КОНДЕНСИРОВАННЫЕ КОЛЬЦЕВЫЕ ГЕТЕРОАРИЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ TRK
CONDENSED RING HETEROARYL COMPOUNDS AND USE THEREOF AS TRK INHIBITORS

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее раскрытие относится к новым химическим соединениям и применению соединений в качестве ингибиторов TRK.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Trkʹs представляют собой рецепторы тирозинкиназы с высокой аффинностью, которые активируются нейротрофинами (NT). Семейство рецепторов Trk состоит из трех членов: TrkA, TrkB и TrkC. Среди нейротрофинов имеется группа растворимых факторов роста: фактора роста нервов (NGF), который активирует TrkA, нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) и NT-4/5, который активирует TrkB, и нейротрофина-3 (NT3), который активирует TrkC. Trkʹs в значительной степени выражены в нервной ткани и участвуют в поддержании, сигнализации и выживании нервных клеток (Patapoutian, A. et al., Current Opinion in Neurobiology, 2001, 11, 272-280).
Было показано, что ингибиторы сигнального пути Trk/нейтрофинов являются эффективными в различных доклинических моделях боли у животных. Было показано, что антагонистические антитела против NGF и TrkA являются эффективными в моделях воспалительных и невропатических болей у животных и при клинических испытаниях на людях. (Woolf, C.J. et al. Neuroscience 1994, 62, 327-331; Zahn, P.K. et al. J. Pain 2004, 5, 157-163; McMahon, S.B. et al. Nat. Med. 1995, 1, 774-780; Ma, Q.P. and Woolf, C. J. Neuroreport 1997, 8, 807-810; Shelton, D.L. et al. Pain 2005, 116, 8-16; Delafoy, L. et al. Pain 2003, 105, 489-497; Lamb, K. et al. Neurogastroenterol. Motil. 2003, 15, 355-361; Jaggar, S.I. et al. Br. J. Anaesth.1999, 83, 442-448).
Было показано, что NGF, секретируемый опухолевыми клетками и проникающими в опухоль макрофагами, непосредственно стимулирует TrkA, расположенные на периферических болевых нервных волокнах. С применением различных моделей опухолей как у мышей, так и крыс, было продемонстрировано, что нейтрализация NGF моноклональным антителом подавляет связанную с раком боль до степени, схожей или превосходящей степень, соответствующую самой высокой переносимой дозе морфина. Согласно данным множества исследований активация сигнального пути BDNF/TrkB является модулятором различных типов боли, включая воспалительную боль (Matayoshi, S., J. Physiol. 2005, 569:685-695), невропатическую боль (Thompson, S.W. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96:7714-7718) и хирургическую боль (Li, C.-Q. et al. Molecular Pain, 2008, 4(28), 1-11). Поскольку киназы TrkA и TrkB могут служить в качестве медиатора NGF управляемых биологических реакций, ингибиторы TrkA и/или других Trk-киназ могут обеспечить эффективное лечение состояний хронической боли.
Связь между сверхэкспрессией, активацией, амплификацией и/или мутацией Trk-киназ и некоторыми видами рака, как видно с проведением исследований на нейробластоме (Brodeur, G.M. Nat. Rev. Cancer 2003, 3, 203-216), раке яичника (Kruettgen et al. Brain Pathology 2006, 16:304-310), раке предстательной железы, (Dionne et al. Clin. Cancer Res. 1998, 4(8), 1887-1898), раке поджелудочной железы (Dang et al. j of Gastroenterology and Hepatology 2006, 21(5), 850-858), крупноклеточных нейроэндокринных опухолях (Marchetti et al. Human Mutation 2008, 29(5), 609-616) и колоректальном раке (Bardelli, A. Science 2003, 300, 949), поддерживает доказательство, что терапевтическое значение эффективного ингибитора Trk может распространяться далеко за пределы терапии боли. В доклинических моделях рака неселективные низкомолекулярные ингибиторы TrkА, В и С были эффективны как в ингибировании роста опухоли, так и в прекращении образования метастазов (Nakagawara, A. Cancer Letters 2001, 169:107-114; Meyer, J. et al. Leukemia 2007, 1-10; Pierottia, M.A. and Greco A. Cancer Letters, 2006, 232:90-98; Eric Adriaenssens, E. et al. Cancer Res 2008, 68(2), 346-351).
Кроме того, было показано, что ингибирование сигнального пути нейротрофинов/Trk является эффективным при лечении воспалительных заболеваний легких, включая астму (Freund-Michel, V. et al. Pharmacology & Therapeutics 2008, 117(1), 52-76), интерстициальный цистит (Hu Vivian Y, et al. The Journal of Urology 2005, 173(3), 1016-1021), воспалительные заболевания кишечника, включая неспецифический язвенный колит и болезнь Крона (Di Mola, F.F, et al. Gut 2000, 46(5), 670-678), и воспалительные заболевания кожи, такие как атопический дерматит (Dou, Y.C. et al. Archives of Dermatological Research 2006, 298(1), 31-37), экзема и псориаз (Raychaudhuri, S.P. et al. J. Investigative Dermatology 2004, 122(3), 812-819).
Также было показано, что модулирование сигнального пути нейротрофинов/Trk влияет на этиологию нейродегенеративных заболеваний, включая рассеянный склероз, болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера (Sohrabji, F. et al. Neuroendocrinology 2006, 27(4), 404-414).
Недавние публикации установили новые слияния генов у пациентов с раком легких, несущих домен киназы гена NTRK1, который кодирует с высокой аффинностью рецептор фактора роста нервов-TrkA белок (Vaishnavi, A. et al. Nature Medisine 2013, 19(11), 1469-1472).
Вышеприведенные данные предоставляются в качестве уровня техники для понимания особенностей изобретения и не являются признанием известного уровня техники.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящая заявка раскрывает новые химические соединения. Данные новые химические соединения могут действовать в качестве ингибиторов Trk и, как полагают, являются пригодными при лечении различных типов острой и хронической боли, включая, но не ограничиваясь ими, воспалительную боль, невропатическую боль и боль, связанную с раком, хирургическим вмешательством или переломом костей. Кроме того, полагают, что соединения являются пригодными при лечении рака, воспаления, нейродегенеративных заболеваний и определенных инфекционных заболеваний.
Один из аспектов изобретения предоставляет соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство:
Формула I
1
2
3
4
5
3
4
5
3
4
4
5
3
5
4
5
5
3
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
2
3
2
В некоторых вариантах осуществления R Формулы I представляет собой фенильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, или 5-6-членное гетероарильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, в которой одна или более групп заместителей независимо выбраны из группы, состоящей из галогена, -CF, -CHF, NH, гидроксила, линейного C1-C4алкила, разветвленного C1-C4алкила, линейного C1-C4алкокси и разветвленного C1-C4алкокси. Кроме того, в Формуле I R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C4алкила и разветвленного линейного C1-C4алкила. Кроме того, в Формуле I Х выбран из группы, состоящей из -CH-, -CHCH-, -CHO-, -CHNH-, -CHN(C1-C4алкила)-, -CH(F)-, -CF-, -CH(Cl)-, -CH(OH)-, -CH(OCH)-, -CH(NH)- или -C(CH)-. Кроме того, в Формуле I Q выбран из группы, состоящей из -CH=CRC(O)NRR, -CH=CRNRC(O)R, -CH=CRNRC(O)NRR, -CH=CRR, -CCC(O)NRR, -CCCR и .
3
4
5
4
5
4
5
4
5
4
5
1
2
3
4
6
6
6
2
В Q Формулы I R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, линейного C1-C6алкила и разветвленного C1-C6алкила. В Q Формулы I -NRR или образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, или не образует кольцевую структуру, причем гетероциклическое кольцо является или гетероарильным, или гетероциклоалкильным кольцом. Когда -NRR образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, 4-7-членное гетероциклическое кольцо включает необязательный второй гетероатом в дополнение к азоту -NRR и необязательно замещено одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из линейного С1-С6алкила, разветвленного C1-C6алкила, гидроксила, карбоновой кислоты, линейной C1-C4алкилкарбоновой кислоты и разветвленной С1-С4алкилкарбоновой кислоты. Когда -NRR не образует кольцевую структуру, R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-С6алкила и разветвленного С1-С6алкила, и R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C6алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, разветвленного C1-C6алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, и С1-С6циклоалкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом. Кроме того, в Q Формулы I Y, Y, Y и Y каждый независимо выбран из группы, состоящей из -CH, N, O, S, -CR и -NR, в которой R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного С1-С4алкила, разветвленного C1-C4алкила, 5-6-членного арильного кольца, 5-6-членного гетероарильного кольца, 3-7-членного гетероциклоалкильного кольца, 3-7-членного циклоалкильного кольца, -NHCO-(арильного кольца) и -CHCO-(С3-С6-членного гетероциклического кольца).
1
2
3
4
5
4
5
2
2
2
2
В других вариантах осуществления R Формулы I представляет собой 6-членное арильное или гетероарильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, линейного C1-C4алкила, разветвленного C1-C4алкила, линейного C1-С4алкокси и разветвленного С1-С4алкокси. Кроме того, в Формуле I R представляет собой водород, линейный C1-C4алкил или разветвленный линейный C1-C4алкил; и Х представляет собой -CH-, -CHCH-, -CHO- или -CH(Z)-, в которой Z представляет собой галоген; и Q представляет собой -CH=CRC(O)NRR, -CCC(O)NRR или .
3
4
5
4
5
4
5
4
5
4
5
1
2
3
4
6
6
6
2
Кроме того, в Q Формулы I R представляет собой водород или галоген. Кроме того, в Q Формулы I -NRR или образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, или не образует кольцевую структуру, причем гетероциклическое кольцо является или гетероарильным, или гетероциклоалкильным кольцом. Когда -NRR образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, 4-7-членное гетероциклическое кольцо включает необязательный второй гетероатом в дополнение к азоту -NRR и необязательно замещено одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из линейного С1-С6алкила, разветвленного C1-C6алкила, гидроксила, карбоновой кислоты, линейной C1-C4алкилкарбоновой кислоты и разветвленной С1-С4алкилкарбоновой кислоты. Когда -NRR не образует кольцевую структуру, R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-С6алкила и разветвленного С1-С6алкила, и R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C6-алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, разветвленного C1-C6алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, и С1-С6циклоалкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом. В Q Формулы I Y, Y, Y и Y каждый независимо выбран из группы, состоящей из -CH, N, O, S, -CR и -NR, в которой R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного С1-С4алкила, разветвленного C1-C4алкила, 5-6-членного арильного кольца, 5-6-членного гетероарильного кольца, 3-7-членного гетероциклоалкильного кольца, 3-7-членного циклоалкильного кольца, -NHCO-(арильного кольца) и -CHCO-(С3-С6-членного гетероциклического кольца).
1
2
3
5
1
2
3
5
1
В вышеприведенном соединении Формулы I R может представлять собой фенильное кольцо, замещенное одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, метокси и этокси; R и R представляют собой Н; R может быть выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, изо-пропила, циклопропила, трет-бутила, метоксиэтила и гидроксиэтила. В соединении Формулы I R может представлять собой пиридиновое кольцо, замещенное, по меньшей мере, одним выбранным из группы, состоящей из фтора и метокси; R и R представляют собой Н; R может быть выбран из группы, состоящей из Н, метила, этила, изо-пропила, циклопропила, трет-бутила, метоксиэтила и гидроксиэтила. В соединении Формулы I R может представлять собой пирид-2-он-3-ильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и C1-C4алкила.
4
5
4
5
4
5
4
5
В соединении Формулы I, когда -NRR не образует кольцевую структуру, R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-С6алкила и разветвленного С1-С6алкила, и R выбран из группы, состоящей из линейного С1-C6фторалкила, разветвленного C1-C6фторалкила, линейного С1-C6дифторалкила, разветвленного C1-C6дифторалкила, линейного С1-C6трифторалкила, разветвленного C1-C6трифторалкила, линейного С1-C6гидроксиалкила, разветвленного С1-C6гидроксиалкила, линейного С2-C6дифторалкила и разветвленного С2-C6дифторалкила. В соединении Формулы I -NRR, образуя 4-7-членное гетероциклическое кольцо, может представлять собой 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо. В соединении Формулы I, когда -NRR образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, второй гетероатом в 4-7-членном гетероциклическом кольце может быть выбран из группы, состоящей из азота, кислорода и серы.
Соединение Формулы I представляет собой соединение Формулы II:
Формула II
Соединение Формулы I представляет собой соединение Формулы III:
Формула III
Соединение Формулы I представляет собой соединение Формулы IV:
Формула IV
Соль соединения Формулы I может быть выбрана из группы, состоящей из ацетата, бензоата, безилата, битартрата, бромида, карбоната, хлорида, эдетата, эдисилата, эстолата, фумарата, глюцептата, глюконата, гидробромида, гидрохлорида, иодида, лактата, лактобионата, малата, малеата, манделата, мезилата, метилбромида, метилсульфата, муката, напсилата, нитрата, оксалата, памоата, фосфата, дифосфата, салицилата, дисалицилата, стеарата, сукцината, сульфата, тартрата, тозилата, триэтиодида, трифторацетата и валерата.
Другой аспект изобретения относится к способу лечения или профилактики TRK-опосредованного заболевания, выбранного из группы, состоящей из папиллярной карциномы щитовидной железы, рака поджелудочной железы, рака легких, рака толстой кишки, карциномы молочной железы, нейробластомы, боли, кахексии, дерматита и астмы. Способ включает введение фармацевтически эффективного количества соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли объекту, нуждающемуся в таком лечении.
Еще один аспект изобретения относится к способу ингибирования фермента TRK. Способ включает введение фармацевтически эффективного количества соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли объекту, нуждающемуся в таком ингибировании.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Новые характерные особенности изобретения подробно изложены в прилагаемой формуле изобретения. Лучшее понимание характерных особенностей и преимуществ настоящего изобретения будет получено путем ссылки на последующее подробное описание, которое предлагает иллюстративные варианты осуществления, в которых используются принципы изобретения. В то время как некоторые варианты осуществления настоящего изобретения были показаны и описаны в настоящей заявке, такие варианты осуществления приведены исключительно для примера. Следует понимать, что различные альтернативные варианты осуществления изобретения, описанные в настоящей заявке, могут быть использованы в практике изобретения. Специалисту в данной области техники будет понятно, что многочисленные варианты, изменения и замещения возможны без отступления от сущности изобретения. Предполагается, что следующая формула изобретения определяет объем аспектов изобретения и что способы и структуры в пределах объема данной формулы изобретения и их эквиваленты охватываются таким образом.
Заголовки разделов, используемые в настоящем описании, представлены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие описанный объект. Все документы или части документов, процитированные в заявке, включая, но не ограничиваясь ими, патенты, патентные заявки, статьи, книги, руководства и монографии определенно включены в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме для любых целей.
Определения
Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, как обычно понимает специалист в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Все патенты, патентные заявки, опубликованные материалы, упоминаемые на всем протяжении данного раскрытия, если не указано иначе, включены посредством ссылки в полном объеме. В случае множества определений для терминов настоящего описания, имеют приоритетное значение термины в данном разделе. Если сделана ссылка на URL или другой такой идентификатор или адрес, следует понимать, что такие идентификаторы могут изменяться и определенная информация в интернете может появляться и исчезать, но равноценную информацию можно найти с помощью поиска в интернете или другом соответствующем нормативном источнике. Ссылка на это свидетельствует о доступности и широком распространении такой информации.
Следует понимать, что вышеприведенное общее описание и последующее подробное описание являются примерными и только пояснительными и не ограничивают любой заявленный объект изобретения. В данной заявке использование единственного числа включает множественное число, если определенно не указано иначе. Следует отметить, что, как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явно не следует иное. Следует также отметить, что использование «или» означает «и/или», если не указано иначе. Кроме того, использование термина «включающий», также как других форм, таких как «включать», «включает» и «включено» не является ограничивающим. Подобным образом, использование термина «содержащий», также как других форм, таких как «содержать», «содержит» и «содержавший» не является ограничивающим.
TH
Определение стандартных химических терминов можно найти в справочных изданиях, включая Carey and Sundberg «ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 ED.» Vols. A (2000) and B (2001), Plenum Press, New York. Если не указано иначе, применяются стандартные методы масс-спектроскопии, ЯМР, ВЭЖХ, ИК и УФ/видимой спектроскопии и фармакологии в пределах данной области техники. Если не предусмотрены конкретные определения, применяемая номенклатура, связанная с и лабораторными методами и методиками, аналитической химией, химией органического синтеза и медицинской и фармацевтической химией, описанной в настоящей заявке, является известной в данной области техники. Стандартные методики могут быть использованы для химических синтезов, химических анализов, фармацевтического получения, приготовления, и доставки, и лечения пациентов. Реакции и методики очистки могут быть выполнены, например, с использованием наборов спецификаций производителя, или как это обычно достигается в данной области, или как описано в настоящей заявке. Вышеуказанные методики и методы обычно могут быть выполнены стандартными способами, хорошо известными в данной области техники, и как описано в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании. По всему описанию группы и их заместители могут быть выбраны специалистом в данной области для обеспечения стабильных фрагментов и соединений.
2
2
Если группы заместителей определяются их стандартными химическими Формулами, написанными слева направо, они в равной степени охватывают химически идентичные заместители, которые возникали бы в результате написания структуры справа налево. В качестве неограничивающего примера СНО эквивалентно OCH. Если не указано иначе, применение общих химических терминов, таких как, но ограничиваясь ими, «алкил», «амин», «арил», эквивалентно их необязательно замещенным формам. Например, «алкил», используемый в настоящем описании, включает необязательно замещенный алкил.
Соединения, представленные в настоящем описании, могут содержать один или более стереоцентров, и каждый центр может существовать в R или S-конфигурации или их комбинациях. Подобным образом, соединения, представленные в настоящем описании, могут содержать одну или более двойных связей, и каждая может существовать в Е (транс) или Z (цис)-конфигурации или их комбинациях. Представление одного конкретного стереоизомера, региоизомера, диастереомера, энантиомера или эпимера следует понимать как включающее все возможные стереоизомеры, региоизомеры, диастереомеры, энантиомеры или эпимеры и их смеси. Таким образом, соединения, представленные в настоящем описании, включают все отдельные конфигурационные стереоизомерные, региоизомерные, диастереомерные, энантиомерные и эпимерные формы, также как их соответствующие смеси. Методики обращения или оставления без изменений определенного стереоцентра и методики для разделения смесей стереоизомеров хорошо известны в данной области техники, и специалист в данной области техники будет в состоянии выбрать соответствующий метод для конкретной ситуации. См., например, Fumiss et al. (eds.), VOGEL'S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, 809-816; и Heller, Acc. Chem. Res. 1990, 23, 128.
Термин «связь» или «одинарная связь» относится к химической связи между двумя атомами или двумя фрагментами, когда атомы, соединенные связью, считаются частью большей подструктуры.
2
3
2
3
2
2
2
2
2
3
2
Термин «необязательный» или «необязательно» означает, что в дальнейшем описанное явление или состояние может или не может возникнуть и что описание включает случаи, когда указанное явление или состояние происходит, и случаи, когда не происходит. Например, «необязательно замещенный алкил» означает или «алкил», или «замещенный алкил», как определено ниже. Кроме того, необязательно замещенная группа может быть незамещенной (например, СНСН), полностью замещенной (например, CFCF), монозамещенной (например, CHCHF) или замещенной на уровне где-нибудь в промежутке между полностью замещенной и монозамещенной (например, CHCHF, CFCH, CFHCHF и т.д.). Специалисту в данной области техники будет очевидно в отношении любой группы, содержащей один или более заместителей, что такие группы не предназначены для введения любого замещения или моделей замещения (например, замещенный алкил включает необязательно замещенные циклоалкильные группы, которые, в свою очередь, определяются как включающие необязательно замещенные алкильные группы, потенциально до бесконечности), которые являются стерически нецелесообразными и/или синтетически неоправданными. Таким образом, любые описанные заместители обычно следует понимать как имеющие максимальную молекулярную массу приблизительно 1000 дальтон и более характерно до приблизительно 500 дальтон (за исключением тех случаев, где очевидно предназначены высокомолекулярные заместители, например, полипептиды, полисахариды, полиэтиленгликоли, ДНК, РНК и подобные).
1
1
2
1
3
1
1
4
1
2
1
3
1
4
Как используется в настоящем описании, С-Cn включает C-C, C-C... C-Cn. Исключительно для примера группа, обозначенная как «C-C», указывает, что содержится от одного до четырех атомов углерода в фрагменте, т.е. группы, содержащие 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода или 4 атома углерода, также как диапазоны С-С и С-С. Таким образом, исключительно для примера «C-Cалкил» указывает, что содержится от одного до четырех атомов углерода в алкильной группе, т.е. алкильная группа выбрана из метила, этила, пропила, изо-пропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила и трет-бутила. Во всех случаях, когда представляется в настоящем описании, диапазон числовых значений, такой как «от 1 до 10» относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, «от 1 до 10 атомов углерода» означает, что группа может содержать 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода, 4 атома углерода, 5 атомов углерода, 6 атомов углерода, 7 атомов углерода, 8 атомов углерода, 9 атомов углерода или 10 атомов углерода.
Используемые в настоящем описании термины «гетероатом» или «гетеро», отдельно или в комбинации, относятся к атому, отличному от углерода и водорода. Гетероатомы независимо выбраны из кислорода, азота, серы, фосфора, кремния, селена и олова, но не ограничиваются данными атомами. Когда присутствуют два или более гетероатомов, два или более гетероатомов могут быть такими же, как каждый другой, или некоторые или все из двух или более гетероатомов могут отличаться от других.
1
6
1-6
Используемый в настоящем описании термин «алкил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному с прямой цепью или необязательно замещенному с разветвленной цепью, насыщенному углеводородному монорадикалу, содержащему от одного до приблизительно десяти атомов углерода, более предпочтительно от одного до шести атомов углерода. Примеры включают, но не ограничиваются ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, 2-метил-1-пропил, 2-метил-2-пропил, 2-метил-1-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-3-бутил, 2,2-диметил-1-пропил, 2-метил-1-пентил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 2,2-диметил-1-бутил, 3,3-диметил-1-бутил, 2-этил-1-бутил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, трет-амил и гексил и более длинные алкильные группы, такие как гептил, октил и подобные. Во всех случаях, когда представляется в настоящем описании, диапазон числовых значений, такой как «C-Cалкил» или «Cалкил» означает, что алкильная группа может состоять из 1 атома углерода, 2 атомов углерода, 3 атомов углерода, 4 атомов углерода, 5 атомов углерода или 6 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает наличие термина «алкил», где диапазон числовых значений не обозначен.
2
2
2
2
2
2
3
2
Используемый в настоящем описании термин «алкилен», отдельно или в комбинации, относится к бирадикалу, полученному из вышеуказанного монорадикала, алкила. Примеры включают, но не ограничиваются ими, метилен (-СН), этилен (-CHCH), пропилен (-CHCHCH), изопропилен (-СН(СН)СН) и подобные.
2
2
2
3
2
2
6
2-6
Используемый в настоящем описании термин «алкенил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному с прямой цепью или необязательно замещенному с разветвленной цепью углеводородному монорадикалу, содержащему одну или более углерод-углерод двойных связей и содержащему от двух до приблизительно десяти атомов углерода, более предпочтительно от двух до приблизительно шести атомов углерода. Группа может находиться или в цис-, или транс-конформации относительно двойной связи(ей), и следует понимать, что включает оба изомера. Примеры включают, но не ограничиваются ими, этенил (CH=CH), 1-пропенил (CHCH=CH), изопропенил [C(CH)=CH], бутенил, 1,3-бутадиенил и подобные. Во всех случаях, когда представляется в настоящем описании, диапазон числовых значений, такой как «C-Cалкенил» или «Салкенил» означает, что алкенильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода, 4 атомов углерода, 5 атомов углерода или 6 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает наличие термина «алкенил», где диапазон числовых значений не обозначен.
2
6
2-6
Используемый в настоящем описании термин «алкинил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному с прямой цепью или необязательно замещенному с разветвленной цепью углеводородному монорадикалу, содержащему одну или более углерод-углерод тройных связей и содержащему от двух до приблизительно десяти атомов углерода, более предпочтительно от двух до приблизительно шести атомов углерода. Примеры включают, но не ограничиваются ими, этинил, 2-пропинил, 2-бутинил, 1,3-бутадиинил и подобные. Во всех случаях, когда представляется в настоящем описании, диапазон числовых значений, такой как «C-Cалкинил» или «Салкинил» означает, что алкинильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода, 4 атомов углерода, 5 атомов углерода или 6 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает наличие термина «алкинил», где диапазон числовых значений не обозначен.
Используемый в настоящем описании термин «алифатический», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному с прямой цепью или с разветвленной цепью, нециклическому, насыщенному, частично ненасыщенному или полностью ненасыщенному неароматическому углеводороду. Таким образом, термин в совокупности включает алкильные, алкенильные и алкинильные группы.
Используемые в настоящем описании термины «гетероалкил», «гетероалкенил» и «гетероалкинил», отдельно или в комбинации, относятся к необязательно замещенным алкильным, алкенильным и алкинильным структурам соответственно, как описано выше, в которых один или более атомов углерода скелетной цепи (и любые связанные атомы водорода в случае необходимости) каждый независимо замещен гетероатомом (т.е. атомом, отличным от углерода, таким как, но не ограничиваясь ими, кислород, азот, сера, кремний, фосфор, олово или их комбинации.
Используемые в настоящем описании термины «галогеналкил», «галогеналкенил» и «галогеналкинил», отдельно или в комбинации, относятся к необязательно замещенным алкильным, алкенильным и алкинильным группам соответственно, как определено выше, в которых один или более атомов водорода замещены атомами фтора, хлора, брома или иода или их комбинациями. Когда два или более атомов водорода могут быть замещены атомами галогена, которые являются одинаковыми друг с другом (например, дифторметил). Когда два или более атомов водорода могут быть замещены атомами галогена, которые не являются одинаковыми друг с другом (например, 1-хлор-1-фтор-1-иодэтил). Неограничивающие примеры галогеналкильных групп представляют собой фторметил и бромэтил. Неограничивающий пример галогеналкенильной группы представляет собой бромэтенил. Неограничивающий пример галогеналкинильной группы представляет собой хлорэтинил.
Используемые в настоящем описании термины «цикл», «циклический», «кольцо» и «членное кольцо», отдельно или в комбинации, относятся к любой ковалентно закрытой структуре, включая алициклические, гетероциклические, ароматические, гетероароматические и полициклические конденсированные или неконденсированные кольцевые системы, как описано в настоящей заявке. Кольца могут быть необязательно замещенными. Кольца могут образовывать часть конденсированной кольцевой системы. Термин «членный» предусмотрен для обозначения числа скелетных атомов, которые составляют кольцо. Таким образом, исключительно для примера циклогексан, пиридин, пиран и пиримидин являются шестичленными кольцами и циклопентан, пиррол, тетрагидрофуран и тиофен являются пятичленными кольцами.
Используемый в настоящем описании термин «конденсированный», отдельно или в комбинации, относится к циклическим структурам, в которых два или более колец разделяют одну или более связей.
Используемый в настоящем описании термин «циклоалкил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному, насыщенному, углеводородному монорадикальному кольцу, содержащему от трех до приблизительно пятнадцати кольцевых углеродных атомов или от трех до приблизительно десяти кольцевых углеродных атомов, хотя может включать дополнительные некольцевые углеродные атомы в качестве заместителей (например, метилциклопропил).
Неограничивающий пример «циклоалкила» включает азинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранил, диоксанил, 1,3-диоксоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинил, имидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексил, 3-азабицикло[4.1.0]гептил, 3Н-индолил и хинолизинил и подобные. Термины также включают все кольцевые формы углеводов, включая, но не ограничиваясь ими, моносахариды, дисахариды и олигосахариды.
n
Используемый в настоящем описании термин «ароматический» относится к находящемуся в одной плоскости циклическому или полициклическому кольцевому фрагменту, имеющему делокализованную электронную систему, содержащую 4n+2  электронов, где n представляет собой целое число. Ароматические кольца могут быть образованы с помощью пяти, шести, семи, восьми, девяти или более девяти атомов. Ароматические соединения могут быть необязательно замещены и могут быть моноциклическим или конденсированным полициклическим кольцом. Термин ароматический охватывает как все содержащие углерод кольца (например, фенил), так и кольца, содержащие один или более гетероатомов (например, пиридин).
Используемый в настоящем описании термин «арил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенному ароматическому углеводородному радикалу, содержащему от шести до приблизительно двадцати атомов углерода в кольце, и включает конденсированные и неконденсированные арильные кольца. Конденсированный арильный кольцевой радикал содержит от двух до четырех конденсированных колец, в котором кольцо присоединения представляет собой арильное кольцо и другие отдельные кольца могут быть алициклическими, гетероциклическими, ароматическими, гетероароматическими или их любой комбинацией. Кроме того, термин арил включает конденсированные и неконденсированные кольца, содержащие от шести до приблизительно двенадцати атомов углерода в кольце, также как кольца, содержащие от шести до приблизительно десяти атомов углерода в кольце. Неограничивающий пример отдельной кольцевой арильной группы включает фенил; конденсированной кольцевой арильной группы включает нафтил, фенантренил, антраценил, азуленил; и неконденсированной биарильной группы включает бифенил.
