ПОЛИКОМПОНЕНТНЫЙ МЕЛАТОНИНСОДЕРЖАЩИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ РОТОВОЙ ПОЛОСТИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
MULTI-COMPONENT MELATONINE-CONTAINING PREPARATION FOR ORAL TISSUE REGENERATION AND METHOD FOR PRODUCING IT

Область техники, к которой относится изобретение
Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и медицине, а именно к способам получения биологически активного препарата, обладающего регенеринстимулирующим действием, и может быть использовано в стоматологии для ускорения восстановления тканей при воспалительных и воспалительно-деструктивных процессах.
Уровень техники
Полость рта постоянно подвергается воздействию неблагоприятных факторов (физических, химических, биологических), которые приводят к стоматологическим заболеваниям как воспалительной, так и не воспалительной природы. Особенности течения, продолжительность, исход и успех лечебно-профилактических мероприятий зависят от соотношения степени повреждения и состояния компенсаторно-приспособительных процессов, к которым относят регенерацию. При этом уровень регенерации может существенно отставать даже на фоне положительной динамики интенсивности реакций повреждения, что особенно часто прослеживается при хронических патологических процессах. В связи с этим борьба за высокий регенераторный потенциал и адекватную уровню повреждения репаративную активность тканей ротовой полости сегодня стала одной из центральных задач стоматолога.
Механизмы патогенеза процессов повреждения и регенерации единые и среди них в последнее время выделяют: иммунологический и метаболический. Ведущими звеньями в обеспечении и регуляции этих механизмов является окислительно-восстановительные, стресс-адаптивные реакции, обеспечивающие гомеостаз, характеризующий морфофункциональную полноценность ткани. При этом необходимо выделить и приоритетную роль факторов, первично определяющих высокий уровень самой пролиферативной активности тканевых элементов (антиоксиданты, клеточные метаболиты, адаптогены и прямые регуляторы клеточного деления). Следовательно, для оптимизации равновесия между повреждением и регенерацией тканей ротовой полости целесообразно, по возможности, одномоментно воздействовать, если не на все, то хотя бы на подавляющее большинство вышеперечисленных процессов и факторов этиопатогенеза. Для полного восстановления морфофункциональной полноценности тканей ротовой полости, активизации и существенного ускорения репарации требуется применение регенеринстимулирующих средств. При этом оптимальных результатов можно добиться или путем комбинации различных препаратов, обладающих полинаправленным этиопатогентическим эффектом, или путем использования инновационных комплексных этипатогенетически поликомпонетных препаратов.
Известен способ получения стоматологического геля с хлоргексидином и дибунолом для лечения воспалительных заболеваний пародонта и слизистой оболочки полости рта. Гель содержит хлоргексидина глюконат в форме 20%-ного раствора и дибунол в качестве действующих веществ, гелевую основу, включающую полиэтиленгликоль 400, глицерин, масло вазелиновое, кремофор RH-40, аэросил и воду, очищенную при определенном соотношении компонентов (см. пат. RU 2 395 292 С1, опубл. 10.06.2011 г. ). Однако препарат ограничивается в основном антибактериальным и антиоксидантным действием. Кроме того, использование сильного антисептика хлоргексидина глюконата не исключает подавление сапрофитной микрофлоры, что может приводить к снижению иммунорезистентности тканей полости рта.
Известен способ получения гелевой композиции для лечения стоматологических заболеваний, содержащей активный компонент, хлоргексидин глюконат, мукоадгезивный реагент, гелеобразующий агент и фармацевтически приемлемый разбавитель, характеризующейся тем, что в качестве активного компонента используют диклофенак в виде соли при следующем содержании компонентов, мас. %: хлоргексидинглюконат (0,05-2,0), мукоадгезивный реагент (1,0-20,0), диклофенак (1,0-5,0), гелебразующий агент (0,2-7), фармацефтически приемлемый растворитель (остальное) (см. пат. RU 2 288 699 С2, опубл. 10.12.2006 г. ). Недостаток препарата, обладающего мощным антисептическим и противовоспалительным действием, наряду с вышеназванным заключается в отсутствии компонентов, охватывающих другие регенеринстимулирующие механизмы. Кроме того, содержание сильного противовоспалительного компонента (диклофенак) не исключает побочного действия препарата на организм.
