ПОЛИПЕПТИДЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ЦЕЛЛЮЛАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

1. Рекомбинантный полипептид, содержащий серин в С-концевом участке в мотиве, включающем последовательность GEXDG, где Х представляет собой С, А или G (SEQ ID NO:107), где Х заменен серином, где этот вариант содержит целлюлазную активность, и где полипептид обладает повышенной термостойкостью по сравнению с целлюлазой дикого типа, в которой отсутствует серин в последовательности GEXDG (SEQ ID NO:107).
2. Рекомбинантный полипептид по п.1, где полипептид включает последовательность, которая по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:2, содержащей C314S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:4, содержащей C311S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:12, содержащей C310S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:13, содержащей C312S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:14, содержащей C314S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:15, содержащей C315S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:16, содержащей C313S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:17, содержащей C311S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:19, содержащей C313S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:21, содержащей C312S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:22, содержащей C311S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:64, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:65, содержащей C407S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:66, содержащей C394S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:67, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:68, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:69, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:70, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:71, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:72, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:73, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:74, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:75, содержащей C400S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:76, содержащей C407S; по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:77, содержащей C394S; или по меньшей мере на 85%, 90%, 95%, 98%, 99% идентична SEQ ID NO:78, содержащей C412S, где вышеуказанные полипептиды обладают целлюлазной активностью и улучшенной термостойкостью по сравнению с их соответствующим родительским (дикого типа) белком, не имеющим мутации Cys→Ser.
3. Рекомбинантные полипептиды, включающие последовательность, представленную ниже, имеющую 1-10, 10-20 или 20-30 консервативных аминокислотных замен за исключением положения, идентифицированного ниже, где присутствует замена C→S: SEQ ID NO:2, содержащую C314S; SEQ ID NO:4, содержащую C311S; SEQ ID NO:12, содержащую C310S; SEQ ID NO:13, содержащую C312S; SEQ ID NO:14, содержащую C314S; SEQ ID NO:15, содержащую C315S; SEQ ID NO:16, содержащую C313S; SEQ ID NO:17, содержащую C311S; SEQ ID NO:19, содержащую C313S; SEQ ID NO:21, содержащую C312S; SEQ ID NO:22, содержащую C311S; SEQ ID NO:64, содержащую C400S; SEQ ID NO:65, содержащую C407S; SEQ ID NO:66, содержащую C394S; SEQ ID NO:67, содержащую C400S; SEQ ID NO:68, содержащую C400S; SEQ ID NO:69, содержащую C400S; SEQ ID NO:70, содержащую C400S; SEQ ID NO:71, содержащую C400S; SEQ ID NO:72, содержащую C400S; SEQ ID NO:73, содержащую C400S; SEQ ID NO:74, содержащую C400S; SEQ ID NO:75, содержащую C400S; SEQ ID NO:76, содержащую C407S; SEQ ID NO:77, содержащую C394S; или SEQ ID NO:78, содержащую C412S.
