ПРИЕМЛЕМЫЙ ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ РАСТВОР ПО МЕНЬШЕЙ МЕРЕ ОДНОГО БАЗАЛЬНОГО ИНСУЛИНА
BASAL INSULIN SOLUTION FOR INJECTIONS

[0001] Изобретение относится к терапии путем инъекций инсулина одного или нескольких видов для лечения диабета.
[0002] Инсулинотерапия или терапия диабета путем инъекций инсулина в последние годы претерпела значительный прогресс, в частности, благодаря разработке новых видов инсулина, обеспечивающих коррекцию уровня глюкозы в крови пациентов, что позволяет лучше моделировать физиологическую активность поджелудочной железы.
[0003] Для покрытия суточной потребности в инсулине пациентам с диабетом в настоящее время согласно общей схеме предлагается два вида инсулинов, имеющих комплементарное действие: прандиальные инсулины (или инсулины, называемые инсулинами быстрого действия) и базальные инсулины (или инсулины, называемые инсулинами медленного действия).

[0004] Прандиальные инсулины обеспечивают быстрое усвоение (метаболизацию и/или депонирование) глюкозы, потребленной во время завтраков и обедов. Пациент должен осуществлять инъекции прандиального инсулина перед каждым приемом пищи или приблизительно от 2 до 3 инъекций в день. Наиболее часто используемые прандиальные инсулины представляют собой рекомбинантный инсулин человека, препараты NovoLog (инсулин аспарт от компании NOVO NORDISK), Humalog (инсулин лизпро от компании ELI LILLY) и Apidra (инсулин глулизин от компании SANOFI-AVENTIS).

[0005] Базальные инсулины обеспечивают поддержание гликемического гомеостаза пациента в периоды между приемами пищи. Они действуют в основном путем блокирования эндогенного продуцирования глюкозы (глюкозы, продуцируемой печенью). Ежедневная доза базального инсулина соответствует в общем случае 40-50% от общей суточной потребности в инсулине. В зависимости от применяемого базального инсулина эту дозу распределяют на 1 или 2 инъекции, регулярно осуществляемые в течение дня. Наиболее часто применяемые базальные инсулины представляют собой препараты Levemir (инсулин детемир от компании NOVO NORDISK) и Lantus (инсулин гларгин от компании SANOFI-AVENTIS).

[0006] Для полноты информации следует отметить препарат NPH (сокращенно от Neutral Protamine Hagedorn (нейтральный протамин Хагедорна); Humuline NPH, Insulatard), представляющий собой наиболее старый базальный инсулин. Этот состав представляет собой результат осаждения инсулина человека (представляющего собой соединение анионного типа при нейтральном значении pH) протамином, представляющим собой белок катионного типа. Эти микрокристаллы находятся в диспергированном состоянии в водной суспензии и медленно растворяются после подкожной инъекции. Такое медленное растворение обеспечивает пролонгированное высвобождение инсулина. Однако такое высвобождение не обеспечивает постоянную концентрацию инсулина с течением времени. Профиль высвобождения по форме представляет колокол и наблюдается в течение только от 12 до 16 часов. Таким образом, инъекции осуществляют два раза в день. Базальный инсулин NPH является значительно менее эффективным, чем современные базальные инсулины Levemir и Lantus. NPH представляет собой препарат базального инсулина промежуточного действия.

[0007] Принцип действия NPH изменился с появлением аналоговых инсулинов быстрого действия, позволяющих получать препараты, называемые "Premix" и обеспечивающие одновременно быстрое и промежуточное действие. Препараты NovoLog Mix (NOVO NORDISK) и Humalog Mix (ELI LILLY) представляют собой композиции, содержащие аналоговые инсулины быстрого действия Novolog и Humalog, частично связанные в комплекс протамином. Таким образом, эти композиции содержат микрокристаллы инсулина, действие которого называют промежуточным, и часть инсулина, который остался в растворенном виде и действие которого является быстрым. Эти композиции в хорошей степени обладают преимуществом инсулина быстрого действия, но у них есть также недостаток, свойственный NPH, т.е. продолжительность действия ограничена длительностью от 12 до 16 часов, а профиль высвобождения инсулина имеет форму колокола. Однако такие соединения позволяют пациенту осуществлять только одну инъекцию базального инсулина промежуточного действия с прандиальным инсулином быстрого действия. Тем не менее многие пациенты хотели бы уменьшить число инъекций.
[0008] Базальные инсулины, коммерчески реализуемые в настоящее время и находящиеся в настоящее время на стадии клинических разработок, могут быть классифицированы в зависимости от технического решения, которое обеспечивает пролонгированное действие, для чего до настоящего времени реализуют два подхода.
in vivo
in vivo
[0009] Первый подход, относящийся к инсулину детемир, основан на связывании с альбумином . Он представляет собой аналог, растворимый при pH=7 и содержащий боковую цепь жирной кислоты (тетрадеканоил), которая прикреплена в положении B29 и которая  позволяет этому инсулину связываться с альбумином. Его пролонгированное действие обязано, главным образом, этому сродству к альбумину после подкожной инъекции.
[00010] Однако его фармакокинетический профиль не обеспечивает суточного покрытия, что наиболее часто принуждает использовать его в виде двух инъекций в день.

[00011] Другие базальные инсулины, растворимые при pH=7, такие как Degludec, в настоящее время находятся в стадии разработки. Degludec также содержит боковую цепь жирной кислоты, прикрепленную к инсулину (гексадекандиоил-γ-L-Glu).
[00012] Второй подход, относящийся к инсулину гларгин, состоит в осаждении при физиологическом значении pH. Он представляет собой аналог инсулина человека, полученный путем удлинения C-концевой части цепи B инсулина человека двумя остатками аргинина и замещения остатка аспарагина A21 остатком глицина (US 5656722). Присоединение двух остатков аргинина было предусмотрено для регулирования pI (изоэлектрической точки) инсулина гларгин при физиологическом значении pH, чтобы таким образом сделать этот аналог инсулина нерастворимым в физиологической среде.
[00013] Замещение Α21 было предусмотрено для того, чтобы сделать инсулин гларгин стабильным при значениях pH в кислой области и иметь возможность, таким образом, получать его в форме приемлемого для инъекцийраствора при значениях pH в кислой области. В случае подкожной инъекции переход инсулина гларгин от значения pH в кислой области (pH=4-4,5) до физиологического значения pH (нейтральное значение pH) вызывает его осаждение под кожей. Последующее медленное растворение микрочастиц инсулина гларгин обеспечивает медленное и пролонгированное действие.
[00014] Гипогликемизирующее действие инсулина гларгин является практически постоянным на протяжении 24 часов, что позволяет большей части пациентов ограничиваться только одной инъекцией в день.
[00015] Инсулин гларгин в настоящее время считается наилучшим базальным инсулином, реализуемым коммерчески.
[00016] Однако находящееся в кислой области значение pH композиций базальных инсулинов, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, типа инсулина гларгин, мешает любой фармацевтической комбинации с другими белками и, в частности, с прандиальными инсулинами, поскольку последние являются нестабильными при значениях pH в кислой области.
in vitro
in vivo
[00017] Однако до настоящего времени никто не пытался осуществить солюбилизацию базальных инсулинов, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, типа инсулина гларгин, при нейтральном значении pH, сохраняя при этом разницу в растворимости между средой  (в эксципиенте) и средой  (под кожей), независимо от значения pH.
[00018] На практике принцип действия базальных инсулинов, типа инсулина гларгин, описанный ранее и состоящий в том, что они являются растворимыми при значениях pH в кислой области и выпадают в осадок при физиологическом значении pH, отклоняется специалистами в данной области техники в любом варианте решения, при котором инсулин типа инсулина гларгин был бы солюбилизирован при pH=6-8, сохраняя при этом свое существенное свойство, состоящее в выпадении в осадок в среде под кожей.
[00019] В то же время, невозможность получения композиций прандиального инсулина при значениях pH в кислой области основана на том, что прандиальный инсулин в этих условиях вступает во вторичную реакцию деамидирования в положении A21, что не позволяет отвечать требованиям Фармакопеи США, а именно по содержанию меньше 5% вторичных соединений через 4 недели хранения при 30°C.
[00020] Кроме того, находящееся в кислой области значение pH композиций базальных инсулинов, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, типа инсулина гларгин, мешает также любой экстемпоральной комбинации с прандиальными инсулинами при нейтральном значении pH.
[00021] Недавнее клиническое исследование, представленное на 69-й научной сессии Американской диабетической ассоциации, Нью-Орлеан, Луизиана, 5-9 июня 2009 года, позволило проверить это ограничение применения инсулина гларгин. Доза инсулина гларгин и доза прандиального инсулина (в данном случае, инсулина лизпро) были смешаны непосредственно перед инъекцией (E. Cengiz et al., 2010; Diabetes care - 33(5):1009-12). Этот эксперимент позволил выявить значительную задержку в фармакокинетическом и фармакодинамическом профилях прандиального инсулина, что может обуславливать случаи постпрандиальной и ночной гипогликемии. Это исследование в должной степени подтверждает несовместимость инсулина гларгин с инсулинами быстрого действия, коммерчески реализуемыми в настоящее время.

[00022] При этом в инструкции по применению препарата Lantus, представляющего собой коммерчески реализуемый препарат на основе инсулина гларгин от компании SANOFI-AVENTIS, пользователям в ясной форме указано не готовить никаких смесей с раствором прандиального инсулина по причине серьезного риска изменения фармакокинетики и фармакодинамики смешанного инсулина гларгин и/или прандиального инсулина.