N
Используемый в настоящем описании термин «гетероарил», отдельно или в комбинации, относится к необязательно замещенным ароматическим монорадикалам, содержащим от приблизительно пяти до приблизительно двадцати скелетных кольцевых атомов, где один или более кольцевых атомов представляют собой гетероатом, независимо выбранный из кислорода, азота, серы, фосфора, кремния, селена и олова, но не ограничиваясь данными атомами, и при условии, что кольцо указанной группы не содержит двух соседних атомов О или S. Когда два или более гетероатомов присутствуют в кольце, два или более гетероатомов могут быть такими же, как каждый другой, или некоторые или все из двух или более гетероатомов каждый может отличаться от других. Термин гетероарил необязательно включает замещенные конденсированные и неконденсированные гетероарильные радикалы, содержащие, по меньшей мере, один гетероатом. Термин гетероарил также включает конденсированные и неконденсированные гетероарилы, содержащие от пяти до приблизительно двенадцати скелетных кольцевых атомов, также как содержащие от пяти до приблизительно десяти скелетных кольцевых атомов. Присоединение к гетероарильной группе может осуществляться через атом углерода или гетероатом. Таким образом, в качестве неограничивающего примера имидазольная группа может быть присоединена к исходной молекуле с помощью любого из ее атомов углерода (имидазол-2-ил, имидазол-4-ил или имидазол-5-ил) или ее атомов азота (имидазол-1-ил или имидазол-3-ил). Подобным образом, гетероарильная группа дополнительно может быть замещена при любом или всех ее атомах углерода и/или любом или всех ее гетероатомах. Конденсированный гетероарильный радикал может содержать от двух до четырех конденсированных колец, где кольцо присоединения представляет собой гетероароматическое кольцо, и другие отдельные кольца могут быть алициклическими, гетероциклическими, ароматическими, гетероароматическими или их любой комбинацией. Неограничивающий пример отдельной кольцевой гетероарильной группы включает пиридил; конденсированных кольцевых гетероарильных групп включает бензимидазолил, хинолинил, акридинил; и неконденсированной бигетероарильной группы включает бипиридинил. Дополнительные примеры гетероарилов включают, но не ограничиваются ими, фуранил, тиенил, оксазолил, акридинил, феназинил, бензимидазолил, бензофуранил, бензоксазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензотиофенил, бензоксадиазолил, бензотриазолил, имидазолил, индолил, изоксазолил, изохинолинил, индолизинил, изотиазолил, изоиндолилоксадиазолил, индазолил, пиридил, пиридазил, пиримидил, пиразинил, пирролил, пиразолил, пуринил, фталазинил, птеридинил, хинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, триазолил, тетразолил, тиазолил, триазинил, тиадиазолил, и подобные, и их оксиды, такие как, например, пиридил--оксид и подобные.
1
6
1
6
Используемый в настоящем описании термин «гетероциклил», отдельно или в комбинации, относится в совокупности к гетероалициклическим и гетероарильным группам. В настоящем описании, во всех случаях, когда указывается число атомов углерода в гетероцикле (например, С-Сгетероцикл), по меньшей мере, один неуглеродный атом (гетероатом) должен присутствовать в кольце. Обозначения, такие как «С-Сгетероцикл» относятся только к числу атомов углерода в кольце и не относятся к общему числу атомов в кольце. Обозначения, такие как «4-6-членный гетероцикл» относятся к общему числу атомов, которые содержатся в кольце (то есть четырех-, пяти- или шестичленное кольцо, в котором, по меньшей мере, один атом представляет собой атом углерода, по меньшей мере, один атом представляет собой гетероатом и остальные два-четыре атома представляют собой или атомы углерода, или гетероатомы). Для гетероциклов, содержащих два или более гетероатомов, данные два или более гетероатомов могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга. Гетероциклы могут быть необязательно замешенными. Неароматические гетероциклические группы включают группы, содержащие только три атома в кольце, тогда как ароматические гетероциклические группы должны содержать, по меньшей мере, пять атомов в кольце. Присоединение (т.е. присоединение к исходной молекуле или дополнительное замещение) к гетероциклу может осуществляться через гетероатом или атом углерода. Используемый в настоящем описании термин «алкокси», отдельно или в комбинации, относится к алкилэфирному радикалу, O-алкилу, включая О-алифатические и О-карбоциклические группы, в которых алкильные, алифатические и карбоциклические группы могут быть необязательно замещенными и в которых термины алкил, алифатический и карбоцикл являются такими, как определено в настоящем описании. Неограничивающие примеры алкоксирадикалов включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси и подобные.
Используемый в настоящем описании термин «фармацевтическая композиция» относится к биологически активному соединению, необязательно смешанному, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым химическим компонентом, таким как, но не ограничиваясь ими, носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или эксципиенты.
Используемый в настоящем описании термин «сольват» относится к комбинации соединения данного изобретения с молекулой растворителя, образованной сольватацией. В некоторых ситуациях сольват относится к гидрату, то есть молекула растворителя представляет собой молекулу воды, комбинация соединения данного изобретения и воды образует гидрат.
1-4
4
Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к солям, которые сохраняют биологическую эффективность свободных кислот и оснований указанного соединения и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Соединения, описанные в настоящей заявке, могут содержать кислотные или основные группы и, следовательно, могут взаимодействовать с любым из целого ряда неорганических или органических оснований и неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемой соли. Данные соли могут быть получены in situ во время окончательного выделения и очистки соединений изобретения или отдельно взаимодействием очищенного соединения в его форме свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделением полученной таким образом соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли, полученные взаимодействием соединений, описанных в настоящей заявке, с минеральной или органической кислотой или неорганическим основанием, такие соли, включающие ацетат, акрилат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, бутин-1,4-диоат, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорбензоат, хлорид, цитрат, циклопентанпропионат, деканоат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гексин-1,6-диоат, гидроксибензоат, гидроксибутират, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, иодид, изобутират, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, манделат, метафосфат, метоксибензоат, метилбензоат, моногидрофосфат, 1-нафталинсульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, пиросульфат, пирофосфат, пропиолат, фталат, фенилацетат, фенилбутират, пропансульфонат, салицилат, сукцинат, сульфат, сульфит, суберат, себацат, сульфонат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и ксилолсульфонат. Другие кислоты, такие как щавелевая, хотя сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы при получении солей, пригодных в качестве промежуточных соединений при получении соединений изобретения и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей (См. примеры Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19). Кроме того, данные соединения, описанные в настоящей заявке, которые могут содержать группу свободной кислоты, могут взаимодействовать с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, с аммиаком или с фармацевтически приемлемым органическим первичным, вторичным или третичным амином. Типичные щелочные или щелочно-земельные соли включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния и алюминия и подобные. Иллюстрирующие примеры оснований включают гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид холина, карбонат натрия, IVʹ (Cалкил) и подобные. Типичные органические амины, пригодные для образования основно-аддитивных солей, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и подобные. Следует понимать, что соединения, описанные в настоящей заявке, также включают кватернизацию любых основных азотсодержащих групп, которые они могут содержать. Водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты могут быть получены с помощью такой кватернизации. См., например, Berge et al., выше.
Используемый в настоящем описании термин «полиморфная модификация» или «полиморфизм» относится к соединению данного изобретения, присутствующему в различных формах кристаллической решетки.
Используемый в настоящем описании термин «сложный эфир» относится к производному соединения данного изобретения, полученному из оксокислотной группы и гидроксильной группы, или одна из которых может присутствовать в соединении данного изобретения.
Используемый в настоящем описании термин «таутомер» относится к изомеру, легко взаимопревращающемуся из соединения данного изобретения, например, миграцией атома водорода или протона.
Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемое производное или пролекарство» относится к любой фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру, соли сложного эфира или другому производному соединения данного изобретения, которое при введении реципиенту способно обеспечить или непосредственно, или опосредованно соединение данного изобретения или его фармацевтически активный метаболит или остаток. Наиболее предпочтительные производные или пролекарства представляют собой такие, которые увеличивают биодоступность соединений данного изобретения, когда такие соединения вводят пациенту (например, позволяя перорально вводимому соединению более легко всасываться в кровь) или которые увеличивают доставку исходного соединения биологическому отделу (например, мозгу или лимфатической системе).
N
N
N
Фармацевтически приемлемые пролекарства соединений, описанных в настоящей заявке, включают, но не ограничиваются ими, сложные эфиры, карбонаты, тиокарбонаты, -ацилпроизводные, -ацилоксиалкилпроизводные, четвертичные производные третичных аминов, -основания Манниха, основания Шиффа, конъюгаты аминокислот, фосфатные эфиры, соли металлов и эфиры сульфокислоты. Различные формы пролекарств хорошо известны в данной области техники. См., например, Design of Prodrugs, Bundgaard, A. Ed., Elseview, 1985 и Method in Enzymology, Widder, K. et al., Ed.; Academic, 1985, vol. 42, p. 309-396; Bundgaard, H. «Design and Application of Prodrugs» in A Textbook of Drug Design and Development, Krosgaard-Larsen and H. Bundgaard, Ed., 1991, Chapter 5, p. 113-191; и Bundgaard, H., Advanced Drug Delivery Review, 1992, 8, 1-38, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки. Описанные в настоящей заявке пролекарства включают, но не ограничиваются ими, следующие группы и комбинации данных групп; полученные из амина пролекарства: пролекарства на основе гидроксигрупп включают, но не ограничиваются ими, ацилоксиалкильные эфиры, алкоксикарбонилоксиалкильные эфиры, алкильные эфиры, арильные эфиры и содержащие дисульфид эфиры.
50
50
50
Используемый в настоящем описании термин «ингибитор TRK» относится к соединению, которое проявляет IC по отношению к активности Trk не более чем приблизительно 100 мкм активности, не более чем приблизительно 50 мкM, как измерено в анализе пан-TRK киназы, описанном в общем случае в настоящей заявке. «IC» представляет собой такую концентрацию ингибитора, которая уменьшает активность фермента (например, Trk) до половины от максимального уровня. Было обнаружено, что соединения, описанные в настоящей заявке, демонстрируют ингибирование в отношении Trk. Соединения настоящего изобретения предпочтительно проявляют IC по отношению к Trk не более чем приблизительно 10 мкМ, более предпочтительно, не более чем приблизительно 5 мкМ, предпочтительно, не более чем приблизительно 1 мкМ и наиболее предпочтительно, не более чем приблизительно 200 нМ, как измерено в анализе киназы Trk, описанном в настоящей заявке.
50
Используемый в настоящем описании термин «селективный», «селективно» или «селективность» относится к соединению данного изобретения, имеющему более низкое значение IC для фермента Trk по сравнению с любыми другими ферментами (например, по меньшей мере, в 2, 5, 10 или более раз ниже).
Используемый в настоящем описании термин «объект», «пациент» или «лицо» в отношении лиц, страдающих от нарушения, состояния и подобного, охватывает млекопитающих и не относящихся к млекопитающим. Примеры млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, любого представителя класса млекопитающих: человека, приматов кроме человека, таких как шимпанзе и других видов человекообразных обезьян и обезьян; сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, лошади, овцы, козы, свиньи; домашних животных, таких как кролики, собаки и кошки; лабораторных животных, в том числе грызунов, таких как крысы, мыши и морские свинки и подобные. Примеры животных, не относящихся к млекопитающим, включают, но не ограничиваются ими, птиц, рыб и подобных. В одном варианте осуществления способов и композиций, представленных в настоящем описании, млекопитающим является человек.
Используемые в настоящем описании термины «лечить», «лечащий» или «лечение» и другие грамматические эквиваленты включают облегчение, смягчение или уменьшение интенсивности симптомов заболевания или состояния, предотвращение дополнительных симптомов, уменьшение интенсивности или предотвращение лежащих в основе метаболических причин симптомов, ингибирование заболевания или состояния, например, прекращение развития заболевания или состояния, облегчение заболевания или состояния, вызывание ремиссии заболевания или состояния, облегчение состояния, вызванного заболеванием или состоянием, или прекращение симптомов заболевания или состояния и предназначены для включения профилактики. Термины дополнительно включают достижение терапевтического эффекта и/или профилактического эффекта. Под терапевтическим эффектом подразумевается устранение или уменьшение интенсивности основного нарушения, подлежащего лечению. Кроме того, терапевтический эффект достигается при устранении или уменьшении интенсивности одного или более физиологических симптомов, связанных с основным нарушением, так что у пациента наблюдается улучшение несмотря на то, что пациент все еще может страдать от основного нарушения. Для профилактического эффекта композиции могут вводиться пациенту с риском развития конкретного заболевания или пациенту, жалующемуся на один или более физиологических симптомов заболевания, даже если диагноз данного заболевания может быть не поставлен.
Используемые в настоящем описании термины «эффективное количество», «терапевтически эффективное количество» или «фармацевтически эффективное количество» относятся к достаточному количеству, по меньшей мере, одного агента или соединения, подлежащего введению, которое будет ослаблять до некоторой степени один или более симптомов заболевания или состояния, подлежащего лечению. Результатом может быть ослабление и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания или любое другое желательное изменение биологической системы. Например, «эффективное количество» для терапевтических целей представляет собой количество композиции, содержащей соединение, как раскрыто в настоящем описании, необходимое для обеспечения клинически значимого ослабления заболевания. Соответствующее «эффективное» количество в каждом отдельном случае может быть определено с использованием методик, таких как исследование с эскалацией дозы.
Используемые в настоящем описании термины «вводить», «вводящий», «введение» и подобные относятся к способам, которые могут быть использованы для обеспечения доставки соединений или композиций к желаемому месту биологического действия. Данные способы включают, но не ограничиваются ими, пероральные пути, интрадуоденальные пути, парентеральную инъекцию (включая внутривенную, подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутрисосудистую или инфузию), местное и ректальное введение. Специалист в данной области техники знаком с методиками введения, которые могут быть использованы с соединениями и способами, описанными в настоящей заявке, например, как рассмотрено в Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; and Remington's, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa. В предпочтительных вариантах осуществления соединения и композиции, описанные в настоящей заявке, вводят перорально.
Используемый в настоящем описании термин «приемлемый» применительно к составу, композиции или ингредиенту означает не имеющий постоянного негативного воздействия на общее состояние здоровья объекта, подлежащего лечению.
Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый» относится к материалу, такому как носитель или разбавитель, который не подавляет биологическую активность или свойства соединений, описанных в настоящей заявке, и является относительно нетоксичным, то есть материал может быть введен пациенту, не вызывая нежелательных биологических эффектов или не взаимодействуя повреждающим образом с любым из компонентов композиции, в которой он содержится.
Используемый в настоящем описании термин «носитель» относится к относительно нетоксичным химическим соединениям или агентам, которые способствуют введению соединения в клетки или ткани.
Используемый в настоящем описании термин «агонист» относится к молекуле, такой как соединение, лекарственное средство, активатор ферментов или модулятор гормонов, которая усиливает активность другой молекулы или активность рецепторного участка.
Используемый в настоящем описании термин «антагонист» относится к молекуле, такой как соединение, лекарственное средство, ингибитор ферментов или модулятор гормонов, которая ослабляет или предотвращает действие другой молекулы или активность рецепторного участка.
Используемый в настоящем описании термин «модулировать» означает взаимодействие с мишенью или непосредственно, или опосредованно таким образом, чтобы изменять активность мишени, включая, исключительно для примера, повышение активности мишени, ингибирование активности мишени, ограничение активности мишени или расширение активности мишени.
Используемый в настоящем описании термин «модулятор» относится к молекуле, которая взаимодействует с мишенью или непосредственно, или опосредованно. Взаимодействия включают, но не ограничиваются ими, взаимодействия агониста и антагониста.
Используемые в настоящем описании термины «усиливать» или «усиление» означают увеличение или продление или активности, или продолжительности желательного эффекта. Таким образом, в отношении усиления эффекта терапевтических агентов термин «усиление» относится к способности увеличивать или продлять или активность, или продолжительность эффекта других терапевтических агентов в системе.
Используемый в настоящем описании термин «усиливающее эффективность количество» относится к количеству, достаточному для усиления эффекта другого терапевтического агента в желаемой системе.
Используемые в настоящем описании термины «фармацевтическая комбинация», «введение дополнительной терапии», «введение дополнительного терапевтического агента» и подобные относятся к фармацевтической терапии, являющейся результатом смешивания или комбинирования более чем одного активного ингредиента, включая как фиксированные, так и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин «фиксированная комбинация» означает, что, по меньшей мере, одно из соединений, описанных в настоящей заявке, и, по меньшей мере, один сопутствующий агент вводят пациенту одновременно в виде одного препарата или дозировки. Термин «нефиксированная комбинация» означает, что, по меньшей мере, одно из соединений, описанных в настоящей заявке, и, по меньшей мере, один сопутствующий агент вводят пациенту в виде отдельных препаратов или одновременно, совместно, или последовательно с варьирующимися промежуточными временными интервалами, при этом такое введение обеспечивает эффективные уровни двух или более соединений в организме пациента. Это также применимо к вариантам терапии по типу коктейля, например, к введению трех или более активных ингредиентов.
Используемые в настоящем описании термины «совместное введение», «вводимый в комбинации с» и их грамматические эквиваленты или подобные предназначены охватить введение выбранных терапевтических агентов одному пациенту и предназначены включить схемы лечения, в которых агенты вводят одинаковым или различным путем введения или в одинаковое или различное время. В некоторых вариантах осуществления соединения, описанные в настоящей заявке, будут введены совместно с другими агентами. Данные термины охватывают введение двух или более агентов животному, таким образом, что оба агента и/или их метаболиты присутствуют в организме животного в одно и то же время. Они включают одновременное введение в разных композициях, введение в разное время в разных композициях и/или введение в композиции, в которой присутствуют оба агента. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления соединения изобретения и другой агент(ы) вводят в виде одной композиции.
Используемый в настоящем описании термин «метаболит» относится к производному соединения, которое образуется, когда соединение метаболизируется.
Используемый в настоящем описании термин «активный метаболит» относится к биологически активному производному соединения, которое образуется, когда соединение метаболизируется.
Используемый в настоящем описании термин «метаболизированный» относится к сумме процессов (включая, но не ограничиваясь ими, реакции гидролиза и реакции, катализированные ферментами), посредством которых конкретное вещество преобразуется в организме. Таким образом, ферменты могут производить специфические структурные изменения в соединении. Например, цитохром Р450 катализирует ряд окислительных и восстановительных реакций, тогда как уридиндифосфатглюкуронилтрансферазы катализируют перенос активированной молекулы глюкуроновой кислоты в ароматические спирты, алифатические спирты, карбоновые кислоты, амины и свободные сульфгидрильные группы. Дополнительная информация о метаболизме может быть получена из The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996).
Новые соединения
В соответствии с вариантами осуществления изобретения новые химические соединения включают соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
Формула I
1
3
2
2
В некоторых вариантах осуществления R Формулы I представляет собой фенильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, или 5-6-членное гетероарильное кольцо, необязательно замещенное одной или более группами заместителей, в которой одна или более групп заместителей независимо выбраны из группы, состоящей из галогена, -CF, -CHF, NH, гидроксила, линейного C1-C4алкила, разветвленного C1-C4алкила, линейного C1-C4алкокси и разветвленного C1-C4алкокси.
2
3
4
5
3
4
5
3
4
4
5
3
5
4
5
5
2
2
2
2
2
2
2
3
2
3
2
В некоторых вариантах осуществления R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C4алкила и разветвленного линейного C1-C4алкила. Кроме того, в Формуле I Х выбран из группы, состоящей из -CH-, -CHCH-, -CHO-, -CHNH-, -CHN(C1-C4алкила)-, -CH(F)-, -CF-, -CH(Cl)-, -CH(OH)-, -CH(OCH)-, -CH(NH)- или -C(CH)-. Кроме того, в Формуле I Q выбран из группы, состоящей из -CH=CRC(O)NRR, -CH=CRNRC(O)R, -CH=CRNRC(O)NRR, -CH=CRR, -CCC(O)NRR, -CCCR и .
3
В некоторых вариантах осуществления R выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, линейного C1-C6алкила и разветвленного C1-C6алкила.
4
5
В некоторых вариантах осуществления -NRR или образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, или не образует кольцевую структуру, причем гетероциклическое кольцо является или гетероарильным, или гетероциклоалкильным кольцом.
4
5
4
5
В вариантах осуществления, в которых -NRR образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, 4-7-членное гетероциклическое кольцо включает необязательный второй гетероатом в дополнение к азоту -NRR и необязательно замещено одной или более группами заместителей, независимо выбранными из группы, состоящей из линейного С1-С6алкила, разветвленного C1-C6алкила, гидроксила, карбоновой кислоты, линейной C1-C4алкилкарбоновой кислоты и разветвленной С1-С4алкилкарбоновой кислоты.
4
5
4
5
В вариантах осуществления, в которых -NRR не образует кольцевую структуру, R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-С6алкила и разветвленного С1-С6алкила, и R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C6алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, разветвленного C1-C6алкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом, и С1-С6циклоалкила, необязательно замещенного, по меньшей мере, одним фтором или, по меньшей мере, одним гидроксилом.
1
2
3
4
6
6
6
2
В некоторых вариантах осуществления Y, Y, Y и Y каждый независимо выбран из группы, состоящей из -CH, N, O, S, -CR и -NR, в которой R выбран из группы, состоящей из водорода, линейного С1-С4алкила, разветвленного C1-C4алкила, 5-6-членного арильного кольца, 5-6-членного гетероарильного кольца, 3-7-членного гетероциклоалкильного кольца, 3-7-членного циклоалкильного кольца, -NHCO-(арильного кольца) и -CHCO-(С3-С6-членного гетероциклического кольца).
В некоторых вариантах осуществления соединение Формулы I представляет собой соединение Формулы II, III или IV:
Формула II
Формула III
Формула IV
В некоторых вариантах осуществления некоторые соединения Формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, сольват, полиморфная модификация, сложный эфир, таутомер или пролекарство имеют структуру, в которой
Q представляет собой 5-6-членные гетероарильные кольца, включая, но не ограничиваясь ими, следующие структуры:
и таутомеры вышеуказанных.
Дополнительные примеры Q включают следующие структуры:
.
5
3
2
2
2
2
2
3
2
3
3
3
В определенных вариантах осуществления R выбран из метила, этила, пропила, изопропила, трет-бутила, изобутила, -C(CH)CHF, -CHCF, CHCHF, CF, CHCF и CH(CH)CF.
5
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
3
3
2
2
2
3
2
3
2
2
3
2
2
2
3
2
2
3
2
2
3
3
2
2
3
2
2
2
3
2
2
2
2
3
2
3
3
3
2
2
3
2
3
2
3
3
2
3
2
3
2
2
3
2
3
3
2
2
3
2
3
2
3
3
3
2
2
2
2
3
В определенных вариантах осуществления R представляет собой -(C1-C6)гидроксиалкил или [(C1-C6)алкокси](C1-C6)алкил-. Примеры включают -CHCHOH, -CHCHCHOH, -CHCHCHCHOH, -CHCH(OH)CH, -C(CH)CHOH, -CHC(CH)OH, -CH(CH)CHOH, -CHC(CH)CHOH, -CH(CHOH)CH(CH), -CH(CHCH)CHOH, -CH(CHOH)C(CH), -CHCHOCH, -CHCHCHOCH, -CHCHCHCHOCH, -CHCH(OCH)CH, -C(CH)CHOCH, -CHC(CH)OCH, -CH(CH)CHOCH, -CHC(CH)CHOCH, -CH(CHOCH)CH(CH), -CH(CHCH)CHOCH и -CH(CHOCH)C(CH). Определенный пример представляет собой -CHCHOH или CHCHOCH.
5
4
В одном варианте осуществления R представляет собой -(C1-C6)гидроксиалкил или [(C1-C6)алкокси](C1-C6)алкил- и R представляет собой водород.
5
4
В одном варианте осуществления R представляет собой -(C1-C6)гидроксиалкил или [(C1-C6)алкокси](C1-C6)алкил- и R представляет собой -(С1-С6)алкил.
5
5
4
5
4
2
2
3
2
2
2
2
2
3
2
2
3
2
2
В определенных вариантах осуществления R представляет собой -(С2-С6)дигидроксиалкил. Примеры включают -CHCH(OH)CHOH, -C(CH)(CHOH), -CH(CHOH) и -CH(CHOH)(CHOHCH). Определенные примеры включают -CHCH(OH)CHOH и -C(CH)(CHOH). В одном варианте осуществления R представляет собой -(С2-С6)дигидроксиалкил и R представляет собой водород. В одном варианте осуществления R представляет собой -(С2-С6)дигидроксиалкил и R представляет собой -(С1-С6)алкил.
5
4
5
2
2
2
2
2
2
3
2
3
2
2
2
3
2
2
2
3
2
3
3
В определенных вариантах осуществления R представляет собой -O(С1-С6)алкил, который необязательно замещен ОН или (С1-С4)алкокси, и R представляет собой водород. Примеры R включают -OMe, -OEt, -OCHCHOH, -OCHCHCHOH, -OCHCH(OH)CH, -OCHC(CH)OH, -OCHCHOCH, -OCHCHCHOCH и -OCHCH(OCH)CH.
5
В определенных вариантах осуществления R представляет собой:
5
В определенных вариантах осуществления R представляет собой:
4
5
В определенных вариантах осуществления NRR образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, содержащее кольцевой атом азота и необязательно имеющее второй кольцевой гетероатом, выбранный из N и O, в котором указанное кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из (С1-С6)алкила, ОН, СООН и (С1-С3алкил)СООН. В определенных вариантах осуществления гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним или двумя из указанных заместителей. Определенные примеры включают, но не ограничиваются ими, следующие структуры:
1
3
2
2
2
В некоторых вариантах осуществления R представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или более заместителями, независимо выбранными из галогена, (С1-С4)алкокси, -CF, -CHF, -O(C1-C4алкила), -(С1-С4)алкила и NH, или 5-6-членное гетероарильное кольцо, содержащее кольцевой гетероатом, выбранный из N и S, в котором указанное гетероарильное кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из галогена, O(C1-C4алкила), -(С1-С4)алкила и NH, или пирид-2-он-3-ильное кольцо, необязательно замещенное одним или более заместителями, независимо выбранными из галогена и (С1-С4)алкила. Определенные примеры включают, но не ограничиваются ими, следующие структуры:
В вариантах осуществления Формулы I, II, III и IV включают соединения, показанные ниже:
Когда соединения, раскрытые в настоящем описании, имеют, по меньшей мере, один хиральный центр, они могут существовать в виде отдельных энантиомеров и диастереомеров или в виде смесей таких изомеров, включая рацематы. Разделение отдельных изомеров или селективный синтез отдельных изомеров осуществляется путем применения различных способов, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Если не указано иначе, все такие изомеры и их смеси включены в объем соединений, раскрытых в настоящем описании. Кроме того, соединения, раскрытые в настоящем описании, могут существовать в одной или более кристаллических или аморфных формах. Если не указано иначе, все такие формы включены в объем соединений, раскрытых в настоящем описании, включая любые полиморфные формы. Кроме того, некоторые из соединений, раскрытых в настоящем описании, могут образовывать сольваты с водой (то есть гидраты) или стандартными органическими растворителями. Если не указано иначе, такие сольваты включены в объем соединений, раскрытых в настоящем описании.
Специалисту в данной области техники будет очевидно, что некоторые структуры, описанные в настоящей заявке, могут представлять собой резонансные формы или таутомеры соединений, которые могут быть достаточно представлены другими химическими структурами, даже в случае кинетически; специалист в данной области техники признает, что такие структуры могут представлять только очень малую часть образца такого соединения(й). Такие соединения рассматриваются в рамках изображенных структур, хотя такие резонансные формы или таутомеры не представлены в настоящем описании.
Изотопы могут присутствовать в описанных соединениях. Каждый химический элемент, как представлено в структуре соединения, может включать любой изотоп указанного элемента. Например, в структуре соединения атом водорода может быть явно раскрыт или понимается как присутствующий в соединении. При любом положении соединения, в котором атом водорода может присутствовать, атом водорода может быть любым изотопом водорода, включая, но не ограничиваясь ими, водород-1 (протий) и водород-2 (дейтерий). Таким образом, ссылка в настоящем описании на соединение охватывает все возможные изотопные формы, если из контекста явно не следует иное.
Фармацевтические композиции, лечение заболеваний, введение
Новые соединения, раскрытые выше, являются ингибиторами TrkA, TrkB и/или TrkC и являются пригодными для лечения боли, рака и других гиперпролиферативных заболеваний. В одном аспекте настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию, включающую одно или более химических соединений Формулы I или их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, полиморфных модификаций, сложных эфиров, таутомеров или пролекарств для применения при лечении боли, рака и других гиперпролиферативных заболеваний.
