КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ОБНАРУЖЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА КЛЕТОК-ХОЗЯЕВ В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ И РЕКОМБИНАНТНЫЕ ПОЛИПЕПТИДНЫЕ ПРОДУКТЫ

1. Способ иммунологического анализа (иммуноанализа) для обнаружения фосфолипаза В-подобного 2 белка (PLBL2) хомячка в образце, который получен из препарата рекомбинантного полипептида или линии клеток-хозяев, включающий:
(a) контактирование первого антитела захвата, которое связывает PLBL2 хомячка, с образцом, при этом образуется комбинированный материал образец - антитело захвата;
(b) контактирование второго детекторного антитела, которое связывает PLBL2 хомячка, с комбинированным материалом образец - антитело захвата; и
(c) обнаружение второго антитела, связанного с комбинированным материалом образец - антитело захвата.
2. Способ по п. 1, в котором антитело захвата не конкурирует за связывание с детекторным антителом, а антитело захвата связывается с другим эпитопом, нежели детекторное антитело.
3. Способ по п. 1, дополнительно включающий количественное определение уровня второго детекторного связанного антитела с применением стандартной кривой титрования.
4. Способ по п. 3, дополнительно включающий расчет количества PLBL2 хомячка в образце на основании содержания (уровня) второго детекторного связанного антитела.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором иммунологический анализ представляет собой электрохемилюминесцентный (ECL) анализ.
6. Способ по любому из пп. 1-4, в котором иммунологический анализ представляет собой сэндвич-анализ.
7. Способ по п. 6, в котором сэндвич-анализ представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA, ИФА).
8. Способ по п. 1, в котором препарат рекомбинантного полипептида или линию клетки-хозяина, получен с использованием линии клеток яичника китайского хомячка (СНО).
9. Способ по п. 8, в котором образец представляет собой собранную клеточную культуральную жидкость.
10. Способ по п. 8, в котором образец получен из препарата рекомбинантного полипептида и препарат рекомбинантного полипептида был подвергнут одной или более стадиям хроматографической очистки.
11. Способ по п. 10, в котором препарат рекомбинантного полипептида представляет собой конечный очищенный продукт.
12. Способ по п. 1, в котором рекомбинантный полипептид, содержащийся в препарате рекомбинантного полипептида, представляет собой антитело или иммуноадгезин.
13. Способ по п. 12, в котором антитело представляет собой полиспецифическое антитело, биспецифическое антитело, половинное антитело или фрагмент антитела.
14. Способ по п. 12, в котором рекомбинантный полипептид представляет собой IgG.
15. Способ по п. 14, в котором рекомбинантный полипептид выбран из IgG1, IgC2, IgG3 и IgG4.
16. Способ по п. 15, в котором рекомбинантный полипептид представляет собой IgG1.
17. Способ по. 16, в котором рекомбинантный полипептид представляет собой IgG4.
18. Моноклональное антитело, которое связывает фосфолипаза В-подобный 2 белок, при этом антитело содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий участки: CDRH1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, CDRH2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, и CDRH3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17.
19. Моноклональное антитело, которое связывает фосфолипаза В-подобный 2 белок, причем антитело содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок легкой цепи, содержащий участки: CDRL1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, CDRL2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и CDRL3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
20. Моноклональное антитело, которое связывает фосфолипаза В2-подобный белок, причем антитело содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий участки: CDRH1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, CDRH2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, и CDRH3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и вариабельную область, включающую вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDRL1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, CDRL2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, и CDRL3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
21. Антитело по п. 18, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
22. Антитело по п. 19, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
23. Антитело по п. 20, содержащее вариабельную область, которая включает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
24. Антитело по п. 23, содержащее тяжелую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, и легкую цепь, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
25. Моноклональное антитело, связывающее фосфолипаза В-подобный 2 белок хомячка, которое представляет собой антитело 19С10.
