О возможностях установления наличия кислой фосфатазы в пятнах спермы на вещественных доказательствах колориметрическим методом с использованием тест-набора "Асю phosphatase colqrimetric homazym test

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

СДГ носит компенсаторный характер. Энергообеспечение транспортных процессов при этих условиях может идти по иному пути утилизации глюкозы, а именно - по пути гликолиза, ключевым ферментом которого является ЛДГ.

Обнаруженная нами активация НАД-Н2-дегидрогена-зы может свидетельствовать об увеличении энергетических потребностей клеток, направленных в условиях токсического воздействия на осуществление процессов синтеза веществ. Однако повышение ее активности может отражать и мозаичность повреждения, особенно при повышении транспорта через апикальные мембраны канальцев, маркируемого ферментом ЩФ. Таким образом, экспериментальное исследование показало, что при данной модели отравления возникает тяжелое необратимое поражение печени, сопровождающееся декомпенсиро-ванным ацидозом с преобладанием метаболического компонента. Ацидотический сдвиг при этом является результатом, по-видимому, развивающейся тяжелой циркулярной гипоксии, вызванной токсическим воздействием газа.

выводы

Таким образом, полученные результаты позволяют считать, что интоксикация газом и его метаболитами вызывает глубокие структурно-метаболические поражения печени, способные в дальнейшем приводить к развитию хронической печеночной недостаточности.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бучии, В. Н. Особенности формирования и клиническая структура начальных форм пограничных нервно-психических расстройств / В. Н. Бучин, С. Б. Селезнев // Практ. конф. «Экология и здоровье». - Пенза, 1993. - Ч. II. - С. 70-71.

2. Гилев, В. Г. К патоморфологии хронической интоксикации крекинг-газом (экспериментальное исследование) / В. Г. Гилев. -Уфа, 1971. - 32 с.

» • СПбГМУ

3. Могош, Г. Острые отравления : диагноз и лечение / Г. Мо-гош. - Бухарест, 1984. - 580 с.

4. Сетко, Н. П. Гигиена труда при переработке сероводород-содержащего природного газоконденсата и особенности его биологического действия на организм : автореф. дисс. ... д-ра мед. наук / Н. П. Сетко. - М., 1990. - 45 с.

5. Томипин, В. В. О значении некоторых лечебных мероприятий для судебно-медицинской экспертизы острых отравлений эти-ленгликолем / В. В. Томилин, Р. В. Бережной, С. Н. Сергеев // Судебно-мед. экспертиза. - 1980. - № 3. - С. 51-53.

6. Kandas, J. Exposure to hydrogen sufide, mercaptans and sulfur dioxide in pulp industry / J. Kandas, P. Jappinen, H. Sovolainen // Am. Ind. Hyg. asroc. J. - 1984. - Vol. 45. - № 12. - P. 787-790.

РЕЗЮМЕ

E. Ю. Калинина, О. Д. Ягмуров

Функциональная морфология печени при моделировании острого смертельного отравления бытовым газом

Работа посвящена изучению гистологических и гистохимических изменений печени при моделировании острых отравлений бытовым газом в эксперименте. В процессе проведенных исследований установлено, что интоксикация газом и его метаболитами вызывает глубокие структурно-метаболические поражения печени, способные в дальнейшем приводить к развитию хронической печеночной недостаточности.

Ключевые слова: отравление бытовым газом, печень.

SUMMARY

Е. Y. Kaliniria, О. D. Yagmurov

Functional liver morphology at modeling of acute domestic gas poisoning

The work deals with the study of histological and histochemical liver changes in rats at modeling of domestic gas poisoning experiment. The investigation has shown that intoxication with gas and its metabolites causes deep structural and metabolic liver damages which may lead to development of chronic liver decompensation.

Key words: domestic gas poisoning, liver.

© В. Л. Сидоров, О. Д. Ягмуров, 2010 г. УДК 616-003.263:577.153.3]-079.6

В. Л. Сидоров, О. Д. Ягмуров

О ВОЗМОЖНОСТЯХ УСТАНОВЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ КИСЛОЙ ФОСФАТАЗЫ В ПЯТНАХ СПЕРМЫ НА ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВАХ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТЕСТ-НАБОРА «ACID PHOSPHATASE COLORIMETRIC HÜMAZYM TEST»

Кафедра судебной медицины и правоведения Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова; Бюро судебно-медицинской экспертизы, Санкт-Петербург

ВВЕДЕНИЕ

Для установления наличия спермы в пятнах на вещественных доказательствах широко используются ориентировочные методики [I, 5-7, 10].