В вариантах осуществления фармацевтическая композиция включает эффективное количество соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства. Кроме того, фармацевтическая композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель, адъюванты и/или эксципиенты. В некоторых вариантах осуществления такая композиция может содержать, по меньшей мере, один из консервантов, агентов для задержки поглощения, наполнителей, связующих веществ, адсорбентов, буферов, разрыхлителей, солюбилизирующих агентов и других носителей, адъювантов и/или эксципиентов в качестве инертных ингредиентов. Композиция может быть приготовлена с помощью способа, хорошо известного в данной области техники.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в форме, пригодной для перорального введения. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в форме таблетки, капсулы, пилюли, порошка, состава с замедленным высвобождением, раствора и суспензии. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для парентерального введения, такой как стерильный раствор, суспензия или эмульсия; для местного введения в виде мази или крема или для ректального введения в виде суппозитория.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в форме, пригодной для перорального введения. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в форме таблетки, капсулы, пилюли, порошка, составов с замедленным высвобождением, раствора и суспензии для перорального введения, для парентерального введения в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии, для местного введения в виде мази или крема или для ректального введения в виде суппозитория. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных дозировок. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтический носитель, эксципиент и/или адъювант.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции объекту для лечения боли, воспаления, нейродегенеративных заболеваний, определенных инфекционных заболеваний, рака, других гиперпролиферативных заболеваний или состояний, модулируемых каскадом Trk, у млекопитающего, включая человека.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования фермента Trk. Способ включает взаимодействие указанного фермента Trk с количеством композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство, достаточным для ингибирования указанного фермента, в котором указанный фермент ингибируется. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу селективного ингибирования фермента Trk.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства в приготовлении фармацевтической композиции для ингибирования фермента Trk.
В вариантах осуществления фермент Trk представляет собой Trk-киназу. В некоторых вариантах осуществления фермент Trk представляет собой TrkA. В некоторых вариантах осуществления фермент Trk представляет собой TrkB. В некоторых вариантах осуществления фермент Trk представляет собой TrkC.
В некоторых вариантах осуществления соединения Формулы I могут селективно ингибировать фермент TrkA, фермент TrkB или фермент TrkC. В некоторых других вариантах осуществления соединения Формулы I могут не иметь селективность от фермента TrkA, фермента TrkB и фермента TrkC.
В некоторых вариантах осуществления взаимодействие происходит в пределах клетки. В других или дополнительных вариантах осуществления клетка представляет собой клетку млекопитающего. В других или дополнительных вариантах осуществления клетка млекопитающего представляет собой клетку человека. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент Trk ингибируется с помощью композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения Trk-опосредованного нарушения у объекта, страдающего от указанного нарушения, включающему введение указанному объекту эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства в приготовлении фармацевтической композиции для лечения Trk-опосредованного нарушения.
В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция находится в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных дозировок. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,002 до приблизительно 6 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,005 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день.
В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция предназначена для введения млекопитающему.
В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, одно терапевтическое средство. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств.
В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство представляет собой таксол, бортезомиб или оба. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическую композицию вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 1%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 2%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 3%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 4%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 5%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 10%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 20%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 25%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 30%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 40%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 50%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 60%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 70%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 75%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 80%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется, по меньшей мере, приблизительно на 90%. В других или дополнительных вариантах осуществления фермент ингибируется по существу полностью.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день.
В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день.
В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от Trk-опосредованного нарушения, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств.
В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста.
В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из таксола, бортезомиба или обоих. В некоторых вариантах осуществления Trk-опосредованное нарушение выбрано из группы, состоящей из воспалительных заболеваний, инфекций, аутоиммунных нарушений, инсульта, ишемии, заболевания сердца, неврологических нарушений, фиброгенных нарушений, пролиферативных нарушений, гиперпролиферативных нарушений, нераковых гиперпролиферативных нарушений, опухолей, лейкозов, новообразований, рака, карцином, метаболических заболеваний, злокачественного заболевания, сосудистого рестеноза, псориаза, атеросклероза, ревматоидного артрита, остеоартрита, сердечной недостаточности, хронической боли, невропатической боли, сухости глаза, закрытоугольной глаукомы и открытоугольной глаукомы.
В других или дополнительных вариантах осуществления Trk-опосредованное нарушение представляет собой воспалительное заболевание. В других или дополнительных вариантах осуществления Trk-опосредованное нарушение представляет собой гиперпролиферативное заболевание. В других или дополнительных вариантах осуществления Trk-опосредованное нарушение выбрано из группы, состоящей из опухолей, лейкозов, новообразований, рака, карцином и злокачественного заболевания. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак почек, рак толстой кишки или лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления фиброгенетическое нарушение представляет собой склеродермию, полимиозит, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, цирроз печени, келоидное образование, интерстициальный нефрит или фиброз легких. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу разрушения, ингибирования роста или уничтожения раковой клетки, включающему взаимодействие указанной клетки с количеством композиции, эффективным для разрушения, ингибирования роста или уничтожения указанной клетки, композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства в приготовлении фармацевтической композиции для разрушения и/или ингибирования роста или уничтожения раковой клетки.
В некоторых вариантах осуществления раковые клетки содержат раковые клетки мозга, молочной железы, легких, яичников, поджелудочной железы, простаты, почек или толстой кишки. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию вводят, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство представляет собой таксол, бортезомиб или оба. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств. В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевые средства выбраны из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста.
В некоторых вариантах осуществления раковые клетки разрушаются. В других или дополнительных вариантах осуществления 1% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 2% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 3% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 4% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 5% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 10% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 20% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 25% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 30% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 40% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 50% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 60% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 70% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 75% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 80% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 90% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления 100% раковых клеток разрушается. В других или дополнительных вариантах осуществления по существу все раковые клетки разрушаются.
В некоторых вариантах осуществления раковые клетки погибают. В других или дополнительных вариантах осуществления 1% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 2% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 3% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 4% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 5% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 10% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 20% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 25% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 30% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 40% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 50% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 60% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 70% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 75% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 80% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 90% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления 100% раковых клеток погибает. В других или дополнительных вариантах осуществления по существу все раковые клетки погибают.
В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 1%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 2%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 3%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 4%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 5%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 10%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 20%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 25%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 30%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 40%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 50%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 60%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 70%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 75%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 80%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 90%. В других или дополнительных вариантах осуществления рост раковых клеток ингибируется приблизительно на 100%. В других или дополнительных вариантах осуществления используется композиция, содержащая фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики пролиферативного заболевания у объекта, включающему введение указанному объекту эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства при приготовлении фармацевтической композиции для лечения или профилактики пролиферативного заболевания.
В некоторых вариантах осуществления пролиферативное заболевание представляет собой рак, псориаз, рестеноз, аутоиммунное заболевание или атеросклероз. В других или дополнительных вариантах осуществления пролиферативное заболевание представляет собой гиперпролиферативное заболевание. В других или дополнительных вариантах осуществления пролиферативное заболевание выбрано из группы, состоящей из опухолей, лейкозов, новообразований, рака, карцином и злокачественного заболевания. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак почек, рак толстой кишки или лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления фиброгенетическое нарушение представляет собой склеродермию, полимиозит, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, цирроз печени, келоидное образование, интерстициальный нефрит или фиброз легких. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак почек, рак толстой кишки или лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга или адренокортикальную карциному. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак яичников. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак поджелудочной железы. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак простаты. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак почек. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак толстой кишки. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой миелоидный лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой глиобластому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой фолликулярную лимфому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой пре-В-острый лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой хронический лимфоцитарный В-лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой мезотелиому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой мелкоклеточный рак.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств. В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из таксола, бортезомиба или обоих. В некоторых вариантах осуществления композицию вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона.
В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от пролиферативного заболевания, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики воспалительного заболевания у объекта, включающему введение указанному объекту эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства при приготовлении фармацевтической композиции для лечения или профилактики воспалительного заболевания.
В других или дополнительных вариантах осуществления воспалительное заболевание выбрано из хронических воспалительных заболеваний, ревматоидного артрита, спондилоартропатий, подагрического артрита, остеоартрита, ювенильного артрита, острого ревматоидного артрита, энтеропатического артрита, невропатического артрита, псориатического артрита, пиогенного артрита, атеросклероза, системной красной волчанки, воспалительного заболевания кишечника, синдрома раздраженного кишечника, язвенного колита, рефлюкс-эзофагита, болезни Крона, гастрита, астмы, аллергических реакций, респираторного дистресс-синдрома, панкреатита, хронической обструктивной болезни легких, фиброза легких, псориаза, экземы или склеродермии. В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления композицию вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона.
В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от воспалительного заболевания, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения или профилактики рака у объекта, включающему введение указанному объекту эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства при приготовлении фармацевтической композиции для лечения или профилактики рака.
В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак почек, рак толстой кишки или лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления фиброгенетическое нарушение представляет собой склеродермию, полимиозит, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, цирроз печени, келоидное образование, интерстициальный нефрит или фиброз легких. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга, рак молочной железы, рак легких, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, рак почек, рак толстой кишки или лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак мозга или адренокортикальную карциному. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак яичников. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак поджелудочной железы. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак простаты. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак почек. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой рак толстой кишки. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой миелоидный лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой глиобластому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой фолликулярную лимфому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой пре-В-острый лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой хронический лимфоцитарный В-лейкоз. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой мезотелиому. В других или дополнительных вариантах осуществления рак представляет собой мелкоклеточный рак.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств. В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из таксола, бортезомиба или обоих. В некоторых вариантах осуществления композицию вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона.
В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от рака, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу уменьшения размера опухоли, ингибирования увеличения размера опухоли, уменьшения пролиферации опухоли или предотвращения пролиферации опухоли у объекта, включающему введение указанному объекту эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства при приготовлении фармацевтической композиции для уменьшения размера опухоли, ингибирования увеличения размера опухоли, уменьшения пролиферации опухоли или предотвращения пролиферации опухоли.
В некоторых вариантах осуществления размер опухоли уменьшается. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 1%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 2%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 3%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 4%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 5%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 10%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 20%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 25%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 30%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 40%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 50%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 60%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 70%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 75%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 80%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 85%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 90%. В других или дополнительных вариантах осуществления размер опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 95%. В других или дополнительных вариантах осуществления опухоль устраняется. В некоторых вариантах осуществления размер опухоли не увеличивается.
В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 1%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 2%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 3%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 4%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 5%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 10%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 20%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 25%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 30%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 40%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 50%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 60%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 70%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 75%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 80%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 90%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли уменьшается, по меньшей мере, на 95%. В некоторых вариантах осуществления пролиферация опухоли предотвращается.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из группы цитотоксических средств, антиангиогенных средств и противоопухолевых средств.
В других или дополнительных вариантах осуществления противоопухолевое средство выбрано из группы, состоящей из алкилирующих средств, антиметаболитов, эпидофиллотоксинов; противоопухолевых ферментов, ингибиторов топоизомеразы, прокарбазинов, митоксантронов, координационных комплексов платины, модификаторов биологического ответа и ингибиторов роста, гормональных/антигормональных терапевтических средств и гемопоэтических факторов роста. В других или дополнительных вариантах осуществления терапевтическое средство выбрано из таксола, бортезомиба или обоих. В некоторых вариантах осуществления композицию вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона.
В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от рака, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу достижения эффекта у пациента, включающему введение эффективного количества композиции, содержащей соединение Формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, полиморфную модификацию, сложный эфир, таутомер или пролекарство, пациенту, в котором эффект выбран из группы, состоящей из ингибирования различных видов рака, иммунологических заболеваний и воспалительных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления эффект представляет собой ингибирование различных видов рака. В других или дополнительных вариантах осуществления эффект представляет собой ингибирование иммунологических заболеваний. В других или дополнительных вариантах осуществления эффект представляет собой ингибирование воспалительных заболеваний.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства при приготовлении фармацевтической композиции для ингибирования различных видов рака, иммунологических заболеваний и/или воспалительных заболеваний.
В некоторых вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации с дополнительной терапией. В других или дополнительных вариантах осуществления дополнительная терапия представляет собой лучевую терапию, химиотерапию или комбинацию обоих. В других или дополнительных вариантах осуществления композицию, содержащую соединение Формулы I, вводят в комбинации, по меньшей мере, с одним терапевтическим средством. В некоторых вариантах осуществления композицию вводят перорально, интрадуоденально, парентерально (включая внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисосудистое или путем инфузии), местно или ректально.
В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I находится в диапазоне от приблизительно 0,5 до приблизительно 50 мг/кг массы тела/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,001 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,01 до приблизительно 7 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,02 до приблизительно 5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,05 до приблизительно 2,5 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления количество соединения Формулы I представляет собой от приблизительно 0,1 до приблизительно 1 г/день. В других или дополнительных вариантах осуществления могут быть более чем достаточными уровни дозировки ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона. В других или дополнительных вариантах осуществления могут потребоваться уровни дозировки выше верхнего предела вышеуказанного диапазона.
В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде однократной дозы один раз в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят в виде многократных доз более одного раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят два раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят три раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят четыре раза в день. В других или дополнительных вариантах осуществления соединение Формулы I вводят более четырех раз в день. В некоторых вариантах осуществления объект, страдающий от рака, является млекопитающим. В других или дополнительных вариантах осуществления объект является человеком. В других или дополнительных вариантах осуществления вводят эффективное количество композиции, содержащей фармацевтически приемлемую соль соединения Формулы I.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения Формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата, полиморфной модификации, сложного эфира, таутомера или пролекарства.
Получение соединений Формулы I
Вышеуказанная схема предоставляет общие пути синтеза соединений Формулы I, II и IV. Ключевое промежуточное соединение 3 может быть получено с помощью реакции сочетания циклических соединений аминов с бициклическим гетероциклическим соединением 1, содержащим различные функциональные группы Q. Различные пятичленные гетероциклические фрагменты в соединениях Формулы I вводят с помощью реакции сочетания, конденсации или реакций циклизации из соединения 3. Соединения Формулы II могут быть получены из соединения 3, содержащего альдегидный фрагмент, посредством реакции HEW, гидролиза с последующей реакцией сочетания амида. В случае Формулы IV реакция Соногаширы с соединением иода 3 обеспечивала целевые соединения.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДИКИ
3
6
3
d
δ
1
ЯМР-спектры регистрировали в CDCl и ДМСО- растворе в 5 мм в.д. трубках (Norell, Inc. 507-HP) при 30°С и собирали на Varian VNMRS-400 при 400 МГц для H. Химические сдвиги () относятся к тетраметилсилану (ТМС=0,00 м.д.) и выражены в м.д. ЖХ/МС проводили в масс-спектрометрической ионной ловушке FINNIGAN Thermo LCQ Advantage MAX, Agilent LC 1200 серии (колонка: YMC Hydrosphere (C18, Ø4,6×50 мм, 3 мкм, 120 Å, 40°С), работая в ESI(+)-режиме ионизации; скорость потока=1,0 мл/мин. Подвижная фаза=0,01% гептафтормасляная кислота (ГФМК) и 1,0% изопропиловый спирт (ИПС) в воде или CHCN.
Пример 1: Получение промежуточного соединения 1
Промежуточное соединение 1: 3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридин
Стадия A: трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилат
3
2
2
4
2
3
трет
1
К раствору пирролидин-2-она (10,0 г, 118 ммоль) в СНCN (118 мл) добавляли ТЭА (19,6 мл, 141 ммоль), ДМАП (7,18 г, 58,8 ммоль) и (-Вос)О (32,7 мл, 141 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем распределяли между EtOAc и водой. Отделенный органический слой промывали 1 N водн. HCl, 1 N водн. NaOH и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (21,0 г, 96%) в виде бледно-желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,53 (9H, с), 2,00 (2H, квинт, J= 8,0 Гц), 2,52 (2H, т, J= 8,0 Гц), 3,75 (2H, т, J= 7,6 Гц).
Стадия B: трет-бутил-4-(5-фторпиридин-3-ил)-4-оксобутилкарбамат
4
2
4
2
К раствору 3-бром-5-фторпиридина (4,26 г, 24,2 ммоль) в сухом ТГФ (25 мл) добавляли изопропилмагния хлорид (2,0 М в ТГФ, 14,5 мл, 29,0 ммоль) при -78°С. Смесь медленно нагревали до 0°C, перемешивали в течение 1 часа при 0°С и затем охлаждали до -78°С. После добавления раствора трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (5,38 г, 29,0 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл) при -78°С реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов и гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением трет-бутил-4-(5-фторпиридин-3-ил)-4-оксобутилкарбамата (4,73 г, 69%) в виде желтого масла.
Стадия С: 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фторпиридин
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-4-(5-фторпиридин-3-ил)-4-оксобутилкарбамата (4,73 г, 16,7 ммоль) в ДХМ (17 мл) добавляли ТФУК (6,45 мл, 84 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов и затем концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc, промывали насыщенным водн. NaHCO, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фторпиридина (1,83 г, 66,5%) в виде желтого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,10 (2H, квинт, J= 8,0 Гц), 2,96 (2H, т, J= 8,4 Гц), 4,10 (2H, т, J= 7,6 Гц), 7,94 (1H, д, J= 9,2 Гц), 8,53 (1H, д, J= 2,4 Гц), 8,79 (1H, с).
Стадия D: 3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридин
2
4
3
1
К раствору 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фторпиридина (1,83 г, 11,1 ммоль) в MeOH (16 мл) и воде (4,0 мл) добавляли порциями боргидрид натрия (0,843 г, 22,3 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и затем гасили 2 N водн. HCl. После испарения MeOH остаток подщелачивали 1 N водн. NaOH и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридина (1,62 г, 87%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,60-1,69 (1H, м), 1,81-1,98 (3H, м), 2,20-2,29 (1H, м), 3,03-3,10 (1H, м), 3,15-3,20 (1H, м), 4,22 (1H, т, J= 7,6 Гц), 7,49 (1H, д, J= 10,0 Гц), 8,32 (1H, д, J= 2,4 Гц), 8,40 (1H, с).
Пример 2: Получение промежуточного соединения 2
Промежуточное соединение 2: 2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
Стадия A: трет-бутил-4-(2,5-дифторфенил)-4-оксобутилкарбамат
4
2
4
К раствору 2-бром-1,4-дифторбензола (5,81 мл, 51,8 ммоль) в сухом ТГФ (50 мл) добавляли изопропилмагния хлорид (2,0 М в ТГФ, 31,1 мл, 62,2 ммоль) при -78°С. Смесь медленно нагревали до 0°C, перемешивали в течение 1 часа при этой температуре и затем снова охлаждали до -78°C. После добавления раствора трет-бутил-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (11,5 г, 62,2 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) при -78°С реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение 2 часов и гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-4-(2,5-дифторфенил)-4-оксобутилкарбамата (15,5 г, 100%) в виде бледно-зеленого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия B: 5-(2,5-дифторфенил)-3,4-дигидро-2Н-пиррол
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-4-(2,5-дифторфенил)-4-оксобутилкарбамата (15,5 г, 51,8 ммоль) в ДХМ (52 мл) добавляли ТФУК (19,9 мл, 259 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов и затем концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc, промывали насыщенным водн. NaHCO, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-(2,5-дифторфенил)-3,4-дигидро-2Н-пиррола (6,17 г, 65,8%) в виде красноватого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,00-2,08 (2H, м), 2,97-3,02 (2H, м), 3,99-4,04 (2H, м), 7,04-7,08 (2H, м), 7,64-7,68 (1H, м).
Стадия C: 2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
2
4
3
1
К раствору 5-(2,5-дифторфенил)-3,4-дигидро-2Н-пиррола (6,17 г, 34,1 ммоль) в MeOH (60 мл) и воде (15 мл) добавляли порциями боргидрид натрия (2,58 г, 68,1 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и затем гасили 2 N водн. HCl. После испарения MeOH остаток подщелачивали 1 N водн. NaOH и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (5,94 г, 95%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,56-1,65 (1H, м), 1,78-1,94 (3H, м), 2,21-2,30 (1H, м), 3,01-3,08 (1H, м), 3,13-3,18 (1H, м), 4,40 (1H, т, J= 7,2 Гц), 6,82-6,88 (1H, м), 6,91-6,97 (1H, м), 7,22-7,26 (1H, м).
Пример 3: Получение промежуточного соединения 3
Промежуточное соединение 3: 5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин
Стадия A: 2-(бут-3-инил)изоиндолин-1,3-дион
1
6
К раствору фталимида (10,0 г, 68,0 ммоль), бут-3-ин-1-ола (5,24 г, 74,8 ммоль) и трифенилфосфина (19,6 г, 74,8 ммоль) в толуоле (136 мл) медленно добавляли DIAD (15,8 мл, 82,0 ммоль) при 0°С более 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После добавления MeOH (50 мл) смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и промывали МеОН. Фильтрат концентрировали под вакуумом и остаточное твердое вещество растирали с МеОН и собирали фильтрованием с получением 2-(бут-3-инил)изоиндолин-1,3-диона (10,9 г, 81%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 2,52 (2H, дт, J= 7,2, 2,4 Гц), 2,78-2,80 (1H, м), 3,68 (2H, т, J= 6,8 Гц), 7,80-7,86 (4H, м).
Стадия B: 2-(4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-инил)изоиндолин-1,3-дион
3
4
3
1
Раствор 3-бром-5-фтор-2-метоксипиридина (4,00 г, 19,4 ммоль), 2-(бут-3-инил)изоиндолин-1,3-диона (3,87 г, 19,4 ммоль) и ТЭА (10,8 мл, 78 ммоль) в ДМФ (40 мл) дегазировали аргоном. После добавления Pd(PPh) (1,12 г, 0,971 ммоль) и CuI (0,370 г, 1,94 ммоль) реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 2 часов и охлаждали до комнатной температуры. После добавления MeOH осажденное твердое вещество собирали фильтрованием. Твердое вещество промывали MeOH и высушивали под вакуумом с получением 2-(4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-инил)изоиндолин-1,3-диона (5,80 г, 92%) в виде белого рассыпчатого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,90 (2H, т, J= 6,8 Гц), 3,85 (3H, с), 3,99 (2H, т, J= 6,8 Гц), 7,34 (1H, дд, J= 7,6, 2,4 Гц), 7,73-7,75 (2H, м), 7,87-7,89 (3H, м).
Стадия C: 4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-ин-1-амин
2
4
3
1
К раствору 2-(4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-инил)изоиндолин-1,3-диона (6,44 г, 19,8 ммоль) в MeOH (20 мл) и ДХМ (100 мл) добавляли гидразин (1,39 мл, 29,8 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов, в то время как было обнаружено нерастворимое твердое вещество. Твердое вещество отфильтровывали и промывали ДХМ. Фильтрат промывали водой. Водный слой экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-ин-1-амина (3,86 г, 100%) в виде желтого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,41 (2H, уш.с), 2,61 (2H, т, J= 6,4 Гц), 2,95 (2H, т, J= 6,4 Гц), 3,97 (3H, с), 7,40 (1H, дд, J= 8,0, 2,8 Гц), 7,92 (1H, д, J= 2,8 Гц).
Стадия D: 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фтор-2-метоксипиридин
2
3
2
4
2
3
1
Смесь 4-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)бут-3-ин-1-амина (3,86 г, 19,8 ммоль) и PdCl (35,0 мг, 0,199 ммоль) в CHCN (50 мл) и воде (17 мл) нагревали при 80°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между ДХМ и водой. Водный слой экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=5:1 до 3:1) с получением 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фтор-2-метоксипиридина (2,10 г, 54%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,01 (2H, квинт, J= 7,6 Гц), 3,01 (2H, т, J= 7,6 Гц), 3,97 (3H, с), 3,99 (2H, т, J= 7,6 Гц), 7,92 (1H, дд, J= 8,4, 2,8 Гц), 8,04 (1H, д, J= 2,8 Гц).
Стадия Е: 5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридин
2
4
3
1
К дисперсии 3-(3,4-дигидро-2Н-пиррол-5-ил)-5-фтор-2-метоксипиридина (500 мг, 2,57 ммоль) в MeOH (10 мл) и воде (2,5 мл) добавляли порциями боргидрид натрия (195 мг, 5,15 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и затем гасили 2 N водн. HCl. После испарения MeOH смесь подщелачивали 1 N водн. NaOH и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридина (437 мг, 87%) в виде желтого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,50-1,59 (1H, м), 1,79-1,87 (2H, м), 1,93 (1H, уш.с), 2,20-2,28 (1H, м), 3,01-3,15 (2H, м), 3,93 (3H, с), 4,29 (1H, т, J= 7,6 Гц), 7,57 (1H, дд, J= 8,8, 3,2 Гц), 7,83 (1H, д, J= 3,2 Гц).
Пример 4: Получение промежуточного соединения 4
Промежуточное соединение 4: (R)-3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридин
Стадия A: 4-хлор-N-метокси-N-метилбутанамид
N
N
2
4
3
1
К раствору 4-хлорбутаноилхлорида (50,0 г, 355 ммоль) и -MeO--метиламина HCl (34,6 г, 355 ммоль) в ДХМ (709 мл) медленно добавляли ТЭА (109 мл, 780 ммоль) при 0°C более 30 минут. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 часов и затем обрабатывали водой (250 мл). Отделенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 4-хлор-N-метокси-N-метилбутанамида (55,0 г, 94%) в виде желтого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,12 (2H, квинт, J= 6,4 Гц), 2,63 (2H, т, J= 7,2 Гц), 3,19 (3H, с), 3,64 (2H, т, J= 6,4 Гц), 3,71 (3H, с).
Стадия B: 4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутан-1-он
N
N
4
2
4
2
3
1
К раствору 3-бром-5-фторпиридина (30,0 г, 170 ммоль) в сухом ТГФ (170 мл) добавляли изопропилмагния хлорид (2,0 М в ТГФ, 102 мл, 205 ммоль) при -78°С. Смесь медленно нагревали до 0°C, перемешивали в течение 1 часа при этой температуре и затем снова охлаждали до -78°C. После добавления раствора 4-хлор--метокси--метилбутанамида (31,1 г, 188 ммоль) в сухом ТГФ (100 мл) реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение 4 часов и гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=7:1 до 6:1) с получением 4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутан-1-она (25,1 г, 125 ммоль, 73%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,27 (2H, квинт, J= 6,4 Гц), 3,22 (2H, т, J= 6,8 Гц), 3,70 (2H, т, J= 6,4 Гц), 7,93-7,97 (1H, м), 8,68 (1H, д, J= 3,2 Гц), 9,03 (1H, т, J= 1,6 Гц).
Стадия C: (S,Z)-N-(4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамид
2
4
2
3
1
Раствор 4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутан-1-она (25,1 г, 125 ммоль), (S)-2-метилпропан-2-сульфинамида (22,6 г, 187 ммоль) и тетраэтоксититана (42,6 г, 187 ммоль) в ТГФ (249 мл) нагревали при 75°С в течение 48 часов и охлаждали до комнатной температуры. После добавления EtOAc (100 мл) и солевого раствора (100 мл) полученную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество отфильтровывали и промывали EtOAc. Фильтрат дважды промывали водой, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=3:1 до 2:1) с получением (S,Z)-N-(4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида (30,0 г, 79%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,35 (9H, с), 2,09-2,26 (2H, м), 3,31-3,38 (1H, м), 3,44-3,51 (1H, м), 3,62-3,71 (2H, м), 7,87 (1H, д, J= 9,2 Гц), 8,59 (1H, д, J= 2,8 Гц), 8,92 (1H, с).
Стадия D: 3-((R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-пирролидин-2-ил)-5-фторпиридин
N
4
2
4
2
3
1
К раствору (S,Z)--(4-хлор-1-(5-фторпиридин-3-ил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида (10,0 г, 32,8 ммоль) в сухом ТГФ (131 мл) добавляли супергидрид (1 М в ТГФ, 36,1 мл, 36,1 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 часа, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 часов при комнатной температуре. После гашения насыщенным водн. NHCl смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали водой, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1 до 1:2 до 1:3 до EtOAc) с получением 3-((R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-пирролидин-2-ил)-5-фторпиридина (3,73 г, 42%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,13 (9H, с), 1,75-1,79 (1H, м), 1,79-2,04 (2H, м), 2,28-2,36 (1H, м), 2,97-3,03 (1H, м), 3,90-3,95 (1H, м), 4,71 (1H, т, J= 7,2 Гц), 7,33-7,36 (1H, м), 8,38-8,39 (2H, м).
Стадия Е: (R)-3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридин
2
4
3
1
К раствору 3-((R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-пирролидин-2-ил)-5-фторпиридина (7,47 г, 27,6 ммоль) в MeOH (55 мл) добавляли HCl (4 М в диоксане, 34,5 мл, 138 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 часов при комнатной температуре. После концентрирования под вакуумом остаток растворяли в воде (100 мл) и промывали EtOAc (100 мл). Отделенный водный слой нейтрализовали 1 N водн. NaOH (150 мл), экстрагировали ДХМ (100 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (R)-3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридина (4,35 г, 95%) в виде красноватого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,60-1,69 (1H, м), 1,83-1,97 (3H, м), 2,20-2,29 (1H, м), 3,04-3,10 (1H, м), 3,15-3,21 (1H, м), 4,23 (1H, т, J= 7,6 Гц), 7,47-7,51 (1H, м), 8,33 (1H, д, J= 2,8 Гц), 8,40 (1H, с).
