Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в новом средстве растительного происхождения «3 красных»

при дуоденальной язве у студентов // Тер. архив. — Т 77, № 2. — С.25-28.

11. Пушкарский С.В., Пашинский В.Г., Поветьева Т.Н. и др. Сгресс-модулирующий эффект алкалоидов АсотШш Ъаюа1ете (Капипси1асеае) при воспалении и иммобилизации // Раст. ресурсы. — 2006. — Вып. 2. — С.115-119.

12. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Пат. физиол. и экспе-рим. терапия. — 2001. — № 1. — С.29-31.

13. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2000. — 263 с.

14. Судаков К.В. Индивидуальная чувствительность к эмоциональному стрессу. — М., 1998. — 179 с.

15. ТемирбулатовР.А., СелезневЕ.И. Метод повышения ин-

Адрес для переписки:

тенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение // Лаб. дело. — 1981. — № 4. — С.209-211.

16. Чевари С., Чаба И., Секкей Й. Роль супероксиддисму-тазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лаб. дело. — 1985. - № 11. - С.678-681.

17. Юматов Е.А., Скоцеляс Ю.Г. Сравнительный анализ устойчивости функций сердечно-сосудистой системы у крыс разных линий при иммобилизации // Журн. высш. нервн. деят. - 1979. - № 2. - С.345-350.

18. Andean R.J., Anderson R.L., Linas S.L, et al. Nonoleguric acute renal failure // N.Engl. J. Med. - 1977. - Vol. 236. -P.1134.

670031 г. Улан-Удэ, ул. Бийская, 90, кв. 78; Шантанова Лариса Николаевна — заведующий лабораторией безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН

© КОРНОПОЛЬЦЕВА Т.В., БАТОМУНКУЕВ Б.Б., ЧЕХИРОВА Г.В., АСЕЕВА Т. А. - 2008

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММАРНОГО СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В НОВОМ СРЕДСТВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ «3 КРАСНЫХ»

Т.В. Корнопольцева, Б.Б. Батомункуев, Г.В. Чехирова, Т.А. Асеева

Резюме. Разработана методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в полиэкстракте сухом «3 красных», полученном из корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctorum L.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и травы мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.).

Ключевые слова: флавоноиды, растительное лекарственное средство, методика.

THE METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE SUM OF FLAVONOIDS IN THE HERBAL REMEDY «3 RED»

T.V. Komopoltseva, B.B. Batomunkuev, G.V. Chekhirova, T.A Aseeva

Summary. The method of quantitative determination of the sum of flavonoids in the novel herbal polyextract «3 red» for standartization was elaborated. This novel herbal remedy of the roots of Rubia tinctorum L., red leaves Bergenia crassifolia (L.) Fritsch and herb of Teloxys aristata (L.) Moq. is composed.

Key words: flavounoids, the method ofquantitative determination, herbal remedy.

Профилактика и лечение заболеваний почек является актуальной проблемой современной медицины, а выбор препаратов, оказывающих нефропротекторное действие, в настоящее время весьма ограничен, что определяет необходимость разработки новых эффективных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний почек.

Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются надежным ориентиром в поиске новых видов лекарственного сырья с заданным спектром фармакотерапевтического влияния. При анализе информации тибетских медицинских трактатов и изучении опыта бурятских лам выявлено 10 композиций, наиболее часто назначающихся для лечения органов мочеполовой системы, в частности, при заболеваниях почек. Одной из этих композиций является трехкомпонентный сбор под условным названием «3 красных», который входит в виде блока в состав многокомпонентных прописей, таких как «Прославленный красный», «Красный отвар-11», «Полный сбор граната» и других [2,8]. В тибетской медицине бурятских лам в состав этого сбора входят корневища и корни марены красильной (Rubia tinctorum L.), красные листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и трава мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq., syn. Chenopodium aristatum L.).

Препараты и извлечения из этих растений в научной и народной медицине используются в качестве спазмолитических и мочегонных средств [4,5,7], что

указывает на целесообразность применения данной композиции в качестве средства для профилактики и терапии заболеваний почек.

Целью настоящей работы явилась разработка методики стандартизации нефропротекторного экстракта под условным названием «3 красных».

Материалы и методы

Растительный материал — корни марены красильной приобретены в аптечной сети (ПФК «Фитофарм», рег. № 70/729/23, серия 010799); красные листья бадана толстолистного и трава мари остистой собраны в конце вегетации в пригороде Улан-Удэ в 2007 году. Сухой полиэкстракт получали методом кратной мацерации с учетом оптимальных параметров экстракции. Наличие основных групп биологически активных веществ определяли общепринятыми методами [3]. Определение потери в массе при высушивании проводили на дериватографе Netzsch 8ТА 449С (Германия). Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре Agilent-8453Е (США) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм. Метрологическую обработку результатов проводили согласно рекомендациям [3].

