ВЕТЕРИНАРНОЕ ГОМЕОПАТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ОПОРНО-ДВИГАТЕЛЬНОГО АППАРАТА
VETERINARY HOMEOPATHIC AGENT FOR EXTERNAL APPLICATION IN MUSCULOSKELETAL DISEASES

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гомеопатическим лекарственным средствам для наружного применения, обладающим противовоспалительным, обезболивающим, противоотечным, регенерирующим, хондропротективным, стимулирующим кроволимфообращение и обменные процессы в тканях суставов и способствующим восстановлению нарушенных физиологических функций тканей суставов действием, и может быть использовано для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата: артритов, артрозов, синовитов, бурситов и др.
В настоящее время в области медицины и ветеринарии для местного лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата используются физиотерапевтические методы, в частности УВЧ-терапия, ультразвуковая терапия, массаж. Эти методы позволяют улучшить кровообращение и лимфациркуляцию, повышают обменные процессы в тканях, уменьшают болевой синдром и воспаление, способствуют развитию иммунобиологических реакций. (Ветеринария. Большой энциклопедический словарь. Гл. ред. В.П.Шишков. М., НИ «Большая Российская энциклопедия», 1998, с.543-544). В частности, используется воздействие низкоинтенсивного инфракрасного лазерного излучения, модулированного инфранизкой частотой с определенной энергией и определенной длиной волны в сочетании с низкоинтенсивным ультразвуком. Способ позволяет улучшить кровообращение и лимфациркуляцию, способствует уменьшению венозного отека, уменьшает болевой синдром и воспаление, повышает тонус мышц (патент RU 2242258, 2002 год). Из наружных средств для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата применяется 10-30% ихтиоловая мазь, которая обладает противовоспалительным и антисептическим действием (Ветеринария. Большой энциклопедический словарь. Гл. ред. В.П.Шишков. М., НИ «Большая Российская энциклопедия», 1998, с.207), мазь Яхалимп, которая вызывает расширение сосудов, улучшает кровоснабжение, ускоряет рассасывание продуктов воспаления, рост грануляционной ткани, эпителизацию ран. Также для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата при необходимости производят пункцию сустава, отсасывают экссудат, промывают полость раствором новокаина с антибиотиками, в случае развития контрактур сустав обкалывают лидазой (Советы Айболита, или здоровье вашей собаки: Справочник практикующего врача по болезням собак. (А.А.Кузьмин, Харьков, «Паритет» ЛТД, 1996, с.186-190).
Однако физиотерапевтические методы имеют ряд противопоказаний. Так, массаж противопоказан при нарушении целостности кожи, при гнойных процессах, повышении температуры тела; УВЧ-терапия и ультразвуковая терапия противопоказаны при злокачественных новообразованиях, лейкозе, сердечно-сосудистых заболеваниях, беременности, острых инфекциях (Ветеринария. Большой энциклопедический словарь. Гл. ред. В.П.Шишков. М., НИ «Большая Российская энциклопедия», 1998, с.530, 532-533). При применении антибиотиков существует риск возникновения аллергических реакции, они могут оказать тератогенное, эмбриотоксическое и нефротоксическое действие. Кроме того, убой животных на мясо при применении антибиотиков разрешен не ранее 45 суток, молока - через 72 часа после прекращения лечения препаратом (Ветеринарные препараты в России. Справочник. И.Ф.Кленова, Н.А.Яременко. М.: Сельхозиздат, 2001, с.107-109).
Из гомеопатических средств, которые в последнее время широко используются в ветеринарии ввиду высокой эффективности и отсутствия при их использовании противопоказаний и побочных явлений, в качестве наружного средства для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата используется лекарственное средство Травма-гель для ветеринарии (Регистрационный номер ПВР-2-3.5/01888), содержащее Arnica, Belladonna, Echinacea purpurea, Chamomilla, Calendula и АСД-2 при определенном разведении и соотношении компонентов, обладает местным противовоспалительным, обезболивающим действием, препятствует развитию септического процесса и способствует быстрой регенерации поврежденных тканей. Однако средство не обладает хондропротективным, стимулирующим кроволимфообращение и обменные процессы в тканях суставов и способствующим восстановлению нарушенных физиологических функций тканей суставов действием. Данное гомеопатическое средство применяется при травмах различного генеза (переломах, вывихах, растяжениях), абсцессах (после вскрытия), флегмонах, ожогах и хронических дерматитах, а также для обработки лап и межпальцевых пространств у животных. Однако средство не применяется при воспалительных заболеваниях опорно-двигательного аппарата: артритах, бурситах, артрозах, синовитах.
Задачей настоящего изобретения является создание отечественного гомеопатического лекарственного средства для наружного применения, которое обладает одновременно противовоспалительным, обезболивающим, противоотечным, регенерирующим, хондропротективным, стимулирующим кроволимфообращение и обменные процессы в тканях суставов и способствующим восстановлению нарушенных физиологических функций тканей суставов действием при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, эффективного и лишенного побочных эффектов.