Пример 5: Получение промежуточного соединения 5
Промежуточное соединение 5: (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
Стадия A: 4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутан-1-он
N
N
4
2
4
2
3
1
К раствору 2-бром-1,4-дифторбензола (30,0 г, 155 ммоль) в сухом ТГФ (155 мл) добавляли изопропилмагния хлорид (2 М в ТГФ, 93,0 мл, 187 ммоль) при -78°С. Смесь медленно нагревали до 0°C, перемешивали в течение 1 часа при этой температуре и затем снова охлаждали до -78°C. После добавления раствора 4-хлор--метокси--метилбутанамида (28,3 г, 171 ммоль) в ТГФ (100 мл) реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение 4 часов и гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=7:1 до 6:1) с получением 4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутан-1-она (13,3 г, 39%) в виде бледно-желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,22 (2H, квинт, J= 6,8 Гц), 3,16-3,20 (2H, м), 3,67 (2H, т, J= 6,4 Гц), 7,11-7,17 (1H, м), 7,20-7,26 (1H, м), 7,55-7,59 (1H, м).
Стадия В: (S,Z)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамид
2
4
2
6
1
Раствор 4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутан-1-она (16,4 г, 75,0 ммоль), (S)-2-метилпропан-2-сульфинамида (13,6 г, 113 ммоль) и тетраэтоксититана (25,7 г, 113 ммоль) в ТГФ (150 мл) нагревали при 75°С в течение 48 часов и охлаждали до комнатной температуры. После добавления EtOAc (50 мл) и солевого раствора (50 мл) полученную смесь интенсивно перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество отфильтровывали и промывали EtOAc. Фильтрат дважды промывали водой, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=3:1 до 2:1) с получением (S,Z)-N-(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида (16,3 г, 67%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,15 и 1,21 (9H, с и с), 1,86-2,12 (2H, м), 2,78-3,30 (2H, м), 3,60-3,76 (2H, м), 7,20-7,60 (3H, м).
C
Стадия: (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
N
4
2
4
2
3
1
К раствору (S,Z)--(4-хлор-1-(2,5-дифторфенил)бутилиден)-2-метилпропан-2-сульфинамида (16,3 г, 50,7 ммоль) в сухом ТГФ (203 мл) добавляли супергидрид (1 М раств в ТГФ, 55,7 мл, 55,7 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 часа, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 часов при комнатной температуре. После гашения насыщенным водн. NHCl смесь экстрагировали EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=6:1 до 5:1 до 4:1) с получением (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (8,60 г, 59%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,15 (9H, с), 1,75-1,80 (1H, м), 1,82-1,98 (2H, м), 2,24-2,32 (1H, м), 2,95-3,01 (1H, м), 3,87-3,93 (1H, м), 4,96 (1H, т, J= 7,2 Гц), 6,87-6,93 (1H, м), 6,95-7,06 (2H, м).
Стадия D: (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин
2
4
3
1
К раствору (R)-1-((S)-трет-бутилсульфинил)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (8,60 г, 29,9 ммоль) в MeOH (60 мл) добавляли HCl (4 М в диоксане, 37,4 мл, 150 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 часов при комнатной температуре. После концентрирования под вакуумом остаток растворяли в воде (100 мл) и промывали EtOAc (100 мл). Отделенный водный слой нейтрализовали 1 N водн. NaOH (150 мл), экстрагировали ДХМ (100 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (5,06 г, 92%) в виде красноватого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,56-1,65 (1H, м), 1,78-1,93 (3H, м), 2,21-2,30 (1H, м), 3,01-3,08 (1H, м), 3,13-3,18 (1H, м), 4,39 (1H, т, J= 7,6 Гц), 6,82-6,88 (1H, м), 6,91-6,97 (1H, м), 7,22-7,26 (1H, м).
Пример 6: Получение промежуточных соединений 6 и 7
Промежуточные соединения 6 и 7: (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (6) и (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (7)
Стадия A: (R)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)пирролидин-2-он
1
3
АВ
АВ
К раствору (R)-4-гидроксипирролидин-2-она (5,00 г, 49,5 ммоль) в ДМФ (24 мл) добавляли TBSCl (7,83 г, 51,9 ммоль) и имидазол (5,05 г, 74,2 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и выливали в воду со льдом. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением (R)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)пирролидин-2-она (9,64 г, 91%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,07 (6H, с), 0,89 (9H, с), 2,27 и 2,54 (2Н, АВкв, J= 16,8 Гц), 3,24 и 3,59 (2Н, АВкв, J= 9,8 Гц), 4,53-4,58 (1H, м), 6,25 (1H, с).
Стадия В: (R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилат
3
2
4
2
4
2
3
АВ
АВ
трет
1
К раствору (R)-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)пирролидин-2-она (9,64 г, 44,8 ммоль) в CHCN (90 мл) добавляли ТЭА (7,49 мл, 53,7 ммоль), ДМАП (5,47 г, 44,8 ммоль) и (-Вос)О (12,5 мл, 53,7 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем распределяли между EtOAc и водой. Отделенный органический слой промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=3:1) с получением (R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (13,4 г, 95%) в виде бледно-коричневого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,077 (3H, с), 0,082 (3Н, с), 0,88 (9H, с), 1,53 (9H, с), 2,47 и 2,71 (2Н, АВкв, J= 17,4 Гц), 3,62 и 3,86 (2Н, АВкв, J= 11,3 Гц), 4,37-4,41 (1H, м).
Стадия C: трет-бутил-(2R)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксибутилкарбамат
4
4
2
4
2
3
1
К раствору 2-бром-1,4-дифторбензола (3,97 мл, 35,4 ммоль) в сухом ТГФ (118 мл) добавляли изопропилмагния хлорид (2,0 М в ТГФ, 21,2 мл, 42,5 ммоль) при -78°С. Смесь медленно нагревали до 0°C, и перемешивали в течение 1 часа при этой температуре, и затем снова охлаждали до -78°C. После добавления раствора (R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-оксопирролидин-1-карбоксилата (13,4 г, 42,5 ммоль) в сухом ТГФ (40 мл) при -78°С реакционную смесь оставляли нагреваться до 0°С при перемешивании в течение одного часа. После добавления MeOH (118 мл) с последующим добавлением NaBH (2,01 г, 53,1 ммоль) при 0°С полученную смесь перемешивали в течение 1 часа и затем гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=6:1) с получением трет-бутил-(2R)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксибутилкарбамата (10,2 г, 67%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,09-0,14 (6Н, м), 0,91-0,93 (9H, м), 1,44 (9H, с), 1,73-1,93 (2H, м), 3,22-3,44 (2H, м), 3,66-3,83 (1H, м), 4,06-4,15 (1H, м), 4,81 (1H, с), 5,15-5,21 (1H, м), 6,87-6,97 (2H, м), 7,22-7,29 (1H, м).
Стадия D: (4R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору (2R)-2-(трет-бутилдиметилсилилокси)-4-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксибутилкарбамата (10,0 г, 23,2 ммоль) в ДХМ (116 мл) добавляли ТЭА (9,69 мл, 69,5 ммоль) и MsCl (1,99 мл, 25,5 ммоль) при -60°С. Смесь перемешивали в течение 30 мин при -60°С. После добавления DBU (5,24 мл, 34,8 ммоль) при -60°С реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. После обработки водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=8:1) с получением (4R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-карбоксилата в виде бесцветного масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,00-0,34 (6H, м), 0,86 1,08 (9H, м), 1,36-1,62 (9H, м), 2,04-2,67 (2H, м), 3,60-3,93 (2H, м), 4,50-4,55 (1H, м), 5,17-5,49 (1H, м), 6,98-7,33 (3H, м).
Стадия E: (4R)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору (4R)-трет-бутил-4-(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-карбоксилата (7,23 г, 17,5 ммоль) в ТГФ (35,0 мл) добавляли TBAF (1,0 М в ТГФ, 22,7 мл, 22,7 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре реакционную смесь выливали в воду со льдом и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1) с получением (4R)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилата (3,81 г, 73%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,20-1,46 (9H, м), 1,94-2,13 (2H, м), 2,42-2,59 (1H, м), 3,56-3,81 (2H, м), 4,49-4,50 (1H, м), 5,06-5,30 (1H, м), 6,88-7,08 (3H, м).
Стадия F: (2R,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат (6а) и (2S,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилат (7a)
3
2
4
2
К раствору (4R)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилата (1,00 г, 3,34 ммоль) в ДХМ (11 мл) добавляли DAST (0,883 мл, 6,68 ммоль) при -78°С. После перемешивания в течение 2 часов при -78°С реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. После гашения медленным добавлением насыщенного водн. раствора NaHCO смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=10:1) с получением (2R,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (6а) (383 мг, 38%) и (2S,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (7a) (252 мг, 25%) в виде бесцветного масла.
(Стереохимия каждого изомера была предложена с помощью сравнения со стандартом (WO2012034095A1)
Для (2R,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (6а)
1
3
Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,21-1,46 (9H, м), 1,94-2,10 (1H, м), 2,71-2,79 (1H, м), 3,62-3,75 (1H, м), 3,98-4,14 (1H, м), 5,09-5,48 (2H, м), 6,92-7,01 (3H, м)
Для (2S,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (7a)
1
3
Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,20-1,49 (9H, с), 2,25-2,35 (1H, м), 2,48-2,60 (1H, м), 3,71-4,03 (1H, м), 5,19-5,33 (2H, м), 6,88-6,99 (3H, м).
Стадия G: (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин (6)
3
2
4
3
1
К раствору (2R,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (383 мг, 1,27 ммоль) в ДХМ (2,5 мл) добавляли ТФУК (1,96 мл, 25,4 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 часа при комнатной температуре реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток нейтрализовали насыщенным водн. NaHCO и экстрагировали EtOAc. Органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (100 мг, 39%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,66-1,83 (1H, м), 1,91 (1H, с), 2,58-2,69 (1H, м), 3,16-3,40 (2H, м), 4,71-4,75 (1H, м), 5,20-5,35 (1H, м), 6,84-6,90 (1H, м), 6,93-6,99 (1H, м), 7,28-7,31 (1H, м).
7
Стадия H: (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин ()
3
2
4
3
1
К раствору (2S,4S)-трет-бутил-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (252 мг, 0,836 ммоль) в ДХМ (1,67 мл) добавляли ТФУК (1,29 мл, 16,7 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 часа реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток нейтрализовали насыщенным водн. NaHCO и экстрагировали EtOAc. Органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали при пониженном давлении с получением (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (117 мг, 70%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,90-2,05 (2H, м), 2,53-2,68 (1H, м), 2,98-3,11 (1H, м), 3,44-3,52 (1H, м), 4,42 (1H, т, J= 7,8 Гц), 5,28 (1H, дт, J= 52,4, 4,8 Гц), 6,87-6,92 (1H, м), 6,93-7,00 (1H, м), 7,28-7,31 (1H, м).
Пример 7: Получение промежуточного соединения 8
Промежуточное соединение 8: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
Стадия А: этил-5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
1
6
Смесь этил-5-амино-1Н-пиразол-4-карбоксилата (20,0 г, 129 ммоль), (Е)-этил-3-этоксиакрилата (22,4 мл, 155 ммоль) и карбоната цезия (63,0 г, 193 ммоль) в ДМФ (322 мл) перемешивали при 110°С в течение ночи. После охлаждения до 0°С реакционную смесь подкисляли 2 N водн. HCl. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и промывали водой и EtOAc с получением этил-5-оксо-4,5-дигидропиразол[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (24,7 г, 92%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,27 (3H, т, J= 7,2 Гц), 4,80 (2H, кв, J= 6,8 Гц), 6,16 (1H, д, J= 8,0 Гц), 8,14 (1H, с), 8,58 (1H, д, J= 8,0 Гц), 11,7 (1H, уш.с).
Стадия B: этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
3
2
3
1
Смесь этил-5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (24,7 г, 119 ммоль) и POCl (111 мл, 1,19 моль) нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc:ДХМ=3:1:1 до 2:1:1) с получением этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (15,6 г, 58%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,42 (3H, т, J= 7,2 Гц), 4,42 (2H, кв, J= 7,2 Гц), 7,00 (1H, д, J= 7,2 Гц), 8,64 (1H, с), 8,64 (1H, д, J= 7,2 Гц).
Стадия С: этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
1
3
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,00 г, 4,43 ммоль), 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 2, 853 мг, 4,65 ммоль) и KF (1,28 г, 22,1 ммоль) в ДМСО (14 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,51 г, 91%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,30-1,49 (3H, м), 1,98-2,18 (3H, м), 2,43-2,58 (1H, м), 3,95-4,20 (2H, м), 4,25-4,48 (2H, м), 5,18-5,23 (1H, м), 5,82-5,94 (1H, м), 6,68-6,80 (1H, м), 6,86-6,98 (1H, м), 7,00-7,12 (1H, м), 8,08-8,22 (1H, м), 8,29 (1H, с).
Стадия D: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
1
К раствору этил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,51 г, 4,06 ммоль) в EtOH (15 мл) и воде (5,0 мл) добавляли LiOH (291 мг, 12,1 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (1,33 г, 95%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,12 (3H, м), 2,35-2,46 (1H, м), 3,58-3,85 (1H, м), 3,94-4,06 (1H, м), 5,31 и 5,53 (1H, с+с), 6,07 и 6,67 (1H, с+с), 6,90-7,42 (3H, м), 8,10-8,24 (1H, м), 8,58 и 8,71 (1H, с+с), 11,4 (1H, уш.с).
Пример 8: Получение промежуточного соединения 9
Промежуточное соединение 9: 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
Стадия A: этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
1
3
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,05 г, 4,65 ммоль), 2 3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридина (промежуточное соединение 1, 812 мг, 4,89 ммоль) и KF (1,35 г, 23,3 ммоль) в ДМСО (15 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,53 г, 93%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,22-1,48 (3H, м), 2,01-2,28 (3H, м), 2,24-2,61 (1H, м), 3,51-4,20 (2H, м), 4,21-4,40 (2H, м), 5,02 и 5,62 (1H, с+с), 5,90 и 6,31 (1H, с+с), 7,20-7,50 (1H, м), 8,10-8,45 (4H, м).
Стадия B: 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
1
К раствору этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,53 г, 4,31 ммоль) в EtOH (32 мл) и воде (10 мл) добавляли LiOH (309 мг, 12,9 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (1,23 г, 87%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,19-2,20 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,60-3,82 (1H, м), 4,00-4,08 (1H, м), 5,25-5,48 (1H, м), 6,12 и 6,65 (1H, с+с), 7,66-7,80 (1H, м), 8,10-8,26 (1H, м), 8,40-8,80 (3H, м), 11,6 (1H, уш.с).
Получение химических соединений 1-10
Пример 9: Получение химического соединения 1: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-оксадиазола
Стадия A: N'-ацетил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
2
4
2
6
1
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8, 100 мг, 0,290 ммоль) в ДМФ (2,0 мл) добавляли ацетогидразид (43,0 мг, 0,581 ммоль), DIPEA (0,152 мл, 0,871 ммоль), HATU (166 мг, 0,436 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением N'-ацетил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (72,0 мг, 62%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-1,92 (2H, м), 1,90-1,98 (1H, м), 2,10-2,16 (2H, м), 2,38-2,48 (1H, м), 3,66-3,78 (1H, м), 5,35-5,37 (1H, м), 6,26-6,27 и 6,69-6,71 (1H, м), 7,02-7,34 (3H, м), 8,14-8,28 (1H, м); 8,61-8,68 (1H, м), 8,82-8,93 (1H, м), 9,78 и 10,0 (1H, с+с). *Два протона из NHNH не наблюдали.
Стадия B: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-ацетил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (40,0 мг, 0,100 ммоль) в ДХМ (0,6 мл) добавляли пиридин (0,0180 мл, 0,220 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0350 мл, 0,210 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:7) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-оксадиазола (15,0 мг, 40%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,04-2,25 (3H, м), 2,43-2,56 (3H, м), 4,05-4,30 (2H, м), 5,20 и 5,70 (1H, с+с), 5,93 и 6,37 (1H, с+с), 6,74-6,83 (1H, м), 6,85-7,20 (2H, м), 7,52-7,54 и 7,67-7,71 (1Н, м+м), 8,19-8,56 (2H, м). МС: 383,3 [МН].
Пример 10: Получение химического соединения 2: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-тиадиазола
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-ацетил-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (63,0 мг, 0,157 ммоль) в толуоле (3,0 мл) добавляли реагент Лоусона (70,0 мг, 0,173 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только ДХМ до ДХМ:MeOH=10:1) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-тиадиазола (63,0 мг, 100%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,04-2,30 (3H, м), 2,40-2,60 (1H, м), 2,32-2,94 (2H, м), 3,60-4,40 (3H, м), 5,22 и 5,66 (1H, с+с), 5,91 и 6,39 (1H, с+с), 6,65-7,18 (3H, м), 8,20-8,37 (1H, м), 8,50-8,60 (1H, м). МС: 399,3 [МН].
Пример 11: Получение химического соединения 3: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-этил-1,3,4-оксадиазола
Стадия A: трет-бутил-2-пропионилгидразинкарбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-гидразинкарбоксилата (3,00 г, 22,7 ммоль), ТЭА (6,33 мл, 45,4 ммоль) в ДХМ (51 мл) добавляли раствор пропионилхлорида (3,00 мл, 34,0 ммоль) в ДХМ (10 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 часов и гасили водой. Смесь экстрагировали ДХМ, промывали 1 N водн. HCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением трет-бутил-2-пропионилгидразинкарбоксилата (2,03 г, 47%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,19 (3H, т, J= 7,6 Гц), 1,47 (9H, с), 2,26 (2H, кв, J= 7,6 Гц), 6,66 (1H, уш.с), 7,67 (1H, уш.с).
Стадия B: пропионогидразида гидрохлорид
1
6
К раствору трет-бутил-2-пропионилгидразинкарбоксилата (615 мг, 3,27 ммоль) в диоксане (11 мл) добавляли HCl (4 N в диоксане, 6,53 мл, 26,1 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Остаток обрабатывали эфиром. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением пропионогидразида гидрохлорида (272 мг, 66%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,00 (3H, т, J= 7,6 Гц), 2,20 (2H, кв, J= 7,6 Гц), 10,4 (3H, уш.с), 11,0 (1H, уш.с).
Стадия C: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пропионилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
2
4
2
3
1
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8, 200 мг, 0,581 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли пропионогидразида гидрохлорид (145 мг, 1,16 ммоль), DIPEA (0,406 мл, 2,32 ммоль), HATU (331 мг, 0,871 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пропионилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (177 мг, 73%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,27 (3H, т, J= 7,4 Гц), 2,04-2,28 (3H, м), 2,32-2,48 (2H, м), 2,48-2,51 (1H, м), 3,70-4,24 (2H, м), 5,22 (0,7H, д, J= 7,2 Гц), 5,50-5,56 (0,3Н, м), 5,92 (0,7H, д, J= 7,2 Гц), 6,30-6,38 (0,3H, м), 6,72-7,09 (3H, м), 8,02-8,12 (0,3H, м), 8,16 (0,7H, д, J= 7,2 Гц), 8,27-8,40 (1H, м), 9,13 (0,7H, д, J= 6,8 Гц), 9,44-9,52 (0,3H, м), 10,9 (1H, д, J= 6,8 Гц).
Стадия D: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-этил-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
3
под вакуумом
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пропионилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,121 ммоль) в ДХМ (1,0 мл) добавляли пиридин (0,0220 мл, 0,278 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0430 мл, 0,253 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали . Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:2 до 1:3) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-этил-1,3,4-оксадиазола (22,1 мг, 46%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,30-1,50 (3H, м), 2,00-2,18 (3H, м), 2,40-2,62 (1H, м), 2,80-3,04 (2H, м), 3,66-4,26 (2H, м), 5,21 и 5,74 (1H, с+с), 5,93 и 6,39 (1H, с+с), 6,72-6,80 (1H, м), 6,82-7,13 (2H, м), 8,10-8,40 (2H, м). МС: 397,3 [МН].
Пример 12: Получение химического соединения 4: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-этил-1,3,4-тиадиазола
2
4
2
3
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пропионилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,121 ммоль) в толуоле (2,5 мл) добавляли реагент Лоусона (54,0 мг, 0,133 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только ДХМ до ДХМ:MeOH=50:1) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-этил-1,3,4-тиадиазола (32,8 мг, 65%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,37-1,52 (3H, м), 2,00-2,21 (3H, м), 2,42-2,64 (1H, м), 3,31-3,22 (2H, м), 3,36-4,20 (2H, м), 5,21 и 5,69 (1H, с+с), 5,90 и 6,26 (1H, с+с), 6,65-6,70 (1H, м), 6,88-7,05 (2H, м), 8,20-8,38 (1H, м), 8,52-8,63 (1H, м). МС: 413,3 [МН].
Пример 13: Получение химического соединения 5: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-оксадиазола
Стадия A: трет-бутил-2-изобутирилгидразинкарбоксилат
2
4
2
3
1
К смеси трет-бутил-гидразинкарбоксилата (10,0 г, 76,0 ммоль), ТЭА (21,1 мл, 151 ммоль) в ДХМ (170 мл) добавляли раствор изобутирилхлорида (12,1 г, 113 ммоль) в ДХМ (34 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 часа и гасили водой. Смесь экстрагировали ДХМ, промывали 1 N водн. HCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением трет-бутил-2-изобутирилгидразинкарбоксилата (14,0 г, 91%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,20 (6H, д, J= 6,8 Гц), 1,47 (9H, с), 2,41-2,47 (1H, м), 6,63 (1H, уш.с), 7,57 (1H, уш.с).
Стадия B: изобутирогидразида гидрохлорид
1
6
К раствору трет-бутил-2-изобутирилгидразинкарбоксилата (14,0 г, 69,2 ммоль) в диоксане (230 мл) добавляли HCl (4 N в диоксане, 104 мл, 415 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Остаток обрабатывали эфиром. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением изобутирогидразида гидрохлорида (8,78 г, 92%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,06 (6H, д, J= 6,8 Гц), 2,52-2,59 (1H, м), 10,4 (3H, уш.с), 11,1 (1H, уш.с).
Стадия C: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
2
4
2
3
1
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8, 200 мг, 0,581 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли изобутирогидразида гидрохлорид (161 мг, 1,16 ммоль), DIPEA (0,406 мл, 2,32 ммоль), HATU (331 мг, 0,871 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (186 мг, 75%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,28 (6H, д, J= 6,0 Гц), 2,52-2,19 (3H, м), 2,50-2,61 (2H, м), 3,71-4,25 (2H, м), 5,22 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 5,58-5,62 (0,3H, м), 5,92 (0,7H, д, J= 7,2 Гц), 6,30-6,38 (0,3H, м), 6,72-7,09 (3H, м), 8,02-8,12 (0,3H, м), 8,19 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 8,28-8,37 (1H, м), 9,02 (0,7H, д, J= 6,0 Гц), 9,52-9,60 (0,3H, м), 10,9 (1H, д, J= 7,2 Гц).
Стадия D: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
3
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (70,0 мг, 0,163 ммоль) в ДХМ (1,0 мл) добавляли пиридин (0,0300 мл, 0,376 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0580 мл, 0,343 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:2 до 1:3) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-оксадиазола (39,0 мг, 58%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,28-1,52 (6H, м), 2,00-2,21 (2H, м), 2,40-2,60 (1H, м), 3,10-3,30 (1H, м), 3,50-4,18 (3H, м), 5,22 и 5,80 (1H, с+с), 5,91 и 6,39 (1H, с+с), 6,69-6,80 (1H, м), 6,85-7,12 (2H, м), 8,12-8,42 (2H, м). МС: 411,3 [МН].
Пример 14: Получение химического соединения 6: 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазола
2
4
2
3
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (100 мг, 0,233 ммоль) в толуоле (4,6 мл) добавляли реагент Лоусона (104 мг, 0,23 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:2 до только EtOAc) с получением 2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазола (61,0 мг, 61%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,38-1,58 (6H, м), 2,01-2,28 (3H, м), 2,47-2,60 (1H, м), 3,42-3,75 (2H, м), 3,85-4,20 (2H, м), 5,22 и 5,72 (1H, с+с), 5,90 и 6,38 (1H, с+с), 6,62-6,80 (1H, м), 6,81-7,02 (2H, м), 8,20-8,37 (1H, м), 8,50-8,61 (1H, м). МС: 427,3 [МН]
Пример 15: Получение химического соединения 7: 2-циклопропил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола
Стадия A: трет-бутил-2-(циклопропанкарбонил)гидразинкарбоксилат
2
4
2
3
1
К смеси трет-бутил-гидразинкарбоксилата (3,00 г, 22,7 ммоль), ТЭА (6,33 мл, 45,4 ммоль) в ДХМ (51 мл) добавляли раствор циклопропанкарбонилхлорида (3,10 мл, 34,0 ммоль) в ДХМ (10 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 часа и гасили водой. Смесь экстрагировали ДХМ, промывали 1 N водн. HCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением трет-бутил-2-(циклопропанкарбонил)гидразинкарбоксилата (2,16 г, 47%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,81-0,84 (2H, м), 1,02-1,04 (2H, м), 1,45-1,52 (10Н, м), 6,65 (1H, уш.с), 7,95 (1H, уш.с).
Стадия B: циклопропанкарбогидразида гидрохлорид
1
6
К раствору трет-бутил-2-(циклопропанкарбонил)гидразинкарбоксилата (2,16 г, 10,8 ммоль) в диоксане (36 мл) добавляли HCl (4 N в диоксане, 6,53 мл, 26,1 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Остаток обрабатывали эфиром. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением циклопропанкарбогидразида гидрохлорида (1,38 г, 94%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 0,77-0,88 (4H, м), 1,73-1,79 (1H, м), 10,5 (3H, уш.с), 11,3 (1H, уш.с).
Стадия C: N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
2
4
2
3
1
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8, 200 мг, 0,581 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли циклопропанкарбогидразида гидрохлорид (159 мг, 1,16 ммоль), DIPEA (0,406 мл, 2,32 ммоль) и HATU (331 мг, 0,871 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=100:1 до 20:1) с получением N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (215 мг, 87%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,84-0,90 (2H, м), 1,09-0,15 (2H, м), 2,00-2,25 (3H, м), 2,48-2,61 (1H, м), 3,71-4,17 (3H, м), 5,22 (0,7H, д, J= 8,4 Гц), 5,50-5,58 (0,3H, м), 5,91 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 6,30-6,38 (0,3Н, м), 6,71-7,09 (2H, м), 8,18 (0,7H, д, J= 7,2 Гц), 8,52-8,62 (0,3H, м), 8,25-8,37 (2H, м), 9,04-9,46 (1H, м), 10,65-10,75 (1H, м).
Стадия D: 2-циклопропил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (100 мг, 0,235 ммоль) в ДХМ (1,5 мл) добавляли пиридин (0,0440 мл, 0,539 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0830 мл, 0,492 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:7) с получением 2-циклопропил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (49,0 мг, 51%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,00-1,18 (4H, м), 2,01-2,18 (4H, м), 2,32-2,61 (1H, м), 3,61-4,20 (2H, м), 5,20 и 5,77 (1H, с+с), 5,92 и 6,39 (1H, с+с), 6,70-6,80 (1H, м), 6,82-7,12 (2H, м), 8,12-8,37 (2H, м). МС: 409,3 [МН].
Пример 16: Получение химического соединения 8: 2-циклопропил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (80,0 мг, 0,188 ммоль) в толуоле (3,5 мл) добавляли реагент Лоусона (76,0 мг, 0,188 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=10:1) с получением 2-циклопропил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (23,0 мг, 29%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,88-0,95 (2H, м), 1,10-1,30 (2H, м), 2,01-2,25 (3H, м), 2,40-2,61 (2H, м), 3,61-3,67 (1H, м), 3,82-4,10 (1H, м), 5,21 и 5,68 (1H, с+с), 5,90 и 6,37 (1H, с+с), 6,62-6,80 (1H, м), 6,83-7,02 (1H, м), 7,04-7,12 (1H, м), 8,15-8,42 (1H, м), 8,50-8,61 (1H, м). МС: 425,3 [МН].
Пример 17: Получение химического соединения 9: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола
Стадия A: трет-бутил-2-пивалоилгидразинкарбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-гидразинкарбоксилата (5,00 г, 37,8 ммоль), ТЭА (10,6 мл, 76,0 ммоль) в ДХМ (85 мл) добавляли раствор пивалоилхлорида (6,98 мл, 56,7 ммоль) в ДХМ (85 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 часа и гасили водой. Смесь экстрагировали ДХМ, промывали 1 N водн. HCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением трет-бутил-2-пивалоилгидразинкарбоксилата (7,65 г, 93%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,25 (9H, с), 1,47 (9H, с), 6,48 (1H, уш.с), 7,39 (1H, уш.с).
