СПОСОБЫ ПЕРФУЗИОННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ тестирования присутствия контаминанта в первой или второй жидкой культуральной среде, исходном материале, используемом для получения первой или второй жидкой культуральной среды, или источнике клетки млекопитающего, содержащей нуклеиновую кислоту, которая кодирует рекомбинантный белок, где способ включает:
обеспечение многолуночного планшета, содержащего по меньшей мере одну лунку, которая содержит клетку млекопитающего, содержащую нуклеиновую кислоту, которая кодирует рекомбинантный белок, помещенную в первую жидкую культуральную среду, причем первая жидкая культуральная среда занимает от приблизительно 5% до приблизительно 70% объема лунки;
инкубацию многолуночного планшета в течение периода времени при от приблизительно 31°C до приблизительно 40°C и с перемешиванием вращением со скоростью от приблизительно 320 оборотов в минуту (об./мин.) до приблизительно 500 об./мин;
непрерывно или периодически, в течение этого периода времени, удаление первого объема первой жидкой культуральной среды и добавление к первой жидкой культуральной среде второго объема второй жидкой культуральной среды, причем первый и второй объемы являются приблизительно равными;
выявление рекомбинантного белка в клетке млекопитающего или в первой и/или второй жидкой культуральной среде;
сравнение количества рекомбинантного белка, находящегося в клетке млекопитающего или в первой и/или второй жидкой культуральной среде, с эталонным уровнем рекомбинантного белка, полученного другим способом, в котором используется одна или несколько другая первая или вторая жидкая культуральная среда, другой исходный материал, используемый для получения первой или второй жидкой культуральной среды, или другой источник клетки млекопитающего; и
идентификацию первой или второй жидкой культуральной среды, исходного материала, используемого для получения первой или второй жидкой культуральной среды, или источника клетки млекопитающего, как содержащего контаминант, когда уровень продуцируемого рекомбинантного белка ниже эталонного уровня,
где:
многолуночный планшет инкубируют в течение периода времени более 7 дней, а в 1-3 день инкубации, в каждый 24-часовой период, первый объем удаляемой первой жидкой культуральной среды и второй объем добавляемой второй жидкой культуральной среды составляют от приблизительно 30% до приблизительно 50% объема первой жидкой культуральной среды;
на 4-6 день инкубации, в каждый 24-часовой период, первый объем удаляемой первой жидкой культуральной среды и второй объем добавляемой второй жидкой культуральной среды составляют от приблизительно 40% до приблизительно 70% объема первой жидкой культуральной среды; и
на 7 день и при дальнейшей инкубации, в каждый 24-часовой период, первый объем удаляемой первой жидкой культуральной среды и второй объем добавляемой второй жидкой культуральной среды составляют от приблизительно 90% до приблизительно 150% объема первой жидкой культуральной среды.
2. Способ по п. 1, в котором контаминант является биологическим контаминантом.
3. Способ по п. 2, в котором биологический контаминант выбран из группы, состоящей из: микобактерии, гриба, бактерии, вируса и нежелательной клетки млекопитающего.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором первый объем первой жидкой культуральной среды по существу не содержит клеток млекопитающих.
5. Способ по любому из пп. 1-3, в котором многолуночный планшет представляет собой планшет с глубокими лунками.
6. Способ по любому из пп. 1-3, в котором диаметр дна лунки составляет от приблизительно 6,0 мм до приблизительно 35 мм.
7. Способ по любому из пп. 1-3, в котором высота лунки составляет от приблизительно 12 мм до приблизительно 50 мм.
8. Способ по любому из пп. 1-3, в котором лунка имеет объем от приблизительно 1 мл до приблизительно 18 мл.
9. Способ по любому из пп. 1-3, в котором клетку млекопитающего суспендируют в от приблизительно 150 мкл до приблизительно 15 мл первой культуральной среды.
10. Способ по любому из пп. 1-3, в котором многолуночный планшет плотно закрывают одноразовой газопроницаемой мембраной.
11. Способ по любому из пп. 1-3, в котором многолуночный планшет плотно закрывают газопроницаемым слоем из силикона.
12. Способ по любому из пп. 1-3, в котором лунка имеет плоское дно.
13. Способ по любому из пп. 1-3, в котором лунка имеет круглое дно.
6
6
14. Способ по любому из пп. 1-3, в результате которого плотность жизнеспособных клеток составляет от 15 × 10 клеток/мл до 60 × 10 клеток/мл в лунке.
15. Способ по любому из пп. 1-3, в котором рекомбинантный белок представляет собой иммуноглобулин.
16. Способ по любому из пп. 1-3, в котором рекомбинантный белок представляет собой фермент.
17. Способ по п. 16, в котором фермент представляет собой галактозидазу.
18. Способ по п. 17, в котором галактозидаза представляет собой альфа-галактозидазу.