Совершенствование методов этиологической расшифровки вспышек пищевых токсикоинфекций в Республике Дагестан

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

массой 2,5—3 кг разделены на 3 группы. Кроликов группы I иммунизировали монофагом с 0,5% биополимера, группы II — монофагом с ПАФ, группы III (контроль) — только монофагом. Динамику накопления антител определяли в реакции нейтрализации с антигеном-монофагом в концентрации пх107—пх108

Специфическая активность сывороток для I и II группы составила 1:600 и 1:500 соответственно. Активность сывороток без адъюванта, составила 1:300. Все полученные сыворотки были высокоспецифичны — не проявляли нейтрализующей активности в отношении других монофагов, входящих в состав бактериофага ctx-. Однако при применении полного адъюванта Фрейнда у всех животных (100%) на месте введения развивались глубокие дефекты кожного покрова и мышечной ткани, что увеличило срок иммунизации на одну неделю. Введение биополимера не приводило к негативным реакциям.

Выводы. Результаты исследований свидетельствуют о целесообразности использования адъю-вантов для получения высокоактивных сывороток к бактериофагам в низкой концентрации. При этом предпочтение отдается низкомолекулярному ацети-лированному биополимеру, который являясь менее реактогенным, позволяет получать активные антифаговые сыворотки.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ РАСШИФРОВКИ ВСПЫШЕК ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ В РЕСПУБЛИКЕ ДАГЕСТАН

Э.Я. Омариева1, А.В. Милихина2

Управление Роспотребнадзора по Республике Дагестан; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Дагестан», г. Махачкала

В последние годы расширились возможности использования современных методов исследования, в том числе полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, при расшифровке этиологии вспышек острых кишечных инфекций и пищевых отравлений бактериальной и вирусной этиологии.

В 2011 г. (с 17 по 19 октября) зарегестрирована вспышка пищевой токсикоинфекции в производственной столовой аэропорта «Уйташ» в Республике Дагестан с числом пострадавших — 37 человек. Исследования проведены в соответствии с МУ 4.2.2746-10 «Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых кишечных инфекций с групповой заболеваемостью» методом ПЦР в режиме реального времени с использованием тест систем ООО ИнтерЛабСервис «Ампли-СенсОКИ-скрин—Fl» и для выявления патогенов в продуктах: «Ампли-Сенс Salmonella spp.—Fl.», «Ампли-Сенс Campilobacter spp.—Fl», «Ампли-Сенс Shigella spp. и EIEC—Fl», а также бактериологическим методом.

Всего исследовано 37 проб фекалий от больных, в том числе от 6 работников пищеблока, 17 проб продуктов, отобранных в очаге отравления, и 30 смывов с оборудования пищеблока столовой.

Скрининговые ПЦР-исследования показали следующие результаты. У 29 больных, у 4 сотрудников столовой в фекалиях и промывных водах обнаружена ДНК сальмонеллы (89,2%). Смывы с тушек кур (2 пробы), замороженный компот, хранивший-

ся вместе с тушками кур (17,6%), а также 2 смыва с разделочных досок пищеблока (6,7%) также дали положительные результаты ПЦР-исследований на сальмонеллы. В последующем, в бактериологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Дагестан» выделены и идентифицированы культуры Salmonella enteritidis. Региональный центр по диагностике ОКИ, ФГУН ЦНИИЭ, подтвердил полученные результаты исследований и определил принадлежность всех выделенных от больных и из внешней среды культур Salmonella enteritidis к фаготипу 1.

Вспышка пищевой токсикоинфекции в производственной столовой аэропорта «Уйташ» показала, что использование метода ПЦР позволяет в течение 5 часов ориентировочно расшифровать этиологию вспышки и упростить бактериологические исследования по выделению и идентификации культур.

КОНСТРУИРОВАНИЕ И ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ НОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ГЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРЫ

H.А. Осина, Т.В. Бугоркова, В.Е. Куклев,

А.С. Абдрашитова, И.В. Шульгина, О.А. Лобовикова, С.А. Щербакова, В.В. Кутырев

ФКУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», г. Саратов

Одним из перспективных направлений в совершенствовании генной диагностики холеры является разработка новых препаратов, направленных не только на детекцию эпидемически значимых штаммов холерных вибрионов в биологическом материале и объектах окружающей среды, но и одновременно на характеристику вибрионов по таксономическому положению (принадлежность к О1, О139 серогруп-пам, биовар).

Нами сконструирован «Набор реагентов для выявления и ускоренной идентификации ДНК Vibrio cholerae методом мультилокусной полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов (Ген Vibrio cholerae — идентификация — РЭФ)», который может быть использован:

I. для определения эпидемической значимости выделенных культур холерных вибрионов; 2. для дифференцирования V. cholerae О1 серогруппы классического и эльтор биоваров; 3. для идентификации V. cholerae О139 серогруппы; 4. для индикации возбудителей холеры в биологическом материале и объектах окружающей среды. Для решения первой задачи предусмотрено проведение амплификации с реакционной смесью «ctx-tcp», содержащей праймеры, комплементарные ctxA и tcpA генам, второй задачи — с реакционной смесью «О1-биовар», включающей праймеры, подобранные на основе wbeN и hlyA генов, третьей — с реакционной смесью «О139», в состав которой входят праймеры фланкирующие фрагмент wbfR гена, а для последней — со всеми реакционными смесями, но в отдельных пробирках.

С целью внедрения набора в практику здравоохранения были проведены его технические и медицинские испытания. Установлено, что чувствительность препарата при исследовании чистых культур составила 1 х 104 м.к./мл в 100% случаях, 1 х 103 м.к./мл в 95,7% случаях, 1 х 102 м.к./мл в 50% случаях; при исследовании искусственно контаминированных проб