Поставленная задача достигается тем, что предложено гомеопатическое средство для наружного применения, обладающее противовоспалительным, обезболивающим, противоотечным, регенерирующим, хондропротективным, стимулирующим кроволимфообращение и обменные процессы в тканях суставов и способствующим восстановлению нарушенных физиологических функций тканей суставов действием при заболеваниях опорно-двигательного аппарата, характеризующееся тем, что оно содержит Rhododendron, Rhus toxicodendron, Ledum, Symphytum, Causticum, Calcium fluoricum, Apis, Lithium carbonicum, Sulfur, Comarum palustre, причем компоненты взяты в указанных ниже разведениях при следующем соотношении в частях:
Rhododendron
D2
3
Rhus toxicodendron
D2
3
Ledum
⌀
3
Symphytum
D2
2
Causticum
D8
1
Calcium fluoricum
D8
1
Apis
D4
2
Lithium carbonicum
D6
1
Sulfur
D6
1
Comarum palustre
⌀
3
Технический результат, получаемый при использовании настоящего изобретения, заключается в расширении арсенала гомеопатических средств для наружного применения, обладающих противовоспалительным, обезболивающим, противоотечным, регенерирующим, хондропротективным, стимулирующим кроволимфообращение и обменные процессы в тканях суставов и способствующим восстановлению нарушенных физиологических функций тканей суставов действием при заболеваниях опорно-двигательного аппарата.
Предлагаемое средство выполнено в виде геля для наружного применения. Все входящие в заявленный состав компоненты известны в гомеопатии и разрешены в медицинской и ветеринарной практике Германии (Гомеопатическая Фармакопея 1985 г.) и в России (ПВР 2.06.0290-96 20.02.97).
Изобретение иллюстрируется следующим примером.
Пример 1:
Состав на 100 мл геля для наружного применения:
Rhododendron
D2
3,0 мл
Rhus toxicodendron
D2
3,0 мл
Ledum
⌀
3,0 мл
Symphytum
D2
2,0 мл
Causticum
D8
1,0 мл
Calcium fluoricum
D8
1,0 мл
Apis
D4
2,0 мл
Lithium carbonicum
D6
1,0 мл
Sulfur
D6
1,0 мл
Comarum palustre
⌀
3,0 мл
Вспомогательные вещества: аммиак водный 10% по ГОСТ 3760 1,0 мл; карбопол по ТУ 2219-005-290633-42 0,7 мл; глицерин по ГОСТ 6259 2,2 мл; вода для инъекций по ГФЧ, с.74, ФС 42-2620 до 100 мл.
Характеристика конечного продукта
1. Внешний вид - внешний вид препарата определяют визуально: прозрачный, бесцветный или слегка желтоватый гель со слабым специфическим запахом.
2. Однородность - однородность препарата определяют визуально с помощью микроскопа. Микроскопия: при 8-кратном увеличении не должно быть крупных агрегатов. При 100-кратном увеличении размер частиц должен быть ≈20 мкм.
3. Определение pH проводят потенциометрическим методом.
Гель помещают в стакан с таким расчетом, чтобы электроды иономера были полностью погружены в препарат. Величина pH препарата должна быть от 6,2 до 8,2.
4. Определение содержания этилового спирта проводят по ГФХ1, в.1 методом отгона.
5. Определение стерильности проводят по ГФХ1, в.2, стр.187 методом прямого посева. Препарат должен выдерживать тест на стерильность.
6. Определение подлинности.
5 мл препарата помещают в пробирку, добавляют 0,1 мл раствора хлорида железа (III), перемешивают. Полученный раствор окрашивается в оливково-коричневый цвет (подлинность флавоноидов). Образец сравнения (гелевая основа) остается бесцветным.
Клинические испытания проведены на базе ветеринарной клиники Костромской ГСХА, ветеринарной клиники «Анима» г.Рязань, ГПЗ «Караваевский» Костромского района Костромской области, СПК «Красная Нива», ЗАО «Менжинец» Мытищинского района Московской области, конно-спортивной школы «Битца», конно-спортивная ферма учхоза «Кубань», конюшня фермерского хозяйства г.Абинска.
Проведенные клинические испытания показали следующее:
- противопоказания и побочные действия не выявлены;
- взаимодействие с другими препаратами не выявлено;
- дозировка и способ применения: по рекомендации ветеринарного врача в зависимости от диагноза и состояния животного;
- курс лечения: по рекомендации ветеринарного врача.
Пример 1
Корова №2783, черно-пестрая порода, 3-я лактация. Диагноз - прекарпальный бурсит. Наблюдается хромота на переднюю левую конечность, суставная бурса при пальпации горячая, отекшая, болезненная. Было назначено заявленное средство, которое наносили 2 раза в день наружно на пораженный сустав, после чего сверху накладывали повязку. На 3-й день лечения состояние животного значительно улучшилось: уменьшилась хромота, спал отек. Полное выздоровление отмечено на 12-й день лечения.
Пример 2
Собака, кличка «Рыжий», метис, 7 лет. Диагноз - бурсит локтевого сустава. При осмотре - хромота на переднюю правую конечность, бурса сильно увеличена, пальпируется в виде горячего, флюктуирующего, болезненного мешочка. Состояние животного угнетенное. Было назначено заявленное средство 2 раз в день наружно на патологический очаг, сверху накладывали повязку. На второй день лечения состояние животного улучшилось: собака стала более активной, начала опираться на больную конечность, бурса уменьшилась в размере. Полное выздоровление было отмечено на 8 день лечения.
