СПОСОБ ОЦЕНКИ ТЯЖЕСТИ ГИПОКСИИ НОВОРОЖДЕННЫХ
METHOD FOR DETERMINING SEVERITY OF NEONATAL HYPOXIA

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неонатологии, и может быть использовано в качестве одного из диагностических критериев определения степени выраженности гипоксии новорожденных.
Потребность в диагностике и прогнозировании развития последствий перинатальных поражений ЦНС и поиск различных возможностей коррекции дезадаптации у новорожденных детей при течении и проведении лечения данных патологических состояний является актуальной и пока еще полностью нерешенной задачей. Использование способа позволяет с высокой точностью и специфичностью оценить степень тяжести гипоксии в периоде новорожденности, что позволит прогнозировать состояние ребенка в раннем возрасте и даст возможность проводить коррекцию данных состояний.
Известен способ оценки степени тяжести состояния новорожденных детей путем комплексного анализа результатов клинического обследования и способа оценки степени тяжести состояния доношенных новорожденных детей по данным кислотных и осмотических эритрограмм с определением показателей Gmax и G120, выраженных в процентах, при этом, в случае если Gmax больше 96,6% и G120 меньше или равно 1%, делают заключение о легкой степени нарушений состояния новорожденных; если Gmax лежит в диапазоне от 80,25 до 96,59%; G120 от 1,1 до 2,12% делают заключение о умеренной степени нарушений состояния новорожденных; если Gmax менее 80,2% и G120 более 2,1%, делают заключение о тяжелой степени нарушений состояния новорожденных детей, требующей повышенного внимания, назначения и проведения необходимых лечебных манипуляций (RU 2396564, МПК G01N 33/49, опубл. 10.08.2010 г.).
Однако при применении данного способа имеется ряд недостатков, которые состоят в том, что он применим только для доношенных новорожденных и не позволяет оценить состояние и выраженность гипоксии у недоношенных детей. Кроме того, способ достаточно трудоемкий и требует определенных затрат времени (кровь приходится трижды центрифугировать в течение 10-15 минут), а состояние новорожденного ребенка, которое необходимо расценить, требует срочной терапии и порой решения вопроса о транспортировке и госпитализации в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных. Еще одним из недостатков является отсутствие возможности оценки степени выраженности гипоксии с учетом структурно-функциональных свойств гемоглобина новорожденного. Кроме того, забор крови из вен головы новорожденного является высоко инвазивной процедурой для ребенка.
Технический результат заключается в определении степени выраженности гипоксии новорожденных с высокой точностью.
Технический результат достигается тем, что в способе оценки степени тяжести гипоксии у новорожденных исследуют кровь. Исследования выполняют методом РАМАН-спектроскопии с записью кривых РАМАН-спектра гемоглобина новорожденного, по которым определяют структурно-функциональные свойства гемоглобина. При этом, если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах составляет от 0,589 до 0,680, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,446 до 0,645, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,598 до 0,786, сродство гемоглобина к лигандам от 0,661 до 1,099; колебания метиновых мостиков от 1,518 до 1,652, то делают заключение о первой степени церебральной ишемии у новорожденного. Если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах лежит в диапазоне от 0,620 до 0,743, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,346 до 0,565, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,627 до 0,789, сродство гемоглобина к лигандам от 0,659 до 0,998, колебания метиновых мостиков от 1,553 до 1,874, то делают заключение о второй степени церебральной ишемии у новорожденного. Если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах лежит в диапазоне от 0,643 до 0,982, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,351 до 0,545, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,711 до 0,816, сродство гемоглобина к лигандам от 0,614 до 0,894; колебания метиновых мостиков от 1,689 до 1,903, то делают заключение о третьей степени церебральной ишемии у новорожденного, требующей постоянного наблюдения и назначения необходимой терапии.
Способ осуществляется следующим образом. Делается забор крови у ребенка, причем достаточно 0,1-0,2 мл крови. Делается обычный мазок крови на предметное стекло. Затем с помощью аппарата проводится РАМАН-спектроскопия с записью кривых РАМАН-спектра гемоглобина новорожденного (Фиг.1, на которой изображены кривые РАМАН-спектра гемоглобина новорожденных при церебральных ишемиях: а - здоровый новорожденный, б - церебральная ишемия I степени, в - церебральная ишемия II степени, г - церебральная ишемия III степени). После этого производится расчет следующих показателей (1. Stein P., I.M. Burke, and T.G. Spiro. Structural interpretation of heme protein resonance Raman frequencies. Preliminary normal coordinate analysis results. J. Amer. Chem. Soc. - 1975. - 97. - P. 2304-2305. 2. Kitagawa Т., Y. Kyogoku, and T. Iizuka. Nature of the iron ligand bond in ferrous low spin hemoproteins studied by resonance Raman scattering. J. Amer. Chem. Soc. - 1976. - 98. - P. 5169-5173. 3. Choi S., T.G. Spiro, K.C. Langry, K.M. Smith, D.L. Budd, and G.N. La Mar. Structural correlations and vinyl influences in resonance Raman spectra of protoheme complexes and proteins. J. Amer. Chem. Soc. - 1982. - 104. - P. 4345-4351. 4. Wood B.R., P. Caspers, G.J. Puppels, S. Pandiancherri, and D. Mc-Naughton. Resonance Raman spectroscopy of red blood cells using near-infrared laser excitation. Anal. Bioanal. Chem. 2007. 387. - P. 1691-1703):
1375
1355
1375
1. относительное количество оксигемоглобина в крови или суспензии эритроцитов рассчитывают по соотношению абсолютных интенсивностей соответственно полосам спектра гемоглобина I/(I+I);
1355
1550
2. относительная способность всего гемоглобина в пробе связывать лиганды определяется по отношению интенсивностей I/I;
1375
1580
3. относительная способность гемоглобина выделять лиганды устанавливается по отношению интенсивностей I/I;
1355
1550
1375
1580
4. сродство гемоглобина к лигандам (кислороду) рассчитывают по отношению (I/I)/(I/I);
1375
1172
5. колебания метиновых мостиков гемоглобина определяют по отношению I/I.
