СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ КЛЕТОК, ПРОЯВЛЯЮЩИХ ВОСПРИИМЧИВОСТЬ К МОДУЛЯЦИИ ПЕРЕДАЧИ СИГНАЛА, ОПОСРЕДОВАННОЙ РЕЦЕПТОРОМ ФАКТОРА РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ ИЛИ ЕГО ВАРИАНТОМ

1. Способ идентификации клеток, восприимчивых к модуляции, в особенности к ингибированию передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, заключающийся в определении статуса фосфорилирования субстрата 2 (FRS-2) рецептора FGF-R, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в биологическом образце, в качестве биомаркера для установления такой чувствительности к ингибированию.
2. Способ по п.1, при осуществлении которого статус фосфорилирования по тирозину в белке FRS-2 используется в качестве биомаркера.
3. Способ по п.1, при осуществлении которого успешное обнаружение фосфорилирования, в особенности по тирозину, в белке FRS-2 или его варианте, в отсутствии модулятора, используется в качестве индикатора того, что ингибирование передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, может быть эффективным для воздействия на передачу сигнала, особенно для ингибирования передачи сигнала.
4. Способ по п.3, при осуществлении которого статус фосфорилирования белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в биологическом образце после проведения инкубации в присутствии и в отсутствие ингибитора передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, сравнивается с целью выявления клеток, реагирующих на введение ингибитора, где обнаружение ингибирования фосфорилирования принимается за вероятность возникновения такой реакции.
-3
-5
-7
5. Способ по п.1, в котором термин «рецептор FGF-R или его варианты» включает в себя все те формы или варианты рецептора FGF-R, которые, тем не менее, являясь активными вследствие связывания предпочтительно с константой диссоциации от 10 и более, более предпочтительно от 10 и более, еще более предпочтительно от 10 и более, одного или более фактора роста фибробластов, или, предпочтительно конститутивно активными, способны к фосфорилированию белка FRS-2 для получения его формы, содержащей фосфотирозин, как показано с антителом против фосфотирозина, и которые содержат, предпочтительно состоят из последовательности, которая идентична на 70% или более, более предпочтительно, которая идентична по меньшей мере на 85% или более, еще более предпочтительно, которая идентична на 90% или более, намного более предпочтительно, идентична на 95% или более, наиболее предпочтительно идентична на 98% или более любому из FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3 или FGF-R4, соответственно, и где термин «субстрат 2 (FRS-2) рецептора FGF-R, его варианта, или фрагмента, содержащего тирозин» включает такие формы белка FRS-2, которые, тем не менее, могут связывать рецепторы FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3 и/или FGF-R4, в особенности таким вариантам белка FRS-2, которые идентичны почти на 70% или более, более предпочтительно, идентичны по меньшей мере почти на 85% или более, еще более предпочтительно, идентичны почти на 90% или более, намного более предпочтительно, идентичны почти на 95% или более, наиболее предпочтительно, идентичны на 98% или более FRS-2α или FRS-2β, или их фрагментам, содержащим фосфотирозин.
6. Способ по п.1 включает по меньшей мере частичную очистку белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, и дальнейшего определения наличия или содержания фосфорилированных, особенно фосфорилированных по тирозину, с помощью реагента биоспецифического распознавания, способного распознавать фосфорилированную форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, в особенности, содержащего фосфотирозин, при котором любой указанный реагент биоспецифического распознавания или в дальнейшем молекула биоспецифического распознавания, способная связываться с указанным реагентом биоспецифического распознавания, маркируется и вводится, что позволяет обнаружить фосфорилированную форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента.
7. Способ по п.1, при осуществлении которого, белок FRS-2, содержащий фосфотирозин, его вариант, содержащий фосфотирозин, или его фрагмент, содержащий фосфотирозин, используется в качестве биомаркера, указывающего на клетки, проявляющие чувствительность к модуляции, особенно к ингибированию передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фактора фибробластов (FGF-R) или его вариант, и, предпочтительно, включает в себя применение реагента биоспецифического распознавания в форме антитела против фосфотирозина для определения наличия или содержания фосфорилирования по тирозину в указанном белке FRS-2, его варианте или его фрагменте.
