Способ раннего выбора тактики ведения животного с кишечной непроходимостью в эксперименте
METHOD FOR EARLY SELECTION OF ANIMAL MANAGEMENT TACTICS WITH INTESTINAL OBSTRUCTION IN EXPERIMENT

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине, и может быть использовано для раннего выбора тактики ведения экспериментального животного, перенесшего оперативное вмешательство по поводу кишечной непроходимости.
В Российской Федерации ежегодно рождается более 1200 новорожденных с врожденными пороками развития (ВПР) кишечника. ВПР ЖКТ у детей занимают один из ведущих мест по причинам инвалидизации. Отмечаются наиболее низкие показатели качества жизни у детей, перенесших оперативные вмешательства по поводу ВПР кишечника, ввиду наличия послеоперационных осложнений, связанных с качеством заживления анастомоза, и соответственно неудовлетворенностью результатами операционного лечения.
Существует множество способов кишечного анастомозирования, однако на качество наложенного анастомоза влияет не только уровень мануальной техники оперирующего хирурга и выбранный способ анастомозирования, но и индивидуальные особенности гистоархитектоники кишечной стенки в зоне анастомозирования.
В известных работах по исследованию кишечных анастомозов в эксперименте нет объективного морфологического критерия, говорящего о регенеративном потенциале кишечной стенки, приводятся только общеизвестные данные (Kuo WY, Huang HC, Huang SW, Yu KH, Cheng FP, Wang JH, Wu JT. Benefits of Intraluminal Agarose Stents during End-to-End Intestinal Anastomosis in New Zealand White Rabbits.Comp Med. 2017 Dec 1;67(6): 504-507).
Известен способ моделирования резекции кишечника кролика путем  наложения анастомоза, макро- и микроскопическое исследование зоны анастомоза на 7 послеоперационные сутки (Nakamura H, Yokoyama Y, Uehara K, Kokuryo T, Yamaguchi J, Tsuzuki T, Nagino M. The effects of bevacizumab on intestinal anastomotic healing in rabbits. Surg Today. 2016 Dec;46(12):1456-1463). Оценку состояния анастомоза проводят путем измерения внутрипросветного давления (bursting pressure of small bowel anastomoses), микроскопическим характеристикам - состояние микроциркуляторного русла (microvessel counts in the anastomotic tissue), степени развития соединительной ткани (degree of collagen deposition decreased in the anastomotic tissue). Однако указанная методика позволяет оценить состояние зоны анастомоза в первую очередь связанное с выбранным способом наложенного анастомоза.
Известно, что при одном и том же способе наложения анастомоза (выборе кишечного шва) у пациентов наблюдается различное течение послеоперационного периода, что в свою очередь влияет на исход заболевания и качество жизни пациента.
Известно, что наличие клеток Панета свидетельствует о благоприятных условиях заживления язв двенадцатиперстной кишки, т.е. в условиях воспаления (Потехин П.П., Переслегина И.А., Широкова Н.Ю., Соколова И.Л., Саралов С.Н., Жукова Е.А., Артемова А.В патент на изобретение № 2162600, опубл.27.01.2001г. «Способ прогнозирования течения язвенной болезни у детей»). Таким образом, присутствие определенного количества клеток Панета в криптах может служить показателем восстановления регенерационного потенциала слизистой оболочки в целом. Однако в известном способе клетки Панета определяются только в желудке и двенадцатиперстной кишке и во время развития патологического (язвенного) процесса, т.е. на уже измененных вследствие хронического воспаления участках.
Задачей изобретения является разработка способа раннего прогнозирования течения послеоперационного периода для выбора тактики ведения животного, обеспечивающего удовлетворительный результат лечения.
Технический результат – обеспечение удовлетворительного результата лечения животного со смоделированной кишечной непроходимостью в эксперименте путем раннего выбора тактики послеоперационного ведения пациента после наложения тонко-тонкокишечного анастомоза основанной на объективных данных о количественном содержании клеток Панета в зоне смоделированной непроходимости.
Технический результат достигается тем, что в способе, включающем моделирование кишечной непроходимости, кишечную непроходимость моделируют путем резекции сегментов кишки и наложения тонко-тонкокишечного анастомоза, выполняют макро- и микроскопические исследования зоны анастомоза на 7 послеоперационные сутки, определяют количество клеток Панета в резецированном фрагменте анастомоза путем подсчета их на 1000 криптальных эпителиоцитов, при значении 4 и более прогноз заживления кишечной стенки и восстановления кишечной функции в зоне тонко-тонкокишечного анастомоза считают благоприятным, не требующим коррекции тактики ведения пациента, а при значениях до 4 клеток Панета на 1000 криптальных эпителиоцитов животному ежедневно проводят лабораторные и инструментальные исследования для своевременной диагностики манифестации послеоперационных осложнений для их своевременного лечения.
Способ осуществляют следующим образом:
Оперативные вмешательства проводят на кроликах-самцах Калифорнийской породы со следующими зоометрическими параметрами: возраст 8±2,4 месяца, масса 3700±500 граммов. Животное до введения в эксперимент помещают на карантин (14 дней). Ежедневный уход за животным совершают согласно Приказу Минздрава РФ №708 от 23.08.10 «Об утверждении правил лабораторной практики в Российской Федерации».
