О КОМПЛЕКСНОЙ ОЦЕНКЕ СОСТОЯНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

Приведенные данные показывают, что СвН„ и СС14 в концентрациях, близких к 20 мг/м'л, способны оказывать влияние на рост и развитие злокачественных новообразований, имеющее ряд общих черт. Общность эта проявляется в первую очередь тем, что изотоксические концентрации СвН„ и СС14 усиливают канцерогенный эффект в 1-ю и 3-ю фазу хронической интоксикации. Выявленная зависимость длительности латентного периода от фазы интоксикации связана, как показали исследования, со снижением неспецифической резистентности организма, присущим 1-й и 3-й фазам, и, в частности, с уменьшением активности гипоталамо-гипофизарной надпо-чечниковой системы (Б. А. Курляндский; Б. А. Курляндский и соавт.).

Вместе с тем СО 4 оказывал более выраженное модифицирующее действие на канцерогенез во 2-ю и особенно в 3-ю фазу хронической интоксикации, чем СвНв, что свидетельствует, по-видимому, об известной роли в этом процессе специфической активности вещества.

^ги предположения нашли подтверждение в изменении динамики нуклеиновых кислот (ДНК, РНК), экскреторной функции и морфологии печени животных, которым БП был индуцирован на фоне хронической затравки С„Нв и СС14.

Полученные нами данные позволили установить выраженное фазово-протекающее модифицирующее действие токсических веществ в малых концентрациях на канцерогенез. Можно также предположить, что при обосновании подходов к гигиенической регламентации канцерогенов имеет значение не только их биологическая активность, но и способность различных факторов, в том числе и токсических, оказывать модифицирующее влияние на процессы канцерогенеза. Дальнейшее изучение этого вопроса представляется важным еще и потому, что позволяет не только разработать новые подходы к изучению механизмов коканцерогенеза, но и обосновать гигиенические мероприятия по профилактике злокачественных новообразований.

ЛИТЕРАТУРА. Курляндский Б. А. Гиг. труда, 1969, № 7, с. 12. — Курлянский Б. А., Клочкова С. И., Мсдведовский А. Г. В кн.: Материалы 24-й Московок, научно-практической конференции по проблеме промышленной гигиены. М., 1969, с. 67. — Монцевичюте-Эрингене Е. В. Пат. физиол., 1964, № 4, с. 71. — Ш о р н и к о в Б. С. Арх. пат., 1969, в. 1, с. 81.

Поступила 16/УП 1971 г.

УДК 612.017.1-06:614.72

О КОМПЛЕКСНОЙ ОЦЕНКЕ СОСТОЯНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

Кандидаты мед. наук А. И. Олефир, О. П. Минцер, Р. Е. Сова Институт гигиены труда и профзаболеваний, Киев

В настоящее время значительно возрос поток информации об изменении иммунобиологической реактивности организма при действии неблагоприятных факторов внешней среды. Благодаря предложенным в последние годы новым методам определения показателей естественного иммунитета — числа микробов на коже и слизистых оболочках, поглотительной способности ретикулоэндотелиальной системы (Н. Н. Клемпарская; Н. А. Калинина) вместе с исследовавшимися ранее содержанием комплемента, лизоцима и бета-лизина, фагоцитарной активностью нейтрофилов можно судить об изменении гуморального и целлюлярного иммунитета, а также о функции внешних барьеров по сдвигам нескольких факторов. Однако характеристика нарушений неспецифического иммунитета в целом затруднительна из-за

отсутствия соответствующих методов комплексной оценки полученных данных.

Комплексной оценке результатов проведенных нами экспериментов предшествовало выявление характера распределения иммунологических тестов. У 250 интактных белых крыс обоего пола весом 150—200 г определяли комплементарную и бактерицидную активность сыворотки, уровень лизоцима и бета-лизина в ней, количество кишечной палочки на коже и слизистой оболочке полости рта, бактерицидные свойства кожи, фагоцитарную активность нейтрофилов in vivo и in vitro и клеток ретикулоэндотелиальной системы. Методики исследования этих тестов приведены ранее одним из нас в соавторстве с В. Н. Карпенко, А. И. Оле-фир и А. П. Мороз.