8. Применение фосфорилирования белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в качестве биомаркера для клеток, тканей или органов, проявляющих гиперактивную, в особенности конститутивно активированную, передачу сигнала через рецептор FGF-R, в особенности, поддающихся воздействию ингибиторами рецептора FGF-R или его варианта, и, реагирующих на такие ингибиторы, где указанное применение состоит в выявлении фосфорилированного по тирозину белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, из биологического образца с помощью реагента биоспецифического распознавания, способного распознавать фосфотирозин в белке FRS-2, причем обнаружение фосфорилирования указывает на гиперактивную, главным образом конститутивно активированную, передачу сигнала через рецептор FGF-R.
9. Применение по п.8, который дополнительно включает, с целью различения восприимчивых клеток, тканей или органов от таких клеток, тканей или органов, не восприимчивых к ингибиторам передачи сигнала, в котором участвует рецептор FGF-R или его вариант, сравнение статуса фосфорилирования по тирозину в отсутствии и в присутствии ингибитора передачи сигнала, опосредованной рецептором FGF-R или его вариантом, причем снижение фосфорилирования по тирозину в присутствии ингибитора указывает на такую восприимчивость.
10. Набор, содержащий реагент биоспецифического распознавания рецептора FGF-R или его варианта и реагент биоспецифического распознавания, способный распознавать фосфорилированную форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, применяемый при идентификации клеток в биологическом образце, восприимчивых к модуляции, в особенности к ингибированию, передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R), где указанный набор содержит средства определения статуса фосфорилирования белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в биологическом образце, в качестве биомаркера такой восприимчивости к ингибированию.
11. Набор по п.10, содержащий в качестве средства для определения статуса фосфорилирования реагент биоспецифического распознавания, способный распознавать фосфорилированную форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин (в особенности, антитело против фосфотирозина), применяемый для определения клеток из числа клеток, тканей или органов, восприимчивых к модуляции, в особенности к ингибированию, передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R), включая определение статуса фосфорилирования белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, в особенности для возможности определения гиперактивности передачи сигнала через рецептор FGF-R, наиболее предпочтительно конститутивной активации передачи сигнала через рецептор FGF-R.
12. Реагент биоспецифического распознавания, способный распознавать фосфорилированную форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, применяемый для идентификации клеток, проявляющих восприимчивость к модуляции, в особенности к ингибированию, передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактор роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, в особенности клеток, проявляющих гиперактивность, наиболее предпочтительно конститутивную активацию передачи сигнала через рецептор FGF-R.
13. Применение реагента биоспецифического распознавания, способного распознавать фосфорилированный белок FRS-2, его вариант или его фрагмент, содержащий тирозин, для производства диагностикумов для выявления клеток из числа клеток или тканей из биологических образцов, восприимчивых к модуляции передачи сигнала, в котором участвует рецептор фактора роста фибробластов (FGF-R) или его вариант, где указанный процесс выявления клеток состоит в определении статуса фосфорилирования субстрата 2 (FRS-2) рецептора FGF-R, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин.
14. Применение по п.13, отличающееся тем, что реагент биоспецифического распознавания способен распознавать фосфорилированную по тирозину форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, более предпочтительно, антитело против фосфотирозина,
15. Способ определения клеток, пролиферация которых требует, в особенности конститутивной, активации рецептора FGF для пролиферации, и которые восприимчивы к ингибированию передачи сигнала через рецептор FGF-R, состоящему из:
а) испытания образца изолированных клеток и тканей в среде в отсутствие ингибитора рецептора FGF-R и параллельного испытания образца в среде в присутствии ингибитора рецептора FGF-R при отсутствии FGF,
б) по меньшей мере частичной очистки белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, из указанных образцов;
в) определения статуса фосфорилирования белка FRS-2 в указанных образцах; и
д) сравнения статуса фосфорилирования образцов, обработанных ингибитором, со статусом фосфорилирования образцов, не обработанных ингибитором, при этом снижение фосфорилирования в присутствии ингибитора указывает на клетки, подходящие для определения ингибиторов, пригодных для лечения состояния, включающего в себя гиперактивность передачи сигнала через рецептор FGF-R.
16. Способ диагностики заболевания, поддающегося лечению посредством ингибитора передачи сигнала через рецептор FGF-R, заключающийся в выявлении фосфорилированной формы белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин в биологическом образце от пациента.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что выявление происходит с использованием реагента биоспецифического распознавания, способного распознавать фосфорилированную по тирозину форму белка FRS-2, его варианта или его фрагмента, содержащего тирозин, предпочтительно антитела против фосфотирозина.