Гуморальный иммунный ответ у пациенток с цервикальными неоплазиями, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска

методы диагностики и технологии

УДК 618.146-097-06: 616.98:578.827

гуморальный иммунный ответ у пациенток с цервикальными неоплазиями, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска

Л. Ф. Телешева, О. С. Абрамовских, И. Ю. Орнер, И. Л. Батурина

Челябинская государственная медицинская академия, г. Челябинск

Изучены гуморальные факторы системного и местного иммунного ответов у пациенток с церви-кальной интраэпителиальной неоплазией III степени и carcinoma in situ, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска. В результате проведенных исследований установлено, что уровни иммуноглобулинов в цервикальной слизи у пациенток с CIN III и carcinoma in situ характеризовалось однонаправленным повышением уровня sIgA при отсутствии колебания IgM. Повышение уровня IgG регистрировалось только в группе больных carcinoma in situ, тогда как количество В-лимфоцитов и концентрация иммуноглобулинов в периферической крови не претерпевали существенных изменений.

Ключевые слова: вирус папилломы человека, цервикальная интраэпителиальная неоплазия, иммуноглобулины, цервикальная слизь, В-лимфоциты.

ВВЕДЕНИЕ

Эффективность гуморального иммунного ответа против вирусиндуцированных опухолевых антигенов некоторое время являлась предметом дискуссии, поскольку была охарактеризована способность некоторых иммуноглобулинов блокировать антигены на клеточной поверхности, экранируя их от распознавания цитотоксическими лимфоцитами [13]. Несмотря на то, что концепция отрицательного действия блокирующих антител экспериментально не подтверждена, полученные данные не опровергают вероятность того, что формирующиеся у пациентов противоопухолевые антитела могут затруднять реализацию иммунного ответа в отношении неопластических процессов.

Тем не менее в настоящий момент достоверно известно, что вирусиндуцированные опу-холеспецифические антитела могут являться эффективным средством, подавляющим рост опухоли [4].

Инициирующим этапом формирования гуморального иммунного ответа на неопластическую трансформацию является проникновение растворимого опухолевого антигена в крово- и лимфоток и попадание его в ком-партменты лимфатических узлов, содержащие резидентные В-клетки. Установлено, что первоначальная выработка иммуноглобулинов происходит местно, в очаге поражения [7]. Присутствие иммуноглобулинов в экзосекретах репродуктивного тракта объясняется как локальным их синтезом, так и поступлением из крови [11]. Имеются разно-

речивые данные о концентрации иммуноглобулинов в периферической крови и цер-викальной слизи при прогрессировании опухолевой трансформации эпителия шейки матки, что и определило цель нашего исследования [1, 5, 7, 8].

Цель исследования — изучение гуморальных факторов системного и местного иммунного ответов у пациенток с цервикальной интраэпителиальной неоплазией III степени и carcinoma in situ, ассоциированными с вирусом папилломы человека (ВПЧ) высокого канцерогенного риска (ВКР).

Материалы и методы

ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач за период с 2007 по 2010 г. на базе ГЛПУ Челябинского окружного клинического онкологического диспансера и НИИ иммунологии ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава было проведено иммунологическое обследование 40 женщин, у которых предварительно методом по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) был обнаружен ВПч ВКР. Все пациентки были разделены на две группы: 1-я группа — 20 пациенток с цервикальной интраэпителиаль-ной неоплазией III степени (CIN III); 2-я группа — 20 больных с carcinoma in situ (Cr. in situ). Контрольную группу, полученную методом случайной выборки, составили 20 женщин с наличием ВПч ВКР в цервикальном канале, при обследовании которых с применением клинических, инструментальных и морфологических методов исследования изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии выявлено не было. Возраст больных варьировал от 20 до 54 лет, средний возраст составил 39,2±1,7 г. Группа контроля и группы больных были сопоставимы по возрасту.

для оценки иммунологических показателей у женщин исследовались перифериче-

ская кровь и цервикальная слизь до начала курса лечения. В периферической крови количество В-лимфоцитов определяли по методике иммунофенотипирования лимфоцитов в модификации С. В. Сибиряка и соавт. (1997) с использованием моноклональных антител анти^20 серии ИКО (НПЦ «Мед-БиоСпектр», г. Москва). Концентрации иммуноглобулинов А (IgA), M (IgM), G (IgG) в периферической крови и уровни секреторного иммуноглобулина А (sIgA), иммуноглобулинов А (IgA), M (IgM), G (IgG) в цервикальной слизи определяли методом ИФА с использованием соответствующих тест-систем ООО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

Полученные результаты исследований были подвергнуты статистической обработке с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 6.0 с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (M±m). Оценка достоверности различий между группами производилась с использованием непараметрического критерия Манна — Уитни, различия считали значимыми только при p<0,05.

Результаты и их обсуждение

Количество СD20+-лимфоцитов и уровней иммуноглобулинов в периферической крови у всех обследованных пациенток не претерпевало существенных изменений относительно группы контроля (табл.).

