СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕРОЯТНОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ОТВЕТА НА ПРОТИВОРАКОВУЮ ХИМИОТЕРАПИЮ СЕРДЕЧНЫМ ГЛИКОЗИДОМ

1. In vitro прогностический анализ, который может быть использован для предсказания in vivo терапевтического ответа на заболевание или расстройство, имеющее этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, в целях проведения лечения сердечным гликозидом или композицией, содержащей сердечный гликозид, где указанный анализ включает:
определение отношения α3-изоформы к α1-изоформе α-субъединиц Na, K-АТФазы в образце, выделенном непосредственно или опосредованно из пораженной клеточной ткани in vivo у индивидуума с заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, где указанный образец содержит одну или несколько изоформ α-субъединицы Na, K-ATФазы; и
определение вероятности терапевтического ответа у индивидуума, подвергнутого лечению терапевтически релевантной дозой сердечного гликозида.
2. Анализ по п.1, который дополнительно включает предсказание терапевтического ответа клеточной ткани на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение превышает или равно по меньшей мере 1, или предсказание по меньшей мере частичного терапевтического ответа клеточной ткани на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет в пределах 0,5-1,0, или предсказание, по существу, отсутствия терапевтического ответа клеточной ткани на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет менее 0,3, или предсказание продуцирования в пораженных тканях, имеющих отношение изоформ α-субъединиц 1:100, более высокого терапевтического ответа, чем в тканях, имеющих отношение изоформ α-субъединиц менее чем 1, или предсказание того что ткани, в которых детектируется лишь изоформа α3, но не изоформа α1, являются наиболее терапевтически восприимчивыми к сердечным гликозидам.
3. Анализ по п.1, который дополнительно включает предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет ≥2, или предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет ≥10, или предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если указанное отношение составляет ≥25, или предсказание продуцирования в клеточных тканях по меньшей мере частичного терапевтического ответа на лечение сердечным гликозидом, если отношение составляет ≥75.
4. Анализ по п.1, где указанная вероятность по меньшей мере частичного терапевтического ответа выражается как отношение α3-изоформы к α1-изоформе Na, K-АТФазы, представленное в нижеследующей таблице:
Отношение
Вероятность терапевтического ответа у индивидуума
0,3-0,45±0,05
от 20 до <30%
0,5-0,95±0,05
от 30 до 50%
≥1±0,05
>50%
>10
>75%
5. Анализ по п.1, где указанная стадия определения отношения включает количественную оценку уровня экспрессии каждой изоформы α3 субъединицы Na, K-AТФазы и изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце in vitro или в биоптате, и вычисление их отношения, или стадия определения отношения включает определение количества каждой изоформы α3 субъединицы Na, K-АТФазы по отношению к количеству изоформы α1 субъединицы Na, K-АТФазы в образце in vitro и вычисление их отношения.
6. Анализ по любому из пп.1-5, где указанным образцом является клеточная ткань, клеточная масса, клеточный лизат, мембранные препараты, приготовленные из этих компонентов, или их гистопатологические срезы, фиксированные на предметных стеклах.
7. Анализ по любому из пп.1-5, где указанный образец содержит по меньшей мере две изоформы α-субъединицы Na, K-ATФазы, или указанный образец содержит по меньшей мере α1- и α3-изоформы α-субъединицы Na, K-AТФазы.
8. Анализ по п.1, который дополнительно включает лизис или разрушение клеток или тканей или взятие биоптатов или фиксацию срезов ткани для гистопатологической оценки пораженной клеточной ткани in vivo с последующим получением образца, или проведение вестерн-блот-анализа или анализа методом иммуногистохимического окрашивания образца для определения количества и относительного уровня экспрессии изоформы α3 субъединицы Na, K-AТФазы по отношению к изоформе α3 субъединицы Na, K-ATФазы в данном образце и вычисление их отношения.
9. Анализ по п.1 или 8, включающий проведение радиометрического или денситометрического анализа геля для определения содержания изоформы α3 субъединицы Na, K-ATФазы по отношению к содержанию изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце, или проведение радиометрического или денситометрического анализа геля для детектирования присутствия и для количественной оценки содержания изоформы α3 субъединицы Na, K-ATФазы и изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце.
10. Анализ по п.1 или 8, дополнительно включающий проведение сравнения уровня содержания изоформы α3 субъединицы Na, K-ATФазы и изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце с уровнем содержания изоформы α3 субъединицы Na, K-AТФазы и/или изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце, используемом в качестве позитивного контроля и/или в образце, используемом в качестве негативного контроля, или проведение сравнения уровня содержания изоформы α3 субъединицы Na, K-ATФазы и изоформы α1 субъединицы Na, K-ATФазы в образце ткани, где, как известно, в качестве контроля используется экспрессия только одной из изоформ α3- и α1 субъединиц.
