Влияние вегетативной регуляции на формирование иммунореактивности при раке тела матки

ВЛИЯНИЕ ВЕГЕТАТИВНОЙ РЕГУЛЯЦИИ НА ФОРМИРОВАНИЕ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ПРИ РАКЕ ТЕЛА МАТКИ

А.И. Пашов, Ю.А. Дыхно, В.Б. Цхай, Л.Н. Платонова

Красноярская государственная медицинская академия

Представлены результаты исследования зависимости функционального состояния иммyнoкoмпeтeнтныx клеток от регуляторным влияний вегетативной нервной системы у З7 здоровьк женщин в постменопаузе и б1 больной раком тела матки. Показано, что у больнык раком эндометрия с превалирующей парасимпатической регуляцией (nCO BHC) на фоне развития oпyxoлeвoгo процесса отмечалась активация иммунной системы. Патологический процесс у пациенток с раком тела матки и преобладанием симпатического отдела вегетативной нервной системы (CO BHC) сопровождался снижением функциональный возможностей основный звеньев иммунной системы.

INFLUENCE OF VEGETATIVE REGULATION ON IMMUNE REACTIVITY IN PATIENTS WITH UTERINE

CANCER

A.I. Pashov, Yu. A. Dykhno, V.B. Tskhay, L.N. Platonova Krasnoyarsk State Medical Academy

The results of studying the dependence of immunocompetent cells functional state on regulatory effects of vegetative nervous system in З7 healthy postmenopausal women and in б1 patients with uterine cancer were presented. Immune system was shown to activate in endometrial cancer patients with predominant parasympathetic regulation in parallel with endometrial cancer development. Pathological process for patients with uterine cancer and predominance of sympathetic part of vegetative nervous system was followed by the reduction in functional status of basic links of immune system.

Рак тела матки (РТМ) вызывает интерес многих специалистов: гинекологов, онкологов, морфологов и эндокринологов. Известно, что возникновение и развитие гормонозависимых новообразований репродуктивной системы - сложный мультифакторный процесс. Он включает в себя наследственную предрасположенность, влияние окружающей среды, изменение репродуктивного поведения женщин - ориентация на малодетность, «постарение» женской популяции, учащающийся за последние годы рост дисфункций вегетативно-эндокринной регуляции центрального и периферического уровней, предшествующих развитию эндокринно-метаболических нарушений [3, 6, 14].

По мнению Ф.М. Бернета (1971), механизмы иммунологического надзора становятся менее эффективными по мере увеличения возраста [2]. Это снижение иммунологической защиты уменьшает вероятность устранения трансформированной раковой клетки, что в конечном итоге приводит к возникновению опухоли. Эффективность противоопухолевой защиты организма во многом определяется функциональным состоянием иммунной системы, осуществляющей надзор за возникновением и пролиферацией трансформированных клеток. С другой стороны, опухолевый процесс, возникший в организме,

оказывает влияние на функционирование системы иммунитета, т.е. сопровождается изменениями иммунного статуса больных, что нуждается в дальнейшем изучении [1, 6, 10, 12, 13, 14, 16].

Целью исследования явилась оценка влияния исходного вегетативного тонуса на иммунный статус больных раком эндометрия.

Материалы и методы

Зависимость функционального состояния имму-нокомпетентных клеток от регуляторных влияний вегетативной нервной системы (ВНС) была изучена у женщин в постменопаузе: 37 здоровых - контрольная (К) группа и 61 больная РТМ I стадии. У 34 пациенток с РТМ преобладал тонус парасимпатического отдела (ПСО), у 27 - симпатического отдела (СО) ВНС.

В качестве физиологических параметров, позволяющих оценить состояние ВНС, использовались индекс Кердо (ИК) и показатель минутного объема крови [4]. Кроме того, для характеристики состояния регуляторных систем организма использован индекс стресса (по Л.Х. Гаркави с соавт.), позволяющий по показателям лейкоцитарной формулы периферической крови дифференцировать неспецифические адап-

тационные реакции: «реакцию тренировки» и «реакцию активации» [5], предшествующие типичным для стресса реакциям организма, описанным Г. Ceльe [В].