В судебно-медицинской практике для этих целей применяется как реакция на кислую фосфатазу [2, 4, 8, 9, 1114], так и реакция, направленная на исследование изофер-ментов кислой фосфатазы [15]. В настоящее время для исследования вещественных доказательств применяются также тестирующие полоски «Фосфотест». Все вышеперечисленные методики направлены на выявление общей кислой фосфатазы и имеют субъективный характер.

Целью нашего исследования является разработка методики выявления общей кислой фосфатазы, а также отделения простатической кислой фосфатазы от общей в пятнах на вещественных доказательствах колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test» для

сыворотки крови. Принцип метода заключается в том, I -Нафтил-фосфат гидролизуется кислой фосфатазой (КФ) и переходит в I-Нафтол, который преобразуется с FRTR-солью (красная быстрая соль) в устойчивый комплекс и способен к окрашиванию. При измерении оптической плотности окрашенного комплекса увеличение абсорбционной способности при длине волны в 405 нм пропорционально активности общей кислой фосфотазы в образце. Простатическая кислая фосфатаза может быть блокирована тартратом и может быть определена косвенно (через непростатическую кислую фосфатазу) путем вычисления разности в активности общей кислой фосфатазы и активности фосфатазы, оставшейся после подавления простатической кислой фосфатазы ингибитором (тартратом).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для исследования были использованы сухие образцы спермы, слюны, крови и влагалищных выделений на носителе (стерильной марле), из которых готовили навески по 15 мг. Исследуемый материал помещали в пробирки и заливали по 0,2 мл дистиллированной воды с рН 7,6 для экстрагирования в течение 20 ч при 4 °С. Затем вытяжки из объектов, как неразведенные, так и в разведениях 1:101:100 000, помещали по 20 мкл в дубликате в лунки 96-луночного полистирольного планшета, добавляли в одни по 200 мкл субстратной смеси (в разведении 1:1 буферным раствором), а в другие лунки - по 200 мкл субстрата, разведенного раствором тартрата, и инкубировали в тер-мошейкере «ST-3» в течение 5 мин при 200 об./мин и 37 °С. Оптическую плотность растворов измеряли фотометрически при длине волны 405 нм двукратно на ридере «SUNRISE» фирмы TECAN с трехминутным интервалом. В качестве положительного контроля использовали образец спермы в разведении 1:10, отрицательными контролями служили неразведенные экстракты из аналогичных навесок стерильной марли. Расчеты проводили по трем измерениям с помощью раздела «Описательная статистика» в приложении «Excel» для Microsoft Office.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты исследования приведены в таблице.

В ходе исследований было установлено, что при проведении измерений положительный результат был получен при реакции с субстратом с экстрактами из пятен сухой человеческой спермы в разведениях от 1:10 до 1:10 000 (оптическая плотность - от 2,123 до 0,195). В разведении 1:100 000 был получен отрицательный результат. Следовательно, разведение 1:10 000 следует считать порогом чувствительности данной реакции. При реакции с тартратом, смешанным с субстратом, в разведениях 1:10 и 1:100 было отмечено достаточно выраженное, но далеко не полное ингибирование простатической кислой фосфатазы (оптическая плотность - 1,316 и 0,231), а в разведениях 1: 1000 и 1:10 000 наблюдалось практически полное ее ингибирование (оптическая плотность - 0,042 и 0,023), что указыва-

ет на простатическое происхождение кислой фосфатазы. При реакции с неразведенными экстрактами из пятен сухой человеческой крови и с этими же экстрактами в разведении от 1:10 было отмечено выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность - от 1,235 до 0,091), при этом при реакции с тартратом, смешанным с субстратом, в данных экстрактах был отмечен фактически такой же уровень кислой фосфатазы, без его снижения (оптическая плотность - 1,035 и 0,098). Это свидетельствует о том, что данная фосфатаза имеет непростатическое происхождение. В разведении 1:100 кислая фосфатаза не выявлялась. С цельными экстрактами из пятен сухого человеческого влагалищного секрета отмечалось выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность - от 0,257), при этом при реакции с тартратом в цельном экстракте наблюдалось практически полное ее ингибирование (оптическая плотность - 0,036), что указывает на простатическое происхождение фосфатазы. В разведении 1:100 кислая фосфатаза не выявлялась.

