БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ СВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Белок, содержащий:
первый связывающий домен (BD1), который связывается с первым эпитопом,
второй связывающий домен (BD2), который связывается со вторым эпитопом, и
H
H
Fc-область, содержащую C2- и C3-домены;
H
H
H
H
где Fc-область содержит BD2 в гидрофильной петле в C2-домене, C3-домене или на границе C2- и C3-доменов; и
где белок является бивалентным в отношении связывания с каждым из первого и второго эпитопов.
H
H
H
H
2. Белок по п. 1, где Fc-область содержит BD2 в гидрофильной петле в аминокислотной последовательности в C2-домене, C3-домене или на границе C2- и C3-доменов.
H
3. Белок по п. 2, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность из C2-домена.
4. Белок по п. 3, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность ISRTP (SEQ ID NO:39).
H
5. Белок по п. 2, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность из C3-домена.
6. Белок по п. 5, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность SNG.
H
H
7. Белок по п. 2, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность из границы C2-домена и C3-домена.
8. Белок по п. 7, где гидрофильная петля содержит аминокислотную последовательность AKGQP (SEQ ID NO:40).
9. Белок по любому из пп. 1-8, где BD2 содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
10. Белок по любому из пп. 1-8, где BD1 содержит связывающий домен, выбранный из группы, состоящей из Fab-домена, scFv, однодоменного антитела и вариабельного домена антитела.
11. Белок по любому из пп. 1-8, где BD1 содержит Fab-домен.
12. Белок по п. 11, где Fab-домен связан с Fc-областью посредством шарнирной области антитела.
13. Белок по любому из пп. 1-8, где Fc-область предусматривает домен, выбранный из группы, состоящей из Fc-области из IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE и IgD.
14. Белок по п. 13, где Fc-область предусматривает вариантную Fc-область.
15. Белок по п. 13, где Fc-область является негликозилированной.
16. Белок по п. 13, где Fc-область является дегликозилированной.
17. Белок по п. 13, где Fc-область характеризуется сниженным фукозилированием или является нефукозилированной.
18. Белок по любому из пп. 1-8, где белок дополнительно содержит белковый линкер L1 между BD2 и Fc-областью.
19. Белок по любому из пп. 1-8, где белок дополнительно содержит первый белковый линкер L1 и второй белковый линкер L2 между BD2 и Fc-областью.
20. Белок по любому из пп. 1-8, где BD2 связан с Fc-областью посредством белкового линкера L1.
21. Белок по любому из пп. 1-8, где BD2 связан с Fc-областью посредством двух белковых линкеров, L1 и L2.
4
2
4
3
4
4
22. Белок по любому из пп. 18-21, где L1 и L2 независимо выбраны из (GS) (SEQ ID NO:41), (GS) (SEQ ID NO:42) и (GS) (SEQ ID NO:43).
23. Белок по п. 1, где белок содержит химерную тяжелую цепь, содержащую следующие полипептидные домены от N-конца к С-концу:
H
H
H
H
H
V1-C1-C2(N-конец)-BD2-C2(C-конец)-C3; и
BD1 содержит Fab-домен;
H
H
где V1 содержит вариабельный домен тяжелой цепи Fab-домена, и C1 содержит константный домен 1 тяжелой цепи Fab.
24. Белок по п. 1, где белок содержит химерную тяжелую цепь, содержащую следующие полипептидные домены от N-конца к С-концу:
H
H
H
H
V1-C1-C2-BD2-C3; и
BD1 содержит Fab-домен;
H
H
где V1 содержит вариабельный домен тяжелой цепи Fab-домена, и C1 содержит константный домен 1 тяжелой цепи Fab.
25. Белок по п. 1, где белок содержит химерную тяжелую цепь, содержащую следующие полипептидные домены от N-конца к С-концу:
H
H
H
H
H
V1-C1-C2-C3(N-конец)-BD2-C3(C-конец); и
BD1 содержит Fab-домен;
H
H
где V1 содержит вариабельный домен тяжелой цепи Fab-домена, C1 содержит константный домен 1 тяжелой цепи Fab.
26. Белок по любому из пп. 23-25, где BD2 содержит scFv.