Пример 3
Собака «Атос», 12 лет, лабрадор-ретривер. В течение последних 3-х лет у собаки наблюдается остеоартрит локтевого сустава. Животному неоднократно проводились курсы нестероидных противовоспалительных препаратов, хондропротекторов. На момент обращения животному уже в течение 5 дней был назначен препарат квадрисол внутрь по 3 мл 1 раз в день, но желаемый обезболивающий и воспалительный эффект не был достигнут: хромота на больную конечность уменьшилась незначительно, также незначительно уменьшилось воспаление и отек сустава. Дополнительно было назначено заявленное средство, которое наносилось наружно 2 раза в день на больной сустав. Сверху накладывалась повязка. Уже на следующий день лечения собака начала более уверенно опираться на больную конечность, 3-й день применения заявленного средства значительно уменьшилось воспаление, болезненность и отечность пораженного сустава. Для достижения стойкого эффекта владельцам собаки было рекомендовано продолжить применение заявленного средства еще в течение 2 недель.
Пример 4
Лошадь «Лаура», 6 лет. На прогулке повредила правую переднюю конечность. При осмотре - хромота на правую переднюю ногу, сильная болезненность и отек в области правого запястного сустава. Диагноз - растяжение связок правого запястного сустава. Назначено заявленное средство наружно на пораженную область 2 раза в день, сверху на сустав накладывали иммобилизирующую повязку. На 2-й день лечения хромота уменьшилась, значительное улучшение наступило на 4-й день лечения - лошадь начала уверенно опираться на поврежденную конечность. На 6-й день лечения лошадь взята в легкую работу. Для закрепления полученного эффекта заявленное средство применялось еще в течение 5 дней.
Пример 5
Корова №1906, 2-я лактация. При транспортировке повредила левую переднюю ногу. При осмотре - левый запястный сустав болезненный, есть незначительный отек. Диагноз - растяжение связок левого запястного сустава. Было назначено заявленное средство наружно 2 раза в день на пораженный сустав, сверху накладывали повязку. На следующий день хромота на травмированную конечность значительно уменьшилась, полное выздоровление наступило на 4-й день лечения.
Исходя из приведенных примеров, можно сделать вывод, что заявленное средство обладает выраженным терапевтическим эффектом.
Изучение специфической активности заявленного средства в животноводческих хозяйствах и профильных научно-исследовательских учреждениях России (в качестве препарата сравнения использованы препараты, широко применяемые в настоящее время для заболеваний опорно-двигательного аппарата).
1. Терапевтическая эффективность заявленного средства при экспериментальном гемоартрите правого коленного сустава у крыс
Оценку действия заявленного средства провели на белых беспородных крысах живой массой по 110,0.
В ходе эксперимента животным был смоделирован гемоартрит правого коленного сустава. Для этого крысу держали таким образом, чтобы пунктируемый сустав находился сверху. Наполовину согнутый сустав пунктировали в краниомедиальном направлении, иммобилизируя кожу в месте прокола кончиком большого пальца левой руки. Прокол делали у медиального края связки коленной чашки посередине между коленной чашкой и местом прикрепления к большеберцовой шероховатости, продвигая иглу проксимокаудально, пока острие иглы не соприкоснется с суставным хрящом. Непосредственно после взятия цельную кровь вводили в полость сустава в количестве 0,2 мл на голову.
Были сформированы пять групп животных (по 5 в каждой).
Крыс первой группы лечили комплексным гомеопатическим инъекционным препаратом Хондартрон. Животным вводили препарат в виде циркулярной блокады в области правого коленного сустава. Инъекции проводили 2 раза в неделю в дозировке 0,2 мл на голову курсом 30 дней.
Животным второй группы вводили препарат Хондартрон в виде циркулярной блокады в области правого коленного сустава 2 раза в неделю в дозе 0,2 мл на голову в течение 30 дней. Наружно применяли заявленное средство, которое наносили на область пораженного сустава ежедневно в течение 30 дней.
Животным третьей группы вводили препарат кетопрофен в дозе 0,003 мл на 1 крысу внутримышечно. Раствор готовили непосредственно перед введением (ex temp.) 2 раза в неделю в течение месяца.
Четвертая группа крыс лечение не получала.
Пятая группа интактные животные.
Условия содержания и кормление животных было одинаковым во всех группах.
Для выяснения метаболических процессов в организме животных проводили биохимические исследования крови. Определяли количество общего белка (метод рефрактометрии), кальция (трилонометрический метод) и активность щелочной фосфатазы (метод по гидролизу глицерофосфата) в сыворотке крови.
Кровь у животных брали до начала лечения, затем на 10, 20 и 30 день лечения. Крыс взвешивали перед началом и в конце опыта.