Результаты и обсуждение

Методом кратной мацерации с учетом оптимальных параметров экстракции получен сухой полиэкстракт. Оптимизацию процесса экстракции проводили с учетом выхода суммы экстрактивных веществ [3] и суммы флавоноидов [1]. Полиэкстракт представляет собой порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом. Гигроскопичен, комку-

ется, хорошо растворим в воде, в 50% спирте этиловом. Потеря в массе при высушивании не превышает 5%. На пяти опытных образцах потеря в массе при высушивании варьирует от 3,04 до 4,93%. Установлено, что основное удаление влаги начинается при температуре 50оС, а при 150оС происходит разложение экстракта (рис. 1).

На основании качественного фитохимического анализа в полученном полиэкстракте установлено наличие антраценпроизводных (ализарин), дубильных веществ, фенолкарбоновых кислот (кофейная и хлорогеновая), флавоноидов (рутин, кверцетин, кемпферол, лютеолин, гиперозид, апигенин). Идентификацию проводили с использованием аутентичных образцов.

При исследовании спектров поглощения спиртовых извлечений полиэкстракта «3 красных» было установлено, что максимумы спектров поглощения спиртовых растворов полиэкстракта близки к таковым ГСО цина-розида (лютеолин-7-глюкозид). При добавлении к раствору полиэкстракта раствора алюминия хлорида I максимум спектра поглощения смещался к 408 нм и был близок к максимуму спектра поглощения стандартного образца цинарозида, снятого в аналогичных условиях (рис. 2).

Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в полиэкстракте «3 красных». Около 0,3 г (точная навеска) сухого полиэкстракта растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 50 мл 70% спирта этилового и доводят объем раствора до метки тем же растворителем (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добав-

ляют 1 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят 95% спиртом этиловым до метки (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряют на спектрофотометре при длине волны 405 нм. В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят 95% спиртом этиловым до метки. Параллельно определяют оптическую плотность раствора стандартного образца цинарозида.

Суммарное содержание флавоноидов (Х, %) вычисляют по формуле:

D * mСТ* kV * 100 * 100

DCT * m * kVCT *

где D - оптическая плотность исследуемого раствора; DCT - оптическая плотность стандартного раствора цинарозида; kV - коэффициент разбавления исследуемого раствора (2500); kVCT -коэффициент разбавления цинарозида (2500); m - масса навески сбора (полиэкстракта), г; тСТ - масса навески цинарозида, г; W - потеря в массе при высушивании сбора (полиэкстракта), %.

Приготовление стандартного раствора цинарозида. Около 0,015 г (точная навеска) цинарозида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют в 10 мл 95% спирта этилового, после чего доводят объем раствора до метки тем же растворителем (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 1 мл 5% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят 95% спиртом этиловым до метки (раствор Б). В качестве раствора сравнения используют следующий раствор: 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят 95% спиртом этиловым до метки.

Расчет суммарного содержания флавоноидов можно проводить также с использованием величины удельного коэффициента поглощения цина-розида (Е1%1см 145). Различия значений, рассчитанных двумя способами, не превышают 3%.

Оценку правильности разработанной методики проводили с использованием общепринятого метода добавок [6]. Относительная ошибка методики при этом не превышала 5%. Средняя ошибка трех определений для трех образцов находится в пределах 0,92-1,67%, что свидетельствует об удовлетворительной воспроизводимости методики.

Метрологические характеристики методики представлены в таблице 1, относительная ошибка единичного определения не превышает 5%.

Таблица 1

Метрологические характеристики определения суммы флавоноидов в полиэкстракте сухом «З красных» в пересчете на цинарозид

f x S Р t Ax є.%

9 10,7 0,078 95 2,26 0,055 3,27

Суммарное содержание флавоноидов, определенное с использованием разработанной методики в 9 сериях полиэкстракта сухого, составило 9,8-10,9%. Следовательно, суммарное содержание флавоноидов в пересчете на цинарозид в полиэкстракте «3 красных» должно нормироваться — не менее 8%.

тг 1% ДСК /

Т экзо

50 100 150 200 250 300 350

Температура /°С

Рис. 1. Дериватограмма полиэкстракта сухого «3 красных», где ТГ - потеря массы, %; ДСК - теплопоглощение, мкВ/мг; 1 - эндотермическая реакция; 2 -экзотермическая реакция.

