РАЗРАБОТКА СТАБИЛЬНОГО ГЕТЕРОДИМЕРНОГО АНТИТЕЛА С МУТАЦИЯМИ В ДОМЕНЕ Fc

1. Гетеродимерная конструкция Fc для придания антителу термостабильности, причем указанное антитело содержит по меньшей мере один антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с раковым антигеном или иммунным антигеном,
гетеродимерная конструкция Fc, содержащая модифицированный домен СН3, где указанный модифицированный домен СН3 содержит:
первый полипептид домена СН3 и второй полипептид домена СН3, каждый из которых содержит аминокислотные модификации по сравнению с полипептидом домена СН3 дикого типа;
причем первый полипептид домена СН3 включает аминокислотные модификации в положениях F405 и Y407, и второй полипептид домена СН3 включает аминокислотные модификации в положениях Т366 и Т394,
причем аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A, F405S, F405T или F405V; аминокислотная модификация в положении Y407 представляет собой Y407I или Y407V; аминокислотная модификация в положении Т366 представляет собой T366I или T366L, и аминокислотная модификация в положении Т394 представляет собой T394W,
причем второй полипептид домена СН3 дополнительно включает аминокислотную модификацию K392J, где J выбран из L, М или F;
причем по меньшей мере один из первого и второго полипептидов домена СН3 дополнительно включает аминокислотную модификацию T350V;
причем конструкция Fc основана на иммуноглобулине G-типа человека (IgG);
причем модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую по меньшей мере приблизительно 74°С, и
причем нумерация аминокислотных остатков соответствует индексу EU, описанному у Kabat.
2. Термостабильное антитело, содержащее:
(i) один или более антигенсвязывающих доменов, причем по меньшей мере один из антигенсвязывающих доменов специфически связывается с раковым антигеном или иммунным антигеном, и
(ii) конструкция гетеродимера Fc содержит модифицированный домен СН3, причем указанный модифицированный домен СН3 содержит:
первый полипептид домена СН3 и второй полипептид домена СН3, каждый из которых содержит аминокислотные модификации по сравнению с полипептидом домена СН3 дикого типа;
причем первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации в положениях F405 и Y407, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации в положениях Т366 и Т394,
причем аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A, F405S, F405T или F405V; аминокислотная модификация в положении Y407 представляет собой Y407I или Y407V; аминокислотная модификация в положении Т366 представляет собой T366I или T366L, и аминокислотная модификация в положении Т394 представляет собой T394W,
причем второй полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию K392J, где J выбран из L, М или F;
причем по меньшей мере один из первого и второго полипептидов домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию T350V;
причем конструкция Fc основана на иммуноглобулине G-типа человека (IgG);
причем модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую по меньшей мере приблизительно 74°С, и
причем нумерация аминокислотных остатков соответствует индексу EU, описанному у Kabat.
3. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
4. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем модифицированный домен СН3 имеет температуру плавления (Tm), составляющую приблизительно 75°С или выше, приблизительно 77°С или выше, или приблизительно 80°С или выше.
5. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотную модификацию K392L или K392M.
6. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 5, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
7. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем первый полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию L351Y.
8. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 7, причем второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотную модификацию K392L или K392M.
9. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 7, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
10. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A.
11. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 10, причем второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотную модификацию K392L или K392M.
12. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 10, причем первый полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию L351Y.
13. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 10, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
14. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем аминокислотная модификация в положении Y407 представляет собой Y407V.
15. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 14, причем второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотную модификацию K392L или K392M.
16. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 14, причем первый полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию L351Y.
17. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 14, причем аминокислотная модификация в положении F405 представляет собой F405A.
18. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 14, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
19. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем:
(a) указанный первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 включает аминокислотные модификации T366L, K392M и T394W, или
(b) указанный первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T366L, K392L и T394W, или
(c) указанный первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T366I, K392M и T394W, или
(d) указанный первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, и указанный второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T366I, K392L и T394W.
20. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 19, причем каждый из первого и второго полипептидов домена СН3 содержит аминокислотную модификацию T350V.
21. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем по меньшей мере один из первого и второго полипептидов домена СН3 дополнительно содержит модификацию S400Z, где Z выбран из положительно заряженной аминокислоты и отрицательно заряженной аминокислоты.
22. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 21, причем первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотную модификацию S400E или S400R.
23. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем по меньшей мере один из первого и второго полипептидов домена СН3 дополнительно содержит модификацию N390Z, где Z выбран из положительно заряженной аминокислоты и отрицательно заряженной аминокислоты.
24. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 23, причем второй домен СН3 содержит аминокислотную модификацию N390R.
25. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем первый полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию S400E, и второй полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию N390R.
26. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 19, причем первый первый полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию S400E, и второй полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию N390R.
27. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем один из первого и второго полипептидов домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию Q347R, и другой полипептид домена СН3 дополнительно содержит аминокислотную модификацию K360E.
28. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем:
(a) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, K392M и T394W, или
(b) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, K392M и T394W, или
(c) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, K392L и T394W, или
(d) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400R, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, K392M и T394W, или
(e) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(f) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405V и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(g) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405T и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(h) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405S и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(i) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(j) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(k) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации Q347R, T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, K360E, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(l) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400R, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390D, K392M и T394W, или
(m) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400R, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390E, K392M и T394W, или
(n) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392L и T394W, или
(о) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392F и T394W, или
(р) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации Y349C, T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, S354C, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(q) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации Y349C, T350V, S400E, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, S354C, T366L, N390R, K392M и T394W, или
(г) первый полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации Y349C, T350V, F405A и Y407V, и второй полипептид домена СН3 содержит аминокислотные модификации T350V, S354C, T366L, K392M и T394W.
29. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 28, причем конструкция Fc основана на IgG1 человека.
30. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 28, причем антитело представляет собой биспецифическое антитело или мультиспецифическое антитело.
31. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем конструкция Fc основана на IgG1 человека.
32. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем антитело представляет собой биспецифическое антитело или мультиспецифическое антитело.
33. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем по меньшей мере один антигенсвязывающий домен связывается с раковым антигеном.
34. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем по меньшей мере один антигенсвязывающий домен связывается с иммунным антигеном.
35. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем по меньшей мере один антигенсвязывающий домен происходит из терапевтического антитела.
36. Гетеродимерная конструкция Fc или термостабильное антитело по п. 35, причем терапевтическое антитело выбрано из группы, состоящей из абаговомаба, адалимумаба, алемтузумаба, аурограба, бапинейзумаба, базиликсимаба, белимумаба, бевацизумаба, бриакинумаба, канакинумаба, катумаксомаба, цертолизумаба пегола, цетуксимаба, даклизумаба, деносумаба, эфализумаба, галиксимаба, гемтузумаба озогамицина, голимумаба, ибритумомаба тиуксетана, инфликсимаба, ипилимумаба, лумиликсимаба, меполизумаба, мотавизумаба, муромонаба, микограба, натализумаба, нимотузумаба, окрелизумаба, офатумумаба, омализумаба, паливизумаба, панитумумаба, пертузумаба, ранибизумаба, реслизумаба, ритуксимаба, теплизумаба, тоцилизумаба/атлизумаба, тозитумомаба, трастузумаба, Проксиниума™, Ренкарекса™, устекинумаба и залутумумаба.
37. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, причем антитело содержит первый антигенсвязывающий домен и второй антигенсвязывающий домен.
38. Гетеродимерная конструкция Fc по п. 1 или термостабильное антитело по п. 2, отличающееся тем, что антитело конъюгировано с терапевтическим агентом.