В конце опыта животных убили и провели гистологические исследования. Материалом для гистологического исследования служили коленные суставы правой задней лапы крыс. Отобранные суставы с частью бедренной и берцовой костей и мягкими тканями вокруг сустава фиксировали в смеси 96% спирта и формалина (3 части 96% спирта и 1 часть неразведенного нейтрального формалина) в течение 3 дней. После проводили декальцинацию костей, помещая ткани в 10% трихлоруксусную кислоту. Декальцинацию проводили в течение 10 дней с трехкратной сменой декальцинирующей жидкости (через сутки, на третьи сутки и через неделю); ткани подвешивали в емкости с жидкостью во избежание контакта с дном емкости. Контроль длительности выдержки тканей в декальцинирующей жидкости проводили путем прокалывания кости препаровальной иглой. В дальнейшем ткань отмывали от кислоты в 96% спирте (3 смены жидкости, 24 часа в каждой), проводили через спирты и хлороформ и заливали в парафин по общепринятой методике. Из залитого в парафин материала готовили срезы толщиной 6-8 микрон, которые наклеивали на предметные стекла и окрашивали гематоксилином, и эозином, и пикроиндигокармином. Окраска гематоксилином и эозином проводили по общепринятой методике. Окраску пикроиндигокармином проводили по следующей схеме:
- парафиновые среды, наклеенные на предметные стекла, депарафинизируют в двух ксилолах (на 2-3 минуты в каждый);
- ксилол смывают последовательным погружением в 96% и 70% спирт (на 2-3 минуты в каждый);
- промывают стекла в воде в течение 2-3 минут;
- наносят на срез квасцовый гематоксилин на 1-2 минуты;
- промывают стекла в воде;
- выщелачивают срезы помещением их в щелочную воду (несколько капель нашатырного спирта на 100 мл воды) до посинения среза;
- промывают стекла в воде;
- помещают стекла в емкость с раствором пикроиндигокармина на 1 -2 минуты;
- промывают стекла в воде;
- обезвоживают срез последовательным помещением в 70% и 90% спирт (на 3-5 минут в каждый);
- просветляют срез в карболксилоле (3-5 минут);
- помещают в ксилол (3-5 минут),
- заключают в канадский бальзам.
Оценка и описание гистологических срезов производили с помощью бинокулярного микроскопа с использованием окулярных насадок с увеличением на 16 и 10 и объективов с увеличением на 4, 20, 40. Фотографирование гистопрепаратов осуществляли при помощи цифрового фотоаппарата Olympus SP 350, жестко закрепленного с помощью фотонасадки на окуляр с увеличением на 10.
Результаты исследований
После моделирования гемоартрита животные всех 4-х подопытных групп в течение 2-3 дней были угнетены, малоподвижны. У них наблюдался плохой аппетит, а у некоторых особей усиленная жажда.
Данные таблицы 1 показывают, что у подопытных групп крыс наиболее существенно изменилось содержание щелочной фосфатазы, которое у животных всех 4-х групп увеличилось в 2,5-3 раза, что указывает на болевой синдром и стресс. Через 10 дней эти показатели нормализовались.
Остальные показатели выглядели следующим образом.
У крыс первой группы (лечение Хондартроном) концентрация общего белка в крови до начала лечения составляла 57,91 г/л, на 30 день 62,05 г/л. Разница между концентрациями составила 4,14 г/л.
Содержание кальция в начале лечения было 2,39 Ммоль/л, на 30 день этот показатель снизился до 2,19 Ммоль/л. Разница составила 0,2 Ммоль/л. Препарат не оказал существенного влияния на данные показатели.
У крыс второй группы (лечение заявленным средством и Хондартроном) концентрация общего белка в крови до начала лечения составляла 66,71 г/л, на 30 день 63,52 г/л. Разница между концентрациями составила 3,19 г/л.
Содержание кальция в начале лечения было 2,35 Ммоль/л, на 30 день этот показатель снизился до 2,2 Ммоль/л. Разница составила 0,15 Ммоль/л. Препарат не оказал существенного влияния на данные показатели.
Активность щелочной фосфатазы в крови у животных снизилась в первые дни лечения, а по сравнению с 10 днем они уменьшилась к 30 дню в 1,3 раза.
У животных третьей группы (лечение препаратом кетопрофен) динамика изменений активности щелочной фосфатазы была почти аналогичной - резкое повышение сразу после операции и такое же резкое снижение в последующие дни. В этой группе животных содержание в крови общего количества белка до начала лечения было 71,29 г/л. К 30 дню лечения его концентрация снизилась до 37,06 г/л, что составило существенную разницу - 34,23 г/л (в 1,92 раза).
Содержание кальция в крови животных этой группы существенных изменений не претерпевало. До лечения оно составляло 2,33 Ммоль/л, к 30 дню лечения это количество снизилось до 1,96 Ммоль/л. Разница составила всего 0,37 Ммоль/л.
В четвертой контрольной группе (животных не лечили) активность щелочной фосфатазы претерпевала аналогичные изменения, как у животных первой и второй подопытных групп - резкое повышение после операции и такое же резкое снижение в первые дни.
Количество общего белка и количество кальция в крови крыс повысилось незначительно и было в пределах статистической ошибки.
Таким образом, из изученных биохимических показателей крови подопытных крыс существенные колебания наблюдались только у щелочной фосфатазы, причем у всех 4-х подопытных групп животных - резкое увеличение сразу после операции и такое же резкое снижение до фоновых результатов в первые дни. Эти изменения не связаны с влиянием лекарственных средств, а с самой операцией.
Характерно, что болевая реакция и болевой стресс повлияли на рост и развитие животных. Так, например, если до начала операции живая масса всех подопытных крыс была примерно одинакова с таковой у интактных животных, то в конце эксперимента она составила: у животных первой группы 94,5% по отношению к контролю; у животных второй группы 98,8% по отношению к контролю, у животных третьей группы 89,7% соответственно и у животных четвертой группы 85,3%.
При клиническом осмотре во всех группах наблюдали за развитием реактивного синовита, интенсивностью болевого синдрома и дефигурацией суставов (таблица 2).
