторы/энхансеры, регулируемые условиями роста. Практически все эукариотические гены имеют AT–богатую область, расположенную приблизительно на 25–30 оснований выше сайта инициации транскрипции. Примеры включают, без ограничений, промоторы 3–фосфоглицераткиназы или других гликолитических ферментов, таких как энолаза, глицеральдегид–3–фосфатдегидрогеназа, гексокиназа, пируватдекарбоксилаза, фосфофруктокиназа, глюкозо–6–фосфат изомераза, 3–фосфоглицератмутаза, пируваткиназа, триозофосфатизомераза, фосфоглюкозоизомераза и глюкокиназа. Транскрипцию антитела из векторов в клетках–хозяевах млекопитающих можно регулировать, например, промоторами, полученными из геномов вирусов. Ранний и поздний промоторы вируса SV40 удобно получать в виде рестрикционного фрагмента SV40, который также содержит вирусную точку начала репликации SV40. Немедленно–ранний промотор человеческого цитомегаловируса удобно получать в виде рестрикционного фрагмента HindIII E. В альтернативном варианте в качестве промотора можно использовать длинный концевой повтор вируса саркомы Рауса.
[0262]
Транскрипцию ДНК, кодирующей антитело согласно этому изобретению, высшими эукариотами часто повышают, вставляя в вектор последовательность энхансера. На сегодняшний день известно много последовательностей энхансеров из генов млекопитающих (глобина, эластазы, альбумина, α–фетопротеина и инсулина). Однако, как правило, используют энхансер из вируса эукариотической клетки.
[0263]
Экспрессионные векторы, применяемые в эукариотических клетках–хозяевах (дрожжей, грибов, насекомых, растений, животных, людей или ядросодержащих клетках других многоклеточных организмов) также будут содержать последовательности, необходимые для терминации транскрипции и для стабилизации мРНК.
[0264]
Escherichia, например, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, например. Salmonella typhirnurium, Serratia, например, Serratia marcescans,
Shigella,
Saccharomyces cerevisiae,
Смотрите, например,
Nat. Biotech.
Клетки–хозяева, подходящие для клонирования или экспрессии ДНК в векторах согласно данному документу являются клетками прокариот, дрожжей или высших эукариот, описанными выше. Подходящие для данной цели прокариоты включают эубактерии, такие как грамотрицательные или грамположительные организмы, например, Enterobactehaceae, такие как  и  и т. д. Кроме прокариот эукариотические микроорганизмы, такие как нитевидные грибы или дрожжи, являются подходящими для клонирования или экспрессии хозяевами для антиген–кодирующих векторов.  или обычные пекарские дрожжи наиболее часто используются среди низших эукариотических микроорганизмов–хозяев. Можно отбирать определенные штаммы грибов и дрожжей, в которых пути гликозилирования были «гуманизированы», что приводит к выработке антитела с частично или полностью человеческим профилем гликозилирования.  Li et al.,  24:210–215 (2006).
[0265]
(Leninaceae
(M. truncatula)
Культуры клеток растений, например, хлопка, кукурузы, картофеля, сои, петунии, томатов, ряски ), люцерны  и табака, также можно использовать в качестве хозяев.
[0266]
Spodoptera frugiperda
Aedes aegypti
Aedes albopictus
Drosophila melanogaster
Bombyx mori
Подходящие для экспрессии гликозилированного антитела клетки–хозяева также получают из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы и варианты и соответствующие пермиссивные клетки–хозяева насекомых из таких хозяев, как  (гусеница),  (москит),  (москит),  (фруктовая муха) и .
[0267]
et al
J. Gen Virol.
Biol. Reprod.
et al. Annals N.Y. Acad. Sci.
et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Methods in Molecular Biology,
Клетки позвоночных можно использовать в качестве хозяев, а размножение клеток позвоночных в культуре (тканевой культуре) стало рутинной процедурой. Примерами применимых линий клеток–хозяев млекопитающих являются линия почки обезьяны CV1, трансформированная SV40 (COS–7, ATCC CRL 1651); линия почки эмбриона человека (клетки 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham .,  36:59 (1977)); клетки почки новорожденного хомяка (BHK, ATCC CCL 10); клетки сертоли мышей (TM4, Mather,  23:243–251 (1980)); клетки почки обезьяны (CV1 ATCC CCL 70); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO–76, ATCC CRL–1587); клетки карциномы шейки матки человека (HELA, ATCC CCL 2); клетки почки собаки (MDCK, ATCC CCL 34); клетки печени серой крысы (BRL 3 A, ATCC CRL 1442); клетки легкого человека (W138, ATCC CCL 75); клетки печени человека (Hep G2, HB 8065); клетки опухоли молочной железы мышей (MMT 060562, ATCC CCL51); клетки TRI (Mather  383:44–68 (1982)); клетки MRC 5; клетки FS4; и линия гепатомы человека (Hep G2). Другие применимые линии клеток–хозяев млекопитающих включают клетки яичника китайского хомяка (CHO), включая DHFR–клетки CHO (Urlaub  77:4216 (1980)); и линии клеток миеломы, такие как NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток–хозяев млекопитающих, подходящих для выработки антител, смотрите, например, в Yazaki and Wu,  Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 255–268.
[0268]
et al, Meth. Enz.
et αl., Anal Biockem.
Клетки–хозяев согласно настоящему изобретению можно культивировать в различных средах. Коммерчески доступные среды, такие как среда Ham F10 (Sigma), минимальная питательная среда ((MEM), (Sigma), RPMi–1640 (Sigma) и среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко ((DMEM), Sigma), подходят для культивирования клеток–хозяев. Кроме того, среды, описанные в Ham  58:44 (1979), Barnes  102:255 (1980), патентах США № 4767704; 4657866; 4927762; 4560655; или 5122469; WO 90/03430; WO 87/00195; или патенте США Re. 30985, можно использовать в качестве культуральной среды для клеток–хозяев. Любые из этих сред можно в случае необходимости дополнять гормонами и/или другими факторами роста (такими как инсулин, трансферрин или эпидермальный фактор роста), солями (такими как хлорид натрия, кальция, магния и фосфат), буферами (такими как ГЭПЭС), нуклеотидами (такими как аденозин и тимидин), антибиотиками (такими как препарат ГЕНТАМИЦИН™), следовыми элементами (определяемыми как неорганические соединения, обычно присутствующие в конечных концентрациях в микромолярном диапазоне) и глюкозой или эквивалентным источником энергии. Любые другие необходимые добавки также могут быть включены в подходящих концентрациях, как известно специалистам в данной области техники. Культуральные условия, такие как температура, pH и т. д., представляют условия, применяемые ранее с клетками–хозяевами, отобранными для экспрессии, и известны для специалиста в данной области техники.
[0269]
et al, Bio/Technology
E. coli.
При применении рекомбинантных технологий антитело можно получать внутриклеточно, в периплазматическом пространстве или оно может напрямую секретироваться в среду. Если антитело вырабатывается внутриклеточно, на первом этапе удаляют дебрис из частиц, как клеток–хозяев, так и лизированных фрагментов, например, путем центрифугирования или ультрафильтрации. В Carter 10:163–167 (1992) описана процедура выделения антител, которые секретируются в периплазматическое пространство
[0270]
Композицию антител, полученную из клеток, можно очищать, используя, например, хроматографию с гидроксиапатитом, хроматографию с гидрофобным взаимодействием, гель–электрофорез, диализ и аффинную хроматографию, при этом аффинная хроматография является одним из обычно предпочитаемых этапов очистки.
[0271]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит константную область каппа или лямбда легкой цепи. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит константную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:325, 326 или 426. Типовые и неограничивающие последовательности константной области легкой цепи приведены в таблице 6. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит константную область лямбда легкой цепи IGLC3 или константную область IGLC7.
[0272]
например,
например, выше.
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению содержит Fc–область. Например, в некоторых вариантах реализации Fc–область представляет собой человеческую Fc–область,  IgG1, IgG2 или IgG4 и их подтипов. Типовые и неограничивающие Fc–области приведены в аминокислотных последовательностях SEQ ID NO:320–324, показанных в таблице 6. В некоторых вариантах реализации Fc–область в одной или более аминокислотных последовательностях SEQ ID NO:320–324 содержит одну или более мутаций, описанных в данном документе,
Таблица 6.
Типовые последовательности константной области
Название
SEQ ID NO
Последовательность
IgG1 дикого типа
320
<img file="00000234.jpg" he="45" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
IgG1_AAA_N297A
321
<img file="00000235.jpg" he="29" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000236.jpg" he="8" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
IgG2
322
<img file="00000237.jpg" he="45" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
IgG2Da
323
<img file="00000238.jpg" he="33" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
IgG4_S228P
324
<img file="00000239.jpg" he="33" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Человеческая каппа
325
<img file="00000240.jpg" he="12" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Человеческая лямбда IGLC1
326
<img file="00000241.jpg" he="12" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Человеческая лямбда IGLC2
426
<img file="00000242.jpg" he="13" wi="104" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0273]
В некоторых вариантах реализации Fc–область содержит одну или более мутаций, которые влияют на одно или более свойств антитела, таких как стабильность, профиль гликозилирования или другие модификации, эффекторная клеточная функция, фармакокинетика и т. д. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению характеризуется сниженным или минимальным гликозилированием. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению имеет устраненную или сниженную эффекторную функцию. Типовые Fc–мутации включают, без ограничений, (i) мутации Fc–области IgG1 человека L234A, L235A, G237A и N297A; (ii) мутации Fc–области IgG2 человека A330S, P331S и N297A; и (iii) мутации Fc–области IgG4 человека S228P, E233P, F234V, L235A, delG236 и N297A (нумерация EU). В некоторых вариантах реализации Fc–область IgG2 человека содержит мутации A330S и P331S. В некоторых вариантах реализации Fc–область IgG4 человека содержит мутацию S288P. В некоторых вариантах реализации Fc–область IgG4 человека содержит мутации S288P и L235E.
[0274]
Антитела, нацеленные на антигены клеточной поверхности, могут запускать иммуностимулирующие и эффекторные функции, которые связаны с привлечением Fc–рецептора (FcR) на иммунных клетках. Существует некоторое количество Fc–рецепторов, специфических для конкретных классов антител, включая IgG (гамма–рецепторы), IgE (эпсилон–рецепторы), IgA (альфа–рецепторы) и IgM (мю–рецепторы). Связывание Fc–области с Fc–рецепторами на клеточной поверхности может запускать многочисленные биологические реакции, включая фагоцитоз покрытых антителами частиц (антителозависимый клеточноопосредованный фагоцитоз или АЗКФ), клиренс иммунных комплексов, лизис покрытых антителами клеток клетками–киллерами (антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность или АЗКЦ) и высвобождение воспалительных медиаторов, перенос через плаценту и регуляция выработки иммуноглобулина. Кроме того, связывание компонента C1 комплемента с антителами может активировать систему комплемента. Активация комплемента может быть важной для лизиса клеточных патогенов. Однако активация комплемента также может стимулировать воспалительный ответ и также может быть вовлечена в аутоиммунную гиперчувствительность или другие иммунологические нарушения. Вариантные Fc–области со сниженной или устраненной способностью связывать определенные Fc–рецепторы применимы для разработки терапевтических антител и Fc–слитых полипептидных конструкций, действие которых состоит в нацеливании, активации или нейтрализации функций лигандов, и в то же время не приводит к повреждению или разрушению локальных клеток или тканей.
[0275]
В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена относится к полипептидной цепи, которая содержит второй и третий константные домены антитела (например, CH2 и CH3). В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена также содержит шарнирный домен. В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена принадлежит антителу любого изотипа иммуноглобулина, включая IgG, IgE, IgM, IgA и IgD. Кроме того, в некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена принадлежит любому подтипу IgG (например, IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgG3 и IgG4). В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена содержит до десяти изменений по сравнению с последовательностью мономера Fc–домена дикого типа (например, 1–10, 1–8, 1–6, 1–4 аминокислотных замен, добавлений или вставок, делеций или их комбинаций), которые изменяют взаимодействие между Fc–доменом и Fc–рецептором.
[0276]
В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена иммуноглобулина или фрагмент мономера Fc–домена способен образовывать Fc–домен с другим мономером Fc–домена. В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена иммуноглобулина или фрагмент мономера Fc–домена не способен образовывать Fc–домен с другим мономером Fc–домена. В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена или фрагмент Fc–домена слит с полипептидом согласно изобретению для повышения сывороточного времени полужизни полипептида. В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена или фрагмент мономера Fc–домена, слитый с полипептидом согласно изобретению, димеризуется со вторым мономером Fc–домена с образованием Fc–домена, который связывает Fc–рецептор, или, в альтернативном варианте, мономер Fc–домена связывается с Fc–рецептором. В некоторых вариантах реализации Fc–домен или фрагмент Fc–домена, слитый с полипептидом для повышения сывороточного времени полужизни полипептида, не индуцирует ответ со стороны иммунной системы. Fc–домен содержит два мономера Fc–домена, которые димеризуются посредством взаимодействия между константными доменами CH3 антитела.
[0277]
Fc–домен дикого типа образует минимальную структуру, которая связывается с Fc–рецептором, например, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIIb и FcγRIV. В некоторых вариантах реализации Fc–домен в антителе согласно настоящему изобретению содержит одну или более аминокислотных замен, добавок или вставок, делеций или любые их комбинации, которые приводят к снижению эффекторной функции, например, снижению антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (АЗКЦ), снижению комплементзависимого цитолиза (КЗЦ), снижению антителозависимого клеточноопосредованного фагоцитоза (АЗКФ) или любым их комбинациям. Например, антитело согласно настоящему изобретению может демонстрировать сниженное связывание (например, минимальное связывание или отсутствие связывания) с человеческим Fc–рецептором сниженное связывание (например, минимальное связывание или отсутствие связывания) с белком комплемента C1q; сниженное связывание (например, минимальное связывание или отсутствие связывания) с человеческим FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIB, FcγRIIIB или любыми их комбинациями и C1q; измененную или сниженную антителозависимую эффекторную функцию, такую как АЗКЦ, КЗЦ, АЗКФ или любые их комбинации; и т. д. Типовые мутации включают, без ограничений, одну или более аминокислотных замен в E233, L234, L235, G236, G237, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331 или P329 (нумерация в соответствии с индексом EU по Kabat (Sequences of Proteins of Immunological interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).
[0278]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению характеризуется сниженным или аблированным связыванием с Fcγ–рецепторами CD16a, CD32a, CD32b, CD32c и CD64. В некоторых вариантах реализации антитело с ненативной Fc–областью, описанное данном документе, демонстрирует по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или большее снижение в связывании C1q по сравнению с антителом, содержащим Fc–область дикого типа. В некоторых вариантах реализации антитело с ненативной Fc–областью, описанное данном документе, демонстрирует по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или большее снижение в КЗЦ по сравнению с антителом, содержащим Fc–область дикого типа.
[0279]
В некоторых вариантах реализации Fc–варианты согласно данному документу характеризуются минимальным гликозилированием или сниженным гликозилированием по сравнению с последовательностью дикого типа. В некоторых вариантах реализации дегликозилирование осуществляют с помощью мутации N297A или посредством мутации N297 на любую аминокислоту, отличную от N.
[0280]
В некоторых вариантах реализации варианты константных областей антитела IgG (например, Fc–варианты) обладают сниженной способностью специфически связывать Fcγ–рецепторы или обладают сниженной способностью индуцировать фагоцитоз. В некоторых вариантах реализации варианты константных областей антитела IgG (например, Fc–варианты) обладают сниженной способностью специфически связывать Fcγ–рецепторы и обладают сниженной способностью индуцировать фагоцитоз. Например, в некоторых вариантах реализации Fc–домен мутирован так, чтобы у него отсутствовали эффекторные функции, что типично для «мертвого» Fc–домена. Например, в некоторых вариантах реализации Fc–домен содержит конкретные аминокислотные замены, которые, как известно, минимизируют взаимодействие между Fc–доменом и Fcγ–рецептором. В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена получен из антитела IgG1 и содержит одну или более аминокислотных замен L234A, L235A, G237A и N297A (обозначенных в соответствии с системой нумерации EU по Kabat et al., 1991). В некоторых вариантах реализации в такой Fc–вариант IgG1 включены одна или более дополнительных мутаций. Неограничивающие примеры таких дополнительных мутаций для Fc–вариантов человеческого IgG1 включают E318A и K322A. В некоторых случаях Fc–вариант человеческого IgG1 содержит всего до 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 или 4 или менее мутаций по сравнению с последовательностью человеческого IgG1 дикого типа. В некоторых вариантах реализации в такой Fc–вариант IgG1 включены одна или более дополнительных делеций. Например, в некоторых вариантах реализации удален С–концевой лизин константной области тяжелой цепи Fc IgG1, например, для повышения гомогенности полипептида, когда полипептид вырабатывается в клетках бактерий или млекопитающих В некоторых случаях Fc–вариант человеческого IgG1 содержит всего до 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 или 4 или менее делеций по сравнению с последовательностью человеческого IgG1 дикого типа.
[0281]
В некоторых вариантах реализации мономер Fc–домена получен из антитела IgG2 и содержит аминокислотные замены A330S, P331S или как A330S, так и P331S. Вышеуказанные аминокислотные позиции определены в соответствии с Kabat, et al. (1991). Нумерация аминокислотных остатков по Kabat для данного антитела может быть определена путем выравнивания областей гомологии последовательности антитела со «стандартной» пронумерованной по Kabat последовательностью. В некоторых вариантах реализации Fc–вариант содержит последовательность Fc человеческого IgG2, содержащую одну или более аминокислотных замен A330S, P331S и N297A (по определению в соответствии с системой нумерации EU по Kabat et al. (1991). В некоторых вариантах реализации в такие Fc–варианты IgG2 включены одна или более дополнительных мутаций. Неограничивающие примеры таких дополнительных мутаций для Fc–варианта человеческого IgG2 включают V234A, G237A, P238S, V309L и H268A (обозначенных в соответствии с системой нумерации EU по Kabat et al. (1991)). В некоторых случаях Fc–вариант человеческого IgG2 содержит всего до 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 или менее мутаций по сравнению с последовательностью человеческого IgG2 дикого типа. В некоторых вариантах реализации в такой Fc–вариант IgG2 включены одна или более дополнительных делеций.
[0282]
Если Fc–вариант представляет собой Fc–вариант IgG4, в некоторых вариантах реализации такой Fc–вариант содержит мутацию S228P, E233P, F234V, L235A, L235E или delG236 (обозначенную в соответствии с Kabat, et al. (1991)). В некоторых случаях Fc–вариант человеческого IgG4 содержит всего до 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 мутации (–ий) по сравнению с последовательностью человеческого IgG4 дикого типа.
[0283]
В некоторых вариантах реализации Fc–вариант демонстрирует сниженное связывание с Fc–рецептором субъекта по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах реализации Fc–вариант демонстрирует аблированное связывание с Fc–рецептором субъекта по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах реализации Fc–вариант демонстрирует снижение фагоцитоза по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа. В некоторых вариантах реализации Fc–вариант демонстрирует аблированный фагоцитоз по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа.
[0284]
Антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность, которая также называется в данном документе АЗКЦ, относится к форме цитотоксичности, при которой секретируемый Ig, связанный с Fc–рецепторами (FcR), присутствует на некоторых цитотоксических клетках (например, естественных клетках–киллерах (NK) и нейтрофилах), позволяя этим цитотоксическим эффекторным клеткам специфически связываться с антиген–несущей клеткой–мишенью и впоследствии уничтожать клетку–мишень. Антителозависимый клеточноопосредованный фагоцитоз, который также называется в данном документе АЗКФ, относится к форме цитотоксичности, при которой секретируемый Ig, связанный с Fc–рецепторами (FcR), присутствует на некоторых фагоцитарных клетках (например, макрофагах), позволяя этим фагоцитарным эффекторным клеткам специфически связываться с антиген–несущей клеткой–мишенью и впоследствии поглощать и расщеплять клетку–мишень. Лиганд–специфические высокоаффинные антитела IgG, направляемые к поверхности клетки, могут стимулировать цитотоксические или фагоцитарные клетки и могут применяться для подобного уничтожения. В некоторых вариантах реализации полипептидные конструкции, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют сниженную АЗКЦ или АЗКФ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа. В некоторых вариантах реализации полипептидные конструкции, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или большее снижение АЗКЦ или АЗКФ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа. В некоторых вариантах реализации антитела, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют аблированную АЗКЦ или АЗКФ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа.
[0285]
Комплементзависимая цитотоксичность, которая также называется в данном документе КЗЦ, относится к форме цитотоксичности, при которой происходит активация каскада комплемента посредством связывания компонента комплемента C1q с Fc антитела. В некоторых вариантах реализации полипептидные конструкции, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или большее снижение в связывании C1q по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа. В некоторых случаях полипептидные конструкции, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют сниженную КЗЦ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа. В некоторых вариантах реализации полипептидные конструкции, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или большее снижение в КЗЦ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа. В некоторых случаях антитела, содержащие описанный в данном документе Fc–вариант, демонстрируют незначительную КЗЦ по сравнению с полипептидной конструкцией, содержащей Fc–область дикого типа.
[0286]
Fc–варианты согласно данному документу включают те, которые демонстрируют сниженное связывание с Fcγ–рецептором по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа. Например, в некоторых вариантах реализации Fc–вариант демонстрирует связывание с Fcγ–рецептором, меньшее, чем связывание с Fcγ–рецептором, демонстрируемое Fc–областью человеческого IgG дикого типа. В некоторых случаях Fc–вариант характеризуется связыванием с Fcγ–рецептором, сниженным на 10%, 20% 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% (полностью аблированная эффекторная функция). В некоторых вариантах реализации снижение связывания наблюдается в отношении одного или более Fcγ–рецепторов, например, CD16a, CD32a, CD32b, CD32c или CD64.
[0287]
В некоторых случаях описанные в данном документе Fc–варианты демонстрируют снижение фагоцитоза по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа. Такие Fc–варианты демонстрируют снижение фагоцитоза по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа, при этом снижение фагоцитарной активности составляется, например, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%. В некоторых случаях Fc–вариант демонстрирует аблированный фагоцитоз по сравнению с Fc–областью человеческого IgG дикого типа.
[0288]
В некоторых вариантах реализации описанные в данном документе Fc–варианты сопряжены с одним или более партнерами по слиянию. В некоторых случаях партнер по слиянию представляет собой терапевтическое соединение, такое как цитотоксический агент согласно настоящему изобретению. В некоторых случаях партнера по слиянию выбирают, чтобы обеспечить возможность нацеливания экспрессируемого белка, очистки, скрининга, представления и т. д. В некоторых вариантах реализации партнер по слиянию также влияет на степень связывания с Fc–рецепторами или на степень снижения фагоцитоза.
[0289]
В некоторых вариантах реализации партнеры по слиянию связаны с последовательностью Fc–варианта посредством линкерной последовательности. В некоторых вариантах реализации линкерная последовательность в общем случае содержит небольшое число аминокислот, например, менее десяти аминокислот, хотя применяются также более длинные линкеры. В некоторых случаях длина линкера составляет менее 10, 9, 8, 7, 6 или 5 аминокислот или меньше. В некоторых случаях длина линкера составляет по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30 или 35 аминокислот или больше. Необязательно, в некоторых вариантах реализации используется отщепляемый линкер.
[0290]
В некоторых вариантах реализации партнер по слиянию представляет собой нацеливающую или сигнальную последовательность, которая направляет белок Fc–варианта и любых связанных с ним партнеров по слиянию в необходимую клеточную локацию или во внеклеточную среду. В некоторых вариантах реализации определенные сигнальные последовательности направляют белок для секреции в среду для роста или в периплазматическое пространство, расположенное между внутренней и внешней мембраной клетки. В некоторых вариантах реализации партнер по слиянию представляет собой последовательность, которая кодирует пептид или белок, которые обеспечивают возможность очистки или скрининга. Такие партнеры по слиянию включают, но не ограничиваются этим, полигистидиновые метки (His–метки) (например, His6 и His10) или другие метки для применения в системах аффинной хроматографии на иммобилизованных ионах металлов (IMAC) (например, в аффинных колонках Ni+2), GST–слияниях, MBP–слияниях, Strep–метках, системе–мишени BSP–биотинилирования бактериального фермента BirA и эпитопных метках, являющихся мишенями антител (например, c–myc–метках, flag–метках и т. д.).
[0291]
В некоторых вариантах реализации такие метки используют для очистки, для скрининга или в обоих вариантах. Например, в некоторых вариантах реализации Fc–вариант очищают, используя His–метку, посредством ее иммобилизации на аффинной колонке Ni+2, а затем, после очистки, ту же самую His–метку используют для иммобилизации антитела на покрытом Ni+2 планшете для проведения анализа ELISA или другого анализа связывания.
[0292]
Доступны различные партнеры по связыванию, которые обеспечивают возможность осуществления различных способов отбора. Например, посредством слияния представителей библиотека Fc–вариантов с белком гена III можно использовать метод фагового дисплея. В некоторых вариантах реализации партнеры по слиянию обеспечивают возможность мечения Fc–вариантов. В альтернативном способе в некоторых вариантах реализации партнер по слиянию связывается с конкретной последовательностью в экспрессионном векторе, что обеспечивает возможность ковалентной или нековалентной связи партнера по слиянию и ассоциированного с ним Fc–варианта с кодирующей их нуклеиновой кислотой.
[0293]
В некоторых вариантах реализации, когда партнер по слиянию представляет собой терапевтическое соединение, терапевтическое соединение представляет собой, например, цитотоксический агент, пептид, белок, антитело, миРНК или малую молекулу.
[0294]
in vitro
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению связано с различными носителями или метками и используется для обнаружения конкретных экспрессирующих антиген клеток. Примеры носителей включают стекло, полистирол, полипропилен, полиэтилен, декстран, нейлон, амилазы, природные и модифицированные целлюлозы, полиакриламиды, агарозы и магнетит. По природе носитель может быть как растворимым, так и нерастворимым. Известны различные метки и способы мечения. Примеры меток включают ферменты, радиоактивные изотопы, флуоресцентные соединения, коллоидные металлы, хемилюминесцентные соединения и биолюминесцентные соединения. Доступны различные способы связывания меток с описанными в данном документе антителами. В некоторых вариантах реализации антитела сопряжены с низкомолекулярными гаптенами. Затем эти гаптены можно обнаруживать специфическим образом посредством проведения второй реакции. Например, в некоторых вариантах реализации гаптен биотин используют вместе с авидином или же проводят обнаружение гаптенов динитрофенола, пиридоксаля или флуоресцеина с помощью специфических антител против гаптенов (например, антител против динитрофенола, антител против пиридоксаля и антител против флуоресцеина). В некоторых вариантах реализации описанные в данном документе антитела используют  для проведения анализа связывания, такого как иммунный анализ. Например, в некоторых вариантах реализации антитела используют в жидкой фазе или связанными с твердофазным носителем. В некоторых вариантах реализации антитела, используемые для проведения иммуноанализа, метят выявляемым образом разными способами.