26. Моноклональное антитело, связывающее фосфолипаза В-подобный 2 белок хомячка, которое содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDRH1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDRH2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и CDRH3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
27. Моноклональное антитело, связывающее фосфолипаза В-подобный 2 белок хомячка, которое содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDRL1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, CDRL2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и CDRL3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
28. Моноклональное антитело, связывающее фосфолипаза В-подобный 2 белок хомячка, которое содержит вариабельную область, включающую вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDRH1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, CDRH2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и CDRH3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный участок легкой цепи, содержащий CDRL1, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, CDRL2, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и CDRL3, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
29. Антитело по п. 26, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
30. Антитело по п. 27, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
31. Антитело по п. 28, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и вариабельную область тяжелой цепи, которая имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
32. Антитело по п. 31, содержащее тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, и легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.
33. Моноклональное антитело, связывающее фосфолипаза В-подобный 2 белок хомячка, которое представляет собой антитело 15G11.
34. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором антитело захвата представляет собой антитело по любому из пп. 18-25.
35. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором детекторное антитело представляет собой антитело по любому из пп. 26-33.
36. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором антитело захвата представляет собой антитело по любому из пп. 18-25, а детекторное антитело представляет собой антитело по любому из пп. 26-33.
37. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором антитело захвата является поликлональным антителом.
38. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором детекторное антитело является поликлональным антителом.
39. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором антитело захвата является поликлональным антителом и детекторное антитело является поликлональным антителом.
40. Способ по п. 39, в котором поликлональное антитело является кроличьим антителом.
41. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором детекторное антитело конъюгировано с биотином.
42. Способ по любому из пп. 1, 4, 7-17, в котором детекторное антитело конъюгировано с пероксидазой хрена.
43. Набор для иммуноанализа для обнаружения фосфолипаза В-подобного 2 белка хомячка, включающий антитело захвата по любому из пп. 18-25 и детекторное антитело по любому из пп. 26-33.
44. Набор для иммуноанализа для обнаружения фосфолипаза В-подобного 2 белка хомячка, включающий поликлональное антитело захвата и поликлональное детекторное антитело.
45. Набор для иммуноанализа по п. 43 или 44, причем иммуноанализ представляет собой ECL иммуноанализ.
46. Набор для иммуноанализа по п. 43 или 44, причем иммуноанализ представляет собой иммуноанализ ELISA.
47. Способ скрининга линии клеток-хозяев для экспрессии PLBL2 хомячка, включающий обнаружение PLBL2 в образце, полученном с использованием клеточной линии клеток-хозяев.
48. Способ по п. 47, в котором обнаружение PLBL2 представляет собой способ по любому из пп. 1-2 или 8-9.
49. Способ по п. 48, в котором образец представляет собой жидкости цельноклеточных культур.
50. Способ по п. 48, дополнительно включающий определение количества PLBL2 хомячка с применением способа по любому из пп. 4-7.
51. Способ отбора оптимальной линии клеток-хозяев из группы, состоящей из двух или более линий клеток-хозяев, в котором оптимальная линия клеток-хозяев экспрессирует малые количества PLBL2 хомячка, включающий:
(i) получение образца линии клеток-хозяев из каждой из двух или более линий клеток-хозяев;
(ii) определение количества PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-хозяев с применением способа по любому из пп. 4-7;
(iii) сравнение количества PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-хозяев с количеством PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-хозяев группы;
(iv) идентификацию образца линии клеток-хозяев, содержащего самое низкое количество PLBL2 по сравнению с каждым из образцов линий клеток-хозяев группы, с получением при этом идентифицированной линии клеток-хозяев из группы, содержащей самое низкое количество PLBL2; и
отбор идентифицированной линии клеток-хозяев (iv) в качестве оптимальной линии клеток-хозяев.
52. Способ по п. 51, в котором каждая из двух или более линий клеток-хозяев является линией клеток СНО.
53. Способ по п. 52, в котором каждый из образцов линий клеток-хозяев представляет собой собранную культуральную клеточную жидкость.
54. Способ по п. 52, в котором каждый из образцов линий клеток-хозяев представляет собой жидкость цельноклеточных культур.
55. Способ скрининга клеточной линии, экспрессирующей рекомбинантный полипептид, на экспрессию PLBL2 хомячка, в котором клеточная линия, экспрессирующая рекомбинантный полипептид, представляет собой линию клеток-продуцентов, включающий обнаружение PLBL2 в образце, полученном при использовании линии клеток-продуцентов.
