Влияние биоэнергетических нарушений на функцию иммунокомпетентных клеток при различных заболеваниях в детском возрасте

Влияние биоэнергетических нарушений на функцию иммунокомпетентных клеток при различных заболеваниях в детском возрасте

Т.В. Виноградова, В.С. Сухорукое, Н.В. Клейменова, А.Н. Пампура, В.А. Белов, М.Ю. Дорофеева

Московский НИИ педиатрии и детской хирургии

Impact of bioenergetic impairments on the function of immunocompetent cells in different childhood diseases

T.V. Vinogradova, V.S. Sukhorukov, N.V. Kleimenova, A.N. Pampura, V.A. Belov, M.Yu. Dorofeyeva

Moscow Research Institute of Pediatrics and Pediatric Surgery

Проведенные исследования у детей с различными заболеваниями выявили влияние биоэнергетических нарушений на функцию иммунокомпетентных клеток. На основании использования цитоферментохимических данных и иммунологических параметров энергоемкого процесса (процесс лигандзависимого перераспределения иммуноглобулиновых рецепторов В-лим-фоцитов) было показано, что биоэнергетическая недостаточность выявляется при различных состояниях и может носить транзиторный характер. Степень ее выраженности и качественные различия зависят от многих причин, в частности, от патогенеза заболевания, возраста пациента и т.д.

Ключевые слова: дети, часто болеющие дети, атопический дерматит, туберозный склероз, митохондриальная дисфункция, радиационное воздействие, митохондриальные ферменты, В-лимфоциты.

The studies of children with different diseases have revealed the impact of bioenergetic impairments on the function of immunocompetent cells. The use of enzyme cytochemical data and immunological parameters of a power-intensive process (ligand-dependent redistribution of immunoglobulin B-lymphocyte receptors) has shown that bioenergy deficiency may be detected in various conditions and be transient. Its degree and qualitative differences depend on many causes, in particular, disease pathogenesis, patient age, etc.

Key words: children, frequently ill children, atopical dermatitis, tuberous sclerosis, mitochondrial dysfunction, radiation exposure, mitochondrial enzymes, B-lymphocytes.

В течение последних десятилетий активно проводятся исследования, направленные на выяснение патогенетической роли нарушений клеточного энергообмена в развитии ряда патологических процессов. Распространенность патологических состояний, связанных с митохондриальной недостаточностью, довольно-таки велика (среди детей не менее 15—20%) [1]. Наряду с «первичными» митохондриальными болезнями существует ряд других заболеваний, включающих в себя те или иные нарушения клеточной

© Коллектив авторов, 2012

Ros Vestn Perinatol Pediat 2012; 4 (2):119-125

Адрес для корреспонденции: Виноградова Татьяна Владимировна — к.м.н., в.н.с. научно-исследовательской лаборатории общей патологии МНИИ педиатрии и детской хирургии

Сухоруков Владимир Сергеевич — д.м.н., проф., зав. указанной лабораторией

Клейменова Нина Васильевна — к.м.н., ст.н.с. той же лаборатории Пампура Александр Николаевич — д.м.н., зав. отделением аллергологии и клинической иммунологии того же института

Белов Владимир Алексеевич — к.м.н., зав. консультативно-диагностическим отделением того же института

Дорофеева Марина Юрьевна — к.м.н., ст.н.с. отделения психоневрологии и эпилептологии того же института 125412 Москва, ул. Талдомская, д. 2

энергетики как вторичные звенья митохондриальной недостаточности. Причины вторичного угнетения митохондриальной активности различны.

Так как нарушение энергозависимых этапов защитных реакций организма может явиться одной из основ нарушения иммунологической резистентности [2, 3], наличие скрытых вариантов энергодефицитного состояния оказывает отрицательное воздействие на процессы течения заболеваний, реабилитации и т.п. Одним из составляющих компонентов снижения адаптационных процессов детского организма в периоды становления иммунной системы [4], характеризующиеся частой манифестацией различных заболеваний, может явиться транзиторная физиологическая дисфункция клеточной биоэнергетики [5]. Поэтому у детей с повышенной частотой инфекционных заболеваний («часто болеющие дети») и у детей с предполагаемыми вторичными иммунодефицит-ными состояниями необходимо исключать наличие энергодефицитного диатеза — скрытой формы относительной индивидуальной недостаточности цито-энергетического статуса организма [3, 6].

