Оценка качества молочного сырья методом хемилюминесцентного анализа

Таблица 1. Уровни оТ3, сТ4 и ТТГ, определенные методами иммуноферментного и регрессионного анализа

оТз, нмоль/л сТ4, пмоль/л ТТГ, мкМЕ/мл

опыт расчет опыт расчет опыт расчет

Контрольная группа

1,86 ± 1,92 ± 17,85 + 18,02 ± 0,044 ± 0,068 ±

0,11 0,16 1,35 1,42 0,01 0,02

Экспериментальный гипотиреоз

1,56 ± 1,61 + 4,34 ± 4,64 ± 0,046 ± 0,058 ±

0,06 0,05 0,14 0,24 0,044 0,006

ном гипотиреозе снижается активность ферментативных систем, что также оказывает ингибирующее влияние на процессы периферического дейодирования Т4. В комплексе это приводит к увеличению разброса значений оТ3 и погрешности в расчетах. У гипотиреоидных кроликов последняя достигает 8,68 %, тогда как у клинически здоровых животных величина этого показателя составляет 4,30 % (см. табл. 2).

Увеличение амплитуды колебаний уровня оТ3, оказывающего регуляторное влияние на продукцию ТТГ, в свою очередь, повышало погрешность при расчетах среднеарифметичес-

ких значений ТТГ у гипотиреоидных кроликов до 9,13 % (в контроле — 4,83 %).

Таким образом, на основании проведенных исследований можно утверждать о приемлемости построенной модели для воспроизведения показателей уровня гормонов гипофизарно-тиреоидной системы. Содержание тиреоидных гормонов (оТ3, сТ4) и ТТГ, определенное расчетным путем, как и результаты иммуноферментного анализа, отражают направленность патофизиологических сдвигов в гипофизарно-тиреоидной системе при экспериментальной дисфункции щитовидной железы по эндемическому типу. Разработанный метод математического моделирования функционального состоя-

ния щитовидной железы можно рекомендовать для использования при диагностике гипо- и гиперти-реоидных состояний у животных.

Таблица 2. Значения коэффициентов для клинически здоровых и гипотиреоид-

ных кроликов

Зависи- Коэффициенты Относительная

мость кі к2 к3 к4 | к5 I к6 погрешность

Клинически здоровые

(1) 1,940 24,533 -0,506 -7,512 -2,927 1,177 4,30 %

(2) 0,462 -9,209 -0,046 2,237 2,435 -0,344 0,63 %

(3) 136,918 -453,743 330,963 50,799 -61,533 2,074 4,83 %

Гипотиреоидные

(1) -0,297 6,857 -3,129 -2,102 0,674 0,422 8,68 %

(2) 4,936 6,045 -2,221 -4,416 -0,292 0,950 1,51 %

(3) 88,307 -88,066 -36,413 -24,279 52,760 -5,082 9,13%

Литература.

1. Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище: Методические указания — М.: Федеральный Центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. — 87 с.

2. Герасимов Г.А. Лабораторные методы в диагностике заболеваний щитовидной железы // Клиническая лабораторная диагностика. — 1998. -№6.~ С. 25-32.

3. Козлов В.Н. Морфофункциональные изменения в печени у белых крыс при экспериментальном гипотиреозе/ В.Н. Козлов // Ветеринарная медицина, - 2006. — N9 2-3. — С. 33-35.

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА МОЛОЧНОГО СЫРЬЯ МЕТОДОМ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА

А. II. МАМЦЕВ

Е.Е. ПОНОМАРЕВ

Филиал Московского государственного университета технологий и управления в г. Мелеузе

А.В. ЦАРЬКОВ

Научно-производственное объединение «Эраконд»

Известно, что многие физиологические и метаболические процессы в организме сопровождаются образованием активных частиц — свободных радикалов. Наиболее часто они возникают при одноэлектронном восстановлении кислорода (активные формы кислорода — АФК) и при перекисном окислении липидов. Содержание свободных радикалов в организме поддерживается на постоянном уровне, который регулирует-

ся разнообразными физико-химическими механизмами [1]. Перспективный метод определения скорости свободнорадикального окисления (СРО) — регистрация хемилюминесценции — свечения, возникающего при взаимодействии свободных радикалов [2].

Изучение процессов сверхслабого свечения позволяет оценивать качественные характеристики как молока, поступающего из хозяйств, так и молочных продуктов в процессе их хранения. Мы оценили влияние условий содержания крупного рогатого скота на процессы свободнорадикального окисления липидов молока методом хемилюминесцентного анализа.

Хемилюминесценцию измеряли включенным в реестр оборудования Медицинской промышленности России прибором ХЛ-003, изготовленным в Межвузовской лаборатории технических систем

Таблица 1. Показатели хемилюминесценции цельного молока из сравниваемых по белковому и минераль-

хозяйств

Хозяйство Светосумма, уел. ед.- мин. Спонтанная светимость, уел. ед. Вспышка, уел. ед. Максимальная светимость, уел. ед. Наклон, уел. ед./ мин.