После выборки и группировки величин по каждому тесту установлено, что полученные данные хорошо апроксимируются распределением Пуассона:

/>(*) = -£ 1"\

где А. — параметр распределения, имеющий смысл математического ожидания случайной величины, совпадающей по величине для данного распределения со значением дисперсии; п — частота встречаемости случайных величин; / — основание натуральных логарифмов.

В справедливости рассмотренного выше положения можно убедиться на примере, в котором даны эмпирические частоты встречаемости отдельных градаций фагоцитарной активности нейтрофилов in vivo и их теоретическая частота по закону Пуассона (табл. 1).

Оценивая достоверность и степень сдвигов иммунологических показателей, мы исходили из следующих соображений.

1. Поскольку при распределении величин, отличном от нормального, трудности математического анализа весьма велики, было предложено использовать оценку различий для каждой градации изучаемого параметра в отдельности. Распределение частот в них при многократных выборках подчиняется нормальному закону.

2. Для суммарной оценки была предложена величина:

Rx = 2ti,

где t — значение критерия Стьюдента, вычисляемого по обычной методике для каждой экспериментальной точки кривой. Смысл критерия заключается в следующем: чем больше значение t, тем меньше вероятность того, что данное различие случайно. Следовательно, сумма величин t позволяет получить интегральную характеристику сдвига параметра от нормы.

3. В предлагаемой комплексной оценке представлялось целесообразным отразить и биологическую ценность признака. С этой целью было решено использовать 2 показателя — вариабельность параметра и важность теста. Значение критерия должно быть пропорционально важности показателя и обратно пропорционально степени вариабельности признака. Математической оценкой последнего могло бы служить значение степени изменения при воздействии токсических агентов, определяемое как экстремум производной от функции вариации параметра. Эта идея на первом этапе была несколько упрощена: использовалось максимальное значение тангенса угла наклона к оси ОХ прямой, проведенной между точками максимального и минимального значения признака за единицу времени (рис. 1).

Таблица 1

Эмпирические частоты градаций фагоцитарной активности нейтрофилов in vivo и их теоретическая частота по закону Пуассона

ь с W = я а S" 5 3

* а х о

Процент активны: рофилов in vivo ° - ft а § S " ¡2 Й 5-° О а г н я ¡¿в о. Я О X 3" х с Частота случаев i кону Пуассона

До 16 12 11,3

17—32 9 9,0

33—48 2 3,6

49—64 1 0,96

65—80 1 0,19

г 3 4 4.5

исследования /несяцы/

5 -

S -X

Рис. 1. Определение tg ос.

I — уровень коыплеыента.

Ввиду неодинаковой значимости иммунологических факторов, необходимо было обосновать соответствующие поправочные коэффициенты. Вопрос об относительной важности показателей неспецифического иммунитета еще недостаточно разработан теоретически (В. К. Врански и соавт.). Оценивая показатели, мы руководствовались как данными литературы, так и результатами собственных многолетних наблюдений.

Среди гуморальных показателей одним из важнейших является содержание лизоцима. Он ускоряет повреждение клеточной стенки и гибель клетки, вызываемые комплементом, обеспечивает стерильность дыхательных путей, стимулирует фагоцитоз и т. д. (Briggs и соавт., Gossgebauer и Lahgmaak). Комплемент, содержащийся в сыворотке, усиливает хемотаксис нейтрофилов, их переваривающую активность, способствует повреждению клеточных мембран при атаке аутоантителами и т. п. (Garatty). В литературе встречается значительно меньше данных ^ о роли бета-лизина. Его обнаруживают в плазме, слюне, водных частях тела, форменных элементах крови. Бета-лизин совместно с другими факторами иммунитета способствует локализации стафилококковой инфекции (Johnson и Donaldson).

