ПОЛУЧЕНИЕ БЕЛКОВ В КУЛЬТУРАЛЬНЫХ СРЕДАХ БЕЗ ГЛУТАМИНА

1. Способ получения полипептида в клетке-хозяине млекопитающего, экспрессирующей указанный полипептид, включающий культивирование клетки-хозяина млекопитающего в фазе продукции культуры в культуральной среде для продукции без глутамина, содержащей аспарагин.
2. Способ по п. 1, где аспарагин добавляют в концентрации в диапазоне от 2,5 мМ до 15 мМ.
3. Способ по п. 1, где аспарагин добавляют в концентрации в диапазоне от 7,5 мМ до 10 мМ.
4. Способ по п. 1, где аспарагин добавляют в концентрации 10 мМ.
5. Способ по п. 1, где аспарагин добавляют в концентрации 10 мМ.
6. Способ по п. 1, где указанная рекомбинантная клетка-хозяин является эукариотической клеткой-хозяином.
7. Способ по п. 6, где указанная эукариотическая клетка-хозяин является клеткой-хозяином млекопитающего.
8. Способ по п. 7, где указанная клетка-хозяин млекопитающего является клеткой яичника китайского хомячка (СНО).
-
9. Способ по п. 6, где клетка-хозяин млекопитающего является клеткой СНО dhfr.
10. Способ по п. 1, где среда для продукции является бессывороточной.
11. Способ по п. 1, где культуральная среда для продукции включает один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из:
источника энергии;
незаменимых аминокислот;
витаминов;
свободных жирных кислот; и
следовых элементов.
12. Способ по п. 11, где культуральная среда для продукции дополнительно включает один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из:
гормонов и других ростовых факторов;
солей и буферов; и
нуклеозидов.
13. Способ по п. 1, где фаза продукции является фазой периодической или подпитываемой культуры.
14. Способ по п. 1, дополнительно включающий этап выделения указанного полипептида.
15. Способ по п. 14, дополнительно включающий определение одного или нескольких из жизнеспособности клеток, продолжительности жизни культуры клеток, специфической продуктивности и конечного титра рекомбинантного белка после выделения.
16. Способ по п. 15, где по меньшей мере одно из: жизнеспособности клеток, продолжительности жизни культуры клеток, специфической продуктивности и конечного титра рекомбинантного белка, увеличено относительно того же полипептида, продуцированного в содержащей глутамин среде для продукции того же состава.
17. Способ по п. 1, где полипептид является гликопротеином млекопитающих.
18. Способ по п. 1, где полипептид выбран из группы, состоящей из антител, фрагментов антител и иммуноадгезинов.
19. Способ по п. 18, где указанный фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из Fab, Fab’, F(ab’)2, scFv, (scFv)2, dAb, фрагментов определяющих комплементарность областей (CDR), линейных антител, одноцепочечных молекул антител, минител, диател и мультиспецифичных антител, образованных из фрагментов антител.
20. Способ по п. 18, где антитело или фрагмент антитела является химерным, гуманизированным или человеческим.
21. Способ по п. 18, где указанное антитело или фрагмент антитела является терапевтическим антителом или его биологически функциональным фрагментом.
4
7
22. Способ по п. 21, где указанное терапевтическое антитело выбрано из группы, состоящей из антител против HER2; антител против CD20; антител против IL-8; антител против VEGF; антител против CD40; антител против CD11a; антител против CD18; антител против IgE; антител против рецептора Apo-2; антител против тканевого фактора (TF); антител против интегрина αβ человека; антител против EGFR; антител против CD3; антител против CD25; антител против CD4; антител против CD52; антител против рецептора Fc; антител против раковоэмбрионального антигена (СЕА); антител, направленных против эпителиальных клеток молочной железы; антител, связывающихся с клетками карциномы толстой кишки; антител против CD38; антител против CD33; антител против CD22; антител против EpCAM; антител против GpIIb/IIIa; антител против RSV; антител против CMV; антител против HIV; антител против гепатита; антител против CA 125; антител против avβ3; антител против почечно-клеточной карциномы человека; антител против 17-1А человека; антител против колоректальной опухоли человека; антитела R24 по выявлению меланомы человека, направленного против ганглиозида GD3; антитела против плоскоклеточной карциномы человека; и антител против лейкоцитарного антигена человека (HLA) и антител против HLA-DR.
23. Способ по п. 21, где указанное терапевтическое антитело является антителом, связывающимся с рецептором HER, VEGF, IgE, CD20, CD11a, CD40, ВR3 или DR5.
24. Способ по п. 23, где указанный рецептор HER является HER1 и/или HER2.
25. Способ по п. 24, где рецептор HER является HER2.
26. Способ по пункту 25, где указанное терапевтическое антитело включает последовательность вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, 17, 18 и 19.
27. Способ по п.23, где указанное терапевтическое антитело является антителом, которое связывается с CD20.
