Методика количественного определении суммы флавоноидов в фиточае «Седафит»

ЛИТЕРАТУРА

1. Барабой В.А., Чеботарева Е.Е. Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии.

— Киев: Наукова думка, 1984. — 184 с.

2. Баторова С.М., Яковлев Т.П., Базарон Э.Г. «Дзэйцхар Мигчжан» - памятник тибетской медицины. — Новосибирск: Наука, 1985. — 88 с.

3. Гаммерман А.Ф., СемичовБ.В. Словарь тибетско-лати-но-русских названий лекарственного растительного сырья, применяемого в тибетской медицине. — Улан-Удэ, 1963. - 180 л.

4. Израилъсон В. Ф. Культура горечавки желтой в Новосибирске // Вторая республиканская конференция по медицинской ботанике. — Киев, 1988. — С.120.

5. Карпович В.Н. Фитохимическое исследование забайкальских видов горечавковых // Вопросы фармакогнозии: Тр. ЛХФИ. — 1960. — Т. 12, вып. 1. — С.201-208.

6. Ковалев И.Е, Данилова Н.П., Андронати С.А., Жеребин Ю.Л. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и др. факторами // Фармакология и токсикология. — 1986.

— № 4. — С.89-91.

7 Малышев Л.И., Пешкова Г.А. Флора Центральной Сибири. — Новосибирск: Наука. 1979. — Т. 2. — С.709-718. 8. Николаев С.М. Желчегонное действие экстракта горечавки бородатой (ОеШапа ЬагЬа1а FroeL) // Фармация.

— 1985. — №№ 3. — С.16-19.

9. Николаев С.М. Полифенольные комплексы при заболеваниях гепатобилиарной системы // Тезисы докладов IV Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. — Ташкент, 1982. — С.32-33.

10. Николаев С.М., Цыренжапов A.B., Самбува З.Г., Николаева Г.Г., Танхаева Л.М., Даргаева Т.Д. Мембраноста-билизирующее действие природных ксантоновых соединений // Фитотерапия в Украине. — 2001. — № 3. — С.26-29.

11. Николаева Г.Г. Фитохимическое исследование растений семейства Горечавковых флоры Сибири: Автореф дис. ... докт.фарм. наук. — Улан-Удэ, 2000 — 40 с.

12. Сыров В.Н., Хусбактов B.A., Гукасов B.M. и др. Антиок-сидантная активность некоторых растительных фе-нольных соединений // Химико-фармацевтический журнал. - 1987. - №№ 1. - С.59-62.

13. Телятъев В.В. Целебные клады. — Иркутск: ВосточноСибирское книжное изд-во, 1991. — 400 с.

14. Хайдав Ц., Алтанчимэг Б., Варламова Т. С. Лекарственные растения в монгольской медицине. — Улан-Батор, 1985. - 390 с.

15. Цыренжапов A.B. Сравнительная оценка желчегонного и гепатозащитного действия лекарственных средств из растений семейства горечавковых: Автореф. дисс... канд. мед. наук. - Улан-Удэ, 1999. - 24 с.

© ЛЫГДЕНОВА Б.Б., АСЕЕВА Т.А., ЧЕХИРОВА Г.В., ПЕТРОВ Е.В., МАТХАНОВ И.Э. -

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИИ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ФИТОЧАЕ «СЕДАФИТ»

Б.Б. Лыгденова, Т.А. Асеева, Г.В. Чехирова, Е.В. Петров, И.Э. Матханов

Резюме. Разработана биологически активная добавка к пище в форме фиточая для профилактики и лечения неврозов, в состав которой входят официнальные лекарственные растения. Для стандартизации разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии. Ключевые слова. Спектрофотометрия, методика количественного определения суммы флавоноидов, фиточай «Седафит».

Актуальность разработки средств, обладающих мягким седативным действием, обусловлена возросшими нагрузками на нервную систему человека, вызванными высокими темпами современной жизни, глобальными социально-экономическими преобразованиями, уменьшением доли физического труда в жизни современного человека и психотравмирующими ситуациями [9]. В настоящее время доказана эффективность применения препаратов из лекарственных растений в качестве седативных средств, при этом наиболее эффективными являются препараты, содержащие в своем составе несколько компонентов [3,7].