Известно местное использование мелатонина в стоматологии в виде аппликации на десну 0,05% раствора хлоргексидина с добавлением 0,1% раствора мелаксена (мелатонин) на турундах в пародонтальные карманы. Эффект включения мелаксена, проявляется мягким подавлением воспалительных процессов в пародонте, антиоксидантным эффектом, иммунологическим действием (Эльбекьян К.С, Маркарова Г.В. Применение препарата мелаксен в лечении воспалительных заболеваний полости рта / Физико-химическая биология: мат. Междунар. интернет-конференции. - Ставрополь, 2012. - С. 21-23). Однако подобное использование раствора, несмотря на положительное действие, ограничивается условиями стоматологических манипуляций, исключающих возможность его использования пациентами самостоятельно и недостаточной пролонгацией действия.
Известен способ получения пленки, обеспечивающей пролонгированный контакт, обладающей выраженным противовоспалительным, бактериостатическим, антиоксидантным, мембрано-стабилизирующим и стимулирующим регенерацию действием, путем трехкратного экстрагирования листьев какали копьевидной 70% этанолом в течение 1,5 ч каждый раз при 96-98°C при соотношении сырья: экстрагент (1:16-18) с последующим объединением экстрактов, отгоном этанола, упариванием и сушкой полупродукта в вакуум-сушильном аппарате, растиранием полупродукта со смесью Твин 80-диметилсульфоксид-глицерин в соотношении 1:1:10 и далее с 5%-ным раствором карбоксиметилцеллюлозы в соотношении 1:5 и 10%-ным раствором желатины в соотношении 1:5, заливанием в формы и сушкой 20-22°C (см. пат. RU 2395292 С1, опубл. 27.07.2010 г. ).
Данный препарат оказывает выраженное заживляющее действие, хорошее проникновение компонентов в ткани пародонта и слизистую оболочку полости рта, однако имеет достаточно сложную технологию получения.
Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы для приготовления противоожоговой пластины и противоожоговая пластина на его основе, обладающей поликомпонентным регенеринстимулирующим действием на покровные ткани при нарушении их целостности. Способ включает гомогенизацию куриного яйца взятого на 9 сутки развития, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°C, при этом после гомогенизации проводят обработку гомогената ультразвуком, затем проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, причем перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату 1:1 добавляют смесь 0,1%-ного раствора натрия бензойнокислого и 0,1%-ного раствора калия сорбиновокислого в равных частях, дополнительно готовят однородную массу, содержащую медицинский желатин, отвар календулы и ромашки, антибиотические средства, анестезин, амарантовое масло, глицерин, бриллиантовый зеленый (см. пат. RU 2433171 С1, опубл. 10.11.2011 г. ).
Однако такая технология получения биологически активной субстанции из эмбрионально-яичной массы на 9-е сутки инкубации не обеспечивает максимального выхода биологически активных веществ, в частности альфа-фетопротеина, который представляется значимым для регенерации тканей ротовой полости и в силу своей низкомолекулярности будет проникать через слизистую оболочку ротовой полости. Кроме того, максимальные концентрации общего белка, способного обеспечивать качественную окклюзию, приходятся на более ранние сроки инкубации.
Раскрытие изобретения
Задача, на решение которой направлено изобретение, состоит в расширении арсенала способов получения препаратов, направленных на стимуляцию процессов регенерации, обеспечивающих быстрое восстановление органотипичности тканей ротовой полости. Ее решение состоит в создании поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата для регенерации полости рта, который бы максимально воздействовал на основные звенья механизмов регенерации, был заключен в оптимальную форму, обеспечивающую длительный контакт и доставку активных веществ препарата в ткани ротовой полости.