[00023] Однако в отношении терапии результаты клинических исследований, представленные на 70-й ежегодной научной сессии Американской диабетической ассоциации (ADA) в 2010 году, см. рефераты 2163-PO и 0001-LB, в частности, исследования, проведенные компанией SANOFI-AVENTIS, показали, что лечение, осуществляемое препаратом Lantus, инсулином гларгин и прандиальным инсулином, является более эффективным, чем лечение на основе препаратов типа "Premix", Novolog Mix или Humalog Mix.
[00024] В отношении комбинаций инсулина гларгин и инсулина быстрого действия компания Biodel описала, в частности в заявке US 7718609, композиции, содержащие базальный инсулин и прандиальный инсулин при значении pH в интервале от 3,0 до 4,2 в присутствии хелатообразующего агента и многоосновных кислот. В этой заявке описана процедура, позволяющая сделать прандиальный инсулин при значениях pH в кислой области совместимым с инсулином типа инсулина гларгин. Однако в ней не описано получение комбинаций инсулина типа инсулина гларгин и прандиального инсулина при нейтральном значении pH.
[00025] Анализ композиций, описанных в литературе и патентах, показал, что нерастворимость базальных инсулинов типа инсулина гларгин при pH=7 представляет собой необходимое предварительное условие для обеспечения его медленного действия. В силу этого, все растворы, предложенные для комбинирования с другими препаратами, такими, как прандиальные инсулины, разработаны на основе испытаний по солюбилизации или стабилизации прандиальных инсулинов при значениях pH в кислой области, см., например, WO 2007/121256 и WO 2009/021955.
Неожиданным образом выяснилось, что композиции по настоящему изобретению позволяют солюбилизировать при pH=7 базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
Неожиданным образом, композиции по настоящему изобретению позволяют поддерживать в течение длительного времени гипогликемизирующую активность базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, несмотря на его солюбилизацию при pH=7 перед инъекцией. Это замечательное свойство обусловлено тем, что инсулин типа инсулина гларгин, солюбилизированный при pH=7, в композиции по настоящему изобретению осаждается в подкожной среде вследствие изменения состава среды. Элемент, запускающий осаждение инсулина типа инсулина гларгин, представляет собой не изменение pH, а изменение состава окружающей среды во время перехода фармацевтической композиции в физиологическую среду.
[00026] Настоящее изобретение вследствие решения проблемы растворимости при pH=7 позволяет:
- предложить приемлемую для инъекций композицию, предназначенную для лечения диабета и содержащую базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, в виде гомогенного раствора с pH=7 при сохранении его биологической активности и его профиля действия;
- предложить композицию в форме состава, содержащего комбинацию базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5 и прандиального инсулина без изменения профиля активности прандиального инсулина, растворимого при pH=6-8 и нестабильного при значениях pH в кислой области, при сохранении профиля базального действия, свойственного базальному инсулину;
- предложить приемлемую для инъекций композицию, предназначенную для лечения диабета и содержащую, кроме того, комбинацию базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и производного соединения или аналога желудочно-кишечного гормона, такого как GLP-1 или "glucagon like peptide-1" (глюкагон-подобный пептид-1);
- уменьшить число инъекций у пациентов;
- обеспечить указанным композициям соответствие требованиям американской и европейской фармакопей.
[00027] Неожиданным образом, в комбинациях инсулина типа инсулина гларгин с прандиальным инсулином, являющихся объектами настоящего изобретения, быстрое действие прандиального инсулина сохраняется, несмотря на осаждение инсулина типа инсулина гларгин в подкожной среде.
[00028] Настоящее изобретение относится к композиции в форме приемлемого для инъекций водного раствора, имеющего значение pH в интервале от 6,0 до 8,0 и содержащего по меньшей мере:
a) базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого pI находится в интервале от 5,8 до 8,5;
b) декстран, имеющий в качестве заместителей карбоксилатные радикалы-носители зарядов и гидрофобные радикалы формулы I или формулы II:
где:
• R представляет собой -OH или выбран из группы, в которую входят радикалы:
f
n
○ -(-[A]-COOH);
g
k
m
○ -(-[B]--[D]), причем D содержит по меньшей мере одну алкильную цепочку, содержащую по меньшей мере 8 атомов углерода;
f
• n означает степень замещения гликозидных остатков группировками --[A]-COOH, при этом 0,1≤n≤2;
g
k
• m означает степень замещения гликозидных остатков группировками --[B]--[D], при этом 0<m≤0,5;
• q означает степень полимеризации гликозидных остатков, то есть, среднее число гликозидных остатков в цепи полисахарида, при этом 3≤q≤50;
f
n
• -(-[A]-COOH);
○ -A- означает линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -A-:
f
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
g
k
m
• -(-[B]--[D]);
○ -B- означает по меньшей мере двухвалентный линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -B-:
g
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
k
k
○ связан c радикалом -D через функциональную группу ; причем  выбрана из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы; причем указанный радикал -D:
l
l
p
• представляет собой радикал -X(--Y), где X представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, содержащий от 1 до 12 атомов, выбранных из группы, в которую входят атомы C, N или O, при необходимости связанный с карбокси- или аминогруппами и/или происходящий из аминокислоты, двухатомного спирта, диамина или моноаминированного или диаминированного моно- или полиэтиленгликоля; Y представляет собой линейный или циклический алкил, алкиларил или арилалкил C8-C30, имеющий при необходимости в качестве заместителей один или несколько алкилов C1-C3; p≥1, а  представляет собой функциональную группу, выбранную из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы;
f
g
k
• ,  и  являются одинаковыми или разными;
+
+
• кислотные группы находятся в форме солей со щелочными катионами, выбранными из группы, в которую входят Na и K;
• в случае, когда p=1, если Y представляет собой алкил C8-C14, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C15, то q*m ≥ 2, и если Y представляет собой алкил C16-C20, то q*m ≥ 1;
• в случае, когда p≥2, если Y представляет собой алкил C8-C9, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C10-C16, то q*m ≥ 0,2;
где:
f
n
• R представляет собой -OH или радикал -(-[A]-COOH):
○ -A- означает линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -A-:
f
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира или карбаматная группа;
f
○ n означает степень замещения гликозидных остатков группировками --[A]-COOH, при этом 0,1≤n≤2;
• R' выбран из группы, в которую входят радикалы:
o
t
○ -C(O)NH-[E]-(-[F]);
2
z
t
o
○ -CHN(L)-[E]-(-[F]);
где:
○ z означает целое положительное число, равное 1 или 2;
○ L выбран из группы, в которую входят:
▪ -H, а z равно 1, и/или
f
▪ -[A]-COOH, а z равно 1 или 2, если  представляет собой функциональную группу простого эфира;
f
▪ -CO-[A]-COOH, а z равно 1, если  представляет собой функциональную группу простого эфира;
f
▪ -CO-NH-[A]-COOH, а z равно 1, если  представляет собой карбаматную группу;
o
t
○ -[E]-(-[F]):
▪ -E- означает по меньшей мере двухвалентный линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 8 атомов углерода и при необходимости гетероатомы, такие как O, N или S;
▪ -F- представляет собой линейный или циклический алкил, алкиларил или арилалкил C12-C30, имеющий при необходимости в качестве заместителей один или несколько алкилов C1-C3;
o
▪  представляет собой функциональную группу, выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира, амидная или карбаматная группа;
▪ t означает целое положительное число, равное 1 или 2;
• q означает степень полимеризации гликозидных остатков, то есть, среднее число гликозидных остатков в цепи полисахарида, при этом 3≤q≤50;
+
+
• кислотные группы находятся в форме солей со щелочными катионами, выбранными из группы, в которую входят Na и K;
• в случае, когда z=2, атом азота находится в форме четвертичного аммония.
[00029] В одном из вариантов осуществления, в случае, когда p=1, если Y означает группу C21-C30, то q*m ≥ 1.
[00030] В одном из вариантов осуществления, в случае, когда p=1, если Y означает группу C21-C30, то q*m ≥ 0,1.
f
n
[00031] В одном из вариантов осуществления радикал -(-[A]-COOH) представляет собой радикал, в котором:
f
• -A- означает радикал, содержащий 1 атом углерода; причем указанный радикал -A- связан c гликозидным остатком через функциональную группу  простого эфира.
g
k
m
[00032] В одном из вариантов осуществления радикал -(-[B]--[D]) представляет собой радикал, в котором:
g
• -B- означает радикал, содержащий 1 атом углерода; причем указанный радикал -B- связан c гликозидным остатком через функциональную группу  простого эфира;
• X означает радикал, происходящий из аминокислоты.
f
n
[00033] В одном из вариантов осуществления радикал -(-[A]-COOH) представляет радикал, в котором:
f
• -A- означает радикал, содержащий 1 атом углерода; причем указанный радикал -A- связан c гликозидным остатком через функциональную группу  простого эфира;
g
k
m
• радикал -(-[B]--[D]) представляет собой радикал, в котором:
g
• -B- означает радикал, содержащий 1 атом углерода; причем указанный радикал -B- связан c гликозидным остатком через функциональную группу  простого эфира;
• X означает радикал, происходящий из аминокислоты;
k
•  означает амидную группу.
[00034] В одном из вариантов осуществления декстран, имеющий в качестве заместителей карбоксилатные радикалы-носители зарядов и гидрофобные радикалы, соответствует формуле III:
где:
• R представляет собой -OH или выбран из группы, в которую входят радикалы:
f
n
○ -(-[A]-COOH);
g
k
m
○ -(-[B]--[D]), причем D содержит по меньшей мере одну алкильную цепочку, содержащую по меньшей мере 8 атомов углерода;
f
• n означает степень замещения гликозидных остатков группировками --[A]-COOH, при этом 0,1≤n≤2;
g
k
• m означает степень замещения гликозидных остатков группировками --[B]--[D], при этом 0<m≤0,5;
• q означает степень полимеризации гликозидных остатков, то есть, среднее число гликозидных остатков в цепи полисахарида, при этом 3≤q≤50;
f
n
• -(-[A]-COOH):
○ -A- означает линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -A-:
f
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
g
k
m
• -(-[B]--[D]):
○ -B- означает по меньшей мере двухвалентный линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -B-:
g
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
k
k
○ связан c радикалом -D через функциональную группу ; причем  выбрана из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы; причем указанный радикал -D:
l
l
p
• представляет собой радикал -X(--Y), где X представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, содержащий от 1 до 12 атомов, выбранных из группы, в которую входят атомы C, N или O, при необходимости связанный с карбокси- или аминогруппами и/или происходящий из аминокислоты, двухатомного спирта, диамина или моноаминированного или диаминированного моно- или полиэтиленгликоля; Y представляет собой линейный или циклический алкил, алкиларил или арилалкил C8-C20, имеющий при необходимости в качестве заместителей один или несколько алкилов C1-C3; p≥1, а  представляет собой функциональную группу, выбранную из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы;
f
g
k
• ,  и  являются одинаковыми или разными;
+
+
• кислотные группы находятся в форме солей со щелочными катионами, выбранными из группы, в которую входят Na и K;
• в случае, когда p=1, если Y представляет собой алкил C8-C14, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C15, то q*m ≥ 2, и если Y представляет собой алкил C16-C20, то q*m ≥ 1;
• в случае, когда p≥2, если Y представляет собой алкил C8-C11, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C12-C16, то q*m ≥ 0,3.
[00035] В одном из вариантов осуществления декстран, имеющий в качестве заместителей карбоксилатные радикалы-носители зарядов и гидрофобные радикалы, соответствует формуле IV:
где:
• R представляет собой -OH или выбран из группы, в которую входят радикалы:
f
n
○ -(-[A]-COOH);
g
k
m
○ -(-[B]--[D]), причем D содержит по меньшей мере одну алкильную цепочку, содержащую по меньшей мере 8 атомов углерода;
f
• n означает степень замещения гидроксильных групп -OH группировками --[A]-COOH в расчете на один гликозидный остаток; при этом 0,1 ≤ n ≤ 2;
g
k
• m означает степень замещения гидроксильных групп -OH группировками --[B]--[D] в расчете на один гликозидный остаток; при этом 0 < m ≤ 0,5;
• q означает степень полимеризации гликозидных остатков, то есть, среднее число гликозидных остатков в цепи полисахарида, при этом 3 ≤ q ≤ 50;
f
n
• -(-[A]-COOH);
○ -A- означает линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -A-:
f
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
g
k
m
• -(-[B]--[D]);
○ -B- означает по меньшей мере двухвалентный линейный или разветвленный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода; причем указанный радикал -B-:
g
○ связан c гликозидным остатком через функциональную группу , выбранную из группы, в которую входят функциональные группы простого эфира, сложного эфира и карбаматная группа;
k
k
○ связан c радикалом -D через функциональную группу ; причем  выбрана из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы; причем указанный радикал -D:
l
l
p
• представляет собой радикал -X(--Y), где X представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, содержащий от 1 до 12 атомов, выбранных из группы, в которую входят атомы C, N или O, при необходимости связанный с карбокси- или аминогруппами и/или происходящий из аминокислоты, двухатомного спирта, диамина или моноаминированного или диаминированного моно- или полиэтиленгликоля; Y представляет собой линейный или циклический алкил, алкиларил или арилалкил C8-C30, имеющий при необходимости в качестве заместителей один или несколько алкилов C1-C3; p≥1, а  представляет собой функциональную группу, выбранную из группы, в которую входят функциональная группа сложного эфира, амидная и карбаматная группы;
f
g
k
• ,  и  являются одинаковыми или разными;
+
+
• кислотные группы находятся в форме солей со щелочными катионами, выбранными из группы, в которую входят Na и K;
• в случае, когда p=1, если Y представляет собой алкил C8-C14, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C15, то q*m ≥ 2, и если Y представляет собой алкил C16-C30, то q*m ≥ 1;
• в случае, когда p≥2, если Y представляет собой алкил C8-C9, то q*m ≥ 2, если Y представляет собой алкил C10-C16, то q*m ≥ 0,2.
[00036] Приведенная структура соответствует изображению, обычно используемому для отображения декстрана, представляющего собой полисахарид, образованный большей частью цепочками гликозидных остатков со связями (1,6), что и отображает принятое изображение. Декстран в общем случае содержит в количестве приблизительно 5% также цепочки со связями (1,3), которые не представлены намеренно, но также входят в объем патентной охраны настоящего изобретения.
[00037] Под базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, понимают инсулин, который является нерастворимым при pH=7 и продолжительность действия которого составляет от 8 до 24 часов или больше в стандартных моделях диабета.
[00038] Эти базальные инсулины, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, представляют собой рекомбинантные инсулины, первичная структура которых была модифицирована главным образом за счет введения основных аминокислот, таких как аргинин или лизин. Они описаны, например, в следующих патентах, заявках или публикациях WO 2003/053339, WO 2004/096854, US 5656722 и US 6100376.
[00039] В одном из вариантов осуществления базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, представляет собой инсулин гларгин.
[00040] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 100 ЕД/мл (или приблизительно 3,6 мг/мл) базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00041] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 40 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00042] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 200 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00043] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 300 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00044] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 400 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00045] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 500 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00046] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 0,2 до 5.
[00047] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 0,2 до 4.
[00048] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 0,2 до 3.
[00049] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 0,5 до 3.
[00050] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 0,8 до 3.
[00051] В одном из вариантов осуществления массовое соотношение между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и замещенным декстраном, т.е. массовое соотношение "замещенный декстран/базальный инсулин", составляет от 1 до 3.
[00052] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 100 мг/мл.
[00053] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 80 мг/мл.
[00054] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 60 мг/мл.
[00055] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 50 мг/мл.
[00056] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 30 мг/мл.
[00057] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 20 мг/мл.
[00058] В одном из вариантов осуществления концентрация замещенного декстрана составляет от 1 до 10 мг/мл.
[00059] В одном из вариантов осуществления концентрация полисахарида составляет от 5 до 20 мг/мл.
[00060] В одном из вариантов осуществления концентрация полисахарида составляет от 5 до 10 мг/мл.
[00061]
[00062] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, прандиальный инсулин. Прандиальные инсулины растворимы при pH=7.
[00063] Под прандиальным инсулином понимают инсулин, называемый инсулином быстрого действия или "регулярным".
[00064] Прандиальные инсулины, называемые инсулинами быстрого действия, представляют собой инсулины, которые должны отвечать потребностям, вызванным потреблением белков и углеводов во время приема пищи, и должны действовать в течение не менее 30 минут.

[00065] В одном из вариантов осуществления прандиальные инсулины, называемые "регулярными", выбраны из группы, в которую входят Humulin (инсулин человека) и Novolin (инсулин человека).
[00066] Прандиальные инсулины, называемые инсулинами очень быстрого действия (fast acting (быстродействующие)), представляют собой инсулины, полученные рекомбинацией и модифицированные для уменьшения времени их действия.

[00067] В одном из вариантов осуществления прандиальные инсулины, называемые инсулинами очень быстрого действия (fast acting), выбраны из группы, в которую входят инсулин лизпро (Humalog), инсулин глулизин (Apidra) и инсулин аспарт (NovoLog).
[00068] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 100 ЕД/мл (или приблизительно 3,6 мг/мл) инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00069] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 40 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00070] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 200 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00071] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 300 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00072] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 400 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00073] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 500 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00074] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 600 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00075] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 700 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00076] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат суммарно 800 ЕД/мл инсулина в комбинации прандиального инсулина и базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5.
[00077] Соотношения между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и прандиальным инсулином, выраженные в процентном отношении по отношению к общему количеству инсулина, составляют, например, 25/75, 30/70, 40/60, 50/50, 60/40, 70/30, 80/20, 90/10 для композиций, соответствующих описанным ранее и содержащих от 40 до 800 ЕД/мл. При этом могут быть реализованы любые другие соотношения.
[00078] Для композиций с концентрацией 100 ЕД/мл общего инсулина, соотношения между базальным инсулином, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и прандиальным инсулином составляют в расчете на ЕД/мл, например, 25/75, 30/70, 40/60, 50/50, 60/40, 70/30, 80/20, 90/10. При этом могут быть реализованы любые другие соотношения.
[00079] В одном из вариантов осуществления композиция по настоящему изобретению содержит, кроме того, GLP-1, аналог или производное соединение GLP-1.

[00080] В одном из вариантов осуществления аналоги или производные соединения GLP-1 выбраны из группы, в которую входят экзенатид или препарат Byetta, разработанный компаниями Eli Lilly & Co и Amylin Pharmaceuticals, лираглутид или препарат Victoza, разработанный компанией Novo Nordisk, или ликсисенатид или препарат Lyxumia, разработанный компанией Sanofi, их аналоги или производные соединения и их фармацевтически приемлемые соли.

[00081] В одном из вариантов осуществления аналог или производное соединение GLP-1 представляет собой экзенатид или препарат Byetta, его аналоги или производные соединения и их фармацевтически приемлемые соли.

[00082] В одном из вариантов осуществления аналог или производное соединение GLP-1 представляет собой лираглутид или препарат Victoza, его аналоги или производные соединения и их фармацевтически приемлемые соли.

