СПОСОБ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ЖИВОТНОВОДЧЕСКИХ ПОМЕЩЕНИЙ ОТ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЭШЕРИХИОЗА
METHOD OF DISINFECTION OF LIVESTOCK BUILDINGS AGAINST COLIBACILLOSIS CAUSATIVE AGENT

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно ветеринарной санитарии.
Существенную проблему в животноводстве составляет эшерихиоз.
Эшерихиоз (колибактериоз) - остропротекающая зоонозная болезнь молодняка животных многих видов, проявляющаяся септицемией, токсемией, энтеритом, обезвоживанием организма, поражением центральной нервной системы, нарастающей депрессией и слабостью, иногда пневмонией. Возбудителем эшерихиоза являются различные биологические варианты бактерии Escherichia coli, которые в зависимости от факторов патогенности подразделяются на энтеротоксигенные, энтеропатогенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические, энтероагрегативные (Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А. Вашутин, Е.С. Воронин и др. Под ред. А.А. Сидорчука. - М.: КолосС, 2007. - С.92-99).
В системе противоэпизоотических мероприятий при данной болезни в обязательном порядке предусматривается проведение ветеринарно-санитарных работ связанных с обеззараживанием помещений, оборудования и предметов ухода за животными от возбудителя.
Возбудитель эшерихиоза относится к группе малоустойчивых микроорганизмов (первая группа), в отношении которых используются такие дезинфицирующие средства, как 2% раствор едкого натра, 2% раствор формалина, 2% раствор хлорной извести, 2% раствор нейтрального гипохлорита кальция и др. средства (Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора, 2002).
Обработку животноводческих помещений, оборудования и инструментария с профилактической целью и вынужденными мерами при возникновении болезни, как правило, осуществляют методом мелкокапельного орошения или аэрозольным методом с помощью различных распылителей или специальных устройств.
Недостатком традиционных дезинфицирующих средств и методов их применения является ряд обстоятельств, а именно:
- они реактогенные и вызывают разрушение различных материалов.
- токсичны для животных и человека, могут быть опасны при попадании на кожу и слизистые оболочки.
- после экспозиции требуют смывания с обеззараживаемой поверхности или инактивации (например, раствор формалина и глутарового альдегида инактивируют водным раствором аммиака, щелочи - органическими кислотами, хлорсодержащие и йодсодержащие дезинфектанты - тиосульфатом натрия).
- при использовании методом мелкокапельного орошения невозможно обеззараживать труднодоступные места, где могут сохраняться возбудители эшерихиоза - щели, кормушки, потолки, перегородки, электрокоммуникации.
- ряд дезинфектантов рекомендуется использовать только в виде горячих (70-80°С) растворов, что повышает стоимость процедуры.
- затруднительно использовать при низких (ниже 0°С) температурах.
3
Известен способ дезинфекции помещений путем обработки их озоно-воздушной смесью с концентрацией озона 2-5 мг/м в течение 50-70 мин с последующим разложением озона без проветривания помещений в течение 90-110 мин или путем проветривания в течение 10-20 мин (патент РФ 2171118 прототип). Изобретение позволяет снизить бактериальную загрязненность воздуха и поверхностей в помещениях, улучшить дезодорацию воздуха и удешевить процесс дезинфекции за счет исключения дорогостоящих дезинфицирующих препаратов и устройств, снизить трудоемкость процесса и обеспечить экологическую чистоту процесса дезинфекции.
Существенным недостатком данного способа является неприемлемость для использования в животноводческих помещениях, где микробная загрязненность воздуха и поверхностей в десятки тысяч раз больше, чем объектов медицинского назначения. Кроме того, в данном способе не указано, как влияет озон на выживаемость эшерихий.
Техническим решением задачи является разработка экономически и экологически целесообразного способа обеззараживания животноводческого помещения от возбудителей эшерихиоза с помощью озона.
3
Технический результат достигается тем, что разработан способ обеззараживания животноводческих помещений от кишечной палочки, включающий обработку животноводческих помещений озоно-воздушной смесью, отличающийся тем, что озоно-воздушную смесь используют с концентрацией озона в воздухе помещений 12-25 мг/м, причем обработку осуществляют в течение 60-120 минут до полного уничтожения кишечной палочки.
