Способ прогнозирования эффективности криоконсервирования спермы жеребцов по количеству колониеобразующих единиц кишечной палочки
METHOD FOR PREDICTING THE EFFECTIVENESS OF CRYOPRESERVATION OF STALLION SPERM BASED ON THE NUMBER OF COLONY-FORMING UNITS OF E. COLI

Изобретение относится к физиологии и биотехнологии воспроизводства лошадей и может быть использовано при повышении эффективности криоконсервирования спермы жеребцов в племенном, спортивном и продуктивном коневодстве.
Существуют действующие в России государственные стандарты, которые четко нормируют максимально допустимый уровень загрязнения свежевзятой и замороженной спермы жеребцов кишечной палочкой. По которым в сперме определяется только коли-титр. Если коли-титр в свежей сперме более 0,1, а в замороженной более 0,9, то сперма считается не пригодной для дальнейшего использования в системе искусственного осеменения и должна выбраковываться [1-2].
Недостатками аналога является отсутствие возможности прогнозирования абсолютного количества кишечной палочки замороженной спермы жеребцов, по количеству колониеобразующих единиц бактерий этой группы; отсутствие распределения ожидаемой контаминации спермы жеребцов кишечной палочкой на группы в зависимости от количества колониеобразующих единиц; не предусматривается определения абсолютного количества колониеобразующих единиц бактерий группы кишечной палочки, а установление коли-титра не дает представления об абсолютном количестве кишечной палочки по количеству колониеобразующих единиц.
Известен способ улучшения криорезистентности и качества спермы жеребцов-производителей (UA 37154 U, A61D19/02 (2008.01), 25.11.2008), в котором применяется пероральное применение антиоксидантных средств, причем используют антиоксидантный препарат «Минерол», стимулирующий активность ферментов антиоксидантной защиты в свежевзятой сперме [3].
Основным недостатком данного способа является то, что он не является способом прогнозирования эффективности замораживания эякулятов и для улучшения криорезистентности спермы необходимо длительное кормление жеребцов с добавлением в пищу антиоксидантного препарата «Минерол», который воздействует на весь организм в целом, а не только на сперматозоиды.
Известен способ прогнозирования результативности криоконсервирования спермы жеребцов по иммуногенетическим показателям, так как он предусматривает прогнозирование эффективности криоконсервирования спермы жеребцов.
В патенте UA 117394 С2, опубл. 25.07.2018 представлен способ прогнозирования результативности криоконсервирования спермы жеребцов по иммуногенетическим показателям, в котором для прогнозирования результативности криоконсервирования спермы у жеребцов определяют аллели полиморфной системы группы крови D, при этом для эффективного прогнозирования рекомендуется отбирать не менее 8 эякулятов от каждого жеребца [4].
Основным недостатком данного способа является то, что прогнозирование криорезистентности не относится к каждому конкретному эякуляту, а прогнозирует показатели спермы после оттаивания в целом на основании иммуногенетического профиля каждого жеребца.
3
Техническим результатом настоящего изобретения является повышение эффективности прогнозирования криоконсервирования каждого конкретно взятого эякулята жеребцов путем отбора свежеполученных эякулятов с определенным количеством колониеобразующих единиц (КОЕ) кишечной палочки в см эякулята.
3
3
3
Технический результат достигается тем, что прогнозирование эффективности криоконсервирования спермы жеребцов по количеству колониеобразующих единиц кишечной палочки, заключается в том, что при количестве колониеобразующих единиц кишечной палочки до 250 на см эякулята прогнозируют получение подвижности спермиев жеребцов после размораживания более 3,5 баллов, более 35 %, при количестве колониеобразующих единиц кишечной палочки от 250 до 3500 на см эякулята прогнозируют получение подвижности спермиев жеребцов после размораживания от 2,5 до 3,5 баллов, от 25 до 35 %, при количестве колониеобразующих единиц кишечной палочки более 3500 на см эякулята прогнозируют получение подвижности спермиев жеребцов после размораживания менее 2,5 баллов, менее 25 %.
Использование предлагаемого способа позволяет повысить эффективность прогнозирования криорезистентности каждого конкретно взятого эякулята жеребца по абсолютному количеству колониеобразующих единиц кишечной палочки.
Данный способ основан на определении абсолютного количества колониеобразующих единиц кишечной палочки в каждом конкретно взятом эякуляте жеребцов.
Способ осуществляется следующим образом.
3
3
3
Для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания более 3,5 баллов, более 35 %, отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки не более 250 в см эякулята, для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания от 2,5 до 3,5 баллов, от 25 до 35 %, отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки от 250 до 3500 на см эякулята, для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания менее 2,5 баллов, менее 25 %, отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки более 3500 на см эякулята.