[00083] В одном из вариантов осуществления аналог или производное соединение GLP-1 представляет собой ликсисенатид или препарат Lyxumia, его аналоги или производные соединения и их фармацевтически приемлемые соли.
[00084] Под "аналогом", в случае, когда его используют по сравнению с пептидом или белком, понимают пептид или белок, в котором один или несколько структурных аминокислотных остатков замещены другими аминокислотными остатками и/или в котором удалены один или несколько структурных аминокислотных остатков, и/или в который введены один или несколько структурных аминокислотных остатков. Процентная степень гомологичности, допускаемая настоящим определением аналога, составляет 50%.
[00085] Под "производным соединением", в случае, когда его используют по сравнению с пептидом или белком, понимают пептид или белок или аналог, химически модифицированный заместителем, который отсутствует в пептиде или белке или в эталонном аналоге, то есть пептид или белок, который был модифицирован за счет создания ковалентных связей для введения заместителей.
[00086] В одном из вариантов осуществления концентрация GLP-1, аналога или производного соединения GLP-1 составляет от 0,01 до 10 мг/мл.
[00087] В одном из вариантов осуществления концентрация экзенатида, его аналогов или производных соединений и их фармацевтически приемлемых солей составляет от 0,05 до 0,5 мг/мл.
[00088] В одном из вариантов осуществления концентрация лираглутида, его аналогов или производных соединений и их фармацевтически приемлемых солей составляет от 1 до 10 мг/мл.
[00089] В одном из вариантов осуществления концентрация ликсисенатида, его аналогов или производных соединений и их фармацевтически приемлемых солей составляет от 0,01 до 1 мг/мл.
[00090] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению получают смешиванием коммерчески реализуемых растворов базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и коммерчески реализуемых растворов GLP-1, аналогов или производных соединений GLP-1 с объемными соотношениями в интервале от 10/90 до 90/10.
[00091] В одном из вариантов осуществления композиция по настоящему изобретению содержит суточную дозу базального инсулина и суточную дозу GLP-1, аналога или производного соединения GLP-1.
[00092] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 500 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл экзенатида.
[00093] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 500 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 1 до 10 мг/мл лираглутида.
[00094] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 500 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл ликсисенатида.
[00095] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 100 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл экзенатида.
[00096] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 100 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 1 до 10 мг/мл лираглутида.
[00097] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 100 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл ликсисенатида.
[00098] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 40 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл экзенатида.
[00099] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 40 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 1 до 10 мг/мл лираглутида.
[000100] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 40 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл ликсисенатида.
[000101] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 200 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл экзенатида.
[000102] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 200 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 1 до 10 мг/мл лираглутида.
[000103] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат 200 ЕД/мл базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и от 0,05 до 0,5 мг/мл ликсисенатида.
[000104] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 0 до 5000 мкМ.
[000105] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 50 до 4000 мкМ.
[000106] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 200 до 3000 мкМ.
[000107] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 0 до 1000 мкМ.
[000108] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 20 до 600 мкМ.
[000109] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, соли цинка с концентрацией в интервале от 50 до 500 мкМ.
[000110] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат буферные растворы, выбранные из группы, в которую входят Tris, цитратные и фосфатные растворы, с концентрациями в интервале от 0 до 100 мМ, предпочтительно в интервале от 0 до 50 мМ или в интервале от 15 до 50 мМ.
[000111] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат, кроме того, консерванты.
[000112] В одном из вариантов осуществления консерванты выбраны из группы, в которую входят м-крезол и фенол, используемые индивидуально или в смеси.
[000113] В одном из вариантов осуществления концентрация консервантов составляет от 10 до 50 мМ.
[000114] В одном из вариантов осуществления концентрация консервантов составляет от 10 до 40 мМ.
[000115] Композиции по настоящему изобретению могут, кроме того, содержать добавки, такие как вещества, регулирующие осмолярность, такие как глицерин, NaCl, маннит и глицин.
[000116] Композиции по настоящему изобретению могут, кроме того, содержать добавки, соответствующие фармакопеям, такие как поверхностно-активные вещества, например полисорбат.
[000117] Композиции по настоящему изобретению могут содержать, кроме того, любые эксципиенты, соответствующие фармакопеям и совместимые с применяемыми инсулинами в используемых концентрациях.
[000118] В одном из вариантов осуществления 0,3 ≤ n ≤ 1,7.
[000119] В одном из вариантов осуществления 0,7 ≤ n ≤ 1,5.
[000120] В одном из вариантов осуществления 0,9 ≤ n ≤ 1,2.
[000121] В одном из вариантов осуществления 0,01 ≤ m ≤ 0,5.
[000122] В одном из вариантов осуществления 0,02 ≤ m ≤ 0,4.
[000123] В одном из вариантов осуществления 0,03 ≤ m ≤ 0,3.
[000124] В одном из вариантов осуществления 0,05 ≤ m ≤ 0,2.
[000125] В одном из вариантов осуществления 3 ≤ q ≤ 50.
[000126] В одном из вариантов осуществления 3 ≤ q ≤ 40.
[000127] В одном из вариантов осуществления 3 ≤ q ≤ 30.
[000128] В одном из вариантов осуществления 3 ≤ q ≤ 20.
[000129] В одном из вариантов осуществления 3 ≤ q ≤ 10.
f
f
n
[000130] В одном из вариантов осуществления радикал -(-[A]-COOH) выбран из группы, в которую входят представленные далее цепочки, причем  имеет значения, приведенные ранее:
g
k
g
k
m
[000131] В одном из вариантов осуществления радикал -(-[B]--[D]) выбран из группы, в которую входят представленные далее цепочки; причем ,  и D имеют значения, приведенные ранее:
[000132] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из аминокислоты.
[000133] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из аминокислоты, выбранной из группы, в которую входят глицин, лейцин, фенилаланин, лизин, изолейцин, аланин, валин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты.
[000134] Радикалы, происходящие из аминокислот, могут быть как левовращающими, так и правовращающими.
[000135] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликоля.
[000136] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из этиленгликоля.
[000137] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из полиэтиленгликоля, выбранного из группы, в которую входят диэтиленгликоль и триэтиленгликоль.
[000138] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольамина.
[000139] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольамина, выбранного из группы, в которую входят этаноламин, диэтиленгликольамин и триэтиленгликольамин.
[000140] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольдиамина.
[000141] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из этилендиамина.
[000142] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X означает по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольдиамина, выбранного из группы, в которую входят диэтиленгликольдиамин и триэтиленгликольдиамин.
[000143] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает алкил, происходящий из гидрофобного спирта.
[000144] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает алкил, происходящий из гидрофобного спирта, выбранного из группы, в которую входят октанол (каприловый спирт), 3,7-диметилоктан-1-ол, деканол (дециловый спирт), додеканол (лауриловый спирт), тетрадеканол (миристиловый спирт) и гексадеканол (цетиловый спирт).
[000145] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает алкил, происходящий из гидрофобной кислоты.
[000146] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает алкил, происходящий из гидрофобной кислоты, выбранной из группы, в которую входят декановая, додекановая, тетрадекановая и гексадекановая кислоты.
[000147] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает группу, происходящую из стерола.
[000148] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает группу, происходящую из стерола, выбранного из группы, в которую входят холестерин и его производные.
[000149] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает группу, происходящую из токоферола.
[000150] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой группа Y означает группу, происходящую из производного соединения токоферола, выбранного из рацемата, L- или D-изомера α-токоферола.
l
[000151] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из глицина, p=1, группа Y происходит из октанола, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000152] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из глицина, p=1, группа Y происходит из додеканола, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000153] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из глицина, p=1, группа Y происходит из гексадеканола, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000154] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из фенилаланина, p=1, группа Y происходит из октанола, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000155] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из фенилаланина, p=1, группа Y происходит из 3,7-диметилоктан-1-ола, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000156] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2, группы Y происходят из октанола, а функциональные группы  означают функциональные группы сложных эфиров.
l
[000157] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2, группы Y происходят из деканола, а функциональные группы  означают функциональные группы сложных эфиров.
l
[000158] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2, группы Y происходят из додеканола, а функциональные группы  означают функциональные группы сложных эфиров.
l
[000159] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из этилендиамина, группа Y происходит из додекановой кислоты, а функциональная группа  означает амидную группу.
l
[000160] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из диэтиленгликольамина, p=1, группа Y происходит из додекановой кислоты, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000161] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из триэтиленгликольдиамина, p=1, группа Y происходит из додекановой кислоты, а функциональная группа  означает амидную группу.
l
[000162] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из триэтиленгликольдиамина, p=1, группа Y происходит из гексадекановой кислоты, а функциональная группа  означает амидную группу.
l
[000163] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой радикал X происходит из лейцина, p=1, группа Y происходит из холестерина, а функциональная группа  означает функциональную группу сложного эфира.
l
[000164] В одном из вариантов осуществления D представляет собой группировку, в которой X происходит из этилендиамина, p=1, группа Y происходит из холестерина, а функциональная группа  представляет собой карбаматную группу.
[000165] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из аминокислоты, выбранной из группы, в которую входят глицин, лейцин, фенилаланин, лизин, изолейцин, аланин, валин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты.
[000166] Радикалы, происходящие из аминокислот, могут быть как левовращающими, так и правовращающими.
[000167] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольамина.
[000168] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольамина, выбранного из группы, в которую входят этаноламин, диэтиленгликольамин и триэтиленгликольамин.
[000169] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольдиамина.
[000170] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из этилендиамина.
[000171] В одном из вариантов осуществления радикал E представляет собой по меньшей мере двухвалентный радикал, происходящий из моно- или полиэтиленгликольдиамина, выбранного из группы, в которую входят диэтиленгликольдиамин и триэтиленгликольдиамин.
[000172] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой алкил, происходящий из гидрофобного спирта.
[000173] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из гидрофобного спирта, выбранного из группы, в которую входят додеканол (лауриловый спирт), тетрадеканол (миристиловый спирт) и гексадеканол (цетиловый спирт).
[000174] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из гидрофобной кислоты.
[000175] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из гидрофобной кислоты, выбранной из группы, в которую входят додекановая, тетрадекановая и гексадекановая кислоты.
[000176] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из стерола.
[000177] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из стерола, выбранного из группы, в которую входят холестерин и его производные.
[000178] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из токоферола.
[000179] В одном из вариантов осуществления группа F представляет собой группу, происходящую из производного соединения токоферола, выбранного из рацемата, L- или D-изомера α-токоферола.
o
[000180] В одном из вариантов осуществления радикал E происходит из этилендиамина, t=1,  означает карбаматную группу, а группа F происходит из холестерина.
[000181] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из глицина,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из октанола;
○ q=38, n=0,9 и m=0,2.
[000182] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из глицина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из гексадеканола;
○ q=19, n=1,0 и m=0,1.
[000183] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из фенилаланина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из октанола;
○ q=38, n=1,0 и m=0,1.
[000184] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из фенилаланина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из октанола;
○ q=19, n=1,0 и m=0,2.
[000185] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из фенилаланина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из 3,7-диметилоктан-1-ола;
○ q=38, n=1,0 и m=0,1.
[000186] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из октанола;
○ q=38, n=1,05 и m=0,05.
[000187] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из деканола;
○ q=38, n=1,05 и m=0,05.
[000188] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из додеканола;
○ q=19, n=1,05 и m=0,05.
[000189] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из этилендиамина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из додекановой кислоты;
○ q=38, n=1,0 и m=0,1.
[000190] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-CH-, а  представляет собой функциональную группу сложного эфира;
g
k
g
k
l
m
2
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу сложного эфира, B означает радикал -CH-CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из глицина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из додеканола;
○ q=38, n=1,3 и m=0,1.
[000191] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой карбаматную группу;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает карбаматную группу, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из октанола;
○ q=38, n=1,3 и m=0,1.
[000192] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из додеканола;
○ q=4, n=0,96 и m=0,07.
[000193] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из диэтиленгликольамина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из додекановой кислоты;
○ q=38, n=1,0 и m=0,1.
[000194] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из триэтиленгликольдиамина, p=1,  означает амидную группу, а Y происходит из додекановой кислоты;
○ q=38, n=1,0 и m=0,1.
[000195] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из триэтиленгликольдиамина, p=1,  означает амидную группу, а Y происходит из гексадекановой кислоты;
○ q=38, n=1,05 и m=0,05.
[000196] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из глицина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из гексадеканола;
○ q=19, n=1,05 и m=0,05.
[000197] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из глицина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из гексадеканола;
○ q=38, n=0,37 и m=0,05.
[000198] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=1,61 и m=0,04.
[000199] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=1,06 и m=0,04.
[000200] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=0,66 и m=0,04.
[000201] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=0,46 и m=0,04.
[000202] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=4, n=1,61 и m=0,05.
[000203] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из этилендиамина, p=1,  означает карбаматную группу, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=1,61 и m=0,04.
[000204] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой карбаматную группу;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает карбаматную группу, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=19, n=1,96 и m=0,04.
[000205] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
o
o
t
○ -[E]-(-[F]) представляет собой группировку, в которой E происходит из этилендиамина,  представляет собой карбаматную группу, а F происходит из холестерина;
○ q=19 и n=1,65.
[000206] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из лейцина, p=1,  означает функциональную группу сложного эфира, а Y происходит из холестерина;
○ q=38, n=0,99 и m=0,05.
[000207] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из додеканола;
○ q=4, n=1,41 и m=0,16.
[000208] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из додеканола;
○ q=4, n=1,50 и m=0,07.
[000209] В одном из вариантов осуществления:
f
f
n
2
○ -(-[A]-COOH) представляет собой группировку, в которой A означает радикал -CH-, а  представляет собой функциональную группу простого эфира;
g
k
g
k
l
m
2
○ -(-[B]--[D]) представляет собой группировку, в которой  означает функциональную группу простого эфира, B означает радикал -CH-,  означает амидную группу, а D представляет собой группировку, в которой X происходит из аспарагиновой кислоты, p=2,  означает функциональные группы сложных эфиров, а Y происходит из деканола;
○ q=4, n=1,05 и m=0,05.
[000210] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат декстран, выбранный из группы, в которую входят следующие декстраны формулы I, III или IV:
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный октилглицинатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный цетилглицинатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный октилфенилаланинатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 3,7-диметил-1-октилфенилаланинатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный диоктиласпартатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дидециласпартатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дилауриласпартатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный N-(2-аминоэтил)додеканамидом;
- декстрансукцинат натрия, модифицированный лаурилглицинатом;
- N-метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный диоктиласпартатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дилауриласпартатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-аминоэтокси)этилдодеканоатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-{2-[додеканоиламино]этокси}этокси)этиламином;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-{2-[гексадеканоиламино]этокси}этокси)этиламином;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестеринлейцинатом;
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом;
- N-метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный холестеринлейцинатом.
[000211] В одном из вариантов осуществления композиции по настоящему изобретению содержат декстран, выбранный из группы, в которую входит следующий декстран формулы II:
- декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом, привитым восстановительным аминированием к концу восстанавливающей цепочки.
[000212] Настоящее изобретение относится также к композициям стандартной дозы, имеющим значение pH в интервале от 6,6 до 7,8 и содержащим базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и прандиальный инсулин.
[000213] Настоящее изобретение относится также к композициям стандартной дозы, имеющим значение pH в интервале от 7 до 7,8 и содержащим базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, и прандиальный инсулин.
[000214] В одном из вариантов осуществления базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, представляет собой инсулин гларгин.

[000215] В одном из вариантов осуществления прандиальный инсулин выбран из группы, в которую входят Humulin (инсулин человека) и Novolin (инсулин человека).