Cрeднee значение HK в группе PTM-CO составило +10,77 + 1,93; в группе PTM-nCO показатель был равен -9,05 + 0,81. В группе PTM-CO отмечался и достоверно более высокий минутный объем крови по сравнению с группой PTM-nCO. Cрeдниe значения величины индекса стресса в этих группах соответственно были равны 0,45 + 0,05 («реакция активации» по H.X. Г аркави) и 0,57 + 0,03 («реакция тренировки») [4]. Аналогичное разделение произведено и в контрольной группе: K-nCO и K-CO -21 и 1б женщин соответственно.

Исследование иммунного статуса здоровых женщин и больных PTM проводилось в соответствии с общепринятыми рекомендациями [7,9]. ^овь забиралась с 8.00 до 10.00 часов утра с учетом циркадных суточных ритмов показателей иммунитета [7].

Экспрессия поверхностных клеточных лимфоцитарных антигенов CD3 (T-лимфоциты), CD4 (T-хелпе-ры), CD8 (T-цитоксические/супрессоры), CD19 (B-лимфоциты) оценивалась методом непрямой флуоресценции с мышиными моноклональными антителами (3AO «Coрбeнт») на люминесцентном микроскопе «Люмам И-1». По соотношению CD4/CD8, то есть по иммуно-регуляторному индексу (ИРИ), судили о балансе регуляторных субпопуляций T-лимфоцитов.

O^Hra функционального состояния гуморального звена иммунной системы производилась по определению концентрации сывороточных иммуноглобулинов IgA, IgM, IgG методом радиальной иммунодиффузии G. Manchini et al. [15]; по определению концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦНЮ после инкубации сыворотки крови с раствором ПЭГ-б000 и последующим учетом результатов на фотоэлектроколориметре.

Функциональное состояние системы фагоцитоза оценивалось по спонтанной и индуцированной хемилюминесценции (XH) гранулоцитов крови методом P. De Soli et al. [11] на 3б-канальном хемилю-минесцентном анализаторе «CL3604» (ЖХБ «Наука», г. Kрaснoярск). В качестве индуктора дыхательного «взрыва» использовался опсонизированный зимо-зан. Из параметров хемилюминесценции учитывались: площади кривых спонтанной (S-sp-XH) и индуцированной (S-st-XH) хемилюминесценции, время выхода на пик кривой индуцированной XH (XH-t’), индекс стимуляции (ИСТ) -соотношение S-st/S-sp. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по их способности к поглощению частиц латекса,

при этом оценивали уровень активных нейтрофилов - фагоцитарный индекс (ФИ) и количество поглощенных одним нейтрофилом частиц - фагоцитарное число (ФЧ).

Верификация диагноза заболевания осуществлялась на основании результатов гистологического исследования соскоба эндометрия, полученного в результате фракционного диагностического выскабливания и исследования послеоперационного материала больных РТМ. Распределение гистологических вариантов опухоли (высокая и умеренная степень диф-ференцировки; низкодифференцированная аденокарцинома) в сравниваемых группах больных было сопоставимым: ПСО - 61,8 % и 38,2 %, СО - 48,1 % и 51,9 % соответственно (р>0,1). Это позволило считать, что различия в показателях сравниваемых групп в основном связаны с состоянием вегетативной регуляции.

При статистической обработке результатов вычисляли значение средней величины показателя и стандартную ошибку средней. При соответствии данных нормальному распределению для их сравнения использовался 1-критерий Фишера - Стьюдента для связанных и несвязанных величин. Сравнение средних значений изучаемого признака для выборок с распределением, отличным от нормального, проводили непараметрическими методами по критерию Вилкоксона и Ван дер Вардена.

Оценка взаимосвязей показателей периферической крови и параметров иммунного статуса больных РТМ, обусловленных преобладанием ПСО или СО ВНС, проводилась с помощью корреляционного анализа, при этом учитывались только статистически значимые связи (р<0,05).

Результаты и обсуждение

Как видно из представленных результатов (табл. 1), показатели иммунного статуса обследованных женщин группы К-СО отличались от соответствующих параметров в группе К-ПСО, помимо относительной лимфопении, и меньшим относительным (р<0,001) и абсолютным содержанием Т-лимфоцитов (р<0,001).

