Значение иммуноферментного определения содержания серотонина крови и ликвора в дифференциальной диагностике черепно-мозговой травмы

давлении, но в то же время ниже, чем в группе сравнения. Низкая активность каталазы в СЖ, особенно в заключительных стадиях глаукомы, может свидетельствовать о дисбалансе в работе клеточных ферментов антиоксидантной защиты (АОЗ) и об увеличении продукции пероксида водорода - аллостерического ингибитора супероксиддисмутазы.

В результате нарушается процесс утилизации супероксидного анион-радикала, что способствует образованию новых, реакционноспособных активных форм кислорода. При этом значительно повышается риск образования пероксинитрита, что нарушает ведущий молекулярный механизм регуляции тонуса сосудистой стенки, в том числе сосудов глаза.

Заключение. Проведенные исследования позволяют заключить, что у больных ПОУГ имеет место нарушение липидного обмена. Высокий уровень атерогенных липи-дов, ТБК-активных продуктов, N0 свидетельствует об активации СРО, угнетении АОЗ, модификации ЛПНП, наличии эндотелиальной дисфункции. Исследование слезной жидкости дает более значительную информацию, чем сыворотка крови, о нарушении молекулярно-приспособительных реакций и может иметь не только диагностическое, но и прогностическое значение и определять характер комплексной терапии ПОУГ. Имеет значение и тот факт, что получение для исследования СЖ является неинвазивным методом.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бунин А.Я. В кн.: Глаукома на рубеже тысячелетий: итоги и перспективы: Материалы Всероссийской науч.-практ. конф. М.; 1999: 9-12.

2. Волков В.В. Глаукома при псевдонормальном давлении. М.; 2001.

3. ЕмченкоН. Л., Цыганенко О. И., Ковалевская Т. В. Клиническая лабораторная диагностика. 1994; 6: 19-20.

4. Жабоедов Г.Д., Курилина Е.И., Петренко О.В. В кн.: Глаукома: проблемы и решения: Материалы Всероссийской науч.-практ. конф. М.; 2004: 53-5.

5. Коробейникова Э.Н. Метод. рекомендации. Челябинск; 2002.

6. КунинВ.Д., СвиринаТ.А. В кн.: Глаукома на рубеже тысячелетий: итоги и перспективы: Материалы Всероссийской науч.-практ. конф. М.; 1999: 28.

7. Курышева Н.И., Томилова И.К., Кадыкова Е.Л. и др. Вестник офтальмологии. 2001; 5: 34-7.

8. Либман Е.С., Чумаева Е.А., Шахова Е.В., Елькина Я.С. В кн.: Глаукома: проблемы и решения: Материалы Всероссийской науч.-практ.конф. М.; 2004: 430-2.

9. Нестеров А. П. Глаукома. М.; 2008.

10. Титов В.Н. Клиническая лабораторная диагностика. 2010; 2: 3-13.

11. Черных В.В. Глаукома. 2005; 4: 20-3.

12. Friedwald W.T., Levy R.I. Clin. ^ет. 1972; 18: 499-502.

13. Moreno M.C., Campanelli J., Sande P. Free Radic. Biol. Med. 2004; 6: 3803-12.

14. Polansky J. Invest.Ophthalmol. 1984; 25 (Suppl.): 122.

Поступила 09.08.12

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013

УДК 617.51-001.4-07:616.154:577.175.823]-078.33

Н.В. Селянина, Ю.В. Каракулова, О.Ю. Ненашева

значение иммуноферментного определения содержания серотонина крови и ликвора в дифференциальной диагностике черепно-мозговой травмы

Кафедра неврологии лечебного факультета им. проф. В.П. Первушина, курс клинической лабораторной диагностики при кафедре терапии и семейной медицины ФПК и ППС ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера минздравсоцразвития России

У 72 больных с черепно-мозговой травмой легкой и средней степени тяжести в остром периоде изучали содержание серотонина сыворотки крови и спинно-мозговой жидкости. Выявили повышение уровня серотонина сыворотки крови в зависимости от степени тяжести травмы, что может служить методом дифференциальной диагностики сотрясения и ушиба головного мозга.

Ключевые слова: черепно-мозговая травма, серотонин N.V. Seliyanina, Yu.V. Karakulova, O.Yu. Nenasheva

THE VALUE OF IMMUNE ENZYME TESTING OF QUALITATIVE CONTENT OF BLOOD SEROTONIN AND LIQUOR, IN DIFFERENTIATE DIAGNOSTIC OF CRANIOCEREBRAL INJURY

The .sample of 72 patients with craniocerebral injury of light and medium degree in acute period was used to study the content of .serotonin in blood .serum and spinal liquor. The increase of the level of serotonin in blood serum depending on degree of severity of trauma was established. This occurrence can be used as a technique of differential diagnostic of concussion and contusion of brain.

