КРИСТАЛЛЫ АНТИТЕЛ К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ PD-1 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Способ получения кристаллического анти-PD-1 моноклонального антитела (mAb), включающий:
а) смешивание:
i. водного буферного раствора, содержащего от примерно 5 мг/мл до примерно 80 мг/мл mAb, причем анти-PD-1 mAb представляет собой пембролизумаб или вариант пембролизумаба,
ii. полиэтиленгликоля (PEG) и
iii. добавки, выбранной из группы, состоящей из кофеина, теофиллина, 2’-дезоксигуанозин-5’-монофосфата, биоактивного гиббереллина и фармацевтически приемлемой соли указанного биоактивного гиббереллина;
с образованием раствора для кристаллизации, причем раствор для кристаллизации имеет pH от примерно 6,0 до примерно 8,8 и содержит от примерно 2% до примерно 40% массы на объем (мас./об.) PEG и от примерно 0,1% до примерно 0,30% мас./об. добавки;
b) инкубацию раствора для кристаллизации в течение периода времени, достаточного для образования кристаллов; и
c) необязательный сбор кристаллического анти-PD-1 mAb из раствора.
2. Способ по п.1, в котором водный буферный раствор, содержащий mAb, дополнительно содержит гистидиновый буфер с pH от примерно 5,0 до примерно 6,0.
3. Способ по п.1 или 2, в котором PEG и добавку смешивают вместе с образованием раствора осадителя перед смешиванием с водным буферным раствором, содержащим mAb.
4. Способ по п.1 или 2, в котором водный буферный раствор, содержащий mAb, смешивают с PEG перед смешиванием с добавкой.
5. Способ по п.1 или 2, в котором водный буферный раствор, содержащий mAb, смешивают с добавкой перед смешиванием с PEG.
6. Способ по п.1, в котором добавка представляет собой гиббереллин A3 или его фармацевтически приемлемую соль.
7. Способ по п.1, в котором добавка составляет от примерно 0,15% до примерно 0,30% мас./об. кофеина или от примерно 0,25% до примерно 0,30% мас./об. теофиллина.
8. Способ по п.1, в котором добавка представляет собой кофеин, и раствор для кристаллизации дополнительно содержит от примерно 1% до примерно 10% мас./об. декстрана сульфата натрия.
9. Способ по п.8, в котором количество декстрана сульфата натрия составляет примерно 5% мас./об.
10. Способ по любому из пп.1-9, в котором PEG присутствует в растворе для кристаллизации в количестве от примерно 5% до примерно 15% мас./об.
11. Способ по любому из пп.1-9, в котором PEG присутствует в растворе для кристаллизации в количестве от примерно 10% до примерно 30% мас./об.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором молекулярная масса PEG составляет от примерно 2500 до примерно 35000.
13. Способ по п.12, в котором PEG представляет собой PEG 3350.
14. Способ по п.13, в котором pH раствора для кристаллизации и количество PEG, присутствующего в растворе для кристаллизации, выбирают из группы, состоящей из:
а) pH раствора для кристаллизации составляет примерно 6,0, и количество PEG составляет 2-4% мас./об.,
b) pH раствора для кристаллизации составляет примерно 6,4, и количество PEG составляет 2-6% мас./об.,
c) pH раствора для кристаллизации составляет примерно от 6,8 до 8,4, и количество PEG составляет 6-12% мас./об., и
d) pH раствора для кристаллизации составляет примерно 8,8, и количество PEG составляет 10-12% мас./об.
15. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором раствор для кристаллизации инкубируют при температуре инкубации от примерно 2°C до примерно 37°C.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором раствор для кристаллизации инкубируют при температуре инкубации от примерно 18°C до примерно 25°C.
17. Способ по любому из пп.1-14, в котором раствор для кристаллизации нагревают до примерно 50°C, затем охлаждают до температуры примерно 37°C или ниже.
18. Способ по п.17, в котором раствор для кристаллизации охлаждают до температуры от примерно 18°C до примерно 25°C.
19. Способ по п.17, в котором раствор для кристаллизации охлаждают до температуры примерно 4°C.
20. Способ по п.17, в котором температуру инкубации увеличивают от примерно 4°C до примерно 10-40°C.
21. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором раствор для кристаллизации инкубируют в течение примерно 15 минут или более.
22. Способ по п.21, в котором раствор для кристаллизации инкубируют в течение примерно 2 часов или более.
23. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором во время инкубации раствор для кристаллизации вращают или встряхивают.
24. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором концентрация раствора анти-PD-1 mAb в растворе для кристаллизации составляет от примерно 5 мг/мл до примерно 50 мг/мл.
25. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором раствор для кристаллизации получают путем диффузии паров, периодической кристаллизации или диализом.
26. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором раствор для кристаллизации дополнительно содержит от примерно 25 мМ до примерно 250 мМ буфера HEPES.
27. Способ по п.26, в котором раствор для кристаллизации содержит примерно 50 мМ буфера HEPES.
28. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором mAb представляет собой пембролизумаб.
29. Способ по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающий стадию затравки раствора для кристаллизации с использованием кристаллов анти-PD-1 mAb.
30. Способ по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающий стадию гомогенизации кристаллического анти-PD-1 mAb.
31. Выделенный кристалл, сформированный способом по любому из предшествующих пунктов.
1
a
b
32. Выделенный кристалл, содержащий пембролизумаб в комплексе с кофеином, причем кристалл характеризуется пространственной группой P222=43,8Å =113,9Å c=175,0Å, α=β=γ=90°.
33. Кристалл по п.32, содержащий полипептид, причем указанный полипептид характеризуется координатами структуры, включающими среднеквадратичное отклонение (RMSD) консервативных остатков атомов основной цепи менее примерно 2,0 ангстрем при наложении на атомы основной цепи, описываемые структурными координатами, приведенными в таблице 7.
34. Кристалл по любому из пп.31-33, в котором размер частиц кристалла составляет примерно от 0,5 до 50 мкм.
13
35. Кристаллический пембролизумаб, содержащий пембролизумаб в комплексе с кофеином, характеризуемый твердотельным спектром ЯМР С с пиками при примерно 182,16, 181,54, 179,99, 109,36, 108,23, 103,58, 76,88 и 76,04 м.д.
36. Кристаллический пембролизумаб по п.35, дополнительно демонстрирующий пики при примерно 183,07, 180,55, 110,70, 110,15, 101,49, 99,75, 98,56, 74,97, 74,41, 73,52, 72,69, 13,85, 13,27, 12,26 и 11,13 м.д.
13
37. Кристаллический пембролизумаб по любому из пп.35-36, характеризующийся твердотельным спектромЯМР С, приведенным на фиг. 10А.
38. Композиция, содержащая кристалл по любому из пп.31-34 или кристаллический пембролизумаб по любому из пп.35-37 и фармацевтически приемлемый носитель.
39. Композиция по п.38, где композиция представляет собой кристаллическую суспензию, и концентрация анти-PD-1 mAb составляет от 5 до 400 мг/мл.
40. Композиция по п.38, в которой концентрация анти-PD-1 mAb ≥ 75 мг/мл.
41. Композиция по любому из пп.38-40, дополнительно содержащая от примерно 5 мМ до примерно 20 мМ буфера.
42. Композиция по любому из пп.38-40, дополнительно содержащая от примерно 0,01% до примерно 0,10% мас./об. неионного поверхностно-активного вещества.
43. Композиция по любому из пп.38-40, дополнительно содержащая второй активный фармацевтический ингредиент (API).
44. Композиция по п.43, в которой второй API представляет собой малую молекулу или биологическое соединение.
45. Способ лечения рака у пациента-человека, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту-человеку кристалла по любому из пп.31-34, кристаллического пембролизумаба по любому из пп.35-37 или композиции по любому из пп.38-44.
46. Способ по п.45, в котором кристалл или композицию вводят пациенту внутривенно или подкожно.
47. Способ по п.45 или 46, где рак выбирают из группы, состоящей из: меланомы, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, лимфомы Ходжкина, рака головы и шеи, первичной крупноклеточной B-клеточной лимфомы средостения, уротелиальной карциномы, рака желудка, рака пищевода, рака почек, рака эндометрия, гепатоцеллюлярной карциномы, карциномы из клеток Меркеля и рака шейки матки.
48. Способ по п.45 или 46, где рак представляет собой солидную опухоль или колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью или с дефицитом системы репарации ошибок репликации.
49. Способ по п.45 или 46, где опухоль пациента имеет высокую мутационную нагрузку.
50. Способ по любому из пп.45-48, где доза анти-PD-1 mAb составляет 200 мг, которую вводят пациенту примерно каждые 3 недели.
51. Способ по любому из пп.45-48, где доза кристаллического mAb составляет 400 мг, которую вводят пациенту примерно каждые 6 недель.