НИФУРТИМОКС ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНЕЙ, ВЫЗВАННЫХ ТРИХОМОНАДИДАМИ
NIFURTIMOX FOR TREATING DISEASES CAUSED BY TRICHOMONADIDA

Настоящее изобретение касается борьбы с болезнями, вызванными трихомонадидами, более конкретно к лекарственному средству для лечения болезней, вызванных трихомонадидами.
Эффективность нитрогетероциклических соединений в борьбе с заболеваниями, вызванными простейшими, в принципе известна ((1) Raether W., Hänel H. (2003): Nitroheterocyclic drugs with broad spectrum activity Parasitol Res. 90:S19-S39).
К простейшим относятся одноядерные организмы, основной структурой которых является эукариотическая клетка. Если точно рассматривать систематику, то имеются, однако, большие различия в образе жизни, морфологии и биохимических путях метаболизма отдельных штаммов, классов, отрядов и видов. Поэтому химические вещества в зависимости от точки своего воздействия и принципа действия обычно эффективны не против всех простейших в равной степени, а лишь против отдельных групп простейших ((2, 3, 4) Harder A., Greif G., Haberkorn A. (2001 a): Chemotherapeutic approoaches to protozoa: Haemosporina - current level of knowledge and outlook. Harder A., Greif G., Haberkorn A. (2001 b): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Giardia, Trichomonas and Entamoeba - current level of knowledge and outlook. Greif G., Harder A., Haberkorn A. (2001): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Caccidiae - current level of knowledge and outlook).
До настоящего времени была описана только эффективность нифуртимокса против видов простейших рода трипаносом, например, Trypanosoma brucei и Trypanosoma cruzi (5, DE-AS-1170957). У трипаносом имеется жгутик, начинающийся в базальном тельце ("кинетосоме", поэтому отряд называется "Кинетопластиды") и вместе с основной частью тела образующий ундулирующую мембрану. Трипаносомы размножаются преимущественно в плазме крови и переносятся кровососущими членистоногими. Эти возбудители вызывают у человека болезнь Шагаса (трипаносомиаз). В настоящее время едва ли не единственным соединением, действующим на этих возбудителей, является нифуртимокс. Предположительно эта эффективность основана на ингибировании трипанотион-редуктазы, специфического фермента трипаносом. У других простейших возбудителей, в частности у трихомонад и гистомонад, этот фермент отсутствует.
Эффективность нифуртимокса в отрядах трихомонадид и дипломонадид до настоящего момента не упомянута. Трихомонадиды - это простейшие, облигатные паразиты, для которых типичны несколько флагелл, как правило 4-6. Их выраженная морфологическая особенность сократительный стержень (Costa) внутри организма, участвующий в движении. В отличие от кинетопластид у трихомонадид отсутствуют митохондрии - важные органеллы энергетического метаболизма. Вместо этого энергетический метаболизм проходит в так называемых гидрогеносомах. В этих органеллах окислительное декарбоксилирование пирувата сопряжено с синтезом АТФ (аденозинтрифосфат) и с регулируемым ферредоксином транспорт электронов ((6) Kulda J. (1999): Trichomonas, hydrogenosomes and drug resistance. International Journal for Parasitology 29:199-212).
Размножаются эти одноклеточные паразиты делением надвое. Половые стадии или цисты отсутствуют. К отряду трихомонадид принадлежат много родов (в частности, роды Trichomonas и Histomonas) и множество видов, большинство из которых, однако, безвредны и непатогенны. Тем не менее, имеются представители этого отряда, вызывающие тяжелые заболевания и наносящие значительный экономический ущерб животноводству. К ним относятся род Trichomonas (в частности, Т. gallinae и T. gallinarum), род Tritrichomonas (в особенности Т. foetus и T. suis) и род Histomonas (в особенности Н. meleagridis).
Трихомоноз голубей и домашних кур - это инфекционное заболевание, вызываемое Trichomonas gallinae и Т. gallinarum. Т. gallinae паразитирует в первую очередь в глотке, пищеводе и зобе. В процессе заболевания, однако, поражаются также и другие органы, прежде всего печень, сердце и легкие. Заражение птенцов голубей происходит уже при первом кормлении "зобным молоком" латентно-инфицированных животных. Прочие источники инфекции - зараженная питьевая вода или корм. Эта болезнь считается самым частым заболеванием птенцов голубей и причиняет большой ущерб, особенно в племенных хозяйствах. Помимо высокой смертности характерны нарушения пищеварения, аппетита, птицы хуже пьют и едят, также ограничена их способность летать. Trichomonas gallinarum паразитирует в слепой кишке кур и индеек. Заболевание вызывает задержку роста, тяжелые поносы, а также некротическое воспаление печени.
Гистомониаз - это инфекционное заболевание, вызываемое Histomonas meleagridis. Гистомонады - кишечные паразиты. Особое значение имеет гистомониаз у индеек, в этом случае говорят также о так называемой "болезни черной головы". Возбудитель, вызывающий эту болезнь у индеек, - это, в частности, Histomonas meleagridis. Кроме индеек этой болезнью могут заражаться куры, цесарки, фазаны, куропатки и перепелки, которые считаются резервуаром.
Инфекция Histomonas meleagridis вызывает тяжелое воспаление слепой кишки и печени, так как возбудитель поражает ткань кишки и по кровеносному руслу попадает в печень, вызывая там некроз. Как сопутствующее явление этого заболевания часто встречается недостаточность кровообращения, заметная по черно-синему цвету голов заболевших животных, что и обусловило название болезни.