Стадия B: пивалогидразида гидрохлорид
1
6
К раствору трет-бутил-2-пивалоилгидразинкарбоксилата (7,65 г, 35,4 ммоль) в диоксане (118 мл) добавляли HCl (4 N в диоксане, 70 мл, 283 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Остаток обрабатывали эфиром. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением пивалогидразида гидрохлорида (5,06 г, 94%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,17 (9H, с), 10,3 (3H, уш.с), 10,8 (1H, уш.с).
Стадия C: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
6
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 8, 441 мг, 1,28 ммоль) в ДМФ (8,5 мл) добавляли пивалогидразида гидрохлорид (391 мг, 2,56 ммоль), DIPEA (0,895 мл, 5,12 ммоль), HATU (730 мг, 1,92 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, выливали в воду и перемешивали в течение дополнительных 30 мин при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (454 мг, 80%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,19 (9H, с), 1,81-2,15 (3H, м), 2,45-2,50 (1H, м), 3,65-3,72 (1H, м), 4,00-4,08 (1H, м), 5,36-5,42 (1H, м), 6,70 (1H, д, J= 8,0 Гц), 6,95-7,11 (3H, м), 8,23 (1H, с), 8,55 (1H, с), 8,83 (1H, д, J= 8,0 Гц), 9,53 (1H, с).
Стадия D: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
6
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (651 мг, 1,47 ммоль) в ДХМ (10 мл) добавляли пиридин (0,274 мл, 3,38 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,522 мл, 3,09 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:4) с получением 2-трет-бутил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (402 мг, 64%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,27 и 1,44 (9H, с+с), 1,82 2,18 (3H, м), 2,32-2,44 (1H, м), 3,54-3,90 (1H, м), 4,00-4,08 (1H, м), 5,32-5,38 (0,3Н, м), 5,67 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 6,06-6,12 (0,3H, м), 6,71 (0,7Н, д, J= 8,0 Гц), 6,88-7,38 (3H, м), 8,32-8,42 (1H, м), 8,58-8,65 (0,3H, м), 8,84 (0,7H, д, J= 8,0 Гц). МС: 425,3 [МН].
Пример 18: Получение химического соединения 10: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
4
10
2
3
2
4
2
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,113 ммоль) в диглиме (2,2 мл) добавляли PS (100 мг, 0,226 ммоль) и NaCO (48,0 мг, 0,452 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=10:1) с получением 2-трет-бутил-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (30,0 мг, 60%) в виде белого твердого вещества. МС: 441,4 [МН].
Получение химических соединений 11-15
Пример 19: Получение химического соединения 11: 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-тиадиазола
Стадия A: N'-ацетил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
3
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9, 200 мг, 0,611 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли ацетогидразид (91,0 мг, 1,22 ммоль), DIPEA (0,320 мл, 283 ммоль) и HATU (349 мг, 0,917 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением N'-ацетил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (168 мг, 71%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,00-2,15 (5H, м), 2,50-2,63 (1H, м), 3,68-4,30 (2H, м), 5,06 и 5,30 (1H, с+с), 5,68 и 6,39 (1H, с+с), 7,10-7,40 (1H, м), 8,20-9,04 (4H, м), 9,84 и 10,8 (1H, с+с). *Два протона из NHNH не наблюдали.
Стадия B: 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-тиадиазол
4
10
2
3
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-ацетил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,130 ммоль) в диглиме (2,6 мл) добавляли PS (116 мг, 0,261 ммоль) и NaCO (55,0 мг, 0,522 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=100:1 до 10:1) с получением 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-метил-1,3,4-тиадиазола (36,0 мг, 72%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,00-2,30 (3H, м), 2,50-2,80 (4H, м), 3,62-4,12 (2H, м), 5,01 и 5,49 (1H, с+с), 5,90 и 6,68 (1H, с+с), 7,20-2,26 (1H, м), 8,29-8,62 (4H, м). МС: 382,3 [МН].
Пример 20: Получение химического соединения 12: 2-этил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
Стадия A: N'-ацетил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
3
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9, 200 мг, 0,611 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли пропионогидразида гидрохлорид (152 мг, 1,22 ммоль), DIPEA (0,320 мл, 283 ммоль) и HATU (349 мг, 0,917 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением N'-ацетил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (168 мг, 71%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,27 (3H, т, J= 7,4 Гц), 2,00-2,28 (3H, м), 2,32-2,45 (3H, м), 2,50-2,67 (1H, м), 3,73-4,26 (2H, м), 5,07 и 5,72 (1H, с+с), 5,71 и 5,90 (1H, с+с), 7,21-7,40 (1H, м), 8,19-9,04 (4H, м), 9,96 и 10,84 (1H, с+с).
Стадия В: 2-этил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол
4
10
2
3
2
4
2
3
1
+
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пропионилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,126 ммоль) в диглиме (2,6 мл) добавляли PS (112 мг, 0,252 ммоль) и NaCO (53,0 мг, 0,503 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=50:1 до 10:1) с получением 2-этил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (36,0 мг, 72%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,40-1,52 (3H, м), 2,00-2,23 (3H, м), 2,52-2,65 (1H, м), 3,05-3,20 (2H, м), 3,60-3,80 (2H, м), 5,08 и 5,52 (1H, с+с), 5,88 и 6,38 (1H, с+с), 7,24-7,26 (1H, м), 8,30-8,60 (4H, м). МС: 396,3 [МН].
Пример 21: Получение химического соединения 13: 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазола
Стадия A: 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
3
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9, 200 мг, 0,611 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли изобутирогидразида гидрохлорид (161 мг, 1,22 ммоль), DIPEA (0,427 мл, 2,44 ммоль) и HATU (349 мг, 0,917 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (208 мг, 83%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,26-1,39 (6H, м), 2,00-2,26 (3H, м), 2,50-2,62 (2H, м), 3,70-4,26 (2H, м), 5,06 и 5,32 (1H, с+с), 5,76 (0,3H, с), 6,39 (0,7H, д, J= 8,0 Гц), 7,26-7,52 (1H, м), 8,24-8,90 (5H, м), 10,06 и 10,85 (1H, с+с).
Стадия B: 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазол
4
10
2
3
2
4
2
3
1
+
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,122 ммоль) в диглиме (2,6 мл) добавляли PS (108 мг, 0,243 ммоль) и NaCO (52,0 мг, 0,486 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=100:1 до 20:1) с получением 2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазола (37,0 мг, 74%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,35-1,70 (7H, м), 2,00-2,28 (3H, м), 2,52-2,67 (1H, м), 3,38-3,57 (1H, м), 3,61-3,80 (1H, м), 3,87-4,17 (1H, м), 5,08 и 5,51 (1H, с+с), 5,84 и 6,38 (1H, с+с), 7,22-7,26 (1H, м), 8,29-8,40 (1H, м), 8,42 (1H, с), 8,55 (1H, с). МС: 410,3 [МН].
Пример 22: Получение химического соединения 14: 2-циклопропил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
Стадия A: N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
3
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9, 200 мг, 0,611 ммоль) в ДМФ (4,0 мл) добавляли циклопропанкарбогидразида гидрохлорид (167 мг, 1,22 ммоль), DIPEA (0,427 мл, 2,44 ммоль) и HATU (349 мг, 0,917 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (196 мг, 78%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,80-0,98 (2H, м), 1,15-1,28 (2H, м), 1,50-1,55 (1H, м), 1,97-2,27 (3H, м), 2,47-2,61 (1H, м), 3,60-4,30 (2H, м), 5,06 и 5,66 (1H, с+с), 5,88 и 6,39 (1H, с+с), 7,02-7,33 (1H, м), 8,24-8,36 (4H, м), 8,74 и 9,21 (1H, с+с), 9,94 и 10,71 (1H, с+с).
Стадия В: 2-циклопропил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол
4
10
2
3
2
4
2
3
1
+
К раствору N'-(циклопропанкарбонил)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (50,0 мг, 0,122 ммоль) в диглиме (2,6 мл) добавляли PS (109 мг, 0,244 ммоль) и NaCO (52,0 мг, 0,488 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=100:1 до 20:1) с получением 2-циклопропил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (33,0 мг, 66%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,94-1,17 (2H, м), 1,17-1,31 (2H, м), 2,04-2,28 (3H, м), 2,37-2,48 (1H, м), 2,52-2,68 (1H, м), 3,50-4,17 (3H, м), 5,07 и 5,58 (1H, с+с), 5,90 и 6,37 (1H, с+с), 7,22 (1H, д, J= 7,2 Гц), 8,30-8,40 (1H, м), 8,43 (1H, с), 8,48-5,56 (1H, м). МС: 408,3 [МН].
Пример 23: Получение химического соединения 15: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
Стадия A: 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
6
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 9, 316 мг, 0,965 ммоль) в ДМФ (6,4 мл) добавляли пивалогидразида гидрохлорид (442 мг, 290 ммоль), DIPEA (0,674 мл, 3,86 ммоль) и HATU (551 мг, 1,45 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (362 мг, 88%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,20 (9H, с), 1,80-2,10 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,62-3,82 (1H, м), 4,00-4,10 (1H, м), 5,36 (0,7H, д, J= 8,0 Гц), 6,17 (0,3H, д, J= 8,4 Гц), 6,71 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 7,65 (0,3Н, д, J= 8,0 Гц), 7,51 (1H, д, J= 7,4 Гц), 8,13 и 8,22 (1H, с+с), 8,28 и 8,43 (1H, с+с), 8,36 и 8,50 (1H, с+с), 8,64 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 8,83 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 8,79 (1H, с), 9,55 и 9,80 (1H, с+с).
Стадия B: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол
4
10
2
3
2
4
2
6
1
+
К раствору 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (100 мг, 0,235 ммоль) в диглиме (4,7 мл) добавляли PS (209 мг, 0,470 ммоль) и NaCO (100 мг, 0,940 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 4 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=20:1) с получением 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (34,0 мг, 34%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,42 и 1,48 (9H, с+с), 1,90-2,07 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,69 (1H, к, J= 8,8 Гц), 4,00-4,18 (1H, м), 5,35 (0,2Н, с), 5,46 (0,8Н, д, J= 8,4 Гц), 6,18 (0,2Н, с), 6,71 (0,8Н, д, J= 8,0 Гц), 7,69 (1H, д, J= 10,0 Гц), 8,38-8,40 (2H, м), 8,48 (1H, с), 8,83 (1H, д, J= 7,6 Гц). МС: 424,4 [МН].
Пример 24: Получение химического соединения 16: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола
3
2
4
2
6
1
+
Смесь 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (60,0 мг, 0,141 ммоль) и POCl (0,394 мл, 4,23 ммоль) нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и ДХМ. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=50:1 до 30:1) с получением 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (38,0 мг, 66%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,27-1,44 (9H, с+с), 1,89-2,21 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,61-3,88 (1H, м), 3,93-4,11 (1H, м), 5,32 (0,3H, с), 5,55 (0,7Н, д, J= 8,0 Гц), 6,18 (0,3H, с), 6,70 (0,7Н, д, J= 7,6 Гц), 7,65 (1H, д, J= 9,2 Гц), 8,34-8,45 (3H, м), 8,64-8,83 (1H, м). МС: 408,4 [МН].
Пример 25: Получение промежуточного соединения 10
Промежуточное соединение 10 (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
Стадия А: Этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
2
4
2
+
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,30 г, 5,76 ммоль), (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 5, 1,13 г, 6,6 ммоль) и KF (1,67 г, 28,8 ммоль) в ДМСО (19 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением этил-(R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (2,11 г, 98%) в виде желтого твердого вещества. МС: 372,90 [МН]
Стадия В: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (2,11 г, 5,68 ммоль) в EtOH (42 мл) и воде (14 мл) добавляли LiOH (408 мг, 17,0 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (1,92 г, 98%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,92-2,04 (3H, м), 2,33-2,60 (1H, уш.с), 3,64 (0,5Н, уш.с), 3,77 (0,5H, уш.с), 4,00 (1H, уш.с), 5,32 (0,5H, с), 5,53 (0,5H, с), 6,07 (0,5H, с), 6,67 (0,5H, с), 6,99-7,33 (3H, м), 8,15-8,19 (1H, м), 8,59 и 8,77 (1H, с+с), 11,45 (1H, с).
Пример 26: Получение промежуточного соединения 11
Промежуточное соединение 11: (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
Стадия A: (R)-этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
2
4
2
6
1
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (5,70 г, 25,3 ммоль), (R)-3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридина (промежуточное соединение 4, 4,37 г, 26,3 ммоль) и KF (7,34 г, 126 ммоль) в ДМСО (15 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:4) с получением (R)-этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (6,42 г, 71%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,17-1,30 (3Н, м), 1,91-2,09 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,61-3,82 (1H, м), 3,94-4,08 (1H, м), 4,09-4,29 (2H, м), 5,24-5,34 (0,3H, м), 5,35-5,48 (0,7Н, м), 6,10-6,19 (0,3H, м), 6,65-6,71 (0,7H, м), 7,60-7,74 (1H, м), 8,12-8,24 (1H, м), 8,36-8,54 (2H, м), 8,55-8,65 (0,3H, м), 8,70-8,81 (0,7Н, м).
Стадия В: (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
1
К раствору (R)-этил-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (6,56 г, 18,4 ммоль) в EtOH (70 мл) и воде (23 мл) добавляли LiOH (1,33 г, 55,4 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (5,80 г, 96%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,89-2,20 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,61-3,82 (1H, м), 3,92-4,08 (1H, м) 5,24-5,48 (1H, м), 6,12 и 6,63 (1H, с+с), 7,56-7,78 (1H, м), 8,46 (1H, с), 8,32-8,78 (3H, м), 11,54 (1H, с).
Пример 27: Получение промежуточного соединения 12
Промежуточное соединение 12: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
Стадия А: пиразоло[1,5-а]пиримидин-5-ол
1
6
К раствору металлического натрия (11,1 г, 481 ммоль) в EtOH (344 мл) добавляли 1Н-пиразол-3-амин (20,0 г, 241 ммоль) и 1,3-диметилпиримидин-2,4(1H,3H)-дион (35,4 г, 253 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи и охлаждали до комнатной температуры. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали холодным EtOH и высушивали под вакуумом с получением пиразоло[1,5-а]пиримидин-5-ола (36,0 г, >99%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 5,35 (1H, д, J= 1,6 Гц), 5,63 (1H, д, J= 7,2 Гц), 7,43 (1H, д, J= 1,6 Гц), 7,97 (1H, д, J= 7,2 Гц). * Протон из ОН не наблюдали.
Стадия В: 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин
3
3
2
4
2
6
1
Смесь пиразоло[1,5-а]пиримидин-5-ола (32,0 г, 237 ммоль) и POCl (177 мл, 1,89 моль) нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли ДХМ, промывали насыщенным водн. NaHCO, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1) с получением 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (14,1 г, 38%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 6,73 (1H, дд, J= 2,0, 0,8 Гц), 7,14 (1H, д, J= 7,2 Гц), 8,29 (1H, д, J= 2,4 Гц), 9,19 (1H, дд, J= 7,2, 0,8 Гц).
Стадия C: 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
3
6
1
К раствору 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (14,1 г, 92,0 ммоль) в ДМФ (184 мл) добавляли POCl (21,4 мл, 230 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем гасили льдом. Смесь нейтрализовали 1 N водн. NaOH. Осажденное желтое твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (15,1 г, 90%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 7,50 (1H, д, J= 7,2 Гц), 8,76 (1H, с), 9,40 (1H, д, J= 7,2 Гц), 10,09 (1H, с).
Стадия D: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
2
4
2
3
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (4,70 г, 25,9 ммоль), (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 5, 5,07 г, 27,7 ммоль) и KF (7,52 г, 129 ммоль) в ДМСО (86 мл) нагревали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (8,50 г, 100%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,90-2,28 (3H, м), 2,38-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,72 (0,4H, м), 5,84-6,02 (0,6Н, м), 6,35-6,46 (0,4H, м), 6,68-6,78 (1H, м), 6,82-7,20 (2H, м), 8,10-8,36 (2H, м), 9,77 и 10,11 (1H, с+с).
Пример 28: Получение химического соединения 17
Химическое соединение 17: (R)-2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазол
Стадия A: (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
2
4
2
6
1
J
J
К раствору (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение 11, 5,65 г, 17,3 ммоль) в ДМФ (115 мл) добавляли изобутирогидразида гидрохлорид (4,78 г, 34,5 ммоль), DIPEA (12,1 мл, 69,0 ммоль) и HATU (13,1 мг, 34,5 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=20:1) с получением (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (6,14 г, 86%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,03-1,42 (6H, м), 1,80-2,10 (3H, м), 3,66-3,81 (1H, м), 4,00-4,15 (1H, м), 5,36 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 5,43 (0,7H, д, J= 6,8 Гц), 6,17 (0,3H, д, J= 7,6 Гц), 6,71 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 7,53 (0,7H, д, J= 9,6 Гц), 7,65 (0,3H, д, J= 10,0 Гц), 8,14 и 8,23 (1H, с+с), 8,29 и 8,43 (1H, с+с), 8,36-8,50 (1H, с+с), 8,64 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 8,83 (0,7H, д, J= 8,0 Гц), 9,08 (0,7H, д, = 2,8 Гц), 9,92 (0,3H, с), 10,10 (0,7H, д, = 3,6 Гц), 10,44 (0,3H, с). *Два протона из NHNH не наблюдали.
Стадия В: (R)-2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазол
2
4
2
6
1
+
К раствору (R)-5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-изобутирилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (5,20 г, 12,6 ммоль) в ТГФ (250 мл) добавляли реагент Лоусона (10,2 г, 25,3 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=50:1) с получением (R)-2-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-изопропил-1,3,4-тиадиазола (1,88 г, 36%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,34-1,38 (6H, м), 1,87-2,10 (3H, м), 3,35-3,85 (1H, м), 3,66-3,75 (1H, м), 4,03-4,12 (1H, м), 5,35 (0,2Н, д, J= 6,4 Гц), 5,44 (0,8H, д, J= 6,8 Гц), 6,17 (0,2Н, с), 6,71 (0,8H, д, J= 7,6 Гц), 7,70 (1H, д, J= 9,2 Гц), 8,35-8,44 (2H, м), 8,45-5,57 (2H, м), 8,64 (0,2Н, с), 8,83 (0,8Н, д, J= 8,0 Гц). МС: 410,4 [МН].
Пример 29: Получение химического соединения 18
Химическое соединение 18: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-1,3,4-оксадиазол
Стадия A: (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-амин
2
3
2
2
3
2
4
2
6
1
К раствору гидразинкарбоксамида гидрохлорида (85,0 мг, 0,761 ммоль) и ацетата натрия (62,0 мг, 0,761 ммоль) в воде (1,5 мл) добавляли раствор (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (промежуточное соединение 12, 250 мг, 0,761 ммоль) в MeOH (1,5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и концентрировали под вакуумом. Полученный остаток растворяли в диоксане (7,7 мл). После добавления KCO (316 мг, 2,28 ммоль) с последующим добавлением иода (232 мг, 0,914 ммоль) реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 часов, охлаждали до комнатной температуры и затем гасили 5% водн. NaSO. Смесь экстрагировали ДХМ/MeOH (10:1, 10 мл × 4). Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=50:1 до 25:1) с получением (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-амина (179 мг, 61%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,05 (3H, м), 2,35-2,55 (1H, м), 3,50-3,80 (1H, м), 3,90-4,05 (1H, м), 5,30 и 5,54 (1H, с+с), 6,05-6,67 (1H, м), 6,68-7,38 (4H, м), 8,00-8,18 (1H, м), 8,50-8,80 (1H, м).
Стадия В: (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
3
3
2
4
2
6
1
К раствору бромида меди (II) (125 мг, 0,560 ммоль) и трет-бутилнитрита (0,0670 мл, 0,560 ммоль) в CHCN (1,9 мл) добавляли раствор (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-амина (179 мг, 0,467 ммоль) в CHCN (3,8 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 65°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (72,0 мг, 34%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,05 (3H, м), 2,35-2,50 (1H, м), 3,60-3,88 (1H, м), 3,96-4,08 (1H, м), 5,36 и 5,53 (1H, с+с), 6,12 и 6,69 (1H, с+с), 6,90-7,40 (3H, м), 8,33-8,40 (1H, м), 8,62-8,82 (1H, м).
Стадия C: (R)-трет-бутил-4-(5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-ил)пиперазин-1-карбоксилат
2
2
6
1
К раствору (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (72,0 мг, 0,161 ммоль) и трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (60,0 мг, 0,322 ммоль) в ДМФ (2,0 мл) добавляли DIPEA (0,0840 мл, 0,483 ммоль) и ДМАП (20,0 мг, 0,161 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 7 часов и выливали в HO. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:9) с получением (R)-трет-бутил-4-(5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (58,0 мг, 65%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,45 (9H, с), 1,80-2,10 (3H, м), 2,30-2,45 (1H, м), 2,95-3,08 (1H, м), 3,20-3,63 (4H, м), 3,40-3,51 (3H, м), 3,52-3,88 (1H, м), 3,98-4,08 (1H, м), 5,39 и 5,69 (1H, с+с), 6,14 и 6,66 (1H, с+с), 6,82-7,40 (3H, м), 8,20-8,30 (1H, м), 8,55-5,88 (1H, м).
Стадия D: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-1,3,4-оксадиазол
3
2
4
2
6
1
+
К раствору (R)-трет-бутил-4-(5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (58,0 мг, 0,105 ммоль) в ДХМ (0,70 мл) добавляли ТФУК (0,162 мл, 2,10 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, подщелачивали насыщенным водн. NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:MeOH=30:1 до 4:1) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-1,3,4-оксадиазола (29,0 мг, 61%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,82-2,08 (4H, м), 2,30-2,45 (1H, м), 2,74-2,90 (4H, м), 3,10-3,28 (3H, м), 3,36-3,45 (1H, м), 3,52-3,84 (1H, м), 3,96-4,06 (1H, м), 5,29 и 5,61 (1H, с+с), 6,06 и 6,66 (1H, с+с), 6,90-7,40 (3H, м), 8,20-8,30 (1H, м), 8,55-8,80 (1H, м). МС: 453,2 [МН].
Пример 30: Получение химического соединения 19
Химическое соединение 19: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(1H-пиразол-4-ил)-1,3,4-тиадиазол
Стадия A: (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-амин
10
3
6
1
К смеси (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение , 1,00 г, 2,90 ммоль) и гидразинкарботиоамида (265 мг, 2,90 ммоль) добавляли POCl (1,08 мл, 11,6 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 3 часов в герметично закрытой пробирке, в то время как повышенное давление сбрасывали каждый час. После охлаждения до 0°С реакционную смесь выливали в воду. Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и высушивали под вакуумом с получением (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-амина (1,16 г, >99%) в виде бледно-желтого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,85-2,20 (3H, м), 2,45-2,55 (1H, м), 3,50-3,75 (4H, м), 5,38 (0,5H, д, J= 8,0 Гц), 5,50 (0,5H, д, J= 7,6 Гц), 6,15 (0,5H, д, J= 7,6 Гц), 6,73 (0,5H, д, J= 7,6 Гц), 6,95-7,30 (2H, м), 7,33-7,39 (1H, м), 8,37 и 8,49 (1H, с+с), 8,72 (0,5H, д, J= 6,0 Гц), 8,92 (0,5H, д, J= 7,6 Гц), 9,36 (1H, уш.с).
Стадия В: (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
3
3
2
4
2
3
1
К раствору CuBr (777 мг, 3,48 ммоль) и трет-бутилнитрита (4,14 мл, 3,48 ммоль) в CHCN (9,6 мл) добавляли раствор (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-амина (1,15 г, 2,90 ммоль) в СНCN (19 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 65°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:2) с получением (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (586 мг, 43%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,14-2,18 (3H, м), 2,46-2,56 (1H, м), 3,63-3,82 (1H, м), 4,03-4,07 (1H, м), 5,36 (0,3Н, д, J= 8,4Н), 5,46 (0,7H, д, J= 8,4), 6,37 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 6,72 (0,7H, д, J= 8,0 Гц), 6,95-7,40 (3H, м), 8,40 и 8,50 (1H, с+с), 8,66 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 8,85 (0,7H, д, J= 7,6 Гц).
Стадия C: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(1H-пиразол-4-ил)-1,3,4-тиадиазол
3
4
2
2
2
2
2
+
Смесь (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (100 мг, 0,216 ммоль), трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол-1-карбоксилата (127 мг, 0,432 ммоль), KPO (137 мг, 0,648 ммоль) и аддукта PdCl(dppf)-CHCl (35,0 мг, 0,043 ммоль) в диоксане (1,9 мл) и воде (0,21 мл) дегазировали N газом. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 15 часов в герметично закрытой пробирке. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли EtOAc и фильтровали через слой силикагеля. Фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=50:1 до 15:1) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(1H-пиразол-4-ил)-1,3,4-тиадиазола (14,0 мг, 14%) в виде белого твердого вещества. МС: 451,2 [МН].
Пример 31: Получение химического соединения 20: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-4-ил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина
3
4
2
2
2
2
2
+
Смесь (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (100 мг, 0,216 ммоль), 1H-пиразол-3-илбороновой кислоты (48,0 мг, 0,432 ммоль), KPO (137 мг, 0,648 ммоль) и аддукта PdCl(dppf)-CHCl (35,0 мг, 0,043 ммоль) в диоксане (1,9 мл) и воде (0,21 мл) дегазировали N газом. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 15 часов в герметично закрытой пробирке. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли EtOAc и фильтровали через слой силикагеля. Фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=50:1 до 15:1) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(1H-пиразол-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (16,0 мг, 16%) в виде белого твердого вещества. МС: 451,2 [МН].
Пример 32: Получение химического соединения 21: (R)-N-(5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)бензамида
2
+
К раствору (R)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-амина (50,0 мг, 0,125 ммоль) в ДМФ (0,20 мл) добавляли ТЭА (0,0130 мл) с последующим добавлением бензоилхлорида (0,0150 мл, 0,125 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 8 часов при комнатной температуре и затем обрабатывали водой. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и высушивали под вакуумом. Твердое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:4 до 1:5) с получением (R)-N-(5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазол-2-ил)бензамида (23,0 мг, 36%) в виде бледно-желтого твердого вещества. МС: 504,3 [МН].
Пример 33: Получение химического соединения 22
Химическое соединение 22: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
2
4
2
+
К раствору (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (89,0 мг, 0,192 ммоль) и пиперазина (41,0 мг, 0,480 ммоль) в ДМФ (2,4 мл) добавляли DIPEA (0,0840 мл, 0,480 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 16 часов, охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до только MeOH) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-1,3,4-тиадиазола (12,0 мг, 13%) в виде желтого твердого вещества. МС: 469,3 [МН].
Пример 34: Получение химического соединения 23: (R)-2-(1,4-диазепан-1-ил)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола
2
4
2
+
К раствору (R)-2-бром-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (100 мг, 0,216 ммоль) и 1,4-диазепана (43,0 мг, 0,432 ммоль) в ДМФ (2,7 мл) добавляли DIPEA (0,113 мл, 0,648 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 16 часов, охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до только MeOH) с получением (R)-2-(1,4-диазепан-1-ил)-5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-тиадиазола (16,0 мг, 15%) в виде желтого твердого вещества. МС: 483,3 [МН].
Пример 35: Получение химического соединения 24
Химическое соединение 24: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперидин-4-ил)-1,3,4-оксадиазол
Стадия A: трет-бутил-4-(гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилат
2
4
3
1
К раствору 1-трет-бутил-4-этил-пиперидин-1,4-дикарбоксилата (2,00 г, 7,77 ммоль) в EtOH (26 мл) добавляли гидразингидрат (5,84 г, 117 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи, охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в ДХМ, промывали водой 3 раза и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-4-(гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата (985 мг, 52%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,46 (9H, с), 1,58-1,70 (2H, м), 1,73-1,85 (2H, м), 2,19-2,26 (1H, м), 2,27 (2H, уш.с), 3,90 (2H, с), 4,15 (2H, уш.с), 6,99 (1H, с).
Стадия В: (R)-трет-бутил-4-(2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилат
10
4
2
4
2
+
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (промежуточное соединение , 200 мг, 0,581 ммоль) в ДМФ (3,8 мл) добавляли трет-бутил-4-(гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилат (212 мг, 0,871 ммоль), DIPEA (0,304 мл, 1,74 ммоль), HATU (331 мг, 0,871 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (R)-трет-бутил-4-(2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата (265 мг, 80%) в виде белого твердого вещества. МС: 569,90 [МН].
(R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперидин-4-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
3
1
К раствору (R)-трет-бутил-4-(2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата (90,0 мг, 0,158 ммоль) в ДХМ (1,0 мл) добавляли пиридин (0,0290 мл, 0,363 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0560 мл, 0,332 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до 5:1) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперидин-4-ил)-1,3,4-оксадиазола (31,0 мг, 43%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,28 (4H, м), 2,30-2,62 (4H, м), 3,13-3,33 (2H, м), 3,35-3,74 (4H, м), 3,82-4,22 (2H, м), 5,21 и 5,76 (1H, с+с), 5,93 и 6,42 (1H, с+с), 6,65-6,80 (1H, м), 6,58-7,15 (2H, м), 8,19-8,38 (2H, м).