В связи с вышеизложенным разработано многокомпонентное седативное средство растительного происхождения в форме фиточая.

Разработка рецептуры фиточая, условно названного «Седафит», осуществлялась на основе анализа данных литературы о седативной активности извлечений из различных лекарственных растений [5,7,11], а также данных фармакологического скрининга. В результате была составлена рецептура, включающая следующие ингредиенты: трава пустырника пятилопастного

(Leonurus quinquelobatus Gilib.), листья мяты перечной (Mentha x piperita L.), цветки ромашки аптечной (Matricaria recutita L.), корневища с корнями валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L.), корни шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi).

В последние годы предъявляются высокие требования к качеству фитопрепаратов и биологически активных добавок к пище, что предполагает использование современных и точных методов стандартизации [2,8,10]. Согласно этим требованиям разработана методика количественного определения содержания суммы флаво-ноидов в фиточае, основанная на дифференциальной спектрофотометрии, так как флавоноиды являются одной из доминирующих групп биологически активных веществ растений, входящих в состав фиточая, и во многом обусловливающих их суммарный фармакологический эффект [1].

Материалы и методы

Объектом исследования служили образцы растений: трава пустырника пятилопастного, листья мяты перечной, цветки ромашки аптечной, корневища с корнями

валерианы лекарственной, корни шлемника байкальского.

Изучение качественного состава флавоноидов проводили методом одномерной и двумерной хроматографии на бумаге марки <^Шгак» Б№-12, К^16 (ГДР), а также тонкослойной хроматографии на пластинках <^йиЮ1» (Чехия) в системах растворителей: н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2); уксусная кислота 15%.

При разработке методики количественного определения суммы флавоноидов было использовано хрома-тографически чистое вещество — государственный стандартный образец (ГСО) — лютеолин (ФС 42-2970-93). Приготовление раствора ГСО лютеолина с алюминием хлоридом проводили согласно ГФ XI. Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре СФ-46 (ЛОМО) в кюветах с толщиной слоя 10 мм.

Результаты и обсуждение

Для разработки методики количественного определения флавоноидов в фиточае «Седафит» был использован метод дифференциальной спектрофотометрии, отличающийся высокой точностью и экспрессностью, и вследствие этого широко применяемый в последнее время для количественного анализа флавоноидов в растительном сырье [4]. Метод базируется на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом. Происходящий при этом батохромный сдвиг первой полосы поглощения флавоноидов с 330-350 нм до 390-415 нм позволяет применить в качестве контроля испытуемый раствор без реактива и тем самым исключить влияние сопутствующих окрашенных веществ. В качестве стандартного вещества использовали лютеолин, максимум дифференциального спектра которого (400± 1 нм) совпадает с максимумом дифференциального спектра извлечения из фиточая «Седафит» (400±3 нм) (рис. 1).

В процессе разработки методики количественного определения изучено влияние условий экстракции на выход флавоноидов при получении извлечений из фиточая. В результате подобраны оптимальные условия извлечения действую-

руют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Фильтр помещают в колбу для экстрагирования, прибавляют 50 мл 70 % спирта, присоединяют обратный холодильник и проводят вторую экстракцию при кипении в течение 1 часа. Извлечение фильтруют в ту же мерную колбу, объем раствора доводят до метки 70% этиловым спиртом и перемешивают (раствор А). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 3 мл раствора А и 2 мл 2% раствора алюминия хлорида, доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор Б). Через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора Б в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 400 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 3 мл раствора А, доведенного 70% этиловым спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора комплекса ГСО лютеолина с алюминия хлоридом.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в абсолютно сухом сырье в % X вычисляют по формуле:

Х= Р «Ш « 2 « 100 » 100 D0 «ш «3 «(100 - ^

где Р — оптическая плотность испытуемого раствора; Р0 — оптическая плотность ГСО лютеолина; ш — масса сырья в г; ш0 — масса ГСО лютеолина в г; W —

л н о о К Ё

П

О

Длина волны; нм

Рис.1. Спектры поглощения спиртового извлечения из фиточая и ГСО лютеолина: 1 — дифференциальный спектр извлечения (1:625, 70% спирт); 2 — дифференциальный спектр лютеолина (с 0,00001 мг/мл, 70% спирт).