СПК 5,72 0,52 0,88 1,50 0,59

«Трудовик» ±0,98 ±0,02 ±0,09 ±0,25 ±0,16

Колхоз 9,26 0,71 1,13 2,58 0,81

«им. Шевченко» ±2,35 ±0,10 ±0,25 ±0,67 ±0,35

медико-биологических исследованиями [3]. Проверку стабильности работы установки проводили перед каждым измерением по излучению вторичного эталона СФХМ-1 (ГОСТ 9411-81). Интенсивность его свечения составляла 5,1105 квантов в секунду. Для удобства эту величину приняли за одну условную единицу (уел. ед.). Для проведения исследований из вены цельную кровь отбирали в пластиковую пробирку (в стеклянной активируется дыхательный взрыв фагоцитов) с предварительно налитым раствором гепарина (10 мл крови: 1 мл гепарина). Гепарин готовили разведением стандартного раствора (5 тыс. ед в 1 мл) в 10 раз. Перед исследованием необходимое количество рабочего раствора (из расчета 2 мл на 1 пробу) нагревали в термостате до 37° С и заранее разливали по 2 мл в стаканчики для измерения ХЛ, которые также выдерживали в термостате. Затем добавляли 0,1 мл ге-паринизированной крови, тщательно размешивали и помещали в камеру прибора. Запись ХЛ вели в течение 10 минут [3]. При изучении скорости и интенсивности реакций цепного свободнорадикального перекисного окисления липидов молока температура составляла 25 °С; pH — 6,55...6,75. Для инициирования процессов перекисного окисления липидов использовали 510'2 М раствор сернокислого железа. Неорганический фосфор в сыворотке крови определяли по Пулсу в модификации

В.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой; общий бе-

ному составу. И, наоборот, в производственных помещениях СПК «Трудовик» соблюдаются основные микроклиматические параметры, животные обеспечены сбалансированными по белковому, углеводному и минеральному составу рационами, в хозяйстве отмечаются высокие суточные привесы и надои молока. Анализ полученных данных показывает, что у молока из колхоза «им. Шевченко» светосумма свечения равна 9,26 ± 2,35 у.е.-мин., а у продукции СПК «Трудовик» — 5,72 ± 0,98 у.е.-мин. (табл. 1). Следовательно, молоко из неблагополучного хозяйства отличается более высоким уровнем липидперокси-дации, а это, в свою очередь, способствует ускоренной порче продукта.

Несоблюдение надлежащих условий содержания и кормления способствует росту заболеваемости, снижению эффективности животноводства. При этом у животных развиваются диеэлементо-зы, снижается иммунитет. Люминол-зависимое свечение крови главным образом связано с генерацией активных форм кислорода макрофагами и нейтрофилами. Оно характеризует состояние гуморально-клеточного иммунитета. Светосумма свечения за время измерения — это интегральный показатель генерации активных форм кислорода. Наши исследования показали, что у животных, содержавшихся на полноценном рационе, более высокая светосумма люминол-зависимого свечения цельной крови. Среднеарифметическое значение этого показателя у десяти коров из СПК «Трудовик» составило 3,55 ± 0,61 уел.ед.-мин., против! ,93+ 0,05 уел. ед.-мин (р < 0,05) у животных из колхоза «им. Шевченко» (табл. 2).

лок — по биуретовой реакции; каротин — по Кари и Таблица 2. Оценка состояния гуморально-клеточного иммунитета по результа-

Примечание: * — р < 0,05;

Юдкина [4].

Статистическую обработку данных осуществляли с помощью стандартных методов по программе Зіа^іса 5.0, оценку значимости различий среднеарифметических — с использованием 1-критерия Стьюдента.

Мы провели биохимические исследования сыворотки крови, процессов свободно-радикального окисления молока и цельной крови коров из двух хозяйств Мелеузовского района Республики Башкортостан — СПК «Трудовик» и колхоз «им. Шевченко». При этом последнее характеризуется как предприятие с низкой упитанностью и продуктивностью скота, отсутствием надлежащих условий для его содержания, несбалансированностью рационов

Хозяйство Светосумма, усл.ед. мин. Спонтанная, светимость, уел. ед. Вспышка, уел. ед. Максимальная светимость, уел. ед. Наклон, уел. ед./ мин.

СПК 3,55 0,24 0,50 1,04 0,33

«Трудовик» ±0,61 ±0,01 ±0,05 ±0,19 ±0,07

Колхоз 1,93* 0,15*** 0,27*** 0,68 0,14*

«им.Шевченко» ±0,05 + 0,02 ± 0,03 ±0,21 ±0,03

-р <0,001.