Пример 36: Получение химического соединения 25: (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперидин-4-ил)-1,3,4-тиадиазола
4
10
2
3
2
4
2
+
К раствору (R)-трет-бутил-4-(2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонил)гидразинкарбонил)пиперидин-1-карбоксилата (90,0 мг, 0,158 ммоль) в диглиме (3,1 мл) добавляли PS (140 мг, 0,316 ммоль) и NaCO (67,0 мг, 0,632 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=10:1) с получением (R)-2-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-5-(пиперидин-4-ил)-1,3,4-тиадиазола (49,0 мг, 66%) в виде желтого твердого вещества. МС: 468,2 [МН].
Пример 37: Получение химического соединения 26
Химическое соединение 26: 2-трет-бутил-5-(5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
Стадия A: (R)-этил-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
6
2
4
2
6
1
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (100 мг, 0,443 ммоль), (2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (промежуточное соединение , 94,0 мг, 0,465 ммоль) и KF (129 мг, 2,21 ммоль) в ДМСО (1,5 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением (R)-этил-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (161 мг, 93%) в виде бледно-желтой пены. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,16-1,30 (3H, м), 2,10-2,34 (1H, м), 2,73-2,95 (1H, м), 4,00-4,30 (3H, м), 4,52 и 5,47 (1H, с+с), 5,49-5,67 (2H, м), 6,11 и 6,74 (1H, с+с), 7,12-7,40 (3H, м), 8,15-8,30 (1H, м), 8,60-8,82 (1H, м).
Стадия B: 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
1
К раствору этил-5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (161 мг, 0,412 ммоль) в EtOH (3,0 мл) и воде (1,0 мл) добавляли LiOH (30,0 мг, 1,24 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (107 мг, 72%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 2,93-2,37 (1H, м), 2,70-2,95 (1H, м), 3,94-4,60 (2H, м), 5,35-5,68 (2H, м), 6,11 и 6,71 (1H, с+с), 7,00-7,40 (3H, м), 8,17 (1H, с), 8,60-6,82 (1H, м), 11,60 (1H, уш.с).
Стадия C: 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
6
К раствору 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (107 мг, 0,295 ммоль) в ДМФ (2,0 мл) добавляли пивалогидразида гидрохлорид (135 мг, 0,886 ммоль), DIPEA (0,206 мл, 1,18 ммоль) и HATU (168 мг, 0,443 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (101 мг, 74%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,17-1,26 (9H, м), 2,10-2,30 (1H, м), 2,78-2,95 (1H, м), 4,10-4,38 (2H, м), 5,35-5,67 (2H, м), 6,14 (0,3H, с), 6,76 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 7,02-7,40 (3H, м), 8,15 и 8,24 (1H, с+с), 8,39 и 8,71 (1H, с+с), 8,86 (1H, д, J= 7,2 Гц), 9,48 и 9,83 (1H, с+с).
Стадия D: 2-трет-бутил-5-(5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
6
1
+
К раствору 5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (101 мг, 0,219 ммоль) в ДХМ (1,5 мл) добавляли пиридин (0,0410 мл, 0,505 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0780 мл, 0,461 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением 2-трет-бутил-5-(5-((2R,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (68,0 мг, 70%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,23-1,44 (9H, м), 2,10-2,38 (1H, м), 2,80-3,00 (1H, м), 4,00-4,60 (2H, м), 5,35-5,51 (1H, м), 5,52-5,71 (1H, м), 6,14 и 6,81 (1H, с+с), 7,02-7,40 (3H, м), 8,38 (1H, с), 8,71-8,87 (1H, м). МС: 443,4 [МН].
Пример 38: Получение химического соединения 27
Химическое соединение 27: 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
Стадия А: 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
7
1
6
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (112 мг, 0,496 ммоль), (2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидина (промежуточное соединение , 105 мг, 0,521 ммоль) и KF (114 мг, 2,48 ммоль) в ДМСО (1,6 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением этил-5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (171 мг, 88%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,04-1,38 (3H, м), 2,17-2,40 (1H, м), 2,62-2,98 (1H, м), 3,85-4,39 (4H, м), 5,45-5,53 (1H, м), 5,61 и 5,75 (1H, с+с), 6,17 и 6,71 (1H, с+с), 6,87-6,95 (1H, м), 7,05-7,40 (2H, м), 8,18-8,29 (1H, м), 8,60-8,90 (1H, м).
Стадия В: 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
2
1
К раствору этил-5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (171 мг, 0,438 ммоль) в EtOH (3,3 мл) и воде (1,1 мл) добавляли LiOH (31,0 мг, 1,31 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (150 мг, 95%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 2,26-2,34 (1H, м), 2,70-2,95 (1H, м), 3,92-4,18 (1H, м), 4,20-4,38 (1H, м) 5,46-6,17 (3H, м), 6,84-6,92 (1H, м), 7,09-7,19 (1H, м), 7,25-7,28 (1H, м), 8,18 (1H, с), 8,60-8,75 (1H, м). *Протон из COH не наблюдали.
Стадия C: 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
6
К раствору 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (150 мг, 0,414 ммоль) в ДМФ (2,7 мл) добавляли пивалогидразида гидрохлорид (190 мг, 1,24 ммоль), DIPEA (0,289 мл, 1,65 ммоль) и HATU (236 мг, 0,621 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (102 мг, 53%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 2,15-2,40 (1H, м), 2,70-2,98 (1H, м), 3,88-4,18 (1H, м), 4,20-4,45 (1H, м), 5,40-5,60 (2H, м), 6,75 (1H, д, J= 7,6 Гц), 6,85-7,40 (3H, м), 8,17 и 8,27 (1H, с+с), 8,53 и 8,71 (1H, с+с), 8,91 (1H, д, J= 7,6 Гц), 9,39 и 9,55 (1H, с+с).
Стадия D: 2-трет-бутил-5-(5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
2
4
2
6
1
+
К раствору 5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (102 мг, 0,222 ммоль) в ДХМ (1,5 мл) добавляли пиридин (0,0410 мл, 0,509 ммоль) при 0°С. Смесь охлаждали до -10°С и затем добавляли к ней по каплям трифторметансульфоновый ангидрид (0,0790 мл, 0,465 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при -10°С в течение 1 часа и затем при 0°С в течение 1 часа. После гашения водой смесь экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3) с получением 2-трет-бутил-5-(5-((2S,4S)-2-(2,5-дифторфенил)-4-фторпирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (28,0 мг, 26%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,15-1,52 (9H, м), 2,20-2,40 (1H, м), 2,65-2,81 (1H, м), 3,88-4,38 (2H, м) 5,40-5,85 (2H, м), 6,19-6,75 (1H, м), 6,85-7,40 (3H, м), 8,34 (1H, с), 8,70-8,70 (1H, м). МС: 443,4 [МН].
Пример 39: Получение химического соединения 28
Химическое соединение 28: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
Стадия A: этил-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат
3
2
4
2
6
1
Смесь этил-5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (200 мг, 0,886 ммоль), 5-фтор-2-метокси-3-(пирролидин-2-ил)пиридина (промежуточное соединение , 186 мг, 0,948 ммоль) и KF (257 мг, 4,43 ммоль) в ДМСО (3,0 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и EtOAc. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением этил-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-карбоксилата (225 мг, 74%) в виде белой пены. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,25-1,30 (3H, м), 1,88-2,08 (3H, м), 2,23-2,37 (1H, м), 3,48-3,85 (1H, м), 3,90-4,09 (5H, м), 4,15-4,30 (1H, м), 5,14 (0,3H, м), 5,48 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 5,98 (0,3H, м), 6,65 (0,7H, д, J= 6,8 Гц), 7,22-7,41 (1H, м), 7,93-8,11 (1H, м), 8,12-8,30 (1H, м), 8,53 (0,3H, с), 8,76 (0,7H, д, J= 7,2 Гц).
Стадия B: 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота
2
4
6
2
1
К раствору этил-5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)циклопентил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (255 мг, 0,663 ммоль) в EtOH (5,0 мл) и воде (1,6 мл) добавляли LiOH (48,0 мг, 1,99 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (170 мг, 72%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,82-2,08 (3H, м), 2,26-2,48 (1H, м), 3,45-3,80 (2H, м), 3,88-4,08 (3H, м), 5,15 и 5,46 (1H, с+с), 6,64 и 7,34 (1H, с+с), 7,34 (1H, с), 7,92-8,18 (2H, м), 8,42-8,85 (1H, м). *Протон из COH не наблюдали.
Стадия C: 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразид
1
6
К раствору 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (170 мг, 0,476 ммоль) в ДМФ (3,1 мл) добавляли пивалогидразида гидрохлорид (218 мг, 0,143 ммоль), DIPEA (0,332 мл, 1,90 ммоль) и HATU (271 мг, 0,714 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (164 мг, 76%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,10-1,23 (9H, м), 1,77-2,10 (3H, м), 2,20-2,48 (1H, м), 3,57-3,78 (1H, м), 3,88-3,99 (3H, м), 4,00-4,10 (1H, м), 5,19 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 5,31 (0,7H, д, J= 8,8 Гц), 6,01 (0,3H, д, J= 8,4 Гц), 6,69 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 7,3-7,42 (1H, м), 7,89-7,98 (1H, м), 8,05-8,18 (1H, м), 8,19-8,32 (1H, м), 8,60 (0,3H, д, J= 8,0 Гц), 8,83 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 9,29 и 9,54 (1H, с+с).
Стадия D: 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазол
3
2
4
2
6
1
+
Смесь 5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)-N'-пивалоилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбогидразида (110 мг, 242 ммоль) и POCl (0,675 мл, 7,25 ммоль) нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь распределяли между водой и ДХМ. Отделенный органический слой промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1 до 1:4) с получением 2-трет-бутил-5-(5-(2-(5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1,3,4-оксадиазола (61,0 мг, 58%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,22 и 1,44 (9H, с+с), 1,70-2,10 (3H, м), 2,20-2,40 (1H, м), 3,52-3,85 (1H, м), 3,95-4,12 (4H, м), 5,15 (0,3H, д, J= 7,6 Гц), 5,50 (0,7H, д, J= 7,6 Гц), 6,00 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 6,70 (0,7H, д, J= 8,0 Гц), 7,23-7,42 (1H, м), 7,95-8,15 (1H, м), 8,30-8,42 (1H, м), 8,60 (0,3H, д, J= 7,2 Гц), 8,83 (0,7H, д, J= 7,2 Гц). МС: 438,4 [МН].
Пример 40: Получение химического соединения 29
Химическое соединение 29: 5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)оксазол
Стадия A: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
2
2
4
2
3
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (300 мг, 1,65 ммоль), 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение , 324 мг, 1,77 ммоль) и KF (480 мг, 8,26 ммоль) в ДМСО (5,5 мл) нагревали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (540 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,90-2,28 (3H, м), 2,38-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,72 (0,4H, м), 5,84-6,02 (0,6Н, м), 6,35-6,46 (0,4H, м), 6,68-6,78 (1H, м), 6,82-7,20 (2H, м), 8,10-8,36 (2H, м), 9,77 и 10,11 (1H, с+с).
Стадия B: 5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)оксазол
2
3
2
4
2
4
1
+
К раствору 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (300 мг, 0,914 ммоль) в MeOH (9,2 мл) добавляли 1-(изоцианометилсульфонил)-4-метилбензол (178 мг, 0,914 ммоль) и KCO (126 мг, 0,914 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения MeOH остаток распределяли между ДХМ и водой. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением 5-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)оксазола (46,0 мг, 13%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (MeOH-d, Varian, 400 МГц): δ 1,95-2,25 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,50-3,88 (2H, м), 3,89-4,10 (1H, м), 5,20-5,70 (1H, м), 6,56-6,77 (1H, м), 6,80-7,20 (3H, м), 7,07-7,20 (1H, м), 7,92-8,20 (1H, м), 8,22-8,55 (1H, м). МС: 368,2 [МН].
Пример 41: Получение химического соединения 30
Химическое соединение 30: 4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)изоксазол
Стадия А: 5-хлор-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидин
N
1
6
К раствору 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (1,00 г, 6,51 ммоль) в ДМФ (13 мл) добавляли порциями -иодсукцинамид (1,61 г, 7,16 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. После добавления воды смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением 5-хлор-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (1,74 г, 96%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 7,15 (1H, д, J= 7,2 Гц), 8,34 (1H, с), 9,17 (1H, д, J= 7,2 Гц).
Стадия B: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидин
2
2
4
2
6
1
Раствор 5-хлор-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (621 мг, 2,22 ммоль), 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение , 407 мг, 2,22 ммоль) и KF (645 мг, 11,1 ммоль) в ДМСО (7,4 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли водой. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=5:1 до 3:1 до 2:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (819 мг, 86%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,15 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,50-3,80 (1H, м), 3,95-3,99 (1H, м), 5,21-5,51 (1H, м), 5,99 и 6,53 (1H, с+с), 6,97 (1H, с), 7,11-7,26 (1H, м), 7,95 (1H, м), 8,44-8,64 (1H, м).
Стадия C: 4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)изоксазол
3
4
2
2
2
2
2
4
1
+
Смесь 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (40,0 мг, 0,0940 ммоль), KPO (60,0 мг, 0,282 ммоль), аддукта PdCl(dppf)-CHCl (7,66 мг, 9,39 мкмоль) и изоксазол-4-илбороновой кислоты (21,0 мг, 0,188 ммоль) в диоксане (0,90 мл) и воде (0,10 мл) дегазировали N газом. Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 15 часов в герметично закрытой бутылке и охлаждали до комнатной температуры. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли EtOAc, фильтровали через слой силикагеля. Фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:4) с получением 4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)изоксазола (5,90 мг, 17%) в виде коричневого масла. Н-ЯМР (MeOH-d, Varian, 400 МГц): δ 1,95-2,20 (3H, м), 2,40-2,60 (1H, м), 3,50-4,12 (3H, м), 5,12-5,70 (1H, м), 5,80-6,40 (1H, м), 6,74 (1H, с), 6,92 (1H, с), 7,00-7,18 (1H, м), 8,00 (1H, с), 8,10-8,50 (2H, м). МС: 368,2 [МН].
Пример 42: Получение химического соединения 31: 4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-3,5-диметилизоксазола
3
4
2
2
2
2
2
4
2
3
1
+
Смесь 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (90,0 мг, 0,211 ммоль), KPO (134 мг, 0,634 ммоль), аддукта PdCl(dppf)-CHCl (17,0 мг, 0,0210 ммоль) и 3,5-диметилизоксазол-4-илбороновой кислоты (60,0 мг, 0,422 ммоль) в диоксане (1,9 мл) и воде (0,21 мл) дегазировали N газом. Реакционную смесь нагревали при приблизительно 100°С в течение 15 часов в герметично закрытой пробирке, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между EtOAc и водой. Отделенный органический слой промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:3 до 1:4) с получением 4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-3,5-диметилизоксазола (13,0 мг, 15%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,95-2,63 (10Н, м), 3,70 (1H, с), 3,91 (1H, с), 5,08-5,55 (1H, м), 5,70-6,38 (1H, м), 6,84 (1H, м), 6,91 (1H, м), 7,00-7,10 (1H, м), 7,84 (1H, с), 8,27 (1H, м). МС: 369,2 [МН].
Пример 43: Получение химического соединения 32
Химическое соединение 32: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(5-метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
Стадия А: 5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрил
2
3
6
1
Смесь 5-амино-1Н-пиразол-4-карбонитрила (1,00 г, 9,25 ммоль), этил-3-этоксиакрилата (2,00 мл, 13,8 ммоль) и CsCO (4,52 г, 13,88 ммоль) в ДМФ (18 мл) нагревали при 100°С в течение 9 часов. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и подкисляли 2 N водн. HCl до рН=2-3. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой с последующим промыванием EtOAc и высушивали под вакуумом с получением 5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (1,33 г, 90%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 6,24 (1H, д, J= 8,0 Гц), 8,31 (1H, с), 8,63 (1H, д, J= 7,6 Гц), 13,24 (1H, уш.с).
Стадия В: 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрил
3
2
3
1
Смесь 5-оксо-4,5-дигидропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (1,33 г, 8,31 ммоль) и POCl (7,74 мл, 83 ммоль) нагревали при 150°С в течение 3 часов и охлаждали до комнатной температуры. После концентрирования под вакуумом остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1) с получением 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (343 мг, 23%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 7,09 (1H, д, J= 7,6 Гц), 8,39 (1H, с), 8,68 (1H, д, J= 7,2 Гц).
Стадия C: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрил
2
4
2
3
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (343 мг, 1,92 ммоль) и 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 2, 343 мг, 1,87 ммоль) в ДМСО (10 мл) нагревали при 180°С в течение 1 часа и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (611 мг, 98%) в виде твердого вещества цвета слоновой кости. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,05-2,11 (3H, м), 2,47-2,55 (1H, м), 3,67-4,10 (2H, м), 5,20 (0,7Н, с), 5,65 (0,3Н, с), 5,96 (0,7Н, с), 6,43 (0,3Н, с), 6,69-6,73 (1H, м), 6,96-7,09 (2H, м), 8,01-8,31 (3H, м).
Стадия D: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамид
2
4
2
4
3
2
2
1
Смесь 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбонитрила (230 мг, 0,707 ммоль) и конц. HSO (1,13 мл, 21,2 ммоль) перемешивали при 0°С в течение 5 часов. После добавления воды со льдом смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамида (172 мг, 71%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,05-1,11 (2H, м), 2,47-2,55 (1H, м), 3,67-4,10 (2H, м), 5,12-5,32 (1H, м), 5,52 (0,6Н, с), 5,74 (0,4H, с), 5,90 (0,4H, с), 6,32 (0,6Н, с), 6,69-6,74 (1H, м), 6,96-7,09 (2H, м), 7,80 (0,5H, с), 8,20 (0,5H, с), 8,25-8,40 (1H, м). *Два протона из NHNH не наблюдали.
Стадия Е: (Z)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(1-(диметиламино)этилиден)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамид
Смесь 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамида (100 мг, 0,291 ммоль) и 1,1-диметокси-N,N-диметилэтанамина (1,06 мл, 7,28 ммоль) нагревали при 120°С в течение 2 часов в герметично закрытой пробирке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом с получением неочищенного (Z)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(1-(диметиламино)этилиден)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамида (160 мг, 99%), который использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия F: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(5-метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
1
+
4
К раствору неочищенного (Z)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-N-(1-(диметиламино)этилиден)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамида (160 мг, 0,291 ммоль) в AcOH (1,0 мл) добавляли гидразингидрат (22,0 мг, 0,437 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 2 часов и затем концентрировали под вакуумом. Остаток обрабатывали водой, в то время как твердое вещество осаждалось. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном и высушивали под вакуумом с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(5-метил-1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (58,0 мг, 52%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (MeOH-d, Varian, 400 МГц): δ 1,92-2,26 (3H, м), 2,34 (3H, м), 2,44-2,60 (2H, м), 3,67-4,22 (2H, м), 5,17 (0,4H, с), 5,68 (0,6Н, с), 6,11 (0,4H, с), 6,65 (0,6Н, с), 6,80-7,20 (2H, м), 7,20-7,43 (1H, м), 8,20-8,60 (2H, м). МС: 382,3 [МН].
Пример 44: Получение промежуточного соединения 13
Промежуточное соединение 13: трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
Стадия A: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
1
6
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидина (1,18 г, 7,68 ммоль), (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (1,51 г, 8,22 ммоль) и KF (2,32 г, 39,1 ммоль) в ДМСО (26 мл) нагревали при 180°С в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (1,70 г, 74% ) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,88-2,06 (3H, м), 2,33-2,45 (1H, м), 3,56-3,70 (1H, м), 3,90-4,00 (1H, м), 5,38 (1H, с), 5,98 (1H, с), 6,10-6,50 (1H, м), 6,85-6,91 (1H, м), 7,10-7,15 (1H, м), 7,26-7,32 (1H, м), 7,81 (1H, д, J= 1,6 Гц), 8,60 (1H, с).
Стадия В: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидин
1
6
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (975 мг, 3,25 ммоль) в ДМФ (6,5 мл) добавляли порциями NIS (804 мг, 3,57 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов и выливали в воду. Смесь перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (1,19 г, 86%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,15 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,50-3,80 (1H, м), 3,95-3,99 (1H, м), 5,21-5,51 (1H, м), 5,99 и 6,53 (1H, с+с), 6,97 (1H, с), 7,11-7,26 (1H, м), 7,95 (1H, м), 8,44-8,64 (1H, м).
Стадия C: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-((триметилсилил)этинил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
2
3
2
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (1,19 г, 2,79 ммоль) в ТГФ (10 мл) и ТЭА (10 мл) добавляли CuI (53,0 мг, 0,279 ммоль), PdCl(PPh) (196 мг, 0,279 ммоль) и этинилтриметилсилан (0,596 мл, 4,19 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После фильтрования через слой целита, в то время как промывая EtOAc, фильтрат концентрировали под вакуумом. Остаток разбавляли EtOAc, промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=2:1 до 1:1) с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-((триметилсилил)этинил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (832 мг, 75%) в виде вязкого желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,260 (9H, с), 2,03-2,20 (3H, м), 2,49 (1H, уш.с), 3,63-4,15 (2H, м), 5,17 и 6,25 (1H, уш.с+уш.с), 5,83 (1H, уш.с), 6,73-6,77 (1H, м), 6,91 (1H, уш.с), 7,04 (1H, уш.с), 7,93 (1H, с), 8,11 (1H, уш.с).
Стадия D: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидин
4
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-((триметилсилил)этинил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (832 мг, 2,10 ммоль) в ТГФ (10 мл) добавляли TBAF (1 М раствор в ТГФ, 2,52 мл, 2,52 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. После гашения насыщенным водн. NHCl смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=3:2 до 1:1) с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (659 мг, 97%) в виде вязкого желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,98-2,18 (3H, м), 2,50 (1H, уш.с), 3,24 (1H, с), 3,93 (1H, уш.с), 4,06 (1H, уш.с), 5,19 (1H, уш.с), 5,87 (1H, уш.с), 6,75 (1H, уш.с), 6,92 (1H, уш.с), 7,05 (1H, уш.с), 7,96 (1H, с), 8,14 (1H, уш.с).
Пример 45: Получение химического соединения 33
Химическое соединение 33: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
Стадия A: трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилат
4
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (1,00 г, 5,02 ммоль) в MeOH (16 мл) добавляли NaBH (285 мг, 7,53 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 часа. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между EtOAc и водой. Отделенный водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата (1,01 г, 100%) в виде вязкого бледно-желтого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,46 (9H, с), 1,48-1,50 (2H, м), 1,84-1,87 (2H, м), 2,99-3,06 (2H, м), 3,81-3,87 (3H, м). *ОН не наблюдали.
Стадия B: трет-бутил-4-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилат
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-4-гидроксипиперидин-1-карбоксилата (1,01 г, 5,02 ммоль) в ДХМ (16 мл) добавляли ТЭА (0,909 мл, 6,52 ммоль) и DMAP (61,0 мг, 0,502 ммоль) с последующим добавлением MsCl (0,469 мл, 6,02 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ, промывали водой, 2 N водн. HCl, насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором последовательно, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-4-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилата (1,40 г, 100%) в виде белого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,46 (9H, с), 1,78-1,86 (2H, м), 1,94-1,99 (2H, м), 3,04 (3H, с), 3,27-3,34 (2H, м), 3,68-3,72 (2H, м), 4,86-4,91 (1H, м).
Стадия C: трет-бутил-4-азидопиперидин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-4-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилата (1,40 г, 5,02 ммоль) в ДМФ (25 мл) добавляли азид натрия (979 мг, 15,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 12 часов при перемешивании, в то время как образовывалось белое твердое вещество. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между EtOAc и водой. Водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=5:1) с получением трет-бутил-4-азидопиперидин-1-карбоксилата (948 мг, 83%) в виде бесцветного масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,46 (9H, с), 1,53-1,57 (2H, м), 1,85-1,88 (2H, м), 3,05-3,12 (2H, м), 3,54-3,60 (1H, м), 3,81-3,84 (1H, м).
Стадия D: (R)-трет-бутил-4-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
4
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (промежуточное соединение 13, 144 мг, 0,444 ммоль) и трет-бутил-4-азидопиперидин-1-карбоксилата (111 мг, 0,488 ммоль) в трет-BuOH (2,0 мл) добавляли порошок меди (23,0 мг, 0,355 ммоль) с последующим добавлением воды (1,0 мл) и 1 М водн. раствора сульфата меди (0,089 мл, 0,089 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 90 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. После добавления конц. NHOH (2,0 мл) с последующим добавлением воды (2,0 мл) смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=30:1) с получением (R)-трет-бутил-4-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (177 мг, 72%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,49 (9H, с), 1,83-2,22 (7H, м), 2,48 (1H, уш.с), 2,97 (2H, с), 3,66 (1H, уш.с.), 3,91 (1H, уш.с), 4,35 (2H, уш.с), 4,67 (1H, уш.с), 5,70 (1H, уш.с), 6,34 (1H, уш.с), 6,75 (1H, уш.с), 6,91 (1H, уш.с), 7,13 (1H, уш.с), 7,52 (1H, с), 8,35 (1H, уш.с), 8,48 (1H, с).
Стадия Е: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
3
2
4
2
3
1
+
К раствору (R)-трет-бутил-4-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (177 мг, 0,321 ммоль) в ДХМ (1,6 мл) добавляли ТФУК (0,867 мл, 11,2 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=10:1 до 3:1 до 2:1) с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (100 мг, 69%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,83-2,30 (8H, м), 2,50 (1H, уш.с), 2,85 (2H, т, J= 11,2 Гц), 3,30-3,33 (2H, м), 3,69 (1H, уш.с), 3,93 (1H, уш.с), 4,58 (1H, уш.с), 5,24 и 5,68 (1H, уш.с+уш.с), 5,87 и 6,30 (1H, уш.с+уш.с), 6,75 (1H, уш.с), 6,90 (1H, уш.с), 7,12 (1H, уш.с), 7,57 (1H, с), 8,30 (1H, уш.с), 8,48 (1H, с). МС: 451,1 [МН].
Пример 46: Получение химического соединения 34: 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина
Стадия А: трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилат
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-3-гидроксипиперидин-1-карбоксилата (1,00 г, 4,97 ммоль) в ДХМ (16 мл) добавляли ТЭА (0,895 мл, 6,46 ммоль) с последующим добавлением MsCl (0,465 мл, 5,96 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ, промывали водой, 2 N водн. HCl, насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором последовательно, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилата (1,39 г, 100%) в виде бесцветного масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 1,55 (1H, уш.с), 1,78-2,01 (3H, м), 3,06 (3H, с), 3,28-3,38 (1H, м), 3,42-3,48 (1H, м), 3,54-3,68 (2H, м), 4,72 (1H, уш.с).
Стадия B: трет-бутил-3-азидопиперидин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пиперидин-1-карбоксилата (1,39 г, 4,98 ммоль) в ДМФ (24 мл) добавляли азид натрия (970 мг, 14,9 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 4 часов при перемешивании, в то время как образовывалось белое твердое вещество. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между EtOAc и водой. Водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=20:1 до 10:1 до 5:1) с получением трет-бутил-3-азидопиперидин-1-карбоксилата (840 мг, 74%) в виде бесцветного масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 1,49-1,62 (2H, м), 1,77 (1H, уш.с), 1,96 (1H, уш.с), 2,90-3,30 (2H, м), 3,44-3,50 (1H, м), 3,52-3,90 (2H, м).
Стадия C: трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилат
4
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (промежуточное соединение 13, 92,0 мг, 0,284 ммоль) и трет-бутил-3-азидопиперидин-1-карбоксилата (71,0 мг, 0,312 ммоль) в трет-BuOH (1,4 мл) добавляли порошок меди (14,0 мг, 0,227 ммоль) с последующим добавлением воды (1,0 мл) и 1 М водн. раствора сульфата меди (0,057 мл, 0,057 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 90 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc. После добавления конц. NHOH (2,0 мл) с последующим добавлением воды (2,0 мл) смесь интенсивно перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=30:1) с получением трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (123 мг, 79%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,48 (9H, с), 1,63-1,76 (2H, м), 1,90-1,94 (1H, м), 2,04 (1H, уш.с), 2,16 (2H, уш.с), 2,29 (1H, уш.с), 2,40-2,58 (1H, м), 2,80-3,50 (2H, м), 3,68 (1H, уш.с), 3,92 (1H, уш.с), 4,18 (1H, уш.с), 4,30-4,60 (2H, м), 5,23 и 5,66 (1H, уш.с+уш.с), 5,86 и 6,31 (1H, уш.с+уш.с), 6,75-6,77 (1H, м), 6,91 (1H, уш.с), 7,04 (1H, уш.с), 7,56 (1H, с), 8,31 (1H, уш.с), 8,47 (1H, с).
