СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СОЧЕТАННЫХ МИКОТОКСИКОЗОВ ДОЙНЫХ КОРОВ
METHOD OF TREATING COMBINED MYCOTOXICOSES IN MILKING COWS

Изобретение относится к сельскохозяйственному производству, точнее к ветеринарной медицины и лечению крупного рогатого скота.
Серьезной проблемой животноводства России являются микотоксикозы - болезни, возникающие в результате поедания животными кормов, содержащих токсичные метаболиты, выделяемые плесневыми грибами. Микотоксины вырабатываются несколькими видами микроскопических грибов, в основном, Aspergillus, Fusarium и Penicillium. Микотоксины обладают полифункциональным действием на организм, нарушают проницаемость мембран, деятельность нервной, гуморальной, сердечно-сосудистой, пищеварительной, воспроизводительной и др. систем (Кузнецов А.Ф. Ветеринарная микология. СПб., Лань, 2001). К наиболее распространенным микотоксикозам у сельскохозяйственных животных относятся афлатоксикоз, Т-2 токсикоз, вомитоксикоз (ДОН), F-2 токсикоз, охратоксикоз, микотоксикоз, вызываемый фуманизином (Хмелевский Б.А. с соавт. Профилактика микотоксикозов животных, М., 1985).
Известно, что на практике проблема защиты от микотксинов решается разными способами - предотвращением формирования микотоксинов в кормах, исключение из рациона зараженных кормов, а также деконтаминация и детоксикация кормов. Однако полностью исключить поедание животными пораженных кормов пока не удается, что требует лечения микотоксикозов.
Известны способы и препараты для лечения микотксикозов у животных с применением энтеросорбентов и симптоматических препаратов. В основном методы лечения разработаны для отдельных видов микотоксикозов (см. Тарасова Е.Ю. Применение пробиотика и энтеросорбента для лечения подострого Т-2 микотоксикоза. // 2 Съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России. Казань, 2009. Иванов А.В., Тремасов М.Я. и др. Микотоксикозы животных (этиология, диагностика, лечение, профилактика). М., Колос, 2008); Патент РФ №2119796, А61К 35/66. Опубл. 10.10.98. Бюл. №28 «Комплексный пробиотический препарат для животных «Бифитрила».
Однако практика показывает, что в реальных производственных условиях чаще всего регистрируются поражения кормов разными одновременно несколькими видами микотоксинов. В связи с этим требуется новый подход, учитывающий все патогенетические механизмы развития сочетанных микотоксикозов и разработка способов лечения таких заболеваний.
Задачей изобретения является разработка способа лечения сочетанных микотоксикозов у крупнорогатого скота, в частности у дойных коров, позволяющего повышать продуктивность животных в условиях использования не вполне качественных кормов без использования дорогостоящих препаратов, не нарушая существующей технологии содержания животных при минимуме дополнительных затрат.
Задача решается тем, что предложен патогенетический способ лечения сочетанных микотоксикозов крупного рогатого скота, в частности дойных коров, основанный на повышении устойчивости организма животных к микотоксикозам на фоне применения эффективного сорбента (вермикулита), причем вермикулит скармливают животным ежедневно в дозе 100 г на голову с комбикормом в течение 60 дней лечения и дополнительно внутримышечно вводят Седимин в дозе 10 мл на голову и Витадаптин в дозе 20 мл на голову в начале курса лечения и повторно через 30 дней лечения, при этом используют вспученный вермикулит Ковдорского месторождения с размером частиц 0,1-2,0 мл.
Схема лечения составлена с учетом того, что на резистентность животных к микотоксикозам значительное влияние оказывает уровень потребляемых витаминов и состояние антиоксидантной системы организма животного.
Производственный опыт с применением предложенного способа проведен в ЗАО «Храмцово» Свердловской области. На предварительном этапе проведено исследование кормов, используемых в хозяйстве на содержание микотоксинов.
