ОДНОДОМЕННОЕ МИНИ-АНТИТЕЛО aHER2/aSKBR3-1, СПЕЦИФИЧЕСКИ СВЯЗЫВАЮЩЕЕ РЕЦЕПТОР ЭПИДЕРМАЛЬНОГО ФАКТОРА РОСТА HER2/ERBB2/neu И СПОСОБНОЕ ЧЕРЕЗ ЭТО ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПРОНИКАТЬ ВНУТРЬ КЛЕТКИ-МИШЕНИ (ИНТЕРНАЛИЗОВАТЬСЯ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДАННОГО АНТИТЕЛА И СПОСОБ ДЕТЕКЦИИ БЕЛКА HER2/ERBB2/neu) И КЛЕТОК, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ЭТОТ БЕЛОК В ПОВЫШЕННОМ КОЛИЧЕСТВЕ, С ПОМОЩЬЮ МИНИ-АНТИТЕЛА aHER2/aSKBR3-1

1. Однодоменное мини-антитело aHER2/aSKBR3-1 (SEQ1, 2), специфически связывающее рецептор эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu, как экспонированный в повышенном количестве на поверхности определенных типов опухолевых клеток, так и очищенный белок, и способное через это взаимодействие, проникать внутрь клетки-мишени, на поверхности которой экспонирован HER2/ERBB2/neu.
2. Способ получения однодоменного мини-антитела aHER2/aSKBR3-1 к белку-рецептору эпидермального фактора роста HER2/ERBB2/neu, включает следующие стадии:
- иммунизацию двугорбого верблюда (Camelus bactrianus) препаратом опухолевых клеток, таких как SKBR3, содержащих на поверхности сильно повышенное (по сравнению с нормальными клетками) количество белка HER2/ERBB2/neu;
- получение библиотеки последовательностей, кодирующих однодоменные мини-антитела;
- процедуру селекции мини-антител, основанную на методе фагового дисплея и включающую стадию инкубации фаговых частиц с экспонированными на их поверхности мини-антителами с живыми растущими клетками (подобными SKBR3), экспрессирующими на своей поверхности в сильно повышенном количестве (по сравнению с нормальными клетками) белок HER2/ERBB2/neu, и последующий отбор именно тех вариантов рекомбинантных частиц, которые смогли проникнуть внутрь клетки-мишени и таким образом стали защищены от протеазной (трипсином) обработки клеток; на заключительном этапе селекции отбирают лишь те варианты клонов мини-антител, которые кодируют мини-антитела, способные специфически связываться также и с изолированным или рекомбинантным белком HER2/ERBB2/neu;
- процедуру форматирования отобранных мини-антител, включающую присоединение к С-концу первичного мини-антитела дополнительных аминокислотных последовательностей с целью более эффективной наработки мини-антитела в бактериальной системе экспрессии, последующей очистки и детекции мини-антитела;
- продукцию наноантител в прокариотической системе экспрессии и очистку.
3. Способ детекции белка HER2/ERBB2/neu) и клеток, экспрессирующих этот белок в повышенном количестве, с помощью мини-антитела aHER2/aSKBR3-1
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что детекцию белка HER2(ERBB2/neu) с помощью мини-антитела aHER2/aSKBR3-1 осуществляют как в свободном виде в биологических жидкостях, так и на поверхности клеток, например, опухолевых, где этот белок оверэксперессирован.