[000216] В одном из вариантов осуществления прандиальный инсулин выбран из группы, в которую входят инсулин лизпро (Humalog), инсулин глулизин (Apidra) и инсулин аспарт (NovoLog).
[000217] Солюбилизация при pH в интервале от 6,6 до 7,8 базальных инсулинов, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, полисахаридами формулы I, II, III или IV может быть простым образом засвидетельствована и проверена невооруженным глазом по изменению внешнего вида раствора.
[000218] Солюбилизация при pH в интервале от 7 до 7,8 базальных инсулинов, изоэлектрическая точка которых находится в интервале от 5,8 до 8,5, полисахаридами формулы I, II, III или IV может быть простым образом засвидетельствована и проверена невооруженным глазом по изменению внешнего вида раствора.
[000219] При этом очень важным обстоятельством является то, что заявитель смог проверить, что базальный инсулин, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5 и солюбилизированный в присутствии полисахарида формулы I, II, III или IV, нисколько не утратил своего действия как инсулин медленного действия.
[000220] Получение композиции по настоящему изобретению имеет преимущество, состоящее в том, что оно может быть осуществлено простым смешиванием водного раствора базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, раствора прандиального инсулина и полисахарида формулы I, II, III или IV в виде водного раствора или в лиофилизованной форме. При необходимости значение pH композиции доводят до pH=7.
[000221] Получение композиции по настоящему изобретению имеет преимущество, состоящее в том, что оно может быть осуществлено простым смешиванием водного раствора базального инсулина, изоэлектрическая точка которого находится в интервале от 5,8 до 8,5, полисахарида формулы I, II, III или IV в виде водного раствора или в лиофилизованной форме и раствора прандиального инсулина в виде водного раствора или в лиофилизованной форме.
[000222] В одном из вариантов осуществления смесь базального инсулина и полисахарида концентрируют ультрафильтрацией перед смешиванием с прандиальным инсулином в виде водного раствора или в лиофилизованной форме.
[000223] При необходимости композицию смеси дополняют эксципиентами, такими, как глицерин, м-крезол, хлорид цинка и раствор Tween, вводя концентрированные растворы этих эксципиентов в смесь. При необходимости значение pH композиции доводят до 7.
[000224] Описание фигур
glucose
[000225] На фиг. 1-6 представлены полученные результаты в виде кривых фармакодинамики глюкозы. По оси ординат отложены значения D (в мМ) в зависимости от времени после инъекции (в минутах).

[000226] Фиг. 1. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Apidra и Lantus (▫) по сравнению с композицией по настоящему изобретению "полисахарид 4/Lantus/Apidra, (75/25)" (▪).

[000227] Фиг. 2. Индивидуальные кривые при введении препаратов Apidra и Lantus (испытано на 6 свиньях).

[000228] Фиг. 3. Индивидуальные кривые при введении смеси "Polysaccharide 4/Apidra/Lantus" (испытано на 6 свиньях).

[000229] Фиг. 4. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog и Lantus (▫) по сравнению с введением композиции по настоящему изобретению "полисахарид 4/Humalog/Lantus" (▪).

[000230] Фиг. 5. Индивидуальные кривые при введении препаратов Humalog и Lantus (испытано на 6 свиньях).

[000231] Фиг. 6. Индивидуальные кривые при введении композиции "полисахарид 4/Humalog/Lantus" (испытано на 5 свиньях).
glucose
[000232] На фиг. 7-12 представлены полученные результаты в виде кривых фармакодинамики глюкозы. По оси ординат отложены значения D (в мМ) в зависимости от времени после инъекции (в часах).

[000233] Фиг. 7. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B28 (0,53 ЕД/кг) (-▪-).

[000234] Фиг. 8. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B27 (0,47 ЕД/кг) (-▪-).

[000235] Фиг. 9. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B29 (0,53 ЕД/кг) (-▪-).

[000236] Фиг. 10. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B31 (0,48 ЕД/кг) (-▪-).

[000237] Фиг. 11. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,24 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B30 (0,64 ЕД/кг) (-▪-).

[000238] Фиг. 12. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) (··▪··) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B32 (0,53 ЕД/кг) (-▪-).
Примеры
Часть A. Полисахариды
[000239] В приведенной далее таблице 1 неограничивающим образом представлены примеры полисахаридов, приемлемых для использования в композициях по настоящему изобретению.
Таблица 1
ПОЛИСАХАРИДЫ
ЗАМЕСТИТЕЛИ-<i>f</i>-A-COONa-<i>g</i>-B-<i>k</i>-D
ТРИВИАЛЬНОЕ НАЗВАНИЕ
<b>Полисахарид 1</b>q: 38n: 0,9m: 0,2
<img file="00000007.tif" he="37" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный октилглицинатом
<b>Полисахарид 2</b>q: 19n: 1,0m: 0,1
<b>Полисахарид 16</b>q: 19n: 1,05m: 0,05
<b>Полисахарид 17</b>q: 38n: 0,37m: 0,05
<img file="00000008.tif" he="53" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный цетилглицинатом
<b>Полисахарид 3</b>q: 38n: 1,0m: 0,1
<b>Полисахарид 4</b>q: 19n: 1,0m: 0,2
<img file="00000009.tif" he="51" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный октилфенилаланинатом
<b>Полисахарид 5</b>q: 38n: 1,0m: 0,1
<img file="00000010.tif" he="38" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 3,7-диметил-1-октилфенилаланинатом
<b>Полисахарид 6</b>q: 38n: 1,05m: 0,05
<img file="00000011.tif" he="47" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный диоктиласпартатом
<b>Полисахарид 7</b>q: 38n: 1,05m: 0,05
<b>Полисахарид 29</b>q: 4n: 1,05m: 0,05
<img file="00000012.tif" he="49" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дидециласпартатом
<b>Полисахарид 8</b>q: 19n: 1,05m: 0,05
<b>Полисахарид 27</b>q: 4n: 1,41m: 0,16
<b>Полисахарид 28</b>q: 4n: 1,50m: 0,07
<img file="00000013.tif" he="56" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дилауриласпартатом
<b>Полисахарид 9</b>q: 38n: 1,0m: 0,1
<img file="00000014.tif" he="37" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный N-(2-аминоэтил)додеканамидом
<b>Полисахарид 10</b>q: 38n: 1,3m: 0,1
<img file="00000015.tif" he="37" wi="55" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстрансукцинат натрия, модифицированный лаурилглицинатом
<b>Полисахарид 11</b>q: 38n: 1,3m: 0,1
<img file="00000016.tif" he="43" wi="55" img-content="undefined" img-format="tif" />
N-Метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный диоктиласпартатом
<b>Полисахарид 12</b>q: 4n: 0,96m: 0,07
<img file="00000017.tif" he="44" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный дилауриласпартатом
<b>Полисахарид 13</b>q: 38n: 1,0m: 0,1
<img file="00000018.tif" he="27" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-аминоэтокси)-этилдодеканоатом
<b>Полисахарид 14</b>q: 38n: 1,0m: 0,1
<img file="00000019.tif" he="30" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-{2-[додеканоиламино]-этокси}этокси)-этиламином
<b>Полисахарид 15</b>q: 38n: 1,05m: 0,05
<img file="00000020.tif" he="29" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный 2-(2-{2-[гексадеканоиламино]этокси}этокси)-этиламином
<b>Полисахарид 18</b>q: 19n: 1,61m: 0,04
<b>Полисахарид 19</b>q: 19n: 1,06m: 0,04
<b>Полисахарид 20</b>q: 19n: 0,66m: 0,04
<b>Полисахарид 21</b>q: 19n: 0,46m: 0,04
<b>Полисахарид 22</b>q: 4n: 1,61m: 0,04
<b>Полисахарид 26</b>q: 38n: 0,99m: 0,05
<img file="00000021.tif" he="55" wi="56" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестеринлейцинатом
<b>Полисахарид 23</b>q: 19n: 1,61m: 0,04
<img file="00000022.tif" he="28" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестерин-1-этилендиамино-карбоксилатом
<b>Полисахарид 24</b>q: 19n: 1,96m: 0,04
<img file="00000023.tif" he="31" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
N-Метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный холестеринлейцинатом
ПОЛИСАХАРИДЫ
ЗАМЕСТИТЕЛИ-<i>f</i>-A-COONa-[E]-<i>o</i>-[F]
ТРИВИАЛЬНОЕ НАЗВАНИЕ
<b>Полисахарид 25</b>q: 19n: 1,65
<img file="00000024.tif" he="32" wi="57" img-content="undefined" img-format="tif" />
Декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестерин-1-этилендиамино-карбоксилатом, привитым восстановительным аминированием к концу восстанавливающей цепочки
Пример A1. Получение полисахарида 1
[000240] 16 г (или 296 ммоль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в воде с концентрацией 420 г/л. К этому раствору прибавляли 30 мл 10н раствора NaOH (296 ммоль). Смесь нагревали до 35°C и затем прибавляли 46 г (396 ммоль) хлорацетата натрия. Температуру реакционной смеси доводили до 60°C со скоростью 0,5°C/мин и далее смесь нагревали при 60°C в течение 100 минут. Реакционную смесь разбавляли 200 мл воды, нейтрализовали уксусной кислотой и очищали ультрафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против 6 объемов воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида; затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
[000241] Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=31,5 мг/г.
[000242] Результат кислотно-основного титрования: среднее число метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 1,1.
[000243] Раствор декстранметилкарбоксилата натрия пропускали через смолу Purolite (анионит) для получения декстранметилкарбоновой кислоты, которую затем лиофилизовали в течение 18 часов.
[000244] Октилглицинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
1
2
[000245] 10 г декстранметилкарбоновой кислоты (44,86 ммоль метилкарбоновой кислоты) солюбилизировали в ДМФА с концентрацией 60 г/л и затем охлаждали до 0°C. 3,23 г октилглицината в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты (8,97 ммоль) суспендировали в ДМФА с концентрацией 100 г/л. Затем к этой суспензии прибавляли 0,91 г триэтиламина (8,97 ммоль). После охлаждения раствора полисахарида до 0°C прибавляли раствор NMM (5,24 г, 51,8 ммоль) в ДМФА (530 г/л) и 5,62 г (51,8 ммоль) EtOCOCl. После проведения реакции в течение 10 минут прибавляли суспензию октилглицината. Затем смесь выдерживали при 10°C в течение 45 минут. Далее смесь нагревали до 30°C. Затем к реакционной смеси прибавляли раствор имидазола (10,38 г в 17 мл воды) и 52 мл воды. Раствор полисахарида подвергали ультрафильтрации через мембрану PES с порогом 10 кДа против 15 объемов 0,9%-го раствора NaCl и 5 объемов воды. Концентрацию раствора полисахарида определяли по сухому остатку. Фракцию раствора лиофилизовали и анализировали способом ЯМР H в DO для определения степени замещения метилкарбоксилатных звеньев октилглицинатными в расчете на один гликозидный остаток.
[000246] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 1]=36,4 мг/г.
[000247] Результат кислотно-основного титрования: n=0,9.
1
[000248] Анализ способом ЯМР H: m=0,2.
Пример A2. Получение полисахарида 2
[000249] Цетилглицинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000250] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный цетилглицинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
[000251] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 2]=15,1 мг/г.
[000252] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000253] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A3. Получение полисахарида 3
[000254] Октилфенилаланинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000255] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный октилфенилаланинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000256] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 3]=27,4 мг/г.
[000257] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000258] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A4. Получение полисахарида 4
[000259] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A3, получали модифицированный октилфенилаланинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
[000260] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 4]=21,8 мг/г.
[000261] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000262] Анализ способом ЯМР H: m=0,2.
Пример 6. Получение полисахарида 5
[000263] 3,7-Диметил-1-октилфенилаланинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000264] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный 3,7-диметил-1-октилфенилаланинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000265] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 5]=24,3 мг/г.
[000266] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000267] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A6. Получение полисахарида 6
[000268] Диоктиласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000269] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный диоктиласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000270] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 6]=22,2 мг/г.
[000271] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000272] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A7. Получение полисахарида 7
[000273] Дидециласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000274] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дидециласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000275] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 7]=19,8 мг/г.
[000276] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000277] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A8. Получение полисахарида 8
[000278] Дилауриласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000279] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дилауриласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
[000280] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 8]=22,8 мг/г.
[000281] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000282] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A9. Получение полисахарида 9
[000283] N-(2-Аминоэтил)додеканамид получали способом, описанным в US 2387201, исходя из метилового эфира додекановой кислоты (SIGMA) и этилендиамина (ROTH).
[000284] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный N-(2-аминоэтил)додеканамидом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000285] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 9]=23,8 мг/г.
[000286] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000287] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A10. Получение полисахарида 10
1
2
[000288] Декстрансукцинат натрия получали исходя из декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS) способом, описанным в статье Sanchez-Chaves et al., 1998 (Manuel et al., Polymer 1998, 39 (13), 2751-2757). Среднее число сукцинатных групп в расчете на один гликозидный остаток по результатам ЯМР H в DO/NaOD равно 1,4.
[000289] Лаурилглицинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000290] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали декстрансукцинат натрия, модифицированный лаурилглицинатом.
[000291] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 10]=16,1 мг/г.
[000292] Результат кислотно-основного титрования: n=1,3.
1
[000293] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A11. Получение полисахарида 11
[000294] Диоктиласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000295] 12 г (или 0,22 моль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в смеси ДМФА/ДМСО. Смесь нагревали до 80°C при перемешивании. Далее постепенно вносили 3,32 г (0,03 моль) 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и затем 14,35 г (0,11 моль) этилизоцианатоацетата. После проведения реакции в течение 5 ч смесь разбавляли водой и очищали диафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против 0,1н раствора NaOH, 0,9%-го раствора NaCl и воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида; затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа N-метилкарбоксилаткарбаматных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
[000296] Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=30,5 мг/г.
[000297] Результат кислотно-основного титрования: среднее число N-метилкарбоксилаткарбаматных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 1,4.
[000298] Способом, аналогичным способу, описанному в примере 1, получали N-метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный диоктиласпартатом.
[000299] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 11]=17,8 мг/г.
[000300] Результат кислотно-основного титрования: n=1,3.
1
[000301] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A12. Получение полисахарида 12
[000302] Дилауриласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000303] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дилауриласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 1 кг/моль (q=4, PHARMACOSMOS).
[000304] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 12]=12,3 мг/г.
[000305] Результат кислотно-основного титрования: n=0,96.
1
[000306] Анализ способом ЯМР H: m=0,07.
Пример A13. Получение полисахарида 13
[000307] 2-(2-Аминоэтокси)этилдодеканоат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000308] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный 2-(2-аминоэтокси)этилдодеканоатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000309] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 13]=25,6 мг/г.
[000310] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000311] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A14. Получение полисахарида 14
[000312] 2-(2-{2-[Додеканоиламино]этокси}этокси)этиламин получали способом, описанным в US 2387201, исходя из метилового эфира додекановой кислоты (SIGMA) и триэтиленгликольдиамина (HUNSTMAN).
[000313] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный 2-(2-{2-[додеканоиламино]этокси}этокси)этиламином декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000314] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 14]=24,9 мг/г.
[000315] Результат кислотно-основного титрования: n=1,0.
1
[000316] Анализ способом ЯМР H: m=0,1.
Пример A15. Получение полисахарида 15
[000317] 2-(2-{2-[Гексадеканоиламино]этокси}этокси)этиламин получали способом, описанным в US 2387201, исходя из метилового эфира пальмитиновой кислоты (SIGMA) и триэтиленгликольдиамина (HUNSTMAN).
[000318] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный 2-(2-{2-[гексадеканоиламино]этокси}этокси)этиламином декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000319] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 15]=22,2 мг/г.
[000320] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000321] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A16. Получение полисахарида 16
[000322] Цетилглицинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000323] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный цетилглицинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
[000324] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 16]=23 мг/г.
[000325] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000326] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A17. Получение полисахарида 17
[000327] 10 г (или 185 ммоль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в воде с концентрацией 420 г/л. К этому раствору прибавляли 19 мл 10н раствора NaOH (185 ммоль). Смесь нагревали до 35°C и затем прибавляли 8,6 г (74 ммоль) хлорацетата натрия. Температуру реакционной смеси доводили до 60°C со скоростью 0,5°C/мин и далее смесь нагревали при 60°C в течение 100 минут. Реакционную смесь разбавляли 200 мл воды, нейтрализовали уксусной кислотой и очищали ультрафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против 6 объемов воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида; затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
[000328] Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=35,1 мг/г.
[000329] Результат кислотно-основного титрования: среднее число метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 0,42.
[000330] Раствор декстранметилкарбоксилата натрия пропускали через смолу Purolite (анионит) для получения декстранметилкарбоновой кислоты, которую затем лиофилизовали в течение 18 часов.
[000331] Цетилглицинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000332] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный цетилглицинатом.
[000333] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 17]=18 мг/г.
[000334] Результат кислотно-основного титрования: n=0,37.
1
[000335] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A18. Получение полисахарида 18
10 г декстранметилкарбоксилата натрия, характеризующегося степенью замещения метилкарбоксилатных звеньев, равной 1,10 в расчете на один гликозидный остаток, синтезировали исходя из декстрана со среднемассовой молекулярной массой 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS) способом, аналогичным способу, описанному в случае полисахарида 1, и затем лиофилизовали.
8 г (или 64 ммоль по гидроксильным группам) декстранметилкарбоксилата натрия, характеризующегося степенью замещения метилкарбоксилатных звеньев, равной 1,05 в расчете на один гликозидный остаток, солюбилизировали в воде с концентрацией 1000 г/л. Затем прибавляли 6 мл 10н раствора NaOH (64 ммоль). Смесь нагревали до 35°C и далее прибавляли 7,6 г (65 ммоль) хлорацетата натрия. Смесь постепенно нагревали до температуры 60°C и далее выдерживали при этой температуре в течение 100 минут. Смесь разбавляли водой, нейтрализовали уксусной кислотой и затем очищали ультрафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида и затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=45,8 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: среднее число метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 1,65.
Раствор декстранметилкарбоксилата натрия пропускали через смолу Purolite (анионит) для получения декстранметилкарбоновой кислоты, которую затем лиофилизовали в течение 18 часов.
Холестеринлейцинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в патенте US 4826818.
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестеринлейцинатом.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 18]=21 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=1,61.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A19. Получение полисахарида 19
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный холестеринлейцинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 19]=19,4 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=1,06.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A20. Получение полисахарида 20
16 г (или 296 ммоль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в воде с концентрацией 420 г/л. К этому раствору прибавляли 30 мл 10н раствора NaOH (296 ммоль). Смесь нагревали до 35°C и затем прибавляли 26 г (222 ммоль) хлорацетата натрия. Температуру реакционной смеси постепенно доводили до 60°C и далее смесь нагревали при 60°C в течение 100 минут. Реакционную смесь разбавляли водой, нейтрализовали уксусной кислотой и очищали ультрафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида и затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=33,1 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: среднее число метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 0,70.
Раствор декстранметилкарбоксилата натрия пропускали через смолу Purolite (анионит) для получения декстранметилкарбоновой кислоты, которую затем лиофилизовали в течение 18 часов.
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестеринлейцинатом.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 20]=18,9 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=0,66.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A21. Получение полисахарида 21
16 г (или 296 ммоль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в воде с концентрацией 420 г/л. К этому раствору прибавляли 30 мл 10н раствора NaOH (296 ммоль). Смесь нагревали до 35°C и затем прибавляли 18 г (158 ммоль) хлорацетата натрия. Температуру реакционной смеси постепенно доводили до 60°C и далее смесь нагревали при 60°C в течение 100 минут. Реакционную смесь разбавляли водой, нейтрализовали уксусной кислотой и очищали ультрафильтрацией через мембрану PES с порогом 1 кДа против воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида и затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=52,6 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: среднее число метилкарбоксилатных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 0,50.
Раствор декстранметилкарбоксилата натрия пропускали через смолу Purolite (анионит) для получения декстранметилкарбоновой кислоты, которую затем лиофилизовали в течение 18 часов.
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали декстранметилкарбоксилат натрия, модифицированный холестеринлейцинатом.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 21]=18,9 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=0,46.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A22. Получение полисахарида 22
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A18, получали модифицированный холестеринлейцинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A18, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 1 кг/моль (q=4, PHARMACOSMOS).
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 22]=20,2 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=1,61.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A23. Получение полисахарида 23
Гидрохлорид холестерин-1-этилендиаминокарбоксилата получали способом, описанным в (Akiyoshi, K. et al., WO 2010/053140).
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A18, получали модифицированный холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A18, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS).
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 23]=20,1 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=1,61.
1
Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A24. Получение полисахарида 24
12 г (или 0,22 моль по гидроксильным группам) декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS) солюбилизировали в смеси ДМФА/ДМСО. Смесь нагревали до 80°C при перемешивании. Далее постепенно вносили 3,32 г (0,03 моль) 1,4-диазабицикло[2.2.2]октана и затем 26,8 г (0,21 моль) этилизоцианатоацетата. После проведения реакции в течение 5 ч смесь разбавляли водой и очищали диафильтрацией через мембрану PES с порогом 5 кДа против 0,1н раствора NaOH, 0,9%-го раствора NaCl и воды. Конечный раствор анализировали по сухому остатку для определения концентрации полисахарида; затем осуществляли анализ способом кислотно-основного титрования в смеси "вода/ацетон", 50/50 (V/V) для определения среднего числа N-метилкарбоксилаткарбаматных звеньев в расчете на один гликозидный остаток.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид]=30,1 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: среднее число N-метилкарбоксилаткарбаматных звеньев в расчете на один гликозидный остаток равно 2,0.
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали N-метилкарбоксилат декстранкарбамата натрия, модифицированный холестеринлейцинатом.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 24]=17,9 мг/г.
[000336] Результат кислотно-основного титрования: n=1,96.
1
[000337] Анализ способом ЯМР H: m=0,04.
Пример A25. Получение полисахарида 25
Гидрохлорид холестерин-1-этилендиаминокарбоксилата получали способом, описанным в (Akiyoshi, K. et al., WO 2010/053140).
1
10 г декстрана со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 5 кг/моль (q=19, PHARMACOSMOS, 3,2 ммоль по концевым группам цепочек) солюбилизировали в ДМСО при 80°C. 4,8 г гидрохлорида холестерин-1-этилендиаминокарбоксилата (9,5 ммоль), 0,96 г триэтиламина (9,5 ммоль) и 2,0 г цианоборгидрида натрия (32 ммоль) прибавляли к реакционной смеси и перемешивали при 80°C в течение 24 часов. После охлаждения смесь осаждали в дихлорметане и затем в ацетоне и сушили в вакууме. По результату анализа способом ЯМР H был получен декстран, модифицированный на конце цепочки холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом. Декстранметилкарбоксилат натрия, характеризующийся степенью замещения метилкарбоксилатных звеньев, равной 1,65 в расчете на один гликозидный остаток, и модифицированный на конце цепочки холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом, был синтезирован способом, аналогичным способу, описанному в примере A18, исходя из декстрана, модифицированного на конце цепочки холестерин-1-этилендиаминокарбоксилатом.
Анализ по сухому остатку: [полисахарид 25]=13,7 мг/г.
Результат кислотно-основного титрования: n=1,65.
1
Анализ способом ЯМР H: каждая цепочка полимера содержит группировку холестерин-1-этилендиаминокарбоксилата, привитую к концу восстанавливающей цепочки.
Пример A26. Получение полисахарида 26
[000338] Холестеринлейцинат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в патенте US 4826818.
[000339] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный холестеринлейцинатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 10 кг/моль (q=38, PHARMACOSMOS).
[000340] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 26]=26,6 мг/г.
[000341] Результат кислотно-основного титрования: n=0,99.
1
[000342] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
Пример A27. Получение полисахарида 27
Дилауриласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дилауриласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A18, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 1 кг/моль (q=4, PHARMACOSMOS).
[000343] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 27]=16,7 мг/г.
[000344] Результат кислотно-основного титрования: n=1,41.
1
[000345] Анализ способом ЯМР H: m=0,16.
Пример A28. Получение полисахарида 28
[000346] Дилауриласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000347] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дилауриласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A18, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 1 кг/моль (q=4, PHARMACOSMOS).
[000348] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 28]=25 мг/г.
[000349] Результат кислотно-основного титрования: n=1,50.
1
[000350] Анализ способом ЯМР H: m=0,07.
Пример A29. Получение полисахарида 29
[000351] Дидециласпартат в виде соли пара-толуолсульфоновой кислоты получали способом, описанным в US 4826818.
[000352] Способом, аналогичным способу, описанному в примере A1, получали модифицированный дидециласпартатом декстранметилкарбоксилат натрия, синтезированный способом, описанным в примере A1, используя декстран со среднемассовой молекулярной массой приблизительно 1 кг/моль (q=4, PHARMACOSMOS).
[000353] Анализ по сухому остатку: [полисахарид 29]=15 мг/г.
[000354] Результат кислотно-основного титрования: n=1,05.
1
[000355] Анализ способом ЯМР H: m=0,05.
[000356] Примеры
Часть B. Определение свойств композиций по настоящему изобретению

