Способы стерильной хроматографии и производства

1. Способ осуществления хроматографии с использованием гамма-облученной хроматографической смолы, включающий:
(a) получение хроматографической колонки, содержащей гамма-облученную хроматографическую смолу;
(b) осуществление первого цикла хроматографии с помощью колонки, где цикл включает подвергание хроматографической смолы воздействию денатурирующего буфера; и
(c) осуществление по меньшей мере одного дополнительного цикла хроматографии с помощью колонки.
2. Способ по п. 1, где осуществление циклов на (b) и/или (c) включает этапы:
(a) захвата рекомбинантного белка посредством подвергания хроматографической смолы воздействию жидкости, содержащей рекомбинантный белок;
(b) промывания хроматографической смолы посредством подвергания хроматографической смолы воздействию промывочного буфера;
(c) элюции рекомбинантного белка посредством подвергания хроматографической смолы воздействию элюирующего буфера; и
(d) регенерации хроматографической смолы посредством подвергания хроматографической смолы воздействию денатурирующего буфера.
3. Способ по п. 2, где жидкость, содержащая рекомбинантный белок, является жидкой средой для культивирования.
4. Способ по п. 1, где циклы (b) и (c) осуществляют с использованием замкнутой и интегрированной системы.
5. Способ по п. 4, где буфер является буфером со сниженной бионагрузкой.
6. Способ по п. 5, где буфер со сниженной бионагрузкой получают посредством фильтрации.
TM
7. Способ по п. 1, где денатурирующий буфер содержит одно или несколько из мочевины, гидрохлорида гуанидина и Triton X-100.
8. Способ по п. 1, где цикл (b) дополнительно включает подвергание хроматографической смолы воздействию промывочного буфера, содержащего от приблизительно 0,5 M до приблизительно 1,5 M гидроксида натрия после подвергания воздействию денатурирующего буфера.
9. Способ по п. 1, где колонка является частью мультиколоночной системы хроматографии (MCCS).
10. Способ по п. 9, где MCCS является системой периодической противоточной хроматографии (PCCS).
11. Способ по п. 1, где хроматографическая смола является анионообменной хроматографической смолой, катионообменной хроматографической смолой, эксклюзионной хроматографической смолой, смолой для хроматографии с гидрофобными взаимодействиями, аффинной хроматографической смолой или любой их комбинацией.
12. Способ по п. 11, где хроматографическая смола является анионообменной хроматографической смолой.
13. Способ по п. 1, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 10 кГр до приблизительно 40 кГр.
14. Способ по п. 13, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 15 кГр до приблизительно 35 кГр.
15. Способ по п. 14, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 20 кГр до приблизительно 30 кГр.
16. Способ по п. 1, где осуществляют четыре или более дополнительных цикла хроматографии.
17. Способ по п. 16, где осуществляют девять или более дополнительных циклов хроматографии.
18. Способ по п. 17, где осуществляют четырнадцать или более дополнительных циклов хроматографии.
19. Способ по п. 18, где осуществляют девятнадцать или более дополнительных циклов хроматографии.
20. Способ по п. 19, где осуществляют двадцать четыре или более дополнительных циклов хроматографии.
21. Способ по п. 20, где осуществляют двадцать девять или более дополнительных циклов хроматографии.
22. Способ по п. 18, где осуществляют тридцать девять или более дополнительных циклов хроматографии.
23. Способ по п. 1, где (c) осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 4 дней.
24. Способ по п. 23, где (c) осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 5 дней.
25. Способ по п. 24, где (c) осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 7 дней.
26. Способ по п. 25, где (c) осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 14 дней.
27. Способ по п. 26, где (c) осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 28 дней.
28. Способ по п. 2, где рекомбинантный белок является рекомбинантным терапевтическим белком.
29. Интегрированный, замкнутый и непрерывный способ производства очищенного рекомбинантного белка, включающий:
(a) получение жидкой среды для культивирования, содержащей рекомбинантный белок, по существу, не содержащей клетки; и
(b) непрерывный фидинг жидкой среды для культивирования в мультиколоночную систему хроматографии (MCCS), содержащую по меньшей мере одну хроматографическую колонку, содержащую гамма-облученную хроматографическую смолу, где хроматографическую смолу в течение каждого цикла подвергают воздействию денатурирующей буфера;
где в способе используют буфер со сниженной бионагрузкой, способ является интегрированным, и его осуществляют непрерывно от жидкой среды для культивирования до элюата из MCCS, являющегося очищенным рекомбинантным белком.
30. Способ по п. 29, где посредством MCCS осуществляют по меньшей мере две разные типовые операции.
31. Способ по п. 30, где применение MCCS включает переключение колонок.
32. Способ по п. 29, где все колонки в MCCS содержат гамма-облученную хроматографическую смолу.
33. Способ по п. 29, где посредством MCCS осуществляют типовые операции захвата рекомбинантного белка и инактивация вирусов.
34. Способ по п. 29, где посредством MCCS осуществляют типовые операции захвата и очистки рекомбинантного белка.
35. Способ по п. 29, где MCCS является системой периодической противоточной хроматографии.
36. Способ по п. 29, где MCCS включает множество колонок для аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии, эксклюзионной хроматографии, или хроматографии с гидрофобными взаимодействиями, или любой их комбинации.
37. Способ по п. 36, где MCCS включает колонку для аффинной хроматографии, и аффинную хроматографию осуществляют с использованием механизма захвата, выбранного из группы, состоящей из: механизма захвата со связыванием протеина A, механизма захвата со связыванием субстрата, механизма захвата со связыванием антитела или фрагмента антитела, механизма захвата со связыванием аптамера и механизма захвата со связыванием кофактора.
