Метилирование генов GST и ESR и клинические особенности заболевания у больных раком тела матки

methods allowed to reveal congenital malformations and hereditary diseases of the fetus in 100% of the cases in pregnant women at risk. We examined 299 patients belonging to the risk group on the occurrence of foetus congenital malformation which were divided into 2 subgroups: 1) main subgroup - 159 women who took polyvitamin complexes with folic acid; 2) control subgroup - 140 women who didn't take polyvitaminic complexes. Taking the folic acid is a very effective prevention of the foetus congenital malformation.

УДК 618.14-006-036:575.113

МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ GST И ESR И КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ТЕЛА МАТКИ

Калаева А.Г.

Харьковская медицинская академия последипломного образования

У159 больных раком эндометрия (РЭ) I-III ст. в возрасте от 34 до 78 лет в сыворотке крови методом полимеразно-цепной реакции изучено наличие метилирования генов GST и ESR. Установлено, что метилирование гена ESR достоверно чаще встречается при экзофитном росте опухоли и меньшей инвазией опухоли в миометрий. Частота эпигенетических нарушений гена GST достоверно возрастает по мере распространения РЭ. Среди признаков, характерных для двух патогенетических вариантов РЭ, не выявлено ни одного, коррелирующего с наличием эпигенетических нарушений гена GST. В тоже время при метилировании гена ESR у больных РЭ достоверно чаще отмечались маточное кровотечение, бесплодие, снижение детородной функции и ожирение. Ключевые слова: ракэндометрия; гены GST и ESR; метилирование В Украине показатель заболеваемости рака

эндометрия (РЭ) за последние десть лет увеличился с 20,7 до 25,7 на 100 000 населения, но, что особенно актуально, рост заболеваемости РЭ происходит в группе женщин молодого возраста [4, 5]. В настоящее время установлена связь между гиперпластическими процессами в эндометрии и (РЭ) [1, 2]. Однако, следует иметь ввиду, что существует множество гиперпластических процессов, которые никогда не заканчиваются образованием опухоли. Наряду с этим, имеется РЭ, который развивается без предшествующей гиперплазии [3, 4].

Нарастание частоты РЭ нельзя объяснить только увеличением средней продолжительности жизни - оно связано и с прогрессирующим ростом болезней цивилизации, и с увеличением количества генетических нарушений. Указанные факторы говорят о необходимости использования новых критериев какдля определения риска развития карциномы эндометрия, так и для прогнозирования течения заболевания [4]. Среди генетических факторов при РЭ активно изучается роль генов GST и ESR [7, 8, 10]. По данным литературы механизмы вовлечения генов GST и ESR в процесс малигнизации и прогрессии РЭ остаются малоизученными [6, 10], однако большинство авторов склоняются к необходимости изучения эпигенетических нарушений данных генов, в частности вопросу метилирования генов, которое приводит к нарушению транскрипции, без его мутации, то есть к невозможности функционирования гена [8,9, 10].

Цель исследования - изучить связь между метилированием генов GST и ESR у больных РЭ и клиническими особенностями течения заболевания.

Материалы и методы исследования

Нами было обследовано 159 больных I-III ст. (Т1а-3вЫ0-1М0), из которых эндометриоидный рак был обнаружен у 122 больных, а неэндо-метриоидный РЭ - у 37 больных. Возраст больных колебался от 34 до 78 лет, а средний возраст составил 61,1+2,7 года. Во всех исследуемых случаях диагноз был верифицирован морфологически.

У всех больных в опухолевой ткани методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) было изучено наличие метилирования генов GST и ESR в сыворотке крови. После выделения ДНК из сыворотки крови определяли метилирования промоторной области генов GST и ESR, для чего ДНК обрабатывали метилчувствительными рестриктазами. [9]. Поиск сайтов рестрикции осуществлялся с помощью программы «WIN-SUN». Исследования проводили в лаборатории «Вирола» ХМАПО.