В первой группе животных (лечение Хондартроном) явления реактивного синовита исчезли к 10-му дню лечения, боль в суставах также уменьшилась и полностью исчезла к 20-му дню лечения. Средняя окружность сустава уменьшилась с 4,4 до 3,9 см к 30-му дню лечения.
У животных 2-й группы (лечение заявленным средством и Хондартроном) воспалительные явления, в том числе боль и отек, снизились к 10 дню терапии и больше не возобновлялись. Средняя окружность сустава уменьшилась с 4,5 до 3,8 см к 30 дню лечения. Уже к 10 дню состояние животных было оценено как «значительное улучшение».
В третьей группе крыс (кетопрофен) боль в суставах также уменьшилась на 10 день лечения. К 20 дню вновь наблюдался болевой синдром. В дальнейшем состояние оставалось без динамики до 30 дня лечения. Окружность сустава уменьшилась незначительно к 10 дню терапии и больше не менялась.
В четвертой группе у животных боль в той или иной степени присутствовала в течение 30 дней опыта. Состояние оставалось без динамики в течение 1 месяца. Средняя окружность практически не изменилась.
Результаты гистологического исследования
Животные I группы
В мягких тканях вокруг суставов имелись признаки отека (тканевые элементы разобщены, имеются оптические пустоты между тканевыми элементами) и слабовыраженной артериальной гиперемии (мелкие кровеносные сосуды (капилляры и артериолы), проходящие в околосуставных мягких тканях, расширены, заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенок сосудов).
Наблюдался отек соединительной ткани фиброзной сумки - в периваскулярных пространствах сосудов фиброзной сумки и в области перехода фиброзной сумки в фиброзный слой надкостницы наблюдалось умеренное разволокнение соединительнотканных волокон с образованием оптических пустот. Кроме того, мелкие кровеносные сосуды фиброзной сумки (артериолы и капилляры), попавшие в плоскость среза, были расширены и заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенки сосуда - умеренная артериальная гиперемия.
В полости сустава было найдено полостное кровоизлияние (возможно, как результат проводимых внутрисуставных инъекций) - в полости сустава, между суставной сумкой, краем мениски и хрящевой поверхностью, видно скопление большого количества эритроцитов, целых и разрушенных с единичными клетками белой крови - лимфоцитами, моноцитами, нейтрофильными лейкоцитами. Макрофаги синовиальной оболочки возле кровоизлияния содержат в цитоплазме темно-коричневые включения - зерна гемосидерина - признаки местного гемосидероза.
Строение суставного хряща было в пределах физиологической нормы.
В месте перехода ареолярной ткани в фиброзную вблизи суставного хряща соединительнотканные волокна были разволокнены с оптическими пустотами между отдельными волокнами - наблюдался отек фиброзной ткани в переходной зоне.
В субхондральной кости наблюдались признаки умеренной артериальной гиперемии.
Животные II группы
Признаки отека мягких тканей вокруг сустава менее выражены, чем в первой группе (тканевые элементы незначительно разобщены, наблюдалась незначительная артериальная гиперемия (каппиляры и артериолы, проходящие в околосуставных мягких тканях слегка расширены)). Наблюдался слабый отек соединительной ткани фиброзной сумки - в периваскулярных пространствах сосудов фиброзной сумки и в области перехода фиброзной сумки в фиброзный слой надкостницы наблюдалось незначительное разволокнение соединительнотканных волокон с образованием оптических пустот. Кроме того, мелкие кровеносные сосуды фиброзной сумки (артериолы и капилляры), попавшие в плоскость среза, были расширены и заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенки сосуда - умеренная артериальная гиперемия.
В полости сустава было найдено полостное кровоизлияние (возможно, как результат проводимых внутрисуставных инъекций) - в полости сустава, между суставной сумкой, краем мениски и хрящевой поверхностью, видно скопление большого количества эритроцитов, целых и разрушенных с единичными клетками белой крови - лимфоцитами, моноцитами, нейтрофильными лейкоцитами. Макрофаги синовиальной оболочки возле кровоизлияния содержат в цитоплазме темно-коричневые включения - зерна гемосидерина - признаки местного гемосидероза.
Строение суставного хряща было в пределах физиологической нормы.
В месте перехода ареолярной ткани в фиброзную вблизи суставного хряща соединительнотканные волокна были незначительно разволокнены с оптическими пустотами между отдельными волокнами - наблюдался слабый отек фиброзной ткани в переходной зоне.
В субхондральной кости наблюдались признаки умеренной артериальной гиперемии.
Животные III группы
В мягких тканях вокруг суставов имелись признаки отека (тканевые элементы разобщены, имеются оптические пустоты между тканевыми элементами) и умеренной артериальной гиперемии (мелкие кровеносные сосуды (капилляры и артериолы), проходящие в околосуставных мягких тканях, расширены, заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенок сосудов). Возле кровеносных сосудов встречались скопления эритроцитов, лежащие вне сосудов - кровоизлияния.
В периваскулярных пространствах и в области перехода фиброзной сумки в фиброзный слой надкостницы наблюдалось сильное разволокнение соединительнотканных волокон с образованием оптических пустот - признаки отека соединительной ткани фиброзной сумки. Имелись признаки умеренной артериальной гиперемии - мелкие кровеносные сосуды фиброзной сумки (артериолы и капилляры), попавшие в плоскость среза, были расширены и заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенки сосуда.