Способы идентификации и/или создания антител
[0295]
Определенные аспекты настоящего изобретения относятся к способам идентификации антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α. Предпочтительно описанные в данном документе способы можно использовать для идентификации антигенсвязывающих доменов, которые блокируют связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α, не блокируют связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α или снижают аффинность человеческого полипептида SIRP–α в отношении человеческого CD47.
[0296]
ниже.
В некоторых вариантах реализации способы включают обеспечение антигенсвязывающего домена, который связывает внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α. Типовые антигенсвязывающие домены и антитела, которые связывают внеклеточный домен (например, домен D1) человеческого полипептида SIRP–α и/или другие полипептиды SIRP, описаны в данном документе, как и типовые способы идентификации таких антигенсвязывающих доменов/антител. Типовые способы более подробно описаны в примерах
[0297]
например,
ниже.
В некоторых вариантах реализации способы включают получение комплекса, содержащего вариант D1 SIRP–α, связанный с полипептидом, содержащим домен IgSF CD47. В некоторых вариантах реализации «получение» комплекса включает обеспечение раствора, содержащего вариант D1 SIRP–α и полипептид, содержащий домен IgSF CD47. В некоторых вариантах реализации вариант D1 SIRP–α представляет собой вариант искусственного происхождения,  который связывается с человеческим CD47 с аффинностью, которая по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей мере в 100 раз больше, чем аффинность связывания домена D1 SIRP–α природного происхождения с человеческим CD47. Преимущественно это облегчает скрининг антител, так как природное взаимодействие SIRP–α:CD47 может быть слишком слабым, чтобы использовать его в анализе связывания или скрининге. Типовые варианты более подробно описаны
[0298]
дисс.
дисс.
В некоторых вариантах реализации способы включают приведение в контакт антигенсвязывающего домена с полученным комплексом. В некоторых вариантах реализации выявляют связывание антигенсвязывающего домена комплексом или его отсутствие или недостаток. В данном документе описаны различные способы выявления. В некоторых вариантах реализации используют ППР или ELISA. Выявляемое связывание антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен не блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. Отсутствие связывания антигенсвязывающего домена с комплексом указывает на то, что антигенсвязывающий домен блокирует связывание между человеческим CD47 и человеческим полипептидом SIRP–α. Кроме того, используют ППР для разделения блокирующих, неблокирующих и отталкивающих антител. Например, в некоторых вариантах реализации неблокирующее антитело повышает РЕ при введении поверх преформированного комплекса SIRP–α:CD47, отталкивающее антитело повышает K преформированного комплекса SIRP–α:CD47, а блокирующее антитело не меняет ни РЕ, ни K преформированного комплекса SIRP–α:CD47.
[0299]
В некоторых вариантах реализации домен IgSF CD47 представляет собой человеческий домен IgSF. В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий домен IgSF CD47, содержит внеклеточный домен человеческого CD47. В некоторых вариантах реализации домен IgSF CD47 содержит аминокислотную последовательность
например,
VS (SEQ ID NO: 16). В некоторых вариантах реализации полипептид, содержащий домен IgSF CD47, конъюгирован с другим полипептидом или другим соединением,  Fc–областью Ig.
Высокоаффинные варианты домена D1 SIRP–α
[0300]
Для применения в контексте данного документа предусмотрено множество высокоаффинных вариантов D1 SIRP–α. Например, в определенных вариантах реализации вариант D1 SIRP–α содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 17–52 (смотрите таблицу 4). Дополнительное описание вариантов D1 SIRP–α приведено ниже.
Таблица 4.
Типовые аминокислотные последовательности вариантов D1 SIRP–α.
SEQ ID NO
Последовательность
17
<img file="00000244.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
18
<img file="00000245.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
19
<img file="00000246.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
20
<img file="00000247.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
21
<img file="00000248.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
22
<img file="00000249.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
23
<img file="00000250.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
24
<img file="00000251.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
25
<img file="00000252.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
26
<img file="00000253.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
27
<img file="00000254.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
28
<img file="00000255.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
29
<img file="00000256.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
30
<img file="00000257.jpg" he="8" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000258.jpg" he="4" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
31
<img file="00000259.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
32
<img file="00000260.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
33
<img file="00000261.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
34
<img file="00000262.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
35
<img file="00000263.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
36
<img file="00000264.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
37
<img file="00000265.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
38
<img file="00000266.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
39
<img file="00000267.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
40
<img file="00000268.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
41
<img file="00000269.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
42
<img file="00000270.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
43
<img file="00000271.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
44
<img file="00000272.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
45
<img file="00000273.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
46
<img file="00000274.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
47
<img file="00000275.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
48
<img file="00000276.jpg" he="7" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000277.jpg" he="8" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
49
<img file="00000278.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
50
<img file="00000279.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
51
<img file="00000280.jpg" he="12" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
52
<img file="00000281.jpg" he="13" wi="128" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0301]
Д
Д
–8
–9
–9
–10
–10
–11
В некоторых вариантах реализации вариантный полипептид D1 SIRP–α или его фрагмент связывается с CD47 с K менее 1×10 М, менее 5×10 М, менее 1×10 М, менее 5×10 М, менее 1×10 М или менее 1×10 М. В некоторых вариантах реализации вариантный полипептид D1 SIRP–α или его фрагмент связывается с CD47 с K от около 500 нМ до 100 нМ, от около 100 нМ до 50 нМ, от около 50 нМ до 10 нМ, от около 10 нМ до 5 нМ, от около 5 нМ до 1 нМ, от около 1 нМ до 500 пМ, от около 500 пМ до 100 пМ, от около 100 пМ до 50 пМ или от около 50 пМ до 10 пМ.
[0302]
В некоторых вариантах реализации фрагменты включают полипептиды длиной менее 10 аминокислот, длиной около 10 аминокислот, длиной около 20 аминокислот, длиной около 30 аминокислот, длиной около 40 аминокислот, длиной около 50 аминокислот, длиной около 60 аминокислот, длиной около 70 аминокислот, длиной около 80 аминокислот, длиной около 90 аминокислот, длиной около 100 аминокислот или длиной более чем около 100 аминокислот. Фрагменты сохраняют способность связываться с CD47. Предпочтительно вариантные полипептиды D1 SIRP–α и их фрагменты связываются с CD47 с большей аффинностью, чем в случае связывания полипептидов SIRP–α с CD47.
[0303]
В некоторых вариантах реализации вышеупомянутые вариантные полипептиды D1 SIRP–α присоединены или слиты со вторым полипептидом. В некоторых вариантах реализации второй полипептид включает, без ограничений, Fc–полипептид, Fc–вариант, полипептид ЧСА, пептид альбумина, полимер ПЭГ или фрагмент вышеуказанных соединений.
[0304]
В некоторых вариантах реализации полипептид включает высокоаффинный домен D1 SIRP–α, который имеет по меньшей мере 85% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности) с любым вариантом, приведенным в таблице 4.
Генерация антител у кур
[0305]
(например,
например,
Определенные аспекты настоящего изобретения относятся к способам получения анти–SIRP–α антитела, которое связывает внеклеточные домены (например, домены D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. Не ограничиваясь теорией считается, что использование кур обеспечивает исключительное преимущество вследствие большой разницы между куриным SIRP–α и SIRP–α млекопитающего  человека, обезьяны, мыши и т. д.). Кроме того, филогенетическое различие между курами и млекопитающими позволяет идентифицировать антитела, которые вступают в перекрестную реакцию,  с человеческими и мышиными полипептидами SIRP–α, что может быть трудно достичь, получая антитела в организме мышей, вследствие аутотолерантности.
[0306]
ниже.
например,
et al.
Microscopy (Oxf)
В некоторых вариантах реализации способы включают иммунизацию курицы пептидом, содержащим по меньшей мере часть внеклеточного домена (например, домена D1) человеческого SIRP–α. Типовая схема иммунизации описана  Способы иммунизации кур описаны,  в Mettler Izquierdo, S.  (2016)  1–16. В некоторых вариантах реализации способы включают получение антитела из вырабатывающей антитело клетки от иммунизированной курицы.
[0307]
например,
(смотрите, например,
et al.
Microscopy (Oxf)
В некоторых вариантах реализации способы включают выявление связывания между антителом, полученным из клетки, и внеклеточными доменами (например, доменами D1) двух или более разных человеческих вариантных полипептидов SIRP–α. Например, в некоторых вариантах реализации используют человеческие SIRP–α v1 и v2,  как описано в данном документе. Типовые способы выявления описаны в данном документе и включают, без ограничений, анализ GEM WO2009111014 and Mettler Izquierdo, S.  (2016)  1–16), ППР и ELISA.
Способы лечения
[0308]
Определенные аспекты настоящего изобретения относятся к лечению заболевания или расстройства с помощью описанного в данном документе антитела. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой рак. В некоторых вариантах реализации заболевание представляет собой аутоиммунное или воспалительное заболевание.
[0309]
например,
Например, в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования рака у индивида путем введения индивиду эффективного количества антитела согласно настоящему изобретению. Не ограничиваясь теорией считается, что описанные в данном документе антитела можно применять в лечении рака,  подавляя способность рака ингибировать фагоцитоз и иммунологический надзор посредством сигнальной оси CD47: SIRP–α, или посредством усиления активации иммунной системы каким–либо иным образом (например, путем активации дендритных клеток).
[0310]
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с химиотерапевтическим агентом.
[0311]
например,
например,
например,
y
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации со вторым антителом,  антителом, которое связывает антиген, экспрессируемый раком. Типовые антигены, экспрессируемые раками, известны в данной области техники и включают, без ограничений, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, GD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop–2, 5T4, EphA4, BCMA, муцин 1, муцин 16, PTK7, PD–L1, STEAP1, рецептор эндотелина B, мезотелин, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, нектин 4, NaPi2b, LIV–1A, гуанилил циклазу C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, интегрин αVβ3, интегрин α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, тенасцин, Le, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, муцин, CAIX, EPHA3, фолатный рецептор α, GD2, GD3 и ГКГС/пептидный комплекс, содержащий пептид из NY–ESO–1/LAGE, SSX–2, белок семейства MAGE, MAGE–A3, gp100/pmel17, Melan–A/MART–1, gp75/TRP1, тирозиназу, TRP2, CEA, PSA, TAG–72, незрелый рецептор ламинина, MOK/RAGE–1, WT–1, SAP–1, BING–4, EpCAM, MUC1, PRAME, сурвивин, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART–2, p53, Ras, β–катенин, TGF–βRII, HPV E6 или HPV E7. Например, в некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с моноклональным антителом, которое связывает CD123 (также известный как рецептор IL–3 альфа), таким как талакотузумаб (также известный как CSL362 и JNJ–56022473). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с моноклональным антителом, которое связывает EGFR (таким как цетуксимаб). В некоторых вариантах реализации второе антитело имеет одну или более эффекторных функций,  эффекторных функций, которые связаны с привлечением Fc–рецепторов (FcR) на иммунных клетках, включая, без ограничений, АЗКЦ или АЗКФ и/или комплементзависимую цитотоксичность (КЗЦ). Не ограничиваясь теорией, считается, что комбинация такого антитела согласно настоящему изобретению обеспечивает исключительное преимущество,  для направления FcR–экспрессирующих лейкоцитов для нацеливания на опухолевую клетку, с которой связано второе антитело, в то же время ингибируя восприимчивость SIRP–α, экспрессируемого лейкоцитом, к любому CD47, экспрессируемому опухолевой клеткой с антителом к SIRP–α.
[0312]
например,
например,
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с иммунотерапевтическим агентом. Иммунотерапевтический агент может относиться к любому терапевтическому средству, которое нацелено на иммунную систему и стимулирует терапевтическое перенаправление иммунной системы, такому как модулятор костимуляторного пути, противораковая вакцина, рекомбинантно модифицированная иммунная клетка и т. д. В некоторых вариантах реализации иммунотерапевтический агент включает антитело. Типовые антигены иммунотерапевтических антител известны в данной области техники и включают, без ограничений, PD–1, PD–L1, ОX40, CTLA–4, СD137/4–1BB, B7–H3, FZD7, CD27, TNFR2, CCR4, CSF1R, CSF, TIM–3, LAG–3, VISTA, ICOS, CCR2, IDO, A2R, CD39, CD73, TIGIT, CD80, CD47, аргиназу, TDO и PVRIG. Иммунотерапевтические агенты, утвержденные или находящиеся на поздних стадиях клинических исследований, включают, без ограничений, ипилимумаб, пембролизумаб, ниволумаб, атезолизумаб, авелумаб, дурвалумаб и т. д. Не ограничиваясь теорией, считается, что антитела согласно настоящему изобретению подходят для применения с иммунотерапевтическими агентами благодаря взаимодополняющему механизму действия,  при активации макрофагов и эффекторных Т–клеток для нацеливания на опухолевые клетки. В определенных вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибитором пути PD–L1/PD–1,  анти–PD–L1 или анти–PD–1 антителом. Как продемонстрировано в данном документе, комбинированное введение анти–SIRP–α антитела согласно настоящему изобретению и ингибитора пути PD–L1/PD–1 может приводить к синергетической противоопухолевой активности. Например, в некоторых вариантах реализации блокирующее анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с анти–PD–1 антителом. В некоторых вариантах реализации неблокирующее анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с анти–PD–1 антителом. В некоторых вариантах реализации блокирующее анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с анти–PD–L1 антителом. В некоторых вариантах реализации неблокирующее анти–SIRP–α антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с анти–PD–L1 антителом.
[0313]
(например,
Может быть включен любой известный в данной области техники тип рака, такой как, без ограничений, карцинома, саркома, лимфома, лейкоз, лимфома и бластома. Более конкретные примеры таких видов рака включают, но не ограничиваются этим, рак легкого, плоскоклеточный рак, опухоли головного мозга, глиобластому, рак головы и шеи, гепатоцеллюлярный рак, колоректальный рак  рак толстой или прямой кишки), рак печени, рак мочевого пузыря, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак шейки матки, рак яичника, рак мочевыводящих путей, рак молочной железы, перитонеальный рак, рак матки, рак слюнных желез, рак почки, рак предстательной железы, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному анального канала, карциному полового члена, меланому, множественную миелому и B–кеточную лимфому (включая неходжкинскую лимфому (НХЛ)); острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ); хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); острый миелоидный лейкоз (ОМЛ); карциному из клеток Меркеля; волосатоклеточный лейкоз; хронический миелобластный лейкоз (ХМЛ); и связанные с ними метастазы.
[0314]
например,
Кроме противораковой терапии, предложенные в данном документе антитела применимы в вариантах терапии, при которых моноклональные антитела вводят в целях снижения количества клеток,  при лечении воспалительных заболеваний путем снижения количества иммунных клеток. В таких целях предложенное в данном документе антитело вводят в комбинации со вторым терапевтическим антителом, например, с ритуксимабом, для снижения количества B–клеток при воспалительных заболеваниях и аутоиммунных состояниях; алемтузумабом в случае множественного склероза; OKT3 в случае иммуносупрессии; другими антителами в случае трансплантационного кондиционирования костного мозга; и т. д.
[0315]
Дополнительно в данном документе предложены способы лечения или замедления прогрессирования аутоиммунного заболевания или воспалительного заболевания у индивида путем введения индивиду эффективного количества антитела согласно настоящему изобретению. Аутоиммунные заболевания и воспалительные заболевания, подлежащие лечению в соответствии с изобретением, включают, но не ограничиваются этим, множественный склероз, ревматоидный артрит, спондилоартропатию, системную красную волчанку, антителоопосредованное воспалительное или аутоиммунное заболевание, болезнь «трансплантат против хозяина», сепсис, диабет, псориаз, атеросклероз, синдром Шегрена, прогрессирующий системный склероз, склеродерму, острый коронарный синдром, ишемическую реперфузию, болезнь Крона, эндометриоз, гломерулонефрит, миастению гравис, идиопатический легочный фиброз, астму, острый респираторный дистресс–синдром (ОРДС), васкулит и воспалительный аутоиммунный миозит. В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с терапевтическим агентом, таким как иммуносупрессивный, противовоспалительный или иммуномодулирующий агент. В некоторых вариантах реализации предложенное в данном документе антитело используют при лечении аутоиммунного заболевания или воспалительного заболевания, например, множественного склероза, ревматоидного артрита, спондилоартропатии, системной красной волчанки, антителоопосредованного воспалительного или аутоиммунного заболевания, болезни «трансплантат против хозяина», сепсиса, диабета, псориаза, псориатического артрита, атеросклероза, синдрома Шегрена, прогрессирующего системного склероза, склеродермы, острого коронарного синдрома, ишемической реперфузии, болезни Крона, язвенного колита, эндометриоза, гломерулонефрита, нефропатии IgA–типа, поликистозной болезни почек, миастении гравис, идиопатического легочного фиброза, астмы, атопического дерматита, острого респираторного дистресс–синдрома (ОРДС), васкулита или воспалительного аутоиммунного миозита.
[0316]
например,
(Remington’s Pharmaceutical Sciences
(например
В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению является частью фармацевтического состава,  содержащего антитело и один или более фармацевтически приемлемых носителей. Фармацевтические композиции и составы, описанные в данном документе, можно готовить, смешивая активные ингредиенты (такие как антитела или полипептиды), имеющие необходимую степень чистоты, с одним или более необязательными фармацевтически приемлемыми носителями  16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители в общем случае являются нетоксичными для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и включают, но не ограничиваются этим: буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты; низкомолекулярные (состоящие из менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов  комплексы Zn–белок); и/или неионные поверхностно–активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ). В некоторых вариантах реализации антитело согласно настоящему изобретению является лиофилизированным.
ПРИМЕРЫ
[0317]
Настоящее изобретение станет более понятным со ссылкой на нижеприведенные примеры. При этом примеры не следует воспринимать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Следует понимать, что описанные в данном документе примеры и варианты реализации приведены исключительно в иллюстративных целях, а различные связанные с ними модификации или изменения станут очевидны для специалистов в данной области техники, и подразумевается, что они включены в суть и сферу действия этой заявки и объема прилагаемой формулы изобретения.
Пример 1: Идентификация антител с новыми вариантами специфичности связывания с белками SIRP–α
Способы
Получение антител
[0318]
Для иммунизации использовали следующие белки. Каждый содержит человеческий или мышиный пептид SIRP–α, слитый с модифицированной Fc–областью (S228P Fc человеческого IgG4 или L234A/L235A/G237A/N297A Fc человеческого IgG1, обозначаемой IgG1_AAA_N297A), для повышения иммуногенности.
Таблица A.
Последовательности иммуногенов.
<b>Описание</b>
<b>SEQ ID NO</b>
<b>Последовательность</b>
Человеческий SIRPα v1(Слияние с Fc IgG4_S228P)
1
<img file="00000282.jpg" he="45" wi="79" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Человеческий SIRPα v2(Слияние с Fc IgG4_S228P)
2
<img file="00000283.jpg" he="45" wi="79" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Мышиный 129 SIRPα(Слияние с Fc IgG1_AAA_N297A)
3
<img file="00000284.jpg" he="45" wi="79" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Мышиный NOD SIRPα(Слияние с Fc IgG1_AAA_N297A)
4
<img file="00000285.jpg" he="45" wi="79" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0319]
смотрите, например,
например,
et al.
Microscopy (Oxf)
Вышеуказанные белки использовали для иммунизации кур дикого типа, кур SynVH, которые представляют собой трансгенных кур, содержащих VH человека и VL курицы, или кур с полностью человеческими локусами иммуноглобулина «HuMAB» (Crystal Bioscience; WO2012162422, WO2011019844 и WO2013059159). Кур иммунизировали согласно переменным схемам с чередующимися дозами антигена. Типовая схема иммунизации является следующей: начальная иммунизация дозой 100 мкг антигена, имеющего последовательность SEQ ID NO: 1, на 1–ой неделе, бустерная доза 100 мкг антигена, имеющего последовательность SEQ ID NO: 2, на 3–ей неделе, взятие образцов на 4–ой неделе, бустерная доза 50 мкг антигена, имеющего последовательность SEQ ID NO: 1, на 5–ой неделе, взятие образцов на 6–ой неделе, бустерная доза 50 мкг антигена, имеющего последовательность SEQ ID NO: 2, на 7–ой неделе и взятие образцов на 8–ой неделе . Дополнительное описание иммунизации кур можно найти,  в Mettler Izquierdo, S.  (2016)  1–16.
Скрининг и экспрессия клонов антител
[0320]
смотрите
et al.
Microscopy (Oxf)
Клоны создавали и проводили их скрининг в соответствии с анализом GEM ( Mettler Izquierdo, S.  (2016)  1–16). Клоны исследовали в формате scFv–Fc, в котором легкая цепь слита посредством линкера с тяжелой цепью. scFv был слит с N–концом человеческой Fc–IgG1. Экспрессия клонов происходила в клетках FreeStyle™ 293–FS (Thermo Fisher), а секретируемую среду использовали для определения характеристик связывания методом ELISA и ППР.
ППР
[0321]
Связывание клонов антител с различными белками SIRP определяли, используя выявление методом поверхностного плазмонного резонанса (ППР) на инструменте ProteOn XPR36 (Bio–Rad, Hercules, CA), используя фосфатно–солевой буфер (ФСБ, pH 7,4), дополненный 0,01% Твин–20 (ФСБТ), в качестве подвижного буфера. Предварительно профильтрованную среду, содержащую секретированные антитела, непосредственно использовали для анализа. Сначала проводили аминное сопряжение антитела против человеческого Fc IgG (BR–1008–39, GE Healthcare) с сенсорным чипом GLC для создания захватывающих поверхностей для антител. Достигали около 4000 РЕ на проточную ячейку с иммобилизованными антителами против Fc человеческого IgG. Скрининг каждого клона проводили одним и тем же способом, описанным ниже. Аналиты SIRP, используемые для скрининга, перечислены в таблице С.
[0322]
(1) ~5–10 мкл предварительно профильтрованной среды в 10 мМ натрий–ацетатного буфера (pH 4,5) вводили в течение 2 мин при 30 мкл/мин;
[0323]
(2) поток буфера в течение 1 мин при 100 мкл/мин;
[0324]
(3) аналит SIRP (100 нМ) вводили в течение 1 мин при 100 мкл/мин с последующим циклом диссоциации в течение 10 мин;
[0325]
(4) восстановление поверхности чипа с помощью потока 3 М хлорида магния в течение 1 мин при 25 мкл/мин в обеих ориентациях; и
[0326]
(5) поток буфера в течение 1 мин при 100 мкл/мин.
[0327]
дисс.
Данные биосенсора дважды корректировали путем вычитания данных в промежутках между точками (не содержащих иммобилизованные антитела против человеческого Fc IgG) из данных для реакционных точек (иммобилизованные антитела против человеческого Fc IgG), а затем вычитания ответа при вводе контрольного буферного аналита из ответа при вводе аналита. Связывание аппроксимировали 1:1 моделью Ленгмюра и рассчитывали значения K (1/с). Весь анализ ППР проводили при 25 °C.
ELISA
[0328]
Анализ ELISA проводили, чтобы исследовать связывание клонов антител с аналитами SIRP и комплексом SIRP–α:CD47. Вкратце, 96–луночные плоскодонные планшеты с высокой степенью связывания (Greiner Bio–One #655061) покрывали следующими белками в отдельных экспериментах ELISA: авидин (Sigma A9275) (2 мкг/мл) с последующим применением биотинилированного человеческого SIRPα V1 (0,5 мкг/мл), авидин (2 мкг/мл) с последующим применением человеческого SIRPα V2, биотин (0,5 мкг/мл), мышиный NOD SIRPα (2 мкг/мл), человеческий SIRPγ (2 мкг/мл), CD47 (2 мкг/мл) с последующим применением высокоаффинного человеческого SIRPα V1 и V2 (по 2 мкг/мл каждого) или анти–hFc (2 мкг/мл, Rockland 609–4103). Планшеты блокировали ФСБТМ (фосфатно–солевой буфер, pH 7,4, 0,05% Твин–20, 3% молока), добавляли 50 мкл супернатанта, содержащего секретированный scFv–Fc в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали ФСБТ. Добавляли 50 мкл анти–hFc–HRP (1:5000, Rockland 609–4303) в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали ФСБТ. Реакцию ТМБ проводили в течение 5 мин, а затем останавливали с помощью 1 Н HCl. Результаты ELISA считывали, используя ридер BioTek Synergy H1 Hybrid Reader. Соответствующие белки, описанные в данном документе и используемые для анализа, представляют собой: человеческий SIRPα V1 (SEQ ID NO: 5); человеческий SIRPα V2 (SEQ ID NO:6); SIRPα яванского макака (SEQ ID NO: 11); SIRPα мышей NOD (SEQ ID NO: 8); человеческий SIRPγ (SEQ ID NO: 15); CD47 (SEQ ID NO: 16); высокоаффинный SIRPα V1 (SEQ ID NO: 42); высокоаффинный SIRPα V2 (SEQ ID NO: 17).
Результаты
[0329]
Фиг. 1A.
SIRPΑ
et al.
Nat. Immunol.
SIRP–α является высокополиморфным белком в организме людей, обезьян и мышей. Например, была выявлена 20–аминокислотная разница между белками SIRP–α в линиях мышей NOD и C57BL/6, и эти полиморфизмы приводят к функциональным последствиям, связанным со связыванием CD47 и прививанием человеческих гемопоэтических стволовых клеток в этих линиях мышей. У людей было идентифицировано по меньшей мере 10 разных аллелей , а аминокислотные вариации, которые отличают эти аллели, встречаются в прогнозированных CD47–связывающих остатках (Takenaka, K.  (2007)  8:1313–23). Выравнивание 10 последовательностей человеческого вариантного белка SIRP–α приведено на  Идентификация антител, имеющих разную специфичность связывания и внутри– и/или межвидовую перекрестную реактивность, представляет большой интерес для разработки клинических кандидатных средств, являющихся эффективными для человеческих популяций, и изучения характеристик этих кандидатных средств в различных животных моделях.
[0330]
Фиг.
Фиг. 1A
Проводили выравнивание доменов D1 белков SIRP–α человека (варианты v1 и v2), яванского макака и мышей 129, чтобы идентифицировать консервативные аминокислоты ( 1B). Хотя последовательности яванского макака и мышей 129 намного больше отличаются от человеческих v1 и v2, чем человеческие варианты v3–v10, как показано на , эти выравнивания демонстрируют некоторую степень консервативности среди всех четырех белков, что позволяет предположить возможность идентификации перекрестно–реактивных антител. Однако каждый белок также демонстрирует уникальные полиморфизмы, что позволяет предположить, что также возможно существование специфических антител.