28. Способ по п. 27, где указанное терапевтическое антитело включает последовательность вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-15.
29. Способ по п. 23, где указанное терапевтическое антитело является антителом, которое связывается с VEGF.
30. Способ по п. 29, где указанное терапевтическое антитело включает последовательность вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 20-25.
31. Способ по п. 23, где указанное терапевтическое антитело является антителом, которое связывается с CD11a.
32. Способ по п. 31, где указанное терапевтическое антитело включает последовательность вариабельного домена тяжелой и/или легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26-29.
33. Способ по п. 23, где указанное терапевтическое антитело связывается с рецептором DR5.
34. Способ по п. 33, где указанное терапевтическое антитело выбрано из группы, состоящей из Apomab 1.1, 2.1, 3.1, 4.1, 5.1, 5.2, 5.3, 6.1, 6.2, 6.3, 7.1, 7.2, 7.3, 8.1, 8.3, 9.1, 1.2, 2.2, 3.2, 4.2, 5.2, 6.2, 7.2, 8.2, 9.2, 1.3, 2.2, 3.3, 4.3, 5.3, 6.3, 7.3, 8.3, 9.3 и 25.3.
35. Способ по п. 33, где указанное терапевтическое антитело является Apomab 8.3 или Apomab 7.3.
36. Способ по п. 35, где указанное терапевтическое антитело является Apomab 7.3.
37. Способ по п. 23, где указанное терапевтическое антитело является антителом против BR3 или иммуноадгезином BR3-Fc.
38. Способ по п. 1, где указанный полипептид является терапевтическим полипептидом.
39. Способ по п. 38, где указанный терапевтический полипептид выбран из группы, состоящей из гормона роста, включая гормон роста человека и гормон роста крупного рогатого скота; фактора высвобождения гормона роста; паратиреоидного гормона; тиреотропного гормона; липопротеинов; альфа-1-антитрипсина; А-цепи инсулина; В-цепи инсулина; проинсулина; фолликулостимулирующего гормона; кальцитонина; лютеинизирующего гормона; глюкагона; факторов свертывания крови, таких как фактор VIIIC, фактор IX, тканевой фактор и фактор Виллебранда; противосвертывающих факторов, таких как протеин С; предсердного натрийуретического фактора; сурфактанта легкого; активатора плазминогена, такого как урокиназа или мочевой или тканевой активатор плазминогена человека (t-PA); бомбезина; тромбина; гемопоэтического ростового фактора; фактора некроза опухолей альфа и бета; энкефалиназы; RANTES (регулируемого при активации нормальных Т-клеток, его экспрессирующих и секретирующих); макрофагального белка воспаления человека (MIP-1-альфа); сывороточного альбумина, такого как сывороточный альбумин человека; мюллерова ингибирующего фактора; А-цепи релаксина; В-цепи релаксина; прорелаксина; мышиного гонадотропин-ассоциированного пептида; микробного белка, такого как бета-лактамаза; ДНКазы; IgE; ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами антигена (CTLA), такого как CTLA-4; ингибина; активина; фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF); рецепторов к гормонам или ростовым факторам; протеина А или D; ревматоидных факторов; нейротрофического фактора, такого как костный нейротрофический фактор (BDNF), нейротрофин-3, -4, -5 или -6 (NT-3, NT-4, NT-5 или NT-6), или фактора роста нервов, такого как NGF-β; тромбоцитарного ростового фактора (PDGF); фактора роста фибробластов, такого как aFGF и bFGF4; эпидермального ростового фактора (EGF); трансформирующего ростового фактора (TGF), такого как TGF-альфа и TGF-бета, включая TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3, TGF-β4 или TGF-β5; инсулиноподобного ростового фактора-I и -II (IGF-I и IGF-II); des(1-3)-IGF-I (мозгового IGF-I); связывающих инсулиноподобный ростовой фактор белков; белков CD, таких как CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD34 и CD40; эритропоэтина; остеоиндуктивных факторов; иммунотоксинов; костного морфогенетического белка (BMP); интерферона, такого как интерферон-альфа, -бета и -гамма; колониестимулирующих факторов (CSF), например, M-CSF, GM-CSF и G-CSF; интерлейкинов (IL), например, IL-1 - IL-10; супероксиддисмутазы; Т-клеточных рецепторов; поверхностных мембранных белков; комплементзависимого стимулятора гемолиза; вирусного антигена, такого как, например, часть оболочки AIDS; транспортных белков; «хоминг»-рецепторов; аддрессинов; регуляторных белков; интегринов, таких как CD11a, CD11b, CD11c, CD18, ICAM, VLA-4 и VCAM; опухолеассоциированного антигена, такого как рецептор HER2, HER3 или HER4; и фрагментов указанных полипептидов.
40. Готовая к использованию клеточная культуральная среда без глутамина для получения полипептида в фазе продукции.