АНТИТЕЛА К МИОСТАТИНУ, ПОЛИПЕПТИДЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ВАРИАНТЫ FC-ОБЛАСТЕЙ, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Выделенное антитело, которое связывается с латентным миостатином, где антитело ингибирует активацию миостатина.
2. Антитело по п. 1, где антитело:
(а) блокирует высвобождение зрелого миостатина из латентного миостатина;
(б) блокирует протеолитическое высвобождение зрелого миостатина;
(в) блокирует спонтанное высвобождение зрелого миостатина или
(г) не связывается со зрелым миостатином или связывается с эпитопом внутри фрагмента, состоящего из аминокислот 21-100 пропептида миостатина (SEQ ID NO: 78).
3. Антитело по п. 1 или 2, где антитело конкурирует за связывание латентного миостатина с антителом, которое содержит пару VH и VL, представленную в таблицах 2а, 11а или 13, или связывается с тем же самым эпитопом, что и указанное антитело.
4. Антитело по одному из пп. 1-3, которое связывается с латентным миостатином с более высокой аффинностью при нейтральном рН, чем при кислом рН или которое связывается с латентным миостатином с более высокой аффинностью при рН 7,4, чем при рН 5,8.
5. Антитело по одному из пп. 1-4, которое представляет собой (а) моноклональное антитело, (б) человеческое, гуманизированное или химерное антитело; (в) полноразмерное антитело IgG-типа или (г) фрагмент антитела, связывающийся с миостатином.
6. Антитело по одному из пп. 1-5, где антитело содержит:
1
2
3
1
2
3
1
1
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
(a) (I) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность GVPAXSXGGDX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает Т или Н, Х обозначает L или K (SEQ ID NO: 128), (II) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность AGGYGGGXYA, в которой X обозначает L или R (SEQ ID NO: 131), и (III) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность IISXAGXXYXXXWAKX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает S или K, Х обозначает Т, М или K, Х обозначает Y или K, Х обозначает А, М или Е, Х обозначает S или Е, Х обозначает G или K (SEQ IDNO: 127);
1
2
1
2
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
1
2
3
(б) (I) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность XXDIS, в которой X обозначает S или Н, Х обозначает Y, Т, D или Е (SEQ ID NO: 126), (II) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность IISXAGXXYXXXWAKX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает S или K, Х обозначает Т, М или K, Х обозначает Y или K, Х обозначает А, М или Е, Х обозначает S или Е, Х обозначает G или K (SEQ ID NO: 127), и (III) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность GVPAXSXGGDX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает Т или Н, Х обозначает L или K (SEQ ID NO: 128);
1
2
1
2
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
4
5
6
7
1
2
3
1
2
3
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5
6
1
2
1
2
1
1
(в) (I) HVR-H1, содержащий аминокислотную последовательность XXDIS, в которой X обозначает S или Н, Х обозначает Y, Т, D или Е (SEQ ID NO: 126), (II) HVR-H2, содержащий аминокислотную последовательность IISXAGXXYXXXWAKX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает S или K, Х обозначает Т, М или K, Х обозначает Y или K, Х обозначает А, М или Е, Х обозначает S или Е, Х обозначает G или K (SEQ ID NO: 127), (III) HVR-H3, содержащий аминокислотную последовательность GVPAXSXGGDX, в которой X обозначает Y или Н, Х обозначает Т или Н, Х обозначает L или K (SEQ ID NO: 128), (IV) HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность XXSQXVXXXNWLS, в которой X обозначает Q или Т, Х обозначает S или Т, Х обозначает S или Е, Х обозначает Y или F, Х обозначает D или Н, Х обозначает N, D, А или Е (SEQ ID NO: 129); (V)HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность WAXTLAX, в которой X обозначает S или Е, Х обозначает S, Y, F или W (SEQ ID NO: 130); и (VI) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность AGGYGGGXYA, в которой X обозначает L или R (SEQ ID NO: 131);
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
5
6
1
2
1
2
1
1
(г) (I) HVR-L1, содержащий аминокислотную последовательность XXSQXVXXXNWLS, в которой X обозначает Q или Т, Х обозначает S или Т, Х обозначает S или Е, Х обозначает Y или F, Х обозначает D или Н, Х обозначает N, D, А или Е (SEQ ID NO: 129); (II) HVR-L2, содержащий аминокислотную последовательность WAXTLAX, в которой X обозначает S или Е, Х обозначает S, Y, F или W (SEQ ID NO: 130); и (III) HVR-L3, содержащий аминокислотную последовательность AGGYGGGXYA, в которой X обозначает L или R (SEQ ID NO: 131).