Результаты и обсуждение

При проведении исследования (таблица) обращает на себя внимание тот факт, что при локализации опухоли в нижнем сегменте матки частота встречаемости как метилирования генов GST и ESR, так и отсутствия данного эпигенетического нарушения (группа контроля), достоверно ниже в сравнении с расположением опухоли как у дна, так и в теле матки. При этом количественные показатели встречаемости метилирования обоих исследуемых генов сравнимы. Нами не отмечено достоверных различий частоты встречаемости эпигенетических нарушений изучаемых генов в сравнении с контрольной группой при определённой локализации опухоли. Так, например, в случаях локализации опухоли в теле матки метилирование гена gSt выявлено

" Работа выполнена по плану НИР кафедры онкологической гинекогологииХМАПО, №01058002871.

Том 9, Выпуск 4

41

в 47,3±6,6% случаев; гена ESR - в 44,6±5,5% случаев; отсутствие метилирования - в 44,6±5,5% случаев.

У больных раком тела матки с экзофитным ростом опухоли метилирование гена ESR отмечалось в 1,6 раза чаще, чем метилирование гена GST. При этом отсутствие метилирования обоих исследуемых генов выявлено в сравнимом количестве случаев: контрольная группа -

Частота метилирования генов GST и ESR в.

20 (47,6±6,2%) больных; метилирование ESR -48,2±5,5% больных (р<0,01).

В случае эндофитного роста опухоли частота встречаемости метилирования исследуемых генов сравнима с аналогичным показателем группы контроля. При этом метилирование гена GST не зависит от типа роста опухоли, тогда как эпигенетическое нарушение гена ESR отмечено в 1,9 раз чаще при экзофитном росте опухоли.

Табл.

симости от клинических особенностей опухоли

Особенности Контроль GST ESR

опухоли n=42 n=57 n=83

Локализа- Дно 22 52,4±7,7% 23 40,4±6,5% 39 47,0±5,5%

ция в мат- Тело 15 35,7±7,4% 27 47,3±6,6% 37 44,6±5,5%

ке Нижний сегмент 5 11,9±5,0% 7 12,3±4,3% 7 8,4±3,0%

Рост опу- Экзофитный 20 47,6±6,2% 17 29,8±6,1% 40 48,2±5,5% *

холи Эндофитный 9 21,4±6,3% 16 28,1±4,8% 21 25,3±4,8%

Смешанный 13 31,0±7,1% 24 42,1±6,5% 22 26,5±4,9%

Инвазия Нет 4 9,5±4,6% 5 8,8±3,8% 12 14,4±3,8%

опухоли До У 15 35,7±7,4% 23 40,4±6,5% 49 59,0±5,4% *

Более У 23 54,8±7,8% 29 50,8±6,6% 22 16,6±4,0%

Метастазы 19 21,4±6,3% 18 31,6±6,1% 14 16,9±4,1% *

Примечание; * р<0,05 - различие статистически достое

Сравнительный анализ метилирования генов GST и ESR выявил, что метилирование гена GST наиболее выражено в группе больных с инвазией опухоли до- и более % миометрия, тогда как при отсутствии инвазии частота встречаемости данного признака невысока. Выявлено увеличение количественных значений данного показателя в зависимости от роста опухоли. При этом метилирование гена ESR в группе больных без инвазии и с инвазией опухоли в миометрий более % сравнимо и достоверно ниже в случаях инвазии до % миометрия. В контрольной группе количественные значения изучаемых показателей увеличиваются с ростом инвазии опухоли в миометрий и сравнимы с частотой встречаемости метилирования гена GST.

При наличии метастазов метилирование гена GST сравнимо с показателем контрольной группы и достоверно выше частоты встречаемости данного нарушения гена ESR.

Учитывая влияние эндокринно-обменных нарушений в организме на развитие неопластических процессов в эндометрии, произведено изучение и оценка их возможного влияния на нарушения эпигенетических механизмов регуляции экспрессии генома, в частности метилирования генов GST и ESR. Из 122 исследуемых больных I патогенетический вариант установлен у 77 пациенток; II патогенетический вариант - у 45 больных .