56. Способ по п. 55, в котором обнаружение PLBL2 включает метод иммуноанализа по любому из пп. 1-2 или 8-17.
57. Способ по п. 56, дополнительно включающий определение количества PLBL2 в образце с применением способа по любому из пп. 4-7.
58. Способ по любому из пп. 55-57, дополнительно включающий скрининг на экспрессию продукта и определение количества продукта в образце.
59. Способ по п. 58, в котором обнаружение продукта и определение количества продукта включает спектрофотометрический метод или метод аффинной хроматографии.
60. Способ отбора оптимальной линии клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, из группы из двух или более линий клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, при этом каждая из двух или более линий клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, является линией клеток-продуцентов, а оптимальная линия клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, представляет собой оптимальную линию клеток-продуцентов, где каждая из линий клеток-продуцентов экспрессирует один и тот же продукт, и оптимальная линия клеток-продуцентов экспрессирует низкое количество PLBL2 хомячка и высокое количество продукта, включающий:
(i) получение образца линии клеток-продуцентов из каждой из двух или более линий клеток-продуцентов;
(ii) определение количества PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-продуцентов способом по любому из пп. 4-7;
(iii) обнаружение продукта и определение количества продукта в каждом из образцов линий клеток-продуцентов;
(iv) сравнение количества PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-продуцентов с количеством PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-продуцентов группы;
(v) сравнение количества продукта в каждом из образцов линий клеток-продуцентов с количеством продукта в каждом из образцов линий клеток-продуцентов группы;
(vi) идентификацию образца линии клеток-продуцентов, содержащего самое низкое количество PLBL2 и самое высокое количество продукта по сравнению с каждым из образцов линий клеток-продуцентов группы, с получением при этом идентифицированной линии клеток продуцентов из группы, содержащей самое низкое количество PLBL2 и самое высокое количество продукта; и
отбор идентифицированной линии клеток-продуцентов (iv) в качестве оптимальной линии клеток-продуцентов.
61. Способ отбора оптимальной линии клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, из группы из двух или более линий клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, при этом каждая из двух или более линий клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, является линией клеток-продуцентов, а оптимальная линия клеток, экспрессирующих рекомбинантный полипептид, представляет собой оптимальную линию клеток-продуцентов, где каждая из линий клеток-продуцентов экспрессирует один и тот же продукт, и оптимальная линия клеток-продуцентов экспрессирует низкое количество PLBL2 хомячка и высокое количество продукта, включающий:
(i) получение образца линии клеток-продуцентов из каждой из двух или более линий клеток-продуцентов;
(ii) определение количества PLBL2 в каждом из образцов линий клеток-продуцентов способом по любому из пп. 4-7;
(iii) обнаружение продукта и определение количества продукта в каждом из образцов линий клеток-продуцентов;
(iv) определение отношения количества PLBL2 к количеству продукта для каждого из образцов линий клеток-продуцентов;
(v) сравнение отношения, рассчитанного для каждого из образцов линий клеток-продуцентов, с каждым из образцов линий клеток-продуцентов группы;
(vi) идентификацию образца линии клеток-продуцентов, имеющего самое низкое отношение в группе, с получением при этом идентифицированной линии клеток- продуцентов из группы, содержащей самое низкое количество PLBL2 и самое высокое количество продукта; и
отбор идентифицированной линии клеток-продуцентов (iv) в качестве оптимальной линии клеток-продуцентов.
62. Способ по п. 60 или 61, в котором каждая из двух или более линий клеток-продуцентов является линией клеток СНО.
63. Способ по п. 62, в котором каждый из образцов линий клеток-продуцентов представляет собой собранную клеточную культуральную жидкость.
64. Способ по любому из пп. 55, 60 или 61, в котором продукт представляет собой антитело или иммуноадгезин.
65. Способ по п. 64, в котором антитело представляет собой полиспецифическое антитело, биспецифическое антитело, половинное антитело или фрагмент антитела.
66. Способ по п. 64, в котором продукт представляет собой IgG.
67. Способ по п. 65, в котором продукт выбран из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
68. Способ по п. 67, в котором продукт представляет собой IgG1.
69. Способ по п. 67, в котором продукт представляет собой IgG4.