4. Рекомбинантный полипептид по п.1, включающий последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
(a) полипептида, обладающего по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO:2, имеющего Ser в положении 314, и где полипептид обладает целлюлазной активностью;
(b) полипептида, обладающего по меньшей мере 70% идентичностью с SEQ ID NO:4, имеющего Ser в положении 311, и где полипептид обладает целлюлазной активностью;
(c) полипептида, обладающего по меньшей мере 70% идентичностью с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: (i) SEQ ID NO:12, имеющей Ser в положении 310, (ii) SEQ ID NO:13, имеющей Ser в положении 312, (iii) SEQ ID NO:14, имеющей Ser в положении 314, (iv) SEQ ID NO:15, имеющей Ser в положении 315, (v) SEQ ID NO:16, имеющей Ser в положении 313, (vi) SEQ ID NO:17, имеющей Ser в положении 311, (vii) SEQ ID NO:19, имеющей Ser в положении 313, (viii) SEQ ID NO:21, имеющей Ser в положении 312, и (ix) SEQ ID NO:22, имеющей Ser в положении 311, и где каждый из вышеуказанных полипептидов обладает целлюлазной активностью;
(d) химерного полипептида, содержащего по меньшей мере два домена от двух различных родительских полипептидов целлобиогидролаз, где эти домены включают от N- к С-концу: (сегмент 1)-(сегмент 2)-(сегмент 3)-(сегмент 4)-(сегмент 5)-(сегмент 6)-(сегмент 7)-(сегмент 8); где:
1
1
2
2
3
3
4
4
5
5
6
6
7
7
8
сегмент 1 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка примерно 1 до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 2 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 3 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 4 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 5 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 6 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); сегмент 7 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка x до примерно х SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"); и сегмент 8 содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50-100% идентична последовательности от аминокислотного остатка х до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3");
1
2
3
4
5
6
7
8
где x представляет собой остаток 43, 44, 45, 46 или 47 SEQ ID NO:2, или остаток 42, 43, 44, 45 или 46 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 70, 71, 72, 73 или 74 SEQ ID NO:2, или остаток 68, 69, 70, 71, 72, 73 или 74 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 113, 114, 115, 116, 117 или 118 SEQ ID NO:2, или остаток 110, 111, 112, 113, 114, 115 или 116 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 153, 154, 155, 156 или 157 SEQ ID NO:2, или остаток 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155 или 156 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 220, 221, 222, 223 или 224 SEQ ID NO:2, или остаток 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222 или 223 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 256, 257, 258, 259, 260 или 261 SEQ ID NO:2, или остаток 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259 или 260 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; x представляет собой остаток 312, 313, 314, 315 или 316 SEQ ID NO:2, или остаток 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315 или 318 SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6; и x представляет собой аминокислотный остаток, соответствующий С-концу полипептида, имеющего последовательность SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:6,
где химерный полипептид содержит Ser в положении 314 SEQ ID NO:2 или в положении 311 SEQ ID NO:4, и где химерный полипептид обладает целлюлазной активностью и улучшенной термостойкостью и/или рН стабильностью по сравнению с полипептидом СВН II, содержащим SEQ ID NO:2, 4 или 6.
1
1
2
2
3
3
4
4
5
5
6
6
7
7
8
5. Рекомбинантный полипептид по п.4, где сегмент 1 содержит аминокислотные остатки от примерно 1 до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3") и имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 2 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 3 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 4 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 5 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 6 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; сегмент 7 составляют аминокислотные остатки от примерно x до примерно х SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен; и сегмент 8 составляют аминокислотные остатки от примерно х до примерно x SEQ ID NO:2 ("1"), SEQ ID NO:4 ("2") или SEQ ID NO:6 ("3"), и он имеет 1-10 консервативных аминокислотных замен, за исключением положения 314 SEQ ID NO:2, положения 311 SEQ ID NO:4 или 313 SEQ ID NO:6.
6. Рекомбинантный полипептид по п.4, где химерный полипептид содержит последовательность, которая по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98% или 99% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:12-62 и 63.
7. Рекомбинантный полипептид по п.1, где химерный полипептид содержит последовательность, обладающую по меньшей мере 85% идентичностью с SEQ ID NO:79-105 или 106, и имеющую серин в Х в последовательности SEQ ID NO:107.
8. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по пп.1, 2, 3, 4 или 7.
9. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.8.
10. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п.8.
11. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.9.
12. Ферментный препарат, содержащий полипептид по пп.1, 2, 3, 4 или 7.
13. Ферментный препарат, содержащий полипептид, продуцированный клеткой-хозяином по п.10.
14. Способ обработки биомассы, содержащей целлюлозу, включающий приведение биомассы в контакт с полипептидом по пп.1, 2, 3, 4 или 7.
15. Способ обработки биомассы, содержащей целлюлозу, включающий приведение биомассы в контакт с ферментным препаратом по п.12.