Выявлено, что метилирование гена ESR встречается чаще как при I, так и II патогенетическом варианте в сравнении с частотой встречаемости метилирования гена GST. При этом нарушение функции гена GST чаще встречается у больных I патогенетического варианта рака

тела матки, тогда как метилирование гена ESR установлено в 1,6 раза чаще у пациенток 1 группы.

В качестве признаков двух патогенетических вариантов (РЭ) нами выбраны следующие: менструальная функция; детородная функция; ожирение; гипертоническая болезнь и сахарный диабет.

Маточные кровотечения отмечены у 7 (16,7±5,8%) больных контрольной группы. Как следует из данных таблицы, метилирование гена GST выявлено у 10 (17,5±5,1%) пациенток, при этом у больных с ненарушенной менструальной функцией отмечено достоверное повышение значения данного показателя.

Что касается выявления метилирования гена ESR у пациенток с опухолевым процессом эндометрия, то в случаях отсутствия нарушений менструальной функции отмечается достоверное повышение значения показателя частоты встречаемости данного механизма регуляции экспрессии генома: 37,3±5,3% в случаях наличия у пациенток маточных кровотечений и 62,7±5,3% при ненарушенной менструальной функции.

При изучении зависимости частоты встречаемости метилирования гена GST у больных РЭ от нарушения детородной функции установлено, что при бесплодии данный показатель в 4 раз ниже, чем у пациенток с наличием беременностей в анамнезе: при бесплодии - 19,3±5,2% случаев; при отсутствии нарушений детородной функции - 80,7±5,2% случаев (р<0,05). Частота встречаемости метилирования гена ESR при бесплодии также ниже, чем при отсутствии нарушений функции деторождения, однако разни-

ца количественных значений данного показателя не настолько выражена по сравнению с исследованием метилирования гена СЭТ .

Обращает на себя внимание тот факт, что отсутствие метилирования генов СЭТ и БЭР встречается в сравнимом с наличием данного эпигенетического нарушения количестве случаев. У 28 больных контрольной группы отмечено наличие ожирения. Метилирование гена СЭТ выявлено в 57,9±6,5% случаев, а гена БЭР в 74,7±4,8% случаев.

В группе пациенток с наличием ожирения эпигенетическое нарушение гена СЭТ встречалось в сравнимом количестве случаев с больными, у которых отсутствует данный патогенетический признак: в группе с ожирением - 57,9±6,5% случаев; во второй группе - 42,1±6,5% случаев соответственно. При исследовании наличия метилирования гена БЭР в зависимости от наличия или отсутствия ожирения установлена повышенная частота встречаемости данного признака (в 3 раза) в группе больных с повышенной массой тела.

Метилирование гена СЭТ выявлено у 23 (40,4±6,5%) больных с гипертонической болезнью. При отсутствии гипертонической болезни данный показатель практически не изменился -34 больных (59,6±6,5%) р>0,05.

Сравнимые данные получены при исследовании наличия метилирования гена БЭР у пациенток (РЭ) в зависимости от наличия такой сопутствующей патологии как гипертоническая болезнь. У больных гипертонической болезнью значения данного показателя составили 50,6±5,5% случаев; при её отсутствии -49,4±5,5% случаев (р>0,05).

Сравнительный анализ частоты встречаемости метилирования генов СЭТ и БЭР у больных раком тела матки при наличии у них гипертонической болезни показал, что количественное значение показателя эпигенетического нарушения гена БЭР и соответствующее значение показателя метилирования гена СЭТ достоверно не различаются и сравнимы с аналогичным показателем группы контроля.

Наличие сахарного диабета, как сопутствующей патологии, выявлено у 4 (9,5±4,6%) больных РЭ контрольной группы. Метилирование гена СЭТ отмечено у 5 (8,8±4,0%) больных этой группы, а гена БЭР - у 14 (16,9±4,1%) больных. Наличие сахарного диабета достоверно уменьшило частоту встречаемости метилирования гена СЭТ: у больных с сахарным диабетом - 8,8±4,0% случаев; при его отсутствии - 91,2±4,0% случаев.