38. Способ по п. 37, где аффинную хроматографию осуществляют с использованием механизма захвата со связыванием протеина A, и рекомбинантный белок является антителом или фрагментом антитела.
39. Способ по п. 29, где рекомбинантный белок является терапевтическим рекомбинантным белком.
40. Способ по п. 39, дополнительно включающий составление очищенного рекомбинантного белка в фармацевтической композиции.
TM
41. Способ по п. 29, где денатурирующий буфер содержит одно или несколько из мочевины, гидрохлорида гуанидина и Triton X-100.
42. Способ по п. 29, где хроматографическую смолу подвергают воздействию промывочного буфера, содержащего от приблизительно 0,5 M до приблизительно 1,5 M гидроксида натрия, после воздействия денатурирующего буфера в каждом цикле.
43. Интегрированный, замкнутый и непрерывный способ производства рекомбинантного белка, включающий:
(a) получение жидкой среды для культивирования, содержащей рекомбинантный белок, по существу, не содержащей клетки;
(b) непрерывный фидинг жидкой среды для культивирования в первую мультиколоночную систему хроматографии (MCCS1);
(c) захват рекомбинантного белка из жидкой среды для культивирования с использованием MCCS1;
(d) получение элюата из MCCS1, содержащего рекомбинантный белок, и непрерывный фидинг элюата во вторую мультиколоночную систему хроматографии (MCCS2);
(e) непрерывный фидинг рекомбинантного белка из элюата в MCCS2 и последующую элюцию рекомбинантного белка, чтобы, таким образом, получать очищенный рекомбинантный белок, где:
в способе используют буфер со сниженной бионагрузкой, способ является интегрированным, и его осуществляют непрерывно от жидкой среды для культивирования до очищенного рекомбинантного белка, и
по меньшей мере одна колонка в MCCS1 и/или MCCS2 является хроматографической колонкой, содержащей гамма-облученную хроматографическую смолу, и хроматографическую смолу подвергают воздействию денатурирующего буфера в течение каждого цикла способа.
44. Способ по п. 43, где посредством MCCS1 и/или MCCS2 осуществляют по меньшей мере две разные типовые операции.
45. Способ по п. 43, где применение MCCS1, или MCCS2, или и той, и другой, включает переключение колонок.
46. Способ по п. 43, где посредством MCCS1 дополнительно осуществляют типовые операции захвата рекомбинантного белка и инактивации вирусов.
47. Способ по п. 43, где посредством MCCS2 осуществляют типовые операции очистки и тонкой очистки рекомбинантного белка.
48. Способ по п. 43, где в MCCS1 и/или MCCS2 используют по меньшей мере две хроматографические колонки.
49. Способ по п. 43, где все хроматографические колонки в MCCS1 и MCCS2 являются хроматографическими колонками, содержащими гамма-облученную хроматографическую смолу.
50. Способ по п. 43, где MCCS1 является первой системой периодической противоточной хроматографии (PCCS1).
51. Способ по п. 43, где захват осуществляют с использованием аффинной хроматографии, катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии или эксклюзионной хроматографии, хроматографии с гидрофобными взаимодействиями или любой их комбинации.
52. Способ по п. 51, где захват осуществляют с использованием аффинной хроматографии с использованием механизма захвата, выбранного из группы, состоящей из: механизма захвата со связыванием протеина A, механизма захвата со связыванием субстрата, механизма захвата со связыванием антитела или фрагмента антитела, механизма захвата со связыванием аптамера и механизма захвата со связыванием кофактора.
53. Способ по п. 52, где аффинную хроматографию осуществляют с использованием механизма захвата со связыванием протеина A, и рекомбинантный белок является антителом или фрагментом антитела.
54. Способ по п. 43, где MCCS2 является второй системой периодической противоточной хроматографии (PCCS2).
55. Способ по п. 43, где рекомбинантный белок является терапевтическим рекомбинантным белком.
56. Способ по п. 55, дополнительно включающий составление очищенного рекомбинантного белка в фармацевтической композиции.
57. Способ по п. 29 или 43, где способ осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 4 дней.
58. Способ по п. 57, где способ осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 5 дней.
59. Способ по п. 58, где способ осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 7 дней.
60. Способ по п. 59, где способ осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 14 дней.
61. Способ по п. 59, где способ осуществляют непрерывно в течение периода по меньшей мере 28 дней.
62. Способ по п. 29 или 43, где хроматографическая смола является анионообменной хроматографической смолой, катионообменной хроматографической смолой, эксклюзионной хроматографической смолой, смолой для хроматографии с гидрофобными взаимодействиями, аффинной хроматографической смолой или любой их комбинацией.
63. Способ по п. 62, где хроматографическая смола является анионообменной хроматографической смолой.
64. Способ по п. 29 или 43, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 10 кГр до приблизительно 40 кГр.
65. Способ по п. 64, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 15 кГр до приблизительно 35 кГр.
66. Способ по п. 65, где хроматографическую смолу обрабатывают дозой гамма-излучения от приблизительно 20 кГр до приблизительно 30 кГр.
TM
67. Способ по п. 43, где денатурирующий буфер содержит одно или несколько из мочевины, гидрохлорида гуанидина и Triton X-100.
68. Способ по п. 43, где хроматографическую смолу подвергают воздействию промывочного буфера, содержащего от приблизительно 0,5 M до приблизительно 1,5 M гидроксида натрия, после подвергания воздействию денатурирующего буфера.