Степень зараженности кормов микотоксинами определяли методом иммуноферментного анализа, который проводили в соответствии с методическими указаниями по экспресс-определению микотоксинов в зерне, кормах и компонентах для их производства (Методические указания по экспресс-определению микотоксинов в зерне, кормах и компонентах для их производства, утвержденные Министерством сельского хозяйства Российской Федерации 10.10.2005 №5-1-14/1001) и ГОСТом Р 52471-2005 «Иммуноферментный метод определения микотоксинов» (2005).
Иммуноферментный анализ кормов проводили с использованием автоматического фотометра Tecan «Sunrise» (Австрия), укомплектованным программным обеспечением «BioChec» с использованием тест-систем Agra Quant (США). Характеристика чувствительности и специфичности данных тест-систем приведена в таблице 1.
Таблица 1
Характеристика тест-систем Agra Quant (США) для определения концентрации микотоксинов
Токсины
Определение суммы микотоксинов
Метод
Результат
Предел обнаружения, мг/кг
Время исследования, мин
Афлатоксин
ИФА
количественный
0,001
90
Охратоксин
ИФА
количественный
0,005
30
ДОН
ИФА
количественный
2,0
30
Зеараленон
ИФА
количественный
0,02
30
Фумонизин
ИФА
полуколичественный
1,0
20
Т-2-токсин
ИФА
количественный
0,1
30
При исследовании кормов была выявлена их высокая степень контаминации различными микотоксинами.
Таблица 2
Сочетание в пробах кормов микотоксинов
Пробы
Микотоксины
Комбикорм
охратоксин, зеараленон
Силос
ДОН, охратоксин, зеараленон, Т-2
Сенаж
охратоксин, Т-2, афлатоксин, зеараленон
Шрот подсолнечный
зеараленон
Основной корм силос содержал Т-2 токсин - 47,2 мг/кг; ДОН - 10,5 мг/кг; зеараленон - 1,7 мг/кг; охратоксин - 15,2 мг/кг. Данные концентрации превышали максимально допустимые уровни: Т-2 токсин в 472 раза; ДОН в 5,25 раза; зеараленон в 0,7 раза; охратоксин в 304 раза.
На период опыта из-за отсутствия качественных кормов данные корма с микотоксинами скармливали животным уже в течение трех месяцев.
При клиническом обследовании дойных коров были выявлены признаки хронического сочетанного микотоксикоза - снижение молочной продуктивности на 15%, жирности молока - на 0,6%, гипотонии, саливация, нарушение шерстного покрова, появление алопеций, аборты на 4-5 месяце стельности, задержания последа. При гематологическом и иммунологическом исследовании выявлена лейкопения, анемия, снижение содержания Т- и Б-лимфоцитов, снижение фагоцитарной активности нейтрофилов. При биохимическом исследовании сыворотки крови установлено снижение содержания глюкозы, общего белка, активности щелочной фосфатазы, мочевины, изменение показателей антиоксидантной системы.
Для лечения подтвержденного сочетанного миктоксикоза использована разработанная комплексная схема, включающая применение в качестве сорбента вспученного вермикулита Ковдорского месторождения с размером частиц 0,1-2 мм, а в качестве средств, повышающих резистентность животных, Витадаптина и Седимина.
Природный вермикулит представляет собой слюду высокой степени гидратированности, имеющую листовато-чешуйчатую структуру золотисто-желтого цвета. Размеры кристаллов природного вермикулита могут составлять от долей миллиметра до нескольких сантиметров и характеризуются мезо-макропористой структурой и сложным составом - Таблица 3.