Аналогичная зависимость прослеживается при исследовании частоты встречаемости метилирования гена БЭР: 16,9±4,1% случаев при наличии сахарного диабета и 83,1±4,1% случаев при его отсутствии (р<0,05).

Таким образом, исследование, оценка и анализ зависимости эпигенетических нарушений генов СЭТ и БЭР от различных патогенетиче-

ских вариантов (РЭ) позволили нам выявить некоторые закономерности в зависимости от клинических особенностей опухолевого процесса.

Выводы

1. Метилирование гена ESR у больных РЭ достоверно чаще встречается при экзофитном росте опухоли и меньшей инвазии опухоли в миометрий в сравнении с больными, имеющими нарушенную функцию гена GST.

2. Частота эпигенетических нарушений гена GST достоверно возрастает по мере генерализации РЭ (метастазирование в придатки матки, влагалище, лимфатические узлы).

3. При исследовании клинических особенностей опухолевого процесса выявлено достоверное отличие между группами больных с нарушенной функцией генов GST и ESR, но при этом показатели не отличались от соответствующих данных контрольной группы (за исключением инвазии в миометрий).

4. Среди признаков, характерных для двух патогенетических вариантов РЭ, не выявлено ни одного, влияющего на изменение частоты эпигенетических нарушений гена GST. Исследуемый показатель не имел принципиальных отличий от группы контроля.

5. Маточное кровотечение, бесплодие, снижение детородной функции и ожирение достоверно чаще отмечались у больных с эпигенетическими нарушениями гена ESR, что позволяет предположить большую гормональную зависимость заболевания уданной группы пациенток.

6. У больных с признаками I патогенетического варианта метилирование гена ESR было достоверно выше как в сравнении со II патогенетическим вариантом заболевания, так и частотой встречаемости у I патогенетического типа метилирования гена GST, что может указывать на патогенетическую роль данного гена в развитии (РЭ).

Литература

1. Берштейн Л.М. Эпидемиология, патогенез и пути профилактики рака эндометрия: стабильность или эволюция? // Практическая онкология. Т.5, №1. -2004. С. 1 - 8.

2. Бохман Я.В. Руководство но онкогинекологии. - П.: Медицина. - 1989. - 464 с.

3. Бучинская Л.Г., Полищук Л.З., Воробьева Л.И. и др. Экспрессия маркеров пролиферации в клетках аденокарцином эндометрия. // Онкология. - 2004. - Т.6, №4. - С. 265 - 268.

4. Воробьева Л.И., Жилка Н.Я. Анализ деятельности онкогинекологической службы Украины в 2002 году. Министерство охраны здоровья Украины. - К. -2003. - 14 с.

5. Чулкова О.В. Предрак и рак эндометрия у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дис. ...д-ра мед. наук - М., 2003. - 34с.

6. Jason R. Navari, Philip Y. Roland, Pacita Keh, et. al. Loss of Estroget Receptors Expression in Endometrial tumors is not associated with de Novo Methy-lation of the ERS gene//Clinical Cancer Research., 2000. - Vol. 6. - P.426-432.

Tom 9, Выпуск 4

43

7. Macleod Kay Tumor suppressor genes//Current opinion in genetics and development.- 2000. - Vol. 10. -P. 81 -93.

8. Masahiro Sasaki, Loulia Kotcherguina,Abhipsa Dharia et. al. Cytosine- Phosphoguanine Methylation of Estrogen Receptors in Endometrial Cancer.// Cancer Research 61, 2001.- P.362-366.

9. Sambrook, Fritsch, Maniatis. Molecular cloning.//Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.- 250 p.

10. Sara Wedren, Lovisa Lovmar, Keith Humphreys et al. Estrogen receptor alpha gene polymorphism and en-dometrial cancer risk -a case -control study.// BMC Cancer. - 2008. - P. 1-11.

Реферат

МЕТИЛУВАННЯ ГЕН1В GST ТА ESR I КЛ1Н1ЧН1 ОСОБЛИВОСТ1 ЗАХВОРЮВАННЯ У ХВОРИХ НА РАК Т1ЛА МАТКИ

Калаева А.Г.