Технический результат достигается с помощью способа получения поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата для регенерации тканей ротовой полости, включающего приготовление желатиновых пленок на основе двух получаемых субстанций.
Первая субстанция готовится путем отбора свежих, не инфицированных куриных яиц, инкубируемых в течение 5-6 суток с целью получения эмбрионально-яичной массы, содержащей практически весь комплекс биологически активных веществ, положительно влияющих на большинство клеток и тканей. При этом количественное соотношение используемых для дальнейшей обработки по методу В.П. Филатова эмбриональных и внеэмбриональных тканей должно быть 1:4, что обусловливает высокое содержание во внеэмбриональных тканях витаминов, аминокислот, липидов, а также высокомолекулярных белков, которые, включаясь в поверхностные слои пленки, тем самым повышая окклюзию, препятствуют удалению жидкости и повышают проницаемость тканей слизистой оболочки ротовой полости для других компонентов, входящих в состав пленки.
С целью включения в состав препарата биогенных стимуляторов инкубированные до 5-6 суток эмбрионы помещаются в неблагоприятные для выживания условия среды в холодильную камеру при температуре 2-8°C на 6-7 суток, с последующим извлечением и гомогенизацией всех эмбриональных и внеэмбриональных тканей.
Вторая субстанция готовится путем растворения в отварах шалфея и зверобоя медицинского желатина, глицерина, масла эвкалипта и мелатонина с тщательным перемешиванием до однородной массы. Добавление в субстанцию мелатонина обусловлено его свойствами как стимулятора метаболических процессов, мощного естественного антиоксиданта и иммуномодулятора, вещества, обладающего хорошим антитоксическим действием. Структура и свойства мелатонина позволяют ему легко проникать через клеточные мембраны, что предполагает наличие его внутриклеточного воздействия. Его включение усиливает иммуномодулирующее, регенеринстимулирующее и антиоксидантное действие эмбрионально-яичной массы. Включение масла эвкалипта оправдывается его выраженным противомикробным, противовирусным и фунгицидным действием, а также противовоспалительным, вяжущим, ранозаживляющим и болеутоляющим эффектом при воздействии местно на слизистые оболочки.
Добавление экстракта травы зверобоя обосновано его многосторонними фармакологическими свойствами, среди которых по местному действию в ротовой полости ярко выражены противовоспалительное, кровоостанавливающее, обезболивающее, антисептическое и ранозаживляющее. Включение экстракта шалфея в субстрат несет дополнительную функцию вяжущего и дубящего компонента.
Присутствие в препарате желатин-глицеринового композита выполняет структурную функцию создания лекарственной формы в виде пленок, обладающих эластичностью, способностью к адгезии. Желатин также служит депо природных лечебных веществ, определяющим длительное и дозированное их поступление в ткани ротовой полости.
Затем к 100 мл второй субстанции добавляют 48,0-50,0 мл первой субстанции и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин. Полученную массу разливают по 15,0 мл в специальную емкость со сторонами 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5-4 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пленок, затем разрезают пленку на полоски шириной 1 см и фасуют в полиэтиленовую оболочку. Преимущества желатиновых лекарственных пленок при наложении на слизистую оболочку полости рта состоят в прочной фиксации их в зоне патологии. Такой контакт обеспечивает направленную доставку лекарственных веществ и позволяет достичь терапевтического эффекта дозами в 10-20 раз меньшими, чем в традиционных лекарственных формах. Желатиновые лекарственные пленки медленно растворяются в секретах слизистой, выделяя лекарственное вещество в течение 3-5 часов.
Сущность способа получения поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата для тканей ротовой полости заключается в следующем. Проводят отбор свежих неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 5-6 суток, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°C, а после гомогенизации проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, при этом перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату добавляют 0,1% раствора натрия бензойнокислого, получая таким образом субстанцию из эмбрионально-яичной массы.