Недостаточно известно пока, от чего зависит высокая бактериальная активность сыворотки и ее значение. Этот показатель может оставаться высоким при снижении уровня комплемента на фоне радиационного поражения и воздействия пестицидов в средних дозах, но связан с содержанием лизоцима (В. Л. Троицкий и савт.; Gemsci и соавт.). Фагоцитарная активность нейтрофилов принадлежит к наиболее функционально активным механизмам защиты. Переваривающая активность фагоцитов более важна, чем их поглотительная способность, так как отражает компенсаторные возможности организма и тесно связана с деятельностью ряда ферментных систем. При облучении и действии химических агентов, например, возможно прекращение переваривания поглощенных микробов, хотя способность лейкоцитов и клеток ретикулоэндотелиальной системы захватывать микробы не снижается (А. Д. Адо; Reed и Tepperman). Поглотительная способность клеток ретикулоэндотелиальной системы имеет немаловажное значение при очищении крови от инородных объектов (Normann и Benditt).

Уровень иммунитета у людей и подопытных животных тесно связан с состоянием внешних барьеров, в частности с бактерицидными свойствами кожи. Снижение ее бактерицидной активности ведет к обсеменению кожи кишечной палочкой. У потомства облученных животных меньшая жизнеспособность сочетается с резким увеличением числа микробов на коже. Состояние неспецифического иммунитета в значительной мере зависит от бактерицидных свойств слюны, препятствующих появлению кишечной палочки в полости рта (Н. Н. Клемпарская и Г. А. Шальнова; О. Г. Алексеева) .

В соответствии со сказанным и были приняты коэффициенты биологической значимости Q (табл. 2).

С учетом коэффициентов формула имеет вид:

Qi

tg а,

где

tg «i

= Si; Si—const, для каждого показателя.

Таблица 2

Статистические величины иммунологических показателей для интактных белых крыс

Иммунологи-

Показатели ческие факторы tg a¡ Qi St

Содержание лизоцима в сыво-

ротке (в разведении 1 : п) 296 17 1,23 4 3,0

Комплементарная активность

сыворотки (в ед/мл) .... Гуморальные 42 6,5 0,53 3 5,7

Содержание бета-лизина в сы-

воротке (в разведении 1 : п) 6,9 2,6 0,38 I 2,6

Бактерицидная активность сы-

воротки (по числу микробных

колоний) ......... 17 4,1 5,67 1 0,2

Процент активных нейтрофилов

in vivo ....... 34,7 5,9 0,72 3 4.2

Фагоцитарный индекс in vivo 0,57 0,75 0,14 3 21,5

Индекс переваривания in vivo Целлюляр-ные 0,36 0,6 0,1 5 50

Процент активных нейтрофилов

in vitro.......... 55,2 7,34 0,38 2 5,0

Фагоцитарный индекс in vitro 2,26 1,5 0,17 2 11,7

Индекс переваривания in vitro 0,88 0,93 0,07 4 j57

Поглотительная способность ре-

тикулоэндотелиальной систе-

мы (по числу микробных

колоний) через 30 мин. 141 12 3,2 3 0,9

Бактерицидная способность

кожи через 10 мин. (в %) Барьерные 90,7 9,5 0,63 3 4,7

Число Е. coli на 1 см'г кожи 0,6 0,77 0,74 2 2,6

Число Е. coli на 1 мм2 слизи-

стой оболочки ....... 0,30 0,55 5,67 4 0,7

Таблица 3

Значимость степеней отклонения неспецифического иммунитета при воздействии факторов внешней среды

Показатели* Область вариации Степени отклонения

слабая умеренная выраженная резко выраженная

Gx 50—370 sc80 81 — 160 161—240 >240

Cx 20—775 s£190 191—380 381—570 >570

T x 0—176 sg 44 45—89 90—134 > 135

Rx 88—1035 s=240 241—480 481—720 >7202

1 При фагоцитозе in vivo.

