СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОВОЙ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕЙ ДОБАВКИ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
METHOD FOR PRODUCTION OF FODDER ADDITIVE FOR PREVENTION AND THERAPY OF ANIMALS AND BIRDS DISEASES

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной медицины, а именно к способам получения иммуностимулирующих кормовых добавок для профилактики и терапии заболеваний сельскохозяйственных животных.
Известна минеральная добавка, содержащая пермаит - цеолитсодержащий туф Первомайского месторождения Чувашской Республики, которая используется в животноводстве для откорма молодняка свиней (RU 2104655 C1, A23K 1/175, 20.02.98). Пермаит содержит большой набор макро- и микроэлементов, необходимых для свиней, вместе с тем токсические элементы находятся в пределах уровня, допустимого для продуктов питания.
Недостатком кормовой добавки является узкий спектр действия и отсутствие в составе добавки необходимых эссенциальных микроэлементов.
Известен способ получения биологически активного препарата из дрожжей (SU 1808331 A1, A61K 35/72, 15.04.93) в виде очищенного полисахаридного комплекса, обладающий иммуностимулирующей активностью. Иммобилизация полисахаридов дрожжевых клеток в агаровом геле (ТУ 10.07.236-91 на производство препарата «Достим») или в 10-14% водно-солевом растворе поливинилпирролидона (RU 2137480 C1, A61K 31/79, 35/72, 20.09.99) повышает иммуностимулирующую активность препаратов.
К недостаткам можно отнести отсутствие комплексной стимулирующей активности в отношении звеньев иммунной системы.
Наиболее близким аналогом (прототипом) по решаемой задаче является иммуномодулирующая кормовая добавка, в состав которой входит биомасса частично гидролизованных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и природный минеральный наполнитель цеолит (RU 2189762 C2, A23K 1/16, A23J 3/20, 27.09.2002). Биомасса дрожжей представляет собой пасту с максимально извлеченными из нее нуклеиновыми кислотами и является отходом производства лекарственных препаратов на основе нуклеиновых кислот. Полученная биостимулирующая кормовая добавка позволяет избежать последствий, связанных с нарушением нуклеинового обмена у животных, удобна для применения в птицеводстве, благотворно влияет на продуктивность и резистентность птицы.
К недостаткам данной кормовой добавки можно отнести трудности связанные с дозированием и отсутствие комплексной стимулирующей активности иммунной системы.
Изобретение направленно на получение кормовой иммуностимулирующей добавки, расширяющей ассортимент средств как для повышения активности клеточных и гуморальных звеньев неспецифической резистентности и специфического иммуногенеза организма, так и для профилактики и терапии заболеваний сельскохозяйственных животных.
Технический результат основан на более длительном и равномерном воздействии данной кормовой добавки на лимфоидные ткани кишечника на всем его протяжении и достигается тем, что полученную взвесь, состоящую на 7-8% из артефактов очищенного полисахаридного комплекса дрожжевых клеток, адсорбируют на поверхности кристаллов цеолитов. После адсорбции полученную массу высушивают и используют в качестве биологически активной кормовой добавки, обладающей иммуностимулирующей активностью.
Отличие заявляемого решения от известного аналога заключается в том, что при адсорбции артефактов полисахаридного комплекса дрожжевых клеток на поверхности кристаллов цеолитов происходит пролонгация действия активного начала, то есть артефакты дрожжевых клеток более равномерно воздействуют на всем протяжении кишечника, постепенно реадсорбируясь с поверхности кристаллов цеолитов.
Для осуществления способа использовали следующие вещества:
1) концентрат очищенного полисахаридного комплекса дрожжей SU 1808331;
3) цеолитсодержащий туф Первомайского месторождения Чувашской Республики ТУ 10.07.16-00670433-97;
3) вода дистиллированная ГОСТ 6709.
Способ осуществляется следующим образом:
Пример 1. 100 мл взвеси состоящей на 7-8% из артефактов полисахаридного комплекса дрожжевых клеток адсорбируют в 100 г цеолитсодержащего туфа Первомайского месторождения Чувашской Республики, предварительно очищенного и высушенного при температуре 250°C в течение 100 минут. После адсорбции полученную массу лиофильно высушивают при давлении 50-55 мм рт.ст. и температуре 100-110°C в течение 2 часов. Полученный продукт тщательно измельчают и вводят в рацион животным в дозе 300 г на 1 тонну концентрированных кормов.
Пример 2. 100 мл взвеси состоящей на 7-8% из артефактов полисахаридного комплекса дрожжевых клеток адсорбируют в 100 г цеолитсодержащего туфа Первомайского месторождения Чувашской Республики, предварительно очищенного и высушенного при температуре 250°C в течение 100 минут. После адсорбции полученную массу высушивают в сушильном шкафу при температуре 180°C в течение 3 часов. Полученный продукт тщательно измельчают и вводят в рацион животным в дозе 300 г на 1 тонну концентрированных кормов.
