КОМПОЗИЦИИ С УЛУЧШЕННЫМИ Т-КЛЕТКАМИ И СПОСОБЫ

1. Выделенная Т-клетка, содержащая
(i) вирусный белок, который снижает уровень экспрессии главного комплекса гистосовместимости (МНС) I класса на клеточной поверхности по сравнению с уровнем экспрессии МНС I класса на поверхности выделенной Т-клетки, которая не содержит вирусный белок, и
(ii) химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.
2. Выделенная Т-клетка по п. 1, причем вирусный белок представляет собой белок цитомегаловируса (CMV), белок аденовируса, белок герпесвируса или белок вируса иммунодефицита человека, причем предпочтительно вирусный белок представляет собой ICP47, K3, K5, E19, US3, US6, US2, U21, Nef, US10 или U21.
3. Выделенная Т-клетка по любому из пп. 1 или 2, причем вирусный белок не вызывает значительного снижения экспрессии CAR на клеточной поверхности относительно уровня экспрессии CAR на поверхности выделенной T-клетки, которая содержит CAR, но не содержит вирусный белок.
4. Выделенная Т-клетка по любому из пп. 1-3, причем выделенная Т-клетка дополнительно содержит антагонист NK-клеток, причем предпочтительно антагонист NK-клеток представляет собой антитело-агонист к ингибирующему NK-клетку рецептору, или антитело-антагонист к активирующему NK-клетку рецептору, причем предпочтительно антитело к ингибирующему NK-клетку рецептору представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
5. Выделенная T-клетка по п. 4, причем антитело к ингибирующему NK-клетку рецептору специфически связывается с иммуноглобулиноподобным рецептором клетки-киллера (KIR), гетеродимером CD94–NKG2A/C/E, рецептором 2B4 (CD244) или лектиноподобным рецептором G1 клетки-киллера (KLRG1).
6. Выделенная T-клетка по п. 5, причем KIR представляет собой KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR3DL1, KIR3DL2, KIR3DL3, KIR2DL5A, KIR2DL5B или KIR2DL4.
in vivo
in vivo
7. Выделенная Т-клетка по любому из пп. 1-6, причем выделенная Т-клетка характеризуется улучшенной стойкостью  относительно стойкости  второй выделенной Т-клетки, причем вторая выделенная Т-клетка содержит все компоненты выделенной Т-клетки за исключением того, что она не содержит вирусный белок; и/или
причем выделенная Т-клетка не вызывает или вызывает ослабленный ответ «трансплантат против хозяина» (GVHD) у гистосовместимого реципиента по сравнению с ответом GVHD, вызываемым второй выделенной T-клеткой, причем вторая выделенная T-клетка содержит все компоненты выделенной Т-клетки, за исключением того, что она не содержит вирусный белок.
8. Популяция CAR-T-клеток, содержащая множество выделенных T-клеток по любому из пп. 1-7, причем предпочтительно уровень экспрессии МНС I класса на клеточной поверхности снижен по меньшей мере приблизительно на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% относительно уровня экспрессии MHC I класса на поверхности Т-клеток, которые не содержат вирусный белок, причем предпочтительно уровень экспрессии МНС I класса на клеточной поверхности измерен с помощью проточной цитометрии.
9. Способ получения выделенной Т-клетки, причем способ включает модификацию T-клетки, экспрессирующей CAR, для экспрессии вирусного белка, причем CAR содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен.
10. Способ по п.  9, дополнительно включающий модификацию Т-клетки для экспрессии антитела-антагониста NK-клетки; и/или
причем вирусный белок стабильно введен в клетку; и/или
причем полинуклеотид, который кодирует вирусный белок, вводят в клетку с помощью транспозон/транспозазной системы, вирусной системы для переноса генов или электропорации; и/или
причем полинуклеотид, который кодирует химерный антигенный рецептор, вводят в клетку с помощью транспозон/транспозазной системы, электропорации или вирусной системы для переноса генов, причем предпочтительно вирусная система для переноса генов представляет собой рекомбинантный ретровирус или лентивирус; и/или
причем полинуклеотид, который кодирует антагонист NK-клеток, вводят в клетку с помощью транспозон/транспозазной системы, с помощью вирусной системы для переноса генов или с помощью электропорации.
11. Фармацевтическая композиция для применения в лечении нарушения, содержащая выделенную Т-клетку по любому из пп. 1-7, причем предпочтительно нарушение представляет собой рак, воспалительное заболевание, иммунное заболевание, аутоиммунное заболевание, инфекцию, вирусное заболевание, бактериальное заболевание или возрастное заболевание.
12. Фармацевтическая композиция по п. 11, причем клетки необходимо вводить субъекту более одного раза, причем предпочтительно клетки необходимо вводить субъекту с интервалом по меньшей мере примерно в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более дней.
13. Фармацевтическая композиция для применения при снижении GVHD у субъекта, или для применения при улучшении стойкости у субъекта, или для применения при удлинении времени продолжительного ответа у субъекта, содержащая выделенную Т-клетку по любому из пп. 1-7.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 11-13, причем субъект ранее проходил лечение терапевтическим средством до введения выделенной Т-клетки, причем предпочтительно терапевтическое средство представляет собой антитело или химиотерапевтическое средство.
15. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 11-14, дополнительно включающая введение антагониста NK-клеток, причем предпочтительно антагонист NK-клеток представляет собой антитело к ингибирующему NK-клетку рецептору, причем предпочтительно антитело к ингибирующему NK-клетку рецептору представляет собой антитело к KIR.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 11, 12, 14 и 15, причем рак представляет собой гематологическое злокачественное новообразование, предпочтительно выбранное из острого лимфобластного лейкоза (ALL), острого миелоидного лейкоза (AML), хронического миелогенного лейкоза (CML), хронического эозинофильного лейкоза (CEL), миелодиспластического синдрома (MDS), неходжкинской лимфомы (NHL) или множественной миеломы (ММ), или причем рак представляет собой солидный рак, предпочтительно выбранный из рака желчных путей, рака мочевого пузыря, рака костей и мягких тканей, опухоли головного мозга, рака молочной железы, рака шейки матки, рака толстой кишки, колоректальной аденокарциномы, колоректального рака, десмоидной опухоли, эмбрионального рака, рака эндометрия, рака пищевода, рака желудка, аденокарциномы желудка, мультиформной глиобластомы, гинекологической опухоли, плоскоклеточного рака головы и шеи, рака печени, рака легкого, злокачественной меланомы, остеосаркомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, протоковой аденокарциномы поджелудочной железы, первичной астроцитарной опухоли, первичного рака щитовидной железы, рака предстательной железы, рака почки, почечно-клеточной карциномы, рабдомиосаркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, опухоли половых клеток яичка, рака уротелия, саркомы матки или рака матки.
17. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 11-16, дополнительно включающая введение субъекту одного или нескольких дополнительных терапевтических средств, причем предпочтительно дополнительное терапевтическое средство представляет собой антитело или химиотерапевтическое средство.
18. Полинуклеотид, кодирующий (i) вирусный белок, который снижает уровень экспрессии молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС) I класса на клеточной поверхности по сравнению с уровнем экспрессии молекулы МНС I класса на поверхности выделенной Т-клетки, которая не содержит вирусный белок, и (ii) химерный антигенный рецептор (CAR).
19. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 18.
20. Вектор по п. 19, причем вектор представляет собой вирусный вектор.