Пример выполнения.
3
Было отобрано 1631 эякулят жеребцов, которые были разделены на 4 группы в зависимости от количества колониеобразующих единиц (КОЕ) бактерий группы кишечной палочки. Во всех эякулятах уровень коли-титра не превышал 0,1. Первая группа была контрольной, в которой определяли только коли-титр. Вторая, третья и четвертая группа были опытными. Во второй, третьей и четвертой группе помимо коли-титра определяли также абсолютное количество колониеобразующих единиц (КОЕ/см) бактерий группы кишечной палочки. Далее выполняли замораживание-размораживание спермы, и в после размораживания оценивали основные физиологические характеристики спермы.
Результативность прогнозирования эффективности криоконсервирования спермы жеребцов представлена в таблице.
3
3
3
3
Из данных таблицы видно, что в случае отбора свежеполученных эякулятов с количеством колониеобразующих единиц (КОЕ) на смэякулята до 250, подвижность спермиев была более 3,5 баллов (35 %), что на 0,84 бала больше (Р<0,001) от среднего количества кишечной палочки (250-3500 КУО/см). При количестве кишечной палочки более 3500 КУО/см свежеполученного эякулята подвижность спермиев после размораживания была на 2,93 балла (29,3 %) меньше (Р<0,001) от эякулятов в которых было до 250 КУО/смкишечной палочки.
3
3
3
Способ прогнозирования эффективности криоконсервирования спермы жеребцов по количеству колониеобразующих единиц кишечной палочки работает следующим образом. Для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания более 3,5 баллов (более 35 %) отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки не более 250 в см эякулята, для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания от 2,5 до 3,5 баллов (от 25 до 35 %) отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки от 250 до 3500 на см эякулята, для получения подвижности спермиев жеребцов после размораживания менее 2,5 баллов (менее 25 %) отбираются свежеполученные эякуляты с количеством колониеобразующих единиц кишечной палочки более 3500 на см эякулята.
3
Предложенный способ позволяет повысить результативность прогнозирования эффективности криоконсервирования каждого конкретно взятого эякулята жеребцов за счет определения в них абсолютного количества кишечной палочки по колониеобразующим единицам в см спермы.
Источники информации
1. ГОСТ 23681-79 Сперма жеребцов неразбавленная свежеполученная. - Москва: Изд. стандартов, 1979. - 12 с.
2. ГОСТ 24168-80 Сперма жеребцов замороженная. - Москва: Изд. стандартов, 1979. - 15 с.
3. Патент UA 37154 U, A61D19/02 (2008.01), 25.11.2008. (https://base.uipv.org/searchINV/search.php?action=viewdetails&IdClaim=126288&chapter=description).
4. Патент UA 117394 С2, A61D19/00 (2018.01), 25.07.2018. (https://base.uipv.org/searchINV/search.php?action=viewdetails&IdClaim=249356&chapter=description).
5.Патент UA 117316 С2, A61D19/00 (2018.01), 10.07.2018. (https://base.uipv.org/searchINV/search.php?action=viewdetails&IdClaim=248871&chapter=description).
Способ прогнозирования эффективности криоконсервирования спермы жеребцов по количеству колониеобразующих единиц кишечной палочки
Таблица. Результативность прогнозирования эффективности криоконсервирования спермы жеребцов (М±m; n=1631)
Количество кишечной палочки, КОЕ/см<sup>3</sup> (количество проб)
Показатели эффективности криоконсервирования спермы после размораживания
подвижность спермиев, баллы (%)
переживаемость спермиев при 37°С, часы
абсолютный показатель переживаемости, уловных единиц
криорезистентность спермиев, %
Контрольная группа
Не определялось, коли-титр 0,1 (119)
2,51±0,08 (25,1±0,8)
2,35±0,07
7,5±0,32
32,11±1,15
Опытные группы
до 250 КОЕ/см<sup>3</sup>, коли-титр 0,1 (930)
3,53±0,04*(35,3±0,4)
3,59±0,04*
10,76±0,14*
53,72±0,53*
250-3500 КОЕ/см<sup>3</sup>, коли-титр 0,1 (454)
2,69±0,09(26,9±0,9)
2,46±0,08
7,45±0,28
31,00±1,13
более 3500 КОЕ/см<sup>3</sup>, коли-титр 0,1 (128)
0,6±0,04*(6,0±0,4)
0,6±0,04*
1,09±0,04*
2,99±0,53*
Различия статистически достоверны по сравнению с контролем: * - Р<0,001