[0331]
Фиг. 1C
(например,
например,
(например,
(например,
Как показано на , также проводили выравнивание последовательностей белка SIRP–α, представляющих ряд человеческих вариантов и линий мышей  129, NOD, C57BL/6 и BALB/c). R1, R2, R3 описывают остатки, расположенные вокруг участков связывания SIRPα с CD47. Эти выравнивания демонстрируют, что R2 и R3 характеризуются значительно большим различием среди и между человеческими и мышиными последовательностями, чем R1. Не ограничиваясь теорией, считается, что анти–SIRP–α антитела, которые связываются с конкретными мышиными белками SIRP–α, можно применять,  для фармакокинетических исследований (например, с использованием мышей CD–1), получения трансгенных мышей (например, в окружении C57BL/6) и/или изучения характеристик в SCID  в окружении NOD) или сингенных  в окружении BALB/c или C57BL/6) мышиных моделях.
[0332]
Также проводили выравнивание описанных выше доменов D1 SIRP–α млекопитающих с доменом D1 куриного SIRP–α, содержащего последовательность
Фиг. 2
(SEQ ID NO:84) (). По сравнению с последовательностями SIRP–α млекопитающих было обнаружено, что последовательность куриного SIRP–α характеризуется намного большим расхождением. Попарное сравнение процента идентичности последовательности между различными белками SIRP–α приведено в таблице B.
Таблица B.
Попарное сравнение идентичности последовательности (%) между белками SIRP–α.
<b>Человеческий v1</b>
<b>Человеческий v2</b>
<b>Мышиный</b>
<b>Яванского макака </b>
<b>Куриный</b>
<b>(SEQ ID NO:5)</b>
<b>(SEQ ID NO:6)</b>
<b>(SEQ ID NO:7)</b>
<b>(SEQ ID NO: 11) </b>
<b>(SEQ ID NO:84)</b>
<b>Человеческий v1 (SEQ ID NO:5)</b>
–
89
66
91
46
<b>Человеческий v2</b><b>(SEQ ID NO:6)</b>
89
68
88
41
<b>Мышиный</b><b>(SEQ ID NO:7)</b>
66
68
–
72
47
<b>Яванского макака </b><b>(SEQ ID NO:11)</b>
91
88
72
–
47
<b>Куриный</b><b>(SEQ ID NO:84)</b>
46
41
47
47
–
[0333]
Не ограничиваясь теорией считается, что это расхождение может обеспечить уникальную возможность создавать антитела, которые являются перекрестно–реактивными среди множества белков SIRP–α млекопитающих. Например, может быть затруднительно создавать анти–SIRP–α антитела, являющиеся перекрестно–реактивными с мышиной последовательностью из мышиного организма–хозяина вследствие иммунной толерантности. Кроме того, большее расхождение между иммунными системами кур и млекопитающих может приводить к большему разнообразию при получении антител.
[0334]
Чтобы идентифицировать антитела с новыми специфичностями связывания с белками SIRP–α, изучали характеристики клонов антител в формате scFv–Fc, как описано выше. Каждое антитело исследовали в концентрациях от 0,008 до 1,0 мкг/мл, используя анализ ELISA, в отношении связывания со следующими мишенями: доменом D1 человеческого SIRP–α v1 (последовательность в соответствии с SEQ ID NO:5), доменом D1 человеческого SIRP–α v2 (последовательность в соответствии с SEQ ID NO:6), доменом D1 вариантного SIRP–α яванского макака (последовательность в соответствии с SEQ ID NO:11), доменом D1 SIRP–α мышей 129 (последовательность в соответствии с SEQ ID NO:7) и человеческой изоформой SIRPγ (последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 15). Далее по тексту клоны антител обозначены по ID–номеру клона. Кроме того, обозначение «S[номер клона]» относится к формату sc–Fv–Fc; обозначение «AB[номер клона]» относится к формату полноразмерного антитела IgG; обозначение «AB[номер клона]a» относится к человеческому IgG1 с мутациями L234A, L235A, G237A и N297A; «AB[номер клона]b» относится к формату мышиного IgG1 с N297A; «AB[номер клона]c» относится к формату мышиного IgG2a; и «[номер клона] Fab» относится к формату фрагмента Fab.
[0335]
(например,
(например,
Кроме того, изучали характеристики связывания каждого клона антитела с пре–комплексом, приготовленным с применением 1:1 смеси из двух высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO:42 и SEQ ID NO: 18), связанных с доменом IgSF CD47 (последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 16). Преимущественно, так как аффинность между доменом D1 SIRP–α дикого типа и доменом IgSF CD47 является относительно низкой, использование комплекса, содержащего высокоаффинный вариант SIRP–α позволяет проводить идентификацию антител, которые связываются с SIRP–α, когда они комплексированы с CD47  неблокирующее антитело). Также это позволяет проводить идентификацию антител, которые не способны связывать SIRP–α, когда они комплексированы с CD47, что позволяет предположить, что антитело и CD47 конкурируют за одну и ту же поверхность связывания на SIRP–α блокирующее антитело). Два используемых варианта SIRPα (SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 19) соответствуют высокоаффинному домену D1 SIRP–α, сконструированному с использованием, соответственно, варианта 1 и варианта 2 человеческого полипептида SIRPα.
[0336] Фиг. 3A
(Фиг.
3B).
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S130 (SEQ ID NO:71). Этот клон демонстрировал перекрестную реактивность среди белков SIRP–α млекопитающих со связыванием с рядом человеческих вариантов, а также белками яванских макаков и мышей Однако его связывание также было специфическим в отношении изоформы, так как с человеческим SIRPγ связывание не наблюдали. Этот клон также был идентифицирован как блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47, так как не было выявлено связывания с преформированным комплексом, содержащим CD47, связанный с высокоаффинным вариантом SIRP–α.
[0337] Фиг. 4A
(Фиг.
4B).
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S121 (SEQ ID NO:75). Этот клон также демонстрировал перекрестную реактивность среди белков SIRP–α млекопитающих, но также он связывался с человеческим SIRPγ, что указывает на связывание с разными изоформами Этот клон также был идентифицирован как блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47.
[0338] Фиг. 5A
Фиг. 5B
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S137 (SEQ ID NO:73). Как и клон, проиллюстрированный на Фиг. 3A и 3B, этот клон демонстрировал перекрестную реактивность среди белков SIRP–α млекопитающих со специфическим в отношении изоформы связыванием, так как он не связывался с человеческим SIRPγ (). Однако этот клон был идентифицирован как не блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47, так как он связывался с преформированным комплексом.
[0339] Фиг. 6А
Фиг.
6B).
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S128 (SEQ ID NO:70). Этот клон демонстрировал специфическую в отношении изоформы перекрестную реактивность среди белков SIRP–α приматов, но не связывался с мышиным белком (Этот клон также был идентифицирован как блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47.
[0340] Фиг. 7A
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S135 (SEQ ID NO:72).
Фиг. 6A и 6B
(Фиг. 7B).
Аналогично клону, проиллюстрированному на , этот блокирующий клон демонстрировал перекрестную реактивность среди белков SIRP–α приматов, но не связывался с мышиным белком В отличие от клона S128, было обнаружено, что этот клон перекрестно реагирует с человеческим SIRPγ.
[0341] Фиг. 8А
Фиг. 8B
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S126 (SEQ ID NO:69). Было обнаружено, что этот клон является специфическим в отношении белков человека, связываясь с обоими вариантами человеческого SIRP–α, но ни с одним из других пептидов (). Этот клон был идентифицирован как блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47.
[0342] Фиг. 9A
(Фиг.
9B).
иллюстрирует кривую связывания ELISA для клона S138 (SEQ ID NO:74). Этот клон связывал только вариант 1 человеческого SIRP–α, демонстрируя высокую степень внутри– и межвидовой специфичности связывания Этот клон был идентифицирован как блокирующий взаимодействие между SIRP–α и CD47.
[0343]
На Фиг. 10A
Фиг. 10B
В заключение необходимо отметить, что были изучены характеристики новых антител с рядом уникальных вариантов специфичности связывания с белками SIRP–α.  приведено выравнивание, иллюстрирующее последовательности вариабельного домена scFv–Fc, полученные от курицы, которая вырабатывает куриные антитела (указаны CDR).  приведено выравнивание, иллюстрирующее последовательности вариабельного домена scFv–Fc, полученные от курицы, которая вырабатывает человеческие антитела (указаны CDR). Эти исследования подчеркивают целесообразность использования кур в качестве источника разнообразия антител для идентификации анти–SIRP–α антител.
[0344]
Чтобы оценить, могут ли антитела блокировать связывание SIRPα с CD47, также проводили исследование методом ППР в дополнение к исследованию методом ELISA. Захват антител проводили, используя антитела против IgG–Fc человека, иммобилизованные на поверхности GLC, приготовленные как описано выше. Вариант SIRPα (SEQ ID NO: 17), сконструированный для связывания CD47 (SEQ ID NO: 16) с высокой нМ–аффинностью, использовали для скрининга вместо SIRP–α дикого типа. Причиной этого стало то, что вариант SIRP–α дикого типа имеет низкую мкМ–аффинность с CD47, что не обеспечивает стабильное взаимодействие в комплексе, чтобы оценить образование сандвич–структуры. Использовали фосфатно–солевой буфер (ФСБ, pH 7,4), дополненный 0,01% Твин–20 (ФСБТ), в качестве подвижного буфера.
[0345]
Сначала вводили приблизительно 5–10 мкл предварительно профильтрованной среды, содержащей антитела в 10 мМ натрий–ацетатном буфере (pH 4,5), в течение 2 мин при 30 мкл/мин и проводили захват, используя поверхность GLC с иммобилизованными антителами против IgG–Fc человека с последующим кратковременным промыванием потоком буфера в течение 1 мин при 100 мкл/мин. После этого 100 нМ высокоаффинного варианта SIRP–α (SEQ ID NO: 17), предварительно смешанного с CD47 (SEQ ID NO:16) в разных концентрациях, составляющих 0, 20, 55, 500 или 1500 нМ, вводили по отдельности в течение минуты при 100 мкл/мин со временем диссоциации 10 мин. В нижеприведенном описании SIRP–α относится к SEQ ID NO: 17.
[0346]
Фиг. 12A
В случае антитела, которое не блокирует связывание SIRP–α с CD47, можно ожидать, что оно будет связываться с комплексом SIRP–α /CD47 и образовывать сандвич–структуру. Следовательно, при повышении концентрации CD47 возрастает резонанс в соответствии с повышением образования сандвич–структур. Было обнаружено, что клон антитела S123 соответствует этому профилю. Пример профиля для S123 приведен на .
[0347]
Фиг. 12B
В случае антитела, которое блокирует связывание SIRP–α с CD47, профиль будет отличным от неблокирующего антитела. При повышении концентрации CD47 можно было бы ожидать, что меньше молекул SIRP–α будет доступно для связывания с антителом, так как антитело конкурирует за тот же участок связывания, что и CD47, а большинство/весь SIRP–α находится в комплексе CD47. Следовательно, можно ожидать снижение резонанса (РЕ) при повышении концентрации CD47 в смеси. Было обнаружено, что клон антитела S119 соответствует этому профилю. Пример профиля для S119 приведен на .
[0348]
Фиг. 12C
В дополнение к блокирующим и неблокирующим антителам, была выделена третья категория антител, имеющих «отталкивающий» профиль. Было обнаружено, что клон антитела S118 соответствует этому профилю. Пример профиля для S118 приведен на . При высокой концентрации CD47 (например, 500 нМ и 1500 нМ CD47) образовывалась временная сандвич–структура между антителом, SIRP–α и CD47, на что указывает более высокое резонансное значение 300 РЕ, которое снижалось со временем. Это снижение резонансных единиц указывает, что антитело было способно связываться с SIRP–α в комплексе и «отталкивать» SIRP–α от связывания с CD47.
[0349]
дисс.
дисс.
Уровни k Для связывания каждого клона с каждым аналитом SIRP определяли, используя ППР (таблица C). Условия проведения ППР–скрининга описаны в данном документе, а значения k определяли, используя кинетическую аппроксимацию Ленгмюра. Свойства блокирования CD47 (блокирование, отсутствие блокирования, отталкивание) описаны в последней колонке таблицы С. Каждое антитело идентифицировано в соответствии с его соответствующей SEQ ID NO. Последовательности аналитов SIRP были следующими: CV1–3, SEQ ID NO: 18; v1, SEQ ID NO:5; v2, SEQ ID NO:6; cyno1, SEQ ID NO:11; cyno2, SEQ ID NO: 12; m129, SEQ ID NO:7; NOD, SEQ ID NO:8; BL6, SEQ ID NO:9; sirpb1, SEQ ID NO:13; sirpg, SEQ ID NO:15.
Таблица C.
дисс.
Кинетическая аппроксимация Ленгмюра (k, 1/с)
<b>Клон</b>
<b>SEQ ID NO</b>
<b>CV1–3</b>
<b>v1</b>
<b>v2</b>
<b>cyno1</b>
<b>cyno2</b>
<b>v129</b>
<b>NOD</b>
<b>BL6</b>
<b>sirpb1</b>
<b>sirpg</b>
<b>блокирование cd47</b>
S1
53
2,19E–03
2,33E–03
ОС
3,48E–02
4,06E–03
2,12E–03
7,89E–03
1,70E–03
ОС
2,19E–03
Блокирование
S2
54
1,49E–01
2,52E–03
ОС
НС
5,59E–03
1,42E–02
ОС
8,85E–03
–
–
Блокирование
S8
55
НС
1,14E–04
1,42E–04
4,15E–0,3
6,12E–04
1,29E–02
1,79E–03
6,96E–03
9,30E–05
3,23E–04
Блокирование
S9
56
1,68E–04
1,29E–04
1,40E–04
3,38E–04
2,70E–04
ОС
1,81E–02
ОС
1,03E–04
7,10E–03
Блокирование
S11
57
2,69E–03
3,35E–05
1,86E–04
1,11E–03
3,92E–03
ОС
НС
НС
1,59E–04
3,86E–04
Блокирование
S12
58
5,15E–02
1,01E–04
1,68E–04
1,17E–03
5,24E–04
ОС
2,60E–02
1,98E–03
1,73E–04
3,07E–04
Блокирование
S13
59
НС
2,07E–04
2,91E–04
1,84E–03
5,01E–04
4,93E–02
3,83E–03
1,03E–02
1,35E–04
4,02E–04
Блокирование
S14
60
3,33E–03
5,42E–05
7,64E–05
6,19E–04
4,52E–04
3,73E–02
4,98E–03
1,81E–02
6,01E–05
1,26E–04
Блокирование
S115
61
4,84E–04
7,86E–06
1,95E–05
2,22E–05
6,91E–05
ОС
ОС
ОС
–
3,34E–05
Отталкивание
S116
62
4,80E–04
2,84E–05
5,07E–05
7,01E–05
1,20E– 04
ОС
ОС
ОС
–
8,25E–05
Отталкивание
S117
63
2,75E–04
1,20E–05
3,40E–05
1,83E–05
5,92E–05
ОС
ОС
ОС
–
4,30E–06
Отталкивание
S118
64
2,47E–04
9,17E–06
4,12E–05
6,97E–05
8,06E–05
ОС
ОС
ОС
1,31E–05
1,13E–05
Отталкивание
S119
65
5,65E–04
4,15E–04
1,48E–04
2,34E–04
3,10E–04
ОС
НС
ОС
4,28E–04
3,95E–04
Блокирование
S120
66
6,26E–04
4,04E–04
1,49E–04
2,36E–04
3,14E–04
ОС
НС
ОС
4,25E–04
3,93E–04
Блокирование
S122
67
6,63E–04
4,98E–04
2,26E–04
2,66E–04
3,27E–04
ОС
НС
ОС
3,52E–04
3,61E–04
Блокирование
S123
68
1,31E–03
1,55E–03
ОС
1,57E–0,3
1,54E–03
ОС
ОС
ОС
OC/НС
1,43E–0,3
Отсутствие блокирования
S126
69
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
–
S128
70
ОС
4,59E–03
2,11E–03
1,52E–02
1,47E–02
ОС
ОС
ОС
4,21E–03
ОС
–
S130
71
3,73E–03
2,82E–03
2,08E–02
НС
НС
НС
ОС
ОС
НС
5,06E–03
Блокирование
S135
72
3,63E–03
6,58E–04
8,78E–05
4,73E–04
3,88E–04
ОС
ОС
ОС
5,21E–04
1,46E–0,3
Блокирование
S137
73
1,37E–03
1,65E–03
1,88E–0,3
2,04E–0,3
1,79E–03
5,15E–04
4,43E–04
4,63E–03
3,76E–03
1,48E–02
Отсутствие блокирования
S138
74
НС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
–
ОС=отсутствие связывания
дисс.
НС=очень низкое связывание (Κневозможно рассчитать в приближении Ленгмюра)
– = не исследовано
[0350]
Эти данные указывают на то, что были идентифицированы клоны антител с различными вариантами специфичности связывания в отношении белков SIRP–α разных видов, а также внутривидовые варианты. Характеристики вариантов специфичности связывания для отобранных антител дополнительно изучали, используя вышеописанный анализ ELISA, путем построения кривых связывания в сравнении с доменами D1 SIRP–α v1 человека (SEQ ID NO:5), v2 человека (SEQ ID NO:6), мышей NOD (SEQ ID NO:8) и яванского макака (SEQ ID NO: 11), а также с SIRPγ человека (SEQ ID NO: 15), и преформированного комплекса 1:1 смеси двух высокоаффинных вариантов SIRP–α (SEQ ID NO: 17 и 19), связанных с доменом IgSF CD47 (SEQ ID NO: 16).
[0351]
Исследованные последовательности клонов scFv–Fc приведены в таблице D.
Таблица D.
Последовательности scFv–Fc.
<b>Клон</b>
<b>Каркасная область/</b><b>CDR</b>
<b>SEQ ID</b><b>NO</b>
<b>Последовательность</b>
S1
Куриная
53
<img file="00000287.jpg" he="8" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000288.jpg" he="53" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S2
Куриная
54
<img file="00000289.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S8
Куриная
55
<img file="00000290.jpg" he="61" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S9
Куриная
56
<img file="00000291.jpg" he="49" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" /><img file="00000292.jpg" he="12" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S11
Куриная
57
<img file="00000293.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S12
Куриная
58
<img file="00000294.jpg" he="61" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S13
Куриная
59
<img file="00000295.jpg" he="61" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S14
Куриная
60
<img file="00000296.jpg" he="29" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000297.jpg" he="33" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S115
Человеческая
61
<img file="00000298.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S116
Человеческая
62
<img file="00000299.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S117
Человеческая
63
<img file="00000300.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S118
Человеческая
64
<img file="00000301.jpg" he="17" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000302.jpg" he="41" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S119
Человеческая
65
<img file="00000303.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S120
Человеческая
66
<img file="00000304.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S122
Человеческая
67
<img file="00000305.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S123
Человеческая
68
<img file="00000306.jpg" he="9" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<img file="00000307.jpg" he="49" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S126
Человеческая
69
<img file="00000308.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S128
Человеческая
70
<img file="00000309.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S130
Человеческая
71
<img file="00000310.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S135
Человеческая
72
<img file="00000311.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S137
Человеческая
73
<img file="00000312.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S138
Человеческая
74
<img file="00000313.jpg" he="41" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
S121
Человеческая
75
<img file="00000314.jpg" he="57" wi="86" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0352]
Не ограничиваясь теорией, считается, что антитела с перекрестно–реактивным связыванием среди белков человека, яванского макака и/или мышей могут позволить изучать характеристики антител как в животных моделях, так и в клинических исследованиях. Антитела со специфическим в отношении изоформы и/или варианта связыванием могут быть полезны для индивидуализированных медицинских подходов среди конкретных популяций людей и/или для исследований с представляющими интерес конкретными вариантами. Кроме получения профилей внутри– и межвидовой специфичности связывания, описанные в данном документе способы также позволяют идентифицировать антитела, которые блокируют или не блокируют связывание между SIRP–α и CD47, а также антитела, которые «отталкивают» SIRP–α от связывания с CD47.
Пример 2: Идентификация дополнительных антител с новыми вариантами специфичности связывания с белками SIRP–α
Способы
Определение K
Д
[0353]
Взаимодействия анти–SIRPα антител с SIPRα различных видов (v1 человека, v2 человека, яванского макака, мышей 129, BL6, BALBc, NOD), SIRPβ и SIRPγ анализировали, используя два метода, прямой иммобилизации антител (посредством чипа GLC) или захвата посредством биотинилированного протеина A (посредством чипа NLC), в соответствии со следующими протоколами. Все эксперименты проводили при 25°C, используя биосенсор ProteOn XPR36 для ППР (BioRad, Inc, Hercules, CA), оснащенный сенсорными чипами GLC или NLC. Антитела экспрессировали, используя клетки FreeStyle™ 293–FS (Thermo Fisher), как описано в примере 1. Очистку проводили с помощью стандартной аффинной колоночной хроматографии с протеином А и хранили элюированные антитела в буфере ФСБ.
[0354]
(смотрите, например,
et al.
) Anal. Biochem.
Подвижным буфером служил ФСБ, pH 7,4, с 0,01% Твин–20 (ФСБТ+). Все аналиты использовали в номинальных концентрациях, определенных по поглощению А280, используя рассчитанный для них молярный коэффициент экстинкции. Аналиты вводили в «однократном» кинетическом режиме, как описано в литературе  Bravman, T.  (2006 358:281–288).
[0355]
(например,
В случае метода с применением чипа GLC аналиты вводили и пропускали через анти–SIRPα антитела, иммобилизованные (~1000 РЕ) на чипах GLC с использованием набора для аминного сопряжения от Proteon. Для проведения этапа иммобилизации чип GLC активировали EDAC/сульфо–NHS 1:1 (Biorad), разведенным 1/100, в течение 300 с при 25 мкл/мин. Анти–SIRPα антитела разводили до концентрации 80 нМ в 10 мМ натрий–ацетатном буфере, pH 4,5, и иммобилизовали на чипе при 30 мкл/мин в течение 50 с. Чип инактивировали этаноламином в течение 300 с при 25 мкл/мин. Аналиты  SIRP–α от разных видов, SIRP–β, SIRP–γ) вводили в «однократном» кинетическом режиме в номинальных концентрациях 100, 33, 11, 3,7, 1,2 и 0 нМ. Время ассоциации отслеживали в течение 90 с при 100 мкл/мин, а время диссоциации отслеживали в течение 1200 с. Поверхности восстанавливали 2:1 об./об. смесью IgG–элюирующий буфер Pierce/4 М NaCl.
[0356]
Д
В альтернативном варианте определение K проводили, применяя захват антител посредством чипа NLC. В этом случае 15 мкл/мин биотинилированного протеина А (Thermofisher) вводили при 30 мкл/мин в течение 120 с поверх чипа NLC, чтобы получить ответ иммобилизации ~1000–1200 РЕ. После этого вводили анти–SIRPα антитела (~160 нМ) в течение 80 с при 30 мкл/мин. После этого вводили аналиты (SIRP–α от разных видов, SIRP–β и SIPR–γ) в «однократном» кинетическом режиме в номинальных концентрациях 100, 33, 11, 3,7, 1,2 и 0 нМ. Время ассоциации отслеживали в течение 60 с при 25 мкл/мин, а время диссоциации отслеживали в течение 120 с. Поверхности восстанавливали 2:1 об./об. смесью IgG–элюирующий буфер Pierce/4 М NaCl.
[0357]
Д
Д
д
а
Данные биосенсора дважды корректировали путем вычитания данных в промежутках между точками (не содержащих иммобилизованный белок) из данных для реакционных точек (иммобилизованный белок), а затем вычитания ответа при вводе контрольного буферного аналита из ответа при вводе аналита. Дважды скорректированные данные аппроксимировали в целом простой моделью Ленгмюра, а значение K рассчитывали из соотношения кажущихся кинетических констант скоростей (K=k/k).
Результаты
[0358]
Дополнительно изучали характеристики трех репрезентативных антител (блокирующего, неблокирующего и «отталкивающего» антитела) в отношении связывания с различными белками SIRP–α, –β, –γ, как описано выше. Эти три антитела содержат человеческие последовательности и были получены в экспериментах с иммунизацией кур HuMab. Эти антитела исследовали как антитела в виде полноразмерного человеческого иммуноглобулина IgG1 с мутациями L234A, L235A, G237A и N297A. Исследуемые в этих экспериментах белки соответствовали человеческому SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческому SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11), изоформе 1 человеческого SIRPβ (SEQ ID NO:13), изоформе 2 человеческого SIRPβ (SEQ ID NO: 14) и изоформе 1 человеческого SIRPγ (SEQ ID NO: 15). Изоформа 1 человеческого SIRPβ (SEQ ID NO:13) также известна в данной области техники как изоформа 1 SIRΡβ1.
[0359]
Д
Значения K, полученные для трех антител, приведены в таблице E ниже.
Таблица E.
Д
Обобщенные данные по значениям K (М)
v1
v2
яв. макак
бета
бета
гамма
изоформа 1
изоформа 2
изоформа 1
Отталкивающее
AB132a
4,26×10<sup>–10</sup>
1,86×10<sup>–9</sup>
2,41×10<sup>–9</sup>
1,31×10<sup>–10</sup>
1,64×10<sup>–10</sup>
5,19×10<sup>–10</sup>
Блокирующее
AB119a
1,98×10<sup>–10</sup>
7,99×10<sup>–10</sup>
1,45×10<sup>–10</sup>
3,42×10<sup>–10</sup>
3,76×10<sup>–10</sup>
8,86×10<sup>–10</sup>
Неблокирующее
AB136a
6,88×10<sup>–10</sup>
3,22×10’<sup>9</sup>
2,65×10<sup>–9</sup>
4,35×10<sup>–9</sup>
2,27×10<sup>–9</sup>
1,20×10<sup>–7</sup>
[0360]
Далее определяли кинетику связывания различных клонов антител с отобранными мышиными белками SIRP–α, как описано выше. Исследуемые мышиные белки включали белки SIRP–α BALBc (SEQ ID NO: 10), BL6 (SEQ ID NO:9), NOD (SEQ ID NO:8) и m129 (SEQ ID NO:7). Результаты обобщены в таблицах F–I ниже. Клоны антител, помеченные «с», исследовали как антитела в виде полноразмерного мышиного IgG2a; клоны антител, помеченные «а», исследовали как антитела в виде полноразмерного человеческого IgG1 с мутациями L234A, L235A, G237A и N297A.
Таблица F.
Обобщенные данные по кинетике связывания отобранных антител с белком SIRP–α мышей BALBc (SEQ ID NO: 10)
<b>Антитело</b>
<b>K</b><sub><b>асс.</b></sub><b> (1/Мс)</b>
<b>K</b><sub><b>дисс.</b></sub><b>(1/с)</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> (М)</b>
AB136a
8,27×105
2,73×10<sup>–4</sup>
3,31×10<sup>–10</sup>
AB3c
7,76×105
4,17×10<sup>–3</sup>
5,31×10<sup>–9</sup>
AB21c
4,62×105
6,18×10<sup>–4</sup>
1,34×10<sup>–9</sup>
AB25c
3,03×105
2,92×10<sup>–3</sup>
9,64×10<sup>–9</sup>
AB27c
1,50×105
2,26×10<sup>–3</sup>
1,50×10<sup>–8</sup>
AB66c
2,24×105
7,62×10<sup>–4</sup>
3,41×10<sup>–9</sup>
Таблица G.