7. Антитело по п. 6(б), дополнительно содержащее каркасный участок вариабельного домена тяжелой цепи FR1, который содержит одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 132-134; FR2, который содержит одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 135-136; FR3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137; и FR4, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138.
8. Антитело по п. 6(г), дополнительно содержащее каркасный участок вариабельного домена легкой цепи FR1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139; FR2, который содержит одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 140-141; FR3, который содержит одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 142-143; и FR4, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 144.
9. Антитело по одному из пп. 1-5, содержащее (а) последовательность VH, идентичную по меньшей мере на 95% одной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 13, 16-30, 32-34 и 86-95; (б) последовательность VL, идентичную по меньшей мере на 95% одной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 15, 31, 35-38 и 96-99; или (в) последовательность VH, представленную в одной из SEQ ID NO: 13, 16-30, 32-34 и 86-95, и последовательность VL, представленную в одной из SEQ ID NO: 15, 31, 35-38 и 96-99.
10. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по одному из пп.1-9.
11. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 10.
12. Способ получения антитела к миостатину, включающий:
(а) культивирование клетки-хозяина по п. 11 так, чтобы получать антитело; или
(б) иммунизацию животного полипептидом, где полипептид содержит область, соответствующую положениям 21-100 пропептида миостатина (SEQ ID NO: 78).
13. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по одному из пп. 1-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
14. Полипептид, содержащий вариант Fc-области, который содержит по меньшей мере одно аминокислотное изменение в родительской Fc-области, для которого соотношение [величина KD родительской Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIb]/[величина KD варианта Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIb] составляет 2,0 или более, а соотношение [величина KD родительской Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIIa]/[величина KD варианта Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIIa] составляет 0,5 или менее.
15. Полипептид по п. 14, для которого также соотношение [величина KD родительской Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIb]/[величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIb] составляет 2,0 или более, а соотношение [величина KD родительской Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIIa]/[величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIIa] составляет 0,5 или менее.
16. Полипептид по п. 15, для которого также соотношение [величина KD родительской Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (Н-типа)]/[величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (Н-типа)] составляет 5,0 или менее.
17. Полипептид по п. 16, для которого также соотношение [величина KD родительской Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (R -типа)]/ [величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (R-типа)] составляет 5,0 или менее.
-6
7
18. Полипептид по п. 14, для которого величина KD варианта Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIb составляет 1,0×10 М или менее, а величина KD варианта Fc-области для обезьяньего Fc-гамма RIIIa составляет 5,0×10 М или более.
-6
-6
19. Полипептид по п. 15, для которого величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIb составляет 2,0×10 М или менее, а величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIIa составляет 1,0×10 М или более.
-7
20. Полипептид по п. 16, для которого величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (Н-типа) составляет 1,0×10 М или более.
-7
21. Полипептид по п. 17, для которого величина KD варианта Fc-области для человеческого Fc-гамма RIIa (R-типа) составляет 2,0×10 М или более.
22. Полипептид по одному из пп. 14-21, в котором вариант Fc-области содержит по меньшей мере одно аминокислотное изменение по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, состоящей из: 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 264, 266, 267, 268, 271, 295, 298, 325, 326, 327, 328, 330, 331, 332, 334 и 396, согласно EU-нумерации.