11. Анализ по п.1, где указанным заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, является раковое или опухолевое заболевание, или другие пролиферативные заболевания, оказывающие негативное влияние на качество жизни человека или животного, или где указанные заболевания или расстройства, имеющие этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, выбраны из группы, состоящей из: 1) аутоиммунных заболеваний, таких как индуцированный антигеном артрит и аллергический энцефаломиелит; 2) хронических воспалительных пролиферативных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, системный хронический ювенильный артрит, остеопороз и псориаз; 3) пролиферативных заболеваний молочной железы, включая фиброкистозное заболевание; 4) пролиферативных заболеваний предстательной железы, включая доброкачественную гиперплазию предстательной железы (BPH); 5) пролиферативных заболеваний глаз, включая пролиферативную диабетическую ретинопатию; и 6) сосудистых пролиферативных заболеваний, включая атеросклероз и стеноз коронарной артерии.
12. Анализ по п.1 или 11, который дополнительно включает: идентификацию индивидуума, страдающего заболеванием или расстройством, имеющим этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, и взятие образца пораженных клеток у индивидуума.
13. Анализ по п.1 или 11, который дополнительно включает получение точной информации о проведении анализов на присутствие α3- и α1-изоформ α-субъединицы Na, K-ATФазы, и/или дополнительно включает получение подробной информации по поводу интерпретации прогностических данных.
14. Анализ по п.1, где указанный сердечный гликозид выбран из группы, состоящей из олеандрина, убаина, буфалина, дигитоксина, дигоксина, цинобуфаталина, цинобуфагина и резибуфогенина.
15. Анализ по п.1, включающий альтернативные средства оценки относительного состава изоформ α-субъединицы Na, K-ATФазы и их отношений, где указанные альтернативные методы включают: использование антител в ELISA (твердофазном иммуноферментном анализе) или массивов белок-содержащих тканей или клеточных лизатов; осуществление Нозерн-блот-анализов и аналогичных методов (например, rtPCR) для определения мРНК, кодирующей различные изоформы α-субъединицы Na, K-ATФазы, или применение анализа на иммуногистохимическое окрашивание.
16. Набор, подходящий для его применения в проведении прогностического анализа, где указанный набор содержит:
a) первое «первичное» антитело, обладающее аффинностью связывания с изоформой α3 субъединицы Na, K-АТФазы; и
b) второе «первичное» антитело, обладающее аффинностью связывания с изоформой α1 субъединицы Na, K-ATФазы.
с) инструкции по применению набора и осуществлению прогностического анализа в целях предсказания in vivo терапевтического ответа на заболевание или расстройство, имеющее этиологию, связанную с избыточной пролиферацией клеток, для проведения лечения с использованием сердечного гликозида или композиции, содержащей сердечный гликозид; и
d) подробную информацию по поводу интерпретации данных, полученных в указанном прогностическом анализе.
17. Набор по п.16, где указанный набор дополнительно включает: a) композицию для лизиса; b) образец, используемый в качестве позитивного контроля и содержащий изоформу α3 субъединицы Na, K-ATФазы; c) образец, используемый в качестве позитивного контроля и содержащий изоформу α3 субъединицы Na, K-ATФазы и изоформу α1 субъединицы Na, K-ATФазы; d) образец, используемый в качестве негативного контроля и содержащий изоформу α3 субъединицы Na, K-ATФазы и изоформу α1 субъединицы Na, K-ATФазы; e) «второе» антитело, то есть, ПХ-конъюгированное козье антитело против мышиных IgG (которое может быть использовано, например, для визуализации представляющих интерес белков); f) гель-образующий материал, подходящий для проведения анализа методом гель-электрофореза; g) радиоактивно меченные или окрашивающие маркеры молекулярной массы (хромогенные маркеры, способные продуцировать визуально или инструментально детектируемый сигнал); h) инструкции по применению набора и осуществлению прогностического анализа; i) денситометр или радиометр; j) водную жидкую среду; k) набор для приготовления геля/мембраны; 1) блокирующий раствор; m) промывочный буфер; n) материалы, содержащиеся в наборе для вестерн-блот-анализа или o) их комбинации.
18. Набор по п.16 или 17, где «вторым» антителом является конъюгированное с пероксидазой хрена козье антитело против α-цепи мышиного IgG, либо другие, но не мышиные «вторые» антитела против мышиного IgG, связанные с соответствующим маркером, таким как пероксидаза хрена.
19. Набор по п.17, где образец позитивного контроля выбран из группы, состоящей из ткани, клеточной массы, клеточного лизата и приготовленных из них мембранных препаратов, которые могут быть получены посредством биопсии или другими хирургическими способами.
20. Набор по п.17, где образец негативного контроля выбран из группы, состоящей из ткани, клеточной массы, клеточного лизата и приготовленных из них мембранных препаратов, которые не содержат α3-изоформы α-субъединицы Na, K-ATФазы.
21. Набор по п.16, включающий альтернативные средства оценки относительного состава изоформ α-субъединицы Na, K-ATФазы и их отношений, где указанные альтернативные методы включают: использование антител в ELISA (твердофазном иммуноферментном анализе) или массивов белок-содержащих тканей или клеточных лизатов; осуществление Нозерн-блот-анализов и аналогичных методов (например, rtPCR) для определения мРНК, кодирующей различные изоформы α-субъединицы Na, K-ATФазы, или применение анализа на иммуногистохимическое окрашивание.