Наблюдалась также особенность распределения иммунорегуляторных популяций Т-лимфоцитов в зависимости от преобладания в организме симпатического или парасимпатического вегетативного тонуса. Так, в группе К-СО по сравнению с группой К-ПСО отмечался достоверно меньший процент СБ4-лимфоцитов (р<0,01), тогда как количество СБ8-лим-фоцитов, напротив, было повышено (р<0,05). Веро-

1B

ятно, перераспределение в сторону усиления пролиферации и дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов связано с иммуносупрессивным воздействием медиаторов СО ВНС на СБ4-лимфоциты. Кроме того, уменьшение иммунорегуляторного индекса (соотношение СБ4/СЭ8) в группе К-СО по сравнению с группой К-ПСО (р<0,001) обусловливало, по-видимому, и менее высокую функциональную активность В-лимфоцитов, что подтверждалось ги-погаммаглобулинемией по ^А (р<0,01) и IgG (р<0,05).

Функциональная активность фагоцитов была более высокой у здоровых женщин в постменопаузе с преобладанием парасимпатической регуляции. Об этом свидетельствовали: увеличение способности фагоцитов к «поглощению» антигена (повышение ФИ и ФЧ по отношению к показателям группы К-СО,

Таблица 1

Показатели иммунного статуса практически здоровых лиц с преобладанием симпатической

Показатели Контрольная группа Достовер-

ПСО (n=2l) СО (n=l6) ность различий

L, мкл 5547,62+142,8 6093,75+197,4 р<0,05

Лф= % 29,43+0,84 26,63+1,03 р<0,05

Лф= мкл 1619,67+61,29 1614,94+76,69 р>0,05

CD3, % 58,52+1,46 49,25+1,54 р<0,001

CD3, мкл 937,56+26,50 791,47+38,45 р<0,01

CD4, % 35,76+1,06 31,56+0,87 р<0,01

CD8, % 27,19+0,88 З0,25+0,81 р<0,05

CD4/CD8 1,33+0,04 1,05+0,04 р<0,001

CD 19, % ІЗ, 00+0,41 13,06+0,63 р>0,05

CD 19, мкл 208,08+6,66 211,12+14,94 р>0,05

IgA, г/л 3,38+0,15 2,74+0,7 р<0,01

IgM, г/л 1,04+0,07 1,8+0,Ю р>0,05

IgG, г/л 14,22+0,27 13,33+0,35 р<0,05

ЦИК, у.е. 52,52+3,35 54,63+3,98 р>0,05

ФИ, % 62,62+1,62 49,50+1,18 р<0,001

ФЧ 6,19+0,29 4,75+0,39 р<0,01

ХЛ-t, мин 24,48+0,52 28,8+0,75 р<0,001

ИСТ 8,90+0,8 6,33+0,33 р<0,001

О. -s - 4371,52+485,6 5384,25+767,3 р>0,05

S-st 37837,24+3791,0 32104,69+3900,3 р>0,05

р<0,01); высокий ответ клеток на дополнительное антигенное раздражение (ИСТ - р<0,001); укорочение времени выхода на пик показателя индуцированной хемилюминесценции (ХЛ4 - р<0,001).

Таким образом, преобладание тонуса ПСО ВНС у здоровых женщин в постменопаузе определяет более высокие функциональные возможности иммунной системы, обеспечивающие быстрое реагирование на антиген. Ограничение возможностей иммунитета у женщин с превалированием симпатической регуляции, по-видимому, можно объяснить за счет «истощения» адаптационных способностей иммунной системы на фоне повышенной надпочечниковой активности.

В группе пациенток с РТМ, у которых преобладал тонус СО ВНС, в отличие от больных группы ПСО

Таблица 2

Показатели иммунного статуса больных раком тела матки с преобладанием парасимпатической (РТМ-ПСО) или симпатической (РТМ-СО) регуляции

