СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРИПИРОПЕНА

1. Способ получения пирипиропена A, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один полинуклеотид из (I)-(III) ниже или содержащий его/их рекомбинантный вектор, с пирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен O:
(I) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей из (a)-(d) ниже:
(a) нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:266,
(b) нуклеотидная последовательность, способная в жестких условиях гибридизоваться с последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:266, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:266,
(c) нуклеотидная последовательность SEQ ID NO:266, в которой один или более нуклеотидов удалены, замещены, вставлены или добавлены, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:266, и
(d) нуклеотидная последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичная полинуклеотиду с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:266 и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:266;
(II) выделенный полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность, кодирующую, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:267-275, или по существу эквивалентную ей аминокислотную последовательность;
(III) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей из (1)-(4) ниже:
(1) нуклеотидная последовательность из (a)-(i) ниже:
(a) нуклеотидная последовательность от положения 3342 до положения 5158 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(b) нуклеотидная последовательность от положения 5382 до положения 12777 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(c) нуклеотидная последовательность от положения 13266 до положения 15144 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(d) нуклеотидная последовательность от положения 16220 до положения 18018 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(e) нуклеотидная последовательность от положения 18506 до положения 19296 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(f) нуклеотидная последовательность от положения 19779 до положения 21389 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(g) нуклеотидная последовательность от положения 21793 до положения 22877 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(h) нуклеотидная последовательность от положения 23205 до положения 24773 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266, и
(i) нуклеотидная последовательность от положения 25824 до положения 27178 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266;
(2) нуклеотидная последовательность, способная гибридизоваться с последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности из (1), в жестких условиях и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью;
(3) нуклеотидная последовательность полинуклеотида с нуклеотидной последовательностью из (1), в которой один или более нуклеотидов удалены, замещены, вставлены или добавлены, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью; и
(4) нуклеотидная последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичная полинуклеотиду с нуклеотидной последовательностью из (1) и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью.
2. Способ получения пирипиропена A по п.1, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего один или более векторов, выбранных из группы, состоящей из плазмид pCC1-PP1, pPP2, pPP3, pPP6, pPP7 и pPP9, с пирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен O.
3. Способ получения пирипиропена A по п.1, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один полинуклеотид из (IV)-(V) ниже или содержащий его/их рекомбинантный вектор, с пирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен O:
(IV) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей, кодирующих, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:269, 270 и 275, или по существу эквивалентную ей аминокислотную последовательность;
(V) полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей из (1)-(4) ниже:
(1) нуклеотидная последовательность из (a)-(c) ниже:
(a) нуклеотидная последовательность от положения 13266 до положения 15144 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(b) нуклеотидная последовательность от положения 16220 до положения 18018 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266, и
(c) нуклеотидная последовательность от положения 25824 до положения 27178 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266;
(2) нуклеотидная последовательность, способная гибридизоваться с последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности из (1), в жестких условиях и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью;
(3) нуклеотидная последовательность полинуклеотида с нуклеотидной последовательностью из (1), в которой один или более нуклеотидов удалены, замещены, вставлены или добавлены, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью;
(4) нуклеотидная последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичная полинуклеотиду с нуклеотидной последовательностью из (1) и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью.
4. Способ получения пирипиропена A по п.2, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего плазмиды pPP2, pPP3 и pPP9, с пирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен O.
5. Способ получения пирипиропена A, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один из указанных полинуклеотидов из (I)-(III) по п.1 или содержащий его/их рекомбинантный вектор, c деацетилпирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен E и пирипиропен O.
6. Способ получения пирипиропена A по п.5, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего один или более векторов, выбранных из группы, состоящей из плазмид pCC1-PP1, pPP2, pPP3, pPP6, pPP7 и pPP9, c деацетилпирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен E и пирипиропен O.
7. Способ получения пирипиропена A по п.5, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один из указанных полинуклеотидов из (VI) и (VII) ниже или содержащий его/их рекомбинантный вектор, c деацетилпирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен E и пирипиропен O:
(VI) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:269, 270, 274 и 275, или по существу эквивалентную ей аминокислотную последовательность;
(VII) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей из (1)-(4) ниже:
(1) нуклеотидная последовательность из (a)-(d) ниже:
(a) нуклеотидная последовательность от положения 13266 до положения 15144 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(b) нуклеотидная последовательность от положения 16220 до положения 18018 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(c) нуклеотидная последовательность от положения 23205 до положения 24773 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266, и
(d) нуклеотидная последовательность от положения 25824 до положения 27178 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266;
(2) нуклеотидная последовательность, способная гибридизоваться с последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности из (1), в жестких условиях и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью;
(3) нуклеотидная последовательность полинуклеотида с нуклеотидной последовательностью из (1), в которой один или более нуклеотидов удалены, замещены, вставлены или добавлены, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью;
(4) нуклеотидная последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичная полинуклеотиду с нуклеотидной последовательностью из (1) и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому каждой нуклеотидной последовательностью.
