ОЧИСТКА БЕЛКОВ

1. Способ очистки интересующего белка из смеси, включающий стадии
a) загрузки в рабочем хроматографическом цикле первого объема смеси, содержащей интересующий белок, из первого контейнера, на хроматографическую матрицу, работающую так, что белок связывается с хроматографической матрицей до достижения 40%-100% емкости статического связывания хроматографической матрицы;
b) сбора элюата, содержащего несвязанный интересующий белок, во втором контейнере, и
c) повторной загрузки в следующем рабочем хроматографическом цикле элюата из второго контейнера и загрузки второго объема интересующего белка из первого контейнера на ту же хроматографическую матрицу, работающую так, что интересующий белок связывается с хроматографической матрицей до достижения 40%-100% максимальной емкости статического связывания хроматографической матрицы.
2. Способ очистки интересующего белка из смеси, включающий стадии
a) загрузки в рабочем хроматографическом цикле первого объема смеси, содержащей интересующий белок, из первого контейнера, на хроматографическую матрицу, работающую так, что емкость динамического связывания хроматографической матрицы превышена;
b) сбора элюата, содержащего несвязанный интересующий белок, во втором контейнере, и
c) повторной загрузки в следующем рабочем хроматографическом цикле элюата из второго контейнера и загрузки второго объема интересующего белка из первого контейнера на ту же хроматографическую матрицу, работающую так, что емкость динамического связывания хроматографической матрицы превышена.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что на стадии (а) загрузка интересующего белка прекращают при достижении по меньшей мере 40% максимальной емкости статического связывания.
4. Способ по п.1, 2 или 3, отличающийся тем, что следующий рабочий хроматографический цикл представляет собой хроматографический цикл, следующий непосредственно после.
5. Способ по п.1, 2, 3 или 4, отличающийся тем, что сбор элюата начинают при первой заданной концентрацией интересующего белка в элюате и прекращают при второй заданной концентрации интересующего белка в элюате.
6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что заданную фракцию элюата собирают во втором контейнере.
7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что элюат обрабатывают перед повторной загрузкой на хроматографическую матрицу, причем обработку выбирают из перемешивания или встряхивания, разбавления, доведения концентрации, доведения рН, доведения проводимости, замены буфера или растворителя, охлаждения или нагревания или любой их комбинации.
8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что хроматографию выбирают из аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии, хроматографии гидрофобного взаимодействия, хроматографии смешанного режима, хиральной хроматографии или диэлектрической хроматографии.
9. Способ по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что способ включает три стадии хроматографии.
10. Способ по п.9, отличающийся тем, что способ включает хроматографию с Протеином А с последующей катионообменной хроматографией и с последующей анионообменной хроматографией.
11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что одна, две, три или все из хроматографических матриц представляют собой хроматографическую колонку.
12. Способ по любому из пп.1-11, отличающийся тем, что интересующий белок представляет собой антитело или фрагмент антитела.
13. Способ получения интересующего белка, включающий способ очистки белка по любому из пп.1-12.
14. Белок, полученный способом по п.13.