При попадании инфекции, например, на птицеводческие предприятия болезнь очень быстро распространяется по всему поголовью скота и ввиду очень высокой смертности (в определенных обстоятельствах до 100%) приводит к большим экономическим потерям.
Histomonas meleagridis из-за своих структурных жгутиков принадлежит к подтипу жгутиковых (биченосцев, Mastigophora) и отряду трихомонадид. На жгутиконосной стадии они размножаются в слепой кишке простым делением. Из зараженной слепой кишки организмы в амебоидной стадии проникают через кровоток в печень и разрушают ее, вызывая обширные некрозы ((7) McDougald L.R. (2005): Blackhead Disease (Histomoniasis) in Poultry: A critical Review. Avian Diseases 49(4):462-476).
Перенос гистомонад прямым путем, например попадание свежего помета, содержащего гистомонады, с пищей, встречается редко, поскольку вне организма хозяина возбудители очень недолго сохраняют жизнеспособность, а в большинстве случаев погибают при прохождении по пищеварительному тракту. Эксперименты американских исследователей на животных показали, что у индеек заражение гораздо легче происходит через клоаку, чем по оральному пути. Поскольку после отделения кала в клоаке возникает небольшое разрежение, на практике вероятно поступление этим путем инфекции, например, через загрязненную подстилку. С научной точки зрения однозначно доказана передача возбудителя через промежуточных хозяев. Известный переносчик (особенно транспортный вектор Histomonas meleagridis) - это в первую очередь обитающий в слепой кишке глист Heterakis gallinarum (в виде яиц или личинок). В эмбрионированных яйцах Heterakis гистомонады могут сохранять инфекционность до 4 лет. Другими промежуточными хозяевами могут быть дождевые черви или членистоногие, зараженные Heterakis. Потенциально опасны также куры и другие виды птиц. Они менее чувствительны, чем индейки, и часто бывают носителями возбудителя, не имея клинических признаков. Таким способом они способствуют распространению возбудителя.
Инфицирование индеек возможно в любом возрасте, но чаще всего заболевание проявляется на 3-12 неделе жизни. Временной промежуток между инфицированием и развертыванием заболевания составляет по большей части 7-12 дней. Смертность может составлять до 100%, а достигает она максимума на 17-е сутки после инфицирования. На 8-й день болезни обнаруживаются воспалительные процессы в слепой кишке, а на 10-й - в печени.
Инфицированные животные выглядят вялыми и истощенными, у них виснут крылья и головы, и животные отказываются есть. Для заболевания характерны: желтый (цвета серы) помет, понос, позднее - кровь в помете. Сопутствующие заболеванию нарушения кровообращения вызывают выраженное сине-черное окрашивание головы, по которому названа болезнь.
Течение заболевания определяется в первую очередь возрастом и состоянием кишечной флоры индеек. Осложнить течение могут дополнительные бактериальные инфекции Е. соli, Clostridium perfringens или кокцидиями. ((8) McDougald, L.R., Hu, J. (2001): Blackhead Disease (Histomonas meleagridis) aggravated in broiler chickens by cncurrent infection with cecal coccidiosis (Eimeria tenella). Avian Diseases 45:307-312).
Диагноз гистомониаза можно поставить по нативным препаратам из слепой кишки и печени с помощью раствора поваренной соли. Возбудители в подвижной амебоидной стадии видны под фазово-контрастным микроскопом. В гистологическом исследовании используют окрашивание с помощью «Шик-реакции» (реактивом Шиффа и йодной кислотой).
До 1950 г. в борьбе с гистомониазом были эффективны только соединения мышьяка (например, нитарсон, карбарсон, роксарсон). Известно однако, что соединения мышьяка в общем случае недостаточно сильны для излечения развившейся инфекции. Еще один их недостаток - это чрезвычайно низкий показатель безопасности: уже двукратное повышение дозы роксарсона ведет к нарушению двигательных функций индюка.
С 1960 г. применяли другие нитроимидазолы или нитрофураны, вводя их, например, в корм или питьевую воду, однако с середины 1990-х гг. их применение в лечении сельскохозяйственных животных и в качестве кормовой добавки стало попадать под запреты ЕС и США - диметридазол был отозван с рынка США в 1997 г., а в 2001 г. было запрещено его применение в ЕС в качестве кормовой добавки. С 31 марта 2003 г. нифурзол, единственный сохраняющий регистрацию в ЕС препарат, также нельзя применять по соображениям безопасности. Таким образом, в настоящее время и в будущем как лекарства для лечения, так и препараты для профилактики гистомониаза отсутствуют.
Единственный доступный на данный момент способ избежать заболевания - это гигиенические мероприятия, оптимизация плотности содержания и снабжения кормами, а также препятствование переносу возбудителя. Этих мер недостаточно, сами по себе они не могут воспрепятствовать инфекции и заболеванию.
Прививки от гистомониаза не имеется. Например, прививка от Histomonas meleagridis невозможна биологически, поскольку даже после инфекции естественный иммунитет не развивается. Животные, переболевшие однажды, могут заболеть снова. Попытки иммунизации ослабленными живыми вакцинами успеха не принесли.
Поэтому имеется потребность в действующих веществах для лечения болезней, вызванных трихомонадидами, например гистомониаза, имеющих высокую эффективность и благоприятные токсикологические свойства.
Мы неожиданно обнаружили, что нифуртимокс эффективен в борьбе с трихомонадидами, причем нифуртимокс также обладает благоприятными токсикологическими характеристиками. До сих пор эта эффективность не была описана, а благоприятных токсикологических свойств также не ожидали.