Исследования состояния энергообеспечивающих процессов на основании определения уровня мито-

хондриальных ферментов лейкоцитов цельной крови в группе часто болеющих детей выявили комбинированное снижение активности ферментов как аэробного, так и анаэробного гликолиза [7—9]. Таким образом, для часто болеющих детей характерно общее снижение митохондриальной активности, особенно процессов анаэробного гликолиза.

В ряде работ [10, 11] показано, что существенным звеном патогенеза туберозного склероза может быть полисистемное нарушение клеточного энергообмена. При исследовании параметров митохондриальной активности лимфоцитов периферической крови у детей с туберозным склерозом обнаружено снижение уровня всех митохондриальных ферментов [12], что согласовывалось с данными морфологического исследования, выявившего нарушения энергетического метаболизма в митохондриях у этих больных [10, 13], и свидетельствовало в пользу данного предположения.

Согласно последним молекулярно-генетическим и эпигенетическим данным [14—16], в развитии ту-берозного склероза основную роль играют первичные мутации, по крайней мере, в двух генах, которые кодируют синтез белков гамартина и туберина [17]. Гамартин, взаимодействуя с одним из семейств ак-тинсвязывающих белков, вызывает реорганизацию актина, обеспечивая связи последнего с клеточной мембраной, что необходимо для проявления адгезивных свойств клетки, а также для удержания клеточных рецепторов на мембране. Белок туберин является контролирующим звеном процессов клеточной пролиферации и дифференцировки [18, 19].

До настоящего времени нет единого мнения о патогенетическом механизме повреждающего действия ионизирующего излучения. Однако приоритет на начальных стадиях лучевого поражения отдается, во-первых, окислительным реакциям свободнорадикаль-ного типа, субстратом для которых, в частности, являются липиды, представляющие основную структурную единицу клеточных мембран; во-вторых, нарушениям метаболизма, т.е. биоэнергетики, что, несомненно, влияет на функции иммунокомпетентных клеток.

Из вышесказанного ясно, что полисистемная биоэнергетическая недостаточность может сказываться на работе иммунокомпетентных клеток. Высокочувствительными (наиболее энергозависимыми) к уровню окислительного фосфорилирования являются процессы миграции и адгезии, рецепции, фагоцитоза, секреции иммуноглобулинов и интерлейкинов. При этом функциональным изменениям принадлежит первое место.

Одним из способов определения функционального состояния иммунокомпетентных клеток, в частности В-лимфоцитов, является изучение процесса ли-гандзависимого перераспределения рецепторов на их поверхности [20]. Данный метод был разработан для диагностики заболеваний атопического генеза [21].

Однако при обследовании детей с атопическим дерматитом, бронхиальной астмой, хроническими воспалительными заболеваниями ЛОР органов, эпилепсией, туберозным склерозом, с радиационным поражением, часто болеющих детей нами в ряде случаев была замечена одна особенность, характеризующаяся заторможенностью, «застыванием» процесса на стадиях, отсутствием динамики. Так как это активный процесс, для которого необходима энергия (АТФ) [22], образование всех нижеописанных стадий, кроме «петча» и сброса «кэпов», может протекать лишь при наличии активного клеточного метаболизма [23], что позволило нам использовать данный метод в рамках лабораторного исследования для определения нарушений митохондриальных функций. Для количественной характеристики особенностей динамики процесса лигандзависимого перераспределения иммуноглобулиновых рецепторов (IgR) В-лимфоци-тов нами был разработан «коэффициент торможения», который способствует выявлению дисбаланса энергетического обмена в митохондриях клеток.

При планировании параллельного цитохимического и иммунологического исследования лимфоцитов нами учитывалось следующее: процесс перераспределения рецепторов на поверхности лимфоцитов является энергозависимым, однако детальные характеристики этой зависимости не изучены. Сопоставление данных о перераспределении рецепторов с параметрами активности митохондриальных ферментов в этих же клетках важно для изучения иммунных процессов в самих лимфоцитах, а их совместное изучение может внести дополнительный вклад в решение диагностических проблем.