При изучении гуморальных факторов защиты цервикальной слизи у пациенток с CIN III и Cr. in situ отмечено значительное повышение уровней sIgA относительно контрольных значений. Концентрация IgA при прогрессировании неопластического процесса имела однонаправленный возрастающий характер. Уровень IgM не претерпевал существенных изменений как относительно группы контроля, так и при межгрупповом сравнении. При Cr. in situ обращает на себя

Пермский медицинский журнал

2011 том XXVIII № 5

Таблица

Показатели гуморальных факторов иммунитета в периферической крови и цервикальной слизи, M±m

Показатели Группа контроля

Периферическая кровь

СD20+, х109/л 0,2±0,02 0,17±0,02 0,18±0,02

IgA, г/л 1,39±0,09 1,32±0,09 1,66±0,12

IgM, г/л 1,3±0,15 1,13±0,08 1,41±0,13

IgG, г/л 8,4±0,4 9,13±0,38 9,13±0,37

Цервикальная слизь

sIgA, мг/мл 0,81±0,02 5,57±0,9 р<0,001 * 7,51±1,18 р<0,001 *

IgA, г/л 0,52±0,07 0,56±0,08 1,16±0,32

IgM, г/л 0,23±0,02 0,34±0,08 0,24±0,03

IgG, г/л 0,91±0,04 0,76±0,06 1,53±0,26 р=0,03 *

Примечание. р* — статистическая достоверность различий показателей больных от группы контроля; п — количество обследованных женщин.

внимание изменение уровня IgG в сторону увеличения по сравнению с таковым в контрольной группе.

Таким образом, установлено, что количество CD20+-лимфоцитов и концентрация иммуноглобулинов в периферической крови у пациенток с CIN III и Cr. in situ не претерпевали существенных изменений как при сравнении с группой контроля, так и при межгрупповом сравнительном анализе. Полученные результаты согласуются с данными литературы о том, что активность гуморального звена иммунитета длительное время остается неизмененной при опухолевой прогрессии [3, 4]. Нормальная активность гуморального иммунитета может быть фактором опухолевой прогрессии и препятствовать деструкции опухолевых клеток [10]. С одной стороны, это связано с тем, что опухольспе-цифические антитела связываются с антигенами опухолевых клеток, препятствующими реализации цитолиза. Это приводит к блокаде антигенов опухолевых клеток и недоступ-

ности их для рецепторов CD8+ Т-киллеров. Другой механизм защиты трансформированных клеток гуморальным иммунитетом связан со сбрасыванием опухолевыми клетками со своей поверхности комплекса антиген — антитело, что также приводит к блокаде специфического противоопухолевого клеточного иммунного ответа. Противоопухолевые антитела не только не обладают защитными свойствами, но и экранируют опухолевые клетки от действия эффекторов клеточного иммунитета. В совокупности эти процессы способствуют развитию опухоли и усугубляют течение болезни [3].

Тем не менее в настоящий момент достоверно известно, что опухольспецифические антитела могут являться эффективным средством, подавляющим рост опухоли. Механизмами противоопухолевого действия антител могут быть связывание с поверхностью опухолевой клетки и блокирование мембранных молекул, необходимых для жизнедеятельности клетки [13], либо же перенаправление

на опухолевую клетку цитотоксического действия гранулоцитов, макрофагов или NK-клеток [12].

При изучении гуморальных факторов защиты цервикальной слизи у пациенток с CIN III и Cr. in situ отмечались однонаправленные изменения, выражающиеся в прогрессирующем росте уровней sIgA и IgA относительно контрольных значений. По нашему мнению, в большей степени это связано с местной продукцией иммуноглобулинов в ответ на локальное повреждение тканей при цервикальных неоплазиях. Известно, что повышение уровней sIgA и IgA в церви-кальной слизи является компенсаторным механизмом в ответ на активное поступление новых антигенов через эпителиальный пласт, утративший свою барьерную функцию [6]. Примечательно, что повышение концентрации IgG наблюдалось только у пациенток с Cr. in situ относительно его уровня как в группе контроля, так у больных с CIN III. Выработка и накопление IgG связаны с массивной антигенной нагрузкой на фоне развивающихся цитопатологических изменений цервикального эпителия и являются отражением напряженной работы гуморального звена иммунитета, подтверждающей преобладание функций Th-2 иммунного ответа при прогрессировании неопластического процесса [2, 9].

Вывод

Учитывая вышеизложенное, мы пришли к выводу, что изменение показателей гуморального звена иммунитета при прогресси-ровании неопластического процесса, индуцированного ВПЧ ВКР, отмечалось только в цервикальной слизи и характеризовалось однонаправленным повышением sIgA при отсутствии колебания IgM. Тогда как количество В-лимфоцитов и концентрация иммуноглобулинов в периферической крови

не претерпевали существенных изменений. Установленный факт связан с местной локализацией очага поражения, при котором неопластический процесс еще не распространился за пределы базальной мембраны цервикального эпителия.