Для получения второй субстанции при приготовлении поликомпонентной мелатонинсодержащей пленки берут 3,5-4,0 г медицинского желатина, заливают отваром шалфея и отваром зверобоя до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 55-60 мин при температуре 20-25°C, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°C до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 1,5-2,0 г мелатонина, 0,9-1,0 мл масла эвкалипта, 2,5-3,0 мл глицерина с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 4-5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 48,0-50,0 мл субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин, полученную массу разливают по 15,0 мл в специальную емкость со стороной 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5-4 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1 -2 суток до застывания в форме пленок, затем пленки нарезают на полоски шириной 1 см и заключают в полиэтиленовую упаковку.
Выявленные отличительные признаки позволяют сделать вывод о соответствии предлагаемого способа получения критерию «новизна».
Осуществление изобретения
Способ иллюстрируется нижеследующими примерами получения поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата для стимуляции процессов регенерации тканей ротовой полости.
Пример 1. Проводят отбор свежих неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 6 суток, с последующим охлаждением в течение 6-7 суток при температуре 2-4°C, а после гомогенизации проводят ультрамикрофильтрацию через фильтры диаметром 0,2 мкм, при этом перед ультрамикрофильтрацией к полученному гомогенату добавляют 0,1% раствора натрия бензойнокислого, получая таким образом субстанцию из эмбрионально-яичной массы.
Для получения второй субстанции при приготовлении поликомпонентной мелатонинсодержащей пленки берут 2,0 г медицинского желатина, заливают отваром шалфея и отваром зверобоя до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 45 мин при температуре 20-25°C, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°C до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 0,5 г мелатонина, 0,5 мл масла эвкалипта, 1,5 мл глицерина с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 3 мин, затем к полученной однородной массе приливают 30,0 мл субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин, полученную массу разливают по 10,0 мл в специальную посуду со стороной 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пленок, затем пленки разрезают на полоски шириной 1 см и заключают в полиэтиленовую упаковку.
Хранят пленки в сухом месте при температуре плюс 2-4°C, однако пленки при этом получаются слишком тонкие, легко рвутся.
Пример 2. Приготовление субстанции из эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Для получения второй субстанции при приготовлении препарата берут 3,0 г медицинского желатина, заливают отваром шалфея и отваром зверобоя до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 55 мин при температуре 20-25°C, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°C до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 1,0 г мелатонина, 0,7 мл масла эвкалипта, 2,0 мл глицерина с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 3,5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 45,0 мл субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин, полученную массу разливают по 20 мл в специальную посуду со стороной 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пленок, затем пленки разрезают на полоски шириной 1 см и заключают в полиэтиленовую упаковку.
Однако полученные пленки слишком толстые, плохо застывают, легко ломаются.
Пример 3. Приготовление субстанции из эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Для получения однородной массы при приготовлении поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата берут 3,5 г медицинского желатина, заливают отваром шалфея и отваром зверобоя до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 1 часа при температуре 20-25°C, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°C до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 1,5 г мелатонина, 1,0 мл масла эвкалипта, 3,0 мл глицерина с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 50,0 мл субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин, полученную массу разливают по 15,0 мл в специальную посуду со стороной 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 3,5 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пленок, затем пленки разрезают на полоски шириной 1 см и заключают в полиэтиленовую упаковку.
Полученные поликомпонентные мелатонинсодержащие пленки обладают оптимальной толщиной, удобны в нанесении на слизистую оболочку полости рта.