Для применения заявляемого технического решения были изучены обеззараживающие свойства озона, которые иллюстрируются следующими примерами.
Пример 1. Озоно-воздушную смесь получали методом диссоциации кислорода воздуха помещения в генераторе озона, который позволяет получать озон в различных концентрациях.
Бактерицидную концентрацию озоно-воздушной смеси для эшерихий устанавливали экспериментально в условиях лаборатории. Озоно-воздушную смесь подавали в специальную камеру с датчиком концентрации озона, куда помещали чашки Петри с посевами тест-бактерий.
3
3
В каждую чашку вносили по 0,1 мл микробной суспензии, содержащей примерно 10000 микробных клеток Escherichia coli в 1 мл, которую равномерно распределяли по всей поверхности питательного агара (среда Эндо). После этого посевы подвергали озонированию. Были испытаны концентрации озона из расчета 25, 12 и 6 мг/м при экспозиции 7, 15, 30, 60 и 120 мин. По окончании озонирования чашки с культурами помещали в термостат при температуре 37°C на 24 ч. Результаты опытов оценивали по количеству выросших колоний - колониеобразующих единиц (КОЕ). Каждое исследование проводили в трех повторностях. В качестве контроля использовались посевы, не подвергавшиеся озонированию. Результаты опыта представлены в таблице 1 из которой видно, что под действием различных концентраций озона клетки Escherichia coli теряют жизнеспособность уже через 7 мин, через 15 мин живых клеток остается от 75 до 43%, 30 мин - от 32 до 10%, а через 60 мин под действием озона в концентрации 25 мг/м все клетки погибли, а после воздействия озоном в концентрации 12 мг/м их осталось только 2%.
3
3
После 2-часовой экспозиции отсутствие роста было в чашках, обработанных озоно-воздушной смесью при концентрации озона 12 и 25 мг/м, в то же время после воздействия озона в концентрации 6 мг/м количество живых клеток Escherichia coli составило 5%.
Таблица 1
Влияние озоно-воздушной смеси на выживаемость кишечной палочки на поверхности питательного агара после обработки озоном
Экспозиция, мин
Escherichia coli
КОЕ
% выживших
КОЕ
% выживших
КОЕ
% выживших
концентрация озона 25 мг/м<sup>3</sup>
концентрация озона 12 мг/м<sup>3</sup>
концентрация озона 6 мг/м<sup>3</sup>
Контроль
1150
100
1559
100
1366
100
Опыт 7
750
65
1249
80
1216
89
15
500
43
951
61
1025
75
30
110
10
319
20
436
32
60
0
0
28
2
235
17
120
0
0
0
0
63
5
3
3
Таким образом, наиболее эффективным режимом воздействия озоно-воздушной смеси на клетки кишечной палочки является - 60 мин при концентрации озона 25 мг/м или 120 мин при концентрации озона 12 мг/м.
3
3
Пример 2. Был проведен опыт по определению дезинфицирующей эффективности озона в 2 режимах - 60-минутном воздействии озоно-воздушной смесью при концентрации озона в ней 25 мг/м и 120-минутном воздействии при концентрации озона 12 мг/м. Озоно-воздушную смесь получали в генераторе озона, который позволяет получать озон в различных концентрациях.
2
5
2
В качестве объекта служили - отрезок доски и металлическая пластинка размерами 5×10 см (50 см), на которые с помощью орошения наносили суточную бульонную культуру кишечной палочки из расчета 1×10 клеток на 1 см поверхности (примерная концентрация кишечной палочки на загрязненных поверхностях животноводческих помещений). После высыхания поверхностей с опытных и контрольных образцов сделали смывы для бактериологических исследований, а затем опытные объекты помещали в специальную камеру и подвергали воздействию озоно-воздушной смесью. После соответствующей экспозиции с поверхностей контрольных и опытных объектов осуществляли смывы, которые подвергали повторному исследованию.
