Иммунологический статус как интегральный компонент диагностического процесса у детей с лимфогранулематозом

рургия. -1993.-№9.-С.50-56.

3. Реакции сосудов конъюнктивы и поражение глазного дна [Текст]/И.Г. Давыдова, А.Я.Бунин//Вестн. офтальмологии. -1985.-№8.-С.38-40.

4. Способ введения лекарственных препаратов при заболеваниях заднего отрезка глаза [Текст]: пат. 2149615 Рос. Федераця: МПК7 А6Ш9/007/авторы и заявители Нестеров А.П. [и др.]; патентообладатель Нестеров А.П. [и др.]; заявл.10.11.99; опубл. 10.05.2003, Бюл. 13.

5. Способ субсклерального введения лекарственных препаратов [Текст]: пат. 2238709 Рос. Федераця: МПК7 А6Ш9/007/авторы и заявители Рева Г.В. [и др.]; патентообладатель Владивостокский гос. мед. ун-т; заявл. 02.06.2003; опубл. 27.10.2004, Бюл.30.

6. Центральная атеросклеротическая макулоди-

строфия [Текст]/А.В.Селицкая.-Томск.: Изд-во Томский ун-т, 1985.-109 с.

7. Модификация операции введения взвеси гомот-

кани в теноново пространство при высокой прогрессирующей близорукости [Текст]/А.В. Свирин,

0.А.Антипова/Юфтальмол. журн.-1984.-№4.-С.-31-33.

8. Againg and degeration of the human macula.

1.Quter nuclear layer and photoreceptops [Теxt]/S.Garther, P.Henkind.//Brit. J. Ophthalm.-1981.-№1.-P.23-28.

9. Treatment of senile macular disease [Теxt]/Marsch R.J.//Trans. Ophtalm. Soc. UK.-1975.-Vol.95.-P.62.

П

УДК 616-006.43/442+616 002.7

Г.А.Ермаков, Г.И.Чубенко

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ СТАТУС КАК ИНТЕГРАЛЬНЫЙ КОМПОНЕНТ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА У ДЕТЕЙ С ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ

ГОУ ВПО Амурская государственная медицинская академия

РЕЗЮМЕ

Целью данного исследования явилась оценка информативности показателей клеточного звена иммунитета у детей Амурской области больных лимфогранулематозом (ЛГМ) на этапах терапии и в связи с гистологическим вариантом ЛГМ. Преобладающим гистологическим вариантом ЛГМ являлся смешанно-клеточныш вариант на втором месте ЛГМ с нодулярныш склерозом. Вытвлены1 различия в показателях клеточного звена иммунитета у детей больных ЛГМ по сравнению со здоровыши детьми. Зарегистрированы существенные различия иммунологических показателей у детей больных ЛГМ в зависимости от гистологического варианта данного заболевания.

SUMMARY

G.A.Yermakov, G.I.Chubenko

IMMUNOLOGICAL STATUS IS INTEGRATIVE COMPONENT OF DIAGNOSTIC PROCESS FOR CHILDREN WITH HODGKIN’S DISEASE

The aim of this study was suggest that parameters of cellular immunity of children with Hodgkin’s disease (HD) in Amur region make more for diagnostic HD according to stage of therapy and histological type of HD. Primary histological type of Hodgkin’s lymphomas (HL) of children was mixed cellularity HL. Nodular sclerosis HL is a secondary histological type. We observed a significant increase in the mean level of leucocytes and lymphocytes counts in patients with HD when compared with normal controls. There are significant changes in cellular immu-

nity of children for deferent histological types of | Hodgkin’s disease in Amur region. |

По результатам статистических данных последних десятилетий отмечается увеличение заболеваемости детей лимфогранулематозом (ЛГМ) как в целом по России, так и в Амурской области. В течение последних лет ЛГМ является вторым по частоте онкогемато-логическим заболеванием у детей Амурской области, после острого лимфобластного лейкоза [2]. ЛГМ относится к злокачественным лимфомам и составляет 1215% среди всех злокачественных заболеваний у детей [3]. Субстрат опухоли происходит из Т-зависимых участков лимфоидной ткани. В патогенезе заболевания придается большое значение нарастающему иммунодефициту. В связи с этим исследование клеточного звена иммунной защиты представляются нам весьма актуальным [1, 3, 4].

Целью данного исследования явилась оценка информативности параметров клеточного звена иммунитета у детей Амурской области больных лимфогранулематозом на этапах терапии и в связи с гистологическим вариантом.

Материалы и методы

Исследование проводилось у 11 детей (3 девочки и 8 мальчиков) в возрасте от 9 до 18 лет с диагнозом лимфогранулематоз за период 2004-2006 гг. находящихся в отделении гематологии Амурской областной детской клинической больницы (г. Благовещенск). В качестве контроля использовались данные иммунологических исследований практически здоровых детей (n=10). Полихимиотерапия проводилась по протоколам ABVD и COPP, количество курсов составляло 4-6. Материалом для исследования служила кровь пациентов.