Библиографический список

1. Аполихина И. А. Папилломавирусная инфекция гениталий у женщин/И. А Аполихина,- М.: Изд. дом «ГЭОТАР-МЕД», 2002— 111 с.

2. Гадецкая Н. А. Клеточные показатели специфического гуморального иммунного ответа на антиген Lec у больных раком молочной железы/Н. А. Гадецкая, Л. Ю. Андреева, Н. Н. ТупицыН///Аллергология и иммунология в педиатрии: материалы между-нар. конгр. «Иммунитет и болезни: от теории к терапии».— 2005.— Т. 6— № 5— Прил. 1.— С. 169.

3. Мальцева В. Н. Респираторный взрыв и особенности его регуляции в периферических нейтрофилах при росте опухоли in vivo: дис. ... канд. биол. наук/В. Н. Мальцева— Пущино, 2007.— 138 с.

4. Молекулярные механизмы взаимодействия опухоли и иммунной системы/А. Е. Бережной, Н. В. Гнучев, Г. П. Георгиев и др.// Вопр. онкологии.— 2008.— Т. 54.— № 6.— С. 669—683.

5. Показатели иммунитета у больных с па-пилломавирусной инфекцией гениталий/ Г. Т. Сухих, Н. К. Матвеева, И. А. Аполихина, В. Н. Верясов, Д. В. Куявская, Л. В. Ванько// Акушерство и гинекология.— 2000— № 2.— С. 35—37.

6. Прилепская В. Н. Патология шейки матки/ В. Н. Прилепская, Н. И. Кондриков, Е. В. Го-гаева//Практическая гинекология: клинические лекции/Под ред. В. И. Кулакова, В. Н. Прилепской— М.: МЕДпресс-информ, 2001.— С. 9—40.

Пермский медицинский журнал

7. Сапрыкина О. А Состояние местного иммунитета и его коррекция у больных с фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки матки в сочетании с папил-ломавирусной инфекцией: автореф. дис. ... канд. мед. наук.— М., 1994.— 23 с.

8. Сухих Г. Т. Механизмы иммунной защиты при острых и хронических инфекциях органов репродуктивной системы/ Г. Т. Сухих, Л. В. ВанькО///Акушерство и гинекология.— 2006.— С. 17—23.— Прил.

9. Bais A. G. A shift to a peripheral Th2-type cytokine pattern during the carcinogenesis of cervical cancer becomes manifest in CIN III lesions/A. G. Bais, I.J. Beckmann et al.//J. Clin. Pathol.— 2005.— Vol. 58.— № 10.— P. 1096—1100.

10. Dranoff G. Cytokines in cancer pathogenesis and cancer therapy/G. Dranoff//Nat. Rev. Cancer.— 2004.— Vol. 4.— P. 11—22.

11. Immunization of mice with HPV vaccinia virus recombinants generates serum IgM, IgG а^ mucosal IgA antibodies/M. E. Hagensee, J. J. Carter, G. C. Wipf D. A. Galloway// Virology.— 1995.— Vol. 206.— № 1.— P. 174—182.

12. Immunobiology/C. A. Janeway, P. Travers, M. Walport, M. Shlomchik: 5th ed.— Garland Science, 2001.

13. The collaboration of both humoral and cellular HER-2/neu tar geted immune responses is required for the complete eradication of HER-2/neu-expressing tumors/R. T. Reilly, J. P. Machiels, L. A. Emens et al.//Cancer Research.— 2001.— Vol. 61.— № 2.— P. 880—883.

_2011 том XXVIII № 5

L. F. Telesheva, O. S. Abramovskikh, I. Yu. Orner, I. L. Baturina

HUMORAL IMMUNE RESPONSE IN PATIENTS WITH CERVICAL NEOPLASIAS ASSOCIATED WITH HUMAN PAPILLOMA VIRUS OF HIGH CARCINOGENIC RISK

Humoral factors of systemic and local immune response in patients with degree III cervical intraepithelial neoplasia and carcinoma in situ associated with human papilloma virus of high carcinogenic risk were studied. Cervical mucus immunoglobulin levels in patients with CIN III and carcinoma in situ were found to be characterized by unidirectional increase in sIgA level with IgM fluctuation absent. Elevation of IgG level was registered only in the group of carcinoma in situ patients, whereas B-lymphocyte number and peripheral blood immunoglobulin concentration had no essential changes.

Keywords: human papilloma virus of high carcinogenic risk, cervical intraepithelial neo-plasia, cervical mucus, B-lymphocytes.

Контактная информация: Телешева Лариса Федоровна, доктор мед. наук, профессор, проректор

по научной работе и международным связям Челябинской государственной медицинской академии, 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64, тел. 8 (351) 232-73-69

Материал поступил в редакцию 26.01.2011