Ключов1 слова: рак ендометр1ю, гени GST та ESR; метилування

У 159 хворих на рак ендометрш (РЕ) I-III ст. BiKOM вщ 34 до 78 рок1в було вивчено наявнють метилування reHiB GST та ESR у сироватщ кров1 методом пол1меразно-ланцюгово1 реакцЛ. Встановлено, що метилування гену ESR достов1рно частое зустр1чаеться при екзоф1тному зростанш пухлин та меншш ¡нвази пухлини до мюметрш. Частота етгенетичних порушень гену GST достов1рно зростае ¡з розпо-всюдженням РЕ. Серед ознак, характерних для двох патогенетичних BapiaHTiB РЕ, не виявлено жод-ного, який би корелював ¡з наявнютю етгенетичних порушень гену GST. В той же час при метилуванш гену ESR у хворих на РЕ достов1рно часпше вщзначались маточш кровотеч1, безплщдя, зниження фу-нкцпд1тонародження та ожиршня.

Summary

METHYLATION OF GST AND ESR GENES AND CLINICAL PECULIARITIES OF UTERINE CARCINOMA Kalayeva A.G.

Key words: uterine carcinoma, GST and ESR genes, methylation

Methylation of GST and ESR genes in blood serum has been studied by means of PCR method in 159 patients with uterine carcinoma (I-III st.) aged 34 - 78. It has been demonstrated that the methylation of ESR gene is reliably more often observed in cases of exophytic growth of tumors and lesser tumor invasion to myometrium. The occurrence of GST gene disorders clearly increases along with endometrial cancer (EC) distribution. Among the symptoms characteristic for two pathogenic variants of EC there was none correlating with epigenetic disorders of the GST gene. However, in cases of the ESR gene methylation the EC patients reliably more often suffered metrorrhagia, infertility, reproductive failure and obesity.

УДК 616.717/.718-001.58-053.4/.7-073-08-031.73

РЕЗУЛЬТАТЫ ЛЕЧЕНИЯ ЗАМЕДЛЕННОЙ КОНСОЛИДАЦИИ ПЕРЕЛОМОВ КОСТЕЙ У ДЕТЕЙ

Каминская М.О.

Днепропетровская государственная медицинская академия

В статье выявлены группы риска больных с замедленной консолидацией переломов костей. Проанализированы результаты лечения 106 больных с замедленно консолидирующимися переломами, которые лечились традиционными способами (контрольная группа) 42 пациента, а другим лечение проводилось по разработанному способу (основная группа) 64 ребенка. Основной метод диагностики - рентгенологический, но для выявления более ранних признаков развития замедленной консолидации применялись УЗД. Использование предложенного нами способа лечения замедленной консолидации переломов костей позволило улучшить результаты лечения этой категории больных, сократить пребывание больного в стационаре, уменьшить продолжительность гипсовой иммобилизации и срок лечения.

способ лечения, дети.

не всегда обеспечивают положительный ре-

Ключевые слова: замедленная консолидация, перелом

Проблема нормализации процессов остеоге-неза при переломах трубчатых костей остается до сих пор не решенной. Несмотря на значительные успехи травматологии и ортопедии, лечение замедленно консолидирующихся переломов костей является весьма трудной и до конца не решенной задачей. Актуальность данной проблемы обусловлена тяжестью патологии, длительностью и достаточно высоким процентом неудовлетворительных исходов лечения от 2,5% до 18% случаев [3,5,7].

Существующие консервативные и оперативные общепринятые способы имеют недостатки и

зультат.

Таким образом, до настоящего времени нет методов лечения замедленно консолидирующихся переломов костей в полной мере отвечающих современным требованиям практической медицины. Поэтому разработка новых методов лечения этой сложной и часто встречающейся патологии имеет важное, актуальное значение для здравоохранения.

Цель исследования: улучшение эффективности результатов лечения замедленной консолидации переломов длинных костей у детей.