Пример B1. Раствор аналогового инсулина быстрого действия (Novolog) с концентрацией 100 ЕД/мл

[000357] Этот раствор представляет собой раствор инсулина аспарт, коммерчески реализуемый компанией Novo Nordisk под названием Novolog в США и Novorapid в Европе. Этот препарат представляет собой аналоговый инсулин быстрого действия.

Пример B2. Раствор аналогового инсулина быстрого действия (Humalog) с концентрацией 100 ЕД/мл

[000358] Этот раствор представляет собой раствор инсулина лизпро, коммерчески реализуемый компанией Eli Lilly под названием Humalog. Этот препарат представляет собой аналоговый инсулин быстрого действия.

Пример B3. Раствор аналогового инсулина быстрого действия (Apidra) с концентрацией 100 ЕД/мл

[000359] Этот раствор представляет собой раствор инсулина глузилин, коммерчески реализуемый компанией Sanofi-Aventis под названием Apidra. Этот препарат представляет собой аналоговый инсулин быстрого действия.

Пример B4. Раствор аналогового инсулина медленного действия (Lantus) с концентрацией 100 ЕД/мл

[000360] Этот раствор представляет собой раствор инсулина гларгин, коммерчески реализуемый компанией Sanofi-Aventis под названием Lantus. Этот препарат представляет собой аналоговый инсулин медленного действия.

Пример B5. Раствор инсулина человека (ActRapid) с концентрацией 100 ЕД/мл

[000361] Этот раствор представляет собой раствор от компании Novo Nordisk, коммерчески реализуемый под названием ActRapid. Этот препарат представляет собой инсулин человека.

Пример B6. Солюбилизация препарата Lantus с концентрацией 100 ЕД/мл и pH=7 при применении замещенного декстрана

[000362] Точно взвешивали 20 мг полисахарида 4, описанного в примере A4. Этот лиофилизат растворяли в 2 мл препарата Lantus в его коммерческой форме. При этом появлялся быстро исчезающий осадок, после чего раствор становился прозрачным приблизительно через 30 минут. Значение pH этого раствора составляло 6,3. Далее значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B7. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Apidra, 75/25" с pH=7

[000363] К 0,75 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,25 мл препарата Apidra (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Apidra в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B8. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Humalog, 75/25" с pH=7

[000364] К 0,75 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,25 мл препарата Humalog (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Humalog в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B9. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Novolog, 75/25" с pH=7

[000365] К 0,75 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,25 мл препарата Novolog (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Novolog в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B10. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Humalog, 75/25" с pH=7

[000366] К 0,75 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,25 мл препарата ActRapid (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и ActRapid в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B11. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Apidra, 60/40", с pH=7

[000367] К 0,6 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,4 мл препарата Apidra (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Apidra в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B12. Получение композиции "замещенный декстран/Lantus/Apidra, 40/60" с pH=7

[000368] К 0,4 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли 0,6 мл препарата Apidra (в его коммерческой форме) для получения 1 мл композиции с pH=7. Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Apidra в этих условиях. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.

Пример B13. Осаждение препарата Lantus

[000369] 1 мл препарата Lantus прибавляли к 2 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (bovine serum albumin (бычий сывороточный альбумин)). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок, что хорошо согласуется с механизмом действия препарата Lantus (выпадение в осадок при инъекции вследствие повышения значения pH).

[000370] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. При этом оказалось, что 86% препарата Lantus находится в форме осадка.

Пример B14. Осаждение композиции "замещенный декстран/Lantus"

[000371] 1 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, прибавляли к 2 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

[000372] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. При этом оказалось, что 85% препарата Lantus находится в форме осадка. Это значение процентной степени осаждения препарата Lantus идентично значению, полученному в контрольном опыте, описанном в примере B13.

[000373] Испытания по солюбилизации и осаждению, идентичные испытаниям, описанным в примерах B6 и B14, осуществляли с другими замещенными декстранами при той же самой концентрации 10 мг/мл полисахарида и препаратом Lantus с концентрацией 100 ЕД/мл. Точно взвешивали 20 мг полисахарида в виде лиофилизата. Этот лиофилизат растворяли в 2 мл препарата Lantus в его коммерческой форме. При этом появлялся быстро исчезающий осадок, после чего раствор становился прозрачным по истечении промежутка времени приблизительно от 30 минут до нескольких часов (в зависимости от природы полисахарида). Значение pH этого раствора составляло 6,3. Далее значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C. Результаты в краткой форме представлены в таблице 2.
Таблица 2
№ полисахарида
Солюбилизация препарата Lantus<sup></sup>
Осаждение препарата Lantus<sup></sup>
Степень осаждения, %
2
Да
Да
85
1
Да
Да
Не определено
4
Да
Да
87
3
Да
Да
Не определено
5
Да
Да
94
6
Да
Да
Не определено
7
Да
Да
Не определено
8
Да
Да
Не определено
9
Да
Да
94
10
Да
Да
Не определено
15
Да
Да
Не определено
14
Да
Да
Не определено
13
Да
Да
Не определено
12
Да
Да
Не определено
11
Да
Да
Не определено
16
Да
Да
Не определено
17
Да
Да
Не определено
18
Да
Да
Не определено
19
Да
Да
Не определено
20
Да
Да
Не определено
21
Да
Да
Не определено
22
Да
Да
Не определено
23
Да
Да
Не определено
24
Да
Да
Не определено
25
Да
Да
Не определено
26
Да
Да
Не определено

Пример B15. Осаждение композиции "замещенный декстран/Lantus/Apidra, 75/25" с pH=7

1 мл композиции "замещенный декстран/Lantus/Apidra", 75/25 (содержащей 7,5 мг/мл полисахарида, 75 ЕД/мл препарата Lantus и 25 ЕД/мл препарата Apidra), полученной по примеру B7, прибавляли к 2 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

[000374] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. Значения процентной степени осаждения препарата Lantus оказались идентичными контрольному значению, полученному в примере B13.
Пример B16. Осаждение различных композиций при изменении природы замещенного декстрана
[000375] В таких же условиях, что и в случае примера B15, осуществляли другие испытания в присутствии других замещенных декстранов.