4-

3.5;

3

Рис. 2. Дифференциальные спектры поглощения ГСО цинарозида (1) и полиэкстракта сухого «3 красных» (2) в 95% спирте этиловом.

Таким образом, разработана методика количественного определения суммарного содержания флавонои-дов в пересчете на цинарозид в полиэкстракте сухом «3 красных», состоящем из корней марены красильной

ЛИТЕРАТУРА

1. Беликов В.В., Точкова Т.В. Реакция комплексообразо-вания в анализе флавоноидов // Материалы 2 Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям. — Алма-Ата, 1973. - С.168-172.

2. Большой Агинский чжор (рецептурник). Ксилограф на тибетском языке: Издание Агинского дацана. — XIX в.

- 151л.

3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. — М., 1987.

— 336 с.

(Rubia tinctorum L.), листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и травы мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.), которая может использоваться при стандартизации указанного объекта.

4. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. - СПб., 2001. - 663 с.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Т.1. - М., 1988. - 624 с.

6. Основы аналитической химии. Кн. 1 / Под ред. Ю.А.

Золотова. - М., 2002. - 494 с.

7. Федосеева Л.М. Фармакотехнологические исследования листьев бадана толстолистного: Автореф. дисс. ... канд. фарм. наук. - Пятигорск, 1988. - 20с.

8. «Чжуд-ши»: Канон тибетской медицины / Перевод с тибетского, предисл., примеч., указатели Д.Б. Дашие-ва. - М., 2001 - 766 с.

Адрес для переписки:

670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Корнополь-цева Татьяна Владимировна - к.фарм.н., н.с. лаб. медико-биологических исследований; E-mail: gchehirova@mail.ru

СЛУЧАИ ИЗ ПРАКТИКИ

© СЕЛИВЕРСТОВ П.В., КУВИН С.С. - 2008

ПОЗДНИЕ СТАДИИ РАЗВИТИЯ ДИСПЛАСТИЧЕСКИ-ДИСТРОФИЧЕСКОГО СИНДРОМА. СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ

П.В. Селиверстов, С.С. Кувин

(Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра лучевой диагностики и лучевой терапии, зав. — к.м.н., доц. А.И. Сидоров; Иркутская государственная областная детская

клиническая больница, гл. врач — В.М. Селивёрстов)

Резюме. Последовательное развитие ряда ортопедических заболеваний тазового пояса, включая пояснично-крестцовый отдел, отмеченное при длительном наблюдении и лечении более 2000 больных в возрасте от года до 16лет с проявлениями диспластически-дистрофического синдрома позволило авторам изложить особенности их диагностики, описать опыт консервативного и хирургического лечения.

Ключевые слова: спондилолистез, дети, диспластически-дистрофический синдром, лучевая диагностика, морфология, лечение.

LATE STAGES OF DEVELOPMENT OF DYSPLASTIC-DYSTROPHIC SYNDROME. WAYS OF DIAGNOSTICS AND TREATMENT

P. Seliverstov, S. Kuvin

Summary. Long-term observation and treatment more than 2000 patients aged from 1 to 16 years with manifestations of dysplastic-dystrophic syndrome and registered consecutive development of some orthopedic disorders allowed the authors to report the peculiarities of diagnostics of spondylolisthesis in children and describes the experience of conservative and surgical treatment.

Key words: spondylolisthesis, children, dysplastic-dystrophic syndrome, morphology, treatment.

Широкое распространение (до 64,0% к числу детской популяции Российской Федерации) и многообразие сочетанных проявлений ортопедической патологии у детей и подростков при диспластически-дистрофи-ческом синдроме (ДДС) с определенной возрастной последовательностью вызвали необходимость анализа патогенетической обусловленности их развития [1,3,6].

При ДДС отмечается последовательное развитие ряда ортопедических заболеваний, которые в клинической практике считаются самостоятельными нозологическими единицами. Появление этих состояний связано с возрастными особенностями формирования скелета и увеличением опорной нагрузки на ее составляю-

щие в области тазового пояса и позвоночника [2,7,9].

Большинство клиницистов считают, что деформирующие спондилезы, коксартрозы — это заболевания, на которые обречены люди среднего и старшего возраста, их невозможно радикально излечить, а тем более — предотвратить [4,5,8]. Значительные усилия и средства тратятся на сложные хирургические вмешательства. Наши наблюдения позволили проследить начальные этапы диспластически-дистрофических состояний тазового пояса, которые зарождаются в детстве, постепенно развиваясь в процессе созревания опорно-двигательной системы и увеличения нагрузки на нее в процессе жизнедеятельности, а в полной мере проявляются во