МАТРИЧНЫЙ БЛОК ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ТКАНЕВЫХ МИКРОЧИПОВ

Относится к области гистологического, иммуногистохимического, молекулярно-генетического анализа образцов нормальных тканей человека или животных и используется для производства тканевых микрочипов - организованных на одном предметном стекле гистологических срезов, включающих образцы тканей, подлежащих анализу в одних условиях.
Известен матричный блок для производства тканевых микрочипов по европейскому патенту ЕР1238286 (G01N 1/31, G01N 35/00, приор. 13.12.2000 г.). Блок представляет собой параллелепипед из парафина с цилиндрическими выемками, заполненными равными выемкам по диаметру цилиндрами (биоптатами, кернами) различных тканей человека или животного, взятых из парафиновых блоков требуемых тканей. Блок предназначен для производства гистологических срезов, включающих образцы всех тканей, подлежащих анализу.
Для выполнения задач анализа с учетом требований регулирующих организаций необходим, как правило, набор как минимум 37 тканей, полученный от 3 различных доноров, и каждый образец должен быть представлен в двух повторах и иметь диаметр среза около 2 мм. Один матричный блок с выемками диаметром 2 мм обычно включает 60 образцов, что позволяет разместить в пределах одного блока 10 тканей в необходимом количестве повторов. Таким образом, для анализа 37 тканей необходимо создание не одного, а нескольких матричных блоков с разным набором тканей (обычно 4 блока). Для качественного анализа необходимо, чтобы в изготовленном из блока посредством микротомии гистологическом срезе отсутствовали дефекты включенных в него образцов тканей.
Техническая проблема состоит в том, что различные ткани существенно различаются по своим физико-химическим свойствам. Соответственно, при случайном наборе тканей в пределах блока часто возникают проблемы из-за неодинаковой вязкости и твердости составляющих его компонентов тканей. В процессе изготовления гистологических срезов и помещения их на предметное стекло, образцы донорских тканей могут выпадать из среза, деформироваться, крошиться, рваться, смещаться по расположению, накладываться одна на другую.
Существенно усложняет как процесс пробоподготовки, так и микротомии наличие жировой ткани, содержание которой в образце определяет вязкость образца при прохождении через него ножа микротома. Кроме того, расположенные ниже по ходу движения микротомного ножа образцы могут быть повреждены вследствие попадания на лезвие частиц от расположенных выше более твердых образцов либо за счет затупления режущей поверхности лезвия вышерасположенными тканями. Это приводит к существенным затруднениям при проведении последующих манипуляций с гистологическими срезами (депарафинизация, окраска тканевых объектов, обработка их многочисленными реагентами) и анализе окрашенных срезов, а также к необходимости многочисленных повторов.
Ставится задача создания матричного блока, позволяющего производить гистологические срезы без потери качества, и повысить повторяемость результатов анализов.
Задача решается за счет того, что для размещения в пределах одного матричного блока для изготовления тканевых микрочипов, представляющего собой прямоугольный параллелепипед из парафина с цилиндрическими выемками, заполненными равными выемкам по диаметру цилиндрами различных тканей человека или животного, берут образцы из органов со средним содержанием жира, в которых содержание паренхиматозной и стромальной тканей сопоставимо, к ним относятся, так называемые, паренхиматозные органы, железы внешней и смешанной секреции, лимфатическая и эмбриональная ткани. То есть для объединения в одном блоке, ткани должны быть, возможно, более близки, в первую очередь, по содержанию жировой ткани, которое определяет вязкость образца. Кроме того, на качество гистологического среза влияет соотношение содержаний в отбираемых для блока образцах паренхимы и стромальной соединительной ткани, которые существенно отличаются по твердости. Минимальные различия по этим показателям у образцов в пределах одного матричного блока способствуют равномерности резки при микротомии. Другим вариантом набора тканей в пределах одного матричного блока может быть набор, в который входят образцы с преобладанием паренхимы и высоким содержанием жира, и, соответственно, наиболее вязкие и мягкие, в третий набор могут входить ткани, обладающие средней гистологической твердостью, в которых содержится незначительное количество жира и стромальный компонент преобладает над паренхиматозным, в четвертый набор включаются наиболее твердые соединительнотканые образцы. Содержание в ткани жирового, паренхиматозного и стромального компонентов зависит от ее морфофункциональных характеристик, поэтому из всего набора образцов для размещения в одном блоке отобраны ткани, имеющие близкие физико-химические свойства, определяющиеся их строением и функцией.
Технический результат заключается в том, что заявленная полезная модель позволит производить гистологические препараты без существенных потерь качества составляющих элементов при изготовлении гистологических срезов с матричного блока и повысить повторяемость результатов анализов.
Изготовленные из такого блока тканевые микрочипы будут содержать необходимые для последующих исследований ткани в пригодном для гистологических и иммуногистохимических окрасок, выявления молекулярно-генетических повреждений, а также для анализа и обобщений, состоянии. Преимущество использования таких тканевых микрочипов состоит в том, что для полноценных разнообразных морфологических исследований требуется меньшее количество гистологических срезов (соответственно, самих микрочипов), при этом существенно сокращение времени на выполнение работ и значительная экономия реагентов, расходных материалов, других ресурсов. Это ведет к повышению качества результатов исследований и последующего их анализа за счет того, что все образцы (биоптаты) тканей обрабатываются одновременно одинаковым способом с использованием установленных (рекомендованных) протоколов (концентрация реагентов, время инкубации, температурные режимы, состав растворов).
Одним из оптимальных вариантов состава тканей в таком наборе может быть набор тканей средней гистологической мягкости - печень, почка, легкое, селезенка, плацента, поджелудочная железа, слюнная железа, лимфоузел, яичко, молочная железа.
На фиг. 1. представлена фотография матричного блока составленного из тканей средней гистологической мягкости.
На фотографии (фиг. 1) показан матричный блок, образцы тканей в котором имеют близкие физико-химические свойства, что достигнуто группировкой тканей исходя из их морфофункциональных характеристик, а именно сочетанием в пределах одного блока образцов, в которых содержание паренхиматозной и стромальной тканей сопоставимо: печень, почка, легкое, селезенка, плацента, поджелудочная железа, слюнная железа, лимфоузел, яичко, молочная железа, что, в свою очередь, позволяет производить гистологические срезы с использованием микротома без потери качества элементов среза.
Это достигается выполнением условий, декларируемых в качестве особенностей полезной модели: сочетания в пределах одного блока образцов из набора тканей, близких друг к другу по морфофункциональным характеристикам, определяющим их поведение при прохождении через них ножа микротома, что и позволяет производить гистологические срезы с использованием микротома без потери качества элементов среза.