Объектом изобретения является лекарственное средство для борьбы с болезнями, вызванными трихомонадидами, содержащее активное вещество, в качестве которого взят нифуртимокс.
Нифуртимокс представляет собой соединение формулы (I)
Данное соединение может иметься в форме обычных приемлемых с точки зрения фармации солей, гидратов или других сольватов и их солей.
Возможно применение лекарственного средства как в профилактических, так и в терапевтических целях. К трихомонадидам относятся роды Histomonas, Trichomonas, Tritrichomonas. Из рода Trichomonas следует, в частности, упомянуть T. gallinae и Т. gallinarum. Из рода Tritrichomonas следует, в частности, упомянуть Т. foetus и Т. suis, a из рода Histomonas - в особенности Н. meleagridis.
Предпочтительна борьба с гистомониазом. Его вызывают Histomonas spp. Крайне предпочтительна борьба согласно изобретению с гистомониазом, вызванным Histomonas meleagridis. Нифуртимокс в борьбе с гистомониазом эффективен не только против кишечной стадии жизненного цикла возбудителя, но и против печеночной.
Согласно изобретению лечат животных. В качестве примера можно упомянуть млекопитающих, например крупный рогатый скот, лошадей, свиней, собак, кошек. Предпочтительно лечить птицу, например кур, цесарок, куропаток, перепелок, уток, гусей, павлинов, фазанов, голубей, а в особенности индеек (в данном случае синонимично термину «индюков»).
В качестве примеров следует особо отметить следующие заболевания.
Трихомоноз голубей, индеек или домашних кур, вызванный Т. gallinarum и/или Т. gallinae.
Гистомониаз кур, цесарок, павлинов, фазанов, куропаток, перепелок, а в особенности индеек. Гистомониаз у индеек (болезнь черной головы) вызывается, в частности, Н. meleagridis.
Действующие вещества применяют непосредственно (в чистом виде) или в форме надлежащих рецептур: энтерально, парентерально, дермально.
По энтеральному пути действующие вещества применяют, например, вводя внутрь в форме порошков, свеч, таблеток, капсул, паст, пойла, гранулятов, вливания, болюсов, добавления медикамента в пищу или питьевую воду. Дермальное нанесение осуществляют, например, посредством погружения (дип), опрыскивания (спрей), ванны, мытья, обливания и опыления. Формы парентерального применения - это, например, инъекция (внутримышечная, подкожная, внутривенная, внутрибрюшинная) или с помощью имплантатов.
Подходящие композиции это:
Растворы: для инъекций, для приема внутрь, концентраты для дачи внутрь после разбавления, растворы для нанесения на кожу или в полости тела, композиции настоев, гели, эмульсии и суспензии для дачи внутрь, нанесения на кожу, а также для инъекций.
Полутвердые (пастообразные) композиции, в которых действующее вещество введено в мазевую основу или в эмульсионную основу типа «масло в воде» или «вода в масле»;
Твердые композиции (лекарственные формы), как то: порошки, премиксы или концентраты, грануляты, крупинки, болюсы, капсулы, аэрозоли и ингаляты, формованные изделия, содержащие действующее вещество.
Растворы для инъекций вводят, например, внутривенно, внутримышечно и подкожно.
Растворы для внутреннего применения используют в готовом виде. Концентраты дают внутрь после предварительного разбавления до концентрации применения.
Растворы для нанесения на кожу наносят каплями, намазывают, втирают, ими опрыскивают, их распыляют или применяют методом погружения, ванн или мойки.
Гели наносят или намазывают на кожу или в полости тела.
Настои наливают или разбрызгивают на ограниченные участки кожи, причем действующее вещество либо проникает через кожу и действует системно, либо распределяется по поверхности тела. Эмульсии принадлежат либо к типу «вода в масле», либо к типу «масло в воде», их можно применять перорально, наносить на кожу или вводить в виде инъекций.
Суспензии можно применять перорально, наносить на кожу или вводить в виде инъекций.
Полутвердые композиции можно давать внутрь или наносить на кожу. От вышеописанных суспензий и эмульсий они отличаются только более высокой вязкостью.
Для изготовления твердых композиций действующие вещества смешивают с носителем, при необходимости с добавлением вспомогательных веществ, и придают им нужную форму.
Согласно изобретению особо предпочтительно применение для лечения птицы. Его целесообразно осуществлять путем введения внутрь, в частности в корме с лекарственными добавками или в питьевой воде.
Все вышепоименованные лекарственные формы, подлежащие применению добавки и вспомогательные вещества, а также изготовление этих лекарственных форм, в принципе, известны специалисту.
Возможна комбинация действующих веществ с синергистами или с другими действующими веществами. В качестве других действующих веществ следует упомянуть:
кокцидиостатики, как то: робенидин или ампролиум, частично в сочетании с антагонистами фолиевой кислоты (например, этопабат, пириметамин, эпироприм);
полиэфирные антибиотики, как то: монэнзин, салиномицин, ласалоцид, нарасин, семдурамицин или мадурамицин;
триазиноны, как то: толтразурил, поназурил или диклазурил;
сульфонамиды (сульфахиноксалин, сульфадимидин, сульфадиазин).
Для достижения долгосрочного эффекта лечения рекомендуется дезинфицировать животноводческие предприятия перед запуском животных в помещения или по окончании периода откорма.