За сутки до выполнения операции животному проводят пищевую депривацию. Операции проводят в идентичных метеорологических условиях с 16:00 до 19:00. Выполняют моделирование кишечной непроходимости путем резекции сегментов кишки и наложения тонко-тонкокишечного анастомоза. Антибиотикотерапию гентамицином проводят животному внутримышечно 2 мг/кг/сут в течение 3 послеоперационных суток. Через 7 дней после проведения операции (первой) выполняют резекцию ранее наложенного анастамоза и наложение последующего. Резецированный анастомоз подвергают макро- и микроскопическому исследованию. При проведении гистологического исследования парафиновых срезов толщиной 5 мк, окрашенных гематоксилином и эозином оценивают состав эпителиального пласта, состояние микроциркуляторного русла, характер и плотность клеточного инфильтрата, наличие специфического эпителия, сохранность ворсин, функционирование крипт, наличия соединительной ткани в строме ворсин и межкриптально, а также отсутствие очагов фиброза и некротических изменений и определения на криптах эпителия тонкой кишки клеток Панета путем подсчета их на 1000 криптальных эпителиоцитов.  При выявленном количестве клеток Панета на 1000 криптальных эпителиоцитов от 4 и более прогноз заживления кишечной стенки и восстановления кишечной функции в зоне тонко-тонкокишечного анастомоза считают благоприятным и ведут пациента (животное, участвующее в эксперименте) по запланированной схеме. При значениях клеток Панета на 1000 криптальных эпителиоцитов до 4 - вносят корректировки в схему ведения пациента для чего ежедневно проводят лабораторные (общий анализ крови, посев крови на флору, определяют белки воспаления) и инструментальные исследования (УЗИ органов брюшной полости). Антибиотикотерапию гентамицином проводят животному внутримышечно 2 мг/кг/сут в течение 3 послеоперационных суток. При обнаружении признаков характерных для манифестации послеоперационных осложнений (септическая реакция, несостоятельность анастомоза, перитонит) назначают дополнительное медикаментозное или при необходимости хирургическое лечение, направленное на их купирование.
По предложенному способу проведено наложение 12 тонко-тонкокишечных анастомозов на 6 кроликах в эксперименте с участием 11 животных (5 животных - группа контроля). Во всех случаях основной группы получен удовлетворительный результат лечения.
Пример 1. Выписка из протокола эксперимента № 9. Кролик-самец Калифорнийской породы 8 месяцев, масса 3500 граммов. Выполнено моделирование кишечной непроходимости путем резекции сегментов кишки и наложения тонко-тонкокишечного анастомоза. Весь послеоперационный период у животного отмечалось отсутствие самостоятельного стула, отказ от энтерального питания, вялость, вздутие живота, а также выраженная болезненность в области послеоперационной раны. На 7-е сутки проведена релапаротомия. В брюшной полости обнаружен выраженный отек кишечной стенки в зоне анастомоза. Признаки перитонита отсутствовали. Зона анастомоза резецирована и отправлена на морфологическое исследование. Макроскопический осмотр показал состоятельность анастомоза, при микроскопическом исследовании выявлены выраженный очаг фиброза в зоне анастомоза, лейкоцитарная инфильтрация, столообразные ворсины, вакуольная дистрофия, ядра в состоянии пикноза, клеток Панета в образце 3 на 1000 криптальных эпителиоцитов прогноз по основному заболеванию неблагоприятный, поэтому животному ежедневно проводили лабораторные (общий анализ крови, посев крови на флору, определяют белки воспаления) и инструментальные исследования (УЗИ органов брюшной полости). На 3-е сутки после операции в общем анализе крови обнаружено нарастание нейтрофильного лейкоцитоза, а также повышение С-реактивного белка назначена дополнительно дезинтаксикационная инфузионная терапия (реамбирин 60 мл болюсно внутривенно каждые 3 часа), нестероидные противовоспалительные препараты в расчете 2мг/кг 2 раза в сутки, продление антибиотикотерапии гентамицином внутримышечно 2 мг/кг/сут. На 6-е сутки по результатам УЗИ брюшной полости данные за абсцесс. Увеличена дозировка антибиотикотерапии до 3 мг/кг/сут. На 8-е сутки отмечается положительная динамика в состоянии животного, отменена инфузионная терапия и нестероидные противовоспалительные препараты. На 10-е сутки нормализация анализа крови, по результатам УЗИ патологии не выявлено. Результат лечения – удовлетворительный.
Пример 2. Выписка из протокола эксперимента № 10. Кролик-самец Калифорнийской породы 8,5 месяцев, масса 3650 граммов. Выполнено моделирование кишечной непроходимости путем резекции сегментов кишки и наложения тонко-тонкокишечного анастомоза. Послеоперационный период протекал спокойно. Энтеральное питание (вода) в первые послеоперационные сутки. Антибиотикотерапия стандартно в течение 3 послеоперационных суток. На 7-е сутки проведена релапаротомия с резекцией ранее наложенного анастомоза. Морфологическая картина подтвердила проходимость анастомоза, адекватное кровенаполнение в зоне анастомоза, а также наличие функционирующих крипт. Количество клеток Панета – 4 на 1000. Прогноз заживления кишечной стенки и восстановления кишечной функции в зоне тонко-тонкокишечного анастомоза по предложенному способу благоприятный, коррекция тактики ведения пациента не требуется. Диурез восстановлен в первые сутки, самостоятельный стул на 4 сутки. Самостоятельное энтеральное питание с конца вторых послеоперационных суток.
Таким образом, способ обеспечивает удовлетворительный результат лечения животного со смоделированной кишечной непроходимостью.