СПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ ПОСРЕДСТВОМ ФИЛЬТРАЦИИ РАЗБАВЛЕННЫХ ВЯЗКОЭЛАСТИЧНЫХ БИОПОЛИМЕРОВ

1. Способ получения растворимого вязкоэластичного биополимера, включающий:
(1) стерилизующую фильтрацию растворимого, произведенного в крупном масштабе биополимера посредством пропускания через мембрану, подходящую для стерилизующей фильтрации; и
(2) концентрирование указанного биополимера посредством ультрафильтрации до желаемой конечной концентрации.
2. Способ получения вязкоэластичного биополимера, включающий:
(1) растворение произведенного в крупном масштабе биополимера в подходящей буферной среде для достижения разбавленной концентрации для стерилизующей фильтрации;
(2) стерилизующую фильтрацию биополимера путем пропускания через мембрану, подходящую для стерилизующей фильтрации; и
(3) концентрирование указанного биополимера посредством ультрафильтрации до желаемой конечной концентрации.
3. Способ получения вязкоэластичного препарата гиалуроновой кислоты, включающий:
(1) растворение произведенной в крупном масштабе гиалуроновой кислоты в подходящей буферной среде для достижения разбавленной концентрации для стерилизующей фильтрации;
(2) стерилизующую фильтрацию растворенной гиалуроновой кислоты путем пропускания через абсолютную мембрану 0,2 мкм; и
(3) концентрирование гиалуроновой кислоты посредством ультрафильтрации до желаемой конечной концентрации.
4. Способ по п.1 или 2, где биополимер выбран из группы, состоящей из гомополисахарида (например, карбоксиметилцеллюлозы, хитина, полиманнуроновой кислоты, камеди курдлана или декстрана), гетерополисахарида (например, гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфата, дерматансульфата, кератансульфата, гепарина, гепарансульфата, агара, альгината, каррагинана, геллановой камеди, гуаровой камеди, камеди бобов рожкового дерева или ксантановой камеди) и их смесей.
5. Способ по пп.1, 2 или 3, где биополимер или произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота получены из источника, выбранного из группы, состоящей из биологического источника, ферментативного синтеза in vitro, химического синтеза и комбинаций двух или более таких источников.
6. Способ по п.5, где биологический источник выбран из группы, состоящей из бактерии (например, штамма рода Streptococcus, например, вида Streptococcus, выбранного из группы, состоящей из штамма Streptococcus equi, Streptococcus pyogenes, Streptococcus equisimilis, Streptococcus dysgalactiae и/или Streptococcus zooepidemicus, и/или штамма Streptococcus, который является негемолитическим и непатогенным), дрожжевой клетки, растения, амфибии, птицы и млекопитающего; или где биополимер или произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота, которые получены из биологического источника, дополнительно включают химическую модификацию, например модификацию, выбранную из группы, состоящей из добавления сульфатных групп, добавления карбоксильных групп, добавления гидроксильных групп, добавления ацетильных групп, этерификации и поперечного сшивания.
4
7
6
6
7. Способ по пп.1, 2 или 3, где вязкоэластичный биополимер или произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне от 1×10 до 1×10 Да, например 3×10±0,6×10 Да.
8. Способ по п.1 или 2, где произведенный в крупном масштабе биополимер выделен из культуральной жидкости от ферментированного штамма Streptococcus, например, где произведенный в крупном масштабе биополимер представляет собой гиалуроновую кислоту; или способ по п.3, где произведенный в крупном масштабе биополимер представляет собой гиалуроновую кислоту, выделенную из культуральной жидкости от ферментированного штамма Streptococcus.
9. Способ по пп.1, 2 или 3, где произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота по существу свободна от примесей, например, где произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота по существу свободна от бактериального эндотоксина, например, где уровень бактериального эндотоксина составляет менее 0,25 МЕ/мл; и/или где произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота по существу свободна от бактериальных клеток, например, где количество жизнеспособных бактериальных клеток составляет менее 100 КОЕ/г, например менее 50 КОЕ/г, например менее 10 КОЕ/г; и/или где произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота, по существу, свободна от белка, например, где уровень белка составляет менее 1 мг/г.
10. Способ по пп.1, 2 или 3, где концентрация растворимого, произведенного в крупном масштабе биополимера на стадии (1) составляет менее 0,2%, например, где концентрация составляет 0,10-0,13%; или где концентрирование осуществляют посредством ультрафильтрации, например, где ультрафильтрацию осуществляют с использованием керамической мембраны; и/или где желаемая конечная концентрация находится в диапазоне от 0,8 до 3,0% мас./об., например примерно 1,0% мас./об., примерно 1,2% мас./об. или примерно 2,0% мас./об.
11. Способ по пп.1, 2 или 3, дополнительно включающий асептическое наполнение биополимером подходящего упаковочного устройства, возможно где упаковочное устройство выбрано из группы, состоящей из шприца, флакона, катетера и небулайзера.
12. Способ по пп.1, 2 или 3, где полученный вязкоэластичный биополимер имеет индекс псевдопластичности в диапазоне от 500 до 4000, возможно в диапазоне от 600 до 1200, например в диапазоне от 600 до 800.
13. Способ по пп.1, 2 или 3, где стерилизующую фильтрацию осуществляют с использованием мембраны с абсолютным размером пор 0,2 мкм.
14. Способ по п.2, где буферная среда содержит соль металла.
15. Способ по п.3, где все стадии выполняют в условиях чистой комнаты и/или где произведенная в крупном масштабе гиалуроновая кислота получена способом, включающим:
(1) осаждение этанолом культуральной жидкости от негемолитического, непатогенного, продуцирующего гиалуроновую кислоту ферментированного штамма Streptococcus;
(2) растворение осадка, полученного на стадии (1), в смеси хлорид натрия/этанол/древесный уголь;
(3) осаждение растворенного материала, полученного на стадии (2), цетилпиридиния хлоридом;
(4) растворение осадка, полученного на стадии (3), в смеси хлорид натрия/этанол;
(5) обработку растворенного материала, полученного на стадии (4), силикатом магния;
(6) фильтрацию обработанного материала, полученного на стадии (5), через абсолютную мембрану 0,65 мкм; и
(7) осаждение фильтрата, полученного на стадии (6), этанолом.
16. Препарат вязкоэластичной гиалуроновой кислоты, полученной способом по п.3, подходящий для инъекции млекопитающим во время операции.
6
6
17. Препарат по п.16, по существу, свободный от примесей и имеющий индекс псевдопластичности более 600; и/или имеющий среднюю молекулярную массу 3×10±0,6×10 Да; и/или дополнительно содержащий лекарственное средство; и/или где гиалуроновая кислота химически поперечно сшита; и/или где гиалуроновая кислота образует комплекс с металлом.
18. Способ по любому из пп.1, 2 или 3, где полученный вязкоэластичный биополимер является стабильным и стерильным в течение по меньшей мере одного года, например является стабильным и стерильным в течение по меньшей мере двух лет, например является стабильным и стерильным в течение по меньшей мере пяти лет; и/или где не используют никаких консервантов в вязкоэластичном биополимере.