Гельминты, в особенности Heterakis spp. (личинки) ((9) Hegngi F.N., Doerr J., Cummings T.S., Schwartz R.D., Saunders G., Zajac A., Larsen C.T, Piierson F.W.(1999): The effectiveness of benzimidazole derivatives fort the treatment and prevention of histomonosis (blachhead) in turkeys. Veterinary Parasitology 81:29-37), играют при переносе гистомонад роль транспортных векторов. Поэтому при лечении гистомониаза может иметь смысл применения в сочетании с противоглистными препаратами. Известно, что противоглистные препараты, как, например, бензимидазолы, альбендазол или фенбендазол, обладают профилактической эффективностью in vivo, если лечение начинать с момента заражения. Обычна противоглистная обработка в течение 14 дней с момента заражения. Поэтому комбинированное лечение нифуртимоксом и противоглистными агентами позволяет сделать лечение заболеваний, вызванных трихомонадами, более эффективным.
В качестве противоглистных агентов следует указать бензимидазолы, например, албендазол, фенбендазол, или пробензимидазолы, как, например, фебантел. Эти вещества эффективны, например, в борьбе с Heterakis spp., в особенности Heterakis gallinarum, являющийся, как известно, транспортным вектором Histomonas meleagridis ((10) Hegngi, F.N., Doeerr, J., Cummings, T.S., Schwartz, R.D., Saunders, G., Zajac, A., Larsen, C.T., Pierson, F.W. (1999): The effectiveness of benzimidazole derivatives for the treatment and prevention of histomonosis (bleackhead) in turkeys. Veterinary Parasitology 81:29-37).
Кроме того, следует назвать имидазолтиазолы (левамизол, тетрамизол), тетрагидропиримидины (пирантел, морантел, оксантел), производные амидина, например, амидантел, трибендимидин, а также деацилированное производное амидантела Bay d 9216 и производные аминоацетонитрила (см., например, Kaminsky et al., Nature 452, 176-180 (13 March 2008)), как то: AAD 1470.
Из противоглистных агентов следует предпочтительно упомянуть депсипептидные противоглистные средства. Депсипептидные средства, как то: PF1022A и эмодепсид, обладают широким спектром эффективности в борьбе с нематодами у различных животных, как то: куриных, грызунов, пресмыкающихся, собак, кошек, овец, крупного рогатого скота, коз, лошадей ((11, 12, 13, 14) von Samson-Himmelstjerna G., Harder A., Schnieder Т., Kalbe J., Mencke N. (2000): In vivo activities of the new anthelmintic depsipeptide PF1022A. Parasitol. Res. 86: 194-199;
Mehlhorn H., Nicolay F., Harder A., von Samson-Himmelstjerna A. (2000): Synergistic action of Bay 44-4400 and piperazine on nematodes of the mouse in vitro and in vivo: a light and transmission electron microscopic study. Parasitol. Res. 86: 982-992;
Harder A., Schmitt-Wrede H. -P., Krücken J., Marinovski P., Wunderlich F., Willson J., Amliwala K., Holden-Dye L., Walker R.(2003): Cyclooctadepsipeptides - an anthelmintically active class of compounds exhibiting a novel mode of action. Int. J. Antimicrobial Agents 22:318-331;
Mehlhorn H., Schmahl G., Frese M., Mevissen I., Harder A., Krieger К. (2005): Effects of a combination emodepside and praziquantel on parasites of reptiles and rodents. Parasitol. Res. 97 Suppl 1:S65-S69).
При этом удалось показать, что PF1022A и эмодепсид эффективны в борьбе с нематодами надсемейства Heterakoidea. Из семейства Heterakidae к ним, помимо Heterakis gallinarum у кур, принадлежит также мышиная нематода Heterakis spumosa. Против последней PF1022A эффективен, например, при даче внутрь в дозе 50 мг/кг, а эмодепсид - в диапазоне дозировок 1-10 мг/кг ((13, 15) Harder A., Schmitt-Wrede H. -P., Krucken J., Marinovski P., Wunderlich F., Willson J., Amliwala K., Holden-Dye L., Walker R.(2003): Cyclooctadepsipeptides - an anthelmintically active class of compounds exhibiting a novel mode of action. Int. J. Antimicrobial Agents 22:318-331; Bernt U., Junkersdorf В., Londershausen M., Harder A., Schierenberg E. (1998); Effects of anthelmintics with different modes of action on the behaviour and development of Caenorhabditis elegans. Fundam. Appl. Nematol. 21:251-263).
Кроме того, доказана эффективность, например, PF1022A против еще одного представителя надсемейства Heterakoidea, Ascaridia galli у кур, принадлежащего к семейству Ascaridiidae. В этом случае соединение эффективно при дозировке в 2 мг/кг ((16) Sasaki Т, Takagi M, Yaguchi T, Miyadoh S, Okada T, Koyama S (1992) A new anthelmintic cyclodepsipeptide, PF1022A. Journal of Antibiotics 45:692-697). Поэтому указанные вещества, принадлежащие к классу циклических депсипептидов, пригодны к профилактике, в частности, гистомониаза.
Предпочтительно применяемые депсипептидные противоглистные агенты - это 24-членные циклодепсипептиды. Из таковых следует упомянуть:
соединения с формулой (IIa)
в которой
2
Z означает водород, N-морфолинил, NH, монометиламиногруппу или диметиламиногруппу.
Кроме того, необходимо назвать соединения с формулой (IIb)
в которой
1
2
3
4
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, алкил с 1-10 атомами углерода или арил, в частности фенил, которые при необходимости замещены гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-10 атомами углерода или галогеном.