С цельным экстрактом из сухой человеческой слюны при реакции с субстратом наблюдалось незначительное выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность -0,099), которая достаточно сильно ингибировалась при реакции с тартратом (оптическая плотность - 0,022). В разведениях 1:10 и 1:100 выявления кислой фосфатазы не наблюдалось. С цельным экстрактом из стерильной марли при реакции с субстратом отмечалось очень низкое значение оптической плотности (0,002).

Из результатов проведенных экспериментов следует, что наиболее целесообразным является использование для экспертных целей водных экстрактов из тампонов с содержимым влагалища либо из пятен на вещественных доказательствах в разведении 1:10, так как кислая фосфа-таза хорошо выявляется в водных растворах пятен сухой спермы человека в разведениях 1:1000 и 1:10 000. В экстрактах же из сухих влагалищных выделений, сухой крови и сухой слюны человека при разведении 1:10 кислая фосфатаза практически не выявляется. Мы считаем, что экстракты из сухой слюны человека и экстракты из сухих влагалищных выделений человека в разведении 1:10 целесообразно использовать в качестве отрицательных контролей. При высокой концентрации спермы в исследуемом материале (разведения экстрактов из сухой спермы человека 1:10 и 1:100) наблюдается не полное, а лишь частичное ингибирование простатической фосфатазы тартра-том. Следовательно, концентрированные вытяжки из пятен на вещественных доказательствах либо из тампонов с содержимым влагалища следует разводить в 10 или в 100 раз, а затем исследовать повторно как с ингибитором, так и без него, чтобы подтвердить простатическое происхождение фосфатазы в исследуемых пятнах. При проведении экспертизы вещественных доказательств в качестве положительного контроля целесообразно, по нашему мнению, использовать экстракты из сухой спермы человека в разведении 1:10 и 1:100.

Проведение практических экспертиз показало, что важным моментом являются числовые значения отрицатель-

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

ных контролей. Они не должны быть слишком низкими во избежание ложно-положительных результатов. Напротив, при исследовании вещественных доказательств, подвергшихся резким гнилостным изменениям, целесообразно увеличить числовые значения отрицательных контролей. Следует отметить, что при высоком содержании кислой фосфатазы в пятнах на вещественных доказательств следует разводить вытяжки перед инги-бицией тартратом таким образом, чтобы числовое значение оптической плотности в них было не более 0,5-0,6. Это связано с тем, что применяемый нами набор предназначен для сыворотки крови и не рассчитан на столь высокие концентрации кислой фосфатазы, которые отмечаются в сперме. При наличии простатической кислой фосфатазы в объектах исследования следует первоначально использовать морфологические методы установления наличия спермы. При отсутствии сперматозоидов в исследуемых объектах целесообразно будет использовать методики, направленные на обнаружение простатического специфического антигена человека (ПСА).

ВЫВОДЫ

Полученные результаты свидетельствуют, что при исследовании вещественных доказательств целесообразно использовать следующий порядок их изучения для установления наличия на них спермы:

1) вырезки и смывы с вещественных доказательств помещают в пробирки и заливают с небольшим избытком дистиллированной водой с рН 7,2-7,6 и экстрагируют в течение 20 часов при 4 °С;

2) устанавливают наличие общей кислой фосфатазы колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test», а также с помощью термошейкера «ST-3» и ридера «SUNRISE»;

3) отделяют простатическую кислую фосфатазу от непростатической с помощью тест-набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test»;

4) вытяжку отсасывают и переносят в другие пробирки, при длительном хранении помещают в условия бытового холодильника;

5) фрагменты исследуемого материала заливают 10 %-м раствором аммиака, а затем исследуют методом концентрированного извлечения сперматозоидов;

6) в случае отрицательного результата исследуют сохраненную ранее вытяжку на наличие простатического антигена человека (ПСА) с помощью диагностического набора «ПСА общий-ИФА-БЕСТ Т-8458», а также с помощью термошейкера «ST-3», автоматического вошера «COLUMBUS pro» и ридера «SUNRISE».