Цель работы — выявление особенностей энергообеспечения иммунокомпетентных клеток у детей с различными заболеваниями.

ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕТЕЙ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Обследованы 337 детей: 53 ребенка в возрасте 3—8 лет с типично протекающим атопическим дерматитом легкой и средней степени тяжести (группа сравнения); 27 детей в возрасте от 4 до 15 лет с атипичной картиной (стертый характер, затяжное течение) заболеваний атопического генеза; 60 часто болеющих детей в возрасте от 1,5 до 12 лет; 23 ребенка в возрасте от 3 до 14 лет, непосредственно подвергшихся радиационному воздействию, а также 19 детей того же возраста, родители которых принимали участие в ликвидации аварии на Чернобыльской АЭС (исследования проводились в различные периоды от момента катастрофы); 155 детей в возрасте от 9 мес до 15 лет с митохондриальной дисфункцией, в том числе 35 — с синдромами Элерса—Данло, 11 — с синдромом Марфана, 109 — с туберозным склерозом.

В качестве материала исследования использовалась гепаринизированная венозная кровь. Объектом исследования являлись лимфоциты.

Определение функционального состояния В-лим-фоцитов проводилось путем изучения процесса ли-гандзависимого перераспределения на их поверхности методом прямой иммунофлюоресценции с помощью диагностических флюоресцентных антивидовых иммуноглобулинов против иммуноглобулинов человека (производство ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН) на люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ И3, ув. 65 х 7. Принцип метода заключается в активации В-лимфо-цитов с помощью антииммуноглобулинов, меченных флюоресцеином, и регистрации последовательных стадий перемещения лигандсвязанных по мембране. В зависимости от иммунофлюоресцентного свечения мембраны клетки дифференцируют пять фазовых состояний: «ринг» — равномерное свечение внешней оболочки клетки; «интактный петч»

— гранулярное свечение по всей внешней оболочке; «абсорбированный петч» — гранулярное свечение внешней оболочки с отдельными светящимися включениями внутри клетки; «кэп» — свечение одного из полюсов клетки (с учетом особенностей — О-образ-ный, грушеобразный кэп, сброс кэпов); «эндоцитоз»

— светящиеся включения внутри клетки (цитоплазме) при отсутствии свечения внешней оболочки.

Процесс лигандзависимого перераспределения проводился в динамике (в течение 30 мин) с одновременным подсчетом количественных показателей (в процентах) по всем пяти стадиям процесса в фиксированных препаратах через определенное время (0, 2, 5, 8, 12, 16, 20, 30 мин) на 100 В-лимфоци-тов и последующим вычислением коэффициента торможения. Данный коэффициент торможения вычисляли путем анализа изменений всех количественных показателей стадий процесса — «ринг», «интактный петч», «абсорбированный петч», «кэп», «эндоцитоз»-в течение 30 мин.

Коэффициент торможения представляет собой сумму условных единиц, характеризующих: 1) повтор идентичных значений (в %), т.е. отсутствие изменений показателя в любой стадии процесса за следующий промежуток времени — 2 усл.ед.; 2) изменения содержания клеток в каждой стадии от предыдущего на 2%—1 усл.ед. Среднее его значение в норме составляет 4,73 усл.ед. (2,1—9,9 усл.ед.). Значения больше 10 усл.ед. указывают на наличие полисистемных нарушений клеточного энергообмена.

При обработке полученных результатов не только учитывались значения коэффициента торможения, но и анализировались данные, характерные для каждой стадии в отдельности, — «стадийные коэффициенты торможения». Такой подход применен для выявления более тонких различий в скорости смены

стадийных состояний IgR у часто болеющих детей и у детей с туберозным склерозом.

Из другой части материала готовились мазки и проводился цитохимический анализ активности сук-цинатдегидрогеназы (СДГ), глутаматдегидрогеназы (ГДГ), а-глицерофосфатдегидрогеназы (ГФДГ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ) на основании подсчета гранул формазана при световой микроскопии по методу Р.П. Нарциссова.

Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программы EXCEL, а также использовались методы корреляционного и регрессионного анализов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

У детей с типичной клинической картиной ато-пического дерматита среднее значение коэффициента торможения составило 6,4±0,27 усл. ед., что соответствовало нормативному показателю. При цитохимическом исследовании у них наблюдалось повышение активности СДГ (24,6 усл. ед. при норме 18—23 усл. ед.) и в большей степени ЛДГ (28,5 усл. ед. при норме 10—17 усл. ед.) при неизмененных показателях ГФДГ (11,0 усл. ед.) и ГДГ (12,9 усл. ед.).

Корреляционный анализ между данными ци-тоферментохимического исследования и стадиями процесса лигандзависимого перераспределения поверхностных рецепторов В-лимфоцитов в этой группе больных показал, что наиболее энергозависимой была стадия эндоцитоза. Установлены следующие корреляции между исследованными параметрами:

• ГДГ < > длительность эндоцитоза; коэффициент корреляции r = —0,61;

• ГДГ/СДГ < > длительность эндоцитоза; коэффициент корреляции r = —0,68;

• ГФДГ/СДГ < > длительность эндоцитоза; коэффициент корреляции r = —0,63.

Связи по данным регрессионного анализа в группе с атопией:

• длительность эндоцитоза = 3,3—1,9 {ГДГ/СДГ} -4,1 {ГФДГ/(СДГ+ГДГ} (коэффициент детерминации 0,49).

Данные регрессионного анализа подтвердили, что у детей с атопией наиболее связанной с активностью изученных митохондриальных ферментов (особенно СДГ и ГДГ) оказалась стадия эндоцитоза. Коэффициент детерминации, равный при этом 0,5, можно считать неспецифическим показателем энергозависимости.

Таким образом, у детей с типичной клинической картиной атопического дерматита отмечается активация или нормальный уровень активности энергетических процессов в митохондриях, что, возможно, является общебиологической характеристикой реакции немедленного типа.

В ряде случаев клиническая картина заболеваний атопического генеза (атопический дерматит, аллергический риносинусит) носит стертый характер и имеет затяжное течение. Одной из причин подобных состояний может явиться несостоятельность энерго-обеспечивающих процессов иммунокомпетентных клеток. В связи с этим у больных была предпринята попытка терапевтической коррекции энергетической недостаточности препаратами L-карнитина [7, 24] в возрастных дозах. Срок наблюдения составил 1 мес.

Основные показатели процесса лигандзависимого перераспределения IgR В-лимфоцитов у детей до лечения были следующими: коэффициент торможения

— 16,2±0,51 усл.ед. (15,0—18,0 усл.ед.); максимальные значения наиболее энергозависимой стадии — эндо-цитоза составляли 33,2% (32—36, норма 70,7%), интегральный показатель стадии эндоцитоза за 30 мин

— 118,4% (при норме 225%). После комплексного лечения с включением энергокорригирующих препаратов у больных наблюдалось улучшение клинического состояния, и при повторном обследовании были зарегистрированы следующие данные: коэффициент торможения — 12,0±0,24 усл.ед. (11,0—13,0 усл.ед.), максимальные значения стадии эндоцитоза — 38,5% (34—44), интегральный показатель — 175%.

Таким образом, назначение энергокорригирую-щих препаратов этой категории больных уже через 1 мес (рекомендуемый курс лечения 2—3 мес) способствовало положительной динамике клинических проявлений заболеваний и существенной коррекции энергетических нарушений, что выражалось в снижении коэффициента торможения в 1,4 раза и повышении интегрального показателя стадии эндоцитоза в 1,5 раза.

В группе часто болеющих детей среднее значение коэффициента торможения составило 9,78±0,63 усл.ед. При оценке индивидуального разброса этого показателя выявлено, что более чем в У случаев (у 34 из 60 детей) он не превышал 10,0 усл.ед. и в среднем в данной 1-й подгруппе составил 7,33±0,46 усл.ед. У остальных пациентов (2-я подгруппа) его среднее значение равнялось 12,92±0,49 усл.ед. (р<0,001). Анализ коэффициента торможения в возрастном аспекте показал, что только у детей до 3 лет его среднее значение несущественно превышало допустимый норматив — 10,5±1,94 усл.ед.