Соединения общей формулы (IIb) известны, их можно получать способами, описанными в европейской заявке ЕР-А-382 173, немецких заявках DE-A 4317432, DE-A 4317457, DE-A 4317458, европейских заявках ЕР-А-634408, ЕР-А-718293, ЕР-А-872481, ЕР-А-685469, ЕР-А-626375, ЕР-А-664297, ЕР-А-669343, ЕР-А-787141, ЕР-А-865498, ЕР-А-903347.
К циклическим депсипептидам с 24 атомами кольца относятся также соединения общей формулы (IIc)
в которой
1a
2a
11a
12a
R, R, R и R независимо друг от друга означают алкил 1-8 атомами углерода, галогеналкил с 1-8 атомами углерода, циклоалкил с 3-6 атомами углерода, аралкил, арил,
3a
5a
7a
9a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород или неразветвленный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода, который при необходимости может быть замещен гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, карбоксильной группой, , карбоксамидом, , имидазолилом, индолилом, гуанидиновой группой, группой -SH или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, а также они означают арил или аралкил, которые могут быть замещены галогеном, гидроксигруппой, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода,
4a
6a
8a
10a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, неразветвленный алкил с 1-5 атомами углерода, алкенил с 2-6 атомами углерода, циклоалкил с 3-7 атомами углерода, которые при необходимости могут быть замещены гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, карбоксильной группой, карбоксамидом, имидазолилом, индолилом, гуанидиновой группой, группой -SH или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, а также они означают арил или аралкил, которые могут быть замещены галогеном, гидроксигруппой, алкилом с 1-4 атомами углерода, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, а также их оптические изомеры и рацематы.
1a
2a
11a
12а
Предпочтительные соединения формулы (IIc) - это те, у которых R, R, R и R независимо друг от друга означают метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил или фенил, который при необходимости замещен галогеном, алкилом с 1-4 атомами углерода, гидроксильной группой, алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, а также это бензил или фенилэтил, которые при необходимости могут быть замещены остатками, указанными в случае фенила;
3a
10a
R-R имеют вышеприведенное значение.
1a
2a
11a
12a
Особо предпочтительные соединения формулы (IIc) - это те, в которых R, R, R и R независимо друг от друга означают метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил и трет-бутил,
3a
5a
7a
9a
R, R, R, R означают водород, неразветвленный или разветвленный алкил с 1-8 атомами углерода, в особенности метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, трет-бутил, которые при необходимости могут быть замещены алкоксигруппой с 1-4 атомами углерода, в частности метоксигруппой, этоксигруппой, имидазолилом, индолилом или алкилтиогруппой с 1-4 атомами углерода, в особенности метилтиогруппой, этилтиогруппой, а также они означают финил, бензил или фенетил, которые могут быть при необходимости замещены галогеном, в частности хлором.
4a
6a
8a
10a
R, R, R, R независимо друг от друга означают водород, метил, этил, н-пропил, н-бутил, винил, циклогексил, которые при необходимости могут быть замещены метоксигруппой, этоксигруппой, имидазолилом, индолилом, метилтиогруппой, этилтиогруппой, а также они означают изопропил, втор-бутил и при необходимости замещенные фенил, бензил или фенэтил.
Соединения общей формулы (IIс) также можно получать способами, описанными в европейской заявке ЕР-А-382173, германских заявках DE-A 4317432, DE-A 4317457, DE-A 4317458, европейских заявках ЕР-А-634408, ЕР-А-718293, ЕР-А-872481, ЕР-А-685469, ЕР-А-626375, ЕР-А-664297, ЕР-А-669343, ЕР-А-787141, ЕР-А-865498, ЕР-А-903347.
В качестве крайне предпочтительного депсипептида следует назвать известное из публикации европейского патента EP-OS 382173 вещество PF 1022, представляющее собой соединение формулы (IIa), где оба заместителя Z означают водород. Следовательно, формула PF 1022 - это формула (IId)
Прочие предпочтительные депсипептиды - это соединения, известные из заявки PCT WO 93/19053, в частности соединения формулы (IIа),
в которой
2
Z означает N-морфолинил, NH, монометиламиногруппу или диметиламиногруппу.
Крайне предпочтительно среди этих соединений депсипептидное соединение эмодепсид (PF 1022-221). Оно представляет собой соединение формулы (IIа), где оба остатка Z означают морфолиновый остаток. Международное непатентованное название (INN) эмодепсид означает соединение с систематическим названием: цикло[(R)-лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-3-(р-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-3-(р-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил. Эмодепсид описан в международной заявке WO 93/19053 и имеет следующую формулу
Названные выше действующие вещества, пригодные к применению в комбинациях, могут в зависимости от структуры находиться в виде стереоизомеров или в виде смесей стереоизомеров, например энантиомеров или рацематов. Применять согласно изобретению можно как чистые стереоизомеры, так и смеси стереоизомеров.
Кроме того, при необходимости можно применять: соли действующих веществ с приемлемыми с точки зрения фармации кислотами или основаниями, а также сольваты, в частности гидраты действующих веществ или их соли.
Применение в комбинации означает, что нифуртимокс и второе действующее вещество, в частности циклодепсипептид, можно применять либо по отдельности, либо со сдвигом по времени. В этом случае нифуртимокс и второе действующее вещество в каждом случае представлены в виде отдельных лекарственных средств.