8. Способ получения пирипиропена A по п.6, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего плазмиды pPP2, pPP3, pPP7 и pPP9, c деацетилпирипиропеном E и выделением пирипиропена A через пирипиропен E и пирипиропен O.
9. Способ получения 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один из указанных полинуклеотидов из (I)-(III) по п.1 или содержащий его/их рекомбинантный вектор, с 4-оксо-6-(3-пиридил)-α-пироном и выделением 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она.
10. Способ получения 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она по п.9, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего один или более векторов, выбранных из группы, состоящей из плазмид pCC1-PP1, pPP2, pPP3, pPP6, pPP7 и pPP9, c 4-оксо-6-(3-пиридил)-α-пироном и выделением 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она.
11. Способ получения 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она по п.9, характеризуемый культивированием микроорганизма, в который введен, по меньшей мере, один полинуклеотид из (VIII) и (IX) ниже или содержащий его/их рекомбинантный вектор, с 4-оксо-6-(3-пиридил)-α-пироном и выделением 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она:
(VIII) выделенный полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей, кодирующих аминокислотную последовательность SEQ ID NO:273 или по существу эквивалентную ей аминокислотную последовательность;
(IX) полинуклеотид, имеющий, по меньшей мере, одну нуклеотидную последовательность, выбранную из нуклеотидных последовательностей из (1)-(4) ниже:
(1) нуклеотидная последовательность от положения 21793 до положения 22877 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266;
(2) нуклеотидная последовательность, способная гибридизоваться с последовательностью, комплементарной нуклеотидной последовательности из (1), в жестких условиях и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью;
(3) нуклеотидная последовательность полинуклеотида с нуклеотидной последовательностью из (1), в которой один или более нуклеотидов удалены, замещены, вставлены или добавлены, и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью;
(4) нуклеотидная последовательность, по меньшей мере, на 90% идентичная полинуклеотиду с нуклеотидной последовательностью из (1) и кодирующая белок, по существу эквивалентный белку, кодируемому нуклеотидной последовательностью.
12. Способ получения 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она по п.11, характеризуемый культивированием микроорганизма, содержащего плазмиду pPP6, с 4-оксо-6-(3-пиридил)-α-пироном и выделением 4-гидрокси-6-(пиридин-3-ил)-3-((2E,6E)-3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)-2H-пиран-2-она.
13. По меньшей мере один выделенный полинуклеотид из (I)-(III) по п.1.
14. Выделенный полинуклеотид по п.13, который выбран из следующих (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g) и (h):
(a) полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:266,
(b) полинуклеотид, кодирующий полипептид, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 269, 270, 273, 274 и 275,
(c) полинуклеотид, имеющий аминокислотную последовательность, по существу эквивалентную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 269, и кодирующий полипептид, обладающий гидроксилазной активностью,
(d) полинуклеотид, имеющий аминокислотную последовательность, по существу эквивалентную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 270, и кодирующий полипептид, обладающий гидроксилазной активностью,
(e) полинуклеотид, имеющий аминокислотную последовательность, по существу эквивалентную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 273, и кодирующий полипептид, обладающий пренилтрансферазной активностью,
(f) полинуклеотид, имеющий аминокислотную последовательность, по существу эквивалентную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 274, и кодирующий полипептид, обладающий ацетилазной активностью,
(g) полинуклеотид, имеющий аминокислотную последовательность, по существу эквивалентную аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 275, и кодирующий полипептид, обладающий ацетилазной активностью, и
(h) выделенный полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность, выбранную из следующих (i), (ii), (iii), (iv) и (v):
(i) нуклеотидная последовательность от положения 13266 до положения 15144 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(ii) нуклеотидная последовательность от положения 16220 до положения 18018 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(iii) нуклеотидная последовательность от положения 21793 до положения 22877 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266,
(iv) нуклеотидная последовательность от положения 23205 до положения 24773 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266, и
(v) нуклеотидная последовательность от положения 25824 до положения 27178 нуклеотидной последовательности, представленной в SEQ ID NO:266.
15. Полинуклеотид по п.14, где аминокислотные последовательности полипептидов, кодируемых полинуклеотидами из указанных (c), (d), (e), (f) и (g) по п.14, на 90% или более идентичны аминокислотным последовательностям, представленным в SEQ ID NO: 269, 270, 273, 274 и 275, соответственно.
16. Рекомбинантный вектор, выбранный из группы, состоящей из плазмид pPP6, pPP7 и pPP9.
17. Трансформант, содержащий один или более векторов, выбранных из группы, состоящей из плазмид pPP6, pPP7 и pPP9.
18. Применение указанного рекомбинантного вектора по п.16 для получения пирипиропена A и/или получения его промежуточного соединения.
19. Применение указанного трансформанта по п.17 получения пирипиропена A и/или получения его промежуточного соединения.