МОДИФИЦИРОВАННЫЙ БИОТИН-СВЯЗЫВАЮЩИЙ БЕЛОК, СЛИТЫЕ БЕЛКИ НА ЕГО ОСНОВЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

1. Растворимый биотин-связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 и любые его функциональные производные.
2. Биотин-связывающий белок по п. 1, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок получают в растворимой форме на уровне, по меньшей мере, 10 мг/л культуральной среды в Е. coli.
3. Биотин-связывающий белок по п. 1, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок представляет собой димер.
4. Биотин-связывающий белок по п. 1, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок включает бактериальную сигнальную последовательность на N-конце.
5. Биотин-связывающий белок по п. 4, отличающийся тем, что бактериальная сигнальная последовательность представляет собой SEQ ID No: 2.
6. Биотин-связывающий белок по п. 4, отличающийся тем, что сигнальная последовательность связана с биотин-связывающим белком пептидным линкером.
7. Биотин-связывающий белок по п. 6, отличающийся тем, что пептидный линкер включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или VSDP (SEQ ID NO: 9).
8. Биотин-связывающий белок по п. 1, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок включает метку очистки на С-конце.
9. Биотин-связывающий белок по п. 8, отличающийся тем, что метка очистки выбрана из группы, состоящей из гистидиновой метки, с-mу метки, Halo метки, Flag метки и любой их комбинации.
10. Биотин-связывающий белок по п. 9, отличающийся тем, что гистидиновая метка включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
11. Биотин-связывающий белок по п. 9, отличающийся тем, что метка очистки связана с биотин-связывающим белком через пептидный линкер.
12. Биотин-связывающий белок по п. 11, отличающийся тем, что пептидный линкер включает аминокислотную последовательность VDKLAAALE (SEQ ID NO: 11) или GGGGSSSVDKLAAALE (SEQ ID NO: 12).
13. Биотин-связывающий белок по п. 1, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.
14. Композиция, включающая биотин-связывающий белок по любому из п.п. 1-13.
15. Слитый белок, включающий биотин-связывающий белок и белок или пептид.
16. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что белок или пептид слит с биотин-связывающим белком пептидным линкером.
17. Слитый белок по п. 16, отличающийся тем, что пептидный линкер включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
18. Слитый белок по п. 17, отличающийся тем, что белок или пептид представляет собой антиген, выбранный из группы, состоящей из: пневмококковых антигенов, туберкулезных антигенов, антигенов сибирской язвы, антигенов ВИЧ, антигенов сезонного или эпидемического гриппа, антигенов инфлюэнцы, антигенов коклюша, антигенов Staphylococcus aureus, менингококковых антигенов, Haemophilus антигенов, антигенов папилломавируса человека или их комбинаций.
19. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что антиген представляет собой негемолитический вариант альфа-гемолизина S. aureus.
20. Слитый белок по п. 19, отличающийся тем, что негемолитический вариант альфа-гемолизина S. aureus содержит мутацию в аминокислотном остатке 205, 213 или 209-211 альфа-гемолизина S. aureus дикого типа.
21. Слитый белок по п. 19, отличающийся тем, что негемолитический вариант альфа-гемолизина 51. aureus содержит одну из следующих мутаций в альфа-гемолизине S. aureus дикого типа: (i) остаток 205 W на A; (ii) остаток 213 W на А; или (iii) остатки 209-211 DRD нa AAA.
22. Слитый белок по п. 19, отличающийся тем, что негемолитический вариант альфа-гемолизина S. aureus включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, и его функциональных вариантов, частей и производных.
23. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что слитый белок включает бактериальную сигнальную последовательность на N-конце.
24. Слитый белок по п. 23, отличающийся тем, что бактериальная сигнальная последовательность представляет собой SEQ ID No: 2.
25. Слитый белок по п. 23, отличающийся тем, что сигнальная последовательность связана с биотин-связывающим белком пептидным линкером.
26. Слитый белок по п. 25, отличающийся тем, что пептидный линкер включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 9.
27. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что слитый белок включает метку очистки на С-конце.
28. Слитый белок по п. 27, отличающийся тем, что метка очистки выбрана из группы, состоящей из гистидиновой метки, с-mу метки, Halo метки, Flag метки и любой их комбинации.
29. Слитый белок по п. 28, отличающийся тем, что гистидиновая метка включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
30. Слитый белок по п. 27, отличающийся тем, что метка очистки связана с биотин-связывающим белком через пептидный линкер.
31. Слитый белок по п. 30, отличающийся тем, что пептидный линкер включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11.
32. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что биотин-связывающий белок представляет собой биотин-связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 15 или ее функциональное производное, или биотин-связывающий белок по любому из пп. 1-13.
33. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что слитый белок включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 и SEQ ID NO: 28.
34. Мутантный альфа-гемолизин (mHla), включающий мутацию в аминокислотном остатке 205, 213 или 209-211 альфа-гемолизина S. aureus дикого типа, при этом мутантный альфа-гемолизин обладает сниженной гемолитической активностью по сравнению с эквивалентным титром альфа-гемолизина (Н1а) дикого типа.
35. Мутантный альфа-гемолизин по п. 34, отличающийся тем, что гемолитическая активность мутантного альфа-гемолизина, по меньшей мере, на 25% ниже, чем эквивалентный титр Н1а дикого типа.
36. Мутантный альфа-гемолизин по п. 34, отличающийся тем, что мутантный альфа-гемолизин включает одну из следующих мутаций в альфа-гемолизине S. aureus дикого типа: (i) остаток 205 W на A; (ii) остаток 213 W на A; или (iii) остатки 209-211 DRD на ААА.
37. Мутантный альфа-гемолизин по п. 34, отличающийся тем, что мутантный альфа-гемолизин включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, и его функциональных вариантов, частей и производных.
38. Композиция, включающая мутантный альфа-гемолизин по любому из пп. 34-37.
39. Слитый белок по п. 15, отличающийся тем, что слитый белок обладает сниженной гемолитической активностью по сравнению с эквивалентным титром альфа-гемолизина (Н1а) дикого типа.
40. Слитый белок по п. 19, отличающийся тем, что альфа-гемолизин состоит из аминокислотной последовательности аминокислот 27-319 альфа-гемолизина S. aureus дикого типа.
41. Слитый белок по п. 40, отличающийся тем, что гемолитическая активность слитого белка, по меньшей мере, на 25% ниже эквивалентного титра Н1а дикого типа.
42. Композиция, включающая слитый белок по любому из пп. 15-33 и 39-41.
43. Способ индуцирования иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту биотин-связывающего белка по любому из пп. 1-13, или слитого белка по любому из пп. 15-33 и 39-41 или мутантного альфа-гемолизина по любому из пп. 34-38.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что иммунный ответ представляет собой антитело или В-клеточный ответ.
45. Способ по п. 43, отличающийся тем, что иммунный ответ представляет собой CD4+ Т-клеточный ответ, включая Th1, Th2 или Th17 ответ, или CD8+ Т-клеточный ответ или CD4+/CD8+ Т-клеточный ответ.