Обобщенные данные по кинетике связывания отобранных антител с белком SIRP–α мышей BL6 (SEQ ID NO:9)
<b>Антитело</b>
<b>K</b><sub><b>асс.</b></sub><b> (1/Мс)</b>
<b>K</b><sub><b>дисс.</b></sub><b>(1/с)</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> (М)</b>
AB136a
6,24×105
5,85×10<sup>–3</sup>
9,37×10<sup>–9</sup>
AB3c
4,12×105
6,19×10<sup>–3</sup>
1,50×10<sup>–8</sup>
AB21c
2,76×105
2,41×10<sup>–4</sup>
8,76×10<sup>–10</sup>
AB25c
1,42×105
3,99×10<sup>–4</sup>
2,81×10<sup>–9</sup>
AB27c
1,47×105
1,40×10<sup>–3</sup>
9,49×10<sup>–9</sup>
AB66c
1,07×105
6,19×10<sup>–4</sup>
5,80×10<sup>–9</sup>
Таблица H.
Обобщенные данные по кинетике связывания отобранных антител с белком SIRP–α мышей NOD (SEQ ID NO: 8)
<b>Антитело</b>
<b>K</b><sub><b>асс.</b></sub><b> (1/Мс)</b>
<b>K</b><sub><b>дисс.</b></sub><b>(1/с)</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> (М)</b>
AB136a
8,41×105
4,48×10<sup>–4</sup>
5,33xl0<sup>–10</sup>
AB3c
9,99×105
1,43×10<sup>–3</sup>
1,43×10<sup>–9</sup>
AB21c
7,49×105
4,79×10<sup>–4</sup>
6,40×10<sup>–10</sup>
AB25c
3,66×105
1,43×10<sup>–3</sup>
3,90×10<sup>–9</sup>
AB27c
2,96×105
1,01×10<sup>–3</sup>
3,42×10<sup>–9</sup>
AB66c
4,12×105
2,32×10<sup>–4</sup>
5,64×10<sup>–10</sup>
Таблица I.
Обобщенные данные по кинетике связывания отобранных антител с белком SIRP–α мышей m129 (SEQ ID NO: 7)
<b>Антитело</b>
<b>K</b><sub><b>асс.</b></sub><b> (1/Мс)</b>
<b>K</b><sub><b>дисс.</b></sub><b>(1/с)</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> (М)</b>
AB136a
6,88×105
5,97×10<sup>–4</sup>
8,67×10<sup>–10</sup>
AB3c
5,34×105
1,18×10<sup>–2</sup>
2,20×10<sup>–8</sup>
AB21c
5,63×105
3,31×10<sup>–5</sup>
5,88×10<sup>–11</sup>
AB25c
3,52×105
2,07×10<sup>–5</sup>
5,87×10<sup>–11</sup>
AB27c
2,07×105
1,01×10<sup>–4</sup>
4,87×10<sup>–10</sup>
AB66c
2,07×105
1,98×10<sup>–5</sup>
9,55×10<sup>–11</sup>
[0361]
В случае вышеуказанных антител последовательности доменов VH и VL (соответственно) были следующими: AB136a: SEQ ID NO: 133 и 134; AB3c: SEQ ID NO: 242 и 243; AB21c: SEQ ID NO: 135 и 136; AB25c: SEQ ID NO: 137 и 138; AB27c: SEQ ID NO: 139 и 140: AB66c: SEQ ID NO: 141 и 142.
[0362]
in vivo
Эти результаты демонстрируют, что некоторое количество клонов антител связывались со всеми четырьмя мышиными белками SIRP–α, что делает эти антитела подходящими для изучения характеристик в  мышиных моделях.
Пример 3:
Функциональные свойства анти–SIRP–α антител
[0363]
in vitro
in vivo
(т. е.
(т. е.
in vitro
in vivo
В предыдущих примерах описана идентификация и изучение характеристик анти–SIRP–α с разнообразным набором свойств, таких как специфичность связывания в отношении различных белков SIRP–α человека, яванского макака и/или мышей, SIRP–β и SIRP–γ и то, блокируют ли антитела связывание между SIRP–α и CD47 или нет. Антитела, представляющие конкретные категории, представляющие интерес, далее исследовали в разных  и функциональных анализах, целью которых было получение характеристик их влияния на биологические функции SIRP–α. В частности, изучали характеристики «блокирующих» антител  антител, которые блокируют связывание между SIRP–α и CD47) и «неблокирующих» антител  антител, которые не блокируют связывание между SIRP–α и CD47) в отношении активности в различных  и  анализах.
[0364]
Как указано выше, клоны антител, помеченные «а», исследовали как антитела в виде полноразмерного человеческого иммуноглобулина IgG1 с мутациями L234A, L235A, G237A и N297A. Клоны антител, помеченные «b», исследовали как антитела в виде полноразмерного мышиного IgG1 с мутацией N297A. Клоны антител, помеченные «с», исследовали как антитела в виде полноразмерного мышиного IgG2a.
Способы
Культивирование опухолевой линии клеток
[0365]
Клетки DLD–1 (колоректальной аденокарциномы человека) и OE19 (карциномы пищевода человека) поддерживали в среде для роста, содержащей RPMI (Gibco), дополненной 10–процентной термоинактивированной фетальной бычьей сывороткой (Gibco), однопроцентным пенициллином/стрептомицином (Gibco) и однопроцентным глутамаксом (Gibco).
Получение и культивирование человеческих моноцитарных макрофагов
[0366]
+
Остатки Trima получали из центров крови стран Тихоокеанского региона и разводили 1:4 фосфатно–солевым буфером (ФСБ, Gibco). Разведенную кровь распределяли по четырем пробиркам с подслоем из 20 мл Ficoll–Paque Plus (GE Healthcare). Пробирки центрифугировали в течение 30 минут при 400 x g. МКПК собирали с поверхности и ресуспендировали в буфере FACS (ФСБ с 0,5–процентным бычьим сывороточным альбумином (Gibco)). Моноциты CD14 очищали путем негативной селекции, используя набор для выделения моноцитов Monocyte Isolation Kit II (Miltenyi Biotec) и колонки LS (Miltenyi Biotec) в соответствии с протоколом производителя.
[0367]
+
В случае неполяризованных макрофагов моноциты CD14 высевали в 15 см планшеты для тканевого культивирования (Coming) при плотности 10 миллионов клеток на планшет в 25 мл IMDM (Gibco), дополненной 10–процентной человеческой сывороткой AB (Corning), однопроцентным пенициллином/стрептомицином (Gibco) и однопроцентным глутамаксом (Gibco). Клетки культивировали в течение семи–десяти суток.
[0368]
+
В случае поляризованных макрофагов M2 моноциты CD14 высевали в 15 см планшеты для тканевого культивирования (Coming) при плотности 6 миллионов клеток на планшет в 25 мл RPMI (Gibco), дополненной 10–процентной фетальной бычьей сывороткой (Thermo Fisher), однопроцентным пенициллином/стрептомицином (Gibco) и однопроцентным глутамаксом (Gibco), и 50 нг/мл M–CSF (Miltenyi). Клетки культивировали в течение семи–десяти суток.
In vitro анализ фагоцитоза
[0369]
Клетки DLD–1 и OE19 отсоединяли от культуральных планшетов, дважды промывая 20 мл ФСБ и инкубируя в 10 мл TrypLE Select (Gihco) в течение 10 минут при 37°C. Клетки центрифугировали, промывали в ФСБ и ресуспендировали в среде. Клетки метили с помощью набора для оценки клеточной пролиферации Celltrace CFSE (Thermo Fisher) в соответствии с инструкциями производителя и ресуспендировали в IMDM. Макрофаги отсоединяли от культуральных планшетов, дважды промывая 20 мл ФСБ и инкубируя в 10 мл TrypLE Select в течение 20 минут при 37°C. Клетки удаляли с помощью скребка для клеток (Corning), промывали в ФСБ и ресуспендировали в IMDM.
[0370]
Анализ фагоцитоза проводили в 96–луночных планшетах с U–образным дном и ультранизкой степенью присоединения (Corning), содержащих 100000 клеток DLD–1 или OE19, 50000 макрофагов, пятикратные серийные разведения анти–SIRP–α антител от 100 нМ до 6,4 пМ и цетуксимаб (абсолютное антитело) при 1 или 0,01 мкг/мл, трастузумаб при 0,01 мкг/мл или контрольное антитело того же изотипа (Southern Biotech). Все исследуемые анти–SIRP–α антитела содержали человеческий IgG1 с мутациями L234A, L235 A, G237A и N297A, за исключением AB136c, которое имело мышиный IgG2a. Планшеты инкубировали два часа при 37°C в увлажненном инкубаторе с 5 процентами диоксида углерода. Клетки осаждали путем центрифугирования в течение пяти минут при 400 x g и промывали в 250 мкл буфера FACS. Макрофаги окрашивали на льду в течение 15 минут в 50 мкл буфера FACS, содержащего 10 мкл блокирующего реагента для человеческого FcR (Miltenyi Biotec), 0,5 мкл анти–CD33 BV421 (Biolegend) и 0,5 мкл анти–CD206 APC–Cy7 (Biolegend). Клетки промывали в 200 мкл буфера FACS, промывали в 250 мкл ФСБ и окрашивали на льду в течение 30 минут в 50 мкл фиксируемого красителя для оценки жизнеспособности eFluor 506 (ebioscience), разведенном 1:1000 в ФСБ. Клетки дважды промывали в 250 мкл буфера FACS и фиксировали в течение 30 минут на льду в 75 мкл Cytofix (BD Biosciences). Клетки промывали в 175 мкл буфера FACS и ресуспендировали в 75 мкл буфера FACS. Клетки анализировали на FACS Canto II (BD Biosciences) с последующим анализом данных с помощью Flowjo 10.7 (Treestar). Мертвые клетки исключали путем гейтинга на e506–отрицательной популяции. Макрофагов, осуществивших фагоцитоз опухолевых клеток, идентифицировали как клетки, положительные в отношении CD33, CD206 и CFSE.
In vivo активация дендритных клеток
[0371]
Мышей Balb/c (n=3/группа) внутривенно инъецировали контрольным крысиным антимышиным анти–SIRP–α антагонистическим антителом (клон p84), крысиным контрольным IgG, AB136b (AB136 с Fc–областью мышиного IgG1 с мутацией N297A), мышиным контрольным IgG или базовым раствором (ФСБ) при 10 мг/кг. Через пять часов после инъекции вырезали селезенки и обрабатывали до одноклеточной суспензии путем механической диссоциации через 70 мкМ фильтр. Клетки дважды промывали ФСБ и проводили лизис красных кровяных клеток. После этого клетки дополнительно промывали два раза ФСБ/10% ФБС и готовили к окрашиванию клеток. Клетки окрашивали конъюгированными с флуорохромом ГКГС–II, CD8, 33D1, CD4, CD11c, CD86, CCR7 и красителем для оценки жизнеспособности при 4 градусах в течение одного часа. Клетки промывали два раза и анализировали, используя проточный цитометр BD Canto II, а данные обрабатывали с помощью Flowjo.
In vivo противоопухолевая активность
[0372]
3
3
В случае сингенной модели карциномы CT26 толстой кишки мышей клетки CT26 подкожно имплантировали мышам BALB/c и рандомизировали животных по группам (8–9 мышей/группа). Группы обработки включали применение базового раствора (ФСБ) и AB136b. AB136 анти–SIRP–α содержало Fc–область мышиного IgG1 с мутацией N297A. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 75–80 мм, на 7 или 8 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали AB136b при 3 мг/кг дважды в неделю в течение трех недель. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
[0373]
3
3
В случае сингенной модели карциномы MC38 толстой кишки мышей клетки MC38 подкожно имплантировали мышам C57BL/6 и рандомизировали животных по группам (8–10 мышей/группа). Группы обработки включали применение базового раствора (ФСБ), AB25b, AB25c, AB27b, AB3b и AB136b. Все анти–SIRPα антитела содержали Fc–область мышиного IgG1 с мутацией N297A, за исключением AB25c, которое имело мышиный IgG2a. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 60–65 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали анти–SIRPα при 10 мг/кг дважды в неделю. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
Результаты
[0374]
in vitro
Исследовали различные анти–SIRP–α антитела в отношении индукции фагоцитоза в  анализе фагоцитоза, используя поляризованные и неполяризованные макрофаги.
[0375]
дисс.
дисс.
Дополнительные анти–SIRP–α антитела AB3 и AB45 исследовали в экспериментах, описанных ниже. Они оба являются неблокирующими антителами. Уровни k для связывания каждого клона (в формате scFv–Fc) с каждым аналитом SIRP определяли, используя ППР (таблица J1). Условия проведения ППР–скрининга описаны в данном документе, а значения K определяли, используя кинетическую аппроксимацию Ленгмюра. Последовательности аналитов SIRP были следующими: CV1–3, SEQ ID NO:18; v1, SEQ ID NO:5; v2, SEQ ID NO:6; cyno1, SEQ ID NO: 11; cyno2, SEQ ID NO:12; m129, SEQ ID NO:7; NOD, SEQ ID NO:8; BL6, SEQ ID NO:9; sirpb1, SEQ ID NO:13; sirpg, SEQ ID NO: 15.
Таблица J1.
Д
K (M) по кинетической аппроксимации Ленгмюра для AB3 и AB45
<b>SEQ ID NO:</b>
<b>5</b>
<b>6</b>
<b>11</b>
<b>12</b>
<b>8</b>
<b>9</b>
<b>10</b>
<b>15</b>
<b>13</b>
<b>14</b>
<b>v1</b>
<b>v2</b>
<b>cyno1</b>
<b>Cyno2</b>
<b>NOD</b>
<b>BL6</b>
<b>BALBc</b>
<b>sirp–g</b>
<b>Sirpb1</b>
<b>Sirpb2</b>
AB3*
1,62E–10
7,67E–11
2,29E–09
2,85E–09
1,63E–09
3,65E–09
1,16E–09
8,36E–08
1,63E–09
6,78E–11
AB45**
6,63E–11
1,34E–10
ОС
ОС
ОС
ОС
ОС
2,71E–08
1,06E–08
2,53E–11
ОС – отсутствие связывания
*Смотрите SEQ ID NO:242 и 243 в отношении доменов VH и VL соответственно.
**Смотрите SEQ ID NO:244 и 245 в отношении доменов VH и VL соответственно.
[0376]
Фиг. 13A и 13B
Фиг. 13C и
13D).
Фиг.
13E)
Фиг. 13F
Фиг.
Как показано на , было обнаружено, что неблокирующее анти–SIRP–α антитело AB3a индуцирует фагоцитоз опухолевых клеток DLD–1 поляризованными макрофагами M2. В частности, обработка макрофагов цетуксимабом (анти–EGFR антителом) и AB3a приводила к сильной индукции фагоцитоза опухолевых клеток. Аналогично, было обнаружено, что неблокирующее анти–SIRP–α антитело AB45a индуцирует фагоцитоз опухолевых клеток DLD–1 поляризованными макрофагами M2, а обработка макрофагов цетуксимабом (анти–EGFR антителом) и AB45a приводила к сильной индукции фагоцитоза опухолевых клеток (Также было обнаружено, что блокирующие анти–SIRP–α антитела AB119a (и AB135a () индуцируют фагоцитоз опухолевых клеток OE19 при совместном введении с трастузумабом (анти–HER2 антителом). Также было обнаружено, что неблокирующее анти–SIRP–α антитело AB136c индуцирует фагоцитоз опухолевых клеток DLD–1 ( 13G).
[0377]
Фиг. 14
Фиг.
14
in vivo
in vivo
Анализ активации дендритных клеток использовали для получения характеристик  действия неблокирующего анти–SIRP–α антитела AB136b (SEQ ID NO: 133 м 134 для последовательностей доменов VH и VL соответственно). Неспособность задействовать рецептор мышиного SIRP–α на дендритных клетках селезенки посредством связывания CD47 приводила к активации дендритных клеток селезенки. Контрольное анти–SIRP–α антагонистическое антитело p84 активировало дендритные клетки селезенки при внутривенной инъекции мышам (). Неблокирующее анти–SIRP–α антитело AB136b исследовали , чтобы определить, приводит ли оно к активации дендритных клеток. Интересно, что обработка AB136b приводила к активации дендритных клеток селезенки на одном уровне с p84 ().
[0378]
(Фиг. 15)
in vivo
3
3
3
3
Далее проводили  анализ противоопухолевого действия различных анти–SIRP–α антител в двух сингенных моделях рака толстой кишки мышей. Противоопухолевую активность блокирующих анти–SIRP–α антител AB25b, AB25c и AB27b и неблокирующих анти–SIRP–α антител AB3b и AB136b исследовали в сингенной модели карциномы MC38 толстой кишки мышей, чтобы оценить их активность как отдельных агентов. Как блокирующие (AB25b, AB25c и AB27b), так и неблокирующие (AB3b и AB136b) анти–SIRP–α антитела замедляли формирование опухолей при 10 мг/кг по сравнению с одним базовым раствором  в сингенной мышиной модели MC38. На 25 сутки группы, обрабатываемые анти–SIRP–α антителами, содержали трех мышей с объемом опухолей менее 600 мм в случае AB25b и AB27b, четырех мышей с объемом опухолей менее 600 мм в случае AB25c и AB3b и пять мышей с объемом опухолей менее 600 мм в случае AB136b, тогда как обрабатываемая базовым раствором группа содержала только двух мышей с объемом опухолей менее 600 мм.
[0379]
Фиг. 16
Далее оценивали противоопухолевую активность неблокирующего AB136b в сингенной модели карциномы CT26 толстой кишки мышей, чтобы оценить его активность как отдельного агента. Эти результаты подтвердили, что обработка AB136b замедляла формирование опухолей при 3 мг/кг по сравнению с одним базовым раствором в сингенной мышиной модели CT26 ().
[0380]
in vivo.
in vivo
in vivo
in vivo
in vivo
(смотрите
et al
JCI Insight
Вместе эти результаты демонстрируют эффективность обработки анти–SIRP–α антителами в отношении индукции фагоцитоза опухолевых клеток макрофагами, активации дендритных клеток и ингибирования роста опухоли  Было обнаружено, что некоторое количество блокирующих анти–SIRP–α антител стимулируют фагоцитоз опухолевых клеток, активацию дендритных клеток и блокируют  рост опухоли. При этом удивительно, что было обнаружено, что обработка неблокирующим анти–SIRP–α антителом также активирует дендритные клетки селезенки и ингибирует рост опухоли  в двух разных сингенных мышиных моделях опухолей. Открытие, что неблокирующие анти–SIRP–α антитела были способны повышать фагоцитоз и блокировать  рост опухоли, было удивительным и неожиданным. Предыдущая работа позволяла предположить, что только блокирующие анти–SIRP–α антитела будут способны ингибировать  рост опухоли  Yanagita, T.  (2017)  2:e89140).
Пример 4: Структурный анализ эпитопов анти–SIRP–α антител на SIRP–α
[0381]
например,
Как описано выше в примерах 1–3, были созданы анти–SIRP–α антитела с различными вариантами специфичности и моделями связывания с SIRP–α,  антитела, которые блокируют связывание CD47 с SIRP–α, антитела, которые не блокируют связывание CD47 с SIRP–α, и антитела, которые связываются с SIRP–α и снижают его аффинность в отношении связывания CD47 («отталкивающие» антитела). Структурный анализ проводили, чтобы понять, как эти типы антител связываются с доменом D1 SIRP–α по сравнению с CD47 и получить характеристики эпитопов отобранных анти–SIRP–α антител.
Способы
Кристаллографический и структурный анализ
[0382]
Экспрессию Fab и SIRPα осуществляли аналогично с ранее установленными протоколами, которые включали традиционные методы аффинной хроматографии и эксклюзионной хроматографии для очистки белка. Мутантный человеческий SIRP–α v1, несущий мутацию N80A по сравнению с SEQ ID NO:5, использовали для облегчения получения белка в Expi293 (SEQ ID NO:296). Целью применения N80A SIRPα было получение гомогенной, негликозилированной формы SIRPα, которая больше всего подошла бы для кристаллизации. Конечный буфер для очистки был минимальным и содержал только 10 мМ Трис, pH 7,5, и 50 мМ NaCl. Образец с очищенным комплексом является стабильным при 4°C, и его концентрировали до 10–12 мг/мл в препарате для экспериментов по кристаллизации и определению возможной структуры.
[0383]
В применяемых в отношении комплекса Fab: SIRPα способах придерживались хорошо отработанных принципов кристаллографии, начиная с метода разреженных матриц, который приводил к созданию специальных оптимизированных условий, согласно обычному протоколу. Кристаллизацию проводили, используя метод диффузии паров в сидячей капле. Для первичного скрининга разреженной матрицы использовали наборы растворов, коммерчески доступные от Qiagen (таблица J2). Эксперименты по кристаллизации осуществляли в каплях с разными соотношениями белка и кристаллизационного раствора. Установленные соотношения находились в диапазоне 1:1, 2:1 и 3:1 белок:раствор в общем объеме 1 мкл в подлунках 96–луночного (8 х 12) планшета. 100 мкл кристаллизационного раствора помещали в луночный резервуар. Капли создавали с помощью робота для создания капель Mosquito, а заполненные планшеты закрывали и хранили в инкубаторе при 12°C. Эксперимент отслеживали, наблюдая планшеты/капли под микроскопом, чтобы видеть изменения, которые включали осаждение капель, агрегацию, разделение фаз, образование аморфной структуры, а также первичные белковые кристаллы.
Таблица J2.
Наборы, используемые для первичного скрининга разреженной матрицы.
<b>Набор</b>
<b>Кат. №/ID</b>
Комплект Classics
130901
Комплект Classics II
130923
Комплект Classics L
130902
Комплект PEGs
130904
Комплект PEGs II
130916
Комплект PACT
130918
Комплект ProComplex
130915
Комплект AmSO<sub>4</sub>
130905
Итоги кристаллизации и сбор кристаллов
[0384]
Кристаллизацию 4 комплексов осуществляли с помощью производных двух основных растворов, как показано в таблице J3). Сбор кристаллов проводили для оптимальных кристаллических форм так, чтобы замораживание погружением в жидкий азот не оказывало негативного влияния на целостность кристалла перед исследованием методом рентгеновской дифракции и возможным получением данных. Для предотвращения обледенения во время замораживания использовали криопротектор. Типичный криопротектор включал добавление 20% глицерина в кристаллизационный раствор, который формировал кристалл. Если кристаллы формировались в растворах с 30% ПЭГ 4000 или выше, добавление глицерина было необязательным. Высокое процентное содержание ПЭГ 4000 проявляло себя как действенный криопротектор. Манипуляции с кристаллами комплексов проводили с помощью криопетель, выполненных из нейлона или Mitigen. Отдельные кристаллы выделяли и извлекали из капли, в которой они формировались, и переносили в криопротектор на короткое время перед погружением в жидкий азот для быстрого замораживания.
Таблица J3.
Условия кристаллизации для образования кристаллов комплекса Fab:SIRP–α.
<b>Антитело Fab</b>
<b>Буфер</b>
<b>Соль</b>
<b>Осадитель</b>
119
0,1 М Трис–HCl, pH 8,5
0,2 М MgCl2
15% (масс./об.) ПЭГ 4000
136
0,1 М Трис–HCl, pH 8,5
0,2 М MgCl2
30% (масс./об.) ПЭГ 4000
3
0,1 М ацетат натрия, pH 4,6
0,45 М сульфат аммония
35% (масс./об.) ПЭГ 4000
115
0,1 М Трис, pH 7,2
0,2 М MgCl2
18% (масс./об.) ПЭГ 4000
Получение и обработка данных
[0385]
(смотрите
Данные получали для кристаллов, которые были быстро заморожены в жидком азоте, как описано выше. Эти образцы оставались в криопотоке во время скрининга в отношении диффузии в белковой решетке перед последующим сбором данных методом колебаний. Сбор происходил с применением усовершенствованного источника фотонов или алмазного источника света. Сжатие наборов данных проводили, используя пакет xia2. xia2 представляет собой скрипт оболочки, который позволяет осуществлять автоматическое сжатие макромолекулярных кристаллографических данных. Эта программа может использовать некоторое количество программ для сжатия данных, таких как XDS, DIALS, Mosfim и Aimless. Эти программы позволяют проводить для дифракционных данных индексирование по соответствующим пространственным группам и элементарным ячейкам, интеграцию интенсивностей и масштабирование для получения оценки интенсивности каждого уникального отражения. В случае первичного набора данных для комплекса 1 фазы рассчитывали, используя молекулярное замещение (МЗ) с помощью Phaser MR из пакета CCP4 с применением гомологичных моделей SIRPα, а также Fab  PDB CODE: 2UV3 и PDB CODE: 4NM4 соответственно). В случае последующих наборов данных для комплексов 2, 3 и 4 использовали координаты полной структурной модели комплекса 1 в качестве поисковой модели для расчета фазы и построения первичной модели.
Построение и уточнение структуры
[0386]
При построении модели использовали программу Coot. Как пример, было рассчитано, что комплекс 1 содержит 4 молекулы в ASU, следовательно, для завершения модели нужно было построить 4 пары ΑΒ119f в комплексе с SIRPα. Стратегия построения структуры состояла во встраивании аминокислотных остатков в электронную плотность согласно известной последовательности целевых белков. Качество данных напрямую коррелирует с соответствием структурной модели наблюдаемому набору кристаллических данных. Следовательно, при построении третичной структуры комплекса придерживались установленного протокола. Сначала строили пептидный остов остатка. После этого следовало размещение боковой цепи остатка в случае, если это позволяла карта электронной плотности. В случае, если оригинальная аминокислота в белковой последовательности не была смоделирована, это происходило вследствие недостатка плотности для соответствующей боковой цепи, таким образом, можно смоделировать только пептидный остов аминокислоты и встроить в этом месте боковую цепь остатка аланина. Участки последовательности могут представлять собой разупорядоченные области и не могут быть построены вследствие недостатка плотности даже для размещения аминокислотного остова. За построением следовали этапы уточнения с помощью программы Refmac, части пакета CCP4. Программу уточнения используют для минимизации координатных параметров посредством максимально вероятного остатка. Уточнение считалось завершенным, когда параметры модели соответствовали благоприятному статистическому допуску: R–фактор, длина и углы связей и соответствие Рамачандрана. Кроме того, чтобы проверить физическое соответствие модели также использовали Molprobity, чтобы гарантировать полное и правильное определение структуры.