При оценке стадийных коэффициентов торможения у часто болеющих детей обращало на себя внимание то, что при ухудшении клеточного энергообеспечения процесса активации В-лимфоцитов наблюдалась разбалансировка показателей по всем стадиям, кроме стадии «кэпа», при которой они оставались стабильными. Наибольшее замедление перераспределения рецепторов по мембране клетки наблюдалось в стадии «абсорбированный петч», которая является доминирующим механизмом работы IgR

В-клеток у здоровых детей [25]. В этой группе были выявлены и возрастные особенности клеточного энергообмена. По нашим данным, наиболее энергоуязвимыми можно считать детей ясельного возраста (до 3 лет) и младшего школьного возраста (8—12 лет).

Результаты исследования активности митохон-дриальных ферментов показали, что у часто болеющих детей наблюдается снижение показателей СДГ в 1,3 раза (15,8 усл. ед., норма 18—23 усл.ед.), ГФДГ в 2,3 раза (5,5 усл.ед., норма 11—14 усл.ед.), ГДГ в 2 раза (5,9 усл.ед., норма 10—15 усл.ед.). Активность ЛДГ колебалась в пределах возрастной нормы (12,2 усл.ед. норма 10—17 усл.ед.).

Таким образом, проведенные исследования у часто болеющих детей дошкольного и школьного возраста позволили установить наличие дисфункции процессов энергообмена. Так, для них характерно общее снижение митохондриальной активности, особенно процессов анаэробного гликолиза, что отражается на функциональном состоянии рецепторного аппарата В-лимфоцитов. При этом более выраженное снижение энергообеспечения иммуноцитов совпало с «критическими» периодами становления иммунной системы ребенка, что, на наш взгляд, указывает на транзиторный характер процесса.

У детей, непосредственно подвергшихся радиационному воздействию, а также у детей, рожденных от ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС, значения коэффициента торможения оказались повышенными и соответственно составили 11,7±0,54 (10,8—27,5) и 13,4±0,31 усл.ед. (11,5—15,3 усл.ед.), что косвенно указывает на недостаточность энергетического обмена. Максимальные изменения показателей в стадии эндоцитоза (снижение в 1,74 раза) были зарегистрированы у детей, непосредственно подвергшихся радиации. У детей, рожденных от ликвидаторов, также наблюдалось снижение данного показателя, который практически не отличался от аналогичного у детей с митохондриальной дисфункцией.

На основании полученных данных были сделаны следующие выводы:

— у детей, непосредственно подвергшихся радиационному воздействию, в ранние периоды от момента катастрофы при нормальном содержании В-лимфоцитов отмечается их функциональная недостаточность в виде снижения (почти в 2 раза) поглотительных процессов (стадия эндоцитоза). Установить взаимосвязь выявленных изменений и полученной дозы облучения не удалось;

— у детей, рожденных от родителей-ликвидаторов, при выраженных функциональных нарушениях наблюдаются и количественные изменения — снижение количества В-лимфоцитов до нижних границ нормы;

- у детей, имевших непосредственную связь с факторами радиационного воздействия, а также ро-

жденных от ликвидаторов, регистрируется замедление процессов перераспределения рецепторов по поверхности мембран клеток, что позволяет предположить единый генез и механизм развития — несостоятельность энергообеспечивающих процессов иммунокомпетентных клеток; - нарушения в В-звене иммунитета у детей, рожденных от ликвидаторов, идентичны показателям у лиц, непосредственно подвергшихся радиационному воздействию, и должны рассматриваться как факторы повышенного риска по развитию заболеваний, так или иначе связанных с радиацией. Проведенные исследования у детей с митохондри-альной дисфункцией показали, что для них характерно: 1) увеличение кэппирующих клеток, в том числе и О-образных, при отсутствии задействованности у них реакции немедленного типа; 2) наличие феномена «сброса кэпов» in vitro; 3) снижение поглотительных процессов (эндоцитоз); 4) заторможенность динамики перераспределения IgR (коэффициент торможения в целом по группе 12,9±0,49 усл.ед.); 5) степень выраженности указанных изменений зависит от нозологической формы [26]. Наиболее значимы они при туберозном склерозе.