Возможно также одновременное применение. В соответствии с одним из вариантов исполнения, подходящего для этого случая, действующие вещества комбинации объединены в одно лекарственное средство. Обычно готовые к применению рецептуры содержат конкретное действующее вещество в концентрациях от 10 частей на млн до 20 вес. %, предпочтительно 0,1-10 вес. %.
Композиции, которые разбавляют до применения, содержат конкретное действующее вещество в концентрациях от 0,5 до 90 вес. %, предпочтительно 5-50 вес. %. В концентрированных растворах для добавления к питьевой воде концентрация конкретного действующего вещества составляет, например, 0,5-20 вес. %, предпочтительно 1-15 вес. %, особо предпочтительно 2-10 вес. %.
Для достижения действенного результата оказалось в общем случае целесообразным вводить количества от 0,05 до 200 мг, преимущественно от 0,1 до 100 мг действующего вещества на кг массы тела в сутки.
В смесях с другими средствами борьбы с кокцидиозом или полиэфирными антибиотиками массовое соотношение действующих веществ согласно изобретению, как правило, составляет от 1:0,01-50 до 1:1-50.
Действующие вещества можно также давать животным с кормом или питьевой водой.
Корма и пища содержат 0,005-1000 частей на млн, предпочтительно 0,05-500 частей на млн действующего вещества в комбинации с подходящим съедобным материалом.
Такие корма можно применять как в целях лечения, так и в целях профилактики.
Такие корма или пищу изготавливают посредством смешения концентрата или предварительной смеси, содержащих 0,5-30, предпочтительно 1-20 вес. % действующего вещества в съедобном органическом или неорганическом носителе, с обычными кормами. Съедобные носители - это, например, кукурузная мука или мука из кукурузы и соевых бобов или минеральные соли, причем целесообразно, чтобы они содержали небольшое количество масла, препятствующего пылеобразованию, например кукурузного масла или соевого масла. Полученную таким образом предварительную смесь можно затем добавлять в цельный корм перед скармливанием его животным.
В качестве примера дано описание применения при гистомониазе.
Для лечения и профилактики гистомониаза у птиц, в частности у кур, уток, гусей или индюков, 0,005-1000 ppm, предпочтительно 0,05-500 ppm действующего вещества смешивают с подходящим съедобным материалом, например питательным кормом. При желании эти количества можно увеличить, особенно если принимающие действующее вещество животные хорошо его переносят. Соответствующим же образом можно вводить вещество с питьевой водой.
Тем не менее, иногда может понадобиться изменение указанных количеств, особенно с учетом массы тела подопытного животного или способа введения препарата, либо же в связи с особенностями конкретного вида животных и их реакции на действующее вещество, или в связи с особенностью лекарственной формы, или времени введения, или интервала между введениями. Так, в некоторых случаях может быть достаточно меньшего количества, чем минимальное названное, в то время как в других случаях необходимо превысить указанный верхний предел. При введении животным больших количеств может оказаться целесообразно распределить эти количества на несколько отдельных приемов в течение дня.
Эффективность соединений согласно изобретению можно доказать, например, в экспериментах с клеточным содержанием животных и их лечением конкретным действующим веществом в следующих условиях.
Содержащий действующее вещество корм готовят тщательно перемешивая потребное количество действующего вещества со сбалансированным по питательным веществам кормом для животных, например с приведенным ниже кормом для цыплят.
Если необходимо приготовить концентрат или предварительную смесь, которая в конце концов подлежит разбавлению в корме до значений, приведенных в описании эксперимента, то в общем случае примерно 1-30 вес. %, предпочтительно примерно 10-20 вес. % действующего вещества смешивают со съедобным органическим или неорганическим носителем, например мукой из кукурузы и соевых бобов или минеральными солями, которые содержат небольшое количество масла, препятствующего пылеобразованию, например кукурузного масла или соевого масла. Полученную таким образом предварительную смесь можно перед введением добавлять к полноценному корму для птиц.
В качестве примера применения веществ согласно изобретению в корме для птиц возможен следующий состав.
52,00%
Кормовой шрот зерновых, а именно 40% кукурузы, 12% пшеницы
17,00%
Соевого шрота экстракт
5,00%
Кукурузный глютеновый корм
5,00%
Кормовая пшеничная мука
3,00%
Рыбная мука
3,00%
Смесь микроэлементов (минеральных веществ)
3,00%
Люцерновая травяная мука
2,50%
Витамины, заранее смешанные
2,00%
Пшеничные зародыши, измельченные
2,00%
Соевое масло
2,00%
Мясокостная мука
1,50%
Сухая молочная сыворотка
1,00%
Мелясса
<u>1,00%</u>
Пивные дрожжи, на пивных дробинах
100,00%
Такой корм содержит 18% сырого белка, 5% сырой клетчатки, 1% Са, 0,7% Р, а также на кг 1200 ME. Витамина А, 1200 ME витамина D3, 10 мг витамина Е, 20 цинковой соли бацитрацина.
Литература
1. Raether W., Hänel H. (2003): Nitroheterocyclic drugs with broad spectrum activity Parasitol Res. 90:S19-S39.
2. Harder A., Greif G., Haberkorn A. (2001a): Chemotherapeutic approoaches to protozoa: Haemosporina - current level of knowledge and outlook.
3. Harder A., Greif G., Haberkorn A. (2001b): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Giardia, Trichomonas and Entamoeba - current level of knowledge and outlook.
4. Greif G., Harder A., Haberkorn A. (2001): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Caccidiae - current level of knowledge and outlook.
5. Harder A., Greif G., Haberkorn А. (2001 с): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Kinetoplastida - current level of knowledge and outlook. Parasitol Res 87:778-780.