[000376] Результаты, представленные в приведенной далее таблице 3, позволяют видеть, что солюбилизация и осаждение препарата Lantus воспроизводятся.
Таблица 3
№ полисахарида
Солюбилизация препаратов Lantus<sup></sup>/Apidra<sup></sup>, 75/25
Степень осаждения, %
2
Да
85
1
Да
Не определено
4
Да
87
3
Да
Не определено
5
Да
86
6
Да
Не определено
7
Да
Не определено
8
Да
Не определено
9
Да
86
10
Да
85
15
Да
87
14
Да
86
13
Да
88
12
Да
91
18
Да
Не определено
19
Да
Не определено
20
Да
Не определено
21
Да
Не определено
22
Да
Не определено
23
Да
Не определено
2
Да
Не определено
25
Да
Не определено
26
Да
Не определено
Пример B17. Осаждение различных композиций при изменении природы прандиального инсулина

[000377] Композиции получали, смешивая 0,75 мл раствора "полисахарид 4/Lantus", полученного по примеру B6, с 0,25 мл прандиального инсулина для получения 1 мл композиции "замещенный декстран/Lantus/прандиальный инсулин" (содержащей 7,5 мг/мл полисахарида, 75 ЕД/мл препарата Lantus и 25 ЕД/мл прандиального инсулина).
[000378] Эту композицию прибавляли к 2 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

[000379] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. В присутствии 4 испытуемых образцов прандиального инсулина препарат Lantus выпадал в осадок приблизительно на 90%. Значения процентной степени осаждения препарата Lantus оказались идентичными контрольному значению, полученному в примере B13, результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
Природа прандиального инсулина
Солюбилизация смеси "Lantus<sup></sup>/прандиальный инсулин", 75/25
Процентная степень осаждения препарата Lantus<sup></sup>
Apidra<sup></sup>
Да
88
Novolog<sup></sup>
Да
92
Humalog<sup></sup>
Да
89
ActRapid<sup></sup>
Да
90
Пример B18. Получение концентрированного раствора аналогового инсулина медленного действия (гларгин).

glargine
glargine
Раствор инсулина гларгин, коммерчески реализуемый компанией Sanofi-Aventis под названием Lantus, концентрировали ультрафильтрацией через мембрану с порогом 3 кДа из регенерированной целлюлозы (мембрана Amicon Ultra-15, коммерчески реализуемая компанией Millipore). На выходе стадии ультрафильтрации концентрацию инсулина гларгин в ретентате определяли обращенно-фазовой жидкостной хроматографией (ОФ-ВЭЖХ). Конечную концентрацию инсулина гларгин регулировали затем прибавлением коммерчески реализуемого раствора гларгина с концентрацией 100 ЕД/мл для получения требуемой конечной концентрации. Этот способ позволяет получать концентрированные растворы гларгина с разными концентрациями, обозначенными C и превышающими 100 ЕД/мл, такими, как C=200, 250, 300 и 333 ЕД/мл. Концентрированные растворы фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и затем хранили при +4°C.
Пример B19. Диализ коммерчески реализуемого раствора аналогового инсулина быстрого действия (лизпро).

Humalog dialysé
Раствор инсулина лизпро, коммерчески реализуемый компанией Lilly под названием Humalog, подвергали диализу ультрафильтрацией через мембрану с порогом 3 кДа из регенерированной целлюлозы (мембрана Amicon Ultra-15, коммерчески реализуемая компанией Millipore). Диализ осуществляли в фосфатном буферном растворе с концентрацией 1 мМ и pH=7. На выходе стадии диализа концентрацию C инсулина лизпро в ретентате определяли обращенно-фазовой жидкостной хроматографией (ОФ-ВЭЖХ). Диализованный раствор хранили в морозильной камере при -80°C.
Пример B20. Лиофилизация раствора аналогового инсулина быстрого действия (лизпро) в его коммерческой форме
Humalog

Объем V раствора инсулина быстрого действия лизпро с концентрацией 100 ЕД/мл в его коммерческой форме вносили в препарат lyogard, предварительно стерилизованный в автоклаве. Препарат lyogard помещали в морозильную камеру при -80°C приблизительно на 1 ч перед осуществлением лиофилизации в течение ночи при температуре 20°C и давлении 0,31 мбар.
Стерильный лиофилизат, полученный таким образом, хранили при комнатной температуре.
Пример B21. Лиофилизация диализованного коммерчески реализуемого раствора аналогового инсулина быстрого действия (лизпро).
Humalog dialysé
Humalog dialysé

Объем V раствора инсулина быстрого действия лизпро, полученного согласно примеру B19 с концентрацией C, вносили в препарат lyogard, предварительно стерилизованный в автоклаве. Препарат lyogard помещали в морозильную камеру при -80°C приблизительно на 1 ч перед осуществлением лиофилизации в течение ночи при температуре 20°C и давлении 0,31 мбар.
Стерильный лиофилизат, полученный таким образом, хранили при комнатной температуре.
Пример B22. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин" с pH=7 исходя из замещенного декстрана способом, по которому применяют гларгин в жидком виде (раствор) и полисахарид в твердом состоянии (лиофилизат)
polys.
glargine
polys.
polys.
glargine
glargine
polys./glargine
Точно взвешивали навеску m полисахарида 18. Этот лиофилизат растворяли в объеме V концентрированного раствора гларгина, полученного согласно примеру B18, для получения композиции с концентрацией полисахарида C (мг/мл)=m/V и концентрацией гларгина C (ЕД/мл). Раствор опалесцировал. Значение pH этого раствора составляло около 6,3. Далее значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH и затем раствору давали стоять в сушильном шкафу при 37°C приблизительно в течение 1 часа. Полученный визуально прозрачный раствор V хранили при +4°C.
Пример B23. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин" с pH=7 исходя из замещенного декстрана способом, по которому применяют гларгин в жидком виде (раствор) и полисахарид в жидком виде (раствор)
mèrepolys.
mèrepolys./excipients

К маточному раствору полисахарида 20 с pH=7 и концентрацией C прибавляли концентрированные растворы м-крезола, глицерина и Tween 20 с целью получения раствора полисахарида с концентрацией C (мг/мл) в присутствии этих эксципиентов с концентрациями, равными концентрациям в коммерчески реализуемом растворе препарата Lantus во флаконе вместимостью 10 мл.
Lantus
mèrepolys./excipients
mèrepolys./excipients

В стерильном сосуде объем V раствора инсулина гларгин медленного действия, коммерчески реализуемого под названием Lantus с концентрацией 100 ЕД/мл, прибавляли к объему V раствора полисахарида с концентрацией C (мг/мл). При этом появлялось помутнение. Значение pH доводили до 7 прибавлением 1 M раствора NaOH и затем раствору давали стоять в сушильном шкафу при 37°C приблизительно в течение 1 ч. Полученный визуально прозрачный раствор хранили при +4°C.
Пример B24. Получение композиции "полисахарид/концентрированный гларгин" с pH=7 исходя из замещенного декстрана способом концентрирования разбавленной композиции

glargine
polys.
Композицию "полисахарид 20/разбавленный гларгин" с pH=7, описанную в примере B23, концентрировали ультрафильтрацией через мембрану с порогом 3 кДа из регенерированной целлюлозы (мембрана Amicon Ultra-15, коммерчески реализуемая компанией Millipore). На выходе стадии ультрафильтрации получали прозрачный ретентат, при этом концентрацию инсулина гларгин в композиции определяли обращенно-фазовой хроматографией (ОФ-ВЭЖХ). При необходимости концентрацию инсулина гларгин в композиции доводили затем до требуемого значения разбавлением раствором эксципиентов "м-крезол/глицерин/Tween 20" с концентрациями по каждому компоненту, равными концентрациям в коммерчески реализуемом растворе препарата Lantus (во флаконе вместимостью 10 мл). Полученный визуально прозрачный раствор с pH=7, концентрацией гларгина C (ЕД/мл) и концентрацией полисахарида C (мг/мл) хранили при +4°C.
Пример B25. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7 исходя из инсулина быстрого действия лизпро в его коммерческой форме
polysach./glargine
glargine
polys.
lispro
polysach./glargine
lispro
lispro
lispro
zinc
Объем V раствора "полисахарид/гларгин" с pH=7, концентрацией гларгина C (ЕД/мл) и концентрацией полисахарида 18 C (мг/мл), полученного согласно примеру B22, прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией объема V, получение которого описано в примере B19, так чтобы выполнялось соотношение V/V=100/C, где C означает концентрацию лизпро (ЕД/мл), предусматриваемую в композиции. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до требуемой концентрации C (мкМ) прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Пример B26. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7 исходя из инсулина быстрого действия лизпро, полученного диализом коммерчески реализуемого раствора
polysach./glargine
glargine
polys.
Humalog dialysé
polysach./glargine
Humalog dialysé
Humalog dialysé
uspro
Humalog dialysé
lispro
zinc
Объем V раствора "полисахарид/гларгин" с pH=7, концентрацией гларгина C (ЕД/мл) и концентрацией полисахарида 20 C (мг/мл), полученного согласно примеру B24, прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией объема V, получение которого описано в примере B21, так чтобы выполнялось соотношение V/V= C/C, где C означает концентрацию лизпро (ЕД/мл), полученную после диализа коммерчески реализуемого раствора на стадии, описанной в примере B19, а C означает концентрацию лизпро (ЕД/мл), предусматриваемую в композиции. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до требуемой концентрации C (мкМ) прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Пример B27. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 200 ЕД/мл и концентрацией лизпро 33 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 85/15)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 200 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 18 (13 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 18 согласно способу получения, описанному в примере B22. Композицию "полисахарид 18/гларгин, 200 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его коммерческой форме, согласно способу получения, описанному в примере B25. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 750 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B28. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 200 ЕД/мл и концентрацией лизпро 66 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 75/25)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 200 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 18 (13 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 18 согласно способу получения, описанному в примере B22. Композицию "полисахарид 18/гларгин, 200 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его коммерческой форме, согласно способу получения, описанному в примере B25. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 1500 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B29. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 300 ЕД/мл и концентрацией лизпро 100 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 75/25)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 300 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 18 (23 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 18 согласно способу получения, описанному в примере B22. Композицию "полисахарид 18/гларгин, 300 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его коммерческой форме, согласно способу получения, описанному в примере B25. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 2000 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B30. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 250 ЕД/мл и концентрацией лизпро 150 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 63/37)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 300 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 18 (19 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" c pH=7 получали исходя из полисахарида 18 согласно способу получения, описанному в примере B22. Композицию "полисахарид 18/гларгин, 250 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его коммерческой форме, согласно способу получения, описанному в примере B25. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 1500 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B31. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 333 ЕД/мл и концентрацией лизпро 67 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 83/17)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 333 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 18 (20 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 18 согласно способу получения, описанному в примере B22. Композицию "полисахарид 18/гларгин, 333 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его коммерческой форме, согласно способу получения, описанному в примере B25. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 2000 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B32. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 300 ЕД/мл и концентрацией лизпро 100 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 75/25)
zinc
Раствор гларгина с концентрацией 300 ЕД/мл получали согласно примеру B18. Композицию "полисахарид 19 (23 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 19 способом, описанным в примере B22. Композицию "полисахарид 19/гларгин, 300 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия в его диализованной форме, согласно способу получения, описанному в примере B26. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 3000 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Пример B33. Получение композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, концентрацией гларгина 300 ЕД/мл и концентрацией лизпро 100 ЕД/мл (процентное соотношение инсулинов "гларгин/лизпро": 75/25)
zinc
Композицию "полисахарид 20 (23 мг/мл)/гларгин, 300 ЕД/мл" с pH=7 получали исходя из полисахарида 20 способом, описанным в примере B23. Композицию "полисахарид 20/гларгин, 300 ЕД/мл" прибавляли к лиофилизату инсулина лизпро, полученному лиофилизацией раствора аналога быстрого действия, полученного диализом коммерчески реализуемого раствора, согласно способу получения, описанному в примере B26. Полученный раствор был прозрачным. Содержание цинка в композиции доводили до концентрации C (мкМ) = 1500 мкМ прибавлением концентрированного раствора хлорида цинка. Конечное значение pH доводили до 7 прибавлением концентрированного раствора NaOH или HCl.
Полученная композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости гларгина и лизпро в этих условиях. Полученный раствор фильтровали через мембрану пористостью 0,22 мкм и хранили при +4°C.
Эта композиция описана в таблице 5.
Таблица 5Композиции "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7
№ примера
№ полисахарида
C<sub>polysach.</sub>, мг/мл
C<sub>glargine</sub>, ЕД/мл
C<sub>lispro</sub>, ЕД/мл
C<sub>glargine</sub>/C<sub>lispro</sub>, %/%
pH
B27
18
13
200
33
85/15
7
B28
18
13
200
66
75/25
7
B29
18
23
300
100
75/25
7
B30
18
19
250
150
63/37
7
B31
18
20
333
67
83/17
7
B32
19
23
300
100
75/25
7
B33
20
23
300
100
75/25
7
Пример B34. Осаждение разных композиций "замещенный декстран/гларгин/лизпро" с pH=7, разными концентрациями инсулинов гларгин и лизпро и разными соотношениями 2 инсулинов

1 мл композиции "замещенный декстран/Lantus/Humalog", полученной по примерам B27-B33, прибавляли к 2 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. Значения процентной степени осаждения препарата Lantus оказались идентичными контрольному значению, полученному в примере B13. Результаты в краткой форме представлены в таблице 6.
Таблица 6
№ примера
№ полисахарида
C<sub>polysach.</sub>, мг/мл
C<sub>glargine</sub>, ЕД/мл
C<sub>lispro</sub>, ЕД/мл
C<sub>glargine</sub>/C<sub>lispro</sub>, %/%
Солюбилизация гларгина и лизпро при pH=7
Осаждение гларгина
Степень осаждения, %
B27
18
13
200
33
85/15
ДА
ДА
96
B28
18
13
200
66
75/25
ДА
ДА
86
B29
18
23
300
100
75/25
ДА
ДА
91
830
18
19
250
150
63/37
ДА
ДА
90
B31
18
20
333
67
83/17
ДА
ДА
93
B32
19
23
300
100
75/25
ДА
ДА
98
B33
20
23
300
100
75/25
ДА
ДА
Не определено
Пример B35. Химическая стабильность композиций

[000380] Композиции "замещенный декстран/Lantus/прандиальный инсулин", описанные в примерах B7, B27, B28 и B29, а также соответствующие контрольные образцы хранили при 30°C в течение 4 недель. По регламенту содержание нативного (не деградировавшего) инсулина после 4 недель хранения при 30°C должно составлять 95%.
[000381] После 4 недель хранения исследованные композиции соответствовали техническим условиям, определенным регламентом. Результаты представлены в таблице.
Таблица 7
Композиции
Процентное содержание нативного гларгина после 4 недель хранения при 30°C
Процентное содержание нативного прандиального инсулина после 4 недель хранения при 30°C
Lantus<sup></sup> (коммерчески реализуемая композиция)
97
н.о.
Apidra<sup></sup> (коммерчески реализуемая композиция)
н.о.
95
Humalog<sup></sup> (коммерчески реализуемая композиция)
н.о.
98
B7
96
98
B27
97
99
B28
95
97
B29
98
100
[000382] Таким образом, установлено, что в любой из исследованных композиций процентное содержание нативного инсулина составляет большей 95%, что соответствует требованиям регламента.
Пример B36. Приемлемость растворов для осуществления инъекций

[000383] Все полученные композиции являются приемлемыми для осуществления инъекций системами, принятыми для инъекции инсулина. Растворы, описанные в примерах B7-B12, а также композиции, описанные в примерах B27-B33, были инъецированы без каких-либо трудностей одинаково хорошо как шприцами для инъекций инсулина, оснащенными иглами калибра 31, так и шприц-ручками для инъекций инсулина от компании Novo Nordisk, коммерчески реализуемыми под названием Novopen и оснащенными иглами калибра 31.
Пример B37. Определение фармакодинамики растворов инсулина
Доклинические исследования осуществляли на свиньях с целью оценки двух композиций по настоящему изобретению:

[000384] композиции препаратов Lantus/Apidra (75/25), составленной с полисахаридом 4 (6 мг/мл) и описанной в примере B7, и

[000385] композиции препаратов Lantus/Humalog (75/25), составленной с полисахаридом 4 (6 мг/мл) и описанной в примере B8.