Пример 3. Биологическую активность кормовой иммуностимулирующей добавки испытывали in vivo и in vitro. Было сформировано 4 группы белых крыс по 50 животных в каждой. В рацион животных первой и второй групп ежедневно в течение 14 суток вводили кормовую иммуностимулирующую добавку, полученную по примеру 1 и 2 в дозе 0,3 г на один кг кормовой смеси. Животным третьей группы применяли иммуномодулирующую кормовую добавку, в состав которой входит биомасса частично гидролизованных дрожжей Saccharomyces cerevisiae и природный минеральный наполнитель цеолит, являющуюся прототипом, в течение четырнадцати суток в дозе 0,3 г на один кг кормовой смеси. Животные четвертой группы служили контролем. На двадцать восьмые сутки опыта общепринятыми методиками определяли морфологический состав крови и проводили определение некоторых показателей неспецифической резистентности организма животных. Результаты исследований приведены в табл.1.
Таблица 1
Гематологические показатели крыс
Показатели
Опытная группа
Прототип
Контрольная группа
добавка по примеру 1
добавка по примеру 2
Эритроциты, RBC, ×10<sup>12</sup>/L
7,3±0,21
7,1±0,23
6,8±0,17
6,4±0,24
Средний объем эритроцитов, MCV, fL
62±1,27
62±1,34
63±1,23
62±0,98
Гемоглобин, HGB, g/L
126±3,17
129±2,27
123±2,79
116±3,19
Среднее содержание гемоглобина, МСН, pg
17±0,63
18±0,42
17±0,55
18±0,34
Средняя концентрация гемоглобина, МСНС, g/L
28±0,41
29±0,34
28±0,59
29±0,82
Гематокрит, НСТ, %
45±0,92
44±0,73
42±0,68
40±0,56
Лейкоциты, WBC, ×10<sup>9</sup>/L
17,23±0,32
14,37±0,31
12,3±0,32
9,72±0,34
Лимфоциты, Lymph, %
74,1±0,61
73,9±0,64
73,3±1,13
66,7±0,81
Базофилы, Bas, %
10,3±0,32
9,6±0,27
9,8±0,23
7,2±0,61
Эозинофилы, Eos, %
2,5±0,25
2,4±0,19
2,4±0,21
2,3±0,24
Нейтрофилы, Neutr, %
11,2±0,41
13,1±0,24
12,5±0,26
22,6±0,62
Моноциты, Mon, %
1,9±0,11
1,0±0,13
2,0±0,12
1,2±0,14
Тромбоциты, PLT, ×10<sup>9</sup>/L
198±5,30
191±5,21
207±6,7
219±2,94
Установлено, что на фоне применения кормовой иммуностимулирующей добавки по примеру 1 и 2 у белых беспородных крыс происходит достоверное увеличение концентрации гемоглобина и числа эритроцитов. Изменения в качественном и количественном составе белых кровяных клеток можно охарактеризовать как лейкоцитоз, не превышающий физиологические нормы, с ярко выраженным лимфоцитозом, на фоне значительного повышения количества базофилов и незначительной нейтропении. В результате происходит увеличение соотношения лимфоцитов к нейтрофилам, одного из показателей иммунологической реактивности организма животных, повышения его защитных свойств. Умеренная нейтропения с ядерным сдвигом вправо и лимфоцитоз характеризуют повышение активности клеточных факторов резистентности и адаптационных способностей организма.
Пример 4. Испытание препарата, полученного заявленным способом, для изучения влияния на показатели неспецифической резистентности и иммуногенез проводили на поросятах, подобранных по принципу пар-аналогов. Были созданы четыре группы животных по 10 голов в каждой. Поросята первой группы дополнительно к основному рациону с 7-суточного возраста до момента их отъема (60-суточного возраста) получали иммуномодулирующую кормовую добавку (прототип) из расчета 0,3 г на 1 кг живой массы в сутки. Поросята второй и третьей групп дополнительно к основному рациону получали кормовую иммуностимулирующую добавку соответственно по примеру 1 и 2 в указанные сроки и дозе. Перед скармливанием кормовые добавки перемешивались с основным кормом. Четвертая группа была контрольной. Определение показателей неспецифической резистентности и иммуногенеза организма проводили на поросятах-отъемышах в возрасте 60-65 суток. Результаты эксперимента приведены в табл.2.