При таком ходе исследований можно добиться наибольшей рациональности и эффективности при получе-

Зависимость оптической плотности, измеренной посредством ридера "SUNRISE", от разведения экстрактов из сухой спермы, слюны, крови и влагалищных выделений человека

Исследуемый образец Разведения Значение оптической плотности

Сперма субстрат тартрат

1:10 1:100 1:1000 1:10000 1:100000 2,123±0,099 0,960±0,044 0,414±0,019 0,195±0,043 0,041 ±0,003 1,316±0,163 0,231 ±0,059 0,042±0,013 0,023±0,002 0,014±0,001

Слюна Цельный экстракт 1:10 1:100 0,099±0,12 0,15±0,003 0,013±0,003 0,022±0,002 0,016±0,002 0,013±0,001

Влагалищный секрет Цельный экстракт 1:10 1:100 0,257±0,031 0,015±0,005 0,012±0,001 0,036±0,003 0,005±0,001 0,014±0,001

Кровь Цельный экстракт 1:10 1:100 1,235±0,015 0,091 ±0,005 0,0 №0,002 1,035±0,008 0,098±0,002 0,025±0,001

Стерильная марля Цельный экстракт Субстрат

0,002±0,001

нии результатов, кроме того, значительно снизить трудозатраты. В случае азооспермии и олигозооспермии установление наличия ПСА в следах на вещественных доказательствах позволяет доказательно установить в них наличие спермы.

Таким образом, метод выявления общей кислой фосфатазы, а также отделения простатической кислой фосфатазы от общей в пятнах на вещественных доказательствах колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test» для сыворотки крови является специфичным и высокочувствительным методом с объективной регистрацией и компьютерной обработкой результатов. В отличие от других ранее применяемых методик, такое исследование позволяет отделить общую кислую фосфатазу от простатической.

Данная методика может быть успешно использована в экспертной практике.

ЛИТЕРАТУРА

1. Барсегянц, Л. О. Судебно-медицинская экспертиза вещественных доказательств / Л. О. Барсегянц // Судебная медицина / под ред. проф. В. В. Томилина. - М., 1997. - С. 241-278.

2. Зарецкая, Е. Ф. Установление наличия спермы в пятнах реакцией ингибиции кислой фосфатазы тартратом / Е. Ф. Зарецкая, Н. Н. Ачеркан // Судебно-мед. экспертиза. - 1980. - Т. 23. - № 4. - С. 33-3S.

3. Зингерман, М. Я. Исследование изоферментов кислой фос-фотазы в пятнах спермы / М. Я. Зингерман // Седьмая республиканская (расширенная) науч.-практ. конф. судебно-мед. экспертов. -Петрозаводск, 1973. - С. 112-114.

4. Стегнова, Т. В. Установление наличия и групповой принадлежности спермы в смешанных пятнах методом изоэлектрическо-го фокусирования / Т. В. Стегнова, Л. С. Иоанесян, Т. Ф. Лозинский // Судебно-мед. экспертиза. - 1990. - Т. 33. - № 2. - С. 33-36.

5. Томилин, В. В. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств / В. В. Томилин, Л. О. Барсегянц, А. С. Гладких. - М. : Медицина, 1989. - 303 с.

6. Туманов, А. К. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств / А. К. Туманов. - М. : Госюриздат, 1961. - S76 с.

7. Туманов, А. К. Основы судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств / А. К. Туманов. - М. : Медицина, 197S. - 407 с.

8. Чарный, В. И. Об ориентировочном значении количественной реакции на кислую фосфатазу при установлении наличия спер-

мы в пятнах / В. И. Чарный // Судебно-мед. экспертиза. - 1965. -Т. 8. - № 2. - С. 18-22.

9. Чарный, В. И. О применении количественной реакции на кислую фосфатазу при исследовании семенных пятен / В. И. Чарный // Актуальные вопросы судебной медицины и криминалистики. - Л., 1966. - С. 141-142.

10. Чарный, В. И. Судебно-медицинская экспертиза вещественных доказательств биологическими методами / В. И. Чарный // Судебная медицина / под ред. проф. А. А. Матышева. - СПб. : Гиппократ, 1998. - С. 435-468.

11. Chiasson, D. A. Interpretation of postmortem vaginal acid phosphatase determinations / D. A. Chiasson [et al] // Am. J. Forensic Med. Pathol. - 1994. - Vol. 15- № 3. - P. 242-246.