6. Kulda J. (1999): Trichomonas, hydrogenosomes and drug resistance. International Journal for Parasitology 29:199-212.
7. McDougald L.R. (2005): Blackhead Disease (Histomoniasis) in Poultry: A critical Review. Avian Diseases 49(4):462-476.
8. McDougald, L.R., Hu, J. (2001): Blackhead Disease (Histomonas meleagridis) aggravated in broiler chickens by cncurrent infection with cecal coccidiosis (Eimeria tenella). Avian Diseases 45:307-312.
9. Hegngi F.N., Doerr J., Cummings T.S., Schwartz R.D., Saunders G., Zajac A., Larsen C.T., Pijerson F.W. (1999): The effectiveness of benzimidazole derivatives fort the treatment and prevention of histomonosis (blachhead) in turkeys. Veterinary Parasitology 81:29-37.
10. Hegngi, F.N., Doeerr, J., Cummings, T.S., Schwartz, R.D., Saunders, G., Zajac, A., Larsen, C.T., Pierson, F.W. (1999): The effectiveness of benzimidazole derivatives for the treatment and prevention of histomonosis (bleackhead) in turkeys. Veterinary Parasitology 81:29-37.
11. von Samson-Himmelstjerna G., Harder A., Schnieder Т., Kalbe J., Mencke N. (2000): In vivo activities of the new anthelmintic depsipeptide PF1022A. Parasitol. Res. 86:194-199.
12. Mehlhorn H., Nicolay F., Harder A., von Samson-Himmelstjerna A. (2000): Synergistic action of Bay 44-4400 and piperazine on nematodes of the mouse in vitro and in vivo: a light and transmission electron microscopic study. Parasitol. Res. 86:982-992.
13. Harder A., Schmitt-Wrede H.-P., Krücken J., Marinovski P., Wunderlich F., Willson J., Amliwala K., Holden-Dye L., Walker R. (2003): Cyclooctadepsipeptides - an anthelmintically active class of compounds exhibiting a novel mode of action. Int. J. Antimicrobial Agents 22:318-331.
14. Mehlhorn H., Schmahl G., Frese M., Mevissen I., Harder A., Krieger K. (2005): Effects of a combination emodepside and praziquantel on parasites of reptiles and rodents. Parasitol. Res. 97 Suppl 1:S65-S69.
15. Bernt U., Junkersdorf В., Londershausen M., Harder A., Schierenberg E. (1998): Effects of anthelmintics with different modes of action on the behaviour and development of Caenorhabditis elegans. Fundam. Appl. Nematol. 21:251-263 16. Sasaki Т, Takagi M, Yaguchi T, Miyadoh S, Okada T, Koyama S (1992) A new anthelmintic cyclodepsipeptide, PF1022A. Journal of Antibiotics 45:692-697.
Примеры
Корма с добавлением медикаментов
Корма с добавлением медикаментов можно изготавливать добавляя и смешивая нифуртимокс в концентрациях 50, 100, 200 и 400 частей на млн с приведенной ниже кормовой смесью:
52,00%
Кормовой шрот зерновых, а именно 40% кукурузы, 12% пшеницы
17,00%
Соевого шрота экстракт
5,00%
Кукурузный глютеновый корм
5,00%
Кормовая пшеничная мука
3,00%
Рыбная мука
3,00%
Смесь микроэлементов (минеральных веществ)
3,00%
Люцерновая травяная мука
2,50%
Витамины, заранее смешанные
2,00%
Пшеничные зародыши, измельченные
2,00%
Соевое масло
2,00%
Мясокостная мука
1,50%
Сухая молочная сыворотка
1,00%
Мелясса
<u>1,00%</u>
Пивные дрожжи, на пивных дробинах
100,00%
Таблетки
Таблетки нифуртимокса известны и представлены в торговле в виде лекарственного средства, например, под торговым наименованием Lampit.
А. Биологический пример: эксперименты по эффективности борьбы с гистомонадами при клеточном содержании индеек
Индюшата-самцы, не имеющие в организме гистомонад, получают с кормом нифуртимокс или соединение сравнения нитарсон с -4-го дня (за 4 дня до инфицирования) до 14-го дня в концентрациях, приведенных в частей на млн. Инфицирование проводят в день 0, в каждой клетке содержат 10 животных. Каждую дозировку изучают на 1-3 таких группах.
Инфицирование проводят полевым штаммом гистомонад, пассажированным в лаборатории и хранящимся в жидком азоте. В день 0 по 5 животных в каждой клетке (за исключением неинфицированной контрольной группы) интраклоакально инфицируют 250000 гистомонадами в каждом случае в 1 мл среды Двайерса (прямое инфицирование). Эти инфицированные животные через несколько дней выделяют новые гистомонады и таким образом передают инфекцию остальным 5 животным клетки (непрямое инфицирование).
При оценке эффективности учитывают критерии по McDougald и Hu 2001 (7):
- уровень смертности от инфекции;
- прибавка в массе тела с начала до конца опыта;
- прием корма;
- переработка корма;
- макроскопическая оценка обусловленных инфекцией поражений в слепой кишке (Caecum) и в печени. При этой оценке "0" по шкале означает отсутствие поражений, а "4" - тяжелые поражения.
Таблица 1
Структура исследования с 210 животными
Группа
Код
Лечение
Инфекция
Соединение
Концентрация
День
Неинф.
D
без лечения
-
-
-
Инфиц. контр.