Кроме того, у коров, содержавшихся на неполноценном рационе, отмечены более низкие значения уровней концентрации белка, неорганического фосфора и каротина (соответственно 7,71 ± 0,11 г%, 4,10 ± 0,13 мг% и 0,348 ± 0,012 мг% в колхозе «им. Шевченко», против 8,14 + 0,08 г%, 5,07 ± 0,46 мг% и 0,609 ± 0,016 мг % у коров из СПК «Трудовик»).

Таким образом, несоблюдение основ зоогигиены и ветеринарии способствует развитию общесоматических нарушений, которые, в свою очередь, обусловливают

изменения качественных характеристик сырья, постав- цепною свободнорадикального перекисного окисления

ляемого на предприятия молочной промышленности. липидов, мы рекомендуем для оценки качественных ха-

Метод исследования хемшпоминесцентных свойств мо- рактеристик сырья и молочных продуктов на техноло-

лока, отражающий инггенсивность и скорость реакций гических этапах производства.

Литература.

1. Колпикова О.С., Фархутдипов P.P., Магжанов Р.В. Влияние некоторых препаратов, используемых в лечении цереброваскулярных расстройств, на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах //Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. — 2002. - Т. 102, № 8. — С. 22-25.

2. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. — Л.: Наука, 1985. — С. 34-36.

3. Фархутдинов P.P., Тевдорадзе С.И. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминомере ХЛ — 003//Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения: Сборник докладов. Москва. Россия. 14-15 сентября 2004/Под общей ред. проф. Е.Б. Бурлаковой — М.: РУДН, 2005. — С. 147-154.

4. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник/Под ред. И.П. Кондрахина. — М.: КолосС, 2004. — 520с.

АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА «ЙОДПОЛИСАХАРИДНЫХ» СОЕДИНЕНИЙ

А. II. МАМЦЕВ

НЛ КРАСНОВА

Филиал Московского государственного университета технологий и управления в г. Мелеузе

Важные и разносторонние функции щитовидной железы позволяют предположить, что нарушения ее состояния могут отражаться на системе окислительного гомеостаза. В исследованиях отечественных и зарубежных специалистов показано, что работоспособность щитовидной железы, в свою очередь, зависит от активности системы свободнорадикального окисления. Кроме того, как указывают авторы, не последнюю роль в формировании аутоиммунной ти-реоидной патологии играет функциональная недостаточность в антиоксидантной системе, представленной супероксиддисмутазой, глутатион-8-транс-феразой, трансферрином, лактоферрином, альбумином. Концентрация антиоксидантных энзимов (ка-талазы, ксантиноксидазы и глутатионпероксидазы) в ткани щитовидной железы существенно изменяется при разнообразных поражениях, сопровождаясь повышением содержания свободных радикалов, а также накоплением малонового диальдегида [1]. Высокий уровень липидпероксидов обнаруживали при гипотиреоидных состояниях, а также у пациентов, страдающих злокачественными новообразованиями щитовидной железы. Таким образом, можно констатировать, что нарушения в системе окислительного гомеостаза играют ключевую роль в патогенезе тиреоидной патологии. Следовательно, при разработке методов коррекции йододефицитных заболеваний необходимо оценивать про- и антиокси-дантные свойства препаратов и биологически активных добавок (БАД). Бесконтрольное введение препаратов, наделенных прооксидантными свойствами, на фоне патофизиологических сдвигов в системе антиоксидантной защиты организма может привести

оксидативному стрессу с повреждением субклеточных структур. Определенное место в этом процессе несомненно, имеет свободнорадикальный механизм повреждения биологических структур. Поэтому нужно учитывать, что биологически активные вещества, введенные в состав пищевого продукта, могут влиять на его качественные характеристики, способствуя накоплению промежуточных продуктов окисления липидов. Можно также предположить, что использование неорганических форм йода в профилактике и лечении тиреовдной патологии по эндемическому типу окажет негативное влияние на функциональное состояние системы окислительного гомеостаза.

Создание комплексной системы оценки анти- и прооксидантной активности биологически активных веществ предполагает разработку стандартных аналитических методов, с помощью которых можно получить всю необходимую информацию. Перспективный метод определения скорости свободнорадикального окисления — регистрация хемилюминесценции (ХЛ) — свечения, возникающего при взаимодействии свободных радикалов.

Одна из важнейших характеристик биологически активного вещества как антиоксиданта — способность его молекулы связывать свободные радикалы и тем самым ингибировать процессы разрушения биологической среды [2]. Сегодня широко используются методы оценки антиокислительной активности как лекарственных средств, так и биологически активных веществ в модельных тест-системах [3,4].

Целью наших исследований было определение про- и антиоксидантных свойств ингредиентов, входящих в состав новой йодосодержащей биологически активной добавки (БАД), разработанной в научно-исследовательской лаборатории «Пищевые технологии» филиала МГУТУ в г. Мелеузе (патент РФ № 2265377 от 10.12.2005 г). Она предназначена для йодирования основных видов продуктов, в том числе и хлебобулочных. В ее состав входят неорга-