АНТИБАКТЕРИАЛЬНАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ БАКТЕРИОФАГИ
ANTIBACTERIAL PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR ORAL USE CONTAINING BACTERIOPHAGES

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, биотехнологии и медицине, а именно к лекарственным средствам, содержащим бактериофаги.
Рост числа заболеваний инфекционной природы, вызванных ассоциациями условно-патогенных бактерий, требует создания препаратов с широким спектром антибактериальной активности. Таким требованиям отвечают комплексные препараты бактериофагов.
Традиционной формой выпуска бактериофагов является жидкий препарат во флаконах за исключением таблетированных фагов кишечной группы. Переход на выпуск капсулированных препаратов диктуется необходимостью стабилизации литической активности фагов, локализации и пролонгации эффекта, а также для придания препарату лучшего товарного вида, для уменьшения объемов при транспортировке и хранении препарата.
В качестве прототипа принято описание изобретения к патенту №2410084, МПК A61K 9/20, A61K 35/74, A61K 47/02, A61K 47/06, А61Р 1/00 «Фармацевтическая композиция на основе Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) или бактериофага сальмонеллезного и способ ее получения», опубл. 27.01.2011.

-3
В упомянутом описании представлена фармацевтическая композиция, содержащая бактериофаг (Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный)) или бактериофаг сальмонеллезный гр. A, B, C, D, E), высушенные с наполнителями (метилцеллюлоза, лактоза, кальция карбонат, кальция или магния стеарат), в виде желудочно-резистентных таблеток без оболочки, отличающаяся тем, что соотношение бактериофага и наполнителей составляет от 1:1 до 1,25:1, а композиция содержит дополнительно сорбит и натрия альгинат, при этом одна таблетка массой 0,16-0,2 г содержит бактериофаги с титром по Аппельману не менее 10 и компоненты в следующем соотношении, мас. %:
Метилцеллюлоза
0,5÷4,0
Лактоза
5,0÷25,0
Сорбит
5,0÷15,0
Кальция карбонат
55,0÷75,0
Натрия альгинат
5,0÷12,0
Кальция или магния стеарат
0,25÷1,0

Недостатками известного технического решения фармацевтической композиции в виде таблеток без оболочки на основе Секстафага (Пиобактериофага поливалентного) или бактериофага сальмонеллезного являются низкая распадаемость в воде очищенной и достаточно низкая биологическая доступность.
Задача, решаемая изобретением, состоит в увеличении биологической доступности антибактериальной фармацевтической композиции для перорального применения, содержащей бактериофаги, и расширении сферы ее применения.
Технический результат, обеспечивающий решение указанной задачи, состоит в улучшении распадаемости в воде очищенной, в увеличении биологической доступности и в расширении спектра фармакологического действия фармацевтической композиции для профилактики и лечения заболеваний, вызванных микроорганизмами из ряда патогенных и условно-патогенных бактерий: Staphylococcus (S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus, S. cohnii), Streptococcus (S. pneumoniae, S. haemolyticus, S. agalactiae, S. pyogenes,), Enterococcus (E. faecalis, E. faecium), Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis), Pseudomonas aeruginosa, энтеропатогенные Escherichia coli различных серогрупп, Klebsiella pneumoniae, Salmonella групп ABCDE (гр. A - S. paratyphi А; гр. В - S. paratyphi B, S. typhimurium, S. heidelberg; гр. С - S. newport. S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; гр. D - S. enteritidis, S. dublin; гр. E - S. anatum, S. newlands), Shigella (Sh. flexneri 1, 2, 3, 4 и 6 сероваров, Sh. sonnei).