В синовиальной оболочке имелись признаки умеренной артериальной гиперемии - расширенные и заполненные эритроцитами некоторые мелкие кровеносные сосуды (капилляров и артериол).
Соединительнотканные волокна переходной зоны (области перехода между синовиальными клетками и хондроцитами) были разволокнены с оптическими пустотами между ними - наблюдался отек фиброзной ткани.
В средней зоне суставного хряща под поверхностной зоной с выраженными деструктивными изменениями также имелись признаки деструкции: были видны единичные хондроциты - округлые, маленькие, располагающиеся в лакунах одиночно, с ядрами-тенями, деформированными ядрами, гиперхромными ядрами. В некоторых лакунах хрящевого матрикса не было видно клеток. Матрикс хряща в этих местах при окраске пикроиндигокармином плохо воспринимал индигокармин - по большей части окрашивался в различные оттенки желтого и фиолетового. Это может быть связано с разрушением коллагена хрящевого матрикса.
В участках суставного хряща, граничащих с выраженными дегенеративными изменениями (в средней зоне суставного хряща), были видны признаки регенерации, местами более, местами менее выраженные.
Местами средняя зона суставного хряща, также граничащего с дегенеративно измененным хрящом, была представлена немногочисленными мелкими хондроцитами, располагающимися по 1-2 клетки в клеточном гнезде, и большим количеством матрикса. В этих местах хондроциты с округлыми гиперхромными ядрами (происходит накопление ядерного хроматина), но фигур митоза встречалось немного.
Толщина глубинной зоны в местах с выраженной деформацией суставного хряща была очень небольшая, плохо выраженная, сильно сливалась с субхондральной костью и местами была деформированная - с хаотично ориентированным матриксом, мелкими хондроцитами с гиперхромными деформированными ядрами. В местах, не граничащих с деформированным суставным хрящом, глубинная зона была более выражена, хотя тоже не широкой.
У некоторых животных наблюдалась дискомплектация костной ткани субхондральной кости - располагался этот участок под участком с наиболее измененным суставным хрящом. Костная ткань в этом месте была хаотично ориентирована, в ней практически не наблюдались ядра клеток, в матриксе были базофильные зернистые включения (вероятно, остатки хроматина погибших клеток).
Животные IV группы
В мягких тканях вокруг сустава имелись признаки отека мягких тканей (тканевые элементы разобщены, имеются оптические пустоты между тканевыми элементами). У некоторых животных недалеко от суставной сумки около прикрепления внутрисуставного мениски имелся участок обширного отека и кровоизлияния в мягкие ткани - тканевые элементы были сильно разъединены (практически отслоилась суставная сумка) с образованием обширной полости, частично оптически пустой, частично заполненной эритроцитами. Макрофаги соединительной ткани возле участка кровоизлияния содержали большое количество темно-коричневых зернистых включений в цитоплазму - местный гемосидероз. Наблюдалась умеренная артериальная гиперемия - мелкие кровеносные сосуды (капилляры и артериолы), проходящие в околосуставных мягких тканях, были расширены, заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенок сосудов.
В области перехода фиброзной сумки в фиброзный слой надкостницы наблюдалось умеренное разволокнение соединительнотканных волокон с образованием оптических пустот - признаки отека соединительной ткани фиброзной сумки. Мелкие кровеносные сосуды фиброзной сумки (артериолы и капилляры), попавшие в плоскость среза, были расширены и заполнены эритроцитами, лежащими обособленно друг от друга и от стенки сосуда - признаки умеренной артериальной гиперемии.
Макрофаги синовиальной оболочки с одной из сторон сустава (там же, где находится обширное кровоизлияние в мягкие ткани вокруг сустава) содержали в цитоплазме темно-коричневые включения - зерна гемосидерина - гемосидероз местный в результате кровоизлияния в полость сустава.
У всех животных наблюдался отек фиброзной ткани переходной зоны (области перехода между синовиальными клетками и хондроцитами) в виде разволокнения фиброзной ткани с появлением оптических пустот между волокнами.
Одновременно наблюдалось сильное расширение синовиальной полости в месте подкапсульного кровоизлияния и уменьшение в других частях - деформация сустава от сдавливания кровью. В полости сустава, между суставной сумкой, краем мениски и хрящевой поверхностью, было видно скопление большого количества эритроцитов, целых и разрушенных с единичными клетками белой крови - лимфоцитами, моноцитами, нейтрофильными лейкоцитами. Это кровоизлияние в полость сустава, возможно - в результате проводимых внутрисуставных инъекций. В центре суставной полости было видно небольшое количество ацидофильных аморфных масс, располагающихся на суставных поверхностях и на поверхности мениска - остатки разрушенных эритроцитов.
Средняя зона суставного хряща большой берцовой кости (особенно в центре суставной поверхности) была очень тоненькая, содержала буквально один ряд хондроцитов, расположенных в лакунах по 1-2 клетки. Хондроциты в этом месте были гиперхромные, но фигур митоза видно мало - это признаки истончения суставного хряща большой берцовой кости.
Суставной хрящ бедренной кости был без выраженных патологических изменений. В субхондральной кости были видны признаки умеренной гиперемии - кровеносные сосуды (артериолы, капилляры), располагающиеся непосредственно под суставным хрящом, были расширены и заполнены эритроцитами.