12. Divall, G. B. The application of electrophoretic techniques in field of criminology / G. B. Divall // Electrophoresis. - 1985. - Vol. 6. -P. 249-250.

13. Kind, S. S. Methods in Forensic Science / S. S. Kind // Interscience. - 1964. - Vol. 3. - P. 266-288.

14. Londquist, P. Function of prostatic phosphotase / F. Londquist // Nature. - 1946. - Vol. 158. - P. 710-711.

15. Steinman, G. Rapid spot test for identifying suspected semen specimens / G. Steinman // Forensic Science Internetional. - 1995. -Vol. 72. - № 3. - P. 191-197.

РЕЗЮМЕ

В. Л. Сидоров, О. Д. Ягмуров

О возможностях установления наличия кислой фосфата-зы в пятнах спермы на вещественных доказательствах колориметрическим методом с использованием тест-набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test»

Работа посвящена изучению методики выявления общей кислой фосфатазы, а также отделения простатической кислой фосфа-тазы от общей в пятнах на вещественных доказательствах колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test» для сыворотки крови. В ходе исследований было установлено, что общая кислая фос-фатаза выявляется в реакции с экстрактами из пятен сухой спермы в разведении 1:10 ООО. Проведенное исследование показало, что предлагаемый метод исследования является специфическим и высокочувствительным. Метод может быть использован в судебно-медицинской практике.

Ключевые слова: вещественные доказательства, кислая фос-фатаза.

SÜMMARY

V. L Sidorou, О. D. Yagmurou

Eliciting of acid phosphatase traces in the sperm spots on material evidences by a colorimetric method and «Acid Phosphatase Colorimetric Humazym Test»

The work deals with methods of identification of acid phosphatase in the stains on material evidences and isolation of prostatic acid phosphatase. Colorimetric method and a diagnostic set «Acid Phosphatase Colorimetric Humazym Test» were used for the purpose. Our investigations have shown that acid phosphatase can be revealed in the reaction with extracts from spots of dry human sperm in the dilution 1:10 000. The method used is rather specific and highly sensitive. The method is applicable in medicolegal practice.

Key words: material evidences, acid phosphatase.

© И. Г. Кайсаров, Е. Ю. Калинина, О. Д. Ягмуров, 2010 г. УДК 616.831-001-053-079.6

И. Г. Кайсаров, Е. Ю. Калинина, О. Д. Ягмуров

ОСОБЕННОСТИ И СЛОЖНОСТИ СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ОЦЕНКИ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ У ДЕТЕЙ

Кафедры судебной медицины и правоведения Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И. П. Павлова; кафедра судебной медицины и правоведения Оренбургской государственной медицинской академии

ВВЕДЕНИЕ

Непрерывный технический прогресс, увеличение количества транспорта, масштабы современного строительства высотных домов способствуют увеличению количества случаев черепно-мозговых травм (ЧМТ), среди которых значительна доля пострадавших детей. Статистические данные свидетельствуют о том, что повреждения черепа и головного мозга занимают 40-50 % среди всех травм детей раннего и младшего возраста. В этой связи вопрос судебно-медицинской дифференциальной диагностики ЧМТ у детей становится весьма актуальным.

В то же время в доступной литературе данной проблеме посвящены немногочисленные, нередко противоречивые исследования. В связи с вышеизложенным разработка четких диагностических критериев, значимых для судебных медиков и врачей-неврологов, осуществляющих осмотр ребенка в промежуточном периоде ЧМТ, представляется весьма важной задачей, решение которой способствует обоснованности аргументации экспертных выводов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ детского травматизма показывает, что наиболее часто повреждения им причиняются при транспортных происшествиях (37,1 %) и бытовых конфликтах (62,9 %). Случаи, связанные с транспортом, в подавляющем большинстве представлены автомобильной травмой (97,2 %), среди которой преобладает наезд автомобиля на пешехода (приблизительно 70 %), примерно 30 % составляет травма, полученная в салоне автомобиля. Среди пострадавших чаще встречаются мальчики дошкольного и младшего школьного возраста, для которых характерна повышенная двигательная активность при отсутствии точной координации и ощущения опасности, в частности, высоты, а также при ситуациях на транспортных магистралях. Известно, что на сегодняшний день во всех разделах практической медицины дети и подростки выделены