Key words: craniocerebral injury, serotonin

Для корреспонденции:

Селянина Наталия Васильевна, канд. мед. наук, доцент Адрес: 614016, Пермь, ул. Куйбышева, 71/1, 13 Телефон: 8-908-250-42-23 E-mail: nselyanina@mail.ru

Серотонинергическая нейромедиаторная система головного мозга является одной из активно функционирующих нейротрансмиттерных систем, принимающих участие в регуляции болевых и психовегетативных феноменов. В настоящее время выделено и

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 5, 2013

изучается около 15 видов серотониновых рецепторов, которые участвуют в регуляции сна и бодрствования, боли и терморегуляции, биоповеденческих, сексуальных и моторных реакций, когнитивных функций [1, 5, 10, 13, 14]. Доказанным фактом является снижение концентрации серотонина в сыворотке крови у больных с хроническими болевыми синдромами [3, 9], при головных болях напряжения [4], а также при некоторых заболеваниях, сопровождающихся депрессией [2, 7]. По мнению В.И. Скворцовой, низкая концентрация серотонина и его метаболитов в крови и спинномозговой жидкости у больных может быть как следствием угнетения активности серотонинергической системы, так и, напротив, отражать компенсаторное ингибирование синтеза серотонина в результате чрезмерного усиления серотонинергической передачи в мозге [7]. А. Adell и соавт. предполагают, что содержание серотонина в плазме периферической крови отражает концентрацию серотонина во внеклеточном пространстве головного мозга (включая синаптиче-ское) [11]. Результаты генетических исследований показали, что структура тромбоцитарного и мозгового серотонинового транспортера кодируется одним и тем же геном, что может быть связано с общим эмбриональным происхождением этих двух различных клеток [16]. Идентичность рецепторов тромбоцитов и серотонинергических нейронов легла в основу теории о сходстве системы тромбоциты - плазма с системой пресинаптические окончания - экстрацеллю-лярная жидкость [8, 12]. Эти факты свидетельствуют о том, что гуморальное звено представляет собой доступную и адекватную модель оценки серотониновой системы ЦНС.

Патологические изменения в остром периоде черепно-мозговой травмы (ЧМТ) складываются из первичного механического и множества вторичных механизмов повреждения вещества головного мозга, которые обусловливают сочетание общемозговой дисфункции с очаговыми симптомами. Сложность объективной оценки степени тяжести ЧМТ в 1-е сутки связана с общностью клинических проявлений, в частности общемозговых симптомов, и отсутствием четких нейровизуализационных критериев дифференциальной диагностики сотрясения головного мозга (СГМ) и ушиба головного мозга (УГМ). Л.Б. Лихтерман и соавт. описывают участие нейротрансмиттерных механизмов в процессах как формирования, так и разрешения травматического повреждения мозга [6].

Целью исследования стала оценка содержания серотонина сыворотки крови и ликвора у больных с УГМ легкой и средней степени тяжести в остром периоде ЧМТ.

Материалы и методы. Обследованы 72 больных (52 мужчины и 20 женщин) в возрасте от 18 до 62 лет (средний возраст составил 31,5±13,3 года). Всех больных разделили на 3 группы в зависимости от степени тяжести полученной закрытой ЧМТ. В 1-ю группу вошло 27 больных с СГМ, во 2-ю - 17 с УГМ легкой степени тяжести (УГМЛ), в 3-ю - 28 с УГМ средней степени тяжести (УГМС). Группу контроля составили 15 здоровых лиц, не имевших ЧМТ в анамнезе. Группы здоровых лиц и больных были сопоставимы по полу и возрасту.

Всем больным в 1-е сутки при поступлении проводили общеклиническое, неврологическое, инструментальное исследования: рентгенографию черепа, эхоэнцефалоскопию, офтальмоскопию, компьютерную томографию головного мозга. Для оценки неврологического дефицита использовали шкалу комы Глазго (ШКГ), NIHSS, Barthell. У всех обследуемых проводили психометрическое тестирование с использованием госпитальной шкалы тревоги и депрессии, теста Спилбергера-Ханина для определения уровня реактивной и личностной тревожности. Исследование содержания серотонина в сыворотке периферической крови и ликворе осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием набора IBL Serotonin ELISA. У больного утром натощак забирали 5 мл крови из вены в пластиковую пробирку. Сыворотку центрифугировали при 1000 оборотах в течение 10 мин. Отделенную сыворотку хранили при -20°С до постановки метода. Набор (IBL) Serotonin ELISA основан на твердофазном конкурентном варианте ИФА. На поверхности лунок планшета (на твердой фазе) иммобилизованы молекулы антигена. Молекулы ацилированного серотонина, содержащиеся в стандартах, контролях и исследуемых образцах, и молекулы, иммобилизованные на твердой фазе, конкурируют за ограниченное количество центров связывания специфических антител. После того как реакция связывания достигнет равновесия, не связавшиеся с твердой фазой антигены и комплексы антиген-антитело удаляют промывкой. Антитела, связавшиеся с иммобилизованным на твердой фазе антигеном, выявляют с помощью конъюганта - антител к IgG кролика, меченных перок-сидазой. В качестве субстрата используют тетраметил-бензидин. Интенсивность цветовой реакции измеряют при длине волны 450 нм. Количество серотонина в исследуемых образцах рассчитывают по калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям в стандартах, и выражают в нг/мл [15].