[000386] Гипогликемизирующее действие этих композиций сравнивали с действием инъекций, осуществленных в виде одновременных инъекций при раздельном введении препарата Lantus (pH=4) с последующим введением прандиального инсулина Apidra или Humalog.
[000387] Шести домашним свиньям массой около 50 кг, которым в яремные вены предварительно были имплантированы катетеры, не давали корм в течение от 2 до 3 часов перед началом эксперимента. За час до инъекции инсулина отбирали 3 пробы крови для определения базального уровня глюкозы.

[000388] Инъекцию инсулина с дозой 0,4 ЕД/кг осуществляли подкожно на уровне шеи под ухо животного посредством шприц-ручки для инъекции инсулина Novopen, оснащенной иглой калибра 31.
[000389] Затем осуществляли отбор проб крови через 4, 8, 12, 16, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 240, 360, 480, 600, 660 и 720 минут. После каждого отбора катетер промывали разбавленным раствором гепарина.
[000390] Для определения уровня глюкозы в крови глюкометром анализировали каплю отобранной крови. Затем строили кривые фармакодинамики глюкозы.
[000391] Полученные результаты представлены в виде кривых фармакодинамики глюкозы на фиг. 1-6.

[000392] Композиция препарата Lantus/Apidra (75/25), составленная с полисахаридом 4 (6 мг/мл)

[000393] Фиг. 1. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Apidra и Lantus по сравнению с композицией по настоящему изобретению "полисахарид 4/Lantus/Apidra, (75/25)"

[000394] Фиг. 2. Индивидуальные кривые при введении препаратов Apidra и Lantus

[000395] Фиг. 3. Индивидуальные кривые при введении композиции "полисахарид 4/Apidra/Lantus"

[000396] На фиг. 1 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых свиней для каждой композиции. Падение уровня глюкозы в крови в течение первых 30 минут совпадает для обеих композиций и указывает на то, что присутствие полисахарида не изменяет характера быстрого действия препарата Apidra.

[000397] В противоположность этому в интервале от 90 мин до 10 ч (600 минут) последовательное введение препаратов Apidra и Lantus индуцировало разнотипное падение уровня глюкозы с однотипным ответом в виде плато у трех свиней и разнотипным ответом у трех других свиней (фиг. 2). В отличие от этого в случае 6 свиней, на которых была испытана композиция "полисахарид 4/Apidra/Lantus", был получен однотипный ответ (фиг. 3). Это обстоятельство выявляется при анализе коэффициентов вариации (CV) в интервале от 60 мин до 10 ч, которые составляют в среднем 54% (в интервале от 21 до 113%) для контрольного образца препаратов Apidra и Lantus и 12% (в интервале от 5 до 25%) для композиции "полисахарид 4/Apidra/Lantus".

[000398] Композиция препаратов Lantus/Humalog (75/25), составленная с полисахаридом 4 (6 мг/мл)

[000399] Фиг. 4. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog и Lantus по сравнению с введением композиции по настоящему изобретению "полисахарид 4/Humalog/Lantus"

[000400] Фиг. 5. Индивидуальные кривые при введении препаратов Humalog и Lantus

[000401] Фиг. 6. Индивидуальные кривые при введении композиции "полисахарид 4/Humalog/Lantus"

[000402] На фиг. 4 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых свиней для каждой композиции. Падение уровня глюкозы в крови в течение первых 30 минут совпадает для обеих композиций и указывает на то, что присутствие полисахарида 4 не изменяет характера быстрого действия препарата Humalog. В противоположность этому в интервале от 60 мин до 8 ч (480 минут) последовательное введение препаратов Humalog и Lantus индуцировало разнотипное падение уровня глюкозы с однотипным ответом в виде плато у четырех свиней и разнотипным ответом у двух других свиней (фиг. 5). В отличие от этого в случае 5 свиней, на которых была испытана композиция "полисахарид 4/Humalog/Lantus", был получен однотипный ответ (фиг. 6). Это обстоятельство выявляется при анализе коэффициентов вариации (CV) по данным падения уровня глюкозы в крови в интервале от 60 мин до 8 ч, которые составляют в среднем 54% (в интервале от 31 до 72%) для контрольного образца препаратов Humalog и Lantus и 15% (в интервале от 6 до 28%) для композиции "полисахарид 4/Humalog/Lantus". Таким образом, присутствие полисахарида 4 сильно уменьшает вариабельность действия препарата Lantus на падение уровня глюкозы в крови.
Пример B38. Определение фармакодинамики растворов инсулина
Доклинические исследования осуществляли на собаках с целью оценки 6 композиций по настоящему изобретению.

Гипогликемизирующее действие этих композиций сравнивали с действием инъекций, осуществленных в виде одновременных инъекций при раздельном введении препарата Lantus (pH=4) с концентрацией 100 ЕД/мл с последующим введением прандиального инсулина Humalog с концентрацией 100 ЕД/мл.
[000404] 10 домашним собакам (породы бигль) массой около 12 кг не давали корм в течение 18 часов перед началом эксперимента. За час до инъекции инсулина отбирали 3 пробы крови для определения базального уровня глюкозы.

[000405] Инъекцию инсулина с дозой 0,53 ЕД/кг (если в приведенных далее примерах не указано иное) осуществляли подкожно на уровне шеи животного посредством шприц-ручки для инъекции инсулина Novopen, оснащенной иглой калибра 31.
[000406] Затем осуществляли отбор проб крови через 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360, 420, 480, 540, 600, 660, 720, 780, 840, 900 и 960 минут. Отбор первых проб осуществляли через катетер (до 180 мин), а затем непосредственно из яремной вены. После каждого отбора катетер промывали разбавленным раствором гепарина.
[000407] Для определения уровня глюкозы в крови глюкометром анализировали каплю отобранной крови. Затем строили кривые фармакодинамики глюкозы.
[000408] Полученные результаты представлены в виде кривых фармакодинамики глюкозы на фиг. 7-12.
Раствор по примеру B28

[000409] Фиг. 7. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B28 (0,53 ЕД/кг)

[000410] На фиг. 7 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. Обе кривые имеют подобный характер изменений в течение 12 часов с быстрым падением уровня глюкозы в крови, указывающим на то, что полисахарид не влияет на характер быстрого действия препарата Humalog, с подъемом, отмеченным между пиком, обусловленным действием препарата Humalog, и плато, обусловленным действием гларгина, с продолжением плато, обусловленным действием гларгина до 12 ч и указывающим на то, что базальное действие гларгина сохраняется в хорошей степени.
Раствор по примеру B27

[000411] Фиг. 8. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B27 (0,47 ЕД/кг)

[000412] На фиг. 8 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. В случае этого сравнения дозы базального инсулина (Lantus) являются одинаковыми, тогда как доза препарата Humalog в композиции в два раза меньше по сравнению с дозой в контрольном образце. Падение уровня глюкозы является более значительным в случае композиции B27 по сравнению с контрольным образцом, хотя в контрольном образце содержится в два раза больше препарата Humalog. При этом протяженность плато в случае композиции меньше, чем в случае контрольного образца.

Это обстоятельство указывает на то, что в этой композиции часть препарата Lantus не выпадает в осадок при инъекции и действует вместе с препаратом Humalog.
Раствор по примеру B29

[000413] Фиг. 9. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B29 (0,53 ЕД/кг)

[000414] На фиг. 9 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. Обе кривые имеют подобный характер изменений с быстрым падением уровня глюкозы в крови, указывающим на то, что полисахарид не влияет на характер быстрого действия препарата Humalog, с подъемом, отмеченным между пиком, обусловленным действием препарата Humalog, и плато, обусловленным действием препарата Lantus, с продолжением плато, обусловленным действием препарата Lantus до 13 ч и указывающим на то, что базальное действие гларгина сохраняется в хорошей степени.
Раствор по примеру B31

[000415] Фиг. 10. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B31 (0,48 ЕД/кг)

[000416] На фиг. 10 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. В случае этого сравнения дозы базального инсулина (Lantus) являются одинаковыми, тогда как доза препарата Humalog в композиции в два раза меньше по сравнению с дозой в контрольном образце. Падение уровня глюкозы является более значительным в случае контрольного образца по сравнению с комбинацией, соответствующей примеру B31. Такой ответ был ожидаем с учетом того, что концентрация препарата Humalog в композиции в два раза меньше по сравнению с контрольным образцом. При этом протяженность плато, обусловленного действием препарата Lantus, в случае композиции совпадает по сравнению с контрольным образцом. Это обстоятельство указывает на то, что в этой композиции по сравнению с композицией, описанной в примере B29 (фиг. 9), можно регулировать количество препарата Humalog, содержащегося в композиции, без изменения базального действия препарата Lantus.
Раствор по примеру B30

[000417] Фиг. 11. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,24 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B30 (0,64 ЕД/кг)

[000418] На фиг. 11 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. Обе кривые имеют подобный характер изменений с быстрым падением уровня глюкозы в крови, указывающим на то, что полисахарид не влияет на характер быстрого действия препарата Humalog, с подъемом, отмеченным между пиком, обусловленным действием препарата Humalog, и плато, обусловленным действием препарата Lantus, с продолжением плато, обусловленным действием препарата Lantus до 10 ч и указывающим на то, что базальное действие гларгина сохраняется в хорошей степени.
Раствор по примеру B32

[000419] Фиг. 12. Кривые "среднее значение + среднее квадратичное отклонение" при последовательном введении препаратов Humalog (100 ЕД/мл, 0,13 ЕД/кг) и Lantus (100 ЕД/мл, 0,4 ЕД/кг) по сравнению с композицией по настоящему изобретению, описанной в примере B32 (0,53 ЕД/кг)

[000420] На фиг. 12 показаны кривые, отображающие средние значения падения уровня глюкозы в крови, а также средние квадратичные отклонения, определенные у испытуемых собак для каждой композиции. Обе кривые имеют подобный характер изменений в течение 10 часов с быстрым падением уровня глюкозы в крови, указывающим на то, что полисахарид не влияет на характер быстрого действия препарата Humalog, с подъемом, отмеченным между пиком, обусловленным действием препарата Humalog, и плато, обусловленным действием препарата Lantus, с продолжением плато, обусловленным действием гларгина и указывающим на то, что базальное действие гларгина сохраняется в хорошей степени до 10 ч.
В заключение, на фиг. 7-12 показано, что регулирование состава полисахарида, концентраций лизпро и гларгина дает возможность получать профили, идентичные профилям, получаемым при двойной инъекции с разными соотношениями инсулина быстрого действия и базального инсулина. Также можно управлять продолжительностью действия базального инсулина без оказания влияния на эффект инсулина быстрого действия или регулировать количество инсулина быстрого действия без оказания влияния на действие базального инсулина.
[000421] Примеры
Часть C. Определение свойств композиций, содержащих аналог или производное соединение GLP-1 по настоящему изобретению

Пример C1. Раствор экзенатида (Byetta), аналога GLP-1, с концентрацией 0,25 мг/мл

[000422] Этот раствор представляет собой раствор экзенатида, коммерчески реализуемый компанией Eli Lilly and Company под названием Byetta.

Пример C2. Раствор лираглутида (Victoza), производного соединения GLP-1, с концентрацией 6 мг/мл

[000423] Этот раствор представляет собой раствор лираглутида, коммерчески реализуемый компанией Novo Nordisk под названием Victoza.

Пример C3. Солюбилизация препарата Lantus с концентрацией 100 ЕД/мл и pH=7 при применении замещенного декстрана с концентрацией 10 мг/мл
[000424] Точно взвешивали 20 мг замещенного декстрана, выбранного из соединений, описанных в таблице 1. Этот лиофилизат растворяли в 2 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4 для получения раствора, в котором концентрация полисахарида равна 10 мг/мл. После механического перемешивания на роллере при комнатной температуре раствор становился прозрачным. Значение pH этого раствора составляло 6,3. Далее значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану (пористость 0,22 мкм) и затем хранили при +4°C.
[000425] Обобщение. Прозрачные растворы препарата Lantus с концентрацией 100 ЕД/мл и pH=7 получали также с концентрациями замещенных декстранов 20 и 40 мг/мл по методике, аналогичной методике, описанной в примере C3. С этой целью точно взвешивали навеску полисахарида, выбранного из соединений, описанных в таблице 1. Этот лиофилизат растворяли в растворе инсулина гларгин по примеру B4 для получения раствора, в котором концентрация замещенного декстрана равна 20 или 40 мг/мл соответственно таблице 8. После механического перемешивания на роллере при комнатной температуре раствор становился прозрачным. Значение pH этого раствора было меньше 7. Значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану (пористость 0,22 мкм) и затем хранили при +4°C.
Таблица 8Получение раствора препарата Lantus<sup></sup> с концентрацией 100 ЕД/мл и pH=7 при применении замещенного декстрана с концентрацией 10, 20 или 40 мг/мл
Конечная концентрация замещенного декстрана, мг/мл
Масса навески замещенного декстрана, мг
Объем прибавленного раствора инсулина гларгин по примеру B4, мл
10
20
2
20
40
2
40
80
2

Пример C4. Получение композиции препаратов Lantus/Byetta, 70/30, с pH=7,5

[000426] К 0,21 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4 прибавляли 0,09 мл раствора экзенатида по примеру C1 для получения 0,3 мл композиции, значение pH которой в смеси равно 4,5. Композиция, содержащая 70 ЕД/мл препарата Lantus и 0,075 мг/мл препарата Byetta, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Byetta в этих условиях (pH=4,5). Значение pH доводили до 7,5 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. При этом композиция помутнела, что свидетельствует о плохой растворимости композиции препаратов Lantus/Byetta при pH=7,5.