Таблица 2
Показатели неспецифической резистентности поросят
Показатели
1 группа (прототип)
Опытная группа
Контрольная группа
добавка по примеру 1
добавка по примеру 2
Эритроциты, ×10<sup>12</sup>/л
5,95±0,08
6,21±0,10
6,28±0,06
5,62±0,19
Гемоглобин, г/л
106±1,85
106±1,47
109±2,10
99±1,98
Лейкоциты, ×10<sup>9</sup>/л
13,10±0,18
13,30±0,22
13,18±0,14
12,04±0,22
Общий белок, г/л
59,6±1,05
60,4±1,13
60,3±1,04
57,1±1,00
Альбумины, г/л
21,3±0,66
22,2±0,64
22,3±0,69
20,1±0,50
α-глобулины, г/л
11,1±0,53
10,8±0,42
10,2±0,68
11,0±0,42
β-глобулины, г/л
10,8±0,54
10,7±0,39
10,3±0,46
11,1±0,63
γ-глобулины, г/л
16,4±0,39
16,8±0,29
18,1±0,37
15,3±0,46
Щелочной резерв, об % CO<sub>2</sub>
48,9±0,58
49,2±0,61
49,8±0,65
47,1±0,49
Глюкоза, ммоль/л
2,97±0,21
3,32±0,18
3,42±0,24
2,62±0,14
Общий кальций, ммоль/л
2,78±0,14
2,93±0,15
2,96±0,11
2,46±0,15
Неорганический фосфор, ммоль/л
1,42±0,12
1,50±0,10
1,55±0,08
1,28±0,08
T-лимфоциты, %
62,7±0,624
64,1±0,58
66,2±0,63
57,3±0,61
B-лимфоциты, %
19,1±0,18
17,9±0,20
18,3±0,21
19,3±0,19
Фагоцитарная активность, %
44,3±1,53
45,0±1,30
47,2±1,66
40,2±1,36
Фгоцитарный индекс
2,6±0,25
2,9±0,24
3,3±0,29
2,1±0,17
Лизоцимная активность плазмы крови
50,7±1,03
52,4±1,08
55,0±0,71
48,8±1,07
Бактерицидная активность сыворотки крови
33,4±1,48
35,8±1,32
35,6±1,57
30,0±1,10
Установлено, что предлагаемый препарат улучшает гемопоэз, о чем свидетельствует повышение содержания эритроцитов на 10,5-11,7%, уровня гемоглобина на 7,1-10,1%. Отмечено улучшение показателей биохимического профиля: повышение уровня общего белка на 5,8-5,6%, альбуминов - 10,4-10,9%, γ-глобулинов - 9,8-18,3%, щелочного резерва - 4,4-5,7%, глюкозы - 26,7-30,5%, общего кальция - 19,1-20,3%, неорганического фосфора на 17,1-17,2%. Препарат улучшает клеточные и гуморальные факторы иммуногенеза, о чем свидетельствует повышение фагоцитарной активности крови на 11,9-17,4%, лизоцимной активности ее плазмы - 7,3-12,7% и бактерицидной активности сыворотки крови на 19,3-18,7%, а также активности T-лимфоцитов на 11,9-15,5%.
Пример 5. Для изучения профилактической и лечебной эффективности препарата проводили исследования на поросятах-сосунах, подобранных по принципу пар-аналогов, в возрасте 7-9 суток. Были созданы четыре группы животных по 10 голов в каждой. Первая группа поросят получала иммуномодулирующую кормовую добавку (прототип) из расчета 0,3 г на 1 кг живой массы в сутки, вторая группа - препарат по изобретению (пример 1) в дозе 0,3 г на 1 кг живой массы в сутки, третья группа - препарат по изобретению (пример 2) в дозе 0,3 г на 1 кг живой массы в сутки. Четвертая группа была контрольной. Изучали заболеваемость и сохранность поросят в течение 60 суток. Результаты исследований приведены в табл.3.
Таблица 3
Заболеваемость и сохранность поросят
Показатели
1 группа (прототип)
Опытная группа
Контрольная группа
препарат по примеру 1
препарат по примеру 2
Количество животных в группах
10
10
10
10
Заболело
3
2
1
5
Выздоровело
3
2
1
3
Пало
-
-
-
2
Продолжительность болезни, сут
2,9±0,35
5,55±1,05
3,00±0,00
8,42±1,74
Заболеваемость, %
30
20
10
50
Сохранность, %
100
100
100
80
Из данных этой таблицы видно, что в контрольной группе заболело 5 поросят или 50%, из них 2 поросенка пали и 3 выздоровели. Вначале у поросят регистрировались признаки острого воспаления кишечного тракта, проявляющиеся поносом (диарея), переходящие в токсическую диспепсию с признаками обезвоживания и эшерихиоза. Продолжительность болезни составила 8,42±1,74 суток. При лабораторных исследованиях патматериала от павших поросят были выделены эшерхии, стрептококки, протей. Осложнения в течении болезни у поросят происходят в результате снижения защитных свойств организма, в результате чего усиливается активность условно патогенной микрофлоры (эшерихий, стрептококков, протея) и болезнь переходит в токсическую форму с признаками обезвоживания и эшерихиоза.
Заболеваемость поросят в 1 группе (прототип) составила 30%, во второй (пример 1) - 20, в третьей (пример 2) - 10%, что соответственно в 1,7, 2,5 и 5,0 раз меньше, чем в контрольной группе. Болезнь у них протекала признаками угнетения, незначительными расстройствами пищеварения и при лечении предложенными способами поросята выздоравливали в течение 3-6 суток. Сохранность поросят в опытных группах составила 100%.
Таким образом, на основании гематологических, биохимических и иммунологических исследований, клинического состояния, заболеваемости и сохранности поросят установлено, что применение кормовой иммуностимулирующей добавки, полученной заявленным способом, повышает параметры неспецифической резистентности и специфического иммунитета организма сельскохозяйственных животных и обладает профилактической и терапевтической эффективностью при болезнях желудочно-кишечного тракта.