Статистическую обработку результатов проводили при помощи пакета прикладных программ Statistica 6.0 с использованием описательной статистики (определение выборочного среднего (М) и среднего квадратичного отклонения (о)), непараметрических методов (сопоставление независимых групп с использованием критерия Манна-Уитни). Анализ зависимостей осуществляли с помощью рангового коэффициента корреляции (r) Спирмена. При p < 0,05 различия считали достоверными.

Результаты и обсуждение. Больные предъявляли жалобы, типичные для острого периода ЧМТ, при клинико-неврологическом обследовании у большинства пациентов с УГМ выявляли очаговые неврологические и менингеальные синдромы. При исследовании степени сознания по ШКГ выявили, что уровень сознания у пациентов с УГМ (14,3±1,8 балла) статистически не отличался от такового у больных с СГМ (15±0,8 балла). Средний балл по шкале NIHSS 2,55±1,88. Уровень статистической значимости различий при оценке неврологического статуса между группой СГМ (0,88±0,8 балла) и УГМЛ (3,08±0,9 балла) составил р=0,0001, а между больными с УГМЛ и УГМС (4,3±1,3 балла) - р=0,009. Степень инва-лидизации по шкале Barthell оказалась достоверно

(р=0,032) выше у пациентов с УГМЛ (97,5±6,2 балла), чем у больных с СГМ (100 баллов); у больных с УГМС 88,46±15,02 балла (р=0,003 по отношению к СГМ и р=0,04 по отношению к УГМЛ).

Средние значения тревоги и депрессии по госпитальной шкале в группе СГМ составили 5,37±3,18 и 3,78±3,03 балла соответственно, в группе УГМЛ - 4,83+4,36 и 4,83+3,27 балла, у больных с УГМС -6,18+4,02 и 5,68+4,12 балла. Данные показатели не выявили статистической значимости различий в группах и по отношению к таковым в контроле. По опроснику Спилбергера-Ханина в большинстве случаев регистрировали умеренную реактивную и легкую личностную тревожность. Среднее значение реактивной тревожности у больных с СГМ составило 44,7±9,78 балла, с УГМЛ - 45,18+14,12 балла, с УГМС - 47,95+9,64 балла, что значимо (р<0,05) больше, чем в контроле (32,5±3,2 балла). Показатели личностной тревожности статистически не отличались (р > 0,05) от контрольных (32,7±3,8 балла), а также между таковыми в группах ЧМТ, составив в группе СГМ 38,74±8,86 балла, УГМЛ 40,09+9,17 балла, УГМС 40,95+10,41 балла.

При изучении содержания сывороточного серото-нина у больных с различной степенью тяжести ЧМТ выявили представляющие интерес закономерности. Уровень серотонина сыворотки крови у больных СГМ составил 148,90±59,57 нг/мл, что не отличается (р > 0,05) от показателя в контрольной группе (187,2±28,9 нг/мл). Концентрация сывороточного серотонина у больных с УГМЛ составила 288,63±57,88 нг/мл, что достоверно (р=0,049) превышает показатель у больных с СГМ и здоровых лиц. У больных с УГМС показатель исследуемого нейромедиатора увеличился до 331,81±77,14 нг/мл, что достоверно (р = 0,029) выше, чем у больных с СГМ. При проведении корреляционного анализа выявили зависимость содержания серотонина сыворотки крови от вида ЗЧМТ (г=0,35, р=0,02).

Содержание серотонина ликвора у больных с УГМ составило в среднем 12,08±9,6 нг/мл без статистической разницы между таковым у пациентов с УГМЛ и УГМС. Отметили обратную линейную корреляционную зависимость уровня серотонина ликвора и сывороточного серотонина (г =-0,8, р=0,00001), что отражает взаимосвязь церебрального и гуморального звена серотонинергической системы при ЧМТ.