[000427] Композиции препаратов Lantus/Byetta, 70/30, получали также со значениями pH=4,5, 5,5, 6,5, 8,5 и 9,5 по методике, аналогичной методике, описанной в примере C4. В случае каждой из этих композиций к 0,21 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4 прибавляли 0,09 мл раствора экзенатида по примеру C1 для получения 0,3 мл композиции, значение pH которой в смеси составляло 4,5. Композиция была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Byetta в этих условиях (pH=4,5). Значение pH доводили до 5,5 или 6,5, или 8,5, или 9,5 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. После установления требуемых значений pH композиция с pH=5,5 слегка помутнела, композиции со значениями pH, равными 6,5, 7,5 и 8,5, сильно помутнели, а композиция с pH=9,5 была прозрачной. Эти композиции выдерживали при +4°C в течение 48 ч. После выдерживания в течение 48 ч при +4°C прозрачной осталась только композиция с pH=4,5. Характеристики внешнего вида композиций препаратов Lantus/Byetta, 70/30, с разными значениями pH после выдерживания в течение 48 ч представлены в таблице 9.
Таблица 9Внешний вид композиций препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>, 70/30, с разными значениями pH через 48 ч
<b>Композиции препаратов Lantus</b><sup></sup><b>/Byetta</b><sup></sup><b>, 70/30, с разными значениями pH</b>
<b>pH</b>
<b>Внешний вид через t=48 ч</b>
4,5
Прозрачный раствор
5,5
Присутствует осадок
6,5
Присутствует осадок
7,5
Присутствует осадок
8,5
Присутствует осадок
9,5
Присутствует осадок

Пример C5. Получение композиции препаратов Lantus/Victoza, 70/30, с pH=7,5

[000428] К 0,21 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4 прибавляли 0,09 мл раствора лираглутида по примеру C2 для получения 0,3 мл композиции, значение pH которой в смеси равно 7. Композиция, содержащая 70 ЕД/мл гларгина и 1,8 мг/мл экзенатида, помутнела, что свидетельствует о плохой растворимости композиции препаратов Lantus/Victoza в этих условиях. Значение pH доводили до 7,5 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. После установления значения pH композиция оставалась мутной. Эту композицию выдерживали при +4°C в течение 48 ч.

[000429] Композиции препаратов Lantus/Victoza, 70/30, получали также со значениями pH=4,5, 5,5, 6,5, 8,5 и 9,5 по методике, аналогичной методике, описанной в примере C5. В случае каждой из этих композиций к 0,21 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4 прибавляли 0,09 мл раствора лираглутида по примеру C1 для получения 0,3 мл композиции, значение pH которой в смеси равно 7. Композиция помутнела, что свидетельствует о плохой растворимости композиции препаратов Lantus/Victoza в этих условиях (pH=7). Значение pH доводили до 4,5 или 5,5, или 6,5 раствором соляной кислоты с концентрацией 0,1н или до 9,5 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. После установления значений pH композиции с pH=4,5, 5,5 и 6,5 помутнели, что свидетельствует о плохой растворимости композиции препаратов Lantus/Victoza в этих условиях. Эти композиции выдерживали при +4°C в течение 48 ч. После выдерживания в течение 48 ч при 4°C прозрачной была только композиция с pH=9,5. Характеристики внешнего вида композиций препаратов Lantus/Victoza, 70/30, с разными значениями pH после выдерживания в течение 48 ч представлены в таблице 10.
Таблица 10Внешний вид композиций препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>, 70/30, с разными значениями pH через 48 ч
<b>Композиции препаратов Lantus</b><sup></sup><b>/Victoza</b><sup></sup><b>, 70/30, с разными значениями pH</b>
<b>pH</b>
<b>Внешний вид через t=48 ч</b>
4,5
Присутствует осадок
5,5
Присутствует осадок
6,5
Присутствует осадок
7,5
Присутствует осадок
8,5
Присутствует осадок
9,5
Прозрачный раствор

Пример C6. Получение композиции "замещенный декстран-Lantus/Byetta, 70/30" с pH=7

[000430] К 0,21 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли 0,09 мл раствора экзенатида по примеру C1 для получения 0,3 мл композиции с pH=5,3. Значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Композиция, содержащая 7 мг/мл полисахарида, 70 ЕД/мл препарата Lantus и 0,075 мг/мл препарата Byetta, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Byetta в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Этот прозрачный раствор хранили при +4°C.

Lantus
Byetta
Lantus
Byetta
[000431] Обобщение. Композиции "замещенный декстран-Lantus/Byetta" с pH=7 получали также с объемными соотношениями V/V, равными 90/10, 50/50, 30/70 и 10/90, по методике, аналогичной методике, описанной в примере C6. С этой целью к объему V раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли объем V раствора экзенатида по примеру C1 для получения композиции, значение pH которой доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Полученные композиции (см. таблицу 11) были прозрачными, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Byetta в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Эти прозрачные растворы хранили при +4°C.

Пример C7. Получение композиции "замещенный декстран-Lantus/Byetta, 100/50" с pH=7

[000432] 0,150 мл раствора экзенатида по примеру C1 лиофилизовали, затем 0,3 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли к лиофилизату для получения композиции, значение pH которой доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Композиция, содержащая 10 мг/мл полисахарида, 100 ЕД/мл препарата Lantus и 0,125 мг/мл препарата Byetta, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Byetta в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Этот прозрачный раствор хранили при +4°C.
Таблица 11Конечные концентрации препарата Lantus<sup></sup>, замещенного декстрана и препарата Byetta<sup></sup> в композициях, полученных по примерам C6 и C7
Lantus<sup></sup>
Полисахарид №, мг/мл
Byetta<sup></sup>, мг/мл
ЕД/мл
мг/мл
100/50
100
3,5
10
0,125
90/10
90
3,15
9
0,025
70/30
70
2,45
7
0,075
50/50
50
1,75
5
0,125
30/70
30
1,05
3
0,175

Пример C8. Получение композиции "замещенный декстран-Lantus/Victoza, 70/30" с pH=7

[000433] К 0,21 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли 0,09 мл раствора лираглутида по примеру C2 для получения 0,3 мл композиции с pH=7,6. Значение pH доводили до 7 раствором соляной кислоты с концентрацией 0,1н. Композиция, содержащая 7 мг/мл полисахарида, 70 ЕД/мл препарата Lantus и 1,8 мг/мл препарата Victoza, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Victoza в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Этот прозрачный раствор хранили при +4°C.

Lantus
Victoza
Lantus
Victoza
[000434] Обобщение. Композиции "замещенный декстран-Lantus/Victoza" с pH=7 получали также с объемными соотношениями V/V, равными 90/10, 50/50, 30/70 и 90/10, по методике, аналогичной методике, описанной в примере C6. С этой целью к объему V раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру B3, прибавляли объем V раствора лираглутида по примеру C2 для получения композиции, значение pH которой доводили до 7 раствором соляной кислоты с концентрацией 0,1н.

[000435] Полученные композиции (см. таблицу 12) были прозрачными, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Victoza в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Эти прозрачные растворы хранили при +4°C.

Пример C9. Получение композиции "замещенный декстран-Lantus/Victoza, 100/50" с pH=7

[000436] 0,150 мл раствора лираглутида по примеру C2 лиофилизовали, затем 0,3 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли к лиофилизату для получения композиции, значение pH которой доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. Композиция, содержащая 10 мг/мл полисахарида, 100 ЕД/мл препарата Lantus и 3 мг/мл препарата Victoza, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus и Victoza в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Этот прозрачный раствор хранили при +4°C.
Таблица 12Конечные концентрации препарата Lantus<sup></sup>, замещенного декстрана и препарата Victoza<sup></sup> в композициях, полученных по примерамC8 и C9
Lantus<sup></sup>
Полисахарид №, мг/мл
Victoza<sup></sup>, мг/мл
ЕД/мл
мг/мл
100/50
100
3,5
10
3
90/10
90
3,15
9
0,6
70/30
70
2,45
7
1,8
50/50
50
1,75
5
3
30/70
30
1,05
3
4,2

Пример C10. Получение композиции "замещенный декстран-Lantus/Apidra/Byetta, 60/20/20" с pH=7

[000437] Точно взвешивали 20 мг лиофилизованного полисахарида 4, описанного в примере A3. Этот лиофилизат растворяли в 2 мл раствора инсулина гларгин по примеру B4. После механического перемешивания на роллере при комнатной температуре раствор становился прозрачным. Значение pH этого раствора составляло 6,3. Далее значение pH доводили до 7 раствором гидроксида натрия с концентрацией 0,1н. К 0,6 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного ранее, прибавляли 0,2 мл раствора экзенатида по примеру C1 и 0,2 мл раствора инсулина глулизин по примеру B3 для получения 1 мл композиции с pH=7. Композиция, содержащая 6 мг/мл полисахарида, 60 ЕД/мл препарата Lantus, 20 ЕД/мл препарата Apidra и 0,05 мг/мл препарата Byetta, была прозрачной, что свидетельствует о хорошей растворимости препаратов Lantus, Apidra и Byetta в присутствии замещенного декстрана при pH=7. Полученный прозрачный раствор фильтровали через мембрану (пористость 0,22 мкм) и затем хранили при +4°C.

Пример C11. Осаждение препарата Lantus

[000438] 0,250 мл препарата Lantus прибавляли к 0,5 мл раствора PBS (Phosphate Buffer Solution (фосфатный буферный раствор)), содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды.

[000439] При этом выпадал осадок, что хорошо согласуется с механизмом действия препарата Lantus (выпадение в осадок при инъекции вследствие повышения значения pH).

[000440] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. При этом оказалось, что 90% препарата Lantus находится в форме осадка.

Пример C12. Осаждение композиции "замещенный декстран/Lantus"

[000441] 0,250 мл раствора "замещенный декстран/Lantus", полученного по примеру C3, прибавляли к 0,5 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA. Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

[000442] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. При этом оказалось, что 90% препарата Lantus находится в форме осадка. Это значение процентной степени осаждения препарата Lantus идентично значению, полученному в контрольном опыте, описанном в примере C11.

Пример C13. Осаждение композиции "замещенный декстран-Lantus/Byetta"

[000443] 0,250 мл композиции "замещенный декстран-Lantus/Byetta", полученной по примеру C6, прибавляли к 0,5 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA. Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

[000444] Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препаратов Lantus и Byetta. Значение процентной степени осаждения препарата Lantus оказалось идентично контрольному значению, полученному в примере C11.

Пример C14. Осаждение композиции "замещенный декстран-Lantus/Victoza", 70/30

[000445] 0,250 мл композиции "замещенный декстран-Lantus/Victoza", полученной по примеру C8, прибавляли к 0,5 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препаратов Lantus и Victoza. Значение процентной степени осаждения препарата Lantus оказалось идентично контрольному значению, полученному в примере C11.
Пример C15. Осаждение различных композиций при изменении природы замещенного декстрана
[000446] В присутствии других декстранов осуществляли другие испытания в таких же условиях, что и в случае примеров C13 и C14.

[000447] Результаты испытаний с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и композиции препаратов Lantus/Byetta, 70/30, представлены в приведенной далее таблице 13. Можно видеть, что солюбилизация и осаждение препарата Lantus воспроизводятся.
Таблица 13Результаты испытаний по солюбилизации и осаждению, полученные с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>, 70/30
№ полисахарида
Солюбилизация композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>, 70/30
Процентная степень осаждения препарата Lantus<sup></sup>
1
Да
94
2
Да
96
5
Да
88
7
Да
95
10
Да
Не определено
11
Да
81
14
Да
Не определено
16
Да
96
26
Да
81
27
Да
96
28
Да
96
29
Да
95

[000448] Результаты испытаний с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и разных композиций препаратов Lantus/Byetta представлены в приведенной далее таблице 14. Можно видеть, что солюбилизация и осаждение препарата Lantus воспроизводятся.
Таблица 14Результаты испытаний по солюбилизации и осаждению, полученные с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и разных композиций препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>
№ полисахарида
Соотношение препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>
Солюбилизация композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Byetta<sup></sup>
Процентная степень осаждения препарата Lantus<sup></sup>
4
100/50
Да
95
4
90/10
Да
94
4
70/30
Да
95
4
50/50
Да
90
4
30/70
Да
82
8
100/50
Да
96
8
90/10
Да
94
8
70/30
Да
96
8
50/50
Да
90
8
30/70
Да
81

[000449] Результаты испытаний с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 40 мг/мл и композиции препаратов Lantus/Victoza, 70/30, представлены в приведенной далее таблице 15. Можно видеть, что солюбилизация и осаждение препарата Lantus воспроизводятся.
Таблица 15Результаты испытаний по солюбилизации и осаждению, полученные с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 40 мг/мл и композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>, 70/30
№ полисахарида
Солюбилизация композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>, 70/30
Процентная степень осаждения препарата Lantus<sup></sup>
1
Да
95
2
Да
97
5
Да
Не определено
7
Да
97
10
Да
Не определено
11
Да
Не определено
14
Да
90
16
Да
97
26
Да
74
27
Да
96
28
Да
95
29
Да
94

[000450] Результаты испытаний с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и разных композиций препаратов Lantus/Victoza представлены в приведенной далее таблице 16. Можно видеть, что солюбилизация и осаждение препарата Lantus воспроизводятся.
Таблица 16Результаты испытаний по солюбилизации и осаждению, полученные с использованием замещенного декстрана с концентрацией не более 20 мг/мл и разных композиций препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>
№ полисахарида
Соотношение препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>
Солюбилизация композиции препаратов Lantus<sup></sup>/Victoza<sup></sup>
Процентная степень осаждения препарата Lantus<sup></sup>
4
90/10
Да
94
4
70/30
Да
Не определено
4
50/50
Да
90
4
30/70
Да
86
8
100/50
Да
93
8
90/10
Да
95
8
70/30
Да
98
8
50/50
Да
89
8
30/70
Да
85

Пример C16. Осаждение композиции "замещенный декстран-Lantus/Apidra/Byetta, 60/20/20" с pH=7

[000451] 0,250 мл композиции "замещенный декстран-Lantus/Apidra/Byetta", полученной по примеру C10, прибавляли к 0,5 мл раствора PBS, содержащего 20 мг/мл BSA. Смесь PBS/BSA моделирует композицию подкожной среды. При этом выпадал осадок.

Для отделения осадка от надосадочной жидкости осуществляли центрифугирование при 4000 об/мин. Затем в надосадочной жидкости определяли содержание препарата Lantus. Значение процентной степени осаждения препарата Lantus оказалось идентично контрольному значению, полученному в примере C11.