Стадия D: 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
3
2
4
2
3
1
+
К раствору трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)пиперидин-1-карбоксилата (123 мг, 0,223 ммоль) в ДХМ (1,1 мл) добавляли ТФУК (0,602 мл, 7,82 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=10:1 до 3:1) с получением 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пиперидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (70,0 мг, 69%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,92-1,95 (1H, м), 1,89-2,14 (8H, м), 2,28 (1H, уш.с), 2,49 (1H, уш.с), 2,77 (1H, т, J= 10,8 Гц), 2,85-3,18 (2H, м), 3,40 (1H, уш.с), 3,66 (1H, уш.с), 3,91 (1H, уш.с), 4,50 (1H, уш.с), 5,30 и 5,67 (1H, уш.с+уш.с), 5,85 и 6,29 (1H, уш.с+уш.с), 6,75 (1H, с), 6,90 (1H, с), 7,00-7,10 (1H, м), 7,57 (1H, с), 8,31 (1H, уш.с), 8,47 (1H, с). МС: 451,1 [МН].
Пример 47: Получение химического соединения 35: 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пирролидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина
Стадия А: трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пирролидин-1-карбоксилат
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-3-гидроксипирролидин-1-карбоксилата (1,00 г, 5,34 ммоль) в ДХМ (17 мл) добавляли ТЭА (0,962 мл, 6,94 ммоль) с последующим добавлением MsCl (0,499 мл, 6,41 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ, промывали водой, 2 N водн. HCl, насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором последовательно, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пирролидин-1-карбоксилата (1,42 г, 100%) в виде бесцветного масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 2,06-2,20 (1H, м), 2,21-2,36 (1H, м), 3,05 (3H, с), 3,44-3,54 (1H, м), 3,54-3,72 (3H, м), 5,27 (1H, уш.с).
Стадия B: трет-бутил-3-азидопирролидин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-3-(метилсульфонилокси)пирролидин-1-карбоксилата (1,42 г, 5,35 ммоль) в ДМФ (26 мл) добавляли азид натрия (1,04 г, 16,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 4 часов при перемешивании, в то время как образовывалось белое твердое вещество. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между EtOAc и водой. Водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=10:1 до 5:1) с получением трет-бутил-3-азидопирролидин-1-карбоксилата (1,07 г, 94%) в виде бесцветного масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 2,02-2,08 (2H, м), 3,35-3,54 (4H, м), 4,14-4,16 (1H, м).
Стадия C: трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)пирролидин-1-карбоксилат
4
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (промежуточное соединение 13, 92,0 мг, 0,284 ммоль) и трет-бутил-3-азидопирролидин-1-карбоксилата (66,0 мг, 0,312 ммоль) в трет-BuOH (1,4 мл) добавляли порошок меди (14,0 мг, 0,227 ммоль) с последующим добавлением воды (1,0 мл) и 1 М водн. раствора сульфата меди (0,057 мл, 0,057 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 90 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc. После добавления конц. NHOH (2,0 мл) с последующим добавлением воды (2,0 мл) смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=30:1) с получением трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)пирролидин-1-карбоксилата (127 мг, 83%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,50 (9H, с), 1,98-2,20 (3H, м), 2,22-2,63 (3H, м), 3,50-3,83 (4H, м), 3,83-4,20 (2H, м), 5,15 (1H, уш.с), 5,30 и 5,66 (1H, уш.с+уш.с), 5,84 и 6,31 (1H, уш.с+уш.с), 6,75 (1H, уш.с), 6,91 (1H, уш.с), 7,00-7,18 (1H, м), 7,52 (1H, с), 8,32 (1H, уш.с), 8,48 (1H, с).
Стадия D: 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пирролидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
3
2
4
2
3
1
К раствору трет-бутил-3-(4-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)пирролидин-1-карбоксилата (127 мг, 0,237 ммоль) в ДХМ (1,2 мл) добавляли ТФУК (0,638 мл, 8,28 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=10:1 до 3:1 до 2:1) с получением 5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(пирролидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (78,0 мг, 76%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,00-2,20 (4H, м), 2,26-2,60 (3H, м), 3,11 (1H, уш.с), 3,24-3,46 (3H, м), 3,68 (1H, уш.с), 3,91 (1H, уш.с), 5,02 (1H, уш.с), 5,39 и 5,64 (1H, уш.с+уш.с), 5,84 и 6,30 (1H, уш.с+уш.с), 6,75 (1H, с), 6,90 (1H, уш.с), 7,06 (1H, уш.с), 7,56 (1H, с), 8,31 (1H, уш.с), 8,46 (1H, с).
Пример 48: Получение химического соединения 36: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина
Стадия A: тетрагидро-2Н-пиран-4-илметансульфонат
3
2
4
3
1
К раствору тетрагидро-2Н-пиран-4-ола (500 мг, 4,90 ммоль) в ДХМ (16 мл) добавляли ТЭА (0,882 мл, 6,36 ммоль) с последующим добавлением MsCl (0,458 мл, 5,87 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли ДХМ, промывали водой, 2 N водн. HCl, насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором последовательно, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением тетрагидро-2Н-пиран-4-илметансульфоната (882 мг, 100%) в виде бесцветного масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,84-1,92 (2H, м), 2,03-2,07 (2H, м), 3,04 (3H, с), 3,52-3,58 (2H, м), 3,92-3,97 (2H, м), 4,87-4,93 (1H, м).
Стадия B: 4-азидотетрагидро-2H-пиран
2
4
2
3
1
К раствору тетрагидро-2Н-пиран-4-илметансульфоната (0,882 г, 4,89 ммоль) в ДМФ (16 мл) добавляли азид натрия (954 мг, 14,68 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток распределяли между EtOAc и водой. Водный слой экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=3:1) с получением 4-азидотетрагидро-2Н-пирана (110 мг, 17%) в виде бесцветного масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,60-1,70 (2H, м), 1,88-1,92 (2H, м), 3,44-3,50 (2H, м), 3,56-3,63 (1H, м), 3,92-3,97 (2H, м).
Стадия C: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин
4
2
4
2
3
1
+
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (96,0 мг, 0,296 ммоль) и 4-азидотетрагидро-2H-пирана (41,0 мг, 0,326 ммоль) в трет-BuOH (1,5 мл) добавляли порошок меди (15,0 мг, 0,237 ммоль) с последующим добавлением воды (1,0 мл) и 1 М водн. раствора сульфата меди (0,059 мл, 0,059 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 90 мин, охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc. После добавления конц. NHOH (2,0 мл) с последующим добавлением воды (2,0 мл) смесь энергично перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=30:1) с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-4-ил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидина (84,0 мг, 63%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,04-2,30 (7H, м), 2,49 (1H, уш.с), 3,61 (2H, т, J= 11,6 Гц), 3,92 (1H, уш.с), 4,18 (2H, т, J= 11,6 Гц), 4,73 (1H, уш.с), 5,19 и 5,66 (1H, уш.с+уш.с), 5,88 и 6,31 (1H, уш.с+уш.с), 6,73-6,78 (1H, м), 6,91 (1H, уш.с), 7,01-7,16 (1H, м), 7,52 (1H, с), 8,32 (1H, уш.с), 8,47 (1H, с). МС: 452,2 [МН].
Пример 49: Получение химического соединения 37: (R)-2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)-1-(пиперазин-1-ил)этан-1-она
Стадия A: трет-бутил-4-(2-бромацетил)пиперазин-1-карбоксилат
3
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-пиперазин-1-карбоксилата (2,00 г, 10,7 ммоль) в 5 масс.% водн. NaHCO (36 мл) и ДХМ (36 мл) добавляли 2-бромацетилбромид (1,40 мл, 16,1 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°С и затем при комнатной температуре в течение 2 часов. После разделения фаз органический слой промывали водой, 2 N водн. HCl, водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Твердый остаток очищали с помощью перекристаллизации из смеси EtOAc и гексан с получением трет-бутил-4-(2-азидоацетил)пиперазин-1-карбоксилата (2,92 г, 89%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 3,42-3,44 (2H, м), 3,46-3,54 (4H, м), 3,58-3,60 (2H, м), 3,86 (2H, с).
Стадия B: трет-бутил-4-(2-азидоацетил)пиперазин-1-карбоксилат
3
2
4
3
1
Суспензию трет-бутил-4-(2-азидоацетил)пиперазин-1-карбоксилата (2,92 г, 9,51 ммоль) и азида натрия (1,54 г, 23,7 ммоль) в СНCN (47 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 1 часа и охлаждали до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляли EtOAc, промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью перекристаллизации из смеси EtOAc и гексан с получением трет-бутил-4-(2-азидоацетил)пиперазин-1-карбоксилата (2,28 г, 89%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 3,33-3,38 (2H, м), 3,42-3,50 (4H, м), 3,58-3,66 (2H, м), 3,95 (2H, с).
Стадия C: трет-бутил-(R)-4-(2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)ацетил)пиперазин-1-карбоксилат
13
4
2
4
2
3
1
К раствору (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-этинилпиразоло[1,5-а]пиримидина (промежуточное соединение , 100 мг, 0,308 ммоль) и трет-бутил-4-(2-азидоацетил)пиперазин-1-карбоксилата (91,0 мг, 0,339 ммоль) в трет-BuOH (1,5 мл) добавляли порошок меди (16,0 мг, 0,247 ммоль) с последующим добавлением воды (0,70 мл) и 1 М водн. раствора сульфата меди (0,0620 мл, 0,0620 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 90 мин, охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc. После добавления конц. NHOH (2,0 мл) с последующим добавлением воды (2,0 мл) полученную смесь интенсивно перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=30:1) с получением (R)-трет-бутил-4-(2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)ацетил)пиперазин-1-карбоксилата (108 мг, 59%) в виде желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 2,00-2,25 (3H, м), 2,42-2,58 (1H, м), 3,34 (4Н, уш.с), 3,59 (2H, уш.с), 3,65 (2H, уш.с), 3,92 (1H, уш.с), 5,20 и 5,52 (1H, уш.с+уш.с), 5,28-5,32 (2H, м), 5,85 и 6,27 (1H, уш.с+уш.с), 6,78 (1H, уш.с), 6,90 (1H, уш.с), 7,04-7,10 (1H, м), 7,63 (1H, с), 8,25 (1H, уш.с), 8,47 (1H, с).
Стадия D: (R)-2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-Н-1,2,3-триазол-1-ил)-1-(пиперазин-1-ил)этан-1-он
3
2
4
2
3
1
+
К раствору (R)-трет-бутил-4-(2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)ацетил)пиперазин-1-карбоксилата (108 мг, 0,182 ммоль) в ДХМ (1,0 мл) добавляли ТФУК (0,500 мл, 6,49 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали насыщенным водн. NaHCO и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=10:1 до 3:1 до 2:1) с получением (R)-2-(4-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)-1-(пиперазин-1-ил)этанона (78,0 мг, 87%) в виде бледно-желтой пены. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 2,00-2,25 (3H, м), 2,50 (1H, уш.с), 2,85 (4Н, уш.с), 3,57 (2H, уш.с), 3,64 (2H, уш.с), 3,90 (1H, уш.с), 5,26 и 5,52 (1H, уш.с+уш.с), 5,26-5,30 (2H, м), 5,85 и 6,26 (1H, уш.с+уш.с), 6,77 (1H, уш.с), 6,88 (1H, уш.с), 7,00-7,12 (1H, м), 7,62 (1H, с), 8,24 (1H, уш.с), 8,46 (1H, с). МС: 494,2 [МН].
Пример 50: Получение химического соединения 38
Химическое соединение 38: (Е)-N-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламид
Стадия A: 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
2
4
2
6
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (500 мг, 2,75 ммоль), 3-фтор-5-(пирролидин-2-ил)пиридина (промежуточное соединение 1, 490 мг, 2,95 ммоль) и KF (800 мг, 13,8 ммоль) в ДМСО (9,2 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1) с получением 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (779 мг, 91%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,92-2,20 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,62-3,88 (1H, м), 3,98-4,15 (1H, м), 5,30-5,45 (1H, м), 6,22 (0,3H, м), 6,72 (0,7Н, д, J= 6,8 Гц), 7,60-7,75 (1H, м), 8,18-8,36 (1H, м), 8,38-8,56 (2H, м), 8,65 (0,3H, м), 8,80 (0,7Н, д, J= 6,0 Гц), 9,60 и 9,94 (1H, с+с).
Стадия В: (Е)-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилат
4
2
4
2
6
1
К суспензии NaH (55 масс.%, 328 мг, 7,51 ммоль) в сухом ТГФ (8,0 мл) добавляли раствор этил-2-(диэтоксифосфорил)ацетата (841 мг, 3,75 ммоль) в сухом ТГФ при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. После добавления раствора 5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (0,779 г, 2,50 ммоль) в сухом ТГФ реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре, гасили насыщенным водн. NHCl и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением (Е)-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (511 мг, 54%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,20-1,32 (4H, м), 1,85-2,13 (3H, м), 3,60-3,90 (1H, м), 3,96-4,22 (3H, м) 5,28-5,42 (1H, м), 6,05-6,32 (1H, м), 6,54-6,70 (1H, м), 7,40-7,77 (2H, м), 8,09-8,12 (1H, м), 8,15-8,80 (3H, м).
Стадия C: (Е)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловая кислота
2
4
6
1
К раствору (E)-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (511 мг, 1,340 ммоль) в EtOH (5,0 мл) и воде (1,7 мл) добавляли LiOH (96,0 мг, 4,02 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (Е)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (373 мг, 79%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,92-2,13 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,60-3,92 (1H, м), 3,93-4,12 (1H, м) 5,28-5,42 (1H, м), 6,05-6,32 (1H, м), 6,54-6,70 (1H, м), 7,40-7,77 (2H, м), 8,09-8,29 (1H, м), 8,32-8,80 (3H, м), 11,73 (1H, уш.с).
Стадия D: (Е)-N-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламид
4
2
4
2
6
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,142 ммоль) в ДМФ (1,0 мл) добавляли этиламин (2,0 М в ТГФ, 0,142 мл, 0,283 ммоль), DIPEA (0,0740 мл, 0,425 ммоль) и HATU (81,0 мг, 0,212 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (Е)-N-этил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида (48,0 мг, 89%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,10 (3H, т, J= 6,6 Гц), 1,92-2,20 (3H, м), 2,43-2,50 (1H, м), 3,10-3,30 (2H, м), 3,60-3,92 (1H, м), 4,00-4,15 (1H, м), 5,28-5,58 (1H, м), 6,05-6,42 (1H, м), 6,54-6,80 (1H, м), 7,18-8,10 (4H, м), 8,32-8,75 (3H, м). МС: 381,1 [МН].
Пример 51: Получение химического соединения 39: (Е)-N-циклопропил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида
4
2
4
2
6
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,142 ммоль) в ДМФ (1,0 мл) добавляли циклопропанамин (0,0200 мл, 0,283 ммоль), DIPEA (0,0740 мл, 0,425 ммоль) и HATU (81,0 мг, 0,212 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (Е)-N-циклопропил-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида (21,0 мг, 38%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 0,40-0,60 (2H, м), 0,61-0,75 (2H, м), 1,86-2,17 (3H, м), 2,43-2,50 (1H, м), 2,72-2,80 (1H, м), 3,60-3,92 (1H, м), 4,00-4,15 (1H, м), 5,25-5,52 (1H, м), 6,05-6,38 (1H, м), 6,54-6,70 (1H, м), 7,28-8,12 (4H, м), 8,32-8,75 (3H, м). МС: 393,1 [МН].
Пример 52: Получение химического соединения 40: (Е)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N,N-диметилакриламида
4
2
4
2
6
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,142 ммоль) в ДМФ (1,0 мл) добавляли диметиламина гидрохлорид (23,0 мг, 0,283 ммоль), DIPEA (0,0740 мл, 0,425 ммоль) и HATU (81,0 мг, 0,212 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (Е)-3-(5-(2-(5-фторпиридин-3-ил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N,N-диметилакриламида (39,0 мг, 72%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,86-2,10 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 2,80-3,00 (6H, м), 3,54-3,88 (1H, м), 3,92-4,15 (1H, м), 5,25-5,50 (1H, м), 6,05-6,12 (0,3Н, м), 6,48-6,70 (0,7Н, м), 6,73-7,70 (3H, м), 8,00-8,70 (4H, м). МС: 381,1 [МН].
Пример 53: Получение химического соединения 41
Химическое соединение 41: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-этилакриламид
Стадия A: 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
2
4
2
3
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (300 мг, 1,65 ммоль), 2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 2, 324 мг, 1,77 ммоль) и KF (480 мг, 8,26 ммоль) в ДМСО (5,5 мл) нагревали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливали в воду. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1) с получением 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (540 мг, 100%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,90-2,28 (3H, м), 2,38-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,72 (0,4H, м), 5,84-6,02 (0,6Н, м), 6,35-6,46 (0,4H, м), 6,68-6,78 (1H, м), 6,82-7,20 (2H, м), 8,10-8,36 (2H, м), 9,77 и 10,11 (1H, с+с).
Стадия В: (Е)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилат
4
2
4
2
3
1
К суспензии NaH (55 масс.%, 349 мг, 8,00 ммоль) в сухом ТГФ (8,9 мл) добавляли раствор этил-2-(диэтоксифосфорил)ацетата (896 мг, 4,00 ммоль) в сухом ТГФ при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. После добавления раствора 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (875 мг, 2,67 ммоль) в сухом ТГФ реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов и затем гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением (Е)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (609 мг, 57%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,36 (3H, т, J= 7,0 Гц), 1,95-2,20 (3H, м), 2,45-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 4,20-4,43 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,70 (0,4H, м), 5,84-5,96 (0,4H, м), 6,25-6,46 (0,6Н, м) 6,65-6,78 (2H, м), 6,82-7,00 (1H, м), 7,10-4,15 (1H, м), 7,50-7,85 (1H, м), 7,80-8,05 (1H, м), 8,12-8,35 (1H, м).
Стадия C: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловая кислота
2
4
6
1
К раствору (E)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (345 мг, 0,866 ммоль) в EtOH (3,3 мл) и воде (1,1 мл) добавляли LiOH (62,0 мг, 2,60 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl до рН 5~6. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (297 мг, 93%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,14 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,35-3,88 (1H, м), 3,98-4,18 (1H, м) 5,28-5,53 (1H, м), 6,00-3,20 (1H, м), 6,50-6,70 (1H, м), 6,90-7,00 (1H, м), 7,01-7,70 (3H, м), 8,05-8,20 (1H, м), 8,50-8,78 (1H, м), 11,95 (1H, с).
Стадия D: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-этилакриламид
2
4
2
3
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (75,0 мг, 0,203 ммоль) в ДХМ (2,0 мл) добавляли 2 капли ДМФ с последующим добавлением оксалилхлорида (0,0355 мл, 0,405 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем концентрировали при пониженном давлении с получением соответствующего соединения ацилхлорида. Остаточное неочищенное соединение ацилхлорида растворяли в ДХМ (2,0 мл) и затем добавляли к нему этиламина гидрохлорид (18,2 мг, 0,405 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов и гасили 1 N водн. HCl. Смесь промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:10 до только EtOAc) с получением (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-этилакриламида (13,0 мг, 16%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,15-1,32 (6H, м), 1,98-2,32 (3H, м), 2,42-2,60 (1H, м), 3,38-3,50 (2H, м), 3,61-4,05 (2H, м), 5,38-5,50 (1H, м), 6,23-6,60 (1H, м), 6,70-6,78 (1H, м), 6,86-7,13 (2H, м), 7,80-9,00 (1H, м), 8,10-8,36 (1H, м). МС: 398,1 [МН].
Пример 54: Получение химического соединения 42: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-изопропилакриламида
4
2
4
2
3
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (55,0 мг, 0,149 ммоль) в ДМФ (1,5 мл) добавляли HATU (73,4 мг, 0,193 ммоль), DIPEA (78,0 мкл, 0,446 ммоль) и изопропиламин (9,66 мг, 0,163 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:10 до только EtOAc) с получением (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-изопропилакриламида (30,0 мг, 49%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,13-1,32 (6H, м), 2,00-2,29 (3H, м), 2,42-2,60 (1H, м), 3,60-4,00 (2H, м), 4,20-4,30 (1H, м), 5,25-5,38 (1H, м), 5,62-5,95 (1H, м), 6,20-6,60 (2H, м), 6,70-6,77 (1H, м), 6,82-6,98 (1H, м), 7,00-7,10 (1H, м), 7,45-7,55 (1H, м), 7,82-7,99 (1H, м), 8,10-8,40 (1H, м). МС: 412,1 [МН].
Пример 55: Получение химического соединения 43: (E)-N-циклопропил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида
4
2
4
2
3
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,135 ммоль) в ДМФ (1,4 мл) добавляли HATU (66,7 мг, 0,176 ммоль), DIPEA (70,7 мкл, 0,405 ммоль) и циклопропиламин (10,5 мкл, 0,149 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=10:1 до только EtOAc) с получением (Е)-N-циклопропил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида (30,0 мг, 54%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 0,50-0,65 (2H, м), 0,78-0,92 (2H, м), 1,92-2,30 (4H, м), 2,39-2,59 (1H, м), 2,82-2,85 (1H, м), 3,58-3,80 (1H, м), 3,86-4,12 (1H, м), 5,50-5,70 (2H, м), 6,23-6,48 (1H, м), 6,69-6,78 (1H, м), 6,82-7,08 (2H, м), 7,45-7,62 (1H, м), 7,82-8,00 (1H, м), 8,12-8,40 (1H, м). МС: 410,1 [МН].
Пример 56: Получение химического соединения 44: (E)-N-трет-бутил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида
4
2
4
2
6
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,135 ммоль) в ДМФ (0,90 мл) добавляли трет-бутиламин (20,0 мг, 0,270 ммоль), DIPEA (0,0710 мл, 0,405 ммоль) и HATU (77,0 мг, 0,203 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (Е)-N-трет-бутил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриламида (38,0 мг, 66%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,31 (9H, с), 1,80-2,10 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,58-3,90 (1H, м), 3,95-4,12 (1H, м), 5,25-5,40 (0,4H, м), 5,50-5,62 (0,6Н, м), 5,97-6,10 (0,4H, м), 6,30-6,54 (0,6Н, м), 6,52-6,68 (1H, м), 6,70-7,00 (1H, м), 7,01-7,52 (4H, м), 7,95-8,10 (1H, м), 8,43-8,72 (1H, м). МС: 426,2 [МН].
Пример 57: Получение химического соединения 45: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N,N-диметилакриламида
4
2
4
2
3
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (55,0 мг, 0,149 ммоль) в ДМФ (1,5 мл) добавляли HATU (73,4 мг, 0,193 ммоль), DIPEA (78,0 мкл, 0,446 ммоль) и диметиламина гидрохлорид (7,36 мг, 0,163 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:10 до только EtOAc) с получением (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N,N-диметилакриламида (38,0 мг, 64%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,98-2,15 (3H, м), 2,35-2,60 (1H, м), 2,82-3,30 (6H, м), 3,50-3,78 (1H, м), 3,80-4,15 (2H, м), 5,64-6,01 (1H, м), 6,18-6,44 (1H, м), 6,60-6,78 (1H, м), 6,83-7,13 (2H, м), 7,55-7,86 (1H, м), 7,90-8,05 (1H, м), 8,10-8,43 (1H, м). МС: 398,1 [МН].
Пример 58: Получение химического соединения 46: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-(2-метоксиэтил)акриламида
1
+
6
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (60,0 мг, 0,162 ммоль) в ДМФ (1,1 мл) добавляли 2-метоксиэтанамин (37,0 мг, 0,486 ммоль), DIPEA (0,0850 мл, 0,486 ммоль) и HATU (185 мг, 0,486 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и разбавляли водой. После перемешивания в течение дополнительных 30 мин осажденное белое твердое вещество собирали фильтрованием и высушивали под вакуумом с получением (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-(2-метоксиэтил)акриламида (43,4 мг, 63%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,10 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,20-3,30 (3H, м), 3,33-3,45 (2H, м), 3,46-3,88 (2H, м), 3,90-4,15 (1H, м), 5,20-5,60 (1H, м), 5,88-6,38 (1H, м), 6,40-6,80 (1H, м), 6,81-7,55 (4H, м), 7,90-8,15 (2H, м), 8,40-8,80 (1H, м). *Протон из NH не наблюдали. МС: 428,2 [МН].
Пример 59: Получение химического соединения 47: (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(3-гидроксиазетидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
4
2
4
2
6
1
+
К раствору (E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,135 ммоль) в ДМФ (0,90 мл) добавляли азетидин-3-ола гидрохлорид (44,0 мг, 0,405 ммоль), DIPEA (0,141 мл, 0,810 ммоль) и HATU (0,103 г, 0,270 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (Е)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(3-гидроксиазетидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (21,0 мг, 36%) в виде белого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,86-2,10 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,56-3,90 (2H, м), 3,92-4,19 (3H, м), 4,20-4,58 (2H, м), 5,30-5,40 (0,4H, м), 5,50-5,62 (0,6Н, м), 5,74 (1H, д, J= 5,6 Гц), 5,97-6,10 (0,4H, м), 6,28-6,40 (0,6Н, м), 6,52-7,70 (2H, м), 7,05-7,52 (3H, м), 8,09-8,20 (1H, м), 8,50-8,78 (1H, м). МС: 426,2 [МН].
Пример 60: Получение химического соединения 48
Химическое соединение 48: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-(2-гидроксиэтил)акриламид
Стадия A: (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегид
2
4
2
3
1
Смесь 5-хлорпиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (промежуточное соединение 10, 4,70 г, 25,9 ммоль) (R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидина (промежуточное соединение 5, 5,07 г, 27,7 ммоль) и KF (7,52 г, 129 ммоль) в ДМСО (86 мл) перемешивали при 180°С в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли водой. Смесь экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH=20:1) с получением (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (8,50 г, 100%) в виде желтого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,90-2,28 (3H, м), 2,38-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,72 (0,4H, м), 5,84-6,02 (0,6Н, м), 6,35-6,46 (0,4H, м), 6,68-6,78 (1H, м), 6,82-7,20 (2H, м), 8,10-8,36 (2H, м), 9,77 и 10,11 (1H, с+с).
Стадия В: (R,E)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилат
4
2
4
2
3
1
К суспензии NaH (55 масс.%, 3,30 г, 76 ммоль) в сухом ТГФ (80 мл) добавляли раствор этил-2-(диэтоксифосфорил)ацетата (8,47 г, 37,8 ммоль) в сухом ТГФ при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. После добавления раствора (R)-5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбальдегида (8,27 г, 25,2 ммоль) в сухом ТГФ (40 мл) реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре и затем гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc, промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1) с получением (R,E)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (6,00 г, 60%) в виде красноватого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,36 (3H, т, J= 7,0 Гц), 1,95-2,20 (3H, м), 2,45-2,60 (1H, м), 3,60-4,18 (2H, м), 4,20-4,43 (2H, м), 5,14-5,28 (0,6Н, м), 5,54-5,70 (0,4H, м), 5,84-5,96 (0,4H, м), 6,25-6,46 (0,6Н, м) 6,65-6,78 (2H, м), 6,82-7,00 (1H, м), 7,10-4,15 (1H, м), 7,50-7,85 (1H, м), 7,80-8,05 (1H, м), 8,12-8,35 (1H, м).
Стадия C: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловая кислота
1
+
d
6
К раствору (R,E)-этил-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилата (6,00 г, 15,1 ммоль) в EtOH (56 мл) и воде (19 мл) добавляли гидрат гидроксида лития (1,90 г, 45,2 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 5 часов и охлаждали до комнатной температуры. После испарения EtOH остаток подкисляли 2 N водн. HCl и разбавляли EtOAc. Осажденное желтое твердое вещество собирали фильтрованием и промывали EtOAc, высушивали под вакуумом с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (5,58 г, >99%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-, Varian, 400 МГц): δ 1,80-2,14 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,35-3,88 (1H, м), 3,98-4,18 (1H, м) 5,28-5,53 (1H, м), 6,00-6,20 (1H, м), 6,50-6,70 (1H, м), 6,90-7,00 (1H, м), 7,01-7,70 (3H, м), 8,05-8,20 (1H, м), 8,50-8,78 (1H, м), 11,95 (1H, с). МС: 371,03 [МН].
Стадия D: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-(2-гидроксиэтил)акриламид
2
4
2
6
1
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (400 мг, 1,080 ммоль) в ДМФ (2,1 мл) добавляли HATU (616 мг, 1,62 ммоль) и DIPEA (0,472 мл, 2,70 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После добавления 2-аминоэтанола (66,0 мг, 1,08 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли ДХМ, промывали водой дважды и 1 N водн. NaOH, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=20:1 до 10:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-N-(2-гидроксиэтил)акриламида (279 мг, 62%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,82-2,12 (3H, м), 2,40-2,50 (1H, м), 3,20-3,30 (3H, м), 3,33-3,52 (2H, м), 3,56-3,92 (2H, м), 3,95-4,15 (1H, м), 5,23-5,62 (1H, м), 5,92-6,43 (1H, м), 6,53-6,83 (1H, м), 6,90-7,55 (4H, м), 7,90-8,20 (1H, м), 8,50-8,80 (1H, м). МС: 414,1 [МН].