Выводы
Таким образом, у животных всех групп наблюдалась умеренная гиперемия мягких тканей вокруг суставов, синовиальной оболочки и субхондральной кости; отек мягких тканей вокруг суставов, синовиальной оболочки и фиброзной ткани переходной зоны между синовиальными клетками и хондроцитами. Кроме того, встречались кровоизлияния в мягкие ткани вокруг сустава и в полость сустава и местный гемосидероз мягких тканей вокруг сустава и синовиальной оболочки. Эти изменения, возможно, были связаны с проводимыми инъекциями внутрь суставов.
У животных второй группы гистологическое строение сустава было с наименьшими патологическими изменениями. Кроме незначительного отека и умеренной артериальной гиперемии все ткани сустава были в пределах нормы. У животных первой группы признаки отека и артериальной гиперемии тканей сустава были более выражены.
У животных третьей группы наблюдались выраженные изменения суставных хрящей в виде дегенеративных изменений и истончения суставного хряща. В тканях, граничащих с дегенеративно измененными тканями, наблюдались умеренные признаки регенерации в виде митозов хондроцитов и усиленного образования матрикса хряща. У ряда животных этой группы также наблюдалась деструкция субхондральной кости.
У животных четвертой группы наблюдались более интенсивные кровоизлияния и отек соединительной ткани фиброзной сумки, а также истончение суставного хряща большеберцовой кости. В отличие от животных третьей группы не было замечено признаков регенерации.
Заключение
Проведенные исследования показали, что смоделированный гемоартрит у крыс проявляется достаточно выраженно, сопровождаясь воспалением, болевым синдромом, дефигурацией сустава и в первые дни резким увеличением в крови (в 2,5-3 раза) щелочной фосфатазы.
Наиболее эффективно оказалось назначение схемы с использованием заявленного средства: это позволило быстрее купировать патологический процесс, нежели назначение одного Хондартрона. Так, при совместном использовании Хондартрона и заявленного средства к 10 дню лечения исчезала боль, практически восстанавливалась дефигурация сустава и исчезало наличие синовита. При назначении кетопрофена боль тоже исчезала на 10 день лечения, однако вновь появлялась на 20 день и несколько снижалась к 30 дню опыта. Одновременно с этим медленнее купировался воспалительный процесс, что показывает лишь незначительное восстановление дефигурации сустава.
В пользу схемы лечения с использование заявленного средства говорит и такой факт, как рост и развитие подопытных животных, о чем можно судить по приросту живой массы. Если до начала эксперимента живая масса всех подопытных крыс была практически одинаковой, то к концу эксперимента она составила: у животных леченых с использованием заявленного средства 98,8% по отношению к интактным крысам, у животных леченых только Хондартроном 94,5%, Кетопрофеном лишь 89,7% и у нелеченых животных только 85,3% соответственно.
Эффективность заявленного средства подтвердилась и результатами гистологического исследования в конце опыта. У крыс, леченых с использованием заявленного средства, гистологическое строение сустава было с наименьшими патологическими изменениями. Кроме незначительных отека и артериальной гиперемии все остальные анатомо-физиологические характеристики сустава были в пределах нормы, в то же время у крыс, леченных только Хондартроном, признаки отека и артериальной гиперемии были более выражены, при применении кетопрофена и нелеченых животных наблюдались выраженные дегенеративные изменения, вплоть до истончения суставного хряща и более выраженных отеков фиброзной ткани.
Таким образом, использование заявленного средства позволяет повысить эффективность лечения при гемоартрите суставов.
2. Лечение бурситов у высокопродуктивных коров
Работа по изучению терапевтической эффективности заявленного средства проводилась на коровах породы черно-пестрая с диагнозом «бурсит заплюсневого сустава», «бурсит прекарпального сустава».
В опытной группе (12 коров) применялось заявленное средство, которое втиралось в пораженную область, на которую затем накладывали повязку. Заявленное средство наносилось 1 раз в день в течение 10 дней, после чего было проведено клиническое обследование животных.
В контрольной группе (11 коров) применялось лечение по принятой в хозяйстве схеме: наружно на пораженную область сустава 1 раз в день в течение 10 дней наносили ихтиоловую мазь, всем животным был проведен курс антибиотикотерапии с использованием раствора гентамицина (в дозе 3 мг/кг внутримышечно 2 раза в день в течение 5 дней). После этого было также проведено повторное клиническое обследование животных.
Результаты лечения представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, в опытной группе к 10-му дню лечения качественное улучшение состояния больной конечности наступило у 8 коров (66,7%): у них наблюдалось значительное уменьшение области припухлости, исчезла хромота на больную конечность. В контрольной группе к 10-му дню лечения улучшение состояния больных конечностей наблюдалось у 5 коров (45,5%). Таким образом, терапевтическая эффективность заявленного средства при лечении бурситов у крупного рогатого скота составила 66,7%, схемы лечения, принятой в хозяйстве, 45,5% (см. таблицу 3).
3. Лечение острых тендовагинитов у лошадей
Работа по изучению терапевтической эффективности заявленного средства проводилась на лошадях с диагнозом «острое асептическое воспаление сухожилий и сухожильного влагалища поверхностного пальцевого сгибателя передней правой и передней левой конечностей» в возрасте от 3 до 10 лет.