Показатели Больные раком эндометрия Досто- верность различий

ПСО

L, мкл 55З8,24±246,5 7159,26±544,5 р<0,01

Лф., % З2,09±1,З0 26,22±l,9l р<0,05

Лф., мкл 17З8,44±84,04 l69l,52±88,75 р>0,05

CD3, % 58,76±l,74 49,70±l,90 р<0,001

CD3, мкл 1014,9З±52,32 812,08±З1,05 р<0,001

CD4, % З6,00±1Д7 27,9З±1Д8 р<0,001

CD8, % 27,9l±0,97 З2,6З±1,66 р<0,05

CD4/CD8 1,З2±0,04 0,92±0,07 р<0,001

CD 19, % 12,56±0,З9 1З,07±0,61 р>0,05

CD19, мкл 215,6З±11Д6 212,57±8,80 р>0,05

IgA, г/л З,85±0Д8 З,20±0Д8 р<0,05

IgM, г/л 0,84±0,0З 0,8З±0,04 р>0,05

IgG, г/л 12,65±0,49 12,29±0,5З р>0,05

ЦИК, у.е. 55,68±5,58 64,74±6,0l р>0,05

ФИ, % 52,82±l,66 49,67±2,25 р>0,05

ФЧ 4,8З±0,2З 4,02±0,26 р<0,05

ХЛ-t, мин. 29,00±0,5l З1,ЗЗ±0,72 р<0,01

ИСТ 2,74±0,25 2,07±0,,8 р<0,05

S-sp З0017,09±ЗЗЗ7,7 29З72,ЗЗ±З5З2,2 р>0,05

S-st 65226,59±6!00,8 50026,З0±468З,5 р<0,05

(табл. 2), несмотря на лейкоцитоз (р<0,01), отмечалось достоверное снижение относительного и абсолютного числа СБ3-клеток (р<0,001), но не было отличий по отношению к контролю. Кроме того, усугублялся дисбаланс иммунорегуляторных субпопуляций за счет меньшего содержания CD4 (различия с соответствующим показателем групп К-СО и РТМ-ПСО статистически значимы) и достоверного роста CDS-клеток (р<0,05). Вероятно, такое перераспределение связано, с одной стороны, с усилением имму-носупрессивного воздействия стрессовых гормонов на CD4-лимфоциты, с другой - «попыткой» стимуляции противоопухолевого иммунитета за счет активации цитотоксических Т-клеток.

У больных РТМ с преобладанием парасимпатической регуляции и в группе РТМ-СО определялось снижение концентраций IgM по сравнению с контролем (р<0,05 и р<0,01 соответственно). Несмотря на тенденцию к росту уровня IgA по отношению к показателю здоровых лиц (р<0,1), его содержание было достоверно ниже параметра в группе РТМ-ПСО (р<0,05).

Обращало на себя внимание достоверное снижение по сравнению с соответствующим контролем у женщин с РТМ группы ПСО фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа (р<0,001), тогда как у пациенток группы СО эти параметры оставались на уровне здоровых лиц. Несмотря на такие изменения, дос-

товерных отличий по показателю ФИ в группах больных не отмечалось, а значение ФИ у пациенток РТМ-ПСО достоверно превышало таковое в группе РТМ-СО (р<0,05), что в совокупности характеризовало низкую способность фагоцитов больных к поглощению антигена, более выраженную при течении болезни на фоне превалирующего тонуса СО ВНС.

В обеих группах больных по сравнению с контролем наблюдался высокий уровень метаболических процессов в фагоцитах, о чем свидетельствовало увеличение показателей спонтанной хемилюминес-ценции (р<0,001). Однако ИСТ, характеризующий ответ клеток на дополнительное антигенное раздражение, снижался в обеих группах (р<0,001 по отношению к контролю), несмотря на достоверное увеличение величины индуцированной ХЛ (РТМ-ПСО -р<0,001; РТМ-СО - р<0,01), менее выраженное на фоне преобладания симпатической регуляции (различия между группами значимы, р<0,05). При этом у пациенток последней группы ИСТ был ниже, чем в сравниваемой (р<0,05), что свидетельствовало не только об уменьшении резервных метаболических возможностей фагоцитов, но и о высоковероятном их истощении под действием катехоламинов и глюкокортикостероидов. Это подтверждалось и удлинением времени до достижения пика кривой индуцированной ХЛ, более выраженным у больных РТМ груп-

--------- - отрицательная связь

--------- - положительная связь

Рис. 1. Корреляционные взаимозависимости параметров иммунного статуса больных раком тела матки с преобладанием парасимпатической (РТМ-ПСО) и симпатической (РТМ-СО) вегетативной регуляции

пы СО (р<0,01 - по отношению к показателю здоровых; р<0,01 - в группах между собой).

Результаты корреляционного анализа иммунологических параметров больных группы ПСО отражали наличие немногим менее жесткой, чем в контроле, взаимозависимости среди показателей функциональных звеньев иммунной системы (процент положительных корреляций - 60,6 %, в контроле - 60,9 %). При этом распределение связей между параметрами клеточного, гуморального и фагоцитарного звеньев было относительно равномерным - 40,4, 29,8 и 29,8 % соответственно. Несмотря на напряжение в функционировании системы иммунитета, это отражало тесное взаимодействие различных звеньев иммунной системы в условиях влияния злокачественной опухоли (рис. 1).