Корреляционный и регрессионный анализы показали, что взаимоотношения между цитохимическими и иммунологическими показателями в этой группе больных были совсем иными, чем при атопии. Степень задержки большинства стадий процесса ли-гандзависимого перераспределения рецепторов (что можно считать показателем функциональной недостаточности лимфоцитов) была прямо пропорциональна активности митохондриальных ферментов. Это соотношение указывает, что у детей данной группы при значительном снижении базового уровня активности митохондриальных ферментов наблюдается нарушение динамики процесса перераспределения рецепторов в целом. Особенно обращает на себя внимание то, что параметры наиболее энергозависимого процесса — эндоцитоза коррелируют только с уровнем ГФДГ (коэффициент корреляции r = —0,74). Если учитывать связь этого фермента с гликолизом, можно предположить, что в условиях значительной неэффективности окислительного фосфорилирова-ния (что наблюдается у детей с митохондриальной недостаточностью) функции лимфоцитов в большой степени начинают зависеть от интенсивности гликолиза, т.е. оказываются тесно связанными с анаэробным синтезом АТФ.

Корреляции между цитоферментохимическими и иммунологическими параметрами были следующими:

• СДГ < > коэффициент торможения; r = 0,68;

• СДГ < > длительность интактного петча; r = 0,7;

• СДГ < > длительность кэпа; r = 0,7;

• ГФДГ < > коэффициент торможения; r = 0,7;

• ГФДГ < > длительность ринга; r = 0,65;

• ГФДГ < > длительность эндоцитоза; г = —0,74. Связи по данным регрессионного анализа:

• коэффициент торможения = 9,2+1,8 {ГФДГ} — 9,5 {ГДГ/СДГ} (коэффициент детерминации 0,7);

• длительность интактного петча = 4,8+0,4 {ГДГ}

— 7,3 {ГДГ/СДГ} (коэффициент детерминации 0,53);

• длительность кэпа = 0,5 - 0,7 {ГФДГ} - 3,3 {ГДГ/ СДГ} (коэффициент детерминации 0,58);

• длительность абсорбированного петча = -1,0

- 0,17 {СДГ} + 1,4 {ГФДГ} (коэффициент детерминации 0,71).

Из представленных уравнений видно, что в этой группе недостаточность энергетики приводит к замедлению процессов перераспределения рецепторов не только на стадии эндоцитоза и что разные стадии процесса перераспределения рецепторов связаны с изученными ключевыми ферментами метаболизма митохондрий достаточно сложными зависимостями.

В связи с тем что наибольшие изменения при исследовании процесса лигандзависимого перераспределения В-лимфоцитов были выявлены у детей с туберозным склерозом, в дальнейшем анализ данных в этой группе пациентов был расширен и углублен. У детей с туберозным склерозом среднее значение коэффициента торможения в целом по группе составило 11,1±,34 усл.ед., что превышало максимальные показатели в норме и достоверно отличалось (р<0,05) от показателей в группе часто болеющих детей. При оценке индивидуального разброса данного коэффициента выявлено, что у 43,7% больных туберозным склерозом он не превышал 10,0 усл.ед. и в среднем составил 8,48±0,23 усл.ед. У остальных 56,3% пациентов его среднее значение равнялось 13,12±0,31 усл.ед. (р <0,0001 по сравнению с группой часто болеющих детей).

Рассматривая особенности энергообеспечения процесса лигандзависимого перераспределения В-лимфоцитов по мембране клетки, следует отметить, что для туберозного склероза («вторичная» митохон-дриальная недостаточность), независимо от средних значений коэффициента торможения, в целом были характерны более высокие значения стадийных коэффициентов (сниженная энергозатрата). При этом при ухудшении состояния биоэнергетики происходило параллельное изменение (возрастание) всех стадийных параметров, что указывает на общность механизма наблюдаемого эффекта.