Пример 61: Получение химического соединения 49: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-морфолинопроп-2-ен-1-она
2
4
2
6
1
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (3,00 г, 8,10 ммоль) в ДМФ (16 мл) добавляли HATU (4,62 г, 12,1 ммоль) и DIPEA (3,54 мл, 20,2 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. После добавления морфолина (1,05 мл, 12,1 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли EtOAc, промывали водой дважды, 1 N водн. NaOH и солевым раствором последовательно, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до EtOAc:MeOH=10:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-морфолинопроп-2-ен-1-она (2,13 г, 60%) в виде розового твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,86-2,40 (5H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 3,40-3,70 (6H, м), 3,95-4,10 (1H, м) 5,24-5,40 (0,4H, м), 5,50-5,62 (0,6Н, м), 5,95-6,18 (0,4H, м), 6,58-6,70 (0,6Н, м), 6,71-6,85 (1H, м), 6,86-7,50 (5H, м), 8,05-8,30 (1H, м), 8,50-8,83 (1H, м). МС: 440,2 [МН].
Пример 62: Получение химического соединения 50: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она
Стадия A: (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-1-карбоксилат
2
4
2
3
1
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (400 мг, 1,08 ммоль) в ДМФ (2,2 мл) добавляли HATU (616 мг, 1,62 ммоль) и DIPEA (0,472 мл, 2,70 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После добавления трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (201 мг, 1,08 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, в то время как образовывалось желтое твердое вещество. Смесь разбавляли ДХМ, промывали водой дважды и 1 N водн. NaOH, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1 до ДХМ:EtOAc=1:10) с получением (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-1-карбоксилата (413 мг, 71%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,48 (9H, с), 1,95-2,09 (3H, м), 2,43-2,78 (1H, м), 3,20-4,00 (10Н, м), 5,17 и 5,75 (1H, с+с), 5,85 и 6,34 (1H, с+с), 6,67 (1H, с), 6,91 (1H, с), 7,05 (1H, с), 7,32 (1H, с), 7,50-8,32 (3H, м).
Стадия В: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-он
3
2
4
2
6
1
+
К раствору (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-1-карбоксилата (413 мг, 0,767 ммоль) в ДХМ (3,8 мл) добавляли ТФУК (2,00 мл, 26,0 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, подщелачивали насыщенным водн. NaHCO, промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=10:1 до 5:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (220 мг, 65%) в виде бледно-желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,86-2,40 (3H, м), 2,38-2,50 (1H, м), 2,64-2,80 (3H, м), 3,40-3,82 (7H, м), 3,95-4,10 (1H, м), 5,24-5,40 (0,4H, м), 5,50-5,62 (0,6Н, м), 5,95-6,18 (0,4H, м), 6,58-6,70 (0,6Н, м), 6,71-6,85 (1H, м), 6,86-7,00 (1H, м), 7,05-7,50 (3H, м), 8,05-8,25 (1H, м), 8,46-8,80 (1H, м). МС: 439,2 [МН].
Пример 63: Получение химического соединения 51: (R,E)-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-2-она
2
4
2
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (50,0 мг, 0,162 ммоль) в ДМФ (0,68 мл) добавляли HATU (62,0 мг, 0,162 ммоль) и DIPEA (0,0570 мл, 0,324 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. После добавления пиперазин-2-она (16,0 мг, 0,162 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, в то время как образовывалось желтое твердое вещество. Смесь разбавляли ДХМ, промывали водой дважды и 1 N водн. NaOH, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1 до ДХМ:EtOAc=1:10) с получением (R,E)-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-2-она (52,0 мг, 85%) в виде желтого твердого вещества.
+
МС: 453,1 [МН].
Пример 64: Получение химического соединения 52: (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(3-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она
Стадия A: 1,4-бис(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновая кислота
2
3
2
2
4
3
трет
1
К раствору 1,4-бис(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновой кислоты (5,00 г, 15,1 ммоль) и NaCO (5,79 г, 54,7 ммоль) в воде (49 мл) добавляли раствор (-Вос)О (7,20 мл, 31,0 ммоль) в ТГФ (31 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь осторожно подкисляли 5 N водн. HCl, пока не доводили до рН=1 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением 1,4-бис(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновой кислоты (5,00 г, 100%) в виде белого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,44 и 1,48 (18H, с и с), 2,83 (1H, уш.с), 3,08-3,23 (2H, м), 3,84 (1H, дд, J= 17,2, 13,2 Гц), 4,01 (1H, уш.с), 4,52-4,60 (1H, м), 4,75 (1H, с), 9,56 (1H, уш.с).
Стадия B: 1,4-ди-трет-бутил-2-метилпиперазин-1,2,4-трикарбоксилат
2
3
4
2
4
2
3
1
К раствору 1,4-бис(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-2-карбоновой кислоты (4,88 г, 14,7 ммоль) в ДМФ (49 мл) добавляли KCO (2,65 г, 19,2 ммоль) и смесь охлаждали до 0°С. К смеси затем медленно добавляли метилиодид (1,38 мл, 22,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов и гасили насыщенным водным NHCl (100 мл). Смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=7:1 до 5:1 до 3:1) с получением 1,4-ди-трет-бутил-2-метилпиперазин-1,2,4-трикарбоксилата (5,09 г, 100%) в виде бледно-коричневого вязкого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,44 (18H, с), 2,80 (1H, уш.с), 3,12-3,24 (1H, м), 3,21 (1H, уш.с), 3,74 (3H, с), 3,80-4,10 (2H, м), 4,48-4,73 (2H, м).
Стадия С: ди-трет-бутил-2-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1,4-дикарбоксилат
4
2
4
2
3
1
К раствору 1,4-ди-трет-бутил-2-метилпиперазин-1,2,4-трикарбоксилата (5,09 г, 14,7 ммоль) в сухом ТГФ (49 мл) добавляли метилмагнийбромид (3,0 М в ТГФ и тол, 31,7 мл, 44,3 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. После гашения насыщенным водн. NHCl смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=5:1 до 3:1 до 2:1) с получением ди-трет-бутил-2-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1,4-дикарбоксилата (2,47 г, 48%) в виде бесцветного вязкого масла. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,21 (3H, с), 1,31 (3H, с), 1,46 (18Н, с), 3,01-3,38 (4H, м), 3,79-4,21 (4H, м).
Стадия D: 2-(пиперазин-2-ил)пропан-2-ол 2HCl
1
6
К раствору ди-трет-бутил-2-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1,4-дикарбоксилата (2,47 г, 7,17 ммоль) в MeOH (23 мл) добавляли HCl (4 М раствор в диоксане, 8,96 мл, 35,9 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов, в то время как осаждалось твердое вещество. После концентрирования под вакуумом твердый остаток высушивали под вакуумом с получением 2-(пиперазин-2-ил)пропан-2-ола 2HCl (1,17 г, 75%) в виде бледно-коричневого твердого вещества, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,19 (3H, с), 1,25 (3H, с), 2,97 (1H, т, J= 13,6 Гц), 3,20-3,34 (3H, м), 3,34-3,48 (2H, м), 3,53-3,56 (2H, м), 9,14 (1H, уш.с), 9,60 (1H, уш.с), 9,89 (2H, уш.с).
Стадия Е: (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(3-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-он
2
4
2
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (67,0 мг, 0,181 ммоль) в ДМФ (1,2 мл) добавляли HATU (89,0 мг, 0,235 ммоль) и DIPEA (0,142 мл, 0,814 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и охлаждали до 0°С. После добавления 2-(пиперазин-2-ил)пропан-2-ола 2HCl (47,0 мг, 0,217 ммоль) при 0°С реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали водой и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до 10:1) с получением (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(3-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (64,0 мг, 71%) в виде бледно-желтого твердого вещества. МС: 468,1 [МН]
Пример 65: Получение химического соединения 53: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она
2
4
2
3
1
+
Смесь (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (50,0 мг, 0,114 ммоль) и формальдегида (37% водный раствор, 0,011 мл, 0,148 ммоль) в MeOH (1,1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. После добавления цианоборгидрида натрия (10,7 мг, 0,171 ммоль) в виде одной порции реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и затем гасили 2 N водн. NaOH (1,42 мл, 2,85 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до 10:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-метилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (44,0 мг, 85%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,65-1,85 (4H, м), 2,34 (3H, с), 2,40-2,52 (5H, м), 3,40-4,20 (6H, м), 5,20 (0,5Н, с), 5,70-5,92 (1H, м), 6,38 (0,5H, с), 6,69 (1H, с), 6,82-7,16 (2H, м), 7,60-7,82 (1H, м), 7,95 (1H, с), 8,10-8,40 (1H, м). МС: 453,1 [МН].
Пример 66: Получение химического соединения 54: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-этилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она
2
4
2
6
1
+
Смесь (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (100 мг, 0,228 ммоль) и ацетальдегида (129 мкл, 0,228 ммоль) в MeOH (1,1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. После добавления триацетоксигидробората натрия (73,0 мг, 0,342 ммоль) с последующим добавлением уксусной кислоты (261 мкл, 4,56 ммоль) реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и затем гасили 2 N водн. NaOH (1,42 мл, 2,85 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до 15:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-этилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (69,5 мг, 63%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,03 (3H, т, J= 7,2 Гц), 1,83-2,00 (2H, м), 2,02-2,10 (1H, м), 2,30-2,48 (6H, м), 3,40-3,70 (4H, м), 4,03 (2H, кв, J= 7,2 Гц), 5,35 и 5,59 (1H, с+с), 6,01 и 6,64 (1H, с+с), 6,76-6,79 (1H, м), 7,05-7,21 (1H, м), 7,23-7,48 (2H, м), 8,13-8,23 (1H, м), 8,54 и 8,74 (1H, с+с). МС: 467,1 [МН].
Пример 67: Получение химического соединения 55: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-изопропилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она
2
4
2
3
1
+
Смесь (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (50,0 мг, 0,114 ммоль) и ацетона (0,025 мл, 0,342 ммоль) в MeOH (1,1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. После добавления цианоборгидрида натрия (10,7 мг, 0,171 ммоль) в виде одной порции реакционную смесь перемешивали в течение 30 часов и гасили 2 N водн. NaOH (1,4 мл, 2,85 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре и экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (ДХМ:МеОН=20:1 до 10:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-изопропилпиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-она (46,3 мг, 84%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,08 (6H, д, J= 6,8 Гц), 1,95-2,36 (4H, м), 2,40-2,50 (5H, м), 2,70-2,78 (1H, м), 3,40-4,20 (6H, м), 5,18 (0,5H, с), 5,65-5,92 (1H, м), 6,34 (0,5H, с), 6,69 (1H, с), 6,82-7,20 (2H, м), 7,60-7,82 (1H, м), 7,95 (1H, с), 8,10-8,40 (1H, м). МС: 481,1 [МН].
Пример 68: Получение химического соединения 56: (R,E)-1-(1,4-диазепан-1-ил)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)проп-2-ен-1-она
Стадия A: трет-бутил-1,4-диазепан-1-карбоксилат
2
2
2
3
2
4
3
1
К раствору 1,4-диазепана (1,00 г, 9,98 ммоль) в ДХМ (22 мл) добавляли раствор (трет-Вос)О (1,08 г, 4,99 ммоль) в ДХМ (11 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в EtO и экстрагировали 10% водн. раствором лимонной кислоты. Водный слой подщелачивали твердым KCO до рН 11 и затем экстрагировали EtOAc дважды. Объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-1,4-диазепан-1-карбоксилата (795 мг, 88%) в виде желтого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,47 (9H, с), 1,59 (1H, уш.с), 1,74-1,80 (2H, м), 2,84-2,93 (4H, м), 3,39-3,51 (4H, м).
Стадия В: (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)-1,4-диазепан-1-карбоксилат
4
2
4
2
6
1
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (100 мг, 0,270 ммоль) в ДМФ (1,8 мл) добавляли HATU (154 мг, 0,405 ммоль), DIPEA (118 мкл, 0,675 ммоль) и трет-бутил-1,4-диазепан-1-карбоксилат (65,0 мг, 0,324 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:4 до 1:5) с получением (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)-1,4-диазепан-1-карбоксилата (137 мг, 92%) в виде желтого твердого вещества. Н-ЯМР (ДМСО-d, Varian, 400 МГц): δ 1,12-1,43 (9H, м), 1,55-1,80 (2H, м), 1,81-2,00 (3H, м), 2,32-2,50 (1H, м), 2,19-3,30 (3H, м), 3,38-3,88 (7H, м), 4,00-4,10 (1H, м), 5,32 и 5,95 (1H, с+с), 6,11 и 3,64 (1H, с+с), 6,67 (1H, с), 6,91 (1H, с), 7,05 (1H, с), 7,32 (1H, с), 7,50-8,32 (3H, м).
Стадия C: (R,E)-1-(1,4-диазепан-1-ил)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)проп-2-ен-1-он
3
2
4
+
К раствору (R,E)-трет-бутил-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акрилоил)-1,4-диазепан-1-карбоксилата (137 мг, 0,283 ммоль) в ДХМ (2,5 мл) добавляли ТФУК (382 мкл г, 4,96 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре и концентрировали под вакуумом. Остаток растворяли в воде, нейтрализовали насыщенным водн. NaHCO и промывали EtOAc. Отделенный водный слой экстрагировали ДХМ дважды. Объединенные органические слои (только ДХМ) высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением (R,E)-1-(1,4-диазепан-1-ил)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)проп-2-ен-1-она (48,1 мг, 42%) в виде бледно-желтого твердого вещества. МС: 453,1 [МН].
Пример 69: Получение химического соединения 57: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-гидроксипиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
3
2
4
2
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (100 мг, 0,270 ммоль) в ДМФ (1,35 мл) добавляли HATU (0,133 г, 0,351 ммоль) и DIPEA (0,118 мл, 0,675 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и охлаждали до 0°С. После добавления пиперидин-4-ола (0,0330 г, 0,324 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали водой и насыщенным водн. NaHCO, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH 20:1 до 10:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-гидроксипиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (120 мг, 98%) в виде желтой пены. МС: 454,1 [МН]
Пример 70: Получение химического соединения 58: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
Стадия A: трет-бутил-4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоксилат
4
2
4
3
1
К раствору трет-бутил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (1,00 г, 5,02 ммоль) в сухом ТГФ (25 мл) добавляли метилмагнийхлорид (2,17 мл, 6,52 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь медленно нагревали до 0°C при перемешивании в течение 2 часов и гасили насыщенным водн. NHCl. Смесь экстрагировали EtOAc дважды и объединенные органические слои высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом с получением трет-бутил-4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоксилата (1,08 г, >99%) в виде бесцветного масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 1,27 (3H, с), 1,46 (9H, с), 1,50-1,58 (4H, м), 3,20-3,27 (2H, м), 3,64-3,76 (2H, м).
Стадия B: 4-метилпиперидин-4-ол
3
2
К раствору трет-бутил-4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-карбоксилата (1,08 г, 5,02 ммоль) в ДХМ добавляли ТФУК (1,93 мл, 25,1 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. После подщелачивания насыщенным водн. NaHCO отделенный водный слой концентрировали под вакуумом (Соединение растворяли в водном слое). Остаток разбавляли МеОН и затем фильтровали через слой SiO, в то время как перемешивая с MeOH. Фильтрат концентрировали под вакуумом с получением 4-метилпиперидин-4-ола (235 мг, 40%) в виде вязкого масла, которое использовали для следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия C: (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он
3
2
4
2
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (100 мг, 0,270 ммоль) в ДМФ (1,35 мл) добавляли HATU (133 мг, 0,351 ммоль) и DIPEA (0,165 мл, 0,945 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и охлаждали до 0°С. После добавления неочищенного 4-метилпиперидин-4-ола (0,155 г, 1,35 ммоль) при комнатной температуре реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. После концентрирования под вакуумом остаток разбавляли ДХМ, промывали водой и насыщенным водн. NaHCO, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (только EtOAc до ДХМ:MeOH 20:1) с получением (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-(4-гидрокси-4-метилпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (126 мг, 100%) в виде бледно-желтой пены. МС: 468,1 [МН].
Пример 71: Получение химического соединения 59: (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-((R)-3-гидроксипирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
4
2
4
2
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (70,0 мг, 0,189 ммоль) в ДМФ (1,5 мл) добавляли HATU (108 мг, 0,284 ммоль), DIPEA (99,0 мкл, 0,567 ммоль) и (R)-пирролидин-3-ол (49,0 мг, 0,567 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=30:1 до 10:1) с получением (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-((R)-3-гидроксипирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (15,0 мг, 18%) в виде желтого твердого вещества. МС: 440,2 [МН].
Пример 72: Получение химического соединения 60: (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-((S)-3-гидроксипирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
4
2
4
2
+
К раствору (R,E)-3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)акриловой кислоты (70,0 мг, 0,189 ммоль) в ДМФ (1,5 мл) добавляли HATU (108 мг, 0,284 ммоль), DIPEA (99,0 мкл, 0,567 ммоль) и (S)-пирролидин-3-ол (49,0 мг, 0,567 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и разбавляли EtOAc. Смесь промывали насыщенным водн. NHCl и солевым раствором, высушивали над NaSO, отфильтровывали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (EtOAc:MeOH=30:1 до 10:1) с получением (Е)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-((S)-3-гидроксипирролидин-1-ил)проп-2-ен-1-она (15,0 мг, 18%) в виде желтого твердого вещества. МС: 440,2 [МН].
Пример 73: Получение химического соединения 61: 3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-морфолинопроп-2-ин-1-она
2
3
2
2
3
1
+
Раствор 5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)-3-иодпиразоло[1,5-а]пиримидина (456 мг, 1,070 ммоль), 1-морфолинопроп-2-ин-1-она (223 мг, 1,60 ммоль) и PdCl(PPh) (75,0 мг, 0,107 ммоль) и иодида меди (I) (20,0 мг, 0,107 ммоль) в ТЭА (5,0 мл) и ТГФ (5,0 мл) перемешивали при 70°С в течение 12 часов. После концентрирования под вакуумом остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO (Hex:EtOAc=1:1 до только EtOAc) с получением 3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-ил)-1-морфолинопроп-2-ин-1-она (45,7 мг, 9,7%) в виде оранжевого твердого вещества. Н-ЯМР (CDCl, Varian, 400 МГц): δ 2,05-2,20 (3H, м), 2,24-2,60 (1H, м), 3,58-4,20 (10Н, м), 5,18 и 5,73 (1H, с+с), 5,88 и 6,36 (1H, с+с), 6,69 (1H, уш.с), 6,94 (1H, уш.с), 7,13 (1H, уш.с), 7,44-7,77 (1H, м), 8,15-8,50 (1H, м). МС: 438,3 [МН].
Пример 74: Анализ TRK А, В и С-киназы
Набор для анализа ADP-Glo приобретали у Promega. Поли(Glu, Tyr), сульфат магния, бычий сывороточный альбумин (БСА) и диметилсульфоксид (ДМСО) приобретали у Sigma-Aldrich. Буфер трис-HCl приобретали у BD Gentest. Набор HTRF KinEASE-TK приобретали у Cisbio. TRK А, В и С-киназу приобретали у Carna bioscience.
Анализ киназы проводили для химических соединений 1-61 с применением двух способов с использованием набора для люминесцентного анализа ADP-Glo (Promega) и набора для анализа HTRF KinEASE-TK (Cisbio). Набор для люминесцентного анализа ADP-Glo (Promega) измеряет АДФ, образованную из реакции киназы. АДФ превращается в АТФ, который затем превращается в свет с помощью люциферазы Ultra-Glo. Набор для анализа HTRF KinEASE-TK (Cisbio) измеряет активности тирозинкиназы с использованием одного субстрата и универсальной системы обнаружения.
Набор для анализа ADP-Glo (Promega)
Анализ протеинкиназы проводили для химических соединений 1-61 с использованием одного субстрата и универсальной системы обнаружения. АДФ превращается в АТФ, концентрации которого представляют собой 0,4 нг/мкл TrkA, 0,5 нг/мкл TrkB и 3 нг/мкл TrkC соответственно), 5 мкл 1 мкг/мкл исходного раствора поли(Glu, Tyr), 5 мкл соединений или буфера для анализа, 5 мкл АТФ (125 мкМ исходного раствора).
Анализ начинали с помощью инкубирования реакционной смеси в 96-луночным планшете при 30°С в течение 1 часа. После инкубирования анализ останавливали с помощью добавления 25 планшета при 30°С в течение 1 часа. Превращали в АТФ, концентрации которого представляют собой 0,4 нг/мкл TrkA, 0,5 нг/мкл. Затем добавляли реагент для определения киназы 50 e, и 96-луночный планшет встряхивали, и затем инкубировали в течение дополнительных 30 мин при температуре окружающей среды. 96-луночный реакционный планшет затем прочитывали на планшет-ридере Enspire. Значения IC50 были получены с помощью аппроксимации кривой с использованием SigmaPlot.
Набор для анализа HTRF KinEASE-TK (Cisbio)
Анализ HTRF KinEASE-ТК проводили для химических соединений 1-61 в 384-луночном микропланшете малого объема (Greiner). Формат анализа HTRF KinEASE-ТК включает две стадии. Первая стадия представляет собой стадию реакции киназы. Данную стадию реакции киназы проводили при КТ (при комнатной температуре) в конечном объеме 10 мкл в соответствии со следующим набором реакции анализа: 10 мкл киназной смеси (киназа (2 мкл)+АТФ (2 мкл)+субстрат (2 мкл)+соединение (4 мкл)). Конечные концентрации киназы представляли собой 0,3 нг/мкл TrkA, 0,1 нг/мкл TrkB, 0,03 нг/мкл TrkC, соответственно. Конечные концентрации АТФ представляли собой 14,7 мкМ (TrkA), 4,77 мкМ (TrkB), 25,6 мкМ (TrkC), соответственно. Конечная концентрация ТК-субстрата представляла собой 0,3 нг/мкл. Смеси подвергали воздействию соединения в отношении дозозависимого эффекта концентрации (DRC) от 0 до 100 нМ в течение 40 мин. Во время стадии реакции киназы реакция киназы начиналась путем добавления АТФ. Киназа фосфорилирует субстрат.
Вторая стадия представляет собой стадию обнаружения. 10 мкл реагентов для обнаружения (5 мкл Sa-XL 665 в ЭДТА+5 мкл TK-антитела-Eu в ЭДТА) добавляли к киназной смеси. Данную стадию проводили при комнатной температуре в течение 1 часа. Реагент для обнаружения выявляет фосфорилированный субстрат.
4
Наконец, 384-луночный реакционный планшет затем прочитывали на устройстве FlexStation 3. Флуоресценцию измеряли при 620 нм (Криптат) и 665 нм (XL665). Соотношение вычисляют (655/620) × 10 для каждой лунки. Значения IC50 получали с помощью аппроксимации кривой с использованием GraphPad Prism. В Таблице 1 ниже представлены результаты анализов.
Пример 74: Анализы пролиферации клеток
Доксорубицин приобретали у Sigma-Aldrich (D1515). Все соединения разводили в ДМСО (Sigma-Aldrich, D2650). Реагент для анализа жизнеспособности клеток AlamarBlue приобретали у Thermo Scientific (88952). Набор для анализа пролиферации клеток CellTiter 96 AQueous One Solution приобретали у Promega. Клетки KM12-luc приобретали у JCRB (Национальный институт здравоохранения, Токио, Япония). Их содержали в среде DMEM (GIB-11965-118) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco, 16000-044) и раствора заменимых аминокислот MEM (Thermo Scientific, 11140-050). Клетки TF-1 приобретали у АТСС. Их содержали в среде RPMI (GIB-A10491) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco, 16000-044), GM-CSF (Thermo Scientific, 11140-050) и β-NGF (R&D systems). Трипсин/ЭДТА приобретали у Gibco (GIB-25300-054, 0,05%). 96-луночные планшеты приобретали у Corning Inc.
Анализ пролиферации клеток
2
2
Анализ пролиферации проводили для химических соединений 1-61 в средах с добавлением 10% ФБС с использованием реагента для анализа жизнеспособности клеток AlamarBlue или набора для анализа пролиферации клеток CellTiter 96 AQueous One Solution. Клетки культивировали в увлажненном инкубаторе при 37°С с 5% CO. Для оценки антипролиферативной активности соединений клетки TF-1 помещали в свободную среду GM-CSF (RPMI, 10% ФБС и 1% пенициллина-стрептомицина) в течение 16 часов и высевали в 96-луночные планшеты в количестве 30000 клеток/лунка со средой (RPMI, 10% ФБС, 1% пенициллина-стрептомицина и 10 нг/мл человеческого β-NGF). KM12-luc высевали в количестве 10000 клеток в лунку в 96-луночные планшеты. После инкубирования в течение ночи добавляли серийные разбавления соединений в трех повторностях в лунки и клетки подвергали воздействию в течение 72 часов. Конечную концентрацию ДМСО доводили до 0,5% в среде. Количественный рост клеток оценивали с использованием двух видов реагентов. 20 мкл реагента AlamarBlue в количестве, равном 10% культурального объема, добавляли в каждую лунку и инкубировали в увлажненном инкубаторе при 37°С с 5% CO в течение 2 часов. Иным способом, 20 мкл реагента CellTiter 96 добавляли в каждую лунку и инкубировали при тех же условиях, как описано ранее. Данные отражали на графике и значения GI50 вычисляли с использованием программного обеспечения GraphPad. В Таблице 1 ниже представлены результаты анализов.
Таблица 1
Химическое соединение №
Структура
IC<sub>50 </sub>(нМ)
Ферментный анализ
Исследование на клетках(TF-1)
Исследование на клетках (KM12)
1
<img file="00000287.jpg" he="27" wi="34" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
2
<img file="00000288.jpg" he="27" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
3
<img file="00000289.jpg" he="27" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
4
<img file="00000290.jpg" he="28" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
5
<img file="00000291.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
6
<img file="00000292.jpg" he="30" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
7
<img file="00000293.jpg" he="31" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
8
<img file="00000294.jpg" he="31" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
9
<img file="00000295.jpg" he="30" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
10
<img file="00000296.jpg" he="31" wi="33" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
11
<img file="00000297.jpg" he="28" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
12
<img file="00000298.jpg" he="28" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
13
<img file="00000299.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
14
<img file="00000300.jpg" he="31" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
15
<img file="00000301.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
16
<img file="00000302.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
17
<img file="00000303.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
18
<img file="00000304.jpg" he="29" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
19
<img file="00000305.jpg" he="31" wi="38" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
20
<img file="00000306.jpg" he="28" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
21
<img file="00000307.jpg" he="33" wi="38" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
22
<img file="00000308.jpg" he="28" wi="39" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
23
<img file="00000309.jpg" he="30" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
24
<img file="00000310.jpg" he="29" wi="39" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
25
<img file="00000311.jpg" he="28" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>-</b>
<b>-</b>
<b>-</b>
26
<img file="00000312.jpg" he="31" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
27
<img file="00000313.jpg" he="30" wi="32" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
<b>>1000</b>
<b>>1000</b>
28
<img file="00000314.jpg" he="30" wi="36" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><10</b>
29
<img file="00000315.jpg" he="26" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
30
<img file="00000316.jpg" he="24" wi="30" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
31
<img file="00000317.jpg" he="24" wi="31" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><100</b>
<b><1000</b>
<b><1000</b>
32
<img file="00000318.jpg" he="27" wi="29" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
33
<img file="00000319.jpg" he="30" wi="38" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
34
<img file="00000320.jpg" he="29" wi="39" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
35
<img file="00000321.jpg" he="30" wi="39" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
36
<img file="00000322.jpg" he="29" wi="37" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>-</b>
<b>-</b>
<b>-</b>
37
<img file="00000323.jpg" he="30" wi="43" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
38
<img file="00000324.jpg" he="28" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><1000</b>
<b><1000</b>
39
<img file="00000325.jpg" he="30" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><1000</b>
<b><1000</b>
40
<img file="00000326.jpg" he="27" wi="39" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><1000</b>
41
<img file="00000327.jpg" he="27" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
42
<img file="00000328.jpg" he="28" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
43
<img file="00000329.jpg" he="30" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
44
<img file="00000330.jpg" he="30" wi="40" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
45
<img file="00000331.jpg" he="27" wi="38" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
46
<img file="00000332.jpg" he="26" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
47
<img file="00000333.jpg" he="26" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
48
<img file="00000334.jpg" he="32" wi="43" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>
49
<img file="00000335.jpg" he="28" wi="43" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
<b><100</b>
50
<img file="00000336.jpg" he="27" wi="45" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><10</b>
51
<img file="00000337.jpg" he="27" wi="41" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
52
<img file="00000338.jpg" he="28" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
53
<img file="00000339.jpg" he="29" wi="46" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
54
<img file="00000340.jpg" he="26" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
55
<img file="00000341.jpg" he="30" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
56
<img file="00000342.jpg" he="32" wi="45" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b>>100</b>
57
<img file="00000343.jpg" he="28" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
58
<img file="00000344.jpg" he="29" wi="47" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><10</b>
59
<img file="00000345.jpg" he="27" wi="49" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
60
<img file="00000346.jpg" he="28" wi="48" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
61
<img file="00000347.jpg" he="33" wi="42" img-content="undefined" img-format="jpg" />
<b><10</b>
<b><100</b>
<b><100</b>