Проведенный анализ корреляционных связей между показателями иммунного статуса больных РТМ с преобладанием симпатической регуляции выявил, как уже было указано выше, резкое увеличение их числа при практически равном соотношении положительных и отрицательных связей (48,4 % и 51,6 % соответственно). Однако необходимо отметить, что характер распределения взаимозависимостей между параметрами функциональных звеньев иммунной системы менялся по сравнению с таковым в группе ПСО. Нарастало количество связей, «замыкающихся» на показателях клеточного звена - с 40,4 % (ПСО) до 47,2 % (СО); на параметрах гуморального и фагоцитарного их число, напротив, снижалось с 29,8 % до 26,4 %. Учитывая достоверное снижение относительного и абсолютного содержания СБЗ-лимфоцитов, развитие иммунорегуляторного дисбаланса, низкую функциональную активность фагоцитов у пациенток рассматриваемой группы, можно предположить, что формирование адекватного иммунного ответа на развивающийся патологический процесс затруднено.

Полученные данные, с учетом возрастных особенностей показателей, свидетельствовали о достаточно сбалансированной работе иммунной системы у здоровых женщин. Однако склонность к развитию лимфопении, иммунодефициту по Т-клеточно-му звену, меньшая функциональная активность фагоцитов у женщин с преобладанием тонуса СО ВНС предполагают неадекватность формирования противоопухолевого иммунитета.

У больных РТМ с превалирующей парасимпатической регуляцией на фоне развития опухолевого процесса отмечалась активация иммунной системы. Это проявлялось как в соответствующих изменениях уровней изученных параметров, так и в возрастании

функциональной нагрузки на систему, что подтверждалось увеличением числа корреляционных связей и изменением их характера.

Патологический процесс у пациенток с РТМ, у которых преобладал тонус СО ВНС, сопровождался снижением функциональных возможностей основных звеньев иммунной системы. Указанное обстоятельство было наиболее характерно для клеточного звена, включая активность фагоцитирующих клеток, что, с учетом их роли в осуществлении противоопухолевой защиты, может иметь негативное значение в плане клинического течения заболевания. Вероятно, констатируемые в данной группе больных изменения связаны не только с воздействием злокачественной опухоли на функцию иммунной системы, но и с иммуносупрес-сивным эффектом медиаторов СО ВНС.

ЛИТЕРАТУРА

1. Абрамов В.В., Абрамова Т.Я. Асимметрия нервной, эндокринной и иммунной систем. Новосибирск: Наука, 1996. 97 с.

2. Бернет М. Клеточная иммунология. М.: Мир, 1971. 542 с.

3. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2002. 542 с.

4. Веин А.М., Соловьева А.Д., Колосова О.А. Вегето-сосудистая дистония. М.: Медицина, 1981. 317 с.

5. Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов н/Д: Изд-во Рост. ун-та, 1990. 224 с.

6. Дильман В.М. Четыре модели медицины. СПб.: Медицина, 1987. 288 с.

7. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. М.: Наука, 1990. 224 с.

8. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медицина, 1960. 254 с.

9. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. 432 с.

10. Blalock J.E. Neuroimmunoendocrinology. Basel: Karger, 1992. Vol. 52. Р. 1-24.

11. De Soli P., Lippa S., Lixxarru G. Whole blood chemiluminescence: a new technical approach to assess oxygen-de-pendent microbial activity of granulocytes // J. Clin. Lab. Autom. 1983. Vol. 3. Р. 391-400.

12. Fujii T., Kawashima K. An independent non-neuronal cholinergic system in lymphocytes // Jpn. J. Pharmacol. 2001. Vol. 85, № 1. Р 11-15.

13. Kawashima K., Fujii T. Extraneuronal cholinergic system in lymphocytes // Pharmacol. Ther. 2000. Vol. 86, № 1. Р. 29-48.

14. Korneeva I., Bongiovanni А. M., Girotra M. Serum antibodies to the 27-kd heat shock protein in women with gynecologic cancers // Am. J. Obstet. Gynecol. 2000. Vol. 183, № 1. Р. 18-21.

15. Manchini G., Carbonara A.O., Heremas J.F. Immunochemical quantitation of antigens by single radical immunodiffusion // Immunochemistry. 1965. Vol. 2. Р 235-254.

16. Poka R., Szucs S., Adany R. et al. Stage-related superoxide anion production of granulocytes of gynecologic cancer patients // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2000. Vol. 89, № 1. Р. 55-57.

Поступила 26.08.05