Следует отметить еще один феномен, характерный для данной нозологии. При туберозном склерозе на фоне общего «замедления» процесса наблюдалось выраженное «ускорение» основной стадии — «абсорбированный петч» (по сравнению с группой часто болеющих детей). Возможно, одной из причин такого феномена является несостоятельность цитоскелета клеток, наблюдаемая при туберозном склерозе [27]

(повреждение актиновых филаментов, ассоциированных с мембраной), и, как следствие, неполноценность деятельности их рецепторного аппарата. Требуется дальнейшее изучение и подтверждение наших предположений. При анализе полученных данных в этой группе не было отмечено различий в зависимости от возраста пациентов, что указывает на общность наблюдаемых нарушений в системе энергообеспечения в патогенезе туберозного склероза и говорит в пользу вторичной митохондриальной недостаточности.

На наш взгляд, наибольшего внимания заслуживает подгруппа детей с туберозным склерозом, у которых использованным методом не было зарегистрировано снижение клеточной энергетики. Однако при детальном анализе стадийных коэффициентов у них были выявлены характерные изменения в динамике процесса перераспределения IgR В-клеток, отличные от наблюдаемых в норме, что указывает на скрытый энергодефицит у этой категории больных.

Так как одним из характерных клинических признаков туберозного склероза являются опухолевидные образования различных органов (мозг, почки, кишечник и др.) и их способность разрастаться по типу доброкачественных опухолей [19, 28, 29], вполне уместно предположить, что нарушение функционирования (снижение биоэнергетики) клеточного звена иммунитета, в частности В-лимфоцитов, может играть определенную роль в патогенезе данного заболевания.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Клиническое значение полученных и ожидаемых

результатов, по нашему мнению, достаточно велико.

Обобщая вышеизложенное можно заключить:

1) биоэнергетическая недостаточность организма выявляется при различных состояниях, может носить транзиторный характер, явиться следствием врожденных мутаций, а также развиться в результате воздействия внешних факторов. Степень ее выраженности и качественные различия зависят от многих причин, в частности, от патогенеза заболевания, возраста пациента и т.д.;

2) угнетение клеточного энергообмена отражается на функциональной активности В-лимфоцитов. У больных с разными формами митохондриальной патологии важно учитывать вероятность функциональной недостаточности иммунокомпетентных клеток и диагностировать такую недостаточность;

3) комплексный иммунологический и цитохимический анализ клеток крови может служить полезным тестом при исследовании широкого круга заболеваний;

4) цитологическое доказательство нарушений мито-хондриальных функций и/или энергозависимых иммунных процессов при различных аллергических и воспалительных заболеваниях может служить достаточным основанием для коррекции терапевтического воздействия с использованием комплекса энерготропных препаратов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Нарушение клеточного энергообмена у детей. Под ред. В.С. Сухорукова и Е.А. Николаевой. М: Ates 2004; 79.

2. Клинические и патогенетические проблемы нарушений клеточной энергетики (митохондриальная патология). Всероссийская конференция, 1-я: Материалы. М 1999; 63.

3. Сухорукое В.С. Энергодефицитный диатез у детей. М: Медпрактика-М 2009; 28.

4. Вельтищев Ю.Е. Становление и развитие иммунной системы у детей. Иммунная недостаточность. Иммунодиа-тезы. Лекция для врачей. М 1998; 79.

5. Сухорукое В.С., Пампура А.Н., Виноградова Т.В. и др. Роль митохондриальной цитопатии в нарушении функций иммунокомпетентных клеток при хронических заболеваниях у детей. Пособие для врачей. М 2004; 22.

6. Часто болеющие дети: тактика врача (сокращенная стенограмма). Открытая дискуссия по актуальным проблемам педиатрии. Рос вестн перинатол и педиат 2009; 3: 84—89.

7. Коррекция метаболических нарушений при различных патологических состояниях у детей (опыт использования препарата Элькар). Под ред. А.Д. Царегородцева, Е.А. Николаевой, В.С. Сухорукова. М: Медпрактика-М 2006; 87.

8. Накостенко Т.Н., Ключников С.О., Сухорукое В.С. Коррекция нарушений вегетативного гомеостаза и внутриклеточного энергообмена у часто болеющих детей. Вестн педиат фармакол и нутрициол 2007; 1: 25—29.