Картирование эпитопов и анализ совмещения
[0387]
Площадь погруженной поверхности антигена для эпитопа рассчитывали как разницу между доступной для растворителя площадью поверхности одного антигена и антигена в комплексе с Fab–фрагментом антитела. И наоборот, площадь погруженной поверхности тяжелых и легких цепей антитела для паратопа рассчитывали как разницу между доступной для растворителя площадью поверхности одного Fab–фрагмента и в комплексе с антигеном. Доступную площадь поверхности рассчитывали методом падающего шарика с применением зонда радиусом 1,4Å.
2
Площадь погруженной поверхности представлена в Å. Проводили совмещение всех комплексов антитело: SIRPα, выбирая SIRPα из каждой структуры и совмещая его атомы углерода, структура комплекса CD47:
SIRPα (вариант V1), используемая для анализа, представляет собой PDB:4CMM. Совмещение и расчет RMSD проводили, используя PYMOL.
Результаты
[0388]
Фиг. 17A
Фиг. 17B
Фиг. 17B
выше
Сначала определяли структуру блокирующего антитела 119 Fab, связанного с SIRP–α, и сравнивали со связыванием CD47 с SIRP–α. Как показано на , антитело 119 и CD47 связывались с одним и тем же эпитопом домена D1 SIRP–α. 56% остатков SIRP–α остатков в эпитопе антитела 119 также были обнаружены в эпитопе CD47, тогда как 75% остатков SIRP–α в эпитопе CD47 также были обнаружены в эпитопе антитела 119. Остатки SIRP–α, принимающие участие во взаимодействии с антителом 119 (согласно определению по изменению площади погруженной поверхности, как описано ), затенены и показаны в виде заполненных моделей на . Также показаны ключевые остатки из паратопа Fab антитела 119 (черные ветки), включая остатки тяжелой цепи N31, S53, D55, Y57, T99, S101 и W102 (N31 не виден при ориентации структуры, приведенной на ) и остатки легкой цепи Y92 и W94 (на основании последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей согласно SEQ ID NO:335 и 97, соответственно).
[0389] Фиг. 18A
Фиг. 18B
иллюстрирует сравнение между связыванием CD47 с доменом D1 SIRP–α и связыванием Fab неблокирующего антитела 136 с доменом D1 SIRP–α. Было обнаружено, что эпитопы связывания SIRP–α для антитела 136 и CD47 являются полностью неперекрывающимися. Остатки SIRP–α, принимающие участие во взаимодействии с антителом 136, затенены и показаны в виде заполненных моделей на . Также показаны ключевые остатки из паратопа Fab антитела 136 (черные ветки), включая остатки тяжелой цепи E56, Y59 и R102 и остатки легкой цепи Y92 и R94 (на основании последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей согласно SEQ ID NO:133 и 134, соответственно).
[0390] Фиг. 19A
Фиг. 19B
иллюстрирует сравнение между связыванием CD47 с доменом D1 SIRP–α и связыванием Fab неблокирующего антитела 3 с доменом D1 SIRP–α. Было обнаружено, что эпитопы связывания SIRP–α для антитела 3 и CD47 также являются полностью неперекрывающимися. Остатки SIRP–α, принимающие участие во взаимодействии с антителом 3, затенены и показаны в виде заполненных моделей на . Также показаны ключевые остатки из паратопа Fab антитела 3 (черные ветки), включая остатки тяжелой цепи R56 и G100 и остатки легкой цепи R24, R26, Y86 и G88 (на основании последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей согласно SEQ ID NO:242 и 243, соответственно).
[0391] Фиг.
19C
Фиг. 19D
иллюстрирует сравнение между связыванием CD47 с доменом D1 SIRP–α и связыванием Fab «отталкивающего» антитела 115 с доменом D1 SIRP–α. Было обнаружено, что эпитоп связывания SIRP–α для антитела 115 прилегает к эпитопу CD47. Хотя было обнаружено, что mAb 115 связывает эпитоп домена D1 SIRP–α, смежный с эпитопом CD47, части эпитопа 115 вероятно перекрываются самим CD47. При сравнении обоих эпитопов было выявлено 2 идентичных остатка, что позволяет предположить, что взаимодействия неперекрывающихся частей каждого эпитопа позволяют Fab 115 и CD47 одновременно связывать SIRP–α. Описанный в данном документе кинетический анализ демонстрирует, что антитело 115 образует временный комплекс с CD47 и SIRP–α, но снижает аффинность CD47 в отношении домена D1 SIRP–α. Остатки SIRP–α, принимающие участие во взаимодействии с антителом 115, затенены на . Также показаны ключевые остатки из паратопа Fab антитела 115, включая остатки тяжелой цепи S31, Y32, N52, Y100 и W102 и остатки легкой цепи K32 и Y92 (на основании последовательностей вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей согласно SEQ ID NO:273 и 274, соответственно).
[0392]
На Фиг. 20B
например,
Фиг. 20A иллюстрирует связывание антител 119, 136, 3 и 115 с SIRP–α в сравнении со связыванием CD47 с SIRP–α. Было обнаружено, что блокирующее антитело 119 связывает полностью неперекрывающийся эпитоп SIRP–α по сравнению с эпитопами SIRP–α обоих неблокирующих антител 136 и 3. Остатки SIRP–α и антитела, которые принимают участие в этих взаимодействиях, обобщены в таблице K1. Остатки SIRP–α, которые были определены как взаимодействующие с CD47, были следующими: 29, 30, 31, 33, 34, 35, 36, 37, 50, 51, 52, 53, 54, 66, 67, 68, 69, 74, 93, 96, 97, 98, 99 и 101 (в соответствии с SEQ ID NO:5).  обобщены данные по эпитопам для связывания CD47 и Fab анти–SIRP–α 119, 136, 3 и 115 с SIRP–α (остатки в соответствии с SEQ ID NO:296) и перечислены изменения в площади погруженной поверхности. Как описано в данном документе, нумерация аминокислотных остатков антитела, используемых для указания паратопа, основана на нумерации в соответствии с аминокислотной последовательностью тяжелой или легкой цепи, а не на,  нумерации остатков антитела по Kabat или Chothia.
Таблица K1.
Эпитопы SIRP–α и паратопы антител для отобранных анти–SIRP–α антител.
<b>Клон антитела</b>
<b>Остатки эпитопа SIRP–α</b>
<b>Остатки паратопа антитела в тяжелой цепи</b>
<b>Остатки паратопа антитела в легкой цепи</b>
119
3, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 35, 36, 38, 50, 52, 53, 54, 62, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 95, 96, 97 и 98 (SEQ ID NO: 296)
30, 31, 32, 33, 50, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 96, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 и 108 (SEQ ID NO:335)
27, 29, 30, 32, 49, 53, 55, 56, 91, 92, 94 и 95 (SEQ ID NO:97)
136
6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 42, 43, 44, 46, 87, 88, 90, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 111, 112, 113, 115 и 116 (SEQ ID NO: 296)
33, 52, 54, 56, 57, 59, 99, 100, 101, 102, 103 и 104 (SEQ ID NO: 133)
27, 30, 32, 92, 93, 94 и 95 (SEQ ID NO: 134)
3
5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 24, 26, 28, 72, 88, 90, 108, 109, 111, 113 и 115 (SEQ ID NO: 296)
31, 50, 52, 53, 54, 56, 58, 99, 100, 101 и 102(SEQ ID NO:242)
24, 25, 26, 45, 86, 87, 88 и 89 (SEQ ID NO:243)
115
17, 39, 40, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 51, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 80, 82, 83, 84, 85, 89, 100 (SEQ ID NO:296)
28, 30, 31, 32, 33, 50, 52, 53, 54, 56, 57, 75, 100, 101, 102(SEQ ID NO:273)
32, 91, 92, 93 и 94 (SEQ ID NO:274)
Таблица K2.
Паратопы анти–SIRP–α антител и расчет площади погруженной поверхности
<b>Название остатка</b>
<b>Номер остатка</b>
<b>Изменение в погруженной поверхности (Å</b><sup><b>2</b></sup><b>)</b>
Тяжелая цепь 119
TRP
102
–228
SER
101
–97,2
THR
99
–70,4
SER
53
–60,9
ASP
55
–59,2
ASN
31
–58,2
TYR
57
–53,5
PHE
32
–43,1
SER
103
–30,7
SER
98
–24,7
SER
30
–19,3
GLY
52
–18,4
VAL
100
–18,4
ASP
105
–17,2
ALA
33
–16,3
GLY
54
–7,8
ASP
108
–6,2
PHE
106
–5,7
GLY
104
–5,6
LYS
96
–5,3
THR
56
–2,9
THR
50
–1,7
Легкая цепь 119
TYR
92
–78
TRP
94
–57,5
ILE
53
–31,5
TYR
49
–30,2
PRO
95
–20,4
GLU
55
–16,6
VAL
29
–12,3
ALA
30
–8,8
ASP
32
–8
TYR
91
–3,5
THR
56
–1,5
GLN
27
–3,4
Тяжелая цепь 136
ARG
102
–114,9
GLU
56
–67,6
TYR
59
–57,3
ARG
104
–46,7
ILE
57
–30,8
ASN
101
–12,6
ASP
33
–12
TYR
103
–10,9
SER
52
–5,1
SER
54
–4
GLU
99
–3,3
ASN
100
–1,1
Легкая цепь 136
ARG
94
–97,6
TYR
92
–95,2
TYR
30
–89
GLN
27
–46,6
TYR
32
–46,5
ASP
93
–19,1
PRO
95
–7,3
Тяжелая цепь 3
ARG
56
–107,9
GLY
100
–62
ASP
31
–34,9
SER
53
–27,1
THR
52
–25,2
SER
101
–22/7
GLY
54
–15,1
TYR
58
–12 2
GLN
50
–7,3
GLY
102
–5,1
PHE
99
–4,5
Легкая цепь 3
ARG
24
–123,6
TYR
86
–62,5
ARG
26
–56,4
GLY
88
–49,1
ASP
87
–22,1
GLY
25
–13,1
ARG
45
–4,8
SER
89
–1,7
Легкая цепь 115
LYS
32
–70,2
TYR
91
–2,9
TYR
92
–85
TYR
93
–22,3
TRP
94
–21,4
Тяжелая цепь 115
SER
28
–35,3
SER
30
–17,2
SER
31
–70,6
TYR
32
–50,2
ALA
33
–1,3
ARG
50
–9,5
ASN
52
–54,4
SER
53
–39,8
GLY
54
–1,4
GLY
56
–34
GLY
57
–11,2
SER
75
–13,3
TYR
100
–53,6
ASP
101
–45,8
TRP
102
–136,4
[0393]
Эти результаты позволили определить поверхности связывания между доменом D1 SIRP–α и различными анти–SIRP–α антителами, а также поверхность связывания между CD47 и SIRP–α. Также они обеспечивают структурное обоснование тому факту, что антитело 119 блокирует связывание между CD47 и SIRP–α (так как они используют перекрывающиеся эпитопы SIRP–α), что антитела 136 и 3 не блокируют связывание (так как их эпитопы не перекрываются с эпитопом CD47) и что антитело 115 «отталкивает» CD47 от связывания SIRP–α (так как они используют только слегка перекрывающиеся эпитопы SIRP–α). Эти исследования позволили дополнительно выделить конкретные остатки антитела и SIRP–α, которые участвуют в каждом взаимодействии.
[0394]
Зная эпитопы связывания SIRPα для неблокирующих (3, 136), блокирующих (119) и отталкивающих (115) антител, определенные методом кристаллографии, можно определить участки связывания для дополнительных анти–SIRPα антител, проводя эпитоп–специфическую сортировку, описанную в примере 5. Например, в случае анти–SIRPα антител, которые конкурируют с неблокирующим антителом 136 за связывание с SIRPα, можно спрогнозировать, что эти антитела будут использовать аналогичные эпитопы связывания, что и 136, по определению методом кристаллографии.
Пример 5: Эпитоп–специфическая сортировка анти–SIRP–α антител
[0395]
Далее описанные выше анти–SIRP–α антитела анализировали в экспериментах по эпитоп–специфической сортировке с SIRP–α, чтобы категоризировать антитела, имеющие общие и отличные эпитопы.
Способы
Эпитоп–специфическая сортировка
[0396]
Фиг. 21A.
Вкратце, эпитоп–специфическую сортировку проводили, как показано на Первое анти–SIRP–α антитело иммобилизовали на чипе, затем вводили человеческий SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5). Затем вводили второе анти–SIRP–α антитело. Если второе антитело было способно связывать комплекс, образуемый между первым анти–SIRP–α антителом и SIRP–α, первое и второе антитела определяли как связывающие разные эпитопы. Если второе антитело не было способно связываться, первое и второе антитела определяли как использующие один эпитоп.
[0397]
Фиг. 21B.
Фиг. 22A и 22B)
Фиг. 22A и 22B).
Фиг. 22A и 22B.
Типовые результаты анализа сортировки с применением анти–SIRP–α антитела (A), иммобилизованного на чипе, и вводом анти–SIRP–α антител (B–F) приведены на Анти–SIRPα антитела (B), (E) и (F) образуют сандвич–структуры с комплексом, на что указывает повышение РЕ в момент времени 60 с (после ввода соответствующих анти–SIRPα антител). Следовательно, они определены как связывающие эпитопы, отличные от анти–SIRPα (А) и указаны белыми прямоугольниками на графике сортировки (. В случае анти–SIRPα антител (C) и (D) они не образуют сандвич–структуры, на что указывает стабильное значение РЕ после ввода соответствующих анти–SIRPα антител. Следовательно, они определены как связывающие тот же эпитоп, что и анти–SIRPα (А) и затенены серым на графике сортировки (Номер клона для лиганда (анти–SIRPα), связанного с чипом, указан в строке, а номер клона для аналитов (анти–SIRPα), проводимых через чип, указан в колонке на  «Х» указаны случаи, когда данные для одной ориентации не согласуются с данными для другой.
[0398]
Сначала анти–SIRPα антитела иммобилизовали на чипах GLC, используя набор для аминного сопряжения от Proteon, как описано в данном документе. Вкратце, для проведения этапа иммобилизации чип GLC активировали EDAC/сульфо–NHS 1:1 (Biorad), разведенном 1/80, в течение 300 с при 25 мкл/мин. Анти–SIRPα антитела разводили до концентрации 80 нМ в 10 мМ натрий–ацетатном буфере, pH 4,5, и иммобилизовали на чипе при 30 мкл/мин в течение 50 с. Чип инактивировали этаноламином в течение 300 с при 25 мкл/мин. После этого сначала вводили SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5) (100 нМ) при 100 мкл/мин в течение 60 с, а после вводили исследуемые анти–SIRPα антитела (100–150 нМ) при 100 мкл/мин в течение 60 с. Поверхности восстанавливали 2:1 об./об. смесью IgG–элюирующий буфер Pierce/4 М NaCl. Полученные в результате сенсограммы использовали для оценки и группировки антител по разным группам в соответствии с их профилями связывания.
Результаты
[0399]
Фиг. 22A и 22B
Проводили сортировку следующих клонов анти–SIRP–α антител: 3, 21, 25, 27, 45, 66, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 132, 135, 136, 137, 149, 161, 162, 173, 194, 209, 213 и 218. Как показано на , результаты продемонстрировали, что каждый тип (Б: блокирование, НБ: не блокирование и О: «отталкивание») связывания анти–SIRP–α антител с человеческим SIRP–α v1 был отсортирован отдельно. В случае отсутствия блокирования анти–SIRP–α антитела можно дополнительно разделить на 4 группы на основании их профилей связывания. Например, анти–SIRP–α антитела 123, 149, 161, 162, 194 и 218 были отнесены к группе 5. Анти–SIRP–α антитела 3, 173, 209 и 213 были отнесены к группе 4. Анти–SIRP–α антитела 136 и 137 были отнесены к группе 2. Анти–SIRP–α антитело 45 имеет уникальный профиль связывания и было отнесено к группе 6.
[0400]
Фиг. 23
Вместе со структурным анализом, описанным в примере 4, эти результаты привели к созданию модели связывания антитела и CD47 с доменом D1 SIRP–α, приведенной на . Например, предполагается, что различные анти–SIRP–α антитела в группах 1, 2, 3 и 4 используют те же эпитопы связывания, что и анти–SIRPα 119, 136, 115 и 3, которые были категоризированы по соответствующим группам. Эпитопы связывания для анти–SIRPα 119, 136, 115 и 3 были получены из кристаллических растворов, как описано в примере 4.
[0401]
Фиг. 22B
Кроме того, предполагается, что анти–SIRPα антитела из группы 5 связываются вблизи анти–SIRPα 136 (группа 2) и 115 (группа 3) соответственно и используют перекрывающиеся эпитопы. Это следует из данных сортировки, показывающих, что анти–SIRPα антитела из группы 5 конкурировали с антителами из групп 2 и 3 за связывание с SIRP–α v1 и не конкурировали с антителами из групп 1, 4 и 6 ().
[0402]
Фиг. 22B
Предполагается, что анти–SIRPα антитело 45 (группа 6) связывается вблизи анти–SIRPα 3 (группа 4) и 136 (группа 2) соответственно, и они используют перекрывающиеся эпитопы. Это следует из данных сортировки, показывающих, что анти–SIRPα 45 конкурировало с антителами из групп 2 и 4 за связывание с SIRP–α v1, и анти–SIRPα 45 не конкурировало с антителами из групп 1, 3 и 5 ().
[0403]
Фиг. 23
Фиг. 11J
Фиг. 11A
Фиг. 11B
Фиг. 11C
Фиг. 11D–11I
дисс.
Модель на  иллюстрирует эпитоп каждой группы антител на основании анализа структуры и сортировки и также демонстрирует перекрытие между различными группами антител с применением типовых клонов антител. Дополнительные анти–SIRP–α антитела, выделенные согласно данному документу, сгруппированы по семейства и группам на основании профилей картирования эпитопов, гомологии последовательностей доменов VH/VL, специфичности связывания с белками SIRP и источников антител. Например, анти–SIRP–α антитела из семейства 1/группы 1 блокируют CD47 и имеют высокую гомологию последовательностей в доменах VH и VL (таблица P и ). VH и VL представляют полностью человеческие последовательности. Анти–SIRP–α антитела из семейства 2/группы 1 также блокируют CD47. Их VH и VL имеют высокую степень гомологии и получены из человеческого и куриного источника соответственно (таблица P, ). Анти–SIRP–α антитела из семейства 3/группы 2 включают не блокирующие CD47 антитела, а их высокогомологичные VH/VL являются полностью человеческими последовательностями (таблица P, ). Анти–SIRP–α антитела из семейства 4/группы 3 включают отталкивающие антитела, а их высокогомологичные VH/VL являются полностью человеческими последовательностями (таблица P, ). Семейство 5 включает не блокирующие CD47 антитела, которые отдельно картированы по группам 4, 5 и 6. Выравнивание последовательностей этих антител и профили их связывания приведены на  и в таблице P, соответственно. Значения K связывания с различными полипептидами SIRP–α, SIRP–β и SIRP–γ соответствующих анти–SIRP–α антител из семейств 1–5 представлены в таблице T.
Пример 6: Варианты анти–SIRP–α антител с мутациями зародышевой линии и подверженности
[0404]
(например,
Некоторые описанные выше анти–SIRP–α антитела являются полностью человеческими антителами, вырабатываемым курами  антитела 119, 135 и 136). Следовательно, некоторые из этих антител могут содержать мутации в последовательностях каркасных областей вариабельного домена по сравнению с последовательностью человеческой зародышевой линии дикого типа за счет генерации этих антител в куриных B–клетках. Следовательно, желательно провести «обратную мутацию» соответствующих остатков, чтобы они совпадали с последовательностью человеческой зародышевой линии, с целью ограничения иммуногенности при исследовании этих анти–SIRP–α антител на людях в качестве потенциальных терапевтических средств. Кроме обратных мутаций до зародышевой линии, CDR и каркасную область антител 119, 135 и 136 анализировали в отношении подверженности горячих точек. Этот анализ позволил определить участки, в которых может требоваться внесение изменений, чтобы ограничить риск вследствие модификаций, которые могут возникать во время производства, хранения и/или разработки лекарства анти–SIRP–α антител.
Способ
Мутации зародышевой линии/подверженности
[0405]
Д
выше.
K связывания соответствующих мутантов зародышевой линии и подверженности с SIRP определяли, используя прямую иммобилизацию на чипе GLC, как описано
[0406]
Антитела дикого и мутантного типа экспрессировали в Expi293 и очищали методом аффинной колоночной хроматографии с протеином А, как было описано ранее. Все антитела экспрессировали в виде Fc человеческих антител IgG1 с мутациями L234A/L235A/G237A/N297A . Мутагенез проводили, используя набор для сайт–направленного мутагенеза QuikChange Lightning в соответствии с инструкциями производителя (номер в каталоге Agilent № 210518).
Результаты
[0407]
Фиг. 24A
Фиг.
24B
(например,
(например,
(например,
Исследовали антитела 119, 135 и 136. Отобранные последовательности антител выравнивали с доступными последовательностями человеческой зародышевой линии, используя IgBlast (NCBI). Например, было идентифицировано всего 7 участков в тяжелой и легкой цепях 119. Как показано на , для остатков, которые обычно не встречались в последовательности человеческой зародышевой линии VH 119  D1, E43 и L112), проводили обратную мутацию для соответствия с последовательностью человеческой зародышевой линии  D1E, E43K и L112Q), оставляя нетронутыми последовательности CDR. В случае VL 119 (, для остатков, которые обычно не встречались в последовательности человеческой зародышевой линии VL 119 (например, F21, R39, E60 и T76), проводили обратную мутацию для соответствия с последовательностью человеческой зародышевой линии  F21L, R39K, E60A и T76S), оставляя нетронутыми последовательности CDR. В контексте данного документа термины «all mut» и «mut» относятся к вариабельным доменам, содержащие все описанные в данном документе мутации зародышевой линии для вариабельного домена конкретного антитела. Нумерация аминокислот, используемая при описании мутаций зародышевой линии и подверженности, основана на последовательной нумерации согласно соответствующим SEQ ID.
[0408]
Кроме того, последовательности антител также анализировали в отношении горячих точек «подверженности», включая остатки, которые могут быть восприимчивыми к окислению, дезамидированию, изомеризации, гидролизу и N–связанному гликозилированию. Потенциальные горячие точки приведены в таблице L. В частности, были созданы варианты M34V и M34L HVR–H1 для VH–домена некоторого количества антител.
Таблица L.
Потенциальные и известные горячие точки
<b>Окисление</b>
M
<b>Дезамидирование</b>
NG
NS
NT
<b>Изомеризация</b>
DG
DS
DT
<b>Гидролиз</b>
DP
<b>Участок (–ки) N–связанного гликозилирования</b>
NXS/T
[0409]
Фиг. 24A
Фиг. 24B
(смотрите
(смотрите
Варианты антитела 119 создавали, используя вариабельные домены тяжелой и/или легкой цепи, несущие обратные мутации зародышевой линии и подверженности. VH–домен мутанта A119 («mut») создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии D1E, E43K и L112Q, а также мутаций M34V в CDR–H1, которые приводят к удалению остатка метионина, который может потенциально окисляться  SEQ ID NO:246 для последовательностей VH). Другой вариант создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии D1E, E43K и L112Q  SEQ ID NO:258 для последовательности VH). Выравнивание между родительскими и вариантными последовательностями приведено на . Легкую цепь мутанта A119 («mut») также создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии F21L, R39K, E60A и T76S; выравнивание между родительской и вариантной последовательностями приведено на .
[0410]
Д
Варианты антитела 119 с мутантной тяжелой и/или легкой цепью сравнивали с родительским антителом 119 с Fc–областью IgG1, несущей мутации L234A, L235A, G237A и N297A (нумерация EU), и родительским антителом 119 с Fc–областью IgG4, несущей мутацию S228P (нумерация EU), в отношении аффинности связывания с человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6) и SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11). Было обнаружено, что мутантные тяжелые и легкие цепи 119 приводят к небольшому снижению аффинности связывания со всеми тремя белками SIRP–α. При этом вариант антитела 119 с мутированными тяжелой и легкой цепями все еще демонстрировал сильное связывание с обоими человеческими белками SIRP–α с K приблизительно 30 нМ (таблица M). По сравнению с родительским антителом выход варианта антитела 119 с мутированными тяжелой и легкой цепями также снизился приблизительно в 4,5 раза (таблица M).
[0411]
Д,
Чтобы исследовать влияние метионина в HVR–H1 на связывание 119 SIRPα, создавали одиночные мутации M34V и M34L в генетическом окружении VH 119 дикого типа («wt») и комбинировали с легкой цепью 119 дикого типа. Как 119 wt/wt_M34V, так и 119 wt/wt_M34L имели сравнимые значения аффинности (K М) в отношении человеческих SIRPα v1 и v2 по сравнению с 119 wt/wt. Это указывает на то, что остаток M34 не является критическим для связывания SIRP–α и может быть замещен с помощью мутаций M34L или M34V. Соответствующие последовательности VH для одиночных мутаций M34V и M34L, созданных в окружении VH 119 дикого типа, представлены SEQ ID NO: 421 и 420 соответственно.
Таблица M.
Д
Аффинность связывания (K, М) вариантов антитела 119 с белками SIRP–α человека и яванского макака
<b>Антитело</b>
<b>VL/VH</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении человеческого v1</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении человеческого v2</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении белка яванского макака</b>
<b>Выход (мг/мл)</b>
119
Mut/mut
3,17E–10
8,75E–11
1,95E–10
1,575
119
wt/mut
2,54E–10
6,94E–11
1,55E–10
5,377
119
mut/wt
2,14E–10
8,64E–11
1,38E–10
3 527
119
wt/wt
1,83E–10
6,82E–11
1,12E–10
7,192
119
Mut/mut_V34M
2,15E–10
6, 6,88E–11
1,18E–10
НИ
AB119
Wt/wt с hIgG4
1,74E–10
5,98E–11
1,16E–10
0,659
НИ=не исследовано
[0412]
Фиг. 25A и 25B
(смотрите
(смотрите
(смотрите
Далее создавали аналогичные варианты антитела 135. Мутантную тяжелую цепь A135 («mut») создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии D1E, R13Q, E16G, E43K и L112Q, а также мутации M34V в CDR–H1, которая приводит к удалению остатка метионина, который может потенциально окисляться  SEQ ID NO:247 для последовательности VH). Аналогичный вариант конструировали без мутации M34V в CDR–H1  SEQ ID NO:259 для последовательности VH). Мутантную легкую цепь A135 («mut») создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии F21L и D60A  SEQ ID NO:248 для последовательности VL). Выравнивание между родительскими и вариантными последовательностями приведено на .
[0413]
Варианты антитела 135 с мутантной тяжелой и/или легкой цепью сравнивали с родительским антителом 135 в отношении аффинности связывания с человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11) и человеческим SIRP–γ v1 (SEQ ID NO: 15). Мутантные тяжелая и легкая цепи 135 имели сравнимую аффинность связывания со всеми четырьмя белками SIRP–α, а также сравнимый выход (таблица N1).