Животных в количестве 20 голов по принципу аналогов разделили на 2 группы. На первом этапе лечения в течение 48 часов после травмирования во всех группах животных лечение было направлено на устранение посттравматического отека с предоставлением лошадям покоя и использования холодных процедур (лед, обливание холодной водой, охлаждающие мази). На втором этапе лечения основной задачей было не допустить перехода патологического процесса из острого в хронический. В этот период животным первой группы втирали в пораженную область заявленное средство 2 раза в день до выздоровления. Животным второй группы применяли смесь из 100 мл камфорного спирта и 100 мл метилсалицилата наружно в виде компресса на область пораженного сухожилия 1 раз в два дня в течение всего срока лечения. Медикаментозное лечение животным двух групп сочетали с методами функциональной терапии (массаж, активные движения лошади).
Ослабление отечности окружающих тканей, уменьшение болезненности и напряженности у животных первой группы наблюдали на 3-5 день лечения, полное отсутствие признаков хромоты регистрировали к 13-15, другие признаки воспаления исчезали на 15-16 день лечения.
У животных второй группы уменьшение отечности и болезненности наблюдалось к 5-6 дню. Хромота исчезала на 15-17 день, другие признаки воспаления только к 18-20 дню лечения.
Полное выздоровление лошадей в первой группе наступало на 20-21 сутки от начала лечения, во второй группе на 24-25 день лечения или на 4-5 дней позже, чем в первой группе (таблица 4).
Таблица 1
Биохимические показатели крови крыс
ЩФ (МЕ/л)
Белок (г/л)
Кальций (Ммоль/л)
Живая масса в % к интактным крысам
1 группа
До начала лечения
518,3±29,7
57,91±3,1
2,39±0,21
99
1507±75,3
На 10 день
532,8±27,4
74,07±4,8
2,31±0,17
На 20 день
515,4±21,3
67,25±5,1
2,5±0,15
На 30 день
428,86±19,8
62,05±3,9
2,19±0,19
94,5
2 группа
До начала лечения
529,2±17,8
66,71±2,2
2,35±0,14
100,5
1684,5±86,7
На 10 день
533,9±23,3
72,81±5,4
2,33±0,2
На 20 день
513,8±27,9
69,44±3,9
2,37±0,16
На 30 день
395,8±20,1
63,52±2,8
2,2±0,16
98,8
3 группа
До начала лечения
497,9±24,3
71,29±5,1
2,33±0,2
101
1818±97,8
На 10 день
603,5±31,2
75,44±4,7
2,27±0,15
На 20 день
413,1±17,4
76,47±6,1
2,45±0,19
На 30 день
289,52±13,6
37,06±1,9
1,96±0,13
89,7
4 группа
До начала лечения
576,5±39,1
66,56±4,3
2,24±0,16
99
1739±94,7
На 10 день
837,3±56,5
70,29±4,1
2,61±0,15
На 20 день
562,4±37,2
67,4±3,8
2,49±0,17
На 30 день
465,98±21,8
66,85±4,2
2,34±0,13
85,3
5 группа
В начале лечения
495,3±27,5
69,7±3,5
2,41±0,2
100
В конце опыта
451,7±22,4
71,8±4,2
2,39±0,14
100
Таблица 2
Клинические показатели подопытных животных
Критерии
Наличие реактивного синовита (+; -)
Боль в суставах (+; -)
Дефигурация сустава (средняя окружность в см на основании измерения окружностей)
Субъективная оценка эффективности врачом (значительное улучшение, улучшение, без динамики, ухудшение: ++, +, +--, --)
До начала лечения
1
+
+
3,8 4,4
2
+
+
3,8 4,5
3
+
+
3,7 4,5
4
+
+
3,8 4,5
На 10 день лечения
1
-
+-
4,1
+
2
-
-
4,0
++
3
+-
+-
4,3
+-
4
+-
+
4,5
+--
На 20 день лечения
1
-
-
3,9
+
2
-
-
3,8
++
3
-
+
4,3
-
4
+-
+
4,4
--
На 30 день лечения
1
-
-
3,9
+
2
-
-
3,8
++
3
-
+-
4,3
+--
4
+-
+
4,4
-
Примечание: в графе «до начала лечения» - дефигурация сустава - первые цифры обозначают окружность сустава до модулирования гемоартрита.
Таблица 3
Терапевтическая эффективность заявленного средства при бурситах коров
Показатели
Опытная группа
Контрольная группа
Количество коров в группах, голов
12
11
Диагноз
бурсит
бурсит
Схема лечения
Заявленное средство 1 раз в день наружно в течение 10 дней
Ихтиоловая мазь наружно 1 раз в день в течение 10 дней, раствор гентамицина в дозе 3 мг/кг 2 раза в день в/м в течение 5 дней
Выздоровело к 10 дню лечения
8
5
Терапевтическая эффективность,
66,7%
45,5%
Таблица 4
Терапевтическая эффективность заявленного средства при острых асептических воспалениях сухожилий и сухожильного влагалища поверхностного пальцевого сгибателя передней правой и передней левой конечностей
Группа
Кол-во животных
Ослабление отечности,
Отсутствие хромоты
Отсутствие воспаления
Полное выздоровление
уменьшение боли (дни)
(дни)
(дни)
(дни)
1 заявленное средство
10
3-5
13-15
15-16
20-21
2 камфорный спирт и метилсалицилат
10
5-6
15-17
18-20
24-25