Пример 4. Приготовление субстанции из эмбрионально-яичной массы проводят аналогично примеру 1. Для приготовления поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата из активированной эмбрионально-яичной массы берут 4,0 г медицинского желатина, заливают отваром шалфея и отваром зверобоя до 100 мл в соотношении 1:1, выдерживают в течение 1 часа при температуре 20-25°C, затем помещают на водяную баню при температуре 65-70°C до полного растворения желатина, после чего в раствор с желатином добавляют 2,0 г мелатонина, 2,0 мл масла эвкалипта, 4,0 мл глицерина с последующим перемешиванием в гомогенизаторе в течение 5 мин, затем к полученной однородной массе приливают 70,0 мл субстанции из эмбрионально-яичной массы и перемешивают в гомогенизаторе в течение 6-7 мин, полученную массу разливают по 15,0 мл в специальную посуду со стороной 10 см и высотой 1 см, помещают в термостат на 4 часа при температуре 37-39°C, затем охлаждают в течение 1-2 суток до застывания в форме пленки, затем пленки разрезают на полоски шириной 1 см и заключают в полиэтиленовую упаковку.
Однако полученный препарат является более дорогостоящим, так как содержит большое количество эмбрионально-яичной массы и всех остальных компонентов.
Таким образом, наиболее оптимальным является способ приготовления, отраженный в примере 3.
Результаты испытания поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата, приготовленного по технологии примера 3, на волонтерах в условиях клиники «ЮТА-Дент» (г.Ставрополь) Препарат апробирован в клинике «ЮТА-Дент» г. Ставрополя на пациентах с различной стоматологической патологией. С пациентами был заключен договор информированного согласия с клиникой «ЮТА-Дент». Нижеследующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.
Клинический пример 1
Пациенты: 18 человек, возраст от 37 лет до 62 лет.
Диагноз: вторичная частичная адентия, осложненная парадонтитом средней степени тяжести.
Лечение: после полной санации полости рта, всех пациентов. Было проведено 10-кратное нанесение препарата для стимуляции регенераторного потенциала тканей ротовой полости в течение 10 дней 1 раз в сутки (каждому пациенту). На третьей процедуре исчезла гиперемия, выделения из зубодесневого желобка, неприятный запах изо рта. Осмотр через 30 дней после окончания процедур, результат стойкая ремиссия.
Клинический пример 2
Пациенты: 23 человека, возраст от 32 лет до 49 лет.
Диагноз: пришеечный кариес, клиновидные дефекты фронтальной группы зубов обеих челюстей.
Лечение: во время санации вводилась ретракционная нить, проводилась поддесневая полировка, непосредственно после полировки нанесение поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата для стимуляции процесса регенерации тканей ротовой полости. Повторное нанесение пленки перед сном в домашних условиях.
Результат на следующий день - десна интактна.
Клинический пример 3
Пациенты: 12 человек, возраст от 30 лет до 70 лет.Диагноз: полная и частичная потеря зубов.
Лечение: ношение пластиночных и бюгельных протезов с предварительным нанесением на слизистую оболочку десневой части препарата от 5 до 12 суток (один раз в сутки) в период привыкания.
Результат: эпителизация декубитальных язв на третьи сутки, на пятые сутки (после коррекции протеза) исчезновение гиперемии и отека тканей протезного ложа.
Таким образом, поликомпонентный мелатонинсодержащий препарат зарекомендовал себя следующими свойствами:
- противовоспалительным и противомикробным;
- местным иммуномодулирующим и антиоксидантным;
- укрепляет стенки сосудов и прекращает кровоточивость десен;
- восстанавливает метаболические процессы в клетках;
- стимулирует деление и дифференцировку утраченных клеток. Клинические результаты указывают на целесообразность использования предлагаемого способа получения поликомпонентного мелатонинсодержащего препарата и эффективность его применения в целях повышения потенций поврежденных тканей ротовой полости к регенерации, что существенно может повысить эффективность и значительно сократить сроки лечения без выполнения ненужных и нередко дорогостоящих процедур.
Предлагаемый способ прост, легко воспроизводим, не требует существенных материальных затрат и использования сложного оборудования. Полученный согласно данному способу поликомпонентный мелатонинсодержащий препарат способен обеспечить надежную стимуляцию процессов регенерации тканей ротовой полости и может быть широко применен в практической стоматологии.