[0414]
Д,
Чтобы исследовать влияние метионина в HVR–H1 135 на связывание SIRP–α, создавали одиночные мутации M34V и M34L в генетическом окружении VH 135 дикого типа и комбинировали с легкой цепью 135 дикого типа. Как 135 wt/wt_M34V, так и 135 wt/wt_M34L имели сравнимые значения аффинности (K М) в отношении человеческих SIRPα v1 и v2 по сравнению с 135 wt/wt. Это указывает на то, что остаток M34 не является критическим для связывания SIRP–α и может быть замещен с помощью мутаций M34L или M34V. Соответствующие последовательности VH для одиночных мутаций M34V и M34L, созданных в окружении VH 135 дикого типа, представлены SEQ ID NO: 423 и 422 соответственно.
Таблица N1.
Д
Аффинность связывания (K, М) вариантов антитела 135 с белками SIRP–α человека и яванского макака и белком SIRP–γ человека
<b>Антитело</b>
<b>VL/VH</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении человеческого α v1</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении человеческого α v2</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении белка яванского макака</b>
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> в отношении человеческого γ v1</b>
<b>Выход (мг/мл)</b>
135
mut/mut
1,92E–10
1,75E–11
1,27E–10
7,33E–10
3,189
135
wt/mut
1,84E–10
1,97E–11
1,25E–10
7,79E–10
2,885
135
mut/wt
1,49E–10
2,66E–11
1,02E–10
5,22E10
2,689
135
wt/wt
1,51E–10
2,90E–11
9,69E–11
5,39E–10
3,264
135
wt/mut_V34M
1,50E–10
1,61E–11
7,94E–11
НИ
НИ
НИ=не исследовано
[0415]
Фиг. 26A и 26B
(смотрите
(смотрите
(смотрите
Создавали аналогичные варианты антитела 136. Мутантную тяжелую цепь A136 («mut») создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии D1E, R13Q, E16R, E43K и L111Q, а также мутации M34V в CDR–H1, которая приводит к удалению остатка метионина, который может потенциально окисляться  SEQ ID NO:249 для последовательности VH). Аналогичный вариант конструировали без мутации M34V в CDR–H1  SEQ ID NO:260 для последовательности VH). Мутантную легкую цепь A136 («mut») создавали с помощью обратных мутаций до зародышевой линии T2I, T12S, T22S и E38Q  SEQ ID NO:250 для VL). Выравнивание между родительскими и вариантными последовательностями приведено на .
[0416]
Фиг. 27A
Д
Д
Д
Как показано на , варианты антитела 136 с мутантной тяжелой и/или легкой цепью сравнивали с родительским («wt») антителом 136 в виде IgG1_AAA_N297A в отношении аффинности связывания с человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO: 11), SIRP–α мышей NOD (SEQ ID NO:8), SIRP–α мышей BL/6 (SEQ ID NO:9) и SIRP–α мышей BALB/c (SEQ ID NO: 10). На Фиг. 27A по оси Y отложено соотношение K mut/K wt для связывания с различными SIRP. Если соотношение=1, это указывало на отсутствие изменения в K по сравнению со связыванием родительского антитела. Соотношение = > 1 и < 1 указывали на снижение и повышение аффинности связывания с SIRPα по сравнению с родительским антителом. Хотя антитело 136 wt (VL)/mut (VH) демонстрировало поведение, аналогичное с wt (VL)/wt(VH), оба варианта с мутированной легкой цепью имели худшую аффинность связывания, что указывает на неприемлемость некоторых мутаций в VL.
[0417]
Фиг. 27B
Фиг. 27A
(смотрите
ниже.
Чтобы проанализировать влияние каждой обратной мутации в легкой цепи на аффинность связывания, конструировали дополнительные варианты антитела 136 и изучали их характеристики в отношении аффинности связывания с SIRP–α мышей BL/6 (SEQ ID NO:9), SIRP–α мышей NOD (SEQ ID NO:8), SIRP–α мышей BALB/c (SEQ ID NO: 10), человеческим SIRP–α v1 (SEQ ID NO:5), человеческим SIRP–α v2 (SEQ ID NO:6), SIRP–α яванского макака (SEQ ID NO:11) и человеческим SIRP–γ v1 (SEQ ID NO: 15). Начиная с окружения «all mutant» (все мутации присутствуют), проводили обратное мутирование для каждой отдельной мутации. Отдельно исследовали мутации I2T, S12T, S22T и Q38E в легких цепях, которые в остальном соответствовали типу «all mutant», как показано на . Мутация I2T в окружении «all mut» систематически демонстрировала сходную аффинность связывания по сравнению с родительским антителом «wt/wt»  SEQ ID NO:251 для I2T в окружении «all mut» и  в отношении выравнивания с родительским и мутантным антителами 136). Однако другие три обратные мутации (S12T, S22T и Q38E) систематически демонстрировали аффинность связывания, более сходную с 136 mut/mut, что указывает на то, что мутация T2I отвечает за снижение аффинности связывания с различными белками SIRP. Дополнительные данные по этим экспериментам приведены в таблице Q
Таблица N2.
Д
Аффинность связывания (K, М) вариантов антител 136 с белками SIRP–α человека, мышей и яванского макака и белком SIRP–γ человека
<b>V1</b>
<b>V2</b>
<b>NOD</b>
<b>BL6</b>
<b>BALBc</b>
<b>Яванский макак</b>
<b>Sirpg</b>
<b>Легкая цепь/тяжелая цепь</b>
<b>SEQ ID NO:5</b>
<b>SEQ ID </b>NO:6
<b>SEQ ID NO:8</b>
<b>SEQ ID NO:9</b>
<b>SEQ ID NO: 10</b>
<b>SEQ ID NO: 11</b>
<b>SEQ </b>ID <b>NO: 15</b>
136
MutRv_I2T/mut
7,17E–10
1,86E–09
6,80E–10
1,53E–08
4,22E–10
2,33E–09
4,00E–08
136
MutRv_S12T/mt
4,88E–09
1,05E–08
2,85E–09
1,63E–08
2,09E–09
7,99E–09
6,67E–08
136
MutRv_S22T/mut
4,99E–09
8,28E–09
2,44E–09
1,33E–08
1,64E–09
6,84E–09
6,17E–08
136
MutRv_Q38E/mut
6,18E–09
1,25E–08
5,98E–09
3,3 IE– 08
2,98E–09
1,04E–08
1,93E–08
136
MutRv_I2T/mut_V34M
5,51E–10
1,74E–09
5,96E–10
1,38E–08
3,61E–10
2,11E–09
3,35E–08
136
Mut/mut
7,32E–09
1,27E–08
5,42E–09
2,16E–08
2,67E–09
9,48E–09
2,88E–08
136
Wt/wt
9,72E–10
2,54E–09
8,21E–10
1,64E–08
4,58E–10
2,83E–09
3,36E–08
Пример 7: Гуманизация анти–SIRP–α антител
[0418]
В вышеприведенных примерах описано создание анти–SIRP–α антител, имеющих полностью человеческую тяжелую цепь и куриную легкую цепь. Чтобы гуманизировать куриные легкие цепи, куриные HVR этих антител прививали в различные каркасные области человеческой лямбда легкой цепи.
Способы
Гуманизация
[0419]
Антитела гуманизировали, используя стандартные методы. Для определения выхода выработки одинаковый объем культур Expi293, экспрессирующих анти–SIRPα антитела, очищали методом аффинной хроматографии на с протеином А. После замены буфера на ФСБ определяли концентрацию белка по A280 и выражали в мг/мл.
Результаты
[0420]
(смотрите
Чтобы сконструировать гуманизированные легкие цепи, каждую последовательность куриной легкой цепи выравнивали относительно наиболее близкой каркасной области человеческой зародышевой линии с помощью IgBLAST (NCBI). Согласно этому анализу, наибольшее совпадение с каркасной областью куриной лямбда легкой цепи имеет человеческая IGLV3  SEQ ID NO:314–317).
[0421]
Смотрите
et al
Proc. Natl Acad. Sci.
et al.
Protein Eng. Des. Sel
et al
Protein Eng. Des. Sel
В другом подходе проводили литературный поиск, чтобы определить оптимальные последовательности каркасной области человеческой лямбда легкой цепи для спаривания с человеческими последовательностями VH3 (человеческой тяжелой цепи, используемой для этих антител). На основании этого анализа посчитали, что человеческая VH3 будет хорошо спариваться с человеческими IGLV1 и IGLV2.  Glanville, J.  (2009)  106:20216–20221; Lloyd, C.  (2009) 22:159–168; и Jayaram, N.  (2012)  25:523–529.
[0422]
Таким образом, было создано шесть гуманизированных легких цепей: Hum1 (AB25 HVR+человеческая каркасная область IGLV3), Hum2 (AB25 HVR+человеческая каркасная область IGLV1), Hum3 (AB66 HVR+человеческая каркасная область IGLV3), Hum4 (AB66 HVR+человеческая каркасная область IGLV1), Hum5 (AB25 HVR+человеческая каркасная область IGLV2) и Hum6 (AB21 HVR+человеческая каркасная область IGLV1). Последовательности полученных в результате вариабельных доменов легкой цепи приведены в таблице О1.
Таблица O1.
Исследованные последовательности вариабельных доменов гуманизированной легкой цепи Последовательности HVR выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
<b>Название</b>
<b>LC HVR</b>
<b>Каркасная область человеческой LC</b>
<b>Последовательность</b>
Hum1
AB25
IGLV3
<img file="00000315.jpg" he="16" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum2
AB25
IGLV1
<img file="00000316.jpg" he="16" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum3
AB66
IGLV3
<img file="00000317.jpg" he="17" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum4
AB66
IGL V1
<img file="00000318.jpg" he="16" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
Hum5
AB25
IGLV2
<img file="00000319.jpg" he="17" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>Hum6</b>
AB21
IGLV1
<img file="00000320.jpg" he="17" wi="89" img-content="undefined" img-format="jpg" />
[0424]
Фиг. 28
Каждую из 6 гуманизированных легких цепей спаривали с каждой из четырех тяжелых цепей (полученных из AB21, AB25, AB27 и AB66), создавая 24 уникальных антитела. Антитела экспрессировали, как описано выше. Неожиданно, последовательности человеческой каркасной области IGLV1 приводили к снижению экспрессии антител вне зависимости от тяжелой цепи. Это относится ко всем вариантам спаривания тяжелой цепи с Hum2, Hum4 и Hum6 (за исключением проведения спаривания с тяжелой цепью из AB66). Результаты обобщены на под заголовком «выход белка» (строка 1). В противоположность этому, антитела с легкими цепями, содержащими человеческие каркасные области IGLV2 и IGLV3 (Hum 1, Hum3, Hum5), демонстрировали более высокие уровни экспрессии вне зависимости от тяжелой цепи.
[0425]
Фиг. 28
(например,
(например,
ниже.
После этого изучали характеристики отобранных антител в отношении связывания с различными белками SIRP  с человеческим SIRP–α v1, человеческим SIRP–α v2, SIRP–α яванского макака, SIRP–α мышей BALB/c и человеческим SIRP–γ). Эти данные также обобщены на . Отобранные гуманизированные легкие цепи приводили к снижению в связывании с одним или более антигенами. Например, было обнаружено, что человеческая каркасная область IGLV3 (представленная Hum1 и Hum3) позволяла получать превосходные уровни выработки антител, не влияя на аффинность связывания. Например, вариабельные домены легкой цепи с каркасными областями IGLV3 и последовательностями HVR любого из антитела 25 или антитела 66 (представленные Hum1 и Hum 3 соответственно) хорошо сочетались с различными тяжелыми цепями  вариабельными доменами тяжелых цепей из антител 21, 25, 27 и 66) и демонстрировали сходное связывание с разными белками SIRP–α и SIRP–γ. В противоположность этому, было обнаружено, что каркасные области IGLV1 и IGLV2 (представленные Hum2, Hum4, Hum5 и Hum6) характеризовались более низкой экспрессией и/или сниженным связыванием с SIRP при спаривании с тяжелыми цепями из антител 21, 25, 27 и 66. Дополнительные данные по связыванию, полученные в этих экспериментах, приведены в таблице R  Для дополнительного исследования была отобрана человеческая каркасная область IGLV3.
[0425]
Фиг. 29
Фиг. 29
Фиг.
ниже.
выше
Другой целью гуманизации этих антител были последовательности антител, имеющие идентичность с последовательностями легкой цепи/тяжелой цепи человеческой зародышевой линии, большую или равную 85%. Был создан дополнительный VL–домен Hum9 и Hum8 на основе VL–домена Hum1. По сравнению с Hum1, Hum9 содержит 4 аминокислотные замены вблизи или в HVR–L1 и –L2, которые повышают человекоподобность легкой цепи до идентичности с последовательностью человеческой легкой цепи, большей или равной 85% (). По сравнению с Hum1, Hum8 содержит 5 аминокислотных замен, соответственно вблизи или в HVR–L1 и –L2, которые повышают человекоподобность легкой цепи до идентичности с последовательностью человеческой легкой цепи, большей или равной 85% (). VL Hum1, Hum8 и Hum9 при спаривании с тяжелой цепью all_mut_AB21 (несущей мутации зародышевой линии) вырабатывали анти–SIRPα антитела, которые связывали человеческий v1 с аффинностью, равной или большей 10 пМ (таблица S). Аналогично, когда VL Hum1, Hum8 и Hum9 спаривали с тяжелой цепью all_mut_AB25 (несущей мутации зародышевой линии), анти–SIRPα антитела связывались с человеческим v1 с аффинностью, равной или большей 10 пМ. Дополнительные данные по связыванию, полученные в этих экспериментах, приведены в таблице S  Эти легкие цепи можно взаимозаменяемо комбинировать с VH–доменами антител 21, 25 и 27 (а также их вариантов, которые были модифицированы, как описано  для антител 119, 135 и 136; 30).Не ограничиваясь теорией, считается, что вышеописанный процесс гуманизации можно применять в отношении легкой цепи любого антитела из семейства 2 (группа 1).
Пример 8:
Индукция фагоцитоза и активация дендритных клеток анти–SIRP–α
антителами
[0426]
(например,
Далее различные анти–SIRP–α антитела, представляющие разные модели связывания с SIRP–α  блокирующие, неблокирующие и «отталкивающие» антитела) исследовали в анализе фагоцитоза.
Анализ связывания CD47–Fc
[0427]
CD47–Fc конъюгировали с Alexa Fluor 647 (AF647), используя набор для микромасштабного мечения белков Alexa Fluor 647 (Thermo Fisher Scientific). В 96–луночных полипропиленовых планшетах (Corning) суспендировали 100000 МКПК в 100 мкл 0,25 мкМ AF647–меченого CD47–Fc и 1 мкл анти–CD14 PE антитела (Biolegend) в буфере FACS. Клетки инкубировали на льду в течение 30 минут, промывали в буфере FACS и инкубировали в 10–кратных серийных разведениях анти–SIRP–α антител, от 1,25 мкМ до 25 мкМ. Клетки инкубировали на льду в течение 30 минут, промывали в буфере FACS и фиксировали в 75 мкл 0,5–процентного формальдегида. Клетки анализировали на FACS Canto II (BD Biosciences) с последующим анализом данных с помощью Flowjo 10.7 (Treestar). Среднее геометрическое значение интенсивности флуоресценции сигнала CD47–Fc определяли в популяции CD14–положительных моноцитов.
Анализ активации дендритных клеток
[0428]
Анализ активации дендритных клеток проводили, как описано в другом месте данного документа. Вкратце, мышей Balb/c (n=3/группа) внутривенно инъецировали контрольным крысиным антимышиным анти–SIRP–α антагонистическим антителом (клон p84), человеческим контрольным IgG1, различными анти–SIRP–α антителами, мышиным контрольным IgG или базовым раствором (ФСБ) при 10 мг/кг. Через пять часов после инъекции вырезали селезенки и обрабатывали до одноклеточной суспензии путем механической диссоциации. Измерения уровня маркеров активации CD86, ГКГСII и CCR7 на дендритных клетках CD4+ селезенки проводили методом проточной цитометрии.
Анализ клеточной адгезии
[0429]
CD47KO
CD47KO
CD47KO
Анализ адгезии проводили, используя изогенные клетки с отсутствием или экспрессией человеческого CD47. Хомячьи клетки CHO с нокаутом CD47 (CHO) создавали, используя технологию CRISPR. Изогенные клетки, экспрессирующие человеческий CD47, создавали посредством временной трансфекции человеческого CD47 в CHO. Через 24 часа после трансфекции трансфицированные человеческим CD47 клетки CHO (4×105) повторно высевали в обработанные 24–луночные планшеты для тканевого культивирования и оставляли для повторного присоединения и достижения конфлюэнтности на ночь при 37°C.
[0430]
CD47 KO
hCD47+
Человеческие мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) отделяли от периферической крови здоровых доноров посредством центрифугирования в градиенте Ficoll. Клетки CD3+ и CD14+ выделяли из МКПК с помощью негативной селекции, используя магнитные гранулы. Выделенные клетки CD3+ и CD14+ (5×106) предварительно инкубировали с антителами Hum1/AB21mutall, Hum9/AB21mutall или 136 wt/mut, содержащими мутированный человеческий IgG1 (L234A L235A G237A и N297A) (20 мкг/мл), при 37°C в течение 20 минут перед высеванием на клетки CHO и CHOи оставляли для прикрепления на 1 час при 37°C. Не прикрепившиеся клетки удаляли путем пятикратной аккуратной промывки ФСБ. Прикрепившиеся клетки отсоединяли трипсином и нейтрализовали 10% ФБС. Клетки переносили в 96–луночный планшет и 2 раза промывали ФСБ+0,5% БСА, после чего метили клеточную поверхность конъюгированными с флуорохромом антителами к человеческим CD3, CD4, CD8 и CD14. Добавляли счетные гранулы и проводили количественное определение клеточной адгезии, используя проточный цитометр BD Canto II. Анализ данных проточной цитометрии проводили, используя Flowjo.
Результаты
[0431]
Фиг. 31
Исследовали пять антител, которые «отталкивали» CD47 от связывания с SIRP–α, в отношении их влияния на фагоцитоз HER2(+) клеток OE19 макрофагами M2 в комбинации с анти–HER2 антителом трастузумабом (). Было обнаружено, что все 5 «отталкивающих» антител усиливают индуцированный трастузумабом фагоцитоз.
[0432]
Фиг. 32
Далее исследовали пять антител, которые не блокируют связывание CD47 с SIRP–α, в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Было обнаружено, что все неблокирующие антитела усиливают индуцированный цетуксимабом фагоцитоз.
[0433]
Фиг.
33А
Фиг.
33B
Фиг. 33C
выше
Далее исследовали вышеописанные гуманизированные антитела в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Было обнаружено, что все гуманизированные антитела усиливают индуцированный цетуксимабом фагоцитоз. Дополнительные варианты антитела 136 (описанные ) исследовали в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Все варианты антитела 136 усиливали индуцированный цетуксимабом фагоцитоз, но в разной степени. Дополнительные гуманизированные антитела, описанные выше (антитела 25 и 27 с вариантными тяжелыми цепями в комбинации с легкими цепями Hum1 или Hum9) исследовали в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Было обнаружено, что все гуманизированные антитела усиливают индуцированный цетуксимабом фагоцитоз.
[0434]
Фиг. 34
2
2
Чтобы изучить влияние Fc–областей анти–SIRP–α антитела на фагоцитоз, исследовали два неблокирующих антитела в виде полноразмерных антител или фрагментов F(ab) в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Эти результаты показывают, что неблокирующие антитела теряют способность индуцировать фагоцитоз в виде фрагментов F(ab), что позволяет предположить, что Fc–область этого класса антител необходима для индукции фагоцитоза.
[0435]
Фиг. 35
выше
Три варианта блокирующего антитела 119 (описанные ) исследовали в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Результаты демонстрируют, что все три варианта усиливали индуцированный цетуксимабом фагоцитоз.
[0436]
Фиг.
36
выше
Два варианта блокирующего антитела 135 (описанные ) исследовали в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Результаты демонстрируют, что оба варианта усиливали индуцированный цетуксимабом фагоцитоз.
[0437]
Фиг. 37
выше
Дополнительные неблокирующие антитела (описанные ) исследовали в отношении их влияния на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 в комбинации с анти–EGFR антителом цетуксимабом (). Было обнаружено, что все неблокирующие антитела усиливают индуцированный цетуксимабом фагоцитоз.
[0438]
Фиг.
38A–38B),
in vivo
(смотрите, например,
et al
Immunity
in vivo
Далее, различные анти–SIRP–α антитела исследовали в отношении их влияния на активацию дендритных клеток (включая известное анти–SIRP–α антитело p84  Tangsheng, Y.  (2015)  433:1–12). Неспособность задействовать рецептор мышиного SIRP–α на дендритных клетках селезенки посредством связывания CD47 приводила к активации дендритных клеток селезенки. Контрольное анти–SIRP–α антагонистическое антитело p84 активировало дендритные клетки селезенки при внутривенной инъекции мышам. Исследовали неблокирующие анти–SIRP–α антитела (AB136b, AB3b и AB136 wt/mut) и блокирующие анти–SIRP–α антитела (Hum1/AB21mutall, Hum8/AB21mutall и Hum9/AB21mutall) , чтобы определить, приводят ли они к активации дендритных клеток. Согласно определению по экспрессии CD86 и ГКГСII, как блокирующие, так и неблокирующие SIRP–α антитела индуцировали активацию дендритных клеток. Эти результаты позволяют предположить, что блокирующие и неблокирующие анти–SIRP–α антитела индуцируют активацию дендритных клеток.
[0439]
(смотрите
Д
Было создано два варианта антитела 218, 218–Hum13/VH_wt и 218–Hum14/VH_wt, путем экспрессии гуманизированных легких цепей (Hum13 и Hum14 соответственно) с тяжелой цепью антитела 218 дикого типа. В Hum13 используется человеческая каркасная область IGLV2, тогда как в Hum14 используется человеческая каркасная область IGLV3  SEQ ID NO:333 и 334 для последовательностей VL Hum13 и Hum14 соответственно). Оба клона демонстрировали более низкую аффинность связывания с v1 и v2 (K составляет от –29,3 до 53,1 нМ), как показано в таблице O2.
Таблица O2.
Д
Аффинность связывания (K, М) антитела 218 и вариантов 218 в отношении человеческого SIRP–α v1 и v2.
<b>K</b><sub><b>Д</b></sub><b> (М)</b>
<b>v1</b>
<b>v2</b>
<b>ALX135</b>
<b>ALX269</b>
AB218a
1,60E–10
3,23E–10
218–Hum13/VH_wt
2,93E–08
3,38E–08
218–Hum14/VH_wt
3,45E–08
5,31E–08
[0440]
Фиг. 39A
Д
Оба антитела исследовали в анализе фагоцитоза в комбинации с цетуксимабом в клетках DLD–1. Интересно, что ни один гуманизированный вариант не был способен усиливать фагоцитоз больше, чем родительское антитело AB218a (). Не ограничиваясь теорией, эти результаты дают основание предположить, что антитела с K в диапазоне приблизительно 30–50 нМ или ниже могут быть более эффективными в отношении индукции фагоцитоза, чем антитела, связывающиеся с более слабой аффинностью.
[0441]
Фиг. 39B
Фиг.
39C).
Фиг. 39D
Далее типовые блокирующие, неблокирующие и отталкивающие анти–SIRP–α антитела исследовали в отношении индукции фагоцитоза в виде отдельных агентов. Сначала исследовали три антитела, которые блокируют связывание CD47 с SIRP–α, AB119a, AB120a и AB122a, в отношении их влияния, как отдельных агентов, на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2 (как описано выше). Было обнаружено, что все блокирующие антитела индуцируют фагоцитоз в виде отдельных агентов (). Потом исследовали два антитела, которые не блокируют связывание CD47 с SIRP–α, AB136a и AB137a, в отношении их влияния в виде отдельных агентов на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2. Было обнаружено, что все неблокирующие антитела индуцируют фагоцитоз в виде отдельных агентов (И наконец, исследовали пять «отталкивающих» SIRP–α антител, AB115a, AB116a, AB117a, AB118a и AB132a, в отношении их влияния в виде отдельных агентов на фагоцитоз EGFR(+) клеток DLD–1 макрофагами M2. Было обнаружено, что все «отталкивающие» антитела индуцируют фагоцитоз в виде отдельных агентов ().
Пример 9: Синергетическое противоопухолевое действие комбинации блокирующих и неблокирующих анти–SIRP–α антител с ингибированием пути PD–L1/PD–1
Способы
In vivo противоопухолевая активность
[0442]
3
3
В случае сингенной модели карциномы CT26 толстой кишки мышей клетки CT26 подкожно имплантировали мышам BALB/c и рандомизировали животных по группам (8–9 мышей/группа). Группы обработки включали применение базового раствора (ФСБ), AB25b, анти–PD–L1 и AB25b/анти–PD–L1. Анти–PD–L1 создавали путем слияния VH– и VL–домена атезолизумаба с Fc–областью мышиного IgG1, несущей мутацию N297A. Все анти–SIRP–α также содержали Fc–область мышиного IgG1, несущую мутацию N297A. Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 75–80 мм, на 7 или 8 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали дозами 3 мг/кг или 10 мг/кг анти–SIRP–α антител дважды в неделю в течение трех недель и тремя дозами 3 мг/кг анти–PD–L1 через пять суток. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
[0443]
3
3
В случае сингенной модели карциномы MC38 толстой кишки мышей клетки MC38 подкожно имплантировали мышам C57BL/6 и рандомизировали животных по группам (8–10 мышей/группа). Группы обработки включали применение базового раствора (ФСБ), AB25b, AB136b, анти–PD1 (клон RMP1–14, BioXCell), AB136b/анти–PD1 и AB25b/анти–PD1. Все анти–SIRPα антитела содержали Fc–область мышиного IgG1, несущую мутацию N297A, за исключением AB25c Обработку начинали, когда опухоли достигали в среднем 60–65 мм, на 7 сутки после имплантации. Мышей внутрибрюшинно (В/Б) дозировали дозами 10 мг/кг анти–SIRP–α дважды в неделю в течение трех недель и тремя дозами 2 мг/кг анти–PD1. Животных умерщвляли, когда опухоли достигали объема ~2000 мм.
Результаты
[0444]
Фиг. 40
3
3
Исследовали противоопухолевую активность анти–SIRP–α антитела AB25b, одного и в комбинации с анти–PD–L1 антителом, в сингенной модели карциномы CT26 толстой кишки мышей. Как показано на , введение AB25b при 10 мг/кг в комбинации с анти–PD–L1 при 3 мг/кг замедляло образование опухоли по сравнению с обработкой каждым отдельным агентом или контрольным раствором. На 27 сутки исследования в группе комбинированной обработки было шесть мышей с объемом опухолей менее 600 мм по сравнению с двумя, двумя и двумя мышами с объемом опухолей менее 600 мм в группах обработки базовым раствором, одним анти–PD–L1 агентом и одним анти–SIRP–α агентом соответственно.