F
без лечения
-
-
+
30 част. на млн
E
нифуртимокс
30 ч. на млн
от -4 до +14
+
60 част. на млн
В
нифуртимокс
60 ч. на млн
от -4 до +14
+
120 част. на млн
C
нифуртимокс
120 ч. на млн
от -4 до +14
+
200 част. на млн
G
нифуртимокс
200 ч. на млн
от -4 до +14
+
Nita.
А
Нитарсон
187,5 ч. на млн
от -4 до +14
+
Таблица 2
Структура исследования 210 животных
Группа
Код
Лечение
Инфекция
Соединение
Концентрация
День
Неинф.
G
без лечения
-
Инфиц. контр.
А
без лечения
-
-
+
100 ч. на млн
D
нифуртимокс
100 ч. на млн
от -4 до +14
+
200 ч. на млн
F
нифуртимокс
200 ч. на млн
от -4 до +14
+
300 ч. на млн
В
нифуртимокс
300 ч. на млн
от -4 до +14
+
400 ч. на млн
C
нифуртимокс
400 ч. на млн
от -4 до +14
+
Nita.
Е
Нитарсон
187,5 ч. на млн
от -4 до +14
+
Таблица 3
Смертность, обусловленная гистомониазом
Лечение
Смертность
Лечение
Смертность
Инфиц. контр.
7
Инфиц. контр.
11
30 ч. на млн
5
100 ч. на млн
13
60 ч. на млн
6
200 ч. на млн
4
120 ч. на млн
5
300 ч. на млн
2
200 ч. на млн
4
400 ч. на млн
0
Nita.
1
Nita.
2
Таблица 4
Средняя прибавка в весе (г) с дня 0 до момента смерти
Лечение
Прямое инфицирование
Лечение
Прямое инфицирование
нет
да
нет
да
Неинф.
791
Неинф.
819
Инфиц. контр.
741
197
Инфиц. контр.
666
259
30 ч. на млн
730
235
100 ч. на млн
581
135
60 ч. на млн
838
304
200 ч. на млн
525
270
120 ч. на млн
744
182
300 ч. на млн
750
450
200 ч. на млн
744
264
400 ч. на млн
832
691
Nita.
782
541
Nita.
725
426
Таблица 5
Среднее потребление корма с дня 0 по день 14
Лечение
Потребление корма (кг)
Лечение
Потребление корма (кг)
Неинфицированный контроль
12.01
Неинфицированный контроль
12.44
Инфицированный контроль
8.84
Инфицированный контроль
9.56
30 ч. на млн
9.00
100 ч. на млн
6.69
60 ч. на млн
9.68
200 ч. на млн
9.14
120 ч. на млн
8.70
300 ч. на млн
10.40
200 ч. на млн
9.59
400 ч. на млн
11.79
Nita.
11.64
Nita.
9.82
Таблица 6
Средняя конверсия корма с дня 0 по день 14
Лечение
Конверсия корма
Лечение
Конверсия корма
Неинфицированный контроль
1.52
Неинфицированный контроль
1.63
Инфицированный контроль
1.89
Инфицированный контроль
2.10
30 ч. на млн
1.88
100 ч. на млн
2.32
60 ч. на млн
1.70
200 ч. на млн
2.33
120 ч. на млн
1.88
300 ч. на млн
1.83
200 ч. на млн
1.91
400 ч. на млн
1.55
Nita.
1.77
Nita.
1.79
Таблица 7
Средний уровень поражений в слепой кишке
Лечение
Прямое инфицирование
Лечение
Прямое инфицирование
нет
да
нет
да
Неинфицированный контроль
0.03
Неинфицированный контроль
0.00
Инфиц. контр.
0.29
3.93
Инфиц. контр.
0.93
2.93
30 ч. на млн
0.29
3.73
100 ч. на млн
1.08
3.79
60 ч. на млн
0.00
3.53
200 ч. на млн
1.80
3.67
120 ч. на млн
0.53
4.00
300 ч. на млн
0.79
2.53
200 ч. на млн
0.47
3.80
400 ч. на млн
0.27
1.20
Nita.
0.00
2.26
Nita.
0.29
3.07
В. Биологический пример: противоглистные свойства циклических октадепсипептидов
Самцов мышей (линия Bor CFW, масса тела 25-30 г) содержат в клетках из макролона (по 3 животных в клетке) и кормят крысиным кормом SNIFF (гранулы длиной по 10 мм) по потребности. Мышей заражают Heterakis spumosa, вводя внутрь 90 эмбрионированных яиц. Яйца получают у самок червей, выделенных из ободочной кишки мышей через 40 дней после инфицирования. Еще 3 недели яйца инкубируют при 37°С. Через 35 дней после инфекции мышам вводят соответствующую дозу PF1022A или эмодепсида в течение четырех дней подряд. PF1022A суспендируют в кремофоре EL. В день 7 после лечения мышей умерщвляют, изымают кишечник (тонкая кишка, слепая и ободочная кишки) и проводят подсчет червей (макроскопическое исследование). Мерой антигельминтной эффективности считают процентную долю изгнанных червей от общего количества червей у не получавших лечения инфицированных контрольных животных.
Эксперименты на курах описаны в (14) и процитированной там литературе.
Таблица 9
Противоглистная активность PF1022A и эмодепсида в борьбе с нематодами надсемейства Heterakoidea
Нематоды
Дозировка с полной эффективностью
PF1022A
Heterakis spumosa (мыши)
50 мг/кг
Ascaridia galli (куры)
2 мг/кг
Эмодепсид
Heterakis spumosa (мыши)
1-10 мг/кг