27. Белок по п. 26, где scFv содержит от N-конца к C-концу:
H
L
L
H
V2-полипептидный линкер-V2 или V2-полипептидный линкер-V2;
H
L
где V2 содержит вариабельный домен тяжелой цепи scFv, и V2 содержит вариабельный домен легкой цепи scFv.
28. Белок по любому из пп. 23-27, где белок дополнительно содержит белковый линкер L1 между BD2 и Fc-областью.
29. Белок по любому из пп. 23-27, где белок дополнительно содержит первый белковый линкер L1 и второй белковый линкер L2 между BD2 и Fc-областью.
H
H
H
H
30. Белок по любому из пп. 23-25, где BD2 связан посредством линкера (L1) с C2-доменом, C2-доменом или границей C2- и C3-доменов Fc-области.
H
H
H
H
31. Белок по любому из пп. 23-25, где BD2 связан посредством двух белковых линкеров, L1 и L2, с C2-доменом, C2-доменом или границей C2 и C3-доменов Fc-области.
32. Белок по любому из пп. 28-31, где L1 и L2 независимо выбраны из белковых линкеров, имеющих длину 1-25 аминокислот.
4
2
4
3
4
4
33. Белок по любому из пп. 28-31, где L1 и L2 независимо выбраны из (GS) (SEQ ID NO:41), (GS) (SEQ ID NO:42) и (GS) (SEQ ID NO:43).
34. Белок по любому из предыдущих пунктов, где первый и второй эпитопы являются разными.
35. Белок по любому из предыдущих пунктов, где первый и второй эпитопы являются одинаковыми.
36. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:1, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:2.
37. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:3, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:4.
38. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:5, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:6.
39. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и CTLA-4, содержащий первую тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9, первую легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7, вторую тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 12, и вторую легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 4.
40. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-L1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:14, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:15.
41. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-L1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:16, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:17.
42. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-L1 и CTLA-4, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:18, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:19.
43. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и TIM3, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:22 или SEQ ID NO:89, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:90.
44. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и TIM3, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:24 или SEQ ID NO:91, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:92.
45. Биспецифический связывающий белок, который связывается с PD-1 и TIM3, содержащий первую тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:9, первую легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 7, вторую тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:27 или SEQ ID NO:30, и вторую легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:26 или SEQ ID NO:28.
46. Биспецифический связывающий белок, который связывается с OX40 и PD-L1, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:34, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:32.
47. Биспецифический связывающий белок, который связывается с OX40 и PD-L1, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:35, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:32.
48. Биспецифический связывающий белок, который связывается с OX40 и PD-L1, содержащий первый пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:36 или SEQ ID NO: 94, и второй пептид, который содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:32 или SEQ ID NO: 93.
49. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с TIM3, содержащие тяжелую цепь, которая содержит CDR1, CDR2 и CDR3, и легкую цепь, которая содержит CDR1, CDR2 и CDR3, где CDR1 тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:79, CDR2 тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:80, CDR3 тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:81 и CDR1 легкой цепи содержит SEQ ID NO:82, CDR2 легкой цепи содержит SEQ ID NO:83, CDR3 легкой цепи содержит SEQ ID NO:84.
50. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 49, содержащие вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, где вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO:85, и вариабельная область легкой цепи содержит SEQ ID NO:86.
51. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п. 49, где тяжелая цепь содержит SEQ ID NO:87, и легкая цепь содержит SEQ ID NO:88.
52. Композиция, содержащая белок или антитело по любому из пп. 1-51 и фармацевтически приемлемый носитель.
53. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую белок или антитело по любому из пп. 1-51.
54. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п. 53.
55. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п. 54.
56. Способ лечения или предупреждения рака у субъекта, при этом способ включает введение субъекту белка или антитела по любому из пп. 1-51.
57. Способ по п. 56, где рак представляет собой один или несколько из рака яичников, рака молочной железы, колоректального рака, рака предстательной железы, рака шейки матки, рака матки, рака яичек, рака мочевого пузыря, рака головы и шеи, меланомы, рака поджелудочной железы, почечно-клеточной карциномы и рака легких.
58. Способ усиления иммунного ответа у субъекта, при этом способ включает введение субъекту белка или антитела по любому из пп. 1-51.