[0445]
Фиг. 41
3
3
3
Далее исследовали противоопухолевую активность блокирующего анти–SIRP–α антитела AB25b и неблокирующего анти–SIRP–α антитела AB136b, по отдельности и в комбинации с анти–PD–1 антителом, в сингенной модели карциномы MC38 толстой кишки мышей. Как показано на , комбинация AB25b или AB136b (при 10 мг/кг) с анти–PD–1 при 5 мг/кг замедляла образование опухоли по сравнению с обработкой каждым отдельным агентом или контрольным раствором. На 27 сутки исследования в группе комбинированной обработки AB25b/PD–1 было семь мышей с объемом опухолей менее 600 мм, а в группе комбинированной обработки AB136b/PD–1 было шесть мышей с объемом опухолей менее 600 мм по сравнению с одной, пятью, двумя и одной мышами с объемом опухолей менее 600 мм в группах обработки базовым раствором, одним анти–PD–1 агентом, одним агентом AB25b и одним агентом AB136b, соответственно.
[0446]
Обобщенные данные по описанным в данном документе антителам и их свойства приведены в таблице P. Дополнительные данные по связыванию приведены в таблице T.
[0447]
Хотя вышеприведенное изобретение было довольно подробно описано в качестве иллюстрации и примера в целях ясности понимания, описания и примеры не следует воспринимать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Содержание всей патентной и научной литературы, цитируемой в данном документе, явным образом и в полном объеме включено посредством ссылки.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ALEXO THERAPEUTICS INC.
PONS, Jaume
SIM, Bang Janet
Wan, Hong
KUO, Tracy Chia-Chien
KAUDER, Steven Elliot
HARRIMAN, William Don
IZQUIERDO, Shelley
<120> АНТИТЕЛА ПРОТИВ СИГНАЛ-РЕГУЯТОРНОГО
БЕЛКА АЛЬФА И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
<130> 757972000140
<140> Права не переданы
<141> Одновременно с настоящим документом
<150> US 62/515,480
<151> 2017-06-05
<150> US 62/397,752
<151> 2016-09-21
<160> 426
<170> FastSEQ for Windows, версия 4.0
<210> 1
<211> 348
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 1
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
115                 120                 125
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
130                 135                 140
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
145                 150                 155                 160
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
165                 170                 175
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
180                 185                 190
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
195                 200                 205
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
210                 215                 220
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
225                 230                 235                 240
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
245                 250                 255
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
260                 265                 270
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
275                 280                 285
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
290                 295                 300
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
305                 310                 315                 320
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
325                 330                 335
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
340                 345
<210> 2
<211> 347
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 2
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
115                 120                 125
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
130                 135                 140
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
145                 150                 155                 160
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
165                 170                 175
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
180                 185                 190
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
195                 200                 205
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
210                 215                 220
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
225                 230                 235                 240
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
245                 250                 255
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
260                 265                 270
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
275                 280                 285
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
290                 295                 300
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
305                 310                 315                 320
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
325                 330                 335
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
340                 345
<210> 3
<211> 346
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 3
Lys Glu Leu Lys Val Thr Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Val Leu Asn Cys Thr Leu Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Lys Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Thr Gly Glu His Phe Pro Arg Val Thr Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Ala Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Lys Gly
85                  90                  95
Pro Ser Glu Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val
100                 105                 110
Tyr Val Leu Ala Lys Pro Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
115                 120                 125
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
130                 135                 140
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
145                 150                 155                 160
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
165                 170                 175
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
180                 185                 190
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
195                 200                 205
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
210                 215                 220
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
225                 230                 235                 240
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
245                 250                 255
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
260                 265                 270
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
275                 280                 285
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
290                 295                 300
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
305                 310                 315                 320
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
325                 330                 335
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340                 345
<210> 4
<211> 342
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 4
Thr Glu Val Lys Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Val Leu Asn Cys Thr Leu Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Arg Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Gln Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Thr Thr Glu His Phe Pro Arg Val Thr Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Ala Thr Lys Arg Ser Asn Leu Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Arg Gly
85                  90                  95
Ser Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val Tyr Val
100                 105                 110
Leu Ala Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
115                 120                 125
Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
130                 135                 140
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
145                 150                 155                 160
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
165                 170                 175
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
180                 185                 190
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
195                 200                 205
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
210                 215                 220
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
225                 230                 235                 240
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
245                 250                 255
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
260                 265                 270
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
275                 280                 285
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
290                 295                 300
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
305                 310                 315                 320
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
325                 330                 335
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340
<210> 5
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 5
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 6
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 6
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 7
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 7
Lys Glu Leu Lys Val Thr Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Val Leu Asn Cys Thr Leu Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Lys Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Thr Gly Glu His Phe Pro Arg Val Thr Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Ala Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Lys Gly
85                  90                  95
Pro Ser Glu Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val
100                 105                 110
Tyr Val Leu Ala Lys Pro Ser
115
<210> 8
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 8
Thr Glu Val Lys Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Val Leu Asn Cys Thr Leu Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Arg Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Gln Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Thr Thr Glu His Phe Pro Arg Val Thr Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Ala Thr Lys Arg Ser Asn Leu Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Arg Gly
85                  90                  95
Ser Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val Tyr Val
100                 105                 110
Leu Ala Lys
115
<210> 9
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 9
Lys Glu Leu Lys Val Thr Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Val Leu Asn Cys Thr Leu Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Arg Trp Tyr Arg Gly Val Gly Pro Ser Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Ala Gly Glu Tyr Val Pro Arg Ile Arg Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Ala Asp Ala Gly Ile Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Lys Gly
85                  90                  95
Ser Ser Glu Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val
100                 105                 110
Tyr Val Leu Ala Lys
115
<210> 10
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Mus musculus
<400> 10
Thr Glu Val Lys Val Thr Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala
1               5                  10                  15
Gly Asp Ser Thr Ile Leu Asn Cys Thr Val Thr Ser Leu Leu Pro Val
20                  25                  30
Gly Pro Ile Arg Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ser Phe Thr Gly Glu His Phe Pro Arg Ile Arg Asn Val Ser Asp
50                  55                  60
Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val
65                  70                  75                  80
Thr Pro Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Arg Gly
85                  90                  95
Ser Ser Glu Pro Asp Thr Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Val
100                 105                 110
Tyr Val Leu Ala Lys
115
<210> 11
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Macaca fascicularis
<400> 11
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Thr Leu Asn Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Val Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr His Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Pro Val Ser
50                  55                  60
Asp Pro Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Val Glu Leu Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 12
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Macaca fascicularis
<400> 12
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Asp Ser Ala Thr Leu Asn Cys Thr Val Ser Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Leu Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Ala Val Ser
50                  55                  60
Asp Pro Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Val Glu Leu Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 13
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 13
Glu Asp Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Thr Leu Arg Cys Ala Met Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Met Trp Phe Arg Gly Ala Gly Ala Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Leu Thr Lys Arg Asn Asn Leu Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 14
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 14
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Ile Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Thr Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp His Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 15
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 15
Glu Glu Glu Leu Gln Met Ile Gln Pro Glu Lys Leu Leu Leu Val Thr
1               5                  10                  15
Val Gly Lys Thr Ala Thr Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Leu Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Val Leu Trp Phe Arg Gly Val Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Ser
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Val Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Glu Asn Val Glu Phe Lys Ser Gly Pro Gly Thr Glu Met
100                 105                 110
Ala Leu Gly Ala Lys Pro Ser
115
<210> 16
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 16
Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe Ser Asn
1               5                  10                  15
Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala Gln Asn
20                  25                  30
Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp Ile Tyr
35                  40                  45
Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp Phe Ser
50                  55                  60
Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr Thr Cys
85                  90                  95
Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu Leu Lys
100                 105                 110
Tyr Arg Val Val Ser
115
<210> 17
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 17
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 18
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 18
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 19
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 19
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 20
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 20
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 21
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 21
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 22
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 22
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 23
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 23
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 24
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 24
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 25
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 25
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 26
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 26
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 27
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 27
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 28
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 28
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 29
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 29
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 30
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 30
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 31
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 31
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 32
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 32
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 33
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 33
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 34
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 34
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 35
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 35
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Thr Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 36
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 36
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 37
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 37
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 38
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 38
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 39
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 39
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 40
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 40
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 41
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 41
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 42
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 42
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 43
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 43
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 44
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 44
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 45
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 45
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Val Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Ile Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 46
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 46
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 47
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 47
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 48
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 48
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 49
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 49
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 50
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 50
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 51
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 51
Glu Glu Glu Leu Gln Ile Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ile Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Glu Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Thr Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 52
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 52
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Phe Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Arg Gln Gly Pro Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Val Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 53
<211> 484
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 53
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Asn Asn Ala Tyr Gly Trp Phe
20                  25                  30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Asp Asn
35                  40                  45
Gly Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
50                  55                  60
Asp Ser Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Arg Val Gln Ala Glu Asp Glu
65                  70                  75                  80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Ala Asp Asn Ser Gly Ala Gly Val Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser
100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr
115                 120                 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser
130                 135                 140
Leu Val Cys Lys Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Ala Met Asn
145                 150                 155                 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Gly Ile
165                 170                 175
Ser Ser Asp Gly Arg Phe Thr Tyr Tyr Gly Ala Ala Val Gln Gly Arg
180                 185                 190
Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu
195                 200                 205
Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Lys Asn
210                 215                 220
Gly Gly Cys Gly Ser Gly Gly Asp Leu Asp Cys Ile Asp Ala Trp Gly
225                 230                 235                 240
His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser
245                 250                 255
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
260                 265                 270
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
275                 280                 285
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
290                 295                 300
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
305                 310                 315                 320
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
325                 330                 335
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
340                 345                 350
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
355                 360                 365
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
370                 375                 380
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
385                 390                 395                 400
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
405                 410                 415
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
420                 425                 430
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
435                 440                 445
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
450                 455                 460
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
465                 470                 475                 480
Pro Gly Lys Val
<210> 54
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 54
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Ser Tyr Tyr Ser Trp His Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Ser Val Ile Tyr Ser Asn Thr
35                  40                  45
Asp Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Ser Ser Ser Asp Ser Asp Ile Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser
100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr
115                 120                 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Gly Leu Ser
130                 135                 140
Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asn Phe Asn Met Ala
145                 150                 155                 160
Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ala Glu Ile
165                 170                 175
Ser Asp Thr Gly Ser Thr Pro Tyr Tyr Gly Ser Ala Val Gln Gly Arg
180                 185                 190
Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu
195                 200                 205
Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Asn
210                 215                 220
Phe Gly Ser Ser Val Ser Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu
225                 230                 235                 240
Val Ile Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 55
<211> 491
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 55
Ala Val Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr His Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Asn Glu Asp Asn Asn Tyr Val Ala Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser Gly Gly
100                 105                 110
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr Leu Asp
115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val
130                 135                 140
Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Met Gly Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Tyr Ala
165                 170                 175
Ser Gly Ser Ser Thr Asp Thr Asp Thr Thr Tyr Gly Pro Ala Val Ala
180                 185                 190
Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu
195                 200                 205
Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala
210                 215                 220
Lys Ala Ala Gly Gly Cys Ser Thr His Thr Cys Thr Ala Tyr Ile Ala
225                 230                 235                 240
Asp Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
245                 250                 255
Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
260                 265                 270
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
275                 280                 285
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
290                 295                 300
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
305                 310                 315                 320
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
325                 330                 335
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
340                 345                 350
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
355                 360                 365
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
370                 375                 380
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
385                 390                 395                 400
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
405                 410                 415
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
420                 425                 430
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
435                 440                 445
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
450                 455                 460
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
465                 470                 475                 480
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485                 490
<210> 56
<211> 489
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 56
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ser Ala His Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Tyr
35                  40                  45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ser Ala Asp Ser Ser Asn Pro Ala Ile
85                  90                  95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser
100                 105                 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val
115                 120                 125
Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Arg Ala Leu
130                 135                 140
Ser Leu Val Cys Arg Gly Ser Gly Phe Ser Ile Ser Ser Tyr Asn Met
145                 150                 155                 160
Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Ile Ala Ser
165                 170                 175
Ile Gly Ser Asp Gly Ser Ser Thr His Tyr Ala Pro Ala Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Ala Thr Ile Thr Arg Asp Val Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln
195                 200                 205
Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Lys
210                 215                 220
Asp Ala Tyr Gln Cys Ser Tyr Ala Thr Cys Asn Asp Tyr Leu Asp Thr
225                 230                 235                 240
Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser Leu
245                 250                 255
Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
260                 265                 270
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
275                 280                 285
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
290                 295                 300
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
305                 310                 315                 320
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
325                 330                 335
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
340                 345                 350
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
355                 360                 365
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
370                 375                 380
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
405                 410                 415
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
420                 425                 430
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
435                 440                 445
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
450                 455                 460
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
465                 470                 475                 480
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485
<210> 57
<211> 487
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 57
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Glu Thr Asn
35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Ile Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser
100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr
115                 120                 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser
130                 135                 140
Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Asn Met Gly
145                 150                 155                 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Ala Ile
165                 170                 175
Tyr Ser Gly Asn Ser Ala Glu Tyr Gly Ala Ala Val Gln Gly Arg Ala
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn
195                 200                 205
Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Phe Cys Ala Lys Asp Ala
210                 215                 220
Gly Ser Gly Cys Tyr Ser Gly Val Cys Ala Gly Thr Ser Ser Ile Asp
225                 230                 235                 240
Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro
245                 250                 255
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
260                 265                 270
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
275                 280                 285
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
290                 295                 300
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
305                 310                 315                 320
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
325                 330                 335
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
340                 345                 350
Leu Asn Gly Glu Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
355                 360                 365
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
370                 375                 380
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
385                 390                 395                 400
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
405                 410                 415
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
420                 425                 430
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
435                 440                 445
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
450                 455                 460
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
465                 470                 475                 480
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485
<210> 58
<211> 489
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 58
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Asp Asp Asn Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Asn Glu Asp Asn Ser Tyr Val Ala Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser Gly Gly
100                 105                 110
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr Leu Asp
115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val
130                 135                 140
Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Met Gly Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Tyr Ile
165                 170                 175
Ala Ser Gly Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Gly Ala Ala Val Gln Gly Arg
180                 185                 190
Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asp Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu
195                 200                 205
Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Ser
210                 215                 220
Ala Gly Gly Cys Ser Ala His Ser Cys Asp Thr Tyr Ile Ala Asp Ser
225                 230                 235                 240
Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser Leu
245                 250                 255
Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
260                 265                 270
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
275                 280                 285
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
290                 295                 300
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
305                 310                 315                 320
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
325                 330                 335
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
340                 345                 350
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
355                 360                 365
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
370                 375                 380
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
405                 410                 415
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
420                 425                 430
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
435                 440                 445
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
450                 455                 460
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
465                 470                 475                 480
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485
<210> 59
<211> 490
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 59
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Arg Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Tyr Cys Gly Asn Glu Asp Asn Ser Tyr Val Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser Gly Gly
100                 105                 110
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr Leu Asp
115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val
130                 135                 140
Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asn Met Gly Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Asp Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Tyr Thr
165                 170                 175
Gly Ser Asp Ala Gly Leu Ser Thr Thr Tyr Gly Ala Ala Val Gln Gly
180                 185                 190
Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln
195                 200                 205
Leu Asn Asn Leu Gly Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Phe Cys Thr Lys
210                 215                 220
Ser Ala Gly Gly Cys Ser Asp Tyr Asn Cys Asp Ala Tyr Ile Ala Asp
225                 230                 235                 240
Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser
245                 250                 255
Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
260                 265                 270
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
275                 280                 285
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
290                 295                 300
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
305                 310                 315                 320
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
325                 330                 335
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
340                 345                 350
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
355                 360                 365
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
370                 375                 380
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
385                 390                 395                 400
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
405                 410                 415
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
420                 425                 430
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
435                 440                 445
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
450                 455                 460
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
465                 470                 475                 480
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485                 490
<210> 60
<211> 489
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 60
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Tyr Cys Gly Asn Glu Asp Met Asn Tyr Val Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser Gly Gly
100                 105                 110
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Ala Ala Val Thr Leu Asp
115                 120                 125
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val
130                 135                 140
Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr Asn Met Gly Trp Val
145                 150                 155                 160
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Gly Ile Tyr Ser
165                 170                 175
Ala Gly Gly Asp Thr Ser Thr Thr Tyr Gly Ala Ala Val Asn Gly Arg
180                 185                 190
Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu
195                 200                 205
Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Phe Cys Ala Lys Ala
210                 215                 220
Ala Gly Gly Cys Thr Ala His Asn Cys Asp Ala Tyr Ile Ala Asp Ser
225                 230                 235                 240
Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ser Leu
245                 250                 255
Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
260                 265                 270
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
275                 280                 285
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
290                 295                 300
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
305                 310                 315                 320
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
325                 330                 335
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
340                 345                 350
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
355                 360                 365
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
370                 375                 380
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
385                 390                 395                 400
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
405                 410                 415
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
420                 425                 430
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
435                 440                 445
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
450                 455                 460
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
465                 470                 475                 480
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
485
<210> 61
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 61
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
165                 170                 175
Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 62
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 62
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
165                 170                 175
Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 63
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 63
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Arg Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
165                 170                 175
Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Val Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 64
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 64
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
165                 170                 175
Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 65
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 65
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala Met
145                 150                 155                 160
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr
165                 170                 175
Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195                 200                 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser
210                 215                 220
Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Pro
245                 250                 255
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305                 310                 315                 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325                 330                 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340                 345                 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355                 360                 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370                 375                 380
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385                 390                 395                 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405                 410                 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420                 425                 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435                 440                 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450                 455                 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470                 475                 480
Val
<210> 66
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 66
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala Met
145                 150                 155                 160
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr
165                 170                 175
Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195                 200                 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser
210                 215                 220
Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Arg Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
245                 250                 255
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305                 310                 315                 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325                 330                 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340                 345                 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355                 360                 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370                 375                 380
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385                 390                 395                 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405                 410                 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420                 425                 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435                 440                 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450                 455                 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470                 475                 480
Val
<210> 67
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 67
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser Asn Phe Ala Met
145                 150                 155                 160
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr
165                 170                 175
Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195                 200                 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser
210                 215                 220
Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
245                 250                 255
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305                 310                 315                 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325                 330                 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340                 345                 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355                 360                 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370                 375                 380
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385                 390                 395                 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405                 410                 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420                 425                 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435                 440                 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450                 455                 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470                 475                 480
Val
<210> 68
<211> 478
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 68
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Gly Lys
20                  25                  30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asp Trp Ser Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr Gly Met
145                 150                 155                 160
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala
165                 170                 175
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg
180                 185                 190
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
195                 200                 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys Val
210                 215                 220
Thr Trp Asn Asn Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu Val Thr
225                 230                 235                 240
Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
245                 250                 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260                 265                 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275                 280                 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290                 295                 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305                 310                 315                 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325                 330                 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340                 345                 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355                 360                 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370                 375                 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385                 390                 395                 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405                 410                 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420                 425                 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435                 440                 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450                 455                 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475
<210> 69
<211> 478
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 69
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser
20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65                  70                  75                  80
Thr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro
85                  90                  95
Pro Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser
100                 105                 110
Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
115                 120                 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
130                 135                 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
145                 150                 155                 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
165                 170                 175
Gly Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180                 185                 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195                 200                 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210                 215                 220
Met Asn Arg Trp Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu Val Thr
225                 230                 235                 240
Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
245                 250                 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260                 265                 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275                 280                 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290                 295                 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305                 310                 315                 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325                 330                 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340                 345                 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355                 360                 365
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
370                 375                 380
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
385                 390                 395                 400
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
405                 410                 415
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
420                 425                 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435                 440                 445
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
450                 455                 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475
<210> 70
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 70
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Arg Ser Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg
165                 170                 175
Ile Asp Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala Pro
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 71
<211> 483
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 71
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Leu
165                 170                 175
Ile Thr Thr Asn Gly Asp Gly Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Asp Gly Ala Ala His Tyr Tyr Asp Ile Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
225                 230                 235                 240
Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp
245                 250                 255
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
260                 265                 270
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
275                 280                 285
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
290                 295                 300
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
305                 310                 315                 320
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
325                 330                 335
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
340                 345                 350
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
355                 360                 365
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
370                 375                 380
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
385                 390                 395                 400
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
405                 410                 415
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
420                 425                 430
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
435                 440                 445
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
450                 455                 460
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
465                 470                 475                 480
Gly Lys Val
<210> 72
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 72
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp
20                  25                  30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Asp Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr
165                 170                 175
Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195                 200                 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser
210                 215                 220
Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
245                 250                 255
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305                 310                 315                 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325                 330                 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340                 345                 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355                 360                 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370                 375                 380
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385                 390                 395                 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405                 410                 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420                 425                 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435                 440                 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450                 455                 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470                 475                 480
Val
<210> 73
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 73
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Leu
165                 170                 175
Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
180                 185                 190
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
195                 200                 205
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
210                 215                 220
Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly Thr Leu
225                 230                 235                 240
Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
245                 250                 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260                 265                 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275                 280                 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290                 295                 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305                 310                 315                 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325                 330                 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340                 345                 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355                 360                 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370                 375                 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385                 390                 395                 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405                 410                 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420                 425                 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435                 440                 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450                 455                 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val
465                 470                 475                 480
<210> 74
<211> 315
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 74
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Ile Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Thr Tyr
20                  25                  30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asp Leu Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro
85                  90                  95
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser
100                 105                 110
Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
115                 120                 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
130                 135                 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
145                 150                 155                 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
165                 170                 175
Gly Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180                 185                 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195                 200                 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
210                 215                 220
Lys Gly Thr Trp Asn Tyr Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
245                 250                 255
Asp Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
305                 310                 315
<210> 75
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 75
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gln Ser Ser
100                 105                 110
Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val
115                 120                 125
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
130                 135                 140
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala Met
145                 150                 155                 160
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr
165                 170                 175
Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180                 185                 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195                 200                 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Ser
210                 215                 220
Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
225                 230                 235                 240
Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Leu Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
245                 250                 255
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
260                 265                 270
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
275                 280                 285
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
290                 295                 300
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
305                 310                 315                 320
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
325                 330                 335
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
340                 345                 350
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
355                 360                 365
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
370                 375                 380
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
385                 390                 395                 400
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
405                 410                 415
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
420                 425                 430
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
435                 440                 445
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
450                 455                 460
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465                 470                 475                 480
Val
<210> 76
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 76
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu Leu Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 77
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 77
Glu Glu Gly Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 78
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 78
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Phe Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 79
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 79
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Pro Ile Arg Ile Gly Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 80
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 80
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Gly Lys Pro Ser
115
<210> 81
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 81
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 82
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 82
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 83
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 83
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Ser Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Ser Ala Ile Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Glu Ser Thr Lys Arg Glu Asn Met Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Thr Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser
100                 105                 110
Val Arg Ala Lys Pro Ser
115
<210> 84
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Gallus gallus
<400> 84
Asp Phe Lys Leu Gln Gln Pro Gln Ser Ser Val Val Val Ile Lys Gly
1               5                  10                  15
Asp Thr Leu Thr Leu Asn Cys Thr Ala Ser Gly Ser Gly Pro Ile Gly
20                  25                  30
Ala Val Lys Trp Val Lys Gly Trp Gly Ser Asp Asn Gln Thr Val Tyr
35                  40                  45
Glu His Lys Gly Ser Phe Pro Arg Val Met Arg Ala Val Pro Asp Pro
50                  55                  60
Thr Asn Asp Phe Thr Ile Arg Ile Ser Asn Val Ser Leu Glu Asp Ala
65                  70                  75                  80
Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Leu Arg Lys Gly Ile Val Asp Asp Val
85                  90                  95
Val Phe Thr Arg Gly Gly Gly Thr Glu Val Ser Val His Ala
100                 105                 110
<210> 85
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 85
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Asn Asn Ala Tyr Gly Trp Phe
20                  25                  30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Asp Asn
35                  40                  45
Gly Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
50                  55                  60
Asp Ser Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Arg Val Gln Ala Glu Asp Glu
65                  70                  75                  80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Ala Asp Asn Ser Gly Ala Gly Val Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 86
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 86
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Ser Tyr Tyr Ser Trp His Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Ser Val Ile Tyr Ser Asn Thr
35                  40                  45
Asp Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Ser Ser Ser Asp Ser Asp Ile Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 87
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 87
Ala Val Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr His Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Asn Glu Asp Asn Asn Tyr Val Ala Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 88
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 88
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ser Ala His Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Tyr
35                  40                  45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ser Ala Asp Ser Ser Asn Pro Ala Ile
85                  90                  95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 89
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 89
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Glu Thr Asn
35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Tyr Leu Ser Ile Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 90
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 90
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Asp Asp Asn Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Asn Glu Asp Asn Ser Tyr Val Ala Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 91
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 91
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Arg Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Tyr Cys Gly Asn Glu Asp Asn Ser Tyr Val Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 92
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 92
Ala Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Asp Asn Asp Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Tyr Cys Gly Asn Glu Asp Met Asn Tyr Val Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 93
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 93
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 94
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 94
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 95
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 95
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 96
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 96
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 97
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 97
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 98
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 98
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 99
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 99
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 100
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 100
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ala Gly Lys
20                  25                  30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Gly Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asp Trp Ser Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 101
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser
20                  25                  30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65                  70                  75                  80
Thr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro
85                  90                  95
Pro Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 102
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 102
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 103
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 104
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp
20                  25                  30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Asp Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 105
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 105
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 106
<211> 109
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 106
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Ile Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Thr Tyr
20                  25                  30
Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asp Leu Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50                  55                  60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro
85                  90                  95
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 107
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 107
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 108
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 108
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Arg Phe Thr Tyr Tyr Gly Ala Ala Val
50                  55                  60
Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Thr Lys Asn Gly Gly Cys Gly Ser Gly Gly Asp Leu Asp Cys Ile Asp
100                 105                 110
Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115                 120
<210> 109
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 109
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Gly Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35                  40                  45
Ala Glu Ile Ser Asp Thr Gly Ser Thr Pro Tyr Tyr Gly Ser Ala Val
50                  55                  60
Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Thr Arg Asn Phe Gly Ser Ser Val Ser Ser Ile Asp Ala Trp Gly His
100                 105                 110
Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115                 120
<210> 110
<211> 133
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 110
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Ser Thr Asp Thr Asp Thr Thr Tyr
50                  55                  60
Gly Pro Ala Val Ala Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln
65                  70                  75                  80
Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly
85                  90                  95
Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Ala Ala Gly Gly Cys Ser Thr His Thr Cys
100                 105                 110
Thr Ala Tyr Ile Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu
115                 120                 125
Val Ile Val Ser Ser
130
<210> 111
<211> 128
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 111
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Arg
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Arg Gly Ser Gly Phe Ser Ile Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Ile
35                  40                  45
Ala Ser Ile Gly Ser Asp Gly Ser Ser Thr His Tyr Ala Pro Ala Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Thr Arg Asp Val Gly Gln Ser Thr Val Arg
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Ala Lys Asp Ala Tyr Gln Cys Ser Tyr Ala Thr Cys Asn Asp Tyr Leu
100                 105                 110
Asp Thr Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 112
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 112
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Ala Ile Tyr Ser Gly Asn Ser Ala Glu Tyr Gly Ala Ala Val Gln
50                  55                  60
Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu
65                  70                  75                  80
Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Phe Cys Ala
85                  90                  95
Lys Asp Ala Gly Ser Gly Cys Tyr Ser Gly Val Cys Ala Gly Thr Ser
100                 105                 110
Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 113
<211> 131
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 113
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Tyr Ile Ala Ser Gly Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Gly Ala
50                  55                  60
Ala Val Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asp Gly Gln Ser Thr
65                  70                  75                  80
Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr
85                  90                  95
Phe Cys Ala Lys Ser Ala Gly Gly Cys Ser Ala His Ser Cys Asp Thr
100                 105                 110
Tyr Ile Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115                 120                 125
Val Ser Ser
130
<210> 114
<211> 132
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 114
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Asp Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Tyr Thr Gly Ser Asp Ala Gly Leu Ser Thr Thr Tyr Gly
50                  55                  60
Ala Ala Val Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser
65                  70                  75                  80
Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu Gly Ala Glu Asp Thr Gly Ile
85                  90                  95
Tyr Phe Cys Thr Lys Ser Ala Gly Gly Cys Ser Asp Tyr Asn Cys Asp
100                 105                 110
Ala Tyr Ile Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val
115                 120                 125
Ile Val Ser Ser
130
<210> 115
<211> 131
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 115
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20                  25                  30
Asn Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Tyr Ser Ala Gly Gly Asp Thr Ser Thr Thr Tyr Gly Ala
50                  55                  60