Таблица 3
Химический состав вермикулита
Ковдорское месторождение
Содержание химических веществ, %
SiO<sub>2</sub>
TiO<sub>2</sub>
Al<sub>2</sub>O<sub>3</sub>
Fe<sub>2</sub>O<sub>3</sub>
FeO
MnO
MgO
CaO
Na<sub>2</sub>O
Ka<sub>2</sub>O
P<sub>2</sub>O<sub>5</sub>
34.17
0.55
11.35
4.89
0.4
0.08
25.12
1.02
0.02
0.14
0.21
2
2
Нагревание (вспучивание) природного вермикулита проводится при температуре 800-900°С, что делает материал практически стерильным. Кроме того, при нагревании происходит увеличение мезопористости, что обусловливает высокие сорбционные свойства вспученного вермикулита. Так, удельная поверхность вермикулитового сырья составляет 3,1 м/г, а полученного из него вспученного вермикулита - 6,9 м/г. Вспученный вермикулит представляет собой гранулы золотисто-желтого цвета размером от 0,1 до 2,0 мм, способные поглощать до 5 весовых частей жидкости. Вермикулит обладает высокими катионообменными, адсорбционными и каталитическими свойствами. Все вышеперечисленные свойства обусловливают способность вермикулита поглощать эндогенные и экзогенные токсины. Вспученный вермикулит способен поглощать из раствора 77,5-92,3% спор микроскопических грибов Aspergillus, Penicillinum, Fusarium (Кузнецов С.Г. Природные цеолиты в животноводстве и ветеринарии. С.х биология, 1999, №6).
Препарат «Витадаптин» (Vitadaptin) инъекционный - стерильная форма масла зародышей пшеницы. Витадаптин в качестве действующих веществ содержит природный комплекс витаминов А, Д, Е и полиненасыщенные жирные кислоты. По внешнему виду препарат представляет собой жидкость от светло-желтого до коричневого цвета (допускается легкое помутнение, осадок) с запахом, характерным для масла зародышей пшеницы. Витадаптин выпускают расфасованным по 100 мл.
Витадаптин содержит природный комплекс витаминов А, Д, Е и полиненасыщенных жирных кислот, действует всем комплексом биологически активных веществ на организм сельскохозяйственных животных как средство при лечении и профилактике гипо- и авитаминозов и заболеваний, развивающихся на их фоне, для нормализации обмена веществ, повышения иммунного статуса организма, повышения репродуктивной функции и роста животных.
Седимин - ветеринарный препарат, содержит действующие вещества: 13-18 мг/мл железа, 5,6-5,8 мг/мл йода, 0,14-0,18 мг/мл селена. Представляет собой стерильную, нелетучую и непрозрачную жидкость темно-коричневого цвета с легким специфическим запахом, хорошо смешивается с водой. Препарат выпускают в стеклянных флаконах вместимостью 100, 200, 400, 500 мл срок хранения в защищенном от света месте при температуре от 2 до 30°С 3 года.
Апробацию предложенного способа проводили в условиях научно-производственного опыта. Учет эффективности способа осуществляли по изменению результатов клинических наблюдений, морфо-биохимических показателей крови и показателей продуктивности двух групп коров-аналогов по 45 голов в каждой.
В контрольную и опытную группы были подобраны коровы продуктивностью 5000-5100 кг молока, находящиеся на 3 месяце лактации. За коровами обеих групп осуществлялось постоянное наблюдение, измерение основных физиологических показателей проводилось ежедневно, полное клиническое обследование, включая одновременное исследование крови, на протяжении эксперимента проводилось трижды через равные промежутки времени. Первое исследование соответствовало началу эксперимента. Все животные находились в одном помещении и получали одинаковый основной рацион.
В качестве сорбента микотоксинов всем коровам дополнительно к основному рациону ежедневно скармливали с комбикормом вспученный вермикулит с размерами частиц 0,1-2,0 мм в дозе 100 г на голову. Животным опытной группы дополнительно к скармливанию вермикулита с начала эксперимента однократно внутримышечно вводили Седимин в дозе 10 мл на голову и Витадаптин в дозе 20 мл на голову. Повторно препараты вводили через 30 дней. Продолжительность опыта составила 60 дней.
Регулярное проведение клинического обследования животных показало, что через 30 дней после введения в рацион вермикулита состояние всех животных обеих групп значительно улучшилось. Нормализовалась моторика рубца, исчезла саливация, улучшился аппетит, повысилась молочная продуктивность. У коров опытной группы к тому же не было зарегистрировано абортов, тогда как в контрольной группе абортировало 5 коров.
На протяжении опытного периода осуществляли контроль иммуногематологических показателей у животных контрольной и опытной групп (Таблица 4).