В проведенном исследовании новорожденным детям (n=78) с церебральными ишемиями была проведена РАМАН-спектроскопия гемоглобина. Группу контроля составили здоровые дети.
При анализе РАМАН-спектроскопии у этой группы новорожденных, перенесших перинатальное поражение ЦНС ишемически-гипоксического генеза, выявлено, что количество оксигемоглобина в крови растет с увеличением тяжести заболевания (табл.1, фиг.1, фиг.2, на которой изображена РАМАН-спектроскопия гемоглобина новорожденных при церебральных ишемиях (а - здоровый новорожденный, б - церебральная ишемия I степени, в - церебральная ишемия II степени, г - церебральная ишемия III степени)).
Показатель, отражающий способность гемоглобина связывать лиганды и, в первую очередь, кислород у новорожденных с перинатальными поражениями ЦНС ишемически-гипоксического генеза уменьшается с увеличением степени тяжести данной патологии. Показатель относительной способности гемоглобина выделять лиганды у новорожденных при гипоксически-ишемическом поражении ЦНС растет по мере возрастания тяжести церебральной ишемии. Показатель сродства гемоглобина к лигандам (кислороду) у новорожденных с церебральными ишемиями меньше по сравнению с данным показателем у здоровых новорожденных, причем он уменьшается по мере увеличения тяжести, перенесенной церебральной ишемии.
Показатель, отражающий конформационные изменения пирролов, у детей с церебральной ишемией растет по мере утяжеления патологии (табл. 1).
При точной верификации исследованных показателей доказано, что:
при церебральной ишемии I степени
- относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах от 0,589 до 0,680;
- способность гемоглобина связывать лиганды от 0,446 до 0,645;
- относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,598 до 0,786;
- сродство гемоглобина к лигандам от 0,661 до 1,099;
- колебания метиловых мостиков, отражающие конформационные изменения пирролов, от 1,518 до 1,652.
При церебральной ишемии II степени
- относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах от 0,620 до 0,743;
- способность гемоглобина связывать лиганды от 0,346 до 0,565;
- относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,627 до 0,789;
- сродство гемоглобина к лигандам от 0,659 до 0,998;
- колебания метиновых мостиков, отражающие конформационные изменения пирролов, от 1,553 до 1,874.
При церебральной ишемии III степени
- относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах от 0,643 до 0,982;
- способность гемоглобина связывать лиганды от 0,351 до 0,545;
- относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,711 до 0,816;
- сродство гемоглобина к лигандам от 0,614 до 0,894;
- колебания метиновых мостиков, отражающие конформационные изменения пирролов, от 1,689 до 1,903.
Таким образом, исследования показали, что РАМАН-спектроскопия высоко информативно оценивает степень выраженности гипоксии новорожденного, определяя структурно-функциональные свойства гемоглобина новорожденного, а предложенный способ с помощью РАМАН-спектроскопии гемоглобина новорожденных, которая характеризует его структурно-функциональные свойства, дает возможность на молекулярном уровне оценить тяжесть перенесенной гипоксии в периоде новорожденности.
Таблица 1
РАМАН-спектроскопия гемоглобина новорожденных при ишемически-гипоксических поражениях ЦНС
Показатель
Здоровые новорожденные (норма)
Новорожденные с гипоксией
ЦИ I степени
ЦИ II степени
ЦИ III степени
Относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах I<sub>1375</sub>/(I<sub>1355</sub>+I<sub>1375</sub>)
от 0,523до 0,580
от 0,589до 0,680
от 0,620до 0,743
от 0,643до 0,982
Относительная способность гемоглобина связывать лиганды I<sub>1355</sub>/I<sub>1550</sub>
от 0,423до 0,440
от 0,446до 0,645
от 0,346до 0,565
от 0,351до 0,545
Относительная способность гемоглобина выделять лиганды I<sub>1375</sub>/I<sub>1580</sub>
от 0,578до 0,590
от 0,598до 0,786
от 0,627до 0,789
от 0,711до 0,816
Сродство гемоглобина к лигандам (O<sub>2</sub>) (I<sub>1355</sub>/I<sub>1550</sub>)/(I<sub>1375</sub>/I<sub>1580</sub>)
от 0,623до 0,660
от 0,661до 1,099
от 0,659до 0,998
от 0,614до 0,894
Колебания метиловых мостиков гемоглобина I<sub>1375</sub>/I<sub>1172</sub>
от 1,340до 1,510
от 1,518до 1,652
от 1,553до 1,874
от 1,689до 1,903
Примечание: жирный шрифт достоверность различия по отношению к норме при p<0,05