Ala Val Asn Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr
65                  70                  75                  80
Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85                  90                  95
Phe Cys Ala Lys Ala Ala Gly Gly Cys Thr Ala His Asn Cys Asp Ala
100                 105                 110
Tyr Ile Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115                 120                 125
Val Ser Ser
130
<210> 116
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 116
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 117
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 117
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 118
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 118
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 119
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 119
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 120
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 120
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala
20                  25                  30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50                  55                  60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65                  70                  75                  80
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp
85                  90                  95
Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 121
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 121
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala
20                  25                  30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50                  55                  60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65                  70                  75                  80
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp
85                  90                  95
Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Arg Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 122
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 122
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser Asn Phe Ala
20                  25                  30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50                  55                  60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65                  70                  75                  80
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp
85                  90                  95
Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 123
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 123
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr Gly
20                  25                  30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Val Thr Trp Asn Asn Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu Val
100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 124
<211> 115
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 124
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
20                  25                  30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Gly Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Met Asn Arg Trp Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu Val Thr
100                 105                 110
Val Ser Ser
115
<210> 125
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Arg Ser Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Arg Ile Asp Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ala
100                 105                 110
Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 126
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
20                  25                  30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Leu Ile Thr Thr Asn Gly Asp Gly Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Asp Gly Ala Ala His Tyr Tyr Asp Ile Phe Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Leu Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 127
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 127
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr Ala
20                  25                  30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50                  55                  60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65                  70                  75                  80
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp
85                  90                  95
Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 128
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 129
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 129
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
20                  25                  30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Gly Ile Ser Gly Arg Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Gly Thr Trp Asn Tyr Gly Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 130
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 130
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser
1               5                  10                  15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala
20                  25                  30
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ser
35                  40                  45
Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50                  55                  60
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65                  70                  75                  80
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp
85                  90                  95
Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 131
<211> 102
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 131
Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala Arg Ala Thr Pro Gln His Thr
1               5                  10                  15
Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr
20                  25                  30
Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn
35                  40                  45
Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala
50                  55                  60
Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val His Ser Gln Val Ile Cys Glu
65                  70                  75                  80
Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp Pro Leu Arg Gly Thr Ala Asn
85                  90                  95
Leu Ser Glu Thr Ile Arg
100
<210> 132
<211> 99
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 132
Val Pro Pro Thr Leu Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn
1               5                  10                  15
Gln Val Asn Val Thr Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu
20                  25                  30
Gln Leu Thr Trp Leu Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala
35                  40                  45
Ser Thr Val Thr Glu Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp
50                  55                  60
Leu Leu Val Asn Val Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys
65                  70                  75                  80
Gln Val Glu His Asp Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu
85                  90                  95
Lys Val Ser
<210> 133
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 133
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 134
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 134
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 135
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 135
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 136
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Ala Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Ala Asn
85                  90                  95
Ala Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 137
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 137
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 138
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 138
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Pro Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 139
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 139
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 140
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 140
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asp Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Ala Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 141
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 141
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 142
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 142
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Ala Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 143
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 143
Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala Met Thr
1               5                  10
<210> 144
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 144
Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 145
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 145
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr
1               5                  10
<210> 146
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 146
Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp Leu Ala
1               5                  10
<210> 147
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 147
Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr
1               5
<210> 148
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 148
Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro Phe Thr
1               5                  10
<210> 149
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 149
Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr Ala Met Ser
1               5                  10
<210> 150
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 150
Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 151
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 151
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr
1               5                  10
<210> 152
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 152
Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp Ile Ala
1               5                  10
<210> 153
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 153
Ala Ala Ser Ser Arg Asp Thr
1               5
<210> 154
<400> 154
000
<210> 155
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 155
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Asn
1               5                  10
<210> 156
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 156
Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 157
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 157
Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp
1               5                  10
<210> 158
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 158
Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr Leu Ala
1               5                  10
<210> 159
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 159
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1               5
<210> 160
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 160
Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro Leu Thr
1               5                  10
<210> 161
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 161
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn Ala
1               5
<210> 162
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 162
Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr
1               5
<210> 163
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 163
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr
1               5                  10
<210> 164
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 164
Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1               5                  10
<210> 165
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 165
Thr Val Ile Tyr Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp
1               5                  10
<210> 166
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 166
Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Ala Asn Ala
1               5                  10
<210> 167
<400> 167
000
<210> 168
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 168
Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr
1               5
<210> 169
<400> 169
000
<210> 170
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 170
Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala
1               5                  10
<210> 171
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 171
Thr Leu Ile Tyr Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn
1               5                  10
<210> 172
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 172
Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr Asn Pro
1               5                  10
<210> 173
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 173
Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr Ala
1               5
<210> 174
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 174
Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr
1               5
<210> 175
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 175
Asn Phe Ala Met Thr
1               5
<210> 176
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 176
Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly
1               5                  10
<210> 177
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 177
Thr Val Ile Tyr Ser Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp
1               5                  10
<210> 178
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 178
Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Ala Asn Thr
1               5                  10
<210> 179
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 179
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1               5
<210> 180
<400> 180
000
<210> 181
<400> 181
000
<210> 182
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 182
Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Ala
1               5                  10
<210> 183
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 183
Thr Val Ile His Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp
1               5                  10
<210> 184
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 184
Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn Thr
1               5                  10
<210> 185
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Asn or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Phe or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Thr or Ser
<400> 185
Gly Phe Ser Phe Ser Xaa Xaa Ala Met Xaa
1               5                  10
<210> 186
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ser or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Gly or Asp
<400> 186
Thr Ile Gly Xaa Xaa Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 187
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Gly
<400> 187
Asp Ser Thr Val Xaa Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr
1               5                  10
<210> 188
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Asn or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Leu or Ile
<400> 188
Arg Ala Ser Gln Asn Val Xaa Xaa Asp Xaa Ala
1               5                  10
<210> 189
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Arg or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ile or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Glu or Asp
<400> 189
Ala Ala Xaa Xaa Arg Xaa Thr
1               5
<210> 190
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 190
Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Ala
1               5
<210> 191
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 191
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
1               5
<210> 192
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 192
Ser Ala Gly Gly Ser Asp
1               5
<210> 193
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 193
Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr
1               5
<210> 194
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 194
Ser Asn Ala Met Ser
1               5
<210> 195
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 195
Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 196
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 196
Ser Ser Gly Ser Asp
1               5
<210> 197
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 197
Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 198
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 198
Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
1               5
<210> 199
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 199
Ser Ser Gly Gly Asp
1               5
<210> 200
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 200
Ser Tyr Ala Met Ser
1               5
<210> 201
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 201
Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 202
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 202
Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
1               5
<210> 203
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 203
Gly Ser Gly Asp
1
<210> 204
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 204
Asn Phe Ala Val Thr
1               5
<210> 205
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 205
Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe Ala
1               5
<210> 206
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 206
Ile Gly Ser Gly Asp Thr
1               5
<210> 207
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 207
Ala Lys Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr
1               5                  10                  15
<210> 208
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 208
Gln Asn Val Lys Asn Asp
1               5
<210> 209
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 209
Ala Ala Arg
1
<210> 210
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 210
Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro
1               5
<210> 211
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 211
Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
1               5
<210> 212
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 212
Gly Ala Asp Asp
1
<210> 213
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 213
Ile Tyr Ala Val Ser
1               5
<210> 214
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 214
Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr Ala
1               5
<210> 215
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 215
Ile Gly Ala Asp Asp Thr
1               5
<210> 216
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 216
Ala Lys Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr
1               5                  10                  15
<210> 217
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 217
Gln Asn Val Arg Ser Asp
1               5
<210> 218
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 218
Ala Ala Ser
1
<210> 219
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 219
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1               5
<210> 220
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 220
Ser Gly Ser Gly Glu Ile
1               5
<210> 221
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 221
Ser Tyr Asp Val Asn
1               5
<210> 222
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 222
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
1               5
<210> 223
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 223
Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile
1               5
<210> 224
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 224
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp
1               5                  10
<210> 225
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 225
Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
1               5
<210> 226
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 226
Gly Ala Ser
1
<210> 227
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 227
Asp Tyr Gly Met Asn
1               5
<210> 228
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 228
Gln Ile Thr Ser Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Gly Ala Ala Val Lys Gly
1               5                  10                  15
<210> 229
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 229
Asp Phe Gly Ser Gly Val Gly Ser Ile Asp Ala
1               5                  10
<210> 230
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 230
Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr
1               5
<210> 231
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 231
Thr Ser Gly Ser Arg
1               5
<210> 232
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 232
Ser Gly Ser Arg Gly Arg Tyr Gly
1               5
<210> 233
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 233
Arg Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1               5
<210> 234
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 234
Gly Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Asp Ile
1               5
<210> 235
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 235
Ser Tyr Ala Met Gly
1               5
<210> 236
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 236
Gly Ile Asp Asp Asp Gly Ser Thr Ala Asn Tyr Gly Pro Ala Val Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 237
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 237
Ala Ser Val Thr Gly Trp Ser Ala His Ile Ser Gly Arg Leu Asp Thr
1               5                  10                  15
<210> 238
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 238
Asp Asp Gly Ser Thr
1               5
<210> 239
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 239
Ser Gly Gly Gly Ile Tyr Tyr Tyr Gly
1               5
<210> 240
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 240
Glu Asn Asp Lys Arg Pro Ser
1               5
<210> 241
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 241
Gly Gly Tyr Asp Ser Asn Thr Thr Ser Gly Ile
1               5                  10
<210> 242
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 242
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr
20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35                  40                  45
Ala Gln Ile Thr Ser Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Gly Ala Ala Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Arg Gln Ser Thr Val Lys Leu
65                  70                  75                  80
Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Phe Cys Ala
85                  90                  95
Arg Asp Phe Gly Ser Gly Val Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly Asn Gly
100                 105                 110
Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 243
<211> 102
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 243
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Ser Arg Gly Arg Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20                  25                  30
Arg Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Arg Asp Asn Gln
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Ser Ser Thr Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ser Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Ser Tyr Asp Gly Ser Ile Asp Ile Phe Gly Ala Gly
85                  90                  95
Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 244
<211> 125
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 244
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Asp Asp Asp Gly Ser Thr Ala Asn Tyr Gly Pro Ala Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65                  70                  75                  80
Leu Gln Leu Asn Asn Pro Arg Ala Glu Asp Ser Gly Thr Tyr Phe Cys
85                  90                  95
Ala Lys Ala Ser Val Thr Gly Trp Ser Ala His Ile Ser Gly Arg Leu
100                 105                 110
Asp Thr Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115                 120                 125
<210> 245
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 245
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ile Tyr Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Glu Asn Asp
35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Asn Thr Phe Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Ser Asn Thr Thr Ser Gly Ile Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 246
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 246
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 247
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 247
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 248
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 248
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asp
20                  25                  30
Ile Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Asp Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 249
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 249
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 250
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 250
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 251
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 251
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 252
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 252
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr
85                  90                  95
Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 253
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 253
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Thr Leu Ile Tyr
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr
85                  90                  95
Asn Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100                 105
<210> 254
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 254
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Thr Val Ile His
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
85                  90                  95
Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 255
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 255
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Thr Val Ile His
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
85                  90                  95
Asn Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100                 105
<210> 256
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 256
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr
20                  25                  30
Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro
35                  40                  45
Lys Thr Leu Ile Tyr Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn Val Ser Asn
50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser
65                  70                  75                  80
Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp
85                  90                  95
Gln Ser Ser Tyr Thr Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
100                 105                 110
Leu
<210> 257
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 257
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Tyr
20                  25                  30
Gly Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Thr Val Ile Tyr
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Ala
85                  90                  95
Asn Ala Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100                 105
<210> 258
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 258
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 259
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 259
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 260
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 260
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 261
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 261
Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala
1               5                  10
<210> 262
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 262
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35                  40                  45
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr
85                  90                  95
Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 263
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 263
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 264
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 264
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 265
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 265
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 266
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 266
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 267
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 267
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 268
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 268
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 269
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 269
Ile Tyr Ala Met Ser
1               5
<210> 270
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 270
Ser Tyr Asp Met Asn
1               5
<210> 271
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 271
Ser Asn Ala Val Ser
1               5
<210> 272
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 272
Ser Tyr Ala Val Ser
1               5
<210> 273
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 273
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 274
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 274
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 275
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 275
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20                  25                  30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Ser Asp Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Ser Trp Ile Trp Trp Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 276
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 276
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn His Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ala Asp Thr
35                  40                  45
Asn Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Thr Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Ser Ser Thr Gly Asp Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 277
<400> 277
000
<210> 278
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 278
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Asp His
20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Leu Arg Gly Gly Val Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Leu Phe Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ser Trp Asn Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 279
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 279
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asn
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Gly Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 280
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 280
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Asp Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Ser Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Val Lys Asp Ser Thr Val Ser Trp Asn Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly
100                 105                 110
Leu Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 281
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 281
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Tyr Gly Ser Asp Asp Gly Ser Ser Ser
20                  25                  30
Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Ile
35                  40                  45
Leu Ile Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Thr Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val
65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Thr Tyr Asp Thr Ser
85                  90                  95
Ser Gly Ala Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105                 110
<210> 282
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 282
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Arg Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Ser Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 283
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 283
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Pro Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 284
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 284
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser
20                  25                  30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Asp Trp Val
35                  40                  45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Gly Val Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Leu Phe Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Thr Asp Thr Phe Asp His Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100                 105                 110
Ser Ser
<210> 285
<211> 102
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 285
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Phe Gly Ser Ser Gly Asn Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20                  25                  30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Tyr Asn Asn Lys
35                  40                  45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50                  55                  60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp Glu Ala Val
65                  70                  75                  80
Tyr Phe Cys Gly Ala Trp Glu Thr Gly Ser Ala Thr Phe Gly Ala Gly
85                  90                  95
Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 286
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 286
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Val Thr Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Val Thr Trp Asn Asn Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 287
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 287
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Pro Ile Asp Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asn Thr Val Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Gln Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 288
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 288
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Val Ser Val Thr Ala Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Ile Thr Trp Asn Asn Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 289
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 289
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ser Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 290
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 290
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Val Thr Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Val Thr Trp Lys Asn Val Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 291
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 291
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Thr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 292
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 292
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20                  25                  30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Ala Ser Ser Gly Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Val Thr Trp Asn Asn Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 293
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 293
Glu Ile Val Leu Ala Gln Ser Pro Asp Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ala Gly Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
His Ala Thr Ser Ser Arg Ala Asp Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Thr Gly Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Asp Trp Ser Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 294
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 294
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 295
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 295
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Ala Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 296
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 296
Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala
1               5                  10                  15
Ala Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro
20                  25                  30
Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu
35                  40                  45
Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser
50                  55                  60
Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Ala
65                  70                  75                  80
Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys
85                  90                  95
Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu
100                 105                 110
Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Thr Arg His His His His His His
115                 120                 125
<210> 297
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Asn or Tyr or His or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Met or Leu or Val
<400> 297
Xaa Xaa Ala Xaa Ser
1               5
<210> 298
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ala or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Gly or Ser or absent
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Asp or Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Gly or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Asp or Ser or Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Thr or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Pro or Gly or Val or Ile or Ala or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Ala or Asp or Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Val or Met
<400> 298
Gly Ile Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Xaa Ser Xaa Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 299
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Asp or Gly or Ser or Ile or absent
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Trp or Gly or Tyr or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Tyr or Thr or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = His or Thr or Ser or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Gly or Ala
<400> 299
Ser Gly Gly Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Tyr Tyr Xaa
1               5                  10
<210> 300
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Asp or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Glu or Lys or Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser or Pro
<400> 300
Ser Asp Xaa Xaa Arg Pro Xaa
1               5
<210> 301
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Gly or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Gly or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Gly or Tyr or Gln or Ser or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Arg or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Thr or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ala or Ile or Val or Leu or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Thr or Ala or Asp or Pro
<400> 301
Xaa Xaa Tyr Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Asn Xaa
1               5                  10
<210> 302
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Asn or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Met or Leu or Val
<400> 302
Ser Xaa Ala Xaa Ser
1               5
<210> 303
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ala or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Gly or absent
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser or Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Pro or Gly or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Ala or Asp
<400> 303
Gly Ile Ser Xaa Gly Xaa Xaa Asp Thr Tyr Tyr Xaa Xaa Ser Val Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 304
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ser or Ala
<400> 304
Ser Gly Gly Xaa Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala
1               5                  10
<210> 305
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 305
Asn Phe Ala Leu Thr
1               5
<210> 306
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 306
Ile Tyr Ala Leu Ser
1               5
<210> 307
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Tyr or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Met or Leu or Val
<400> 307
Xaa Xaa Asp Xaa Asn
1               5
<210> 308
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ile or Thr
<400> 308
Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                  10                  15
Gly
<210> 309
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Asn or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Asn or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Arg or Met
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Asp or Tyr
<400> 309
Glu Xaa Xaa Xaa Tyr Arg Phe Phe Asp Xaa
1               5                  10
<210> 310
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Thr or Ser
<400> 310
Arg Ala Xaa Gln Ser Val Tyr Xaa Tyr Leu Ala
1               5                  10
<210> 311
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Gly or Ala or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ser or Asn or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Thr or Ala
<400> 311
Xaa Ala Xaa Xaa Arg Ala Xaa
1               5
<210> 312
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 312
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Lys Asn Asp
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Arg Ile Arg Glu Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 313
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 313
Ser Tyr Asp Leu Asn
1               5
<210> 314
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 314
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 315
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 315
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
1               5                  10                  15
<210> 316
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 316
Asn Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr
1               5                  10                  15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20                  25                  30
<210> 317
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 317
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1               5                  10
<210> 318
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 318
Ser Asn Ala Leu Ser
1               5
<210> 319
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 319
Ser Tyr Ala Leu Ser
1               5
<210> 320
<211> 330
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 320
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165                 170                 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325                 330
<210> 321
<211> 330
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 321
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100                 105                 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115                 120                 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130                 135                 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145                 150                 155                 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165                 170                 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180                 185                 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195                 200                 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210                 215                 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225                 230                 235                 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245                 250                 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260                 265                 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275                 280                 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290                 295                 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305                 310                 315                 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325                 330
<210> 322
<211> 326
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 322
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100                 105                 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115                 120                 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130                 135                 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165                 170                 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180                 185                 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195                 200                 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210                 215                 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245                 250                 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260                 265                 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275                 280                 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290                 295                 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 323
<211> 326
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 323
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100                 105                 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115                 120                 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130                 135                 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165                 170                 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180                 185                 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195                 200                 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210                 215                 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245                 250                 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260                 265                 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275                 280                 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290                 295                 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 324
<211> 327
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 324
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                  10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85                  90                  95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100                 105                 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115                 120                 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130                 135                 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145                 150                 155                 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165                 170                 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180                 185                 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195                 200                 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210                 215                 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225                 230                 235                 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245                 250                 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260                 265                 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275                 280                 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290                 295                 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305                 310                 315                 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 325
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 325
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1               5                  10                  15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20                  25                  30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35                  40                  45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50                  55                  60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65                  70                  75                  80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85                  90                  95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100                 105
<210> 326
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 326
Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1               5                  10                  15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20                  25                  30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro
35                  40                  45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50                  55                  60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65                  70                  75                  80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85                  90                  95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100                 105
<210> 327
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 327
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 328
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 328
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 329
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 329
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Gln Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 330
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 331
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 331
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 332
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 332
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 333
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 333
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Phe Gly Ser Ser Gly Asn Tyr Gly Leu Val
20                  25                  30
Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr
35                  40                  45
Tyr Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Thr Gly Ser Ala Thr
85                  90                  95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 334
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 334
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Phe Gly Ser Ser Gly Asn Tyr Gly Trp Tyr
20                  25                  30
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Tyr Asn Asn
35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly
50                  55                  60
Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Thr Gly Ser Ala Thr Phe Gly Gly
85                  90                  95
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100
<210> 335
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 335
Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 336
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 336
Ser Asp Asp Lys Arg Pro Ser
1               5
<210> 337
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 337
Gly Ser Tyr Ser Ser
1               5
<210> 338
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 338
Ile Tyr Ser
1
<210> 339
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 339
Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr
1               5
<210> 340
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 340
Gly Asp Tyr Tyr Ser
1               5
<210> 341
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 341
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 342
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 342
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 343
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 343
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Trp Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 344
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 344
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Arg Gln Phe Gln Glu Gln Ser Leu
65                  70                  75                  80
Ser Pro Asn Glu Pro Ala Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85                  90                  95
Cys Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 345
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 345
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Ala Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 346
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 346
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 347
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 347
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Ala Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Ile Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 348
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 348
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 349
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 349
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Ala Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Ser Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Asp Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 350
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 350
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ala Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 351
<211> 105
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 351
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser Asp Asn
35                  40                  45
Gln Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Asp
50                  55                  60
Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Ile Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Ser Ser Thr Tyr Ala Asn Thr Phe
85                  90                  95
Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 352
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 352
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Met Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 353
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 353
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Gly Trp His
20                  25                  30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser Asp
35                  40                  45
Asp Gln Arg Pro Pro Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser
50                  55                  60
Gly Ser Thr Thr Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp Glu
65                  70                  75                  80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Thr Asn Thr
85                  90                  95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 354
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 354
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Met
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 355
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 355
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Phe Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 356
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 356
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asp
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 357
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 357
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asp Ser Ser Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asn Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Thr Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Pro Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 358
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 358
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 359
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 359
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Ala Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 360
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 360
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 361
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 361
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 362
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 362
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Arg Phe Ser Ser His
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ser Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Val Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 363
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 363
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Ser Ser Ser His Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Ser Thr Tyr Ala Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 364
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 364
Asp Val Gln Leu Val Asp Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 365
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 365
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 366
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 366
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 367
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 367
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 368
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 368
Asp Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 369
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 369
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Ile Cys Ser Gly Gly Asp Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ala Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 370
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 370
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Ala Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 371
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 371
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Trp Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 372
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 372
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 373
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 373
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Ala Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 374
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 374
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ile Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 375
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 375
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ile Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr Ala Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Pro Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 376
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 376
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Asp Ser Asp Thr Tyr Tyr Pro Ala Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Thr Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 377
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 377
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Ala Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Tyr Ser Tyr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Ser Ser Tyr Thr Asn
85                  90                  95
Asp Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 378
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 378
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 379
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 379
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asp Trp Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Ile Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 380
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 380
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Thr Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ala Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Met Ser Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 381
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 381
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Thr Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr
20                  25                  30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile His Ser Asp
35                  40                  45
Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser
50                  55                  60
Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu
65                  70                  75                  80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Thr Tyr Val Asn Thr
85                  90                  95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 382
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 382
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Ala Gly Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ile Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 383
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 383
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Tyr Tyr Ser Thr Tyr Tyr Gly Trp
20                  25                  30
Tyr Gln Gln Arg Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile His Ser
35                  40                  45
Asp Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala
50                  55                  60
Ser Gly Ser Ala Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Val Glu Asp
65                  70                  75                  80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Asp Gly Arg Thr Tyr Leu Asn
85                  90                  95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 384
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 384
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Thr Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Gly Ile Ser Ala Ser Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Met Ser Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Thr Trp Asn His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Leu Ser Ser
115
<210> 385
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 385
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1               5                  10                  15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Thr Ser Ser Tyr Tyr Gly Trp Tyr
20                  25                  30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile His Ser Asp
35                  40                  45
Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser
50                  55                  60
Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu
65                  70                  75                  80
Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Tyr Thr Thr Tyr Val Asn Thr
85                  90                  95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 386
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 386
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asp Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 387
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 387
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 388
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 388
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 389
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 389
Lys Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Asp Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 390
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 390
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 391
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 391
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 392
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 392
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asp Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 393
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 393
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 394
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 394
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 395
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 395
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 396
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 396
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 397
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 397
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Ser Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65                  70                  75                  80
Asp Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 398
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 398
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Met Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 399
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 399
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
His Ala Ala Arg Asn Arg Ala Ala Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 400
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 400
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asp Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 401
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 401
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Thr Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 402
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 402
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 403
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 403
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 404
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 404
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 405
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 405
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 406
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 406
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser His
20                  25                  30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Arg Ile Asn Ser Gly Gly Gly Gly Thr Asp Tyr Ala Glu Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Gln Tyr Asp Trp Asn Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 407
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 407
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Thr Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Tyr Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Arg Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 408
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 408
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Val Thr Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Val Thr Trp Lys Asn Val Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 409
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 409
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Thr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 410
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 410
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr
20                  25                  30
Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Val Thr Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50                  55                  60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu
65                  70                  75                  80
Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85                  90                  95
Lys Val Thr Trp Lys Asn Val Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr Leu
100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 411
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 411
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Thr Asp Trp Pro Pro
85                  90                  95
Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 412
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 412
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His
20                  25                  30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ala Gly Ile Ser Leu Arg Gly Gly Val Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Arg Leu Phe Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Arg Glu Ser Trp Asn Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr
100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 413
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 413
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asn
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Gly Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 414
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 414
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ser
20                  25                  30
Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Ser Asp Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Ser Trp Ile Trp Trp Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 415
<211> 103
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 415
Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val
1               5                  10                  15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn His Tyr Gly Trp Tyr Gln
20                  25                  30
Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ala Asp Thr
35                  40                  45
Asn Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly
50                  55                  60
Ser Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Ser Ser Thr Gly Asp Gly Ile Phe Gly Ala
85                  90                  95
Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 416
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 416
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1               5                  10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr
20                  25                  30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35                  40                  45
Ser Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50                  55                  60
Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr
85                  90                  95
Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100                 105
<210> 417
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 417
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 418
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 418
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 419
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 419
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1               5                  10                  15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr
20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro
85                  90                  95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100                 105
<210> 420
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 420
Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 421
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 421
Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe
20                  25                  30
Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 422
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 422
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 423
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 423
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr
20                  25                  30
Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50                  55                  60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65                  70                  75                  80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
85                  90                  95
Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu
100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115                 120
<210> 424
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 424
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 425
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 425
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu
1               5                  10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20                  25                  30
Asp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35                  40                  45
Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85                  90                  95
Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly
100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 426
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая конструкция
<400> 426
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1               5                  10                  15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20                  25                  30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35                  40                  45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50                  55                  60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65                  70                  75                  80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85                  90                  95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100                 105
<---