Через 30 дней после применения комплексной схемы лечения опытных коров отмечали повышение содержания эритроцитов на 67% по сравнению с контролем. Кроме того, у опытных животных произошло достоверное увеличение содержания Т-лимфоцитов на 10% и через 60 дней на 12% по сравнению с фоновыми. В контроле этот показатель существенно не изменялся. Таким образом, достоверно установлено и подтверждено иммунокорректирующее действие предложенной схемы лечения при сочетанном микотоксикозе.
Таблица 4
Динамика иммуногематологических показателей (M±m) n=20
Показатели
Фон
Через 30 дней
Через 60 дней
Опытная группа
Контрольная группа
Опытная группа
Контрольная группа
Опытная группа
Контрольная группа
Лейкоциты, тыс/мкл
8,03±0,04
8,3±0,09
7,4±0,3
7,8±0,13
7,03±0,29
8,3±0,07
Эритроциты, млн/мкл
4,95±0,06
5,01±0,07
6,35±0,07
5,84±0,08
6,63±0,09
6,04±0,08
Гемоглобин, г/л
101,1±0,7
102,6±0,6
113,1±0,6
104,0±1,0
116,1±0,5
105,5±0,8
Лимфоциты, тыс/мкл
5,63±0,04
5,78±0,09
5,06±0,06
5,37±0,14
3,85±0,05
6,26±0,06
Т-лимфоциты, %
26,0±0,48
20,0±0,52
38,3±0,86
22,2±0,52
41,15±0,54
22,8±0,57
В-лимфоциты, %
22,0±0,39
22,5±0,56
25,9±0,42
23,8±0,77
27,9±0,42
24,3±0,67
Т-лимфоциты, тыс/мкл
1,47±0,03
1,15±0,03
1,94±0,05
1,22±0,05
1,59±0,03
1,43±0,04
В-лимфоциты, тыс/мкл
1,17±0,03
1,3±0,04
1,31±0,02
1,27±0,05
1,12±0,05
1,49±0,06
Индекс Т/В
0,89±0,01
0,84±0,02
1,05±0,02
0,91±0,02
1,16±0,02
0,88±0,03
Фагоцитарная активность (ФА), %
34,1±0,64
31,2±1,0
67,3±1,65
34,0±1,12
51,7±0,79
32,26±0,6
Фагоцитарный индекс (ФИ), у.е.
8,21±0,16*
8,34±0,22*
11,67±0,35
8,8±0,36
8,55±0,14
9,12±0,39
* разница между группами достоверна (Р<0,05)
Перед началом эксперимента достоверных различий между результатами исследования крови коров опытной и контрольной групп не отмечалось. Через 30 дней после начала лечения в крови коров опытной группы возросло содержание глюкозы, общего белка, мочевины, снизилось содержание холестерина, что свидетельствует о нормализации функции печени. Дальнейшая динамика положительных изменений в биохимическом составе крови у опытных животных была еще более выражена (Таблица 5).