щих веществ из растительного сырья: экстрагент — 70% этиловый спирт, степень измельчения — 1 мм, соотношение сырье-экстрагент — 1:50, 2-кратная экстракция, время 1-й и 2-й экстракции — 60 мин.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в фиточае «Седафит»

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл и приливают 50 мл 70% этилового спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают до кипения на водяной бане и выдерживают в течение 1 часа, периодически перемешивая. Извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильт-

потеря в массе при высушивании сырья в %.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов представлены в таблице 1.

Как видно из данных таблицы 1, относительная ошибка единичного определения составляет 3,74 %. Отсутствие систематической ошибки методики доказано при помощи опытов с добавками ГСО лютеолина непосредственно при экстракции сырья. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица1

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в фиточае

1 X S Sx Р г Ах

9 1,03 0,01703 0,00539 95 2,26 0,04 1,18 3,74

На основании данных из таблицы 2 можно сделать вывод, что относительная ошибка опыта находится в пределах случайной ошибки предложенной методики, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки при определении содержания суммы флавоно-идов в фиточае. В исследованных пробах фиточая содержание суммы флавоноидов находилось в пределах

от 0,96 до 1,09%. Норму по этому показателю предложено установить не менее 0,50 %.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработана методика количественного определения суммы флавоноидов как критерий стандартизации фиточая «Седафит», использованный в дальнейшем при разработке нормативной документации на биологически активную добавку к пище «Седафит».

Таблица 2

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в фиточае с использованием

метода добавок ГСО лютеолина

Количество Добавлено Должно быть Найдено Абсолютная Относительная

флавоноидов лютеолина, флавоноидов флавоноидов ошибка, мг ошибка, %

в навеске, мг мг и лютеолина, мг и лютеолина, мг

20,624 5,156 25,780 25,837 -0,057 1,46

20,637 10,312 30,949 30,919 0,030 0,93

20,645 15,468 36,113 36,148 -0,035 1,27

THE METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE SUM OF FLAVONOIDS

IN THE MULTICOMPONENT HERBAL TEA «SEDAPHYTE»

B.B. Lygdenova, T.A. Aseyeva, G.V. Chekhirova, E.V. Petrov, I.E. Matkhanov

The multicomponent herbal tea «Sedaphyte», the biologically active additive to the food using in preventive treatment of neuroticisms has been worked out. The method of quantitative determination of the sum of flavonoids for standartization was elaborated.

5. Гиндикин В.Я. Травы, нервы, возраст. — М., 1996. — 288 с.

6. Государственная Фармакопея СССР. Вып.2. Общие методы! анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

7. Гузева В.И., Михайлов И.Б. Фармакотерапия нервных болезней у взрослых и детей. — СПб.: Фолиант, 2002. — 400 с.

8. Ладыгина Е.Я., Самылина И.А. Роль нормативно-технической документации в повышении качества лекарственного растительного сырья: Сб. науч. тр. // Акт. проблемы современной фармации. — М., 1996. — С.119-122.

9. Литвицкий П.Ф. Патофизиология. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. — Т. 2. — 802 с.

10. Самылина И.А. Ермакова В.А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья // Химико-фармацевтический вестник. — М.: Информация, 1996. — №6. — С. 19-22.

11. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. — М., 1990. — 428 с.

2.

3.

ЛИТЕРАТУРА

Азизов И.К. Анализ и контроль качества лекарственных веществ с использованием спектральных методов анализа в видимой области спектра: Дисс. ... докт. фарм. наук. - М., 1993. - 222 с.

Акашкина Л.В., Российская Г.И., Лякина М.Н. Разработка и стандартизация фитопрепаратов // Актуальные проблемы создания новых фитопрепаратов природного происхождения / Материалы 2-го Междунар. съезда (СПб-Валаам, 29 июня-2 июля, 1998 г.). - СПб., 1998. - С.9-13.

Асеева Т.А. Блинова К. Ф., Яковлев Г.П. Лекарственные растения тибетской медицины. - Новосибирск: Наука, 1985. - 159 с.

Беликов В.В., Точкова Т.В., Колесник Н. Т. Экспрессный метод анализа флавоноидов в лекарственном растительном сырье // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Материалы докл. Всесоюз. конф. - М., 1991. - Т.2., Ч.2. - С.15-16.