Указанный технический результат достигается тем, что обладающая антибактериальной активностью фармацевтическая композиция для перорального применения, содержащая бактериофаги: Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный), или Интести-бактериофаг, или сальмонеллезный групп A, B, C, D, E, или дизентерийный поливалентный, согласно изобретению содержит бактериофаг в количестве 1,5-3 масс. %, в качестве целевых добавок уменьшенное количество натрия альгината 0,5÷4,5 масс. % и дополнительно содержит пектин, композиция расфасована в твердые капсулы при следующем соотношении компонентов, масс. %:
Бактериофаг Секстафаг<sup></sup> (Пиобактериофаг
поливалентный), или Интести-бактериофаг, или
Бактериофаг сальмонеллезный групп ABCDE, или
Бактериофаг дизентерийный поливалентный
1,5÷3,0
Метилцеллюлоза
0,5÷5,0
Лактоза
5,0÷35,0
Сорбит
2,5÷5,0
Кальция карбонат
50,0÷75,0
Натрия альгинат
0,5÷4,5
Пектин
0,5÷15,0
Кальция или магния стеарат
0,25÷1,0
При этом совокупность отличительных признаков обеспечивает улучшение показателя распадаемости в воде очищенной, увеличение биологической доступности и расширение спектра фармакологического действия фармацевтической композиции для профилактики и лечения заболеваний, вызванных микроорганизмами из ряда патогенных и условно-патогенных бактерий.
Новые признаки состоят в наличии бактериофага в количестве 1,5-3 масс. %, натрия альгината в количестве 0,5÷4,5 масс. % и дополнительно пектина 0,5÷15,0 масс. %, при следующем соотношении компонентов, масс. %:
Бактериофаг Секстафаг<sup></sup> (Пиобактериофаг
поливалентный), или Интести-бактериофаг, или
Бактериофаг сальмонеллезный групп ABCDE, или
Бактериофаг дизентерийный поливалентный
1,5÷3,0
Метилцеллюлоза
0,5÷5,0
Лактоза
5,0÷35,0
Сорбит
2,5÷5,0
Кальция карбонат
50,0÷75,0
Натрия альгинат
0,5÷4,5
Пектин
0,5÷15,0
Кальция или магния стеарат
0,25÷1,0
Основным показателем качества лекарственных препаратов бактериофагов является биологическая доступность, которая зависит от показателя распадаемости в воде очищенной лекарственных форм бактериофагов, а также от стабильности бактериофагов в кислой среде желудочного сока.
Проведен фармацевтический тест для определения биологической доступности бактериофагов по показателю распадаемости в воде очищенной фармацевтических композиций, полученных по прототипу в виде таблеток, а также полученных по предлагаемому изобретению в виде капсул. У фармацевтической композиции с комплексным поливалентным Секстафагом, полученной по прототипу (патент №2410084, опубл. 27.01.2011) в виде таблеток, показатель распадаемости в воде очищенной составляет 48,5±3,4 мин (норма по ГФ XIII издания не более 15 мин). У фармацевтической композиции с комплексным поливалентным Секстафагом, полученной по предлагаемому изобретению в виде капсул, показатель распадаемости в воде очищенной составляет 16,8±1,3 мин (норма по ГФ XIII издания не более 30 мин). Установлено, что для композиции, полученной по предлагаемому изобретению, распадаемость выше в 2,9 раза в сравнении с композицией, полученной согласно прототипу, что говорит о повышении биологической доступности препаратов бактериофагов в предлагаемом изобретении (таблица 1).
Таким образом, предлагаемая фармацевтическая композиция в виде твердых капсул для перорального применения, содержащая бактериофаги, позволила создать препарат с улучшенными качественными характеристиками, соответствующими по показателю «Распадаемость» требованиям ГФ XIII издания.
-3
Изучение стабильности фармацевтических композиций, полученных по прототипу, а также полученных по предлагаемому изобретению, показало, что желудочная резистентность бактериофагов в кислой среде выше в фармацевтической композиции предлагаемого изобретения, чем у фармацевтической композиции, полученной по прототипу. Показатель литической активности для композиции по предлагаемому изобретению сохраняется на исходном уровне (титр выше 10) после выдерживания в кислой среде в течение 1 часа, в отличие от фармацевтической композиции, полученной по прототипу (таблица 2).

* Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) представляет собой смесь стерильных очищенных фаголизатов бактерий Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, энтеропатогенных Escherichia coli различных серогрупп, Klebsiella pneumoniae, или
** Интести-бактериофаг поливалентный представляет собой смесь стерильных очищенных фаголизатов бактерий Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, энтеропатогенных Escherichia coli различных серогрупп, Salmonella групп A, B, C, D, Shigella (Sh. flexneri 1, 2, 3, 4, 6 сероваров, Sh. sonnei), или
*** Бактериофаг сальмонеллезный групп A, B, C, D, E представляет собой смесь стерильных фильтратов фаголизатов наиболее распространенных сальмонелл (гр. А - S. paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В, S. typhimurium, S. heidelberg; гр. С - S. newport. S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; гр. D - S. dublin, S. enteritidis; гр. E - S. anatum, S. newlands), или
**** Бактериофаг дизентерийный поливалентный представляет собой смесь стерильных фильтратов фаголизатов бактерий Shigella (Sh. flexneri 1, 2, 3,4 и 6 сероваров, Sh. sonnei).
Таким образом, фармацевтическая композиция предлагаемого состава обеспечивает увеличение биологической доступности препаратов бактериофагов.
Фармакокинетические исследования фармацевтических композиций, полученных по прототипу, а также полученных по предлагаемому изобретению, относительно жидкой формы бактериофага - раствор для приема внутрь, местного и наружного применения, показали лучшую биологическую доступность бактериофагов из композиции, полученной по предлагаемому изобретению. После однократного перорального введения белым мышам указанных фармацевтических композиций по результатам анализа биологических жидкостей (сывороток крови и мочи) лабораторных животных установлено, что относительная биологическая доступность у препарата по предлагаемому изобретению в 1,7÷1,8 раза выше, чем у препарата, полученного согласно прототипу (таблица 3).
Примечание:
мах
С - максимальная концентрация фага в биологическом материале животного;
БОЕ/мл или БОЕ/г - количество бляшкообразующих единиц в 1 мл или 1 г биологического материала животного;
max
T, ч - время достижения максимальной концентрации бактериофагов в биологическом материале животного;
0,
Т ч - время полного выведения фага из организма животного;
0-8
0-8
AUC - площадь под фармакокинетической кривой, начиная с нулевого значения времени до времени отбора образца биологического материала через 8 ч после введения препарата; расчет площади под фармакокинетической кривой (AUC) производился по методу обычных трапеций;
композиция
жидкая форма
f - степень всасывания (относительная биодоступность); параметр f рассчитывался по формуле: f=AUC/AUC.
Таким образом, результаты фармакокинетических исследований подтверждают более высокую биологическую доступность бактериофагов по предлагаемому изобретению, чем по прототипу.
Предлагаемую фармацевтическую композицию получают следующим образом.
Пример 1. Получение фармацевтической композиции, содержащей бактериофаги, для перорального применения.
1) Комплексный поливалентный бактериофаг Секстафаг (Пиобактериофаг поливалентный) представляет собой смесь стерильных очищенных фаголизатов бактерий Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, энтеропатогенных Escherichia coli различных серогрупп, Klebsiella pneumoniae или
2) Комплексный поливалентный бактериофаг Интести-бактериофаг представляет собой смесь стерильных очищенных фаголизатов бактерий Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, энтеропатогенных Escherichia coli различных серогрупп, Salmonella групп A, B, C, D, Shigella (Sh. flexneri 1, 2, 3, 4, 6 сероваров, Sh. sonnei), или
3) Бактериофаг сальмонеллезный групп A, B, C, D, E представляет собой смесь стерильных фильтратов фаголизатов наиболее распространенных сальмонелл (гр. А - S. paratyphi А; гр. В - S. paratyphi В, S. typhimurium, S. heidelberg; гр. С - S. newport. S. choleraesuis, S. oranienburg, S. infantis; гр. D - S. dublin, S. enteritidis; гр. E - S. anatum, S. newlands), или
4) Бактериофаг дизентерийный поливалентный представляет собой смесь стерильных фильтратов фаголизатов бактерий Shigella (Sh. flexneri 1, 2, 3, 4 и 6 сероваров, Sh. sonnei).
-5
-6
Стерильные фильтраты фаголизатов комплексных поливалентных бактериофагов с титром не менее 10 концентрируют в 10-100 раз с помощью мембранной ультрафильтрации до титра по Аппельману не менее 10. Затем полученные концентраты подвергают стерилизующей фильтрации через микропористые мембраны (капсулы) с размером пор 0,45; 0,2 мкм и используют для приготовления фармацевтической композиции. Целевые добавки перед введением в бактериофаг предварительно стерилизуют в сушильно-стерилизационном шкафу.
К концентрированному бактериофагу добавляют смесь метилцеллюлозы 3,0 г, сорбита 5,0 г и лактозы 30,0 г. После получения гомогенной гелеобразной массы добавляют смесь кальция карбоната 52,0 г, натрия альгината 4,0 г и пектина 2,0 г. После гомогенизации полученную густую пастообразную массу выкладывают в кассеты, накрывают стерильной тканью и высушивают в сублимационной установке до влажности 1-4%. Сухую массу гранулируют, опудривают стерильной массой целевых добавок (вспомогательных антифрикционных веществ - 1,0 г магния стеарата (или кальция стеарат)), тщательно перемешивают и расфасовывают в твердые капсулы.
Пример 2. Получение фармацевтической композиции, содержащей бактериофаги, для перорального применения.
Проводят подготовку бактериофагов и целевых добавок для сушки и опудривания, как описано в примере 1. К концентрированному бактериофагу добавляют смесь метилцеллюлозы 5,0 г, сорбита 3,0 г и лактозы 35,0 г. После получения гомогенной гелеобразной массы добавляют смесь кальция карбоната 50,0 г, натрия альгината 4,5 г и пектина 0,5 г. После гомогенизации полученную густую пастообразную массу выкладывают в кассеты, накрывают стерильной тканью и высушивают в сублимационной установке до влажности 1-4%. Сухую массу гранулируют, опудривают стерильной массой целевых добавок (вспомогательных антифрикционных веществ - 0,25 г магния стеарата (или кальция стеарат)), тщательно перемешивают и расфасовывают в твердые капсулы.
Пример 3. Получение фармацевтической композиции, содержащей бактериофаги, для перорального применения.
Проводят подготовку бактериофагов и целевых добавок для сушки и опудривания, как описано в примере 1. К концентрированному бактериофагу добавляют смесь метилцеллюлозы 0,5 г, сорбита 2,5 г и лактозы 5,0 г. После получения гомогенной гелеобразной массы добавляют смесь кальция карбоната 75,0 г, натрия альгината 0,5 г и пектина 15,0 г. После гомогенизации полученную густую пастообразную массу выкладывают в кассеты, накрывают стерильной тканью и высушивают в сублимационной установке до влажности 1-4%. Сухую массу гранулируют, опудривают стерильной массой целевых добавок (вспомогательных антифрикционных веществ - 0,25 г магния стеарата (или кальция стеарат)), тщательно перемешивают и расфасовывают в твердые капсулы.