Таблица 5
Результаты биохимического исследования крови (n=20)
Показатели
№ исследования
Группы коров
Контроль (M±m)
Опыт (M±m)
Глюкоза, Ммоль/л
1
2,12±0,08
2,14±0,08
2
2,19±0,04
2,30±0,07
3
2,22±0,11
2,38±0,04
Общий белок, г/л
1
73,15±4,72
72,22±5,78
2
72,68±3,96
78,35±5,91*
3
71,98±5,36
80,05±4,93*
Мочевина, Ммоль/л
1
2,05±0,33
2,08±0,81
2
2,89±0,41
3,98±0,65
3
3,67±0,39
4,88±0,82*
Холестерин, Ммоль/л
1
4,37±0,83
4,24±1,07
2
3,73±1,01
4,56±0,74
3
3,62±0,94
4,92±0,81
Кальций, Ммоль/л
1
2,22±0,09
2,15±0,11
2
2,46±0,05
2,55±0,06
3
2,51±0,03
2,64±0,03
Фосфор, Ммоль/л
1
1,54±0,07
1,62±0,12
2
1,55±0,03
1,58±0,08
3
1,53±0,06
1,55±0,06
2
0,98±0,04
0,96±0,05
3
0,99±0,06
0,88±0,07
АсАт, Ммоль/л
1
2,86±0,02
2,98±0,04
2
3,08±0,11
2,73±0,09
3
4,56±1,01
1,86±0,05*
АлАт, ммоль/л
1
1,56±0,01
1,64±0,05
2
1,89±0,02
1,57±0,03
3
1,98±0,04
1,42±0,04
* разница с контролем достоверна
Известно, что любые токсические воздействия, в том числе микотоксины приводят к развитию окислительного стресса, характеризующегося повышенным содержанием в крови продуктов перикисного окисления липидов и снижением показателей антиоксидантной системы. Установлено, что в начале опыта (исходные данные после скармливания кормов, содержащих микотоксины) у всех животных было повышено содержание малонового альдегида и снижен уровень каталазы и пероксидазы (Таблица 6).
Таблица 6
Показатели антиоксидантной системы коров контрольной и опытной групп
Пероксидаза, мкмоль/л/мин
Каталаза, в ед. опт. пл.
МДА, мкмоль/л
опыт
контроль
опыт
контроль
опыт
контроль
до опыта
5,53
6,17
0,42
0,39
5,31
3,57
через 30 дней
9,94
7,56
0,65
0,41
3,93
5,91
через 60 дней
11,36
7,15
0,74
0,48
3,07
5,67
У коров опытной группы уровень пероксидазы группы увеличивался на протяжении всего опыта. В контрольной группе после скармливания только сорбента происходит повышение уровня пероксидазы, но затем этот показатель снижается. Уровень каталазы в опытной группе постоянно возрастал, в то время как в контрольной группе происходит его постепенное снижение. Одновременно с этим у опытных животных уменьшается количество МДА, а в контрольной группе наоборот: количество продуктов ПОЛ увеличивается.
Ключевым фактором в механизме токсичности является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). АОС является защитным фактором, поддерживающим процессы ПОЛ на определенном уровне. При возрастании скорости ПОЛ повышается вязкость мембран клеток, что способствует дестабилизации мембран, нарушению структуры и функции белков и в конечном итоге приводит к гибели клетки.
Селен является мощным антиоксидантом и совместно с токоферолом и ретинолом, содержащимися в Витадаптине, оказывает защитное действие против окислительного стресса, катализируя распад перикиси водорода и разложение гидроокисей липидов. Взаимосвязь селена и витамина Е обусловлена тем, что эти вещества воздействуют на разные этапы образования органических перекисей. Токоферолы служат антиоксидантами по отношению к ненасыщенным липидам плазматической мембраны, предохраняют их от разрушения свободными радикалами. Витамин Е «перехватывает» образующиеся радикалы. Механизм его действия обусловлен тем, что селен входит в состав глутатионпероксидазы. Селеносодержащая глутатионпероксидаза разрушает как перекись водорода, так и перекиси липидов.
Таким образом, совместное комплексное применение вспученного вермикулита, Витадаптина и Седимина по предложенной схеме способствует нормализации обменных процессов у заболевших животных, уменьшает явления интоксикации, нормализует деятельность печени, а также способствует нормализации процессов перекисного окисления в организме животных. Защитное действие селена на фоне введения вермикулита дополняется и усиливается витаминами А и Е, которые также входят в состав Витадаптина, что в конечном итоге повышает удой.
Исходный уровень молочной продуктивности у коров контрольной группы составил 16,3 л, в опытной - 16,2 л. Через 60 дней удой в контрольной группе был 16,9, в опытной - 17,8 л.
Таким образом, использование комплексного патогенетического способа лечения сочетанного микотоксикоза у лактирующих коров способствует нормализации обменных процессов у животных, обеспечивает повышение показателей естественной резистентности и значительное (на 10%) повышение молочной продуктивности коров, показывая неочевидный эффект предложенного способа и эффективность такого лечения.