Заключение. Высокую концентрацию гуморального серотонина при УГМ можно считать косвенным маркером активности нейрорегенераторных механизмов и объяснить участием указанного нейромедиатора в процессах нейрогенеза, столь необходимых при повреждении головного мозга. Тенденция к снижению уровня ликворного серотонина при нарастании тяжести УГМ и степени повреждения головного мозга свидетельствует, вероятно, о повышении использования серо-тонина клетками мозга для восполнения нейрореге-нераторного потенциала. Обратные взаимоотношения содержания серотонина кровь-ликвор могут быть объяснены нарушением проницаемости гематоэнцефали-ческого барьера в остром периоде ЧМТ. Степень выраженности очаговых неврологических симптомов, а также психоэмоциональной дисфункции, характерной для больных в остром периоде ЧМТ легкой и средней степени тяжести, не зависит от содержания серотонина

плазмы и ликвора. Уровень серотонина сыворотки крови может служить диагностическим маркером степени тяжести ЧМТ и применяться для дифференциальной диагностики СГМ и УГМ (патент на изобретение № 2440581 "Способ дифференциальной диагностики сотрясения и ушиба головного мозга").

В заключение необходимо подчеркнуть, что разработка концептуальной модели участия серотони-новой системы, в частности ее тканевого (церебрального, ликворного) и гуморального звена периферической крови в процессах формирования и разрешения травматического повреждения мозга, позволит более достоверно судить о состоянии центральных нейро-трансмиттерных систем головного мозга, а также будет способствовать инновационным подходам для выработки терапевтических стратегий в остром периоде ЧМТ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Болевые синдромы в неврологической практике. А.М. Вейн, Т.Г. Вознесенская, А.Б. Данилов и др. М.: МЕДпресс-информ; 2001.

2. Дмитриева Т.Б., Дроздов А.З., Коган Б.М. Периферические показатели метаболизма серотонина при психических расстройствах. Российский психиатрический журнал. 2000; 4: 52-6.

3. КазаковаМ.С. Влияние лечебных факторов курорта «Ключи» на болевой, психовегетативный статус и гуморальный серотонин больных цервикальной дорсопатией: Дис. ... канд. мед. наук. Пермь; 2009.

4. КаракуловаЮ.В., Шутов А.А. Серотонин сыворотки крови при головных болях напряжения. Клиническая медицина. 2005; 6: 55-8.

5. Легг Н.Дж. Нейротрансмиттерные системы. М.: Медицина; 1982.

6. Лихтерман Л.Б. Неврология черепно-мозговой травмы. М.: 2009.

7. СкворцоваВ.И., КонцевойВ.А., СавинаМ.А., ПетроваЕ.А., Сер-пуховитина И.А., Шанина Т.В. Постинсультное генерализованное тревожное расстройство: соотношение с депрессией, факторы риска, влияние на восстановление утраченных функций, патогенез, лечение. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2010; 10: 3-7.

8. Ткаченко А.А., Дроздов А.З., Переногин Л.О. и др. Содержание серотонина в плазме крови и тромбоцитах и показатели захвата серотонина тромбоцитами при нарушении половой идентичности у лиц с аномальным сексуальным поведением. Российский психиатрический журнал. 1997; 3: 37-40.

9. Третьякова Е.А., Каракулова Ю.В. Клинико-биохимическое исследование механизмов формирования хронических болей в нижней части спины. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2011; 8: 58-61.

10. Файзуллина Г.И., Нургалина Э.М., Валеева Л.А. Влияние женских половых гормонов на серотониновые рецепторы головного мозга. Психофармакология и биологическая наркология. 2008; 8 (1-2): 2379-80.

11. AdellA., CeladaP., AbellanetM.T. Origin and functional role of the extra cellular serotonin in the midbrain raphe nuclei. Brain Res.Rev. 2002; 39 (2-3): 154-80.

12. Artigas F., Sarrias M.J., Martinez E. et al. Increased plasma free serotonin but unchanged platelet serotonin in bipolar patients treated chronically with lithium. Psychopharmacology (Berl.). 1989; 99(3): 328-32.

13. Garlow S.J., MusselmanD.L., Nemeroff C.B. The neurochemistry of the mood disorders. In: Neurobiology of mental illness. 1999: 348-65.

14. Jacobs B.L., Azmitia E.C. Structure and function of the brain serotonin system. Physiol. Rev. 1992; 72: 165-216.

15. KlugeH. Serotonin in platelets: Comparative analyses using new enzyme immunoassay and HPLC test kits and the traditional fluorimet-ric procedure. J. Lab. Med. 1999; 23: 360-4.

16. Kroeze W.K., Roth B.L. The molecular biology of serotonin recep-torsA therapeutic implication for the interface of mood and psychosis. Biol. Psychiatry. 1998; 44 (11): 1128-42.

Поступила 10.10.12