9. Семенов А.В., Шабельникова Е.И., Зиборова Н.В. и др. Изучение фагоцитоза и активности ферментов энергообмена у часто болеющих детей с ЛОР-патологией. Конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», 1-й: Материалы. М 2002: 474—475.

10. Sukhorukov V, Shabelnikova E., Kleimenova N. et al. Electron microscopic demonstration of mitochondrial disturbances in TS children. TSC International Research Conference. Cambridge, UK 2004; 18.

11. Sukhorukov V, Dorofeeva M., Pivovarova A. Mitochondrial pathology in children with tuberous sclerosis. Mitochondrion 2002; 1: 6: 528.

12. Тозлиян Е.В., Сухорукое В.С., Новиков П.В. Цитохимические доказательства нарушения митохондриальных функций при туберозном склерозе у детей. VIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». М 2001; 494—495.

13. Sukhorukov V.S., Pea M., Klembovski A.I. et al. Ultrastructural changes of mitochondria in TS patients. X-th Internat Symposium on Tuberous Sclerosis. Goteborg (Sweden) 1998; 184.

14. Astrinidis A., Senapedis W., Henske E.P. Hamartin, the tuberous sclerosis complex 1 gene product, interacts with polo-like kinase 1 in a phosphorylation-dependent manner. Hum Mol Genet 2006; 15: 2: 287—297.

15. Chong-Kopera H, Inoki K., Li Y. et al. TSC1 Stabilizes TSC2 by Inhibiting the Interaction between TSC2 and the HERC1 Ubiquitin Ligase. J Biol Chem 2006; 281: 13: 8313—8316.

16. Hengstschlager M., Rosner M, Fountoulakis M. et al. The cellular response to ectopic overexpression of the tuberous sclerosis genes, TSC1 and TSC2: a proteomic approach. Int J Oncol 2005; 27: 3: 831—838.

17. Jozwiak J., Wlodarski P. Hamartin and tuberin modulate gene transcription via beta-catenin. J Neurooncol 2006; 18: 2: 24—29.

18. Jozwiak J. Hamartin and tuberin: working together for tumour suppression. Int J Cancer 2006; 118: 1: 1—5.

19. Piedimonte L.R., Wailes I.K., Weiner H.L. Tuberous sclerosis complex: molecular pathogenesis and animal models. Neuro-surg Focus 2006; 20: 1: E 4.

20. Виноградова Т.В., Стефани Д.В. Исследование процесса мембранной сборки иммуноглобулиновых рецепторов В-лимфоцитов. Роспатент 2029952 1995; 13.

21. Виноградова Т.В, Стефани Д.В., Смолкин Ю.С. Диагностика заболеваний атопического генеза. Роспатент 2029937 1995; 15.

22. Hollenberg H.D. Mechanism of receptor-mediated transmembrane signaling. Expirementa 1986; 42: 7: 718—727.

23. Иммунология. Под ред. У. Пола. М: Мир 1987; 1: 476.

24. Ключников С.О. Р-Каротин при метаболической коррекции у часто болеющих детей. Рус мед журн 2006; 1: 62—63.

25. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. М: Мир 1986; Т.2; 313.

26. Виноградова Т.В, Дорофеева М.Ю., Сухоруков В.С. Особенности процесса лигандзависимого перераспределения иммуноглобулиновых рецепторов В-лимфоцитов у детей с вторичной митохондриальной недостаточностью. Клинико-лабораторный консилиум 2009; 1: 30—34.

27. Passarella S., Atlante A., Valenti D. et al. The role of mitochondrial transport in energy metabolism. Mitochondrion 2003; 2: 5: 319—343.

28. McCall T., Chin S.S., Salzman K.L. et al. Tuberous sclerosis: a syndrome of incomplete tumor suppression. Neurosurg Focus 2006; 20: 1: E 3.

29. Tuberous Sclerosis complex: from Basic Science to Clinical Phenotypes. Ed. P. Curatolo. London, England: Mac Keith Press, 2003; 314.

Поступила 27.06.12