ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ L-ФОРМ МИКОБАКТЕРИЙ
NUTRIENT MEDIUM FOR DETECTION OF L-FORMS OF MYCOBACTERIA

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и касается питательных сред для получения L-форм микобактерий из патологического материала, обеспечивает сокращение сроков роста и повышение выхода биомассы L-форм микобактерий.
Известна плотная питательная среда для выделения из биоматериала животных микобактерий туберкулеза и их культивирования, содержащая яйца куриные, малахитовый зеленый, калий фосфорнокислый двухзамещенный, натрий лимоннокислый, магний сернокислый, пептон, глицерин, тетра или лента, или гексадекан, дистиллированную воду [«Питательная среда для культивирования микобактерий» RU 2410425 C1, C12N 1/20, C12R 1/32, 27.01.2011 г.].
Однако данная среда не является пригодной для культивирования L-форм, так как для них требуется полужидкая питательная среда, обеспечивающая необходимые для их роста осмотические условия.
Наиболее близким аналогом, т.е. прототипом, для выделения и культивирования L-форм микобактерий туберкулеза является полужидкая среда Дорожковой, которая содержит, мас.%:
калий фосфорнокислый - 0,026-0,035;
натрий фосфорнокислый - 0,25-0,33;
магний сернокислый - 0,05-0,07;
натрий лимоннокислый - 0,35-0,47;
железо аммиачное лимоннокислое - 0,005-0,007;
аспарагин - 0,41-0,56;
глицерин - 7,44-9,28;
агар - 0,25-0,3;
дистиллированная вода - остальное;
добавки к одному литру среды: сахароза 10; сыворотка крови крупного рогатого скота 10.
[Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии 18.11.2002 г. с.17-16].
Однако известная среда не позволяет выделить в быстрые сроки из патологического материала L-культуры микобактерии, необходимые для опытов по изучению особенностей вызываемого ими инфекционного процесса. Кроме этого, она не обеспечивает достаточного накопления биомассы.
Задачей изобретения является создание среды для выделения из патологического материала L-культуры микобактерий, которая позволяет сократить сроки роста и повысить выход биомассы L-форм микобактерий.
Для решения поставленной задачи предложена среда, состоящая из следующих компонентов, мас.%:
- калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,026-0,035;
- магний сернокислый - 0,05-0,07;
- натрий фосфорнокислый - 0,25-0,33;
- железо лимоннокислое - 0,005-0,007;
- гликокол - 0,35-0,41;
- натрий глютаминовый однозамещенный - 0,1-0,2;
- глицерин - 0,3-0,4;
- агар - 0,3-0,4;
- дистиллированная вода - остальное;
дополнительно обогащена картофельным отваром 9-12% и сывороткой крови крупного рогатого скота 10-20%, что создает необходимую буферность и играет существенную роль в обмене веществ.
Эффективность прилагаемой среды для выделения L-форм микобактерий, которая позволяет сократить сроки роста и повысить выход биомассы L-форм микобактерий, проверена на трех вариантах испытуемых сред.
Питательная среда для выделения L-форм микобактерий «Испытуемая А» составлена из следующих компонентов, г/л:
калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,5;
сернокислый магний - 0,5;
натрий фосфорнокислый - 2,5;
железо лимоннокислое - 0,05;
гликокол - 1;
глицерин - 40;
агар-агар - 3;
дистиллированная вода мл до 1000;
ингредиенты в указном порядке растворяют в дистиллированной воде, каждый ингредиент после растворения предыдущего, добавляют агар, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере, 120°С, 30 минут. За несколько дней до посева среду разогревают на водяной бане до температуры 40-45°С и в качестве стимулятора роста добавляют стерильный картофельный отвар 20% и сыворотку крови крупного рогатого скота 10%. Среду из колбы разливают в пробирки по 6 мл, проверяют на стерильность на протяжении двух суток.
Питательная среда для выделения L-форм микобактерий «Испытуемая Б» составлена из следующих компонентов, г/л:
калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,5;
сернокислый магний - 0,5;
натрий фосфорнокислый - 2,5;
железо лимоннокислое - 0,05;
гликокол - 1;
натрий глютаминовый однозамещенный - 5;
глицерин - 40;
агар-агар - 3;
дистиллированная вода мл до 1000;
ингредиенты в указном порядке растворяют в дистиллированной воде, каждый ингредиент после растворения предыдущего, добавляют агар, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере, 120°С, 30 минут. За несколько дней до посева среду разогревают на водяной бане до температуры 40-45°С и в качестве стимулятора роста добавляют стерильный картофельный отвар 20% и сыворотку крови крупного рогатого скота 10%. Среду из колбы разливают в пробирки по 6 мл, проверяют на стерильность на протяжении двух суток.
Питательная среда для выделения L-форм микобактерий «Испытуемая В» составлена из следующих компонентов, г/л:
калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,5;
сернокислый магний - 0,5;
натрий фосфорнокислый - 2,5;
железо лимоннокислое - 0,05;
гликокол - 2;
натрий глютаминовый однозамещенный - 10;
глицерин - 40;
агар-агар - 3;
дистиллированная вода мл до 1000;
ингредиенты в указном порядке растворяют в дистиллированной воде, каждый ингредиент после растворения предыдущего, добавляют агар, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют в автоклаве при 1 атмосфере, 120°С, 30 минут. За несколько дней до посева среду разогревают на водяной бане до температуры 40-45°С и в качестве стимулятора роста добавляют стерильный картофельный отвар 20% и сыворотку крови крупного рогатого скота 10%. Среду из колбы разливают в пробирки по 6 мл, проверяют на стерильность на протяжении двух суток.
Результаты, полученные при сравнении трех вариантов питательной среды, представлены в таблице 1.
Сопоставительный анализ показал, что в отличие от Испытуемой А и Б использование предлагаемой питательной среды Испытуемой В позволяет сократить сроки первичного роста L-форм микобактерий в 2-3 раза, повысить интенсивность накопления биомассы в 2 раза, необходимых для дальнейшего изучения особенностей вызываемого ими инфекционного процесса, а также сократить время проведения работы.
Предлагаемая среда доступна для производства и отвечает современным требованиям при работе с заразным материалом, безопасная и эффективная при работе.
Источники информации
1. «Питательная среда для культивирования микобактерий» RU 2410425 C1, C12N 1/20, C12R 1/32, 27.01.2011 г.
2. Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии 18.11.2002 г. с.17-16.
Дополнительные источники информации
1. «Способ реверсии L-форм микобактерий» RU 2275422 С2, C12N 1/20, C12R 1/32, 27.04.2006 г.
2. «Питательная среда для выделения и культивирования L-форм микобактерий туберкулеза» RU 2242511 С2, C12N 1/20, C12Q 1/04, 20.12.2004 г.
3. «Способ видовой дифференциации микобактерий туберкулеза» RU 2428484 С2, C12Q 1/04, C12N 1/20 20, 12.2010 г.