Подсчет лейкоцитов и лейкоцитарной формулы проводился на гемоанализаторе “РЕКТЯА” 60. Субпопуляции лимфоцитов определяли методом поверхностной непрямой иммунофлюоресценции с использованием коммерческих панелей моноклональных антител (МКА) ООО "Сорбент" (регистрационное удостоверение МЗ РФ №ФС 012а1104/2778-06).

Исследование включало в себя оценку: клеточного звена иммунитета с определением числа лейкоцитов, лимфоцитов и субпопуляций лимфоцитов (СБ3+, СБ19+, СБ4+, СБ8+, СБ16+, СБ25+) и подсчетом иммунорегуляторного индекса (ИРИ). Окрашенные клетки анализировали с помощью флуоресцентного микроскопа.

Количество антиген позитивных клеток определяли как процент флуоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом флуоресцирующих клеток (%), наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качестве отрицательного контроля используют препараты, подготовленные аналогичным образом, за исключением того, что вместо моноклональных антител клетки обрабатывали раствором Хенкса.

Иммунологическое исследование проводилось в три этапа: исследование на момент диагностики заболевания (П1=11); исследования на этапах полихимиотерапии (п2=11); исследования в течение 6-ти месяцев после завершения полихимиотерапии

(пэ=11).

Кроме того, оценка иммунных параметров проводилась в связи с гистологическим вариантом ЛГМ. Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программного комплекса

8ТАТШТГСА 6.0. При этом рассчитывались средние значения и доверительный интервал с использованием критерия (1) Стьюдента.

Результаты и обсуждение

По морфологии наиболее распространенным гистологическим вариантом ЛГМ является нодулярный склероз (70%) [1, 3]. В результате наших исследований установлено у 63,6% (п=7) обследованных детей имел место смешанно-клеточный вариант ЛГМ и лишь 36,3% (п=4) обследованных имели гистологический вариант, обозначаемый как нодулярный склероз. Гистологических вариантов ЛГМ с лимфоидным преобладанием и лимфоидным истощением в нашем исследовании не зафиксировано. Стадийность заболевания определяется распространенностью поражений среди одной или нескольких групп лимфоузлов, наличием внелимфатических очагов.

В результате исследования выявлены различия иммунологических показателей у детей больных ЛГМ (табл. 1), а также при различных гистологических вариантах ЛГМ (табл. 2). На момент диагностики заболевания у детей отмечалось повышение лейкоцитов более чем в 1,5 раза, а также абсолютный лимфоцитоз в сравнении с контрольной группой условно здоровых детей Амурской области. На втором этапе исследования эти показатели существенно снижались: лейкоциты до 1,8±0,1-109/л, лимфоциты до 0,75±0,02-109/л по завершению курсов химиотерапии отмечался незначительный лимфоцитоз, лейкоциты восстанавливались до границ нормы.

Таблица1

Динамика показателей клеточного звена иммунитета у детей Амурской области на этапах лечения в сравнении со здоровыми детьми

Показатели Контроль Этапы

I этап II этап III этап

Лейкоциты, -109/л 6,0±0,26 9,6±0,3 1,8±0,1 6,0±0,1

Лимфоциты в % 39,5±0,07 54,69±1,12 57,22±2,0 70,0±2,1

Лимфоциты, -109/л 3,5±0,3 5,25±0,4 0,75±0,04 4,2±0,3

(СБ3+) Т-лимфоциты в % 71,0±1,0 29,14±1,1 19,43±0,8 20,24±0,8

(СБ3+) Т-лимфоциты, -109/л 1,7±0,06 1,53±0,03 0,34±0,02 0,85±0,06

(СБ19+) В-лимфоциты в % 12,5±1,0 7,62±1,0 4,57±0,7 5,71±0,7

(СБ19+) В-лимфоциты, -109/л 0,4±0,02 0,4±0,02 0,08±0,003 0,24±0,03

(СБ4+) Т-хелперы в % 37,0±0,8 47,65±1,1 42,35±1,5 42,35±1,2

(СБ4+) Т-хелперы, -109/л 0,9±0,04 0,73±0,03 0,14±0,01 0,36±0,02

(СБ8+) Т-супрессоры/цтл в % 31,0±0,8 40,69±0,9 88,24±2,1 79,41±1,8

(СБ8+) Т- супрессоры/цтл, -109/л 0,75±0,03 0,62±0,03 0,3±0,01 0,68±0,05

(СБ16+) КК-клетки в % 12,5±1,3 49,02±1,1 44,12±1,3 44,12±1,4

(СБ16+) КК-клетки, -109/л 0,25±0,01 0,75±0,02 0,15±0,01 0,38±0,02

ИРИ (СБ4+/СБ8+) 1,25±0,1 1,17±0,06 0,48±0,04 0,53±0,03

Таблица 2

Параметры клеточного звена иммунитета при гистологических вариантах ЛГМ в сравнении со здоровыми детьми

Показатели Контроль ЛГМ

(CD3+) Т-лимфоциты, -109/л 1,7±0,06 1,2±0,06 0,21±0,02 0,85±0,02 1,8±0,03 0,34±0,05 1,2±0,08