3
3
2
Результаты опыта представлены в таблице 2, из которой видно, что при воздействии озоном в концентрации 25 мг/м на деревянную и металлическую поверхность в течение 60 мин происходит полное подавление жизнедеятельности клеток E.coli. При воздействии озоном в концентрации 12 мг/м в течение 120 мин на металлической поверхности жизнеспособных клеток не обнаружено, а на деревянной поверхности их было только 3 на 1 см. В то же время на поверхности контрольных образцов количество клеток E.coli осталось таким же как и при первоначальном исследовании.
3
Следовательно, озоно-воздушная смесь с концентрацией озона 12-25 мг/м при экспозиции 60-120 мин губительно действует на клетки E.coli, находящиеся на поверхности деревянных и металлических объектов.
Таблица 2
Влияние озона на выживаемость клеток Escherichia coli на поверхности различных объектов под действием озона
Объект
Количество Escherichia coli, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
12 мг/м<sup>3</sup>
25 мг/м<sup>3</sup>
12 мг/м<sup>3</sup>
25 мг/м<sup>3</sup>
Доска: опыт
1,5×10<sup>5</sup>
1,0×10<sub>5</sub>
2
0
контроль
1,3×10<sup>5</sup>
1,1×10<sup>5</sup>
1,5×10<sup>5</sup>
1,1×10<sup>5</sup>
Металлическая пластинка: опыт
1,2×10<sup>5</sup>
1,5×10<sup>5</sup>
0
0
контроль
1,3×10<sup>5</sup>
1,2×10<sup>5</sup>
1,2×10<sup>5</sup>
1,3×10<sup>5</sup>
Пример 3. Исследования по изучению влияния озоно-воздушной смеси на кишечную палочку в условиях животноводческого объекта (свинарник-репродуктор) после освобождения его от животных проводили на СТФ №1 ПЗ «им. В.И. Чапаева» Динского района, Краснодарского края, которая неблагополучна по эшерихиозу поросят. Обработку помещения озоно-воздушной смесью проводили после его механической очистки от навоза и других загрязнений. Озоно-воздушную смесь получали при помощи восьми портативных электроозонаторов. Оценку качества дезинфекции помещения проводили согласно Правилам проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора (2002).
3
3
Результаты дезинфекции поверхностей свинарника-репродуктора с помощью озоно-воздушной смеси представлены в таблицах 3 и 4. Из материалов данных таблиц видно, что обработка животноводческого помещения с большим уровнем бактериального загрязнения с помощью озоно-воздушной смеси с концентрацией озона 12 мг/м в течение 120 мин или с концентрацией озона 25 мг/м в течение 60 мин позволяет полностью освободить от кишечной палочки стены, потолок, пол, перегородки и кормушки.
Таблица 3
Эффективность обработки свинарника-репродуктора озоно-воздушной смесью при концентрации озона 12 мг/м<sup>3</sup> и экспозиции 120 мин
Место отбора проб
Уровень контаминации кишечной палочкой, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
Пол станков
5,3±0,8×10<sup>7</sup>
0
Стена
6,8±1,1×10<sup>8</sup>
0
Потолок
7,4±3,6×10<sup>5</sup>
0
Перегородки станков
4,2±0,7×10<sup>9</sup>
0
Кормушки
5,6±0,5×10<sup>8</sup>
0
Таблица 4
Эффективность обработки свинарника-репродуктора озоно-воздушной смесью при концентрации озона 25 мг/м<sup>3</sup> и экспозиции 60 мин
Место отбора проб
Уровень контаминации кишечной палочкой, КОЕ/см<sup>2</sup>
до обработки
после обработки
Пол станков
1,2±0,8×10<sup>12</sup>
0
Стена
8,8±1,3×10<sup>8</sup>
0
Потолок
6,4±0,6×10<sup>5</sup>
0
Перегородки станков
8,2±0,7×10<sup>9</sup>
0
Кормушки
6,6±3,6×10<sup>8</sup>
0
3
3
Таким образом, использование нового способа обеззараживания животноводческих помещений от возбудителей эшерихиоза с помощью озоно-воздушной смеси с концентрацией озона 12 мг/м в течение 120 мин или концентрацией озона 25 мг/м в течение 60 мин является эффективным, экологически безопасным и может быть рекомендован для использования в ветеринарии.