23. Полипептид по п. 22, в котором вариант Fc-области содержит по меньшей мере два аминокислотных изменения, включающих:
(а) одно аминокислотное изменение в положении 236 и
(б) по меньшей мере одно аминокислотное изменение по меньшей мере в одном положении, выбранном из группы, состоящей из:
(I) положения 231, 232, 233, 234, 235, 237, 238, 239, 264, 266, 267, 268, 271, 295, 298, 325, 326, 327, 328, 330, 331, 332, 334 и 396;
(II) положения: 231, 232, 235, 239, 268, 295, 298, 326, 330 и 396; или
(III) положения 268, 295, 326 и 330;
согласно EU-нумерации.
24. Полипептид по п. 22 или 23, в котором вариант Fc-области содержит по меньшей мере одно аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из:
(а) Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr в положении 231,
(б) Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr в положении 232,
(в) Asp в положении 233,
(г) Trp, Туг в положении 234,
(д) Trp в положении 235,
(е) Ala, Asp, Glu, His, Ile, Leu, Met, Asn, Gln, Ser, Thr, Val в положении 236,
(ж) Asp, Tyr в положении 237,
(з) Glu, Ile, Met, Gln, Tyr в положении 238,
(и) Ile, Leu, Asn, Pro, Val в положении 239,
(к) Ile в положении 264,
(л) Phe в положении 266,
(м) Ala, His, Leu в положении 267,
(н) Asp, Glu в положении 268,
(о) Asp, Glu, Gly в положении 271,
(п) Leu в положении 295,
(р) Leu в положении 298,
(с) Glu, Phe, Ile, Leu в положении 325,
(т) Thr в положении 326,
(у) Ile, Asn в положении 327,
(ф) Thr в положении 328,
(х) Lys, Arg в положении 330,
(ц) Glu в положении 331,
(ч) Asp в положении 332,
(ш) Asp, Ile, Met, Val, Tyr в положении 334 и
(щ) Ala, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr в положении 396;
согласно EU-нумерации.
25. Полипептид по п. 24, в котором вариант Fc-области содержит по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из:
(а) Gly, Thr в положении 231,
(б) Asp в положении 232,
(в) Trp в положении 235,
(г) Asn, Thr в положении 236,
(д) Val в положении 239,
(е) Asp, Glu в положении 268,
(ж) Leu в положении 295,
(з) Leu в положении 298,
(и) Thr в положении 326,
(к) Lys, Arg в положении 330 и
(л) Lys, Met в положении 396;
согласно EU-нумерации.
26. Полипептид, содержащий вариант Fc-области, который содержит по меньшей мере два аминокислотных изменения в родительской Fc-области, где каждое из аминокислотных изменений повышает изоэлектрическую точку (pI) варианта Fc-области по сравнению с родительской Fc-областью.
27. Полипептид по п. 26, в котором аминокислотные изменения экспонируются на поверхности варианта Fc-области.
28. Полипептид по п. 26 или 27, дополнительно содержащий антигенсвязывающий домен.
29. Полипептид по п. 28, в котором антигенсвязывающая активность антигенсвязывающего домена изменяется в зависимости от концентрации ионов.
30. Полипептид по одному из пп. 26-29, в котором вариант Fc-области содержит по меньшей мере два аминокислотных изменения по меньшей мере в двух положениях, выбранных из группы, состоящей из: 285, 311, 312, 315, 318, 333, 335, 337, 341, 342, 343, 384, 385, 388, 390, 399, 400, 401, 402, 413, 420, 422 и 431, согласно EU-нумерации.
31. Полипептид по п. 30, в котором вариант Fc-области содержит Arg или Lys в каждом из выбранных положений.
32. Полипептид, содержащий вариант Fc-области, который содержит аминокислотные изменения, указанные в таблицах 14-30.
33. Полипептид по одному из пп. 14-32, в котором родительскую Fc-область получают из человеческого IgG1.
34. Полипептид по одному из пп. 14-33, где полипептид представляет собой антитело или содержащий Fc слитый белок.
35. Полипептид, содержащий одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 229-381.
36. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид по одному из пп. 14-35.
37. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 36.
38. Способ получения полипептида, содержащего вариант Fc-области, включающий культивирование клетки-хозяина по п. 37 так, чтобы получать полипептид.
39. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по одному из пп. 14-35 и фармацевтически приемлемый носитель.