(CD19+) B-лимфоциты, -109/л 0,4±0,02 0,8±0,03 0,12±0,01 0,6±0,02 0,4±0,03 0,08±0,03 0,24±0,02

(CD4+) Т-хелперы, -109/л 0,9±0,04 0,73±0,06 0,14±0,01 0,36±0,01 1,1±0,02 0,14±0,01 0,6±0,01

(CD8+) Т-супрессоры, -109/л. 0,75±0,03 0,62±0,02 0,3±0,02 0,68±0,02 0,7±0,04 0,3±0,01 0,68±0,02

(CD16+) NK-клетки, -109/л 0,25±0,01 0,5±0,02 0,12±0,01 0,4±0,01 0,8±0,02 0,15±0,01 0,5±0,01

ИРИ (CD4+/CD8+) 1,25 1,18 0,47 0,53 1,57 0,47 0,88

(CD25+) Акт. Т, В- лимф. в % 4,0±2 2,4±0,07 2,1±0,05 2,1±0,04 4,1±0,08 3,1±0,12 3,0±0,23

Соотношение Т :В 4,25 1,50 1,75 1,42 4,50 4,25 5,00

Анализируя популяционный состав лимфоцитов у детей на этапе диагностики, отмечено снижение СБ3+, СБ4+, СБ8+ фракций лимфоцитов, что подтверждается исследованиями авторов. Популяция В-лимфоцитов (СБ19+) практически не страдала. Отмечено трехкратное увеличение популяции натуральных киллеров.

Последующее, закономерное снижение абсолютных показателей всех популяций и субпопуляций лимфоцитов на этапах полихимиотерапии обусловлено агрессивным действием химиопрепаратов на все ростки кроветворения, в том числе и на лимфоидный росток.

В течении первого месяца после завершения ПХТ не наступало полного восстановления абсолютных показателей популяционного состава лимфоцитов за исключением СБ8+ лимфоцитов (супрессо-

ры/цитотоксические лимфоциты) и натуральных киллеров.

Нами отмечен тот факт, что во время проведения химиотерапии иммунорегуляторный индекс - соотношение СБ4+/СБ8+ лимфоцитов было ниже единицы, хотя на момент диагностики заболевания данный параметр находился на уровне нижней границы нормы. Таким образом, СБ8+ лимфоциты менее, чем СБ4+ подвержены действию химиопрепаратов при терапии ЛГМ у детей.

Проводя оценку параметров клеточного звена иммунитета у детей с ЛГМ, имеющим разные гистологические варианты нами установлено следующее. Имеются различия иммунологических показателей при ЛГМ с нодулярным склерозом и ЛГМ со смешанно-клеточным гистологическим вариантом. Во время всех трех этапов исследования отмечено достоверно высокие показатели СБ3+ (Т-лимфоцитов) в основном за счет увеличения СБ4+ лимфоцитов хел-перов и в меньшей степени за счет СБ8+ лимфоцитов при смешанно-клеточном варианте ЛГМ. Кроме того при смешанно-клеточном гистологическом варианте ЛГМ показатели В-лимфоцитов ниже, чем при ЛГМ с нодулярным склерозом 0,4±0,03-109/л и

0,8±0,03-109/л, соответственно. Этим обусловлено высокое соотношение Т :В лимфоцитов 4,50±0,09 при данном гистологическом варианте. При ЛГМ с ноду-

лярным склерозом соотношение Т:В лимфоцитов приближалось к единице (1,50±0,06).

Субпопуляция СБ25+ (активированных) Т- и В-лимфоцитов преобладала при смешанно клеточном варианте ЛГМ, превышая соответствующие показатели у детей страдающих ЛГМ с нодулярным склерозом почти в два раза на всех этапах исследования.

Выводы

1. Отмечены существенные различия в показателях клеточного звена иммунитета у детей Амурского региона больных ЛГМ по сравнению со здоровыми, которые проявлялись в выраженном лейко- и лимфо-цитозе, снижении СБ3+, СБ4+, СБ8+ субпопуляций лимфоцитов и 3-кратном увеличении натуральных киллеров.

2. Данные иммунологического обследования могут быть применены для динамической оценки им-муно-резистентных свойств на постхимиотерапевти-ческом этапе.

3. Иммунологические показатели у детей Амурского области больных ЛГМ информативны при характеристике гистологического варианта данного заболевания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Диагностика злокачественных опухолей при диспансеризации населения [Текст]/Н.Н.Блинова, А.Г.Веснина, Ю.Г.Пучкова.-СПб., 1994.-С.224.

2. Структура гемабластозов у детей Амурской области [Текст]/Г.А.Ермаков//Материалы VI региональной науч.-практ. конф. «Молодежь ХХ! века: шаг в будущее».-Благовещенск, 2005.-С-64-65.

3. Курс лекций по детской гематоло-гии/Т.В.Кобец, Г.А.Бассалыго (для студентов-интернов и практических врачей).-Симферополь, 2000.-77 с.

4. Состояние детской онкогематологической службы в России / А.Г.Румянцев, Е.Б.Владимирская //Гематология и трансфузиология.-1996.-№2.-С.3-7.