5 Поскольку сроки максимальных и минимальных отклонений Gx, Сх и Тх не совпадали, величина Rх не всегда равна их сумме.

Тогда окончательная формула примет следующий вид:

Я* = 2.И Я*.

Комплексная оценка уровня неспецифического иммунитета слагается из суммирования отклонений гуморального, целлюлярного и барьерного иммунитета. Поэтому:

Ял: = вх + Сх + Тх,

где вх — сумма отклонений факторов гуморального иммунитета; Сх — сумма отклонений факторов целлюлярного иммунитета; Тх — сумма отклонений факторов барьерного иммунитета.

Для суждения о значимости степеней отклонения йх, Сх и Тх были взяты наименьшие и наибольшие цифровые выражения, полученные после комплексной оценки перечисленных тестов у животных, подвергавшихся хроническому воздействию ряда карбаминовых, фосфор- и хлорорганиче-

Рис. 2. Динамика /?х у крыс при многократном воздействии хлорофоса. 1 — предел слабого отклонения; 2 — предел умеренного отклонения: 3 — предел выраженного отклонения.

800

700 600

н

О: SOC

% 400

I 300 э

too

/

/

-I-b / / /

V

05 / 1.5 2 г.5 3 3.5 4 4.5 Срони исследования

ских пестицидов в дозах l/'„0—VRn LD

50 ¡-^ъа (табл. 3). Вся область вариации предложенных критериев была разбита на 4 уровня по методу, часто используемому в физиологических исследованиях (В. С. Генес). Необходимо отметить, что предложенный алгоритм позволяет включать в комплексный показатель результаты определения новых тестов.

В качестве примера приводим динамику Их у крыс при многократном пероральном введении хлорофоса в дозе 1/20 ЬО50 (рис. 2).

Выводы

1. Показателям естественного иммунитета, приведенным в настоящей работе, присущ характер распределения Пуассона.

2. Предлагаемый критерий Их может быть использован для комплексной оценки состояния неспецифического иммунитета.

3. Предложенный критерий обеспечивает возможность сравнительного количественного анализа влияния на организм различных факторов внешней среды.

ЛИТЕРАТУРА. А до А. Д. Патофизиология фагоцитов. М., 1961. — Алексеева О. Г. Гиг. труда, 1970. Л» 9, с. 8. — В р а н с к и В. К., К а р д а ш е в Ц. Д., Малеев Н. С. Вестн. АМН СССР, 1971, № 4, с. 60. — Г е н е с В. С. Некоторые простые методы кибернетической обработки данных диагностических и физиологических исследований. М., 1967. — Калинина Н. А. Бюлл. экспер. биол., 1963, № 2, с.121. — К а р п е и к о В. Н., Олефир А. И., Мороз А. П. Лабор. дело, 1970, № 3, с. 165. — Клемпарская Н. Н. Мед. радиол., 1966, № 2, с. 85. — К л е м -парская Н. Н., Шальнова Г. А. Аутофлора как индикатор радиационного поражения организма. М., 1966. — Троицкий В. Л., К а у л е и Д. Р., Т у м а -н я н М. А. и др. Радиационная иммунология. М., 1965. — В г i g g s R., Peril-le P., Finch S.. J. Histochem. Cytochem., 1966, v. 14, p. 167. —Garatty G., J. med. Lab. Technol., 1968, v. 25, p. 313. — G e m s a D., Davis S., W e d g w o-o d R., Nature, 1966, v. 210, p. 950. —Grossgebauer K.,Langmaack H., Klin. Wschr., 1968, Bd 46, p. 1121. — J о h n s о n F. В., Donaldson D., J. Bacl., 1968, v. 96, p. 589. — N о г m a n n S., В e n d i t t E.. J. exp. Med., 1965, v. 122, p. 61. — Reed P., Тер per man J., Am. J. Physiol., 1969, v. 216, p. 223.

Поступила 23/11 1972 г.