ПРИМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЭНДОГЕННОЙ ДНКАЗЫ ДЛЯ ПОНИЖЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ДНК

1. Способ понижения содержания ДНК в бульоне, в котором культивировали клетки-хозяева, являющиеся клетками нитчатых грибов, включающий следующие стадии:
корректировка pH и/или температуры бульона, в котором культивировали грибные клетки-хозяева в течение по меньшей мере 24 часов, с повышением pH и/или температуры, применяемых в культивировании; и
инкубирование бульона при повышенных pH и/или температуре в течение периода, достаточного для поддающегося выявлению понижения содержания ДНК грибов-хозяев в препарате;
при условии, что понижение содержания ДНК преимущественно не обусловлено наличием экзогенной ДНКазы в бульоне.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий осуществление стадии разделения жидкой и твердой фазы для отделения бульона от клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, перед стадией корректировки.
3. Способ по п. 1, дополнительно включающий стадию ультрафильтрации, отличающийся тем, что макромолекулы в бульоне концентрируют путем осуществления ультрафильтрации перед стадией корректировки.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что бульон имеет комнатную температуру после стадии ультрафильтрации.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что температура бульона перед стадией корректировки составляет от 25ºC до 34ºC.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что pH бульона перед стадией корректировки составляет от 4 до 5.
7. Способ по п. 1, дополнительно включающий культивирование клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, в бульоне до достижения желаемой концентрации представляющих интерес секретируемых белков в бульоне перед стадией корректировки.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что pH повышают до pH 6-8 во время стадии корректировки.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что температуру повышают до 35-47ºC во время стадии корректировки.
10. Способ по п. 1, дополнительно включающий оценивание содержания ДНК в бульоне.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что содержание ДНК оценивают перед и после стадии инкубирования.
12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что содержание ДНК понижают до невыявляемого уровня, оцениваемого с помощью ПЦР и/или гель-электрофореза с окрашиванием бромистым этидием.
13. Способ по п. 1, дополнительно включающий предоставление возможности бульону охладиться до комнатной температуры после стадии инкубирования.
14. Способ по п. 1, дополнительно включающий очистку одного или нескольких белков из бульона.
15. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, рекомбинантным путем экспрессирует один или несколько белков в бульоне.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что в клетке-хозяине, являющейся клеткой нитчатого гриба, отсутствует экзогенная ДНКаза.
17. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в бульон не добавляют ДНКазу.
18. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, рекомбинантным путем экспрессирует фермент целлюлазу.
19. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, рекомбинантным путем экспрессирует фитазу.
20. Способ по п. 1, отличающийся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, рекомбинантным путем экспрессирует липазу.
21. Способ понижения содержания ДНК в белковом препарате, полученном из клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, включающий следующие стадии:
оценивание уровня ДНК клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, в белковом препарате, полученном из грибных клеток-хозяев;
корректировка pH и/или температуры белкового препарата до скорректированных pH и/или температуры;
инкубирование белкового препарата при скорректированных pH и/или температуре в течение периода, достаточного для поддающегося выявлению понижения уровня ДНК клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, в белковом препарате; и
определение понижения количества ДНК клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов, в белковом препарате
при условии, что понижение преимущественно не обусловлено наличием экзогенной ДНКазы в белковом препарате.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что количество ДНК понижают до невыявляемого уровня.
23. Способ снижения содержания ДНК в бульоне, в котором культивировали клетки-хозяева, являющиеся клетками нитчатых грибов, включающий следующие стадии:
повышение pH и/или температуры бульона, в котором культивировали клетки-хозяева, являющиеся клетками нитчатых грибов, в течение по меньшей мере 24 часов и в котором осуществляли стадию разделения жидкой и твердой фазы для отделения бульона от клеток-хозяев, являющихся клетками нитчатых грибов; и
инкубирование бульона при повышенных pH и/или температуре в течение периода, достаточного для поддающегося выявлению понижения содержания ДНК нитчатых грибов-хозяев в бульоне;
при условии, что понижение преимущественно не обусловлено наличием экзогенной ДНКазы в бульоне.
24. Способ по любому из пп. 1, 21 и 23, отличающийся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, представляет собой клетку T. reesei, A. niger, A. tubingensis, A. oryzae, G. emersonii, M. thermophila, P. funiculosum, F. venenatum или H. insolens.
25. Применение активности эндогенной ДНКазы клетки-хозяина, являющейся клеткой нитчатого гриба, для понижения содержания ДНК нитчатых грибов-хозяев в белковом препарате, полученном из клетки-хозяина, являющейся клеткой нитчатого гриба.
26. Применение активности эндогенной ДНКазы клетки-хозяина, являющейся клеткой нитчатого гриба, для понижения содержания ДНК нитчатых грибов-хозяев в культуральном бульоне, в котором культивировали клетку-хозяина, являющуюся клеткой нитчатого гриба.
27. Применение по п. 25 или 26, отличающееся тем, что клетка-хозяин, являющаяся клеткой нитчатого гриба, представляет собой клетку T. reesei, A. niger, A. tubingensis, A. oryzae, G. emersonii, M. thermophila, P. funiculosum, F. venenatum или H. insolens.